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特表2023-506838新生血管形成因子を阻害するための化合物およびその用途

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-20

(54)【発明の名称】新生血管形成因子を阻害するための化合物およびその用途

(51)【国際特許分類】

C07F 9/54 20060101AFI20230213BHJP

A61K 31/662 20060101ALI20230213BHJP

A61K 9/08 20060101ALI20230213BHJP

A61P 27/02 20060101ALI20230213BHJP

A61P 27/06 20060101ALI20230213BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20230213BHJP

【ＦＩ】

C07F9/54 CSP

A61K31/662

A61K9/08

A61P27/02

A61P27/06

A61P3/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022536658

(86)(22)【出願日】2020-12-16

(85)【翻訳文提出日】2022-07-26

(86)【国際出願番号】 KR2020018475

(87)【国際公開番号】W WO2021125800

(87)【国際公開日】2021-06-24

(31)【優先権主張番号】10-2019-0168238

(32)【優先日】2019-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】515351884

【氏名又は名称】ユニスト（ウルサンナショナルインスティテュートオブサイエンスアンドテクノロジー）

(71)【出願人】

【識別番号】522235168

【氏名又は名称】スマーティンバイオインコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＭＡＲＴＩＮＢＩＯＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ａ－１６ｈｏ３ｒｄＦｌ．，１９４－２５，Ｏｓｏｎｇｓａｅｎｇｍｙｅｏｎｇ１－ｒｏ，Ｏｓｏｎｇ－ｅｕｐ，Ｈｅｕｎｇｄｅｏｋ－ｇｕ，Ｃｈｅｏｎｇｊｕ－ｓｉ，Ｃｈｕｎｇｃｈｅｏｎｇｂｕｋ－ｄｏ２８１６０ＲｅｐｕｂｌｉｃｏｆＫｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】110002262

【氏名又は名称】ＴＲＹ国際弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】カンビョンヒョン

(72)【発明者】

【氏名】キムソヨン

(72)【発明者】

【氏名】ユンナムグ

(72)【発明者】

【氏名】イチャンウク

(72)【発明者】

【氏名】パクドンホ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

4H050

【Ｆターム（参考）】

4C076AA11

4C076BB24

4C076CC10

4C076DD63

4C076FF68

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086DA34

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086MA58

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZC35

4C086ZC52

4H050AA01

4H050AA03

4H050AB20

(57)【要約】

本出願は、新生血管形成因子を阻害するための化合物およびその用途に関する。さらに、本出願は、前記化合物を用いた新生血管形成性疾患の治療方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の化学式１で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグ：
［化学式１］

ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、およびＲ_５は、それぞれＨ、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、Ｃ_１～５アルキニル、およびＣ_１～５アルコキシから選択され、
（Ｒ_１、Ｒ_４）は、これらのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではなく、また（Ｒ_２、Ｒ_５）は、これらのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではなく、
Ｌは、－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、また
ｎは、５～１２の整数であることを特徴とする。

【請求項2】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、
Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、
Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであり、
Ｒ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

ｎ＝１０であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項8】

前記化学式１は、下記の化学式２～５から選択されるいずれかで表されることを特徴とする請求項１に記載の化合物：
［化学式２］

［化学式３］

［化学式４］

［化学式５］

【請求項9】

下記の化学式１で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグを有効成分で含むことを特徴とする新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物：
［化学式１］

ここで、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、およびＲ_５は、それぞれＨ、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、Ｃ_１～５アルキニル、およびＣ_１～５アルコキシから選択され、
（Ｒ_１、Ｒ_４）は、これらのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではなく、また
（Ｒ_２、Ｒ_５）は、これらのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではなく、
Ｌは、－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、また
ｎは、５～１２の整数であることを特徴とする。

【請求項10】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項11】

Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項12】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、
Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項13】

Ｒ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項14】

Ｒ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、
Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであり、
Ｒ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項15】

ｎ＝１０であることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項16】

前記化学式１は、下記の化学式２～５から選択されるいずれかで表されることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物：
［化学式２］

［化学式３］

［化学式４］

［化学式５］

【請求項17】

前記薬学的組成物は、点眼投与用であることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項18】

前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患、網膜新生血管形成疾患、網膜下新生血管形成疾患、角膜新生血管形成疾患、虹彩新生血管形成疾患、新生血管形成性緑内障であることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項19】

前記新生血管形成性眼疾患は、網膜新生血管形成疾患であり、
前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症または網膜静脈閉塞症であることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【請求項20】

前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患であり、
前記脈絡膜新生血管形成疾患は、ウェット型加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）であることを特徴とする請求項９に記載の新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

【背景技術】

【0002】

新生血管形成（Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）は奇形形成された血管の周辺に新しい血管が形成される身体的現象であり、異常発生する場合、病気または疾患の原因となる恐れがある。本出願で言及される新生血管形成は、奇形形成された血管から新しい血管が伸びて出る血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）を含み、２つの用語を区別することなく使用する。

【0003】

例えば、癌細胞は新生血管形成因子（Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ）を過剰生成することによって過剰成長した癌組織に微細血管を形成し、これを介して酸素および養分を供給して癌細胞の生存能力を高める。また、眼球構造（ｏｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）で新生血管形成因子が過剰生成されると、様々な眼疾患（ｏｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ）の原因になることが知られている。

【0004】

このような新生血管形成性疾患（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ）を治療するための既存の研究は、主要な新生血管形成因子であるＶＥＧＦを阻害することに主に焦点を当てている［１、２］。具体的には、ＶＥＧＦ阻害治療法は、次の三種類のアプローチによっている。そのアプローチとして、まず、ＶＥＧＦリガンド（ＶＥＧＦｌｉｇａｎｄ）がＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦｒｅｃｅｐｔｏｒ）に結合することを防ぐためにＶＥＧＦリガンド特異的抗体を使用する方法（ｅ．ｇ．ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ，ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ，ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）；ＶＥＧＦ受容体特異的抗体を使用する方法（ｅ．ｇ．ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）；またはＶＥＧＦ受容体を阻害するチロシンキナーゼ阻害剤（ｔｙｒｏｓｉｎｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ＴＫＩ）を投与する方法（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ，ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ，ｐａｚｏｐａｎｉｂ）である。

【0005】

この中で、抗体を使用するアプローチは抗体の物理的限界が問題となる［３］。抗体は分子量が大きくなると薬物動態学的特性が改善されるが、血管透過度が低くなって組織浸透能が低くなる問題がある。モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ）は薬物動態学的特性が改善されるが組織浸透能が低下し、単鎖可変領域フラグメント抗体（Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｒａｇｍｅｎｔ；ＳｃＦｖ）等の抗体の断片は組織浸透能が改善されるが薬物動態学的特性が劣る。これによって多くの抗体治療法は薬物が異常組織に直接作用するようにするために注射投与による侵襲的（ｉｎｖａｓｉｖｅ）方法に依存しており、経口投与（ｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、皮膚経路投与（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｄｅｌｉｖｅｒｙ）等の非侵襲的（ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ）方法は不可能である。

【0006】

また、抗体を介してＶＥＧＦを直接阻害すると、副作用が発生する可能性がある［４］。ＶＥＧＦは様々な機能を有する成長因子であるため、ＶＥＧＦ阻害剤が全身に作用する場合、組織の正常な成長に影響を及ぼす可能性がある。これによってＶＥＧＦ阻害治療法は異常組織に直接投与したり、誘導治療されなかった場合、安全性が大きく低下する問題がある。このような欠点によって、現在、ＶＥＧＦ阻害治療法は主流の治療法であるが、その限界が明らかであり、ＶＥＧＦ阻害ではない新しい機序による治療法の研究が必要である。

【0007】

ＴＲＡＰ－１はＶＥＧＦの上位調整因子の中の１つであるＨＩＦ－１αを調整することが知られている。ＴＲＡＰ－１はＨＳＰ９０のパラログの中の１つであり、従来はＨＳＰ９０の阻害剤が活発に研究されてきたが、このような阻害剤はＨＳＰ９０およびそのパラログに非選択的に作用して高い毒性を示す問題を有していた（韓国特許公開公報ＫＲ２０１５０１０９５４０Ａ参照）。本出願の発明者は、ＴＲＡＰ－１がＶＥＧＦに代わることができる治療学的ターゲットになり得ることを認識し、ＴＲＡＰ－１を選択的に阻害できる新規な方法を発明し、本出願に至った。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】［１］ＫｅｌｌｅｎＬ．ＭｅａｄｏｗｓａｎｄＨｅｒｂｅｒｔＩ．Ｈｕｒｗｉｔｚ，Ａｎｔｉ－ＶＥＧＦＴｈｅｒａｐｉｅｓｉｎｔｈｅＣｌｉｎｉｃ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂＰｅｒｓｐｅｃｔＭｅｄ．２０１２Ｏｃｔ１；２（１０）．

【非特許文献2】［２］ＫａｔｊａＺｉｒｌｉｋａｎｄＪｕｓｔｕｓＤｕｙｓｔｅｒ，Ａｎｔｉ－Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｓ：ＣｕｒｒｅｎｔＳｉｔｕａｔｉｏｎａｎｄＦｕｔｕｒｅＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，ＯｎｃｏｌＲｅｓＴｒｅａｔ．２０１８；４１（４）：１６６－１７１．

【非特許文献3】［３］ＰａｔｒｉｃｋＣｈａｍｅｓ，ＭａｒｃＶａｎＲｅｇｅｎｍｏｒｔｅｌ，ＥｔｉｅｎｎｅＷｅｉｓｓａｎｄＤａｎｉｅｌＢａｔｙ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｓｕｃｃｅｓｓｅｓ，ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓａｎｄｈｏｐｅｓｆｏｒｔｈｅｆｕｔｕｒｅ，ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．２００９Ｍａｙ；１５７（２）：２２０－３３．

【非特許文献4】［４］ＴＫａｍｂａａｎｄＤＭＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｄｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉ－ＶＥＧＦｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｃａｎｃｅｒ，ＢｒＪＣａｎｃｅｒ．２００７Ｊｕｎ１８；９６（１２）：１７８８－９５．

【非特許文献5】［５］ＰｅｔｅｒＡ．Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ，ＯｃｕｌａｒＮｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，ＪＭｏｌＭｅｄ（Ｂｅｒｌ）．２０１３Ｍａｒｃｈ；９１（３）：３１１－３２１．

【非特許文献6】［６］ＢａｒｂａｒａＯｎｎｉｓ，ＡｎｎａｍａｒｉａＲａｐｉｓａｒｄａａｎｄＧｉｏｖａｎｎｉＭｅｌｉｌｌｏ，ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＨＩＦ－１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ１３，Ｎｏ９Ａ，２００９ｐｐ．２７８０－２７８６．

【非特許文献7】［７］ＹｏｕｎｇＣｈａｎＣｈａｅ，Ｍ．ＣｅｃｉｌｉａＣａｉｎｏ，ＳｏｆｉａＬｉｓａｎｔｉ，ａｎｄｅｔａｌ．ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＴｕｍｏｒＢｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓａｎｄＳｕｒｖｉｖａｌＳｔｒｅｓｓＳｉｇｎａｌｉｎｇｂｙＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＨＳＰ９０ｓ，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ．２０１２Ｓｅｐ１１；２２（３）：３３１－４４．

【非特許文献8】［８］ＳｔｕａｒｔＫ．ＣａｌｄｅｒｗｏｏｄａｎｄＴｈｏｍａｓＬ．Ｐｒｉｎｃｅ，Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ：ＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，２０１８，ｐｐ．４２４－４３２．

【非特許文献9】［９］ＤａｎｉｅｌＴ．Ｇｅｗｉｒｔｈ，ＰａｒａｌｏｇｓｐｅｃｉｆｉｃＨｓｐ９０Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ－ａｂｒｉｅｆｈｉｓｔｏｒｙａｎｄａｂｒｉｇｈｔｆｕｔｕｒｅ，ＣｕｒｒＴｏｐＭｅｄＣｈｅｍ．２０１６；１６（２５）：２７７９－２７９１．

【非特許文献10】［１０］ＩｏｎｉｃａＭａｓｇｒａｓ，ＣａｒｌｏｓＳａｎｃｈｅｚ－Ｍａｒｔｉｎ，ＧｉｏｒｇｉｏＣｏｌｏｍｂｏａｎｄＡｎｄｒｅａＲａｓｏｌａ，ＴｈｅＣｈａｐｅｒｏｎｅＴＲＡＰ１ＡｓａＭｏｄｕｌａｔｏｒｏｆｔｈｅＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＡｄａｐｔａｔｉｏｎｓｉｎＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ，ＦｒｏｎｔＯｎｃｏｌ．２０１７Ｍａｒ２９；７：５８．

【非特許文献11】［１１］ＶｅｒｂａＫＡ，ＷａｎｇＲＹ，ＡｒａｋａｗａＡ，ＬｉｕＹ，ＳｈｉｒｏｕｚｕＭ，ＹｏｋｏｙａｍａＳ，ａｎｄＡｇａｒｄＤＡ，ＡｔｏｍｉｃｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＨｓｐ９０－Ｃｄｃ３７－Ｃｄｋ４ｒｅｖｅａｌｓｔｈａｔＨｓｐ９０ｔｒａｐｓａｎｄｓｔａｂｉｌｉｚｅｓａｎｕｎｆｏｌｄｅｄｋｉｎａｓｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１６Ｊｕｎ２４；３５２（６２９３）：１５４２－７．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

本出願によって開示される１つの課題は、新生血管形成因子を阻害するための化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供することである。

【0010】

本出願によって開示される他の課題は、前記化合物、その薬学的に許容可能な塩またはそのプロドラッグを含む薬学的組成物を提供することである。

【0011】

本出願によって開示されるまた他の課題は、前記化合物、その薬学的に許容可能な塩またはそのプロドラッグを含む薬学的組成物を処方することを含む新生血管形成性疾患を治療するための方法を提供することである。

【0012】

さらに、本出願によって開示されるまた他の課題は、新生血管形成性疾患のうちの新生血管形成性眼疾患を治療するための方法を提供することである。

【0013】

さらに、本出願によって開示されるまた他の課題は、新生血管形成性眼疾患を治療するための点眼投与用の薬学的組成物を提供することである。

【0014】

また、本出願によって開示されるまた他の課題は、前記薬学的組成物を経口投与または眼球点眼投与することを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0015】

本出願は、下記［化学式１］で表される構造を有する化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグを提供する、

【0016】

［化学式１］

【0017】

【0018】

または、前記化学式１でＲ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであることを特徴とする化合物を提供する。

【0019】

または、前記化学式１でＲ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする化合物を提供する。

【0020】

または、前記化学式１でＲ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする化合物を提供する。

【0021】

または、前記化学式１でＲ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする化合物を提供する。

【0022】

または、前記化学式１でＲ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであり、Ｒ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする化合物を提供する。

【0023】

または、前記化学式１でＬは－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、ここでｎ＝１０であることを特徴とする化合物を提供する。

【0024】

または、前記化学式１は、下記［化学式２］～［化学式５］から選択されるいずれかで表されることを特徴とする化学物を提供する。

【0025】

［化学式２］

【0026】

［化学式３］

【0027】

［化学式４］

【0028】

［化学式５］

【0029】

さらに、本出願は下記［化学式１］で表される構造を有する化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグを有効成分として含むことを特徴とする新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物を提供する。

【0030】

［化学式１］

【0031】

【0032】

または、前記化学式１でＲ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであることを特徴とする薬学的組成物を提供する。

【0033】

または、前記化学式１でＲ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする薬学的組成物を提供する。

【0034】

または、前記化学式１でＲ_１は、Ｈ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり、Ｒ_３およびＲ_４は、それぞれＣ_１～５アルコキシであることを特徴とする薬学的組成物を提供する。

【0035】

または、前記化学式１でＲ_２およびＲ_５は、それぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであることを特徴とする薬学的組成物を提供する。

【0036】

【0037】

または、前記化学式１でＬは－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、ここでｎ＝１０であることを特徴とする薬学的組成物を提供する。

【0038】

または、前記化学式１は、下記［化学式２］～［化学式５］から選択されるいずれかで表されることを特徴とする新生血管形成性眼疾患治療用の薬学的組成物を提供する。

【0039】

［化学式２］

【0040】

［化学式３］

【0041】

［化学式４］

【0042】

［化学式５］

【0043】

また、本出願は、下記［化学式６］で表される構造を有する化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグを含む新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物を提供する。

【0044】

［化学式６］

【0045】

ここで、
Ｒ_１はメチルであり、
Ｌは－（ＣＨ_２）_ｎ－を含み、ｎは５以上１２以下の整数であることを特徴とする。
または、前記構造において、Ｌは－（ＣＨ_２）_１０－であることを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が本出願により提供される。

【0046】

さらに、本出願の薬学的組成物は点眼投与用であることを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が提供される。

【0047】

または、前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患、網膜新生血管形成疾患、網膜下新生血管形成疾患、角膜新生血管形成疾患、虹彩新生血管形成疾患または新生血管緑内障であることを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が提供される。さらに、前記新生血管形成性眼疾患は、網膜新生血管形成疾患であり、前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症または網膜静脈閉塞であることを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が提供される。さらに、前記網膜新生血管形成疾患は糖尿病性網膜症であることを特徴で新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が提供される。

【0048】

さらに、前記脈絡膜新生血管形成疾患は、ウェット型加齢黄斑変性症（ｗｅｔＡＭＤ）であることを特徴とする新生血管形成性眼疾患を治療するための薬学的組成物が提供される。

【発明の効果】

【0049】

本出願の薬学的組成物によって新生血管形成性疾患の治療が可能である。その中で、特に新生血管形成性眼疾患の治療が可能である。本出願の薬学的組成物を用いて以下の効果を得ることができる。

【0050】

本出願の薬学的組成物を用いると、非侵襲的治療が可能である。本出願のＳＭｘおよび新規化合物分子は蛋白質ではない低分子（ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅ）であり、組織浸透能が高い。これによって異常組織への直接注射投与が不要であり、経口投与または眼球点眼投与のような非侵襲的治療が可能な利点がある。

【0051】

また、本出願によって開示される薬学的組成物またはこの薬学的組成物を用いた治療法は、既存の治療剤または治療法よりも高い安定性を有する。これは、既存の治療剤は異常細胞と正常細胞の両方で発現される因子をターゲットとするのに対し、本出願によって開示される薬学的組成物であるＳＭｘおよび新規化合物分子は異常細胞で過剰に発現される因子をターゲットとするためである。従って、異常細胞に対する特異的治療を可能にする。これによって正常細胞に対する副作用を示さないことによって、本出願によって開示される薬学的組成物はより毒性が改善された利点を有する。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】ＴＲＡＰ－１およびそれに関連する新生血管形成因子のシグナル経路を示す図である。

【図2】ＴＲＡＰ－１とＨＩＦ－１αとの間の具体的なシグナル経路を示す図である。

【図3】ＴＲＡＰ－１の構造およびその動作過程を示す図である。

【図4】ＴＲＡＰ－１＋／＋マウスおよびＴＲＡＰ－１＋／－マウスで調製された酸素誘導網膜症モデルの網膜血管写真である。

【図5】図４において、ＴＲＡＰ－１＋／＋マウスおよびＴＲＡＰ－１＋／－マウスで調製された酸素誘導網膜症モデルの網膜血管写真を統計処理した結果である。

【図6】ＴＲＡＰ－１をノックダウンさせた細胞に対する管形成アッセイ（ｔｕｂｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ）結果を示す図である。

【図7】図６による管形成アッセイ結果を統計処理した結果である。

【図8】ＳＭｘの濃度によるＨＩＦ－１αの発現変化を確認したウェスタンブロットの結果を示す図である。

【図9】ＨＩＦ－１αＳＭｘを処理したときの新生血管形成因子の発現変化を確認したウェスタンブロットの結果を示す図である。

【図10】既存の論文で確認されたＨＳＰ９０とクライアント蛋白質の結合構造を示す図である。

【図11】図１０によるＨＳＰ９０－クライアント蛋白質間結合位置と図１２によるＴＲＡＰ－１－ＳＭｘ間結合位置とをオーバーラップしたものである。

【図12】ＴＲＡＰ－１とＳＭｘの結合構造のＸ線クリスタログラフィ（Ｘ－ｒａｙｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ）分析結果である。

【図13】ＴＲＡＰ－１上でＳＭｘとの結合に関与する位置の種間保存性分析の結果を示す図である。

【図14】ＳＭｘがクライアント蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１に結合することを検証するためのプルダウンアッセイ結果を示す図である。

【図15】ＴＲＡＰ－１上でＳＭｘとの結合に関与する位置がＴＲＡＰ－１上でクライアント蛋白質との結合に関与する位置と同一であることを確認するための実験結果である。左側は当該位置を変形させた後に行ったプルダウンアッセイ結果であり、右側は当該位置を変形させた後に行ったＳＩＲＴ３活性実験結果である。

【図16】ＳＭｘとＰＵ－Ｈ７１を処理した野生型（ｗｉｌｄｔｙｐｅ）および突然変異型（ｍｕｔａｎｔ）のＴＲＡＰ－１に対するＡＴＰａｓｅ活性アッセイ（ＡＴＰａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙ）結果を示す図である。

【図17】ＳＭｘとＥｙｌｅａ（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）を眼球注射した酸素誘導網膜症マウスモデルの網膜血管分析結果を示す図である。

【図18】ＳＭｘを点眼投与した酸素誘導網膜症マウスモデルの網膜血管分析写真である。

【図19】ＳＭｘを点眼投与した酸素誘導網膜症マウスモデルの網膜血管分析写真を統計処理した結果である。

【図20】（１０－（２－ブロモ－５－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムホルメート（（１０－（２－ｂｒｏｍｏ－５－ｈｙｄｒｏｘｙ－３，４－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－６－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｄｅｃｙｌ）ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅ）を製造するステップを示す模式図である。

【図21】（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミド（（１０－（３－ｂｒｏｍｏ－４，５，６－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ－２－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｄｅｃｙｌ）ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）を製造するステップを示す模式図である。

【図22】（１０－（２－ブロモ－３，４，５－トリメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミド（（１０－（２－ｂｒｏｍｏ－３，４，５－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ－６－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｄｅｃｙｌ）ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）を製造するステップを示す模式図である。

【図23】（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドを製造するステップを示す模式図である。

【図24】ＳＭｘおよび新規化合物分子（ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、ＳＢ－Ｕ０１２）がクライアント蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１に結合することを検証するためのプルダウンアッセイ結果を示す図である。

【図25】ＭＩＯ－Ｍ１ＨＲＥ細胞株にＳＭｘおよび新規化合物分子（ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、ＳＢ－Ｕ０１２）を処理した時のＩＣ_５０値を示す図である。

【図26】網膜色素上皮細胞であるＡＲＰＥ－１９細胞株にＳＭｘおよび新規化合物分子（ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、ＳＢ－Ｕ０１２）を処理した時の新生血管形成因子（ＨＩＦ－１α）の発現変化を確認したウェスタンブロットの結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0053】

１．用語の定義（Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）
「アルコキシ」という用語は、アルキル基、好ましくは低級アルキル基であり、それに酸素が結合していることを意味する。代表的なアルコキシ基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシなどが含まれる。

【0054】

「アルコキシアルキル」という用語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を意味する。また、一般式としてはアルキル－Ｏ－アルキルで表されてもよい。

【0055】

「アルケニル」という用語は、本出願で使用される限り、脂肪族残基として少なくとも１つの二重結合を含むことを意味する。また、「非置換アルケニル」および「置換アルケニル」の両方を含むように意図され、この中で後者はアルケニル基として前記アルケニル基の１つ以上の炭素上で水素に代わる置換基を有することを意味する。このような置換基は、１つ以上の二重結合に含まれるか含まれない１つ以上の炭素上に存在し得る。さらに、このような置換基は、安定性が問題となる場合を除いて、以下で論じるように、アルキル基に関して考慮することができる全てのものを含む。例えば、１つ以上のアルキル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリール基へのアルケニル基の置換を考慮することができる。

【0056】

「アルキル」基または「アルカン」は、鎖状または分岐状の非芳香族炭化水素として完全に飽和したものである。代表的には、鎖状または分岐状のアルキル基は、特に定義しない限り、１～約２０個の炭素原子を有する。鎖状および分岐状のアルキル基には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチルおよびオクチルが含まれる。Ｃ_１－Ｃ_６鎖状または分岐状のアルキル基は、別名として「低級アルキル」基と呼ばれる。

【0057】

さらに、本明細書、例示、および特許請求の範囲で使用される「アルキル」（または「低級アルキル」）という用語は、「非置換アルキル」および「置換アルキル」の両方を含むように意図され、この中で後者はアルキル基として前記炭化水素の１つ以上の炭素上で水素に代わる置換基を有することを意味する。前記置換基は、特に明記しない限り、例示的に、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボニル（例えば、カルボキシ、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アルコキシ、ホスホリル、リン酸塩、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、硫酸塩、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族またはヘテロ芳香族基を含むことができる。置換することが適切な場合、炭化水素鎖上の置換された残基がそれ自体で置換されてもよいことは当業者に理解され得る。例えば、置換アルキルの置換基は、置換形態および非置換形態のアミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホネートおよびホスフィネートを含む）、スルホニル（硫酸塩、スルホンアミド、スルファモイルおよびスルホネートを含む）、およびシリル基を含んでもよく、エーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレート、およびエステルを含む）、－ＣＦ_３、－ＣＮなども同様に含み得る。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル－置換アルキル、－ＣＦ_３、－ＣＮなどで追加的に置換されてもよい。

【0058】

「ヒドロキシアルキル」という用語は、少なくとも１つのヒドロキシ置換基を有するアルキル基であり、例えば、１つまたは２つのヒドロキシ基で置換され、１～６個の炭素原子を含む直鎖状の一価炭化水素ラジカルまたは３～６個の炭素原子を含む分岐状の一価炭化水素ラジカルを意味するが、２つのヒドロキシ基が存在する場合、これらの両方は同じ炭素原子に存在しない。具体的には、ヒドロキシメチル、２－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシプロピル、３－ヒドロキシプロピル、１－（ヒドロキシメチル）－２－メチルプロピル、２－ヒドロキシブチル、３－ヒドロキシブチル、４－ヒドロキシブチル、２，３－ジヒドロキシプロピル、１－（ヒドロキシメチル）－２－ヒドロキシエチル、２，３－ジヒドロキシブチル、３，４－ジヒドロキシブチルおよび２－（ヒドロキシメチル）－３－ヒドロキシプロピルなどを含む。

【0059】

「アルキニル」という用語は、本出願で使用される限り、少なくとも１つの三重結合を含む脂肪族残基を意味する。また、「非置換アルキニル」および「置換アルキニル」の両方を含むように意図され、この中で後者はアルキニル基として前記アルキニル基の１つ以上の炭素上で水素に代わる置換基を有することを意味する。このような置換基は、１つ以上の三重結合に含まれるか含まれない１つ以上の炭素上にあり得る。また、このような置換基は、安定性が問題となる場合を除いて、上記で論じたように、アルキル基に関して考慮された全てのものを含む。例えば、アルキニル基を１つ以上のアルキル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリール基で置換することが考えられる。

【0060】

「Ｃ_ｘ－ｙ」という用語は、例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシのような残基とともに使用される場合、鎖にｘ～ｙ個の炭素を含む残基を含むように意図される。例えば、「Ｃ_ｘ－ｙアルキル」という用語は、置換または非置換の飽和炭化水素基であり、鎖状のアルキルおよび分岐状のアルキル基として鎖にｘ～ｙ個の炭素を含むものを含み、例示的にはトリフルオロメチルおよび２，２，２－トリフルオロエチルなどのハロアルキル基を含むことを意味する。Ｃ_０アルキルは、末端位置にある場合は水素を、内部にある場合は結合を意味する。「Ｃ_２－ｙアルケニル」および「Ｃ_２－ｙアルキニル」という用語は、前記アルキルに対する定義で説明されたように、長さおよび可能な置換に関する定義が適用される置換または非置換の不飽和脂肪族残基であるが、それぞれが少なくとも１つの二重または三重結合を含むことを意味する。

【0061】

「アリール」という用語は、本出願で使用される限り、置換または非置換の単環芳香族基として環のそれぞれの原子が炭素であることを含む。好ましくは、前記環は５～７員環であり、より好ましくは、６員環である。「アリール」という用語は、また多環式環系として２個以上の環式環を有し、互いに接している２つの環が２個以上の炭素を共有し、少なくとも１つの前記環が芳香族であることを含み、例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。アリール基には、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリンなどが含まれる。

【0062】

「カルボサイクル」および「カルボ環式」という用語は、本出願で使用される限り、飽和または不飽和環として環のそれぞれの原子が炭素であることを意味する。カルボサイクルという用語は、芳香族カルボサイクルおよび非芳香族カルボサイクルの両方を含む。非芳香族カルボサイクルは、すべての炭素原子が飽和された、シクルロアルカン環および少なくとも１つの二重結合を含む、シクルロアルケン環を含む。

【0063】

「カルボサイクル」という用語は、５－７員環単環式および８－１２員環二環式環を含む。二環式カルボサイクルのそれぞれの環は、飽和、不飽和または芳香環から選択することができる。カルボサイクルは、二環式分子として、２または３またはそれ以上の原子が２つの環の間で共有されているものを含む。「縮合カルボサイクル」という用語は、二環式カルボサイクルであり、それぞれの環が異なる環とともに隣接した２個の原子を共有することを意味する。縮合カルボサイクルのそれぞれの環は、飽和、不飽和および芳香環から選択することができる。例示的な実施例では、芳香環（例えば、フェニル）が飽和または不飽和環（例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクルロヘキセン）と縮合することができる。飽和、不飽和および芳香族二環式環のすべての組み合わせは、価数によって許容される限り、カルボ環式の定義に含まれる。例示的な「カルボサイクル」は、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５－シクロオクタジエン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクト－３－エン、ナフタレンおよびアダマンタン（ａｄａｍａｎｔａｎｅ）を含む。例示的な縮合カルボサイクルは、デカリン（ｄｅｃａｌｉｎ）、ナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インデンおよびビシクロ［４．１．０］ヘプト－３－エンを含む。「カルボサイクル」は、水素原子を有することができるすべての１つ以上の位置で置換されてもよい。

【0064】

「シクロアルキル」基は完全に飽和した環状炭化水素である。「シクロアルキル」は単環式および二環式環を含む。特に定義しない限り、一般に、単環式シクロアルキル基は３～約１０個の炭素原子を有し、より一般的には３～８個の炭素原子を有する。二環式シクロアルキルの二番目の環は、飽和、不飽和および芳香環から選択することができる。シクロアルキルは、二環式分子として、１、２または３またはそれ以上の原子が２つの環の間で共有されているものを含む。「縮合シクロアルキル」という用語は、二環式シクロアルキルとしてそれぞれの環が異なる環とともに隣接する２個の原子を共有することを意味する。縮合した二環式シクロアルキルの二番目の環は、飽和、不飽和および芳香環から選択することができる。「シクロアルケニル」基は、１つ以上の二重結合を含む環状炭化水素である。

【0065】

「ヘテロアリール」および「ヘタリール（ｈｅｔａｒｙｌ）」という用語は、置換または非置換の芳香族単環構造であり、好ましくは、５～７員環であり、より好ましくは、５～６員環であり、その環構造が少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１または２個のヘテロ原子を含むことを含む。

【0066】

また、「ヘテロアリール」および「ヘタリール」という用語は、多環式環系として２個以上の環式環を有し、互いに接している２つの環が２個以上の炭素を共有し、少なくとも１つの前記環がヘテロ芳香族であることを含み、例示的に、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンなどが含まれる。

【0067】

「ヘテロ原子」という用語は、本出願で使用される限り、炭素または水素ではないすべての元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は窒素、酸素、および硫黄である。

【0068】

「ヘテロシクリル」、「ヘテロサイクル」、および「ヘテロ環状」という用語は、置換または非置換の非芳香族環構造であり、好ましくは３～１０員環であり、より好ましくは３～７員環であり、その環構造が少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１～４個のヘテロ原子、より好ましくは１または２個のヘテロ原子を含むことを意味する。また、「ヘテロシクリル」および「ヘテロ環状」という用語は、多環式環系として、２個以上の環式環を有し、互いに接している２つの環が２個以上の炭素を共有し、少なくとも１つの前記環がヘテロ環状であることを含み、例示的に、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、および／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロシクリル基には、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなどが含まれる。

【0069】

「低級」という表現は、例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシのような化学的残基とともに使用される場合、置換基中に１０個以下、好ましくは６個以下の水素でない原子が存在する残基を含むことが意図されている。「低級アルキル」は、例えば、アルキル基として、１０個以下、好ましくは６個以下の炭素原子を含むことを意味する。

【0070】

「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｂｏｎｄ）」という用語は、原子間の化学結合であり、イオン結合ではないことを意味する。

【0071】

「Ｘ含有残基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｒｏｕｐｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇＸ）」という用語は、化学的残基としてＸ原子を含むことを意味する。例えば、代表的なＯ含有残基としては、ケトン、ヒドロキシ、アルコキシアルキル、カルボキシなどが挙げられる。

【0072】

「ｈｓｐ９０ｓ」は、シャペロン蛋白質であるＨＳＰ９０（Ｈｓｐ９０－α１、Ｈｓｐ９０－α２、Ｈｓｐ９０－β）および体内に存在するそれらのパラログ（ｇｒｐ９４、ＴＲＡＰ－１）の両方を指す。「ＨＳＰ９０」は、特に言及がない限り、細胞質に存在するｈｓｐ９０ｓであるＨｓｐ９０－α１、Ｈｓｐ９０－α２、Ｈｓｐ９０－βを総称する。

【0073】

「結合能（ｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）」は、２つの分子間の静電力（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｆｏｒｃｅ）および／または疏水性相互作用（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｅｆｆｅｃｔ）によって発生する生物化学的および／または物理的現象の全てを指し、特定のレベル以上の強度を有する相互作用に限定するためのものではない。

【0074】

「プロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇ）」は、生体内に投与した後、目的とする医薬作用物質に変換されるものを指し、ここで変換は酵素的や非酵素的なものであり得る。活性化合物のプロドラッグは、活性親（ｐａｒｅｎｔ）化合物に対して通常の操作によってまたは生体内で改変が切断されるように活性化合物内の官能基を改変（ｍｏｄｉｆｙ）して製造することができる。プロドラッグは、ヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基が任意の基に結合している化合物を含み、すなわち、活性化合物のプロドラッグは、対象体に投与される時、切断してそれぞれ遊離（ｆｒｅｅ）ヒドロキシ、遊離アミノまたは遊離メルカプト基を形成する。プロドラッグの例として、活性化合物中のアルコールまたはアセトアミドの、アセテート、ホルメートおよび安息香酸誘導体と、アミン官能基のホルムアミドおよびベンズアミド誘導体などを含むか、これらに限定されない。

【0075】

「薬学的に許容可能な塩」は、様々な生理学的に許容可能な有機および無機対イオンに由来する化合物の塩を指す。前記対イオンは、当該技術分野で周知であり、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウム、例えば、テトラアルキルアンモニウムなど（分子が酸性官能基を含む場合）；および分子が塩基性官能基を含有する場合、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸硝酸塩（ｎｉｔｒａｔｅｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ）、酒石酸塩、メシレート、アセテート、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマレート、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩、ステアレート、メタンスルホネート、ｐ－トルエンスルホネート、およびシュウ酸塩などの有機または無機酸の塩を含む。適切な薬学的に許容可能な塩には、文献［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ, １７ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ, ｐｇ．１４１８（１９８５）およびＰ．ＨｅｉｎｒｉｃｈＳｔａｈｌ, ＣａｍｉｌｌｅＧ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）, ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ, Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、ａｎｄＵｓｅ；２００２］に記載されたものが含まれている。酸付加塩の例としては、例えば、ヨウ化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸などの酸、および有機酸として、例えば、アルギン酸、アスコルビン酸、アントラニル酸、安息香酸、カンポル硫酸、クエン酸、エンボン酸（ｅｍｂｏｎｉｃａｃｉｄ）（パモ酸）、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、イソニコチン酸、イソチオン酸、ラント酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、パントテン酸、フェニル酢酸、プロピオン酸、サッカリン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、トリフルオロ酢酸およびアリールスルホン酸、例えば、ベンゼンスルホン酸およびｐ－トルエンスルホン酸から形成された塩が含まれる。アルカリ金属およびアルカリ土類金属および有機塩基で形成された塩基付加塩の例として、クロロプロカイン、コリン、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチレンジアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、リジン、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）、およびクロカイン、ならびに内部で形成された塩が含まれる。非生理学的に許容可能なアニオンまたはカチオンを有する塩は、生理学的に許容可能な塩の製造のための、および／または非治療的に、例えば、試験管内の状況で使用するための有用な中間体として本発明の範囲内にある。本出願による薬学的に許容可能な塩には、ハロゲン塩、すなわちフッ素塩、臭素塩、ヨウ素塩などが含まれる。

【0076】

２．本出願の化合物構造
本出願は、ＴＲＡＰ－１を阻害するための薬物分子を提供する。

【0077】

本出願による薬物分子は、下記［化学式７］で表される構造を有する化合物である。

【0078】

［化学式７］
Ｂ－Ｌ－Ｃ^＋

【0079】

ここで、ＢはＴＲＡＰ－１ユニットに対する親和力のある結合部（ｂｏｎｄｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）であり、Ｌは結合部と正電荷部を連結するための連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）であり、Ｃ^＋は正電荷を帯びる正電荷部（ｃａｔｉｏｎｉｃｍｏｉｅｔｙ）である。

【0080】

この場合、結合部は、環式環を含んでもよく、さらに４～１０の単環式環を含んでもよく、さらに５～７の単環式環を含んでもよい。また、前記環式環は、カルボ環式環であっても複素環式環であってもよい。ここで、複素環式環を構成するヘテロ原子は、例示的に窒素、酸素、硫黄またはリンであり得る。また、前記環式環はアリールであり得る。また、前記環式環は二環式環などの多環式環であり得る。

【0081】

または、前記環式環は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。この場合、前記置換基は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり得る。または、前記置換基はヘテロ原子含有残基であり得る。

【0082】

ここで、前記ヘテロ原子含有残基はハロゲン含有残基であり得る。この場合、ハロゲン含有残基は、例示的にＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり得る。

【0083】

あるいは、この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。この場合、酸素含有残基は、例示的にヒドロキシ、カルボニル、ホルミル、アルコキシカルボニルオキシ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシまたはメチレンジオキシであり得る。

【0084】

あるいは、この場合、前記ヘテロ原子含有残基は窒素含有残基であり得る。この場合、窒素含有残基は、例示的にアミド、アミン、アンモニウム、イミン、イミド、シアネート、ナイトレート、ニトリル、ピリジン、アジドまたはカルバメートであり得る。

【0085】

あるいは、この場合、前記ヘテロ原子含有残基は硫黄含有残基であり得る。この場合、硫黄含有残基は、例示的にチオール、スルフィド、ジスルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルホネート、チオン、チアル、チオエートまたはジチオエートであり得る。

【0086】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0087】

この場合、ｎは１以上２０以下の整数であり得る。さらに、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０から選択された２つの数の間の整数であり得る。さらに、ｎは５、６、７、８、９、１０、１１、１２から選択された２つの数の間の整数であり得る。さらに、ｎは５以上１２以下の整数であり得る。好ましい例では、ｎは１０であり得る。

【0088】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0089】

あるいは、この場合、前記脂肪族残基は、ヘテロ原子を介して結合部、陽電子部、または他の脂肪族残基と結合することができる。この場合、前記ヘテロ原子は、例示的に酸素、窒素、硫黄を含む。例えば、例示的な１つの連結部は、－（ＣＨ_２）_ｘ－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－の構造を有することができる（ｘ、ｙは０以上の整数）。

【0090】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0091】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0092】

あるいは、連結部は、特定の範囲の長さを有することができる。この場合、連結部の長さは５～６０オングストロームであり得る。さらに、１０～５０オングストローム、さらに２０～４０オングストローム、さらに２５～３５オングストロームであり得る。

【0093】

Ｃは、正電荷部（ｃａｔｉｏｎｉｃｍｏｉｅｔｙ）として正電荷を帯びる部位またはその還元形態である。

【0094】

この場合、正電荷部は正電荷を帯びることができる。

【0095】

この場合、正電荷部は酸化された原子（ｏｘｉｄｉｚｅｄａｔｏｍ）を含むことができる。さらに、酸化された原子はＮ^＋またはＰ^＋であり得る。

【0096】

あるいは、この場合、正電荷部は酸化された原子を含む残基を含むことができる。

【0097】

この場合、前記残基はアミン基、ホスフェン基（ｐｈｏｓｐｈａｎｅ）であり得る。

【0098】

あるいは、この場合、正電荷部はその還元形態であり得る。

【0099】

あるいは、正電荷部は、環式環を含んでもよく、さらに４～１０の単環式環を含んでもよく、さらに５～７の単環式環を含んでもよい。また、前記環式環は、カルボ環式環であっても複素環式環であってもよい。ここで、複素環式環を構成するヘテロ原子は、例示的に窒素、酸素、硫黄またはリンであり得る。また、前記環式環はアリールであり得る。また、前記環式環は二環式環などの多環式環であり得る。

【0100】

あるいは、前記環式環は、１つ以上の置換基で置換されていてもよい。この場合、前記置換基は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり得る。または、前記置換基はヘテロ原子含有残基であり得る。

【0101】

あるいは、正電荷部が酸化された原子を含む場合、前記環式環は酸化された原子に結合した置換基であり得る。

【0102】

あるいは、分子全体の位置関係における結合部および正電荷部の間の距離は、５～６０オングストロームであり得る。さらに１０～５０オングストローム、さらに２０～４０オングストローム、さらに２５～３５オングストロームであり得る。

【0103】

本出願による薬物分子は、化学式８の構造を有する化合物であり得る。

【0104】

［化学式８］

【0105】

ここで、左側の結合部を構成する６員環はカルボ環式環であっても複素環式環であってもよい。６員環の内部に示されている点線と「？」は、前記環を構成する原子間の結合が許容される範囲内で任意に単結合または多重結合を構成できることを意味する。この場合、複素環式環を構成するヘテロ原子は、例示的に窒素、酸素、硫黄またはリンであり得る。また、前記６員環はアリールであり得る。

【0106】

ここで、Ｒ_１～Ｒ_５はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはヘテロ原子含有残基であり得る。例示的にＲ_１～Ｒ_５のいずれかはアルキルであり得、さらに前記アルキルはＣ_１－５アルキルであり得、さらに前記アルキルはメチルであり得る。

【0107】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0108】

この場合、酸素含有残基は、例示的にヒドロキシ、カルボニル、ホルミル、アルコキシカルボニルオキシ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アルコキシアルキルまたはメチレンジオキシ基であり得る。

【0109】

好ましい一例として、前記酸素含有残基は、Ｃ_１－５アルコキシであり得、さらにメトキシであり得る。また、他の好ましい一例として、前記酸素含有残基はヒドロキシまたはカルボニリルであり得る。

【0110】

あるいは、この場合、前記ヘテロ原子含有残基はハロゲン含有残基であり得る。この場合、ハロゲン含有残基は、例示的にＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり得る。

【0111】

【0112】

【0113】

前記化学式８中のＬは連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）として結合部と正電荷部を連結する部位である。

【0114】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0115】

【0116】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0117】

【0118】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0119】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0120】

【0121】

本出願による薬物分子は、化学式９の構造を有する化合物であり得る。

【0122】

［化学式９］

【0123】

ここで、Ｒ_１～Ｒ_３はそれぞれ独立してＨ、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはヘテロ原子含有残基であり得る。例示的にＲ_１～Ｒ_３のいずれかはアルキルであり得、さらに前記アルキルはＣ_１－５アルキルであり得、さらに前記アルキルはメチルであり得る。

【0124】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0125】

【0126】

【0127】

【0128】

【0129】

【0130】

前記化学式９中のＬは連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）として結合部と正電荷部を連結する部位である。

【0131】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0132】

【0133】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0134】

【0135】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0136】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0137】

【0138】

あるいは、本出願による薬物分子は、化学式９の構造を有する化合物の還元形態の化合物であり得る。

【0139】

本出願による薬物分子は、下記の化学式１０の構造を有する化合物であり得る。

【0140】

［化学式１０］

【0141】

【0142】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0143】

【0144】

【0145】

【0146】

【0147】

【0148】

前記化学式１０中のＬは連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）として結合部と正電荷部を連結する部位である。

【0149】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0150】

【0151】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0152】

【0153】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0154】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0155】

【0156】

本出願による薬物分子は、下記の化学式６の構造を有する化合物であり得る。

【0157】

［化学式６］

【0158】

ここで、Ｒ_１はＨ、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはヘテロ原子含有残基であり得る。例示的にＲ_１はアルキルであり得、さらに前記アルキルはＣ_１－５アルキルであり得、さらに前記アルキルはメチルであり得る。

【0159】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0160】

【0161】

【0162】

【0163】

【0164】

【0165】

前記化学式６中のＬは連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）として結合部と正電荷部を連結する部位である。

【0166】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0167】

【0168】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0169】

【0170】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0171】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0172】

【0173】

あるいは、本出願による薬物分子は、化学式６の構造を有する化合物の還元形態の化合物であり得る。

【0174】

本出願による薬物分子は、下記の化学式１１の構造を有する化合物であり得る。

【0175】

［化学式１１］

【0176】

ここで、Ｒ_１～Ｒ_３はＨ、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはヘテロ原子含有残基であり得る。例示的にＲ_１～Ｒ_３はアルキルであり得、さらに前記アルキルはＣ_１－５アルキルであり得、さらに前記アルキルはメチルであり得る。

【0177】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0178】

【0179】

【0180】

【0181】

【0182】

【0183】

また、連結部の構造のうち炭化水素の部分においてｎは１以上の整数である。この場合、ｎは１以上２０以下の整数であり得る。さらに、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０から選択された２つの数の間の整数であり得る。さらに、ｎは５、６、７、８、９、１０、１１、１２から選択された２つの数の間の整数であり得る。さらに、ｎは５以上１２以下の整数であり得る。好ましい例では、ｎは１０であり得る。この場合、前記炭化水素の部分は許容される範囲内で多重結合を含むことができる。

【0184】

【0185】

例示的に、前記化学式６による化合物は、以下のいずれかであり得る。

【0186】

さらに、本出願による化合物分子は、下記の化学式１の構造を有する新規化合物であり得る。

【0187】

［化学式１］

【0188】

【0189】

この場合、前記ヘテロ原子含有残基は酸素含有残基であり得る。

【0190】

この場合、酸素含有残基は、例示的にヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、カルボニル、ホルミル、アルコキシカルボニルオキシ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アルコキシアルキルまたはメチレンジオキシ基であり得る。

【0191】

一例では、前記酸素含有残基は、Ｃ_１－５アルコキシであり得、さらにメトキシであり得る。また、他の好ましい一例として、前記酸素含有残基はヒドロキシ、ヒドロキシアルキルであり得る。

【0192】

【0193】

【0194】

【0195】

一例として、前記Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、およびＲ_５は、それぞれＨ、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、Ｃ_１～５アルキニル、およびＣ_１～５アルコキシから選択することができる。

【0196】

この場合、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、およびＲ_５のいずれかがヒドロキシである場合、ヒドロキシと対向する方向に位置する置換基はヒドロキシでなくてもよい。ここで、対向する方向に位置する置換基とは、例えば、（Ｒ_１およびＲ_４）または（Ｒ_２およびＲ_５）であり得る。具体的には、Ｒ_１およびＲ_４は、それらのうちのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではなく、またはＲ_２およびＲ_５は、それらのうちのいずれかがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではない可能性がある。ここで、「（ｘおよびｙ）」は、ｘおよびｙからなる集合を意味する。

【0197】

前記Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、およびＲ_５のうち対向する置換基が全てヒドロキシである場合、例えば、Ｒ_１およびＲ_４が全てヒドロキシである場合、またはＲ_２およびＲ_５が全てヒドロキシである化合物の場合、化合物自体の元素の電磁気交換により酸化／還元反応を起こすことができる。したがって、前記化学式２の化合物の対向する置換基中の１つがヒドロキシである場合、残りの１つはヒドロキシではないことを特徴とするので、化合物自体で起こる酸化／還元反応を失活させる効果を有することができる。

【0198】

具体的には、前記化学式１中、Ｒ_１はＨ、Ｃ_１～５アルキル、Ｃ_１～５アルケニル、またはＣ_１～５アルキニルであり得、さらにＣ_１～５アルキルであり得、さらにメチルであり得る。

【0199】

あるいは、前記Ｒ_３およびＲ_４はそれぞれＣ_１～５アルコキシであり得る。

【0200】

あるいは、前記Ｒ_２およびＲ_５はそれぞれヒドロキシ、アルコキシまたはハロゲンであり、ここで、Ｒ_２およびＲ_５の中の少なくとも１つはハロゲンであり得る。

【0201】

さらに、前記化学式１中のＬは連結部（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）としてＲ_１～Ｒ_５置換基を含む結合部（左）とトリフェニルホスホニウム（右）を連結する部位である。

【0202】

この場合、連結部は、脂肪族残基、例えば、アルキル（－（ＣＨ_２）_ｎ）を含むことができる。

【0203】

【0204】

あるいは、この場合、前記連結部はアルケニルまたはアルキニルを含むことができる。

【0205】

【0206】

あるいは、連結部は、エチレンオキシ単位（（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）ｍ）を含むことができる。この場合、ｍは１以上の整数または０であり得る。

【0207】

あるいは、連結部は、アルキルおよびエチレンオキシ単位を含むことができる。

【0208】

【0209】

好ましい一例として、前記化学式１は、下記の化学式２で表される化合物であり得る。

【0210】

［化学式２］

別の一例として、前記化学式１は、下記の化学式３で表される化合物であり得る。

【0211】

［化学式３］

【0212】

また他の一例として、前記化学式１は、下記の化学式４で表される化合物であり得る。

【0213】

［化学式４］

【0214】

また他の一例として、前記化学式１は、下記の化学式５で表される化合物であり得る。

【0215】

［化学式５］

【0216】

前記化学式１～１１で表される本出願による化合物は、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグの形態で提供することができる。特定の一例では、前記薬学的に許容可能な塩は、酸付加塩またはハロゲン塩であり得る。好ましくは、前記薬学的に許容可能な塩は臭素塩であり得る。

【0217】

３．新生血管形成因子と新生血管形成性疾患の関係
新生血管形成性疾患は異常な新生血管形成により発生する。新生血管形成は原発組織への円滑な血液供給のための正常な恒常性維持行為である。ただし、このような新生血管形成が正常な組織よりも過剰な場合、このような異常な新生血管形成によって新生血管形成性疾患が発症することになる。新生血管形成性疾患の発生要因はいくつかの共通点を共有しているが、同じ病理機序を有しているとは見えない。概して詳細な病理機序は明確には知られていない。しかし、一般的に、ほとんどの新生血管形成性疾患では、新生血管形成因子が主な原因として関与している。

【0218】

新生血管形成性疾患において、異常細胞は正常細胞と比較して新生血管形成因子を過剰生成する。重要であることが知られている新生血管形成因子のうち代表的なものは、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞成長因子：Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）である。ＶＥＧＦリガンドとＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）およびそれらのシグナル送達に関与する因子を阻害すると、このような異常な新生血管形成が改善されることが知られている。

【0219】

また、最近、ＨＩＦ－１α（ＨＩＦ－１－ａｌｐｈａ、Ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ（低酸素誘導因子）１－ａｌｐｈａ）が新生血管形成に関与するという研究結果が発表されている。例えば、ＨＩＦ－１αが眼球で網膜および網膜下の新生血管形成を誘導するという結果がある［５］。ＨＩＦ－１αは低酸素状態で過剰発現する因子として細胞の成長および生存に関与する因子として知られている。これに加えて、ＨＩＦ－１αは新生血管形成に関与し、ＶＥＧＦの上位調整因子（ｐａｒｅｎｔｍｏｄｅｒａｔｏｒ）の中の１つである。ＨＩＦ－１αの新生血管形成シグナル送達経路は図１の通りである。ＨＩＦ－１αの直接的な阻害治療の可能性が研究されているにも関わらず、現在までは予想外の毒性によって大きな成果が出ていない状況である［６］。

【0220】

さらに、ＨＩＦ－１αの下位調整因子（ｃｈｉｌｄｍｏｄｅｒａｔｏｒ）のうち、ＥＰＯ、ＰＧＦ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＳＤＦ－１、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＣＸＣＲ４も新生血管形成因子として機能する。

【0221】

４．ＴＲＡＰ－１の阻害による新生血管形成性疾患の治療
本出願の発明者は、既に主なターゲットとして扱われたＶＥＧＦおよびＨＩＦ－１αではなく、その上位調整因子として、異常細胞にのみ発現される因子を同定した。本出願は、それを阻害する方法および阻害する効果を有する物質、ならびにそれを含む剤形および治療方法も含んでいる。

【0222】

ＴＲＡＰ－１（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ－１）は、シャペロン蛋白質であるＨＳＰ９０（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ－９０）のパラログ（ｐａｒａｌｏｇ）であり、ミトコンドリアにのみ存在するミトコンドリア蛋白質（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ）である。

【0223】

ＨＳＰ９０は、体内蛋白質のかなりの部分を担うシャペロン蛋白質として細胞の恒常性（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ）を調整する機能に関与することが知られており、これによって抗癌ターゲットとして研究されている［７］。しかし、ＨＳＰ９０は異常細胞または正常細胞を区別することなく発現される一般的なシャペロン蛋白質であるため、これを阻害することは予想外の副作用を生むことが多かった。これにより、１９９９年から臨床実験段階に入ったＨＳＰ９０阻害剤は１８だったが、２０１８年まで臨床実験が持続しているＨＳＰ９０阻害剤は５つに過ぎなかった［８］。

【0224】

ＴＲＡＰ－１を含むｈｓｐ９０ｓは、２つのユニット（ｐｒｏｔｏｍｅｒ）が結合している構造を有している。ここで、各ユニットを第１ユニット、第２ユニットと称する。ｈｓｐ９０ｓは、ｈｓｐ９０ｓに対して特異的なクライアント蛋白質（ｃｌｉｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ）が結合すると、互いに離れて配置されていたユニットが接近してＡＴＰが結合して分解され、クライアント蛋白質の立体構造を形成する。各ユニットは、Ｎ－末端部位（Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎ）、中間部位（ｍｉｄｄｌｅｄｏｍａｉｎ）、Ｃ－末端部位（Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎ）から構成されている。Ｎ－末端部位は、ＡＴＰが結合してｈｓｐ９０ｓの活性のためのエネルギーを産生する部位である。中間部位は、各ｈｓｐ９０ｓに特異的なクライアント蛋白質が結合する部位である。Ｃ－末端部位は、２つのユニットが連結される部位である。例示的にＴＲＡＰ－１の構造と動作過程が図３に示されている。

【0225】

ｈｓｐ９０ｓは、パラログ間のＮ－末端部位の相同性が非常に高いが、中間部位の相同性は低い特徴がある。従来のＨＳＰ９０阻害剤はＡＴＰと相同性があるアデノシンバックボーンを含んでおり、ｈｓｐ９０ｓのＮ－末端にＡＴＰが結合するのを競合的に阻害することによってＨＳＰ９０を阻害した。これによって、従来のＨＳＰ９０阻害剤はすべてのｈｓｐ９０ｓに対して非選択的に作用する問題があった［９］。これにより、各パラログに対して相同性の低い部位をターゲットとする選択的阻害剤の必要性に関する問題意識があったが、実用的な薬物分子の開発には結びつかなかった［１０］。

【0226】

本出願の発明者は、ｈｓｐ９０ｓおよびその阻害剤を研究したところ、新生血管形成性疾患において、細胞質のｈｓｐ９０ｓではなく、ミトコンドリア内部のｈｓｐ９０ｓが異常細胞の物質代謝に積極的に関与していることを確認した。これに着目して、ＨＳＰ９０の阻害剤として知られるゲルダナマイシンにミトコンドリア膜透過能のある残基を付着したガミトリニブ（Ｇａｍｉｔｒｉｎｉｂ）を開発し、優れた治療効果があることを確認した。ただし、ガミトリニブは依然として細胞質のｈｓｐ９０ｓに対しても阻害能を示し、強い毒性を示す問題があった（韓国特許公開公報ＫＲ２０１５０１０９５４０Ａ参照）。

【0227】

さらに、本出願の発明者は、新生血管形成性疾患が発生した組織を分析している間、ミトコンドリアｈｓｐ９０ｓにおけるＴＲＡＰ－１が異常組織部位にのみ発現していることを見出した。ＴＲＡＰ－１に対する選択的阻害の必要性を認識し、ＴＲＡＰ－１を阻害する実験を進めた結果、ＴＲＡＰ－１が新生血管形成性疾患を治療するための有効なターゲットであることを検証した。その後、ＴＲＡＰ－１を選択的に阻害できる阻害剤を継続的に研究した後、ＴＲＡＰ－１の選択的阻害剤を最初に開発することができた。そのうちの１つである本出願による化合物は、ＴＲＡＰ－１のユニットの中で相同性の低い中間部に結合することによって、ＴＲＡＰ－１の選択的阻害を可能にする。

【0228】

ＴＲＡＰ－１は、ＨＩＦ－１αの上位調整因子であり、同定されたＴＲＡＰ－１とＨＩＦ－１αのシグナル送達スキームは図２の通りである。

【0229】

５．本出願の化合物によるＴＲＡＰ－１の阻害
本目次では、本出願による化合物の構造とＴＲＡＰ－１との間の相互作用について同定することを目的とする。また、これと関連する化合物の構造的特徴を開示することを目的とする。

【0230】

本出願による薬物分子は、化学式７の構造を有する化合物である。

【0231】

［化学式７］
Ｂ－Ｌ－Ｃ^＋

【0232】

【0233】

この場合、結合部は、ＴＲＡＰ－１ユニットのＮ－末端部位、中間部位、またはＣ－末端部位に対する結合能を有し得る。この場合、結合部は、ＴＲＡＰ－１ユニットの活性部位（ａｃｔｉｖｅｓｉｔｅ）に対する結合能がなければならず、その中でも中間部位に対する結合能があることが好ましい。

【0234】

また、結合部は特定の体積を有することが好ましい。これは、ＴＲＡＰ－１ユニットの特定部位に対する結合能を有するために適した体積を有することが好ましいからである。好ましいいくつかの実施例では、結合部は置換基としてアルコキシ基を含むことができる。さらに、結合部は置換基として２個以上のアルコキシ基を含むことができる。好ましいいくつかの実施例では、結合部は置換基としてカルボニル基を含むことができる。さらに、結合部は置換基として２個以上のカルボニル基を含むことができる。好ましいいくつかの実施例では、結合部は置換基としてアルキル基を含むことができる。好ましいいくつかの実施例では、結合部は置換基としてアルコキシ基およびカルボニル基を含むことができる。さらに、結合部は置換基として２個以上のアルコキシ基、２個以上のカルボニル基およびアルキル基を含むことができる。

【0235】

この場合、連結部の長さは、ＴＲＡＰ－１と本出願の薬物分子との間の相互作用に影響を及ぼし得る。ＴＲＡＰ－１と薬物分子との間の相互作用は、（１）ＴＲＡＰ－１の２つの前駆体の特定部位にそれぞれ薬物分子が結合する場合、（２）ＴＲＡＰ－１の２つの前駆体の特定部位に１つの薬物分子が全て結合する場合、（３）ＴＲＡＰ－１の前駆体の特定部位に薬物分子が結合できない場合があり得る。（３）の場合を除いて、例示的に連結部の長さが特定の長さ未満の場合、（１）の比率が（２）の比率より高くてもよい。また、連結部の長さが特定の長さ以上の場合、（２）の比率が（１）の比率より高くてもよい。また、連結部の長さが特定の長さである場合、（２）の比率が一番高いように最適化される可能性がある。

【0236】

また、連結部の長さは、ＴＲＡＰ－１がＡＴＰと結合していない状態において、第１ユニットの特定構成要素と第２ユニットの特定構成要素との間の距離に近い値であり得る。この場合、各ユニットの特定構成要素はそれぞれＮ－末端部位、中間部位またはＣ－末端部位であり得る。さらに、この場合、各ユニットの特定構成要素のうち少なくとも１つは中間部位であり得る。または、この場合、連結部の長さは、ＴＲＡＰ－１がＡＴＰと結合した状態において、第１ユニットの特定構成要素と第２ユニットの特定構成要素との間の距離と近い値であり得る。この場合、各ユニットの特定構成要素はそれぞれＮ－末端部位、中間部位またはＣ－末端部位であり得る。さらに、この場合、各ユニットの特定構成要素のうち少なくとも１つは中間部位であり得る。

【0237】

あるいは、正電荷部は高い脂肪親和性（ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ）を有することができる。例示的に脂肪親和性が大きな分子は、体積が大きな無極性部位を有するか、極性部位が無極性部位で囲まれているか、または大きな分子量を有することができる。正電荷部は、ミトコンドリアの膜を透過することによって薬物分子がミトコンドリアの内部に送達されることを可能にする。

【0238】

さらに、正電荷部は、ユニットのＮ－末端部位、中間部位、またはＣ－末端部位に対する結合能を有し得る。正電荷部がユニットに対して結合能を示す場合、治療学的に有効な薬物分子の最小量を効率的に低減できるからである。ただし、正電荷部のユニットに対する結合能は結合部と同等である必要は全くない。

【0239】

また、結合部の特定部位は特定の体積を有することが好ましい。これは、ユニットの特定部位に対する結合能を有するために適した体積を有する必要があるからである。この場合、前記特定部位は環状構造を有することができる。

【0240】

６．眼疾患の分類
眼疾患はいくつかの方法で分類することができる。まず、眼疾患は異常が発生した眼球構造（ｏｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）に応じて分類することができる。

【0241】

この場合、異常が発生する眼球構造は眼球を囲んでいる眼球周辺構造（ｅｙｅｂａｌｌｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）であり得る。眼球周辺構造はまぶたまたは涙腺であり得る。

【0242】

あるいは、異常が発生する眼球構造は眼球を構成する眼球構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｅｙｅｂａｌｌ）であり得る。眼球構成要素は、結膜、強膜、角膜、虹彩、毛様体、水晶体、脈絡膜、網膜、硝子体、視神経または眼筋肉であり得る。この場合、網膜に発生する眼疾患は網膜症または網膜病症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）と呼ばれる。

【0243】

また、眼疾患は新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）の有無により分類することができる。

【0244】

特定の眼球構造または眼球全体の新生血管形成によって発生する眼疾患を新生血管形成性眼疾患（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｏｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ）と呼ぶ。新生血管形成は、奇形形成された血管の周辺に新しい血管が形成される身体的現象をいい、本出願では、奇形形成された血管から新しい血管が伸びて出る現象である血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）を含む。異常な血管の弱化、虚血（ｉｓｃｈｅｍｉａ）または新生血管形成因子（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ）の過剰生成によって眼球構造で異常な新生血管形成が発生する可能性がある。これにより、血管構造が密集し、血管が十分に厚く成長できないことによって、血管の圧力が上昇し、血管が眼球構造から分離されるなど異常症状が発生することになる。

【0245】

新生血管形成性眼疾患は、新生血管形成が発生する眼球構造により分類することができる。この場合、新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成（ｃｈｏｒｏｉｄａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、網膜新生血管形成（ｒｅｔｉｎａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、網膜下新生血管形成（ｓｕｂｒｅｔｉｎａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）、角膜新生血管形成（ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）または虹彩新生血管形成（Ｒｕｂｅｏｓｉｓｉｒｉｄｉｓ；ｉｒｉｓｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）であり得る。

【0246】

そのうち、網膜新生血管形成は、網膜の内部から始まる新生血管形成が網膜と硝子体の境界まで突出して発生する。新生血管によって引き起こされる虚血によって硝子体の汚染、網膜分離などの症状が現れる。これによる眼疾患は、糖尿病性網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、未熟児網膜症（ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ）または網膜静脈閉塞（ｒｅｔｉｎａｌｖｅｉｎｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）等がある。網膜新生血管形成疾患は、網膜血管の虚血症状が伴い、虚血性網膜症（ｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）とも呼ばれる。

【0247】

網膜下新生血管形成は、網膜の下部構造から始まる新生血管形成が下部構造と網膜の境界まで突出して発生する。この場合、網膜下新生血管形成は脈絡膜新生血管形成によって発生する可能性がある。これによる代表的な眼疾患は湿式加齢黄斑変性（ｗｅｔａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄｍａｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｗｅｔＡＭＤ）等がある。湿式加齢黄斑変性の場合、黄斑の下に浸透した新生血管で発生した虚血によって黄斑の光受容体および黄斑細胞の変性が発生する。

【0248】

あるいは、新生血管形成性眼疾患は特定の眼球構造に特定されず、症状に従って分類することができる。例えば、新生血管緑内障（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｇｌａｕｃｏｍａ）がこれに属する。

【0249】

特定の眼球構造または眼球全体で新生血管形成が観察されない眼疾患を非新生血管形成性眼疾患（ｎｏｎ－ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｏｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ）と称する。乾式加齢黄斑変性（ｄｒｙａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄｍａｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｄｒｙＡＭＤ）がこれに属する。

【0250】

本出願において、治療対象となる眼疾患は新生血管形成性眼疾患に該当する。

【0251】

７．本出願による薬学的組成物
本出願は、本出願による化合物から選択される１つ以上を有効成分として含む薬学的組成物を提供することができる。ここで、本出願による化合物は、化学式１～１１で表される化合物を意味し、前記化学式１～１１については、「２．本出願の化合物構造」の内容を準用する。

【0252】

特定の一例において、本出願による薬学的組成物は、新生血管形成性眼疾患治療用であり得る。さらに、前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患、網膜新生血管形成疾患、網膜下新生血管形成疾患、角膜新生血管形成疾患、虹彩新生血管形成疾患、新生血管形成性緑内障であり得る。一例では、前記新生血管形成性眼疾患は、網膜新生血管形成疾患であり得る。さらに、前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症または網膜静脈閉塞症であり得る。好ましくは、前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症であり得る。他の例では、前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患であり得る。さらに、前記脈絡膜新生血管形成疾患は、ウェット型加齢黄斑変性症（ｗｅｔＡＭＤ）であり得る。

【0253】

特定の一例において、本出願による薬学的組成物は、経口用または点眼投与用であり得る。好ましくは、本出願による薬学的組成物は点眼投与用であり得る。

【0254】

本出願は、本出願による化合物から選択される１つ以上を投与することを含む新生血管形成性眼疾患の治療方法を提供することができる。ここで、本出願による化合物は、化学式１～１１で表される化合物を意味し、前記化学式１～１１については、「２．本出願の化合物構造」の内容を準用する。

【0255】

特定の一例において、前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患、網膜新生血管形成疾患、網膜下新生血管形成疾患、角膜新生血管形成疾患、虹彩新生血管形成疾患、新生血管形成性緑内障であり得る。一例では、前記新生血管形成性眼疾患は、網膜新生血管形成疾患であり得る。さらに、前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症または網膜静脈閉塞症であり得る。好ましくは、前記網膜新生血管形成疾患は、糖尿病性網膜症であり得る。他の例では、前記新生血管形成性眼疾患は、脈絡膜新生血管形成疾患であり得る。さらに、前記脈絡膜新生血管形成疾患は、ウェット型加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）であり得る。

【0256】

特定の一例において、本出願による新生血管形成性眼疾患の治療方法は、本出願による化合物を経口経路で投与すること、または点眼経路で投与することを含み得る。好ましくは、本出願による新生血管形成性眼疾患の治療方法は、本出願による化合物を点眼経路で投与することを含み得る。

【0257】

本出願の組成物および発明は、それを必要とする対象を治療するために使用することができる。特定の実施例では、対象はヒトなどの哺乳類であるか、または非ヒトの哺乳類である。対象、例えば、ヒトに投与される場合、組成物または化合物は、例えば、本出願の化合物および薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物として投与されることが好ましい。薬学的に許容可能な担体は、当該技術分野で周知であり、例えば、水のような水溶性溶液または生理学的に緩衝された食塩水またはグリコール、グリセロール、オリーブ油などの油、または注射可能な有機エステルのような他の溶媒または担体を含む。好ましい実施例では、そのような薬学的組成物がヒトを投与対象とするとき、特に侵襲的経路で投与される場合（すなわち、注射または移植のように、上皮上壁を通る輸送または拡散を回避する経路）、水溶液は発熱物質が存在しないか、または実質的に発熱物質がない。添加剤は、例えば、製剤の持続的な放出に寄与するか、または１つ以上の細胞、組織または器官を選択的に対象とするために選択することができる。薬学的組成物は、丸薬、カプセル（スプリンクルカプセル（ｓｐｒｉｎｋｌｅｃａｐｓｕｌｅ）、ゼラチンカプセルを含む）、顆粒剤、再成形可能な凍結乾燥物、粉末、溶液、シロップ、坐剤、注射または他の投与単位剤形として提供されてもよい。また、組成物は、経皮送達システム、例えば、皮膚パッチとして提供されてもよい。また、組成物は、局所投与に適した溶液、例えば、目薬として提供されてもよい。

【0258】

薬学的に許容可能な担体は、生理学的に許容可能な製剤として、例えば、安定化したり、溶解度を増加させたり、または本出願の化合物と同じ化合物の吸収を増加させる機能をすることを含み得る。そのような生理学的に許容可能な製剤には、例えば、グルコース、スクロースまたはデキストランのような炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンのような酸化防止剤、キレート剤、低分子量蛋白質または他のスタビライザーまたは添加剤が含まれる。薬学的に許容可能な担体、例えば、生理学的に許容可能な製剤の選択は、例えば、組成物の投与経路に依存する。前記薬学的組成物の製剤は、自己乳化薬物送達システム（ｓｅｌｆ－ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ）または自己マイクロ乳化薬物送達システム（ｓｅｌｆ－ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍ）であり得る。薬学的組成物（製剤）は、リポソームまたは他のポリマー基質であり、それらの内部に、例えば、本出願の化合物が含まれるものであり得る。リポソームは、例えば、リン脂質または他の脂質で構成されており、毒性がなく、生理学的に許容可能であり、代謝可能（ｍｅｔａｂｏｌｉｚａｂｌｅ）な担体として製造して投与することが比較的容易である。

【0259】

本明細書で使用される「薬学的に許容可能な」という用語は、合理的な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題または副作用を示さず、対象の組織と接触させるのに適しており、合理的な利益／リスク比率（ｂｅｎｅｆｉｔ／ｒｉｓｋｒａｔｉｏ）を有する化合物、物質、組成物、および／または投与剤形を指す。

【0260】

本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体」という用語は、薬学的に許容可能な物質、組成物または担体として、例えば、液体または固体フィラー、希釈液、添加剤、溶媒またはカプセル化物質を意味する。各担体は、「許容可能」でなければならず、これは剤形の他の成分と互換性があり、また対象に損傷を与えてはいけないことを意味する。薬学的に許容可能な担体として機能し得る物質の一部の例には、以下が含まれる。（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースのような糖類；（２）トウモロコシ澱粉またはジャガイモ澱粉のような澱粉；（３）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびセルロースアセテートのようなセルロース、およびその誘導体；（４）トラガカント粉末（ｐｏｗｄｅｒｅｄｔｒａｇａｃａｎｔｈ）；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオバターおよび坐剤用ワックスのような添加剤；（９）ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および豆油のような油；（１０）プロピレングリコールのようなグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マニトールおよびポリエチレングリコールのようなポリポール；（１２）エチルオレイン酸およびエチルラウリン酸のようなエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張性蒸溜水；（１８）リンガー液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝溶液；および（２１）薬学的剤形に含まれる他の無毒性互換可能物質。

【0261】

薬学的組成物（製剤）は、対象に様々な投与経路を介して投与することができる。投与経路には、例えば、経口（例えば、水溶性または非水溶性の溶液または懸濁液のようなドレンチ、丸薬、カプセル（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、塊、粉末、顆粒剤、舌に塗布するためのペースト）；口腔粘膜による吸収（例：舌下）；肛門、直腸または膣（例えば、ペッサリー、クリームまたはフォーム）；非経口（筋肉内、静脈内、皮下または脊髄腔内に、例えば、滅菌溶液または懸濁液による）；鼻腔；腹腔内；皮下；経皮（例えば、皮膚に貼り付けるパッチ）；および局所的（例えば、クリーム、軟膏または皮膚に塗布されるスプレー、または目薬）投与が含まれる。または、化合物は吸入できるように調製されてもよい。特定の実施例では、化合物は単に滅菌水に溶解または懸濁することができる。適切な投与経路およびそれに適した組成物の具体的な例は、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．６，１１０，９７３、５，７６３，４９３、５，７３１，０００、５，５４１，２３１、５，４２７，７９８、５，３５８，９７０および４，１７２，８９６、ならびにそれらが引用する特許に記載されている。

【0262】

剤形は、単位投与単位剤形として都合よく提供することができ、薬学分野で周知の任意の方法によって製造することができる。単一投与剤形を製造するために担体物質と混合することができる有効物質の量は、治療対象、特定の投与方法に応じて変化する。単一投与剤形を製造するために担体物質と混合することができる有効物質の量は、一般に治療学的効果を示すための化合物の量である。一般に、１００％を基準として、上記の量は有効物質１％～約９９％であり、好ましくは約５％～約７０％であり、最も好ましくは１０％～３０％である。

【0263】

このような剤形または組成物の製造方法は、有効化合物、例えば、本出願の化合物を担体および場合により１つ以上の追加成分と結合させるステップを含む。一般に、剤形は、本出願の化合物を液体担体、または微粉化した固体担体、またはその両方に均一かつ親密に結合させ、その後、必要に応じて製品を成形することによって製造される。

【0264】

経口投与に適した本出願の剤形は、カプセル（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、カシェ（ｃａｃｈｅｔｓ）、錠剤、丸薬、トローチ（ｌｏｚｅｎｇｅ）（風味付けされたベースを使用し、主にスクロースおよびアカシアまたはトラガカントを使用する）、凍結乾燥物、粉末、顆粒剤、または水溶性または非水溶性液体の溶液または懸濁液、または油中水または水中油液体エマルション、またはエリクサーまたはシロップ、またはキャンディ（不活性ベースを使用し、例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用する）および／または含水剤などであり、それぞれ有効物質として所定の量の本出願の化合物を含む形態であり得る。また、組成物または化合物は、塊、軟膏またはペーストの形態で投与することができる。

【0265】

固体投与剤形を製造するために（カプセル（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、丸薬、錠剤、糖剤（ｄｒａｇｅｅ）、粉末、顆粒剤およびその他）、有効成分は１つ以上の薬学的に許容可能な担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ジカルシウム、および／または以下のいずれかと混合される：（１）澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マニトール、および／またはケイ酸のようなフィラーまたは増量制；（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアのような結合剤；（３）グリセロールのような保湿剤；（４）寒天、カルシウムカーボネート、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇａｇｅｎｔ）；（５）パラフィンのような溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎｒｅｔａｒｄｉｎｇａｇｅｎｔ）；（６）第４級アンモニウム化合物のような吸収促進剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒｓ）；（７）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートのような湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇａｇｅｎｔｓ）；（８）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カリウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム（ｌａｕｒｙｌｓｕｌｆａｔｅ）、およびその混合物などの潤滑剤；（１０）改質および非改質されたシクロデキストリンのような錯化剤（ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇａｇｅｎｔｓ）；および（１１）着色剤。カプセル（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、丸薬および錠剤の場合、薬学的組成物は緩衝剤も含み得る。同様の種類の固体組成物も同様に、ラクトースまたは乳糖、および高分子ポリエチレングリコールおよびその他を使用して軟質および硬質のゼラチンカプセルのフィラーとして使用することができる。

【0266】

丸薬は、選択的に１つ以上の追加成分と共に圧縮または成形することで作ることができる。圧縮丸薬（ｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄｔａｂｌｅｔ）は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、非活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、澱粉グリコール酸ナトリウムまたはクロス結合カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤を使用して製造することができる。成形丸薬（ｍｏｌｄｅｄｔａｂｌｅｔ）は、適切な機械で粉末形態の化合物を不活性液体希釈剤で濡らした混合物を成形することによって製造することができる。

【0267】

丸薬および薬学的組成物の他の固体投与剤形は、例えば、糖剤、カプセル（スプリンクルカプセルおよびゼラチンカプセルを含む）、錠剤および顆粒剤は、腸溶性コーティングおよび薬学的剤形の当該技術分野で周知の他のコーティングのようなコーティングおよびシェルで選択的に包まれるか、または製造されてもよい。また、このような剤形は、例えば、所望の放出プロファイルを示すために、これらの内部に含まれる活性成分が遅延または調整して放出されるように、様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマー基質、リポソームおよび／またはマイクロスフェアを使用して製造することができる。このような剤形は、例えば、バクテリアフィルターを介して濾過するか、または滅菌水に溶解することができる滅菌された固体組成物の形態の滅菌剤を結合させるか、または使用直前に滅菌用注射物質を適量入れることによって滅菌することができる。このような組成物は選択的に不透明化剤を含み得、そして有効成分を必然的にまたは優先的に消化管から特定の量で放出し、選択的に、遅延放出する組成物の形態であり得る。使用することができる包埋組成物（ｅｍｂｅｄｄｉｎｇｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の例には、ポリマー物質およびワックスが含まれる。また、有効物質は、それが適切な場合、１つ以上の上記の添加剤とともにマイクロカプセルの形態として提供することができる。

【0268】

経口投与に有用な液体投与剤形は、薬学的に許容可能なエマルション、再成形できる凍結乾燥物、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよびエリクサーを含む。有効成分に加えて、液体投与剤形は、当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒、シクロデキストリンおよびその誘導体、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（具体的には、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、胚乳、オリーブ油、キャスター油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、およびその混合物を含み得る。

【0269】

不活性希釈剤に加えて、経口用組成物は、湿潤剤、乳化剤または懸濁剤、甘味料、調味料、着色料、着香料および保存性物質のようなアジュバントを含み得る。

【0270】

懸濁液は、活性物質に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース（ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにその混合物などの懸濁剤を含むことができる。

【0271】

直腸、膣、または尿道投与のための薬学的組成物の剤形は、坐剤として提供することができ、１つ以上の活性化合物と１つ以上の適切な無刺激性添加剤または担体として、例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ワックスまたはサリチル酸塩、および常温で固体であるが、体温で液体であり、これによって、直腸または膣腔内で融解して活性化合物を放出することを含むものを混合することによって製造することができる。

【0272】

口腔内投与用の薬学的組成物の剤形は、含水剤、または口腔スプレー、または口腔軟膏で提供することができる。

【0273】

代替的または追加的に、組成物は、カテーテル、ステント、ワイヤー、または他の管腔内治療器具（ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌｄｅｖｉｃｅ）を介した送達のために調製することができる。このような器具を介した送達は、特に膀胱、尿道、尿管、直腸、または腸への送達に有用であり得る。

【0274】

また、膣投与に適した剤形には、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー剤形として適切な技術分野で周知の担体を含むものも含まれる。

【0275】

局所または経皮投与のための投与剤形は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤を含む。有効化合物は、滅菌環境で薬学的に許容可能な担体、および必要に応じて任意の保存剤、緩衝剤、または噴射剤と混合することができる。

【0276】

軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、活性化合物に加えて、動物および植物脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはその混合物などの添加剤を含み得る。

【0277】

粉末およびスプレーは、活性化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、または前記物質の混合物などの添加剤を含み得る。さらに、スプレーは、クロロフルオロヒドロカーボンおよびブタンおよびプロパンのような揮発性非置換ヒドロカーボンのような一般的な噴射剤を含み得る。

【0278】

経皮用パッチは、本出願の化合物を身体に調整して送達するようにするさらなる利点を有する。このような投与剤形は、適切な賦形剤に活性化合物を溶解させるか、または分散させて作ることができる。皮膚を通過する化合物の流れを増加させるために吸収増強剤が使用されてもよい。このような流れの速度は、速度調整のための膜を提供するか、または化合物をポリマー基質またはゲルに分散させることによって調整することができる。

【0279】

また、眼科剤形、眼軟膏、粉末、溶液などは、本出願の範囲内であると考えられる。例示的な眼科剤形は、参考資料としてその内容が本出願に含まれるＵ．Ｓ．公報番号：２００５／００８００５６、２００５／００５９７４４、２００５／００３１６９７および２００５／００４０７４およびＵ．Ｓ．特許番号：６，５８３，１２４に記載されている。所望であれば、液体眼科剤形は、涙液、水様液または硝子体液と類似の物性を有するか、またはこのような流体と互換性があり得る。好ましい投与経路は局所投与である（例えば、目薬またはインプラントによる投与などの局所投与）．

【0280】

本出願で使用される「非経口投与」および「非経口で投与される」という用語は、腸管および局所投与を除く投与方法であり、一般に注射によるものであり、静脈内、筋肉内、動脈内、脊椎腔内、皮膜内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管経由、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、クモ膜下、脊髄内および胸骨内注射および注入を含むが、これらに限定されない。

【0281】

非経口投与に適した薬学的組成物は、１つ以上の活性化合物が１つ以上の薬学的に許容可能な滅菌された等張性水溶性または非水溶性溶液、分散物、懸濁液またはエマルション、または滅菌された粉末として使用する直前に滅菌された溶液または分散物で再成形することができるものと混合して含まれ、酸化防止剤、緩衝剤、細菌発育阻止剤、剤形を意図された投与対象者の血液に投与する場合、等張性を示すように調整する溶質または懸濁剤または濃厚剤を含むことができる。

【0282】

本出願の薬学的組成物に使用できる適切な水溶性または非水溶性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング物質の使用、分散物である場合は必要な粒子の大きさの維持、および界面活性剤の使用を通じて維持することができる。

【0283】

また、このような組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のようなアジュバントを含むことができる。微生物活動の阻害は、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸、および他の様々な抗細菌および抗真菌剤を含むことで確実にすることができる。また、糖類、塩化ナトリウム、および他の等張剤を組成物に含むことが好ましい場合がある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる製剤を含むことによって注射可能な薬学的剤形の延長吸収をもたらすことができる。

【0284】

場合によっては、薬物の効果を延長するために、皮下および筋肉内注射から薬物の吸収を遅らせることが好ましい。これは、水溶性の低い結晶性または非晶質物質の液体懸濁液を使用して達成することができる。この場合、薬物の吸収速度は物質の溶解速度に依存し、すなわち、結晶の大きさおよび結晶の形態に依存し得る。あるいは、非経口投与された薬物剤形の遅延吸収は、薬物を油担体に溶解または懸濁させることによって達成することができる。

【0285】

注射可能なデポー剤形（ｄｅｐｏｔｆｏｒｍ）は、対象化合物がポリラクチド－ポリグリコリドのような生分解性ポリマーの内部にあるマイクロカプセル化された基質を形成することによって作られる。薬物に対するポリマーの比率および使用される特定のポリマーの特性に応じて、薬物の放出速度を調整することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー注射可能剤形は、薬物を人体組職と互換性のあるリポソームまたはマイクロエマルションに閉じ込めることによって製造することもできる。

【0286】

本出願の方法で使用するために、活性化合物は、それ自体、または、例えば、０．１～９９．５％（より好ましくは、０．５～９０％）の活性成分を薬学的に許容可能な担体とともに含む薬学的組成物として提供することができる。

【0287】

また、導入方法は、再充電可能または生分解性装置を介して提供することができる。最近、蛋白性バイオ医薬品を含む、薬物の放出を調整するために様々な徐放性ポリマーデバイス（ｓｌｏｗｒｅｌｅａｓｅｐｏｌｙｍｅｒｉｃｄｅｖｉｃｅ）が開発され、生体内で実験されてきた。生分解性および非分解性ポリマーの両方を含む、様々な生体適合性ポリマー（ヒドロゲルを含む）が特定の標的場所で化合物を持続的に放出するためのインプラントを作るために使用され得る。

【0288】

薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量は、特定の患者、組成物、および投与方法に対して患者に毒性を示さず、所望の治療学的反応を達成するのに有効な量の活性成分を得るために変わり得る。

【0289】

選択された投与量は、特定の化合物または使用される化合物の組み合わせ、またはそのエステル、塩またはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出速度、治療期間、使用される特定の化合物と共に使用される他の薬物、化合物および／または物質、年齢、性別、体重、状態、一般健康および治療中の対象の病歴、および他の医学分野で周知の要因を含む様々な要因に依存するであろう。

【0290】

その分野で通常の知識を有する医師または獣医師は、薬学的組成物の必要とされる治療学的有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師または獣医師は、薬学的組成物または化合物の投与量を所望の治療学的効果を達成するために必要な程度より低い数値から開始し、所望の効果が達成されるまでゆっくりと投与量を増加させることができる。「治療学的有効量」は、所望の治療学的効果を導出するのに十分な化合物の濃度を意味する。一般に、化合物の有効量は、対象の体重、性別、および病歴によって変わり得ると理解されている。有効量に影響を与える他の要素には、対象の状態の重症度、治療対象の障害、化合物の安定性、および所望の場合、本出願の化合物と共に投与される他の種類の治療剤が含まれるか、これらに限定されない。大量の総投与量は、製剤を複数回投与することによって送達することができる。効果および投与量を決定する方法は当業者に知られている（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒｅｔａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ１３ｅｄ．，１８１４－１８８２、本明細書に参考文献として組み込まれる）。

【0291】

一般に、本出願の組成物および方法に使用される活性化合物の適切な１日投与量は、治療効果を生じるのに効果的な最低投与量の化合物であろう。このような効果的投与量は一般に上記の要因に依存するであろう。

【0292】

特定の実施例では、本出願の化合物は、単独または他の種類の治療剤と一緒に投与することができる。本出願で使用される通り、「共同投与（ｃｏｎｊｏｉｎｔａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語は、その前に投与された治療化合物がまだ身体で有効である間に第２化合物が投与されるように２つ以上の異なる治療化合物を投与する任意の方式である（例えば、２つの化合物は対象に同時に効果的であり、２つの化合物の同伴上昇効果を含み得る）。例えば、異なる治療化合物は、同じ剤形または別途の剤形で、付随的にまたは逐次的に投与することができる。特定の実施例では、異なる治療化合物は、互いに１時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、または１週間以内に投与することができる。したがって、そのような治療を受ける対象は、異なる治療化合物の併用効果から利益を得ることができる。

【0293】

特定の実施例では、本出願の化合物と１つ以上の追加的な治療剤（例えば、１つ以上の追加的な化学療法制）の共同投与は、本出願の化合物または１つ以上の追加的な治療剤をそれぞれ個別投与することと比較して改善された効果を提供する。このような特定の実施例では、共同投与は付加的効果を提供する。ここで付加的効果は、本出願の化合物および１つ以上の追加的な治療剤の個別投与の効果のそれぞれを合わせたことを意味する。

【0294】

本出願は、本出願の組成物および方法における本出願の化合物の薬学的に許容される塩の用途を含む。特定の実施例では、本出願の意図された塩は、アルキル、ジアルキル、トリアルキルまたはテトラアルキルアンモニウム塩を含むが、これらに限定されない。特定の実施例では、本出願の意図された塩は、Ｌ－アルギニン、ベネンタミン、ベンザチン、ベタイン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２－（ジエチルアミノ）エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ－イミダゾール、リチウム、Ｌ－リジン、マグネシウム、４－（２－ヒドロキシエチル）モルホリン、ピペラジン、カリウム、１－（２－ヒドロキシエチル）ピロリジン、ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、および亜鉛塩を含むが、これらに限定されない。特定の実施例では、本出願の意図された塩は、Ｎａ、Ｃａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｚｎまたは他の金属塩を含むが、これらに限定されない。

【0295】

また、薬学的に許容可能な酸付加塩は、水、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、および他の様々な溶媒和物として存在し得る。このような溶媒和物の混合物も製造することができる。このような溶媒和物の供給源は結晶化される溶媒からであり得、これは製造または結晶化される溶媒の固有の特徴によるものであるか、または前記溶媒による不測の原因によるものであり得る。

【0296】

ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのような湿潤剤、乳化剤および潤滑剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味料および着香剤、保存剤および酸化防止剤も前記組成物にあり得る。

【0297】

薬学的に許容可能な酸化防止剤の例には、以下が含まれる：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、硫酸ナトリウムおよびその他の水溶性酸化防止剤；（２）アスコルビルパルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、プロピルガレートおよびα－トコフェロール、およびその他の油溶性酸化防止剤；および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸、およびその他の金属－キレート剤。

【0298】

具体的な実施例
実施例１．以下の実験のための実験実施方法
－酸素誘導網膜症マウスモデルおよびＳＭＸ眼球注射
酸素誘導網膜症マウスモデルは、誕生後７日（Ｐ７）のＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ヒョチャンサイエンス）子マウスを高酸素チャンバー（Ｃｏｙｌａｂ．ｉｎｖｉｖｏｃｈａｍｂｅｒ、７５％Ｏ_２）で５日間飼育した後（Ｐ１２）、正常酸素環境で５日間飼育する（Ｐ１７）ことで誘導した。高酸素チャンバーで子マウスを取り出した後（Ｐ１２）、ＳＭＸを１回、０．１５ｍＭ濃度（０．１％ＤＭＳＯ）で１ｕｌ眼球注射した。眼球注射に使用したＳＭＸは、１ｘＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓａｌｉｎｅ）で０．１％に希釈した後使用し、コントロールマウスには１ＸｐｂｓにＤＭＳＯ０．１％を使用した。Ｅｙｌｅａ（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ、ａｎｔｉ－ＶＥＧＦａｂ）の場合、４０ｕｇを１ｕｌに希釈して１ｕｌ眼球注射した。

【0299】

－網膜血管分析
酸素誘導網膜マウスモデルを形成した後、１ＸＰＢＳ、４％ＰＦＡで灌流（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）した。マウスの目を摘出し、４％ＰＦＡで固定した後、網膜を分離した。分離した網膜を１ＸＰＢＳで洗浄した後、１時間常温でブロッキング（Ｂｌｏｃｋｉｎｇ）（０．１％ＢＳＡ、０．１％ＴｒｙｔｏｎＸ－１００ｉｎ１ＸＰＢＳ）した。４℃で１日間、ＣＤ３１血管染色抗体（ＣＤ３１、ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１：１００）で染色した。翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、二次抗体（２ｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ）で４℃で１日間染色した。（ａｌｅｘａｆｌｏｕｒ５９４－ａｎｔｉｒａｂｂｉｔａｎｔｉｂｏｄｙ、１：５００）翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、マウンティング（ｍｏｕｎｔｉｎｇ）した。蛍光顕微鏡で血管染色を分析した（Ｚｅｎ、ａｘｉｏｚｏｏｍ）。分析はＺＥＮソフトウェア（Ｚｅｎｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用した。

【0300】

－細胞培養
ミュラー細胞（ＭＩＯ－Ｍ１）を３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、培地をＤＭＥＭ－ｌｏｗｇｌｕｃｏｓｅ（ｓｉｇｍａ）＋１０％Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ＋１％ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ＆ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの条件で使用した。低酸素チャンバーは３７℃、５％ＣＯ_２、１％Ｏ_２に維持した。

【0301】

－ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）
ミュラー細胞（ＭＩＯ－Ｍ１）を６０ミリプレートに４ｘ１０５の水で細胞を分注し、３ｍｌの培地で２４時間培養した。翌日、ミトコンドリア熱蛋白質９０（ＴＲＡＰ１）阻害剤であるＳＭＸを図に示す濃度別に処理し、低酸素チャンバーで６時間培養した。培養された細胞から全細胞溶解物（Ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓ）を調製して電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に移動させた後、一次抗体を４℃で１８時間処理した。翌日、二次抗体を１時間処理し、ウェスタンブロッティング検出試薬を用いて蛋白質発現を分析した。

【0302】

－ＴｏｔａｌＲＮＡ抽出およびＲＮＡｌｅｖｅｌ分析
ミュラー細胞にガミトリニブ（Ｇｅｍｉｔｒｉｎｉｂ）とＳＭＸを３ｕＭで処理し、１％Ｏ_２環境で８時間培養後、ｔｏｔａｌＲＮＡを抽出した（Ｑｕｉａｚｅｎ、ｔｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔ）。１ｕｇのｔｏｔａｌＲＮＡでｃＤＮＡを合成した（ＮＥＢ、ｃＤＮＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｋｉｔ）。ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒをＰＣＲを用いて合成した後、アガロース電気泳動してＲＮＡｌｅｖｅｌを分析した。

【0303】

－管形成アッセイ（ｔｕｂｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ）
ミュラー細胞でｓｉＲＮＡを用いてＴＲＡＰ１をノックダウン（ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ）した。培地（ｍｅｄｉａ）を変えた後、１％Ｏ_２環境で２４時間培養して条件培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉａ）を調製して８６℃で保管した。９６ウェルプレートにマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）でコーティングし、ＨＵＶＥＣセル（ｃｅｌｌ）と条件培地を混合して分注した。３７℃のインキュベーター（ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で４時間培養後、管形成（ｔｕｂｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を分析した。バイオ画像ナビゲータ（Ｂｉｏｉｍａｇｅｎａｖｉｇａｔｏｒ）顕微鏡を用いて画像を撮影し、ｉｍａｇｅｊプログラムで分析した。

【0304】

－ＡＴＰａｓｅ活性アッセイ
ＡＴＰａｓｅ活性は、メーカーのマニュアルに従ってＰｉＣｏｌｏｒＬｏｃｋＧｏｌｄＰｈｏｓｐｈａｔｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ（ＩｎｎｏｖａＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を介して非有機リン酸塩の放出を測定することによって測定した。ＴＲＡＰ１（０．５μＭ）を０．２ｍＭＡＴＰとともに１００ｍＭＴｒｉｓ、２０ｍＭＫＣｌ、および６ｍＭＭｇＣｌ_２で、ｐＨ７．０、３７℃の条件で３時間培養した。その後、１００μＬのＡＴＰ加水分解物サンプルにＰｉＣｏｌｏｒＬｏｃｋＧｏｌｄｒｅａｇｅｎｔと促進剤（１００：１）を添加した。２５℃で５分間培養した後、１０μＬ停止液（ｓｔｏｐｓｏｌｕｔｉｏｎ）を添加して色変化を停止させ、ＳＹＮＥＲＧＹＮＥＯｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒ（ＢｉｏＴｅｋＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を介して６２０ｎｍでの吸光度を測定した。

【0305】

阻害能分析のために、ＴＲＡＰ－１を所定の濃度（０．５２０μＭ）の阻害剤とともに３０分間培養した後、ＡＴＰと撹拌した。吸光度の値をＤＭＳＯ対照群で正規化し、データを％ＡＴＰａｓｅ活性として表した。

【0306】

実施例２．ＴＲＡＰ１の阻害は新生血管形成性眼疾患の治療効果を有する。
実施例２．１．ＴＲＡＰ１＋／＋、＋／－マウスを用いた酸素誘導網膜症マウスモデルの調製
ＴＲＡＰ１＋／－（メス）とＴＲＡＰ１＋／－（オス）を交配し、同じ腹から出たＴＲＡＰ１＋／＋とＴＲＡＰ１＋／－マウスを使用した。

【0307】

ＴＲＡＰ１ｗｉｌｄ、ｈｅｔｅｒｏ子マウスを誕生の７日から１２日まで（Ｐ７－Ｐ１２）高酸素チャンバー（Ｃｏｙｌａｂ．ｉｎｖｉｖｏｃｈａｍｂｅｒ、７５％Ｏ_２）で飼育した後、１２日から１７日まで正常酸素環境で飼育して網膜症マウスモデルを作成した。

【0308】

実施例２．２．ＴＲＡＰ－１＋／＋、＋／－酸素誘導網膜症マウスモデルの網膜血管分析
酸素誘導網膜マウスモデルを形成した後、１ＸＰＢＳ、４％ＰＦＡで灌流した。マウス目を摘出して４％ＰＦＡで固定した後、網膜を分離した。分離した網膜を１ＸＰＢＳで洗浄した後、常温で１時間ブロッキング（０．１％ＢＳＡ、０．１％ＴｒｙｔｏｎＸ－１００ｉｎ１ＸＰＢＳ）した。４℃で１日間ＣＤ３１血管染色抗体（ＣＤ３１、ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１：１００）で染色した。翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、二次抗体で４℃で１日間染色した。（ａｌｅｘａｆｌｏｕｒ５９４－ａｎｔｉｒａｂｂｉｔａｎｔｉｂｏｄｙ、１：５００）翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、マウンティングした。蛍光顕微鏡で血管染色を分析した（Ｚｅｎ、ａｘｉｏｚｏｏｍ）。分析はＺＥＮソフトウェアを用いた。

【0309】

網膜血管分析の結果、ＴＲＡＰ－１＋／＋酸素誘導網膜症マウスモデルは網膜の無血管領域（ａｖａｓｃｕｌａｒａｒｅａ）が増加し、同時に新生血管領域（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒａｒｅａ）が増加したことが観察され、酸素誘導網膜症の症状が明確に観察された。逆に、ＴＲＡＰ－１＋／－酸素誘導網膜症マウスモデルは、網膜の無血管領域（ａｖａｓｃｕｌａｒａｒｅａ）と新生血管領域（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒａｒｅａ）の変化が明らかに小さく観察され、酸素誘導網膜症が大幅に改善されたことを確認できた（図４、図５）。また、ＴＲＡＰ－１＋／－酸素誘導網膜症マウスモデルは、酸素誘導網膜症が改善されたほか、野生型マウスと異なる表現型が観察されず、阻害による副作用がないことを確認できた。これをまとめると、ＴＲＡＰ－１は網膜新生血管形成疾患を治療または予防するための有効で安全なターゲットであると結論を導き出すことができた。

【0310】

実施例２．３．ＴＲＡＰ－１を阻害すると、新生血管形成因子の生成が阻害される。
ＴＲＡＰ－１は、ＨＩＦ－１αの上位調整因子として同時にＶＥＧＦなどの新生血管形成因子の上位調整因子であることを前述した（図２）。糖尿網膜症の場合、代表的な網膜新生血管形成疾患であるため、ＴＲＡＰ－１を阻害すると新生血管形成因子が阻害され、糖尿網膜症も治療されるであろう。

【0311】

ＴＲＡＰ－１が新生血管形成因子の上位調整因子であることを検証するために管形成アッセイを行った。

【0312】

ミュラー細胞（ＭＩＯ－Ｍ１）を３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、培地をＤＭＥＭ－ｌｏｗｇｌｕｃｏｓｅ（ｓｉｇｍａ）＋１０％Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ＋１％ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ＆ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの条件で使用した。低酸素チャンバーは３７℃、５％ＣＯ_２、１％Ｏ_２に維持した。ミュラー細胞でｓｉＲＮＡを用いてＴＲＡＰ１をノックダウンした。培地を変えた後、１％Ｏ_２環境で２４時間培養して条件培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉａ）を調製して８６℃で保管した。９６ウェルプレートにマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）でコーティングし、ＨＵＶＥＣセルと条件培地を混合して分注した。３７℃で４時間培養後、管形成を分析した。バイオ画像ナビゲータ顕微鏡を用いて画像を撮影し、ｉｍａｇｅｊプログラムで分析した。

【0313】

管形成アッセイ結果（図６、図７）、ＴＲＡＰ－１をノックダウンさせたミュラー細胞から作った条件培地を使用したグループでチューブの長さ、枝の数、交差点が減少して新生血管形成が阻害されることが確認できた。

【0314】

実施例３．ＳＭｘ分子はＴＲＡＰ－１の阻害能を有する。
実施例３．１．実験に使用した物質および入手先
実験実施のために下記の構造式のＳＭｘ分子を得た。ＳＭｘ分子はＭｅｄｃｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓから入手した（ＣＡＳＮｏ．８４５９５９－５０－４）。

【0315】

また、ＳＭｘとの比較のために、ｈｓｐ９０ｓのＮ－末端部位阻害剤であるＰＵ－Ｈ７１および発明者が以前に開発したガミトリニブを得た。ＰＵ－Ｈ７１はＴｏｃｒｉｓから入手し、ガミトリニブはレゴケムバイオサイエンスから入手した。

【0316】

実施例３．２．ＴＲＡＰ－１とＳＭｘの結合構造
ＴＲＡＰ－１上でＳＭｘが結合する位置を確認するために、ＴＲＡＰ－１とＳＭｘの結合構造に対するＸ－ｒａｙｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＤ）測定を行った。ＴＲＡＰ－１はゼブラフィッシュ（ｚｅｂｒａｆｉｓｈ）のＴＲＡＰ－１を使用した。ＴＲＡＰ－１とＳＭｘの結合構造を観察した結果は図１２のとおりである。図１２の右側には、ＴＲＡＰ－１上でＳＭｘとの結合に関与した主なアミノ酸残基を示した。前記残基が有する機能を理解するために、当該残基の種間保存性を分析した。分析の結果、当該残基は、種間保存性が非常に高い部位としてＴＲＡＰ－１の機能に重要な役割を果たすと予想できた（図１３）。

【0317】

これらの役割をもう少し理解するために、前記結合構造をＴＲＡＰ－１のホモログ（Ｈｏｍｏｌｏｇ）であるＨｓｐ９０の構造と比較分析した。既存の論文から、Ｈｓｐ９０とそのクライアント蛋白質であるＣＤＫ４の結合構造を導き出した［１１］。両構造を比較分析した結果、ＴＲＡＰ－１上のＳＭｘとの結合位置がＨｓｐ９０上のクライアント蛋白質との結合位置と一致することを構造比較により確認することができた。当該位置は、ＴＲＡＰ－１の中間部位に属する残基であり、ＳＭｘがクライアント蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１に結合することを予想することができた（図１１）。

【0318】

実施例３．３．ＳＭｘはクライアント蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１に結合する。
ＳＭｘがＴＲＡＰ－１のクライアント蛋白質として知られているＳＩＲＴ３およびＳＤＨＢと競合的に結合するかを確認するために、プルダウンアッセイ（Ｐｕｌｌｄｏｗｎａｓｓａｙ）を行った。ＧＳＴフュージョン（ＧＳＴｆｕｓｉｏｎ）形態のＴＲＡＰ１蛋白質をバクテリアセル（ｂａｃｔｅｒｉａｃｅｌｌ）から精製した後、グルタチオンベース（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｂｅａｄ）に結合させてＴＲＡＰ１－ｂｅａｄ形態を作製した後、マンマリアンセル（ｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌ）からアイソレーション（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）したミトコンドリアと（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｉｓｏｌａｔｉｏｎｋｉｔ）４℃で薬物と共に１８時間結合させた。薬物としては、ＳＭｘと以前に開発されたｈｓｐ９０ｓのＮ－末端部位阻害剤であるガミトリニブおよびＰＵ－Ｈ７１を図に示す濃度別に処理した。プルダウンアッセイの結果（図１４）、ＳＭｘの濃度に応じてクライアント蛋白質の結合が有意に減少することを確認した。これは、ＳＭｘがＴＲＡＰ－１の中間部位に対する結合能を有するという強力な証拠である。ガミトリニブおよびＰＵ－Ｈ７１の処理結果では、ＳＩＲＴ３およびＳＤＨＢの発現があまり変化しなかったという事実はこれを支持する。

【0319】

また、実施例２．２で確認されたＴＲＡＰ－１上のＳＭｘの結合部位を変形させたミュータントのＴＲＡＰ１ｍｕｔａｎｔ－ｂｅａｄ形態を調製した後、プルダウンアッセイを行った（図１５、左側）。実験の結果、当該位置を変形させたミュータントの場合、クライアント蛋白質と正しく結合することができないことが観察された。これは、ＳＭｘがＴＲＡＰ－１と結合する位置が、ＴＲＡＰ－１がクライアント蛋白質と結合する部位と同一であることを交差検証している。

【0320】

実施例３．４．ＳＭｘによって血管生成因子の発現が減少する。
ミュラー細胞（ＭＩＯ－Ｍ１）を３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、培地をＤＭＥＭ－ｌｏｗｇｌｕｃｏｓｅ（ｓｉｇｍａ）＋１０％Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ＋１％ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ＆ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの条件で使用した。低酸素チャンバーは３７℃、５％ＣＯ_２、１％Ｏ_２に維持した。ミュラー細胞（ＭＩＯ－Ｍ１）を６０ミリプレートに４ｘ１０５の水で細胞を分注し、３ｍｌの培地で２４時間培養した。翌日、ミトコンドリア熱蛋白質９０（ＴＲＡＰ１）阻害剤であるＳＭＸ、以前に開発されたｈｓｐ９０ｓのＮ－末端部位阻害剤であるガミトリニブおよびＰＵ－Ｈ７１を図に示す濃度別に処理し、低酸素チャンバーに２４時間の間培養した。培養された細胞から全細胞溶解物（Ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓ）を調製して電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に移動させた後、一次抗体を４℃で１８時間処理した。翌日、二次抗体を１時間処理し、ウェスタンブロッティング検出試薬を用いて蛋白質発現を分析した。

【0321】

また、ウェスタンブロットと定量的重合酵素連鎖反応の結果、ＳＭｘによってＨＩＦ－１αをはじめとする（図８）周知の新生血管形成因子の発現（図９）が阻害されることが確認できた。

【0322】

実施例３．５．ＳＭｘは既存のｈｓｐ９０ｓ阻害剤と異なる新規機序でＴＲＡＰ－１を阻害する。
実施例３．３の結果によってＳＭｘがＴＲＡＰ－１の機能を成功裏に阻害していることが確認できた。次に、ＳＭｘが既存のｈｓｐ９０ｓ阻害剤とは異なる新規機序によってＴＲＡＰ－１を阻害することを検証するために、ＴＲＡＰ－１にＳＭｘとＰＵ－Ｈ７１をそれぞれ処理してＡＴＰａｓｅ活性アッセイを行った。

【0323】

既存のｈｓｐ９０ｓ阻害剤（ガミトリニブ、ＰＵ－Ｈ７１）は、ＡＴＰａｓｅとして機能するｈｓｐ９０ｓのＮ－末端部位と結合する特性を有しており、ＴＲＡＰ－１のＡＴＰａｓｅ活性を低下させる特性を有している。ただし、ｈｓｐ９０ｓのＮ－末端部位はパラログ間の相同性が非常に高く、このような阻害剤が非選択的にｈｓｐ９０ｓを阻害する問題があった。ｈｓｐ９０ｓを非選択的に阻害する場合に発生する可能性のある問題については、先に「４．ＴＲＡＰ－１の阻害による新生血管形成性疾患の治療」で述べた。

【0324】

したがって、ＳＭｘが前述のようにＴＲＡＰ－１のＮ－末端部位に結合せずにＴＲＡＰ－１を阻害することができれば、既存のｈｓｐ９０ｓの問題点を革新的に解決することができるであろう。また、これはＳＭｘを処理した後にＴＲＡＰ－１のＡＴＰａｓｅ活性を測定することによって検証することができる。

【0325】

ＡＴＰａｓｅ活性は、メーカーのマニュアルに従ってＰｉＣｏｌｏｒＬｏｃｋＧｏｌｄＰｈｏｓｐｈａｔｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ（ＩｎｎｏｖａＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を介して非有機リン酸塩の放出を測定することによって測定された。ＴＲＡＰ１（０．５μＭ）を０．２ｍＭＡＴＰとともに１００ｍＭＴｒｉｓ、２０ｍＭＫＣｌ、および６ｍＭＭｇＣｌ_２で、ｐＨ７．０、３７℃の条件で３時間培養した。その後、１００μＬのＡＴＰ加水分解物サンプルにＰｉＣｏｌｏｒＬｏｃｋＧｏｌｄｒｅａｇｅｎｔと促進剤（１００：１）を添加した。２５℃で５分間培養した後、１０μＬ停止液（ｓｔｏｐｓｏｌｕｔｉｏｎ）を添加して色変化を停止させ、ＳＹＮＥＲＧＹＮＥＯｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒ（ＢｉｏＴｅｋＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を介して６２０ｎｍでの吸光度を測定した。

【0326】

【0327】

ＡＴＰａｓｅ活性アッセイの結果、ＴＲＡＰ－１にＰＵ－Ｈ７１を処理した場合、濃度によってＴＲＡＰ－１のＡＴＰａｓｅ活性は全て有意に減少したが、ＳＭｘを処理した場合とは反対に濃度によってＴＲＡＰ－１のＡＴＰａｓｅ活性が有意に増加することが観察された（図１６）。これは、ＳＭｘがＴＲＡＰ－１のＮ－末端部位に結合しないことを示すと同時に、クライアント蛋白質の結合位置に結合することによってＡＴＰの結合を促進することを強く示している。

【0328】

実施例４．ＳＭｘ分子は新生血管形成性眼疾患の治療効果を有する。
酸素誘導網膜症マウスモデルは、誕生後７日（Ｐ７）のＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ヒョチャンサイエンス）子マウスを高酸素チャンバー（Ｃｏｙｌａｂ．ｉｎｖｉｖｏｃｈａｍｂｅｒ、７５％Ｏ_２）で５日間飼育した後（Ｐ１２）、正常酸素環境で５日間飼育する（Ｐ１７）ことで誘導した。高酸素チャンバーで子マウスを取り出した後（Ｐ１２）、ＳＭＸを１回、０．１５ｍＭ濃度（０．１％ＤＭＳＯ）で１ｕｌ眼球注射した。眼球注射に使用したＳＭＸは、１ｘＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓａｌｉｎｅ）で０．１％に希釈した後使用し、コントロールマウスには１ＸｐｂｓにＤＭＳＯ０．１％を使用した。既に糖尿網膜症の治療効果があることが知られているＥｙｌｅａ（Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ、ａｎｔｉ－ＶＥＧＦａｂ）の場合、４０ｕｇを１ｕｌに希釈して１ｕｌ眼球注射した。

【0329】

酸素誘導網膜マウスモデルを形成した後、１ＸＰＢＳ、４％ＰＦＡで灌流した。マウスの目を摘出し、４％ＰＦＡで固定した後、網膜を分離した。分離した網膜を１ＸＰＢＳで洗浄した後、１時間常温でブロッキング（０．１％ＢＳＡ、０．１％ＴｒｙｔｏｎＸ－１００ｉｎ１ＸＰＢＳ）した。４℃で１日間、ＣＤ３１血管染色抗体（ＣＤ３１、ｃｅｌｌｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１：１００）で染色した。翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、二次抗体で４℃で１日間染色した。（ａｌｅｘａｆｌｏｕｒ５９４－ａｎｔｉｒａｂｂｉｔａｎｔｉｂｏｄｙ、１：５００）翌日、１ＸＰＢＳで洗浄した後、マウンティングした。蛍光顕微鏡で血管染色を分析した（Ｚｅｎ、ａｘｉｏｚｏｏｍ）。分析はＺＥＮソフトウェアを使用した。

【0330】

コントロールマウス、Ｅｙｌｅａ注射マウス、ＳＭｘ注射マウスの網膜血管の分析結果（図１７）、まずＳＭｘ注射マウス網膜の新生血管領域がＥｙｌｅａ注射マウス網膜と同等に減少し、糖尿網膜症の治療効果があることを確認できた。また、例外的に、ＳＭｘ注射マウス網膜の無血管領域がＥｙｌｅａ注射マウス網膜と比較して著しく減少することが確認された。これにより、ＳＭｘがＥｙｌｅａとは異なって網膜の血管生成パターンを正常化する効果を有することが確認できた。

【0331】

実施例５．本出願の分子は低分子（ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅ）薬物として口腔／点眼投与が可能である。
既存の糖尿網膜症治療剤は、ＶＥＧＦに対する抗体薬物として分子量が大きいため、組織への侵襲性が低く、従って、眼球注射による処方のみが可能であった。本出願によるＳＭｘおよび新規化合物分子は、低分子薬物として、送達の面で著しく改善すると考えられ、マウスモデルに対する点眼投与を実施した。

【0332】

酸素誘導網膜症マウスモデルは、誕生後７日（Ｐ７）のＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ヒョチャンサイエンス）子マウスを高酸素チャンバー（Ｃｏｙｌａｂ．ｉｎｖｉｖｏｃｈａｍｂｅｒ、７５％Ｏ_２）で５日間飼育した後（Ｐ１２）、正常酸素環境で５日間飼育する（Ｐ１７）ことで誘導した。

【0333】

酸素誘導網膜症マウスモデルは、誕生後７日（Ｐ７）のＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ヒョチャンサイエンス）子マウスを高酸素チャンバー（Ｃｏｙｌａｂ．ｉｎｖｉｖｏｃｈａｍｂｅｒ、７５％Ｏ_２）で５日間飼育した後（Ｐ１２）、正常酸素環境で５日間飼育する（Ｐ１７）ことで誘導した。正常酸素に出て酸素誘導網膜症が誘導される時期であるＰ１２～Ｐ１７（５日間）にＳＭｘをリポジック（溶媒）に１ｍＭに希釈した後、１日に３回点眼投与した。右目にはＳＭｘを、左目には対照群であるリポジックを投与した。

【0334】

【0335】

点眼投与後の網膜血管分析した写真およびプログラム分析の結果は、図１８、図１９のとおりである。各個体の右目にＳＭｘを点眼投与し、左目はＳＭｘを投与せず、対照群とした。その結果、ＳＭｘを注射した眼球において新生血管領域および無血管領域が有意に減少し、網膜新生血管形成疾患が改善されたことを確認することができた。

【0336】

実施例６．本出願の新規化合物の合成方法
本出願の［化学式２］～［化学式５］で表される新規分子の製造方法を提供する。

【0337】

前記化合物を製造する方法は、下記の具体的な実施例に限定されるものではなく、当業者に周知の方法を用いて製造することができる。

【0338】

実施例６．１．（１０－（２－ブロモ－５－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムホルメート（（１０－（２－ｂｒｏｍｏ－５－ｈｙｄｒｏｘｙ－３，４－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ－６－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ）ｄｅｃｙｌ）ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅ）を製造する方法（ＳＢ－Ｕ００９）
本出願において［化学式２］で表される化合物の製造方法を説明する（図２０）。前記化学式２の化合物を製造する方法は下記のステップ１～７の製造ステップを含む。

【0339】

ステップ１：５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（５－（１０－ｂｒｏｍｏｄｅｃｙｌ）－１，２，３－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ－ｂｅｎｚｅｎｅ）の製造
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２０ｍＬ）に５－ブロモ－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（１．３ｇ、５．２６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を溶解した溶液に、－７８℃でｎ－ブチルリチウム（ｎ－ＢｕＬｉ、２．５Ｍ、２．１０ｍＬ、１ｅｑ）を滴下した。

【0340】

添加後、前記混合物を同じ温度で１時間撹拌し、その後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）に１，１０－ジブロモデカン（３．１６ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ、２ｅｑ）溶液を－７８℃で滴下した後、得られた混合物を２０℃で１１時間撹拌した。

【0341】

液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣＭＳ）により所望の質量の５０．６％が検出されたことを確認した。

【0342】

残留物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0343】

混合有機層（ｃｏｍｂｉｎｅｄｏｒｇａｎｉｃｌａｙｅｒｓ）を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥後、濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0344】

前記残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝１００／０～９５／５）で精製し、無色油状の５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（５８０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、収率１９．３５％、純度６８％）化合物を得た。

【0345】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝６．４０（ｓ、２Ｈ）、３．８６（ｓ、６Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．５９－２．５２（ｍ、２Ｈ）、１．８６（ｑｕｉｎ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、１．６０（ｂｒｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８－１．３８（ｍ、２Ｈ）、１．３８－１．２６（ｍ、１０Ｈ）
エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_３１ＢｒＯ_３）の質量を測定し、３８７．４；ｍ／ｚ実測値、３８７．１［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0346】

ステップ２：６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒドの製造
無水ジクロロメタン（ｄｒｙＣＨ_２Ｃｌ_２、２ｍＬ）に溶解した５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（５８０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）溶液を、０℃でＡｌＣｌ_３のｄｒｙＣＨ_２Ｃｌ_２（８ｍＬ）に滴下した。

【0347】

前記混合物を同じ温度で、４５分間撹拌し、続いて、ジクロロ（メトキシ）メタン（１８８．９７ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１４５．３６ｕＬ、１．６１ｅｑ、収率６８％）のｄｒｙＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液を１０分間撹拌した。滴下後、前記混合物を０℃で５分間撹拌した。

【0348】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0349】

前記反応混合物を氷水３０ｍＬに注ぎ、ジクロロメタン（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ）相を分離した後、前記水相をジクロロメタン（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ、５０ｍＬ）を用いて２回抽出した。

【0350】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0351】

前記粗生成物（ｃｒｕｄｅｐｒｏｄｕｃｔ）をさらに精製することなく、次のステップに使用した。

【0352】

無色油状の６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒド（５１０ｍｇ、８５８．２７ｕｍｏｌ、収率８４．２９％、純度６９．９％）化合物を得た。

【0353】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝１０．４１（ｓ、１Ｈ）、６．５３（ｓ、１Ｈ）、４．００（ｓ、３Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、３．４３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．９９－２．９２（ｍ、２Ｈ）、１．９３－１．８２（ｍ、２Ｈ）、１．４９－１．３９（ｍ、４Ｈ）、１．３２（ｂｒｓ、１０Ｈ）

【0354】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３１ＢｒＯ_４）の質量を測定し、４１５．４；ｍ／ｚ実測値、４１５．１［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0355】

ステップ３：６－（１０－ブロモデシル）－２－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－ベンズアルデヒドの製造
三塩化ホウ素（ＢＣｌ_３、１Ｍ、１．９ｍＬ、２．２１ｅｑ）を０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）に溶解した６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒド（５１０．００ｍｇ、８５８．２７ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度６９．９％）溶液に滴下した。

【0356】

前記混合物を０℃で３０分間撹拌した後、２０℃で３０分間撹拌した。

【0357】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0358】

前記残留物を氷水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0359】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］を用いて乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0360】

前記残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝１００／０～９５／５）を用いて精製し、無色油状の６－（１０－ブロモデシル）－２－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－ベンズアルデヒド（３００ｍｇ、５８３．０６ｕｍｏｌ、収率６７．９３％、純度７８％）化合物を得た。

【0361】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_２９ＢｒＯ_４）の質量を測定し、４０１．３；ｍ／ｚ実測値、４０１．１［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0362】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝１２．３０－１２．２０（ｍ、１Ｈ）、１０．２４－１０．０３（ｍ、１Ｈ）、６．３４（ｓ、１Ｈ）、３．９６（ｓ、３Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、３．４３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．９０－２．８３（ｍ、２Ｈ）、１．８８（ｑｕｉｎ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、１．７０－１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．５０－１．３８（ｍ、３Ｈ）、１．４９－１．２９（ｍ、１Ｈ）。

【0363】

ステップ４：３－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－６－ヒドロキシ－４，５－ジメトキシ－ベンズアルデヒドの製造
クロロホルム（ＣＨＣｌ_３、２．５ｍＬ）および四塩化炭素（ＣＣｌ_４、２．５ｍＬ）に溶解した６－（１０－ブロモデシル）－２－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－ベンズアルデヒド（２５０ｍｇ、６２２．９２ｕｍｏｌ、１ｅｑ）溶液を０℃でＮ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、Ｎ－Ｂｒｏｍｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ、１３３．０４ｍｇ、７４７．５１ｕｍｏｌ、１．２ｅｑ）に添加した。

【0364】

前記混合物を０℃で１時間撹拌した後、２０℃で１１時間撹拌した。

【0365】

このとき、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを確認した。

【0366】

前記混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３、１０ｍＬ）およびエチルアセテート（ＥｔＯＡｃ、２０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0367】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］を用いて乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0368】

前記残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝４：１）で精製して、黄色油状の３－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－６－ヒドロキシ－４，５－ジメトキシ－ベンズアルデヒド（２００ｍｇ、３０７．７７ｕｍｏｌ、収率４９．４１％、純度７３．９％）化合物を得た。

【0369】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_２８Ｂｒ_２Ｏ_４）の質量を測定し、４８０．２；ｍ／ｚ実測値、４８１．０［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0370】

ステップ５：５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノールの製造
０℃でＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍＬ）に溶解した３－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－６－ヒドロキシ－４，５－ジメトキシ－ベンズアルデヒド（１９０ｍｇ、２９２．３８ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度７３．９％）およびトリエチルシラン（ＴＥＳ、Ｅｔ_３ＳｉＨ、１６９．９９ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、２３３．５０ｕＬ、５ｅｑ）をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ、７０８．４０ｍｇ、６．２１ｍｍｏｌ、４６０ｕＬ、２１．２５ｅｑ）に添加漏斗（ａｄｄｉｔｉｏｎｆｕｎｎｅｌ）で５分間滴下した。

【0371】

前記反応混合物を０℃で２時間撹拌した。

【0372】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0373】

前記混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３、５０ｍＬ）にゆっくりと注ぎ入れた後、１００ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0374】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥させ、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0375】

前記残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ：Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝４：１）を用いて精製し、無色油状の５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノール（１３０ｍｇ、２４１．６４ｕｍｏｌ、収率８２．６５％、純度７２％）化合物を得た。

【0376】

ステップ６：４－ブロモ－５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノールの製造
酢酸（ＡｃＯＨ、５ｍＬ）に溶解し、撹拌した５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノール（１３０ｍｇ、２４１．６４ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度７２％）および臭化ナトリウム（ＮａＢｒ、３７．２９ｍｇ、３６２．４６ｕｍｏｌ、１１．６５ｕＬ、１．５ｅｑ）溶液を過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２、４１．０９ｍｇ、３６２．４６ｕｍｏｌ、３４．８２ｕＬ、純度３０％、１．５ｅｑ）に添加した後、２０℃で３時間撹拌した。

【0377】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0378】

前記残留物を３０ｍＬの１０：１比の飽和ＮａＨＣＯ_３／Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３で希釈した後、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0379】

前記混合有機層を塩水（ｂｒｉｎｅ、１０ｍＬ）で洗浄した後、［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥させ、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0380】

前記粗生成物をさらに精製することなく、次のステップに使用した。

【0381】

これにより、黄色油状の４－ブロモ－５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノール（１４０ｍｇ、１９５．１８ｕｍｏｌ、収率８０．７７％、純度６５％）化合物を得た。

【0382】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_３０Ｂｒ_２Ｏ_３）の質量を測定し、４６６．３；ｍ／ｚ実測値、４６６．９［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0383】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝５．７３（ｓ、１Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、３．３４（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．７１－２．６４（ｍ、２Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ）、１．８４－１．７６（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｂｒｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、７Ｈ）、１．２４（ｂｒｓ、７Ｈ）

【0384】

ステップ７：（１０－（２－ブロモ－５－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムホルメートの製造
トルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ、２ｍＬ）に溶解した４－ブロモ－５－（１０－ブロモデシル）－２，３－ジメトキシ－６－メチル－フェノール（１４０ｍｇ、１９５．１８ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度６５％）およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３、２５５．９６ｍｇ、９７５．８８ｕｍｏｌ、５ｅｑ）の撹拌溶液をＮ２下で、１２５℃で８時間加熱した。

【0385】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0386】

前記溶媒を真空状態で除去して残留物を得た。

【0387】

前記残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝１００／０～０／１００；Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ：ＭｅＯＨ＝１００／０～９２／８）を用いて精製した。

【0388】

前記残留物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ条件；カラム：ＸｔｉｍａｔｅＣ１８１００＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［ｗａｔｅｒ（０．２２５％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％－７０％、８分）を用いて精製した。

【0389】

無色ガム状（ｇｕｍ）の（１０－（２－ブロモ－５－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムホルメート（６ｍｇ、８．６１ｕｍｏｌ、収率４．４１％、純度９９．５４％）を得た。

【0390】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_３７Ｈ_４５ＢｒＯ_３Ｐ^＋）の質量を測定し、６４８．６；ｍ／ｚ実測値、６４９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0391】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝８．５６（ｂｒｓ、１．３０９Ｈ）、７．７８－７．５９（ｍ、１５Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、３．４４（ｂｒｓ、２Ｈ）、２．７０－２．５９（ｍ、２Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、１．５０（ｂｒｓ、４Ｈ）、１．４０－１．１２（ｍ、１２Ｈ）
^３１ＰＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝２４．１７（ｓ、１Ｐ）

【0392】

実施例６．２．（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドを製造する方法（ＳＢ－Ｕ００５）
本出願において［化学式３］で表される化合物の製造方法について説明する（図２１）。前記化学式３の化合物を製造する方法は、下記のステップ１～４の製造ステップを含む。

【0393】

ステップ１：１０－ブロモ－１－（２－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチル－フェニル）デカン－１－オンの製造
新たに粉末化したＡｌＣｌ_３（４５７．８９ｍｇ、３．４３ｍｍｏｌ）をｄｒｙＤＣＥ（１０ｍＬ）下で、１０－ブロモデカノイルクロリド（１０－ｂｒｏｍｏｄｅｃａｎｏｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）（０．５３６ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）および１，２，３－トリメトキシ－５－メチル－ベンゼン（３１２．８６ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）溶液に添加した後、２５℃で４０時間撹拌した。

【0394】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の物質が主要成分として生成したことを確認した。

【0395】

前記混合物を氷水に注ぎ入れ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬｘ２）を用いて抽出した。

【0396】

前記混合した抽出物を水で洗浄した後、Ｎａ_２ＳＯ_４を用いて乾燥し、濃縮して油を得た。前記得られた油をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、１０：０～１０：１Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／ＥｔＯＡｃ）で精製して無色の油状物質（５２０ｍｇ、収率６６．５６％）を得た。

【0397】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_２９ＢｒＯ_４）の質量を測定し、４００．１２；ｍ／ｚ実測値、４０２．８［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0398】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２１－１．５５（ｍ、１０Ｈ）、１．５６－１．７８（ｍ、２Ｈ）、１．８５（ｍ、２Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．８９（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８８（ｄ、Ｊ＝１２．３Ｈｚ、６Ｈ）、６．３１（ｓ、１Ｈ）、１０．３８（ｓ、１Ｈ）。

【0399】

ステップ２：２－（１０－ブロモデシル）－５，６－ジメトキシ－３－メチル－フェノールの製造
１０－ブロモ－１－（２－ヒドロキシ－３，４－ジメトキシ－６－メチル－フェニル）デカン－１－オン（５２０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１０ｍＬ）に溶解させ、その後、Ｅｔ_３ＳｉＨ（２ｍＬ）を添加した後、８０℃で１２時間撹拌した。

【0400】

このとき、ＬＣＭＳによりスターティングケトン（ｓｔａｒｔｉｎｇｋｅｔｏｎｅ）が消費され、１つの新しいピークが形成されたことを確認した。

【0401】

前記反応混合物を蒸発乾燥させ、これをカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、５：０－５：１Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／ＥｔＯＡｃ）で精製して無色の油状物質（４１０ｍｇ、収率８２．３４％）を得た。

【0402】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_３１ＢｒＯ_３）の質量を測定し、３８６．１５；ｍ／ｚ実測値、３８８．９［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0403】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２２－１．５５（ｍ、１４Ｈ）、１．８６（ｑｕｉｎ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．５１－２．６５（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．８６（ｍ、６Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、６．２９（ｓ、１Ｈ）。

【0404】

ステップ３：４－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－５，６－ジメトキシ－３－メチル－フェノールの製造
２－（１０－ブロモデシル）－５，６－ジメトキシ－３－メチル－フェノール（４１０ｍｇ、９４０．９８ｕｍｏｌ）およびＮａＢｒ（１４５．２３ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を酢酸（ＡｃＯＨ、１０ｍＬ）に溶解させた後、過酸化水素（Ｈ_２Ｏ_２、１６０．０４ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、３０％）を添加し、その後、２５℃で２時間撹拌した。

【0405】

このとき、ＬＣＭＳにより出発物質（ｓｔａｒｔｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ）が消費され、１つの新しいピークが形成されたことを確認した。

【0406】

前記反応混合物を５０ｍＬの水にクエンチし、ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬｘ２）を用いて抽出した。

【0407】

前記混合有機相をｐＨ＞７になるまで飽和ＮａＨＣＯ_３で洗浄した後、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濃縮して無色の油状物質（３００ｍｇ、ｃｒｕｄｅ）に濃縮した。

【0408】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_３０Ｂｒ_２Ｏ_３）の質量を測定し、４６４．０６；ｍ／ｚ実測値、４６６．９［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0409】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２２－１．５５（ｍ、１４Ｈ）、１．８６（ｑｕｉｎ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．５１－２．６５（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、５．７７（ｓ、１Ｈ）。

【0410】

ステップ４：（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドの製造
４－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－５，６－ジメトキシ－３－メチル－フェノール（３００ｍｇ、５９７．１１ｕｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３、９３９．６８ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ）をトルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ、１ｍＬ）に溶解させた後、Ｎ２下、１３０℃で１８時間撹拌した。

【0411】

薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ＝０．２）により、ＯＰＰｈ_３の下に１つの主要な新しいピークが形成されたことを確認した。

【0412】

前記反応混合物を蒸発させて褐色の残留物を得、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：３＿ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８７５＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［ｗａｔｅｒ（０．２％ＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５２％－８２％、６分）で精製した。

【0413】

凍結乾燥後、白色固体の所望の生成物（１６ｍｇ、収率１２．２４％、純度９７．２％）を得た。

【0414】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_３７Ｈ_４５ＢｒＯ_３Ｐ^＋）の質量を測定し、６４７．２３；ｍ／ｚ実測値、６４９．３［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0415】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δ１．１３－１．７０（ｍ、１６Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．５６－２．７６（ｍ、２Ｈ）、３．６５－３．７９（ｍ、２Ｈ）、３．６８－３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、７．６１－７．９３（ｍ、１５Ｈ）、８．７６（ｓ、１Ｈ）；^３１ＰＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δ２４．４７（ｓ、１Ｐ）。

【0416】

実施例６．３．（１０－（２－ブロモ－３，４，５－トリメトキシ－６－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドを製造する方法（ＳＢ－Ｕ０１２）
本出願において［化学式４］で表される化合物の合成方法について説明する（図２２）。前記化学式４の化合物を製造する方法は、下記のステップ１～５の製造ステップを含む。

【0417】

ステップ１：５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼンの製造
ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解した５－ブロモ－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（２ｇ、８．０９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）溶液を－７８℃でｎ－ＢｕＬｉ（２．５Ｍ、３．２４ｍＬ、１ｅｑ）に滴下した。

【0418】

添加後、前記混合物を同じ温度で１時間撹拌し、その後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した１，１０－ジブロモデカン（４．８６ｇ、１６．１９ｍｍｏｌ、２ｅｑ）溶液を７８℃で滴下した。

【0419】

前記得られた混合物を２０℃で１１時間撹拌した。

【0420】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の質量の２０％が検出されることを確認した。

【0421】

前記残留物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ＊３）で抽出した。

【0422】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0423】

前記残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝１００／０～９５／５）を用いて精製して無色油状の５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（４３０ｍｇ、３９５．８６ｕｍｏｌ、収率４．８９％、純度３５．６６％）化合物を得た。

【0424】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_１９Ｈ_３１ＢｒＯ_３）の質量を測定し、３８７．４；ｍ／ｚ実測値、３８９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0425】

ステップ２：６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒドの製造
５－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－ベンゼン（４３０ｍｇ、３９５．８６ｕｍｏｌ、１ｅｑ、３５．６６％ｐｕｒｉｔｙ）のｄｒｙＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液を０℃で徐々にＡｌＣｌ_３（１７８ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、７２．９５ｕＬ、３．３７ｅｑ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（６ｍＬ）溶液に滴下した。

【0426】

前記混合物を同じ温度で４５分間撹拌し、ジクロロ（メトキシ）メタン（１４０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、１０７．６９ｕＬ、３．０８ｅｑ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液を１０分間かけて徐々に滴下した。

【0427】

前記反応混合物を３０ｍＬの氷水に注ぎ入れ、塩化メチレン相（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅｐｈａｓｅ）を分離した後、水相（ａｑｕｅｏｕｓｐｈａｓｅ）を５０ｍＬの塩化メチレンで２回抽出した。

【0428】

前記混合有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0429】

前記粗生成物をさらに精製することなく、次のステップに使用した。

【0430】

無色油状の６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒド（４１０ｍｇ、３８４．９７ｕｍｏｌ、収率９７．２５％、純度３９％）化合物を得た。

【0431】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３１ＢｒＯ_４）の質量を測定し、４１５．４；ｍ／ｚ実測値、４１５．２［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0432】

ステップ３：１－（１０－ブロモデシル）－３，４，５－トリメトキシ－２－メチル－ベンゼンの製造
ＴＦＡ（３ｍＬ）を６－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－ベンズアルデヒド（４１０ｍｇ、３８４．９７ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度３９％）およびＥｔ_３ＳｉＨ（４４７．６４ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ、６１４．８９ｕＬ、１０ｅｑ）混合物に添加した。

【0433】

前記混合物を２０℃で１２時間撹拌した。

【0434】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0435】

前記混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）にゆっくりと注ぎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0436】

前記混合物有機層を［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥し、濾過した後、減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0437】

前記残留物を分取ＴＬＣ（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝４：１）で精製して無色油状の１－（１０－ブロモデシル）－３，４，５－トリメトキシ－２－メチル－ベンゼン（１２０ｍｇ、１５２．１８ｕｍｏｌ、収率３９．５３％、純度５０．９％）化合物を得た。

【0438】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３３ＢｒＯ_３）の質量を測定し、４０１．４；ｍ／ｚ実測値、４０２．８［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0439】

ステップ４：１－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－４，５，６－トリメトキシ－３－メチル－ベンゼンの製造
１－（１０－ブロモデシル）－３，４，５－トリメトキシ－２－メチル－ベンゼン（１２０ｍｇ、１５２．１８ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度５０．９％）およびＮａＢｒ（１５．６６ｍｇ、１５２．１８ｕｍｏｌ、４．８９ｕＬ、１ｅｑ）をＡｃＯＨ（４ｍＬ）に溶解した撹拌溶液にＨ_２Ｏ_２（１７．２５ｍｇ、１５２．１８ｕｍｏｌ、１４．６２ｕＬ、純度３０％、１ｅｑ）を添加し、２０℃で１２時間撹拌した。

【0440】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0441】

前記残留物を飽和ＮａＨＣＯ_３：Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３＝１０：１（３０）ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ＊３）を用いて抽出した。

【0442】

前記混合有機層をｂｒｉｎｅ（１０ｍＬ）で洗浄した後、［Ｎａ_２ＳＯ_４］で乾燥し、濾過後減圧下で濃縮して残留物を得た。

【0443】

前記粗生成物をさらに精製することなく、次のステップに使用した。

【0444】

黄色油状の１－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－４，５，６－トリメトキシ－３－メチル－ベンゼン（１３０ｍｇ、ｃｒｕｄｅ）化合物を得た。

【0445】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３２Ｂｒ_２Ｏ_３）の質量を測定し、４８０．３；ｍ／ｚ実測値、４８０．９［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0446】

ステップ５：１－ブロモ－２－（１０－ＢＬＡＨデシル）－４，５，６－トリメトキシ－３－メチル－ベンゼンの製造
１－ブロモ－２－（１０－ブロモデシル）－４，５，６－トリメトキシ－３－メチル－ベンゼン（１３０ｍｇ、１６２．４１ｕｍｏｌ、１ｅｑ、純度６０％）およびＰＰｈ_３（２１２．９９ｍｇ、８１２．０４ｕｍｏｌ、５ｅｑ）をトルエン（ｔｏｌｕｅｎｅ、２ｍＬ）に溶解した撹拌溶液をＮ２下、１２５℃で１２時間加熱した。

【0447】

このとき、ＬＣＭＳにより前記反応が完了したことを確認した。

【0448】

前記溶媒を真空下で除去して残留物を得た。

【0449】

前記残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ／Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ＝１００／０～０／１００；Ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ：ＭｅＯＨ＝１００／０～９２／８）で精製し、無色油状の１－ブロモ－２－（１０－ＢＬＡＨデシル）－４，５，６－トリメトキシ－３－メチル－ベンゼン（３０ｍｇ、３９．６９ｕｍｏｌ、収率２４．４４％、純度９８．２３４％）化合物を得た。

【0450】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_３８Ｈ_４７ＢｒＯ_３Ｐ^＋）の質量を測定し、６６２．７；ｍ／ｚ実測値、６６３．２［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0451】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝７．９３－７．６６（ｍ、１５Ｈ）、３．９４－３．７８（ｍ、１１Ｈ）、２．７８－２．６７（ｍ、２Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、１．６４（ｂｒｓ、４Ｈ）、１．５０－１．３４（ｍ、４Ｈ）、１．２５（ｂｒｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、８Ｈ）。
^３１ＰＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ＝２４．５４（ｓ、１Ｐ）。

【0452】

実施例６．４．（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドを製造する方法（ＳＢ－Ｕ０１１）
本出願において［化学式５］で表される化合物の製造方法について説明する（図２３）。前記化学式５の化合物を製造する方法は、下記のステップ１～４の製造ステップを含む。

【0453】

ステップ１：１０－ブロモ－１－（２，３，４－トリメトキシ－６－メチル－フェニル）デカン－１－オンの製造
４－ブロモ－１，２，３－トリメトキシ－５－メチル－ベンゼン（４４９．１１ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）および０－ブロモデカノイルクロリド（５３６．９４ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１０ｍＬ）に溶解した撹拌溶液にＡｌＣｌ_３（２０６．４１ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を添加した後、２５℃で１８時間撹拌した。

【0454】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の生成物が主要成分として生成したことを確認した。

【0455】

ＴＬＣ（Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ：ＥｔＯＡｃ＝３：１、Ｒｆ＝０．４）によって１つの主要な新しいスポットが形成されたことを確認した。

【0456】

前記反応混合物を氷水に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３０ｍＬｘ３）で抽出した後、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濃縮して黄色の油状物質を得た。

【0457】

前記黄色の油状物質をシリカゲル（０～１００％ＥｔＯＡｃｉｎｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ、３０分）でフラッシュカラム（Ｆｌａｓｈｃｏｌｕｍｎ）で精製して無色の油状物質（２１５ｍｇ、収率２９．１％）を得た。

【0458】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３１ＢｒＯ_４）の質量を測定し、４１４．１４；ｍ／ｚ実測値、４１６．８［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0459】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．３２（ｍ、８Ｈ）、１．３８－１．４９（ｍ、２Ｈ）、１．６７（ｍ、２Ｈ）、１．８６（ｑｕｉｎ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．１９（ｓ、３Ｈ）、２．７５（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．７７－３．９２（ｍ、９Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）。

【0460】

ステップ２：４－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－５－メチル－ベンゼンの製造
ＴＦＡ（１０ｍＬ）に溶解した１０－ブロモ－１－（２，３，４－トリメトキシ－６－メチル－フェニル）デカン－１－オン（２１０ｍｇ、４５５．０３ｕｍｏｌ）の撹拌溶液に２５℃でＥｔ_３ＳｉＨ（１．４６ｇ、１２．５２ｍｍｏｌ、２ｍＬ）を添加した後、８０℃で２時間撹拌した。

【0461】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の生成物が主要成分として生成したことを確認した。

【0462】

ＴＬＣ（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ：ＥｔＯＡｃ＝４：１、Ｒｆ＝０．４５）を介して１つの主要な新しいスポットが形成されたことを確認した。

【0463】

前記反応混合物を真空下で蒸発させ、乾燥して無色の油状物質を得、前記無色の油状物質をシリカゲル（ｓｉｌｉｃａｌｇｅｌ、２５ｇ、０～５０％ＥｔＯＡｃｉｎｐｅｔｒｏｌｅｕｍｅｔｈｅｒ、３０分）でフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦｌａｓｈＣｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を用いてさらに精製し、無色油状の所望の生成物４－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－５－メチル－ベンゼン（１１８ｍｇ、２５０．９３ｕｍｏｌ、収率５５．１５％）を得た。

【0464】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３３ＢｒＯ_３）の質量を測定し、４００．１６；ｍ／ｚ実測値、４０３．０［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0465】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２０－１．５４（ｍ、１４Ｈ）、１．７７－１．９６（ｍ、２Ｈ）、２．２７（ｓ、３Ｈ）、２．４６－２．６４（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．７６－３．９７（ｍ、９Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）。

【0466】

ステップ３：１－ブロモ－５－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－６－メチル－ベンゼンの製造
４－（１０－ブロモデシル）－１，２，３－トリメトキシ－５－メチル－ベンゼン（１１８ｍｇ、２５０．９３ｕｍｏｌ）およびＮａＢｒ（３８．７３ｍｇ、３７６．３９ｕｍｏｌ）をＡｃＯＨ（５ｍＬ）に溶解した撹拌溶液にＨ_２Ｏ_２（４２．６８ｍｇ、３７６．３９ｕｍｏｌ）を添加した後、２５℃で２時間撹拌した。

【0467】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の生成物が主要成分として形成されたことを確認した。

【0468】

前記反応混合物をＥｔＯＡｃ／Ｈ_２Ｏ（８０ｍＬ／６０ｍＬ）の間に分配した。

【0469】

前記有機層をＰＨ＞７になるまでｓａｔ．ａｑ．ＮａＨＣＯ_３（６０ｍＬ）を用いて洗浄した。

【0470】

前記収集された有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して黄色の油状物質（１４０ｍｇ、ｃｒｕｄｅ）を得た。

【0471】

このとき、ＨＮＭＲにより次のステップのための十分な純度の所望の生成物であることを確認した。

【0472】

また、エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_２０Ｈ_３２Ｂｒ_２Ｏ_３）の質量を測定し、４７８．０７；ｍ／ｚ実測値、４８１．０［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0473】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ１．２０－１．５２（ｍ、１４Ｈ）、１．７８－１．９４（ｍ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．６２（ｍ、２Ｈ）、３．４２（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．８１－３．９８（ｍ、９Ｈ）。

【0474】

ステップ４：（１０－（３－ブロモ－４，５，６－トリメトキシ－２－メチルフェニル）デシル）トリフェニルホスホニウムブロミドの製造
１－ブロモ－５－（１０－ブロモデシル）－２，３，４－トリメトキシ－６－メチル－ベンゼン（１４０ｍｇ、２７９．１３ｕｍｏｌ）およびＰＰｈ_３（３６６．０６ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をｔｏｌｕｅｎｅ（１ｍＬ）に溶解した後、撹拌溶液をＮ２下、１３０℃で１８時間加熱した。

【0475】

このとき、ＬＣＭＳにより所望の生成物が生成したことを確認した。

【0476】

また、ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ＝０．２）により、ＯＰＰｈ_３の下に１つの主要な新しいピークが形成されたことを確認した。

【0477】

前記反応混合物を蒸発させて褐色の残留物を得、これをシリカゲル（２５ｇ、０～１５％ＭｅＯＨｉｎＤＣＭ、３０分間）でフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦｌａｓｈＣｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を用いて精製した。

【0478】

前記所望の生成物を凍結乾燥して、白色固体（１０８．５ｍｇ、収率５１．４１％、純度９８．２％）を得た。

【0479】

エレクトロスプレー質量分析法（ＭＳ－ＥＳＩ）により前記得られた化合物（Ｃ_３８Ｈ_４７ＢｒＯ_３Ｐ^＋）の質量を測定し、６６１．２４；ｍ／ｚ実測値、６６３．３［Ｍ＋Ｈ］^＋であることを確認した。

【0480】

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δ１．１２－１．５０（ｍ、１２Ｈ）、１．６４（ｍ、４Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．５２－２．７１（ｍ、２Ｈ）、３．７７－３．９７（ｍ、１１Ｈ）、７．６０－７．９７（ｍ、１５Ｈ）；^３１ＰＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、ＣＨＬＯＲＯＦＯＲＭ－ｄ）δ２４．５３（ｓ、１Ｐ）。

【0481】

実施例７．本出願のＳＭｘおよび新規化合物分子はクライアント蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１に結合してＴＲＡＰ－１を阻害する。
－細胞培養
２２Ｒｖ１細胞株を３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、培地をＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ＋１％ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ＆ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎの条件で使用した。

【0482】

－ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）
２２Ｒｖ１細胞株を６－ｗｅｌｌプレートに３ｘ１０５の水で細胞を分注し、２ｍｌの培地で２４時間培養した。翌日、ミトコンドリア熱蛋白質９０（ＴＲＡＰ１）阻害剤であるＳＢ－シリーズ（ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、ＳＢ－Ｕ０１２）とＳＭＸを５μＭで処理し、２時間培養した。培養された細胞から全細胞溶解物（Ｗｈｏｌｅｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓ）を調製して電気泳動し、ＰＶＤＦ膜に移動させた後、一次抗体を４℃で１８時間処理した。翌日、二次抗体を１時間処理し、ウェスタンブロッティング検出試薬を用いてプルダウンアッセイを介して蛋白質発現を分析した（図２４）。

【0483】

薬物としては、ＳＭｘ分子と前記実施例６で合成した新規化合物分子ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、およびＳＢ－Ｕ０１２を処理し、ＤＭＳＯで正規化した。

【0484】

プルダウンアッセイの結果（図２４）、各新規化合物分子を処理した場合、実施例３．３のＳＭｘを処理した場合の結果とともにクライアント蛋白質（ＳＩＲＴ３、ＳＤＨＢ）の濃度が有意に減少することが確認できる（図２４）。すなわち、このような結果は、本出願の新規化合物分子がＣｌｉｅｎｔ蛋白質と競合的にＴＲＡＰ－１の中間部位に結合してＴＲＡＰ－１を阻害するという強力な証拠となり得る。

【0485】

実施例８．本出願のＳＭｘおよび新規化合物分子は糖尿網膜症（ＤＲ）に対する治療効果を有する。
－ＭＩＯ－Ｍ１ＨＲＥ細胞株を用いた薬物活性分析
ＭＩＯ－Ｍ１ミュラー細胞に５ＨＲＥ／ＧＦＰプラスミド（ａｄｄｇｅｎｅ．＃４６９２６）をトランスフェクション（ｊｅｔｐｒｉｍｅｋｉｔ）した後、選択マーカー（ｓｅｌｅｃｔａｂｌｅｍａｒｋｅｒ）であるＧ４１８（Ｎｅｏｍｙｃｉｎ）１ｍｇ／ｍｌを用いてプラスミドがトランスフェクションされた細胞を選別した。シングルセル（Ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌ）でコロニー（ｃｏｌｏｎｙ）形態を呈し成長する細胞を選別して安定発現細胞株（ｓｔａｂｌｅｃｅｌｌｌｉｎｅ）を作製した。作製したＭＩＯ－Ｍ１－ＨＲＥ／ＧＦＰｓｔａｂｌｅｃｅｌｌｌｉｎｅを９６ｗｅｌｌに分注し、翌日薬物を濃度別に処理した。低酸素環境で（１％Ｏ_２）２４時間露出させた後、ＧＦＰ（Ｅｘ／Ｅｍ：４８８／５０７）蛍光シグナルをＳＹＮＥＲＧＹＮＥＯｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｒｅａｄｅｒ（ＢｉｏＴｅｋＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）で測定した。陰性対照群としては薬物を溶解した溶媒であるＤＭＳＯを使用し、陰性対照群を１００％基準で計算した。

【0486】

ＭＩＯ－Ｍ１細胞株にＳＭｘおよび新規化合物分子を処理した場合、新血管生成因子であるＨＩＦ１－αを阻害することが確認できる（図２５）。このような結果から、本出願のＳＭｘおよび新規化合物分子の糖尿網膜症（ＤＲ）に対する治療効果があることがわかる。

【0487】

実施例９．本出願のＳＭｘおよび新規化合物分子のウェット型加齢黄斑変性症（ｗｅｔ－ＡＭＤ）に対する治療効果を有する。
－細胞培養
網膜色素上皮細胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｄｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）であるＡＲＰＥ－１９細胞は、１０％ＦＢＳと１％抗生剤が含まれたＤＭＥＭ／Ｆ－１２細胞培養液で５％ＣＯ_２、９５％大気空気および３７℃細胞培養器で６０ｍｍ細胞培養プレートに３Ｘ１０５細胞水で播種（ｓｅｅｄｉｎｇ）した後、２日間培養した。２日後、ＤＭＳＯ（０．５％）、ＳＭｘ、ＳＢ－Ｕ００５、ＳＢ－Ｕ００９、ＳＢ－Ｕ０１１、およびＳＢ－Ｕ０１２を１μＭで処理し、Ｈｙｐｏｘｉａｃｈａｍｂｅｒで１％酸素条件で６時間培養した後、ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）実験を行った。

【0488】

－ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）
細胞培養実験完了後、細胞培養液を除去し、冷たいＰＢＳで１回洗浄した後、ＲＩＰＡ溶液（５０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．２５％Ｎａ－ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、１％ＮＰ－４０）を入れ、細胞スクレーパー（ｃｅｌｌｓｃｒａｐｅｒ）で細胞を採取（ｈａｒｖｅｓｔ）した。細胞を十分に溶解させた後、低温遠心分離して得た細胞浮遊液に６×サンプルバッファー（ｓａｍｐｌｅｂｕｆｆｅｒ）を混合し、９５℃で５分間煮沸した後、１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥを実施した。電気泳動が完了したゲル（ｇｅｌ）の蛋白質をＰＶＤＦｍｅｍｂｒａｎｅで３５０ｍＡ、１時間２０分間トランスファー（ｔｒａｎｓｆｅｒ）した後、ブロッキング（１０％ｓｋｉｍｍｉｌｋ）し、常温で１時間反応させて非特異的抗体の結合を防いだ。一次抗体ＨＩＦ－１α（１：１０００）とＡｃｔｉｎ（１：３０００）を抗体溶液（Ａｎｔｉｂｏｄｙｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＴＢＳ－Ｔｗｉｔｈ０．０２％ｓｏｄｉｕｍａｚｉｄｅ、１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ）で希釈し、４℃で皮膜（ｍｅｍｂｒａｎｅ）と一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）反応させた。

【0489】

その後、ＴＢＳ－Ｔ（Ｔｒｉｓ－ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ＋Ｔｗｅｅｎ－２０）で２回洗浄した後、二次抗体（１：５，０００で希釈）と常温で１時間反応させた。ＭｅｍｂｒａｎｅはＴＢＳ－Ｔで２回洗浄した後、ＣｌａｒｉｔｙＷｅｓｔｅｒｎＥＣＬＳｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｂｉｏ－ｒａｄ）を使用してＣｈｅｍｉｄｏｃｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ、ＬＡＳ４０００）で蛋白質発現量の変化を測定した。

【0490】

その結果、ＳＭｘおよび本出願の新規化合物分子がＡＲＰＥ－１９細胞株においてＨＩＦ－１αを効果的に阻害することが確認できた（図２６）。これにより、本出願の化合物がウェット型加齢黄斑変性症（ｗｔ－ＡＭＤ）に対する治療効果を有することが分かる。

【図1】