(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-02-03
(54)【発明の名称】癌および／または転移の治療のためのペプチド
(51)【国際特許分類】
C07K 7/08 20060101AFI20230127BHJP
C12N 9/64 20060101ALI20230127BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230127BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20230127BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230127BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20230127BHJP
【ＦＩ】
C07K7/08 ZNA
C12N9/64 Z
A61P35/00
A61P35/04
A61P35/02
A61K38/10
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022533172
(86)(22)【出願日】2020-11-30
(85)【翻訳文提出日】2022-08-02
(86)【国際出願番号】 EP2020083987
(87)【国際公開番号】W WO2021110609
(87)【国際公開日】2021-06-10
(31)【優先権主張番号】19383084.1
(32)【優先日】2019-12-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】512188753
【氏名又は名称】ベセエネ ペプチドス エセ．ア．
(74)【代理人】
【識別番号】110000338
【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ
(72)【発明者】
【氏名】フェレナンデズ カルネアド，ジメナ
(72)【発明者】
【氏名】ポンサティ，ベルタ
(72)【発明者】
【氏名】パレンテ ドエナ，アントニオ
(72)【発明者】
【氏名】ヴァレス－ミレト，マリオナ
(72)【発明者】
【氏名】ファレラ－シンフレウ，ジョセプ
(72)【発明者】
【氏名】アルマザン－モガ，アンナ
(72)【発明者】
【氏名】ロマ カスタンイェル，ジョセプ
(72)【発明者】
【氏名】ガレゴ メルコン，ソレダド
(72)【発明者】
【氏名】サンチェス デ トレド コディナ，ホセ
(72)【発明者】
【氏名】モレノ マルティン－レトロティロ，ルカス
(72)【発明者】
【氏名】ナヴァロ バレア，ナタリア
(72)【発明者】
【氏名】モリスト ムノズ，カルラ
【テーマコード（参考）】
4B050
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B050DD11
4B050LL01
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA18
4C084BA23
4C084CA59
4C084MA22
4C084MA24
4C084MA37
4C084MA41
4C084MA52
4C084MA55
4C084MA56
4C084MA58
4C084MA59
4C084MA60
4C084MA63
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA17
4H045BA18
4H045BA50
4H045CA40
4H045DA89
4H045EA20
4H045FA33
4H045GA25
(57)【要約】
本発明は、生物医化学の分野に属す。本発明は、タンパク質ＡＤＡＭ－１２のアミノ酸配列に由来する修飾ペプチドおよびそれらの二量体、それらの組成物、合成方法、ならびに医療におけるそれらの使用、特に、種々の癌における癌増殖の抑制、および／または癌細胞の侵襲および転移の減少または抑制を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（Ｉ）のペプチド：Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－ＡＡ３－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｒ２ （Ｉ）
その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、
ＡＡ１ Ｐｙｒ、または、結合であり；
ＡＡ２は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
ＡＡ３は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、または、Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）（Ｃｙｓｔｉｎｅ）であり；
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）、または、２，４，６－トリメチルフェニルグリシン（Ｍｓｇ）であり；
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、ポリエチレングリコールに由来するポリマー、およびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、置換または非置換のヘテロシクリル、および置換または非置換のヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４、－ＯＲ３、および－ＳＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のアラルキルからなる群より選択される、
ペプチド、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項3】
ＡＡ２およびＡＡ５は、Ｌｙｓまたは結合から独立して選択される、請求項１または２に記載のペプチド。
【請求項4】
Ｒ１は、ＨおよびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される、請求項１～３の何れか１項に記載のペプチド。
【請求項5】
Ｒ１は、Ｈ、アセチル、ｔｅｒｔ－ブタノイル、ヘキサノイル、２－メチルヘキサノイル、シクロヘキサンカルボキシル、オクタノイル、デカノイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、オレオイル、およびリノレオイルからなる群より選択される、請求項４に記載のペプチド。
【請求項6】
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４または－ＯＲ３であって、ここで、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される、請求項１～５の何れか１項に記載のペプチド。
【請求項7】
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルおよびヘキサデシルからなる群より選択される、請求項６に記載のペプチド。
【請求項8】
請求項１～７の何れか１項に記載の式（Ｉ）で表されるペプチドを２個含むペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、前記ペプチド二量体は、ジスルフィド架橋ペプチド二量体である、ペプチド二量体。
【請求項9】
以下からなる群より選択される、請求項１～７の何れか１項に記載のペプチド、または請求項８に記載のペプチド二量体：Ｒ１－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号３－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（配列番号４－Ｒ２）
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号５－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号６－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号７－Ｒ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号８－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号９－Ｒ２）。
【請求項10】
以下からなる群より選択される、請求項１～７、９の何れか１項に記載のペプチド、または請求項８または９に記載のペプチド二量体：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（配列番号４－ＮＨ２）
Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号６－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号７－ＮＨ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号９－ＮＨ２）。
【請求項11】
請求項１～７、９～１０の何れか１項に記載のペプチドまたは請求項８～１０の何れか１項に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、固相ペプチド合成または溶液中でのペプチド合成を用いて行われる、方法。
【請求項12】
以下の工程を含む、請求項１１に記載の方法：ａ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｂ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断する工程；
ｃ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、環状ペプチドまたはペプチド二量体を得る工程；
ｄ）必要に応じて、保護基を除去する工程；
あるいは、
ｉ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｉｉ）必要に応じて、前記ポリマー支持体中で、固相ペプチドサイクリングまたは二量体形成を行う工程；
ｉｉｉ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断し、必要に応じて、同時に保護基を除去する工程；
ｉｖ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、ペプチド二量体を得る工程。
【請求項13】
少なくとも１個の請求項１～７、９～１０の何れか１項に記載のペプチド、または、少なくとも１個の請求項８～１０の何れか１項に記載のペプチド二量体、もしくは、それらの組み合わせ、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩、の薬学的な有効量を含む、薬学的組成物。
【請求項14】
請求項１～７、９～１０の何れか１項に記載のペプチド、または、請求項８～１０の何れか１項に記載のペプチド二量体、もしくは、それらの組み合わせ、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩は、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造脂質担体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤－リン脂質混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェア、ナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マイクロエマルジョン、およびナノエマルジョンからなる群より選択される、送達システム、および／または持続放出システムに組み込まれる、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項15】
薬剤として使用するための、請求項１～７、９～１０の何れか１項に記載のペプチド、または請求項８～１０の何れか１項に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
癌および／または転移の治療および／または診断に使用するための、請求項１～７、９～１０の何れか１項に記載のペプチド、または請求項８～１０の何れか１項に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
癌および／または転移は、神経芽細胞腫、肉腫、軟部組織肉腫、横紋筋肉腫（胎児性、胞巣状、多形性および紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫を含む）、内膜肉腫、未分化紡錘細胞肉腫、未分化多形性肉腫、未分化円形細胞肉腫、未分化類上皮細胞肉腫、脂肪肉腫、異型脂肪性腫瘍、悪性孤立性線維性腫瘍、炎症性筋線維芽細胞腫、低悪性度筋線維芽細胞肉腫、線維肉腫（成人および硬化性類上皮線維肉腫の変種を含む）、粘液線維肉腫、低悪性度線維類粘液肉腫、軟部組織の巨細胞腫瘍、平滑筋肉腫、悪性グロムス腫瘍、血管内皮腫（網状、偽筋原性および類上皮血管内皮腫を含む）、軟部組織の血管肉腫、骨外性骨肉腫、悪性消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、悪性末梢神経鞘種、悪性トリトン腫瘍、悪性顆粒細胞腫、悪性骨化性粘液性腫瘍、間質肉腫、筋上皮腫、悪性リン酸塩尿性間葉系腫瘍、滑膜肉腫（紡錘細胞および二相性滑膜肉腫を含む）、類上皮肉腫、胞巣状軟部肉腫、軟部組織の明細胞肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨外性ユーイング肉腫、繊維形成性小円形細胞性腫瘍、腎外性横紋筋様腫瘍、血管周囲類上皮細胞腫瘍、骨肉腫（bone sarcomas）、骨肉腫（osteosarcoma）、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、血管内皮腫、血管肉腫、線維肉腫、筋線維肉腫、脊索腫、エナメル上皮腫、乳癌（乳管癌、小葉癌、および乳頭癌を含む）、結腸癌、直腸癌、肛門癌、結腸直腸癌、脳腫瘍、膠芽腫、星細胞腫、または髄芽腫、悪性神経膠腫、前立腺癌、黒色腫およびその他の皮膚癌、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌（高悪性度漿液性卵巣癌を含む）、子宮体癌、リンパ腫、頭頸部癌、口腔癌、唾液腺癌、網膜芽細胞腫、消化器癌、食道癌、胃癌、膵癌、胆のう癌、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、腎臓癌（kidney cancer）または腎臓癌（renal cancer）、ウィルムス腫瘍または腎芽細胞腫、膀胱癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、下垂体腺腫、扁平上皮癌、精巣癌、白血病（急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞腫および多発性骨髄腫を含む）からなる群より選択される、請求項１６に記載の使用のためのペプチドまたはペプチド二量体。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
〔発明の分野〕
本発明は、生物医化学の分野に含まれる。特に、本発明は、癌および／または転移の抑制の分野に関する。
本発明は、生物医化学の分野に含まれる。特に、本発明は、癌および／または転移の抑制の分野に関する。
【0002】
〔発明の背景〕
転移は、症例の約９０％で癌患者の死亡の原因である（例えば、Reymond et al.Nature Reviews 2016,13(12),858-70を参照のこと）。
転移は、症例の約９０％で癌患者の死亡の原因である（例えば、Reymond et al.Nature Reviews 2016,13(12),858-70を参照のこと）。
【0003】
転移による癌腫瘍の播種に伴い、標準治療は全く有効ではなく、新たな治療ターゲットおよび治療法の研究が必要とされている。
【0004】
ＡＤＡＭ（Ａ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）は、１９９０年代に初めて報告された膜貫通タンパク質ファミリーである。ＡＤＡＭ－９、ＡＤＡＭ－１０、ＡＤＡＭ－１２、ＡＤＡＭ－１５およびＡＤＡＭ－１７を含む複数のＡＤＡＭメンバーは、癌の形成または進行のいずれかにおいて役割を果たすことが示されている。これらの知見と一致して、いくつかの癌種において、特定のＡＤＡＭの発現の増加が、侵襲性疾患の特徴および予後不良と相関することが明らかにされた（例えば、Duffyet al.Clin Chim Acta 2009,403(1-2),31-6を参照のこと）。多くのＡＤＡＭは、細胞の増殖および侵襲の促進をもたらす成長因子活性およびインテグリン機能の調節に関与する（例えば,Mochizukiet al.Cancer Sci 2007,98(5):621－8; Zadka et al.Neoplasma 2018,65(6),823－39を参照のこと）。
【0005】
ＡＤＡＭ－１２は、フェルチリンの相同体を調査するためにマウス筋原性細胞株中にて１９９５年に同定された（例えば、Yagami－Hiromasa et al.Nature 1995,377(6550),652-6を参照のこと）。ヒトＡＤＡＭ－１２は、１９９８年に特性決定された（例えば、Gilpin et al.J Biol Chem 1998,73(1),157-66を参照のこと）。その構造は、Ｎ末端シグナルペプチド、プロ領域、メタロプロテイナーゼ（すなわちメタロプロテアーゼ）領域、ディスインテグリン領域、システインリッチ領域、ＥＧＦ領域、膜貫通領域およびＣ末端の細胞質尾部からなる。ＡＤＡＭ－１２は、上述の全ての領域を有する膜結合型（ＡＤＡＭ１２－Ｌ）、および分泌型（ＡＤＡＭ１２－Ｓ）を含み、これは、膜貫通領域および細胞質領域を欠く（例えば、Nyren－Erickson et al.Biochim Biophys Acta 2013,1830(10),4445-55を参照のこと）。
【0006】
ＡＤＡＭ－１２は、多くの種類の癌および腫瘍細胞にて高度に発現する。ＡＤＡＭ－１２は、インテグリンおよびシンデカンなどの接着分子への結合を介して、細胞－細胞接着または細胞－ＥＣＭ相互作用を調節することができる（例えば、Kveiborg et al.J Biochem Cell Biol 2008,40(9),1685－702を参照のこと）。ＡＤＡＭ－１２はシンデカン－４と相互作用し、細胞の播種およびストレス線維のアセンブリーを促進し得る（例えば、Thodeti et al.J Biol Chem 2003,278(11),9576－84を参照のこと）。
【0007】
全体として、ＡＤＡＭ－１２の過剰発現は、癌の広範な多様性について、転移および不良な生存率と相関している。
【0008】
乳癌ではＡＤＡＭ－１２が高度に発現し、乳癌転移のプロモーターとして作用することが公表されている（例えば、Iba et al.Am J Pathol 1999,154(5),1489－501; Huang et al.Oncogene 2018,37(49),6316－26を参照のこと）。Ｋｖｅｉｂｏｒｇらによる機能研究（例えば、Kveiborg et al.Cancer Res 2005,65(11),4754-61を参照のこと）は、マウス乳癌モデルにおいて、ＡＤＡＭ－１２のアップレギュレーションが腫瘍の進行を加速させることを実証した。また、ＡＤＡＭ－１２は、乳癌の腫瘍組織では隣接する正常組織と比較して、アップレギュレートされる。カプラン－マイヤー生存曲線の結果から、ＡＤＡＭ－１２のレベルが高い患者は、ＡＤＡＭ－１２のレベルが低い患者と比較して、生存期間が短いことが示された（例えば、Ma et al.Int J Clin Exp Pathol 2015,8(10),13279-83を参照のこと）。また、乳癌患者の疾患進行に比例して、患者の尿中のＡＤＡＭ－１２が増加することも記されている（例えば、Roy et al.J Biol Chem 2004,279(49),51323-30を参照のこと）。
【0009】
ＡＤＡＭ－１２の高い腫瘍レベルは、ＡＤＡＭ－１２が高グレード漿液性卵巣癌の侵襲性分子サブタイプにて、最も予後不良と関連する予後因子であることを示している（例えば、Cheon et al. Carcinogenesis 2015,36(7),739-47を参照のこと）。
【0010】
ＡＤＡＭ－１２は、前立腺癌（例えば、Peduto et al. Oncogene 2006,25(39),5462-6を参照のこと）、膠芽腫（例えば、Kodama et al.Am.J Pathol 2004,165(5),1743-53を参照のこと）、および胃癌（例えば、Carl-McGrath et al.Int J Oncol 2005,26(1),17-24; Shimura et al.Cancer Prev Research 2015,8(3),240-8を参照のこと）において、高度に発現する。
【0011】
膵管腺癌と診断された患者では、健常対照群と比較して、ＡＤＡＭ－１２レベルの上昇が認められた。治療中のＡＤＡＭ－１２レベルの低下は、生存期間の延長と関連していた（例えば、Veenstraet al.Oncogenesis 2018,7(11),87を参照のこと）。
【0012】
ＡＤＡＭ－１２は膀胱癌のバイオマーカーとしても提唱されている。膀胱癌患者は、最大６０％の筋層侵襲癌に進行するリスクを有する。そのアップレギュレーションは、ｍＲＮＡレベルおよびタンパク質発現について、膀胱癌のグレードおよびステージと相関している（例えば、Frolich et al.Clin Cancer Research 2006,12(24),7359-68を参照のこと）。
【0013】
ＡＤＡＭ－１２の発現は、正常な肝臓ではほとんど検出されない。しかし、肝細胞癌および肝転移では増加する（例えば、Mazzocca et al.Biochim Biophys Acta 2010,1806(1),74-81; Le Pabic,Hepatology 2003,37(5),1056-66を参照のこと）。
【0014】
転移性小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）もまた、侵襲および転移の増強と共にＡＤＡＭ－１２発現の増加を示した（例えば、Shao et al.Plos One 2014,9(1),e85936を参照のこと）。
【0015】
ＡＤＡＭ－１２ｍＲＮＡは、骨巨細胞腫の７０％にて検出されている。また、巨細胞腫での単核間質細胞の細胞融合プロセスにおけるＡＤＡＭ－１２の意義についても記載されている（例えば、Tian et al.J Clin Pathol 2002,55(6),394-7を参照のこと）。ＡＤＡＭ－１２の高度な発現は腫瘍の増殖と相関しているだけでなく、骨溶解の亢進と、動物の生存率の有意な低下とも関連しており、ＡＤＡＭ－１２が骨肉腫の新たな治療ターゲットとなりうることが示唆されている（例えば、George et al.Eur J Cancer 2013,49(9),2253-63を参照のこと）。
【0016】
ＡＤＡＭ－１２は早期ステージ黒色腫と比較して、進行期に有意に過剰発現する（例えば、Cireap et al.Pathol Oncol Res 2013,19(4),755-62を参照のこと）。
【0017】
Ｉｂａらは、癌腫細胞株（例えば、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌腫細胞）のパネル中で細胞接着を支持する場合、ＡＤＡＭ－１２のＣｙｓリッチ領域の重要性を述べた（例えば、Iba et al.Am J Pathol 1999,154(5),1489-501を参照のこと）。Ｉｂａらによれば、ヒトＡＤＡＭ－１２の場合、システインリッチ領域の組換えポリペプチドは、癌腫細胞株のパネルの細胞接着を支持したが、ディスインテグリン様領域は支持しなかった。
【0018】
続いて、ＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域の関与（配列番号１、Gilpin et al.J Biol Chem 1998,73(1),157-66から得た）を調査した。Ｄｙｃｚｙｎｓｋａらは、ＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域における乳癌関連突然変異が、タンパク質の細胞内の輸送および処理を妨害することを示した（例えば、Dyczynska et al.Int J Cancer 2008,122(11),2634-40を参照のこと）。Ｌｉらは、トリプルネガティブ乳癌および乳癌イニシエーション細胞（ＢＴＩＣ）にて、上皮細胞増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）の活性化に関するＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域での役割についても記載している（例えば、Li et al.Breast Cancer Res Treat 2012,135(3),759-69; Li et alBreast Cancer Res Treat 2013,139(3),691-703を参照のこと）。
【0019】
α９β１インテグリンは多種多様な細胞種に発現し、フィブロネクチンおよびテネイシン－Ｃ、特にＡＤＡＭ－１２など多くのリガンドと相互作用する。α９β１の異常発現は、病理学的状態（例えば、癌）を引き起こすか、または悪化させる可能性がある（例えば、Hoye et al.Adv Biol Regul 2012,52(2),326-39を参照のこと）。
【0020】
α９β１インテグリン発現は、基底細胞様(basal-like)乳癌サブタイプにおける生存率の低下と関連している。したがって、この腫瘍サブタイプの新規マーカーとして提唱されている（例えば、Allen et al.J Pathol 2011,223(5),646-58を参照のこと）。反対に、トリプルネガティブ乳癌腫瘍でのダウンレギュレーションは、腫瘍血管新生、腫瘍増殖および転移の減少と相関している（例えば、Wang et al.Int J Cancer 2019,145(10),2767-80を参照のこと）。また、腫瘍－α９β１インテグリン媒介シグナリングは、乳癌の増殖およびリンパ行性転移を促進する特有の原発腫瘍組織微小環境を生み出す際に、中心的な役割を果たす（例えば、Majumder et al.Plos One 2012,7(4),e35094; Ota et al.J Mol Med 2014,92(12),1271-81を参照のこと）。
【0021】
ＡＤＡＭ－１２は、黒色腫細胞でのα９β１インテグリン媒介細胞付着およびＧＰＴ－Ｒａｃ依存性移動を支持するα９β１インテグリンのリガンドとして記載されている（例えば、Lydolph et al.Exp Cell Research 2009,315(19),3312-24を参照のこと）。しかし、このレセプターが発現されない場合、β１インテグリンファミリーの他のメンバーに結合し得ることも開示されている。
【0022】
ＡＤＡＭのディスインテグリン領域は、インテグリンとの相互作用において、重要な役割を果たしているようだ。大多数のＡＤＡＭは、そのディスインテグリン領域中のＲＧＤ－モチーフまたはＸＣＤ－モチーフを介して、インテグリンと相互作用し得る。実際、ＸＣＤ配列領域は、おそらく血小板凝集の抑制およびインテグリン相互作用の主因である（例えば、Lu et al.Cardiovasc Hematol Agents Med Chem 2007,5(1),29-42を参照のこと）。
【0023】
いくつかのＡＤＡＭは、細胞接着および転移の抑制において役割を果たすと仮定されている。しかし、癌および／または転移の治療におけるＡＤＡＭ－１２タンパク質またはそのペプチドの臨床適用に関する文献は、ほとんど見出されない。
【0024】
ＷＯ２０１５／０２８０２７Ａ１は、ＡＤＡＭ－１２のプロ領域に対するモノクローナル抗体および癌の治療のためのそれらの使用を開示している。ＡＤＡＭ－１２のプロ領域は、システインリッチ領域およびディスインテグリン領域から離れた領域である。
【0025】
ＷＯ２００６／０１４９０３Ａ２は、癌組織において高度に発現されるＡＤＡＭ－１２ポリヌクレオチドまたはそれらのコードされたポリペプチド、およびそのモジュレーター（例えば、抗体）を開示している。当該文献は、癌および乾癬を含む増殖性障害の治療および診断の方法を提唱する。当該文献は、癌性組織におけるＡＤＡＭ－１２の発現のみを開示しており、任意の化合物を用いた活性または治療の例は開示していない。
【0026】
ＷＯ２０１１／１００３６２Ａ１は、癌の治療に使用するための、ＡＤＡＭからのディスインテグリン様領域に由来するＡＤＡＭポリペプチドを含む修飾したＡＤＡＭ由来ポリペプチド、およびＮ末端セグメントとしてチオレドキシンを含む融合タンパク質を開示している。上記ポリペプチドの配列は、ＡＤＡＭのディスインテグリン領域の全長配列に近い約８０個のアミノ酸の配列長を有する。
【0027】
横紋筋肉腫（ＲＭＳ）および神経芽細胞腫（ＮＢ）は、一般的な小児癌の例である。早期発症の悪性腫瘍である横紋筋肉腫（ＲＭＳ）は、小児の軟部組織肉腫の中で最も多い種類である（例えば、Masia et al.Br J Cancer 2012,107(8),1374-83を参照のこと）。神経芽細胞腫は、乳児に最も多くみられる癌であり、小児に３番目に多くみられる癌である。神経芽細胞腫を呈する全患者のほぼ半数に、診断時に疾患の転移が認められる（例えば、Maris et al.The Lancet 2007,369 (9579),2106-20を参照のこと）。
【0028】
転移性疾患の患者は極めて予後不良である。したがって、より強力な治療方法が必要とされる。さらに、これらの患者の主要な死因は遠隔転移の形成である。
【0029】
侵襲および転移のプロセスでのα９β１インテグリンの関与は、横紋筋肉腫などの小児癌でも報告されている（例えば、Masia et al.Br J Cancer 2012,107(8),1374-83を参照のこと）。横紋筋肉腫細胞株は、筋形成において、ＡＤＡＭ‐１２／α９β１インテグリン相互作用の役割を確立するためのモデルとして使用されている。しかし、横紋筋肉腫の腫瘍形成におけるＡＤＡＭ－１２の役割は記載されていない。神経芽細胞腫におけるＡＤＡＭ－１２の役割は、いずれも開示されていない。
【0030】
したがって、癌および／または転移性の疾患を有する患者の生存率を改善するために、新たな治療ターゲットを同定し、新たな薬理学的治療を見出すことが緊急に必要とされている。
【0031】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、種々の癌における癌の増殖、侵襲および／または転移形成を、減少または抑制する必要性に対して、解決策を提供する。
本発明は、種々の癌における癌の増殖、侵襲および／または転移形成を、減少または抑制する必要性に対して、解決策を提供する。
【0032】
本発明の発明者らは、広範かつ徹底的な調査の後、驚くべきことに、様々な癌（例えば、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、および乳癌）の転移可能性を低減することができるＡＤＡＭ－１２の一連の合成類似体を見出した。
【0033】
先行技術では、癌増殖の抑制、並びに／または、侵襲および／若しくは転移の減少において、臨床使用するための非天然アミノ酸で置換したＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域に由来する短いペプチドが開示または示唆されていない。
【0034】
本発明は、タンパク質ＡＤＡＭ－１２のアミノ酸配列、具体的にはＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域、より具体的にはアミノ酸配列－ＣＲＤＳＳＮＳＣＤＬＰＥＦＣ、すなわちＡＤＡＭ－１２のディスインテグリン領域内に含まれるＣｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ（配列番号２）に由来する修飾ペプチド（およびその二量体）を提供する。修飾ペプチド（およびその二量体）は血漿中で安定であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの侵襲を抑制することができる。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏでの侵襲および転移を減少させることができる。合成アミノ酸を用いた特定の修飾（例えば、メシチルアミノ酸（例えば、３－メシチルアラニン（２，４，６－トリメチルフェニルアラニン、Ｍｓａ））のフェニルアラニン位置への導入）は、任意に他の修飾（例えば、システイン残基の置換および／または非天然アミノ酸（例えば、ペプチドのアミノ末端中のピログルタミン酸）の包含）と共に、癌増殖の抑制、並びに／または、種々の癌での癌細胞の侵襲および転移の減少若しくは抑制について、改善した薬理学的特性および活性を有する新規の化合物を提供する。システイン残基は、メチオニン、シスチン、または塩基性アミノ酸（例えば、リジン）によって置換され得る。
【0035】
本発明のＡＤＡＭ‐１２類似体を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究は、α９β１インテグリンを過剰発現（ＲＤ）する横紋筋肉腫細胞、およびα９β１インテグリンを過剰発現（ＲＨ３０）しない横紋筋肉腫細胞において、侵襲の減少を示した。この事実から、インテグリンが本発明のＡＤＡＭ－１２類似体の限定的なターゲットにはなり得なかったことが明らかになった。
【0036】
〔定義〕
本発明の理解を容易にするために、本発明に関連して使用するいくつかの用語および表現の意味を挙げる。
本発明の理解を容易にするために、本発明に関連して使用するいくつかの用語および表現の意味を挙げる。
【0037】
「侵襲（Invasion）」および「侵襲性（invasiveness）」およびそれらの複数形は、細胞移動に関し、細胞が運動性となり、組織内の細胞外マトリックスを通るか、または隣接組織に浸潤する能力を定義する。細胞侵襲は、隣接組織への侵入および隣接組織の破壊である。侵襲性となった癌細胞が二次的な部位に播種し、転移を形成することがある。
【0038】
「転移（Metastasis）」およびその複数形は、原発性と呼ばれる先存の癌に関する癌性細胞の病巣であるが、この原発性病巣から離れて発生したものであり、原発性病巣とは連続していない。これらの二次病巣の播種は、リンパ行性経路または血行性経路を介して起こる。
【0039】
用語「処置（treatment）」およびその複数形は、本明細書中で使用する場合、疾患によって引き起こされる有害な臨床症状を予防、改善または排除するための、もしくは前記疾患の発生率または重症度を、低減または排除するための、本発明による化合物の投与を意味する。
【0040】
本発明との関連において、用語「診断」は、ヒトの身体の非存在下で行われる診断方法（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの診断方法）を指す。
【0041】
本発明との関連において、用語「処置用量（therapeutic dose）」およびその複数形は、医学的または生物学的な陽性反応を得るために、個体に投与しなければならない本発明に開示の化合物の必要量を指す。これは、個々の細胞、動物またはヒトであり、研究者、医師、獣医師または個体自身によって投与される化合物である。
【0042】
本発明との関連において、用語「治療剤（therapeutic agent）」およびその複数形は、個体（細胞、動物またはヒト）において、所望の薬理学的効果を生じる任意の薬剤または化合物を指す。
【0043】
本発明との関連において、用語「活性（activity）」または「薬理学的活性（pharmacological activity）」およびそれらの複数形は、本発明に開示の化合物による個体（細胞、動物またはヒト）処置の結果としての生物学的または医学的な応答を指す。これは、研究者、医師、獣医師または個体自身によって投与される化合物である。
【0044】
用語「個体（individual）」およびその複数形は、本発明に記載の化合物を投与し得る任意の有機体を指す。これは、実験、診断、および／または治療を目的とした投与である。個体は、細胞、動物またはヒトであり得る。
【0045】
本発明との関連において、用語「ペプチド二量体（peptide dimer）」およびその複数形は、システイン残基間のジスルフィド架橋によって連結した本発明のペプチドを２モノマー単位含む化合物を指す。２個の等しいペプチドサブユニットのホモ二量体ペプチドにおいて、ペプチド二量体は（ペプチド）２（ジスルフィド架橋）として表す。
【0046】
用語「ペプチド（peptide）」または「ペプチド類似体（peptide analogue）」およびそれらの複数形は、本発明のペプチドおよびペプチド二量体の両方を包含する本発明の化合物の一般的な用語として使用することができる。
【0047】
本明細書において、アミノ酸に使用する略語は、J. Biol. Chem. (1989) 264:633-673に概説されている、生化学命名法に関するＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ合同委員会規則に従う。
【0048】
それゆえ、例えば、Ａｓｎは、ＮＨ２－ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＮＨ２）－ＣＯＯＨを表す。したがって、ペプチド結合を表すダッシュは、記号の右に位置する場合にはアミノ酸の１－カルボキシル基（ここでは、非イオン化慣用形態で表す）のＯＨを排除し、記号の左に位置する場合にはアミノ酸の２－アミノ基のＨを排除する。両方の修飾に同じ記号を使用することができる。
【0049】
アミノ酸構造、ならびにそれらの１文字および３文字の命名コード、および／または、構造を表１に示す。アミノ酸はＬ－またはＤ－の立体配置を有し得る。
【0050】
【表1】
【0051】
略語「Ａｃ－」は、本明細書においてアセチル基（ＣＨ３－ＣＯ－）を命名するために使用する。オクタノイル基は、ｎ－オクタノイル基またはカプリロイル基を指す。
【0052】
本発明との関連において、用語「メシチルアミノ酸（mesityl amino acid）」およびその複数形は、３－メシチルアラニン（２，４，６トリメチルフェニルアラニン、Ｍｓａ）および２－メシチルグリシン（２，４，６トリメチルフェニルグリシン、Ｍｓｇ）を包含する。
【0053】
用語「非環状脂肪族基」は、例えば、直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、およびアルキニル基を包含するために使用するが、これらに限定されない。
【0054】
用語「アルキル基」は、飽和、直鎖または分岐の基に関する。それは１個～２４個、好ましくは１個～１６個、より好ましくは１個～１４個、さらにより好ましくは１個～１２個、一層さらにより好ましくは１個、２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有する。これらは、単結合（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ヘプチル、オクチル、デシル、ドデシル、ラウリル、ヘキサデシル、オクタデシル、アミル、２－エチルヘキシル、２－メチルブチル、５－メチルヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない）によって残りの分子に結合する。
【0055】
用語「アルケニル基」は、２個～２４個、好ましくは２個～１６個、より好ましくは２個～１４個、さらにより好ましくは２個～１２個、一層さらにより好ましくは２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有し、共役または非共役の１個以上の炭素－炭素二重結合、好ましくは１個、２個または３個の炭素－炭素二重結合を有する、直線または分岐の基を指す。アルケニル基は、単結合（例えば、ビニル、オレイル、リノレイルおよび類似の基が挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0056】
用語「アルキニル基」は、２個～２４個、好ましくは２個～１６個、より好ましくは２個～１４個、さらにより好ましくは２個～１２個、一層さらにより好ましくは２個、３個、４個、５個または６個の炭素原子を有し、共役または非共役の１個以上の炭素－炭素三重結合、好ましくは１個、２個または３個の炭素－炭素三重結合を有する、直鎖または分岐の基を指す。アルキニル基は、単結合（例えば、エチニル基、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、ペンチニル（例えば、１－ペンチニル）および類似の基が挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0057】
用語「脂環式基」は、本発明において、例えば、シクロアルキル基またはシクロアルケニル基またはシクロアルキニル基を包含するために使用するが、これらに限定されない。
【0058】
用語「シクロアルキル」は、３個～２４個、好ましくは３個～１６個、より好ましくは３個～１４個、さらにより好ましくは３個～１２個、一層さらにより好ましくは３個、４個、５個または６個の炭素原子を有する、飽和単環式または多環式脂肪族基に関する。シクロアルキルは、単結合（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、メチルシクロヘキシル、ジメチルシクロヘキシル、オクタヒドロインデン、デカヒドロナフタレン、ドデカヒドロフェナレンなどが挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0059】
用語「シクロアルケニル」は、５個～２４個、好ましくは５個～１６個、より好ましくは５個～１４個、さらにより好ましくは５個～１２個、一層さらにより好ましくは５個または６個の炭素原子を有し、共役または非共役の１個以上の炭素－炭素二重結合、好ましくは１個、２個または３個の炭素－炭素二重結合を有する、非芳香族の単環または多環脂肪族基に関する。シクロアルケニルは、単結合（例えば、シクロペント－１－ｅｎ－１－ｙｌ基および類似の基が挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0060】
用語「シクロアルキニル」は、８個～２４個、好ましくは８個～１６個、より好ましくは８個～１４個、さらにより好ましくは８個～１２個、一層さらにより好ましくは８個または９個の炭素原子を有し、共役または非共役の１個以上の炭素－炭素三重結合、好ましくは１個、２個または３個の炭素－炭素三重結合を有する、非芳香族の単環または多環脂肪族基に関する。シクロアルキニルは、単結合（例えば、シクロオクト－２－ｙｎ－１－ｙｌ基などが挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0061】
用語「アリール基」は、６個～３０個、好ましくは６個～１８個、より好ましくは６個～１０個、さらにより好ましくは６個または１０個の炭素原子を有する芳香族基に関する。アリール基は、１個、２個、３個または４個の芳香環を含み、炭素－炭素結合によって結合されるか、あるいは融合される。アリール基は、単結合（例えば、特に、フェニル、ナフチル、ジフェニル、インデニル、フェナントリルまたはアントリルが挙げられるが、これらに限定されない）を介して残りの分子に結合する。
【0062】
用語「アラルキル基」は、７個～２４個の炭素原子を有する、芳香族基によって置換されたアルキル基に関する。アラルキル基には、例えば、－（ＣＨ２）１－６－フェニル、－（ＣＨ２）１－６－（１－ナフチル）、－（ＣＨ２）１－６－（２－ナフチル）、－（ＣＨ２）１－６－ＣＨ（フェニル）２などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0063】
用語「複素環基」は、３員～１０員のヘテロシクリルまたは炭化水素環に関する。複素環基では、１個以上の環原子、好ましくは１個、２個または３個よりも多い環原子が、炭素とは異なる元素（例えば、窒素、酸素または硫黄）であり、飽和または不飽和であってもよい。本発明の目的のために、ヘテロシクリルは、融合環系を含み得る環状、単環状、二環状または三環系であってもよく；窒素、炭素または硫黄原子は、任意に、ヘテロシクリルラジカル中で酸化されてもよく；窒素原子は、任意に、四元化されてもよく；ヘテロシクリルラジカルは、部分的または完全に飽和され得るか、あるいは芳香族であってもよい。好ましくは、複素環という用語は、５員環または６員環に関する。
【0064】
用語「ヘテロアリールアルキル基」は、置換または非置換の芳香族ヘテロシクリル基で置換されたアルキル基に関する。アルキル基は１個～６個の炭素原子を有し、芳香族ヘテロシクリル基は２個～２４個の炭素原子および炭素以外の１個～３個の原子（例えば、－（ＣＨ２）１－６－イミダゾリル、－（ＣＨ２）１－６－トリアゾリル、－（ＣＨ２）１－６－チエニル、－（ＣＨ２）１－６－フリル、－（ＣＨ２）１－６－ピロリジニルなどが挙げられるが、これらに限定されない）を有する。
【0065】
当技術分野で使用する場合、上述で定義した基では、ある程度の置換が生じ得る。したがって、本発明の基のいずれかに置換が生じてもよい。本発明の基について、置換した基に関する本明細書の参照は、特定したラジカルが１個以上の利用可能な位置において、１個以上の置換基によって、好ましくは１、２または３の位置において、より好ましくは１または２の位置において、さらにより好ましくは１の位置において置換され得ることを示す。これらの置換基としては、例えば、Ｃ１－Ｃ４アルキル；ヒドロキシル；Ｃ１－Ｃ４アルコキシル；アミノ；Ｃ１－Ｃ４アミノアルキル；Ｃ１－Ｃ４カルボニルオキシル；Ｃ１－Ｃ４オキシカルボニル；ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素）；シアノ；ニトロ；アジド；Ｃ１－Ｃ４アルキルスルホニル；チオール；Ｃ１－Ｃ４アルキルチオ；アリールオキシル（例えば、フェノキシル）；－ＮＲｂ（Ｃ＝ＮＲｂ）ＮＲｂＲＣ；ここで、ＲｂおよびＲＣは、Ｈ、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ２－Ｃ４アルケニル、Ｃ２－Ｃ４アルキニル、Ｃ３－Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ６－Ｃ１８アリール、Ｃ７－Ｃ１７アラルキル、３－１０員ヘテロシクリルまたはアミノ保護基からなる群より独立して選択される、が挙げられる。
【0066】
ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質に関する「一致の割合」は、本明細書中で使用する場合、当技術分野において一般に帰する意味を有する。したがって、これらの配列の最適アラインメントの後に、比較する２つのアミノ酸配列が同一であるアミノ酸の割合に関する。ここで、前記割合は単に統計的であり、２つのアミノ酸配列間の差は、配列全体にわたってランダムに分布する。「最適アラインメント」は、より大きな一致の割合を生じるアミノ酸配列のアラインメントとして理解される。一致の割合は、アミノ酸が比較する２つの配列において、一致する同一位置の数を測定し、同一位置の数を比較した位置の数で割り、得られた結果に１００を掛けることによって計算し、２つの配列間の一致の割合を得た。２つのアミノ酸配列間の配列の比較は、手動で、または当技術分野で公知のコンピュータプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）アルゴリズム）の手段によって行うことができる。
【0067】
〔本発明の化合物〕
本発明の第一態様は、一般式（Ｉ）のペプチド：
Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－ＡＡ３－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｒ２ （Ｉ）
その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、以下を特徴とするもの；
ＡＡ１ Ｐｙｒ、または、結合であり；
ＡＡ２は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
ＡＡ３は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、または、Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）（Ｃｙｓｔｉｎｅ）であり；
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）、または、２，４，６－トリメチルフェニルグリシン（Ｍｓｇ）であり；
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換の脂環式、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、ポリエチレングリコールに由来するポリマー、およびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、置換または非置換のヘテロシクリル、および置換または非置換のヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４、－ＯＲ３、および－ＳＲ３からなる群より独立して選択され、ここで、Ｒ３およびＲ４はＨ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のアラルキルからなる群より選択される、
ペプチド、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩を指す。
本発明の第一態様は、一般式（Ｉ）のペプチド：
Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－ＡＡ３－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｒ２ （Ｉ）
その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、以下を特徴とするもの；
ＡＡ１ Ｐｙｒ、または、結合であり；
ＡＡ２は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
ＡＡ３は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、または、Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）（Ｃｙｓｔｉｎｅ）であり；
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）、または、２，４，６－トリメチルフェニルグリシン（Ｍｓｇ）であり；
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換の脂環式、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、ポリエチレングリコールに由来するポリマー、およびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、置換または非置換のヘテロシクリル、および置換または非置換のヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４、－ＯＲ３、および－ＳＲ３からなる群より独立して選択され、ここで、Ｒ３およびＲ４はＨ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のアラルキルからなる群より選択される、
ペプチド、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩を指す。
【0068】
好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）中のＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）である。
【0069】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）中のＡＡ２およびＡＡ５は、Ｌｙｓまたは結合から独立して選択される。
【0070】
Ｒ１およびＲ２の基は、ペプチド配列のアミノ末端（Ｎ末端）およびカルボキシ末端（Ｃ末端）にそれぞれ結合する。
【0071】
本発明の好ましい実施形態では、Ｒ１は、ＨまたはＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される。好ましくは、Ｒ５は、置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル、置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル、および置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキルからなる群より選択される。より好ましくは、Ｒ１は、Ｈ、アセチル、ｔｅｒｔ－ブタノイル、ヘキサノイル、２－メチルヘキサノイル、シクロヘキサンカルボキシル、オクタノイル、デカノイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、オレオイル、およびリノレオイルから選択される。さらにより好ましくは、Ｒ１は、Ｈ、アセチル、オクタノイル、ラウロイル、ミリストイルまたはパルミトイルである。さらにより好ましい実施形態では、Ｒ１は、アセチル、オクタノイルまたはパルミトイルである。
【0072】
別の好ましい実施形態によれば、Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４、－ＯＲ３または－ＳＲ３であり、ここで、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される。好ましくは、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル、置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル、および置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキルからなる群より独立して選択される。Ｒ３およびＲ４は、任意に、飽和または不飽和炭素－炭素結合を介して結合して、窒素原子と環を形成することができる。好ましくは、Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４または－ＯＲ３である。より好ましくは、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルおよびヘキサデシルからなる群より選択される。さらにより好ましくは、Ｒ３はＨであり、Ｒ４は、Ｈ、メチル、エチル、ヘキシル、ドデシルおよびヘキサデシルからなる群より選択される。さらにより好ましい実施形態では、Ｒ２は、－ＯＨおよび－ＮＨ２より選択される。
【0073】
特定の態様では、本発明はまた、本発明の式（Ｉ）で表されるペプチドを２個含むペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩に関する。前記ペプチド二量体は、ジスルフィド架橋ペプチド二量体であることを特徴とする。
【0074】
好ましい態様では、ペプチド二量体はホモ二量体ペプチドである。また、好ましくは、ペプチド二量体は、ＡＡ３がＣｙｓであり、ＡＡ２およびＡＡ５が独立してＬｙｓまたは結合である場合に、本発明の式（Ｉ）の２つの等しいペプチドモノマー間のジスルフィド架橋によって形成される。
【0075】
好ましくは、本発明のペプチドまたはペプチド二量体は、以下からなる群より選択される：
Ｒ１－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号３－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（配列番号４－Ｒ２）
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号５－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号６－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号７－Ｒ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号８－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号９－Ｒ２）
ここで、Ｒ１およびＲ２は上述で定義した通りである。
Ｒ１－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号３－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（配列番号４－Ｒ２）
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号５－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号６－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号７－Ｒ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号８－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号９－Ｒ２）
ここで、Ｒ１およびＲ２は上述で定義した通りである。
【0076】
より好ましくは、本発明のペプチドまたはペプチド二量体は、以下からなる群より選択される：
Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（配列番号４－ＮＨ２）
Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号６－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号７－ＮＨ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号９－ＮＨ２）
ペプチドおよびペプチド二量体を形成するアミノ酸は、Ｌ－またはＤ－立体配置、またはそれらの組み合わせを有し得る。
Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（配列番号４－ＮＨ２）
Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号６－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号７－ＮＨ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号９－ＮＨ２）
ペプチドおよびペプチド二量体を形成するアミノ酸は、Ｌ－またはＤ－立体配置、またはそれらの組み合わせを有し得る。
【0077】
例えば、ＡＡ５がＬｙｓであり得ることが示される場合、ＡＡ５は、Ｌ－ＬｙｓまたはＤ－Ｌｙｓより選択されることが理解される。本明細書に記載の調製方法は、当業者が適切な配置を有するアミノ酸を選択することによって、本発明のペプチドまたはペプチド二量体の各々の立体異性体を得ることに役立つ。
【0078】
好ましい実施形態では、本発明のペプチドまたはペプチド二量体のアミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。本発明のペプチドおよびペプチド二量体の好ましい構造は、純粋な異性体（すなわち、エナンチオマーまたはジアステレオマー）である。
【0079】
本発明との関連において、用語「非暗号化アミノ酸（uncodified amino acid）」およびその複数形は、天然または非天然の遺伝暗号によって暗号化されていないアミノ酸（例えば、ピログルタミン酸、またはシスチン、または合成アミノ酸２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）、または２，４，６－トリメチルフェニルグリシン（Ｍｓｇ）（表１参照））に関する。
【0080】
本発明のペプチドおよびペプチド二量体のアミノ酸配列は、所与の配列の修飾を含み得る。このような修飾は、当業者に公知である。例えば、本発明のペプチドおよびペプチド二量体のアミノ酸配列の１個以上のＬ－アミノ酸は、それらの安定性を増大させるために、Ｄ－アミノ酸によって置換してもよい。例えば、本発明のペプチドおよびペプチド二量体のアミノ酸配列のＮ－アシル化、および／または、Ｃ－アミド化またはＣ－エステル化は、タンパク質分解に対するそれらの耐性を増大させ得る。例えば、本発明のペプチドの１個以上のアミノ酸配列の環化は、それらの安定性および透過性を増大させ得る。例えば、本発明のペプチドおよびペプチド二量体のアミノ酸配列の１個以上のアミノ酸は、それらの安定性を改善するために、Ｎ－アルキル化（一般にＮ－メチル化）され得る。例えば、本発明のペプチドおよびペプチド二量体の１個以上のアミノ酸配列は、１個以上の巨大分子（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アルブミン）に結合され得る。結果として、１個以上のアミノ酸配列は、それらの安定性を改善し、および／または腎クリアランスを減少させる。
【0081】
本発明が提供するペプチドおよびペプチド二量体の薬学的に許容される塩もまた、本発明に含まれる。用語「薬学的に許容される塩」は、動物、特にヒトにおいて、その使用のために承認される塩を意味し、塩基付加塩の形成のために使用する塩を含む。薬学的に許容される塩は、無機（例えば、特に、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、またはアルミニウムなどが挙げられるが、これらに限定されない）か；または、有機（例えば、特に、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、アルギニン、リジン、ヒスチジン、またはピペラジンなどが挙げられるが、これらに限定されない）または塩基付加塩であり、有機（例えば、特に、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、安息香酸塩、アスパラギン酸塩、ジアスパラギン酸塩、トリアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、コハク酸などが挙げられるが、これらに限定されない）か；または、無機（例えば、特に、塩化物、硫酸塩、ホウ酸塩、または炭酸塩などが挙げられるが、これらに限定されない）である。塩の性質は、それが薬学的に許容されるならば重要ではない。本発明のペプチドおよびペプチド二量体の薬学的に許容される塩は、先行技術において、従来の公知の方法によって得ることができる（例えば、Berge et al.J Pharm Sci 1977,66(1),1-19を参照のこと）。
【0082】
本発明のペプチドについて本明細書に記載の活性を示す保存的または非保存的な置換、より好ましくは保存的置換を有するペプチドまたはペプチド二量体も、本発明に含まれる。本発明のペプチドまたはペプチド二量体のいずれかに関して、８０％、より好ましくは８５％、より好ましくは９０％、より好ましくは９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％、または９９％の割合で一致するペプチドまたはペプチド二量体も、本発明に含まれる。当該ペプチドは、本発明のペプチドに関して、本明細書に記載の活性、より好ましくは保存的置換を示す。
【0083】
〔調製方法〕
本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩は、当技術分野で知られている従来の方法にしたがって合成することができる。本発明の一実施形態では、ペプチドおよびペプチド二量体は、溶液相または固相ペプチド合成方法によって合成する。
本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩は、当技術分野で知られている従来の方法にしたがって合成することができる。本発明の一実施形態では、ペプチドおよびペプチド二量体は、溶液相または固相ペプチド合成方法によって合成する。
【0084】
固相合成方法は、例えば、Stewart J.M. and Young J.D.,1984, “Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd edition”Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanszky M., and Bodanszky A., 1984 “The practice of Peptide Synthesis”Springer Verlag, Berlin; Lloyd-Williams P., Albericio F. and Giralt E. (1997) “Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins”CRC, Boca Raton, FL, USAに記載されている。溶液法における合成および固相合成の組み合わせ、ならびに溶液法または酵素合成は、Kullmann,J Biol Chem 1980,255(17),8234-8238に記載されている。
【0085】
例えば、本発明のペプチドおよびペプチド二量体を得る方法は、以下の工程を含む：
－Ｎ末端が保護されており、Ｃ末端が遊離であるアミノ酸を、Ｎ末端が遊離であり、Ｃ末端が保護されているか、または固体支持体に結合しているアミノ酸にカップリングする工程；
－Ｎ末端の保護基を除去する工程；
－所望のペプチド配列が得られるまで、Ｎ末端の保護基のカップリングおよび除去の配列を繰り返す工程；
－Ｃ末端の保護基を除去、または固体支持体から切断する工程。
－Ｎ末端が保護されており、Ｃ末端が遊離であるアミノ酸を、Ｎ末端が遊離であり、Ｃ末端が保護されているか、または固体支持体に結合しているアミノ酸にカップリングする工程；
－Ｎ末端の保護基を除去する工程；
－所望のペプチド配列が得られるまで、Ｎ末端の保護基のカップリングおよび除去の配列を繰り返す工程；
－Ｃ末端の保護基を除去、または固体支持体から切断する工程。
【0086】
－必要に応じて、得られたペプチドを酸化して、ジスルフィド架橋ペプチド二量体を得る工程。
【0087】
本発明の一実施形態では、本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩は、以下の工程を含む方法によって調製する：
ａ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｂ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断する工程（好ましくは、酸処理による）；
ｃ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、環状ペプチドまたはペプチド二量体を得る工程；
ｄ）必要に応じて、保護基を除去する工程（好ましくは、トリフルオロ酢酸を用いる）；
あるいは、
ｉ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｉｉ）必要に応じて、前記ポリマー支持体中で、固相ペプチドサイクリングまたは二量体形成を行う工程；
ｉｉｉ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断し、必要に応じて、同時に保護基を除去する工程（好ましくは、トリフルオロ酢酸を用いた処理による）；
ｉｖ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、ペプチド二量体を得る工程。
ａ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｂ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断する工程（好ましくは、酸処理による）；
ｃ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、環状ペプチドまたはペプチド二量体を得る工程；
ｄ）必要に応じて、保護基を除去する工程（好ましくは、トリフルオロ酢酸を用いる）；
あるいは、
ｉ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｉｉ）必要に応じて、前記ポリマー支持体中で、固相ペプチドサイクリングまたは二量体形成を行う工程；
ｉｉｉ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断し、必要に応じて、同時に保護基を除去する工程（好ましくは、トリフルオロ酢酸を用いた処理による）；
ｉｖ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、ペプチド二量体を得る工程。
【0088】
好ましい態様では、本発明のペプチド二量体は、液相中で本発明のペプチドを酸化することによって得られる。ペプチドのシステイン残基の遊離スルフヒドリル基を酸化して、ジスルフィド架橋ペプチド二量体を形成することができる。好ましくは、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いて酸化を行う。
【0089】
Ｃ末端はポリマー支持体に結合し、プロセスは固相で展開することが好ましい。したがって、当該プロセスは、保護されたＮ末端および遊離のＣ末端を有するアミノ酸の、遊離のＮ末端とポリマー支持体に結合したＣ末端とを有するアミノ酸へのカップリング工程；Ｎ末端から保護基を除去する工程；および前記手順を必要な回数繰り返してターゲットペプチド配列を得、最後に合成したペプチドまたはペプチド二量体を、元のポリマー支持体から切断する工程、を含む。必要に応じて、ペプチドは環状ペプチドであってもよく、環化工程はポリマー支持体から切断する前または後に行ってもよい。アミノ酸側鎖の官能基は、合成の間、一時的または永久的な保護基を用いて適切な保護を維持する。それらは、ポリマー支持体からペプチドを切断するプロセスと同時にまたは直交して脱保護され得る。
【0090】
あるいは、ポリマー支持体上またはポリマー支持体に予め結合させたペプチド断片上に、ペプチド断片をカップリングさせることによる収束的なストラテジーによって固相合成を行うことができる。収束的な合成ストラテジーは当業者に公知であり、Lloyd-Williams P. et al. Tetrahedron 1993, 49(48), 11065-11133に記載されている。
【0091】
本方法は、当技術分野で公知の標準的な方法および条件を用いて、Ｎ末端およびＣ末端を脱保護する工程および／またはペプチドをポリマー支持体から不明確な順序で切断する追加の工程を含んでいてもよい。その後、前記末端の官能基を修飾してもよい。Ｎ末端およびＣ末端の任意の修飾は、ポリマー支持体に固定した本発明の式（Ｉ）のペプチドを用いて、またはペプチドがポリマー支持体から切断された後に行うことができる。
【0092】
必要に応じて、Ｒ１は本発明のペプチドのＮ末端をＲ１－Ｚ化合物と反応させることによって導入してもよい。ここで、Ｒ１は上述の意味を有し、Ｚは脱離基（例えば、特に、トシル基、メシル基、およびハロゲン基が挙げられるが、これに限定されない）であり；また、適切な塩基および溶媒の存在下にて、求核置換反応を介して、断片はＮ－Ｃ結合形成に関与せず、一時的または永久的な保護基で便宜的に保護される官能基を有する。Ｒ１はまた、本発明の化合物のＮ末端と、Ｒ５ＣＯＯＨ基またはそのエステル、酸ハロゲン化物またはその無水物との反応によって導入してもよい。Ｒ５はすでに上述で定義した通りである。
【0093】
必要に応じて、および／または追加的に、適切な溶媒と、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、またはトリエチルアミン）、または添加剤（例えば、１－ハイドベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、または１－ハイドロアザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ））と、脱水剤（例えば、特に、カルボジイミド、ウロニウム塩、ホスホニウム塩、またはアミジニウム塩）との存在下での、ＨＲ２化合物（ここでＲ２は、－ＯＲ３、－ＮＲ３Ｒ４、または－ＳＲ３）と本発明の式（Ｉ）のペプチドに対応する相補的断片（Ｒ２は－ＯＨである）との反応によって、Ｒ２ラジカルが導入され得る。それにより、一般式（Ｉ）の本発明のペプチドを得る。ここで、前記断片は、Ｎ－Ｃ、Ｏ－Ｃ、またはＳ－Ｃの結合形成に関与せず、一時的または永久的な保護基によって適切に保護される官能基を有する。あるいは、他のＲ２ラジカルは、ポリマー支持体からペプチドを切断するプロセスに同時に組み込み得る。
【0094】
当業者は、Ｃ末端およびＮ末端の脱保護／切断の段階、ならびにそれらのその後の誘導体化は、先行技術にて公知の方法にしたがって、不明確な順序で行ってもよいことを容易に理解する。（例えば、Smith M. B. and March J., 1999 “March’s Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure”, 5th Edition, John Wiley & Sons, 2001を参照のこと）。
【0095】
用語「保護基（protecting group）」およびその複数形は、有機官能基をブロックし、制御した条件下で除去され得る基に関する。保護基、それらの相対反応性、およびそれらが不活性で維持される状態は、当業者に公知である。
【0096】
アミノ基の代表的な保護基の例は、アミド（例えば、アミドアセテート、アミドベンゾエート、アミドピバレート；カルバメート（例えば、特に、ベンジルオキシカルボニル（ＣｂｚまたはＺ）、２－クロロベンジルオキシカルボニル（ＣｌＺ）、ｐａｒａ－ニトロベンジルオキシカルボニル（ｐＮＺ）、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２，２，２-トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、またはアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ））、トリチル（Ｔｒｔ）、メトキシトリチル（Ｍｔｔ）、２，４－ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）、Ｎ－［１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシル－１－リデン）エチル］（Ｄｄｅ）、１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソ－シクロへキシリデン）－３－メチル－ブチル（ｉｖＤｄｅ）、１－（１－アダマンチル）－１－メチルエトキシ－カルボニル（Ａｄｐｏｃ）；好ましくは、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである。
【0097】
カルボキシル基の代表的な保護基の例は、エステル（例えば、特に、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔＢｕ）エステル、アリル（Ａｌｌ）エステル、トリフェニルメチルエステル（トリチルエステル、Ｔｒｔエステル）、シクロヘキシル（ｃＨｘ）エステル、ベンジル（Ｂｚｌ）エステル、ｏｒｔｈｏ－ニトロベンジルエステル、ｐａｒａ－メトキシベンジルエステル、トリメチルシリルエチルエステル、２－フェニルイソプロピルエステル、フルオレニルメチル（Ｆｍ）エステル、４－（Ｎ－（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）－３－メチルブチル）ベンジル（Ｄｍａｂ）エステルであり；本発明の好ましい保護基は、Ａｌｌ、ｔＢｕ、ｃＨｅｘ、Ｂｚｌ、およびＴｒｔエステルである。
【0098】
三官能性アミノ酸は、合成プロセスの間、Ｎ末端およびＣ末端の保護基に直交する一時的または永久的な保護基を用いて保護することができる。上述のアミノ基の保護基は、リジン側鎖のアミノ基を保護するために使用され；アルギニン側鎖のグアニジン基は、ニトロ基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ｐａｒａ－トルエンスルホニル（ｔｏｓｙｌ、Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホニル（Ｐｍｃ）、２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（Ｐｂｆ）、または４－メトキシ－２，３，６－トリメチルベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）で保護され得、セリンおよびトレオニンの側鎖は、ｔｅｒｔ－ブチル（ｔＢｕ）エステルで保護され得；システイン側鎖は、トリチルおよびアセトアミドメチルからなる群より選択される保護基で保護され得；ならびに、アスパラギン側鎖は、メトキシトリチル、トリチル、およびキサンチルからなる群より選択される保護基で保護され得るか、または、アスパラギン側鎖は、保護されていなくてもよい。アスパラギン酸およびグルタミン酸の側鎖のカルボキシル基を保護するために、エステル（例えば、特に、ｔｅｒｔ－ブチルエステル（ｔＢｕ）、アリルエステル（Ａｌｌ）、トリフェニルメチルエステル（トリチルエステル、Ｔｒｔ）、シクロヘキシルエステル（ｃＨｘ）、ベンジルエステル（Ｂｚｌ）、ｏｒｔｈｏ－ニトロベンジルエステル、ｐａｒａ－ニトロベンジルエステル、ｐａｒａ－メトキシベンジルエステル、トリメチルシリルエチルエステル、２－フェニルイソプロピルエステル、フルオレニルメチルエステル（Ｆｍ）、４－（Ｎ－（１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキシリデン）－３－メチルブチル）ベンジルエステル（Ｄｍａｂ））を使用することができる。メチオニン側鎖は、スルホキシドで保護されるか、または保護されずに使用される。
【0099】
本発明の好ましい三官能性アミノ酸保護基は、セリンおよびトレオニン中、ならびにアスパラギン酸側鎖およびグルタミン酸側鎖中のｔＢｕエステル；リシン側鎖中のＢｏｃ、システイン側鎖中のＴｒｔ、およびＮ末端の一時的な保護基としてのＦｍｏｃまたはＢｏｃである。
【0100】
これらおよび追加の保護基、それらの導入および除去の例は、文献Greene T.W. and Wuts P.G.M., (1999) “Protective groups in organic synthesis”John Wiley & Sons, New York; Atherton B. and Sheppard R.C. (1989) “Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach”IRL Oxford University Pressに見出せる。用語「保護基（protecting group）」およびその複数形はまた、固相合成にて使用するポリマー支持体を含む。
【0101】
合成を完全にまたは部分的に固相にて行う場合、本発明の手順で用いる可能性のある固体支持体は、ポリスチレン支持体、ポリスチレンにグラフトされたポリエチレングリコールなど（例えば、ｐ－メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ）（Matsueda et al. Peptides 1981, 2(1), 45-50を参照のこと）、２－クロロトリチル樹脂（Barlos et al. Tetrahedron Lett 1989, 30, 3943-3946; Barlos K. et al. Tetrahedron Lett. 1989, 30, 3947-3951を参照のこと）、ＴｅｎｔａＧｅｌ樹脂（Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ ＧｍｂＨ）、ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘ樹脂（Ｍａｔｒｉｘ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ、Ｉｎｃ）などが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられる。これらは、不安定なリンカー（例えば、５－（４－アミノメチル－３，５－ジメトキシフェノキシ）吉草酸（ＰＡＬ）（Albericio et al. J Org Chem 1990, 55(3), 3730-3743を参照のこと）、２－［４－アミノメチル－（２，４－ジメトキシフェニル）］フェノキシル酢酸（ＡＭ）（Rink 1987,Tetrahedron Lett 28(33),3787-90を参照のこと）、Ｗａｎｇ（Wang,J Am Chem Soc 1973,95(4),1328-33を参照のこと）など）を含んでも含まなくてもよい。これらは、溶液中、または固相環式および続く同時発生のペプチドの脱保護および切断においてさえ、脱保護工程を用いて溶液中で半分保護したペプチドの切断および環形成に役立つ。
【0102】
〔薬学的組成物〕
本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、哺乳動物の身体、好ましくはヒトの身体において、ペプチドおよびペプチド二量体とそれらの作用部位との間の接触を引き起こす任意の手段によって、それらを含有する組成物の形態で投与することができる。
本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、哺乳動物の身体、好ましくはヒトの身体において、ペプチドおよびペプチド二量体とそれらの作用部位との間の接触を引き起こす任意の手段によって、それらを含有する組成物の形態で投与することができる。
【0103】
この点に関して、本発明の別の態様は、本発明の少なくとも１つのペプチドおよび／または少なくとも１つのペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩を薬学的な有効量含む、薬学的組成物である。本発明の薬学的組成物は、凍結乾燥または噴霧乾燥によって得られる本発明のペプチドまたはペプチド二量体を含むことができ、その投与に適した溶媒中に再構成することができる。
【0104】
本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、それらの配列の性質、またはＮ末端および／またはＣ末端における任意の起こり得る修飾にしたがって、可変的な水溶性を有する。したがって、本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、水溶液を用いる方法によって、組成物中に組み込むことができる。水に溶解しないものは、薬学的に許容される従来の溶媒（例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、プロピレングリコール、グリセロール、ブチレングリコール、またはポリエチレングリコール、またはそれらの任意の組合せなどが挙げられるが、これらに限定されない）中で可溶化することができる。
【0105】
投与しなければならない本発明のペプチドおよびペプチド二量体の薬学的な有効量、およびそれらの用量は、多数の因子（年齢、患者の状態、治療または予防する障害または疾病の性質または重症度、投与の経路および頻度、ならびに使用するペプチドの特異的性質が挙げられる）に依存する。
【0106】
「薬学的な有効量」は、所望の薬学的効果（すなわち、治療すべき病理の予防治療および／または改善）を提供するために、非毒性であるが充分な量の本発明のペプチドまたはペプチド二量体を意味すると理解される。本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、本発明の薬学的組成物において、所望の薬学的効果を達成するための薬学的な有効濃度にて使用する；それらの好ましい形態では、ヒトにおいて有効な１日用量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ～２５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．００５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。
【0107】
薬学的組成物の投与頻度は、例えば、１ヶ月間に１回、２週間に１回、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、または１日間に１回とすることができるが、これらに限定されない。
【0108】
本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、その混合物、および／またはそれらの薬学的に許容される塩はまた、送達システムおよび／または薬学的持続放出システムに組み込まれてもよい。
【0109】
本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤および／または補助剤を含んでいてもよい。薬学的に許容される賦形剤の数および性質は、所望の投与方法に依存する。薬学的に許容される賦形剤は、当該分野の専門家に公知である（Rowe R.C., Sheskey P.J., Quinn, M.E. (2009) “Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th Edition”, Pharmaceutical Press and American Pharmacists Associationを参照のこと）。前記組成物は、当技術分野で知られている従来の方法を用いて調製することができる。
【0110】
用語「送達システム（delivery system）」およびその複数形は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体を投与する希釈剤、補助賦形剤または担体に関する。これらの薬学的担体は、液体（例えば、水、油、または界面活性剤（石油、動物、植物、または合成由来のもの（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油、ヒマシ油、ポリソルベート、ソルビタンエステル、エーテル硫酸塩、硫酸塩、ベタイン、グリコシド、マルトシド、脂肪アルコール、ノノキシノール、ポロキサマー、ポリオキシエチレン、ポリエチレングリコール、デキストロース、グリセロール、ジギトニンなどが挙げられるが、これらに限定されない）を含む））であってもよい。当業者は、本発明のペプチドおよびペプチド二量体を投与し得る種々の送達システムにて、使用することができる希釈剤、補助剤、または賦形剤を知っている。
【0111】
用語「持続放出」は、ある期間中に前記化合物の徐放を提供し、好ましくは、必ずしもそうではないが、ある期間にわたって比較的一定の化合物放出レベルを有する化合物の送達システムを指す従来の意味で使用する。
【0112】
送達システムまたは持続放出システムの例は、限定されないが、リポソーム、混合リポソーム、オレソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造脂質担体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤－リン脂質混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェア、およびナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセル、およびナノカプセル、ならびにマイクロエマルジョンおよびナノエマルジョンが挙げられる。これらは、活性成分のより大きな生物学的有用性を達成するために、および／またはその薬物動態学的および薬力学的な特性を改善するために添加してもよい。
【0113】
本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、その混合物、および／またはそれらの薬学的に許容される塩の薬学的組成物は、所望の投与形態の処方に必要な薬学的に許容される賦形剤を含む任意の適切な経路によって、局所または系統的な使用（例えば、局所、経腸、または非経口の経路が挙げられるが、これらに限定されない）によって投与することができる。本発明との関連において、用語「局所」経路は、経皮および眼の経路を含む。用語「経腸」経路は、消化器系（例えば、経口、頬、胃、舌下、および直腸経路）への投与を含む。用語「非経口」は、鼻、耳介、眼、直腸、尿道、膣、皮下、皮内、血管内注射（例えば、静脈内、筋肉内、眼内、脊髄内、頭蓋内、頚部内、脳内、髄膜内、関節内、肝臓内、胸部内、気管内、髄腔内、および腹腔内、および任意の他の類似の注射または注入技術）を指す。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの処置はまた、例えば、損傷細胞培養物および／または幹細胞中での処置、およびｅｘ ｖｉｖｏでの処置も考慮する。
【0114】
より具体的には、本発明のペプチド、ペプチド二量体、および組成物による処置は、投与経路が皮下であることが好ましいため、ｉｎ ｖｉｖｏで実施する。
【0115】
本発明のペプチドおよびペプチド二量体、それらの立体異性体、その混合物、および／またはそれらの薬学的に許容される塩の薬学的組成物は、他の治療剤および／または治療処置との併用療法によって投与することができる。好ましくは、上記治療剤および／または治療処置は、抗癌剤および／または処置である。
【0116】
〔使用〕
別の態様に関して、本発明は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または薬剤として使用するための本発明の薬学的組成物に関する。
別の態様に関して、本発明は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または薬剤として使用するための本発明の薬学的組成物に関する。
【0117】
本発明の別の態様は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または癌および／もしくは転移の治療ならびに／または診断にて使用するための本発明の薬学的組成物に関する。具体的には、本発明のペプチドおよびペプチド二量体は、種々の癌における癌増殖を抑制し、および／または癌細胞の浸潤および転移を減少または抑制することができる。
【0118】
本発明は、癌および／もしくは転移の治療ならびに／または診断の方法に関する。当該方法は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または本発明の薬学的組成物の、それを必要とする個体（好ましくは、ヒト）への薬学的な有効量の投与を含む。
【0119】
本発明は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物および／もしくはその薬学的に許容される塩、または薬剤の製造のための本発明の薬学的組成物の使用に関する。
【0120】
本発明は、癌および／もしくは転移の診断ならびに／または治療を目的とした薬剤の製造のための、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または本発明の薬学的組成物の使用に関する。
【0121】
一実施形態では、本発明は、癌および／もしくは転移の診断における本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または本発明の薬学的組成物の使用に関する。前記診断は、ヒトの身体を用いずに行われる。これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの診断と言われている。
【0122】
したがって、好ましい態様では、本発明は、本発明のペプチドまたはペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／もしくはその薬学的に許容される塩、または本発明の薬学的組成物の使用を含む、癌および／もしくは転移のｉｎ ｖｉｔｒｏでの診断方法を指す。
【0123】
癌および／または転移は、神経芽細胞腫、肉腫、軟部組織肉腫（例えば、横紋筋肉腫（胎児性、胞巣状、多形性、および紡錘細胞／硬化性を含む））、内膜肉腫、未分化紡錘細胞肉腫、未分化多形性肉腫、未分化円形細胞肉腫、未分化類上皮細胞肉腫、脂肪肉腫、異型脂肪性腫瘍、悪性孤立性線維性腫瘍、炎症性筋線維芽細胞腫、低悪性度筋線維芽細胞肉腫、線維肉腫（成人および硬化性類上皮型の変種を含む）、粘液線維肉腫、低悪性度線維類粘液肉腫、軟部組織の巨細胞腫瘍、平滑筋肉腫、悪性グロムス腫瘍、血管内皮腫（網状、偽筋原性および類上皮を含む）、軟部組織の血管肉腫、骨外性骨肉腫、悪性消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、悪性末梢神経鞘種（類上皮の変種を含む）、悪性トリトン腫瘍、悪性顆粒細胞腫、悪性骨化性粘液性腫瘍、間質肉腫、筋上皮腫、悪性リン酸塩尿性間葉系腫瘍、滑膜肉腫（紡錘細胞および二相性滑膜肉腫を含む）、類上皮肉腫、胞巣状軟部肉腫、軟部組織の明細胞肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨外性ユーイング肉腫、繊維形成性小円形細胞性腫瘍、腎外性横紋筋様腫瘍、血管周囲類上皮細胞腫瘍、骨肉腫（bone sarcomas）（例えば、骨肉腫（osteosarcoma））、軟骨肉腫、およびユーイング肉腫、血管内皮腫、血管肉腫、線維肉腫、および筋線維肉腫、脊索腫、エナメル上皮腫、乳癌（例えば、乳管癌、小葉癌、および乳頭癌）、結腸癌、直腸癌、肛門癌、結腸直腸癌、脳腫瘍（例えば、膠芽腫、星細胞腫、または髄芽腫）、悪性神経膠腫、前立腺癌、黒色腫およびその他の皮膚癌、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌（例えば、高悪性度漿液性卵巣癌）、子宮体癌、リンパ腫、頭頸部癌、口腔癌、唾液腺癌、網膜芽細胞腫、消化器癌、食道癌、胃癌、膵癌、胆のう癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、腎臓癌（kidney cancer）または腎臓癌（renal cancer）（例えば、ウィルムス腫瘍または腎芽細胞腫）、膀胱癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、下垂体腺腫、扁平上皮癌、精巣癌、白血病（例えば、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞腫または多発性骨髄腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0124】
理解を深めるために、添付の図面を参照して、以下で本発明をより詳細に説明する。当該図面は、例として、例示的かつ非限定的な例を参照して示す。
【0125】
〔図面の簡単な説明〕
図１．６個の横紋筋肉腫細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
図１．６個の横紋筋肉腫細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【0126】
図２．３個の神経芽細胞腫細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【0127】
図３：６個の異なる乳癌細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【0128】
図４．賦形剤（ＰＢＳ、実線、－）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（点線、・・・）、または２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（破線、－－－）で処置した横紋筋肉腫転移マウスの２７週間の研究に沿った無事象生存カプラン－マイヤー曲線。ｙ軸は無事象生存率（％）を示す。ｘ軸は週（週数）を示す。
【0129】
図５．尾静脈にＲＤ細胞を注射し、賦形剤（ＰＢＳ）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、および２ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、または０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２、および２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２で処置したマウスの２７週間の研究に沿ったマウス１匹当たりの平均転移数。横線は、平均±ＳＥＭを示す。統計的有意性：＊ｐ－値＜０．０５；＊＊ｐ－値＜０．０１。ｙ軸はマウス当たりの転移数を示す。ｘ軸は処置群を示し、種々の群は左から右に、賦形剤（ＰＢＳ）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、２ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２、２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２である。
【0130】
図６．賦形剤（ＰＢＳ、実線、－）、１ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（点線、・・・）または２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（破線、－－－）で処置した神経芽細胞腫転移性マウスの１３週間の研究に沿った無事象生存カプラン－マイヤー曲線。ｙ軸は無事象生存率（％）を示す。ｘ軸は週（週数）を示す。
【0131】
〔実施例〕
本明細書中にて提供する以下の具体的な実施例は、本発明の性質を例示するのに役立つ。これらの実施例は単に例示の目的のために挙げており、本明細書中で権利を主張する本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
本明細書中にて提供する以下の具体的な実施例は、本発明の性質を例示するのに役立つ。これらの実施例は単に例示の目的のために挙げており、本明細書中で権利を主張する本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0132】
〔略語〕
本明細書中で使用する略語は、以下の意味を有する：
Ａｃ２Ｏ、無水酢酸；ＡＣＮ、アセトニトリル；ＡｃＯＨ、酢酸；Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル；ＤＣＭ、ジクロロメタン；ＤＭＥＭ、ダルベッコ修飾イーグル培地（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）；ＤＩＥＡ、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＩＰＣＤＩ、ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；Ｅｔ２Ｏ、ジエチルエーテル；ｅｑ、等価物；ＥＳＩ－ＭＳ、エレクトロスプレーイオン化質量分析；Ｅｔ２Ｏ、ジエチルエーテル；Ｆｍｏｃ、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル；ＨＯＢＴ、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィー；ＩＴＧＡ９、インテグリンα９β１；ｉ．ｖ．、静脈内；ｐ－ＭＢＨＡ樹脂、４－メチルベンズヒドリルアミン樹脂；ＭｅＯＨ、メタノール；ＭＷ、分子量；μＬ、マイクロリットル；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ＲＰ－ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ；ｒｐｍ、毎分回転数；ｓ．ｃ、皮下；ｔＢｕ、ｔｅｒｔ－ブチル；ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸；ＴＩＳ、トリイソプロピルシラン；ＴＩＯ、チオアニソール；ｔｒ、滞留時間；Ｔｒｔ、トリチル。
本明細書中で使用する略語は、以下の意味を有する：
Ａｃ２Ｏ、無水酢酸；ＡＣＮ、アセトニトリル；ＡｃＯＨ、酢酸；Ｂｏｃ、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル；ＤＣＭ、ジクロロメタン；ＤＭＥＭ、ダルベッコ修飾イーグル培地（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）；ＤＩＥＡ、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン；ＤＩＰＣＤＩ、ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；Ｅｔ２Ｏ、ジエチルエーテル；ｅｑ、等価物；ＥＳＩ－ＭＳ、エレクトロスプレーイオン化質量分析；Ｅｔ２Ｏ、ジエチルエーテル；Ｆｍｏｃ、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル；ＨＯＢＴ、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＰＬＣ、高速液体クロマトグラフィー；ＩＴＧＡ９、インテグリンα９β１；ｉ．ｖ．、静脈内；ｐ－ＭＢＨＡ樹脂、４－メチルベンズヒドリルアミン樹脂；ＭｅＯＨ、メタノール；ＭＷ、分子量；μＬ、マイクロリットル；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ＲＰ－ＨＰＬＣ、逆相ＨＰＬＣ；ｒｐｍ、毎分回転数；ｓ．ｃ、皮下；ｔＢｕ、ｔｅｒｔ－ブチル；ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸；ＴＩＳ、トリイソプロピルシラン；ＴＩＯ、チオアニソール；ｔｒ、滞留時間；Ｔｒｔ、トリチル。
【0133】
実施例１．ペプチドおよびペプチド二量体の合成。
【0134】
Ａｃ－配列番号１０－ＮＨ２：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－ＮＨ２
Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
配列番号４－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２：Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号６－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号７－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）：（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号９－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２。
Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
配列番号４－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２
Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２：Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号６－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号７－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）：（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２：Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２
配列番号９－ＮＨ２：Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２。
【0135】
ペプチドの合成には、固相ペプチド合成を使用した。ペプチドＡｃ－配列番号１０－ＮＨ２（ＡＤＡＭ－１２の天然ディスインテグリン領域内に含まれ、特に、配列番号２内に含まれる１２個のアミノ酸配列）も対照化合物として合成した。
【0136】
ペプチドは全て、種々のスケール（０．３ｍｍｏｌ～３０ｍｍｏｌ）で、４－メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ－ＭＢＨＡ）を用いた標準的なＦｍｏｃ／ｔＢｕストラテジーによる固相ペプチド合成によって、手動または自動ペプチド合成機（Ｌｉｂｅｒｔｙ、ＣＥＭ）を用いて合成した。各々の配列について、樹脂を、フィルタープレートを備えた適切な反応容器に入れた。Ｆｍｏｃ－ＡＭ－ＯＨリンカー（２ｅｑ）およびＨＯＢＴ（２ｅｑ）を溶解するまで撹拌したＤＭＦ：ＤＣＭ（１：１）に溶解し、次いでＤＩＰＣＤＩ（２ｅｑ）を添加した。溶液を反応容器に移し、４０分間～６０分間反応させた。リンカーの取り込みはニンヒドリン試験によって制御した。ニンヒドリン試験が陽性であった場合、再活性化または再カップリング工程を、カップリングが完了するまで実施した。
【0137】
カップリングが完了すると、合成は、ＤＭＦ中２０％のピペリジン溶液を用いた処置（５分間に２回および１０分間に２回）によって、Ｆｍｏｃ基の除去と共に進行した。ペプチド樹脂をＤＭＦで５回洗浄し、濾過し、洗浄液を廃棄し、次のアミノ酸をカップリングした。ＤＭＦ（Ｆｍｏｃ－Ｍｓａ－ＯＨを１．５ｅｑでカップリング）中のＦｍｏｃ－ＡＡ－ＯＨ：ＤＩＰＣＤＩ：ＨＯＢｔ（３ｅｑ：３ｅｑ：３ｅｑ）を用いて、カップリングを行った。これらのカップリング反応は全て、４０分間～６０分間反応した。各々のカップリング反応の完了をニンヒドリン試験（またはカップリングがプロリンの第二級アミン上にある場合はクロラニル）で制御した。必要に応じて、再活性化工程または再カップリング工程を行った。自動合成機で行った合成は、ニンヒドリン試験によって（クロラニルによっても）制御しなかった。必要に応じて、合成の最後に、ＤＭＦ中Ａｃ２Ｏ（２．５ｅｑ）とＤＩＥＡ（５ｅｑ）とを用いることで、アセチル化を行った。Ｎ末端オクタノイルを有するこれらの配列については、５ｅｑのオクタン酸、ＨＯＢＴおよびＤＩＰＣＤＩをアシル化に使用した。ペプチド配列の完成後、ペプチジル樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、およびＥｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させた。
【0138】
合成後、以下の手順にしたがってペプチドの切断を行った。ペプチジル樹脂を、室温で適切なＴＦＡ混合物（以下表２を参照のこと）中にて、２時間～４時間反応させた。樹脂をＴＦＡおよびＥｔ２Ｏで洗浄した。全ての濾液を低温エーテル８１：７（ｖ：ｖ）に注入し、１５分間～３０分間静置した。フィルタープレートを通して、得られた懸濁液を濾過し、フィルターを廃棄した。残渣をエーテルで洗浄し、各々の洗浄で用いたフィルターを廃棄した。固体を凍結乾燥し、ペプチド粗生成物を得た。以下の表（表２）は、種々のペプチドおよびペプチド二量体に使用したＴＦＡカクテルを示す。
【0139】
【表2】
【0140】
ペプチド二量体（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）は、水中、１０％ＡｃＯＨ中、１５％ＤＭＳＯ中にて、１０ｍｇ／ｍＬ濃度のペプチド（配列番号６－ＮＨ２）２０ｍｇを４８時間～７２時間酸化することによって得た。次いで、Ｓｅｐ ｐａｃｋ Ｃ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）を使用して回収した。ペプチド二量体を、Ｃ１８カラムに保持した。次いで、水：アセトニトリルの混合物（８０：２０）で回収し、凍結乾燥して１７ｍｇのペプチド二量体（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）を得た（収率８１％）。
【0141】
粗ペプチドおよびペプチド二量体を、１０マイクロメートルのクロマシルシリカを充填したＮＷ５０カラムを備えた半分取システムで精製し、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣで分析した純粋画分を凍結乾燥した。
【0142】
以下の表（表３）は、合成の重量計、粗ペプチドおよび純粋ペプチドの収率、ならびに各々の化合物のＭＷを示す。
【0143】
【表3】
【0144】
イオン交換工程は以下のように行った。凍結乾燥した純粋な化合物をＡｃＯＨの混合物に溶解した。次いで、それらを含有する酢酸溶液をＤＯＷＥＸ樹脂で処置し、酢酸塩対イオンを有するペプチドまたはペプチド二量体を得た。最後に、酢酸塩化合物を濾過して回収し、凍結乾燥した。
【0145】
以下の表（表４）に示すように、ペプチドおよびペプチド二量体をＥＳＩ－ＭＳ装置中にて質量分析によって特性決定した。
【0146】
【表4】
【0147】
実施例２．ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性。ヒト血漿中のペプチドおよびペプチド二量体の半減期（ｔ１／２）の測定。
【0148】
実施例１にしたがって合成および調製したペプチドおよびペプチド二量体を、６ｍｇ／ｍＬの濃度にて水中に溶解し、３７℃まで温めた。
【0149】
ヒト血漿を凍結乾燥固形物（Ｋ３ ＥＤＴＡ血漿、ＢＢＩ溶液、コードＳ１１２－１）として得た。滅菌０．９％塩化ナトリウム溶液で再構成し、－２０℃で保存した。ヒト血漿を解凍し、使用前に３７℃でインキュベートした。
【0150】
ペプチドおよびペプチド二量体を、９０％ヒト血漿中、３７℃にて種々の期間インキュベートし、次いで２体積当量のメタノールで沈殿させた。サンプルをアセトン－二酸化炭素浴中で数秒間冷却し、約１０，０００ｒｐｍ、４℃にて１２分間遠心分離した。上清を０．４５μｍＰＶＤＦフィルターで濾過し、定組成法（溶離剤Ａ＝水中０．１％ＴＦＡ；溶離剤Ｂ＝ＡＣＮ中０．０７％ＴＦＡ、カラム＝Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍ、流量＝１ｍＬ／分、波長：２２０ｎｍ、注射容量＝２０μＬ、温度＝６０℃）を用いて、ＲＰ－ＨＰＬＣによって３連で分析した。化合物の消失は、その半減期を計算するための初期期間の面積に関連して決定した。
【0151】
以下の表（表５）は、ペプチドおよびペプチド二量体についてのｔ１／２データを示す。
【0152】
【表5】
【0153】
実施例３．インテグリンα９β１（ＩＴＧＡ９）タンパク質レベル。ウェスタンブロットによるＩＴＧＡ９タンパク質発現の評価。
【0154】
横紋筋肉腫細胞株ＲＨ３０、ＣＷ９０１９、ＲＨ４、ＲＨ１８、ＲＤ、およびＨＴＢ８２を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｘ非必須アミノ酸、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（全てＢｉｏｗｅｓｔの試薬）を補充したアール塩（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を含む最小必須培地中で培養した。神経芽細胞腫細胞株ＣＨＬＡ－９０、ＢＥ（２）－ＣおよびＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）－Ｃを、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％インスリン－トランスフェリン－セレンＧサプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび０．１ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を補充したイスコフ改変ダルベッコ培地（Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で増殖させた。乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８ ＭＣＦ７、Ｔ４７Ｄ、ＢＴ４７４およびＭＣＦ１０Ａを、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、１ｘ非必須アミノ酸、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（全てＢｉｏｗｅｓｔの試薬）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養した。全ての細胞株を、５％ＣＯ２で制御した大気中で３７℃にて管理した。
【0155】
８０％コンフルエンスにて、細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）およびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ）を補充したＲＩＰＡタンパク質溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中にてかき取った。細胞溶解物を９５℃で５分間インキュベートした。４℃にて１５分間、１３０００ｒｐｍで遠心分離した後、細胞の残骸を廃棄した。上清タンパク質濃度を、ＤＣタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によって製造業者の指示にしたがって定量した。
【0156】
タンパク質を、８％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）によって分離し、ＰＶＤＦ（ポリフッ化ビニリデン）膜（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に移した。ＴＢＳ－Ｔ（トリス緩衝生理食塩水－ツイーン）中の５％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）で１時間ブロッキングした後、膜を４℃にて希釈した一次抗体と共に一晩インキュベートした。抗体は以下の通りであった：１：１０００に希釈した抗α９－インテグリンモノクローナル抗体クローン３Ｅ４（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、１：１０００に希釈した抗ＦＡＫ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、１：１０００に希釈したＴｙｒ３９７（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）の抗ホスホ－ＦＡＫ、および１：１００００に希釈した抗アクチン（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。ＴＢＳ－Ｔで洗浄した後、膜を、対応するペルオキシダーゼ結合二次抗体と共に、室温で１時間インキュベートした。免疫反応性バンドをＥＣＬプライム化学発光検出試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で可視化した。
【0157】
図１、２および３のウェスタンブロット画像に示されるように、ＩＴＧＡ９の発現は、ＲＤにおいてＲＨ３０細胞よりも高く、ＢＥ（２）－ＣおよびＣＨＬＡ－９０細胞においてＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）－Ｃ細胞よりも高く、また評価した残りの乳癌細胞株の中で、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞においても高い。
【0158】
実施例４．横紋筋肉腫細胞株（ＲＨ３０およびＲＤ）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでの侵襲性の測定。
【0159】
１０５個のＲＨ３０またはＲＤ細胞を、マトリゲル被覆トランスウェル（コーニング）の上部チャンバーに、ＦＢＳを含まない０．１ｍＬ培地中で平板培養した。細胞を種々の濃度（０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、５００ｎＭ、および１０００ｎＭ）のペプチドおよびペプチド二量体と共に４８時間予めインキュベートし、細胞浸潤アッセイの間に培地中にも存在させた。下部チャンバーに、ＦＢＳを含む培地０．６ｍＬを添加した。細胞を３７℃で２４時間インキュベートした。
【0160】
その後、細胞を４％パラホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）で１０分間固定した。その後、ＰＢＳで洗浄した。マトリゲルおよび残りの細胞を綿棒で膜の上面から除去した。その後、下面に存在する細胞をＨｏｅｃｈｓｔ希釈液（Ｓｉｇｍａ）で染色し、１０ｘ対物レンズを備えた倒立蛍光顕微鏡Ｎｉｋｏｎで数えた（各々のウェルについて５視野）。実験は全て３連で行った。表６において、％侵襲性は、それらの制御に対する侵襲性細胞の平均割合を示す。
【0161】
【表6】
【0162】
全てのペプチド類似体は、非処置細胞と比較して、ＲＨ３０および／またはＲＤ横紋筋肉腫細胞の侵襲性の割合（％侵襲性）の有意な減少を引き起こした。これは、種々の濃度のペプチド類似体で有意に達した。Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２および（配列番号６－ＮＨ２）２は、１００ｎＭのペプチド濃度にてＲＨ３０細胞の侵襲性％の有意な減少を示した。Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２および配列番号６－ＮＨ２は、５００ｎＭにて有意な減少を示した。ＲＤ細胞の侵襲性％の有意な低下は、５００ｎＭ濃度でのＯｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２での処置、および１μＭ濃度での（配列番号６－ＮＨ２）２およびＯｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２での処置にて観察された。配列番号７－ＮＨ２は、最低投与量（１００ｎｍ）でさえ、５０％未満の侵襲性で、ＲＤ細胞侵襲性に有意な影響を示した。低いＩＴＧＡ９発現を示したＲＨ３０細胞株中では、その効果はより穏やかであり、有意に達することなく％侵襲性を減少させた。
【0163】
実施例５．神経芽細胞腫細胞株（ＣＨＬＡ－９０およびＢＥ（２）－Ｃ）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでの侵襲性の測定。
【0164】
ＣＨＬＡ－９０およびＢＥ（２）－Ｃ細胞株を用いたトランスウェルアッセイを同じ詳細な条件で行い、横紋筋肉腫細胞における侵襲性％を測定した。
【0165】
表７で述べるように、神経芽細胞腫細胞株はまた、ペプチド（配列番号６－ＮＨ２）に対する感受性を示し、２００ｎＭおよび５００ｎＭの濃度にて、それぞれ、細胞株ＣＨＬＡ－９０およびＢＥ（２）－Ｃの両方について、％侵襲性の有意な減少に達した。
【0166】
【表7】
【0167】
実施例６．神経芽細胞腫細胞（ＣＨＬＡ‐９０、ＢＥ（２）‐ＣおよびＳＫ‐Ｎ‐ＢＥ（２）‐Ｃ）および乳癌細胞株（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１およびＭＤＡ‐ＭＢ‐４６８）におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ侵襲性に対するペプチド（配列番号７－ＮＨ２）の結果。
【0168】
神経芽細胞腫細胞株（ＣＨＬＡ－９０、ＢＥ（２）－ＣおよびＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）－Ｃ）および乳癌細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１およびＭＤＡ－ＭＢ－４６８）を用いたトランスウェルアッセイを、同じ詳細な条件で行い、横紋筋肉腫細胞における侵襲性％を測定した。
【0169】
表８に示すように、神経芽細胞腫細胞株ＣＨＬＡ－９０およびＢＥ（２）－Ｃはまた、ペプチド（配列番号７－ＮＨ２）に対する感受性を示し、細胞侵襲性は有意に減少した。第３の神経芽細胞腫細胞株中にて、当該ペプチドを使用したさらなる侵襲性の研究では、この処置がまた、ＩＴＧＡ９を過剰発現しないＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）－Ｃ細胞株において、５００ｎＭ濃度での侵襲を抑制する点で有効であることを示した。乳癌細胞株において、細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８は、処置下での侵襲の明らかな減少を示した。一方で、細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（低いＩＴＧＡ９発現を伴う）は、最大処置用量で穏やかな減少を示した（統計的に有意ではなかった）。
【0170】
【表8】
【0171】
総合して、これらの結果は、より高いＩＴＧＡ９発現レベルと、侵襲を減少させるペプチド（配列番号７－ＮＨ２）のより良好な有効性との間の特有の関連性を示さない。したがって、ＩＴＧＡ９との相互作用は、ペプチドアナログが効力を示す唯一の分子メカニズムであってはならない。その理由は、例えば、５００ｎｍ濃度での配列番号７－ＮＨ２が、低ＩＴＧＡ９発現レベルを有する細胞株であるＳＫ－Ｎ－ＢＥ（２）－Ｃの侵襲性について、有意な減少を引き起こしたからである。
【0172】
実施例７．横紋筋肉腫転移マウスモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの侵襲性。
【0173】
５週齢のＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅ雌マウスに、－１日目に、賦形剤（ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水）またはペプチドを最初の処置用量で皮下（ｓ．ｃ．）投与した。０日目に、マウスの尾静脈に２×１０６のＲＤ横紋筋肉腫細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。その後、マウスを、賦形剤ＰＢＳ（ｎ＝９）；配列番号６－ＮＨ２０．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）；配列番号６－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）；配列番号７－ＮＨ２０．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）および配列番号７－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）にて、２７週間、週に３回（２～３日毎）皮下に処置した。
【0174】
体重は２７週間、週２回評価した。全ての生存率および無事象生存率を測定した。剖検時に、転移の総数を定量し、マウス１匹当たりの転移数およびその局在位置も報告した。
【0175】
研究に沿って、賦形剤処置マウスは、配列番号６－ＮＨ２（ｐ＜０．０００１）０．５ｍｇ／ｋｇ、配列番号６－ＮＨ２（ｐ＜０．０００１）２ｍｇ／ｋｇ、配列番号７－ＮＨ２（ｐ＝０．０００６）０．５ｍｇ／ｋｇおよび配列番号７－ＮＨ２（ｐ＝０．００１２）２ｍｇ／ｋｇで処置したマウスよりも、統計的に有意に低い体重を示した。これらの差異は主に、配列番号６－ＮＨ２および配列番号７－ＮＨ２ペプチドで処置した群において、転移が発生したマウスの割合が低いことによるものであった。
【0176】
表９に示すように、全てのＰＢＳ処置マウスは転移を発症した。配列番号６－ＮＨ２の２つの試験用量および配列番号７－ＮＨ２の低用量での処置は、転移形成において、約１５％の減少を引き起こした。一方、配列番号７－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇで処置した群では、７匹のマウスのうち２匹のみが転移し、ＰＢＳ処置群と比べて統計的に有意な減少を示した（ｐ＝０．００４８）。
【0177】
【表9】
【0178】
処置群当たりの無事象生存率の表出はまた、賦形剤で処置した対照群と比較した場合、２ｍｇ／ｋｇ用量の配列番号７－ＮＨ２で処置した群において有意な差を示した（ログ・ランク ｐ値＝０．０００６）。試験した、より低用量の配列番号７－ＮＨ２および両用量の配列番号６－ＮＨ２は、賦形剤で処置した群と比較した場合、統計的に有意な差を示さなかった（図４は、ＰＢＳおよび配列番号７－ＮＨ２で処置した動物についての結果を示す）。
【0179】
さらに、ＲＤ細胞を単回静脈内投与した後に、ならびに賦形剤または種々の処置を１週間に３回皮下投与した後に、マウス１匹当たりの形成した転移数を評価したところ、２ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２および配列番号７－ＮＨ２は、賦形剤（ＰＢＳ）で処置した対照マウスと比較して、マウス１匹当たりの転移形成が統計的に減少していた（配列番号６－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．００５８；配列番号７－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇ、ｐ＝０．０１８４）（図５）。
【0180】
上述の結果は、より低用量の配列番号６－ＮＨ２または配列番号７－ＮＨ２が、無事象生存率として評価した転移発現の遅延においても、転移がないマウスの数においても、有意な影響を示さなかったことを表す。しかし、より高用量の配列番号６－ＮＨ２および配列番号７－ＮＨ２での処置は、剖検で観察される転移数の減少において、有用であることを示した。
【0181】
局在位置との関係では、転移は、腸、子宮、足、背部脾臓、卵巣および副腎の種々の局在位置にて発現した。全ての処置群において、卵巣、副腎、背部および脾臓への転移が、より高頻度であった。
【0182】
実施例８．神経芽細胞腫転移性マウスモデルに対するペプチド（配列番号７－ＮＨ２）の効果。
【0183】
－１日目に、５週齢のＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅ雌マウスに、１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇの用量の賦形剤（ＰＢＳ）またはペプチド（配列番号７－ＮＨ２）を最初の処置用量で皮下（ｓ．ｃ．）投与した。０日目に、マウスの尾静脈に２×１０５のＢＥ（２）－Ｃ神経芽細胞腫細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。その後、マウスを、１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝９）および２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝９）の用量の賦形剤ＰＢＳ（ｎ＝８）および配列番号７－ＮＨ２で１３週間、週３回（２～３日毎）皮下に処置した。
【0184】
表１０に示すように、ＰＢＳ処置群の８匹中７匹（８８％）が転移を発症したのに対し、配列番号７－ＮＨ２２ｍｇ／ｋｇで処置した群では、転移したマウスの数が少ない傾向にあった（９匹中４匹（４４％）、ｐ＝０．１３１２）
【0185】
【表10】
【0186】
さらに、無事象生存率の表出は、賦形剤で処置した群（生存率：８匹中１匹、１３％）、ペプチド１ｍｇ／ｋｇ（配列番号７－ＮＨ２）で処置した群（生存率：９匹中２匹（２２％）、ログ・ランク ｐ値＝０．６２９４）、およびペプチド２ｍｇ／ｋｇで処置した群（生存率：９匹中５匹（５６％）、ログ・ランクｐ値＝０．０６５８）の間で顕著な差を示し、最大用量でのペプチド（配列番号７－ＮＨ２）の有用性を示した（図６）。
【図面の簡単な説明】
【0187】
【図1】６個の横紋筋肉腫細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【図2】３個の神経芽細胞腫細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【図3】６個の異なる乳癌細胞株におけるＩＴＧＡ９の発現を示すウェスタンブロット画像。対照としてアクチンを使用した。
【図4】賦形剤（ＰＢＳ、実線、－）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（点線、・・・）、または２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（破線、－－－）で処置した横紋筋肉腫転移マウスの２７週間の研究に沿った無事象生存カプラン－マイヤー曲線。ｙ軸は無事象生存率（％）を示す。ｘ軸は週（週数）を示す。
【図5】尾静脈にＲＤ細胞を注射し、賦形剤（ＰＢＳ）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、および２ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、または０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２、および２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２で処置したマウスの２７週間の研究に沿ったマウス１匹当たりの平均転移数。横線は、平均±ＳＥＭを示す。統計的有意性：＊ｐ－値＜０．０５；＊＊ｐ－値＜０．０１。ｙ軸はマウス当たりの転移数を示す。ｘ軸は処置群を示し、種々の群は左から右に、賦形剤（ＰＢＳ）、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、２ｍｇ／ｋｇの配列番号６－ＮＨ２、０．５ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２、２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２である。
【図6】賦形剤（ＰＢＳ、実線、－）、１ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（点線、・・・）または２ｍｇ／ｋｇの配列番号７－ＮＨ２（破線、－－－）で処置した神経芽細胞腫転移性マウスの１３週間の研究に沿った無事象生存カプラン－マイヤー曲線。ｙ軸は無事象生存率（％）を示す。ｘ軸は週（週数）を示す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-08-03
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（Ｉ）のペプチド：Ｒ１－ＡＡ１－ＡＡ２－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－ＡＡ３－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－ＡＡ４－ＡＡ５－Ｒ２ （Ｉ）
その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、
ＡＡ１ Ｐｙｒ、または、結合であり；
ＡＡ２は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
ＡＡ３は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、または、Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）（Ｃｙｓｔｉｎｅ）であり；
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）、または、２，４，６－トリメチルフェニルグリシン（Ｍｓｇ）であり；
ＡＡ５は、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、または、結合であり；
Ｒ１は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、ポリエチレングリコールに由来するポリマー、およびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のアリール、置換または非置換のアラルキル、置換または非置換のヘテロシクリル、および置換または非置換のヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４、－ＯＲ３、および－ＳＲ３からなる群より選択され、ここで、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換または非置換の非環状脂肪族基、置換または非置換のアリシクリル、置換または非置換のヘテロシクリル、置換または非置換のヘテロアリールアルキル、置換または非置換のアリール、および置換または非置換のアラルキルからなる群より選択される、
ペプチド、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
ＡＡ４は、２，４，６－トリメチルフェニルアラニン（Ｍｓａ）である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項3】
ＡＡ２およびＡＡ５は、Ｌｙｓまたは結合から独立して選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項4】
Ｒ１は、ＨおよびＲ５－ＣＯ－からなる群より選択され、ここで、Ｒ５は；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項5】
Ｒ１は、Ｈ、アセチル、ｔｅｒｔ－ブタノイル、ヘキサノイル、２－メチルヘキサノイル、シクロヘキサンカルボキシル、オクタノイル、デカノイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、オレオイル、およびリノレオイルからなる群より選択される、請求項４に記載のペプチド。
【請求項6】
Ｒ２は、－ＮＲ３Ｒ４または－ＯＲ３であって、ここで、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ；置換または非置換のＣ１－Ｃ２４アルキル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルケニル；置換または非置換のＣ２－Ｃ２４アルキニル；置換または非置換のＣ３－Ｃ２４シクロアルキル；置換または非置換のＣ５－Ｃ２４シクロアルケニル；置換または非置換のＣ８－Ｃ２４シクロアルキニル；置換または非置換のＣ６－Ｃ３０アリール；置換または非置換のＣ７－Ｃ２４アラルキル；３個～１０個の環員を有する置換または非置換のヘテロシクリル；ならびに、２個～２４個の炭素原子を有し、１個～３個の炭素以外の原子を有し、かつ、炭素原子が１個～６個であるアルキル鎖を有する、置換または非置換のヘテロアリールアルキル；からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド。
【請求項7】
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルおよびヘキサデシルからなる群より選択される、請求項６に記載のペプチド。
【請求項8】
請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるペプチドを２個含むペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩であって、前記ペプチド二量体は、ジスルフィド架橋ペプチド二量体である、ペプチド二量体。
【請求項9】
以下からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド、または請求項８に記載のペプチド二量体：Ｒ１－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号３－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｒ２（配列番号４－Ｒ２）
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号５－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号６－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号７－Ｒ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－Ｒ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｒ１－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（Ｒ１－配列番号８－Ｒ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－Ｒ２（配列番号９－Ｒ２）。
【請求項10】
以下からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド、または請求項８に記載のペプチド二量体：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号３－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－ＮＨ２（配列番号４－ＮＨ２）
Ａｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ａｃ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号５－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号６－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号７－ＮＨ２）
（Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）［（配列番号６－ＮＨ２）２（ジスルフィド架橋）］
Ｏｃｔａｎｏｙｌ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（Ｏｃｔａｎｏｙｌ－配列番号８－ＮＨ２）
Ｐｙｒ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（Ｃｙｓ）－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｍｓａ－Ｌｙｓ－ＮＨ２（配列番号９－ＮＨ２）。
【請求項11】
請求項１に記載のペプチドまたは請求項８に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、固相ペプチド合成または溶液中でのペプチド合成を用いて行われる、方法。
【請求項12】
以下の工程を含む、請求項１１に記載の方法：ａ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｂ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断する工程；
ｃ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、環状ペプチドまたはペプチド二量体を得る工程；
ｄ）必要に応じて、保護基を除去する工程；
あるいは、
ｉ）ポリマー支持体中で固相ペプチド合成を行う工程；
ｉｉ）必要に応じて、前記ポリマー支持体中で、固相ペプチドサイクリングまたは二量体形成を行う工程；
ｉｉｉ）前記ポリマー支持体から前記ペプチドを切断し、必要に応じて、同時に保護基を除去する工程；
ｉｖ）必要に応じて、溶液中で前記ペプチドを酸化して、ペプチド二量体を得る工程。
【請求項13】
少なくとも１個の請求項１に記載のペプチド、または、少なくとも１個の請求項８に記載のペプチド二量体、もしくは、それらの組み合わせ、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩、の薬学的な有効量を含む、薬学的組成物。
【請求項14】
上記ペプチド、または、上記ペプチド二量体は、リポソーム、混合リポソーム、オレオソーム、ニオソーム、エトソーム、ミリ粒子、マイクロ粒子、ナノ粒子、および固体脂質ナノ粒子、ナノ構造脂質担体、スポンジ、シクロデキストリン、小胞、ミセル、界面活性剤の混合ミセル、界面活性剤－リン脂質混合ミセル、ミリスフェア、ミクロスフェア、ナノスフェア、リポスフェア、ミリカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マイクロエマルジョン、およびナノエマルジョンからなる群より選択される、送達システム、および／または持続放出システムに組み込まれる、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項15】
薬剤として使用するための、請求項１に記載のペプチド、または請求項８に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
癌および／または転移の治療および／または診断に使用するための、請求項１に記載のペプチド、または請求項８に記載のペプチド二量体、その立体異性体、その混合物、および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
上記癌および／または転移は、神経芽細胞腫、肉腫、軟部組織肉腫、横紋筋肉腫（胎児性、胞巣状、多形性および紡錘細胞／硬化性横紋筋肉腫を含む）、内膜肉腫、未分化紡錘細胞肉腫、未分化多形性肉腫、未分化円形細胞肉腫、未分化類上皮細胞肉腫、脂肪肉腫、異型脂肪性腫瘍、悪性孤立性線維性腫瘍、炎症性筋線維芽細胞腫、低悪性度筋線維芽細胞肉腫、線維肉腫（成人および硬化性類上皮線維肉腫の変種を含む）、粘液線維肉腫、低悪性度線維類粘液肉腫、軟部組織の巨細胞腫瘍、平滑筋肉腫、悪性グロムス腫瘍、血管内皮腫（網状、偽筋原性および類上皮血管内皮腫を含む）、軟部組織の血管肉腫、骨外性骨肉腫、悪性消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、悪性末梢神経鞘種、悪性トリトン腫瘍、悪性顆粒細胞腫、悪性骨化性粘液性腫瘍、間質肉腫、筋上皮腫、悪性リン酸塩尿性間葉系腫瘍、滑膜肉腫（紡錘細胞および二相性滑膜肉腫を含む）、類上皮肉腫、胞巣状軟部肉腫、軟部組織の明細胞肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨外性ユーイング肉腫、繊維形成性小円形細胞性腫瘍、腎外性横紋筋様腫瘍、血管周囲類上皮細胞腫瘍、骨肉腫（bone sarcomas）、骨肉腫（osteosarcoma）、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、血管内皮腫、血管肉腫、線維肉腫、筋線維肉腫、脊索腫、エナメル上皮腫、乳癌（乳管癌、小葉癌、および乳頭癌を含む）、結腸癌、直腸癌、肛門癌、結腸直腸癌、脳腫瘍、膠芽腫、星細胞腫、または髄芽腫、悪性神経膠腫、前立腺癌、黒色腫およびその他の皮膚癌、子宮頸癌、子宮癌、卵巣癌（高悪性度漿液性卵巣癌を含む）、子宮体癌、リンパ腫、頭頸部癌、口腔癌、唾液腺癌、網膜芽細胞腫、消化器癌、食道癌、胃癌、膵癌、胆のう癌、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、腎臓癌（kidney cancer）または腎臓癌（renal cancer）、ウィルムス腫瘍または腎芽細胞腫、膀胱癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、下垂体腺腫、扁平上皮癌、精巣癌、白血病（急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、形質細胞腫および多発性骨髄腫を含む）からなる群より選択される、請求項１６に記載の使用のためのペプチドまたはペプチド二量体。
【国際調査報告】