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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-02-15
(54)【発明の名称】Ｔａｃｒ２のアゴニスト
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20230208BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20230208BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20230208BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20230208BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20230208BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230208BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230208BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20230208BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20230208BHJP
A61K 47/60 20170101ALI20230208BHJP
A61K 47/61 20170101ALI20230208BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20230208BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20230208BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61K38/08
A61K38/10
A61K38/16
A61P3/04
A61P3/10
A61P43/00 111
A61K38/17
A61K47/64
A61K47/60
A61K47/61
A61K47/54
C07K7/06 ZNA
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022522926
(86)(22)【出願日】2019-10-17
(85)【翻訳文提出日】2022-05-12
(86)【国際出願番号】 EP2019078201
(87)【国際公開番号】W WO2021073742
(87)【国際公開日】2021-04-22
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】508335820
【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ コペンハーゲン
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ゲアハルト－ハインズ，ザッカリー
(72)【発明者】
【氏名】ハンセン，ジェイコブ ボンド
(72)【発明者】
【氏名】シュワルツ，ツエ ダブリュー．
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB16
4C076CC21
4C076EE23
4C076EE30
4C076EE41
4C076FF63
4C084AA02
4C084AA17
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA17
4C084BA18
4C084BA22
4C084BA42
4C084CA59
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA701
4C084ZA702
4C084ZC351
4C084ZC352
4C084ZC411
4C084ZC412
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA14
4H045EA20
4H045FA10
4H045GA21
(57)【要約】
本開示は、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストなどのＴａｃｒ２のアゴニスト、ならびにインスリン抵抗性、肥満および／または糖尿病の処置のためにＴａｃｒ２のアゴニストを使用する方法に関する。本開示はまた、個体におけるエネルギ消費の増強のための前記Ｔａｃｒ２のアゴニストの使用に関する。
【選択図】図1
【選択図】図1
【特許請求の範囲】
【請求項1】
それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置における使用のためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩。
【請求項2】
それを必要とする個体において体重減少を誘導する方法における使用のためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩。
【請求項3】
ペプチドを含むまたはそれからなる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項4】
コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項5】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、配列Ｘ６Ｘ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のペプチドを含みまたはそれからなりかつＸ６＝アスパラギン酸（Ｅ）またはグルタミン酸（Ｄ）；
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）
である、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項6】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、配列ＤＸ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のペプチドを含みまたはそれからなりかつＸ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）
である、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項7】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、ニューロキニンＡまたはその機能的類似体を含むまたはそれからなる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項8】
前記ペプチドが、少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる、請求項４～７のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項9】
前記ペプチドが、少なくとも１０および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる、請求項４～７のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項10】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体を含む、請求項４～９のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項11】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体の断片を含む、請求項４～１０のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項12】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体の連続配列からなる、請求項４～１１のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項13】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含みかつ多くとも２つのアミノ酸が、交換されている、請求項４～１２のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項14】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列からなりかつ多くとも２つのアミノ酸が、交換されている、請求項４～１３のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項15】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含むまたはそれからなる、請求項４～１４のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項16】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含むまたはそれからなる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項17】
前記ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含むまたはそれからなる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項18】
前記ペプチドが、Ｃ末端アミド化またはＮ末端アセチル化を含有する、請求項３～１７のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項19】
前記コンジュゲートされた部分が、ペプチド、脂質、グリカン、糖類およびＰＥＧからなる群から選択される、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項20】
前記コンジュゲートされた部分が、マンノースなどの、糖類である、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項21】
前記コンジュゲートされた部分が、マンノースであり、かつ前記マンノースが、前記ペプチドのＮ末端アミノ酸にコンジュゲートされる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項22】
前記コンジュゲートされた部分が、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキドン酸からなる群から選択される脂肪酸である、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項23】
前記コンジュゲートされた部分が、－Ｎａａ－カプリン酸、－Ｎａａ－ラウリン酸、－Ｎａａ－ミリスチン酸、－Ｎａａ－パルミチン酸、－Ｎａａ－ステアリン酸、および－Ｎａａ－アラキドン酸からなる群から選択される、アミノ酸に連結された脂肪酸である、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項24】
前記コンジュゲートされた部分が、請求項５～１８のいずれか１項に記載のペプチドの末端アミノ酸にまたは非末端アミノ酸に付着される、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項25】
前記コンジュゲートされた部分が、－Ｎａａ－ミリスチン酸、－Ｎａａ－パルミチン酸、－Ｎａａ－ステアリン酸からなる群から選択され、－Ｎａａ－が、任意のタンパク質構成アミノ酸であり、かつ前記コンジュゲートされた部分が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドの２位にあるリシンに付着される、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項26】
前記コンジュゲートされた部分が、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸からなる群から選択され、かつ前記コンジュゲートされた部分が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドのＮ末端アミノ酸に付着される、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項27】
前記コンジュゲートされた部分が、マンノースであり、かつ前記マンノースが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１のペプチドのＮ末端セリンにコンジュゲートされる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項28】
Ｔａｃｒ１に対してよりもＴａｃｒ２に対してより高い親和性を有する、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項29】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠糖尿病のいずれか１つである、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項30】
前記アゴニストが、前記それを必要とする個体の血中グルコースＣｍｉｎを低減する、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項31】
前記アゴニストが、前記それを必要とする個体においてインスリンに応答して血中グルコースＣｍｉｎに達してからプレインスリングルコースレベルに戻る間の時間間隔を増加させる、前記請求項のいずれか１項に記載のアゴニスト。
【請求項32】
それを必要とする個体における肥満、インスリン抵抗性および／または糖尿病の処置のための請求項１～３１のいずれか１項に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項33】
インスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための医薬の製造のためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の使用。
【請求項34】
前記アゴニストが、請求項１～３１のいずれか１項に定義された通りである、請求項３３３３に記載の使用。
【請求項35】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠糖尿病のいずれか１つである、請求項３３３３に記載の使用。
【請求項36】
それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、前記個体にＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項37】
それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、前記個体へのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の治療有効量の投与により前記個体における褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法。
【請求項38】
それを必要とする個体において体重減少を誘導するための方法であって、前記個体にＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項39】
それを必要とする個体において体重減少を誘導するための方法であって、前記個体へのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の治療有効量の投与により前記個体における褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法。
【請求項40】
前記Ｔａｃｒ２のアゴニストが、請求項２～４２のいずれか１項に定義された通りである、請求項３６～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
前記アゴニストが、前記個体に非経口投与される、請求項３６～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記Ｔａｃｒ２への前記ペプチドアゴニストの結合をさらに含む、請求項３６～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
初代褐色脂肪細胞における基礎酸素消費速度および／またはノルエピネフリン誘導性酸素消費速度および／または最大酸素消費速度を増加させることをさらに含む、請求項３６～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
褐色およびベージュ脂肪細胞においてグルコースの吸収を増加させることをさらに含む、請求項３６～４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
褐色およびベージュ脂肪細胞においてエネルギー消費を増加させることをさらに含む、請求項３６～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
前記個体においてインスリン感受性を増加させることをさらに含む、請求項３６～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
褐色およびベージュ脂肪細胞において内因性ニューロキニンＡの放出を刺激することをさらに含む、請求項４７～５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項48】
前記個体の血中グルコースＣｍｉｎを低減することをさらに含む、請求項３６～４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項49】
インスリンに応答して血中グルコースＣｍｉｎに達してからプレインスリングルコースレベルに戻る間の時間間隔を増加させることをさらに含む、請求項３６～４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項50】
糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠糖尿病のいずれか１つである、請求項３６～４９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本開示は、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストなどのＴａｃｒ２のアゴニスト、ならびにそれを肥満および／または糖尿病の処置に使用する方法に関する。本開示はまた、個体におけるグルコースおよびエネルギー消費の増大のための上記Ｔａｃｒ２アゴニストの使用に関する。
本開示は、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストなどのＴａｃｒ２のアゴニスト、ならびにそれを肥満および／または糖尿病の処置に使用する方法に関する。本開示はまた、個体におけるグルコースおよびエネルギー消費の増大のための上記Ｔａｃｒ２アゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
世界にはおよそ２０億人の過体重または肥満個体と、３億５千万人の糖尿病個体が存在し（世界保健機関による）、継続的研究がなされているにもかかわらず、依然として有効な処置が必要とされている。
世界にはおよそ２０億人の過体重または肥満個体と、３億５千万人の糖尿病個体が存在し（世界保健機関による）、継続的研究がなされているにもかかわらず、依然として有効な処置が必要とされている。
【0003】
試験された治療的方策の１つは、ベージュ／ブライト脂肪組織の活性化である。ノルエピネフリン（ＮＥ）による褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の古典的活性化は、ベータ－アドレナリン作動性受容体（β３ＡＲ）を通してこれらの細胞内でのエネルギー消費を増加させる（Ｃａｎｎｏｎ ａｎｄ Ｎｅｄｅｒｇａａｒｄ， ２００４）。これらの褐色およびベージュ／ブライト脂肪のエネルギー消費量の主なエフェクターの１つは、プロトン勾配を解消してＡＴＰ発生の代わりに熱を生成する、脱共役タンパク質１（Ｕｃｐ１）である。褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の活性化に加えて、寒冷暴露もまた、褐色およびベージュ／ブライトの脂肪デポの拡大を惹起する。褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の拡大および活性化は、有意な量の脂質およびグルコースを消費するその能力ゆえ、肥満および糖尿病を処置するための大きな関心を寄せられている。ＮＥは現在、褐色およびベージュ／ブライト脂肪の拡大および活性化の有力な神経伝達物質およびエフェクターであると考えられている。不幸にもＮＥは、それが血圧および心拍数の上昇を招くため、肥満および糖尿病の処置に有用でない。
【0004】
現在、肥満および／または糖尿病の処置のための褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の活性化剤は、存在しない。アドレナリン作動性活性化剤のうち、過活動膀胱を処置するために認可された薬物ミラベグロン（Ｍｙｒｂｅｔｒｉｑ、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ， Ｉｎｃ．）は、ヒト褐色脂肪を活性化することが概念実証試験で示された（Ｃｙｐｅｓｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１５）。しかしこの薬物は、潜在的な肥満患者の望ましくない副作用である血圧および心拍数上昇をもたらし、この治療手段への熱意を低下させた。
【0005】
それゆえ、アドレナリン作動性活性化剤の全身投与を必要とせずに、褐色およびベージュ／ブライト脂肪デポのより特異的な活性化を提供する手段が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
発明の概要
本開示は、それを必要とする個体において糖尿病および／または肥満の処置で使用するためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩に関する。本発明者らは、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストが、ノルエピネフリン（ＮＥ）／β－アドレナリン作動性受容体シグナル伝達から独立して褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織を活性化し得ることを見出した。本発明は、個体へのＴａｃｒ２のアゴニストの投与が、肥満および糖尿病の処置に有益である、褐色およびベージュ脂肪細胞に対する多数の効果を有することを開示する。特にＴａｃｒ２のアゴニストは、褐色およびベージュ脂肪細胞において、酸素消費速度を、好ましくはグルコース吸収、酸素消費速度、エネルギー消費、および熱産生も増加させる。好ましくはＴａｃｒ２のアゴニスト、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、褐色脂肪組織の活性化をもたらし、血圧および心拍数上昇などの有害な副作用を引き起こさない。
本開示は、それを必要とする個体において糖尿病および／または肥満の処置で使用するためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩に関する。本発明者らは、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストが、ノルエピネフリン（ＮＥ）／β－アドレナリン作動性受容体シグナル伝達から独立して褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織を活性化し得ることを見出した。本発明は、個体へのＴａｃｒ２のアゴニストの投与が、肥満および糖尿病の処置に有益である、褐色およびベージュ脂肪細胞に対する多数の効果を有することを開示する。特にＴａｃｒ２のアゴニストは、褐色およびベージュ脂肪細胞において、酸素消費速度を、好ましくはグルコース吸収、酸素消費速度、エネルギー消費、および熱産生も増加させる。好ましくはＴａｃｒ２のアゴニスト、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、褐色脂肪組織の活性化をもたらし、血圧および心拍数上昇などの有害な副作用を引き起こさない。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示の一態様は、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置で使用するためのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストに関する。
【0008】
本開示の別の態様は、それを必要とする個体における肥満および／または糖尿病の処置のための、本明細書に定義されたＴａｃｒ２アゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストを含む医薬組成物に関する。
【0009】
本開示の別の態様は、糖尿病および／または肥満の処置のための医薬の製造のための、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストの使用に関する。
【0010】
本開示の別の態様は、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。
【0011】
本発明の別の態様は、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、上記個体へのＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストの治療有効量の投与により上記個体における褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1a】褐色および白色脂肪組織中のＮＫＡ／ＴＡＣＲ２の発現的および機能的特徴づけ。Ｃ５７ＢＩ／６マウスからの温熱的中性に比べた、寒冷誘導された（ａ）肩甲骨間の褐色脂肪組織（ｉＢＡＴ）、（ｂ）鼠径部の白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）および（ｃ）精巣上体の白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）におけるＴａｃｒ２の発現プロファイル。データは、ｎ＝５の平均およびＳＥＭを示す。
【図1b】褐色および白色脂肪組織中のＮＫＡ／ＴＡＣＲ２の発現的および機能的特徴づけ。Ｃ５７ＢＩ／６マウスからの温熱的中性に比べた、寒冷誘導された（ａ）肩甲骨間の褐色脂肪組織（ｉＢＡＴ）、（ｂ）鼠径部の白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）および（ｃ）精巣上体の白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）におけるＴａｃｒ２の発現プロファイル。データは、ｎ＝５の平均およびＳＥＭを示す。
【図1c】褐色および白色脂肪組織中のＮＫＡ／ＴＡＣＲ２の発現的および機能的特徴づけ。Ｃ５７ＢＩ／６マウスからの温熱的中性に比べた、寒冷誘導された（ａ）肩甲骨間の褐色脂肪組織（ｉＢＡＴ）、（ｂ）鼠径部の白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）および（ｃ）精巣上体の白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）におけるＴａｃｒ２の発現プロファイル。データは、ｎ＝５の平均およびＳＥＭを示す。
【図2a】（ａ）Ｔａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、温熱的中性に馴化された、または寒冷チャレンジされたマウスのｉＢＡＴからの成熟脂肪細胞および間質血管画分において決定した。（ｂ）１２週間の固形飼料または６０％高脂肪食（ＨＦＤ）のどちらかを摂取したＣ５７ＢＩ／６マウスからのｉＢＡＴ中のＴａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現。データは、ｎ＝８の平均およびＳＥＭを示す。（ｃ）
【図2b】（ａ）Ｔａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、温熱的中性に馴化された、または寒冷チャレンジされたマウスのｉＢＡＴからの成熟脂肪細胞および間質血管画分において決定した。（ｂ）１２週間の固形飼料または６０％高脂肪食（ＨＦＤ）のどちらかを摂取したＣ５７ＢＩ／６マウスからのｉＢＡＴ中のＴａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現。データは、ｎ＝８の平均およびＳＥＭを示す。（ｃ）
【図2c】（ａ）Ｔａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現レベルを、温熱的中性に馴化された、または寒冷チャレンジされたマウスのｉＢＡＴからの成熟脂肪細胞および間質血管画分において決定した。（ｂ）１２週間の固形飼料または６０％高脂肪食（ＨＦＤ）のどちらかを摂取したＣ５７ＢＩ／６マウスからのｉＢＡＴ中のＴａｃｒ２ ｍＲＮＡ発現。データは、ｎ＝８の平均およびＳＥＭを示す。（ｃ）
【図3a】（ａ）Ｔａｃｒ２またはベクター対照のどちらかをトランスフェクトされた初代褐色脂肪細胞におけるＮＫＡ介在性ＩＰ３産生。（ｂ）ＮＫＡまたはビヒクルで７２時間処置された初代褐色脂肪細胞において、Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｚｅｒにより測定された酸素消費速度（ＯＣＲ）。基礎呼吸の測定に続いて、ＮＥ（５μＭ）、オリゴマイシン（１μＭ）、ＦＣＣＰ（１μＭ）ならびにロテノンおよびアンチマイシンＡ（各々１μＭ）を用いて測定した。データは、平均およびＳＥＭを示す、ｎ＝８。
【図3b】（ａ）Ｔａｃｒ２またはベクター対照のどちらかをトランスフェクトされた初代褐色脂肪細胞におけるＮＫＡ介在性ＩＰ３産生。（ｂ）ＮＫＡまたはビヒクルで７２時間処置された初代褐色脂肪細胞において、Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｚｅｒにより測定された酸素消費速度（ＯＣＲ）。基礎呼吸の測定に続いて、ＮＥ（５μＭ）、オリゴマイシン（１μＭ）、ＦＣＣＰ（１μＭ）ならびにロテノンおよびアンチマイシンＡ（各々１μＭ）を用いて測定した。データは、平均およびＳＥＭを示す、ｎ＝８。
【図4a】マウスに、連続９日間の照光期間に、矢印で標識された１ｍｇ／ｋｇ ＮＫＡ（灰色）またはビヒクル（黒色）を１日２回注射した。酸素消費を、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒを利用して５分ごとに測定した。データは、全日の代表であり、ｎ＝６の平均±ＳＥＭを示す。
【図4b】体重を、実験期間全体で毎日測定した。データは、ｎ＝６～７の平均±ＳＥＭを示す。シダック多重比較を用いた二元配置分散分析を利用して、＊ ｐ＜０．０５、＊＊ ｐ＜０．０１。
【図4c】インスリン負荷テストを、処置の翌日に３時間絶食マウスにおいて実施し、マウスは、１ＵＩ／ｋｇ除脂肪体重のインスリンを腹腔内に受けた。データは、ｎ＝６～７の平均±ＳＥＭを示す。シダック多重比較を用いた二元配置分散分析を利用して、＊ ｐ＜０．０５、＊＊ ｐ＜０．０１。
【図4d】３つの大きな脂肪組織を、実験終了時に採取して計量した。データは、ｎ＝６～７の平均±ＳＥＭを示す。対応のないスチューデントｔ検定を利用して、＊ ｐ＜０．０５。
【図5a】ビヒクル（黒色）または［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡ（灰色）のどちらかで処置されたマウスにおけるａ）体重減少；ｂ）摂餌量；およびｃ）カロリー消費。データは、ｎ＝６の平均±ＳＥＭを示す。
【図5b】ビヒクル（黒色）または［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡ（灰色）のどちらかで処置されたマウスにおけるａ）体重減少；ｂ）摂餌量；およびｃ）カロリー消費。データは、ｎ＝６の平均±ＳＥＭを示す。
【図5c】ビヒクル（黒色）または［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡ（灰色）のどちらかで処置されたマウスにおけるａ）体重減少；ｂ）摂餌量；およびｃ）カロリー消費。データは、ｎ＝６の平均±ＳＥＭを示す。
【発明を実施するための形態】
【0013】
発明の詳細な記載
定義
本明細書で用いられる用語「アゴニスト」は、他に具体的に断りがなければ、Ｔａｃｒ２のアゴニストに関する。本明細書で定義されるＴａｃｒ２のアゴニストは、Ｔａｃｒ２を結合しそれによりＴａｃｒ２の活性を増強できるペプチドを含む、またはそれからなる化合物を指す。
定義
本明細書で用いられる用語「アゴニスト」は、他に具体的に断りがなければ、Ｔａｃｒ２のアゴニストに関する。本明細書で定義されるＴａｃｒ２のアゴニストは、Ｔａｃｒ２を結合しそれによりＴａｃｒ２の活性を増強できるペプチドを含む、またはそれからなる化合物を指す。
【0014】
本明細書で用いられる「褐色および／またはベージュ／ブライト脂肪細胞の活性」などの用語「褐色および／またはベージュ／ブライト脂肪組織細胞の活性」は、Ｔａｃｒ２とアゴニストの相互作用に応答して変動し得る褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の細胞に典型的な複数の生化学的パラメータを指す。褐色および／またはベージュ／ブライト脂肪細胞の活性を定義するパラメータの幾つかの例は、基礎酸素消費速度（ＯＣＲ）、ノルエピネフリン（ＮＥ）誘導性ＯＣＲ、最大呼吸、グルコース取り込み／吸収、脂質取り込み／吸収、熱産生である。
【0015】
タンパク質構成「アミノ酸」は、ＩＵＰＡＣからの推奨に従って１文字コードを利用して本明細書で命名されており、例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ ｃｈｅｍ．ｑｍｗ．ａｃ．ｕｋ／ｉｕｐａｃを参照されたい。他に何も指定されなければ、アミノ酸は、ＤまたはＬ型であり得る。
【0016】
本明細書で用いられる用語「Ｃｍｉｎ」は、化合物の最小血液濃度を指す。したがってインスリンの投与後の血中グルコースレベルに関係するＣｍｉｎは、上記投与後に観察される最小血中グルコース濃度である。多くの場合、血中グルコースレベルに関係するＣｍｉｎは、インスリン投与間隔の間に観察される最小血中グルコース濃度である。
【0017】
本明細書で用いられる用語「機能的類似体」は、参照化合物と類似の様式で作用する化合物を指す。したがってＴａｃｒ２のペプチドアゴニストの機能的類似体は、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストとして作用する。機能的類似体は、例えばペプチドを含む化合物であり得、ペプチドは、Ｔａｃｒ２を結合しそれによりＴａｃｒ２の活性を増強し得るアミノ酸残基から必ずしもならない部分で修飾されていてもよい。
【0018】
「非標準的アミノ酸」は、任意の生物体の遺伝暗号によりコードされていないアミノ酸残基である。非標準的アミノ酸残基は、生物体の中で自然に発生し得る。非標準的アミノ酸の非限定的例は、Ｄ配置の天然アミノ酸、βアミノ酸、γアミノ酸および非タンパク質構成アミノ酸である。
【0019】
用語「ＰＥＧ」ポリエチレングリコールは、化学式Ｃ２ｎＨ４ｎ＋２Ｏｎ＋１および繰り返し構造：
を有するエチレングリコールのポリマーを指す。
【化1】
【0020】
本明細書で用いられる用語「ペプチド」は、アミド結合を介して連結された少なくとも２つのアミノ酸残基の配列である。
【0021】
用語「ペプチドアゴニスト」は、他に具体的に断りがなければ、Ｔａｃｒ２の化合物アゴニストを指す。本明細書で定義されるＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、Ｔａｃｒ２を結合しそれによりＴａｃｒ２の活性を増強できるペプチドを含む、またはそれからなる化合物を指す。Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ペプチドおよびコンジュゲートされた部分からなっていてもよい。コンジュゲートされた部分は、例えば熟練者に有益と見なされる糖、脂質、第二のペプチド、または任意の他の化学基であってもよい。
【0022】
本明細書で用いられる用語「配列同一性」は、アライメントによる候補配列と参照配列の間の同一アミノ酸またはヌクレオチドの割合％を指す。したがって参照配列と８０％のアミノ酸同一性を共有する候補配列は、アライメントにより、候補配列中のアミノ酸の８０％が参照配列中の対応するアミノ酸と同一であることを必要とする。本発明による同一性は、非限定的に、ポリペプチド配列のアライメントのためのＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａコンピュータアライメントプログラム（Ｓｉｅｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （２０１１ Ｏｃｔｏｂｅｒ １１） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７ ：５３９， ＰＭＩＤ： ２１９８８８３５； Ｌｉ ｅｔ ａｌ． （２０１５ Ａｐｒｉｌ ０６） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４３ （Ｗ１） ：Ｗ５８０－４ ＰＭＩＤ： ２５８４５５９６； ＭｃＷｉｌｌｉａｍ ｅｔ ａｌ．， （２０１３ Ｍａｙ １３） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４１ （Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５９７－６００ ＰＭＩＤ： ２３６７１３３８）などのコンピュータ解析、およびその中に示唆されたデフォルトパラメータの助力により決定される。Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａソフトウエアは、ＥＭＢＬ－ＥＢＩからｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏ／で入手可能である。デフォルト設定でこのプログラムを利用して、クエリーの成熟（生物活性）部分および参照ポリペプチドがアライメントされる。完全に保存された残基の数が、カウントされ、参照ポリペプチドの長さで割られる。ＭＵＳＣＬＥまたはＭＡＦＦＴアルゴリズムが、ヌクレオチド配列のアライメントに用いられてもよい。配列同一性は、アミノ酸配列に指示されたものと類似の方法で計算されてもよい。したがって本明細書で提供される配列同一性は、参照配列の全長にわたり計算される。
【0023】
本明細書で用いられる用語「処置」は、病気、疾患または障害を克服することを目的とした患者の管理およびケアを指す。この用語は、症状もしくは合併症を軽減または緩和すること；病気、疾患もしくは障害の進行を遅延させること；病気、疾患または障害を好転、治癒もしくは排除すること；および／または病気、疾患または障害を予防すること、を目的とした活性化合物の投与などの、患者が罹患している所与の病気のための処置の全領域を含むと意図される。処置される患者は、好ましくは哺乳動物、特にヒトである。処置される患者は、様々な年齢であり得る。
【0024】
Ｔａｃｒ２のアゴニスト
本開示の一態様は、肥満および／または糖尿病の処置で使用するための、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストに関する。Ｔａｃｒ２のアゴニストは、Ｔａｃｒ２を結合しＴａｃｒ２の活性を増強できる任意の化合物であってよい。幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニストは、ペプチドアゴニストである。上記Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、以下の「ペプチドアゴニスト」および「コンジュゲートされた部分」の節に詳細に記載される通り、ペプチドおよび場合によりコンジュゲートされた部分を含んでいても、またはそれからなってもよい。
本開示の一態様は、肥満および／または糖尿病の処置で使用するための、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩、特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストに関する。Ｔａｃｒ２のアゴニストは、Ｔａｃｒ２を結合しＴａｃｒ２の活性を増強できる任意の化合物であってよい。幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニストは、ペプチドアゴニストである。上記Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、以下の「ペプチドアゴニスト」および「コンジュゲートされた部分」の節に詳細に記載される通り、ペプチドおよび場合によりコンジュゲートされた部分を含んでいても、またはそれからなってもよい。
【0025】
好ましくはＴａｃｒ２のアゴニストは、任意の適切なアッセイにより、特にＴａｃｒ２の活性を測定し得る細胞機能アッセイ、例えば両者ともＡｂｌａｓ Ｊ． ｅｔ ａｌ． （１９９５）に記載されるＣａ２＋動員アッセイまたはイノシトール－３－リン酸（ＩＰ３）の生成により決定されるＴａｃｒ２の活性を増強できる。放射性リガンドアッセイまたは他のアッセイ、例えば機能的「モノレセプトリアル（ｍｏｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｉａｌ）」バイオアッセイが、Ｔａｃｒ２活性を測定するための適切な手段として熟練者に選択され得る。したがってＴａｃｒ２のアゴニストは、前述のアッセイのいずれかにより決定されるＴａｃｒ２のアゴニストを増強できる、好ましくはＴａｃｒ２の活性を少なくとも３０％など、例えば少なくとも４０％など、少なくとも２０％増強できる、ペプチドアゴニストなどの任意の化合物であってよい。
【0026】
幾つかの実施形態において、アゴニスト活性は、Ｔａｃｒ２を発現する細胞中のＩＰ３産生を決定することにより測定される。好ましくはＴａｃｒ２のアゴニストは、そのような細胞と接触するとＩＰ３の産生増加をもたらす、化合物である。したがって、化合物がＴａｃｒ２のアゴニストであるかどうかは、
・Ｔａｃｒ２を発現する細胞を提供するステップと、
・上記細胞を、ミオイノシトールおよびＴａｃｒ２の推定アゴニストである化合物と接触させるステップと、
・Ｔａｃｒ２の上記推定アゴニストの非存在下および存在下で上記細胞中のＩＰ３の産生を決定するステップ、
を含み、
上記化合物の存在下でのＩＰ３の産生増加が、上記化合物がＴａｃｒ２のアゴニストであることの指標である、方法により決定されてよい。
・Ｔａｃｒ２を発現する細胞を提供するステップと、
・上記細胞を、ミオイノシトールおよびＴａｃｒ２の推定アゴニストである化合物と接触させるステップと、
・Ｔａｃｒ２の上記推定アゴニストの非存在下および存在下で上記細胞中のＩＰ３の産生を決定するステップ、
を含み、
上記化合物の存在下でのＩＰ３の産生増加が、上記化合物がＴａｃｒ２のアゴニストであることの指標である、方法により決定されてよい。
【0027】
細胞は、Ｔａｃｒ２を内因的に発現してよく、またはそれらは、Ｔａｃｒ２を発現するように組換え操作された細胞であってよく、例えば細胞は、Ｔａｃｒ２をコードする非相同核酸を含むＣＯＳ－７またはＨＥＫ２９３細胞であってよい。ＩＰ３の産生は、用量反応曲線として決定されてよい。
【0028】
細胞はまた、初代褐色脂肪細胞、例えばＴａｃｒ２をコードする非相同核酸を含む初代褐色脂肪細胞であってよい。したがって、Ｔａｃｒ２のアゴニストは、実施例２に記載された通り実施されたアッセイでＩＰ３の産生を誘導する化合物であることが、好ましいかもしれない。好ましくは上記アゴニストは、ＮＫＡと類似の様式でＩＰ３の産生を誘導する化合物、または実施例２に記載された通り決定される場合にＮＫＡに比較して少なくとも８０％のＩＰ３の産生を誘導する化合物である。
【0029】
Ｔａｃｒ２のアゴニストはそれゆえ、上記の通りＩＰ３産生をモニタリングするアッセイを利用した測定でＴａｃｒ２活性を少なくとも２０％増強する化合物であってよい。Ｔａｃｒ２のアゴニストは、上記の通りＩＰ３産生をモニタリングするアッセイを利用した測定でＴａｃｒ２活性を少なくとも３０％増強する化合物であってよい。
【0030】
Ｔａｃｒ２のアゴニストは、上記の通りＩＰ３産生をモニタリングするアッセイを利用した測定でＴａｃｒ２活性を少なくとも４０％増強する化合物であってよい。
【0031】
Ｔａｃｒ２のアゴニストは好ましくは、Ｔａｃｒ２への高い親和性を有する。受容体への化合物の親和性、すなわちＴａｃｒ２への化合物の親和性は、異なるアッセイを介して測定でき、それにより以下に記載される、表１に示されるような異なる親和性単位をもたらす：
－ ｐＩＣ５０は、アゴニストのＩＣ５０の底１０での負の対数であり、ここでＩＣ５０は、複数の方法で用いられる用語であり、特に放射セリリガンドの結合を５０％阻害する非標識アゴニストのモル濃度であってよく；放射性リガンドの濃度が与えられなければならず、本開示のＩＣ５０の単位は、他に指定されなければＭ（モーラー）である。
－ ｐＥＣ５０は、アゴニストのＥＣ５０の底１０での負の対数であり、ここでＥＣ５０は、アゴニストの、この節で先に定義された適当なアッセイでの測定で、可能な最大効果の５０％を生じるアゴニストのモル濃度である。他のパーセント値（ＥＣ２０、ＥＣ４０など）を指定でき、本開示におけるＥＣ５０の単位は、他に指定されない限りＭ（モーラー）である。
－ ｐＫｄは、Ｋｄの底１０での負の対数であり、ここでＫｄは、アゴニストの標識形態を利用した結合アッセイで直接決定されるアゴニストの平衡解離定数を指す。
－ ｐＫｉは、Ｋｉの底１０での負の対数であり、ここでＫｉは、阻害試験で決定されるリガンドの平衡解離定数を指す。所与のリガンドのＫｉは典型的には（必ずではないが）、平衡条件下で該当する競合リガンドによる参照放射性リガンドの結合の阻害を測定することにより、競合放射性リガンド結合試験で決定される。
－ ｐＩＣ５０は、アゴニストのＩＣ５０の底１０での負の対数であり、ここでＩＣ５０は、複数の方法で用いられる用語であり、特に放射セリリガンドの結合を５０％阻害する非標識アゴニストのモル濃度であってよく；放射性リガンドの濃度が与えられなければならず、本開示のＩＣ５０の単位は、他に指定されなければＭ（モーラー）である。
－ ｐＥＣ５０は、アゴニストのＥＣ５０の底１０での負の対数であり、ここでＥＣ５０は、アゴニストの、この節で先に定義された適当なアッセイでの測定で、可能な最大効果の５０％を生じるアゴニストのモル濃度である。他のパーセント値（ＥＣ２０、ＥＣ４０など）を指定でき、本開示におけるＥＣ５０の単位は、他に指定されない限りＭ（モーラー）である。
－ ｐＫｄは、Ｋｄの底１０での負の対数であり、ここでＫｄは、アゴニストの標識形態を利用した結合アッセイで直接決定されるアゴニストの平衡解離定数を指す。
－ ｐＫｉは、Ｋｉの底１０での負の対数であり、ここでＫｉは、阻害試験で決定されるリガンドの平衡解離定数を指す。所与のリガンドのＫｉは典型的には（必ずではないが）、平衡条件下で該当する競合リガンドによる参照放射性リガンドの結合の阻害を測定することにより、競合放射性リガンド結合試験で決定される。
【0032】
特にＴａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、Ｂｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り、放射性リガンドアッセイまたは「モノレセプトリアル」アッセイなどのテストでの測定で、８～１０のｐＥＣ５０を有する化合物であってよい。
【0033】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合に、６．７～９．５の範囲のネズミ受容体でのｐＥＣ５０を有する化合物であってよい。
【0034】
例えばペプチドアゴニストは、少なくとも７のｐＥＣ５０など、好ましくは少なくとも７．５のｐＥＣ５０、例えば少なくとも８のｐＥＣ５０、少なくとも８．５のｐＥＣ５０など、好ましくは少なくとも９のｐＥＣ５０などの、少なくとも６．８のネズミ受容体のｐＥＣ５０を有する化合物であってよい。
【0035】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合に、７．２～９．５の範囲のヒト受容体でのｐＥＣ５０を有する化合物であってよい。
【0036】
例えばペプチドアゴニストは、少なくとも７．８のｐＥＣ５０など、好ましくは少なくとも８のｐＥＣ５０、例えば少なくとも８．５のｐＥＣ５０、少なくとも９のｐＥＣ５０などの、少なくとも７．５のヒト受容体でのｐＥＣ５０有する化合物であってよい。
【0037】
特にＴａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、Ｂｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り放射性リガンド結合アッセイまたは「モノレセプトリアル」バイオアッセイなどのテストでの測定で、６～１０のｐＫｄを有する化合物であってよい。
【0038】
特にＴａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、Ｂｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り放射性リガンド結合アッセイまたは「モノレセプトリアル」バイオアッセイなどのテストでの測定で、５～１０のｐＫｉを有する化合物であってよい。
【0039】
この節の冒頭に記載された通りＴａｃｒ２の活性を測定するアッセイを利用して、潜在的アゴニストがＴａｃｒ２への高い親和性を有するかどうかも決定されてよい。アゴニストは、Ｃａ２＋動員またはイノシトール蓄積の増加などのＴａｃｒ２活性の上昇をもたらすそれらの化合物、好ましくはペプチドアゴニストである。好ましくは本開示のペプチドアゴニストはまた、Ｔａｃｒ１よりもＴａｃｒ２に対して高い親和性を有することを特徴とする。それらは、Ｔａｃｒ１に対して低い、または無視できるほどの親和性を有してよい。それらは、Ｔａｃｒ１に結合できるが、Ｔａｃｒ２へのそれらの親和性は、Ｔａｃｒ１への親和性より高い。したがって好ましくはＴａｃｒ２のペプチドアゴニストなどのＴａｃｒ２のアゴニストは、Ｔａｃｒ１への親和性の少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍であるＴａｃｒ２への親和性を有する。
【0040】
Ｔａｃｒ２のアゴニストは、天然由来および人工の両方の化合物であり得る。ヒト（ホモサピエンス、Ｈｓ）、ラット（ラッツス・ノルベギクス、Ｒｎ）およびモルモット（キャビア・ポルセルス、Ｃｐ）で見出されたＴａｃｒ２の天然アゴニストの非限定的例、ならびにＴａｃｒ２へのそれらの親和性のリストが、表１に列挙される（Ｄｏｕｇｌａｓ Ｓ． Ｄ．， ｅｔ ａｌ． ２０１５）。
【表1】
【0041】
Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、Ｂｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り放射性リガンド結合アッセイまたは「モノレセプトリアル」バイオアッセイなどのテストで測定され得る、高い有効性を有する化合物であってよく、その最上値は、テストされたアゴニストの有効性を示し、最上値と最低値の差は、テストされた値の有効性のスパンを示す。
【0042】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、可能な限り高い有効性を有する化合物であってよい。有効性は、例えばＢｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り放射性リガンド結合アッセイまたは「モノレセプトリアル」バイオアッセイなどのテストで得られた最上値から得られてよい。
【0043】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合、少なくとも１３００の相対的単位など、少なくとも１４００の相対的単位など、少なくとも１５００の相対的単位など、少なくとも１６００の相対的単位など、少なくとも１７００の相対的単位など、少なくとも１８００の相対的単位など、少なくとも１９００の相対的単位など、少なくとも２０００の相対的単位など、少なくとも２４００の相対的単位など、少なくとも２７００の相対的単位などの、少なくとも１２６０の相対的単位のネズミ受容体への有効性を有する化合物であってよい。
【0044】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合、少なくとも２２００の相対的単位など、少なくとも２４００の相対的単位など、少なくとも２６００の相対的単位など、少なくとも２８００の相対的単位など、少なくとも３０００の相対的単位などの、少なくとも２０００の相対的単位のヒト受容体への有効性を有する化合物であってよい。
【0045】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、可能な限り大きな有効性を有する化合物であってよい。有効性のスパンは、例えばＢｅｌｌｕｃｃｉ Ｆ． ｅｔ ａｌ．（２００２）に記載された通り放射性リガンド結合アッセイまたは「モノレセプトリアル」バイオアッセイなどのテストで得られた最上値から最低値を差し引くことにより測定されてよい。
【0046】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合、少なくとも１３００の相対的単位など、少なくとも１４００の相対的単位など、少なくとも１５００の相対的単位など、少なくとも１６００の相対的単位など、少なくとも１７００の相対的単位など、少なくとも１８００の相対的単位など、少なくとも１９００の相対的単位など、少なくとも２０００の相対的単位など、少なくとも２４００の相対的単位など、少なくとも２７００の相対的単位などの、少なくとも１１００の相対的単位のネズミ受容体に関係する有効性スパンを有する化合物であってよい。
【0047】
本開示の一実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、例えばペプチドアゴニストは、実施例７に記載された通り決定される場合、少なくとも２０００の相対的単位など、少なくとも２２００の相対的単位など、少なくとも２４００の相対的単位など、少なくとも２６００の相対的単位など、少なくとも２８００の相対的単位など、少なくとも３０００の相対的単位などの、少なくとも１７００の相対的単位のヒト受容体に関係する有効性スパンを有する化合物であってよい。
【0048】
ペプチドアゴニスト
本開示の一態様は、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置で使用するための、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩に関し、ぺプチドアゴニストは、ペプチドを含む、またはそれからなる。Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストが、ペプチドを含む場合、上記ペプチドは、以下の「コンジュゲートされた部分」の節に記載される通り、コンジュゲートされた部分に共有結合で連結されてよい。好ましくはペプチドアゴニストは、Ｔａｃｒ２に結合でき、Ｔａｃｒ２を発現する細胞においてＣａ２＋動員またはイノシトール蓄積を増加させることができる。ペプチドアゴニストは、上記の「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に記載された通りＴａｃｒ２に対して高い親和性を有することを特徴とする。Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストおよびその親和性の幾つかの例が、表１に列挙される。
本開示の一態様は、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置で使用するための、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩に関し、ぺプチドアゴニストは、ペプチドを含む、またはそれからなる。Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストが、ペプチドを含む場合、上記ペプチドは、以下の「コンジュゲートされた部分」の節に記載される通り、コンジュゲートされた部分に共有結合で連結されてよい。好ましくはペプチドアゴニストは、Ｔａｃｒ２に結合でき、Ｔａｃｒ２を発現する細胞においてＣａ２＋動員またはイノシトール蓄積を増加させることができる。ペプチドアゴニストは、上記の「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に記載された通りＴａｃｒ２に対して高い親和性を有することを特徴とする。Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストおよびその親和性の幾つかの例が、表１に列挙される。
【0049】
一実施形態において、ペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡまたはその機能的類似体を含む、またはそれからなる。サブスタンスＫとしても知られるニューロキニンＡは、プレプロタキキニン遺伝子から翻訳されるペプチドである。ニューロキニンＡは、プレプロタキキニン遺伝子の異なるアイソフォームから選択的スプライシングを介して翻訳され得る。ヒトには、ニューロキニンＡをコードする遺伝子の２つのアイソフォームと、それによる２つの前駆体タンパク質、プロタキキニン－１アイソフォームベータ前駆体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２）およびプロタキキニン－１アイソフォームガンマ前駆体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３）が存在する。同様にニューロキニンＡをコードする遺伝子の２つのアイソフォームと、それによる２つの前駆体タンパク質が、マウスにも存在し、プロタキキニン－１アイソフォーム２前駆体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４）およびプロタキキニン－１アイソフォーム１前駆体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５）と命名されている。
【0050】
幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡの前駆体タンパク質またはその断片を含む、またはそれからなる。したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質、またはそれと少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％などの、少なくとも７５％の配列同一性を共有する機能的類似体を含む。好ましくはペプチドアゴニストは、ヒトプロタキキニン－１アイソフォームベータ前駆体またはその断片を含む、またはそれからなる。より好ましくはペプチドアゴニストは、ヒトプロタキキニン－１アイソフォームガンマ前駆体またはその断片を含む、またはそれからなる。より好ましくはペプチドアゴニストは、ネズミプロタキキニン－１アイソフォーム２前駆体またはその断片を含む、またはそれからなる。より好ましくはペプチドアゴニストは、ネズミプロタキキニン－１アイソフォーム１前駆体またはその断片を含む、またはそれからなる。
【0051】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質の、またはそれと少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％などの、少なくとも７５％の配列同一性を共有する機能的類似体の断片を含む。したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５の、またはそれらと少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％などの、少なくとも７５％の配列同一性を共有する上述のいずれかの機能的類似体の、多くとも１３０のアミノ酸残基の連続配列からなる。例えば幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなってよく、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５の、、またはそれと少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％などの、少なくとも７５％の配列同一性を共有する上述のいずれかの機能的類似体の、多くとも１３０のアミノ酸残基の連続配列からなり、上記ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む。
【0052】
好ましくはＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡの機能的類似体である。幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、連続配列Ｘ６Ｘ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０］を含み、またはそれからなり、ここで
Ｘ６＝アスパラギン酸（Ｅ）またはグルタミン酸（Ｄ）；
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）。
Ｘ６＝アスパラギン酸（Ｅ）またはグルタミン酸（Ｄ）；
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）。
【0053】
より好ましくは、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、少なくとも７のアミノ酸および多くとも１３０のアミノ酸の配列からなり、配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０を含む。
【0054】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる。好ましくはペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも７０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも５０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも３０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも２０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも１５のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の配列を含む少なくとも７および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。さらなる実施形態において、ペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３０の７アミノ酸残基からなる。
【0055】
好ましくはＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡの機能的類似体である。幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、連続配列ＤＸ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６］を含み、またはそれからなり、ここで
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）。
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）。
【0056】
より好ましくはＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、少なくとも７のアミノ酸および多くとも１３０のアミノ酸の配列からなり、配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６を含む。
【0057】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストの親和性またはそのアゴニスト性挙動を改善し得るＤ－γ－ラクタム、β－アラニン、γ－ラクタム－ロイシン、メチル－ロイシン、ノルロイシンまたは他のアミノ酸などの非標準的アミノ酸残基を含んでよい。
【0058】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６を含む、少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる。好ましくはペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも７０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも５０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも３０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも２０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも１５のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の配列を含む少なくとも７および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。さらなる実施形態において、ペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１６の７アミノ酸残基からなる。
【0059】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７、および多くとも２つのアミノ酸が標準的または非標準的アミノ酸で交換されている前述のもののいずれかからなる群から選択される配列を含む、またはそれからなる。
【0060】
特に、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７、および多くとも１つのアミノ酸が交換されている前述のもののいずれかからなる群から選択される配列を含んでも、またはそれからなってもよい。より好ましくはＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、またはそれからなる。
【0061】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７、および多くとも１つなどの多くも２つのアミノ酸が標準的または非標準的アミノ酸で交換されている前述のもののいずれかからなる群から選択される配列を含む、少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる。特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなってよく、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む少なくとも７および多くとも７０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む少なくとも７および多くとも５０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む少なくとも７および多くとも３０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む少なくとも７および多くとも１５のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む少なくとも７および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。
【0062】
したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１５、または前述のもののいずれかの断片の、またはそれと少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％の、少なくとも７５％の配列同一性を共有する前述のもののいずれかの機能的類似体の、７～１００の範囲など、例えば７～５０の範囲など、７～１５の範囲の連続するアミノ酸などの、７～１３０の範囲のアミノ酸の連続配列からなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む。
【0063】
１つの好ましい実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列からなる。
【0064】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含む少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなり、多くとも１つなどの多くとも２つのアミノ酸は、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなってよく、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含む少なくとも７および多くとも７０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含む少なくとも７および多くとも５０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含む少なくとも７および多くとも３０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２を含む少なくとも７および多くとも１５のアミノ酸残基など、少なくとも７および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。
【0065】
したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２の、７～１００の範囲など、例えば７～５０の範囲、７～１５の連続アミノ酸の範囲でなどの、７～１３０アミノ酸の範囲の連続配列からなり、多くとも１などの多くとも２つのアミノ酸が、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。
【0066】
１つの好ましい実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２からなる。
【0067】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも１３０のアミノ酸残基からなり、多くとも１つなどの多くとも２つのアミノ酸は、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなってよく、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも７０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも５０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも３０のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも１５のアミノ酸残基など、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１を含む少なくとも１０および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。
【0068】
したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の、が１０～１００の範囲など、例えば１０～５０の範囲、１０～１５の連続アミノ酸の範囲でなどの、１０～１３０アミノ酸の範囲の連続配列からなり、多くとも１などの多くとも２つのアミノ酸が、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。
【0069】
１つの好ましい実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１からなり、多くとも１つなどの多くとも２つのアミノ酸は、交換されている。１つの好ましい実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１からなる。
【0070】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、配列ＤＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む、またはそれからなる。好ましくはペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１）を含む、またはそれからなる。好ましくはペプチドアゴニストは、ニューロキニンＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１）である。
【0071】
別の実施形態において、Ｔａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも１３０のアミノ酸残基からなり、多くとも１つなどの多くとも２つのアミノ酸が、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。特にＴａｃｒ２のペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなってよく、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも７０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも５０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも３０のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも１５のアミノ酸残基など、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列を含む、少なくとも１０および多くとも１００のアミノ酸残基からなる。
【0072】
したがって幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列の、１０～１００の範囲など、例えば１０～５０の範囲、１０～１５の連続するアミノ酸の範囲でなどの、１０～１３０アミノ酸の範囲の連続配列からなり、多くとも１つなどの多くとも２つのアミノ酸が、標準的または非標準的アミノ酸で交換されている。
【0073】
１つの好ましい実施形態において、ペプチドアゴニストは、コンジュゲートされた部分に場合により連結されたペプチドからなり、ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２７からなる群から選択される配列からなる。
【0074】
幾つかの実施形態において、ペプチドアゴニストは、ＳＫＴＤＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、ＨＫＴＤＳＦＶＧＬＸ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、ＨＫＴＥＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、ＨＫＴＥＳＦＶＧＬＸ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、ＫＴＤＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、ＫＤＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、ＫＥＳＦＶＧＬＭ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）からなる群から選択される配列を含む、またはそれからなる。
【0075】
コンジュゲートされた部分
Ｔａｃｒ２のアゴニストは、コンジュゲートされた部分に共有結合で連結されたペプチドを含んでいても、またはそれからなってもよい。例えばペプチドアゴニストは、本明細書の上記の「ペプチドアゴニスト」の節に記載されたペプチドアゴニストのいずれかであってよく、コンジュゲートされた部分は、この節に記載されたコンジュゲートされた部分のいずれかであってよい。
Ｔａｃｒ２のアゴニストは、コンジュゲートされた部分に共有結合で連結されたペプチドを含んでいても、またはそれからなってもよい。例えばペプチドアゴニストは、本明細書の上記の「ペプチドアゴニスト」の節に記載されたペプチドアゴニストのいずれかであってよく、コンジュゲートされた部分は、この節に記載されたコンジュゲートされた部分のいずれかであってよい。
【0076】
一実施形態において、コンジュゲートされた部分は、ペプチドに共有結合で連結され得るペプチド、糖、脂質または任意の他の化学基であってよい。好ましくはコンジュゲートされた部分は、Ｔａｃｒ２に対するアゴニストのアゴニスト性挙動を改善する。コンジュゲートされた部分はまた、溶解度、安定性または半減期などのＴａｃｒ２のアゴニストの物理的特性を改善してもよい。
【0077】
一実施形態において、コンジュゲートされた部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー鎖または修飾ＰＥＧ、例えばＮＰＥＧなどの、宿主免疫系からアゴニストを覆い隠す化合物であってよい。
【0078】
幾つかの実施形態において、１～５０の間のエチレングリコール単位を含むＰＥＧ部分が、ペプチドアゴニストにコンジュゲートされる。ＰＥＧ部分は、少なくとも４エチレングリコール単位など、少なくとも６エチレングリコール単位など、少なくとも２エチレングリコール単位を含んでよい。ＰＥＧ部分は、ペプチドアゴニストの存在への宿主免疫反応を低減でき、またはそれは、その水力学的サイズを増加でき、それによりその循環時間を増加できる。
【0079】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、アゴニストと膜および他の生物学的構造との相互作用を容易にする。例えば１種または複数の脂肪酸などの１種または複数の脂質が、ペプチドアゴニストにコンジュゲートされてよい。コンジュゲートされた脂肪酸は、ペプチドアゴニストの疎水性を増強してよく、それゆえ膜とのその相互作用を増強してもよい。ペプチドアゴニストにコンジュゲートされ得る脂質の例は、パルミトレオイル基、プレニル基、ミリストイル基である。他の脂質基が、コンジュゲートされてもよい。
【0080】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、ペプチド、例えばポリアルギニンなどの細胞透過を容易にするペプチドである。好ましくはコンジュゲートされた部分は、Ｔａｃｒ２のアゴニストと生物学的系の中に存在するタンパク質および／またはペプチドとの相互作用を容易にするペプチドである。有利であれば、コンジュゲートされた部分は、ホルモン断片であってもよい。
【0081】
幾つかの実施形態において、アゴニストは、グリコシル化、例えばＮ－グリコシル化またはＯ－グリコシル化されてよい。アゴニストのグリコシル化は、正しいフォールディングを容易する、または生物学的系の中に存在する他の炭水化物部分、例えば他のグリコシル化部分の認識を容易にし得る。ペプチドにコンジュゲートされ得る、またはＴａｃｒ２のアゴニストに含まれ得るグリカンの幾つかの例は、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ノイラミン酸、Ｎ－アセチルグルコサミン、フルクトース、マンノース、および他の単糖類を含むグリカンである。
【0082】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、糖類、例えば単糖類、または二糖類、または多糖類である。
【0083】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、糖類であり、上記糖類は、ペプチドのアミノ酸残基の中の酸素原子にコンジュゲートされる。例えば上記糖類は、セリンのヒドロキシル基にコンジュゲートされてよい。
【0084】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、糖類であり、上記糖類は、ペプチドのアミノ酸残基の中の窒素原子にコンジュゲートされる。例えば上記糖類は、アルギニンのアミノ基にコンジュゲートされてよい。
【0085】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、糖類、例えばマンノース（Ｍａｎ）である。例えばコンジュゲートされたペプチドアゴニストは、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１を含み、またはそれからなり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２１の１２位のセリンにコンジュゲートされたマンノースを有する。
【0086】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、アミン基である。例えば、アゴニストがペプチドアゴニストである本発明の実施形態において、上記ペプチドは、Ｃ末端アミド化を含有しよく、例えばペプチドのＣ末端ＯＨ基は、アミン基と交換されてよい。
【0087】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、アセチル基である。例えば、アゴニストがペプチドアゴニストである本発明の実施形態において、上記ペプチドは、Ｎ末端アセチル化を含有してよく、例えばＮ末端アミンは、アセチル化されてよい。
【0088】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、ペプチドアゴニストの末端アミノ酸に付着される。
【0089】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、ペプチドアゴニストの末端アミノ酸に付着され、ペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５， ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０からなる群から選択される配列を含む、またはそれからなる。
【0090】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、本明細書に定義されたペプチドアゴニストの非末端アミノ酸の側鎖のアミノ基に、例えばリシンの、またはアルギニンのγ－Ｎに付着される。
【0091】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、脂質であり、それは直接、またはさらなるアミノ酸を介して、ペプチドアゴニストに付着される。一実施形態において、コンジュゲートされた部分は、脂肪酸であり、例えばコンジュゲートされた部分は、Ｃ６～４０アルキレン－ＣＯＯＨ、例えばＣ８～３０アルキレン－ＣＯＯＨ、例えばＣ１０～２５アルキレン－ＣＯＯＨであってよい。一実施形態において、脂質は、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキドン酸からなる群から選択される。
【0092】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、アミノ酸に連結された脂肪酸であり、例えばコンジュゲートされた部分は、－Ｎａａ－Ｃ６～４０－アルキレン－ＣＯＯＨ、例えば－Ｎａａ－Ｃ８～３０－アルキレン－ＣＯＯＨ、例えば－Ｎａａ－Ｃ１０～２５－アルキレン－ＣＯＯＨであってよく、ここでＮａａは、任意のアミノ酸、例えばＧｌｕまたはＡｓｐなどの任意のタンパク質構成アミノ酸であってよい。
【0093】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、－Ｎａａ－ミリスチン酸であり、それは、ペプチドアゴニストの非末端リシンのγ－アミノ基に付着される。例えば一実施形態において、コンジュゲートされたペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドであり、グルタミン酸塩がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の２位にあるリシンの側鎖のγ－Ｎに接続され、ミリスチン酸が上記グルタミン酸塩のアミノ基に接続される。
【0094】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、－Ｎａａ－パルミチン酸であり、それは、ペプチドアゴニストの非末端リシンのγ－アミノ基に付着される。例えば一実施形態において、コンジュゲートされたペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドであり、グルタミン酸塩がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の２位にあるリシンの側鎖のγ－Ｎに接続され、パルミチン酸が上記グルタミン酸塩のアミノ基に接続される。
【0095】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、－Ｎａａ－ステアリン酸であり、それは、ペプチドアゴニストの非末端リシンのγ－アミノ基に付着される。例えば一実施形態において、コンジュゲートされたペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドであり、グルタミン酸塩がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１の２位にあるリシンの側鎖のγ－Ｎに接続され、ステアリン酸が上記グルタミン酸塩のアミノ基に接続される。
【0096】
幾つかの実施形態において、コンジュゲートされた部分は、パルミチン酸であり、それは、ペプチドアゴニストのＮ末端アミノ酸のアミノ基に付着される。例えば一実施形態において、コンジュゲートされたペプチドアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のペプチドであり、パルミチン酸が上記ペプチドのＮ末端アミノ酸のアミノ基に接続される。
【0097】
Ｔａｃｒ２
アゴニストは、タキキニン受容体２（Ｔａｃｒ２）への高い親和性を有すること、および上記受容体のアゴニストであることを特徴とする。Ｔａｃｒ２は、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）であり、本発明者らは、それが寒冷暴露後に褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織で誘導されることを見出した。本発明者らは、褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の膜上のＴａｃｒ２の発現および存在を増加させること、ならびにペプチドアゴニストとＴａｃｒ２の相互作用によりＴａｃｒ２の活性を増加させることが、褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞内の基礎酸素消費速度（ＯＣＲ）、ノルエピネフリン（ＮＥ）誘導性ＯＣＲ、および最大呼吸の増加をもたらすことを見出した。褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞は、ＮＥでの活性化により脂肪およびグルコースを消費して熱を産生する。
アゴニストは、タキキニン受容体２（Ｔａｃｒ２）への高い親和性を有すること、および上記受容体のアゴニストであることを特徴とする。Ｔａｃｒ２は、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）であり、本発明者らは、それが寒冷暴露後に褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織で誘導されることを見出した。本発明者らは、褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の膜上のＴａｃｒ２の発現および存在を増加させること、ならびにペプチドアゴニストとＴａｃｒ２の相互作用によりＴａｃｒ２の活性を増加させることが、褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞内の基礎酸素消費速度（ＯＣＲ）、ノルエピネフリン（ＮＥ）誘導性ＯＣＲ、および最大呼吸の増加をもたらすことを見出した。褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞は、ＮＥでの活性化により脂肪およびグルコースを消費して熱を産生する。
【0098】
本発明のＴａｃｒ２のアゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１０からなるヒトＴａｃｒ２と相互作用でき、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１１からなるネズミＴａｃｒ２とも相互作用できる。
【0099】
医薬組成物
本開示の一態様は、医薬組成物、特に必要とする個体における肥満および／または糖尿病の処置のための、本明細書で定義されたＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物に関する。
本開示の一態様は、医薬組成物、特に必要とする個体における肥満および／または糖尿病の処置のための、本明細書で定義されたＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物に関する。
【0100】
「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節において先に定義されたアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩は、医薬組成物の一部であってよく、そのため以下の「糖尿病および／または肥満の処置のための方法」の節に記載される通り、肥満および／または糖尿病に冒された個体に投与されてよい。
【0101】
本開示の別の態様は、糖尿病および／または肥満の処置のための医薬の製造のための、上記の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩の使用に関する。
【0102】
本発明の化合物または塩は、原材料のペプチドアゴニストとして投与されることが可能であるが、医薬配合剤の形態でそれらを与えることが好ましい。したがって本発明はさらに、本明細書に定義された本発明の化合物またはその医薬的に許容できる塩もしくはエステルと、それらのための医薬的に許容できる担体とを含む医薬配合剤を提供する。医薬配合剤は、 例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ（２００５）に記載された通り、従来の技術により調製されてよい。
【0103】
医薬組成物は、先に定義された通りＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩と、医薬的に許容できる担体および／または希釈剤とを含んでよい。医薬的に許容できる担体および／または希釈剤は、当業者に熟知されている。溶液として配合された組成物の場合、許容できる担体および／または希釈剤としては、生理食塩水および滅菌水が挙げられ、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および他の一般的添加剤を場合により含んでよい。
【0104】
本発明によるＴａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物は特に、非経口投与物に配合されてよい。したがって本発明の医薬組成物は、非経口投与用の多種多様の配合剤で配合されてよい。
【0105】
注射および輸液の場合、配合剤は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョン、例えば水性ポリエチレングリコール中の溶液のような形態をとってよい。あるいは有効成分が、滅菌固体の無菌単離により、または使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水で構成するための溶液から凍結乾燥により得られる粉末形態であってもよい。配合剤は、アンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ、輸液バックなどの単回投与もしくは反復投与用の密閉コンテナの中で与えることができ、または使用の直前に注射用の滅菌液体賦形剤、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件で貯蔵できる。用時注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。
【0106】
油性または非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射可能な有機エステルが挙げられ、防腐剤、湿潤剤、乳化剤もしくは懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含有してよい。
【0107】
医薬組成物は、任意の種類の非経口投与のために配合されてよい。好ましい実施形態において、医薬組成物は、必要とする個体への皮下注射用に調製されてよい。
【0108】
インスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法
本開示の態様は、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、そのような方法での使用のための、例えばこの節に記載された方法での使用のための、Ｔａｃｒ２のアゴニストを提供する。
本開示の態様は、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、そのような方法での使用のための、例えばこの節に記載された方法での使用のための、Ｔａｃｒ２のアゴニストを提供する。
【0109】
本開示の別の態様は、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法であって、上記個体への、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量の投与により、上記個体における褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法に関する。
【0110】
本開示のさらなる態様は、それを必要とする個体における体重減少を誘導する方法であって、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。
【0111】
本開示のさらなる態様は、それを必要とする個体における体重減少を誘導する方法であって、上記個体への、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量の投与により、上記個体における褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法に関する。
【0112】
幾つかの実施形態において、アゴニストは、「医薬組成物」の節に定義された通り、医薬組成物の形態で投与される。多くの場合、アゴニストは、非経口投与される。例えばアゴニストは、注射を介して投与されてよい。アゴニストは、皮下注射を介して投与されてよい。
【0113】
幾つかの実施形態において、投与されたアゴニストは、褐色およびベージュ脂肪細胞中のＴａｃｒ２を結合する。
【0114】
投与されたアゴニストは、Ｔａｃｒ２に及ぼす多数の効果を有してよい。したがって好ましくはそれは、褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の細胞膜上のＴａｃｒ２の発現およびＴａｃｒ２の局在化を刺激する。それはまた好ましくは、グルコース取り込み、特に褐色脂肪細胞によるグルコース取り込みを増加させてよい。それはまた好ましくは、脂質取り込み、特に褐色脂肪細胞による脂質取り込みを増加させてよい。それはまた好ましくは、エネルギー消費、特に褐色脂肪細胞によるエネルギー消費を増加させてよい。それはまた好ましくは、酸素消費、特に褐色脂肪細胞での酸素消費を増加させてよい。それはまた好ましくは、熱産生、特に褐色脂肪細胞での熱産生を増加させてよい。それらの効果は、肥満および／または糖尿病を処置することにおいて有益である。
【0115】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、初代褐色脂肪細胞における基礎酸素消費速度を増加させることを含む。脂肪細胞における酸素消費は、当該技術分野で公知の方法を利用して測定されてよく、例えば実施例２にも記載される通りＳｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ－９６ Ｆｌｕｘ Ａｎａｌｙｚｅｒを利用して測定されてよい。それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法はまた、初代褐色脂肪細胞におけるノルエピネフリン誘導性酸素消費速度を増加させることを含んでよい。それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法はまた、初代褐色脂肪細胞における最大酸素消費速度を増加させることを含んでよい。
【0116】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、褐色およびベージュ脂肪細胞へのグルコースの吸収／取り込みを増加させることを含む。したがって方法は、血中グルコースのレベル低減をもたらしてよい。血中グルコースレベルは、当該技術分野で公知の方法を利用して評価されてよい。例えば、実施例４にも記載されるグルコース負荷テスト（ＧＴＴ）、または経口グルコースチャレンジテスト（ＯＧＣＴ）、または熟練者が適切と見なす他のテスト。
【0117】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、褐色およびベージュ脂肪細胞におけるエネルギー消費を増加させることを含む。細胞のエネルギー消費の測定のためのアッセイは、当該技術分野で即座に利用可能であり、例えばエネルギー消費は、例えば実施例５に記載される通り、代謝ケージ内の生存動物における間接的熱量測定（即ち、Ｏ２消費／ＣＯ２産生）により測定され得る。エネルギー散逸はまた、ニューロキニンＡに応答した動物の深部および褐色脂肪温度の増加を記録する、動物組織内に埋め込まれたサーモメータを介して測定され得る。
【0118】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、Ｔａｃｒ２のアゴニストへの褐色およびベージュ脂肪細胞の脱感作なしに、本明細書に開示された上記Ｔａｃｒ２のアゴニストの投与により上記褐色およびベージュ脂肪細胞におけるエネルギー消費を増加させることを含む。
【0119】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、褐色およびベージュ脂肪細胞において内因性ニューロキニンＡの放出を刺激することを含む。
【0120】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、Ｔａｃｒ２の発現を増加させること、および結果的に褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の細胞膜への局在化を増加させることを含む。
【0121】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、上記個体における体重減少を誘導することを含む。
【0122】
幾つかの実施形態において、上記誘導された体重減少は、白色脂肪組織の低減に対応する。
【0123】
幾つかの実施形態において、上記誘導された体重減少は、褐色およびベージュ／ブライト脂肪組織の低減に対応しない。
【0124】
Ｔａｃｒ２のアゴニストの投与量は、個々のアゴニストおよび個体に依存してよい。幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニスト、特にＴａｃｒ２のアゴニストは、例えば２μｇ／ｋｇ体重未満の投与量でヒト個体に投与されてよい。幾つかの実施形態において、アゴニストは、例えば０．１と２μｇ／ｋｇ体重の間など、０．５と２μｇ／ｋｇ体重の間など、１と２μｇ／ｋｇ体重の間など、０．１と１．５μｇ／ｋｇ体重の間など、０．１と１μｇ／ｋｇ体重の間など、０．１と０．５μｇ／ｋｇ体重の間などの、０．０５と２μｇ／ｋｇ体重の間の用量でヒト個体に投与されてよい。
【0125】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体は、肥満および／または糖尿病に冒されている。個体は、任意の個体であってよく、例えば個体は、哺乳動物、特にヒトであってよい。
【0126】
一実施形態において、本発明は、糖尿病を処置する方法に関し、上記糖尿病が、例えば１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠糖尿病からなる群から選択される。上記糖尿病は、特にインスリン抵抗性に関連する糖尿病であってよい。
【0127】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、上記個体におけるインスリン感受性を増加させることを含む。インスリン感受性は、実施例４および５に記載されたインスリン負荷テスト（ＩＴＴ）などの当該技術分野で公知の方法を利用して決定されてよい。
【0128】
幾つかの実施形態において、本発明は、インスリン感受性を増加させるための方法および／またはインスリン抵抗性の処置のための方法を提供する。インスリン抵抗性は、糖尿病２型の前駆症状であってよく、またはそれは、糖尿病２型に関連してよい。したがって糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、上記個体においてインスリン感受性を増加させることを含んでよい。インスリン感受性を決定するための方法は、当該技術分野で公知であり、例えば血中グルコースレベルがインスリンの投与後に決定されるインスリン負荷テスト（ＩＴＴ）であってよい。有用なＩＴＴは、実施例４および５に記載されており、熟練者は、本明細書に記載された方法を他の哺乳動物に、例えばヒトに適応させることができよう。一実施形態において、インスリン抵抗性が、高インスリン血症性正常血糖クランプ法を利用して全血グルコース消失率（ＧＤＲ）を決定することにより決定される。ＧＤＲは、高インスリン血症を完全に補填するのに必要な外因性グルコースの量を反映する。個々の個体がインスリン抵抗性に罹患しているかどうかについての決定は、例えばＴａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ．２０１２ Ｊｕｌ；３５（７）：１６０５－１０．ｄｏｉ：１０．２３３７／ｄｃ１１－２３３９に記載される通り実施されてよい。
【0129】
通常、血中グルコースレベルは、インスリン投与の結果減少し、Ｃｍｉｎに達する。特定の期間の後、血中グルコースレベルは、再度上昇して、典型的にはインスリンの投与前に登録されたレベルに戻る。インスリン抵抗性に罹患した個体は、異なる方法でインスリンの投与に応答し、特にその応答は、
－ インスリン抵抗性に罹患していない個体のＣｍｉｎより高いＣｍｉｎ；および／または
－ Ｃｍｉｎに達してから、インスリン投与前に登録された血中グルコースレベルである、「プレインスリングルコースレベル」に戻るまでの、インスリン耐性に罹患していない個体に比較して短い時間間隔、
を特徴とする。
－ インスリン抵抗性に罹患していない個体のＣｍｉｎより高いＣｍｉｎ；および／または
－ Ｃｍｉｎに達してから、インスリン投与前に登録された血中グルコースレベルである、「プレインスリングルコースレベル」に戻るまでの、インスリン耐性に罹患していない個体に比較して短い時間間隔、
を特徴とする。
【0130】
本開示の方法によれば、Ｔａｃｒ２のアゴニストは、それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置のために、例えばインスリン抵抗性に罹患している、または罹患した疑いがある個体に、投与される。インスリン抵抗性に罹患している、または罹患した疑いがあり、本開示の方法により、即ちＴａｃｒ２のアゴニストの投与により処置される個体は、インスリン抵抗性に罹患している、または罹患した疑いがあり、本明細書に開示されるＴａｃｒ２のアゴニストを投与されない個体に比較して、異なる方法でインスリン投与に応答する。特に、本明細書に記載されるＴａｃｒ２のアゴニストの投与を受けた個体は、
－ より低いＣｍｉｎ；および／または
－ Ｃｍｉｎに達してからプレインスリングルコースレベルに戻るまでのより長い時間間隔、
を特徴とする応答を有する。
－ より低いＣｍｉｎ；および／または
－ Ｃｍｉｎに達してからプレインスリングルコースレベルに戻るまでのより長い時間間隔、
を特徴とする応答を有する。
【0131】
上記応答は、インスリン抵抗性に罹患しており、もしくは罹患した疑いがあり、本明細書に開示されるＴａｃｒ２のアゴニストを投与されない個体、または処置前の同じ個体に比較されてよい。
【0132】
それゆえ幾つかの実施形態において、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、血中グルコースＣｍｉｎを低減することを含む。
【0133】
幾つかの実施形態において、それを必要とする個体における糖尿病および／または肥満の処置のための方法は、インスリンに応答して血中グルコースＣｍｉｎに達してからプレインスリングルコースレベル、即ちインスリン投与前に登録された血中グルコースレベルに戻るまでの時間間隔を増加させることを含み、上記インスリンは、内因性または外因性である。
【0134】
幾つかの実施形態において、本開示は、それを必要とする個体における肥満および／または肥満関連疾患の処置のための方法であって、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。
【0135】
他の実施形態において、本開示は、それを必要とする個体における肥満および肥満関連疾患の処置のための方法であって、上記個体への、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量の投与により、上記個体における褐色脂肪細胞の活性を増強することを含む、方法に関する。
【0136】
さらなる実施形態において、本開示は、体重減少を誘導するための方法であって、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量を上記個体に投与することを含む、方法に関する。
【0137】
他の実施形態において、本開示は、それを必要とする個体において体重減少を誘導するための方法であって、上記個体への、「Ｔａｃｒ２のアゴニスト」の節に定義されたＴａｃｒ２のアゴニストの治療有効量の投与により上記個体における上記褐色脂肪組織細胞の活性を増強することを含む、方法に関する。
【0138】
幾つかの実施形態において、肥満および／または肥満関連障害は、それを必要とする個体の体重を少なくとも６％など、少なくとも７％など、少なくとも８％など、少なくとも１０％など、またはより多量など、少なくとも５％低減することにより処置される。
【0139】
それゆえ本開示の幾つかの実施形態において、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩は、肥満および／または肥満関連疾患に罹患している、または罹患した疑いがある個体に投与され、上記個体の体重の少なくとも６％など、少なくとも７％など、少なくとも８％など、少なくとも１０％など、またはより多量などの、少なくとも５％の低減を引き起こす。
【0140】
一実施形態において、処置を必要とする個体は、過体重、肥満および／または肥満関連疾患、例えば糖尿病または心臓疾患に罹患した個体である。
【0141】
一実施形態において、処置を必要とする個体は、３０以上など、例えば３５以上、４０以上などの、２５以上のＢＭＩを有する。別の実施形態において、処置を必要とする個体は、少なくとも０．８０、例えば０．８０～０．８４、少なくとも０．８５（女性）または少なくとも０．９０など、例えば０．９～０．９９、１．００を超える（男性）などの、少なくとも０．８０のウエスト／ヒップ比を有する。さらなる実施形態において、処置を必要とする個体は、少なくとも６．１ｍｍｏｌ／ｌ、例えば少なくとも７．０ｍｍｏｌ／ｌの空腹時血糖を有する。さらなる実施形態において、処置を必要とする個体は、４２と４６ｍｍｏｌ／ｍｏｌの間など、少なくとも４８ｍｍｏｌ／ｍｏｌなどの、少なくとも４２ｍｍｏｌ／ｍｏｌの糖化ヘモグロビンを有する。
【0142】
開示された方法により提供される処置を必要とする個体は、以下の症状の１つまたは複数を提示してよい：
・ １４０／９０ｍｍＨｇ以上の高血圧；
・ 脂質異常症：１．６９５ｍｍｏｌ／Ｌ以上のトリグリセリド（ＴＧ）かつ０．９ｍｍｏｌ／Ｌ以下（男性）、１．０ｍｍｏｌ／Ｌ（女性）以下の高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）；
・ 中心性肥満；０．９０を超える（男性）、０．８５を超える（女性）ウエスト：ヒップ比、または３０ｋｇ／ｍ２を超えるボディマス指数；
・ 微量アルブミン尿症：２０μｇ／分以上の尿中アルブミン排泄率または３０ｍｇ／ｇ以上のアルブミン：クレアチニン比；
・ 高血糖：１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）より高い血糖レベル、または５．６～７ｍｍｏｌ／ｌ（１００～１２６ｍｇ／ｄｌ）の慢性糖レベル。
・ １４０／９０ｍｍＨｇ以上の高血圧；
・ 脂質異常症：１．６９５ｍｍｏｌ／Ｌ以上のトリグリセリド（ＴＧ）かつ０．９ｍｍｏｌ／Ｌ以下（男性）、１．０ｍｍｏｌ／Ｌ（女性）以下の高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）；
・ 中心性肥満；０．９０を超える（男性）、０．８５を超える（女性）ウエスト：ヒップ比、または３０ｋｇ／ｍ２を超えるボディマス指数；
・ 微量アルブミン尿症：２０μｇ／分以上の尿中アルブミン排泄率または３０ｍｇ／ｇ以上のアルブミン：クレアチニン比；
・ 高血糖：１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）より高い血糖レベル、または５．６～７ｍｍｏｌ／ｌ（１００～１２６ｍｇ／ｄｌ）の慢性糖レベル。
【0143】
したがって肥満関連疾患は、前述の症状に関連する疾患であってよい。
【表2】
【0144】
実施例
実施例１ 寒冷暴露および高脂肪食に応答した脂肪組織中のＴａｃｒ２発現
動物
全ての動物実験を、食餌および水に随意に接近できる、１２時間の明暗周期で、Ｄａｎｉｓｈ ａｎｉｍａｌ ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎに従って実施した。雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、４週齢でＴａｃｏｎｉｃ（デンマーク）から購入し、実験前に１週間馴化した。寒冷暴露試験では、マウスを、寒冷暴露前の少なくとも３週間の温熱的中和（およそ２８℃）での個別飼育の前にＭＲＩスキャン（ＥｃｈｏＭＲＩ、米国テキサス州）により測定した体重および体組成に従って無作為化した。高脂肪食試験では、雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、室温で飼育し、６０％高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、デンマーク）を７週間摂取させた。
実施例１ 寒冷暴露および高脂肪食に応答した脂肪組織中のＴａｃｒ２発現
動物
全ての動物実験を、食餌および水に随意に接近できる、１２時間の明暗周期で、Ｄａｎｉｓｈ ａｎｉｍａｌ ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎに従って実施した。雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、４週齢でＴａｃｏｎｉｃ（デンマーク）から購入し、実験前に１週間馴化した。寒冷暴露試験では、マウスを、寒冷暴露前の少なくとも３週間の温熱的中和（およそ２８℃）での個別飼育の前にＭＲＩスキャン（ＥｃｈｏＭＲＩ、米国テキサス州）により測定した体重および体組成に従って無作為化した。高脂肪食試験では、雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、室温で飼育し、６０％高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、デンマーク）を７週間摂取させた。
【0145】
脂肪細胞の分別
温熱的中性または寒冷で飼育された４週齢雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスからの肩甲骨内ＢＡＴを、１０分ごとにボルテックス処理しながら、３７℃の水平振とう式水槽で３０分間、コラゲナーゼＩＩ型（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）で消化した。間質血管画分（ＳＶＦ）および脂肪細胞画分を、遠心分離により分離した。
温熱的中性または寒冷で飼育された４週齢雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスからの肩甲骨内ＢＡＴを、１０分ごとにボルテックス処理しながら、３７℃の水平振とう式水槽で３０分間、コラゲナーゼＩＩ型（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）で消化した。間質血管画分（ＳＶＦ）および脂肪細胞画分を、遠心分離により分離した。
【0146】
ＲＮＡ抽出
組織を、Ｔｒｉ－Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、デンマーク）を用いて溶解し、Ｔｉｓｓｕｅ Ｌｙｓｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ、デンマーク）を用いてホモジナイズした。ＲＮＡを、製造業者のプロトコルに従いＱｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ドイツ）により抽出した。
組織を、Ｔｒｉ－Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、デンマーク）を用いて溶解し、Ｔｉｓｓｕｅ Ｌｙｓｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ、デンマーク）を用いてホモジナイズした。ＲＮＡを、製造業者のプロトコルに従いＱｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ドイツ）により抽出した。
【0147】
ｑＰＣＲ
相補性ＤＮＡを、製造業者のプロトコルに従いＡＢ Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、デンマーク）を用いて作製し、ｑＰＣＲを、Ｒｏｃｈｅ ＬＣ４８０（Ｒｏｃｈｅ、スイス）によりＳｙｂｒ Ｇｒｅｅｎ（Ｐｒｉｍｅｒ Ｄｅｓｉｇｎ、米国）を用いて実施した。プライマーを、Ｔａｇ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ（デンマーク）から購入した。表２を参照されたい。
相補性ＤＮＡを、製造業者のプロトコルに従いＡＢ Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、デンマーク）を用いて作製し、ｑＰＣＲを、Ｒｏｃｈｅ ＬＣ４８０（Ｒｏｃｈｅ、スイス）によりＳｙｂｒ Ｇｒｅｅｎ（Ｐｒｉｍｅｒ Ｄｅｓｉｇｎ、米国）を用いて実施した。プライマーを、Ｔａｇ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ（デンマーク）から購入した。表２を参照されたい。
【表3】
【0148】
結果
インビボ実験は、Ｔａｃｒ２が、温熱的中性（３０℃）に比較して寒冷暴露（４℃）の後に肩甲骨内褐色脂肪組織（ｉＢＡＴ）および鼠径部白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）中に有意に誘導されることを示する。注目すべきことに、ｉＢＡＴおよびｉＷＡＴ中で寒冷により誘導されたＴａｃｒ２発現は、１週間の寒冷暴露の終了時に依然として著しく誘導され、一方で褐色化を受けず、または感知できるほどのエネルギー消費量を誘起しなかった精巣上体白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）は、寒冷チャレンジによりＴａｃｒ２発現を誘導しない（図１ａ～ｃ）。ＢＡＴ中のＴａｃｒ２の寒冷介在性誘導は、成熟脂肪細胞および脂肪前駆幹細胞の両方で起こっている（図２ａ～ｂ）。その上、６０％高脂肪食チャレンジは、褐色脂肪細胞中のＴａｃｒ２発現レベルを増加させ、肥満個体におけるＮＫＡなどのＴａｃｒ２アゴニストの投与への治療的感知を示唆する（図２ｃ）。
インビボ実験は、Ｔａｃｒ２が、温熱的中性（３０℃）に比較して寒冷暴露（４℃）の後に肩甲骨内褐色脂肪組織（ｉＢＡＴ）および鼠径部白色脂肪組織（ｉＷＡＴ）中に有意に誘導されることを示する。注目すべきことに、ｉＢＡＴおよびｉＷＡＴ中で寒冷により誘導されたＴａｃｒ２発現は、１週間の寒冷暴露の終了時に依然として著しく誘導され、一方で褐色化を受けず、または感知できるほどのエネルギー消費量を誘起しなかった精巣上体白色脂肪組織（ｅＷＡＴ）は、寒冷チャレンジによりＴａｃｒ２発現を誘導しない（図１ａ～ｃ）。ＢＡＴ中のＴａｃｒ２の寒冷介在性誘導は、成熟脂肪細胞および脂肪前駆幹細胞の両方で起こっている（図２ａ～ｂ）。その上、６０％高脂肪食チャレンジは、褐色脂肪細胞中のＴａｃｒ２発現レベルを増加させ、肥満個体におけるＮＫＡなどのＴａｃｒ２アゴニストの投与への治療的感知を示唆する（図２ｃ）。
【0149】
結果：褐色脂肪細胞、脂肪前駆幹細胞およびｉＷＡＴ中でのＴａｃｒ２の発現は、寒冷への暴露に応答して誘導された。Ｔａｃｒ２発現レベルは、高脂肪食にも応答して、褐色脂肪細胞中で増加する。
【0150】
実施例２：ＮＫＡで処置された初代褐色脂肪細胞におけるイノシトール３リン酸（ＩＰ３）レベルおよびＯ２消費
初代脂肪細胞の単離、分化および培養
初代褐色脂肪前駆細胞を、１０分ごとにボルテックス処理しながら、３７℃の水平振とう式水槽で３０分間、コラゲナーゼ１型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、米国ニュージャージー州）消化により肩甲骨内褐色脂肪体から単離した。コラゲナーゼを、遊離脂肪酸不含ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）を含むＫＲＢにより１：１０の比で希釈した。酵素反応を、生育培地の添加により停止し、細胞懸濁液を、ペレット化し、生育培地に再懸濁した後、４０μｍナイロンメッシュ（ＶＷＲ、デンマーク）でふるいにかけて組織の凝集を回避した。脂肪前駆細胞を、コンフルエントまで、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、デンマーク）ならびに１％ペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ、デンマーク）を補充されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、デンマーク）中で増殖させた。コンフルエントに達した翌日に、初代褐色脂肪前駆細胞を、インスリン（０．５ｍｇ／ｍＬ）、ロシグリタゾン（１ｍＭ）、デキサメタゾン（１００μＭ）、ＩＢＭＸ（５０ｍＭ）およびＴ３（１μＭ）からなるカクテルを用いて２日間分化させ、その後、細胞を、インスリンおよびＴ３を含有する生育培地中で実験期間全体にわたり維持した。維持培地を、２日ごとに交換した。細胞を、３７℃および１０％ＣＯ２で生育させた。
初代脂肪細胞の単離、分化および培養
初代褐色脂肪前駆細胞を、１０分ごとにボルテックス処理しながら、３７℃の水平振とう式水槽で３０分間、コラゲナーゼ１型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、米国ニュージャージー州）消化により肩甲骨内褐色脂肪体から単離した。コラゲナーゼを、遊離脂肪酸不含ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）を含むＫＲＢにより１：１０の比で希釈した。酵素反応を、生育培地の添加により停止し、細胞懸濁液を、ペレット化し、生育培地に再懸濁した後、４０μｍナイロンメッシュ（ＶＷＲ、デンマーク）でふるいにかけて組織の凝集を回避した。脂肪前駆細胞を、コンフルエントまで、１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、デンマーク）ならびに１％ペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ、デンマーク）を補充されたＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、デンマーク）中で増殖させた。コンフルエントに達した翌日に、初代褐色脂肪前駆細胞を、インスリン（０．５ｍｇ／ｍＬ）、ロシグリタゾン（１ｍＭ）、デキサメタゾン（１００μＭ）、ＩＢＭＸ（５０ｍＭ）およびＴ３（１μＭ）からなるカクテルを用いて２日間分化させ、その後、細胞を、インスリンおよびＴ３を含有する生育培地中で実験期間全体にわたり維持した。維持培地を、２日ごとに交換した。細胞を、３７℃および１０％ＣＯ２で生育させた。
【0151】
一過性トランスフェクションおよび処置
分化の３日目に、細胞を、電気穿孔により一過的にトランスフェクトするか、または実験のために再播種した。一過性トランスフェクションでは、マウスＴａｃｒ２コード配列を含有する、またはエンプティのｐｃＤＮＡ３．１（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、米国ニュージャージー州）を、Ｌｏｎｚａ（デンマーク）の電気穿孔装置プログラムＡ３４およびキットを用いて脂肪細胞中に電気穿孔した。脂肪細胞を、示された時間ニューロキニンＡ（１０－７Ｍ）で処置した。
分化の３日目に、細胞を、電気穿孔により一過的にトランスフェクトするか、または実験のために再播種した。一過性トランスフェクションでは、マウスＴａｃｒ２コード配列を含有する、またはエンプティのｐｃＤＮＡ３．１（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、米国ニュージャージー州）を、Ｌｏｎｚａ（デンマーク）の電気穿孔装置プログラムＡ３４およびキットを用いて脂肪細胞中に電気穿孔した。脂肪細胞を、示された時間ニューロキニンＡ（１０－７Ｍ）で処置した。
【0152】
ＩＰ３アッセイ
電気穿孔の翌日、初代褐色脂肪細胞に完全維持培地中の５μＣｉ ミオ－［３Ｈ］イノシトール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を負荷し、一晩インキュベートした。細胞を、１０ｍＭ ＬｉＣｌを補充されたＨＢＳＳ中でＮＫＡにより３７℃で９０分間処置した。処置の後、細胞を、１０ｍＭギ酸で抽出し、細胞膜を、ポリ－Ｌ－リシンコーティングＳＰＡビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を用いて捕捉し、Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｉｍｅｒ、デンマーク）で分析した。
電気穿孔の翌日、初代褐色脂肪細胞に完全維持培地中の５μＣｉ ミオ－［３Ｈ］イノシトール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を負荷し、一晩インキュベートした。細胞を、１０ｍＭ ＬｉＣｌを補充されたＨＢＳＳ中でＮＫＡにより３７℃で９０分間処置した。処置の後、細胞を、１０ｍＭギ酸で抽出し、細胞膜を、ポリ－Ｌ－リシンコーティングＳＰＡビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を用いて捕捉し、Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｉｍｅｒ、デンマーク）で分析した。
【0153】
酸素消費
酸素消費を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ－９６ Ｆｌｕｘ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、デンマーク）を用いて測定した。初代褐色脂肪細胞を、電気穿孔の翌日に完全維持培地中でＳｅａｈｏｒｓｅ９６ウェル細胞培養プレート（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、デンマーク）に播種し、実験前にさらに４日間培養した。細胞を、０．５％遊離脂肪細胞不含ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）、２５ｍＭグルコースおよび１ｍＭピルビン酸塩（Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｏｕｎｔｒｙ）を補充されたフェノールレッド不含の非緩衝ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）からなるＦｌｕｘ培地中で平衡化させ、ｐＨを、７．４に調整した。全ての読み取りを、２分間にわたり実施し、混合を、３分間実施した。Ｃ末端アミド化を含有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）を、ＩＰ３決定前２４時間および酸素消費決定の開始（図３ｂの０時間）前７２時間、細胞に添加した。化合物を、Ｆｌｕｘ培地で希釈し、図３ｂに示された時間に細胞培養物に最終濃度のノルエピネフリン（５μＭ）、ＦＣＣＰ（１μＭ）、アンチマイシンＡ（１μＭ）およびロテノン（１μＭ）になるように注射した。実験を、ＮＫＡに暴露された初代脂肪細胞で７２時間実行した（図３ｂ）。
酸素消費を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ－９６ Ｆｌｕｘ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、デンマーク）を用いて測定した。初代褐色脂肪細胞を、電気穿孔の翌日に完全維持培地中でＳｅａｈｏｒｓｅ９６ウェル細胞培養プレート（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、デンマーク）に播種し、実験前にさらに４日間培養した。細胞を、０．５％遊離脂肪細胞不含ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）、２５ｍＭグルコースおよび１ｍＭピルビン酸塩（Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｏｕｎｔｒｙ）を補充されたフェノールレッド不含の非緩衝ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、デンマーク）からなるＦｌｕｘ培地中で平衡化させ、ｐＨを、７．４に調整した。全ての読み取りを、２分間にわたり実施し、混合を、３分間実施した。Ｃ末端アミド化を含有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）を、ＩＰ３決定前２４時間および酸素消費決定の開始（図３ｂの０時間）前７２時間、細胞に添加した。化合物を、Ｆｌｕｘ培地で希釈し、図３ｂに示された時間に細胞培養物に最終濃度のノルエピネフリン（５μＭ）、ＦＣＣＰ（１μＭ）、アンチマイシンＡ（１μＭ）およびロテノン（１μＭ）になるように注射した。実験を、ＮＫＡに暴露された初代脂肪細胞で７２時間実行した（図３ｂ）。
【0154】
結果
このインビトロ実験は、２４時間のＮＫＡ処置が、Ｔａｃｒ２を過剰発現する初代褐色脂肪細胞中のＩＰ３レベルを上昇させることを示す（図３ａ）。この実験はまた、７２時間のＮＫＡ処置が、Ｔａｃｒ２でトランスフェクトされていない初代褐色脂肪細胞においても酸素消費速度（ＯＣＲ）を増加させることを示す（図３ｂ）。
このインビトロ実験は、２４時間のＮＫＡ処置が、Ｔａｃｒ２を過剰発現する初代褐色脂肪細胞中のＩＰ３レベルを上昇させることを示す（図３ａ）。この実験はまた、７２時間のＮＫＡ処置が、Ｔａｃｒ２でトランスフェクトされていない初代褐色脂肪細胞においても酸素消費速度（ＯＣＲ）を増加させることを示す（図３ｂ）。
【0155】
酸素消費の増加は、ＮＫＡに応答した褐色脂肪細胞のエネルギー消費量の増加を示している。
【0156】
実施例３
グルコース取り込み試験を、条件付きおよび全身性ノックアウトマウスを用いて、Ｃ末端アミド化を含有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）またはビヒクルのどちらかの投与後に、Ｔａｃｒ２機能喪失型試験の初代褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞で実施する。加えて、ヒト褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の呼吸能力へのＮＫＡ介在性アゴニズムをテストする。エネルギー消費量を、ＰＥＴスキャンを介して評価する。
グルコース取り込み試験を、条件付きおよび全身性ノックアウトマウスを用いて、Ｃ末端アミド化を含有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）またはビヒクルのどちらかの投与後に、Ｔａｃｒ２機能喪失型試験の初代褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞で実施する。加えて、ヒト褐色およびベージュ／ブライト脂肪細胞の呼吸能力へのＮＫＡ介在性アゴニズムをテストする。エネルギー消費量を、ＰＥＴスキャンを介して評価する。
【0157】
実施例４：肥満および糖尿病関連の合併症の熱発生および復帰に及ぼすＴＡＣＲ２アゴニズムの影響
高脂肪食（ＨＦＤ）
５週齢雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスに、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のモデルとして肥満（５０ｇ）およびグルコース不耐性になるまで、脂肪からの６０％エネルギーを有するＨＦＤを摂取させる。
高脂肪食（ＨＦＤ）
５週齢雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスに、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のモデルとして肥満（５０ｇ）およびグルコース不耐性になるまで、脂肪からの６０％エネルギーを有するＨＦＤを摂取させる。
【0158】
レプチン欠損（Ｏｂ／Ｏｂ）マウス
Ｏｂ／Ｏｂマウスに、Ｔ２Ｄの遺伝的モデルとして肥満およびグルコース不耐性になるまで固形飼料を摂取させる。
Ｏｂ／Ｏｂマウスに、Ｔ２Ｄの遺伝的モデルとして肥満およびグルコース不耐性になるまで固形飼料を摂取させる。
【0159】
反復低用量ストレプトゾトシン（ＭＬＤＳ）
固形飼料を摂食した７週齢Ｃ５７ＢＩ／６マウスに、１型糖尿病のモデルとしてストレプトゾトシン（３５ｍｇ／ｋｇ）の１日１回注射を連続５日間投与する（Ｈａｎｓｅｎ ＪＢ ｅｔ ａｌ． ２０１２）。
固形飼料を摂食した７週齢Ｃ５７ＢＩ／６マウスに、１型糖尿病のモデルとしてストレプトゾトシン（３５ｍｇ／ｋｇ）の１日１回注射を連続５日間投与する（Ｈａｎｓｅｎ ＪＢ ｅｔ ａｌ． ２０１２）。
【0160】
インスリン負荷テスト（ＩＴＴ）
肥満マウスにグルコースｉ．ｐ．を注射し、グルコースレベルを２時間にわたり評価する。
肥満マウスにグルコースｉ．ｐ．を注射し、グルコースレベルを２時間にわたり評価する。
【0161】
グルコース負荷テスト（ＧＴＴ）
肥満マウスにグルコースｉ．ｐ．を注射するか、またはグルコースを強制経口投与で与え、グルコースレベルを２時間にわたり評価する。
肥満マウスにグルコースｉ．ｐ．を注射するか、またはグルコースを強制経口投与で与え、グルコースレベルを２時間にわたり評価する。
【0162】
体重および体組成
体重および体組成（ＭＲＩスキャン）を、実験全期間でモニタリングする。
体重および体組成（ＭＲＩスキャン）を、実験全期間でモニタリングする。
【0163】
エネルギー消費量
ＮＫＡ／ビヒクルでの処置にわたり、マウスを、ＴＳＥ間接的熱量測定システム中で飼育して、摂餌量および摂水量、身体活性、マウスからのＯ２消費およびＣＯ２産生を測定する。
ＮＫＡ／ビヒクルでの処置にわたり、マウスを、ＴＳＥ間接的熱量測定システム中で飼育して、摂餌量および摂水量、身体活性、マウスからのＯ２消費およびＣＯ２産生を測定する。
【0164】
実施例５
動物
全ての動物実験を、食餌および水に随意に接近できる、１２時間の明暗周期で、Ｄａｎｉｓｈ ａｎｉｍａｌ ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎに従って実施した。雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、４週齢でＪａｎｖｉｅｒ（デンマーク）から購入し、実験前に１週間馴化した。高脂肪食試験では、雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、室温で飼育し、６０％高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、デンマーク）を１８週間摂取させた。この食餌を摂取した後、マウスは、典型的には４２～４５ｇの体重を有する、高肥満になった。これらのマウスは、食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスとも称され得る。マウスを、処置前の少なくとも１週間の個別飼育の前にＭＲＩスキャン（ＥｃｈｏＭＲＩ、米国テキサス州）により測定された体重および体組成に従って無作為化した。酸素消費および呼吸効率（ＲＥＲ）を、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ（ＴＳＥ－Ｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ）を用いて測定した。食餌摂取量を、２日ごとに手作業で評価した。
動物
全ての動物実験を、食餌および水に随意に接近できる、１２時間の明暗周期で、Ｄａｎｉｓｈ ａｎｉｍａｌ ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎに従って実施した。雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、４週齢でＪａｎｖｉｅｒ（デンマーク）から購入し、実験前に１週間馴化した。高脂肪食試験では、雄Ｃ５７ＢＩ／６マウスを、室温で飼育し、６０％高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、デンマーク）を１８週間摂取させた。この食餌を摂取した後、マウスは、典型的には４２～４５ｇの体重を有する、高肥満になった。これらのマウスは、食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスとも称され得る。マウスを、処置前の少なくとも１週間の個別飼育の前にＭＲＩスキャン（ＥｃｈｏＭＲＩ、米国テキサス州）により測定された体重および体組成に従って無作為化した。酸素消費および呼吸効率（ＲＥＲ）を、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ（ＴＳＥ－Ｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ）を用いて測定した。食餌摂取量を、２日ごとに手作業で評価した。
【0165】
ニューロキニンＡ処置
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）を、Ａｌｍａｃ Ｇｒｏｕｐ（英国）によりカスタム合成し、滅菌生理食塩溶液に溶解した。処置では、ＮＫＡを、皮下注射の前にＧｅｌｏｆｕｓｉｎｅ（登録商標）（Ｂ．Ｂｒａｕｎ、デンマーク）で希釈した。マウスを、１日２回９日間処置した。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１のニューロキニンＡ（ＮＫＡ）を、Ａｌｍａｃ Ｇｒｏｕｐ（英国）によりカスタム合成し、滅菌生理食塩溶液に溶解した。処置では、ＮＫＡを、皮下注射の前にＧｅｌｏｆｕｓｉｎｅ（登録商標）（Ｂ．Ｂｒａｕｎ、デンマーク）で希釈した。マウスを、１日２回９日間処置した。
【0166】
インスリン負荷テスト
マウスを、腹腔内インスリン負荷テスト（ＩＰＩＴＴ）の前に３時間、絶食させた。インスリン（Ａｃｔｒａｐｉｄ、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク）を、処置前に測定したｋｇ除脂肪体重あたり１ＩＵ投与した。血中グルコースを、Ｒｏｃｈｅからのグルコメータを用いて決定した。より低い血中グルコースレベルは、より大きなインスリン感受性を示す。
マウスを、腹腔内インスリン負荷テスト（ＩＰＩＴＴ）の前に３時間、絶食させた。インスリン（Ａｃｔｒａｐｉｄ、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク）を、処置前に測定したｋｇ除脂肪体重あたり１ＩＵ投与した。血中グルコースを、Ｒｏｃｈｅからのグルコメータを用いて決定した。より低い血中グルコースレベルは、より大きなインスリン感受性を示す。
【0167】
結果
ニューロキニンＡ処置は、食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスにおいてカロリー消費を増加させ（図４ａ）、代謝パラメータを改善した。興味深いことに、カロリー消費は、ＮＫＡの脱感作を伴なわず、実際に図４ａに示された結果は、連続９日間の処置を表している。体重の有意な低減もまた観察され（図４ｂ）、それは図４ｄに示される通り、白色脂肪組織の低減によるものであり、褐色脂肪によるものでなかった。加えて、ＩＴＴは、処置されたマウスが、インスリン処置後に対照マウスより有意に低い血中グルコースレベルを、つまりより高いインスリン感受性を有したことを示した。興味深いことに、血中グルコースレベルは、より低いだけでなく、Ｃｍｉｎに達した後に、より緩やかに基礎レベルに戻る。
ニューロキニンＡ処置は、食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスにおいてカロリー消費を増加させ（図４ａ）、代謝パラメータを改善した。興味深いことに、カロリー消費は、ＮＫＡの脱感作を伴なわず、実際に図４ａに示された結果は、連続９日間の処置を表している。体重の有意な低減もまた観察され（図４ｂ）、それは図４ｄに示される通り、白色脂肪組織の低減によるものであり、褐色脂肪によるものでなかった。加えて、ＩＴＴは、処置されたマウスが、インスリン処置後に対照マウスより有意に低い血中グルコースレベルを、つまりより高いインスリン感受性を有したことを示した。興味深いことに、血中グルコースレベルは、より低いだけでなく、Ｃｍｉｎに達した後に、より緩やかに基礎レベルに戻る。
【0168】
実施例６
ペプチド設計および合成
ＮＫＡを、Ｎ末端での脂肪酸アシル化、またはＬｙｓ２上に付着されたガンマＧｌｕへの脂肪酸アシル化を介してアルブミンを結合するように設計した。ペプチドを、ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）またはステアリン酸（Ｃ１８）で標識した。ＮＫＡを追加的に、Ｓｅｒ残基に連結されたマンノースを利用してグリコシル化した。ペプチドを、Ａｌｍａｃ Ｇｒｏｕｐ（スコットランド）により樹脂合成を利用して合成し、ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。ペプチドを、ＨＰＬＣおよび質量分析により分析した。
ペプチド設計および合成
ＮＫＡを、Ｎ末端での脂肪酸アシル化、またはＬｙｓ２上に付着されたガンマＧｌｕへの脂肪酸アシル化を介してアルブミンを結合するように設計した。ペプチドを、ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）またはステアリン酸（Ｃ１８）で標識した。ＮＫＡを追加的に、Ｓｅｒ残基に連結されたマンノースを利用してグリコシル化した。ペプチドを、Ａｌｍａｃ Ｇｒｏｕｐ（スコットランド）により樹脂合成を利用して合成し、ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。ペプチドを、ＨＰＬＣおよび質量分析により分析した。
【0169】
実施例７
ＩＰ３アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、デンマーク）を用いてヒトまたはマウスＴａｃｒ１～３をコードするプラスミド （ｐｃＤＮＡ３．１、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、米国ニュージャージー州）で一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの６時間後に、細胞に、完全維持培地中の５μＣｉ ミオ－［３Ｈ］イノシトール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を負荷し、一晩培養した。細胞を、１０ｍＭ ＬｉＣｌを補充されたＨＢＳＳ中でＮＫＡ類似体により３７℃で９０分間処置した。処置の後、細胞を、１０ｍＭギ酸で抽出し、細胞膜を、ポリ－Ｌ－リシンコーティングＳＰＡビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を用いて捕捉し、Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｉｍｅｒ、デンマーク）で分析した。ＮＫＡ類似体を、ＤＭＳＯに溶解し、０．２％または２％ｗ／ｖ遊離脂肪酸（ＦＦＡ）不含ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ、デンマーク）を含有するＰＢＳで希釈した。データを、４パラメータロジスティックカーブフィッティングを用いたＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７（ＧｒａｐｈＰａｄ、米国カリフォルニア州）を利用して解析した。データ解析は、最上値、最低値、ヒルスロープに加え、ＬｏｇＥ５０の計算を含んだ。
ＩＰ３アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、デンマーク）を用いてヒトまたはマウスＴａｃｒ１～３をコードするプラスミド （ｐｃＤＮＡ３．１、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、米国ニュージャージー州）で一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの６時間後に、細胞に、完全維持培地中の５μＣｉ ミオ－［３Ｈ］イノシトール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を負荷し、一晩培養した。細胞を、１０ｍＭ ＬｉＣｌを補充されたＨＢＳＳ中でＮＫＡ類似体により３７℃で９０分間処置した。処置の後、細胞を、１０ｍＭギ酸で抽出し、細胞膜を、ポリ－Ｌ－リシンコーティングＳＰＡビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、デンマーク）を用いて捕捉し、Ｔｏｐ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｉｍｅｒ、デンマーク）で分析した。ＮＫＡ類似体を、ＤＭＳＯに溶解し、０．２％または２％ｗ／ｖ遊離脂肪酸（ＦＦＡ）不含ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ、デンマーク）を含有するＰＢＳで希釈した。データを、４パラメータロジスティックカーブフィッティングを用いたＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７（ＧｒａｐｈＰａｄ、米国カリフォルニア州）を利用して解析した。データ解析は、最上値、最低値、ヒルスロープに加え、ＬｏｇＥ５０の計算を含んだ。
【0170】
体重減少
食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスを、先の実施例５に記載された通り調製した。ＤＩＯマウスを、１ｍｇ／ｋｇ（Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡまたはビヒクル（３％ｗ／ｖ ＦＦＡ不含ＢＳＡおよび１．２５％ＤＭＳＯを含有する滅菌濾過生理食塩溶液）によりｓ．ｃ．で１日１回、連続３日間処置し、続いて休薬期間をおき、さらに４回処置した。マウスを、処置後にモニタリングして、処置の持続効果を観察した。摂餌量およびカロリー消費を、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ（ＴＳＥ－Ｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ）を利用してモニタリングした。
食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスを、先の実施例５に記載された通り調製した。ＤＩＯマウスを、１ｍｇ／ｋｇ（Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡまたはビヒクル（３％ｗ／ｖ ＦＦＡ不含ＢＳＡおよび１．２５％ＤＭＳＯを含有する滅菌濾過生理食塩溶液）によりｓ．ｃ．で１日１回、連続３日間処置し、続いて休薬期間をおき、さらに４回処置した。マウスを、処置後にモニタリングして、処置の持続効果を観察した。摂餌量およびカロリー消費を、ＰｈｅｎｏＭａｓｔｅｒ（ＴＳＥ－Ｓｙｓｔｅｍｓ、ドイツ）を利用してモニタリングした。
【0171】
結果：ＩＰ３アッセイの結果は、ＮＫＡおよびＮＫＡ類似体（ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ステアリン酸（Ｃ１８）またはマンノースで標識されたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１および２１）が、ネズミおよびヒト受容体の両者の例でＴａｃｒ２受容体に特異的であることを示す；表３、４および５を参照されたい。
【表4】
【表5】
【表6】
【0172】
ＩＰ３アッセイの結果は、安定なＮＫＡ類似体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:２、５および２２～２７）がネズミおよびヒト受容体の両者の例でＴａｃｒ２受容体に特異的であることを示す；表４を参照されたい。
【0173】
表５に示される通り、ＮＫＡおよびＮＫＡ類似体（ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）またはステアリン酸（Ｃ１８）で標識されたＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１および２１）は、低いＢＳＡ結合親和性を有し、それらがＴａｃｒ２に特異的であることを示す。
【表7】
【0174】
体重の有意な低減が、［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡでの処置の結果として観察され（図５ａ）、それは、白色脂肪組織の低減によるものであり、褐色脂肪によるものでなかった。摂餌量は、マウスを［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡで処置した場合に有意に低減された。［Ｌｙｓ２－γ－Ｇｌｕ－Ｃ１６］ＮＫＡでの処置はまた、食餌誘導型肥満（ＤＩＯ）マウスにおいて体重の低減（図５Ｃ）および代謝パラメータの改善により示された通り、カロリー消費を増加させた。
【0175】
参考資料
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【図1a】
【図1b】
【図1c】
【図2a】
【図2b】
【図2c】
【図3a】
【図3b】
【図4a】
【図4b】
【図4c】
【図4d】
【図5a】
【図5b】
【図5c】
【手続補正書】
【提出日】2022-07-26
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-10-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
それを必要とする個体におけるインスリン抵抗性、糖尿病および／または肥満の処置における使用のための医薬であって、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬。
【請求項2】
それを必要とする個体において体重減少を誘導する方法における使用のための医薬であって、Ｔａｃｒ２のアゴニストまたはその医薬的に許容できる塩を含む医薬。
【請求項3】
前記アゴニストがペプチドを含むかそれからなり、前記ペプチドは場合によりコンジュゲートされた部分に連結されている、請求項１または２に記載の医薬。
【請求項4】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、配列Ｘ６Ｘ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のペプチドを含むかそれからなりかつＸ６＝アスパラギン酸（Ｅ）またはグルタミン酸（Ｄ）；
Ｘ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）
である、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項5】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、配列ＤＸ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のペプチドを含むかそれからなりかつＸ１＝セリン（Ｓ）またはリシン（Ｋ）；
Ｘ２＝バリン（Ｖ）またはトリプトファン（Ｗ）；
Ｘ３＝グリシン（Ｇ）、β－アラニン（β－ａｌａ）；
Ｘ４＝メチル－ロイシン（Ｍｅ－Ｌｅｕ）、Ｌ，γ－ラクタム－ロイシン（γ－ラクタム－Ｌｅｕ）；
Ｘ５＝ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）
である、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項6】
前記アゴニストまたは前記ペプチドが、ニューロキニンＡまたはその機能的類似体を含むかそれからなる、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項7】
前記ペプチドが、少なくとも７および多くとも１３０のアミノ酸残基からなり、例えば少なくとも１０および多くとも１３０のアミノ酸残基からなる、請求項３～６のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項8】
前記ペプチドが、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４もしくは配列番号１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体を含み、例えば前記ペプチドが、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４もしくは配列番号１５のニューロキニンＡの前駆体タンパク質または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体の断片を含む、請求項３～７のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項9】
前記ペプチドが、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４もしくは配列番号１５または少なくとも７５％の配列同一性を共有するその機能的類似体の連続配列からなる、請求項３～８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項10】
前記ペプチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７からなる群から選択される配列を含むかそれからなりかつ多くとも２つのアミノ酸が、交換されている、請求項３～９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項11】
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号１、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される配列を含むかそれからなる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項12】
前記ペプチドが、Ｃ末端アミド化またはＮ末端アセチル化を含有する、請求項３～１１のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項13】
前記コンジュゲートされた部分が、ペプチド、脂質、グリカン、糖類およびＰＥＧからなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項14】
前記コンジュゲートされた部分が、ａ．マンノースなどの、糖類である、かつ／または
ｂ．カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキドン酸からなる群から選択される脂肪酸であり、例えば－Ｎａａ－カプリン酸、－Ｎａａ－ラウリン酸、－Ｎａａ－ミリスチン酸、－Ｎａａ－パルミチン酸、－Ｎａａ－ステアリン酸、および－Ｎａａ－アラキドン酸からなる群から選択される、アミノ酸に連結された脂肪酸であり、－Ｎａａ－が、任意のタンパク質構成アミノ酸である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項15】
ａ．前記コンジュゲートされた部分が、－Ｎａａ－ミリスチン酸、－Ｎａａ－パルミチン酸、－Ｎａａ－ステアリン酸からなる群から選択され、－Ｎａａ－が、任意のタンパク質構成アミノ酸であり、かつ前記コンジュゲートされた部分が、配列番号１のペプチドの２位にあるリシンに付着されているか、ｂ．前記コンジュゲートされた部分が、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸からなる群から選択され、かつ前記コンジュゲートされた部分が、配列番号１のペプチドのＮ末端アミノ酸に付着されているか、または
ｃ．前記コンジュゲートされた部分が、マンノースであり、かつ前記マンノースが、配列番号２１のペプチドのＮ末端セリンにコンジュゲートされている、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項16】
前記アゴニストが、Ｔａｃｒ１に対してよりもＴａｃｒ２に対してより高い親和性を有する、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項17】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病および妊娠糖尿病のいずれか１つである、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項18】
前記アゴニストが、前記それを必要とする個体の血中グルコースＣｍｉｎを低減する、かつ／または
前記アゴニストが、前記それを必要とする個体においてインスリンに応答して血中グルコースＣ ｍｉｎ に達してからプレインスリングルコースレベルに戻る間の時間間隔を増加させる、請求項１～１７のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項19】
前記アゴニストが、前記個体に非経口投与される、請求項１～１８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項20】
前記Ｔａｃｒ２への前記ペプチドアゴニストの結合をさらに含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項21】
初代褐色脂肪細胞における基礎酸素消費速度および／もしくはノルエピネフリン誘導性酸素消費速度および／もしくは最大酸素消費速度を増加させること、並びに／または
褐色およびベージュ脂肪細胞においてグルコースの吸収を増加させること、並びに／または
褐色およびベージュ脂肪細胞においてエネルギー消費を増加させること、並びに／または
褐色およびベージュ脂肪細胞において内因性ニューロキニンＡの放出を刺激すること、並びに／または
前記個体においてインスリン感受性を増加させることをさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の医薬。
【国際調査報告】