特表 2023-504287 三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン修飾ヒドロキシルポリアミドアミンデンドリマーおよびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-02

(54)【発明の名称】三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン修飾ヒドロキシルポリアミドアミンデンドリマーおよびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/60 20170101AFI20230126BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230126BHJP

   A61K 31/4184 20060101ALI20230126BHJP

   A61K 31/575 20060101ALI20230126BHJP

   A61K 31/426 20060101ALI20230126BHJP

   A61K 31/355 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 9/12 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230126BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230126BHJP

【ＦＩ】

A61K47/60

A61K45/00

A61K31/4184

A61K31/575

A61K31/426

A61K31/355

A61P1/16

A61P31/00

A61P3/10

A61P9/12

A61P3/04

A61P9/04

A61P13/12

A61P35/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022534313

(86)(22)【出願日】2020-12-04

(85)【翻訳文提出日】2022-08-01

(86)【国際出願番号】 US2020063342

(87)【国際公開番号】W WO2021113657

(87)【国際公開日】2021-06-10

(31)【優先権主張番号】62/943,705

(32)【優先日】2019-12-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/067,155

(32)【優先日】2020-08-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/086,109

(32)【優先日】2020-10-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/108,186

(32)【優先日】2020-10-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522223121

【氏名又は名称】アシュバッタ セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】クリーランド， ジェフリー

(72)【発明者】

【氏名】シャルマ， リシ

(72)【発明者】

【氏名】ソン， ミンハオ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

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4C086MA01

4C086MA16

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4C086NA13

4C086ZA36

4C086ZA42

4C086ZA70

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZB32

4C086ZC35

4C086ZC75

(57)【要約】

炭水化物の三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（三分岐β－ＧａｌＮＡｃ）にコンジュゲートしている、またはそれと複合体を形成しているデンドリマーが、肝細胞内に選択的に蓄積し、治療剤、予防剤、または診断剤を肝臓に選択的に送達することが確立されている。必要な対象における肝傷害、肝疾患、または肝障害を防止する、処置する、または診断するために、三分岐β－ＧａｌＮＡｃおよび１つまたは複数の作用剤と複合体を形成しているデンドリマーの組成物、ならびにその使用方法が開発されている。組成物は、減少した毒性で、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および肝臓がんの１つまたは複数の症状を処置および／または改善するために特に適している。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

必要な対象における肝疾患および／または肝障害の１つまたは複数の症状を処置または予防する方法であって、
三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）に共有結合によりコンジュゲートされ、かつ１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されているデンドリマーを含む組成物を対象に投与するステップを含み、
前記組成物が、肝疾患および／または肝障害の１つまたは複数の症状を処置する、緩和する、または予防するために有効な量で投与される、方法。

【請求項2】

前記デンドリマーが、エステル、エーテル、またはアミド結合を介して、必要に応じて１つまたは複数のリンカーによって三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）に共有結合によりコンジュゲートされている、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記デンドリマーが、ヒドロキシル末端デンドリマーである、請求項１または２に記載の方法。

【請求項4】

前記デンドリマーが、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代ポリ（アミドアミン）デンドリマーである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記治療剤が、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト、デス受容体５アゴニスト、ナトリウム－グルコース共輸送体２型阻害剤、リゾホスファチジン酸１受容体アンタゴニスト、エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲδアゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニスト、抗線維化剤、抗炎症剤、抗酸化剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＳＨＰ２阻害剤、化学療法薬、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の作用剤である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記作用剤が、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、前記デンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記リンカーまたはスペーサー部分が、エーテル、エステル、およびアミド連結からなる群から選択される連結を介して前記デンドリマーに結合している、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記リンカーまたはスペーサー部分が、アミドまたはエーテル連結を介して前記デンドリマーに結合している、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記１つまたは複数の肝疾患および／または肝障害が、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、肝細胞癌、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤が、テルミサルタン、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグであり、必要に応じてテルミサルタン－アミド誘導体またはテルミサルタン－エステル誘導体である、請求項５～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記ＦＸＲアゴニストが、ケノデオキシコール酸、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグであり、必要に応じてケノデオキシコール酸－アミド誘導体またはケノデオキシコール酸－エステル誘導体である、請求項５～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

１つまたは複数のＳＧＬＴ２阻害剤が、フロリジン、Ｔ－１０９５、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、エンパグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、およびレモグリフロジンエタボネート、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグからなる群から選択される、請求項５～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記ＰＰＡＲδアゴニストが、ＧＷ０７４２、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグであり、必要に応じてＧＷ０７４２－アミド誘導体またはＧＷ０７４２－エステル誘導体である、請求項５～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記抗酸化剤が、ビタミンＥ、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグである、請求項５～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記組成物が、前記対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、トリグリセリド、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ、総コレステロール、低密度リポタンパク質、絶食時血糖の１つまたは複数、またはそれらの組合せの血清レベルを低減させるために有効な量で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記組成物が、前記対象における脂肪症、炎症、風船様腫大、線維症、硬変の１つまたは複数、またはそれらの組合せを低減させるために有効な量で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

製剤が、前記対象の肝臓における小葉炎症を低減させるために有効な量で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記組成物が、前記対象の肝臓における１つまたは複数の炎症促進性細胞、ケモカイン、および／またはサイトカインの量または存在を低減させるために有効な量で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記組成物が、前記対象における１つまたは複数の炎症促進性サイトカインを低減させるために有効な量で投与されるか、または前記炎症促進性サイトカインが、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＩＬ－２３、およびＩＬ－１７からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記治療剤が、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＳＨＰ２阻害剤、細胞傷害剤、化学療法薬、およびそれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の作用剤である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、環状ジヌクレオチドＧＭＰ－ＡＭＰもしくはＤＭＸＡＡであり、
前記ＣＳＦ１Ｒ阻害剤が、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ１０８－０１、ＡＲＲＹ－３８２、ＰＬＸ７４８６、ＢＬＺ９４５、ＪＮＪ－４０３４６５２７、およびＧＷ２５８０からなる群から選択され、
前記ＰＡＲＰ阻害剤が、オラパリブ、ベリパリブ、ニラパリブ、およびルカパリブからなる群から選択され、
前記ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が、スニチニブもしくはその誘導体もしくはアナログ、ソラフェニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、セディラニブ、バタラニブ、ダサチニブ、ニンテダニブ、およびモテサニブからなる群から選択され、
前記ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ３２５９０１、ＰＤ０３５９０１、ＰＤ０３２９０１、およびＴＡＫ－７３３からなる群から選択され、
前記グルタミナーゼ阻害剤が、ビス－２－（５－フェニルアセトイミド－１，２，４－チアジアゾル－２－イル）エチルスルフィド（ＢＰＴＥＳ）および６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）、アザセリン、アシビシン、およびＣＢ－８３９からなる群から選択され、
前記ＣＸＣＲ２阻害剤が、ナバリキシン、ＳＢ２２５００２、もしくはＳＢ３３２２３５であり、
前記ＣＤ７３阻害剤が、ＡＰＣＰ、ケルセチン、もしくはテノホビル、もしくはその誘導体、アナログであり、
前記アルギナーゼ阻害剤が、２－（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸の誘導体もしくはアナログであり、
前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、アルペリシブ、セラベリシブ、ピララリシブ、ＷＸ－０３７、ダクトリシブ、プレキサセルチブ、ボクスタリシブ、ＰＸ－８６６、ＺＳＴＫ４７４、ブパルリシブ、ピクチリシブ、およびコパンリシブからなる群から選択され、
免疫調節剤が、ＳＨＰ２阻害剤であり、または
前記細胞傷害剤が、アウリスタチンＥもしくはメルタンシンである、
請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記化学療法剤が、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、ダウノルビシン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テニポシド、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、タキソール、トリコスタチンＡおよびその誘導体、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ならびにベバシズマブからなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

前記組成物が、前記対象における腫瘍サイズを低減するために有効な、および／または腫瘍特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強するために有効な量で投与される、請求項２０～２２のいずれかに記載の方法。

【請求項24】

前記組成物が、静脈内、皮下、または筋肉内投与のために薬学的に許容される製剤として製剤化される、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。

【請求項25】

前記組成物が、腸投与のための薬学的に許容される製剤として製剤化される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記組成物が静脈内、皮下、または筋肉内経路を介して投与される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記組成物が腸投与を介して投与される、請求項１～２３または２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記組成物が、１つまたは複数の追加の療法または手順による前記対象の処置の前、処置と共に、処置の後に、または処置と交互に前記対象に投与される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記１つまたは複数の追加の手順が、感染症、敗血症、糖尿病合併症、高血圧症、肥満、高血圧、心不全、腎疾患、およびがんを含む前記対象における肝傷害の関連疾患または状態の１つまたは複数の症状を防止または処置するために１つまたは複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤を投与するステップを含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法において使用するための医薬組成物。

【請求項31】

１つまたは複数の三分岐ＧａｌＮＡｃ分子をその上に有するデンドリマーを作製する方法であって、
（ａ）ハイパーモノマーＡＢ_３を調製するステップであって、
３つの反応基でハイパーモノマーのプロパルギル化を実施することを含むステップ；
（ｂ）１つのアジド基をＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）分子上に、好ましくはスペーサーを介してコンジュゲートして、ＧａｌＮＡｃ－アジドビルディングブロックを産生するステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）からの前記ハイパーモノマーＡＢ_３およびステップ（ｂ）からの前記ＧａｌＮＡｃ－アジドビルディングブロックを混合し、銅（Ｉ）触媒アルキンアジドクリックケミストリーを実施して、三分岐ＧａｌＮＡｃを生じるステップ；ならびに
（ｄ）前記三分岐ＧａｌＮＡｃを、デンドリマーの反応性末端基にコンジュゲートするステップ
を含む方法。

【請求項32】

ステップ（ｄ）の前に、好ましくはスペーサーを介して、ＧａｌＮＡｃを有しない前記ハイパーモノマーＡＢ_３の１つの反応基上に１つのアジド基を導入するステップをさらに含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記デンドリマーの１つまたは複数の末端官能基をヘキシン酸と反応させることによって、末端アルキンを前記デンドリマー上に導入するステップをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。

【請求項34】

三分岐ＧａｌＮＡｃをデンドリマーの１つの反応基上にコンジュゲートするステップ（ｄ）が、銅（Ｉ）触媒アルキンアジドクリックケミストリーを介して達成される、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記デンドリマーが、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、第８世代ヒドロキシル末端ポリアミドアミンデンドリマーである、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記デンドリマーがさらに、１つまたは複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤と複合体を形成している、および／またはそれにコンジュゲートされている、請求項３１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、その全体が参照により組み込まれる、２０１９年１２月４日に出願された米国仮出願第６２／９４３，７０５号、２０２０年８月１８日に出願された米国仮出願第６３／０６７，１５５号、２０２０年１０月１日に出願された米国仮出願第６３／０６８，１０９号、および２０２０年１０月３０日に出願された米国仮出願第６３／１０８，１８６号に基づく利益を主張する。

【0002】

発明の分野
本発明は全般的に、薬物送達、特に、肝臓の部位または領域を選択的に標的化する、デンドリマーに結合した薬物を送達する方法の分野にある。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
肝疾患、例えば肝感染症、肝硬変、薬物誘発性肝不全、および肝細胞癌は、常に世界全体で有意な健康上の課題となっている。肝疾患の有病率は、世界全体で増加しつつあり、世界全体で推定８億４４００万人が慢性肝疾患に罹患しており、毎年およそ２００万人が、肝障害のために死亡する。

【0004】

非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）としても公知であり、現在、最も一般的な肝障害であり、２０３０年には肝移植の最多の適応となると予想される。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨは、肝硬変（瘢痕化）または肝臓がんを引き起こすことがあり、有意な罹患率および死亡率に関連している。ＮＡＦＬＤの世界全体での推定有病率は、一般的な集団で６．３％～３３％であり、有病率の中央値は２０％である。ＮＡＦＬＤの有病率の中央値は、先進国では一般的に高い。

【0005】

これらの驚くほどの数にもかかわらず、多くの肝疾患に関する現在の処置の選択肢は限定的で、進行例および重度の例を処置するために必要な有効性を欠如している。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの疫学、自然経過、および発病の解明にはかなりの進歩が認められているが、有効な治療は依然としてなく、患者の管理のためのエビデンスに基づく臨床ガイドラインの選択肢は限定的である。ＮＡＦＬＤを有する患者の薬理学的処置はなおも発展途上であり、特に疾患の経過を変更するために明らかに有効であることが証明されている単剤治療はない。

【0006】

肝細胞は、最も豊富な肝細胞型であり、肝生物量の＞８０％を構成し、ほとんどの肝障害、例えば肝細胞癌、薬物誘発性肝不全、肝炎、および非アルコール性脂肪性肝炎に主に関係している。疾患を有する肝細胞に薬物を有効に送達することは課題である。注射した場合、ほとんどの薬物は肝臓に蓄積するが、肝細胞ではなくてマクロファージおよびクッパー細胞を通して除去される傾向があり、そのため、肝細胞を選択的かつ有効に標的化することは難しい。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

したがって、本発明の目的は、肝疾患および／または肝障害の１つまたは複数の症状を選択的に低減または防止するための組成物および方法を提供することである。

【0008】

本発明の目的はまた、肝疾患および／または肝障害の発症および進行に関連する病的プロセスを低減または防止する組成物、ならびにそれらを作製および使用する方法を提供することでもある。

【0009】

本発明のなお別の目的は、それを必要とする部位で肝細胞に活性剤を選択的に標的化するための組成物および方法を提供することである。

【0010】

発明の要旨
三分岐(triantennary)Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされているデンドリマーは、ｉｎ ｖｉｖｏで活性剤を肝細胞に選択的に送達することが確立されている。一部の実施形態では、デンドリマーは、エステル、エーテル、またはアミド結合を介して、必要に応じて１つまたは複数のリンカーによって三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）に共有結合によりコンジュゲートされている。

【0011】

必要な対象における肝疾患および／または肝障害の１つまたは複数の症状を処置または予防するための組成物および方法を提供する。典型的に、対象における肝疾患を処置するための方法は、１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを含む製剤を対象に投与することを含む。製剤は典型的に、レシピエントにおける肝疾患および／または肝障害の１つまたは複数の症状を処置する、緩和する、または予防するために有効な量で投与される。処置することができる例示的な肝疾患および／または肝障害としては、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、肝細胞癌、またはそれらの組合せが挙げられる。一部の実施形態では、デンドリマーはヒドロキシル末端デンドリマーである。一部の実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーである。

【0012】

本方法を使用して、１つまたは複数の活性剤、例えば治療剤、予防剤、および／または診断剤を、レシピエントの肝細胞に選択的に送達する。送達することができる例示的な治療剤としては、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト、デス受容体５アゴニスト、ナトリウム－グルコース共輸送体２型（ＳＧＬＴ２）阻害剤、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）１受容体アンタゴニスト、エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲδアゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニスト、抗線維化剤、抗炎症剤、および／または抗酸化剤が挙げられる。一部の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤は、テルミサルタン、またはテルミサルタン－アミド誘導体、またはテルミサルタン－エステル誘導体である。一部の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、ケノデオキシコール酸、またはケノデオキシコール酸－アミド誘導体、またはケノデオキシコール酸－エステル誘導体である。送達することができる例示的なＳＧＬＴ２阻害剤としては、フロリジン、Ｔ－１０９５、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、エンパグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、レモグリフロジンエタボネート、またはその誘導体が挙げられる。一部の実施形態では、ＰＰＡＲδアゴニストは、ＧＷ０７４２、ＧＷ０７４２－アミド誘導体、およびＧＷ０７４２－エステル誘導体である。一部の実施形態では、抗酸化剤は、ビタミンＥまたはその誘導体である。

【0013】

典型的に、方法は、対象において所望の生理的応答を達成するために有効な量で活性剤を対象に送達する。例えば、一部の実施形態では、方法は、対象におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ（glutamyltrasferase）（ＧＧＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＰ）、絶食時血糖の１つまたは複数、またはそれらの組合せの血清レベルを低減させるために有効な量で活性剤を対象に送達する。一部の実施形態では、方法は、対象における脂肪症、炎症、風船様腫大、線維症、硬変の１つまたは複数、またはそれらの組合せを低減させるために有効な量で活性剤を対象に送達する。一部の実施形態では、方法は、肝臓における小葉の炎症を低減させるため；肝臓における１つもしくは複数の炎症促進性細胞、ケモカイン、および／もしくはサイトカインの量もしくは存在を低減させるため；またはＴＮＦ－α、ＩＬ－６、およびＩＬ－１αを含む１つもしくは複数の炎症促進性サイトカインを低減させるために有効な量で活性剤を対象に送達する。

【0014】

一部の実施形態では、肝細胞に送達される治療剤、予防剤、および／または診断剤は、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＳＨＰ２阻害剤、化学療法薬、および細胞傷害剤を含む。一部の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチドＧＭＰ－ＡＭＰまたはＤＭＸＡＡである。一部の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ１０８－０１、ＡＲＲＹ－３８２、ＰＬＸ７４８６、ＢＬＺ９４５、ＪＮＪ－４０３４６５２７、およびＧＷ２５８０からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＰＡＲＰ阻害剤は、オラパリブ、ベリパリブ、ニラパリブおよびルカパリブからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブまたはその誘導体もしくはアナログ、ソラフェニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、アキシチニブ、セディラニブ、バタラニブ、ダサチニブ、ニンテダニブ、およびモテサニブからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ＰＤ３２５９０１、ＰＤ０３５９０１、ＰＤ０３２９０１、およびＴＡＫ－７３３からなる群から選択される。一部の実施形態では、グルタミナーゼ阻害剤は、ビス－２－（５－フェニルアセトイミド－１，２，４－チアジアゾル－２－イル）エチルスルフィド（ＢＰＴＥＳ）および６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）、アザセリン、アシビシン、およびＣＢ－８３９からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ２阻害剤は、ナバリキシン、ＳＢ２２５００２、またはＳＢ３３２２３５である。一部の実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、ＡＰＣＰ、ケルセチン、またはテノホビル、またはその誘導体、アナログである。一部の実施形態では、アルギナーゼ阻害剤は、２－（Ｓ）－アミノ－６－ブロモヘキサン酸（boronohexanoic acid）の誘導体またはアナログである。一部の実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、アルペリシブ、セラベリシブ、ピララリシブ、ＷＸ－０３７、ダクトリシブ、プレキサセルチブ、ボクスタリシブ、ＰＸ－８６６、ＺＳＴＫ４７４、ブパルリシブ、ピクチリシブ、およびコパンリシブからなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫調節剤は、ＳＨＰ２阻害剤である。一部の実施形態では、細胞傷害剤は、アウリスタチンＥまたはメルタンシンである。一部の実施形態では、化学療法剤は、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン（innotecan）、ロイコボリン、ダウノルビシン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テニポシド、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、タキソール、トリコスタチンＡおよびその誘導体、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ならびにベバシズマブからなる群から選択される。好ましい実施形態では、方法は、対象における腫瘍サイズを低減するために有効な、および／または腫瘍特異的細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強するために有効な量で活性剤を対象に送達する。

【0015】

一部の実施形態では、治療剤、予防剤、および／または診断剤は、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、エーテル、エステル、およびアミド連結からなる群から選択される連結を介してデンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている。好ましい実施形態では、治療剤、予防剤、および／または診断剤は、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、アミドまたはエーテル連結を介してデンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている。

【0016】

一部の実施形態では、製剤は、対象に静脈内、皮下、または筋肉内投与するために、または腸投与するために製剤化される。一部の実施形態では、製剤は、１つまたは複数の追加の療法または手順による処置の前に、処置と共に、処置の後に、または処置と交互に投与される。例示的な追加の手順は、肝傷害の関連疾患または状態、例えば感染症、敗血症、糖尿病合併症、高血圧症、肥満、高血圧、心不全、腎疾患、およびがんの１つまたは複数の症状を防止または処置するために、１つまたは複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤を投与することを含む。

【0017】

１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーの医薬製剤もまた記載される。１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを含むキットもまた提供される。

【0018】

三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを作製する方法、および１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを作製する方法もまた記載される。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】図１は、β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐βＥＧ３－アジド（ＡＢ３ビルディングブロック）の合成を示すスキームである。試薬および条件を以下に示す：（ｉ）トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、ＤＣＥ、３時間、８０℃、（ｉｉ）臭化プロパルギル、トルエン、水酸化ナトリウム、水、ＴＢＡＢ、（ｉｉｉ）ピリジン、塩化チオニル、クロロホルム、６５℃、２時間；（ｉｖ）テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩、５０％ＮａＯＨ、１６時間、室温；（ｖ）（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＴＨＦ、水、１０時間；（ｖｉ）ＤＭＦ、ヨウ化テトラブチルアンモニウム、ＮａＮ_３、８０℃、５時間；（ｖｉｉ）メトキシドナトリウム、無水メタノール、３０℃、３時間。

【0020】

【図2】図２は、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ－ＣＹ５の合成を示すスキームである。試薬および条件を以下に示す：（ｉ）ＥＤＣ、ＤＭＡＰ、ＤＭＦ、室温、２４時間；（ｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間；（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間。

【0021】

【図3】図３は、デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃとのテルミサルタンエステルコンジュゲートの合成を示すスキームである。試薬および条件を以下に示す：（ｉ）ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、室温、４時間；（ｉｉ）ＥＤＣ、ＤＭＡＰ、ＤＭＦ、室温、２４時間；（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間；（ｉｖ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間。

【0022】

【図4】図４は、デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃとのテルミサルタンアミドコンジュゲートの合成を示すスキームである。試薬および条件を以下に示す：（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ、室温、４時間；（ｉｉ）ＥＤＣ、ＤＭＡＰ、ＤＭＦ、室温、２４時間；（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間；（ｉｖ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間。

【図5】図５は、血漿（ｐＨ７．４、ＰＢＳ）および細胞内条件（ｐＨ５．５、エステラーゼ）でのデンドリマー－テルミサルタンエステルコンジュゲートからの１８日間のｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物放出を示す棒グラフである。

【0023】

【図6】図６は、血漿（ｐＨ７．４、ＰＢＳ）および細胞内条件（ｐＨ５．５、エステラーゼ）でのデンドリマー－テルミサルタンアミドコンジュゲートからの１８日間のｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物放出を示す棒グラフである。

【0024】

【図7】図７は、ヒト、マウス、およびラット血漿でのデンドリマー－テルミサルタンアミドコンジュゲートからの３７℃で４８時間のｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物放出を示す棒グラフである。

【0025】

【図8】図８は、デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－オベチコール酸コンジュゲートの合成を示すスキームである。試薬および条件を以下に示す：（ｉ）ＥＤＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、室温、４時間；（ｉｉ）ＣｕＳＯ_４－５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間；（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４－５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＤＭＦ、水、８時間。

【0026】

【図9-1】図９Ａ～９Ｃは、媒体、遊離のテルミサルタン、オベチコール酸（ＯＣＡ）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンアミドコンジュゲート（Ｄ－Ｔｅｌ 高）、低用量Ｄ－Ｔｅｌ（Ｄ－Ｔｅｌ 低）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンエステルコンジュゲート（Ｄ－ＴｅｌＢ 高）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－オベチコール酸エステルコンジュゲート（Ｄ－ＯＣＡ 高）、および低用量Ｄ－ＯＣＡ（Ｄ－ＯＣＡ 低）によって処置した正常マウスおよび非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）マウスの、９週齢で屠殺した場合のグラムでの体重（図９Ａ）、グラムでの肝重量（図９Ｂ）、および肝重量の体重に対する比（図９Ｃ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊＊ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図9-2】図９Ａ～９Ｃは、媒体、遊離のテルミサルタン、オベチコール酸（ＯＣＡ）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンアミドコンジュゲート（Ｄ－Ｔｅｌ 高）、低用量Ｄ－Ｔｅｌ（Ｄ－Ｔｅｌ 低）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンエステルコンジュゲート（Ｄ－ＴｅｌＢ 高）、高用量デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－オベチコール酸エステルコンジュゲート（Ｄ－ＯＣＡ 高）、および低用量Ｄ－ＯＣＡ（Ｄ－ＯＣＡ 低）によって処置した正常マウスおよび非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）マウスの、９週齢で屠殺した場合のグラムでの体重（図９Ａ）、グラムでの肝重量（図９Ｂ）、および肝重量の体重に対する比（図９Ｃ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊＊ｐ＜０．００１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0027】

【図10-1】図１０Ａおよび１０Ｂは、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の血清中のアミノトランスフェラーゼレベル（ＡＬＴ）（図１０Ａ）および肝臓中のトリグリセリドレベル（図１０Ｂ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図10-2】図１０Ａおよび１０Ｂは、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の血清中のアミノトランスフェラーゼレベル（ＡＬＴ）（図１０Ａ）および肝臓中のトリグリセリドレベル（図１０Ｂ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0028】

【図11-1】図１１Ａ～１１Ｄは、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の肝臓における非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（図１１Ａ）、脂肪症スコア（図１１Ｂ）、炎症スコア（図１１Ｃ）、および風船様腫大スコア（図１１Ｄ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図11-2】図１１Ａ～１１Ｄは、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の肝臓における非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（図１１Ａ）、脂肪症スコア（図１１Ｂ）、炎症スコア（図１１Ｃ）、および風船様腫大スコア（図１１Ｄ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図11-3】図１１Ａ～１１Ｄは、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の肝臓における非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（図１１Ａ）、脂肪症スコア（図１１Ｂ）、炎症スコア（図１１Ｃ）、および風船様腫大スコア（図１１Ｄ）を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0029】

【図12】図１２は、媒体、遊離のテルミサルタン、ＯＣＡ、Ｄ－Ｔｅｌ 高、Ｄ－Ｔｅｌ 低、Ｄ－ＴｅｌＢ 高、Ｄ－ＯＣＡ 高、およびＤ－ＯＣＡ 低によって処置した正常マウスおよびＮＡＳＨマウスの、９週齢で屠殺した場合の肝臓におけるシリウスレッド陽性領域を示すプロットである。媒体と比較して、^＊ｐ＜０．０５；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0030】

【図13-1】図１３Ａは、活性剤の２つの異なるクラスＲ１およびＲ２にコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームであり；図１３Ｂは、カペシタビンおよびゲムシタビン、ならびにそのアナログを含む例示的なＲ１群を示し、図１３Ｃは、例示的なＲ２群、例えばＴＩＥ ＩＩ阻害剤およびそのアナログを示す。

【図13-2】図１３Ａは、活性剤の２つの異なるクラスＲ１およびＲ２にコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームであり；図１３Ｂは、カペシタビンおよびゲムシタビン、ならびにそのアナログを含む例示的なＲ１群を示し、図１３Ｃは、例示的なＲ２群、例えばＴＩＥ ＩＩ阻害剤およびそのアナログを示す。

【図13-3】図１３Ａは、活性剤の２つの異なるクラスＲ１およびＲ２にコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームであり；図１３Ｂは、カペシタビンおよびゲムシタビン、ならびにそのアナログを含む例示的なＲ１群を示し、図１３Ｃは、例示的なＲ２群、例えばＴＩＥ ＩＩ阻害剤およびそのアナログを示す。

【0031】

【図14-1】図１４Ａおよび１４Ｂは、２つの例示的なＴＬＲ４アゴニストにコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームである。

【図14-2】図１４Ａおよび１４Ｂは、２つの例示的なＴＬＲ４アゴニストにコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームである。

【0032】

【図15】図１５は、例示的なＣＳＦ１Ｒ阻害剤にコンジュゲートされているデンドリマーの合成スキームである。

【0033】

【図16】図１６は、デンドリマー－Ｎ－アセチル－Ｌ－システインメチルエステルコンジュゲートの合成スキームである。

【0034】

【図17-1】図１７Ａおよび１７Ｂはそれぞれ、デンドリマー－ＧＷ２５８０エーテルコンジュゲート（図１７Ａ）およびデンドリマー－ＧＷ２５８０エステルコンジュゲート（図１７Ｂ）の合成の化学反応ステップを示すスキームである。

【図17-2】図１７Ａおよび１７Ｂはそれぞれ、デンドリマー－ＧＷ２５８０エーテルコンジュゲート（図１７Ａ）およびデンドリマー－ＧＷ２５８０エステルコンジュゲート（図１７Ｂ）の合成の化学反応ステップを示すスキームである。

【発明を実施するための形態】

【0035】

発明の詳細な説明
Ｉ．定義
「活性剤」または「生物活性剤」という用語は、治療剤、予防剤、または診断剤を指し、予防剤、治療剤、または診断剤であってもよい所望の薬理学的および／または生理学的効果を誘導する化学または生物学的化合物を指すために互換的に使用される。これらは、核酸、核酸アナログ、２ｋＤａ未満の分子量、より典型的には１ｋＤａ未満を有する低分子、ペプチド模倣体、タンパク質、またはペプチド、炭水化物、または糖、脂質、または界面活性剤、またはそれらの組合せであってもよい。用語はまた、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、およびアナログを含むがこれらに限定されない、活性剤の薬学的に許容される、薬理学的に活性な誘導体も包含する。

【0036】

「治療剤」という用語は、疾患または障害の１つまたは複数の症状を処置するために投与することができる活性剤を指す。

【0037】

「診断剤」という用語は、病的プロセスの局在を明らかにする、正確に指摘する、および定義するために投与することができる活性剤を指す。診断剤は、標的細胞を標識することができ、それによってこれらの標識標的細胞のその後の検出または撮像を可能にする。
「予防剤」という用語は、疾患を防止するために、またはある特定の状態もしくは症状を防止するために投与することができる活性剤を指す。

【0038】

「プロドラッグ」という用語は、不活性型（または有意により活性が低い型）で対象に投与される薬理学的物質（薬物）を指す。投与されると、プロドラッグは、体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で酵素または化学反応によって、または両者の組合せによって、所望の薬理活性を有する化合物へと代謝される。プロドラッグは、上記の化合物に存在する適切な官能基を、例えばH. Bundgaar, Design of Prodrugs (1985)に記載される「プロ部分」に置換することによって調製することができる。プロドラッグのさらなる考察に関しては、例えば、Rautio,J. et al. Nature Reviews Drug Discovery. 7:255- 270 (2008)を参照されたい。

【0039】

「免疫的」、「免疫学的」、または「免疫」応答という用語は、レシピエント患者における免疫原に対する有益な液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介される）応答の発生である。そのような応答は、免疫原の投与によって誘導される能動的応答、または抗体もしくはプライミングされたＴ細胞の投与によって誘導される受動的応答であり得る。細胞性免疫応答は、クラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣ分子に会合するポリペプチドエピトープの提示によって誘発され、抗原特異的ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞および／またはＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。応答はまた、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、アストロサイト、ミクログリア細胞、好酸球、または自然免疫の他の成分の活性化を伴ってもよい。細胞性免疫応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって決定することができる。免疫原の保護効果または治療効果に対する液性および細胞性応答の相対的関与は、免疫した同系動物から抗体およびＴ細胞を個別に単離すること、および第２の対象において保護効果または治療効果を測定することによって識別することができる。

【0040】

「免疫調節剤」または「免疫療法剤」という用語は、レシピエントにおける自然免疫応答または適応免疫応答の１つまたは複数の要因を調節する、増強する、低減する、延長する、減少する、またはそれ以外の方法で変更するために投与することができる活性剤を指す。一般的に、免疫調節剤は、標的部位で１つまたは複数の免疫細胞または細胞の型を標的化することによって所望の免疫応答に関する免疫微小環境をモジュレートすることができ、このように任意のがんの型に対して必ずしも特異的ではない。例えば、免疫細胞上の１つの分子、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）の遮断は、抗腫瘍活性をもたらした。一部の実施形態では、免疫調節剤は、腫瘍部位での増強された抗腫瘍応答のために腫瘍関連マクロファージなどの抑制性免疫細胞を阻害または低減するために特異的に送達される。

【0041】

「免疫抑制細胞」という用語は、腫瘍の成長、血管新生、浸潤、転移、治療に対する耐性、またはそれらの組合せを促進する免疫細胞を指す。例示的な免疫抑制細胞としては、がん関連線維芽細胞、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、間葉間質細胞（ＭＳＣ）およびＴＩＥ２発現単球、ならびに腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）が挙げられる。

【0042】

「炎症促進性細胞」という用語は、炎症促進活性、炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦ－α、またはそれらの組合せの分泌を促進する免疫細胞を指す。例示的な炎症促進性細胞としては、炎症促進性Ｍ１マクロファージ、または古典的活性化マクロファージ（ＣＡＭ）が挙げられる。

【0043】

「薬学的に許容される」または「生物学的適合性」という用語は、妥当な利益／リスク比に釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を示すことなく、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するために適した組成物、ポリマー、および他の材料および／または投薬剤形を指す。「薬学的に許容される担体」という語句は、薬学的に許容される材料、組成物、または媒体、例えば液体または固体の増量剤、希釈剤、溶媒、または任意の対象組成物の体の１つの臓器または一部から体の別の臓器または一部への移動または輸送に関係するカプセル化材料を指す。各々の担体は、対象組成物の他の成分と適合性であり、患者に対して有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。「薬学的に許容される塩」という用語は、当技術分野で認識されており、化合物の比較的非毒性の無機および有機酸付加塩を含む。薬学的に許容される塩の例としては、無機酸、例えば塩酸および硫酸に由来する塩、ならびに有機酸、例えばエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ－トルエンスルホン酸に由来する塩が挙げられる。塩の形成のための適した無機塩基の例としては、アンモニア、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、および亜鉛の水酸化物、炭酸塩、および重炭酸塩が挙げられる。塩はまた、非毒性でそのような塩を形成するために十分に強い塩基を含む、適した有機塩基によっても形成され得る。説明目的のため、そのような有機塩基のクラスは、モノ、ジ、およびトリアルキルアミン、例えばメチルアミン、ジメチルアミン、およびトリエチルアミン；モノ、ジ、またはトリヒドロキシアルキルアミン、例えばモノ、ジ、およびトリエタノールアミン；アミノ酸、例えばアルギニンおよびリシン；グアニジン；Ｎ－メチルグルコサミン；Ｎ－メチルグルカミン；Ｌ－グルタミン；Ｎ－メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；ならびにＮ－ベンジルフェネチルアミンを含んでもよい。

【0044】

「治療有効量」という用語は、デンドリマーの中および／または上に組み込まれる場合、任意の医学的処置に応用可能な妥当な利益／リスク比で何らかの所望の効果を生じる治療剤の量を指す。有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定の標的化された構築物、対象の体格、または疾患もしくは状態の重症度などの要因に応じて異なり得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく、特定の化合物の有効量を経験的に決定してもよい。一部の実施形態では、「有効量」という用語は、肝疾患／障害を発症するリスクを低減もしくは減損させる、または肝疾患／障害の１つまたは複数の症状を低減もしくは減損させる、例えば肝臓における炎症を低減させる予防剤または治療剤の量を指す。追加の所望の結果はまた、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）および総コレステロール（ＴＣ）の血清レベル、脂肪蓄積または脂肪症、炎症、風船様腫大、線維症、長期の病的状態および死亡率を低減および／または阻害することも含む。がんまたは腫瘍の場合、薬物の有効量は、がん細胞の数を低減する；腫瘍サイズを低減する；がん細胞の末梢臓器への浸潤を阻害する；腫瘍転移を阻害する；腫瘍成長を阻害する；および／または障害に関連する症状の１つまたは複数を軽減する効果を有し得る。有効量は、１回または複数回の投与で投与することができる。

【0045】

「阻害する」または「低減する」という用語は、活性および量を低減または減少させることを意味する。これは、活性もしくは量の完全な阻害もしくは低減、または部分的阻害もしくは低減であり得る。阻害または低減は、対照または標準レベルと比較することができる。阻害は、５、１０、２５、５０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％、またはその間の整数であり得る。例えば、１つまたは複数の作用剤を含むデンドリマー組成物は、疾患を有する肝臓におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）および総コレステロール（ＴＣ）の血清レベル、脂肪蓄積または脂肪症、炎症、風船様腫大、線維症、長期の病的状態および死亡率を、デンドリマー組成物を投与されていない、または処置されていないまたは処置前の対象から約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、または９９％阻害または低減し得る。一部の実施形態では、阻害および低減は、ｍＲＮＡ、タンパク質、細胞、組織、および臓器レベルで比較される。例えば、腫瘍の増殖または腫瘍サイズ／体積の阻害および低減。

【0046】

「処置する」または「防止する」という用語は、疾患、障害、および／または状態に対する素因を有し得るが、まだそれらを有すると診断されていない動物において疾患、障害、または状態が起こるまたは進行するのを改善する、低減する、またはそれ以外の方法で停止させること；疾患、障害、または状態を阻害すること、例えばその進行を妨害すること；ならびに疾患、障害、または状態を軽減すること、例えば疾患、障害、および／または状態の退縮を引き起こすことを意味する。疾患または状態を処置することは、たとえ基礎となる病理生理学が影響を受けなくとも、特定の疾患もしくは状態の少なくとも１つの症状を改善すること、例えばたとえそのような作用剤が疼痛の原因を処置しない場合であっても鎮痛剤の投与によって対象の疼痛を処置することを含む。処置の望ましい効果は、疾患進行速度を減少させること、疾患状態を改善または和らげること、および寛解または予後の改善を含む。例えば、個体は、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）を含むトランスアミナーゼの上昇を低減および／または阻害すること、肝臓がんの場合にはがん様細胞の増殖を低減させること、疾患に罹患している対象のクオリティオブライフを増加させること、疾患を処置するために必要な他の投薬の用量を減少させること、疾患の進行を遅らせること、および／または個体の生存を延長させることを含むがこれらに限定されない、肝疾患／障害に関連する１つまたは複数の症状が緩和または除去される場合、「処置」が成功している。

【0047】

「Ｔ細胞機能を増強する」という語句は、Ｔ細胞が持続的または増幅された生物機能を有するように誘導する、引き起こす、もしくは刺激すること、または消耗したもしくは不活化Ｔ細胞を再生もしくは再活性化することを意味する。Ｔ細胞機能を増強する例としては：介入前のそのようなレベルと比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのグランザイムＢおよび／またはＩＦＮ－γの分泌の増加、増殖の増加、抗原応答性の増加（例えば、ウイルス、病原体、または腫瘍の除去）が挙げられる。一実施形態では、増強レベルは、少なくとも５０％、あるいは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、または２００％である。この増強を測定する形式は、当業者に公知である。

【0048】

「腫瘍免疫」という用語は、腫瘍が免疫による認識および除去を回避するプロセスを指す。このように、治療の考え方として、腫瘍免疫は、そのような回避が弱められ、腫瘍が免疫系によって認識され、攻撃される場合に「処置」される。腫瘍の認識の例としては、腫瘍の結合、腫瘍の縮小および腫瘍の除去が挙げられる。
「免疫原性」という用語は、特定の物質が免疫応答を誘発する能力を指す。腫瘍は免疫原性であり得るが、腫瘍の免疫原性を増強することは、免疫応答による腫瘍細胞の除去を助ける。

【0049】

「生分解性」という用語は、生理的条件下で、体が代謝、除去、または排泄することが可能なより小さい単位または化学種へと分解または腐食する材料を指す。材料の分解時間は、材料の組成および形態の関数である。

【0050】

「デンドリマー」という用語は、内部コア、内部コアに規則正しく結合した反復単位の内層（または「世代」）、および最も外側の世代に結合した末端基の外部表面を有する分子構造を含むがこれらに限定されない。

【0051】

「官能化する」という用語は、官能基または部分の結合をもたらす形式で化合物または分子を修飾することを意味する。例えば、分子を強い求核性または強い求電子性にする分子の導入によって、分子を官能化してもよい。

【0052】

「標的化部分」という用語は、特定の場所に局在するまたは特定の場所から離れて局在する部分を指す。部分は、例えばタンパク質、核酸、核酸アナログ、炭水化物、または低分子であり得る。実体は、例えば治療化合物、例えば低分子または診断的実体、例えば検出可能な標識であり得る。場所は、組織、特定の細胞の型または細胞活性化状態、または細胞下区画であってもよい。一部の実施形態では、標的化部分は、活性剤の局在化を方向付ける。

【0053】

「延長された滞留時間」という用語は、比較のための標準、例えば送達媒体、例えばデンドリマーにコンジュゲートされていない同等の作用剤と比較して、患者の体、またはその患者の臓器もしくは組織から作用剤が除去されるために必要な時間の増加を指す。ある特定の実施形態では、「延長された滞留時間」は、比較のための標準、例えば送達媒体、例えばデンドリマーにコンジュゲートされていない同等の作用剤と比較して、１０％、２０％、５０％、または７５％長い半減期で除去される作用剤を指す。ある特定の実施形態では、「延長された滞留時間」は、比較のための標準、例えば炎症および／または腫瘍領域の部位に関連する特定の細胞の型を特異的に標的化するデンドリマーを有しない同等の作用剤より、２、５、１０、２０、５０、１００、２００、または１００００倍長い半減期で除去される作用剤を指す。

【0054】

「組み込まれた」および「カプセル化された」という用語は、活性成分を組成物の中および／または上に組み込む、製剤化する、またはそれ以外の方法で含めることを指す。例えば、活性剤または他の材料を、そのようなデンドリマーの１つまたは複数の表面官能基を含むデンドリマーに組み込む（共有結合、イオン、または他の結合相互作用によって）、物理的に混合する、作用剤をデンドリマー構造内に被包化する、デンドリマー構造内にカプセル化することができる等である。

【0055】

粒子の「中性表面電荷」という用語は、０ｍＶである粒子の界面動電位（ゼータ電位）を指す。一部の実施形態では、「中性付近の表面電荷」という用語は、およそ０ｍＶ、例えば－１０ｍＶ～１０ｍＶ、－５ｍＶ～５ｍＶ、好ましくは－１ｍＶ～１ｍＶであるゼータ電位を指す。
ＩＩ．組成物

【0056】

炭水化物三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）にコンジュゲートされている、またはそれと複合体を形成しているデンドリマーが、肝細胞内に選択的に蓄積し、肝疾患を防止および／または処置することが確立されている。

【0057】

１つまたは複数の活性剤、特にそれを必要とする対象における肝傷害、肝疾患、または肝障害を防止する、処置する、または診断するための１つまたは複数の活性剤を送達するために適した、炭水化物と複合体を形成しているデンドリマーの組成物が開発されている。組成物は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）および／または肝細胞癌（ＨＣＣ）の１つまたは複数の症状を処置および／または改善するために特に適している。

【0058】

デンドリマーにカプセル化されている、会合している、および／またはコンジュゲートされている１つまたは複数の予防剤、治療剤、および／または診断剤を含むデンドリマー－炭水化物複合体の組成物が提供される。一般的に、１つまたは複数の活性剤は、約０．０１重量／重量％～約３０重量／重量％、約１重量／重量％～約２５重量／重量％、約５重量／重量％～約２０重量／重量％、および約１０重量／重量％～約１５重量／重量％の濃度でデンドリマー複合体にカプセル化されている、会合している、および／またはコンジュゲートされている。好ましくは、活性剤は、１つまたは複数の連結、例えばジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カーバメート、カーボネート、ヒドラジン、およびアミドを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサーを介して、デンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている。一部の実施形態では、スペーサーは、活性剤、例えばテルミサルタンである。例示的な活性剤としては、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ＦＸＲアゴニスト、ＰＰＡＲδアゴニスト、抗酸化剤、抗炎症薬、化学療法薬、抗線維化薬、および抗感染症剤が挙げられる。

【0059】

追加の作用剤の存在は、デンドリマーのゼータ電位または表面電荷に影響を及ぼし得る。一実施形態では、デンドリマー－炭水化物複合体のゼータ電位は、－１００ｍＶ～１００ｍＶの間、－５０ｍＶ～５０ｍＶの間、－２５ｍＶ～２５ｍＶの間、－２０ｍＶ～２０ｍＶの間、－１０ｍＶ～１０ｍＶの間、－１０ｍＶ～５ｍＶの間、－５ｍＶ～５ｍＶの間、または－２ｍＶ～２ｍＶの間である。好ましい実施形態では、表面電荷は、中性または中性付近である。上記の範囲は、－１００ｍＶ～１００ｍＶの間の全ての範囲を含む。

【0060】

Ａ．デンドリマー
デンドリマーは、高密度の表面末端基を含む、三次元の高度分岐、単分散の球状の多価高分子である（Tomalia, D. A., et al., Biochemical Society Transactions, 35, 61 (2007);and Sharma, A., et al., ACS Macro Letters, 3, 1079 (2014)）。その独自の構造特徴および物理的特徴により、デンドリマーは、標的化された薬物／遺伝子送達、撮像、および診断を含む様々な生物医学応用のナノ担体として有用である（Sharma,A., et al., RSC Advances, 4, 19242 (2014); Caminade, A.-M., et al., Journal ofMaterials Chemistry B, 2, 4055 (2014); Esfand, R., et al., Drug DiscoveryToday, 6, 427 (2001); and Kannan, R. M., et al., Journal of Internal Medicine,276, 579 (2014)）。

【0061】

最近の研究により、デンドリマーの表面基は、その生体分布に有意な影響を及ぼすことが示されている（Nance, E., et al., Biomaterials, 101, 96 (2016)）。いかなる標的化リガンドも有しないヒドロキシル末端第４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー（サイズ約４ｎｍ）は、ウサギ脳性麻痺モデル（ＣＰ）において全身投与後に、健康な対照と比較して機能障害のＢＢＢを有意により多く（＞２０倍）通過し、活性化ミクログリアおよびアストロサイトを選択的に標的化する（Lesniak,W. G., et al., Mol Pharm, 10 (2013)）。

【0062】

「デンドリマー」という用語は、内部コアと、この内部コアに規則正しく結合し、そこから伸長する反復単位の層（または「世代」）であって各層が１つまたは複数の分岐点を有する層と、最も外側の世代に結合した末端基の外部表面とを有する分子構造を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、デンドリマーは、規則性のデンドリマーまたは「ｓｔａｒｂｕｒｓｔ」分子構造を有する。

【0063】

一般的に、デンドリマーは、約１ｎｍ～約５０ｎｍの間、より典型的には約１ｎｍ～約２０ｎｍの間、約１ｎｍ～約１０ｎｍの間、または約１ｎｍ～約５ｎｍの間の直径を有する。一部の実施形態では、直径は、約１ｎｍ～約２ｎｍの間である。コンジュゲートは一般的に同じサイズ範囲であるが、大きいタンパク質、例えば抗体は、サイズを５～１５ｎｍ増加させ得る。一般的に、作用剤は、大きい世代のデンドリマーの場合、１：１～４：１の作用剤のデンドリマーに対する比でカプセル化される。好ましい実施形態では、デンドリマーは、肝細胞を標的化し、肝細胞中に長期間留まるために有効な直径を有する。

【0064】

一部の実施形態では、デンドリマーは、約５００ダルトン～約１００，０００ダルトンの間、好ましくは約５００ダルトン～約５０，０００ダルトンの間、最も好ましくは約１，０００ダルトン～約２０，０００ダルトンの間の分子量を有する。

【0065】

使用することができる適したデンドリマー足場構造は、ＰＡＭＡＭまたはＳＴＡＲＢＵＲＳＴ（商標）デンドリマーとしても公知であるポリ（アミドアミン）；ポリプロピルアミン（ＰＯＰＡＭ）、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリエステル、イプチセン、脂肪族ポリ（エーテル）、および／または芳香族ポリエーテルデンドリマーを含む。デンドリマーは、カルボキシル、アミン、および／またはヒドロキシル末端を有し得る。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ヒドロキシル末端を有する。デンドリマー複合体の各デンドリマーは、他のデンドリマーと類似のまたは異なる化学的性質であり得る（例えば、第１のデンドリマーはＰＡＭＡＭデンドリマーを含んでもよく、第２のデンドリマーはＰＯＰＡＭデンドリマーであってもよい）。

【0066】

「ＰＡＭＡＭデンドリマー」という用語は、アミドアミンビルディングブロックと共に異なるコアを含有してもよく、第１世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第２世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第３世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第５世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第６世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第７世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第８世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第９世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、または第１０世代ＰＡＭＡＭデンドリマーを含むがこれらに限定されない、任意の世代のカルボキシル、アミン、およびヒドロキシル末端を有し得るポリ（アミドアミン）デンドリマーを意味する。好ましい実施形態では、デンドリマーは、製剤に可溶性であり、第４、５、または６世代（「Ｇ」）のデンドリマー（すなわち、Ｇ４～Ｇ６デンドリマー）、および／またはＧ４～Ｇ１０デンドリマー、Ｇ６～Ｇ１０デンドリマー、またはＧ２～Ｇ１０デンドリマーである。デンドリマーは、その機能的表面基にヒドロキシル基が結合していてもよい。好ましい実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代のヒドロキシル末端ポリアミドアミンデンドリマーである。

【0067】

デンドリマーを作製する方法は当業者に公知であり、一般的に中心の開始コア（例えば、エチレンジアミンコア）の周囲に樹状のβ－アラニン単位の同心円のシェル（世代）を生じる２ステップの反復反応シーケンスを伴う。各々のその後の成長ステップは、より大きい分子直径を有するポリマーの新規「世代」を表し、反応性の表面部位の数を２倍にし、その前の世代の分子量をほぼ倍加させる。使用するために適したデンドリマーの足場構造は、多様な世代が市販されている。好ましくは、デンドリマー組成物は、第０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０世代のデンドリマー足場構造に基づく。そのような足場構造はそれぞれ、４、８、１６、３２、６４、１２８、２５６、５１２、１０２４、２０４８、および４０９６個の反応部位を有する。このように、これらの足場構造に基づくデンドリマー化合物は、直接またはリンカーを通して間接的に、組み合わせた標的化部分、例えば三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）および活性剤の対応する最大数を有し得る。

【0068】

一部の実施形態では、デンドリマーは、複数のヒドロキシル基を含む。一部の例示的な高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーとしては、市販のポリエステル樹状ポリマー、例えば超分岐２，２－ビス（ヒドロキシル－メチル）プロピオン酸ポリエステルポリマー（例えば、超分岐ビス－ＭＰＡポリエステル－６４－ヒドロキシル、第４世代）、樹状ポリグリセロールが挙げられる。

【0069】

一部の実施形態では、高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーは、オリゴエチレングリコール（ＯＥＧ）様デンドリマーである。例えば、第２世代ＯＥＧデンドリマー（Ｄ２－ＯＨ－６０）は、非常に効率的で、ロバストなアトムエコノミカル化学反応、例えばＣｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーおよび光触媒チオール－エンクリックケミストリーを使用して合成することができる。最少の反応ステップで非常に低い世代の高密度ポリオールデンドリマーは、例えばＷＯ２０１９０９４９５２号に記載されるように直交するハイパーモノマーおよびハイパーコア戦略を使用することによって達成することができる。一部の実施形態では、デンドリマー骨格は、ｉｎ ｖｉｖｏでのデンドリマーの崩壊を回避し、そのようなデンドリマーの単一の実体としての体からの排除を可能にするために（非生分解性）、構造全体に非切断性のポリエーテル結合を有する。

【0070】

一部の実施形態では、デンドリマーは、特定の組織領域および／または細胞の型、例えば肝細胞、肝臓の腫瘍／がんにおける腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、または肝臓の自己免疫疾患に関係する炎症促進性マクロファージを特異的に標的化する。

【0071】

好ましい実施形態では、デンドリマーは、デンドリマーの末端に複数のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有する。ヒドロキシル（－ＯＨ）基の好ましい表面密度は、少なくとも１つのＯＨ基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／ｎｍ^２での表面積）である。例えば、一部の実施形態では、ヒドロキシル基の表面密度は、２個より多く、３個より多く、４個より多く、５個より多く、６個より多く、７個より多く、８個より多く、９個より多く、１０個より多く；好ましくは少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、または５０個より多くの表面ヒドロキシル基／ｎｍ^２での表面積である。さらなる実施形態では、ヒドロキシル（－ＯＨ）基の表面密度は、約１～約５０個、好ましくは５～２０個のヒドロキシル表面基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／ｎｍ^２での表面積）の間であり、約５００Ｄａ～約１０ｋＤａの間の分子量を有する。一部の実施形態では、デンドリマー上の総表面基（コンジュゲートおよび非コンジュゲート）中の遊離の、すなわち非コンジュゲートヒドロキシル基のパーセンテージは、７０％より高い、７５％より高い、８０％より高い、８５％より高い、９０％より高い、９５％より高い、および／または１００％未満である。

【0072】

一部の実施形態では、デンドリマーは、ヒドロキシル基の画分が外部表面に露出していてもよく、他の画分がデンドリマーの内部コアにあってもよい。好ましい実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１個のＯＨ基／ｎｍ^３（ヒドロキシル基の数／ｎｍ^３での体積）のヒドロキシル（－ＯＨ）基の体積密度を有する。例えば、一部の実施形態では、ヒドロキシル基の体積密度は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、または１０個より多く、１５個より多く、２０個より多く、２５個より多く、３０個より多く、３５個より多く、４０個より多く、４５個より多く、および５０個より多くのヒドロキシル基／ｎｍ^３である。一部の実施形態では、ヒドロキシル基の体積密度は、約４～約５０個のヒドロキシル基／ｎｍ^３の間、好ましくは約５～約３０個の基／ｎｍ^３の間、より好ましくは約１０～約２０個のヒドロキシル基／ｎｍ^３の間である。

【0073】

Ｂ．三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）によって修飾されたデンドリマー
炭水化物三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）にコンジュゲートされている、またはそれと複合体を形成しているデンドリマーは、肝細胞内に選択的に蓄積することが確立されている。三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）をデンドリマー表面に付加することによって修飾されたデンドリマーの組成物が記載される。

【0074】

肝細胞上で豊富に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）は、炭水化物認識ドメイン（ＣＲＤ）を通してガラクトースおよびＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を選択的に認識することができ、受容体に堅固に結合する。炭水化物部分のＡＳＧＰＲ受容体との効率的な結合は、受容体媒介エンドサイトーシスを介して肝細胞内での選択的内部移行を可能にする。エンドソームにおける低いｐＨによって、糖リガンドとＡＳＧＰＲ受容体との間の４価のカルシウムキレート化が破壊され、これによって肝細胞にリガンドを放出する。リガンドが放出されると、受容体複合体は、リサイクルし、大量のリガンドが飽和効果なく肝細胞に内部移行するのを可能にする。ＧａｌＮＡｃのＡＳＧＰＲとの結合は、肝細胞の類洞表面で起こるが、肝細胞は細胞あたり約５００，０００個のＡＳＧＰＲ受容体を含有し、そのうち約５％～１０％は、いつでも細胞表面に存在する。以前の研究から、リガンドのＡＳＧＰＲとの結合は、糖の型（ＧａｌＮＡｃ＞Ｇａｌ）および糖の数４＝３＞２＞１に依存することが示されている。ＡＳＧＰＲの細胞外ドメインのＸ線結晶構造から、浅い炭水化物結合ポケットが明らかとなり、これは多価の必要性を説明している。したがって、多価結合が探索されており、３価および４価の炭水化物構築物のＡＳＧＰＲとの結合親和性は、糖鎖クラスター効果により、一価のリガンドと比較して１００～１０００倍強い。

【0075】

ＳｉＲＮＡにコンジュゲートされている二分岐および三分岐ＧａｌＮＡｃリガンドは、皮下投与後のＣ５７ＢＬ／６マウスの肝臓において有意に高レベルのＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡを実証し、ＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡの９４％が肝細胞に局在した。さらに、これらのｓｉＲＮＡコンジュゲートは、効率的な遺伝子沈黙化を媒介した。さらなる試験は、三分岐ＧａｌＮＡｃに連結されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）が、マウスモデルにおいて親ＡＳＯより最大１０倍強力であったことを報告した。

【0076】

炭水化物－タンパク質相互作用は、生物プロセス、例えば受容体媒介エンドサイトーシスにおいて重要な役割を果たし、細胞認識試験ならびに生物医学的材料の設計に適用されている。炭水化物末端デンドリマー（糖デンドリマー）は、同類の受容体に対して増強された結合親和性を与えられ、それらは標的化された薬物送達に関するアビディティおよび選択性で特異的細胞タイプと相互作用することが可能となる。薬物送達プラットフォームにおける炭水化物部分の導入はまた、生体適合性も提供し、ならびにデンドリマー複合体の水溶性も増加させる。

【0077】

三分岐ＧａｌＮＡｃは、肝細胞におけるＡＳＧＰＲに対して有効な多価結合を提供する。したがって、好ましい実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数の表面末端基（例えば、－ＯＨ）で１つまたは複数の三分岐ＧａｌＮＡｃ基によって修飾されている。

【0078】

デンドリマーの三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾は、各々の表面末端基で３つのＧａｌＮＡｃの組を生じる。一部の実施形態では、３つのβ－ＧａｌＮＡｃ分子は、１つまたは複数のリンカーを介してビルディングブロックにグラフトされ、デンドリマーの表面官能基とのコンジュゲーションにとって適したＡＢ_３ビルディングブロック（すなわち、三分岐ＧａｌＮＡｃデンドロン）を生じる。

【0079】

一実施形態では、３つのβ－ＧａｌＮＡｃ分子は、１つまたは複数のリンカーを介してプロパルギル化ペンタエリスリトールビルディングブロックにグラフトされ、以下に示すデンドリマーの表面官能基とのコンジュゲーションにとって適したＡＢ_３ビルディングブロックを生じる。

【化1】

【0080】

一部の実施形態では、１つまたは複数の表面基を通しての三分岐ＧａｌＮＡｃのコンジュゲーションは、コンジュゲーション前のデンドリマーの利用可能な総表面官能基、好ましくはヒドロキシル基の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％を介して起こる。他の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃのコンジュゲーションは、コンジュゲーション前のデンドリマーの利用可能な総表面官能基の５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満で起こる。好ましい実施形態では、デンドリマーは、肝細胞上でのＡＳＧＰＲとの結合および／または標的化のために三分岐β－ＧａｌＮＡｃの有効量にコンジュゲートされ、なおも肝疾患または障害を処置、防止、および／または撮像するために活性剤の有効量にコンジュゲートされている。

【0081】

Ｃ．デンドリマー複合体
三分岐ＧａｌＮＡｃによって修飾されたデンドリマー（デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ）は、デンドリマーと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子内に分散しているもしくはカプセル化されている１つまたは複数の治療剤または予防剤を含み得る。１つまたは複数の作用剤とデンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ複合体のデンドリマー成分とのコンジュゲーションは、デンドリマーと三分岐ＧａｌＮＡｃとのコンジュゲーションの前に、それと同時に、またはその後に起こり得る。作用剤をデンドリマーにコンジュゲートするための組成物および方法は当技術分野で公知であり、米国特許出願公開第２０１１／００３４４２２号、米国特許出願公開第２０１２／０００３１５５号、および米国特許出願公開第２０１３／０１３６６９７号に詳細に記載されている。

【0082】

一部の実施形態では、１つまたは複数の活性剤は、デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃのデンドリマー成分に共有結合されている。一部の実施形態では、活性剤は、必要に応じて１つまたは複数のスペーサーまたは連結部分を介して、デンドリマーとのコンジュゲーションのために官能化されている。官能化された活性剤および／または連結部分は、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃからの活性剤の望ましい放出速度を有するように設計される。官能化された活性剤および／または連結部分は、ｉｎ ｖｉｖｏで活性剤の持続的な放出を提供するために、加水分解、酵素、またはそれらの組合せによって切断されるように設計することができる。切断型が望ましい場合、連結部分の組成物と、活性剤とのその結合点の両方を、連結部分の切断によって活性剤またはその適したプロドラッグのいずれかが放出されるように選択する。一部の実施形態では、官能化された活性剤および／または連結部分は、ｉｎ ｖｉｖｏで最低速度または有意でない速度で切断されるように設計される。連結部分の組成物はまた、活性剤の所望の放出速度に関して選択することもできる。好ましい実施形態では、１つまたは複数の活性剤は、例えば１つまたは複数のアミドもしくはエーテル連結を介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃから非切断性であるかまたはほとんど切断されないように官能化されている。

【0083】

一部の実施形態では、作用剤とデンドリマーとの結合は、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カーバメート、カーボネート、ヒドラジン、またはアミド連結の１つまたは複数を介して起こる。好ましい実施形態では、結合は、活性剤の所望の放出速度論に応じて作用剤とデンドリマーとの間にエステル結合またはアミド結合を提供する適切なスペーサーを介して起こる。一部の例では、エステル結合は、活性剤の放出型のために導入される。他の例では、アミド結合は、活性剤の非放出型のために導入される。

【0084】

連結部分は一般的に、１つまたは複数の有機官能基を含む。適した有機官能基の例としては、二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、二級カーバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、三級カーバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、エーテル（－Ｏ－）、およびエステル（－ＣＯＯ－、－ＣＨ_２Ｏ_２Ｃ－、ＣＨＲＯ_２Ｃ－）が挙げられ、式中Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環基である。一般的に、連結部分内の１つまたは複数の有機官能基の同一性は、活性剤の所望の放出速度に関して選択することができる。加えて、１つまたは複数の有機官能基は、活性剤のデンドリマーとの共有結合を容易にするように選択することができる。好ましい実施形態では、結合は、作用剤とデンドリマーとの間のジスルフィド架橋を提供する適切なスペーサーを介して起こり得る。デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ複合体は、体において見出される還元条件下で、チオール交換反応によってｉｎ ｖｉｖｏで作用剤を迅速に放出することが可能である。

【0085】

ある特定の実施形態では、連結部分は、スペーサー基と組み合わせた上記の有機官能基の１つまたは複数を含む。スペーサー基は、オリゴマーおよびポリマー鎖を含む原子の任意の集合体で構成され得るが、スペーサー基における原子の総数は好ましくは、３～２００個の原子の間、より好ましくは３～１５０個の原子の間、より好ましくは３～１００個の原子の間、最も好ましくは３～５０個の原子の間である。適したスペーサー基の例としては、アルキル基、ヘテロアルキル基、アルキルアリール基、オリゴおよびポリエチレングリコール鎖、ならびにオリゴおよびポリ（アミノ酸）鎖が挙げられる。スペーサー基の変形形態は、ｉｎ ｖｉｖｏで作用剤の放出に対して追加の制御を提供する。連結部分がスペーサー基を含む実施形態では、１つまたは複数の有機官能基を一般的に使用して、スペーサー基を活性剤およびデンドリマーの両方に接続する。

【0086】

作用剤とデンドリマーとの共有結合にとって有用な反応および戦略は、当技術分野で公知である。例えば、March, "Advanced Organic Chemistry," 5th Edition, 2001,Wiley-Interscience Publication, New York) and Hermanson, "BioconjugateTechniques," 1996, Elsevier Academic Press, U.S.Aを参照されたい。所定の活性剤を共有結合するために適切な方法は、所望の連結部分、ならびに官能基の適合性に関連する作用剤およびデンドリマーの全体としての構造、保護基の戦略、および不安定な結合の存在に関して選択することができる。

【0087】

最適な薬物ローディングは、薬物の選択、デンドリマーの構造およびサイズ、ならびに処置される組織を含む多くの要因に必然的に依存する。一部の実施形態では、１つまたは複数の活性薬は、好ましくはデンドリマーの１つまたは複数の表面基を通して、約０．０１重量％～約４５重量％、好ましくは約０．１重量％～約３０重量％、約０．１重量％～約２０重量％、約０．１重量％～約１０重量％、約１重量％～約１０重量％、約１重量％～約５重量％、約３重量％～約２０重量％、および約３重量％～約１０重量％の濃度でデンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ複合体にカプセル化されている、会合している、および／またはコンジュゲートされている。しかし、任意の所定の薬物、デンドリマー、および標的部位に関する最適な薬物ローディングを、記載される方法などのルーチンの方法によって同定することができる。

【0088】

一部の実施形態では、デンドリマーと活性剤とのコンジュゲーションは、デンドリマーと三分岐ＧａｌＮＡｃとのコンジュゲーションの前に起こる。一部の実施形態では、活性剤および／またはリンカーとデンドリマーとのコンジュゲーションは、１つまたは複数の表面基および／または内部基を通して起こる。このように、一部の実施形態では、活性剤／リンカーのコンジュゲーションは、コンジュゲーション前のデンドリマーの利用可能な総表面官能基、好ましくはヒドロキシル基の約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％を介して起こる。他の実施形態では、活性剤／リンカーのコンジュゲーションは、コンジュゲーション前および／または三分岐β－ＧａｌＮＡｃによる修飾前のデンドリマーの利用可能な総表面官能基の５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満で起こる。好ましい実施形態では、デンドリマー複合体は、肝細胞を標的化するために三分岐β－ＧａｌＮＡｃによる修飾のための表面官能基の有効量を保持し、なおも疾患または障害を処置、防止、および／または撮像するために活性剤の有効量にコンジュゲートされている。
Ｄ．カップリング剤およびスペーサー

【0089】

デンドリマー複合体は、デンドリマーにコンジュゲートされているまたは結合している治療活性剤または化合物で形成され得る。必要に応じて、活性剤は、１つまたは複数のスペーサー／リンカーを介して、異なる連結、例えばジスルフィド、エステル、カーボネート、カーバメート、チオエステル、ヒドラジン、ヒドラジド、およびアミド連結を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。デンドリマーと活性剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマー活性複合体の放出型または非放出型を提供するように設計することができる。一部の実施形態では結合は、作用剤とデンドリマーとの間にエステル結合を提供する適切なスペーサーを介して起こる。一部の実施形態では結合は、作用剤とデンドリマーとの間にアミドまたはエーテル結合を提供する適切なスペーサーを介して起こる。好ましい実施形態では、デンドリマーと作用剤の間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏで所望のおよび有効な放出速度論を達成するために付加される。

【0090】

スペーサーは、デンドリマーおよび活性剤を架橋するために共に連結される単一の化学実体または２つもしくはそれより多くの化学実体のいずれかであり得る。スペーサーは、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシンイミジル、マレイミド、ビニルスルホン、およびカーボネート末端を有する任意の小さい化学実体、ペプチド、またはポリマーを含み得る。

【0091】

スペーサーは、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシンイミジル、マレイミド、ビニルスルホン、およびカーボネート基で終わる化合物のクラスから選択することができる。スペーサーは、チオピリジン末端化合物、例えばジチオジピリジン、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエートＬＣ－ＳＰＤＰまたはスルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰを含み得る。スペーサーはまた、本質的にスルフヒドリル基、例えばグルタチオン、ホモシステイン、システインおよびその誘導体、ａｒｇ－ｇｌｙ－ａｓｐ－ｃｙｓ（ＲＧＤＣ）、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－ｄ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ）（ｃ（ＲＧＤｆＣ））、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）、およびシクロ（Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｓｐ－ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）を有する線形または環状であるペプチドも含み得る。一部の実施形態では、スペーサーは、メルカプト酸誘導体、例えば３メルカプトプロピオン酸、メルカプト酢酸、４メルカプト酪酸、チオラン－２－オン、６メルカプトヘキサン酸、５メルカプト吉草酸および他のメルカプト誘導体、例えば２メルカプトエタノール、および２メルカプトエチルアミンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、チオサリチル酸およびその誘導体、（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－アルファ－２－ピリジルチオ）トルエン、（３－［２－ピリジルチオ］プロピオニルヒドラジドを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、マレイミド末端を含み、スペーサーは、ポリマーまたは小さい化学実体、例えばビス－マレイミドジエチレングリコールおよびビス－マレイミドトリエチレングリコール、ビス－マレイミドエタン、ビスマレイミドヘキサンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ビニルスルホン、例えば１，６－ヘキサン－ビス－ビニルスルホンを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、チオグリコシド、例えばチオグルコースを含む。他の実施形態では、スペーサーは、還元されたタンパク質、例えばウシ血清アルブミンおよびヒト血清アルブミン、ジスルフィド結合を形成することが可能な任意のチオール末端化合物を含む。特定の実施形態では、スペーサーは、マレイミド、スクシンイミジル、およびチオール末端を有するポリエチレングリコールを含む。

【0092】

作用剤および／または標的化部分は、デンドリマーに共有結合している、またはそれらが分子内に分散しているもしくはカプセル化されていることのいずれかであり得る。デンドリマーは、好ましくはヒドロキシル末端を有する第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、第８世代、第９世代、または第１０世代ＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ジスルフィド、エステル、エーテル、またはアミド結合で終わるスペーサーを介して作用剤に連結される。

【0093】

一部の実施形態では、デンドリマー／活性剤複合体の非放出型は、同じデンドリマー／活性剤複合体の放出型と比較して増強された治療有効性を提供する。したがって、一部の実施形態では、１つまたは複数の活性剤（複数可）は、非放出性の形式で、例えばエーテルまたはアミド結合によってデンドリマーに結合するスペーサーを介してデンドリマーにコンジュゲートされている。一部の実施形態では、１つまたは複数の活性剤（複数可）は、非放出性の形式で、例えばエーテルまたはアミド結合によってスペーサーに結合している。したがって、一部の実施形態では、１つまたは複数の活性剤（複数可）は、デンドリマーおよび活性剤（複数可）に非放出性の形式で結合するスペーサーを介してデンドリマーに結合している。例示的な実施形態では、１つまたは複数の活性剤（複数可）は、アミドおよび／またはエーテル結合を介してデンドリマーおよび活性剤（複数可）に結合するスペーサーを介してデンドリマーに結合している。例示的なスペーサーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
１．エーテル連結を介した活性剤とのデンドリマーのコンジュゲーション

【0094】

一部の実施形態では、エーテル連結を介して、必要に応じて１つまたは複数のリンカー／スペーサーによって活性剤にコンジュゲートされている、ヒドロキシル末端三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを含む組成物を記載する。

【0095】

好ましい実施形態では、デンドリマーの表面基とリンカーとの間、またはデンドリマーと活性剤との間（いかなる連結部分もなくコンジュゲートされている場合）の共有結合は、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下で安定であり、すなわち、対象に投与した場合ほとんど切断されず、および／または体からインタクトのまま排泄される。例えば、好ましい実施形態では、総デンドリマー複合体の１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、０．１％未満、または０．１％未満が、ｉｎ ｖｉｖｏでの投与後２４時間、または４８時間、または７２時間以内に活性剤を切断する。一実施形態では、これらの共有結合はエーテル結合である。さらに好ましい実施形態では、デンドリマーの表面基とリンカーとの間、またはデンドリマーと活性剤（いかなる連結部分もなくコンジュゲートされている場合）の間の共有結合は、加水分解により切断性の結合でも、酵素により切断性の結合、例えばエステル結合でもない。

【0096】

一部の実施形態では、１つまたは複数のエーテル結合を介した、１つまたは複数の連結部分および１つまたは複数の活性剤とのヒドロキシル末端デンドリマーコンジュゲートの１つまたは複数のヒドロキシル基を以下の式（Ｉ）に示す。

【化2】

式中、
Ｄは、第２世代～第１０世代ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；Ｌは、１つまたは複数の連結部分またはスペーサーであり；Ｘは、活性剤、または誘導体、アナログ、またはそのプロドラッグであり；ｎは、１～１００の整数であり；ならびにｍは、１６～４０９６の整数であり；
ならびにＹは、二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、二級カーバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、三級カーバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カーボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、式中Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環基である。好ましくは、Ｙは、ｉｎ ｖｉｖｏでほとんど切断されない結合または連結である。

【0097】

好ましい実施形態では、Ｙは、二級アミド（－ＣＯＮＨ－）である。

【0098】

一実施形態では、Ｄは、第４世代または第６世代ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーであり；Ｌは、１つまたは複数の連結またはスペーサー部分であり；Ｘは、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト、デス受容体５アゴニスト、ナトリウム－グルコース共輸送体２型阻害剤、リゾホスファチジン酸１受容体アンタゴニスト、エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲδアゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニスト、抗線維化剤、抗炎症剤、および／または抗酸化剤または誘導体、アナログ、もしくはそのプロドラッグであり；ｎは、約５～１５であり；ｍは、約４９～５９の整数であり；ならびにｎ＋ｍ＝６４である。

【0099】

一実施形態では、Ｙは、二級アミド（－ＣＯＮＨ－）である。
Ｅ．治療剤、予防剤、および診断剤

【0100】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の治療剤、予防剤、および診断剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。送達されるデンドリマー複合体に含まれる作用剤は、タンパク質またはペプチド、糖または炭水化物、核酸またはオリゴヌクレオチド、脂質、低分子（例えば、分子量２５００ダルトン未満、好ましくは２０００ダルトン未満、より好ましくは１５００ダルトン未満、より好ましくは３００～７００ダルトン未満）、またはそれらの組合せであり得る。核酸は、タンパク質をコードするオリゴヌクレオチド、例えばＤＮＡ発現カセットまたはｍＲＮＡであり得る。代表的なオリゴヌクレオチドとしては、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＤＮＡ、およびＲＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、活性剤は、治療抗体である。

【0101】

デンドリマーは、複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤を同じデンドリマーによって送達することができるという利点を有する。一部の実施形態では、活性剤の１つまたは複数の型を、デンドリマーにカプセル化する、それと複合体を形成する、またはそれにコンジュゲートすることができる。特定の実施形態では、デンドリマーは、２つまたはそれより多くの異なるクラスの作用剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされており、標的部位で異なるまたは独立した放出速度論による同時の送達を提供する。例えば、１つのデンドリマーを、１つまたは複数のＰＰＡＲδアゴニストおよび１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤に共有結合により連結することができる。別の実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１つの検出可能な部分および少なくとも１つのクラスの作用剤に共有結合により連結されている。さらなる実施形態では、各々が異なるクラスの作用剤を有するデンドリマー複合体を、組合せ処置のために同時に投与する。一実施形態では、デンドリマー組成物は、デンドリマーと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている、複数の作用剤、例えば化学療法薬、免疫療法剤、抗線維化剤、腫脹を減少させるステロイド、抗生物質、抗血管新生剤、および／または診断剤を有する。

【0102】

三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーの選択的標的化は、デンドリマーにコンジュゲートされていない同じ活性剤と比較して、または三分岐β－ＧａｌＮＡｃによって修飾されていないデンドリマーにコンジュゲートされている同じ活性剤と比較して、同じ治療効果を達成するために、より弱い活性剤を投与することを可能にし、このように、活性剤に関連する用量関連細胞傷害性および／または他の副作用を低減させる。デンドリマーはまた、送達される１つまたは複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤の溶解度を増加させることもできる。例えば、テルミサルタンは、非常に疎水性の薬物であるが、デンドリマーにコンジュゲートされると、高度に水溶性となり、水溶性はおよそ６０ｍｇ／ｍｌである。

【0103】

活性剤はまた、以下に記載される化合物のいずれかの薬学的に許容されるプロドラッグであってもよい。プロドラッグは、ｉｎ ｖｉｖｏで代謝されると、所望の薬理活性を有する化合物へと変換される化合物である。プロドラッグは、例えばH. Bundgaar, Design of Prodrugs (1985)に記載されるように、上記の化合物に存在する適切な官能基を「プロ部分」と置換することによって調製することができる。プロドラッグの例としては、上記の化合物のエステル、エーテル、またはアミド誘導体、上記の化合物のポリエチレングリコール誘導体、Ｎ－アシルアミン誘導体、ジヒドロピリジンピリジン誘導体、ポリペプチドにコンジュゲートされているアミノ含有誘導体、２－ヒドロキシベンズアミド誘導体、カーバメート誘導体、活性アミンへと生物学的に還元されるＮ－オキシド誘導体、およびＮ－マンニッヒ塩基誘導体が挙げられる。プロドラッグのさらなる考察に関しては、例えばRautio,J. et al. Nature Reviews Drug Discovery. 7:255-270 (2008)を参照されたい。

【0104】

活性剤は、１つまたは複数の肝疾患または障害を処置および防止するために有効性を有することが示されている治療剤を含む。例示的な治療剤としては、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ナトリウム－グルコース共輸送体２型（ＳＧＬＴ２）阻害剤、アポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ－１）阻害剤、ピリジノン誘導体、ＦＧＦ－２１アナログ、ＦＧＦ－１９アナログ、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）１受容体アンタゴニスト、エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲα／δアゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２阻害剤、デス受容体５（ＤＲ５）の活性化剤、抗線維化剤、抗炎症剤、および／または抗酸化剤が挙げられる。一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃは、１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤、ＦＸＲアゴニスト、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＡＳＫ－１阻害剤、ピリジノン誘導体、ＦＧＦ－２１アナログ、ＦＧＦ－１９アナログ、ＬＰＡ１受容体アンタゴニスト、エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲα／δアゴニスト、ＡＴ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニスト、ＤＲ５の活性化剤、抗線維化剤、抗炎症剤、抗酸化剤またはそれらの組合せと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。

【0105】

ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体デルタ（ＰＰＡＲδ）は、核受容体ファミリーのメンバーであり、脂肪、骨格筋、および肝臓を含む様々な組織において多面的作用を有する重要な代謝調節剤として現れつつある。ＰＰＡＲδアゴニストは、肝細胞のＲＯＳ生成を低減させることによって肝細胞を細胞死から保護し、より少ない肝線維症をもたらす。例示的なＰＰＡＲδアゴニストは、以前に記載されている。一部の実施形態では、ＰＰＡＲδアゴニストは、Rudolph J et al., J. Med. Chem. 2007, 50, 5, 984- 1000 (2007)に記載されているように４－チアゾリル－フェノキシテール基を有するインダニル酢酸誘導体である。例示的なＰＰＡＲδアゴニストは、例えばHamJ et al., Eur J Med Chem. 53:190-202 (2012)によって以前に記載されている。このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＰＰＡＲδアゴニストと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子内に分散しているもしくはカプセル化されている。一実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＰＰＡＲδアゴニスト、例えばＧＷ０７４２、ＧＷ５０１５１６、エラフィブラノル、またはその誘導体、もしくはアナログもしくはプロドラッグと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0106】

ナトリウム－グルコース共輸送体２型（ＳＧＬＴ２）阻害剤は、体重減少を促進し、血清尿酸レベルを低下させながら、血糖コントロールを改善する血糖低下剤である。ＳＧＬＴ２阻害剤が脂肪肝に及ぼす有益な効果は、Scheen AJ. Diabetes Metab. 2019;45(3):213- 223; Omori et al., Metab.Clin. Exp. 2019 Jul 11によって報告されている。例示的なＳＧＬＴ２阻害剤としては、フロリジン、Ｔ－１０９５、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、エンパグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、およびレモグリフロジンエタボネートが挙げられる。このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＳＧＬＴ２阻害剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0107】

リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）は、オートタキシン（ＡＴＸ）によるリゾホスファチジルコリンの加水分解を介して主に活性化血小板によって産生される脂質メディエーターである。ＬＰＡは、増殖、アポトーシス、遊走、およびがん細胞浸潤を含むいくつかの機能に関係する生物活性脂質である。ＬＰＡおよびＬＰＡ１受容体（ＬＰＡ１Ｒ）は、肺線維症、肝線維症、および全身性強皮症を含む多くの炎症状態で増加している。ＬＰＡは、実質細胞の受容体に対して様々な生理的効果を発揮し、ＬＰＡ１Ｒアンタゴニストは、肝線維症、肺線維症、および強皮症モデルにおいて抗線維化効果を示した。例示的なＬＰＡ１受容体アンタゴニストとしては、ＢＭＳ－９８６２０２、ＢＭＳ－９８６０２０、ＶＰＣ１２２４９、ＡＭ９６６、ＡＭ０９５、Ｋｉ１６４２５、およびＫｉ１６１９８が挙げられる。このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＬＰＡ１受容体アンタゴニスト、例えばＢＭＳ－９８６２０２、ＢＭＳ－９８６０２０、ＶＰＣ１２２４９、ＡＭ９６６、ＡＭ０９５、Ｋｉ１６４２５、Ｋｉ１６１９８、またはその誘導体もしくはアナログもしくはプロドラッグと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0108】

エンドセリン－Ａ受容体アンタゴニストであるアンブリセンタンの抗線維化効果は、マウス非アルコール性脂肪性肝炎モデルにおいて示されている（World J Hepatol. 2016 Aug 8; 8(22): 933-941）。例示的なエンドセリン受容体アンタゴニストとしては、シタキセンタン、アンブリセンタン、マシテンタン、およびジボテンタンが挙げられる。このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のエンドセリン受容体アンタゴニスト、例えばシタキセンタン、アンブリセンタン、マシテンタン、およびジボテンタン、またはその誘導体もしくはアナログもしくはプロドラッグと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0109】

酸化的ストレスは、ＮＡＦＬＤの発病に関係していることから、反応性酸素種（ＲＯＳ）と反応することが公知である抗酸化剤、例えばビタミンＥの役割は、広範囲の酸化的ストレスの状況でフリーラジカル反応の鎖成長を遮断する。一実施形態では、活性剤は、ビタミンＥまたはその誘導体もしくはアナログもしくはプロドラッグである。

【0110】

典型的に、１つまたは複数の活性剤は、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによってデンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために官能化されている。好ましい実施形態では、１つまたは複数の活性剤は、例えばエーテルまたはアミドを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって、ｉｎ ｖｉｖｏでデンドリマーから非切断性であるかまたはほとんど切断されないように官能化されている。

【0111】

好ましい実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを介して送達される１つまたは複数の活性剤は、標的細胞、組織、領域で治療的に有効であるために有効な量で、哺乳動物対象に投与後デンドリマー複合体から少なくとも１日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、好ましくは少なくとも１週間、２週間、または３週間、より好ましくは少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、または６ヶ月間放出される。

【0112】

１．アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤（ＡＲＢ）
一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤（ＡＲＢ）と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。肝星細胞におけるレニンアンジオテンシン経路は、反応性酸素種を誘導し、肝線維症を加速する。持続的な肝傷害に応答して、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）は、肝線維症の発病に関係する血管収縮アゴニストであるアンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）の産生によって、炎症、組織修復、および線維素形成を局所的に加速する。ＲＡＳは、レニンがアンジオテンシノーゲンをアンジオテンシンＩ（ＡｎｇＩ）に変換し、これがアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によってアンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）に変換される単一のカスケードとして記載される。ＡｎｇＩＩは、２つのＧタンパク質カップリング受容体、すなわちＡｎｇＩＩ受容体１型（ＡＴ１）およびＡｎｇＩＩ受容体２型（ＡＴ２）を通して生物学的応答を媒介する。しかし、ＡｎｇＩＩの線維素形成作用は、主にアンジオテンシン受容体ＡＴ１によって媒介される。

【0113】

ＮＡＦＬＤに関して現れつつある処置アプローチの中には、降圧剤であるテルミサルタンがあり、これはＡＣＥ／ＡｎｇＩＩ／ＡＴ１軸を遮断することによって、およびＡＣＥ２／Ａｎｇ（１－７）／Ｍａｓ軸活性化を増加させることによって、特にレニン－アンジオテンシン系に及ぼすその作用を通して肝臓、脂質、およびグルコース代謝に対して正の効果を有する。

【0114】

このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の肝疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、またはそれらの組合せを処置する、緩和する、または予防するために、１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0115】

一部の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化されている。好ましい実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えばエーテルまたはアミドを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによってデンドリマーから非切断性であるかまたはほとんど切断されないように官能化されている。好ましい実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。

【0116】

一実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、テルミサルタンまたはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。一部の実施形態では、テルミサルタンは、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって官能化されている。デンドリマー－テルミサルタンエステルコンジュゲートおよびデンドリマー－テルミサルタンアミドコンジュゲートとしての、テルミサルタンと三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーとの例示的なコンジュゲーションをそれぞれ、図３および図４に示す。

【0117】

２．ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト
一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）の１つまたは複数のアゴニストと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）は、胆汁酸合成および細胞膜輸送に関係する遺伝子の転写調節を通して胆汁酸の恒常性の主な調節因子である。胆管症による胆汁酸の流出障害は、慢性の胆汁うっ滞をもたらし、肝臓内および全身の胆汁酸レベルの異常な上昇をもたらす。オベチコール酸（ＯＣＡ）は、内因性のリガンドであるケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）より１００倍強力である強力かつ選択的なＦＸＲアゴニストである。

【0118】

一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の肝疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、またはそれらの組合せを処置する、緩和する、または予防するために、１つまたは複数のＦＸＲアゴニスト、例えばオベチコール酸およびＧＷ４０６４と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0119】

一部の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化されている。好ましい実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えばエーテルまたはアミドを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによってデンドリマーから非切断性であるかまたはほとんど切断されないように官能化されている。

【0120】

一実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、オベチコール酸またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。一部の実施形態では、オベチコール酸は、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって官能化されている。デンドリマー－オベチコール酸エステルコンジュゲートとしての、オベチコール酸と三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーとの例示的なコンジュゲーションを、図８に示す。

【0121】

３．デス受容体５（ＤＲ５）アゴニスト
一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、デス受容体５（ＤＲ５）の１つまたは複数のアゴニストと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。デス受容体５（ＤＲ５）はまた、ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）および腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ）としても公知であり、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）に結合するＴＮＦ受容体スーパーファミリーの細胞表面受容体である。

【0122】

一部の実施形態では、組成物は、１つまたは複数の肝疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発制肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、またはそれらの組合せを処置する、緩和する、または予防するために１つまたは複数のＤＲ５アゴニストを含む。ＤＲ５アゴニストは、ＤＲ５を発現する細胞に特異的に結合し、アポトーシスカスケードを誘発し、少なくとも１つのＤＲ５アゴニスト感受性細胞株（ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５、またはヒト肺癌細胞株Ｈ２１２２を含むがこれらに限定されない）において測定した場合に、細胞死（すなわち、アポトーシス）の統計学的に有意な増加をもたらす。ＤＲ５アゴニストは、抗体、ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、アビマー、Ｆｃ－ペプチド融合タンパク質（例えば、ペプチボディ）、または低分子ＤＲ５アゴニストであり得る。一部の実施形態では、ＤＲ５アゴニストは、アビマー（例えば、Nature Biotechnology 23:1556-1561 (2005)）、またはヒトＴＲＡＩＬリガンド（例えば、米国特許第６，２８４，２３６号；および第６，９９８，１１６号）ＤＲ５アゴニスト（例えば、米国特許出願公開第２０１２／００７０４３２号および第２００６／０２７５８３８号）である。一部の実施形態では、組成物は、組み換え可溶性ＴＲＡＩＬを含む。

【0123】

一部の実施形態では、組成物は、１つまたは複数のＤＲ５アゴニスト性抗体を含む。例示的なＤＲ５アゴニスト性抗体は、Lee H et al., Biomacromolecules 2016 17 (9), 3085-3093; Yada A etal., Ann. Oncol. 2008, 19, 1060-1067; Ichikawa, K. et al., Nat. Med. 2001, 7,954-960; Camidge, D. R et al., Clin. Cancer Res. 2010, 16, 1256-1263; Graves,J. D et al., Cancer Cell 2014, 26, 177-189によって記載されている。

【0124】

一部の実施形態では、組成物は、１つまたは複数のＤＲ５オリゴマーペプチドおよび抗体アゴニスト、例えばその「抗ｈＤＲ５ペプチド」および「抗ＤＲ５抗体」が本明細書に組み込まれる、Li B et al., J Mol Biol 2006 Aug 18;361(3):522-36に記載されるものを含む。

【0125】

一部の実施形態では、組成物は、１つまたは複数のジスルフィド結合破壊剤、例えばWangM et al., Cell Death Discovery (2019) 5:153; Ferreira, R. B. et al. Oncotarget8, 28971-28989 (2017); Law, M. E. et al. Breast Cancer Res. 18, 80 (2016);Ferreira, R. B. et al. Oncotarget 6, 10445-10459 (2015)に記載されるものを含む。一実施形態では、組成物は、以下に示すｔｃｙＤＴＤＯを含む。
構造Ｉ：ｔｃｙＤＴＤＯの化学構造

【化3】

【0126】

ＤＲ５を直接標的化してアポトーシスを開始する一部の低分子は、以前に記載されている（WangG et al., Nat Chem Biol. 2013 Feb;9(2):84-9）。このように、一部の実施形態では、組成物は、ＤＲ５を直接標的化する１つまたは複数の低分子を含む。ＤＲ５を直接標的化する一部の例示的な低分子を以下に示す。
構造ＩＩ：ＤＲ５を直接標的化する低分子の化学構造

【化4】

４．抗炎症剤

【0127】

一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の肝疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、またはそれらの組合せを処置する、緩和する、または予防するために、１つまたは複数の抗炎症剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。抗炎症剤は炎症を低減し、ステロイド薬および非ステロイド薬を含む。

【0128】

例示的な抗炎症剤としては、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノロンアセトニド、デキサメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン酢酸エステル、コルチゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、フルシノニド（Flucinonide）、アルクロメタゾン、ジフルプレドナート、トリアムシノロン二酢酸エステル、ベタメタゾン、ベタメタゾン吉草酸エステル、ベクロメタゾン、ならびにその塩およびプロドラッグが挙げられる。グルココルチコイドステロイド性抗炎症剤としては、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびコルチコステロイド、例えばフルオシノロンアセトニドおよびメチルプレドニゾロンが挙げられる。

【0129】

非ステロイド薬の例は、ＮＳＡＩＤＳおよびＣＯＸ－２阻害剤に分類することができる。これらとしては、イブフェナク、アセチルサリチル酸、ベノキサプロフェン、ナプロキセン、アルミノプロキセン（alminoproxen）、ブクロキシ酸、イブプロフェン、セレコキシブ、カルプロフェン、エトドラク、フルフェナム酸、フルビプロフェン、インドメタシン、イソキセパク、ケトプロフェン、メフェナム酸、オキサプロゼン（oxaprozen）、オキシピナク（oxpinac）、パレコキシブ、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、スプロフェン、チアプロフェン酸、トルメチン、トラマドール、バルデコキシブ塩、およびそのプロドラッグが挙げられる。

【0130】

好ましい実施形態では、活性剤は、トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾン、デキサメタゾン、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩である。トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾン、およびデキサメタゾンの例示的なアナログを以下に示す（構造ＩＩＩ）。
構造ＩＩＩ ａ～ｆ：トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾン、デキサメタゾンのアナログの化学構造

【化5】

【0131】

一実施形態では、抗炎症剤は、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインである。好ましい実施形態では、Ｎ－アセチル－Ｌ－システインは、投与後にｉｎ ｖｉｖｏで遊離のＮ－アセチル－システインがほとんど放出されないように非切断性の連結を介してヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーにコンジュゲートされている。デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体の例示的な非放出（または非切断）型の合成経路を、図１６に示す。デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体の非放出型は、デンドリマー／Ｎ－アセチル－システイン複合体の放出型または切断型と比較して増強された治療有効性を提供する。

【0132】

例示的な免疫調節薬としては、シクロスポリン、タクロリムス、およびラパマイシンが挙げられる。一部の実施形態では、抗炎症剤は、１つまたは複数の免疫細胞の型、例えばＴ細胞の作用を遮断する、または免疫系のタンパク質を遮断する生物薬、例えば腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－アルファ）、インターロイキン１７－Ａ、インターロイキン－１２、およびインターロイキン－２３である。

【0133】

一部の実施形態では、抗炎症薬は、合成または天然の抗炎症性タンパク質である。免疫成分を選択するために特異的な抗体を、免疫抑制治療に加えることができる。一部の実施形態では、抗炎症薬は、抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗胸腺細胞グロブリンまたは抗リンパ球グロブリン）、抗ＩＬ－２Ｒα受容体抗体（例えば、バシリキシマブまたはダクリズマブ）、または抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）である。

【0134】

多くの炎症性疾患が、リポ多糖（ＬＰＳ）のための受容体、ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体４（ＴＬＲ４）を介した病的に上昇したシグナル伝達に関連し得る。このように、一部の実施形態では、活性剤は、１つまたは複数のＴＬＲ４阻害剤である。

【0135】

５．抗線維化剤
一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の肝疾患または障害、例えば非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、薬物誘発性肝不全、肝炎、肝線維症、肝硬変、またはそれらの組合せを処置する、緩和する、または予防するために１つまたは複数の抗線維化治療剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。一部の実施形態では、肝線維症を処置するために有効であることが示されている１つまたは複数の既存の抗線維化治療剤は、肝細胞への送達および肝細胞内部での蓄積を増強するために三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。例えば、例示的な抗線維化治療剤としては、Cohen-Naftaly M et al., Therap Adv Gastroenterol. 4(6): 391-417(2011) and Chang Y et al., J Clin Transl Hepatol. 28; 8(2): 222-229 (2020)において考察されている治療剤が挙げられる。一部の実施形態では、抗線維化治療剤は、抗酸化剤、抗ＴＮＦα、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＩＦＮαアゴニスト、アンジオテンシン受容体遮断剤、エンドセリン受容体アンタゴニスト、抗凝固剤、ＦＸＲアゴニスト、結合組織増殖因子に対する抗体、インスリン、ｐｅｇ化インターフェロン、またはそれらの組合せである。一部の実施形態では、抗線維化治療剤は、ペントキシフィリン、トコフェロール、ｐｅｇインターフェロン２ａ、エタネルセプト、組み換えＩＬ－１０、ピオグリタゾン、ビタミンＥ、Ｌｏｖａｚａ（魚油）、ポリエニルホスファチジルコリン、オベチコール酸、インフリキシマブ、ｐｅｇ化ＩＦＮα－２ｂ、リバビリン、Ｐｅｇ－ＩＦＮα－２ｂ、グリチルリチン、カンデサルタン、ロサルタン、イルベサルタン、アンブリセンタン、ＦＧ－３０１９（結合組織増殖因子に対するヒトモノクローナル抗体）、ワーファリン、インスリン、コルヒチン、またはそれらの組合せである。
６．肝臓がんを処置するための免疫調節剤

【0136】

一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の免疫調節剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。「免疫調節剤」および「免疫療法剤」という用語は、レシピエントの免疫系に特定の作用を誘発する活性剤を意味する。免疫調節は、対照と比較して、自然免疫応答または抗原に対する適応免疫応答の１つまたは複数の生理的プロセスの抑制、低減、増強、延長、または刺激を含み得る。典型的には、免疫調節剤は、１つまたは複数の免疫細胞または細胞の型を標的部位に標的化することによって、所望の免疫応答（例えば、抗腫瘍活性を増加させる、または自己免疫疾患においてそれを必要とする部位での抗炎症活性を増加させる）に関して免疫微小環境をモジュレートすることができるが、このように任意のがんの型に対して必ずしも特異的ではない。一部の実施形態では、免疫調節剤は、腫瘍部位での増強された抗腫瘍応答のために、腫瘍関連マクロファージなどの抑制性免疫細胞を殺滅、その活性または量を阻害、または低減するように特異的に送達される。

【0137】

三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーと共に使用される一部の例示的な免疫調節剤は、インターフェロン刺激遺伝子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）阻害剤、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、およびＳＨＰ２（Ｓｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙ－２ドメイン含有タンパク質チロシンホスファターゼ－２）阻害剤が挙げられる。好ましい実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＳＨＰ２阻害剤の１つまたは複数、またはそれらの組合せと複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0138】

これらのデンドリマー複合体は、肝臓の腫瘍領域における１つまたは複数の抑制性免疫細胞を標的化するためならびにがん細胞の数を低減するため；腫瘍サイズを低減するため：がん細胞の末梢臓器への浸潤を阻害するため；腫瘍の転移を阻害するため；腫瘍の成長を阻害するため；および／または腫瘍／がんに関連する症状の１つもしくは複数を軽減するために特に適している。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫調節剤に会合している、またはコンジュゲートされているデンドリマーは、例えば自然免疫遺伝子の発現、活性化エフェクターＴ細胞の浸潤および増大、抗原の伝播、および永続的な免疫応答を増加させるために、抗腫瘍ワクチンおよび／またはアジュバントとしての養子細胞治療（ＡＣＴ）と組み合わせて使用される。

【0139】

一部の実施形態では、免疫調節剤は、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＶＥＧＦＲ、Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ、ＡＢＬ、ＳＲＣ、ｍＴＯＲ、およびそれらの組合せの１つまたは複数を標的化する任意の阻害剤である。一部の実施形態では、免疫調節剤は、１つまたは複数の阻害剤およびそのアナログ、例えばクリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、イマチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、イブルチニブ、パルボシクリブ、リボシクリブ、カボザンチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、オシメルチニブ、ルキソリチニブ、トファシチニブ、トラメチニブ、アキシチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ボスチニブ、ダサチニブ、ダコミチニブ、ポナチニブ、およびそれらの組合せである。一部の実施形態では、免疫調節剤は、チロシンキナーゼ阻害剤、例えばＨＥＲ２阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤である。例示的なＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤としては、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、およびオシメルチニブが挙げられる。

【0140】

追加の免疫調節剤は、１つまたは複数の免疫細胞に対して毒性である１つまたは複数の細胞傷害剤を含むことができ、このように抑制性免疫細胞の１つまたは複数の型を殺滅または阻害することができる。デンドリマーにコンジュゲートされているように免疫細胞を標的化するように選択的に送達されると、これらの作用剤は、抑制性免疫細胞を選択的に殺滅し、このように腫瘍内および腫瘍周囲の免疫学的微小環境を変更することができる。細胞傷害性免疫調節剤は、アウリスタチンＥおよびメルタンシンを含む。
ＳＴＩＮＧアゴニスト

【0141】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のインターフェロン刺激遺伝子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。インターフェロン刺激遺伝子（ＳＴＩＮＧ）は、外因性および内因性の両方のサイトゾル環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）を感知し、ＴＢＫ１／ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）、ＮＦ－κＢ（核内因子κＢ）、およびＳＴＡＴ６（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ６）シグナル伝達経路を活性化して、強固なＩ型インターフェロンおよび炎症促進性サイトカイン応答を誘導するサイトゾル受容体である。ＳＴＩＮＧは、マウスがんモデルにおいて抗腫瘍ＣＤ８ Ｔ応答の誘導にとって必要である。腫瘍の微小環境では、ｅｘ ｖｉｖｏでＳＴＩＮＧアゴニストによって刺激されたＴ細胞、内皮細胞、および線維芽細胞は、Ｉ型ＩＦＮを産生する（Corrales, et al., Cell Rep (2015) 11(7):1018-30）。これに対し、ほとんどの試験は、腫瘍細胞がＳＴＩＮＧ経路活性化を阻害し、おそらく発がんの間の免疫回避をもたらすことができることを示した（He,et al., Cancer Lett (2017) 402:203-12; Xia, et al., Cancer Res (2016)76(22):6747-59）。このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＳＴＩＮＧアゴニストまたはそのアナログに会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＳＴＩＮＧアゴニストとしては、環状ジヌクレオチド、例えば２’３’環状グアノシン一リン酸－アデノシン一リン酸（ｃＧＡＭＰ）およびＤＭＸＡＡ（バディメザンまたはＡＳＡ４０４としても公知である）が挙げられる。一実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、ＤＭＸＡＡまたはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグに会合している、またはコンジュゲートされている。好ましい実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃおよびＤＭＸＡＡの複合体またはコンジュゲートは、標的部位でＴＮＦ－α、ＩＰ－１０、ＩＬ－６、ＩＦＮ－β、およびＲＡＮＴＥＳの１つまたは複数を誘導するために有効である。

【0142】

一部の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化されている。例えば、ＤＭＸＡＡは、ＤＭＸＡＡアナログ、例えばＤＭＸＡＡエステル、ＤＭＸＡＡエーテル、またはＤＭＸＡＡアミドへと修飾することができる。好ましい実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストまたはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。ＳＴＩＮＧアゴニスト、例えばＤＭＸＡＡとデンドリマー、例えば第４世代または第６世代ＰＡＭＡＭデンドリマーとの例示的なコンジュゲーションを図１に示す。

【0143】

好ましい例では、１つまたは複数のＳＴＩＮＧアゴニストを含むデンドリマー複合体は、腫瘍浸潤性ＡＰＣ（例えば、ＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂ－またはＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞）によるＩＦＮ－β産生を誘導／増強するため、ＴＮＦ－α、ＩＰ－１０、ＩＬ－６、ＩＦＮ－β、およびＲＡＮＴＥＳの１つまたは複数を誘導／増強するため、腫瘍の成長を阻害するため、腫瘍サイズを低減するため、長期間の生存率を増加させるため、免疫チェックポイント遮断に対する応答を改善するため、および／または腫瘍再チャレンジに対して保護する免疫学的メモリーを誘導するために有効な量で投与される。
コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）阻害剤

【0144】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のコロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＣＳＦ１Ｒは、ＩＩＩ型タンパク質チロシンキナーゼ受容体ファミリーに属し、ＣＳＦ１またはより最近同定されたリガンドであるＩＬ－３４の結合は、受容体のホモ二量体化、およびその後の受容体シグナル伝達の活性化を誘導する（Achkova D, Maher J. Biochem Soc Trans. (2016) 44:333-41）。ＣＳＦ１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）媒介シグナル伝達は、単核球色細胞系および特にマクロファージの分化および生存にとって極めて重要である（StanleyER, Chitu V. Cold Spring Harb Perspect Biol (2014), 6(6)）。ＣＳＦ１Ｒ＋マクロファージの腫瘍内存在は、様々な腫瘍の型において不良な生存と相関することから（PedersenMB, et al., Histopathology. (2014), 65:490-500; Zhang QW et al., PLoS One.(2012), 7:e50946）、腫瘍促進性ＴＡＭにおけるＣＳＦ１Ｒシグナル伝達の標的化は、これらの細胞を除去するためにまたは再分極するために魅力的な戦略を表す。ＴＡＭに加えて、ＣＳＦ１Ｒ発現は、腫瘍微小環境内の他の骨髄性細胞、例えば樹状細胞、好中球、および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）において検出することができる。

【0145】

ＣＳＦ１ＲまたはそのリガンドであるＣＳＦ１に対する多様な低分子およびモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、単剤療法としておよび標準的な処置モダリティ、例えば化学療法ならびに他のがん免疫療法アプローチとの組合せで臨床開発中である。低分子のクラスの中でも、ＣＳＦ１Ｒ、ｃＫＩＴ、突然変異体ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、および血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）－βの経口チロシンキナーゼ阻害剤であるペキシダルチニブ（ＰＬＸ３３９７）は、単剤療法で最も広い臨床開発プログラムの対象であり、ｃ－ｋｉｔ突然変異黒色腫、前立腺がん、膠芽腫（ＧＢＭ）、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、神経線維腫症、肉腫、および白血病における試験が終了したものもまたは進行中のものもある。ＡＲＲＹ－３８２、ＰＬＸ７４８６、ＢＬＺ９４５、およびＪＮＪ－４０３４６５２７を含む、追加のＣＳＦ１Ｒ標的化低分子は、固形腫瘍およびｃＨＬにおいて現在試験中である。臨床開発中のｍＡｂとしては、エマクツズマブ（ＲＧ７１５５）、ＡＭＧ８２０、ＩＭＣ－ＣＳ４（ＬＹ３０２２８５５）、カビラリズマブ、ＭＣＳ１１０、およびＰＤ－０３６０３２４が挙げられ、後者の２つはリガンドＣＳＦ１を標的化する化合物である。「ＣＳＦ１Ｒ阻害剤」という語句は、受容体標的化およびリガンド標的化化合物の両方の全般的用語として使用される。

【0146】

このように、一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達経路の活性を低減または阻害するための１つまたは複数の作用剤、例えば１つもしくは複数のＣＳＦ１Ｒ阻害剤、またはリガンドＣＳＦ１を標的化する１つもしくは複数の化合物に会合している、またはコンジュゲートされている。一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数の低分子ＣＳＦ１Ｒ阻害剤またはそのアナログに会合している、またはコンジュゲートされている。例示的な低分子ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、Current Medicinal Chemistry, 2019, 26, 1-23に提供されている。例示的なＣＳＦ１Ｒ標的化低分子としては、ペキシダルチニブ（ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ１０８－０１）、ＡＲＲＹ－３８２、ＰＬＸ７４８６、ＢＬＺ９４５、ＪＮＪ－４０３４６５２７、およびＧＷ２５８０が挙げられる。低分子ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、低分子ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。

【0147】

デンドリマーとのコンジュゲーションにとって適した例示的なＣＳＦ１Ｒ標的化低分子またはそのアナログの化学構造を以下に示す。
構造ＩＶ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤１の化学構造

【化6】

構造Ｖ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤２の化学構造

【化7】

構造ＶＩ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤３の化学構造

【化8】

構造ＶＩＩ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤４の化学構造

【化9】

構造ＶＩＩＩ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤５の化学構造

【化10】

構造ＩＸ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤６の化学構造

【化11】

構造Ｘ ａ～ｂ：ａ）ＣＳＦ１Ｒ－Ｅアナログおよびｂ）デンドリマー－コンジュゲートＣＳＦ１Ｒ－Ｅの化学構造

【化12】

構造ＸＩ：ＣＳＦ１Ｒ－Ｅアナログ１の化学構造

【化13】

【0148】

ＣＳＦ１Ｒ－Ｅアナログ１（構造ＸＩ）の結合親和性は約１３ｎｍであり、デンドリマーコンジュゲートＣＳＦ１Ｒ－Ｅアナログ１（例えば、アルキン－アジドクリックケミストリーを介して）の結合親和性は約２００ｎｍである。このように、好ましい実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、ＣＳＦ１Ｒに対する結合親和性の低減を最小限にするように、例えば１倍未満、２倍未満、３倍未満、４倍未満、５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、３０倍未満、４０倍未満、５０倍未満、または１００倍未満とするようにスペーサーの存在下または非存在下でデンドリマーにコンジュゲートされている。
構造ＸＩＩ：ＣＳＦ１Ｒ阻害剤Ｆの化学構造

【化14】

【0149】

例示的なＣＳＦ１Ｒ標的化ｍＡｂとしては、エマクツズマブ（ＲＧ７１５５）、ＡＭＧ８２０、ＩＭＣ－ＣＳ４（ＬＹ３０２２８５５）、およびカビラリズマブが挙げられる。例示的なｍＡｂは、リガンドＣＳＦ１ＭＣＳ１１０およびＰＤ－０３６０３２４を標的化する。

【0150】

好ましい実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＣＳＦ１Ｒのチロシンキナーゼ阻害剤、例えばＧＷ２５８０（構造Ｘとして示される）にコンジュゲートされている。ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。例えば、ＧＷ２５８０を、ＧＷ２５８０エーテル、ＧＷ２５８０エステル、およびＧＷ２５８０アミドを含むＧＷ２５８０アナログへと修飾することができる。好ましい実施形態では、ＧＷ２５８０またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、例えばＧＷ２５８０をデンドリマーにコンジュゲートするための例示的な戦略を図１７Ａおよび１７Ｂに示す。
構造ＸＩＩＩ：ＧＷ２５８０の化学構造

【化15】

【0151】

一実施形態では、デンドリマーは、以下の構造を有するＣＳＦ１Ｒ阻害剤またはそのアナログにコンジュゲートされている。
構造ＸＩＶ：ＡＲ００４の化学構造

【化16】

【0152】

ＡＲ００４にコンジュゲートされているデンドリマーの合成経路を図１５に示す。
ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤

【0153】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）は、補因子としてＮＡＤ＋を使用して特異的アクセプタータンパク質上のＡＤＰ－リボース基を転移する一般的な触媒部位によって特徴付けられる１７個の核タンパク質のファミリーである。ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤

【0154】

オラパリブ（Ｃ_２４Ｈ_２３ＦＮ_４Ｏ_３）は、臨床診療に導入された最初のＰＡＲＰ阻害剤であった。ニラパリブは、ＰＡＲＰ－１およびＰＡＲＰ－２の強力かつ選択的阻害剤である。ルカパリブは、単剤として、少なくとも２つの化学療法ライン後に再発したｇＢＲＣＡｍまたはｓＢＲＣＡｍを有するＨＧＳＯＣ患者の処置に関して、２０１６年１２月にＦＤＡによって承認され、２０１８年５月にＥＭＡによって承認された強力なＰＡＲＰ阻害剤である。

【0155】

一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＰＡＲＰ阻害剤、例えばオラパリブ、ニラパリブ、およびルカパリブを含む。ＰＡＲＰ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、ＰＡＲＰ阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。
ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤

【0156】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。チロシンキナーゼは、細胞増殖および遊走を含む多様な生物活性を有する重要な細胞シグナル伝達タンパク質である。受容体チロシンキナーゼ、例えば血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）を含む複数のキナーゼが血管新生に関係している。臨床開発中の抗血管新生チロシンキナーゼ阻害剤は、主にＶＥＧＦＲ－１、－２、－３、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、ＰＤＧＦＲ－β、ＫＩＴ、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、コロニー刺激因子－１受容体（ＣＳＦ－１Ｒ）、Ｒａｆ、およびＲＥＴを標的化する。

【0157】

ＶＥＧＦＲファミリーは、ＶＥＧＦＲ－１、－２、および－３として公知である３つの関連する受容体チロシンキナーゼを含み、これらはＶＥＧＦリガンドの血管新生効果を媒介する（Hicklin DJ, Ellis LM. J Clin Oncol. (2005), 23(5):1011-27）。哺乳動物ゲノムにおいてコードされるＶＥＧＦファミリーは、５つのメンバーを含む：ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、および胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）。ＶＥＧＦは、内皮細胞の増殖および遊走の重要な刺激剤である。ＶＥＧＦ－Ａ（一般的にＶＥＧＦと呼ばれる）は、腫瘍の血管新生の主要なメディエーターであり、主要なＶＥＧＦシグナル伝達受容体であるＶＥＧＦＲ－２を通してシグナルを伝達する（KerbelRS, N Engl J Med. (2008), 358(19):2039-49）。

【0158】

最も注目すべき血管新生阻害剤は、血管内皮増殖因子シグナル伝達経路を標的化し、例えばモノクローナル抗体ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）および２つのキナーゼ阻害剤スニチニブ（ＳＵ１１２４８、Ｓｕｔｅｎｔ、Ｐｆｉｚｅｒ）およびソラフェニブ（ＢＡＹ４３－９００６、Ｎｅｘａｖａｒ、Ｂａｙｅｒ）である。ベバシズマブは、最初は結腸直腸がんの処置に関して、最近では乳がんおよび肺がんの処置に関しても臨床承認されている最初の血管新生阻害剤であった。低分子チロシンキナーゼ阻害剤であるスニチニブおよびソラフェニブは、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）、主にＶＥＧＦＲ－２を標的化し、多様ながんの型において臨床で有効性を示している。両方の薬物は、腎細胞がんを有する患者において利点を示している（Motzer RJ, Bukowski RM, J Clin Oncol. (2006); 24(35):5601-8）。加えて、スニチニブは、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）の処置のために承認されている。ソラフェニブは、Ｒａｆセリンキナーゼも同様に阻害し、肝細胞がんの処置のためにも承認されている。セディラニブは、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の経口チロシンキナーゼ阻害剤である。

【0159】

一部の実施形態では、デンドリマーは、スニチニブ（ＳＵ１１２４８；ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３９００６；ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、パゾパニブ（ＧＷ７８６０３４；ＶＯＴＲＩＥＮＴ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＤ６４７４；ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標））、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、セディラニブ（ＡＺＤ２１７１；ＲＥＣＥＮＴＩＮ（登録商標））、バタラニブ（ＰＴＫ７８７；ＺＫ２２２５８４）、ダサチニブ、ニンテダニブ、およびモテサニブ（ＡＭＧ７０６）、またはそのアナログを含む１つまたは複数のＶＥＧＦ受容体阻害剤にコンジュゲートされている。

【0160】

一部の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、１つまたは複数のＶＥＧＦ受容体阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。例えば、スニチニブを、エステル連結またはアミド連結を有するスニチニブへと修飾することができる（図３Ａおよび３Ｂ）。ＶＥＧＦ受容体阻害剤、例えばスニチニブのデンドリマーとの例示的なコンジュゲーションを、図３Ａ（ヒドロキシメチル連結を介する）および３Ｂ（アミド連結を介する）に示す。一実施形態では、スニチニブアナログは、Ｎ，Ｎ－ジデスエチルスニチニブである。

【0161】

機能的なスペーサー／連結を有する例示的なＶＥＧＦ受容体阻害剤アナログを、以下の構造ＸＶ、構造ＸＶＩ、および構造ＸＶＩＩに示す。
構造ＸＶ ａ～ｂ：ソラフェニブアナログの化学構造

【化17】

構造ＸＶＩ ａ～ｄ：ニンテダニブおよびアナログの化学構造

【化18】

構造ＸＶＩＩ：オラチニブアナログの化学構造

【化19】

ＭＥＫ阻害剤

【0162】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＭＥＫ阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。マイトゲン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケードは、ヒトがん細胞の生存、播種、および薬物療法に対する耐性に関する重要な経路である。ＭＡＰＫ／ＥＲＫ（細胞外シグナル調節キナーゼ）経路は、内部代謝ストレスおよびＤＮＡ損傷経路、ならびに変更されたタンパク質濃度を含む多数の刺激からの入力、ならびに外部増殖因子からのシグナル伝達、細胞マトリックス相互作用、および他の細胞からの伝達を介した入力を受けるコンバージェントシグナル伝達ノードである。

【0163】

一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＭＥＫ阻害剤にコンジュゲートされている。例示的なＭＥＫ阻害剤としては、レファメチニブ、ピマセルチブ、トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）、コビメチニブ（またはＸＬ５１８）、ビニメチニブ（ＭＥＫ１６２）、セルメチニブ、ＣＩ－１０４０（ＰＤ－１８４３５２）、ＰＤ３２５９０１、ＰＤ０３５９０１、ＰＤ０３２９０１、およびＴＡＫ－７３３、またはそのアナログが挙げられる。好ましい実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化されている。好ましい実施形態では、ＭＥＫ阻害剤またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。例えば、ビニメチニブは、ビニメチニブエステル、ビニメチニブエーテル、またはビニメチニブアミドへと修飾することができる；トラメチニブは、トラメチニブエーテル、トラメチニブエステル、またはトラメチニブアミドへと修飾することができ；ピマセルチブは、ピマセルチブエステルおよびピマセルチブエーテルへと修飾することができる。例示的なＭＥＫ阻害剤およびそのアナログを以下に示す：エステル連結（構造ＸＶＩＩＩ）およびエーテル連結（構造ＸＩＸ）を介してＰＥＧリンカーおよびアジド基によって官能化されたビニメチニブ；アミド連結（構造ＸＸ）を介してＰＥＧリンカーおよびアジド基によって官能化されたトラメチニブアナログ；ならびにエステル連結（構造ＸＸＩ）を介してＰＥＧリンカーおよびアジド基によって官能化されたピマセルチブアナログ。
構造ＸＶＩＩＩ：ビニメチニブアナログ１の化学構造

【化20】

構造ＸＩＸ：ビニメチニブアナログ２の化学構造

【化21】

構造ＸＸ：トラメチニブアナログの化学構造

【化22】

構造ＸＸＩ：ピマセルチブアナログの化学構造

【化23】

グルタミナーゼ阻害剤

【0164】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のグルタミナーゼ阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。グルタミンのグルタメートへの変換に関与するグルタミナーゼ（ＧＬＳ）は、腫瘍細胞成長のための細胞代謝の上方調節において必須の役割を果たす。例示的なグルタミナーゼ阻害剤としては、ビス－２－（５－フェニルアセトイミド－１，２，４－チアジアゾル－２－イル）エチルスルフィニド（ＢＰＴＥＳ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）、アザセリン、アシビシン、およびＣＢ－８３９が挙げられる。一部の実施形態では、グルタミナーゼ阻害剤は、ＢＰＴＥＳアナログ、例えばＪＨＵ－１９８、ＪＨＵ－２１２、およびＪＨＵ－３２９である（Thomas AG et al., Biochem Biophys Res Commun. (2014); 443(1): 32-36）。

【0165】

一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のグルタミナーゼ阻害剤にコンジュゲートされている。例示的なグルタミナーゼ阻害剤としては、ＢＰＴＥＳ、ＤＯＮ、アザセリン、アシビシン、ＣＢ－８３９、ＪＨＵ－１９８、ＪＨＵ－２１２、およびＪＨＵ－３２９が挙げられる。グルタミナーゼ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、グルタミナーゼ阻害剤またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ＣＢ－８３９またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩にコンジュゲートされている。ＣＢ－８３９は、以下の構造を有する：
構造ＸＸＩＩ：ＣＢ－８３９の化学構造

【化24】

【0166】

一部の実施形態では、デンドリマーは、グルタミンアナログ、またはアンタゴニストＬ－［αＳ，５Ｓ］－α－アミノ－３－クロロ－４，５－ジヒドロ－５－イソキサゾール酢酸（アシビシン）、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩にコンジュゲートされている。アシビシンの化学構造を以下の構造ＸＸＩＩＩに示す。
構造ＸＸＩＩＩ：

【化25】

【0167】

アシビシンは、がんの処置のための臨床試験の対象である。投薬量および製剤は当技術分野で公知であり、例えばHidalgo, Clinical Cancer Research, 4(11): 2763-2770 (1998)、米国特許第３，８５６，８０７号、第３，８７８，０４７号、および第５，０８７，６３９号を参照されたい。一実施形態では、デンドリマーは、アシビシンにコンジュゲートされている。好ましい実施形態では、アシビシンは、デンドリマーにコンジュゲートされる前に、例えばエーテル、エステル、Ｎ－アルキル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって官能化されている。
ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト

【0168】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＴＩＥ ＩＩアンタゴニストと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＣＤ２０２Ｂ（ＣＤ分類２０２Ｂ）としても公知であるアンジオポエチン－１受容体は、ヒトにおいてＴＥＫ遺伝子によってコードされるタンパク質である。同様に、ＴＩＥ２としても公知であるのは、アンジオポエチン受容体である。アンジオポエチンは、腫瘍の成長および発達を支える血管の形成（血管新生）にとって必要なタンパク質増殖因子である。したがって、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＴＩＥ ＩＩアンタゴニストにコンジュゲートされている。

【0169】

ＴＩＥ ＩＩアンタゴニストは、例えばデンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。例示的なＴＩＥ ＩＩ阻害剤の化学構造を以下の構造ＸＸＩＶに示す。遊離のＴＩＥ ＩＩアンタゴニストのＴＩＥ ＩＩ阻害は、約８．８ｎｍの解離定数Ｋ_ｄを有し、デンドリマーコンジュゲートＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト（構造ＸＸＩＶ）のＴＩＥ ＩＩ阻害は、約２５ｎｍの解離定数Ｋ_ｄを有する。このように、好ましい実施形態では、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニストは、ＴＩＥ ＩＩ阻害の低減を最小限にするように、例えば１倍未満、２倍未満、３倍未満、４倍未満、５倍未満、１０倍未満、２０倍未満、３０倍未満、４０倍未満、５０倍未満、および１００倍未満にするように、スペーサーの存在下または非存在下でデンドリマーにコンジュゲートされている。
構造ＸＸＩＶ：ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト１

【化26】

【0170】

一部の実施形態では、デンドリマーは、２つまたはそれより多くの異なるクラスの活性剤と複合体を形成している、またはコンジュゲートされており、標的部位で異なるまたは独立した放出速度論での同時の送達を提供する。一実施形態では、第４世代または第６世代ＰＡＭＡＭデンドリマーは、ＴＩＥ ＩＩ阻害剤およびゲムシタビン、またはそのアナログにコンジュゲートされている。別の実施形態では、第４世代または第６世代ＰＡＭＡＭデンドリマーは、ＴＩＥ ＩＩ阻害剤およびカペシタビン、またはそのアナログにコンジュゲートされている。２つまたはそれより多くの異なるクラスの活性剤にコンジュゲートされているデンドリマーの例示的な合成経路を、図１３Ａ～１３Ｃに示す。
ＣＸＣＲ２阻害剤

【0171】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＣＸＣＲ２阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＣＸＣＲ２は、多くの腫瘍細胞によって発現され、がんの多様な前臨床モデルにおいて化学療法耐性に関係している（Poeta VM et al., Front Immunol. 2019; 10: 379）。乳がん細胞では、ＣＸＣＲ２欠失は、パクリタキセルに対する良好な応答をもたらした。黒色腫モデルでは、ＣＸＣＲ２阻害剤ナバリキシンはＭＥＫ阻害剤と相乗効果を示したが、卵巣腫瘍モデルでは、ＣＸＣＲ２阻害剤ＳＢ２２５００２は、ソラフェニブの血管新生治療を改善した。ヒト胃がんでは、レパリキシン、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２阻害剤は、５－フルオロウラシルの有効性を増強した。

【0172】

ＣＸＣＲ２標的化は、骨髄細胞浸潤に影響を及ぼすことから、腫瘍の成長も阻害する。膵臓腫瘍では、ＣＸＣＲ２阻害は、Ｔ細胞応答を開放する好中球の蓄積を防止し、転移性の播種を阻害し、抗ＰＤ－１に対する応答の改善をもたらした。興味深いことに、ＣＸＣＲ２とＣＣＲ２阻害剤の組み合わせた応答は、ＴＡＭの補完的応答を制限し、抗腫瘍免疫を増加させ、ＦＸに対する応答を改善した。最後に、前立腺がんモデルでは、ＳＢ２６５６１０によるＣＸＣＲ２阻害は、骨髄細胞の動員を減少させ、ドセタキセル誘発性の老化を増強し、腫瘍の成長を制限する。

【0173】

このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＣＸＣＲ２阻害剤に会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＣＸＣＲ２阻害剤としては、ナバリキシン、ＳＢ２２５００２、ＳＢ３３２２３５、ＳＢ２６５６１０、レパリキシン、およびＡＺＤ５０６９が挙げられる。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ナバリキシン、ＳＢ２２５００２、またはＳＢ３３２２３５、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩にコンジュゲートされている。ＣＸＣＲ２阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、Ｎ－アルキル、またはアミド連結によって官能化することができる。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ２阻害剤は、クリックケミストリーを使用するＮ－アルキル連結を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。
ＣＤ７３阻害剤

【0174】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＣＤ７３阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＣＤ７３は、細胞外アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を免疫抑制性のアデノシンに変換し、これは、抗腫瘍免疫監視をＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のレベルで遮断する。がんにおいて、腫瘍細胞および腫瘍間質細胞中の細胞におけるＣＤ７３発現の上方調節は、アデノシン産生の増加をもたらし、これはＴ細胞およびＮＫ細胞の細胞傷害性、サイトカイン産生、および増殖の阻害、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）の抑制；増強された制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）増殖および抑制性活性、ならびにＭＤＳＣおよびマクロファージＭ２分極化をもたらす。これらの変化は腫瘍の成長および疾患進行を可能にする。

【0175】

このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＣＤ７３阻害剤にコンジュゲートされている。例示的なＣＤ７３阻害剤としては、非加水分解性ＡＭＰアナログ、例えばアデノシン５’－（α，β－メチレン）ジホスフェート（ＡＰＣＰ）、フラボノイドに基づく化合物、例えばケルセチン、およびプリンヌクレオチドアナログ、例えばテノホビルおよびスルホン酸化合物が挙げられる。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ＡＰＣＰ、ケルセチン、またはテノホビル、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩を含む１つまたは複数のＣＤ７３阻害剤にコンジュゲートされている。ＣＤ７３阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、ＣＤ７３阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介してデンドリマーにコンジュゲートされている。

【0176】

一部の実施形態では、以下の構造ＸＸＶ ａ～ｉおよび構造ＸＸＶＩ ａ～ｃに示される構造を有する１つまたは複数のＣＤ７３阻害剤および／またはその誘導体、もしくはアナログは、デンドリマーとのコンジュゲーションにとって適している。
構造ＸＸＶ ａ～ｉ：ＣＤ７３阻害剤およびそのアナログの構造

【化27】

構造ＸＸＶＩ ａ～ｃ：ＣＤ７３阻害剤およびそのアナログの構造

【化28】

アルギナーゼ阻害剤

【0177】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のアルギナーゼ阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。酵素アルギナーゼ１（Ａｒｇ１）の発現は、免疫抑制性骨髄性細胞の明確な特徴であり、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞増殖にとって必要な栄養であるＬ－アルギニンの枯渇をもたらす。したがって、がんの状況においてＡｒｇ１活性を遮断すると、Ｌ－アルギニン代謝の平衡をリンパ球増殖に有利となるようにシフトさせることができた。実際に、マウスの試験では、アルギナーゼ阻害剤ｎｏｒ－ＮＯＨＡを注射するかまたは骨髄性区画におけるＡｒｇ１を遺伝子破壊すると、低減された腫瘍成長をもたらし、Ａｒｇ１が腫瘍形成促進性であることを示している。

【0178】

このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のアルギナーゼ阻害剤に会合している、またはコンジュゲートされている。一部の実施形態では、１つまたは複数のアルギナーゼ阻害剤は、ボロン酸に基づくアルギナーゼ阻害剤、例えば２－（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）の誘導体（Borek B et al., Bioorg Med Chem. 2020 Sep 15;28(18):115658）、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩である。好ましい実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のアルギナーゼ阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩にコンジュゲートされている。アルギナーゼ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、アミン、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、アルギナーゼ阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介してデンドリマーにコンジュゲートされている。

【0179】

一部の実施形態では、以下の構造ＸＸＶＩＩ ａ～ｇおよび構造ＸＸＶＩＩＩ ａ～ｈに示される構造を有する１つまたは複数のアルギナーゼ阻害剤および／またはその誘導体もしくはアナログは、デンドリマーにコンジュゲートされている。
構造ＸＸＶＩＩ ａ～ｇ：アルギナーゼ阻害剤およびそのアナログの構造

【化29】

構造ＸＸＶＩＩＩ ａ～ｈ：アルギナーゼ阻害剤およびそのアナログの構造

【化30】

ホスファチジルイノシトール－３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤

【0180】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋ阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ経路成分の調節障害は、過剰活性化ＰＩ３Ｋシグナル伝達をもたらし、様々ながんでしばしば観察されており、腫瘍の成長および生存と相関する。受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤および化学療法剤を含む多様な抗がん治療に対する耐性は、ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ経路に沿って下方調節するシグナルの非存在または減弱のためである。マクロファージＰＩ３－キナーゼγは、炎症およびがんの際の免疫の刺激と抑制の間の重要な切り替えを制御する。ＡｋｔおよびｍＴｏｒを通してのＰＩ３Ｋγシグナル伝達は、ＮＦκＢ活性化を阻害するが、Ｃ／ＥＢＰβ活性化を刺激し、それによって炎症および腫瘍成長の際の免疫抑制を促進する転写プログラムを誘導する。これに対し、マクロファージＰＩ３Ｋγの選択的不活化は、ＮＦκＢ活性化を刺激し、延長させ、Ｃ／ＥＢＰβ活性化を阻害し、このようにＣＤ８＋Ｔ細胞活性化および細胞傷害性を回復する免疫刺激転写プログラムを促進する。

【0181】

このように、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋ阻害剤に会合している、またはコンジュゲートされている。好ましい実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＰＩ３Ｋγ阻害剤に会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＰＩ３Ｋ阻害剤としては、ＢＹＬ７１９（アルペリシブ）、ＩＮＫ１１１７（セラベリシブ、ＭＬＮ－１１１７、またはＴＡＫ－１１７）、ＸＬ１４７（ＳＡＲ２４５４０８）、ピララリシブ、ＷＸ－０３７、ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５（ダクトリシブまたはＢＥＺ２３５）、ＬＹ３０２３４１４（プレキサセルチブ）、ＸＬ７６５（ボクスタリシブまたはＳＡＲ２４５４０９）、ＰＸ－８６６、ＺＳＴＫ４７４、ＮＶＰ－ＢＫＭ１２０（ブパルリシブ）、ＧＤＣ－０９４１（ピクチリシブ）、およびＢＡＹ８０－６９４６（コパンリシブ）が挙げられる。ＰＩ３Ｋ阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。例示的なＰＩ３Ｋ阻害剤の化学構造を以下の構造ＸＸＩＸおよび構造ＸＸＸに示す。
構造ＸＸＩＸ ａ～ｋ：ＰＩ３Ｋ阻害剤およびそのアナログの構造

【化31】

構造ＸＸＸ ａ～ｆ：ＰＩ３Ｋ阻害剤およびそのアナログの構造

【化32】

Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体４（ＴＬＲ４）およびＴＬＲ７アゴニスト

【0182】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＴｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストおよび／またはＴｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＴＬＲは、免疫応答の活性化において極めて重要な役割を果たす。ＴＬＲは、広範囲の微生物上で発現される保存された病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、ならびにストレスを受けたまたは死につつある細胞から放出される内因性のＤＡＭＰを認識する。

【0183】

一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＴＬＲ４アゴニストに会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＴＬＲ４アゴニストとしては、合成のｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ受容体４アゴニストであるグルコピラノシルリピッドＡ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、およびモノホスホリルリピッドＡ（ＭＰＬＡ）が挙げられる。ＴＬＲ４アゴニストは、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。一部の実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、または第６世代ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、ＴＬＲ４アゴニスト、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。例示的なＴＬＲ４アゴニストまたはそのアナログを以下に示す。
構造ＸＸＸＩ ａ～ｂ：２つのＴＬＲ４アゴニストアナログの構造

【化33】

【0184】

デンドリマーにコンジュゲートした例示的なＴＬＲ４アゴニストの化学合成経路を、図１４Ａおよび１４Ｂに示す。

【0185】

一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＴＬＲ７アゴニストに会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＴＬＲ７アゴニストとしては、イミキモド、レシキモド、ガルジキモド、８５２Ａ、ロキソリビン（Loxoribine）、ブロピリミン、３Ｍ－０１１、３Ｍ－０５２、ＤＳＲ－６４３４、ＤＳＲ－２９１３３、ＳＣ１、ＳＺＵ－１０１、ＳＭ－２７６００１、およびＳＭ－３６０３２０が挙げられる。好ましい実施形態では、ＴＬＲアゴニストはレシキモドである。ＴＬＲ７アゴニストは、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。

【0186】

一部の実施形態では、１つまたは複数のＴＬＲ４またはＴＬＲ７アゴニストに会合している、またはコンジュゲートされているデンドリマーは、例えば、自然免疫遺伝子の発現、活性化エフェクターＴ細胞の浸潤および増大、抗原提示、ならびに永続的な免疫応答を増加させるために、抗腫瘍ワクチンおよび／またはアジュバントとしての養子細胞治療（ＡＣＴ）と組み合わせて使用される。
ＳＨＰ２阻害剤

【0187】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数のＳＨＰ２阻害剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている。ＳＨＰ２（Ｓｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙ－２ドメイン含有タンパク質チロシンホスファターゼ－２）は、チロシンリン酸化を除去する非受容体タンパク質チロシンホスファターゼである。機能的に、ＳＨＰ２は、幾つかの細胞内腫瘍遺伝子シグナル伝達経路、例えばＪａｋ／ＳＴＡＴ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＲＡＳ／Ｒａｆ／ＭＡＰＫ、およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を接続する重要なハブとして作用する。ＳＨＰ２の突然変異および／または過剰発現は、遺伝的な発達疾患およびがんに関連している。

【0188】

したがって、一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数のＳＨＰ２阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩に会合している、またはコンジュゲートされている。例示的なＳＨＰ２阻害剤としては、ＳＨＰ２の触媒部位を標的化する阻害剤およびＳＨＰ２のアロステリック部位を標的化する阻害剤、例えばＴＮＯ１５５、ＲＭＣ－４６３０、ＪＡＢ－３０６８、ＪＡＢ－３３１２、およびＲＭＣ－４５５０が挙げられる。ＳＨＰ２阻害剤は、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。一部の実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、または第６世代ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、ＳＨＰ２阻害剤、またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。例示的なＳＨＰ２阻害剤またはそのアナログを以下に示す。
構造ＸＸＸＩＩ ａ～ｂ：２つのＳＨＰ２阻害剤アナログの構造

【化34】

【0189】

デンドリマーと共に使用される一部の例示的な免疫調節剤としてはまた、ＳＴＩＮＧアンタゴニスト、ＪＡＫ１阻害剤、および抗炎症剤が挙げられる。好ましい実施形態では、ＳＴＩＮＧアンタゴニスト、ＪＡＫ１阻害剤、および抗炎症剤を含む１つまたは複数の免疫調節剤に会合している、またはコンジュゲートされているデンドリマーは、１つまたは複数の炎症促進性免疫細胞を標的化するために特に適している。

【0190】

７．肝臓がんに関する追加の作用剤
一部の実施形態では、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、従来のがん治療剤、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ケモカイン、および放射線療法を含む１つまたは複数の追加の治療剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。化学療法薬物の大部分は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤に分類することができる。これらの薬物は、細胞分裂またはＤＮＡ合成および機能に何らかの影響を及ぼす。追加の治療剤としては、モノクローナル抗体およびチロシンキナーゼ阻害剤、例えばある特定の型のがん（慢性骨髄性白血病、消化管間質腫瘍）における分子異常を直接標的化するイマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）またはＧＬＩＶＥＣ（登録商標））が挙げられる。

【0191】

一部の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、１つまたは複数の化学療法剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはその中にカプセル化されている。代表的な化学療法剤としては、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、リポソームドキソルビシン、リポソームダウノルビシン（daunorubici）、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキンサトロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テニポシド、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、タキソール、トリコスタチンＡ、およびその誘導体、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ、およびリツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）またはＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、およびそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。代表的なアポトーシス促進剤としては、フルダラビン、スタウロスポリン（taurosporine）、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ－ＰＧＪ（２）５、およびそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。

【0192】

一実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、好ましくはエステル、エーテル、またはアミド連結を介して、ＰＥＧなどのスペーサーを介してカペシタビンに共有結合によりコンジュゲートされている。

【0193】

別の実施形態では、三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーは、好ましくはエステル、エーテル、またはアミド連結を介して、ＰＥＧなどのスペーサーを介してゲムシタビンに共有結合によりコンジュゲートされている。

【0194】

一部の実施形態では、活性剤は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤である。一実施形態では、活性剤はボリノスタットである。他の実施形態では、活性剤はトポイソメラーゼＩおよび／またはＩＩ阻害剤である。特定の実施形態では、活性剤は、エトポシドまたはカンプトテシンである。

【0195】

追加の抗がん剤としては、イリノテカン、エキセメスタン、オクトレオチド、カルモフール、クラリスロマイシン、ジノスタチン、タモキシフェン、テガフール、トレミフェン、ドキシフルリジン、ニムスチン、ビンデシン、ネダプラチン、ピラルビシン、フルタミド、ファドロゾール、プレドニゾン、メドロキシプロゲステロン、ミトタン、ミコフェノール酸モフェチル、およびミゾリビンが挙げられるがこれらに限定されない。

【0196】

代表的な抗血管新生剤としては、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体、例えばベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））およびｒｈｕＦＡｂ Ｖ２（ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、およびアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））を含む他の抗ＶＥＧＦ化合物；ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブ（pegaptanim）ナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー、またはＥＹＥ００ｌ）（Ｅｙｅｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；色素上皮由来因子（複数可）（ＰＥＤＦ）；ＣＯＸ－２阻害剤、例えばセレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））およびロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（登録商標））；インターフェロンアルファ；インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）；サリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標））およびその誘導体、例えばレナリドミド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））；スクアラミン；エンドスタチン；アンジオスタチン；リボザイム阻害剤、例えばＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）（Ｓｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；多機能抗血管新生剤、例えばＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（登録商標）（ＡＥ－９４１）（Ａｅｔｅｒｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｑｕｅｂｅｃ Ｃｉｔｙ，Ｃａｎａｄａ）；受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤、例えばスニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））；チロシンキナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；上皮成長因子受容体に対する抗体、例えばパニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））およびセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、ならびに当技術分野で公知の他の抗血管新生剤が挙げられるがこれらに限定されない。

【0197】

一部の例では、活性剤は、抗感染症剤である。例示的な抗感染症剤としては、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、および抗真菌剤が挙げられる。例示的な抗生物質としては、モキシフロキサシン、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、レボフロキサシン、セファゾリン、バンコマイシン、チゲサイクリン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、セフタジジム、オフロキサシン、ガチフロキサシン；抗真菌剤；アムホテリシン、ボリコナゾール、ナタマイシンが挙げられる。

【0198】

追加の活性化合物のいずれも、デンドリマーとのコンジュゲーションを容易にするため、および／または所望の放出速度論のために、例えばエーテル、エステル、エチル、またはアミド連結によって、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカーによって官能化することができる。好ましい実施形態では、活性剤またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグは、Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックケミストリーまたはチオール－エンクリックケミストリーを介して、必要に応じて１つまたは複数のスペーサー／リンカー、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を介してデンドリマーにコンジュゲートされている。一部の実施形態では、追加の活性剤は、化学療法剤またはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩である。一実施形態では、デンドリマーと複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている活性剤は、例えば構造ＸＸＸＩＩＩに示されるメトトレキサートまたはその誘導体、アナログ、もしくはプロドラッグ、またはその薬理学的に活性な塩である。
構造ＸＸＸＩＩＩ：メトトレキサートアナログの化学構造

【化35】

８．高血圧症および他の障害を処置するための作用剤

【0199】

一部の実施形態では、デンドリマーは、肝傷害および／または関連疾患もしくは状態、例えば感染症、敗血症、糖尿病合併症、高血圧症、肥満、高血圧、心不全、腎疾患、およびがんの１つまたは複数の症状を防止または処置するために、１つまたは複数の追加の活性剤、特に１つまたは複数の治療剤、予防剤、および／または診断剤を送達するために使用される。

【0200】

一部の実施形態では、他の作用剤、例えば化学療法薬、抗血管新生剤、および抗興奮毒性剤、例えばバルプロ酸、Ｄ－アミノホスホノ吉草酸、Ｄ－アミノホスホノヘプタン酸、グルタメート形成／放出の阻害剤、例えばバクロフェン、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、ラニビズマブ、およびアフリベルセプトを含む抗ＶＥＧＦ剤、ならびに免疫調節剤、例えばラパマイシンを組み込むことができる。

【0201】

送達され得る他の治療剤としては、インスリン感受性改善剤、ピオグリタゾンが挙げられる。

【0202】

一部の実施形態では、活性剤は、抗感染症剤である。例示的な抗感染症剤としては、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、および抗真菌剤が挙げられる。
９．診断剤

【0203】

一部の例では、作用剤は、診断剤を含み得る。診断剤の例としては、常磁性分子、蛍光化合物、磁性分子、および放射性核種、ｘ線造影剤、およびコントラスト媒体が挙げられる。他の適したコントラスト剤の例としては、放射線不透過性である気体または気体放出化合物が挙げられる。デンドリマー複合体は、投与された組成物の位置を決定するために有用な作用剤をさらに含むことができる。この目的にとって有用な作用剤は、蛍光タグ、放射性核種、およびコントラスト剤を含む。

【0204】

例示的な診断剤としては、色素、蛍光色素、近赤外線色素、ＳＰＥＣＴ造影剤、ＰＥＴ造影剤、および放射性同位元素が挙げられる。

【0205】

さらなる実施形態では、単一のデンドリマー複合体組成物は、体における１つまたは複数の位置で疾患または状態を同時に処置および／または診断することができる。
ＩＩＩ．医薬製剤

【0206】

デンドリマーおよび１つまたは複数の活性剤、例えば１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤を含む医薬組成物は、活性化合物を、薬学的に使用することができる調製物へと処理することを容易にする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理的に許容される担体を使用して通常の形式で製剤化されてもよい。製剤は、選択される投与経路に依存する。好ましい実施形態では、組成物は、非経口送達のために製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、皮下注射のために製剤化される。典型的には、組成物は、処置される組織または細胞に注射するために、滅菌食塩水または緩衝溶液中で製剤化される。組成物は、使用直前に再水和するために単回使用バイアル中に凍結乾燥状態で保存することができる。再水和および投与のための他の手段は当業者に公知である。

【0207】

医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて１つまたは複数のデンドリマーを含有する。代表的な賦形剤としては、溶媒、希釈剤、ｐＨ調整剤、保存剤、抗酸化剤、懸濁剤、湿潤剤、粘度調整剤、等張剤、安定化剤、およびそれらの組合せが挙げられる。適した薬学的に許容される賦形剤は、好ましくは、一般的に安全であると認識され（ＧＲＡＳ）、望ましくない生物学的副作用または望ましくない相互作用を引き起こすことなく個体に投与され得る材料から選択される。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Lippincott Williams& Wilkins, Baltimore, MD, 2000, p. 704を参照されたい。

【0208】

組成物は、好ましくは、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために単位投与剤形に製剤化される。「単位投与剤形」という語句は、処置される患者にとって適切なコンジュゲートの物理的に個別の単位を指す。しかし、組成物の総１回投与量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されると理解される。治療有効量は、最初に細胞培養アッセイまたは動物モデル、通常マウス、ウサギ、イヌ、またはブタのいずれかにおいて推定することができる。動物モデルはまた、所望の濃度範囲および投与経路を達成するためにも使用される。次にそのような情報は、ヒトでの投与のための有用な用量および経路を決定するために有用でなければならない。コンジュゲートの治療有効性および毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順、例えばＥＤ５０（用量は、集団の５０％において治療的に有効である）およびＬＤ５０（用量は、集団の５０％において致死的である）によって決定することができる。毒性効果の治療効果に対する用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表記することができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを、ヒトで使用するための投薬量範囲を製剤化するために使用することができる。

【0209】

非経口投与（筋肉内、腹腔内、静脈内、または皮下注射）による投与および腸内投与経路のために製剤化される医薬組成物を記載する。
Ａ．非経口投与

【0210】

「非経口投与」および「非経口に投与された」という語句は、当技術分野で認識された用語であり、腸および局所適用投与以外の投与形式、例えば注射を含み、静脈内、筋肉内、胸膜内、血管内、心膜内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内（intradennal）、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、間接内、被膜下、くも膜下、脊椎内、および胸骨内注射および注入を含むがこれらに限定されない。デンドリマーは、例えば硬膜下、静脈内、髄腔内、心室内、動脈内、羊水内、腹腔内、または皮下経路によって非経口投与することができる。好ましい実施形態では、デンドリマー組成物は、皮下注射によって投与される。

【0211】

液体製剤の場合、薬学的に許容される担体は、例えば水溶液または非水溶液、懸濁液、乳剤、または油であり得る。非経口媒体（例えば、皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内注射）は、例えば塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル、および固定油を含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は、例えば食塩水および緩衝培地を含む、水、アルコール／水溶液、シクロデキストリン、乳剤、または懸濁剤を含む。デンドリマーはまた、乳剤、例えば油中水型乳剤中で投与することもできる。油の例は、石油、動物、植物、または合成起源の油、ワセリン、および鉱物油である。非経口製剤において使用するための適した脂肪酸は、例えばオレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸を含む。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、適した脂肪酸エステルの例である。

【0212】

非経口投与にとって適した製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質、ならびに懸濁剤、溶解剤、濃化剤、安定化剤、および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁液を含み得る。静脈内媒体は、流体および栄養補充剤、電解質補充剤、例えばリンゲルデキストロースに基づく補充剤を含むことができる。一般的に、水、食塩水、水性デキストロース、および関連する糖溶液、およびグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、特に注射用溶液のために好ましい液体担体である。

【0213】

注射用組成物のための注射可能な薬学的担体は、当業者に周知である（例えば、Pharmaceuticsand Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker andChalmers, eds., pages 238-250 (1982), and ASHP Handbook on Injectable Drugs,Trissel, 15th ed., pages 622-630 (2009)を参照されたい）。
Ｂ．腸投与

【0214】

組成物は、腸に投与することができる。担体または希釈剤は、カプセルまたは錠剤などの固形担体または固体製剤のための希釈剤、液体製剤のための液体担体もしくは希釈剤、またはそれらの組合せであり得る。

【0215】

液体製剤の場合、薬学的に許容される担体は、例えば水溶液または非水溶液、懸濁液、乳剤、または油であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は、例えば食塩水および緩衝培地を含む水、アルコール／水溶液、シクロデキストリン、乳剤または懸濁剤を含む。

【0216】

油の例は、石油、動物、植物、または合成起源の油、例えば落花生油、ダイズ油、鉱物油、オリーブ油、ヒマワリ油、肝油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ、ワセリン、および鉱物油である。非経口製剤での使用のために適した脂肪酸は、例えばオレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸を含む。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、適した脂肪酸エステルの例である。

【0217】

媒体は、例えば塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル、および固定油を含む。製剤は、例えば抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性および非水性の等張滅菌注射溶液、ならびに懸濁剤、溶解剤、濃化剤、安定化剤、および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁液を含む。媒体は、例えば流体および栄養補充剤、電解質補充剤、例えばリンゲルデキストロースに基づく補充剤を含み得る。一般的に、水、食塩水、デキストロース水溶液および関連する糖溶液が好ましい液体担体である。これらはまた、タンパク質、脂肪、糖類、および小児用処方の他の成分と共に製剤化することもできる。

【0218】

好ましい実施形態では、組成物は、経口投与のために製剤化される。経口製剤は、チューインガム、ゲルストリップ、錠剤、カプセル剤、またはトローチ剤の形態であってもよい。腸溶コーティングされた経口製剤の調製のためのカプセル化物質は、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタル酸エステル、およびメタクリル酸エステルコポリマーを含む。固体経口製剤、例えばカプセル剤または錠剤が好ましい。エリキシル剤およびシロップ剤もまた、周知の経口製剤である。
ＩＶ．作製方法
Ａ．デンドリマーを作製する方法

【0219】

デンドリマーは、多様な化学反応ステップを介して調製することができる。デンドリマーは通常、構築のあらゆる段階でその構造を制御することを可能にする方法に従って合成される。デンドリマー構造はほとんどが、２つの主な異なるアプローチ；ダイバージェントまたはコンバージェントアプローチで合成される。

【0220】

一部の実施形態では、デンドリマーは、異なる方法を使用して調製され、この場合デンドリマーは多機能コアからアセンブルされ、一連の反応、一般的にマイケル反応によって外方向に伸長する。戦略は、反応基および保護基を保有する単量体分子と多機能コア部分とのカップリングを伴い、これによってコアの周囲に世代が段階的に付加され、その後保護基が除去される。例えば、ＰＡＭＡＭ－ＮＨ_２デンドリマーは最初に、Ｎ－（２－アミノエチル）アクリルアミド単量体をアンモニアコアにカップリングすることによって合成される。

【0221】

他の実施形態では、デンドリマーは、コンバージェント法を使用して調製され、この場合デンドリマーは、球体の表面で終わる低分子から構築され、反応は内向きに構築するように進行し、最終的にコアに達する。

【0222】

デンドリマーを調製するために、他の多くの合成経路、例えば直交アプローチ、加速アプローチ、ダブルステージコンバージェント法、またはハイパーコアアプローチ、ハイパーモノマー法、または分岐モノマーアプローチ、二重指数法；直交カップリング法、または２ステップアプローチ、２モノマーアプローチ、ＡＢ_２－ＣＤ_２アプローチが存在する。

【0223】

一部の実施形態では、デンドリマーのコア、１つまたは複数の分岐単位、１つまたは複数のリンカー／スペーサー、および／または１つまたは複数の表面基は、１つまたは複数の銅支援アジド－アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）、ディールス－アルダー反応、チオール－エンおよびチオール－イン反応、ならびにアジド－アルキン反応を使用するクリックケミストリーを介して、さらなる官能基（分岐単位、リンカー／スペーサー、表面基等）、モノマー、および／または活性剤とのコンジュゲーションを可能にするように修飾することができる（Arseneault M et al., Molecules. 2015 May 20;20(5):9263-94）。一部の実施形態では、事前に作製したデンドロンを、高密度ヒドロキシポリマー上でクリック反応させる。「クリックケミストリー」は、例えば２つの異なる部分（例えば、コア基と分岐単位；または分岐単位と表面基）を、第１の部分の表面上のアルキン部分（またはその等価物）と、第２の部分上のアジド部分（例えば、トリアジン組成物またはその等価物上に存在する）、または任意の活性末端基、例えば、一級アミン末端基、ヒドロキシル末端基、カルボン酸末端基、チオール末端基等）との間の１，３－双極子環化付加反応を介してカップリングすることを伴う。

【0224】

一部の実施形態では、デンドリマー合成は、１つまたは複数の反応、例えばチオール－エンクリック反応、チオール－インクリック反応、ＣｕＡＡＣ、ディールス－アルダークリック反応、アジド－アルキンクリック反応、マイケル付加、エポキシ開環、エステル化、シランケミストリー、およびそれらの組合せに依存する。

【0225】

任意の既存の樹状プラットフォームを使用して、高ヒドロキシル含有部分、例えば１－チオ－グリセロール、またはペンタエリスリトールをコンジュゲートすることによって、所望の官能性、すなわち、高密度表面ヒドロキシル基を有するデンドリマーを作製することができる。例示的な樹状プラットフォーム、例えばポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、ポリ（プロピレンイミン）（ＰＰＩ）、ポリ－Ｌ－リシン、メラミン、ポリ（エーテルヒドロキシルアミン）（ＰＥＨＡＭ）、ポリ（エステルアミン）（ＰＥＡ）およびポリグリセロールを合成および探索することができる。

【0226】

デンドリマーはまた、２つまたはそれより多くのデンドロンを組み合わせることによっても調製することができる。デンドロンは、反応性の中心部官能基を有するデンドリマーのくさび形セグメントである。多くのデンドロン足場構造が市販されている。それらは、第１世代、第２世代、第３世代、第４世代、第５世代、および第６世代であり、それぞれ２、４、８、１６、３２、および６４個の反応基を有する。ある特定の実施形態では、活性剤の１つの型は、デンドロンの１つの型に連結され、活性剤の異なる型は、デンドロンの別の型に連結される。次に、２つのデンドロンを接続してデンドリマーを形成する。２つのデンドロンは、クリックケミストリー、すなわち１つのデンドロン上のアジド部分と、別のデンドロン上のアルキン部分との間の１，３－双極子環化付加反応を介して連結し、トリアゾールリンカーを形成することができる。

【0227】

デンドリマーを作製する例示的な方法は、ＷＯ２００９／０４６４４６号、ＷＯ２０１５１６８３４７号、ＷＯ２０１６０２５７４５号、ＷＯ２０１６０２５７４１号、ＷＯ２０１９０９４９５２号、および米国特許第８，８８９，１０１号に詳細に記載されている。
Ｂ．三分岐Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）とデンドリマーとのコンジュゲーション

【0228】

一部の実施形態では、β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドは、図１に示されるように調製される。一部の実施形態では、β－ＧａｌＮＡｃ－アジドの３つの分子が必要に応じてＰＥＧなどのリンカーによって、プロパルギル化ペンタエリスリトールビルディングブロック上にグラフトされてＡＢ_３型直交性ビルディングブロックを生じる、三分岐ビルディングブロックが調製される。他の実施形態では、ＡＢ_４モノマー、例えばペンタエリスリトールまたはその誘導体を、β－ＧａｌＮＡｃの３つの分子をコンジュゲートするためのコアとして使用する。一部の実施形態では、合成は、β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃペントアセテート（例えば、図１の化合物１）と２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エタン－１－オール（図ｌの化合物２）とのグリコシル化反応から始まり、ＰＥＧスペーサー／リンカーによって過アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－アジドを生じる（例えば、図１の化合物３）。一部の実施形態では、ペンタエリスリトール（化合物４）は、３つのプロパルギルアームによって選択的に修飾されてトリプロパルギルペンタエリスリトール（例えば、図１の化合物５）を生じる。一部の実施形態では、トリプロパルギルペンタエリスリトール上の残りの１つのヒドロキシル基は、ビス－クロロテトラエチレングリコール（化合物７）と反応して中間化合物、ＡＢ_３ビルディングブロック（例えば、図１の化合物８）を生じる。一部の実施形態では、過アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ３－アジドは、従来のＣｕＡＡＣクリック反応条件を使用して、ＡＢ_３ビルディングブロック（例えば、化合物８）とクリック反応して化合物９を生じる。一部の実施形態では、クリック反応の成功を、^１Ｈ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣによって確認する。一部の実施形態では、化合物９の末端塩化物基は、求核置換によってアジドに交換されて化合物１０を生じる。一部の実施形態では、最後のステップはトランスエステル化であり、脱アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３アジド（化合物１１）ビルディングブロック、ＧａｌＮＡｃデンドロンを生じる。

【0229】

一部の実施形態では、β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドは、図２に示すようにデンドリマーにコンジュゲートされている。一部の実施形態では、第４世代または第６世代ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーは、５－ヘキシン酸による部分的エステル化を受けて、２つまたはそれより多くのヘキシンアーム、好ましくは５～２０、または１０～１５、または１２～１４個のヘキシンアームがデンドリマーに結合した化合物を生じる。一部の実施形態では、１つまたは複数のβ－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドは、銅触媒クリック（ＣｕＡＡｃ）反応を使用して、ヘキシンアームがそれに結合しているデンドリマーにコンジュゲートされ、β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐修飾デンドリマーを生じる。好ましい実施形態では、デンドリマーにコンジュゲートされている１つまたは複数のヘキシンアームは、ＧａｌＮＡｃデンドロンまたはβ－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドとのコンジュゲーションのためであり、デンドリマーにコンジュゲートされている１つまたは複数のヘキシンアームは、薬物または造影剤とのコンジュゲーションのためである。一実施形態では、５～６個のヘキシンアームは、ＧａｌＮＡｃデンドロンまたはβ－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドとのコンジュゲーションのためであり、５～７個のヘキシンアームは、薬物および／または造影剤とのコンジュゲーションのためである。デンドロンの５～６個のアームの導入は、最終構造において１５～１８個のＧａｌＮＡｃ単位をもたらす。
Ｖ．使用方法

【0230】

活性剤を肝細胞に選択的に送達する方法を提供する。三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマー組成物が、肝細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合することが確立されている。ＡＳＧＰＲ受容体に対する効率的な結合は、受容体媒介エンドサイトーシスを介して肝細胞内のデンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃの選択的内部移行を方向付ける。肝細胞内のエンドソームにおける低いｐＨによって、三分岐β－ＧａｌＮＡｃリガンドとＡＳＧＰＲ受容体との間の相互作用が破壊され、リガンドの肝細胞への放出を引き起こす。１つまたは複数の活性剤の肝細胞への選択的送達、蓄積、および細胞内放出のために三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマー組成物を使用する方法を記載する。
Ａ．肝障害および疾患を処置する方法

【0231】

対象における１つまたは複数の肝疾患または障害を処置または予防するために、デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾組成物を使用する方法を記載する。

【0232】

肝疾患または障害を処置または予防するために１つまたは複数の活性剤を含むデンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ組成物を、対象における１つまたは複数の肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を処置する、防止する、および／または診断するために対象に投与することができる。方法は、必要な対象を同定および／または選択するステップを含み得る。

【0233】

１つまたは複数の肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を処置または予防する方法は、１つまたは複数の治療剤または予防剤と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されているデンドリマーを、１つまたは複数の肝障害または疾患の１つまたは複数の症状を処置する、緩和する、または予防するために有効な量で、対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、１つまたは複数の抗酸化剤および／もしくはアンジオテンシンＩＩ Ｉ型受容体遮断剤を含むデンドリマー組成物、またはその製剤を、１つまたは複数の肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を処置するまたは防止するために、例えば肝臓における小葉炎症を低減するために有効な量で投与する。

【0234】

一実施形態では、１つまたは複数の肝障害および／または疾患を処置または予防する方法は、１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ Ｉ型受容体遮断剤に共有結合によりコンジュゲートされている第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代の三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーを含む組成物を、１つまたは複数の肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を処置または予防するために有効な量で対象に投与することを含む。
１．処置される肝障害および疾患

【0235】

一部の実施形態では、１つまたは複数の肝障害および／または疾患を処置する、防止する、および／または診断するために、１つまたは複数の活性剤と複合体を形成している、またはそれにコンジュゲートされている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーを、対象における１つまたは複数の肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を処置する、防止する、および／または診断するために対象に投与する。

【0236】

デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、肝疾患または障害、例えば急性または慢性肝疾患の１つまたは複数の症状を処置または改善するために有効である。処置することができる例示的な適応としては、例えば新生物浸潤に起因する急性肝不全（急性肝炎、劇症肝炎）、急性バッドキアリ症候群、熱中症、マッシュルームの摂取、代謝疾患、例えばウィルソン病、または例えば単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、パルボウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ａ型肝炎、Ｅ型肝炎、Ｄ＋Ｂ型肝炎ウイルス感染症）によって引き起こされるウイルス性肝疾患に関連する疾患、またはリファンピシン誘発性肝毒性、アセトアミノフェン誘発性肝毒性、脱法薬誘発性毒性、例えば３，４－メチレンジオキシ－Ｎ－メチルアンフェタミン（ＭＤＭＡ、エクスタシーとしても公知である）、もしくはコカイン誘発性毒性を含む薬物誘発性肝傷害、急性虚血性肝細胞傷害、または低酸素性肝炎、または外傷性肝傷害に起因する疾患が挙げられるがこれらに限定されない。方法は、以前は正常な肝臓を有する個体における脳症、凝固障害、および黄疸の発生によって定義される任意の超急性、急性、亜急性肝疾患を処置および防止することができる。

【0237】

急性肝疾患の症状および臨床発現は、黄疸および脳症、ならびに肝機能障害（例えば代謝機能の喪失、低血糖症をもたらす糖新生の減少、乳酸アシドーシスをもたらす乳酸クリアランスの減少、高アンモニア血症をもたらすアンモニアクリアランスの減少、および凝固障害をもたらす合成能の低減）を含む。急性肝疾患および障害はしばしば、敗血症の高リスクに寄与する免疫不全麻痺；高エネルギー消費または異化速度を伴う全身性炎症応答；門脈圧亢進；腎機能障害；心筋傷害；膵炎（特に、アセトアミノフェン関連疾患）；血圧低下に寄与する副腎における不適切なグルココルチコイド産生；および急性呼吸窮迫症候群をもたらす急性肺傷害を含む複数の全身症状に関連している。

【0238】

記載される方法は全て、処置を必要とする対象、または組成物による投与から利益を得る対象を同定および選択するステップも含み得る。一部の実施形態では、対象は、疾患の臨床（例えば、身体）症状を示すことによって、急性肝疾患または障害を有すると医学的に診断されている。他の実施形態では、対象は、急性肝疾患を発症するリスクまたは可能性の増加を示す臨床（または、身体）症状を示すことによって、亜急性肝疾患または慢性肝疾患を有すると医学的に診断されている。したがって、一部の実施形態では、本開示のデンドリマー組成物の製剤は、急性肝疾患の臨床診断の前に対象に投与される。

【0239】

好ましい実施形態では、方法は、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎に関連する肝線維症、原発性胆汁性胆管炎を処置または予防する。
ｉ．非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）

【0240】

一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）に関連する１つまたは複数の症状を処置または緩和する。ＮＡＦＬＤは、肝細胞における脂肪の過剰な蓄積（脂肪症）として主に現れる疾患の臨床－病理的スペクトルを表す。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪症から、生命を脅かす肝硬変および最も重症型の肝細胞癌をもたらし得る非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に及ぶ疾患の全スペクトルを包含する。これは代謝症候群の肝臓での発現であると考えられており、その他の病態は肥満、インスリン抵抗性、高血圧症、および高脂血症を含む。組織学的には、ＮＡＳＨは、肝脂肪症および肝細胞の風船様腫大を有する小葉内炎症の兆候によって特徴付けられる。推定されるＮＡＳＨの有病率は、ＮＡＦＬＤよりはるかに低く、３～５％の範囲である。ＮＡＳＨ患者の２０％は、肝硬変を発症することが報告されており、ＮＡＳＨ硬変を有する患者の３０～４０％は、肝関連死を経験する。

【0241】

一部の実施形態では、デンドリマー組成物は、ＮＡＦＬＤのＮＡＳＨへの変換を防止するため、および疾患の病理生理学を改善するために有効な量で投与される。

【0242】

ＮＡＦＬＤは、広く２つの表現型：孤発性の脂肪症を特徴とする非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）と、より劇症性の亜型である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に分類され、ＮＡＳＨは、細胞傷害、炎症細胞の浸潤、および線維症とさらに進行し得る肝細胞の風船様腫大、硬変、および肝細胞癌（ＨＣＣ）によって特徴付けられる。一部の実施形態では、デンドリマー組成物は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の１つまたは複数の症状を処置または改善するために有効な量で使用される。

【0243】

ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨの１つまたは複数の症状を処置および／または防止するための方法は典型的に、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨに関連する１つまたは複数の症状を処置および／または緩和するために、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーおよび１つまたは複数の作用剤を含む組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。一実施形態では、デンドリマー組成物は、１つまたは複数のアンジオテンシンＩＩ Ｉ型受容体遮断剤に共有結合によりコンジュゲートされている第４世代、第５世代、または第６世代の三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーを含む。

【0244】

一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）、および総コレステロール（ＴＣ）の血清レベル、脂肪蓄積または脂肪症、炎症、風船様腫大、線維症、長期罹患率および死亡率を阻害または低減するために有効な量で投与される。
ｉｉ．肝臓がん

【0245】

一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫調節剤、１つまたは複数の化学療法剤、および／または追加の治療剤もしくは診断剤にコンジュゲートされている、またはそれと複合体を形成しているデンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃの組成物は、増殖性疾患、例えば良性または悪性腫瘍を有する対象に投与される。一部の実施形態では、処置される対象は、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶのがんであると診断されている。がんという用語は、具体的に悪性腫瘍を指す。制御されない成長に加えて、悪性腫瘍は転移を示す。このプロセスでは、がん様細胞の小さい集団が腫瘍から外れ、血管またはリンパ管に浸潤し、他の組織へと運ばれ、そこでそれらは増殖し続ける。このようにして、１つの部位の原発腫瘍は、別の部位で二次腫瘍を生じることができる。

【0246】

一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、肝臓がんに関連する１つまたは複数の症状を処置または緩和する。一部の実施形態では、対象は、肝臓がんを有すると医学的に診断されている。

【0247】

一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、肝細胞癌（ＨＣＣ）に関連する１つまたは複数の症状を処置または緩和する。ＨＣＣの発症は、環境的要因と遺伝的要因の間の相互作用に起因する。肝硬変、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症、過剰なアルコール摂取、アフラトキシンＢ１の摂取、ならびに非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、ＨＣＣ発症の重要な危険因子である。

【0248】

肝臓がんの１つまたは複数の症状を処置および／または防止する方法は典型的に、肝臓がんまたはＨＣＣに関連する１つまたは複数の症状を処置および／または緩和するために、三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーおよび１つまたは複数の作用剤を含む組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。一実施形態では、第４世代、第５世代、または第６世代の三分岐β－ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーを含むデンドリマー組成物は、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、グルタミナーゼ阻害剤、ＴＩＥ ＩＩアンタゴニスト、ＣＸＣＲ２阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、アルギナーゼ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＳＨＰ２阻害剤、またはそれらの組合せの１つまたは複数と複合体を形成している、それに共有結合によりコンジュゲートされている、またはそれらが分子間に分散しているもしくはカプセル化されている。

【0249】

一部の実施形態では、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ組成物は、がん細胞の数および／または増殖を低減するため、腫瘍サイズを低減するため、がん細胞の末梢臓器への浸潤を阻害するため、腫瘍の転移を阻害するため、腫瘍の成長を阻害するため、長期間の生存率を増加させるため、免疫チェックポイント遮断に対する応答を改善するため、および／または腫瘍の再チャレンジに対して保護する免疫学的記憶を誘導するために有効な量で投与される。
２．投薬量および有効量

【0250】

投薬量および投与レジメンは、障害もしくは傷害の重症度および場所、ならびに／または投与方法に依存し、当業者が決定することができる。肝障害および／または疾患の処置に使用されるデンドリマー組成物の治療有効量は典型的に、肝障害および／または疾患の１つまたは複数の症状を低減または緩和するために十分である。

【0251】

好ましくは、活性剤は、疾患／損傷を有する組織内に存在しないもしくはそれに関連しない健康な細胞を標的化せず、またはそれ以外の方法でそれら細胞の活性もしくは量をモジュレートしない、または疾患／傷害を有する肝臓に関連する細胞と比較して、低減されたレベルで標的化し、もしくはモジュレートする。このようにして、組成物に関連する副産物および他の副作用が低減される。

【0252】

デンドリマー組成物の治療有効量および薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む医薬組成物が記載される。一部の実施形態では、医薬組成物は、テルミサルタンにコンジュゲートされている三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーの有効量を含む。一部の実施形態では、使用するために適した投薬量範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇを含むその間；約０．５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇを含むその間；約１．０ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇを含むその間；および約２．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇを含むその間の範囲である。

【0253】

デンドリマー組成物を含む医薬組成物の投薬剤形も同様に提供される。「投薬剤形」は、患者に投与されることが意図される、カプセルまたはバイアルなどの、治療化合物の用量の物理的な形態を指す。「投薬単位」という用語は、単一用量で患者に投与される治療化合物の量を指す。一部の実施形態では、使用するために適した投薬単位は、（成人患者の平均体重が７０ｋｇであると仮定して）、５ｍｇ／投薬量単位～約７０００ｍｇ／投薬量単位を含むその間；約３５ｍｇ／投薬量単位～約２８００ｍｇ／投薬量単位を含むその間；および約７０ｍｇ／投薬量単位～約１４００ｍｇ／投薬量単位を含むその間；および約１４０ｍｇ／投薬量単位～約７００ｍｇ／投薬量単位を含むその間である。

【0254】

デンドリマー複合体の実際の有効量は、投与される特定の活性剤、製剤化される特定の組成物、投与様式、および処置される対象の年齢、体重、状態、ならびに投与経路および疾患または障害を含む要因に従って異なり得る。対象は、好ましくはヒトである。一般的に投薬量は、経口投与などの他の全身性の投与経路と比較して静脈内注射または注入ではより低く、処置される領域に基づく局所適用、局所、または限局的投与と比較して患者あたりの体重に基づく。

【0255】

一般的に、投与のタイミングおよび回数は、所定の処置の有効性または診断スケジュールと所定の送達系の副作用とのバランスをとるように調整される。例示的な投薬回数としては、連続注入、１回および複数回投与、例えば毎時間、毎日、毎週、毎月、または毎年の投与が挙げられる。

【0256】

一部の実施形態では、投薬量は、１日１回、２回、または３回、またはそれより低い頻度、すなわち１日毎、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、または６日毎にヒトに投与される。一部の実施形態では、投薬量は、週に約１回または２回、２週間毎、３週間毎、または４週間毎に投与される。一部の実施形態では、投薬量は、１ヶ月に約１回または２回、２ヶ月毎、３ヶ月毎、４ヶ月毎、５ヶ月毎、６ヶ月毎、またはそれより低い頻度で投与される。

【0257】

投薬レジメンは、対象における障害を処置するために十分な任意の期間であり得ることは当業者によって理解される。一部の実施形態では、レジメンは、１ラウンドの治療の後に休薬期間（例えば、薬物なし）を設ける１つまたは複数のサイクルを含む。休薬期間は、１、２、３、４、５、６、もしくは７日間；または１、２、３、４週間、または１、２、３、４、５、もしくは６ヶ月間であり得る。
３．対照

【0258】

１つまたは複数の作用剤を含むデンドリマー組成物の効果を、対照または代替処置と比較することができる。適した対照は、当技術分野で公知であり、例えば無処置対象またはプラセボ処置対象を含む。典型的な対照は、標的化された作用剤の投与前および投与後の対象の状態または症状の比較である。状態または症状は、生化学、分子、生理学、または病理学的読み出しであり得る。例えば、特定の症状、薬理学的、または生理学的指標に及ぼす組成物の効果を、無処置対象、または処置前の対象の状態と比較することができる。一部の実施形態では、症状、薬理学的、または生理学的指標を、対象において処置前、および処置を開始した後に再度１回または複数回測定する。一部の実施形態では、対照は、処置される疾患または状態を有さない１人または複数の対象（例えば、健康な対象）における症状、薬理学的、または生理的指標の測定に基づいて決定された参照レベルまたは平均値である。一部の実施形態では、処置の効果を、当技術分野で公知である従来の処置と比較する。一部の実施形態では、無処置対照の対象は、処置される対象と同じ急性肝疾患または症状に罹患している。
Ｂ．組合せ治療および手順

【0259】

組成物は、単独で、または１つもしくは複数の従来の治療と組み合わせて投与することができる。一部の実施形態では、従来の治療は、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせた組成物の１つまたは複数の投与を含む。組合せ治療は、同じ混合物中で、または個別の混合物中で活性剤を共に投与することを含む。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、２つ、３つ、またはそれより多くの活性剤を含む。そのような製剤は典型的に、処置部位を標的化する作用剤の有効量を含む。追加の活性剤（複数可）は、同じまたは異なる作用機序を有することができる。一部の実施形態では、組合せは、肝状態の処置に対して追加の効果をもたらす。一部の実施形態では、組合せは、疾患または障害の処置に対して追加の効果より多くの効果をもたらす。

【0260】

追加の療法または手順は、デンドリマー組成物の投与と同時または連続的であり得る。一部の実施形態では、追加の治療は、薬物サイクルの間、または組成物投薬レジメンの一部である休薬期間の間に行われる。例えば、一部の実施形態では、追加の療法または手順は、手術、放射線治療、化学療法、肝移植、幹細胞移植、または間葉幹細胞（ＭＳＣ）である。

【0261】

例示的な追加の療法または手順は、飽和脂肪、過剰な糖含有食、ソフトドリンク、ファストフード、および精製糖質を避けることなどのライフスタイルの変更を含み、また適度の運動も行うように奨励する。糖尿病患者は、ライフスタイルの変更によって処置することができ、必要に応じて、経口スルホニルウレア－グリクラジド、グリメペリド、および／またはインスリンによって処置することができる。脂質異常症は、スタチンによって管理することができ、高血圧症の場合は、降圧剤によって管理することができる。

【0262】

一部の実施形態では、組成物および方法は、１つまたは複数の追加の療法または手順による処置の前に、処置と共に、処置の後に、または処置と交互に使用される。追加の治療剤は、従来のがんの治療、例えば化学療法剤、サイトカイン、ケモカイン、および放射線治療を含む。化学療法薬物の大部分は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤に分類することができる。これらの薬物は、細胞分裂またはＤＮＡ合成および機能に何らかの影響を及ぼす。追加の治療剤としては、モノクローナル抗体およびチロシンキナーゼ阻害剤、例えばある特定の型のがん（慢性骨髄性白血病、消化管間質腫瘍）における分子異常を直接標的化するイマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）またはＧＬＩＶＥＣ（登録商標））が挙げられる。

【0263】

代表的な化学療法剤としては、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、リポソームドキソルビシン、リポソームダウノルビシン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テニポシド、テガフール－ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、タキソール、トリコスタチンＡ、およびその誘導体、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ、およびリツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）またはＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、およびそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。代表的なアポトーシス促進剤としては、フルダラビン、スタウロスポリン、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ－ＰＧＪ（２）５、およびそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。

【0264】

一部の実施形態では、組成物および方法は、免疫療法の前にまたは免疫療法と共に、１つまたは複数の免疫チェックポイント調節剤（例えば、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－１リガンドアンタゴニスト、およびＣＴＬＡ４アンタゴニスト）、養子Ｔ細胞治療、および／またはがんワクチンを使用して、チェックポイントタンパク質、例えばＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸またはＣＤ２８－ＣＴＬＡ－４軸の成分を阻害するために使用される。免疫療法において使用される例示的な免疫チェックポイント調節剤としては、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、デュルバルマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、ＰＤＲ００１（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、ニボルマブ（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ４ ｍＡｂ）、アベルマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、およびＲＧ７８７６（ＣＤ４０アゴニスト ｍＡｂ）が挙げられる。

【0265】

養子Ｔ細胞治療の方法は、当技術分野で公知であり、臨床の実践において使用されている。一般的に養子Ｔ細胞治療は、ワクチン接種単独で得られる数より多数のＴ細胞を達成するために腫瘍特異的Ｔ細胞の単離およびｅｘ ｖｉｖｏでの増大を伴う。次に、がんを攻撃して殺滅することができるＴ細胞を介して残存腫瘍を克服する能力を免疫系に与える試みで、腫瘍特異的Ｔ細胞を、がんを有する患者に注入する。腫瘍浸潤性リンパ球またはＴＩＬを培養すること；１つの特定のＴ細胞またはクローンを単離および増大すること；ならびに腫瘍を認識して攻撃するように操作されているＴ細胞を使用することを含むがこれらに限定されない、いくつかの形態の養子Ｔ細胞治療を、がんの処置のために使用することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、患者の血液から直接採取される。適応性（adaptive）Ｔ細胞治療のためにＴ細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏでプライミングおよび活性化する方法は、当技術分野で公知である。例えば、Wang, et al, Blood, 109(11):4865-4872 (2007) and Hervas-Stubbs, etal, J. Immunol.,189(7):3299-310 (2012)を参照されたい。

【0266】

組織学的に、養子Ｔ細胞治療戦略は、腫瘍細胞を直接殺滅することができる腫瘍抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の注入に大きく重点を置いている。しかし、ＣＤ４＋ ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞、例えばＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｆｈ、Ｔｒｅｇ、およびＴｈ１７もまた使用することができる。Ｔｈは、抗原特異的エフェクター細胞を活性化することができ、自然免疫系の細胞、例えばマクロファージおよび樹状細胞を動員して抗原提示（ＡＰＣ）を助けることができ、抗原によってプライミングされたＴｈ細胞は、抗原特異的ＣＴＬを直接活性化することができる。ＡＰＣの活性化の結果として、抗原特異的Ｔｈ_１は、腫瘍における他の抗原に対する免疫の拡大であるエピトープまたは決定因子拡大の開始剤として関係している。エピトープ拡大を誘発する能力は、腫瘍における多くの潜在的抗原に対する免疫応答を拡大し、異種応答を開始する能力によってより効率的な腫瘍細胞の殺滅をもたらすことができる。このようにして、養子Ｔ細胞治療を使用して内因性の免疫を刺激することができる。

【0267】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ、ＣＡＲ Ｔ細胞、またはＣＡＲＴ）を発現する。人工Ｔ細胞受容体は、特定の特異性を免疫エフェクター細胞にグラフトする操作された受容体である。典型的に、これらの受容体は、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞にグラフトするために使用され、実質的にいかなる腫瘍関連抗原も標的化するように操作することができる。第１世代ＣＡＲは典型的に、ＣＤ３ζ鎖からの細胞内ドメインを有し、これは内因性ＴＣＲからのシグナルの一次伝達物質である。第２世代ＣＡＲは、様々な共刺激タンパク質受容体（例えば、ＣＤ２８、４１ＢＢ、ＩＣＯＳ）からの細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質テールに付加して、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供し、第３世代ＣＡＲは、複数のシグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－４１ＢＢ、またはＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－ＯＸ４０を組み合わせて、有効性をさらに増強する。

【0268】

一部の実施形態では、組成物および方法は、がんワクチン、例えば樹状細胞がんワクチンの前に、またはそれと共に使用される。ワクチン接種は典型的に、抗原（例えば、がん抗原）をアジュバンと共に対象に投与して、ｉｎ ｖｉｖｏで治療的Ｔ細胞を誘発することを含む。一部の実施形態では、がんワクチンは、樹状細胞によって送達される抗原がｅｘ ｖｉｖｏでプライミングされてがん抗原を提示する樹状細胞がんワクチンである。例としては、前立腺がんを処置するための樹状細胞に基づくワクチンであるＰＲＯＶＥＮＧＥ（登録商標）（シプリューセル－Ｔ）（Ledford, et al., Nature, 519, 17-18 (05 March 2015）が挙げられる。そのようなワクチンならびに免疫療法のための他の組成物および方法は、Palucka,et al., Nature Reviews Cancer, 12, 265-277 (April 2012)において論評されている。

【0269】

一部の実施形態では、組成物および方法は、例えば原発腫瘍の転移を防止するために、腫瘍の外科的切除の前または切除と共に使用される。一部の実施形態では、組成物および方法は、体自身の抗腫瘍免疫機能を増強するために使用される。

【0270】

これらの三分岐ＧａｌＮＡｃ修飾デンドリマーのｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験を、非アルコール性脂肪性肝炎のマウスモデル、例えば非アルコール性脂肪性肝炎のＳＴＡＭＴＭモデル（マウス）において評価することができる。
方法

【0271】

病原体フリーの妊娠１４日目のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ，Ｉｎｃ．（Ｊａｐａｎ）から得ることができる。
ＮＡＳＨは、雄性マウスにおいてストレプトゾトシン（ＳＴＺ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）２００μｇを生後２日目に１回皮下注射し、４週齢以降（２８日目±２日）、高脂肪食（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ）を自由に与えることによって確立することができる。

【0272】

ＮＡＳＨマウスを、６週齢（４２日目±２日）で処置開始の前日に、その体重に基づいてマウス８匹の８群およびマウス４匹の２群に無作為化することができる。ＳＴＺプライミングを行わなかった同腹子の対照マウス（ｎ＝８）に、通常食を自由に与え、対照目的として設定することができる。
動物が、１週間以内に＞２５％の体重減少を示す場合、または前日と比較して＞２０％の体重減少を示す場合、動物を試験終了前に安楽死させる。動物が腹臥位などの瀕死の兆候を示す場合、動物を試験終了前に安楽死させる。安楽死させた動物からは試料を採取しない。

【0273】

処置期間の間に、個々の体重を毎日測定する。

【0274】

マウスの生存、臨床徴候、および行動を毎日モニターする。

【0275】

群
群１（正常）：正常なマウス８匹に、いかなる処置も行わずに通常食を自由に与え、９週齢で屠殺する。
群２（媒体）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、媒体［食塩水］を１０ｍＬ／ｋｇの体積で１日おきに腹腔内投与する。
群３（テルミサルタン）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、テルミサルタンの１０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した純水を１日１回経口投与する。
群４（オベチコール酸、または「ＯＣＡ」）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、ＯＣＡの３０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した１％メチルセルロースを１日１回経口投与する。
群５（デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンアミドコンジュゲート、または「Ｄ－Ｔｅｌ」高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－Ｔｅｌの９０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与する。
群６（Ｄ－Ｔｅｌ 低）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－Ｔｅｌの１８ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与する。
群７（デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンエステルコンジュゲートまたは「Ｄ－ＴｅｌＢ」高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＴｅｌＢの９０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与する。
群８（Ｄ－ＯＣＡ 高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＯＣＡの３１５ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与する。
群９（Ｄ－ＯＣＡ 低）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＯＣＡの６３ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与する。
群１０（Ｄ－Ｃｙ５－６ ｗｋｓ）：ＮＡＳＨマウス４匹に、６週齢時に、Ｄ－Ｃｙ５の５０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を単回腹腔内投与する。
群１１（Ｄ－Ｃｙ５－９ ｗｋｓ）：ＮＡＳＨマウス４匹に、９週齢時に、Ｄ－Ｃｙ５の５０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を単回腹腔内投与する。

【0276】

群１０および１１のマウスを、６および９週齢で投与の４８時間後に屠殺する。群１～９のマウスは、後のアッセイのために９週齢で屠殺し、群１０および１１のマウスは、後のアッセイのために６および９週齢で屠殺する。
臓器重量の測定：
・ 個々の肝重量を測定し、
・ 肝重量の体重に対する比を計算する。
生化学アッセイ（群１～９）：
・ 非絶食時血清ＡＬＴレベルは、ＦＵＪＩ ＤＲＩ ＣＨＥＭ （Ｆｕｊｉｆｉｌｍ，Ｊａｐａｎ）が定量する、
・ 肝トリグリセリドは、トリグリセリドＥ試験キット（ＦＵＪＩＦＵＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）によって定量する、
肝切片（ルーチンの方法に従う）の組織学分析（群１～９）：
・ ＮＡＦＬＤ活動性スコアのＨＥ染色および推定、
・ シリウスレッド染色および線維症領域のパーセンテージの推定、

【0277】

試料の採取および固定：
試験の生存中部分の終了後、以下の試料を、さらなる分析または輸送のために採取する。

【0278】

群１０～１１の動物を、イソフルランによって麻酔し、左心室の中を食塩水（その後に４％中性緩衝ホルマリン、ＮＢＦ、ｐＨ７．４）によって２０～３０分間灌流する。動物を解剖し、組織試料（左右の腎臓、肝臓）を連続的に採取する。試料の厚さは、適切な固定を確実にするためにおよそ５ｍｍ未満である。平坦な表面を目的の領域に対して整形する。試料を固定のために直ちに４％ＮＢＦ中に入れる。試料を４％ＮＢＦ中、室温で一晩固定する。

【0279】

固定後、試料に以下のプロセスを行う。

【0280】

試料の処理
１．組織をＰＢＳ中に５分間、３回入れる；
２．組織を１０％スクロース（ＰＢＳ中）に４℃で２４時間入れる；
３．組織を２０％スクロース（ＰＢＳ中）に４℃で２４時間入れる；
４．組織を３０％スクロース（ＰＢＳ中）に４℃で２４時間入れる；
５．組織を３０％スクロース（ＰＢＳ中）：ＯＣＴ（１：１）中に４℃で２４時間入れる。

【0281】

組織包埋手順
組織および３０％スクロース：ＯＣＴ（１：１～２）を包埋モジュールに入れ、組織の方向を調整する；
平坦なドライアイス上にモジュールを置き、固化するまで待つ；
包埋モデルを－８０℃で保存する；
切片作製
包埋モデルをＴｈｅｒｍｏＨＭ５５０ミクロトームに入れ、軸方向に厚さ１０μｍの切片を作製する；
スライドガラスを使用するまで－８０℃で保存する。
試料
・ 血清試料（群１～９）を凍結する、
・ 肝試料（群１～１１）を凍結する、
・ 肝切片（群１０～１１）を凍結する、
・ Ｏ．Ｃ．Ｔ．－包埋した肝ブロック（群１０～１１）、
・ Ｏ．Ｃ．Ｔ．－包埋した腎ブロック（群１０～１１）、
統計学検定（群１～９）
・ 統計学検定は、ボンフェローニ多重比較検定を使用して行う。Ｐ値＜０．０５は、統計学的に有意であると考えられる。
Ｖ．キット

【0282】

組成物を、キットにパッケージングすることができる。キットは、デンドリマーにカプセル化されている、会合している、またはコンジュゲートされている１つまたは複数の作用剤を含む組成物の単一用量または複数用量、および組成物を投与するための使用説明書を含み得る。具体的には、使用説明書は、組成物の有効量が指示通り特定の肝状態／疾患を有する個体に投与されることを指示する。組成物は、特定の処置方法を参照して上記の通りに製剤化することができ、任意の簡便な形式でパッケージングすることができる。

【0283】

本発明は、以下の非限定的な実施例を参照してさらに理解される。

【実施例】

【0284】

（実施例１）
β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジドビルディングブロックの合成
三分岐Ｇａｌ－ＮＡｃに基づくヒドロキシルＰＡＭＡＭデンドリマーを、薬物を部位特異的に肝細胞に標的化および送達することに関して評価した。表面のＧａｌＮＡｃ糖によって、ＡＳＧＰＲに対して多価結合効果が得られ、デンドリマーが非アルコール性脂肪性肝炎のＳＴＡＭモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで肝細胞を選択的に標的化し、内部移行することを可能にすることが示されている。

【0285】

４つの異なるデンドリマー－薬物コンジュゲートを合成し、このモデルにおいて評価した：１）標的化のためのＤ－ＧａｌＮＡｃ－Ｃｙ５、２）Ｄ－ＧａｌＮＡｃ－テルミサルタン－エステル（切断性薬物リンカー、アンジオテンシン２受容体遮断剤）、３）Ｄ－ＧａｌＮＡｃ－テルミサルタン－アミド（非切断性薬物リンカー）、およびＤ－オベチコール酸（切断性薬物リンカー）。標的化リガンド、造影色素、および治療剤の組合せの正確なローディングが首尾よく実証されている。デンドリマーをさらに操作して、多様な治療分子の組合せを結合させることができる。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ ＰＡＭＡＭデンドリマーが、肝疾患の処置のための有効なプラットフォームを表すことを示している。
方法

【0286】

β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３－アジド（ＡＢ３ビルディングブロック）の合成スキームを図１に示す。試薬および条件：（ｉ）トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム、ＤＣＥ、３時間、８０℃、（ｉｉ）臭化プロパルギル、トルエン、水酸化ナトリウム、水、ＴＢＡＢ、（ｉｉｉ）ピリジン、塩化チオニル、クロロホルム、６５℃、２時間；（ｉｖ）硫酸水素テトラブチルアンモニウム、５０％ＮａＯＨ、１６時間、室温；（ｖ）（ｉｉｉ）ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ、アスコルビン酸Ｎａ、ＴＨＦ、水、１０時間；（ｖｉ）ＤＭＦ、ヨウ化テトラブチルアンモニウム、ＮａＮ_３、８０℃、５時間；（ｖｉｉ）メトキシドナトリウム、無水エタノール、３０℃、３時間。

【0287】

ベータ－ＧＡＬＮＡｃ－ＰＥＧ３アジドの３つの分子がプロパルギル化ペンタエリスリトールビルディングブロック上にグラフトされ、ＡＢ_３型直交ビルディングブロックを生じる三分岐ビルディングブロックを調製した。ジクロロメタン中のトリフルオロメタンスルホン酸スカンジウムの存在下で、β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃペントアセテート（１、図１）と２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エタン－１－オール（２）とのグリコシル化反応によって合成を開始し、過アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ３－アジド（３）を生じた。他方、ペンタエリスリトール４を、文献の方法に従ってＤＭＳＯ中の水酸化ナトリウムおよび臭化テトラブチルアンモニウムの存在下で３つのプロパルギルアームによって選択的に修飾し、トリプロパルギルペンタエリスリトール（５）を生じた。化合物（５）上の残っている１つのヒドロキシル基を、ＤＭＳＯ中の水酸化ナトリウムおよびＴＢＡＢを使用してビス－クロロテトラエチレングリコール（７）と反応させて中間化合物（８）を与えた。次の合成ステップの間、過アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－ＰＥＧ３－アジドを、通常のＣｕＡＡＣクリック反応条件（ＴＨＦ：水中のスルホン酸銅（ＩＩ）五水和物およびアスコルビン酸ナトリウム）を使用してＡＢ_３ビルディングブロック（８）とクリック反応させ、化合物（９）を生じた。クリック反応の成功を、^１Ｈ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣによって確認する。^１Ｈ ＮＭＲでは、トリアゾールの単一のシャープな一重線がδ７．９ｐｐｍで観察された。他の特徴的なピークは、δ２．０～１．７４ｐｐｍの間の酢酸ピーク、δ５．２～３．２ｐｐｍでのＧａｌＮＡｃプロトン、およびδ７．７８ｐｐｍのＧＡＬＮＡＣのＮＨである。次の合成ステップにおいて、化合物（９）の末端塩化物基を、ＤＭＦ中のアジ化ナトリウムおよびヨウ化テトラブチルアンモニウムの存在下で求核置換によってアジドに置換し、化合物（１０）を生じた。最後のステップは、反応がメトキシドナトリウムを使用してメタノール中で行われ、脱アセチル化β－ＧａｌＮＡｃ－三分岐ＰＥＧ３アジド（１１）ビルディングブロックを与える、ｚｅｍｐｌｅｎ条件を使用するトランスエステル化である。
結果

【0288】

反応の完了の成功を、^１Ｈ ＮＭＲによって確認し、Ｏ－酢酸塩に対応するピークは完全に消失し、全ての糖プロトンは高磁場にシフトした。全合成シーケンスを、^１Ｈ ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＨＲＭＳを使用して特徴付け、所望の化合物を確認した。
（実施例２）
蛍光標識肝細胞標的化デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ－ＣＹ５の合成および特徴付け

【0289】

標的化デンドロン（１１）の合成後、デンドリマー－三分岐β－ＧａｌＮＡｃ－ＣＹ５の合成を行って、共焦点顕微鏡および蛍光分光法を使用してこのデンドリマーの選択的肝細胞標的化能を評価した。
方法

【0290】

デンドリマー合成を、第４世代ＰＡＭＡＭヒドロキシル末端デンドリマー１２（図２）について開始し、５－ヘキシン酸（１３）による部分的エステル化を、ステグリッヒエステル化を使用して達成し、化合物（１４）を生じた。この反応に関して、ＥＤＣ－ＨＣｌをカップリング試薬として、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）と共に使用し、１２～１４個のヘキシンアームをデンドリマーに結合させた。化合物（１４）の構造を、^１Ｈ ＮＭＲによって確認すると、エステル化されたＣＨ_２のピークはδ４．０ｐｐｍで観察され、ヘキシンアームからのＣＨ_２に対応する他の多重線がδｌ．７～１．６ｐｐｍで観察された。ヘキシンアームのローディングを正確に定量するために、δ８．０～７．７ｐｐｍでのデンドリマーの内部アミドピークを、参照点として使用し、プロトン積分法を使用して、結合したアームの数を計算した。ヘキシンアームがデンドリマー表面に導入されると、ＧａｌＮＡｃデンドロン（３）（図１）を、銅触媒クリック（ＣｕＡＡｃ）反応を使用してデンドリマー（１４）に結合し、デンドリマー（１５）を生じた。^１Ｈ ＮＭＲから、ＧａｌＮＡｃデンドロン（１１）の５～６個のアームが、デンドリマーに結合したことが確認された。ＧａｌＮＡｃデンドロンの５～６個のアームは、標的化のために維持され、ヘキシンの５～７個のアームは薬物または造影剤に結合するために触れられないままで維持された。デンドロンの５～６個のアームの導入は、最終構造において１５～１８個のＧａｌＮＡｃ単位をもたらす。

【0291】

ローディングの計算のために、プロトン積分法を使用した。^１Ｈ ＮＭＲでは、内部アミドプロトン＋デンドロンからの１５個のトリアゾールプロトン、および新たに作製されたトリアゾールに関する５～６個のプロトンが、δ８．０～７．７ｐｐｍの間で観察された。ＧａｌＮＡｃからのＮＨピークがδ７．６ｐｐｍで観察され、４５個のプロトンに対応するＮ－アセチル一重線がδ１．７８ｐｐｍで観察された。^１Ｈ ＮＭＲをＤ_２Ｏ中で記録する場合、ＮＨに関連する全てのシグナルは水に交換されて消失し、１５および５個のプロトンに対応する２つの異なるトリアゾールピークが、δ８．０および７．８ｐｐｍで明らかに認められた。全てのＧａｌＮＡｃおよびデンドリマーシグナルは、δ５．０～１．５ｐｐｍの間で観察することができる。標的化部分がデンドリマーに結合すると、次のステップは、蛍光タグをこのデンドリマーに結合することである。近赤外線色素ＣＹ５を蛍光タグとする。ＣＹ５アジド（１６）をデンドリマー（１５）に結合させるため、ＣｕＡＡｃ反応を利用して蛍光－ＧａｌＮＡｃデンドリマー（１７）を生じた。
結果

【0292】

クリック反応は、２～３個のＣＹ５分子（診断剤として有用な代表的な低分子であり、低分子薬による結果を予測する）が結合しているＣＹ５標識デンドリマーを首尾よく生成した。最終的なデンドリマーを、^１Ｈ ＮＭＲによって特徴付け、ＣＹ５ローディングを、プロトン積分法を使用して計算した。ＣＹ５に対応するピークは、δ７．５～６．２ｐｐｍの間に現れた。全合成シーケンスをＨＰＬＣによって追跡した。Ｇ４－ＯＨのＨＰＬＣスペクトルは、６．ｌ分で現れる。ＨＰＬＣスペクトルは、ヘキシンアームをデンドリマーに付加した場合、疎水性側に９．４分にシフトし、水溶性三分岐ＧａｌＮＡｃデンドロンをデンドリマーにコンジュゲートするともう一度親水性側にシフトし、７．７分で現れる。ＣＹ５の付加はまた、ピークを右方向に８．４分にシフトさせた。最終的なＣＹ５標識デンドリマー（１７）は、ＨＰＬＣによって決定した場合、＞９８％純粋であった。
（実施例３）
ＮＡＳＨ処置のための酵素による切断性および非切断性のリンカーとのデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ－テルミサルタンコンジュゲートの合成および特徴付け

【0293】

蛍光デンドリマーが首尾よく完了した後、次の目的は、肝障害に関する標的化部分および薬物を有するデンドリマーを合成することであった。ＮＡＳＨは、肝硬変および肝細胞癌などの疾患をもたらす十分に認識された世界的な健康問題である。多くの異なる型の治療分子、例えばＰＰＡＲガンマ、抗酸化剤、および細胞保護剤が使用されているが、その成功は限定的であるかまたは成功していない。
方法

【0294】

現在、ＮＡＳＨおよび他の慢性肝疾患の処置に関して承認された薬物はない。最近、アンジオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）およびペルオキシソーム増殖剤受容体の部分的アゴニストであるテルミサルタンが、インスリン感受性を増加させ、肝臓における脂肪の蓄積を阻害することによって、ＮＡＳＨの多くの動物モデルにおいて有望であることが示されている。良好な結果にもかかわらず、その臨床への橋渡しは、用量関連毒性および血圧低下などの他の副作用によって進んでいない。

【0295】

これらの課題を克服するために、薬物ロードを所望の臓器または組織へと送達するために、非常に特異的な標的化薬物送達ナノプラットフォームが必要である。この目的のために、テルミサルタンを、２つの異なる連結、すなわちテルミサルタンエステル（図３）およびテルミサルタンアミド（図４）を使用してデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ（１５）に結合した。テルミサルタン－エステルＰＥＧ４アジド（１９）を合成するために、テルミサルタンを、無水ＤＣＭ中のＤＣＣおよびＤＭＡＰの存在下で、２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（２）と反応させた。テルミサルタンエステル－ＰＥＧ４アジドは、定量的収量で達成された。

【0296】

デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンエステルコンジュゲートの合成に関して、産物を、^１Ｈ ＮＭＲおよびＬＣＭＳを使用して確認した。^１Ｈ ＮＭＲでは、芳香族プロトン（１４）は、δ７．８～７．１ｐｐｍの間に現れ、ベンジルＣＨ_２は、δ５．６ｐｐｍで現れ、ＣＨ_３の隣のＣＨ_２は、δ１．８５ｐｐｍで現れ、ＣＨ_３に対応する三重項は、δ１．０ｐｐｍで現れる。テルミサルタンアジドが首尾よく形成されたことが確認された後、ＣｕＡＡＣクリック反応を使用して、これをヘキシンリンカーの６～７個のアームを有するＧａｌＮＡｃデンドリマー（１５）とクリック反応させた。クリック反応は、デンドリマー－三分岐ＧａｌＮＡｃ（４－５）－テルミサルタン（７－８）（２０）を首尾よく作製した。産物の確認を、^１Ｈ ＮＭＲによって再度行った。デンドリマー内部アミドピーク、トリアゾールピーク、テルミサルタンからの芳香族プロトン、およびＧａｌＮＡｃに対応するＮＨは、δ８．０～７．０ｐｐｍの間に現れる。ベンジルＣＨ_２は、δ５．６ｐｐｍで現れる。観察すべき他の重要なピークは、δ１．７ｐｐｍでのＮ－アセチルピーク、およびδ０．９ｐｐｍでのＣＨ_３ピークである。プロトン積分法を使用して、薬物ローディングを計算した。テルミサルタンエステルの７～９分子がデンドリマーに結合していることが確認された。テルミサルタンの重量％ローディングはおよそ１４％であり、テルミサルタン８分子が結合していると考えられた。テルミサルタンは、非常に疎水性の薬物であるが、コンジュゲートは非常に水溶性であり、溶解度はおよそ６０ｍｇ／ｍｌである。最終的なコンジュゲートの純度は＞９６％である。

【0297】

酵素感受性エステル連結を有するデンドリマーテルミサルタンが首尾よく完了した後、生理的条件下でより安定でなければならないデンドリマー－テルミサルタンアミドコンジュゲートを合成した（図４）。これを達成するために、テルミサルタンに対するリンカーアジドを、ＨＡＴＵおよびＤＩＰＥＡを使用して、２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミン（２１）とカップリングさせることによって最初に導入し、テルミサルタン－ＰＥＧ３－アミドアジド（２２）を与えた。化合物を、^１Ｈ ＮＭＲおよびＬＣＭＳを使用して特徴付けた。アジド官能化テルミサルタンが形成された後、これを、ＣｕＡＡｃを使用してデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ（１５）にコンジュゲートし、デンドリマー－ＧａｌＮＡｃ（４－５）－テルミサルタンアミド（６－７）（２３）を得た。

【0298】

デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンアミドコンジュゲートの合成に関して、産物の確認を^１Ｈ ＮＭＲによって行った。薬物分子が結合した後、最終化合物中の薬物からの全てのシグネチャーピークが観察された。デンドリマー内部アミドピーク、トリアゾールピーク、テルミサルタンからの芳香族プロトン、およびＧａｌＮＡｃに対応するＮＨは、δ８．２～７．１ｐｐｍの間で現れる。ベンジルＣＨ_２はδ５．６ｐｐｍで現れる。他の重要なピークは、δ１．８ｐｐｍで現れるＮ－アセチルピーク、およびδ１．０ｐｐｍで現れるＣＨ_３ピークである。^１Ｈ ＮＭＲをＤ_２Ｏ中で記録すると、デンドリマーに対応する内部アミドピークは交換されて消失し、トリアゾールに対応する一重線がδ８．０ｐｐｍで現れる。プロトン積分法を使用して薬物ローディングを計算した。
結果

【0299】

テルミサルタンアミド６分子がデンドリマーに結合していることが確認された。テルミサルタンの重量％ローディングはおよそ１１％であり、テルミサルタン６分子が結合したと考えられた。最終的なコンジュゲートは、高度に水溶性であり、溶解度はおよそ６０～７０ｍｇ／ｍｌである。

【0300】

全合成プロセスの進行をＨＰＬＣによって追跡した。ＧａｌＮＡｃ三分岐コンジュゲート（１５）の保持時間は７．８分であるが、疎水性のテルミサルタンアジドの付加が起こると、最終的なコンジュゲート（２３）の保持時間は、疎水性側にシフトし、１０．４分となる。最終的なコンジュゲートの純度は＞９５％である。
（実施例４）
ヒトアンジオテンシンＩＩ ＡＴ１受容体に対するテルミサルタンおよびテルミサルタンリンカーの結合親和性
方法

【0301】

テルミサルタン、テルミサルタン－エステル－ＰＥＧ４アジドおよびテルミサルタン－ＰＥＧ３－アミドアジドの結合親和性を、ヒトアンジオテンシンＩＩ ＡＴ１受容体（放射リガンドアンタゴニスト）結合アッセイを使用して評価した（表１）。細胞膜ホモジネート（タンパク質８μｇ）を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．１％ＢＳＡを含有する緩衝液中で、０．０５ｎＭ［１２５Ｉ］［Ｓａｒ１－Ｉｌｅ８］アンジオテンシンＩＩと共に試験化合物の非存在下または存在下、３７℃で１２０分間インキュベートする。非特異的結合を１０μＭアンジオテンシンＩＩの存在下で決定する。インキュベーション後、試料溶液を、０．３％ＰＥＩを予め浸したガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を通して真空下で急速にろ過し、９６試料のセルハーベスター（Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌによって数回すすぐ。フィルターを乾燥させた後、シンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、シンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）によって放射活性に関して計数する。
結果

【0302】

結果を、対照の放射リガンド特異的結合のパーセント阻害として表記する。サララシンを標準的な参照化合物として使用し、これを各実験において数個の濃度で試験し、競合曲線を得て、そこからそのＩＣ５０を計算する。

【0303】

試料の調製：テルミサルタン、テルミサルタンエステルリンカー、およびテルミサルタンアミドリンカーを、ＤＭＳＯ水溶液中で溶解し、１０ｍＭの遊離の薬物（テルミサルタン）濃度の溶液を形成した。各試料溶液を、結合試験のためにそれぞれ、ＤＭＳＯ中で１０μＭ、３．３３μＭ、ｌ．ｌｌμＭ、０．３７μＭ、０．１２３μＭ、４１．２ｎＭ、１３．７ｎＭ、４．５７ｎＭ、１．５２ｎＭ、０．５０８ｎＭ、および０．１６９ｎＭへとさらに希釈した。

【0304】

修飾された薬物リンカーの結合親和性は、ナノモル濃度範囲の値を保持した（表１）。
表1. テルミサルタン、テルミサルタン-エステル-PEG4アジド、およびテルミサルタン-PEG3-アミドアジドの結合親和性

【表1】

（実施例５）
デンドリマー－テルミサルタン－エステルおよびデンドリマー－テルミサルタン－アミドの放出試験
方法

【0305】

両方のコンジュゲートの薬物放出プロファイルを、血漿（ｐＨ７．４、ＰＢＳ）および細胞内条件（ｐＨ５．５、エステラーゼ）で評価した。
結果

【0306】

結果は、血漿の生理的条件で、デンドリマー－エステル連結構築物が非常に安定であり、１８日間でわずか１４％の薬物放出が観察されているが、細胞内条件下では、１８日間で薬物の９４％が放出されることを示している（図５）。しかし、デンドリマー－テルミサルタンアミドコンジュゲートの放出実験では、血漿の生理的条件下で２％未満の薬物が１８日間で放出され、細胞内条件下では１８日間で１０％未満の薬物が放出された（図６）。アミド連結薬物コンジュゲートは、生理的条件下でエステル連結デンドリマーコンジュゲートより安定である。

【0307】

Ｄ－テルミサルタンアミドコンジュゲートの安定性をまた、３７℃でヒト、マウス、およびラット血漿においても評価し、２日間の期間で放出されたのは薬物のわずか３％であった（図７）。
（実施例６）
ＮＡＳＨ処置のためのデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ－オベチコール酸（Obiticholic acid）コンジュゲートの合成および特徴付け

【0308】

非常に強力な薬物であるオベチコール酸は、半合成の胆汁酸アナログであり、ＮＡＳＨにおいて有望な結果を示しているが用量関連毒性の問題を有する、ファルネソイドＸ受容体の最も活性な生理的リガンドであり、これを利用した。オベチコール酸をデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ－ヘキシン酸（１５）にコンジュゲートするために、オベチコール酸のカルボン酸官能性ハンドル（２４）を、ＥＤＣ、ＤＭＡＰカップリング反応を使用してＰＥＧ４アジドリンカー（２５）によって選択的にエステル化した（図８）。オベチコール酸リンカーアジド（２６）を、^１Ｈ ＮＭＲ、ＨＲＭＳ、およびＨＰＬＣを使用して特徴付けた。アジド末端オベチコール酸は、クリック反応を使用してデンドリマー－ＧａｌＮＡｃ－ヘキシン（１５）に首尾よくコンジュゲートされ、デンドリマー－ＧａｌＮＡｃ（４－５）－オベチコール酸コンジュゲート（６－７）（２７）を与えた。デンドリマーおよび中間体を、^１Ｈ ＮＭＲ（図８）およびＨＰＬＣを使用して十分に特徴付けた。デンドリマーの薬物ローディングを、デンドリマー内部アミドプロトンを参照ピークとして使用するプロトン積分法によって計算した。メチルピークは、δ０．６ｐｐｍでオベチコール酸に属し、これは正確な薬物ローディングを計算するために役立った。オベチコール酸６分子がデンドリマーに結合し、薬物ローディングはおよそ９．５％である。最終的なコンジュゲートの純度は９９％より高く、溶解度の範囲は約ｌ００ｍｇ／ｍＬである。
（実施例７）
マウス非アルコール性脂肪性肝炎モデルにおける三分岐Ｇａｌｎａｃ修飾ヒドロキシルデンドリマーのｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験
方法
マウスおよびＮＡＳＨモデル

【0309】

病原体フリーの妊娠１４日目のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ，Ｉｎｃ．（Ｊａｐａｎ）から得ることができる。ＮＡＳＨは、雄性マウスにおいてストレプトゾトシン（ＳＴＺ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）２００μｇを生後２日目に１回皮下注射し、４週齢以降（２８日目±２日）、高脂肪食（ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ）を自由に与えることによって確立された。ＮＡＳＨマウスを、６週齢（４２日目±２日）で処置開始の前日に、その体重に基づいてマウス８匹の８群およびマウス４匹の２群に無作為化した。ＳＴＺプライミングを行わなかった同腹子の対照マウス（ｎ＝８）に、通常食を自由に与え、対照目的として設定した（群分けに関する詳細は以下を参照されたい）。動物が、１週間以内に＞２５％の体重減少を示す場合、または前日と比較して＞２０％の体重減少を示す場合、動物を試験終了前に安楽死させる。動物が腹臥位などの瀕死の兆候を示す場合、動物を試験終了前に安楽死させた。安楽死させた動物からは試料を採取しない。処置期間の間に、個々の体重を毎日測定する。マウスの生存、臨床徴候、および行動を毎日モニターする。

【0310】

群分け
群１（正常）：正常なマウス８匹に、いかなる処置も行わずに通常食を自由に与え、９週齢で屠殺した。
群２（媒体）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、媒体（食塩水）を１０ｍＬ／ｋｇの体積で１日おきに腹腔内投与した。
群３（テルミサルタン）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、テルミサルタンの１０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した純水を１日１回経口投与した。
群４（オベチコール酸、または「ＯＣＡ」）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、ＯＣＡの３０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した１％メチルセルロースを１日１回経口投与した。
群５（デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンアミドコンジュゲート、または「Ｄ－Ｔｅｌ」高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－Ｔｅｌの９０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与した。
群６（Ｄ－Ｔｅｌ 低）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－Ｔｅｌの１８ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与した。
群７（デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－テルミサルタンエステルコンジュゲートまたは「Ｄ－ＴｅｌＢ」高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＴｅｌＢの９０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与した。
群８（Ｄ－ＯＣＡ 高）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＯＣＡの３１５ｍｇ／ｋｇ用量（この投薬量でデンドリマーにコンジュゲートしたＯＣＡの約３０ｍｇ／ｋｇと等価である）を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与した。
群９（Ｄ－ＯＣＡ 低）：ＮＡＳＨマウス８匹に、６から９週齢まで、Ｄ－ＯＣＡの６３ｍｇ／ｋｇ用量（この投薬量でデンドリマーにコンジュゲートしたＯＣＡの約６ｍｇ／ｋｇと等価である）を補充した媒体を１日おきに腹腔内投与した。
群１０（Ｄ－Ｃｙ５－６ ｗｋｓ）：ＮＡＳＨマウス４匹に、６週齢時に、Ｄ－Ｃｙ５の５０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を単回腹腔内投与した。
群１１（Ｄ－Ｃｙ５－９ ｗｋｓ）：ＮＡＳＨマウス４匹に、９週齢時に、Ｄ－Ｃｙ５の５０ｍｇ／ｋｇ用量を補充した媒体を単回腹腔内投与した。

【0311】

群１０および１１のマウスを、６および９週齢で投与の４８時間後に屠殺した。群１～９のマウスは、後のアッセイのために９週齢で屠殺し、群１０および１１は、後のアッセイのために６および９週齢で屠殺した。個々の肝重量を測定し、肝重量の体重に対する比を計算した。
生化学アッセイ（群１～９）：

【0312】

非絶食時血清ＡＬＴレベルは、ＦＵＪＩ ＤＲＩ ＣＨＥＭ（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ，Ｊａｐａｎ）が定量した。肝トリグリセリドは、トリグリセリドＥ試験キット（ＦＵＪＩＦＵＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）によって定量した。
肝切片の組織学分析（群１～９）：

【0313】

ＨＥ染色およびＮＡＦＬＤ活動性スコアの推定は、ルーチンの方法によって行った。シリウスレッド染色および線維症領域のパーセンテージの推定も同様に計算した。
試料の採取および固定：

【0314】

試験の生存中部分の終了後、以下の試料を、さらなる分析または輸送のために採取した。群１０～１１の動物を、イソフルランによって麻酔し、左心室の中を食塩水（その後に４％中性緩衝ホルマリン、ＮＢＦ、ｐＨ７．４）によって２０～３０分間灌流する。動物を解剖し、組織試料（左右の腎臓、肝臓）を連続的に採取する。試料の厚さは、適切な固定を確実にするためにおよそ５ｍｍ未満である。平坦な表面を目的の領域に対して整形する。試料を固定のために直ちに４％ＮＢＦ中に入れる。試料を４％ＮＢＦ中、室温で一晩固定する。
結果

【0315】

個々の体重を、測定期間を通して測定した。処置を行っていない（媒体）または処置を行った実験的ＮＡＳＨマウスは、試験期間を通して類似の体重を維持した。実験を通して体重約２６～２７グラムの正常なマウスは、全てのＮＡＳＨマウスより大きかったが、全ての処置群のＮＡＳＨマウスは処置期間を通して類似の体重を示した。９週目では、すなわち処置の開始後３週目では、異なる処置群からの体重は有意差を示さなかった（図９Ａ）。遊離のテルミサルタンによって処置した群を除く全ての処置群が９週目で類似の肝重量を示した。遊離のテルミサルタンによって処置したＮＡＳＨマウスは、媒体処置ＮＡＳＨマウスと比較して低減された肝重量を有した（図９Ｂ）。図９Ｃは、全ての実験群の肝重量の体重に対する比を示す。

【0316】

非絶食時血清ＡＬＴレベルおよび肝トリグリセリドレベルを測定する生化学アッセイを、９週齢で行った（図１０Ａおよび１０Ｂ）。

【0317】

組織病理学分析を９週齢で屠殺した全ての処置群からの正常なマウスおよびＮＡＳＨマウスの肝臓について実施した。非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア、脂肪症スコア、炎症スコア、および風船様腫大スコアを図１１Ａ～１１Ｄに示す。シリウスレッド染色を使用して、全ての処置群からの正常なマウスおよびＮＡＳＨマウスの肝臓における線維症の程度を評価した（図１２）。

【0318】

オベチコール酸（ＯＣＡ）は、強力かつ選択的なファルネソイドＸ受容体アゴニスト（ＦＸＲａ）である。肝組織の免疫組織化学分析は、デンドリマー－三分岐β－ＧｌｃＮＡｃ－アジド－オベチコール酸エステルコンジュゲート（Ｄ－ＯＣＡ）がＮＡＦＬＤスコア、肝線維症、および肝細胞風船様腫大を、遊離のＯＣＡおよび媒体対照と比較して有意に減少させることを実証する（ｐ＜０．０５、ｎ＝８）。低用量Ｄ－ＯＣＡ処置は、脂肪症スコアの有意な低減を示したが、高用量Ｄ－ＯＣＡ処置は、遊離のＯＣＡ群と比較して線維症スコアの改善された低減を示した。生化学分析はまた、肝細胞標的化ヒドロキシルデンドリマーがコンジュゲートされているオベチコール酸の処置が肝機能を改善したことも示唆している。

【0319】

要約すると、肝細胞標的化ヒドロキシルデンドリマー治療剤は、全身投与後にアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ－Ｒ）媒介取り込みを通してＦＸＲａの肝細胞への選択的標的化、薬物有効性の増強、ならびに用量および部位以外での毒性の低減を可能にすることが確立されている。ＦＸＲａの肝細胞への選択的標的化は、ＮＡＳＨモデルにおいて機能的転帰を改善する。この標的化されたアプローチは、現行のＦＸＲａ化合物について観察される全身性の標的外毒性を有意に低減させる。ヒドロキシル末端デンドリマーによる以前の試験は、最大１ヶ月間の標的細胞内の持続的な局在を実証した。全体として、肝細胞標的化ヒドロキシルデンドリマーアプローチは、肝疾患を処置するための広範囲の薬物を開発するためのプラットフォームを提供する。

【0320】

それ以外の方法で定義されていない限り、本明細書で使用した全ての科学技術用語は、本開示の発明が属する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で引用した刊行物およびそれらが引用される材料は、明確に参照により組み込まれる。

【0321】

当業者は、単なるルーチンの実験を使用して、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するまたは確認することができるであろう。そのような等価物は以下の特許請求の範囲に包含されると意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9-1】

【図9-2】

【図10-1】

【図10-2】

【図11-1】

【図11-2】

【図11-3】

【図12】

【図13-1】

【図13-2】

【図13-3】

【図14-1】

【図14-2】

【図15】

【図16】

【図17-1】

【図17-2】

【国際調査報告】