特表 2023-502968 アミロイド沈着物を標的化するための修飾免疫グロブリン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-26

(54)【発明の名称】アミロイド沈着物を標的化するための修飾免疫グロブリン

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230119BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230119BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20230119BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230119BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230119BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230119BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230119BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230119BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230119BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20230119BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20230119BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K19/00 ZNA

C07K16/18

C07K14/47

C12N15/12

C12N15/13

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 Y

A61P25/28

A61K47/68

A61K38/16

G01N33/53 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022528305

(86)(22)【出願日】2020-11-13

(85)【翻訳文提出日】2022-07-06

(86)【国際出願番号】 US2020060596

(87)【国際公開番号】W WO2021097360

(87)【国際公開日】2021-05-20

(31)【優先権主張番号】62/936,002

(32)【優先日】2019-11-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/074,912

(32)【優先日】2020-09-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】504326686

【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ テネシー リサーチ ファウンデーション

(71)【出願人】

【識別番号】522189850

【氏名又は名称】アトララス・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】ジョナサン・エス・ウォール

(72)【発明者】

【氏名】ジェームズ・エス・フォスター

(72)【発明者】

【氏名】スペンサー・ガズリー

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C076AA95

4C076CC01

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA18

4C084BA19

4C084BA23

4C084CA59

4C084DC50

4C084NA14

4C084ZA15

4C084ZA16

4C085AA13

4C085AA16

4C085AA21

4C085AA34

4C085BB31

4C085BB36

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA41

4H045BA70

4H045BA71

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本明細書において、抗体に連結されたアミロイド反応性ペプチドを含む修飾免疫グロブリン、ならびにヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体、及び抗体－ペプチド融合タンパク質が提供される。また、修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することによって、アミロイド系疾患を治療する方法も本明細書に提供される。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

修飾免疫グロブリンであって、
アミロイド反応性ペプチドと、
ヒトアミロイド原線維に結合するＩｇ抗体またはその機能的断片と、を含み、前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、重鎖と軽鎖とを含み、前記ペプチド及び前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、前記Ｉｇ軽鎖のＮ末端及び／または前記Ｉｇ重鎖のＮ末端及び／またはＣ末端で一緒に連結される、前記修飾免疫グロブリン。

【請求項2】

前記アミロイド反応性ペプチドが、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項3】

前記アミロイド反応性ペプチド及び前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、前記Ｉｇ軽鎖のＮ末端または前記Ｉｇ重鎖のＮ末端で一緒に連結される、請求項１または２に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項4】

前記修飾免疫グロブリンが、前記アミロイド反応性ペプチドと前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片との間にスペーサー配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項5】

前記修飾免疫グロブリンが、少なくとも２つのアミロイド反応性ペプチドを含み、前記アミロイド反応性ペプチドが、同じペプチドまたは異なるペプチドである、請求項１～４のいずれかに記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項6】

前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、
前記ＶＬが、配列番号２０に記載のＣＤＲＬ１、配列番号２１に記載のＣＤＲＬ２、及び配列番号２２に記載のＣＤＲＬ３を含み、
前記ＶＨが、配列番号１７に記載のＣＤＲＨ１、配列番号１８に記載のＣＤＲＨ２、配列番号１９に記載のＣＤＲＨ３を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項7】

前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、キメラ抗体またはその機能的断片である、請求項６に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項8】

前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、
ａ）前記ＶＬが、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、または
ｂ）前記ＶＬが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、
ｃ）前記ＶＬが、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項9】

前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、ヒトフレームワーク配列を含む、請求項１～６及び８のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項10】

前記Ｉｇ抗体が、ヒトＦｃ領域を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項11】

前記修飾免疫グロブリンが、ヒト化されている、請求項１～６、８、及び１０のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項12】

前記修飾免疫グロブリンが、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項13】

アミロイド反応性ペプチドに融合されたヒトアミロイド原線維に結合する抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質であって、前記抗体が、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む、前記抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項14】

前記ＶＬが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項１３に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項15】

前記抗体が、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１３または１４に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項16】

ａ）前記ＶＬが、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、または
ｂ）前記ＶＬが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、
ｃ）前記ＶＬが、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項１３に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項17】

前記ＶＬが、
ａ．位置３６のＴｙｒ、
ｂ．位置３７のＬｅｕ、
ｃ．位置４６のＬｅｕ、
ｄ．位置８５のＬｅｕ、及び
ｅ．位置８７のＰｈｅ、からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
前記ＶＨが、
ａ．位置３７のＶａｌ、
ｂ．位置４８のＬｅｕ、
ｃ．位置６７のＬｅｕ、
ｄ．位置６８のＳｅｒ、
ｅ．位置７１のＬｙｓ、
ｆ．位置７６のＳｅｒ、
ｇ．位置７８のＶａｌ、
ｈ．位置７９のＬｅｕ、
ｉ．位置８０のＰｈｅ、
ｊ．位置８９のＴｈｒ、
ｋ．位置９３のＶａｌ、及び
ｌ．位置９４のＴｈｒ、からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる、請求項１４または１６に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質

【請求項18】

前記ＶＬが、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項１７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項19】

前記ＶＬが、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項１７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項20】

前記ＶＬが、配列番号３２～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項21】

前記ＶＨが、配列番号４３～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７または２０に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項22】

前記ＶＬが、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項23】

前記ＶＬが、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項24】

前記アミロイド反応性ペプチドが、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１３～２３のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項25】

前記アミロイド反応性ペプチドが、前記ＶＬのＮ末端または前記ＶＨのＮ末端に融合される、請求項１３～２４のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項26】

前記アミロイド反応性ペプチドが、スペーサーによって前記ＶＬのＮ末端に融合される、または前記ＶＨのＮ末端に融合される、請求項２５に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項27】

前記スペーサーが、ペプチドスペーサーである、請求項２６に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項28】

前記スペーサーが、アミノ酸配列ＧＧＧＹＳを含む、請求項２７に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項29】

前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する、請求項１３～２８のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合。

【請求項30】

請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン、または請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質を含む、医薬組成物。

【請求項31】

請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン、または請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする、核酸（複数可）。

【請求項32】

請求項３１に記載の核酸（複数可）を含む、ベクター。

【請求項33】

請求項３２に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項34】

修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を作製する方法であって、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする前記ベクターの発現に好適な条件下で、請求項３３に記載の宿主細胞を培養することと、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質を回収することと、を含む、前記方法。

【請求項35】

アミロイド関連障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合物を投与することを含む、前記方法。

【請求項36】

前記アミロイド関連障害が、アミロイドーシスである、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記アミロイド関連障害が、ＡＬ、ＡＨ、Ａβ２Ｍ、ＡＴＴＲ、トランスサイレチン、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬＥｃｔ２、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、またはＡβアミロイドーシスからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

前記対象が、ヒトである、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化する方法であって、アミロイド沈着物を、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン、または請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることを含む、前記方法。

【請求項40】

前記アミロイド沈着物が、除去される、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記アミロイド沈着物が、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質によってオプソニン化される、請求項３９または４０に記載の方法。

【請求項42】

クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化する方法であって、アミロイド沈着物を、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン、または請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることを含む、前記方法。

【請求項43】

クリアランスのために前記アミロイド沈着物を標的化することが、前記アミロイド沈着物のクリアランスをもたらす、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

クリアランスが、前記アミロイド沈着物のオプソニン化から生じる、請求項４２または４３に記載の方法。

【請求項45】

前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質における前記アミロイド反応性ペプチドの半減期が、前記アミロイド反応性ペプチド単独と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれ以上増加する、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

修飾免疫グロブリンを生成する方法であって、
第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターを提供することであって、
前記第１の発現ベクターが、Ｉｇ抗体軽鎖またはその機能的断片をコードする第１の核酸配列を含み、
前記第２の発現ベクターが、Ｉｇ抗体重鎖またはその機能的断片をコードする第２の核酸配列を含み、
前記第１の発現ベクター及び／または前記第２の発現ベクターが、第１のペプチドをコードする第３の核酸配列を含み、前記第３の核酸配列が、前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列に隣接して位置する、前記提供することと、
前記第１及び前記第２の発現ベクターを細胞に挿入することであって、前記細胞における前記第１及び前記第２の発現ベクターの発現が、前記第１のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす、前記挿入することと、を含む、前記方法。

【請求項47】

前記第１の発現ベクター及び／または前記第２の発現ベクターが、第２のペプチドをコードする第４の核酸配列を含み、前記第４の核酸配列が、前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列に隣接して位置する、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記細胞における前記第１及び前記第２の発現ベクターの発現が、前記第１のペプチド及び前記第２のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

スペーサー核酸配列が、前記第３の核酸配列と前記第１の核酸配列及び／または前記第２の第１の核酸配列との間に位置する、請求項４６に記載の方法。

【請求項50】

アミロイド系疾患に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる対象を治療する方法であって、
ａ）前記対象がアミロイド沈着物を有するかどうかを、
ｉ）前記対象に、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することであって、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、検出可能な標識を含む、前記投与すること、及び
ｉｉ）前記検出可能な標識に関連するシグナルが、前記対象から検出され得るかどうかを判定すること、によって判定することと、
ｂ）前記シグナルが検出された場合、前記対象にアミロイドーシス治療を施すことと、を含む、前記方法。

【請求項51】

シグナルが検出されない場合、アミロイド沈着物のその後の発生について、前記対象を監視する、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記シグナルの強度を決定することと、前記シグナルを閾値と比較することと、をさらに含み、前記閾値を超えた場合、前記対象がアミロイド沈着物を有すると判定される、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記アミロイドーシス治療が、前記対象に、請求項１～１２のいずれかに記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１３～２９のいずれかに記載の抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することを含む、請求項５０～５２のいずれかに記載の方法。

【請求項54】

前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質の投与が、前記対象における前記アミロイド沈着物のクリアランスをもたらす、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法であって、前記対象に、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することであって、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、検出可能な標識を含む、前記投与することと、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体ペプチド融合タンパク質からのシグナルを検出することと、を含む、前記方法。

【請求項56】

前記対象が、アミロイドを含まないか、または意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、もしくは１つ以上の関連する形質細胞疾患を患っていると判定される、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。

【請求項57】

リガンドを検出する方法であって、
前記リガンドを、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることであって、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、検出可能な標識を含み、前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質の前記ペプチドが、前記リガンドに対する結合親和性を有する、前記接触させることと、
前記検出可能な標識からのシグナルを判定し、それによって、前記リガンドを検出することと、を含む、前記方法。

【請求項58】

ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、
前記ＶＬが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、
前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、
前記ＶＬが、
ａ．位置３６のＴｙｒ、
ｂ．位置３７のＬｅｕ、
ｃ．位置４６のＬｅｕ、
ｄ．位置８５のＬｅｕ、及び
ｅ．位置８７のＰｈｅ、からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
前記ＶＨが、
ａ．位置３７のＶａｌ、
ｂ．位置４８のＬｅｕ、
ｃ．位置６７のＬｅｕ、
ｄ．位置６８のＳｅｒ、
ｅ．位置７１のＬｙｓ、
ｆ．位置７６のＳｅｒ、
ｇ．位置７８のＶａｌ、
ｈ．位置７９のＬｅｕ、
ｉ．位置８０のＰｈｅ、
ｊ．位置８９のＴｈｒ、
ｋ．位置９３のＶａｌ、及び
ｌ．位置９４のＴｈｒ、
からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる、前記ヒト化抗体。

【請求項59】

前記ＶＬが、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。

【請求項60】

前記ＶＬが、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。

【請求項61】

前記ＶＬが、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。

【請求項62】

前記ＶＨが、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５８または６１に記載のヒト化抗体。

【請求項63】

前記ＶＬが、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。

【請求項64】

前記ＶＬが、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５８に記載のヒト化抗体。

【請求項65】

ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、
ａ）前記ＶＬが、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、または
ｂ）前記ＶＬが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、前記ヒト化抗体。

【請求項66】

ＶＬが、
ａ．位置３６のＴｙｒ、
ｂ．位置３７のＬｅｕ、
ｃ．位置４６のＬｅｕ、
ｄ．位置８５のＬｅｕ、及び
ｅ．位置８７のＰｈｅ、
からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
前記ＶＨが、
ａ．位置３７のＶａｌ、
ｂ．位置４８のＬｅｕ、
ｃ．位置６７のＬｅｕ、
ｄ．位置６８のＳｅｒ、
ｅ．位置７１のＬｙｓ、
ｆ．位置７６のＳｅｒ、
ｇ．位置７８のＶａｌ、
ｈ．位置７９のＬｅｕ、
ｉ．位置８０のＰｈｅ、
ｊ．位置８９のＴｈｒ、
ｋ．位置９３のＶａｌ、及び
ｌ．位置９４のＴｈｒ、
からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み、
アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる、請求項６５に記載のヒト化抗体。

【請求項67】

前記抗体が、全長抗体、Ｆａｂ断片、またはｓｃＦｖである、請求項５８～６６のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項68】

前記抗体が、Ｆｃ領域を含む、請求項５８～６６のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項69】

前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項６８に記載のヒト化抗体。

【請求項70】

前記ヒト化抗体が、検出可能な標識にコンジュゲートされる、請求項５８～６９のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項71】

前記ヒト化抗体が、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、ＫＥＮ ｈＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、及び／またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物に結合する、請求項５８～７０のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項72】

前記ヒト化抗体が、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する、請求項５８～７１のいずれか１項に記載のヒト化抗体。

【請求項73】

請求項５８～７２のいずれか１項に記載のヒト化抗体を含む、医薬組成物。

【請求項74】

請求項５８～７３のいずれか１項に記載のヒト化抗体をコードする、核酸（複数可）。

【請求項75】

請求項７４に記載の核酸（複数可）を含む、ベクター。

【請求項76】

請求項７５に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項77】

前記ヒト化抗体をコードする前記ベクターの発現に好適な条件下で、請求項７６に記載の宿主細胞を培養することと、前記ヒト化抗体を回収することと、を含む、ヒト化抗体を作製する方法。

【請求項78】

アミロイド関連障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、有効量の請求項５８～７３のいずれか１項に記載のヒト化抗体を投与することを含む、前記方法。

【請求項79】

前記アミロイド関連障害が、アミロイドーシスである、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記アミロイド関連障害が、ＡＬ、ＡＨ、Ａβ２Ｍ、ＡＴＴＲ、トランスサイレチン、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬＥｃｔ２、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、またはＡβアミロイドーシスからなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。

【請求項81】

前記対象が、ヒトである、請求項７８～８０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

アミロイド系疾患に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる対象を治療する方法であって、
前記対象がアミロイド沈着物を有するかどうかを、
請求項５８～７３のいずれか１項に記載のヒト化抗体を検出可能に標識すること、
前記対象に前記ヒト化抗体を投与すること、
前記検出可能な標識に関連するシグナルが、前記対象から検出され得るかどうかを判定すること、によって判定することと、及び
前記シグナルが検出された場合、前記対象にアミロイドーシス治療を施すことと、を含む、前記方法。

【請求項83】

シグナルが検出されない場合、アミロイド沈着物のその後の発生について、前記対象を監視する、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

前記シグナルの強度を決定することと、前記シグナルを閾値と比較することと、をさらに含み、前記閾値を超えた場合、前記対象がアミロイド沈着物を有すると判定される、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記アミロイドーシス治療が、前記対象に、請求項５８～７３のいずれか１項に記載のヒト化抗体を投与することを含む、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法であって、請求項５８～７３のいずれか１項に記載のヒト化抗体を検出可能に標識することと、前記対象に前記ヒト化抗体を投与することと、前記ヒト化抗体からのシグナルを検出することと、を含む、前記方法。

【請求項87】

前記対象が、アミロイドを含まないか、または意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、もしくは１つ以上の関連する形質細胞疾患を患っていると判定される、請求項８２～８６のいずれかに記載の方法。

【請求項88】

前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項89】

前記修飾免疫グロブリンまたは前記抗体－ペプチド融合タンパク質が、前記アミロイド反応性ペプチドのＮ末端側にあるスペーサーを含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン、または、請求項１３～２９のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項90】

ａ）前記ＶＬが、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項１６に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項91】

前記ＶＬが、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項９０に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項92】

前記ＶＬが、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９０に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項93】

前記アミロイド反応性ペプチドが、配列番号１～１４からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９０～９２のいずれか１項に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質。

【請求項94】

ａ）前記ＶＬが、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項６５に記載のヒト化抗体。

【請求項95】

前記ＶＬが、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項９４に記載のヒト化抗体。

【請求項96】

前記ＶＬが、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９４に記載のヒト化抗体。

【請求項97】

ａ）前記ＶＬが、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、前記ＶＨが、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項８に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項98】

前記ＶＬが、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含み、前記ＶＨが、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む、請求項９７に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項99】

前記ＶＬが、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９７に記載の修飾免疫グロブリン。

【請求項100】

前記アミロイド反応性ペプチドが、配列番号１～１４からなる群に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９７～９９のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１１月１５日に出願された米国仮出願第６２／９３６，００２号、及び２０２０年９月４日に出願された米国仮出願第６３／０７４，９１２号の優先権を主張し、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、その全体において参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１６５９９２０００１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年１１月１２日、サイズ：５２ＫＢ）。

【0003】

本出願は、アミロイド沈着物を標的とするための修飾免疫グロブリン、ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体、及び抗体－ペプチド融合タンパク質、ならびにそれらを使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

アミロイドーシスは、タンパク質性原線維及びヘパラン硫酸プロテオグリカンが重要な器官及び組織に凝集及び沈着することを特徴とする致命的なタンパク質フォールディング障害である（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。アミロイドの絶え間ない蓄積は、必ず臓器機能障害及び重篤な罹患または死亡につながる。沈着物は、アルツハイマー病、ハンチントン病、もしくはプリオン病の患者のように脳性であり得るか、または軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシス及び２型糖尿病の患者のように末梢性であり得る。局所性または全身性へのさらなるサブグループ化は、それぞれ、前駆体タンパク質が局所的に（沈着部位で）産生されるか、または血流中で循環し、遠隔の解剖学的部位で沈着するかを示す（非特許文献５）。アミロイドはあらゆる臓器や組織に影響を与える可能性があるが、家族性または散発性の末梢アミロイド疾患の患者では、腎臓、膵臓、肝臓、脾臓、神経組織、心臓が主要な沈着部位を構成する。アルツハイマー病は現在４００万人以上のアメリカ人に影響を与えており、この数値は２０５０年までに１６００万人以上に増加すると推定されている。これは、アミロイドーシスの最も一般的な形態であり、社会経済的に最も大きな影響を与えている。対照的に、末梢性（または全身性）アミロイドーシスは難病（ｏｒｐｈａｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）であるが、米国だけで年間５，０００人以上の新規患者を占める。

【0005】

これらのうち、主要な末梢性アミロイドーシスは、軽鎖関連（ＡＬ）アミロイドーシスであり、これは、免疫グロブリン軽鎖タンパク質からなる原線維の沈着をもたらす散発的なモノクローナル形質細胞異常症である。ＡＬは全末梢アミロイド症例の約３分の２を占め、米国では年間１０万人当たり約１．４人の発症率（計算値）を有し、急性リンパ球性白血病及び慢性骨髄性白血病に匹敵する（非特許文献６）。ＡＬは、関連する形質細胞異常多発性骨髄腫の５分の１と一般的なものであるが、部分的には、臓器破壊の急速な進行性、効果的な抗アミロイド治療薬の欠如、及び臓器不全が生じる前に疾患を効果的に診断できないことに起因して、生存期間中央値がわずか１３．２ヶ月であり、より破壊的であると言える。診断時から１０年以上生存する患者は、全ＡＬ患者の５％未満である（非特許文献７）。さらに、心ＡＬアミロイドーシス患者の生存期間中央値は、５ヶ月未満である。

【0006】

ＡＴＴＲは、全身性アミロイドーシスの形態である。ＡＴＴＲアミロイドーシスを有する患者の２５％は、診断から２４ヶ月以内に死亡する（非特許文献８）。現在の療法では、臓器損傷を防止することはできない。ＡＴＴＲアミロイドーシスは、トランスサイレチン（ｔｒａｎｓｔｈｅｒｙｒｅｔｉｎ）（ＴＴＲ）原線維によって引き起こされる。トランスサイレチンは、肝臓によって作られるタンパク質であり、血中の甲状腺ホルモン及びビタミンＡを運ぶのを助ける。通常、ＴＴＲは、４つの一本鎖モノマーからなる四量体である。遺伝性ＡＴＴＲアミロイドーシスでは、ＴＴＲ遺伝子変異は、タンパク質を不安定化させ、四量体の単量体への解離を引き起こし、それがアミロイド原線維に凝集すると考えられている。野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスでは、正常ＴＴＲタンパク質が不安定になり、ミスフォールディングし、アミロイド原線維を形成する。

【0007】

次いで、これらのアミロイド原線維は、全身の複数の臓器に蓄積する。例えば、手首では、手根管と呼ばれる狭い経路に蓄積する。これは、手根管症候群を引き起こし、手や腕がしびれてひりひりすることがある。脊柱管では、脊柱の狭小化（脊柱管狭窄）が引き起こされる可能性がある。心臓では、心不全及び／または心房細動と呼ばれる不規則な心拍が引き起こされる可能性がある。

【0008】

米国における末梢性アミロイドーシスの別の一般的な形態は、炎症関連（ＡＡ）アミロイドーシスであり、これは、関節炎、結核、家族性地中海熱などの慢性炎症性障害に関連する。ＡＡの発症率は、ヨーロッパの特定の地域で最大であり、その頻度は、民族間で変化する（非特許文献９）。家族性地中海熱が蔓延し、治療されていない地域では、ＡＡの発症率が１００％であり得る。ヨーロッパでは、デンマークで実施された剖検研究に基づいて、ＡＡの発症率は０．８６％と推定されているが（非特許文献１０）、リウマチまたは乾癬性関節炎の患者では、ＡＡの発症率は２６％と高くなり得る。このような高い有病率は、疾患をより早く検出するためのスクリーニングプログラムを必要とし得る。アミロイドの沈着は、アミロイド原線維の前駆体である血清アミロイドタンパク質Ａ（ｓＡＡ）の血漿濃度の持続的な増加と関連付けられる（非特許文献１１）。ＡＡは、沈着する前駆体タンパク質の種類において、ＡＬとは異なるが、双方は、線維形成及び沈着の関連する共通の機構的な特徴を共有する（非特許文献１２、非特許文献１３）。

【0009】

アミロイドの病因が十分に確立されている障害に加えて、アミロイドの構造的特性及び着色特性を有する線維性沈着物は、他の症候群において特定されているが、それらの疾患状態との関連性はまだ確立されていない。例えば、２型糖尿病において、膵島アミロイド前駆体タンパク質（ＩＡＰＰ）は、ランゲルハンス島にアミロイドとして沈着する（非特許文献１４）。ＩＡＰＰの凝集は、膵臓細胞に毒性のあるオリゴマー構造をもたらす（非特許文献１５）。したがって、１型糖尿病患者におけるＩＡＰＰアミロイドの形成が、β細胞の破壊に寄与し、インスリン依存への移行を先導することが示唆されている（非特許文献１６）。別の例では、アポリポタンパク質Ａ－Ｉから構成されるアミロイド原線維を含有するプラークは、アテローム硬化性頸動脈を有する患者の半分以上において特定されている（非特許文献１７、非特許文献１８）。これらの原線維の沈着は、高齢の患者ではより一般的であったが、ａｐｏＡ－Ｉは、間違いなく、プラーク発生の初期に存在する（非特許文献１９）。最後の例として、Ａｐｏ－Ａ－Ｉアミロイドは、膝関節置換手術を受けた患者から得られた膝関節半月板においても最近同定され、関節の物理的劣化に寄与し得る（非特許文献２０）。

【0010】

合計で、２９種類を超えるタンパク質が、アミロイド沈着物中の原線維の構成要素として化学的または血清学的に同定されている。疾患を鑑別し、治療を決定し、予後を確立するのは、これらのタンパク質の性質である。アミロイド原線維は、臨床的に不均一な疾患群と関連しており、構造的に異なり、機能的に多様な前駆体タンパク質から形成され得るが、沈着物自体は、原線維構造、原線維エピトープ、及びヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）を含む類似の付属分子の発生を含む、顕著に類似したいくつかの特徴を共有する。アミロイドは、不均一な複合体であり、これには、原線維に加えて、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、特に、パールカンＨＳＰＧが含まれる（非特許文献２１、非特許文献２２、非特許文献２３、非特許文献２４、非特許文献２５、非特許文献２６）。図１に、アミロイド及びアミロイド関連障害の部分的なリストを示す。

【0011】

これまで、臓器機能の回復を促進し、予後の改善をもたらし得るアミロイド沈着物を除去するための最も効果的な治療的介入は、免疫療法の手段としてのアミロイド反応性抗体の使用を伴う。アミロイド関連疾患のためのいくつかの免疫療法（抗体）が開発されており、ＡＬアミロイドーシスの治療のためのモノクローナル抗体１１－１Ｆ４、ＡＬアミロイドーシスの患者のためのＮＥＯＤ００１、アミロイドーシスのためのＧＳＫ２３９８８５２（抗ＳＡＰモノクローナル抗体）、アルツハイマー病のためのソラネズマブ、アルツハイマー病のための静脈内ＩｇＧ（ＩＶＩＧ）、及びアルツハイマー病のためのバピニューズマブが挙げられる。これらのアプローチの各々は、限界があるか、後期臨床試験（第２／３相）で主要な結果を満たしていなかった。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｍｅｒｌｉｎｉ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９，５８３－５９６

【非特許文献2】Ｍｅｒｌｉｎｉ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２５５，１５９－１７８

【非特許文献3】Ｄｅ Ｌｏｒｅｎｚｉ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１１，１０６５－１０８４

【非特許文献4】Ｍｅｒｌｉｎｉ，Ｇ．（２００４）Ｎｅｔｈ．Ｊ．Ｍｅｄ．６２，１０４－１０５

【非特許文献5】Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａｍｙｌｏｉｄ．１４，１７９－１８３

【非特許文献6】Ｇｒｏｕｐ，Ｕ．Ｓ．Ｃ．Ｓ．Ｗ．（２００７）Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ：１９９９－２００３ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅｂ－Ｂａｓｅｄ Ｒｅｐｏｒｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ａｔｌａｎｔａ

【非特許文献7】Ｃｏｍｅｎｚｏ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ ９９，４２７６－４２８２

【非特許文献8】Ｇｅｒｔｚ ａｎｄ Ｄｉｓｐｅｎｚｉｅｒｉ ＪＡＭＡ ３２４（１）７９－８９（２００２）

【非特許文献9】Ｂｕｃｋ，Ｆ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．２，３７２－３７７

【非特許文献10】Ｌｏｆｂｅｒｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｃｔａ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ，ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ，ｅｔ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ ９５，２９７－３０２

【非特許文献11】Ｒｏｃｋｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．４４０，１１１－１２２

【非特許文献12】Ｒｏｃｋｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．２１０，４７８－４８７

【非特許文献13】Ｒｏｃｋｅｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１０２９－１０３８

【非特許文献14】Ｊａｉｋａｒａｎ，Ｅ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５３７，１７９－２０３

【非特許文献15】Ｌｉｎ，Ｃ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５６，１３２４－１３３２

【非特許文献16】Ｊａｉｋａｒａｎ，Ｅ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５３７，１７９－２０３

【非特許文献17】Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７，１１８６－１１９２

【非特許文献18】Ｍｕｃｃｈｉａｎｏ，Ｇ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９３，２７０－２７５

【非特許文献19】Ｖｏｌｌｍｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．Ａ．Ｐａｔｈｏｌ．Ａｎａｔ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．４１９，７９－８８

【非特許文献20】Ｓｏｌｏｍｏｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．５４，３５４５－３５５０

【非特許文献21】Ａｎｃｓｉｎ，Ｊ．Ｂ．（２００３）Ａｍｙｌｏｉｄ １０，６７－７９

【非特許文献22】Ａｉｌｌｅｓ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．６９，４４３－４４８

【非特許文献23】Ｋｉｓｉｌｅｖｓｋｙ，Ｒ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．９，２３－２４

【非特許文献24】Ｋｉｓｉｌｅｖｓｋｙ，Ｒ．（１９９０）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．６３，５８９－５９１

【非特許文献25】Ｓｎｏｗ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．５６，１２０－１２３

【非特許文献26】Ｌｉ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２，６４７３－６４７７

【発明の概要】

【0013】

ヒトアミロイド原線維に結合する抗体またはその機能体に連結されたアミロイド反応性ペプチドを含む修飾免疫グロブリン及び抗体－ペプチド融合タンパク質が、本明細書に提供される。本明細書に提供される修飾免疫グロブリン及び抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体及びアミロイド反応性ペプチドがヒトアミロイド原線維に結合することによって、ヒトアミロイド原線維に対して予想外に高い親和性を示す。一部の実施形態では、ペプチドは、アミロイド沈着物をクリアするための抗体の増強された活性を提供する。特に、抗体Ｆｃは、例えば、オプソニン化によって、アミロイド原線維及び沈着物を貪食及びクリアすることができるマクロファージを動員し、アミロイド反応性ペプチドは、多様なアミロイド原線維及びヘパラン硫酸グリコサミノグリカンに結合することができる。驚くべきことに、Ｎ末端アミロイド反応性ペプチドにコンジュゲートされたヒト化抗アミロイド抗体は、アミロイド繊維に結合するキメラ抗体よりも有意に優れたオプソニン化を提供する。さらに、ＶＨ９／ＶＬ４などの特定のヒト化抗体は、マウス抗体またはキメラ抗体のいずれかよりも高い親和性でアミロイド原線維に結合する。

【0014】

アミロイドーシスを検出及び治療する方法、または本明細書に提供される修飾免疫グロブリンを使用する方法も、本明細書に提供される。

【0015】

さらに、修飾免疫グロブリンをコードする核酸が本明細書に提供される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンをコードする核酸を含む宿主細胞が本明細書に提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞である。

【0016】

一態様では、本発明は、アミロイド反応性ペプチドと、ヒトアミロイド原線維に結合するＩｇ抗体またはその機能的断片とを含む、修飾免疫グロブリンを提供し、Ｉｇ抗体またはその機能的断片は、重鎖と軽鎖とを含み、ペプチド及びＩｇ抗体またはその機能的断片は、Ｉｇ軽鎖のＮ末端、及び／またはＩｇ重鎖のＮ末端及び／またはＣ末端で一緒に連結される。

【0017】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つと少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0018】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチド及びＩｇ抗体またはその機能的断片は、Ｉｇ軽鎖のＮ末端で一緒に連結される。

【0019】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、アミロイド反応性ペプチドとＩｇ抗体またはその機能的断片との間にスペーサー配列を含む。

【0020】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、少なくとも２つのアミロイド反応性ペプチドを含み、アミロイド反応性ペプチドは、同じペプチドまたは異なるペプチドである。

【0021】

一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のＣＤＲＬ１、配列番号２１に記載のＣＤＲＬ２、及び配列番号２２に記載のＣＤＲＬ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のＣＤＲＨ１、配列番号１８に記載のＣＤＲＨ２、配列番号１９に記載のＣＤＲＨ３を含む。

【0022】

一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片は、キメラ抗体またはその機能的断片である。

【0023】

一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ａ）ＶＬは、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、またはｂ）ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0024】

一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片は、ヒトフレームワーク配列を含む。

【0025】

一部の実施形態では、Ｉｇ抗体は、ヒトＦｃ領域を含む。

【0026】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、少なくとも２つのアミロイド反応性ペプチドを含み、ペプチドは、同じペプチドまたは異なるペプチドである。

【0027】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する。

【0028】

別の態様では、アミロイド反応性ペプチドに融合されたヒトアミロイド原線維に結合する抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質が本明細書に提供され、抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含む。

【0029】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0030】

一部の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。

【0031】

一部の実施形態では、ａ）ＶＬは、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、またはｂ）ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、またはｃ）ＶＬは、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0032】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0033】

一部の実施形態では、ＶＬは、位置４６にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、ＶＨは、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む。

【0034】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含む。

【0035】

一部の実施形態では、ＶＬは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む：位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅ。一部の実施形態では、ＶＨは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む：位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒ（アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って付番される）。

【0036】

一部の実施形態では、ＶＬは、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、ＶＨは、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含む。

【0037】

一部の実施形態では、ＶＬは、位置４６にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、ＶＨは、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む。

【0038】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３２～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0039】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４３～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0040】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0041】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む。

【0042】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0043】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、ＶＬまたはＶＨのＮ末端に融合される。

【0044】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、スペーサーによってＶＬまたはＶＨのＮ末端に融合される。一部の実施形態では、スペーサーは、ペプチドスペーサーである。一部の実施形態では、スペーサーは、アミノ酸配列ＧＧＧＹＳを含む。

【0045】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する。

【0046】

別の態様では、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。

【0047】

別の態様では、修飾免疫グロブリン及び抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）が本明細書に提供される。別の態様では、核酸（複数可）を含むベクターが本明細書に提供される。別の態様では、ベクターを含む宿主細胞が本明細書に提供される。

【0048】

別の態様では、本発明は、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を作製する方法を提供し、段落［００４５］に記載の宿主細胞を、培修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質をコードするベクターの発現に好適な条件下で培養することと、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を回収することと、を含む。

【0049】

別の態様では、本発明は、アミロイド関連障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象に、有効量の修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することを含む。

【0050】

一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、アミロイドーシスである。

【0051】

一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、ＡＬ、ＡＨ、Ａβ２Ｍ、ＡＴＴＲ、トランスサイレチン、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬＥｃｔ２、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、またはＡβアミロイドーシスからなる群から選択される。

【0052】

一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0053】

別の態様では、本発明は、クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化する方法を提供し、アミロイド沈着物を、本明細書に提供される修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることを含む。一部の実施形態では、アミロイド沈着物が除去される。一部の実施形態では、アミロイド沈着物は、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質によってオプソニン化される。

【0054】

別の態様では、アミロイド沈着物を修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることを含む、クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化する方法が本明細書に提供される。

【0055】

一部の実施形態では、クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化することは、アミロイド沈着物のクリアランスをもたらす。

【0056】

一部の実施形態では、クリアランスは、アミロイド沈着物のオプソニン化から生じる。

【0057】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質におけるアミロイド反応性ペプチドの半減期は、アミロイド反応性ペプチド単独と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれ以上増加する。

【0058】

別の態様では、修飾免疫グロブリンを生成する方法が本明細書に提供され、当該方法は、第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターを提供することであって、第１の発現ベクターが、Ｉｇ抗体軽鎖またはその機能的断片をコードする第１の核酸配列を含み、第２の発現ベクターが、Ｉｇ抗体重鎖またはその機能的断片をコードする第２の核酸配列を含み、第１の発現ベクター及び／または第２の発現ベクターが、第１のペプチドをコードする第３の核酸配列を含み、第３の核酸配列が、第１の核酸配列及び／または第２の核酸配列に隣接して位置する、提供することと、第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターを細胞に挿入することであって、細胞における第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターの発現が、第１のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす、挿入することと、を含む。

【0059】

一部の実施形態では、第１の発現ベクター及び／または第２の発現ベクターは、第２のペプチドをコードする第４の核酸配列を含み、第４の核酸配列は、第１の核酸配列及び／または第２の核酸配列に隣接して位置する。

【0060】

一部の実施形態では、細胞における第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターの発現は、第１のペプチド及び第２のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす。

【0061】

一部の実施形態では、スペーサー核酸配列は、第３の核酸配列と第１の核酸配列及び／または第２の第１の核酸配列との間に位置する。

【0062】

別の態様では、本発明は、アミロイド系疾患に罹患している対象、またはアミロイド系疾患に罹患していると疑われる対象を治療する方法を提供し、ｉ）対象に、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することであって、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合が、検出可能な標識を含む、投与することと、ｉｉ）検出可能な標識に関連するシグナルが対象から検出され得るかどうかを判定することと、ｂ）シグナルが検出された場合、対象に、アミロイドーシス治療を施すことと、を含む。

【0063】

一部の実施形態では、シグナルが検出されなかった場合、本方法は、アミロイド沈着物のその後の発生について、対象を監視することをさらに含む。

【0064】

一部の実施形態では、本方法は、シグナルの強度を決定することと、シグナルを閾値と比較することと、をさらに含み、閾値を超えると、対象は、アミロイド沈着物を有すると判定される。

【0065】

一部の実施形態では、アミロイドーシス治療は、対象に、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することを含む。

【0066】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質の投与は、対象におけるアミロイド沈着物のクリアランスをもたらす。

【0067】

別の態様では、本発明は、対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法を提供し、対象に、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することであって、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合が、検出可能な標識を含む、投与することと、修飾免疫グロブリンまたは抗体ペプチド融合タンパク質からのシグナルを検出することと、を含む。

【0068】

一部の実施形態では、対象は、アミロイドを含まないか、または意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、もしくは１つ以上の関連する形質細胞疾患を患っていると判定される。

【0069】

別の態様では、本発明は、リガンドを検出する方法を提供し、段落のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合を検出可能に標識することであって、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質のペプチドが、リガンドに対する結合親和性を有する、標識することと、リガンドを修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることと、検出可能な標識からのシグナルを決定し、それによって、リガンドを検出することと、を含む。

【0070】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンまたは抗体ペプチド融合タンパク質は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。

【0071】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド反応性ペプチドのＮ末端側にあるスペーサーを含む。

【0072】

一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、抗体のＶＨのＮ末端に連結される。

【0073】

一態様では、ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体が本明細書に提供され、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含み：位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅ、ＶＨは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む：位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒ（ここで、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って付番される）。

【0074】

一部の実施形態では、ＶＬは、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、ＶＨは、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含む。

【0075】

一部の実施形態では、ＶＬは、位置４６にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含み、ＶＨは、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含む。

【0076】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0077】

一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0078】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0079】

一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む。

【0080】

別の態様では、ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体が本明細書に提供され、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ａ）ＶＬは、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、またはｂ）ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むか、またはｃ）ＶＬは、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0081】

一部の実施形態では、ＶＬは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む：位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅ、ＶＨは、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含む：位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒ（ここで、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って付番される）。

【0082】

一部の実施形態では、抗体は、全長抗体、Ｆａｂ断片、またはｓｃＦｖである。

【0083】

一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域を含む。

【0084】

一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃ領域である。

【0085】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。

【0086】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、ＫＥＮ ｈＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、及び／またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物に結合する。

【0087】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する。

【0088】

別の態様では、ヒト化抗体を含む薬学的組成物が本発明に提供される。別の態様では、本発明は、ヒト化抗体をコードする核酸（複数可）を提供する。別の態様では、核酸（複数可）を含むベクターが本明細書に提供される。別の態様では、ベクターを含む宿主細胞が本明細書に提供される。

【0089】

別の態様では、本発明は、ヒト化抗体を作製する方法を提供し、ヒト化抗体をコードするベクターの発現に好適な条件下で、段落［００８８］に記載の宿主細胞を培養することと、ヒト化抗体を回収することと、を含む。

【0090】

別の態様では、本発明は、アミロイド関連障害を有する対象を治療する方法を提供し、対象に、有効量のヒト化抗体を投与することを含む。一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、アミロイドーシスである。一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、ＡＬ、ＡＨ、Ａβ２Ｍ、ＡＴＴＲ、トランスサイレチン、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬＥｃｔ２、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、またはＡβアミロイドーシスからなる群から選択される。一部の実施形態では、対象はヒトである。

【0091】

別の態様では、本発明は、アミロイド系疾患に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる対象を治療する方法を提供し、当該方法は、ヒト化抗体を検出可能に標識すること、対象にヒト化抗体を投与すること、検出可能な標識に関連するシグナルが対象から検出され得るかどうかを判定すること、によって、対象がアミロイド沈着物を有するかどうかを判定することと、シグナルが検出された場合、対象にアミロイドーシス治療を施すことと、を含む。

【0092】

一部の実施形態では、シグナルが検出されなかった場合、本方法は、アミロイド沈着物のその後の発生について、対象を監視することをさらに含む。

【0093】

一部の実施形態では、本方法は、シグナルの強度を決定することと、シグナルを閾値と比較することと、をさらに含み、閾値を超えると、対象がアミロイド沈着物を有すると判定される。一部の実施形態では、アミロイドーシス治療は、対象にヒト化抗体を投与することを含む。

【0094】

別の態様では、本発明は、対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法を提供し、ヒト化抗体を検出可能に標識することと、対象にヒト化抗体を投与することと、ヒト化抗体からのシグナルを検出することと、を含む。

【0095】

一部の実施形態では、対象は、アミロイドを含まないか、または意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、もしくは１つ以上の関連する形質細胞疾患を患っていると判定される。

【図面の簡単な説明】

【0096】

【図1】アミロイド及びアミロイド関連障害の部分的なリストを示す。

【図2】Ｉｇ－ペプチド融合物の概略図である。パネルＡは、Ｉｇ軽鎖のＮ末端に融合されたペプチドｐ５（配列番号１）の概略図を示す。パネルＢは、Ｉｇ－ペプチド融合物を示し、ペプチドｐ５（配列番号１）に融合された２つのＩｇ軽鎖を有するＩｇ構造を示している。

【図3】アミロイド沈着物をクリアするためのＩｇ－ペプチド融合物（縮尺通りではない）の、提案された作用様式の概略図を示す。Ｉｇ－ペプチドは、アミロイド原線維（または、ヘパラン硫酸グリコサミノグリカン）とのペプチド相互作用を通してアミロイドに結合し、これがマクロファージを動員し、次いで、アミロイドを破壊するために飲み込む（貪食する）。

【図4】ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動後の^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５のオートラジオグラフを示す。非還元条件下では、タンパク質は単一のＩｇとして泳動され、還元された場合、重鎖及び軽鎖－ｐ５を含み、インタクトなＩｇ分子と一致することが示された。

【図5】注射後２０時間におけるＡＡアミロイドマウス（ＡＡ）及び健常なアミロイド不含マウス（ＷＴ）における^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の生体内分布を示す。

【図6】Ｉｇｐ５の注射後２０時間におけるＡＡマウス及び健常な野生型対照における^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５のＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を示し、ＡＡマウスのアミロイドを含む肝臓及び脾臓における取り込み、ならびにＷＴ動物における試薬の長い血液プール半減期を示す。Ｈ、心臓；Ｌ、肝臓；Ｓ、脾臓。赤色／黄色は、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の存在を示す。

【図7】ヒトＴＨＰ１単球／マクロファージの存在下におけるｐＨｒｏｄｏ赤色標識ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維のインビトロでの貪食を示す。蛍光強度の増加は、マクロファージのファゴリソソームの低ｐＨ環境における標識アミロイド基質の存在を示す。ＭＯＰＣ ３１ｃは、原線維との反応性を有しないマウスモノクローナル抗体対照である。

【図8】ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動後の^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５のオートラジオグラフを示す。Ｉｇｐ５を組織培養上清から精製し、^１２５Ｉで放射標識し、対照としてマウス１１－１Ｆ４（ＩｇＧ１κ）を使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、生成物を特徴付けた。タンパク質を、還元条件（Ｒｅｄ．）及び非還元条件（ＮＲ）の両方下で分析した。

【図9】多様なアミロイド関連基質への^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の結合を示す。パネルＡは、^１２５Ｉ－ｍ１１－１Ｆ４及び^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の、κ４－ペプチドでコーティングされたビーズまたはｒＶλ６Ｗｉｌ原線維への結合を示す。^１２５Ｉ－ｍ１１－１Ｆ４は、κ４－ペプチドでコーティングされたビーズに結合するが、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維には結合せず、一方、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５は、両方の基質に結合する。パネルＢは、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５及びｍ１１－１Ｆ４の、多様な合成アミロイド原線維及びアミロイド抽出物への結合の定量化を示す。パネルＣは、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５及び^１２５Ｉ－ｐ５の基質への結合の間の相関を示す。^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の多様な合成アミロイド原線維及びアミロイド抽出物への結合は、ｍ１１－１Ｆ４と比較して大幅に増強され、反応性は、ｐ５ペプチド単独のものと相関しており、結合が、ペプチドによって駆動されることを示す。

【図10】様々な組織のミクロオートラジオグラフィー（ＡＲＧ）分析及びコンゴレッド染色を示す。パネルＡは、マウスにおける肝脾ＡＡアミロイド、ならびに他の組織のアミロイド結合における^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の保持を示す。ＡＲＧ及びコンゴレッド染色は、マウスにおける肝脾ＡＡアミロイド、ならびに他の組織のアミロイド結合における^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の特異的保持を示す。パネルＢは、アミロイド不含組織のＡＲＧ分析の結果を示す。健常（ＷＴ）マウスにおいて、アミロイド不含組織との特異的な反応性は観察されず、特定された^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の供給源は、血液プールのみであった。

【図11A】ｍＩｇＧ－ｐ５の概略図を示す。左から右へ、ｍＩｇＧ－ｐ５のＣ末端からＮ末端への領域を図示し、Ｉｇ軽鎖配列（「ＩｇＬＣ」、２２０アミノ酸）、スペーサー配列、ペプチドｐ５（３１アミノ酸）、スペーサー配列、及びＮ末端分泌リーダー配列が含まれる。

【図11B】ｍＩｇＧ－ｐ５の領域のアミノ酸配列を示し、左から右へ、Ｉｇ軽鎖のＮ末端（アミノ酸残基ＤＶＶＭＴＱＴＰ（配列番号８２）から始まる）、ｐ５ペプチドのＣ末端のスペーサー配列（アミノ酸残基ＶＴＰＴＶ（配列番号２４））、ペプチドｐ５（アミノ酸残基ＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱＡＱＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱ（配列番号１））、及びＮ末端のスペーサー配列（アミノ酸残基ＡＱＡＧＱＡＧＱＡＱＧＧＧＹＳ（配列番号２３））が含まれる。Ｃ末端からＮ末端へ、アミノ酸配列が示されている。

【図11C】Ｉｇ軽鎖のＮ末端に融合されたペプチドｐ５の提案された構造モデルを示す。

【図11D】ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動後の^１２５Ｉ標識ｍＩｇＧ－ｐ５、^１２５Ｉ－ｍ１１－１Ｆ４、及び^１２５Ｉ－ｐ５のオートラジオグラフを示す。各タンパク質は、非還元（「ＮＲ」）または還元（「Ｒ」）条件下の、全長抗体（「Ｉｇ」）、重鎖（「ＨＣ」）、軽鎖（「ＬＣ」）、及びペプチドｐ５の相対的な位置が示されている。

【図11E】野生型アミロイド不含マウスにおける、^１２５Ｉ－ｍＩｇＧ－ｐ５を注射して２４、４８、または７２時間後の^１２５Ｉ標識ｍＩｇＧ－ｐ５の生体内分布を示す。ｙ軸は、組織１ｇ当たりの注射用量の割合としての生体内分布のレベルを示し、組織の種類は、ｘ軸上に示されている。

【図11F】ＡＡアミロイドーシス（主に肝臓及び脾臓）を有するマウスにおける、^１２５Ｉ－ｍＩｇＧ－ｐ５を注射して２４、４８、または７２時間後の^１２５Ｉ標識ｍＩｇＧ－ｐ５の生体内分布を示す。ｙ軸は、組織１ｇ当たりの注射用量の割合としての生体内分布のレベルを示し、組織の種類は、ｘ軸上に示されている。

【図11G】注射２４時間後の、ＡＡアミロイドーシスを有するマウスにおける^１２５Ｉ標識ｍＩｇ－ｐ５を示すマイクロオートグラフィー画像を示す。２４時間を黒色で示し、４８時間を濃い灰色で示し、７２時間を薄い灰色で示した。

【図12】親マウス抗体ｍ１１－１Ｆ４の注釈付きＶＨ（上、配列番号１５）及びＶＬ（下、配列番号１６）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲはボックスで示され、正準フレームワーク領域の残基は、下線が引かれ、ＶＨ－ＶＬ界面の残基は、太字及び斜体で示されている。

【図13A】合成ｒＶλ６Ｗｉｌ軽鎖アミロイド様原線維への、キメラ（ｃ）１１－１Ｆ４、及びヒト化バリアント、ＶＨ１０／ＶＬ４、ＶＨ９／ＶＬ４、ＶＨ８／ＶＬ４、ＶＨ７／ＶＬ４、またはＶＨ６／ＶＬ３の結合を測定する、ユーロピウム結合免疫吸着アッセイ（ＥｕＬＩＳＡ）からのデータを示す。

【図13B】ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維への７０％純粋なＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５（６－３－ｐ５）、６５％純粋なＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒ（６－３－ｐ５Ｒ）、ｃ１１－１Ｆ４、またはＶＨ６／ＶＬ３の結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。

【図13C】ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、Ｋｅｎ ＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物へのＶＨ９／ＶＬ／４－ｐ５Ｒの結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。

【図13D】ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、Ｋｅｎ ＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物へのＶＨ９／ＶＬ／４－ｐ５の結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。

【図13E】ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維へのｃ１１－１Ｆ４、ｍ１１－１Ｆ４、またはＶＨ９／ＶＬ４の結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。

【図13F】Ｓｎｏ ＡＴＴＲ抽出物（濃い灰色の円）またはＫｅｎ ＡＴＴＲ抽出物（薄い灰色の円）へのＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５の結合、及びＳｎｏ ＡＴＴＲ抽出物（黒色の正方形）へのｃ１１－１Ｆ４の結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。

【図13G】Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ（灰色の円、ラベルを参照）、Ｓｎｏ ＡＴＴＲ抽出物（濃い灰色の円）、またはＫｅｎ ＡＴＴＲ抽出物（薄い灰色の円）へのＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒの結合、及びＳｎｏ ＡＴＴＲ抽出物（黒い正方形）へのｃ１１－１Ｆ４の結合を測定するＥｕＬＩＳＡからのデータを示す。ｘ軸に、モノクローナル抗体の対数変換モル濃度（－ｌｏｇ（Ｍ））を示し、ｙ軸に、結合のレベル（フェムトモル ユウロピウム）を示す。

【図14】プルダウンアッセイにおいて組織から得られた、ｒＶλ６Ｗｉｌアミロイド様原線維及びヒトアミロイド抽出物への^１２５Ｉ－ｍＩｇｐ５結合の結果を示す。ｙ軸は、結合した^１２５Ｉ－ｍＩｇＧ－ｐ５の割合を示し、各試料の結合の割合は、ヒストグラムのバーの上に示されている。ｘ軸は、試験したアミロイド抽出物の種類を示し、左から右へ、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維（７１％結合）、ＳＮＯ遺伝性（ｈ）ＡＴＴＲ（１２％結合）、ＫＥＮ ｈＡＴＴＲ（１５％結合）、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ（３１％結合）、Ｐｅｒ２５３野生型（ｗｔ）ＡＴＴＲ（１７％結合）、ＡＬκ ＨＩＧ抽出物（１０％結合）、ＡＬκ ＴＡＬ抽出物（３７％結合）、ＡＬλ ＳＨＩ抽出物（３４％結合）、及びＡＬλ ＴＹＬ抽出物（２１％結合）が含まれる。エラーバーは、標準偏差を表す。

【図15A】ｘ軸上で左から右へ示されるように、ヒトＴＨＰ－１マクロファージ単独による、またはヒト（ｈ）ＩｇＧ対照、ｃｈ１１－１Ｆ４、ｍｕＩｇｐ５（ｅｘｐｉＨＥＫ２９３細胞株で産生）、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５、もしくはＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒの存在下での、ｐＨｒｏｄｏ赤色標識ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の取り込みを示す。ｙ軸は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の取り込みのレベル（蛍光単位で測定）を示し、エラーバーは、標準偏差を表す。

【図15B】ｘ軸上で左から右へ示されるように、ＴＨＰ－１単独、またはともにｈＩｇＧ対照、ｃ１１－１Ｆ４、ｍＩｇｐ５、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５、もしくはＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒの存在下での、マクロファージによるｐＨｒｏｄｏ赤色標識ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の貪食を示す。ｙ軸は、貪食のレベル（蛍光単位）を示し、エラーバーは、標準偏差を表す。

【図15C】ｘ軸上で左から右へ示されるように、ｈＩｇＧ対照、５μｇのリツキサン（陰性対照としてのキメラｍＡｂ）、５μｇのｃ１１－１Ｆ４、５μｇのＶＨ６／ＶＬ３、５μｇのＶＨ９／ＶＬ４、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒ、またはＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５の存在下での、マクロファージによるｐＨｒｏｄｏ赤色標識ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の貪食を示す。ｙ軸は、貪食（ｐＨｒｏｄｏ蛍光）のレベルを示し、エラーバーは、標準偏差を表す。

【図16】野生型（「ＷＴ」）マウスに静脈内投与された^１２５Ｉ標識ＶＨ９／ＶＬ４抗体の薬物動態（ＰＫ）分析を示す。ｘ軸は、投与後の時間を時間で示し、ｙ軸は、血中放射能のレベルを１分間当たりのカウント（「ｃｐｍ」）で示す。曲線への適合は、二重指数関数的減衰方程式を使用する。

【図17A】ＷＴアミロイド不含マウスにおける^１２５Ｉ－ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５の生体内分布を示す。ｘ軸は、左から右へ、筋肉、肝臓、膵臓、脾臓、左腎臓、右腎臓、胃、上部腸管、下部腸管、心臓、肺、及び血液を含むサンプリングされた臓器を示し、ｙ軸は、組織１グラム当たりの注射用量の割合として、生体内分布レベルを示す。

【図17B】ＷＴアミロイド不含マウスにおける^１２５Ｉ－ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒの生体内分布を示す。ｘ軸は、左から右へ、筋肉、肝臓、膵臓、脾臓、左腎臓、右腎臓、胃、上部腸管、下部腸管、心臓、肺、及び血液を含むサンプリングされた臓器を示し、ｙ軸は、組織１グラム当たりの注射用量の割合として、生体内分布レベルを示す。

【図18】マウス血漿中のＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５の安定性を測定するペプチド捕捉ＥＬＩＳＡからのデータを示す。１００ｎＭのＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５を、４℃のＰＢＳ（最も濃い灰色）、３７℃のＰＢＳ（中低度の濃い灰色の円）、３７℃のＥＤＴＡ抗凝固血漿（中低度の薄い灰色の円）、または３７℃のヘパリン抗凝固血漿（最も薄い灰色の円）のいずれかに添加した。ｘ軸は、投与後の時間を日数で示し、ｙ軸は、リガンドに結合する抗体を吸光度単位（「ａｕ」）で示す。

【発明を実施するための形態】

【0097】

アミロイドに結合する修飾免疫グロブリンが本明細書に提供される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、ペプチド－Ｉｇ融合物である。

【0098】

Ｉ．定義
特に明記しない限り、技術用語は、従来の用法に従って使用される。分子生物学における一般的な用語の定義は、Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ ＩＸ，Ｊｏｎｅｓ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔ出版，２００８（ＩＳＢＮ ０７６３７５２２２３）、Ｋｅｎｄｒｅｗ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．出版，１９９４（ＩＳＢＮ ０６３２０２１８２９）、及びＲｏｂｅｒｔ Ａ．Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．出版，１９９５（ＩＳＢＮ ９７８０４７１１８５７１０）、ならびに他の同様の参考文献に見出すことができる。本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないことが示されていない限り、単数形ならびに複数形の両方を指す。「例えば（ｅ．ｇ．）」という略語は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ ｇｒａｔｉａに由来し、非限定的な例を示すために本明細書で使用される。したがって、「例えば（ｅ．ｇ．）」という略語は、「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」という用語と同義である。本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。

【0099】

本明細書において、範囲は、「約」ある特定の値から、及び／または「約」別の特定の値まで、として表現することができる。かかる範囲が表現された場合、別の態様は、範囲の一方の特定の値から、及び／または範囲の他方の特定の値まで、を含む。範囲の各々のエンドポイントは、他のエンドポイントとの関係において、及び他のエンドポイントとは独立して、の両方で重要であることがさらに理解されるであろう。同様に、値が近似値として表現される場合、先行する「約」の使用によって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。特定の例示的な実施形態では、「約」という用語は、当技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均の２標準偏差以内であると理解される。約は、記載の値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内であると理解され得る。文脈から別途明確でない限り、本明細書に提供されるすべての数値は、約という用語によって修飾され得る。さらに、「例」、「例示的な」、または「例示される」などの本明細書で使用される用語は、選好を示すことを意味するものではなく、むしろ、その後に論じられる態様が、提示された態様の単なる一例であることを説明するものである。

【0100】

核酸またはポリペプチドに対して与えられるすべての塩基のサイズまたはアミノ酸のサイズ、及びすべての分子量または分子質量の値は、おおよその値であり、説明のために提供されることをさらに理解されたい。本明細書に記載のものと同様または同等の方法及び材料が、本開示の実施または試験に使用され得るが、好適な方法及び材料を以下に記載する。矛盾する場合、用語の説明を含めて、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、及び実施例は例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

【0101】

本開示の様々な実施形態の概説を容易にするために、特定の用語の以下の説明が提供される。

【0102】

投与：選択された経路による対象への組成物の導入。例えば、選択された経路が静脈内である場合、組成物を対象の静脈に導入することによって、組成物が投与される。一部の実施例では、対象に、ペプチドが投与される。

【0103】

アミロイド、アミロイド沈着物、アミロイド原線維、及びアミロイド線維という用語は、特定の構造的特徴を共有する不溶性の線維状タンパク質の凝集体を指す。タンパク質凝集体は、例えば、いくつかの異なるタンパク質のいずれかの凝集によって形成され、繊維軸に垂直に積み重ねられたβシートの規則正しい配置からなる三次構造を有する。Ｓｕｎｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９７）２７３：７２９－３９を参照されたい。臓器中にアミロイドが異常に蓄積すると、アミロイドーシスにつながる可能性がある。それらの発生は多様であるが、すべてのアミロイドは、コンゴレッドなどの特定の色素で染色され、染色後の偏光で特徴的な赤緑色の複屈折外観を有するという点で、共通の形態学的特性を有する。アミロイドはまた、共通の超微細構造的特徴及び共通のＸ線回折及び赤外スペクトルを共有する。

【0104】

アミロイドーシスは、アミロイドの存在（例えば、アミロイド沈着物の存在）を特徴とする病理学的状態または疾患を指す。「アミロイド疾患」または「アミロイドーシス」は、アミロイド原線維の形成、沈着、蓄積、または持続に関連する疾患である。かかる疾患には、限定されないが、アルツハイマー病、ダウン症候群、オランダ型のアミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、及び脳βアミロイド血管症が含まれる。他のアミロイド疾患、例えば、全身性ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、ＡＴＴＲアミロイドーシス、ＡＬｅｃｔ２アミロイドーシス、及びＩＩ型糖尿病のＩＡＰＰアミロイドーシスも、アミロイド疾患である。

【0105】

アミロイド原性とは、アミロイド沈着物を産生すること、または産生する傾向があることを指す。例えば、特定の可溶性モノマータンパク質は、大規模な立体構造変化を起こし、それらの凝集を非常に規則正しい、分枝のない８～１０ｎｍ幅の原線維へと導き、最終的にアミロイド凝集体の形成をもたらし得る。例えば、ヒトでは、３０種類を超えるタンパク質が、アミロイド沈着物（またはアミロイド）を形成することが見出されている。免疫グロブリン軽鎖などの多様なタンパク質のクラス内のすべてタンパク質がアミロイドを形成することができるわけではなく、すなわち、一部のタンパク質は、非アミロイド原性であり、つまり、アミロイドを形成する傾向がない。しかしながら、このクラスの他のタンパク質は、アミロイド沈着物を形成することができ、したがって、アミロイド原性である。さらに、軽鎖タンパク質のクラス内の一部は、アミロイド原線維を形成する容易さに基づいて、他のものよりも「アミロイド原性」であるとみなされ得る。特定の軽鎖タンパク質は、患者またはインビトロでアミロイド原線維を容易に形成することができないため、非アミロイド原性または低アミロイド原性とみなされる。

【0106】

動物：生きている多細胞脊椎動物、例えば、哺乳類及び鳥類を含むカテゴリー。哺乳動物という用語は、ヒト及び非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、「対象」という用語は、ヒト対象及び獣医学的対象の両方を含む。一部の実施例では、対象は、アミロイド疾患に罹患している対象などの対象である。

【0107】

クリアランス：「クリアする」または「クリアランス」という用語は、測定可能な程度で低減または除去することを指す。例えば、本明細書に記載されるアミロイド沈着物のクリアランスは、測定可能または識別可能な程度まで沈着物を低減または除去することに関する。クリアランスは、１００％の除去をもたらす場合があるが、１００％除去する必要はない。むしろ、クリアランスは、１００％未満の除去（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上の除去）をもたらし得る。

【0108】

コンジュゲート：本明細書で使用される場合、「コンジュゲート」という用語は、２つ以上の材料の結合または連結の生成物を指し、得られる生成物は、少なくとも２つのドメインなどの少なくとも２つの異なる要素を有する。結合される材料は、同じであってもよく、または異なっていてもよい。かかる結合は、１つ以上の連結基を介してもよい。「タンパク質コンジュゲート」は、例えば、２つ以上のアミノ酸配列のカップリングから生じる。２つのタンパク質のコンジュゲートは、例えば、個々に連結されたタンパク質の各々に対応するドメインを有する単一のタンパク質をもたらす。

【0109】

抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、及びヘテロ免疫グロブリン（モノクローナル抗体が好ましい）のクラスに属する一本鎖、二本鎖、及び多鎖のタンパク質ならびに糖タンパク質を指し、これらの免疫グロブリンの合成バリアント及び遺伝子操作バリアントも含まれる。「抗体断片」には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ならびに所望の標的エピトープ（複数可）に対する特異性を有する抗体の任意の部分が含まれる。「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンによって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に既知の方法によって（例えば、骨髄腫細胞と免疫脾細胞との融合物から、ハイブリッドの抗体形成細胞を作製することによって）、産生される。

【0110】

エピトープとは、抗体によって認識される抗原上の部位を指し、抗体のアミノ酸配列の特異性によって決定される。エピトープは、抗原決定基とも呼ばれる。例えば、エピトープは、特定の抗体によって認識される組換えタンパク質の一部であってもよい。さらに、エピトープは、立体構造エピトープ及び直鎖状エピトープであり得る。

【0111】

キメラ抗体は、典型的には異なる種のものである２つの異なる抗体に由来する配列を含む抗体を指す。最も典型的には、キメラ抗体は、ヒト抗体断片とマウス抗体断片と（概して、ヒト定常領域とマウス可変領域と）を含む。

【0112】

ヒト化抗体は、非ヒト抗体（典型的には、マウス）に由来する抗体、及び親抗体の抗原結合特性を保持または実質的に保持するが、ヒトにおける免疫原性が低いヒト抗体を指す。

【0113】

相補性決定領域またはＣＤＲは、天然免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性と特異性とを一緒に定義するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖は、各々、３つのＣＤＲを有し、それぞれ、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、及びＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３と称される。定義により、軽鎖のＣＤＲは、位置２４及び３４の残基（Ｌ－ＣＤＲ１）、位置５０及び５６の残基（Ｌ－ＣＤＲ２）、位置８９及び９７の残基（Ｌ－ＣＤＲ３）によって境界が定められ、重鎖のＣＤＲは、位置３１及び３５ｂの残基（Ｈ－ＣＤＲ１）、位置５０及び６５の残基（Ｈ－ＣＤＲ２）、位置９５及び１０２の残基（Ｈ－ＣＤＲ３）によって境界が定められる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ（ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）によって描写された付番規則を使用）。

【0114】

フレームワーク領域は、ＣＤＲ間に挿入されたアミノ酸配列を指す。抗体のこれらの部分は、抗原結合のために、ＣＤＲを適切な配向で保持する役割を果たす。

【0115】

特異性決定残基またはＳＤＲは、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を指す。

【0116】

定常領域は、エフェクター機能を付与する抗体分子の一部分を指す。本発明において、バリアント抗体は、ヒト免疫グロブリンに由来する定常領域を含む。重鎖定常領域は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミューの５つのアイソタイプのうちのいずれかから選択することができる。様々なサブクラスの重鎖（例えば、重鎖のＩｇＧサブクラス）は、異なるエフェクター機能を担う。したがって、所望の重鎖定常領域を選択することによって、所望のエフェクター機能を有するヒト化抗体を産生することができる。軽鎖定常領域は、カッパ型またはラムダ型（好ましくは、カッパ型）であり得る。

【0117】

有効量または治療有効量：障害もしくは疾患のいずれかの症状及び／または根本的な原因を、防止、治療（予防を含む）、軽減、及び／または緩和するために（例えば、アミロイドーシスを防止、抑制するために）十分である薬剤の量。一部の実施形態では、「有効量」は、疾患の症状を低減または除去するのに十分である。有効量は、１回以上投与することができる。例えば、有効量のペプチドは、アミロイドに結合するのに十分な量である。ペプチドは、例えば、体重１ｋｇ当たり約１μｇ超～約３０ｍｇ／ｋｇの量で非経口投与される場合に有効であり得る。

【0118】

発現制御配列：作動可能に連結された異種核酸配列の発現を調節する核酸配列。発現制御配列は、発現制御配列が核酸配列の転写及び適切な翻訳を制御及び調節する場合、核酸配列に作動可能に連結される。したがって、発現制御配列は、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、タンパク質コード遺伝子の前の開始コドン（ＡＴＧ）、イントロンのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの適切な翻訳を可能にするためのその遺伝子の正しいリーディングフレームの維持、及び終止コドンを含み得る。「制御配列」という用語は、少なくとも、その存在が発現に影響を及ぼし得る構成要素を含み、また、その存在が有利である追加の構成要素（例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列）も含み得ることが意図される。発現制御配列は、プロモーターを含むことができる。

【0119】

プロモーターは、転写を誘導するのに十分な最小の配列である。また、プロモーター依存性の遺伝子発現を、細胞型特異的、組織特異的、または外部シグナルもしくは薬剤によって誘導可能なものにするのに十分であるプロモーターエレメントも含まれ、かかるエレメントは、遺伝子の５’領域または３’領域に位置し得る。構成的プロモーター及び誘導性プロモーターの両方が含まれる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １５３：５１６－５４４，１９８７を参照されたい）。例えば、細菌システムにおけるクローニングの場合、バクテリオファージλのｐＬ、ｐｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ－ｌａｃハイブリッドプロモーター）などの誘導性プロモーターを使用することができる。一実施形態では、哺乳動物細胞システムにおけるクローニングの場合、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、レトロウイルス長鎖末端反復、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を使用することができる。組換えＤＮＡまたは合成技術によって生成されるプロモーターも、核酸配列の転写を提供するために使用することができる。ポリヌクレオチドを、宿主の挿入された遺伝子配列の効率的な転写を促進する、プロモーター配列を含む発現ベクターに挿入することができる。発現ベクターは、典型的には、複製起点、プロモーター、ならびに形質転換細胞の表現型の選択を可能にする特定の核酸配列を含む。

【0120】

抑制：測定可能な程度で低減すること。抑制は、例えば、測定される態様の機能の完全な喪失または完全な停止を必要としない。例えば、プラークの形成を抑制することは、プラークのさらなる成長を停止すること、プラークのさらなる成長を減速すること、またはプラークのサイズを減少させることを意味し得る。

【0121】

疾患の抑制または治療：疾患または状態の完全な発症を抑制すること（例えば、アミロイドーシスを抑制すること）。「治療」は、疾患または病理学的状態が発症し始めた後の、徴候または症状を改善する治療的介入を指す。「緩和する」という用語は、疾患または病理学的状態に関して、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、感受性のある対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患の一部またはすべての臨床症状の重症度の低減、疾患の進行の遅延、対象の全体的な健康状態または幸福度の改善、または特定の疾患に特異的である当該技術分野で周知の他のパラメータによって証明され得る。「予防的」治療は、病態を発症するリスクを低減する目的で、疾患の徴候を示さないか、または初期の徴候のみを示す対象に投与される治療である。

【0122】

アミロイド沈着物の形成に関して、「抑制」は、対照と比較した場合など、アミロイド沈着物の形成における減少の防止を指す。例えば、抑制は、対照と比較した場合、アミロイド沈着物の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上の減少をもたらし得る。

【0123】

標識は、別の分子に直接的または間接的にコンジュゲートされ、その分子の検出を容易にする任意の検出可能な化合物または組成物を指す。標識の特定の非限定的な例としては、蛍光タグ、化学発光タグ、ハプテン、酵素結合、及び放射性同位体が挙げられる。「検出可能に標識される」タンパク質は、例えば、タンパク質の存在が、タンパク質と関連付けられた標識によって決定され得ることを意味する。

【0124】

単離された：「単離された」生物学的成分、例えば、ペプチド（例えば、本明細書に開示されるペプチドのうちの１つ以上）、細胞、核酸、または血清試料は、その成分が天然に存在する生物の細胞の他の生物学的成分（例えば、他の染色体及び染色体外のＤＮＡ及びＲＮＡ、ならびにタンパク質）から実質的に分離され、別個に産生され、または精製されている。したがって、「単離」された核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製方法によって精製された核酸及びタンパク質を含む。この用語はまた、細胞における組換え発現によって調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、ならびに化学的に合成されたペプチド及び核酸を包含する。「単離された」または「精製された」という用語は、絶対的な純粋性を必要とせず、むしろ、相対的な用語として意図されている。したがって、例えば、単離されたペプチド調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、細胞内のその天然環境にあるものよりも濃縮されている。好ましくは、調製物は、タンパク質またはペプチドが、調製物の全ペプチドまたは全タンパク質の含有量の少なくとも５０％（例えば、ペプチドまたはタンパク質濃度の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはさらに少なくとも９９％）を表すように精製される。

【0125】

連結する：本明細書で使用される場合、「連結する（ｊｏｉｎ）」、「連結された（ｊｏｉｎｅｄ）」、「連結する（ｌｉｎｋ）」、または「連結された（ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、タンパク質及び／またはタンパク質ドメインを機能的に接続するための当該技術分野で既知の任意の方法を指す。例えば、１つのタンパク質ドメインは、例えば、組換え融合タンパク質において、介在する配列またはドメインの有無にかかわらず、共有結合を介して別のタンパク質ドメインに連結され得る。また、連結されたとは、例えば、配列が一緒に発現されるように、２つの核酸配列を同じ核酸鎖に一緒に配置するなど、２つの配列を一緒に組み込むことも含む。

【0126】

核酸：ホスホジエステル結合を介して連結されたヌクレオチド単位（リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、関連する天然に存在する構造バリアント、及びそれらの天然に存在しない合成類似体）、関連する天然に存在する構造バリアント、及びそれらの天然に存在しない合成類似体からなるポリマー。したがって、この用語は、ヌクレオチド及びそれらの間の連結が、例えば、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などの、天然に存在しない合成類似体を含むヌクレオチドポリマーを含む。かかるポリヌクレオチドは、例えば、自動化されたＤＮＡシンセサイザーを使用して合成され得る。「オリゴヌクレオチド」という用語は、典型的には、概して約５０ヌクレオチド以下の短いポリヌクレオチドを指す。ヌクレオチド配列がＤＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）によって表される場合、「Ｔ」が「Ｕ」に置き換わるＲＮＡ配列（すなわち、Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ）もこれに含まれることが理解されるであろう。

【0127】

ヌクレオチドには、糖に連結された塩基（例えば、ピリミジン、プリン、もしくはその合成類似体）、またはアミノ酸に連結された塩基（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ））を含むモノマーが含まれるが、これらに限定されない。ヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの中の１つのモノマーである。ヌクレオチド配列は、ポリヌクレオチドの塩基の配列を指す。

【0128】

ヌクレオチド配列を説明するために、従来の表記が本明細書で使用される：一本鎖ヌクレオチド配列の左端は、５’末端であり、二本鎖ヌクレオチド配列の左方向は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物への５’から３’へのヌクレオチドの付加の方向は、転写方向と称される。ｍＲＮＡと同じ配列を有するＤＮＡ鎖は「コード鎖」と呼ばれ、そのＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’に位置するＤＮＡ鎖上の配列は「上流配列」と呼ばれる。ＲＮＡと同じ配列を持ち、コードＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’にあるＤＮＡ鎖上の配列は、「下流配列」と呼ばれる。

【0129】

ｃＤＮＡは、一本鎖形態または二本鎖形態のいずれかの、ｍＲＮＡに相補的または同一であるＤＮＡを指す。

【0130】

コードするとは、ポリヌクレオチド（例えば、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡ）におけるヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指し、ヌクレオチド（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）の定義された配列、またはアミノ酸の定義された配列、ならびにそれらから得られる生物学的特性のいずれかを有する他のポリマー及び巨大分子の生物学的プロセスにおける合成のためのテンプレートとして機能する。したがって、遺伝子は、その遺伝子によって産生されるｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。遺伝子またはｃＤＮＡのコード鎖（そのヌクレオチド配列は、ｍＲＮＡ配列と同一であり、通常、配列表に提供される）及び非コード鎖（転写のための鋳型として使用される）の両方が、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質もしくは他の産物をコードすると称され得る。別途指定されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重したバージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。タンパク質及びＲＮＡをコードするヌクレオチド配列は、イントロンを含み得る。

【0131】

組換え核酸とは、天然に一緒に連結されていないヌクレオチド配列を有する核酸を指す。これには、核酸ベクター（例えば、アデノウイルスベクター）が含まれ、好適な宿主細胞を形質転換するために使用され得る増幅または構築された核酸を含む。組換え核酸を含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」と称される。次いで、遺伝子を組換え宿主細胞で発現させて、「組換えポリペプチド」などを産生する。組換え核酸は、非コード機能（プロモーター、複製起点、リボソーム結合部位など）も担うことができる。第１の配列は、配列が第１の配列であるポリヌクレオチドが、配列が第２の配列であるポリヌクレオチドと特異的にハイブリダイズする場合、第２の配列に関して「アンチセンス」である。

【0132】

薬学的に許容される担体：使用する薬学的に許容される担体は、従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９５）には、本明細書に開示される融合タンパク質の薬学的送達に好適な組成物及び製剤が記載されている。

【0133】

一般に、担体の性質は、用いられる特定の投与様式に依存することになる。例えば、非経口製剤は、通常、薬学的及び生理学的に許容される流体（例えば、ビヒクルとして、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロールなど）を含む注射可能な流体を含む。固体組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤、またはカプセルの形態）の場合、従来の非毒性固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される薬学的組成物は、少量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤もしくは乳化剤、保存剤、及びｐＨ緩衝剤など）など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含むことができる。

【0134】

ポリペプチド：モノマーがアミノ酸残基であり、アミド結合を介して一緒に連結されたポリマー。アミノ酸がαアミノ酸である場合、Ｌ－光学異性体またはＤ－光学異性体のいずれかを使用することができる（Ｌ－異性体が好ましい）。本明細書で使用される「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、任意のアミノ酸配列を包含し、糖タンパク質などの修飾配列を含むことが意図されている。「ポリペプチド」という用語は、具体的には、天然に存在するタンパク質、ならびに組換えもしくは合成によって産生されるものを包含することが意図されている。いくつかの実施例では、ペプチドは、本明細書に開示されるペプチドのうちの１つ以上である。

【0135】

精製された：「精製された」という用語は、絶対的な純粋性を必要とせず、むしろ、相対的な用語として意図されている。したがって、例えば、精製されたタンパク質調製物は、参照されるタンパク質が、細胞または産生反応チャンバ内（適宜）におけるその天然環境でのタンパク質よりも純粋であるものである。

【0136】

組換え：組換え核酸は、天然に存在しない配列を有するか、または配列の２つの別様で分離されたセグメントの人工的な組み合わせによって作製される配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、多くの場合、化学合成によって、またはより一般的には、核酸の単離されたセグメントの人工的な操作によって（例えば、遺伝子工学技術によって）達成される。

【0137】

配列同一性：２つの核酸配列間または２つのアミノ酸配列間の類似性は、配列間の類似性の観点から表され、配列同一性と呼ばれる。配列同一性は、同一性（または類似性もしくは相同性）のパーセンテージの観点から頻繁に測定され、パーセンテージが高いほど、２つの配列がより類似している。

【0138】

比較のための配列の整列方法は、当該技術分野で周知である。様々なプログラム及び整列アルゴリズムについては、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２，１９８１、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３，１９７０、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４，１９８８、Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ Ｇｅｎｅ ７３：２３７－２４４，１９８８、Ｈｉｇｇｉｎｓ＆Ｓｈａｒｐ ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１－１５３，１９８９、Ｃｏｒｐｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６，１０８８１－９０，１９８８、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｐｐｌｓ．Ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ８，１５５－６５，１９９２、及びＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２４，３０７－３１，１９９４．Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０，１９９０）に記載されており、配列整列法及び相同性計算の詳細な考察が提示されている。

【0139】

ＮＣＢＩ Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０，１９９０）は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）を含むいくつかのソースから入手可能であり、配列解析プログラムであるｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ、及びｔｂｌａｓｔｘに関連して使用するために、インターネット上で利用可能である。

【0140】

作動可能に連結された：第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係を持って配置されるとき、第２の核酸配列と作動可能に連結される。例えば、プロモーターは、そのプロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結される。一般に、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、同じリーディングフレームにおいて隣接しており、必要な場合、２つのタンパク質コード領域を繋ぐためのものである。

【0141】

薬剤：対象または細胞に適切に投与された場合、所望の治療効果または予防効果を誘発することができる化合物または組成物。

【0142】

ベクター：宿主細胞に導入され、それによって、形質転換された宿主細胞を産生する核酸分子。組換えＤＮＡベクターは、組換えＤＮＡを有するベクターである。ベクターは、宿主細胞においてそれを複製させる核酸配列、例えば、複製起点を含むことができる。ベクターはまた、当該技術分野で既知の１つ以上の選択可能なマーカーの遺伝子及び他の遺伝要素を含むことができる。ウイルスベクターは、１つ以上のウイルスに由来する少なくともいくつかの核酸配列を有する組換えＤＮＡベクターである。ベクターという用語には、プラスミド、直鎖状核酸分子、ならびにアデノウイルスベクター及びアデノウイルス全体にわたって記載されているものが含まれる。

【0143】

対象は、脊椎動物を指す。脊椎動物は、哺乳動物（例えば、ヒト）であり得る。対象は、ヒト患者であり得る。対象は、疾患もしくは状態に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる患者であり得、治療もしくは診断を必要とし得るか、または疾患もしくは状態の進行について監視を必要とし得る。患者はまた、有効性について監視する必要がある療法治療中であってもよい。一部の例示的な実施形態では、対象は、アミロイドーシス（例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、もしくはプリオン病）、または末梢性アミロイドーシス（軽鎖（ＡＬ）アミロイドーシス及び２型糖尿病の患者に見られる）を患っている対象を含む。

【0144】

治療することまたは治療という用語は、疾患または病理学的状態が発症し始めた後の徴候または症状を緩和する治療的介入を指す。「緩和する」という用語は、疾患または病理学的状態に関して、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、感受性のある対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患の一部またはすべての臨床症状の重症度の低減、疾患の進行の遅延、対象の全体的な健康状態または幸福度の改善、または特定の疾患に特異的である当該技術分野で周知の他のパラメータによって証明され得る。「予防的」治療は、病態を発症するリスクを低減する目的で、疾患の徴候を示さないか、または初期の徴候のみを示す対象に投与される治療である。

【0145】

好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」という用語は、類似した側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンであり、脂肪族－ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びスレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン－グルタミンである。

【0146】

本明細書で論じられるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変動は、本開示に包含されるものとして企図されるが、ただし、そのアミノ酸配列の変動が、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、９０％、９５％、及び、最も好ましくは、９９％を維持することを条件とする。具体的には、保存的アミノ酸置換が企図される。保存的置換は、それらの側鎖において関連するアミノ酸のファミリー内で起こる置換である。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、以下のファミリーに分類される：（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸であり、（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンであり、（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、（４）無電荷極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリン、及びスレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーとしては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリン及びスレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギン及びグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、ならびに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンが挙げられる。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸のグルタミン酸との、スレオニンのセリンとの単独の置換、またはアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸との類似した置換は、特に、置換がフレームワーク部位内のアミノ酸に関与しない場合、結果として得られる分子の結合または特性に対して大きな影響を有さないと予想することが妥当である。アミノ酸変化が機能性ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることによって容易に決定することができる。本明細書において、アッセイが詳細に説明される。抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、当業者によって容易に調製され得る。好ましい断片または類似体のアミノ末端及びカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近で生じる。構造的及び機能的ドメインは、ヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列データを公的または専有配列データベースと比較することによって特定することができる。好ましくは、構造及び／または機能が既知の他のタンパク質内で生じる、配列モチーフまたは予想されるタンパク質立体構造ドメインを特定するために、コンピュータ化された比較方法が使用される。既知の三次元構造へと折り畳まれるタンパク質配列を特定するための方法は、既知である（Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１６４（１９９１））。したがって、前述の例は、当業者が、本発明に従って構造的及び機能的ドメインを定義するために使用することができる配列モチーフ及び構造的立体構造を認識できることを実証する。

【0147】

好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低減するもの、（２）酸化に対する感受性を低減するもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させるもの、（４）結合親和性を変化させるもの、（４）かかる類似体の他の物理化学的特性または機能的特性を与えるか、修飾するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の、ある配列の様々な変異タンパク質を含み得る。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列において（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外部のポリペプチドの部分において）行われてもよい。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的には変化させない（例えば、置換アミノ酸は、親配列において生じるヘリックスを破壊する傾向も、親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向もない）。当該技術分野で認識されているポリペプチドの二次構造及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））、及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。

【0148】

ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲまたはａ－ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含まれる。例示的なＣＤＲ（ａ－ＣＤＲ－Ｌ１、ａ－ＣＤＲ－Ｌ２、ａ－ＣＤＲ－Ｌ３、ａ－ＣＤＲ－Ｈ１、ａ－ＣＤＲ－Ｈ２、及びａ－ＣＤＲ－Ｈ３）は、アミノ酸残基３１～３４（Ｌ１）、５０～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～５８（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）で生じる（Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）。

【0149】

「フレームワーク」または「ＦＲ」は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメインの残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、以下の４つのＦＲドメインからなる：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４。したがって、ＣＤＲ配列及びＦＲ配列は、一般に、以下のＶＨ（またはＶＬ）の配列で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４、またはＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。

【0150】

ＩＩ．修飾免疫グロブリン及び抗体－ペプチド融合タンパク質
Ａ．修飾免疫グロブリン
特定の例示的な実施形態では、アミロイドを標的とする修飾免疫グロブリンが提供される。かかる修飾免疫グロブリンとしては、例えば、アミロイド反応性ペプチドが挙げられ、これは、例えば、断片、抗原結合（Ｆａｂ）領域におけるＩｇ軽鎖タンパク質のＮ末端の伸長を介して、または重鎖のＣ末端を介して、免疫グロブリン（Ｉｇ）に連結され、それによって、ペプチド－Ｉｇ融合物が形成される。修飾免疫グロブリンを使用して、例えば、対象に修飾免疫グロブリンを投与することなどによって、アミロイドーシスに罹患している対象を治療することができる。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、アミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む融合タンパク質である。

【0151】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、抗体１１－１Ｆ４の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１１－１Ｆ４のＶＨ及び／またはＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１１－１Ｆ４の重鎖及び／または軽鎖を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0152】

特定の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、抗体を含み、抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0153】

特定の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、抗体を含み、抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0154】

一実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0155】

別の態様では、修飾免疫グロブリンは抗体を含み、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0156】

別の態様では、修飾免疫グロブリンは、抗体を含み、抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬとを含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0157】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0158】

別の態様では、修飾免疫グロブリンは、アミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、ペプチドは、抗体の軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端に連結される。一部の実施形態では、抗体はまた、ペプチドと軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端との間のスペーサーアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ペプチドは、軽鎖のＮ末端に連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、重鎖のＮ末端に連結される。

【0159】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0160】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0161】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0162】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0163】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0164】

一部の実施形態では、本明細書に記載の修飾免疫グロブリンは、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、アミロイドの１つ以上のアミロイド原性ペプチドに結合する。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンによって結合されるアミロイドは、アミロイド原性λ６可変ドメインタンパク質（Ｖλ６Ｗｉｌ）もしくはアミロイド原性免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、Ａβ（１－４０）アミロイド様原線維もしくはアミロイド原性Ａβ前駆体タンパク質、または血清アミロイドタンパク質Ａ（ＡＡ）を含む。他の実施形態では、修飾免疫グロブリンによって結合されるアミロイドは、アミロイド原性形態の免疫グロブリン重鎖（ＡＨ）、β_２－マイクログロブリン（Ａβ_２Ｍ）、トランスサイレチンバリアント（ＡＴＴＲ）、アポリポタンパク質ＡＩ（ＡＡｐｏＡＩ）、アポリポタンパク質ＡＩＩ（ＡＡｐｏＡＩＩ）、ゲルソリン（ＡＧｅｌ）、リゾチーム（ＡＬｙｓ）、白血球走化性因子（ＡＬｅｃｔ２）、フィブリノーゲンＡバリアント（ＡＦｉｂ）、シスタチンバリアント（ＡＣｙｓ）、カルシトニン（ＡＣａｌ）、ラクトアドヘリン（ＡＭｅｄ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＡＩＡＰＰ）、プロラクチン（ＡＰｒｏ）、インスリン（ＡＩｎｓ）、プリオンタンパク質（ＡＰｒＰ）、α－シヌクレイン（ＡαＳｙｎ）、タウ（ＡＴａｕ）、心房ナトリウム利尿因子（ＡＡＮＦ）、またはＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、他のアミロイド原性ペプチドを含む。修飾免疫グロブリンによって結合されるアミロイド原性ペプチドは、タンパク質、タンパク質断片、またはタンパク質ドメインであってもよい。一部の実施形態では、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維は、組換えアミロイド原性タンパク質を含む。一部の実施形態では、アミロイドは、疾患の病理の一部である。

【0165】

当業者が理解するように、抗原結合断片（またはＦａｂ領域）は、標的抗原と自然に相互作用する抗体の頭部である。Ｆａｂ領域の構成要素は、例えば、抗体が特定のリガンドに結合し、その相互作用を通して、免疫系をさらに活性化することを可能にする。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭの抗体アイソタイプについて、Ｉｇは、２つのタンパク質である重鎖及び軽鎖からなり、対で相互作用して、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含むインタクトなＩｇを形成する。重鎖と軽鎖の両方とも、可変ドメイン及び定常ドメインにさらに分割される（Ｆａｂ機能領域を含む軽可変ドメイン及び重可変ドメイン、ならびに細胞の受容体及び補体と相互作用する断片結晶性（Ｆｃ）ドメインを形成する重鎖）。ＩｇのＦｃ領域は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位を有する。

【0166】

特定の例示的な実施形態では、以下の表１に示されるペプチドのうちの１つ以上は、軽鎖タンパク質のＮ末端または重鎖のＣ末端を介してＩｇ抗体またはその機能的断片に連結され得、それによって、修飾免疫グロブリンが形成される。すなわち、表１において以下に特定された配列のいずれかを、Ｉｇ抗体またはその機能的断片の重鎖または軽鎖に独立してまたは同時に連結させて、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートを形成することができる。例えば、アミロイド反応性ペプチドのうちの２つは、アミロイド反応性ペプチドのアミノ酸配列をＩｇ軽鎖タンパク質のＮ末端に連結することによって、単一のＩｇ抗体と連結することができる。

【表1】

【0167】

いかなる特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートのペプチドドメインは、対象に投与された場合、修飾免疫グロブリンをアミロイド沈着物に標的化すると考えられる。次いで、Ｆｃドメインは、アミロイドの位置で免疫応答を引き起こし、それによって、オプソニン化などによるアミロイドの除去をもたらす。加えて、修飾免疫グロブリンは、アミロイド反応性ペプチド単独よりも長い半減期を有すると考えられる。例えば、ヒトにおけるＩｇＧの循環半減期は、およそ２１日であり、一方、ヒトにおけるアミロイド反応性ペプチド単独の半減期は、およそ１１時間である。したがって、Ｉｇは、循環中の修飾免疫グロブリンの半減期を増強する。特定の例示的な実施形態では、アミロイド沈着物を修飾免疫グロブリンと接触させると、アミロイド沈着物をアミロイド反応性ペプチド単独と接触させるのと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれ以上増加した半減期がもたらされる。したがって、修飾免疫グロブリンは、対象に投与された場合、アミロイド沈着の位置において免疫刺激効果をより長く発揮することができ、それによって、アミロイド沈着の位置における免疫応答を増加させる。

【0168】

一部の実施形態では、本明細書に記載の修飾免疫グロブリンペプチドのアミロイド反応性ペプチドは、配列番号１～１４のうちのいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、またはそれ以上同一（例えば、配列番号１～１４のうちのいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片に結合したアミロイド反応性ペプチドは、約１０～約５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本発明のアミロイド反応性ペプチドは、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５個のアミノ酸を含むか、またはそれらからなり得る。そのようなペプチドは、例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１６０３２９４９号に記載されている（その全体が本明細書に援用される）。

【0169】

Ｉｇ抗体またはその断片に結合したアミロイド反応性ペプチドの全部または一部を形成するアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、翻訳後修飾アミノ酸、酵素的に合成されたアミノ酸、誘導体化アミノ酸、アミノ酸を模倣するように設計された構築物または構造などの立体異性体及び修飾であり得る。本発明のペプチドを形成するアミノ酸は、天然に存在するタンパク質に見られる２０個の共通のアミノ酸のうちの１つ以上、または修飾アミノ酸及び非通常のアミノ酸のうちの１つ以上であり得る。修飾免疫グロブリンは、当業者に既知の任意の技術（化学合成または標準的な分子生物学的技術を使用した組換え手段を含む）によって作製され得る。

【0170】

特定の例示的な実施形態では、組換えＤＮＡ技術を用いて、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列をクローニングし、Ｉｇ軽鎖に融合し、発現ベクターに挿入し、適切な宿主細胞に形質転換またはトランスフェクションし、発現に好適な条件下で培養することができる（実施例を参照されたい）。次いで、ペプチド－Ｉｇ軽鎖融合物を単離する。有利には、当業者が本開示を鑑みて理解するように、本明細書に記載の方法を使用して、任意のペプチド配列をＩｇ抗体に連結することができる。すなわち、アミロイド反応性ペプチドは、Ｉｇ抗体に連結されたペプチドの例として使用されるが、ペプチドをＩｇ抗体に（例えば、Ｉｇ軽鎖タンパク質のＮ末端に、及び／またはＩｇ重鎖タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端に）連結する方法は、ペプチドをＩｇ抗体に連結するために、様々な異なるペプチドに対して使用され得る。

【0171】

特定の例示的な実施形態では、複数の同じまたは異なるペプチドは、単一のＩｇ抗体またはその機能的断片に連結され得る。例えば、第１の発現ベクターは、ペプチドＡをコードする核酸配列と一体化される軽鎖核酸配列を含むことができ、ペプチドＡが軽鎖タンパク質のＮ末端に連結されて発現されるように、ペプチドＡの核酸配列がベクターに配置される。さらに、第２の発現ベクターは、ペプチドＢをコードする核酸配列と一体化される重鎖核酸配列を含むことができ、ペプチドＢが軽鎖タンパク質のＮ末端に連結されて発現されるように、ペプチドＢの核酸配列がベクターに配置される。

【0172】

かかる例示的な実施形態では、両方の発現ベクターが同じ細胞内で発現される場合、得られるＩｇタンパク質は、各軽鎖のＮ末端に１つのペプチドＡ配列（合計２つのペプチドＡ）を有することができ、重鎖のＮ末端にペプチドＢを有することができる。特定の例示的な実施形態では、ベクターは、Ｃ末端にペプチドＣを含むことができ、それによって、２つのペプチドＡ配列（各軽鎖に１つ）、重鎖のＮ末端にペプチドＢ配列、及び重鎖のＣ末端に連結されたペプチドＣ配列を有する抗体が得られる。したがって、当業者は本開示に基づいて理解するであろうが、発現ベクターは、同じまたは異なるタンパク質の組み合わせを有するように、免疫グロブリンを修飾するために調整され得る。アミロイド反応性ペプチドを使用する特定の例として、修飾免疫グロブリンは、２つのｐ５タンパク質配列（配列番号１）、すなわち、各軽鎖のＮ末端に１つ、を含み得る。他の例示的な実施形態では、免疫グロブリンに連結されたペプチドは、リガンドに対する親和性を有し得、したがって、リガンドを検出するために使用することができる。

【0173】

特定の例示的な実施形態では、修飾免疫グロブリンは、単離または精製によって得ることができる。タンパク質精製技術は、あるレベルでは、細胞、組織、または臓器を、ペプチド及び非ペプチド画分に均質化及び粗分画することを伴う。他のタンパク質精製技術としては、例えば、硫酸アンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、抗体などによる沈殿、または熱変性による沈殿、続いて、遠心分離、クロマトグラフィーステップ（例えば、イオン交換、ゲル濾過、逆相、ヒドロキシルアパタイト、及び親和性クロマトグラフィー）、等電点電気泳動、ゲル電気泳動、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ならびにこれらの技術及び他の技術との組み合わせが挙げられる。

【0174】

様々なクロマトグラフィー技術には、限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、及び逆相クロマトグラフィーが含まれる。ペプチドを精製する特に効率的な方法は、高速性能液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。特定の例示的な実施形態では、Ｆｃドメインは、ＧＧＧＹＳリンカー配列（配列番号２７）を介してアミロイド反応性ペプチドに連結され得る。

【0175】

特定の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端とアミロイド反応性ペプチドとの間に、アミノ酸のスペーサー配列を含み得る。特定の実施形態では、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートは、ペプチドのＮ末端と、試薬を発現する細胞由来のＩｇペプチドの分泌に必要なリーダー配列との間に、アミノ酸のスペーサー配列を含み得る。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、約３～約５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本発明のスペーサーペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本明細書で使用される場合、核酸配列またはアミノ酸配列が配列において互いに近接している場合、核酸配列またはアミノ酸配列は、別の核酸配列またはアミノ酸配列に「隣接している」。例えば、２つの核酸配列は、本明細書に記載されるように、互いに隣接していてもよいが、それでも介在スペーサー配列を含むことができる。

【0176】

Ｂ．抗体－ペプチド融合タンパク質
また、アミロイドを標的とする抗体－ペプチド融合タンパク質も本明細書に提供される。かかる抗体－ペプチド融合タンパク質としては、例えば、アミロイド反応性ペプチドが挙げられ、これは、例えば、断片、抗原結合（Ｆａｂ）領域におけるＩｇ軽鎖タンパク質のＮ末端の伸長を介して、または重鎖のＣ末端を介して、免疫グロブリン（Ｉｇ）に連結され、それによって、ペプチド－Ｉｇ融合物が形成される。抗体－ペプチド融合タンパク質を使用して、例えば、対象に抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することなどによって、アミロイドーシスに罹患している対象を治療することができる。

【0177】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表３に示されるように、抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む抗体を含む。

【0178】

特定の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0179】

特定の実施形態では抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0180】

一実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含む抗体を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0181】

別の態様では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0182】

別の態様では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬとを含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0183】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0184】

別の態様では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、ペプチドは、抗体の軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端に連結される。一部の実施形態では、抗体はまた、ペプチドと軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端との間のスペーサーアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ペプチドは、軽鎖のＮ末端に連結される。

【0185】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0186】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0187】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0188】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含む抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0189】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体を含み、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0190】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイドの１つ以上のアミロイド原性ペプチドに結合する。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイドは、アミロイド原性λ６可変ドメインタンパク質（Ｖλ６Ｗｉｌ）もしくはアミロイド原性免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、Ａβ（１－４０）アミロイド様原線維もしくはアミロイド原性Ａβ前駆体タンパク質、または血清アミロイドタンパク質Ａ（ＡＡ）を含む。他の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイドは、アミロイド原性形態の免疫グロブリン重鎖（ＡＨ）、β_２－マイクログロブリン（Ａβ_２Ｍ）、トランスサイレチンバリアント（ＡＴＴＲ）、アポリポタンパク質ＡＩ（ＡＡｐｏＡＩ）、アポリポタンパク質ＡＩＩ（ＡＡｐｏＡＩＩ）、ゲルソリン（ＡＧｅｌ）、リゾチーム（ＡＬｙｓ）、白血球走化性因子（ＡＬｅｃｔ２）、フィブリノーゲンＡバリアント（ＡＦｉｂ）、シスタチンバリアント（ＡＣｙｓ）、カルシトニン（ＡＣａｌ）、ラクトアドヘリン（ＡＭｅｄ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＡＩＡＰＰ）、プロラクチン（ＡＰｒｏ）、インスリン（ＡＩｎｓ）、プリオンタンパク質（ＡＰｒＰ）、α－シヌクレイン（ＡαＳｙｎ）、タウ（ＡＴａｕ）、心房ナトリウム利尿因子（ＡＡＮＦ）、またはＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、他のアミロイド原性ペプチドを含む。抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイド原性ペプチドは、タンパク質、タンパク質断片、またはタンパク質ドメインであってもよい。一部の実施形態では、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維は、組換えアミロイド原性タンパク質を含む。一部の実施形態では、アミロイドは、疾患の病理の一部である。

【0191】

一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、アミロイド軽鎖の原線維に特異的に結合する。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、アミロイド原性λ６可変ドメインタンパク質（Ｖλ６Ｗｉｌ）もしくはアミロイド原性免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、Ａβ（１－４０）アミロイド様原線維もしくはアミロイド原性Ａβ前駆体タンパク質、または血清アミロイドタンパク質Ａ（ＡＡ）などの様々なアミロイド原線維に結合する。他の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイドは、アミロイド原性形態の免疫グロブリン重鎖（ＡＨ）、β_２－マイクログロブリン（Ａβ_２Ｍ）、トランスサイレチンバリアント（ＡＴＴＲ）、アポリポタンパク質ＡＩ（ＡＡｐｏＡＩ）、アポリポタンパク質ＡＩＩ（ＡＡｐｏＡＩＩ）、ゲルソリン（ＡＧｅｌ）、リゾチーム（ＡＬｙｓ）、白血球走化性因子（ＡＬｅｃｔ２）、フィブリノーゲンＡバリアント（ＡＦｉｂ）、シスタチンバリアント（ＡＣｙｓ）、カルシトニン（ＡＣａｌ）、ラクトアドヘリン（ＡＭｅｄ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＡＩＡＰＰ）、プロラクチン（ＡＰｒｏ）、インスリン（ＡＩｎｓ）、プリオンタンパク質（ＡＰｒＰ）、α－シヌクレイン（ＡαＳｙｎ）、タウ（ＡＴａｕ）、心房ナトリウム利尿因子（ＡＡＮＦ）、またはＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、他のアミロイド原性ペプチドを含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、ヘパラン硫酸グリコサミノグリカンに結合する。

【0192】

当業者が理解するように、抗原結合断片（またはＦａｂ領域）は、標的抗原と自然に相互作用する抗体の頭部である。Ｆａｂ領域の構成要素は、例えば、抗体が特定のリガンドに結合し、その相互作用を通して、免疫系をさらに活性化することを可能にする。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭの抗体アイソタイプについて、Ｉｇは、２つのタンパク質である重鎖及び軽鎖からなり、対で相互作用して、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含むインタクトなＩｇを形成する。重鎖と軽鎖の両方とも、可変ドメイン及び定常ドメインにさらに分割される（Ｆａｂ機能領域を含む軽可変ドメイン及び重可変ドメイン、ならびに細胞の受容体及び補体と相互作用する断片結晶性（Ｆｃ）ドメインを形成する重鎖）。ＩｇのＦｃ領域は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位を有する。

【0193】

特定の例示的な実施形態では、以下の表１に示されるペプチドのうちの１つ以上は、軽鎖タンパク質のＮ末端または重鎖のＣ末端を介してＩｇ抗体またはその機能的断片に連結され得、それによって、抗体－ペプチド融合タンパク質が形成される。すなわち、表１において以下に特定された配列のいずれかを、Ｉｇ抗体またはその機能的断片の重鎖または軽鎖に独立してまたは同時に連結させて、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートを形成することができる。例えば、アミロイド反応性ペプチドのうちの２つは、アミロイド反応性ペプチドのアミノ酸配列をＩｇ軽鎖タンパク質のＮ末端に連結することによって、単一のＩｇ抗体と連結することができる。

【0194】

いかなる特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートのペプチドドメインは、対象に投与された場合、抗体－ペプチド融合タンパク質をアミロイド沈着物に標的化すると考えられる。次いで、Ｆｃドメインは、アミロイドの部位で免疫応答を引き起こし、それによって、オプソニン化などによるアミロイドの除去をもたらす。加えて、抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド反応性ペプチド単独よりも長い半減期を有すると考えられる。例えば、ヒトにおけるＩｇＧの循環半減期は、およそ２１日であり、一方、ヒトにおけるアミロイド反応性ペプチド単独の半減期は、およそ１１時間である。したがって、Ｉｇは、循環中の抗体－ペプチド融合タンパク質の半減期を増強する。特定の例の実施形態では、アミロイド沈着物を抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させると、アミロイド沈着物をアミロイド反応性ペプチド単独と接触させるのと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれ以上増加した半減期がもたらされる。したがって、抗体－ペプチド融合タンパク質は、対象に投与された場合、アミロイド沈着部位において免疫刺激効果をより長く発揮することができ、それによって、アミロイド沈着部位における免疫応答を増加させる。

【0195】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質のアミロイド反応性ペプチドは、配列番号１～１４のうちのいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、またはそれ以上同一（例えば、配列番号１～１４のうちのいずれか１つとして記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｉｇ抗体またはその機能的断片に結合したアミロイド反応性ペプチドは、約１０～約５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本発明のアミロイド反応性ペプチドは、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５個のアミノ酸を含むか、またはそれらからなり得る。そのようなペプチドは、例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１６０３２９４９号に記載されている（その全体が本明細書に援用される）。

【0196】

Ｉｇ抗体またはその断片に結合したアミロイド反応性ペプチドの全部または一部を形成するアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、翻訳後修飾アミノ酸、酵素的に合成されたアミノ酸、誘導体化アミノ酸、アミノ酸を模倣するように設計された構築物または構造などの立体異性体及び修飾であり得る。本発明のペプチドを形成するアミノ酸は、天然に存在するタンパク質に見られる２０個の共通のアミノ酸のうちの１つ以上、または修飾アミノ酸及び非通常のアミノ酸のうちの１つ以上であり得る。抗体－ペプチド融合タンパク質は、当業者に既知の任意の技術（化学合成または標準的な分子生物学的技術を使用した組換え手段を含む）によって作製され得る。

【0197】

特定の例示的な実施形態では、組換えＤＮＡ技術を用いて、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列をクローニングし、Ｉｇ軽鎖に融合し、発現ベクターに挿入し、適切な宿主細胞に形質転換またはトランスフェクションし、発現に好適な条件下で培養することができる（実施例を参照されたい）。次いで、ペプチド－Ｉｇ軽鎖融合物を単離する。有利には、当業者が本開示を鑑みて理解するように、本明細書に記載の方法を使用して、任意のペプチド配列をＩｇ抗体に連結することができる。すなわち、アミロイド反応性ペプチドは、Ｉｇ抗体に連結されたペプチドの例として使用されるが、ペプチドをＩｇ抗体に（例えば、Ｉｇ軽鎖タンパク質のＮ末端に、及び／またはＩｇ重鎖タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端に）連結する方法は、ペプチドをＩｇ抗体に連結するために、様々な異なるペプチドに対して使用され得る。

【0198】

特定の例示的な実施形態では、複数の同じまたは異なるペプチドは、単一のＩｇ抗体またはその機能的断片に連結され得る。例えば、第１の発現ベクターは、ペプチドＡをコードする核酸配列と一体化される軽鎖核酸配列を含むことができ、ペプチドＡが軽鎖タンパク質のＮ末端に連結されて発現されるように、ペプチドＡの核酸配列がベクターに配置される。さらに、第２の発現ベクターは、ペプチドＢをコードする核酸配列と一体化される重鎖核酸配列を含むことができ、ペプチドＢが軽鎖タンパク質のＮ末端に連結されて発現されるように、ペプチドＢの核酸配列がベクターに配置される。

【0199】

かかる例示的な実施形態では、両方の発現ベクターが同じ細胞内で発現される場合、得られるＩｇタンパク質は、各軽鎖のＮ末端に１つのペプチドＡ配列（合計２つのペプチドＡ）を有することができ、重鎖のＮ末端にペプチドＢを有することができる。特定の例示的な実施形態では、ベクターは、Ｃ末端にペプチドＣを含むことができ、それによって、２つのペプチドＡ配列（各軽鎖に１つ）、重鎖のＮ末端にペプチドＢ配列、及び重鎖のＣ末端に連結されたペプチドＣ配列を有する抗体が得られる。したがって、当業者は本開示に基づいて理解するであろうが、発現ベクターは、同じまたは異なるタンパク質の組み合わせを有するように、免疫グロブリンを修飾するために調整され得る。アミロイド反応性ペプチドを使用する特定の例として、抗体－ペプチド融合タンパク質は、２つのｐ５タンパク質配列（配列番号１）、すなわち、各軽鎖のＮ末端に１つ、を含み得る。他の例示的な実施形態では、免疫グロブリンに連結されたペプチドは、リガンドに対する親和性を有し得、したがって、リガンドを検出するために使用することができる。

【0200】

特定の例示的な実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、単離または精製によって得ることができる。タンパク質精製技術は、あるレベルでは、細胞、組織、または臓器を、ペプチド及び非ペプチド画分に均質化及び粗分画することを伴う。他のタンパク質精製技術としては、例えば、硫酸アンモニウム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、抗体などによる沈殿、または熱変性による沈殿、続いて、遠心分離、クロマトグラフィーステップ（例えば、イオン交換、ゲル濾過、逆相、ヒドロキシルアパタイト、及び親和性クロマトグラフィー）、等電点電気泳動、ゲル電気泳動、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ならびにこれらの技術及び他の技術との組み合わせが挙げられる。

【0201】

様々なクロマトグラフィー技術には、限定されないが、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、及び逆相クロマトグラフィーが含まれる。ペプチドを精製する特に効率的な方法は、高速性能液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。特定の例示的な実施形態では、Ｆｃドメインは、ＧＧＧＹＳリンカー配列（配列番号２７）を介してアミロイド反応性ペプチドに連結され得る。

【0202】

特定の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端とアミロイド反応性ペプチドとの間に、アミノ酸のスペーサー配列を含み得る。特定の実施形態では、ペプチド－Ｉｇコンジュゲートは、ペプチドのＮ末端と、試薬を発現する細胞由来のＩｇペプチドの分泌に必要なリーダー配列との間に、アミノ酸のスペーサー配列を含み得る。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、約３～約５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本発明のスペーサーペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。本明細書で使用される場合、核酸配列またはアミノ酸配列が配列において互いに近接している場合、核酸配列またはアミノ酸配列は、別の核酸配列またはアミノ酸配列に「隣接している」。例えば、２つの核酸配列は、本明細書に記載されるように、互いに隣接していてもよいが、それでも介在スペーサー配列を含むことができる。

【0203】

ＩＩＩ．ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体
ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、マウス抗体の１つ以上のＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。一部の実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬは、ヒトＶＨ及び／またはＶＬ配列（例えば、「ヒトアクセプター配列」）に由来する。一部の実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬは、例えば、ＶＨ及び／またはＶＬのフレームワーク領域において、アミノ酸置換を含む。

【0204】

Ａ．ヒト化抗体
一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表３に示されるように、抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び、ＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する、表３に示される抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。

【0205】

一部の実施形態では、ヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬはフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、ＶＨはフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。一部の実施形態では、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４である。一部の実施形態では、ＶＬは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、Ｎ末端からＣ末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ－Ｌ１、ＦＲ２、ＣＤＲ－Ｌ２、ＦＲ３、ＣＤＲ－Ｌ３、及びＦＲ４を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、Ｎ末端からＣ末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ－Ｈ１、ＦＲ２、ＣＤＲ－Ｈ２、ＦＲ３、ＣＤＲ－Ｈ３、及びＦＲ４を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、移植ＣＤＲ（例えば、配列番号３２または配列番号４３）を有するヒトアクセプター配列と比較して、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、またはＦＲ４）の１つ以上の位置にアミノ酸置換を含むＶＬ及び／またはＶＨを含む。

【0206】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＦＲ２にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３６のアミノ酸置換、位置３７のアミノ酸置換、及び位置４６のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３６のＴｙｒ、位置３７のＬｅｕ、及び位置４６のＬｅｕからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0207】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＦＲ３にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置８５のアミノ酸置換、及び位置８７のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置８５のＬｅｕ、及び位置８７のＰｈｅからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0208】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＦＲ２にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３７のアミノ酸置換、及び位置４８のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３７のＶａｌ及び位置４８のＬｅｕからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0209】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＦＲ３にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置６７のアミノ酸置換、位置４８のアミノ酸置換、位置７１のアミノ酸置換、位置７６のアミノ酸置換、位置７８のアミノ酸置換、位置７９のアミノ酸置換、位置８０のアミノ酸置換、位置８９のアミノ酸置換、位置９３のアミノ酸置換、及び位置９４のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置６７のＬｅｕ、位置４８のＳｅｒ、位置７１のＬｙｓ、位置７６のＳｅｒ、位置７８のＶａｌ、位置７９のＬｅｕ、位置８０のＰｈｅ、位置８９のＴｈｒ、位置９３のＶａｌ、及び位置９４のＴｈｒからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0210】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、配列番号３２のＮ末端から始めて順次番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３３にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３４にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４２にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置５１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９０にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９２にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるように、ＶＬ１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含む。

【0211】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、配列番号３２の番号付けによるＶＬのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３３にＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、またはＡｌａを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３４にＡｌａまたはＶａｌを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４１にＴｙｒを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４２にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置５１にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９０にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９２にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0212】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、ＶＨのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９２にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９６にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、Ｔｈｒ位置９７を含むＶＨを含む。

【0213】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置８５にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0214】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ及び位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0215】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置８９にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９３にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。

【0216】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ及び位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、及び位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。

【0217】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。

【0218】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ４－Ｎ３３Ｓ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｑ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｅ、ＶＬ４－Ｎ３３Ａ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｈ、ＶＬ４－Ｇ３４Ａ、またはＶＬ４－Ｇ３４Ｖからなる群から選択されるＶＬを含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0219】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ｂに示されるＶＨのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ｂに示されるＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ９－Ｄ５４Ｓ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｑ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｅ、ＶＨ９－Ｄ５４Ａ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｈ、ＶＨ９－Ｇ５５Ａ、ＶＨ９－Ｇ５５Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｉ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｌ、またはＶＨ９－Ｍ６４Ａからなる群から選択されるＶＨを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0220】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ９のＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む。

【0221】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ３のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ６のＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0222】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ１０のＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ８のＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ７のＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含む。

【0223】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、全長抗体、Ｆａｂ断片、またはｓｃＦｖである。

【0224】

ＣＤＲ置換を有するヒト化抗体
一部の実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上のＣＤＲ置換を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ置換は、ＣＤＲ－Ｌ１内にある。一部の実施形態では、ＣＤＲ置換はＣＤＲ－Ｈ２内にある。

【0225】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、位置３６のＴｙｒ、位置３７のＬｅｕ、位置４６のＬｅｕ、位置８５のＬｅｕ、及び位置８７のＰｈｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含む：位置３７のＶａｌ、位置４８のＬｅｕ、位置６７のＬｅｕ、位置６８のＳｅｒ、位置７１のＬｙｓ、位置７６のＳｅｒ、位置７８のＶａｌ、位置７９のＬｅｕ、位置８０のＰｈｅ、位置８９のＴｈｒ、位置９３のＶａｌ、位置９４のＴｈｒ（アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる）。

【0226】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0227】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0228】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表６Ｃ及び／または表６Ｄに示される抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。

【0229】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号５３～６３に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３６～４２に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0230】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＣＤＲ－Ｌ１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２８のアミノ酸置換及び位置２９のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２８のＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、またはＡｌａからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２９のＡｌａまたはＶａｌからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0231】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＣＤＲ－Ｈ２にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５４、位置５５、または位置６４のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５４のＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＨｉｓからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５５のＡｌａまたはＶａｌからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置６４のＶａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、またはＡｌａからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0232】

Ｂ．ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質
アミロイド反応性ペプチドに融合されたヒトアミロイド原線維に結合するヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質も本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、本明細書に記載されるヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、上述のヒト化抗体のうちのいずれか１つである。

【0233】

特定の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖可変領域（ＶＨ）とを含むヒト化抗体を含み、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、表３に示されるように、抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び、ＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖可変領域（ＶＨ）とを含み、ＶＬは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する、表３に示される抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。

【0234】

一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。

【0235】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＦＲ２におけるアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３６のアミノ酸置換、位置３７のアミノ酸置換、及び位置４６のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３６のＴｙｒ、位置３７のＬｅｕ、及び位置４６のＬｅｕからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0236】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＦＲ３におけるアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置８５のアミノ酸置換、及び位置８７のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置８５のＬｅｕ、及び位置８７のＰｈｅからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0237】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＦＲ２におけるアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３７のアミノ酸置換、及び位置４８のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ２におけるアミノ酸置換は、位置３７のＶａｌ及び位置４８のＬｅｕからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0238】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＦＲ３におけるアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置６７のアミノ酸置換、位置４８のアミノ酸置換、位置７１のアミノ酸置換、位置７１のアミノ酸置換、位置７６のアミノ酸置換、位置７８のアミノ酸置換、位置７９のアミノ酸置換、位置８０のアミノ酸置換、位置８９のアミノ酸置換、位置９３のアミノ酸置換、及び位置９４のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＦＲ３におけるアミノ酸置換は、位置６７のＬｅｕ、位置４８のＳｅｒ、位置７１のＬｙｓ、位置７６のＳｅｒ、位置７８のＶａｌ、位置７９のＬｅｕ、位置８０のＰｈｅ、位置８９のＴｈｒ、位置９３のＶａｌ、及び位置９４のＴｈｒからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0239】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、配列番号３２のＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３３にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３４にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４２にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置５１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９０にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９２にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるように、ＶＬ１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含む。

【0240】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、配列番号４３のＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置３７にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置４８にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置６７にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置６８にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７１にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７６にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７８にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７９にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置８０にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９２にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９６にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９７にアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、表６Ｂに示されるように、ＶＨ１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含むＶＨを含む。

【0241】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物はヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、ＶＬのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３３にＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、またはＡｌａを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３４にＡｌａまたはＶａｌを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４１にＴｙｒを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４２にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置５１にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９０にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９２にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0242】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物はヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、ＶＨのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９２にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９６にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９７にＴｈｒを含むＶＨを含む。

【0243】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置８５にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0244】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ及び位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含む。

【0245】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合物は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置８９にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９３にＶａｌを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。

【0246】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含み、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ及び位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、及び位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含む。

【0247】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨと、を含む。

【0248】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬのアミノ酸配列を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、表６Ａに示されるＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ４－Ｎ３３Ｓ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｑ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｅ、ＶＬ４－Ｎ３３Ａ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｈ、ＶＬ４－Ｇ３４Ａ、またはＶＬ４－Ｇ３４Ｖからなる群から選択されるＶＬを含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0249】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ｂに示されるＶＨのアミノ酸配列を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、表６Ｂに示されるＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ９－Ｄ５４Ｓ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｑ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｅ、ＶＨ９－Ｄ５４Ａ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｈ、ＶＨ９－Ｇ５５Ａ、ＶＨ９－Ｇ５５Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｉ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｌ、またはＶＨ９－Ｍ６４Ａからなる群から選択されるＶＨを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含む。

【0250】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ９のＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。

【0251】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬ３のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ６のＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。

【0252】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ１０のＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ８のＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ７のＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと、を含むヒト化抗体を含む。

【0253】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド反応性ペプチドを含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、表１に示されるペプチドのうちの１つ以上を含む。特定の一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、配列番号１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、正に帯電している。

【0254】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、軽鎖を含む。一部の実施形態では、アミロイド反応性ペプチドは、軽鎖のＮ末端に融合される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒト化抗体を含み、ヒト化抗体は、軽鎖を含み、アミロイド反応性ペプチドは、リンカーによって軽鎖のＮ末端に融合される。一部の実施形態では、リンカーは、ペプチドリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＹＳを含む。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、無荷電である。

【0255】

一部の実施形態では、以下の表１に示されるペプチドのうちの１つ以上は、軽鎖タンパク質のＮ末端または重鎖のＣ末端を介してヒト化抗体またはその機能的断片に結合され得、それによって、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質を形成する。すなわち、表１において特定される以下の配列のうちのいずれかは、ヒト化抗体またはその機能的断片の重鎖もしくは軽鎖に、独立してまたは同時に連結されて、抗体－ペプチド融合タンパク質を形成することができる。例えば、アミロイド反応性ペプチドのアミノ酸配列を、ヒト化抗体の軽鎖のＮ末端に連結することによって、アミロイド反応性ペプチドのうちの２つを、単一のＩｇ抗体と連結することができる。

【0256】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、軽鎖を含み、Ｎ末端からＣ末端へ、アミロイド反応性ペプチド及び軽鎖を含む。一部の実施形態では、軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＬ及びＣＬ１を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、本明細書に記載のＶＬのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、重鎖を含み、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、本明細書に記載のＶＨのうちのいずれか１つである。

【0257】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、軽鎖を含み、Ｎ末端からＣ末端へ、アミロイド反応性ペプチド、スペーサーペプチド、及び軽鎖を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＬ及びＣＬ１を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、本明細書に記載のＶＬのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、重鎖を含み、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。

【0258】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、分泌型リーダーペプチド、第１のスペーサーペプチド、アミロイド反応性ペプチド、第２のスペーサーペプチド、及び軽鎖を含む。一部の実施形態では、第１のスペーサーペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のスペーサーペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第２のスペーサーペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＬ及びＣＬ１を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、本明細書に記載のＶＬのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、重鎖を含み、Ｎ末端からＣ末端へ、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、本明細書に記載のＶＨのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、ＶＨは、本明細書に記載のＶＨのうちのいずれか１つである。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、図１１Ａまたは図１１Ｂに図示される構造を含む。

【0259】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、軽鎖のＮ末端とアミロイド反応性ペプチドとの間に、アミノ酸のスペーサー配列を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、ペプチドのＮ末端と、抗体－ペプチド融合タンパク質を発現する細胞からの抗体－ペプチド融合タンパク質の分泌に必要なリーダー配列との間に、アミノ酸のスペーサー配列を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、可撓性スペーサーペプチドである。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、帯電していない。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、グリシン・セリンリンカーである。一部の実施形態では、スペーサーペプチドはグリシン・セリンリンカーを含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、約３～約５５個のアミノ酸を含むかまたはそれからなる。本発明のスペーサーペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５個のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、５０、１００、または１５５個のアミノ酸長である（これらの値間の任意の値または範囲を含む）。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、１５個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、スペーサーペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド反応性ペプチドと抗体との間に、スペーサーを含まない。

【0260】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸を含むＶＬとを含むヒト化抗体を含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸を含むＶＬとを含むヒト化抗体を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0261】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含むヒト化抗体を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0262】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0263】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0264】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0265】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0266】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0267】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0268】

一部の実施形態では、抗体－ペプチド融合タンパク質は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含むヒト化抗体を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端で軽鎖に連結される。

【0269】

Ｃ．ヒト化抗体及びヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質
一部の実施形態では、本開示のヒト化抗体またはヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃである。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質は、Ｆｃ媒介性抗体エフェクター機能を促進する。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体依存性細胞貪食を促進する。

【0270】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約１００、１０、１、０．１、０．０１μＭ未満である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、５０、７５、または１００μＭ（これらの値の間の任意の値または範囲を含む）である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、５００、１００、１０、または１ｎＭ未満である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、２０００、または２２００ｎＭ未満である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、２０００、または２２００ｎＭ（これらの値の間の任意の値または範囲を含む）である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約４０～５０ｎＭである解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、４０～５０ｎＭである解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、５０ｎＭ未満である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ｃ１１－１Ｆ４がヒトアミロイド原線維に結合するＫｄ未満である解離定数（Ｋｄ）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。

【0271】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約０．０１、０．１、または１μＭ未満である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０μＭ（これらの値の間の任意の値または範囲を含む）である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約１、１０、１００、または１０００ｎＭ未満である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１００、２５０、５００、７５０、または１０００ｎＭ（これらの値間の任意の値または範囲を含む）である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約１７ｎＭ、７ｎＭ、１６ｎＭ、７５ｎＭ、または９５ｎＭである抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、約１０ｎＭ、２０ｎＭ、８０ｎＭまたは１００ｎＭ未満である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒトアミロイド原線維に結合するｃ１１－１Ｆ４のＥＣ_５０未満である抗体の半最大結合濃度（ＥＣ_５０）で、ヒトアミロイド原線維に結合する。

【0272】

解離定数及びＥＣ_５０を計算する方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、表面プラズモン共鳴及びＥｕＬＩＳＡを含む（例えば、実施例、表７、及び図１３Ａ～１３Ｇを参照されたい）。一部の実施形態では、解離定数は、例えば、表面プラズモン共鳴を使用して、Ｌｅｎ（１－２２）モノマーペプチドへの結合を測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、ＥｕＬＩＳＡを使用して決定される。一部の実施形態では、ＥＣ_５０は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、Ｋｅｎ ＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物への結合レベルを測定するために、ＥｕＬＩＳＡを使用して決定される。

【0273】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、放射性核種（例えば、Ｉ－^１２５、Ｉ－^１２３、Ｉ－^１３１、Ｚｒ－^８９、Ｔｃ－^９９ｍ、Ｃｕ－^６４、Ｂｒ－^７６、Ｆ－^１８）、酵素（西洋ワサビペルオキシダーゼ）、ビオチン、及びフルオロフォアなどからなる群から選択される。タンパク質を検出可能に標識するための当該技術分野における既知の任意の手段を、本明細書に記載の方法とともに使用するために、使用及び／または適合させることができる。例えば、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、放射性同位体で放射標識され得るか、または蛍光タグもしくは化学発光タグで標識され得る。例示的な放射性同位体としては、例えば、^１８Ｆ、^１１１Ｉｎ、^９９ｍＴｃ、ならびに^１２３Ｉ及び^１２５Ｉが挙げられる。これら及び他の放射性同位体は、例えば、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質の軽鎖タンパク質に共有結合されたＤＴＰＡまたはＤＯＴＡなどのキレート剤の使用を伴うかまたは伴わない場合がある周知の化学を使用して、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質に結合することができる。例示的な蛍光タグまたは化学発光タグとしては、フルオレセイン、テキサスレッド、ローダミン、Ａｌｅｘａ色素、及びルシフェラーゼが挙げられ、これらは、リジン、システイン、グルタミン酸、及びアスパラギン酸側鎖との反応によって、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質にコンジュゲートされ得る。一例の実施形態では、標識は、使用されるタグに適した励起波長及び発光波長を使用して、蛍光マイクロプレートリーダー、または蛍光光度計を使用して検出される。放射標識は、例えば、放射性放出の種類に応じてガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターを使用して、特定の放射性核種の正確な検出に好適なエネルギーウィンドウを使用することによって、検出することができる。しかしながら、放射性同位体を検出するための任意の他の好適な技術も、標識を検出するために使用することができる。一部の実施形態では、検出可能な標識は、^１２５Ｉである。

【0274】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、ＫＥＮ ｈＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、及び／またはＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維に結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、アミロイドの１つ以上のアミロイド原性ペプチドに結合する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイドは、アミロイド原性λ６可変ドメインタンパク質（Ｖλ６Ｗｉｌ）もしくはアミロイド原性免疫グロブリン軽鎖（ＡＬ）、Ａβ（１－４０）アミロイド様原線維もしくはアミロイド原性Ａβ前駆体タンパク質、または血清アミロイドタンパク質Ａ（ＡＡ）を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質によって結合されるアミロイドは、アミロイド原性形態の免疫グロブリン重鎖（ＡＨ）、β_２－マイクログロブリン（Ａβ_２Ｍ）、トランスサイレチンバリアント（ＡＴＴＲ）、アポリポタンパク質ＡＩ（ＡＡｐｏＡＩ）、アポリポタンパク質ＡＩＩ（ＡＡｐｏＡＩＩ）、ゲルソリン（ＡＧｅｌ）、リゾチーム（ＡＬｙｓ）、白血球走化性因子（ＡＬｅｃｔ２）、フィブリノーゲンＡバリアント（ＡＦｉｂ）、シスタチンバリアント（ＡＣｙｓ）、カルシトニン（ＡＣａｌ）、ラクトアドヘリン（ＡＭｅｄ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＡＩＡＰＰ）、プロラクチン（ＡＰｒｏ）、インスリン（ＡＩｎｓ）、プリオンタンパク質（ＡＰｒＰ）、α－シヌクレイン（ＡαＳｙｎ）、タウ（ＡＴａｕ）、心房ナトリウム利尿因子（ＡＡＮＦ）、またはＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、他のアミロイド原性ペプチドを含む。ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質よって結合されるアミロイド原性ペプチドは、タンパク質、タンパク質断片、またはタンパク質ドメインであってもよい。一部の実施形態では、アミロイド沈着物またはアミロイド原線維は、組換えアミロイド原性タンパク質を含む。一部の実施形態では、アミロイドは、疾患の病理の一部である。

【0275】

一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質のヒトアミロイドへの結合は、ヒトアミロイド原線維の貪食を促進する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒトアミロイド原線維をオプソニン化する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維をオプソニン化する。一部の実施形態では、ヒトアミロイド原線維を、マクロファージの存在下で、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることで、マクロファージによるヒトアミロイド原線維の取り込みが促進される。一部の実施形態では、ヒトアミロイド原線維を、マクロファージの存在下で、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることで、ヒトアミロイド原線維のオプソニン化が促進される。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質のヒトアミロイドへの結合は、対照抗体（例えば、ｍＩｇｐ５及び／またはｃ１１－１Ｆ４）と同等またはそれよりも高い程度に、ヒトアミロイド原線維の貪食を促進する。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質は、抗体依存性細胞貪食を促進する。

【0276】

本明細書に記載の修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質のうちのいずれかを含む薬学的組成物も、本明細書に提供される。一部の実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。

【0277】

ＩＶ．診断及び検出方法
特定の例示的な実施形態では、修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、及び抗体－ペプチド融合タンパク質は、様々な薬剤で標識して、例えば、融合ペプチドを精製した後で、インビボ及びインビトロアッセイにおけるそれらの検出が可能になり得る。限定されないが、これには、放射性核種（例えば、Ｉ－^１２５、Ｉ－^１２３、Ｉ－^１３１、Ｚｒ－^８９、Ｔｃ－^９９ｍ、Ｃｕ－^６４、Ｂｒ－^７６、Ｆ－^１８）、酵素（西洋ワサビペルオキシダーゼ）、ビオチン、及びフルオロフォアなどが含まれる。タンパク質を検出可能に標識するための当該技術分野における既知の任意の手段を、本明細書に記載の方法とともに使用するために、使用及び／または適合させることができる。例えば、Ｉｇ抗体もしくはその断片、及び／またはアミロイド反応性ペプチドは、放射性同位体で放射標識することができるか、または蛍光タグもしくは化学発光タグで標識することができる。例示的な放射性同位体としては、例えば、^１８Ｆ、^１１１Ｉｎ、^９９ｍＴｃ、ならびに^１２３Ｉ及び^１２５Ｉが挙げられる。これら及び他の放射性同位体は、例えば、Ｉｇ抗体の軽鎖タンパク質に共有結合されたＤＴＰＡまたはＤＯＴＡなどのキレート剤の使用を伴うかまたは伴わない場合がある周知の化学を使用して、単離された免疫グロブリン軽鎖に結合することができる。例示的な蛍光タグまたは化学発光タグとしては、フルオレセイン、テキサスレッド、ローダミン、Ａｌｅｘａ色素、及びルシフェラーゼが挙げられ、これらは、リジン、システイン、グルタミン酸、及びアスパラギン酸側鎖との反応によって、タンパク質にコンジュゲートされ得る。一例の実施形態では、標識は、使用されるタグに適した励起波長及び発光波長を使用して、蛍光マイクロプレートリーダー、または蛍光光度計を使用して検出される。放射標識は、例えば、放射性放出の種類に応じてガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターを使用して、特定の放射性核種の正確な検出に好適なエネルギーウィンドウを使用することによって、検出することができる。しかしながら、放射性同位体を検出するための任意の他の好適な技術も、標識を検出するために使用することができる。

【0278】

アミロイドーシスに関して、例えば、そのような標識を使用して、アミロイドの存在を診断し、アミロイドタンパク質の負荷を決定し、特定の対象において修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、もしくは抗体－ペプチド融合タンパク質がアミロイドに結合する能力を監視し、アミロイドーシスの進行を監視し、及び／またはアミロイド治療（対象への修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質の投与に関連する治療を含む）に対する対象の応答を監視することができる。例えば、アミロイド反応性ペプチド、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質を含む修飾免疫グロブリンを、本明細書に記載の検出可能な標識で標識し、その後、アミロイド系疾患（例えば、アミロイドーシス、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、または関連する形質細胞疾患）に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる対象に投与する。その後、対象は、例えば、検出可能に標識された免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質の存在を検出するために、画像診断され得る。

【0279】

特定の例示的な実施形態では、検出可能に標識された修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質からのシグナルは、定量化することができ、それによって、対象におけるアミロイド沈着のレベルの指標を提供する。例えば、シグナル強度は、標準的なシグナル閾値と比較することでき、閾値以上ではアミロイドーシスが存在するが、閾値以下ではアミロイドーシスが存在しないか、または低レベルである。対象は、アミロイドを有すると診断される場合があり、その場合、化学療法、コルチコステロイド薬（レナリドミドまたはサリドマイド）、及び／またはボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）などの治療が施され得る。追加的に、または代替的に、本明細書に記載の修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質は、本明細書に記載のように、対象を治療するために、対象に投与され得る。特定の例示的な実施形態では、対象は、低アミロイド負荷、中アミロイド負荷、または高アミロイド負荷などの１つ以上の群に階層化され、次いで、それに応じて治療され得る。治療の進行を監視するために、対象に、検出可能に標識された修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質を再投与し、したがって、それらのアミロイド負荷を再評価することができる。

【0280】

Ｖ．治療の方法
Ａ．修飾免疫グロブリンを使用する方法
特定の例示的な実施形態では、アミロイドーシスを有する対象を治療する方法が本明細書に提供される。例えば、対象に、有効量の本明細書に記載される修飾免疫グロブリンが投与され、それによって、対象が治療されるか、またはアミロイド沈着物の画像診断が可能になる。特定の例示的な態様では、対象におけるアミロイド沈着物をクリアするための方法が提供される。本方法は、例えば、アミロイドーシスを有する対象を選択し、対象に、有効量の本明細書に記載される修飾免疫グロブリンを投与することを含む。修飾免疫グロブリンとしては、例えば、Ｉｇ抗体またはその断片の軽鎖タンパク質のＮ末端もしくは重鎖のＣ末端を介して、Ｉｇ抗体またはその断片に連結される、アミロイド沈着物に結合するアミロイド反応性ペプチドが挙げられる。アミロイド反応性Ｉｇ融合ペプチドの投与により、アミロイドのクリアランスがもたらされ、それによって、対象が治療される。

【0281】

一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、個体におけるアミロイドに結合する。一部の実施形態では、アミロイド沈着物は、疾患の病理に寄与し得る。他の実施形態では、アミロイド沈着物は、個体におけるアミロイドーシスまたはアミロイド関連疾患を示し得る。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、アミロイドーシスを有する個体において、アミロイドに結合する。一部の実施形態では、アミロイドーシスは、肝臓、心臓、または中枢神経系などの特定の組織または臓器系に局在する。他の実施形態では、アミロイドーシスは、全身性アミロイドーシスである。一部の実施形態では、アミロイドーシスは、家族性アミロイドーシスである。他の実施形態では、アミロイドーシスは、散発性アミロイドーシスである。一部の実施形態では、アミロイドーシスまたはアミロイド関連疾患は、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、ＡＨアミロイドーシス、Ａβアミロイドーシス、ＡＴＴＲアミロイドーシス、ＡＬｅｃｔ２アミロイドーシス、ならびにＩＩ型糖尿病のＩＡＰＰアミロイドーシス、アルツハイマー病、ダウン症候群、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳βアミロイド血管症、海綿状脳症、甲状腺腫瘍、パーキンソン病、レビー小体型認知症、タウオパシー、ハンチントン病、老人性全身性アミロイドーシス、家族性血液透析、老人性全身老化、加齢性下垂体障害、医原性症候群、海綿状脳症、反応性慢性炎症、甲状腺腫瘍、骨髄腫、または他の形態のがんである。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、正常な老化に関連するアミロイドに結合する。他の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、対象におけるアミロイドーシスまたはアミロイド関連疾患の診断、治療、または予後において使用される。

【0282】

特定の例示的な実施形態では、アミロイドーシスに罹患している対象の診断及び治療の両方のための方法が提供される。かかる方法は、対象に、アミロイド反応性ペプチドを含む検出可能に標識された修飾免疫グロブリンを投与することと、標識された修飾免疫グロブリンを投与することに基づいて、対象がアミロイドーシスを患っていると判定することと、を含む。次に、有効量のアミロイド治療薬を対象に投与することができる。例えば、有効量のアミロイド反応性ペプチドを含む１つ以上の修飾免疫グロブリンを投与することができる。

【0283】

一部の実施形態では、対象は、霊長類、ウシ、げっ歯類、またはブタなどの哺乳動物である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0284】

Ｂ．ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質を使用する方法
アミロイド関連障害を有する対象を治療する方法も本明細書に提供され、対象に、有効量の本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することを含む。

【0285】

一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、ＡＬ、ＡＨ、Ａβ２Ｍ、ＡＴＴＲ、トランスサイレチン、ＡＡ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬＥｃｔ２、ＡＦｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、α－シヌクレイン、ａｕ、またはＡβアミロイドーシスからなる群から選択される。一部の実施形態では、アミロイドーシスまたはアミロイド関連疾患は、ＡＡアミロイドーシス、ＡＬアミロイドーシス、ＡＨアミロイドーシス、Ａβアミロイドーシス、ＡＴＴＲアミロイドーシス、ＡＬｅｃｔ２アミロイドーシス、ならびにＩＩ型糖尿病のＩＡＰＰアミロイドーシス、アルツハイマー病、ダウン症候群、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、脳βアミロイド血管症、海綿状脳症、甲状腺腫瘍、パーキンソン病、レビー小体型認知症、タウオパシー、ハンチントン病、老人性全身性アミロイドーシス、家族性血液透析、老人性全身老化、加齢性下垂体障害、医原性症候群、海綿状脳症、反応性慢性炎症、甲状腺腫瘍、骨髄腫、または他の形態のがんである。一部の実施形態では、アミロイド関連障害は、全身性アミロイドーシスである。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、正常な老化に関連するアミロイドに結合する。他の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、対象におけるアミロイドーシスまたはアミロイド関連疾患の診断、治療、または予後において使用される。

【0286】

また、クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的とする方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、本方法は、アミロイド沈着物を、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質と接触させることを含む。一部の実施形態では、アミロイド沈着物が除去される。一部の実施形態では、アミロイド沈着物がクリアされる。一部の実施形態では、アミロイド沈着物は、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質によってオプソニン化される。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質のヒトアミロイド原線維への結合は、ヒトアミロイド原線維の貪食及びアミロイド沈着物の除去を促進する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ヒトアミロイド原線維をオプソニン化し、それによって、アミロイド沈着物を除去する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維をオプソニン化する。一部の実施形態では、ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質のヒトアミロイド原線維への結合は、ヒトアミロイド原線維の貪食及び／またはオプソニン化を、対照抗体（例えば、ｍＩｇｐ５及び／またはｃ１１－１Ｆ４）と同等またはそれよりも高い程度に促進する。

【0287】

一部の実施形態では、アミロイド関連障害を治療する方法が本明細書に提供され、検出可能な標識にコンジュゲートされた修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与すること、標識を検出すること、及び、シグナルが検出された場合、対象にアミロイドーシス治療を施すことを含む。一部の実施形態では、検出可能な標識は、放射標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、Ｉ^１２５、Ｔｃ^９９標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、酵素標識である。一部の実施形態では、標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼである。標識は、化学部分（例えば、ビオチン）をさらに含み、これは、特定の同族の検出可能な部分（例えば、標識されたアビジン）への結合を介して検出され得る。一部の実施形態では、アミロイド沈着物は、対象の肝臓、脾臓、または血液において特定される。一部の実施形態では、アミロイドーシス治療は、本明細書に提供される修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を含む。

【0288】

また、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質を投与することを含む、対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法も本明細書に提供され、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、本方法は、修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質からのシグナルを検出することを含む。一部の実施形態では、検出可能な標識は、放射標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、Ｉ^１２５、Ｔｃ^９９標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、酵素標識である。一部の実施形態では、標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼである。標識は、化学部分（例えば、ビオチン）をさらに含み、これは、特定の同族の検出可能な部分（例えば、標識されたアビジン）への結合を介して検出され得る。一部の実施形態では、アミロイド沈着物は、対象の肝臓、脾臓、または血液において特定される。

【0289】

一部の実施形態では、リガンドを検出する方法が本明細書に提供され、リガンドを、検出可能な標識にコンジュゲートされた修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合物と接触させることと、検出可能な標識からのシグナルを決定することと、を含む。一部の実施形態では、検出可能な標識は、放射標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、Ｉ^１２５、Ｔｃ^９９標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光標識である。一部の実施形態では、検出可能な標識は、酵素標識である。一部の実施形態では、標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼである。標識は、化学部分（例えば、ビオチン）をさらに含み、これは、特定の同族の検出可能な部分（例えば、標識されたアビジン）への結合を介して検出され得る。一部の実施形態では、接触は、インビトロである。一部の実施形態では、接触は、インビボである。

【0290】

ＶＩ．核酸、ベクター、宿主細胞、及び抗体の作製方法
Ａ．修飾免疫グロブリンまたは抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸
修飾免疫グロブリンをコードする核酸も本明細書に提供される。一部の実施形態では、核酸は、本明細書に記載の修飾免疫グロブリンのうちのいずれかをコードする。

【0291】

一部の実施形態では、核酸は、抗体１１－１Ｆ４のＶＨ及び／またはＶＬを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、抗体１１－１Ｆ４の重鎖及び／または軽鎖を含む抗体をコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0292】

特定の実施形態では、核酸は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0293】

特定の実施形態では、核酸は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0294】

一実施形態では、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0295】

別の態様では、核酸は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬとを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0296】

別の態様では、核酸は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３とを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む。

【0297】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンは、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む抗体を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0298】

別の態様では、核酸は、上記の提供された実施形態のうちのいずれかのＶＨと、上記の提供された実施形態のうちのいずれかのＶＬとを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0299】

一部の実施形態では、核酸は、アミロイド反応性ペプチドに連結された抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された軽鎖を含む抗体をコードする。一部の実施形態では、ペプチドは、抗体の軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端に連結される。一部の実施形態では、核酸は、ペプチドと抗体軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端との間のスペーサーアミノ酸配列も含む抗体をコードする。一部の実施形態では、ペプチドは、抗体軽鎖のＮ末端に連結される。

【0300】

一部の実施形態では、核酸は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結された配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結された配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結された配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体をコードする。

【0301】

一部の実施形態では、核酸は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結された配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結された配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結された配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体をコードする。

【0302】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0303】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0304】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む修飾免疫グロブリンをコードし、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0305】

また、抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）も本明細書に提供される。一部の実施形態では、核酸は、本明細書に記載の抗体－ペプチド融合タンパク質のうちのいずれかをコードする。

【0306】

特定の実施形態では、核酸は、抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0307】

特定の実施形態では、核酸は、抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬを含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0308】

一実施形態では、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨとを含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0309】

別の態様では、核酸は、抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。

【0310】

別の態様では、核酸は、抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬとを含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。

【0311】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、抗体は、ペプチドに連結される。

【0312】

別の態様では、核酸は、アミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表１に列挙されるアミノ酸配列のうちのいずれかを含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２のアミノ酸配列を含むアミロイド反応性ペプチドに連結された抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。一部の実施形態では、ペプチドは、抗体の軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端に連結される。一部の実施形態では、抗体はまた、ペプチドと軽鎖のＮ末端または重鎖のＣ末端との間のスペーサーアミノ酸配列を含む。

【0313】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0314】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0315】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0316】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0317】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖とを含む抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0318】

Ｂ．ヒト化抗体またはヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸
また、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）も本明細書に提供される。ヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質は、本明細書に記載されるヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質のいずれかであり得る。

【0319】

一部の実施形態では、核酸は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含むヒト化抗体をコードし、ＶＬは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施形態では、核酸は、表３に示されるように、抗体の１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び、ＣＤＲ－Ｌ３と、を含むヒト化抗体をコードする。

【0320】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体をコードし、ヒト化抗体は、１つ以上のＣＤＲ置換を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号６４～７０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体をコードし、ヒト化抗体は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１～８１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、を含む。

【0321】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、配列番号３２のＮ末端から始めて順次番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３３にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置３４にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４１にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置４２にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置５１にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９０にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、位置９２にアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体をコードし、表６Ａに示されるように、ＶＬ１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸置換を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。

【0322】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、配列番号４３のＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置３７にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置４８にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置６７にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置６８にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７１にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７６にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７８にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置７９にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置８０にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９２にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９６にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、位置９７にアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表６Ｂに示されるように、ＶＨ１と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。

【0323】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、ＶＬのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３３にＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、またはＡｌａを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３４にＡｌａまたはＶａｌを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４１にＴｙｒを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４２にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置５１にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９０にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９２にＰｈｅを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。

【0324】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、ＶＨのＮ末端から始めて番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９２にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９６にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９７にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。

【0325】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３６にＴｙｒを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置８５にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。

【0326】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＬの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３６にＴｙｒ及び位置３７にＬｅｕを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕ、位置８７にＰｈｅを含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。

【0327】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置６７にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７１にＬｙｓを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７６にＳｅｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７８にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７９にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置８０にＰｈｅを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置８９にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９３にＶａｌを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。

【0328】

一部の実施形態では、核酸は、ＶＨの１つ以上の位置に１つ以上のアミノ酸残基を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードし、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、及び位置６８にＳｅｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置３７のＶａｌ、位置４８のＬｅｕ、位置６７のＬｅｕ、位置６８のＳｅｒ、位置７１のＬｙｓ、位置８９のＴｈｒ、位置９３のＶａｌ、及び位置９４のＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。

【0329】

一部の実施形態では、核酸は、位置３６にＴｙｒ、位置３７にＬｅｕ、位置４６にＬｅｕ、位置８５にＬｅｕ、及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置３７にＶａｌ、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置８９にＴｈｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置９６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置８０にＰｈｅ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置４８にＬｅｕ、位置６７にＬｅｕ、位置６８にＳｅｒ、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７６にＳｅｒ、位置９３にＶａｌ、及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、位置４６にＬｅｕ及び位置８７にＰｈｅを含むＶＬと、位置７１にＬｙｓ、位置７８にＶａｌ、位置７９にＬｅｕ、位置９３にＶａｌ及び位置９４にＴｈｒを含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。

【0330】

一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬのアミノ酸配列を含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ４－Ｎ３３Ｓ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｑ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｅ、ＶＬ４－Ｎ３３Ａ、ＶＬ４－Ｎ３３Ｈ、ＶＬ４－Ｇ３４Ａ、またはＶＬ４－Ｇ３４Ｖからなる群から選択されるＶＬを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含むヒト化抗体をコードする。

【0331】

一部の実施形態では、核酸は、表６Ｂに示されるＶＨのアミノ酸配列を含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表６Ｂに示されるＶＨ２、ＶＨ３、ＶＨ４、ＶＨ５、ＶＨ６、ＶＨ７、ＶＨ８、ＶＨ９、ＶＨ１０、ＶＨ９－Ｄ５４Ｓ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｑ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｅ、ＶＨ９－Ｄ５４Ａ、ＶＨ９－Ｄ５４Ｈ、ＶＨ９－Ｇ５５Ａ、ＶＨ９－Ｇ５５Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｖ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｉ、ＶＨ９－Ｍ６４Ｌ、またはＶＨ９－Ｍ６４Ａからなる群から選択されるＶＨを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含むヒト化抗体をコードする。

【0332】

一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ９のＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。

【0333】

一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ３のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ６のＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。

【0334】

一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ１０のＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ８のＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含むＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表６Ａに示されるＶＬ４のＶＬと、表６Ｂに示されるＶＨ７のＶＨとを含むヒト化抗体をコードする。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含む。

【0335】

また、本開示のヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）も本明細書に提供される。一部の実施形態では、核酸は、本開示のヒト化抗体のうちのいずれか１つを含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする。

【0336】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬとを含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、Ｃ末端リジン残基を含まない配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸を含むＶＬと、を含み、抗体は、ペプチドに連結される。

【0337】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４４～６３からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0338】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３３～４２からなる群に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0339】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0340】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0341】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0342】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、表１のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むペプチドに連結される。

【0343】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0344】

一部の実施形態では、核酸は、ヒト化抗体を含む抗体－ペプチド融合タンパク質をコードし、ヒト化抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨを含む重鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む軽鎖と、を含み、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドに連結される。

【0345】

Ｃ．ベクター、宿主細胞
一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、１つ以上のベクターにある。例えば、一部の実施形態では、修飾免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖を含むベクターが本明細書に提供され、軽鎖は、ペプチドに連結される。一部の実施形態では、ペプチドに連結された重鎖及び軽鎖は、異なるベクターにある。

【0346】

一部の実施形態では、ベクターは、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）を含む。

【0347】

抗体産生の場合、ペプチド発現ベクターに連結される重鎖及び軽鎖は、当該技術分野で既知の適切な産生細胞株に導入され得る。発現ベクターの導入は、エレクトロポレーションを介した同時トランスフェクションまたは当該技術分野で利用可能な任意の他の好適な形質転換技術によって達成され得る。次いで、抗体産生細胞株を選択し、増殖させ、抗体を精製することができる。次いで、精製された抗体を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥなどの標準的な技術によって分析することができる。

【0348】

また、宿主細胞も提供され、本明細書に記載の修飾免疫グロブリンのうちのいずれかをコードする核酸を含む。抗体コードベクターのクローニングまたは発現にとって好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核生物細胞または真核生物細胞が含まれる。例えば、修飾免疫グロブリンは、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌で産生され得る。細菌中での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現についての説明）も参照されたい）。発現後、ペプチドに連結された抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。

【0349】

一部の実施形態では、宿主細胞は、本開示のヒト化抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質をコードする核酸（複数可）を含むベクターを含む。

【0350】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクション用に、昆虫細胞と併せて使用され得る。

【0351】

植物細胞培養物も、宿主細胞として利用され得る。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号も参照されたい（トランスジェニック植物で抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について説明されている）。

【0352】

脊椎動物細胞も、宿主として使用されて良い。例えば、懸濁液中で増殖するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶｌ株（ＣＯＳ－７）、ヒト胎児腎臓細胞株（２９３または２９３細胞、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶｌ）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載）、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびに骨髄腫細胞株（Ｙ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０など）が挙げられる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0353】

Ｄ．抗体または抗体－ペプチド融合タンパク質を作製するための方法
また、本開示の修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質を作製する方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、本方法は、修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質をコードするベクターの発現に好適な条件下で、本開示の宿主細胞を培養することと、修飾免疫グロブリン、ヒト化抗体、または抗体－ペプチド融合タンパク質を回収することと、を含む。

【0354】

ＶＩＩ．マウス抗体をヒト化する方法
マウス抗体をヒト化する方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、マウス抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖可変領域（ＶＨ）と、を含み、ＶＬは、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含み、ＶＨは、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＨ及びＶＬは、１つ以上のフレームワーク残基を含む。一部の実施形態では、マウス抗体のＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、マウス抗体のＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、マウス抗体のＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、マウス抗体のＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含み、マウス抗体のＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含み、マウス抗体のＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、マウス抗体は、表３に示されるように、抗体１１－１Ｆ４の１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、マウス抗体は、配列番号１５に記載の配列を有するＶＨのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と、配列番号１６に記載の配列を有するＶＬのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び、ＣＤＲ－Ｌ３と、を含む。

【0355】

一部の実施形態では、マウス抗体をヒト化する方法は、ｉ．マウス抗体のモデル化された構造を得るために、相同性モデリングを行うことと、ｉｉ．マウス抗体のモデル化された構造におけるフレームワーク残基の溶媒アクセス可能表面積を計算することと、ｉｉｉ．フレームワーク残基が埋もれた残基であるかどうかを判定することであって、埋もれた残基が、約１５％未満の溶媒可達表面積を有する残基であるかどうかを判定する、判定することと、ｉｖ．ヒトＶＨ及びＶＬを提供することと、ｖ．マウス抗体のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３を、それぞれ、ヒトＶＨ及びＶＬに導入し、それによって、移植された抗体を生成することと、ｖｉ．移植抗体の位置に復帰変異を導入することであって、復帰変異の位置が埋もれた残基である、導入することと、を含む。一部の実施形態では、ステップｖｉが繰り返される。一部の実施形態では、ステップｖｉは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回行われる。

【0356】

一部の実施形態では、復帰変異の位置は、ＣＤＲに近接している。一部の実施形態では、復帰変異の位置は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以下のアミノ酸残基によって、ＣＤＲから分離されている。一部の実施形態では、復帰変異の位置は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０オングストローム以下（その間の任意の範囲または値を含む）によって、ＣＤＲから分離されている。

【0357】

一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、復帰変異は、位置３６にＴｙｒを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、復帰変異は、位置３７にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、復帰変異は、位置４６にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、復帰変異は、位置８５にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＬに導入され、復帰変異は、位置８７にＰｈｅを含む。

【0358】

一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置３７にＶａｌを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置４８にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置６７にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置６８にＳｅｒを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置７１にＬｙｓを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置７６にＳｅｒを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置７８にＶａｌを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置７９にＬｅｕを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置８０にＰｈｅを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置８９にＴｈｒを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置９３にＶａｌを含む。一部の実施形態では、復帰変異は、ヒトＶＨに導入され、復帰変異は、位置９４にＴｈｒを含む。

【0359】

一部の実施形態では、本方法は、移植抗体のＣＤＲに１つ以上のアミノ酸置換を導入することをさらに含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、移植抗体のＶＬと比較して、ＣＤＲ－Ｌ１にアミノ酸置換を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２８のアミノ酸置換及び位置２９のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２８のＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、またはＡｌａからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１におけるアミノ酸置換は、位置２９のＡｌａまたはＶａｌからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、移植抗体のＶＨと比較して、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５４、位置５５、または位置６４のアミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５４のＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、またはＨｉｓからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置５５のＡｌａまたはＶａｌからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２におけるアミノ酸置換は、位置６４のＶａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、またはＡｌａからなる群から選択され、アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔの付番システムに従って番号付けされる。

【0360】

実施形態
実施形態１．修飾免疫グロブリンであって、
アミロイド反応性ペプチドであって、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記アミロイド反応性ペプチドと、
Ｉｇ抗体またはその機能的断片と、を含む、前記修飾免疫グロブリン。

【0361】

実施形態２．前記アミロイド反応性ペプチド及び前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片が、前記Ｉｇ軽鎖タンパク質のＮ末端または前記Ｉｇ重鎖タンパク質のＣ末端で一緒に連結される、実施形態１に記載の修飾免疫グロブリン。

【0362】

実施形態３．前記修飾免疫グロブリンが、前記アミロイド反応性ペプチドと前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片との間にスペーサー配列を含む、実施形態１または２に記載の修飾免疫グロブリン。

【0363】

実施形態４．前記修飾免疫グロブリンが、少なくとも２つのアミロイド反応性ペプチドを含み、前記アミロイド反応性ペプチドが、同じペプチドまたは異なるペプチドである、実施形態１～３のいずれかに記載の修飾免疫グロブリン。

【0364】

実施形態５．アミロイドーシスに罹患している対象を治療する方法であって、対象に、有効量の実施形態１～４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンを投与することを含む、前記方法。

【0365】

実施形態６．クリアランスのためにアミロイド沈着物を標的化する方法であって、アミロイド沈着物を、実施形態１～４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンと接触させることを含む、前記方法。

【0366】

実施形態７．クリアランスのために前記アミロイド沈着物を標的化することが、前記アミロイド沈着物のクリアランスをもたらす、実施形態６に記載の方法。

【0367】

実施形態８．クリアランスが、前記アミロイド沈着物のオプソニン化から生じる、実施形態６または７に記載の方法。

【0368】

実施形態９．前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片に連結された前記アミロイド反応性ペプチドが、ＡＡ、ＡＬ、ＡＨ、ＡＴＴＲ、Ａβ２Ｍ、ＡＬｅｃｔ２、野生型、ＴＴＲ、ＡＡｐｏＡＩ、ＡＡｐｏＡＩＩ、ＡＧｅｌ、ＡＬｙｓ、ＡＬｅｃｔ２、Ａｆｉｂ、ＡＣｙｓ、ＡＣａｌ、ＡＭｅｄｉｎ、ＡＩＡＰＰ、ＡＰｒｏ、ＡＩｎｓ、ＡＰｒＰ、またはＡβを含む１つ以上のアミロイド沈着物型に結合する、実施形態１～８のいずれかに記載の方法。

【0369】

実施形態１０．前記アミロイド沈着物を、前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片に連結された前記アミロイド反応性ペプチドと接触させると、前記アミロイド反応性ペプチド単独と比較して、アミロイド反応性Ｉｇｐ５コンジュゲートの半減期が約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはそれ以上増加する、実施形態６～８のいずれかに記載の方法。

【0370】

実施形態１１．修飾免疫グロブリンであって、
ペプチドと、
Ｉｇ抗体またはその機能的断片と、を含み、前記ペプチド及びＩｇ抗体またはその機能的断片が、Ｉｇ軽鎖タンパク質のＮ末端及び／またはＩｇ重鎖タンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端で一緒に連結される、前記修飾免疫グロブリン。

【0371】

実施形態１２．前記修飾免疫グロブリンが、前記ペプチドと前記Ｉｇ抗体またはその機能的断片との間にスペーサー配列を含む、実施形態１１に記載の修飾免疫グロブリン。

【0372】

実施形態１３．前記修飾免疫グロブリンが、少なくとも２つのペプチドを含み、ペプチドが、同じペプチドまたは異なるペプチドである、実施形態１～３のいずれかに記載の修飾免疫グロブリン。

【0373】

実施形態１４．修飾免疫グロブリンを生成する方法であって、
第１の発現ベクター及び第２の発現ベクターを提供することであって、
前記第１の発現ベクターが、Ｉｇ抗体軽鎖またはその機能的断片をコードする第１の核酸配列を含み、
前記第２の発現ベクターが、Ｉｇ抗体重鎖またはその機能的断片をコードする第２の核酸配列を含み、
前記第１の発現ベクター及び／または前記第２の発現ベクターが、第１のペプチドをコードする第３の核酸配列を含み、前記第３の核酸配列が、前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列に隣接して位置する、前記提供することと、
前記第１及び前記第２の発現ベクターを細胞に挿入することであって、前記細胞における前記第１及び前記第２の発現ベクターの発現が、前記第１のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす、前記挿入することと、を含む、前記方法。

【0374】

実施形態１５．前記第１の発現ベクター及び／または前記第２の発現ベクターが、第２のペプチドをコードする第４の核酸配列を含み、前記第４の核酸配列が、前記第１の核酸配列及び／または前記第２の核酸配列に隣接して位置する、実施形態１４に記載の方法。

【0375】

実施形態１６．前記細胞における前記第１及び前記第２の発現ベクターの発現が、前記第１のペプチド及び前記第２のペプチドに連結される免疫グロブリンをもたらす、実施形態１５に記載の方法。

【0376】

実施形態１７．スペーサー核酸配列が、前記第３の核酸配列と前記第１の核酸配列及び／または前記第２の第１の核酸配列との間に位置する、実施形態１４に記載の方法。

【0377】

実施形態１８．前記第１のペプチドが、配列番号１～１４に記載のアミノ酸のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４に記載の方法。

【0378】

実施形態１９．実施形態１４～１９のいずれかに記載の方法によって産生される、修飾免疫グロブリン。

【0379】

実施形態２０．アミロイド系疾患に罹患しているか、またはそれに罹患していると疑われる対象を治療する方法であって、
前記対象がアミロイド沈着物を有するかどうかを、
実施形態１～４のいずれかに記載の修飾免疫グロブリンを検出可能に標識することと、
前記対象に、前記修飾免疫グロブリンを投与することと、
前記検出可能な標識に関連するシグナルが、前記対象から検出され得るかどうかを判定することと、によって判定し、
前記シグナルが検出された場合、前記対象にアミロイドーシス治療を施すことと、を含む、前記方法。

【0380】

実施形態２１．シグナルが検出されない場合、アミロイド沈着物のその後の発生について、前記対象を監視する、実施形態２０に記載の方法。

【0381】

実施形態２２．前記シグナルの強度を決定することと、前記シグナルを閾値と比較することと、をさらに含み、前記閾値を超えた場合、前記対象がアミロイド沈着物を有すると判定される、実施形態２１に記載の方法。

【0382】

実施形態２３．前記アミロイドーシス治療が、前記対象に、請求項１～４のいずれかに記載の修飾免疫グロブリンを投与することを含む、実施形態２０～２２のいずれかに記載の方法。

【0383】

実施形態２４．前記修飾免疫グロブリンの投与が、前記対象における前記アミロイド沈着物のクリアランスをもたらす、実施形態２３に記載の方法。

【0384】

実施形態２５．実施形態１～４のいずれかに記載の修飾免疫グロブリンを検出可能に標識することと、前記対象に前記修飾免疫グロブリンを投与することと、前記修飾免疫グロブリンからのシグナルを検出することと、を含む、対象におけるアミロイド沈着物を特定する方法。

【0385】

実施形態２６．前記対象が、アミロイドを含まないか、または意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、もしくは１つ以上の関連する形質細胞疾患を患っていると判定される、実施形態２０～２５のいずれかに記載の方法。

【0386】

実施形態２７．リガンドを検出する方法であって、
実施形態１１～１３のいずれかに記載の修飾免疫グロブリンを検出可能に標識することであって、前記修飾免疫グロブリンの前記ペプチドが、前記リガンドに対する結合親和性を有する、前記標識することと、
前記リガンドを前記修飾免疫グロブリンと接触させることと、
前記検出可能な標識からシグナルを決定し、それによって、前記リガンドを検出することと、を含む、前記方法。

【0387】

実施形態２８．修飾免疫グロブリンであって、
アミロイド反応性ペプチドであって、配列番号１～１４に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む、前記アミロイド反応性ペプチドと、
抗体またはその免疫学的に活性な断片であって、前記抗体が、配列番号１７に記載のＣＤＲＨ１、配列番号１８に記載のＣＤＲＨ２、配列番号１９に記載のＣＤＲＨ３を含む、重鎖可変ドメインと、
配列番号２０に記載のＣＤＲＬ１、配列番号２１に記載のＣＤＲＬ２、及び配列番号２２に記載のＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変ドメインと、を含む、前記断片と、を含む、前記修飾免疫グロブリン。

【0388】

実施形態２９．前記アミロイド反応性ペプチドが、配列番号１または配列番号２を含む、請求項２８に記載の修飾免疫グロブリン。

【0389】

実施形態３０．前記アミロイド反応性ペプチドが、前記抗体の軽鎖またはその免疫学的に活性な断片のＮ末端に連結される、実施形態２８または２９に記載の修飾免疫グロブリン。

【0390】

実施形態３１．前記アミロイド反応性ペプチドが、リンカーによって、前記抗体の軽鎖またはその免疫学的に活性な断片のＮ末端に連結される、実施形態２８～３０のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【0391】

実施形態３２．前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２８～３１のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【0392】

実施形態３３．前記抗体が、キメラまたはヒト化である、実施形態２８～３２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【0393】

実施形態３４．前記抗体が、ヒトフレームワーク配列を含む、実施形態２８～３２のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【0394】

実施形態３５．対象におけるアミロイドーシスを治療する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態２８～３４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンを投与することを含む、前記方法。

【0395】

実施形態３６．前記修飾免疫グロブリンをコードする１つ以上の核酸で宿主細胞を形質転換することと、前記修飾免疫グロブリンを産生するための条件下で前記細胞を培養することと、を含む、実施形態２８～３４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンを産生する方法。

【0396】

実施形態３７．前記修飾免疫グロブリンが、ｒＶλ６Ｗｉｌ、Ａβ、Ａβ（１－４０）、ＩＡＡＰ、ＡＬκ４、Ａｌλ１、またはＡＴＴＲ原線維に結合する、実施形態１～４、１１～１３、または２８～３４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリン。

【0397】

実施形態３８．実施形態１～４、１１～１３、または２８～３４のいずれか１項に記載の修飾免疫グロブリンをコードする、核酸。

【0398】

実施形態３９．実施形態３８に記載の核酸を含む、宿主細胞。

【0399】

実施形態４０．前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞である、請求項３９に記載の宿主細胞。

【実施例】

【0400】

以下の実施例は本発明をさらに説明するが、決してその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示及び当業者の一般的なレベルに照らして、以下の実施例は例示的なものに過ぎず、多数の変更、修正、及び改変が、本開示の主題の範囲から逸脱することなく用いられ得ることが理解されるであろう。添付の図面は、本開示の明細書及び説明の不可欠な部分として考慮されることを意図する。

【0401】

本明細書で使用される場合、以下の略称が適用される：ｅｑ（当量）、Ｍ（モル濃度）、μＭ（マイクロモル濃度）、Ｎ（規定）、モル（モル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、μｍｏｌ（マイクロモル）、ｎｍｏｌ（ナノモル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｋｇ（キログラム）、μｇ（マイクログラム）、Ｌ（リットル）、ｍｌ（ミリリットル）、μｌ（マイクロリットル）、ｃｍ（センチメートル）、ｍｍ（ミリメートル）、μｍ（マイクロメートル）、ｎｍ（ナノメートル）、℃。（摂氏温度）、ｈ（時間）、ｍｉｎ（分）、ｓｅｃ（秒）、ｍｓｅｃ（ミリ秒）。

【0402】

実施例１．アミロイド沈着物の標的化及び除去のための、アミロイド親和性（ａｍｙｌｏｉｄｏｐｈｉｌｉｃ）ペプチドに融合された免疫グロブリンの生成及び使用。
序論：免疫グロブリン－ペプチド融合構築物は、別のタンパク質またはペプチドを組み込んだＩｇからなる合成生体分子である。Ｉｇは、目的のペプチドに２つの大きな利点：第１に、Ｉｇと新生児Ｆｃ受容体との相互作用に起因するアミロイド反応性ペプチドの血漿中半減期の増強、及び第２に、膜結合Ｆｃ受容体及び補体の結合による相互作用を介して、エフェクター免疫細胞を関与及び活性化させる能力、を付与する。アミロイド沈着物の標的化及び除去（例えば、クリアリング）のための融合ペプチド抗体を生成するために、ペプチドアミノ酸配列及びスペーサーエレメントをＩｇ軽鎖タンパク質のＮ末端に連結することによって、合成アミロイド親和性ペプチドｐ５（配列番号１）をマウスＩｇＧ２ａと組み込むマウスＩｇ－ペプチド融合構築物を合成した（図２）。

【0403】

本開示に基づいて当業者は理解するであろうが、本構築物は、本明細書に記載されるように、本発明者らが開発または提案した任意の数のアミロイド反応性ペプチドと、任意の数のスペーサー配列とを含むことができる（表１のものを含む；ＷＯ２０１６０３２９４９も参照されたい）。マウスＩｇｐ５融合物をＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞において生成し、インビトロ結合及び貪食アッセイのパネルを使用して原理証明データを生成するために使用し、アミロイドーシスのマウスモデルを使用して、全身性アミロイド沈着物と局在することが示されている。まとめると、これらのデータは、Ｉｇ－ペプチド融合物が、（１）複数の形態のアミロイド沈着物に結合することができること、（２）インビボでアミロイドに特異的に結合することができること、及び（３）培養マクロファージアッセイシステムを使用して、インビトロでアミロイド抽出物及び合成原線維をオプソニン化することができること、を示す。本発明者らは、Ｉｇ－ペプチド融合が、アミロイド反応性ペプチドを介して、すべてのアミロイド沈着物に見られる過剰硫酸化ヘパラン硫酸プロテオグリカン及び／またはタンパク質原線維に結合すると予測する。次いで、Ｆｃ領域は、補体を固定し、Ｆｃ受容体を発現するマクロファージ及び他の細胞を関与させることができ、次いで、アミロイドを除去することができる。図３に、このプロセスの概略図を示す。

【0404】

材料及び方法：Ｉｇｐ５重鎖構築物については、マウスＩｇＧ２ａ重鎖のＣＨ２（定常重鎖ドメイン２）及びＣＨ３（定常重鎖ドメイン３）ドメインをコードするｐＦＵＳＥ－ｍＩｇＧ２Ａ－Ｆｃベクターは、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した。マウス１１－１Ｆ４ Ｉｇの配列に由来するマウス重鎖ＶＨ（可変重鎖）及びＣＨ１（定常重鎖ドメイン１）ドメインのｃＤＮＡを合成し（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、５’分泌リーダー及びＦｃ領域のＣＨ２／ＣＨ３ドメインをインフレームでベクターにクローニングした。Ｉｇｐ５軽鎖構築物については、５’分泌リーダー、１５アミノ酸の５’スペーサー（配列番号２３）、及び５アミノ酸の３’スペーサー（配列番号２４）、続いて、マウス１１－１Ｆ４のＶＬ（可変軽鎖）及びＣＬ（定常軽鎖）領域をコードする配列を有するペプチドｐ５（配列番号１）のｃＤＮＡを合成し（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）、ｐｃＤＮＡ３．１－Ｈｙｇｒｏ（＋）ベクターにクローニングした。Ｉｇｐ５軽鎖構築物のアミノ酸配列は、配列番号２５に提供される。ベクターを、Ｉｇ枯渇血清を含む培地中で培養したＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞株に、一過的にトランスフェクトした。分泌されたＩｇｐ５を、プロテインＡコンジュゲートマトリックスを使用して、培地から精製した。精製されたＩｇｐ５と合成アミロイド原線維との結合は、プルダウンアッセイを使用することによって実証した。インビボでのマウスＡＡアミロイドとの反応性は、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）標識Ｉｇｐ５を使用したミクロオートラジオグラフィー、組織生体内分布測定、及び小動物ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングによって評価した。合成原線維のＩｇｐ５媒介性貪食を、定量的ｐＨｒｏｄｏ－ｒｅｄ蛍光アッセイにおいて、ＴＨＰ－１ヒトマクロファージ細胞を使用して、インビトロで測定した。

【0405】

結果：Ｆｃｐ５融合物は、約１～４μｇ／ｍＬの培養培地で、両方のＨＥＫ細胞株で発現した。プルダウンアッセイについては、Ｉｇｐ５を、^１２５Ｉで標識した。還元条件及び非還元条件を使用したゲル電気泳動を使用して、Ｉｇｐ５構築物で、重鎖及び軽鎖の両方の存在が示された（図４）。

【0406】

プルダウンアッセイを使用して、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５が、組換えアミロイド原性λ６可変ドメインタンパク質からなる合成原線維に結合することが示された（ｒＶλ６Ｗｉｌ、表２）。反応性は、原線維ペレット中の放射標識物質の存在によって明らかように、７０％超であった。

【表2】

【0407】

ＡＡアミロイドを有するマウスにおいて、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５は、組織生体内分布測定によって証明されるように、肝臓及び脾臓におけるアミロイド沈着物（これらのマウスにおける最大アミロイド沈着部位）に特異的に結合した（図５）。注目すべきことに、健常なアミロイド不含マウスでは、これらの臓器において^１２５Ｉｇｐ５の保持はなかった（図５）。ミクロオートラジオグラフィーは、すべての臓器及び組織のより少ないアミロイド沈着物への取り込みを明らかにした（図示せず）。ＡＡマウス及び健常なアミロイド不含対照のＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングは、ＩＶ注射の２０時間後、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５がＡＡマウスの肝臓及び脾臓に取り込まれたことを確認したが、ＷＴマウスでは、明らかなように、血液プールのみに取り込まれた（図６）。

【0408】

最後に、Ｉｇｐ５は、インビトロにおけるｐＨｒｏｄｏグリーンで標識された合成軽鎖アミロイド原線維の貪食を効果的に媒介した（図７）。

【0409】

考察：本発明者らは、これらのデータに基づいて、機能的ペプチドをＩｇ軽鎖のＮ末端で融合することによって、リガンド結合特性が増強された機能的Ｉｇ分子を生成することが可能であることを実証した。さらに、本発明者らのデータは、アミロイド反応性ペプチドをＩｇ軽鎖に融合することによって、Ｉｇ－ペプチド融合物を生成することができることを示し、これは、インビトロ及びインビボでアミロイドに特異的に結合することができ、かつオプソニン化試薬として機能し、マクロファージによるアミロイドの取り込みを増強することができる。Ｉｇｐ５融合物、または他のアミロイド親和性ペプチドを使用する同様の構築物は、免疫学的に活性な生体分子（Ｉｇ）をアミロイド沈着物に標的化するための新規の試薬を提供し、それによって、免疫系の細胞（マクロファージ及び好中球）による患者におけるアミロイドのクリアランスが迅速化され得る。これらの試薬は、汎アミロイド反応性を提供し、すべてではないにしても、多くのアミロイド疾患の形態を有する患者に利益をもたらすことができる。さらに、これらの試薬は、適切な放射性核種で標識した場合、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴイメージングによる患者におけるアミロイド沈着物の検出に使用することができ、非標識Ｉｇ－ペプチド融合物試薬を使用して、療法への応答の監視または療法前の患者の階層化に使用することができる。

【0410】

実施例２．Ｉｇ－ペプチド融合物のアミロイド原線維への結合。
この実施例は、多様なアミロイド関連基質へのＩｇｐ５の結合を示す。この実施例はまた、マウス組織におけるペプチド－Ｉｇ融合物の例を示す。

【0411】

材料及び方法
ペプチドｐ５に融合されたＩｇκ ＬＣ配列を含むペプチド－Ｉｇ融合物を、ベクターで発現させた。ＩｇＧ１可変ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、及びＩｇＧ２ａのＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むＩｇＨＣ配列を、第２のベクター系で発現させた。ベクターを、ＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞に共トランスフェクトし、プロテインＡコンジュゲートビーズを使用して、Ｉｇ産物を単離した。Ｉｇｐ５及びＩｇ対照を、^１２５Ｉで放射標識し、ゲル電気泳動によって分析した。プルダウンアッセイを使用して、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５及びＩｇ対照と合成アミロイド原線維及びアミロイド抽出物との結合を評価した。^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５を、組織での保持を評価するために、健常（ＷＴ）マウス及び重度の全身性血清アルブミンタンパク質Ａ（ＡＡ）アミロイドーシスを有する（Ｈ２／ＩＬ－６トランスジェニック）マウスに静脈内注射した。次いで、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の組織局在を、ミクロオートラジオグラフィー（ＡＲＧ）によって評価した。

【0412】

結果
Ｉｇｐ５を、ＨＥＫ細胞内で一過的に発現させ、プロテインＡビーズを使用して細胞培養上清から精製し、^１２５Ｉで放射線標識して予備分析した。^１２５Ｉ標識Ｉｇｐ５を、還元条件下及び非還元条件下の両方で、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。マウス１１－１Ｆ４（ＩｇＧ１κ）をＩｇ対照として使用した。比較として、ｐ５ペプチド単独も分析した。図８は、精製された^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。精製されたＩｇｐ５は、ゲル電気泳動後、重鎖及び軽鎖の両方を有するインタクトなＩｇとして現れた。

【0413】

合成アミロイド原線維及びアミロイド抽出物への^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５及びＩｇ対照の結合を、プルダウンアッセイを使用して評価した。図９に示されるように、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５は、多様なアミロイド関連基質に結合する。^１２５Ｉ－ｍ１１－１Ｆ４は、κ４－ペプチドでコーティングされたビーズに結合したが、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維には結合せず、一方、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５は、両方の基質に結合した。^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５は、ｒＶλ６Ｗｉｌ及びＡβ（１－４０）アミロイド様原線維に約６４％結合した（対照Ｉｇ、マウス１１－１Ｆ４よりも２１倍高い）。アミロイド抽出物への結合も１０～３０倍高く、^１２５Ｉ－ｐ５のものと正の相関があった（ｒ＝０．９、ｐ＝０．０１）。多様な合成アミロイド原線維及びアミロイド抽出物への^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の結合は、ｍ１１－１Ｆ４と比較して、大幅に増強され、その反応性は、ｐ５ペプチド単独のものと相関し、結合がペプチドによって引き起こされていることを示す。

【0414】

インビボでのＩｇＰ５の保持を評価するために、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５を、健常（ＷＴ）マウス及び重度の全身性血清アルブミンタンパク質Ａ（ＡＡ）アミロイドーシスを有する（Ｈ２／ＩＬ－６トランスジェニック）マウスに静脈内注射した。様々な組織にわたる^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の局在を、ミクロオートラジオグラフィー（ＡＲＧ）によって評価した。コンゴレッド染色を使用して、アミロイド沈着物を染色した。図１０のパネルＡに示されるように、ＡＲＧ及びコンゴレッド染色は、マウスにおける肝脾ＡＡアミロイド、ならびに他の組織において結合するアミロイドにおける、^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の特異的保持を示す。図１０のパネルＢに示されるように、ＷＴマウスにおいて、アミロイド不含組織との特異的反応性は観察されず、血液プールが、唯一特定された^１２５Ｉ－Ｉｇｐ５の検出源である。

【0415】

これらの結果は、Ｉｇｐ５が、多くの形態のアミロイドに結合し、インビボでアミロイドを特異的に標的化することを示す。

【0416】

実施例３．抗アミロイド抗体のヒト化
以下の実施例は、ヒト化抗アミロイド抗体の生成を説明する。

【0417】

材料及び方法
親抗体及びペプチドのアミノ酸配列
マウス抗体ｍ１１－１Ｆ４を親抗体として使用して、ヒト化抗体を生成した。軽鎖のＮ末端で融合されたペプチドｐ５を有する親マウス抗体は、「ｍＩｇＧ－ｐ５」と命名された。Ｎ末端からＣ末端へ、ｍＩｇＧ－ｐ５軽鎖は、アミノ酸スペーサー配列に融合された分泌リーダー配列、ｐ５ペプチド配列、別のアミノ酸スペーサー配列、及び抗体軽鎖を含む（図１１Ａ及び図１１Ｂを参照されたい）。

【0418】

ｐ５のアミノ酸配列は、配列番号１に記載されている（表１を参照されたい）。

【0419】

抗体のヒト化
以下のようにヒト化抗体を作製した。まず、ｍ１１－１Ｆ４の可変ドメイン配列を解析した。相補性決定領域（ＣＤＲ）、超可変ループ、及びフレームワーク領域（ＦＲ）を同定した。ｍ１１－１Ｆ４の相補性決定領域のアミノ酸配列を、以下の表３に示す。ＣＤＲ、ＦＲ、及びＶＨ－ＶＬ界面における残基のアミノ酸配列も、図１２に示す。

【表3】

【0420】

次に、相同性モデリングを行って、マウス抗体のモデリングされた構造を得た。相同モデルは、カスタマイズされたビルド相同モデルのプロトコルを使用して構築された。ジスルフィド架橋を特定し、連結した。離散最適化タンパク質エネルギー（ＤＯＰＥ）法を使用して、ループを最適化した。

【0421】

フレームワーク残基の溶媒可達表面積を計算した。この結果に基づいて、埋設されたフレームワーク残基を特定した。溶媒可達表面積が１５％未満であった残基を、埋設残基とみなした。

【0422】

次に、マウス対応物に最も高い配列同一性を共有したＶＨ及びＶＬ配列の各々について１つのヒトアクセプターを選択した（表４Ａ～４Ｂを参照されたい）。マウス抗体のＣＤＲをヒトアクセプターのフレームワークに直接移植し、いかなる逆変異も含まない移植抗体の配列を得た。これらの配列は、「ＶＨ１」及び「ＶＬ１」と称される（以下の表６Ａ～６Ｂを参照されたい）。

【表4】

【表5】

【0423】

次に、ステップ５で特定された重要な残基を、移植されたＶＨ１及びＶＬ１ならびにマウスＶＨ及びＶＬの配列において比較した。移植及びマウス抗体フレームワーク配列（すなわち、推定復帰変異部位）において異なるすべての重要な残基を特定した。

【0424】

次に、１つ以上の復帰変異を、以下のガイドラインに従って、段階的な様式で、移植抗体配列に組み込んだ：（１）免疫応答を誘発する可能性が低い埋もれた残基を復帰変異について選択し、（２）ＣＤＲにも近接している埋もれた残基を優先度の高い復帰変異について選択し、（３）他の埋もれたＦＲ残基を優先度の低い復帰変異について選択した。

【0425】

最後に、追加の変異を、ＶＨまたはＶＬのＮ末端から数えて、ヒト化重鎖可変領域ＶＨ９のＣＤＲの残基Ｄ５４、Ｇ５５、またはＭ６４、及びヒト化軽鎖可変領域ＶＬ４のＣＤＲの残基Ｎ３３またはＧ３４に導入した。これらの変異を、翻訳後修飾の部位を除去するように設計し、以下の表６Ａ～６Ｂに列挙する。

【0426】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
ヒト化抗アミロイド抗体がＶκ４Ｌｅｎ（１－２２）（「Ｌｅｎ（１－２２）モノマー」）モノマーペプチド（ｍ１１－１Ｆ４抗体の天然リガンド）に結合する親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システムを用いて測定した。親抗体ｍ１１－１Ｆ４は、変性カッパ４軽鎖タンパク質のＮ末端に存在するエピトープに結合する。Ｌｅｎ（１－２２）モノマーは、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０１５９０５号に記載されているように、このエピトープを含むペプチドである。追加の変異を有するＶＨ９及びＶＬ４のバージョンを含む、ヒト化重鎖領域ＶＨ９及びヒト化軽鎖ＶＬ４を組み込んだ抗アミロイド抗体の結合親和性を試験した（表５）。

【0427】

すべてのＳＰＲデータは、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ評価ソフトウェア（バージョン１．１）を使用して処理した。各サイクルにおけるフローセル１及び緩衝液のブランク注入を応答単位の減算のための二重参照として使用した。ＳＰＲ実験の追加の実験条件が、以下の表３に提供される。

【表6】

【0428】

結果
ヒト化ＶＨ及びＶＬ配列を有する抗体は、ｍ１１－１Ｆ４に由来した。ヒト化ＶＬ配列を、ＶＬ１～ＶＬ４と命名し、ヒト化ＶＨ配列をＶＨ１～ＶＨ１０と命名した。ヒト化ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列を、以下の表６Ａ～６Ｂに提供する。表６Ａ～６Ｂにおいて、ＣＤＲ配列を下線で示し、ＶＬ４及びＶＨ９に導入された復帰変異残基及びさらなる変異を太字及び斜体で示す。ＶＬ４及びＶＨ９に導入されたさらなる変異は、表６Ａ及び６ＢのＩｇＧの列に列挙されている。これらの変異は、ＶＬまたはＶＨのＮ末端を基準にして番号付けされている。修飾ＣＤＲを有するＶＬ４及びＶＨ９のバリアントを生成し、これらのＣＤＲ配列を、ＶＬ４及びＶＨ９と比較して、表６Ｃ及び６Ｄに提示する。

【表7】

【表8-1】

【表8-2】

【表9】

【表10】

【0429】

ヒト化及び親ＶＬ配列のアミノ酸配列同一性を、配列整列によって比較した。１１２残基のＶＬ配列のうち、ＶＬ４は、ｍ１１－１Ｆ４に対して９１．１％の同一性を有し、ＶＬ３は、ｍ１１－１Ｆ４に対して９３．８％の同一性を有し、ＶＬ３は、ＶＬ４に対して９８．１％の同一性を有した。

【0430】

ヒト化抗アミロイド抗体の結合親和性
表７は、ヒト化抗アミロイド抗体のＬｅｎ（１－２２）モノマーペプチドへの結合を測定するＳＰＲアッセイの結果を提供する。具体的には、ヒト化ＶＨ９及びＶＬ４配列は、表７の「リガンド」の列に示されるように、追加のアミノ酸置換の有無で試験した。

【表11】

【0431】

実施例４．ペプチドｐ５に融合された抗アミロイド抗体のアミロイド原線維及び細胞抽出物への結合
以下の実施例は、ヒト化抗アミロイド抗体がアミロイド原線維及びヒトＡＬ及びＡＴＴＲアミロイド抽出物と結合する能力を試験する、酵素結合免疫吸着アッセイ及びプルダウン実験を記載する。

【0432】

材料及び方法
試験した抗アミロイド抗体
実施例３に記載のように、ヒト化抗アミロイド抗体を使用した。加えて、リジン（「ｐ５」）またはアルギニン（「ｐ５Ｒ」）残基を有するペプチドｐ５のバリアントを、軽鎖のＮ末端に融合し、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒ、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５、及びＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒを生成した。ｐ５Ｒのアミノ酸配列は、配列番号２に記載されている（表１を参照されたい）。

【0433】

ユウロピウム結合免疫吸着アッセイ（ＥｕＬＩＳＡ）
ユウロピウム結合免疫吸着アッセイ（ＥｕＬＩＳＡ）を実施するために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に０．８３μＭで、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の懸濁液（超音波処理）を調製した。原線維を、各ウェルに５０μＬを添加することによって、９６ウェルマイクロプレートのウェル上にコーティングした。プレートを、３７℃で一晩乾燥させた。マイクロプレートのウェルを、スーパーブロック（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）（ＳＢ）を２００μＬ／ウェルで添加することによってブロッキングし、３７℃で１時間放置した。一次（試験）抗体（すなわち、ヒト化抗体）を添加し、１００μＬ／ウェルを使用して、１μＭから始まる１：２の希釈系列で、ＳＢ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＳＢＴ）中で調製した。次いで、プレートを、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄ステップ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を使用してプレートを３回洗浄した）後、二次抗体を、１００μＬ／ウェルで、ＳＢＴ中のビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）の１：３０００希釈液として添加した。プレートを３７℃で１時間インキュベートした。さらなる洗浄ステップの後、１００μＬ／ウェルの、ＳＢＴ中のユウロピウム／ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）の１：１０００希釈液を添加した。プレートを、３７℃で１時間インキュベートした。最終洗浄ステップ後、１００μＬ／ウェルのユウロピウム増強溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加した。時間分解蛍光発光を、マイクロプレートリーダー（Ｗａｌｌａｃ）を使用して検出した。

【0434】

プルダウン結合アッセイ
ｒＶλ６Ｗｉｌから合成アミロイド原線維を調製するために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、０．０１％（ｗ／ｖ）ＮａＮ３（ｐＨ７．５）中に１ｍｇ／ｍＬのモノマーを含む１ｍＬの容量を、０．２ｍｍポアサイズのフィルターを通して濾過し、１５ｍＬ円錐形ポリプロピレンチューブ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）に添加し、反応混合物が不透明になるまで、３７℃、２２５ｒｐｍで４５°の角度で３～５日間振盪した。

【0435】

精製ヒトアミロイド組織抽出物は、Ｐｒａｓ ｅｔ ａｌ．に記載されている水浮遊法を変更なしで使用して、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）またはトランスサイレチン関連アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）を有する患者からの剖検由来組織を使用して調製した（Ｐｒａｓ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９６８ Ａｐｒ；４７（４）：９２４－９３３）。水洗中に単離された精製アミロイド材料、及びアミロイドリッチペレットを回収し、凍結乾燥して、使用するまで室温で保管した。

【0436】

プルダウンアッセイの場合、２５マイクロリットルの１ｍｇ／ｍＬのＡＬ抽出物、または合成ｒＶλ６Ｗｉｌ可変ドメイン原線維（Ｗａｌｌ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３８（１９９９）１４１０１－１４１０８）を、０．５ｍＬ微量遠心チューブ中で、２１，０００×ｇで５分間遠心分離した。上清を廃棄し、ペレットを、２００μＬの０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に再懸濁した。^１２５Ｉ－ｐ５＋１４（約１００，０００カウント／分（ＣＰＭ）；約５ｎｇのペプチド）ストックの１：１００希釈液１０マイクロリットルを、懸濁液に加えた。混合物を、室温で１時間回転させた。次いで、試料を１５，０００×ｇで１０分間、２回遠心分離した。各ステップ後、上清及びペレットを分離し、各ステップにおける放射能を、１分間の収集でＣｏｂｒａＩＩγカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。ペレットに結合した^１２５Ｉ－ｐ５＋１４の割合（％）を、以下のように決定した：
ペレットのＣＰＭ／（ペレットのＣＰＭ＋上清のＣＰＭ）×１００

【0437】

結果
ＥｕＬＩＳＡ
ヒト化抗アミロイド抗体がｒＶλ６Ｗｉｌ原線維に結合する能力をＥｕＬＩＳＡによって試験した（図１３Ａ）。図１３Ａに提示されるそのデータに基づいて、ｃ１１－１Ｆ４は、約７２ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ１０／ＶＬ４は、１７ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ９／ＶＬ４は、７ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ８／ＶＬ４は、１６ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ７／ＶＬ４は、７５ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ６／ＶＬ３は、９５ｎＭのＥＣ_５０値で結合した。ＶＨ９／ＶＬ４は、ｃ１１－１Ｆ４と比較して、増加した結合を示した（図１３Ａ）。ＶＨ９／ＶＬ４抗体は、ＶＨ６／ＶＬ３よりも大きな程度でアミロイド原線維に結合した（図１３Ａ）。さらなる開発には、ＶＨ９／ＶＬ４及びＶＨ６／ＶＬ３を選択した。

【0438】

図１３Ｂに示されるように、ペプチドｐ５及びｐ５Ｒを、ＶＨ６／ＶＬ３の軽鎖のＮ末端に付加すると、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維への結合が約３０倍増加した（ＥＣ_５０に基づく）。図１３Ｂに提示されるそのデータに基づいて、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５は、３ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒは、３ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ｃ１１－１Ｆ４は、約１００ｎＭのＥＣ_５０値で結合し、ＶＨ６／ＶＬ３は、９５ｎＭのＥＣ_５０値で結合した。

【0439】

概して、ｐ５のアルギニンバリアント（ｐ５Ｒ）を有するバリアントは、ｐ５バリアントよりも優れていた（図１３Ｃ及び図１３Ｄ）。この結果は、ペプチド単独の以前の研究と一致した（Ｗａｌｌ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１３ Ｊｕｎ ４；８（６）：ｅ６６１８１）。

【0440】

図１３Ｅに示されるように、ＶＨ９／ＶＬ４は、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維に対して、マウス親抗体と同じ反応性を有した。

【0441】

図１３Ｅ及び図１３Ｆに示されるように、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５及びＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒの両方とも、ｈＡＴＴＲアミロイド抽出物への結合を示した。図１３Ｅ及び図１３Ｆのデータに基づいて、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５は、５０ｎＭのＥＣ_５０値でＳｎｏ ｈＡＴＴＲ抽出物に結合し、９０ｎＭのＥＣ_５０値でＫｅｎ ＡＴＴＲ抽出物に結合し、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒは、４７ｎＭのＥＣ_５０値でＳｎｏ ＡＴＴＲ抽出物に結合し、７０ｎＭのＥＣ_５０値でＫｅｎ ＡＴＴＲ抽出物に結合し、８５ｎＭのＥＣ_５０値でＰｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲに結合した。

【0442】

以下の表８は、ＥＬＩＳＡの結果を提供し、ｍＩｇｐ５、ｈＩｇＧ１、ｃ１１－１Ｆ４、ｍ１１－１Ｆ４、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５、及びＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒが、ｒＶλ６Ｗｉｌ原線維、Ｐｅｒ１２５ ｗｔＡＴＴＲ抽出物、ＫＥＮ ｈＡＴＴＲ抽出物、ＳＨＩ ＡＬλ肝臓抽出物、及びＴＡＬ ＡＬκ肝臓抽出物に結合する能力を測定した。抗体及び基質の各組み合わせについて、アッセイにおける対数変換ＥＣ_５０、ＥＣ_５０、及び結合の最大レベルが示されている。「ｎａ」とラベルされた条件は、試験されなかった。

【0443】

表８に示されるように、ｐ５またはｐ５Ｒに融合されたヒト化抗アミロイド抗体は、様々なアミロイド原線維及びアミロイド抽出物に結合することができた。ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５、及びＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒは、ｍ１１－１Ｆ４及びすべての他の対照抗体よりも高い親和性（ＥＣ_５０測定に基づく）で、試験したすべての原線維及び抽出物に結合した。ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒは、概して、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５よりも低いＥＣ_５０を示し、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５は、概して、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５よりも低いＥＣ_５０を示した。

【表12-1】

【表12-2】

【0444】

プルダウン実験
免疫沈降基質に対する抗アミロイド抗体の能力を調べた。ｍＩｇＧ－ｐ５は、プルダウンアッセイにおいて、Ｗｉｌ原線維及びアミロイド抽出物への優れた結合をもたらした（図１４）。

【0445】

下記の表９に示されるように、基質をプルダウンするＶＨ９／ＶＬ４親及びバリアントの能力は、ｍＩｇｐ５と比較して、有意に低下した。表９では、示される値は、パーセント結合であり、データのない細胞は、試験されなかった抗体／基質の組み合わせを表す。

【表13】

【0446】

実施例５．ペプチドｐ５に融合された抗アミロイド抗体及びエクスビボ貪食
以下の実施例は、ヒト化抗アミロイド抗体がオプソニンとして作用する能力を試験する実験を説明する。具体的には、抗アミロイド抗体の存在下におけるアミロイド原線維のエクスビボ貪食のレベルを測定した。

【0447】

材料及び方法
エクスビボ貪食
固相Ｗｉｌ原線維の取り込みのアッセイの場合、２４ウェル組織培養プレートを、室温で２時間、Ｉ型ラットコラーゲン（２０ｍＭの酢酸中に７５μｇ／ｍｌ、０．４ｍｌ）でコーティングし、０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、４℃で、０．５ｍｌのＰＢＳ中で一晩、２０μｇ／ウェルのｐＨｒｏｄｏレッド標識ｒＶλ６原線維（３０％標識画分）でコーティングする。ウェルを０．５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、０．５ｍｌの無血清フェノールレッド不含ＲＰＭＩ１６４０を添加する。抗体オプソニンを５μｇ／ウェルで添加し、続いて、無血清フェノールレッド不含ＲＰＭＩ１６４０中のＲＡＷ２６４．７または非誘導ＴＨＰ－１細胞（０．５ｍｌに１．２×１０^６個の細胞）を即座に添加して、３７℃で４時間インキュベーションする。取り込みを測定する場合、各ウェルからの細胞を、黒色プラスチック／透明底９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の３連のウェルに移して、ＢｉｏＴｅｋ ＳｙｎｅｒｇｙＨＴ－１マイクロプレートリーダーにおいて、ウェルスキャニングモードで、励起５３０／２５ｎｍ及び発光６４５／４０ｎｍで蛍光測定する。１ｍｌの培地単独でインキュベートしたウェルからのバックグラウンド測定値を減算して、相対蛍光単位を得る。

【0448】

結果
アミロイド原線維のオプソニンとして作用する（すなわち、アミロイド原線維の貪食を促進する）ヒト化抗アミロイド抗体の能力を試験した。

【0449】

ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５及びＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒは、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５及びＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒよりも優れたｒＶλ６Ｗｉｌ原線維の取り込みを促進し、これは上記のＥＬＩＳＡ結合データの差と一致した（図１５Ａ及び図１５Ｂを参照）。図１５Ｃに示されるように、ペプチドを含まないＶＨ９／ＶＬ４は、ｐ５またはｐ５Ｒが結合したＶＨ６／ＶＬ３とほぼ同等であり、ペプチドを含まないＶＨ６／ＶＬ３よりも何倍も優れていた。

【0450】

ＶＨ９／ＶＬ４単独は、ｃ１１－１Ｆ４よりも優れたオプソニンであった（図１５Ｂ）。

【0451】

ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５及びＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５Ｒは、ｍＩｇｐ５に対して同等レベルの原線維の取り込みを促進し、ｃ１１－１Ｆ４よりも優れた性能を示した（図１５Ａ）。ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５及びＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒも、ｍＩｇｐ５に対して同等レベルの原線維の取り込みを促進し、ｃ１１－１Ｆ４よりも優れた性能を示した（図１５Ｂ）。

【0452】

驚くべきことに、ｐ５またはｐ５Ｒペプチドにコンジュゲートされたヒト化抗アミロイド抗体は、ｃ１１－１Ｆ４よりも有意に優れたオプソニン化をもたらした。

【0453】

実施例６．野生型マウスにおけるＶＨ９／ＶＬ４の薬物動態測定
以下の実施例は、野生型マウスに投与されるＶＨ９／ＶＬ４の薬物動態の評価を説明する。

【0454】

材料及び方法
ＶＨ９／ＶＬ４投与
ＶＨ９／ＶＬ４を^１２５Ｉで標識し、野生型マウスに投与した。

【0455】

結果
^１２５Ｉ標識ＶＨ９／ＶＬ４を野生型マウスに投与し、存在する^１２５Ｉ標識ＶＨ９／ＶＬ４のレベルを経時的に測定した（図１６）。

【0456】

曲線に線形の除去成分（図１６のより大きな点）を当てはめることによって、半減期を（－０．６９３／－傾き）として計算した：ｔ_１／２＝１７３．５時間（７日）。

【0457】

曲線全体（図１６の点線の小さい点）を二重指数関数的減衰に当てはめることによって、半減期を（－０．６９３／－ｋ_２）として計算した：ｔ_１／２＝８６．６ｈ（３．６日）。

【0458】

実施例７．野生型マウスにおけるＶＨ９／ＶＬ４の生体内分布
以下の実施例は、野生型マウスに投与されるｐ５またはｐ５ＲにコンジュゲートされたＶＨ９／ＶＬ４の生体内分布の評価を説明する。

【0459】

材料及び方法
野生型マウスに、ＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５またはＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒを投与し、注射して４８時間後に、筋肉、肝臓、膵臓、脾臓、左右の腎臓、胃、上部腸管、下部腸管、心臓、肺、及び血液に存在する抗体のレベルを測定した（図１７Ａ及び図１７Ｂ）。

【0460】

結果
野生型マウスにおけるＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５（図１７Ａ）またはＶＨ９／ＶＬ４－ｐ５Ｒ（図１７Ｂ）の特異的な蓄積の証拠はなかった。４８時間での高い血中プールは、親ＩｇＧの薬物動態推定値と一致していた。高レベルの肺の活性は、安楽死中の血液浸潤に起因していた。

【0461】

実施例８．ペプチドの完全性及び血漿中安定性の検証
以下の実施例は、ｐ５及びｐ５Ｒにコンジュゲートされたヒト化抗アミロイド抗体の完全性及び血漿中安定性を評価するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びペプチド捕捉ＥＬＩＳＡ実験を説明する。

【0462】

材料及び方法
ペプチド捕捉ＥＬＩＳＡ
ペプチド捕捉ＥＬＩＳＡを行って、マウスの血漿中のＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５の安定性を測定した。４℃でＰＢＳ、３７℃でＰＢＳ、３７℃でＥＤＴＡ血漿、または３７℃でヘパリン血漿のいずれかに、１００ｎＭのＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５を添加し（図１８）、存在するインタクトなＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５の量を、７２時間にわたって測定した。ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５を、抗ヒトＦｃ反応抗体を使用して捕捉し、ビオチン化抗ペプチドｐ５ ｍＡｂを使用して検出した。シグナルを、ストレプトアビジンコンジュゲートＨＲＰＯを使用して検出し、プレートリーダーを使用して定量化した。

【0463】

結果
加えて、抗ペプチドｐ５モノクローナル抗体の結合及びヘパリン結合の試験は、ペプチドがＩｇＧ上に存在することを示した（データ図示せず）。

【0464】

マウス血漿中安定性アッセイにおいて、ＶＨ６／ＶＬ３－ｐ５のレベルは、新鮮なマウス血漿中で、７２時間にわたって変化しなかった（図１８）。

【0465】

配列
すべてのポリヌクレオチド配列は、５’→３’方向に示されている。すべてのポリペプチド配列は、Ｎ末端からＣ末端方向に示されている。
１１－１Ｆ４ ＶＨ配列（配列番号１５）

【化1】

１１－１Ｆ４ ＶＬ配列（配列番号１６）

【化2】

１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｈ１配列（配列番号１７）
ＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳ
１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｈ２配列（配列番号１８）
ＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｈ３配列（配列番号１９）
ＬＤＹ
１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｌ１配列（配列番号２０）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨ
１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｌ２配列（配列番号２１）
ＫＶＳＮＲＦＳ
１１－１Ｆ４ ＣＤＲ－Ｌ３配列（配列番号２２）
ＦＱＴＴＹＶＰＮＴ
５’スペーサー配列（配列番号２３）
ＡＱＡＧＱＡＧＱＡＱＧＧＧＹＳ
３’スペーサー配列（配列番号２４）
ＶＴＰＴＶ
Ｉｇｐ５軽鎖構築物（配列番号２５）
ＡＱＡＧＱＡＧＱＡＱＧＧＧＹＳＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱＡＱＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱＶＴＰＴＶＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＬＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ｐ５－３’スペーサー－１１－１Ｆ４ ＶＬ配列（配列番号２６）
ＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱＡＱＫＡＱＫＡＱＡＫＱＡＫＱＶＴＰＴＶＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＬＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
リンカー配列（配列番号２７）
ＧＧＧＹＳ
ＩＧＫＶ２－３０＊０２－ヒト生殖系列配列（配列番号２８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＨＷＰＰ
ヒトＶＬアクセプター配列（配列番号２９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＮＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＩＧＨＶ４－４＊０８－ヒト生殖系列配列（配列番号３０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＴＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ
ヒトＶＬアクセプター配列（配列番号３１）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＴＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＬ１（配列番号３２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ２（配列番号３３）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＲＰＧＱＳＰＲＲＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ３（配列番号３４）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＬＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４（配列番号３５）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｓ（配列番号３６）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＳＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｑ（配列番号３７）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＱＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｅ（配列番号３８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＥＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｎ３３Ａ（配列番号３９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｈ（配列番号４０）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＨＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｇ３４Ａ（配列番号４１）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＬ４－Ｇ３４Ｖ（配列番号４２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＶＧＮＴＹＬＨＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＲＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＦＣＦＱＴＴＹＶＰＮＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＶＨ１（配列番号４３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ２（配列番号４４）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ３（配列番号４５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳＲＬＳＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＴＹＹＣＶＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ４（配列番号４６）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳＲＬＳＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ５（配列番号４７）
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ＶＨ６（配列番号４８）
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ＶＨ７（配列番号４９）
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ＶＨ８（配列番号５０）
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ＶＨ９（配列番号５１）
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ＶＨ１０（配列番号５２）
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ＶＨ９－Ｄ５４Ｓ（配列番号５３）
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ＶＨ９－Ｄ５４Ｑ（配列番号５４）
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ＶＨ９－Ｄ５４Ｅ（配列番号５５）
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ＶＨ９－Ｄ５４Ａ（配列番号５６）
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ＶＨ９－Ｄ５４Ｈ（配列番号５７）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＨＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＳＱＶＬＦＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ９－Ｇ５５Ａ（配列番号５８）
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ＶＨ９－Ｇ５５Ｖ（配列番号５９）
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ＶＨ９－Ｍ６４Ｖ（配列番号６０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＶＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＳＱＶＬＦＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ｉ（配列番号６１）
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ＶＨ９－Ｍ６４Ｌ（配列番号６２）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＬＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＳＱＶＬＦＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ａ（配列番号６３）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＳＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＡＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＳＱＶＬＦＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＴＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｓ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６４）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＳＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｑ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６５）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＱＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｅ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６６）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＥＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｎ３３Ａ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６７）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｎ３３Ｈ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６８）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＨＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｇ３４Ａ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号６９）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＨ
ＶＬ４－Ｇ３４Ｖ ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号７０）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＶＧＮＴＹＬＨ
ＶＨ９－Ｄ５４Ｓ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７１）
ＶＩＷＧＳＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｄ５４Ｑ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７２）
ＶＩＷＧＱＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｄ５４Ｅ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７３）
ＶＩＷＧＥＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｄ５４Ａ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７４）
ＶＩＷＧＡＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｄ５４Ｈ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７５）
ＶＩＷＧＨＧＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｇ５５Ａ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７６）
ＶＩＷＧＤＡＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｇ５５Ｖ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７７）
ＶＩＷＧＤＶＳＴＮＹＨＰＮＬＭＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ｖ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７８）
ＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＶＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ｉ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号７９）
ＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＩＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ｌ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号８０）
ＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＬＳ
ＶＨ９－Ｍ６４Ａ ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号８１）
ＶＩＷＧＤＧＳＴＮＹＨＰＮＬＡＳ
Ｉｇ軽鎖のＮ末端（配列番号８２）
ＤＶＶＭＴＱＴＰ

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図11G】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図13E】

【図13F】

【図13G】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【配列表】

2023502968000001.app

【国際調査報告】