特表 2023-504848 エテルカルセチド中間体及びエテルカルセチドの合成方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-07

(54)【発明の名称】エテルカルセチド中間体及びエテルカルセチドの合成方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/00 20060101AFI20230131BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230131BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20230131BHJP

【ＦＩ】

C07K7/00

A61P43/00 111

A61K38/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022533637

(86)(22)【出願日】2019-12-27

(85)【翻訳文提出日】2022-06-03

(86)【国際出願番号】 CN2019129440

(87)【国際公開番号】W WO2021109297

(87)【国際公開日】2021-06-10

(31)【優先権主張番号】201911217130.X

(32)【優先日】2019-12-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519153006

【氏名又は名称】アシムケム ラボラトリーズ （ティエンジン） カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＡＳＹＭＣＨＥＭ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ （ＴＩＡＮＪＩＮ） ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110002066

【氏名又は名称】弁理士法人筒井国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジウユアン

(72)【発明者】

【氏名】マット，ジョンソン

(72)【発明者】

【氏名】リー，チャンフェン

(72)【発明者】

【氏名】ジン，ルータオ

(72)【発明者】

【氏名】バラスブラマニアン，アルムガム

(72)【発明者】

【氏名】レイ，シャオロン

(72)【発明者】

【氏名】ジュー，ジーリー

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA06

4C084BA01

4C084BA09

4C084BA17

4C084NA20

4C084ZC412

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA15

4H045DA30

4H045EA30

4H045FA52

4H045GA21

(57)【要約】

本発明はエテルカルセチド中間体及びエテルカルセチドの合成方法を開示する。当該エテルカルセチド中間体はＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨであり、エテルカルセチド中間体の合成方法は次のステップを含む。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを出発原料として、置換反応によって一次生成物(Ａ)を生成し、式中、ＲはＳ－Ｐｙ又はＣｌであり、一次生成物がＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨアミノ酸とカップリング反応してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。当該重要中間体をエテルカルセチドの合成に用いると純度及び収率を高めることができ、そして重要なのは、当該重要中間体の合成原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルである。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

エテルカルセチド中間体の合成方法であって、前記エテルカルセチド中間体はＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨであり、前記エテルカルセチド中間体の合成方法は、下記のステップを含むことを特徴とする、合成方法。
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを出発原料として、置換反応によって一次生成物

を生成し、式中、ＲはＳ－Ｐｙ又はＣｌであり、前記一次生成物がＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨアミノ酸とカップリング反応して前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。

【請求項2】

前記一次生成物はＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕであり、前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは、
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンの置換反応により一次生成物Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを合成するステップと、
前記Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨのカップリングにより前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ）－ＯＨを得るステップとで得ることを特徴とする請求項１に記載の合成方法。

【請求項3】

前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは、
室温下で、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ及びジチオジピリジンを溶媒Ａに加えて、６～１２時間攪拌し、その後、水を加えて、抽出剤を使用して抽出し、得た有機相を乾燥及び濾過し、精製してＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを得るステップと、
溶媒ＢにＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨ及びＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを加え、温度を１５～３０℃にして０．５～２時間攪拌して反応させ、反応系を水洗、濃縮及び精製して前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得るステップとで得、
前記溶媒ＡはＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれ、
前記抽出剤はＥｔＯＡｃ、ＭＴＢＥ及びＤＣＭのうちの１種又は複数種から選ばれ、
前記溶媒ＢはＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれることを特徴とする請求項２に記載の合成方法。

【請求項4】

前記Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンの反応において、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンのモル比は１：１．２～１：６．４であり、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕの前記溶媒Ａにおける濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬであり、前記溶媒ＢにおけるＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬであり、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨとＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕのモル比は１：０．８～１．４であることを特徴とする請求項３に記載の合成方法。

【請求項5】

前記一次生成物は（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕであり、前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは、
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＮＣＳを反応させて（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕを合成するステップと、
（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを反応させてＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得るステップとで得ることを特徴とする請求項１に記載の合成方法。

【請求項6】

前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは、
Ａ． Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを溶媒Ｃに溶解し、温度を０～１０℃にして、ＤＩＰＥＡを加え、数回に分けてＮＣＳを加え、４～５時間攪拌し、反応が終了したら、濾過し、洗い流して、濾液を得るステップと、
Ｂ．温度を０～１０℃にして、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを前記濾液に加え、ＤＩＰＥＡを加え、反応温度を１０～３０℃にして、０．５～２時間攪し、反応系を水洗、濃縮及び精製して前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得るステップとで得、
前記溶媒ＣはＤＣＭ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれることを特徴とする請求項５に記載の合成方法。

【請求項7】

前記ステップＡで、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを前記溶媒Ｃに溶解して濃度０．０１～０．３ｇ／ｍＬの溶液を得、ＤＩＰＥＡの添加量はモル基準で２～３ｅｑであり、ＮＣＳの添加量は１．１～１．５ｅｑであり、前記ステップＢで、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの添加量は１．１～１．５ｅｑであることを特徴とする請求項６に記載の合成方法。

【請求項8】

エテルカルセチドの合成方法であって、
Ｓ１．請求項１～７のいずれか一項に記載のエテルカルセチド中間体の合成方法に従ってＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成するステップと、
Ｓ２． ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇと前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを反応させ、その後、Ｆｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドを得るステップとを含むことを特徴とする合成方法。

【請求項9】

前記Ｓ２において、前記ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｒｇはＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドであることを特徴とする請求項８に記載の合成方法。

【請求項10】

前記Ｓ２は、
アミノ樹脂を使用して固相合成法でＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドをリンクし、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ、ＰｙＢｏｐ及びＤＩＰＥＡを０～５℃下で０～１０分間活性化させ、温度を２０～３０℃にして２～６時間反応させ、反応が終了したらＤＭＦで４～６回洗浄し、１０％～２０％ピペリジンでＦｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドのペプチド樹脂を得ることを含むことを特徴とする請求項８に記載の合成方法。

【請求項11】

Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ：ＰｙＢｏｐ：ＤＩＰＥＡ＝３：３～６：３～６の比率であることを特徴とする請求項１０に記載の合成方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は化学合成の技術分野に関し、具体的には、エテルカルセチド中間体及びエテルカルセチドの合成方法に関する。

【背景技術】

【0002】

エテルカルセチドはＫａｉＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．社によって開発された、副甲状腺ホルモンの分泌を阻害できる新型のカルシウム受容体作動薬である。エテルカルセチドは副甲状腺上のカルシウム感知受容体と結合してそれを活性化させることによって、副甲状腺ホルモンのレベルを低下させることを実現できる。

【0003】

エテルカルセチドは３つのＤ－アルギニン、２つのＤ－アラニン、１つのＤ－アルギニンアミド、１つのＬ－システイン及び１つのＤ－システイン（Ｎ末端がアセチル基によってブロックされる）から構成され、Ｄ－システインとＬ－システインがジスルフィド結合によってリンクされている（Ｎ－ａｃｅｔｙｌ－Ｄ－ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ－Ｄ－ａｌａｎｙｌ－Ｄ－ａｒｇｉｎｙｌ－Ｄ－ａｒｇｉｎｙｌ－Ｄ－ａｒｇｉｎｙｌ－Ｄ－ａｌａｎｙｌ－Ｄ－Ａｒｇｉｎｉｎａｍｉｄｅ，ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｌ－ｃｙｓｔｅｉｎｅ）。

【0004】

既存の特許はいずれもヘプタペプチドを固相合成し、その後、様々な方法でジスルフィド結合をリンクさせるもので、特にＭＭＴを除去するプロセスを、１％～２％ＴＦＡ／ＤＣＭを使用して１５回以上繰り返す必要があるため、非常に操作しにくい。

【0005】

特許２０１７／１１４２３８Ａ１では、液相合成法を採用し、経路が長く、総収率がわずか１１％である。特許ＷＯ２０１７／１１４２４０Ａ１では、粗ペプチドの純度が８１．０％で、不純物が多く、精製後の総収率が３０．５％である。特許ＵＳ２０１９／０１００５５４Ａ１では、粗ペプチドの純度が低く、複数回の精製を必要とし、総収率が５０％である。中国特許ＣＮ２０１８１１２７７０８１では、粗ペプチドの純度が８８．２％で、精製後の総収率が５７．８％である。つまり、ヘプタペプチドを固相合成してシステインをリンクさせるという従来の方法とその誘導体の合成方法には、粗ペプチドの純度が低く、不純物が多く、精製しにくいなどの問題がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】国際公開第２０１７／１１４２３８Ａ１号

【特許文献2】国際公開第ＷＯ２０１７／１１４２４０Ａ１号

【特許文献3】米国出願公開特許第２０１９／０１００５５４Ａ１号

【特許文献4】中国特許出願第ＣＮ２０１８１１２７７０８１号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明はエテルカルセチド中間体及びエテルカルセチドの合成方法を提供し、当該中間体をエテルカルセチドの合成に用いられ、エテルカルセチドの合成ステップが複雑であるという従来技術の技術的課題を解決することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

上記の目的を達成するための本発明の一態様として、エテルカルセチド中間体の合成方法を提供する。当該エテルカルセチド中間体はＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨであり、構造式Ｉに示すとおりである。

【0009】

構造式Ｉ

【化1】

【0010】

エテルカルセチド中間体の合成方法は次のステップを含む。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを出発原料として、置換反応によって一次生成物

を生成し、式中、ＲはＳ－Ｐｙ又はＣｌであり、一次生成物がＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨアミノ酸とカップリング反応してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。

【0011】

さらに、一次生成物はＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕであり、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンの置換反応により一次生成物Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを合成し、そして、Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨのカップリングによりＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ）－ＯＨを得る。

【0012】

さらに、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。室温下で、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ及びジチオジピリジンを溶媒Ａに加えて、６～１２時間攪拌し、その後、水を加えて、抽出剤を使用して抽出し、得た有機相を乾燥及び濾過し、精製してＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを得る。溶媒ＢにＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨ及びＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを加え、温度を１５～３０℃にして０．５～２時間攪拌して反応させ、反応系を水洗、濃縮及び精製してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。好ましくは、溶媒ＡはＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。好ましくは、抽出剤はＥｔＯＡｃ、ＭＴＢＥ及びＤＣＭのうちの１種又は複数種から選ばれる。好ましくは、溶媒ＢはＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。

【0013】

さらに、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンの反応で、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンのモル比は１：１．２～１：６．４であり、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕの溶媒Ａにおける濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬである。溶媒ＢにおけるＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬである。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨとＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕのモル比は１：０．８～１．４である。

【0014】

さらに、一次生成物は（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕであり、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＮＣＳを反応させて（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕを合成し、そして、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを反応させてＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。

【0015】

さらに、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ａ． Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを溶媒Ｃに溶解し、温度を０～１０℃にして、ＤＩＰＥＡを加え、数回に分けてＮＣＳを加え、４～５時間攪拌し、反応が終了したら、濾過し、洗い流して、濾液を得る。Ｂ．温度を０～１０℃にして、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを濾液に加え、ＤＩＰＥＡを加え、反応温度を１０～３０℃にして、０．５～２時間攪拌する。反応系を水洗、濃縮及び精製してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。好ましくは、溶媒ＣはＤＣＭ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。

【0016】

さらに、ステップＡで、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを溶媒Ｃに溶解して濃度０．０１～０．３ｇ／ｍＬの溶液を得、ＤＩＰＥＡの添加量はモル基準で２～３ｅｑであり、ＮＣＳの添加量は１．１～１．５ｅｑである。ステップＢで、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの添加量は１．１～１．５ｅｑである。

【0017】

本発明の別の態様として、エテルカルセチドの合成方法を提供する。当該合成方法は次のステップを含む。Ｓ１．上記のいずれかのエテルカルセチド中間体の合成方法でＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成する。Ｓ２． ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｒｇとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを反応させ、その後、Ｆｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドを得る。

【0018】

さらに、Ｓ２で、ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｒｇはＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドである。

【0019】

さらに、Ｓ２は次を含む。アミノ樹脂を使用して固相合成法でＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドをリンクし、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ、ＰｙＢｏｐ及びＤＩＰＥＡを０～５℃下で０～１０分間活性化させ、温度を２０～３０℃にして２～６時間反応させ、反応が終了したらＤＭＦで４～６回洗浄し、１０％～２０％ピペリジンでＦｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドのペプチド樹脂を得る。

【0020】

さらに、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ：ＰｙＢｏｐ：ＤＩＰＥＡ＝３：３～６：３～６の比率である。

【発明の効果】

【0021】

本発明の技術案を用いて、重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成し、さらにエテルカルセチドを合成することによって、ペプチド鎖にジスルフィド結合を構築する時の副反応を避け、操作を簡素化し、エテルカルセチドの合成に用いると、純度及び収率を高めることができ、そして重要なのは、当該中間体の合成原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルである。

【図面の簡単な説明】

【0022】

本願の一部を構成する添付の図面は本発明の一層の理解に供するもので、本発明の例示的な実施例とその説明は、本発明を不適切に限定するものではなく、本発明を解釈するためのものである。

【図1】図１は実施例１のＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨの純度スペクトルを示す。

【図2】図２は実施例１の中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨのＬＣＭＳスペクトル（ＬＣ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝６１７．９（Ｍ－１，３０ｅｖ），１２３５．７（２Ｍ－１，３０ｅｖ））を示す。

【図3】図３は実施例３で分取精製後のエテルカルセチドの純度スペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0023】

なお、矛盾しない限り、本願の実施例と実施例の特徴を組み合わせることができる。以下、図面を参照し実施例と結び付けて本発明を詳細に説明する。

【0024】

本発明で使用する略語とその解釈は次のとおりである。
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基。
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基。
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブチル基。
Ａｒｇ：アルギニン。
Ｃｙｓ：システイン。
Ａｌａ：アラニン。
ＰｙＢｏｐ：ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム。
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン。
ＤＣＭ：ジクロロメタン。
ＮＣＳ：Ｎ－クロロスクシンイミド。
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド。
ＮＭＰ：Ｎ－メチルピロリドン。
ＤＭＡｃ：Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド。
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ－ブトキシ基。
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル。

【0025】

エテルカルセチドの合成で最も重要なのはジスルフィド結合の合成である。当該ステップの収率は最終的に経路全体の収率に直接的な影響を与える。本願の発明者らは、重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ（Ｎ－フルオレニルホルミル－Ｄ－システイン－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－Ｌ－システインｔｅｒｔ－ブチル））の合成で事前にジスルフィド結合を合成すると固相反応効率が低く収率が悪いという問題を避けられることを発見した。

【0026】

本発明の典型的な実施形態として、エテルカルセチド中間体の合成方法を提供する。エテルカルセチド中間体はＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨであり、エテルカルセチド中間体の合成方法は次のステップを含む。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを出発原料として、置換反応によって一次生成物

を生成し、式中、ＲはＳ－Ｐｙ又はＣｌであり、一次生成物がＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨアミノ酸とカップリング反応してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。

【0027】

本発明の技術案を用いて、重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成し、そしてエテルカルセチドを合成するのは、ペプチド鎖にジスルフィド結合を入れる時の副反応を避け、操作を簡素化し、エテルカルセチドの合成に用いると純度と収率を高めることができ、そして重要なのは、当該重要中間体の合成原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルである。

【0028】

本発明の典型的な実施形態では、一次生成物はＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕであり、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンを反応させてＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを合成し、そして、Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨのカップリングによりＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。重要なのは、当該中間体の合成原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルである。

【0029】

好ましくは、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。室温下で、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ及びジチオジピリジンを溶媒Ａに加え、６～１２時間攪拌し、その後、水を加えて、抽出剤を使用して抽出し、得た有機相を乾燥及び濾過し、精製してＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを得る。溶媒ＢにＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨ及びＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを加え、温度を１５～３０℃にして０．５～２時間攪拌して反応させ、反応系を水洗、濃縮及び精製してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。好ましくは、溶媒ＡはＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。好ましくは、抽出剤はＥｔＯＡｃ、ＭＴＢＥ及びＤＣＭのうちの１種又は複数種から選ばれる。好ましくは、前記溶媒ＢはＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。

【0030】

原料の利用率を高め、反応が高速で効果的に行われること保証するために、好ましくは、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンの反応で、Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとジチオジピリジンのモル比は１：１．２～１：６．４であり、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕの溶媒Ａにおける濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬである。溶媒ＢにおけるＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの濃度は０．０１～０．３ｇ／ｍＬである。Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨとＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕのモル比は１：０．８～１．４である。

【0031】

本発明の典型的な実施形態では、一次生成物は（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕであり、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕとＮＣＳを反応させて（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕを合成し、そして、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕとＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを反応させてＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。

【0032】

好ましくは、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨは次のステップより得る。Ａ． （Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを溶媒Ｃに溶解し、温度を０～１０℃にして、ＤＩＰＥＡを加え、数回に分けてＮＣＳを加え、４～５時間攪拌し、反応が終了したら、濾過し、洗い流して、濾液を得る。Ｂ．温度を０～１０℃にして、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨを濾液に加え、ＤＩＰＥＡを加え、反応温度を１０～３０℃にして、０．５～２時間攪拌する。反応系を水洗、濃縮及び精製してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを得る。好ましくは、前記溶媒ＣはＤＣＭ、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＮＭＰ及びＤＭＡｃのうちの１種又は複数種から選ばれる。

【0033】

原料の利用率を高め、反応が高速で効果的に行われること保証するために、好ましくは、ステップＡで、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕを溶媒Ｃに溶解して濃度０．０１～０．３ｇ／ｍＬの溶液を得、ＤＩＰＥＡの添加量はモル基準で２～３ｅｑであり、ＮＣＳの添加量は１．１～１．５ｅｑである。前記ステップＢで、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨの添加量は１．１～１．５ｅｑである。

【0034】

本発明の典型的な実施形態として、エテルカルセチドの合成方法を提供する。当該合成方法は次のステップを含む。Ｓ１．上記のいずれかのエテルカルセチド中間体の合成方法に従ってＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成する。Ｓ２． ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇと前記Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを反応させ、その後、Ｆｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドを得る。

【0035】

重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨの原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルであるため、本発明のエテルカルセチドの合成方法は原料が安価で入手しやすく、プロセスがシンプルである。

【0036】

好ましくは、Ｓ２で、ＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｒｇはＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドである。好ましくは、Ｓ２は次を含む。アミノ樹脂を使用して固相合成法でＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドをリンクし、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ、ＰｙＢｏｐ及びＤＩＰＥＡを０～１０℃下で０～１０分間活性化させ、温度を２０～３０℃にして２～６時間反応させ、反応が終了したらＤＭＦで６回洗浄し、１０％～２０％ピペリジンでＦｍｏｃを除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドのペプチド樹脂を得る。好ましくは、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ：ＰｙＢｏｐ：ＤＩＰＥＡ＝３：３～６：３～６の比率である。

【0037】

以下、実施例と結び付けてさらに本発明の有益な効果について説明する。

【0038】

実施形態の合成経路は次のとおりである。

【0039】

【化2】

【0040】

（実施例１）
Ｒ＝Ｓ－Ｐｙ
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ１）を原料として、ジチオジピリジンと反応してＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ２ａ）を合成し、Ｐｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ２ａ）とＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨのカップリングによりＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ）－ＯＨ（Ｃｐｄ３）を得た。

【0041】

ステップ１：
室温下で、Ｃｐｄ１（１．６ｇ、１．０ｅｑ）及び２，２－ｄｉｔｈｉｏｄｉｐｙｒｉｄｎｅ（２，２－ジチオジピリジン、５．１ｇ、４．０ｅｑ）をＤＭＦ（１６ｍＬ、１０ｖｏｌ．）に加えた。反応系を室温下で６～１２時間攪拌した。その後、反応系に水を加えた。酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせてＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過した。有機相を濃縮して粗Ｃｐｄ２ａを得、カラムクロマトグラフィーにより精製して純粋なＰｙ－Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ２ａ）を得た。

【0042】

ステップ２：
１５～３０℃下で、ＤＣＭ（３０ｍＬ、３０ｖｏｌ．）にＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨ（１．０ｇ、１．０ｅｑ．）を加え、その後、Ｃｐｄ２ａ（１．１３ｇ、１．０ｅｑ．）を反応系に加えた。温度を１５～３０℃にして０．５～２時間攪拌して反応させた。反応系を３回水洗し、濃縮して粗Ｃｐｄ３を得た。カラムクロマトグラフィーにより純粋なＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－（ＯｔＢｕ））－ＯＨ（Ｃｐｄ３）を得た。

【0043】

図１は精製後のＣｐｄ３の純度スペクトルを示す。図２は精製後のＣｐｄ３のＬＣＭＳスペクトルを示す。
（実施例２）
Ｒ＝Ｃｌ
Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ１）を原料として、ＮＣＳと反応して（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ２ｂ）を合成し、（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｃｌ）－ＯｔＢｕ（Ｃｐｄ２ｂ）がＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨと反応してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－（ＯｔＢｕ））－ＯＨ（Ｃｐｄ３）を得た。

【0044】

ステップ１：
（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｃｙｓ－ＯｔＢｕ（０．２８ｇ、０．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、攪拌して温度を０～１０℃にして、ＤＩＰＥＡ（０．１９ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。温度を０～１０℃にして数回に分けてＮＣＳ（０．１５ｇ、１．１ｅｑ）を加えた。反応を保温して４～５時間攪拌し、ＨＰＬＣにより反応の終了を検出した。反応が終了したら、濾過した。フィルターケーキをＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗い流した。濾液を合わせてそのまま次のステップに使用した。

【0045】

ステップ２：
温度を０～１０℃にして、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－ＯＨ（０．３４ｇ、０．１ｍｍｏｌ）をステップ１の濾液に加えた。ＤＩＰＥＡ（０．１５ｇ、１．１ｅｑ）を反応系に滴加した。反応温度を１０～３０℃にして、０．５～２時間攪拌した。反応系を３回水洗し、濃縮して粗Ｃｐｄ３を得た。カラムクロマトグラフィーにより純粋なＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ－（ＯｔＢｕ））－ＯＨ（Ｃｐｄ３）を得た。

【0046】

精製後のＣｐｄ３のＬＣＭＳスペクトルは図２に示すとおりである。
（実施例３）
重要中間体を使用してエテルカルセチドを合成する。

【0047】

アミノ樹脂（Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂を含み、ただしそれらに限定されない）を使用して、固相合成法でＮＨ_２－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｒｇ－樹脂ヘキサペプチドをリンクして、重要中間体を使用してＦｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨ：ＰｙＢｏｐ：ＤＩＰＥＡ＝３：３：３の比率で０～５℃下で０～５分間活性化させ、温度を２０～３０℃にして２～６時間反応させ、ｋａｉｓｅｒで反応の終了を検出した。反応が終了したらＤＭＦで６回洗浄し、２０％ピペリジンでＦｍｏｃ除去し、アセチル化を経てエテルカルセチドのペプチド樹脂を得た。切断後の粗ペプチドの純度は９０．３％で、分取精製した後、純度は９９．５１％で、総収率は６５％であった。

【0048】

エテルカルセチドの重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨの新規開発の合成プロセスを参照して、システイン１００ｇを出発原料として、最終的に重要中間体３５７ｇが合成された。当該中間体を使用して実施例３に従ってエテルカルセチドを合成し、分取精製した後、純粋な生成物２２７ｇ（ＴＦＡ塩）を得た。純度は９９．５１％で（図３）、総収率は６５％であった。

【0049】

上記の説明から、本発明の上記の実施例は次の技術的効果を実現していることが明らかになった。本願ではまずエテルカルセチドの重要中間体Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｃｙｓ（Ｓ－Ｓ－（Ｎ－Ｂｏｃ）－Ｌ－Ｃｙｓ（ＯｔＢｕ））－ＯＨを合成し、当該中間体を使用してエテルカルセチドを合成し、分取精製した後、純度は９９．５１％に達し（図３）、収率は７３％であった。従来の合成プロセスではポリペプチド鎖間のジスルフィド結合がミスマッチする反応が存在し、副反応と副生成物の種類が多いという問題を解決している。

【0050】

上述した説明は本発明を限定するものではなく、本発明の好ましい実施例に過ぎず、当業者は、本発明に様々な修正と変更を行うことができる。本発明の趣旨を逸脱せず、修正、同等な置き換え、改善などを行う場合は、そのいずれも本発明の保護範囲に含まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】