特表 2023-509083 腫瘍を予防又は治療するための薬物の調製における抗ＣＤ４７抗体と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-06

(54)【発明の名称】腫瘍を予防又は治療するための薬物の調製における抗ＣＤ４７抗体と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230227BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230227BHJP

   C07K 16/30 20060101ALN20230227BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20230227BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 T

A61P43/00 121

A61P35/00

C07K16/30 ZNA

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022542078

(86)(22)【出願日】2021-01-06

(85)【翻訳文提出日】2022-07-07

(86)【国際出願番号】 CN2021070493

(87)【国際公開番号】W WO2021139687

(87)【国際公開日】2021-07-15

(31)【優先権主張番号】202010023504.0

(32)【優先日】2020-01-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519274183

【氏名又は名称】イノベント バイオロジクス（スーチョウ）カンパニー，リミティド

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100108903

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 和広

(74)【代理人】

【識別番号】100123593

【弁理士】

【氏名又は名称】関根 宣夫

(74)【代理人】

【識別番号】100208225

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 修二郎

(74)【代理人】

【識別番号】100217179

【弁理士】

【氏名又は名称】村上 智史

(74)【代理人】

【識別番号】100227592

【弁理士】

【氏名又は名称】孔 詩麒

(72)【発明者】

【氏名】ピンリャン チェン

(72)【発明者】

【氏名】ウー ミン

(72)【発明者】

【氏名】ウー ウェイウェイ

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085BB11

4C085EE03

4H045AA11

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における、完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体である抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの応用を開示する。また、本発明は、抗腫瘍薬物組成及びその応用を更に開示する。本発明により提供される抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の併用は優れた抗腫瘍有効性を有する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの使用であって、
前記抗ＣＤ４７抗体は完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体であり、
前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は重鎖可変領域ＶＨと軽鎖可変領域ＶＬとを含み、前記ＶＨは、配列番号３又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ１と、配列番号４に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ２と、配列番号５又は配列番号１２に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ３とを含み、前記ＶＬは、配列番号６に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ１と、配列番号７に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ２と、配列番号８に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ３とを含む、
使用。

【請求項2】

前記重鎖可変領域ＶＨは配列番号９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域ＶＬは配列番号１０に示される配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する配列を含み、
好ましくは、前記重鎖可変領域ＶＨのアミノ酸配列は配列番号９に示され、前記軽鎖可変領域ＶＬのアミノ酸配列は配列番号１０に示されている、ことを特徴とする、
請求項１に記載の使用。

【請求項3】

前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記重鎖は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する、ことを特徴とする、
請求項１に記載の使用。

【請求項4】

前記抗ＣＤ２０抗体は抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であり、
好ましくは、前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、オビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブチウキセタン（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、オクレリズマブ（ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）又はリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）であり、
好ましくは、前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体はリツキシマブである、ことを特徴とする、
請求項１～３のいずれか１項に記載の使用。

【請求項5】

有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片及び抗ＣＤ２０抗体を含む、単回薬物用量ユニット。

【請求項6】

有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ及び薬学的に許容可能な担体を含む、薬物組成物。

【請求項7】

有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ、請求項５に記載の単回薬物用量ユニット又は請求項６に記載の薬物組成物を含み、
好ましくは、同じ包装には、
－前記抗ＣＤ４７抗体を含む非経口投与用の薬物組成物を含有する第１容器と、
－前記抗ＣＤ２０抗体を含む非経口投与用の薬物組成物を含有する第２容器と、を含む、
薬物キット。

【請求項8】

腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ、請求項５に記載の単回薬物用量ユニット、請求項６に記載の薬物組成物又は請求項７に記載の薬物キットの使用であって、
好ましくは、前記腫瘍及び／又は癌は血液腫瘍、より好ましくはリンパ腫、更に好ましくはＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫である、
使用。

【請求項9】

腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療する抗ＣＤ２０抗体の治療効果を強化する製品の調製における抗ＣＤ４７抗体の使用であって、
好ましくは、前記抗ＣＤ４７抗体は請求項１～３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体であり、
好ましくは、前記抗ＣＤ２０抗体は請求項４に記載の抗ＣＤ２０抗体であり、
好ましくは、前記腫瘍は血液腫瘍、より好ましくはリンパ腫、更に好ましくはＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫である、
使用。

【請求項10】

有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ、請求項５に記載の単回薬物用量ユニット、請求項６に記載の薬物組成物又は請求項７に記載の薬物キットを個体に投与するステップを含む、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、バイオテクノロジー分野に属し、抗腫瘍薬物組成及びその使用に関し、特に腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における、抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体とを含む組み合わせの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

リツキシマブは、ヒトＣＤ２０分子を標的とするモノクローナル抗体であり、ＡＤＣＣ、ＣＤＣなどの作用を介してＣＤ２０陽性腫瘍細胞を除去することができ、現在、非ホジキンリンパ腫の第一選択治療として使用されている。リツキシマブは非ホジキンリンパ腫の治療として優れた効果があるが、既存のデータによって、患者体内のＦｃＲ多型、ＣＤ２０標的の喪失などの原因により、患者のリツキシマブに対する薬物耐性が生じ、再発難治性が示されることが分かっている。

【0003】

表面抗原分類４７（ＣＤ４７）はインテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）とも呼ばれ、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーである。幾つかの研究によれば、ほとんどの腫瘍細胞及び組織はＣＤ４７を高発現させた。現在、複数の抗ＣＤ４７抗体が様々な腫瘍及び／又は癌の治療用として開発されたことが報告されている。

【0004】

ｆｏｒｔｙ－ｓｅｖｅｎ社には、抗ＣＤ４７抗体とリツキシマブの併用投与計画及び製品があるが、腫瘍形成メカニズムの複雑さ、異なる抗ＣＤ４７抗体薬物とリツキシマブの相互作用の予測不可能性などの要因を考えると、既知の併用投与計画と比べてより優れた効果（単回薬物用量を減らし、治療中の有害事象（ＡＥ）の発生率及び／又は重症度を改善し、及び／又は相乗的に作用するなど）をもたらすことができる実行可能な併用投与計画及び製品の開発は、依然として医薬分野における大きなチャレンジである。

【0005】

これらを鑑み、より優れた抗腫瘍有効性を示すことができる改善された抗腫瘍薬物組成を開発することは依然として必要である。

【発明の概要】

【0006】

本発明の目的は、従来技術よりも優れた腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における抗ＣＤ４７抗体と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの使用を提供することである。

【0007】

一態様では、本発明は、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における、完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体である抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせの使用を提供する。

【0008】

前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は重鎖可変領域ＶＨと軽鎖可変領域ＶＬを含み、前記ＶＨは、配列番号３又は配列番号１１に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ１と、配列番号４に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ２と、配列番号５又は配列番号１２に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＨＣＤＲ３とを含み、前記ＶＬは、配列番号６に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ１と、配列番号７に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ２と、配列番号８に示されるアミノ酸配列である相補性決定領域ＬＣＤＲ３とを含む。

【0009】

幾つかの実施形態において、上記使用では、前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の重鎖可変領域ＶＨは配列番号９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号１０に示される配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有する配列を含む。

【0010】

好ましくは、前記重鎖可変領域ＶＨのアミノ酸配列は配列番号９に示され、前記軽鎖可変領域ＶＬのアミノ酸配列は配列番号１０に示されている。

【0011】

幾つかの実施形態において、上記のいずれか１つに記載の使用では、前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は重鎖と軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％、９５％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0012】

好ましくは、前記重鎖は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する。

【0013】

幾つかの実施形態において、前記完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は特許公開番号ＷＯ２０１９０４２２８５Ａ１に開示される抗ＣＤ４７モノクローナル抗体である。本願の目的のために、当該ＰＣＴ出願の内容の全ては、ここで参照として本明細書に組み込まれる。そのうち、前記抗ＣＤ４７抗体は、好ましくはＷＯ２０１９０４２２８５Ａ１に開示される抗ＣＤ４７抗体ＡＤＩ－２６６３０である。本明細書において、使用される当該抗ＣＤ４７抗体の配列に対して番号を付け直した。

【0014】

幾つかの実施形態において、上記のいずれか１つに記載の使用では、前記抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、イブリツモマブチウキセタン（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、オクレリズマブ（ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）又はリツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）など、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。

【0015】

幾つかの実施形態において、上記のいずれか１つに記載の使用では、前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体はリツキシマブである。

【0016】

別の態様では、本発明は、有効量の上記のいずれか１つに記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片及び抗ＣＤ２０抗体を含む単回薬物用量ユニットを更に提供する。

【0017】

別の態様では、本発明は、有効量の上記のいずれか１つに記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ及び薬学的に許容可能な担体を含む薬物組成物を更に提供する。

【0018】

別の態様では、本発明は、上記薬物組成物を含む薬物キットを更に提供する。

【0019】

好ましくは、前記薬物キットは単回薬物用量ユニット形式である。

【0020】

幾つかの実施形態において、上記薬物キットの同じ包装には、
－上記のいずれか１つに記載の抗ＣＤ４７抗体を含む非経口投与用の薬物組成物を含有する第１容器と、
－上記のいずれか１つに記載の抗ＣＤ２０抗体を含む非経口投与用の薬物組成物を含有する第２容器と、を含む。

【0021】

別の態様では、本発明は、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における上記のいずれか１つに記載の薬物組成、単回薬物用量ユニット又は薬物キットの使用を更に提供する。前記腫瘍及び／又は癌は、好ましくは血液腫瘍、より好ましくはリンパ腫、更に好ましくはＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫である。

【0022】

別の態様では、本発明は、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療するための薬物の調製における上記のいずれか１つに記載の組成物の使用を更に提供する。前記腫瘍及び／又は癌は、好ましくは血液腫瘍、より好ましくはリンパ腫、更に好ましくはＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫である。

【0023】

別の態様では、本発明は、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療する抗ＣＤ２０抗体の治療効果を強化する製品の調製における抗ＣＤ４７抗体の使用を更に提供する。前記腫瘍及び／又は癌は、好ましくは血液腫瘍、より好ましくはリンパ腫、更に好ましくはＣＤ２０陽性非ホジキンリンパ腫である。

【0024】

別の態様では、本発明は、有効量の上記のいずれか１つに記載の抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片と抗ＣＤ２０抗体の組み合わせ、上記のいずれか１つに記載の単回薬物用量ユニット、上記のいずれか１つに記載の薬物組成物又は上記のいずれか１つに記載の薬物キットを個体に投与するステップを含む、腫瘍及び／又は癌を予防及び／又は治療する方法を更に提供する。

【0025】

本発明に関与する抗ＣＤ４７抗体は、全く新しい完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体であり、単独投与の場合でも、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるリツキシマブとの併用投与の場合でも、ｆｏｒｔｙ－ｓｅｖｅｎ社のＨｕ５Ｆ９抗体よりも優れた抗腫瘍有効性が示されており、特に当該完全ヒト抗ＣＤ４７モノクローナル抗体とリツキシマブの併用投与によって得られた抗腫瘍有効性は、Ｈｕ５Ｆ９抗体とリツキシマブの併用投与によって得られた抗腫瘍効果よりも有意に優れている。

【0026】

本発明は、本発明の抗ＣＤ４７抗体を併用することによって、マクロファージ媒介性食作用を増加させるのに役立ち、更にリツキシマブの有効性を高めることができ、従来技術の抗ＣＤ４７抗体とリツキシマブの組み合わせと比べ、より優れた抗腫瘍有効性が示され、患者体内のＦｃＲ多型、ＣＤ２０標的の喪失などの原因により、患者のリツキシマブに対する薬物耐性が生じることを効果的に解決するという問題において、優れた応用の見通しがある。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】各群の担癌マウスの体重変化率である。

【図2】各群の担癌マウスの腫瘍体積変化である。

【図3】低用量群の担癌マウスの腫瘍体積変化である。

【図4】高用量群の担癌マウスの腫瘍体積変化である。

【発明を実施するための形態】

【0028】

発明の詳細
定義
「及び／又は」という用語は、選択可能オプションのうちのいずれか１項又は選択可能オプションのいずれか２項又は複数項の組み合わせを指すと理解すべきである。

【0029】

「包含する」又は「含む」という用語は、前記要素、整数又はステップを含むが、任意の他の要素、整数又はステップを排除しないことを意味する。本明細書において、「包含する」又は「含む」という用語を用いる場合、特記しない限り、前記要素、整数又はステップからなる場合も含まれる。例えば、ある具体的な配列を「包含する」抗体可変領域が言及される場合、当該配列からなる抗体可変領域を含むことも意図する。

【0030】

本明細書において、「抗体」という用語は、少なくとも軽鎖又は重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドを指し、前記免疫グロブリン可変領域は、抗原を特異的に認識して結合する。当該用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体又は多重鎖抗体、単特異性又は多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全ヒト化抗体又はキメラ抗体又はヒト化抗体、全長抗体及び抗体断片などの様々な抗体構造を含むが、これらに限定されず、所望の抗原結合活性を示せばよい。

【0031】

抗体の「抗原結合断片」（本明細書では、「抗体断片」及び「抗原結合部分」と互換的に使用される）という用語は、完全な抗体でない分子を指し、完全な抗体における当該完全な抗体に結合される抗原に結合するための部分を包含する。当業者には理解されるように、抗体の抗原結合部分は、通常、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基を包含する。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、又は酵素もしくは化学的手段により完全な抗体を切断することによって調製することができる。抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ、二重鎖抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、三重鎖抗体（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、四重鎖抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニ抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含むが、これらに限定されない。抗体断片のより詳細な説明については、基礎免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９３）、邵栄光 ｅｔ ａｌ．（編集），抗体薬物研究及び応用，人民衛生出版社（２０１３）、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。

【0032】

「予防」という用語は、疾患又は病症又はその症状の発症又は発症頻度に対する阻害又は遅延を含み、一般的には、病症又は症状の発症前、特にリスクのある個体の病症又は症状の発症前の薬物投与を指す。

【0033】

本明細書で使用される「治療」という用語は、疾患の臨床的又は診断的症状の緩和又は解消によって証明される対象における癌の進行の遅延、停止又は逆転を指す。治療には、例えば、症状の重症度、症状の数又は再発頻度の減少、例えば、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の停止又は既存腫瘍の退縮が含まれてよい。

【0034】

本明細書で使用される「単回薬物用量ユニット」という用語は、投与計画の時刻に、注射液、錠剤及び凍結乾燥粉末などを含む、患者に投与する単回薬物剤形を表す。

【0035】

「薬物組成」という用語は、非固定組み合わせ製品、又は、薬物キットなどの固定組み合わせ製品を指す。「非固定組み合わせ」という用語は、活性成分（例えば、（ｉ）抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片、及び、（ｉｉ）抗ＣＤ２０抗体）が別々の実体として、同時に、特定の時間制限なしに、又は、同じ又は異なる時間間隔で、患者に連続して投与されることを意味する。そのうち、このような投与は、患者の体内において予防的または治療的に有效なレベルの前記２つの活性剤を提供する。幾つかの実施形態において、薬物組成で使用される抗ＣＤ４７抗体分子と抗ＣＤ２０抗体の２つの分子は、それらが単独で使用される場合のレベルを超えないレベルで投与される。「固定組み合わせ」という用語は、２つの活性剤が単一実体の形態で同時に患者に投与されることを意味する。好ましくは、各成分の併用が疾患又は病症の治療において、いずれかの成分を単独で使用する場合よりも、大きな効果を達成できるように、２つの活性剤の用量及び／又は時間間隔を選択する。各成分はそれぞれ、単独の製剤形態であってもよく、その製剤形態は同じであってもよく、異なってもよい。

【0036】

「投与」という用語は、当業者に知られている様々な方法及び送達システムのうちのいずれか１つを使用して本発明の薬物組成における各活性成分を個体に物理的に導入することを意味する。本発明の薬物組成における各活性成分の投与経路は、経口、静脈内（例えば、注入（点滴とも呼ばれる）又は注射）、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄、局所又は他の非経口投与経路を含む。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、胃腸及び局所投与以外の、通常静脈内の投与方式を指し、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊柱内、硬膜外及び胸骨内の注射及び注入、並びにインビボ電気穿孔を非制限的含む。対応的に、本発明の薬物組成における各活性成分は、カプセル剤、錠剤、注射剤（注入液又は注射液を含む）、シロップ、スプレー剤、トローチ剤、リポソーム又は坐剤などに調製できる。

【0037】

「用量」という用語は、治療効果を引き出す薬物の量である。特に断らない限り、用量は遊離形態の薬物の量に関連している。薬物が薬学的許容可能な塩の形態である場合、薬物の量は遊離形態の薬物の量に比例して増加する。例えば、用量は製品包装又は製品情報シートに記載されている。

【0038】

本発明の薬物組成は、１つ又は複数の従来の療法で治療されたが、その後再発又は転移した個体に投与することができる。

【0039】

本明細書で使用されるように、「モノクローナル抗体」という用語は、その調製方法ではなく、単一のアミノ酸からなる抗体分子を有する調製物を指す。モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、ＣＤＲグラフトなどの合成技術、若しくは類似の技術、又は当該分野で既知の他の技術の組み合わせにより産生できる。

【0040】

本明細書で使用されるように、「結合」及び「特異的結合」という用語は、抗体又は抗原結合部分がインビトロアッセイ、好ましくは精製された野生型抗原を使用した生物光学干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）において抗原エピトープに結合することを指す。特定の実施形態において、抗体又は抗原結合部分が好ましくタンパク質及び／又は高分子の複雑な混合物中のその標的抗原を認識する場合、抗体又は抗原結合部分を特異的結合抗原と呼ぶ。

【0041】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原の結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖と軽鎖の可変ドメインは、通常、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存的なフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの相補性決定領域とを含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．９１ページ（２００７）が参照される）。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインでも、抗原結合特異性を付与することができる。なお、特定の抗原に結合する抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを利用して前記抗原に結合する抗体を分離することによって、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）が参照される。

【0042】

可変領域は通常、３つの相補性決定領域又はＣＤＲとも呼ばれる超可変領域によって接続された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と同じである一般的な構造を示している。各ペアの２本の鎖からのＣＤＲは通常、フレームワーク領域によって整列（ａｌｉｇｎ）され、前記ＣＤＲにより、特異的エピトープに結合可能にする。２本の軽鎖と重鎖の可変領域は一般に、Ｎ－末端からＣ－末端まで、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。

【0043】

「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ領域」又は「ＣＤＲ」又は「超可変領域」（本明細書では、超可変領域「ＨＶＲ」と互換的に使用できる）は、配列が超可変であり、構造的に決定されたリング（「超可変リング」）を形成する及び／又は抗原接触残基（「抗原接触点」）を含む抗体可変ドメイン内の領域である。ＣＤＲは、主に抗原エピトープに結合する役割を果たす。重鎖と軽鎖のＣＤＲは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ－末端から順に番号付けられる。抗体の重鎖可変ドメイン内に位置するＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３と呼ばれ、抗体の軽鎖可変ドメイン内に位置するＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３と呼ばれる。１つの特定の軽鎖可変領域又は重鎖可変領域のアミノ酸配列において、各ＣＤＲにおける正確なアミノ酸配列の境界は、多くの公知の抗体ＣＤＲ割り当てシステムのいずれか１種又はその組合せにより正確に決定できる。前記割り当てシステムの例は、抗体の三次元構造とＣＤＲリングのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３，Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、抗体配列可変性に基づくＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７））、ＡｂＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）、Ｃｏｎｔａｃｔ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）、国際的ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＭＧＴ）（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／にて利用可能）、大量の結晶構造が利用されるアフィニティ伝播クラスタリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づくＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義を含む。

【0044】

例えば、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの番号付けを使用したＣＤＲ領域は、異なる定義範囲を有する。

【0045】

【表1】

【0046】

本発明の抗体のＣＤＲは、当該分野の任意の形態又はその組み合わせ及び人間による評価に従って境界を決定することができる。

【0047】

ＣＤＲは、参照ＣＤＲ配列と同じＫａｂａｔ番号付け位置を有することに基づいて決定することもできる。

【0048】

特に断らない限り、本発明において、「ＣＤＲ」又は「ＣＤＲ配列」という用語は、上記のいずれかの方法で決定されるＣＤＲ配列を含む。

【0049】

特に断らない限り、本発明において、抗体可変領域における残基位置（重鎖可変領域残基と軽鎖可変領域残基を含む）を言及する場合、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））に基づいた番号付け位置を指す。

【0050】

一実施形態において、本発明の抗体のＣＤＲの境界はＫａｂａｔ規則により決定され、例えば、下記表２に示される。

【0051】

一実施形態において、本発明の抗体のＣＤＲの境界はＫａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ及び経験などの統合的な要因を組み合わせることにより決定され、例えば、下記表２に示される：ＶＬ内の位置ＲＡＳＱＧＩＳＲＷＬＡ（ＬＣＤＲ１）、位置ＡＡＳＳＬＱＳ（ＬＣＤＲ２）と位置ＱＱＴＶＳＦＰＩＴ（ＬＣＤＲ３）、及び、ＶＨ内の位置ＧＳＩＳＳＹＹＷＳ（ＨＣＤＲ１）、位置ＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ＨＣＤＲ２）と位置ＡＲＧＫＴＧＳＡＡ（ＨＣＤＲ３）である。

【0052】

ただし、異なる割り当てシステムに基づいて得られた同一抗体の可変領域のＣＤＲの境界には、差異がある可能性があることを認識すべきである。即ち、異なる割り当てシステムで定義された同一抗体の可変領域のＣＤＲ配列には違いがある。従って、本発明で定義された具体的なＣＤＲ配列により抗体が限定される場合、前記抗体の範囲には、可変領域配列が前記具体的なＣＤＲ配列を含むが、異なる形態（例えば、異なる割り当てシステムのルール又は組合せ）が使用されることにより、かかるＣＤＲ境界が本発明で定義された具体的なＣＤＲ境界と異なるような抗体も含まれる。

【0053】

異なる特異性（即ち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。しかし、抗体と抗体との間にあるＣＤＲが異なるにもかかわらず、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位置のみが抗原との結合に直接参与する。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ及びＮｏｒｔｈ方法のうちの少なくとも２種を用いて、最小重複領域を決定し、それによって抗原結合用の「最小結合単位」を提供することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの１つのサブ部分であってもよい。当業者が明らかにしたように、抗体の構造とタンパク質のフォールディングによって、ＣＤＲ配列の残り部分の残基を確定することができる。従って、本発明は、本願に提供される如何なるＣＤＲの変異体も考慮する。例えば、１つのＣＤＲの変異体において、最小結合単位のアミノ酸残基はそのまま保持することができ、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａに基づいて定義された残りのＣＤＲ残基は保守的なアミノ酸残基で置換されることができる。

【0054】

以下のとおりに配列間の配列同一性を計算する。

【0055】

２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列における同一性パーセンテージを決定するために、前記配列を最適な比較の目的でアラインメントする（例えば、最適な比較のために第１アミノ酸配列と第２アミノ酸配列又は核酸配列のいずれかもしくは両方にギャップを導入するか、又は比較の目的で非相同配列を捨ててもよい）。１つの好ましい実施形態において、比較の目的で、アラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、少なくとも６０％、さらに好ましくは少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％である。次に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第１配列における位置が、第２配列における対応の位置での同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占有されている場合、前記分子はこの位置において同一である。

【0056】

数学的アルゴリズムを用いて、２つの配列間の配列比較及び同一性パーセンテージの計算を実現できる。１つの好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間における同一性パーセンテージは、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに統合されているＮｅｅｄｌｅｍａ及びＷｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３）アルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて取得可能）により、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２行列もしくはＰＡＭ２５０行列、ギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６もしくは４と長さ重み１、２、３、４、５もしくは６を用いて決定される。別の好ましい実施形態において、２つのヌクレオチド配列間における同一性パーセンテージは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて取得可能）により、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、ギャップ重み４０、５０、６０、７０もしくは８０と長さ重み１、２、３、４、５もしくは６を用いて決定される。特に好ましいパラメータセット（特に断らない限り、１つのパラメータセットを使用すべきである）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、フレームシフトギャップペナルティ５のＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリング行列を採用する。

【0057】

更に、２つのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列間における同一性パーセンテージは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒアルゴリズム（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７）により、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長さペナルティ１２、ギャップペナルティ４を用いて決定されることができる。

【0058】

有効量は、当業者である主治医により、例えば、哺乳類の生物種、その大きさ、年齢、一般健康状態、関連する特定の疾患、疾患の程度又は重症度、個体患者の応答、投与される特定の抗体、投与方式、投与製剤の生物学的利用能の特徴、選択される投与計画、及び任意の併用療法の適用などの複数種の要因を考慮して容易に決定されることができる。

【0059】

上記のように、場合によっては、抗体及びその標的抗原の間の相互作用は標的の機能を妨害する可能性がある。投与に必要な量は、その特異的抗原に対する抗体の結合親和性に更に依存し、投与を受けた被験者における投与された抗体のクリアランス速度にも依存する。「個体」又は「被験者」は、哺乳動物を含む。哺乳動物は、家畜（例えば、ウシ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類動物（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類動物）、ウサギ、及びげっ歯類動物（例えば、マウス、ラット）を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、個体又は被験者はヒトである。

【0060】

「抗ＣＤ４７抗体」、「抗ＣＤ４７」、「ＣＤ４７抗体」又は「ＣＤ４７に結合する抗体」という用語は、標的ＣＤ４７における診断剤及び／又は治療剤として使用できるように、十分な親和性でＣＤ４７タンパク質又はその断片に結合する抗体を指す。

【0061】

本発明の抗ＣＤ４７抗体の重鎖配列は、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＫＴＧＳＡＡＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号１）である。

【0062】

本発明の抗ＣＤ４７抗体の軽鎖配列は、
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＲＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＶＳＦＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２）である。

【0063】

本発明の抗ＣＤ４７抗体の重鎖と軽鎖ＣＤＲの配列は表２に示されている。本発明の抗ＣＤ４７抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の配列は表３に示されている。

【0064】

【表2】

【0065】

【表3】

【実施例】

【0066】

発明を実施するための形態
特に断らない限り、下記実施例で使用される実験方法は、いずれも従来の方法である。特に断らない限り、下記実施例で使用される材料、試薬などは、いずれも商業的に入手可能である。

【0067】

以下、具体的な実施例と組み合わせて本発明を更に説明する。以下の実施例は、本発明を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。

【0068】

Ｒａｊｉリンパ腫細胞はＡＴＣＣ製品であり、カタログ番号はＣＣＬ－８６ＴＭであり、バッチ番号は５８７７０５７６である。

【0069】

Ｍａｔｒｉｇｅｌゲルは米国ＣＯＲＮＩＮＧ製品であり、カタログ番号は３５６２３１である。

【0070】

ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウス（雌，３５日齢～４１日齢）は、北京維通利華実験動物技術有限公司から購入し、合格証明書番号は１１００１１１９１１００６８６５である。
ｈ－ＩｇＧはＥｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ製品であり、カタログ番号はＳＬＨ５６であり、バッチ番号は１６０３０８－０２である。

【0071】

実施例１．抗ＣＤ４７抗体、Ｈｕ５Ｆ９抗体及びリツキシマブの製造及び精製
１、抗ＣＤ４７抗体
本実施例における抗ＣＤ４７抗体は、特許公開番号ＷＯ２０１９０４２２８５Ａ１に開示される抗ＣＤ４７モノクローナル抗体である。本願の目的のために、当該ＰＣＴ出願の内容の全ては、ここで参照として本明細書に組み込まれる。そのうち、前記抗ＣＤ４７抗体は、好ましくはＷＯ２０１９０４２２８５Ａ１に開示される抗ＣＤ４７抗体ＡＤＩ－２６６３０である。本明細書において、使用される当該抗ＣＤ４７抗体の配列に対して番号を付け直した。

【0072】

本発明の例示的な抗ＣＤ４７抗体のＣＤＲ領域、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域、軽鎖と重鎖のアミノ酸配列は、本願の「配列表」に列挙されている。なお、上記の本発明の例示的な抗体のＣＤＲ領域、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の配列番号は表２と表３に示されている。

【0073】

酵母及びＣＨＯ－Ｓ細胞において、本発明の抗ＣＤ４７抗体を発現して精製する。

【0074】

酵母における発現及び精製：
従来の方法（ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、Ｗ０２０１２００９５６８）に従って、酵母ベースの抗体ディスプレイ（ｙｅａｓｔ－ｂａｓｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）ライブラリー（Ａｄｉｍａｂ）に基づき、各ライブラリーの多様性が１×１０^９になるよう増幅させる。簡単に説明すると、最初の２回のスクリーニングにおいて、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社のＭＡＣＳシステムを利用して磁気活性化細胞選別を行う。まず、ライブラリーの酵母細胞（～１×１０^１０細胞／ライブラリー）を、１００ｎＭのビオチンで標識されたＣＤ４７抗原（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＣＤ７－Ｈ５２２７－１ｍｇ）を含有するＦＡＣＳ洗浄緩衝液（０．１％のウシ血清タンパク質を含有するリン酸塩緩衝液）に室温でそれぞれ１５ｍｉｎインキュベートした。５０ｍＬの予め冷却されたＦＡＣＳ洗浄緩衝液で１回洗浄し、更に４０ｍＬの同じ洗浄緩衝液で細胞を再懸濁させ、５００μｌのストレプトマイシンビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳ）を加えて４℃で１５ｍｉｎインキュベートした。１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離して上清を捨てた後、５ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で細胞を再懸濁させ、細胞溶液をＭｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムに加えた。試料をロードした後、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液でカラムを３回洗浄し、各回に３ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液を使用した。磁気領域からＭｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムを取り外し、５ｍＬの成長培地で溶出し、溶出された酵母細胞を収集し、３７℃で一晩成長させた。

【0075】

フローサイトメーターを利用して次回の選別を行った。具体的には、ＭＡＣＳシステムによってスクリーニングされた約１×１０^８の酵母細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、室温で低濃度のビオチン（１００－１ｎＭ）標識を含有するＣＤ４７抗原において培養した。培養液を捨て、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で細胞を２回洗浄した後、細胞をＬＣ－ＦＩＴＣ（ＦＩＴＣによって標識されたヤギ抗ヒト免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）ｋａｐｐａ鎖抗体、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１：１００希釈）と混合し、ＳＡ－６３３（ストレプトアビジン－６３３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）（１：５００希釈）又はＳＡ－ＰＥ（ストレプトアビジン－フィコエリスリン、Ｓｉｇｍａ）（１：５０希釈）試薬と混合し、４℃で１５ｍｉｎ培養した。予め冷却されたＦＡＣＳ洗浄緩衝液で２回溶出し、０．４ｍＬの緩衝液に再懸濁させ、フィルターを備える分離管に細胞を移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を選別した。

【0076】

３０℃で、スクリーニングして得られた抗ＣＤ４７抗体を発現する酵母細胞を振とうし４８時間誘導することによって、抗ＣＤ４７抗体を発現させた。誘導完了後、１３００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心分離して酵母細胞を除去し、上清液を得た。上清液における抗ＣＤ４７抗体をＰｒｏｔｅｉｎ Ａで精製し、ｐＨ２．０の酢酸溶液で溶出し、抗ＣＤ４７抗体を得て、抗体純度が＞９５％であった。パパインで消化して、更にＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ生命医療集団）によって精製し対応するＦａｂ断片を得ることができる。

【0077】

ＣＨＯ－Ｓ細胞における発現及び精製：
製造者の取扱説明書に従い、Ｆｒｅｅｄｏｍ（登録商標）ＣＨＯ－Ｓ（登録商標）キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して抗体を発現するＣＨＯ－Ｓ細胞株を作製した。まず、抗体分子の重鎖と軽鎖のＤＮＡ配列を、重鎖が軽鎖の上流にあるように同一のｐＣＨＯ１．０プラスミドに挿入した。その後構築したｐＣＨＯ１．０プラスミドを、化学的トランスフェクション法及びエレクトロトトランスフェクション法によってＣＨＯ細胞株に移し、４８時間トランスフェクションした後にＦｏｒｔｅＢｉｏを用いて抗体産生量を検出し、トランスフェクション効率を判定した。トランスフェクション後の細胞を２回加圧スクリーニングして抗体を高発現する細胞プール（ｐｏｏｌ）を得た。その後細胞プールを増幅し、抗体を大量に発現させ、細胞上清を収集し、抗体の純度が９５％を上回るようにＰｒｏｔｅｉｎ Ａで上清液を精製した。

【0078】

２、Ｈｕ５Ｆ９抗体
２９３ＨＥＫ細胞における対照抗体Ｈｕ５Ｆ９の発現及び精製：
Ｈｕ５Ｆ９は、２９３ＨＥＫ細胞において一過性発現されたヒトＣＤ４７抗体であり、その配列は米国特許ＵＳ２０１５／０１８３８７４ Ａ１に記載の抗体「５Ｆ９」の配列と同じである。

【0079】

２９３ＨＥＫ細胞における抗体の一過性発現は、担体ｐＴＴ５（Ａｄｄｇｅｎｅ社製品、カタログ番号５２３２６）を使用した。まず、抗体の重鎖と軽鎖を単独のｐＴＴ５担体にクローニングした。抗体分子の重鎖と軽鎖を有するｐＴＴ５担体を、化学的トランスフェクション法を用いて２９３ＨＥＫ細胞に移した。使用された化学的トランスフェクション試薬はＰＥＩ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）であり、培養された２９３ＨＥＫを製造業者が提供する方法に従って一過性にトランスフェクトした。まず、超クリーンな作業台にプラスミドＤＮＡとトランスフェクション試薬を準備し、Ｆ１７培地（Ｇｉｂｃｏ）（体積はトランスフェクション体積の１／５）を半分ずつ５０ｍＬの遠心管に入れ、半分を濾過したプラスミド（１３０μｇ／１００ｍＬ）に加え、残りの半分を濾過したＰＥＩ（１ｇ／Ｌ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）（質量比（プラスミド：ＰＥＩ）＝１：３）に加え、５ｍｉｎ均一に混合し、両方を２０回穏やかに混合し、１５～３０ｍｉｎ静置し、３０ｍｉｎを超えないようにした。ＤＮＡ／ＰＥＩ混合物を２９３ＨＥＫ細胞に穏やかに注入して混合し、細胞を、４８時間ごとに新鮮な培地を流加して３７℃、８％ＣＯ_２の条件下で７日間培養した。７日後又は細胞活性≦６０％となるまで連続培養した場合、１３０００ｒｐｍで２０ｍｉｎ遠心分離した。上清液を収集し、抗体の純度が９５％を上回るようにＰｒｏｔｅｉｎ Ａで上清液を精製した。

【0080】

Ｈｕ５Ｆ９重鎖配列：ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＮＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＴＩＹＰＧＮＤＤＴＳＹＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１３）。

【0081】

Ｈｕ５Ｆ９軽鎖配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＹＳＮＧＮＴＹＬＧＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１４）。

【0082】

３、リツキシマブ
先発医薬品リツキシマブは、商品名がマブセラ（ＭａｂＴｈｅｒａ）であり、バイオジェン・アイデック社（Ｂｉｏｇｅｎ）とロシュ・ファーマシューティカルズ社（ＲｏｃｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）によって共同で製造される。ＩＢＩ３０１は、信達生物製薬（蘇州）有限公司によって製造された先発医薬品リツキシマブのバイオシミラーである。本発明の後述の実施例では、リツキシマブとしてＩＢＩ３０１が使用される。

【0083】

ＩＢＩ３０１の抗体調製方法は以下のとおりである。

【0084】

製造者の取扱説明書に従い、Ｆｒｅｅｄｏｍ（登録商標）ＣＨＯ－Ｓ（登録商標）キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して抗体を発現するＣＨＯ－Ｓ細胞株を作製した。まず、抗体分子の重鎖と軽鎖のＤＮＡ配列を、重鎖が軽鎖の上流にあるように同一のｐＣＨＯ１．０プラスミドに挿入した。その後構築されたｐＣＨＯ１．０プラスミドを、化学的トランスフェクション法及び電気的トランスフェクション法によってＣＨＯ細胞株に移した。トランスフェクション後の細胞を２回加圧スクリーニングして抗体を高発現する細胞プール（ｐｏｏｌ）を得た。その後細胞プールを増幅し、抗体を大量に発現させ、細胞上清を収集し、抗体の純度が９５％を上回るようにＰｒｏｔｅｉｎ Ａで上清液を精製した。

【0085】

ＩＢＩ３０１重鎖配列：ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＫＱＴＰＧＲＧＬＥＷＩＧＡＩＹＰＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＳＴＹＹＧＧＤＷＹＦＮＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＡＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５）。

【0086】

ＩＢＩ３０１軽鎖配列：
ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＩＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＨＷＦＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＴＳＮＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１６）。

【0087】

実施例２、Ｒａｊｉ腫瘍細胞担癌マウスモデルの構築
細胞密度が１０×１０^６個／ｍＬになるようにＰＢＳ（１×）でＲａｊｉリンパ腫細胞を分散させ、更にＭａｔｒｉｇｅｌゲルと体積比１：１で混合して、細胞濃度が５×１０^６個／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。

【0088】

ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの右背部を剃毛し、上記細胞懸濁液を１×１０^６個細胞／０．２ｍＬ／マウスの用量で皮下注射により接種した。

【0089】

接種後７日目に、モデリングに成功した（腫瘍体積が４４．３０ｍｍ^３～９７．６５ｍｍ^３）７７匹のマウスを選択し、ジグザグ配置で１１群に分け、各群に７匹であった。各群の投与方法は次のとおりである。

【0090】

ＰＢＳ群：１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、ＰＢＳを各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0091】

ｈ－ＩｇＧ群：ｈ－ＩｇＧを１．６２ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0092】

Ｈｕ５Ｆ９－０．０２ｍｇ／ｋｇ群：Ｈｕ５Ｆ９を０．００２ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0093】

Ｈｕ５Ｆ９－０．１ｍｇ／ｋｇ群：Ｈｕ５Ｆ９を０．０１ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0094】

抗ＣＤ４７抗体－０．０２ｍｇ／ｋｇ群：抗ＣＤ４７抗体を０．００２ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0095】

抗ＣＤ４７抗体－０．１ｍｇ／ｋｇ群：抗ＣＤ４７抗体を０．０１ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0096】

リツキシマブ－１．５ｍｇ／ｋｇ群：リツキシマブを０．１５ｍｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0097】

Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群：Ｈｕ５Ｆ９とリツキシマブをＰＢＳで溶解して、０．００２ｍｇ／ｍＬのＨｕ５Ｆ９、０．１５ｍｇ／ｍＬのリツキシマブを含有する溶液を調製し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0098】

Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群：Ｈｕ５Ｆ９とリツキシマブをＰＢＳで溶解して、０．０１ｍｇ／ｍＬのＨｕ５Ｆ９、０．１５ｍｇ／ｍＬのリツキシマブを含有する溶液を調製し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0099】

抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群：抗ＣＤ４７抗体とリツキシマブをＰＢＳで溶解して、０．００２ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ４７抗体、０．１５ｍｇ／ｍＬのリツキシマブを含有する溶液を調製し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0100】

抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群：抗ＣＤ４７抗体とリツキシマブをＰＢＳで溶解して、０．０１ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ４７抗体、０．１５ｍｇ／ｍＬのリツキシマブを含有する溶液を調製し、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積に従って、２日に１回、各マウスに腹腔内注射し、６回続けて投与した。

【0101】

各群のマウスの体重、腫瘍組織の最大長径（Ｌ）と最大短径（Ｗ）を週２回で、４週連続してモニタリングした。実験終了後、各群のマウスの相対腫瘍阻害率を計算した。

【0102】

腫瘍体積測定：
ノギスを用いて腫瘍の最大長径（Ｌ）と最大短径（Ｗ）を測定し、式Ｖ＝Ｌ×Ｗ^２／２により腫瘍体積を計算した。

【0103】

相対腫瘍阻害率の計算：
腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）＝１００％×（対照群に投与した後の腫瘍最終体積-投与群に投与した後の腫瘍最終体積）／（対照群に投与した後の腫瘍最終体積－対照群に投与する前の腫瘍体積）

【0104】

そのうち、対照群はｈ－ＩｇＧ群である。

【0105】

各群の腫瘍阻害率は表４に示されている。

【0106】

【表4】

【0107】

各群の担癌マウスの体重変化率は図１に示されている。各群の担癌マウスの腫瘍体積に対する阻害は図２に示されている。低用量群と高用量群の担癌マウスの腫瘍体積に対する阻害はそれぞれ図３と図４に示されている。

【0108】

表４から分かるように、６回投与後、ＰＢＳ群とｈ－ＩｇＧ群と比べ、抗ＣＤ４７抗体－０．１ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群及び抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群はＲａｊｉ担癌マウスの腫瘍増殖に対して明らかな阻害作用を有し、腫瘍の体積がより小さく、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群の有効性は抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群よりも優れ、この腫瘍有効性は抗ＣＤ４７抗体に対して用量依存性があることが示されている。なお、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群の腫瘍阻害率はＨｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群、Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群よりもはるかに高い。

【0109】

ｈ－ＩｇＧ群と比べ、Ｈｕ５Ｆ９－０．０２ｍｇ／ｋｇ群とリツキシマブ－１．５ｍｇ／ｋｇは抗腫瘍有効性が示されていない。Ｈｕ５Ｆ９－０．１ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体－０．０２ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体－０．１ｍｇ／ｋｇ群の腫瘍阻害率はそれぞれ２０％、２４％と５２％である。Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群、Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群の腫瘍阻害率はそれぞれ３３％、２８％、５６％と９２％である。

【0110】

抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群のマウスの腫瘍阻害効果は、抗ＣＤ４７抗体－０．０２ｍｇ／ｋｇ、リツキシマブ－１．５ｍｇ／ｋｇとＨｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群よりも優れる。抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群のマウスの腫瘍阻害効果は、抗ＣＤ４７抗体－０．１ｍｇ／ｋｇ、リツキシマブ－１．５ｍｇ／ｋｇとＨｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群よりも優れる。以上をまとめ、結果により、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブの腫瘍阻害効果はいずれも、抗ＣＤ４７抗体単剤群とリツキシマブ単剤群よりも優れ、併用効果が示され、且つ同じ用量下で、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ併用群の腫瘍阻害効果はＨｕ５Ｆ９＋リツキシマブ併用群よりも優れていることが示されている。抗ＣＤ４７抗体－０．１ｍｇ／ｋｇ群では、１匹のマウスの腫瘍が完全に退縮し、Ｈｕ５Ｆ９＋リツキシマブ－０．０２ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群では、１匹のマウスの腫瘍が完全に退縮し、抗ＣＤ４７抗体＋リツキシマブ－０．１ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇ群では、４匹のマウスの腫瘍が完全に退縮し、非常に優れた腫瘍阻害効果が示されている。

【0111】

図１から分かるように、抗ＣＤ４７抗体、リツキシマブ単剤又は併用投与は、前臨床マウスモデルで明らかな毒性及び副作用が見られず、マウスの体重は正常であり、低下しなかった。

【0112】

図２、図３、図４及び表４から分かるように、抗ＣＤ４７抗体は一定の抗腫瘍有効性を有し、リツキシマブと併用することで、その抗腫瘍有効性を大幅に増加させ、２つの薬物の併用が相乗効果を有することが示されている。更に、同じ用量で、抗ＣＤ４７抗体とリツキシマブの併用投与は、Ｈｕ５Ｆ９とリツキシマブの併用投与よりも、担癌マウスに対してより優れた腫瘍阻害効果が示されている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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【国際調査報告】