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▶ ノボザイムス アクティーゼルスカブの特許一覧

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-02-20
(54)【発明の名称】α-アミラーゼ変異体
(51)【国際特許分類】
   C12N 9/28 20060101AFI20230213BHJP
   C11D 3/386 20060101ALI20230213BHJP
   C11D 17/06 20060101ALI20230213BHJP
   C11D 17/08 20060101ALI20230213BHJP
   C12N 15/56 20060101ALN20230213BHJP
【FI】
C12N9/28
C11D3/386
C11D17/06
C11D17/08
C12N15/56 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022537147
(86)(22)【出願日】2020-12-18
(85)【翻訳文提出日】2022-07-21
(86)【国際出願番号】 EP2020087043
(87)【国際公開番号】W WO2021123184
(87)【国際公開日】2021-06-24
(31)【優先権主張番号】201941052843
(32)【優先日】2019-12-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(31)【優先権主張番号】202041053525
(32)【優先日】2020-12-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500586299
【氏名又は名称】ノボザイムス アクティーゼルスカブ
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】カーステン アナスン
(72)【発明者】
【氏名】ラジェンドラ クロトゥンガン サイナサン
(72)【発明者】
【氏名】マドフプリヤ マハンカリ
(72)【発明者】
【氏名】スビス クリシュナ
(72)【発明者】
【氏名】ディネッシュ プラサド
【テーマコード(参考)】
4B050
4H003
【Fターム(参考)】
4B050CC04
4B050DD02
4B050HH01
4B050LL04
4H003AB03
4H003AB19
4H003AB31
4H003AC08
4H003BA01
4H003BA09
4H003BA12
4H003DA01
4H003DA05
4H003DA17
4H003DA19
4H003EA21
4H003EB04
4H003EB05
4H003EB07
4H003EB14
4H003EB24
4H003EC01
4H003ED02
4H003FA04
4H003FA16
(57)【要約】
本発明は、親α-アミラーゼと比較する場合に改善された洗浄性能を有する、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体に関する。本発明はまた、変異体をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクター、及び宿主細胞、並びに本発明の変異体を導入する方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて303、1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、前記変異体が、前記親ポリペプチド、好ましくは配列番号2又は3と比較する場合に、改善された性能、例えば改善係数(IF)>1.0の比活性の測定値に対して改善された洗浄性能を有する、α-アミラーゼ変異体。
【請求項2】
請求項1に記載の変異体であって、前記改変が、番号付けのために配列番号1を用いてG303、H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475及びG476位に対応する少なくとも1つの位置にあり、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する変異体。
【請求項3】
請求項1又は2に記載の変異体であって、前記改変が、番号付けのために配列番号1を用いてG303R、H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する少なくとも1つの位置にあり、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する変異体。
【請求項4】
請求項1~3のいずれか一項に記載の変異体であって、前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*;R180*+T182*;R180*+G183*;S181*+T182*;S181*+G183*;及びT182*+G183*からなる群から選択される、2つ以上の位置に欠失を含む変異体。
【請求項5】
請求項1~4のいずれか一項に記載の変異体であって、前記変異体が、
(a)前記親α-アミラーゼ内の2つ、3つ、又は4つの位置における置換及び/又は欠失であって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182、及び183位に対応する置換及び/又は欠失と、
(b)番号付けのために配列番号1を用いてG303R、H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変とを含むか又はそれからなり、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する変異体。
【請求項6】
請求項1~5のいずれか一項に記載の変異体であって、前記変異体が、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aからなる群から選択される、1つ以上の改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、α-アミラーゼ活性を有する変異体。
【請求項7】
請求項1~6のいずれか一項に記載の変異体であって、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*、及び
A111G+R180*+S181*からなる群から選択される、1つ以上の改変を含むかそれからなり、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、α-アミラーゼ活性を有する変異体。
【請求項8】
請求項1~7のいずれか1つに記載の変異体であって、前記親α-アミラーゼが、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14に記載されるアミノ酸配列から選択されるか、又は、任意のα-アミラーゼが、配列番号1、2又は3に記載されるアミノ酸配列のいずれかと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する変異体。
【請求項9】
請求項1~8のいずれか1つに記載の変異体であって、前記親α-アミラーゼが、配列番号1、配列番号2及び配列番号3に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる変異体。
【請求項10】
番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を導入することによって親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を得る方法であって、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する方法。
【請求項11】
親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体の洗浄性能を改善する方法であって、前記変異体が、配列番号1のアミノ酸配列を有するか、又はそれと少なくとも60%の配列相同性を有し、前記方法が、(a)前記親α-アミラーゼ内の2つ、3つ、又は4つの位置に置換及び/又は欠失を導入するステップであって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182、及び183位に対応する、導入するステップと、(b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を導入するステップとを含み、前記変異体が、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、前記変異体が、α-アミラーゼ活性と、前記親ポリペプチドに対して改善された洗浄性能とを有する方法。
【請求項12】
洗濯又は食器洗浄を含む硬質表面洗浄及び工業用クリーニングなどの洗浄プロセスにおける、請求項1~9のいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体の使用。
【請求項13】
請求項1~9のいずれか1つに記載の変異体を含む組成物。
【請求項14】
前記組成物が、液体洗剤、固体洗剤、ゲル洗剤、粉末洗剤、タブ、ポッド、パウチ及び粒状洗剤を含む群から選択される、請求項13に記載の組成物。
【請求項15】
自動食器洗浄(ADW)液体洗剤組成物などの液体洗濯組成物若しくは液体食器洗浄組成物、又はソープバーなどの固体洗濯組成物、又はADW単位用量洗剤組成物などの粉末食器洗浄組成物である、請求項13又は14に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
配列表の参照
本出願には、コンピュータ可読形式の配列表が含まれる。このコンピュータ可読形式は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、α-アミラーゼ活性を有するα-アミラーゼ変異体に関する。本発明は更に、そのような変異体をコードするポリヌクレオチド、そのような変異体をコードする遺伝子を含み、またそのような変異体の産生も可能にし得るベクター及び宿主細胞に関する。本発明は更に、家庭用クリーニング及びトリートメント、特に、手洗い及び/若しくは自動洗濯、並びに/又は手洗い及び/若しくは自動食器洗浄を含む、洗濯及び食器洗浄における使用に関する。本発明は、特に洗濯物の洗浄に有用である。
【背景技術】
【0003】
α-アミラーゼ(α-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ、E.C.3.2.1.1)は、デンプン並びに他の直鎖及び分枝1,4-グルコシドオリゴ糖及び多糖体の加水分解を触媒する酵素のグループから構成される。それらは長年にわたって家庭用に使用されていることで公知であり、例えば、ターマミルとしても公知のB.リケニフォルミス(B.licheniformis)由来の最初の細菌性α-アミラーゼが使用されている。例えば、AA560(国際公開第2000/060060号パンフレット)及びSP707(Tsukamoto et al.,1988,Biochem.Biophys.Res.Comm.151;25-31に記載されている)のようなアルカリ性アミラーゼは洗剤に有用であり、洗剤中におけるそれらの安定性を改善するために、これら及び他のアミラーゼを改変することが知られている。例えば、このアミラーゼの安定性を改善するために、国際公開第96/23873号パンフレットでは、SP707のアミノ酸181+182又はアミノ酸183+184(国際公開第96/23873号パンフレットの配列番号7)を欠失させることが記載されている。国際公開第96/23873号パンフレットには更に、酸化に対して分子を安定化させるために、SP707アミラーゼのM202を、例えばロイシンで置換することによって改変することが記載されている。
【0004】
特に、環境的に好ましい方法でアミロース分解性酵素の性能を改善することは、常に課題となっている。また、環境的な理由のため、多くの場合より少量の水及び/又はより低温による、効果的で、また好ましくは迅速な洗浄サイクルでのアミロース分解性酵素を提供することがますます重要になってきている。従って、親ポリペプチドと比較した場合に、比活性などの改善された特性を示すアミロース分解性酵素を有することが望ましい。本発明によって、ハイブリッド及び/又は親ポリペプチドと比較して、α-アミラーゼ活性を有し、デンプンを含有する汚れを除去するなどの改善された特性若しくは酵素洗浄利点又は比活性を有する変異ポリペプチドが提供される。特に好ましいアミロース分解性酵素は、低温下及び/又は短い洗浄サイクルで機能し、それと同時に比活性(アミロース分解活性)、安定性及び/又は洗浄性能などのその他の望ましい特性を保持又は向上させることができる。
【0005】
従って、本発明の目的は、親ポリペプチドと比較した場合に、5~40℃の温度などの低温における洗浄、食器洗浄、及び/又は洗浄プロセスに使用することができる、デンプンを含有する汚れの除去又は比活性などの改善された特性を示すα-アミラーゼ変異体を提供することである。本発明の更なる目的は、親α-アミラーゼと比較して、又は配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13若しくは14のいずれかのα-アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能を有するα-アミラーゼ変異体を提供することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含む親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体に関し、前記変異体は、親ポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0007】
本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含む親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体に関し、前記変異体は、親ポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、前記変異体は改善された洗浄性能を有し、この改善された洗浄性能とは、親ポリペプチドと比較したものであり、親ポリペプチドは好ましくは配列番号1又は配列番号2又は配列番号3である。
【0008】
本発明はまた、本発明によるα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド、本発明による変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物、本発明による変異体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター、又は本発明による変異体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。
【0009】
本発明はまた、(a)変異体の発現に好適な条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、(b)変異体を回収することとを含む、α-アミラーゼ変異体を産生する方法に関する。
【0010】
本発明は更に、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、各改変は独立して置換又は欠失であり、変異体はα-アミラーゼ活性を有する、導入することと、変異体を回収することとを含む、α-アミラーゼ変異体を得る方法に関する。
【0011】
定義
この発明を実施するための形態によれば、以下の定義が適用される。文脈上別途明確に指示されない限り、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」及び「その(the)」は、複数の対象を含むことに留意されたい。
【0012】
本明細書において、ある値又はパラメータの「約(about)」の言及は、それ自体の値又はパラメータに関する態様を含む。例えば、「約X」について言及する説明は、態様「X」を含む。
【0013】
本明細書の全体を通して、範囲の形式で表現される値は、範囲の限界として明示的に列挙された数値だけを含むものではなく、あたかも各数値及び部分範囲が明示的に列挙されているかの如く、範囲内に包含される全ての個々の数値又は部分範囲も含むものと柔軟に解釈すべきである。例えば、「約0.1パーセント~約5パーセント」又は「約0.1パーセント~5パーセント」の範囲は、約0.1パーセント~約5パーセントだけを含むものではなく、示された範囲内の個々の値(例えば、1パーセント、2パーセント、3パーセント及び4パーセント)、及び部分範囲(例えば、0.1パーセント~0.5パーセント、1.1パーセント~2.2パーセント、3.3パーセント~4.4パーセント)も含むものと解釈すべきである。別途指示がない限り、「約X~Y」の記述は、「約X~約Y」と同一の意味を有する。同様に、別途指示がない限り、「約X、Y、又は約Z」の記述は、「約X、約Y、又は約Z」と同一の意味を有する。
【0014】
別途定義しない限り、又は文脈によって明確に指示されない限り、本明細書において用いられる全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。
【0015】
A、B及びCドメイン:α-アミラーゼの構造は、3つの別個のドメイン、A、B及びCを含んでおり、例えば、Machius et al.,1995,J.Mol.Biol.246;545-559を参照されたい。「ドメイン」という用語は、分子全体の別個の及び独立した構造を形成するポリペプチドの領域を意味する。α-アミラーゼは、Aドメインと表記される活性部位、Bドメインと表記されるβシート3とαヘリックス3との間のやや長いループ、及びCドメインを有するβ/α-8バレルで構成され、場合によっては炭水化物結合ドメイン(例えば、国際公開第2005/001064号パンフレット;Machius et al.,前掲)も有している。
【0016】
α-アミラーゼのドメインは、例えば結晶学的手法を用いて構造分析することによって決定することができる。α-アミラーゼのドメインを決定するための代替方法には、α-アミラーゼのアミノ酸配列を、ドメインが決定されている別のα-アミラーゼと配列をアライメントすることによるものがある。例えば、Bドメインが決定されているα-アミラーゼのBドメイン配列とアライメントする配列は、所与のα-アミラーゼのBドメインであると見なすことができる。
【0017】
対立遺伝子変異体:「対立遺伝子変異体」という用語は、同一の染色体座を占める遺伝子の2つ以上の代替形態のいずれかを意味する。突然変異によって対立遺伝子のバリエーションが自然に生じ、集団内に遺伝子多形をもたらし得る。遺伝子変異は、サイレント(コードされるポリペプチド内に変異がない)であってもよく、又は改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしてもよい。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によってコードされるポリペプチドである。
【0018】
α-アミラーゼ:「α-アミラーゼ」という用語は、「α-アミラーゼ活性を有するポリペプチド」と同義である。「α-アミラーゼ活性」は、デンプン並びに他の直鎖及び分枝1,4-グルコシドオリゴ糖及び多糖体の加水分解を触媒する酵素のグループから構成されるα-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ、E.C.3.2.1.1の活性を意味する。従って、本明細書で使用する場合、「α-アミラーゼ」という用語は、デンプン及びグリコーゲンなどの大型のα結合多糖体のα結合を加水分解して、グルコース及びマルトースが得られるα-アミラーゼ活性(酵素分類:EC3.2.1.1)を有する酵素を指す。「α-アミラーゼ」及び「アミラーゼ」という用語は互換的に用いてもよく、本明細書では同一の意味及び目的をなす。本発明の目的上、α-アミラーゼ活性は、下記の副表題の「方法」の下で説明される手順に従って決定される。一態様では、本発明のα-アミラーゼは、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14のポリペプチドに対するアミノ酸配列と、少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0019】
アミノ酸:「アミノ酸」という用語は、本明細書で使用する場合、標準的な20個の遺伝的にコードされているアミノ酸及び(天然の「l」形態と比較して)「d」形態のそれらの対応する立体異性体、オメガアミノ酸、他の天然に存在するアミノ酸、非従来型アミノ酸(例えば、α,α-ジ置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸等)、及び化学的に誘導体化されたアミノ酸を指す。1つ以上のアミノ酸の化学的誘導体化は、官能性側基と反応させることによって達成してもよい。そのような誘導体化分子としては、例えば、遊離アミノ基が誘導体化してアミン塩酸塩を形成している分子、p-トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、t-ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基又はホルミル基が挙げられる。遊離カルボキシル基を誘導体化して、塩、メチル及びエチルエステル又は他の種類のエステル及びヒドラジドを形成してもよい。遊離ヒドロキシル基を誘導体化して、O-アシル又はO-アルキル誘導体を形成してもよい。化学的誘導体としては、20個の標準的アミノ酸の天然に存在するアミノ酸誘導体を含むペプチドのようなものも挙げられる。例えば、4-ヒドロキシプロリンをプロリンと置換してもよく、5-ヒドロキシリシンをリシンと置換してもよく、3-メチルヒスチジンをヒスチジンと置換してもよく、ホモセリンをリシンのためにセリン及びオルニチンと置換してもよい。誘導体としては、必要な活性が維持される限り、1つ以上の付加又は欠失を含むペプチドも挙げられる。他に含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端のアシル化(例えば、アセチル化又はチオグリコール酸のアミド化)、末端のカルボキシアミド化(例えば、アンモニア又はメチルアミンによる)などの末端修飾である。
【0020】
アミノ酸が「アラニン」又は「Ala」又は「A」などのように具体的に列挙されている場合、別途明示的に述べられていない場合、この用語はl-アラニン及びd-アラニンの両方を指す。他の非従来型アミノ酸も、ポリペプチドによって所望の機能特性が保持されている限り、本発明のポリペプチドに好適な構成成分であり得る。示されるペプチドに関して、それぞれのコードされているアミノ酸残基は、必要に応じて従来型アミノ酸の慣用名に対応する一文字の表記で表される。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、l-アミノ酸を含むか又はそれからなる。
【0021】
触媒ドメイン:「触媒ドメイン」という用語は、酵素の触媒機構を含有する酵素の領域を意味する。
【0022】
cDNA:「cDNA」という用語は、真核細胞から得られる、熟成し、スプライシングされたmRNA分子から逆転写によって調製することができるDNA分子を意味する。cDNAには、対応するゲノムDNAに存在し得るイントロン配列が欠如している。最初の一次RNA転写物は、成熟し、スプライシングされたmRNAが現れる前の、スプライシングを含む一連のステップを経てプロセシングされたmRNAの前駆体である。
【0023】
コード配列:「コード配列」という用語は、変異体のアミノ酸配列を直接特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、通常、ATG、GTG又はTTGなどの開始コドンで開始して、TAA、TAG又はTGAなどの終止コドンで終了するオープンリーディングフレームによって一般に決定される。コード配列は、DNA、cDNA、合成又は組み換えポリヌクレオチドであってよい。
【0024】
制御配列:「制御配列」という用語は、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドの発現に必要となる核酸配列を意味する。それぞれの制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドに対して天然(即ち、同一の遺伝子に由来する)若しくは外来性(即ち、異なる遺伝子に由来する)のものであってよいか、又は互いに天然若しくは外来性のものであってよい。そのような制御配列としては、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモーター、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネーターが挙げられるが、これらに限定されない。最低でも、制御配列にはプロモーター、並びに転写及び翻訳停止シグナルが含まれる。制御配列には、変異体をコードするポリヌクレオチドのコード領域と制御配列の連結を容易にする特異的な制限部位を導入するためのリンカーが設けられていてもよい。
【0025】
対応する:「対応する」という用語は、本明細書で使用する場合、特異的アミノ酸配列を参照する配列の特異的アミノ酸を決定する方法を指す。例えば、本発明の目的上、特異的アミノ酸位置を参照する場合、当業者であれば、どの特異的アミノ酸が別のアミノ酸配列内の対象となり得るのかを決定するために、参照される前記アミノ酸配列と前記別のアミノ酸配列をアライメントすることができる。別のアミノ酸配列を、例えば配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13若しくは14に記載される配列、又は本明細書に列挙した任意の他の配列とアライメントすることは、本明細書の他の箇所に記載されている。代替的なアライメント法を使用してもよく、これらは当業者に公知である。
【0026】
食器洗浄組成物:「食器洗浄組成物」という用語は、本明細書で使用する場合、食器を洗浄するためのあらゆる形式の組成物を指す。食器洗浄組成物は、液体の食器洗浄組成物、粉末の食器洗浄組成物であり、任意選択により、組成物は単位用量の形式である。単位用量の食器洗浄組成物は、2つ以上の区画を含んでもよく、複数の区画には粉末、液体、又はこれらの組み合わせが含まれる。
【0027】
酵素洗浄力の利点:本明細書で使用される「酵素洗浄性の利点」という用語は、酵素を含まない同一の洗剤と比較して、酵素によって洗剤に加えられ得る有利な効果を指す。酵素によってもたらされ得る重要な洗浄力の利点は、洗濯及び/又は洗浄後に全く又はごくわずかに見える汚れを染み除去すること、洗濯プロセス中に遊離した汚れが再付着することを防止又は低減させること(再付着防止とも呼ばれる効果)、元々白かったが、繰り返し使用して洗濯した後に灰色又は黄色っぽい見た目となった織物の白さを完全に又は部分的によみがえらせること(ホワイトニングとも呼ばれる効果)にある。織物ケアの利点は、触媒作用的な染み除去又は汚れの再付着の防止に直接関連するものではないが、酵素洗浄力の利点にとっても重要であり得る。このような織物ケアの利点の例としては、ある布地から別の布地又は同じ布地の別の部分の染料移りを防止又は低減すること(染料移りの抑制又は逆染色防止とも呼ばれる効果)、布地表面の突出若しくは破断繊維を除去して毛玉が発生する傾向を低減するか、又は既に存在する毛玉若しくはけばを除去すること(アンチピリングとも呼ばれる効果)、布地の柔軟性を改善すること、布地の色をクリアにすること、布地又は衣類の繊維に閉じ込められた粒子状の汚れを除去することがある。酵素漂白は、一般に、過酸化水素又は他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するのに触媒活性が使用される、更なる酵素洗浄力の利点である。
【0028】
発現:「発現」という用語は、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、及び分泌が挙げられるがこれらに限定されない変異体の生成に関与する任意のステップが含まれる。
【0029】
発現ベクター:「発現ベクター」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを含む、線状又は環状DNA分子を意味し、発現をもたらす更なるヌクレオチドに作動可能に連結されている。
【0030】
フラグメント:「フラグメント」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書に開示される親配列、例えば、配列番号1~14のいずれか1つの成熟したポリペプチドのアミノ及び/又はカルボキシル末端のない1つ以上の(例えば、いくつかの)アミノ酸を有するポリペプチドを指し、フラグメントはα-アミラーゼ活性を有する。一態様では、フラグメントは、配列番号1~14の少なくとも200個の連続したアミノ酸残基、例えば、配列番号1~14の少なくとも300個の連続したアミノ酸残基、又は少なくとも350個の連続したアミノ酸残基、又は少なくとも400個の連続したアミノ酸残基、又は少なくとも450個の連続したアミノ酸残基を含む。
【0031】
融合ポリペプチド:「融合ポリペプチド」という用語は、本明細書で使用する場合、2つ以上、例えば2つ、3つ、又は4つの種に由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。このような融合ポリペプチドは、当業者によく知られた分子技術によって生成されていてもよい。本発明の融合ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有している。特に、本発明の融合ポリペプチドは、例えば、あるα-アミラーゼのAドメイン及びCドメインと、別のα-アミラーゼ由来のBドメインから構成される。ハイブリッドポリペプチド(又は「ハイブリッド」)及び融合ポリペプチドは互換的に用いることができ、同一の意味及び目的をなす。
【0032】
硬質表面洗浄:「硬質表面洗浄」という用語は、本明細書で使用する場合、床、屋根、車、台所又は浴室の表面、並びに食器洗い(食器洗浄)を含む、あらゆる硬質表面を洗浄することを指す。
【0033】
異種ポリヌクレオチド:「異種ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書では、宿主細胞に対して天然でないポリヌクレオチド、コード領域に構造的に改変を加えた天然のポリヌクレオチド、組み換えDNA技術、例えば、異なる(外来)プロモーターによってDNAを操作した結果、量的に発現が変化した天然のポリヌクレオチド、又は発現を量的に変化させるポリヌクレオチドの1つ以上の追加のコピーを有する宿主細胞の天然のポリヌクレオチドとして定義される。「異種遺伝子」は、異種ポリヌクレオチドを含む遺伝子である。
【0034】
異種:宿主細胞に対する「異種」という用語は、宿主細胞で天然に存在しないポリペプチド又は核酸を意味する。ポリペプチド又は核酸に対する「異種」という用語は、制御配列、例えばプロモーター又はポリペプチド若しくは核酸のドメインが、ポリペプチド又は核酸に天然に結合しないこと、即ち、制御配列が変異体をコードする遺伝子以外の遺伝子に由来するものであることを意味する。
【0035】
高ストリンジェンシー条件:「高ストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び50%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、65℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0036】
宿主細胞:「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物又は発現ベクターが導入される、あらゆる微生物又は植物細胞を意味する。導入方法としては、プロトプラスト融合、形質移入、形質転換、エレクトロポレーション、コンジュゲーション、及び形質導入が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、タンパク質、核酸、細胞等が挙げられるがこれらに限定されない少なくとも1つの他の構成成分から部分的に又は完全に分離された、単離された組み換え宿主細胞である。
【0037】
ハイブリダイゼーション:「ハイブリダイゼーション」という用語は、標準的なサザンブロッティング手順を使用して、核酸の相補鎖を実質的に対合させることを意味する。ハイブリダイゼーションは、中、中~高、高、又は非常に高いストリンジェンシー条件下で実施してもよい。中ストリンジェンシー条件は、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び35%のホルムアミド中42℃で12~24時間プレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後0.2×SSC、0.2%のSDSを使用して、55℃でそれぞれ3回、15分間洗浄する。中~高ストリンジェンシー条件は、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び35%のホルムアミド中42℃で12~24時間プレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後0.2×SSC、0.2%のSDSを使用して、60℃でそれぞれ3回、15分間洗浄する。高ストリンジェンシー条件は、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び50%のホルムアミド中42℃で12~24時間プレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後0.2×SSC、0.2%のSDSを使用して、65℃でそれぞれ3回、15分間洗浄する。非常に高いストリンジェンシー条件は、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び50%のホルムアミド中42℃で12~24時間プレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後0.2×SSC、0.2%のSDSを使用して、70℃でそれぞれ3回、15分間洗浄する。
【0038】
改善された特性:「改善された特性」という用語は、本明細書では、親α-アミラーゼと比較して改善された変異体に関連する特徴として定義される。そのような改善された特性としては、アミロース分解活性の向上、触媒効率の向上、触媒反応速度の向上、化学安定性の向上、酸化安定性の向上、pH活性の向上、pH安定性の向上、比活性の向上、基質結合性の向上、基質切断性の向上、基質特異性の向上、基質安定性の向上、表面特性の向上、熱活性の向上、熱安定性の向上、汚れ除去性能などの洗浄性能、例えば、デンプンを含有する汚れ、染み除去、灰色になるのを防ぐことに対する性能の向上、安定性、例えば、熱安定性、pH安定性、又はキレート剤を含むビルダーの存在下における安定性、粉末、液体又はゲル洗剤配合物又は食器洗浄組成物中における安定性、変化する温度依存性性能、及び活性プロファイル、pH活性、基質特異性、生成物特異性及び化学安定性が挙げられるが、これらに限定されない。
【0039】
改善された洗浄性能:「改善された洗浄性能」という用語は、本明細書では、例えば、染み除去を向上させることによって、親アミラーゼの洗浄性能と比較して、又は配列番号1、配列番号2、又は配列番号3のいずれかのα-アミラーゼと比較してアミラーゼの洗浄性能の改善を示すこととして定義される。改善された洗浄性能は、いわゆる強度値を比較することによって測定してもよい。改善された洗浄性能は、実施例に従って測定することが好ましい。改善係数(IF)が実施例に列挙される条件の1つ以上で1.0を上回る、好ましくは1.05を上回る場合に、洗浄性能が改善される。洗浄条件は実施例の項に記載されている。「洗浄性能」という用語には、一般的に、例えば食器洗浄のような硬質表面を洗浄することが含まれるが、洗濯などの織物における洗浄性能、並びに工業用及び業務用クリーニングにおける洗浄性能も含まれる。改善された洗浄性能は、本明細書における定義に記載したようなデルタ強度を比較することによって測定してもよい。
【0040】
単離された:「単離された」という用語は、自然界に存在することのない形態又は環境における物質を意味する。単離された物質の非限定的な例としては、(1)任意の天然に存在しない物質、(2)それが自然界で結合する天然に存在する成分のうち1つ以上又はその全てを少なくとも部分的に除去した任意の酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチド又は補因子が挙げられるが、これらに限定されない任意の物質、(3)自然界で見られる物質に対してヒトの手で改変された任意の物質、又は(4)それと天然に結合する他の成分と比較して物質の量を増大させることによって改変された任意の物質(例えば、物質をコードする遺伝子の複数コピー、物質をコードする遺伝子と自然に結合するプロモーターよりも強力なプロモーターの使用)が挙げられる。単離された物質は、発酵ブロス試料中に存在してもよい。一態様では、本発明は、単離されたα-アミラーゼ変異体に関する。
【0041】
強度値:洗浄性能は、白色光で照らしたときに、試料から反射する光の強度として表される輝度として測定する。試料を染色すると、反射光の強度は、清浄な試料よりも低い強度となる。従って、反射光の強度を用いて洗浄性能を測定することができるが、この場合、高い強度値は高い洗浄性能と相関している。専門のフラットベッドスキャナー(Kodak iQsmart、Kodak)を使用して、洗浄した織物の画像を取り込むことによって色測定を行う。走査画像から光の強度の値を抽出するために、画像からの24ビットのピクセル値を赤、緑及び青(RGB)の値に変換する。RGB値をベクトルとして共に加算し、次いで得られたベクトルの長さを取得することによって強度値(Int)を算出する。
【数1】
【0042】
低ストリンジェンシー条件:「低ストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び25%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、0.2×SSC、0.2%のSDSを使用して、50℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0043】
低温:「低温」とは、5~40℃、又は5~35℃、又は5~30℃、又は更に5~25℃、又は5~20℃、又は5~15℃、又は5~10℃の温度である。好ましくは、「低温」は、10~35℃、好ましくは10~30℃、又は10~25℃、又は10~20℃の温度である。
【0044】
成熟したポリペプチドコード配列:「成熟したポリペプチドコード配列」という用語は、α-アミラーゼ活性を有する成熟したポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【0045】
成熟したポリペプチド:「成熟したポリペプチド」という用語は、N末端プロセシング、C末端トランケーション、グリコシル化、リン酸化等などの翻訳及び任意の翻訳後修飾後の最終形態にあるポリペプチドを意味する。宿主細胞が同一のポリヌクレオチドによって発現する2つ以上の異なる成熟したポリペプチドの混合物(即ち、異なるC末端及び/又はN末端アミノ酸)を生成することができることは、当該技術分野において公知である。
【0046】
中ストリンジェンシー条件:「中ストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び35%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、55℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0047】
中~高ストリンジェンシー条件:「中~高ストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び35%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、60℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0048】
改変:「改変」という用語は、本発明のポリペプチドの文脈では、参照アミノ酸配列(例えば、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14)内の1つ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸で置換されることによって、アミノ酸の挿入によって、又は欠失によって、好ましくは少なくとも1つの欠失によって変更されていることを意味する。「改変」、「変更」、及び「突然変異」という用語は互換的に用いることができ、同一の意味及び目的をなす。
【0049】
突然変異体:「突然変異体」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを意味する。
【0050】
天然:「天然」という用語は、宿主細胞に天然に存在する核酸又はポリペプチドを意味する。
【0051】
核酸構築物:「核酸構築物」という用語は、天然に存在する遺伝子から単離した、又は普通では自然界に存在することのない方法で核酸のセグメントを含有するように改変させた、又は1つ以上の制御配列を含む合成物である、一本鎖又は二本鎖のいずれかの核酸分子を意味する。核酸構築物という用語は、核酸構築物が本発明のコード配列の発現に必要とされる制御配列を含有する場合、「発現カセット」という用語と同義である。
【0052】
作動可能に連結された:「作動可能に連結された」という用語は、制御配列がコード配列の発現を誘導するように、制御配列がポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に置かれている構成を意味する。
【0053】
親又は親α-アミラーゼ:「親」α-アミラーゼという用語は、本明細書で使用する場合、本発明の変異α-アミラーゼを生成するために改変が加えられたα-アミラーゼを意味する。この用語はまた、本発明の変異体と比較されるポリペプチドを指す。親は、天然に存在する(野生型)ポリペプチドであってよく、又は任意の好適な手段で調製されたこれらの変異体であってもよい。例えば、親タンパク質は、アミノ酸配列が改変又は変更されている、天然に存在するポリペプチドの変異体であってよい。従って、親α-アミラーゼは、1つ以上の(又は1つ若しくはいくつかの)アミノ酸置換、欠失及び/又は挿入を有し得る。従って、親α-アミラーゼは、親α-アミラーゼの変異体であってよい。親はまた、同一の染色体座を占める遺伝子の2つ以上の代替形態のいずれかによってコードされるポリペプチドである対立遺伝子変異体であってよい。「親」又は「親α-アミラーゼ」という用語は、本明細書で使用する場合、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13若しくは14のα-アミラーゼ、又は配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13若しくは14のポリペプチドのいずれかと、少なくとも60%の配列相同性を有する任意のα-アミラーゼを指す。親α-アミラーゼはまた、配列番号1~14のフラグメントを含むポリペプチドであってよい。親は、細菌性又は真菌性α-アミラーゼ、好ましくは細菌性α-アミラーゼであってよい。配列番号1、2又は3を有するアミラーゼは、例えば、本発明に必須の親又はハイブリッドポリペプチドであり得る。
【0054】
精製された:「精製された」という用語は、当該技術分野においてよく知られた分析技術によって測定したときに、他の成分を実質的に含まない核酸又はポリペプチドを意味する(例えば、精製されたポリペプチド又は核酸は、電気泳動ゲル中で、クロマトグラフ溶出液中で、及び/又は密度勾配遠心分離を施した培地中で分離したバンドを形成し得る)。精製された核酸又はポリペプチドは、少なくとも約50%純粋であり、通常は、少なくとも約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%以上純粋である(例えば、モル基準の重量パーセント)。関連する意味では、精製又は濃縮手法を適用した後に分子の濃度が実質的に増加した場合、組成物は分子が濃縮されている。「濃縮された」という用語は、出発組成物よりも高い相対濃度又は絶対濃度で組成物中に存在する化合物、ポリペプチド、細胞、核酸、アミノ酸、又は他の特定の材料若しくは構成成分を指す。
【0055】
組み換え:「組み換え」という用語は、細胞、核酸、タンパク質又はベクターに関して使用する場合、天然の状態から改変されていることを意味する。従って、例えば、組み換え細胞は、細胞の天然形態内に見られない(非組み換え型)遺伝子を発現するか、又は自然界に見られるものと異なるレベル若しくは異なる条件下で天然の遺伝子を発現する。組み換え核酸は、1つ以上のヌクレオチドで天然配列とは異なっており、及び/又は異種配列、例えば、発現ベクターの異種プロモーターに作動可能に連結されている。組み換えタンパク質は、1つ以上のアミノ酸で天然配列とは異なっていてもよく、及び/又は異種配列と融合している。ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターは、組み換えベクターである。「組み換え」という用語は、「遺伝子改変された」及び「遺伝子導入」と同義である。
【0056】
配列相同性:2つのアミノ酸配列又は2つのヌクレオチド配列間の相関性は、「配列相同性」というパラメータによって説明される。
【0057】
本発明の目的上、2つのアミノ酸配列間の配列相同性は、好ましくはバージョン5.0.0以降のEMBOSSパッケージ(EMBOSS;The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16;276-277)のNeedleプログラムに実装されているような、ニードルマン-ブンシュアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48;443-453)を用いて決定する。使用されるパラメータは、ギャップ開始ペナルティが10、ギャップ伸長ペナルティが0.5、EBLOSUM62(BLOSUM62のEMBOSSバージョン)置換行列であってよい。「最長同一性(longest identity)」と表示されたNeedle出力(-nobriefオプションを使用して得られる)が同一性パーセントとして使用され、次のように計算される。
(同一残基×100)/(アライメントの長さ-アライメント中のギャップの合計数)
【0058】
本発明の目的上、2つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列相同性は、好ましくはバージョン5.0.0以降のEMBOSSパッケージ(EMBOSS;The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,前掲)のNeedleプログラムに実装されているような、ニードルマン-ブンシュアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,前掲)を用いて決定する。使用されるパラメータは、ギャップ開始ペナルティが10、ギャップ伸長ペナルティが0.5、及びEDNAFULL(NCBI NUC4.4のEMBOSSバージョン)置換行列である。「最長同一性(longest identity)」と表示されたNeedle出力(-nobriefオプションを使用して得られる)が同一性パーセントとして使用され、次のように計算される。
(同一デオキシリボヌクレオチド×100)/(アライメントの長さ-アライメント中のギャップの合計数)。
【0059】
シグナルペプチド:「シグナルペプチド」という用語は、本明細書では、生物活性を有するポリペプチドのアミノ末端にインフレームで結合(融合)されたペプチドであり、ポリペプチドを細胞の分泌通路に誘導するものとして定義される。シグナル配列は、当該技術分野において公知の技術を使用して決定してもよい(例えば、Zhang and Henzel,2004,Protein Science 13;2819-2824を参照されたい。)
【0060】
デンプン結合ドメイン:「デンプン結合ドメイン」(SBD)、又は炭水化物結合モジュール(CBM)という用語は、本明細書において互換的に用いられる。SBDは、9つのCBMファミリーに分けることができる。デンプンは、エネルギー供給源として、多数の様々なアミロース分解性酵素によって分解される。しかしながら、生デンプンに結合して分解することができるのは、それらの約10パーセントに過ぎない。これらの酵素は、通常、デンプン粒への結合を媒介する、デンプン結合ドメインと呼ばれる別個の配列構造的モジュールを有している。SBDは、優先的にデンプン(多糖体)基質又はマルトサッカライド、α、β及びγ-シクロデキストリン等に結合するアミノ酸配列を指す。これらは、通常は約10パーセントの微生物性アミロース分解性酵素に見られる、約100個のアミノ酸残基のモチーフである。
【0061】
部分配列:「部分配列」という用語は、成熟したポリペプチドのコード配列の5’末端及び/又は3’末端から欠失した1つ以上の(例えば、いくつかの)ヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し、部分配列は、α-アミラーゼ活性を有するフラグメントをコードしている。
【0062】
織物ケアの利点:「織物ケアの利点」という用語は、本明細書で使用する場合、触媒作用的な染み除去又は汚れの再付着の防止に直接関連しないものとして定義され、酵素洗浄力の利点にとっても重要なものである。このような織物ケアの利点の例としては、ある織物から別の織物又は同じ織物の別の部分の染料移りを防止又は低減すること(染料移りの抑制)、織物表面の突出若しくは破断繊維を除去して毛玉が発生する傾向を低減するか、又は既に存在する毛玉若しくはけばを除去すること(アンチピリング)、織物の柔軟性を改善すること、織物の色をクリアにすること、織物の繊維に閉じ込められた粒子状の汚れを除去することがある。酵素漂白は、更なる酵素洗浄力の利点であり、一般に、触媒活性が過酸化水素若しくは他の過酸化物、又は漂白剤種などの漂白成分の形成を触媒するために使用される。
【0063】
変異体:「変異体」という用語は、本明細書で使用する場合、1つ以上の(例えば、いくつかの)位置に改変、即ち、置換、挿入、及び/又は欠失を含むα-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換は、ある位置を占めているアミノ酸を異なるアミノ酸と置き換えることを意味し、欠失は、ある位置を占めているアミノ酸を除去することを意味し、挿入は、ある位置を占めているアミノ酸に隣接し、その直後にアミノ酸を付加することを意味する。変異体は、配列番号1~14の1つ以上のポリペプチドのα-アミラーゼ活性の少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、ただし100%未満を有する。
【0064】
非常に高いストリンジェンシー条件:「非常に高いストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び50%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、70℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0065】
非常に低いストリンジェンシー条件:「非常に低いストリンジェンシー条件」という用語は、少なくとも100ヌクレオチド長のプローブの場合、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、及び25%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間行うことを意味する。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、45℃で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0066】
洗浄性能:本明細書の文脈では、「洗浄性能」という用語は、例えば、洗濯又は食器洗浄などの硬質表面を洗浄するときに、洗浄すべき対象に存在するデンプン又はデンプンを含有する汚れを除去する酵素の能力として使用される。「洗浄性能」という用語には、一般的に、例えば食器洗浄のような硬質表面を洗浄することが含まれるが、また、洗濯物などの織物における洗浄性能、並びに工業用及び業務用クリーニングにおける洗浄性能も含まれる。洗浄性能は、いわゆる強度値を算出することよって定量化してもよい。
【0067】
野生型酵素:「野生型」α-アミラーゼという用語は、自然界に見られるバクテリア、酵母菌、又は糸状菌などの天然に存在する微生物によって発現するα-アミラーゼを意味する。「野生型酵素」及び「親酵素」という用語は、親酵素が変異酵素でない場合、互換的に用いることができる。
【0068】
命名法
本発明の目的上、命名法[Y/F]は、その位置のアミノ酸が、チロシン(Try、Y)又はフェニルアラニン(Phe、F)であり得ることを意味する。同様に、本明細書で記載されるようなその他の組み合わせでは、命名法[V/G/A/I]は、その位置のアミノ酸が、バリン(Val、V)、グリシン(Gly、G)、アラニン(Ala、A)又はイソロイシン(Ile、I)等であり得ることを意味する。アミノ酸Xは、別途明記しない限り20個の天然アミノ酸のいずれかであり得るように定義される。
【0069】
変異体の表記に関する従来法
本発明の目的上、配列番号1に開示されるポリペプチドを使用して、別のα-アミラーゼ内の対応するアミノ酸残基を決定する。或いは、配列番号2又は配列番号3に開示されるポリペプチドを使用して、別のα-アミラーゼ内の対応するアミノ酸残基を決定してもよい。別のα-アミラーゼのアミノ酸配列を配列番号1に開示されるポリペプチドとアライメントさせ、このアライメントに基づいて、配列番号2又は配列番号3に開示されるポリペプチド内の任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号を、好ましくはバージョン3.0.0以降のEMBOSSパッケージ(EMBOSS;The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16;276-277)のNeedleプログラムに実装されているような、ニードルマン-ブンシュアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48;443-453)を用いて決定する。
【0070】
別のα-アミラーゼ内の対応するアミノ酸残基の同定は、MUSCLE(multiple sequence comparison by log-expectation;バージョン3.5以降;Edgar,2004,Nucleic Acids Research 32;1792-1797)、MAFFT(バージョン6.857以降;Katoh and Kuma,2002,Nucleic Acids Research 30;3059-3066;Katoh et al.,2005,Nucleic Acids Research 33;511-518;Katoh and Toh,2007,Bioinformatics 23;372-374;Katoh et al.,2009,Methods in Molecular Biology 537;39-64;Katoh and Toh,2010,Bioinformatics 26;1899-1900)、及びEMBOSS EMMAを使用するClustalW(1.83以降;Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research 22;4673-4680)が挙げられるが、これらに限定されない、それらの対応するデフォルトのパラメータを用いたいくつかのコンピュータプログラムを用いて、複数のポリペプチド配列をアライメントすることによって決定することができる。
【0071】
他の酵素が配列番号1のポリペプチドから分岐して、その結果、従来の配列ベースの比較をしてもそれらの関係性を検出しない場合(Lindahl and Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295;613-615)、他のペアワイズ配列比較アルゴリズムを使用することができる。ポリペプチドファミリーの確率的表現(プロファイル)を利用してデータベースを検索する検索プログラムを使用すると、配列ベースの検索でより高い感度を達成することができる。例えば、PSI-BLASTプログラムによって反復データベース検索プロセスを介してプロファイルを生成し、離れた相同体を検出することができる(Atschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.25;3389-3402)。
【0072】
ポリペプチドのファミリー又はスーパーファミリーが、タンパク質構造データベースに1つ以上の標本を有する場合、更に高い感度を達成することができる。GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287;797-815;McGuffin and Jones,2003,Bioinformatics 19;874-881)などのプログラムは、様々なソース(PSI-BLAST、二次構造予測、構造的アライメントプロファイル、溶媒和ポテンシャル)からの情報を、問い合わせ配列の構造的折り畳みを予測するニューラルネットワークへのインプットとして利用するものである。同様に、Gough et al.,2000,J.Mol.Biol.313;903-919の方法を使用して、未知の構造の配列をSCOPデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとアライメントさせることができる。これらのアライメントは、ひいてはポリペプチドの相同性モデルを生成するのに使用することができ、その目的のために開発された様々なツールを使用してそのようなモデルの精度を評価することができる。
【0073】
公知の構造のタンパク質の場合、構造的アライメントを検索及び生成するための、いくつかのツール及びリソースが利用可能である。例えば、タンパク質のSCOPスーパーファミリーが構造的にアライメントされており、これらのアライメントは利用可能であり、ダウンロード可能である。2つ以上のタンパク質構造を、距離アライメント行列(Holm and Sander,1998,Proteins 33;88-96)、又はコンビナトリアル拡張(hindyalov and Bourne,1998,Protein Engineering 11;739-747)などの様々なアルゴリズムを用いてアライメントすることができ、更にこれらのアルゴリズムの実装を利用して、考えられる構造的同族体を見つけ出すために目的の構造を有する構造データベースを照会することができる(例えば、Holm and Park,2000,Bioinformatics 16;566-567)。
【0074】
変異体を記載する際に、参照を容易にするために下記に記載する命名法を適用する。認められているIUPACの一文字又は三文字アミノ酸略号を採用する。
【0075】
置換:アミノ酸置換の場合、以下の命名法:元のアミノ酸、位置、置換されるアミノ酸を使用する。従って、226位のスレオニンのアラニンでの置換は、「Thr226Ala」又は「T226A」と表記する。所与の位置のアミノ酸が任意の他のアミノ酸と置換され得る場合は、T226ACDEFGHIKLMNPQRSWVYと表記する。従って、このことは、226位のスレオニンが、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、W、V又はYからなる群から選択されるアミノ酸で置換され得ることを意味する。同様に、所与の位置のアミノ酸が特定の群のアミノ酸から選択される1つのアミノ酸と置換され得る場合、例えば、226位のスレオニンがチロシン、フェニルアラニン又はヒスチジンのいずれかで置換され得る場合は、T226YFHと表記する。また、所与の位置における異なる変更をカンマで区切ってもよく、例えば、「Arg170Tyr,Glu」又は「R170Y,E」は、170位のアルギニンをチロシン又はグルタミン酸で置換したことを表す。従って、「Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala」は、以下の変異体を示す:「Tyr167Gly+Arg170Gly」、「Tyr167Gly+Arg170Ala」、「Tyr167Ala+Arg170Gly」及び「Tyr167Ala+Arg170Ala」。
【0076】
複数の突然変異は、加算記号(「+」)で分けられ、例えば、「Gly205Arg+Ser411Phe」又は「G205R+S411F」は、205位のグリシン(G)をアルギニン(R)で、及び411位のセリン(S)をフェニルアラニン(F)でそれぞれ置換することを示す。
【0077】
欠失。アミノ酸欠失の場合、以下の命名法:元のアミノ酸、位置、*を使用する。従って、195位のグリシンの欠失は、「Gly195*」又は「G195*」と表記する。複数の欠失は、加算記号(「+」)で分けられ、例えば、「Gly195*+Ser411*」又は「G195*+S411*」である。
【0078】
挿入。アミノ酸挿入の場合、以下の命名法:元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されるアミノ酸を使用する。従って、195位のグリシンの後のリシンの挿入は、「Gly195GlyLys」又は「G195GK」と表記する。複数のアミノ酸の挿入は、[元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、第1の挿入されるアミノ酸、第2の挿入されるアミノ酸…]と表記する。例えば、195位のグリシンの後のリシン及びアラニンの挿入は、「Gly195GlyLysAla」又は「G195GKA」と表記する。
【0079】
そのような場合、挿入されるアミノ酸残基は、挿入されるアミノ酸残基の前のアミノ酸残基の位置番号に、小文字を加えることによって番号付けされる。従って、上記の例では、配列は以下のようになる。
【0080】
【表1】
【0081】
複数の改変。複数の改変を含む変異体は、加算記号「+」で分けられ、例えば、「Arg170Tyr+Gly195Glu」又は「R170Y+G195E」は、170位及び195位のアルギニン及びグリシンを、それぞれチロシン及びグルタミン酸で置換することを表す。
【発明を実施するための形態】
【0082】
親α-アミラーゼ
本発明は、ポリペプチドが融合(ハイブリッド)ポリペプチドである、アミラーゼ活性を有するポリペプチドに関する。
【0083】
本発明は、配列番号1、2、3、4又は5のいずれかのAドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するAドメインと、配列番号1、2、10、11又は12のいずれかのBドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するBドメインと、配列番号1、2、3、4又は5のいずれかのCドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するCドメインとを含む、α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを提供する。
【0084】
本発明は、Aドメイン、Bドメイン及びCドメインを含む、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドのハイブリッドα-アミラーゼであって、前記ハイブリッドは融合ポリペプチドである、ハイブリッドα-アミラーゼを含む。
【0085】
一実施形態では、Aドメインは、配列番号1のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0086】
一実施形態では、Aドメインは、配列番号2のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0087】
一実施形態では、Aドメインは、配列番号3のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0088】
一実施形態では、Aドメインは、配列番号4のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0089】
一実施形態では、Aドメインは、配列番号5のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0090】
一実施形態では、Bドメインは、配列番号1のBドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0091】
一実施形態では、Bドメインは、配列番号2のBドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0092】
一実施形態では、Bドメインは、配列番号10のBドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0093】
一実施形態では、Bドメインは、配列番号11のBドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0094】
一実施形態では、Bドメインは、配列番号12のBドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0095】
一実施形態では、Cドメインは、配列番号1のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0096】
一実施形態では、Cドメインは、配列番号2のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0097】
一実施形態では、Cドメインは、配列番号3のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0098】
一実施形態では、Cドメインは、配列番号4のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0099】
一実施形態では、Cドメインは、配列番号5のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。
【0100】
α-アミラーゼは、あるα-アミラーゼのBドメイン又はその部分を、別のα-アミラーゼのBドメイン又はその部分と置換することによって生成してもよい。α-アミラーゼはまた、あるα-アミラーゼのAドメイン及びCドメイン又はその部分を、別のα-アミラーゼのAドメイン及びCドメイン又はその部分と置換することによって生成してもよい。
【0101】
Bドメインがアミノ酸残基109~206として決定されているバチルス属(Bacillus)のα-アミラーゼ(配列番号4)の場合、別のα-アミラーゼの対応する配列で置換されるべき配列は、配列番号12の93~113位の範囲の位置で始まり、195~215位の範囲の位置で終わる、例えば、97~109位の範囲の位置で始まり、199~215の範囲の位置で終わる、又は100~106位の範囲の位置で始まり、202~208位の範囲の位置で終わり、特に109~206位である。バチルス属(Bacillus)のα-アミラーゼのA及びCドメインは、それぞれアミノ酸残基1~108(A1)+207~396(A2)、及び397~485であると決定した。本発明のα-アミラーゼは、配列番号4の1~5位の範囲の位置で始まり、94~114位の範囲の位置で終わる、例えば、1~3位の範囲の位置で始まり、99~110位の範囲の位置で終わる、又は1~3位の範囲の位置で始まり、104~109位の範囲の位置で終わる、特に1~108位のA1ドメインを含み得る。本発明のα-アミラーゼは、配列番号4の201~221位の範囲の位置で始まり、478~514位の範囲の位置で終わる、例えば、203~211位の範囲の位置で始まり、480~510位の範囲の位置で終わる、又は205~216位の範囲の位置で始まり、482~484位の範囲の位置で終わる、特に207~485位のA2ドメイン及びCドメインを含み得る。
【0102】
一実施形態では、ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1又は2に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。別の実施形態では、ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1又は2のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0103】
別の実施形態では、親ポリペプチドは、配列番号1に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなってもよい。本明細書の別の箇所で述べた通り、親ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有し、配列番号1~14に記載されるようなアミノ酸配列のいずれか1つと、少なくとも60%の配列相同性を有するあらゆるポリペプチドであってよい。
【0104】
一実施形態では、親ポリペプチドは、配列番号2に記載されるアミノ酸配列と、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列相同性を有し、この親ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号1~14に記載されるアミノ酸配列と最大10個、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のアミノ酸で異なっている。
【0105】
本発明によれば、1.0の値は、親ポリペプチドで観察される性能に相当する。1.0を上回る値は、親ポリペプチドと比較して試験されたハイブリッドの性能が改善されたことを示す。従って、>1.0の任意の値は、親ポリペプチドと比較したハイブリッドポリペプチドの比活性の向上などの、特性の改善を示す。
【0106】
一態様では、ハイブリッドポリペプチドは親ポリペプチドである。
【0107】
親α-アミラーゼは、配列番号1~14のポリペプチドのいずれか1つと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有するポリペプチドであってよい。
【0108】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号1のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号1のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0109】
親は、配列番号1のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0110】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号2のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号2のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0111】
親は、配列番号2のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0112】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号3のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号3のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0113】
親は、配列番号3のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0114】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号4のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号4のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0115】
親は、配列番号4のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0116】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号5のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号5のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0117】
親は、配列番号5のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0118】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号6のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号6のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0119】
親は、配列番号6のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0120】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号7のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号7のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0121】
親は、配列番号7のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0122】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号8のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号8のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0123】
親は、配列番号8のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号8のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号8のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0124】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号9のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号9のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0125】
親は、配列番号9のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号9のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号9のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0126】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号10のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号10のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0127】
親は、配列番号10のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号10のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号10のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0128】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号11のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号11のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0129】
親は、配列番号11のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号11のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号11のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0130】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号12のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号12のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0131】
親は、配列番号12のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号12のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号12のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0132】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号13のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号13のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0133】
親は、配列番号13のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号13のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号13のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0134】
一態様では、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号14のポリペプチドと、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号14のポリペプチドと、10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸で異なっている。
【0135】
親は、配列番号14のアミノ酸配列を含むか又はそれからなっていることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号14のポリペプチドを含むか又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号14のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
【0136】
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14のアミノ酸配列又はそれらのフラグメントを使用して核酸プローブを設計し、当該技術分野においてよく知られた方法に従って、親をコードするDNAを異なる属又は種の株から同定してクローニングしてもよい。特に、そのようなプローブを使用して、対応するそれらの遺伝子を同定及び単離するために、標準的なサザンブロッティング手順に従って目的の属若しくは種のゲノム又はcDNAとハイブリダイズさせてもよい。そのようなプローブは、配列全体よりも大幅に短いものであってよいが、少なくとも14、例えば、少なくとも25、少なくとも35、少なくとも70ヌクレオチド長である必要がある。好ましくは、核酸プローブは、少なくとも100ヌクレオチド長、例えば、少なくとも200ヌクレオチド長、少なくとも300ヌクレオチド長、少なくとも400ヌクレオチド長、少なくとも500ヌクレオチド長、少なくとも600ヌクレオチド長、少なくとも700ヌクレオチド長、少なくとも800ヌクレオチド長、又は少なくとも900ヌクレオチド長である。DNAプローブ及びRNAプローブの両方を使用することができる。プローブは、典型的には対応する遺伝子を検出するために標識されている(例えば、32P、H、35S、ビオチン、又はアビジン)。そのようなプローブは、本発明に包含される。
【0137】
そのような他の株から調製されるゲノムDNA又はcDNAライブラリーを、上記に記載したプローブとハイブリダイズし、且つ親をコードするDNAかどうかについてスクリーニングしてもよい。そのような他の株のゲノム又は他のDNAは、アガロース若しくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、又は他の分離技術によって分離してもよい。ライブラリーからのDNA又は分離したDNAを、ニトロセルロース又は他の適切な担体材料上に移し、固定化してもよい。この担体材料は、親又はその部分配列とハイブリダイズするクローン又はDNAを同定するために、サザンブロットに用いられる。
【0138】
本発明の目的上、ハイブリダイゼーションは、ポリヌクレオチドが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、又はこれらの部分配列をコードするポリヌクレオチドに対応する標識したヌクレオチドプローブに、低~非常に高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズすることを示している。プローブがハイブリダイズする分子は、例えば、X線フィルム又は当該技術分野において公知の任意の他の検出手段を使用して検出することができる。
【0139】
一態様では、核酸プローブは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、又はこれらのフラグメントのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
【0140】
少なくとも100ヌクレオチド長の長いプローブの場合、非常に低い~非常に高いストリンジェンシー条件は、5×SSPE、0.3%のSDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性したサケ精子DNA、非常に低い及び低ストリンジェンシーの場合は25%のホルムアミド、中及び中~高ストリンジェンシーの場合は35%のホルムアミド、又は高及び非常に高いストリンジェンシーの場合は50%のホルムアミド中42℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を最適には12~24時間行うものと定義される。最終的に、2×SSC、0.2%のSDSを使用して、45℃(非常に低いストリンジェンシー)、50℃(低ストリンジェンシー)、55℃(中ストリンジェンシー)、60℃(中~高ストリンジェンシー)、65℃(高ストリンジェンシー)、又は70℃(非常に高いストリンジェンシー)で15分間、担体材料をそれぞれ3回洗浄する。
【0141】
約15ヌクレオチド~約70ヌクレオチド長の短いプローブの場合、ストリンジェンシー条件は、ml当たり0.9MのNaCl、0.09Mのトリス-HCl(pH7.6)、6mMのEDTA、0.5%のNP-40、1×デンハート液、1mMのピロリン酸ナトリウム、1mMのリン酸二水素ナトリウム、0.1mMのATP、及び0.2mgの酵母菌RNA中、Bolton及びMcCarthyによる計算(1962,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48;1390)を用いて算出されたTm未満の約5℃~約10℃でプレハイブリダイズ及びハイブリダイズし、その後標準的なサザンブロッティング手順を最適には12~24時間行うものと定義される。最終的に、6×SCCに加えて0.1%のSDS中で15分間、担体材料を1回洗浄し、6×SSCを使用して、算出されたTm未満の5℃~10℃で15分間、それぞれ2回洗浄した。
【0142】
親は、あらゆる属の微生物から得てもよい。本発明の目的上、「から得られた」という用語は、所与の供給源に関連して本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドによってコードされる親が、供給源によって生成されるか、又は供給源からのポリヌクレオチドが挿入されている株によって生成されることを意味するものとする。一態様では、親は細胞外に分泌される。
【0143】
親は、細菌性α-アミラーゼであってよい。例えば、親は、バチルス属(Bacillus)、クロストリジウム属(Clostridium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ゲオバチルス属(Geobacillus)、ラクトバチルス属(Lactobacillus)、ラクトコッカス属(Lactococcus)、オセアノバチルス属(Oceanobacillus)、ブドウ球菌属(Staphylococcus)、ストレプトコッカス属(Streptococcus)、若しくはストレプトマイセス属(Streptomyces)のα-アミラーゼなどのグラム陽性細菌性ポリペプチド、又はカンピロバクター属(Campylobacter)、大腸菌(E.coli)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、フソバクテリウム属(Fusobacterium)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、イリオバクター属(Ilyobacter)、ナイセリア属(Neisseria)、シュードモナス属(Pseudomonas)、サルモネラ属(Salmonella)、若しくはウレアプラズマ属(Ureaplasma)のα-アミラーゼなどのグラム陰性菌性ポリペプチドであってよい。
【0144】
一態様では、親は、バチルス・アルカロフィラス(Bacillus alkalophilus)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・ブレビ(Bacillus brevis)、バチルス・サーキュランス(Bacillus circulans)、バチルス・クラウジイ(Bacillus clausii)、バチルス・コアギュランス(Bacillus coagulans)、バチルス・フィルムス(Bacillus firmus)、バチルス・ロータス(Bacillus lautus)、バチルス・レンタス(Bacillus lentus)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)又はバチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)のα-アミラーゼである。
【0145】
別の態様では、親は、ストレプトコッカス・エキシミリス(Streptococcus equisimilis)、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streptococcus pyogenes)、ストレプトコッカス・ウベリス(Streptococcus uberis)、又はストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)のα-アミラーゼである。
【0146】
別の態様では、親は、ストレプトマイセス・アクロモゲネス(Streptomyces achromogenes)、ストレプトマイセス・アベルミティリス(Streptomyces avermitilis)、ストレプトマイセス・セリカラー(Streptomyces coelicolor)、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、又はストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)のα-アミラーゼである。
【0147】
別の態様では、親は、バチルス属(Bacillus)種のα-アミラーゼ、例えば、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13又は配列番号14のα-アミラーゼである。
【0148】
上述した種について、本発明は、名称が知られている種に関わらず、完全及び不完全世代の両方、並びに他の分類学上の等価物、例えば、アナモルフを包含することを理解されるであろう。当業者であれば、適切な等価物の同一性を容易に理解するであろう。
【0149】
これらの種の株は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM)、Centraalbureau Voor Schimmelcultures(CBS)、及びAgricultural Research Service Patent Culture Collection,Northern Regional Research Center(NRRL)などの多数の微生物株保存機関において公的に容易に利用可能である。
【0150】
親は、上述のプローブを使用して、自然(例えば、土壌、コンポスト、水等)から単離された微生物、又は天然物質(例えば、土壌、コンポスト、水等)から直接入手したDNA試料を含む他の供給源から同定して入手してもよい。自然の生育地から微生物及びDNAを直接単離するための手法は、当該技術分野においてよく知られている。次いで、別の微生物又は混合したDNA試料のゲノムライブラリー又はcDNAライブラリーを同様にスクリーニングすることによって、親をコードするポリヌクレオチドを取り出してもよい。親をコードするポリヌクレオチドがプローブによって検出された時点で、当業者に公知の手法を利用して、このポリヌクレオチドを単離及びクリーニングしてもよい(例えば、Sambrook et al.,1989(前掲)を参照されたい)。
【0151】
親は、あるポリペプチドの一部が別のポリペプチドの一部のN末端又はC末端に融合しているハイブリッドポリペプチドであってよい。
【0152】
親はまた、あるポリペプチドが別のポリペプチドのN末端又はC末端で融合している融合ポリペプチド又は切断可能な融合ポリペプチドであってよい。融合ポリペプチドは、あるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、別のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに融合させることによって生成される。融合ポリペプチドを生成するための手法は、当技術分野において公知であり、ポリペプチドをコードするコード配列を、それらがインフレームとなり、融合ポリペプチドの発現が同一のプロモーター及びターミネーターの制御下となるように結合させることを含む。融合タンパク質はまた、融合が翻訳後に生じるインテイン技術を使用して構築してもよい(Cooper et al.,1993,EMBO J.12;2575-2583;Dawson et al.,1994,Science 266;776-779)。
【0153】
融合ポリペプチドは更に、2つのポリペプチドの間に切断部位を含むことができる。融合タンパク質が分泌されると、この部位が切断されて2つのポリペプチドが遊離する。切断部位の例としては、Martin et al.,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3;568-576;Svetina et al.,2000,J.Biotechnol.76;245-251;Rasmussen-Wilson et al.,1997,Appl.Environ.Microbiol.63;3488-3493;Ward et al.,1995,Biotechnology 13;498-503;及びContreras et al.,1991,Biotechnology 9;378-381;Eaton et al.,1986,Biochemistry 25;505-512;Collins-Racie et al.,1995,Biotechnology 13;982-987;Carter et al.,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics 6;240-248;及びStevens,2003,Drug Discovery World 4;35-48に開示される部位が挙げられるが、これらに限定されない。
【0154】
変異体の調製
本発明は、(a)番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、各改変は独立して置換又は欠失であり、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有する、導入することと、(b)前記変異体を回収することとを含む、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法に関する。
【0155】
α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法は、(a)配列番号1に記載されるようなアミノ酸配列の1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、各改変は独立して置換又は欠失であり、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有する、導入することと、(b)前記変異体を回収することとを含む。
【0156】
一態様では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法は、(a)番号付けのために配列番号1を用いて、配列番号2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14に記載されるようなアミノ酸配列の1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、各改変は独立して置換又は欠失であり、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有する、導入することと、(b)前記変異体を回収することとを含む。
【0157】
一実施形態では、改変は置換である。一実施形態では、改変は欠失である。
【0158】
別の実施形態では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得る方法は、(a)1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、改変は、配列番号1に記載のアミノ酸配列のH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476Aから選択される、導入することと、(b)変異体を回収することとを含む。
【0159】
別の実施形態では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得る方法は、(a)1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、改変は、番号付けのために配列番号1を用いて、配列番号2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14に記載のアミノ酸配列のN3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180Q、R180S、S181L、S181T、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476Aから選択される、導入することと、(b)変異体を回収することとを含む。
【0160】
一実施形態では、方法は、1つ以上の位置における欠失を親α-アミラーゼに導入することであって、欠失は、番号付けのために配列番号1を用いて、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14のポリペプチドのH1*、H2*、R180*、S181*、T182*及びG183*から選択される、導入することと、変異体を回収することとを更に含む。
【0161】
変異体は、部位特異的突然変異誘発、合成遺伝子構築法、半合成遺伝子構築法、ランダム突然変異誘発、シャッフリング手順等などの当該技術分野において公知の任意の突然変異誘発を用いて調製してもよい。
【0162】
部位特異的突然変異誘発は、1つ以上の(いくつかの)突然変異を、親をコードするポリヌクレオチド内の1つ以上の画定された部位に生じさせる手法である。
【0163】
部位特異的突然変異誘発は、所望の突然変異を含むオリゴヌクレオチドプライマーを使用することを含むPCRによってインビトロで実施することができる。部位特異的突然変異誘発は、親をコードするポリヌクレオチドを含むプラスミド内の部位の制限酵素によって切断し、その後にポリヌクレオチド内に突然変異を含むオリゴヌクレオチドを結合させることを含むカセット変異導入法によって、インビトロで実施することもできる。通常は、プラスミドで消化される制限酵素とオリゴヌクレオチドは同じものであり、これによってプラスミド及びインサートの付着末端が互いに結合することが可能となる。例えば、Scherer and Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76;4949-4955;及びBarton et al.,1990,Nucleic Acids Res.18;7349-4966を参照されたい。
【0164】
部位特異的突然変異誘発は、当該技術分野において公知の方法でインビボで実施することもできる。例えば、米国特許出願公開第2004/0171154号明細書、Storici et al.,2001,Nature Biotechnol.19;773-776;Kren et al.,1998,Nat.Med.4;285-290;及びCalissano and Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.43;15-16を参照されたい。
【0165】
任意の部位特異的突然変異誘発手順を、本発明に使用してもよい。変異体を調製するのに使用することができる、利用可能な多くの市販のキットが存在している。
【0166】
合成遺伝子構築法は、目的のポリペプチドをコードするために設計されたポリヌクレオチド分子のインビトロ合成を必要とする。遺伝子合成は、多くの手法、例えば、Tian et al.(2004,Nature 432:1050-1054)に記載される多重マイクロチップをベースとした技術、及びフォトプログラム可能なマイクロ流体チップ上でオリゴヌクレオチドが合成され、組み立てられる類似の技術を利用して実行することができる。
【0167】
単一又は複数のアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入は、突然変異誘発、組み換え、及び/又はシャッフリング法の公知の方法を使用して生成及び試験することができ、その後、Reidhaar-Olson and Sauer,1988,Science 241;53-57;Bowie and Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86;2152-2156;国際公開第95/17413号パンフレット;又は国際公開第95/22625号パンフレットに開示されているような関連するスクリーニング手順を行うことができる。使用可能な他の方法としては、エラープローンPCR、ファージディスプレイ(例えば、Lowman et al.,1991,Biochemistry 30;10832-10837;米国特許第5,223,409号明細書;国際公開第92/06204号パンフレット)及び領域特異的変異誘発(Derbyshire et al.,1986,Gene 46;145;Ner et al.,1988,DNA 7;127)が挙げられる。
【0168】
突然変異誘発/シャッフリング法は、ハイスループットな自動化されたスクリーニング方法と組み合わせて、宿主細胞によって発現した、クローニングされ、突然変異が誘発されたポリペプチドの活性を検出することができる(Ness et al.,1999,Nature Biotechnology 17;893-896)。活性ポリペプチドをコードする、突然変異が誘発されたDNA分子を宿主細胞から回収し、標準的な当該技術分野の方法を使用して容易に配列決定することができる。これらの方法により、ポリペプチド内の個々のアミノ酸残基の重要性を迅速に決定することが可能となる。
【0169】
半合成遺伝子構築法は、合成遺伝子構築法、及び/又は部位特異的突然変異誘発、及び/又はランダム突然変異誘発、及び/又はシャッフリング法の態様を組み合わせることによって実施する。半合成構築法としては、PCR手法と組み合わせた、合成されたポリヌクレオチドフラグメントを利用したプロセスが典型的なものである。このように、遺伝子の画定された領域を新規に合成してもよいが、一方で他の領域を部位特異的突然変異プライマーを使用して増幅してもよく、一方で更に他の領域をエラープローンPCR又は非エラープローンPCR増幅に供してもよい。次いで、ポリヌクレオチド部分配列をシャッフリングしてもよい。
【0170】
α-アミラーゼ変異体
本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有する、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体に関する。
【0171】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有する。
【0172】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0173】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して改善された特性を有する。
【0174】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して改善された特性を有する。
【0175】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して改善された特性を有し、前記親ポリペプチドは、配列番号1、2又は3である。
【0176】
別の実施形態では、変異体は、親ポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0177】
別の実施形態では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0178】
一実施形態では、変異体は、ハイブリッドポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0179】
一実施形態では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有するハイブリッドポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0180】
別の実施形態では、変異体は、配列番号1のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0181】
別の実施形態では、変異体は、配列番号2のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0182】
別の実施形態では、変異体は、配列番号3のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0183】
別の実施形態では、変異体は、配列番号4のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0184】
別の実施形態では、変異体は、配列番号5のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0185】
別の実施形態では、変異体は、配列番号6のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0186】
別の実施形態では、変異体は、配列番号7のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0187】
別の実施形態では、変異体は、配列番号8のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0188】
別の実施形態では、変異体は、配列番号9のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0189】
別の実施形態では、変異体は、配列番号10のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0190】
別の実施形態では、変異体は、配列番号11のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0191】
別の実施形態では、変異体は、配列番号12のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0192】
別の実施形態では、変異体は、配列番号13のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0193】
別の実施形態では、変異体は、配列番号14のポリペプチドと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0194】
一態様では、置換アミノ酸残基は、その位置の天然に存在するアミノ酸残基と異なっている。一実施形態では、置換は、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W及びYからなる群から選択されるが、ただし、置換アミノ酸残基がその位置の天然に存在するアミノ酸残基と異なっている。
【0195】
一態様では、改変の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49又は50個の改変である。
【0196】
一態様では、置換の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49又は50個の置換である。
【0197】
一態様では、欠失の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49又は50個の欠失である。
【0198】
置換を有する上述の変異体は、特定の位置における1つ以上の置換の全ての考えられる組み合わせを包含するものと理解すべきである。
【0199】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0200】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の(例えば、いくつかの)位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0201】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する2つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0202】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する3つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0203】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する4つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0204】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する5つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0205】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する6つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0206】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する7つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0207】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する8つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0208】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する9つの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0209】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する10個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0210】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する11個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0211】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する12個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0212】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する13個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0213】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する14個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0214】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する15個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0215】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する16個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0216】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する17個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0217】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する18個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0218】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する19個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0219】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する20個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0220】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する21個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0221】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する22個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0222】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する23個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0223】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する24個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0224】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する25個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0225】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する26個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0226】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する27個の位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0227】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応するそれぞれの位置に改変を含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0228】
別の態様では、変異体は、1位に対応する位置に、欠失を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの1位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失H1*を含むか又はそれからなる。
【0229】
別の態様では、変異体は、2位に対応する位置に、欠失を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの2位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失H2*を含むか又はそれからなる。
【0230】
別の態様では、変異体は、配列番号1の3位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、3位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N3S又はN3D又はN3Gを含むか又はそれからなる。
【0231】
別の態様では、変異体は、配列番号1の7位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、7位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G7A又はG7H又はG7Sを含むか又はそれからなる。
【0232】
別の態様では、変異体は、配列番号1の26位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、26位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R26Yを含むか又はそれからなる。
【0233】
別の態様では、変異体は、配列番号1の31位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、31位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A31Sを含むか又はそれからなる。
【0234】
別の態様では、変異体は、配列番号1の37位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、37位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R37A又はR37N又はR37Vを含むか又はそれからなる。
【0235】
別の態様では、変異体は、配列番号1の40位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、40位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T40N又はT40Gを含むか又はそれからなる。
【0236】
別の態様では、変異体は、配列番号1の41位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、41位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A41Dを含むか又はそれからなる。
【0237】
別の態様では、変異体は、配列番号1の54位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、54位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N54Sを含むか又はそれからなる。
【0238】
別の態様では、変異体は、配列番号1の56位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、56位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V56Tを含むか又はそれからなる。
【0239】
別の態様では、変異体は、配列番号1の60位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、60位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A60P又はA60Vを含むか又はそれからなる。
【0240】
別の態様では、変異体は、配列番号1の63位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、63位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L63Fを含むか又はそれからなる。
【0241】
別の態様では、変異体は、配列番号1の72位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、72位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K72Rを含むか又はそれからなる。
【0242】
別の態様では、変異体は、配列番号1の73位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、73位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G73Lを含むか又はそれからなる。
【0243】
別の態様では、変異体は、配列番号1の93位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、93位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K93Dを含むか又はそれからなる。
【0244】
別の態様では、変異体は、配列番号1の94位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、94位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N94Dを含むか又はそれからなる。
【0245】
別の態様では、変異体は、配列番号1の98位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、98位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q98Lを含むか又はそれからなる。
【0246】
別の態様では、変異体は、配列番号1の103位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、103位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V103又はVA103Iを含むか又はそれからなる。
【0247】
別の態様では、変異体は、配列番号1の104位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、104位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V104Mを含むか又はそれからなる。
【0248】
別の態様では、変異体は、配列番号1の105位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、105位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M105I又はM105Lを含むか又はそれからなる。
【0249】
別の態様では、変異体は、配列番号1の106位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、106位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N106Dを含むか又はそれからなる。
【0250】
別の態様では、変異体は、配列番号1の109位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、109位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A109Gを含むか又はそれからなる。
【0251】
別の態様では、変異体は、配列番号1の110位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、110位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G110Kを含むか又はそれからなる。
【0252】
別の態様では、変異体は、配列番号1の111位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、111位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A111G又はA111Lを含むか又はそれからなる。
【0253】
別の態様では、変異体は、配列番号1の113位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、113位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G113A又はG113Q又はG113Sを含むか又はそれからなる。
【0254】
別の態様では、変異体は、配列番号1の114位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、114位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T114Kを含むか又はそれからなる。
【0255】
別の態様では、変異体は、配列番号1の116位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、116位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F116L又はF116N又はF116Q又はF116Wを含むか又はそれからなる。
【0256】
別の態様では、変異体は、配列番号1の117位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、117位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V117Gを含むか又はそれからなる。
【0257】
別の態様では、変異体は、配列番号1の118位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、118位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D118T又はD118Qを含むか又はそれからなる。
【0258】
別の態様では、変異体は、配列番号1の123位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、123位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D123Nを含むか又はそれからなる。
【0259】
別の態様では、変異体は、配列番号1の126位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、126位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N126Dを含むか又はそれからなる。
【0260】
別の態様では、変異体は、配列番号1の128位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、128位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N128Yを含むか又はそれからなる。
【0261】
別の態様では、変異体は、配列番号1の131位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、131位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T131I又はT131Vを含むか又はそれからなる。
【0262】
別の態様では、変異体は、配列番号1の132位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、132位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S132D又はS132Lを含むか又はそれからなる。
【0263】
別の態様では、変異体は、配列番号1の134位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、134位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T134Dを含むか又はそれからなる。
【0264】
別の態様では、変異体は、配列番号1の135位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、135位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y135Eを含むか又はそれからなる。
【0265】
別の態様では、変異体は、配列番号1の136位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、136位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q136T又はQ136Kを含むか又はそれからなる。
【0266】
別の態様では、変異体は、配列番号1の137位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、137位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I137Fを含むか又はそれからなる。
【0267】
別の態様では、変異体は、配列番号1の138位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、138位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q138Vを含むか又はそれからなる。
【0268】
別の態様では、変異体は、配列番号1の140位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、140位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W140S又はW140Y又はW140Mを含むか又はそれからなる。
【0269】
別の態様では、変異体は、配列番号1の142位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、142位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K142E又はK142G又はK142Pを含むか又はそれからなる。
【0270】
別の態様では、変異体は、配列番号1の144位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、144位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D144Nを含むか又はそれからなる。
【0271】
別の態様では、変異体は、配列番号1の146位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、146位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P146H又はP146Sを含むか又はそれからなる。
【0272】
別の態様では、変異体は、配列番号1の151位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、151位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T151Aを含むか又はそれからなる。
【0273】
別の態様では、変異体は、配列番号1の152位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、152位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y152Lを含むか又はそれからなる。
【0274】
別の態様では、変異体は、配列番号1の155位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、155位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F155Wを含むか又はそれからなる。
【0275】
別の態様では、変異体は、配列番号1の159位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、159位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W159H又はW159Lを含むか又はそれからなる。
【0276】
別の態様では、変異体は、配列番号1の160位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、160位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y160Pを含むか又はそれからなる。
【0277】
別の態様では、変異体は、配列番号1の165位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、165位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T165Vを含むか又はそれからなる。
【0278】
別の態様では、変異体は、配列番号1の167位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、167位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W167A又はW167D又はW167E又はW167F又はW167P又はW167Sを含むか又はそれからなる。
【0279】
別の態様では、変異体は、配列番号1の169位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、169位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E169V又はE169I又はE169Qを含むか又はそれからなる。
【0280】
別の態様では、変異体は、配列番号1の172位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、172位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K172G又はK172Qを含むか又はそれからなる。
【0281】
別の態様では、変異体は、配列番号1の173位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、173位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L173Fを含むか又はそれからなる。
【0282】
別の態様では、変異体は、配列番号1の174位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、174位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N174K又はN174Sを含むか又はそれからなる。
【0283】
別の態様では、変異体は、配列番号1の176位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、176位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I176Vを含むか又はそれからなる。
【0284】
別の態様では、変異体は、配列番号1の177位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、177位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y177Dを含むか又はそれからなる。
【0285】
別の態様では、変異体は、配列番号1の178位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、178位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K178Aを含むか又はそれからなる。
【0286】
別の態様では、変異体は、180位に対応する位置に、欠失又は置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの180位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失R180*を含むか又はそれからなる。別の態様では、180位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R180Q又はR180Sを含むか又はそれからなる。
【0287】
別の態様では、変異体は、181位に対応する位置に、欠失又は置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの181位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失S181*を含むか又はそれからなる。別の態様では、181位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S181L又はS181Tを含むか又はそれからなる。
【0288】
別の態様では、変異体は、配列番号1の182位に対応する位置に、欠失又は置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの182位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失T182*を含むか又はそれからなる。別の態様では、182位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T182D又はT182E又はT182G又はT182I又はT182L又はT182M又はT182Sを含むか又はそれからなる。
【0289】
別の態様では、変異体は、配列番号1の183位に対応する位置に、欠失又は置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、配列番号1のポリペプチドの183位に対応する位置のアミノ酸が欠失されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失G183*を含むか又はそれからなる。別の態様では、183位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G183Pを含むか又はそれからなる。
【0290】
別の態様では、変異体は、配列番号1の185位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、185位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A186D又はA186E又はA186K又はA186N又はA186Q又はA186Rを含むか又はそれからなる。
【0291】
別の態様では、変異体は、配列番号1の188位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、188位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W188Cを含むか又はそれからなる。
【0292】
別の態様では、変異体は、配列番号1の189位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、189位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E189Pを含むか又はそれからなる。
【0293】
別の態様では、変異体は、配列番号1の193位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、193位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E193Iを含むか又はそれからなる。
【0294】
別の態様では、変異体は、配列番号1の194位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、194位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N194Fを含むか又はそれからなる。
【0295】
別の態様では、変異体は、配列番号1の196位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、196位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N196F又はN196Iを含むか又はそれからなる。
【0296】
別の態様では、変異体は、配列番号1の202位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、202位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F202Yを含むか又はそれからなる。
【0297】
別の態様では、変異体は、配列番号1の203位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、203位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A203Fを含むか又はそれからなる。
【0298】
別の態様では、変異体は、配列番号1の205位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、205位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L205F又はL205N又はL205Q又はL205R又はL205V又はL205Yを含むか又はそれからなる。
【0299】
別の態様では、変異体は、配列番号1の224位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、224位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T224F又はT244Yを含むか又はそれからなる。
【0300】
別の態様では、変異体は、配列番号1の225位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、225位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N225Sを含むか又はそれからなる。
【0301】
別の態様では、変異体は、配列番号1の242位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、242位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y242F又はY242Lを含むか又はそれからなる。
【0302】
別の態様では、変異体は、配列番号1の243位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、243位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S243Qを含むか又はそれからなる。
【0303】
別の態様では、変異体は、配列番号1の244位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、244位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Ser、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F244I又はF244Lを含むか又はそれからなる。
【0304】
別の態様では、変異体は、配列番号1の252位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、252位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V252Iを含むか又はそれからなる。
【0305】
別の態様では、変異体は、配列番号1の256位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、256位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T256A又はT256Dを含むか又はそれからなる。
【0306】
別の態様では、変異体は、258位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、258位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K258Vを含むか又はそれからなる。
【0307】
別の態様では、変異体は、259位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、259位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E259G又はE259Vを含むか又はそれからなる。
【0308】
別の態様では、変異体は、260位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、260位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M260D又はM260Wを含むか又はそれからなる。
【0309】
別の態様では、変異体は、261位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、261位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F261K又はF261P又はF261Sを含むか又はそれからなる。
【0310】
別の態様では、変異体は、266位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、266位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F266Yを含むか又はそれからなる。
【0311】
別の態様では、変異体は、276位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、276位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N276F又はN276W又はN276Yを含むか又はそれからなる。
【0312】
別の態様では、変異体は、279位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、279位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N279Sを含むか又はそれからなる。
【0313】
別の態様では、変異体は、280位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、280位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K280F又はK280W又はK280Yを含むか又はそれからなる。
【0314】
別の態様では、変異体は、283位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、283位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W283Nを含むか又はそれからなる。
【0315】
別の態様では、変異体は、286位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、286位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S286K又はS286Lを含むか又はそれからなる。
【0316】
別の態様では、変異体は、302位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、302位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S302T又はS302Yを含むか又はそれからなる。
【0317】
別の態様では、変異体は、303位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、303位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G303Rを含むか又はそれからなる。
【0318】
別の態様では、変異体は、315位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、315位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T315Aを含むか又はそれからなる。
【0319】
別の態様では、変異体は、320位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、320位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H320Tを含むか又はそれからなる。
【0320】
別の態様では、変異体は、321位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、321位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P321H又はP321Yを含むか又はそれからなる。
【0321】
別の態様では、変異体は、322位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、322位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M322G又はM322Yを含むか又はそれからなる。
【0322】
別の態様では、変異体は、323位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、323位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H323A又はH323N又はH323Wを含むか又はそれからなる。
【0323】
別の態様では、変異体は、346位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、346位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W346Nを含むか又はそれからなる。
【0324】
別の態様では、変異体は、354位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、354位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L354Vを含むか又はそれからなる。
【0325】
別の態様では、変異体は、359位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、359位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E359Wを含むか又はそれからなる。
【0326】
別の態様では、変異体は、360位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、360位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q360M又はQ360W又はQ360Yを含むか又はそれからなる。
【0327】
別の態様では、変異体は、361位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、361位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G361Mを含むか又はそれからなる。
【0328】
別の態様では、変異体は、362位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、362位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y362Vを含むか又はそれからなる。
【0329】
別の態様では、変異体は、365位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、365位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はTrpで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V365Iを含むか又はそれからなる。
【0330】
別の態様では、変異体は、371位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、371位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y371S又はY371Nを含むか又はそれからなる。
【0331】
別の態様では、変異体は、383位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、383位に対応する位置のアミノ酸が、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A383Dを含むか又はそれからなる。
【0332】
別の態様では、変異体は、390位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、390位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E390A又はE390Dを含むか又はそれからなる。
【0333】
別の態様では、変異体は、394位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、394位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N394W又はN394Dを含むか又はそれからなる。
【0334】
別の態様では、変異体は、395位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、395位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F395Yを含むか又はそれからなる。
【0335】
別の態様では、変異体は、405位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、405位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D405Gを含むか又はそれからなる。
【0336】
別の態様では、変異体は、409位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、409位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I409Lを含むか又はそれからなる。
【0337】
別の態様では、変異体は、414位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、414位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R414Mを含むか又はそれからなる。
【0338】
別の態様では、変異体は、420位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、420位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H420A又はH420P又はH420Q又はH420Yを含むか又はそれからなる。
【0339】
別の態様では、変異体は、422位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、422位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N422Vを含むか又はそれからなる。
【0340】
別の態様では、変異体は、427位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、427位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T427Lを含むか又はそれからなる。
【0341】
別の態様では、変異体は、455位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、455位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G455Rを含むか又はそれからなる。
【0342】
別の態様では、変異体は、457位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、457位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K457N又はK457Rを含むか又はそれからなる。
【0343】
別の態様では、変異体は、458位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、458位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P458Sを含むか又はそれからなる。
【0344】
別の態様では、変異体は、470位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、470位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N470A又はN470Mを含むか又はそれからなる。
【0345】
別の態様では、変異体は、472位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、472位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S472Rを含むか又はそれからなる。
【0346】
別の態様では、変異体は、473位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、473位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V473Cを含むか又はそれからなる。
【0347】
別の態様では、変異体は、474位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、474位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N474F又はN474Lを含むか又はそれからなる。
【0348】
別の態様では、変異体は、475位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、475位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G475E又はG475Kを含むか又はそれからなる。
【0349】
別の態様では、変異体は、476位に対応する位置に、置換を含むか又はそれからなる。別の態様では、476位に対応する位置のアミノ酸が、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換されている。別の態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G476A又はG476E又はG476Hを含むか又はそれからなる。
【0350】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475及びG476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0351】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0352】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0353】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号2と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0354】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号3と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0355】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号4と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0356】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号5と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0357】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号6と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0358】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号7と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0359】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号8と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0360】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号9と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0361】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号10と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0362】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号11と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0363】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号12と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0364】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号13と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0365】
別の態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0366】
「ペアワイズ欠失」という用語は、本明細書で使用する場合、2つの位置におけるアミノ酸の欠失を指す。この2つの位置は、互いに隣接していてもよいが、1個、2個、3個、4個、又は5個のアミノ酸によって隔てられていてもよい。
【0367】
一態様では、変異体は、親ポリペプチドのBドメイン内にペアワイズ欠失を含んでいる。
【0368】
一態様では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドのBドメイン内にペアワイズ欠失を含んでいる。
【0369】
「ペアワイズ欠失」という用語は、本明細書で使用する場合、2つの位置におけるアミノ酸の欠失を指す。この2つの位置は、互いに隣接していてもよいが、1個、2個、3個、4個、又は5個のアミノ酸によって隔てられていてもよい。
【0370】
一態様では、本発明のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*及びT182*+G183*、好ましくはR180*+S181*からなる群から選択される1つ以上の位置に欠失を含む。
【0371】
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*に対応する位置に欠失を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する、配列番号1の変異体に関する。
【0372】
従って、一実施形態では、前記α-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182及び183位に対応する2つ以上の位置に欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変とを含み、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0373】
一実施形態では、前記α-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180、S181、T182及びG183位に対応する2つ以上の位置に欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2*、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475及びG476位に対応する1つ以上の位置に改変とを含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0374】
一実施形態では、前記α-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180、S181、T182及びG183位に対応する2つ以上の位置における欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置に改変とを含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0375】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0376】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0377】
一態様では、本発明は、配列番号1のα-アミラーゼ変異体に関し、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0378】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0379】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0380】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0381】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0382】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0383】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0384】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0385】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0386】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0387】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0388】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0389】
一態様では、配列番号2の変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A
、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0390】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0391】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0392】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0393】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0394】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0395】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0396】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0397】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0398】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
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H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0399】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0400】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0401】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0402】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0403】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0404】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0405】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0406】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0407】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0408】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0409】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0410】
一態様では、配列番号4のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0411】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0412】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0413】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0414】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0415】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0416】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0417】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0418】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0419】
一態様では、配列番号5のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0420】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0421】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0422】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0423】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0424】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0425】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0426】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0427】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0428】
一態様では、配列番号6のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0429】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0430】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0431】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0432】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0433】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0434】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
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H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0435】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0436】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0437】
一態様では、配列番号7のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0438】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0439】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0440】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0441】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0442】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0443】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0444】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0445】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0446】
一態様では、配列番号8のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0447】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0448】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0449】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0450】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0451】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0452】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0453】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0454】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0455】
一態様では、配列番号9のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0456】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0457】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0458】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0459】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0460】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0461】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
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H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0462】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0463】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0464】
一態様では、配列番号10のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0465】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0466】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0467】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0468】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0469】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0470】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0471】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0472】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0473】
一態様では、配列番号11のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0474】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0475】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0476】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0477】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0478】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0479】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
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H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0480】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0481】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0482】
一態様では、配列番号12のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0483】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0484】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0485】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0486】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0487】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0488】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
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H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
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H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
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H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0489】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0490】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0491】
一態様では、配列番号13のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0492】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0493】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E1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82S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0494】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0495】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y2
42F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0496】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W
140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0497】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
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H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
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H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
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H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0498】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0499】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A位に対応する位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0500】
一態様では、配列番号14のα-アミラーゼ変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を用いてR180*及びS181*位に対応する位置に欠失と、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aとを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0501】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0502】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてE169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*及びV117G+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0503】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0504】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてG7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0505】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてA60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0506】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてF116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0507】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0508】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K及びL63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0509】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K及びW140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0510】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0511】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0512】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0513】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0514】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0515】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N422V+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0516】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0517】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0518】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0519】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0520】
一態様では、配列番号1のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0521】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてE169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*及びV117G+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0522】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0523】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてG7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0524】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてA60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0525】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてF116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0526】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0527】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K及びL63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0528】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K及びW140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0529】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0530】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0531】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0532】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0533】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0534】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0535】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0536】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0537】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0538】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0539】
一態様では、配列番号2のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0540】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてE169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*及びV117G+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0541】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0542】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてG7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0543】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてA60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0544】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてF116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0545】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0546】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K及びL63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0547】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K及びW140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0548】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0549】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0550】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0551】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0552】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0553】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0554】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0555】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0556】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0557】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0558】
一態様では、配列番号3のα-アミラーゼ変異体は、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に改変を含み、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する。
【0559】
変異体は更に、1つ以上の(例えば、いくつかの)他の位置に、1つ以上の追加の置換及び/又は欠失を含んでもよい。
【0560】
アミノ酸の変化は軽微な性質のもの、即ち、タンパク質の折り畳み及び/若しくは活性に著しい影響を及ぼすことのない保存的アミノ酸置換若しくは挿入、典型的には1~30アミノ酸の小さな欠失、アミノ末端のメチオニン残基のような小さなアミノ末端若しくはカルボキシル末端伸長、最大20~25残基の小さなリンカーペプチド、又は正味の電荷を変更することによって精製を容易にする小さな伸長、又はポリヒスチジントラクト、抗原性エピトープ又は結合ドメインなどの別の機能であってよい。
【0561】
従って、本発明において有用なα-アミラーゼ変異体は、本発明による改善された特性をもたらす1つの特定の置換のみを含んでもよいが、この変異体は、配列番号1、2又は3のアミノ酸配列と、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有するα-アミラーゼ変異体をもたらす追加の変異をなお有し得る。これらの追加の改変は、好ましくは、α-アミラーゼ変異体の改善された性質を著しく変化させるようなものでないようにする必要がある。
【0562】
保存的置換の例としては、塩基性アミノ酸(アルギニン、リシン及びヒスチジン)、酸性アミノ酸(グルタミン酸及びアスパラギン酸)、極性アミノ酸(グルタミン及びアスパラギン)、疎水性アミノ酸(ロイシン、イソロイシン及びバリン)、芳香族アミノ酸(フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン)、並びに低分子アミノ酸(グリシン、アラニン、セリン、トレオニン及びメチオニン)の群の範囲内である。一般的に比活性を変化させないアミノ酸置換は、当技術分野において公知であり、例えば、H.Neurath and R.L.Hill,1979,In,The Proteins,Academic Press,New Yorkに記載されている。一般的な置換としては、Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、及びAsp/Glyである。
【0563】
ポリペプチドの必須アミノ酸は、部位特異的突然変異誘発又はアラニン走査突然変異誘発などの、当該技術分野において公知の手順に従って同定可能である(Cunningham and Wells,1989,Science244:1081-1085)。後者の技法では、分子の活性に極めて重要なアミノ酸残基を同定するために、分子内のあらゆる残基に単一のアラニン突然変異を導入して、得られた突然変異分子をプロテアーゼ活性について検査する。Hilton et al.,1996,J.Biol.Chem.271;4699-4708も参照されたい。酵素又は他の生物相互作用の活性部位は、推定上の接触部位のアミノ酸を突然変異させると共に、核磁気共鳴、結晶学、電子回折、又は光親和性標識などの技法によって決定するように、構造を物理的に分析することによって決定することもできる。例えば、de Vos et al.,1992,Science 255;306-312;Smith et al.,1992,J.Mol.Biol.224;899-904;Wlodaver et al.,1992,FEBS Lett.309;59-64を参照されたい。
【0564】
一態様では、本発明において有用なα-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して改善された特性を有し、改善された特性は、触媒効率の向上、触媒反応速度の向上、化学安定性の向上、酸化安定性の向上、pH活性の向上、pH安定性の向上、比活性の向上、保存状態下における安定性の向上、基質結合性の向上、基質切断性の向上、基質特異性の向上、基質安定性の向上、表面特性の向上、熱活性の向上、及び熱安定性の向上からなる群から選択される。
【0565】
一実施形態では、α-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して改善された(向上した)比活性を有する。
【0566】
一実施形態では、α-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して改善された(向上した)洗浄性能を有する。
【0567】
一実施形態では、α-アミラーゼ変異体は、配列番号1、配列番号2又は配列番号3と比較して改善された(向上した)洗浄性能を有する。
【0568】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して改善された(向上した)特性を有し、前記改善された特性は、比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能であり、モデルAの洗剤組成物の前記比活性の向上である。
【0569】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して改善された(向上した)特性を有し、前記改善された特性は、比活性の向上を測定して改善された洗浄性能であり、実施例に記載されるようなマイクロスワッチアッセイ及び/又はAMSAアッセイにおけるモデルAの洗剤組成物の前記比活性の向上である。
【0570】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、前記親ポリペプチドと比較して、改善係数(IF)が>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0として測定されるような、モデルAの洗剤組成物の比活性の向上を測定して改善された洗浄性能を有する。
【0571】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、配列番号1、配列番号2又は配列番号3と比較して、改善係数(IF)が>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0として測定されるような、モデルAの洗剤組成物の比活性の向上を測定して改善された洗浄性能を有する。
【0572】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、配列番号1、配列番号2又は配列番号3と比較して、改善係数(IF)が>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0として測定されるような、モデルAの洗剤組成物の比活性の向上を測定して改善された洗浄性能を有する。
【0573】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0574】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、改善係数(IF)>1.1と測定された比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0575】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0576】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0577】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0578】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0579】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0580】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0581】
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する位置に改変を含み、前記α-アミラーゼ変異体が、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0582】
一態様では、α-アミラーゼ変異体が、親ポリペプチドと比較して、モデルAの洗剤組成物の改善係数(IF)>1.1の比活性の向上としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、前記変異体が、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
R180*+S181*
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*
T114K+R180*+S181*
E169V+R180*+S181*
R180*+S181*+W188C
W167D+R180*+S181*
W167S+R180*+S181*
W167E+R180*+S181*
W167P+R180*+S181*
R180*+S181*+E193I+H323N
R180*+S181*+A203F
W159L+R180*+S181*
W159H+R180*+S181*
K178A+R180*+S181*
A111L+R180*+S181*
G110K+R180*+S181*
A111G+R180*+S181*からなる群から選択され、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0583】
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドに関する。
【0584】
一態様では、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドは、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
【0585】
ポリヌクレオチドを単離又はクローニングするのに用いられる技法は当技術分野において公知であり、ゲノムDNA若しくはcDNA、又はこれらの組み合わせから単離することが含まれる。ゲノムDNAからポリヌクレオチドをクローニングすることは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)又は発現ライブラリーの抗体スクリーニングを用いて、共有する構造的特徴を有するクローニングしたDNAフラグメントを検出することによって実施することができる。例えば、Innis et al.,1990,PCR;A Guide to Methods and Application,Academic Press,New Yorkを参照されたい。リガーゼ連鎖反応(LCR)、ライゲーション活性化転写(LAT)、及びポリヌクレオチドベース増幅(NASBA)などの他の核酸増幅手順を使用してもよい。ポリヌクレオチドは、トリコデルマ属(Trichoderma)、レカニシリウム属(Lecanicillium)、シンプリシリウム属(Simplicillium)、アスペルギルス属(Aspergillus)、コリナスクス属(Cornyascus)、アクロフィアロホラ属(Acrophialophora)、リノクラディエラ属(Rhinocladiella)、ネマニア属(Nemania)、タラロマイセス属(Talaromyces)、コラリエラ属(Collariella)、リジドポラス属(Rigidoporous)及び/若しくはロラマイセス属(Loramyces)、又は関連微生物の株からクローニングしてもよく、従って、例えば、このポリヌクレオチドの領域をコードするポリペプチドの種の変異体であってよい。
【0586】
本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドの改変は、このポリペプチドに実質的に類似したポリペプチドを合成するのに必要となり得る。ポリペプチドに「実質的に類似した」という用語は、天然に存在しないポリペプチドの形態であることを指す。これらのポリペプチドは、天然源から単離されたポリペプチドといくつかの工学的方法で異なっていてもよく、例えば、比活性、熱安定性、至適pH等において異なる変異体であってよい。変異体は、成熟したポリペプチドのコード配列、例えば、これらの部分配列として存在するポリヌクレオチドを基準にして、及び/又はポリペプチドのアミノ酸配列に変化を生じさせることはないが、酵素を産生することが意図される宿主生物のコドン使用頻度に対応するヌクレオチド置換を導入することによって、又は異なるアミノ酸配列を生じさせる可能性のあるヌクレオチド置換を導入することによって構築してもよい。ヌクレオチド置換の一般的な記載については、例えば、Ford et al.,1991,Protein Expression and Purification 2;95-107を参照されたい。
【0587】
核酸構築物
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
【0588】
一態様では、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、ポリヌクレオチドは、好適な宿主細胞内において制御配列と適合する条件下でコード配列の発現を誘導する1つ以上の制御配列に作動可能に連結されている。
【0589】
本発明はまた、好適な宿主細胞内において制御配列と適合する条件下でコード配列の発現を誘導する1つ以上の制御配列に作動可能に連結されている、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
【0590】
ポリヌクレオチドは、変異体の発現をもたらすために、様々な方法で操作されていてもよい。ベクターに挿入する前に、発現ベクターに応じてポリヌクレオチドを操作することが望ましいか、又は必要であり得る。組み換えDNA法を利用した、ポリヌクレオチドを改変するための技法は、当該技術分野においてよく知られている。
【0591】
制御配列はプロモーター(ポリヌクレオチドを発現させるために宿主細胞によって認識されるポリヌクレオチド)であってよい。プロモーターは、変異体の発現を媒介する転写制御配列を含んでいる。プロモーターは、突然変異プロモーター、切断型プロモーター、及びハイブリッドプロモーターを含む、宿主細胞で転写活性を示す任意のポリヌクレオチドであってよく、宿主細胞に対して同相又は異種の細胞外又は細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得てもよい。
【0592】
細菌性宿主細胞内で本発明の核酸構築物の転写を誘導する好適なプロモーターの例は、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)のα-アミラーゼ遺伝子(amyQ)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)のα-アミラーゼ遺伝子(amyL)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)のペニシリナーゼ遺伝子(penP)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)のマルトース生成アミラーゼ遺伝子(amyM)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のレバンスクラーゼ遺伝子(sacB)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のxylA及びxylB遺伝子、バチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)のcryIIIA遺伝子(Agaisse and Lereclus,1994,Molecular Microbiology 13;97-107)、大腸菌(E.coli)のLacオペロン、大腸菌(E.coli)のtrcプロモーター(Egon et al.,1988,Gene 69;301-315)、ストレプトマイセス・セリカラー(Streptomyces coelicolor)のアガラーゼ遺伝子(dagA)、及び原核生物のβ-ラクタマーゼ遺伝子(Villa-Kamaroff et al.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75;3727-3731)、並びにtacプロモーター(DeBoer et al.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80;21-25)から得られるプロモーターである。更なるプロモーターは、Gilbert et al.,1980,Scientific American 242;74-94;及びSambrook et al.,1989(前掲)の“Useful proteins from recombinant bacteria”に記載されている。タンデムプロモーターの例は、国際公開第99/43835号パンフレットに開示されている。
【0593】
糸状菌宿主細胞内で本発明のポリヌクレオチドの転写を誘導するための好適なプロモーターの例は、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)のアセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)の中性α-アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)の酸安定性α-アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)又はアスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)のグルコアミラーゼ(glaA)、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKAアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のアルカリ性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のトリオースリン酸イソメラーゼ、フザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)のトリプシン様プロテアーゼ(国際公開第96/00787号パンフレット)、フザリウム・ベネナタム(Fusarium venenatum)のアミログルコシダーゼ(国際公開第00/56900号パンフレット)、フザリウム・ベネナタム(Fusarium venenatum)のDaria(国際公開第00/56900号パンフレット)、フザリウム・ベネナタム(Fusarium venenatum)のQuinn(国際公開第00/56900号パンフレット)、リゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)のリパーゼ、リゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)のアスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のβ-グルコシダーゼ、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼV、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のβ-キシロシダーゼ、及びトリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)の翻訳伸長因子、並びにNa2-tpiプロモーター(その非翻訳リーダーがアスペルギルス属(Aspergillus)のトリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーによって置換されているアスペルギルス属(Aspergillus)の中性α-アミラーゼ遺伝子由来の改変プロモーター)の遺伝子から得られるプロモーターであり、非限定的な例としては、その非翻訳リーダーがアスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)又はアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のトリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーによって置換されているアスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)の中性α-アミラーゼ遺伝子由来の改変プロモーター、並びにそれらの突然変異プロモーター、切断型プロモーター、及びハイブリッドプロモーターが挙げられる。他のプロモーターは、米国特許第6,011,147号明細書に記載されている。
【0594】
酵母菌宿主では、有用なプロモーターは、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のエノラーゼ(ENO-1)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のガラクトキナーゼ(GAL1)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のアルコール脱水素酵素/グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(ADH1、ADH2/GAP)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のトリオースリン酸イソメラーゼ(TPI)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のメタロチオネイン(CUP1)、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の3-ホスホグリセレートキナーゼの遺伝子から得られるものである。酵母菌宿主細胞に有用な他のプロモーターは、Romanos et al.,1992,Yeast 8;423-488に記載されている。
【0595】
制御配列はまた、転写を終了するために宿主細胞によって認識される転写ターミネーターであってもよい。ターミネーターは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの3’末端に作動可能に連結されている。宿主細胞内で機能的な任意のターミネーターを本発明で使用してもよい。
【0596】
細菌性宿主細胞に好ましいターミネーターは、バチルス・クラウジイ(Bacillus clausii)のアルカリ性プロテアーゼ(aprH)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)のα-アミラーゼ(amyL)、及び大腸菌(Escherichia coli)のリボソームRNA(rrnB)の遺伝子から得られるものである。
【0597】
糸状菌宿主細胞に好ましいターミネーターは、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)のアセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)のアントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のα-グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKAアミラーゼ、フザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)のトリプシン様プロテアーゼ、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のβ-グルコシダーゼ、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のエンドグルカナーゼV、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼI、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のキシラナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のβ-キシロシダーゼ、及びトリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)の翻訳伸長因子の遺伝子から得られるものである。
【0598】
酵母菌宿主細胞に好ましいターミネーターは、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のエノラーゼ、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のシトクロムC(CYC1)、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素の遺伝子から得られるものである。酵母菌宿主細胞に有用な他のターミネーターは、Romanos et al.,1992(前掲)に記載されている。
【0599】
制御配列はまた、プロモーターの下流にあり、遺伝子の発現を増加させる遺伝子のコード配列の上流にあるmRNA安定化領域であってよい。
【0600】
好適なmRNA安定化領域の例は、バチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)のcryIIIA遺伝子(国際公開第94/25612号パンフレット)及びバチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のSP82遺伝子(Hue et al.,1995,J.Bacteriol.177;3465-3471)から得られるものである。
【0601】
制御配列はまた、リーダー(宿主細胞による翻訳に重要なmRNAの非翻訳領域)であってよい。リーダーは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの5’末端に作動可能に連結されている。宿主細胞内で機能的な任意のリーダーを使用してもよい。
【0602】
糸状菌宿主細胞に好ましいリーダーは、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKAアミラーゼ及びアスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)のトリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られるものである。
【0603】
酵母菌宿主細胞に好適なリーダーは、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のエノラーゼ(ENO-1)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の3-ホスホグリセレートキナーゼ、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のα因子、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のアルコール脱水素酵素/グリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(ADH2/GAP)の遺伝子から得られるものである。
【0604】
制御配列はまた、ポリヌクレオチドの3’末端に作動可能に連結された配列であり、転写されると宿主細胞によってシグナルとして認識され、転写されたmRNAにポリアデノシン残基を付加するポリアデニル化配列であってよい。宿主細胞内で機能的な任意のポリアデニル化配列を使用してもよい。
【0605】
糸状菌宿主細胞に好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)のアントラニル酸シンターゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のα-グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKAアミラーゼ、及びフザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)のトリプシン様プロテアーゼの遺伝子から得られるものである。
【0606】
酵母菌宿主細胞に有用なポリアデニル化配列は、Guo and Sherman,1995,Mol.Cellular Biol.15;5983-5990に記載されている。
【0607】
制御配列はまた、ポリペプチドのN末端に連結され、このポリペプチドを細胞の分泌通路に誘導するシグナルペプチドをコードする、シグナルペプチドコード領域であってよい。ポリヌクレオチドのコード配列の5’末端は、ポリペプチドをコードするコード配列のセグメントによって翻訳読み枠に天然に連結されたシグナルペプチドコード配列を本質的に含んでもよい。或いは、コード配列の5’末端は、コード配列に対して異種のシグナルペプチドコード配列を含んでもよい。コード配列がシグナルペプチドコード配列を天然に含んでいない場合に、異種のシグナルペプチドコード配列が必要となり得る。或いは、異種のシグナルペプチドコード配列は、ポリペプチドの分泌を増強させるために天然のシグナルペプチドコード配列を単に置換したものであってよい。しかしながら、発現したポリペプチドを宿主細胞の分泌通路に誘導する、任意のシグナルペプチドコード配列を使用することが可能である。
【0608】
細菌性宿主細胞に効果的なシグナルペプチドコード配列は、バチルス(Bacillus) NCIB 11837のマルトース生成アミラーゼ、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)のサブチリシン、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)のβ-ラクタマーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)のα-アミラーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)の中性プロテアーゼ(nprT、nprS、nprM)、及びバチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のprsAの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。更なるシグナルペプチドは、Simonen and Palva,1993,Microbiol.Rev.57;109-137に記載されている。
【0609】
糸状菌宿主細胞に効果的なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)の中性アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のグルコアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKAアミラーゼ、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)のセルラーゼ、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)のエンドグルカナーゼV、フミコラ・ラヌギノーサ(Humicola lanuginosa)のリパーゼ、及びリゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)のアスパラギン酸プロテイナーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。
【0610】
酵母菌宿主細胞に有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のα因子、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のインベルターゼの遺伝子から得られるものである。他の有用なシグナルペプチドコード配列は、Romanos et al.,1992(前掲)に記載されている。
【0611】
制御配列はまた、ポリペプチドのN末端に位置するプロペプチドをコードするプロペプチドコード配列であってよい。得られたポリペプチドは、プロ酵素又はプロポリペプチド(又は、場合によってはチモーゲン)として公知である。プロポリペプチドは一般的に非活性であり、プロペプチドの触媒的又は自己触媒的開裂によってプロポリペプチドから活性ポリペプチドに変換され得る。プロペプチドコード配列は、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のアルカリ性プロテアーゼ(aprE)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)の中性プロテアーゼ(nprT)、ミセリオフトラ・テルモフィラ(Myceliophthora thermophila)のラッカーゼ(国際公開第95/33836号パンフレット)、リゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)のアスパラギン酸プロテイナーゼ、及びサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のα因子の遺伝子から得られるものであってよい。
【0612】
シグナルペプチド及びプロペプチド配列の両方が存在する場合、プロペプチド配列はポリペプチドのN末端に隣接して位置し、シグナルペプチド配列はプロペプチド配列のN末端に隣接して位置する。
【0613】
また、宿主細胞の増殖に対してポリペプチドの発現を調節する調節配列を追加することが望ましい場合がある。調節配列の例には、調節性化合物の存在を含む化学的又は物理的刺激に応答して遺伝子の発現を活性化又は不活性化させるようなものがある。原核生物系の調節配列としては、lac、tac、及びtrpオペレーター系が挙げられる。酵母では、ADH2系又はGAL1系を使用してもよい。糸状菌では、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のグルコアミラーゼプロモーター、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のTAKA α-アミラーゼプロモーター、及びアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のグルコアミラーゼプロモーター、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼIプロモーター、及びトリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)のセロビオヒドロラーゼIIプロモーターを使用してもよい。調節配列の他の例には、遺伝子増幅が可能となるようなものがある。真核生物系のこれらの調節配列としては、メトトレキサートの存在下で増幅されるジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、及び重金属によって増幅されるメタロチオネイン遺伝子が挙げられる。このような場合では、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、調節配列に作動可能に連結されている。
【0614】
発現ベクター
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド、プロモーター、並びに転写及び翻訳停止シグナルを含む組み換え発現ベクターに関する。1つ以上の都合のよい制限部位を含み、そのような部位で変異体をコードするポリヌクレオチドを挿入又は置換することを可能にし得る組み換え発現ベクターを作製するために、様々なヌクレオチド及び制御配列を共に連結してもよい。或いは、発現に適切なベクターにポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含む核酸構築物を挿入することによってポリヌクレオチドを発現させてもよい。発現ベクターを作製する際に、コード配列が発現に適切な制御配列に作動可能に連結されるように、コード配列をベクター内に配置する。
【0615】
一態様では、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む組み換えベクターは、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する1つ以上の位置に改変と、プロモーターと、転写及び翻訳停止シグナルを含む。1つ以上の(いくつかの)都合のよい制限部位を含み、そのような部位で変異体をコードするポリヌクレオチドを挿入又は置換することを可能にし得る組み換え発現ベクターを作製するために、様々なヌクレオチド及び制御配列を共に連結してもよい。或いは、発現に適切なベクターにポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含む核酸構築物を挿入することによってポリヌクレオチドを発現させてもよい。発現ベクターを作製する際に、コード配列が発現に適切な制御配列に作動可能に連結されるように、コード配列をベクター内に配置する。
【0616】
組み換え発現ベクターは、組み換えDNA手順を好都合に施すことができ、ポリヌクレオチドの発現をもたらすことが可能な任意のベクター(例えば、プラスミド又はウイルス)であってよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターとベクターが導入される宿主細胞との適合性に依存する。ベクターは、直鎖又は閉環状プラスミドであってよい。
【0617】
ベクターは、自己複製ベクター、即ち、その複製が染色体複製とは独立した染色体外の要素として存在するベクター、例えば、プラスミド、染色体外エレメント、微小染色体、又は人工染色体であってよい。ベクターは、確実に自己複製するための任意の手段を含み得る。或いは、ベクターは、宿主細胞に導入されるとゲノムに組み込まれ、そこに組み込まれている染色体と共に複製されるようなものであってよい。更に、単一のベクター若しくはプラスミド、又は宿主細胞のゲノムに導入される全DNA若しくはトランスポゾンを共に含む2つ以上のベクター若しくはプラスミドを使用してもよい。
【0618】
ベクターは、形質転換細胞、形質移入細胞、形質導入細胞等を容易に選択することを可能にする、1つ以上の選択マーカーを含むことが好ましい。選択マーカーは、その生成物が殺生物剤抵抗性又はウイルス抵抗性、重金属に対する抵抗性、栄養要求株に対する原栄養性等をもたらす遺伝子である。
【0619】
細菌性選択マーカーの例には、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)若しくはバチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)のdal遺伝子、又はアンピシリン耐性、クロラムフェニコール耐性、カナマイシン耐性、ネオマイシン耐性、スペクチノマイシン耐性、又はテトラサイクリン耐性などの抗生物質耐性を付与するマーカーがある。酵母菌宿主細胞に好適なマーカーとしては、ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、及びURA3が挙げられるが、これらに限定されない。糸状菌宿主細胞に使用される選択マーカーとしては、adeA(ホスホリボシルアミノイミダゾール-スクシノカルボキサミドシンターゼ)、adeB(ホスホリボシル-アミノイミダゾールシンターゼ)、amdS(アセトアミダーゼ)、argB(オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ)、bar(ホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼ)、hph(ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ)、niaD(硝酸レダクターゼ)、pyrG(オロチジン-5’-リン酸デカルボキシラーゼ)、sC(硫酸アデニリルトランスフェラーゼ)、及びtrpC(アントラニル酸シンターゼ)、並びにそれらの等価物が挙げられるが、これらに限定されない。アスペルギルス属(Aspergillus)細胞に使用するのに好ましいのは、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)又はアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のamdS及びpyrG遺伝子、並びにストレプトマイセス・ヒグロスコピクス(Streptomyces hygroscopicus)のbar遺伝子である。トリコデルマ属(Trichoderma)細胞に使用するのに好ましいのは、adeA、adeB、amdS、hph、及びpyrG遺伝子である。
【0620】
選択マーカーは、国際公開第2010/039889号パンフレットに記載されているような二重選択マーカー系であってよい。一態様では、二重選択マーカーは、hph-tk二重選択マーカー系である。
【0621】
ベクターは、好ましくは、宿主細胞のゲノムにベクターを組み込んだり、又はゲノムと独立して細胞内でベクターが自己複製したりすることを可能にするエレメントを含む。
【0622】
宿主細胞ゲノムへの組み込みのために、ベクターは、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列、又は同相組み換え若しくは非相同組み換えによってゲノムに組み込むためのベクターの任意の他のエレメントに依存し得る。或いは、ベクターは、相同組み換えによる染色体内の正確な位置における宿主細胞のゲノムへの組み込みを誘導するための追加のポリヌクレオチドを含有し得る。正確な位置での組み込みの可能性を増大させるため、組み込みエレメントは、対応する標的配列と高度な配列相同性を有する十分な数の核酸、例えば100~10,000個の塩基対、400~10,000個の塩基対、及び800~10,000個の塩基対を含有して、相同組み換えの確率を高める必要がある。組み込みエレメントは、宿主細胞のゲノム内の標的配列と同相な任意の配列であってよい。更に、組み込みエレメントは、非コード化ポリヌクレオチド、又はコード化ポリヌクレオチドであってよい。また一方では、ベクターは、非相同組み換えによって宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよい。
【0623】
自己複製のため、ベクターは、ベクターが当該宿主細胞で自己複製することを可能にする複製起点を更に含んでもよい。複製起点は、細胞内で機能する、自己複製を媒介する任意のプラスミドレプリケーターであってよい。「複製起点」又は「プラスミドレプリケーター」という用語は、プラスミド又はベクターをインビボで複製することができるポリヌクレオチドを意味する。
【0624】
細菌性複製起点の例には、大腸菌(E.coli)で複製可能なpBR322、pUC19、pACYC177、及びpACYC184プラスミド、及びバチルス属(Bacillus)で複製可能なpUB110、pE194、pTA1060、及びpAMβ1プラスミドの複製起点がある。
【0625】
酵母菌宿主細胞に使用される複製起点の例には、2ミクロンの複製起点であるARS1、ARS4、ARS1及びCEN3の組み合わせ、並びにARS4及びCEN6の組み合わせがある。
【0626】
糸状菌細胞において有用な複製起点の例には、AMA1及びANS1がある(Gems et al.,1991,Gene 98;61-67;Cullen et al.,1987,Nucleic Acids Res.15;9163-9175;国際公開第00/24883号パンフレット)。AMA1遺伝子と、この遺伝子を含むプラスミド又はベクターの構造物とを分離することは、国際公開第00/24883号パンフレットに開示される方法に従って実施することができる。
【0627】
2コピー以上の本発明のポリヌクレオチドを宿主細胞に挿入して、ポリペプチドの産生を増大させてもよい。ポリヌクレオチドのコピー数を増大させることは、配列の少なくとも1つの更なるコピーを宿主細胞ゲノムに組み込むことによって、又はポリヌクレオチドに増幅可能な選択マーカー遺伝子を含めることによって達成することができ、適切な選択剤の存在下で細胞を培養することにより、増幅されたコピーの選択マーカー遺伝子を含む細胞、従って更なるコピーのポリヌクレオチドを含む細胞を選択することができる。
【0628】
上記に記載したエレメントを連結して、本発明の組み換え発現ベクターを構築するために用いられる手順は、当業者によく知られている(例えば、Sambrook et al.,1989(前掲)を参照されたい)。
【0629】
宿主細胞
本発明はまた、本発明の変異体の生成を誘導する1つ以上の制御配列に作動可能に連結されている、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む組み換え宿主細胞に関する。ポリヌクレオチドを含む構築物又はベクターは、染色体組み込み体として、又は前述のように自己複製染色体外ベクターとして構築物又はベクターが維持されるように宿主細胞に導入される。「宿主細胞」という用語には、複製の間に発生する突然変異によって親細胞と同一ではない、親細胞のあらゆる後代が包含される。宿主細胞の選択は、変異体及びその源をコードする遺伝子にかなりの程度依存する。
【0630】
宿主細胞は、α-アミラーゼ変異体の組み換え産生に有用な任意の細胞、例えば、原核生物又は真核生物であってよい。
【0631】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、組み換え宿主細胞に対して異種である。
【0632】
いくつかの実施形態では、1つ以上の制御配列のうちの少なくとも1つが、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドに対して異種である。
【0633】
いくつかの実施形態では、組み換え宿主細胞は、少なくとも2コピー、例えば、3、4、又は5コピーの本発明のポリヌクレオチドを含む。
【0634】
宿主細胞は、本発明のポリペプチドの組み換え産生に有用な任意の微生物細胞又は植物細胞、例えば、原核細胞又は真菌細胞であってよい。
【0635】
原核生物宿主細胞は、任意のグラム陽性菌又はグラム陰性菌であってよい。グラム陽性菌としては、バチルス属(Bacillus)、クロストリジウム属(Clostridium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ゲオバチルス属(Geobacillus)、ラクトバチルス属(Lactobacillus)、ラクトコッカス属(Lactococcus)、オセアノバチルス属(Oceanobacillus)、ブドウ球菌属(Staphylococcus)、ストレプトコッカス属(Streptococcus)、及びストレプトマイセス属(Streptomyces)が挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性菌としては、カンピロバクター属(Campylobacter)、大腸菌(E.coli)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、フソバクテリウム属(Fusobacterium)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、イリオバクター属(Ilyobacter)、ナイセリア属(Neisseria)、シュードモナス属(Pseudomonas)、サルモネラ属(Salmonella)、及びウレアプラズマ属(Ureaplasma)が挙げられるが、これらに限定されない。
【0636】
細菌性宿主細胞は、バチルス・アルカロフィラス(Bacillus alkalophilus)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・ブレビ(Bacillus brevis)、バチルス・サーキュランス(Bacillus circulans)、バチルス・クラウジイ(Bacillus clausii)、バチルス・コアギュランス(Bacillus coagulans)、バチルス・フィルムス(Bacillus firmus)、バチルス・ロータス(Bacillus lautus)、バチルス・レンタス(Bacillus lentus)、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、及びバチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)細胞が挙げられるが、これらに限定されない任意のバチルス属(Bacillus)細胞であってよい。
【0637】
細菌性宿主細胞はまた、ストレプトコッカス・エキシミリス(Streptococcus equisimilis)、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streptococcus pyogenes)、ストレプトコッカス・ウベリス(Streptococcus uberis)、及びストレプトコッカス・エクイ亜種ズーエピデミカス(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)細胞が挙げられるが、これらに限定されない任意のストレプトコッカス属(Streptococcus)細胞であってよい。
【0638】
細菌性宿主細胞はまた、ストレプトマイセス・アクロモゲネス(Streptomyces achromogenes)、ストレプトマイセス・アベルミティリス(Streptomyces avermitilis)、ストレプトマイセス・セリカラー(Streptomyces coelicolor)、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、及びストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)細胞が挙げられるが、これらに限定されない任意のストレプトマイセス属(Streptomyces)細胞であってよい。
【0639】
バチルス属(Bacillus)細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換(例えば、Chang and Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.168;111-115を参照されたい)、コンピテント細胞形質転換(例えば、Young and Spizizen,1961,J.Bacteriol.81;823-829,又はDubnau and Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.56;209-221を参照されたい)、エレクトロポレーション(例えば、Shigekawa and Dower,1988,Biotechniques 6;742-751を参照されたい)、又はコンジュゲーション(例えば、Koehler and Thorne,1987,J.Bacteriol.169;5271-5278を参照されたい)によって実施してもよい。大腸菌(E.coli)細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換(例えば、Hanahan,1983,J.Mol.Biol.166;557-580を参照されたい)、又はエレクトロポレーション(例えば、Dower et al.,1988,Nucleic Acids Res.16;6127-6145を参照されたい)によって実施してもよい。ストレプトマイセス属(Streptomyces)細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換、エレクトロポレーション(例えば、Gong et al.,2004,Folia Microbiol.(Praha)49;399-405を参照されたい)、コンジュゲーション(例えば、Mazodier et al.,1989,J.Bacteriol.171;3583-3585を参照されたい)、又は形質導入(例えば、Burke et al.,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98;6289-6294を参照されたい)によって実施してもよい。シュードモナス属(Pseudomonas)細胞へのDNAの導入は、エレクトロポレーション(例えば、Choi et al.,2006,J.Microbiol.Methods 64;391-397を参照されたい)、又はコンジュゲーション(例えば、Pinedo and Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.71;51-57を参照されたい)によって実施してもよい。ストレプトコッカス属(Streptococcus)細胞へのDNAの導入は、天然コンピテンス(例えば、Perry and Kuramitsu,1981,Infect.Immun.32;1295-1297を参照されたい)、プロトプラスト形質転換(例えば、Catt and Jollick,1991,Microbios 68;189-207を参照されたい)、エレクトロポレーション(例えば、Buckley et al.,1999,Appl.Environ.Microbiol.65;3800-3804を参照されたい)、又はコンジュゲーション(例えば、Clewell,1981,Microbiol.Rev.45;409-436を参照されたい)によって実施してもよい。しかしながら、宿主細胞にDNAを導入するための当該技術分野において公知のあらゆる方法を使用することができる。
【0640】
宿主細胞は、真菌細胞であってよい。本明細書で使用する「真菌」としては、子嚢菌門(Ascomycota)、担子菌門(Basidiomycota)、ツボカビ門(Chytridiomycota)、及び接合菌門(Zygomycota)、並びに卵菌(Oomycota)及び全ての栄養胞子形成菌(Hawksworth et al.,In,Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi,8th edition,1995,CAB International,University Press,Cambridge,UKで定義される)が挙げられる。
【0641】
真菌宿主細胞は、酵母細胞であってよい。本明細書で使用する「酵母」としては、有子嚢胞子酵母(エンドミセス目(Endomycetales))、担子菌酵母、及び不完全菌類に属する酵母(分芽菌(Blastomycetes))が挙げられる。酵母の分類は将来変更される場合があるため、本発明の目的上、酵母は、Biology and Activities of Yeast(Skinner,Passmore,and Davenport,editors,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9,1980)に記載される通りに定義するものとする。
【0642】
酵母菌宿主細胞は、クルイベロマイセス・ラクティス(Kluyveromyces lactis)、サッカロマイセス・カールスベルゲンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロマイセス・ジアスタティクス(Saccharomyces diastaticus)、サッカロマイセス・ドウグラシイ(Saccharomyces douglasii)、サッカロマイセス・クルイベリ(Saccharomyces kluyveri)、サッカロマイセス・ノルベンシス(Saccharomyces norbensis)、サッカロマイセス・オビホルミス(Saccharomyces oviformis)、又はヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)細胞などのカンジダ属(Candida)、ハンゼヌラ属(Hansenula)、クリベロマイセス属(Kluyveromyces)、ピキア属(Pichia)、サッカロマイセス属(Saccharomyces)、シゾサッカロマイセス属(Schizosaccharomyces)、又はヤロウイア属(Yarrowia)細胞であってよい。
【0643】
真菌宿主細胞は、糸状菌細胞であってよい。「糸状菌」としては、真菌亜門(Eumycota)及び卵菌亜門(Oomycota)の全ての真菌形態が挙げられる(Hawksworth et al.,1995(前掲)に定義される)。糸状菌は、一般的にキチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、及び他の複合多糖で構成される菌糸体壁を特徴とする。栄養増殖は菌糸伸長によるものであり、炭素異化は偏性好気性である。対照的に、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)などの酵母による栄養増殖は、単細胞性葉状体の出芽によるものであり、炭素異化は発酵であり得る。
【0644】
糸状菌宿主細胞は、アクレモニウム属(Acremonium)、アスペルギルス属(Aspergillus)、オーレオバシディウム属(Aureobasidium)、ブエルカンデラ属(Bjerkandera)、セリポリオプシス属(Ceriporiopsis)、クリソスポリウム属(Chrysosporium)、ヒトヨタケ属(Coprinus)、カワラタケ属(Coriolus)、クリプトコッカス属(Cryptococcus)、フィロバシディウム属(Filibasidium)、フザリウム属(Fusarium)、フミコラ属(Humicola)、マグナポルテ属(Magnaporthe)、ムコール属(Mucor)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、ネオカリマスティクス属(Neocallimastix)、ニューロスポラ属(Neurospora)、ペシロマイセス属(Paecilomyces)、ペニシリウム属(Penicillium)、ファネロカエテ属(Phanerochaete)、シワウロコタケ属(Phlebia)、ピロマイセス属(Piromyces)、ヒラタケ属(Pleurotus)、スエヒロタケ属(Schizophyllum)、タラロマイセス属(Talaromyces)、サーモアスカス属(Thermoascus)、チエラビア属(Thielavia)、トリポクラディウム属(Tolypocladium)、ホウロクタケ属(Trametes)、又はトリコデルマ(Trichoderma)細胞であってよい。
【0645】
例えば、糸状菌宿主細胞は、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・フォエティダス(Aspergillus foetidus)、アスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)、アスペルギルス・ジャポニクス(Aspergillus japonicus)、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)、ブエルカンデラ・アズスタ(Bjerkandera adusta)、セリポリオプシス・アネイリナ(Ceriporiopsis aneirina)、セリポリオプシス・カレギエア(Ceriporiopsis caregiea)、セリポリオプシス・ギルベセンス(Ceriporiopsis gilvescens)、セリポリオプシス・パノシンタ(Ceriporiopsis pannocinta)、セリポリオプシス・リブロサ(Ceriporiopsis rivulosa)、セリポリオプシス・スブルファ(Ceriporiopsis subrufa)、セリポリオプシス・サブバーミスポラ(Ceriporiopsis subvermispora)、クリソスポリウム・イノプス(Chrysosporium inops)、クリソスポリウム・ケラティノフィラム(Chrysosporium keratinophilum)、クリソスポリウム・ルクノウエンセ(Chrysosporium lucknowense)、クリソスポリウム・メルダリウム(Chrysosporium merdarium)、クリソスポリウム・パンニコラ(Chrysosporium pannicola)、クリソスポリウム・クイーンスランジクム(Chrysosporium queenslandicum)、クリソスポリウム・トロピクム(Chrysosporium tropicum)、クリソスポリウム・ゾナツム(Chrysosporium zonatum)、コプリヌス・シネレウス(Coprinus cinereus)、コリオルス・ヒルスツス(Coriolus hirsutus)、フザリウム・バクテリジオイデス(Fusarium bactridioides)、フザリウム・セレアリス(Fusarium cerealis)、フザリウム・クロークウェレンス(Fusarium crookwellense)、フザリウム・クルモルム(Fusarium culmorum)、フザリウム・グラミネアラム(Fusarium graminearum)、フザリウム・グラミヌム(Fusarium graminum)、フザリウム・ヘテロスポルム(Fusarium heterosporum)、フザリウム・ネグンディ(Fusarium negundi)、フザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)、フザリウム・レチクランツム(Fusarium reticulatum)、フザリウム・ロゼウム(Fusarium roseum)、フザリウム・サムブシヌム(Fusarium sambucinum)、フザリウム・サルコクロウム(Fusarium sarcochroum)、フザリウム・スポロトリキオイデス(Fusarium sporotrichioides)、フザリウム・スルフレウム(Fusarium sulphureum)、フザリウム・トルロスム(Fusarium torulosum)、フザリウム・トリコテシオイデス(Fusarium trichothecioides)、フザリウム・ベネナタム(Fusarium venenatum)、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)、フミコラ・ラヌギノーサ(Humicola lanuginosa)、ムコール・ミエヘイ(Mucor miehei)、ミセリオフトラ・テルモフィラ(Myceliophthora thermophila)、ニューロスポラ・クラッサ(Neurospora crassa)、ペニシリウム・プルプロゲヌム(Penicillium purpurogenum)、ファネロカエテ・クリソスポリウム(Phanerochaete chrysosporium)、フレビア・ラジアタ(Phlebia radiata)、プレウロツス・エリンギイ(Pleurotus eryngii)、タラロマイセス・エメルソニイ(Talaromyces emersonii)、チエラビア・テレストリス(Thielavia terrestris)、トラメテス・ビロサ(Trametes villosa)、トラメテス・ベルシコロル(Trametes versicolor)、トリコデルマ・ハルジアヌム(Trichoderma harzianum)、トリコデルマ・コニンギイ(Trichoderma koningii)、トリコデルマ・ロンギブラキアタム(Trichoderma longibrachiatum)、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)、又はトリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viride)細胞であってよい。
【0646】
真菌細胞は、プロトプラスト形成、プロトプラスト形質転換、及び細胞壁の再生に関与するプロセスによって、それ自体公知の方法で形質転換してもよい。アスペルギルス属(Aspergillus)及びトリコデルマ属(Trichoderma)宿主細胞の形質転換に好適な手順は、欧州特許第238023号明細書、Yelton et al.,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81;1470-1474、及びChristensen et al.,1988,Bio/Technology 6;1419-1422に記載されている。フザリウム属(Fusarium)種を形質転換するのに好適な方法は、Malardier et al.,1989,Gene 78;147-156及び国際公開第96/00787号パンフレットに記載されている。酵母は、Becker and Guarente,In Abelson,J.N.and Simon,M.I.,editors,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology,Methods in Enzymology,Volume 194,pp 182-187,Academic Press,Inc.,New York;Ito et al.,1983,J.Bacteriol.153;163;及びHinnen et al.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75;1920に記載される手順を用いて形質転換してもよい。
【0647】
α-アミラーゼの産生方法
変異体は、(a)本発明の宿主細胞を変異体の発現に好適な条件下で培養することと、(b)変異体を回収することとを含む方法によって産生してもよい。
【0648】
一態様では、α-アミラーゼ変異体を得る方法は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476位に対応する1つ以上の位置における改変を親α-アミラーゼに導入することであって、変異体がα-アミラーゼ活性を有する、導入することと、任意選択により変異体を回収することとを含む。
【0649】
宿主細胞は、当該技術分野において公知の方法を使用して、ハイブリッド又は変異体を産生するのに好適な培養液中で培養される。例えば、細胞をフラスコ振盪培養によって培養してもよく、又はポリペプチドが発現及び/若しくは単離することが可能となる条件下の好適な培地中で実施される、実験室用発酵槽若しくは工業用発酵槽内での小規模若しくは大規模発酵(連続発酵、回分発酵、流加発酵、若しくは固形発酵を含む)によって培養してもよい。培養は、当技術分野において公知の手順を使用して、炭素源及び窒素源、並びに無機塩を含む好適な培養液中で行われる。好適な培地は、商業的供給者から入手可能であるか、又は公開された組成(例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログ)に従って調製してもよい。ハイブリッド又は変異体が培養液に分泌される場合は、ハイブリッド又は変異体を培地から直接回収することができる。ハイブリッド又は変異体が分泌されない場合は、細胞溶解物から回収することができる。
【0650】
ハイブリッド又は変異体は、ハイブリッド又は変異体に特定の当該技術分野において公知の方法を使用して検出してもよい。これらの検出法には、特異抗体の使用、酵素生成物の形成、又は酵素基質の消失が含まれ得る。例えば、酵素アッセイを使用して、ハイブリッド又は変異体の活性を測定してもよい。
【0651】
代替的な態様では、ハイブリッド又は変異体を回収するのではなく、ハイブリッド又は変異体を発現する本明細書に記載されるような宿主細胞を、ハイブリッド又は変異体の供給源として使用する。
【0652】
一態様では、α-アミラーゼを有するポリペプチドの変異体の洗浄性能を改善する方法であって、前記変異体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するか、又はそれと少なくとも60%の配列相同性を有し、前記方法は、以下のステップ:(a)α-アミラーゼ活性を有するポリペプチド内の2つ、3つ、又は4つの位置における置換及び/又は欠失であって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182、及び183位に対応する位置である、置換及び/又は欠失と、(b)番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475及びG476位に対応する1つ以上の位置における改変とを含み、前記変異体は、α-アミラーゼ活性及び前記ポリペプチドと比較して改善された(向上した)洗浄性能を有する。
【0653】
α-アミラーゼ変異体粒剤
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体を含む酵素粒剤/粒子に関する。一実施形態では、粒剤はコアを含み、任意選択によりコアを囲む1つ以上のコーティング(外層)を含む。
【0654】
コアは、20~2000μm、特に50~1500μm、100~1500μm又は250~1200μmの同等の球径(容積ベースの平均粒径)として測定される直径を有してもよい。
【0655】
一実施形態では、コアは、1つ以上の本発明のα-アミラーゼ変異体を含む。一実施形態では、コアは、本発明のα-アミラーゼ変異体を有する1つ以上のポリペプチドを含む。一実施形態では、コアは、α-アミラーゼ変異体を有する1つ以上のポリペプチド及び/又は本発明のα-アミラーゼ変異体を有する1つ以上のポリペプチドを含む。
【0656】
コアは、フィラー、繊維材料(セルロース又は合成繊維)、安定化剤、可溶化剤、懸濁剤、粘度調整剤、ライトスフィア、可塑剤、塩、潤滑剤及び芳香剤などの追加の材料を含み得る。
【0657】
コアは、合成ポリマー、ワックス、脂肪、又は炭水化物などの結合剤を含み得る。
【0658】
コアは、多価カチオンの塩、還元剤、酸化防止剤、過酸化物分解触媒、及び/又は酸性緩衝液成分を、典型的には均一のブレンドとして含み得る。
【0659】
コアは、酵素をその中に吸収した、又は、例えば流動層コーティングによって表面に塗布された不活性粒子を含み得る。
【0660】
コアは、20~2000μm、特に50~1500μm、100~1500μm又は250~1200μmの直径を有してもよい。
【0661】
コアは、例えば、保存安定性を改善するため、取り扱い中の発塵性を低減するため、又は粒剤を着色するために、少なくとも1つのコーティングによって囲まれていてもよい。任意選択のコーティングとしては、塩コーティング、又は他の適切なコーティング材料、例えばポリエチレングリコール(PEG)、メチルヒドロキシ-プロピルセルロース(MHPC)及びポリビニルアルコール(PVA)を挙げることができる。
【0662】
コーティングは、コアの少なくとも0.1重量%、例えば、少なくとも0.5重量%、少なくとも1重量%、少なくとも5重量%、少なくとも10重量%、又は少なくとも15重量%の量で塗布してもよい。量は、最大で100%、70%、50%、40%又は30%であってよい。
【0663】
コーティングは、好ましくは少なくとも0.1μm、特に少なくとも0.5μm、少なくとも1μm、又は少なくとも5μmの厚さである。いくつかの実施形態では、コーティングの厚さは100μm未満、例えば60μm未満、又は40μm未満である。
【0664】
コーティングは、実質的な連続層を形成することによってコア単位を封入しなければならない。実質的な連続層とは、封入/包囲されるコア単位にコーティングされていない領域がほとんどないような、穴がほとんどないコーティングであると理解すべきである。層又はコーティングは、特に厚さが均一でなければならない。
【0665】
コーティングは更に、当技術分野において公知の他の材料、例えば、二酸化チタン、カオリン、炭酸カルシウム、又はタルクなどのフィラー、固着防止剤、顔料、染料、可塑剤、及び/又は結合剤を含むことができる。
【0666】
塩コーティングには、少なくとも60重量%、少なくとも65重量%、少なくとも70重量%、少なくとも75重量%、少なくとも80重量%、少なくとも85重量%、少なくとも90重量%、少なくとも95重量%又は少なくとも99重量%の塩が含まれていてもよい。
【0667】
許容可能な保護をもたらすために、塩コーティングは、好ましくは少なくとも0.1μm、例えば、少なくとも0.5μm、少なくとも1μm、少なくとも2μm、少なくとも4μm、少なくとも5μm、又は少なくとも8μmの厚さである。特定の実施形態では、塩コーティングの厚さは100μm未満、例えば60μm未満、又は40μm未満である。
【0668】
塩は、塩が完全に溶解している塩溶液から添加してもよいし、又は微粒子が50μm以下、例えば10μm以下、若しくは5μm以下の塩懸濁液から添加してもよい。
【0669】
塩コーティングは、単一の塩を含んでもよく、又は2つ以上の塩の混合物を含んでもよい。塩は水溶性であってもよく、特に、20℃の水100g中に少なくとも0.1g、好ましくは水100g当たり少なくとも0.5g、例えば、水100g当たり少なくとも1g、例えば、水100g当たり少なくとも5gの溶解度を有する。
【0670】
塩は、無機塩、例えば、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、塩化物塩若しくは炭酸塩の塩、又はクエン酸塩、マロン酸塩若しくは酢酸塩などの単純有機酸(10個以下の炭素原子、例えば、6個以下の炭素原子)の塩であってよい。これらの塩におけるカチオンの例としては、アルカリ若しくは土類アルカリ金属イオン、アンモニウムイオン、又はナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛若しくはアルミニウムなどの第一遷移系列の金属イオンがある。アニオンの例としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩、次亜リン酸塩、ピロリン酸二水素塩、四ホウ酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、メタケイ酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、酪酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩又はグルコン酸塩が挙げられる。特に、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、塩化物塩若しくは炭酸塩のアルカリ若しくは土類アルカリ金属塩、又はクエン酸塩、マロン酸塩若しくは酢酸塩などの単純有機酸の塩を使用してもよい。
【0671】
コーティングの塩は、20℃で60超、特に70%超、80%超又は85%超の一定の水分を有してもよく、又はこのような塩(例えば無水物)の別の水和物形態であってよい。塩コーティングは、国際公開第00/01793号パンフレット又は国際公開第2006/034710号パンフレットに記載されるようなものであってよい。
【0672】
好適な塩の具体的な例は、NaCl(CH20℃=76%)、NaCO(CH20℃=92%)、NaNO(CH20℃=73%)、NaHPO(CH25℃=95%)、NaPO(CH25℃=92%)、NHCl(CH20℃=79.5%)、(NH)2HPO(CH20℃=93、0%)、NHPO(CH20℃=93.1%)、(NHSO(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、KHPO(CH20℃=92%)、KHPO(CH20℃=96.5%)、KNO(CH20℃=93.5%)、NaSO(CH20℃=93%)、KSO(CH20℃=98%)、KHSO(CH20℃=86%)、MgSO(CH20℃=90%)、ZnSO(CH20℃=90%)及びクエン酸ナトリウム(CH25℃=86%)である。その他の例としては、NaHPO、(NH)HPO、CuSO、Mg(NO及び酢酸マグネシウムが挙げられる。
【0673】
塩は無水形態であってもよく、又は水和塩、即ち、国際公開第99/32595号パンフレットに記載されているような、結合水が結晶化した結晶性の塩水和物であってもよい。特定の例としては、無水硫酸ナトリウム(NaSO)、無水硫酸マグネシウム(MgSO)、硫酸マグネシウム七水和物(MgSO・7HO)、硫酸亜鉛七水和物(ZnSO.7HO)、リン酸ナトリウム二塩基性七水和物(NaHPO・7HO)、硝酸マグネシウム六水和物(Mg(NO(6HO))、クエン酸ナトリウム二水和物及び酢酸マグネシウム四水和物が挙げられる。
【0674】
塩は、塩の溶液として、例えば流動層を用いて塗布されることが好ましい。
【0675】
コーティング材料は、ワックスコーティング材料及び皮膜形成コーティング材料であってよい。ワックスコーティング材料の例には、平均モル重量が1000~20000のポリ(エチレンオキシド)生成物(ポリエチレングリコール、PEG)、16~50のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール、アルコールが12~20個の炭素原子を含有し、15~80のエチレンオキシド単位が存在するエトキシ化脂肪族アルコール、脂肪族アルコール、脂肪酸、並びに脂肪酸のモノ及びジ及びトリグリセリドがある。流動層技術によって塗布するのに好適な皮膜形成コーティング材料の例は、GB1483591に示されている。
【0676】
粒剤は、任意選択により1つ以上の追加のコーティングを有してもよい。好適なコーティング材料の例には、ポリエチレングリコール(PEG)、メチルヒドロキシ-プロピルセルロース(MHPC)及びポリビニルアルコール(PVA)がある。多層コーティングの酵素粒剤の例は、国際公開第93/07263号パンフレット及び国際公開第97/23606号パンフレットに記載されている。
【0677】
コアは、原料のブレンドを造粒することによって、例えば、結晶化、沈殿、パンコーティング、流動層コーティング、流動層凝集、回転霧化、押出成形、プリル化、球状化、サイズリダクション法、ドラム造粒、及び/又は高剪断造粒などの造粒技術を含む方法によって調製することができる。
【0678】
コアの調製方法は、Handbook of Powder Technology;Particle size enlargement by C.E.Capes;Volume 1;1980;Elsevierに見出すことができる。調製方法としては、例えば以下の公知の飼料及び粒剤配合技術が挙げられる。
(a)液体の酵素含有溶液を噴霧乾燥塔内で霧状にして小滴を形成し、これを乾燥塔を通過する間に乾燥させて酵素含有微粒子物質を形成する、噴霧乾燥した生成物。このようにして微小粒子を生成することができる(Michael S.Showell(editor);Powdered detergents;Surfactant Science Series;1998;vol.71;page 140-142;Marcel Dekker)。
(b)事前に形成した不活性コア粒子の周りに酵素を層としてコーティングし、典型的には事前に形成したコア粒子を流動化する流動層装置内で酵素含有溶液を霧状にし、酵素含有溶液をコア粒子に付着させて乾燥し、コア粒子の表面上に乾燥した酵素の層が残される、積層体。有用な所望のサイズのコア粒子を見出すことが可能であれば、このようにして所望のサイズの粒子を得ることができる。このタイプの生成物は、例えば、国際公開第97/23606号パンフレットに記載されている。
(c)コアの周りに酵素を層としてコーティングするのではなく、酵素がコアの表面上及び/又はその中に吸収される、吸収されたコア粒子。このようなプロセスは、国際公開第97/39116号パンフレットに記載されている。
(d)酵素含有ペーストをプレスしてペレットにするか、又は圧力下で小さな開口部を通して押出成形して粒子になるように切断し、続いてこれを乾燥させる、押出成形又はペレット化された生成物。そのような粒子は通常、押出成形の開口部が作られる材料(通常は穿孔のあるプレート)が、押出成形の開口部にわたって許容圧力降下を制限するため、かなり大きなサイズを有する。また、小さな開口部を用いる場合、非常に高い押出成形圧力によって酵素ペースト内で熱の発生が増大するが、これは酵素に有害なものである(Michael S.Showell(editor);Powdered detergents;Surfactant Science Series;1998;vol.71;pages 140-142;Marcel Dekker)。
(e)酵素含有粉末を溶融ワックスに懸濁させ、この懸濁剤を、例えば回転ディスクアトマイザーで冷却チャンバーに噴霧し、冷却チャンバーで液滴を急速に固体化させる、プリル化生成物(Michael S.Showell(editor);Powdered detergents;Surfactant Science Series;1998;vol.71;page 140-142;Marcel Dekker)。得られた生成物は、酵素がその表面に濃縮されているのではなく、不活性材料の全体にわたって均一に分布したものである。米国特許第4,016,040号明細書及び同第4,713,245号明細書では、この技術について記載している。
(f)従来の造粒成分の乾燥粉末組成物に、酵素含有液体が加えられる、ミキサー造粒生成物。液体及び粉末を好適な比率で混合し、液体の水分が乾燥粉末に吸収されると、乾燥粉末の成分が付着して凝集を始め、粒子が構築されて酵素を含む顆粒が形成される。このようなプロセスは、米国特許第4,106,991号明細書、並びに関連文献である欧州特許第170360号明細書、欧州特許第304332号明細書、欧州特許第304331号明細書、国際公開第90/09440号パンフレット及び国際公開第90/09428号パンフレットに記載されている。このプロセスの特定の生成において、造粒機として様々な高剪断ミキサーを使用することができる。いわゆるT顆粒を生成するために、酵素、フィラー及び結合剤等からなる顆粒をセルロース繊維と混合して粒子を強化する。強化した粒子はより頑強となり、酵素の粉塵を放出することが少なくなる。
(g)酵素を含有するより大きな粒子、ペレット、錠剤、ブリケット等を粉砕又は破砕することによってコアを生成する、サイズリダクション。粉砕又は破砕された生成物をふるいにかけることによって、所望のコア粒子画分が得られる。大型及び小型の粒子は再利用することができる。サイズリダクションは、Martin Rhodes(editor);Principles of Powder Technology;1990;Chapter 10;John Wiley & Sonsに記載されている。
(h)流動層造粒。流動層造粒は、気流中に微粒子を懸濁させ、ノズルによって流動化粒子に液体を噴霧することを含むものである。噴霧滴に当たった粒子は、濡れて粘着性になる。粘着性粒子が他の粒子に衝突してそれらが付着し、粒剤が形成される。
(i)流動層乾燥機などの乾燥をコアに施してもよい。当業者は、飼料又は酵素業界で粒剤を乾燥させる他の公知の方法を使用することができる。25~90℃の生成物温度で乾燥を行うことが好ましい。いくつかの酵素では、酵素を含むコアが、塩でコーティングする前に少量の水を含有していることが重要となる。過剰な水を除去する前に感水性酵素を塩でコーティングする場合は、水がコア内に閉じ込められ、酵素の活性に悪い影響を与える可能性がある。乾燥後、コアは0.1~10%重量/重量の水を含有していることが好ましい。
【0679】
非粉塵性の顆粒は、例えば、米国特許第4,106,991号明細書及び同第4,661,452号明細書に開示されているように生成してもよく、任意選択により当該技術分野において公知の方法でコーティングしてもよい。
【0680】
顆粒は更に、1つ以上の追加の酵素を含んでもよい。次いで、各酵素がより多くの粒剤に存在することとなり、酵素がより一様に分布することが確保され、更に異なる酵素が粒径の違いによって物理的に分離することが低減される。多酵素共顆粒の製造方法は、ip.com disclosure IPCOM000200739Dに開示されている。
【0681】
共顆粒を使用することによって酵素を形成する別の例は、国際公開第2013/188331号パンフレットに開示されている。
【0682】
本発明はまた、欧州特許第238,216号明細書に開示されている方法に従って調製される、保護された酵素に関する。
【0683】
一実施形態では、粒剤は、1つ以上の追加の酵素、例えば、ヒドロラーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、リアーゼ、オキシドレダクターゼ、及びトランスフェラーゼを更に含む。1つ以上の追加の酵素は、アセチルキシランエステラーゼ、アシルグリセロールリパーゼ、アミラーゼ、α-アミラーゼ、β-アミラーゼ、アラビノフラノシダーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、フェルロイルエステラーゼ、ガラクタナーゼ、α-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、β-グルカナーゼ、β-グルコシダーゼ、リゾホスホリパーゼ、リゾチーム、α-マンノシダーゼ、β-マンノシダーゼ(マンナナーゼ)、フィターゼ、ホスホリパーゼA1、ホスホリパーゼA2、ホスホリパーゼD、プロテアーゼ、プルラナーゼ、ペクチンエステラーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、キシラナーゼ、β-キシロシダーゼ又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることが好ましい。
【0684】
発酵ブロス配合物又は細胞組成物
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体を含む発酵ブロス配合物又は細胞組成物に関する。発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、例えば、細胞(目的のポリペプチドを産生するのに使用される、本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を含有する宿主細胞を含む)、細胞片、バイオマス、発酵培地及び/又は発酵生成物などの、発酵プロセスに使用される追加の成分を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、有機酸を含有する細胞死滅全ブロス、死滅細胞及び/又は細胞片、並びに培地である。
【0685】
本明細書で使用する「発酵ブロス」という用語は、回収及び/又は精製を全く行わないか又は最小限で行う、細胞の発酵によって生成された調製物を指す。例えば、発酵ブロスは、微生物の培養液が飽和するまで増殖したときに生成され、タンパク質を合成(例えば、宿主細胞による酵素を発現)し、細胞培養培地に分泌することができるように、炭素制限条件下でインキュベートされる。発酵ブロスは、発酵の最後に得られる発酵物質の未分画又は分画された内容物を含み得る。典型的には、発酵ブロスは未分画であり、例えば遠心分離によって微生物細胞(例えば、糸状菌細胞)が除去された後に存在する、使用済み培地及び細胞片を含んでいる。いくつかの実施形態では、発酵ブロスは、使用済み細胞培養培地、細胞外酵素、並びに生存及び/又は非生存微生物細胞を含有する。
【0686】
いくつかの実施形態では、発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、少なくとも1~5個の炭素の有機酸を含む第1の有機酸成分及び/又はその塩、並びに少なくとも1~6個以上の炭素の有機酸を含む第2の有機酸成分及び/又はその塩を含む。いくつかの実施形態では、第1の有機酸成分は、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、それらの塩、又は前述の2つ以上の混合物、及び第2の有機酸成分は、安息香酸、シクロヘキサンカルボン酸、4-メチル吉草酸、フェニル酢酸、それらの塩、又は前述の2つ以上の混合物である。
【0687】
一態様では、組成物は有機酸を含有し、任意選択により更に死滅細胞及び/又は細胞片を含有する。いくつかの実施形態では、死滅細胞及び/又は細胞片は、これらの成分を含まない組成物を得るために、細胞死滅全ブロスから除去される。
【0688】
発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、ソルビトール、塩化ナトリウム、ソルビン酸カリウム、及び当該技術分野において公知の他のものが挙げられるが、これらに限定されない防腐剤及び/又は抗菌(例えば、静菌)剤を更に含み得る。
【0689】
細胞死滅全ブロス又は組成物は、発酵の最後に得られる発酵物質の未分画の内容物を含み得る。典型的には、細胞死滅全ブロス又は組成物は、使用済み培地と、微生物細胞(例えば、糸状菌細胞)が飽和するまで増殖した後に存在する細胞片とを含み、タンパク質を合成することができるように炭素制限条件下でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物は、使用済み細胞培養培地、細胞外酵素、及び死滅した糸状菌細胞を含有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物に存在する微生物細胞を、当該技術分野において公知の方法を使用して透過処理及び/又は溶解させることができる。
【0690】
本明細書で記載されるような全ブロス又は細胞組成物は、典型的には液体であるが、死滅細胞、細胞片、培地成分、及び/又は不溶性酵素などの不溶性成分が含まれていてもよい。いくつかの実施形態では、不溶性成分を除去して、清澄化した液体組成物を得てもよい。
【0691】
本発明の全ブロス配合物及び細胞組成物は、国際公開第90/15861号パンフレット又は国際公開第2010/096673号パンフレットに記載されている方法によって生成してもよい。
【0692】
洗浄組成物
本発明の洗浄組成物は、好ましくは、空気ケア、カーケア、食器洗浄、洗濯物の洗浄、ケア(コンディショニング及び/又は柔軟化)、洗濯及びすすぎ用添加剤、硬質表面洗浄及び/又はトリートメント、並びに消費者又は業務用途の他のクリーニング用の特許請求される組成物に関連する生成物及び/又は方法、及び/又はその使用に関する。好ましくは、組成物は、洗濯洗剤、又は食器洗浄組成物などの硬質表面洗浄組成物を含む。本発明の組成物は、固体(例えば、バー、錠剤、粉末、粒剤)、液体、ゲル及び/若しくはペーストであってよく、又はシート形態であってよい。好ましい形態は単位用量であり、錠剤、シート、又は好ましくは液体及び/若しくは固体組成物を含むパウチであってよい。多区画パウチが好ましい。組成物は、粉末形態の汎用「重質」洗浄剤、ペースト形態の汎用洗浄剤、液体タイプの重質洗浄剤、液体高級布地用洗浄剤、手洗い用食器洗浄剤、軽質食器洗浄剤、高発泡性タイプの洗浄剤、機械用食器洗浄剤であってよい。食器洗浄組成物は、液体、ゲル又は粉末形態であってよく、錠剤又はパウチなどの単位用量形態であってよく、好ましくはメインの洗浄組成物であっても、又はリンス補助型であってもよい。組成物はまた、単位用量パッケージになっていてもよく、当該技術分野において公知のもの、並びに水溶性、水不溶性、及び/又は透水性のものが含まれる。液体洗剤は水性であり、典型的には最大70%の水及び0~30%の有機溶媒を含有してもよく、又は非水性であってもよく、又は0.5g/L超の洗剤組成物を含有する溶液であってもよい。
【0693】
本発明の組成物は、例えば、汚れた布地の前処理に好適な洗濯添加物組成物、及び布地柔軟剤組成物に添加されるリンスを含む、手洗い用又は機械用洗濯洗剤組成物として配合されてもよく、又は一般の家庭用硬質表面洗浄作業に使用される洗剤組成物として配合されてもよく、手洗い用又は機械用食器洗浄作業のために配合されてもよい。
【0694】
好ましい単位用量組成物は、固体(好ましくは粉末形態)、若しくは液体又はこれらの組み合わせを含み、好ましくは多区画単位用量である。特に好ましいのは、パウチの形態で、任意選択により多成分パウチの形態で水溶性材料内に封入された液体洗剤を含む、単位用量形態である。好ましい単位用量は、任意選択により単位用量形態の液体洗濯洗剤/ケア組成物を含む。
【0695】
本発明の洗浄組成物は、ソープバー、好ましくは洗濯ソープバーの形態であってよく、手洗い用の洗濯物、布地及び/又は織物に使用してもよい。洗濯ソープバーという用語には、洗濯バー、ソープバー、コンボバー、シンデットバー及び洗剤バーが含まれる。
【0696】
洗浄組成物は、ハイブリッドポリペプチド又はアミラーゼ変異酵素に加えて、洗浄/洗剤補助剤を含む。本明細書における洗浄補助剤という表現は、典型的には2つ以上の洗浄補助剤の組み合わせが含まれる。典型的には、洗浄補助剤は、0.0001~99.9999重量%、好ましくは10~99.999重量%、好ましくは少なくとも30重量%又は40重量%又は50重量%の洗浄補助剤の量で組成物中に存在することとなる。好適な洗浄補助剤には、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白触媒、着色剤、漂白促進剤、キレート剤、染料移行剤、付着助剤、分散剤、追加の酵素、及び酵素安定剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、蛍光増白剤、光活性化剤、蛍光剤、布地色調剤、布地コンディショナー、予め形成された過酸、ポリマー分散剤、粘土汚れ除去/再付着防止剤、充填剤塩、向水性物質、増白剤、泡抑制剤、構造弾性化剤、布地柔軟剤、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、収縮防止剤、殺菌剤、殺真菌剤、色褪せ防止剤、耐食剤、アルカリ性供給源、可溶化剤、担体、加工助剤、顔料、染料、香料、及びpH調節剤、封入剤、ポリマー、及びこれらの混合物が含まれる。例えば、これらには、イミン漂白促進剤などの漂白剤成分;過炭酸塩及び/又は過ホウ酸塩などの過酸化水素源、特に炭酸塩及び/又は硫酸塩、ケイ酸塩、ホウケイ酸塩、並びにこれらの任意の混合物などの材料でコーティングされた過炭酸塩;封入形態で予め形成された過酸を含む、予め形成された過酸;遷移金属触媒;シリコーン系泡抑制剤及び/又は脂肪酸系泡抑制剤などの泡抑制剤又は抑制因子系;粘土、シリコーン及び/又は四級アンモニウム化合物などの布地柔軟剤;ポリエチレンオキシドなどの凝集剤;ポリビニルピロリドン、ポリ4-ビニルピリジンN-オキシド及び/又はビニルピロリドンとビニルイミダゾールとのコポリマーなどの染料移行阻害剤;イミダゾール及びエピクロルヒドリンの縮合により生成されるオリゴマーなどの布地仕上げ成分;アルコキシル化ポリアミンポリマー及びエトキシ化エチレンイミンポリマーなどの汚れ分散剤及び汚れ再付着防止助剤;ポリエステルなどの再付着防止成分;マレイン酸ポリマー又はマレイン酸とアクリル酸とのコポリマーなどのカルボキシレートポリマー;香料マイクロカプセル、デンプン封入アコード、香料噴霧などの香料;ソープリング;審美的粒子;染料;硫酸ナトリウム及び/又はシトラスファイバーなどのフィラー(ただし組成物がフィラーを実質的に含まないことが好ましい場合がある):1.6R及び2.0Rのケイ酸ナトリウム又はメタケイ酸ナトリウムを含むケイ酸ナトリウムなどのケイ酸塩;ジカルボン酸とジオールとのコポリエステル;メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエトキシセルロース、又は他のアルキル若しくはアルキルアルコキシセルロースなどのセルロースポリマー;1,2プロパンジオール、モノエタノールアミンなどの溶媒;ジエチレングリコール、エタノール、及びこれらの任意の混合物;クメンスルホン酸ナトリウム、キシレンスルホン酸ナトリウム、トルエンスルホン酸ナトリウム、及び任意の混合物などの向水性物質;クエン酸などの有機酸、並びにこれらの任意の組み合わせが含まれ得る。組成物は、界面活性剤及び追加の酵素を含む、洗浄補助剤を含むことが好ましい。組成物は、(i)香料マイクロカプセル、(ii)布地色調剤、(iii)プロテアーゼ、(iv)両親媒性洗浄ポリマー、(v)リパーゼ、(vi)DNase及び/若しくはRNase、(vii)マンナナーゼ、(viii)キサンタンリアーゼ、(ix)ヘキソサミニダーゼ、又は(viii)それらの混合物からなる群から選択される、1つ以上の補助剤を含むことが好ましい。
【0697】
組成物は、好ましくは組成物の0.1~60重量%、又は0.5~50重量%、又は1~40重量%の界面活性剤を含むことが好ましい。界面活性剤は、例えば、アニオン性、半極性を含む非イオン性、カチオン性、双性イオン性及び/又は両性界面活性剤、並びにこれらの混合物を含み得る、2つ以上の界面活性剤の混合物を含む界面活性剤系を含むことが好ましい。
【0698】
組成物は、アニオン性界面活性剤を含むことが好ましい。好ましいアニオン性界面活性剤は、スルホネート及びサルフェート界面活性剤であり、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は(任意選択によりアルコキシル化)アルキルサルフェートである。特に好ましいアニオン性界面活性剤は、直鎖アルキルベンゼンスルホネート(LAS)を含む。好ましいアルキルサルフェートは、アルキルエーテルサルフェート、特にC9~15アルコールエーテルサルフェート、特に0.5~7、好ましくは1~5の平均エトキシル化度を有するもの、モノドデシルエステルサルフェートなどのC8~C16エステルサルフェート及びC10~C14エステルサルフェートを含む。本発明による好ましい組成物では、界面活性剤はアニオン性界面活性剤を含み、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は任意選択によりエトキシル化アルキルサルフェートを含み、好ましくは0~7、より好ましくは0.5~3のエトキシル化度を有する。LASの異性体、分枝アルキルベンゼンスルホネート(BABS)、フェニルアルカンスルホネート、α-オレフィンスルホネート(AOS)、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン-2,3-ジイルビス(サルフェート)、ヒドロキシアルカンスルホネート及びジスルホネート、アルキルサルフェート(AS)、例えばドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、脂肪族アルコールサルフェート(FAS)、一級アルコールサルフェート(PAS)、アルコールエーテルサルフェート(AES又はAEOS又はFES、アルコールエトキシサルフェート又は脂肪族アルコールエーテルサルフェートとしても公知である)、二級アルカンスルホネート(SAS)、パラフィンスルホネート(PS)、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート(MES)を含むα-スルホ脂肪酸メチルエステル(α-SFMe又はSES)、アルキル又はアルケニルコハク酸、ドデセニル/テトラデセニルコハク酸(DTSA)、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホ-コハク酸のジエステル及びモノエステル、又は脂肪酸塩(石鹸)、並びにこれらの組み合わせも好適なアニオン性界面活性剤である。好ましい実施形態では、界面活性剤はアニオン性界面活性剤を含み、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は任意選択によりエトキシル化アルキルサルフェートを含み、好ましくは0~7、より好ましくは0.5~3のエトキシル化度を有する。
【0699】
アニオン性界面活性剤を、塩形態で洗浄組成物に添加することが好ましい。好ましいカチオンは、ナトリウム及びカリウムなどのアルカリ金属イオンである。しかしながら、アニオン性界面活性剤の塩形態は、界面活性剤の酸形態を、水酸化ナトリウム又はアミン、例えばモノ、ジ、又はトリエタノールアミンなどのアルカリと中和させることによってその場形成してもよい。界面活性剤は、非イオン性界面活性剤を含むことが好ましい。界面活性剤は、好ましくはアニオンとノニオンの重量比が30:1~1:2、好ましくは20:1~2:3又は1:1のアニオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤を含むことが好ましい。
【0700】
非イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート(AE又はAEO)、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪族アルコール(PFA)、アルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、例えば、エトキシ化及び/又はプロポキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート(APE)、ノニルフェノールエトキシレート(NPE)、アルキルポリグリコシド(APG)、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド(FAM)、脂肪酸ジエタノールアミド(FADA)、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド(EFAM)、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド(PFAM)、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体(グルカミド、GA、又は脂肪酸グルカミド、FAGA)、並びに商標名SPAN及びTWEENで入手可能な製品、並びにこれらの組み合わせが挙げられる。好ましくはC9~18アルキル鎖、好ましくはC12~15アルキル鎖を有し、好ましくは3~9、より好ましくは3~7の平均エトキシル化度を有するアルコールエトキシレートが特に好ましい。市販の非イオン性界面活性剤としては、BASF社製Plurafac(商標)、Lutenso(商標)及びPluronic(商標)、Cognis社製Dehypon(商標)シリーズ、並びにClariant社製Genapol(商標)シリーズが挙げられる。
【0701】
洗浄組成物は、約1%~約40%のアニオン性界面活性剤を含むことが好ましい。洗浄組成物は、0.2%~約40%の非イオン性界面活性剤、例えばアルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体(「グルカミド」)を含むことが好ましい。
【0702】
洗浄組成物は、1つ以上の追加の酵素を含むことが好ましい。従って、好ましい組成物は、(a)本明細書で定義されるアミラーゼと、(b)アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エンドグルカナーゼ、エステラーゼ、α-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α-グルコシダーゼ、β-グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、ヘキソサミニダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リケニナーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素(プロテアーゼ)、ペルオキシダーゼ、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、キサンタンリアーゼ、キサンタナーゼ、キシログルカナーゼ及びこれらの混合物からなる群から好ましくは選択される、1つ以上の追加の酵素とを含む。好ましくは、組成物は、キサンタンリアーゼ、キサンタナーゼ、マンナナーゼ及びこれらの混合物から選択される追加の酵素を含む。マンナナーゼが特に好ましい。キサンタンリアーゼ及びキサンタナーゼ及びこれらの混合物も特に好ましい。プロテアーゼ、リパーゼ及び/又はセルラーゼが好ましく、特にプロテアーゼが好ましい。追加の酵素は、例えば、アスペルギルス属(Aspergillus)、例えば、アスペルギルス・アクレータス(Aspergillus aculeatus)、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルス・フォエティダス(Aspergillus foetidus)、アスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)、アスペルギルス・ジャポニクス(Aspergillus japonicus)、アスペルギルス・ニデュランス(Aspergillus nidulans)、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)、若しくはアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae);フザリウム属(Fusarium)、例えば、フザリウム・バクテリジオイデス(Fusarium bactridioides)、フザリウム・セレアリス(Fusarium cerealis)、フザリウム・クロークウェレンス(Fusarium crookwellense)、フザリウム・クルモルム(Fusarium culmorum)、フザリウム・グラミネアラム(Fusarium graminearum)、フザリウム・グラミヌム(Fusarium graminum)、フザリウム・ヘテロスポルム(Fusarium heterosporum)、フザリウム・ネグンディ(Fusarium negundi)、フザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)、フザリウム・レチクランツム(Fusarium reticulatum)、フザリウム・ロゼウム(Fusarium roseum)、フザリウム・サムブシヌム(Fusarium sambucinum)、フザリウム・サルコクロウム(Fusarium sarcochroum)、フザリウム・スルフレウム(Fusarium sulphureum)、フザリウム・トルロセウム(Fusarium toruloseum)、フザリウム・トリコテシオイデス(Fusarium trichothecioides)、若しくはフザリウム・ベネナタム(Fusarium venenatum);フミコラ属(Humicola)、例えば、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)、若しくはフミコラ・ラヌギノーサ(Humicola lanuginosa)、又はトリコデルマ属(Trichoderma)、例えば、トリコデルマ・ハルジアヌム(Trichoderma harzianum)、トリコデルマ・コニンギイ(Trichoderma koningii)、トリコデルマ・ロンギブラキアタム(Trichoderma longibrachiatum)、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)、若しくはトリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viride)に属する微生物によって産生されてもよい。
【0703】
好ましくは、組成物は、1つ以上のプロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、追加のアミロース分解性酵素、例えば、追加のα-アミラーゼ、グルコアミラーゼ、イソアミラーゼ、マルトース生成アミラーゼ、好ましくは追加のα-アミラーゼ、CGTase、セルラーゼ、マンナナーゼ(Novozyme、Denmark社製MANNAWAY(商標)など)、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、クチナーゼ、及び/若しくはラッカーゼ、又はこれらのうちの2つ以上の混合物を含む。
【0704】
一般に、選択される酵素の特性は、選択された洗剤に適合できるものでなければならず(即ち、至適pH、他の酵素及び非酵素的成分等との適合性)、酵素は有効量で存在しなければならない。好ましくは、本発明の組成物は、組成物1グラム当たり少なくとも0.01mg、好ましくは約0.05~約10mg、より好ましくは約0.1~約6mg、特に約0.2~約5mgの活性な更なる酵素を含む。
【0705】
プロテアーゼ:好適なプロテアーゼとしては、サブチリシン(EC3.4.21.62)などの中性又はアルカリ性の微生物セリンプロテアーゼを含むメタロプロテアーゼ及び/又はセリンプロテアーゼが挙げられる。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物又は微生物由来のものが挙げられる。一態様では、そのような好適なプロテアーゼは、微生物由来のものであってよい。好適なプロテアーゼには、上述した好適なプロテアーゼの化学的又は遺伝子学的に改変された変異体が含まれる。一態様では、好適なプロテアーゼは、アルカリ性微生物プロテアーゼ又は/及びトリプシン型プロテアーゼなどのセリンプロテアーゼであってよい。好適な中性又はアルカリ性プロテアーゼの例としては、以下のものが挙げられる。
(a)米国特許第6,312,936B1号明細書、米国特許第5,679,630号明細書、米国特許第4,760,025号明細書、米国特許第7,262,042号明細書、及び国際公開第09/021867号パンフレットに記載されている、バチルス・レンタス(Bacillus lentus)、B.アルカロフィラス(B.alkalophilus)、B.サブティリス(B.subtilis)、B.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、及びバチルス・ギブソニイ(Bacillus gibsonii)などのバチルス属(Bacillus)由来のものを含む、サブチリシン(EC3.4.21.62)。
(b)国際公開第89/06270号パンフレットに記載されているフザリウムプロテアーゼ、並びに国際公開第05/052161号パンフレット及び国際公開第05/052146号パンフレットに記載されているセルモナス属(Cellumonas)に由来するキモトリプシンプロテアーゼを含む、トリプシン(例えばブタ又はウシ由来)などのトリプシン型プロテアーゼ又はキモトリプシン型プロテアーゼ。
(c)国際公開第07/044993A2号パンフレットに記載されている、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)由来のものを含む、メタロプロテアーゼ。
【0706】
好ましいプロテアーゼとしては、バチルス・ギブソニイ(Bacillus gibsonii)又はバチルス・レンタス(Bacillus lentus)由来のものが挙げられる。
【0707】
好適な市販のプロテアーゼ酵素としては、Novozymes A/S(Denmark)により商標名Alcalase(登録商標)、Savinase(登録商標)、Primase(登録商標)、Durazym(登録商標)、Polarzyme(登録商標)、Kannase(登録商標)、Liquanase(登録商標)、Liquanase Ultra(登録商標)、Savinase Ultra(登録商標)、Ovozyme(登録商標)、Neutrase(登録商標)、Everlase(登録商標)、及びEsperase(登録商標)で販売されているもの、Genencor Internationalにより商標名Maxatase(登録商標)、Maxacal(登録商標)、Maxapem(登録商標)、Properase(登録商標)、Purafect(登録商標)、Purafect Prime(登録商標)、Purafect Ox(登録商標)、FN3(登録商標)、FN4(登録商標)、Excellase(登録商標)及びPurafect OXP(登録商標)で販売されているもの、Solvay Enzymesにより商標名Opticlean(登録商標)及びOptimase(登録商標)で販売されているもの、Henkel/Kemiraから入手可能なもの、即ち、BLAP(次の変異S99D+S101R+S103A+V104I+G159Sを含む、米国特許第5,352,604号明細書の図29に示される配列、以下BLAPと称する)、BLAP R(S3T+V4I+V199M+V205I+L217Dを含むBLAP)、BLAP X(S3T+V4I+V205Iを含むBLAP)、及びBLAP F49(S3T+V4I+A194P+V199M+V205I+L217Dを含むBLAP)(全てHenkel/Kemira社製);並びに花王株式会社製KAP(A230V+S256G+S259Nの変異を含むバチルス・アルカロフィラス(Bacillus alkalophilus)サブチリシン)が挙げられる。更なる好適なプロテアーゼは、国際公開第2011/03623号パンフレット、国際公開第2011/140316号パンフレット、国際公開第2011/140364号パンフレット、及び国際公開第2012/05778号パンフレットに記載されている。
【0708】
リパーゼ:好適なリパーゼとしては、細菌又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質が改変された突然変異体が含まれる。有用なリパーゼの例としては、例えば、H.ラヌギノーサ(H.lanuginosa)(T.ラヌギノサス(T.lanuginosus))、又はH.インソレンス(H.insolens)由来のフミコラ属(Humicola)(サーモマイセス属(Thermomyces)と同義)由来のリパーゼ、例えば、P.アルカリゲネス(P.alcaligenes)又はP.シュードアルカリゲネス(P.pseudoalcaligenes)、P.セパシア(P.cepacia)、P.スタッツェリ(P.stutzeri)、P.フルオレセンス(P.fluorescens)、シュードモナス属(Pseudomonas)種株SD705、P.ウィスコンシネンシス(P.wisconsinensis)由来のシュードモナス属(Pseudomonas)リパーゼ、例えば、B.サブティリス(B.subtilis)(Dartois et al.(1993),Biochemica et Biophysica Acta,1131,253-360)、B.ステアロサーモフィルス(B.stearothermophilus)又はB.プミルス(B.pumilus)由来のバチルス属(Bacillus)リパーゼが挙げられる。
【0709】
リパーゼは、米国特許第6,939,702 B1号明細書及び米国特許第2009/0217464号明細書に記載されているような「第1サイクルリパーゼ」であってよい。一態様では、リパーゼは、第一洗浄リパーゼであり、好ましくはT231R及びN233Rに変異を含むサーモマイセス・ラヌギノサス(Thermomyces lanuginosus)由来の野生型リパーゼの変異体である。野生型配列は、Swissprotアクセッション番号、Swiss-Prot O59952(サーモマイセス・ラヌギノサス(Thermomyces lanuginosus)(フミコラ・ラヌギノーサ(Humicola lanuginosa))に由来する)の269個のアミノ酸(アミノ酸23~291)である。好ましいリパーゼは、Lipex(登録商標)、Lipolex(登録商標)及びLipoclean(登録商標)の商標名で販売されているものが挙げられる。
【0710】
セルラーゼ:好適なセルラーゼとしては、細菌又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質が改変された突然変異体が含まれる。好適なセルロースとしては、バチルス属(Bacillus)、シュードモナス属(Pseudomonas)、フミコラ属(Humicola)、フザリウム属(Fusarium)、チエラビア属(Thielavia)、アクレモニウム属(Acremonium)由来のセルロースが挙げられ、例えば、フミコラ・インソレンス(Humicola insolens)、ミセリオフトラ・テルモフィラ(Myceliophthora thermophila)及びフザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)から生成される真菌セルラーゼが挙げられる。
【0711】
一態様では、好ましい酵素としては、エンド-β-1,4グルカナーゼ活性を示す微生物由来のエンドグルカナーゼ(E.C.3.2.1.4)、好ましくは以下を含む群から選択されるものが挙げられる。
(a)米国特許第7,141,403B2号明細書の配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも90%、94%、97%、及び更に99%同一の配列を有する、バチルス属(Bacillus)メンバーに内在性の細菌性ポリペプチド;
(b)キシログルカンと非晶質セルロース基質の両方に対して酵素活性を有するグリコシルヒドロラーゼであって、GHファミリー5、12、44又は74から選択される、グリコシルヒドロラーゼ;
(c)国際公開第09/148983号パンフレットの配列番号3のアミノ酸配列と少なくとも90%、94%、97%、及び更に99%同一の配列を有する、グリコシルヒドロラーゼ;
(d)並びにこれらの混合物。
【0712】
好適なエンドグルカナーゼは、Celluclean(登録商標)及びWhitezyme(登録商標)(Novozymes A/S、Bagsvaerd、Denmark)の商標名で販売されている。
【0713】
他の市販されているセルラーゼとしては、CELLUZYME(登録商標)、及びCAREZYME(登録商標)(Novozymes A/S)、CLAZINASE(登録商標)、及びPURADAX HA(登録商標)(Genencor International Inc.)、並びにKAC-500(B)(登録商標)(花王株式会社)が挙げられる。
【0714】
追加のアミラーゼ:好ましくは、組成物は、追加の(更なる)アミラーゼを含む。好適な更なるアミラーゼとしては、細菌又は真菌由来のものを含むα-アミラーゼが挙げられる。化学的又は遺伝子改変突然変異体(変異体)が含まれる。好ましいアルカリ性α-アミラーゼは、バチルス属(Bacillus)菌株、例えば、バチルス・リケニフォルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、又は他のバチルス属(Bacillus)種、例えばバチルス属(Bacillus)種NCIB 12289、NCBI 12512、NCBI 12513、DSM 9375(米国特許第7,153,818号明細書)、DSM 12368、DSMZ番号12649、KSM AP1378(国際公開第97/00324号パンフレット)、KSM K36又はKSM K38(欧州特許第1,022,334号明細書)に由来する。好ましい更なるアミラーゼは、以下から選択されるものであってよい。(a)国際公開第94/02597号パンフレット、国際公開第94/18314号パンフレット、国際公開第96/23874号パンフレット、及び国際公開第97/43424号パンフレットに記載されている変異体、特に、国際公開第96/23874号パンフレットの配列番号2に記載される酵素に対し、15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408、及び444位の1つ以上に置換を有する変異体、(b)国際公開第96/23873号パンフレット、国際公開第00/60060号パンフレット、国際公開第06/002643号パンフレット、及び国際公開第2017/192657号パンフレットに記載されている変異体、特に国際公開第06/002643号パンフレットで配列番号12として記載されるAA560酵素に対し、26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、203、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484位に1つ以上の置換を有する変異体であって、好ましくはD183*及びG184*の欠損も含有する変異体、(c)バチルス属(Bacillus)SP722由来の野生型酵素である、国際公開第06/002643号パンフレットの配列番号4と少なくとも90%の同一性を示し、特に183及び184位に欠損を有する変異体、並びに本明細書に参照により組み込まれる国際公開第00/60060号パンフレットに記載されている変異体、(d)バチルス属(Bacillus)種707由来の野生型酵素(米国特許第6,093,562号明細書の配列番号7)と少なくとも95%の同一性を示す変異体、特に、突然変異M202、M208、S255、R172、及び/又はM261のうちの1つ以上を含むもの。前記アミラーゼは、M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N及び/又はR172Qの1つ以上を含むことが好ましい。M202L又はM202T突然変異を含むものが特に好ましい。(e)国際公開第09/149130号パンフレットに記載されている変異体であって、好ましくはゲオバチルス・ステアロサーモフィルス(Geobacillus Stearophermophilus)由来の野生型酵素、若しくはその切断型バージョンである、国際公開第09/149130号パンフレットの配列番号1若しくは配列番号2と少なくとも90%の同一性を示すもの、(f)国際公開第2016091688号パンフレットの配列番号1と少なくとも89%の同一性を示す変異体であって、特にH183+G184位に欠失を含み、更に405、421、422及び/若しくは428位に1つ以上の突然変異を含むもの、(g)パエニバチルス・カードラノリティカス(Paenibacillus curdlanolyticus)YK9由来の「PcuAmyl α-アミラーゼ」(国際公開第2014099523号パンフレットの配列番号3)と少なくとも60%のアミノ酸配列相同性を示す変異体、(h)サイトファーガ属(Cytophaga)種由来の「CspAmy2アミラーゼ」(国際公開第2014164777号パンフレットの配列番号1)と少なくとも60%のアミノ酸配列相同性を示す変異体、(i)バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)由来のAmyE(国際公開第2009149271号パンフレットの配列番号1)と少なくとも85%の同一性を示す変異体、(j)アクセッション番号AB051102のバチルス属(Bacillus)種KSM-K38由来の野生型アミラーゼと少なくとも90%の同一性を示す変異体、(k)バチルス属(Bacillus)種に由来するAAI10の成熟したアミノ酸配列(国際公開第2016180748号パンフレットの配列番号7)と少なくとも80%の同一性を示す変異体、(l)アリシクロバチルス属(Alicyclobacillus)種アミラーゼの成熟したアミノ酸配列(国際公開第2016180748号パンフレットの配列番号8)と少なくとも80%の同一性を示す変異体、又はこれらの混合物。存在する場合、本発明の組成物は、組成物1グラム当たり、少なくとも0.01mg、好ましくは約0.05~約10mg、より好ましくは約0.1~約6mg、特に約0.2~約5mgの活性な更なるアミラーゼを含むことが好ましい。
【0715】
好適な市販のα-アミラーゼは、DURAMYL(登録商標)、LIQUEZYME(登録商標)、TERMAMYL(登録商標)、TERMAMYL ULTRA(登録商標)、NATALASE(登録商標)、SUPRAMYL(登録商標)、STAINZYME(登録商標)、STAINZYME PLUS(登録商標)、FUNGAMYL(登録商標)、ATLANTIC(登録商標)、INTENSA(登録商標)及びBAN(登録商標)(Novozymes A/S、Bagsvaerd、Denmark)、KEMZYM(登録商標)AT 9000 Biozym Biotech Trading GmbH Wehlistrasse 27b A-1200 Wien Austria、RAPIDASE(登録商標)、PURASTAR(登録商標)、ENZYSIZE(登録商標)、OPTISIZE HT PLUS(登録商標)、POWERASE(登録商標)、PREFERENZ S(登録商標)シリーズ(PREFERENZ S1000(登録商標)及びPREFERENZ S2000(登録商標)及びPURASTAR OXAM(登録商標)を含む(DuPont.、PaloAlto、California)、並びにKAM(登録商標)(花王株式会社、東京都中央区日本橋茅場町一丁目14-10、103-8210、日本)が挙げられる。一態様では、好適なアミラーゼとしては、ATLANTIC(登録商標)、STAINZYME(登録商標)、POWERASE(登録商標)、INTENSA(登録商標)及びSTAINZYME PLUS(登録商標)、並びにこれらの混合物が挙げられる。
【0716】
ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ:好適なペルオキシダーゼ/オキシダーゼとしては、植物、細菌又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された、又はタンパク質が改変された突然変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、国際公開第93/24618号パンフレット、国際公開第95/10602号パンフレット、及び国際公開第98/15257号パンフレットに記載されているような、ヒトヨタケ属(Coprinus)由来、例えばC.シネレウス(C.cinereus)及びこれらの変異体由来のペルオキシダーゼが挙げられる。
【0717】
市販のペルオキシダーゼとしては、GUARDZYME(登録商標)(Novozymes A/S)が挙げられる。
【0718】
他の酵素:他の好ましい酵素としては、Pectawash(登録商標)、Pectaway(登録商標)の商標名で販売されているペクチン酸リアーゼ、及びMannaway(登録商標)の商標名で販売されているマンナナーゼ(全てNovozymes A/S、Bagsvaerd、Denmark社製)、及びPurabrite(登録商標)(Genencor International Inc.、Palo Alto、California)が挙げられる。
【0719】
酵素は、1つ以上の酵素を含有する個別の添加剤(プレミックス)を添加することによって、又はこれらの酵素の全てを含む混合された添加剤(プレミックス)を添加することによって、洗浄組成物中に含まれていてもよい。本発明の洗剤添加剤は、即ち個別の添加剤又は混合された添加剤は、例えば、顆粒、液体、スラリー等で配合することができる。好ましい洗剤添加剤配合物は顆粒であり、特に非粉塵性の顆粒、液体であり、特に安定化された液体、又はスラリーである。
【0720】
非粉塵性の顆粒は、当該技術分野において公知の方法で製造してもよく、任意選択により当該技術分野において公知の方法でコーティングしてもよい。ワックスコーティング材料の例には、平均モル重量が1000~20000のポリ(エチレンオキシド)生成物(ポリエチレングリコール、PEG)、16~50のエチレンオキシド単位を有するエトキシ化ノニルフェノール、アルコールが12~20個の炭素原子を含有し、15~80のエチレンオキシド単位が存在するエトキシ化脂肪族アルコール、脂肪族アルコール、脂肪酸、並びに脂肪酸のモノ及びジ及びトリグリセリドがある。皮膜形成コーティング材料は、例えば、流動層技術によって塗布してもよい。液体酵素の調製物は、例えば、確立された方法に従って、ポリオール、例えばプロピレングリコール、糖又は糖アルコール、乳酸又はホウ酸を添加することによって安定化してもよい。
【0721】
洗浄組成物は、布地色調剤(色直し剤、青味剤、又は白色剤と称することもある)を含んでもよい。典型的には、色調剤は、布地に青又は紫の色合いを与えるものである。色調剤は、色調の特定の色合いを生成するため、及び/又は異なる布地の種類を色づけするために、単独で、又は組み合わせて使用することができる。このことは、例えば、赤及び青緑の染料を混ぜ合わせて、青又は紫の色合いを得ることによって提供することができる。色調剤は、アクリジン、アントラキノン(多環式キノンを含む)、含金アゾを含むアジン、アゾ(例えば、モノアゾ、ジスアゾ、トリスアゾ、テトラキスアゾ、ポリアゾ)、ベンゾジフラン及びベンゾジフラノン、カロテノイド、クマリン、シアニン、ジアザヘミシアニン、ジフェニルメタン、ホルマザン、ヘミシアニン、インジゴイド、メタン、ナフタルイミド、ナフトキノン、ニトロ及びニトロソ、オキサジン、フタロシアニン、ピラゾール、スチルベン、スチリル、トリアリルメタン、トリフェニルメタン、キサンテン並びにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない、染料の任意の公知の化学的分類から選択してもよく、好ましい染料はアゾであり、特にビスアゾ、アントラキノン、アジン及びトリアリルメタン染料である。アゾ染料が特に好ましい。
【0722】
好適な布地色調剤は、染料、染料粘土結合体、並びに有機顔料及び無機顔料が挙げられる。適切な染料としては、小分子染料及びポリマー染料が挙げられ、ポリマー染料が好ましい。適切な小分子染料としては、例えばブルー、バイオレット、レット、グリーン又はブラックに分類され、単独又は組み合わせて所望の色合いを提供する、ダイレクト、ベーシック、リアクティブ、又は加水分解性リアクティブ、ソルベント、又はディスパース染料のカラーインデックス(C.I.)分類に該当する染料からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、好適な小分子染料としては、カラーインデックス(英国染料染色学会、Bradford、UK)番号9、35、48、51、66及び99などのダイレクトバイオレット染料、1、71、80及び279などのダイレクトブルー染料、17、73、52、88及び150などのアシッドレッド染料、15、17、24、43、49及び50などのアシッドバイオレット染料、15、17、25、29、40、45、75、80、83、90及び113などのアシッドブルー染料、1などのアシッドブラック染料、1、3、4、10及び35などのベーシックバイオレット染料、3、16、22、47、66、75及び159などのベーシックブルー染料、欧州特許第1794275号明細書若しくは欧州特許第1794276号明細書に記載されているようなディスパース若しくはソルベント染料、又は米国特許第7,208,459 B2号明細書に開示されている染料、並びにそれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、好適な小分子染料としては、カラーインデックス番号のアシッドバイオレット17、ダイレクトブルー71、ダイレクトバイオレット51、ダイレクトブルー1、アシッドレッド88、アシッドレッド150、アシッドブルー29、アシッドブルー113、又はこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。
【0723】
好適なポリマー染料としては、共有結合した(結合したと称することもある)色素体(染料ポリマー結合体)、例えば、色素体がポリマーの主鎖に共重合したポリマー、及びこれらの混合物を含むポリマーからなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。ポリマー染料としては、国際公開第2011/98355号パンフレット、国際公開第2011/47987号パンフレット、米国特許第2012/090102号明細書、国際公開第2010/145887号パンフレット、国際公開第2006/055787号パンフレット、及び国際公開第2010/142503号パンフレットに記載されるものが挙げられる。
【0724】
別の態様では、好適なポリマー染料としては、Liquitint(登録商標)(Milliken、Spartanburg、South Carolina、USA)の名称で販売されている布地直接着色剤、少なくとも1つの反応染料と、ヒドロキシル部分、一級アミン部分、二級アミン部分、チオール部分及びこれらの混合物からなる群から選択される部分を含むポリマーからなる群から選択されるポリマーとから形成される、染料ポリマー結合体からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。更に別の態様では、適切なポリマー染料としては、リアクティブブルー、リアクティブバイオレット、又はリアクティブレッド染料と共有結合したカルボキシメチルセルロース(CMC)であるLiquitint(登録商標)Violet CT、例えば、商品名AZO-CM-CELLULOSE(製品コードS-ACMC)でMegazyme、Wicklow、Irelandによって市販されている、C.I.リアクティブブルー19と結合したCMC、アルコキシル化トリフェニル-メタンポリマー着色剤、アルコキシル化チオフェンポリマー着色剤、及びこれらの混合物からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。
【0725】
好ましい色調染料としては、例えば、米国特許第2008/0177090号明細書に記載されているようなアルコキシル化チオフェンアゾ白色剤が挙げられ、任意選択により、国際公開第2011/011799号パンフレットの表5の実施例1~42から選択されるようなアニオン性のものであってよい。他の好ましい染料は、米国特許第8138222号明細書に開示されている。
【0726】
好適な顔料としては、フラバントロン、インダンスロン、1~4個の塩素原子を含有する塩素化インダンスロン、ピラントロン、ジクロロピラントロン、モノブロモジクロロピラントロン、ジブロモジクロロピラントロン、テトラブロモピラントロン、ペリレン-3,4,9,10-テトラカルボン酸ジイミド(イミド基は非置換、又はC1~C3アルキル若しくはフェニル若しくは複素環式基で置換されていてもよく、フェニル及び複素環式基は、更に水溶性を付与しない置換基を有してもよい)、アントラピリミジンカルボン酸アミド、ビオラントロン、イソビオラントロン、ジオキサジン顔料、1分子当たり最大2個の塩素原子を含有し得る銅フタロシアニン、ポリクロロ-銅フタロシアニン、又は1分子当たり最大14個の臭素原子を含有するポリブロモクロロ-銅フタロシアニン、ウルトラマリンブルー(C.I.顔料のブルー29)、ウルトラマリンバイオレット(C.I.顔料のバイオレット15)、並びにこれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。
【0727】
ビルダー-洗浄組成物は、ビルダー、例えば炭酸塩、重炭酸塩又はケイ酸塩ベースのビルダーを更に含んでもよく、ゼオライトA、ゼオライトMAP(最大アルミニウムP型)などのゼオライトであってよい。好ましくは、洗濯に使用可能なゼオライトは、式Na12(AlO12(SiO12・27HOを有し、粒径は通常、ゼオライトAでは1~10μm、ゼオライトMAPでは0.7~2μmである。他のビルダーは、強アルカリ性のメタケイ酸ナトリウム(NaSiO・nHO又はNaSi・nHO)であり、食器洗浄に使用することが好ましい。好ましい実施形態では、洗剤ビルダーの量は、5%未満、10%未満、20%未満、30%未満、40%未満又は50%未満であってよく、80%、65%未満であってもよい。食器洗浄洗剤中のビルダーの濃度は、典型的に40~65%、特に50~65%又は更に75~90%である。
【0728】
封入剤-組成物は封入剤を含んでもよい。一態様では、封入剤はコア、内側表面と外側表面とを有するシェルを含み、前記シェルが前記コアを封入している。
【0729】
前記封入剤の一態様では、前記コアは、香料、増白剤、染料、防虫剤、シリコーン、ワックス、香味料、ビタミン、布地柔軟剤、一態様ではスキンケア剤、パラフィン、酵素、抗菌剤、漂白剤、感覚剤、及びこれらの混合物からなる群から選択される材料を含んでもよく、前記シェルは、ポリエチレン、ポリアミド、ポリスチレン、ポリイソプレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリアクリレート、アミノプラストからなる群から選択される材料を含んでもよく、一態様では、前記アミノプラストは、ポリ尿素、ポリウレタン、及び/又はポリ尿素ウレタンを含んでもよく、一態様では、前記ポリ尿素は、ポリオキシメチレン尿素及び/又はメラミンホルムアルデヒド、ポリオレフィン、多糖体を含んでもよく、一態様では、前記多糖体は、アルギネート及び/又はキトサン、ゼラチン、セラック、エポキシ樹脂、ビニルポリマー、水不溶性無機物、シリコーン並びにこれらの混合物を含んでもよい。
【0730】
前記封入剤の一態様では、前記コアは、香料を含んでもよい。そのような封入剤は、香料マイクロカプセルである。好適な封入剤のシェルは、メラミンホルムアルデヒド及び/又は架橋メラミンホルムアルデヒド、及び/又はポリアクリレートを含み得る。
【0731】
一態様では、前記封入剤の少なくとも75%、85%、又は更に90%が、約1ミクロン~約80ミクロン、約5ミクロン~60ミクロン、約10ミクロン~約50ミクロン、又は更に約15ミクロン~約40ミクロンの粒径を有してもよい。
【0732】
一態様では、前記封入剤の少なくとも75%、85%、又は更に90%が、約30nm~約250nm、約80nm~約180nm、又は更に約100nm~約160nmの粒子壁厚を有してもよい。
【0733】
一態様では、前記封入剤のコア材料は、香料原料からなる群から選択される材料、並びに/又は任意選択によりヒマシ油(caster oil)、ココナッツ油、綿実油、ブドウ油、菜種、大豆油、コーン油、パーム油、亜麻仁油、ヒマワリ油、オリーブ油、ピーナッツ油、ココナッツ油、パーム核油、ヒマシ油(castor oil)、レモン油及びこれらの混合物を含む、純粋な又はブレンドされた植物油などの植物油;植物油のエステル、アジピン酸ジブチル、フタル酸ジブチル、アジピン酸ブチルベンジル、アジピン酸オクチルベンジル、リン酸トリクレシル、リン酸トリオクチル及びこれらの混合物を含むエステル;約80℃を超える沸点を有する直鎖若しくは分枝鎖炭化水素を含む、直鎖若しくは分枝鎖炭化水素;部分的に水素化されたテルフェニル、フタル酸ジアルキル、モノイソプロピルビフェニルを含むアルキルビフェニル、ジプロピルナフタレンを含むアルキル化ナフタレン、灯油を含む石油スピリット、鉱油及びこれらの混合物;ベンゼン、トルエン及びこれらの混合物を含む芳香族溶媒;シリコーン油;並びにこれらの混合物からなる群から選択される材料を含んでもよい。
【0734】
一態様では、前記封入剤の壁材は、アルデヒド及びアミンの反応生成物を含む好適な樹脂を含んでもよく、好適なアルデヒドとしては、ホルムアルデヒドが挙げられる。好適なアミンとしては、メラミン、尿素、ベンゾグアナミン、グリコールウリル及びこれらの混合物が挙げられる。好適なメラミンには、メチロールメラミン、メチル化メチロールメラミン、イミノメラミン及びこれらの混合物が挙げられる。好適な尿素には、ジメチロール尿素、メチル化ジメチロール尿素、尿素-レゾルシノール、及びこれらの混合物が挙げられる。
【0735】
一態様では、好適なホルムアルデヒド捕捉剤を、例えばカプセルスラリー中で封入剤と共に用いてもよく、及び/又は封入剤が消費者製品に加えられる前、その間、或いはその後でそのような消費者製品に加えてもよい。
【0736】
好適なカプセルは、Appleton,Wisconsin USAのAppleton Papers Inc.から購入することができる。
【0737】
加えて、上述した封入剤を製造するための材料は、Solutia Inc.(St Louis、Missouri U.S.A.)、Cytec Industries(West Paterson、New Jersey U.S.A.)、sigma-Aldrich(St.Louis、Missouri U.S.A.)、San Diego、California、USAのCP Kelco Corp.;Ludwigshafen、GermanyのBASF AG;Cranbury、New Jersey、USAのRhodia Corp.;Wilmington、Delaware、USAのHercules Corp.;Calgary、Alberta、CanadaのAgrium Inc.、New Jersey U.S.AのISP、Chicago、IL、USAのAkzo Nobel;Bremen、GermanyのStroever Shellac Bremen;Midland、MI、USAのDow Chemical Company;Leverkusen、GermanyのBayer AG;St.Louis、Missouri、USAのSigma-Aldrich Corp.から入手可能である。
【0738】
組成物は、ジグリセリド及びトリグリセリド、エチレングリコールジステアレート、微結晶セルロース、セルロース系材料、マイクロファイバーセルロース、生体ポリマー、キサンタンガム、ジェランガム、並びにこれらの混合物からなる群から選択される構造化剤を含んでもよい。
【0739】
ポリマー
洗浄組成物は、1つ以上のポリマーを含み得る。例としては、カルボキシメチルセルロース、ポリ(ビニルピロリドン)、ポリ(エチレングリコール)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(ビニルピリジン-N-オキシド)、ポリ(ビニルイミダゾール)、ポリカルボキシレート、例えばポリアクリレート、マレイン酸/アクリル酸コポリマー及びラウリルメタクリレート/アクリル酸コポリマー、並びに両親媒性ポリマーがある。
【0740】
洗剤は、漂白系を含有してもよく、過ホウ酸塩又は過炭酸塩などのHO2源が含まれてもよく、テトラアセチルエチレンジアミン又はノナノイルオキシベンゼンスルホネートなどの過酸を形成する漂白活性化剤と組み合わせてもよい。或いは、漂白系は、例えばアミド、イミド、又はスルホン型のペルオキシ酸を含んでもよい。一般に、漂白剤を使用する場合、本発明の化合物は、対象の洗浄組成物の約0.1重量%~約50重量%、又は更に約0.1重量%~約25重量%の漂白剤を含んでもよい。
【0741】
キレート剤-本明細書の洗浄組成物は、キレート剤を含有してもよい。好適なキレート剤としては、銅、鉄及び/又はマンガンキレート剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。キレート剤を使用する場合、対象の洗浄組成物は、対象の洗浄組成物の約0.005重量%~約15重量%、又は更に約3.0重量%~約10重量%のキレート剤を含んでもよい。好適なキレートとしては、DTPA(ジエチレントリアミン五酢酸)、HEDP(ヒドロキシエタンジホスホン酸)、DTPMP(ジエチレントリアミンペンタ(メチレンホスホン酸))、1,2-ジヒドロキシベンゼン-3,5-ジスルホン酸二ナトリウム塩水和物、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、エチレンジアミン二コハク酸(EDDS)、N-ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸(HEDTA)、トリエチレンテトラアミン六酢酸(TTHA)、N-ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HEIDA)、ジヒドロキシエチルグリシン(DHEG)、エチレンジアミンテトラプロピオン酸(EDTP)、及びこれらの誘導体が挙げられる。
【0742】
本発明の酵素変異体は、従来の安定化剤及び又はプロテアーゼ阻害剤、例えば、プロピレングリコール又はグリセロールなどのポリオール、糖又は糖アルコール、塩化ナトリウム及び塩化カリウムなどの塩、乳酸、ギ酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステル、又は4-ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体、又はジ、トリ、若しくはテトラペプチドアルデヒドなどのペプチドアルデヒド又はアルデヒド類似体(いずれもB1-B0-Rの形態であって、式中、RはH、CH3、CX3、CHX2、又はCH2Xであり(X=ハロゲン)、B0は単一のアミノ酸残基であり(好ましくは任意選択により置換された脂肪族又は芳香族側鎖を有する);及びB1は1つ以上(好ましくは1、2若しくは3つ)のアミノ酸残基からなり、任意選択によりN末端の保護基を含むか、又は国際公開第09118375号パンフレット、国際公開第98/13459号パンフレットに記載されているようなもの)、又はRASI、BASI、WASIなどのタンパク質型のプロテアーゼ阻害剤(米、大麦及び小麦の二官能性α-アミラーゼ/サブチリシン阻害剤)、又はCI2又はSSIを使用して安定化させてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される酵素は、最終組成物中に、亜鉛(II)、カルシウム(II)及び/又はマグネシウム(II)イオンの水溶性供給源が存在し、酵素にそのようなイオンを提供することにより安定化されるが、他の金属イオン(例えば、バリウム(II)、スカンジウム(II)、鉄(II)、マンガン(II)、アルミニウム(III)、スズ(II)、コバルト(II)、銅(II)、ニッケル(II)及びオキソバナジウム(IV))も同様である。
【0743】
組成物は、(a)カルシウム塩、マグネシウム塩、及びこれらの混合物からなる群から選択される無機塩、(b)オリゴ糖、多糖体、及びこれらの混合物からなる群から選択される炭水化物、(c)フェニルボロン酸及びこれらの誘導体からなる群から選択される重量効率的な可逆的プロテアーゼ阻害剤、並びに(d)これらの混合物からなる群から選択される酵素安定剤を含んでもよい。
【0744】
組成物は、(1)ボロン含有化合物などの可逆的プロテアーゼ阻害剤、(2)1-2プロパンジオール、(3)ギ酸カルシウム及び/又はギ酸ナトリウム、並びに(4)これらの任意の組み合わせを含んでもよい。
【0745】
洗浄組成物はまた、例えば、粘土を含む布地コンディショナー、起泡増進剤、泡抑制剤、耐食剤、汚れ懸濁剤、汚れ再付着防止剤、染料、殺菌剤、蛍光増白剤、向水性物質、色褪せ防止剤、エタノールなどの有機溶媒、又は香料などの他の従来の洗剤成分を(洗浄補助剤として)含んでもよい。更に、洗剤は、一般的な洗浄レベルを向上させるために洗浄剤に添加されるプレスポッター又はブースターを含有することができ、これら添加剤のいくつかを洗浄ステップの前に織物に塗布する前処理剤として使用してもよい。
【0746】
洗浄組成物中の任意の酵素、特に、本発明に必須の酵素は、洗浄溶液1リットル当たり0.001~100mgの酵素タンパク質、好ましくは洗浄溶液1リットル当たり0.005~5mgの酵素タンパク質、より好ましくは、洗浄溶液1リットル当たり0.01~1mgの酵素タンパク質、特に洗浄溶液1リットル当たり0.1~1mgの酵素タンパク質に対応する量で添加してもよいことが現時点で想定されている。しかしながら、本発明の組成物は、少なくとも0.0001~約0.1重量%、例えば、約0.0001重量%~約0.01重量%、約0.001重量%~約0.01重量%又は約0.001重量%~約0.01重量%の純粋な酵素タンパク質を含む。しかしながら、配合された酵素を使用する場合、洗剤組成物は、約0.02重量%~約20重量%、例えば、約0.05重量%~約15重量%、又は約0.05~約20重量%、又は約0.05重量%~約5重量%、又は約0.05重量%~約3重量%を含む。本発明に有用なα-アミラーゼ変異体は更に、参考として本明細書に組み込まれる国際公開第97/07202号パンフレットに開示されている洗剤配合物中に組み込まれてもよい。
【0747】
使用方法
本発明は、表面、好ましくは布地を洗浄及び/又は処理するための方法を含む。一態様では、そのような方法は、任意選択により前記表面を洗浄及び/又はすすぐステップ、前記表面を本明細書に記載されている洗浄組成物を含む水性洗浄溶液と接触させるステップ、次いで任意選択により前記表面を洗浄及び/又はすすぐステップを含む。
【0748】
水性洗浄溶液は、好ましくは約4又は約7若しくは8~約12、好ましくは約10.5のpHを有する。組成物は、溶液中で約500ppm~約15,000ppmの濃度で使用することが好ましい。水温は、典型的には約5℃~約90℃の範囲である。水と布地の比率は、典型的には約1:1~約30:1である。
【0749】
本発明はまた、洗剤組成物及び洗剤用途において、例えば低温での食器洗浄又は洗濯において改善された洗浄性能をもたらすための本発明の洗浄組成物の使用を提供するものである。
【0750】
更なる態様では、本発明は、表面を本明細書で記載されるようなハイブリッドポリペプチド又はアミラーゼ変異体、及び洗浄補助剤と接触させることを含む、表面から染みを除去するための方法に関し、洗浄補助剤は界面活性剤を含み、任意選択により向水性物質、ビルダー及び補助ビルダー、漂白系、ポリマー、布地色調剤及び補助剤材料、又は洗剤組成物及び洗剤用途におけるこれらの任意の混合物からなるリストから選択される1つ以上の洗浄補助剤を含む。更なる態様は、表面を本明細書で記載されるような洗浄組成物と接触させることを含む、表面から染みを除去するための方法である。
【0751】
使用
本発明は、洗濯又は自動食器洗浄を含む硬質表面洗浄などの洗浄プロセスにα-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを使用するための方法、又はその組成物に関する。
【0752】
洗浄に重要となる汚れ及び染みは多くの異なる物質で構成されており、洗濯と食器洗浄などの硬質表面洗浄との両方に関係する洗剤に使用するために、全て異なる基質特異性を有する様々な異なる酵素が開発されている。これらの酵素は、酵素のない同様のプロセスと比較して、それらが使用される洗浄プロセスで染み除去を特に改善することから、酵素洗浄効果をもたらすものと考えられている。当技術分野において公知の染みを除去する酵素としては、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、リケニナーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナナーゼなどの酵素が挙げられる。
【0753】
一態様では、本発明は、食器洗浄などの硬質表面洗浄、又は洗濯若しくは染み除去のために使用される洗剤組成物中の本発明のα-アミラーゼの使用に関する。更なる態様では、本発明は、本発明のα-アミラーゼを使用すると、洗剤組成物及び低温での食器洗浄又は洗濯などの洗剤用途において改善された洗浄性能を有することを実証するものである。
【0754】
本発明の別の態様は、本発明のα-アミラーゼを、1つ以上の界面活性剤、及び任意選択により向水性物質、ビルダー及び補助ビルダー、漂白系、ポリマー、布地色調剤及び補助剤材料、又は洗剤組成物及び洗剤用途におけるこれらの任意の混合物からなるリストから選択される1つ以上の洗剤組成物と共に含む洗剤組成物の使用である。
【0755】
更なる態様は、本発明のα-アミラーゼを、1つ以上の界面活性剤、及びプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、リケニナーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナナーゼ、又は洗剤組成物及び洗剤用途におけるこれらの任意の混合物を含む群から選択される1つ以上の追加の酵素と共に含む洗剤組成物の使用である。
【0756】
別の態様では、本発明は、家庭用食器洗浄に加えて工業用食器洗浄向けであってよい食器洗浄プロセスに関する。本明細書で使用する「食器洗浄」という用語は、手動の食器洗浄と自動化された食器洗浄との両方を指す。更に、本発明は、硬質表面(例えば、ナイフ、フォーク、スプーンなどのカテラリー、皿、グラス、ボウルなどの陶器、及び鍋)を洗浄するプロセスに関し、プロセスは、硬質表面を本発明の洗剤組成物及びα-アミラーゼ変異体を含有する洗浄溶液で処理することを含む。硬質表面洗浄は、本発明のα-アミラーゼを、例えば、任意選択によりプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ、マンナナーゼ、又はこれらの任意の混合物からなる群から選択される1つ以上の更なる酵素と共に含有する洗剤組成物を使用して、家庭用又は工業用食器洗浄機を用いて実行することができるか、又は手動で実行することができる。
【0757】
更なる態様では、本発明は、表面を、1つ以上の界面活性剤、及び任意選択により向水性物質、ビルダー及び補助ビルダー、漂白系、ポリマー、布地色調剤及び補助剤材料、又は洗剤組成物及び洗剤用途におけるこれらの任意の混合物からなるリストから選択される1つ以上の洗剤組成物と共に本発明のα-アミラーゼを含む組成物と接触させることを含む、表面から染みを除去するための方法に関する。更なる態様は、表面を、1つ以上の界面活性剤、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、リケニナーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナナーゼ、又は洗剤組成物及び洗剤用途におけるこれらの任意の混合物を含む群から選択される1つ以上の追加の酵素と共に本発明のα-アミラーゼ変異体を含む組成物と接触させることを含む、表面から染みを除去するための方法である。
【0758】
使用方法
本発明はまた、ある部位、とりわけ表面又は布地を洗浄及び/又は処理する方法に関する。一態様では、そのような方法は、任意選択により前記表面又は布地を洗浄及び/又はすすぐステップを含み、前記表面又は布地を本明細書に開示されている任意の消費者製品と接触させ、次いで任意選択により前記表面又は布地を洗浄及び/又はすすぐことが開示されている。
【0759】
本明細書で使用する洗浄には、スクラビング及び機械的撹拌が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような表面又は布地の乾燥は、家庭用又は工業用設定のいずれかで使用される一般的な手段の任意の1つによって実施してもよい。そのような手段としては、日光、赤外線、紫外線及びマイクロ波照射を含む電磁放射線の存在下又は非存在下において、圧力が5~0.01気圧での周囲温度又は高温の強制空気乾燥又は静止空気乾燥が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、前記乾燥は、アイロンを使用することによって周囲温度を上回る温度で実施してもよく、例えば、前記布地を前記アイロンに比較的短時間或いは長時間直接接触させてもよく、普通では重力によって通常存在する圧力以上の圧力をかけてもよい。別の態様では、前記乾燥は、乾燥機を使用することによって周囲温度を上回る温度で実施してもよい。布地を乾燥させる器具はよく知られており、しばしば衣服乾燥機と呼ばれている。そのような電気機器は、衣服に加えて多くの他のアイテム、例えばタオル、シーツ、枕カバー、おむつ等を乾燥させるために使用され、そのような装置は世界中の多くの国で標準的な便利なものとして受け入れられており、布地を乾燥させる物干綱の使用と実質的に置き換えられている。近頃使用されている多くの乾燥機は、乾燥機内で布地を回転させながら、布地の上又はその中を通る加熱空気を使用するものである。例えば、電気的に、ガス炎によって、或いはマイクロウェーブ放射によって空気を加熱してもよい。このような空気を、約15℃~約400℃、約25℃~約200℃、約35℃~約100℃、又は更に約40℃~約85℃に加熱して、乾燥機で使用して表面及び/又は布地を乾燥させてもよい。当業者に理解されるように、本発明の洗浄組成物は、理想的には洗濯用途に用いるのに好適である。従って、本発明は布地を洗濯するための方法を含む。この方法は、洗濯する布地を本出願人らの洗浄組成物、洗浄添加物、又はこれらの混合物の少なくとも1つの実施形態を含む前記洗浄用洗濯溶液と接触させるステップを含む。布地には、通常の消費者用又は業務用の使用条件で洗濯可能な大部分のあらゆる布地が含まれ得る。溶液は、好ましくは約4.0~約12.0のpHを有する。組成物は、溶液中で約500ppm~約15,000ppmの濃度で使用してもよい。水温は、典型的には約5℃~約90℃の範囲である。水と布地の比率は、典型的には約1:1~約30:1である。
【0760】
更に以下のパラグラフで上記に記載される本発明を定義する。
【0761】
パラグラフ1。親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含む、α-アミラーゼ変異体。
【0762】
パラグラフ2。パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する、α-アミラーゼ変異体。
【0763】
パラグラフ3。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、前記変異体が、前記親ポリペプチド、好ましくは配列番号2又は3と比較した場合に、改善された性能、例えば改善係数(IF)>1.0の比活性の測定値に対して改善された洗浄性能を有する、α-アミラーゼ変異体。
【0764】
パラグラフ4。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記改変が、番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476位に対応する1つ以上の位置にある、α-アミラーゼ変異体。
【0765】
パラグラフ5。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記改変が、番号付けのために配列番号1を用いてH1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E及びG476A位に対応する1つ以上の位置にある、α-アミラーゼ変異体。
【0766】
パラグラフ6。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記改変が、番号付けのために配列番号1を用いてR180、S181、T182、及びG183位に対応する2つ以上の位置に欠失を含む、α-アミラーゼ変異体。
【0767】
パラグラフ7。パラグラフ6に記載のα-アミラーゼ変異体であって、欠失が、番号付けのために配列番号1を用いてR180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*、又はT182*+G183*からなる群から選択される、α-アミラーゼ変異体。
【0768】
パラグラフ8。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体が、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aからなる群から選択される1つ以上の改変を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する、α-アミラーゼ変異体。
【0769】
パラグラフ9。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体が、
番号付けのために配列番号1を用いてH1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*、及び
A111G+R180*+S181*からなる群から選択される、1つ以上の改変を含むかそれからなり、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する、α-アミラーゼ変異体。
【0770】
パラグラフ10。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、改善された特性を有し、前記改善された特性が、改善係数(IF)>1.0の比活性の向上の測定値に対して改善された洗浄性能である、α-アミラーゼ変異体。
【0771】
パラグラフ11。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、改善された特性を有し、前記改善された特性が、前記親ポリペプチドと比較して、改善係数(IF)>1.0の比活性が向上した測定値に対して改善された洗浄性能である、α-アミラーゼ変異体。
【0772】
パラグラフ12。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、改善された特性を有し、前記改善された特性が、配列番号2及び/又は配列番号3の前記親ポリペプチドと比較して、改善係数(IF)>1.0の比活性が向上した測定値に対して改善された洗浄性能である、α-アミラーゼ変異体。
【0773】
パラグラフ13。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、改変の数が、1~20個、例えば、1~10個、及び1~5個、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20個の改変である、α-アミラーゼ変異体。
【0774】
パラグラフ14。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記α-アミラーゼが、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、B.リケニフォルミス(B.licheniformis)、バチルス属(Bacillus)種KSM-K38、B.レントス(B.lentos)、B.ブレビ(B.brevis)、B.ステアロサーモフィルス(B.stearothermophilus)、B.アルカロフィラス(B.alkalophilus)、B.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)、B.コアギュランス(B.coagulans)、B.サーキュランス(B.circulans)、B.ロータス(B.lautus)、B.チューリンゲンシス(B.thuringiensis)、ストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)、バチルス・ハルマパルス(Bacillus halmapalus)又はS.ムリナス(S.murinus)に由来する、α-アミラーゼ変異体。
【0775】
パラグラフ15。前述のパラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記親α-アミラーゼが、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13及び14に記載されるアミノ酸配列から選択されるか、又は、任意のα-アミラーゼが、配列番号1、2又は3に記載されるアミノ酸配列のいずれかと、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する、α-アミラーゼ変異体。
【0776】
パラグラフ16。パラグラフに記載のα-アミラーゼ変異体であって、前記親α-アミラーゼが、配列番号1、2及び3に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる、α-アミラーゼ変異体。
【0777】
パラグラフ17。パラグラフ1~16に記載のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド。
【0778】
パラグラフ18。パラグラフ17に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。
【0779】
パラグラフ19。パラグラフ17に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【0780】
パラグラフ20。パラグラフ17に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、パラグラフ18に記載の核酸構築物、又はパラグラフ19に記載の発現ベクター。
【0781】
パラグラフ21。a.前記変異体の発現に好適な条件下でパラグラフ20の宿主細胞を培養することと、b.任意選択により前記変異体を回収することとを含む、α-アミラーゼ変異体を産生する方法。
【0782】
パラグラフ22。番号付けのために配列番号1を用いて1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び476位に対応する1つ以上の位置に改変を導入することによって、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を得る方法であって、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する方法。
【0783】
パラグラフ23。配列番号1のアミノ酸配列を有するか、又はそれと少なくとも60%の配列相同性を有する親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体の洗浄性能を改善する方法であって、前記方法は、以下のステップ:
a)ハイブリッドα-アミラーゼ内の2つ、3つ、又は4つの位置における置換及び/又は欠失であって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182、及び183位に対応する、置換及び/又は欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を用いてH1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476位に対応する1つ以上の位置に改変とを含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14と、60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有し、前記変異体が、α-アミラーゼ活性と、前記親ポリペプチドと比較して改善された洗浄性能とを有する方法。
【0784】
パラグラフ24。パラグラフ1~16のいずれか1つに記載の変異体を含む組成物。
【0785】
パラグラフ25。少なくとも1つの更なる活性成分を更に含む、パラグラフ24に記載の組成物。
【0786】
パラグラフ26。活性成分が、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート剤、染料移行阻害剤、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予め形成された過酸、ポリマー分散剤、粘土汚れ除去/再付着防止剤、増白剤、泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、向水性物質、ビルダー及び補助ビルダー、布地色調剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、並びに/又は色素からなる群から選択される、パラグラフ25に記載の組成物。
【0787】
パラグラフ27。前記活性成分が酵素である、パラグラフ26に記載の組成物。
【0788】
パラグラフ28。酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナナーゼ、又はこれらの任意の混合物を含む群から選択される、パラグラフ24~27のいずれか1つに記載の組成物。
【0789】
パラグラフ29。液体洗剤、固体洗剤、ゲル洗剤、粉末洗剤、タブ、ポッド、パウチ及び粒状洗剤などの洗浄組成物である、パラグラフ24~28のいずれか1つに記載の組成物。
【0790】
パラグラフ30。液体洗濯組成物又は自動食器洗浄(ADW)液体洗剤組成物などの液体食器洗浄組成物、又はソープバーなどの粉末洗濯組成物、又はADW単位用量洗剤組成物などの粉末食器洗浄組成物である、パラグラフ24~29のいずれか1つに記載の組成物。
【0791】
パラグラフ31。洗濯又は食器洗浄を含む硬質表面洗浄及び工業用クリーニングなどの洗浄プロセスにおける、パラグラフ1~16のいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体の使用。
【0792】
パラグラフ32。配列番号1、2、3、4又は5のいずれかのAドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するAドメインと、配列番号1、2、10、11又は12のいずれかのBドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するBドメインと、配列番号1、2、3、4又は5のいずれかのCドメインと少なくとも60%の配列相同性を有するCドメインとを含む、α-アミラーゼ活性を有するハイブリッドポリペプチド。
【0793】
パラグラフ33。Aドメインが、配列番号4のAドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する、パラグラフ32に記載のハイブリッド。
【0794】
パラグラフ34。A1ドメインが、配列番号4の1~5位の範囲の位置で始まり、94~114位の範囲の位置で終わる、例えば、1~3位の範囲の位置で始まり、99~110位の範囲の位置で終わる、又は1~3位の範囲の位置で始まり、104~109位の範囲の位置で終わる、特に1~108位の配列と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する、パラグラフ32~33に記載のハイブリッド。
【0795】
パラグラフ35。Bドメインが、配列番号12の93~113位の範囲の位置で始まり、195~215位の範囲の位置で終わる、例えば、97~109位の範囲の位置で始まり、199~211位の範囲の位置で終わる、又は100~106位の範囲の位置で始まり、202~208位の範囲の位置で終わる、特に109~205位の配列と、少なくとも60%の配列相同性、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する、パラグラフ32~34に記載のハイブリッド。
【0796】
パラグラフ36。Cドメインが、配列番号4のCドメインと、少なくとも60%の配列相同性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する、パラグラフ32~35に記載のハイブリッド。
【0797】
パラグラフ37。A2ドメイン及びCドメインが、配列番号4の201~221位の範囲の位置で始まり、478~514位の範囲の位置で終わる、例えば、203~211位の範囲の位置で始まり、480~510位の範囲の位置で終わる、又は205~216位の範囲の位置で始まり、480~500位の範囲の位置で終わる、特に206~485位の配列と、少なくとも60%の配列相同性、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列相同性を有する、パラグラフ32~36に記載のハイブリッド。
【0798】
パラグラフ38。前記ハイブリッドポリペプチドが、配列番号3の前記親ポリペプチドと比較して改善された特性を有する、パラグラフ32~37のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0799】
パラグラフ39。改善された特性が、比活性の向上、特にモデルAの洗剤組成物の比活性の向上としての洗浄性能の向上である、パラグラフ32~38のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0800】
パラグラフ40。改善された特性が、配列番号3の前記親ポリペプチドと比較した場合に、改善係数>1.0として測定される比活性の向上である、パラグラフ32~39のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0801】
パラグラフ41。前記親ポリペプチドが、配列番号1~14のいずれか1つと、少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する、パラグラフ32~40のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0802】
パラグラフ42。前記ハイブリッドポリペプチドが、配列番号1~14のいずれか1つと、少なくとも60%、例えば65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば少なくとも99%、ただし100%未満の配列相同性を有する、パラグラフ32~41のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0803】
パラグラフ43。番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182及び183位に対応する1つ以上のアミノ酸の欠失を更に含む、パラグラフ32~42のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0804】
パラグラフ44。番号付けのために配列番号1を用いて180、181、182及び183位に対応する2つ以上のアミノ酸の欠失を含む、パラグラフ43に記載のハイブリッドポリペプチド。
【0805】
パラグラフ45。番号付けのために配列番号1を用いて180及び181位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0806】
パラグラフ46。番号付けのために配列番号1を用いて180及び182位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0807】
パラグラフ47。番号付けのために配列番号1を用いて180及び183位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0808】
パラグラフ48。番号付けのために配列番号1を用いて181及び182位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0809】
パラグラフ49。番号付けのために配列番号1を用いて181及び183位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0810】
パラグラフ50。番号付けのために配列番号1を用いて182及び183位に対応するアミノ酸の欠失を含む、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0811】
パラグラフ51。配列番号1又は2を含むか又はそれからなる、前述のパラグラフ43~44のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0812】
パラグラフ52。配列番号3の親ポリペプチドと比較して少なくとも1つの改善された特性を有し、改善された特性が、洗剤安定性、比活性の向上、基質特異性、熱安定性、pH依存活性、pH依存安定性、酸化安定性、Ca2+依存性、及び洗浄性能を含む群から選択される、前述のパラグラフ32~51のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチド。
【0813】
パラグラフ53。前述のパラグラフ32~52のいずれかに記載のハイブリッドポリペプチドであって、前記α-アミラーゼが、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)、B.リケニフォルミス(B.licheniformis)、バチルス属(Bacillus)種KSM-K38、B.レントス(B.lentos)、B.ブレビ(B.brevis)、B.ステアロサーモフィルス(B.stearothermophilus)、B.アルカロフィラス(B.alkalophilus)、B.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)、B.コアギュランス(B.coagulans)、B.サーキュランス(B.circulans)、B.ロータス(B.lautus)、B.チューリンゲンシス(B.thuringiensis)、ストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)、バチルス・ハルマパルス(Bacillus halmapalus)又はS.ムリナス(S.murinus)に由来する、ハイブリッドポリペプチド。
【0814】
パラグラフ54。前述のパラグラフ32~53のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【0815】
パラグラフ55。パラグラフ54に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物。
【0816】
パラグラフ56。パラグラフ54に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【0817】
パラグラフ57。パラグラフ54に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞、パラグラフ55に記載の核酸構築物、又はパラグラフ56に記載の発現ベクター。
【0818】
パラグラフ58。配列番号4又は5のα-アミラーゼと少なくとも60%の同一性を有するα-アミラーゼの洗浄性能を改善する方法であって、前記方法は、前記α-アミラーゼのBドメインを、配列番号12のアミノ酸109~206を有するBドメインか、又はこれと少なくとも60%の同一性を有する配列と置換することを含む方法。
【0819】
パラグラフ59。a.前記ハイブリッドの発現に好適な条件下でパラグラフ57の宿主細胞を培養することと、b.任意選択により前記ハイブリッドを回収することとを含む、ハイブリッドポリペプチドを産生する方法。
【0820】
パラグラフ60。パラグラフ32~53のいずれか1つに記載のハイブリッドを含む洗浄組成物。
【0821】
パラグラフ61。少なくとも1つの更なる活性成分を更に含む、パラグラフ60に記載の組成物。
【0822】
パラグラフ62。活性成分が、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート剤、染料移行阻害剤、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予め形成された過酸、ポリマー分散剤、粘土汚れ除去/再付着防止剤、増白剤、泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、向水性物質、ビルダー及び補助ビルダー、布地色調剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、並びに/又は色素からなる群から選択される、パラグラフ61に記載の組成物。
【0823】
パラグラフ63。前記活性成分が酵素である、パラグラフ62に記載の組成物。
【0824】
パラグラフ64。酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナナーゼ、又はこれらの任意の混合物を含む群から選択される、パラグラフ60~63のいずれか1つに記載の組成物。
【0825】
パラグラフ65。組成物が、液体洗剤、固体洗剤、ゲル洗剤、粉末洗剤、タブ、ポッド、パウチ及び粒状洗剤を含む群から選択される、パラグラフ60~64のいずれか1つに記載の組成物。
【0826】
パラグラフ66。液体洗濯組成物又は自動食器洗浄(ADW)液体洗剤組成物などの液体食器洗浄組成物、又はソープバーなどの粉末洗濯組成物、又はADW単位用量洗剤組成物などの粉末食器洗浄組成物である、パラグラフ60~65のいずれか1つに記載の組成物。
【0827】
パラグラフ67。洗濯、又は食器洗浄及び工業用クリーニングを含む硬質表面洗浄などの洗浄プロセスにおける、パラグラフ60~66のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチドの使用。
【0828】
材料及び方法
α-アミラーゼ活性のためのアッセイ
pNP-G7アッセイ
α-アミラーゼ活性は、G7-pNP基質を使用する方法によって測定してもよい。G7-pNPは、4,6-エチリデン(G)-p-ニトロフェニル(G)-α,D-マルトヘプタオシドの略称であり、α-アミラーゼなどのエンド-アミラーゼによって切断することができるブロックオリゴ糖である。切断後、キットに含まれるα-グルコシダーゼが加水分解された基質を消化して更に遊離PNP分子を放出するが、この分子は黄色であるため、λ=405nm(400~420nm)での可視分光光度法によって測定することができる。G7-pNP基質及びα-グルコシダーゼを含有するキットは、Roche/Hitachi(カタログ番号11876473)によって製造されている。
【0829】
試薬:
このキットのG7-pNP基質には、22mMの4,6-エチリデン-G7-pNP、及び52.4mMのHEPES(2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]-エタンスルホン酸)、pH7.0が含まれている。
【0830】
α-グルコシダーゼ試薬には、52.4mMのHEPES、87mMのNaCl、12.6mMのMgCl、0.075mMのCaCl、>4kU/Lのα-グルコシダーゼが含まれている。
【0831】
1mgのα-グルコシダーゼ試薬を0.2mLのG7-pNP基質で混合することによって基質希釈標準溶液を作製する。この基質希釈標準溶液は、使用する直前に作製する。
【0832】
希釈緩衝液:50mMのMOPS、0.05%(重量/体積)のTriton X100(ポリエチレングリコールp-(1,1,3,3-テトラメチルブチル)-フェニルエーテル(C1422O(CO)n(n=9~10)))、1mMのCaCl2、pH8.0。
【0833】
手順:
分析するアミラーゼ試料を希釈緩衝液中で希釈し、希釈試料のpHが確実に7となるようにする。20μlの希釈酵素試料を96ウェルマイクロタイタープレートに移し、80μlの基質希釈標準溶液を添加することによってアッセイを実施する。溶液を混合して室温で1分間プレインキュベートし、吸収をOD 405nmで5分間にわたって20秒毎に測定する。
【0834】
時間依存的な吸収曲線の傾き(1分当たりの吸光度)は、所与の条件下における当該α-アミラーゼの比活性(酵素mg当たりの活性)と正比例する。アミラーゼ試料は、傾きが1分当たり0.4吸光度単位未満となるレベルまで希釈する必要がある。
【0835】
ファデバス活性アッセイ:
α-アミラーゼ活性は、ファデバス基質(例えば、Magle Life Sciences、Lund、Sweden社製)を使用する方法によって測定することもできる。ファデバス錠剤には、水に不溶性である球状の微小球形態の連結したデンプンポリマーが含まれている。これらの微小球には青色の染料が二重結合している。微小球の連結したデンプンポリマーは、α-アミラーゼ活性に比例した速度で分解される。α-アミラーゼがデンプンポリマーを分解したときに、放出された青色の染料が水溶性となり、620nmでの吸光度を測定することによって染料の濃度を測定することができる。青色の濃度は、試料中のα-アミラーゼ活性に比例する。
【0836】
分析するアミラーゼ試料を所望のpHの活性緩衝液中に希釈する。5mLの活性緩衝液中に1つの基質錠剤を懸濁し、マグネティックスターラーで混合する。基質を混合する間に、150μlをマイクロタイタープレート(MTP)又はPCR-MTPに移す。30μlの希釈アミラーゼ試料を150μlの基質に添加し、混合する。37℃で15分間インキュベートする。30μlの1M NaOHを添加して混合することによって反応を停止させる。4000xgで5分間、MTPを遠心分離する。新しいMTPに100μlを移し、620nmでの吸光度を測定する。
【0837】
アミラーゼ試料は、620nmでの吸光度が0~2.2となり、且つ活性アッセイの線形範囲内となるように希釈する必要がある。
【0838】
還元糖活性アッセイ:
α-アミラーゼ活性は、例えば、トウモロコシデンプン基質を使用した還元糖アッセイによって測定することもできる。p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PHBAH)と反応させることによって、デンプンのα-1,4-グリコシド結合を加水分解するα-アミラーゼにより形成された還元末端の数を測定する。PHBAHと反応させた後に、405nmでの吸光度によって還元末端の数を測定することができ、還元末端の濃度は試料中のα-アミラーゼ活性に比例する。
【0839】
トウモロコシデンプン基質(3mg/ml)を、アッセイの前にmilliQ水で5分間加熱処理して冷却することによって可溶化する。停止溶液用にKa-Na-酒石酸/NaOH溶液(Ka-Na-酒石酸(Merck 8087)50g/l、NaOH 20g/l)を調製し、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PHBAH、Sigma H9882)をKa-Na-酒石酸/NaOH溶液に15mg/mlとなるまで添加することによって、新鮮な停止溶液を調製する。
【0840】
PCR-MTP中で、50μlの活性緩衝液を50μlの基質と混合する。50μlの希釈酵素を添加し、混合する。所望の温度で5分間、PCR装置内でインキュベートする。75μlの停止溶液(Ka-Na-酒石酸/NaOH/PHBAH)を添加することによって反応を停止させる。95℃で10分間、PCR装置内でインキュベートする。新しいMTPに150μlを移し、405nmでの吸光度を測定する。
【0841】
アミラーゼ試料は、405nmでの吸光度が0~2.2となり、且つ活性アッセイの線形範囲内となるように希釈する必要がある。
【0842】
EnzChek(登録商標)アッセイ:
アミラーゼの残留活性を測定するために、EnzChek(登録商標)Ultra Amylase Assayキット(E33651、Invitrogen、La Jolla、CA、USA)を使用してもよい。
【0843】
基質は、トウモロコシデンプン誘導体であるDQ(商標)デンプンであり、これはBODIPY(登録商標)FL染料で蛍光が消光する程度に標識したトウモロコシデンプンである。約1mgの凍結乾燥した基質を含有する1つのバイアルを、100マイクロリットルの50mM 酢酸ナトリウム(pH4.0)中に溶解させる。バイアルを20秒間ボルテックスし、溶解するまで時々混合しながら室温で暗所に放置する。次いで、900マイクロリットルの100mMのアセテート、0.01%(重量/体積)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl、pH 5.5を添加して完全にボルテックスし、使用する準備が整うまで室温で暗所に保存する。ストック基質希釈標準溶液は、残留活性緩衝液(100mMのアセテート、0.01%(重量/体積)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl、pH 5.5)中に10倍に希釈することによって調製する。インキュベーションの直後に、酵素を100mMのアセテート、0.01%(重量/体積)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl、pH 5.5中に1ml当たり10~20ngの酵素タンパク質の濃度となるまで希釈する。
【0844】
アッセイでは、黒色384ウェルマイクロタイタープレート内で25マイクロリットルの基質希釈標準溶液を25マイクロリットルの希釈酵素と10秒間混合する。蛍光強度を25℃でウェル毎に15分間で毎分1回測定し(励起:485nm、発光:555nm)、Vmaxを時間に対する蛍光強度のプロットの傾きとして計算する。傾きは線形である必要があり、残留活性アッセイでは、希釈した参照酵素溶液が活性アッセイの線形範囲内となるように補正されている。
【実施例
【0845】
実施例1:配列番号1に記載されるハイブリッドポリペプチドの構築
配列番号3に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸番号1~アミノ酸番号108、及びアミノ酸番号207~アミノ酸番号485を有するポリペプチド(第1の親ポリペプチド)由来のAドメイン及びCドメインと、配列番号11に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸番号109~アミノ酸番号206を有するポリペプチド(第2の親ポリペプチド)由来のBドメインとの間のハイブリッドの構築。
【0846】
2つのアミラーゼの3D構造的アライメントに基づき、第1の親ポリペプチドのアミノ酸番号1~アミノ酸番号108、及びアミノ酸番号207~アミノ酸番号485をドメインA及びドメインCと定義し、第2の親ポリペプチドのアミノ酸番号109~アミノ酸番号206をBドメインと定義する。第1の親ポリペプチド由来のA-Cドメイン、及び第2の親ポリペプチド由来のBドメインの一部をコードする合成DNAフラグメントを設計して外部ベンダーより購入した。
【0847】
第1の親ポリペプチド由来のAドメイン及びCドメイン、並びに第2の親ポリペプチド由来のBドメインからなる得られたアミラーゼは、配列番号1に記載されるポリペプチドである。更に、得られたR180*+S181*の欠失を有するアミラーゼは、配列番号2に記載されるポリペプチドである。
【0848】
実施例2:ハイブリッドポリペプチドの比活性
実施例1に記載したように生成したハイブリッドポリペプチドが、維持された、又は更に改善された活性を有しているかどうかを判断するために、マイクロスワッチアッセイによってハイブリッドポリペプチドを評価した。以下の洗剤組成物を調製した。
【0849】
【表2】
【0850】
モデルA洗剤(0.33%)の調製:6000dH(水の硬度)を有するモル比4:1のCaCl及びMgClストック溶液。125.8gのCaCl.2HOを1リットルの瓶に秤量し、これに500mlのタイプIの水を添加してよく撹拌した。これに43.8gのMgCl.6HOを秤量して添加し、十分に溶解させて、タイプIの水によって最終容量を1000mlとなるようにした。
【0851】
0.535MのNaHCO溶液:44.9gの炭酸水素ナトリウムを、100mlのタイプIの水中に溶解させた。
【0852】
水の硬度が15(15°dH)のモデルA洗剤:3.335gのモデルA洗剤を秤量して1リットルの瓶に移し、これに865mlのタイプIの水を添加してよく混合した。これに7.5mlの0.535M NaHCOを添加してよく混合し、タイプ1の水によって容積を1リットルとなるようにした。水の硬度を15°dHに調節するため、6000°dHの2.5mlのモル比4:1のCaCl.2HO及びMgCl.6HOストック溶液を添加し、混合物を15分間撹拌した。
【0853】
実験手順
マザープレートの調製:
コロニーピッカー(KBiosystems)によってコロニーを形質転換プレートから選択し、TBGly培地を含む96ウェル培養プレートに播種して増殖させた。培養液を37℃で3日間増殖させ、遠心分離することによって上清をプレートから回収した。
【0854】
基質プレートの調製:
Center for Test materials(CFT、The Netherlands)からCS-27という5メートルのスワッチを入手し、スワッチパンチャーを用いて6mmのマイクロスワッチに切断した。96ウェルのNuncプレートの各ウェルに1つ又は2つのスワッチを置き、そこに180μlのモデルA洗剤(0.33%)を添加した。培養液上清又は精製されたタンパク質を、0.1mMのCaCl、0.01%のTriton-Xを含む100mMのMOPS、pH7によって0.1ppm又は0.4ppmとなるまで希釈した。スワッチ及びモデルA洗剤を含有するプレートに、20μlの希釈酵素試料を添加して0.01ppm又は0.04ppmの終濃度となるようにし、25℃にて800RPMで10分間インキュベートした。40μlの反応混合物を別の96ウェルプレートに移し、全ての遊離したオリゴ糖をグルコースに消化させるために、0.1mg/mlのアミログルコシダーゼ(AMG)10μlを添加して、室温で5分間インキュベートした。市販用の製品であるAMG 300L(Novozyme)からAMGを精製した。p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PAHBAH)法(Lever M Anal Biochem.81:21-7)によって還元末端を検出した。1.5%のPAHBAH試薬を調製するために、1.5gのp-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PAHBAH)を、1.0MのNaCO、0.17Mの酒石酸カリウムナトリウム、及び5mMのBi(NO)3.5HOを含む緩衝液中に溶解させた。50μlのAMG消化物を50μlの1.5% PAHBAH試薬に添加し、95℃で10分間加熱した。得られた混合物の吸光度を405nmで測定したが、この吸光度は酵素活性に比例するものであった。培養液上清の場合は、特異抗体を用いたELISAにより、発現した酵素の濃度を測定した。比活性は、タンパク質濃度による活性の比率を取ることによって計算し、ヒットしたものは親ポリペプチド(α-アミラーゼ)の比活性よりも高いと定義した。
【0855】
改善係数(IF)を以下のように計算した。
改善係数(IF)=[ハイブリッドポリペプチドの比活性]/[親ポリペプチド(α-アミラーゼ)の比活性]
ハイブリッドポリペプチドの比活性=15.70
親ポリペプチドの比活性=11.41
改善係数(IF)=15.70/11.41=1.4。
【0856】
従って、配列番号2(ハイブリッドポリペプチド)のIFは1.4であり、配列番号3(親ポリペプチド)のIFは1.0である。
【0857】
実施例3:本発明による変異体の生成
配列番号1のアミラーゼ変異体を、簡潔に述べると以下の標準的な手順によって調製した:ランダム及び/又は部位特異的突然変異を遺伝子に導入し、バチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)宿主細胞を変異遺伝子で形質転換し、形質転換宿主細胞を発酵させる(例えば、国際公開第2004/111220号パンフレットの実施例1に記載される通り)。α-アミラーゼ変異体は、同様の方法でバチルス・サブティリス(Bacillus subtilis)内で組み換えによって産生した。位置が変わる異なる組み合わせが生じた場合に、変異体のライブラリーを生成した。生成された変異体を以下の実施例に列挙する。
【0858】
実施例4:変異体の比活性
実施例3に記載したように生成した変異体が、維持された、又は更に改善された活性を有しているかどうかを判断するために、実施例2に記載したようなマイクロスワッチアッセイによって変異体を評価した。比活性は、タンパク質濃度による活性の比率を取ることによって計算し、変異体を配列番号3又は配列番号2のα-アミラーゼの比活性よりも高いと定義した。
【0859】
【表3】
【0860】
【表4】
【0861】
【表5】
【0862】
【表6】
【0863】
【表7】
【0864】
【表8】
【0865】
【表9】
【0866】
【表10】
【0867】
【表11】
【0868】
【表12】
【0869】
【表13】
【0870】
【表14】
【0871】
【表15】
【0872】
【表16】
【0873】
【表17】
【0874】
【表18】
【0875】
【表19】
【0876】
【表20】
【0877】
【表21】
【0878】
【表22】
【0879】
【表23】
【0880】
【表24】
【0881】
【表25】
【0882】
【表26】
【0883】
【表27】
【0884】
【表28】
【0885】
【表29】
【0886】
【表30】
【0887】
実施例5:自動機械的応力アッセイを使用したα-アミラーゼの洗浄性能
洗剤ベースの組成物中のα-アミラーゼの洗浄性能を評価するために、自動機械的応力アッセイ(AMSA)を使用して洗浄実験を実施してもよい。AMSA試験により、少量の酵素洗剤溶液の洗浄性能を大量に検査することができる。AMSAプレートは、試験溶液用の多数のスロットと、洗浄対象の織物のスワッチを全てのスロット開口部にしっかりと圧搾する蓋とを有する。洗浄時間中にプレート、試験溶液、織物及び蓋を激しく振盪して、試験溶液を織物と接触させ、規則的、周期的に機械的応力を加える。更なる説明については、国際公開第02/42740号パンフレット、特に23~24ページのパラグラフ「特定方法の実施形態」を参照されたい。
【0888】
一般的な洗浄性能についての説明
水及び下記に記載するようなモデル洗剤Aを含む試験溶液、並びに0ppm又は0.09ppmの濃度の本発明の酵素を用意する。デンプンで染色した布地(Center For Test materials BV(P.O.Box120、3133KT、Vlaardingen、The Netherlands)社製CS-28)を加え、20℃で10分間洗浄した。水道水を流しながらすすぎ、暗所で乾燥させた後、続いて染色した布地の光の強度値を洗浄性能の測定値として測定した。1L当たり0mgの酵素タンパク質による試験をブランクとして使用し、これを洗剤による寄与に対応させる。洗浄ステップの間に、例えば、洗浄溶液を布地と共に振盪、回転又は撹拌する形で機械的作用を加えることが好ましい。AMSA洗浄性能実験は、下記に明記する実験条件下で行ってもよい。
【0889】
【表31】
【0890】
【表32】
【0891】
CaCl、MgCl、及びNaHCO
(Ca2+:Mg2+:HCO =4:1:7.5)を試験システムに添加することによって水の硬度を15°dHに調節した。洗浄後、織物を水道水で流して乾燥させた。
【0892】
洗浄性能は、白色光で照らしたときに、試料から反射する光の強度として表される輝度として測定する。試料を染色すると、反射光の強度は、清浄な試料よりも低い強度となる。従って、反射光の強度を用いて洗浄性能を測定することができる。
【0893】
専門のフラットベッドスキャナー(EPSON Expression 10000XL、EPSON)を使用して、洗濯した織物の画像を取り込むことによって色測定を行う。
【0894】
走査画像から光の強度の値を抽出するために、画像からの48→24ビットのピクセル値を赤、緑及び青(RGB)の値に変換する。RGB値をベクトルとして共に加算し、次いで得られたベクトルの長さを取得することによって強度値(Int)を算出する。
【数2】
【0895】
【表33】
【0896】
【表34】
【0897】
【表35】
【0898】
【表36】
【0899】
本明細書に開示される寸法及び値は、列挙した正確な数値に厳密に制限されるものと理解すべきではない。その代わりに、特に明記しない限り、そのような寸法はそれぞれ、列挙した値とその値周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味することが意図される。
【0900】
本明細書に記載され、特許請求される本発明は、本明細書に開示される特定の態様による範囲に限定されるべきではなく、なぜなら、これらの態様は、本発明のいくつかの態様を例示することを意図するものであるためである。任意の均等な態様が、本発明の範囲内であることが意図される。実際に、本明細書に図示及び記載されるものに加えて、前述の説明から、本発明の種々の変更形態が当業者に明らかとなるであろう。そのような変更形態もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。矛盾する場合には、定義を含む本開示が優先される。
【配列表】
2023506927000001.app
【国際調査報告】