特表 2023-503804 ＩＬ－３４アンチセンス薬剤、およびこれを使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-01

(54)【発明の名称】ＩＬ－３４アンチセンス薬剤、およびこれを使用する方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20230125BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230125BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230125BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230125BHJP

   C07H 21/00 20060101ALI20230125BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

A61K31/7088

A61K48/00

A61P29/00

A61P43/00 105

A61P1/00

A61P17/06

A61P19/02

A61P3/10

A61P25/00

A61P37/06

A61P1/16

A61P35/00

A61P3/04

A61P11/00

A61P37/02

A61P1/02

A61P1/04

A61P13/12

C07H21/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022524611

(86)(22)【出願日】2020-11-16

(85)【翻訳文提出日】2022-06-23

(86)【国際出願番号】 EP2020082281

(87)【国際公開番号】W WO2021094616

(87)【国際公開日】2021-05-20

(31)【優先権主張番号】62/935,819

(32)【優先日】2019-11-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】511134621

【氏名又は名称】ノグラ ファーマ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(72)【発明者】

【氏名】ヴィティ，フランチェスカ

(72)【発明者】

【氏名】マクナルティ，マリー

(72)【発明者】

【氏名】ベリンヴィア，サルバトーレ

【テーマコード（参考）】

4C057

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C057BB02

4C057CC03

4C057DD01

4C057MM01

4C057MM09

4C084AA13

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA63

4C084NA14

4C084ZA59

4C084ZA66

4C084ZA67

4C084ZA70

4C084ZA75

4C084ZA81

4C084ZA89

4C084ZA96

4C084ZB07

4C084ZB08

4C084ZB11

4C084ZB15

4C084ZB26

4C084ZC01

4C084ZC35

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA63

4C086NA14

4C086ZA59

4C086ZA66

4C086ZA67

4C086ZA70

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZA96

4C086ZB07

4C086ZB08

4C086ZB11

4C086ZB15

4C086ZB26

4C086ZC01

4C086ZC35

(57)【要約】

【解決手段】本明細書には、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４阻害剤、ならびにＩＬ－３４の活性もしくは発現の上昇に関連する炎症性腸疾患および／または線維症などの炎症性疾患を処置する方法が開示される。さらに、炎症性疾患および／または線維症の処置に有用であり、かつ炎症性疾患および／または線維症の処置に使用される本開示のＩＬ－３４阻害剤を含有する薬剤の製造に有用であるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物も、開示される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、ならびに
５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項2】

前記ヌクレオチド配列が配列番号３であり、少なくとも１つのシチジンが化学修飾されている、請求項１に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項3】

前記ヌクレオチド配列が５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）であり、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである、請求項２に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項4】

前記ヌクレオチド配列が配列番号５であり、少なくとも１つのシチジンが化学修飾されており、任意選択で前記シチジンは、配列番号５の１０位にて化学修飾されており、および、前記ヌクレオチド配列が５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）であり、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである、請求項１に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項5】

１つ以上のロックド核酸（ＬＮＡ）を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項6】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチドがそれぞれロックド核酸（ＬＮＡ）を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項7】

５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号９）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ｃｔｔｔＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｃｔｔｃ－３’（配列番号１０）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃｇＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１１）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンである）、
５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１２）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンである）、
５’－ｇｇｃＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１３）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣｃａｇ－３’（配列番号１４）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、ａはＬＮＡアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
５’－ｔｇａＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｇｔｔ－３’（配列番号１５）（配列中、ａはＬＮＡアデノシンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項8】

５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１６）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１７）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧＣＸＧＣＡＣＣＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１８）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡＣＣＸＧＧＡＡＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１９）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧｘＣｘＸＧｘＣｘＡｘＣｘＣｘＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号２０）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡｘＣｘＣｘＸＧｘＧｘＡｘＡｘＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号２１）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項9】

１つ以上のリボヌクレオチドを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項10】

１つ以上のデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項11】

リボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項12】

前記配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項13】

前記配列の少なくとも１つのヌクレオチド間連結がホスホロチオエート連結である、請求項１から１２のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項14】

前記配列のヌクレオチド間連結がすべてホスホロチオエート連結である、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項15】

１つ以上のシチジンは５－メチルシチジンと置き換えられる、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項16】

長さ２０のヌクレオチド、あるいは長さ２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、または３０～３５のヌクレオチドである、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項17】

長さ２０～２５のヌクレオチドである、請求項１６に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項18】

長さ２０、２５、３０、または３５以下のヌクレオチドである、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項19】

請求項１から１８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩を含む化合物。

【請求項20】

請求項１から３および５から１８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩を含む化合物であって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのシチジンは化学修飾されている、化合物。

【請求項21】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヌクレオチド配列５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）を含み、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである、請求項２０に記載の化合物。

【請求項22】

炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項23】

炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項24】

炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減または阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項25】

必要とする患者において改質されたＩＬ－３４発現に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項26】

炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型マクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）シグナル伝達を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項27】

炎症性疾患を患う患者の線維性狭搾を低減または排除する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項28】

前記線維性狭窄が腸に存在する、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項２２から２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項３１に記載の方法。

【請求項34】

前記ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドが、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与される、請求項２２から３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドが経口投与される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記患者がヒトである、請求項２２から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的に許容可能な組成物。

【請求項38】

局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している、請求項３７に記載の薬学的に許容可能な組成物。

【請求項39】

炎症性疾患の処置用の薬剤の製造における、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物の使用。

【請求項40】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項３９に記載の使用。

【請求項41】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項４０に記載の使用。

【請求項42】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項４１に記載の使用。

【請求項43】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項４２に記載の使用。

【請求項44】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項４２に記載の使用。

【請求項45】

対象の細胞中のＩＬ－３４発現を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬調製物を薬学的に有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。

【請求項46】

対象の細胞中の１つ以上のコラーゲン発現を阻害する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬調製物を薬学的に有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。

【請求項47】

前記細胞が腸細胞である、請求項４５または４６に記載の方法。

【請求項48】

前記細胞が腸間質細胞である、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記細胞が、腸の線維性狭窄の一部を形成する、請求項４５または４６に記載の方法。

【請求項50】

前記対象は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病から選択される疾患の処置を必要とする、請求項４５または４６に記載の方法。

【請求項51】

前記１つ以上のコラーゲンが、コラーゲン１Ａ、コラーゲン３Ａ、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。

【請求項52】

前記医薬調製物が経口投与される、請求項４５または４６に記載の方法。

【請求項53】

前記対象がヒトである、請求項４５または４６に記載の方法。

【請求項54】

線維症を予防または処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を治療上有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項55】

前記線維症が腸線維症である、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記線維症が肺線維症である、請求項５４に記載の方法。

【請求項57】

前記線維症が、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎形成性全身性線維症からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。

【請求項58】

腸線維症を予防または処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬調製物を薬学的に有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項59】

前記医薬調製物が経口投与される、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記患者がヒトである、請求項５８または５９に記載の方法。

【請求項61】

前記患者がクローン病も患っている、請求項５８から６０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

肺線維症を予防または処置する方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬調製物を薬学的に有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項63】

前記医薬調製物が経口投与される、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記患者がヒトである、請求項６２または６３に記載の方法。

【請求項65】

薬剤として使用するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項66】

炎症性疾患の処置に使用するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいは請求項１９から２１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項67】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項６６に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項68】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項６７に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項69】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項６８に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項70】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項６９に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項71】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項６９に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド。

【請求項72】

線維症の処置に使用するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項73】

前記線維症が腸線維症である、請求項７２に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項74】

前記線維症が肺線維症である、請求項７２に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項75】

前記線維症が、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎形成性全身性線維症からなる群から選択される、請求項７２に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項76】

５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、
５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、ならびに
５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項77】

前記ヌクレオチド配列が配列番号３であり、少なくとも１つのシチジンが化学修飾されている、請求項７６に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項78】

前記ヌクレオチド配列が５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）であり、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである、請求項７７に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項79】

前記ヌクレオチド配列が配列番号５であり、少なくとも１つのシチジンが化学修飾されており、任意選択で前記シチジンは、配列番号５の１０位にて化学修飾されており、および、前記ヌクレオチド配列が５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）であり、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである、請求項７６に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項80】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、１つ以上のロックド核酸（ＬＮＡ）を含む、請求項７６から７９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項81】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチドがそれぞれロックド核酸（ＬＮＡ）を含む、請求項７６から８０のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項82】

ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項７６から８１のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項83】

前記配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される、請求項８２に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項84】

前記配列の少なくとも１つのヌクレオチド間連結がホスホロチオエート連結である、請求項８２または８３に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項85】

前記配列のヌクレオチド間連結がすべてホスホロチオエート連結である、請求項８２から８４のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項86】

１つ以上のシチジンは５－メチルシチジンと置き換えられる、請求項８２から８５のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項87】

前記ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡが、長さ１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、２０～２５、２０～３０、または２５～３０のヌクレオチドである、請求項８２から８６のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項88】

前記ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡが長さ２０～２５のヌクレオチドである、請求項８７に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項89】

前記ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡが、長さ２０、２５、または３０以下のヌクレオチドである、請求項８２から８６のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項90】

炎症性疾患を処置する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項91】

炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項92】

炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減または阻害する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項93】

必要とする患者において改質されたＩＬ－３４発現に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項94】

炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型マクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）シグナル伝達を阻害する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項95】

炎症性疾患を患う患者の線維性狭搾を低減または排除する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法。

【請求項96】

前記線維性狭窄が腸に存在する、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項９０から９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項９９に記載の方法。

【請求項102】

前記ＩＬ－３４阻害剤が、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与される、請求項９０から１０１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項103】

前記ＩＬ－３４阻害剤が経口投与される、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記患者がヒトである、請求項９０から１０３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項105】

請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的に許容可能な組成物。

【請求項106】

非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している、請求項１０５に記載の薬学的に許容可能な組成物。

【請求項107】

炎症性疾患の処置用の薬剤の製造における、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩の使用。

【請求項108】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項１０７に記載の使用。

【請求項109】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項１０８に記載の使用。

【請求項110】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項１０９に記載の使用。

【請求項111】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項１１０に記載の使用。

【請求項112】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項１１０に記載の使用。

【請求項113】

対象の細胞中のＩＬ－３４発現を阻害する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。

【請求項114】

対象の細胞中の１つ以上のコラーゲン発現を阻害する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で前記対象に投与する工程を含む方法。

【請求項115】

前記細胞が腸細胞である、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項116】

前記細胞が腸間質細胞である、請求項１１５に記載の方法。

【請求項117】

前記細胞が、腸の線維性狭窄の一部を形成する、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項118】

前記対象は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病から選択される疾患の処置を必要とする、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項119】

前記１つ以上のコラーゲンが、コラーゲン１Ａ、コラーゲン３Ａ、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１１４に記載の方法。

【請求項120】

前記医薬調製物が経口投与される、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項121】

前記対象がヒトである、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項122】

線維症を予防または処置する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を治療上有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項123】

前記線維症が腸線維症である、請求項１２２に記載の方法。

【請求項124】

腸線維症を予防または処置する方法であって、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法。

【請求項125】

前記医薬調製物が経口投与される、請求項１２４に記載の方法。

【請求項126】

前記患者がヒトである、請求項１２４または１２５に記載の方法。

【請求項127】

前記患者がクローン病も患っている、請求項１２４から１２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項128】

薬剤として使用するための、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項129】

炎症性疾患の処置に使用するための、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項130】

前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項１２９に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項131】

前記炎症性疾患が炎症性腸疾患である、請求項１３０に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項132】

前記炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、および非定型的大腸炎からなる群から選択される、請求項１３１に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項133】

前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、請求項１３２に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項134】

前記炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、請求項１３２に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項135】

線維症の処置に使用するための、請求項７６から８９のいずれか一項に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【請求項136】

前記線維症が腸線維症である、請求項１３５に記載のＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年１１月１５日出願の米国仮特許出願第６２／９３５，８１９号に基づく利益とこれに係る優先権を主張するものであり、当該文献の開示は、その全体がすべての目的のために参照により本明細書に引用される。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体が参照により本明細書で引用される配列表を含んでいる。２０２０年１１月１３日に作成された前記ＡＳＣＩＩのコピーは、ファイル名ＧＩＵ－０６０ＷＯ＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、２１，０８０バイトのサイズである。

【背景技術】

【0003】

インターロイキン－３４（ＩＬ－３４）は、関節リウマチなどの骨変性疾患における炎症と破骨細胞形成の媒介物質であるマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ１、またＭＣＳＦ１やＭＣＳＦ－１でも知られる）と機能が重複する、近年発見されたサイトカインである。炎症性疾患は、急性のものも慢性のものも、依然として完全には理解されていない重要な疾患カテゴリである。

【0004】

例えば、炎症性腸疾患は、米国で約１４０万の患者が患う胃腸管の慢性炎症性障害である。炎症性腸疾患は、米国で最もよく見られる５つの胃腸疾病負荷の１つであり、その医療費は全体で１７億ドルを超える。毎年米国では、炎症性腸疾患による患者の受診は７００，０００例、入院は１００，０００例、身体障害は１１９，０００例を超えている。治療法は現在も存在していないため、疾患管理には生涯の治療が必要となる。

【0005】

炎症性腸疾患に最もよく見られる２つ形態は、クローン病と潰瘍性大腸炎である。クローン病は、胃腸管全体に影響を及ぼす可能性があるが、最初に回腸（小腸の遠位または下方にある部分）と大腸に影響を及ぼす。潰瘍性大腸炎は、最初に結腸と直腸に影響を及ぼす。炎症性腸疾患の病因学は完全には理解されていないが、環境および遺伝子両方の因子が、この疾患の治療において役割を果たすと考えられている。環境要素としては、摂取された食品および薬剤への曝露の影響を受ける腸のフローラの改質を挙げることができる。

【0006】

炎症性腸疾患は、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、重度痙攣、筋痙攣、体重減少、栄養失調、発熱、および貧血に関連する。炎症性腸疾患患者は、皮膚病変、関節痛、眼炎症、肝障害も患う場合があり、潰瘍性大腸炎を患う小児は成長欠損を患う場合がある。これらの症状は、死に至るのはまれであるが、患者の生活の質を低下させてしまう。

【0007】

このため、炎症性腸疾患などの炎症性障害を処置する信頼の高い方法を速やかに開発する必要がある。さらに、広範囲の患者にわたり症状を有効かつ恒久的に緩和するとともに、悪性副作用または炎症と寛解のサイクルに関連しない処置方法を特定する必要がある。

【発明の概要】

【0008】

本明細書には、ＩＬ－３４遺伝子発現を阻害する薬剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドが記載される。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の配列番号１～８のいずれかのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。例えば、本発明のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の配列：５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、もしくは５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩であってよい。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号３の配列を含み、配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは化学修飾され、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号３の配列を含み、配列中、少なくとも１つのシチジンは化学修飾される。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）の配列を含み、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号５の配列を含み、配列中、少なくとも１つのシチジンは化学修飾され、任意選択で、シチジンは配列番号５の１０位にて化学修飾され、ヌクレオチド配列は５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）であり、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである。

【0009】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチドおよび／またはデオキシリボヌクレオチドを含んでよい。例えば、本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオチドを含んでよい。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上のデオキシリボヌクレオチドを含んでよい。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含んでよい。

【0010】

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上のロックド核酸（「ＬＮＡ」）ヌクレオチドを含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上のＬＮＡヌクレオチド、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１～５、５～１０、５～１２、またはそれを超えるＬＮＡヌクレオチドを含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチドはそれぞれ、ＬＮＡヌクレオチドである。

【0011】

特定の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドはＬＮＡヌクレオチドを含み、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、以下：
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号９）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔｔＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｃｔｔｃ－３’（配列番号１０）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃｇＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１１）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１２）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンである）、
・５’－ｇｇｃＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１３）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣｃａｇ－３’（配列番号１４）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、ａはＬＮＡアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ｔｇａＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｇｔｔ－３’（配列番号１５）（配列中、ａはＬＮＡアデノシンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
のうち１つ、またはその薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0012】

加えて、本明細書に記載の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏメチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルチミジン、２’－Ｏ－メチルウリジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシンを含む化学修飾塩基、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンも含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の化学修飾ヌクレオシド：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル－２’－デオキシシチジンのうちいずれかも含んでよい。加えて、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（「２’－ＭＯＥ」）ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオシド、２’－フルオロ－β－Ｄ－アラビノヌクレオシド、架橋核酸、ＬＮＡヌクレオチド、拘束エチル（ｃＥＴ）核酸、トリシクロ－ＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン連結核酸（ＥＮＡ）、および／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含んでよい。本明細書に記載の実施形態は、前述の化学修飾ヌクレオシドのいずれか１つ以上を含む配列番号１～１５のいずれかのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド配列のうち少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド配列のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１～５、１～１０、１～１４、１～１５、１～１６、１～１９、５～１０、５～１４、５～１５、５～１９、１０～１４、１０～１５、または１０～１９のヌクレオシドは、ヌクレオシドである。

【0013】

特定の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、以下：
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１６）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１７）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧＣＸＧＣＡＣＣＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１８）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡＣＣＸＧＧＡＡＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１９）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧｘＣｘＸＧｘＣｘＡｘＣｘＣｘＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号２０）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡｘＣｘＣｘＸＧｘＧｘＡｘＡｘＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号２１）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
のうち１つ、またはそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0014】

加えて、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２’－ＯＭｅヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、以下：
・５’－ＣｙＴｙＴｙＴｙＧｙＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｙＣｙＴｙＴｙＣｙ－３’（配列番号２２）（配列中、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ＴｙＣｙＣｙＡｙＴｙＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｙＡｙＧｙＴｙＴｙ－３’（配列番号２３）（配列中、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ａｙは２’－Ｏ－メチルアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
のうち１つ、またはそれらの薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0015】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間連結を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、またはボラノホスフェート連結であるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド配列のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１～５、１～１０、１～１４、１～１５、１～１６、１～１９、５～１０、５～１４、５～１５、５～１９、１０～１４、１０～１５、または１０～１９のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列のヌクレオシド間連結はすべてホスホロチオエート連結である。

【0016】

本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドの数は、変動してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５～２０、１５～２５、１５～３０、１５～３５、２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、または３０～３５のヌクレオチドである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５～２５のヌクレオチドである。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ２０～２５のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、最大数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、または３５以下のヌクレオチドである。

【0017】

一実施形態では、本明細書には、配列番号１～２３のいずれか１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を含む化合物が提供される。例えば、いくつかの実施形態では、化合物は配列番号３のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、配列中、少なくとも１つのシチジンは化学修飾される。いくつかの実施形態では、化合物は配列番号７のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである。

【0018】

本明細書に記載の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩のヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドで置換されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つ以上のシチジンは、５－メチルシチジンと置き換えられる。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオチド、例えば５－メチル－２’－デオキシシチジンを含む。例えば、様々な実施形態では、本開示のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５－メチル－２’－デオキシシチジン、５’－モノホスフェート、５－メチル－２’－デオキシシチジン－５’－モノホスホロチオエートを含むがこれらに限定されないデオキシシチジンおよび／または５－メチル－２’－デオキシシチジンを含むヌクレオチドを含むか、またはこれらを含んでもよい。例えば、本明細書に記載の実施形態では、配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩の１つ以上のシチジンヌクレオシドは、それぞれ５－メチルシチジンで置換されてもよい。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの１つのシチジンヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換される。

【0019】

また本明細書には、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドが必要とする患者に投与される処置方法も記載される。例えば、本明細書には、炎症性疾患を処置する方法であって、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法が、記載される。また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法であって、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0020】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減または阻害する方法であって、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。また本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の改質に関連する炎症性疾患を処置方法であって、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。例えば、本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の増加に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。ＩＬ－３４発現の増加は、ＩＬ－３４発現の調節値、例えば、健康な対照患者またはその集団で測定される平均または中央値のＩＬ－３４、あるいはＩＬ－３４発現の増加に関連する疾患の発症または検出前の患者で測定されるＩＬ－３４値に相関する場合がある。

【0021】

また本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の改質に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つに記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0022】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中のマクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）シグナル伝達を阻害する方法であって、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0023】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の線維性狭窄を低減または排除する方法であって、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。いくつかの実施形態では、線維性狭窄は、腸、例えば大腸や小腸に存在する。特定の実施形態では、線維性狭窄は、大腸に存在する。いくつかの実施形態では、線維性狭窄は、大腸および／または小腸の１つ以上の部分、例えば盲腸、回腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸、直腸、肛門、十二指腸、および／または空腸に存在する。

【0024】

本明細書に記載の方法は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、自己免疫疾患を含むがこれらに限定されない１つ以上の炎症性疾患を処置するために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または特発性肺線維症（ＩＰＦ）を処置するために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、または非定型的大腸炎である。特定の実施形態では、炎症性腸疾患は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である。

【0025】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩は、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与される。特定の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩は、経口投与される。

【0026】

いくつかの実施形態では、処置を必要とする患者はヒトである。

【0027】

また本明細書には、本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的に許容可能な組成物も、記載される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している。

【0028】

また本明細書には、薬剤として使用するためのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドも記載される。例えば、配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを、薬剤として使用することができる。

【0029】

また本明細書には、炎症性疾患の処置用の薬剤の製造における、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つに記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの使用も記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患である。また本明細書には、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置用の薬剤の製造における、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの使用も記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、または非定型的大腸炎である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である。

【0030】

また本明細書には、炎症性疾患の処置に使用するための、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つに記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドも記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患である。また本明細書には、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置に使用するための、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドも記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、または非定型的大腸炎である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である。

【0031】

また本明細書には、対象の細胞中のＩＬ－３４発現を阻害する方法であって、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で対象に投与する工程を含む方法も、記載される。また本明細書には、対象の細胞中の１つ以上のコラーゲンの発現を阻害する方法であって、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で対象に投与する工程を含む方法も、記載される。前述の方法のいくつかの実施形態では、細胞は、腸細胞、例えば腸間質細胞、腸上皮細胞、腸幹細胞、分泌細胞、エンテロサイト、杯状細胞、腸内分泌細胞、パネート細胞、ＴＡ細胞（ｔｒａｎｓｉｔ ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ｃｅｌｌ）、小襞細胞、カップ細胞、またはタフト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、腸の線維狭窄の一部を形成する。前述の実施形態では、対象は、炎症性疾患または線維症、例えば炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病の処置を必要とする対象であってよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象の細胞中の１つ以上のコラーゲン、例えばＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、ＶＩ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲン、ＶＩＩＩ型コラーゲン、ＩＸ型コラーゲン、Ｘ型コラーゲン、ＸＩ型コラーゲン、ＸＩＩ型コラーゲン、ＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＶ型コラーゲン、ＸＶ型コラーゲン、ＸＶＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＸ型コラーゲン、ＸＸ型コラーゲン、ＸＸＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＸＩＶ型コラーゲン、ＸＸＶ型コラーゲン、ＸＸＶＩ型コラーゲン、ＸＸＶＩＩ型コラーゲン、ＸＸＶＩＩＩ型コラーゲンまたはＸＸＩＸ型コラーゲンの発現を阻害するために使用することができる。例えば、本明細書に記載の実施形態では、コラーゲンは、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２ＩＩ、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ６、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ６Ａ５、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＯＬ８Ａ２、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＯＬ９Ａ３、ＣＯＬ１０Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１２Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ１５Ａ１、ＣＯＬ１６Ａ１、ＣＯＬ１７Ａ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ１９Ａ１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＣＯＬ２１Ａ１、ＣＯＬ２２Ａ１、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＬ２４Ａ１、ＣＯＬ２５Ａ１、ＥＭＩＤ２、ＣＯＬ２７Ａ１、ＣＯＬ２８Ａ１、またはＣＯＬ２９Ａ１である。特定の実施形態では、コラーゲンは、ＣＯＬ１Ａ１（コラーゲン１Ａ）、ＣＯＬ３Ａ１（コラーゲン３Ａ）、またはそれらの混合物である。特定の実施形態では、医薬調製物は経口投与されてよい。特定の実施形態では、上記対象はヒトである。

【0032】

様々な実施形態では、本発明は、線維症、例えば腸線維症、肺線維症、もしくは肝線維症を処置または予防する、あるいはコラーゲン堆積を防止する方法であって、線維症を患う患者のＩＬ－３４を阻害する工程を含む方法である。本発明はまた、線維症を処置または予防、あるいはコラーゲン堆積を防止する方法の場合もあり、この方法は、細胞、例えば腸細胞のＩＬ－３４を阻害する工程を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、患者の線維症を処置または予防、あるいはコラーゲン堆積を防止する方法の場合もあり、この方法は、ＩＬ－３４の特定の阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で患者に投与する工程を含む。

【0033】

本明細書にはまた、線維症の処置用の薬剤の製造におけるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの使用も記載される。いくつかの実施形態では、線維症は腸線維症である。いくつかの実施形態では、線維症は肺線維症である。他の実施形態では、線維症は、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎形成性全身性線維症である。

【0034】

また本明細書には、線維症の処置に使用するためのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドも記載される。いくつかの実施形態では、線維症は腸線維症である。いくつかの実施形態では、線維症は肺線維症である。他の実施形態では、線維症は、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎形成性全身性線維症である。

【0035】

いくつかの実施形態では、線維症、例えば腸線維症を患う患者は、以前に炎症性腸疾患を患ったか、または現在炎症性腸疾患を患っており、あるいは炎症性腸疾患は、患者において腸線維症より先立っていた。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である。

【0036】

いくつかの実施形態では、腸線維症を患う患者は、以前に大腸炎を患っているか、または現在大腸炎を患っており、あるいは大腸炎は、腸線維症より先に患者に生じている。いくつかの実施形態では、大腸炎は急性大腸炎である。いくつかの実施形態では、大腸炎は慢性大腸炎である。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態では、患者は哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトである。

【0038】

本明細書に記載の本発明の方法において線維症患者に投与されるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々な投与経路により投与可能であることが理解されることとなる。様々な実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、経口、局所、非経口を含む１または複数の経路により、例えば皮下注射、吸入スプレー、直腸により投与可能である。非経口という用語は、本明細書で使用するとき、皮下注射、膵臓内投与、および静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内の注射または注入の技法を含む。好ましい実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、線維症、例えば腸線維症や肺線維症の患者に経口投与可能である。

【0039】

本発明は、分解のためにＩＬ－３４ ＲＮＡを標的とする、ＲＮＡスプライシングを妨げる、あるいはＩＬ－３４遺伝子発現またはタンパク質翻訳を防止することが可能なＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を含む方法を提供することができる。本発明のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、結合のためにマウスおよび／またはヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡの様々な領域を標的とする場合がある。ＮＣＢＩ参照配列の配列；ＮＭ＿００１１７２７７１．１（配列番号２４）、ＮＭ＿００１１７２７７２．１（配列番号２５）、またはＮＭ＿１５２４５６．２（配列番号２６）は、ヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列である。ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１１３５１００．２（配列番号２７）またはＮＭ＿０２９６４６．３（配列番号２８）は、マウスＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列である。

【0040】

ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、ＩＬ－３４ ＲＮＡを標的とすることが可能な複数の配列から選択されてよい。本発明のいくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエート、すなわち、ヌクレオチド間連結の少なくとも一部が、患者の細胞への送達に適したホスホロチオエート連結であるオリゴヌクレオチドである。加えて、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば修飾塩基を含有するヌクレオチド、例えば５－メチル－２’－デオキシシチジンを含む場合がある。

【0041】

本発明のいくつかの実施形態では、線維症、例えば腸線維症を処置する、腸線維症もしくは肺線維症を予防する、または患者のコラーゲン堆積を防止する方法は、医薬組成物、例えば、ＩＬ－３４の特異的な阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は非経口投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は経口投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腸溶コーティング、例えばアクリル酸エチル－メタクリル酸コポリマーを含む腸溶コーティングを含む。

【0042】

本発明の実施形態では、炎症性疾患（例えば炎症性クローン病や線維狭窄性クローン病）を処置および／もしくは予防する、患者（例えば線維狭窄性クローン病を患う患者）の線維性狭窄を処置、低減、および／もしくは排除する、線維症（例えば腸線維症や肺線維症）を処置する、または患者のコラーゲン堆積を処置、改善、もしくは予防する方法は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいはＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つの配列を含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を様々な量で投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを少なくとも１μｇ、少なくとも５μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも９０μｇ、または少なくとも１００μｇ投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはこれを含む医薬組成物を、３５ｍｇ～５００ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、１０ｍｇ～２０ｍｇ、２０ｍｇ～３０ｍｇ、３０ｍｇ～４０ｍｇ、４０ｍｇ～５０ｍｇ、５０ｍｇ～６０ｍｇ、６０ｍｇ～７０ｍｇ、７０ｍｇ～８０ｍｇ、８０ｍｇ～９０ｍｇ、９０ｍｇ～１００ｍｇ、１００ｍｇ～１５０ｍｇ、１５０ｍｇ～２００ｍｇ、２００ｍｇ～２５０ｍｇ、２５０ｍｇ～３００ｍｇ、３００ｍｇ～３５０ｍｇ、３５０ｍｇ～４００ｍｇ、４００ｍｇ～４５０ｍｇ、４５０ｍｇ～５００ｍｇ、５００ｍｇ～６００ｍｇ、６００ｍｇ～７００ｍｇ、７００ｍｇ～８００ｍｇ、８００ｍｇ～９００ｍｇ、９００ｍｇ～１ｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、２０ｍｇ～４０ｍｇ、または１ｍｇ～５００ｍｇ投与する工程を含む。

【0043】

本明細書にはまた、肝線維性、肺線維症、もしくは腸線維症を予防または処置する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に開示されるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、必要とする患者に投与する工程を含む方法も、提供される。また、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、特発性肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および／もしくは腎形成性全身性線維症を予防または処置する方法であって、本明細書に開示されるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を、必要とする患者に投与する工程を含む方法も、提供される。

【0044】

さらに本明細書には、ＩＬ－３４小型ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ＩＬ－３４小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＩＬ－３４モルホリノオリゴマー、およびＩＬ－３４マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含むがこれらに限定されないヌクレオチドベースのＩＬ－３４阻害剤、ならびにこのような化合物を含む組成物も、記載される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容可能な塩を含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容可能な塩を含んでよい。例えば、ＩＬ－３４阻害剤は、配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列、例えば配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４小型ヘアピンＲＮＡ、ＩＬ－３４小型干渉ＲＮＡ、ＩＬ－３４マイクロＲＮＡ、およびＩＬ－３４モルホリノオリゴマー、ならびにこのような化合物を含む組成物、例えば薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物を含む。

【0045】

本明細書に記載の特定の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列、例えば配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩である。例えば、本発明のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、以下の配列：５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）、５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）（配列中、Ｘは５－メチルシチジンである）、または５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）（配列中、Ｘは５－メチルシチジンである）を含むｓｉＲＮＡ、あるいは配列番号１～８のうち１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの薬学的に許容可能な塩であってよい。

【0046】

また本明細書には、配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、例えば配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列のｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物も記載される。

【0047】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間連結を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、またはボラノホスフェート連結であるＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡである。特定の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤配列のうち１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１～５、１～１０、１～１４、１～１５、１～１６、１～１９、５～１０、５～１４、５～１５、５～１９、１０～１４、１０～１５、または１０～１９のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤配列のヌクレオシド間連結はすべてホスホロチオエート連結である。

【0048】

本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤に含まれるヌクレオチドの数は、変動してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、長さ２０～２５、２０～３０、または２５～３０のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、長さ１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、最大数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、長さ１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０以下のヌクレオチドである。

【0049】

本明細書に記載の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、例えば配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、化学修飾ヌクレオシドで置換されてよい。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの１つ以上のシチジンは、５－メチルシチジンと置き換えられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、１つ以上の修飾ヌクレオチド、例えば５－メチル－２’－デオキシシチジンを含む。例えば、様々な実施形態では、本開示のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、５－メチル－２’－デオキシシチジン、５’－モノホスフェート、５－メチル－２’－デオキシシチジン－５’－モノホスホロチオエートを含むがこれらに限定されないデオキシシチジンおよび／または５－メチル－２’－デオキシシチジンを含むヌクレオチドを含むか、またはこれらを含んでもよい。例えば、本明細書に記載の実施形態では、配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩の１つ以上のシチジンヌクレオシドは、それぞれ５－メチルシチジンで置換されてもよい。

【0050】

加えて、本明細書に記載の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、化学修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏメチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルチミジン、２’－Ｏ－メチルウリジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシチジン、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンを含む１つ以上の化学修飾塩基も含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、以下の化学修飾ヌクレオシド：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル－２’－デオキシシチジンのうちいずれかも含んでよい。加えて、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、１つ以上の２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（「２’－ＭＯＥ」）ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオシド、２’－フルオロ－β－Ｄ－アラビノヌクレオシド、架橋核酸、ＬＮＡヌクレオチド、拘束エチル（ｃＥＴ）核酸、トリシクロ－ＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン連結核酸（ＥＮＡ）、および／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含んでよい。本明細書に記載の実施形態は、前述の化学修飾ヌクレオシドのいずれか１つ以上を含む配列番号１～２３のいずれかのＩＬ－３４阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩を含む。特定の実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩は、前述の化学修飾ヌクレオシドのいずれか１つ以上を含むよう修飾される、配列番号１～２３のいずれかの配列を含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、本開示は、炎症性疾患を処置する方法、炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法、炎症性疾患を患う患者の１つ以上の細胞中のＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減もしくは阻害する方法、必要とする患者のＩＬ－３４発現の改質に関連する炎症性疾患を処置する方法、炎症性疾患を患う患者の１つ以上の細胞中のＩＬ－３４媒介型Ｍ－ＣＳＦＲ－１シグナル伝達を阻害する方法、線維症を予防もしくは処置する方法、腸線維症を予防もしくは処置する方法、および／または炎症性疾患を患う患者の線維性狭窄を低減もしくは排除する方法であって、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを投与する工程を含む方法を提供する。前述の方法は、必要とする患者に、ＩＬ－３４阻害剤（例えば、配列番号１～２３、例えば配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４小型ヘアピンＲＮＡ、ＩＬ－３４小型干渉ＲＮＡ、ＩＬ－３４マイクロＲＮＡ、もしくはＩＬ－３４モルホリノオリゴマー、またはかかるＩＬ－３４阻害剤を含む組成物）、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含んでよい。例えば、前述の方法は、必要とする患者に、配列番号１～２３、例えば配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはかかるＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡもしくはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物を有効量で投与する工程を含んでよい。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、例えば炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病である。

【0052】

また本明細書には、対象の細胞中のＩＬ－３４発現を阻害するか、対象の細胞中の１つ以上のコラーゲンの発現を阻害する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを投与する工程を含む方法も開示される。例えば、前述の方法は、ＩＬ－３４阻害剤（例えば、配列番号１～２３、例えば配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４小型ヘアピンＲＮＡ、ＩＬ－３４小型干渉ＲＮＡ、ＩＬ－３４マイクロＲＮＡ、もしくはＩＬ－３４モルホリノオリゴマー、またはかかるＩＬ－３４阻害剤を含む組成物）、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を、薬学的に有効量で対象に投与する工程を含んでよい。例えば、前述の方法は、配列番号１～２３、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはかかるＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡもしくはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物を含む医薬調製物を、薬学的に有効量で対象に投与する工程を含んでよい。前述の方法のいくつかの実施形態では、対象は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病の処置を必要とする。

【0053】

また本明細書には、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡが必要とする患者に投与される処置方法も記載される。例えば、本明細書には、炎症性疾患を処置する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを有効量で、必要とする患者に投与する工程を含む方法が、記載される。また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0054】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減または阻害する方法であって、配列番号１～１５のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。また本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の改質に関連する炎症性疾患を処置方法であって、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。例えば、本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の増加に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。ＩＬ－３４発現の増加は、ＩＬ－３４発現の調節値、例えば、健康な対照患者またはその集団で測定される平均または中央値のＩＬ－３４、あるいはＩＬ－３４発現の増加に関連する疾患の発症または検出前の患者で測定されるＩＬ－３４値に相関する場合がある。

【0055】

また本明細書には、必要とする患者のＩＬ－３４発現の改質に関連する炎症性疾患を処置する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0056】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の細胞中のＩＬ－３４媒介型Ｍ－ＣＳＦＲ－１シグナル伝達を阻害する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。

【0057】

また本明細書には、炎症性疾患を患う患者の線維性狭窄を低減または排除する方法であって、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を有効量で投与する工程を含む方法も、記載される。いくつかの実施形態では、線維性狭窄は、腸、例えば大腸や小腸に存在する。特定の実施形態では、線維性狭窄は、大腸に存在する。いくつかの実施形態では、線維性狭窄は、大腸および／または小腸の１つ以上の部分、例えば盲腸、回腸、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸、直腸、肛門、十二指腸、および／または空腸に存在する。

【0058】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与される。特定の実施形態では、ＩＬ－ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩は、経口投与される。

【0059】

また本明細書には、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的に許容可能な組成物も、記載される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与、非経口投与、経口投与、経肺投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している。

【0060】

また本明細書には、薬剤として使用するためのＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡも記載される。例えば、配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを、薬剤として使用することができる。

【0061】

また本明細書には、炎症性疾患の処置用の薬剤の製造における、ＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つに記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの使用も記載される。また本明細書には、炎症性疾患の処置に使用するための、ＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つに記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡも記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯根膜炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、大腸癌、大腸炎関連型結腸癌、散在性大腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患である。また本明細書には、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置用の薬剤の製造における、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの使用も記載される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、または非定型的大腸炎である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である。

【0062】

また本明細書には、対象の細胞中のＩＬ－３４発現を阻害する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で対象に投与する工程を含む方法も、記載される。また本明細書には、対象の細胞中の１つ以上のコラーゲンの発現を阻害する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬調製物を薬学的に有効量で対象に投与する工程を含む方法も、記載される。前述の方法のいくつかの実施形態では、細胞は、腸細胞、例えば腸間質細胞、腸上皮細胞、腸幹細胞、分泌細胞、エンテロサイト、杯状細胞、腸内分泌細胞、パネート細胞、ＴＡ細胞、小襞細胞、カップ細胞、またはタフト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、腸の線維狭窄の一部を形成する。前述の実施形態では、対象は、炎症性疾患または線維症、例えば炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病の処置を必要とする対象であってよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象の細胞中の１つ以上のコラーゲンの発現を阻害するために使用されてよい。特定の実施形態では、医薬調製物は経口投与されてよい。特定の実施形態では、上記対象はヒトである。

【0063】

いくつかの実施形態では、本発明は、患者の線維症を処置または予防、あるいはコラーゲン堆積を防止する方法の場合もあり、この方法は、ＩＬ－３４の特定の阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、または薬学的に許容可能な塩を有効量で患者に投与する工程を含む。

【0064】

また本明細書には、線維症の処置用の薬剤の製造におけるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの使用も記載される。いくつかの実施形態では、線維症は腸線維症である。いくつかの実施形態では、線維症は肺線維症である。他の実施形態では、線維症は、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎形成性全身性線維症である。

【0065】

また本明細書には、線維症の処置に使用するためのＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡも記載される。いくつかの実施形態では、線維症は腸線維症である。いくつかの実施形態では、線維症は肺線維症である。他の実施形態では、線維症は、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎形成性全身性線維症である。

【0066】

様々な実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、経口、局所、非経口を含む１または複数の経路により、例えば皮下注射、吸入スプレー、直腸により投与可能である。好ましい実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、線維症、例えば腸線維症や肺線維症の患者に経口投与可能である。

【0067】

本発明は、分解のためにＩＬ－３４ ＲＮＡを標的とする、ＲＮＡスプライシングを妨げる、あるいはＩＬ－３４遺伝子発現またはタンパク質翻訳を防止することが可能なＩＬ－３４阻害剤の投与を含む方法を提供することができる。本発明のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを含む本発明のＩＬ－３４阻害剤は、結合のためにマウスおよび／またはヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡの様々な領域を標的とすることができる。

【0068】

本発明のいくつかの実施形態では、線維症、例えば腸線維症を処置する、腸線維症もしくは肺線維症を予防する、または患者のコラーゲン堆積を防止する方法は、医薬組成物、例えば、ＩＬ－３４の特異的な阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は非経口投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は経口投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腸溶コーティング、例えばアクリル酸エチル－メタクリル酸コポリマーを含む腸溶コーティングを含む。

【0069】

本発明の実施形態では、炎症性疾患（例えば炎症性クローン病や線維狭窄性クローン病）を処置および／もしくは予防する、患者（例えば線維狭窄性クローン病を患う患者）の線維性狭窄を処置、低減、および／もしくは排除する、線維症（例えば腸線維症や肺線維症）を処置する、線維症（例えば腸線維症や肺線維症）を予防する、または患者のコラーゲン堆積を処置、改善、もしくは予防する方法は、ＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩、あるいはＩＬ－３４阻害剤、例えば配列番号１～８のいずれか１つのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡまたはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を様々な量で投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＩＬ－３４阻害剤を少なくとも１μｇ、少なくとも５μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも９０μｇ、または少なくとも１００μｇ投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＩＬ－３４阻害剤またはこれを含む医薬組成物を、３５ｍｇ～５００ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、１０ｍｇ～２０ｍｇ、２０ｍｇ～３０ｍｇ、３０ｍｇ～４０ｍｇ、４０ｍｇ～５０ｍｇ、５０ｍｇ～６０ｍｇ、６０ｍｇ～７０ｍｇ、７０ｍｇ～８０ｍｇ、８０ｍｇ～９０ｍｇ、９０ｍｇ～１００ｍｇ、１００ｍｇ～１５０ｍｇ、１５０ｍｇ～２００ｍｇ、２００ｍｇ～２５０ｍｇ、２５０ｍｇ～３００ｍｇ、３００ｍｇ～３５０ｍｇ、３５０ｍｇ～４００ｍｇ、４００ｍｇ～４５０ｍｇ、４５０ｍｇ～５００ｍｇ、５００ｍｇ～６００ｍｇ、６００ｍｇ～７００ｍｇ、７００ｍｇ～８００ｍｇ、８００ｍｇ～９００ｍｇ、９００ｍｇ～１ｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、２０ｍｇ～４０ｍｇ、または１ｍｇ～５００ｍｇ投与する工程を含む

【0070】

本明細書にはまた、肝線維性、肺線維症、もしくは腸線維症を予防または処置する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に開示されるＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを含む医薬組成物を、必要とする患者に投与する工程を含む方法も、提供される。また、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、特発性肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および／もしくは腎形成性全身性線維症を予防または処置する方法であって、本明細書に開示されるＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡなどのＩＬ－３４阻害剤を含む医薬組成物を、必要とする患者に投与する工程を含む方法も、提供される。

【図面の簡単な説明】

【0071】

【図1】ＤＬＤ－１細胞、ＨＴ－２９細胞、ＨＣＴ－１１６細胞、およびＮＣＭ－４６０細胞における正規化されたＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現レベルを示すグラフである。

【図2A】スクランブルされた陰性対照オリゴヌクレオチド（Ｓｒｃ ＡＳ）または配列番号１、２、３、もしくは４のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（それぞれＡＳ３４Ｎｅｗ１、ＡＳ３４Ｎｅｗ２、ＡＳ３４Ｎｅｗ３、ＡＳ３４Ｎｅｗ４）で２４時間トランスフェクトされたＨＴ－２９細胞における正規化されたＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現を示すグラフである。

【図2B】ＳｒｃＡＳ対照またはＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ３４Ｎｅｗ１もしくはＡＳ３４Ｎｅｗ３でトランスフェクトされたＨＴ－２９細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図2C】ＳｒｃＡＳ対照またはＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ３４Ｎｅｗ１、ＡＳ３４Ｎｅｗ３、もしくはＡＳ３４Ｎｅｗ４でトランスフェクトされたＲＡＷ２６４．７細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図3A】ＳｒｃＡＳ対照またはＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ３４Ｎｅｗ１もしくはＡＳ３４Ｎｅｗ３でトランスフェクトされた線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）線維芽細胞を培養したものから得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図3B】ＳｒｃＡＳ対照またはＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ３４Ｎｅｗ３でトランスフェクトされた癌関連線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図4A】スクランブルされた２つの対照アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－１－ＰＳまたはＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－３－ＰＳ）のうち１つ、または配列番号１、３、もしくは７のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（それぞれＮｅｗ１－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ－ＭＥＣ）でトランスフェクトされたＨＴ－２９細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図4B】スクランブルされた２つの対照アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－１－ＰＳまたはＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－３－ＰＳ）のうち１つ、または配列番号１、３、もしくは７のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（それぞれＮｅｗ１－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ－ＭＥＣ）でトランスフェクトされたＲＡＷ２６４．７細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図4C】スクランブルされた２つの対照アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－１－ＰＳまたはＣｏｎｔｒｏｌＡＳＮｅｗ－３－ＰＳ）のうち１つ、または配列番号１、３、もしくは７のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（それぞれＮｅｗ１－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ－ＭＥＣ）でトランスフェクトされたＭＣ－３８細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットはＩＬ－３４（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図5A】結腸癌（回腸ＣＴＲ）および回腸の炎症性ＣＤ（Ｉ ＣＤ）の手術を受けた患者の影響を受けていない回腸領域から得た回腸対照検体、またはＣＤ患者から得た線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）検体における、ＲＴ－ＰＣＲにより評価された正規化Ｍ－ＣＳＦＲ－１ ｍＲＮＡ発現を示すグラフである。

【図5B】回腸ＣＴＲ、Ｉ ＣＤ、およびＦＳ ＣＤの各組織試料から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットは、Ｍ－ＣＳＦＲ－１（上部）またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図5C】回腸ＣＴＲ、Ｉ、ＣＤ、およびＦＳ ＣＤの各組織試料から得た抽出物のウェスタンブロットにおける相対的Ｍ－ＣＳＦＲ－１シグナルの定量解析を示す図である。Ｍ－ＣＳＦＲ－１シグナルはβ－アクチンシグナルに対して正規化された。

【図5D】結腸癌（回腸ＣＴＲ）の手術を受けた患者から得た回腸切片におけるＭ－ＣＳＦＲ－１の免疫組織化学的検出を示す図である。

【図5E】ＣＤ患者（ＦＳ ＣＤ）の回腸切片から得た線維狭窄性クローン病検体におけるＭ－ＣＳＦＲ－１の免疫組織化学的検出を示す。

【図5F】アイソタイプ対照（アイソタイプ）を用いた回腸切片のＭ－ＣＳＦＲ－１抗体染色を示す図である。

【図5G】対照回腸検体（回腸ＣＴＲ）および線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）における、ＲＴ－ＰＣＲにより評価した正規化Ｍ－ＣＳＦＲ－１ ｍＲＮＡ発現を示す図である。

【図6A】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物における、ＲＴ－ＰＣＲにより評価した正規化コラーゲンＩ型α１鎖（ＣＯＬ１Ａ１）ｍＲＮＡ発現を示す棒グラフである。

【図6B】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物における、ＲＴ－ＰＣＲにより評価した正規化コラーゲンＩＩＩ型α１鎖（ＣＯＬ３Ａ１）ｍＲＮＡ発現を示す棒グラフである。

【図6C】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ウェスタンブロットは、ＣＯＬ１Ａ１（上部パネル）、ＣＯＬ３Ａ１（中央パネル）、またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図6D】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物における、ウェスタンブロッティングにより評価した正規化ＣＯＬ１Ａ１タンパク質発現のグラフを示す図である。

【図6E】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物における、ウェスタンブロッティングにより評価した正規化ＣＯＬ３Ａ１タンパク質発現のグラフを示す図である。

【図6F】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した腸線維芽細胞培養物から得た上清における総コラーゲン含有量を示す図である。

【図7A】刺激せず放置した（Ｕｎｓｔ）または組換えヒトＩＬ－３４、ＴＮＦ－α、もしくはＩＬ－６で刺激した血清飢餓腸線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ブロットは、総合（ｐ３８）およびリン酸化ｐ３８（ｐ－ｐ３８）マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼについてプロービングされた。

【図7B】ジメチルスルホキシド対照（ＤＭＳＯ）もしくはｐ３８阻害剤ＳＢ２０２１９０（ＳＢ２０２１９０）で事前に処置して刺激せず放置、またはＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置した後に組換えヒトＩＬ－３４（ＩＬ－３４）で刺激した線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ブロットは、ＣＯＬ１Ａ１（上部パネル）、ＣＯＬ３Ａ１（中央パネル）、またはβ－アクチン（下部）についてプロービングされた。

【図7C】ＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置して刺激せず放置、またはＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置した後に組換えヒトＩＬ－３４で刺激した線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットにおける、ＣＯＬ１Ａ１シグナルの定量化を示す図である。ＣＯＬ１Ａ１シグナルは、β－アクチンシグナルに正規化された。

【図7D】ＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置して刺激せず放置、またはＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置した後に組換えヒトＩＬ－３４で刺激した線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットにおける、ＣＯＬ３Ａ１シグナルの定量化を示す図である。ＣＯＬ１Ａ１シグナルは、β－アクチンシグナルに正規化された。

【図7E】ＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置して刺激せず放置、またはＤＭＳＯもしくはＳＢ２０２１９０で事前に処置した後に組換えヒトＩＬ－３４で刺激した線維芽細胞から得た上清における総コラーゲン含有量を示す図である。

【図8A】対照回腸検体（回腸ＣＴＲ）、または炎症性クローン病（Ｉ ＣＤ）もしくは線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）腸組織試料から採取した腸検体における、ＲＴ－ＰＣＲにより評価した正規化ＩＬ－３４発現を示す棒グラフである。

【図8B】対照回腸（回腸ＣＴＲ）、または炎症性クローン病（Ｉ ＣＤ）もしくは線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）患者から得た一対の腸粘膜試料の抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ブロットはＩＬ－３４（上部パネル）またはβ－アクチン（下部パネル）についてプロービングされた。

【図8C】回腸ＣＴＲ、Ｉ、ＣＤ、およびＦＳ ＣＤの各試料から得た抽出物のウェスタンブロットにおけるＩＬ－３４シグナルの定量化を示す図である。

【図8D】対照回腸組織（回腸ＣＴＲ）におけるＩＬ－３４の免疫組織化学染色を示す図である。

【図8E】線維狭窄性クローン病腸組織（ＦＳ ＣＤ）におけるＩＬ－３４の免疫組織化学染色を示す図である。

【図8F】アイソタイプ対照（アイソタイプ）での腸組織の染色を示す図である。

【図8G】対照の回腸試料（回腸ＣＴＲ）、および線維狭窄性クローン病患者（ＦＳ ＣＤ）の組織から単離した線維芽細胞における相対的ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現を示すグラフである。

【図8H】対照患者の回腸試料（回腸ＣＴＲ）、および線維狭窄性クローン病患者（ＦＳ ＣＤ）から単離され、ＩＬ－３４（上部）およびβ－アクチン（下部）シグナルについてプロービングされた線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットを示す図である。

【図9A】配列番号３のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＬ－３４ＡＳ）または相補的センスオリゴヌクレオチド（ＮＣＡＳ）でトランスフェクトした、線維狭窄性クローン病患者（ＦＳ ＣＤ）から得た線維芽細胞培養物の抽出物のウェスタンブロットを示す図である。ブロットは、ＩＬ－３４、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、およびβ－アクチンシグナルについてプロービングされた。

【図9B】培養かつトランスフェクトされたＦＳ ＣＤ線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットにおけるＩＬ－３４シグナルの定量化を示す図である。

【図9C】培養かつトランスフェクトされたＦＳ ＣＤ線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットにおけるＣＯＬ１Ａ１シグナルの定量化を示す図である。

【図9D】培養かつトランスフェクトされたＦＳ ＣＤ線維芽細胞から得た抽出物のウェスタンブロットにおけるＣＯＬ３Ａ１シグナルの定量化を示す図である。

【図9E】配列番号３のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＬ－３４ＡＳ）または相補的センスオリゴヌクレオチド（ＮＣＡＳ）でトランスフェクトしたＦＳ ＣＤ線維芽細胞の培養物から得た上清における総コラーゲン含有量を示す図である。

【図9F】配列番号３のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＬ－３４ＡＳ）または相補的センスオリゴヌクレオチド（ＮＣＡＳ）でトランスフェクトしたＦＳ ＣＤ線維芽細胞培養物における細胞死の割合を示すグラフである。

【図9G】ＮＣＡＳでトランスフェクトしたＦＳ ＣＤ線維芽細胞培養物の蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）プロットを示す図である。細胞は、アネキシンＶおよびフルオレセインイソチオシアネート（アネキシンＶ ＦＩＴＣ－Ａ、Ｙ軸）およびヨウ化プロピジウム（ヨウ化プロピジウム－Ａ、Ｘ軸）について染色された。

【図9H】ＩＬ－３４ＡＳでトランスフェクトしたＦＳ ＣＤ線維芽細胞培養物の蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）プロットを示す図である。細胞は、アネキシンＶおよびフルオレセインイソチオシアネート（アネキシンＶ ＦＩＴＣ－Ａ、Ｙ軸）およびヨウ化プロピジウム（ヨウ化プロピジウム－Ａ、Ｘ軸）について染色された。

【発明を実施するための形態】

【0072】

ＩＬ－３４阻害剤
ＩＬ－３４の値（例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたはタンパク質値）および／または活性（例えば生物活性、例えばＩＬ－３４受容体刺激）は、ＩＬ－３４遺伝子またはＩＬ－３４遺伝子産物（例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡ）を標的とする化合物または組成物を使用すると低下する場合がある。

【0073】

ＩＬ－３４阻害剤は、ＩＬ－３４のヌクレオチド系阻害剤（例えばＩＬ－３４小型ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ＩＬ－３４マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＩＬ－３４小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ならびにＬＮＡヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、およびモルホリノオリゴマーを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド）、およびかかる化合物を含む組成物であってよいが、これらに限定されるものではない。

【0074】

ＩＬ－３４アンチセンス治療薬
アンチセンス治療薬は、遺伝子発現を阻害するのに使用可能な核酸系化合物のクラスである。アンチセンス治療薬は、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ（ＤＮＡ）系、リボ核酸（ＲＮＡ）系、ＤＮＡとＲＮＡの混合型、またはＤＮＡ／ＲＮＡ化学アナログ化合物であってよい。一般的に、アンチセンス治療薬は、アンチセンス治療薬とｍＲＮＡ前駆体またはｍＲＮＡとの結合を促すために、所与の遺伝子から転写されるｍＲＮＡもしくはｍＲＮＡ前駆体の配列に相補的、またはほぼ相補的なヌクレオチド配列を含むように設計される。理論により縛られるものではないが、大半の例において、アンチセンス治療薬は、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ前駆体に結合することで、タンパク質翻訳を阻害し、成熟ｍＲＮＡへのｍＲＮＡ前駆体スプライシングを改質し、および／またはｍＲＮＡを破壊することにより作用すると考えられている。大半の例では、アンチセンス治療薬のヌクレオチド配列は、標的とされた遺伝子またはｍＲＮＡのセンス配列の一部に相補的である。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンス治療薬は、ＩＬ－３４遺伝子センス配列、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ前駆体センス配列、および／もしくはＩＬ－３４ ｍＲＮＡセンス配列、またはそれらの一部に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド系化合物である。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンス治療薬はまた、ＩＬ－３４遺伝子センス配列、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ前駆体センス配列、および／もしくはＩＬ－３４ ｍＲＮＡセンス配列、またはそれらの一部に結合可能なヌクレオチド化学アナログ系化合物であってもよい。ＩＬ－３４アンチセンス治療薬は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＩＬ－３４ ｓｈＲＮＡ、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、ＩＬ－３４ ＰＮＡ、ＩＬ－３４ ＬＮＡ、およびＩＬ－３４モルホリノオリゴマーを含む。

【0075】

アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）は、標的ＲＮＡ配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む短鎖オリゴヌクレオチド系配列である。ＡＯＮは、一般的に長さ８～５０の間、例えば長さ２０のヌクレオチドである。

【0076】

本明細書に記載のＡＯＮは、化学修飾ヌクレオシドを含んでよい。本明細書で使用するとき、「化学修飾ヌクレオシド」は、アデノシン、シチジン、チミジン、グアノシン、またはウリジン以外のヌクレオシドを意味する。例えば、いくつかの実施形態では、化学修飾ヌクレオシドとして、ロックド核酸（ＬＮＡ）（例えばＬＮＡシチジン、ＬＮＡチミジン、ＬＮＡアデノシン、ＬＮＡグアノシン）、安定した末端５’－ホスフェートまたは５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログ、例えば５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネートアナログ、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、５’－Ｃ－メチルアナログを有するヌクレオシド、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、２’－Ｏ－メチルアデノシン、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、または５－メチル２’－デオキシシチジンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0077】

本明細書に記載のＡＯＮは、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間連結を含んでよい。本明細書で使用するとき、「ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との接続を意味する。「修飾されたヌクレオシド間連結」とは、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との接続のうち自然でないものを言う。例えば、いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオシド間連結として、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネ―ト連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオアルキルホスホネート連結、チオアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、ボラノホスフェート連結が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0078】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＯＮは、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドと少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間連結とを含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＯＮは、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドと少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間連結とを含んでよい。

【0079】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、ＩＬ－３４ ＲＮＡ配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列を含む。

【0080】

ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＤＮＡまたはＲＮＡを模倣する構造を備える人為的に合成された短ポリマーである。ＰＮＡは、ペプチド結合により連結されるＮ－（２－アミノエチル）－グリシンユニットの繰り返しで構成される骨格を含む。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＰＮＡは、高特異性をもってＩＬ－３４ ＲＮＡ配列に結合してＩＬ－３４遺伝子発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用可能である。

【0081】

ロックド核酸（ＬＮＡ）は、２’酸素および４’炭素を接続する余剰の架橋によりリボース部分が修飾される１つ以上の修飾ＲＮＡヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列である。ＬＮＡは、類似するオリゴヌクレオチド配列よりも高いＴｍ’ｓを有すると考えられる。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＬＮＡは、高特異性をもってＩＬ－３４ ＲＮＡ配列に結合してＩＬ－３４遺伝子発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用可能である。

【0082】

モルホリノオリゴマーは、ホスホロジアミデート基を介して連結されるメチレンモルホリン環の骨格に付着するＤＮＡ塩基を含むオリゴヌクレオチド化合物である。本発明のモルホリノオリゴマーは、目的の特異的ＩＬ－３４ ＲＮＡ配列（例えば目的のＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたはＩＬ－３４ ｍＲＮＡ前駆体の配列）に結合することで、遺伝子発現を防止するように設計されてよい。本明細書に記載のＩＬ－３４モルホリノオリゴマーは、高特異性をもってＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に結合してＩＬ－３４遺伝子発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用可能である。本明細書に記載のＩＬ－３４モルホリノオリゴマーは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ前駆体配列に結合して、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ前駆体スプライシングおよびＩＬ－３４遺伝子発現を改質するのにも使用可能である。

【0083】

小型ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、一般的に遺伝子発現をサイレンシングするために使用可能なヘアピン様構造のＲＮＡ分子である。ｓｈＲＮＡは、一般的にｓｈＲＮＡ配列をコードするプラスミドから発現され、ウイルスベクターから発現されてレンチウイルス、アデノウイルス、またはアデノ随伴ウイルスの発現を可能にすることができる。理論に縛られるものではないが、ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）プロセスの利用により遺伝子発現を阻害すると考えられている。簡潔に言えば、ｓｈＲＮＡ転写産物は、ＤｒｏｓｈａおよびＤｉｃｅｒにより処理された後、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）にロードされ、特異的ｍＲＮＡの標的化、およびタンパク質翻訳のｍＲＮＡ分解または抑制を可能とする。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｈＲＮＡは、ＩＬ－３４の遺伝子発現を阻害することができる。

【0084】

小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、分解のためにｍＲＮＡに結合してこれを標的とするためのＲＮＡｉ機構（例えばＤｒｏｓｈａ、ＲＩＳＣ）を利用する、長さ約２０～２５の塩基対（しかし、例えば長さ１８～３０の塩基対であってもよい）の二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡは、発現のためにプラスミドまたはベクターには依存せず、一般的には例えばトランスフェクションにより標的細胞に直接送達され得る。ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に相補的なＲＮＡ配列を含み、ＩＬ－３４タンパク質翻訳を防止する二本鎖ＲＮＡ配列である。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列、例えば配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列またはその薬学的に許容可能な塩を含むｓｉＲＮＡを含む。

【0085】

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ＲＮＡサイレンシングおよび転写後の遺伝子発現調節において機能する、約２２個のヌクレオチドを含有する小型の非コーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ配列の部分に相補的な配列を含む。ｍｉＲＮＡは、高度に特異的なステムループ構造を呈する長い一本鎖ＲＮＡ分子から産生される。人工ｍｉＲＮＡは、自然に発生するｍｉＲＮＡ配列の成熟した２１ヌクレオチド配列を、標的、例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡ標的由来の２１ヌクレオチド配列と置き換えることにより設計される。

【0086】

本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、オリゴヌクレオチドの末端５’－ホスフェートおよび５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログの安定化を促す化学修飾を含む場合がある。オリゴヌクレオチド末端５’－ホスフェート安定化を促すか、または５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログである化学修飾として、５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネートアナログ、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチルアナログが挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＡＯＮ末端５’－ホスフェートおよび５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログの安定化を促す化学修飾は、Ｋｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，（２０１７）“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３５（３）：２３８－４８に記載されており、その内容は参照により本明細書で引用される。

【0087】

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、化学修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏメチル２’－リボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシチジン、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンを含む１つ以上の化学修飾塩基を含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、以下の化学修飾ヌクレオシド：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル２’－デオキシシチジンのうちいずれかを含んでよい。

【0088】

２’－ＯＭｅヌクレオチドは、ｔＲＮＡおよびその他小型ＲＮＡにおいて自然に発見される。オリゴヌクレオチド配列への２’－ＯＭｅヌクレオチドの組込みは、ヌクレアーゼ分解を防止し、加水分解に対する安定性を増大させる。オリゴヌクレオチドにおける２’－ＯＭｅ修飾の組込みは、一般的にＲＮＡ－ＲＮＡ二本鎖（ｄｕｐｌｅｘｅｓ）のＴ_ｍを追加ごとに１～４℃上昇させる。

【0089】

２’－ＭＯＥ基の導入は、一般的に、得られたオリゴヌクレオチドのＴ_ｍを約１．１℃上昇させ、ヌクレアーゼによる分解への耐性を改善する。加えて、２’－ＭＯＥオリゴは、標的ｍＲＮＡ鎖のＲＮａｓｅ Ｈ媒介型の分解を維持するためにギャップマー化合物にしばしば使用される。

【0090】

本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、オリゴヌクレオチド連結の１つ以上がホスフェート連結であるホスフェート骨格を含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤は、修飾オリゴヌクレオチド骨格を含んでよく、ヌクレオチド配列のヌクレオシド連結のうち１つ以上は、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤のいくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤のいくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列の１、２、３、またはそれより多くのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤のいくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列のヌクレオシド間連結はすべてホスホロチオエート連結である。このため、いくつかの実施形態では、配列番号１～２３のいずれかのＩＬ－３４阻害剤のヌクレオチド連結はすべて、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、配列番号１～２３のいずれかのＩＬ－３４阻害剤のヌクレオチド連結のうち１つ以上は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、またはそれ以上のホスホロチオエート連結を含んでよい。いくつかの実施形態では、配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結はすべて、ホスホロチオエート連結である。

【0091】

ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド
本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）は、ＩＬ－３４転写産物（例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写産物）に相補的な短鎖合成オリゴヌクレオチド配列である。

【0092】

ＩＬ－３４ ＡＯＮは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に完全に、またはほぼ完全に相補的なヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、非二重（ｎｏｎ－ｄｕｐｌｅｘｅｄ）オリゴヌクレオチドを含んでよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、２つのオリゴヌクレオチドの二本鎖を含んでよく、そこでは第１のオリゴヌクレオチドは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に完全に、またはほぼ完全に相補的なヌクレオチド配列を含み、第２のオリゴヌクレオチドは、第１のオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。ＡＯＮ結合特異性は、解離定数、融解温度（Ｔｍ）、またはタンパク質もしくはＲＮＡの発現値の変化などの他の基準といったパラメータの測定、あるいはＩＬ－３４の活性または発現を測定する他のアッセイを介して評価することができる。

【0093】

本明細書に開示されるものなどのＩＬ－３４ ＡＯＮは、例えば長さ１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５のヌクレオチド、または長さ１５～２０、１５～２５、１５～３０、１５～３５、２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、もしくは３０～３５のヌクレオチドのオリゴヌクレオチド配列であってもよい。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＡＯＮが長さ２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５のヌクレオチドとなるように、サイズが上限まで制限される。

【0094】

ＩＬ－３４ ＡＯＮは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列またはＩＬ－３４遺伝子配列、例えばマウスもしくはヒトのＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたは遺伝子の配列の一部に相補的なオリゴヌクレオチド配列であってよい。

【0095】

本開示のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写変異体の一部、またはそれらの一部、例えばＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１７２７７１．１（配列番号２４）、ＮＭ＿００１１７２７７２．１（配列番号２５）、もしくはＮＭ＿１５２４５６．２（配列番号２６）のヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列、またはＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１３５１００．２（配列番号２７）もしくはＮＭ＿０２９６４６．３（番号２８）のマウスＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に相補的あるいはほぼ相補的な、ヌクレオチド配列を含む。

【0096】

本明細書に記載の本発明の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、１以上の種、例えばマウスやヒトのＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写産物のＩＬ－３４遺伝子から産生されるＩＬ－３４ ｍＲＮＡを標的とすることができる。例えば、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、哺乳動物ＩＬ－３４遺伝子、例えばヒト（すなわちホモ・サピエンス）ＩＬ－３４遺伝子、マウス（すなわちハツカネズミ（ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ））ＩＬ－３４遺伝子のＩＬ－３４ ｍＲＮＡを標的とすることができる。特定の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、ヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡを標的とする。いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、ＩＬ－３４遺伝子またはＩＬ－３４ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列、あるいはその一部に相補的なヌクレオチド配列を含む。

【0097】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、以下のヌクレオチド配列：５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）、５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）、または５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）、あるいはその薬学的に許容可能な塩を含むＩＬ－３４ ＡＯＮを含み、配列中、Ｘは５－メチルシチジンである。

【0098】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、修飾リボヌクレオシドおよび修飾デオキシリボヌクレオシドを含む化学修飾ヌクレオシドを含んでよい。化学修飾ヌクレオシドとして、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）修飾、例えば２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シトシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）ウリジン）、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、本開示は、ＩＬ－３４阻害剤の混合形態、例えばＩＬ－３４ペプチド核酸（ＰＮＡ）とＩＬ－３４ロックド核酸（ＬＮＡ）の組合せを提供する。化学修飾ヌクレオシドとして、ロックド核酸（ＬＮＡ）、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、２’－フルオロ－β－Ｄ－アラビノヌクレオチド（ＦＡＮＡ）修飾が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮに含まれ得る化学修飾ヌクレオシドは、Ｊｏｈａｎｎｅｓ ａｎｄ Ｌｕｃｃｈｉｎｏ，（２０１８）“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＲＮＡｓ”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．２８（３）：１７８－９３、Ｒｅｔｔｉｇ ａｎｄ Ｂｅｈｌｋｅ，（２０１２）“Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｔｏｗａｒｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｕｓｅ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ－ＩＩ”Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２０：４８３－５１２、およびＫｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，（２０１７）“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３５（３）：２３８－４８に記載されており、これらそれぞれの内容は、参照により本明細書に引用される。

【0099】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、オリゴヌクレオチドの末端５’－ホスフェートおよび５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログの安定化を促す化学修飾を含む場合がある。オリゴヌクレオチド末端５’－ホスフェート安定化を促すか、または５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログである化学修飾として、５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネートアナログ、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチルアナログが挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＡＯＮ末端５’－ホスフェートおよび５’－ホスフェートのホスファターゼ抵抗アナログの安定化を促す化学修飾は、Ｋｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，（２０１７）“Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３５（３）：２３８－４８に記載されており、その内容は参照により本明細書で引用される。

【0100】

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、２’－Ｏメチル２’－リボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含む化学修飾ヌクレオシドを含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、１つ以上の化学修飾ヌクレオシドを含んでよく、化学修飾ヌクレオシドは、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシチジン、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンを含む塩基を含む。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、以下の化学修飾ヌクレオシド：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル２’－デオキシシチジンのうちいずれかを含んでよい。

【0101】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、以下のヌクレオチド配列：５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）、もしくは５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）（配列中、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドであり、および／または少なくとも１つの連結は、修飾されたヌクレオシド間連結である）を含むＩＬ－３４ ＡＯＮを含む。

【0102】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは化学修飾ヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第３のシチジンは、化学修飾ヌクレオシドで置換されてよい。いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第３のシチジンは、５－メチルシチジンと置き換えられ、これにより、配列番号７のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第３のシチジン以外のヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドで置換され、これにより、配列番号７以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第３のシチジンは、５－メチルシチジンではない化学修飾ヌクレオシドで置換され、これにより、配列番号７以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0103】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは化学修飾ヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号５の（５’末端からの）第５のシチジンは、化学修飾ヌクレオシドで置換されてよい。いくつかの実施形態では、配列番号５の（５’末端からの）第５のシチジンは、５－メチルシチジンと置き換えられ、これにより、配列番号８のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第５のシチジン以外のヌクレオシドは、化学修飾ヌクレオシドで置換され、これにより、配列番号８以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。いくつかの実施形態では、配列番号３の（５’末端からの）第５のシチジンは、５－メチルシチジンではない化学修飾ヌクレオシドで置換され、これにより、配列番号８以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0104】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、１つ以上のＬＮＡヌクレオチドを含むＩＬ－３４ ＡＯＮも含んでよい。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、以下：
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号９）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔｔＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｃｔｔｃ－３’（配列番号１０）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃｇＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１１）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１２）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンである）、
・５’－ｇｇｃＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１３）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣｃａｇ－３’（配列番号１４）（配列中、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、ａはＬＮＡアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ｔｇａＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｇｔｔ－３’（配列番号１５）（配列中、ａはＬＮＡアデノシンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
のいずれかのヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容可能な塩を含むＩＬ－３４ ＡＯＮを含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドはＬＮＡである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３の第１および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立してＬＮＡシチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立してＬＮＡチミジンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号９のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0106】

別の実施形態では、配列番号３の第１、第１７、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立してＬＮＡシチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第４、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立してＬＮＡチミジンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号１０のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0107】

別の実施形態では、配列番号３の第１、第９、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立してＬＮＡシチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立してＬＮＡチミジンで置換され、配列番号３の第１０のヌクレオシドは、ＬＮＡグアノシンで置換され、これにより、配列番号１１のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0108】

また別の実施形態では、配列番号３の第１、第９、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立してＬＮＡシチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第１８に、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立してＬＮＡチミジンで置換され、これにより、配列番号１２のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0109】

他の実施形態では、配列番号３の１つ以上のヌクレオシドは、配列番号９、１０、１１、または１２のいずれか１つにおいて置換されたもの以外のＬＮＡヌクレオチドで置換されてよい。他の実施形態では、配列番号３は、配列番号９、１０、１１、または１２のいずれか１つにおいて置換されたもの以外のＬＮＡヌクレオチドで１つ以上の位置において置換されてよい。

【0110】

特定の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは２’－ＭＯＥヌクレオシドを含み、ＩＬ－３４ ＡＯＮの配列は、以下：
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１６）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１７）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧＣＸＧＣＡＣＣＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１８）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡＣＣＸＧＧＡＡＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１９）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧｘＣｘＸＧｘＣｘＡｘＣｘＣｘＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号２０）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡｘＣｘＣｘＸＧｘＧｘＡｘＡｘＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号２１）（配列中、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）
のうち１つ、またはその薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0111】

例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３の第１、第１７、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第４、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号３の第５および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号１６のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0112】

いくつかの実施形態では、配列番号３の第１、第１７、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第４、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号３の第５、第６、および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号３の第１５のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号１８のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0113】

いくつかの実施形態では、配列番号３の第１、第８、第１１、第１３、第１４、第１７、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号３のチミジンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号３のグアノシンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号３のアデノシンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号２０のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0114】

他の実施形態では、配列番号３の１つ以上のヌクレオシドは、配列番号１６、１８、または２０のいずれか１つにおいて置換されたもの以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されてよい。また他の実施形態では、配列番号３は、配列番号１６、１８、または２０のいずれか１つにおいて置換されたもの以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで１つ以上の位置において置換されてよい。

【0115】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号５の第１、第５、第１９、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号５の第２、第３、および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号５の第４および第１７のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換され、配列番号５の第１８のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号５の第１０のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号１７のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0116】

いくつかの実施形態では、配列番号５の第１、第５、第１９、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号５の第２、第３、および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号５の第４および第１７のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換され、配列番号５の第６、第１５、および第１８のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号５の第１０のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号１９のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0117】

いくつかの実施形態では、配列番号５の第２、第３、第８、第９、および第１６のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換され、配列番号５のチミジンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換され、配列番号５のグアノシンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換され、配列番号５のアデノシンはすべて、それぞれ独立して２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換され、配列番号５の第１０のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号２１のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0118】

他の実施形態では、配列番号５の１つ以上のヌクレオシドは、配列番号１７、１９、または２１のいずれか１つにおいて置換されたもの以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されてよい。また他の実施形態では、配列番号５は、配列番号１７、１９、または２１のいずれか１つにおいて置換されたもの以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで１つ以上の位置において置換されてよい。

【0119】

加えて、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは２’－ＯＭｅヌクレオシドを含み、ＩＬ－３４ ＡＯＮの配列は、以下：
・５’－ＣｙＴｙＴｙＴｙＧｙＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｙＣｙＴｙＴｙＣｙ－３’（配列番号２２）（配列中、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである）、ならびに
・５’－ＴｙＣｙＣｙＡｙＴｙＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｙＡｙＧｙＴｙＴｙ－３’（配列番号２３）（配列中、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ａｙは２’－Ｏ－メチルアデノシンであり、Ｘは５メチルシチジンである）
のうち１つ、またはその薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0120】

例えば、いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－ＯＭｅヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３の第１、第１７、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルシチジンで置換され、配列番号３の第２、第３、第４、第１８、および第１９のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルチミジンで置換され、配列番号３の第５および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルグアノシンで置換され、配列番号３の第９のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号２２のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0121】

他の実施形態では、配列番号３の１つ以上のヌクレオシドは、配列番号２２において置換されたもの以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されてよい。また他の実施形態では、配列番号３は、配列番号２２において置換されたもの以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで１つ以上の位置において置換されてよい。

【0122】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮは配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－ＯＭｅヌクレオシドである。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号５の第１、第５、第１９、および第２０のヌクレオシド（５’末端に対する）は、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルチミジンで置換され、配列番号５の第２、第３、および第１６のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルシチジンで置換され、配列番号５の第４および第１７のヌクレオシドは、それぞれ独立して２’－Ｏ－メチルグアノシンで置換され、配列番号５の第１８のヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチルグアノシンで置換され、配列番号５の第１０のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換され、これにより、配列番号２３のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＯＮが得られる。

【0123】

他の実施形態では、配列番号５の１つ以上のヌクレオシドは、配列番号２３において置換されたもの以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されてよい。また他の実施形態では、配列番号５は、配列番号２３において置換されたもの以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで１つ以上の位置において置換されてよい。

【0124】

本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、オリゴヌクレオチド連結の１つ以上が、修飾されたヌクレオシド間連結であるホスフェート骨格を含んでよい。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、少なくとも１つのホスフェート連結を含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮは、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホラミデート連結、アミノアルキルホスホラミデート連結、チオホスホラミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される１つ以上の修飾されたヌクレオシド間連結を含んでよい。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮのいくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列の少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮのいくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列の１、２、３、またはそれより多くのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＯＮの好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列のヌクレオシド間連結はすべてホスホロチオエート連結である。このため、いくつかの実施形態では、配列番号１～２３のいずれかのＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結はすべて、ホスホロチオエート連結である。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結はすべて、ホスホロチオエート連結である。別の例において、いくつかの実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結はすべて、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、配列番号１～２３のいずれかのＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結のうち１つ以上は、ホスホロチオエート連結である。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結の１つ以上は、ホスホロチオエート連結である。別の例において、いくつかの実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ＡＯＮのヌクレオチド連結の１つ以上は、ホスホロチオエート連結である。

【0125】

いくつかの実施形態では、開示されたＩＬ－３４ ＡＯＮ、またはその薬学的に許容可能な塩は、例えば５’末端もしくは３’末端のいずれか一方に、５’末端と３’末端の両方に、またはオリゴヌクレオチド配列に沿って配置される少なくとも１つの修飾核酸塩基、例えば５－メチルシチジン、および／あるいは少なくとも１つのメチルホスホネートヌクレオチドを任意選択で有する場合があることが、企図される。

【0126】

企図されたＩＬ－３４ ＡＯＮは、任意選択で少なくとも１つの修飾糖を含んでよい。例えば、オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部は、リボースであり、その中では、２’－ＯＨ基は、ＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ_２、ＮＲ_２、Ｎ_３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ（Ｒはアルキルまたはアリールであり、Ｒ’はアルキレンである）からなる群から選択されるいずれか１つにより置き換えられる場合がある。

【0127】

本明細書に記載のいくつかの実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＯＮはギャップマー化合物である。ギャップマー化合物とは、修飾ヌクレオチドの５’および３’フランキング基（ｆｌａｎｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ）を含むオリゴヌクレオチド配列である。これら修飾ヌクレオチドのフランキング基は、ヌクレオチドの内部基をヌクレアーゼ分解から保護すると考えられている。ヌクレオチドの内部基は、通常長さ６～１０のヌクレオチドである。フランキング基の５’基または３’基はそれぞれ、長さ３、４、５、６、またはそれ以上のヌクレオチドであってよい。ギャップマー化合物中のフランキング基の５’基と３’基は、同じ長さのヌクレオチドであってよい。修飾ヌクレオチドのフランキング基として、例えば、２’－ＭＯＥ、２’－ＯＭｅ、ＬＮＡヌクレオチドが挙げられる。ギャップマー化合物の配列は、修飾されたヌクレオシド間連結（例えばホスホロチオエート連結）、２’－ＭＯＥ、２’－ＯＭｅ、ＬＮＡ、ＰＮＡ、５－メチルシチジン、および本明細書に記載の他の化学修飾ヌクレオシドを含む修飾も組み込む場合がある。

【0128】

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、各アンチセンスオリゴヌクレオチドにおける組み込まれたヌクレオチド配列の標的化部分は、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列もしくはＩＬ－３４相互作用パートナーのｍＲＮＡ配列に、完全にまたはほぼ完全に相補的となるように設計されてよい。かかる相補的、またはほぼ相補的なヌクレオチド配列の組込みにより、所与の標的に対し高度の特異性をもってアンチセンスオリゴヌクレオチドを操作することが可能となる。特異性は、解離定数、またはタンパク質もしくはＲＮＡの発現値の変化などの他の基準といったパラメータの測定、あるいはＩＬ－３４の活性または発現を測定する他のアッセイを介して評価することができる。

【0129】

自己免疫疾患および炎症性疾患
本開示は、部分的に、必要とする患者のＩＬ－３４活性に関連する炎症性障害を処置することであって、開示されたアンチセンス化合物を投与することを含む処置することを企図している。いくつかの実施形態では、本明細書には、必要とする患者の炎症性疾患の処置のための方法であって、開示されたアンチセンス化合物を投与する工程を含む方法が提供される。本開示のいくつかの実施形態では、有効量のＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、炎症性疾患を処置して、例えば、炎症性疾患を患う患者の細胞中の炎症性サイトカイン産生を阻害する、および／またはＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減もしくは阻害するために、必要とする患者に投与されてよい。

【0130】

「炎症性疾患」は、本明細書で使用するとき、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、変形性関節症、糖尿病（ＩおよびＩＩ型）、組織もしくは臓器拒絶反応、多発性硬化症、歯根膜炎（例えば歯周炎）、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸癌、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満症、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患を含むがこれらに限定されない多数の急性および慢性炎症性障害を意味する。

【0131】

いくつかの実施形態では、必要とする患者の狼瘡に関連する皮膚病変を処置する方法であって、開示された化合物を投与する工程を含む方法が、提供される。いくつかの実施形態では、狼瘡に関連する皮膚病変の処置は、皮膚病変の数の減少、皮膚病変の形成速度の低下、および皮膚病変の重症度の低下から選択される少なくとも１つの効果を含む。患者の狼瘡および／または狼瘡腎炎を処置する方法であって、開示されたアンチセンス化合物を投与する工程を含む方法が、提供される。いくつかの実施形態では、狼瘡に関連する腎臓疾病の進行を遅くする方法が、提供される。

【0132】

本明細書には、必要とする対象のＣＮＳ炎症性疾患を処置する、その発症リスクを低下する、またはその発症を遅らせる方法であって、開示された化合物を投与する工程を含む方法が提供される。本方法は、例えば、ＣＮＳ炎症性疾患の発症リスクのある対象を処置する工程、例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを有効量で対象に投与する工程を含む。このように処置可能なＣＮＳ炎症性疾患として、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病が挙げられる。

【0133】

本明細書にはまた、必要とする対象の自己免疫性疾患を処置する、その発症リスクを低下する、またはその発症を遅らせる方法であって、開示された化合物、例えば本明細書に記載のＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法が、提供される。本方法は、自己免疫疾患の発症リスクを有するか、そのリスクにある対象と処置する工程を含む。このように処置可能な自己免疫疾患として、関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症が挙げられる。

【0134】

炎症性腸疾患
本開示はさらに、必要とする患者に対する炎症性疾患の処置の方法であって、開示された化合物を投与する工程を含む方法を提供する。「炎症性腸疾患」とは、本明細書で使用するとき、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全結腸炎、回結腸炎、回腸炎、非定型的大腸炎を含む多くの慢性炎症性腸疾患を言う。炎症性腸疾患で最もよく見られる２つの形態は、クローン病と潰瘍性大腸炎である。炎症性腸疾患は、消化器系の自己免疫疾患である。クローン病は、末端回腸を含む胃腸管の任意の部分に局在化される場合があり、胃腸管の細胞型すべてに影響を及ぼす場合がある。潰瘍性大腸炎は、結腸と直腸に局在化され、粘膜の細胞のみに影響を及ぼす。

【0135】

炎症性クローン病は、過剰な胃腸炎症を生じさせる異常な免疫応答を特徴とする。炎症性クローン病は、小腸および／または大腸の部分、例えば回腸、結腸を含む腸壁に影響を及ぼすことが多い。炎症性クローン病は、肥厚・膨張組織の発達のほか、潰瘍にも関連する。適切なオートファジーに関連する遺伝子と同様、免疫系機能に役割を果たす遺伝子突然変異（例えばＮＯＤ２、ＡＴＧ１６Ｌ１、ＩＬ２３Ｒ、ＩＲＧＭ）は、クローン病に関連する。

【0136】

線維狭窄性クローン病は、胃腸管の線維狭窄性病変／線維性狭窄の発生を含むクローン病の一種である。線維性狭窄は、結腸と対照的に、回腸のクローン病に関連することが多い。炎症は、一般的に発達性狭窄の前に生じる。狭窄は、以下の症状：腹部痙攣、腹痛、腹部膨満・膨張、食欲不振、疲労、悪心、嘔吐、便秘のいずれかに関連する場合がある。クローン病を患う患者の５０％超が線維性狭窄を発症する。

【0137】

線維性狭窄は、細胞表面ＩＬ－１７Ａ受容体発現、およびコラーゲンサブタイプＩ、ＩＩＩ、およびＶを含むコラーゲンの産生増加に関連する。線維性狭窄は、フィステルの同時発生にも関連する。狭窄は、組織学的に、過剰量の細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の堆積を伴う炎症性細胞と間葉細胞との混合物の存在を特徴とする。腸の間葉細胞の活性化により、フィブロネクチンおよびコラーゲン（例えばＩＩＩ型、ＩＶ型コラーゲン）を含むＥＣＭ成分が蓄積される。まとまりのない平滑筋増殖および過剰なＥＣＭ堆積は、狭窄性腸組織の機械的特徴を修飾し、線維性狭窄に関連する腸管の硬さを増加させ狭化をもたらすと考えられている。線維性狭窄が存在すると、腸壁の粘膜層、粘膜下層、および筋肉層の腸組織に異常が生じる。

【0138】

環境および遺伝的要因の両方が炎症性腸疾患に役割を果たすと考えられるが、このような要因の特定は十分に規定されていない。例えば、喫煙の常習によりクローン病の発症リスクは２倍になる。環境要素としては、摂取された食品および薬剤への曝露の影響を受ける腸のフローラの改質を挙げることができる。

【0139】

炎症性腸疾患は、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、重度の痙攣、筋痙攣、体重減少、栄養失調、発熱、貧血症、皮膚病変、関節痛、眼炎症、肝臓障害、関節炎、壊疽性膿皮症、原発性硬化性胆管炎、非甲状腺疾患症候群を含む症状に関連し、開示されたアンチセンス化合物を使用したこれらの症状の処置は、一実施形態、例えば成長欠損も患う場合がある潰瘍性大腸炎を患う小児の処置においても企図される。

【0140】

腸線維症
腸線維症は、一般的に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）により生じる慢性炎症など、腸組織における反応から炎症までをもたらす。ＩＢＤでは、ＳＭＡＤ７値が増加すると、ＴＧＦ－β経路活性化およびＳｍａｄ２／３リン酸化を介して媒介される抗炎症性遺伝子発現が遮断される。筋線維芽細胞をＴＧＦ－βシグナル伝達の増加にさらすと、多量のコラーゲンが産生される。クローン病の観点では、持続性および慢性炎症は、線維化プロセスを促進させ、小腸および結腸の狭窄を含む狭窄の形成をもたらす。

【0141】

腸線維症は、造影超音波検査法などの多数の画像処理技法のうちいずれかにより特定可能である。例えば、Ｑｕａｉａ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｂｏｗｅｌ ｗａｌｌ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ａｆｔｅｒ ｓｕｌｆｕｒ ｈｅｘａｆｌｕｏｒｉｄｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｆｒｏｍ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｓｔｒｉｃｔｕｒｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３８，１３２４－１３３２（２０１２）、Ｎｙｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ－ｅｎｈａｎｃｅｄ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３９，１１９７－１２０６（２０１３）、Ｓｔｉｄｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｉｍａｇｉｎｇ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４１，８１９－８２６（２０１１）を参照されたい。磁化移動ＭＲＩなどのＭＲＩ技法も使用可能である。例えば、Ｍａｃｃｉｏｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｔ２－ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｗａｌｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｂｄｏｍ．Ｉｍａｇｉｎｇ ３７，９４４－９５７（２０１２）、Ａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｈｅｌｐｓ ｄｅｔｅｃｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｃｒｏｈｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２５９，１２７－１３５（２０１１）、Ｐａｚａｈｒ ｅｔ ａｌ．Ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｂｏｗｅｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｎｉｔｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍａｔ．Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２６，２９１－３０１（２０１３）を参照されたい。

【0142】

線維症
肝線維症、肺線維症、および／または腸線維症などの線維症を予防または処置する方法は、本開示の一部を形成する。かかる方法は、必要とする患者またはリスクにある患者に、本明細書に開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬調製物を投与する工程を含む場合がある。例えば、肝線維症を予防または処置する方法であって、必要とする患者に、本明細書に開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法が、提供される。あるいは、腸線維症を予防または処置する方法であって、必要とする患者に、本明細書に開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法が、提供される。あるいは、肺線維症を予防または処置する方法であって、必要とする患者に、本明細書に開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法が、提供される。

【0143】

上記の方法を使用して処置される患者は、検出可能な線維症を有する、または有していない場合がある。いくつかの実施形態では、患者に存在する線維症の量は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後、例えば１日、２日、１週間、１か月、６か月、またはそれ以上経過した後、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはそれ以上減少する。かかるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、例えば少なくとも毎日行われてよい。化合物は経口投与されてもよい。本明細書に開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の結果として生じる、患者における線維症の臨床症状の遅延は、本明細書に開示されるものなどのＩＬ－３４阻害剤を投与されていない患者と比較して、例えば少なくとも６か月、１年、１８か月、さらには２年以上の場合がある。

【0144】

必要とする患者は、肝硬変へと進行した肝線維症を有する場合がある。肝線維症のリスクのある患者は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の患者を含む場合がある。ＮＡＳＨは、脂肪過多症や肝硬変を含む非アルコール性脂肪肝疾患のスペクトルに含まれる。ＮＡＳＨはメタボリック症候群の構成要素であり、メタボリック症候群は、肥満症、２型糖尿病、および脂質異常症を特徴とし、最終的に肝細胞癌を引き起こす場合がある。

【0145】

α－１－アンチトリプシン欠乏症、銅蓄積症（例えばウィルソン病）、果糖血症、ガラクトース血症、糖原病（例えばＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＩＸ、Ｘ型）、鉄過剰症候群（例えばヘモクロマトーシス）、脂質異常（例えばゴーシェ病）、ペルオキシソーム障害（例えばツェルヴェーガー症候群）、チロシン血症などの特定の沈着症や先天性代謝異常；細菌感染（例えばブルセラ症）；寄生虫感染（例えば包虫症）；ＮＡＳＨ；ウイルス感染（例えば慢性Ｂ型またはＣ型肝炎を含むＢ型肝炎とＣ型肝炎）；バッド・キアリー症候群；心不全；肝静脈閉塞性疾患；および門脈血栓症のうち少なくとも１つの処置など、肝線維症に関連する障害を処置する方法も提供される。先天性肝線維症を処置する方法も、企図される。組成物は経口投与されてもよい。

【0146】

薬物および／またはアルコールの乱用は、肝線維症の症例に関与している。本明細書には、薬物および／またはアルコール中毒の既往歴のある患者の肝線維症を処置する方法が企図される。例えば、アルコール、アミオダロン、クロルプロマジン、イソニアジド、メトトレキサート、メチルドパ、オキシフェニサチン、およびトルブタミドのうち少なくとも１つを乱用する既往歴のある患者が処置される。

【0147】

腸線維症のリスクのある患者は、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、またはクローン病の患者を含む場合がある。リスクのある患者は、幼児期に進展型および／または重度の慢性疾患であるクローン病または大腸炎を診断された患者、原発性硬化性胆管炎が存在する患者、ならびに／あるいは癌の家族歴がある患者も含む場合がある。

【0148】

潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、またはクローン病のうち少なくとも１つの処置など、腸線維症に関連する障害を処置する方法も提供される。

【0149】

本明細書には、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、特発性肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎形成性全身性線維症を予防または処置する方法であって、ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に開示されるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬調製物を、必要とする患者に投与する工程を含む方法が、企図される。

【0150】

例えばＩＬ－３４ ＡＯＮを含む本発明のＩＬ－３４阻害剤は、単独で、または阻害剤同士を組み合わせて使用することができ、これにより本発明の少なくとも２つのＩＬ－３４阻害剤は、単一の組成物中で、または処置レジメンの一部として一緒に使用される。本発明のＩＬ－３４阻害剤は、薬物および／またはアルコール中毒、腎線維症、心線維症、心内膜心筋線維症、特発性肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、あるいは腎形成性全身性線維症、薬物および／またはアルコール中毒を処置するための他の薬物と併用することもできる。

【0151】

処置および評価
「患者」または「対象」は、本明細書で使用するとき、炎症性疾患および／または線維性疾患のリスクにあるか、この疾患を患うか、あるいはこの疾患が診断された、哺乳動物、霊長類、ヒトを含むがこれらに限定されない動物を言う。特定の実施形態では、患者は、例えばネコ、イヌ、ウマなどの非ヒト哺乳動物であってもよい。患者は、炎症性および／または線維性疾患を発症するリスクが高いと診断された個体、炎症性および／または線維性疾患と診断された人、炎症性および／または線維性疾患の既往歴のある人、あるいは炎症性および／または線維性疾患の症状または兆候、例えばＩＬ－３４発現シグナルを評価された個体であってもよい。

【0152】

「必要とする患者」は、本明細書で使用するとき、炎症性および／または線維性疾患の症状または徴候のいずれかを患う患者、炎症性および／または線維性疾患の症状または徴候のいずれかを患う可能性のある患者、あるいは炎症性および／または線維性疾患を処置するための本開示の方法により利益を得る可能性のある任意の患者を言う。必要とする患者は、炎症性および／または線維性疾患を発症するリスクがあると診断された患者、過去に炎症性および／または線維性疾患を患った患者、あるいは炎症性および／または線維性疾患の治療歴のある患者を含む場合がある。特に関連性があるのは、ＩＬ－３４の発現または活性のレベルの増加に関連する炎症性および／または線維性疾患を患う個体である。

【0153】

「処置する」、「処置」、「処置すること」などの用語は、一般的に所望の薬理学的および／または生理学的効果を達成することを意味するように本明細書で使用される。この効果は、疾患もしくはその症状の完全または部分的な予防の観点では予防的であり、ならびに／あるいは、疾患および／もしくはこれに起因する有害事象の部分的または完全な治療の観点では治療的であり得る。「処置」という用語は、本明細書で使用するとき、哺乳動物、とりわけヒトの疾患の処置を包含し、以下：（ａ）疾患に罹りやすいが依然として疾患があると診断されていない対象において、疾患が生じることを予防すること、（ｂ）疾患を阻害、すなわち疾患の重症度または範囲が増加するのを予防すること、（ｃ）疾患を緩和、すなわち疾患の部分的または完全な改善を引き起こすこと、あるいは（ｄ）疾患の再発を予防、すなわち、以前に疾患またはその症状の処置が成功した後に疾患が活性状態に戻るのを防ぐことを含む。

【0154】

「有効量」または「薬学的に有効量」は、本明細書で使用するとき、患者への投与に際して疾病を少なくとも部分的に処置するのに十分な薬剤の量を指す。治療上有効量は、疾病の重症度、成分の投与経路、処置対象の患者の年齢や体重などに応じて変動する。したがって、開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの有効量は、患者の炎症性および／または線維性疾患を処置するのに必要なＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの量であり、そのため、この薬剤の投与により、炎症性および／または線維性疾患が対象に生じるのが予防され、炎症性および／または線維性疾患の進行が予防される（例えば、直腸出血、貧血症、胃腸の炎症などの炎症性腸疾患症状の発症または重症度増加を防ぐ）、あるいは炎症性および／または線維性疾患の一部またはすべての関連症状が軽減または完全に改善される、例えばその疾患の退縮が生じる。

【0155】

処置の有効性は、炎症性および／または線維性疾患に関連する症状全体の評価、組織構造の解析、生化学物質アッセイ、例えば磁気共鳴撮像などの撮像法、あるいは他の既知の方法を用いて評価することができる。例えば、処置の有効性は、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、痙攣、筋痙攣、体重減少、栄養失調、発熱、貧血症、または開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの炎症性疾患を患う患者への投与後の炎症性疾患に関連する病態全体の他の態様における変化など、疾患の症状全体の解析により評価することができる。

【0156】

処置の有効性は、例えば、組織生検（例えば胃腸組織生検）を採取して組織もしくは細胞全体の形態学または染色性を評価する手段により、組織または細胞の水準で評価することもできる。タンパク質またはＲＮＡ発現を検査する生化学物質アッセイも、処置の有効性の評価に使用することができる。例えば、免疫細胞化学法、免疫組織化学法、ウェスタンブロッティング法もしくはノーザンブロッティング法、または定量的もしくは半定量的ポリメラーゼ連鎖反応などのＲＮＡ値を評価するのに有用な方法を介して、分離細胞または非分離組織における、ＩＬ－３４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、あるいは、炎症性および／または線維性疾患、炎症性サイトカイン産生、もしくはＩＬ－３４媒介型炎症反応を示す他のタンパク質または遺伝子産物のレベルを評価することができる。さらに、疾患状態および処置の有効性を評価するために、糞便、血漿、または血清中に見られる有用なバイオマーカーの発現の存在またはレベルを評価することもできる。

【0157】

処置の有効性の評価では、有効な評価を確認するのに適切な対照を選択することができる。例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後の炎症性および／または線維性疾患患者において評価される症状を、処置前もしくは処置期間の初期の時点にある同患者、または炎症性および／もしくは線維性疾患と診断されていない別の患者の症状と比較することができる。あるいは、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後の胃腸組織の生化学的または組織学的解析の結果を、同患者、炎症性および／もしくは線維性疾患と診断されていない患者、またはＩＬ－３４阻害剤の投与前の同患者から得た胃腸組織の結果と比較することができる。さらに、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後の血液、血清、細胞、または糞便試料を、炎症性および／もしくは線維性疾患と診断されていない個体またはＩＬ－３４アンチセンス阻害剤の投与前の同患者から得た同等の試料と比較することができる。

【0158】

ＩＬ－３４阻害の検証は、ＩＬ－３４の発現レベルまたは活性を直接または間接的に評価することで判定することができる。例えば、ＩＬ－３４タンパク質またはＲＮＡ発現を測定する生化学アッセイは、全体的なＩＬ－３４阻害を評価するために使用することができる。例えば、全体的なＩＬ－３４レベルを評価するためにウェスタンブロットにより胃腸組織中のＩＬ－３４タンパク質レベルを測定することができる。また、全体的なＩＬ－３４阻害を判定するためにノーザンブロットまたは定量的ポリメラーゼ連鎖反応を用いてＩＬ－３４ ｍＲＮＡレベルを測定することもできる。さらに、免疫細胞化学または免疫組織化学法を介して、分離細胞、非分離組織、血液、血清、または糞便中のＩＬ－３４タンパク質レベル、あるいはＩＬ－３４シグナル伝達活性を示す他のタンパク質レベルを評価することもできる。

【0159】

ＩＬ－３４阻害はさらに、マクロファージもしくは単球の生成または増殖などのパラメータの測定、あるいは、ＭＡＰキナーゼリン酸化、および他のＩＬ－３４受容体、マクロファージコロニー刺激因子受容体（ＭＣＳＦＲ－１やＭ－ＣＳＦＲ１、ＣＳＦ１Ｒとしても知られるＭ－ＣＳＦＲ－１）のシグナル伝達活性化の指標を含む、ＩＬ－３４活性の変化と相関する他のパラメータにおける改質の測定により、間接的に評価することができる。例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した患者の細胞中の活性ＭＡＰＫ１またはＭＡＰＫ３リン酸化のレベルを、前記細胞中のＩＬ－３４活性の指標として測定することができる。また、ＩＬ－３４阻害の有効性を評価するために、血漿、血液、糞便、または組織中に見られる有用なバイオマーカーの存在または発現レベルを評価することもできる。

【0160】

本明細書に開示される処置方法は、炎症性サイトカイン産生を阻害する方法を含む。「炎症性サイトカイン産生」とは、炎症性サイトカイン応答を開始および／または促進するサイトカインの発現を指す。「炎症性サイトカイン応答」とは、顆粒球動員、リンパ球動員、全身性炎症（特に胃腸管またはその一部の）、発熱、組織破壊、ショック、および／または死亡を特徴とする場合がある免疫応答を指す。炎症性サイトカイン応答は、個々のサイトカインを、その同族細胞表面受容体（例えばＣＳＦ１Ｒに結合するＩＬ－３４）、および続く細胞機能と遺伝子発現を改質する細胞内シグナル伝達のカスケードに結合させることを特徴とする場合がある。炎症性サイトカインとして、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－３４、ＴＮＦ－αが挙げられるが、これらに限定されるものではない。炎症性サイトカインの発現は、例えばマクロファージ、単球、粘膜固有層単核球（ｐｒｏｐｉａ ｌａｍｉｎａ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ）、胃腸管の他の細胞、または免疫系の細胞に生じる場合がある。炎症性サイトカイン産生を阻害する方法は、炎症性疾患を患う患者における一部またはすべての炎症性サイトカインの発現レベルを低下させる方法を含む。炎症性サイトカイン産生を阻害する方法は、炎症性疾患を患う患者の細胞における一部またはすべての炎症性サイトカインの発現レベルを低下させる方法も含む。

【0161】

本開示の炎症性サイトカイン産生を阻害する方法は、ＩＬ－３４媒介型炎症反応を低減または阻害する方法を含む。「ＩＬ－３４媒介型炎症反応」は、本明細書で使用するとき、ＩＬ－３４発現またはＩＬ－３４シグナル伝達活性により開始され、容易とされ、または促進される炎症反応を指す。ＩＬ－３４媒介型炎症反応は、ＩＬ－３４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－αを含むがこれらに限定されない炎症性サイトカインの発現、および炎症性サイトカインシグナル伝達の活性化をもたらす場合がある。加えて、ＩＬ－３４媒介型炎症反応は、顆粒球動員、リンパ球動員、全身性炎症（特に胃腸管または一部の）、発熱、組織破壊、ショック、および／または死亡を特徴とする場合がある。ＩＬ－３４媒介型炎症反応はまた、ＩＬ－３４シグナル伝達の活性化、例えばＩＬ－３４とＣＳＦ１Ｒとの結合、および下流ＭＡＰキナーゼのリン酸化を特徴とする場合がある。ＩＬ－３４媒介型炎症反応の低減または阻害とは、ＩＬ－３４媒介型炎症反応に関連する細胞および全身の変化のいずれか、またはすべてを緩和することを指す。例えば、炎症性サイトカイン産生、免疫細胞動員、または組織炎症の低減は、ＩＬ－３４媒介型炎症反応の低減または阻害を示すことになる。

【0162】

本開示は、炎症性および／または線維性疾患を患う患者の細胞におけるＩＬ－３４を阻害する方法も提供する。ＩＬ－３４は、ＩＬ－３４発現または活性が生じる、胃腸管、免疫系、および血液の細胞を含む細胞において阻害される場合がある。胃腸管細胞（腸壁、胃、十二指腸、空腸、大腸、小腸、回腸、結腸、直腸、肛門管の各細胞を含む）は、柱状上皮細胞、腸間質細胞、粘膜上皮細胞、酵素原細胞、頚部粘液細胞、壁細胞、ガストリン細胞、杯状細胞、パネート細胞、オリゴ粘液細胞（ｏｌｉｇｏｍｕｃｕｓ ｃｅｌｌ）、および絨毛吸収細胞（ｖｉｌｌｕｓ ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ ｃｅｌｌ）を含む。免疫系細胞は、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）、食細胞（例えば、マクロファージ、好中球、樹状細胞）、単球、肥満細胞、好酸球、好塩基球、ナチュラルキラー細胞、固有細胞（ｉｎｎａｔｅ ｃｅｌｌ）、リンパ球、Ｂ細胞、およびＴ細胞を含む。血液細胞は、赤血球（ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ））ならびに白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（白血球、単球、および血小板）を含む。

【0163】

医薬組成物および投与経路
本開示は、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物の投与により炎症性および／または線維性疾患を処置するための方法も提供する。別の態様では、本開示は、炎症性および／または線維性疾患の処置に使用するための医薬組成物を提供する。医薬組成物は、ＩＬ－３４を標的とする開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な賦形剤とで構成されてよい。本明細書で使用するとき、「医薬組成物」という用語は、例えば、炎症性および／または線維性疾患を処置するために、哺乳動物、例えばヒトに投与される、薬学的に許容可能な賦形剤中に指定量の治療用化合物、例えば治療上有効量の治療用化合物を含有する混合物を意味する。一部の実施形態では、開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドと薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書において企図される。別の態様では、本開示は、炎症性および／または線維性疾患を処置するための薬剤の製造における、開示されるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの使用を提供する。「薬剤」は、本明細書で使用するとき、「医薬組成物」という用語と基本的に同じ意味を有する。

【0164】

本明細書で使用するとき、「薬学的に許容可能な賦形剤」とは、対象への活性薬剤の投与および／または対象による吸収を補助して、患者に著しく有害な毒性作用を生じさせることなく本開示の組成物に含めることのできる物質を指す。薬学的に許容可能な賦形剤の非限定的な例として、水、ＮａＣｌ、リン酸緩衝生理食塩水溶液などの正常食塩溶液、乳剤（例えば油／水または水／油の乳剤など）、ラクトリンゲル、正常スクロース、正常グルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、コーティング、甘味料、香料、食塩水（リンゲル液など）、アルコール、油、ゼラチン、ラクトースなどの炭水化物、アミロースまたはデンプン、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、着色料などが挙げられる。このような調製物は滅菌されてよく、望まれる場合には、本発明のＩＬ－３４阻害剤に対し有害に反応しない潤滑剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼす塩、緩衝液、着色料、芳香剤などと混合されてよい。賦形剤の例については、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５）を参照されたい。

【0165】

一実施形態では、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびその医薬組成物は、局所、非経口、経口、経肺、気管内、鼻腔内、経皮、または十二指腸内を含む１または複数の経路により投与されてもよい。非経口という用語は、本明細書で使用するとき、皮下注射、膵内投与、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、胸骨内注射または注入の技法を含む。例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、被験体に皮下投与されてもよい。別の例では、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、被験体に経口投与されてもよい。別の例では、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非経口投与により胃腸系、または胃腸系の特定領域（例えば回腸、結腸、直腸）に直接投与されてもよい。

【0166】

ＩＬ－３４阻害剤、例えば本明細書に開示されるものなどのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物は、単位投与形態で提供され、適切な方法により調製することができる。医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化する必要がある。有用な製剤は、医薬品分野で公知の方法により調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）を参照されたい。

【0167】

医薬製剤は、例えば滅菌されている。滅菌は、例えば濾過滅菌膜による濾過により達成可能である。組成物を凍結乾燥するとき、濾過滅菌は、凍結乾燥および再構成の前または後に行ってもよい。

【0168】

非経口投与
本開示の医薬組成物は、非経口投与のために製剤化可能であり、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、病巣内、または腹腔内経路を介する注射のために製剤化可能である。開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物水溶液などの組成物水溶液の調製は、本開示の観点から当業者に公知となるであろう。一般的に、そのような組成物は、溶液または懸濁液のいずれかとしての注入物質として調製可能であり、注射前に液体の添加に際して溶液または懸濁液の調製への使用に適切な固体形態も調製可能であり、この調製物は乳化することもできる。

【0169】

注射可能な使用に適した剤形は、滅菌水溶液または分散液、ゴマ油、ピーナッツ油、またはプロピレングリコール水溶液を含む製剤、および注射可能な滅菌溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末を含む。あらゆる場合に、剤形は滅菌される必要があり、無菌でなければならず、容易な注射針貫通性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性である必要がある。剤形は、製造および保存の条件下で安定している必要があり、細菌や真菌などの微生物の汚染作用を防止する必要がある。

【0170】

遊離塩基または薬理学的に容認可能な塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適宜混合した水の中で調製可能である。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中、ならびに油中でも調製可能である。加えて、溶媒または懸濁媒として滅菌固定油が利用されてよい。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む配合固定油を利用してもよい。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射可能な調製物に使用されてよい。注射可能な滅菌調製物は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、非経口投与に許容可能な無毒の希釈剤または溶媒中にある注射可能な滅菌溶液、懸濁液、または乳剤であってよい。許容可能なビヒクルおよび溶媒の中で利用可能なのは、水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張食塩水である。一実施形態では、開示されたＩＬ－３４阻害剤は、１％（ｗ／ｖ）ナトリウムカルボキシメチルセルロースと０．１％（ｖ／ｖ）ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０とを含む担体または賦形剤流体中に懸濁されてよい。通常の保存および使用の条件下で、こうした調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存料を包含している。

【0171】

注射可能な調製物、例えば注射可能な滅菌水性懸濁液または油性懸濁液は、適切な分散化剤または湿潤剤、および懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化されてよい。一般に、分散剤は、塩基性分散媒と、上に列挙されたものから他の必要な成分とを含む滅菌ビヒクルに、滅菌された様々な有効成分を組み入れることにより調製される。本開示の注射可能な滅菌溶液は、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを、必要量の適切な溶媒中、上に列挙された他の成分のいくつかに組み入れ、その後必要に応じて滅菌濾過を行うことにより、調製されてよい。注射可能な滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および冷凍乾燥技法であり、この技法により、以前に滅菌濾過された溶液の追加の所望成分を加えた有効成分の粉末が得られる。注射可能な製剤は、例えば細菌を保持するフィルタを介した濾過により滅菌可能である。

【0172】

さらに、または高度に濃縮した筋肉内注射用溶液の調整も、企図される。この点では、極めて速やかな調製をもたらし、高濃度の開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを小さな領域に送達することから、溶媒としてＤＭＳＯの使用が好ましい。

【0173】

かかる溶液中での使用に適切な保存料は、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどが挙げられる。適切な緩衝液は、ホウ酸、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム、１０炭酸ナトリウムおよび１０炭酸カリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ １０ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどを、ｐＨを約６～８の間、例えばｐＨ約７～７．５の間に維持するのに十分な量で含む。適切な等張化剤は、溶液の食塩相当量が＋０．９または－０．２％の範囲内にあるような、デキストラン４０、デキストラン７０、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどである。適切な抗酸化剤および安定化剤は、亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、チオ尿素などを含む。適切な湿潤剤および清澄剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２、チロキサポールを含む。適切な増粘剤は、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ペトロラタム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどを含む。

【0174】

経口投与
いくつかの実施形態では、本明細書には、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば腸溶コーティング（例えば胃耐性コーティング）を含む錠剤を経口投与するのに適した組成物が企図され、それにより、組成物は、ＩＬ－３４阻害剤を、例えば患者の胃腸管に送達することができる。例えば、かかる投与は、患者の胃腸管の影響を受けた部分に対してほぼ局所的にＩＬ－３４阻害剤を直接適用することで、局所効果をもたらすことができる。かかる投与は、いくつかの実施形態では、実質的にＩＬ－３４阻害剤の不要な体内吸収を回避することができる。

【0175】

例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む経口投与用錠剤が、提供される。かかる錠剤は、腸溶コーティングでコーティングを施されてよい。企図された錠剤は、充填剤、結合剤、崩壊剤、および／または潤滑剤などの薬学的に許容可能な賦形剤のほか、着色料、剥離剤、甘味料、ウィンターグリーン、オレンジ、キシリトール、ソルビトール、フルクトース、マルトデキストリンなどの香料、芳香剤、保存料、および／または抗酸化剤を含んでよい。

【0176】

いくつかの実施形態では、企図された医薬製剤は、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な充填剤とを含む粒子間相を含む。例えば、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび充填剤は、任意選択で他の賦形剤と一緒に配合されて、顆粒剤へと形成される場合がある。いくつかの実施形態では、粒子間相は湿式製粒法を使用して形成することができ、例えば、液体（例えば水）をＩＬ－３４阻害剤と充填剤との配合物に添加し、次いでその組合せを乾燥、粉砕、および／またはふるいにかけて、顆粒を生じさせる。当業者は、粒子間相を達成するために他のプロセスが使用されてもよいことを理解するであろう。

【0177】

いくつかの実施形態では、企図された製剤は粒子外相（ｅｘｔｒａ－ｇｒａｎｕｌａｒ ｐｈａｓｅ）を含み、この粒子外相は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでもよく、本開示の製剤を形成するために粒子間相と配合されてよい。

【0178】

開示された製剤は、充填剤を含む粒子間相を含んでよい。例示的な充填剤として、セルロース、ゼラチン、リン酸カルシウム、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、微結晶性セルロース、ペクチン、ポリアクリレート、デキストロース、酢酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、予め部分的にゼラチン化されたデンプン、その他それらの組合せを含むものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0179】

いくつかの実施形態では、開示された製剤は、結合剤を含む粒子間相および／または粒子外相を含んでよく、この結合剤は、一般的に医薬製剤の複数の成分をまとめて保持するよう機能することができる。本開示の例示的な結合剤の例として、デンプン、糖、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの修飾セルロース、ラクトース、予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、糖アルコール、その他それらの組合せを含むものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0180】

企図された製剤、例えば、粒子間相および／または粒子外相を含むものは、デンプン、セルロース、架橋ポリビニルピロリドン、ナトリウムデンプングリコレート、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、アルギネート、トウモロコシデンプン、クロスメロース（ｃｒｏｓｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、アカシア、その他それらの組合せを含むものなどであるがこれらに限定されない崩壊剤を含んでよい。例えば、粒子間相および／または粒子外相は、崩壊剤を含んでよい。

【0181】

いくつかの実施形態では、企図された製剤は、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびマンニトール、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびナトリウムデンプングリコレート、またはそれらの組合せから選択される賦形剤を含む粒子間相と、微結晶性セルロース、ナトリウムデンプングリコレート、ステアリン酸マグネシウム、またはそれらの混合物のうち１つ以上を含む粒子外相とを含む。

【0182】

いくつかの実施形態では、企図された製剤は潤滑剤を含んでよく、例えば、粒子外相は潤滑剤を含んでよい。潤滑剤として、タルク、シリカ、脂肪、ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸金属塩、水添植物油、トウモロコシデンプン、安息香酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、酢酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0183】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は腸溶コーティングを含む。一般的に、腸溶コーティングは、薬物が消化管に沿って吸収される場所を制御する、経口薬剤に対するバリアを作り出す。腸溶コーティングは、ｐＨに応じて様々な速度で崩壊するポリマーを含む場合がある。腸溶コーティングとして、例えば酢酸フタル酸セルロース、メチルアクリレート－メタクリル酸コポリマー、セルロースアセテートスクシネート、ヒドロキシメチルプロピルセルロースフタレート、メチルメタクリレート－メタクリル酸コポリマー、アクリル酸エチル－メタクリル酸コポリマー、メタクリル酸コポリマーＣ型、ポリビニルアセテート－フタレート、セルロースアセテートフタレートを挙げることができる。

【0184】

例示的な腸溶コーティングとして、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）ＡＭＢ、Ａｃｒｙｌ－ＥＺＥＲ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）グレードが挙げられる。いくつかの実施形態では、腸溶コーティングは、約５重量％～約１０重量％、約５重量％～約２０重量％、約８重量％～約１５重量％、約８重量％～約２０重量％、約１０重量％～約２０重量％、約１２重量％～約２０重量％、または約１８重量％の企図された錠剤を含んでよい。例えば、腸溶コーティングは、アクリル酸エチル－メタクリル酸コポリマーを含んでよい。

【0185】

例えば、企図された実施形態では、約０．５重量％～約７０重量％、例えば約０．５重量％～約１０重量％、または約１重量％～約２０重量％の開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容可能な塩を含むか、あるいはこれらから実質的になる錠剤が、提供される。かかる錠剤は、例えば、約０．５重量％～約６０重量％のマンニトール、例えば約３０重量％～約５０重量％のマンニトール、例えば約４０重量％のマンニトール、および／あるいは、約２０重量％～約４０重量％の微結晶性セルロース、または約１０重量％～約３０重量％の微結晶性セルロースを含んでよい。例えば、開示された錠剤は、約３０重量％～約６０重量％、例えば約４５重量％～約６５重量％、または約５重量％～約１０重量％の開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、約３０重量％～約５０重量％、または約５重量％～約１５重量％のマンニトール、約５重量％～約１５重量％の微結晶性セルロース、約０重量％～約４重量％、または約１重量％～約７重量％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、および約０重量％～約４重量％、例えば約２重量％～約４重量％のナトリウムデンプングリコレートを含む粒子間相を含んでよい。

【0186】

他の企図された実施形態では、開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの経口投与用の医薬品錠剤製剤は、粒子間相を含み、粒子間相は、開示されたＩＬ－３４阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩（ナトリウム塩などの）、および薬学的に許容可能な充填剤を含み、ＩＬ－３４阻害剤はさらに、崩壊剤などの薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る粒子外相も含んでよい。粒子外相は、微結晶性セルロース、ステアリン酸マグネシウム、およびそれらの混合から選択される成分を含んでよい。医薬組成物は、錠剤の約１２重量％～２０重量％の腸溶コーティングも含んでよい。例えば、経口投与用の薬学的に許容可能な錠剤は、約０．５重量％～１０重量％の開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、約３０重量％～５０重量％のマンニトール、約１０重量％～３０重量％の微結晶性セルロース、アクリル酸エチル－メタクリル酸コポリマーを含む腸溶コーティングを含んでよい。

【0187】

別の例では、経口投与用の薬学的に許容可能な錠剤は、約５～約１０重量％の開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその薬学的に許容可能な塩、約４０重量％のマンニトール、約８重量％の微結晶性セルロース、約５重量％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、および約２重量％のナトリウムデンプングリコレートを含む粒子間相、約１７重量％の微結晶性セルロース、約２重量％のナトリウムデンプングリコレート、約０．４重量％のステアリン酸マグネシウムを含む粒子外相、ならびにアクリル酸エチル－メタクリル酸およびコポリマーを含む錠剤上の腸溶コーティングを含んでよい。

【0188】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１３重量％もしくは約１５重量％、１６重量％、１７重量％、または１８重量％を含む腸溶コーティング、例えばＡｃｙｒｌＥＺＥ（登録商標）を含有してもよい（例えば、その全体を参照することで本明細書に引用されるＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１０／０５４８２６を参照）。

【0189】

その時点でコーティングが溶解して有効成分が放出される速度は、その溶出速度である。一実施形態では、企図された錠剤は、例えば、約１２０分～約２４０分後、例えば１８０分後に放出する約５０％～約１００％のＩＬ－３４阻害剤のｐＨ７．２のリン酸緩衝液中、１００ｒｐｍ、３７℃で、ＵＳＰ／ＥＰ Ｔｙｐｅ２装置（パドル）で試験したときの溶解プロファイルを有する場合がある。別の実施形態では、企図された錠剤は、例えば、１２０分後にほぼすべてのＩＬ－３４阻害剤が放出されないｐＨ１．０の希釈ＨＣｌ中、１００ｒｐｍ、３７℃で、ＵＳＰ／ＥＰ Ｔｙｐｅ２装置（パドル）で試験したときの溶解プロファイルを有する場合がある。別の実施形態では、企図された錠剤は、例えば、３０分後に放出する約１０％～約３０％、または約５０％以下のＩＬ－３４阻害剤の、ｐＨ１．０の希釈ＨＣｌ中、１００ｒｐｍ、３７℃で、ＵＳＰ／ＥＰ Ｔｙｐｅ２装置（パドル）で試験したときの溶解プロファイルを有する場合がある。

【0190】

企図された製剤、例えば錠剤は、いくつかの実施形態では、患者に経口投与されると、患者におけるＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド血漿中濃度を最小限に抑えることができる。別の実施形態では、開示された製剤は、患者に経口投与されると、患者の結腸または直腸に、例えば患者の影響を受けた部位または罹患部位に局所送達される。

【0191】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、本明細書に開示される疾患および障害の処置を対象とする少なくとも１つの他の薬剤を投与する工程をさらに含んでもよい。一実施形態では、企図された他の薬剤は、共投与されてもよい（例えば、連続で、または同時に）。

【0192】

企図された薬剤は、グルココルチコイド、細胞増殖抑止剤、抗体、イムノフィリンに作用する薬剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小型生物学的因子を含む免疫抑制剤を含む。例えば、企図された免疫抑制剤として、タクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムス、シロリムス、エベロリムス、ミコフェノール酸、フィンゴリモド、デキサメタゾン、フルダラビン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、レフノミド、テリフルノミド、アナキンラ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン、ムロモナブ－ＣＤ３、アフツズマブ、リツキシマブ、テプリズマブ、エファリズマブ、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アダリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブペゴール、ナタリズマブ、エタネルセプトが挙げられるが、これらに限定されるものではない。他の企図された薬剤として、抗生物質、止瀉薬、緩下薬、鎮痛剤、鉄補給食品、カルシウムまたはビタミンＤもしくはＢ－１２サプリメントが挙げられる。

【0193】

投与量および投与頻度
例示的な製剤は、約３５ｍｇ～約５００ｍｇの開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むか、この阻害剤から実質的になる投与形態を含む。例えば、約３５ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、または２５０ｍｇの開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む製剤が、本明細書で企図される。一実施形態では、製剤は、約４０ｍｇ、８０ｍｇ、または１６０ｍｇの開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでよい。いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１００μｇの開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでよい。例えば、製剤は、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、または２５ｍｇの開示されたＩＬ－３４阻害剤、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでよい。投与される量は、処置対象の疾患または適応症の種類と程度、患者の全身健康状態とサイズ、ＩＬ－３４阻害剤のｉｎ ｖｉｖｏ効力、医薬製剤、投与経路などの変数に左右される。所望の血中濃度または組織レベルを速やかに達成するために、初期量を、上限を超えて増やすことができる。代替的に、初期量は最適量より少なくてもよく、投与量は、処置経過中に徐々に増やされる場合がある。ヒトへの投与量は、例えば４０ｍｇ～１６０ｍｇで行われるようデザインされる従来の第Ｉ相用量漸増試験において最適化されてよい。投与頻度は、投与経路、投与量、処置対象の疾患などの因子に応じて変動する場合がある。例示的な投与頻度は、１日１回、週１回、および２週間に１回である。いくつかの実施形態では、投与は、１日１回７日間行われる。

【0194】

診断法
本開示は、患者の１つ以上の生体試料中のＩＬ－３４発現シグナルのレベルの検出に依存する、炎症性および／または線維性疾患を患う患者を診断する方法も提供する。本明細書で使用するとき、「ＩＬ－３４発現シグナル」という用語は、ＩＬ－３４遺伝子発現の任意の指標、遺伝子活性、または遺伝子産物活性を指す場合がある。ＩＬ－３４遺伝子産物は、ＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）、ペプチド、およびタンパク質を含む。評価可能なＩＬ－３４遺伝子発現の疾患指標として、ＩＬ－３４遺伝子またはクロマチン状態、遺伝子発現を調節する細胞成分とのＩＬ－３４遺伝子相互作用、ＩＬ－３４遺伝子産物発現レベル（例えばＩＬ－３４ ＲＮＡ発現レベル、ＩＬ－３４タンパク質発現レベル）、あるいはＩＬ－３４ ＲＮＡまたはタンパク質と転写、翻訳、もしくは翻訳後プロセシング機構との相互作用が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＩＬ－３４遺伝子産物活性の疾患指標として、ＩＬ－３４シグナル伝達活性の評価（例えばＣＳＦ１Ｒ活性化またはＭＡＰＫ１／ＭＡＰＫ３リン酸化の評価）、ＩＬ－３４受容体結合の評価（例えばＣＳＦ１Ｒ結合）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0195】

ＩＬ－３４発現シグナルの検出は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、またはｅｘ ｖｉｖｏの方法により達成することができる。好ましい実施形態では、本開示の方法はｉｎ ｖｉｔｒｏで実行可能である。検出方法は、患者の血液、血清、糞便、組織、または細胞を対象とする検出を含む場合がある。検出は、組織全体、組織外植片、細胞培養物、分離細胞、細胞抽出物、または血液や血清を含む体液中のＩＬ－３４発現シグナルを測定することにより達成することができる。企図される検出方法は、ウェスタンブロッティング、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡ、他の定量的結合アッセイ、細胞または組織成長アッセイ、ノーザンブロット、定量的または半定量的ポリメラーゼ連鎖反応、医療撮像法（例えばＭＲＩ）、免疫染色法（例えば免疫組織化学的検査や免疫細胞化学）など、ＩＬ－３４遺伝子産物発現のレベルを測定するアッセイを含む。

【実施例】

【0196】

本開示は、以下の実施例によりさらに例示される。本実施例は、例示目的のためだけに提供されるものであり、本開示の範囲または内容をあらゆる方法で制限するものと解釈されるべきではない。

【実施例1】

【0197】

ＨＴ－２９ ＣＲＣ細胞株は高レベルでＩＬ－３４を発現する
ヒトＣＲＣ細胞株中のＩＬ－３４発現を評価するために、ＤＬＤ－１、ＨＴ－２９、およびＨＣＴ－１１６のヒトＣＲＣ細胞株、ならびにＮＣＭ－４６０正常腸上皮細胞株を対象に、ＲＴ－ＰＣＲによりＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現を解析した。β－アクチンｍＲＮＡレベルを基準として使用し、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現レベルを正規化した。図１に示すように、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現はＨＴ－２９細胞で多く見られた。

【実施例2】

【0198】

ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの設計と評価
マウスおよびヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に相補的な配列番号１～４のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ホスホロチオエート骨格とともに産生した。ＩＬ－３４発現のノックダウンを、ＨＴ－２９ヒトおよびＲＡＷ２６４．７マウス細胞株において評価した。１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ（すべてＬｏｎｚａ由来）を捕捉したＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（Ｌｏｎｚａ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）の中、ＨＴ－２９細胞（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）を培養し、加湿インキュベータの中、３７℃、５％ＣＯ_２で維持した。１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ、および１％非必須アミノ酸（ＮＥＡ）（すべてＬｏｎｚａ由来）を含むダルベッコ改変イーグル培地（グルコース１ｇ／Ｌ）中、マウスＲＡＷ２６４．７マクロファージ（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）を培養し、加湿インキュベータの中、３７℃、５％ＣＯ_２で維持した。細胞は未処置のまま放置するか、あるいは、特定のＩＬ－３４ ＡＯＮ、または製造業者の指示に従いＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地とＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）を用いてスクランブルされたＡＯＮでトランスフェクトした。全ＲＮＡおよびタンパク質を抽出した。

【0199】

ＨＴ－２９細胞を対象としにリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）によりノックダウンを評価した。ＲＴ－ＰＣＲは次のように行った：一定量のＲＮＡ（０．５μｇ／試料）を相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）へとレトロ転移（ｒｅｔｒｏ－ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ）させた。次いで、１μｌのｃＤＮＡ／試料を、次のプロトコル：９５℃で１分間の変性、６０℃で３０秒間のアニーリング、続いて７２℃でさらに３０秒間のアニーリングを用いて増幅した。次のプライマー：ＩＬ－３４フォワード、５’－ＡＣＡＧＧＡＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＧＴＡＣ－３’（配列番号２９）、ＩＬ－３４リバース、５’－ＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＣＣＧ－３’（配列番号３０）、β－アクチンフォワード、５’－ＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣ－３’（配列番号３１）、およびβ－アクチンリバース、５’－ＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＴ－３’（配列番号３２）を使用した。ｍＲＮＡ発現をβ－アクチンｍＲＮＡ発現と比して算出した。

【0200】

ＨＴ－２９細胞は、配列番号１、２、３、もしくは４のヒトＩＬ－３４ ＡＯＮ、またはスクランブルされた陰性対照オリゴヌクレオチド（ＳＲＣ ＡＳ；５’－ＡＡＣＡＣＧＴＣＴＡＴＡＣＧＣ－３’（配列番号３３））で２４時間トランスフェクトした（図２Ａ、ＡＳ３４Ｎｅｗ１－４、それぞれ配列番号１～４）。ＩＬ－３４転写産物はＲＴ－ＰＣＲにより評価し、値をβ－アクチンへと正規化した。ＲＴ－ＰＣＲにより評価すると、配列番号１と３のＩＬ－３４ ＡＯＮでのＨＴ－２９細胞のトランスフェクションにより、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ発現は大幅に減少した（図２Ａ、Ｓｒｃ ＡＳ ｖ．ＡＳ３４Ｎｅｗ１、ｐ＝０．０３、Ｓｒｃ ＡＳ ｖ．ＡＳ３４Ｎｅｗ３、ｐ＝０．０３、データは±平均標準誤差（ＳＥＭ）として表す）。

【0201】

ＨＴ－２９細胞およびＲＡＷ２６４．７細胞を対象に、ウェスタンブロッティングによりノックダウンも評価した。ウェスタンブロッティングは次のように行った。トランスフェクションの後、氷の上で、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭ ＫＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２ｍＭ ＥＧＴＡ、および０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ４０を包含し、１ｍＭジチオスレイトール、１０ｍｇ／ｍｌアプロチニン、１０ｍｇ／ｍｌロイペプチン、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、および１ｍＭ ＮａＦを捕捉した緩衝液において、細胞を溶かした。４℃、１２．０００ｘｇで３０分間遠心分離を行い、溶解物を浄化し、１０％ドデシルに硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドによるゲル電気泳動で分離した。マウス抗ヒトＩＬ－３４抗体（１：１，０００の最終希釈、Ａｂｃａｍ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）でコンジュゲートした二次ＩｇＧモノクローナル抗体（１：２０，０００の最終希釈、Ｄａｋｏ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）と組み合わせて使用し、ＩＬ－３４を検出した。ＨＲＰ反応は感度増強化学発光キット（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で検出した。解析後、ブロットをストリップし、マウス抗ヒトβ－アクチン抗体（１：５，０００の最終希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、続いてＨＲＰでコンジュゲートした二次ＩｇＧモノクローナル抗体（１：２０，０００も最終希釈、Ｄａｋｏ）でプロービングした。

【0202】

図２Ｂでは、ＩＬ－３４のスクランブルされた対照、ＡＳ３４Ｎｅｗ１、または３つのＩＬ－３４ ＡＯＮによるＨＴ－２９細胞のトランスフェクションが、ＩＬ－３４タンパク質発現の減少をもたらしたことが示されている。図２Ｃでは、ＩＬ－３４のスクランブルされた対照、ＡＳ３４Ｎｅｗ１、または３つのＩＬ－３４ ＡＯＮによるＲＡＷ２６４．７細胞のトランスフェクションが、ＩＬ－３４タンパク質発現の減少をもたらしたことが示されている。

【0203】

ＩＬ－３４ ＡＯＮｓ ＡＳ３４Ｎｅｗ１および３によるＩＬ－３４ノックダウンは、線維狭窄性クローン病および癌関連の線維芽細胞を対象にさらに評価した。結腸癌または線維狭窄性ＣＤ（ＦＳ ＣＤ）外植片から、腸線維芽細胞を単離した。線維芽細胞を、新しく、または継代３と８の間で使用した。１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）を捕捉したＵｌｔｒａＧｌｕｔａｍｉｎｅを含むＤＭＥＭ高グルコースにおいて線維芽細胞を培養し、加湿インキュベータ中、３７℃、５％ＣＯ_２で維持した。トリプシン／ＥＤＴＡ溶液を使用して線維芽細胞を分離した。ＡＳ３４Ｎｅｗ１または３でのＦＳ ＣＤ外植片のトランスフェクションでは、Ｓｒｃ ＡＳでトランスフェクトしたＦＳ ＣＤ外植片と比較して、ＩＬ－３４のノックダウンが明らかに増加した（図３Ａ）。ＡＳ３４Ｎｅｗ３での癌関連線維芽細胞のトランスフェクションでは、Ｓｒｃ ＡＳでトランスフェクトした線維芽細胞と比較して、ＩＬ－３４のノックダウンが明らかに増加した（図３Ｂ）。

【0204】

５－メチルシトシン修飾（配列番号７のＩＬ－３４ ＡＯＮ）を含むＩＬ－３４ ＡＯＮのノックダウン有効性を、ＨＴ－２９、ＲＡＷ２６４．７、およびＭＣ－３８の各細胞株を対象に試験した。ＭＣ３８はマウス細胞株である。１０％ＦＢＳおよび１％Ｐ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）を捕捉したＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａの中、ＭＣ－３８細胞（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）を培養し、加湿インキュベータ中、３７℃、５％ＣＯ_２で維持した。すべての細胞株をＩＬ－３４ ＡＯＮで２４時間トランスフェクトし、その後、ＩＬ－３４およびβ－アクチンの値をウェスタンブロッティングにより解析した。配列番号１、３、もしくは７のホスホロチオエート骨格を備えたＩＬ－３４ ＡＯＮ（それぞれＮｅｗ１－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ、Ｎｅｗ－３－ＰＳ－ＭＥＣ；図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ）、またはスクランブルされた対照（対照ＡＳＮｅｗ－１－ＰＳ、対照ＡＳＮｅｗ－３－ＰＳ）で、細胞トランスフェクトした。５－メチルシトシンを含む配列番号７のＩＬ－３４ ＡＯＮでのトランスフェクションは、試験を行った他のすべてのＡＯＮでのトランスフェクションと比較してＩＬ－３４ノックダウンを増加させた（図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃ）。これらの結果は、配列番号７のＩＬ－３４ ＡＯＮを含むＩＬ－３４ ＡＯＮが、マウスおよびヒト細胞株においてＩＬ－３４ ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現をノックダウンさせることが可能であったことを実証する。

【実施例3】

【0205】

Ｍ－ＣＳＦＲ－１はクローン病線維性狭窄において過剰発現される
ＣＤ患者から得た回腸の炎症性ＣＤ（Ｉ ＣＤ）およびＦＳ－ＣＤ検体を対象に、Ｍ－ＣＳＦＲ－１の発現をＲＴ－ＰＣＲによりに評価した。外科検体は、慢性活性疾患の手術を受けたが医学的処置に対する応答が良くないＩ ＣＤ患者１０名、および手術を受けたＦＳ ＣＤ患者２７名から得た。回腸対照（ＣＴＲ）は、結腸癌の手術を受けた患者２７名の巨視的にも微視的にも影響を受けていない領域から採取した粘膜検体であった。試験に参加した各患者はインフォームド・コンセントを書面で提出し、試験実施計画は地域倫理委員会により承認された。

【0206】

ＲＴ－ＰＣＲは次のように行った：ＲＮＡ（０．５μｇ／試料）はｃＤＮＡへとレトロ転移させた。次いで、１μｌのｃＤＮＡ／試料を、次の条件を用いて増幅した：９５℃で１分間の変性、Ｍ－ＣＳＦＲ－１では５８℃、またはβ－アクチンでは６０℃で３０秒間アニーリングを行い、続いて７２℃でさらに３０秒間アニーリングを行った。次のプライマー：Ｍ－ＣＳＦＲ－１フォワード、５’－ＣＴＧＣＴＣＡＡＣＴＴＴＣＴＧＣＧＡＡＧ－３’（配列番号３４）、Ｍ－ＣＳＦＲ－１リバース、５’－ＣＴＣＡＴＣＴＣＣＡＣＡＴＡＧＧＴＧＴＣ－３’（配列番号３５）、β－アクチンフォワード、５’－ＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣ－３’（配列番号３１）、およびβ－アクチンリバース、５’－ＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＴ－３’（配列番号３２）を使用した。ｍＲＮＡ発現をβ－アクチンｍＲＮＡ発現と比して算出した。

【0207】

Ｍ－ＣＳＦＲ－１発現を評価するＲＴ－ＰＣＲは、上述のように、対照、Ｉ、ＣＤ、およびＦＳ ＣＤの各試料において行った。Ｍ－ＣＳＦＲ－１ ｍＲＮＡ転写産物は、ＣＴＲよりもＩ ＣＤ患者において増加した（図５Ａ）。加えて、Ｍ－ＣＳＦＲ－１ ｍＲＮＡ転写産物は、Ｉ ＣＤおよび回腸ＣＴＲ試料よりもＦＳ ＣＤ試料において増加した（図５Ａ；回腸ＣＴＲ ｖ．Ｉ ＣＤ、ｐ＝０．００３；Ｉ ＣＤ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．０１；平均±ＳＥＭ）。

【0208】

Ｉ ＣＤおよびＦＳ ＣＤの各サンプルに対するウェスタンブロッティングを行い、Ｍ－ＣＳＦＲ－１発現を評価した。氷の上で、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭ ＫＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２ｍＭ ＥＧＴＡ、および０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ４０を包含し、１ｍＭジチオスレイトール、１０ｍｇ／ｍｌアプロチニン、１０ｍｇ／ｍｌロイペプチン、１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４、および１ｍＭ ＮａＦを捕捉した緩衝液にて、細胞を溶かした。４℃で３０分間遠心分離を行い、溶解物を浄化し、１０％ドデシルに硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミド上、ゲル電気泳動により分離した。タンパク質が膜に転移した後、膜をウサギ抗ヒトＭ－ＣＳＦＲ－１（１：５００、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｏｕｔｈｐａｒｋ Ｗａｙ，ＵＳＡ）、続いてＨＲＰをコンジュゲートした二次ＩｇＧモノクローナル抗体（１：２０，０００の最終希釈、Ｄａｋｏ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）でインキュベートした。ＨＲＰ反応は感度増強化学発光キット（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）で検出した。解析後、ブロットをストリップし、マウス抗ヒトβ－アクチン（１：５，０００の最終希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でインキュベートした。コンピュータ支援型走査デンシトメトリー（Ｉｍａｇｅ－Ｌａｂ ５．２．１，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）を使用して、免疫反応帯の強度を解析した。

【0209】

Ｉ ＣＤ、ＦＳ ＣＤ、およびＣＴＲの各試料におけるＭ－ＣＳＦＲ－１のタンパク質抽出およびウェスタンブロット検出により、のＭ－ＣＳＦＲ－１発現はＣＴＲよりＩ ＣＤにおいて高く、ＦＳ ＣＤにおける発現はＣＴＲとＩ ＣＤの両試料よりも増加したことを認めた（図５Ｂと５Ｃ；回腸ＣＴＲ ｖ．Ｉ ＣＤ、ｐ＝０．０３；Ｉ ＣＤ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．０１；平均±ＳＥＭ）。

【0210】

免疫組織化学的検査によりＭ－ＣＳＦＲ－１の発現をさらに評価した。免疫組織化学的検査は、回腸ＣＴＲ、Ｉ ＣＤ患者、およびＦＳ ＣＤ患者のホルマリン固定パラフィン包埋回腸切片を対象に行った。切片をキシレンおよびエタノールで脱パラフィンかつ脱水し、恒温槽にあるＴｒｉｓ ＥＤＴＡクエン酸緩衝液（ｐＨ７．８）中、９８℃（Ｄａｋｏ）で３０分間、抗原賦活化を行った。室温（ＲＴ）で１時間インキュベートしたヒトＭ－ＣＳＦＲ－１（最終濃度１：２００、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を対象とするウサギモノクローナル抗体を使用して、免疫組織化学染色を行い、続いて、クロモゲンとして３，３’ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）を用いるビオチンフリーのＨＲＰ高分子検出技術（ＭＡＣＨ ４ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＨＲＰ－Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｋｉｔ，Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）を使用して検出を行った。切片をヘマトキシリンで対比染色し、脱水してマウントした（ｍｏｕｎｔｅｄ）。上記と同じ免疫組織化学条件下であるが、一次抗体を精製されたマウス正常ＩｇＧ対照抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と置き換えた条件下で、アイソタイプ対照のＩｇＧで染色した切片を調製した。

【0211】

回腸対照およびＦＳ ＣＤの各試料の免疫組織化学解析により、対照切片（図５Ｄ）と比較してＦＳ ＣＤ（図５Ｅ）でのＭ－ＣＳＦＲ－１の発現の向上を認めた。Ｍ－ＣＳＦＲ－１発現は、アイソタイプ対照では観察されなかった（図５Ｆ）。免疫組織化学解析はさらに、間質細胞においてＭ－ＣＳＦＲ－１が陽性であったことを実証した（図５Ｅ）。これらの結果はＲＴ－ＰＣＲによってさらに確認された。これより、ＦＳ ＣＤ患者の回腸試料から単離した線維芽細胞におけるＭ－ＣＳＦＲ－１ ｍＲＮＡ発現は、対照線維芽細胞と比較して増加したことを認めた（図５Ｇ；回腸ＣＴＲ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．０４；平均±ＳＥＭ）。これらの結果は、ＩＬ－３４に対する受容体であるＭ－ＣＳＦＲ－１の発現が、非ＣＤ患者由来の回腸組織と比してＣＤ患者の組織において増加したことを実証する。さらに、これらの結果は、Ｍ－ＣＳＦＲ－１発現は、Ｉ ＣＤ患者由来の組織よりＦＳ ＣＤ組織において高いことを実証した。

【実施例4】

【0212】

ＩＬ－３４はクローン病線維芽細胞中のコラーゲン産生を誘導した
対照腸線維芽細胞をＩＬ－３４で刺激することにより、ＩＬ－３４発現による腸線維芽細胞中のコラーゲン産生の調節を評価した。線維芽細胞を継代３と８の間で使用した。線維芽細胞を７５ｃｍ^２プラスチックフラスコに維持し、Ｕｌｔｒａ Ｇｌｕｔａｍｉｎｅを含む高グルコースを含有するとともに、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、および１％非必須アミノ酸（Ｌｏｎｚａ；Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を捕捉したＤ－ＭＥＭ中、５％ＣＯ_２を含む加湿雰囲気下、３７℃でインキュベートした。５×１０^４の正常な線維芽細胞を１２ウェルプレートの各ウェルに蒔き、２４時間放置して接着させ、６時間飢餓させ、最終的に刺激せず放置するか、または組換えヒトＩＬ－３４（５０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で刺激した。６～４８時間後、細胞および無細胞上清を採取した。細胞はタンパク質および遺伝子の発現解析に使用し、無細胞上清はコラーゲンの含有量について解析された。次のプライマー：ＣＯＬ１Ａ１フォワード、５’－ＧＧＡＣＡＣＡＧＡＧＧＴＴＴＣＡＧＴＧＧ－３’（配列番号３６）、ＣＯＬ１Ａ１リバース、３’－ＧＧＴＧＡＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧ－５（配列番号３７）、ＣＯＬ３Ａ１フォワード、５’－ＧＧＡＧＡＡＴＧＴＴＧＴＧＣＡＧＴＴＴＧＣ－３’（配列番号３８）、およびＣＯＬ３Ａ１リバース、３’－ＣＧＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＴＧＴＡＡＧＡＧＧ－５’（配列番号３９）は、ＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１のＲＴ－ＰＣＲに使用した。次の抗体：ウサギ抗ヒトＣＯＬ１Ａ１（最終希釈１：１，０００、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｉｔａｌｙ）およびウサギ抗ヒトＣＯＬ３Ａ１（最終希釈１：１，０００、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）は、ウェスタンブロッティングに使用した。

【0213】

ＲＴ－ＰＣＲ解析では、組換えヒトＩＬ－３４で刺激した線維芽細胞は、未刺激線維芽細胞と比較して、ＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１ ｍＲＮＡ転写産物の産生を顕著に向上させたことが実証された（Ｕｎｓｔ；図６Ａ、Ｕｎｓｔ ｖ．ＩＬ－３４、ｐ＝０．０４；図６Ｂ、Ｕｎｓｔ ｖ．ＩＬ－３４、ｐ＝０．０３；平均±ＳＥＭ）。図６Ｃは、組換えヒトＩＬ－３４で刺激した線維芽細胞が、未刺激線維芽細胞と比較してＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１タンパク質発現も顕著に向上させたことを示すウェスタンブロットである。図６Ｄと６Ｅは、β－アクチン対照へと正規化される図６Ｃに示すウェスタンブロットの、それぞれＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１シグナルの定量化を示す棒グラフである（ＣＯＬ１Ａ１、Ｕｎｓｔ ｖ．ＩＬ－３４、ｐ＝０．０３；ＣＯＬ３Ａ１、Ｕｎｓｔ ｖ．ＩＬ－３４、ｐ＝０．０１；平均±ＳＥＭ）。

【0214】

製造業者の指示（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ Ｌｔｄ，Ｂｅｌｆａｓｔ，ＵＫ）に従いＳｉｒｃｏｌ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔを使用し、線維芽細胞上清におけるコラーゲンの総量も測定した。線維芽細胞上清におけるコラーゲンの可溶性形態の定量化により、ＩＬ－３４での刺激の結果、未刺激対照と比してコラーゲン合成が増加したことが実証された（図６Ｆ、Ｕｎｓｔ ｖ．ＩＬ－３４、ｐ＝０．０１；平均±ＳＥＭ）。これらの結果は、ＩＬ－３４が線維芽細胞中のコラーゲン産生を刺激したことを実証する。

【実施例5】

【0215】

ＩＬ－３４はｐ３８ＭＡＰキナーゼ依存型経路を介してコラーゲン産生を刺激する
ｐ３８ＭＡＰキナーゼ上でのコラーゲン合成に対するＩＬ－３４の依存度を調べた。ＩＬ－３４は、腸線維芽細胞機能を制御するシグナル伝達経路である、上皮細胞中のｐ３８ＭＡＰキナーゼを活性化する。対照の血清飢餓腸線維芽細胞は、刺激せず放置するか、または組換えヒトＩＬ－３４（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＴＮＦ－α（２５ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、もしくはＩＬ－６（５０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で３０分間刺激して、溶解した。ＴＮＦ－αとＩＬ－６は陽性対照として機能した。総抽出量を、リン酸化（ｐ－ｐ３８）と総ｐ３８マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼ両方の含有量について、ウェスタンブロッティングにより解析した。ウェスタンブロッティングは次の抗体：ウサギ抗ヒトｐ－ｐ３８（１：１，０００ ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）およびマウス抗ヒト完全ｐ３８（最終希釈１：５００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）を使用して行った。ＩＬ－３４刺激を行った線維芽細胞では、未刺激細胞と比較してｐ３８ＭＡＰキナーゼのリン酸化が向上した（図７Ａ）。

【0216】

ＩＬ－３４で誘導されたコラーゲン産生に対するＭＡＰキナーゼｐ３８の効果を評価するために、正常線維芽細胞を、ＳＢ２０２１９０、ｐ３８の阻害剤（１０ｍｏｌ／ｌ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、ビヒクル）で１時間あらかじめインキュベートするか、またはＩＬ－３４（５０ｎｇ／ｍｌ）で刺激せず２４～４８時間放置した。細胞中のタンパク質発現をウェスタンブロッティングにより解析し、無細胞上清をコラーゲン含有量について解析した。図７Ｂは、ＳＢ２０２１９０での細胞のプレインキュベーションが、ＩＬ－３４で誘導されたＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１産生を阻害したことを示すウェスタンブロットである。図７Ｃと７Ｄは、図７Ｂに示すウェスタンブロットの、それぞれＣＯＬ１Ａ１シグナルの定量化とＣＯＬ３Ａ１シグナルの定量化を示す棒グラフであり、ウェスタンブロッティングにより評価したときのβ－アクチン対照（ＣＯＬ１Ａ１（ＤＭＳＯ ｖ．ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０００９；ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４ ｖ．ＳＢ２０２１９０、ｐ＝０．０００３；ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４ ｖ．ＳＢ２０２１９０＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０００１；ＤＭＳＯ ｖ．ＳＢ２０２１９０＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０５）；ＣＯＬ３Ａ１（ＤＭＳＯ ｖ．ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０１；ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４ ｖ．ＳＢ２０２１９０、ｐ＝０．００２；ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４ ｖ．ＳＢ２０２１９０＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．００２；ＤＭＳＯ ｖ．ＳＢ２０２１９０＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０３）；平均±ＳＥＭ）、およびＳｉｒｃｏｌアッセイにより評価したときの線維芽細胞中の総コラーゲン産生量（図７Ｅ；ＤＭＳＯ ｖ．ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．００１；ＤＭＳＯ＋ＩＬ－３４ ｖ．ＳＢ２０２１９０＋ＩＬ－３４、ｐ＝０．０１；平均±ＳＥＭ）に正規化される。これらの結果は、ＩＬ－３４で誘導されたコラーゲン産生がｐ３８ＭＡＰキナーゼ経路に依存することを実証する。

【実施例6】

【0217】

クローン病線維性狭窄におけるＩＬ－３４産生
線維性狭窄におけるＩＬ－３４発現を評価し、線維性狭窄のどの細胞がＩＬ－３４を産生するかを求めた。ＩＬ－３４に対するＲＮＡ転写物は、Ｉ ＣＤ、ＦＳ ＣＤ、および対照から採取した腸検体において評価した。ＩＬ－３４ＲＮＡ転写産物は、対照よりもＩ ＣＤ患者において顕著に増加した（図８Ａ）。ＩＬ－３４ＲＮＡ発現は、対照およびＩ ＣＤ試料よりもＦＳ ＣＤ試料において増加した（図８Ａ、回腸ＣＴＲ ｖ．Ｉ ＣＤ、ｐ＝０．００２；Ｉ ＣＤ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．０３；回腸ＣＴＲ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．００２；平均±ＳＥＭ）。図８Ｂは、ＩＬ－３４発現が、対照よりもＩ ＣＤ患者において、および対照とＩ ＣＤ細胞の両方よりもＦＳ ＣＤ患者において顕著に増加することを示す、一対の粘膜試料から抽出した全タンパク質のウェスタンブロット解析である。図８Ｃは、β－アクチン対照へと正規化される、図８Ｂに示すウェスタンブロットのＩＬ－３４シグナルの定量化を示す棒グラフである（回腸ＣＴＲ ｖ．Ｉ ＣＤ、ｐ＝０．００４；Ｉ ＣＤ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．０４；回腸ＣＴＲ ｖ．ＦＳ ＣＤ、ｐ＝０．００４；平均±ＳＥＭ）。免疫組織化学解析ではさらに、ＩＬ－３４は、回腸対照（図８Ｄ）およびアイソタイプ対照（図８Ｆ）と比較してＦＳ ＣＤ細胞（図８Ｅ）において高度に発現されることが実証された。免疫組織化学的検査ではさらに、ＦＳ ＣＤ線維性狭窄において間質細胞がＩＬ－３４を発現することが実証された（図８Ｅ）。ＩＬ－３４ ＲＮＡ（図８Ｇ、平均±ＳＥＭ）およびタンパク質発現（図８Ｈ）は、対照線維芽細胞よりもＦＳ ＣＤ患者の回腸試料から単離した線維芽細胞において向上したことを観察した。

【実施例7】

【0218】

クローン病線維芽細胞におけるＩＬ－３４ノックダウンはコラーゲン産生の低下をもたらす
ＦＳ検体から単離したＣＤ線維芽細胞におけるコラーゲン合成に対するＩＬ－３４阻害の効果を、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して評価した。簡潔に言えば、５×１０^４のＦＳ ＣＤ線維芽細胞を１２ウェルプレートの各ウェルに蒔き、２４時間放置して接着させ、次いで刺激せず放置するか、または、製造業者の指示（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）のＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００試薬を使用し、２４～４８時間、配列番号３のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＬ－３４ ＡＳ）もしくは相補的センスオリゴヌクレオチド（ＮＣＡＳ；ともに２００ｎＭで使用；Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｌｅｕｖｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）でトランスフェクトした。トランスフェクション効率はウェスタンブロッティングにより判定した。４８時間後、無細胞上清をコラーゲン含有量について解析した。

【0219】

ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドでのＦＳ ＣＤ線維芽細胞のトランスフェクションは、ウェスタンブロッティングにより評価すると、対照アンチセンス配列でのトランスフェクションと比較してＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ３Ａ１両方のタンパク質合成を大幅に低下させた（図９Ａ）。

【0220】

図９Ｂ、９Ｃ、９Ｄは、β－アクチン対照へと正規化される図９Ａに示すウェスタンブロットの、それぞれＩＬ－３４、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１シグナルの定量化を示す棒グラフである（ＩＬ－３４、ＮＣＡＳ ｖ．ＩＬ－３４ＡＳ、ｐ＝０．０１；ＣＯＬ１Ａ１ ＮＣＡＳ ｖ．ＩＬ－３４ＡＳ、ｐ＝０．０００４；ＣＯＬ３Ａ１ ＮＣＡＳ ｖ．ＩＬ－３４ＡＳ、ｐ＝０．００４；平均±ＳＥＭ）。ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドでのＦＳ ＣＤ線維芽細胞のトランスフェクションはさらに、線維芽細胞培養液上清におけるコラーゲン分泌を低下させた（図９Ｅ；ＮＣＡＳ ｖ．ＩＬ－３４ＡＳ、ｐ＝０．００６、平均±ＳＥＭ）。

【0221】

細胞死に対するＩＬ－３４ノックダウンの効果も評価した。細胞死を採点するために、ＦＳ線維芽細胞をＰＢＳ中で洗浄し、製造業者の指示に従いＦＩＴＣ－ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ（ＡＶ、１：１００の最終希釈、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｏｌｓ，Ｆｒｉｅｓｏｙｔｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により染色し、４℃で２０分間、５ｍｇ／ｍｌ ＰＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でインキュベートした。ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）フローサイトメーターのＦＬ－１およびＦＬ－２チャネルを用いるフローサイトメトリーにより、蛍光を測定した。ＡＶ－／ＰＩ－細胞は生存細胞であると認め、ＡＶ＋／ＰＩ－細胞はアポトーシス性であると認め、二次壊死細胞はＡＶ＋／ＰＩ＋染色により特徴解析した。図９Ｇと９Ｈは、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＮＣＡＳでトランスフェクトされたＦＳ ＣＤ線維芽細胞のフローサイトメトリーにおけるドットプロットである。図９Ｆは、図９Ｇおよび９Ｈのフローサイトメトリーデータに相当する棒グラフ（平均±ＳＥＭ）であり、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトされたそのＦＳ ＣＤ線維芽細胞が、細胞死の増加をもたらさなかったことが示されている。これらの結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＦＳ ＣＤ線維芽細胞におけるＩＬ－３４ノックダウンが、細胞死に対して有意な効果を有することなくコラーゲン産生の大幅な低下をもたらすことを実証する。

【0222】

参照による引用
本明細書中で引用する特許文献と科学論文それぞれの全体開示は、すべての目的のために参照により組み込まれる。

【0223】

等価物
本開示は、その必須特徴から逸脱した他の特異的な形態で具体化することができる。このため、前述の実施形態は、本明細書に記載の開示に対して例示的なものであり、限定的ではないことを考慮されたい。本開示の範囲は、前述の記載ではなく添付の特許請求の範囲により示されるものであり、この特許請求の範囲と等価な意味と範囲内で行われる変更はすべて、その範囲内に包含されることが意図される。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図5G】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図8G】

【図8H】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【配列表】

2023503804000001.app

【国際調査報告】