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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-02-13
(54)【発明の名称】特発性肺線維症の処置のためのＥＰＡＣ１阻害剤
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230206BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230206BHJP
A61K 31/4365 20060101ALI20230206BHJP
A61K 31/44 20060101ALI20230206BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20230206BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P11/00
A61K31/4365
A61K31/44
A61K31/496
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022535070
(86)(22)【出願日】2020-12-11
(85)【翻訳文提出日】2022-08-04
(86)【国際出願番号】 EP2020085730
(87)【国際公開番号】W WO2021116389
(87)【国際公開日】2021-06-17
(31)【優先権主張番号】19306645.3
(32)【優先日】2019-12-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】591100596
【氏名又は名称】アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル
(71)【出願人】
【識別番号】510139564
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ ポール サバティエ トゥールーズ トロワ
(71)【出願人】
【識別番号】509059941
【氏名又は名称】アイカーン・スクール・オブ・メディシン・アット・マウント・サイナイ
【氏名又は名称原語表記】ＩＣＡＨＮ ＳＣＨＯＯＬ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＴ ＭＯＵＮＴ ＳＩＮＡＩ
【住所又は居所原語表記】Ｏｎｅ Ｇｕｓｔａｖｅ Ｌ．Ｌｅｖｙ Ｐｌａｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ １００２９ Ｕ．Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】弁理士法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ビザリア，マリク
(72)【発明者】
【氏名】ルズーアオ，フランク
(72)【発明者】
【氏名】ハドリ，ラホアリア
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZC411
4C084ZC412
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC17
4C086BC50
4C086CB26
4C086GA07
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA59
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、特発性肺線維症の処置に関する。今日、ＩＰＦに治療法はない。本発明者らは、ＥＰＡＣ１阻害剤、特にＣＥ３Ｆ４及びＡＭ－００１が、肺線維症の患者を処置するための有望な治療方策であることを示した。よって本発明は、特発性肺線維症の処置及び／又は予防に使用するためのＥＰＡＣ１阻害剤に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
特発性肺線維症の処置、予防及び／又は回復、好ましくは処置に使用するためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項2】
請求項１記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤であって、式（Ｉ）：【化21】
［式中、
－ Ｒ’９は、Ｈ又は下記式：
【化22】
で示される基であり、そして下記式：
【化23】
で示される基は、テトラヒドロキノリンの窒素原子への結合であり；
－ Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’４、及びＲ’８は、Ｈ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル、（Ｃ６－Ｃ１０）アリール、（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－（Ｃ６－Ｃ１０）アリール及び（Ｃ３－Ｃ１０）ヘテロアリールからなる群より独立して選択され、前記アリール及びヘテロアリール基は、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、（Ｃ１－Ｃ６）アルキル、及びハロゲンから選択される少なくとも１個の置換基により置換されていてもよく；
－ Ｒ’５は、ハロゲン原子であり；
－ Ｒ’６及びＲ’７は、Ｈ及びハロゲン原子からなる群より独立して選択される］を有する前記ＥＰＡＣ１阻害剤、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマー［ただし、
式（Ｉ）の化合物は、下記式：
【化24】
で示される化合物とは異なる］。
【請求項3】
式（Ｉ）において、Ｒ’９がＨである、請求項２記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項4】
請求項１又は２記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤であって、下記式（I-1）：【化25】
を有する前記ＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項5】
請求項１記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤であって、式（II）：【化26】
［式中、
Ｒ１は、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する］を有する前記ＥＰＡＣ１阻害剤、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマー。
【請求項6】
式（II）において、Ｒ３が、－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されている、請求項５記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項7】
式（II）において、Ｒ１が、－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アリール及びヘテロアリール基は、－ＮＲ７Ｒ８、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されており；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される、請求項５又は６記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項8】
式（II）において、Ｒ２が、－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されている、請求項５～７のいずれか一項記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項9】
式（II）において、Ｒ３が、１個以上の置換基（好ましくは（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される）によって場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールである、請求項５～８のいずれか一項記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項10】
式（II）において、Ｒ４がＨであるか、又はＲ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ５－Ｃ６）シクロアルキル基を形成する、請求項５～９のいずれか一項記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項11】
式（II）において、Ｒ１がフェニル基であり、かつ／又はＲ２がチエニル基であり、前記フェニル及びチエニル基は場合により置換されている、請求項４～９のいずれか一項記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項12】
下記式（III）：【化27】
［式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、Ｈ、－ＯＨ、ハロゲン原子、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ、及び－ＮＲ５Ｒ６からなる群より選択され；
ここで、Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＨ２及び－Ｃ（Ｏ）ＯＨからなる群より選択され；そして
Ｒ３は、請求項５と同義である］を特徴とする、請求項５記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項13】
下記式：【化28】
のうちの１つを有する、請求項５記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項14】
下記式：【化29】
を有する、請求項５記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項15】
ピルフェニドン又はニンテダニブと併用される、請求項１～１４のいずれか一項記載の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤。
【請求項16】
特発性肺線維症の予防及び／又は処置及び／又は回復の方法であって、それを必要とする患者への薬学的に許容し得る量のＥＰＡＣ１阻害剤の投与を含む方法であって、前記ＥＰＡＣ１阻害剤が、ピルフェニドン又はニンテダニブと場合により併用される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、特発性肺線維症の処置のためのＥＰＡＣ１阻害剤に関する。
【0002】
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与されたHL133554の下で米国政府の支援を受けて行われた。米国政府は、本発明において一定の権利を有している。
【背景技術】
【0003】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、病因不明の慢性及び進行性の線維化性間質性肺炎を特徴とする稀な疾患であり、有効な治療法の用意がない。今日まで、実験的及び臨床的研究における広範な研究にもかかわらず、ＩＰＦは依然として罹患率及び死亡率の増加原因であり、診断からの平均生存期間は３年以下である。残念ながら、ＩＰＦには治療法がない。
【0004】
したがって、ＩＰＦの患者を処置するための新しい治療標的及び方策を特定することが緊急に必要である。
【0005】
本発明の目的は、新しい治療標的を提供することであり、また、この進行性の致命的な肺疾患を阻止し、そして回復させ得る低分子化合物を使用することによって、安全かつ効率的な方策を提供することである。
【0006】
よって、本発明の目的は、ＩＰＦを処置するための低分子を提供することである。
【0007】
したがって、本発明は、特発性肺線維症の処置、予防及び／又は回復、好ましくは処置に使用するためのＥＰＡＣ１阻害剤に関する。
【0008】
本発明は、ｃＡＭＰによって調節される交換タンパク質１（Ｅｐａｃ１）の発現が、対照と比較して、ＩＰＦ患者及びブレオマイシン投与マウスからの肺組織において有意に増加したという事実に基づいている。
【0009】
Ｅｐａｃ１の薬理学的阻害は、増殖を有意に減少させ、幾つかの線維化マーカーの発現を阻止する。注目すべきことに、Ｅｐａｃ１の薬理学的阻害はまた、ブレオマイシン誘発ＰＦマウスモデルを使用したインビボの肺線維化を有意に減少させることも分かった。
【0010】
好ましくは、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、ＥＰＡＣ１選択的阻害剤から選択される。
【0011】
１つの実施態様において、ＥＰＡＣ１選択的阻害剤は、ＥＰＡＣ１アイソフォームに対して阻害作用を示す化合物である。更に特定すると、これらは一般にＥＰＡＣ１に対して阻害作用を示し、そしてＥＰＡＣ２アイソフォームに対しては多少の阻害作用を示すか又は全く示さない。
【0012】
「選択的ＥＰＡＣ１阻害剤」によって、他のアイソフォームであるＥＰＡＣ２に優先して特定のＥＰＡＣ１アイソフォームに作用するＥＰＡＣ１阻害剤の能力が理解され得る。ＥＰＡＣ１選択的阻害剤は、これら２つのアイソフォームを識別する能力を有する可能性があり、そのため本質的にＥＰＡＣ１アイソフォームに作用する。
【0013】
「阻害剤」という用語は、「アンタゴニスト」として理解されるべきである。
【0014】
ある実施態様によれば、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、式（Ｉ）：
【0015】
【化1】
［式中、
－ Ｒ’９は、Ｈ又は下記式：
【0016】
【化2】
で示される基であり、そして下記式：
【0017】
【化3】
で示される基は、テトラヒドロキノリンの窒素原子への結合であり；
－ Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’４、及びＲ’８は、Ｈ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル、（Ｃ６－Ｃ１０）アリール、（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－（Ｃ６－Ｃ１０）アリール及び（Ｃ３－Ｃ１０）ヘテロアリールからなる群より独立して選択され、前記アリール及びヘテロアリール基は、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、（Ｃ１－Ｃ６）アルキル、及びハロゲンから選択される少なくとも１個の置換基により置換されていてもよく；
－ Ｒ’５は、ハロゲン原子であり；
－ Ｒ’６及びＲ’７は、Ｈ及びハロゲン原子からなる群より独立して選択される］を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーである。
【0018】
ある実施態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、下記式：
【0019】
【化4】
で示される化合物とは異なる。
【0020】
本発明に関連して、本明細書に使用されるとき「処置すること」又は「処置」という用語は、そのような用語が適用される障害若しくは状態、又はそのような障害若しくは状態の１つ以上の症状の進行を回復、緩和、阻害することを意味する。
【0021】
本発明に関連して、本明細書に使用されるとき「予防すること」又は「予防」という用語は、そのような用語が適用される障害若しくは状態、又はそのような障害若しくは状態の１つ以上の症状の出現又は進行を回避することを意味する。
【0022】
したがって、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤の第１のファミリーは、テトラヒドロキノリン誘導体からなる。
【0023】
本発明によれば、「（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル」という用語は、鎖中に１～１０個の炭素原子を有する直鎖であっても分岐していてもよい飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキル基は、鎖中に１～４個の炭素原子を有しており、好ましいアルキル基は、特にメチル又はエチル基である。「分岐」とは、メチル、エチル又はプロピルなどの１個以上の低級アルキル基が、直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。
【0024】
「（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－」という用語は、鎖中に１～６個の炭素原子を有する直鎖であっても分岐していてもよい飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素二価ラジカルを意味する。例えば、好ましい（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－（Ｃ６－Ｃ１０）アリールは、ベンジル基である。
【0025】
「（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル」とは、３～１０個の炭素原子を有する環状の飽和炭化水素基、特にシクロプロピル又はシクロヘキシル基を意味する。
【0026】
「（Ｃ６－Ｃ１０）アリール」という用語は、芳香族の単環式、二環式、又は三環式炭化水素環系であって、置換可能な任意の環原子が置換基により置換されていてもよい環系のことをいう。アリール部分の例には、フェニルが含まれるが、これに限定されない。
【0027】
「（Ｃ３－Ｃ１０）ヘテロアリール」という用語は、芳香族の単環式、二環式、又は三環式炭化水素環系であって、置換可能な任意の環原子が置換基により置換されていてもよく、そして１個以上の炭素原子が、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子などの１個以上のヘテロ原子；例えば、１個若しくは２個の窒素原子、１個若しくは２個の酸素原子、１個若しくは２個の硫黄原子、又は１個の窒素原子と１個の酸素原子などの異なるヘテロ原子の組合せによって置換されている環系のことをいう。好ましいヘテロアリール基は、ピリジル、ピリミジル及びオキサジル基である。
【0028】
「ハロゲン」という用語は、周期表の第１７族の原子のことをいい、特に、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素原子を、更に好ましくは、フッ素、塩素、及び臭素原子を包含する。
【0029】
「テトラヒドロキノリン」によって、次の基：
【0030】
【化5】
が理解される。
【0031】
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有し得る。非対称に置換された原子を含有する本発明の化合物は、光学活性体又はラセミ体として単離することができる。ラセミ体の分割によるか、又は光学活性出発物質からの合成によるなど、光学活性体を調製する方法は当技術分野において周知である。立体化学又は異性体が具体的に示されていない限り、化合物の全てのキラル型、ジアステレオマー、ラセミ体及び全ての幾何異性体が想定されている。
【0032】
ある実施態様において、上記で定義されたＲ’２～Ｒ’９を有する式（Ｉ）において（＊）で参照される炭素原子は、（Ｒ）であっても（Ｓ）であってもよい：
【0033】
【化6】
【0034】
ある実施態様において、それは（Ｒ）である。特定の実施態様において、式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー（Ｒ）が好ましく、そして更に特定すると以下のエナンチオマーが好ましい：
【0035】
【化7】
【0036】
別の実施態様において、式（Ｉ）の化合物の（Ｒ）－エナンチオマーは、式（Ｉ）の化合物のラセミ体及び（Ｓ）－エナンチオマーよりも強力なｃＡＭＰアンタゴニストである。１つの実施態様において、式（Ｉ）の化合物の（Ｒ）－エナンチオマーは、ＥＰＡＣ１の選択的阻害剤である。前記（Ｒ）－エナンチオマーは、（Ｓ）－エナンチオマーよりも１０倍高い効率でＥＰＡＣ１のＧＥＦ活性を阻害し得る。
【0037】
「薬学的に許容し得る塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的にも他の面でも不適切でない塩のことをいう。薬学的に許容し得る酸付加塩は、無機酸及び有機酸から調製することができ、一方、薬学的に許容し得る塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基から調製することができる。薬学的に許容し得る塩の総説については、Bergeら（(1977) J. Pharm. Sd, vol. 66, 1）を参照のこと。例えば、塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来するもの、更には酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、フマル酸、メタンスルホン酸、及びトルエンスルホン酸などの有機酸から調製される塩が含まれる。
【0038】
特定の実施態様において、本発明の化合物は、下記式（I-1）：
【0039】
【化8】
を有するが、これは、式（Ｉ）に含まれ、Ｒ’９は、下記式：
【0040】
【化9】
で示される。
【0041】
特定の実施態様において、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、下記式（I-1）：
【0042】
【化10】
［式中、
－ Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’４及びＲ’８は、Ｈ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル、（Ｃ６－Ｃ１０）アリール、（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－（Ｃ６－Ｃ１０）アリール及び（Ｃ３－Ｃ１０）ヘテロアリールからなる群より独立して選択され、前記アリール及びヘテロアリール基は、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、（Ｃ１－Ｃ６）アルキル及びハロゲンから選択される少なくとも１個の置換基により置換されていてもよく；
－ Ｒ’５は、ハロゲン原子であり；
－ Ｒ’６及びＲ’７は、Ｈ及びハロゲン原子からなる群より独立して選択される］又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーを有する。
【0043】
特定の実施態様において、上記と同義の式（I-1）において、Ｒ’１はＨである。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルである。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルである。好ましくは、Ｒ’２は（Ｃ１－Ｃ４）アルキルである。
更に好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２はメチル基である。別の実施態様において、Ｒ’２はＨである。好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は、Ｈ又はメチル基である。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルである。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルである。好ましくは、Ｒ’２は（Ｃ１－Ｃ４）アルキルである。
更に好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２はメチル基である。別の実施態様において、Ｒ’２はＨである。好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’２は、Ｈ又はメチル基である。
【0044】
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’３はＨである。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’４はＨである。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’８はＨである。
１つの実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’３、Ｒ’４及びＲ’８はＨである。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’４はＨである。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’８はＨである。
１つの実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’３、Ｒ’４及びＲ’８はＨである。
【0045】
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、（Ｃ３－Ｃ１０）ヘテロアリール基は、ピリジル、ピリミジル及びオキサジル基からなる群より選択される。
【0046】
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、（Ｃ３－Ｃ１０）アリール基はフェニル基である。
【0047】
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、（Ｃ１－Ｃ６）アルキレン－（Ｃ６－Ｃ１０）アリールはベンジル基である。
【0048】
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’５は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。好ましくは、Ｒ’５はＢｒである。
【0049】
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６はＦである。別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６はＨである。好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６は、Ｈ又はＦである。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。
別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６はＦである。別の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６はＨである。好ましくは、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’６は、Ｈ又はＦである。
【0050】
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’７は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’７は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。別の実施態様において、Ｒ’７はＢｒである。別の実施態様において、Ｒ’７はＨである。好ましくは、Ｒ’７は、Ｈ又はＢｒである。
特定の実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’７は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群より選択される。別の実施態様において、Ｒ’７はＢｒである。別の実施態様において、Ｒ’７はＨである。好ましくは、Ｒ’７は、Ｈ又はＢｒである。
【0051】
好ましい実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’１はＨであり、そしてＲ’５はＢｒである。
別の好ましい実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’５、Ｒ’６及びＲ’７のうち少なくとも２個はハロゲンである。
別の好ましい実施態様において、式（Ｉ）又は（I-1）において、Ｒ’５、Ｒ’６及びＲ’７のうち少なくとも２個はハロゲンである。
【0052】
上記の特定の実施態様は、互いに組合せることができる。
【0053】
上記と同義の使用のための幾つかの具体的なＥＰＡＣ１阻害剤は、下記式：
【0054】
【化11】
（本明細書においてＣＥ３Ｆ４と命名される）
【0055】
【化12】
を有する。
【0056】
更に特定すると、上記と同義の使用のための幾つかの具体的な化合物は、下記式：
【0057】
【化13】
を有する。
【0058】
１つの実施態様において、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、下記式：
を有する化合物である。
【化14】
を有する化合物である。
【0059】
他のＥＰＡＣ１阻害剤としては、下記式：
【0060】
【化15】
で示されるテトラヒドロキノリン誘導体などが挙げられ得る。
【0061】
式（Ｉ）の化合物は、P. Bouyssou et al., J. Heterocyclic Chem., 29, 895, 1992の以前に公開された方法によって合成することができる。式（Ｉ）の化合物の調製方法は周知である。
【0062】
ある実施態様によれば、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、式（II）：
【0063】
【化16】
［式中、
Ｒ１は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する］を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーである。
【0064】
したがって、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤の第２のファミリーは、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体からなる。
【0065】
式（II）において、「（Ｃ１－Ｃ２０）アルキル」又は「（Ｃ２－Ｃ２０）アルキル」という用語は、鎖中にそれぞれ１～２０個の炭素原子又は２～２０個の炭素原子を有する、直鎖であっても分岐していてもよい飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキル基は、鎖中に１～５個の炭素原子を有しており、好ましいアルキル基は、特にメチル又はエチル基である。「分岐」とは、メチル、エチル又はプロピルなどの１個以上の低級アルキル基が、直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。アルキル基は置換されていてもよい。
【0066】
式（II）において、「（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル」とは、３～１０個の炭素原子を有する環状の飽和炭化水素基であって、置換可能な任意の炭素原子が置換基により置換されていてもよい基を意味する。特に、シクロアルキル基は、シクロプロピル又はシクロヘキシル基である。
【0067】
「３～１０員ヘテロシクロアルキル」とは、３～１０個の炭素原子を有する環状の飽和炭化水素基であって、１個以上の炭素原子が、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子などの１個以上のヘテロ原子；例えば、１個若しくは２個の窒素原子、１個若しくは２個の酸素原子、１個若しくは２個の硫黄原子、又は１個の窒素原子と１個の酸素原子などの異なるヘテロ原子の組合せによって置換されている基を意味する。置換可能な任意の環原子は、置換基により置換されていてもよい。好ましい３～１０員ヘテロシクロアルキルは、フラン、チオフェン、ピロール若しくはピラゾールなどの窒素環又はフルオロフェニル環である。
【0068】
式（II）において、「（Ｃ６－Ｃ１０）アリール」という用語は、芳香族の単環式、二環式、又は三環式炭化水素環系であって、置換可能な任意の環原子が置換基により置換されていてもよい環系のことをいう。アリール部分の例には、フェニルが含まれるが、これに限定されない。
【0069】
「５～１０員ヘテロアリール」という用語は、芳香族の単環式、二環式、又は三環式炭化水素環系であって、置換可能な任意の環原子が置換基により置換されていてもよく、そして１個以上の炭素原子が、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子などの１個以上のヘテロ原子；例えば、１個若しくは２個の窒素原子、１個若しくは２個の酸素原子、１個若しくは２個の硫黄原子、又は１個の窒素原子と１個の酸素原子などの異なるヘテロ原子の組合せによって置換されている環系のことをいう。好ましいヘテロアリール基は、チエニル、ピリジル、ピリミジル及びオキサジル基であり、更に好ましくはチエニル基である。
【0070】
「ハロゲン」という用語は、周期表の第１７族の原子のことをいい、特に、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素原子を、更に好ましくは、フッ素、塩素及び臭素原子、例えば、フッ素を包含する。
【0071】
「場合により置換されている」とは、本発明の化合物のアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基が、－ＯＨ、ハロゲン原子、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、－（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ、及び－ＮＲ７Ｒ８基からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されていることを意味し得、ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。
【0072】
好ましくは、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、１個以上のハロゲン原子によって、更に好ましくはフッ素原子によって場合により置換されている。
【0073】
「チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体」という用語は、以下の化学構造：
【0074】
【化17】
から誘導される化合物のことをいう。
【0075】
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有し得る。非対称に置換された原子を含有する本発明の化合物は、光学活性体又はラセミ体として単離することができる。ラセミ体の分割によるか、又は光学活性出発物質からの合成によるなど、光学活性体を調製する方法は当技術分野において周知である。立体化学又は異性体が具体的に示されていない限り、化合物の全てのキラル型、ジアステレオマー、ラセミ体及び全ての幾何異性体が想定されている。
【0076】
「薬学的に許容し得る塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的にも他の面でも不適切でない塩のことをいう。薬学的に許容し得る酸付加塩は、無機酸及び有機酸から調製することができ、一方、薬学的に許容し得る塩基付加塩は、無機塩基及び有機塩基から調製することができる。薬学的に許容し得る塩の総説については、Bergeら（(1977) J. Pharm. Sd, vol. 66, 1）を参照のこと。例えば、塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来するもの、更には酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、フマル酸、メタンスルホン酸、及びトルエンスルホン酸などの有機酸から調製される塩が含まれる。
【0077】
ＥＰＡＣ１阻害剤の好ましいファミリーは、上記式（II）であって、式中、
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４が、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚが、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する、式（II）を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーからなる。
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４が、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚが、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する、式（II）を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーからなる。
【0078】
ＥＰＡＣ１阻害剤の好ましいファミリーは、上記式（II）であって、式中、
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４が、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚが、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する、式（II）を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーからなる。
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；
Ｒ３が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ４が、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＲｘＲｙ及び－Ｃ（Ｏ）ＯＲｚからなる群より選択され；
Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚが、互いに独立して、Ｈ又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルであるか；又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する、式（II）を有する化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物若しくは水和塩、又はその多形結晶構造、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーからなる。
【0079】
ある実施態様によれば、式（II）において、Ｒ３は、
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されている。
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されている。
【0080】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ３は、１個以上の置換基（好ましくは（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される）によって場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールである。１つの実施態様において、Ｒ３は、Ｈであるか、又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールである。特定の実施態様において、Ｒ３は、Ｈであるか、又は１個以上のハロゲン原子によって場合により置換されているフェニルである。特定の実施態様において、Ｒ３は、好ましくは１個以上のハロゲン原子によって、場合により置換されているフェニルである。
【0081】
ある実施態様によれば、式（II）において、Ｒ１は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アリール及びヘテロアリール基は、－ＮＲ７Ｒ８、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されており；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。
－ Ｈ；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アリール及びヘテロアリール基は、－ＮＲ７Ｒ８、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されており；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。
【0082】
ある実施態様によれば、式（II）において、Ｒ１は、Ｈであるか、又は１個以上の置換基によって（例えば、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、ハロゲン原子及び－ＮＲ７Ｒ８基からなる群より選択される置換基によって）場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールであり；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。特定の実施態様において、Ｒ１は、Ｈであるか、又は１個以上のハロゲン原子によって（例えば、１個のフッ素原子によって、好ましくはパラ位で）、場合により置換されているフェニルである。
【0083】
別の実施態様において、Ｒ１は、
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アリール及びヘテロアリール基は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、ハロゲン原子及び－ＮＲ７Ｒ８基からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されており；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アリール及びヘテロアリール基は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、ハロゲン原子及び－ＮＲ７Ｒ８基からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されており；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。
【0084】
好ましくは、式（II）において、Ｒ１は、１個以上の置換基によって（例えば、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、ハロゲン原子及び－ＮＲ７Ｒ８基からなる群より選択される置換基によって）場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールであり；ここで、Ｒ７及びＲ８は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択される。特定の実施態様において、Ｒ１は、１個以上のハロゲン原子によって（例えば、１個のフッ素原子によって、好ましくはパラ位で）、場合により置換されているフェニルである。
【0085】
ある実施態様によれば、式（II）において、Ｒ２は、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されている。
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって場合により置換されている。
【0086】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ２は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、及び５～６員ヘテロアリール基からなる群より選択されるか、又はＲ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ６）シクロアルキル基を形成し、ここで、前記アルキル、シクロアルキル、及びヘテロアリール基は、好ましくは（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって、場合により置換されている。
【0087】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ２は、５～６員ヘテロアリール基からなる群より選択され、前記ヘテロアリール基は、好ましくは（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって、場合により置換されている。特定の実施態様において、Ｒ２はチエニル基である。
【0088】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ２は、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びチエニル環からなる群より選択されるか、又はＲ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に、シクロヘキシル基などの（Ｃ５－Ｃ６）シクロアルキル基を形成する。
【0089】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ３は、好ましくは（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル及びハロゲン原子からなる群より選択される１個以上の置換基によって、場合により置換されている（Ｃ６－Ｃ１０）アリールである。
【0090】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ４は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＨ２及び－Ｃ（Ｏ）ＯＨからなる群より選択されるか、又はＲ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成する。１つの実施態様において、式（II）において、Ｒ４はＨであるか、又はＲ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ５－Ｃ６）シクロアルキル基を形成する。好ましくは、Ｒ４はＨである。
【0091】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ４はＨであるか、又はＲ２及びＲ４は、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ５－Ｃ６）シクロアルキル基を形成する。
【0092】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ１はフェニル基であり、かつ／又はＲ２はチエニル基であり、前記フェニル及びチエニル基は場合により置換されている。
【0093】
特定の実施態様において、式（II）において、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一方は、（Ｃ６－Ｃ１０）アリール基又は５～１０員ヘテロアリール基である。
【0094】
特定の実施態様において、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、式（II）を有する化合物であって、式中、
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されている、化合物からなる。
Ｒ１が、
－ （Ｃ２－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ ３～１０員ヘテロシクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択され；
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されており；そして
Ｒ２が、
－ Ｈ；
－ （Ｃ１－Ｃ２０）アルキル；
－ （Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル；
－ （Ｃ６－Ｃ１０）アリール；及び
－ ５～１０員ヘテロアリール
からなる群より選択されるか、又は
Ｒ２及びＲ４が、これらを有する炭素原子と一緒に（Ｃ３－Ｃ１０）シクロアルキル基を形成し、
ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール及びヘテロアリール基は、場合により置換されている、化合物からなる。
【0095】
本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤の好ましいファミリーは、下記式（III）：
【0096】
【化18】
［式中、
－ Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、Ｈ、－ＯＨ、ハロゲン原子、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、（Ｃ１－Ｃ１０）アルコキシ、及び－ＮＲ５Ｒ６からなる群より選択され；
ここで、前記Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル又はＨから選択され；
－ Ｒ４は、Ｈ、－ＯＨ、－ＮＨ２及び－Ｃ（Ｏ）ＯＨからなる群より選択され；そして
－ Ｒ３は、上記式（II）と同義である］を有する化合物からなる。
【0097】
特定の実施態様において、式（III）において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、Ｈ、ハロゲン原子又は（Ｃ１－Ｃ１０）アルキルから選択される。１つの実施態様において、式（III）において、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、Ｈであるか、かつ／又はＲａ、Ｒｂ、Ｒｄ及びＲｅは、Ｈである。好ましくは、式（III）において、Ｒｃは、Ｈであるか、又はハロゲン原子、例えば、フッ素原子である。
【0098】
ある実施態様によれば、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、下記式：
【0099】
【化19】
のうちの１つを有する。
【0100】
好ましくは、本発明の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤は、下記式：
【0101】
【化20】
を有しており、本明細書においてＡＭ－００１と命名される。
【0102】
本発明はまた、上記と同義の使用のためのＥＰＡＣ１阻害剤であって、ピルフェニドン又はニンテダニブと併用される前記ＥＰＡＣ１阻害剤に関する。
【0103】
本発明はまた、特発性肺線維症の予防及び／又は処置及び／又は回復の方法であって、それを必要とする患者への薬学的に許容し得る量のＥＰＡＣ１阻害剤の投与を含む方法に関するものであり、前記ＥＰＡＣ１阻害剤は、ピルフェニドン又はニンテダニブと場合により併用される。
【図面の簡単な説明】
【0104】
【図1】Ｅｐａｃ１の発現は肺線維化で上昇している。Ａ）ヒトの非ＩＰＦ及びＩＰＦ患者におけるＲＴｑ－ＰＣＲ（ｎ＝８／群）によって定量化されたＥｐａｃ１ ｍＲＮＡ発現レベル。Ｂ）及びＣ）ブレオマイシン（４U/Kg；１４日間）の気管内注入によって誘発された特発性肺線維症の実験モデルにおけるｑＲＴ－ＰＣＲ（ｎ＝８／群）及びウエスタンブロット（ｎ＝３／群）によって定量化されたＥｐａｃ１ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値はｔ検定を使用して算出された；＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図2】強力なＥｐａｃ１阻害剤であるＣＥ３Ｆ４は、線維芽細胞の増殖を有意に減少させ、ＴＧＦ－β１によって誘導される線維化マーカーの発現を抑制した。Ａ）正常なヒト肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）におけるＥｐａｃ１阻害剤ＣＥ３Ｆ４の役割を研究するための実験計画の概略図。Ｂ）ＮＨＬＦ細胞の増殖は、ＢｒｄＵアッセイで細胞を標識することによって判定された。特定条件下での相対的な増殖が示されている（ｎ＝４）。Ｃ）ＮＨＬＦ細胞をＴＧＦ－β１（２ng/mL；４８時間）単独で、又はＥｐａｃ１阻害剤ＣＥ３Ｆ４（２０μM；４８時間）との併用で処理した。プロコラーゲン、Ｉ型、α１［ＣＯＬ１］、III型コラーゲン［ＣＯＬ３］、結合組織増殖因子［ＣＴＧＦ］、トランスフォーミング増殖因子β［ＴＧＦβ］の線維化マーカーｍＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって定量化した（ｎ＝３）。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は一元配置分散分析を使用して算出された；ｎｓ＝有意でない、＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、及び＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図3】新しいＥｐａｃ１選択的阻害剤であるＡＭ－００１は、肺線維芽細胞の増殖を阻止し、インビトロでＮＨＬＦの線維化マーカーの発現を減少させた。Ａ）正常なヒト肺線維芽細胞におけるＡＭ－００１の役割を評価するための実験方策の概略図。Ｂ）増殖は、ＢｒｄＵアッセイで細胞を標識することによって判定された。特定条件下での相対的な増殖が示されている（ｎ＝４）。Ｃ）ＮＨＬＦ細胞をＴＧＦ－β１単独で、又はＡＭ－００１（２０μM；４８時間）との併用で処理し、線維化マーカー（プロコラーゲン、Ｉ型、α１［ＣＯＬ１］、III型コラーゲン［ＣＯＬ３］、結合組織増殖因子［ＣＴＧＦ］、トランスフォーミング増殖因子β［ＴＧＦβ］）のｍＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって定量化した（ｎ＝３）。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は一元配置分散分析を使用して算出された；ｎｓ＝有意でない、＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、及び＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図4】Ａ）ブレオマイシン誘発性肺線維症のマウスモデルにおけるＥｐａｃ１阻害剤ＡＭ－００１の治療効果を評価するための実験計画の概略図。Ｂ）右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）、及びＣ）右心室肥大は、フルトン指数（ＲＶ／（ＬＶ＋中隔））（ｎ＝３～７／群）によって評価された。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は一元配置分散分析を使用して算出された；＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、及び＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図5】Ｅｐａｃ１阻害剤ＡＭ－００１は、マウスのブレオマイシン誘発性肺線維症において肺線維化を低減させる。Ａ）指定マウスの代表的なマッソントリクローム染色された肺切片（上のパネル）。グラフは線維化の定量化を表す。Ｂ）線維化マーカーＣＯＬ１、ＣＯＬ３、ＣＴＧＦ、及びＴＧＦβのレベルは、肺組織におけるｑＰＣＲによって定量化された（ｎ＝３～７／群）。Ｃ）代表的なヘマトキシリン及びエオシン染色された肺切片（上）並びに内側壁の厚さの定量化（下）が示される（ｎ＝３～７／群）。Ｄ）ＲＶ切片を蛍光標識コムギ胚芽凝集素で染色して、ＲＶ心筋細胞の断面積（上）及び心筋細胞の断面積の定量化（下）を検討した。Ｅ）ＣＯＬ１、ＣＯＬ３、ＣＴＧＦ、及びＴＧＦβの線維化マーカーｍＲＮＡレベルは、ＲＶ組織におけるｑＰＣＲによって定量化された（ｎ＝３～７／群）。Ｆ）ｑＰＣＲによって評価されたＲＶ心肥大関連転写物（心房性ナトリウム利尿因子［ＡＮＦ］、脳性ナトリウム利尿ペプチド［ＢＮＰ］、β－ミオシン重鎖［β－ＭＨＣ］）のｍＲＮＡレベル。
【図6】Ｅｐａｃ１－／－マウスは、ブレオマイシン誘発性肺線維症から保護されている。Ａ）指定マウスの代表的なマッソントリクローム染色された肺切片（左パネル）。グラフは線維化の定量化を表す（右パネル）。Ｂ）線維化マーカーＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＴＧＦ、及びＴＧＦβのレベルは、肺組織におけるｑＰＣＲによって定量化された（ｎ＝３～７／群）。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値はｔ検定又は一元配置分散分析を使用して算出された；＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、及び＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図7】Ｅｐａｃ１阻害はＦＧＦＲ１及びＴＮＣの発現を低減させた。Ａ～Ｂ）ヒト肺から単離されたＲＮＡにおけるＦＧＦＲ１及びＴＮＣ ｍＲＮＡの発現、並びにＣ～Ｄ）対照と比較したＢＬＭ Ｅｐａｃ１ ＫＯ投与マウス（２８日）。Ｅ～Ｆ）ＢＬＭ＋ビヒクル対ＢＬＭ＋ＡＭ－００１処理マウス（ｎ＝３～７／群）におけるＦＧＦＲ１及びＴＮＣ ｍＲＮＡレベル。データは平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値はｔ検定又は一元配置分散分析を使用して算出された；＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、及び＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図8】Ｅｐａｃ１の標的としてのＦＯＸＯ３転写因子。Ａ）Ｅｐａｃ１サイレンシング後の線維芽細胞におけるＦＯＸＯ３ ｍＲＮＡ発現又はＢ）ＮＨＬＦ細胞におけるＡｄ．Ｅｐａｃ過剰発現（ｎ＝３）。
【図9】Ｅｐａｃ１サイレンシングは、ＩＰＦ線維芽細胞の増殖、ＩＬ－６、及びＳＭＡの発現を低減させ、ＦＯＸＯ３を回復させる。Ａ）ｌｅｎｔｉ．ｓｈ．Ｅｐａｃ１で７２時間トランスフェクトされたＮＨＬＦ及びＩＰＦ ＦＢにおけるＥｐａｃ１ ｍＲＮＡ発現。Ｂ）示された条件でＢｒｄＵアッセイによって判定されたＮＨＬＦ及びＩＰＦ ＦＢ細胞の増殖。Ｃ～Ｅ）ＩＬ－６、α－ＳＭＡ、及びＦＯＸＯ３ ｍＲＮＡの発現（ｎ＝２）。
【図10】ＡＭ－００１は、ＩＰＦ線維芽細胞の増殖を減少させ、ＩＬ－６及びα－ＳＭＡの発現を低減させた。Ａ）ｌｅｎｔｉ．ｓｈ．Ｅｐａｃ１で７２時間トランスフェクトされたＮＨＬＦ及びＩＰＦ ＦＢにおけるＥｐａｃ１ ｍＲＮＡ発現。Ｂ）示された条件でＢｒｄＵアッセイによって判定されたＮＨＬＦ細胞の増殖。Ｃ～Ｅ）ＡＭ－００１（２０μMで４８時間、ｎ＝２）で処理されたＮＨＬＦ及びＩＰＦ線維芽細胞におけるＩＬ－６、α－ＳＭＡ、及びＦＯＸＯ３のｍＲＮＡ発現レベル。Ｆ）ＡＭ－００１で処理されたＮＨＬＦ及びＩＰＦ線維芽細胞における示された条件の代表的な免疫ブロット。
【実施例】
【0105】
背景。ｃＡＭＰによって直接活性化される交換タンパク質（Ｅｐａｃ）は、アドレナリン刺激によって活性化されるＰＫＡ非依存性シグナル伝達分子である（de Rooij et al., 1998, Nature, 396, 474-7; Kawasaki et al., 1998, Science, 282, 2275-9）。Ｅｐａｃ１及びＥｐａｃ２の２つのアイソフォームが同定されている。Ｅｐａｃ１は遍在的に発現される。２つのＥＰＡＣアイソフォームであるＥＰＡＣ１及びＥＰＡＣ２は、Ｒａｓ様ＧＴＰａｓｅであるＲａｐ１及びＲａｐ２のグアニンヌクレオチド交換因子であり、これらは、ｃＡＭＰの古典的なエフェクターであるプロテインキナーゼＡとは無関係に活性化する。ＥＰＡＣの薬理学的モジュレーターの開発に伴い、文献の多数の報告は、種々の心血管疾患及び腎疾患の調節におけるＥＰＡＣの重要な役割を証明している（Yang et al., 2013, Am J Physiol Renal Physiol, 304, F831-9; Laudette et al., 2018, J Cardiovasc Dev Dis, 5）。Ｅｐａｃ１に選択的な阻害化合物は、心血管疾患におけるその潜在的な特性が調査されている（Fazal et al., 2017, Circ Res, 120, 645-657）。ＡＭ－００１化合物は、Ｅｐａｃ１の新規な選択的薬理学的阻害剤として同定及び性状解析されている。この低分子は、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体（３－アミノ－Ｎ－（４－フルオロフェニル）－４－フェニル－６－（チオフェン－２－イル）チエノ［２，３－ｂ］ピリジン－２－カルボキサミド）であり、Ｅｐａｃ１の触媒活性を選択的に阻害する。ＡＭ－００１は、心筋虚血／再灌流傷害及び慢性β－ＡＲ活性化の有害な作用に対する心臓保護特性を示す（Laudette et al., 2019, Cardiovasc Res, 115, 1766-1777）。
【0106】
材料及び方法
患者。本研究では、ヒトＩＰＦ及び健常対照ドナーのＲＮＡ、タンパク質試料、及びホルマリン固定パラフィン包埋切片を使用した。ヒトの肺組織は、臓器移植プログラムのために手術を受けたＩＰＦ患者（ｎ＝８）から得られ、そして肺外植片の健常対照試料は、University General Consortium Hospital of Valenciaの臓器移植プログラムから得られた（ｎ＝８）。試料は匿名でアーカイブ標本であった。プロトコールは、University General Consortium Hospital of Valenciaの地域研究及び独立倫理委員会によって承認された（CEIC/2013)。書面によるインフォームド・コンセントが各参加者から得られた。
患者。本研究では、ヒトＩＰＦ及び健常対照ドナーのＲＮＡ、タンパク質試料、及びホルマリン固定パラフィン包埋切片を使用した。ヒトの肺組織は、臓器移植プログラムのために手術を受けたＩＰＦ患者（ｎ＝８）から得られ、そして肺外植片の健常対照試料は、University General Consortium Hospital of Valenciaの臓器移植プログラムから得られた（ｎ＝８）。試料は匿名でアーカイブ標本であった。プロトコールは、University General Consortium Hospital of Valenciaの地域研究及び独立倫理委員会によって承認された（CEIC/2013)。書面によるインフォームド・コンセントが各参加者から得られた。
【0107】
動物。マウスは無菌施設に収容され、全ての動物実験はAnimal Care and Use Committees of the University of Toulouseによって承認された。Ｅｐａｃ１欠損マウス（Ｅｐａｃ１－／－）は、Frank Lezoualc'h博士の研究室で操作された。簡単に説明すると、Ｅｐａｃ１ノックアウトマウスは、GenowayによるＲＡＰＧＥＦ３遺伝子のイントロン７及び１５内にｌｏｘＰ配列を挿入することによって作製された。卵母細胞でＣｒｅリコンビナーゼを散発的に発現するデスミン（Desmin）－Ｃｒｅ（Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド）トランスジェニックのメスをＥｐａｃ１ ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ（Ｃ５７ＢＬ／６－ＳＶ１２９バックグラウンド）のオスと交配して、デスミン－Ｃｒｅ－Ｅｐａｃ１－／－、次にＥｐａｃ１－／－マウスを作製した。遺伝子型は、使用前にＰＣＲによって確認された。この研究において、１４週齢のマウス（Ｅｐａｃ１ノックアウト及び対照同腹仔のＣ５７ＢＬ／６又はＣ５７ＢＬ／６－ＳＶ１２９バックグラウンド）を使用した。
【0108】
気管内ブレオマイシン動物モデル。全ての動物実験及び操作は、実験動物の管理及び使用に関するＮＩＨガイド（NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals）に従って実施された。動物をキシラジン／ケタミンのＩＰ注射によって麻酔し、仰臥位でトレイに固定した。挿管後、ボードを４５度に傾け、IA-1C Microsprayerチップ（PennCentury, Wyndmoor, PA）を血管カテーテルの内腔に挿入した。動物にＢＬＭ（５０μL；４U/Kg）を２８日間にわたり単回気管内注射した。Ｅｐａｃ１の薬理学的阻害剤であるＡＭ－００１を、１日置きに（１０mg/kg）２週間腹腔内注射した。
【0109】
心臓の血行動態研究。マウスを（２～４％）イソフルランで麻酔し、気管切開により挿管し、１～２％イソフルラン及び酸素（一回換気量、６mL/kg；呼吸数、１００呼吸／分）で機械的に換気した。胸腔が開かれ、胸骨切開により臓器にアクセスした。心膜が開かれ、心臓に完全にアクセスできるようになったら、超音波血流計プローブ（血流計プローブ2.5S176；Transonic Systems Inc., Ithaca, NY）をＲＶに挿入して、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を収集した。血行動態データは、Scisense PV Control Unit（Scisense, Ontario, Canada）を使用して記録された。
【0110】
右心室重量測定。血行動態データを収集した後、マウスを回収して心臓及び肺を収集した。心臓を胸部から取り出し、ＰＢＳで灌流して血液及び血塊を除去した。心房及び接続血管の両方を別々にした。次に、ＲＶを心臓から分離し、秤量した。最後に、残りの左心室（ＬＶ）及び中隔を秤量した。フルトン指数は、ＲＶ肥大を具体的に説明するために、ＬＶ＋中隔の重量に対するＲＶ重量の重量比（ＲＶの重量／ＬＶ＋中隔の重量）によって算出された。
【0111】
ヘマトキシリン＆エオシン及びマッソントリクローム染色。肺組織を摘出し、ＰＢＳ／ＯＣＴ（５０：５０）で満たし、ＯＣＴで固定（－８０℃で凍結）した。切片を８μmに切り、カラーフロストスライドガラス（ThermoFisher）に付着させた。肺組織切片をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）並びにマッソントリクローム（Sigma-Aldrich）で染色し、光学顕微鏡を使用して可視化した。次に、ImageJソフトウェアを使用して、内側壁の厚さ及びコラーゲン沈着を定量化した。
【0112】
コムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）免疫染色
ＲＶ切片を１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定し、蛍光標識コムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）（Invitrogen）を使用して４℃で一晩染色し、Zeiss Observer Z.1顕微鏡（Carl Zeiss）で１６０倍の倍率で画像化した。心筋細胞の輪郭を追跡し、ImageJソフトウェアを使用して心筋細胞の面積を算出した。
ＲＶ切片を１％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定し、蛍光標識コムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）（Invitrogen）を使用して４℃で一晩染色し、Zeiss Observer Z.1顕微鏡（Carl Zeiss）で１６０倍の倍率で画像化した。心筋細胞の輪郭を追跡し、ImageJソフトウェアを使用して心筋細胞の面積を算出した。
【0113】
細胞培養。正常なヒト肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）及びＩＰＦ患者の肺線維芽細胞を、Lonza, Inc.（Allendale, NJ）から購入し、３７℃で５％ ＣＯ２中で５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足したＦＧＭ－２培地で推奨どおりに培養し、そしてコンフルエントに達したら継代した。全ての細胞株は製造業者によって試験され、ＨＩＶ－１、ＨＢＶ、ＨＣＶ、マイコプラズマ、細菌、酵母、及び真菌に対して陰性であった。
【0114】
ｓｈＲＮＡ及びレンチウイルス産生。ｐＬＫＯ．１レンチウイルス発現ベクターにクローニングされたＥｐａｃ１ ｓｈＲＮＡ（TRCN0000047228）をDharmaconから入手した。レンチウイルス産生には、構築物とウイルスパッケージングプラスミドｐＳＰＡＸ２及びｐＭＤ２．Ｇを、製造業者の推奨によりEffectene（登録商標）（Qiagen）を使用して２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクトした。供給業者の推奨どおりLenti-X Concentrator（Clontech）とのインキュベーションによって、ウイルスを濃縮した。濃縮ウイルス粒子を使用して、ＮＨＬＦ細胞に７２時間感染させた。ＲＮＡ及びタンパク質の発現をＲＴ－ｑＰＣＲ及び免疫ブロット法によってそれぞれ測定し、Ｅｐａｃ１ノックダウンを検証した。
【0115】
薬理学的処理。細胞を６ウェルプレートに２５０，０００細胞／ウェルで播種し、使用前に５％ ＣＯ２の３７℃のインキュベーターで２４時間維持培養した。細胞をＴＧＦ－β１（２ng/mL；４８時間）単独で、又はＥｐａｃ１阻害剤のＣＥ３Ｆ４（２０μM；４８時間）若しくはＡＭ－００１（２０μM；４８時間）との併用で処理した。
【0116】
細胞増殖
ＮＨＬＦの増殖は、製造業者の取扱説明書によりCell Proliferation ELISA、ＢｒｄＵ（比色法）アッセイ（Roche, Indianapolis, IN）を使用して、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みによって測定された。
ＮＨＬＦの増殖は、製造業者の取扱説明書によりCell Proliferation ELISA、ＢｒｄＵ（比色法）アッセイ（Roche, Indianapolis, IN）を使用して、５－ブロモ－２’－デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みによって測定された。
【0117】
全ＲＮＡの単離、ｃＤＮＡの調製、及び定量的ＲＴ－ＰＣＲ分析
全ＲＮＡは、製造業者の取扱説明書により、TRIzol（商標）（Invitrogen）を使用して分離し、RNeasyミニカラム（Qiagen）を使用して精製した。ｃＤＮＡ合成キット（Applied Biosystems, Foster City, CA）を使用して、製造業者の説明どおりにｃＤＮＡを合成した。定量的ＲＴ－ＰＣＲは、PerfeCTa SYBR（商標）Green FastMixキット（Quantabio, Beverly, MA）及び指定遺伝子に対する特異的プライマーを使用して、製造業者の取扱説明書により実施した。遺伝子発現の倍率変化は、内部ローディングコントロールとしてのＧＡＰＤＨに対して正規化した相対比較法を使用して決定された。
全ＲＮＡは、製造業者の取扱説明書により、TRIzol（商標）（Invitrogen）を使用して分離し、RNeasyミニカラム（Qiagen）を使用して精製した。ｃＤＮＡ合成キット（Applied Biosystems, Foster City, CA）を使用して、製造業者の説明どおりにｃＤＮＡを合成した。定量的ＲＴ－ＰＣＲは、PerfeCTa SYBR（商標）Green FastMixキット（Quantabio, Beverly, MA）及び指定遺伝子に対する特異的プライマーを使用して、製造業者の取扱説明書により実施した。遺伝子発現の倍率変化は、内部ローディングコントロールとしてのＧＡＰＤＨに対して正規化した相対比較法を使用して決定された。
【0118】
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び免疫ブロット分析。タンパク質溶解物は、プロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤カクテル（Pierce）を含有するＲＩＰＡ溶解緩衝液（Boston BioProducts）を使用して調製した。１５０００×ｇで２０分間遠心分離した後、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ（Sigma-Aldrich）を使用してタンパク質濃度を判定した。次に、タンパク質をＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ポリフッ化ビニリデン膜に転写した。膜を５％ スキムミルクでブロックし、次の一次抗体：Ｅｐａｃ１（Cell Signaling）、ｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＭＡＤ２／３（Cell Signaling）、ｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ３（Cell Signaling）、ｐｈｏｓｐｈｏ－ＡＫＴ（Cell Signaling）、全ＡＫＴ（Cell Signaling）、及びＧＡＰＤＨ（Thermofisher）と４℃で一晩ハイブリダイズさせた。次に、膜を適切な二次ＨＲＰ結合抗体（Cell Signaling）と一緒に１時間インキュベートし、ＥＣＬシステム（Thermofisher）を使用してブロットを発色させた。
【0119】
結果
１．ヒトＩＰＦ及びＢＬＭ誘発性肺線維症のマウスモデルにおけるＥｐａｃ１の発現の増加。ＩＰＦの病因に対するＥｐａｃタンパク質の寄与を判定するために、Ｅｐａｃ１、及びＥｐａｃ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、ＩＰＦと診断された患者の肺生検及び正常肺において測定した。我々は、Ｅｐａｃ１ ｍＲＮＡの発現の有意な増加を見い出したが、一方、Ｅｐａｃ２ ｍＲＮＡレベルは、健常肺試料と比較してヒト肺線維症肺組織では変化がなかった（図１Ａ）。これらの知見により、ブレオマイシン（ＢＬＭ）の気管内送達によって誘発されたＰＦの実験マウスモデルからの肺試料において、Ｅｐａｃ１ａ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の増加が見られた（図１Ｂ～Ｃ）。
１．ヒトＩＰＦ及びＢＬＭ誘発性肺線維症のマウスモデルにおけるＥｐａｃ１の発現の増加。ＩＰＦの病因に対するＥｐａｃタンパク質の寄与を判定するために、Ｅｐａｃ１、及びＥｐａｃ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、ＩＰＦと診断された患者の肺生検及び正常肺において測定した。我々は、Ｅｐａｃ１ ｍＲＮＡの発現の有意な増加を見い出したが、一方、Ｅｐａｃ２ ｍＲＮＡレベルは、健常肺試料と比較してヒト肺線維症肺組織では変化がなかった（図１Ａ）。これらの知見により、ブレオマイシン（ＢＬＭ）の気管内送達によって誘発されたＰＦの実験マウスモデルからの肺試料において、Ｅｐａｃ１ａ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の増加が見られた（図１Ｂ～Ｃ）。
【0120】
２．Ｅｐａｃ１の選択的な薬理学的阻害は、増殖を減少させ、幾つかの線維化マーカーの発現を抑制した。肺線維化におけるＥｐａｃ１ａの役割を更に調査するために、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を使用して、正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）の増殖に対するＥｐａｃ１阻害の効果を検討した。ＮＨＬＦ細胞は、ＴＧＦβ単独で、又はＥｐａｃ１阻害剤ＣＥ３Ｆ４と併用して、０．１％又は５％ ＦＢＳのいずれかを含有する培地を使用して４８時間処理した（図２Ａ）。線維化促進剤のＴＧＦβ１は線維化の重要なメディエーターであり、ＩＰＦの病因に寄与すると考えられている（Fernandez et al., 2012）。ＴＧＦβ処理及び血清刺激はＮＨＬＦの増殖を増加させたが、一方、ＣＥ３Ｆ４処理はこの反応を有意に減少させた（図２Ｂ）。本発明者らは更に、Ｅｐａｃ１阻害がインビトロで幾つかのＴＧＦβ１調節遺伝子の発現を調節するかどうかを判定しようと試みた。したがって、ＮＨＬＦ細胞をＴＧＦβ１で４８時間、単独で、又はＣＥ３Ｆ４化合物と併用して処理した。次に、コラーゲンＩＡＩ（ＣＯＬＩＡ１）、ＣＯＬＩＩＩ、並びに結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）及びトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ１）などの幾つかの線維化マーカーのｍＲＮＡ発現を分析した。注目すべきことに、ＣＥ３Ｆ４化合物によるＥｐａｃ１阻害は、ＴＧＦβ処理によって誘導された線維化マーカーの誘導を障害した（図２Ｃ）。
【0121】
３．新しいＥｐａｃ１選択的阻害剤であるＡＭ－００１は、肺線維芽細胞の増殖を阻止し、インビトロでＮＨＬＦにおける線維化マーカーの発現を減少させた。ＣＥ３Ｆ４は、インビトロのＥｐａｃ１の選択的薬理学的阻害剤として同定されたが、その低い生物学的利用能により、将来のインビボ適用への使用が阻まれる。したがって、本発明者らは、ＡＭ－００１と命名された新しいＥｐａｃ１選択的阻害化合物であるＡＭ－００１が、ＮＨＬＦの増殖及びインビトロの線維化マーカーの発現に及ぼす効果を調査した。実際、低分子ＡＭ－００１は、チエノ［２，３－ｂ］ピリジン誘導体（３－アミノ－Ｎ－（４－フルオロフェニル）－４－フェニル－６－（チオフェン－２－イル）チエノ［２，３－ｂ］ピリジン－２－カルボキサミド）であり、Ｅｐａｃ２又はプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）活性に対するアンタゴニスト作用が報告されていないため、Ｅｐａｃ１に対して選択的な阻害活性を示した（Laudette et al., Cardiovasc. Res. 2019, 115(12):1766-1777）。この新たに性状解析及び同定された化合物は、前臨床研究において心筋虚血／再灌流傷害及び慢性β－ＡＲ活性化中の病的心臓リモデリングに対する有望な心臓保護特性を示した。ＣＥ３Ｆ４の存在下で実施された以前の実験と同様に、ＮＨＬＦ細胞をＴＧＦβ単独で、又は新しいＥｐａｃ１阻害剤ＡＭ－００１と併用して、０．１％又は５％ ＦＢＳのいずれかを含有する培地を使用して４８時間処理した（図３Ａ）。我々の結果は、ＡＭ－００１が高濃度血清又はＴＧＦβ刺激によって誘導されるＮＨＬＦの増殖を阻害することを示した（図３Ｂ）。以前の結果と一致して、ＡＭ－００１は、インビトロでＴＧＦβによって誘導される線維化遺伝子マーカーのアップレギュレーションを障害した（図３Ｃ）。
【0122】
４．ブレオマイシン誘発性ＰＦマウスモデルにおける肺線維化及び肺機能障害を阻害するための新しい治療方策としてのＥｐａｃ１の薬理学的阻害。肺線維化の病因におけるＥｐａｃ１のアップレギュレーションの関与を更に裏付けるために、Ｅｐａｃ１阻害の治療効果の見込みを、次にＥｐａｃ１選択的阻害化合物ＡＭ－００１を使用してインビボで評価した（Laudette et al., Cardiovasc. Res. 2019, 115(12):1766-1777）。ＢＬＭマウスモデルは、肺線維化を誘導するために頻繁に使用され、依然として間質性肺疾患を研究するために齧歯類で最も一般的に使用される動物モデルである（Liu et al., 2017, Methods Mol Biol, 1627, 27-42; Leach et al., 2013, Am J Respir Cell Mol Biol, 49, 1093-101）。ＢＬＭエアゾール投与は、活性酸素種の産生の増加を誘導し、それによって内皮細胞及び他の細胞型に細胞損傷を引き起こし、ＴＧＦβ及びＩＬ－６などのサイトカイン及び線維化促進メディエーターの産生につながることによって、その後のマウスの線維増殖反応を伴う肺損傷を招く（Adamson, 1976, Environ Health Perspect, 16, 119-26; Yamamoto and Nishioka, 2005, Exp Dermatol, 14, 81-95; Leach et al., 2013）。
【0123】
治療方策を利用して、マウスを、生理食塩水を気管内投与された偽の対照処理群と、ＢＬＭ（４U/kg）のエアゾールを気管内単回投与されたＰＦ群とにランダムに割り当てた。２週間後、ＢＬＭ投与群を、ビヒクル又はＥｐａｃ１阻害剤ＡＭ－００１のいずれかを２週間投与するようにランダムに割り当てた（図４Ａ）。ビヒクル又はＡＭ－００１を１日置きに２週間腹腔内注射した（１０mg/kg）。興味深いことに、ＡＭ－００１処理群では対照群と比較して右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）の低減が分かった（図４Ｂ）。更に、我々の結果はまた、フルトン指数の低減によって明らかにされたとおり、ＡＭ－００１処理がＢＬＭ投与マウスのＲＶ肥大を有意に低減させたことを示した（図４Ｃ）。
【0124】
５．ＡＭ－００１は、間質性肺線維化及び血管リモデリングを効果的に回復させる。ＰＦにおけるＥｐａｃ１阻害の治療効果の見込みを更に調査するために、次に間質性線維化レベル及び血管リモデリングを、２週間の処理後の組織学的分析によって評価した。結果は、ブレオマイシン注入に応答して間質性線維化と血管周囲線維化の両方が増加し、結果としてＡＭ－００１処理群と比較してビヒクル処理群で実質的な組織学的な組織損傷があったことを示した（図５Ａ）。興味深いことに、これらの結果は、間質性線維化と血管周囲線維化との両方がビヒクル対照群で増加し、ＡＭ－００１処理ＢＬＭ群で有意に減少したことを示した（図５Ａ）。本発明者らはまた、ＲＴ－ｑＰＣＲによって、肺試料における線維化の幾つかのマーカーの発現を測定した。Ｅｐａｃ１阻害により、肺試料中のＣＯＬＩ、ＣＯＬＩＩＩ、ＣＴＧＦ、及びＴＧＦβのｍＲＮＡレベルの発現が著しく低減することが分かった（図５Ｂ）。更に、遠位肺動脈の形態計測分析は、ＢＬＭ処理マウスの内側壁の厚さの有意な増加を示した（図５Ｃ）。同様に、ＡＭ－００１は、ビヒクル処理ＢＬＭマウス群と比較して、肺血管リモデリングを著しく減少させた（図５Ｃ）。組織学的分析は、Ｅｐａｃ１阻害剤ＡＭ－００１で処理した場合にＲＶの心筋細胞サイズの低減を示した（図５Ｄ）。更に、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、ベータミオシン重鎖（β－ＭＨＣ）などの線維化及び肥大関連遺伝子マーカーの発現のアップレギュレーションは、ＡＭ－００１処理マウスで障害された（図５Ｅ）。
【0125】
全体として、これらの前臨床データは、Ｅｐａｃ１の薬理学的阻害が、ブレオマイシン誘発性ＩＰＦモデルの血行動態パラメーターを改善しながら、肺線維化、血管リモデリング、及びＲＶ肥大を有意に阻害することを導いた。まとめると、インビトロ及びインビボの結果は、Ｅｐａｃ１の薬理学的阻害が肺線維症の患者を処置するための有望な治療方策であることを更に裏付けている。
【0126】
６．Ｅｐａｃ１欠損は、ＢＬＭ誘発性線維症からマウスを保護する。本発明者らは、ＰＦに対するＥｐａｃ１欠失の影響に取り組もうと試みた。汎用性のＥｐａｃ１ ＫＯ幼若マウス（Lezoualch博士から寄贈）及びＷＴマウスをランダムに２群に割り当てた：未損傷の対照生理食塩水群（ｎ＝１０）及びＢＬＭ（４U/Kg）を２８日間にわたり単回気管内注射したＢＬＭ群（ｎ＝１０）。注目すべきことに、ＢＬＭの２８日後、マッソントリクローム染色によって評価された線維化病変は、ＷＴ ＢＬＭ投与マウスと比較してＥｐａｃ１ ＫＯマウスで有意に減少した（図６Ａ）。これと一致して、プロコラーゲン、Ｉ型、α１［ＣＯＬ１Ａ１］、III型コラーゲン［ＣＯＬ３Ａ１］、結合組織増殖因子［ＣＴＧＦ］、トランスフォーミング増殖因子β［ＴＧＦβ］などの線維化マーカーのｍＲＮＡレベルが、ＢＬＭ Ｅｐａｃ ＫＯマウスにおいて有意に低減することが分かった（図６Ｂ）。これらのデータは、Ｅｐａｃ１が肺線維化の発症に必要であり、その欠失が線維化からの顕著な保護を得るのに十分であることを示唆している。
【0127】
７．ＲＮＡ－Ｓｅｑは、主要な線維化経路に関与するＥｐａｃ１標的遺伝子を同定する。Ｅｐａｃ１の標的を包括的に同定するために、ＤＭＳＯ又は２０μMのＡＭ－００１（Ｅｐａｃ１阻害剤）のいずれかで４８時間処理したＮＨＬＦにおいてＲＮＡ－Ｓｅｑを実行した。対照及びＡＭ－００１処理ＮＨＬＦ細胞での我々の予備実験結果データセット分析により、線維化、ＥＣＭリモデリング、及び肺損傷時の増殖に関与する主要なＩＰＦ遺伝子シグネチャーが同定された。
【0128】
この広範なデータセットから、ＴＧＦβシグナル伝達、ＦＧＦＲ１（線維芽細胞増殖因子受容体１）、及びＴＮＣ（テネイシンＣ）が候補遺伝子として選択された。ＴＧＦ－βは、ヒト肺線維芽細胞におけるＦＧＦ／ＦＧＦＲシグナル伝達カスケードの調節因子であり（１、２）、多くの増殖因子間で複雑な相互作用を示している。ＴＧＦ－βはまた、ＴＮＣをアップレギュレートした（３～５）。まとめると、この証拠は、肺線維症の疾患発症機序におけるＥｐａｃ１の重要な役割を示唆している。ＦＧＦＲ１及びＴＮＣは確立された肺線維症の引き金であり（５、６）、両方とも我々のヒト肺試料でアップレギュレートされる（図７Ａ～Ｂ）。本発明者らはまた、Ｅｐａｃ１ ＫＯマウスにおけるＲＮＡ ｓｅｑの結果を検証した。データは、ＢＬＭがＥｐａｃ１ ＫＯと比較して投与ＷＴマウスのＦＧＦＲ１及びＴＮＣ ｍＲＮＡレベルを有意に増加させることを示した（図７Ｃ～Ｄ）。興味深いことに、ＡＭ－００１処理は、ＷＴマウスにおいてＴＮＣ ｍＲＮＡの減少傾向と共に、ＦＧＦＲ１を有意に減少させることにより、ＢＬＭの作用を逆転させた（図７Ｅ～Ｆ）。本発明者らは、ＡＭ－００１処理ＮＨＬＦを使用して得られたＲＮＡ－Ｓｅｑデータセットを更に分析し、ＥＮＣＯＤＥ及びＣｈＥＡライブラリーを使用して上位５０個の転写因子（ＴＦ）を同定した。本発明者らは、フォークヘッドボックスＯ３（Forkhead Box O3）（ＦＯＸＯ３）を見込みある候補として同定した。フォークヘッドボックスＯ（ＦＯＸＯ）は、進化的に保存されたＴＦであり、ＰＩ３－キナーゼ／プロテインキナーゼＢ－ＡＫＴシグナル伝達経路の標的であり、そして一連の基本的な生物学的プロセスに関与している。
【0129】
研究によると、ＦＯＸＯ３の喪失は、肺線維芽細胞の分化転換及び過剰増殖の表現型を導くことが示されている（７、８）。更には、ＦＯＸＯ３ ＫＯマウスは、ＢＬＭ投与に対する感受性の増強、線維化の増加、肺機能の喪失、及び死亡率の上昇を示した（７）。注目すべきことに、ｓｈＲＮＡ介在性Ｅｐａｃ１サイレンシングは、ＦＯＸＯ３ ｍＲＮＡの発現を増強し、一方Ｅｐａｃ１の過剰発現は、ＮＨＬＦ細胞におけるこれらの作用を逆転させることが分かった（図８Ａ～Ｂ）。
【0130】
８．正常及びＩＰＦ線維芽細胞におけるＥｐａｃ１の機能喪失又は機能獲得の効果。Ｅｐａｃ１欠失ＩＰＦ線維芽細胞、又はＡＭ－００１で処理された同細胞は、ＢｒｄＵ取り込みアッセイを使用して基本条件での増殖に関して評価された（２２）。予備データは、ＩＰＦ線維芽細胞（ＦＢ）が基本条件においてＮＨＬＦと比較して高いＥｐａｃ１のｍＲＮＡレベルを示し、そしてＥｐａｃ１ノックダウン（図９Ａ）及びＡＭ－００１阻害の両方が、ＩＰＦ線維芽細胞の増殖を減少させることを示している（図９Ｂ～１０Ｂ）。Ｅｐａｃ１は、炎症誘発性ＩＬ－６シグナル伝達経路の必須の調節因子として浮上している（９、１０）。ＩＰＦ線維芽細胞におけるＥｐａｃ１の欠失又は阻害は、ＩＬ－６及びα－ＳＭＡを減衰させ、ＦＯＸＯ３ ｍＲＮＡ発現を回復させる（図９Ｃ～Ｅ及び１０Ｃ～Ｅ）。更には、ＳＭＡＤ２／３、ＳＴＡＴ３、及びＡＫＴのリン酸化は、ＡＭ－００１処理ＩＰＦ線維芽細胞において減少した（図１０Ｅ）。ＡＭ－００１は、ＴＧＦ－β１シグナル伝達、ＡＫＴ、及びＩＬ－６を標的としていると考えられる。
【0131】
要約すると、これらのデータは、ＰＦにおける肺線維化促進遺伝子発現並びに線維芽細胞の活性化及び増殖における重要なプレーヤーとしてのＥｐａｃ１の可能性の予備的証拠を提供する。よって、Ｅｐａｃ１は、ＰＦの新規な抗線維化薬としてのＡＭ－００１の開発のための見込みある治療標的かもしれない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0132】
【表1】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【国際調査報告】