特表 2023-507282 ヒトＩＬ‐１３に結合特異性を有する抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-02-22

(54)【発明の名称】ヒトＩＬ‐１３に結合特異性を有する抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230215BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20230215BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230215BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230215BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230215BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 17/04 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230215BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20230215BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230215BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K16/24 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C12P21/08

A61P11/02

A61P17/00

A61P17/04

A61P1/04

A61P29/00

A61P37/08

A61K39/395 U

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022534780

(86)(22)【出願日】2020-12-18

(85)【翻訳文提出日】2022-06-08

(86)【国際出願番号】 EP2020087053

(87)【国際公開番号】W WO2021123190

(87)【国際公開日】2021-06-24

(31)【優先権主張番号】1919062.8

(32)【優先日】2019-12-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514232085

【氏名又は名称】ユーシービー バイオファルマ エスアールエル

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ライトウッド、ダニエル ジョン

(72)【発明者】

【氏名】アダムズ、ラルフ

(72)【発明者】

【氏名】パルフラマン、ロジャー トーマス

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064DA01

4B065AA91Y

4B065AA93X

4B065AA93Y

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB41

4C085BB43

4C085BB44

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ヒトＩＬ‐１３の抗原決定基に対する特異性を有する抗体分子、該抗体分子の治療的使用及び該抗体分子の製造方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＩＬ‐１３に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、以下のものを含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
（ａ）以下を含む軽鎖可変領域：
ｉ．配列番号１を含むＣＤＲ‐Ｌ１、
ｉｉ 配列番号２を含むＣＤＲ‐Ｌ２、及び
ｉｉｉ 配列番号３を含むＣＤＲ‐Ｌ３
及び
（ｂ）以下を含む重鎖可変領域：
ｉ．配列番号４を含むＣＤＲ‐Ｈ１、
ｉｉ 配列番号５を含むＣＤＲ‐Ｈ２、及び
ｉｉｉ 配列番号６を含むＣＤＲ‐Ｈ３。

【請求項2】

軽鎖可変領域が配列番号１３又は配列番号１７に示される配列を含む、請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項3】

重鎖可変領域が配列番号１４又は配列番号１８に示される配列を含む、請求項１又は請求項２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項4】

軽鎖可変領域が配列番号１３に示される配列を含み、重鎖可変領域が配列番号１４に示される配列、又はそれと少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項5】

軽鎖可変領域が配列番号１７に示される配列を含み、重鎖可変領域が配列番号１８に示される配列、又はそれと少なくとも９５％同一である配列を含む、請求項１から３のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項6】

ＣＤＲ‐Ｌ１／ＣＤＲ‐Ｌ２／ＣＤＲ‐Ｌ３／ＣＤＲ‐Ｈ１／ＣＤＲ‐Ｈ２／ＣＤＲ‐Ｈ３配列が配列番号１／２／３／４／５／６を含み、軽鎖及び重鎖可変領域の残りが配列番号１３及び１４又は配列番号１７及び１８に対してそれぞれ少なくとも９５％の同一性を有する、請求項４又は請求項５に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項7】

抗体がキメラ、ヒト化又は完全ヒト抗体である、請求項１～６のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項8】

抗体が完全長抗体である、請求項１～６のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項9】

抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、又はｄｓｓｃＦｖである、請求項１～６のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項10】

抗原結合フラグメントが、配列番号２１に示される配列を含むｓｃＦｖまたは配列番号に示される配列を含むｄｓｓｃＦｖである、請求項９に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチド。

【請求項12】

請求項１１に記載のポリヌクレオチドを有する発現ベクター。

【請求項13】

請求項１２に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項14】

請求項１３の宿主細胞を、抗体又は抗原結合フラグメントの産生を許容する条件下で培養し、産生された抗体又は抗原結合フラグメントを回収することを含む、請求項１～１０のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメントの製造方法。

【請求項15】

請求項１～１０のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメントと、薬学的に許容されるアジュバント又は担体とを含む、医薬組成物。

【請求項16】

ヒト又は動物の身体を治療によって処置する方法に使用するための、請求項１～１０のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント、又は請求項１５に記載の医薬組成物。

【請求項17】

アトピー性皮膚炎、慢性手湿疹、鼻のマイクロポリポーシス又はポリポーシス、食物アレルギー、又は好酸球性食道炎の治療に用いるための、請求項１６に記載の抗体、抗原結合フラグメント又は医薬組成物。

【請求項18】

アトピー性皮膚炎、慢性手湿疹、鼻のマイクロポリポーシス若しくはポリポーシス、食物アレルギー、又は好酸球性食道炎の治療又は予防方法であって、治療有効量の請求項１～１０のいずれかに記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は請求項１５に記載の医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、上記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＩＬ‐１３抗体及びその結合フラグメントなどのフラグメント、それを含む組成物に関し、特にＩＬ‐１３関連疾患の予防及び／又は治療におけるそれらの使用に関するものである。

【背景技術】

【0002】

ＩＬ‐１３は、ＩＬ‐４と２５％の配列同一性を持つ短鎖のサイトカインである。それは、およそ１３２個のアミノ酸を含み、残基１０～２１（ヘリックスＡ）、残基４３～５２（ヘリックスＢ）、残基６１～６９（ヘリックスＣ）、及び残基９２～１１０（ヘリックスＤ）に亘る４つのヘリックスと、残基３３～３６と残基８７～９０に亘る２つのβストランドとの２次構造を形成している。ＩＬ‐１３の溶液構造が解明され、ＩＬ‐４でも観察される予測されたアップ‐アップ‐ダウン‐ダウン型の４つのヘリックスバンドル構造が明らかにされた。

【0003】

ヒトＩＬ‐１３は１７ｋＤａの糖タンパク質で、Ｔｈ２系統の活性化Ｔ細胞によって産生されるが、Ｔｈ０及びＴｈ１ ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びマスト細胞などのいくつかの非Ｔ細胞集団もＩＬ‐１３を産生する。ＩＬ‐１３の機能としては、ヒトＢ細胞におけるＩｇＥへの免疫グロブリンアイソタイプの切り替え、及びヒト及びマウスの両方における炎症性サイトカイン産生の抑制が挙げられる。

【0004】

ＩＬ‐１３は、細胞表面のレセプターであるＩＬ‐１３Ｒ‐α１及びＩＬ‐１３Ｒ‐α２に結合する。ＩＬ‐１３Ｒ‐α１はＩＬ‐１３と低親和性（Ｋ_Ｄ～１０ｎＭ）で相互作用し、次いでＩＬ‐４Ｒ‐αが高親和性（Ｋ_Ｄ～０．４ｎＭ）のシグナル伝達ヘテロ二量体レセプター複合体を形成している。

【0005】

ＩＬ‐４Ｒ／ＩＬ‐１３Ｒ‐α１複合体は、Ｂ細胞、単球／マクロファージ、樹状細胞、好酸球、好塩基球、線維芽細胞、内皮細胞、気道上皮細胞、気道平滑筋細胞などの多くの細胞型に発現している。ＩＬ‐１３Ｒ‐α／ＩＬ‐４Ｒレセプター複合体のライゲーションにより、シグナル・トランスデューサー・アンド・アクティベーター・オブ・トランスクリプション６（ＳＴＡＴ６）やインスリンレセプター基質２（ＩＲＳ２）経路を含む様々なシグナル伝達経路が活性化される。

【0006】

ＩＬ‐１３Ｒ‐α２鎖は単独でＩＬ‐１３に対して高い親和性を持つ（Ｋ_Ｄ～０．２５‐０．４ｎＭ）。それはＩＬ‐１３の結合を負に制御するデコイレセプターとして、またマクロファージやおそらく他の細胞型においてＡＰ‐１経路を介してＴＧＦ‐β合成と線維化を誘導するシグナルレセプターとして機能する。

【0007】

ＩＬ‐１３は、多くのヒト疾患の病態に関与しており、ＩＬ‐１３の活性を阻害したり、打ち消したりする治療戦略が考案されている。特に、ＩＬ‐１３に結合して中和する抗体は、ＩＬ‐１３活性を阻害する手段として求められてきた。しかしながら、ＩＬ‐１３、特にヒトＩＬ‐１３に結合することができる適切な及び／又は改良された抗体、特に、ヒトＩＬ‐１３を中和することができる抗体に対する必要性が当技術分野において存在する。本発明は、ヒトＩＬ‐１３を結合し、高い親和性で結合し、ヒトＩＬ‐１３を結合して中和することができる結合タンパク質、ＣＤＲグラフト化抗体、ヒト化抗体及びそのフラグメントの新規ファミリーを提供するものである。

【発明の概要】

【0008】

本発明は、ヒトＩＬ‐１３に結合する改良型抗体、特にＩＬ‐１３の生物学的活性を阻害する中和抗体を提供するものである。本発明はさらに、該抗体を含む医薬組成物、及びＩＬ‐１３関連疾患の治療におけるその使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】 Ａｂ６５０ヒト化アラインメント。ラット抗体（ドナー）Ｖ領域配列とヒト生殖細胞系列（アクセプター）Ｖ領域配列、及び設計されたヒト化配列のアラインメント。（Ａ）軽鎖グラフト６５０。６５０＝ラット可変軽鎖配列。６５０ｇＬ８＝ＩＧＫＶ１‐３９ヒト生殖細胞系列をアクセプターフレームワークとして用いた６５０可変軽鎖のヒト化グラフト。ＣＤＲは太字／下線で示す。ドナー残基は太字／イタリック体で示し、ハイライトした：Ｉ５８とＹ７１。（Ｂ）重鎖グラフト６５０。６５０＝ラット可変重鎖配列。６５０ｇＨ９＝ＩＧＨＶ１‐６９ヒト生殖細胞系列をアクセプターフレームワークとして用いた６５０可変重鎖のヒト化グラフト。ＣＤＲは太字／下線で示す。ドナー残基は太字／イタリック体で示し、ハイライトした：Ａ６７、Ｆ６９、及びＶ７１。

【図2】 抗ＩＬ１３アミノ酸配列及びＤＮＡ配列。抗体６５０のＣＤＲ、重及び軽可変領域、ｓｃＦｖ及びｄｓｓｃＦＶフォーマットをコードするアミノ酸及びＤＮＡ配列。

【発明を実施するための形態】

【0010】

発明の詳細な説明
抗体
本開示の文脈において使用するための抗体には、全抗体及びその機能的に活性なフラグメント、すなわち、ＩＬ‐１３に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む分子（抗原結合フラグメントとも呼ばれる）が挙げられる。抗体に関して本明細書に記載された特徴は、文脈上他に指示されない限り、抗体フラグメントにも適用される。

【0011】

全抗体は、一般に「免疫グロブリン（Ｉｇ）」とも呼ばれ、２本の重鎖と２本の軽鎖の要素がジスルフィド結合によって互いに結合し、それらが特徴的なＹ字型の３次元構造を定義するように集合している、インタクトな又は完全長の抗体である。古典的な天然型全抗体は、１種類の抗原型と結合する一価性と、２つの独立した抗原結合ドメインを持つ二価性を持っている。「インタクトな抗体」、「全長抗体」及び「全抗体」という用語は、本明細書で定義するＦｃ領域を含むネイティブ抗体構造に類似した構造を有する一価性二価性抗体を指すために互換的に使用される。

【0012】

各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略記）と軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）から構成されている。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略記）と、Ｉｇクラスに応じて３つの定常ドメインＣ_H１、Ｃ_H２及びＣ_H３、又は４つの定常ドメインＣ_H１、Ｃ_H２、Ｃ_H３及びＣ_Ｈ４から構成される重鎖定常領域（ＣＨ）とから構成されている。Ｉｇ又は抗体の「クラス」は、定常領域の種類を意味し、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭを含み、それらのいくつかは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などのサブクラスにさらに分割することが可能である。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0013】

本発明による抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる抗原の認識を決定する超可変性の領域（又は「超可変領域」）にさらに細分化することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより構造的に保存されている領域とともに散在している。各Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で並んだ３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。ＣＤＲとＦＲは一緒になって可変領域を形成する。慣習的に、抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域におけるＣＤＲは、ＣＤＲ‐Ｈ１、ＣＤＲ‐Ｈ２及びＣＤＲ‐Ｈ３と呼ばれ、軽鎖可変領域におけるＣＤＲは、ＣＤＲ‐Ｌ１、ＣＤＲ‐Ｌ２及びＣＤＲ‐Ｌ３と呼ばれる。これらは、各鎖のＮ末端からＣ末端に向かう方向に順次番号付けされている。

【0014】

ＣＤＲは、従来、Ｋａｂａｔらによって考案されたシステムに従って番号付けされる。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，ＵＳＡ（以下「Ｋａｂａｔら（前掲）」）に記載されている。本明細書では、特に指示する場合を除き、この番号付けシステムを用いる。

【0015】

Ｋａｂａｔ残基の呼称は、アミノ酸残基の線形番号付けと必ずしも直接対応しない。実際の直鎖アミノ酸配列は、フレームワークであれ相補性決定領域であれ、基本可変ドメイン構造の構造的構成要素の短縮又は挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔ番号付けよりも少ない又は追加のアミノ酸を含む場合がある。残基の正しいＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列中の相同性のある残基を「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とアラインメントすることにより、所定の抗体について決定することができる。

【0016】

重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによると、残基３１～３５（ＣＤＲ‐Ｈ１）、残基５０～６５（ＣＤＲ‐Ｈ２）、残基９５～１０２（ＣＤＲ‐Ｈ３）に位置している。しかし、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１‐９１７（１９８７））によれば、ＣＤＲ‐Ｈ１に相当するループは、残基２６から残基３２まで延びている。したがって、本明細書で採用する「ＣＤＲ‐Ｈ１」は、他に示されない限り、Ｋａｂａｔ番号付けシステムとＣｈｏｔｈｉａのトポロジカルループ定義の組み合わせによって記述されるように、残基２６から３５を指すことを意図している。

【0017】

軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、残基２４～３４（ＣＤＲ‐Ｌ１）、残基５０～５６（ＣＤＲ‐Ｌ２）及び残基８９～９７（ＣＤＲ‐Ｌ３）に位置している。

【0018】

ＣＤＲループに加えて、ＣＤＲ‐２（ＣＤＲ‐Ｌ２又はＣＤＲ‐Ｈ２）とＣＤＲ‐３（ＣＤＲ‐Ｌ３又はＣＤＲ‐Ｈ３）の間に第４のループが存在し、これはフレームワーク３（ＦＲ３）によって形成されている。Ｋａｂａｔ番号付けシステムでは、フレームワーク３は重鎖の６６‐９４位と軽鎖の５７‐８８位と定義されている。

【0019】

免疫グロブリンファミリーの異なるメンバーの配列のアラインメントに基づいて、番号付けのスキームが提案されており、例えばＫａｂａｔら、１９９１、及びＤｏｎｄｅｌｉｎｇｅｒら、２０１８、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ９，ａｒｔｉｃｌｅ ２２７８に記述されている。

【0020】

本明細書で使用する「定常ドメイン」、「定常領域」という用語は、可変領域の外側にある抗体のドメインを指すために互換的に使用される。定常領域は、同じアイソタイプのすべての抗体において同一であるが、あるアイソタイプから別のアイソタイプへは異なる。典型的には、重鎖の定常領域は、Ｎ末端からＣ末端まで、ＣＨ１‐ヒンジ‐ＣＨ２‐ＣＨ３‐任意にＣＨ４で形成され、３つ又は４つの定常ドメインを含む。

【0021】

本発明の抗体分子の定常ドメインは、存在する場合、抗体分子の提案された機能、特に必要とされ得るエフェクター機能を考慮して選択され得る。例えば、定常ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭドメインであってもよい。特に、抗体分子が治療用途に意図され、抗体エフェクター機能が必要とされる場合、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常ドメインが使用され得る。あるいは、抗体分子が治療目的で、抗体エフェクター機能が必要とされない場合には、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４アイソタイプが使用され得る。これらの定常ドメインの配列変異体もまた使用され得ることが理解されよう。例えば、２４１位のセリン（Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従った番号付け）が、アンガルら（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｂｏｌｉｓｈｅｓ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ（ＩｇＧ４） ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ａｎａｌｙｓｉｓ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０，１０５‐１０８）(単一のアミノ酸置換は、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析中に観察されるキメラマウス／ヒト（ＩｇＧ４）抗体の不均一性を廃する)に記載されるようにプロリンに変更され、本明細書ではＩｇＧ４Ｐと呼ばれるＩｇＧ４分子を使用することができる。

【0022】

「Ｆｃ」、「Ｆｃフラグメント」、及び「Ｆｃ領域」は、第１定常免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含む抗体のＣ末端領域を指すために互換的に使用される。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常ドメイン、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３、又はＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常ドメイン、及びこれらのドメインのＮ末端の柔軟なヒンジを指している。ヒトＩｇＧ１重鎖Ｆｃ領域は、本明細書において、残基Ｃ２２６からそのカルボキシル末端までを含むように定義され、ここで、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるものである。ヒトＩｇＧ１の文脈において、下部ヒンジは２２６～２３６位を、ＣＨ２ドメインは２３７～３４０位を、ＣＨ３ドメインは３４１～４４７位を、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスにしたがって指す。他の免疫グロブリンの対応するＦｃ領域は、配列のアラインメントによって同定することができる。

【0023】

本開示の文脈において、存在する場合、定常領域又はＦｃ領域は、機能的なＦｃＲ結合ドメイン、好ましくは機能的なＦｃＲｎ結合ドメインを含むことを条件として、上記で定義したように天然であってもよく、さもなければ様々に修飾されてもよい。好ましくは、修飾された定常領域又はＦｃ領域は、機能性及び／又は薬物動態を改善することにつながる。修飾は、Ｆｃフラグメントの特定の部分の欠失を含んでもよい。修飾は、さらに、抗体の生物学的性質に影響を与えることができる様々なアミノ酸置換を含むことができる。ＦｃＲｎ結合を増加させるための変異、したがってインビボ半減期もまた存在し得る。修飾はさらに、抗体のグリコシル化プロファイルの修飾を含み得る。天然のＦｃフラグメントは、ＣＨ２ドメインでグリコシル化されており、２つの重鎖のそれぞれにおいて、２９７位のアスパラギン残基（Ａｓｎ２９７）に結合したＮ‐グリカンが存在する。本開示の文脈において、抗体は糖鎖修飾されてもよい。すなわち、特定のグリコシル化プロファイルを有するように改変され、例えば、向上した特性、例えば、向上したエフェクター機能、又は向上した血清半減期を導く。

【0024】

本明細書に記載される抗体は、単離されたものである。「単離された」抗体は、その自然環境の構成要素から（例えば、精製手段によって）分離されたものである。

【0025】

「抗体」という用語は、１価の抗体、すなわち１つのみの抗原結合ドメインを含む抗体（例えば、完全長の重鎖と完全長の軽鎖が連結した１アーム抗体、「ハーフ抗体」とも呼ばれる）、及び多価の抗体、すなわち２つ以上の抗原結合ドメインを含む抗体を包含する。

【0026】

本発明による「抗体」という用語は、抗体の抗原結合フラグメントも包含する。抗体の抗原結合フラグメントには、単鎖抗体（例えばｓｃＦｖ，及びｄｓｓｃｆｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体又はナノボディ（例えばＶ_Ｈ若しくはＶ_Ｌ、又はＶ_ＨＨ若しくはＶ_ＮＡＲ）が挙げられる。本発明で使用するための他の抗体フラグメントには、国際特許出願ＷＯ２０１１／１１７６４８、ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１に記載されているＦａｂ及びＦａｂ’フラグメントが挙げられる。

【0027】

これらの抗体フラグメントを作成し、製造する方法は、当技術分野でよく知られている（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６、１６５‐１８１を参照）。

【0028】

本明細書で使用する「Ｆａｂフラグメント」という用語は、軽鎖のＶＬ（可変軽鎖）ドメインと定常ドメイン（ＣＬ）、及び重鎖のＶＨ（可変重鎖）ドメインと第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含む軽鎖フラグメントを含む抗体フラグメントを意味する。

【0029】

典型的な「Ｆａｂ’フラグメント」は、重鎖と軽鎖の対を含み、重鎖は可変領域ＶＨ、定常ドメインＣＨ１及び天然又は修飾されたヒンジ領域を含み、軽鎖は可変領域ＶＬ及び定常ドメインＣＬを含む。本開示によるＦａｂ’の二量体は、例えば、二量化がヒンジを介して行われ得るＦ（ａｂ’）_２を作成する。

【0030】

本明細書で使用する「単一ドメイン抗体」という用語は、単一の単量体可変抗体ドメインを含む抗体フラグメントを意味する。単一ドメイン抗体の例としては、Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌ又はＶ_ＨＨ又はＶ‐ＮＡＲが挙げられる。

【0031】

「Ｆｖ」は、２つの可変ドメイン、例えば、同族ペアや親和性成熟可変ドメイン、すなわちＶＨとＶＬのペアのような共働可変ドメインを指す。

【0032】

本明細書で使用する「一本鎖可変フラグメント」又は「ｓｃＦｖ」は、Ｖ_Ｈ可変ドメインとＶ_Ｌ可変ドメインの間のペプチドリンカーによって安定化されている一本鎖可変フラグメントを意味する。

【0033】

本明細書で採用する「ジスルフィド安定化単鎖可変フラグメント」又は「ｄｓｓｃＦｖ」は、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ可変ドメイン間のペプチドリンカーによって安定化され、またＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ間のドメイン間ジスルフィド結合を含む単鎖可変フラグメントを意味する（例えば、Ｗｅａｔｈｅｒｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２５（３２１‐３２９），２０１２，ＷＯ２００７１０９２５４を参照されたい。

【0034】

一実施形態では、可変ドメインＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ又はＶ_１又はＶ_２間のジスルフィド結合は、以下に列挙する残基のうちの２つの間にある（文脈が他に示す場合を除いて、以下のリストではＫａｂａｔ番号付けが採用されている）。Ｋａｂａｔ番号付けに言及する場合、関連する文献は、Ｋａｂａｔら、１９９１年（第５版、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡに記載されている。

【0035】

一実施形態では、ジスルフィド結合は、以下のものを含む群から選択される位置：
‐Ｖ_Ｈ３７＋Ｖ_Ｌ９５Ｃ 例えばＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６，７８１‐７８８ Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ（１９９７）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ４４＋Ｖ_Ｌ１００ 例えばＷｅａｔｈｅｒｉｌｌら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２５（３２１‐３２９），２０１２を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ４４＋Ｖ_Ｌ１０５ 例えば、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８，８２５‐８３１ Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ（１９９５）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ４５＋Ｖ_Ｌ８７ 例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６，７８１‐７８８ Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ（１９９７）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ５５＋Ｖ_Ｌ１０１ 例えばＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３７７ １３５‐１３９ Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９５）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ１００＋Ｖ_Ｌ５０ 例えばＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９ １３６２‐１３６７ Ｇｌｏｃｋｓｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９０）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ１００ｂ＋Ｖ_Ｌ４９；例えばＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９ １３６２‐１３６７ Ｇｌｏｃｋｓｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９０）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ９８＋Ｖ_Ｌ４６ 例えばＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６，７８１‐７８８ Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ（１９９７）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ１０１＋Ｖ_Ｌ４６ 例えばＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６，７８１‐７８８ Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ（１９９７）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ１０５＋Ｖ_Ｌ４３ 例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ Ｖｏｌ．９０ ｐｐ．７５３８‐７５４２ Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ｅｔ ａｌ（１９９３）；又はＰｒｏｔｅｉｎｓ １９，３５‐４７ Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９４）を参照されたい。
‐Ｖ_Ｈ１０６＋Ｖ_Ｌ５７ 例えば、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３７７ １３５‐１３９ Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９５）を参照されたい。
及び分子内に位置する可変領域対におけるそれに対応する位置（単数又は複数）にある。
一実施形態では、ジスルフィド結合は、位置Ｖ_Ｈ４４とＶ_Ｌ１００との間に形成される。

【0036】

一実施形態では、本発明の抗ＩＬ１３抗体は、拮抗抗体である。本明細書で使用される場合、用語「拮抗抗体」は、例えば、ＩＬ‐１３のＩＬ‐１３レセプターへの結合をブロック、又は結合を低減し、したがってレセプターの活性化を阻害することによって、ＩＬ‐１３の生物学的シグナル伝達活性を阻害又は中和できる抗体を記載する。

【0037】

ＩＬ‐１３の活性を阻害する抗体は、いくつかの可能性のある作用機序を介して作用し得る。ビン１は、ヒトＩＬ‐１３に結合し、ＩＬ‐１３Ｒα１の結合を阻止し、その結果、ＩＬ‐４Ｒの結合も阻止する抗体を表す。ビン１抗体は、ＩＬ‐１３のＩＬ‐１３Ｒα２への結合を阻害することもできる。ビン２は、ＩＬ‐１３Ｒα１への結合は可能にするが、ＩＬ‐４Ｒの複合体へのリクルートを阻止するようにｈＩＬ‐１３と結合する抗体を示す。我々はビン１を経由して作用する抗体を選択していた。

【0038】

一実施形態では、抗ＩＬ１３抗体は、ヒトＩＬ‐１３に結合し、ＩＬ‐１３Ｒα１の結合を阻止する。

【0039】

一実施形態では、抗ＩＬ１３抗体は、ヒトＩＬ‐１３に結合し、ＩＬ‐１３Ｒα２の結合を阻止する。

【0040】

一実施形態では、抗ＩＬ１３抗体は、ヒトＩＬ‐１３に結合し、ＩＬ‐１３Ｒα１及びＩＬ‐１３Ｒα２の結合を阻止する。

【0041】

一実施形態では、抗ＩＬ１３抗体は、＜１００ｐＭのＫ_ＤでヒトＩＬ‐１３に結合する。

【0042】

本発明で使用するための抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体又はキメラ抗体であってもよいが、これらに限定されるものではない。

【0043】

モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５‐４９７）、トリオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ，１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，４：７２）、ＥＢＶ‐ハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ７７‐９６，Ａｌａｎ Ｒ Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ，１９８５）などの当業者に知られている任意の方法によって調製することができる。

【0044】

また、抗体は、例えばＢａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３（１５）：７８４３‐７８４８ｌ；ＷＯ９２／０２５５１；ＷＯ２００４／０５１２６８及び国際特許出願番号ＷＯ２００４／１０６３７７に記載の方法によって、特定の抗体の産生のために選択された単一リンパ球から生成した免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニングし発現させることにより、単一リンパ球抗体法を用いて生成することもできる。

【0045】

抗体のスクリーニングは、ＩＬ‐１３への結合を測定するアッセイ及び／又はＩＬ‐１３の１つ以上のレセプターへの結合をブロックする能力を測定するアッセイを用いて行うことができる。結合アッセイの例は、例えば、プレート上に固定化されたＩＬ‐１３の融合タンパク質を用いるＥＬＩＳＡであり、ＩＬ‐１３に結合した抗ＩＬ‐１３抗体を検出するためにコンジュゲートした二次抗体を採用するものである。ブロッキングアッセイの例としては、ＩＬ‐１３リガンドタンパク質とＩＬ‐１３Ｒの結合のブロッキングを測定するフローサイトメトリーベースのアッセイがある。蛍光標識された二次抗体は、ＩＬ‐１３Ｒに結合するＩＬ‐１３リガンドタンパク質の量を検出するために使用される。

【0046】

ヒト化抗体（ＣＤＲグラフト化抗体を含む）は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する抗体分子である（例えば、ＵＳ５，５８５，０８９；ＷＯ９１／０９９６７を参照されたい）。ＣＤＲ全体ではなく、ＣＤＲの特異性決定残基を移植することだけが必要な場合があることが理解されよう（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６、２５‐３４を参照）。ヒト化抗体は、任意で、ＣＤＲが由来する非ヒト種に由来する１つ以上のフレームワーク残基をさらに含んでもよい。

【0047】

キメラ抗体は、２つの異なる種に由来する要素から構成され、その要素が由来する種の特性を保持するようにしたものである。一般的に、キメラ抗体は、例えばマウス、ラット、ウサギなどの１つの種に由来する可変領域と、ヒトなどの別の種に由来する定常領域を含む。

【0048】

抗体はまた、当技術分野で公知の様々なファージディスプレイ法を用いて生成することができ、Ｂｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９５，１８２：４１‐５０）、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９５，１８４：１７７‐１８６）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，２４：９５２‐９５８）、Ｐｅｒｓｉｃ（Ｇｅｎｅ，１９９７ １８７ ９‐１８）、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，５７：１９１‐２８０）及びＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；及びＵＳ５，６９８，４２６；５，２２３，４０９；５，４０３，４８４；５，５８０，７１７；５，４２７，９０８；５，７５０，７５３；５，８２１，０４７；５，５７１，６９８；５，４２７，９０８；５，５１６，６３７；５，７８０，２２５；５，６５８，７２７；５，７３３，７４３及び５，９６９，１０８に記載されたものを挙げることができる。

【0049】

完全ヒト抗体とは、重鎖及び軽鎖の両方の可変領域及び定常領域（存在する場合）が全てヒト由来であるか、又はヒト由来の配列と実質的に同一である抗体であるが、必ずしも同じ抗体から得られるとは限らない。完全ヒト抗体の例としては、例えば上記のファージディスプレイ法によって作製された抗体、及びマウス免疫グロブリン可変領域遺伝子及び任意に定常領域遺伝子がヒト対応物に置換されたマウスによって作製された抗体、例えば、ＥＰ０５４６０７３、ＵＳ５，５４５，８０６、ＵＳ５，５６９，８２５、ＵＳ５，６２５，１２６、ＵＳ５，６３３，４２５、ＵＳ５，６６１，０１６、ＵＳ５，７７０，４２９、ＥＰ０４３８４７４及びＥＰ０４６３１５１に一般的用語で記載されているような抗体を挙げることができる。

【0050】

本発明の抗体は、多重特異性抗体であってもよい。本明細書で採用する「多重特異性抗体又はマルチスペシフィック抗体」とは、少なくとも２つの結合ドメイン、すなわち２つ以上の結合ドメイン、例えば２つ又は３つの結合ドメインを有し、少なくとも２つの結合ドメインが独立して２種類の異なる抗原又は同じ抗原上の２種類の異なるエピトープを結合する本明細書に記載の抗体のことをいう。多重特異性抗体は、一般に、各特異性（抗原）に対して一価である。本明細書に記載の多重特異性抗体は、１価及び多価、例えば、２価、３価、４価の多重特異性抗体を包含する。

【0051】

一実施形態では、構築物は、二重特異性抗体である。本明細書で採用する「二重特異性又はバイスペシフィック抗体」は、２つの抗原結合特異性を有する抗体を指す。一実施形態では、抗体は、２つの抗原結合ドメインを含み、一方の結合ドメインが抗原１を結合し、他方の結合ドメインが抗原２を結合する、すなわち、各結合ドメインが各抗原に対して一価である。一実施形態では、抗体は４価の二重特異性抗体であり、すなわち、抗体は４つの抗原結合ドメインを含み、例えば２つの結合ドメインが抗原１を結合し、他の２つの結合ドメインが抗原２を結合する。一実施形態では、抗体は、３価の二重特異性抗体である。

【0052】

一実施形態では、抗体構築物は、三重特異性抗体である。本明細書で採用される「三重特異性又はトリスペシフィック抗体」は、３つの抗原結合特異性を有する抗体を指す。例えば、抗体は、独立して３つの異なる抗原又は同じ抗原上の３つの異なるエピトープに結合する、すなわち、各結合ドメインが各抗原に対して一価である３つの抗原結合ドメイン（３価）を有する抗体である。

【0053】

パラトープとは、抗原を認識して結合する抗体の領域のことである。本発明の抗体は、マルチパラトピック抗体であってもよい。本明細書で採用される「マルチパラトピック抗体」は、本明細書に記載されるような、同じ抗原からの又は２つの異なる抗原からの、異なるエピトープと相互作用する２つ以上の異なるパラトープを含む抗体をいう。本明細書に記載されるマルチパラトピック抗体は、バイパラトピック、トリパラトピック、テトラパラトピックであってもよい。

【0054】

本明細書で採用する「抗原結合ドメイン」とは、抗体の一部であって、標的抗原と特異的に相互作用する１つ以上の可変ドメインの一部又は全体、例えば一対の可変ドメインＶＨ及びＶＬの一部又は全体を含むものをいう。結合ドメインは、単一ドメイン抗体を含んでもよい。一実施形態では、各結合ドメインは一価である。好ましくは、各結合ドメインは、１つ以下のＶＨ及び１つのＶＬを含む。

【0055】

様々なマルチスペシフィック抗体フォーマットが生み出されてきた。異なる分類が提案されているが、多重特異性ＩｇＧ抗体フォーマットは、一般に、二重特異性ＩｇＧ、付加ＩｇＧ、多重特異性（例えば二重特異性）抗体フラグメント、多重特異性（例えば二重特異性）融合タンパク質、及び多重特異性（例えば二重特異性）抗体コンジュゲートを含み、例えば、Ｓｐｉｅｓｓら、Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５‐１０６（二重特異性抗体の代替分子フォーマットと治療への応用）に記載の通りである。

【0056】

二重特異性抗体を作るための技術には、ＣｒｏｓｓＭａｂ技術（Ｋｌｅｉｎら、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ＣｒｏｓｓＭａｂ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ １５４（２０１９）２１‐３１）（ＣｒｏｓｓＭａｂ技術による治療用二重特異性抗体の作製）、ノブインホール（Ｋｎｏｂｓ‐ｉｎ‐ｈｏｌｅｓ）工学（例えばＷＯ１９９６０２７０１１、ＷＯ１９９８０５０４３１）、ＤｕｏＢｏｄｙ技術（例えばＷＯ２０１１１３１７４６）、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ技術（例えばＷＯ２０１２０５８７６８）などがあるが、それだけにとどまるわけではない。二重特異性抗体を作製するためのさらなる技術は、例えば、Ｇｏｄａｒら、２０１８、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒｍａｔｓ： ａ ｐａｔｅｎｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｒｅｖｉｅｗ（１９９４‐２０１７），Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ，２８：３，２５１‐２７６（二重特異性抗体の治療用フォーマット：特許出願レビュー）で説明されている。二重特異性抗体には、特にＣｒｏｓｓＭａｂ抗体、ＤＡＦ（ｔｗｏ‐ｉｎ‐ｏｎｅ）、ＤＡＦ（ｆｏｕｒ‐ｉｎ‐ｏｎｅ）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ‐ｌｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ（Ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－ｈｏｌｅｓ ｃｏｍｍｏｎ ＬＣ）、ノブインホールアセンブリ、チャージペア、Ｆａｂ‐アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ‐Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ体及び直交Ｆａｂを挙げることができる。

【0057】

付加ＩｇＧは、通常、ＩｇＧの重鎖及び／又は軽鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に追加の抗原結合ドメイン又は抗原結合フラグメントを付加することによって改変された完全長ＩｇＧを含む。このような追加の抗原結合フラグメントの例としては、ｓｄＡｂ抗体（例えば、ＶＨ又はＶＬ）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｖがある。付加ＩｇＧ抗体フォーマットは、特にＤＶＤ‐ＩｇＧ、ｌｇＧ（Ｈ）‐ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ‐（Ｈ）ｌｇＧ、ｌｇＧ（Ｌ）‐ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ‐（Ｌ）ｌｇＧ、ｌｇＧ（Ｌ，Ｈ）‐Ｆｖ、ｌｇＧ（Ｈ）‐Ｖ、Ｖ（Ｈ）‐ｌｇＧ、ｌｇＣ（Ｌ）‐Ｖ、Ｖ（Ｌ）‐ｌｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ‐ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ‐ｌｇＧ、ｌｇＧ‐２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４‐ｌｇ、Ｚｙｂｏｄｙ及びＤＶＩ‐ＩｇＧ（ｆｏｕｒ‐ｉｎ‐ｏｎｅ）、例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５‐１０６（二重特異性抗体の代替分子フォーマットと治療への応用。）に記載されるものを含む。

【0058】

多重特異性抗体フラグメントとしては、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）：９５‐１０６（二重特異性抗体の代替分子フォーマットと治療への応用。）に記載されるように、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ナノボディ‐ＨＡＳ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃ‐Ｄｉａｂｏｄｙ‐ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ‐ＣＨ３、トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅ Ｂｏｄｙ）、ミニ抗体（Ｍｉｎｉａｎｔｉｂｏｄｙ）；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、トリビミニボディ（Ｔｒｉ Ｂｉ ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ｓｃＦｖ‐ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ‐ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ‐ＣＨ‐ＣＬ‐ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）２‐ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ‐ＫＩＨ、Ｆａｂ‐ｓｃＦｖ‐Ｆｃ、４価のＨＣＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ‐Ｆ_Ｃ、Ｄｉａｂｏｄｙ‐ＦＣ、タンデム ｓｃＦｖ‐Ｆ_Ｃ；及びイントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）が挙げられる。

【0059】

多重特異性融合タンパク質には、ドックアンドロック（Ｄｏｃｋ ａｎｄ Ｌｏｃｋ）、ＩｍｍＴＡＣ，ＨＳＡｂｏｄｙ，ｓｃＤｉａｂｏｄｙ‐ＨＡＳ、及びタンデム ｓｃＦｖ‐トキシンが挙げられる。

【0060】

多重特異性抗体コンジュゲートには、ＩｇＧ‐ｌｇＧ、Ｃｏｖ‐Ｘ‐Ｂｏｄｙ、ｓｃＦｖ１‐ＰＥＧ‐ｓｃＦｖ２がある。

【0061】

追加の多重特異性抗体フォーマットは、例えばＢｒｉｎｋｍａｎｎ ａｎｄ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｍＡｂｓ，９：２，１８２‐２１２（２０１７）、特に図２に、例えばタンデムｓｃＦｖ、トリプルボディ、Ｆａｂ‐ＶＨＨ、ｔａＦｖ‐Ｆｃ、ｓｃＦｖ_４‐Ｉｇ、ｓｃＦｖ_２‐Ｆｃａｂ、ｓｃＦｖ_４‐ＩｇＧで説明されている。バイボディ（ｂｉｂｏｄｉｅｓ）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｉｅｓ）及びその製造方法は、例えば、ＷＯ９９／３７７９１に開示されている。

【0062】

本発明で使用するための好ましい抗体は、付加ＩｇＧ及び付加Ｆａｂを含み、ここで、全ＩｇＧ又はＦａｂフラグメントはそれぞれ、例えば、ＷＯ２００９／０４０５６２、ＷＯ２０１０／０３５０１２、ＷＯ２０１１／０３０１０７、ＷＯ２０１１／０６１４９２、ＷＯ２０１１／０６１２４６及びＷＯ２０１１／０８６０９１に記載されているように、前記ＩｇＧ又はＦａｂの重鎖及び／又は軽鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に、少なくとも１つの追加の抗原結合ドメイン（例えば、２つ、３つ又は４つの追加の抗原結合ドメイン）、例えば単一ドメイン抗体（ＶＨ又はＶＬ、又はＶＨＨ等）、ｓｃＦｖ、ｄｓｓｃＦｖ、ｄｓＦｖを付加することによって設計される。特に、Ｆａｂ‐ＦｖフォーマットはＷＯ２００９／０４０５６２に記載されており、そのジスルフィド安定化バージョンであるＦａｂ‐ｄｓＦｖはＷＯ２０１０／０３５０１２に記載されている。ｄｓＦｖが、ＦｖのＶＬドメイン又はＶＨドメインのいずれかと、ＦａｂのＬＣ又はＨＣのＣ末との間で、単一リンカーを介してＦａｂに連結されている、単一リンカーＦａｂ‐ｄｓＦｖが、ＷＯ２０１４／０９６３９０に記載されている。ＩｇＧの重鎖又は軽鎖のＣ末端にｄｓＦｖを付加することによって設計された全長ＩｇＧ１を含む付加ＩｇＧは、ＷＯ２０１５／１９７７８９に記載されている。

【0063】

本発明で使用するための別の好ましい抗体は、２つのｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖに連結したＦａｂを含み、各ｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖは同じ又は異なる標的（例えば、治療標的を結合する１つのｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖ、及び例えば、アルブミンを結合することによって半減期を増加する１つのｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖ）と結合している。そのような抗体は、ＷＯ２０１５／１９７７７２に記載されている。本発明フラグメントで使用するための別の好ましい抗体は、例えばＷＯ２０１３／０６８５７１及びＤａｖｅら、Ｍａｂｓ、８（７）１３１９‐１３３５（２０１６）に記載されているように、１つのｓｃＦｖ又はｄｓｓｃＦｖのみに結合したＦａｂを含む。

【0064】

一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ‐Ｌ１について配列番号１に示される配列を有する少なくとも１つのＣＤＲ、ＣＤＲ‐Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ又はＣＤＲ‐Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む、ヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0065】

一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ‐Ｌ１について配列番号１に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ‐Ｌ２について配列番号２に示される配列を有するＣＤＲ及びＣＤＲ‐Ｌ３について配列番号３に示される配列を有するＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む、ヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0066】

一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ‐Ｈ１について配列番号４に示される配列を有する少なくとも１つのＣＤＲ、ＣＤＲ‐Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ又はＣＤＲ‐Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲを含む重鎖可変ドメインを含む、ヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0067】

一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ‐Ｈ１について配列番号４に示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ‐Ｈ２について配列番号５に示される配列を有するＣＤＲ及びＣＤＲ‐Ｈ３について配列番号６に示される配列を有するＣＤＲを含む重鎖可変ドメインを含む、ヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。

【0068】

本発明の抗体分子は、それぞれ相補的な軽鎖又は相補的な重鎖を含んでいてもよい。

【0069】

したがって、１つの実施形態において、本発明は、ヒトＩＬ‐１３に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって、以下を含む抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
（ａ）以下を含む軽鎖可変領域：
ｉ．配列番号１を含むＣＤＲ‐Ｌ１、
ｉｉ 配列番号２を含むＣＤＲ‐Ｌ２、及び
ｉｉｉ 配列番号３を含むＣＤＲ‐Ｌ３；
及び
（ｂ）以下を含む重鎖可変領域：
ｉ．配列番号４を含むＣＤＲ‐Ｈ１、
ｉｉ 配列番号５を含むＣＤＲ‐Ｈ２、及び
ｉｉｉ 配列番号６を含むＣＤＲ‐Ｈ３；及び

【0070】

ＩＬ‐１３に結合し、ＩＬ‐１３活性を中和する抗体の能力を著しく変化させることなく、本発明によって提供されるＣＤＲに１つ以上のアミノ酸置換、付加及び／又は欠失を行うことができることが理解されるであろう。任意のアミノ酸置換、付加及び／又は欠失の効果は、例えば、本明細書に記載された方法、特に実施例に例示された方法を用いて、ＩＬ‐１３結合及びＩＬ‐１３／ＩＬ‐１３レセプター相互作用の阻害を決定することにより、当業者によって容易に試験することができる。

【0071】

したがって、本発明は、ＣＤＲ‐Ｌ１（配列番号１）、ＣＤＲ‐Ｌ２（配列番号２）、ＣＤＲ‐Ｌ３（配列番号３）、ＣＤＲ‐Ｈ１（配列番号４）、ＣＤＲ‐Ｈ２（配列番号５）及びＣＤＲ‐Ｈ３（配列番号６）から選ばれる１以上のＣＤＲを含むヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体を提供するものであり、これらにおいては、１つ又は複数のＣＤＲにおける１つ又は複数のアミノ酸が別のアミノ酸、例えば、以下に定義する類似のアミノ酸で置換されているものである。

【0072】

一実施形態では、本発明は、例えば、ＣＤＲ‐Ｌ１（配列番号１）、ＣＤＲ‐Ｌ２（配列番号２又は配列番号２０）、ＣＤＲ‐Ｌ３（配列番号３）、ＣＤＲ‐Ｈ１（配列番号４）、ＣＤＲ‐Ｈ２（配列番号５）及びＣＤＲ‐Ｈ３（配列番号６）を含む、ヒトＩＬ‐１３に対して特異性を有する抗体を提供するものであり、これらにおいては、１つ又は複数のＣＤＲにおける１つ又は複数のアミノ酸が別のアミノ酸、例えば、以下に定義する類似のアミノ酸で置換されているものである。

【0073】

本明細書で使用する「同一性」とは、位置合わせした配列中の任意の特定の位置において、アミノ酸残基が配列間で同一であることを示す。本明細書で使用する「類似性」とは、位置合わせした配列中の任意の特定の位置で、アミノ酸残基が配列間で類似のタイプであることを示す。例えば、ロイシンで、イソロイシン又はバリンを置き換えてもよい。しばしば互いに置き換え得る他のアミノ酸には、以下が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
‐フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）、
‐リジン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性側鎖を有するアミノ酸）、
‐アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性側鎖を有するアミノ酸）、
‐アスパラギン及びグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）、及び
‐システイン及びメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）。同一性や類似性の程度は容易に計算できる（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ｉｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、ＮＣＢＩから入手できるＢＬＡＳＴ^TMソフトウェア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３‐４１０；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆ Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．１９９３，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．３：２６６‐２７２．Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１３１‐１４１；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９‐３４０２；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．＆Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．１９９７，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．７：６４９‐６５６，）に記載のとおりである。

【0074】

一実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤＲ‐Ｌ１の配列が配列番号１に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲ‐Ｌ２が配列番号２に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲ‐Ｌ３が配列番号３に示された配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％若しくは９８％の同一性又は類似性を有する３つのＣＤＲを含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0075】

一実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤＲ‐Ｈ１の配列が配列番号４に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲ‐Ｈ２が配列番号５に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有し、及び／又はＣＤＲ‐Ｈ３が配列番号６に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する３つのＣＤＲを含む重鎖可変ドメインを含む。

【0076】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１３又は配列番号１７に示される配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１３又は配列番号１７に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0077】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１４又は配列番号１８に示される配列を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１４又は配列番号１８に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0078】

一実施形態では、本発明の抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１３に示される配列を含み、重鎖可変領域は、配列番号１４に示される配列を含む。一実施形態では、本発明の抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１３に示されたものに対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含み、及び／又は重鎖可変領域は、配列番号１４に示されたものに対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。

【0079】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１／２／３／４／５／６をそれぞれ含むＣＤＲ‐Ｌ１／ＣＤＲ‐Ｌ２／ＣＤＲ‐Ｌ３／ＣＤＲ‐Ｈ１／ＣＤＲ‐Ｈ２／ＣＤＲ‐Ｈ３配列を含み、軽鎖及び重鎖可変領域の残りは、配列番号１３及び１４又は配列番号１７及び１８とそれぞれ少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％同一又は類似性を有している。

【0080】

一実施形態では、本発明の抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、又はｄｓｓｃＦｖである。一実施形態では、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体又はナノボディ、例えば、Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌ又はＶ_ＨＨ又はＶ_ＮＡＲである。

【0081】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２１に示される配列、又は配列番号２１に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含むｓｃＦｖである。

【0082】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１／２／３／４／５／６でそれぞれ示されるＣＤＲ‐Ｌ１／ＣＤＲ‐Ｌ２／ＣＤＲ‐Ｌ３／ＣＤＲ‐Ｈ１／ＣＤＲ‐Ｈ２／ＣＤＲ‐Ｈ３配列を含むｓｃＦｖであり、そのｓｃＦｖ残部は配列番号２１に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性及び類似性を有している。

【0083】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２３に示される配列、又は配列番号２３に示される配列に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含むｄｓｓｃＦｖである。

【0084】

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１／２／３／４／５／６にそれぞれ示されるＣＤＲ‐Ｌ１／ＣＤＲ‐Ｌ２／ＣＤＲ‐Ｌ３／ＣＤＲ‐Ｈ１／ＣＤＲ‐Ｈ２／ＣＤＲ‐Ｈ３配列を含むｄｓｓｃＦｖであり、そのｄｓｓｃＦｖの残りは配列番号２３に対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有している。

【0085】

一実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖含み、重鎖はＣＨ１ドメインを含み、軽鎖はＣＬドメイン、カッパ又はラムダのいずれかを含む。

【0086】

抗体やそのフラグメントなどの生体分子は、酸性及び／又は塩基性の官能基を含んでおり、それによって分子に正又は負の電荷を与えている。全体の「観測される」電荷の量は、実体の絶対的なアミノ酸配列、３次元構造における荷電基の局所的な環境、及び分子の環境条件によって決まる。等電点（ｐＩ）とは、特定の分子又は表面が正味の電荷を運ばないｐＨである。一実施形態では、本開示による抗体又はフラグメントは、少なくとも７の等電点（ｐＩ）を有する。一実施形態では、抗体又はフラグメントは、８．５、８．６、８．７、８．８又は９などの、少なくとも８の等電点を有する。一実施形態では、抗体のｐＩは８である。

【0087】

本発明のＩＬ‐１３抗体及びフラグメントは、適切な等電点を有するように設計され得る。これは、より堅牢な特性、特に適切な溶解度及び／又は安定性プロファイルを有する抗体及び／又はフラグメントをもたらし得る。したがって、１つの態様において、本発明は、もともと同定された抗体の等電点とは異なる等電点を有するように改変されたヒト化ＩＬ‐１３抗体を提供する。抗体は、例えば、酸性アミノ酸残基を１つ又は複数の塩基性アミノ酸残基に置き換えるなど、アミノ酸残基を置き換えることによって改変されてもよい。あるいは、塩基性アミノ酸残基を追加してもよいし、酸性アミノ酸残基を除去してもよい。あるいは、分子が許容できないほど高いｐＩ値を持つ場合、必要に応じて酸性残基を導入してｐＨを下げてもよい。改変された抗体又はフラグメントのｐＩは、例えば８以上、例えば８．５又は９とすることができる。ｐＩを操作する場合、抗体又はフラグメントの望ましい活性を保持するように注意しなければならないことが重要である。したがって、１つの実施形態において、改変された抗体又はフラグメントは、「非修飾」抗体又はフラグメントと同じ又は実質的に同じ活性を有する。

【0088】

抗体又はフラグメントの等電点を予測するために、^＊＊ＥｘＰＡＳＹ http://www.expasy.ch/tools/pi_tool.html及びhttp://www.iut‐arles.up.univ‐mrs.fr/w3bb/d_abim/compo‐p.htmlのようなプログラムを使用することができる。

【0089】

エピトープ
エピトープとは、抗体と結合する抗原の領域のことである。エピトープの定義は構造的なものと機能的なものとに分けられる。機能的エピトープは、一般に構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体配座的であってもよく、すなわち、非直鎖アミノ酸で構成されていてもよい。特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基である決定基を含んでよく、特定の実施形態では、特定の三次元構造特性、及び／又は特定の電荷特性を有することができる。

【0090】

ある抗体が参照抗体と同じエピトープに結合するか、あるいは参照抗体と結合を競合するかどうかは、当該技術分野で知られている日常的な方法を用いて容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体は飽和条件下でタンパク質又はペプチドに結合させられる。次に、試験抗体がタンパク質又はペプチドに結合する能力を評価する。参照抗体との飽和結合後、試験抗体がタンパク質又はペプチドに結合できる場合、試験抗体は参照抗体とは異なるエピトープに結合すると判断することができる。一方、試験抗体が参照抗体との飽和結合後にタンパク質又はペプチドに結合できない場合、試験抗体は、本発明の参照抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合している可能性がある。

【0091】

抗体が参照抗体と結合するために競合するかどうかを決定するために、上記の結合方法は２つの方法で実行される。第一の方法では、参照抗体を飽和条件下でタンパク質／ペプチドに結合させ、その後、試験抗体のタンパク質／ペプチド分子への結合を評価する。第二の方法では、試験抗体を飽和条件下でタンパク質／ペプチドに結合させ、その後、参照抗体のタンパク質／ペプチドへの結合を評価する。両方の方法で、第一（飽和）抗体だけがタンパク質／ペプチドに結合できる場合、試験抗体と参照抗体はタンパク質／ペプチドへの結合について競合すると結論付けられる。当業者には理解されるように、参照抗体と結合を競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープに結合するとは限らず、重複又は隣接するエピトープに結合することによって参照抗体の結合を立体的にブロックすることがある。

【0092】

２つの抗体は、それぞれが他方の抗体の抗原への結合を競合的に阻害（ブロック）する場合、同一又は重複するエピトープに結合する。すなわち、１‐、５‐、１０‐、２０‐又は１００倍過剰の一方の抗体は、競合結合アッセイで測定した場合、他方の結合を少なくとも５０％、７５％、９０％又は９９％さえ阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、１９９０：５０：１４９５‐１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗体の結合を減少又は除去する抗原の本質的にすべてのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を減少又は除去する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を減少又は除去するいくつかのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を減少又は除去する場合、２つの抗体は重複するエピトープを有する。

【0093】

その後、追加のルーチン実験（例えば、ペプチド変異及び結合分析）を実施して、試験抗体の観察された結合の欠如が、実際に参照抗体と同じエピトープへの結合によるものか、又は立体的なブロッキング（又は別の現象）が観察された結合の欠如の原因であるかを確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当技術分野で利用可能な他の定量的又は定性的な抗体結合アッセイを用いて実施することができる。

【0094】

抗体は、軽鎖、重鎖、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）又はＣＤＲ配列の観点から上で定義されたものと、ＩＬ‐１３への結合を競合する、又はそれと同じエピトープに結合することができる。特に、抗体は、配列番号１／２／３／４／５／６のＣＤＲ‐Ｌ１／ＣＤＲ‐Ｌ２／ＣＤＲ‐Ｌ３／ＣＤＲ‐Ｈ１／ＣＤＲ‐Ｈ２／ＣＤＲ‐Ｈ３配列の組み合わせを含む抗体と、ＩＬ‐１３への結合を競合する、又はそれと同じエピトープに結合することができる。抗体は、配列番号１３／１４又は１７／１８のＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ配列の組を含む抗体と、ＩＬ‐１３への結合を競合する、又はそれと同じエピトープに結合することができる。抗体は、配列番号２１に示される配列を含むｓｃＦｖ、又は配列番号２３に示される配列を含むｄｓｓｃＦｖと、ＩＬ‐１３への結合を競合する、又はそれと同じエピトープに結合することができる。

【0095】

エフェクター分子
所望により、本発明で使用するための抗体は、１つ又は複数のエフェクター分子にコンジュゲートされていてもよい。エフェクター分子は、単一のエフェクター分子、又は本発明の抗体に結合できる単一の部位を形成するように連結された２つ以上のそのような分子を含むことができることが理解されよう。エフェクター分子に結合した抗体フラグメントを得たい場合、これは、抗体フラグメントがエフェクター分子に直接又はカップリング剤を介して結合する標準的な化学的又は組み換えＤＮＡ手順によって調製することができる。このようなエフェクター分子を抗体にコンジュゲートさせる技術は、当技術分野でよく知られている（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ｅｄｓ．，１９８７，ｐｐ．６２３‐５３；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２ 、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９‐５８及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら，１９９９，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８３，６７‐１２３参照）。特定の化学的手順には、例えば、ＷＯ９３／０６２３１、ＷＯ９２／２２５８３、ＷＯ８９／００１９５、ＷＯ８９／０１４７６及びＷＯ０３０３１５８１に記載のものが挙げられる。あるいは、エフェクター分子がタンパク質又はポリペプチドの場合、結合は、例えばＷＯ８６／０１５３３及びＥＰ０３９２７４５に記載されているように、組換えＤＮＡ手順を用いて達成され得る。

【0096】

本明細書で使用するエフェクター分子という用語には、例えば、抗悪性腫瘍剤、薬剤、毒素、生物学的に活性なタンパク質、例えば酵素、他の抗体又は抗体フラグメント、合成又は天然由来のポリマー、核酸及びそのフラグメント、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びそのフラグメント、放射性核種、特に放射性ヨウ化物、ラジオアイソトープ、キレート金属、ナノ粒子及びレポーター基、例えば蛍光化合物又はＮＭＲ若しくはＥＳＲ分光法により検出できる化合物などが挙げられる。

【0097】

エフェクター分子の例としては、細胞に有害な（例えば、殺す）任意の薬剤を含む細胞毒素又は細胞毒性薬剤が含まれ得る。例としては、コンブレスタチン、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、メイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン、ヘミアステルリン、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１‐デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシン及びそれらのアナログ又は同族体が挙げられる。

【0098】

エフェクター分子にはまた、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６‐メルカプトプリン、６‐チオグアニン、シタラビン、５‐フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス‐ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、カリケアマイシン又はデュオカルマイシン）、及び抗有糸分裂薬（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）が挙げられるが、それらに限定されるわけではない。

【0099】

その他のエフェクター分子としては、^１１１Ｉｎや^９０Ｙ、Ｌｕ^１７７、ビスマス^２１３、カリホルニウム^２５２、イリジウム^１９２、タングステン^１８８／レニウム^１８８などのキレート化放射性核種、又はアルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド、スラミンなどではあるが、それらにとどまらない薬物が挙げられる。

【0100】

その他のエフェクター分子としては、タンパク質、ペプチド、酵素などが挙げられる。興味のある酵素には、タンパク質分解酵素、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼが挙げられるが、これらに限定されるものではない。関心のあるタンパク質、ポリペプチド及びペプチドには、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、又はジフテリア毒素などの毒素、インスリン、腫瘍壊死因子、α‐インターフェロン、β‐インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲン活性剤などのタンパク質、血栓剤又は血管新生阻害剤、例えばアンジオスタチン又はエンドスタチン、又は、リンホカイン、インターロイキン‐１（ＩＬ‐１）、インターロイキン‐２（ＩＬ‐２）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ‐ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ‐ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）などの生体応答調節因子又は他の成長因子及び免疫グロブリンを挙げることができるが、それらに限られるわけではない。

【0101】

他のエフェクター分子には、例えば診断に有用な検出可能な物質が挙げられる。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補綴基、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、ポジトロン放出金属（ポジトロン放出断層撮影における使用のため）、及び非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。診断薬として使用するために抗体にコンジュゲートさせることができる金属イオンについては、一般に米国特許第４，７４１，９００号を参照されたい。適当な酵素には、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適当な補体基にはストレプトアビジン、アビジン及びビオチンが挙げられ；適当な蛍光性物質にはウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド及びフィコエリトリンなどが挙げられ；適切な発光材料にはルミノールが挙げられ；適切な生物発光材料にはルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びイクオリンが挙げられ；及び適切な放射性核種には^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１１１Ｉｎ、及び^９９Ｔｃが挙げられる。

【0102】

別の例では、エフェクター分子は、インビボでの抗体の半減期を増加させ、及び／又は抗体の免疫原性を低下させ、及び／又は上皮障壁を越えて免疫系への抗体の送達を強化し得る。このタイプの適切なエフェクター分子の例としては、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、又はＷＯ０５／１１７９８４に記載されているものなどのアルブミン結合化合物が挙げられる。

【0103】

エフェクター分子がポリマーである場合、それは一般に、合成又は天然由来のポリマー、例えば、任意に置換された直鎖又は分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン又はポリオキシアルキレンポリマー、又は分岐若しくは非分岐多糖、例えば、ホモ若しくはヘテロ多糖であってもよい。

【0104】

上記合成ポリマー上に存在し得る具体的な任意の置換基としては、１つ以上のヒドロキシ基、メチル基又はメトキシ基が挙げられる。

【0105】

合成ポリマーの具体例としては、任意に置換された直鎖又は分岐鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）ポリ（ビニルアルコール）又はその誘導体、特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体などの任意に置換されたポリ（エチレングリコール）が挙げられる。

【0106】

具体的な天然由来のポリマーとしては、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はその誘導体などが挙げられる。

【0107】

本明細書で使用する「誘導体」は、反応性誘導体、例えばマレイミドなどのチオール選択的反応性基を含むことを意図している。反応性基は、ポリマーに直接又はリンカーセグメントを介して連結されてもよい。このような基の残基は、場合によっては、抗体フラグメントとポリマーとの間の連結基として生成物の一部を形成することが理解されよう。

【0108】

ポリマーのサイズは所望により変化させることができるが、一般に５００Ｄａから５００００Ｄａ、例えば５０００から４００００Ｄａ、例えば２００００から４００００Ｄａの平均分子量範囲になる。ポリマーサイズは特に、例えば腫瘍などの特定の組織に局在化する能力、又は循環半減期を延長する能力などの製品の意図された使用に基づいて選択され得る（レビューについては、Ｃｈａｐｍａｎ，２００２，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，５４，５３１‐５４５を参照されたい）。したがって、例えば、製品が循環を離れて組織に浸透することを意図している場合、例えば約５０００Ｄａの分子量を有する低分子量ポリマーを使用することが有利である場合がある。製品が循環系に留まる用途では、例えば分子量が２００００Ｄａから４００００Ｄａの範囲にあるような、より高分子量のポリマーを使用することが有利である場合がある。

【0109】

好適なポリマーとしては、ポリアルキレンポリマー、例えば、ポリ（エチレングリコール）、又は特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体、特に分子量が約１５０００Ｄａ～約４００００Ｄａの範囲であるものが挙げられる。

【0110】

一例では、本発明で使用するための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部位に結合している。ある特定の例では、抗体は抗体フラグメントであり、ＰＥＧ分子は、抗体フラグメントに位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば任意の遊離アミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシル又はカルボキシル基を介して結合されてもよい。そのようなアミノ酸は、抗体フラグメント中に天然に存在してもよいし、組換えＤＮＡ法を用いてフラグメント中に設計されてもよい（例えばＵＳ５，２１９，９９６；ＵＳ５，６６７，４２５；ＷＯ９８／２５９７１を参照されたい）。一例として、本発明の抗体分子は修飾Ｆａｂフラグメントであり、その修飾は、エフェクター分子の結合を可能にするために、その重鎖のＣ末端に１つ以上のアミノ酸を付加することである。好適には、追加のアミノ酸は、エフェクター分子が結合され得る１つ以上のシステイン残基を含む修飾されたヒンジ領域を形成する。複数の部位は、２つ以上のＰＥＧ分子を結合させるために使用することができる。

【0111】

好適には、ＰＥＧ分子は、抗体フラグメントに位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を介して共有結合していてもよい。修飾抗体フラグメントに結合した各ポリマー分子は、フラグメントに位置するシステイン残基の硫黄原子に共有結合していてもよい。共有結合は、一般に、ジスルフィド結合又は特に硫黄‐炭素結合であろう。チオール基が適切な活性化エフェクター分子の結合点として使用される場合、例えばマレイミド及びシステイン誘導体のようなチオール選択的誘導体が使用され得る。活性化ポリマーは、上記のようなポリマー修飾抗体フラグメントの調製において出発物質として使用することができる。活性化ポリマーは、α‐ハロカルボン酸又はエステル、例えばヨードアセトアミド、イミド、例えばマレイミド、ビニルスルホン又はジスルフィドなどのチオール反応性基を含む任意のポリマーであってもよい。このような出発材料は、商業的に入手することができ（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、旧Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、ＵＳＡから）、又は従来の化学手順を使用して商業的に入手できる出発材料から調製することもできる。特定のＰＥＧ分子には、２０Ｋメトキシ‐ＰＥＧ‐アミン（Ｎｅｋｔａｒ、旧Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ；Ｒａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ；及びＳｕｎＢｉｏから入手可能）及びＭ‐ＰＥＧ‐ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、旧Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）などがある。

【0112】

一実施形態では、抗体は、ＰＥＧ化されている、すなわち、例えばＥＰ０９４８５４４又はＥＰ１０９００３７に開示されている方法に従って、そこにＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））が共有結合している修飾Ｆａｂフラグメント又はｄｉＦａｂである［”Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、１９９２、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ（ｅｄ），Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、”Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ） Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”、１９９７、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ Ｈａｒｒｉｓ ａｎｄ Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（ｅｄｓ），Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、及び”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１９９８，Ｍ．Ａｓｌａｍ ａｎｄ Ａ．Ｄｅｎｔ，Ｇｒｏｖｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．２００２，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００２，５４：５３１‐５４５も参照されたい］。一実施例では、ＰＥＧはヒンジ領域のシステインに結合している。一実施例では、ＰＥＧ修飾Ｆａｂフラグメントは、修飾ヒンジ領域において単一のチオール基に共有結合されたマレイミド基を有する。リジン残基は、マレイミド基に共有結合していてもよく、リジン残基上のアミン基の各々に、約２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーが結合してよい。したがって、Ｆａｂフラグメントに結合したＰＥＧの総分子量は、約４０，０００Ｄａであってもよい。

【0113】

一実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ‐１３に対する特異性を有する拮抗抗体分子を提供し、これは、その重鎖のＣ末端に、エフェクター分子が結合している少なくとも１つのシステイン残基を含む修飾ヒンジ領域を有する修飾Ｆａｂ’フラグメントである。好適には、エフェクター分子はＰＥＧであり、（ＷＯ９８／２５９７１及びＷＯ２００４０７２１１６又はＷＯ２００７／００３８９８に記載の方法を用いて結合させることができる。エフェクター分子は、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０及びＷＯ２００５／００３１７１に記載の方法を用いて抗体フラグメントに結合させることができる。

【0114】

一実施形態では、抗体又はフラグメントは、エフェクター分子が結合していない。

【0115】

抗体の製造
本発明はまた、本発明の抗体分子の重鎖及び／又は軽鎖（複数可）をコードする単離されたＤＮＡ配列を提供する。好適には、ＤＮＡ配列は、本発明の抗体分子の重鎖又は軽鎖をコードする。本発明のＤＮＡ配列は、例えば化学処理、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はそれらの任意の組み合わせによって製造された合成ＤＮＡを含むものであってもよい。

【0116】

本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列は、当業者によく知られた方法によって得ることができる。例えば、抗体重鎖及び軽鎖の一部又は全部をコードするＤＮＡ配列は、決定されたＤＮＡ配列から、又は対応するアミノ酸配列に基づいて所望により合成され得る。

【0117】

アクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡは、当業者であれば広く入手可能であり、その既知のアミノ酸配列に基づいて容易に合成することが可能である。

【0118】

本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を調製するために、分子生物学の標準的な技術を用いることができる。所望のＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成技術を使用して、完全に又は部分的に合成され得る。部位特異的突然変異誘発法及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を適宜使用してもよい。

【0119】

好適な配列の例は、本明細書に提供される。したがって、１つの実施形態では、本発明は、配列番号８、１０、１５、１６、１９、２０、２２又は２４に示される配列を含む、抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。

【0120】

ベクターが構築され得る一般的な方法、トランスフェクション方法、及び培養方法は、当業者によく知られている。この点に関しては、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１９９９年、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（ｅｄ），Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ及びＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇが作成したＭａｎｉａｔｉｓ Ｍａｎｕａｌが参照される。

【0121】

また、本発明の抗体をコードする１つ又は複数のＤＮＡ配列を含む１つ又は複数のクローニング又は発現ベクターを含む宿主細胞も提供される。本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列の発現には、任意の適切な宿主細胞／ベクター系を使用することができる。細菌、例えば大腸菌、及び他の微生物系を用いてもよいし、真核生物、例えば哺乳類の宿主細胞発現系を用いてもよい。好適な哺乳類宿主細胞としては、ＣＨＯ細胞、ミエローマ細胞又はハイブリドーマ細胞が挙げられる。

【0122】

また、本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞を、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからのタンパク質の発現を導くのに適した条件下で培養し、抗体分子を単離することを含む、本発明に係る抗体分子の製造方法を提供する。

【0123】

抗体分子は重鎖又は軽鎖ポリペプチドのみを含んでいてもよく、その場合、重鎖又は軽鎖ポリペプチドのコーディング配列のみを用いて宿主細胞にトランスフェクトする必要がある。重鎖と軽鎖の両方を含む産物を生産するためには、細胞株を２つのベクター、すなわち軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクターと重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターでトランスフェクトすることができる。あるいは、軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードする配列を含む単一のベクターを用いてもよい。

【0124】

本開示による抗体及びフラグメントは、宿主細胞から良好なレベルで発現される。したがって、抗体及び／又はフラグメントの特性は、最適化され、商業的加工に資するようである。

【0125】

医薬組成物、投与量及び投与レジーム
本発明の抗体は、医薬組成物中で提供することができる。医薬組成物は、通常、無菌であり、典型的には、薬学的に許容される担体及び／又はアジュバントを含むであろう。本発明の医薬組成物は、さらに、薬学的に許容されるアジュバント及び／又は担体を含んでいてもよい。

【0126】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合する任意の及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等が挙げられる。担体は、非経口投与、例えば静脈内、筋肉内、皮内、眼内、腹腔内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば注射又は点滴による投与に適している場合がある。あるいは、担体は、非経口投与、例えば、局所、表皮又は粘膜の投与経路に適していてもよい。担体は、経口投与に適していてもよい。投与経路に応じて、調節剤は、化合物を不活性化する可能性のある酸及び他の自然条件の作用から化合物を保護する材料でコーティングされてもよい。

【0127】

本発明の医薬組成物は、１つ又は複数の薬学的に許容される塩を含んでもよい。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくない毒性学的効果を与えない塩をいう。そのような塩の例としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。

【0128】

薬学的に許容される担体は、水性担体又は希釈剤を含む。本発明の医薬組成物に採用され得る適切な水性担体の例としては、水、緩衝水、及び生理食塩水が挙げられる。他の担体の例としては、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物、植物油、例えばオリーブ油、及び注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルなどが挙げられる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、又は塩化ナトリウムを含めることが望ましいであろう。

【0129】

治療用組成物は通常、無菌であり、製造及び保管の条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は高濃度の薬物に適した他の秩序ある構造として製剤化することができる。

【0130】

本発明の医薬組成物は、さらなる有効成分を含んでいてもよい。

【0131】

また、本発明の範囲内には、本発明の抗体又は調節剤及び使用説明書を含むキットもある。キットは、上述したような追加の治療剤又は予防剤などの、１つ又は複数の追加の試薬をさらに含んでもよい。

【0132】

本発明のモジュレーター及び／又は抗体、あるいはその製剤又は組成物は、予防的及び／又は治療的な処置のために投与され得る。

【0133】

治療用途では、化合物は、上記のような障害又は状態に既に罹患している対象に、その状態又はその症状の１つ以上を治癒、緩和又は部分的に停止するのに十分な量で投与される。このような治療的処置は、疾患症状の重症度の減少、又は無症状期間の頻度若しくは持続時間の増加をもたらす可能性がある。これを達成するのに十分な量が、「治療的に有効な量」と定義される。

【0134】

予防的用途では、製剤は、上記のような障害又は状態の危険性がある対象に、その状態又はその症状の１つ以上の後遺症を予防又は軽減するのに十分な量で投与される。これを達成するのに十分な量が、「予防的に有効な量」と定義される。各目的に有効な量は、疾患又は傷害の重症度、並びに対象の体重及び一般的状態に依存する。

【0135】

投与のための対象は、ヒト又は非ヒト動物であってよい。「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、羊、犬、猫、馬、牛、鶏、両生類、爬虫類等を含む。ヒトへの投与が典型的である。

【0136】

本発明の抗体／モデュレーター又は医薬組成物は、当技術分野で知られている様々な方法の１つ又は複数を使用して、１つ又は複数の投与経路を介して投与することができる。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／又は様式は、所望の結果に応じて変化する。本発明の化合物又は医薬組成物の投与経路の例としては、静脈内、筋肉内、皮内、眼内、腹腔内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば、注射又は点滴による投与が挙げられる。本明細書で使用する「非経口投与」という語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、通常は注射によるものである。あるいは、本発明の抗体／モデュレーター又は医薬組成物は、非非経口経路（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｒｏｕｔｅ）、例えば、局所、表皮又は粘膜の投与経路を介して投与することができる。本発明の抗体／調節剤又は医薬組成物は、経口投与用であってもよい。

【0137】

本発明の抗体／調節剤又は医薬組成物の適切な投与量は、当業者によって決定され得る。本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与様式について、患者に毒性がなく、所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように、変化させることができる。選択された投与量レベルは、採用される本発明の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、採用される特定の化合物の排泄速度、治療の期間、採用される特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬剤、化合物及び／又は材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、状態、一般健康及び以前の病歴、並びに医学分野で周知の同様の要因を含む種々の薬物動態的要因によって決定される。

【0138】

好適な投与量は、例えば、治療される患者の約０．０１μｇ／ｋｇ～約１０００ｍｇ／ｋｇ体重、典型的には約０．１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であってよい。例えば、好適な投与量は、１日当たり約１μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は１日当たり約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。

【0139】

投与レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）を提供するように調整されてもよい。例えば、単回投与してもよいし、数回に分けて経時的に投与してもよいし、治療状況の緊急性に応じて投与量を比例的に減少又は増加させてもよい。本明細書で使用される投与単位の形態とは、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。

【0140】

投与は、単回投与であっても複数回投与であってもよい。複数回投与は、同じ又は異なる経路で、同じ又は異なる場所に投与することができる。あるいは、投与は、徐放性製剤を介して行うことができ、この場合、より少ない投与回数が必要とされる。投与量及び投与頻度は、患者におけるアンタゴニストの半減期及び望まれる治療期間に応じて変化し得る。

【0141】

上述のように、本発明のモジュレーター／抗体又は医薬組成物は、１つ又は他のより多くの他の治療剤と共投与することができる。

【0142】

２種以上の薬剤の併用投与は、多くの異なる方法で達成することができる。両者は単一の組成物で一緒に投与されてもよいし、複合療法の一部として別々の組成物で投与されてもよい。例えば、一方を他方の前に、後に、又は同時に投与することができる。

【0143】

治療適応症
本発明の抗体は、ＩＬ－１３活性に関連する任意の状態、例えば、ＩＬ－１３レセプターを介したシグナルの全部又は一部に起因する任意の状態の治療、予防又は改善に使用することができる。

【0144】

ＩＬ‐１３関連疾患としては、乳がん、結腸がん、直腸がん、肺がん、中咽頭がん、下咽頭がん、食道がん、胃がん、膵臓がん、肝臓がん、胆嚢がん、胆管がん、小腸がん、尿路がん（腎臓、膀胱、尿路上皮など）、女性生殖系（子宮頸部、子宮、卵巣、絨毛がん、妊娠性絨毛膜症など）、男性生殖系（前立腺、精嚢、精巣、胚細胞腫瘍など）、内分泌腺（甲状腺、副腎、下垂体など）、及び皮膚、並びに血管腫、黒色腫、肉腫（骨軟部組織から発生するもの、及びカポジ肉腫を含む）等の原発性及び転移性がん、脳・神経・眼・髄膜の腫瘍（星状細胞腫、神経膠腫、膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経鞘腫、髄膜腫など）、白血病、リンパ腫（ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）などの造血器悪性腫瘍に起因する固形がん、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、アレルギー性疾患、乾癬、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶反応、臓器移植に伴う急性又は慢性免疫性疾患。サルコイドーシス、動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホシェーンライン紫斑病、顕微鏡的腎臓血管炎、慢性活性肝炎、ぶどう膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横紋筋炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、アジソン病、散発性、ポリグランデュラ欠損症Ｉ型・ポリグランデュラ欠損症ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸困難症候群、脱毛症、円形脱毛症、関節症、ライター病、乾癬性関節症、潰瘍性大腸菌性関節症、腸管滑膜炎、クラミジア・エルシニア・サルモネラ関連関節症、アテローム性疾患・動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、Ｃｏｏｍｂｓ陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、一般的変動性免疫不全症（一般的変動性低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣不全、早発性卵巣不全、線維性肺疾患、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病関連間質性肺疾患、混合結合組織病関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性エリテマトーデス関連肺疾患。皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデリン関連肺疾患、薬剤誘発間質性肺疾患、線維症、放射線線維症、閉塞性気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、痛風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫肝炎又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体性肝炎）、自己免疫介在性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に伴う急性免疫疾患、臓器移植に伴う慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎疾患 ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊症 特発性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感神経性眼症、結合組織病による二次性肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマトイド脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑 急性肝臓疾患、慢性肝臓疾患、アルコール性肝硬変、アルコール性肝障害、胆汁酸塩症、特発性肝疾患、薬剤性肝炎、非アルコール性脂肪肝炎、アレルギー、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染症、精神疾患、うつ病、統合失調症、Ｔｈ２型及びＴｈ１型介在疾患、急性及び慢性痛症、異なる形態の痛み、がん、肺がん、乳がん、胃がん、膀胱がん、結腸がん、膵臓がん、卵巣がん、前立腺がん、直腸がん、造血器悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、無βリポタンパク血症（Ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、アクロシアン症、急性及び慢性の寄生虫又は感染プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺がん、空中異所性拍動、ＡＩＤＳ 認知症複合体、アルコール性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎（季節性アレルギー性鼻炎を含む）、非アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶反応、α‐Ｉ‐アンチトリプシン欠損症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性症、抗ｃｄ３療法、抗リン脂質症候群、抗レセプター過敏症反応、大動脈及び末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化、動静脈瘻、運動失調、心房細動（持続性又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞性リンパ腫、骨移植片拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反応、束枝ブロック、バーキットリンパ腫、熱傷、心臓不整脈、心臓スタン症候群、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶反応、小脳皮質変性症、小脳障害、カオス性又は多巣性心房頻拍、化学療法関連障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性病態、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サリチル酸慢性中毒、大腸がん、鬱血性心不全、結膜炎、接触皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー認知症、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚疾患、糖尿病、真正糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、糖尿病性動脈硬化症、びまん性レビー小体病、拡張うっ血性心筋症、基底核の障害、中年期のダウン症状、中枢神経系ドパミンレセプターを遮断する薬剤による薬剤性運動障害、薬剤過敏症、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌障害、喉頭蓋炎、エプスタインバールウイルス感染、肢端紅痛症、錐体外路・小脳障害、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺移植拒絶反応、フリードライヒ失調症、機能性末梢動脈障害、真菌性敗血症、ガス壊疽、胃潰瘍、糸球体腎炎、あらゆる臓器又は組織の移植片拒絶反応、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内細菌による肉芽腫、ヘアリー細胞白血病、ハレルボーデンシュパッツ病、橋本病（甲状腺炎）、花粉症、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑病、出血、Ａ型肝炎、ヒスバンドル（Ｈｉｓ ｂｕｎｄｌｅ）不整脈、ＨＩＶ感染症／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過多症、過敏性反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下症、視床下部‐下垂体‐副腎軸評価、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、小児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、インフルエンザａ、電離放射線被曝、虹彩毛様体炎／ぶどう膜炎／視神経炎、虚血・再灌流障害、虚血性脳梗塞、若年性リウマチ様関節炎、若年性脊髄性筋萎縮症 カポジ肉腫、腎移植拒絶反応、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系病変、脂肪浮腫、肝移植拒絶反応、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性、片頭痛、ミトコンドリア多系統障害、混合結合組織病、単クローン性免疫グロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性症（Ｍｅｎｃｅｌ Ｄｅｊｅｒｉｎｅ‐Ｔｈｏｍａｓ Ｓｈｉ‐Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ‐Ｊｏｓｅｐｈ）、細胞内トリ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、ヒト結核菌、Ｍｅｌｏｄｙｐｌａｓｔｉｃ症候群、心筋梗塞、心筋虚血障害、鼻咽頭がん、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性筋萎縮症、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、睾丸炎／精巣上体炎、睾丸炎／精管切除術反転手術、臓器肥大症、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶反応、膵臓がん、腫瘍随伴症候群／悪性腫瘍高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶反応、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢動脈硬化性疾患、末梢血管障害、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチスカリニ肺炎（ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経炎、臓器肥大、内分泌障害、モノクローナル・ガンマ症、皮膚変化症候群）、灌流後症候群、ポストポンプ症候群、Ｍｌ開心術後症候群、妊娠高血圧腎症（子癇前症）、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象及びレイノー病、レイノー病、レフスム病、規則的狭小ＱＲＳ頻脈、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束性心筋症、肉腫、老人性振戦、レビー小体型認知症の老年性認知症、血清反応陰性関節症、ショック、鎌形赤血球貧血、皮膚同種移植片拒絶反応、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶反応、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄失調症、脊髄小脳変性症、溶連菌性筋炎、小脳構造病変、亜急性硬化性全脳炎、失神、循環器系の梅毒、全身性無痛症、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リューマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏反応、ＩＶ型過敏反応、不安定狭心症、尿毒症、尿性敗血症、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈性疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染症、バイタル脳炎／無菌性髄膜炎、バイタル関連血球貪食症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウイルソン病、あらゆる臓器・組織の異種移植拒絶反応、急性冠不全症候群、急性特発性多発神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根障害、急性虚血、成人スティル病、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に伴う自己免疫疾患、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質抗体症候群、セリアック病、頸部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを伴う臨床分離症候群（ｃｉｓ）、小児発症の精神障害、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬剤性免疫溶血性貧血、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形紅斑、多形紅斑大斑点、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ介在性アレルギー、免疫溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病又はクスマウル‐マイヤー病。ランドリー麻痺、ランゲルハーン細胞組織球症、網状皮斑、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、モルブス・ベクテレフ、運動ニューロン障害、粘膜類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、非関節型ＪＲＡ、末梢動脈閉塞性疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎（又は結節性動脈周囲炎）、多軟骨炎、白毛症、多関節型ＪＲＡ、多内分泌不全症候群、多発筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、原発性パーキンソニズム、前立腺炎、純赤血球形成不全、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性

心疾患、サホ（滑膜炎、にきび、膿疱症、骨過形成、骨炎）、二次性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコン関連結合組織病、スネドン・ウィルキンソン（Ｓｎｅｄｄｏｎ‐Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ）皮膚病、アンキロサン脊椎炎、スティーブンス‐ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、側頭動脈炎、トキソプラズマ網膜炎、中毒性表皮壊死症、横紋筋炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子レセプター、１型アレルギー反応、２型糖尿病、蕁麻疹、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、Ｖｏｇｔ‐小柳‐原田症候群（ＶＫＨ症候群）、湿性黄斑変性症、又は創傷治癒、アスピリン感受性喘息、アトピー性喘息、慢性手湿疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、セリアック病、Ｃｈｕｒｇ‐Ｓｔｒａｕｓｓ症候群（結節性動脈周囲炎＋アトピー）、好酸球性筋痛症候群、過好酸球性症候群、エピソード性血管浮腫を含む浮腫性反応、蠕虫感染症、オンコセルカ性皮膚炎、好酸球関連消化管障害、好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性腸炎、好酸球性大腸炎、鼻のマイクロポリポーシス及びポリポーシス、食物アレルギー、アスピリン不耐症及び閉塞性睡眠時無呼吸症候群、慢性喘息、クローン病及び心内膜心筋線維症、がん（例えば、膠芽細胞腫（多形性膠芽細胞腫など）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、線維症、炎症性腸疾患、肺線維症（特発性肺線維症（ＩＰＦ）、硬化症に続発する肺線維症など）、ＣＯＰＤ、肝線維症、などがある。

【0145】

本発明の抗体は、アトピー性皮膚炎、慢性手湿疹、鼻のマイクロポリポーシス又はポリポーシス、食物アレルギー、又は好酸球性食道炎の治療又は予防に特に有用であると考えられる。

【0146】

したがって、１つの実施形態において、本発明の抗体又は医薬組成物は、ヒト又は動物の身体を治療によって処置する方法において使用するために提供される。

【0147】

一実施形態では、抗体又は医薬組成物は、アトピー性皮膚炎、慢性手湿疹、鼻のマイクロポリポーシス又はポリポーシス、食物アレルギー、又は好酸球性食道炎の治療方法における使用のために提供される。

【0148】

一実施形態では、本発明は、アトピー性皮膚炎、慢性手湿疹、鼻のマイクロポリポーシス又はポリポーシス、食物アレルギー、又は好酸球性食道炎を治療又は予防する方法であって、治療有効量の抗体又は医薬組成物をそれを必要としている患者に投与することを含む、上記方法を提供する。

【0149】

一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の１つ以上の医学的適応症の治療又は予防のための医薬の製造における、抗体又は医薬組成物の使用を提供する。

【実施例】

【0150】

以下の実施例により、本発明を説明する。

【0151】

例１．治療用抗ＩＬ‐１３抗体ＣＡ６５０の生成と選択
ラットに、精製ヒトＩＬ‐１３（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社）又はヒトＩＬ‐１３を発現するラット線維芽細胞（培養上清中に約１μｇ／ｍｌを発現）で、あるいは場合によっては、この２つを組み合わせて免疫した。３～６回の注射後、動物を犠牲にし、ＰＢＭＣ、脾臓、骨髄、リンパ節を採取した。血清は、ＥＬＩＳＡでヒトＩＬ‐１３との結合を、またＨＥＫ‐２９３ ＩＬ‐１３Ｒ‐ＳＴＡＴ‐６レポーター細胞アッセイ（ＨＥＫ‐Ｂｌｕｅアッセイ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）でｈＩＬ‐１３を中和する能力についてモニターされた。

【0152】

Ｂ細胞培養をセットアップし、上清をまずＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社のＦＭＡＴアッセイでビーズベースのアッセイでｈＩＬ‐１３との結合能力をスクリーニングした。これは、ストレプトアビジンビーズにコートされたビオチン化ヒトＩＬ‐１３と、暴露剤（ｒｅｖｅａｌ ａｇｅｎｔ）としてヤギ抗ラットＦｃ‐Ｃｙ５コンジュゲートを用いた均一なアッセイであった。次に、このアッセイからの陽性は、中和剤を同定するためにＨＥＫ‐２９３ ＩＬ‐１３Ｒ‐ＳＴＡＴ‐６レポーター細胞アッセイ（ＨＥＫ‐Ｂｌｕｅ ａｓｓａｙ，Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に進められた。次いで中和上清をＢｉａｃｏｒｅでプロファイリングし、オフレートを推定し、また中和の作用機序を明らかにした。中和は、ビン１又はビン２に分類された。ビン１は、ヒトＩＬ‐１３に結合してＩＬ‐１３Ｒα１の結合を阻害し、その結果、ＩＬ‐４Ｒの結合も阻害する抗体を表す。ビン１抗体は、ＩＬ‐１３のＩＬ‐１３Ｒα２への結合を阻害することもある。Ｂｉｎ２は、ＩＬ‐１３Ｒα１への結合は可能であるが、ＩＬ‐４Ｒの複合体へのリクルートを阻止するような形でｈＩＬ‐１３と結合する抗体を表す。我々は、ｂｉｎ１を経由して作用する抗体を選択していた。

【0153】

合計２７ｘ１００プレートのＳＬＡＭ実験から、約７５００のＩＬ‐１３特異的な陽性がプライマリーＦＭＡＴスクリーニングで同定された。８００ウェルがＨＥＫ‐ｂｌｕｅアッセイで中和を実証した。１７０ウェルが望ましいＢｉａｃｏｒｅプロファイル、すなわちオフレート＜５ｘ１０^－４ｓ^－１のｂｉｎ１抗体を有していた。これらの１７０ウェルから可変領域のクローニングを試みたところ、１６０ウェルで蛍光巣を得ることに成功した。１００ウェルで逆転写（ＲＴ）‐ＰＣＲを行い、重鎖と軽鎖の可変領域遺伝子ペアを生成した。これらのＶ領域遺伝子をマウスＩｇＧ１完全長抗体としてクローニングし、ＨＥＫ‐２９３一過性発現系で再発現させた。配列解析の結果、抗ヒトＩＬ‐１３抗体には２７のユニークなファミリーが存在することが判明した。これらの組換え抗体は、次に組換えｈＩＬ‐１３（大腸菌由来及び哺乳類由来）、組換え変異型ｈＩＬ‐１３（Ｒ１３０Ｑ）（大腸菌由来）、天然野生型及び変異型ｈＩＬ‐１３（ヒトドナー由来）、及びカニクイザルＩＬ‐１３（哺乳類由来）を細胞ベースのアッセイでブロックする能力について再試験された。組み換え抗体は、またＢｉａｃｏｒｅで変異型ヒトＩＬ‐１３（Ｒ１３０Ｑ）及びカニクイザルＩＬ‐１３への結合能力もテストされた。この特性評価の後、我々の基準を満たす抗体ファミリー、すなわち、すべてのヒト及びカニクイザルＩＬ‐１３製剤に対して、力価及び親和性の低下が少ない１００ｐＭ以下の抗体が選択された。

【0154】

ヒト化グラフトにおける中和力、親和性、ドナー含有量（下記参照）に基づき、ヒト化ＣＡ６５０がさらなる進行のために選択された。

【0155】

例２．抗体ＣＡ６５０のヒト化
抗体６５０は、ラットＶ領域からのＣＤＲをヒト生殖細胞系列抗体Ｖ領域フレームワークに移植することによりヒト化された。抗体の活性を回復するために、ラットＶ領域からの多数のフレームワーク残基もまたヒト化配列に保持された。これらの残基は、Ａｄａｉｒら（１９９１）（ヒト化抗体、ＷＯ９１／０９９６７）により概説されたプロトコルを使用して選択された。ラット抗体（ドナー）Ｖ領域配列とヒト生殖細胞系列（アクセプター）Ｖ領域配列のアラインメントを、設計したヒト化配列と共に示す。（図１（Ａ）軽鎖グラフト６５０及び図１（Ｂ）重鎖グラフト６５０）。ドナーからアクセプター配列にグラフトされたＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ／Ｋａｂａｔの定義を組み合わせて用いた場合、ＣＤＲ－Ｈ１を除いて、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、１９８７）によって定義された通りである（Ａｄａｉｒら、１９９１ ヒト化抗体、ＷＯ９１／０９９６７を参照のこと）。

【0156】

Ｖ領域の初期配列をコードする遺伝子はＥｎｔｅｌｅｃｈｏｎ ＧｍｂＨの自動合成法により設計・構築され、オリゴヌクレオチド指向性変異導入によりグラフト版ｇＬ８及びｇＨ９を生成するように修正された。ｇＬ８配列を、ヒトＣ‐カッパ定常領域（Ｋｍ３アロタイプ）をコードするＤＮＡを含むＵＣＢ Ｃｅｌｌｔｅｃｈヒト軽鎖発現ベクターｐＶｈＣＫにサブクローニングした。ｇＨ９配列は、ヒト重鎖γ‐１ＣＨ１定常領域をコードするＤＮＡを含むｐＶｈｇ１Ｆａｂにサブクローニングした。

【0157】

ヒトＶ領域ＩＧＫＶ１‐３９＋ＪＫ２ Ｊ領域（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＩＭＧＴ），http://www.imgt.org）が抗体６５０軽鎖ＣＤＲのアクセプターとして選択された。グラフトｇＬ８の軽鎖フレームワーク残基は、残基５８と７１（Ｋａｂａｔによる番号付け）を除いて、すべてヒト生殖細胞系列遺伝子からのものであり、ドナー残基イソロイシン（Ｉ５８）とチロシン（Ｙ７１）がそれぞれ保持された。Ｉ５８とＹ７１の残基の保持は、ヒト化抗体の完全な効力に不可欠であった。

【0158】

ヒトＶ領域ＩＧＨＶ１‐６９＋ＪＨ４Ｊ領域（ＩＭＧＴ、http://www.imgt.org）が、抗体６５０の重鎖ＣＤＲのためのアクセプターとして選択された。グラフトｇＨ９の重鎖フレームワーク残基は、残基６７、６９及び７１（Ｋａｂａｔによる番号付け）を除いて、すべてヒト生殖細胞系列遺伝子からのものであり、ドナー残基アラニン（Ａ６７）、フェニルアラニン（Ｆ６９）及びバリン（Ｖ７１）は、それぞれ保持された。Ａ６７、Ｆ６９及びＶ７１残基の保持は、ヒト化抗体の完全な効力に不可欠であった。ヒトフレームワークの１位のグルタミン残基をグルタミン酸（Ｅ１）に置換し、均質な産物の発現と精製を可能にした。抗体及び抗体フラグメントのＮ末端におけるグルタミンからピログルタミン酸への変換は、広く報告されている。最終的に選択された可変グラフト配列ｇＬ８とｇＨ９をそれぞれ図１（Ａ）及び図１（Ｂ）に示す。

【0159】

抗体６５０のＣＤＲ、重及び軽可変領域、ｓｃＦｖ及びｄｓｓｃＦＶフォーマットをコードするアミノ酸配列及びＤＮＡ配列を図２に示す。

【0160】

例３．抗ＩＬ１３抗体の生物学的活性
抗原結合とＩＬ‐１３の中和を確認した、データは示していない。

【配列表フリーテキスト】

【0161】

配列番号１～２４ ＜２２３＞ 組み換え配列

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図2-4】

【配列表】

2023507282000001.app

【国際調査報告】