特表 2023-504768 Ｎ－アシル－ホモセリンラクトンの類似体及びそれを含む医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-07

(54)【発明の名称】Ｎ－アシル－ホモセリンラクトンの類似体及びそれを含む医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   C07D 333/36 20060101AFI20230131BHJP

   C07C 235/74 20060101ALI20230131BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230131BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20230131BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230131BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/381 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 31/164 20060101ALI20230131BHJP

【ＦＩ】

C07D333/36

C07C235/74 CSP

A61P1/04

A61P17/06

A61P17/00

A61P29/00

A61K31/381

A61K31/164

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022523614

(86)(22)【出願日】2020-10-23

(85)【翻訳文提出日】2022-05-20

(86)【国際出願番号】 EP2020079913

(87)【国際公開番号】W WO2021078952

(87)【国際公開日】2021-04-29

(31)【優先権主張番号】1911861

(32)【優先日】2019-10-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】518059934

【氏名又は名称】ソルボンヌ・ユニヴェルシテ

【氏名又は名称原語表記】ＳＯＲＢＯＮＮＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ

(71)【出願人】

【識別番号】511142062

【氏名又は名称】アンスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ レシェルシュ メディカル（アンセルム）

(71)【出願人】

【識別番号】507139834

【氏名又は名称】アシスタンス ピュブリック－オピト ドゥ パリ

(71)【出願人】

【識別番号】511134470

【氏名又は名称】セントレ ナショナル デ ラ ルシェルシェ サイエンティフィック

(71)【出願人】

【識別番号】522159750

【氏名又は名称】エコール・ノルマル・シュペリウール

【氏名又は名称原語表記】ＥＣＯＬＥ ＮＯＲＭＡＬＥ ＳＵＰＥＲＩＥＵＲＥ

【住所又は居所原語表記】４５ ｒｕｅ ｄ’Ｕｌｍ，７５２３０ ＰＡＲＩＳ ＣＥＤＥＸ ０５（ＦＲ）

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】セクシク，フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】グリル，ジャン－ピエール

(72)【発明者】

【氏名】マレ，ジャン－モーリス

(72)【発明者】

【氏名】レイントー，ドミニク

(72)【発明者】

【氏名】ランドマン，セシリア

(72)【発明者】

【氏名】ペイロット，アガト

(72)【発明者】

【氏名】ブロット，ロイック

【テーマコード（参考）】

4C086

4C206

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BB02

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA66

4C086ZA89

4C086ZB11

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA03

4C206GA03

4C206GA30

4C206GA31

4C206KA17

4C206MA01

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZA66

4C206ZA89

4C206ZB11

4H006AA01

4H006AB22

4H006BJ20

4H006BJ50

4H006BM72

4H006BN20

4H006BR10

4H006BV24

(57)【要約】

本発明は、Ｎ－アシル－ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）の類似体及びそれを含む医薬組成物に関する。本発明はまた、上皮の炎症性疾患の治療におけるそれらの使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の一般式Ｉを有し、上皮の炎症性疾患の治療に使用するため化合物：

【化1】

式中、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、炭素原子又はＳ、Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子であり、但し、ＸはＯとは異なり、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ及びＩから選択されるハロゲン、又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で場置換されていてもよく、
－ ｘ、ｙ、ｚ、及びｗは、互いに独立して、０又は１であり、但し、
３≦ｘ＋ｙ＋ｚ＋ｗ≦４であり、
－ Ｒは、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基、又はヒドロキシル基（ＯＨ）又はアジド基（Ｎ_３）を表し、
－ －－－－－－は、単結合又は二重結合（シス又はトランス）を表し、
－ Ｒ’は、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基を表す。

【請求項2】

以下からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物：
－ 以下の式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３－オキソ－Ｃ_１２アミノチオラクトン（（Ｄ／Ｌ）－３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＴＬ）：

【化2】

－ 以下の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソ－Ｃ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）：

【化3】

－ 以下の式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２アミノチオラクトン（Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２－ＨＴＬ）：

【化4】

－ 以下の式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２－アミノシクロヘキサノール：

【化5】

－ 以下の式Ｉ－５の３－オキソ－Ｃ１２－アミノシクロヘキサノール：

【化6】

－ 以下の式Ｉ－６の３－オキソ－Ｃ１２－アミノクロロフェノール：

【化7】

【請求項3】

前記腸の炎症性疾患の治療に使用するための、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

乾癬の治療に使用するための、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項5】

以下の一般式Ｉを有する少なくとも１つの化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物：

【化8】

式中、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、炭素原子又はＳ、Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子であり、但し、ＸはＯとは異なり、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ及びＩから選択されるハロゲン、又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ１～Ｃ４アルキル基で置換されていてもよく、
－ ｘ、ｙ、ｚ、及びｗは、互いに独立して、０又は１であり、但し、
３≦ｘ＋ｙ＋ｚ＋ｗ≦４であり、
－ Ｒは、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基、又はヒドロキシル基（ＯＨ）又はアジド基（Ｎ_３）を表し、
－ Ｒ’は、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基を表し、
－ －－－－－－は、単結合又は二重結合（シス又はトランス）を表す。

【請求項6】

式Ｉの前記少なくとも１つの化合物が、以下からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物：
－ 式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３－オキソ－Ｃ１２－アミノチオラクトン（（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ１２－ＨＴＬ）：

【化9】

－ 以下の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２－アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）３－オキソ－Ｃ１２－ＡＣＨ）：

【化10】

－ 以下の式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２－ＨＴＬ）：

【化11】

－ 以下の式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソ－Ｃ１２－アミノシクロヘキサノール：

【化12】

－ 以下の式Ｉ－５の３－オキソＣ１２－アミノシクロヘキサノール：

【化13】

－ 以下の式Ｉ－６の３－オキソＣ１２－アミノクロロフェノール：

【化14】

【請求項7】

前記上皮の炎症性疾患の治療に使用するための、請求項５又は６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記腸の炎症性疾患の治療に使用するための、請求項５又は６に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記乾癬の治療に使用するための、請求項５又は６に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、Ｎ－アシル－ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）の類似体及びそれを含む医薬組成物に関する。

【0002】

本発明はまた、上皮の炎症性疾患の治療におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0003】

上皮の炎症性疾患は、消化管と皮膚の両方に影響を及ぼす。

【0004】

実際、これらの器官は外部媒体と直接接触しており、それらの微生物叢は特異的である。

【0005】

炎症性皮膚疾患は乾癬を含む。

【0006】

慢性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、２つの主要な疾患であるクローン病（ＣＤ）、及び腸の損傷をもたらす腸粘膜の慢性炎症及び腸癌のリスク増加（結腸については一般集団と比較して４倍、小腸については４０倍）を特徴とする潰瘍性大腸炎（ＵＣ）によって表される。

【0007】

ＩＢＤは若年者に影響を及ぼし、先進国ではその発生率が比較的高い（１００，０００人／年当たり８から１５人）ため、社会経済的帰結が重要である。

【0008】

長期リスクは欧州では１％と推定され、ＣＤ及びＵＣは依然として不治の疾患である。

【0009】

生物学的薬剤の拡大を含むＩＢＤの治療の最近の進歩は、多くのＩＢＤ患者の迅速な臨床的寛解及び生活の質の改善をもたらした。

【0010】

しかし、これらの強力な免疫抑制療法は必ずしも有効ではなく、費用がかかり、重篤な副作用を誘発する可能性がある。

【0011】

したがって、限定された毒性及び高い費用効果で寛解を誘導及びび維持するためのより生理学的なアプローチが必要とされている。

【0012】

ＣＤは、消化管の全ての部分に先験的に影響を及ぼし得るが、回腸、結腸及び肛門により頻繁に影響を及ぼす。この疾患は、壁内炎症、すなわち消化管壁の異なる層に影響を及ぼし、狭窄及び瘻孔などの重篤な合併症を患者に引き起こす可能性がある。

【0013】

ＵＣは、直腸、及び結腸の末端部に影響を及ぼす。生じる炎症は、通常、腸粘膜及び粘膜下組織に限定される。

【0014】

ＩＢＤの病態生理は複雑であり、まだよく理解されていないが、環境的原因、遺伝的素因、免疫障害、バリア機能の欠陥、及び腸内細菌叢：微生物叢のディスバイオシスと呼ばれる不均衡を含む複数の因子が明らかに関与している。

【0015】

腸内微生物叢は、炎症の制御及びバリア機能の調節において重要な役割を果たす。抗微生物ペプチド又は粘液分泌の刺激などのバリア強化のいくつかの機構が記載されているが、傍細胞透過性の制御における重要な役割を果たすタイトジャンクションの透過性に対する共生微生物叢の影響を分析した研究はほとんどない。

【0016】

クオラムセンシング（ＱＳ）は、化学メッセンジャーとして作用し、自己誘導物質（ＡＩ）と呼ばれる周囲環境への小さな拡散性分子の分泌に基づく、細菌コロニー内の個体間のコミュニケーションの様式である。

【0017】

クオラムセンシングは、媒体中に存在する細菌の密度及びそれらの直接環境中のシグナル分子の濃度に基づく。媒体中の分子の量はコロニーの状態を直接反映しており、個体数が少ない場合、自己誘導物質の濃度も低いが、細胞密度が増加すると、分子の濃度は、１つ又は複数の細菌表現型が変化する閾値を越えるまで順に増加する。この閾値はクオラムと呼ばれる。センシングという用語は、適切な受容体を介して媒体中の分子を検出する細菌の能力を指し、したがって分子は分泌されて検出されるので、自己誘導物質いう名称である。

【0018】

Ｎ－アシル－ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）を含むクオラムセンシングは、多くの生態系のグラム陰性菌に記載されている細菌間コミュニケーションの様式である。

【0019】

これらの分子はまた、「界間対話」において、宿主細胞に効果を発揮することができる。しかし、腸生態系におけるＡＨＬ型の分子の存在は、これまであまり報告されていない。

【0020】

腸内微生物叢は、我々の消化管に存在する全ての微生物（細菌、酵母、古細菌及びウイルス）を含み、１０００種に分けられる１０^１４の細菌（ヒト細胞数の約１０倍であるが、この比率は議論の対象である）を含む。宿主とその腸内微生物叢との間の関係は、両者に相互に利益をもたらすので、共生的である。宿主は食物塊を介して栄養素を提供し、一方、微生物叢は、生理学的性質（炭水化物及び脂質の代謝、胆汁酸の変換など）、免疫（免疫系の「教育」）の多くの機能を果たすが、共生微生物叢による腸空間の占有が病原性種によるコロニー形成を防止するため、生態学的機能も果たす。

【0021】

成人個体の微生物叢は独特であるが、主要な共通の特徴が、正常微生物叢状態における健康な微生物叢を説明するために同定されている。支配的な微生物又はコアマイクロバイオームは４つの門からなり、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）及びバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）は強く示され、程度は低いがアクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）及びプロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）が示される。

【0022】

特定の状況では、通常存在する細菌集団の提示の不均衡が出現することがあり、これはディスバイオシスである。したがって、ＩＢＤにはディスバイオシスの状態が存在することが示されており、これは確かにこれらの病態の発症における重要な要素であるが、発症機序はまだ解明されていない。このディスバイオシスは、微生物組成（バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）及びファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）の減少、特にクロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）の有意な喪失、ガンマプロテオバクテリア（Ｇａｍｍａ ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）の増加、並びにＡＩＥＣ及びフソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）などの新しい群の出現）及び微生物叢の機能（アミノ酸代謝並びにＳＣＦＡ及び酪酸塩の生合成の減少、酸化ストレスの増加など）の変化を伴う多様性の喪失を特徴とする。

【0023】

上記のように、ＱＳは細菌の種間コミュニケーションに関与するが、宿主－微生物叢（界間）の関係にも関与する可能性がある。これは、海洋生態系及び様々な根圏で記載されているが、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）などの一部の胃腸病原体でも記載されている。後者は、少なくとも８つの異なるＡＨＬを分泌することができ、他の細菌集団によって産生されるＡＨＬに対して感受性にする２つのＬｕｘＩ／ＬｕｘＲ相同系を有する。他の種は、ＳｄｉＡ受容体（ＡＨＬシンターゼに関連しないＬｕｘＲ相同受容体であり、したがってＡＨＬ自体を合成することなくＡＨＬを感知することができる種に存在する）を有すると記載されている。

【0024】

ますます多くの研究が、ヒト宿主細胞に対するＡＨＬ、特に病原体緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって産生される３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの影響を調査している。

【0025】

この分子は、それ自体で病原性因子として作用することによって宿主の免疫応答を調節し、ＮＦ－κＢの発現を介して免疫細胞及び炎症促進性サイトカインの誘導によって炎症応答をもたらす可能性があることが示されている。真核細胞へのＡＨＬの進入は、Ｒｉｔｃｈｉｅらによって２００７年に実証された（非特許文献１）。

【0026】

したがって、腸内微生物叢におけるＱＳの分子の検出に注目が集まっており、２型の自己誘導性ＱＳの分子（ＡＩ－２）の合成は、９つの共生種及び健康な対象の糞便において報告されているが、ＡＨＬ（ＡＩ－１）に関する研究は、依然として稀である。新生児の便におけるＡＨＬの存在は、生物発光によって実証された。

【0027】

本発明者らは、腸生態系におけるいくつかのＡＨＬを同定することができ、そのうちの１つは炎症性フレア中にＩＢＤ患者において失われる、以下の式Ｂの３－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬであった。

【化1】

【0028】

本発明者らは、このＡＨＬが健康な微生物叢に関連することを示した。

【0029】

現在までに、２つの「天然」ＡＨＬ、以下の式Ａの３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ：

【化2】

及び式Ｂの３－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬ（非特許文献２に開示される活性物質）は、抗炎症効果及びタイトジャンクションに対する作用を有する分子として公知であり、記載されている。

【0030】

これらの２つの分子（病原体によって産生される３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び健康な微生物叢に関連する３－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬ）は両方とも腸生態系の真核細胞に作用する。

【0031】

しかし、「天然」ＡＨＬは安定性に乏しい分子である。ＡＨＬの分解は、２つの異なる副生成物をもたらす可能性があり、一方では、ラクトン頭部の加水分解は、新しいアルコール官能基及びカルボン酸を有するＡＨＬの開環形態を生成し（この分子は本明細書では３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳと命名される）、他方では、分子の再配列は、テトラミン酸と呼ばれる新しい分子を与えることができる。ＡＨＬの開環形態への変換は、水性媒体中での自然加水分解によって起こり得るか、又は哺乳動物の腸上皮によって分泌される酵素、特にパラオキソナーゼ（ＰＯＮ１、２及び３）によって触媒され得る。

【0032】

ＡＨＬの安定性の問題に加えて、細菌受容体によるこれらの分子の認識は問題がある。ＡＨＬは主に細菌のために細菌によって分泌される化合物であり、したがって、細菌はＡＨＬに対する受容体を有し、その活性化が表現型の改変をもたらす反応のカスケードをもたらすことに留意すべきである。とりわけ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）では、その天然リガンドが３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬであるＬａｓＲ ＡＨＬに対する受容体の活性化は、下流のバイオフィルム形成及びピオシアニンなどのいくつかの病原性因子の分泌増加をもたらす。

【0033】

細菌受容体のこの活性化は、特にＩＢＤにおける炎症に対するＡＨＬの直接使用を妨げるので、問題がある。特定の細菌株の病原性を活性化するリスクは、あまりにも重要な望ましくない効果である。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0034】

【非特許文献1】Ｒｉｔｃｈｉｅ ＡＪ，Ｊａｎｓｓｏｎ Ａ，Ｓｔａｌｌｂｅｒｇ Ｊ，Ｎｉｌｓｓｏｎ Ｐ，Ｌｙｓａｇｈｔ Ｐ，Ｃｏｏｌｅｙ ＭＡ，Ｔｈｅ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ Ｑｕｏｒｕｍ－Ｓｅｎｓｉｎｇ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｎ－３－（Ｏｘｏｄｏｄｅｃａｎｏｙｌ）－Ｌ－Ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ Ｌａｃｔｏｎｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ａ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ａｎ Ｅａｒｌｙ Ｓｔｅｐ ｉｎ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００５；７３：１６４８－１６５５，ｄｏｉ：１０．１１２８／ＩＡＩ．７３．３．１６４８－１６５５，２００５

【非特許文献2】Ｉｎｔｅｒ－ｋｉｎｇｄｏｍ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎ－Ａｃｙｌ ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ ｌａｃｔｏｎｅ ３－ｏｘｏ－Ｃ１２：２，ａ ｍａｊｏｒ ｑｕｏｒｕｍ－ｓｅｎｓｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｒｏｍ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ，Ｌａｎｄｍａｎ Ｃ，Ｇｒｉｌｌ ＪＰ，Ｍａｌｌｅｔ ＪＭ，Ｍａｒｔｅａｕ Ｐ，Ｈｕｍｂｅｒｔ Ｌ，Ｌｅ Ｂａｌｃ’ｈ Ｅ，Ｍａｕｂｅｒｔ ＭＡ，Ｐｅｒｅｚ Ｋ，Ｃｈａａｒａ Ｗ，Ｂｒｏｔ Ｌ，Ｂｅａｕｇｅｒｉｅ Ｌ，Ｓｏｋｏｌ Ｈ，Ｔｈｅｎｅｔ Ｓ，Ｒａｉｎｔｅａｕ Ｄ，Ｓｅｋｓｉｋ Ｐ，Ｑｕｅｖｒａｉｎ Ｅ；Ｓａｉｎｔ Ａｎｔｏｉｎｅ ＩＢＤ Ｎｅｔｗｏｒｋ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１２９；１３（８）：ｅ０２０２５８７ ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０２０２５８７．ｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ２０１８

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0035】

これに関連して、本発明は、天然ＡＨＬの生体模倣分子（天然ＡＨＬの類似体）を提供することを目的とし、その構造修飾は以下を目的とする。
－安定性を増加させること、
－毒性を制限すること、
－治療用分子としての直接使用を可能にすること、
－生物学的活性を調節すること、
－宿主に対する影響を研究することを可能にすること、
－治療目的のために特性を利用すること。

【課題を解決するための手段】

【0036】

この目的のために、本発明は、以下の一般式Ｉを有し、上皮の炎症性疾患の治療に使用するためのものである化合物を提供する：

【化3】

式中、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、炭素原子又はＳ、Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子であり、但し、ＸはＯとは異なり、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ及びＩから選択されるハロゲン、又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で場置換されていてもよく、
－ ｘ、ｙ、ｚ、及びｗは、互いに独立して、０又は１であり、但し、
３≦ｘ＋ｙ＋ｚ＋ｗ≦４であり、
－ Ｒは、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基、又はヒドロキシル基（ＯＨ）又はアジド基（Ｎ_３）を表し、
－ －－－－－－は、単結合又は二重結合（シス又はトランス）を表し、
－Ｒ’は、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基を表す。

【0037】

上皮の炎症性疾患は、より具体的には、炎症性腸疾患又は乾癬である。

【0038】

好ましくは、式Ｉの化合物は、以下からなる群から選択される：
－ 以下の式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）：

【化4】

－ 以下の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）：

【化5】

－ 以下の式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）：

【化6】

－ 以下の式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール：

【化7】

－ 以下の式Ｉ－５の３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール：

【化8】

－ 以下の式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノール：

【化9】

【0039】

本発明はまた、以下の一般式Ｉを有する少なくとも１つの化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する：

【化10】

－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、炭素原子又はＳ、Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子であり、但し、ＸはＯとは異なり、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ及びＩから選択されるハロゲン、又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で場置換されていてもよく、
－ ｘ、ｙ、ｚ、及びｗは、互いに独立して、０又は１であり、但し、
３≦ｘ＋ｙ＋ｚ＋ｗ≦４であり、
－ Ｒは、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基、又はヒドロキシル基（ＯＨ）又はアジド基（Ｎ_３）を表し、
－ Ｒ’は、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基を表し、
－ －－－－－－は、単結合又は二重結合（シス又はトランス）を表す。

【0040】

好ましくは、本発明の医薬組成物において、式Ｉの少なくとも１つの化合物は、以下からなる群から選択される：
－ 式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３－オキソＣ_１２－アミノチオラクトン（（Ｄ／Ｌ）－３オキソ－Ｃ_１２－ＨＴＬ）：

【化11】

－ 以下の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）：

【化12】

－ 以下の式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）：

【化13】

－ 以下の式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール：

【化14】

－ 以下の式Ｉ－５の３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール：

【化15】

－ 以下の式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノール：

【化16】

【0041】

本発明による医薬組成物は、好ましくは、上皮の炎症性疾患、より具体的には腸の炎症性疾患又は乾癬の治療に使用するためのものである。

【0042】

添付の図面に関連してなされる以下の説明的な説明を読むことにより、本発明はよりよく理解され、他の利点及び特徴がより明確になるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】本発明で使用される式Ｉ－１の（Ｄ，Ｌ）－３オキソＣ_１２アミノチオラクトンの存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図2】天然分子Ｃ４－ＨＳＬ及び３－オキソ－Ｃ１２－ＨＳＬ並びに本発明で使用される式Ｉ－１の分子に関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す図である。

【図3】本発明で使用される式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図4】本発明で使用される漸増用量の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でＩＬ－１７及びＴＮＦ－αによって刺激されたヒトケラチノサイトによるＩＬ－８分泌の阻害曲線を表す図である。

【図5】本発明で使用される式Ｉ－２の漸増用量の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下で、ＣＤ２、ＣＤ３及びＣＤ２８によって刺激されたヒトリンパ球によるＩＬ－２分泌の阻害曲線を示す図である。

【図6】天然の３－オキソ－Ｃ_１２ＨＳＬ分子及び本発明で使用される式Ｉ－２の分子に関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す図である。

【図7】本発明で使用される式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）の存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図8】本発明で使用される式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図9】本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図10】本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図11】天然分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノールに関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す図である。

【図12】本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールの存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図13】本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールの存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図である。

【図14】天然分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールに関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す図である。

【図15】刺激条件下（ＬＰＳ１０ｎｇ／ｍＬ、ＩＦＮ－γ２０Ｕ／ｍＬ）でのＲａｗ２６４．７マウス細胞による２３種のサイトカインの分泌をヒートマップとして示す図である（対照に対して正規化）。

【図16】ヒストグラム形式で示す図であり、 上は、３－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬの存在下でＬＰＳ及びインターフェロンγによって刺激されたＲａｗ２６４．７．７マウス細胞によって分泌されたＴＮＦαの量である。 下は、ＰＣＡの存在下でＬＰＳ及びインターフェロンγによって刺激されたＲａｗ２６４．７マウス細胞によって分泌されたＴＮＦαの量である。

【図17】目的の３つのサイトカインであるＲａｎｔｅｓ、ＴＮＦα、ＩＬ１－βについて、定量的ＰＣＲによりメッセンジャーＲＮＡを測定して得られた遺伝子発現の結果を示す図である。

【図18】刺激されたＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞に対するＡＨＬ３オキソＣ_１２－ＨＳＬ（Ａ）及び３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬ（Ｂ）処理の細胞傷害性をヒストグラム形式で示す図である。異なる反復実験の平均値（ｎ≧３）±ＳＥＭである。

【図19】基礎（Ａ、Ｂ）又は刺激（Ｃ、Ｄ）状態のＲａｗ２６４．７マウス細胞に対するＡＨＬ３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ（Ａ、Ｃ）及び３－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬ（Ｂ、Ｄ）処理の細胞傷害性をヒストグラム形式で示す図である。異なる反復実験の平均値（ｎ＝３）±ＳＥＭ刺激である。

【図20】Ｃａｃｏ－２／ＴＣ ７（左）及びＲａｗ２６４．７（右）細胞株における刺激条件下でのＬＤＨ分泌をヒストグラム形式で示す図である。複数の反復実験の平均値（ｎ≧６）±ＳＥＭである。

【図21】Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７（Ａ）及びＲａｗ２６４．７（Ｂ）細胞株における刺激条件下でのＬＤＨ分泌をヒストグラム形式で示す図である。複数の反復実験の平均値（ｎ≧６）±ＳＥＭである。

【図22】Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７（Ａ）及びＲａｗ２６４．７（Ｂ）細胞株における刺激条件下でのＬＤＨ分泌をヒストグラム形式で示す図である。複数の反復実験の平均値（ｎ≧８）±ＳＥＭである。

【図23】対照分子又は３オキソＣ１２－ＨＳＬ及び３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬ ＡＨＬの漸増用量の存在下での１８時間のインキュベーション後の大腸菌Ｋ１２株の比較生存率をヒストグラム形式で示す図である。異なる反復実験の平均値（ｎ＝６）±ＳＥＭである。

【図24】対照分子又は１００μＭの分子の存在下での１８時間のインキュベーション後の大腸菌Ｋ１２株の比較生存率をヒストグラム形式で示す図である。異なる反復実験の平均値（ｎ＝６）±ＳＥＭである。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本発明は、より良好な安定性、遅延した細菌認識及びより低い毒性を有しながら、腸内で産生される天然ＡＨＬのものと少なくとも同等の抗炎症活性及びタイトジャンクションに対する作用を有するＮ－アシル－ホモセリンラクトン（ＡＨＬ）の合成生体模倣類似体の発見に基づいている。

【0045】

本発明で使用される化合物が類似体である、腸で産生される天然ＡＨＬは、３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び－オキソ－Ｃ_１２：２－ＨＳＬである。

【0046】

本発明者らは、これらの天然ＡＨＬを３つの目的の領域にセグメント化した。
－ラクトンホモセリンヘッド
－炭素鎖の３番目の炭素でケトンを形成するオキソ置換
－炭素数１０～１６のアシル鎖。

【0047】

更に、ＡＨＬのＬ－エナンチオマーは活性形態である（Ｄ－エナンチオマーの活性はない）。

【0048】

次いで、本発明者らは、このようにして得られた類似体のヒト及びマウス細胞に対する生物学的活性、安定性及び細菌認識に対する、これらの３つの目的の領域の各々の様々な化学基による改変の影響を研究した。

【0049】

次いで、本発明者らは、炭素鎖の長さが１０個から最大１６個の炭素原子であってもよく、最適な長さが１４個の炭素原子であり、低い立体障害の化学基の付加のみを許容することを発見した。Ｃ３位におけるラクトン基の存在は、除去又はアセタールへの変換がＡＨＬの抗炎症活性を阻害するので必要である。頭部基は、サイズを過度に大きくせず、水素結合を提供することができる化学基を保持する軽微な修飾のみを許容することができる。

【0050】

したがって、上皮の炎症性疾患、特に腸の炎症性疾患及び乾癬の治療のために本発明で使用される化合物は、以下の一般式Ｉを有する：

【化17】

式中、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、炭素原子又はＳ、Ｎ及びＯから選択されるヘテロ原子であり、但し、ＸはＯとは異なり、
－ Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＷは、互いに独立して、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ及びＩから選択されるハロゲン、又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基で場置換されていてもよく、
－ ｘ、ｙ、ｚ、及びｗは、互いに独立して、０又は１であり、但し、
３≦ｘ＋ｙ＋ｚ＋ｗ≦４であり、
－ Ｒは、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基、又はヒドロキシル基（ＯＨ）又はアジド基（Ｎ_３）を表し、
－Ｒ’は、Ｈ又は直鎖若しくは分岐鎖のＣ_１～Ｃ_４アルキル基を表し、
－ －－－－－－は、単結合又は二重結合（シス又はトランス）を表す。

【0051】

式Ｉのこれらの化合物は、薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて使用して、医薬組成物を形成することができる。

【0052】

医薬組成物は、ゲル、クリーム、バームなどの固体又は液体又は半固体形態の任意の投与形態に製剤化することができ、経口、直腸、静脈内又は局所投与することができる。

【0053】

この医薬組成物は、特に、上皮の炎症性疾患、特に腸の炎症性疾患及び乾癬の治療を意図する。

【0054】

上皮の炎症性疾患の治療に使用するための好ましい化合物は以下の化合物である。

【0055】

これらの化合物の第１は、以下の式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ１２アミノチオラクトン（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）である：

【化18】

【0056】

式Ｉ－１の化合物は、ラクトン頭部がチオラクトン基によって置換されている天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬに対応する。

【0057】

本発明で使用される式Ｉ－１の（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ_１２アミノチオラクトンの存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図１に示すように、ＤＭＳＯと比較して、この化合物は、ヒトＣａｃｏ－２／ＴＣ７腸細胞株（腸上皮の細胞）において、天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの活性と同等の活性を示し、１００μＭ用量で後者よりも活性である。

【0058】

図２は、天然分子Ｃ４－ＨＳＬ及び３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ並びに本発明で使用される式Ｉ－１の分子に関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す。

【0059】

この図２から、式Ｉ－１のラセミ体は、天然分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬに対して１２５ｎＭ対９ｎＭのＥＣ_５０で、及び天然分子Ｃ_４－ＨＳＬに対して認識なし（ＥＣ_５０＞１０００μＭ）で、遅延認識能力を示すことが分かる。

【0060】

第２のこれらの化合物は、以下の式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）３オキソＣ_１２－ＡＣＨ）である：

【化19】

【0061】

式Ｉ－２の化合物は、ラクトン頭部が（Ｓ，Ｓ）－アミノシクロヘキサノール基によって置換されている３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬに対応する。

【0062】

本発明で使用される式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＬ－１ＢによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図３から、この化合物は、ヒトＣａｃｏ－２／ＴＣ７腸細胞株において１～５０μＭ範囲で天然３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの活性と同等の活性を示すことが分かる。本発明で使用される式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の漸増用量の存在下でＩＬ－１７及びＴＮＦ－αによって刺激されたヒトケラチノサイトによるＩＬ－８分泌の阻害曲線を示す図４に見られるように、この化合物は、１１１ｎＭの相対ＥＣ_５０及び参照化合物ベタメタゾンの存在下で得られた阻害の３９％に相当する最大阻害を示し、これにより、人体の様々な器官から生じるいくつかの細胞株に対するこの分子の抗炎症効果の一般化を示すことが可能になる。

【0063】

本発明で使用される式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノール（（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の漸増用量の存在下で、ＣＤ２、ＣＤ３及びＣＤ２８によって刺激されるヒトリンパ球によるＩＬ－２分泌の阻害曲線を示す図５から、この化合物は、８９．９ｎＭの相対ＥＣ_５０及び基準化合物ベタメタゾンの存在下で得られた阻害の４６％に相当する最大阻害を示すことが分かり、これは、この分子の抗炎症効果が、人体の様々な器官から生じるいくつかの細胞株に一般化されることを裏付けている。

【0064】

図４及び図５から、式Ａ及び式Ｂの天然のＡＨＬは試験の範囲内で不活性であることも分かるが、その結果は図４及び図５に示されており、これは本発明で使用される式Ｉの分子の優位性を実証している。

【0065】

天然の３－オキソ－Ｃ_１２ＨＳＬ分子及び本発明で使用される式Ｉ－２の分子に関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す図６から、式Ｉ－２の化合物のＥＣ_５０は１６５ｎＭである。したがって、式Ｉ－２の化合物は、式Ｉ－１の化合物よりも更に遅延認識能力を有する。

【0066】

最後に、式Ｉ－２のこの分子も加水分解に耐性であり、開環形態（酵素的及び自発的の両方）を与える。

【0067】

図８は、式Ｉ－２の（Ｓ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す。この図は、１～５０μＭの濃度範囲の全ての用量で、式Ｉ－２の化合物が参照分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬよりも活性であることを示す。

【0068】

第３の化合物は、以下の式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）である：

【化20】

【0069】

式Ｉ－３の化合物は、ラクトン頭部がチオラクトン基によって置換されている３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬに対応する。

【0070】

式Ｉ－３の（Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノチオラクトン（（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ）の存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す図７に示すように、本発明で使用される式Ｉ－３の分子で観察される効果は、天然の３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ分子で観察される効果と同様であり、特に５μＭで炎症分泌が２７％減少した。

【0071】

第４の化合物は、以下の式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ１２－アミノシクロヘキサノールである：

【化21】

【0072】

図９は、本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２アミノシクロヘキサノール（（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－ＡＣＨ）の存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す。

【0073】

図９から、ヒト腸細胞株Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７において、１～５０μＭの範囲で天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの活性と同等の活性が見られる。

【0074】

図１０は、本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－ＡＣＨの存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す。

【0075】

図１０から、Ｒａｗ２６４．７マウスマクロファージ株において、分子は、１～５０μＭの範囲で天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬよりも高い活性を示すことが分かる。

【0076】

図１１は、天然分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び本発明で使用される式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノールに関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す。図１１から分かるように、式Ｉ－４の（Ｒ，Ｓ）－３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノールは、ＥＣ_５０が２００μＭである。したがって、式Ｉ－４の化合物は、天然のＡＨＬと比較して非常に遅延した認識能力を有する。

【0077】

第５の化合物は、以下の式Ｉ－５の３－オキソＣ_１２－アミノシクロヘキサノールである：

【化22】

【0078】

式Ｉ－５の化合物は、ラクトン頭部がアミノシクロヘキサノール基によって置換されている３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬに対応する。

【0079】

第６の化合物は、以下の式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールである：

【化23】

【0080】

式Ｉ－６の化合物は、ラクトン頭部がアミノクロロフェノール基によって置換されている３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬに対応する。

【0081】

図１２は、本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールの存在下でのＩＬ－１βによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す。

【0082】

図１２から、ヒト腸細胞株Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７において、分子は、１０～１００μＭの範囲で天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの活性よりも有意に高い活性を示すことが分かる。

【0083】

図１３は、本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールの存在下でのＩＦＮ－γ／ＬＰＳの組合せによるＲａｗ２６４．７マウス細胞の刺激の結果を棒グラフ形式で示す。

【0084】

図から分かるように、式Ｉ－６の分子は、Ｒａｗ２６４．７マウスマクロファージ株において、１０～５０μＭの範囲で天然の３－オキソ－Ｃ_１２ ＨＳＬの活性よりも有意に高い活性を示す。

【0085】

図１４は、天然分子３－オキソ－Ｃ_１２－ＨＳＬ及び本発明で使用される式Ｉ－６の３－オキソＣ_１２－アミノクロロフェノールに関連する細菌レポーター株上のＬａｓＲ受容体の活性化曲線を示す。

【0086】

図から分かるように、式Ｉ－６の分子のＥＣ_５０は１０００μＭを超える。式Ｉ－６の分子は、天然のＡＨＬ及び本発明で使用される式Ｉ－１～Ｉ－５の分子と比較して最も遅延した認識能力を有する。

【実施例】

【0087】

１．生物学で使用される実験手順及びプロトコル

【0088】

・ ペニシリン－ストレプトマイシン抗生物質、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）及びＬ－グルタミンはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国ウォルサム）から入手した。ダルベッコリン酸（ＤＰＢＳ １０Ｘ）で緩衝した生理食塩水、高グルコース細胞培養培地（ＤＭＥＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ ４．５ｇ／Ｌグルコース）、ＤＭＥＭ、及びフェノールレッドを含まないＤＭＥＭはＧｉｂｃｏ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国マサチューセッツ州ウォルサム）から入手した。ウシ胎児血清はＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国ユタ州サウス・ローガン）から入手した。

【0089】

・ ２－ヒドロキシキノリン（ＣＡＳ［５９－３１－４］）、３オキソＣ_１２－ＨＳＬ分子、及び滅菌ＤＭＳＯは、Ｓｉｇｍａから購入した。分子３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬは、必要に応じてＤｉｖｅｒｃｈｉｍ（フランス、ロワシー＝アン＝フランス）によって合成した。

【0090】

・ 全ての吸光度及び発光試験は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（登録商標）のＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５分光計で読み取った。

【0091】

１．１．細胞培養

【0092】

１．１．１．Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７細胞株

【0093】

・ Ｃａｃｏ－２細胞株は、ヒト結腸腺癌に由来し、小腸の上皮を裏打ちする腸細胞の細胞培養モデルを表す。Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７細胞株は、正常なヒト腸細胞の形態学的及び機能的特徴の大部分をかなりの程度均一に再生するＣａｃｏ－２細胞のクローン集団である。

【0094】

・ Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７細胞は、細胞がコンフルエンスに達すると増殖停止をもたらす接触阻害特性を示し、これにより細胞単層の確立が可能になる。指数増殖期（播種からコンフルエンスまで）の間、細胞は未分化のままである。コンフルエンスでは、細胞は自発的に（分化誘導物質の非存在下で）分化し、漸進的に極性化することができる。増殖関連機構である分化過程は、コンフルエンスの終了時（増殖曲線の定常期）に最大となる。

【0095】

・ 細胞は、微絨毛を含み、ヒドロラーゼなどの特徴的な腸細胞性酵素を有する頂極で刷子縁を発達させる。

【0096】

・ 公開された文献に従って、本発明者らの実験におけるＣａｃｏ－２／ＴＣ７細胞を、６ウェルプラスチック培養プレートに１０^５細胞／ウェル（１０～１２×１０^３細胞／ｃｍ^２に相当）で播種した。細胞を、２０％熱不活性化ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸ＮＥＡＡ及び１％ペニシリンストレプトマイシンを補充したグルコースに富む培地（ＤＭＥＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地中の高グルコース４．５ｇ／ｌグルコース）中で維持した。細胞を、１０％ＣＯ_２／空気雰囲気中、３７℃で増殖させた。培地を毎日交換した。これらの条件下で、細胞は６日目にコンフルエントになった。１７日目に細胞を血清飢餓にし、１８日目に使用した。

【0097】

１．１．２．Ｒａｗ２６４．７細胞株

【0098】

・ Ｒａｗ２６４．７細胞株は、エーベルソン白血病ウイルスによって形質転換された細胞株に由来するマクロファージ型のマウス細胞からなり、ＢＡＬＢ／ｃマウスから提供されたものである。この細胞株は、インビトロでマクロファージのモデルとして非常に頻繁に使用される。Ｒａｗ２６４．７細胞は、食作用及び飲作用が可能であり、抗体依存性細胞傷害性によって標的細胞を死滅させることができ、広範囲の炎症性サイトカイン並びに一酸化窒素（ＮＯ）を分泌する。更に、Ｒａｗ２６４．７細胞は非常に便利な細胞株であり、細胞は急速に増殖し、小さな直径のウェルを認識し、コンフルエンス前に使用されるべきである。これらの条件により、化合物スクリーニングに有利な株となる。

【0099】

細胞を継代１３と２６の間に使用した。

【0100】

・ 使用したＲａｗ２６４．７細胞は、ＡＴＣＣバンクからのものである。細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清及び１％Ｌ－グルタミンを２００ｍＭまで補充したＤＭＥＭ中で増殖させ、５％ＣＯ２／空気雰囲気下で３７℃で維持した。培地を２日ごとに交換した。

【0101】

１．１．３．細菌レポーター株大腸菌ｐＳＢ１０７５

【0102】

・ クオラムセンシングの細菌レポーター株を使用して、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＨＬ受容体（ＬａｓＲ）によって認識され、活性化を誘導する分子の能力を研究した。したがって、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ｐＳＢ１０７５株を使用した。

【0103】

・ 腸内細菌である大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）は、ＡＨＬを天然に産生せず、ＡＨＬを認識することができるオーファン受容体も有していない。この生物発光株をプラスミドｐＳＢ１０７５の添加によって改変した。このプラスミドは、テトラサイクリン耐性及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のＬａｓＲ ＡＨＬ受容体の発現の両方をコードする遺伝子、並びにＬａｓＲプロモーターに由来する融合遺伝子及びフォトラブダス・ルミネセンス（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）由来のｌｕｘＣＤＡＢＥ遺伝子を含む。細菌株を、５μｇ／ｍｌテトラサイクリンを補充したＬＢ培地中で増殖させて選択圧をかけ、所望の株のみが増幅されるようにした。プラスミドに含まれる融合遺伝子は、ＬａｓＲ受容体が活性化されたときに生物発光を発する能力を細菌に与え、分子スクリーニングのためのロバストな試験をユーザに提供する。緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のＬａｓＲ受容体は、長鎖ＡＨＬ、特にその天然パートナーである３オキソＣ_１２－ＨＳＬの認識によく適しており、最も高い生物発光応答を引き起こす。対照的に、Ｃ_４－ＨＳＬなどの短鎖ＡＨＬは生物発光の放出を誘導しない。

【0104】

・ 簡潔には、５μｇ／ｍｌテトラサイクリンを補充した１０ｍｌのＬＢ培地中で０日目に細菌培養を開始し、７０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で２４時間維持した。１日目に、５μｇ／ｍｌテトラサイクリンを補充した１０ｍｌのＬＢ培地で１：１００（Ｐ１）に培養液を希釈し、７０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で２４時間維持した。２日目に、実験を行い、５μｇ／ｍｌテトラサイクリン（Ｐ２）を補充したＬＢ培地で１：１０に即時希釈した細菌懸濁液を黒色不透明９６ウェルプレートに分注し、得られた発光が終点で読み取られるまで、一定範囲のＡＨＬ濃度又は対照と共に４時間インキュベートした。全ての実験を３連で行った。

【0105】

１．１．４．殺菌剤の用量

【0106】

・ ０日目に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＫ１２株を寒天上で増殖させ、１日目にコロニーをＬＹＢＨＩ液体細菌培養培地に移した。２日目に、コロニーをＬＹＢＨＩ培地で１：１００に希釈し、１８時間増幅した後、不透明な９６ウェルプレートに移した。各ウェルには、ＬＹＢＨＩ、対照、又は漸増用量の試験分子及び細菌を分布させた。６００ｎｍでの吸光度を、開始時（ｔ＝０）及び１８時間のインキュベーション後に読み取った。生の吸光度値を、細菌を含まない溶液の吸光度を用いて補正した。全ての実験を２回行い、それぞれ４回繰り返した。

【0107】

１．２．哺乳動物細胞における分子の生物学的活性の評価

【0108】

１．２．１．サイトカインによるＣａｃｏ－２／ＴＣ７の刺激

【0109】

・ Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７細胞を１００，０００細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種し、１８日間増殖させた。１７日目に細胞を血清飢餓にし、これは、細胞培地をウシ胎仔血清非含有培地と交換し、１８日目に使用したことを意味する。

【0110】

・ 刺激培地は、「飢餓培地」と呼ばれる培地、すなわち１００μＭの２－ＨＱを含み、ウシ胎仔血清（ＤＭＥＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１％ＮＥＡＡ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン）を含まない培地で構成されていた。細胞を、０．１％ＤＭＳＯ（陰性対照）を含有する刺激培地、又は所望の濃度で試験化合物を含有する刺激培地２ｍｌと共に、炎症促進性サイトカインの存在下又は非存在下で、３７℃で１８時間インキュベートして炎症を誘導した。炎症を誘導するために、それぞれ２５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１β又は５０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αとＩＦＮ－γの組み合わせのいずれかを使用した。１８時間後、上清を回収し、－８０℃で保存した後、ＥＬＩＳＡ試験による分析を行った。細胞を１ｍｌのＰＢＳ １Ｘ／ウェルで洗浄し、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有する１００μｌのＰＢＳ １Ｘに溶解した。掻爬することによって細胞を回収し、－８０℃で保存した後、タンパク質を定量した。ＬＤＨの投与は、凍結直前に行った。

【0111】

・ 細胞に対する全ての実験を３連で行った。

【0112】

１．２．２．ＬＰＳ及びＩＦＮ－γによるＲａｗ２６４．７の刺激

【0113】

・ Ｒａｗ２６４．７細胞を、７５，０００細胞／ウェルで１２ウェルプレートに、又は４０，０００細胞／ウェルで２４ウェルプレートに播種して、培養の３日後に８０～９０％のコンフルエンスに達した。刺激のために、細胞を、ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮ－γ（２０Ｕ／ｍｌ）の存在下又は非存在下で、０．１％ＤＭＳＯ（陰性対照）又は所望の濃度で試験化合物を含有する７５０μＬ（それぞれ５００μＬ）の１００μＭ２－ＨＱ富化細胞培地共に３７℃で６時間インキュベートして、炎症を確立した。６時間後、上清を回収し、－８０℃で保存した後、ＥＬＩＳＡ試験による分析を行った。掻爬することによって細胞を回収し、１００μＬのＰＢＳ １Ｘ／ウェル中で、－８０℃で保存した後、総タンパク質を定量した。ＬＤＨの投与は、凍結直前に行った。

【0114】

・ 全ての実験を３連で行った。

【0115】

１．２．３．細胞溶解物中のタンパク質濃度の測定

【0116】

・ 細胞溶解物中の総タンパク質濃度を、製造業者（Ｕｐｔｉｍａ－Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、フランス、モントルソン）の指示に従って、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）であるタンパク質のアッセイ試薬を使用して決定した。

【0117】

１．２．４．ＥＬＩＳＡによるヒトサイトカインの定量

【0118】

・ 細胞によって産生された炎症促進性サイトカインＩＬ－８のレベルを、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（米国ミネソタ州ミネアポリス）によって提供される市販のＩＬ－８ＥＬＩＳＡ検出キット（Ｄｕｏｓｅｔ Ｈｕｍａｎ Ｃ Ｘ ＣＬ８／ＩＬ－８、参照番号ＤＹ２０８）を製造業者の指示に従って使用して、細胞上清及び／又は細胞溶解物中で決定した。

【0119】

・ 全てのサイトカインレベルを、対応する細胞溶解物において決定されたタンパク質含有量に対して最初に正規化した。次いで、実験を比較するために、１００％応答として活性化対照条件（ＤＭＳＯ＋サイトカイン）を使用して実験を更に正規化することができた。

【0120】

１．２．５．マウスサイトカインの定量

【0121】

・ 細胞によって産生されたＩＬ－６マウスサイトカインのレベルを、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（米国カリフォルニア州サンノゼ、参照番号５５５２４０）から市販されている「ＢＤ ＯｐｔＥＩＡマウスＩＬ－６ＥＬＩＳＡセット」を使用して、細胞上清又は溶解物中で決定した。全てのＥＬＩＳＡキットを製造者の指示に従って使用した。

【0122】

・ サイトカイン率を、対応する細胞溶解物中で決定されたタンパク質含量に対して最初に正規化した。実験を比較するために、１００％応答として活性化対照条件（ＤＭＳＯ＋サイトカイン）を使用することによって、実験を更に正規化することができた。

【0123】

１．２．６．細胞傷害性試験

【0124】

・ 試験化合物及び対照の細胞傷害性は、炎症促進性サイトカインの存在下又は非存在下で、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の放出試験で評価し、これは、細胞上清中のこの酵素の放出を追跡し、膜損傷及び細胞死の良い指標である。化合物は、その分泌されたＬＤＨ率が１０％を超えた場合、細胞傷害性とみなされた。

【0125】

・ ２つの方法であるピルビン酸／ＮＡＤＨ溶液（Ｓｉｇｍａ）を用いた測定、又はＲｏｃｈｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の細胞傷害性検出キット^ＰＬＵＳ（ＬＤＨ）を用いた測定を使用して試験を行うことができる。

【0126】

・ ピルビン酸／ＮＡＤＨ法のために、６０ｍｌの０．１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の４．１ｍｇピルビン酸（０．６２ｍＭ）及び７．７ｍｇ ＮＡＤＨ（０．１８ｍＭ）を用いてピルビン酸／ＮＡＤＨ溶液を調製した。

【0127】

・ 上清中のＬＤＨ濃度を測定するために、８００μＬのＮＡＤＨをプラスチックキュベット中の２００μＬの上清に添加し、３４０ｎｍでの吸光度の減少を１分間監視した。細胞溶解物中のＬＤＨ濃度を測定するために、８００μＬのＮＡＤＨをプラスチックキュベット中の１０μＬの上清及び１９０μＬの０．１Ｍ ＰＢＳに添加し、３４０ｎｍでの吸光度の減少を１分間監視した。上清中に放出されたＬＤＨのパーセンテージを、上清と細胞溶解物の補正された勾配の比率として計算した。

【0128】

・ 細胞傷害性検出キット^ＰＬＵＳ（ＬＤＨ－Ｒｏｃｈｅ－参照番号０４７４４９３４００１）を使用して、吸収ベース及び比色試験によって細胞上清及び溶解物中のＬＤＨレベルを決定し、製造業者の指示に従って実施した。細胞傷害性のパーセンテージは、以下の式を用いて確立することができた。

【0129】

【数1】

【0130】

１．３．細菌レポーター株大腸菌ｐＳＢ１０７５に対する分子の生物学的活性

【0131】

・ 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）は、ＡＨＬを天然に産生しない。この生物発光株は、テトラサイクリン耐性及びＬａｓＲ ＡＨＬ受容体の発現をコードする遺伝子、並びにＬａｓＲプロモーターとフォトラブダス・ルミネセンス（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）のｌｕｘＣＤＡＢＥ遺伝子との融合遺伝子を含むプラスミドｐＳＢ１０７５の添加によって開発された。

【0132】

・ １日目に、細菌株の１／１００希釈液（Ｐ１）を、５μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含有するＬＢ培地（圧力選択性）中、撹拌下（７０ｒｐｍ）しながら３７℃で２４時間増殖させた。２日目に、Ｐ１を同じ培地で１：１０に希釈してＰ２を得た。黒色の９６ウェルプレートに、２００μＬのＰ２及び１０μＬの短鎖化合物（陰性対照としては培地、水及びＤＭＳＯ、陽性対照としてはＣ４－ＨＳＬ、並びに所望の濃度の試験試料）を入れた。プレートを７０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で４時間インキュベートした。次いで、発光をマイクロプレートリーダで全ての波長（積分時間２００ｍｓ）で読み取った。

【0133】

・ 競合アッセイについては、培養プロトコルは同様であったが、細菌を最初に１、１０又は１００ｎＭの３オキソＣ_１２－ＨＳＬと共に異なる期間（１、２、６又は１６時間）プレインキュベートした後、希釈してＰ２を得た。その後、試験化合物を所望の濃度で用いて、従来のプロトコルに従ってインキュベーションを継続した。

【0134】

１．４．統計解析

【0135】

・ 全てのデータは、ｎ回の独立した実験の平均±ＳＥＭとして表され、ガウス分布について試験された。統計学的有意性は、スチューデント検定ｔ、一元配置分散分析、二元配置分散分析、又はクラスカル・ワリス検定によって、データセットに応じて、事後検定（チューキー又はダン多重比較検定）と組み合わせて試験した。ｐ＜０．０５の場合、差を有意とみなした。全ての統計分析は、Ｐｒｉｓｍ６．０、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して行った。

【0136】

２．化学における材料及び方法

【0137】

・ 特に明記しない限り、全ての反応は乾燥ガラス器具中アルゴン雰囲気下で行った。試薬は、商業的供給業者Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ及びＴＣＩ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入し、更に精製することなく使用した。

【0138】

・ フラッシュクロマトグラフィは、ＡｒＭｅｎ製の自動化ＳＰＯＴプラットフォーム上に搭載されたＣＨＲＯＭＡＢＯＮＤ（登録商標）Ｆｌａｓｈ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ、ドイツ、デューレン）の予め包装されたシリカゲルカラム（４０～６３μｍの不規則なＳｉＯ２シリカゲル）で行った。

【0139】

・ 薄層クロマトグラフィは、シリカゲル６０Ｆ_２５４（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｍｅｒｃｋ）でコーティングされたアルミニウムシートで行い、過マンガン酸カリウム（ＫＭｎＯ４）、シリカ上のヨウ素、ブロモクレゾールグリーン又はＵＶ光（２５４ｎｍ又は３６５ｎｍ）下で明らかにした。

【0140】

２．１．Ｎ－アシルホモセリンラクトン及びそれらの類似体における原子の番号付けに関する規則

【0141】

・ ＡＨＬ分子及びそれらの類似体に採用される原子の番号付けは以下の通りである。

【化24】

【0142】

２．２天然ＡＨＬ、中間体及び非天然類似体の合成及び物理化学的特性評価のための実験手順

【0143】

・ メルドラム３ａ－ｂ酸誘導体（ＧＰ１）の一般的な調製手順

【0144】

・ 適切なカルボン酸（１．０当量）をジクロロメタン（ＤＣＭと表示）（１．５ｍｌ／ｍｍｏｌ酸）に室温で溶解した。ＤＣＣ（１．１当量）、ＤＭＡＰ（１．０５当量）、及びメルドラム酸（１．０当量）を混合物に順次添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌した。反応を１：１のＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン混合物中のＴＬＣで監視し、ヨウ素で明らかにした。

【0145】

・ 反応の完了後、反応混合物を濾過して沈殿したＤＣＵを除去し、濾過残渣をジクロロメタンで十分に洗浄した。濾液を回収し、溶媒を真空下で除去した。得られた油状物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機相をＨＣｌ １Ｍで抽出し（２回）、水相をＥｔＯＡｃで洗浄した（２回）。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、真空下で溶媒を除去する。油状物の形態で得られた粗生成物を次のステップに直接使用した。

【0146】

・ ２，２－ジメチル－５－（１－オキソデシル）－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン３ａ［１８２３５９－６５－５］

【化25】

【0147】

・ ＧＰ１により収率９４％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ：１２－３．０３（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．７４（ｓ，６Ｈ，ＯＣ（ＣＨ_３）_２Ｏ），１．４５－１：２４（ｍ，１４Ｈ Ｃ（５）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１～０．８６（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ１９８．３２（Ｃ（３））、１７０．５７（エステル）、１６０．１８（エステル）、１０４．７４（ＯＣ（ＣＨ_３）_２Ｏ）、９１．２３、３５．７４、３１．８３、２９．３７、２６．７６、２６．１５、２２．６５、１４．０８（Ｃ（１２））。Ｒ_ｆ（１：３ ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．２２。

【0148】

・ ２，２－ジメチル－５－（１－オキソデシル）－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン３ｂアジド

【化26】

【0149】

ＧＰ１により収率８７％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ）：３．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ），３：０８－３：０２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．１２（ｓ，１Ｈ，Ｃ（２）Ｈ），１．７２（ｓ，６Ｈ，Ｃ（ＣＨ_３）_２），１．６２－１．５４（ｍ，４Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２及びＣ（６）Ｈ_２，１．３１－１．２８（ｍ，１０Ｈ，Ｃ（７）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１９８．３３（ケトン），１７０．６８（エステル），１６０．３０（エステル），１０４．８８（Ｃ_２），９１．３６（ＯＣ（ＣＨ_３）２Ｏ），５１．５６（Ｃ_１２，４３．８７（Ｃ_４），３５．８２（Ｃ_５），２９．３７，２９．１７，２８．９２，２６．９１（（ＣＨ_３）_２），２６．７７，２６．２０，２３．９１。Ｒ_ｆ（１：３ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．２５。

【0150】

・ メルドラム４ａ－ｂ酸誘導体（ＧＰ２）のメタノリシスの一般的手順

【0151】

・ メルドラム３ａ－ｃ酸誘導体（１．０当量）を過剰のメタノールに溶解し、反応フラスコにアルゴン雰囲気下で還流装置を取り付けた。反応物を還流で２時間加熱し、次いで、加熱を停止し、混合物を自然に室温まで冷却させ、一晩撹拌した。反応の進行に続いて、ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン混合物中で１：１のＴＬＣを行い、ヨウ素で明らかにした。完了したら、溶媒を真空下で除去し、油状生成物を以下のステップでそのままで使用した。

【0152】

・ ３－オキソドデカン酸メチル４ａ［７６８３５－６４－８］

【化27】

【0153】

・ ＧＰ２により収率９６％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．７５（ｓ，３Ｈ，ＯＣ Ｈ_３），３．４６（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２．５４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．５９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２８（ｓ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９２～０．８７（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０２．８６（Ｃ_３），１６７．７０（Ｃ_１），５２．３１（ＯＣＨ_３），４９．０１，４３．０９，３１．８５，２９．３９，２９．３４，２９．２４，２９．００，２３．４７，２２．６６，１４：０９（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（１：３ ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．５５。

【0154】

・ 酸１２－アジド－３－オキソドデカン酸のメチルエステル４ｂ［１４２１５９８－０１－７］

【化28】

【0155】

・ ＧＰ２により収率８１％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．７１（ｓ，３Ｈ，ＯＣ Ｈ_３），３．４２（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），３．２２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_２），２．５０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），０１．５５（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２７（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：２０２．８５，１６７．７７，５２．４０，５１．５６，４９．１１，４３．１２，２９．３６，２９．３０，２９．１４，２９．０２，２８．９１，２６．７７，２３．５０。Ｒ_ｆ（１：３ ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン）：０．６．

【0156】

・ 位置Ｃ_３ ５ａ－ｂ（ＧＰ３）にアセタールを導入するための一般的な手順

【0157】

・ エステル３－ケトメチル４ａ－ｂ（１．０当量）をトルエン（約１ｍｌ／ｍｍｏｌエステル）に希釈し、カンファースルホン酸（０．２当量）、トリメチルオルトホルマート（５．０当量）、及びエチレングリコール（８．９当量）を連続的に添加した。反応混合物を８０℃に３時間加熱し、自然に冷却させ、室温で一晩撹拌した。反応後、ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン１：６混合物中でＴＬＣを行い、ヨウ素で明らかにした。完了したら、トルエンを真空下で除去し、得られた油状物をＤＣＭに溶解した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３回）で抽出し、水相をＤＣＭで洗浄した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で溶媒を除去した。

【0158】

・ 必要に応じて、油状生成物を、１：８～１：２ ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサンの溶出勾配を使用するシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製した。

【0159】

・ 酸２－ノニル－１，３－ジオキソラン－２－酢酸のメチルエステル５ａ［１０９８７３－２９－２］

【化29】

【0160】

ＧＰ３により収率９５％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０４：０１－３．９５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），３．７０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），２．６７（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．８３－１．７６（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．４１－１：３６（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２８（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１－０．８５（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．０５（Ｃ_１），１０９．４１（Ｃ_３），６５．１０（ケタール），５１．７２（ＯＣＨ_３），４２．４２，３７．７５，３１．８８，２９．６８，２９．５６，２９．５１，２９．２９，２３．５１，２２．６７，１４．１０（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（１：８ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．３１。

【0161】

・ 酸２－（９－アジド）ノニル－１，３－ジオキソラン－２－酢酸のメチルエステル５ｂ

【化30】

【0162】

・ ＧＰ３により収率９３％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ０４：００－３．９３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），３．６７（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ_３），３．２３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_２），２．６４（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．８０－１．７４（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．６１－１．５５（ｍ，２ＨＣ（５）Ｈ_２），１．２８（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．１５（Ｃ_１），１０９．４９（Ｃ_３），６５．２２（アセタール），５１．８７（ＯＣＨ_３），５１．５９（Ｃ_１２），４２．５２，３７．８１，２９．７１，２９．５１，２９．４５，２９．２０，２８．９３，２６．７９，２３．５６。Ｒ_ｆ（１：４ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．４５。

【0163】

メチルエステル６ａ－ｂ（ＧＰ４）の塩基性加水分解の一般手順

【0164】

・ ケタール保護メチルエステル５ａ－ｂ（１．０当量）をＴＨＦ（１．２５ｍｌ／ｍｍｏｌエステル）に溶解し、ＮａＯＨ １Ｍ溶液（約２．５当量）を添加した。反応混合物を３時間還流した。

【0165】

・ 反応の進行に続いて、１：８のＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン中のＴＬＣを行い、ヨウ素で明らかにした。

【0166】

・ 完了したら、反応混合物を室温に冷却した後、ＨＣｌ １Ｍを用いてｐＨを４～５に固定した。有機相をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で溶媒を除去して、所望の生成物を油状物として得た。

【0167】

・ 酸２－ノニル－１，３－ジオキソラン－２－酢酸６ａ［５９６１０４－６０－８］

【化31】

【0168】

・ ＧＰ４により収率９５％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１０．９３（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），４：０６－３．９９（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），２．７２（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．８５－１．７８（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．４３－１．３７（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２）１．２９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９２－０．８７（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７４．６１（Ｃ_１），１０９．３２（Ｃ_３），６５．１０（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），４２．３６（Ｃ_２），３７．６１（Ｃ_４），３１．８８，２９．６５，２９．５１，２９．３０，２６．９１，２３．５１，２２．６７，１４．１０（Ｃ_１２）。通常のＴＬＣ条件下では移動しない。

【0169】

・ 酸２－（９－アジド）ノニル－１，３－ジオキソラン－２－酢酸６ｂ［１４２１５９８－０２－８］

【化32】

【0170】

・ ＧＰ４により収率９７％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．７７（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），４．０７～３．９３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_２），２．６８（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．９５～１．８２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．６１～１．５５（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１７４．３２（Ｃ_１），１０９．４２（Ｃ_３），６５．２１（アセタール），５１．５９（Ｃ_１２），４２．５０，３７．６６，２９．６８，２９．５１，２９．４５，２９．２０，２８．９３，２６．１９，２３．５６。通常のＴＬＣ条件下では移動しない。

【0171】

・ 様々頭部基機能（ＧＰ５）を有するＥＤＣ及びＤＭＡＰを使用したケトアミドの一般的な調製

【0172】

・ 一般的な頭部基の場合、ケタール保護カルボン酸６ａ（１．０当量）をＤＣＭ（約７ｍｌ／ｍｍｏｌ酸）に溶解し、以下を順次添加した：ＥＤＣ（１．２当量）、ＤＭＡＰ（１．７当量）及び適切なアミノ頭部基（１．３当量）。

【0173】

・（Ｓ）－（－）－（α）－アミノ－（γ）ブチロラクトンの場合、ケタール保護された酸６ａ－ｂ（１．０当量）及びＥＤＣ（１．１当量）をアルゴン雰囲気下でＤＣＭ（約２ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）に溶解し、室温で２０分間撹拌した。次いで、ＤＣＭ（約２ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）中の塩酸塩（Ｓ）－（－）－（α）－アミノ－（γ）ブチロラクトン（１．３当量）及びＤＭＡＰ（１．７当量）を添加した。反応物をアルゴン雰囲気下、室温で１２～２２時間撹拌した。

【0174】

・ 反応の進行に続いて、ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン混合物中でＴＬＣを行い、頭部基の性質に応じて、ヨウ素、ＵＶ光、過マンガン酸カリウム又はブロモクレゾールグリーンを用いて確認した。反応が完了したら、追加のＤＣＭ（１３ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）を添加し、有機相をＨＣｌ １Ｍ（３回）で洗浄した。相を分離し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で溶媒を除去して、所望の化合物を油状物として得た。必要に応じて、生成物をシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製した。

【0175】

・（Ｓ）－（－）－（α）－アミノ－（γ）ブチロラクトン（ＧＰ５）からケトアミドを調製するためのＥＣＤ及びＥｔ_３Ｎを使用する代替手順
ＤＣＭ（約６ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）中の（Ｓ）－（－）－（α）－アミノ－（γ）塩酸塩ブチロラクトン（０．９１当量）の溶液を撹拌した。Ｅｔ_３Ｎ（１．０当量）、保護された酸６ａ（１．０当量）及びＥＤＣ（１．３７当量）を連続的に添加した。反応混合物を室温で４０時間撹拌した。

【0176】

・ 反応後、ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ１：２中でＴＬＣを行い、ヨウ素、過マンガン酸カリウム及びＵＶ光で明らかにした。完了したら、混合物を真空下で蒸発乾固した。残渣を水（８ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）とＥｔＯＡｃ（１７ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）に分配し、有機相をＮａＨＣＯ３の飽和溶液（２回）及びブライン（２回）で連続的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させて、所望の化合物を油状物として得た。必要に応じて、生成物をシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製することができる。

【0177】

・（Ｓ）－２－（２－ノニル－１，３－ジオキソラン－２－イル）－Ｎ－（２－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）アセトアミド７ａ［１８２３５９－６１－１］

【化33】

【0178】

ＧＰ５及びＧＰ５ビスによってそれぞれ収率８８％及び９１％で調製

【0179】

・ ^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ６．９９（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），０４．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．６，６．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），４．４６（ｔｄ，Ｊ＝９．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），４．２７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．２，９．１，５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），４．１１～３．９６（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），２．８０（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．５，８．７，５．９，１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），２．６４（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ２），２．１３（ｄｔｄ，Ｊ＝１２．５，１１．３，８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），１．７１－１．６５（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．３９－１．３３（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２７（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１－０．８４（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７５．３５（Ｃ_１），１６９．９５（エステル），１０９．７６（Ｃ_３），６６．０６（ＣＨ_Ａ Ｈ_Ｂ），６５．２５（ＣＨ_２アセタール），６５．１２（ＣＨ_２アセタール），４９．１１（ＣＨ），４４．３３，３７．６６，３２．０２，３０．５３（Ｃ Ｈ_Ｃ Ｈ_Ｄ），２９．８２，２９．６７，２９．６５，２９．４５，２９．８５，２２．８２，１４．２６（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（４：１ ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．３５。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_３１ＮＯ_５Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：３６２．２０９４。実測値３６４．２０９５。

【0180】

・ １２－アジド－３－（１，３－ジオキソラン）－Ｎ－（（３Ｓ）－テトラヒドロ－２－オキソ－３－フラニル）ドデカンアミド７ｂ

【化34】

【0181】

・ ＧＰ５により収率６９％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３：δ９９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．６，８．７，６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），４．４５（ｔｄ，Ｊ＝９．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），４．２６（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．１，９．１，５．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），４．０８－３．９５（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_２），２．８４～２．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），２．６３（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２．１３（ｄｔｄ，Ｊ＝１２．５，１１．４，８．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），１．７１～１．６５（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．６３～１．５３（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１：３８－１：２８（ｍ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）．^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：１７５．３３（Ｃ_１），１６９．９０（エステル），１０９．７１（Ｃ_３），６６．０３（ＣＨ_ＡＨ_Ｂ），６５．２３（ＣＨ_２アセタール），６５．１１（ＣＨ２アセタール），５１．６０（Ｃ_１２），４９．０７（ＣＨ），４４．３１，３７．６０，３０．４１（ＣＨ_ＣＨ_Ｄ），２９．７２，２９．４８，２９．４５，２９．２１，２８．９４，２６．８０，２３．７７。Ｒ_ｆ（２：１ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン）：０．２０。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_３０Ｎ_４Ｏ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：４０５．２１０８。実測値：４０５．２１１０。

【0182】

・ ２－ノニル－Ｎ－（３－テトラヒドロ－２－オキソ－３－チエニル）－１，３－ジオキサラン－２－アセトアミド７ｆ

【化35】

【0183】

・ 改変ＧＰ５により収率５３％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ６．８９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５６（ｄｔ，Ｊ＝１３．１，６．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），４．１０～３．９３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），０３：３４（ｔｄ，Ｊ＝１１．７，５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），３．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），２．８６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．７，５．１，１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），２．６１（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．９２（ｄｑ，Ｊ＝１２．４，７．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），１．７０－１．６２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１：３８－１：３２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２３（ｓ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９０～０．８１（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣ_３）：δ２０５．３２（Ｃ＝Ｏ），１６９．７９（Ｃ_１，１０９．７５（Ｃ_３），６５．１７（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），６５．０３（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），５９．２７（ＣＨ），４４．３６（Ｃ_２），３７．５９，３１．９６，３１．９２，２９．７７，２９．６０，２９．５９，２９．３９，２７．５９，２３．７９，２２．７６，１４：２１（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（１：１ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．３１。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ_１８Ｈ_３１ＮＯ_４ＳＨ（［Ｍ＋Ｈ］^＋）について計算された正確な質量：３５８．２０４７。実測値：３５８．２０４７。

【0184】

・ ２－ノニル－Ｎ－（３（Ｓ）－テトラヒドロ－２－オキソ－３－チエニル）－１，３－ジオキサラン－２－アセトアミド７ｇ［４２９６７５－２４－１］

【化36】

【0185】

・ ＧＰ５ビスにより収率６４％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ６．８９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５６（ｄｔ，Ｊ＝１３．１，６．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ），４．１０～３．９３（ｍ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），０３：３４（ｔｄ，Ｊ＝１１．７，５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），３．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），２．８６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．７，５．１，１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），２．６１（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．９２（ｄｑ，Ｊ＝１２．４，７．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），１．７０～１．６２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１：３８－１：３２（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２３（ｓ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９０～０．８１（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０５．３２（Ｃ＝Ｏ），１６９．７９（Ｃ），１０９．７５（Ｃ_３），６５．１７（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），６５．０３（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），５９．２７（ＣＨ），４４．３６（Ｃ_２），３７．５９，３１．９６，３１．９２，２９．７７，２９．６０，２９．５９，２９．３９，２７．５９，２３．７９，２２．７６，１４：２１（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（１：１ ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．３１。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_３１ＮＯ_４ＳＨ（［Ｍ＋ＨＡ］^＋）について計算された正確な質量：３５８．２０４７。実測値：３５８．２０４７。

【0186】

・ Ｎ－（（１Ｓ，２Ｓ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル）－２－（２－ノニル－１，３－ジオキサラン－２－イル）アセトアミド７ｈ

【化37】

【0187】

・ ＧＰ５により収率５４％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ６．４７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），３．９６（ｐ，Ｊ＝３．７，３．１Ｈｚ，４Ｈ），３．６６－３．５３（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（ＯＨ）Ｈ），３．２８（ｔｄ，Ｊ＝９．９，４．３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），２．６３－２．４９（ｍ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２．０１（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．９，４．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（Ｈ）Ｈ_ｅｑ．），１．８９（ｄｑ，Ｊ＝１４．３，４．６，３．３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（Ｈ）Ｈ_ａｘ），１．７３－１．５９（ｍ，４Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２及びＮＨＣＨＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２），１．３５－１．２７（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２１（ｓ，１６Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２及びＮＨＣＨＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ＯＨ）Ｈ），０．８３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１７０．９５（Ｃ_１），１０９．８９（Ｃ_３），７５．３１（ＣＨＯＨ），６５．０４（ケタール），６５．０２（ケタール），５５．４５（ＮＨＣＨ），４４．５６（Ｃ_２），３７．５１，３４．３５，３１．９２（Ｃ_４），３１．４４（Ｃ_５），２９．７３，２９．５８，２９．５５，２９．３５，２４．６２，２４．６２，２４．０６，２３．７１，２２．７２，１４．１６（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（２：１ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．１５。ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２０Ｈ_３７ＮＯ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算した正確な質量：３５５．５２。実測値：３７８．１。

【0188】

・ Ｎ－（（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル）－２－（２－ノニル－１，３－ジオキソラン－２－イル）アセトアミド７ｉ

【化38】

【0189】

・ ＧＰ５により収率５１％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ６．７０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４：０１－３，９６（ｍ，４Ｈ，ケタール），３．９５－３．８７（ｍ，２Ｈ，ＮＨＣＨＣ（ＯＨ）Ｈ及びＮＨＣＨ），２．５６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２：３７（ｓ，１Ｈ），１．７１－１．５７（ｍ，７Ｈ），０１：３８（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．３，６．９，４．０Ｈｚ，４Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．８９～０．８３（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．３２（Ｃ_１），１１０．０３（Ｃ_３），６９．５２（ＣＨＯＨ），６５．０９（ケタール），５０．７８（ＮＨＣＨ），４４．７５（Ｃ_２），３７．５２，３１．９９，３１．５３，２９．８３，２９．６４，２９．４３，２７．３７，２３．８０，２３．４８，２２．７９，２０．４５，１４．２３（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（３：１ ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．２６。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２０Ｈ_３７ＮＯ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算した正確な質量：３７８．２６１５。実測値：３７８．２６１５。

【0190】

・ Ｎ－（５－クロロ－２－ヒドロキシフェニル）－２－（２－ノニル－１，３－ジオキソラン－２－イル）アセトアミド７ｍ

【化39】

【0191】

・ ＧＰ５により収率３７％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ８．７８（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），８．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１２．５Ｈｚ，１Ｈ，芳香族），６．９８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ，芳香族），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ，芳香族），４．０７（ｓ，４Ｈ，ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ），２．８０（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．７５－１．６９（ｍ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．４３－１．３６（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２８－１．２５（ｍ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９０－０．８５（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１６９．７５（Ｃ_１），１４７．６８（ＣＯＨ），１２７．０４（ＮＨＣ），１２６．７３（ＣＣｌ），１２４．９４（芳香族），１２１．９４（芳香族），１２１．１７（芳香族）１０９．７７（Ｃ_３），６５．２９（アセタール），４４．６７（Ｃ_２），３７．６５，３２．０１，２９．７３，２９．６２，２９．４２，２３．８０，２２．８１，１４．２５（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（１：４ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．１４。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_２０Ｈ_３０ＣｌＮＯ_４Ｈ（［Ｍ＋Ｈ^＋］）について計算された正確な質量：３８４．１９３６。実測値：３８４．１９３６。

【0192】

・ 末端アジドカルボン酸の合成手順

【0193】

・ 適切なブロモカルボン酸（１．０当量）及びアジ化ナトリウム（１．５当量）をＤＭＦ（５ｍｌ／ｍｍｏｌカルボン酸）に溶解した。反応混合物を６０℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で一晩撹拌した。終了後、溶媒を減圧下で除去した。得られた油状物を、ＥｔＯＡｃ、Ｈ_２Ｏ及びブラインの１：１：１（ｖ／ｖ／ｖ）混合物に溶解した。有機相をＥｔＯＡｃ（３回）で抽出し、半飽和ブライン（２回）で洗浄した後、ＭｇＳＯ_４で乾燥させる。溶媒を真空下で除去して、生成物を油状物として得た。

【化40】

【0194】

・ 酸１０－アジドデカン酸１４［１８６７８８－３２－９］

【化41】

【0195】

・ 定量的収率で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１０）Ｈ_２），２：３３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），１．６０（ｄｔ，Ｊ＝１０．１，６．９Ｈｚ，４Ｈ，Ｃ（３）Ｈ_２及びＣ（９）Ｈ_２），１．３０（ｍ，１０Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２～Ｃ（８）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ１８０．３１（酸），５１．５９（Ｃ_１０），３４．１８（Ｃ_２），２９．３６，２９．２３，２９．１９，２９．１１，２８．９４，２６．８０，２４．７６。

【0196】

・ アセタール保護基を除去するための一般的手順（ＧＰ６）

【0197】

・ ＡＨＬ前駆体又は保護類似体（１．０当量）をＴＦＡ（４ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）及び水（１ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）に溶解した。溶解度を改善するために、必要に応じてＤＣＭを添加することができる（最大１０ｍｌ／ｍｍｏｌ基質）。ＥｔＯＡｃ／ＣｙｃＨｅｘ中のＴＬＣ分析が出発試薬の完全な消費を示すまで（一晩）、反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌した。ｐＨが４～５に安定するまで飽和ＮａＨＣＯ３溶液及びＮａＨＣＯ３を添加することによって反応を停止させ、有機相をＤＣＭで抽出した（３回）。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空下で溶媒を除去した。必要に応じて、生成物をシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製することができる。

【0198】

・ Ｎ－（３（Ｓ）－オキソドデカノイル）ホモセリンラクトン１（＝１５ａ）［１６８９８２－６９－２］

【化42】

【0199】

・ ＧＰ６により収率９８％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．６８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５９（ｄｄｄ，Ｊ．＝１１．５，８．７，６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），４．４８（ｄｔ，Ｊ＝９．１，１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），４．２７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．１，９．１，６．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），３．４７（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２．７６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．６，８．８，６．０，１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），２．５２（ｔ，Ｊ．＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２：３０－２：１５（ｍ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），０１．５７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２６（ｔ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９０－０．８５（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：２０６．７７（Ｃ_３），１７４．８５（エステル），１６６．４４（Ｃ_１），６５．９９（ＣＨ_ＡＨ_Ｂ），４９．１９（Ｃ_α），４８．１２，４４．１２，３１．９９，３０．０４，２９．５２，２９．４７，２９．３８，２９．１３，２３．５１，２２．８０，１４．２４（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（２：１ＥｔＯＡｃ／Ｃｙｃｈｅｘ）：０．３５。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１６Ｈ_２７ＮＯ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：３２０．１８３２。実測値：３２０．１８３４。

【0200】

・ １２－アジド－３－オキソ－Ｎ－（（３Ｓ）－テトラヒドロ－２－オキソ－３－フラニル）ドデカンアミド１５ｂ［１１７５０５２－１３－７］

【化43】

【0201】

・ ＧＰ６により収率８７％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．６１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．５，８．７，６．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），４．４７（ｄｔ，Ｊ＝９．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ａ），４．２７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．０，９．３，６．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｂ），３．４６（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），３．２５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_２），２．７６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．６，８．７，６．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），２．５２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．２２（ｄｔｄ，Ｊ＝１２．５，１１．２，８．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ），１．５９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１：３７－１：２７（ｍ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２１０．５６（Ｃ_３），１６８．４５（エステル），１６５．９７（Ｃ_１），６５．９９（ＣＨ_ＡＨ_Ｂ），５１．６１（Ｃ_１２），４９．２１，４８．１９，４４．０６，３０．０６（ＣＨ_ＣＨ_Ｄ），２９．３５，２９．３３，２９．１８，２９．０６，２８．９６，２６．８１，２３．４５。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１６Ｈ_２６Ｎ_４Ｏ_４Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：３６１．１８４６。実測値：３６１．１８４８。

【0202】

・ ３－オキソ－Ｎ－（テトラヒドロ－２－オキソ－３－チエニル）－ドデカンアミド１５ｆ［６６３８８３－９３－０］

【化44】

【0203】

・ 定量的収率でＧＰ６によって調製した。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），４．５８（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），３．４５（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），３．４０－３．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ_ＡＨ_Ｂ），２．８６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，６．７，５．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），２．５２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．０１（ｄｑ，Ｊ＝１２．４，７．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ）１．６２－１．５５（ｍ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２６（ｔ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１－０．８４（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０６．７６（Ｃ_３），２０４．６７（チオエステル），１６６．３９（Ｃ_１），５９．４０（Ｃ_α），４８．３４，４４．０９，３１．９９，３１．６６，２９．５２，２９．４７，２９．３８，２９．１３，２７．６２，２３．５０，２２．８０，１４．２４（Ｃ_１２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１６Ｈ_２７ＮＯ_３Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：３３６．１６０４。実測値３３６．１６０５。

【0204】

・ ３－オキソＮ－［（３Ｓ）－テトラヒドロ－２－オキソ－３－チエニル］－ドデカンアミド１５ｇ［１７７１５８－２９－１］

【化45】

【0205】

・ 定量的収率でＧＰ６によって調製した。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．４８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），４．５８（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ_αＨ），３．４５（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），３．３５（ｔｄ，Ｊ＝１１．５，５．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ_Ａ），３．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．５，７．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ_Ｂ），２．８４（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，６．７，５．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｄ），２．５２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．０１（ｄｑ，Ｊ＝１２．４，７．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ_Ｃ）１．５７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．２５（ｔ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１－０．８２（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０６．７２（Ｃ_３），２０４．７１（チオエステル），１６６．３６（Ｃ_１），５９．３６（Ｃ_α），４８．４１（ＣＳ），４４．０６（Ｃ_２），３１．９８，３１．６４，２９．５１，２９．４７，２９．３７，２９．１２，２７．６１，２３．４８，２２．７９，１４．２４（Ｃ_１２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１６Ｈ_２７ＮＯ_３ＳＨ（［Ｍ＋Ｈ］^＋）について計算された正確な質量：３１４．１７８４。実測値：３１４．１７８５。

【0206】

・ Ｎ－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル］－３－オキソ－ドデカンアミド１５ｈ［８８６７５５－１９－７］

【化46】

【0207】

・ ＧＰ６により収率５４％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．１７（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），３．６５（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１１．２，９．１，７．４，４．３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（ＯＨ）Ｈ_ａｘ），３．４１（ｓ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），３：３８－３：２７（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），２．５１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．９～１．９９（ｍ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（Ｈ）Ｈ_ｅｑ），１．９５（ｔｄｄ，Ｊ＝７．４，３．９，２．３Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（Ｈ）Ｈ_ａｘ），１．７１（ｄｄｔ，Ｊ＝８．８，５．６，２．７Ｈｚ，２ＨＮＨＣＨＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２），１．５６（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．３６－１．１６（ｍ，１６Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２及びＮＨＣＨＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ＯＨ）Ｈ，０．９０－０．８１（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０７．５５（Ｃ_３），１６７．３７（Ｃ_１），７５．２４（ＣＨＯＨ），５５．８８（ＮＨＣＨ），４８．６０，４４．０８（Ｃ_２），３４．３９，３１．９７，３１．３８，２９．５０，２９．４６，２９．３６，２９．１１，２４．６７，２４．１０，２３．４８，２２．７８，１４．２２（Ｃ_１２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_３３ＮＯ_３Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）について計算された正確な質量：３３４．２３５３。実測値３３４．２３５３。

【0208】

・ Ｎ－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヒドロキシシクロヘキシル］－３－オキソ－ドデカンアミド１５ｉ［８９７０３１－３７－７］

【化47】

【0209】

・ ＧＰ６により収率６７％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．２５－７．１４（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．２，２．７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨ），３．９２（ｄｔ，Ｊ＝５．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＣＨＣ（ＯＨ）Ｈ_ｅｑ），３．４０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（２）Ｈ_２），２．５２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），２．２０－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．６８－１．５３（ｍ，６Ｈ），１．４２（ｔｔｄ，Ｊ＝１１．５，５．５，５．０，２．８Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９１－０．８３（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ２０７．３１（Ｃ_３），１６５．８４（Ｃ_１），６９．３８（ＣＯＨ），５１．２３（ＮＨＣＨ），４９．１７，４４．０７，３１．９９，３１．５１，２９．５２，２９．４８，２９．３８，２９．１５，２７．３２，２３．５２，２３．４４，２２．７９，２０．４３，１４．２３（Ｃ_１２）。Ｒ_ｆ（３：１ＥｔＯＡｃ／ＣｙｃＨｅｘ）＝０．３８。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_３３ＮＯ_３Ｈ（［Ｍ＋Ｈ］^＋）について計算された正確な質量：３１２．２５３３。実測値：３１２．２５３４。

【0210】

・ Ｎ－（５－クロロ－２－ヒドロキシフェニル）－３－オキソドデカンアミド１５ｍ［６６３８８３－６８－９］

【化48】

【0211】

・ ＧＰ６により収率９８％で調製。^１Ｈ ＲＭＮ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ_４）：δ８：０１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ，芳香族Ｈ），６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．６Ｈｚ，１Ｈ，芳香族Ｈ），６．８４～６．７６（ｍ，１Ｈ，芳香族Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｃ（２）Ｈ－フォーム－エノール），２．６０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（４）Ｈ_２），１．５９（ｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ（５）Ｈ_２），１．３４－１．２６（ｍ，１２Ｈ，Ｃ（６）Ｈ_２～Ｃ（１１）Ｈ_２），０．９２～０．８７（ｍ，３Ｈ，Ｃ（１２）Ｈ_３）。^１３Ｃ ＲＭＮ（７５ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ_４）：δ２０７．４１（Ｃ_３），１６７．６４（Ｃ_１），１４７．５９（ＣＯＨ），１２８．３０（芳香族Ｃ），１２５．５１（芳香族ＣＨ），１２４．９１（芳香族Ｃ），１２２．４５（芳香族ＣＨ），１１６．９５（芳香族ＣＨ），４３．９９（Ｃ_２），３３．０３（Ｃ_４），３０．５７，３０．５３，３０．４０，３０．１３，２４．４５，２３．７２，１４．４３（Ｃ_１２）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_２６ＣｌＮＯ_３Ｈ（［Ｍ＋Ｈ］^＋）について計算された正確な質量：３４０．１６５４。実測値３４０．１６６３。

【0212】

３．本発明の化合物の抗炎症効果

【0213】

目的の化合物の特性を評価するために、マウスマクロファージ株、ＲＡＷ２６４．７を使用した。

【0214】

炎症に対する効果を評価するために、細胞を炎症促進性カクテル（インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ、２０Ｕ／ｍＬ）及びリポ多糖（ＬＰＳ、１０ｎｇ／ｍＬ））の添加で処理したか、又は処理しなかった。細胞の上清に２３種のサイトカインの分泌を投与することによる多重分析によって炎症状態を評価した。ヒートマップの結果を図１５に示し、これは、刺激条件下（ＬＰＳ１０ｎｇ／ｍＬ、ＩＦＮ－γ２０Ｕ／ｍＬ）でのＲＡＷ２６４．７によるサイトカインの分泌を示す（対照に対して正規化されている）。

【0215】

これらの結果は、５０μＭ ＰＣＡの存在下でのサイトカインの産生の減少を全体的に可視化することを可能にする。本発明の化合物によって産生が調節されたサイトカインは、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦα、炎症促進性サイトカインである。これらのタンパク質の減少は用量依存的であり、５０μＭ ＰＣＡの存在下で最大の効果が観察された。

【0216】

これを説明するために、ＴＮＦ－αについて観察された結果（多重分析の結果）を示す２つのヒストグラム（第１は３オキソＣ１２：２で、第２はＰＣＡで）を図１６に示す（上段：３オキソＣ_１２：２の存在下でＬＰＳ及びインターフェロン－γによって刺激されたＲＡＷ２６４．７によって分泌されたＴＮＦα、及び下段：ＰＣＡの存在下でＬＰＳ及びインターフェロン－γによって刺激されたＲＡＷ２６４．７によって分泌されたＴＮＦα）。

【0217】

いくつかの遺伝子発現結果の確認は、特に、目的の３つのサイトカインであるＲａｎｔｅｓ、ＴＮＦα、ＩＬ１－βについて、定量的ＰＣＲによってメッセンジャーＲＮＡを測定することによって行った。結果を図１７に示す図に示す。

【0218】

したがって、本発明者らは、タンパク質レベル及びｍＲＮＡ発現の両方で、マクロファージ型の細胞に対する化合物の抗炎症効果を観察する。

【0219】

４ 本発明の化合物の毒性の測定

【0220】

４．１ 真核細胞に対する化合物の毒性の測定

【0221】

ＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）分泌の測定試験を使用して、試験化合物及び対照化合物の細胞傷害性を評価した。この試験は、細胞内コンパートメントに残るＬＤＨの量と比較した、それらの上清中の細胞によって分泌されたＬＤＨの量の測定に基づく。この比率は、細胞が受ける膜損傷、したがって化合物の細胞傷害性の指標を提供する。比率が１０％より高い場合、化合物は毒性であると考えられる。

【0222】

２つの方法を使用してこの試験を実施した：即時的に調製したピルビン酸／ＮＡＤＨ溶液を使用するか、又は製造業者Ｒｏｃｈｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）からの細胞傷害性検出キット^ＰＬＵＳ（ＬＤＨ）を使用して測定した。

【0223】

ピルビン酸／ＮＡＤＨ法：６０ｍｌの０．１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、４．１ｍｇのピルビン酸（０．６２ｍＭ）及び７．７ｍｇのＮＡＤＨ（０．１８ｍＭ）を用いて調製したピルビン酸／ＮＡＤＨ溶液。

【0224】

上清中のＬＤＨ濃度を測定するために、８００μＬのＮＡＤＨをプラスチック分光分析キュベット中の２００μＬの上清に添加し、最終溶液の吸光度の減少を３４０ｎｍで１分間読み取った。細胞溶解物中のＬＤＨ濃度を測定するために、８００μＬのＮＡＤＨをプラスチック分光分析キュベット中の１０μＬの細胞溶解物及び１９０μＬの０．１Ｍ ＰＢＳに添加し、最終溶液の吸光度の減少を３４０ｎｍで１分間読み取った。次いで、分泌されたＬＤＨのパーセンテージを、上清及び細胞溶解物（それぞれ）の吸光度の減衰勾配の比によって計算した。

【0225】

細胞傷害性検出キット^ＰＬＵＳ（ＬＤＨ）法：製造業者の指示に従って実施した吸光度試験。次いで、分泌されたＬＤＨのパーセンテージを以下の式によって計算した：

【数2】

【0226】

４．２ 細菌株に対する化合物の毒性を測定する方法

【0227】

大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２株をＤ０で寒天ゲル上で培養し、次いで、選択したコロニーをＤ１で液体細菌培養ＬＹＢＨＩ培地に移した。２日目に、このコロニーをＬＹＢＨＩ培地で１：１００に希釈し、増殖のために１８時間維持した後、不透明な９６ウェルプレートに分配した。各ウェルには、以下のものが分布していた：ＬＹＢＨＩ培地、細菌培養、及び試験化合物又は対照化合物。ウェルの吸光度をｔ０及びｔ１８時間で６００ｎｍで読み取った。生の吸光度値を、細菌又は化合物を含まないＬＹＢＨＩ培地のみを含むウェルの吸光度に対して補正した。

【0228】

４．３ 真核細胞に関する結果

【0229】

ａ．天然ＡＨＬ３オキソＣ_１２－ＨＳＬ及び３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬ

【0230】

図１８は、Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７細胞株において、炎症促進性サイトカインの存在下及び非存在下において、２つの分子が１～１００μＭの濃度範囲で良好に耐容されることを示し、測定された細胞傷害性は、３オキソＣ_１２－ＨＳＬについては２．５％を超えず、３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬについては１．５％を超えない。比較すると、活性化対照（ＤＭＳＯ ０．１％及びサイトカイン）の毒性は約４％である。

【0231】

図１９は、Ｒａｗ２６４．７マウス細胞株において、分泌されたＬＤＨの増加が両方のＡＨＬについて５０μＭという早期に観察され、１００μＭ濃度で１０％を超える細胞傷害性を有したことを示す。この現象は、基礎条件及び刺激条件で観察され、したがって分子の毒性に起因する。これは、マクロファージ株に関する残りの研究において１～５０μＭ用量を使用することを正当化する。

【0232】

ｂ．（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ（式Ｉ－１）及び（Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＨＴＬ（式Ｉ－３）

【0233】

図２０に見られるように、これらの２つのチオラクトン頭部化合物のいずれも、２つの細胞株に対して毒性を示さず、最高濃度でも１０％未満のＬＤＨ分泌を有した。

【0234】

ｃ．（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ（式（Ｉ－２）及び（Ｒ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ（式（Ｉ－４）

【0235】

図２１に示されるように、両化合物は低濃度で細胞傷害性ではないが、（Ｒ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ分子は、より高い濃度（≧５０μＭ）でＬＤＨ分泌の増加を示す。Ｃａｃｏ－２／ＴＣ７上皮細胞では、１０％マークを超えることなく、１００μＭで９％の分泌が観察される。この効果は、（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨジアステレオマーほど有意ではない。

【0236】

この観察結果は、Ｒａｗ２６４．７マクロファージ株において見出され、一貫して、（Ｒ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨの存在下で分泌されたＬＤＨは、全ての濃度で、（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨの存在下で分泌されたＬＤＨよりも大きい。（Ｒ，Ｓ）－３オキソＣ_１２－ＡＣＨ分子はまた、５０μＭで毒性である。

【0237】

ｄ．３オキソＣ_１２－アミノクロロフェノール（式Ｉ－６）

【0238】

分子は、図２２に示すように、試験した濃度のいずれにおいても、いずれの株に対しても毒性ではない。

【0239】

４．４ 細菌株に関する結果

【0240】

ａ．天然ＡＨＬ３オキソＣ１２－ＨＳＬ及び３オキソＣ１２：２－ＨＳＬ

【0241】

３オキソＣ_１２－ＨＳＬ及び３オキソＣ_１２：２－ＨＳＬ ＡＨＬを、１～１００μＭの範囲における殺菌効果について試験した。１８時間のインキュベーション後に毒性作用は観察されず、記録された吸光度は、ＬＹＢＨＩ培地単独及び０．１％ ＤＭＯＳの存在下での吸光度と同一であり、図２３を参照されたい。

【0242】

４．５ 細菌株に関する結果

【0243】

ａ．（Ｄ／Ｌ）－３オキソＣ１２－ＨＴＬ（式Ｉ－１）、（Ｓ）－３オキソＣ１２－ＨＴＬ（式Ｉ－３）、（Ｓ，Ｓ）－３オキソＣ１２－ＡＣＨ（式Ｉ－２）、（Ｒ，Ｓ）－３オキソＣ１２－ＡＣＨ（式Ｉ－４）及び３オキソＣ１２－アミノクロロフェノール（式Ｉ－６）類似体

【0244】

全ての濃度及び試験した全ての分子間で有意差は観察されなかったので、最大濃度（１００μＭ）のみを図２４に示す。

【0245】

一般に、天然又は合成の化合物は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２株に対して殺菌性ではない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16A-B】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18A-B】

【図19A-D】

【図20A-B】

【図21A-B】

【図22A-B】

【図23A-B】

【図24】

【国際調査報告】