特表 2023-508439 治療ＦＣ組成物の化学誘導会合および解離ならびにＴ細胞エンゲージャーとヒト血清アルブミンとの化学誘導二量体形成

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-02

(54)【発明の名称】治療ＦＣ組成物の化学誘導会合および解離ならびにＴ細胞エンゲージャーとヒト血清アルブミンとの化学誘導二量体形成

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20230222BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230222BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230222BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20230222BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230222BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20230222BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20230222BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230222BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20230222BHJP

   C07K 16/46 20060101ALN20230222BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20230222BHJP

   C07K 14/55 20060101ALN20230222BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230222BHJP

   C12P 21/02 20060101ALN20230222BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

A61P35/00

A61K47/68

A61K47/64

A61P43/00 121

A61K38/19

A61K38/22

A61K39/395 C

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61K38/20

A61K39/395 G

A61K39/395 E

A61K39/395 T

C07K16/46

C07K16/28

C07K14/55

C12P21/08

C12P21/02 C

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022539277

(86)(22)【出願日】2020-12-23

(85)【翻訳文提出日】2022-08-22

(86)【国際出願番号】 US2020066865

(87)【国際公開番号】W WO2021133921

(87)【国際公開日】2021-07-01

(31)【優先権主張番号】62/953,003

(32)【優先日】2019-12-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/952,984

(32)【優先日】2019-12-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522253058

【氏名又は名称】ソテリア・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＯＴＥＲＩＡ ＢＩＯＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】ヒル，ザッカリー ビー

(72)【発明者】

【氏名】マルティンコ，アレクサンダー ジェイ

(72)【発明者】

【氏名】ウェルズ，ジェイムズ エイ

(72)【発明者】

【氏名】ズブラット，メーガン

(72)【発明者】

【氏名】シモンズ，エリン エフ

【テーマコード（参考）】

4B064

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG05

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4C076AA94

4C076BB13

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE41M

4C076EE59

4C076EE59M

4C076FF31

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA44

4C084CA18

4C084DA01

4C084DA12

4C084DA14

4C084DB01

4C084MA05

4C084NA12

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC22

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4C085EE01

4C085EE05

4C085GG02

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA41

4H045DA04

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA74

4H045GA22

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、治療部分とＦｃドメインとの会合または解離を低分子によって誘導することによって、治療部分の血清半減期の正確な時間制御を可能にするシステムを提供する。本開示はまた、化学誘導二量体形成化合物（ＣＩＤ）を組み込むことによって、Ｔ細胞エンゲージャードメインの血清半減期の正確な制御を可能にするシステムも提供する。ＣＩＤの一方はＴ細胞エンゲージャーと融合し、ＣＩＤの他方はＨＳＡ結合ドメインと融合する。低分子の添加または除去は、Ｔ細胞エンゲージャーとＨＳＡとの会合または解離を誘導し、それによってＴ細胞エンゲージャーの血清半減期の正確な時間制御を可能にする。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）ａ）第１のＣＩＤドメインと、ＩｇＧの第１のＦｃドメインとを含み、前記第１のＣＩＤドメインが前記第１のＦｃドメインに共有的に連結された、第１の単量体、
および
ｂ）前記ＩｇＧの第２のＦｃドメインを含む第２の単量体
を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質；
（２）第２のＣＩＤドメインと、治療部分とを含み、前記第２のＣＩＤドメインが、ＮまたはＣ末端で前記治療部分に共有的に連結された、融合タンパク質部分
を含む組成物であって、
ＣＩＤ低分子の存在下で、前記第１のＣＩＤドメインと、前記第２のＣＩＤドメインとが、前記第１のＣＩＤドメイン－前記ＣＩＤ低分子－前記第２のＣＩＤドメインの複合体を形成する、組成物。

【請求項2】

前記ＣＩＤ低分子が、ＦＫ１０１２、リミドゥシド、ＦＫ５０６、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰタグ、ＡＢＴ－７３７からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記第１のＣＩＤドメイン－前記ＣＩＤ低分子－前記第２のＣＩＤドメインが、ＦＫＢＰ－ＦＫ１０１２－ＦＫＢＰ、変異体ＦＫＢＰ－リミドゥシド－変異体ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰ－ＦＫ５０６－カルシニューリン、ＦＫＢＰ－ＦＫＣｓＡ－ＣｙＰ－Ｆａｓ、ＦＫＢＰ－ラパマイシン－ＦＲＢ、変異体ＦＫＢＰ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＲＢ、ＣｙｒＢ－クーママイシン－ＧｙｒＢ、ＧＡＩ－ジベレリン－ＧＩＤ１、ＳＮＡＰタグ－ＨａＸＳ－ＨａｌｏＴａｇ、ｅＤＨＦＲ－ＴＭＰタグ－ＨａｌｏＴａｇおよびＡＺ１－ＡＢＴ－７３７－ＢＣＬ－ｘＬからなる複合体群から選択され、前記第１のＣＩＤドメインと前記第２のＣＩＤドメインとが、前記複合体内で位置を交換してもよい、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記第１のＣＩＤドメインが、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記低分子が、メトトレキサートである、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記第１のＣＩＤドメインが、ＢＣＬ－２またはその変異体であり、前記ＣＩＤ低分子が、ＡＢＴ－１９９またはＡＢＴ－２６３であり、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記第１のＣＩＤドメインが、ＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）であり、前記ＣＩＤ低分子が、ＡＢＴ－１９９であり、前記第２のＣＩＤドメインが、
ａ）ｉ）配列番号１を含むｖｈＣＤＲ１；
ｉｉ）配列番号７２を含むｖｈＣＤＲ２；および
ｉｉｉ）配列番号１２９を含むｖｈＣＤＲ３
を含む可変重鎖ドメイン（ＶＨ）；ならびに
ｂ）ｉ）配列番号３１０を含むｖｌＣＤＲ１；
ｉｉ）配列番号３１１を含むｖｌＣＤＲ２；および
ｉｉｉ）配列番号２３３を含むｖｌＣＤＲ３
を含む可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項６に記載の組成物。

【請求項8】

前記第１のＣＩＤドメインが、Ｂｃｌ－ｘＬのＡＢＴ－７３７結合ドメインであり、前記ＣＩＤ低分子が、ＡＢＴ－７３７であり、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項9】

前記第１のＣＩＤドメインが、ＦＫＢＰのラパマイシン結合ドメインであり、前記ＣＩＤ低分子が、ラパマイシンであり、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記第１のＣＩＤドメインが、ＧＤＣ－０１５２、ＬＣＬ１６１、ＡＴ４０６、ＣＵＤＣ－４２７、またはｃＩＡＰｌのビリナパント結合ドメインであり、前記ＣＩＤ低分子が、ＧＤＣ－０１５２、ＬＣＬ１６１、ＡＴ４０６、ＣＵＤＣ－４２７、またはビリナパントであり、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

前記第１のＣＩＤドメインが、セレブロンのサリドマイド結合ドメインであり、前記低分子が、サリドマイド、レナリドミド、またはポマリドミドであり、前記第２のＣＩＤドメインが、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

前記治療部分が、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記治療部分が、二特異性抗体である、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記治療部分が、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

前記二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分が、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記Ｔ細胞抗原がＣＤ３であり、前記腫瘍関連抗原がＣＤ１９である、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

前記治療部分が、ヒトインターロイキン分子である、請求項１２に記載の組成物。

【請求項18】

前記治療部分が、ヒトＩＬ－２である、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記第１のＣＩＤドメインが、第１のリンカーを介して前記第１のＦｃドメインに連結される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記第２のＣＩＤドメインが、第２のリンカーを介して前記治療部分に連結される、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記ＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

前記第１のＦｃドメインが、第１の変異体Ｆｃドメインであり、前記第２のＦｃドメインが、第２の変異体Ｆｃドメインである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項23】

患者における治療部分の血清半減期を延長する方法であって、
ａ）前記患者に、請求項１から２２のいずれか一項に記載の前記治療部分を含む前記組成物を投与すること；
ｂ）前記患者に、請求項１から２２のいずれか一項に記載の前記ＣＩＤ低分子を投与すること
を含み、
前記第１および第２のＣＩＤドメインが、前記患者において前記低分子と複合体を形成し、それによって、前記治療部分の血清半減期が延長される、方法。

【請求項24】

請求項１から２２のいずれか一項に記載の前記治療部分および前記ＣＩＤ低分子を含む前記組成物を投与された患者から治療部分をクリアランスさせる方法であって、前記治療部分が前記患者の血液からクリアランスされるように、前記患者への前記ＣＩＤ低分子の投与を停止することを含む、方法。

【請求項25】

（１）ａ）第１のＣＩｎＤドメインと、ＩｇＧの第１のＦｃドメインとを含み、前記第１のＣＩｎＤドメインが、前記第１のＦｃドメインに共有的に連結された、第１の単量体、
および
ｂ）ＩｇＧの第２のＦｃドメインを含む第２の単量体
を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質；
（２）第２のＣＩｎＤドメインと、第２の治療部分とを含み、前記第２のＣＩｎＤドメインが、ＮまたはＣ末端で前記第２の治療部分に共有的に連結された、融合タンパク質部分
を含む組成物であって、
前記第１のＣＩｎＤドメインが、前記第２のＣＩｎＤドメインに結合し、複合体を形成し、複合体が、ＣＩｎＤ低分子によって中断されていてもよい、組成物。

【請求項26】

前記第１のＣＩｎＤドメインまたは前記第２のＣＩｎＤドメインのいずれかが抗体部分を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記第１のＣＩｎＤドメインが、第１のリンカーを介して前記第１のＦｃドメインに連結される、請求項２５または２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記第２のＣＩｎＤドメインが、第２のリンカーを介して前記治療部分に連結される、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項29】

前記ＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１である、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項30】

前記第１のＦｃドメインが、第１の変異体Ｆｃドメインであり、前記第２のＦｃドメインが、第２の変異体Ｆｃドメインである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

前記第２の治療部分が、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項32】

前記第２の治療部分が、二特異性抗体である、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

前記第２の治療部分が、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である、請求項３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分が、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記Ｔ細胞抗原がＣＤ３であり、前記腫瘍関連抗原がＣＤ１９である、請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記第２の治療部分が、ヒトインターロイキン分子である、請求項３１に記載の組成物。

【請求項37】

前記第２の治療部分が、ヒトＩＬ－２である、請求項３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記第２の単量体が、前記第２のＦｃドメインに共有的に連結された第１の治療部分をさらに含む、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

前記第１の治療部分が、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される、請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

前記第１の治療部分が、Ｔ細胞抗原結合ドメインであり、前記第２の治療部分が、腫瘍関連抗原結合ドメインであるか、または前記第１の治療部分が、腫瘍関連抗原結合ドメインであり、前記第２の治療部分が、Ｔ細胞抗原結合ドメインである、請求項３９に記載の組成物。

【請求項41】

前記Ｔ細胞抗原がＣＤ３であり、前記腫瘍関連抗原がＣＤ１９である、請求項４０に記載の組成物。

【請求項42】

（１）２つの同一の単量体を含み、前記２つの単量体がそれぞれ、ＩｇＧのＦｃドメインに共有的に連結された第１のＣＩｎＤドメインを含む、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質；
（２）第２のＣＩｎＤドメインと、治療部分とを含み、前記第２のＣＩｎＤドメインが、ＮまたはＣ末端で前記治療部分に共有的に連結された、融合タンパク質部分
を含む組成物であって、
前記第１のＣＩｎＤドメインが、前記第２のＣＩｎＤドメインに結合し、複合体を形成し、前記複合体が、ＣＩｎＤ低分子によって中断されていてもよい、組成物。

【請求項43】

前記第１のＣＩｎＤドメインまたは前記第２のＣＩｎＤドメインのいずれかが抗体部分を含む、請求項４２に記載の組成物。

【請求項44】

前記第１のＣＩｎＤドメインが、第１のリンカーを介して前記第１のＦｃドメインに連結される、請求項４２または４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記第２のＣＩｎＤドメインが、第２のリンカーを介して前記治療部分に連結される、請求項４２から４４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項46】

前記ＩｇＧが、ヒトＩｇＧ１である、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項47】

前記治療部分が、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項48】

前記治療部分が、二特異性抗体である、請求項４７に記載の組成物。

【請求項49】

前記治療部分が、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である、請求項４８に記載の組成物。

【請求項50】

前記二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分が、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、請求項４９に記載の組成物。

【請求項51】

前記Ｔ細胞抗原がＣＤ３であり、前記腫瘍関連抗原がＣＤ１９である、請求項５０に記載の組成物。

【請求項52】

前記治療部分が、ヒトインターロイキン分子である、請求項４７に記載の組成物。

【請求項53】

前記治療部分が、ヒトＩＬ－２である、請求項５２に記載の組成物。

【請求項54】

患者における治療部分の血清半減期を延長する方法であって、前記患者に、請求項２５から５３のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項55】

請求項２５から５３のいずれか一項に記載の組成物を以前に投与された患者から治療部分をクリアランスさせる方法であって、請求項２５から５３に記載の前記ＣＩｎＤ低分子を投与することを含み、それによって、前記治療部分が、前記ヘテロ二量体またはホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質から解離する、方法。

【請求項56】

（ａ）ｉ）第１のＣＩＤドメイン；
ｉｉ）必要に応じたドメインリンカー；および
ｉｉｉ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合ドメイン
を含む第１の単量体；ならびに
（ｂ）ｉ）第２のＣＩＤドメイン；
ｉｉ）必要に応じたドメインリンカー；および
ｉｉｉ）Ａ）ＣＤ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）；
Ｂ）必要に応じたドメインリンカー；および
Ｃ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ＡＢＤ（ＴＡＡ－ＡＢＤ）
を含むＴ細胞エンゲージャー
を含む第２の単量体
を含む組成物であって、
ＣＩＤ低分子の存在下で、前記第１のＣＩＤドメインと、前記第２のＣＩＤドメインとが、前記第１のＣＩＤドメイン－前記ＣＩＤ低分子－前記第２のＣＩＤドメインの複合体を形成する、組成物。

【請求項57】

前記ＣＩＤ低分子が、ＦＫ１０１２、リミドゥシド、ＦＫ５０６、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰタグ、ＡＢＴ－７３７からなる群から選択される、請求項５６に記載の組成物。

【請求項58】

前記第１のＣＩＤドメイン－前記ＣＩＤ低分子－前記第２のＣＩＤドメインの前記複合体が、ＦＫＢＰ－ＦＫ１０１２－ＦＫＢＰ、変異体ＦＫＢＰ－リミドゥシド－変異体ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰ－ＦＫ５０６－カルシニューリン、ＦＫＢＰ－ＦＫＣｓＡ－ＣｙＰ－Ｆａｓ、ＦＫＢＰ－ラパマイシン－ＦＲＢ、変異体ＦＫＢＰ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＲＢ、ＧｙｒＢ－クーママイシン－ＧｙｒＢ、ＧＡＩ－ジベレリン－ＧＩＤ１、ＳＮＡＰタグ－ＨａＸＳ－ＨａｌｏＴａｇ、ｅＤＨＦＲ－ＴＭＰタグ－ＨａｌｏＴａｇ、ＡＺ１－ＡＢＴ－７３７－ＢＣＬ－ｘＬ、カルシニューリン－ＦＫ５０６－ＦＫＢＰ、ＣｙＰ－Ｆａｓ－ＦＫＣｓＡ－ＦＫＢＰ、ＦＲＢ－ラパマイシン－ＦＫＢＰ、変異体ＦＲＢ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＫＢＰ、ＧＩＤ１－ジベレリン－ＧＡＩ、ＨａｌｏＴａｇ－ＨａＸＳ－ＳＮＡＰタグ、ＨａｌｏＴａｇ－ＴＭＰタグ－ｅＤＨＦＲ、ＢＣＬ－ｘＬ－ＡＢＴ－７３７－ＡＺ１からなる複合体群から選択される、請求項５７に記載の組成物。

【請求項59】

前記ＨＳＡ結合ドメインが、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン、または単一の単量体可変抗体ドメインを含む、請求項５６から５８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項60】

前記第１のＣＩＤドメインが、第１のリンカーを介して前記ＨＳＡ結合ドメインに連結され、前記第２のＣＩＤドメインが、第２のリンカーを介して前記Ｔ細胞エンゲージャーに連結される、請求項５６から５９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項61】

請求項５６から６０のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬組成物。

【請求項62】

患者におけるＴ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長する方法であって、
ａ）前記患者に、請求項５６から６１のいずれか一項に記載の前記Ｔ細胞エンゲージャーを含む前記組成物または前記医薬組成物を投与すること；
ｂ）前記患者に、請求項５６から６１のいずれか一項に記載の前記低分子薬物を投与すること
を含み、
前記第１および第２のＣＩＤドメインが、前記患者において前記低分子と複合体を形成し、それによって、前記Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期が延長される、方法。

【請求項63】

患者におけるがんを処置する方法であって、
ａ）前記患者に、請求項５６から６１のいずれか一項に記載の前記Ｔ細胞エンゲージャーを含む前記組成物または前記医薬組成物を投与すること；
ｂ）前記患者に、請求項５６から６１のいずれか一項に記載の前記低分子を投与すること
を含み、
前記第１および第２のＣＩＤドメインが、前記患者において前記低分子と複合体を形成して、がんを処置する、方法。

【請求項64】

請求項５６から６１のいずれか一項に記載の前記Ｔ細胞エンゲージャーおよび前記低分子を含む前記組成物を投与された患者からＴ細胞エンゲージャーをクリアランスさせる方法であって、前記Ｔ細胞エンゲージャーが前記患者の血液からクリアランスされるように、前記患者への前記低分子の投与を停止することを含む、方法。

【請求項65】

患者におけるがんを処置する方法であって、
ａ）前記患者に、請求項１から５３のいずれか一項に記載の前記Ｔ細胞エンゲージャーを含む前記組成物または前記医薬組成物を投与すること；
ｂ）前記患者に、請求項１から５３のいずれか一項に記載の前記低分子を投与すること
を含み、
前記第１および第２のＣＩＤドメインが、前記患者において前記低分子と複合体を形成して、がんを処置する、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１２月２３日に出願された米国仮出願第６２／９５３，００３号および２０１９年１２月２３日に出願された同第６２／９５２，９８４号の優先権を主張し、これらの内容はいずれも全体が参照により明白に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）を介してＴ細胞と腫瘍細胞の表面抗原とを一過性に繋ぐ抗体由来治療薬である。これは、Ｔ細胞の活性化と、結合された標的腫瘍細胞のＴ細胞誘導溶解の指示とをもたらす。Ｔ細胞エンゲージャーの治療能は、再発／難治性急性リンパ性白血病を有する成人患者の処置に関して承認されたＣＤ１９／ＣＤ１３二特異性Ｔ細胞エンゲージャーであるブリナツモマブによって実証された。Ｔ細胞誘導療法の成功にもかかわらず、既存のＴ細胞エンゲージャーの欠点のうちの１つは短い血清半減期である。

【0003】

Ｔ細胞エンゲージャーの短い血清半減期に対処するための改良は、例えば、Ｔ細胞エンゲージャーをヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはＦｃドメインと融合させることによって行われている（Merlot et al., Future Med Chem. 2015; 7:553-556、Kontermann et al., Chem Biotechnol. Pharm Biotechnol. 2011;22:868-876）。

【0004】

ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）（分子量約６７ｋＤａ）は、血漿中で最も豊富なタンパク質であり、約５０ｍｇ／ｍｌ存在し、ヒトにおいて２０日前後の半減期を有する。ＨＳＡは、血漿ｐＨを維持するのに役立ち、膠質血圧に寄与し、多くの代謝産物および脂肪酸の担体として機能し、血漿における主要な薬物輸送タンパク質として役立つ。アルブミンとの非共有的会合は、短寿命タンパク質の消失半減時間（ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｈａｌｆ－ｔｉｍｅ）を延長する。例えば、アルブミン結合ドメインとＦａｂ断片との組換え融合は、マウスおよびウサギに静脈内投与した場合、それぞれ、Ｆａｂ断片単独の投与と比較して２５および５８倍のインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）クリアランス、ならびに２６および３７倍の半減期延長をもたらした［Dennis et al., J Biol Chem. 2002;277(38):35035-43］。別の例では、アルブミンとの会合を促進するために脂肪酸を用いてインスリンをアシル化する場合、ウサギまたはブタに皮下注射すると遅延性効果が観察される（Kurtzhals et al., Biochem. J. 1995; 312: 725-731）。まとめると、これらの研究はアルブミン結合と作用の長期化との関連性を実証する。

【0005】

Ｆｃに基づく融合タンパク質は、別のペプチドに直接連結する免疫グロビンＦｃドメインから構成される。融合パートナーは、細胞表面受容体との相互作用時に活性化するリガンド、課題となる病原体に対するペプチド抗原、またはタンパク質マイクロアレイにおいてアセンブルされる結合パートナーを同定するための「ベイト」タンパク質等の、任意の他の目的のタンパク質分子であり得る。しかしながら大半の場合、融合パートナーは、有意な治療能を有し、Ｆｃドメインに結合して、そのハイブリッドにいくつかのさらなる有益な生物学的および薬理学的特性を付与する。最も重要な有益な特性のうちの１つは、Ｆｃドメインの存在が、サルベージ胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用のため［Roopenian & Akilesh, Nat Rev Immunol. 2007;7(9):715-25］、およびより大きなサイズの分子のためにより緩慢となった腎クリアランスのため［Kontermann, Curr Opin Biotechnol. 2011; 22(6):868-76］に、血漿半減期を著しく増加することであり、このことが治療活性を長期化する。結合したＦｃドメインはまた、腫瘍学的療法およびワクチンにおける使用に特に重要な特色として、これらの分子が免疫細胞に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）と相互作用することを可能にする［Nimmerjahn & Ravetch, Nat Rev Immunol. 2008;8(1):34-47］。生物物理学的観点から見ると、Ｆｃドメインは、独立してフォールディングし、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）とインビボの両方においてパートナー分子の溶解性および安定性を向上させることができ、他方、技術的見地から見ると、Ｆｃ領域は、製造中にプロテインＧ／Ａアフィニティークロマトグラフィーによる容易かつ費用対効果の高い精製を可能にする（Carter, Exp Cell Res. 2011;317:1261-1269）。

【発明の概要】

【0006】

生物製剤をＦｃドメインと融合させることによって遂げられた、生物製剤の血清半減期を延長することにおける成果および進歩にもかかわらず、血清半減期の延長はこれまでのところ調整可能ではない。本発明は、生物製剤の血清半減期の正確な時間制御を可能にするシステムを提供すること、およびそうすることで生物製剤の患者へのより安全かつより有効な投薬を可能にすることによって、より進展した療法の開発に対する必要性を満たす。

【0007】

本発明は、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期のための調節可能な制御システムを提供する。一態様では、本発明は、（１）第１の化学誘導性二量体化剤（ＣＩＤ）ドメインと、ＩｇＧの第１のＦｃドメインとを含み、前記第１のＣＩＤドメインが前記第１のＦｃドメインに共有的に連結された、第１の単量体および前記ＩｇＧの第２のＦｃドメインを含む第２の単量体を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質；ならびに（２）第２のＣＩＤドメインと、治療部分とを含み、前記第２のＣＩＤドメインが、ＮまたはＣ末端で前記治療部分に共有的に連結された、融合タンパク質部分を含む組成物を提供する。ＣＩＤ低分子の存在下で、第１のＣＩＤドメインと、第２のＣＩＤドメインとは、第１のＣＩＤドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のＣＩＤドメインの複合体を形成する。

【0008】

一部の実施形態では、ＣＩＤ低分子は、ＦＫ１０１２、リミドゥシド、ＦＫ５０６、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰタグ、ＡＢＴ－７３７からなる群から選択される。

【0009】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のＣＩＤドメインは、ＦＫＢＰ－ＦＫ１０１２－ＦＫＢＰ、変異体ＦＫＢＰ－リミドゥシド－変異体ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰ－ＦＫ５０６－カルシニューリン、ＦＫＢＰ－ＦＫＣｓＡ－ＣｙＰ－Ｆａｓ、ＦＫＢＰ－ラパマイシン－ＦＲＢ、変異体ＦＫＢＰ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＲＢ、ＣｙｒＢ－クーママイシン－ＧｙｒＢ、ＧＡＩ－ジベレリン－ＧＩＤ１、ＳＮＡＰタグ－ＨａＸＳ－ＨａｌｏＴａｇ、ｅＤＨＦＲ－ＴＭＰタグ－ＨａｌｏＴａｇおよびＡＺ１－ＡＢＴ－７３７－ＢＣＬ－ｘＬからなる複合体群から選択され、第１のＣＩＤドメインと第２のＣＩＤドメインとは、複合体内で位置を交換してもよい。

【0010】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含み、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。

【0011】

一部の実施形態では、ＣＩＤ低分子は、メトトレキサートである。

【0012】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＢＣＬ－２またはその変異体であり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－１９９またはＡＢＴ－２６３であり、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）であり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－１９９であり、第２のＣＩＤドメインは、配列番号１を含むｖｈＣＤＲ１、配列番号７２を含むｖｈＣＤＲ２、配列番号１２９を含むｖｈＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号３１０を含むｖｌＣＤＲ１、配列番号３１１を含むｖｌＣＤＲ２、および配列番号２３３を含むｖｌＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。

【0013】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、Ｂｃｌ－ｘＬのＡＢＴ－７３７結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－７３７であり、第２のＣＩＤドメインは、前記第１のＣＩＤドメインと前記ＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。

【0014】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＦＫＢＰのラパマイシン結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ラパマイシンであり、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。

【0015】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＧＤＣ－０１５２、ＬＣＬ１６１、ＡＴ４０６、ＣＵＤＣ－４２７、またはｃＩＡＰｌのビリナパント結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＧＤＣ－０１５２、ＬＣＬ１６１、ＡＴ４０６、ＣＵＤＣ－４２７、またはビリナパントであり、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。

【0016】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、セレブロンのサリドマイド結合ドメインであり、低分子は、サリドマイド、レナリドミド、またはポマリドミドであり、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に結合することができる、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含む。

【0017】

一部の実施形態では、治療部分は、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される。一部の実施形態では、治療部分は、二特異性抗体である。

【0018】

一部の実施形態では、治療部分は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である。一部の実施形態では、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３であり、腫瘍関連抗原はＣＤ１９である。

【0019】

一部の実施形態では、治療部分は、ヒトインターロイキン分子である。一部の実施形態では、治療部分は、ヒトＩＬ－２である。

【0020】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、第１のリンカーを介して第１のＦｃドメインに連結される。一部の実施形態では、第２のＣＩＤドメインは、第２のリンカーを介して治療部分に連結される。

【0021】

一部の実施形態では、ＩｇＧは、ヒトＩｇＧ１である。

【0022】

一部の実施形態では、第１のＦｃドメインは、第１の変異体Ｆｃドメインであり、第２のＦｃドメインは、第２の変異体Ｆｃドメインである。

【0023】

本発明の別の態様は、患者における治療部分の血清半減期を延長させる方法に関する。方法は、患者に、（１）上記のその様々な実施形態を含む組成物；および（２）上記のＣＩＤ低分子を投与することを含む。低分子の投与は、第１および第２のＣＩＤドメインを誘導して、複合体を形成させ、それによって、治療部分の血清半減期を延長させる。

【0024】

本発明の別の態様は、治療部分と、上記のＣＩＤ低分子とを含む組成物を投与された患者から治療部分をクリアランスさせる方法に関する。方法は、治療部分が患者の血液からクリアランスされるように、前記患者へのＣＩＤ低分子の投与を停止することを含む。

【0025】

本発明の別の態様は、（１）（ａ）第１の化学阻害性二量体化剤（ＣＩｎＤ）ドメインと、ＩｇＧの第１のＦｃドメインとを含み、第１のＣＩｎＤドメインが第１のＦｃドメインに共有的に連結された、第１の単量体、および（ｂ）ＩｇＧの第２のＦｃドメインを含む第２の単量体を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質；ならびに（２）第２のＣＩｎＤドメインと、第２の治療部分とを含み、第２のＣＩｎＤドメインが、ＮまたはＣ末端で第２の治療部分に共有的に連結された、融合タンパク質部分を含む組成物に関する。第１のＣＩｎＤドメインは、第２のＣＩｎＤドメインに結合し、複合体を形成し、複合体は、ＣＩｎＤ低分子によって中断されていてもよい。

【0026】

一部の実施形態では、第１のＣＩｎＤドメインと、第２のＣＩｎＤドメインとは、抗体部分を含む。

【0027】

一部の実施形態では、第１のＣＩｎＤドメインは、第１のリンカーを介して第１のＦｃドメインに連結される。一部の実施形態では、第２のＣＩｎＤドメインは、第２のリンカーを介して治療部分に連結される。

【0028】

一部の実施形態では、上記ＩｇＧは、ヒトＩｇＧ１である。

【0029】

一部の実施形態では、第１のＦｃドメインは、第１の変異体Ｆｃドメインであり、第２のＦｃドメインは、第２の変異体Ｆｃドメインである。

【0030】

一部の実施形態では、第２の治療部分は、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される。一部の実施形態では、第２の治療部分は、二特異性抗体である。一部の実施形態では、第２の治療部分は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である。一部の実施形態では、第２の治療部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３であり、腫瘍関連抗原はＣＤ１９である。

【0031】

一部の実施形態では、第２の治療部分は、ヒトインターロイキン分子である。一部の実施形態では、第２の治療部分は、ヒトＩＬ－２である。

【0032】

一部の実施形態では、上記の第２の単量体は、第２のＦｃドメインに共有的に連結された第１の治療部分をさらに含む。一部の実施形態では、第１の治療部分は、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される。

【0033】

一部の実施形態では、第１の治療部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメインであり、第２の治療部分は、腫瘍関連抗原結合ドメインである。あるいは、第１の治療部分は、腫瘍関連抗原結合ドメインであり、第２の治療部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメインである。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３であり、腫瘍関連抗原はＣＤ１９である。

【0034】

本発明の別の態様は、（１）２つの単量体がそれぞれ、ＩｇＧのＦｃドメインに共有的に連結された第１のＣＩｎＤドメインを含む、２つの同一の単量体を含むホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質；および（２）第２のＣＩｎＤドメインがＮまたはＣ末端で治療部分に共有的に連結された、第２のＣＩｎＤドメインと治療部分とを含む融合タンパク質部分を含む組成物に関する。第１のＣＩｎＤドメインは、第２のＣＩｎＤドメインに結合し、複合体を形成し、複合体は、ＣＩｎＤ低分子によって中断されていてもよい。

【0035】

一部の実施形態では、第１のＣＩｎＤドメインまたは第２のＣＩｎＤドメインのいずれかは、抗体部分を含む。

【0036】

一部の実施形態では、第１のＣＩｎＤドメインは、第１のリンカーを介して第１のＦｃドメインに連結される。一部の実施形態では、第２のＣＩｎＤドメインは、第２のリンカーを介して治療部分に連結される。

【0037】

一部の実施形態では、ＩｇＧは、ヒトＩｇＧ１である。

【0038】

一部の実施形態では、治療部分は、抗体、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、ポリペプチド、および抗体薬物コンジュゲートから選択される。一部の実施形態では、治療部分は、二特異性抗体である。一部の実施形態では、治療部分は、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分である。一部の実施形態では、二特異性Ｔ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞抗原はＣＤ３であり、腫瘍関連抗原はＣＤ１９である。

【0039】

一部の実施形態では、治療部分は、ヒトインターロイキン分子である。一部の実施形態では、治療部分は、ヒトＩＬ－２である。

【0040】

本発明の別の態様は、患者における治療部分の血清半減期を延長させる方法であって、患者に、上記のＣＩｎＤを含む組成物のいずれかを投与することを含む、方法に関する。

【0041】

本発明の別の態様は、上記のＣＩｎＤを含む組成物を以前に投与された患者から治療部分をクリアランスさせる方法に関する。方法は、ＣＩｎＤ低分子を患者に投与すること、ヘテロ二量体またはホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質から治療部分を解離させることを含む。

【0042】

本発明は、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期のための調節可能な制御システムを提供する。一態様では、本発明は、第１の単量体と第２の単量体とを含み、第１の単量体が第１のＣＩＤドメイン、必要に応じたドメインリンカー、およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合ドメインを含み、第２の単量体が第２のＣＩＤドメイン、必要に応じたドメインリンカーおよびＴ細胞エンゲージャーを含み、第１のドメインと第２のドメインとが、ＣＩＤ低分子の存在下で会合して、第１のドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のドメイン複合体を形成する、組成物を提供する。低分子の非存在下では、第１のドメインと第２のドメインとは、互いに会合しない。Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）、必要に応じたドメインリンカーおよび腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを含む。

【0043】

一部の実施形態では、低分子は、ＦＫ１０１２、リミドゥシド、ＦＫ５０６、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰタグ、ＡＢＴ－７３７からなる群から選択される。

【0044】

一部の実施形態では、第１のドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のドメインの複合体は、ＦＫＢＰ－ＦＫ１０１２－ＦＫＢＰ、変異体ＦＫＢＰ－リミドゥシド－変異体ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰ－ＦＫ５０６－カルシニューリン、ＦＫＢＰ－ＦＫＣｓＡ－ＣｙＰ－Ｆａｓ、ＦＫＢＰ－ラパマイシン－ＦＲＢ、変異体ＦＫＢＰ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＲＢ、ＧｙｒＢ－クーママイシン－ＧｙｒＢ、ＧＡＩ－ジベレリン－ＧＩＤ１、ＳＮＡＰタグ－ＨａＸＳ－ＨａｌｏＴａｇ、ｅＤＨＦＲ－ＴＭＰタグ－ＨａｌｏＴａｇ、ＡＺ１－ＡＢＴ－７３７－ＢＣＬ－ｘＬ、カルシニューリン－ＦＫ５０６－ＦＫＢＰ、ＣｙＰ－Ｆａｓ－ＦＫＣｓＡ－ＦＫＢＰ、ＦＲＢ－ラパマイシン－ＦＫＢＰ、変異体ＦＲＢ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＫＢＰ、ＧＩＤ１－ジベレリン－ＧＡＩ、ＨａｌｏＴａｇ－ＨａＸＳ－ＳＮＡＰタグ、ＨａｌｏＴａｇ－ＴＭＰタグ－ｅＤＨＦＲ、ＢＣＬ－ｘＬ－ＡＢＴ－７３７－ＡＺ１からなる群から選択される。

【0045】

一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含む。

【0046】

一部の実施形態では、第１のドメインは、第１のリンカーを介してＨＳＡ結合ドメインに連結され、第２のドメインは、第２のリンカーを介してＴ細胞エンゲージャーに連結される。

【0047】

別の態様では、本発明は、上記の組成物のいずれか１つを含む医薬組成物を提供する。

【0048】

別の態様では、本発明は、患者におけるＴ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長させる方法であって、患者に、本明細書に記載の組成物または医薬組成物のいずれか１つを投与すること、および患者に、本明細書に記載の第１のＣＩＤドメインと第２のＣＩＤドメインとの会合を誘導するＣＩＤ低分子を投与すること、それによって、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長させることを含む、方法を提供する。

【0049】

別の態様では、本発明は、患者におけるがんを処置する方法であって、患者に、本明細書に記載の組成物または医薬組成物のいずれか１つを投与すること、および患者に、本明細書に記載の第１のＣＩＤドメインと第２のＣＩＤドメインとの会合を誘導するＣＩＤ低分子を投与すること、それによって、がんを処置することを含む、方法を提供する。

【0050】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャーおよびＣＩＤ低分子を含有する組成物を投与された患者からＴ細胞エンゲージャーをクリアランスさせる方法であって、Ｔ細胞エンゲージャーが最早ＨＳＡと会合せず、患者の血液からクリアランスされるように、患者への低分子の投与を停止することを含む、方法を提供する。

【0051】

別の態様では、本発明は、患者におけるがんを処置する方法であって、ａ）前記患者に、本明細書に記載の組成物のいずれか１つによる前記Ｔ細胞エンゲージャーを含む前記組成物または前記医薬組成物を投与すること；ｂ）前記患者に、本明細書に記載の組成物のいずれかによる前記低分子を投与することを含み、前記第１および第２のＣＩＤドメインが、前記患者において前記低分子と複合体を形成して、がんを処置する、方法を提供する。

【0052】

本発明はまた、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期のための調節可能な制御システムも提供する。一態様では、本発明は、第１の単量体と第２の単量体とを含み、第１の単量体が第１のＣＩＤドメイン、必要に応じたドメインリンカー、およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合ドメインを含み、第２の単量体が第２のＣＩＤドメイン、必要に応じたドメインリンカーおよびＴ細胞エンゲージャーを含み、第１のドメインと第２のドメインとが、ＣＩＤ低分子の存在下で会合して、第１のドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のドメイン複合体を形成する、組成物を提供する。低分子の非存在下では、第１のドメインと第２のドメインとは、互いに会合しない。Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）、必要に応じたドメインリンカーおよび腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）結合ドメインを含む。

【0053】

一部の実施形態では、低分子は、ＦＫ１０１２、リミドゥシド、ＦＫ５０６、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰタグ、ＡＢＴ－７３７からなる群から選択される。

【0054】

一部の実施形態では、第１のドメイン－ＣＩＤ低分子－第２のドメインの複合体は、ＦＫＢＰ－ＦＫ１０１２－ＦＫＢＰ、変異体ＦＫＢＰ－リミドゥシド－変異体ＦＫＢＰ、ＦＫＢＰ－ＦＫ５０６－カルシニューリン、ＦＫＢＰ－ＦＫＣｓＡ－ＣｙＰ－Ｆａｓ、ＦＫＢＰ－ラパマイシン－ＦＲＢ、変異体ＦＫＢＰ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＲＢ、ＧｙｒＢ－クーママイシン－ＧｙｒＢ、ＧＡＩ－ジベレリン－ＧＩＤ１、ＳＮＡＰタグ－ＨａＸＳ－ＨａｌｏＴａｇ、ｅＤＨＦＲ－ＴＭＰタグ－ＨａｌｏＴａｇ、ＡＺ１－ＡＢＴ－７３７－ＢＣＬ－ｘＬ、カルシニューリン－ＦＫ５０６－ＦＫＢＰ、ＣｙＰ－Ｆａｓ－ＦＫＣｓＡ－ＦＫＢＰ、ＦＲＢ－ラパマイシン－ＦＫＢＰ、変異体ＦＲＢ－ラパマイシンアナログ－変異体ＦＫＢＰ、ＧＩＤ１－ジベレリン－ＧＡＩ、ＨａｌｏＴａｇ－ＨａＸＳ－ＳＮＡＰタグ、ＨａｌｏＴａｇ－ＴＭＰタグ－ｅＤＨＦＲ、ＢＣＬ－ｘＬ－ＡＢＴ－７３７－ＡＺ１からなる群から選択される。

【0055】

一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含む。

【0056】

一部の実施形態では、第１のドメインは、第１のリンカーを介してＨＳＡ結合ドメインに連結され、第２のドメインは、第２のリンカーを介してＴ細胞エンゲージャーに連結される。

【0057】

別の態様では、本発明は、上記の組成物のいずれか１つを含む医薬組成物を提供する。

【0058】

別の態様では、本発明は、患者におけるＴ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長させる方法であって、患者に、本明細書に記載の組成物または医薬組成物のいずれか１つを投与すること、および患者に、本明細書に記載の第１のＣＩＤドメインと第２のＣＩＤドメインとの会合を誘導するＣＩＤ低分子を投与すること、それによって、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長させることを含む、方法を提供する。

【0059】

別の態様では、本発明は、患者におけるがんを処置する方法であって、患者に、本明細書に記載の組成物または医薬組成物のいずれか１つを投与すること、および患者に、本明細書に記載の第１のＣＩＤドメインと第２のＣＩＤドメインとの会合を誘導するＣＩＤ低分子を投与すること、それによって、がんを処置することを含む、方法を提供する。

【0060】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャーおよびＣＩＤ低分子を含有する組成物を投与された患者からＴ細胞エンゲージャーをクリアランスさせる方法であって、Ｔ細胞エンゲージャーが最早ＨＳＡと会合せず、患者の血液からクリアランスされるように、患者への低分子の投与を停止することを含む、方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0061】

【図1】図１Ａ～１Ｂは本発明の一態様を示す。概して、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）と融合タンパク質部分（１０２）とは患者に同時投与される。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）は、ドメインリンカー（１０４）を使用して第１のＦｃドメイン（１０５）（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）に連結された本明細書に定義される第１のＣＩＤドメイン（１０３）を含有する第１の単量体と、第１のＦｃドメインとヘテロ二量体形成する第２のＦｃドメイン（１０６）を含有する第２の単量体とを含む。融合タンパク質（１０２）（本質的には第３の単量体である）は、ドメインリンカー（１０８）を使用して治療部分（１０９）に連結された本明細書に定義される第２のＣＩＤドメイン（１０７）を含む。ＣＩＤ低分子（１１０）への曝露時（例えば、ＣＩＤ低分子が患者に投与される場合）、第１のＣＩＤドメイン（１０３）と第２のＣＩＤドメイン（１０７）とはそれぞれＣＩＤ低分子（１１０）と会合し、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）と融合タンパク質部分（１０２）との複合体が形成される。したがって、ここで治療部分はＦｃドメインと非共有的に会合し、複合体全体は患者の血流からの急速なクリアランスから保護され、治療部分（１０９）の血清半減期は延長される。概して、ＣＩＤ低分子は非常に短い血清中半減期を有するため、ＣＩＤ低分子の投与は経時的に継続されることになる。治療部分の活性がもはや必要とされないかまたは有害な副作用を引き起こしているある時点では、ＣＩＤ低分子の投与は中止され、このことは、複合体解離とそれに続く融合タンパク質部分（１０２）の患者からのクリアランスとをもたらす。図１Ｂに示す一部の実施形態では、治療部分（１０９）は、ｓｃＦｖの形態の抗ＣＤ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）（１１１）に連結された抗原結合ドメイン（１１２）（例えばｓｃＦｖの形態の抗ＣＤ１９ ＡＢＤ）を含むＴ細胞エンゲージャーである。

【図2】図２Ａ～２Ｂは本発明の別の態様を示す。概して、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）と融合タンパク質部分（１０２）とは患者に同時投与される。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）は、ドメインリンカー（１０３）を使用して第１のＦｃドメイン（１０５）（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）に連結された本明細書に定義される第１のＣＩｎＤドメイン（１０４）を含有する第１の単量体と、第１のＦｃドメインとヘテロ二量体形成する第２のＦｃドメイン（１０６）を含有する第２の単量体とを含む。融合タンパク質部分は、ドメインリンカー（１０８）を使用して治療部分（１０９）に連結された本明細書に定義される第２のＣＩｎＤドメイン（１０７）を含む。同時投与時、第１のＣＩＤドメイン（１０５）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０６）とは会合して複合体を形成する。したがって、ここで治療部分（１０９）はＦｃドメインと非共有的に会合し、複合体全体は患者の血流からの急速なクリアランスから保護され、治療部分（１０９）の血清半減期は延長される。治療部分（１０９）の活性がもはや必要とされないかまたは有害な副作用を引き起こしているある時点では、ＣＩｎＤ低分子（１１０）が患者に投与され、第１のＣＩＤドメイン（１０５）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０６）とにより形成された複合体を中断する。結果として、治療部分（１０９）は、Ｆｃ融合タンパク質から解離し、その短い血清半減期のために血清から急速にクリアランスされる。図１Ｂに示す一部の実施形態では、治療部分は、ｓｃＦｖの形態の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）（例えば、抗ＣＤ１９抗原結合ドメイン１１２）に連結された抗ＣＤ３抗原結合ドメイン（１１１）を含むＴ細胞エンゲージャーである。

【図3】図３は本発明の別の態様を示す。概して、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）と融合タンパク質部分（１０２）とは患者に同時投与される。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）は、ドメインリンカー（１０３）を使用して第１のＦｃドメイン（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）（１０５）に連結された本明細書に定義される第１のＣＩｎＤドメイン（１０４）を含有する第１の単量体と、第１の治療部分（１１１）に共有的に連結し、第１のＦｃドメイン（１０５）とヘテロ二量体形成する第２のＦｃドメイン（１０６）を含有する第２の単量体とを含む。融合タンパク質部分（１０２）は、ドメインリンカー（１０８）を使用して第２の治療部分（１０９）に連結された本明細書に定義される第２のＣＩｎＤドメイン（１０７）を含む。同時投与時、第１のＣＩＤドメイン（１０７）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０７）とは会合して複合体を形成し、したがって、２つの治療部分（１１１）および（１０９）を一緒にする（例えば、抗ＣＤ３抗原結合ドメイン、および抗ＣＤ１９抗原結合ドメイン等の腫瘍関連抗原結合ドメイン）。ここで第２の治療部分（１０９）はＦｃドメインと非共有的に会合し、患者の血流からの急速なクリアランスから保護される。第２の治療部分（１０９）の血清半減期は延長される。第２の治療部分（１０９）の活性がもはや必要とされないかまたは有害な副作用を引き起こしているある時点では、ＣＩｎＤ低分子（１１０）が患者に投与され、第１のＣＩＤドメイン（１０４）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０７）とにより形成された複合体を中断する。結果として、第２の治療部分１０９は、Ｆｃ融合タンパク質から解離し、血清から急速にクリアランスされる。

【図4】図４は本発明の別の態様を示す。概して、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）と融合タンパク質部分（１０２）とは患者に同時投与される。ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質（１０１）は、それぞれがドメインリンカー（１０３）を使用して第１のＦｃドメイン（１０５）（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）に連結された本明細書に定義される第１のＣＩｎＤドメイン（１０４）を含有する２つの同一の単量体を含む。融合タンパク質部分（１０２）は、ドメインリンカー（１０７）を使用して治療部分（１０８）に連結された本明細書に定義される第２のＣＩｎＤドメイン（１０６）を含む。同時投与時、第１のＣＩＤドメイン（１０４）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０６）とは会合して複合体を形成し、したがって、２つの治療部分を一緒にする。ここで治療部分（１０８）はＦｃドメインと非共有的に会合し、患者の血流からの急速なクリアランスから保護される。治療部分（１０８）の血清半減期は延長される。治療部分（１０８）の活性がもはや必要とされないかまたは有害な副作用を引き起こしているある時点では、ＣＩｎＤ低分子（１０９）が患者に投与され、第１のＣＩＤドメイン（１０４）と第２のＣＩｎＤドメイン（１０６）とにより形成された複合体を中断する。結果として、治療部分（１０８）は、Ｆｃ融合タンパク質から解離し、血清から急速にクリアランスされる。

【図5】図５は、ドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメイン（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）に連結された第１のＣＩＤドメイン（ＢＣｌ－２ Ｃ１５８Ａ）を含有する第１の単量体と、第１のＦｃドメインとヘテロ二量体形成する第２のＦｃドメイン（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含有する第２の単量体とを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質Ａｂ５９の一例を例示する。

【図6】図６は、例示的な融合タンパク質部分を例示し、それぞれは、第２のＣＩＤドメイン（ＡＺ－２１）と、ｓｃＦｖの形態の抗ＣＤ３抗原結合ドメインに連結された抗ＣＤ１９抗原結合ドメインを含有するＴ細胞エンゲージャーとを含む。ＡＺ－２１はＴ細胞エンゲージャーのＮまたはＣ末端に連結することができる。ＡＺ－２１はＦａｂまたは一本鎖Ｆａｂフォーマットにおいて作製することができる。抗ＣＤ３抗原結合ドメインはクローンＬ２ＫまたはＵＣＨＴ１．ｖ９に由来し得る。Ｈｉｓタグは融合タンパク質部分の精製を容易にするために使用される。

【図7A】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7B】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7C】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7D】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7F】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7G】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7H】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7I】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図7J】図７Ａ～７Ｊは、図５および６に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図8】図８Ａは、例示的な融合タンパク質部分を例示し、それぞれは、ドメインリンカーを介してヒトＩＬ－２（ｈＩＬ－２）に連結された第２のＣＩＤドメイン（ＡＺ－２１）を含む。ＡＺ－２１はｓｃＦｖのフォーマットであり、ｈＩＬ－２のＮまたはＣ末端に連結することができる。Ｈｉｓタグは融合タンパク質部分の精製を容易にするために使用される。図８Ｂは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、およびＩＬ－１５、ならびにそれらの変異体のアミノ酸配列を提供する。

【図9】図９は、図８に示した例示的な融合タンパク質部分のアミノ酸配列を示す。

【図10】図１０は、ＡＺ－２１、ＢＣＬ－２、およびＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）のアミノ酸配列を示す。ＡＺ－２１とＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）とはＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９の存在下でＣＩＤを形成する。

【図11】図１１は、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－７３７の存在下で第１のＣＩＤドメインＢｃｌ－ｘＬと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図12A】図１２Ａおよび１２Ｂは、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９（ベネトクラクス）の存在下で第１のＣＩＤドメインＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）と複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図12B】図１２Ａおよび１２Ｂは、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９（ベネトクラクス）の存在下で第１のＣＩＤドメインＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）と複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図13】図１３は、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－２６３の存在下で第１のＣＩＤドメインＢＣＬ－２と複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図14】図１４は、ＣＩＤ低分子ＬＣＬ１６１の存在下で第１のＣＩＤドメインｃＩＡＰｌと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図15】図１５は、ＣＩＤ低分子ＧＤＣ－０１５２の存在下で第１のＣＩＤドメインｃＩＡＰｌと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図16】図１６は、ＣＩＤ低分子ＡＴ４０６の存在下で第１のＣＩＤドメインｃＩＡＰｌと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図17】図１７は、ＣＩＤ低分子ＣＵＤＣ－４２７の存在下で第１のＣＩＤドメインｃＩＡＰｌと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図18】図１８は、ＣＩＤ低分子ラパマイシンの存在下で第１のＣＩＤドメインＦＫＢＰと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。各クローンは第２のＣＩＤドメインを表す。

【図19】図１９は、ＣＩＤ低分子メトトレキサートの存在下で第１のＣＩＤドメイン、すなわちメトトレキサート結合ドメインと複合体を形成することができる第２のＣＩＤドメインのｖｈ－ＣＤＲおよびｖｌ－ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。

【図20】図２０Ａ～２０Ｂは、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５７、およびＡｂ６３と共にインキュベートしたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化の用量反応曲線を示す。

【図21】図２１は、Ａｂ５９とＡＢＴ－１９９または媒体対照との存在下でＡｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、およびＡｂ５７と共にインキュベートしたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化の用量反応曲線を示す。

【図22】図２２Ａは、初代ヒトＴ細胞とＡｂ５３またはＡｂ５７との共培養後のＲａｊｉ細胞の細胞傷害性の用量反応曲線を示す。図２２Ｂは、Ａｂ５９とＡＢＴ－１９９または媒体対照との存在下における初代ヒトＴ細胞とＡｂ５３との共培養後のＲａｊｉ細胞の細胞傷害性の用量反応曲線を示す。

【図23】図２３は、ヒトＴ細胞であって、ｈＩＬ－２またはｈＩＬ－２を含む融合タンパク質部分を用いて処理された、ヒトＴ細胞において検出されたＳＴＡＴ５のリン酸化を示す。

【図24】図２４は、融合タンパク質部分のサイズ排除クロマトグラムを示す。

【図25A】図２５Ａは、Ａｂ５３およびＡｂ５７の固定化ＢＣＬ－２への結合のバイオレイヤー干渉測定を示す。図２５Ｂは、Ａｂ５９の固定化ＡＺ２１への結合のバイオレイヤー干渉測定を示す。

【図25B】図２５Ａは、Ａｂ５３およびＡｂ５７の固定化ＢＣＬ－２への結合のバイオレイヤー干渉測定を示す。図２５Ｂは、Ａｂ５９の固定化ＡＺ２１への結合のバイオレイヤー干渉測定を示す。

【図26】図２６は、ＡＢＴ－１９９の存在下または非存在下におけるＡｂ９３およびＡｂ９４の固定化ＢＣＬ－２への結合のバイオレイヤー干渉測定を示す。結合のＫＤ値を示す。

【図27】図２７は、例示的な抗ＣＤ３ ＡＢＤのアミノ酸配列を示す。

【図28】図２８は、例示的なＩｇＧ１ Ｆｃドメインのアミノ酸配列を示す。

【図29】図２９は本発明の別の態様を示す。概して、患者に同時投与される２つの単量体が存在する：ドメインリンカーを使用してヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合ドメインに連結された本明細書に定義される第１のＣＩＤドメインを含む第１の単量体。患者への投与時、第１の単量体は患者の血流中でＨＳＡと会合する。第２の単量体は、ドメインリンカーを使用して本明細書に定義されるＴ細胞エンゲージャードメインに連結された第２のＣＩＤドメインを含む。ＣＩＤ低分子への曝露時（例えば、ＣＩＤ低分子が患者に投与される場合）、第１および第２のＣＩＤドメインはそれぞれＣＩＤ低分子と会合し、２つの単量体からなる二量体が形成される。したがって、ここでＴ細胞エンゲージャードメインはＨＳＡと非共有的に会合し、複合体全体は、患者の血流からの急速なクリアランスから保護され、循環してＴ細胞の腫瘍細胞との結合をもたらし、癌の処置をもたらすことができる。したがって、第１および第２の単量体とＣＩＤ低分子との同時投与は癌の処置をもたらす。概して、ＣＩＤ低分子は非常に短い血清中半減期を有するため、ＣＩＤ低分子の投与は継続されることになる。Ｔ細胞誘導活性がもはや必要とされないかまたは有害な副作用を引き起こしているある時点では、ＣＩＤ低分子の投与は中止され、このことは、二量体解離とそれに続くＴ細胞エンゲージャードメインを有する第２の単量体の患者からのクリアランスとをもたらす。

【図30A】図３０Ａは、ＨＳＡ ＡＢＤに連結された第１のＣＩＤドメイン［単一ドメイン抗ＨＳＡ抗体に連結されたＢｃｌ－２（Ｃ１１５８Ａ）］で構成される単量体のアミノ酸配列を示す。図３０Ｂは、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９の存在下における上記単量体の第２のＣＩＤドメインＡＺ２１に対する結合曲線を示す。

【図30B】図３０Ａは、ＨＳＡ ＡＢＤに連結された第１のＣＩＤドメイン［単一ドメイン抗ＨＳＡ抗体に連結されたＢｃｌ－２（Ｃ１１５８Ａ）］で構成される単量体のアミノ酸配列を示す。図３０Ｂは、ＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９の存在下における上記単量体の第２のＣＩＤドメインＡＺ２１に対する結合曲線を示す。

【図31A】図３１Ａおよび３１Ｂは、例示的なＨＳＡ結合ドメインのアミノ酸配列を示す。

【図31B】図３１Ａおよび３１Ｂは、例示的なＨＳＡ結合ドメインのアミノ酸配列を示す。

【図32】図３２は、化学誘導二量体形成が低分子による二特異性Ｔ細胞エンゲージャーの半減期の制御を可能にしたことを示す。（Ａ）ＣＩＤに基づく二特異性Ｔ細胞エンゲージャーの半減期延長の概略図。（Ｂ）この研究において使用した治療モジュールおよび半減期延長モジュール。（Ｃ）マウスにおける二特異性Ａｂ５７の血漿消失半減期は、マウスにベネトクラクスを投薬した場合、５倍延長された。^＊＊＊＊：Ｐ≦０．０００１、両側ｔ検定。

【図33】図３３は、化学誘導二量体形成が低分子によるＩＬ－２の半減期の制御を可能にしたことを示す。（Ａ）ＣＩＤに基づくＩＬ－２の半減期延長の概略図。（Ｂ）この研究において使用した治療モジュールおよび半減期延長モジュール。（Ｃ）マウスにおけるサイトカインＩＬ－２の血漿消失半減期は、マウスにベネトクラクスを投薬した場合、１７倍延長された。^＊＊＊＊：Ｐ≦０．０００１、両側ｔ検定。

【発明を実施するための形態】

【0062】

Ａ．概要
本発明は、図面において全体の概要を示したように化学誘導二量体形成（ＣＩＤ）ドメインと結合する低分子の添加（例えば患者への投与）または低分子の除去（例えば投与の停止とそれに続く患者による低分子のクリアランス）によって、治療部分の血清中半減期の調整可能な制御を可能にする。これらの低分子は、図１に示すような二量体の形成を誘導する化学誘導二量体形成化合物（ＣＩＤ、ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉｍｅｒｉｚｅｒ）低分子（ＣＩＤＳＭ）、または図２に示すような二量体を中断する化学阻害二量体形成化合物（ＣＩｎＤ）低分子（ＣＩｎＤＳＭ）のいずれかである。

【0063】

全般的に、本発明は、治療分子をＦｃドメインまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）等の半減期延長部分と会合させることによって治療分子の血清半減期を延長することを対象とする。当技術分野において公知であるように、一般に身体から急速にクリアランスされる生物学的製剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｄｒｕｇ）とＦｃドメインまたはＨＳＡのいずれかとの会合は、製剤の血清中での半減期の延長をもたらす。

【0064】

したがって、図１Ａに概略的に示されるＦｃドメインの半減期延長分子としての使用に関して、本発明の一態様は、適宜ドメインリンカーを介して、Ｆｃドメインを、本明細書では「第１のＣＩＤドメイン」と称される化学誘導二量体形成化合物（ＣＩＤ）の一方に連結させることを伴う。治療部分は、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第２のＣＩＤドメイン」と称されるＣＩＤの他方に連結される。したがって、図１の組成物は全体として３つのタンパク質鎖または単量体、すなわち、第１のＦｃドメイン、ドメインリンカー、および第１のＣＩＤドメインを含む第１の単量体；第２のＦｃドメインを含む第２の単量体、ならびに本明細書では融合タンパク質部分とも称される第３の単量体を有する。ＣＩＤＳＭの添加は、ＣＩＤの２つの部分の会合を誘導し、それによって治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。治療部分が血液から迅速にクリアランスされなければならない場合、ＣＩＤ低分子の投与は停止され、このことは、ＣＩＤの２つの部分の解離、および治療部分のＦｃドメインからの解離を引き起こす。

【0065】

例えば、患者は、本明細書に記載されるＦｃ融合タンパク質と融合タンパク質部分とを含む組成物を投薬され得る。患者はまた、ＣＩＤの２つの部分の二量体形成を誘導する、したがってＦｃ融合タンパク質と融合タンパク質部分とを一緒にして二量体を形成するＣＩＤ低分子を投与され得る。結果として、治療部分はＦｃドメインと直ちに会合し、その血清半減期は延長される。治療部分とＦｃドメインとの会合を維持するために、患者はＣＩＤＳＭを定期的に投薬されてもよく、投薬の頻度は、ＣＩＤＳＭの血清半減期と、ＣＩＤＳＭの第１および第２のＣＩＤドメインに対する結合親和性と、ＣＩＤ複合体（例えばＣＩＤ二量体）の寿命との組合せに依存する。患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者はＣＩＤＳＭの投薬を中止し、このことは、患者におけるＣＩＤＳＭのクリアランス、治療部分のＦｃドメインからの解離、および患者における治療部分のクリアランスを引き起こす。治療部分のクリアランスの速度は、ＣＩＤＳＭの血清半減期と、ＣＩＤ複合体の寿命と、もはやＦｃドメインと会合していない治療部分のクリアランス速度との組合せに依存する。

【0066】

図２Ａ、図３、および図４に概略的に示されるように、本発明の別の態様は、適宜ドメインリンカーを介して、第１のＦｃドメインを、本明細書では「第１のＣＩｎＤドメイン」と称される化学阻害二量体形成化合物（ＣＩｎＤ）の一方に連結させることを伴う。第２の単量体は、第１のＦｃドメインと一緒にヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成する第２のＦｃドメインである。第３の単量体（本明細書では融合タンパク質部分とも称される）は、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第２のＣＩｎＤドメイン」と称されるＣＩｎＤの他方に連結された治療部分を含む。ＣＩｎＤドメインの２つの部分は互いと会合し、二量体を形成して、治療部分とヘテロ二量体Ｆｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。治療部分が血液から迅速にクリアランスされなければならない場合、ＣＩｎＤ低分子が投与され、このことは、ＣＩｎＤの２つの部分の解離を誘導し、それによって治療部分のヘテロ二量体Ｆｃドメインからの解離と患者における治療部分のクリアランスとを可能にする。

【0067】

当業者は、本明細書では「二量体」という用語が２つの文脈において使用されることを理解するだろう。１つの文脈は、一緒になって二量体を形成する第１および第２のＦｃドメイン（例えば、図１、２、および３の場合におけるヘテロ二量体Ｆｃドメイン、ならびに例えば図４の場合におけるホモ二量体Ｆｃドメイン）を指す。第２の文脈は、本発明の第１および第２のＣＩＤドメインを一緒にする本発明のＣＩＤＳＭを使用することによって形成される二量体、ならびに本発明の第１のＣＩｎＤドメインと第２のＣＩｎＤドメインとにより形成される二量体を指す。

【0068】

図２Ａに概略的に示される一部の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、第１のＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する一方の単量体と、第２のＦｃドメイン単独（例えば「空のＦｃドメイン」）を含有する他方の単量体とを有するヘテロ二量体である。第１のＦｃドメインと第２のＦｃドメインとは、例えば本明細書に記載されるヘテロ二量体形成突然変異を組み込むことによってヘテロ二量体形成する。第３の単量体である融合タンパク質部分は、ドメインリンカーを介して本明細書に記載される治療部分に連結された第２のＣＩｎＤドメインを含む。

【0069】

図３に概略的に示される一部の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、第１のＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する一方の単量体を有するヘテロ二量体である。他方のＦｃ単量体は、第１の治療部分に連結された第２のＦｃドメインを含有する。第３の単量体は、ドメインリンカーを用いて第２の治療部分に連結された第２のＣＩｎＤドメインを含む。第１のＦｃドメインと第２のＦｃドメインとは、例えば本明細書に記載されるヘテロ二量体形成突然変異を組み込むことによってヘテロ二量体形成する。第２のＣＩｎＤドメインに連結された第２の治療部分を含む融合タンパク質部分の投与は、ＣＩｎＤドメインの２つの部分の会合を誘導し、第２の治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、その血清半減期を延長する。加えて、このフォーマットは、二特異性の性質を治療部分および第２の治療部分に付与する一方で、同時にそれらの半減期を増加する。

【0070】

図４に示される一部の他の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれが適宜ドメインリンカーを介してＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する２つの同一の単量体を有するホモ二量体である。第２のＣＩｎＤドメインに連結された治療部分を含む融合タンパク質部分の投与は、ＣＩｎＤドメインの２つの部分の会合を誘導し、２つの治療部分と単一のＦｃ二量体との会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。このフォーマットは、治療部分の化学量論および結合価（ｖａｌａｎｃｉｎｇ）を増加する一方で、同時にその半減期を延長する。

【0071】

一部の実施形態では、本明細書に記載される本発明の組成物の投与は、治療部分の血清半減期を少なくとも約２日、少なくとも約４、少なくとも約６、少なくとも約８日、少なくとも約１０日、少なくとも約１２日、または少なくとも約１４日に延長する。これは、相対的にはるかに短い血清消失半減期を有する治療部分単独の投与と対照的である。治療部分がもはや必要ではない場合、治療部分は、短寿命ＣＩＤ低分子の除去（例えば、投与の停止とそれに続く患者によるＣＩＤ低分子のクリアランス）またはＣＩｎＤ低分子の添加（例えば患者への投与）によって急速に除去することができる。

【0072】

ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の半減期延長部分としての使用に関して、これは図２９に概略的に示される。図２９に概略的に示されるように、Ｔ細胞エンゲージャードメインは、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第１のＣＩＤドメイン」と称される化学誘導二量体形成化合物（ＣＩＤ）の一方に連結される。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）結合ドメインは、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第２のＣＩＤドメイン」と称されるＣＩＤの他方に連結される。ＨＳＡ結合ドメインはＨＳＡに恒常的に結合することができる。低分子の添加は、ＣＩＤの２つの部分の会合を誘導し、それによって２つの単量体を一緒にし、Ｔ細胞エンゲージャードメインとＨＳＡとの会合、およびＴ細胞エンゲージャードメインの血清半減期の延長を可能にする。Ｔ細胞エンゲージャードメインが血液から迅速にクリアランスされなければならない場合、ＣＩＤ低分子の投与は停止され、このことは、ＣＩＤの２つの部分の解離、およびＴ細胞エンゲージャードメインのＨＳＡからの解離を引き起こす。

【0073】

例えば、患者は、本明細書に記載される第１および第２の単量体を含む組成物を投薬され得る。患者はまた、ＣＩＤの２つの部分の二量体形成を誘導する、したがって２つの単量体を一緒にして二量体を形成するＣＩＤ低分子を投与され得る。結果として、Ｔ細胞エンゲージャードメインはＨＳＡと直ちに会合し、その血清半減期は延長される。Ｔ細胞エンゲージャードメインとＨＳＡとの会合を維持するために、患者はＣＩＤ低分子を定期的に投薬されてもよく、投薬の頻度は、ＣＩＤ低分子の血清半減期と、ＣＩＤ低分子の第１および第２のＣＩＤドメインに対する結合親和性と、ＣＩＤ複合体（例えばＣＩＤ二量体）の寿命との組合せに依存する。患者が、例えば安全性に対する懸念のために、Ｔ細胞エンゲージャーを迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は低分子の投薬を中止し、このことは、患者における低分子のクリアランス、Ｔ細胞エンゲージャーのＨＳＡからの解離、および患者におけるＴ細胞エンゲージャーのクリアランスを引き起こす。Ｔ細胞エンゲージャーのクリアランスの速度は、低分子薬の血清半減期と、ＣＩＤ複合体の寿命と、もはやＨＳＡと会合していないＴ細胞エンゲージャーのクリアランス速度との組合せに依存する。

【0074】

一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物の投与は、Ｔ細胞エンゲージャーの血清消失半減期を少なくとも約２日、少なくとも約４、少なくとも約６、少なくとも約８日、少なくとも約１０日、少なくとも約１２日、または少なくとも約１４日に延長する。これは、相対的にはるかに短い血清消失半減期を有するＴ細胞エンゲージャー単独の投与と対照的である。例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３二特異性ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ融合分子であるＢｌｉｎｃｙｔｏ（登録商標）は、短い消失血清半減期のために連続的な静脈内注入を必要とする。

【0075】

本明細書に記載される組成物の投与は、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長することができるだけでなく、Ｔ細胞エンゲージャーが必要ではない場合に、低分子の投薬を中止することによってＴ細胞エンゲージャーの急速な除去を可能にすることもできる。

【0076】

Ｂ．定義
本出願がより完全に理解されるようにするため、いくつかの定義が以下に記載される。そのような定義は文法上の同義語を包含することが意図される。

【0077】

別段の説明がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

【0078】

受託番号：米国立衛生研究所によって維持されているＮＣＢＩデータベース（米国立生物工学情報センター）における様々な核酸およびアミノ酸配列に割り当てられた参照番号。本明細書において列挙される受託番号は、本出願の出願日時点でデータベースに提供されている通りに参照により本明細書に組み込まれる。

【0079】

「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」という用語は、本明細書では、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書において論じられる標的抗原と特異的に結合する１組の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を意味する。したがって、「ＨＳＡ抗原結合ドメイン」は本明細書において概説されるヒト血清アルブミンと結合する。当技術分野において公知であるように、これらのＣＤＲは一般に、第１の組の可変重ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲまたはＶＨＣＤＲ）および第２の組の可変軽ＣＤＲ（ｖｌＣＤＲまたはＶＬＣＤＲ）として存在し、それぞれは３つのＣＤＲ、すなわち、重鎖はｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖はｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは可変重および可変軽ドメインにそれぞれ存在し、一緒になってＦｖ領域を形成する。したがって、一部の場合では、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲは可変重および可変軽鎖によって与えられる。例えば、ｓｃＦｖフォーマットでは、ｖｈおよびｖｌドメインは、一般に本明細書において概説されるリンカーの使用により共有結合して単一ポリペプチド配列となり、これは（Ｎ末端から）ｖｈ－リンカー－ｖｌまたはｖｌ－リンカー－ｖｈのいずれかの可能性があり、一般に前者が好ましい（使用されるフォーマットに応じて、各側に必要に応じたドメインリンカーを含む）。一部の場合では、リンカーは本明細書に記載されるドメインリンカーである。

【0080】

加えて、一部の場合では、本発明において使用されるＡＢＤは単一ドメインＡＢＤ（「ｓｄＡＢＤ」）であり得る。「単一ドメインＦｖ」、「ｓｄＦｖ」、または「ｓｄＡＢＤ」とは、本明細書では、一般にラクダ科抗体技術に基づく３つのＣＤＲのみを有する抗原結合ドメインを意味する。Protein Engineering 9(7):1129-35 (1994)、Rev Mol Biotech 74:277-302 (2001)、Ann Rev Biochem 82:775-97 (2013)を参照されたい。これらは当技術分野において「ＶＨＨ」ドメインと称されることがある。

【0081】

当業者によって理解されるように、ＣＤＲの正確な番号付けおよび配置は種々の番号付けシステムの間で異なり得る。しかしながら、可変重および／または可変軽配列の開示には関連する（固有の）ＣＤＲの開示が含まれることが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示はｖｈＣＤＲ（例えばｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示はｖｌＣＤＲ（例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。

【0082】

ＣＤＲ番号付けの有用な比較は以下の通りであり、Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)を参照されたい。本明細書全体にわたって、可変ドメインの残基に言及する場合はＫａｂａｔ番号付けシステムが全般に使用され（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７および重鎖可変領域の残基１～１１３）、Ｆｃ領域についてはＥＵ番号付けシステムが使用される［例えば、Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)］。

【0083】

【表1】

【0084】

「ドメインリンカー」または文法上の同義語は、本明細書では、タンパク質の異なるドメインを連結することにおいて使用されるリンカー等の、２つのタンパク質ドメインを接続して一つにするリンカーを意味する。一般に、各ドメインが生物学的機能を保持することを可能にするのに十分な長さと柔軟性とを有する２つのドメインの組換え結合を可能にする組換え技法によって生成される、従来のペプチド結合を含むいくつかの好適なリンカーが使用可能である。

【0085】

「エピトープ」とは、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特定の抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープはアミノ酸または糖側鎖等の分子の分類であり、通例、特異的な構造特徴および特異的な電荷特徴を有する。単一の抗原は２つ以上のエピトープを有し得る。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性成分とも呼ばれる）、および結合に直接は関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的に抗原結合するペプチドによって効果的にブロックされる、換言すれば、アミノ酸残基が特異的に抗原結合するペプチドのフットプリント内に存在するアミノ酸残基を含み得る。エピトープは構造的であっても線状であってもよい。構造的エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に並置されたアミノ酸によって作製される。線状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接アミノ酸残基によって作製されるエピトープである。構造的エピトープと非構造的エピトープとは、変性溶媒の存在下では後者ではなく前者への結合が喪失するという点において識別することができる。

【0086】

「修飾」とは、本明細書では、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入、および／もしくは欠失、またはタンパク質に化学的に連結する部分に対する変更を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合する炭水化物またはＰＥＧ構造の変更であってもよい。「アミノ酸修飾」とは、本明細書では、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。説明を明確にするために、別段の指摘がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えばＤＮＡおよびＲＮＡにおけるコドンを有する２０種類のアミノ酸に対するものとする。

【0087】

「アミノ酸置換」または「置換」とは、本明細書では、親ポリペプチド配列における特定の位置のアミノ酸の異なるアミノ酸との置換えを意味する。説明を明確にするために、核酸コード配列を変化させるが開始アミノ酸を変化させない［例えばＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（依然としてアルギニンをコードする）に入れ替えて宿主生物発現レベルを増加させる］ように操作されたタンパク質は「アミノ酸置換」ではない、すなわち、同じタンパク質をコードする新たな遺伝子の作出にもかかわらず、タンパク質が開始した特定の位置において同じアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。

【0088】

「アミノ酸挿入」または「挿入」とは、本明細書で使用される場合、親ポリペプチド配列における特定の位置でのアミノ酸配列の付加を意味する。例えば、－２３３Ｅまたは２３３Ｅは、２３３位の後ろかつ２３４位の前でのグルタミン酸の挿入を示す。加えて、－２３３ＡＤＥまたはＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後ろかつ２３４位の前でのＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。

【0089】

「アミノ酸欠失」または「欠失」とは、本明細書で使用される場合、親ポリペプチド配列における特定の位置のアミノ酸配列の除去を意味する。例えば、Ｅ２３３－またはＥ２３３＃、Ｅ２３３（）またはＥ２３３ｄｅｌは、２３３位におけるグルタミン酸の欠失を示す。加えて、ＥＤＡ２３３－またはＥＤＡ２３３＃は、２３３位から開始する配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。

【0090】

「変異体タンパク質」もしくは「タンパク質変異体」、または「変異体」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのアミノ酸修飾のために親タンパク質のものと異なるタンパク質を意味する。タンパク質変異体は、タンパク質それ自体、タンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ配列を指すことができる。

【0091】

本明細書で使用される場合、本明細書における「タンパク質」とは、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。ペプチジル基は天然に存在するアミノ酸およびペプチド結合を含む。加えて、ポリペプチドは、１つまたは複数の側鎖または末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、循環置換、環化、他の分子に対するリンカー、タンパク質またはタンパク質ドメインとの融合、およびペプチドタグまたは標識の付加を含み得る。

【0092】

本明細書で使用される場合、「ドメイン」とは、機能することができ、残りのタンパク質鎖から独立して存在することができる、タンパク質ドメイン、所与のタンパク質配列の一部、および三次構造を意味する。各ドメインは、緻密な三次元構造を形成し、多くの場合独立して安定で、フォールディングされ得る。ドメインは長さが可変であり、少なくとも１０アミノ酸長である。独立して安定であるため、ドメインは、遺伝子操作によってあるタンパク質と別のタンパク質との間で「交換」されてキメラタンパク質を作製することができる。

【0093】

「残基」とは、本明細書で使用される場合、タンパク質およびその関連するアミノ酸同一性における位置を意味する。

【0094】

「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」とは、本明細書で使用される場合、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、単離されているこの領域、または全長抗体もしくは抗体断片の文脈におけるこの領域を指すことができる。

【0095】

「Ｆｖ」または「Ｆｖ断片」または「Ｆｖ領域」とは、本明細書で使用される場合、単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。当業者によって理解されるように、これらは２つのドメイン、すなわち可変重ドメインおよび可変軽ドメインによって構成される。

【0096】

「アミノ酸」および「アミノ酸同一性」とは、本明細書で使用される場合、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされる２０種類の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。

【0097】

「親ポリペプチド」とは、本明細書で使用される場合、その後変異体を生成するために修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドであっても、天然に存在するポリペプチドの変異体または操作体であってもよい。親ポリペプチドは、ポリペプチドそれ自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指すことができる。したがって、「親免疫グロブリン」とは、本明細書で使用される場合、変異体を生成するために修飾される未修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、「親抗体」とは、本明細書で使用される場合、変異体抗体を生成するために修飾される未修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説される商業的な組換え産生抗体が含まれることが注意されるべきである。

【0098】

「位置」とは、本明細書で使用される場合、タンパク質の配列における場所を意味する。位置は、逐次に、または確立したフォーマット、例えば抗体番号付けのためのＥＵインデックスに従って番号付けを行うことができる。

【0099】

「標的抗原」とは、本明細書で使用される場合、所与の抗体の可変領域によって特異的に結合される分子を意味する。本例では、例えば、本明細書における目的の標的抗原はＣＤ１９タンパク質を含む腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であり得る。したがって、「抗ＣＤ１９結合ドメイン」は抗原がＣＤ１９である抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）である。さらなる標的は以下に概説される。

【0100】

「標的細胞」とは、本明細書で使用される場合、標的抗原を発現する細胞を意味する。

【0101】

「可変ドメイン」とは、本明細書で使用される場合、カッパ、ラムダ、および重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するＶκ（Ｖ．カッパ）、Ｖλ（Ｖ．ラムダ）、および／またはＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つまたは複数のＩｇドメインを含む免疫グロブリンの領域を意味する。したがって、「可変重ドメイン」は（ＶＨ）ＦＲ１－ｖｈＣＤＲ１－（ＶＨ）ＦＲ２－ｖｈＣＤＲ２－（ＶＨ）ＦＲ３－ｖｈＣＤＲ３－（ＶＨ）ＦＲ４を含み、「可変軽ドメイン」は（ＶＬ）ＦＲ１－ｖｌＣＤＲ１－（ＶＬ）ＦＲ２－ｖｌＣＤＲ２－（ＶＬ）ＦＲ３－ｖｌＣＤＲ３－（ＶＬ）ＦＲ４を含む。

【0102】

「野生型またはＷＴ」とは、本明細書では、アレル変異を含む天然に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は意図的には修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。

【0103】

本発明の抗体は全般に組換えである。「組換え」とは、抗体が外来宿主細胞において組換え核酸技法を使用して生成されることを意味する。

【0104】

「特異的結合」、または特定の抗原もしくはエピトープ「に特異的に結合する」もしくは「に特異的」であるとは、非特異的相互作用と測定可能なほど異なる結合を意味する。特異的結合は例えば、分子の結合を、一般には結合活性を有しない類似した構造の分子である対照分子の結合と比較して決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合によって決定することができる。

【0105】

「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、ＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から取得され、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体に対するＫＤ値は、当技術分野において十分に確立されている方法を使用して決定することができる。一部の実施形態では、抗体のＫＤを決定するための方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システム等のバイオセンサーシステムを使用することによって行われる。一部の実施形態では、抗体のＫＤは、バイオレイヤー干渉法によって決定される。一部の実施形態では、ＫＤは、抗原発現細胞を用いるフローサイトメトリーを使用して測定される。一部の実施形態では、ＫＤ値は、抗原を固定化して測定される。他の実施形態では、ＫＤ値は、抗体（例えば、親マウス抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体変異体）を固定化して測定される。ある特定の実施形態では、ＫＤ値は、二価結合様式において測定される。他の実施形態では、ＫＤ値は、一価結合様式において測定される。特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合は、例えば抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ、少なくとも約１０－１３Ｍ、または少なくとも約１０－１４ＭのＫＤを有する抗体によって呈され得る。典型的には、抗原と特異的に結合する抗体は、対照分子に対して抗原またはエピトープを基準として２０、５０、１００、５００、１０００、５，０００、１０，０００倍、またはそれよりも大きいＫＤを有し得る。

【0106】

タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、必要な場合はギャップを導入して最大の配列同一性パーセントを達成した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として見なさない、特定の（親）配列におけるアミノ酸残基と同一の候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的としたアラインメントは、当技術分野の技術の範囲内にある様々な方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたる最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するのに適切なパラメーターを決定することができる。１つの特定のプログラムは、これにより参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６０２４４５２５号明細書の［０２７９］～［０２８０］段落において概説されているＡＬＩＧＮ－２プログラムである。核酸配列に対する別の近似アラインメントは、Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics, 2:482-489 (1981)の局所相同性アルゴリズムによって提供される。このアルゴリズムは、Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M.O. Dayhoff ed., 5 suppl. 3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USAによって開発され、Gribskov, Nucl. Acids Res. 14(6):6745-6763 (1986)によって正規化されたスコア行列を使用することによってアミノ酸配列に適用することができる。

【0107】

配列の同一性パーセントを決定するアルゴリズムのインプリメンテーションの一例は、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）によって「ＢｅｓｔＦｉｔ」ユーティリティーアプリケーションにおいて提供されている。この方法の初期パラメーターは、Wisconsin Sequence Analysis Package Program Manual, Version 8 (1995)（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩから入手可能）に記載されている。本発明の文脈において同一性パーセントを確立する別の方法は、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｃｏｌｌｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｎｅ Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）によって配布されている、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈが著作権を有するプログラムのＭＰＳＲＣＨパッケージを使用することである。この一式のパッケージから、スコア表に関して初期パラメーターが使用される（例えば、ギャップオープンペナルティが１２、ギャップ伸長ペナルティが１、およびギャップが６）、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムが用いられ得る。生成されたデータから、「一致」値は「配列同一性」を反映する。配列間の同一性または類似性パーセントを算出するのに好適な他のプログラムは一般に当技術分野において公知であり、例えば、別のアラインメントプログラムは初期パラメーターを用いて使用されるＢＬＡＳＴである。例えば、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰは以下の初期パラメーターを使用して使用することができる：遺伝暗号＝標準；フィルター＝なし；鎖＝両方；カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記載＝５０配列；並べ替え＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；データベース＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ，ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋Ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔｅｉｎ＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、http:// in front of blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgiを入力することによって特定されるインターネットアドレスにおいて見出すことができる。

【0108】

本発明のアミノ酸配列（「発明配列」）と親アミノ酸配列との間の同一性の程度は、２つの配列のアラインメントにおける正確な一致の数を「発明配列」の長さまたは親配列の長さのいずれか短い方で割ることによって算出される。結果は同一性パーセントにおいて表される。

【0109】

「処置」、「処置すること」、「処置する」等の用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を取得することを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に防止するという点、または疾患もしくはその症状の可能性を低下させるという点において予防的であり得る、ならびに／あるいは疾患および／または疾患に起因する有害作用の部分的または完全な治癒という点において治療的であり得る。「処置」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の処置を包含し、（ａ）疾患に罹りやすくなっていると考えられるがそれを有すると未だ診断されていない対象において疾患が生じることを防止すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発生または進行を停止すること、ならびに（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち疾患の退縮を引き起こすこと、および／または１つもしくは複数の疾患症状を軽減することを含む。「処置」はまた、疾患または状態の非存在下でも薬理学的効果を実現するための薬剤のデリバリーを包含することも意図される。例えば、「処置」は、例えばワクチンの場合、疾患状態の非存在下で免疫応答を誘発するかまたは免疫を付与することができる組成物のデリバリーを包含する。

【0110】

組成物の「有効量」または「治療有効量」には、組成物が投与される対象に有益な効果をもたらすのに十分な組成物の量が含まれる。デリバリー媒体の「有効量」には、組成物と効果的に結合するかまたは組成物を効果的に送達するのに十分な量が含まれる。

【0111】

「核酸」という用語には、一本鎖、二本鎖、オリゴヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む任意の形態の２つ以上のヌクレオチドを有するＲＮＡまたはＤＮＡ分子が含まれる。「ヌクレオチド配列」という用語には、一本鎖形態の核酸中のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの順序が含まれる。

【0112】

「ベクター」は、遺伝子配列を標的細胞に移入することができる。典型的には、「ベクターコンストラクト」、「発現ベクター」、および「遺伝子移入ベクター」とは、目的の遺伝子の発現を導くことができ、遺伝子配列を標的細胞に移入することができる任意の核酸コンストラクトを意味し、移入は、ベクターの全部もしくは一部のゲノム組入れ、または染色体外エレメントとしてのベクターの一過性もしくは遺伝性の維持によって遂行することができる。したがって、この用語には、クローニングおよび発現媒体、ならびに組入れベクターが含まれる。

【0113】

「腫瘍関連抗原」または「ＴＡＡ」という用語には、腫瘍細胞上で産生される任意の抗原性物質が含まれる。腫瘍関連抗原としては、腫瘍細胞上にのみ存在し、非腫瘍細胞上には存在しない抗原、および一部の腫瘍細胞上に存在し、一部の正常細胞上にも存在する抗原が挙げられる。

【0114】

本明細書で使用される場合、「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」とは、可変重ドメインと可変軽ドメインとを含む抗体断片を指し、ここで、可変重ドメインと可変軽ドメインとは短い柔軟性ポリペプチドリンカーを介して連続して連結され、単一ポリペプチド鎖として発現することができ、ｓｃＦｖは、それが由来する無傷抗体の特異性を保持する。ｓｃＦｖの可変重ドメインおよび可変軽ドメインは、例えば以下の配向のいずれかであり得る：可変軽ドメイン－ｓｃＦｖリンカー－可変重ドメイン、または可変重ドメイン－ｓｃＦｖリンカー－可変軽ドメイン。

【0115】

「ＩｇＧサブクラス修飾」または「アイソタイプ修飾」とは、本明細書で使用される場合、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、アラインメントされた異なるＩｇＧアイソタイプにおける対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧ１はＥＵ２９６位にチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むため、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換はＩｇＧサブクラス修飾と見なされる。同様に、ＩｇＧ１は２４１位にプロリンを有し、ＩｇＧ４はそこにセリンを有するため、Ｓ２４１Ｐを有するＩｇＧ４分子はＩｇＧサブクラス修飾と見なされる。本明細書においてサブクラス修飾はアミノ酸置換と見なされることに留意されたい。

【0116】

「天然に存在しない修飾」とは、本明細書でＩｇＧドメインに関して使用される場合、アイソタイプではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧはいずれも４３４位にセリンを含まないため、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（またはそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは天然に存在しない修飾と見なされる。

【0117】

「エフェクター機能」とは、本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能としては、これらに限定されないが、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣが挙げられる。

【0118】

「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」とは、本明細書で使用される場合、一部の事例では第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）の全てまたはその一部を除外し、一部の場合ではヒンジの全てまたは一部を含んでもよい、抗体の定常領域を含むポリペプチドを意味する。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣＨ２およびＣＨ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびに適宜、ＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）との間のヒンジ領域の全てまたは一部を含む。したがって、一部の場合では、Ｆｃドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＨ２－ＣＨ３、またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来のＦｃドメインであり、ＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は多くの実施形態における特定の用途を提供する。加えて、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、ある特定の実施形態では、ヒンジはＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。さらに、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである一部の実施形態では、ヒンジはＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域の境界は可変であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通例、番号付けがＫａｂａｔのＥＵインデックスに従っている残基Ｅ２１６、Ｃ２２６、またはＡ２３１をカルボキシル末端に含むように定義される。したがって、ＩｇＧの文脈では、「ＣＨ」ドメインは以下の通りである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って１１８～２１５位を指す。「ヒンジ」は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って２１６～２３０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って２３１～３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従って３４１～４４７位を指す。一部の実施形態では、以下により完全に記載されるように、アミノ酸修飾は、Ｆｃ領域に対して、例えば１つもしくは複数のＦｃγＲまたはＦｃＲｎへの結合を変更するために行われる。

【0119】

「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、または「ＦｃガンマＲ」とは、本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域と結合し、ＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質のファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトでは、このファミリーとしては、これらに限定されないが、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、およびＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１およびＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、およびＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８およびＦ１５８を含む）およびＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（全体が参照により組み込まれるJefferis et al., 2002, Immunol Lett 82:57-65）、ならびに任意の未知のヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが挙げられる。一部の場合では、本明細書において概説されるように、１つまたは複数のＦｃγＲ受容体への結合は減少または切断される。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の減少はＡＤＣＣを低減し、一部の場合では、ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂへの結合の減少は所望される。

【0120】

「ＦｃＲｎ」または「胎児性Ｆｃ受容体」とは、本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域と結合し、少なくとも部分的にはＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むがこれらに限定されない任意の生物由来であり得る。当技術分野において公知であるように、機能性ＦｃＲｎタンパク質は、多くの場合重鎖および軽鎖と称される２つのポリペプチドを含む。軽鎖はベータ－２－ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされる。本明細書において別段の指摘がない限り、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とベータ－２－ミクログロブリンとの複合体を指す。本明細書において論じられるように、ＦｃＲｎ受容体への結合は望ましく、一部の場合では、Ｆｃ変異体はＦｃＲｎ受容体への結合を増加するために導入することができる。

【0121】

「Ｆｃ変異体」または「変異体Ｆｃ」とは、本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。本発明のＦｃ変異体は、それらを構成するアミノ酸修飾によって定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓまたは４３４Ｓは、番号付けがＥＵインデックスに従っている、親Ｆｃポリペプチドと比べて４３４位にセリンに代わる置換を有するＦｃ変異体である。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドと比べて置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓを有するＦｃ変異体を定義する。野生型アミノ酸の正体は明記されなくてもよく、その場合、前述の変異体は４２８Ｌ／４３４Ｓと称される。置換が提供される順番は任意である、すなわち、例えば４２８Ｌ／４３４Ｓは４３４Ｓ／４２８Ｌと同じＦｃ変異体であり、他も同様であることに留意されたい。抗体または誘導体およびそれらの断片（例えば、Ｆｃドメイン）に関する、本明細書において論じられる全ての位置に関して、別段の指摘がない限り、アミノ酸位番号付けはＥＵインデックスに従っている。「ＥＵインデックス」または「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」または「ＥＵ番号付け」スキームとは、ＥＵ抗体の番号付けを指す（全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれるEdelman et al., 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85）。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。

【0122】

「融合タンパク質」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも２つのタンパク質またはタンパク質ドメインの共有的接続を意味する。融合タンパク質は人工配列、例えば、本明細書に記載されるドメインリンカー、Ｆｃドメイン（例えば、変異体Ｆｃドメイン）、ＣＩＤまたはＣＩｎＤドメインを含み得る。「Ｆｃ融合タンパク質」とは、本明細書では、全般に１つまたは複数の異なるタンパク質ドメインに連結された（本明細書に記載されるドメインリンカーを介してもよい）Ｆｃ領域を含むタンパク質を意味する。一部の事例では、２つのＦｃ融合単量体は、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成することができる。一部の実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体はＦｃドメイン単独（例えば、「空のＦｃドメイン」）を含み、他方の単量体は、本明細書において概説されるＣＩＤドメインまたはＣＩｎＤドメインを含むＦｃ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体はＣＩＤドメインまたはＣＩｎＤドメインに連結されたＦｃドメインを含み、他方の単量体は治療部分に連結されたＦｃドメインを含む。一部の他の実施形態では、第１の単量体と第２の単量体の両方は、ＦｃドメインおよびＣＩｎＤドメインを含むＦｃ融合タンパク質である。

【0123】

「融合した」または「共有的に連結された」とは、本明細書では、成分（例えば、ＣＩＤドメインとＦｃドメインと）が、本明細書において概説されるように、ドメインリンカーを介して直接または間接的にペプチド結合によって連結していることを意味する。

【0124】

「重定常領域」とは、本明細書では、ＩｇＧ抗体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を意味する。

【0125】

「軽定常領域」とは、カッパまたはラムダ由来のＣＬドメインを意味する。

【0126】

発明の詳細な説明
当業界で理解されるように、本発明の組成物は、種々のコンフォメーションで本発明の成分を連結する、様々な構成を採ってもよい。一般に、本明細書で概略されるように、本発明の組成物は、２つのメカニズムのうちの１つに依拠する：いずれかの単量体成分が、機能のために低分子と一緒に保持されると共に、低分子の除去が、単量体成分の解離およびその後の患者からのクリアランスを引き起こす。これらの実施形態は、ＣＩＤ低分子に依拠し、図１に一般的に描写される。あるいは、本発明の組成物は、低分子の存在下では自己会合するが、低分子の添加によって解離する；これらの実施形態は、ＣＩｎＤ低分子に依拠し、図２、図３および図４に一般的に描写される。

【0127】

これらのシステムは、ＦｃドメインまたはＨＳＡのいずれかを使用することによって治療部分の半減期を増加させるために使用され、両方とも、それらが結合する分子の血清半減期を増加させることが当業界で周知である。ＣＩＤドメインおよび低分子（ＣＩＤＳＭ）を使用することによって、ＦｃドメインまたはＨＳＡドメインと、治療部分との会合が制御される：低分子の存在下では、ＣＩＤドメインは会合し、かくして、半減期延長部分を、治療部分を含有する組成物中に組み込む。ＣＩＤＳＭが除去される（または最早患者に投与されない）場合、２つの「半分」の会合は停止し、治療部分は迅速にクリアランスされる。

【0128】

Ａ．ＣＩＤを含む組成物
本発明は、患者の血清中のＴ細胞エンゲージャードメインの半減期の時間的制御のための組成物および方法を提供する。本明細書で概略されるように、組成物は、本明細書に記載のように、特定の方法で会合した、様々な異なる成分を含む。一般に、本発明の組成物は、一般的には、ＣＩＤ低分子の存在下で非共有的に一緒になる、第１および第２の単量体を含む。組成物の種々の実施形態は、本明細書に記載される。

【0129】

したがって、本発明の一態様は、図１Ａに一般的に描写されるように、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および融合タンパク質部分を含む組成物を含む。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第１および第２の単量体によって融合される。第１の単量体は、適宜、ドメインリンカーによって、第１のＦｃドメインに共有的に連結されたＣＩＤドメインの一方の半分（本明細書では「第１のＣＩＤドメイン」と称される）を含む。一部の実施形態では、第１の単量体は、ＮからＣ末端に向かって、第１のＣＩＤドメイン－ドメインリンカー－Ｆｃドメインを含み、さらなる実施形態では、ＮからＣ末端の順序は、Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－第１のＣＩＤドメインである。第２の単量体は、空のＦｃドメインを含む。融合タンパク質部分は、適宜、ドメインリンカーによって、本明細書では「第２のＣＩＤドメイン」と称される、ＣＩＤの他方の半分に共有的に連結された治療部分を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質部分は、ＮからＣ末端に向かって、第２のＣＩＤドメイン－ドメインリンカー－治療部分を含み、さらなる実施形態では、ＮからＣ末端の順序は、治療部分－ドメインリンカー－第２のＣＩＤドメインである。ＣＩＤ低分子の添加は、ＣＩＤの２つの半分の会合を誘導し、それによって、治療部分と、Ｆｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長させる。治療部分が血液から迅速にクリアランスされる必要がある事象では、ＣＩＤ低分子の投与が停止されると、ＣＩＤの２つの半分の解離およびＦｃドメインからの治療部分の解離をもたらす。組成物の種々の実施形態は、本明細書に記載される。

【0130】

１．第１の単量体
当業者であれば理解できるように、本発明の組成物は、異なる機能を有するいくつかの異なる融合タンパク質を含む。

【0131】

一部の実施形態では、本発明は、半減期延長部分としてＨＳＡを利用し、図２９に一般的に描写されるように、第１のＣＩＤドメイン、ドメインリンカーおよびＨＳＡ結合ドメインを含む第１の単量体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、第１の単量体は、ＮからＣ末端に向かって、第１のＣＩＤドメイン－ドメインリンカー－ＨＳＡ結合ドメインを含み、さらなる実施形態では、ＮからＣ末端の順序は、ＨＳＡ結合ドメイン－ドメインリンカー－ＣＩＤドメインである。

【0132】

一部の実施形態では、本発明の第１の単量体は、半減期延長部分としてＦｃドメインを利用し、本明細書に概略されるような様々な構成の、３つの成分、ＣＩＤドメイン、ドメインリンカー、およびＦｃドメインを含む。

【0133】

ａ．ＣＩＤドメイン
化学誘導性二量体化は、２つのタンパク質が、非共有的に会合するか、または二量体化剤の存在下でのみ結合する生物学的メカニズムである。本発明では、二量体化剤は、「化学誘導性二量体化低分子」または「ＣＩＤ低分子」または「ＣＩＤＳＭ」と称される。

【0134】

本発明では、ＣＩＤドメインは、ＣＩＤＳＭの存在下で会合する対を形成する。当業者であれば理解できるように、一部のＣＩＤ対は同一であり、例えば、ＣＩＤドメインは両方とも同じであり、ＣＩＤＳＭによって一緒になる。他の実施形態では、ＣＩＤ対は、ＣＩＤＳＭによって一緒になる２つの異なるＣＩＤドメインから構成される。

【0135】

本発明の一部の実施形態では、ＣＩＤ対は、ＣＩＤＳＭの天然に存在する結合パートナーに由来する。例えば、ＣＩＤは、２つのＦＫＢＰの半分から構成され、ＦＫ１０１２の存在下で二量体化する［Fegan, A et al., Chemical Reviews. 110 (6): 3315-36を参照されたい］；ＣＩＤは、２つの変異体ＦＫＢＰの半分から構成され、リミドゥシドの存在下で二量体化する［Clackson T et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 95(18):10437-42を参照されたい］；ＣＩＤの一方の半分はＦＫＢＰであり、ＣＩＤの他方の半分はカルシニューリンであり、ＦＫ５０６の存在下で二量体化する［Ho, SN et al., Nature. 382 (6594): 822-6］；ＣＩＤの一方の半分はＦＫＢＰであり、ＣＩＤの他方の半分はＣｙＰ－Ｆａｓであり、ＦＫＣｓＡの存在下で二量体化する［Belshaw, PJ et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 93(10): 4604-7］；ＣＩＤの一方の半分はＦＫＢＰであり、ＣＩＤの他方の半分はＦＲＢであり、ラパマイシンの存在下で二量体化する［Rivera, VM et al., Nature Medicine. 2 (9): 1028-32］；ＣＩＤの一方の半分は変異体ＦＫＢＰであり、ＣＩＤの他方の半分は変異体ＦＲＢであり、ラパマイシンアナログの存在下で二量体化する（J. Henri Bayle et al., Chemistry and Biology Vol 13, Issue 1, page 99-107）；ＣＩＤの一方の半分はＧｙｒＢであり、ＣＩＤの他方の半分はＧｙｒＢであり、クーママイシンの存在下で二量体化する［Farrar, MA et al., Nature. 383 (6596): 178-81］；ＣＩＤの一方の半分はＧＡＩであり、ＣＩＤの他方の半分はＧＩＤ１であり、ジベレリンの存在下で二量体化する［Miyamoto, T et al., Nature Chemical Biology. 8 (5): 465-70］；ＣＩＤの一方の半分はＳＮＡＰタグであり、ＣＩＤの他方の半分はＨａｌｏＴａｇであり、ＨａＸＳの存在下で二量体化する［Erhart, D et al., Chemistry and Biology. 20 (4): 549-57］；およびＣＩＤの一方の半分はｅＤＨＦＲであり、ＣＩＤの他方の半分はＨａｌｏＴａｇであり、ＴＭＰタグの存在下で二量体化する［Ballister, E et al., Nature Communications. 5 (5475)］。

【0136】

本発明の一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＣＩＤ低分子の天然に存在する結合パートナーであり、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインと、ＣＩＤＳＭとの間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離低分子に結合しない、抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）である。例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／２１３８４８に見出すことができる。この文脈におけるこの第２のＣＩＤドメインはまた、「ＣＩＤ－ＡＢＤ」；すなわち、第１のＣＩＤドメインおよびＣＩＤＳＭに結合する抗原結合ドメインと称される。

【0137】

例えば、一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、Ｂｃｌ－ｘＬのＡＢＴ－７３７結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－７３７である。第２のＣＩＤドメインは、図１１に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、Ｂｃｌ－ｘＬのＡＢＴ－７３７結合ドメインは、配列番号３１４のアミノ酸配列を含む。

【0138】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＢＣｌ－２またはＢＣｌ－２（Ｃ１５８Ａ）のＡＢＴ－１９９結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－１９９（ベネトクラクス）である。第２のＣＩＤドメインは、図１２Ａ～図１２Ｂに示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離低分子に結合しない。一部の実施形態では、ＢＣｌ－２またはＢＣｌ－２（Ｃ１５８Ａ）のＡＢＴ－１９９結合ドメインは、配列番号３１５のアミノ酸配列を含む。

【0139】

一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＢＣＬ－２のＡＢＴ－２６３結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＡＢＴ－２６３である。第２のＣＩＤドメインは、図１３に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ＢＣｌ－２のＡＢＴ－２６３結合ドメインは、配列番号３１５のアミノ酸配列を含む。

【0140】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ｃＩＡＰｌのＬＣＬ１６１結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＬＣＬ１６１である。第２のＣＩＤドメインは、図１４に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ｃＩＡＰｌのＬＣＬ１６１結合ドメインは、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む。

【0141】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ｃＩＡＰｌのＧＤＣ－０１５２結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＧＤＣ－０１５２である。第２のＣＩＤドメインは、図１５に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ｃＩＡＰｌのＧＤＣ－０１５２結合ドメインは、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む。

【0142】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ｃＩＡＰｌのＡＴ４０６結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＡＴ４０６である。第２のＣＩＤドメインは、図１６に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ｃＩＡＰｌのＡＴ４０６結合ドメインは、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む。

【0143】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ｃＩＡＰｌのＣＵＤＣ－４２７結合ドメインであり、ＣＩＤ低分子は、ＣＵＤＣ－４２７である。第２のＣＩＤドメインは、図１７に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ｃＩＡＰｌのＣＵＤＣ－４２７結合ドメインは、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む。

【0144】

さらなる実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、ＦＫＢＰのラパマイシン（ＳＬＦ）結合ドメインの合成リガンドであり、ＣＩＤ低分子は、ＳＬＦである。第２のＣＩＤドメインは、図１８に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、ＣＩＤ低分子なしでは第１のＣＩＤドメインに結合せず、遊離ＣＩＤ低分子に結合しない。一部の実施形態では、ＦＫＢＰのＳＬＦ結合ドメインは、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む。

【0145】

本発明の一部の他の実施形態では、ＣＩＤドメインは両方とも、抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）である。第１のＣＩＤドメインは、抗原として作用するＣＩＤ低分子に特異的に結合し、第２のＣＩＤドメインは、第１のＣＩＤドメインとＣＩＤ低分子との間で形成される複合体に特異的に結合するが、第１のＣＩＤドメインまたは遊離ＣＩＤ低分子には結合しない。

【0146】

一部の実施形態では、ＣＩＤ低分子は、メトトレキサートであり、第１のＣＩＤドメインは、それぞれ、配列番号３１９、３２０、３２１、３２２、３２３および３２４としてのｖｈ－ＣＤＲ１、ｖｈ－ＣＤＲ２、ｖｈ－ＣＤＲ３、ｖｌ－ＣＤＲ１、ｖｌ－ＣＤＲ２およびｖｌ－ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含むメトトレキサートＡＢＤである。第２のＣＩＤドメインは、メトトレキサートと第１のＣＩＤドメインとの複合体に特異的に結合することができるＡＢＤを含み、第２のＣＩＤドメインは、図１９に示されるｖｈＣＤＲおよびｖｌＣＤＲを含む。一部の実施形態では、メトトレキサートＡＢＤは、Gayda et al. Biochemistry 2014 53 (23), 3719-3726に記載されたメトトレキサート結合Ｆａｂである。

【0147】

一部の実施形態では、ＣＩＤの第２の半分は、ＡＢＤを含み、低分子の少なくとも一部およびＣＩＤの第１の半分の一部を含む複合体の部位に結合する。一部の実施形態では、ＣＩＤの第２の半分は、ＡＢＤを含み、低分子とＣＩＤの第１の半分との複合体の部位に結合し、ＣＩＤの第２の半分は、低分子の少なくとも１個の原子と、ＣＩＤの第１の半分の１個の原子とを含む部位に結合する。

【0148】

一部の実施形態では、ＣＩＤの第２の半分は、それぞれの遊離低分子およびＣＩＤの遊離第１の半分への結合に関するその解離定数（ＫＤ）の約１／２５０を超えない（約１／３００、１／３５０、１／４００、１／４５０、１／５００、１／６００、１／７００、１／８００、１／９００、１／１０００、１／１１００、１／１２００、１／１３００、１／１４００、または１／５０００、またはそれ未満などを超えない）ＫＤで、ＣＩＤの第１の半分と、低分子との複合体に結合する。

【0149】

低分子と、同族結合部分との複合体に特異的に結合する結合部分を、当業界で公知の方法に従って生産することができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、具体的には、ＣＩＤドメインを生産するための方法に関する、ＷＯ２０１８／２１３８４８を参照されたい。簡単に述べると、抗体ライブラリー、ＤＡＲＰｉｎライブラリー、ナノボディライブラリー、またはアプタマーライブラリーまたはファージディスプレイＦａｂライブラリーからスクリーニングを実施する。例えば、工程１として、低分子の非存在下では同族結合部分に結合しない結合部分を選択し、それによって、対抗選択された結合部分のセットを生成することができる；次いで、工程２として、対抗選択された結合部分を、低分子と、同族結合部分との複合体に結合する結合部分についてスクリーニングし、それによって、陽性選択された結合部分のセットを生成することができる。低分子と、同族結合部分との複合体に特異的に結合する結合部分のセットが生成されるように、スクリーニングのそれぞれのラウンドが、工程１のスクリーニングおよび工程２のスクリーニングを含む、１または複数のラウンドで、スクリーニングの工程１および２を行うことができる。一部の実施形態では、第１ラウンドのスクリーニングに関する工程１の結合部分の入力セットが、結合分子ライブラリーである；それぞれのラウンドのスクリーニングに関する工程２の結合部分の入力セットが、所与のラウンドのスクリーニングに関する工程１の対抗選択された結合部分のセットである；第１ラウンドのスクリーニング後のそれぞれのラウンドのスクリーニングに関する工程１の結合部分の入力セットが、前のラウンドのスクリーニングからの工程２の陽性選択された結合部分のセットである；および低分子と、同族結合部分との複合体に特異的に結合する結合部分のセットが、最後のラウンドのスクリーニングに関する工程２の陽性選択された結合部分のセットである、２ラウンド以上のスクリーニングを実施する。

【0150】

ファージディスプレイスクリーニングを、以前に確立されたプロトコール［Seiler, et al, Nucleic Acids Res., 42:D12531260 (2014)を参照されたい］に従って行うことができる。例えば、ＢＣＬ－ｘＬとＡＢＴ－７３７との複合体のための抗体結合部分を選択するために、ストレプトアビジン被覆磁気ビーズ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて捕捉されたビオチン化されたＢＣＬ－ｘＬに対して、抗体ファージライブラリーをスクリーニングすることができる。それぞれの選択の前に、ファージプールを、ＡＢＴ－７３７の非存在下でストレプトアビジンビーズ上の固定された１ｍＭのＢＣＬ－ｘＬと共にインキュベートして、アポ型のＢＣＬ－ｘＬに対する任意の結合剤のライブラリーを枯渇させることができる。続いて、ビーズを除去し、ＡＢＴ－７３７を１ｍＭの濃度でファージプールに添加することができる。減少する量のＢＣＬ－ｘＬ抗原（１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭおよび１０ｎＭ）を用いて、合計で４ラウンドの選択を実施することができる。非特異的に結合するファージの有害な効果を低減するために、特異的なＢＣＬ－ｘＬ結合Ｆａｂ－ファージを、２ｇ／ｍＬのＴＥＶプロテアーゼの添加によって磁気ビーズから選択的に溶出させることができる。次いで、第４ラウンドの選択からの個々のファージクローンを、配列決定のために分析することができる。

【0151】

ｂ．ＨＳＡ結合ドメイン
第１のＣＩＤドメインに加えて、一部の実施形態は、半減期延長部分としてＨＳＡ結合ドメインも含む本発明の第１の単量体に依拠する。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体に由来する抗原結合ドメインを含む。抗ＨＳＡ抗原結合ドメインは、限定されるものではないが、完全抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびラクダ科由来単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体を含む、任意の形式を採ってもよい。

【0152】

ＨＳＡ結合ドメインの結合親和性を、Ｔ細胞エンゲージャーの特定の血清半減期を標的とするために選択することができる。かくして、一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ＨＳＡに対する高い結合親和性を有する。他の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ＨＳＡに対する中程度の結合親和性を有する。さらに他の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ＨＳＡに対する低いか、またはわずかな結合親和性を有する。例示的な結合親和性としては、１０ｎＭ以下（高い）、１０ｎＭ～１００ｎＭ（中程度）、および１００ｎＭより大きい（低い）ＫＤ濃度が挙げられる。上記の通り、ＨＳＡに対する結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）などの公知の方法によって決定される。

【0153】

一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ＨＳＡに結合するｓｃＦｖを含む抗原結合ドメインである。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ｓｄＡＢＤである。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、連鎖球菌のプロテインＧのＨＳＡ結合ドメインである。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ヒト化ｓｃＦｖまたはｓｄＡＢＤなどの、ヒト化抗ＨＳＡ結合断片である。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、配列番号３３９の重鎖可変ドメインと、配列番号３４０の軽鎖可変ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、ｓｄＡＢＤであり、配列番号３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６および３４７から選択される単一の単量体可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、例えば、Ralph et al., MABS. 2016, VOL. 8, NO. 7, 1336-1346に示された方法を使用して、ＨＳＡに対するその親和性を増加または減少させるように改変される。一部の実施形態では、ＨＳＡ結合ドメインは、配列番号３４８の重鎖と、配列番号３４９の軽鎖とを含む。例示的なアミノ酸配列は、図３１Ａおよび図３１Ｂに示される。

【0154】

ｃ．ドメインリンカー
本明細書の多くの実施形態では、ドメインリンカーは、成分の生物学的機能が保持されるように、本発明の種々の成分を一緒に連結するために使用される。

【0155】

ドメインリンカーは、例えば、２つの実体を空間的に分離するための手段として、単に、２つの実体を連結する都合の良い方法として役立ち得る。ドメインリンカーは、２つの分子が所望の活性を保持するように互いに対して正確なコンフォメーションを取るように、それらを連結するのに十分な長さを有してもよい。一般に、２つのドメインを結合するリンカーは、（１）２つのドメインを、フォールディングさせ、互いに独立に作用させるように、（２）２つのドメインの機能的ドメインを阻害し得る規則的な二次構造を生じる傾向を有しないように、（３）機能的タンパク質ドメインと相互作用し得る最小限の疎水性もしくは電荷特性を有するように、および／または（４）２つのドメインの立体的分離を提供するように設計することができる。また、ドメインリンカーを使用して、例えば、２つのドメイン間の接続に対する不安定性、酵素切断部位（例えば、プロテアーゼのための切断部位）、安定性配列、分子タグ、検出可能な標識、またはその様々な組合せを提供することもできる。

【0156】

ドメインリンカーが分子架橋としてのその目的を満たすことができるという条件で、ドメインリンカーの長さおよび組成をかなり変化させてもよい。リンカーの長さおよび組成は、一般的には、リンカーの意図される機能、および必要に応じて、合成の容易性、安定性、ある特定の化学物質および／または温度パラメーターに対する耐性、ならびに生体適合性などの他の因子を考慮に入れて選択される。例えば、ドメインリンカーは、以下のアミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒを含むペプチドであってもよい。一部の実施形態では、リンカーペプチドは、約１～５０アミノ酸の長さ、約１～３０アミノ酸の長さ、約１～２０アミノ酸の長さ、または約５～約１０アミノ酸の長さである。例示的なペプチドリンカーとしては、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＳＧ）ｎ、（ＧＧＳＧＧ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、少なくとも１の整数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）である）などのグリシン－セリンポリマー；グリシン－アラニンポリマー；アラニン－セリンポリマー；ならびに他の可撓性リンカーが挙げられる。

【0157】

あるいは、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含む、種々の非タンパク質性ポリマーをドメインリンカーとして使用することができる。

【0158】

ドメインリンカーはまた、免疫グロブリン軽鎖、例えば、ＣκまたはＣλに由来してもよい。リンカーはまた、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε、およびＣμを含む、任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来してもよい。例えば、ドメインリンカーは、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基ではないが、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列；例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５～１２個のアミノ酸残基を含んでもよい。

【0159】

ドメインリンカーはまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、ヒンジ領域由来配列、および他のタンパク質に由来する他の天然配列などの、他のタンパク質に由来してもよい。

【0160】

本発明の一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、第１のドメインリンカーを介してＦｃドメインに連結される。一部の実施形態では、第２のＣＩＤドメインは、第２のドメインリンカーを介して治療部分に連結される。第１および第２のドメインリンカーは、同じであっても、同じでなくてもよい。

【0161】

本発明の一部の実施形態では、第１のＣＩＤドメインは、第１のドメインリンカーを介してＨＳＡ結合ドメインに連結される。一部の実施形態では、第２のＣＩＤドメインは、第２のドメインリンカーを介して治療部分に連結される。第１および第２のドメインリンカーは、同じであっても、同じでなくてもよい。

【0162】

一部の実施形態では、ドメインリンカーは、ＦｖのＶＨおよびＶＬドメインを一緒に連結するように働き、ｓｃＦｖを形成し、「ｓｃＦｖリンカー」と称することができる。これらの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、ＶＨおよびＶＬドメインを適切に会合させるのに十分な長さである。一部の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、１０～２５アミノ酸の長さである。

【0163】

ｄ．Ｆｃドメイン
特に、半減期延長部分としてＦｃドメインを使用する、一部の実施形態では、本発明は、第１のＦｃドメインと第１のＣＩＤドメインとを含む第１の単量体、および第２のＦｃドメイン（例えば、「空のＦｃドメイン」）を含む第２の単量体を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれの単量体上での２個のＦｃドメインの自己集合性質に基づく。ヘテロ二量体Ｆｃドメインは、以下により完全に考察されるように、それぞれの単量体中のＦｃドメインのアミノ酸配列を変更して、ヘテロ二量体Ｆｃドメインの形成を「歪める」ことによって作製される。

【0164】

Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインに由来してもよく、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインが、本発明において特に有用である。本明細書に記載されるように、常にではないが、しばしば、エフェクター機能を除去するためのアブレーション変異体と共に、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインを使用してもよい。同様に、低いエフェクター機能が望まれる場合、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを使用してもよい。

【0165】

本明細書に記載の二量体Ｆｃ融合タンパク質のいずれかについて、それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を規定する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域のいくつかの一次配列を収集した。配列の保存度に基づいて、彼らは、個々の一次配列を、ＣＤＲおよびフレームワークに分類し、その一覧を作製した（全体が参照により組み込まれる、SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th edition, NIH publication, No. 91-3242, E.A. Kabat et al.を参照されたい）。本明細書を通して、可変ドメイン中の残基（おおよそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７および重鎖可変領域の残基１～１１３）を言う場合、一般的にはＫａｂａｔの番号付けシステムが使用され、Ｆｃ領域［例えば、Kabat et al., supra (1991)］についてはＥＵの番号付けシステムが使用される。

【0166】

本明細書に記載の二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部の実施形態では、第１および第２の単量体はそれぞれ、式：ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（式中、ヒンジは完全または部分的ヒンジ配列のいずれかである）を有するＦｃドメインを含む。本明細書に記載の二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部の実施形態では、第１および第２の単量体はそれぞれ、式：ＣＨ２－ＣＨ３を有するＦｃドメインを含む。

【0167】

（ｉ）ヘテロ二量体Ｆｃ変異体
半減期延長部分としてＦｃドメインを使用する実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質である。そのようなヘテロ二量体タンパク質は、本明細書では集合的に「ヘテロ二量体化変異体」と称される、第１および第２の単量体のヘテロ二量体化を容易にする、ならびに／またはホモ二量体よりもヘテロ二量体の精製を容易にする改変を含む２つの異なるＦｃドメイン（１つは第１および第２の単量体のそれぞれの上にある）を含む。当業者であれば理解できるように、一般的には、これらのヘテロ二量体単量体は、それぞれの単量体のための遺伝子を宿主細胞中に含ませることによって作製される。これは一般に、所望のヘテロ二量体（Ａ－Ｂ）、ならびに２つのホモ二量体（Ａ－ＡおよびＢ－Ｂ）の形成をもたらす。当業界で公知のように、本発明のＦｃヘテロ二量体を生成するために使用することができるいくつかのメカニズムが存在する。かくして、ヘテロ二量体の産生をもたらすアミノ酸変異体は、「ヘテロ二量体化変異体」と称される。以下で考察されるように、ヘテロ二量体化変異体は、Ａ－ＡおよびＢ－Ｂホモ二量体よりもＡ－Ｂヘテロ二量体の形成を「歪める」立体変異体（例えば、以下に記載される「ノブアンドホール」変異体および以下に記載される「電荷対」変異体を含んでもよい。

【0168】

１つのメカニズムは、一般に、「ノブアンドホール」と当業界で称されるか、または立体的影響を創出して、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を抑制するアミノ酸工学を指すＫＩＨである。すなわち、一方の単量体は、嵩高いアミノ酸を有するように操作され（「ノブ」）、他方はアミノ酸側鎖のサイズを減少させるように操作され（「ホール」）、ホモ二量体よりもヘテロ二量体の形成を歪める。これらの技術および配列は、Ridgway et al.,Protein Engineering 9(7):617 (1996)；Atwell et al., J. Mol. Biol. 1997 270:26；米国特許第８，２１６，８０５号、ＵＳ２０１２／０１４９８７６に記載されており、これらは全てその全体が参照により本明細書に組み込まれる。これらの参考文献の図面（また、アミノ酸変異体について参照により本明細書に具体的に組み込まれる）は、「ノブアンドホール」に依拠する、いくつかの「単量体Ａ－単量体Ｂ」対を同定する。さらに、Merchant et al., Nature Biotech. 16:677 (1998)に記載されるように、これらの「ノブアンドホール」突然変異を、ジスルフィド結合と組み合わせて、ヘテロ二量体化への形成を歪めることができる。

【0169】

ヘテロ二量体の生成において有用であるさらなるメカニズムは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Gunasekaran et al., J. Biol. Chem. 285(25):19637 (2010)に記載された「静電気ステアリング」または「電荷対」と称されることもある。これは、本明細書では「電荷対」と称されることもある。この実施形態では、ヘテロ二量体化に向かう形成を歪めるために、静電気が使用される。当業者であれば理解できるように、これらのものはまた、ｐＩ、かくして、精製に対する効果も有し、かくして、場合によっては、ｐＩ変異体と考えることもできる。しかしながら、これらのものを生成してヘテロ二量体化を強制し、精製手段として使用しなかったため、それらは「立体変異体」として分類される。これらのものとしては、限定されるものではないが、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒ（例えば、これらのものは、「単量体対応セット」である）と対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８ＥおよびＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが挙げられる。

【0170】

ヘテロ二量体化変異体は、スキュー変異体（例えば、以下に記載される「ノブアンドホール」および「電荷対」変異体）を含んでもよい。例示的な方法としては、表２にまとめられるような、例えば、ＫｉＨ、ＨＡ－ＴＦ、およびＺＷ１突然変異を導入する、対称－非対称立体相補性設計［全てその全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Atwell et al., J Mol Biol (1997) 270(1):26-35；Moore et al., MAbs (2011) 3(6):546-57；Von Kreudenstein et al., MAbs (2013) 5(5):646-54を参照されたい］；電荷間交換（例えば、ＤＤ－ＫＫ突然変異を導入する）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Gunasekaran et al., J Biol Chem 2010; 285:19637-46を参照されたい）；電荷－立体相補性交換＋さらなる長距離静電気相互作用（例えば、ＥＷ－ＲＶＴ突然変異を導入する）［その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Choi et al., Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748-59］；ならびに例えば、鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）を導入する、アイソタイプ鎖交換［全てその全体が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Klein et al, MAbs (2012) 4(6):653-63；Von Kreudenstein et al., MAbs (2013) 5(5):646-54］が挙げられる。

【0171】

【表2】

【0172】

ヘテロ二量体化変異体に加えて、本明細書で提供される二量体Ｆｃ融合タンパク質（ホモ二量体とヘテロ二量体の両方）は、限定されるものではないが、１つまたは複数のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲおよびＦｃＲｎ）への結合の変更などの、機能に影響するＦｃ改変を独立に含んでもよい。

【0173】

（ｉｉ）ＦｃγＲ変異体
一部の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、１つまたは複数のＦｃγＲ受容体への結合に影響する１つまたは複数のアミノ酸改変（例えば、「ＦｃγＲ変異体」）を含む。結合の増加ならびに結合の減少をもたらすＦｃγＲ変異体（例えば、アミノ酸置換）が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害；ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応）の増加をもたらすことが知られている。同様に、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害的受容体）への結合の減少は、同様に一部の環境では有益であり得る。ＦｃγＲ活性化およびＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡなどのＦｃ媒介性毒性を低減させるＦｃγＲ変異体は、本発明におけるＦｃ融合タンパク質において有用であり得る［その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Schlothauer et al. Protein Eng Des Sel. 2016;29(10):457-466を参照されたい］。例えば、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａを含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを本発明において使用することができ、ヘテロ二量体化を容易にするためにさらに改変することができる。例示的なアミノ酸配列は、図２８に示される。

【0174】

さらなるＦｃγＲ変異体は、米国特許第８，１８８，３２１号（特に、図４１）および第８，０８４，５８２号、ならびに米国特許出願公開第２００６０２３５２０８号および第２００７０１４８１７０号に列挙されたものを含んでもよく、これらは全て、その全体が、特に、Ｆｃγ受容体結合に影響するその中に開示された変異体について、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。有用である特定の変異体としては、限定されるものではないが、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖおよび２９９Ｔが挙げられる。

【0175】

（ｉｉｉ）ＦｃＲｎ変異体
さらに、本明細書に記載のＦｃ融合タンパク質は、ＦｃＲｎへの結合の増加および血清半減期の増大を提供するＦｃ置換を独立に含んでもよい。そのような改変は、例えば、その全体が、特に、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期を増大させるＦｃ置換について、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，３６７，８０５号に開示されている。そのような改変としては、限定されるものではないが、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６ＩまたはＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌおよび２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌが挙げられる。

【0176】

（ｉｖ）アブレーション変異体
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃ融合タンパク質は、さらなる作用メカニズムを避けるために、１つもしくは複数または全部のＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減する、または除去する１つまたは複数の改変を含む。そのような改変は、「ＦｃγＲアブレーション変異体」または「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯもしくはＫＯ）」変異体と称される。一部の実施形態では、特に、免疫調節タンパク質の使用において、Ｆｃドメインの１つが１つまたは複数のＦｃγ受容体アブレーション変異体を含むように、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を除去して、ＡＤＣＣ活性を除去するか、または有意に低減させることが望ましい。これらのアブレーション変異体は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第１０，２５９，８８７号の図３１に描写されており、それぞれ、独立に、かつ適宜、含有または排除してもよく、好ましい態様では、ＥＵインデックスによる、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択されるアブレーション変異体を使用する。本明細書で参照されるアブレーション変異体は、ＦｃγＲ結合を除去するが、一般的には、ＦｃＲｎ結合は除去しない。

【0177】

２．第２の単量体
一部の実施形態では、第１のＦｃドメインと第１のＣＩＤドメインとを含む第１の単量体、および第２のＦｃドメインを含む第２の単量体を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が本明細書で提供される。一部の場合、第２の単量体は、Ｆｃドメインのみ（例えば、「空のＦｃドメイン」）を含む。第２の単量体のためのヘテロ二量体化変異体および他のＦｃ変異体は、本明細書に記載される。

【0178】

一部の他の実施形態では、図２９に一般的に描写されるように、本発明は、ＣＩＤＳＭの存在下で会合して、Ｔ細胞エンゲージャードメインへの半減期延長ドメインの会合をもたらし、かくして、Ｔ細胞エンゲージャードメインの半減期の時間的制御を可能にする、第１および第２の単量体を提供する。かくして、上で考察された第１の単量体に加えて、本発明は、図２９に一般的に描写されるような、第２のＣＩＤドメイン、ドメインリンカーおよびＴ細胞エンゲージャードメインを含む第２の単量体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、第２の単量体は、ＮからＣ末端に向かって、第２のＣＩＤドメイン－ドメインリンカー－Ｔ細胞エンゲージャードメインを含み、さらなる実施形態では、ＮからＣ末端の順序は、Ｔ細胞エンゲージャードメイン－ドメインリンカー－ＣＩＤドメインである。

【0179】

第２のＣＩＤドメインおよびドメインリンカーは、本明細書に概略される。

【0180】

ａ．Ｔ細胞エンゲージャードメイン
多くの実施形態では、治療部分は、Ｔ細胞エンゲージャードメインである。一般に、当業界で公知のように、Ｔ細胞エンゲージャードメインは、少なくとも、Ｔ細胞に、一般的には、がん細胞上の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合するＡＢＤに連結された、Ｔ細胞の表面上に発現されるＣＤ３タンパク質に結合するＡＢＤを含む。これらのＴ細胞エンゲージャードメインは、細胞傷害性Ｔ細胞を動員することによって標的抗原を発現する細胞の特異的ターゲティングを可能にするように設計される。したがって、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャードメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の一部を形成する、表面に発現されたＣＤ３タンパク質への結合を介して、細胞傷害性Ｔ細胞と係合することができる。Ｔ細胞エンゲージャーの、ＣＤ３および特定の腫瘍細胞の表面上に発現される標的抗原への同時的結合は、Ｔ細胞活性化を引き起こし、特定の標的抗原を発現する細胞のその後の溶解を媒介する。かくして、Ｔ細胞エンゲージャードメインは、強力、特異的かつ効率的な標的細胞死滅を誘導することができる（Ellerman, Methods, 2019; 54:102-107）。

【0181】

一部の実施形態では、Ｔ細胞ＡＢＤのＣ末端は、ドメインリンカーを介して、ＴＡＡ－ＡＢＤのＮ末端に連結される。他の実施形態では、Ｔ細胞結合ドメインのＮ末端は、ドメインリンカーを介して、Ｔ細胞エンゲージャーの標的抗原結合ドメインのＣ末端に連結される。

【0182】

（ｉ）Ｔ細胞ＡＢＤ
Ｔ細胞エンゲージャーのＴ細胞に対する結合特異性は、ＴＣＲの認識によって媒介される。ＴＣＲの一部として、ＣＤ３は、細胞表面上に存在する、ＣＤ３λ（ガンマ）鎖、ＣＤ３δ（デルタ）鎖、および２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖を含むタンパク質複合体である。ＣＤ３は、ＴＣＲのα（アルファ）およびβ（ベータ）鎖ならびにＣＤ３（ゼータ）と会合して、全体として完全なＴＣＲを形成する。固定された抗ＣＤ３抗体などによる、Ｔ細胞上でのＣＤ３のクラスタリングは、Ｔ細胞受容体の係合と類似するが、そのクローンに典型的な特異性とは無関係に、Ｔ細胞活性化をもたらす。

【0183】

本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャードメインは、ＴＣＲに特異的に結合するドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャードメインは、ヒトＣＤ３に特異的に結合するドメインを含む。

【0184】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャードメインのＴ細胞ＡＢＤは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体に由来する抗原結合ドメインを含む。Ｔ細胞ＡＢＤは、限定されるものではないが、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびラクダ科由来単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体を含む、任意の形式を採ってもよい。

【0185】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分のＴ細胞ＡＢＤは、抗ＣＤ３抗体の３つの軽鎖ＣＤＲ（ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３）と、３つの重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２およびｖｈＣＤＲ３）とのセットを含む、抗ＣＤ３ ＡＢＤである。ＣＤＲセットに寄与する例示的な抗ＣＤ３抗体としては、限定されるものではないが、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、ＵＣＨＴ１．ｖ９を含むＵＣＨＴ１の変異体、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビシリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４［Yang SJ, The Journal of Immunology (1986) 137; 1097-1100を参照されたい］、ＴＲ－６６またはＸ３５－３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢＴ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、およびＷＴ－３１が挙げられる。抗ＣＤ３ ＡＢＤの例示的なアミノ酸配列は、図２７に提供される。

【0186】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、０、１、２、３、４、５または６個のアミノ酸改変（アミノ酸置換が特に有用である）を有する。すなわち、６個のＣＤＲのセットにおける変化の総数が、６個未満のアミノ酸改変である限り、ＣＤＲを改変してもよく、任意の組合せのＣＤＲが変化する；例えば、ｖｌＣＤＲ１中には１個のアミノ酸変化、ｖｈＣＤＲ２中には２個のアミノ酸変化、ｖｈＣＤＲ３中には変化なし、などがあってもよい。

【0187】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒト化またはヒト由来である。例えば、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒト軽鎖フレームワーク領域中のヒトＣＤＲまたは非ヒト軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域と、ヒト重鎖フレームワーク領域中のヒトまたは非ヒト重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域を含んでもよい。一部の実施形態では、軽鎖フレームワーク領域は、ラムダ軽鎖フレームワークである。他の実施形態では、軽鎖フレームワーク領域は、カッパ軽鎖フレームワークである。

【0188】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、本明細書に提供される抗ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。本明細書で使用される場合、「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」とは、軽鎖および重鎖可変領域が、短い可撓性ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、単一のポリペプチド鎖として発現させることができ、ｓｃＦｖが、それが由来する無傷抗体の特異性を保持する、軽鎖の可変領域と、重鎖の可変領域とを含む抗体断片を指す。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、以下の方向：軽鎖可変領域－ｓｃＦｖリンカー－重鎖可変領域または重鎖可変領域－ｓｃＦｖリンカー－軽鎖可変領域のいずれかにあってもよい。

【0189】

したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、本明細書に提供される抗ＣＤ３抗体配列の軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ＣＤ３に結合するｓｃＦｖを、公知の方法に従って調製することができる。例えば、ｓｃＦｖ分子を、可撓性ポリペプチドリンカーを使用してＶＨおよびＶＬ領域を一緒に連結することによって生産することができる。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さおよび／またはアミノ酸組成を有するｓｃＦｖリンカーを含む。したがって、一部の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーの長さは、１０～約２５アミノ酸である。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸組成に関して、可撓性を提供し、可変ドメインを阻害せず、ならびに鎖間フォールディングを可能にして、２つの可変ドメインを一緒にして、機能的なＣＤ３結合部位を形成させるペプチドが選択される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、グリシンおよびセリン残基を含む。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列を、例えば、ファージディスプレイ法によって最適化して、ＣＤ３結合およびｓｃＦｖの生産収率を改善することができる。ｓｃＦｖ中の可変軽鎖領域と可変重鎖領域とを連結するのに好適なペプチドｓｃＦｖリンカーの例としては、限定されるものではないが、（ＧＳ）ｎ（配列番号３２５）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号３２６）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３２７）、（ＧＧＳＧ）ｎ（配列番号３２８）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（配列番号３２９）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３３０）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）が挙げられる。一部の実施形態では、ペプチドｓｃＦｖリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３１２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３１３）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号３１８）から選択される。

【0190】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャードメインの抗ＣＤ３抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、または０．５ｎＭ以下のＫＤの、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対する親和性を有する。ＣＤ３に結合する親和性を、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定することができる。

【0191】

（ｉｉ）腫瘍関連抗原抗原結合ドメイン（「ＴＡＡ－ＡＢＤ」）
一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャーの標的抗原ＡＢＤは、疾患、障害または状態、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症疾患、免疫障害、自己免疫疾患、感染症、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生虫反応、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患に関与する、および／またはそれと関連する標的抗原に結合する。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞上で発現される腫瘍関連抗原である。

【0192】

一部の実施形態では、標的抗原は、タンパク質、脂質または多糖などの細胞表面分子である。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞上にある。

【0193】

本発明における標的抗原結合ドメインは、限定されるものではないが、完全抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）およびラクダ科由来単一ドメイン抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体を含む、任意の形式を採ってもよい。

【0194】

一部の実施形態では、標的抗原は、がん細胞上に発現される腫瘍関連抗原である。例えば、腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９であり、Ｔ細胞エンゲージャードメインは、限定されるものではないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）およびＢ細胞リンパ腫を含む多くのＢ細胞悪性腫瘍などの、ＣＤ１９を発現するがんを標的とする。例示的なＣＤ１９結合ドメインは、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９、ＭＥＤＩ－５５１、またはコンボトックスの抗ＣＤ１９結合ドメインの１つまたは複数のＣＤＲに由来する抗体部分を含んでもよい。

【0195】

３．融合タンパク質部分
一部の実施形態では、融合タンパク質部分（本明細書では「第３の単量体」とも称される）は、ＮからＣ末端に向かって、第２のＣＩＤドメイン－ドメインリンカー－治療部分を含み、さらなる実施形態では、ＮからＣ末端の順序は、治療部分－ドメインリンカー－第２のＣＩＤドメインである。ＣＩＤの２つの半分は、上記の通りであり、２つの半分のうちのいずれか一方を使用して、治療部分と連結して、本発明における融合タンパク質部分を形成させることができる。

【0196】

ａ．治療部分
本明細書で考察されるように、本発明は、一般的には、患者の血流中の治療部分の半減期を制御する能力に関する。かくして、一般的には、任意の治療部分を本発明において使用することができるが、Ｔ細胞エンゲージャー薬などの特定の有害な副作用を有するものは、本発明において特に有用である。

【0197】

任意の治療部分を使用して、第２のＣＩＤドメインと連結して、本明細書に記載の融合タンパク質部分を創出することができる。例えば、治療部分としては、限定されるものではないが、Ｔ細胞エンゲージャー部分；限定されるものではないが、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ；ラクダ科由来ｓｄＡｂのＶＨＨドメインなどの断片を含む）などの種々の形式を採る抗体断片を含む抗体；サイトカイン；ホルモン；ペプチド；抗体薬物コンジュゲート；またはペプチド薬物コンジュゲートが挙げられる。

【0198】

一部の実施形態では、治療部分は、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症疾患、免疫障害、自己免疫疾患、感染症、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生虫反応、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患と関連する抗原を標的とする抗体または抗体断片である。一部の実施形態では、治療部分は、本明細書に記載の腫瘍細胞上に発現される１つまたは複数の腫瘍関連抗原に結合する抗体または抗体断片である。

【0199】

一部の実施形態では、治療部分は、限定されるものではないが、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、およびその変異体などの、図８に一般的に示されるようなインターロイキン分子である。

【0200】

（ｉ）Ｔ細胞エンゲージャードメイン
特に有用な実施形態では、治療部分は、Ｔ細胞エンゲージャー部分である。当業界で公知のように、これらのものは一般に、非常に有効ながん治療剤であるが、それらはまた、毒性副作用を示すことがあり、かくして、患者の血流からそれらを迅速に除去する能力は、極めて有益である。

【0201】

一般に、当業界で公知のように、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞抗原結合ドメイン（ＴＣ－ＡＢＤ）および腫瘍標的関連抗原結合ドメイン（ＴＴＡ－ＡＢＤ）を含み、細胞傷害性Ｔ細胞を動員することによって標的抗原を発現する細胞の特異的ターゲティングを可能にするように設計される。例えば、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の一部を形成する、表面に発現されたＣＤ３タンパク質への結合を介して、細胞傷害性Ｔ細胞と係合することができる。Ｔ細胞エンゲージャー部分の、ＣＤ３および特定の腫瘍細胞の表面上に発現される標的抗原への同時的結合は、Ｔ細胞活性化を引き起こし、特定の標的抗原を発現する細胞のその後の溶解を媒介する。かくして、Ｔ細胞エンゲージャーは、強力、特異的かつ効率的な標的細胞死滅を誘導することができる。

【0202】

一部の実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャー部分は、Ｔ細胞ＡＢＤおよび標的抗原結合ドメインを含み、ここで、標的抗原は、病原性細胞（例えば、腫瘍細胞、ウイルスまたは細菌に感染した細胞、自己反応性Ｔ細胞など）上で発現される。結果として、Ｔ細胞エンゲージャーは、細胞傷害性Ｔ細胞による標的細胞死滅を刺激して、病原性細胞を除去する。例示的なＴ細胞エンゲージャーは、Dreier, T. et al., Int. J. Cancer, 100: 690-697 (2002)；およびBrischwein K et al., Molecular Immunology Vol 43, Issue 8, 1129-1243 (2006)に記載されており、それらは両方とも、その全体が参照により組み込まれる。

【0203】

一部の実施形態では、Ｔ細胞ＡＢＤのＣ末端は、ドメインリンカーを介して、標的ＡＢＤのＮ末端に連結される。他の実施形態では、Ｔ細胞結合ドメインのＮ末端は、ドメインリンカーを介して、Ｔ細胞エンゲージャーの標的抗原結合ドメインのＣ末端に連結される。

【0204】

図３に描写されるものを含む、一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分である治療部分は、２つの単量体の間、異なる鎖上のＴ細胞ＡＢＤおよび腫瘍抗原ＡＢＤに実質的に分割される。これは、以下で一般的に考察される。

【0205】

（ａ）Ｔ細胞ＡＢＤ
Ｔ細胞エンゲージャー部分のＴ細胞に対する結合特異性は、ＴＣＲの認識によって媒介される。ＴＣＲの一部として、ＣＤ３は、細胞表面上に存在する、ＣＤ３λ（ガンマ）鎖、ＣＤ３δ（デルタ）鎖、および２つのＣＤ３ε（イプシロン）鎖を含むタンパク質複合体である。ＣＤ３は、ＴＣＲのα（アルファ）およびβ（ベータ）鎖ならびにＣＤ３（ゼータ）と会合して、全体として完全なＴＣＲを形成する。固定された抗ＣＤ３抗体などによる、Ｔ細胞上でのＣＤ３のクラスタリングは、Ｔ細胞受容体の係合と類似するが、そのクローンに典型的な特異性とは無関係に、Ｔ細胞活性化をもたらす。

【0206】

本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャー部分は、ＴＣＲに特異的に結合するドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞エンゲージャー部分は、ヒトＣＤ３εに特異的に結合するドメインを含む。

【0207】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分のＴ細胞ＡＢＤは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体に由来する抗原結合ドメインを含む。Ｔ細胞ＡＢＤは、限定されるものではないが、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、およびラクダ科由来ｓｄＡｂのＶＨＨドメインなどのｓｄＡｂを含む、任意の形式を採ってもよい。

【0208】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分のＴ細胞ＡＢＤは、抗ＣＤ３抗体の３つの軽鎖ＣＤＲ（ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３）と、３つの重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２およびｖｈＣＤＲ３）とのセットを含む、抗ＣＤ３ ＡＢＤである。ＣＤＲセットに寄与する例示的な抗ＣＤ３抗体としては、限定されるものではないが、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、ＵＣＨＴ１．ｖ９を含むＵＣＨＴ１の変異体、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビシリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＳＰ３４、ＴＲ－６６またはＸ３５－３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０ （ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆ１１１－４０９、ＣＬＢＴ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰＶ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、およびＷＴ－３１が挙げられる。抗ＣＤ３ ＡＢＤの例示的なアミノ酸配列は、図２７に提供される。

【0209】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、０、１、２、３、４、５または６個のアミノ酸改変（アミノ酸置換が特に有用である）を有する。すなわち、６個のＣＤＲのセットにおける変化の総数が、６個未満のアミノ酸改変である限り、ＣＤＲを改変してもよく、任意の組合せのＣＤＲが変化する；例えば、ｖｌＣＤＲ１中には１個のアミノ酸変化、ｖｈＣＤＲ２中には２個のアミノ酸変化、ｖｈＣＤＲ３中には変化なし、などがあってもよい。

【0210】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒト化またはヒト由来である。例えば、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒト軽鎖フレームワーク領域中のヒトＣＤＲまたは非ヒト軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域と、ヒト重鎖フレームワーク領域中のヒトまたは非ヒト重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域を含んでもよい。一部の実施形態では、軽鎖フレームワーク領域は、ラムダ軽鎖フレームワークである。他の実施形態では、軽鎖フレームワーク領域は、カッパ軽鎖フレームワークである。

【0211】

一部の実施形態では、抗ＣＤ３ ＡＢＤは、本明細書に提供される抗ＣＤ３抗体の軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ＣＤ３に結合するｓｃＦｖを、公知の方法に従って調製することができる。例えば、ｓｃＦｖ分子を、可撓性ポリペプチドリンカーを使用してＶＨおよびＶＬ領域を一緒に連結することによって生産することができる。ｓｃＦｖ分子は、最適化された長さおよび／またはアミノ酸組成を有するｓｃＦｖリンカーを含む。したがって、一部の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーの長さは、１０～約２５アミノ酸である。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸組成に関して、可撓性を提供し、可変ドメインを阻害せず、ならびに鎖間フォールディングを可能にして、２つの可変ドメインを一緒にして、機能的なＣＤ３結合部位を形成させるペプチドが選択される。一部の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、グリシンおよびセリン残基を含む。ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列を、例えば、ファージディスプレイ法によって最適化して、ＣＤ３結合およびｓｃＦｖの生産収率を改善することができる。ｓｃＦｖ中の可変軽鎖領域と可変重鎖領域とを連結するのに好適なペプチドｓｃＦｖリンカーの例としては、限定されるものではないが、（ＧＳ）ｎ（配列番号３２５）、（ＧＧＳ）ｎ（配列番号３２６）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３２７）、（ＧＧＳＧ）ｎ（配列番号３２８）、（ＧＧＳＧＧ）ｎ（配列番号３２９）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３３０）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）が挙げられる。一部の実施形態では、ペプチドｓｃＦｖリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３１２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３１３）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号３１８）から選択される。

【0212】

一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分の抗ＣＤ３抗原結合ドメインは、１０００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、または０．５ｎＭ以下のＫＤの、ＣＤ３発現細胞上のＣＤ３に対する親和性を有する。ＣＤ３に結合する親和性を、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定することができる。

【0213】

（ｂ）標的ＡＢＤ
Ｔ細胞に結合する成分、例えば、抗ＣＤ３ ＡＢＤ（ＣＤ３－ＡＢＤ）に加えて、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、上記のドメインリンカーを介して連結された、標的抗原、一般的には、標的腫瘍関連抗原（ＴＴＡ）に結合するＡＢＤも含む。かくして、一部の実施形態では、Ｔ細胞エンゲージャー部分の標的抗原ＡＢＤは、疾患、障害または状態、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症疾患、免疫障害、自己免疫疾患、感染症、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生虫反応、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患に関与する、および／またはそれと関連する標的抗原に結合する。一部の実施形態では、標的抗原は、タンパク質、脂質または多糖などの細胞表面分子である。一部の実施形態では、標的抗原は、腫瘍細胞上で発現される腫瘍関連抗原である。

【0214】

本発明における標的抗原ＡＢＤは、限定されるものではないが、完全抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ラクダ科由来単一ドメイン抗体のＶＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む、任意の形式を採ってもよい。多くの実施形態では、標的抗原ＡＢＤは、ｓｃＦｖである。

【0215】

一部の実施形態では、標的抗原は、がん細胞上に発現される腫瘍関連抗原である。例えば、腫瘍関連抗原は、ＣＤ１９であり、Ｔ細胞エンゲージャー部分は、限定されるものではないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）およびＢ細胞リンパ腫を含む多くのＢ細胞悪性腫瘍などの、ＣＤ１９を発現するがんを標的とする。例示的なＣＤ１９結合ドメインは、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９、ＭＥＤＩ－５５１、またはコンボトックスの抗ＣＤ１９結合ドメインの１つまたは複数のＣＤＲに由来する抗体部分を含んでもよい。

【0216】

ＣＤ１９に加えて、Ｈｅｒ２などの、任意の他の腫瘍関連抗原が想定される。

【0217】

Ｂ．ＣｌｎＤを含む組成物
本明細書において論じられるように、本発明の組成物は２つの機構のうちの１つに依存する、すなわち、単量体成分が機能するために低分子と一緒に保持される（上に記載した「ＣＩＤ実施形態」）か、または会合した単量体が低分子の添加によって分離される（「ＣＩｎＤ実施形態」）。

【0218】

したがって、本発明の別の態様は、二量体Ｆｃ融合タンパク質と融合タンパク質部分とを含む組成物を伴う。二量体Ｆｃ融合タンパク質は、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第１のＣＩｎＤドメイン」と称される化学阻害二量体形成化合物（ＣＩｎＤ）の一方に連結された第１のＦｃドメインを含有する第１の単量体と、第１のＦｃドメインと二量体形成する第２のＦｃドメインを含有する第２の単量体とを含む。融合タンパク質部分は、適宜ドメインリンカーを介して、本明細書では「第２のＣＩｎＤドメイン」と称されるＣＩｎＤドメインの他方に連結された治療部分を含む。投与後、ＣＩｎＤドメインの２つの部分は二量体を形成して、治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。治療部分が血液から迅速にクリアランスされなければならない場合、ＣＩｎＤ低分子が投与され、このことは、ＣＩｎＤの２つの部分の解離を誘導し、それによって治療部分のＦｃドメインからの解離と患者における治療部分のクリアランスとを可能にする。

【0219】

一部の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、図２Ａに例示されるように、第１のＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する一方の単量体と、Ｆｃドメイン単独（例えば、「空のＦｃドメイン」）を含有する他方の単量体とのヘテロ二量体である。第１のＦｃドメインと第２のＦｃドメインとは、例えば本明細書に記載されるヘテロ二量体形成突然変異を組み込むことによってヘテロ二量体形成する。

【0220】

一部の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、図３に例示されるように、第１のＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する一方の単量体と、適宜リンカーを介して第２の治療部分に連結された第２のＦｃドメインを含有する他方の単量体とのヘテロ二量体である。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、上に記載した第２のＣＩｎＤドメインに連結された治療部分を含む融合タンパク質部分との投与は、ＣＩｎＤドメインの２つの部分の会合を誘導し、治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。加えて、このフォーマットは、二特異性の性質を治療部分に付与し、治療部分の効力を高めることができる一方で、同時にその血清半減期を増加する。第１のＦｃドメインと第２のＦｃドメインとは、例えば本明細書に記載されるヘテロ二量体形成突然変異を組み込むことによってヘテロ二量体形成する。

【0221】

一部の他の実施形態では、図４に例示されるように、Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれが適宜リンカーを介してＦｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する２つの同一の単量体を有するホモ二量体である。ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、上に記載した第２のＣＩｎＤドメインに連結された治療部分を含む融合タンパク質部分との投与は、ＣＩｎＤドメインの２つの部分の会合を誘導し、治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。このフォーマットは、治療部分の化学量論および結合価を増加する一方で、同時にその半減期を延長する。

【0222】

１．ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質
第１のＣＩｎＤドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に関して、互いとヘテロ二量体形成するＦｃドメインが本明細書に概略的に記載される。Ｆｃ切断変異体、ＦｃＲｎ変異体、ＦｃγＲ変異体、および／または半減期延長変異体を含むがこれらに限定されない追加のＦｃ変異体もまた、本明細書において全体の概要が示されるヘテロ二量体形成突然変異と組み合わせて導入することができる。

【0223】

一部の実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、適宜リンカーを介して第２の単量体に連結された第１の治療部分を含む。第１の治療部分は、抗体；これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、例えばラクダ科由来単一ドメイン抗体のＶＨＨ等の様々なフォーマットを取る抗体断片；サイトカイン；ホルモン；ペプチド；抗体薬物コンジュゲート；またはペプチド薬物コンジュゲートであり得る。一部の実施形態では、第１の治療部分は、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病と関連する抗原を標的とする抗体または抗体断片である。

【0224】

一部の実施形態では、第１の治療部分は、本明細書に記載される腫瘍細胞に発現する１つまたは複数の腫瘍関連抗原と結合する抗体または抗体断片である。

【0225】

一部の実施形態では、第１の治療部分は、これらに限定されないが、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、およびＩＬ－１５等のインターロイキン分子である。

【0226】

一部の実施形態では、第１の治療部分は、融合タンパク質部分の第２の治療部分と協働して、２つの標的に結合する二特異性分子として作用する。一部の実施形態では、２つの標的は同じ細胞に存在する。一部の実施形態では、２つの標的は異なる細胞に存在する。一部の実施形態では、一方の標的は細胞に存在し、他方の標的は細胞が存在する微小環境に存在する。

【0227】

例えば、第１の治療部分は、融合タンパク質部分内の第２の治療部分と協働して、Ｔ細胞エンゲージャーとして作用することができ、ここで、第１の治療部分は、ＣＤ３ ＡＢＤ等のＴ細胞抗原を認識するＡＢＤであり、第２の治療部分は、疾患、障害、または状態、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病に関与および／または関連する標的抗原を認識するＡＢＤである。あるいは、第２の治療部分が、ＣＤ３ ＡＢＤ等のＴ細胞抗原を認識するＡＢＤであり、第１の治療部分が、疾患、障害、または状態、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病に関与および／または関連する標的抗原を認識するＡＢＤであってもよい。一部の実施形態では、標的抗原は、タンパク質、脂質、または多糖等の細胞表面分子である。一部の実施形態では、標的抗原は、ＣＤ１９等の本明細書に記載される腫瘍細胞に発現する腫瘍関連抗原である。

【0228】

ａ．ＣｌｎＤ
化学阻害二量体形成は、２つのタンパク質が非共有的に会合するかまたは非共有結合し、会合が低分子によって中断される生物学的機構である。本発明では、中断性低分子は「化学阻害二量体形成化合物（ＣＩｎＤ）低分子」または「ＣＩｎＤ低分子」または「ＣＩｎＤＳＭ」と称される。

【0229】

本発明では、２つのＣＩｎＤドメインは、ＣＩｎＤＳＭの存在下で解離する対として生じる。当業者によって理解されるように、一部のＣＩｎＤ対は同一である、例えば、両方のＣＩｎＤドメインは同一である。他の実施形態では、ＣＩｎＤ対は２つの異なるＣＩｎＤドメインによって構成される。

【0230】

いかなるＣＩｎＤ対も本発明において使用することができる。本発明の一部の実施形態では、ＣＩｎＤ対は天然に存在する結合パートナーに由来する。一部の実施形態では、ＣＩｎＤ対は、タンパク質と、タンパク質に特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）とを含む。一部の実施形態では、ＣＩｎＤ対は２つの抗体部分を含み、一方は抗原として作用し、他方は抗体として作用する。

【0231】

ＣＩｎＤ低分子は天然に存在し、ＣＩｎＤ対の会合を中断することができる。ＣＩｎＤ低分子はまた、ＣＩｎＤ対の対形成を中断することができる低分子ライブラリーからスクリーニングすることもできる。一部の実施形態では、ＣＩｎＤ低分子は、ＣＩｎＤ対の２つのドメインの結合親和性の少なくとも２倍、例えば、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍の親和性においてＣＩｎＤ対の一方のドメインに結合することによって、ＣＩｎＤ対を中断する。一部の実施形態では、ＣＩｎＤ低分子は、ＣＩｎＤ対の２つのドメインの間の結合面を遮蔽するかまたは変化させることによってＣＩｎＤ対を中断する。

【0232】

ＣＩｎＤドメイン対およびＣＩｎＤＳＭは、抗体ライブラリー、ＤＡＲＰｉｎライブラリー、ナノボディライブラリー、またはアプタマーライブラリーもしくはファージディスプレイＦａｂライブラリーから実施されるスクリーニングを使用して作製することができる。例えば、ステップ１として、低分子の非存在下で同族結合部分に結合する結合部分が選択され、それによって１組の選択結合部分を生成することができ、次いで、ステップ２として、選択結合部分が、低分子の存在下で同族結合部分と結合しない結合部分に関してスクリーニングされ、それによって１組の反選択結合部分（ｃｏｕｎｔｅｒ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）を生成することができる。スクリーニングのステップ１および２は１ラウンドまたは複数ラウンド行うことができ、スクリーニングの各ラウンドは、低分子の存在下で同族結合部分から特異的に解離する１組の結合部分が生成されるように、ステップ１のスクリーニングとステップ２のスクリーニングとを含む。

【0233】

２．ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質
ａ．Ｆｃドメイン
一態様では、二量体Ｆｃ融合タンパク質はホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質である。そのようなホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれがＦｃドメインと同じアミノ酸配列の第１のＣＩｎＤドメインとを有する第１の単量体と第２の単量体とを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインはドメインリンカーを介して第１のＣＩｎＤドメインに連結し、これは本明細書に概略的に記載される。一部の実施形態では、Ｆｃドメインはドメインリンカーを伴わずに第１のＣＩｎＤドメインに連結する。これらのＦｃドメインは上に概略的に記載されるが、ヘテロ二量体形成変異体を欠く。

【0234】

３．融合タンパク質部分
融合タンパク質部分は、第２のＣＩｎＤドメインと治療部分とを含む。第２のＣＩｎＤドメインと治療部分とは本明細書に概略的に記載される。

【0235】

Ｃ．例示的な組成物
一部の実施形態では、本発明は、図１Ｂに例示される、第１のＣＩＤドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、第２のＣＩＤドメインおよび治療ドメインを含む融合タンパク質部分とを含む組成物を伴う。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は第１の単量体および第２の単量体によって融合される。第１の単量体は、ドメインリンカーを介してヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに共有的に連結された第１のＣＩＤドメインＢＣＬ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）を含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＢＣＬ－２もしくはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）－ドメインリンカー－ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、またはＮ末端からＣ末端に向かって、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－ＢＣＬ－２もしくはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）を含む。第２の単量体は、第１の単量体のＦｃドメインと二量体形成する空のヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む。融合タンパク質部分は、ドメインリンカーを介して、ＣＤ３ ｓｃＦｖとＣＤ１９ ｓｃＦｖとを含むＴ細胞エンゲージャーに連結された第２のＣＩＤドメインＡＺ２１を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質部分は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＡＺ２１－ドメインリンカー－ＣＤ１９ ｓｃＦｖ－ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質部分は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ－ＣＤ３ ｓｃＦｖ－ドメインリンカー－ＡＺ２１を含む。ＡＺ２１はＦａｂまたは一本鎖Ｆａｂのフォーマットにすることができる。組成物の種々の形状は、図５および図６にＡｂ５９、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ６３、Ａｂ５７、およびＡｂ５８として示される。ＣＩＤ低分子ＡＢＴ１９９の添加は、ＢＣｌ－２またはＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）とＡＺ２１との会合を誘導し、それによってＴ細胞エンゲージャーとＦｃドメインとの会合を可能にし、Ｔ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長する。

【0236】

一部の実施形態では、本発明は、図２Ｂに例示される、第１のＣＩｎＤドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、第２のＣＩｎＤドメインおよび治療ドメインを含む融合タンパク質部分とを含む組成物を伴う。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は第１の単量体および第２の単量体によって融合される。第１の単量体は、ドメインリンカーを介してヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに共有的に連結された第１のＣＩｎＤドメインを含む。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１のＣＩｎＤドメイン－ドメインリンカー－ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、またはＮ末端からＣ末端に向かって、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン－ドメインリンカー－第１のＣＩｎＤドメインを含む。第２の単量体は、第１の単量体のＦｃドメインと二量体形成する空のヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含む。融合タンパク質部分は、ドメインリンカーを介して、ＣＤ３ ｓｃＦｖとＣＤ１９ ｓｃＦｖとを含むＴ細胞エンゲージャーに連結された第２のＣＩｎＤドメインを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質部分は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２のＣＩｎＤドメイン－ドメインリンカー－ＣＤ１９ ｓｃＦｖ－ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質部分は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ－ＣＤ３ ｓｃＦｖ－ドメインリンカー－第２のＣＩｎＤドメインを含む。第１のＣＩｎＤドメインと第２のＣＩｎＤドメインとは会合して二量体を形成し、Ｔ細胞エンゲージャーをＦｃドメインと会合させ、それによってＴ細胞エンゲージャーの血清半減期を延長する。患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は、ＣＩｎＤ対を中断するＣＩｎＤ低分子を投薬される。このことは、Ｔ細胞エンゲージャーのＦｃドメインからの解離、および患者におけるＴ細胞エンゲージャーの急速なクリアランスを引き起こす。

【0237】

一部の実施形態では、本発明は、図３に例示されるように、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と融合タンパク質部分とを含む組成物を伴う。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、リンカーを介して第１のヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する第１の単量体と、リンカーを介してＣＤ１９ ｓｃＦｖ等の第２の治療部分に連結された第２のヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含有する第２の単量体とを含む。第１のＩｇＧ１ Ｆｃドメインは第２のＦｃドメインと二量体形成する。融合タンパク質部分は、ＣＤ３ ｓｃＦｖ等の治療部分に連結された第２のＣＩｎＤドメインを含む。２つのＣＩｎＤドメインの会合は、治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。加えて、このフォーマットは、治療部分を一緒にし、二特異性の性質を治療部分に付与し（例えば、ＣＤ３ ＡＢＤとＣＤ１９ ＡＢＤとをＴ細胞エンゲージャーとして一緒にし）、効力を高める一方で、同時にその血清半減期を増加する。ＣＤ３ ｓｃＦｖとＣＤ１９ ｓｃＦｖとは、組成物内で位置を交換することができ、それらのＮまたはＣ末端のいずれかにおいて隣接しているドメインに連結することができる。患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は、ＣＩｎＤ対を中断するＣＩｎＤ低分子を投薬される。このことは、一方の治療部分のＦｃドメインからの解離、および患者における該治療部分の急速なクリアランスを引き起こす。

【0238】

一部の実施形態では、本発明は、図４に例示されるように、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質と融合タンパク質部分とを含む組成物を伴う。Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれがリンカーを介してヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに連結された第１のＣＩｎＤドメインを含有する２つの同一の単量体を含む。融合タンパク質部分は、ドメインリンカーを介して治療部分に連結された第２のＣＩｎＤドメインを含む。例えば、治療部分は、ＣＤ１９ ｓｃＦｖおよびＣＤ３ ｓｃＦｖを含むＴ細胞エンゲージャーであり得る。２つのＣＩｎＤドメインの会合は、治療部分とＦｃドメインとの会合を可能にし、治療部分の血清半減期を延長する。このフォーマットは、２つの治療部分と単一のＦｃ二量体との会合を可能にし、このことは、化学量論の増加を引き起こし、治療部分の効力を高めることができる一方で、その血清半減期を延長する。患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は、ＣＩｎＤ対を中断するＣＩｎＤ低分子を投薬される。このことは、治療部分のＦｃドメインからの解離、および患者における治療部分の急速なクリアランスを引き起こす。

【0239】

Ｄ．組成物をコードする核酸
本発明の単量体成分をコードするポリヌクレオチド分子を含む、本明細書に記載される組成物をコードする核酸組成物が提供される。すなわち、全般に、本発明の組成物は、それぞれが核酸によってコードされる３つの単量体（２つのＦｃ融合タンパク質単量体と１つの融合タンパク質部分と）を含む。

【0240】

核酸を含有する発現ベクター、ならびに核酸および／または発現ベクターを用いて形質転換した宿主細胞もまた提供される。当業者によって理解されるように、本明細書に示されるタンパク質配列は、遺伝暗号の縮重のために、多くの可能な核酸配列によってコードされ得る。

【0241】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチド分子はＤＮＡコンストラクトとして提供される。

【0242】

一部の実施形態では、二量体Ｆｃ融合タンパク質の各単量体および融合タンパク質部分をコードするポリヌクレオチド分子は、単一の発現ベクターに入れられる。一部の実施形態では、二量体Ｆｃ融合タンパク質の各単量体および融合タンパク質部分をコードするポリヌクレオチド分子は、異なる発現ベクターに入れられる。当技術分野において公知であるように、発現ベクターは、シグナルおよび分泌配列、調節配列、プロモーター、複製起点、選択遺伝子等を含むがこれらに限定されない適切な転写および翻訳制御配列を含有することができる。

【0243】

発現ベクターは、宿主細胞に形質転換され、宿主細胞において本明細書に記載される組成物を形成するように発現することができる。適切な宿主細胞発現系としては、これらに限定されないが、細菌、昆虫細胞、および哺乳動物細胞が挙げられる。本発明の少なくとも一部の実施形態の組換え抗体を発現するのに好ましい哺乳動物宿主細胞としては、当技術分野において公知であるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＨＥＫ２９３等が挙げられる。

【0244】

一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、組成物を発現する１つまたは複数の発現ベクターを宿主細胞に導入し、前記宿主細胞を、タンパク質が発現し、場合により単離され、さらに精製されてもよい条件下において培養することによって産生される。

【0245】

Ｅ．製剤
前述の方法の実施において使用される組成物は、所望のデリバリー法に好適な担体を含む医薬組成物に製剤化することができる。好適な担体としては、治療組成物と組み合わせた場合に、治療組成物の治療機能を保持し、患者の免疫系と全般に非反応性である任意の材料が挙げられる。例としては、これらに限定されないが、いくつかの標準的な薬学的担体のいずれか、例えば、滅菌リン酸緩衝食塩水溶液、静菌水等が挙げられる（一般には、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th Edition, A. Osal., Ed., 1980を参照されたい）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量および濃度ではレシピエントに対して非毒性であり、緩衝剤を含んでもよい。

【0246】

好ましくは滅菌水溶液の形態での、本発明に記載される医薬組成物の投与は、静脈内または局所を含むがこれらに限定されない多様な方法において行うことができる。

【0247】

Ｆ．組成物を使用する方法
１．Ｆｃ融合タンパク質
本明細書に記載される組成物は、いくつかの治療応用における用途を提供することができる。通例、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた処置され得る。

【0248】

第１のＣＩＤドメインを含有するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、第２のＣＩＤドメインおよび治療部分を含有する融合タンパク質部分とを含む組成物が患者に投与され得る。ＣＩＤ低分子の同じ患者への投与は、２つのＣＩＤドメインの会合を誘導し、治療部分をＦｃドメインと会合させ、それによって治療部分の血清半減期を延長する。ＣＩＤ低分子は、組成物の投与の前、それと同時、またはその後に投与することができる。

【0249】

当業者によって理解されるように、治療部分の最初の血清半減期は大きく異なる可能性があり、ＩＬ－２のように半減期が時間単位で測定される部分もあれば、抗体のように半減期が日単位で測定される部分もある。したがって、治療部分の血清半減期は、少なくとも約１２時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約４日、少なくとも約６日、少なくとも約８日、少なくとも約１０日、少なくとも約１２日、または少なくとも約１４日に延長され得る。あるいは、血清半減期は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、または一部の場合では１～１００倍延長され得る。治療部分とＦｃドメインとの会合を維持するために、患者はＣＩＤ低分子を定期的に投薬されてもよく、投薬の頻度は、ＣＩＤ低分子の血清半減期とＣＩＤ複合体の寿命との組合せに依存する。

【0250】

患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者はＣＩＤ低分子の投薬を中止し、このことは、ＣＩＤ低分子のクリアランス、治療部分のＦｃドメインからの解離、および患者における治療部分の急速なクリアランスを引き起こす。治療部分のクリアランスの速度は、ＣＩＤ低分子の血清半減期と、ＣＩＤ低分子の第１および第２のＣＩＤドメインに対する結合親和性と、ＣＩＤ複合体の寿命と、もはやＦｃドメインと会合していない場合の治療部分のクリアランス速度との組合せに依存する。

【0251】

第１のＣＩｎＤドメインを含有するヘテロ二量体またはホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、第２のＣＩｎＤドメインおよび治療部分を含有する融合タンパク質部分とを含む組成物が患者に投与され得る。第１のＣＩｎＤドメインと第２のＣＩｎＤドメインとは会合して二量体を形成し、治療部分をＦｃドメインと会合させ、それによって治療部分の血清半減期を延長する。

【0252】

上で論じられたように、治療部分の血清半減期は、少なくとも約１２時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約４日、少なくとも約６日、少なくとも約８日、少なくとも約１０日、少なくとも約１２日、または少なくとも約１４日に延長され得る。あるいは、血清半減期は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、または一部の場合では１～１００倍延長され得る。

【0253】

患者が、例えば安全性に対する懸念のために、治療部分を迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は、ＣＩｎＤ対を中断するＣＩｎＤ低分子を投薬される。このことは、治療部分のＦｃドメインからの解離、および患者における治療部分の急速なクリアランスを引き起こす。治療部分のクリアランスの速度は、ＣＩｎＤ低分子の第１および第２のＣＩｎＤドメインに対する結合親和性と、もはやＦｃドメインと会合していない場合の治療部分のクリアランス速度とに依存する。

【0254】

上に記載した方法は、患者における治療部分の血清半減期の正確な時間制御を可能にし、多様な疾患または状態、例えば、増殖性疾患、腫瘍性疾患、炎症性疾患、免疫学的障害、自己免疫疾患、感染性疾患、ウイルス疾患、アレルギー反応、寄生反応、移植片対宿主病、または宿主対移植片病に罹患している患者に適用可能である。患者の疾患に応じて、適した治療部分が、本明細書に記載される組成物に組み込まれるように設計可能である。例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、およびＢ細胞リンパ腫を含むがこれらに限定されない大半のＢ細胞悪性腫瘍に罹患している患者における治療部分の血清半減期を扱うおよび制御するために、治療部分は、ＣＤ１９ ＡＢＤとＣＤ３ ＡＢＤとを含むＴ細胞エンゲージャーを本明細書に記載される組成物に組み込むことができる。

【0255】

本明細書に記載される組成物の投与は、静脈内または局所を含むがこれらに限定されない多様な方法において行うことができる。

【0256】

投薬の量および投与の頻度は、好適な実施形態では、治療上または予防上効果的となるように選択される。当技術分野において公知であるように、任意の１名の患者に対する投薬量は、必要となる場合がある多くの因子、例えば、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与の時間および経路、薬物相互作用、ならびに状態の重症度に依存し、当業者であれば慣例的な実験によって確認可能であり得る。

【0257】

２．ＨＳＡ
本明細書に記載される第１および第２の単量体を含む組成物は、いくつかの治療応用における用途を提供することができる。通例、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた処置され得る。

【0258】

一部の実施形態では、組成物は、患者におけるＴ細胞エンゲージャードメインの血清半減期を延長するために患者に投与され、ここで、Ｔ細胞エンゲージャーは、細胞傷害性Ｔ細胞による標的細胞死滅を刺激するために患者に使用される。標的細胞は、疾患、障害、または状態、例えば、増殖性疾患および腫瘍性疾患に関与および／または関連する。ＣＩＤ低分子の同じ患者への投与は、第１の単量体と第２の単量体との会合を誘導し、Ｔ細胞エンゲージャードメインをＨＳＡと会合させ、それによってＴ細胞エンゲージャードメインの血清半減期を延長する。低分子は、組成物の投与の前、それと同時、またはその後に投与することができる。

【0259】

Ｔ細胞エンゲージャードメインの血清半減期は、少なくとも約１２時間、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約４日、少なくとも約６日、少なくとも約８日、少なくとも約１０日、少なくとも約１２日、または少なくとも約１４日に延長され得る。あるいは、血清半減期は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０倍、または一部の場合では１～１００倍延長され得る。Ｔ細胞エンゲージャーとＨＳＡとの会合を維持するために、患者はＣＩＤ低分子を定期的に投薬されてもよく、投薬の頻度は、ＣＩＤ低分子の血清半減期とＣＩＤ複合体の寿命との組合せに依存する。

【0260】

患者が、例えば安全性に対する懸念のために、Ｔ細胞エンゲージャーを迅速にクリアランスさせなければならない場合、患者は低分子の投薬を中止し、このことは、低分子のクリアランス、Ｔ細胞エンゲージャーのＨＳＡからの解離、および患者におけるＴ細胞エンゲージャーの急速なクリアランスを引き起こす。Ｔ細胞エンゲージャーのクリアランスの速度は、低分子の血清半減期と、ＣＩＤ低分子の第１および第２のＣＩＤドメインに対する結合親和性と、ＣＩＤ複合体の寿命と、もはやＨＳＡと会合していない場合のＴ細胞エンゲージャーのクリアランス速度との組合せに依存する。

【0261】

上に記載した方法は、患者におけるＴ細胞エンゲージャードメインの血清半減期の正確な時間制御を可能にし、多様な疾患または状態、例えば、増殖性疾患および腫瘍性疾患に罹患している患者に適用可能である。患者の疾患、および細胞傷害性Ｔ細胞によって標的とされると考えられる細胞に応じて、適切なＴ細胞エンゲージャードメインが、本明細書に記載される組成物に組み込まれるように設計可能である。例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、およびＢ細胞リンパ腫を含むがこれらに限定されない大半のＢ細胞悪性腫瘍に罹患している患者におけるＴ細胞エンゲージャードメインの血清半減期を扱うおよび制御するために、ＣＤ１９ ＡＢＤとＣＤ３ ＡＢＤとを含むＴ細胞エンゲージャードメインが本明細書に記載される組成物に組み込まれ得る。

【0262】

本明細書に記載される組成物の投与は、静脈内または局所を含むがこれらに限定されない多様な方法において行うことができる。

【0263】

投薬の量および投与の頻度は、好適な実施形態では、治療上または予防上効果的となるように選択される。当技術分野において公知であるように、任意の１名の患者に対する投薬量は、必要となる場合がある多くの因子、例えば、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与の時間および経路、薬物相互作用、ならびに状態の重症度に依存し、当業者であれば慣例的な実験によって確認可能であり得る。

【実施例】

【0264】

ここで概略的に記載された本発明は、単に本発明のある特定の態様および実施形態の例示の目的のためにのみ含まれ、本発明を限定することを意図していない以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるだろう。
［実施例１］

【0265】

第２のＣＩＤドメイン（ＡＺ２１）と治療ドメイン（抗ＣＤ３抗原結合ドメインと抗ＣＤ１９抗原結合ドメインとを含むＴ細胞エンゲージャードメイン）とを含む融合タンパク質部分を構築した。種々のフォーマットを図６に示す。これらの融合タンパク質部分のＴ細胞を活性化させる能力を試験した。

【0266】

Ｒａｊｉ Ｂリンパ腫細胞を、ＤＰＢＳ中でＣＦＳＥ－ＤＡ（Ｔｏｎｂｏ、７５０ｎＭの最終濃度）を用いて１０分間標識し、次いでＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地を用いて洗浄した。次いで、Ｒａｊｉ Ｂ細胞をＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞と１０：１のエフェクター：標的比において混合し、Ｕ底９６ウェルプレートに、ウェル１つ当たり合計１．１ｅ５個播種した。段階希釈した融合タンパク質部分を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２において１６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、膜不透過性タンパク質反応性色素（Ｂｉｏｔｉｕｍ ＣＦ４０５Ｓ－ＳＥ、１．５μＭの最終濃度）を添加することによって、３７℃において１０分間、生存に関して染色した。次いで直ちに、細胞を、パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１．６％の最終濃度）を添加することによって１０分間固定した。細胞を遠心分離し、上清を吸引し、次いで、ペレットを５０μＬのＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ６９（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＦＮ５０）に再懸濁し、室温において３０分染色した後、フローサイトメトリーによる測定を行った。生存Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＣＦ４０５Ｓ陰性、ＣＦＳＥ陰性）をＣＤ６９発現に関して、フローサイトメトリーおよび手動ゲーティングによって評価した。ＣＤ６９＋細胞の頻度を生存Ｊｕｒｋａｔ細胞のパーセントとして表す。非線形（ロジスティック）近似曲線およびＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８ソフトウェアにおいて算出した。図２０Ａ～２０Ｂに示すように、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５７、およびＡｂ６３はＴ細胞を活性化した。
［実施例２］

【0267】

Ｊｕｒｋａｔ／Ｒａｊｉ共培養アッセイを実施し、Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ６９発現を、実施例１に記載したようにフローサイトメトリーによって、以下の変更を加えて測定した：Ａｂ５９（抗ＨＳＡ ＢＣＬ２融合タンパク質）を、滴定されている融合タンパク質部分と等モル濃度において全てのウェルに添加した。次いで、細胞を３７℃において１０分間インキュベートした後、１０ｎＭのＡＢＴ－１９９（ベネトクラクス、黒丸）または媒体対照（ＤＭＳＯ、白丸）のいずれかを添加した。ＥＣ５０を各条件下において測定した。

【0268】

図２１に示すように、融合タンパク質部分のＴ細胞を活性化させる能力は、抗ＨＳＡ ＢＣＬ２融合タンパク質との複合体形成後、有意には影響を受けなかった。
［実施例３］

【0269】

融合タンパク質部分の、Ｔ細胞のＲａｊｉ Ｂリンパ腫細胞に対する細胞傷害性を誘導する能力を検討した。Ｒａｊｉ Ｂリンパ腫細胞を、ＤＰＢＳ中でＣＦＳＥ－ＤＡ（Ｔｏｎｂｏ、７５０ｎＭの最終濃度）を用いて１０分間標識し、次いでＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地を用いて洗浄した。次いで、Ｒａｊｉ Ｂ細胞を磁気分離初代ヒトＴ細胞（ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット、ネガティブセレクション；ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ１７９５１を用いて磁気分離した）と１０：１のエフェクター：標的比において混合し、Ｕ底９６ウェルプレートに、ウェル１つ当たり合計１．１ｅ５個播種した。段階希釈した融合タンパク質部分を添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２において４２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、膜不透過性タンパク質反応性色素（Ｂｉｏｔｉｕｍ ＣＦ４０５Ｓ－ＳＥ、１．５μＭの最終濃度）を添加することによって、３７℃において１０分間、生存に関して染色した。次いで直ちに、細胞を、パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１．６％の最終濃度）を添加することによって１０分間固定した。細胞を遠心分離し、上清を吸引し、次いで、ペレットを７５μＬのＡｕｔｏＭＡＣＳ泳動用緩衝剤（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に再懸濁した後、フローサイトメトリーによる測定を行った。Ｒａｊｉ細胞（ＣＦ４０５Ｓ陽性、ＣＦＳＥ陽性）を手動ゲーティングによって同定した。死（ＣＦ４０５Ｓ＋）Ｒａｊｉ細胞の頻度を全てのＲａｊｉ細胞のパーセントとして表す。非線形（ロジスティック）近似曲線およびＥＣ５０値を、Ｒ：Ａ Ｌａｎｇｕａｇｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇにおいてｄｒ４ｐｌパッケージを使用して算出した。

【0270】

図２２Ａに示すように、融合タンパク質部分Ａｂ５３およびＡｂ５７はＴ細胞のＲａｊｉ Ｂリンパ腫細胞に対する細胞傷害性を誘導した。

【0271】

初代Ｔ細胞／Ｒａｊｉ共培養アッセイを実施し、細胞傷害性を、上に記載したようにフローサイトメトリーによって、以下の変更を加えて測定した：Ａｂ５９（ヒトＩｇＧ１ ＦＣ ＢＣＬ２融合タンパク質）を、滴定されている抗体と等モル濃度において一部のウェルに添加した（図２２Ｂに示す丸）。Ａｂ５９を添加した後、細胞を３７℃において１０分間インキュベートし、次いで、ＡＢＴ－１９９（ベネトクラクス、図２２Ｂにおける黒い記号）または媒体対照（ＤＭＳＯ、図２２Ｂにおける白い記号）のいずれかを１０ｎＭの最終濃度において添加した。この実験に関して、共培養インキュベーション時間は４０時間であった。図２２Ｂに示すように、融合タンパク質部分のＴ細胞の細胞傷害性を誘導する能力は、抗ＨＳＡ ＢＣＬ２融合タンパク質との複合体形成後、有意には影響を受けなかった。
［実施例４］

【0272】

ヒトＩＬ－２を含有する融合タンパク質部分の、Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５転写因子を活性化させる能力をアッセイし、ヒトＩＬ－２と比較した。

【0273】

初代ヒトＴ細胞（ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット、ネガティブセレクション；ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃａｔ１７９５１を用いて磁気分離した）を、１ｅ６個／ｍＬにおいてＲＰＭＩ＋１０％ＦＣＳ培地に再懸濁し、示された濃度のヒトインターロイキン－２（ＩＬ－２）またはヒトＩＬ－２を含有する融合タンパク質部分を用いて、３７℃において１５分間処理した。Ａｂ９３は、ＡＺ２１の一本鎖Ｆｖ抗体断片のＣ末端と融合したヒトＩＬ－２である。Ａｂ９４は、ＡＺ２１の一本鎖Ｆｖ抗体断片のＮ末端と融合したヒトＩＬ－２である。インキュベーション後直ちに、細胞を、パラホルムアルデヒド（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１．６％の最終濃度）を添加することによって１０分間固定した。細胞を遠心分離し、上清を吸引し、次いで、ペレットを氷冷１００％メタノールに４℃において１０分間再懸濁した。メタノールを、等容量のＡｕｔｏＭＡＣＳ泳動用緩衝剤（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて希釈し、細胞を再び遠心分離した。細胞を、ＡｕｔｏＭＡＣＳ泳動用緩衝剤を用いて再び洗浄し、次いで、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトホスホ－ＳＴＡＴ５（ｐＹ６９４）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、クローン４７）を用いて、室温において３０分間染色した。細胞を再び２回洗浄した後、フローサイトメトリーによる測定を行った。リン酸化ＳＴＡＴ５の存在量を、一重項ゲーティング細胞（ｓｉｎｇｌｅｔ－ｇａｔｅｄ ｃｅｌｌ）間の蛍光強度中央値として表す。中央値の値はＣｙｔｏｂａｎｋソフトウェア（cytobank.org）において算出した。

【0274】

図２３に示すように、ヒトＩＬ－２を含有する融合タンパク質部分は、Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５転写因子をヒトＩＬ－２と同程度活性化することができる。
［実施例５］

【0275】

ｈｉｓタグを付されている融合タンパク質部分をＮｉ－ＮＴＡ樹脂によって精製した。精製後、融合タンパク質部分を、２８０ｎｍのＵＶ下においてモニタリングしたＳｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ＧＬカラムにおいて行ったサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに分離した。各融合タンパク質部分のサイズ排除クロマトグラフィーのクロマトグラムを図２４に示した。
［実施例６］

【0276】

融合タンパク質部分とＢＣＬ－２との間の結合動態をバイオレイヤー干渉法によってアッセイした。図２５Ａに示すように、Ａｂ５３およびＡｂ５７は、ＡＢＴ－１９９の存在下ではＢＣＬ－２への強力かつ可逆的な結合を示し（灰色の線）、ＡＢＴ－１９９の非存在下では有意な結合は観察されなかった（黒色の線）。図２６に示すように、Ａｂ９３およびＡｂ９４は、ＡＢＴ－１９９の存在下ではＢＣＬ－２への強力かつ可逆的な結合を示し（右）、ＡＢＴ－１９９の非存在下では有意な結合は観察されなかった（左）。曲線は、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４において測定したデータ点を表す。ＫＤもまた算出した。

【0277】

ＢＣｌ－２融合タンパク質Ａｂ５９とＡＺ－２１との間の結合動態をバイオレイヤー干渉法によってアッセイした。図２５Ｂに示すように、Ａｂ５９は、ＡＢＴ－１９９の存在下ではＡＺ２１への強力かつ可逆的な結合を示し（灰色）、ＡＢＴ－１９９の非存在下では有意な結合は観察されなかった（黒色）。曲線は、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４において測定したデータ点を表す。
［実施例７］

【0278】

Ｂｃｌ－２ ＣＩＤドメインはＡＺ２１ ＣＩＤドメインと二量体形成する
ＣＩＤドメインＢｃｌ－２（Ｃ１５８Ａ）とその同族ＣＩＤドメインＡＺ２１との結合をＣＩＤ低分子ＡＢＴ－１９９の存在下または非存在下で試験した。単一ドメイン抗ＨＳＡ抗体と連結されたＢＣＬ－２（Ｃ１５８Ａ）から構成される単量体（配列は図３０Ａを参照されたい）をＣＨＯ細胞において産生および精製した。同族ＣＩＤドメインＡＺ２１は、Ｆａｂフォーマットにおいて産生され、ｖｈ－ＣＤＲ１（配列番号１）、ｖｈ－ＣＤＲ２（配列番号７２）、ｖｈ－ＣＤＲ３（配列番号１２９）、ｖｌ－ＣＤＲ１（配列番号３１０）、ｖｌ－ＣＤＲ２（配列番号３１１）、およびｖｌ－ＣＤＲ３（配列番号２２３）を含む。ＡＺ２１を固定化し、単量体とＡＺ２１との結合ダイナミクスを１μＭのＡＢＴ－１９９の存在下または非存在下でＯｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４によって測定した。図３０Ｂは、ＡＢＴ－１９９がＢｃｌ－２（Ｃ１５８Ａ）とその同族ＣＩＤドメインＡＺ２１との結合を媒介し、ＡＢＴ－１９９の非存在下では有意な結合が観察されなかったことを示す。
［実施例８］

【0279】

Ａｂ５７＋Ａｂ５９ ＰＫ研究
１０匹の６週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを、それぞれ５匹の２つの群に無作為化した。抗体投与の６日前に、２５μＬの血液試料を、前処置対照試料として全てのマウスから採取し、血漿に処理し、ＰＢＳ中５０％グリセロールに１／１０に希釈し、特殊９６ウェル保存プレート中で凍結させ、－２０℃において保存した。抗体投与の２時間前に、第１群のマウスに５ｍｇ／ｋｇ、すなわち５ｍｌ／ｋｇのベネトクラクスを投薬（強制経口投与）し、第２群のマウスに５ｍｌ／ｋｇの媒体を投薬（強制経口投与）した。抗体投与の２２、４６、７０、９４、１４２、および１６６時間後に、マウスにこれらの化合物を反復投薬した。０日目の０時間の時点において、Ａｂ９３およびＡｂ５９をそれぞれ０．１５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ、合計５ｍｌ／ｋｇに組み合わせ、ＩＶ注射した。２５μＬの血液試料を、３分、３０分、１時間、２時間、６時間、１日、３日、および７日時点において全てのマウスから採取した。血液試料を上に記載したように処理した。血漿試料をＥＬＩＳＡによって評価した。ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡ（Ｍａｂｔｅｃｈ）を使用してＡｂ５９濃度を測定した。特注のヒトＦａｂ ＥＬＩＳＡ（マウス抗ヒトＩｇＧカッパ捕捉抗体、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、およびヤギ抗ヒトＦａｂ検出抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用してＡｂ５７濃度を測定した。ＰＫ解析を、ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して、Ａｂ９３およびＡｂ５９のＥＬＩＳＡから生成した血漿濃度に対して行った。
［実施例９］

【0280】

Ａｂ９３＋Ａｂ５９ ＰＫ研究
１０匹の６週齢Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスを、それぞれ５匹の２つの群に無作為化した。抗体投与の６日前に、２５μＬの血液試料を、前処置対照試料として全てのマウスから採取し、血漿に処理し、ＰＢＳ中５０％グリセロールに１／１０に希釈し、特殊９６ウェル保存プレート中で凍結させ、－２０℃において保存した。抗体投与の２時間前に、第１群のマウスに５ｍｇ／ｋｇ、すなわち５ｍｌ／ｋｇのベネトクラクスを投薬（強制経口投与）し、第２群のマウスに５ｍｌ／ｋｇの媒体を投薬（強制経口投与）した。抗体投与の２２、４６、７０、９４、１４２、および１６６時間後に、マウスにこれらの化合物を反復投薬した。０日目の０時間の時点において、Ａｂ９３およびＡｂ５９をそれぞれ０．１５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ、合計５ｍｌ／ｋｇに組み合わせ、ＩＶ注射した。２５μＬの血液試料を、３分、３０分、１時間、２時間、６時間、１日、３日、および７日時点において全てのマウスから採取した。血液試料を上に記載したように処理した。血漿試料をＥＬＩＳＡによって評価した。ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡ（Ｍａｂｔｅｃｈ）を使用してＡｂ５９濃度を測定し、ヒトＩＬ－２ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＡｂ９３濃度を測定した。ＰＫ解析を、ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを使用して、Ａｂ９３およびＡｂ５９のＥＬＩＳＡから生成した血漿濃度に対して行った。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25A】

【図25B】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30A】

【図30B】

【図31A】

【図31B】

【図32】

【図33】

【配列表】

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【国際調査報告】