特表 2023-505304 Ｂ型肝炎ウイルスに関連する疾患の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-08

(54)【発明の名称】Ｂ型肝炎ウイルスに関連する疾患の治療

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/36 20060101AFI20230201BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230201BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20230201BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230201BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230201BHJP

   A61K 38/10 20060101ALI20230201BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20230201BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20230201BHJP

   C07K 14/02 20060101ALI20230201BHJP

【ＦＩ】

C12N15/36 ZNA

A61K35/76

A61P31/20

A61K48/00

A61K31/7088

A61K38/10

A61K38/16

C12N15/86 Z

C07K14/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022534243

(86)(22)【出願日】2020-12-04

(85)【翻訳文提出日】2022-06-06

(86)【国際出願番号】 EP2020084636

(87)【国際公開番号】W WO2021110919

(87)【国際公開日】2021-06-10

(31)【優先権主張番号】19214315.4

(32)【優先日】2019-12-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514084004

【氏名又は名称】アイエスエー ファーマシューティカルズ ビー．ヴイ．

【氏名又は名称原語表記】ＩＳＡ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｂ．Ｖ．

(71)【出願人】

【識別番号】315006920

【氏名又は名称】エラスムス ユニバーシティ メディカルセンター ロッテルダム

【氏名又は名称原語表記】Ｅｒａｓｍｕｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ

【住所又は居所原語表記】Ｄｒ． Ｍｏｌｅｗａｔｅｒｐｌｅｉｎ ５０， ３０１５ ＧＥ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ブッショー， ソンヤ， イングリッド

(72)【発明者】

【氏名】デ バイヤー， モニカ， テオドラ， アントネッタ

(72)【発明者】

【氏名】モレナー， ミランダ， ベルナルディーナ， ヨハンナ

(72)【発明者】

【氏名】ビーナッカー， トーマス， ヨハネス， マリア

(72)【発明者】

【氏名】クレバー， ヴィルヘルムス， ヨハネス， テオドルス， アレクサンダー

(72)【発明者】

【氏名】メリーフ， コルネリス， ヨハネス， マリア

(72)【発明者】

【氏名】ヴィークマイヤー， アンナ－ソフィア

(72)【発明者】

【氏名】ファン ライン， ピーター

(72)【発明者】

【氏名】ヤンセン， ダイアン， タリア， サティラ， ルドヴィカ

(72)【発明者】

【氏名】ファン エシュ， ヴィルヘルムス ヨハネス エリザベス

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA13

4C084BA02

4C084BA18

4C084BA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB33

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB33

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA17

4H045BA18

4H045CA02

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA10

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のＸタンパク質及びポリメラーゼタンパク質に由来する新規免疫原性ペプチドを提供する。このペプチドは、複数のＨＢＶ変異体間で良く保存されたエピトープを含み、タンパク質の中でウイルス複製に必須の領域に由来する。更に、この新規ＨＢＶ抗原は複数のＨＬＡタイプに結合し、ＨＢＶ解消者からのＰＢＭＣにおいてＩＦＮ_γ応答を引き出すエピトープが同定された。
【選択図】図７

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドであって、前記断片が２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片が、
ａ）ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）、及び／又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、及び／又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、及び／又は
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、及び／又は
－ 配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含むもの、
又は
ｂ）ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）、及び／又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、及び／又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、及び／又は
－ 配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含むもの、
又は
ｃ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列（ｘ１３２－１４０）、
又は
ｄ）配列番号１１に示されるアミノ酸配列（ｐ１２４－１３３）、
又は
ｅ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列（ｐ１６４－１７３）、
又は
ｆ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列（ｐ２７５－２８３）、
又は
ｇ）ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含むもの、
又は
ｈ）ＨＢＶポリメラーゼの領域５０９位～５２３位の少なくとも９連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１７に示されるアミノ酸配列（ｐ５０９－５１７）、及び／又は
－ 配列番号１８に示されるアミノ酸配列（ｐ５１５－５２３）
を含むもの、
又は
ｉ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６４９位～６５８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号１９に示されるアミノ酸配列（ｐ６４９－６５８）、及び／又は
－ 配列番号２０に示されるアミノ酸配列（ｐ６５０－６５８）
を含むもの、
又は
ｊ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６９３位～７０６位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号２１に示されるアミノ酸配列（ｐ６９３－７０１）、及び／又は
－ 配列番号２２に示されるアミノ酸配列（ｐ６９７－７０６）
を含むもの、
又は
ｋ）配列番号２３に示されるアミノ酸配列（ｐ７２３－７３１）、
又は
ｌ）ＨＢＶポリメラーゼの領域７５５位～７６５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号２４に示されるアミノ酸配列（ｐ７５５－７６４）、及び／又は
－ 配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ｐ７５６－７６５）
を含むもの、
又は
ｍ）配列番号２６に示されるアミノ酸配列（ｐ８２９－８３７）
を含み、
ＨＢＶポリメラーゼ及びＨＢＶ－Ｘ内でのアミノ酸位置の番号付けが、それぞれ、配列番号２８及び配列番号３０に示されるコンセンサス配列の番号付けに対応する、ペプチド。

【請求項2】

ＨＢＶタンパク質の前記断片からなる、請求項１に記載のペプチド。

【請求項3】

２０～３４アミノ酸長、即ち２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４アミノ酸長など、即ち２０～３３アミノ酸長、例えば２０～３２アミノ酸長など、即ち２０～３１アミノ酸長、例えば２０～３０アミノ酸長など、即ち２０～２９アミノ酸長、例えば２０～２８アミノ酸長など、即ち２０～２７アミノ酸長、例えば２０～２６又は２０～２５アミノ酸長などである、請求項１又は２に記載のペプチド。

【請求項4】

前記断片が、２０～３３アミノ酸長、即ち２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２又は３３アミノ酸長など、即ち２０～３２アミノ酸長など、即ち２０～３１アミノ酸長、例えば２０～３０アミノ酸長など、即ち２０～２９アミノ酸長、例えば２０～２８アミノ酸長など、即ち２０～２７アミノ酸長、例えば２０～２６又は２０～２５アミノ酸長などである、請求項１～３のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項5】

ａ）前記断片が、ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸を含み、及び前記断片が、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含むか、
又は
ｂ）前記断片が、ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸を含み、及び前記断片が、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含むか、
又は
ｃ）前記断片が、ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸を含み、及び前記断片が、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）、又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含む、
請求項１～４のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項6】

配列番号３１（ＳＬＰ１）、配列番号３２（ＳＬＰ２）、配列番号３３（ＳＬＰ３）、配列番号３４（ＳＬＰ４）、配列番号３５（ＳＬＰ５）、配列番号３６（ＳＬＰ６）及び配列番号３７（ＳＬＰ７）
からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載のペプチド。

【請求項7】

ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドであって、前記ペプチドが２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片が、配列番号１～配列番号２６からなる群から選択される配列を含む、ペプチド。

【請求項8】

請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。

【請求項9】

請求項８に記載のポリヌクレオチドを含む組換えウイルス。

【請求項10】

免疫原性組成物であって、
－ 請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド、請求項８に記載のポリヌクレオチド又は請求項９に記載の組換えウイルス、及び
－ 薬学的に許容可能な担体
を含み、
任意選択でアジュバントを更に含む、免疫原性組成物。

【請求項11】

ＨＢＶ関連疾患の治療又は予防方法であって、ヒト対象への、
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド又は
－ 上述のペプチドの組み合わせのいずれか１つをコードする配列を含む１つ又は２つのポリヌクレオチド
の投与を含む方法。

【請求項12】

医薬としての使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド、請求項８に記載のポリヌクレオチド、請求項９に記載の組換えウイルス又は請求項１０に記載の免疫原性組成物。

【請求項13】

ＨＢＶ関連疾患の治療又は予防における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド、請求項８に記載のポリヌクレオチド、請求項９に記載の組換えウイルス又は請求項１０に記載の免疫原性組成物。

【請求項14】

抗原を負荷した活性化抗原提示細胞又は拡大した抗原特異的Ｔ細胞のエキソビボ刺激における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド又は配列番号１～配列番号２６からなる群から選択される配列を含むペプチド。

【請求項15】

ＨＢＶ関連疾患の治療における使用のための、請求項１～７のいずれか一項に記載のペプチド、請求項８に記載のポリヌクレオチド、請求項９に記載の組換えウイルス又は請求項１０に記載の免疫原性組成物であって、前記治療が、以下のステップ：
（ｉ）ＨＢＶ感染患者に抗ウイルス治療を与えてウイルス負荷量を減少させるステップ、
（ｉｉ）前記ウイルス負荷量が大幅に減少したところで、前記１つ又は複数の免疫原性ペプチド、ポリヌクレオチド、組換えウイルス又は免疫原性組成物を投与するステップ、及び
（ｉｉｉ）前記患者において初期Ｔ細胞応答が起こるのに十分な時間が経過したところで、抗ウイルス治療を中断又は中止するステップ
を含む、ペプチド、ポリヌクレオチド、組換えウイルス又は免疫原性組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、感染性疾患の分野に関する。詳細には、本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に関連する疾患を治療するための免疫原性ペプチド、ポリヌクレオチド、免疫原性組成物及び方法に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による慢性感染症は、世界規模の重大な健康問題である。ＨＢＶは、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）のプロトタイプメンバーであり、肝細胞への強力な感染選択性を有する（Ｇａｎｅｍ ｅｔ ａｌ，２００４ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５０：１１１８）。

【0003】

３０年も前から、Ｂ型肝炎の防御に効果的な予防ワクチンが利用可能であるにも関わらず、それでもなお推定２０億人がＨＢＶに感染しており、現在、慢性（長期）Ｂ型肝炎感染者は２億４０００万人を超え、地理的には西ヨーロッパ及び北アメリカを除く地域に頻発している（世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）、２０１３年７月）。

【0004】

このウイルスの人から人への伝播は、血液間の直接接触によるか、又は感染者の精液若しくは膣液を介して起こる。特徴的なことに、流行地では、周産期伝播によって母から子への感染が起こる。このように、ＨＢＶは偶発的に伝播するものではないが、このウイルスは、周産期、経皮又は性的曝露によって容易に伝播し得る。これに伴い、医療従事者などの集団にとっては、感染者との人的接触機会が多いことにより、深刻なリスクが生じる。

【0005】

ＨＢＶ感染症は、全般的な体調不良、食欲不振、悪心、嘔吐、体の痛み、微熱、及び暗色尿から始まり、次に黄疸の発生に進行する病気である急性ウイルス性肝炎として現れ得る。この病気は数週間続き、次にほとんどの罹患成人では徐々に好転するが、一部には、死亡を引き起こし得る重篤な肝疾患（劇症肝不全）に罹る者もいる。この感染症は全く無症候であることもあり、認識されないまま進むこともある。

【0006】

Ｂ型肝炎ウイルスによる慢性感染症は、無症候であることも、又は肝臓の慢性炎症を伴うことも（慢性肝炎）、いずれもあり、長年をかけて肝硬変に至り得る。この種の感染症では、肝細胞癌（肝癌）の発生率が劇的に増加し、また潜伏期間も多年に及ぶ。慢性ＨＢＶ感染者をヌクレオシド／ヌクレオチド類似体（例えばエンテカビル及びテノホビル）などの抗ウイルス薬又はインターフェロン（ＩＦＮ）αで治療すると、血清ウイルス負荷量が効率的に低下する。しかしながら、抗ウイルス療法が持続的なウイルス学的反応につながることはまれであり、薬剤耐性が起こる（Ｚｏｕｌｉｍ ｅｔ ａｌ，２０１２ Ｂ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ ５６ ｓｕｐｐｌ．１ Ｓ１１２；ＥＡＳＬ ２０１７ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ６７：３７０）。更に、ＨＢＶ保有者の大多数は未治療のままである。

【0007】

慢性ＨＢＶ保有者の約１５～４０％は、その生涯のうちに臨床的に有意な肝疾患を発症することになり、肝硬変及び付随する肝不全又は肝細胞癌による死亡リスクが高い（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ，２０１１ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：２３７）。抗ウイルス薬では感染症を根絶できず、結果的に、一生続くわけではないにしろ、長期にわたる抗ウイルス療法が必要となるが、それには中毒性副作用及び高コストなどの欠点が伴うため、差し迫って新規治療手法が必要とされている（Ｇｒｉｍｍ ｅｔ ａｌ．，２０１３ Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ）１２４：７７）。

【0008】

慢性Ｂ型肝炎の治療には、治療ワクチン接種が有望な戦略となる。主に現在の予防ワクチンによるＨＢＶ感染防御に関わるＨＢＶに対する体液性免疫応答に次いで（Ｌｏｋ，２００２ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４６：１６８２）、細胞性免疫応答は、明白にＨＢＶ感染に対する自然の抵抗力に関わる。

【0009】

ＨＢＶの母親から新生児への周産期伝播及び生後１年の間の感染は、９０％を超える小児に持続感染を引き起こす。対照的に、成人期間の感染は、９０％を超える症例で自然に除去され、防御免疫が一生続くことになる（Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５：２１５）。

【0010】

急性で自己限定性のＢ型肝炎ウイルス感染症では、多くのＨＢＶ抗原に対する活発なポリクローナル多重特異性ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）及びＣＤ４＋ Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞応答が末梢血中に容易に実証される（Ｍｉｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ，２０１１ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ ５４：１２８６）。

【0011】

これらのＴ細胞応答は、ＨＢＶの除去及び制御において極めて重要である。ＨＢＶに感染したチンパンジーにおける実験により、この過程でＨＢＶ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞がエフェクター細胞として不可欠な役割を担うことが示されている（Ｔｈｉｍｍｅ ｅｔ ａｌ，２００３ Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７７：６８）。ＨＢＶ感染が解消した患者の応答と対照的に、慢性Ｂ型肝炎患者では、Ｔ細胞応答は通常極めて弱く、数個のエピトープにのみ集中していて、機能的に損なわれている（Ｍｉｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ，２０１１ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ ５４：１２８６）。治療ワクチン接種の目標は、多くのＨＢＶ抗原を対象とする活発でロバストな多価ＣＴＬ及びＴヘルパー細胞応答を構築し、それによってウイルス除去、肝炎管理及び治癒を推進することである。

【0012】

この疾患の病因学及び疫学の理解が大きく進歩しているという事実にも関わらず、有効な治療用ＨＢＶワクチンがなおも必要とされている。

【0013】

当該技術分野においては、特定のＨＬＡタイプに限定的な推定上のＴ細胞エピトープを含むＨＢＶタンパク質由来のペプチドが記載されている（国際公開第０２１９９８６号パンフレット、国際公開第２００２０２００３５号パンフレット、国際公開第２０１４１０２５４０号パンフレット、国際公開第１５１８７００９号パンフレット）。しかしながら、これらの提案されている抗原の多くには、以下の欠点のうちの１つ以上が見られる：
・ ＨＢＶ遺伝子型間での配列保存性が低く、有効性が（ごく）一部のＨＢＶ遺伝子型に限られることになる、
・ その由来である抗原領域とウイルス複製との機能的結び付きがなく、その領域に対する免疫応答がウイルス複製の妨げとなるであろう可能性が低くなる、
・ 抗原への過剰な曝露に起因した免疫枯渇のため、免疫応答の効果がなくなる、
・ １種又は数種のＨＬＡタイプのみをまとめて網羅するため、そうしたＨＬＡタイプを欠いているある種の集団では、有効性に欠けることになる、
・ 製造が困難である（特に長鎖のペプチドについて）、
・ Ｔ細胞応答を誘導する潜在的能力が確認されていない、
・ そのペプチド抗原に対する免疫応答に感染を解消する潜在的能力があるかどうかに関する指標がない。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0014】

本発明は、これまでに記載されているペプチド抗原に関連する不都合な点の全て又はほとんどを解消するＨＢＶ－Ｘ及びＨＢＶポリメラーゼタンパク質に由来する新規ロングペプチド抗原を提供する。

【0015】

本明細書に記載されるＨＢＶロングペプチド抗原は、複数のＨＢＶ遺伝子型間で良く保存されている新規ＨＬＡ結合ペプチド配列を含み、ウイルス複製に必須のタンパク質の保存領域に由来し、従ってＨＢＶ特異的免疫応答を回避する可能性が低い。更に、この新規ＨＢＶ由来ロングペプチド抗原は、多様なＨＬＡタイプによって提示される能力のある複数のＨＬＡ結合ペプチド配列を持つ。更に、こうしたＨＬＡ結合ペプチド配列を含む合成ロングペプチド（ＳＬＰ）であって、十分な収率及び十分な純度で製造することのできるＳＬＰが記載される。更に、新規に同定されたＨＬＡ結合ペプチド配列を含むＳＬＰは、ＨＢＶ感染が解消した人（ＨＢＶ解消者）のＰＢＭＣにおいてＩＦＮγ応答を引き出すことが分かった。

【0016】

第１の主要な態様において、本発明は、ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドに関し、ここで前記断片は２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
ａ）ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）、及び／又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、及び／又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、及び／又は
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、及び／又は
－ 配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含むもの、
又は
ｂ）ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）、及び／又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、及び／又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、及び／又は
－ 配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含むもの、
又は
ｃ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列（ｘ１３２－１４０）、
又は
ｄ）配列番号１１に示されるアミノ酸配列（ｐ１２４－１３３）、
又は
ｅ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列（ｐ１６４－１７３）、
又は
ｆ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列（ｐ２７５－２８３）、
又は
ｇ）ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含むもの、
又は
ｈ）ＨＢＶポリメラーゼの領域５０９位～５２３位の少なくとも９連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１７に示されるアミノ酸配列（ｐ５０９－５１７）、及び／又は
－ 配列番号１８に示されるアミノ酸配列（ｐ５１５－５２３）
を含むもの、
又は
ｉ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６４９位～６５８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号１９に示されるアミノ酸配列（ｐ６４９－６５８）、及び／又は
－ 配列番号２０に示されるアミノ酸配列（ｐ６５０－６５８）
を含むもの、
又は
ｊ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６９３位～７０６位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号２１に示されるアミノ酸配列（ｐ６９３－７０１）、及び／又は
－ 配列番号２２に示されるアミノ酸配列（ｐ６９７－７０６）
を含むもの、
又は
ｋ）配列番号２３に示されるアミノ酸配列（ｐ７２３－７３１）、
又は
ｌ）ＨＢＶポリメラーゼの領域７５５位～７６５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号２４に示されるアミノ酸配列（ｐ７５５－７６４）、及び／又は
－ 配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ｐ７５６－７６５）
を含むもの、
又は
ｍ）配列番号２６に示されるアミノ酸配列（ｐ８２９－８３７）
を含む。

【0017】

更なる態様において、本発明は、本発明に係るペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、本発明の免疫原性ペプチド又はポリヌクレオチドを含む免疫原性組成物及びＨＢＶ関連疾患の治療における本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、組換えウイルス又は免疫原性組成物の使用に関する。

【図面の簡単な説明】

【0018】

【図1】ＨＢｘについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。中心に置いた棒図表がＨＢｘタンパク質のコンセンサス配列の長さを表示し（方法）、ここでは各アミノ酸について、ウイルス遺伝子型間での保存スコアがグレースケールによる色分けによって示される（凡例）。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列をこのコンセンサスタンパク質配列とアラインメントし、最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプ代表例について、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する。アラインメントされた結合体の下に、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される全ての結合体（８～１４アミノ酸長）の範囲内にある各アミノ酸の頻度分布をプロットした。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。その突然変異がウイルス持続性の喪失につながる必須アミノ酸を、保存スコアの色と一致する矢印で指示する。最下部に、ＨＢＶｄｂの命名法に従う機能ドメインを表示する。

【図2-1】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-2】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-3】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-4】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-5】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-6】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-7】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図2-8】ポリメラーゼについてのタンパク質の保存及び機能に対する妥当性確認済みＨＬＡ－Ｉエピトープ及び予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のアラインメント。最初の２００アミノ酸（Ａ、Ｅ）、アミノ酸２０１～４７４（Ｂ、Ｆ）、４７５～６３１（Ｃ、Ｇ）及びアミノ酸６３２～８４３（Ｄ、Ｈ）について表示する。Ｈｅｐｉｔｏｐｅｓデータベースから入手した既報告の妥当性確認済みエピトープ配列を最上段に示す。その下に、各ＨＬＡスーパータイプについて、ＮｅｔＭＨＣｐａｎによって予想される新規結合体候補（９～１１アミノ酸）を表示する（Ａ～Ｄ）。加えて、本発明者らは、タンパク質配列にわたる予想される結合体（８～１４アミノ酸長）の頻度分布をプロットした（Ｅ～Ｈ）。各アミノ酸の保存スコア（凡例）を、水平のグレースケールで色分けした棒図表として示す。それについての単一又は複合突然変異がウイルス持続性の喪失（５０％以上）につながる必須アミノ酸を、その特定のアミノ酸についての保存スコアの色と一致する矢印で指示する。ウイルスタンパク質の正しい折り畳みに不可欠であると予想されるアミノ酸は、アスタリスクを付して指示する。予め決められた命名法（Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ ２１：８８２）に従う一般的ドメインを表示し、ここにはまた、Ｔ３ドメイン及びＹＭＤＤモチーフも表される。

【図3-1】選択された予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のインビトロ結合能。予想されるＨＬＡ結合ペプチド配列の結合を、指示されるＨＬＡタイプに高親和性を示す陽性対照ペプチド（ｐｏｓ．ｃｔ．）に対するパーセント結合として表す。対照（黒色）、結合体（陽性対照の２５％超；灰色）及び非結合体（陽性対照の２５％以下；白色）について、平均値及び標準偏差を表示する。６つのスーパータイプ代表例について結合能を評価し、加えて、慢性Ｂ型肝炎患者集団間でのその高い保有率を考慮して、ＨＬＡ＊１１：０１を含めた。これらは、各々を別個のグラフに表示する（Ａ～Ｇ）。陰性対照として、本発明者らは、各ＨＬＡタイプについての公知の非結合ペプチド（ｎｅｇ．ｃｔ．）及びペプチドが存在しない条件を含めた。実線の下線を付したペプチドは、検証したＨＬＡタイプに関連してエピトープ配列として記載されることがほとんどないものである。破線の下線を付したペプチドは、これまでのところ別のＨＬＡタイプに関連した記載しかないエピトープ配列であり、そのうち交差反応性のある結合体を表にまとめている（Ｈ）。アスタリスクは、どのペプチドが本発明者らの長さ及び保存閾値を満たさなかったかを指示している。

【図3-2】選択された予想ＨＬＡ結合ペプチド配列のインビトロ結合能。予想されるＨＬＡ結合ペプチド配列の結合を、指示されるＨＬＡタイプに高親和性を示す陽性対照ペプチド（ｐｏｓ．ｃｔ．）に対するパーセント結合として表す。対照（黒色）、結合体（陽性対照の２５％超；灰色）及び非結合体（陽性対照の２５％以下；白色）について、平均値及び標準偏差を表示する。６つのスーパータイプ代表例について結合能を評価し、加えて、慢性Ｂ型肝炎患者集団間でのその高い保有率を考慮して、ＨＬＡ＊１１：０１を含めた。これらは、各々を別個のグラフに表示する（Ａ～Ｇ）。陰性対照として、本発明者らは、各ＨＬＡタイプについての公知の非結合ペプチド（ｎｅｇ．ｃｔ．）及びペプチドが存在しない条件を含めた。実線の下線を付したペプチドは、検証したＨＬＡタイプに関連してエピトープ配列として記載されることがほとんどないものである。破線の下線を付したペプチドは、これまでのところ別のＨＬＡタイプに関連した記載しかないエピトープ配列であり、そのうち交差反応性のある結合体を表にまとめている（Ｈ）。アスタリスクは、どのペプチドが本発明者らの長さ及び保存閾値を満たさなかったかを指示している。

【図4】インシリコ予想によって導き出された順位スコアに対する選択された予想ＨＬＡ結合ペプチド配列の結合能。図３に表示されるとおりのインビトロＨＬＡ結合アッセイによる予想ＨＬＡ結合配列の結合能を、順位スコアとして表されるＮｅｔＭＨＣｐａｎによるインシリコ予想ＨＬＡ結合能に対してプロットする。確定した結合体を低結合体／非結合体と分けるため、陽性対照の２５％の結合のカットオフを指示している。

【図5-1】ＨＬＡ結合ペプチド配列の免疫原性。確定したＨＬＡ結合ペプチド配列及び十分に確立されているｃ１８－２７及びｐ５４９－５５７エピトープ配列（パネルＢ）とのインキュベーションに応答した９例のＨＢＶ解消者からの拡大後ＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生（ＤＭＳＯ減算後）を計測した。灰色の囲みは、各ＨＬＡ結合ペプチド配列について、応答があったドナーの数を被験対象者の総数に対する分数として表す。実線の下線を付したエピトープ配列は、検証したＨＬＡタイプについて記載されることがほとんどないものである。破線の下線を付したエピトープ配列は、これまでのところ別のＨＬＡタイプに関連した記載しかないものである。アスタリスクは、どのＨＬＡ結合ペプチド配列が本発明者らの長さ及び保存閾値を満たさなかったかを指示している。

【図5-2】ＨＬＡ結合ペプチド配列の免疫原性。確定したＨＬＡ結合ペプチド配列及び十分に確立されているｃ１８－２７及びｐ５４９－５５７エピトープ配列（パネルＢ）とのインキュベーションに応答した９例のＨＢＶ解消者からの拡大後ＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生（ＤＭＳＯ減算後）を計測した。灰色の囲みは、各ＨＬＡ結合ペプチド配列について、応答があったドナーの数を被験対象者の総数に対する分数として表す。実線の下線を付したエピトープ配列は、検証したＨＬＡタイプについて記載されることがほとんどないものである。破線の下線を付したエピトープ配列は、これまでのところ別のＨＬＡタイプに関連した記載しかないものである。アスタリスクは、どのＨＬＡ結合ペプチド配列が本発明者らの長さ及び保存閾値を満たさなかったかを指示している。

【図6】ＥＬＩＳｐｏｔにより測定したＳＬＰ刺激後のＩＦＮγ応答。過去にＨＢＶ感染が解消したことのある１５例のドナーからのＰＢＭＣを１０ｕＭ ＳＬＰ又は等価濃度のＤＭＳＯと共に２０～２４時間インキュベートし、続くＩＦＮγ産生をＥＬＩＳｐｏｔにより測定した。ＤＭＳＯ対照条件の４レプリケートウェルからの累積スポット形成単位（ＳＦＵ）を減算した４レプリケートウェルからの累積ＳＦＵを表示する。各点が１例のドナーに相当し、全てのドナーを異なる記号で表示する。陰性ＳＦＵは０として表示する。図６のドナー数は、必ずしも図５のドナー数に対応しない。

【図7】新規ＳＬＰは、インビトロでＨＢＶ解消者及び慢性ＨＢＶ患者からの白血球において機能性ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ Ｔ細胞応答をブーストすることができる。以前にＨＢＶを除去した健常ドナーのバフィーコートから分離したＰＢＭＣ、ｒＨＢＶ、（Ａ）又は本発明者らの外来患者診療所に来院する慢性ＨＢＶ患者の全血から分離したＰＢＭＣ、ｃＨＢＶ、（Ｂ）を、指示されるＳＬＰ（１、２、４及び６）を含有するＳＬＰプールに曝露し、ＩＬ－２の存在下で１４日間拡大させた。１４日後、拡大した細胞を指示されるＳＬＰで個々に２２時間再刺激し、その後、細胞及び培養上清の両方を、それぞれ、機能性Ｔ細胞活性化の指標である表面マーカー（ｍａｋｅｒ）及びサイトカインに関して評価した。活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の割合、及び最近のＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞傷害活性の指標であるＣＤ１０７ａを発現するＣＤ８＋ Ｔ細胞の割合（ＤＭＳＯ媒体対照試料について観察される割合を減算した）を示す。また、ＳＬＰ再刺激の結果としての上清中のＴ細胞サイトカインＩＦＮγ及びＴＮＦαの分泌についてもプロットする。サイトカイン値は、ＤＭＳＯ／無関係のペプチド対照試料について観察される平均値＋それらの対照の標準偏差の２倍を減算した。

【図8】ＨＢＶ感染の除去に向けた新規治療スケジュール。治療ワクチン接種（Ｔ）の開始前に、ヌクレオシド／ヌクレオチド類似体（ＮＡ）治療によってウイルス負荷量を減少させる。ウイルス負荷量が低値に安定したところで、治療ワクチン接種を投与する。Ｔ細胞エフェクター機能を更に向上させるため、任意選択で治療ワクチン接種を、抑制性骨髄細胞（ＭＤＳＣ）を標的とする薬物（治療ワクチン接種前に与えられる）、ｓｉＲＮＡ（治療ワクチン接種前）、Ｔ細胞代謝を修飾する薬物（治療ワクチン接種前又は接種中）又はチェックポイント遮断（治療ワクチン接種中又は接種後）と組み合わせてもよい。「天然の」ブースターとして、ＮＡ治療を中止してウイルス抗原の存在を増加させることにより、インサイチューでＨＢＶ特異的Ｔ細胞をブーストし、残っている感染ヘパトサイトの除去を促進する。好ましくは、ウイルス負荷量の適切なモニタリングを行うことによりワクチンの有効性を判定し、フォローアップ（組み合わせ）療法を決定し、及び／又はＮＡを中止する。時間の経過に伴う指示されるパラメータの展開について、線が概略的な指示を与える。矢印は、介入又はモニタリングの好ましい時期を指示している。

【発明を実施するための形態】

【0019】

定義
用語「ＨＢＶ」は、Ｂ型肝炎ウイルスを指す。ＨＢＶについては、Ａ～Ｈと呼ばれる８つの異なる遺伝子型が記載されている。これらの遺伝子型は、高い配列相同性を共有しているが、配列に少なくとも８％の差異がある。遺伝子型の範囲内で、サブタイプが記載されている：それらはゲノムに４～８％の差異がある。

【0020】

用語「ＨＢＶポリメラーゼ」又は単に「ポリメラーゼ」又は「Ｐｏｌ」は、Ｂ型肝炎（ｈｅｐａｔｉｓ Ｂ）ゲノムによってコードされるポリメラーゼを指す。ＧｅｎＢａｎｋ ＮＣＢＩ参照ＮＣ＿００３９７７．２が、一般に参照として用いられるＨＢＶポリメラーゼ配列を記載しており、本明細書の配列番号２７にも示される。配列番号２８は、７４８９個の遺伝子型に基づくＨＢＶポリメラーゼのコンセンサス配列を示す。本発明の一実施形態において、本発明のペプチドに存在するＨＢＶポリメラーゼ断片は、８５％超、９０％超など、例えば９５％超、９８％超などが、配列番号２７に示される対応する配列と同一である。本発明の別の実施形態において、ＨＢＶポリメラーゼ断片は、８５％超、９０％超など、例えば９５％超、９８％超などが、配列番号２８に示される対応する配列と同一である。別の実施形態において、参照されるＨＢＶポリメラーゼは、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨからなる群から選択される遺伝子型のものである。

【0021】

用語「ＨＢＶ－Ｘ」、「ＨＢｘ」、「ＨＢｘＡｇ」、「ＨＢＶ－Ｘタンパク質」又は「Ｘ－タンパク質」などは、Ｂ型肝炎（ｈｅｐａｔｉｓ Ｂ）ゲノムによってコードされるＸタンパク質を指す。ＧｅｎＢａｎｋ ＮＣＢＩ参照ＮＣ＿００３９７７．２が、一般に参照として用いられるＨＢＶ－Ｘ配列を記載しており、本明細書の配列番号２９にも示される。配列番号３０は、８１２７個の遺伝子型に基づくＨＢＶ－Ｘタンパク質のコンセンサス配列を示す。本発明の一実施形態において、本発明のペプチドに存在するＨＢＶ－Ｘ断片は、８５％超、９０％超など、例えば９５％超、９８％超などが、配列番号２９に示される対応する配列と同一である。本発明の別の実施形態において、ＨＢＶ－Ｘ断片は、８５％超、９０％超など、例えば９５％超、９８％超などが、配列番号３０に示される対応する配列と同一である。別の実施形態において、参照されるＨＢＶ－Ｘタンパク質は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨからなる群から選択される遺伝子型のものである。

【0022】

本明細書におけるＨＢＶポリメラーゼ及びＨＢＶ－Ｘ内での位置の番号付けは、それぞれ、配列番号２８及び配列番号３０に示されるコンセンサス配列を基準とする。換言すれば、ＨＢＶポリメラーゼ及びＨＢＶ－Ｘタンパク質内でのアミノ酸位置の番号付けは、それぞれ、配列番号２８及び配列番号３０に示されるコンセンサス配列における番号付けに対応する。一方の配列中にあるもう一方の配列中のアミノ酸位置に「対応する」アミノ酸位置とは、ＡＬＩＧＮ、ＣｌｕｓｔａｌＷなどの標準的な配列アラインメントプログラムを典型的にはデフォルト設定で用いると、他方のアミノ酸と整列するものである。配列をアラインメントして、ＨＢＶポリメラーゼ又はＨＢＶ－Ｘ配列中の特定の位置について、コンセンサス配列中の対応する位置が何かを決定する方法は、当該技術分野において周知と考えられる。例えば、アラインメントは、コンセンサス配列と比べて所与のＨＢＶポリメラーゼにギャップがある場合に、その所与のＨＢＶポリメラーゼのアミノ酸２０位～４０位の断片がコンセンサス配列の２０～４１位に対応することを示し得る。誤解を避けるために言えば、位置の番号付けはコンセンサス配列を基準とするが、断片の実際のアミノ酸配列はコンセンサス配列と異なり、ＨＢＶ遺伝子型に応じてばらつきがあり得る。

【0023】

「配列同一性」は、本明細書では、２つ以上のアミノ酸配列間の、それらの配列を比較することにより決定されるとおりの関係として定義される。配列同一性は、２つのペプチド配列のアラインメントによって決定することができる。同程度の長さの配列は、好ましくは、配列を全長にわたって最適にアラインメントする大域的アラインメントアルゴリズム（例えば、ニードルマン・ブンシュ（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ Ｗｕｎｓｃｈ））を用いてアラインメントされ、一方、実質的に異なる長さの配列は、好ましくは局所的アラインメントアルゴリズム（例えば、スミス・ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎ））を用いてアラインメントされる。

【0024】

「治療」又は「治療すること」は、症状、障害又は疾患状態を緩和、改善、阻止、根絶（治癒）又は予防することを目的とした、有効量の免疫原性組成物の投与を指す。「有効量」は、所望の治療結果を実現するのに必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。

【0025】

本明細書で使用されるとき、用語「免疫原性ペプチド」は、免疫応答を惹起する又はブーストする能力を有するペプチドを意味する。本発明の免疫原性ペプチドは、非コンジュゲート型又は非修飾型、即ち、アミノ酸がペプチド結合によって連結した単純な鎖であってもよく、又はこれは、別の分子、例えばアジュバントに共有結合的に結合しているなど、更に修飾、例えばコンジュゲートされていてもよい。

【0026】

本発明の文脈の中で、「２０～３４アミノ酸長」は、アミノ酸残基の数が２０～３４、即ち、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４アミノ酸残基であることを意味する。本発明のペプチドは、ロングペプチドとも称され、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ及びクラスＩＩによって提示されるエピトープペプチド配列の長さを超えている。好ましくは、本発明のロングペプチドは合成ペプチドであり、本明細書では合成ロングペプチド（ＳＬＰ）とも称される。

【0027】

本発明の文脈の中で、用語「ＨＢＶタンパク質の断片」は、ＨＢＶタンパク質の部分配列に対応する、即ちそれと同一のアミノ酸配列を意味する。従って、これは、挿入、欠失又は置換のない、天然ＨＢＶタンパク質の連続配列を指す。ペプチドが特定の長さのＨＢＶタンパク質断片を含むと指定される場合、それは、その断片がそれより短くも長くもないことを意味する。例えば、断片が２０～３４アミノ酸長であると指定される場合、それは、前記断片が２０アミノ酸以上３４アミノ酸長以下であることを意味する。従って、かかるペプチドが、例えば、前記ＨＢＶタンパク質の３５アミノ酸長以上の連続配列を含むことはない。しかしながら、誤解を避けるために言えば、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、当該技術分野におけるその通常の意味を有し、即ち「ＨＢＶタンパク質の断片を含むペプチド」は、指定される断片を越えて追加的な配列、例えば前記ＨＢＶタンパク質に由来しない配列又はＨＢＶタンパク質中で前記断片に隣接しないＨＢＶタンパク質の他の部分配列を含み得る。

【0028】

本発明の文脈の中で、用語「ＨＬＡ結合ペプチド」又は「ＨＬＡ結合体」又は「結合体」は、ＨＬＡ分子に特異的に結合し得るＨＢＶ－Ｘ又はＨＢＶポリメラーゼの短いタンパク質断片部分を指す。

【0029】

本発明の文脈の中で、「エピトープ」は、指定されるＨＬＡ分子に結合する短いＨＬＡ結合ペプチドであって、細胞の表面に提示されたとき、個体においてＴ細胞応答を引き出す能力を有するものとして定義される。

【0030】

不定冠詞「ある（ａ）」又は「ある（ａｎ）」による要素への言及は、その要素が１つあり、且つ１つしかないことが文脈上明確に要求されない限り、その要素が１つより多く存在する可能性を排除しない。従って、不定冠詞「ある（ａ）」又は「ある（ａｎ）」は、通常は「少なくとも１つ」を意味する。

【0031】

本発明の更なる態様及び実施形態
上述のとおり、第１の主要な態様において、本発明は、ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドに関し、ここで前記断片は２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
ａ）ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）、及び／又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、及び／又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、及び／又は
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、及び／又は
－ 配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含むもの、
又は
ｂ）ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）、及び／又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、及び／又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、及び／又は
－ 配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含むもの、
又は
ｃ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列（ｘ１３２－１４０）、
又は
ｄ）配列番号１１に示されるアミノ酸配列（ｐ１２４－１３３）、
又は
ｅ）配列番号１２に示されるアミノ酸配列（ｐ１６４－１７３）、
又は
ｆ）配列番号１３に示されるアミノ酸配列（ｐ２７５－２８３）、
又は
ｇ）ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含むもの、
又は
ｈ）ＨＢＶポリメラーゼの領域５０９位～５２３位の少なくとも９連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号１７に示されるアミノ酸配列（ｐ５０９－５１７）、及び／又は
－ 配列番号１８に示されるアミノ酸配列（ｐ５１５－５２３）
を含むもの、
又は
ｉ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６４９位～６５８位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号１９に示されるアミノ酸配列（ｐ６４９－６５８）、及び／又は
－ 配列番号２０に示されるアミノ酸配列（ｐ６５０－６５８）
を含むもの、
又は
ｊ）ＨＢＶポリメラーゼの領域６９３位～７０６位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、好ましくは、
－ 配列番号２１に示されるアミノ酸配列（ｐ６９３－７０１）、及び／又は
－ 配列番号２２に示されるアミノ酸配列（ｐ６９７－７０６）
を含むもの、
又は
ｋ）配列番号２３に示されるアミノ酸配列（ｐ７２３－７３１）、
又は
ｌ）ＨＢＶポリメラーゼの領域７５５位～７６５位の少なくとも１０連続アミノ酸であって、
－ 配列番号２４に示されるアミノ酸配列（ｐ７５５－７６４）、及び／又は
－ 配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ｐ７５６－７６５）
を含むもの、
又は
ｍ）配列番号２６に示されるアミノ酸配列（ｐ８２９－８３７）
を含む。

【0032】

一実施形態において、ペプチドは、ＨＢＶタンパク質の前記断片からなる。

【0033】

別の実施形態において、前記ペプチドは２０～３４アミノ酸長、即ち２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４アミノ酸長など、即ち２０～３３アミノ酸長、例えば２０～３２アミノ酸長など、即ち２０～３１アミノ酸長、例えば２０～３０アミノ酸長など、即ち２０～２９アミノ酸長、例えば２０～２８アミノ酸長など、即ち２０～２７アミノ酸長、例えば２０～２６又は２０～２５アミノ酸長などである。

【0034】

更なる実施形態において、前記断片は２０～３３アミノ酸長、即ち２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４アミノ酸長、例えば２０～３２アミノ酸長など、即ち２０～３１アミノ酸長、例えば２０～３０アミノ酸長など、即ち２０～２９アミノ酸長、例えば２０～２８アミノ酸長など、即ち２０～２７アミノ酸長、例えば２０～２６又は２０～２５アミノ酸長などである。

【0035】

更なる態様において、本発明は、ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドに関し、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、又は３３アミノ酸長など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）、
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、
－ 配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）、
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、
－ 配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、
－ 配列番号１０に示されるアミノ酸配列（ｘ１３２－１４０）、
－ 配列番号１１に示されるアミノ酸配列（ｐ１２４－１３３）、
－ 配列番号１２に示されるアミノ酸配列（ｐ１６４－１７３）、
－ 配列番号１３に示されるアミノ酸配列（ｐ２７５－２８３）、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）、
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）、
－ 配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）、
－ 配列番号１７に示されるアミノ酸配列（ｐ５０９－５１７）、
－ 配列番号１８に示されるアミノ酸配列（ｐ５１５－５２３）、
－ 配列番号１９に示されるアミノ酸配列（ｐ６４９－６５８）、
－ 配列番号２０に示されるアミノ酸配列（ｐ６５０－６５８）、
－ 配列番号２１に示されるアミノ酸配列（ｐ６９３－７０１）、
－ 配列番号２２に示されるアミノ酸配列（ｐ６９７－７０６）、
－ 配列番号２３に示されるアミノ酸配列（ｐ７２３－７３１）、
－ 配列番号２４に示されるアミノ酸配列（ｐ７５５－７６４）、
－ 配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ｐ７５６－７６５）、及び
－ 配列番号２６に示されるアミノ酸配列（ｐ８２９－８３７）
からなる群から選択される１つ以上の配列を含み、
好ましくは前記断片は、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）、又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含む。

【0036】

記載されるとおり、一実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶ－Ｘの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）、及び／又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、及び／又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、及び／又は
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、及び／又は
－ 配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含む、ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0037】

更なる実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶ－Ｘの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、前記断片は、ＨＢＶ－Ｘの領域５７位～７８位の少なくとも１０連続アミノ酸を含み、及び前記断片は、
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号１に示されるアミノ酸配列（ｘ７０－７８）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号２に示されるアミノ酸配列（ｘ６７－７５）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）、又は
－ 配列番号３に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ５８－６６）、又は
－ 配列番号４に示されるアミノ酸配列（ｘ６２－７３）及び配列番号５に示されるアミノ酸配列（ｘ５７－６６）
を含む。

【0038】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの５３位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの５３よりもＣ末端側にある位置、即ち、５４位、５５位、５６位等のアミノ酸である。

【0039】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの９１位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの９１よりもＮ末端側にある位置、即ち、９０位、８９位、８８位等のアミノ酸である。

【0040】

なおも更なる実施形態において、
－ 断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの５３位のアミノ酸又はＨＢＶ－Ｘの５３よりもＣ末端側にある位置のアミノ酸であり、及び
－ 断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの９１位のアミノ酸又はＨＢＶ－Ｘの９１よりもＮ末端側にある位置のアミノ酸である。

【0041】

従って、この後者の実施形態において、本発明のペプチド中に含まれるＨＢＶ－Ｘ断片は、ＨＢＶ－Ｘの５３位及び９１位を越えて広がることはない。

【0042】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶ－Ｘの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）、及び／又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、及び／又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、及び／又は
－ 配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含む、ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸を含む。

【0043】

更なる実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶ－Ｘの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、前記断片は、ＨＢＶ－Ｘの領域１０３位～１２０位の少なくとも１１連続アミノ酸を含み、及び断片は、
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）、又は
－ 配列番号６に示されるアミノ酸配列（ｘ１０３－１１１）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号７に示されるアミノ酸配列（ｘ１０４－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）、又は
－ 配列番号８に示されるアミノ酸配列（ｘ１０５－１１３）及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（ｘ１１０－１２０）
を含む。

【0044】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１０３位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１０３よりもＣ末端側にある位置、即ち、１０４位、１０５位、１０６位等のアミノ酸である。

【0045】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１２２位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１２２よりもＮ末端側にある位置、即ち、１２１位、１２０位、１１９位等のアミノ酸である。

【0046】

なおも更なる実施形態において、本発明のペプチド中に含まれるＨＢＶ－Ｘ断片は、ＨＢＶ－Ｘの１０３位及び１２２位を越えて広がることはない。

【0047】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶ－Ｘの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列（ｘ１３２－１４０）を含む。

【0048】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１１６位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１１６よりもＣ末端側にある位置、即ち、１１７位、１１８位、１１９位等のアミノ酸である。

【0049】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１４０位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１４０よりもＮ末端側にある位置、即ち、１３９位、１３８位、１３７位等のアミノ酸である。

【0050】

なおも更なる実施形態において：
－ 断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１１６位のアミノ酸又はＨＢＶ－Ｘの１１６よりもＣ末端側にある位置のアミノ酸であり、及び
－ 断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶ－Ｘの１４０位のアミノ酸又はＨＢＶ－Ｘの１４０よりもＮ末端側にある位置のアミノ酸である。

【0051】

従って、この後者の実施形態において、本発明のペプチド中に含まれるＨＢＶ－Ｘ断片は、ＨＢＶ－Ｘの１１６位及び１４０位を越えて広がることはない。

【0052】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列（ｐ１２４－１３３）を含む。

【0053】

更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１５５位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１５５よりもＮ末端側にある位置、即ち、１５４位、１５３位、１５２位等のアミノ酸である。

【0054】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列（ｐ１６４－１７３）を含む。

【0055】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１５１位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１５１よりもＣ末端側にある位置、即ち、１５２位、１５３位、１５４位等のアミノ酸である。

【0056】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１７４位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの１７４よりもＮ末端側にある位置、即ち、１７３位、１７２位、１７１位等のアミノ酸である。

【0057】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列（ｐ２７５－２８３）を含む。

【0058】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの２６２位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの２６２よりもＣ末端側にある位置、即ち、２６３位、２６４位、２６５位等のアミノ酸である。

【0059】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）、及び／又は
－ 配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0060】

更なる実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、前記断片は、
－ 配列番号１４に示されるアミノ酸配列（ｐ４０３－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）、又は
－ 配列番号１５に示されるアミノ酸配列（ｐ４０４－４１２）及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列（ｐ４０７－４１５）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域４０３位～４１５位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0061】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの３９０位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの３９０よりもＣ末端側にある位置、即ち、３９１位、３９２位、３９３位等のアミノ酸である。

【0062】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの４２５位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの４２５よりもＮ末端側にある位置、即ち、４２４位、４２３位、４２２位等のアミノ酸である。

【0063】

なおも更なる実施形態において、
－ 断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの３９０位のアミノ酸又はＨＢＶポリメラーゼの３９０よりもＣ末端側にある位置のアミノ酸であり、及び
－ 断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの４２５位のアミノ酸又はＨＢＶポリメラーゼの４２５よりもＮ末端側にある位置のアミノ酸である。

【0064】

従って、この後者の実施形態において、本発明のペプチド中に含まれるＨＢＶポリメラーゼ断片は、ＨＢＶポリメラーゼの３９０位及び４２５位を越えて広がることはない。

【0065】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号１７に示されるアミノ酸配列（ｐ５０９－５１７）、及び／又は
－ 配列番号１８に示されるアミノ酸配列（ｐ５１５－５２３）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域５０９位～５２３位の少なくとも９連続アミノ酸を含む。

【0066】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの５０３位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの５０３よりもＣ末端側にある位置、即ち、５０４位、５０５位、５０６位等のアミノ酸である。

【0067】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの５３２位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの５３２よりもＮ末端側にある位置、即ち、５３１位、５３０位、５２９位等のアミノ酸である。

【0068】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号１９に示されるアミノ酸配列（ｐ６４９－６５８）、及び／又は
－ 配列番号２０に示されるアミノ酸配列（ｐ６５０－６５８）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域６４９位～６５８位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0069】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６２４位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６２４よりもＣ末端側にある位置、即ち、６２５位、６２６位、６２７位等のアミノ酸である。

【0070】

別の更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６５８位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６５８よりもＮ末端側にある位置、即ち、６５７位、６５６位、６５５位等のアミノ酸である。

【0071】

なおも更なる実施形態において、
－ 断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６２４位のアミノ酸又はＨＢＶポリメラーゼの６２４よりもＣ末端側にある位置のアミノ酸であり、及び
－ 断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６５８位のアミノ酸又はＨＢＶポリメラーゼの６５８よりもＮ末端側にある位置のアミノ酸である。

【0072】

従って、この後者の実施形態において、本発明のペプチド中に含まれるＨＢＶポリメラーゼ断片は、ＨＢＶポリメラーゼの６２４位及び６５８位を越えて広がることはない。

【0073】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号２１に示されるアミノ酸配列（ｐ６９３－７０１）、及び／又は
－ 配列番号２２に示されるアミノ酸配列（ｐ６９７－７０６）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域６９３位～７０６位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0074】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６７２位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの６７２よりもＣ末端側にある位置、即ち、６７１位、６７０位、６９６位等のアミノ酸である。

【0075】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列（ｐ７２３－７３１）を含む。

【0076】

更なる実施形態において、断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの７５１位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＣ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの７５１よりもＮ末端側にある位置、即ち、７５０位、７４９位、７４８位等のアミノ酸である。

【0077】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、
－ 配列番号２４に示されるアミノ酸配列（ｐ７５５－７６４）、及び／又は
－ 配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ｐ７５６－７６５）
を含む、ＨＢＶポリメラーゼの領域７５５位～７６５位の少なくとも１０連続アミノ酸を含む。

【0078】

別の実施形態において、免疫原性ペプチドはＨＢＶポリメラーゼの断片を含み、ここで前記断片は、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３又は３４など、２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列（ｐ８２９－８３７）を含む。

【0079】

更なる実施形態において、断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの８１５位のアミノ酸であるか、又は断片の最もＮ末端側のアミノ酸は、ＨＢＶポリメラーゼの８１５よりもＣ末端側にある位置、即ち、８１６位、８１７位、８１８位等のアミノ酸である。

【0080】

更なる実施形態において、本発明のペプチドは、
配列番号３１：ＨＬＳＬＲＧＬＰＶＣＡＦＳＳＡＧＰＣＡＬＲＦＴＳＡ（ＳＬＰ１）、
配列番号３２：ＬＳＡＭＳＴＴＤＬＥＡＹＦＫＤＣＬＦＫＤＷＥＥＬＧ（ＳＬＰ２）、
配列番号３３：ＡＳＳＳＳＳＣＬＨＱＳＡＶＲＫＡＡＹＳＨＬＳＴＳＫ（ＳＬＰ３）、
配列番号３４：ＲＫＬＨＬＹＳＨＰＩＩＬＧＦＲＫＩＰＭＧＶＧＬＳＰ（ＳＬＰ４）、
配列番号３５：ＧＦＡＡＰＦＴＱＣＧＹＰＡＬＭＰＬＹＡＣＩＱＡＫＱＡ（ＳＬＰ５）、
配列番号３６：ＡＲＱＲＰＧＬＣＱＶＦＡＤＡＴＰＴＧＷＧＬＡＩＧＨ（ＳＬＰ６）及び
配列番号３７：ＳＰＳＶＰＳＨＬＰＤＲＶＨＦＡＳＰＬＨＶＡＷＲＰＰ（ＳＬＰ７）
からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなる。

【0081】

更なる実施形態において、本発明のペプチドは、
配列番号１２１：ＫＬＨＬＹＳＨＰＩＩＬＧＦＲＫＩＰＭＧＶＧＬＳＰＦＬＬ（ＳＬＰ８）、
配列番号１２２：ＧＬＬＧＦＡＡＰＦＴＱＣＧＹＰＡＬＭＰＬＹＡＣＩＱＡＫＱＡＦＴ（ＳＬＰ９）、及び
配列番号１２３：ＡＲＱＲＰＧＬＣＱＶＦＡＤＡＴＰＴＧＷＧＬＡＩＧＨＱＲＭＲ（ＳＬＰ１０）
からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなる。

【0082】

配列番号１２１、１２２及び１２３は、それぞれ、ＳＬＰ４、ＳＬＰ５及びＳＬＰ６の変異体である。これらの変異体の可能性のある改良点としては、Ｎ末端／Ｃ末端の伸長によって導入される追加的な推定上のエピトープ／リガンド、又は（推定上の）エピトープ／リガンドの損失のない、Ｎ末端／Ｃ末端の伸長又は短縮による製造適合性の向上が挙げられる。

【0083】

更なる実施形態において、本発明のペプチドは、国際公開第１５１８７００９号パンフレットに配列番号５３、５４、５９、７０、７６及び７９として記載されるペプチド、即ち、
配列番号３８：ＶＶＮＥＫＲＲＬＫＬＩＭＰＡＲＦＹＰＴＨＴＫＹＬＰＬＤＫＧＩＫＰＹＹ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号５３）、
配列番号３９：ＹＰＴＨＴＫＹＬＰＬＤＫＧＩＫＰＹＹＰＤＱＶＶＮＨＹＦＱＴＲＨＹＬ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号５４）、
配列番号４０：ＴＡＥＳＲＬＶＶＤＦＳＱＦＳＲＧＩＳＲＶＳＷＰＫＦＡＶＰＮＬＱＳＬ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号５９）、
配列番号４１：ＱＲＭＲＧＴＦＶＡＰＬＰＩＨＴＡＥＬＬＡＡＣＦＡＲＳＲＳＧＡＫＬ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号７０）、
配列番号４２：ＡＬＰＳＰＳＰＳＡＶＰＡＤＨＧＡＨＬＳＬＲＧＬＰＶＣＡＦＳＳＡＧＰ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号７６）、又は
配列番号４３：ＬＥＡＹＦＫＤＣＶＦＫＤＷＥＥＬＧＥＥＩＲＬＫＶＦＶＬＧＧＣＲＨＫＬ（国際公開第１５１８７００９号パンフレットの配列番号７９）
のいずれも含まず、又はそれからならない。

【0084】

更なる主要な態様において、本発明は、ＨＢＶタンパク質の断片を含む免疫原性ペプチドに関し、ここで前記ペプチドは２０～３４アミノ酸長であり、及び前記断片は、配列番号１～配列番号２６からなる群から選択される配列を含む。

【0085】

好ましくは、本発明の免疫原性ペプチドは、ヒト対象に投与したときに、抗原指向性ＣＤ４＋ Ｔヘルパー及びＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答の強力な組み合わせを誘導する能力を有する。好ましくは、本ペプチドは、
－ 少なくとも１週間治療した後の、ＥＬＩＳｐｏｔ若しくはＥＬＩＳＡアッセイ又は関連する好適な技法によるか、又はＣＤ４＋若しくはＣＤ８＋ Ｔ細胞のＨＬＡ多量体染色によって確立されるとおりの、免疫系の活性化若しくは誘導及び／又は末梢血中若しくは組織中における抗原特異的活性化ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加、又はフローサイトメトリーにおけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞内サイトカイン染色若しくはそれへのサイトカイン捕捉によって確立されるとおりの、これらのＴ細胞によって産生されるサイトカインの増加；及び／又は
－ 抗原関連感染の増殖の阻害又は抗原発現細胞の検出可能な減少又は抗原発現細胞の細胞生存率の低下；及び／又は
－ 抗原発現細胞の細胞死の誘導又は誘導増加；及び／又は
－ 抗原発現細胞の阻害又はその増加の防止；及び／又は
－ ウイルス負荷量の減少（例えば、血清ウイルスＤＮＡ、ウイルスＲＮＡ又はウイルスタンパク質の減少）疾患の前癌期）；及び／又は
－ 組み込まれたウイルスＤＮＡ及び／又は共有結合性の閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）を有するヘパトサイトの減少
－ 基準病変サイズの減少；及び／又は
－ 基準腫瘍サイズの減少；及び／又は
－ 生存率（例えば、無増悪生存率、全生存率）の上昇
によって好ましくは検出可能なとおりの、対象におけるＨＢＶ、ＨＢＶ関連疾患又は病態の予防、部分的除去及び／又は治療又は完全除去に有効に使用することができる。

【0086】

好ましい実施形態において、本発明で使用されるペプチドは、上記に記載されるとおりのＣＴＬエピトープと、治療しようとするヒト対象の集団において優勢なＨＬＡアレルによってコードされるＨＬＡクラスＩＩ分子に対して結合親和性、好ましくは少なくとも中程度の結合親和性、より好ましくは高い結合親和性を示すＴヘルパーエピトープとを含む。

【0087】

好ましい実施形態において、本発明で使用されるペプチドは、ペプチドのＮ末端又はＣ末端にシステイン残基を有しない。

【0088】

更に、別の好ましい実施形態において、本発明で使用されるペプチドは、システイン残基を２個より多く含まない。

【0089】

別の好ましい実施形態において、本発明で使用されるペプチドは、メチオニンを３個より多く含まない。

【0090】

別の好ましい実施形態において、本発明で使用されるペプチドは、Ｎ末端にグルタミンを有しない。

【0091】

好ましくは、本発明で使用されるペプチドは、単離されているペプチドであり、ここで「単離されている」とは、ペプチドがどの程度精製されているかを反映するものではなく、そのペプチドがその天然の環境から取り出されている（即ち、ヒトによる操作に供されている）ことを指し示しており、組換えで作製されたペプチド又は合成的に作製されたペプチドであり得る。

【0092】

ペプチドは、典型的には合成的に作製される。これは、固相ペプチド合成によるか、又は他のいずれか好適な方法によって行われてもよい。

【0093】

更なる態様において、本発明は、本発明に係るペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに関する。上記に説明したとおり、用語「ＨＢＶタンパク質の断片」とは、ＨＢＶタンパク質の部分配列に対応するアミノ酸配列を意味する。ペプチドが特定の長さのＨＢＶタンパク質の断片を含むと指定される場合、それは、その断片がそれより短くも長くもないことを意味する。例えば、断片が２０～３４アミノ酸長であると指定される場合、それは、かかるペプチドが前記ＨＢＶタンパク質の３５アミノ酸長以上の連続配列を含まないことを意味する。結果として、本発明のペプチドは、ＨＢＶタンパク質の３４アミノ酸長を超える断片を含まないことになる。従って、本発明に係るペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む本発明のポリヌクレオチドもまた、ＨＢＶタンパク質の３４アミノ酸長を超える断片を含むペプチドはコードしないであろうことが理解されるべきである。

【0094】

更なる態様において、本発明は、
－ 本明細書に記載されるとおりの本発明に係るペプチド又は本明細書に記載されるとおりの本発明に係るポリヌクレオチド、及び
－ 薬学的に許容可能な担体
を含み、
任意選択でアジュバントを更に含む免疫原性組成物に関する。

【0095】

ポリヌクレオチドベースのワクチン接種に好適な方法については、例えば、Ｔｒｉｍｂｌｅ ｅｔ ａｌ．２０１５ Ｌａｎｃｅｔ ３８６：２０７８；Ｋｒａｎｚ ｅｔ ａｌ．２０１６ Ｎａｔｕｒｅ ５３４：３９６；国際公開第２０１１０１５６５６Ａ２号パンフレット；Ｋｒａｔｚｅｒ，ｅｔ ａｌ．２０１８ ＡＡＳＬＤ，Ｔｈｅ Ｌｉｖｅｒ Ｍｅｅｔｉｎｇ ２０１８，ａｂｓｔｒａｃｔ ＃４２６；国際公開第２０１７０８０９２０号パンフレット；及びＢｏｎｉ ｅｔ ａｌ．２０１９ Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ ２０（１１）：２７５４に記載されている。

【0096】

更なる態様において、本発明は、本発明に係るポリヌクレオチドを含む組換えウイルスに関する。

【0097】

本発明で使用される免疫原性組成物は、好ましくはヒト対象への投与用であり、従ってそれに好適であるように製剤化される。好ましくは、投与は非経口、例えば、静脈内、皮下、筋肉内、真皮内、皮内及び／又は腫瘍内投与であり、即ち注射による。

【0098】

免疫原性組成物は、好ましくは化学的に安定しており、即ち、組成物中のペプチドは化学的に劣化せず、又は分解しない。従って、好ましくは、溶液又は液体組成物を室温で少なくとも約０．５、１、１．５、２又は少なくとも３時間貯蔵した後に、その溶液及び／又は組成物中にある未劣化、未分解及び／又は未反応のペプチドの量は、その当初と比較して重量基準で少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は更には１００％である。化学安定性は、当該技術分野において公知の任意の好適な技術を用いて、例えば本明細書に例示されるとおりＵＰＬＣ／ＭＳを用いて評価することができる。ＵＰＬＣ／ＭＳを用いるとき、室温で少なくとも約０．５、１、１．５、２又は少なくとも３時間貯蔵した後にＵＶスペクトル上で所望のペプチド産物に相当しない％ピーク面積の合計が、その当初と比較して多くても２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％である場合に、溶液／組成物は化学的に安定していると定義される。

【0099】

免疫原性組成物は、好ましくはまた、物理的にも安定しており、即ち、組成物中のペプチドは沈殿せず、又は再分散しない。物理的安定性は、当該技術分野において公知の任意の好適な技術を用いて、例えば目視検査によるか、又は本明細書に例示されるとおりＭａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを使用した粒子分布（ここで平均粒径はＤ（０．５）単位で表される）によって評価することができる。本明細書に例示されるとおり物理的安定性の評価にＭａｌｖｅｒｎ Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを用いるとき、室温で少なくとも約０．５、１、１．５、２又は少なくとも３時間貯蔵した後の平均Ｄ（０．５）の増加が、その当初（即ち、調製後そのままの調製したての溶液）と比較して多くても５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％である場合に、溶液／組成物は物理的に安定していると定義される。好ましくは、室温で３時間貯蔵した後の平均Ｄ（０．５）の増加が、その当初と比較して多くても５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％、好ましくは多くても２０％である場合に、溶液／組成物は物理的に安定していると定義される。

【0100】

一実施形態において、免疫原性組成物は、一緒に投与されることになる乾燥又は凍結乾燥ペプチドの混合物を含むか、又はそれからなる。

【0101】

本発明で使用される免疫原性組成物は、任意の好適な方法によって調製されてもよい。一部の実施形態において、１つ又は複数の免疫原性組成物は、乾燥、好ましくは凍結乾燥ペプチドから調製される。

【0102】

例えば、本組成物は、以下のステップ：
ａ）乾燥、好ましくは凍結乾燥ペプチドを含むバイアルを提供するステップ；
ｂ）好ましくは約５～３０分間、ペプチドを解凍するステップ；
ｃ）ペプチドを含むバイアルに再構成組成物を、好ましくはバイアルを回すことなく加えるステップ；
ｄ）好ましくは約０．５～５分間、混和させておくステップ；及び
ｅ）好ましくは約１～３分間、澄明な溶液が得られるまで回すステップ
を含む方法によって調製されてもよい。

【0103】

好ましくは、ステップｂ）～ｅ）は室温で実施される。

【0104】

好ましくは、前記バイアルは、予防及び／又は治療方法、好ましくは本明細書に定義するとおりの治療及び／又は予防方法における単回容積としての注射量、即ち、単回医薬投薬量単位、又は対象の体の異なる部位に実質的に同じ時点で複数注射する場合には、その一部のペプチドを含む。

【0105】

一実施形態において、ステップｃ）の再構成組成物は、ＤＭＳＯ及び／又は注射用水を含むか、又はそれからなる。別の実施形態において、ペプチドの再構成方法のステップｃ）の再構成組成物は、約６０～８０％ｖ／ｖの有機酸含有水溶液、約５～１０％ｖ／ｖのプロピレングリコール（ＣＡＳ番号５７－５５－６）、約１０～２０％ｖ／ｖの低級アルコール及び約５～１０％ｖ／ｖの非イオン性親水性界面活性剤を含むか、又はそれからなる。一実施形態において、有機酸はクエン酸であり、クエン酸は、水溶液中に約０．０５～０．１Ｍの濃度で存在する。一実施形態において、低級アルコールはエタノールである。一実施形態において、非イオン性親水性界面活性剤は、
ａ．モノ、ジ又はトリグリセリド、好ましくはエトキシ化トリグリセリドであり、及び／又は
ｂ．親水性親油性バランス（ＨＬＢ）値９～１４を有する。更なる実施形態において、非イオン性親水性界面活性剤は、エトキシ化ヒマシ油、好ましくはポリオキシエチレングリセロールトリリシノール酸３５（ＣＡＳ番号６１７９１－１２－６）である。

【0106】

一実施形態において、本組成物は、約７５％ｖ／ｖの約０．１Ｍクエン酸含有水溶液、約６．２５％ｖ／ｖのプロピレングリコール（ＣＡＳ番号５７－５５－６）、約１２．５％ｖ／ｖのエタノール及び約６．２５％ｖ／ｖのポリオキシエチレングリセロールトリリシノール酸３５（ＣＡＳ番号６１７９１－１２－６）を含むか、又はそれからなる。

【0107】

好ましくは、ステップｃ）における再構成組成物の量は、約０．５～２ｍＬの範囲、好ましくは１ｍＬである。好ましくは、ステップ（ａ）において再構成されるペプチドの量は、ステップｅ）の後に得られるとおりの、即ち、ステップｅ）の後に得られる澄明な溶液中にある再構成ペプチドの総量である。

【0108】

一実施形態において、再構成された組成物は、約１～２ｍｇ／ｍＬのペプチド、０．０３８Ｍのクエン酸、約３．１３％ｖ／ｖのプロピレングリコール（ＣＡＳ番号５７－５５－６）、約６．２５％ｖ／ｖのエタノール、約３．１３％ｖ／ｖのポリオキシエチレングリセロールトリリシノール酸３５（ＣＡＳ番号６１７９１－１２－６）及び約５０％の油系アジュバント、好ましくはＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１ ＶＧ（Ｓｅｐｐｉｃ）を水中に含むか、又はそれからなる。

【0109】

乾燥ペプチドは、更なる構成成分を含まないペプチドであり得るが、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などの緩衝液成分、ナトリウム塩、カリウム塩又はリン酸塩などの塩（例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ及びＮａＰＯ_４）を含むこともある。更なる構成成分の量は、再構成されることになる乾燥ペプチドの総重量の好ましくは３０％未満、より好ましくは２５％未満である。再構成されることになる乾燥ペプチドは、限定はされないが、回転蒸発、凍結乾燥（フリーズドライ）及び噴霧乾燥などのプロセスによって入手し得るとおりの、物理的に乾燥した状態であり得る。

【0110】

アジュバント
一実施形態において、本発明の組成物はアジュバントを更に含み、又は本発明に係る治療若しくは使用は、アジュバントの投与を更に含む。用語「アジュバント」は、本明細書では、免疫増強効果のある、対象への投与時に抗原に対する免疫応答を亢進させ、誘導し、引き出し、及び／又は調節するために抗原と共投与されるか、又はそれに加えられるか、又はそれと共製剤化される物質を指して使用される。一実施形態において、アジュバントは、再構成されることになる１つ又は複数のペプチドに共有結合的に連結されるなど、物理的に連結される。

【0111】

一実施形態において、アジュバントは乳化アジュバントである。例えば、一実施形態において、アジュバントは油系アジュバントである。油系アジュバントを使用すると、エマルション（例えば、油中水型又は水中油型エマルション）を形成することができ、当該技術分野では、免疫応答を亢進させて、それを誘導することが認められている。好ましくは油系アジュバントは鉱油系アジュバントである。油系アジュバントの非限定的な例は、バイオ系油アジュバント（植物油／魚油等をベースとする）、スクアレン系アジュバント（例えばＭＦ５９）、Ｓｙｎｔｅｘアジュバント製剤（ＳＡＦ；Ｌｉｄｇａｔｅ，Ｄｅｂｏｒａｈ Ｍ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｅｘ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ，ＳＡＦ－ｍ，ａｎｄ ＳＡＦ－１），Ｉｎ：Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ４２ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ^ＴＭ ｐ２２９－２３７，ＩＳＳＮ１５４３－１８９４）、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）、フロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）、ピーナッツ油をベースとするアジュバント（例えば、Ａｄｊｕｖａｎｔ ６５）、Ｌｉｐｏｖａｎｔ（Ｂｙａｒｓ，Ｎ．Ｅ．，Ａｌｌｉｓｏｎ，Ａ．Ｃ．，１９９０．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ａｄｊｕｖａｎｔｓ：ｇｅｎｅｒａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｄｖａｎｔａｇｅｓ，ａｎｄ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ．Ｉｎ：Ｚｏｌａ，Ｈ．（Ｅｄ．），Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｐ３９－５１）、ＡＳＯ４（Ａ．Ｔａｇｌｉａｂｕｅ，Ｒ．Ｒａｐｐｕｏｌｉ Ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｊｕｖａｎｔｓ：ｔｈｅ ｄｒｅａｍ ｂｅｃｏｍｅｓ ｒｅａｌ Ｈｕｍ．Ｖａｃｃｉｎｅ，４（５），２００８，ｐ３４７－３４９）、精製スクアレン及び高度に精製したモノオレイン酸マンニドで乳化したスクアレンをベースとするＭｏｎｔａｎｉｄｅアジュバント（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ２５ ＶＧ、２８ ＶＧ、３５ ＶＧ、５０ Ｖ、５０ Ｖ２、５１ ＶＧ、６１ ＶＧ、７０ ＶＧ、７０ Ｍ ＶＧ、７１ ＶＧ、７２０ ＶＧ、７６０ ＶＧ、７６３ Ａ ＶＧ、７７５ ＶＧ、７８０ ＶＧ、２０１ ＶＧ、２０６ ＶＧ、２０７ ＶＧ）である。より好ましくは、油系アジュバントは、Ｄｒａｋｅｏｌ ＶＲとモノオレイン酸マンニドとの混合物であるＭｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ５１ＶＧ（Ｓｅｐｐｉｃ）である。

【0112】

他の好適なアジュバントは、樹状細胞など、抗原提示細胞を活性化するアジュバントである。例えば、かかるアジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体を介し、及び／又はＲＩＧ－Ｉ（レチノイン酸誘導性遺伝子－１）タンパク質を介し、及び／又はエンドセリン受容体を介し得る。自然免疫系を活性化する能力を有する免疫修飾化合物は、ＴＬＲ１～１０を含め、トール様受容体（ＴＬＲ）を介して特に良好に活性化され得る。ＴＬＲ受容体を活性化する能力を有する化合物並びにその修飾体及び誘導体については、当該技術分野で十分に裏付けられている。ＴＬＲ１は、細菌リポタンパク質及びそのアセチル化形態によって活性化させることができ、ＴＬＲ２は、加えて、グラム陽性菌の糖脂質、ＬＰＳ、ＬＰＡ、ＬＴＡ、線毛、外膜タンパク質、細菌由来又は宿主由来の熱ショックタンパク質、及びマイコバクテリアのリポアラビノマンナンによって活性化させることができる。ＴＬＲ３は、ｄｓＲＮＡ、詳細にはウイルス起源のｄｓＲＮＡによるか、又は化学的化合物ポリ（Ｉ：Ｃ）によって活性化させることができる。ＴＬＲ４は、グラム陰性ＬＰＳ、ＬＴＡ、宿主由来又は細菌起源由来の熱ショックタンパク質、ウイルス外被又はエンベロープタンパク質、タキソール又はその誘導体、ヒアルロナン含有オリゴ糖及びフィブロネクチンによって活性化させることができる。ＴＬＲ５は、細菌の鞭毛又はフラジェリンで活性化させることができる。ＴＬＲ６は、マイコバクテリアのリポタンパク質及びＢ群ストレプトコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）の易熱性可溶性因子（ＧＢＳ－Ｆ）又はスタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）のモジュリンによって活性化させることができる。ＴＬＲ７は、イミキモド、レシキモドなどのイミダゾキノリン類及びイミキモド又はレシキモドの誘導体（例えば３Ｍ－０５２）によって活性化させることができる。ＴＬＲ９は、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ又はクロマチン－ＩｇＧ複合体によって活性化させることができる。特に好ましいアジュバントは、限定はされないが、ｄｓＲＮＡを含む合成的に作製された化合物、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ポリＩ：ＣＬＣ、非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ（ＴＬＲ３及びＴＬＲ９受容体を惹起する）、ＩＣ３１、ＴＬＲ９アゴニスト、ＩＭＳＡＶＡＣ、ＴＬＲ４アゴニスト、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ－５１、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ、仏国によって生産されるアジュバント）を含む。ＲＩＧ－Ｉタンパク質は、まさにＴＬＲ３のように、ｄｓ－ＲＮＡによって活性化されることが公知である（Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ，（２００５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：１９－２８）。

【0113】

更なる特に好ましいＴＬＲリガンドは、ｐａｍ３ｃｙｓ及び／又はその誘導体、好ましくはｐａｍ３ｃｙｓリポペプチド又はその変異体若しくは誘導体、好ましくは国際公開第２０１３０５１９３６Ａ１号パンフレットに記載されるものなど、より好ましくはＵ－Ｐａｍ１２又はＵ－Ｐａｍ１４又はＡＭＰＬＩＶＡＮＴ（登録商標）である。Ｐａｍ３ｃｙｓ及び／又はその誘導体は、任意選択で、１つ又は複数のペプチド抗原と共有結合的に連結されてもよい。

【0114】

更なる好ましいアジュバントは、環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）及びポリＩＣＬＣである。好ましい実施形態において、本発明のアジュバントは、国際公開第２０１３０５１９３６Ａ１号パンフレットに記載されるとおりのｐａｍ３ｃｙｓリポペプチド誘導体など、ポリＩＣＬＣ、イミキモド、レシキモド又はその誘導体などのイミダゾキノリン、天然に存在しない配列を有するＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）、及びペプチドをベースとするアジュバント、例えば、天然に存在しないアミノ酸を含むムラミルジペプチド（ＭＤＰ）又は破傷風トキソイドペプチドなど、天然に存在しないアジュバントである。

【0115】

更に、１０１８ ＩＳＳ、アルミニウム塩、Ａｍｐｌｉｖａｘ、ＡＳ １５、ＢＣＧ、ＣＰ－８７０，８９３、ＣｐＧ７９０９、ＣｙａＡ、ｄＳＬＩＭ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＣ３０、ＩＣ３１、ＩｍｕＦａｃｔ ＥＶ１Ｐ３２１、ＩＳ Ｐａｔｃｈ、ＩＳＳ、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ、Ｊｕｖｌｍｍｕｎｅ、リポプレックス、リポソーム、ＬｉｐｏＶａｃ、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＭＳ １３１２、ナノ粒子（アジュバントが組み込まれたナノ粒子など）、ＯＫ－４３２、ＯＭ－１７４、ＯＭ－１９７－ＭＰ－ＥＣ、ＯＮＴＡＫ、ＰｅｐＴｅｌ（登録商標）、ベクター系、ＰＬＧＡマイクロパーティクル、ＳＲＬ１７２、ビロソーム及び他のウイルス様粒子、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＧＤＰＫＨＰＫＳＦ、ＹＦ－１７Ｄ、ＶＥＧＦ ｔｒａｐ、Ｒ８４８、βグルカン、ＡｑｕｉｌａのＱＳ２１スティミュロン、バジメザン、ＡｓＡ４０４（ＤＭＸＡＡ）、ＳＴＩＮＧ（ＩＦＮ遺伝子の刺激物質）アゴニスト（例えばｃ－ジ－ＧＭＰ ＶａｃｃｉＧｒａｄｅ（商標））、ＰＣＩ、ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ細胞）アゴニスト（例えば、α－ガラクトシルセラミド又はα－ＧａｌＣｅｒ、ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｃｕｒｅｖａｃ）、レチノイン酸誘導性タンパク質Ｉリガンド（例えば３ｐＲＮＡ又は５’－三リン酸ＲＮＡ）からなる群から選択されるアジュバントが好ましい。

【0116】

治療及び使用方法
本発明の免疫原性ペプチド、本発明のポリヌクレオチド、本発明の組換えウイルス及び本発明の免疫原性組成物は、慢性ＨＢＶ感染症などのＨＢＶ感染症の治療及び／又はＨＢＶ関連疾患の治療に使用することができる。

【0117】

本発明の免疫原性ペプチド、ポリヌクレオチド及び免疫原性組成物を使用して治療される疾患の例としては、限定なしに、慢性Ｂ型肝炎感染症などのＢ型肝炎感染症、Ｂ型肝炎関連肝硬変及びＢ型肝炎関連肝細胞癌が挙げられる。

【0118】

従って、更なる態様において、本発明は、医薬としての使用のための本発明に係るペプチド、本発明に係るポリヌクレオチド又は本発明に係る免疫原性組成物に関する。

【0119】

更なる態様において、本発明は、ＨＢＶ関連疾患の治療又は予防における使用のための本発明に係るペプチド、本発明に係るポリヌクレオチド又は本発明に係る免疫原性組成物に関する。

【0120】

更なる態様において、本発明は、ＨＢＶ関連疾患の治療又は予防方法であって、それを必要としているヒト対象への、本発明に係る免疫原性ペプチド、本発明に係るポリヌクレオチド又は本発明に係る免疫原性組成物の投与ステップを含む方法に関する。

【0121】

好ましくは、投与は、静脈内、皮下、又は筋肉内であるが、粘膜投与又は真皮内及び／又は皮内投与、例えば注射によるなど、他の投与経路も想定することができる。

【0122】

好ましくは、１つ又は複数の免疫原性組成物の投与は、ロングペプチドに含まれるＨＬＡクラスＩ分子によって提示される少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチド配列に対する細胞傷害性ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を誘導する。より好ましくは、１つ又は複数の免疫原性組成物の投与は、細胞傷害性ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を、１つ又は複数の免疫原性組成物に含まれるＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＨＬＡ結合ペプチド配列に対するヘルパーＣＤ４＋ Ｔ細胞応答と併せて誘導する。好ましくは、投与は、
－ 少なくとも１週間治療した後の、ＥＬＩＳｐｏｔ若しくはＥＬＩＳＡアッセイ又は関連する好適な技法によるか、又はＣＤ４＋又はＣＤ８＋ Ｔ細胞のＨＬＡ多量体染色によって確立されるとおりの、免疫系の活性化若しくは誘導及び／又は末梢血中若しくは組織中における抗原特異的活性化ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加、又はフローサイトメトリーにおけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞内サイトカイン染色又はそれへのサイトカイン捕捉によって確立されるとおりの、これらのＴ細胞によって産生されるサイトカインの増加；及び／又は
－ 抗原関連感染の増殖の阻害又は抗原発現細胞の検出可能な減少又は抗原発現細胞の細胞生存率の低下；及び／又は
－ 抗原発現細胞の細胞死の誘導又は誘導増加；及び／又は
－ 抗原発現細胞の阻害又はその増加の防止；及び／又は
－ ウイルス負荷量の減少（疾患の前癌期）；及び／又は
－ 基準病変サイズの減少；及び／又は
－ 基準腫瘍サイズの減少；及び／又は
－ 生存率（例えば、ＰＦＳ、ＯＳ）の上昇
によって好ましくは検出可能なとおりの、対象におけるＨＢＶ関連感染症又は疾患の予防、部分的除去及び／又は治療又は完全除去のための投与である。

【0123】

組み合わせ
一部の実施形態において、治療は、本発明の免疫原性ペプチド、ポリヌクレオチド又は組換えウイルスを更なる免疫原性ペプチド、ポリヌクレオチド又は組換えウイルスと組み合わせた投与を含む。例えば、治療は、３、４、５、６、７、８又はそれ以上など、２つ以上の免疫原性ペプチドの投与を含み得る。

【0124】

２つ以上のペプチドは、全てが１つの免疫原性組成物中に含まれてもよく、又は複数のペプチドが２つ以上の組成物に分けられてもよい。ペプチドが２つ以上の組成物に分けられる場合、それらの組成物は投与前に混合され、ひいては共投与されてもよく、又はそれらは別々に投与されてもよい。典型的には、全ての組成物、ひいては複数のペプチド中の全てのペプチドが、２４時間という時間枠の中で、好ましくは４、２又は１時間以内に対象に投与されることになる。

【0125】

２つ以上の組成物が投与される場合、投与は同じ部位、例えば同じ肢、又は２ヵ所以上の異なる部位であってもよい。治療の経過中、１つ又は複数の組成物の投与は１回行われてもよく、又はそれに代えて、限定はされないが２回又は３回など、後に繰り返されてもよい（ブーストされてもよい）。

【0126】

好ましい実施形態において、本治療方法はロングペプチドの組み合わせを含み、ここで前記ロングペプチドの組み合わせは、治療しようとするヒト対象の集団中で優勢なＨＬＡアレルによってコードされるＨＬＡクラスＩ分子の少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％への結合能を有するＨＬＡ結合ペプチド配列を含む。本発明に係るロングペプチドにおける好ましいＨＬＡクラスＩ ＨＬＡ結合ペプチド配列は、ＨＬＡクラスＩアレルスーパータイプクラスＨＬＡ－Ａ＊０１、ＨＬＡ－Ａ＊０２、ＨＬＡ－Ａ＊０３、ＨＬＡ－Ａ＊２４、ＨＬＡ－Ｂ＊０７、ＨＬＡ－Ｂ＊０８、ＨＬＡ－Ｂ＊２７、ＨＬＡ－Ｂ＊４４、ＨＬＡ－Ｂ＊５８、ＨＬＡ－Ｂ＊６２、及びＨＬＡスーパータイプＡ＊０１の組み合わせ、ＨＬＡ－Ａ＊０１／Ａ＊０３及びＨＬＡ－Ａ＊０１／Ａ＊２４並びにこれらのそれぞれのサブタイプ（Ｓｉｄｎｅｙ ｅｔ ａｌ ２００８ ＢＭＣ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９）、好ましくはＨＬＡ－Ａ０１０１；ＨＬＡ－Ａ０２０１；ＨＬＡ－Ａ０２０６；ＨＬＡ－Ａ０３０１；ＨＬＡ－Ａ１１０１；ＨＬＡ－Ａ２３０１；ＨＬＡ－Ａ２４０２；ＨＬＡ－Ａ２５０１；ＨＬＡ－Ａ２６０１；ＨＬＡ－Ａ２９０２；ＨＬＡ－Ａ３００１；ＨＬＡ－Ａ３００２；ＨＬＡ－Ａ３１０１；ＨＬＡ－Ａ３２０１；ＨＬＡ－Ａ３３０３；ＨＬＡ－Ａ６８０１；ＨＬＡ－Ａ６８０２；ＨＬＡ－Ａ７４０１；ＨＬＡ－Ｂ０７０２；ＨＬＡ－Ｂ０８０１；ＨＬＡ－Ｂ１３０１；ＨＬＡ－Ｂ１３０２；ＨＬＡ－Ｂ１４０２；ＨＬＡ－Ｂ１５０１；ＨＬＡ－Ｂ１５０２；ＨＬＡ－Ｂ１５２５；ＨＬＡ－Ｂ１８０１；ＨＬＡ－Ｂ２７０２；ＨＬＡ－Ｂ２７０５；ＨＬＡ－Ｂ３５０１；ＨＬＡ－Ｂ３５０３；ＨＬＡ－Ｂ３７０１；ＨＬＡ－Ｂ３８０１；ＨＬＡ－Ｂ３９０１；ＨＬＡ－Ｂ４００１；ＨＬＡ－Ｂ４００２；ＨＬＡ－Ｂ４４０２；ＨＬＡ－Ｂ４４０３；ＨＬＡ－Ｂ４６０１；ＨＬＡ－Ｂ４８０１；ＨＬＡ－Ｂ４９０１；ＨＬＡ－Ｂ５００１；ＨＬＡ－Ｂ５１０１；ＨＬＡ－Ｂ５２０１；ＨＬＡ－Ｂ５３０１；ＨＬＡ－Ｂ５５０１；ＨＬＡ－Ｂ５６０１；ＨＬＡ－Ｂ５７０１；ＨＬＡ－Ｂ５８０１及びＨＬＡ－Ｂ５８０２への結合能を有するＨＬＡ結合ペプチド配列である。好ましい実施形態において、本治療方法はロングペプチドの組み合わせを含み、ここで前記ロングペプチドの組み合わせは、治療しようとするヒト対象の集団中で優勢なＨＬＡアレルによってコードされるＨＬＡクラスＩの少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％への結合能を有するＨＬＡ結合ペプチド配列、及びＨＬＡクラスＩＩ分子の少なくとも２０％、３０％、４０％、４２％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％又は５０％への結合能を有するＨＬＡ結合ペプチド配列を含む。

【0127】

好ましい実施形態において、本発明で使用されるロングペプチドは、治療しようとするヒト対象の集団において優勢なＨＬＡアレルによってコードされるＨＬＡクラスＩ分子に対して結合親和性、好ましくは少なくとも中程度の結合親和性、より好ましくは高い結合親和性を示し、且つ細胞傷害性ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を引き出すＨＬＡ結合ペプチド配列を含む。好ましくは、本発明で使用されるロングペプチドは、以下からなるＨＬＡクラスＩ分子群の少なくとも１つのＨＬＡクラスＩ分子に対して結合親和性、好ましくは少なくとも中程度の結合親和性、より好ましくは高い結合親和性を示すＨＬＡ結合ペプチド配列を含む：

【化1】

【化2】

【化3】

【化4】

【化5】

【化6】

【0128】

記載されるとおり、治療は、本発明の抗原の２つ以上の投与を含み得る。一実施形態において、本発明は、ＨＢＶ関連疾患の治療又は予防方法であって、ヒト対象への
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ａ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｂ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｃ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｄ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｅ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｆ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｇ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｈ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｉ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｊ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｋ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド、又は
－ 請求項１ｌ）に記載されるとおりのペプチド及び請求項１ｍ）に記載されるとおりのペプチド又は
－ 上述のペプチドの組み合わせのいずれか１つをコードする配列を含む１つ又は２つのポリヌクレオチド
の投与を含む方法を提供する。

【0129】

好ましくは、免疫原性組成物は、医薬用量を成す量のペプチドを含むか、又はそれからなる。医薬用量とは、本明細書では、所与の時点で対象に適用される活性成分の量（即ち、ペプチドベースの免疫原性組成物中にあるペプチドの総量）として定義される。医薬用量は、単回容積、即ち単回注射で対象に適用されてもよく、又は好ましくは身体の異なる位置、例えば右肢と左肢とに適用される２、３、４、５又はそれ以上の分割容積で適用されてもよい。単回医薬用量を分割容積で適用する理由は、負の副作用を回避すること、抗原競合を回避すること、及び／又は組成分析上の考慮事項など、複数あり得る。

【0130】

医薬用量は、有効量又は有効量の一部であり得る。「有効量」とは、本明細書では、未治療の患者と比べて疾患（例えば、慢性感染症、前癌病態及び／又は癌）の症状を予防し及び／又は低減するのに必要な活性成分の量又は用量と理解されるべきである。疾患又は病態の予防的及び／又は治療的処置のための本発明の実施に使用される１つ又は複数の活性化合物の有効量は、投与方法、対象の年齢、体重、及び全般的な健康に応じて変わる。最終的には、担当の医師又は獣医師が、適切な量及び投薬量レジメンを決断することになる。かかる量が、「有効」量と称される。この有効量はまた、治療しようとする対象において有効な細胞性Ｔ細胞応答、又はより好ましくは有効な全身性の細胞性Ｔ細胞応答を誘導することが可能な量であってもよい。

【0131】

好ましくは、特定の時点における単回又は頻回のいずれかの注射又は投与での医薬用量、即ち所与の時点で対象に適用されるペプチドの総量は、約０．１マイクログラム、０．５マイクログラム、１マイクログラム、５マイクログラム、１０マイクログラム、１５マイクログラム、２０マイクログラム、３０マイクログラム、４０マイクログラム、５０マイクログラム、６０マイクログラム、７０マイクログラム、８０マイクログラム、９０マイクログラム、１００マイクログラム、１５０マイクログラム、２００マイクログラム、２５０マイクログラム、３００マイクログラム、３５０マイクログラム、４００マイクログラム、４５０マイクログラム、５００マイクログラム、６５０マイクログラム、７００マイクログラム、７５０マイクログラム、８００マイクログラム、８５０マイクログラム、９００マイクログラム、１ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ又は約２０ｍｇなど、０．１マイクログラム～２０ｍｇの範囲又は間にある任意の値の量のペプチドを含む。医薬用量の好ましい範囲は、０．１マイクログラム～２０ｍｇ、１マイクログラム～１０ｍｇ、１０マイクログラム～５ｍｇ、０．５ｍｇ～２ｍｇ、０．５ｍｇ～１０ｍｇ又は１ｍｇ～５ｍｇ又は２～４ｍｇである。

【0132】

一実施形態において、本発明で使用される免疫原性組成物は、１マイクログラム～３００マイクログラム、例えば、約１００マイクログラムなど、５０マイクログラム～１５０マイクログラムの各ペプチドの用量で投与される。

【0133】

本発明の方法は、他の形態のＨＢＶ治療との組み合わせ療法の一部であってもよく、この他方の治療は、別個の治療として提供されてもよく、又は本発明の免疫原性組成物に加えられてもよい。本発明の方法は、ウイルス複製を阻害する薬物（例えば、エンテカビル、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩、テノホビルアラフェナミドを含むヌクレオシド又はヌクレオチド類似体）、及び／又は細胞へのＨＢＶの侵入を防ぐ薬物（例えば、ミルクルデックス）、及び／又はウイルスタンパク質産生を阻害する薬物（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９をベースとするもの）及び／又は免疫応答を調節する薬物（例えば、ＰＥＧ－インターフェロンα）、自然免疫応答を活性化させる薬物（例えば、αＧａｌＣｅｒ）及び／又はワクチンによって誘導される免疫応答を補助するＢ型肝炎免疫グロブリン（ＨＢＩＧ）及び／又はＨＢｓＡｇ特異的抗体を誘導するＨＢＶ予防ワクチン、及び／又は肝切除術又は肝移植及び腫瘍アブレーション療法（例えば、経内皮的塞栓術、高周波アブレーション）及び／又はＶＥＧＦＲ及び／又はキナーゼを阻害する薬物及び／又は免疫チェックポイント分子を阻害又は遮断する薬物（例えば、Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２Ａ受容体）、Ｂ７－Ｈ３／ＣＤ２７６、Ｂ７－Ｈ４／ＶＴＣＮ１、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ１５２、ＩＤＯ（インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子－３）、ＮＯＸ２（ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸ＮＡＤＰＨオキシダーゼアイソフォーム２）、ＰＤ－１（プログラム死１）、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３）、ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサップレッサー）、ＳＩＧＬＥＣ７／ＣＤ３２８及びＳＩＧＬＥＣ９／ＣＤ３２９、ＮＫＧ２Ａ及び／又は刺激チェックポイント分子を刺激する薬物（例えば、選ばれた腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＯＸ－４０／ＣＤ１３４及びＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連））、ＣＤ２８及びＩＣＯＳ／ＣＤ２７８）、免疫抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β及びＩＬ－６）及び／又はγＣサイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１又はＩＬ－２）、サリドマイド及び／又はその誘導体、更なる免疫調節薬（例えば、免疫抑制性Ｔｒｅｇ及び／又はＭＤＳＣを枯渇させることが公知の化合物））と組み合わされてもよい。））

【0134】

一実施形態において、本発明の１つ又は複数の免疫原性ペプチド又は組成物は、以下のステップ
（ｉ）ＨＢＶ感染患者に抗ウイルス（例えばＮＡ）治療を与えてウイルス負荷量を減少させるステップ、
（ｉｉ）ウイルス負荷量が大幅に（例えば、２、５又は１０分の１未満に）減少したところで、本発明の１つ又は複数の免疫原性ペプチド又は組成物を（好ましくは皮内又は皮下に）投与するステップ、及び
（ｉｉｉ）患者に初期Ｔ細胞応答が起こるのに十分な時間が経過したところで（例えば、免疫原性組成物の最終回投与から２～１６週間後、即ち２～１２週間後、例えば２～８週間後など）、任意選択の免疫モニタリング（例えば、末梢及び肝内Ｔ細胞の特徴付け、詳細には、例えばＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ分析又は抗原特異的Ｔ細胞増殖及び／又はＦＡＣＳベースの抗原特異的Ｔ細胞の表現型タイピングによる、本発明の組成物の１つ又は複数の免疫原性ペプチドの投与に対するワクチン特異的Ｔ細胞応答の決定。任意選択で、目的の非ワクチン抗原及び無関係の対照微生物抗原に対するＴ細胞応答の決定を伴う）を実施して、ワクチンによって好適なＴ細胞応答が誘発されたかどうかを評価するステップ（例えば、Ｒｉｖｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２８：６６８を参照）を含む治療レジメンにおいて、ヌクレオシド／ヌクレオチド類似体（ＮＡ）などの抗ウイルス性化合物と組み合わされてもよい。続いて、ウイルス抗原提示を増加させて、ひいてはインサイチューでＨＢＶ特異的Ｔ細胞を更にブーストするために、及び感染ヘパトサイトを免疫系に曝露して（即ち、ヘパトサイトＨＢＶタンパク質発現及び抗原提示を増加させることによる）、残る感染ヘパトサイトの除去を促進するために、抗ウイルス治療を中断又は中止する。Ｔ細胞エフェクター機能を更に向上させるため、任意選択で治療ワクチン接種を、抑制性骨髄細胞（ＭＤＳＣ）を標的化する薬物（治療ワクチン接種前に与えられる）、ｓｉＲＮＡ（治療ワクチン接種前）、Ｔ細胞代謝を修飾する薬物（治療ワクチン接種前又は接種中）又はチェックポイント遮断（治療ワクチン接種中又は接種後）と組み合わせることができる。好ましくはウイルス負荷量の十分なモニタリングを行うことにより、ワクチンの有効性を判定してフォローアップ（組み合わせ）療法を決定し、及び／又はＮＡを中止する。図８は、この実施形態に係る治療レジメンの非限定的な図解を提供する。この治療レジメンは、治療指針に従い抗ウイルス治療を受けることが推奨される患者に特に好適である。ワクチン接種前の抗ウイルス治療は、ウイルス負荷が持続的だが低量の感染患者には必ずしも必要でないこともある。かかる患者は、いつでも所与の時点で治療ワクチン接種を受けるのに適格であり、患者に初期Ｔ細胞応答が起こるのに十分な時間が経過したとき、任意選択の免疫モニタリングを実施して、ワクチンによって好適なＴ細胞応答が誘発されたかどうかを評価する。Ｔ細胞エフェクター機能を更に向上させるため、任意選択で治療ワクチン接種を、抑制性骨髄細胞（ＭＤＳＣ）を標的化する薬物（治療ワクチン接種前に与えられる）、ｓｉＲＮＡ（治療ワクチン接種前）、Ｔ細胞代謝を修飾する薬物（治療ワクチン接種前又は接種中）又はチェックポイント遮断（治療ワクチン接種中又は接種後）と組み合わせることができる。好ましくはウイルス負荷量の十分なモニタリングを行うことにより、ワクチン有効性を判定し、フォローアップ（組み合わせ）療法を決定する。

【0135】

更なる態様において、免疫原性ペプチド又は組成物は、エキソビボ免疫化レジメンで使用されてもよい。エキソビボ免疫化レジメンでは、本ペプチド又は組成物は、抗原を負荷した活性化樹状細胞（ＤＣ）など、抗原を負荷した抗原提示細胞（ＡＰＣ）の作成、及び続く抗原特異的Ｔ細胞（例えばＣＤ４及びＣＤ８陽性循環Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ））の拡大の刺激に使用されてもよい。かかる抗原を負荷したＡＰＣ又は拡大した抗原特異的Ｔ細胞は、続いてヒト対象に投与される。

【0136】

従って、更なる態様において、本発明は、抗原を負荷した活性化抗原提示細胞又は拡大した抗原特異的Ｔ細胞のエキソビボ刺激における使用のための、本発明に係るペプチド又は配列番号１～配列番号２６からなる群から選択される配列を含むペプチドに関する。

【0137】

同様に、別の実施形態において、本発明の方法は、抗原を負荷した活性化抗原提示細胞（ＡＰＣ）又は拡大した抗原特異的Ｔ細胞の集団によってヒト対象を治療することを含み、ここで前記細胞は、本明細書に記載される１つ又は複数の免疫原性組成物を使用してエキソビボで（即ち、体外で）作成されたものである。これは、例えば、患者のＰＢＭＣを培養して自家性の活性化ＡＰＣ（例えばＤＣ）を作成し、免疫原性組成物を負荷し（即ち、抗原を負荷したＡＰＣ）、続いてＰＢＭＣから得られたＴ細胞又は腫瘍浸潤リンパ球を刺激し、拡大することにより行われてもよい。或いは、抗原特異的Ｔ細胞は、免疫原性組成物を負荷した、ＨＬＡ対応健常ドナーのＰＢＭＣから培養した活性化ＡＰＣと共にインキュベートすることによって拡大してもよい。好適な技法については、当該技術分野において、例えば、ＭｃＣｏｒｍａｃｋ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ ２０：３８５；Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３３：１５４３；及びＳｔｅｖａｎｏｖｉｃ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８－０４３２に記載されている。

【0138】

更なる実施形態において、活性化抗原提示細胞（ＡＰＣ）又は拡大した抗原特異的Ｔ細胞の集団による治療が、本明細書に記載される免疫原性組成物によるヒト対象の直接の免疫化と組み合わされる。かかる組み合わせたプロトコルは、逐次投与及び／又は同時投与を含み得る。

【0139】

本明細書に引用される全ての特許及び参考文献は、本明細書によって全体として参照により援用される。

【実施例】

【0140】

実施例１：ＨＢＶ－Ｘ及びＨＢＶポリメラーゼのコンセンサス配列並びに機能ドメインとのアラインメント
ＨＢＶｄｂ Ｖ４２．０（Ｈａｙｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１３ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ ４１：５６６）から、ＨＢＶ－Ｘ（ｎ＝８１２７）及びＨＢＶポリメラーゼ（ｎ＝７４８９）についての全ての遺伝子型のＨＢＶ配列に基づき頻度表をダウンロードした。ギャップ（「－」によって指示する）の頻度が最も高い位置を削除した後、各位置で優勢なアミノ酸を決定した。優勢なアミノ酸を含む配列の割合を保存スコアとして計算した。

【0141】

ＨＢＶポリメラーゼについての全ての優勢なアミノ酸を組み合わせると、コンセンサス配列（配列番号２８）：

【化7】

に至る。

【0142】

ＨＢＶ－Ｘについての得られたコンセンサス配列は、（配列番号３０）：

【化8】

と決定した。

【0143】

加えて、単独又は組み合わせで以前にウイルス複製の喪失と関連付けられたアミノ酸をコンセンサス配列とアラインメントした（図１及び図２）。ＨＢＶ－Ｘと比較してＰｏｌの方が、機能的に関連性のあるアミノ酸が多かった。従って、Ｐｏｌについてウイルス持続性の５０％以上の喪失という追加的な閾値を導入して、最も不可欠なアミノ酸を選択した。表１及び表２に、機能ドメイン及びアミノ酸に関する参考文献を掲示する。

【0144】

【表1】

【0145】

【表2】

【0146】

実施例２：ＨＢＶ－ｘ及びＨＢＶポリメラーゼに由来する新規ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドの予想
本発明者らは、白人、アフリカ人又はアジア人によく見られるとともに、結合を確認するインビトロアッセイを随意に用いることのできる６つのＨＬＡスーパータイプ（即ち、スーパータイプＨＬＡ－Ａ＊０１；Ａ＊０２；Ａ＊０３；Ａ＊２４；Ｂ＊０７；Ｂ＊０８）のうちの少なくとも１つに結合できる新規ペプチドの同定に着手した。本発明者らは、初めに、スーパータイプを代表するＨＬＡタイプについて、確立されたインシリコ予測ツールＮｅｔＭＨＣｐａｎ（Ｎｉｅｌｓｅｎ ａｎｄ Ａｎｄｒｅａｔｔａ ２０１６，Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ ８：３３）を用いて８～１４アミノ酸にわたる結合体を予想することにより、予想される結合体の頻度分布を作成した（図１及び図２、灰色の棒図表）。アミノ酸毎の予想される全ての結合体の密度は、ＰｏｌとＨＢｘとの間で同様であった（平均値±ＳＤ Ｐｏｌ １６．３６±１２．６２、ＨＢｘ １５．６０±９．４９；マン・ホイットニー；ｐ＝０．５７）。続いて、関連性のあるエピトープに相当する可能性は９～１１ｍｅｒが最も高いため（Ｔｒｏｌｌｅ ｅｔ ａｌ．２０１６ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：１４８０）、９～１１アミノ酸にわたる予想結合体を、実施例１に記載される保存及び機能の概要を描く本発明者らのマップとアラインメントした（図１及び図２）。

【0147】

この予想から、合計でＨＢｘについて２５１個及びＰｏｌについて１６５５個の新規ＨＬＡ結合体候補が生じた。これらのうち、本発明者らは、紫外線誘発性ペプチド交換をベースとするインビトロＨＬＡ結合アッセイ（Ｔｏｅｂｅｓ ｅｔ ａｌ．２００６ Ｎａｔ Ｍｅｄ １２：２４６）で結合を検証するために最も有望なペプチドを選択した。実作業上の理由及び経済的理由から、本発明者らは、両方のタンパク質について各種ＨＬＡタイプにわたる９６個のユニークなペプチド配列の結合を試験することを目指した。本発明者らは、十分な記載がある２つのエピトープ（コア１８～２７及びＰｏｌ ５４９～５５７）を含めて、本発明者らの新規に同定された結合体の結合能をコンテクストに入れた。これらの９６個の結合体候補は、ペプチド長さ（９ｍｅｒが好ましい）、予想されるＨＬＡ結合強度、含まれるアミノ酸の保存及び機能的重要性に基づき選択した。９６個の結合体候補全てについて、全ての判定基準が常に満たされるとは限らなかった。ＨＬＡ－Ａ＊０１及びＨＬＡ－Ａ＊２４については、ＨＢｘに対する予想結合体が、保存及びペプチド長さに関する本発明者らの厳しい閾値を維持するには不満足な数しかなかった。従ってこれらの条件については、本発明者らはまた、幾らか保存性の低いペプチド又は８～１２アミノ酸にわたるペプチドも含めた（図３にアスタリスクで指示される、実施例３を参照のこと）。加えて、本発明者らは、文献にエピトープとして報告されることがほとんどない（１回又は２回）、従って確立されていないものと見なされる幾つかのペプチドを選択した（図３：実線の下線、実施例３を参照のこと）。ｃ１２３－１３０は、ＨＬＡ－Ｂ＊０８に関連してＨｅｐｉｔｏｐｅｓに登録されている唯一のＨＢＶ由来エピトープであったため、これにはｃ１２３－１３０を含めた。更に、この選択手順全体を通じて、幾つかのＨＬＡタイプに結合すると予想されたペプチドを優先し、合計１１３個の一組の結合体候補を試験するに至った。全体では、この選択手順により、インビトロ結合アッセイで検証するためのＨＢｘについて４５個及びＰｏｌについて６８個の結合体候補が得られた。これらの大多数は、機能的重要性が確立されている高度に保存された領域にマッピングされた。選択されたペプチド間での保存中央値は、ＨＢｘについて９３％を上回り、更にＰｏｌに至っては９６％を上回った。

【0148】

実施例３：ＨＢｘ及びポリメラーゼに由来する選択されたペプチドのインビトロ結合能
３．１ 方法
以前記載されているとおりのインビトロ結合アッセイにおいて（Ｋａｒｉｍｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．２０１８ Ｊ Ｖｉｒｏｌ ９２：ｅ０１８９１）、選択されたＨＬＡ結合体候補の合成ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅ ２．０ Ｉｎｃ）を使用した。端的には、指示されるペプチド（５０μＭ）の存在下又は非存在下で、条件付きペプチド－ＨＬＡ複合体（ｐＨＬＡ）（０．５３μＭ）を３６６ｎｍ紫外線ランプ（Ｃａｍａｇ）を使用して長波長紫外線に３０分間曝露することにより、ペプチド交換反応を実施した。続いて、交換反応混合物中のペプチド安定化ＨＬＡクラスＩ複合体のβ－２ミクログロブリンを検出するＨＬＡクラスＩ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、ペプチド交換効率を分析した。この目的で、ストレプトアビジン（２μｇ／ｍｌ）をポリスチレン製マイクロタイターウェル（Ｎｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ）に結合させた。洗浄及びブロッキング後、交換反応混合物中に存在するＨＬＡ複合体又は対照をマイクロタイタープレート上のストレプトアビジンによってそのビオチン化重鎖で捕捉した（３７℃で１時間のインキュベーション）。洗浄によって未結合の材料を除去した。続いて、ヒトβ－２－ミクログロブリンに対する西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート抗体（０．６μｇ／ｍｌ；Ｓａｎｑｕｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｂ．Ｖ．）を加えた（３７℃で１時間のインキュベーション）。未結合のＨＲＰコンジュゲートを洗浄によって除去した後、ＡＢＴＳ［２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）ジアンモニウム塩］（Ｓａｎｑｕｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｂ．Ｖ．）基質溶液をウェルに加えた。８分（室温でインキュベーション）経った後に、２％（ｗ／ｖ）シュウ酸二水和物停止液（Ｓａｎｑｕｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｂ．Ｖ．）を加えることによって反応を停止させて、Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＥＬＩＳＡリーダーにおいて４１４ｎｍで読み取った。各ペプチドにつき独立して２回交換した。このＨＬＡクラスＩ ＥＬＩＳＡでは、全ての交換混合物をデュプリケートで測定した。全てのペプチドの吸光度を、各対応するアレルに高親和性を有する既知のＨＬＡアレル特異的リガンドの吸光度（１００％に相当する；表３）で正規化した。陰性対照には、ＨＬＡアレル特異的非結合体及びレスキューペプチドの非存在下の条件付きＨＬＡクラスＩ複合体の紫外線照射を含めた。

【0149】

【表3】

【0150】

３．２ 結果
第３．１節に記載されるとおりのプレートベースのインビトロ結合アッセイにおいて、選択のペプチドの結合能を試験した。ペプチドは、その結合能が既知の高親和性ペプチドの２５％より高いとき、ＨＬＡ結合体に分類した。多くのＨＢＶ感染症患者がアジア人であり、この集団では、白人で保有率が高いスーパータイプ代表例ＨＬＡ－Ａ＊０３：０１と比較して、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１の保有率が高いため（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ ２０１３ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４３：１１０９）、ＨＬＡ－Ａ＊１１：０１及びＨＬＡ－Ａ＊０３：０１は両方とも、ＨＬＡ－Ａ＊０３スーパータイプのメンバーとして試験した。

【0151】

本発明者らは、各種ＨＬＡスーパータイプにわたるＨＢｘについて１３個及びＰｏｌについて３３個の結合体を同定した（図３の灰色のバー）。これには、以前に別のＨＬＡタイプのコンテクストで記載されている新規結合体が含まれた（図３Ａ～図３Ｇの破線の下線及び図３Ｈ）。注目すべきことに、試験した各ＨＬＡスーパータイプについて、ＨＢｘ由来及びＰｏｌ由来の両方の結合体が同定された。ＨＬＡ－Ａ＊０２については、十分に確立されたエピトープｃ１８－２７及びｐ５４９－５５７が陽性対照よりもむしろ良いスコアであった（図３Ｂ）。対照的に、報告されることがほとんどないエピトープ（図３：実線の下線）の結合は、必ずしも確認できるとは限らなかった。

【0152】

概して、予想された結合体のうち閾値を上回る結合能を有したのは事実上３分の１に過ぎなかったため、この結合予想はかなり悪いことが分かった。強く結合すると予想された（インシリコ予想で低い順位スコアの）多くのペプチドが、インビトロアッセイでは閾値を上回る結合を示さなかった（図４）。

【0153】

表４は、各ＨＬＡタイプについて試験したペプチドの予想スコア（順位）をアッセイ結果（結合％）と比較する。

【0154】

【表4】

【0155】

実施例４：選択されたＨＬＡ結合ペプチドの免疫原性
４．１ 方法
インビトロＨＬＡ結合アッセイでスコアが２５％より高い結合のペプチドについて、免疫原性を評価した。簡潔に言えば、以前にＨＢＶが解消したことがある９ドナーのバフィーコートから、ＰＢＭＣをＦｉｃｏｌｌ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）密度遠心法によって分離した。バフィーコートは、地域の血液バンクによって、対応する２桁のＨＬＡタイプと共に提供された。９ドナーのうち７ドナーで、グローバルスクリーニングアレイ（ＧＳＡ）（Ｉｌｌｕｍｉｎａ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｆａｃｉｌｉｔｙ Ｅｒａｓｍｕｓ ＭＣ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ）を用いて４桁のＨＬＡタイピングを実施した（表５）。

【0156】

【表5】

【0157】

全てのドナーが、書面によるインフォームドコンセントを提出した。１０μｇ／ｍｌ／ペプチドのＨＬＡの一致に基づく最大５個の目的のペプチドのペプチドプールの存在下に、ＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ）＋２％ヒト血清（Ｓａｎｑｕｉｎ）＋５０ＩＵ／ｍｌ ｈＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）でＰＢＭＣを培養した。１４日後、２００，０００細胞を目的のペプチドによって１０μｇ／ｍｌ／ペプチドとして３７℃で４８時間、トリプリケートで再刺激した。続いて再刺激の上清をｈＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）において製造者の指示に従い使用した。Ｉｎｆｉｎｉｔｅ ２００Ｐｒｏ ＥＬＩＳＡリーダーを使用して、プレートを４５０ｎｍ波長で読み取った。製造者によって提供されるｈＩＦＮγ標準物質を使用して別個のＥＬＩＳＡで定量化したｃ１８－２７による以前に成功した再刺激に由来する上清を使用したバックグラウンド減算後のＯＤ値（トリプリケートの平均値）から、ｈＩＦＮγレベルを計算した。ＯＤ平均値が少なくともＤＭＳＯ対照の平均値＋２×ＳＤであるＨＬＡ結合体を定量化した。

【0158】

４．２ 結果
続いて、ＨＢｘ由来及びＰｏｌ由来結合体の免疫原性を確認できるかどうかを試験した。以前にＨＢＶ感染が解消したことがある供血ドナーからのＰＢＭＣをペプチドプールの存在下で２週間拡大し、続いて第４．１節に記載されるとおり単回ペプチド再刺激及びＩＦＮγ ＥＬＩＳＡを行った。予想どおり、十分に確立されたエピトープｃ１８－２７及びｐ５４９－５５７に応答したＩＦＮγ産生が検出された（図５Ｂ）。ＩＦＮγ産生量には極めて大きいばらつきがあり、概して一部のドナーの応答が他と比べて良好であるように見えた（図５）。全体として、本発明者らは、５個の完全に新規のＨＢｘ由来ペプチド及び１７個の新規Ｐｏｌ由来ペプチドに対する応答を観察した。加えて、本発明者らは、記載されたことがほとんどない１個のＨＢｘ由来エピトープ及び３個のＰｏｌ由来エピトープに応答したＩＦＮγ産生を観察したが、これらの応答はいずれも、あまり高くなかった（図５；実線の下線）。重要なことに、４個の更なるＰｏｌ由来エピトープが、それらのエピトープが以前に記載されたＨＬＡタイプに関して陰性のドナーにおいて応答を引き出しており（図５；破線の下線及び表３）、これらのペプチド配列が、複数のＨＬＡタイプのエピトープであることが示唆される。６個のＰｏｌ由来及び７個のＨＢｘ由来ＨＬＡ結合体に対しては、試験したドナーのいずれにおいても計測可能な応答はなかったが（図５；灰色の囲み）、これは、ドナー数の少なさに起因する可能性があった。従って、将来、更なるドナーを試験すれば、これらのＨＬＡ結合体の免疫原性が確認される可能性もある。

【0159】

実施例５：
５．１ 方法
特許請求されるペプチド断片がヒトのセッティングで免疫原性かどうかを評価するため、エピトープペプチド配列の１つ以上を含有する７つのＳＬＰを設計し、製造し、過去にＨＢＶ感染を除去している１５例の異なるドナーからのＰＢＭＣ試料を使用して試験した。

【0160】

７つのＳＬＰの設計は、１）ＨＢＶポリメラーゼ遺伝子型配列の天然に存在するＨＢＶ－Ｘ、２）一般的な合成原理、中でも特に本明細書において上記に記載される原理に基づいた、且つ大規模な現実のペプチド合成収量の集合で訓練されるインシリコ機械学習アルゴリズムを用いて予想される製造適合性が高い、及び３）エピトープペプチド配列（表６を参照のこと）の１つ以上を含んでいることに基づいた。ＳＬＰの好ましい長さは２５ＡＡに設定した。必要と見なされる場合、確立されたペプチド合成経験に基づいた予想される製造適合性の悪さを考慮して、対応するＨＢＶ－Ｘ又はＨＢＶポリメラーゼ配列に沿った隣接領域を含めることにより、製造適合性を高めた。長さ２５ＡＡのＳＬＰが６個得られ、２６ＡＡのＳＬＰが１個得られる。

【0161】

確立された方法に従い、個々のＳＬＰ（表６）を固相Ｆｍｏｃ／^ｔＢｕ化学を用いて合成し、切断カクテルで処理し、ＨＰＬＣによって精製し、ＵＰＬＣ－ＭＳによって分析した。固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）の試薬及び溶媒は全て、Ｍｅｒｃｋ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｔｕ－Ａｌｌ、Ｂａｃｈｅｍ及びＢｉｏｓｏｌｖｅ、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍから購入し、受領時のまま使用した。ペプチド合成はＴｅｔｒａｓペプチドシンセサイザー（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ）で実施した。樹脂を乾燥させて、冷却し、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）ベースの切断カクテルで処理した。樹脂のろ過後、反応混合物を室温で振盪した。続いて、ペプチドをエーテルベースの溶液中に沈殿させて、遠心し、上清を除去した。固体の沈殿物をエーテルベースの溶液に再懸濁し、遠心し、上清を除去した。得られたペレットをアセトニトリル（ＡＣＮ）及びＴＦＡ含有又は酢酸含有のＨ_２Ｏベースの混合物中に溶解し、一晩凍結乾燥した。Ｈ_２Ｏ中ＴＦＡ及びＡＣＮ中ＴＦＡ又はＨ_２Ｏ中ＴＦＡ及びｔｅｒｔ－ブタノール含有ＡＣＮ中ＴＦＡの溶媒系に基づくＨＰＬＣによる精製後、選択された精製画分をプールし、一晩凍結乾燥した。高純度ペプチドのアイデンティティ及び純度をＵＰＬＣ－ＭＳにより決定した。使用前、ＳＬＰを２ｍＭの濃度に達するように１０％ＤＭＳＯ及び９０％Ｈ_２Ｏ中に再構成した。

【0162】

ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを用いて、ＳＬＰが２４時間の刺激後にＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生を誘導する能力を試験した。手短に言えば、以前にＨＢＶ感染を除去している１５例のＨＬＡタイプ決定済みドナーのバフィーコートから（Ｓａｎｑｕｉｎ血液バンク）、ＰＢＭＣを密度勾配遠心法によって分離した。１０ｕＭ ＳＬＰ又は等価なＤＭＳＯ対照の存在下に、ＩＦＮγ捕捉抗体（５ｕｇ／ｍｌ、Ｍａｂ－１－Ｄ１Ｋ、Ｍａｂｔｅｃｈ）をコートしたＰＶＤＦプレート（ＭＳＩＰＳ４５１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でＰＢＭＣを培養した。細胞を４レプリケートウェルに、各ウェルＩＭＤＭ＋８％ヒト血清中２００，０００細胞の密度で播種した。２０～２４時間インキュベートした後、ＩＦＮγ検出抗体（０．３ｕｇ／ｍｌ、Ｍａｂ－７－Ｂ６－１－ビオチン、Ｍａｂｔｅｃｈ）を加え、続いてストレプトアビジン－ＡＬＰ（１ｕｇ／ｍｌ、Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えた。ＢＣＩＰ／ＮＢＴ－ｐｌｕｓ基質（１００ｕｌ／ウェル、Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えることによりスポットの発色を実施し、ＣＴＬ Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ Ｓ６ Ｕｌｔｉｍａｔｅアナライザー（Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ）でスポットをカウントした。４レプリケートウェルからのスポット形成単位（ＳＦＵ）の数を足し合わせ、４レプリケートＤＭＳＯ対照ウェルの累積スポット数を減算した。

【0163】

５．２ 結果
ＳＬＰがＩＦＮγ産生応答を誘導する能力を試験するため、１５例のＨＢＶ解消者（ｒｅｖｏｌｖｅｒ）からのＰＢＭＣでＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを実施した。これらのドナーは過去にＨＢＶ感染が解消したことがあり、従ってＨＢＶ特異的Ｔ細胞応答を有するものと思われる。ポリメラーゼ及びＨＢｘの両方に由来する全てのＳＬＰが、ＩＦＮγ応答の誘導能を有した（図６）。

【0164】

【表6】

【0165】

実施例６．新規ＳＬＰはインビトロでＨＢＶ解消者及び慢性ＨＢＶ患者からの白血球の機能性ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ Ｔ細胞応答をブーストすることができる
６．１ 方法
新規ＳＬＰの機能ブースター能力を拡大実験で試験した。端的には、以前にＨＢＶを除去した健常ドナーに由来するバフィーコート（ｎ＝６）又はＥｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ Ｒｏｔｔｅｒｄａｍの外来患者診療所に来院した慢性ＨＢＶ患者の血液（ｎ＝５）のいずれかからＰＢＭＣを分離した。ＳＬＰプール（３ｕＭの各ＳＬＰ）の存在下に、ＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ）＋２％ヒト血清（Ｓａｎｑｕｉｎ）でＰＢＭＣを１４日間培養した。２日後、培養物に５０ＩＵ／ｍｌ ＩＬ－２を加え、これを１４日目まで週３回繰り返した。１４日後、各ウェル２００，０００細胞を個々のＳＬＰ（１０ｕＭの各ＳＬＰ）又は媒体対照としてのＤＭＳＯによって４レプリケートで再刺激した。２２時間後、上清を回収してサイトカイン分析にかけ、細胞をフローサイトメトリー分析に使用した。細胞をプールし、以下のパネル；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのＣＤ３（ＳＫ７）及びＣＤ８（ＲＰＡ－Ｔ８）、ＢＤからのＣＤ４（ＳＫ３）、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄからのＣＤ６９（ＦＮ５０）及びＣＤ１０７ａ（Ｈ４Ａ３）及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤグリーンによって暗所下４℃で３０分間染色し、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ機器で捕捉し、ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０（ＢＤ）を用いて分析した。対応するマーカーについてのＤＭＳＯ対照で観察された発現率を減算することにより、マーカー発現率を決定した。培養上清中の分泌されたサイトカインをＬｕｍｉｎｅｘ技術を用いて決定した。サイトカインはＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒのカスタムＰｒｏｃａｒｔａプレートで分析し、ＭＡＧＰＩＸ機器（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して分析した。標準物質を使用して、分泌されたサイトカインの量を計算した。計算値から平均値（ＤＭＳＯ及び無関係のペプチド）＋２×ＳＤ（ＤＭＳＯ及び無関係のペプチド）を減算することにより、バックグラウンド減算を実施した。

【0166】

６．２ 結果
ワクチン接種を模倣するインビトロ拡大実験が示すところによれば、４つの新規ＳＬＰ（ＳＬＰ１、ＳＬＰ２、ＳＬＰ４及びＳＬＰ６）はいずれも、インビトロでＨＢＶ解消者（ｒＨＢＶ１－６）及び慢性ＨＢＶ患者（ｃＨＢＶ１－５）からの白血球において、これらのＳＬＰの各々が少なくとも１例のドナーで応答を惹起したとおり、機能性ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ Ｔ細胞応答をブーストすることが可能である。両方の細胞型でＳＬＰに応答してＣＤ６９の存在が増加したことにより、Ｔ細胞活性化が実証された（図７）。細胞傷害性薬剤が新しく分泌されたことを指示する、ＣＤ８＋ Ｔ細胞がＳＬＰに応答してＣＤ１０７ａを提示したという事実により、及びＴ細胞エフェクター機能に必須のＩ型Ｔ細胞サイトカインＩＦＮγ及びＴＮＦαの存在により、このドナーＴ細胞の拡大及び活性化がまた機能性Ｔ細胞も生み出したことが実証された。

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図2-4】

【図2-5】

【図2-6】

【図2-7】

【図2-8】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

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【国際調査報告】