▶ メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-01
(54)【発明の名称】複素環化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 405/14 20060101AFI20230221BHJP
C07D 401/14 20060101ALI20230221BHJP
A61K 31/4427 20060101ALI20230221BHJP
A61K 31/444 20060101ALI20230221BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20230221BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230221BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20230221BHJP
【ＦＩ】
C07D405/14 CSP
C07D401/14
A61K31/4427
A61K31/444
A61K31/4439
A61P3/10
A61P27/02
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022552856
(86)(22)【出願日】2021-03-04
(85)【翻訳文提出日】2022-10-14
(86)【国際出願番号】 CN2021079093
(87)【国際公開番号】W WO2021175290
(87)【国際公開日】2021-09-10
(31)【優先権主張番号】202010144412.8
(32)【優先日】2020-03-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】516304780
【氏名又は名称】メッドシャイン ディスカバリー インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100108903
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 和広
(74)【代理人】
【識別番号】100123593
【弁理士】
【氏名又は名称】関根 宣夫
(74)【代理人】
【識別番号】100208225
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 修二郎
(74)【代理人】
【識別番号】100217179
【弁理士】
【氏名又は名称】村上 智史
(74)【代理人】
【識別番号】100227592
【弁理士】
【氏名又は名称】孔 詩麒
(72)【発明者】
【氏名】スン コアンロン
(72)【発明者】
【氏名】シェン チュンリー
(72)【発明者】
【氏名】ウー チョントー
(72)【発明者】
【氏名】チェン シューホイ
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C063AA03
4C063AA05
4C063BB01
4C063CC22
4C063CC72
4C063DD02
4C063DD22
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC36
4C086GA02
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA33
4C086ZC35
(57)【要約】
本出願は、医学分野に属し、具体的には、式（Ｉ）で表される化合物、その製造方法及び当該化合物を含む医薬組成物を開示する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学に許容される塩。【化1】
Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル又はＣ１－３アルコキシであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１－３アルキルであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲｂにより置換され、
Ｔ１は、Ｎ又はＣＲ５であり、
Ｔ２は、Ｎ又はＣＲ６であり、
Ｔ３は、Ｎ又はＣＲ７であり、
Ｅ１は、Ｏ又はＮＲ８であり、
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－３アルキル又は－Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ１－３アルキルであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキル、－Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－３アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ１－３アルキルは、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲｃにより置換され、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２である。）
【請求項2】
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＨ３又は－Ｏ－ＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３及び－Ｏ－ＣＨ３は、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換される、請求項１に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ３は、－Ｏ－ＣＨ３である、請求項２に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ４は、Ｈ又はＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３は、任意選択で１、２又は３つのＲｂにより置換される、請求項１に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項5】
Ｒ４は、Ｈ又はＣＨ３である、請求項４に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項6】
Ｒ８は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３は、任意選択で１、２又は３つのＲｃにより置換される、請求項１に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項7】
Ｒ８は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＦ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３である、請求項６に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項8】
化合物は、式（Ｉ－１）又は式（Ｉ－２）で表される構造を有する、請求項１に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。【化2】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ８は請求項１で定義された通りである。）
【請求項9】
下記の式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩。【化3-1】
【化3-2】
【請求項10】
前記塩は塩酸塩である、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学に許容される塩。
【請求項11】
血漿カリクレイン阻害剤に関連する医薬の製造における、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項12】
血漿カリクレイン阻害剤に関連する医薬の製造における、請求項１０に記載の塩酸塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は下記の優先権を主張する：
ＣＮ２０２０１０１４４４１２．８、出願日は２０２０年０３月０４日である。
ＣＮ２０２０１０１４４４１２．８、出願日は２０２０年０３月０４日である。
【0002】
本出願は、医学分野に属し、具体的には、式（Ｉ）で表される化合物、その製造方法及び当該化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0003】
Ｆｌｅｔｃｈｅｒ因子としても呼ばれる血漿カリクレイン（ｐｌａｓｍａ ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ、ＰＫａｌ）は、肝細胞で特異的に発現され、高分子量の糖タンパク質であり、ＦＸＩＩａがカリクレインゲンに作用して生成され、カリクレインの切断を媒介してブラジキニン（ＢＫ）を生成し、そのＢ１受容体及びＢ２受容体を活性化し、血管張力、炎症反応及び内因性血液凝固及び線溶過程を調節する。ＰＫａｌは、糖尿病患者において高度に発現することが多く、血管拡張及び血管透過性（ＲＶＰ）の増加を引き起こし、それによって糖尿病性網膜症（ＤＲ）及び糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）を引き起こす。血漿カリクレイン阻害剤の主な機能は、体内で血漿カリクレインのレベルを低下させ、２つの受容体でのブラジキニンの活性化を低下させて、血管透過性及び炎症を緩和し、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫の治療において重要な役割を果たしている。ＫａｌＶｉｓｔａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社によって開発された血漿カリクレイン阻害剤ＫＶＤ００１（ＷＯ２０１３００５０４５）は臨床第ＩＩ相にあり、硝子体内注射により投与されて糖尿病性黄斑浮腫を治療し、患者のコンプライアンスを改善する必要がある。
【0004】
血漿カリクレイン阻害剤の重要な役割及び現在の投与方法による患者のコンプライアンスを考えると、経口治療薬に適した血漿カリクレイン阻害剤の開発は特に重要である。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0006】
【化1】
Ｒ１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、Ｃ１－３アルキル又はＣ１－３アルコキシであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキル及びＣ１－３アルコキシは、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１－３アルキルであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキルは、任意選択で１、２又は３つのＲｂにより置換され、
Ｔ１は、Ｎ又はＣＲ５であり、
Ｔ２は、Ｎ又はＣＲ６であり、
Ｔ３は、Ｎ又はＣＲ７であり、
Ｅ１は、Ｏ又はＮＲ８であり、
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２であり、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－３アルキル又は－Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ１－３アルキルであり、ここで、前記Ｃ１－３アルキル、－Ｃ１－３アルコキシ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１－３アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｃ１－３アルキルは、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲｃにより置換され、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは、それぞれ独立してＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ又はＮＨ２である。
【0007】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＨ３又は－Ｏ－ＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３及び－Ｏ－ＣＨ３は、それぞれ独立して任意選択で１、２又は３つのＲａにより置換され、Ｒａ及び他の変量は本発明で定義された通りである。
【0008】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ３は、－Ｏ－ＣＨ３であり、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0009】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ４は、Ｈ又はＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３は、任意選択で１、２又は３つのＲｂにより置換され、Ｒｂ及び他の変量は本発明で定義された通りである。
【0010】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ４は、Ｈ又はＣＨ３であり、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0011】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ８は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３であり、ここで、前記ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＨ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３は、任意選択で１、２又は３つのＲｃにより置換され、Ｒｃ及び他の変量は本発明で定義された通りである。
【0012】
本発明の一部の形態において、上記Ｒ８は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２－ＣＦ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＣＨ３であり、他の変量は本発明で定義された通りである。
【0013】
本発明更なる一部の形態は、上記の各変量を任意の組み合わせにより形成される。
【0014】
本発明の一部の形態において、上記化合物は、式（Ｉ－１）又は式（Ｉ－２）で表される構造を有する。
【0015】
【化2】
Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ８は本発明で定義された通りである。
【0016】
本発明は更に下記式で表される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【0017】
【化3-1】
【0018】
【化3-2】
【0019】
本発明は、更に血漿カリクレイン阻害剤に関連する医薬の製造における、上記化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【0020】
本発明の一部の形態は、血漿カリクレイン阻害剤に関連する医薬の製造における、上記塩酸塩の使用である。
【技術効果】
【0021】
本発明の化合物は、有意な血漿カリクレイン阻害活性を有する。本発明の化合物は、良好な経口ＰＫ特性及び適切な眼曝露量を有し、経口投与による炭酸脱水酵素（ＣＡ－１）によって誘発される糖尿病性黄斑浮腫動物モデルにおいて網膜浮腫に対する明らかな緩和効果を有する。
【定義及び説明】
【0022】
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の用語又は連語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【0023】
本明細書で用いられる「薬学的許容される塩」は、それらの化合物、材料、組成物及び／又は剤形に対するもので、これらは信頼できる医学判断の範囲内にあり、ヒト及び動物の組織との接触に適し、毒性、刺激性、アレルギー反応又はほかの問題又は合併症があまりなく、合理的な利益／リスク比に合う。
【0024】
用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の塩で、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物と比較的に無毒の酸又は塩基とで製造される。本発明の化合物に比較的に酸性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は適切な不活性溶媒において十分な量の塩基でこれらの化合物と接触することで塩基付加塩を得ることができる。薬学的許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミン又はマグネシウム塩あるいは類似の塩を含む。本発明で化合物に比較的塩基性の官能基が含まれる場合、単独の溶液又は、適切な不活性溶媒において十分な量の酸でこれらの化合物と接触することで酸付加塩を得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の実例は、無機酸塩及び有機酸塩、さらにアミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、及びグルクロン酸のような有機酸の塩を含み、上記無機酸は、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸水素イオン、リン酸、リン酸一水素イオン、リン酸二水素イオン、硫酸、硫酸水素イオン、ヨウ化水素酸、亜リン酸などを含み、上記有機酸は、例えば酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸やメタンスルホン酸などの類似の酸を含む。本発明の一部の特定的の化合物は、塩基性及び酸性の官能基を含有するため、任意の塩基付加塩又は酸付加塩に転換することができる。
【0025】
本発明の薬学的許容される塩は、酸基又は塩基性基を含む母体化合物から通常の方法で合成することができる。通常の場合、このような塩の製造方法は、水又は有機溶媒あるいは両者の混合物において、遊離酸又は塩基の形態のこれらの化合物を化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させて製造する。
【0026】
本発明の化合物は、化合物を構成する一つまた複数の原子には、非天然の原子同位元素が含まれてもよい。例えば三重水素（３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）又はＣ－１４（１４Ｃ）のような放射性同位元素で化合物を標識することができる。又、例えば重水素を水素に置換して重水素化薬物を形成することができ、重水素と炭素で形成された結合は、通常の水素と炭素で形成された結合よりも強く、重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物には、毒性の副作用が軽減され、薬物の安定性が増し、治療効果が向上され、薬物の生物学的半減期が延ばされるという利点がある。本発明の化合物の同位体組成の変換は、放射性であるかいやかに関わらず、本発明の範囲に含まれる。
【0027】
「任意」また「任意に」は後記の事項又は状況によって可能であるが必ずしも現れるわけではなく、かつ当該記述はそれに記載される事項又は状況が生じる場合によってその事項又は状況が乗じない場合を含むことを意味する。
【0028】
用語「置換された」は特定の原子における任意の一つ又は複数の水素原子が置換基で置換されたことで、特定の原子価状態が正常でかつ置換後の化合物が安定していれば、置換基は重水素及び水素の変形体を含んでもよい。置換基がケト基（すなわち＝Ｏ）である場合、２つの水素原子が置換されたことを意味する。ケト基置換は、芳香族基で生じない。用語「任意選択に置換される」は、置換されてもよく、置換されなくてもよく、別途に定義しない限り、置換基の種類と数は化学的に安定して実現できれば任意である。
【0029】
変量（例えばＲ）のいずれかが化合物の組成又は構造に１回以上現れた場合、その定義はいずれの場合においても独立である。そのため、例えば、一つの基が０～２個のＲで置換された場合、上記基は任意に２個以下のＲで置換され、かついずれの場合においてもＲは独立して選択肢を有する。また、置換基及び／又はその変形体の組み合わせは、このような組み合わせであれば安定した化合物になる場合のみ許容される。
【0030】
連結基の数が０の場合、例えば、－（ＣＲＲ）０－は、当該連結基が単結合であることを意味する。
【0031】
そのうち一つの変量が単結合の場合、それで連結する２つの基が直接連結し、例えばＡ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、この構造は実際にＡ－Ｚになる。
【0032】
置換基がない場合、当該置換基が存在しないことを表し、例えば、Ａ－ＸのＸがない場合、当該構造が実際にＡとなることを表す。挙げられた置換基に対してどの原子を通して置換された置換基が明示しない場合、このような置換基はその任意の原子を通して結合することができ、例えば、置換基としてのピリジニル基は、ピリジン環の任意の炭素原子を通して置換基に結合してもよい。
【0033】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルキル」は直鎖又は分枝鎖の１～３個の炭素原子で構成された飽和炭化水素基を表す。前記Ｃ１－３アルキルにはＣ１－２とＣ２－３アルキルなどが含まれ、それは１価（例えばメチル）、２価（例えばメチレン）及び多価（例えばメチン）であってもよい。Ｃ１－３アルキルの実例は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピル及びイソプロピルを含む）を含むが、これらに限定されない。
【0034】
別途に定義しない限り、用語「Ｃ１－３アルコキシ」は酸素原子を介して分子の残り部分に連結した１～３個の炭素原子を含むアルキル基を表す。前記Ｃ１－３アルコキシ基は、Ｃ１－２、Ｃ２－３、Ｃ３及びＣ２アルコキシなどが含まれる。Ｃ１－３アルコキシの実例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ―プロポキシ又はイソプロポキシを含む）などを含むが、これらに限定されない。
【0035】
別途に定義しない限り、Ｃｎ－ｎ＋ｍ又はＣｎ－Ｃｎ＋ｍはｎ～ｎ＋ｍ個の炭素の任意の一つの具体的な様態を含み、例えば、Ｃ１－１２はＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、及びＣ１２を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の一つの範囲も含み、例えば、Ｃ１－１２はＣ１－３、Ｃ１－６、Ｃ１－９、Ｃ３－６、Ｃ３－９、Ｃ３－１２、Ｃ６－９、Ｃ６－１２、及びＣ９－１２等を含む。同様に、ｎ員～ｎ＋ｍ員は環における原子数がｎ～ｎ＋ｍ個であることを表し、例えば、３～１２員環は３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、及び１２員環を含み、ｎ～ｎ＋ｍのうちの任意の一つの範囲も含み、例えば、３～１２員環は３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、及び６～１０員環等を含む。
【0036】
用語「脱離基」とは別の官能基又は原子で置換反応（例えば求核置換反応）で置換されてもよい官能基又は原子を指す。例えば、体表的な脱離基は、トリフルオロメタンスルホン酸エステル、塩素、臭素、ヨウ素、例えばメタンスルホン酸エステル、トルエンスルホン酸エステル、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸エステル、ｐ－トルエンスルホン酸エステルなどのスルホン酸エステル基、例えばアセチルオキシ基、トリフルオロアセチルオキシ基などのアシルオキシ基を含む。
【0037】
用語「保護基」は「アミノ保護基」、「ヒドロキシ保護基」又は「メルカプト保護基」を含むが、これらに限定されない。用語「アミノ保護基」とはアミノ基の窒素の位置における副反応の防止に適する保護基を指す。代表的なアミノ酸保護基は、ホルミル、アルカノイル（例えばアセチル、トリクロロアセチル又はトリフルオロアセチル）のようなアシル、ｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）のようなアルコキシカルボニル、ベントキシカルボニル（Ｃｂｚ）及び９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）のようなアリールメトキシカルボニル、ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）、１，１－ビス（４´－メトキシフェニル）メチルのようなアリールメチル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）及びｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）のようなシリルなどを含むが、これらに限定されない。用語「ヒドロキシ保護基」とはヒドロキシの副反応の防止に適する保護基を指す。代表的なヒドロキシ保護基は、メチル、エチル及びｔ－ブチルのようなアルキル、アルカノイル（例えばアセチル）のようなアシル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ－メトキシベンジル（ＰＭＢ）、９－フルオレニルチル（Ｆｍ）及びジフェニルメチル（ＤＰＭ）のようなアリールメチル、トリメチルシリル（ＴＭＳ）及びｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）のようなシリルなどを含むが、これらに限定されない。
【0038】
本発明の化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、他の化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【0039】
本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができ、本発明が化合物の絶対配置に関する場合、絶対配置は、当業者の従来の技術的手段によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折（ＳＸＲＤ）、培養された単結晶はＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計によって収集され、光源はＣｕＫα放射線、走査方法：φ／ω走査、関連データを収集した後、更に直接法は（Ｓｈｅｌｘｓ９７）結晶構造解析により、絶対配置を確認できる。
【0040】
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品から得ることができる。
【0041】
本発明は下記の略語を用いる：ａｑは、水を表す。
【0042】
化合物は本分野の通常の名称又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトによって名付けられ、市販化合物はメーカーのカタログの名称が使用された。
【発明を実施するための形態】
【0043】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明の不利な制限を意味するものではない。本出願は本明細書で詳細に説明されており、その特定の実施形態も開示されており、当業者にとって、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の特定の実施形態において様々な変更及び修正を行うことができることは明らかである。本出願に使用されたすべての溶媒は市販品で、さらに精製せずにそのままで使用してもよい。本出願の合成に使用される最初の化合物の原料は市販されており、先行技術の方法によって製造することもできる。
実施例１
実施例１
【0044】
【化4】
【0045】
【化5】
三口フラスコに化合物１－１（９２ｇ、６６５．８８ｍｍｏｌ）、塩酸（１２Ｍ、２７７．４５ｍＬ）及び無水トルエン（９２０ｍＬ）を加え、２５℃で４時間攪拌した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えてｐＨを７に調節し、酢酸エチル（３００ｍＬ×３）を加えて抽出し、有機相を収集し、合わせ、飽和食塩水（５００ｍＬ）を加えて洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物１－２を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １３９ ［Ｍ－１７］＋。
２）化合物１－３の合成
予め乾燥させた一口フラスコに５－フルオロ－２－ヒドロキシピリジン（１４．７ｇ、１３０．２６ｍｍｏｌ）、化合物１－２（１７．０ｇ、１０８．５５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１６０ｍＬ）、炭酸カリウム（１５．０ｇ、１０８．５５ｍｍｏｌ）を加え、６５℃で１８時間攪拌した。反応系を４０℃に自然冷却した後、反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（１００ｍＬ×３）ですすぎ、濾液を収集して飽和食塩水（２００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮して油状の粗生成物を得た。粗生成物に酢酸エチル（４０ｍＬ）を加え、２５℃で１０分間攪拌し、濾過し、ケーキを酢酸エチル（１０ｍＬ×３）ですすぎ、ケーキを収集し、真空乾燥させて化合物１－３を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２３４ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物１－４の合成
予め乾燥させた反応フラスコにジクロロメタン（２５ｍＬ）、化合物１－３（２．２ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．７３ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却し、メチルスルホニルクロリド（１．４ｇ、１１．８８ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、２０℃に昇温させて１６時間攪拌した。反応溶液をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）を加え、１０分間攪拌し、水相を除去し、有機相を無水硫酸ナトリウム乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物１－４を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．３６－７．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３１ （ｄ， Ｊ＝８．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２４－７．２９ （ｍ， １Ｈ）， ７．１６ （ｔ， Ｊ＝３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６１ （ｄｄ， Ｊ＝５．４， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５８ （ｓ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２５２ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物１－５ｂの合成
丸底フラスコに化合物１－５ａ（０．５ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）、カルボニルジイミダゾール（９５３ｍｇ、５．８８ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）を加え、２５℃の室温で２時間攪拌し、次に、マロン酸エチルカリウム（１．０ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）、塩化マグネシウム（５７４ｍｇ、６．０２ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１６時間攪拌し、反応溶液に酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、水相を除去し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：０～１００％の酢酸エチル／石油エーテル、流速２０ｍＬ／分）により精製して化合物１－５ｂを得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ４．７５－４．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０７－４．１６ （ｍ， １Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ２Ｈ）， １．２２－１．３３ （ｍ， ３Ｈ）。
５）化合物１－５ｃの合成
予め乾燥させた反応フラスコにＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）に溶解させた化合物１－５ｂ（３．５ｇ、２０．３３ｍｍｏｌ）を加え、次に、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（４．８ｇ、４０．６６ｍｍｏｌ）を加えた。１２０℃で２時間攪拌し、反応系を２０℃に冷却させ、減圧濃縮して化合物１－５ｃを得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．８０ （ｓ， １Ｈ）， ４．８０ （ｓ， ２Ｈ）， ４．７８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２３－４．３５ （ｍ， １Ｈ）， ４．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２１－３．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ２．８０－２．９０ （ｍ， ３Ｈ）， １．２９ （ｍ， ３Ｈ）。
６）化合物１－５の合成
予め乾燥させた反応フラスコにｎ－ブタノール（１０ｍＬ）、１－５ｃ（４．６ｇ、２０．２４ｍｍｏｌ）、ヒドラジン一水和物（１．３ｇ、２４．２９ｍｍｏｌ）、酢酸（１．５ｇ、２４．２９ｍｍｏｌ）を加え、１２０℃で２時間攪拌し、反応系を２０℃に冷却させ、反応溶液に酢酸エチル（５０ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、水相を除去し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物１－５を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ｐｐｍ ７．８５－８．２３ （ｍ， １Ｈ）， ５．００－５．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５７－４．８４ （ｍ， １Ｈ）， ４．２５ （ｍ， ２Ｈ）， １．３３ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。
７）化合物１－６の合成
予め乾燥させた反応フラスコにＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）、化合物１－４（３８９ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）、１－５（０．５ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５４９ｍｇ、３．９７ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１６時間反応させ、反応系を２０℃に冷却させ、次に、反応系に水（１０ｍＬ）を加え、濾過し、水（２０ｍＬ）でケーキを洗浄し、ケーキを収集し、真空乾燥させて化合物１－６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．８３ （ｓ， １Ｈ）， ７．３２－７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２６－７．３１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１８ （ｔ， Ｊ＝３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．６２ （ｄｄ， Ｊ＝５．４， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９４－５．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ４．６５ （ｍ， １Ｈ）， ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）， １．３３ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。
８）化合物１－７の合成
予め乾燥させた反応フラスコにテトラヒドロフラン（１２ｍＬ）、メタノール（３ｍＬ）、化合物１－６（０．６５ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、水（３ｍＬ）、水酸化リチウム一水和物（１９９ｍｇ、４．７４ｍｍｏｌ）を加えた。７０℃で２時間攪拌し、反応系を２０℃に冷却させ、次に、クエン酸水溶液（０．５Ｍ）を加えてｐＨを４～５に調節し、濃縮し、有機溶媒を除去し、濾過し、ケーキを収集し、真空乾燥させて化合物１－７を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．９１－８．０７ （ｍ， １Ｈ）， ７．５７ （ｍ， １Ｈ）， ７．２０－７．３９ （ｍ， ４Ｈ）， ６．４４ （ｍ， １Ｈ）， ５．３１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６１－４．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．４４－４．６０ （ｍ， １Ｈ）。
９）化合物１－８ｂの合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物１－８ａ（２３．０ｇ、１５９．５９ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（４６０ｍＬ）を加え、窒素ガズの保護下で反応を－７８℃に冷却させた後、２Ｍのリチウムジイソプロピルアミドのテトラヒドロフランとｎ－ヘプタンの混合溶液（２Ｍ、１１９．６９ｍＬ）を加え、２時間反応させた後、反応溶液にシアノギ酸エチル（３９．５ｇ、３９８．９８ｍｍｏｌ、３９．１４ｍＬ）のテトラヒドロフラン（２３０ｍＬ）溶液を加え、０．５時間反応を続け、反応溶液を１５℃にゆっくりと昇温させ、反応溶液に飽和塩化アンモニウム水溶液（７００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（７００ｍＬ×２）で抽出し、有機相合わせ、飽和食塩水（３００ｍＬ）を加えて洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：酢酸エチル／石油エーテル、酢酸エチル％：０～１００％、流速２０ｍＬ／分）により精製して化合物１－８ｂを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２１７ ［Ｍ＋１］＋。
１０）化合物１－８ｃの合成
予め乾燥させた三口フラスコに水素化ホウ素リチウム（９．３ｇ、４２７．４２ｍｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン（２２０ｍＬ）を加え、窒素ガスの保護下で、０℃に冷却させ、化合物１－８ｂ（２２０ｇ、１０１．７７ｍｍｏｌ）及び無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）の混合溶液を加え、２５℃に自然に昇温させた後、４０℃の油浴に移して、１７時間攪拌した。合わせた反応系を飽和塩化アンモニウム（１Ｌ）の溶液にゆっくりと注ぎ、クエンチし、泡が発生しなくなるまでゆっくりと攪拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ×３）を加えて抽出し、分液し、有機相を収集し、飽和食塩水（１００ｍＬ）を加えて洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物１－８ｃを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １５７ ［Ｍ－１７］＋。
１１）化合物１－８ｄの合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１－８ｃ（１４．０ｇ、８０．３９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１４０ｍＬ）、塩化チオニル（４４．０ｇ、３６９．８１ｍｍｏｌ、２６．８３ｍＬ）を加え、２５℃で０．５時間攪拌した後、反応系を４０℃に昇温させ、冰浴で２５℃に冷却させて０．５時間攪拌を続けた。反応系に酢酸エチル（１００ｍＬ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×３）を加えて洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して、化合物１－８ｄを得た。
１２）化合物１－８の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１－８ｄ（１５．４ｇ、７９．９６ｍｍｏｌ）、アンモニア／メタノール（１４Ｍ、１５０ｍＬ）を加え、２５℃で２４時間攪拌した。反応系をスピン乾燥させ、無水ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、２５℃で０．５時間攪拌し、濾過し、ケーキをジクロロメタン（１０ｍＬ×３）ですすぎ、濾取した固体を収集し、減圧濃縮して化合物１－８を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ７．２８ （ｄｔ， Ｊ＝５．４， ９．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１４ （ｄｔ， Ｊ＝１．８， ９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８５ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：１７４ ［Ｍ＋１］＋。
１３）化合物１の合成
三口フラスコに化合物１－７（５０ｍｇ、１３０．４２μｍｏｌ）、化合物１－８（２２ｍｇ、１３０．４２μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）、ジイソプロピルエチルアミン（７５ｍｇ、８６．９０μｍｏｌ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４ｍｇ、１９４μｍｏｌ）を加え、０℃で２時間攪拌した。粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：３０％～５０％、１０．５分）により精製して化合物１を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．２５ （ｔ， Ｊ＝５．１４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ８．０１－８．０５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５６ （ｄｄｄ， Ｊ＝１０．１３， ７．１２， ３．３３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２７－７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０－７．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ＝９．３５， ５．２７ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９５－７．０４ （ｍ， １Ｈ）， ６．４３ （ｄｄ， Ｊ＝１０．０４， ５．４０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２８ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄｄ， Ｊ＝８．４７， ５．５８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６７ （ｔ， Ｊ＝６．２７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４６－４．５６ （ｍ， １Ｈ）， ４．３７ （ｄ， Ｊ＝４．８９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５３９ ［Ｍ＋１］＋。
実施例２
【0046】
【化6】
【0047】
【化7】
窒素ガズの保護下で、予め乾燥させた三口フラスコに化合物２－１ａ（２５．０ｇ、１９０．０６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液を加え、－７８℃に冷却させ、２Ｍのリチウムジイソプロピルアミドのテトラヒドロフランとｎ－ヘプタンの混合溶液（２Ｍ、１０４．５３ｍＬ）を滴下し、２時間攪拌した後、原料であるホウ酸トリメチル（３９．５ｇ、３８０．１３ｍｍｏｌ、４２．９３ｍＬ）を滴下し、２５℃の室温に自然に昇温させて２２時間攪拌を続けた。反応系に飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）を加えて反応系をクエンチし、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えて３０分間で攪拌し、水相を分離して収集し、減圧濃縮して粗生成物２－１ｂを得た。
２）化合物２－１ｃの合成
０～５℃で、化合物２－１ｂ（３３．３ｇ、１８９．９０ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（３３０ｍＬ）に過酸化水素（５９．０ｇ、５２０．３６ｍｍｏｌ、５０ｍＬ、３０％の純度）を滴下し、得られた混合物を２５℃の室温に自然に昇温させて４．５時間攪拌した。更に過酸化水素（１１８．０ｇ、１．０４ｍｏｌ、１００ｍＬ、３０％の純度）を加え、１８時間攪拌を続けた。飽和亜硫酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）に反応系をゆっくりと加え、澱粉ヨウ化カリウム試験紙が変色しなくなるまで１時間攪拌し、酢酸エチル（３００ｍＬ×３）で抽出し、有機相を収集して合わせ、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物２－１ｃを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １４８ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物２－１ｄの合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物２－１ｃ（７．９ｇ、５３．４１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８０ｍＬ）、炭酸カリウム（１４．８ｇ、１０６．８２ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（１１．４ｇ、８０．１２ｍｍｏｌ、４．９９ｍＬ）を加え、２５℃で１８時間攪拌した。反応系に酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌した後、ブフナー漏斗で反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（１５ｍＬ×３）ですすぎ、濾液を収集し、飽和食塩水（４０ｍＬ×３）を加えて洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：酢酸エチル／石油エーテル、酢酸エチル％：０～３０％、流速３０ｍＬ／分）により精製して化合物２－１ｄを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １６２ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物２－１ｅの合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物２－１ｄ（２．９ｇ、１７．９５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）、シアン化亜鉛（２．１ｇ、１７．９５ｍｍｏｌ、１．１４ｍＬ）、１，１－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（９９５ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（８２２ｍｇ、８９７．４９μｍｏｌ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１２０℃で１６時間攪拌した。反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（３０ｍＬ×５）ですすぎ、濾液に飽和食塩水を加えて２０分間攪拌し、分液ロートを使用して分離し、有機相に無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：酢酸エチル／石油エーテル、酢酸エチル％：０～５０％、流速３０ｍＬ／分）により精製して化合物２－１ｅを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １５３ ［Ｍ＋１］＋。
５）化合物２－１の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物２－１ｅ（１．８ｇ、１１．８３ｍｍｏｌ）、無水エタノール（１０ｍＬ）、無水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）、塩酸（１．２０ｇ、１１．８３ｍｍｏｌ、１．１７ｍＬ、３６％の純度）、パラジウム／炭素（５００ｍｇ、１０％の純度）を加え、１５ｐｓｉで水素ガス（２３．８５ｍｇ、１１．８３ｍｍｏｌ）をバブリングし、２５℃で４時間攪拌した。反応系を珪藻土で濾過し、ケーキを残留物がなくなるまでメタノール（２０ｍＬ×４）ですすぎ、濾液を減圧濃縮して化合物２－１を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３６ （ｄ， Ｊ＝５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３４ （ｔ， Ｊ＝６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２０ － ４．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １５６ ［Ｍ＋１］＋。
６）化合物２の合成
０℃で、予め乾燥させた反応フラスコにＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）、化合物１－７（５０ｍｇ、１３０．４２μｍｏｌ）、化合物２－１（２８ｍｇ、１４３．４６μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）を加えた。次に、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４ｍｇ、１９４μｍｏｌ）を加え、２０℃で２時間攪拌した。反応系を濾過し、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル、Ｂ％：２５％～５５％、１０．５分）により精製して化合物２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ｐｐｍ ８．１６ （ｄ， Ｊ＝５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｓ， １Ｈ）， ７．７７ （ｔ， Ｊ＝３．８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｍ， １Ｈ）， ７．２５－７．３７ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１１ （ｔ， Ｊ＝６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５７ （ｄｄ， Ｊ＝５．２， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３２ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９３－５．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．８８－４．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６０－４．７０ （ｍ， １Ｈ）， ４．５７ （ｄ， Ｊ＝２．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３Ｈ）。
実施例３
【0048】
【化8】
【0049】
【化9】
０℃で、予め乾燥させた反応フラスコにＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）、化合物１－７（５０ｍｇ、１３０．４２μｍｏｌ）、化合物３－１（３０ｍｇ、１５６．５１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７６ｍｇ、５８６．９０μｍｏｌ）を加え、次に、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４ｍｇ、１９４μｍｏｌ）を加え、２５℃で２時間攪拌した。反応系を濾過し、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリルＢ％：３０％～６０％、１０．５分）により精製して化合物３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０－８．１８ （ｍ， １Ｈ）， ７．９７－８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ７．５６ （ｍ， １Ｈ）， ７．２７－７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０－７．２６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１０－７．１８ （ｍ， １Ｈ）， ６．４３ （ｄｄ， Ｊ＝５．４， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２８ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄｄ， Ｊ＝５．６， ８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６４－４．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４８－４．５９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８１－３．８６ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５５５ ［Ｍ＋１］＋。
実施例４
【0050】
【化10】
【0051】
【化11】
化合物１－５（３．１ｇ、１５．８０ｍｍｏｌ）及び化合物４－１（３．７ｇ、１５．９６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（４．６ｇ、３３．６４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を６５℃に加熱して４時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、水相を除去し、有機相を減圧濃縮し、残余物に酢酸エチル（６ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、濾過して４－２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．８０ （ｓ， １Ｈ）， ７．２５－７．３７ （ｍ， ６Ｈ）， ６．６２ （ｄ， Ｊ＝８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１７ （ｔｄ， Ｊ＝６．８， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３０ （ｓ， １Ｈ）， ５．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９３－５．０６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．６３ （ｔ， Ｊ＝７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２２ （ｑ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３１ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。
２）化合物４－３の合成
化合物４－２（６．２ｇ、１５．７６ｍｍｏｌ）のエタノール（７０ｍＬ）溶液に水酸化ナトリウム水溶液（２．５Ｍ、１８．９１ｍＬ）を加え、得られた混合物を３５℃に加熱して１６時間攪拌した。反応溶液に０．５Ｍのクエン酸水溶液を滴下してｐＨを４～５に調節し、大量の白色固体を析出させ、濾過して固体を収集し、エタノール（３０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、濾過して化合物４－３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．２３－７．３８ （ｍ， ６Ｈ）， ６．６６ （ｄ， Ｊ＝８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１６－６．２３ （ｍ， １Ｈ）， ５．２７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９４－５．０７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．６４ （ｔ， Ｊ＝７．７ Ｈｚ， １Ｈ）。
３）化合物４の合成
三口フラスコに化合物４－３（５０ｍｇ、１３６．８４μｍｏｌ）、化合物３－１（２５ｍｇ、１３６．８４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）、ジイソプロピルエチルアミン（７９ｍｇ、６１５．７８μｍｏｌ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７８ｍｇ、２０５．２６μｍｏｌ）を加え、０℃で２時間攪拌した。粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：４０％～７０％、１０．５分）により精製して化合物４を得た。１ＨＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６， ４００ ＭＨｚ） δ ｐｐｍ ８．２０ （ｓ， １Ｈ）， ８．０８－８．１４ （ｍ， １Ｈ）， ７．７２－７．７８ （ｍ， １Ｈ）， ７．３７－７．４４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１－７．３０ （ｍ， ６Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ＝９．１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１７－６．２５ （ｍ， １Ｈ）， ５．２７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄｄ， Ｊ＝８．４１， ５．５２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６８ （ｔ， Ｊ＝６．２７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４８－４．５９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．２６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８４ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５３７ ［Ｍ＋１］＋。
実施例５
【0052】
【化12】
【0053】
【化13】
予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－１（３．０ｇ、１３．４４ｍｍｏｌ）、無水塩化カルシウム（６．０ｇ、５３．７６ｍｍｏｌ）、無水エタノール（３３ｍＬ）、無水テトラヒドロフラン（３５ｍＬ）を加えた。０℃に冷却させ、水素化ホウ素ナトリウム（１．０ｇ、２６．８８ｍｍｏｌ）を加え、０℃で５時間攪拌した。反応フラスコに飽和塩化アンモニウム溶液（１５０ｍＬ）を加え、１０分間攪拌した。２７℃に自然に昇温させ、反応フラスコにジクロロメタン（２５０ｍＬ）及び水（２５０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（２５０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物５－２を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １８２ ［Ｍ＋１］＋。
２）化合物５－３の合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－２（２．２ｇ、１２．１４ｍｍｏｌ）、無水ジクロロメタン（２５ｍＬ）を加えて０℃に冷却させ、０℃で塩化スルホキシド（７．７ｇ、６４．３５ｍｍｏｌ、４．６７ｍＬ）を加えた。２７℃に自然に昇温させ、３時間で攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬ）を加えた後、ジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（２００ｍＬ）を加え、有機相を収集し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物５－３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ９．１１ （ｄ， Ｊ＝１．６２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２８ （ｄｄ， Ｊ＝８．０８， ２．０６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄ， Ｊ＝８．１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６２－４．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３１－４．４５ （ｍ， ２Ｈ）， １．２９－１．４５ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：２００ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物５－４の合成
２７℃で、予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－３（１．７ｇ、８．４７ｍｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）を加え、－７８℃に冷却させ、水素化ジイソブチルアルミニウム（１Ｍ、２９．６３ｍＬ）を加え、－７８℃に維持して反応を３時間攪拌した。水酸化ナトリウム溶液（３０ｍＬ）を加え、５分間攪拌した。珪藻土で濾過し、濾液を収集した。濾液に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物５－４を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １５８ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物５－５の合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－４（６００ｍｇ、３．６８ｍｍｏｌ）、１－５（７３７ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８．１０ｍｍｏｌ）を加え、６５℃に昇温させて１２時間攪拌した。２７℃に自然に冷却させ、反応フラスコにジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、１０分間攪拌し、濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物５－５を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３１８ ［Ｍ＋１］＋。
５）化合物５－６の合成
予め乾燥させた反応フラスコに、化合物５－５（３００ｍｇ、９４５．３６μｍｏｌ）、無水ジクロロメタン（４ｍＬ）及びトリエチルアミン（３８３ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ、５２６．３３μＬ）を加え、０℃でメチルスルホニルクロリド（１６１ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、１０８．５９μＬ）を加え、２７℃に自然に昇温させて７時間攪拌した。反応溶液に水（５０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、分液・抽出して水相を除去し、有機相を得、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、吸引濾過し、減圧濃縮して化合物５－６を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３３６ ［Ｍ＋１］＋。
６）化合物５－７の合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－６（３００ｍｇ、７４４．５２μｍｏｌ）、２－ヒドロキシピリジン（７４ｍｇ、７８１．７５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）及び無水炭酸カリウム（１０３ｍｇ、７４４．５２μｍｏｌ）を加えた。反応を７０℃に加熱し、１２時間反応させた。２７℃に自然に冷却させ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加え、濾過し、濾液を減圧濃縮した後分取用高速液体クロマトグラフィー（中性系）により精製して化合物５－７を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３９５ ［Ｍ＋１］＋。
７）化合物５－９の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物５－７（５４ｍｇ、１３６．９１μｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（１６ｍｇ、４１０．７３μｍｏｌ）、無水エタノール（１ｍＬ）、無水テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、水（０．３ｍＬ）を加え、７５℃で２０時間攪拌した。反応系を乾燥するまで減圧濃縮し、粗生成物化合物５－９を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３６６ ［Ｍ－２２］＋。
８）化合物５の合成
予め乾燥させた三口フラスコに化合物１－９（４４ｍｇ、１２０．１０μｍｏｌ）、１－８（２１ｍｇ、１２０．１０μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７０ｍｇ、５４０．４４μｍｏｌ、９４．１３μＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）を加え、０℃に冷却させて２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（６９ｍｇ、１８０．１５μｍｏｌ）を加え、０℃で３時間攪拌した。反応系を濾過し、濾液を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリルＢ％：２０％～５０％、１０．５分）により精製して化合物５を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．５５ （ｄ， Ｊ＝１．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １Ｈ）， ７．６６ （ｄｄ， Ｊ＝２．２， ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７－７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１５ （ｄ， Ｊ＝８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９１－６．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ６．６１ （ｄ， Ｊ＝９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２０ （ｔ， Ｊ＝６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０２ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．３６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０３ （ｄｄ， Ｊ＝５．８， ８．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．９２ （ｔ， Ｊ＝６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６７－４．６１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．８７ （ｓ， ３Ｈ）。
実施例６
【0054】
【化14】
【0055】
【化15】
予め乾燥させた反応フラスコに化合物５－４（０．５ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）、５－フルオロ－２－ヒドロキシピリジン（４１４ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（６ｍＬ）、無水炭酸カリウム（４８２ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を加えた。６５℃に昇温させ１２時間攪拌した。２７℃に自然に冷却させ、反応フラスコにジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、１０分間攪拌し、濾過し、減圧濃縮して化合物６－５を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．５５ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５－７．５３ （ｍ， ５Ｈ）， ６．５０－６．６９ （ｍ， ５Ｈ）， ５．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．７０－４．７６ （ｍ， ２Ｈ）． ３．５１ （ｓ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：２３５ ［Ｍ＋１］＋。
２）化合物６－６の合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物６－５（０．１ｇ、４２６．９μｍｏｌ）、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）を加え、反応を０℃に冷却させ、塩化チオニル（２５３ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ、１５４．８μＬ）を加えた。２７℃に自然に昇温させて３時間反応させた。反応系を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２０ｍＬ）に注ぐことによりクエンチし、５分間静置し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。更に水相にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相合わせた。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物６－６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．５７ （ｄ， Ｊ＝１．７５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄｄ， Ｊ＝７．８９， ２．１９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１－７．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２８－７．３３ （ｍ， １Ｈ）， ６．５７ （ｄｄ， Ｊ＝１０．０９， ５．２６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５８ （ｓ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２５３ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物６－７の合成
２５℃で、予め乾燥させたサムボトルに化合物６－６（０．１ｇ、３９５．７μｍｏｌ）、化合物１－５（７８ｍｇ、３９９．３μｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（１１６ｍｇ、８４２．９μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加えた。油浴で６５℃に加熱して１２時間攪拌した。２７℃に自然に冷却させ、反応フラスコにジクロロメタン（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相合わせた。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物６－７を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．３８－８．５８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７８－８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４９－７．６７ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２－５．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．７８－５．０６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１２－４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１ （ｓ， ２Ｈ）， １．２２－１．３８ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４１３ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物６－８の合成
２７℃で、予め乾燥させた反応フラスコに化合物６－７（０．１ｇ、１９３．９μｍｏｌ）を加え、無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させ、更に系に水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ、３８７．９μＬ）及びエタノール（２ｍＬ）を加えた。４０℃に昇温させて１２時間攪拌した。反応を２７℃に自然に冷却させ、反応フラスコに塩酸（１Ｍ、１０ｍＬ）を加えて溶液のｐＨを６に調節し、反応フラスコにジクロロメタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物６－８を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３８５ ［Ｍ＋１］＋。
５）化合物６の合成
２７℃で、予め乾燥させた一口フラスコに化合物６－８（３６ｍｇ、９３．６μｍｏｌ）、化合物１－８（１６ｍｇ、９３．６μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５４ｍｇ、４２１．８μｍｏｌ、７３．４μＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５３ｍｇ、１４０．５μｍｏｌ）を加え、０℃で５時間攪拌した。反応を２７℃に自然に昇温させ、水（１０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集し、減圧濃縮して粗生成物を得、分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：２５％～５５％、１０．５分）により精製して化合物６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３７－８．５１ （ｍ， １Ｈ）， ７．３４－７．６３ （ｍ， ５Ｈ）， ６．８４ （ｄ， Ｊ＝８．３３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０４ （ｄｄ， Ｊ＝８．３３， ６．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．８８－４．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６４ （ｄ， Ｊ＝５．２６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５４ （ｓ， ６Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５４１ ［Ｍ＋１］＋。
実施例７
【0056】
【化16】
【0057】
【化17】
予め乾燥させた三口フラスコにＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）、無水炭酸カリウム（３．４ｇ、２４．２９ｍｍｏｌ）、化合物７－１（４ｇ、１６．１９ｍｍｏｌ）、２－ヒドロキシピリジン（１．６ｇ、１７．００ｍｍｏｌ）を加えた。７０℃で４時間加熱して攪拌し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）を加えて希釈し、分液した後、有機相を収集し、水相を酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。有機相合わせ、飽和食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物７－２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．７９ （ｄｄ， Ｊ＝７．８９， １．７５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄｄ， Ｊ＝１０．５２， １．３２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８ （ｔ， Ｊ＝７．６７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３１－７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ６．６０ （ｄ， Ｊ＝９．２１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１９ （ｔｄ， Ｊ＝６．８０， １．３２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １６２ ［Ｍ＋１］＋。
２）化合物７－３の合成
予め乾燥させた反応フラスコに７－２（２．３ｇ、８．８２ｍｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）を加えた。０℃の氷浴で、反応フラスコに水素化ホウ素リチウム（２Ｍ、２２．０６ｍＬ）を加え、２７℃に自然に昇温させて１２時間攪拌した。反応系を０℃に冷却させ、酢酸エチル（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて希釈し、分液した後、有機相を収集し、水相を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機相合わせ、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物７－３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．３５－７．４６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２７－７．３５ （ｍ， １Ｈ）， ７．０４－７．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ６．５６ （ｄ， Ｊ＝９．２１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１６ （ｔｄ， Ｊ＝６．８０， １．３２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．６０ － ４．７４ （ｍ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２３４ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物７－４の合成
２７℃で、予め乾燥させた反応フラスコに、化合物７－３（１．８ｇ、７．７２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２０ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．６ｇ、１５．４３ｍｍｏｌ、２．２ｍＬ）を加え、０℃でメチルスルホニルクロリド（１．１ｇ、９．２６ｍｍｏｌ、７１６．８μＬ）を加え、２７℃に自然に昇温させて１２時間攪拌した。反応溶液に水（１００ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、分液・抽出して水相を除去し、有機相を得、減圧濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物７－４を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２５２ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物７－５の合成
２５℃で、予め乾燥させたサムボトルに化合物７－４（０．２ｇ、７９４．７μｍｏｌ）、１－５（１５７ｍｇ、８０２．６μｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（２３４ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）を加えた。油浴で６５℃に加熱して１２時間攪拌した。反応系を０℃に冷却させ、酢酸エチル（５０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）を加えて希釈し、分液した後有機相を収集し、水相を酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機相合わせ、飽和食塩水（１０ｍＬ）で２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物７－５を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４１２ ［Ｍ＋１］＋。
５）化合物７－６の合成
２７℃で、予め乾燥させた反応フラスコに化合物７－５（０．２ｇ、５２９．８μｍｏｌ）を加え、無水テトラヒドロフラン（３ｍＬ）に溶解させ、更に反応系に水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ、１．１ｍＬ）及びエタノール（４ｍＬ）を加え、４０℃に昇温させて６時間攪拌した。反応を２７℃自然に冷却させ、塩酸（１Ｍ、１０ｍＬ）を加え、反応溶液のｐＨを１に調節した。ジクロロメタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相に更にジクロロメタン（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相合わせた。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物７－６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．４８ （ｔ， Ｊ＝７．８４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝７．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３０－７．３７ （ｍ， １Ｈ）， ６．９３－７．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．６１ （ｄ， Ｊ＝８．７８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２２－５．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．００－５．０７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９１－５．００ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６５ （ｔ， Ｊ＝７．６５ Ｈｚ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３８４ ［Ｍ＋１］＋。
６）化合物７の合成
２７℃で、予め乾燥させた一口フラスコに化合物１－８（２２ｍｇ、１３０．４μｍｏｌ）、化合物７－６（０．１ｇ、１３０．４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７５ｍｇ、５８６．９μｍｏｌ、１０２．２μＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４ｍｇ、１９４μｍｏｌ）を加え、０℃で６時間攪拌した。反応を２７℃に自然に昇温させ、水（１０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリルＢ％：３０％～５０％、１０．５分）により精製して化合物７を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ７．６０ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９－７．４６ （ｍ， ３Ｈ）， ６．９０－７．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７８－６．８９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．５７ （ｄ， Ｊ＝９．２１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１３－６．２２ （ｍ， １Ｈ）， ６．０６ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１３ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０４ （ｄｄ， Ｊ＝８．３３， ５．７０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．９３ （ｔ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５８－４．６８ （ｍ， ３Ｈ）， ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５３９ ［Ｍ＋１］＋。
実施例８
【0058】
【化18】
【0059】
【化19】
予め乾燥させた一口フラスコに化合物７－１（１ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）、５－フルオロ－２－ヒドロキシピリジン（５０３ｍｇ、４．４５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．１ｇ、８．５０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）を加え、６５℃で２０時間攪拌した。反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（１５ｍＬ×３）ですすぎ、濾液を収集し、水（３０ｍＬ×３）を加えて洗浄し、有機相を分離し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物８－２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ｐｐｍ ７．８４－７．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７３ （ｄｄ， Ｊ＝１．４， １０．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ＝３．２， ７．０， １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３５ （ｔ， Ｊ＝７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５８ （ｄｄ， Ｊ＝５．０， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２５ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ３Ｈ）。
２）化合物８－３の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－２（５２３ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加え、０℃で水素化ホウ素リチウム（２８５．６ｍｇ、１３．１１ｍｍｏｌ）を加え、２５℃に自然に冷却させて４８時間攪拌した。反応系に飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応系をクエンチした。酢酸エチル（１５ｍＬ×３）を加えて抽出し、分液し、有機相合わせ、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮して化合物８－３を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２５２ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物８－４の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－３（５４３ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）、無水ジクロロメタン（６ｍＬ）を加え、０℃に冷却させて塩化チオニル（１．２ｇ、９．９４ｍｍｏｌ、７２１．２４μＬ）を加え、２５℃で２０時間攪拌した。反応系に飽和食塩水（１０ｍＬ）、酢酸エチル（１５ｍＬ×３）を加えて抽出し、有機相を収集して合わせ、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮して化合物８－４を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２７０ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物８－６の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－４（５０３ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、化合物１－５（３６６ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５１６ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を加え、６５℃で５時間攪拌した。反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（１０ｍＬ×３）ですすいだ。濾液を収集し、飽和食塩水（１０ｍＬ×３）を加えて洗浄し、有機相を乾燥するまで減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物８－６を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４３０［Ｍ＋１］＋。
５）化合物８－７の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－６（４５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、無水エタノール（５ｍＬ）、無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）、水酸化ナトリウム（１２６ｍｇ、３．１４ｍｍｏｌ）を加え、６５℃で１７時間攪拌した。反応系に０．５Ｍのクエン酸を加えて反応系のｐＨを３に調節し、減圧濃縮して反応系の有机溶媒をスピン乾燥させ、濾過し、ケーキを水（３ｍＬ×３）ですすぎ、ケーキを収集し、真空乾燥させて化合物８－７を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ４０２［Ｍ＋１］＋。
６）化合物８の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－７（３２２ｍｇ、８０２．２７μｍｏｌ）、１－８（１８０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４６７ｍｇ、３．６１ｍｍｏｌ、６２８．８３μＬ）、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４５８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で５時間攪拌した。反応溶液を分取高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ ＯＢＤ Ｃ１８ １５０×４０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［Ａ－０．０５％のアンモニア水＋１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：２５％～５５％、８分）により精製して標的化合物８を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．２７ （ｔ， Ｊ＝５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９６ （ｔ， Ｊ＝４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０ （ｍ， １Ｈ）， ７．１９－７．０７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０６－６．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．４３ （ｄｄ， Ｊ＝５．６， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３２ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄｄ， Ｊ＝５．６， ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６７ （ｔ， Ｊ＝６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５９－４．４７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）； ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５５７ ［Ｍ＋１］＋。
実施例９
【0060】
【化20】
【0061】
【化21】
予め乾燥させた反応フラスコに化合物９－１（１ｇ、９．７９ｍｍｏｌ、９７０．８μＬ）、（ジアセトキシヨード）ベンゼン（６．３ｇ、１９．５８ｍｍｏｌ）、水（１０ｍＬ）、アセトニトリル（１０ｍＬ）を加えた。氷浴で０℃に冷却させ、２，２，６，６－テトラメチルピペリジンオキシド（３０７ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を加えた。２０℃に自然に昇温させ１２時間攪拌した。反応フラスコを氷浴に置き、水酸化ナトリウム固体（２．４ｇ）を加えてクエンチし、３分間攪拌し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ）を加え、２回分液・抽出し、水相を収集した。水相を氷浴に置き、０℃に冷却させ、塩酸（１２Ｍ）を加えて溶液のｐＨを３に調節した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。有機相合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物９－２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ４．９８ （ｄ， Ｊ＝５．７０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４２ （ｄ， Ｊ＝５．７０ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．６１ （ｓ， ４Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １１５ ［Ｍ－１］－。
２）化合物９－３の合成
２０℃で、予め乾燥させた反応フラスコに化合物９－２（２０ｍｇ、１７２．２μｍｏｌ）、無水テトラヒドロフラン（１ｍＬ）及びＮ，Ｎ－カルボニルジピラゾール（３３ｍｇ、２０６．６μｍｏｌ）を加えた。２時間攪拌した後、塩化マグネシウム（２０ｍｇ、２１１．８μｍｏｌ、８．６μＬ）及びマロン酸エチルカリウム（３５ｍｇ、２０６．６μｍｏｌ）を加えて４時間攪拌した。酢酸エチル（５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を加えて５分間攪拌し、分液・抽出し、有機相を収集した。水相に酢酸エチル（１０ｍＬ×３）を加え、有機相合わせ、有機相に飽和食塩水（３０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を乾燥するまで減圧濃縮して化合物９－３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ４．３４－４．６１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３４－３．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．３２－１．５３ （ｍ， ８Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： １８５ ［Ｍ－１］－。
３）化合物９－４の合成
予め乾燥させた反応フラスコに化合物９－３（０．１ｇ、５３７．１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）、１，１－ジメトキシトリメチルアミン（１２８ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、１４２．７μＬ）を加え、反応を１２０℃に昇温させて２時間反応させた。２０℃に冷却させ、減圧濃縮して化合物９－４を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２４２ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物９－５の合成
化合物９－４（１２０ｍｇ、４９７．３μｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（３０ｍｇ、５９６．８μｍｏｌ、２９．６μＬ）のｎ－ブタノール（１ｍＬ）溶液に醋酸（３０ｍｇ、５０７．３μｍｏｌ、２９．１μＬ）を加えたの混合物を加え、１１０℃で２時間攪拌した。酢酸エチル（５ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加え、分間攪拌した。分液・抽出し、水相を除去し、有機相を減圧濃縮して化合物９－５を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．０４ （ｓ， １Ｈ）， ５．１１ （ｄ， Ｊ＝６．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．６９ （ｄ， Ｊ＝６．１４ Ｈｚ， ２Ｈ） ， ４．２２－４．３８ （ｍ， ３Ｈ）， １．７６ （ｓ， ４Ｈ）， １．３５－１．４３ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２１１ ［Ｍ＋１］＋。
５）化合物９－６の合成
２５℃で、予め乾燥させたサムボトルに化合物１－４（１１８ｍｇ、４７０．９μｍｏｌ）、化合物９－５（０．１ｇ、４７５．６μｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（１３８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を加えた。油浴で６５℃に加熱して１２時間攪拌した。２０℃に自然に冷却させ、反応フラスコにジクロロメタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、有機相を収集し、有機相合わせた。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物９－６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．０２ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ （ｓ， １Ｈ）， ７．１０－７．４１ （ｍ， ６Ｈ）， ６．４９－６．６５ （ｍ， １Ｈ）， ５．１７－５．２８ （ｍ， １Ｈ）， ５．０１－５．１３ （ｍ， ３Ｈ）， ４．６４ （ｄ， Ｊ＝６．０２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１３－４．３２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３ （ｓ， ３Ｈ）， １．１６－１．３８ （ｍ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：４２６ ［Ｍ＋１］＋。
６）化合物９－７の合成
２０℃で、予め乾燥させた反応フラスコに化合物９－６（０．３ｇ、７０５．１μｍｏｌ）を加え、無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させ、更に反応系に固体水酸化ナトリウム（２８２ｍｇ、７．０５ｍｍｏｌ）及びエタノール（２ｍＬ）、水（２ｍＬ）を加えた。６０℃に昇温させて１２時間攪拌した。反応を２７℃で自然に冷却させ、反応フラスコに塩酸（１Ｍ、１０ｍＬ）を加えて溶液のｐＨを６に調節し、反応フラスコにジクロロメタン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出し、有機相を収集した。水相にジクロロメタン（１０ｍＬ）を加え、分液・抽出して有機相を収集し、有機相合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して化合物９－７を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３９８ ［Ｍ＋１］＋。
７）化合物９の合成
２０℃で、予め乾燥させた一口フラスコに化合物９－７（５０ｍｇ、１２５．８μｍｏｌ）、２－１（２０ｍｇ、１２５．８μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７３ｍｇ、５６６．１μｍｏｌ、９８．６μＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７１ｍｇ、１８８．７μｍｏｌ）を加え、０℃で６時間攪拌した。２０℃に自然に昇温させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：１５％～５０％、１０分）により精製して化合物９を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３６－８．４３ （ｍ， １Ｈ）， ８．２４ （ｓ， １Ｈ）， ８．２０ （ｄ， Ｊ＝５．２９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０２－８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２－７．６５ （ｍ， １Ｈ）， ７．２９－７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２３－７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１４－７．１９ （ｍ， １Ｈ）， ６．４４ （ｄｄ， Ｊ＝１０．１４， ５．２９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｄ， Ｊ＝６．１７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４５ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．７５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０ （ｄ， Ｊ＝５．９５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ３Ｈ）， １．５４ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：５３６ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１０
【0062】
【化22】
【0063】
【化23】
２０℃で、予め乾燥させた一口フラスコに化合物９－７（４９ｍｇ、１２５．５μｍｏｌ）、１－８（２６ｍｇ、１５０．６μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７２ｍｇ、５６４．７μｍｏｌ、９８．３μＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７１ｍｇ、１８８．２μｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。反応溶液を濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：２０％～５０％、８分）により精製して化合物１０を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．８２ （ｄ， Ｊ＝５．８７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５２ （ｄ， Ｊ＝６．３６ Ｈｚ， ３Ｈ）， ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．８７－８．１２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．４７－７．７３ （ｍ， １Ｈ）， ５．９３ （ｓ， １Ｈ）， ５．６３－５．８３ （ｍ， ３Ｈ）， ５．１５－５．３４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５７ （ｄ， Ｊ＝６．２４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８８ （ｓ， Ｊ＝６．２４ Ｈｚ， ６Ｈ）， １．９７ （ｓ， １Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：５５３ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１１
【0064】
【化24】
【0065】
【化25】
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１１－１ａ（２４．０ｇ、１１９．２７ｍｍｏｌ）、１，１－カルボニルジイミダゾール（２３．２ｇ、１４３．１３ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）を加え、窒素ガスで３回置換し、２５℃で２時間攪拌し、塩化マグネシウム（１３．２ｇ、１４６．７１ｍｍｏｌ）、マロン酸エチルカリウム（２４．３ｇ、１４３．１３ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で４時間攪拌した。反応系をスピン乾燥させ、酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、水（２００ｍＬ×４）を加えて分離し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１１－１ｂを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２１６ ［Ｍ－５５］＋。
２）化合物１１－１ｃの合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１１－１ｂ（２８．０ｇ、１０３．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２４．６ｇ、２０６．４１ｍｍｏｌ、２７．４２ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２８０ｍＬ）を加え、１２０℃で１８時間攪拌し、反応系を６０℃に冷却させ、乾燥するまで減圧濃縮して粗生成物化合物１１－１ｃを得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３２７ ［Ｍ＋１］＋。
３）化合物１１－１の合成
反応フラスコに化合物１１－１ｃ（３２．０ｇ、９８．０４ｍｍｏｌ）、ｎ－ブタノール（３２０ｍＬ）、氷醋酸（６．０ｇ、１００．００ｍｍｏｌ、５．７２ｍＬ）、ヒドラジン水化物（５．７ｇ、１０７．８５ｍｍｏｌ、５．５２ｍＬ）を加え、窒素ガスで３回置換し、１１０℃で７時間反応させた。減圧濃縮して反応系をスピン乾燥させた。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応系のｐＨを８に調節し、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）を加えて抽出し、有機相を収集して合わせ、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで減圧濃縮し、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１１－１を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ ８．０６ （ｓ， １Ｈ）， ４．３８－４．１２ （ｍ， ７Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）， １．３５ （ｔ， Ｊ＝７．０ Ｈｚ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ２４０ ［Ｍ－５５］＋。
４）化合物１１－２の合成
サムボトルに化合物４－１（３３０ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）、化合物１１－１（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）、炭酸カリウム（４１５ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガスで３回置換し、６５℃で４時間反応させた。反応溶液に酢酸エチル（２０ｍＬ）及び飽和食塩水（１０ｍＬ）溶液を加えて５分間攪拌し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１１－２を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｄｄ， Ｊ＝６．７８， １．８８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｄｄｄ， Ｊ＝８．９７， ６．７１， ２．０１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５ （ｓ， ４Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ＝９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１９－６．２５ （ｍ， １Ｈ）， ５．３０ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８４－４．１５ （ｍ， ７Ｈ）， １．３６ （ｓ， ９Ｈ）， １．２４ （ｔ， Ｊ＝７．０９ Ｈｚ， ３Ｈ）。
５）化合物１１－３の合成
サムボトルに化合物１１－２（４５０ｍｇ、９１３．５８μｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（１０９ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、エタノール（６ｍＬ）、水（２ｍＬ）を加え、窒素ガスで３回置換し、２５℃で１６時間反応させ、更に水酸化ナトリウム（３６ｍｇ、９１３．５８μｍｏｌ）を加え、２５℃で４時間反応を続けた。反応溶液にクエン酸水溶液（０．５Ｍ）を滴下してｐＨを４～５に調節し、反応溶液に酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１１－３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ｐｐｍ ８．１１ （ｓ， １Ｈ）， ７．６９ （ｄ， Ｊ＝４．５２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８－７．５８ （ｍ， １Ｈ）， ７．２４－７．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ６．５７ （ｄ， Ｊ＝９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３９ （ｔ， Ｊ＝６．２７ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３１ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０６－４．２９ （ｍ， ５Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）。
６）化合物１１－４の合成
三口フラスコに化合物１１－３（２００ｍｇ、４３０．５６μｍｏｌ）、化合物１－８（７４ｍｇ、４３０．５６μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）、ジイソプロピルエチルアミン（２５０ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却させ、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２４５ｍｇ、６４５．８４μｍｏｌ）を加え、２５℃に自然に昇温させて１時間反応させた。反応溶液に２０ｍＬの酢酸エチル及び１０ｍＬの飽和食塩水溶液を加えて５分間攪拌し、分液し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をシリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィーにより精製して化合物１１－４を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６２０ ［Ｍ＋１］＋。
７）化合物１１塩酸塩の合成
反応フラスコに化合物１１－４（５０ｍｇ、８０．６９μｍｏｌ）、塩酸／酢酸エチル（６Ｍ、１２．４９ｍＬ）を加え、窒素ガスで３回置換し、２５℃で１時間反応させた。反応溶液を減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－０．０４％の塩酸水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：１０％～４０％、１０分）により精製して化合物１１の塩酸塩を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．９８ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．５３－８．７２ （ｍ， １Ｈ）， ８．４２ （ｔ， Ｊ＝５．０８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄｄ， Ｊ＝６．７８， １．８８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄｄ， Ｊ＝９．００， ６．６８， ２．０１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０－７．３３ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１２ （ｔｄ， Ｊ＝９．３２， ５．２１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９６－７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ＝９．１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２３ （ｔｄ， Ｊ＝６．６５， １．１３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２９ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２８－４．４４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．０４－４．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５２０ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１２
【0066】
【化26】
【0067】
【化27】
反応フラスコに化合物１１（１５ｍｇ、２８．８７μｍｏｌ）、メタノール（１ｍＬ）、パラホルムアルデヒド（２６ｍｇ、２８８．７２μｍｏｌ）を加え、０．５時間攪拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（９ｍｇ、１４４．３６μｍｏｌ）を加え、２５℃で０．５時間攪拌した。反応溶液に希塩酸水溶液（１Ｍ、１ｍＬ）を加えて１分間攪拌した後濾過し、濾液を収集した。減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－０．０４％の塩酸水溶液；Ｂ－アセトニトリルＢ％：１５％～４５％、１０分）により精製して化合物１２の塩酸塩を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ） δ ｐｐｍ ７．９８－８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ７．５６ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝７．１５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｂｒ ｓ， ４Ｈ）， ６．９７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．９０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７８－６．８８ （ｍ， １Ｈ）， ６．５４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝８．４１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．４０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２２ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．９８－５．１２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３７－４．５４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９８－４．３５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７５ （ｂｒ ｓ， ３Ｈ）， ２．９０ （ｓ， １Ｈ）， ２．７７ （ｓ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５３４ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１３
【0068】
【化28】
【0069】
【化29】
反応フラスコに化合物１１（１０ｍｇ、１９．２５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）、トリエチルアミン（２ｍｇ、１９．２５μｍｏｌ）を加え、０℃に冷却させ、トリエチルアミン（２ｍｇ、１９．２５μｍｏｌ）を加え、２５℃に自然に昇温させて２時間反応させた。反応溶液を減圧濃縮した後粗生成物を得、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－０．０４％の塩酸水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製して化合物１３を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．２９ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝５．０２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄｄ， Ｊ＝６．７１， １．６９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄｄ， Ｊ＝８．９４， ６．７４， １．８８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４ （ｑ， Ｊ＝８．２４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ７．０７－７．１６ （ｍ， １Ｈ）， ６．９６－７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ＝９．０３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２２ （ｔ， Ｊ＝６．６５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３２－４．４４ （ｍ， ３Ｈ）， ４．０３－４．１８ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．７６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）， １．７３ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５６２ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１４
【0070】
【化30】
【0071】
【化31】
反応フラスコに化合物１１（７０ｍｇ、１３４．７３μｍｏｌ）、ジクロロメタン（１ｍＬ）、トリエチルアミン（４１ｍｇ、４０４．２０μｍｏｌ）を加え、０℃に冷却させ、メチルスルホニルクロリド（３８ｍｇ、３３６．８４μｍｏｌ）を加え、０℃で３時間攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（５ｍＬ×３）で抽出し、分液し、有機相合わせ、有機相を飽和食塩水（２ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５×３０ｍｍ×３μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－メタノール；Ｂ％：４５％～７５％、１０．５分）により精製して化合物１４を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３３ （ｔ， Ｊ＝５．０８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６ （ｄｄ， Ｊ＝６．７１， １．９５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄｄ， Ｊ＝９．００， ６．６８， ２．０１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０－７．３０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ＝９．３２， ５．３３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９６－７．０４ （ｍ， １Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ＝９．１６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２２ （ｔｄ， Ｊ＝６．６５， １．２５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２８ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．３８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝４．８９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０９－４．１５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９５－４．０１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８１ （ｓ， ３Ｈ）， ２．９２ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５９８ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１５
【0072】
【化32】
【0073】
【化33】
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１１－１（１．３ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）、化合物１－４（１．７ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．５ｇ、１１．００ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）を加え、６５℃で３時間攪拌した。反応系を濾過し、ケーキを酢酸エチル（１０ｍＬ×３）ですすぎ、濾液を収集し、飽和食塩水（１０ｍＬ×２）を加えて洗浄し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１５－１を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５１１ ［Ｍ＋１］＋。
２）化合物１５－２の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１５－１（１．０ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（２３５ｍｇ、５．８８ｍｍｏｌ）、エタノール（５ｍＬ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）を加え、７５℃で１６時間攪拌した。反応系に飽和クエン酸水溶液を加えてｐＨを３に調節し、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を収集して合わせ、飽和食塩水（２０ｍＬ）を加えて洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して化合物１５－２を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ３８３ ［Ｍ－９９］＋。
３）化合物１５－３の合成
予め乾燥させた三口フラスコに化合物１５－２（７９７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、化合物２－１（２５８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．９ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９６１ｍｇ、７．４３ｍｍｏｌ、１．２９ｍＬ）、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（９４２ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間攪拌した。反応系に飽和食塩水（２０ｍＬ）、酢酸エチル（１５ｍＬ×３）を加えて抽出し、有機相を収集し無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して化合物１５－３を得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６２１ ［Ｍ＋１］＋。
４）化合物１５－４の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１５－３（５０３ｍｇ、８１０．４５μｍｏｌ）、酢酸エチル（１ｍＬ）、塩酸／酢酸エチル（４Ｍ、５ｍＬ）を加え、２３℃で１時間攪拌した。反応系の溶媒を減圧濃縮して化合物１５－４を得た。
５）化合物１５の合成
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１５－４（１６９ｍｇ、３０３．４２μｍｏｌ）、トリフルオロエチルトリフルオロメタンスルホナート（１７６ｍｇ、７５８．５４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３７ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、１８４．９７μＬ）、テトラヒドロフラン（０．８ｍＬ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．８ｍＬ）を加え、２７℃で４時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮して粗生成物を得、粗生成物を薄層クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール＝２０／１）により精製して化合物１５を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ８．２４－８．１７ （ｍ， ２Ｈ）， ８．０４ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６３－７．５４ （ｍ， １Ｈ）， ７．３５－７．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１７ （ｔ， Ｊ＝５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４５ （ｄｄ， Ｊ＝５．６， １０．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２８ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４７ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝３．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０７－３．９５ （ｍ， １Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６８ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４１ （ｂｒ ｔ， Ｊ＝７．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．１６ （ｑ， Ｊ＝９．８ Ｈｚ， ２Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ６０３ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１６
【0074】
【化34】
【0075】
【化35】
０℃の氷水浴で、窒素ガズの保護下で、化合物４－３（２．０ｇ、５．４７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．４１ｇ、１０．９５ｍｍｏｌ）及び２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（３．１２ｇ、８．２１ｍｍｏｌ）を加え、３０分間攪拌した後化合物１－８（１ｇ、５．７８ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を２５℃の室温に自然に昇温させて１６時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（１００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）を加えて１０分間攪拌し、有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した後粗生成物を得、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：メタノール／ジクロロメタン、メタノール％：０～１０％、流速６０ｍＬ／分）により精製して化合物１６を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ｐｐｍ ８．０２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６９ （ｄｄ， Ｊ＝６．７， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５２ （ｄｄｄ， Ｊ＝９．０， ６．８， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２９ （ｑ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ７．０３ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８８ （ｂｒ ｄ， Ｊ＝２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５７ （ｄ， Ｊ＝９．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３５－６．４１ （ｍ， １Ｈ）， ５．２９ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．９８ （ｄｄ， Ｊ＝８．５， ５．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．９０ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．６５ （ｓ， １Ｈ）， ４．５１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８４ ｐｐｍ （ｓ， ３Ｈ）；ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５２１ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１７
【0076】
【化36】
【0077】
【化37】
２５℃の室温で、窒素ガズの保護下で、化合物４－３（１００ｍｇ、２７３．７μｍｏｌ）及び化合物２－１（６３．２ｍｇ、３２８．４μｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１０６．２ｍｇ、８２１．６μｍｏｌ）及び２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１２４．９ｍｇ、３２８．４μｍｏｌ）を加え、得られた混合物を１６時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（５ｍＬ）及び水（３ｍＬ）を加えて５分間攪拌し、水相を除去し、有機相を減圧濃縮し、粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０×２５ｍｍ×５μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリル；Ｂ％：２５％～５５％、１０．５分）により精製して化合物１７を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ｐｐｍ ８．１７ （ｄ， Ｊ＝５．６， １Ｈ）， ８．１０ （ｓ， １Ｈ）， ７．７０ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２ （ｍ， １Ｈ）， ７．２８－７．３４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１１－７．１４ （ｍ， １Ｈ）， ６．５６－６．５８ （ｍ， １Ｈ）， ６．３８－６．４０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３２ （ｓ， １Ｈ）， ５．１９ （ｓ， １Ｈ）， ４．９７－４．９９ （ｍ， ４Ｈ）， ４．６２－４．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３Ｈ）； ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ： ５０４ ［Ｍ＋１］＋。
実施例１８
【0078】
【化38】
【0079】
【化39】
予め乾燥させた一口フラスコに化合物８－７（２００ｍｇ、４９８．３０μｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３ｍＬ）を加え、次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２２５．４１ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、３０３．７８μＬ）、Ｎ，Ｎ’カルボニルジイミダゾール（１０５．０４ｍｇ、６４７．７９ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１時間攪拌した後、化合物２－１（１１５．１８ｍｇ、５９７．９６μｍｏｌ）を加え、５０℃で１６時間攪拌した後、２－１（２３．３４ｍｇ、１２１．０９μｍｏｌ）を加え、５０℃で３時間攪拌した後、化合物２－１（２２ｍｇ、１１４．２２μｍｏｌ）を加え、５０℃で１６時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）を加えて溶解させ、濾過し、濾液を減圧濃縮した後分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８ １００×３０ｍｍ×１０μｍ；移動相：［Ａ－１０ｍＭの炭酸水素アンモニウム水溶液；Ｂ－アセトニトリルＢ％：１５％～４５％、８分）により精製して標的化合物１８を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．３９ （ｔ， Ｊ＝５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２９ （ｓ， １Ｈ）， ８．２１ （ｄ， Ｊ＝５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９８－７．９３ （ｍ， １Ｈ）， ７．６０ （ｄｄｄ， Ｊ＝３．５， ７．０， １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９－７．１２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．０９－７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ６．４４ （ｄｄ， Ｊ＝５．７， １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１０－６．０８ （ｍ， １Ｈ）， ５．３４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８１－４．７６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６７ （ｄｄ， Ｊ＝５．７， ７．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５６－４．４３ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９１ （ｓ， ３Ｈ）。
２）化合物１８塩酸塩の製造
予め乾燥させた一口フラスコに化合物１８（４２．８ｍｇ、７９．３３μｍｏｌ）、アセトニトリル（２０ｍＬ）を加え、超音波処理して透明になるまで溶解した後希塩酸（１．１Ｍ，７２．１２μＬ）を加え、１５℃で３時間攪拌し、反応溶液を吸引濾過し、アセトニトリル（５ｍＬ）でケーキをすすぎ、濾過して乾燥させた後２時間減圧して吸引濾過を続け、残留アセトニトリルを除去し、ケーキを収集し、乾燥させた後化合物１８の塩酸塩を得た。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ ８．４６ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４－８．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．９７ （ｔ， Ｊ＝３．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２５ （ｓ， １Ｈ）， ７．１９－７．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０９－７．０４ （ｍ， １Ｈ）， ６．４４ （ｄｄ， Ｊ＝５．３， １０．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３５ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．７８ （ｄｄ， Ｊ＝５．７， ８．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．７１－４．６４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５３－４．４４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３Ｈ） ； ＬＣＭＳ （ＥＳＩ） ｍ／ｚ：５４０ ［Ｍ＋１］＋。
実験例１：血漿カリクレイン（ＰＫａｌ）に対する試験化合物の阻害効果
1． ＰＫａｌ反応緩衝液：２５ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（トロメタモール－ＨＣｌ）、ｐＨ８．０、１００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．５、０．０１％のＢｒｉｊ３５（ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、及び１％のＤＭＳＯ（最終濃度）。
2． 酵素：ＰＫａｌ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｔ＃２４９７－ＳＥ）、マウス骨髄腫細胞株で発現した組換えヒト血漿カリクレイン、ＮＳ０－由来のＧｌｙ２０－Ａｌａ６３８、Ｃ末端に６０－Ｈｉｓ付属物を有し、ＭＷ＝７０ｋＤａ。酵素の活性化：（１）ｒｈＰＫａｌを２００μｇ／ｍＬの活性化緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５（ＴＣＮ）に希釈し、（２）サーモリシン（Ｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｎ）を２０μｇ／ｍＬの活性化緩衝液に希釈し、（３）ｒｈＰＫａｌ（２００μｇ／ｍＬ）及びサーモリシン（２０μｇ／ｍＬ）を同じ体積で混合し、（４）３７℃で３０分間培養し、（５）更に、５０μＭのＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）で反応を停止させた。
3． 基質（Ｅｎｚｏ Ｃａｔ＃Ｐ－１３９）：１０μＭのＺ－ＦＲ－ＡＭＣ（ＡＭＣ：７－アミノ－４－メチルクマリン）。
4． 検出：ＥｎＶｉｓｉｏｎ（ＰＥ）、Ｅｘ／Ｅｍ ３５５／４６０ｎｍ。
5． 反応ステップ：（１）新たに製造した活性化緩衝液で特定の酵素及び基質を準備し、（２）酵素溶液を反応ウェルに注ぎ、（３）試験化合物のＤＭＳＯ溶液を音響技術（Ｅｃｈｏ５５０、ＬａｂＣｙｔｅ Ｉｎｃ．Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して、反応混合物に注入し、ナノリットル範囲内に制御し、（４）１０分間培養した後、基質溶液を反応ウェルに注いでて反応を開始させ、（５）酵素の活性は、蛍光標識ペプチド基質の蛍光シグナルの増加によって示されることができ、５分ごとにモニタリングし、室温で１２０分間続け、（６）データ解析：直線の勾配＊（蛍光シグナル／時間）を測定し、勾配はＥｘｃｅｌで計算することができ、Ｐｒｉｓｍソフトで曲線を適合させた。血漿カリクレイン（Ｐｋａｌ）に対する化合物の阻害効果の試験結果は下記の表１に示された通りである。
【0080】
【表1】
実験例２：本発明の化合物の薬物動態試験
1. 要約
オスＳＤラットを試験動物として使用し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用して、ラットに試験化合物を静脈内及び胃内投与した後、異なる時点での血漿中の薬物濃度を測定した。ラットにおける化合物の薬物動態行動を研究し、その薬物動態特性を評価した。
2. 実験スキーム
2.1 試験医薬：試験化合物。
2.2 実験動物：２８匹の健康な成体のオスＳＤラットを群当たり２匹として、１４つの群に分けた。動物は、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。
2.3 医薬の製造
適量の試料を秤量し、適量のＤＭＳＯ、ポリオキシエチレンヒマシ油、注射用滅菌水を１０：１０：８０の体積比で順次加え、攪拌し、超音波処理して０．５ｍｇ／ｍＬの透明な状態にして静脈内投与に使用した。
【0081】
適量の試料を秤量し、適量のＤＭＳＯ、ポリオキシエチレンヒマシ油、注射用滅菌水を１０：１０：８０の体積比で順次加え、攪拌し、超音波処理して０．４ｍｇ／ｍＬの透明な状態にして胃内投与に使用した。
【0082】
適量の試料を秤量し、適量のＤＭＳＯ、ポリオキシエチレンヒマシ油、注射用滅菌水を１０：１０：８０の体積比で順次加え、攪拌し、超音波処理して３ｍｇ／ｍＬの透明な状態にして静脈内投与に使用した。
2.4 投与：２８匹のオスＳＤラットを１４群に分け、一晩絶食させた後、静脈内投与群には、２ｍＬ／ｋｇの投与体積を、１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与し、胃内投与群１には、５ｍＬ／ｋｇの投与体積を、２ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。胃内投与群２には、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積を、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。
3. 実験操作及び結果
オスＳＤラットに化合物を静脈内投与した後、それぞれ第０．０８３３、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間に４０μＬの血液を採取し、２μＬのＥＤＴＡ－Ｋ２を含むチューブに入れた。胃内投与群は化合物を投与後、それぞれ第０．２５、０．５、１、２、４、６、１０及び２４時間目に４０μＬの血液を採取し、２μＬのＥＤＴＡ－Ｋ２を含むチューブに入れた。チューブを４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を分離し、－６０℃で保存した。動物は、投与２時間後に食べさせた。
2.4 投与：２８匹のオスＳＤラットを１４群に分け、一晩絶食させた後、静脈内投与群には、２ｍＬ／ｋｇの投与体積を、１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与し、胃内投与群１には、５ｍＬ／ｋｇの投与体積を、２ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。胃内投与群２には、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積を、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。
3. 実験操作及び結果
オスＳＤラットに化合物を静脈内投与した後、それぞれ第０．０８３３、０．２５、０．５、１、２、４、８及び２４時間に４０μＬの血液を採取し、２μＬのＥＤＴＡ－Ｋ２を含むチューブに入れた。胃内投与群は化合物を投与後、それぞれ第０．２５、０．５、１、２、４、６、１０及び２４時間目に４０μＬの血液を採取し、２μＬのＥＤＴＡ－Ｋ２を含むチューブに入れた。チューブを４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を分離し、－６０℃で保存した。動物は、投与２時間後に食べさせた。
【0083】
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、静脈内及び胃内投与後のラットの血漿における試験化合物の含有量を測定した。方法の線形範囲は２．００～６０００ｎｍｏｌ／Ｌであり、血漿試料は、アセトニトリルで処理してタンパク質を沈殿させた後分析した。化合物の薬物動態試験結果は、下記の表２に示された通りである。
【0084】
【表2】
実験例３：ラット眼における本発明の化合物の薬物動態試験
1. 要約
オスラットを試験動物として使用し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用して、試験化合物を胃内投与した後、異なる時点での眼組織中の薬物濃度を測定した。胃内投与後のラットの眼における化合物の薬物動態行動を研究し、その薬物動態特性を評価した。
2. 実験プロトコル
2.1 試験医薬：試験化合物
2.2 実験動物：６匹の健康な成体のオスラットを群当たり４眼として、３つの群に分けた。動物は、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。
2.3 医薬の製造：適量の試料を秤量し、適量のＤＭＳＯ及びカプリルカプロイルマクロゴールグリセリド（ｃａｐｒｙｌｃａｐｒｏｙｌ ｍａｃｒｏｇｏｌ ｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ、ｌａｂｒａｓｏｌ）を１０：９０の体積比で順次加え、攪拌し、超音波処理して１５ｍｇ／ｍＬの透明な状態にして胃内投与に使用した。
2.4 投与：６匹のオスＳＤラットを３つの群に分け、一晩絶食させた後、胃内投与群には、５ｍＬ／ｋｇの投与体積を、７５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。
3. 実験操作及び結果
オスラットに化合物１を胃内投与した後、それぞれ１、４及び８時間後に１つの群（２匹）のラットを安楽死させ、各ラットの２つの眼から眼組織を合わせて、網膜、脈絡膜／強膜における化合物の濃度を測定した。
【0085】
ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法を使用して、胃内投与後のラットの眼組織における試験化合物の含有量を測定した。本方法の線形範囲は２．００～６０００ｎｍｏｌ／Ｌであり、眼組織濃度データを表３に示し、ここで、各眼組織濃度データは２匹のラットの左眼・右眼を組み合わせて得られたものである。本発明の化合物の眼における薬物動態試験結果は、下記の表３に示された通りである。
【0086】
【表3】
実験例４ ＣＡ－１（１００ｎｇ）によって誘発されるラットＤＭＥモデルにおける本発明の化合物の体内薬力学研究
1. 実験デザイン
２５匹のオスＳＤラットから２０匹を選択し、体重に応じて各群４匹として、５つの群に分け、各群に１匹の予備動物を置き、モデリング前、モデリング後４８時間及び７２時間後、それぞれすべての動物に対して網膜光干渉断層撮影を実行した。適切なスキャン位置を選択して測定し、網膜の厚さを測定してマークした。各群の網膜厚の変化から、試料の網膜浮腫改善する試験化合物の効果を比較し、活性化合物をスクリーニングした。上記のモデリング及び検査の実験操作は、まず右目、次に左目の順で実行しなければならない。
【0087】
【表4】
２．１実験動物
種：ラット
系統：ＳＤラット、ＳＰＦ級
週齢及び体重：７～８週齢、体重２５０～３００ｇ
性別：オス
サプライヤー：Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．
動物合格証番号：
２．２成形剤
炭酸脱水酵素－１（ＣＡ－１、Ｓｉｇｍａ）
3. 実験方法及びステップ
３．１投与及びモデリング
モデリングの当日、すべての動物に溶媒又は試料を経口投与し、約４時間後、動物の両眼の硝子体に生理食塩水（５μＬ／眼）又はＣＡ－Ｉ（１００ｎｇ／眼）を注射してモデリングし、第２眼の注射完了時間を０時間として記録し、モデリング後の４±０．５時間、２０±０．５時間、２８±０．５時間、４４±０．５時間、５２±０．５時間及び６８±０．５時間でそれぞれすべての動物に溶媒（１０％のＤＭＳＯ＋９０％のカプリルカプロイルマクロゴールグリセリド）又は試料を経口投与した。
３．２光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）検査
モデリングの前、モデリング４８時間及び７２時間後、まず動物に麻酔をかけ、次に光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）を実行し、麻酔前に適切な瞳孔拡張器を使用して、動物の瞳孔を十分に拡張させ、シュウタイ（５ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン溶液（３ｍｇ／ｋｇ）を筋肉注射の方法で麻酔を実行した。ＯＣＴ検査の要件は下記で示された通りである。
【0088】
１）データ取得時、視神経乳頭を赤外眼底像の中央に位置させる必要がある。
【0089】
２）漢字「米」の形状を採用し、交点は視神経乳頭の上にあり、網膜スキャンは最も広い長さで実行された。
【0090】
３）可能な限りソフトウェアのトラッキング機能を使用して、投与前後の網膜厚を比較し、トラッキング機能が使用できない場合は、眼の位置を可能な限り投与前と一致するように調節し、投与前後の網膜厚の比較を容易にするため、断層画像の鮮明さは可能な限り確保した。
4. 実験結果
モデリング前のＯＣＴ検査で各群の動物の網膜は正常を示し、モデリング後４８時間及び７２時間で生理食塩水のみを注射したラットで有意な網膜肥厚が観察され、経口投与群のラットの網膜肥厚は異なる程度で緩和され、化合物１の低投与量群（５０ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間で網膜肥厚を部分的に緩和し（緩和率は１９％）、７２時間で網膜肥厚を有意に緩和し（緩和率は７９％）、化合物１の高投与量群（７５ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間及び７２時間で、いずれも炭酸脱水酵素－１による網膜肥厚を完全に緩和した（緩和率は１００％）。化合物８（７５ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間で網膜肥厚を部分的に緩和し（緩和率は８４％）、７２時間で炭酸脱水酵素－１による網膜肥厚を完全に緩和し（緩和率は１１６％）、動物は上記試験化合物に対して良好な耐性を示した。
4. 実験結果
モデリング前のＯＣＴ検査で各群の動物の網膜は正常を示し、モデリング後４８時間及び７２時間で生理食塩水のみを注射したラットで有意な網膜肥厚が観察され、経口投与群のラットの網膜肥厚は異なる程度で緩和され、化合物１の低投与量群（５０ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間で網膜肥厚を部分的に緩和し（緩和率は１９％）、７２時間で網膜肥厚を有意に緩和し（緩和率は７９％）、化合物１の高投与量群（７５ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間及び７２時間で、いずれも炭酸脱水酵素－１による網膜肥厚を完全に緩和した（緩和率は１００％）。化合物８（７５ｍｇ／ｋｇ）は、４８時間で網膜肥厚を部分的に緩和し（緩和率は８４％）、７２時間で炭酸脱水酵素－１による網膜肥厚を完全に緩和し（緩和率は１１６％）、動物は上記試験化合物に対して良好な耐性を示した。
【国際調査報告】