特表 2023-509979 オリゴヌクレオチドの標的化及び局所インビボ送達

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-10

(54)【発明の名称】オリゴヌクレオチドの標的化及び局所インビボ送達

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20230303BHJP

   C12N 15/87 20060101ALI20230303BHJP

   C07K 1/13 20060101ALI20230303BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20230303BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20230303BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230303BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230303BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20230303BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20230303BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20230303BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20230303BHJP

   A61K 47/61 20170101ALI20230303BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z

C12N15/87 Z ZNA

C07K1/13

C07K16/00

C07K14/00

C12N5/10

A61K48/00

A61K47/68

A61K31/7088

A61K31/713

A61K31/7105

A61K31/711

A61K39/395 N

A61P27/02

A61P17/00

A61P19/00

A61P3/00

A61P9/00

A61P25/00

A61P31/00

A61P37/02

A61P29/00

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/06

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P31/16

A61P31/18

A61P31/12

A61P21/00

A61P25/16

A61P25/14

A61P25/28

A61P7/00

A61K47/65

A61K47/64

A61K47/54

A61K47/61

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022542436

(86)(22)【出願日】2021-01-11

(85)【翻訳文提出日】2022-09-07

(86)【国際出願番号】 US2021012988

(87)【国際公開番号】W WO2021142454

(87)【国際公開日】2021-07-15

(31)【優先権主張番号】62/959,928

(32)【優先日】2020-01-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】502087552

【氏名又は名称】オンコイミューニン，インコーポレイティド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ビバリー パッカード

(72)【発明者】

【氏名】アキラ コモリヤ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA01

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC01

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC10

4C076CC11

4C076CC18

4C076CC21

4C076CC27

4C076CC29

4C076CC31

4C076CC35

4C076DD66

4C076EE30

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA13

4C084NA13

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA221

4C084ZA222

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB151

4C084ZB152

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZB311

4C084ZB312

4C084ZB331

4C084ZB332

4C084ZC211

4C084ZC212

4C085AA14

4C085AA21

4C085BB36

4C085BB41

4C085EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA04

4C086EA16

4C086MA01

4C086NA13

4C086ZA01

4C086ZA02

4C086ZA15

4C086ZA16

4C086ZA22

4C086ZA33

4C086ZA36

4C086ZA51

4C086ZA89

4C086ZA94

4C086ZA96

4C086ZB07

4C086ZB08

4C086ZB11

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB31

4C086ZB33

4C086ZC21

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA54

4H045FA10

(57)【要約】

本開示は、オリゴヌクレオチドの標的化及び局所インビボ送達のための組成物及び方法を提供する。標的オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートを含有する組成物は、治療、診断、及び他の用途においてコンジュゲートを作製及び使用する方法として提供される。標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体は、受容体に依存しない方法で膜を通過することができ、相補配列を含むオリゴヌクレオチドをインビボで生細胞のサイトゾルに送達することができる。標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートは、生きている生物におけるアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、及び他の核酸配列の標的化及び／または局所送達を含む使用を有する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートであって、場合により前記オリゴヌクレオチドが治療用オリゴヌクレオチドである、前記コンジュゲート。

【請求項2】

前記標的指向性部分が、前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体に直接コンジュゲートしているか、またはリンカーを介して前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている、請求項１に記載のコンジュゲート。

【請求項3】

前記標的指向性部分が、リンカーを介して前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている、請求項１または２に記載のコンジュゲート。

【請求項4】

式（Ｉ）
Ｔ－（Ｌ_ｎ－（オリゴ－ＨＥＳ）_ｘ）_ｐ （Ｉ）
の構造を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載のコンジュゲート
（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり；
オリゴ－ＨＥＳは、治療用オリゴヌクレオチド及びＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
ｎは、０または１であり；
ｘは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５であり；
ｐは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５である）。

【請求項5】

式（ＩＩ）
Ｔ－［Ｌ_ｎ－（（オリゴ２－ＳＰ）_ｍ－オリゴ１－ＨＥＳ）_ｓ］_ｕ （ＩＩ）
の構造を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載のコンジュゲート
（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり；
ＳＰはリンカーであり、場合により、ＳＰは、Ｃ６、Ｃ１０、またはＣ１８の直鎖または分岐鎖アルキルなどの６～１２個のアミノ酸残基ペプチドまたはアルキル鎖スペーサーであり；
オリゴ１－ＨＥＳは、オリゴヌクレオチド１（オリゴ１）とＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
オリゴ２は、オリゴ１と同じでも異なっていてもよいオリゴヌクレオチドであり；
ｎは、０または１であり；
ｍは、０または１であり；
ｓは、１または２であり；
ｕは１、２、３、４、または５である）。

【請求項6】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、前記核酸によってコードされるかまたは制御されるタンパク質のレベルを調節する治療用オリゴヌクレオチドを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項7】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、前記核酸配列の対応する逆相補鎖と比較して、１、２、または３個の置換、欠失、または挿入を含有する、請求項６に記載のコンジュゲート。

【請求項8】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、約８ヌクレオチド～約７５０ヌクレオチドの長さである、請求項１～７のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項9】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、１８～２５、１８～３５、１８～４０、または１８～４５、１８～５０、１８～６０、１８～７０、１８～８０、１８～９０、１８～１００、１８～１５０、または１８～２００ヌクレオチドの長さである、請求項１～８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項10】

前記治療用オリゴヌクレオチドが一本鎖である、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項11】

前記治療用オリゴヌクレオチドが二本鎖である、請求項１～９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項12】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、３６～５０、３６～６０、３６～７０、または３６～１００ヌクレオチドの長さである、請求項１１に記載のコンジュゲート。

【請求項13】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アルファＬＮＡ、２’－フルオロ（２’Ｆ）、２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（２’－ＭＯＥ）、２’－－デオキシ－２’－－フルオロ－Ｄ－アラビノ核酸（ＦＡＮＡ）、２’－ＯＣＨ３（２’－Ｏ－メチル）（２’ＯＭＥ）、ＰＮＡ、及びモルホリノ、から選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシドモチーフを含有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項14】

前記修飾ヌクレオシドモチーフが、メチレン（－－ＣＨ２－－）ｎ基が２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋するＬＮＡまたはアルファＬＮＡであり、ｎが１または２である、請求項１３に記載のコンジュゲート。

【請求項15】

前記ＬＮＡまたは前記アルファＬＮＡが５’位にメチル基を含有する、請求項１３または１４に記載のコンジュゲート。

【請求項16】

ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミド、３’－メチレンホスホネート、Ｏ－メチルホスホロアミジエート（Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄｉａｔｅ）、ＰＮＡ及びモルホリノから選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含有する、請求項１～１５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項17】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、Ｃ－５プロピン、及び５－メチルＣから選択される１つまたは複数の修飾核酸塩基を含有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項18】

前記コンジュゲートの前記治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３、ｃＭｅｔ、ｐ５６ｌｃｋ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＦＧＦＲ、ＡＮＧ１、ＡＮＧ２、ｂＦＧＦ，ＴＩＥ２、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－アルファ）、ｐ５６ｌｃｋ ＰＫＡ、ＴＧＦ－β、ＩＧＦＩＲ、Ｐ１２、ＭＤＭ２、ＢＲＣＡ、ＩＧＦ１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＩＦ１アルファ、フェリチン、トランスフェリン受容体、ＴＭＰＲＳＳ２、ＩＲＥ、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＭＩＴＦ、クラステリン、ＰＡＲＰ１Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｎ－ｍｙｃ、Ｃ－ｒａｆ、Ｂ－ｒａｆ、Ａ１、Ｈ－ｒａｆ、Ｓｋｐ２、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、ファレンシルトランスフェラーゼ、ｃ－Ｓｒｃ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ｃ－Ｋｉｔ、ＥｐｈＡ２、ＰＤＧＦＢ、ＡＲＦ、ＮＯＸ１、ＮＦ１、ＳＴＡＴ３、Ｅ６／Ｅ７、ＡＰＣ、ＷＮＴ、ベータカテニン、ＧＳＫ３ｂ、ＰＩ３ｋ、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、ＰＤＫ－１、ＣＤＫ、Ｍｅｋ１、ＥＲＫ１、ＡＰ－１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｓｙｋ、オステオポンチン、ＣＤ４４、ＭＥＫ、ＭＡＰＫ、ＮＦ－κβ（ＮＦカッパベータ）、Ｅカドヘリン、サイクリンＤ、サイクリンＥ、Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ＢＸＬ－ＸＬ、ＢＣＬ－Ｗ、ＭＣＬ１、ＥＲ、ＭＤＲ、テロメラーゼ、テロメラーゼ逆転写酵素、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ（例えば、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２）、インテグリン、ＩＡＰ、オーロラキナーゼ、メタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９）、プロテアソーム、またはメタロチオネイン遺伝子、に特異的にハイブリダイズする、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記コンジュゲートの前記治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：サバイビン、ＨＳＰＢ１、ＥＩＦ４Ｅ、ＰＴＰＮ１、ＲＲＭ２、ＢＣＬ２、ＰＴＥＮ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＴＬＲ９、ＨａＲａｓ、Ｐｋａ－ｒＩＡ、ＪＮＫ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＸＩＡＰ、ＴＧＦ－β２、ｃ－ｍｙｂ、ＰＬＫ１、Ｋ－ｒａｓ、ＫＳＰ、ＰＫＮ３、リボヌクレオチドレダクターゼ（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼＲ１及びリボヌクレオチドレダクターゼＲ２）、ＲｅｃＱヘリカーゼ（例えば、ＷＲＮ、ＲｅｃＱＬ１、ＢＬＭ、ＲｅｃＱＬ４、ＲｅｃＱ５、及びＲＴＳ）、ＭＥＭ２及びＴＬＲ９、に特異的にハイブリダイズする、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う少なくとも１つのフルオロフォアを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項21】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、１つまたは複数のＨＥＳを形成することができる２、３、４、またはそれ以上のフルオロフォアを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項22】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う２、３、４、またはそれ以上のフルオロフォアを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項23】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、キサンテン、インドカルボシアニン、インドジカルボシアニン、及びクマリンから選択される少なくとも１つのフルオロフォアを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項24】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、カルボキシローダミン１１０、カルボキシテトラメチルローダミン、カルボキシローダミン－Ｘ、ジエチルアミノクマリン及びＮ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ’’－スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル］インドカルボシアニンクロリド、Ｎ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ’’－スクシンイミジルオキシカルボニル））ペンチル］－３，３，３’，３’－テトラメチル－２’，２’－インドジカルボシアニンクロリド色素、から選択される少なくとも１つのフルオロフォアを含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項25】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、請求項１～２４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項26】

前記治療用オリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡである、請求項１～２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項27】

前記治療用オリゴヌクレオチドがｓｈＲＮＡである、請求項１～２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項28】

前記治療用オリゴヌクレオチドがｍｉＲＮＡまたはアンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）（ｍｉＲＮＡの阻害剤）である、請求項１～２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項29】

前記治療用オリゴヌクレオチドがダイサー基質である、請求項１～２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項30】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、それぞれ１８～２５、１８～３０、１８～３５、１８～４０、１８～４５、または１８～５０ヌクレオチドの長さであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングである２つの核酸相補的核酸鎖を含有する、請求項２９に記載のコンジュゲート。

【請求項31】

前記治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘発することができる、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項32】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、前記ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である、請求項２５に記載のコンジュゲート。

【請求項33】

前記治療用オリゴヌクレオチドがギャップマーである、請求項２５に記載のコンジュゲート。

【請求項34】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、前記ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない、請求項２５に記載のコンジュゲート。

【請求項35】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１～２５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項36】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、目的のＲＮＡに特異的にハイブリダイズする、請求項３５に記載のコンジュゲート。

【請求項37】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＤＮＡまたはＤＮＡ模倣物である、請求項３５または３６に記載のコンジュゲート。

【請求項38】

前記治療用アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドが、２’位での修飾を含む修飾糖部分、ＰＮＡモチーフ、またはモルホリノモチーフを含む、請求項３５～３７のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項39】

前記治療用アンチセンスオリゴヌクレオチド配列が、以下からなる群：
（ａ）ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンから３０ヌクレオチド以内の配列；
（ｂ）ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０；
（ｃ）ｍＲＮＡの５’－非翻訳領域における配列；
（ｄ）ｍＲＮＡの３’－非翻訳領域における配列；
（ｅ）ｍＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション；
（ｆ）前記オリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の配列；ならびに
（ｇ）イントロン／エキソンジャンクション、及びＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基の領域；から選択されるＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする、請求項３５～３８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項40】

前記オリゴヌクレオチドのその標的ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションによって、前記コード配列の翻訳を立体的に遮断するか、もしくは前記標的ｍＲＮＡの発現を調節し、及び／またはヌクレオチド結合タンパク質を遮断して、それにより、標的ｍＲＮＡの安定性を調節する、請求項３５～３９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項41】

前記アンチセンスオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が複数のアンチセンス鎖を含み、場合により前記アンチセンス鎖が架橋されている、請求項３５～４０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項42】

前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、５’側から３’側へ直列にスペーサーアームと直鎖状に連結され、第２鎖の５’末端または３’末端残基に連結された別のアンチセンスオリゴヌクレオチドにスペーサーアーム（例えば、６～３０アミノ酸残基ペプチドもしくは直鎖アルキル（例えば、Ｃ６、Ｃ１０、もしくはＣ１２）またはポリエチルオキシ－グリコール（例えば、トリエチルオキシ－グリコール、テトラエチルオキシ－グリコールもしくはヘキサ－エチルオキシ－グリコール）で連結された複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、請求項４１に記載のコンジュゲート。

【請求項43】

リンカーアーム（ＬまたはＳＰ）が、Ｃ６、Ｃ１０、もしくはＣ１２の直鎖アルキル、またはポリエチルオキシ－グリコール（例えば、トリエチルオキシ－グリコール、テトラエチルオキシ－グリコールまたはヘキサ－エチルオキシ－グリコール）である、請求項１～４２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項44】

前記オリゴ－ＨＥＳ複合体が、５’側から３’側への２つ以上のアンチセンス鎖及び反対方向の３’側から５’側への２つ以上の治療用アンチセンスと架橋された複数の治療用アンチセンスを含み、（前記）オリゴ－ＨＥＳ複合体は、スペーサーＳＰを用いて５’側から３’側、次いで３’側から５’側の方向で２つ以上のアンチセンス鎖と架橋された複数の治療用アンチセンスを含む、請求項４１～４３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項45】

前記アンチセンス鎖が２つ以上の同じ相補配列及び／または２つ以上の異なる相補配列を有する、請求項４４に記載のコンジュゲート。

【請求項46】

直鎖状または分岐鎖状リンカーを含む、請求項１～４５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項47】

６～３０アミノ酸残基長のペプチドリンカーまたはＳＰスペーサーを含む、請求項１～４６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項48】

前記リンカーが６～３０アミノ酸残基長の直鎖状ペプチドである、請求項４６または４７に記載のコンジュゲート。

【請求項49】

前記リンカーが切断可能である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項50】

前記リンカーが、Ｐ１－Ｐ１’残基を含有するプロテアーゼ切断部位を含むアミノ酸配列を有し、ループ構造を有する、請求項４９に記載のコンジュゲート。

【請求項51】

前記切断可能なリンカーが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、請求項４９または５０に記載のコンジュゲート。

【請求項52】

前記切断可能なリンカーが、疾患組織において活性である少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、請求項４９～５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項53】

前記切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、請求項４９～５２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項54】

前記切断可能なリンカーが、
（ａ）ＭＭＰ９；
（ｂ）ＭＭＰ１４；
（ｃ）ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７；
（ｄ）セリンプロテアーゼ（例えば、ＭＴ－ＳＰ１、ｕＰＡ、及びＴＭＰＲＳＳ２）；
（ｅ）システインプロテアーゼ；
（ｆ）（ａ）～（ｃ）を含むメタロプロテアーゼ；
（ｇ）アスパルチルプロテアーゼ；及び
（ｈ）スレオニンプロテアーゼ；から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、請求項４９～５３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項55】

前記切断可能なリンカーが、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４の基質であるアミノ酸配列を含む、請求項５４に記載のコンジュゲート。

【請求項56】

前記切断可能なリンカーが、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、またはプラスミンなどの、免疫補体系の少なくとも１つの酵素の基質であるアミノ酸配列を含む、請求項５４または５５に記載のコンジュゲート。

【請求項57】

前記切断可能なリンカーが、前記コンジュゲートの前記標的と共局在することが知られている、または報告されているプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、請求項４９～５６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項58】

前記リンカーが細胞内条件（例えば、リソソームもしくはエンドソームまたはカベオラ内の条件）下で切断可能である、請求項４９に記載のコンジュゲート。

【請求項59】

前記リンカーがｐＨ感受性である、請求項４９に記載のコンジュゲート。

【請求項60】

前記リンカーが還元条件下で切断可能である、請求項４９に記載のコンジュゲート。

【請求項61】

前記リンカーがマロネートリンカーである、請求項４４～５６のいずれか１項に記載のコンジュゲート（のコンジュゲート）。

【請求項62】

前記リンカーが切断不能である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項63】

前記リンカーが、Ｈ－二量体形成フルオロフォア（例えば、アミノ末端残基及び／またはカルボキシル末端残基にコンジュゲートしたＨ－二量体形成フルオロフォアを含むリンカー）を有する、請求項４６～６２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項64】

前記リンカーが、前記アミノ末端残基及び前記カルボキシル末端残基にコンジュゲートしたＨ－二量体形成フルオロフォアを有する、請求項４６～６３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項65】

前記リンカーが、前記ペプチドの前記アミノ末端及び前記カルボキシル末端にスルフヒドリルまたはアミノ官能基を有する、請求項４６～６４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項66】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン－アビジン結合対、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ビタミン、微生物の成分、ホルモン、受容体リガンド（受容体リガンドを含有するＦｃ融合タンパク質を含む）、抗体、抗体の抗原結合部分、代替結合足場、またはそれらの任意の誘導体である、請求項１～６５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項67】

前記標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、請求項１～６６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項68】

前記標的指向性部分が、抗体、ヒト化抗体、抗体の抗原結合断片、一本鎖抗体、二重特異性抗体、合成抗体、またはＰＥＧ化抗体である、請求項１～６７のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項69】

前記標的指向性部分が抗体である、請求項１～６８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項70】

前記標的指向性部分が、単一特異性、二重特異性、もしくは多重特異性抗体及び／または一価、二価、もしくは多価抗体である、請求項６９に記載のコンジュゲート。

【請求項71】

前記標的指向性部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、請求項６９または７０に記載のコンジュゲート。

【請求項72】

前記標的指向性部分が治療用抗体である、請求項６９～７０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項73】

前記抗体が、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、（ＨＥＲ３）、オナルツズマブ（ｃ－ＭＥＴ）、パトリツマブ、クリバツズマブ（ＭＵＣ１）、ソフィツズマブ（ＭＵＣ１６）、エドレコロマブ（ＥＰＣＡＭ）、アデカツムマブ（ＥＰＣＡＭ）、アネツマブ（ＭＳＬＮ）、ｈｕＤＳ６（ＣＡ６）、リファスツズマブ（ＮＡＰＩ２Ｂ）、サシツズマブ（ＴＲＯＰ２）、ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３（ＣＥＡ）、ヒト化Ａｂ２－３（ＣＥＡ）、ＩＭＡＢ３６２／クラウディキシマブ（クローディン１８．２）、ＡＭＧ５９５（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＡＢＴ８０６（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、ＤＳ－８８９５ａバリアント１（ＥｐｈＡ２）、ＤＳ－８８９５ａバリアント２（ＥｐｈＡ２）、抗ＥｐｈＡ２（ＥｐｈＡ２）、ＭＥＤＩ－５４７（ＥｐｈＡ２）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ＲＧ７８４１（ＬＹ６Ｅ）、ファルレツズマブ（ＦＲＡ／葉酸受容体アルファ）、ミルベツキシマブ（ＦＲＡ）、Ｊ５９１バリアント１（ＰＳＭＡ）、Ｊ５９１バリアント２（ＰＳＭＡ）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、ＰＦ－０６６４７０２０（ＰＴＫ７）、抗ＰＴＫ７（ＰＴＫ７）、ラディラツズマブ（ＬＩＶ１）、シルムツズマブ（ＲＯＲ１）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ５２）、アレムツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ＣＴ－０１１（ＰＤ１）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）（ＣＴＬＡ４）、ニボルマブ（ＰＤ１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ１）、デュルバルマブ（ＰＤＬ１）抗ＭＡＧＥ－Ａ３、抗ＮＹ－ＥＳＯ－１、抗ＡＣＥ２、抗ヒアルロニダーゼ、または抗ノイラミニダーゼ；から選択される、請求項７２に記載のコンジュゲート。

【請求項74】

前記標的指向性部分が、抗体、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、または二重特異性抗体の抗原結合断片である、請求項１～６８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項75】

前記標的指向性部分が、アフィボディ、ナノボディ、アンチカリン、フィノマー、ＤＡＲＰｉｎ、テトラネクチン、トランスボディ、アドネクチン、アフィリン、マイクロボディ、ペプチドアプタマー、アルタラーゼ、プラスチック抗体、フィロマー、ストラドボディ、マキシボディ、エビボディ、Ｚドメイン、Ｄドメイン、アルマジロリピートタンパク質、クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペップボディ（ｐｅｐｂｏｄｙ）ワクシボディ、ユニボディ、アフィマー、またはデュオボディ、から選択される代替結合足場である、請求項１～６６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項76】

前記標的指向性部分が、疾患細胞、がん細胞、免疫細胞、感染細胞、または感染因子などの目的の細胞または組織上またはその近くの細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～７５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項77】

前記標的指向性部分が、ネオアンチゲンなどの、特定の対象のがん（例えば、腫瘍）に由来するか、またはそのがんで発現されると判定された細胞表面抗原（複数可）に特異的に結合する、請求項１～７６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項78】

前記標的指向性部分が、結合時に前記コンジュゲートを内在化しない細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～７７のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項79】

前記標的指向性部分が、結合時に前記コンジュゲートを内在化する細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～７５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項80】

前記標的指向性部分が、腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～７９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項81】

前記標的指向性部分が、白血病細胞、リンパ腫細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、大腸癌細胞、腎臓癌細胞、肝臓癌細胞、前立腺癌細胞、骨癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞；またはリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫細胞上の腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～８０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項82】

前記標的指向性部分が、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＨＬＤ－ＤＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フェリチン、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ｐ１８５ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮増殖因子、ａｖＢ３、ＷＴ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、Ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、Ｐ５３変異体、ＰＲ１、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、フコシルＧＭ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｓＬｅ（動物）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＶ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ ３、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲ、エンドグリン、ＰＤＬ、ＶＴＣＮ１、及びＶＩＳＴＡ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項83】

前記標的指向性部分が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＰＳＭＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、エンドグリン、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＶＴＣＮ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＬＰ－３、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１６、ＵＰＫ１Ｂ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＥＭ２３８、Ｃ１ｏｒｆ１８６、及びＬＲＲＣ１５、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～８１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項84】

前記標的指向性部分が、腫瘍微小環境細胞表面抗原（ある特定の膜固定型プロテアーゼを含む）に特異的に結合する、請求項１～８３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項85】

前記標的指向性部分が、内皮細胞もしくはマクロファージに発現する細胞表面抗原（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＴＩＥ１、及びＴＩＥ２）、または腫瘍間質細胞、例としてがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、腫瘍浸潤Ｔ細胞及びその他の白血球、ならびにマスト細胞、好酸球、及び腫瘍関連マクロファージを含む骨髄細胞に発現する細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～８４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項86】

前記標的指向性部分が、免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１～８５のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項87】

前記標的指向性部分が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などのリンパ系または骨髄系起源の免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する請求項８６に記載のコンジュゲート。

【請求項88】

前記標的指向性部分が、抗原提示細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項８６または８７に記載のコンジュゲート。

【請求項89】

前記標的指向性部分が、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＭＡＲＣＯ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、デクチン１、デクチン２、ＤＥＣ－２０５、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＬＥＣ９Ａ、ＣＬＥＣ１０Ａ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３６、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ６４、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＨＶＥＭ、ＰＤＬ１、マンノーススカベンジャー受容体１、及びＢＤＣＡ２から選択される抗原に特異的に結合する、請求項８８に記載のコンジュゲート。

【請求項90】

前記標的指向性部分が、抗原提示細胞ではない免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項８６または８７に記載のコンジュゲート。

【請求項91】

前記標的指向性部分が、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析を用いて決定された０．５×１０^－１０～１０×１０^－６の範囲の平衡解離定数（Ｋｄ）により前記目的の標的（例えば、細胞表面抗原）に結合する、請求項１～９０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項92】

細胞内の核酸またはタンパク質レベルを調節する方法であって、前記細胞を、治療有効量の請求項１～９１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと接触させることを含み、前記オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が：
（ａ）前記細胞上または付近の細胞上の細胞表面抗原に結合する標的指向性部分；と
（ｂ）前記核酸に特異的にハイブリダイズし、前記核酸及び／または前記核酸によってコードまたは制御されるタンパク質の前記レベルを調節するオリゴヌクレオチド；とを含む、前記方法。

【請求項93】

前記Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの前記標的指向性部分が、前記接触した細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合し、前記細胞は、前記Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの切断可能なリンカーを切断してオリゴ－ＨＥＳ複合体を放出する細胞表面プロテアーゼを発現する、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

前記調節された核酸またはタンパク質が、疾患細胞、感染細胞、感染因子、または免疫細胞にある、請求項９２または９３に記載の方法。

【請求項95】

前記調節された核酸またはタンパク質が疾患細胞内にある、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記調節された核酸またはタンパク質が、がん細胞にある、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記がん細胞が、血液癌細胞または固形腫瘍癌細胞である、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

前記がん細胞が、白血病細胞、リンパ腫細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、結腸直腸癌細胞、前立腺癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞、肉腫細胞、または任意の癌腫細胞である、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

前記調節された核酸またはタンパク質が、感染細胞または感染因子内にある、請求項９４に記載の方法。

【請求項100】

前記調節された核酸またはタンパク質が、感染因子内にある、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

前記細胞が、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ－１、ジカウイルス、デングウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、痘瘡ウイルス、ＳＡＲＳウイルス、リフトバレー熱ウイルス、結核、炭疽菌、ボツリヌス中毒症、野兎病、ペスト、ブルセラ症、鼻疽、類鼻疽、Ｑ熱、またはアルファウイルス、例としてチクングニアウイルス、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、西部、東部及びベネズエラ馬脳炎ウイルス、ロスリバーウイルス、ＣＯＶＩＤ、またはインフルエンザ、に感染している、請求項９９または１００に記載の方法。

【請求項102】

前記調節された核酸またはタンパク質が免疫細胞内にある、請求項９４に記載の方法。

【請求項103】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などの骨髄系由来のリンパ系細胞である、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、請求項９２～１０３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項105】

前記コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、請求項９２～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項106】

前記切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、請求項９２～１０６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項108】

対象における核酸またはタンパク質レベルを調節する方法であって、治療有効量の請求項１～９１のいずれか１項に記載のコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、前記コンジュゲートが：
（ａ）前記核酸またはタンパク質が調節される細胞上または細胞近くの細胞表面抗原に結合する標的指向性部分；と
（ｂ）前記核酸に特異的にハイブリダイズし、前記核酸及び／または前記核酸によってコードまたは制御されるタンパク質の前記レベルを調節するオリゴヌクレオチド；とを含む、前記方法。

【請求項109】

前記核酸またはタンパク質が、
（ａ）前記対象における前記核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）前記対象における前記核酸によってコードされる前記タンパク質の過剰発現もしくは過少発現；を特徴とする、請求項１０８に記載の方法。

【請求項110】

前記調節された核酸またはタンパク質が、疾患細胞、感染細胞、感染因子、または免疫細胞にある、請求項１０８または１０９に記載の方法。

【請求項111】

前記調節された核酸またはタンパク質が疾患細胞内にある、請求項１０８に記載の方法。

【請求項112】

前記調節された核酸またはタンパク質が、がん細胞にある、請求項１１０に記載の方法。

【請求項113】

前記がん細胞が、血液癌細胞または固形腫瘍癌細胞である、請求項１１２に記載の方法。

【請求項114】

前記がん細胞が、白血病細胞、リンパ腫細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、結腸直腸癌細胞、前立腺癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞、肉腫細胞、または任意の癌腫細胞である、請求項１１３に記載の方法。

【請求項115】

前記調節された核酸またはタンパク質が、感染細胞または感染因子内にある、請求項１１０に記載の方法。

【請求項116】

前記調節された核酸またはタンパク質が、感染因子内にある、請求項１１５に記載の方法。

【請求項117】

前記感染細胞がリンパ系または骨髄系由来の免疫細胞である、請求項１１５に記載の方法。

【請求項118】

前記調節された核酸またはタンパク質が免疫細胞内にある、請求項１１０に記載の方法。

【請求項119】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などのリンパ系または骨髄系細胞である、請求項１１８に記載の方法。

【請求項120】

前記治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、請求項１０８～１１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項121】

前記コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、請求項１０８～１２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項122】

前記切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、請求項１２１に記載の方法。

【請求項123】

前記コンジュゲート標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、請求項１０８～１２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項124】

対象における疾患または障害を治療する方法であって、請求項１～９１のいずれか１項に記載の治療有効量のコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、前記核酸によってコードまたは制御されるタンパク質のレベルを調節し；前記疾患または障害は、
（ａ）前記対象における前記核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）前記対象における前記核酸によってコードされる前記タンパク質の過剰発現もしくは過少発現；を特徴とする、前記方法。

【請求項125】

前記コンジュゲートが、前記核酸またはタンパク質が調節される細胞上または細胞近くの細胞表面抗原に結合する標的指向性部分を含む、請求項１２４に記載の方法。

【請求項126】

前記疾患または障害が、増殖性疾患または障害、例として、がん、免疫系の疾患もしくは障害、炎症性疾患もしくは障害、感染症、神経疾患もしくは障害、心血管系の疾患もしくは障害、代謝疾患もしくは障害、骨格系の疾患もしくは障害、または皮膚もしくは目の疾患もしくは障害、である、請求項１２４または１２５に記載の方法。

【請求項127】

前記疾患または障害が、がん、炎症性疾患もしくは障害、または免疫系の疾患もしくは障害、感染症、または神経変性疾患もしくは障害などの神経疾患もしくは障害（ａ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）である、請求項１２４～１２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項128】

前記疾患または障害が、がんである、請求項１２４～１２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項129】

前記がんが、血液癌または固形腫瘍癌である、請求項１２８に記載の方法。

【請求項130】

前記がんが、白血病、膵臓癌、乳癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、膀胱癌、大腸癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、骨癌、神経膠芽腫を含む脳腫瘍；または任意のリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫である、請求項１２９に記載の方法。

【請求項131】

前記疾患または障害が、がん、炎症性疾患もしくは障害、免疫系の疾患もしくは障害、または感染症である、請求項１２４に記載の方法。

【請求項132】

前記疾患が、炎症性疾患もしくは障害、または自己免疫疾患もしくは障害（例えば、関節リウマチ）である、請求項１３１に記載の方法。

【請求項133】

前記疾患または障害が炎症である、請求項１３２に記載の方法。

【請求項134】

前記疾患または障害が感染症である、請求項１３３に記載の方法。

【請求項135】

前記感染症が、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ－１、ジカ熱、デング熱、インフルエンザ、エボラ、マールブルグ病、クリミアコンゴ出血熱、ラッサ熱ウイルス、痘瘡、ＳＡＲＳ、リフトバレー熱、結核、炭疽菌、ボツリヌス中毒症、野兎病、ペスト、ブルセラ症、鼻疽、類鼻疽、Ｑ熱であり、またはアルファウイルス、例としてチクングニアウイルス、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、西部、東部及びベネズエラ馬脳炎ウイルス、ロスリバーウイルス、もしくはＣＯＶＩＤ、に感染している、請求項１３４に記載の方法。

【請求項136】

前記疾患または障害が、神経疾患または障害である、請求項１２６に記載の方法。

【請求項137】

前記神経疾患または障害が、神経変性疾患、例として、家族性及び孤発性筋萎縮性側索硬化症（それぞれＦＡＬＳ及びＡＬＳ）、家族性及び孤発性パーキンソン病、ハンチントン病（ハンチントン舞踏病）、家族性及び孤発性アルツハイマー病、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、多発性硬化症、びまん性大脳皮質萎縮症、認知症、またはピック病である、請求項１３６に記載の方法。

【請求項138】

前記コンジュゲートの前記治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、請求項１２４～１３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項139】

前記コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、請求項１２４～１３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項140】

前記切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、請求項１３９に記載の方法。

【請求項141】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、請求項１２４～１４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項142】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、抗体または抗体の抗原結合断片である、請求項１２４～１４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項143】

前記標的指向性部分が、抗体またはナノボディである、請求項１４２に記載の方法。

【請求項144】

前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、請求項１４３に記載の方法。

【請求項145】

前記抗体が治療用抗体である、請求項１４３または１４４に記載の方法。

【請求項146】

前記コンジュゲートが、１つまたは複数の他の治療薬と同時に、連続して、または別々に投与される、請求項１２４～１４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項147】

対象におけるがんを治療する方法であって、請求項１～９１のいずれか１項に記載の治療有効量のコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、前記がん細胞または組織内の核酸に特異的にハイブリダイズし、前記核酸によってコードまたは制御される前記核酸及び／またはタンパク質のレベルを調節し、前記核酸またはタンパク質は、
（ａ）前記がん細胞、組織、及び／もしくは対象における前記核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）前記がん細胞、組織、及び／もしくは対象における前記核酸によってコードされる前記タンパク質の過剰発現もしくは過少発現；を特徴とする、前記方法。

【請求項148】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、前記がん細胞上またはその近くの細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７に記載の方法。

【請求項149】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、前記がん細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７または１４８に記載の方法。

【請求項150】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、前記がん細胞付近の細胞（例えば、間質細胞、癌関連線維芽細胞、免疫細胞、血液もしくはリンパ管細胞、内皮細胞、脂肪細胞、または神経内分泌細胞などの腫瘍微小環境内の細胞）上の細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７～１４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項151】

前記がんが固形腫瘍である、請求項１４７～１５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項152】

前記がんが、白血病、膵臓癌、乳癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、膀胱癌、大腸癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、骨癌、神経膠芽腫を含む脳腫瘍；またはリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫である、請求項１４７～１５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項153】

前記がんが血液癌である、請求項１５２に記載の方法。

【請求項154】

前記血液癌が白血病またはリンパ腫である、請求項１５３に記載の方法。

【請求項155】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＨＬＤ－ＤＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フェリチン、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ｐ１８５ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮増殖因子、ａｖＢ３、ＷＴ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＨＩＶ ＧＰ１２０、ＨＩＶ ＧＰ１６０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、Ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、Ｐ５３変異体、ＰＲ１、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、フコシルＧＭ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｓＬｅ（動物）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＶ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ ３、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲ、エンドグリン、ＰＤＬ、ＶＴＣＮ１、及びＶＩＳＴＡ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７～１５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項156】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、ＤＬＬ３、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰα）、ＮＧ２（神経膠抗原－２）、血小板由来増殖因子受容体－β（ＰＤＧＦＲ－β）、ＰＤ１、ＣＤ１６３、ＫＩＲ、ＨＭＧＢ１、ＶＥＧＦＲ３、ＬＹＶＥ１、ＣＤ３１、ＣＤ３４、Ｐ１ＧＦ、及びＶＥＧＦ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７～１５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項157】

前記コンジュゲートの標的指向性部分が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＰＳＭＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、エンドグリン、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＶＴＣＮ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＬＰ－３、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１６、ＵＰＫ１Ｂ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＥＭ２３８、Ｃ１ｏｒｆ１８６、及びＬＲＲＣ１５、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、請求項１４７～１５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項158】

前記コンジュゲートの前記治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、請求項１４７～１５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項159】

前記コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３、ｃＭｅｔ、ｐ５６ｌｃｋ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＦＧＦＲ、ＡＮＧ１、ＡＮＧ２、ｂＦＧＦ，ＴＩＥ２、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－アルファ）、ｐ５６ｌｃｋ ＰＫＡ、ＴＧＦ－β、ＩＧＦＩＲ、Ｐ１２、ＭＤＭ２、ＢＲＣＡ、ＩＧＦ１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＩＦ１アルファ、フェリチン、トランスフェリン受容体、ＴＭＰＲＳＳ２、ＩＲＥ、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＭＩＴＦ、クラステリン、ＰＡＲＰ１Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｎ－ｍｙｃ、Ｃ－ｒａｆ、Ｂ－ｒａｆ、Ａ１、Ｈ－ｒａｆ、Ｓｋｐ２、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、ファレンシルトランスフェラーゼ、ｃ－Ｓｒｃ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ｃ－Ｋｉｔ、ＥｐｈＡ２、ＰＤＧＦＢ、ＡＲＦ、ＮＯＸ１、ＮＦ１、ＳＴＡＴ３、Ｅ６／Ｅ７、ＡＰＣ、ＷＮＴ、ベータカテニン、ＧＳＫ３ｂ、ＰＩ３ｋ、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、ＰＤＫ－１、ＣＤＫ、Ｍｅｋ１、ＥＲＫ１、ＡＰ－１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｓｙｋ、オステオポンチン、ＣＤ４４、ＭＥＫ、ＭＡＰＫ、ＮＦ－κβ（ＮＦカッパベータ）、Ｅカドヘリン、サイクリンＤ、サイクリンＥ、Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ＢＸＬ－ＸＬ、ＢＣＬ－Ｗ、ＭＣＬ１、ＥＲ、ＭＤＲ、テロメラーゼ、テロメラーゼ逆転写酵素、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ（例えば、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２）、インテグリン、ＩＡＰ、オーロラキナーゼ、メタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９）、プロテアソーム、またはメタロチオネイン遺伝子、に特異的にハイブリダイズする、請求項１４７～１５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項160】

前記コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：サバイビン、ＨＳＰＢ１、ＥＩＦ４Ｅ、ＰＴＰＮ１、ＲＲＭ２、ＢＣＬ２、ＰＴＥＮ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＴＬＲ９、ＨａＲａｓ、Ｐｋａ－ｒＩＡ、ＪＮＫ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＸＩＡＰ、ＴＧＦ－β２、ｃ－ｍｙｂ、ＰＬＫ１、Ｋ－ｒａｓ、ＫＳＰ、ＰＫＮ３、リボヌクレオチドレダクターゼ（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼＲ１及びリボヌクレオチドレダクターゼＲ２）、ＲｅｃＱヘリカーゼ（例えば、ＷＲＮ、ＲｅｃＱＬ１、ＢＬＭ、ＲｅｃＱＬ４、ＲｅｃＱ５、及びＲＴＳ）、ＭＥＭ２及びＴＬＲ９、に特異的にハイブリダイズする、請求項１４７～１５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項161】

前記コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、請求項１４７～１５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項162】

前記切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、請求項１６０に記載の方法。

【請求項163】

前記コンジュゲート標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、請求項１４７～１６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項164】

前記コンジュゲートの前記標的指向性部分が、抗体または抗体の抗原結合断片である、請求項１４７～１６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項165】

前記標的指向性部分が、抗体である、請求項１６３に記載の方法。

【請求項166】

前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、請求項１６４に記載の方法。

【請求項167】

前記抗体が治療用抗体である、請求項１６４または１６５に記載の方法。

【請求項168】

前記抗体が、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、（ＨＥＲ３）、オナルツズマブ（ｃ－ＭＥＴ）、パトリツマブ、クリバツズマブ（ＭＵＣ１）、ソフィツズマブ（ＭＵＣ１６）、エドレコロマブ（ＥＰＣＡＭ）、アデカツムマブ（ＥＰＣＡＭ）、アネツマブ（ＭＳＬＮ）、ｈｕＤＳ６（ＣＡ６）、リファスツズマブ（ＮＡＰＩ２Ｂ）、サシツズマブ（ＴＲＯＰ２）、ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３（ＣＥＡ）、ヒト化Ａｂ２－３（ＣＥＡ）、ＩＭＡＢ３６２／クラウディキシマブ（クローディン１８．２）、ＡＭＧ５９５（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＡＢＴ８０６（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、ＤＳ－８８９５ａバリアント１（ＥｐｈＡ２）、ＤＳ－８８９５ａバリアント２（ＥｐｈＡ２）、抗ＥｐｈＡ２（ＥｐｈＡ２）、ＭＥＤＩ－５４７（ＥｐｈＡ２）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ＲＧ７８４１（ＬＹ６Ｅ）、ファルレツズマブ（ＦＲＡ／葉酸受容体アルファ）、ミルベツキシマブ（ＦＲＡ）、Ｊ５９１バリアント１（ＰＳＭＡ）、Ｊ５９１バリアント２（ＰＳＭＡ）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、ＰＦ－０６６４７０２０（ＰＴＫ７）、抗ＰＴＫ７（ＰＴＫ７）、ラディラツズマブ（ＬＩＶ１）、シルムツズマブ（ＲＯＲ１）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ５２）、アレムツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ＣＴ－０１１ （ＰＤ１）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）（ＣＴＬＡ４）、ニボルマブ（ＰＤ１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ１）、デュルバルマブ（ＰＤＬ１）抗ＭＡＧＥ－Ａ３、及び抗ＮＹ－ＥＳＯ－１；から選択される、請求項１６６に記載の方法。

【請求項169】

前記コンジュゲートが、１つまたは複数の他の抗がん薬と同時に、連続して、または別々に投与される、請求項１４６～１６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項170】

医薬における使用のための、請求項１～９１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項171】

対象における疾患または障害の治療における使用のための、請求項１～９１のいずれか１項に定義されたコンジュゲート。

【請求項172】

感染症、がん、増殖性疾患または障害、神経疾患または障害、及び炎症性疾患または障害、免疫系の疾患または障害、心血管系の疾患または障害、代謝疾患または障害、骨格系の疾患または障害、ならびに皮膚または目の疾患または障害から選択される疾患または障害の治療における使用のための、請求項１～９１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【請求項173】

対象における標的核酸またはタンパク質を調節する際に；対象における核酸の過剰発現または過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する際に、対象におけるタンパク質の過剰発現または過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する際に；対象における異常な核酸またはタンパク質発現を特徴とする疾患または障害を治療する際に、使用するための、請求項１～９１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、オリゴヌクレオチド治療法に関する。特に、本開示は、修飾オリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド模倣物を含む、オリゴヌクレオチドの標的化及び局所インビボ送達の改善を提供する標的化コンジュゲート、ならびにこれらのコンジュゲートを作製及び使用する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

オリゴヌクレオチドは、さまざまなヒト疾患に対する治療剤としての可能性がますます認められている。しかし、治療用オリゴヌクレオチドの開発における主な課題は、標的細胞への特異的かつ効率的なインビボ送達であり、これは臨床応用を成功させるために必須である。標的化システムは、オリゴヌクレオチド送達の効率及び特異性を大幅に改善させることができる。しかし、効果的な送達システムは、オリゴヌクレオチドが作用部位に到達し、生物学的標的にアクセスできるようにするために、多数の生物学的障壁をうまく克服する必要がある。これらの目的を達成するために、さまざまなプラットフォーム技術及びさまざまな標的指向性リガンドに基づくいくつかの標的送達戦略が開発されているが、各戦略には制限があり、オリゴヌクレオチド治療法への幅広い適用性が妨げられている。したがって、新しい標的化オリゴヌクレオチド送達技術が必要とされている。

【発明の概要】

【0003】

本開示は、Ｈ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体を含む標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲート化合物、ならびにこれらの化合物を作製及び使用する方法に関する。本開示は、オリゴ－ＨＥＳ複合体を標的指向性部分にコンジュゲートすることにより、標的オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドの、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原を発現する細胞内及び／または周囲の標的化核酸への標的化及び局所送達が増加するという本発明者らの重要な発見に部分的に基づいている。標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートは、オリゴヌクレオチド単独及びオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体と比較して、薬物動態特性、選択的組織分布を劇的に改善し、標的化細胞及び標的化細胞の微小環境におけるコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドの細胞内取り込みを増強する。

【0004】

いくつかの実施形態では、本開示は以下を提供する、
［１］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている標的指向性部分を含むコンジュゲートであって、場合によりオリゴヌクレオチドが治療用オリゴヌクレオチドであるコンジュゲート；
［２］標的指向性部分が、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体に直接コンジュゲートしているか、またはリンカーを介してオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている、［１］に記載のコンジュゲート；
［３］標的指向性部分がリンカーを介してオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている、［１］または［２］のコンジュゲート；
［４］式（Ｉ）
Ｔ－（Ｌ_ｎ－（オリゴ－ＨＥＳ）_ｘ）_ｐ （Ｉ）
の構造を有する［１］～［３］のいずれか１つのコンジュゲート
（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり、
オリゴ－ＨＥＳは、治療用オリゴヌクレオチド及びＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
ｎは、０または１であり；
ｘは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５であり；
ｐは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５である）；
［５］式（ＩＩ）
Ｔ－［Ｌ_ｎ－（（オリゴ２－ＳＰ）_ｍ－オリゴ１－ＨＥＳ）_ｓ］_ｕ （ＩＩ）
の構造を有する［１］～［４］のいずれか１つのコンジュゲート（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり、
ＳＰはリンカーであり、場合により、ＳＰは、Ｃ６、Ｃ１０、またはＣ１８の直鎖または分岐鎖アルキルなどの６～１２個のアミノ酸残基ペプチドまたはアルキル鎖スペーサーであり；
オリゴ１－ＨＥＳは、オリゴヌクレオチド１（オリゴ１）とＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
オリゴ２は、オリゴ１と同じでも異なっていてもよいオリゴヌクレオチドであり；
ｎは、０または１であり；
ｍは、０または１であり；
ｓは、１または２であり；
ｕは１、２、３、４、または５である）；
［６］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、核酸によってコードされるかまたは制御されるタンパク質のレベルを調節する治療用オリゴヌクレオチドを含む、［１］～［５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７］治療用オリゴヌクレオチドが、核酸配列の対応する逆相補鎖と比較して、１、２、または３個の置換、欠失、または挿入を含有する、［６］のコンジュゲート；
［８］治療用オリゴヌクレオチドが、約８ヌクレオチド～約７５０ヌクレオチドの長さである、［１］～［７］のいずれか１つのコンジュゲート；
［９］治療用オリゴヌクレオチドが１８～２５、１８～３５、１８～４０、または１８～４５、１８～５０、１８～６０、１８～７０、１８～８０、１８～９０、１８～１００、１８～１５０、または１８～２００ヌクレオチドの長さである、［１］～［８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１０］治療用オリゴヌクレオチドが一本鎖である、［１］～［９］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１１］治療用オリゴヌクレオチドが二本鎖である、［１］～［９］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１２］治療用オリゴヌクレオチドが、３６～５０、３６～６０、３６～７０、または３６～１００ヌクレオチド長である、［１１］のコンジュゲート；
［１３］治療用オリゴヌクレオチドが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アルファＬＮＡ、２’－フルオロ（２’Ｆ）、２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（２’－ＭＯＥ）、２’－－デオキシ－２’－－フルオロ－Ｄ－アラビノ核酸（ＦＡＮＡ）、２’－ＯＣＨ３（２’－Ｏ－メチル）（２’ＯＭＥ）、ＰＮＡ、及びモルホリノ、から選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシドモチーフを含有する、［１］～［１２］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１４］修飾ヌクレオシドモチーフが、メチレン（－－ＣＨ２－－）ｎ基が２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋するＬＮＡまたはアルファＬＮＡであり、ｎが１または２である、［１３］のコンジュゲート；
［１５］ＬＮＡまたはアルファＬＮＡが５’位にメチル基を含有する、［１３］または［１４］のコンジュゲート；
［１６］ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミド、３’－メチレンホスホネート、Ｏ－メチルホスホロアミジエート（Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｍｉｄｉａｔｅ）、ＰＮＡ及びモルホリノから選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含有する、［１］～［１５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１７］治療用オリゴヌクレオチドが、Ｃ－５プロピン、及び５－メチルＣから選択される１つまたは複数の修飾核酸塩基を含有する、［１］～［１６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［１８］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３、ｃＭｅｔ、ｐ５６ｌｃｋ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＦＧＦＲ、ＡＮＧ１、ＡＮＧ２、ｂＦＧＦ，ＴＩＥ２、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－アルファ）、ｐ５６ｌｃｋ ＰＫＡ、ＴＧＦ－β、ＩＧＦＩＲ、Ｐ１２、ＭＤＭ２、ＢＲＣＡ、ＩＧＦ１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＩＦ１アルファ、フェリチン、トランスフェリン受容体、ＴＭＰＲＳＳ２、ＩＲＥ、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＭＩＴＦ、クラステリン、ＰＡＲＰ１Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｎ－ｍｙｃ、Ｃ－ｒａｆ、Ｂ－ｒａｆ、Ａ１、Ｈ－ｒａｆ、Ｓｋｐ２、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、ファレンシルトランスフェラーゼ、ｃ－Ｓｒｃ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ｃ－Ｋｉｔ、ＥｐｈＡ２、ＰＤＧＦＢ、ＡＲＦ、ＮＯＸ１、ＮＦ１、ＳＴＡＴ３、Ｅ６／Ｅ７、ＡＰＣ、ＷＮＴ、ベータカテニン、ＧＳＫ３ｂ、ＰＩ３ｋ、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、ＰＤＫ－１、ＣＤＫ、Ｍｅｋ１、ＥＲＫ１、ＡＰ－１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｓｙｋ、オステオポンチン、ＣＤ４４、ＭＥＫ、ＭＡＰＫ、ＮＦ－κβ（ＮＦカッパベータ）、Ｅカドヘリン、サイクリンＤ、サイクリンＥ、Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ＢＸＬ－ＸＬ、ＢＣＬ－Ｗ、ＭＣＬ１、ＥＲ、ＭＤＲ、テロメラーゼ、テロメラーゼ逆転写酵素、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ（例えば、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２）、インテグリン、ＩＡＰ、オーロラキナーゼ、メタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９）、プロテアソーム、またはメタロチオネイン遺伝子、に特異的にハイブリダイズする、［１］～［１７］のいずれか１つに記載の方法；
［１９］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：サバイビン、ＨＳＰＢ１、ＥＩＦ４Ｅ、ＰＴＰＮ１、ＲＲＭ２、ＢＣＬ２、ＰＴＥＮ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＴＬＲ９、ＨａＲａｓ、Ｐｋａ－ｒＩＡ、ＪＮＫ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＸＩＡＰ、ＴＧＦ－β２、ｃ－ｍｙｂ、ＰＬＫ１、Ｋ－ＲＡＳ、ＫＳＰ、ＰＫＮ３、リボヌクレオチドレダクターゼ（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼＲ１及びリボヌクレオチドレダクターゼＲ２）、ＲｅｃＱヘリカーゼ（例えば、ＷＲＮ、ＲｅｃＱＬ１、ＢＬＭ、ＲｅｃＱＬ４、ＲｅｃＱ５、及びＲＴＳ）、ＭＥＭ２及びＴＬＲ９、に特異的にハイブリダイズする、［１］～［１７］のいずれか１つに記載の方法；
［２０］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う少なくとも１つのフルオロフォアを含む、［１］～［１９］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２１］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、１つまたは複数のＨＥＳを形成することができる２、３、４、またはそれ以上のフルオロフォアを含む、［１］～［２０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２２］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う２、３、４、またはそれ以上のフルオロフォアを含む、［１］～［２１］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２３］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、キサンテン、インドカルボシアニン、インドジカルボシアニン、及びクマリンから選択される少なくとも１つのフルオロフォアを含む、［１］～［２２］のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
［２４］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、カルボキシローダミン１１０、カルボキシテトラメチルローダミン、カルボキシローダミン－Ｘ、ジエチルアミノクマリン及びＮ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ’’－スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル］インドカルボシアニンクロリド、Ｎ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ’’－スクシンイミジルオキシカルボニル））ペンチル］－３，３，３’，３’－テトラメチル－２’，２’－インドジカルボシアニンクロリド色素、から選択される少なくとも１つのフルオロフォアを含む、［１］～［２３］のいずれか１つのコンジュゲート；さらなる実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、スクシンイミジルエステルまたは塩酸塩；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、トリフルオロアセトアミドまたはスクシンイミジルエステル；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）－Ｘスクシンイミジルエステルまたは塩酸塩；Ｒｈｏｄｏｌ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、Ｎ，Ｏ－ビス－（トリフルオロアセチル）またはスクシンイミジルエステル；ビス－（４－カルボキシピペリジニル）スルホンローダミンまたはジ（スクシンイミジル、エステル）；５－（及び－６）－カルボキシナフトフルオレセイン、５－（及び－６）－カルボキシナフトフルオレセインスクシンイミジルエステル；５－カルボキシローダミン６Ｇ塩酸塩；６－カルボキシローダミン６Ｇ塩酸塩、５－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；６－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５－カルボキシ－２’，４’，５’，７’－テトラブロモスルホンフルオレセインスクシンイミジルエステルまたはビス－（ジイソプロピルエチルアンモニウム）塩；５－カルボキシテトラメチルローダミン；６－カルボキシテトラメチルローダミン；５－（及び－６）－カルボキシテトラメチルローダミン；５－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン；５－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；５－カルボキシ－Ｘ－ローダミントリエチルアンモニウム塩；Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ（商標）ローダミンＢスルホニルクロリド；マラカイトグリーンイソチオシアネート；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｒｅｄ（商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；６－（テトラメチルローダミン－５－（及び－６）－カルボキサミド）ヘキサン酸スクシンイミジルエステル；テトラメチルローダミン－５－イソチオシアネート；テトラメチルローダミン－６－イソチオシアネート；テトラメチルローダミン－５－（及び－６）－イソチオシアネート；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）スルホニル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）塩化スルホニル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘ ＳＴＰ エステルまたはナトリウム塩；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；Ｘ－ローダミン－５－（及び－６）－イソチオシアネート；及びカルボシアニン、からなる群から選択されるフルオロフォアを含有する；
［２５］治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、［１］～［２４］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２６］治療用オリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡである、［１］～［２５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２７］治療用オリゴヌクレオチドが一ｓｈＲＮＡである、［１］～［２５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２８］治療用オリゴヌクレオチドがｍｉＲＮＡまたはアンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）（ｍｉＲＮＡの阻害剤）である、［１］～［２５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［２９］治療用オリゴヌクレオチドがダイサー基質である、［１］～［２５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［３０］治療用オリゴヌクレオチドが、それぞれ１８～２５、１８～３０、１８～３５、１８～４０、１８～４５、または１８～５０ヌクレオチド長であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングである２つの核酸相補的核酸鎖を含有する、［２９］のコンジュゲート；
［３１］治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘発することができる、［１］～［３０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［３２］ＲＮＡにハイブリダイズした場合、治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡｓｅ Ｈの基質である、［２５］のコンジュゲート；
［３３］治療用オリゴヌクレオチドがギャップマーである、［２５］のコンジュゲート；
［３４］ＲＮＡにハイブリダイズした場合、治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない、［２５］のコンジュゲート；
［３５］治療用オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、［１］～［２５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［３６］アンチセンスオリゴヌクレオチドが目的のＲＮＡに特異的にハイブリダイズする、［３５］のコンジュゲート；
［３７］アンチセンスオリゴヌクレオチドがＤＮＡまたはＤＮＡ模倣物である、［３５］または［３６］のコンジュゲート；
［３８］治療用アンチセンスオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドが、２’位での修飾を含む修飾糖部分、ＰＮＡモチーフ、またはモルホリノモチーフを含む、［３５］～［３７］のいずれか１つのコンジュゲート；
［３９］治療用アンチセンスオリゴヌクレオチド配列が、以下からなる群：
（ａ）ｍＲＮＡのＡＵＧ開始コドンから３０ヌクレオチド以内の配列；
（ｂ）ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０；
（ｃ）ｍＲＮＡの５’－非翻訳領域における配列；
（ｄ）ｍＲＮＡの３’－非翻訳領域における配列；
（ｅ）ｍＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション；
（ｆ）オリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の配列；ならびに
（ｇ）イントロン／エキソンジャンクション、及びＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基の領域、から選択されるＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする、［３５］～［３８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４０］オリゴヌクレオチドのその標的ｍＲＮＡへのハイブリダイゼーションが、コード配列の翻訳を立体的に遮断するか、もしくは標的ｍＲＮＡの発現を調節し、及び／またはヌクレオチド結合タンパク質を遮断して、それにより、標的ｍＲＮＡの安定性を調節する、［３５］～［３９］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４１］アンチセンスオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が複数のアンチセンス鎖を含み、場合によりアンチセンス鎖が架橋されている、［３５］～［４０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４２］オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が、５’側から３’側へ直列にスペーサーアームと直鎖状に連結され、第２鎖の５’末端または３’末端残基に連結された別のアンチセンスオリゴヌクレオチドにスペーサーアーム（例えば、６～３０アミノ酸残基ペプチドもしくは直鎖アルキル（例えば、Ｃ６、Ｃ１０、もしくはＣ１２）またはポリエチルオキシ－グリコール（例えば、トリエチルオキシ－グリコール、テトラエチルオキシ－グリコールもしくはヘキサ－エチルオキシ－グリコール）で連結された複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、［４１］のコンジュゲート；
［４３］リンカーアーム（ＬまたはＳＰ）が、Ｃ６、Ｃ１０、もしくはＣ１２の直鎖アルキル、またはポリエチルオキシ－グリコール（例えば、トリエチルオキシ－グリコール、テトラエチルオキシ－グリコールまたはヘキサ－エチルオキシ－グリコール）である、請求項１～４２のいずれか１項に記載のコンジュゲート；
［４４］オリゴ－ＨＥＳ複合体が、５’側から３’側への２つ以上のアンチセンス鎖及び反対方向の３’側から５’側への２つ以上の治療用アンチセンスと架橋された複数の治療用アンチセンスを含み、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、スペーサーＳＰを用いて５’側から３’側、次いで３’側から５’側の方向で２つ以上のアンチセンス鎖と架橋された複数の治療用アンチセンスを含む、［４１］～［４３］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４５］アンチセンス鎖が２つ以上の同じ相補配列及び／または２つ以上の異なる相補配列を有する、［４４］のコンジュゲート；
［４６］直鎖状または分岐鎖状リンカーを含む、［１］～［４５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４７］６～３０アミノ酸残基長のペプチドリンカーまたはＳＰスペーサーを含む、［１］～［４６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［４８］リンカーが６～３０アミノ酸残基長の直鎖状ペプチドである、［４６］または［４７］のコンジュゲート；
［４９］リンカーが切断可能である、［４６］～［４８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［５０］リンカーが、Ｐ１－Ｐ１’残基を含有するプロテアーゼ切断部位を含むアミノ酸配列を有し、ループ構造を有する、［４９］のコンジュゲート；
［５１］切断可能なリンカーが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、［４９］または［５０］のコンジュゲート；
［５２］切断可能なリンカーが、疾患組織において活性である少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、［４９］～［５１］のいずれか１つのコンジュゲート；
［５３］切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、［４９］～［５２］のいずれか１つのコンジュゲート；
［５４］切断可能なリンカーが、
（ａ）ＭＭＰ９；
（ｂ）ＭＭＰ１４；
（ｃ）ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７；
（ｄ）セリンプロテアーゼ（例えば、ＭＴ－ＳＰ１、ｕＰＡ、及びＴＭＰＲＳＳ２）；
（ｅ）システインプロテアーゼ；
（ｆ）（ａ）～（ｃ）を含むメタロプロテアーゼ；
（ｇ）アスパルチルプロテアーゼ；及び
（ｈ）スレオニンプロテアーゼ；から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、［４９］～［５３］のいずれか１つのコンジュゲート；
［５５］切断可能なリンカーが、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４の基質であるアミノ酸配列を含む、［５４］に記載のコンジュゲート；
［５６］切断可能なリンカーが、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、及びプラスミンなどの、免疫補体系の少なくとも１つの酵素の基質であるアミノ酸配列を含む、［５４］または［５５］のコンジュゲート；
［５７］切断可能なリンカーが、コンジュゲートの標的と共局在することが知られている、または報告されているプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む、［４９］～［５６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［５８］リンカーが細胞内条件（例えば、リソソームもしくはエンドソームまたはカベオラ内の条件）下で切断可能である、［４９］のコンジュゲート；
［５９］リンカーがｐＨ感受性である、［４９］のコンジュゲート；
［６０］リンカーが還元条件下で切断可能である、［４９］のコンジュゲート；
［６１］リンカーがマロネートリンカーである、［４４］～［５６］のいずれかのコンジュゲート（のコンジュゲート）；
［６２］リンカーが切断不能である、［４６］～［４８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６３］リンカーが、Ｈ－二量体形成フルオロフォア（例えば、アミノ及び／またはカルボキシル末端残基にコンジュゲートしたＨ－二量体形成フルオロフォアを含むリンカー）を有する、［４６］～［６２］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６４］リンカーが、アミノ末端残基及びカルボキシル末端残基にコンジュゲートしたＨ－二量体形成フルオロフォアを有する、［４６］～［６３］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６５］リンカーが、ペプチドのアミノ末端及びカルボキシル末端にスルフヒドリルまたはアミノ官能基を有する、［４６］～［６４］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６６］コンジュゲートの標的指向性部分が、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン－アビジン結合対、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ビタミン、微生物の成分、ホルモン、受容体リガンド（受容体リガンドを含有するＦｃ融合タンパク質を含む）、抗体、抗体の抗原結合部分、代替結合足場、またはそれらの任意の誘導体である、［１］～［６５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６７］標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、［１］～［６６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６８］標的指向性部分が、抗体、ヒト化抗体、抗体の抗原結合断片、一本鎖抗体、二重特異性抗体、合成抗体、またはＰＥＧ化抗体である、［１］～［６７］のいずれか１つのコンジュゲート；
［６９］標的指向性部分が抗体である、［１］～［６８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７０］標的指向性部分が、単一特異性、二重特異性、もしくは多重特異性抗体及び／または一価、二価、もしくは多価抗体である、［６９］に記載のコンジュゲート；
［７１］標的指向性部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、［６９］または［７０］のコンジュゲート；
［７２］標的指向性部分が治療用抗体である、［６９］～［７０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７３］抗体が、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、（ＨＥＲ３）、オナルツズマブ（ｃ－ＭＥＴ）、パトリツマブ、クリバツズマブ（ＭＵＣ１）、ソフィツズマブ（ＭＵＣ１６）、エドレコロマブ（ＥＰＣＡＭ）、アデカツムマブ（ＥＰＣＡＭ）、アネツマブ（ＭＳＬＮ）、ｈｕＤＳ６（ＣＡ６）、リファスツズマブ（ＮＡＰＩ２Ｂ）、サシツズマブ（ＴＲＯＰ２）、ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３（ＣＥＡ）、ヒト化Ａｂ２－３（ＣＥＡ）、ＩＭＡＢ３６２／クラウディキシマブ（クローディン１８．２）、ＡＭＧ５９５（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＡＢＴ８０６（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、ＤＳ－８８９５ａバリアント１（ＥｐｈＡ２）、ＤＳ－８８９５ａバリアント２（ＥｐｈＡ２）、抗ＥｐｈＡ２（ＥｐｈＡ２）、ＭＥＤＩ－５４７（ＥｐｈＡ２）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ＲＧ７８４１（ＬＹ６Ｅ）、ファルレツズマブ（ＦＲＡ／葉酸受容体アルファ）、ミルベツキシマブ（ＦＲＡ）、Ｊ５９１バリアント１（ＰＳＭＡ）、Ｊ５９１バリアント２（ＰＳＭＡ）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、ＰＦ－０６６４７０２０（ＰＴＫ７）、抗ＰＴＫ７（ＰＴＫ７）、ラディラツズマブ（ＬＩＶ１）、シルムツズマブ（ＲＯＲ１）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ５２）、アレムツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ＣＴ－０１１（ＰＤ１）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）（ＣＴＬＡ４）、ニボルマブ（ＰＤ１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ１）、デュルバルマブ（ＰＤＬ１）抗ＭＡＧＥ－Ａ３、抗ＮＹ－ＥＳＯ－１、抗ＡＣＥ２、抗ヒアルロニダーゼ、または抗ノイラミニダーゼ；から選択される、［７２］のコンジュゲート；
［７４］標的指向性部分が、抗体、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、または二重特異性抗体の抗原結合断片である、［１］～［６８］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７５］標的指向性部分が、アフィボディ、ナノボディ、アンチカリン、フィノマー、ＤＡＲＰｉｎ、テトラネクチン、トランスボディ、アドネクチン、アフィリン、マイクロボディ、ペプチドアプタマー、アルタラーゼ、プラスチック抗体、フィロマー、ストラドボディ、マキシボディ、エビボディ、Ｚドメイン、Ｄドメイン、アルマジロリピートタンパク質、クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペップボディ（ｐｅｐｂｏｄｙ）ワクシボディ、ユニボディ、アフィマー、またはデュオボディ、から選択される代替結合足場である、［１］～［６６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７６］標的指向性部分が、疾患細胞、がん細胞、免疫細胞、感染細胞、または感染因子などの目的の細胞または組織上またはその近くの細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［７５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７７］標的指向性部分が、ネオアンチゲンなどの、特定の対象のがん（例えば、腫瘍）に由来するか、またはそのがんで発現されると判定された細胞表面抗原（複数可）に特異的に結合する、［１］～［７６］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７８］標的指向性部分が、結合時にコンジュゲートを内在化しない細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［７７］のいずれか１つのコンジュゲート；
［７９］標的指向性部分が、結合時にコンジュゲートを内在化する細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［７５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８０］標的指向性部分が、腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［７９］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８１］標的指向性部分が、白血病細胞、リンパ腫細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、大腸癌細胞、腎臓癌細胞、肝臓癌細胞、前立腺癌細胞、骨癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞；またはリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫細胞上の腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［８０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８２］標的指向性部分が、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＨＬＤ－ＤＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フェリチン、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ｐ１８５ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮増殖因子、ａｖＢ３、ＷＴ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、Ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、Ｐ５３変異体、ＰＲ１、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、フコシルＧＭ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｓＬｅ（動物）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＶ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ ３、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲ、エンドグリン、ＰＤＬ、ＶＴＣＮ１、及びＶＩＳＴＡ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［８１］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８３］標的指向性部分が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＰＳＭＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、エンドグリン、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＶＴＣＮ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＬＰ－３、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１６、ＵＰＫ１Ｂ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＥＭ２３８、Ｃ１ｏｒｆ１８６、及びＬＲＲＣ１５、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［８１］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８４］標的指向性部分が、腫瘍微小環境細胞表面抗原（ある特定の膜固定型プロテアーゼを含む）に特異的に結合する、［１］～［８３］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８５］標的指向性部分が、内皮細胞もしくはマクロファージに発現する細胞表面抗原（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＴＩＥ１、及びＴＩＥ２）、または腫瘍間質細胞、例としてがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、腫瘍浸潤Ｔ細胞及びその他の白血球、ならびにマスト細胞、好酸球、及び腫瘍関連マクロファージを含む骨髄細胞に発現する細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［８４］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８６］標的指向性部分が、免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［１］～［８５］のいずれか１つのコンジュゲート；
［８７］標的指向性部分が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などのリンパ系または骨髄系起源の免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［８６］のコンジュゲート；
［８８］標的指向性部分が、抗原提示細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［８６］または［８７］に記載のコンジュゲート；
［８９］標的指向性部分が、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＭＡＲＣＯ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、デクチン１、デクチン２、ＤＥＣ－２０５、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＬＥＣ９Ａ、ＣＬＥＣ１０Ａ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３６、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ６４、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＨＶＥＭ、ＰＤＬ１、マンノーススカベンジャー受容体１、及びＢＤＣＡ２から選択される抗原に特異的に結合する、［８８］に記載のコンジュゲート；
［９０］標的指向性部分が、抗原提示細胞ではない免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［８６］または［８７］に記載のコンジュゲート；
［９１］標的指向性部分が、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析を用いて決定された０．５×１０^－１０～１０×１０^－６の範囲の平衡解離定数（Ｋｄ）により目的の標的（例えば、細胞表面抗原）に結合する、［１］～［９０］のいずれか１つのコンジュゲート；
［９２］細胞内の核酸またはタンパク質レベルを調節する方法であって、細胞を、治療有効量の［１］～［９１］のいずれか１つのコンジュゲートと接触させることを含み、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体が：
（ａ）細胞上または付近の細胞上の細胞表面抗原に結合する標的指向性部分；と
（ｂ）核酸に特異的にハイブリダイズし、核酸及び／または核酸によってコードまたは制御されるタンパク質のレベルを調節するオリゴヌクレオチド；とを含む、前記方法。
［９３］Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分が、接触した細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合し、細胞は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの切断可能なリンカーを切断してオリゴ－ＨＥＳ複合体を放出する細胞表面プロテアーゼを発現する、［９２］の方法。
［９４］調節された核酸またはタンパク質が、疾患細胞、感染細胞、感染因子、または免疫細胞にある、［９２］または［９３］の方法；
［９５］調節された核酸またはタンパク質が疾患細胞内にある、［９４］の方法。
［９６］調節された核酸またはタンパク質が、がん細胞内にある、［９５］の方法。
［９７］がん細胞が、血液癌細胞または固形腫瘍癌細胞である、［９６］の方法。
［９８］がん細胞が、白血病細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、大腸癌細胞、腎臓癌細胞、肝臓癌細胞、前立腺癌細胞、骨癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞；または任意のリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫細胞である、［９７］の方法；
［９９］調節された核酸またはタンパク質が、感染細胞または感染性細胞内にある、［９４］に方法。
［１００］調節された核酸またはタンパク質が、感染細胞または感染因子内にある、［９９］の方法。
［１０１］細胞が、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ－１、ジカウイルス、デングウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、クリミアコンゴ出血熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、痘瘡ウイルス、ＳＡＲＳウイルス、リフトバレー熱ウイルス、結核、炭疽菌、ボツリヌス中毒症、野兎病、ペスト、ブルセラ症、鼻疽、類鼻疽、Ｑ熱、またはアルファウイルス、例としてチクングニアウイルス、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、西部、東部及びベネズエラ馬脳炎ウイルス、ロスリバーウイルス、ＣＯＶＩＤ、またはインフルエンザ、に感染している、［９９］または［１００］の方法；
［１０２］調節された核酸またはタンパク質が、免疫細胞内にある、［９４］の方法。
［１０３］免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などの骨髄系由来のリンパ系細胞である、［１０２］の方法；
［１０４］治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、［９２］～［１０３］のいずれか１つの方法；
［１０５］コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、［９２］～［１０４］のいずれか１つの方法；
［１０６］切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、［１０５］の方法；
［１０７］コンジュゲートの標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、［９２］～［１０６］のいずれか１つの方法；
［１０８］対象における核酸またはタンパク質レベルを調節する方法であって、治療有効量の［１］～［９１］のいずれか１つのコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、コンジュゲートが：
（ａ）核酸またはタンパク質が調節される細胞上または細胞近くの細胞表面抗原に結合する標的指向性部分；と
（ｂ）核酸に特異的にハイブリダイズし、核酸及び／または核酸によってコードまたは制御されるタンパク質のレベルを調節するオリゴヌクレオチド；とを含む、前記方法；
［１０９］核酸またはタンパク質が、
（ａ）対象における核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）対象における核酸によってコードされるタンパク質の過剰発現もしくは過少発現；を特徴とする、［１０８］の方法。
［１１０］調節された核酸またはタンパク質が、疾患細胞、感染細胞、感染因子、または免疫細胞にある、［１０８］または［１０９］の方法；
［１１１］調節された核酸またはタンパク質が疾患細胞内にある、［１０８］の方法。
［１１２］調節された核酸またはタンパク質が、がん細胞にある、［１１０］の方法。
［１１３］がん細胞が、血液癌細胞または固形腫瘍癌細胞である、［１１２］の方法。
［１１４］がん細胞が、白血病細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、大腸癌細胞、腎臓癌細胞、肝臓癌細胞、前立腺癌細胞、骨癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞；または任意のリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫細胞である、［１１３］の方法；
［１１５］調節された核酸またはタンパク質が、感染細胞または感染因子内にある、［１１０］の方法。
［１１６］調節された核酸またはタンパク質が、感染因子内にある、［１１５］の方法。
［１１７］感染細胞がリンパ系または骨髄系由来の免疫細胞である、［１１５］の方法。
［１１８］調節された核酸またはタンパク質が疾患細胞内にある、免疫細胞内にある、［１１０］の方法。
［１１９］免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などのリンパ系または骨髄系細胞である、［１１８］の方法；
［１２０］治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、［１０８］～［１１９］のいずれか１つの方法；
［１２１］コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、［１０８］～［１２０］のいずれか１つの方法；
［１２２］切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、［１２１］の方法；
［１２３］コンジュゲート標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、［１０８］～［１２２］のいずれか１つの方法；
［１２４］対象における疾患または障害を治療する方法であって、［１］～［９１］のいずれか１つの治療有効量のコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、核酸によってコードまたは制御されるタンパク質のレベルを調節し；疾患または障害は、以下：
（ａ）対象における標的核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）対象における標的核酸によってコードされるタンパク質の過剰発現または過少発現；を特徴とする、前記方法；
［１２５］コンジュゲートが、核酸またはタンパク質が調節される細胞上または細胞近くの細胞表面抗原に結合する標的指向性部分を含む、［１２４］の方法；
［１２６］疾患または障害が、増殖性疾患または障害、例として、がん、免疫系の疾患もしくは障害、炎症性疾患もしくは障害、感染症、神経疾患もしくは障害、心血管系の疾患もしくは障害、代謝疾患もしくは障害、骨格系の疾患もしくは障害、または皮膚もしくは目の疾患もしくは障害、である、［１２４］または［１２５］の方法；
［１２７］疾患または障害が、がん、炎症性疾患もしくは障害、または免疫系の疾患もしくは障害、感染症、または神経変性疾患もしくは障害（ａ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）などの神経疾患もしくは障害、である、［１２４］～［１２６］のいずれか１つの方法；
［１２８］疾患または障害が、がんである、［１２４］～［１２７］のいずれか１つの方法；
［１２９］がんが、血液癌または固形腫瘍癌である、［１２８］の方法。
［１３０］がんが、白血病、膵臓癌、乳癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、膀胱癌、大腸癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、骨癌、神経膠芽腫を含む脳腫瘍；または任意のリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫である、［１２９］に記載の方法；
［１３１］疾患または障害が、がん、炎症性疾患もしくは障害、免疫系の疾患もしくは障害、または感染症である、［１２４］に記載の方法；
［１３２］疾患が、炎症性疾患もしくは障害、または自己免疫疾患もしくは障害（例えば、関節リウマチ）である、［１３１］の方法；
［１３３］疾患または障害が炎症である、［１３２］の方法；
［１３４］疾患または障害が感染症である、［１３３］の方法；
［１３５］感染症が、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ－１、ジカ熱、デング熱、インフルエンザ、エボラ、マールブルグ病、クリミアコンゴ出血熱、ラッサ熱ウイルス、痘瘡、ＳＡＲＳ、リフトバレー熱、結核、炭疽菌、ボツリヌス中毒症、野兎病、ペスト、ブルセラ症、鼻疽、類鼻疽、Ｑ熱であり、またはアルファウイルス、例としてチクングニアウイルス、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、西部、東部及びベネズエラ馬脳炎ウイルス、ロスリバーウイルス、もしくはＣＯＶＩＤ、に感染している、［１３４］の方法；
［１３６］疾患または障害が、神経疾患または障害である、［１２６］の方法；
［１３７］神経疾患または障害が、神経変性疾患、例として、家族性及び孤発性筋萎縮性側索硬化症（それぞれＦＡＬＳ及びＡＬＳ）、家族性及び孤発性パーキンソン病、ハンチントン病（ハンチントン舞踏病）、家族性及び孤発性アルツハイマー病、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、多発性硬化症、びまん性大脳皮質萎縮症、認知症、またはピック病である、［１３６］の方法；
［１３８］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、［１２４］～［１３７］のいずれか１つの方法；
［１３９］コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、［１２４］～［１３８］のいずれか１つの方法；
［１４０］切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、［１３９］の方法；
［１４１］コンジュゲートの標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、［１２４］～［１４０］のいずれか１つの方法；
［１４２］コンジュゲートの標的指向性部分が、抗体または抗体の抗原結合断片である、［１２４］～［１４１］のいずれか１つの方法；
［１４３］標的指向性部分が、抗体またはナノボディである、［１４２］の方法；
［１４４］抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、［１４３］の方法；
［１４５］抗体が治療用抗体である、［１４３］または［１４４］の方法；
［１４６］コンジュゲートが、１つまたは複数の他の治療薬と同時に、連続して、または別々に投与される、［１２４］～［１４５］のいずれか１つの方法。
［１４７］対象におけるがんを治療する方法であって、［１］～［９１］のいずれか１つの治療有効量のコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、がん細胞または組織内の核酸に特異的にハイブリダイズし、核酸によってコードまたは制御される核酸及び／またはタンパク質のレベルを調節し、核酸またはタンパク質は、以下：
（ａ）がん細胞、組織、及び／もしくは対象における核酸の過剰発現もしくは過少発現、または
（ｂ）がん細胞、組織、及び／もしくは対象における核酸によってコードされるタンパク質の過剰発現もしくは過少発現；を特徴とする、前記方法；
［１４８］コンジュゲートの標的指向性部分が、がん細胞上またはその近くの細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］の方法；
［１４９］コンジュゲートの標的指向性部分が、がん細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］または［１４８］の方法；
［１５０］コンジュゲートの標的指向性部分が、がん細胞付近の細胞（例えば、間質細胞、癌関連線維芽細胞、免疫細胞、血液もしくはリンパ管細胞、内皮細胞、脂肪細胞、または神経内分泌細胞などの腫瘍微小環境内の細胞）上の細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］～［１４９］のいずれか１つの方法；
［１５１］がんが固形腫瘍である、［１４７］～［１５０］のいずれか１つの方法；
［１５２］がんが、白血病、膵臓癌、乳癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、膀胱癌、大腸癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、骨癌、神経膠芽腫を含む脳腫瘍；またはリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫である、［１４７］～［１５１］のいずれか１つの方法；
［１５３］がんが血液癌である、［１５２］の方法。
［１５４］血液癌が白血病またはリンパ腫である、［１５３］の方法。
［１５５］コンジュゲートの標的指向性部分が、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＨＬＤ－ＤＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フェリチン、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ｐ１８５ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮増殖因子、ａｖＢ３、ＷＴ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＨＩＶ ＧＰ１２０、ＨＩＶ ＧＰ１６０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、Ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、Ｐ５３変異体、ＰＲ１、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、フコシルＧＭ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｓＬｅ（動物）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＶ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ ３、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲ、エンドグリン、ＰＤＬ、ＶＴＣＮ１、及びＶＩＳＴＡ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］～［１５４］のいずれか１つの方法；
［１５６］コンジュゲートの標的指向性部分が、ＤＬＬ３、線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰα）、ＮＧ２（神経膠抗原－２）、血小板由来増殖因子受容体－β（ＰＤＧＦＲ－β）、ＰＤ１、ＣＤ１６３、ＫＩＲ、ＨＭＧＢ１、ＶＥＧＦＲ３、ＬＹＶＥ１、ＣＤ３１、ＣＤ３４、Ｐ１ＧＦ、及びＶＥＧＦ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］～［１５４］のいずれか１つの方法；
［１５７］コンジュゲートの標的指向性部分が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＰＳＭＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、エンドグリン、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＶＴＣＮ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＬＰ－３、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１６、ＵＰＫ１Ｂ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＥＭ２３８、Ｃ１ｏｒｆ１８６、及びＬＲＲＣ１５：から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する、［１４７］～［１５４］のいずれか１つの方法；
［１５８］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、及びアンチセンスから選択される、［１４７］～［１５６］のいずれか１つの方法；
［１５９］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３、ｃＭｅｔ、ｐ５６ｌｃｋ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＦＧＦＲ、ＡＮＧ１、ＡＮＧ２、ｂＦＧＦ，ＴＩＥ２、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－アルファ）、ｐ５６ｌｃｋ ＰＫＡ、ＴＧＦ－β、ＩＧＦＩＲ、Ｐ１２、ＭＤＭ２、ＢＲＣＡ、ＩＧＦ１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＩＦ１アルファ、フェリチン、トランスフェリン受容体、ＴＭＰＲＳＳ２、ＩＲＥ、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＭＩＴＦ、クラステリン、ＰＡＲＰ１Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｎ－ｍｙｃ、Ｃ－ｒａｆ、Ｂ－ｒａｆ、Ａ１、Ｈ－ｒａｆ、Ｓｋｐ２、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、ファレンシルトランスフェラーゼ、ｃ－Ｓｒｃ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ｃ－Ｋｉｔ、ＥｐｈＡ２、ＰＤＧＦＢ、ＡＲＦ、ＮＯＸ１、ＮＦ１、ＳＴＡＴ３、Ｅ６／Ｅ７、ＡＰＣ、ＷＮＴ、ベータカテニン、ＧＳＫ３ｂ、ＰＩ３ｋ、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、ＰＤＫ－１、ＣＤＫ、Ｍｅｋ１、ＥＲＫ１、ＡＰ－１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｓｙｋ、オステオポンチン、ＣＤ４４、ＭＥＫ、ＭＡＰＫ、ＮＦ－κβ（ＮＦカッパベータ）、Ｅカドヘリン、サイクリンＤ、サイクリンＥ、Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ＢＸＬ－ＸＬ、ＢＣＬ－Ｗ、ＭＣＬ１、ＥＲ、ＭＤＲ、テロメラーゼ、テロメラーゼ逆転写酵素、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ（例えば、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２）、インテグリン、ＩＡＰ、オーロラキナーゼ、メタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９）、プロテアソーム、またはメタロチオネイン遺伝子、に特異的にハイブリダイズする、［１４７］～［１５７］のいずれか１つに記載の方法；
［１６０］コンジュゲートの治療用オリゴヌクレオチドが、以下から選択される核酸：サバイビン、ＨＳＰＢ１、ＥＩＦ４Ｅ、ＰＴＰＮ１、ＲＲＭ２、ＢＣＬ２、ＰＴＥＮ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＴＬＲ９、ＨａＲａｓ、Ｐｋａ－ｒＩＡ、ＪＮＫ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＸＩＡＰ、ＴＧＦ－β２、ｃ－ｍｙｂ、ＰＬＫ１、Ｋ－ｒａｓ、ＫＳＰ、ＰＫＮ３、リボヌクレオチドレダクターゼ（例えば、リボヌクレオチドレダクターゼＲ１及びリボヌクレオチドレダクターゼＲ２）、ＲｅｃＱヘリカーゼ（例えば、ＷＲＮ、ＲｅｃＱＬ１、ＢＬＭ、ＲｅｃＱＬ４、ＲｅｃＱ５、及びＲＴＳ）、ＭＥＭ２及びＴＬＲ９、に特異的にハイブリダイズする、［１４７］～［１５７］のいずれか１つに記載の方法；
［１６１］コンジュゲートが、少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する切断可能なリンカーを含む、［１４７］～［１５９］のいずれか１つの方法；
［１６２］切断可能なリンカーが、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＣＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＴＴＳＰ）、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含有する、［１６０］の方法；
［１６３］コンジュゲート標的指向性部分が、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、及びｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体である、［１４７］～［１６１］のいずれか１つの方法；
［１６４］コンジュゲートの標的指向性部分が、抗体または抗体の抗原結合断片である、［１４７］～［１６２］のいずれか１つの方法；
［１６５］標的指向性部分が、抗体である、［１６３］の方法；
［１６６］抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である、［１６４］の方法；
［１６７］抗体が治療用抗体である、［１６４］または［１６５］の方法；
［１６８］抗体が、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、（ＨＥＲ３）、オナルツズマブ（ｃ－ＭＥＴ）、パトリツマブ、クリバツズマブ（ＭＵＣ１）、ソフィツズマブ（ＭＵＣ１６）、エドレコロマブ（ＥＰＣＡＭ）、アデカツムマブ（ＥＰＣＡＭ）、アネツマブ（ＭＳＬＮ）、ｈｕＤＳ６（ＣＡ６）、リファスツズマブ（ＮＡＰＩ２Ｂ）、サシツズマブ（ＴＲＯＰ２）、ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３（ＣＥＡ）、ヒト化Ａｂ２－３（ＣＥＡ）、ＩＭＡＢ３６２／クラウディキシマブ（クローディン１８．２）、ＡＭＧ５９５（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＡＢＴ８０６（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、ＤＳ－８８９５ａバリアント１（ＥｐｈＡ２）、ＤＳ－８８９５ａバリアント２（ＥｐｈＡ２）、抗ＥｐｈＡ２（ＥｐｈＡ２）、ＭＥＤＩ－５４７（ＥｐｈＡ２）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ＲＧ７８４１（ＬＹ６Ｅ）、ファルレツズマブ（ＦＲＡ／葉酸受容体アルファ）、ミルベツキシマブ（ＦＲＡ）、Ｊ５９１バリアント１（ＰＳＭＡ）、Ｊ５９１バリアント２（ＰＳＭＡ）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、ＰＦ－０６６４７０２０（ＰＴＫ７）、抗ＰＴＫ７（ＰＴＫ７）、ラディラツズマブ（ＬＩＶ１）、シルムツズマブ（ＲＯＲ１）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ５２）、アレムツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ＣＴ－０１１（ＰＤ１）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）（ＣＴＬＡ４）、ニボルマブ（ＰＤ１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ１）、デュルバルマブ（ＰＤＬ１）抗ＭＡＧＥ－Ａ３、及び抗ＮＹ－ＥＳＯ－１；から選択される、［１６６］の方法；
［１６９］コンジュゲートが、１つまたは複数の他の抗がん薬と同時に、連続して、または別々に投与される、［１４６］～［１６７］のいずれか１つの方法。
［１７０］医薬における使用のための、［１］～［９１］のいずれか１に記載のコンジュゲート；
［１７１］対象における疾患または障害の治療における使用のための、［１］～［９１］のいずれか１つに定義されたコンジュゲート；
［１７２］感染症、がん、増殖性疾患または障害、神経疾患または障害、及び炎症性疾患または障害、免疫系の疾患または障害、心血管系の疾患または障害、代謝疾患または障害、骨格系の疾患または障害、ならびに皮膚または目の疾患または障害から選択される疾患または障害の治療における使用のための［１］～［９１］のいずれか１つに記載のコンジュゲート；
［１７３］対象における標的核酸またはタンパク質を調節する際に；対象における核酸の過剰発現または過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する際に、対象におけるタンパク質の過剰発現または過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する際に；対象における異常な核酸またはタンパク質発現を特徴とする疾患もしくは障害を治療する際に、使用するための［１］～［９１］のいずれか１つに記載のコンジュゲート。

【0005】

本明細書で説明される組成物及び方法のさらなる他の特徴及び利点は、添付の図面と共に読めば、以下の詳細な説明からさらに明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1】Ｔ（抗体）－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの例示的な合成を示す。一部のクリックケミストリー試薬の構造は、説明のために単純化されている。リンカーは、抗体のアミノ基またはそのスルフヒドリル基のいずれかを介して抗体に共有結合し、後者は（スルフヒドリル基を介する場合）、ジチオスレイトールまたはＴＣＥＰなどの薬剤による還元に続く。アミノ基を標識するために、Ｎ－ヒドロキシ－スクシンイミジルエステルなどの官能基または他の脱離基を使用することができる。抗体のスルフヒドリルの標識には、マレイミドまたは３－アリールプロピオロニトリルなどの官能基を使用することができる。リンカーアームは、典型的には、原子が６～５０個の間の範囲にある。リンカーの遠位端、すなわち抗体から最も離れた末端の官能基は、アジドまたはアルキンのいずれかであり得、後者は好ましくは、三重結合の両側にｓｐ２軌道を有するシクロオクチン環、例えばジベンゾシクロオクチンなどの歪み立体配座の炭素－炭素三重結合である。クリックケミストリーでは、それぞれアルキンまたはアジドを使用して、抗体上のリンカーを、細胞表面上のプロテアーゼの切断部位として機能する立体配座依存性切断部位を含有するペプチドにコンジュゲートさせることができる。ペプチドは、一本鎖アンチセンスまたは二本鎖ｓｉＲＮＡのいずれかであるオリゴヌクレオチドに、抗体連結の遠位側でコンジュゲートされる。立体配座依存性切断部位を含有するペプチドとオリゴヌクレオチドの両方を、それぞれ２つのフルオロフォアにより事前に誘導体化して、ＨＥＳ、具体的にはペプチドＨＥＳとオリゴヌクレオチドＨＥＳを形成させる。一部のクリックケミストリー試薬の構造は、説明のために単純化されている。

【図2】リンカーアームで共有結合標識された抗体の例示的な誘導体化を示す。最初にＩｇＧ２ａをＴＣＥＰで還元し、次に２５原子のリンカーを付加した。次に、ジベンゾシクロオクチン基で終端するリンカーを、アジド含有フルオロフォアとコンジュゲートさせた。１時間の反応時間の後、溶液をゲル濾過カラムに通し、コンジュゲートは、ボイドボリュームの直後に溶出された。２８０ｎｍのピークは抗体によるものであり、６４１のピークはフルオロフォアの共有結合を示す。Ｔ（例えば、抗体）－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの完全な合成は、複数のステップで、例えば（ａ）最初にリンカーを付加し、次に立体配座依存性切断部位を含有するペプチド及びオリゴヌクレオチドを順次付加することによるか、または（ｂ）立体配座依存性切断部位を含有するペプチド及びオリゴヌクレオチドに既にコンジュゲートしたリンカーを抗体に直接付加することにより、行うことができる。各ステップは、フルオロフォアなどのレポーター基を含有する相補的な官能性化学基を使用して確認することができる。

【図3】立体配座依存性切断部位の特異性を示す。ＰＬＧＩＡのアミノ酸配列（配列番号７７）を含有し、各末端付近で同じフルオロフォアで共有結合的に標識された（ＨＥＳ構造を生じさせる）１８アミノ酸ペプチドは、マトリックスメタロプロテアーゼ－９（ＭＭＰ－９）によって認識され、ＬＧとＩＡの間で切断される。２μＭで、ＰＬＧＩＡ（配列番号７７）ペプチドが存在するｐＨ７．５緩衝液中にＭＭＰ－１９を加える。ペプチドの切断により、蛍光強度が増加する。この特異性を、対照ペプチド、すなわち、同じ長さ、同じ標識を含むが、立体配座依存性切断部位を含有していないＨＥＳ担持ペプチドと比較する。後者の蛍光は、ＭＭＰの添加により増加せず、このことは、ＭＭＰ－１９に対するＰＬＧＩＡ（配列番号７７）配列の特異性を示す。

【図4】Ａは、立体配座依存性切断部位を含有するＰＬＧＩＡ（配列番号７７）ペプチドの断片化／切断を示す。立体配座依存性切断部位を含有するＨＥＳ－ＰＬＧＩＡ（配列番号：７７）ペプチドの保持時間をＨＰＬＣで測定し、Ｃ１８カラムでの保持時間は逆相条件下、すなわち水性緩衝液に負荷し、アセトニトリル緩衝液で３８分で溶出して、測定した。Ｂは、立体配座依存性切断部位を含有するＰＬＧＩＡ（配列番号７７）ペプチドの断片化／切断を示す。立体配座依存性切断部位を含有するＨＥＳ－ＰＬＧＩＡ（配列番号：７７）ペプチドの保持時間をＨＰＬＣで測定し、Ｃ１８カラムでの保持時間は逆相条件下、すなわち水性緩衝液に負荷し、アセトニトリル緩衝液で３８分で溶出して、測定した。ＭＭＰ－９への曝露後、主ピークはおよそ３０分及び３１分にあり、３８分にピークがほぼ完全に消失し、図３に示された切断と一致していた。

【図5】立体配座依存性切断部位を含有するペプチドに連結した抗体の形成を示す。Ｂリンパ球上のＣＤ２０を認識するモノクローナル抗体であるリツキシマブは、リンカー及び立体配座依存性切断部位を含有するペプチドにコンジュゲートしていた。２８０ｎｍでのピークは、抗体の存在を示す。ＨＥＳの存在によるペプチド切断部位の立体配座依存性特異性は、５５２ｎｍでのピークと比較して５２０ｎｍでのより強度なピークによって示される。分子内Ｈ－二量体を形成する２つのフルオロフォアが存在しない場合、５５２のピークは５２０のピークよりも高くなる。したがって、ペプチドの立体配座特異性は、リンカーとの共有結合形成後も維持される。

【図6】Ｂ細胞によるリツキシマブ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの認識を示す。ＣＤ２０＋Ｂリンパ球細胞株であるＲａｊｉ細胞を、リンカーアーム及び立体配座依存性切断部位を含有するペプチドで標識されたリツキシマブに４℃で曝露した。洗浄及び生存率色素の添加後、細胞をフローサイトメトリーにより調査した。修飾リツキシマブコンジュゲートに曝露された細胞は、抗体を認識し、細胞の生存率に影響を与えずに抗体に結合した。したがって、クリックケミストリーによる付加の化学による抗体の修飾によって、モノクローナル抗体の認識機能は低下しなかった。

【発明を実施するための形態】

【0007】

本開示は、オリゴヌクレオチドの標的化及び局所インビボ送達のための組成物及び方法を提供する。標的オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートを含有する組成物は、治療、診断、及び他の用途においてコンジュゲートを作製及び使用する方法として提供される。標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体は、受容体に依存しない方法で膜を通過することができ、相補配列を含むオリゴヌクレオチドをインビボで生細胞のサイトゾルに送達することができる。標的化オリゴヌクレオチド－ＨＥＳコンジュゲートは、生きている生物におけるアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、及び他の核酸配列の標的化及び／または局所送達を含む使用を有する。

【0008】

定義：
本明細書で列挙されるある特定の用語の意味は、本開示の以下または他の場所で提供される：

【0009】

「核酸」または「オリゴヌクレオチド」という用語は、共有結合で一緒に連結した少なくとも２つのヌクレオチドを指す。本明細書で提供される核酸オリゴヌクレオチドは、好ましくは一本鎖または二本鎖であり、一般にホスホジエステル結合を含有するが、場合によっては、以下に概説するように、例えばホスホラミド（例えば、Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９（１０）： １９２５ （１９９３））及びその中に引用されている文献；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． ３５：３８００ （１９７０）；Ｓｐｒｉｎｚｌ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ８１： ５７９ （１９７７）；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １４：３５８７ （１９８６）；Ｓａｗａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ８０５ （１９８４）；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １ １０：４４７０ （１９８８）；及びＰａｕｗｅｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍｉｃａ Ｓｃｒｉｐｔａ ２６： １４１９ （１９８６）を参照のこと、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ホスホラチオエート（Ｍａｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １９：１４３７ （１９９１）；及び米国特許第５，６４４，０４８号、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる ）、ホスホロジチオエート（Ｂｒｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１１：２３２１ （１９８９））、Ｏ－メチルホスホロアミジエート連結（例えば、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ， Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓを参照のこと）、ならびにペプチド核酸主鎖及び連結（例えば、Ｅｇｈｏｌｍ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １ １４： １８９５ （１９９２）；Ｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ３１： １００８ （１９９２）；Ｎｉｅｌｓｅｎ， Ｎａｔｕｒｅ ３６５：５６６ （１９９３）；Ｃａｒｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３８０：２０７ （１９９６）、を参照のこと、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、を含む、代替主鎖を有する核酸／オリゴヌクレオチド類似体が含まれる。他の類似体核酸／オリゴヌクレオチドには、正の主鎖を有するもの（例えば、Ｄｅｍｐｃｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ， Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：６０９７ （１９９５）、を参照のこと、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；非－イオン性主鎖（例えば、米国特許第５，３８６，０２３号、同第５，６３７，６８４号、同第５，６０２，２４０号、同第５，２１６，１４１号及び第４，４６９，８６３号；Ａｎｇｅｗ， Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ， Ｅｄ． Ｅｎｇｌｉｓｈ ３０：４２３ （１９９１）；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１０：４４７０ （１９８８）；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ １３： １５９７ （１９９４）；Ｃｈａｐｔｅｒｓ ２ ａｎｄ ３， ＡＳＣ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０， ”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ”， Ｅｄ． Ｙ． Ｓ． Ｓａｎｇｈｕｉ ａｎｄ Ｐ． Ｄａｎ Ｃｏｏｋ；Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． ４：３９５ （１９９４）；Ｊｅｆｆｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＮＭＲ ３４：１７ （１９９４）；Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３７：７４３ （１９９６）、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ならびに米国特許第５，２３５，０３３号及び同第５，０３４，５０６号、及びＣｈａｐｔｅｒｓ ６ ａｎｄ ７， ＡＳＣ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｅｄ． Ｙ．Ｓ． Ｓａｎｇｈｕｉ ａｎｄ Ｐ． Ｄａｎ Ｃｏｏｋに記載されている非リボース主鎖を有するもの、が含まれる。１つまたは複数の炭素環式糖を含有する核酸／オリゴヌクレオチドも、核酸／オリゴヌクレオチドの定義内に含まれる （例えば、Ｊｅｎｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｒｅｖ． ｐｐ １６９－ １７６ （１９９５）を参照のこと、これらのそれぞれの全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの核酸／オリゴヌクレオチド類似体は、Ｒａｗｌｓ， Ｃ ＆ Ｅ Ｎｅｗｓ Ｊｕｎ． ２ １９９７， ｐａｇｅ ３５に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。リボース－ホスフェート主鎖のこれらの修飾は、例えば、標識などの付加部分の付加を容易にするため、または生理学的環境におけるそのような分子の安定性及び半減期を増加させるために行うことができる。本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドの核酸／オリゴヌクレオチド主鎖は、約５ヌクレオチド～約７５０ヌクレオチドの範囲である。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにおける好ましい核酸／オリゴヌクレオチドは、長さが約５ヌクレオチド～約５００ヌクレオチド、好ましくは約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチドの範囲である。本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、数値とともに使用される場合、参照数値の０．２５％、０．５％、１％、５％または１０％以内の任意の数値を指す。

【0010】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、核酸標的の少なくともある領域に特異的にハイブリダイズできるヌクレオシド及び／またはヌクレオチドモノマーのポリマー構造である。上記のように、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチドには、天然に存在する塩基、糖及び糖間（主鎖）連結を含む化合物、天然に存在する対応物と同様に機能する、天然に存在しない修飾モノマー、またはその一部（例えば、オリゴヌクレオチド類似体もしくは模倣体）、及びこれらの天然に存在するモノマーと天然に存在しないモノマーの組み合わせが含まれるが、これらに限定されるものではない。本明細書で使用される場合、「修飾された」または「修飾」という用語は、オリゴヌクレオチドなどの出発または天然オリゴマー化合物からの任意の置換及び／または任意の変更を含む。オリゴヌクレオチドへの修飾は、本明細書に記載のもの及び別様に当技術分野で知られているもののような、ヌクレオシド間連結、糖部分、または塩基部分への置換または変更を包含する。

【0011】

本明細書で使用される「アンチセンス」という用語は、５’から３’方向に記述され、標的核酸の対応する領域の逆相補体を含み、及び／または、生理的条件下での標的核酸に特異的にハイブリダイズできるオリゴヌクレオチド配列を指す。したがって、いくつかの実施形態では、アンチセンスという用語は、低分子非コードＲＮＡ、非翻訳ｍＲＮＡ及び／またはゲノムＤＮＡ配列の対応する領域の逆相補体を含むオリゴヌクレオチドを指す。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、核酸標的にハイブリダイズすると、標的遺伝子の発現、標的遺伝子のレベル、または標的核酸によってコードされるタンパク質のレベルの低下を誘起または誘発することができる。

【0012】

本明細書で使用される「相補的」とは、オリゴヌクレオチドのモノマー成分と標的核酸（例えば、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡ（ｒａｉＲＮＡ）などの非コードＲＮＡ）中のヌクレオチドとの間の対形成能力を指す。例えば、オリゴヌクレオチドのある位置のヌクレオチドが、ＤＮＡ／ＲＮＡ分子の同じ位置のヌクレオチドと水素結合できる場合、オリゴヌクレオチドとＤＮＡ／ＲＮＡはその位置で相補的であると考えられる。

【0013】

本出願との関係において、「ハイブリダイゼーション」は、オリゴヌクレオチドと相補的核酸配列との対形成を意味する。そのような対形成は、典型的には、オリゴヌクレオチドの相補的なヌクレオシドまたはヌクレオチド塩基（核酸塩基）と標的核酸配列との間の、ワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合であり得る、水素結合を含む（例えば、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の対応する領域の逆相補的ヌクレオチド配列を含む）。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは標的核酸に特異的にハイブリダイズする。「特異的にハイブリダイズする」及び「特異的にハイブリダイズ可能な」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、オリゴヌクレオチドと標的核酸（すなわち、ＤＮＡまたはＲＮＡ）との間で安定かつ特異的な結合が起こるような、十分な程度の相補性を示す。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズ可能であるために、その標的核酸配列に対して１００％相補的である必要はないことが理解される。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸配列へのオリゴヌクレオチドの結合が、標的核酸の正常な機能を妨げ、それによる有用性または発現の喪失または変化をもたらす場合に、特異的にハイブリダイズ可能であると考えられる。好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間には、特異的結合が望まれる条件下での望ましくない非標的配列へのオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避または最小化するのに十分な程度の相補性が存在する（例えば、インビボアッセイまたは治療的処置の場合、生理学的条件下で、及びインビトロアッセイの場合、アッセイが実施される条件下で）。非特異的ハイブリダイゼーション事象が最小限である標的核酸への特異的ハイブリダイゼーションに条件が最適である場合を定型的に決定することは、十分にオリゴヌクレオチド分野の科学者の技術レベルの範囲内にある。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、それが特異的にハイブリダイズする標的ＤＮＡまたはＲＮＡ配列の領域の対応する相補配列と比較して、１、２、または３塩基置換を含む。いくつかの実施形態では、非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端にある。追加の実施形態では、非相補的核酸塩基は、オリゴヌクレオチドの内部位置に位置する。２つ以上の非相補的核酸塩基がオリゴヌクレオチドに存在する場合、それらは連続（すなわち、連結している）、非連続、またはその両方であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される複合体中のオリゴヌクレオチドは、標的核酸内の標的領域に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸内のポリヌクレオチド配列に対して１００％の配列同一性を有する。パーセント同一性は、オリゴヌクレオチドが比較される対応する核酸配列と同一である塩基の数に従って計算される。この同一性は、オリゴマー化合物（すなわち、オリゴヌクレオチド）の全長にわたるか、またはオリゴヌクレオチドの一部にわたり得る（例えば、２７量体の核酸塩基１～２０を２０量体と比較して、オリゴヌクレオチドに対するオリゴヌクレオチドのパーセント同一性を決定することができる）。オリゴヌクレオチドと標的核酸との間のパーセント同一性は、当技術分野で知られているアラインメントプログラム及びＢＬＡＳＴプログラム（基本局所アラインメント検索ツール）（ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌｓ）を使用して定型的に決定することができる（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２１５：４０３－４１０ （１９９０）；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．， ７：６４９－６５６ （１９９７）を参照のこと）。

【0014】

本明細書で使用される「標的核酸」及び「標的をコードする核酸」という用語は、限定されないが、所与の分子標的（すなわち、タンパク質またはポリペプチド）をコードするＤＮＡ、そのようなＤＮＡから転写されたＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ及びｍＲＮＡを含む）、及びまたそのようなＲＮＡに由来するｃＤＮＡを含む、標的とすることができる任意の核酸を包含するために使用される。妨害され得る例示的なＤＮＡの機能には、複製、転写及び翻訳が含まれる。標的核酸の機能に対するこのような妨害の全体的効果は、標的分子の発現の調節である。本明細書で使用される場合、「調節」は、例えば遺伝子の発現における、増加（刺激）または減少（阻害）のいずれかの量的変化を意味する。ＲＮＡレベルの低下による遺伝子発現の阻害は、調節の好ましい形態である。

【0015】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「生理学的に許容される」という用語、及びそれらの文法的変形は、それらが組成物、担体、希釈剤及び試薬を指す場合、交換可能に使用され、悪心、めまい、胃の不調などの治療上禁忌である望ましくない生理学的効果を生じさせることなく、材料が、対象（例えば、哺乳動物、例としてマウス、ラット、ウサギ、またはヒトなどの霊長類）に対しまたは対象上に投与可能であることを表す。

【0016】

本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物」は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び薬学的に許容される希釈剤を含む組成物を指す。例として、好適な薬学的に許容される希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水である。

【0017】

「安定化修飾」または「安定化モチーフ」は、ヌクレアーゼの存在下で、ホスホジエステルヌクレオシド間連結によって連結された２－デオキシヌクレオシドによって提供される安定性と比較して、強化された安定性を提供することを意味する。したがって、そのような修飾は、オリゴヌクレオチドに「強化されたヌクレアーゼ安定性」を提供する。安定化修飾には、少なくとも安定化ヌクレオシド及び安定化ヌクレオシド間連結基が含まれる。

【0018】

「対象」という用語は、特定の治療のレシピエントとなる、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。典型的には、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書ではヒト対象に関して交換可能に使用される。

【0019】

本明細書で使用される「投与する」及び「投与」という用語は、対象にインビボまたはエクスビボでオリゴヌクレオチドなどの化学物質を加えることを指す。したがって、投与することは、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチドを対象に直接加えること、及び細胞をＨＥＳ－オリゴヌクレオチド組成物と接触させ、次に接触させた細胞を対象に導入することの両方を包含する。一実施形態では、対象から除去された細胞をＨＥＳ－オリゴヌクレオチドと接触させ、その後、接触させた細胞を対象に再導入する。「接触」という用語は、オリゴヌクレオチドなどの化学物質を、哺乳動物、植物、細菌、またはウイルスなどのインビボ生物に加えることを指す。哺乳動物の場合、一般的な接触経路には、経口（口から）、局所（皮膚）、経粘膜（鼻、頬／舌下、膣、眼及び直腸）、吸入（肺）、筋肉内（筋肉）及び静脈内（静脈）が含まれる。細菌及びウイルスの場合、接触は宿主生物の細胞または組織内への送達であり得る。

【0020】

「治療すること」または「治療」には、疾患、状態、もしくは障害の症状、合併症、もしくは生化学的徴候の発症を予防するかもしくは遅らせるためのＨＥＳ－オリゴヌクレオチドの投与、症状を緩和すること、または疾患、状態、もしくは障害のさらなる進行を停止させることもしくは阻害することが含まれる。治療は、予防的であるか（疾患の発症を予防するかもしくは遅らせるため、またはその臨床的もしくは潜在的症状の発現を予防するため）または疾患、状態、もしくは障害の発現後の症状の治療的抑制または緩和であり得る。治療は、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体含有組成物単独で、または１、２、３もしくはそれ以上の追加の治療剤と組み合わせて行うことができる。

【0021】

「治療有効量」という用語は、対象において所望の治療結果を達成するため、及び／または疾患もしくは障害を「治療する」ために有効な、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体（「治療剤」）の、または他の薬物の量を指す。「治療有効量」という用語はまた、疾患の進行の遅延、生存時間の増加、及び／または疾患に罹患している対象における疾患または疾患の進行の１つもしくは複数の指標の改善をもたらすのに必要な量を指す場合がある。例えば、がんの場合、治療有効量のＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体は、血管新生及び新生血管形成を減少させ；がん細胞の数を減少させ、治療有効量のＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体は、腫瘍サイズを減少させ、がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、遅延または停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、遅延または停止させ）、腫瘍増殖もしくは腫瘍発生を阻害しもしくは遅延させ、がん細胞に対する免疫応答を刺激し、及び／またはがんに関連する１つまたは複数の症状を緩和し得る。感染症の場合、治療有効量のＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体は、感染因子の数（例えば、ウイルス量）の減少及び／または感染因子によって引き起こされる感染に関連する１つまたは複数の症状または状態の改善に関連し得る。「治療有効量」はまた、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量及び期間で有効な量を指す場合もある。ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体の治療有効量は、対象の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびにＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体が対象において所望の応答を誘発する能力などの要因によって異なり得る。治療有効量は、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体の任意の毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が上回っている量でもある。

【0022】

「治療指数」とは、望ましくない効果を生じるＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体の用量の、所望の効果をもたらす用量に対する比を意味する。本開示との関係において、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体は、活性が保持されるが、望ましくない効果は減少するかまたは存在しない場合、「改善された治療指数」を示す。例えば、改善された治療指数を有するＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体は、免疫刺激活性などの望ましくない効果をもたらすことなく、または少なくとも複合体の投与を妨げる程度の望ましくない効果をもたらすことなく、ｍｉＲＮＡ活性を阻害する能力を保持する．

【0023】

本明細書で使用される場合、「治療用オリゴヌクレオチド」は、十分な用量で投与された場合に、所望の治療結果を達成することができる、及び／または対象もしくはエクスビボにおいて疾患もしくは障害を「治療する」ことができるオリゴヌクレオチドを指す。そのような所望の結果には、例えば、疾患進行の遅延、生存時間の増加、及び／または疾患に罹患している対象における疾患、疾患進行、もしくは疾患関連状態の１つまたは複数の指標の改善が含まれる。例示的な治療用オリゴヌクレオチドには、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質（例えば、ｄｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、アンチセンス、デコイ、アプタマー、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはタンパク質コード配列を発現することができるプラスミドが含まれる。所望の治療結果を達成することができないプローブ及びプライマーなどのオリゴヌクレオチドは、本開示の目的では治療用オリゴヌクレオチドとは考えられない。平均して、ｍＲＮＡの１％未満がアンチセンスオリゴヌクレオチドの好適な標的である。提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体への組み込みに好適な多数のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、本明細書に記載されているか、または別様に当技術分野で知られている。同様に、好適な治療用オリゴヌクレオチドは、当技術分野で知られているガイドライン、アルゴリズム、及びプログラムを使用して定型的に設計することができる（例えば、Ａａｒｔｓｍａ－Ｒｕｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １７（３）：５４８－５５３ （２００９）及びＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２２（３）：３２６－３３０ （２００４）、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ３１ ｅ７２ （２００３）を参照）のこと、これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。同様に、好適な治療用オリゴヌクレオチドは、市販のプログラム （例えば、ＭｙｓｉＲＮＡ－Ｄｅｓｉｇｎｅｒ， ＡｓｉＤｅｓｉｇｎｅｒ （Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ， ＫＲＩＢＢ）、ｓｉＲＮＡ Ｔａｒｇｅｔ Ｆｉｎｄｅｒ （Ａｍｂｉｏｎ）、Ｂｌｏｃｋ－ｉＴ ＲＮＡｉ Ｄｅｓｉｇｎｅｒ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｇｅｎｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉＲＮＡ ｓｅｌｅｃｔｏｒ （Ｔｈｅ Ｗｉｓｔａｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ｓｉＲＮＡ Ｔａｒｇｅｔ Ｆｉｎｄｅｒ （ＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ）、ｓｉＤＥＳＩＧＮ Ｃｅｎｔｅｒ （Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）， ＳｉＲＮＡ ａｔ Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ、ｓｉＲＮＡ Ｄｅｓｉｇｎ （ＩＤＴ）、Ｄ： Ｔ７ ＲＮＡｉ Ｏｌｉｇｏ Ｄｅｓｉｇｎｅｒ （Ｄｕｄｅｋ Ｐ ａｎｄ Ｐｉｃａｒｄ Ｄ．）、ｓｆｏｌｄ－ｓｏｆｔｗａｒｅ、及びＲＮＡｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４．５）；ヒトスプライシングファインダーソフトウエア（例えば「．ｕｍｄ．ｂｅ／ＨＳＦ／」における）及びＴａｒｇｅｔｆｍｄｅｒ（「ｂｉｏｉｔ．ｏｒｇ．ｃｎ／ａｏ／ｔａｒｇｅｔｆｉｎｄｅｒ」で入手可能）など、インターネット経由で入手可能なプログラム；及び商用プロバイダー（例えば、Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ， ＬＬＣ）、を使用して、定型的に設計することができる。場合によっては、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ、ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド、またはオリゴ－ＨＥＳ、及び治療用オリゴヌクレオチドは、文脈上明らかに別段の指示がない限り、本明細書では交換可能に使用することができる。

【0024】

本明細書で使用される場合、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートとの関係における「治療用抗体」は、治療標的分子に結合し、インビボで疾患の軽減または疾患の進行の低減をもたらすと予想される抗体である標的指向性部分を指す。

【0025】

治療用抗体または他の標的指向性部分との関係における「特異的に結合する」または「特異的親和性」という用語は、抗体または抗原結合抗体断片などの標的指向性部分が、標的エピトープとは無関係のタンパク質を含む代替物質よりも、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より大きな親和性により、または上記のいくつかの組み合わせにより、エピトープ、タンパク質、または標的分子に反応または会合することを意味する。異なる種における相同タンパク質間の配列同一性のために、特異的親和性は、いくつかの実施形態では、複数の種におけるタンパク質または標的を認識する結合剤を含み得る。同様に、異なるタンパク質のポリペプチド配列のある特定の領域内の相同性のために、「特異的親和性」または「特異的に結合する」という用語は、複数のタンパク質または標的を認識する結合剤を含み得る。ある特定の実施形態では、第１の標的に特異的に結合する標的指向性部分は、第２の標的に特異的に結合してもしなくてもよいことが理解される。このように、「特異的親和性」は、排他的結合、例えば、単一の標的への結合を必ずしも必要としない（これを含めることはできるが）。したがって、標的指向性部分は、ある特定の実施形態では、複数の標的に特異的に結合することができる。ある特定の実施形態では、複数の標的が同じ標的指向性部分によって結合され得る。いくつかの実施形態では、標的指向性部分（例えば、治療用抗体）は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析を用いて決定された０．５×１０^－１０～１０×１０^－６の範囲の平衡解離定数（Ｋｄ）により、標的（例えば、細胞表面抗原）に結合する。

【0026】

本明細書で使用される「感染因子」という用語は、感染症を引き起こす因子を指す。感染因子は、ウイルス、細菌、真菌、及び寄生虫の４つの主な群に属する。前記感染因子は、細胞外または細胞内（例えば、感染細胞）であり得る。

【0027】

本明細書で使用される「感染症」という用語は、細菌、ウイルス、寄生虫、または真菌などの感染因子によって引き起こされる疾患を指す。感染症は、直接的または間接的に（ベクター及び／またはリザーバーを介して）、ある生物（例えば、ヒト）から別の生物に広がる可能性がある。

【0028】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート：
提供されるＴ－オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ（Ｔ－オリゴ－ＨＥＳ）コンジュゲートは、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体（オリゴ－ＨＥＳ）にコンジュゲートされた標的指向性部分（Ｔ）を含み、標的指向性部分は、場合によりリンカーを介してオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている。特定の実施形態では、標的指向性部分は、リンカーを介してオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている。さらなる特定の実施形態では、標的指向性部分は、切断可能なリンカーを介してオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートしている。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドは治療用オリゴヌクレオチドである。さらなる特定の実施形態では、コンジュゲートは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができる発現カセット（例えば、プラスミド）から選択される治療用オリゴヌクレオチドを含有する。

【0029】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、リンカーを介してオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートした標的指向性部分を含み、コンジュゲートは治療用オリゴヌクレオチドを含む。さらなる特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、リンカーを介してオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートした標的指向性部分を含み、コンジュゲートは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができる発現カセット（例えば、プラスミド）から選択される治療用オリゴヌクレオチドを含む。

【0030】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（Ｉ）
Ｔ－（Ｌ_ｎ－（オリゴ－ＨＥＳ）_ｘ）_ｐ （Ｉ）
の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを提供する
（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり；
オリゴ－ＨＥＳは、治療用オリゴヌクレオチド及びＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
ｎは、０または１であり；
ｘは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５であり；
ｐは、１～３０、１～２０、１～１０、または１～５である）。

【0031】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、核酸によってコードされるかまたは制御されるタンパク質のレベルを調節する治療用オリゴヌクレオチドを含む。

【0032】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、核酸配列の対応する逆相補鎖と比較して、１、２、または３個の置換、欠失、または挿入を含有する治療用オリゴヌクレオチドを含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）
Ｔ－［Ｌ_ｎ－｛（（オリゴ２－ＬＬ）_ｍ－オリゴ１－ＨＥＳ）_ｓ｝_ｔ］_ｕ （ＩＩ）
の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを提供する
（式中、
Ｔは、目的の標的に選択的に結合する標的指向性部分であり；
Ｌは、リンカーであり；
ＬＬはリンカーであり、場合により、ＬＬはＣ６、Ｃ１０、またはＣ１８アルキルなどのアルキルであり；
オリゴ１－ＨＥＳは、オリゴヌクレオチド１（オリゴ１）とＨ型励起子構造（ＨＥＳ）を含有するオリゴヌクレオチド複合体であり；
オリゴ２は、オリゴ１と同じでも異なっていてもよいオリゴヌクレオチドであり；
ｎは、０または１であり；
ｍは、０または１であり；
ｓは、１または２であり；
ｔは、１または２であり；
ｕは１、２、３、４、または５である）。

【0034】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、インビボで核酸配列に特異的にハイブリダイズし、核酸によってコードされるかまたは制御されるタンパク質のレベルを調節する治療用オリゴヌクレオチドを含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の構造を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、核酸配列の対応する逆相補鎖と比較して、１、２、または３個の置換、欠失、または挿入を含有する治療用オリゴヌクレオチドを含む。

【0036】

本明細書に開示される態様または実施形態が、マーカッシュ群または代替案の他の群分けに関して説明される場合、開示は、全体として列挙された群全体だけでなく、群の各メンバーを個別に、及び主群の可能なすべての下位群、及び群メンバーの１または複数が不在の主群も包含する。本開示は、群メンバーのいずれかの１または複数を明示的に除外することも想定している。

【0037】

本明細書の「Ａ及び／またはＢ」などの句で使用される「及び／または」という用語は、ＡとＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような句で使用される場合、以下の実施形態のそれぞれを包含するように意図されている：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

【0038】

Ｈ型励起子構造（ＨＥＳ）
「発色団」は、光の吸収を担う基、部分構造、または分子である。典型的な発色団は、それぞれ特徴的な吸収スペクトルを有する。

【0039】

「フルオロフォア」は、特徴的な波長で光を吸収し、次に最も典型的に特徴的な異なる波長で光を再放出する発色団である。フルオロフォアは、当業者には周知であり、キサンテン及びキサンテン誘導体（キサンテンにはフルオレセイン及びその誘導体が含まれる）、シアニン及びシアニン誘導体（例えば、インドカルボシアニン、インドジカルボシアニン）、クマリン及びクマリン誘導体、ならびにランタニドイオン系列のキレート剤、を含むが、これらに限定されない。フルオロフォアは、光を吸収するが特徴的に再放出しない発色団とは区別される。

【0040】

「Ｈ型励起子構造」（ＨＥＳ）は、遷移双極子が平行配座で配置され、励起一重項状態の分裂をもたらす２つ以上のフルオロフォアを指し；基底状態と上位励起状態との間の遷移は許可され、基底状態と下位励起状態との間の遷移は禁止されていると考えられる。ある特定のフルオロフォアに関連するＨＥＳ形成は当技術分野で知られており、本開示は、本明細書に記載の方法による、これらのフルオロフォアのオリゴヌクレオチド（例えば、診断用及び治療用オリゴヌクレオチド）への付着、及び得られたオリゴ－ＨＥＳ複合体のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにおける使用を包含する。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれ、本明細書で提供される方法で使用できるＨＥＳ形成フルオロフォアの例には、キサンテン及びキサンテン誘導体、シアニン及びシアニン誘導体、クマリンならびにランタニドイオン系列を含むキレート剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＨＥＳ中の少なくとも１つのフルオロフォアは、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有する。いくつかの実施形態では、ＨＥＳ中の少なくとも２つのフルオロフォアは、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有する。

【0041】

「オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ」複合体、「オリゴ－ＨＥＳ」複合体、及び「ＨＥＳ－オリゴヌクレオチド」複合体という用語は、本明細書では交換可能に使用され、ＨＥＳを形成する２つ以上のフルオロフォアを含む１つまたは複数のオリゴヌクレオチド鎖（例えば、同じ、相補的、または異なるオリゴヌクレオチド配列を含む直鎖状または環状オリゴヌクレオチドの一本鎖、二本鎖、三本鎖、またはさらに複数の鎖）の複合体を指す。集合ＨＥＳオリゴヌクレオチドが１つまたは複数のＨＥＳを含有する限り、ＨＥＳオリゴヌクレオチドのフルオロフォアは、５’及び／または３’末端主鎖ホスフェートで、及び／またはオリゴヌクレオチド内または異なるオリゴヌクレオチド内の別の塩基で付着され得る。フルオロフォアは、場合により、柔軟な脂肪族鎖などのリンカーを介してオリゴヌクレオチドに付着される。オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体及びそれらの使用は、国際出願公開番号ＷＯ２０１４２０１３０６Ａ１にさらに記載されており、その内容は、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0042】

オリゴ－ＨＥＳは、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上のＨＥＳを含み得る。さらに、ＨＥＳオリゴヌクレオチド中のＨＥＳは、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の同一のまたは異なるフルオロフォアを含み得る。例えば、Ｔｏｐｔｙｇｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｐｈｙｓ． Ｌｅｔｔ． ２７７：４３０－４３５ （１９９７）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ＨＥＳは、ＨＥＳオリゴヌクレオチド間のフルオロフォア凝集体の結果として形成される。いくつかの実施形態では、ＨＥＳは、ＨＥＳを形成することができるフルオロフォアで単独に標識されたオリゴヌクレオチド間のフルオロフォア凝集体の結果として形成される。

【0043】

提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴ－ＨＥＳ複合体中のフルオロフォアは、複合体中のホモ型またはヘテロ型の同族フルオロフォア（複数可）とＨＥＳを形成できる、複合体中の任意のフルオロフォアであり得る。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、Ｈ型励起子構造を形成できる２つのフルオロフォアを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う少なくとも１つのフルオロフォアを含む。追加の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、Ｈ型励起子構造を形成できる２つ、３つ、４つまたはそれ以上のフルオロフォアを含む。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴ－ＨＥＳ複合体は、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う２、３、４またはそれ以上のフルオロフォアを含む。さらなる実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、Ｈ型励起子構造を形成することができる約２～２０、約２～１０、約２～６、または約２～４のフルオロフォアを含有する。追加の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、１つまたは複数のＨ型励起子構造を形成することができる２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のフルオロフォアを含む。さらなる実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、３００～８５０ｎｍの励起及び／または発光を伴う２つ、３つ、４つ、５つまたはそれ以上のフルオロフォアを含む。２つ以上のフルオロフォアは、それらの凝集蛍光が、例えば、溶液中およそ１μＭ以下で、それらが分離されている場合のフルオロフォアの凝集蛍光よりも検出可能に小さい場合、ＨＥＳにおいて互いに消光すると言われる。個々のフルオロフォアのスペクトルと比較すると、ＨＥＳ吸光度スペクトルの最大値は、最大吸光度波長がより短い波長にシフトすること、つまりブルーシフトを示す。Ｈ型励起子構造または凝集体（ここでは「ＨＥＳ」）の蛍光強度は、その成分の強度よりも低い強度を示す。はＨ型励起子構造もしくは凝集体の吸光度スペクトルのブルーシフトまた蛍光強度挙動の減少のいずれかを、シグナルレポーター部分の指標として利用することができる。好ましい実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中の２つ以上のフルオロフォアは、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％、またはさらには少なくとも９９％増加または消光する。Ｈ型励起子構造を形成することができるフルオロフォアの例には、キサンテン、インドカルボシアニン、インドジカルボシアニン、及びクマリンが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴ－ＨＥＳ複合体のＨＥＳは、キサンテン、インドカルボシアニン、インドジカルボシアニン、またはクマリンである少なくとも１つのフルオロフォアを含有する。

【0044】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体は、カルボキシローダミン１１０、カルボキシテトラメチルローダミン、カルボキシローダミン－Ｘ、ジエチルアミノクマリン及びＮ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ”－スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル］インドカルボシアニンクロリド、Ｎ－エチル－Ｎ’－［５－（Ｎ’’－スクシンイミジルオキシカルボニル）ペンチル］－３，３，３’，３’－テトラメチル－２’，２’－インドジカルボシアニンクロリド色素、及びＣｙ７ ＮＨＳエステル、から選択されるフルオロフォアを含有する。

【0045】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴ－ＨＥＳ複合体は、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、スクシンイミジルエステルまたは塩酸塩；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、トリフルオロアセトアミドまたはスクシンイミジルエステル；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ（商標）－Ｘスクシンイミジルエステルまたは塩酸塩；Ｒｈｏｄｏｌ Ｇｒｅｅｎ（商標）カルボン酸、Ｎ，Ｏ－ビス－（トリフルオロアセチル）またはスクシンイミジルエステル；ビス－（４－カルボキシピペリジニル）スルホンローダミンまたはジ（スクシンイミジル、エステル）；５－（及び－６）－カルボキシナフトフルオレセイン、５－（及び－６）－カルボキシナフトフルオレセインスクシンイミジルエステル；５－カルボキシローダミン６Ｇ塩酸塩；６－カルボキシローダミン６Ｇ塩酸塩、５－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；６－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシローダミン６Ｇスクシンイミジルエステル；５－カルボキシ－２’，４’，５’，７’－テトラブロモスルホンフルオレセインスクシンイミジルエステルまたはビス－（ジイソプロピルエチルアンモニウム）塩；５－カルボキシテトラメチルローダミン；６－カルボキシテトラメチルローダミン；５－（及び－６）－カルボキシテトラメチルローダミン；５－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシテトラメチルローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン；５－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；６－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシ－Ｘ－ローダミンスクシンイミジルエステル；５－カルボキシ－Ｘ－ローダミントリエチルアンモニウム塩；Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ（商標）ローダミンＢスルホニルクロリド；マラカイトグリーンイソチオシアネート；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｒｅｄ（商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；６－（テトラメチルローダミン－５－（及び－６）－カルボキサミド）ヘキサン酸スクシンイミジルエステル；テトラメチルローダミン－５－イソチオシアネート；テトラメチルローダミン－６－イソチオシアネート；テトラメチルローダミン－５－（及び－６）－イソチオシアネート；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）スルホニル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）塩化スルホニル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘ ＳＴＰ エステルまたはナトリウム塩；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（登録商標）－Ｘスクシンイミジルエステル；Ｘ－ローダミン－５－（及び－６）－イソチオシアネート；及びカルボシアニン、から選択されるフルオロフォアを含有する。

【0046】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴ－ＨＥＳ複合体は、異なるフルオロフォアから構成されるヘテロ－ＨＥＳを含有する。特定の実施形態では、ヘテロＨＥＳは、ローダミンもしくはローダミン誘導体及びフルオレセインもしくはフルオレセイン誘導体または２つのカルボシアニンを含有する。さらなる実施形態では、ヘテロＨＥＳは、６－カルボキシ－４’，５’－ジクロロ－２’，７’－ジメトキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；５－（及び－６）－カルボキシエオシン；５－カルボキシフルオレセイン；６－カルボキシフルオレセイン；５－（及び－６）－カルボキシフルオレセイン；５－カルボキシフルオレセイン－ビス－（５－カルボキシメトキシ－２－ニトロベンジル）エーテル、－アラニン－カルボキサミド、またはスクシンイミジルエステル；５－カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；６－カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル、５－（及び－６）－カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル；５－（４，６－ジクロロトリアジニル）アミノフルオレセイン；２’，７’－ジフルオロフルオレセイン；エオシン－５－イソチオシアネート；エリスロシン－５－イソチオシアネート；６－（フルオレセイン－５－カルボキサミド）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；６－（フルオレセイン－５（及び－６）－カルボキサミド）ヘキサン酸またはスクシンイミジルエステル；フルオレセイン－５－ＥＸスクシンイミジルエステル；フルオレセイン－５－イソチオシアネート；及びフルオレセイン－６－イソチオシアネート、から選択されるフルオレセインまたはフルオレセイン誘導体を含む。

【0047】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれる少なくとも１つのオリゴ－ＨＥＳ複合体は、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有するフルオロフォアを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれる少なくとも２つのオリゴ－ＨＥＳ複合体は、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有するフルオロフォアを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれる全てのオリゴ－ＨＥＳ複合体が、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有するフルオロフォアを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のフルオロフォアのすべてが、３５０～８００ｎｍに最大励起及び／または発光を有する。

【0048】

Ｈ型励起子構造ＨＥＳ及びＨＥＳを形成することができるフルオロフォアについては、国際出願公開番号ＷＯ２０１４２０１３０６Ａ１にさらに記載されており、その内容はすべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0049】

オリゴヌクレオチド
本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」または「オリゴ」という用語は、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはそれらの模倣体のオリゴマーまたはポリマーを指す。この用語には、天然に存在する核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間（主鎖）共有結合から構成されるオリゴヌクレオチド（すなわち、「未修飾オリゴヌクレオチド」）、ならびに天然に存在しない核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間連結及び／または同様の方法で機能するＤＮＡ及び／またはＲＮＡ類似体（すなわち、核酸「模倣体」または「模倣物」）を有するオリゴマー化合物が含まれる。そのような模倣体オリゴヌクレオチドは、核酸標的に対する親和性の向上及びヌクレアーゼの存在下での安定性の向上などの望ましい特性のために、天然型よりも多くの場合好ましい。例えば、本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド主鎖の１または複数のリボース環がモルホリン環により置き換えられているモルホリノ（ＭＮＯ）、及びヌクレオチド主鎖の１または複数のリボース環がモルホリン環により置き換えられておりかつ負に荷電したサブユニット間連結が非荷電ホスホロジアミデート連結により置き換えられているホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）を含む。同様に、オリゴヌクレオチドという用語は、オリゴヌクレオチドの１つまたは複数の糖ホスフェート主鎖がアミド含有主鎖で置き換えられているＰＮＡを包含する。本明細書の目的のために、また当技術分野で時々言及されるように、ヌクレオシド間主鎖にリン原子を有していない修飾オリゴヌクレオチドもオリゴヌクレオシドと考えることができる。さらに、オリゴヌクレオチドは、オリゴマーと呼ばれることもある。

【0050】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用したオリゴヌクレオチドの送達は、配列に依存せず、したがって、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートビヒクルに含まれるオリゴヌクレオチドは、細胞への導入が望ましいことが知られている任意の形態の核酸または模倣体であり得る。

【0051】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖、環状またはヘアピンオリゴヌクレオチドの形態であり得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、一本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡ、または核酸模倣体（例えば、ＰＭＯ、ＭＮＯ、ＰＮＡ、または２’ＯＭＥ及びＬＮＡなどの１つ以上の修飾ヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチド）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡ、核酸模倣体、ＤＮＡ／核酸模倣体、ＤＮＡ－ＲＮＡ及びＲＮＡ－核酸模倣体である。

【0052】

本発明者らは、驚くべきことに、ｓｓＤＮＡ及びｄｓＲＮＡなどのオリゴ－ＨＥＳを含有する複合体が、従来のオリゴヌクレオチド送達ビヒクルによって必要とされるものよりも桁違いに少ないオリゴヌクレオチドの投与を必要とする優れた配列非依存性細胞内送達を示すことを発見した。本明細書で提供される複合体及びＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれる一本鎖核酸の例には、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、三重鎖形成オリゴヌクレオチド及びアプタマーが含まれるが、これらに限定されない。

【0053】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）である。好ましい実施形態では、ｓｓＤＮＡオリゴヌクレオチドの少なくとも一部は、標的ＲＮＡと特異的にハイブリダイズして、オリゴヌクレオチド－ＲＮＡ二重鎖を形成する。さらに好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＲＮＡ二重鎖は、ＲＮａｓｅ切断機構（例えば、ＲＮａｓｅ Ｈ）の影響を受けやすい。いくつかの実施形態では、複合体中の一本鎖オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾主鎖連結、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾された核酸塩基（例えば、本明細書に記載されたような）を含む。いくつかの実施形態では、複合体中の一本鎖オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾主鎖連結、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基（例えば、本明細書に記載の）を含み、ＲＮａｓｅ切断機構の影響を受けやすいオリゴヌクレオチド－ＲＮＡ二重鎖を形成することができる。特定の実施形態では、一本鎖オリゴヌクレオチドはギャップマーである（すなわち、本明細書に記載の、または別様に当技術分野で既知の）。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＲＮａｓｅ切断機構に対する感受性を低下させる少なくとも１つの修飾主鎖連結、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基（例えば、本明細書に記載の）を含むオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、一本鎖オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’ＯＭＥ、ＬＮＡ、ＭＮＯまたはＰＮＡモチーフを含む

【0054】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれる二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドの例には、ｄｓＲＮＡｉ及びダイサー基質及び他のＲＮＡ干渉試薬、ならびに構造遺伝子及び／または制御及び終結領域に対応する配列、が含まれるが、これらに限定されない。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれるオリゴヌクレオチドは、直鎖二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。好ましい実施形態では、ｄｓ－ＲＮＡは、ＲＮａｓｅ切断機構（例えば、ダイサー及びドロシャ（Ｄｒｏｓｈａ）（ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素））の影響を受けやすい。追加の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、細胞のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に挿入することができる。さらなる実施形態では、ｄｓＲＮＡのＲＮＡ鎖は、ＲＩＳＣ複合体を使用してＲＮＡ標的の切断をもたらすことができる。

【0056】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれるオリゴヌクレオチドは、一方または両方のオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾主鎖連結、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含有する二本鎖オリゴヌクレオチドである。好ましい実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅ切断機構（例えば、ダイサー及びドロシャ（Ｄｒｏｓｈａ）（ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素））の影響を受けやすい。追加の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、細胞のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に挿入することができる。さらなる実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド鎖は、ＲＩＳＣ複合体を使用してＲＮＡ標的の切断をもたらすことができる。

【0057】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれるオリゴヌクレオチドは、三本鎖ＤＮＡ／ＲＮＡキメラである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド複合体は、少なくとも１つの修飾主鎖連結、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、複合体中の少なくとも１つのオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’ＯＭＥ、ＬＮＡ、ＭＮＯまたはＰＮＡモチーフを含む。

【0058】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、定型的に、直鎖状に調製されるが、環状になるように結合または別様に調製することができ、分岐鎖も含み得る。別々のオリゴヌクレオチドが特異的にハイブリダイズして二本鎖化合物を形成することができ、これらの二本鎖化合物は平滑末端を有することができ、または１端もしくは両端にオーバーハングを含むことができる。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれる二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓＲＮＡ、及びオリゴヌクレオチド鎖の少なくとも１つが核酸模倣体である二本鎖オリゴヌクレオチド）は、２１～２５ヌクレオチドの長さであり、いずれかまたは両方の末端に１、２、または３ヌクレオチドのオーバーハングを有する。

【0059】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体に含まれるオリゴヌクレオチドは、一般に核酸または模倣体の特定の形態及びその使用目的に応じて、種々の長さであり得る。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中の核酸／オリゴヌクレオチドは、長さが約５ヌクレオチド～約５００ヌクレオチド、好ましくは約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチドの範囲である。

【0060】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体は、標的核酸配列に相補的な少なくとも８個の連続核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを含有する。種々の関連実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、約８～約１００モノマーサブユニット（本明細書では「ヌクレオチド」という用語と交換可能に使用される）または約８～約５０ヌクレオチドの長さである。

【0061】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、長さが、約８～約３０ヌクレオチド、約１５～約３０ヌクレオチド、約２０～約３０ヌクレオチド、約１８～２６ヌクレオチド、約１９～２５ヌクレオチド、約２０～２５または約２１～２５ヌクレオチドの範囲である。

【0062】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０サブユニット（ヌクレオチド）である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５ヌクレオチドの長さを有する。

【0063】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、長さが２１～２５ヌクレオチドの間であるＲＮＡオリゴヌクレオチドの二本鎖を含有し、いずれかまたは両方の末端に１、２または３ヌクレオチドのオーバーハングを有する。他の実施形態では、複合体中のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの二本鎖を含有し、オリゴヌクレオチド鎖の少なくとも一方は２１～２５ヌクレオチドの長さの核酸模倣体であり、二本鎖オリゴヌクレオチドはいずれかまたは両方の末端に１、２または３ヌクレオチドのオーバーハングを有する。
修飾を含有するオリゴヌクレオチド

【0064】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、好ましくは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を含む。そのような修飾オリゴヌクレオチド（すなわち、模倣体）は、典型的には、例えば、細胞取り込みの増強、核酸標的に対する親和性の増強、ヌクレアーゼの存在下での安定性の増大、及び／または阻害活性の増大を含む望ましい特性のために、天然の形態よりも好ましい。

【0065】

修飾ヌクレオシド間連結
本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシド間主鎖にリン原子を保持するオリゴヌクレオチド、及びヌクレオシド間主鎖にリン原子を有していないオリゴヌクレオチドを指す。

【0066】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含む。本明細書で提供される複合体及びコンジュゲートのオリゴヌクレオチドにおける修飾ヌクレオシド間連結は、例えば、ホスホジエステルヌクレオシド間連結によって提供されるものと比較して、オリゴヌクレオチドに対して強化されたヌクレアーゼ安定性を提供することが知られている任意の様式のヌクレオシド間連結を含み得る。修飾ヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子を保持するヌクレオシド間連結及びリンを含有しないヌクレオシド間連結が含まれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間連結と非修飾ヌクレオシド間連結との間で交互になる修飾ヌクレオシド間連結を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結のほとんどが修飾されている。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド中のすべてのヌクレオシド間連結が修飾される。

【0067】

好ましい修飾されたオリゴヌクレオチド主鎖には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、アミノアルキル－ホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホネート、例えば３’－アルキレンホスホネート、５’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホラミデート、例えば３－アミノホスホラミデート及びアミノアルキルホスホラミデート、チオノホスホラミデート、チオノ－アルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、正常３’－５’連結、これらの２’－５連結類似体を有するセレノホスフェート及びボラノホスフェート、ならびに１または複数のヌクレオシド間連結が３’－３’、５’－５’、または２’－２’連結である極性反転（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｐｏｌａｒｉｔｙ）を有するものが含まれる。極性反転を有する好ましいオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド間連結の最３’側に単一３’－３’連結、すなわち塩基脱落でもよい単一の反転ヌクレオシド残基（核酸塩基が欠けているかまたはそれに代えてヒドロキシル基を有する）を含む。種々の塩、混合塩及び遊離酸形態も含まれる。

【0068】

好ましい実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート（ＰＳ）ヌクレオシド間連結を含み、ホスホジエステル結合中の非架橋酸素原子の１つが硫黄によって置き換えられている。ＰＳヌクレオシド間連結を含有するオリゴヌクレオチドは、通常のワトソン－クリック塩基対を形成し、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化し、細胞送達のために負電荷を担持し、他の追加の所望の薬物動態特性を示す。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結はホスホロチオエートである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオシド間連結の少なくとも２、３、４、５、１０または１５は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結の少なくとも１～１０、１～２０、１～３０は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結の少なくとも少なくとも２、３、４、５、１０または１５は、ホスホロチオエート連結である。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。

【0069】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、いずれかの末端に２～５個のＭＯＥヌクレオチドが隣接している８～１４塩基のＰＳ修飾デオキシヌクレオチド「ギャップ」（すなわち、ＭＯＥギャップマー）を含有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、２～５個のＬＮＡヌクレオチドが両端に隣接している８～１４塩基のＰＳ修飾デオキシヌクレオチド「ギャップ」（すなわち、ＬＮＡギャップマー）を含有するオリゴヌクレオチドを有する。追加の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、いずれかの末端に２～５個のトリシクロＤＮＡヌクレオチドが隣接している８～１４塩基のＰＳ修飾デオキシヌクレオチド「ギャップ」（すなわち、ｔｃＤＮＡギャップマー）を含有するオリゴヌクレオチドを有する。

【0070】

別の好適なリン含有修飾ヌクレオシド間連結は、２’－デオキシリボース環の３’－ヒドロキシル基が３’－アミノ基で置き換えられているＮ３’－Ｐ５’ホスホロアミデート（ＮＰ）である。ＮＰヌクレオシド間連結を含有するオリゴヌクレオチドは、相補的ＲＮＡに対して高い親和性を示し、ヌクレアーゼに対して耐性を示す。ホスホロアミデートは標的ＲＮＡのＲＮａｓｅ Ｈ切断を誘導しないため、これらのヌクレオシド間連結を含有するオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドｍＲＮＡスプライシング調節の場合など、ＲＮＡの完全性を維持する必要がある場合に適用される。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結の少なくとも２、３、４、５、１０または１５はホスホロアミデート連結である。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結の少なくとも１～１０、１～２０、１～３０は、ホスホロアミデート連結である。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結の少なくとも少なくとも２、３、４、５、１０または１５は、ホスホロアミデート連結である。追加の実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間連結は、ホスホロアミデートヌクレオシド間連結である。

【0071】

多数の修飾ヌクレオシド間連結及びそれらの合成方法が当技術分野で知られており、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴヌクレオチドに含まれ得る修飾に包含される。リン含有ヌクレオシド間連結の調製を教示する米国特許の例としては、米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９６号；同第５，１８８，８９７号；同第５，１９４，５９９号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４８９，６７７号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５２７，８９９号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３０６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５６５，５５５号；同第５，６０２，２４０号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；同第５，６２５，０５０号；同第５，６４６，２６９号；同第５，６６３，３１２号；同第５，６７２，６９７号；同第５，６７７，４３９号；及び同第５，７２１，２１８号が含まれるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0072】

リン原子を含まないオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートも本明細書で提供される。このようなオリゴヌクレオチドの例には、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルとの混合ヌクレオシド間連結、または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式ヌクレオシド間連結により形成される主鎖を含有するものが含まれる。これらの修飾主鎖には、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）；シロキサン主鎖；スルフィド、スルホキシド及びスルホン主鎖；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル主鎖；リボアセチル主鎖；アルケン含有主鎖；スルファメート主鎖；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ主鎖；スルホネート及びスルホンアミド主鎖；アミド主鎖；ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２成分部分を有する他のもの、を含むオリゴヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。リン原子を含まない主鎖を含有するオリゴヌクレオチドを作製する方法は、当技術分野で知られており、米国特許第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，２１４，１３４号、同第５，２１６，１４１号、同第５，２３５，０３３号、同第５，２６４，５６２号、同第５，２６４，５６４号、同第５，４０５，９３８号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４６６，６７７号、同第５，４７０，９６７号、同第５，４８９，６７７号、同第５，５４１，３０７号、同第５，５６１，２２５号、同第５，５９６，０８６号、同第５，６０２，２４０号、同第５，６０８，０４６号、同第５，６１０，２８９号、同第５，６１８，７０４号、同第５，６２３，０７０号、同第５，６４６，２６９号、同第５，６６３，３１２号、同第５，６３３，３６０号、同第５，６７７，４３７号、同第５，６７７，４３９号、同第５，７９２，６０８号に開示されている方法及び組成物を含むが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0073】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、３’－メチレンホスホネート、メチレン（メチルイミノ）（ＭＭＩとしても知られる）、モルホリノ、ロックド核酸、及びペプチド核酸連結から選択される１または複数の修飾主鎖連結を含有する。修飾主鎖連結は、均一であってもよく、またはＲＮＡｓｅ Ｈ切断が支持されない限り、他の連結、特にホスホジエステルまたはホスホロチオエート連結と交互であってもよい。

【0074】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、核酸模倣体であるオリゴヌクレオチドを含有する。オリゴヌクレオチドに適用される模倣体という用語は、糖または糖とヌクレオチド間連結の両方がそれに代わる基により置き換えられているオリゴヌクレオチドを含むことが意図される。

【0075】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数のモルホリノ連結を有するオリゴヌクレオチドを含有する。モルホリノのＲＮＡｓｅ及びヌクレアーゼ耐性特性により、それらが特に細胞での転写を制御するのに有用なものとなる。したがって、いくつかの実施形態では、モルホリノ単位を含有する複合体を使用して遺伝子発現を調節する。いくつかの実施形態では、モルホリノ単位は、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノに対応する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各モノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。追加の実施形態では、モルホリノオリゴヌクレオチド（例えば、ＰＭＯ）を含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して、対象におけるｍＲＮＡスプライシングを変更する。追加の実施形態では、ＰＭＯなどの１つまたは複数のモルホリノ核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが、アンチセンス剤として使用される。

【0076】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であるオリゴヌクレオチドを含む。ＰＮＡは、オリゴヌクレオチドの糖ホスフェート主鎖がアミド含有主鎖により置き換えられている核酸模倣体である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのホスフェート主鎖は、アミノエチルグリシン主鎖により置き換えられており、核酸塩基は、主鎖のアミド部分のアザ窒素原子に直接的または間接的に結合している。多くのＰＮＡ及びＰＮＡの製造方法が当技術分野で知られている（例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２５４： １４９７－１５０ （１９９１）、ならびに米国特許第５，５３９，０８２号、同第５，７１４，３３１号及び同第５，７１９，２６２号を参照のこと、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＰＮＡ含有オリゴヌクレオチドは、安定性の向上及び好ましいハイブリダイゼーション動態を提供し、非置換対応核酸と比較してＤＮＡよりもＲＮＡに対する親和性が高く、ＲＮＡｓｅ Ｈ媒介分解を活性化しない。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含めることができるオリゴヌクレオチドには、ＰＮＡ類似体、例えばオリゴヌクレオチドの１または複数のモノマー単位のＣ２（α）、例としてＤ－アミノ酸、またはＣ５（γ）、例としてＬ－アミノ酸（例えば、Ｌ－リジン）位置に正に荷電した基及び／または１つもしくは複数のキラル立体中心規制を含む修飾主鎖を有するＰＮＡが含まれる。

【0077】

ＰＮＡオリゴヌクレオチドのＲＮＡｓｅ及びヌクレアーゼ耐性特性は、立体遮断機構を介して細胞内のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）を制御するのに特に有用である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含有し、染色体二重鎖ＤＮＡの鎖侵入によって遺伝子発現を調節する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つのＰＮＡオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含有し、対象におけるｍＲＮＡスプライシングを変更する。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＰＭＯなどの少なくとも１つのＰＮＡオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含有し、アンチセンスとして作用する。

【0078】

同様に、モルホリノ含有オリゴヌクレオチドのＲＮＡｓｅ及びヌクレアーゼ耐性特性により、これらのオリゴヌクレオチドは、立体遮断機構を介して細胞内のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）を制御するのに有用である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＰＭＯなどの少なくとも１つのモルホリノオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含有し、染色体二重鎖ＤＮＡの鎖侵入によって遺伝子発現を調節する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＰＭＯなどの少なくとも１つのモルホリノを含み、対象におけるｍＲＮＡスプライシングを変更する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＰＭＯなどの少なくとも１つのモルホリノオリゴヌクレオチドを含み、アンチセンスとして作用する。

【0079】

さらに、二環式糖含有ヌクレオチドのＲＮＡｓｅ及びヌクレアーゼ耐性特性により、これらのオリゴヌクレオチドは、立体遮断機構を介して細胞内のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）を制御するのに有用である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ヌクレオチドを含有する少なくとも１つの二環式糖を含むオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドを含む二環式糖は、ロックド核酸（ＬＮＡ）である。さらなる実施形態では、ＬＮＡは、糖環の３’または４’炭素原子に連結した２’－ヒドロキシル基を有する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、メチレン（－－ＣＨ２－－）ｎ基が２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋し、ｎが１または２である、少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＬＮＡなどのヌクレオチドを含有する少なくとも１つの二環式糖を含むオリゴヌクレオチドを含有し、染色体二重鎖ＤＮＡの鎖侵入によって遺伝子発現を調節する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡなどの少なくとも１つの二環式糖を含み、対象におけるｍＲＮＡスプライシングを変更する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡなどの少なくとも１つの二環式糖オリゴヌクレオチドを含み、アンチセンスとして作用する。

【0080】

修飾糖部分
いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、天然に存在するかまたは合成の非修飾核酸塩基と構造的に区別可能であるが機能的に交換可能である１つまたは複数の修飾糖部分を有する１つまたは複数のヌクレオシドを含む。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、各ヌクレオシド（単位）に修飾糖を含むオリゴヌクレオチドを含有する。

【0081】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドに有用な糖修飾の例には、ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルであって、アルキル、アルケニル及びアルキニルは、置換もしくは非置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであり得るもの、から選択される糖置換基を含む化合物が含まれるが、これらに限定されない。

【0082】

代表的な修飾糖には、炭素環式または非環式糖、それらの２’、３’、または４’位の１つまたは複数に置換基を有する糖、糖の１つまたは複数の水素原子の代わりに置換基を有する糖、及び糖内の任意の他の２つの原子間に連結を有する糖が含まれる。オリゴヌクレオチドにおいて有用な２’－糖置換基の例には、ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルケニル；アリル、アミノ；アジド；チオ；Ｏ－アリル；Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルであって、アルキル、アルケニル及びアルキニルは、置換もしくは非置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであり得るもの、が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２、であって、ｎ及びｍは１～約１０であるもの、から選択される少なくとも１つの２’－糖置換基を含有する。他の好ましいオリゴヌクレオチドは、Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、薬物動態特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチド化合物の薬力学特性を改善するための基、及び類似の特性を有する他の置換基、から選択される少なくとも１つの２’－糖置換基を含有する。

【0083】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、別名２’－ＭＯＥ）置換基を有する少なくとも１つの２’－置換糖を含む。

【0084】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、２’－アリル（２’－－ＣＨ２－－ＣＨ－－ＣＨ２）、２’－Ｏ－アリル（２’－Ｏ－－ＣＨ２－－ＣＨ－－ＣＨ２）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、及び２’－アセトアミド（２’－Ｏ－－ＣＨ２Ｃ（－－Ｏ）ＮＲ１Ｒ１であって、式中、各Ｒ１は独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ１アルキル、から選択される少なくとも１つの２’修飾ヌクレオシドを含む。

【0085】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ（２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、２’－ＤＭＡＯＥとしても知られる）置換基；２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（２’－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ２）２、２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても知られる）置換基；または２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－－ＣＨ３）置換基、を有する少なくとも１つの２’置換糖を含む。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ（２’－Ｆ）置換基を有する少なくとも１つの２’－置換糖を含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの二環式糖を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’－ヒドロキシル基が糖環の３’または４’炭素原子に連結している少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）を有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、メチレン（－－ＣＨ２－－）ｎ基が２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋し、ｎが１または２である、少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間に架橋を有する少なくとも１つの二環式修飾ヌクレオシドを含み、ここで、架橋は、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２；４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－Ｃ（ＣＨ３）２－Ｏ－２’；４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’；４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’；４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’；４’－ＣＨ２－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－２’；４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－－Ｏ－２’；４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’及び４’－ＣＨ２－Ｃ（－－ＣＨ２）－２’から選択され、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、または保護基である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、前述の糖立体配置の少なくとも１つ、及び追加のモチーフ、例としてα－Ｌ－リボフラノース、β－Ｄ－リボフラノース、またはα－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－－Ｏ－２’）を含む。本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドに有用なさらなるＬＮＡ及びそれらの調製は、当技術分野で知られている。例えば、米国特許第６，２６８，４９０号、同第６，６７０，４６１号、同第７，２１７，８０５号、同第７，３１４，９２３号及び同第７，３９９，８４５号；ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６；ならびにＳｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ． ４：４５５－４５６ （１９９８）を参照のこと、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0087】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、化学的に修飾されたフラノシル（例えば、リボフラノース）環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例には、置換基の付加（５’及び２’置換基、特に２’位、非ジェミナル環原子の架橋による二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、Ｓ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ）２（Ｒ－－Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは保護基）によるリボシル環酸素原子の置き換え、及びそれらの組み合わせなどが含まれるが、これらに限定されない。化学修飾糖の例としては、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについては、例えばＷＯ２００８／１０１１５７を参照のこと）、またはＳによるリボシル環酸素原子の置き換え及び２’位におけるさらなる置換（例えば、ＵＳ２００５０１３０９２３を参照のこと）、あるいはＢＮＡの５’－置換（ＷＯ２００７／１３４１８１、ここでＬＮＡは例えば５’－メチルまたは５’－ビニル基により置換される）が挙げられる。

【0088】

３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位または２’－５’連結オリゴヌクレオチド及び５’－末端ヌクレオチドの５’位における上記の修飾に類似する修飾を有する少なくとも１つのヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートも本明細書に提供される。提供されるオリゴヌクレオチドに含まれる２’－修飾ヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第５，１１８，８００号、同第５，３１９，０８０号、同第５，３５９，０４４号、同第５，３９３，８７８号、同第５，４４６，１３７号、同第５，４６６，７８６号、同第５，５１４，７８５号、同第５，５１９，１３４号、同第５，５６７，８１１号、同第５，５７６，４２７号、同第５，５９１，７２２号、同第５，５９７，９０９号、同第５，６１０，３００号、同第５，６２７，０５３号、同第５，６３９，８７３号、同第５，６４６，２６５号、同第５，６５８，８７３号、同第５，６７０，６３３号、同第５，７００，９２０号、及び同第５，７９２，７４７号が含まれるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0089】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つの複素環式二環式核酸を含むオリゴヌクレオチドを含有する。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＥＮＡモチーフを有する（例えば、ＷＯ０１／４９６８７を参照のこと、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0090】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、６員環による５員フラノース環の少なくとも１つの置換を含むオリゴヌクレオチドを含有する。少なくとも１つの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのシクロヘキセン核酸（ＣｅＮＡ）を有する。

【0091】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つのトリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）を含むオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、いずれかの末端に２～５個のトリシクロＤＮＡヌクレオチドが隣接している８～１４塩基のＰＳ修飾デオキシヌクレオチド「ギャップ」（すなわち、ｔｃＤＮＡギャップマー）を含有する。

【0092】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ホスホロチオエート主鎖を含むオリゴヌクレオチド、ならびに／またはヘテロ原子主鎖、例として－－ＣＨ２－－ＮＨ－－Ｏ－－ＣＨ２－－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｏ－－ＣＨ２－（メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ主鎖としても知られる）、－－ＣＨ２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－及び－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－ＣＨ２－、及びアミド主鎖を含むオリゴヌクレオシドを含有する（例えば、米国特許第５，６０２，２４０号を参照のこと）。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ホスホロジアミデート主鎖構造を含むオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ホスホロジアミデートモルホリノ（すなわち、ＰＭＯ）主鎖構造を含むオリゴヌクレオチドを含有する（例えば、米国特許第５，０３４，５０６号を参照のこと、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる）。

【0093】

修飾核酸塩基
Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートはまた、天然に存在するかまたは合成の非修飾核酸塩基と構造的に区別可能であるが機能的に交換可能である１つまたは複数の核酸塩基修飾を含む１つまたは複数のオリゴヌクレオチドを含有し得る。

【0094】

本明細書で使用される「非修飾」または「天然」核酸塩基という用語には、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾核酸塩基は、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）のような合成及び天然核酸塩基を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つの５’メチルシトシンまたはＣ－５プロピンを含むオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド中の各シトシンは、メチルシトシンである。

【0095】

修飾核酸塩基はまた、本明細書では複素環式塩基部分と称され、他の合成及び天然の核酸塩基、例としてキサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－－ＣＣ－－ＣＨ３）ウラシル及びシトシン、及びピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが挙げられる。

【0096】

オリゴヌクレオチドに含まれる複素環式塩基部分にはまた、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環により置き換えられているもの、例として７－デアザアデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン及び２－ピリドンが含まれ得る。提供されるオリゴヌクレオチドの結合親和性を高めるのに特に有用な核酸塩基には、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、ならびに２アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシンを含むＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリンが含まれる。

【0097】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドに場合により含まれる追加の修飾核酸塩基には、三環式ピリミジン、例としてフェノキサジンシチジン（１Ｈ－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾキサジン－２（３Ｈ）－オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾチアジン－２（３Ｈ）－オン）、Ｇ－クランプ、例として置換フェノキサジンシチジン（例えば、９－（２－アミノエトキシ）－Ｈ－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾキサジン－２（３Ｈ）－オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－２－オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ－ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－２－オン）、またはグアニジニウムＧ－クランプ及び類似体、が含まれるが、これらに限定されない。代表的なグアニジノ置換基は米国特許第６，５９３，４６６号に開示されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。代表的なアセトアミド置換基は米国特許第６，１４７，２００号に開示されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0098】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドに包含される多数の修飾核酸塩基及びそれらの合成方法は当技術分野で知られており、例えば、これらには、Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｐａｇｅｓ ８５８－８５９， Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ， Ｊ． Ｉ．， ｅｄ． Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， １９９０；Ｅｎｇｌｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ３０：６１３ （１９９３）；Ｓａｎｇｈｖｉ， Ｙ． Ｓ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １５， Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ｐａｇｅｓ ２８９－３０２；Ｃｒｏｏｋｅ， Ｓ． Ｔｅｄ．， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， １９９３；ならびに米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，８４５，２０５号、同第５，１３０，３０２号、同第５，１３４，０６６号、同第５，１７５，２７３号、同第５，３６７，０６６号、同第５，４３２，２７２号、同第５，４３４，２５７号、同第５，４５７，１８７号、同第５，４５９，２５５号、同第５，４８４，９０８号、同第５，５０２，１７７号、同第５，５２５，７１１号、同第５，５５２，５４０号、同第５，５８７，４６９号、同第５，５９４，１２１号、同第５，５９６，０９１号、同第５，６１４，６１７号、同第５，６４５，９８５号、同第５，６４６，２６９号、同第５，６８１，９４１号、同第５，７５０，６９２号、同第５，８３０，６５３号、同第５，７６３，５８８号、同第６，００５，０９６号、同第６，０２８，１８３号、及び同第６，００７，９９２号、米国特許出願公開第２００３０１５８４０３号に開示された修飾核酸塩基が含まれ、これらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
キメラオリゴヌクレオチド：

【0099】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、キメラオリゴヌクレオチド（例えば、キメラオリゴマー化合物）である。「キメラオリゴヌクレオチド」または「キメラ」という用語は、少なくとも２つの化学的に異なる領域（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿って配置された化学的に修飾されたサブユニットのモチーフのパターン及び／または方向）を含有し、それぞれ少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、核酸ベースのオリゴヌクレオチド化合物の場合にはヌクレオチドまたはヌクレオシドから構成される。キメラオリゴヌクレオチドはまた、例えばハイブリッド（例えば、融合）及びギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）とも称されている。このようなキメラオリゴヌクレオチド構造の調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第５，０１３，８３０号；同第５，１４９，７９７号；同第５，２２０，００７号；同第５，２５６，７７５号；同第５，３６６，８７８号；同第５，４０３，７１１号；同第５，４９１，１３３号；同第５，５６５，３５０号；同第５，６２３，０６５号；同第５，６５２，３５５号；同第５，６５２，３５６号；及び同第５，７００，９２２号が含まれるが、これらに限定されず、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0100】

キメラアンチセンス化合物は、典型的には、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞取り込みの増加、標的核酸に対する結合親和性の増加、及び／または阻害活性の増加を付与するように修飾された少なくとも１つの領域を含有する。例として、ギャップマーは、３つの領域、すなわち２つの外部領域（ウイング）に隣接している中央領域（ギャップ）、に分割されるヌクレオシドの連続配列を含むキメラオリゴヌクレオチドである。ギャップマー設計は、典型的には、ＲＮａｓｅ Ｈの基質として機能し、標的ＲＮＡ結合親和性を高めるが、標的ＲＮＡ分子のＲＮＡｓｅ Ｈ切断を支持しない２’－修飾オリゴヌクレオチドの１つまたは２つの領域に典型的に隣接している約５～１０個の連続した２’－デオキシヌクレオチドの中央領域を含む。したがって、キメラが使用される場合、例えば、同じ標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシリボヌクレオチドと比較して、基質領域を有するより短いオリゴヌクレオチドを用いて匹敵する結果を、多くの場合得ることができる。他のキメラオリゴヌクレオチドは、例えば、他の領域と比較して親和性の増加または低下のいずれかを呈する修飾ヌクレオシドの領域を含む、その標的に対するオリゴヌクレオチドの長さにわたって変化したレベルの結合親和性を付与する領域に依存する。いわゆる、「ＭＯＥギャップマー」は、ウイング中に２’－ＭＯＥ修飾を有し、多くの場合完全なＰＳ主鎖を含有し、頻繁にすべてのシトシン上に５’ＭｅＣ修飾を含む。

【0101】

あるいは、ＲＮＡプロセシングの調節など、ＲＮＡｓｅ Ｈ活性が望ましくない可能性がある状況では、均一に修飾されたオリゴヌクレオチド、例として各ヌクレオチドまたはヌクレオシド位置におけるＲＮＡｓｅ Ｈ活性を支持しない修飾オリゴヌクレオチドを使用する設計を使用することが好ましい場合がある。本発明で使用される場合、「完全修飾モチーフ」という用語は、本質的に各ヌクレオシドが修飾されて同じ修飾糖部分を有する、糖修飾ヌクレオシドの連続配列を含むことを意味する。完全修飾オリゴヌクレオチドに好適な糖修飾ヌクレオシドには、２’－フルオロ（２’Ｆ）、２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（２’－ＭＯＥ）、２’－ＯＣＨ３（２’－Ｏ－メチル）、及び二環式糖修飾ヌクレオシドが含まれるが、これらに限定されない。一態様では、３’及び５’末端ヌクレオシドは未修飾のままである。好ましい実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’－ＭＯＥ、２’－Ｆ、２’－Ｏ－Ｍｅ、または二環式糖修飾ヌクレオシドのいずれかである。

【0102】

いくつかの実施形態では、提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の安定化基を有するように修飾されたオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ安定性などの特性を高めるために、安定化基を、オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合させる。いくつかの実施形態では、安定化基はキャップ構造である。「キャップ構造または末端キャップ部分」とは、オリゴヌクレオチドのいずれかの末端に組み込まれた化学修飾を意味する（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ９７／２６２７０を参照のこと）。これらの末端修飾は、末端核酸分子を有するオリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼ分解から保護し、及び／または細胞内でのオリゴヌクレオチドの送達及び／または局在化に役立つ場合がある。オリゴヌクレオチドは、５’末端（５’キャップ）、３’末端（３’キャップ）、または５’末端と３’末端の両方にキャップを含有し得る。二本鎖オリゴヌクレオチドの場合、キャップはいずれかの鎖のいずれかまたは両方の末端に存在し得る。キャップ構造は当技術分野において知られており、例えば反転デオキシ脱塩基キャップが含まれる。オリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンス）化合物の一方または両方の末端をキャップしてヌクレアーゼ安定性を付与するために使用することができるさらなる３’及び５’－安定化基には、ＷＯ０３／００４６０２に開示されているものが含まれ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0103】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、５’－キャップ及び／または反転脱塩基残基（ｉｎｖｅｒｔｅｄ ａｂａｓｉｃ ｒｅｓｉｄｕｅ）（部分）である構造、４’，５’－メチレンヌクレオチド；１－（β－Ｄ－エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’－チオヌクレオチド、炭素環ヌクレオチド；１，５－アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；Ｌ－ヌクレオチド；α－ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート連結；スレオ－ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’－セコヌクレオチド；非環式３，４－ジヒドロキシブチルヌクレオチド；非環式３，５－ジヒドロキシペンチルヌクレオチド；３－３’－反転ヌクレオチド部分；３’－３’－反転脱塩基部分；３’－２’－反転ヌクレオチド部分；３－２’－反転脱塩基部分；１，４－ブタンジオールホスフェート；３’－ホスホラミデート；ヘキシルホスフェート；アミノヘキシルホスフェート；３’－ホスフェート；３’－ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；または架橋もしくは非架橋メチルホスホネート部分を含む（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ９７／２６２７０を参照のこと）。

【0104】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、３’－キャップ及び／または４’，５’－メチレンヌクレオチド；１－（β－Ｄ－エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４’－チオヌクレオチド、炭素環ヌクレオチド；５’－アミノ－アルキルホスフェート；１，３－ジアミノ－２－プロピルホスフェート、３－アミノプロピルホスフェート；６－アミノヘキシルホスフェート；１，２－アミノドデシルホスフェート；ヒドロキシプロピルホスフェート；１，５－アンヒドロへキシトールヌクレオチド；Ｌ－ヌクレオチド；α－ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート；スレオ－ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’－セコヌクレオチド；３，４－ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５－ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’－５’－反転ヌクレオチド部分；５’－５’－反転脱塩基部分；５’－ホスホロアミデート；５’－ホスホロチオエート；１，４－ブタンジオールホスフェート；５’－アミノ；架橋及び／または非架橋５’－ホスホラミデート、ホスホロチオエート及び／またはホスホロジチオエート、架橋または非架橋メチルホスホネート及び５’－メルカプト部分を含む（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｅａｕｃａｇｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：１９２５ （１９９３）に開示されている安定化基もまた参照のこと）。

【0105】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、５’－キャップ及び１つまたは複数のカチオン性尾部を含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リジンまたはアルギニンなどの、少なくとも１、２、３、４個、またはそれ以上の正に荷電したアミノ酸とコンジュゲートしている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドはＰＮＡであり、１つまたは複数のリジンまたはアルギニン残基が分子のＣ末端にコンジュゲートしている。さらに好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドはＰＮＡであり、各ＰＮＡ連結にコンジュゲートされた１～４個のリジン及び／またはアルギニン残基を含む。

【0106】

追加の関連実施形態では、本開示は、１つまたは複数の活性剤または治療剤をさらに含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び／またはＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、活性剤または治療剤は核酸である。種々の実施形態では、核酸は、プラスミド、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、デコイ、アプタマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはリボザイムである。

【0107】

オリゴヌクレオチド合成
オリゴヌクレオチドは、当技術分野で十分に確立された方法によって合成及び／または修飾することができる。修飾及び非修飾ヌクレオシドのオリゴマー化は、適当であれば合成について、ＤＮＡ様化合物（Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ， Ｅｄ． Ａｇｒａｗａｌ （１９９３）， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ） 及び／または ＲＮＡ様化合物 （例えば、Ｓｃａｒｉｎｇｅ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３：２０６－２１７ （２００１） ａｎｄ Ｇａｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ＲＮＡ ｉｎ ＲＮＡ： Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， Ｅｄ． Ｓｍｉｔｈ （１９９８）， １－３６． Ｇａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５７：５７０７－５７１３ （２００１）、に関する文献の手順に従って実行される （Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｂｅａｕｃａｇｅ， Ｓ． Ｌ． ｅｔ ａｌ．，（Ｅｄｒｓ．）， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， ＵＳＡもまたを参照のこと、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドは、好ましくは、適切に保護された試薬及び市販のオリゴヌクレオチド合成機を使用して化学的に合成される。提供されるオリゴヌクレオチドの製造に有用なオリゴヌクレオチド合成試薬の供給者には、Ｐｒｏｌｉｇｏ （Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、ＣＯ、ＵＳＡ）， Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ （Ｐｅｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、ＵＳＡの一部）、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （Ｓｔｅｒｌｉｎｇ、ＶＡ、ＵＳＡ）、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ （Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）、及びＣｒｕａｃｈｅｍ （Ｇｌａｓｇｏｗ、ＵＫ）が含まれるが、これらに限定されない。あるいは、オリゴマーは、種々のオリゴヌクレオチド合成会社、例として、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｃｏｌｏ．）、Ｑｉａｇｅｎ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ）、Ｐｒｏｌｉｇｏ 及びＡｍｂｉｏｎから購入することができる。

【0108】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの調製は、ＤＮＡ：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ， Ａｇｒａｗａｌ， Ｅｄ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， １９９３、についての、及び／またはＲＮＡ： Ｓｃａｒｉｎｇｅ， Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２３：２０６－２１７ （２００１）；Ｇａｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ＲＮＡ ｉｎ ＲＮＡ： Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， Ｓｍｉｔｈ， Ｅｄ．， １９９８， １－３６；Ｇａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５７：５７０７－５７１３ （２００１）、についての文献の手順に従って実行される。固相合成のための追加の方法は、米国特許第４，４１５，７３２号、同第４，４５８，０６６号、同第４，５００，７０７号、同第４，６６８，７７７号、同第４，７２５，６７７号、同第４，９７３，６７９号、及び同第５，１３２，４１８号、ならびに再発行特許第３４，０６９号に見出すことができる。

【0109】

使用される特定のプロトコルに関係なく、提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドは、固相合成の周知の技術によって簡便かつ定型的に作製することができる。そのような合成のための装置は、例えば、Ｇｅｎｅ Ｆｏｒｇｅ （Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆ．）を含むいくつかの業者によって販売されている。自動合成技術を含む、好適な固相技術が、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ， ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｆ． Ｅｃｋｓｔｅｉｎ， Ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１に記載されている。当技術分野で知られているそのような合成のための任意の他の手段を、追加的または代替的に使用することができる（液相合成を含む）。

【0110】

二環式糖修飾モノマー、アデニン、シトシン、グアニン、５－メチル－シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製、ならびにそれらのオリゴマー化、及び核酸認識特性が記載されており（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ５４：３６０７－３６３０ （１９９８）；ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６）、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。４’－ＣＨ２－－Ｓ－２’類似体などの他の二環式糖修飾ヌクレオシド類似体も調製されている（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ８：２２１９－２２２２ （１９９８））。核酸ポリメラーゼの基質としてオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を含有する他の二環式糖類似体の調製も記載されており（ＷＯ９８－ＤＫ３９３ １９９８０９１４）、それらのそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0111】

提供された方法に従って使用されるような、フルオロフォアをオリゴヌクレオチドに連結するための技術は、当技術分野で周知であり、これを使用または定型的に改変して、提供されたＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体を調製することができる。例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １３：４４８５－４５０２ （１９８５）；Ｄｒｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８６：９７５２－９７５６ （１９８９）；Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １７：７１８７－７１９４ （１９８９）；Ｓｐｒｏａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５：６１８１－６１９６ （１９８７）及びＺｕｃｋｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １５：５３０５－５３２１ （１９８７）を参照のこと、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。多くのフルオロフォアは通常、好適な反応部位を含む。あるいは、フルオロフォアを誘導体化して、別の分子への結合のための反応部位を提供することができる。第２の分子にカップリングするため官能基により誘導体化されたフルオロフォアは、様々な製造者から市販されている。誘導体化は、フルオロフォア自体上の基の単純な置換によるものであってもよく、リンカーへのコンジュゲーションによるものであってもよい。

【0112】

フルオロフォアは、任意選択的に、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’及び／もしくは３’末端主鎖ホスフェートならびに／または他の塩基に結合される。種々の好適なリンカーが当業者に知られており、及び／または以下で議論されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、柔軟な脂肪族リンカーである。追加の実施形態では、リンカーは、Ｃ１～Ｃ３０の直鎖状または分岐鎖状の飽和または不飽和炭化水素鎖である。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｃ２～Ｃ６の直鎖状または分岐鎖状の飽和または不飽和炭化水素鎖である。追加の実施形態では、炭化水素鎖リンカーは、１または複数のヘテロ原子、アリール；または低級アルキル、ヒドロキシアルキルまたはアルコキシにより置換される。

【0113】

いくつかの実施形態では、１または複数の、フルオロフォア修飾ヌクレオシド、フルオロフォア及び糖／塩基／及び／または連結修飾ヌクレオシド、及び／またはデオキシヌクレオシドホスホラミダイトを使用して、自動合成中に１つまたは複数のフルオロフォアがオリゴヌクレオチドに組み込まれる。

【0114】

いくつかの実施形態では、１つまたは複数のフルオロフォアが、合成後標識反応においてオリゴヌクレオチドに組み込まれる。適切な合成後標識反応は当技術分野で知られており、定型的に適用または改変して本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体を合成することができる。一実施形態では、合成後標識反応において、１または複数のフルオロフォアがオリゴヌクレオチドに組み込まれ、この場合、合成オリゴヌクレオチド中のアミン－またはチオール修飾ヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドが、アミン－またはチオール－反応性フルオロフォア、例としてスクシンイミジルエステルフルオロフォアと反応する。

【0115】

さらなる実施形態では、１または複数の同一のフルオロフォアが単一反応でオリゴヌクレオチドに組み込まれ、この単一反応は、色素の反応形態を、フルオロフォアと反応することができる所望の数の反応性基を含有するオリゴヌクレオチドと、好適な緩衝液中で、オリゴヌクレオチドへのフルオロフォアの組み込みを達成するのに十分な条件下でかつ十分な時間にわたって、接触させることを含む。反応性基は、当技術分野で知られている標準的な技術及び試薬を使用して、合成中にオリゴヌクレオチドに定型的に組み込むことができる。

【0116】

例示的な作用機序
いくつかの実施形態では、本開示は、対象における核酸の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、核酸を含むかまたはコードする核酸を標的とし、対象における核酸のレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有するＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体を対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、タンパク質をコードする核酸を標的とするか、対象におけるタンパク質の内因性発現、プロセシング、または機能を低下させるオリゴヌクレオチドを含有するＨＥＳ－オリゴヌクレオチド複合体を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンタゴミル（ａｎｔａｇｍｉｒ）（抗ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。

【0117】

アンチセンス
いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。「アンチセンスオリゴヌクレオチド」または単に「アンチセンス」という用語は、治療対象の細胞内の同族のｍＲＮＡに結合し、例えば、標的ＲＮＡのタンパク質翻訳部位への転座を変更すること、標的ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、標的ＲＮＡのスプライシングを変更すること（例えば、エキソンスキッピングの促進）、及び標的ＲＮＡに関連するかまたはそれにより促進され得る触媒活性を変更すること、ならびに内因性ＲＮａｓｅ Ｈによる分解についてｍＲＮＡを標的化することにより、ＲＮＡの機能を調節する、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡ、モルホリノ（例えば、ＰＭＯ）などの核酸模倣体、ならびに修飾ヌクレオシド及び／またはヌクレオシド間連結を含有する組成物）の一本鎖に対応するオリゴヌクレオチドを含むことが意図される。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、染色体ＤＮＡと特異的にハイブリダイズすることによって細胞活性を変化させる。アンチセンスオリゴヌクレオチドという用語は、所望の標的遺伝子に正確に相補的でない場合があるアンチセンスオリゴヌクレオチドも包含する。したがって、提供される方法は、非標的特異的活性がアンチセンスで見られる場合、または標的配列との１つまたは複数のミスマッチを含有するアンチセンス配列が特定の使用に好ましい場合に利用することができる。標的核酸の機能に対するこのような妨害の全体的効果は、目的の標的タンパク質の調節である。本開示との関係において、「調節」は、低分子非コードＲＮＡ、核酸標的、低分子非コードＲＮＡに関連するＲＮＡもしくはタンパク質、または低分子非コードＲＮＡの下流の標的（例えば、低分子非コードＲＮＡによって制御されるタンパク質をコードする核酸を表すｍＲＮＡ）の量またはレベルにおける遺伝子またはタンパク質の発現の増加（刺激）または減少（阻害）のいずれかを意味する。阻害は調節の好適な形態であり、低分子非コードＲＮＡは、好適な核酸標的である。レベルを調節することができる低分子非コードＲＮＡには、ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ前駆体が含まれる。本開示の文脈において、「機能の調節」とは、低分子非コードＲＮＡの機能もしくは活性の変更、または低分子非コードＲＮＡが関連または下流効果を有する細胞成分の機能の変更を意味する。一実施形態では、機能の調節は、低分子非コードＲＮＡの活性の阻害である。

【0118】

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくは、長さが約８～約８０個の連続連結ヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０～約５０のヌクレオシドまたは約１３～約３０のヌクレオチドである。本明細書で提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、リボザイム、抗ｍｉＲＮＡ、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、及び標的核酸に特異的にハイブリダイズしてその発現を調節する他の短い触媒ＲＮＡまたは触媒オリゴヌクレオチドが挙げられる。

【0119】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、長さ約１５～約３０ヌクレオシド（すなわち、１５～３０連結ヌクレオシド）、あるいは長さ約１７～約２５ヌクレオシドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０ヌクレオシドである。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０～約５０ヌクレオチド、より好ましくは約１５～約３０ヌクレオチドである。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが４、５、６または７ヌクレオチドである。

【0120】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、目的の標的ＲＮＡの転写を妨害する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、鎖置換によって目的のｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの転写を妨害する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、鎖侵入または三重鎖形成（三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＨＯｓ）、例としてＬＮＡを含むもの、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０１２２１０４号を参照のこと、引用により本明細書に組み入れる）によって標的遺伝子の一部と安定な複合体を形成することによってｍＲＮＡの転写を妨害する。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、細胞の転写装置を妨害することにより、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）の転写を妨害する。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡの５’末端またはＡＵＧ開始コドン（例えば、ＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内）の領域に特異的に結合し、翻訳を減少させるように設計される。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴヌクレオチド成分は、ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションに特異的にハイブリダイズするように設計される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳標的配列に特異的に結合するように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０に特異的に結合するように設計される。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的に結合するように設計される。

【0121】

他の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、必須のＲＮＡ二次構造の部位に結合するか、または翻訳されたポリペプチドの切断を引き起こす立体ブロッカーとして作用する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、例えば、標的ｍＲＮＡのスプライスジャンクションにまたはその近くに結合することによって、イントロン切除を妨害するように設計される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、イントロン切除を妨害するか、または選択的スプライスバリアントの発現を増加させるように設計される。

【0122】

ＲＮａｓｅ Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ部分を特異的に切断する内因性酵素である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸に結合するとＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたは核酸模倣体である。オリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発し、例えば、内因性リボヌクレアーゼを利用して標的ＲＮＡを減少させるという点で、特定の利点を有する。

【0123】

ＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発するための１つのアンチセンス設計は、ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）モチーフ設計であり、この設計においては、ホスホロチオエート修飾を伴うかまたは伴わないＤＮＡから構成される中央ブロック、及びヌクレアーゼ耐性５’及び３’隣接ブロックを有するキメラオリゴヌクレオチドであり、通常は２’－Ｏ－メチルＲＮＡであるが、広範囲な２’－修飾が使用されている（Ｃｒｏｏｋｅ， Ｃｕｒｒ． Ｍｏｌ． Ｍｅｄ． ４（５）：４６５－４８７ （２００４）を参照のこと）。他のギャップマーの設計は、本明細書に記載されているか、そうでなければ当技術分野で知られている。

【0124】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、細胞内でのＲＮａｓｅ Ｈの活性化を回避するように設計されているアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。ＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発しないオリゴヌクレオチドは、例えば、転写機構の遮断（立体ブロック機構による）及び標的ＲＮＡのスプライシングの変更において、特定の利点を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、例えば、標的ｍＲＮＡのスプライスジャンクションにまたはその近くに結合することによって、イントロン切除を妨害及び／または改変するように設計される。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、メッセージの選択的スプライスバリアントの発現を増加させるように設計される。好ましい一実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、モルホリノ（例えば、ＰＭＯ）アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドを含む。別の好ましい実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＰＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。

【0125】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的ｍＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの上流５０核酸塩基までの領域の少なくとも一部を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。より好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの上流の領域２０～２４または３０～５０核酸塩基の少なくとも一部を標的とし、好ましくは結合時にｍＲＮＡ標的のＲＮＡｓｅ Ｈ切断を支持しない。好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ標的（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に対する結合親和性を増加させ、アンチセンス化合物のヌクレアーゼ耐性を増加させる少なくとも１つの修飾を含有する。

【0126】

一実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、その糖部分の２’修飾を有する少なくとも１つのヌクレオシドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その糖部分の２’修飾を有する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０のヌクレオシドを含む。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その糖部分の２’修飾を有する少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０のヌクレオシドを含む。なおさらなる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオシドは、その糖部分の２’修飾を有する。好ましくは、２’修飾は、２’－フルオロ、２’－ＯＭＥ、２’－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）またはロックド核酸（ＬＮＡ）である。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドモチーフは、メチレン（－－ＣＨ２－－）ｎ基が２’酸素原子と４’炭素原子とを架橋し、ｎは１または２であるＬＮＡまたはアルファＬＮＡである。さらなる実施形態では、ＬＮＡまたはアルファＬＮＡは、５’位にメチル基を含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’修飾及び少なくとも１つのヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結は、ホスホジエステル主鎖連結とホスホロチオエート主鎖連結のと間で交互になっている。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。

【0127】

追加の好ましい実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つの３’－メチレンホスホネート連結、ＬＮＡ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）連結またはホスホロジアミデートモルホリノ連結を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾核酸塩基を含有する。好ましくは、修飾核酸塩基はＣ－５プロピンまたは５－メチルＣである。

【0128】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的ｍＲＮＡまたは標的遺伝子の異なる配列に相補的な１または２を超えるアンチセンス鎖を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、直鎖状または分岐鎖状に連結される（例えば、デンドリマー）。さらなる実施形態では、連結されたアンチセンス鎖は、標的ｍＲＮＡ及び／または遺伝子の新しい二次構造を誘導し、それによって標的ヌクレオチドの適切な転写／翻訳を減少または阻害する。

【0129】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物は、当技術分野で知られている技術を使用して定型的に合成することができる。

【0130】

ＲＮＡｉ－転写後遺伝子サイレンシング
短い二本鎖ＲＮＡ分子及び短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、すなわち、ｓｉＲＮＡを生じさせるフォールドバックステムループ構造は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＲＮＡｉを誘導するオリゴヌクレオチドを含む。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドには、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｄｓＲＮＡドロシャ及び／またはダイサー基質が含まれるが、これらに限定されない。ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びｄｓＲＮＡの一方または両方の鎖は、好ましくは、本明細書に記載の、または別様に当技術分野で公知の、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を含む。これらのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、対象における目的の遺伝子（複数可）またはポリヌクレオチド（複数可）の発現を妨害することを含むが、これに限定されない用途を有する。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、標的核酸の発現を特異的に阻害するために使用される。いくつかの実施形態では、遺伝子及び／または核酸発現の二本鎖ＲＮＡ媒介抑制は、ｄｓＲＮＡドロシャ基質、ｄｓＲＮＡダイサー基質、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象及び／または細胞に投与することによって達成される。遺伝子及び核酸発現の二本鎖ＲＮＡ媒介抑制は、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することによって達成され得る。ｓｉＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含むハイブリッド分子、例えば、１本のＲＮＡ鎖と１本のＤＮＡ鎖であり得る。

【0131】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、約２１～３０ヌクレオチドで長である、ＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡセンス：ＲＮＡアンチセンスハイブリッド、ＲＮＡセンス：ＤＮＡアンチセンスハイブリッド、及びＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッド二重鎖から選択されるｓｉＲＮＡを含み、ＲＮＡｉ誘発サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として知られる細胞質多タンパク質複合体と会合することができる。ｓｉＲＮＡ担持ＲＩＳＣは、相同なｍＲＮＡ転写産物の分解を媒介する。提供される方法は、これらの異なるタイプの二本鎖分子のいずれかを含むＲＮＡｉ分子の使用を含む。加えて、ＲＮＡｉ分子を使用して、様々な形態で細胞に導入できることが理解される。したがって、本明細書で使用されるように、ＲＮＡｉ分子は、２つの別々の鎖、すなわちセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖ポリヌクレオチド、例えば低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；二本鎖領域を形成する相補配列のヘアピンループを含むポリヌクレオチド、例えばｓｈＲＮＡｉ分子、及び二本鎖ポリヌクレオチドを単独でまたは別のポリヌクレオチドと組み合わせて形成することができる１つまたは複数のポリヌクレオチドを発現する発現ベクター、を含むがこれらに限定されない、細胞においてＲＮＡｉ応答を誘導することができるあらゆる分子を包含する。

【0132】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、二本鎖であり、長さが１６～３０または１８～２５ヌクレオチドであるオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、ｄｓＲＮＡオリゴヌクレオチドは二本鎖であり、長さが１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２ヌクレオチドである。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、長さが２１ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、０～７ヌクレオチドの３’オーバーハング、または０～４ヌクレオチドの５’オーバーハングを有する。特定の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する。さらなる実施形態では、ｄｓＲＮＡは、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する長さ２１ヌクレオチドの２つの相補的ＲＮＡ鎖を含有する（すなわち、センス鎖とアンチセンス鎖との間に１９ヌクレオチドの相補的領域を含有する）。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを有する長さ２５ヌクレオチドの２つの相補的ＲＮＡ鎖を含有する（すなわち、センス鎖とアンチセンス鎖との間に２３ヌクレオチドの相補的領域を含有する）。ある特定の実施形態では、オーバーハングはＵＵまたはｄＴｄＴ３’オーバーハングである。

【0133】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的ＲＮＡの対応する逆相補鎖に完全に相補的なｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドを含有する。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡの対応する逆相補鎖と比較して、１つまたは２つの置換、欠失、または挿入を含有する。

【0134】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ショートヘアピンＲＮＡであるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む。ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを生じさせるフォールドバックステムループ構造を含有するヘアピンＲＮＡの形態であり、したがって同様に、標的遺伝子の発現を配列特異的に低下させることができる。ショートヘアピンＲＮＡは一般に、ｓｉＲＮＡよりも安定であり、細胞環境での分解を受けにくくなっている。ｓｈＲＮＡのステムループ構造は、ステムの長さが異なり、典型的には、長さが１９～２９ヌクレオチドであり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、長さが１９～２１または２７～２９ヌクレオチドであるステムを有するｓｈＲＮＡを含有する。追加の実施形態では、ｓｈＲＮＡは、長さが４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有する。標的ｍＲＮＡ（アンチセンス鎖）に特異的にハイブリダイズするステムの部分とｍＲＮＡとの間の完全な相補性が好ましいが、ｓｈＲＮＡは、場合により、ｓｈＲＮＡヘアピンステムの２つの鎖の間にミスマッチを含有してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｈＲＮＡは、ヘアピンを安定化させるために、ヘアピンステムに１つまたはいくつかのＧ－Ｕ対形式を含む。

【0135】

一実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの核酸標的は、ＡＡジヌクレオチド配列の出現について標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）をスキャンすることによって選択される。３’隣接のおよそ１９ヌクレオチドと組み合わせた各ＡＡジヌクレオチド配列は、潜在的なｓｉＲＮＡ標的部位であり、それに基づいてＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを定型的に設計することができる。いくつかの実施形態では、標的ＲＮＡの制御領域に結合するタンパク質によるｓｉＲＮＰエンドヌクレアーゼ複合体の結合の潜在的な妨害を回避するために、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド標的部位は、標的ＲＮＡの５’及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）または開始コドン付近の領域内（例えば、開始コドンの約７５塩基以内）には位置しない。

【0136】

特定のポリヌクレオチドを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、当技術分野で知られた試薬及び手順を使用して、または定型的に改変して容易に調製することができる。効果的なｓｉＲＮＡ分子の構造的特性が同定されている。Ｅｌｓｈａｂｉｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４－４９８ （２００１）及びＥｌｓｈａｂｉｒ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ ２０：６８７７－６８８８ （２００１）。したがって、当業者は、多種多様な異なるｓｉＲＮＡ分子を使用して、特定の遺伝子または転写物を標的とすることができることを理解するであろう。

【0137】

酵素核酸
いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、酵素オリゴヌクレオチドを含む。提供されるコンジュゲート中の酵素的オリゴヌクレオチドの２つの好ましい特徴は、標的遺伝子のＤＮＡまたはＲＮＡ領域の１つまたは複数に相補的な特異的基質結合部位を有することであり、それらは、オリゴヌクレオチドにＲＮＡ切断活性を付与する基質結合部位内またはその周囲のヌクレオチド配列を有することである。いくつかの実施形態では、酵素オリゴヌクレオチドはリボザイムである。リボザイムは、エンドヌクレアーゼ活性を有する特定の触媒ドメインを有するＲＮＡ－タンパク質複合体である。例示的なリボザイムオリゴヌクレオチドは、ハンマーヘッド、ヘアピン、デルタ型肝炎ウイルス、グループＩイントロンまたはＲＮａｓｅＰ ＲＮＡ（ＲＮＡガイド配列に関連する）またはニューロスポラＶＳ ＲＮＡモチーフで形成される。

【0138】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれ得る酵素的オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の、または別様に当技術分野で知られた修飾ヌクレオチドを含有し得るが、そのような修飾が、酵素オリゴヌクレオチドの触媒活性を無効にする配座の変化につながらないことが重要である。リボザイムなどの酵素的オリゴヌクレオチドを設計、製造、試験及び最適化する方法は、当技術分野で知られており、本明細書に包含される（例えば、ＷＯ９１／０３１６２；ＷＯ９２／０７０６５；ＷＯ９３／１５１８７；ＷＯ９３／２３５６９；ＷＯ９４／０２５９５、ＷＯ９４／１３６８８；ＥＰ ９２１１０２９８；及び米国特許第５，３３４，７１１号を参照のこと、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0139】

アプタマー及びデコイ
いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アプタマー及び／またはデコイを含有する。本明細書で使用される場合、アプタマーは、特定の配列依存形状を呈し、高い親和性及び特異性で標的タンパク質に特異的にハイブリダイズする一本鎖核酸分子（ＤＮＡまたはＲＮＡなど）を指す。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのアプタマーは、一般に、長さが１００ヌクレオチド未満、７５ヌクレオチド未満、または５０ヌクレオチド未満である。本明細書で使用される「アプタマー」という用語は、Ｄ－オリゴヌクレオチドと比較して、酵素分解に対する耐性を付与する、鏡像アプタマー（複数可）（Ｌ－リボースまたはＬ－２’－デオキシリボース単位などの高親和性Ｌ－エナンチオマー核酸）を包含する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アプタマーＭａｃｕｇｅｎ（ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはＡＲＣ１７７９（Ａｒｃｈｅｍｉｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を含有する。さらなる実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アプタマーＭａｃｕｇｅｎ（ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはＡＲＣ１７７９（Ａｒｃｈｅｍｉｘ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）と結合する標的タンパク質と競合するオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、コンジュゲートは、ＴａｔまたはＲｅｖに結合するオリゴヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、コンジュゲートは、ＨＩＶ－１のＴａｔ、ヌクレオキャプシド、逆転写酵素、インテグラーゼ、またはＲｅｖに結合するオリゴヌクレオチドを含む。追加の実施形態では、コンジュゲートは、ｇｐ１２０、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ、Ｃ型肝炎ＮＳ３ｍペスト菌チロシンホスファターゼ、受容体チロシンキナーゼの細胞内ドメイン（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ヌクレオリン（ＡＭＬ）に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。アプタマーを作製及び同定する方法は当技術分野で知られており、これを定型的に改変して、所望の診断及び／または治療特性を有するアプタマーを同定し、これらのアプタマーを本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに組み込むことができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｌｏｔｚｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ９９（１３）：８８９８－８９０２ （２００２）を参照のこと。

【0140】

本明細書で使用する場合、「デコイ」という用語は、タンパク質などの因子が結合する核酸上の部位を模倣する短い二本鎖核酸（それ自体で「フォールドバック」するように設計された一本鎖核酸を含む）を指す。そのようなデコイは、因子の活性及び／または機能を競合的に阻害し、それによって低下させる。デコイを作製及び同定する方法は当技術分野で知られており、これを定型的に改変して、所望の診断及び／または治療特性を有するデコイを同定し、これらのデコイをＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体に組み込むことができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７１６，７８０号を参照のこと。

【0141】

低分子非コードＲＮＡ及びアンタゴニスト（ｍｉＲＮＡ及び抗ｍｉＲＮＡなど）
本明細書で使用する場合、「低分子非コードＲＮＡ」という用語は、限定されるものではないが、長さが１７～２９ヌクレオチドの範囲のポリヌクレオチド分子を包含するために使用される。一実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ、Ｍｉｒｓ、ｍｉＲｓ、ｍｉｒｓ、及び成熟ｍｉＲＮＡとしても知られる）である。

【0142】

「成熟」ｍｉＲＮＡとしても知られるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、発生、細胞増殖、アポトーシス、及び分化の重要な制御因子として同定されている低分子（長さ約２１～２４ヌクレオチド）非コードＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡが関与する特定の発達過程の例には、幹細胞の分化、神経新生、血管新生、造血、及びエキソサイトーシスが含まれる（Ａｌｖａｒｅｚ－Ｇａｒｃｉａ ａｎｄ Ｍｉｓｋａ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１３２：４６５３－４６６２ （２００５）により概説されている）。ｍｉＲＮＡは疾患状態で異常に発現することがわかっており、すなわち特定のｍｉＲＮＡは、健康な細胞または組織と比較して、疾患のある細胞または組織に高いレベルまたは低いレベルで存在する。

【0143】

ｍｉＲＮＡは、長い内因性一次ｍｉＲＮＡ転写物（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ、ｐｒｉ－ｍｉｒ、ｐｒｉ－ｍｉＲ、またはｐｒｉ－ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡとしても知られる）に由来すると考えられており、これらは多くの場合長さが数百ヌクレオチドである（Ｌｅｅ， ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ．， ２１（１７）：４６６３－４６７０ （２００２））。ｍｉＲＮＡが遺伝子発現を制御する機構の１つは、特定のｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）への結合によるものである。ＲＮＡ誘発サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれるｍｉＲＮＡヌクレオチド（ｎｔ）ＲＮＡ分子は、翻訳阻害、転写産物の切断、またはその両方を介して遺伝子発現のダウンレギュレーションを媒介する。ＲＩＳＣは、広範囲の真核生物の核における転写サイレンシングにも関与している。

【0144】

いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、疾患状態に関連するｍｉＲＮＡ活性を含む低分子非コードＲＮＡ活性を調節するためのＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び方法を提供する。本明細書で提供される特定のあるコンジュゲート及び組成物は、送達の改善、強力な活性及び／または治療指数の改善により、インビボ方法での使用に特に好適である。

【0145】

本開示は、ｍｉＲＮＡを含む低分子非コードＲＮＡを調節するためのＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ｍｉＲＮＡなどの１つまたは複数の低分子非コードＲＮＡのレベル、発現、プロセシングまたは機能を調節するためのＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ｍｉＲＮＡなどの低分子非コードＲＮＡと特異的にハイブリダイズする少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む、医薬組成物などの組成物を包含する。

【0146】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡなどの１つまたは複数の低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸分子と特異的にハイブリダイズするか、またはこれを立体的に妨害するオリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、本開示は、アンチセンス機構に依存するもの及びアンチセンス機構に依存しないものを含む、ｍｉＲＮＡのレベル、活性、または機能を調節するのに有用なＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート及び方法を提供する。

【0147】

本明細書で使用される場合、「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、「標的ＲＮＡ転写物」または「核酸標的」という用語は、ＲＮＡを含むがこれに限定されない、標的とすることができる任意の核酸を包含するために使用される。一実施形態では、標的核酸は、ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ前駆体を含むがこれらに限定されない非コード配列である。好ましい実施形態では、標的核酸は、ｍｉＲＮＡとも称され得るｍｉＲＮＡである。オリゴヌクレオチドが、ｍｉＲＮＡに対し、１００％を含む実質的に相補的な配列を含む場合、オリゴヌクレオチドは、「ｍｉＲＮＡを標的とする」。

【0148】

本明細書で使用される場合、オリゴヌクレオチドは、生理学的条件下で低分子非コードＲＮＡに特異的にハイブリダイズできる場合、例えば、低分子非コードＲＮＡなどのＲＮＡに「実質的に相補的」である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが、ｍｉＲＮＡの少なくとも８個の連続するヌクレオチドに対し、１００％を含む、実質的に相補的な配列を含む場合、オリゴヌクレオチドは「ｍｉＲＮＡを標的とする」。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡに特異的にハイブリダイズし、長さが約８～約２１ヌクレオチド、約８～約１８ヌクレオチド、または約８～約１４ヌクレオチドの範囲であるオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡに特異的にハイブリダイズし、長さが約１２～約２１ヌクレオチド、約１２～約１８ヌクレオチド、または約１２～約１４ヌクレオチドの範囲である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１のモノマーサブユニット（ヌクレオチド）である。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１４、１５、１６、１７、または１８のモノマーサブユニット（ヌクレオチド）である。

【0149】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡに対して完全長の相補性を有するオリゴヌクレオチドを含有する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の相補性の長さ、ならびにオリゴヌクレオチドと標的ｍｉＲＮＡとの間の最大３つの「ミスマッチ」において、オリゴヌクレオチドは依然として標的ｍｉＲＮＡとハイブリダイズすることができ、オリゴヌクレオチドの機能は実質的に損なわれない。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３’もしくは５’末端のいずれか、または３’及び５’末端の両方で、標的ｍｉＲＮＡの長さに関して最大６ヌクレオシドまでの切断または伸長を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ｍｉＲＮＡの長さと比較して、１つまたは２つのヌクレオシド分が切断されている。非限定的な例として、標的ｍｉＲＮＡが２２ヌクレオチドの長さであれば、実質的に完全長相補性を有するオリゴヌクレオチドは、長さが２０または２１ヌクレオチドであり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡと比較して、３’末端または５’末端のいずれかで１ヌクレオチド分が切断されている。

【0150】

いくつかの実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡを調節する方法であって、低分子非コードＲＮＡ、低分子非コードＲＮＡ前駆体（例えば、ｍｉＲＮＡ前駆体）または低分子非コードＲＮＡをコードする核酸に対して実質的に相補的である配列を含むオリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに、細胞を接触させることを含む、方法を提供する。本明細書で使用される場合、「低分子非コードＲＮＡ前駆体ｍｉＲＮＡ前駆体」という用語は、低分子（成熟）非コードＲＮＡが由来する任意のより長い核酸配列を包含するために使用され、限定されないが、一次ＲＮＡ転写産物、ｐｒｉ－低分子非コードＲＮＡ、及びｐｒｅ－低分子非コードＲＮＡを含んでもよい。例えば、「ｍｉＲＮＡ前駆体」は、ｍｉＲＮＡが由来する任意のより長い核酸配列を包含し、一次ＲＮＡ転写物、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ、及びｐｒｅ－ｍｉＲＮＡを含み得るが、これらに限定されない。

【0151】

いくつかの実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、低分子非コードＲＮＡのレベルを調節するか、その機能を調節するように作用するオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含有する医薬組成物などの組成物を提供する。さらなる実施形態では、本開示は、ｍｉＲＮＡを標的とし、ｍｉＲＮＡのレベルを調節するように作用するか、またはそのプロセシングもしくは機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含有する、医薬組成物などの組成物を提供する

【0152】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズする。

【0153】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、低分子非コードＲＮＡのレベルを低下させる、及び／または細胞内での機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0154】

他の実施形態では、組成物は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含有し、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ（例えば、非コードＲＮＡをコードする遺伝子の調節配列に結合することにより）、低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／または細胞内でその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する。

【0155】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡ核酸標的を含むかまたはコードする核酸にハイブリダイズして、通常の機能に変化をもたらすことによって、低分子非コードＲＮＡのレベル、発現、または機能を調節することができる。例えば、オリゴヌクレオチドが低分子非コードＲＮＡの活性（レベル、発現または機能を含む）を低下させ得る非限定的な機構には、切断、隔離、立体閉塞（ｓｔｅｒｉｃ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ）を介して、及び低分子非コードＲＮＡにハイブリダイズし、低分子非コードＲＮＡが通常の細胞標的（複数可）にハイブリダイズするのを防ぎ、その活性を制御することによって、低分子非コードＲＮＡの破壊を促進することが含まれる。

【0156】

別の実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡの活性を阻害する方法であって、細胞表面抗原を発現する細胞を、表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分、及び低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、細胞内での低分子非コードＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸に実質的に相補的な配列を含む。特定の実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。

【0157】

追加の実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡの活性を阻害する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、対象内での低分子非コードＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、標的核酸は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原を発現する細胞内にある。いくつかの実施形態では、標的核酸は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分が特異的に結合する細胞表面抗原を発現する細胞に近い細胞内にある。

【0158】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸に実質的に相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。

【0159】

追加の実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡの活性を増加させる方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、（例えば、非コードＲＮＡをコードする遺伝子の調節配列に結合することにより）低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／または細胞内でその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと細胞とを接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸と実質的に同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡ配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。特定の実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。

【0160】

別の実施形態では、本開示は、低分子非コードＲＮＡの活性を増加させる方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、対象内における低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、低分子非コードＲＮＡの活性が増加した細胞は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合された細胞表面抗原を発現する。いくつかの実施形態では、低分子非コードＲＮＡの活性が増加した細胞は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分が特異的に結合する細胞表面抗原を発現する細胞の近くにある。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸と実質的に同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡ配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。特定の実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。

【0161】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸と実質的に同じオリゴヌクレオチド配列を含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲＮＡ模倣物である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ模倣物は二本鎖である。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖であり、長さが１８～２３単位のオリゴヌクレオチドを含有し、平滑末端であるか、または１、２、もしくは３ヌクレオチドの１つまたは複数の３’オーバーハングを含むｍｉＲＮＡ模倣物を含有する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～２３単位である一本鎖ｍｉＲＮＡ模倣物を含む。これらのｍｉＲＮＡ模倣物を発現する発現ベクターを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートも、本開示に包含される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡ配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。特定の実施形態では、低分子非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。

【0162】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における低分子非コードＲＮＡの過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、対象における低分子非コードＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、核酸の活性が標的とされる細胞の細胞表面上、または近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは抗ｍｉＲＮＡ（抗ｍｉＲ）である。追加の実施形態では、抗ｍｉＲＮＡは二本鎖である。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖であり、長さが１８～２３単位のオリゴヌクレオチドを含有し、平滑末端であるか、または１、２、もしくは３ヌクレオチドの１つまたは複数の３’オーバーハングを含む抗ｍｉＲＮＡを含有する。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが８～２５単位である一本鎖抗ｍｉＲを含む。これらの抗ｍｉＲを発現する発現ベクターを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートも、本開示に包含される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、過剰発現した低分子非コードＲＮＡに実質的に相補的な配列を含む。

【0163】

さらなる実施形態では、本開示は、対象におけるｍｉＲＮＡの過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、ｍｉＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とし、対象におけるｍｉＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、核酸活性が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、核酸活性が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、過剰発現したｍｉＲＮＡに実質的に相補的な配列を含む。

【0164】

ｍｉＲＮＡのファミリーは、シード配列として知られる領域であるｍｉＲＮＡの２～８位のヌクレオチドの同一性を特徴とすることができる。ｍｉＲＮＡファミリーのメンバーは、本明細書において「関連ｍｉＲＮＡ」と称される。ｍｉＲＮＡファミリーの各メンバーは、ｍｉＲＮＡターゲティング及び機能において重要な役割を果たす同一のシード配列を共有している。本明細書で使用される場合、「シード配列」または「シード領域」という用語は、成熟ｍｉＲＮＡ配列の５’末端から２～９のヌクレオチドを指す。ｍｉＲＮＡファミリーの例は、当技術分野で知られており、限定されないが、ｌｅｔ－７ファミリー（９ｍｉＲＮＡを有する）、ｍｉＲ－１５ファミリー（ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ１５－１６、ｍｉＲ－１６－１、及びｍｉＲ－１９５を含む）、及びｍｉＲ－１８１ファミリー（ｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－１８１ｂ、及びｍｉＲ－１８１ｃを含む）。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡのシード領域に特異的にハイブリダイズし、ｍｉＲＮＡのプロセシングまたは機能を妨害する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡのシード領域に特異的にハイブリダイズし、複数のｍｉＲＮＡのプロセシングまたは機能を妨害する。さらなる実施形態では、複数のｍｉＲＮＡのうちの少なくとも２つは、関連するシード配列を有するか、またはｍｉＲＮＡスーパーファミリーのメンバーである。

【0165】

疾患、例としてがん、線維症、代謝障害及び炎症性障害を伴うｍｉＲＮＡ機能障害と、一般の細胞過程に含まれる遺伝子の完全なネットワークに影響を及ぼすｍｉＲＮＡの能力との関連付けによって、抗ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ模倣物を使用するｍｉＲＮＡの選択的調節が、特に魅力的な疾患調節療法になっている。いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、タンパク質の産生増加に影響を与える低分子非コードＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とするオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、対象における低分子非コードＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の産生が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の産生が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡに実質的に相補的な配列を含む。

【0166】

いくつかの実施形態では、本開示はまた、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、タンパク質の産生増加に影響を与えるｍｉＲＮＡを含むかまたはコードする核酸を標的とするオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、オリゴヌクレオチドは、対象におけるｍｉＲＮＡのレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の産生が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の産生が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡに実質的に相補的な（特異的にハイブリダイズ可能な）配列を含む。

【0167】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における低分子非コードＲＮＡの過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、対象における低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、低分子非コードＲＮＡが標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、低分子非コードＲＮＡが標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、過剰発現した低分子非コードＲＮＡに実質的に相補的な（特異的にハイブリダイズ可能な）配列を含む。

【0168】

さらなる実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるｍｉＲＮＡの過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、対象内における低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、低分子非コードＲＮＡが標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、低分子非コードＲＮＡが標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、過剰発現されたｍｉＲＮＡに実質的に相補的な配列を含む。

【0169】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、対象内における低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の発現が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の発現が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、低分子非コードＲＮＡに実質的に相補的な配列を含む。

【0170】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、低分子非コードＲＮＡを含むかもしくはコードし、または低分子非コードＲＮＡの内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させ、低分子非コードＲＮＡのレベルを増加させ、及び／または対象内でその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の発現が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、タンパク質の発現が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡに実質的に相補的な（特異的にハイブリダイズ可能な）配列を含む。

【0171】

別の実施形態では、本開示は、ｍｉＲＮＡ活性を阻害する方法であって、本明細書に記載のものなどの抗ｍｉＲＮＡ活性を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、ｍｉＲＮＡ活性の阻害を必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、ｍｉＲＮＡ活性が標的とされる細胞の表面上で発現する。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原は、ｍｉＲＮＡ活性が標的とされる細胞の近くの細胞の表面上で発現する。

【0172】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質（例えば、ｄｓＲＮＡ）、リボザイム、デコイ、アプタマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現できるプラスミドから選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。

【0173】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、またはすべての２’－Ｆ修飾オリゴヌクレオチドを含有する内部領域、及び少なくとも１つの安定性増強修飾を含む外部領域を含むキメラオリゴヌクレチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、第１の２’修飾ヌクレオチドを有する内部領域と、第２の２’修飾ヌクレオチドをそれぞれ含む外部領域とを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の２’－フルオロ修飾を含むギャップ領域を含有し、ウィング領域は、１つまたは複数の２’－メトキシエチル修飾を含む。一実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ ３９３２０６またはＩＳＩＳ ３２７９８５である。

【0174】

標的指向性部分
「標的指向性部分」という用語は、本明細書では、選択された標的、例えば、細胞表面抗原、細胞、細胞型、組織、器官、体の領域、またはコンパートメントに特異的に結合する能力を提供する分子を指すために使用される。標的指向性部分は、多種多様な実体を含むことができ、天然に存在する分子、または組換えもしくは合成分子を含むことができる。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、アプタマー、アビマー、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン－アビジン結合対、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ビタミン、微生物の成分、ホルモン、受容体リガンド（受容体リガンドを含有するＦｃ融合タンパク質を含む）、抗体、抗体の抗原結合部分、代替結合足場、または前述のいずれかの誘導体である。

【0175】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、抗体、抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓＦｖ、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、及びダイアボディ）、または単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、モノクローナル抗体、ヒト抗体（例えば、完全長ヒト抗体）、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、合成抗体、またはＰＥＧ化抗体である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、全長ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である。

【0176】

追加の実施形態では、標的指向性部分は、代替結合足場分子である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、アフィボディ、ナノボディ（ＶＨＨ）、ＶＮＡＲ、アンチカリン、フィノマー、ＤＡＲＰｉｎ、テトラネクチン、トランスボディ、アドネクチン、アフィリン、マイクロボディ、ペプチドアプタマー、アルタラーゼ、プラスチック抗体、フィロマー、ストラドボディ、マキシボディ、エビボディ、Ｚドメイン、Ｄドメイン、アルマジロリピートタンパク質、クニッツドメイン、アビマー、アトリマー、プロボディ、イムノボディ、トリオマブ、トロイボディ、ペップボディ（ｐｅｐｂｏｄｙ）ワクシボディ、ユニボディ、アフィマー、及びデュオボディ、から選択される代替結合足場である。

【0177】

種々の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、細胞表面抗原に特異的に結合することができる抗体（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及び単一ドメイン抗体）の抗原結合部分（断片）である。Ｆａｂ及びｓｃＦｖなどの抗体断片は、かさばらず、インビボ送達を妨げる場合があるＦｃドメインを欠いていることがあるため、全長抗体よりも利点がある。

【0178】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、活性化可能な抗体である。活性化可能な抗体は、疾患部位で高度に発現するプロテアーゼによって切断及び除去される阻害ドメインで抗体の結合部位をマスキングすることにより、疾患部位の領域への（すなわち、標的抗体への）標的指向性選択性を改善するように設計されたプロテアーゼ活性化抗体である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は活性化可能な抗体であり、抗体は、切断可能なリガンドによって少なくとも１つのオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、活性化可能な抗体の結合部位のマスクは、コンジュゲート中のオリゴ－ＨＥＳ複合体に抗体をコンジュゲートさせる少なくとも１つの切断可能なリンカーと同じプロテアーゼによって切断される。いくつかの実施形態では、活性化可能な抗体の抗原結合部位のマスクは、コンジュゲート中のオリゴ－ＨＥＳ複合体に抗体をコンジュゲートさせる少なくとも１つの切断可能なリンカーに対し異なるプロテアーゼによって切断される。例えば、いくつかの実施形態では、活性化可能な抗体（例えば、ＩｇＧ抗体）の抗原結合部位のマスクは、疾患部位（例えば、腫瘍）で高度に発現するプロテアーゼによって切断され、抗体をオリゴ－ＨＥＳ複合体にコンジュゲートするコンジュゲート中の少なくとも１つの切断可能なリンカーは、免疫補体系の酵素（例えば、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、またはプラスミン）によって切断される。活性化抗体は、国際出願公開番号ＷＯ２０１６／１７９２８５に記載されており、その内容は、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0179】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体である。いくつかの実施形態では、「治療用抗体」という用語は、治療標的分子に結合し、インビボで疾患の軽減または疾患の進行の低減をもたらすと予想される抗体を指す。いくつかの実施形態では、治療用抗体は、細胞表面抗原に特異的に結合する。さらなる実施形態では、「治療用抗体」という用語は、ヒト治療薬としての承認のために臨床研究で試験されている、または試験されており、疾患の治療のために個体に投与することができる抗体を意味する。さらなる実施形態では、「治療用抗体」は、少なくとも１つの規制機関によってヒト治療薬としての投与が承認されている。追加の実施形態では、治療用抗体は承認された抗体である。さらなる実施形態では、標的指向性部分は、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、（ＨＥＲ３）、オナルツズマブ（ｃ－ＭＥＴ）、パトリツマブ、クリバツズマブ（ＭＵＣ１）、ソフィツズマブ（ＭＵＣ１６）、エドレコロマブ（ＥＰＣＡＭ）、アデカツムマブ（ＥＰＣＡＭ）、アネツマブ（ＭＳＬＮ）、ｈｕＤＳ６（ＣＡ６）、リファスツズマブ（ＮＡＰＩ２Ｂ）、サシツズマブ（ＴＲＯＰ２）、ＰＲ１Ａ３、ヒト化ＰＲ１Ａ３（ＣＥＡ）、ヒト化Ａｂ２－３（ＣＥＡ）、ＩＭＡＢ３６２／クラウディキシマブ（クローディン１８．２）、ＡＭＧ５９５（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＡＢＴ８０６（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、ＤＳ－８８９５ａバリアント１（ＥｐｈＡ２）、ＤＳ－８８９５ａバリアント２（ＥｐｈＡ２）、抗ＥｐｈＡ２（ＥｐｈＡ２）、ＭＥＤＩ－５４７（ＥｐｈＡ２）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ＲＧ７８４１（ＬＹ６Ｅ）、ファルレツズマブ（ＦＲＡ／葉酸受容体アルファ）、ミルベツキシマブ（ＦＲＡ）、Ｊ５９１バリアント１（ＰＳＭＡ）、Ｊ５９１バリアント２（ＰＳＭＡ）、ロバルピツズマブ（ＤＬＬ３）、ＰＦ－０６６４７０２０（ＰＴＫ７）、抗ＰＴＫ７（ＰＴＫ７）、ラディラツズマブ（ＬＩＶ１）、シルムツズマブ（ＲＯＲ１）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ５２）、アレムツズマブ（ＣＤ３３）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ＣＴ－０１１（ＰＤ１）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ４）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）（ＣＴＬＡ４）、ニボルマブ（ＰＤ１）、ペムブロリズマブ（ＰＤ１）、デュルバルマブ（ＰＤＬ１）抗ＭＡＧＥ－Ａ３、または抗ＮＹ－ＥＳＯ－１；から選択される、治療用抗体である。

【0180】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体トラスツズマブである。

【0181】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体セツキシマブである。

【0182】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体リツキシマブである。

【0183】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）である。

【0184】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体ギレンツキシマブ（ＣＡＩＸ）である。

【0185】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体ニボルマブである。

【0186】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分は、治療用抗体ペムブロリズマブである。

【0187】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分によって特異的に結合される目的の標的は、目的の細胞または組織上またはその近くの細胞表面抗原である。特定の実施形態では、目的の細胞または組織は、疾患細胞、がん細胞、免疫細胞、感染細胞、または感染因子である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分によって特異的に結合される目的の標的は、疾患関連抗原である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、がん及び／または特定の細胞型（例えば、過剰増殖細胞）に特徴的な細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、免疫系の障害に関連する細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0188】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分によって特異的に結合される目的の標的は、感染細胞上で発現する表面抗原である。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、病原体などの感染因子（例えば、結核、天然痘、及び炭疽菌などの細菌細胞；ＨＩＶなどのウイルス；マラリア及びリーシュマニアなどの寄生虫；真菌感染；カビ；ならびにマイコプラズマ）に特異的に結合する。さらなる実施形態では、標的指向性部分によって結合される目的の標的は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、マイコプラズマ抗原、プリオン抗原、または寄生虫抗原（例えば、哺乳動物に感染するもの）である。一実施形態では、標的指向性部分の標的は、炭疽菌、ｂ型肝炎、狂犬病、ニパウイルス、ウエストナイルウイルス、髄膜炎ウイルス、またはＣＭＶである。追加の実施形態では、標的指向性部分は病原体に特異的に結合する。

【0189】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、結合時にコンジュゲートを内在化しない細胞表面抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、標的指向性部分は、結合時にコンジュゲートを内在化する細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、ネオアンチゲンなどの、特定の対象のがん（例えば、腫瘍）に由来するか、またはそのがんで発現されると判定された細胞表面抗原（複数可）に特異的に結合する。

【0190】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する。「腫瘍細胞表面抗原」（ＴＳＡ）という用語は、がんなどの特定の過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する。ＴＡＡは、腫瘍細胞及び一部の正常細胞の両方に見られる抗原である。ＴＡＡは、免疫系が未熟であり、応答することができない場合に胎児発育中に正常細胞で発現し得るか、または、通常、非常に低レベルで正常細胞上に存在し得るが、はるかにより高いレベルで、腫瘍細胞で発現する。腫瘍の動的な性質のため、場合によっては、腫瘍細胞はある特定の段階で固有の抗原を発現する場合があり、他の段階ではまた、非腫瘍細胞でも発現する抗原を発現する。したがって、ＴＡＡとしてある特定のマーカーを含めることは、それが腫瘍特異的抗原と考えられることを排除しない。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）である腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する。ＴＳＡは、腫瘍細胞に固有の抗原であり、体内の他の細胞には発生しない。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、原発性または転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌（ＮＳＣＬＣまたはＳＣＬＣなど）、肝臓癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、膠芽腫、神経芽腫、子宮癌、子宮頸癌、腎臓癌、甲状腺癌、膀胱癌、腎臓癌、中皮腫、及び腺癌、例として乳癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、結腸癌、及び当技術分野で知られている他のがん、を含むがこれらに限定されない、がんの表面に発現する腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、腫瘍微小環境内の細胞の表面に発現する細胞表面抗原（例えば、内皮細胞及びマクロファージにそれぞれ発現する、ＶＥＧＦＲ及びＴＩＥ１、またはＴＩＥ２などの抗原、または腫瘍間質細胞、例として、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、腫瘍浸潤Ｔ細胞及びその他の白血球、ならびにマスト細胞、好酸球、及び腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を含む骨髄細胞に発現する抗原、に特異的に結合する。

【0191】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、白血病細胞、リンパ腫細胞、膵臓癌細胞、乳癌細胞、黒色腫細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、卵巣癌細胞、膀胱癌細胞、大腸癌細胞、腎臓癌細胞、肝臓癌細胞、前立腺癌細胞、骨癌細胞、神経膠芽腫細胞を含む脳腫瘍細胞；またはリンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、白血病もしくは癌腫細胞上の腫瘍細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0192】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＣＡＭＰＡＴＨ－１、ＨＬＤ－ＤＲ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＴＡＧ－７２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１５、葉酸結合タンパク質、Ａ３３、Ｇ２５０、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フェリチン、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、Ｌｅｙ、ＣＡ－１２５、ＣＡ１９－９、上皮成長因子、ｐ１８５ＨＥＲ２、ＩＬ－２受容体、テネイシン、メタロプロテイナーゼ、エンドシアリン、血管内皮増殖因子、ａｖＢ３、ＷＴ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、Ｐ５３非変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、Ｐ５３変異体、ＰＲ１、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ＰＳＡ、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント融合タンパク質、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ－ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥＲＧ、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、フコシルＧＭ１、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ｓＬｅ（動物）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＶ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ １、Ｂ７Ｈ３、レグマイン、Ｔｉｅ ３、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＰＤＧＦＲ－Ｂ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＲＯＲ２、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、ＶＥＧＦＲ、エンドグリン、ＰＤＬ、ＶＴＣＮ１、及びＶＩＳＴＡ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0193】

追加の実施形態では、標的指向性部分は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＭＥＴ、ＨＥＲ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＰＣＡＭ、ＭＳＬＮ、ＣＡ６、ＮＡＰＩ２Ｂ、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＲＯＮ、ＬＹ６Ｅ、ＦＲＡ、ＰＳＭＡ、ＤＬＬ３、ＰＴＫ７、ＬＩＶ１、ＲＯＲ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、エンドグリン、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＣＤ３０１、ＶＴＣＮ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＬＰ－３、ＣＬＤＮ６、ＣＬＤＮ１６、ＵＰＫ１Ｂ、ＳＴＲＡ６、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４、ＴＭＥＭ２３８、Ｃ１ｏｒｆ１８６、及びＬＲＲＣ１５：から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0194】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、結合後にコンジュゲートを内在化する細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、ＧＯＮＭＢ、ＴＡＣＳＴＤ２（ＴＲＯＰ２）、ＣＥＡＣＡＭＳ、ＥＰＣＡＭ、葉酸受容体（例えば、葉酸受容体－α、葉酸受容体－βまたは葉酸受容体－δ）、ムチン１（ＭＵＣ－１）、ＭＵＣ－６、ＳＴＥＡＰ１、メソテリン、ネクチン４、ＥＮＰＰ３、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＳＬＣ４４Ａ４、ＮａＰｉ２ｂ、ＣＤ７０（ＴＮＦＳＦ７）、ＣＡ９（炭酸脱水酵素）、ＲＡＡＧ１２、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、ＳＬＴＲＫ６、ＳＣ－１６、組織因子、ＬＩＶ－１（ＺＩＰ６）、ＣＧＥＮ－１５０２７、Ｐカドヘリン、フィブロネクチン エクストラドメインＢ（ＥＤ－Ｂ）、ＶＥＧＦＲ２（ＣＤ３０９）、テネイシン、コラーゲンＩＶ、ペリオスチン、エンドセリン受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ６、ＩＧＦＲ－１、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、ＳＭＯ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１５、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２６、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１０５、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ｃｒｉｐｔｏ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦ－２Ｒ、ＥｐｈＡ１ ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ６、インテグリン（例えば、インテグリンａｖｂ３、ａｖｂ５、またはａｖｂ６）、Ｃ２４２抗原、Ａｐｏ２、ＰＳＧＲ、ＮＧＥＰ、ＰＳＣＡ、ＴＭＥＦＦ２、エンドグリン、ＰＳＭＡ、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＤＤＲ１、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、ＵＦＯ、ＬＴＫ、ＡＬＫ、Ｔｉｅ１、Ｔｉｅ２、ＰＴＫ７、Ｒｙｋ、ＴＣＲ、ＮＭＤＡＲ、ＬＮＧＦＲ、及びＭｕＳＫ、から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0195】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、腫瘍微小環境細胞表面抗原（ある特定の膜固定型プロテアーゼを含む）に特異的に結合する。さらなる実施形態では、標的指向性部分は、内皮細胞もしくはマクロファージに発現する細胞表面抗原（例えば、ＶＥＧＦＲ、ＴＩＥ１、及びＴＩＥ２）、または腫瘍間質細胞、例としてがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、腫瘍浸潤Ｔ細胞及びその他の白血球、ならびにマスト細胞、好酸球、及び腫瘍関連マクロファージを含む骨髄細胞に発現する細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0196】

いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４ ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＴＬＡ、Ａ２ａＲ及びＣＤ７３から選択される細胞表面抗原に特異的に結合する。

【0197】

追加の実施形態では、標的指向性部分は、免疫細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、疾患、活性化、白血病性または正常である。さらなる実施形態では、標的指向性部分は、１つまたは複数の免疫細胞上で発現する細胞表面抗原に特異的に結合し、これには、限定されるものではないが、骨髄由来のリンパ球、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、樹状細胞、またはそのサブセット、が含まれ得る。いくつかの実施形態では、標的指向性部分は、リンパ系もしくは骨髄系起源の免疫細胞上に、例としてＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、または樹状細胞などの上に発現する細胞表面抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、巨核球、血小板、赤血球、マスト細胞、好塩基球、好中球、好酸球、またはそれらのサブセット上に見出される。

【0198】

さらなる実施形態では、標的指向性部分は、抗原提示細胞上の細胞表面抗原に特異的に結合する。さらなる実施形態では、標的指向性部分は、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＭＡＲＣＯ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、デクチン１、デクチン２、ＤＥＣ－２０５、ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＬＥＣ９Ａ、ＣＬＥＣ１０Ａ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＤ１Ａ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３６、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＣＤ６４、ＣＤ２０４、ＣＤ２０６、ＨＶＥＭ、ＰＤＬ１、マンノーススカベンジャー受容体１、及びＢＤＣＡ２から選択される抗原に特異的に結合する。

【0199】

リンカー
いくつかの実施形態では、標的オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数のリンカーを含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的指向性部分とオリゴ－ＨＥＳ複合体のオリゴヌクレオチドとを接続するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１～３０個、１～２０個、１～１０個、または１～５個のオリゴ－ＨＥＳ複合体をＴ－オリゴ－ＨＥＳ複合体の標的指向性部分に接続する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドを標的指向性部分に接続する複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドを標的指向性部分に接続する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１～１０、１～１５、または１～２０個のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドを標的指向性部分に接続する１～３０、１～２０、１～１０、または１～５個のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーのうちの１、２、３、４個、またはそれ以上が異なっている。いくつかの実施形態では、リンカーのうちの１、２、３、４個、またはそれ以上、またはすべてが同じである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドをＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中の標的指向性部分に接続するリンカーのうちの１、２、３、４個、またはそれ以上、またはすべてが同じである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドをＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中の標的指向性部分に接続するリンカーの１、２、３、４個、またはそれ以上が異なっている。

【0201】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートに含まれるオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間にリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間に複数のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１～１０、１～１５、または１～２０個のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間のリンカーのうちの１、２、３、４個、またはそれ以上、またはすべてが同じである。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間のリンカーのうちの１、２、３、４個、またはそれ以上が異なっている。

【0202】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的指向性部分とコンジュゲートのオリゴヌクレオチドとを接続するリンカーを含み、コンジュゲートはまた、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間にリンカーを含む。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的指向性部分とコンジュゲートのオリゴヌクレオチドとを接続する複数のリンカーを含み、コンジュゲートはまた、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチド間に複数のリンカーを含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、単一のヌクレオチド配列として本明細書に記載のリンカーのいずれかに連結されたオリゴ－ＨＥＳ－コンジュゲートの提供された標的指向性部分をコードするベクターが提供され、これを使用して、そのような標的指向性部分－リンカー複合体を調製することができる。

【0204】

いくつかの実施形態では、リンカーの長さにより、標的指向性部分及びＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが目的の細胞表面抗原（例えば、本明細書に記載のがん表面抗原、免疫細胞表面抗原、または感染因子表面抗原）に効率的に結合することが可能になる。好ましくは、リンカーの長さは、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中の標的指向性部分とオリゴ－ＨＥＳ複合体との間の間隔を最適化し、別様にリンカー機能を最適化する。

【0205】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、様々なリンカー配列を含有することができ、各Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、異なる組成を含有する異なるリンカーを含むことができる。例えば、オリゴヌクレオチドをコンジュゲートの標的指向性部分に接続するリンカーは、長さが１５～３０アミノ酸残基の直鎖状ペプチドであってもよく、一方、コンジュゲートのオリゴ－ＨＥＳ複合体におけるオリゴヌクレオチド間のリンカーは、Ｃ２～６、Ｃ１０、またはＣ１８直鎖アルキルなどの直鎖または分岐鎖アルキルであり得る）。

【0206】

種々の実施形態では、リンカーは、天然に存在するマルチドメインタンパク質に由来し得るか、または例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ． ２２（２）：１５３－１６７ （２０１３）， Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ． ６５（１０）：１３５７－１３６９ （２０１３）に記載される経験的リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ． ６５（１０）：１３５７－１３６９ （２０１３）， ａｎｄ Ｃｒａｓｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． １３（５）：３０９－３１２ （２０００）に記載されているものなどの、リンカー設計データベース及びコンピュータプログラムを使用して設計される。種々の実施形態では、リンカーは機能的であり得る。例えば、これらに限定されないが、リンカーは、フォールディング及び／または安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／またはＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの生物活性を改善するように機能し得る。

【0207】

リンカー（複数可）は直鎖状または分岐鎖状であり得る。特定の実施形態では、望ましくないホモポリマー形成を排除するヘテロ二官能性架橋剤が使用される。

【0208】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ペプチドリンカー（例えば、標的指向性部分とオリゴ－ＨＥＳ複合体のオリゴヌクレオチドとを接続するペプチドリンカー）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、５０未満のアミノ酸残基の長さである。例えば、ペプチドリンカーは、長さが５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３未満のアミノ酸残基であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、長さが２～５０、２～４０、２～３０、または２～２０、２～１５、または２～１０のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、長さが最大１５または最大３０のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、長さが５～５０、１０～４０、または１５～３０のアミノ酸残基である。さらなる実施形態では、リンカーは、直鎖状ペプチド（例えば、長さが最大１５、最大３０、５～５０、１０～４０、または１５～３０アミノ酸残基の直鎖状ペプチド）である。

【0209】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的指向性リガンド（例えば、抗体）と剛性リンカーアームを提供するプロテアーゼ基質との間にプロテアーゼ基質－治療用オリゴコンジュゲート連結アーム（カーゴ－プロジェクションアーム）（Ｃａｒｇｏ－Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ Ａｒｍ）リンカーアームを含む。いくつかの実施形態では、リンカーアームは、配列５’－ＣＵＣＵＣＣＴＴＣＴＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＴＣＡＡＡＡＵＵ－３’（配列番号８０）を含む。さらなる実施形態では、リンカーアームは、配列５’－［Ｃ６アミノリンカーアーム］－ＣＵＣＵＣＣＴＴＣＴＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＴＣＡＡＡＡＵＵ［Ｃ６アミノリンカーアーム］－３’（配列番号８０）を含む。さらなる実施形態では、リンカーアームのヌクレオチドは、配列５’－［Ｃ６アミノリンカーアーム］－ＣＵＣＵＣＣＴＴＣＴＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＴＣＡＡＡＡＵＵ［Ｃ６アミノリンカーアーム］－３’（配列番号８０）を含み、これは、オリゴのそれぞれの結合においてホスホロチオエート主鎖である。さらなる実施形態では、リンカーアームのヌクレオチドは、配列５’－［Ｃ６アミノリンカーアーム］－ＣＵＣＵＣＣＴＴＣＴＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＴＣＡＡ^ｘＡ^ｘＡ^ｘＵ^ｘＵ^ｘ［Ｃ６アミノリンカーアーム］－３’（配列番号８０）を含み、これは、オリゴの各結合におけるホスホロチオエート主鎖であり、^Ｘは糖の２’ＯＨ基上の２’ＯＭｅ修飾を示す。いくつかの実施形態では、オリゴリンカーアームは、配列５’－ＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡ－３’（配列番号８１）を有するセンス鎖をさらに含む。理論に束縛されることを望むものではないが、リンカーアーム、すなわち抗体とプロテアーゼ基質との間のカーゴプロジェクションアームに対するこのセンス鎖の存在は、アームの剛性を増大し、それによってプロテアーゼ基質を標的細胞膜に向かって突出させ、そうして、細胞表面に発現したプロテアーゼが、標的リガンド（抗体など）に結合した基質を認識して切断できるようにする。それにより、プロテアーゼ基質ペプチドの半分を有する治療用オリゴヌクレオチドが抗体から放出される。

【0210】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲートのリンカーは切断不可能である。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、切断可能な１つまたは複数のリンカー及び切断不可能な１つまたは複数のリンカーを含む。

【0211】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、細胞外プロテアーゼなどの少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、Ｐ１－Ｐ１’残基を含有し、ループ構造を有するプロテアーゼ切断部位を含むアミノ酸配列を有する。目的のプロテアーゼの基質である好適なアミノ酸配列は、さまざまな既知の技術のいずれかを使用して定型的に同定することができる。例えば、ペプチド基質は、米国特許第７，６６６，８１７号、同第８，５６３，２６９号、及び国際公開番号ＷＯ２０１４／０２６１３６に記載される方法を用いて同定が可能であり、これらのそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。（Ｂｏｕｌｗａｒｅ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ． １０６（３）： ３３９－３４６ （２０１０））も参照のこと）。

【0212】

特定の実施形態では、リンカーは、立体配座依存性切断部位を含むペプチドである。この立体配座依存性切断プロテアーゼ基質は、直鎖状配列プロテアーゼ切断部位と比較して特異性及び感受性の増加をもたらす明確な二次構造を提供すると考えられている。後者は、少量の標的プロテアーゼで基質の切断が可能になる。

【0213】

さらなる特定の実施形態では、リンカーは、本明細書にさらに記載されるように、剛性であり、プロテアーゼが局在する標的細胞表面に対し抗体から外側にプロテアーゼ基質を物理的に露出させると考えられるカーゴプロジェクションアームを含む。

【0214】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、疾患組織において活性である少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、活性であり、及び／またはＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの標的指向性部分によって特異的に結合される細胞表面抗原を発現する細胞と共局在する（例えば、腫瘍及び／または腫瘍微小環境において）少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、炎症においてアップレギュレートされるか、またはアップレギュレートされると考えられる少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、自己免疫においてアップレギュレートされるか、またはアップレギュレートされるかもしくは別様に無制御であると考えられる少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。

【0215】

いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、がんにおいてアップレギュレートされるか、またはアップレギュレートされるかもしくは別様に無制御であると考えられる少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ１～３、ＭＭＰ７～１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７）、トロンビン、エラスターゼ（例えば、ヒト好中球エラスターゼ）、システインプロテアーゼ（例えば、レグマイン及びクルジパイン）、セリンプロテアーゼ（例えば、カテプシンＣ、及びＤＥＳＣ１、ＦＡＰ、マトリプターゼ－２、ＭＴ－ＳＰ１／マトリプターゼ、及びＴＭＰＲＳＳ２－４などのＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（ＴＴＳＰ））、ウロキナーゼ（ｕＰＡ）、アスパラギン酸プロテアーゼ（例えば、ＢＡＣＥ及びレニン）；アスパラギン酸カテプシン（例えば、カテプシンＤ）、及びスレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。

【0216】

いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、ヘプシン（ＨＰＮ）、フリン、マトリプターゼ、マトリプターゼ－２、ゼラチナーゼ（例えば、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ ２）、及びプロゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ ９）及びプロゼラチナーゼＡ）、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４（ＣＡＰ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、カリクレイン関連ペプチダーゼ（ＫＬＫファミリー）、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、及びＫＬＫ１４、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。

【0217】

いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、及びＡＤＡＭＴＳ５から選択されるトロンボスポンジンモチーフ（ＡＤＡＭＴＳ）を有する少なくとも１つのＡＤＡＭの基質であるアミノ酸配列を含む。

【0218】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、（ａ）ＭＭＰ９；（ｂ）ＭＭＰ１４；（ｃ）ＭＭＰ１、ＭＭＰ２（例えばゼラチナーゼＡ）、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、及びＭＭＰ２７；（ｄ）セリンプロテアーゼ（例えば、ＭＴ－ＳＰ１及びｕＰＡ）；（ｅ）システインプロテアーゼ；（ｆ）（ａ）～（ｃ）を含むメタロプロテアーゼ；（ｇ）アスパルチルプロテアーゼ；及び（ｈ）スレオニンプロテアーゼ、から選択される少なくとも１つのプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、少なくとも１つのＭＭＭＰの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４の基質であるアミノ酸配列を含む。

【0219】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡＤＡＭＳ／ＡＤＡＭＴＳ（例えば、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５）；カテプシンＥ）；カスパーゼ（例えば、カスパーゼ１－１０、及びカスパーゼ１４）；システインカテプシン（例えば、カテプシンＢ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、及びカテプシンＸ／Ｚ／Ｐ）；ＫＬＫ（例えば、ＫＬＫ４－８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、及びＫＬＫ１４）；メタロプロテイナーゼ（例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡ、及びＢＭＰ１）；カテプシンＡ、キマーゼ、凝固因子プロテアーゼ（例：ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、及びＦＸＩＩａ）；グランザイムＢ；グアニジノベンゾアターゼ；ＨｔｒＡｌ；ラクトフェリン；マラプシン；ＮＳ３／４Ａ；ＰＡＣＥ４；プラスミン；ＰＳＡ、ｔＰＡ；トリプターゼ；ＤＰＰ－４；及びヘプシン、から選択される少なくとも１つの酵素またはプロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。

【0220】

プロテアーゼの切断部位を含有する基質に好適なアミノ酸配列は当技術分野で知られており、本明細書で提供される切断可能なリンカーの配列に含めることができる。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、それぞれの内容は、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際出願公開番号ＷＯ２０１９０１８８２８Ａ１（例えば、段落１０５～１１７、及び表４、表６、６８ページ、及び配列識別子番号３９３（３５６～４２３、６８０～６９８、７１３、７１４、７８９～８０８、及び１０３７）のそれぞれに対応する基質配列を参照のこと）、及びＷＯ２０１６／１７９２８５（例えば、４０～４７ページを参照のこと）、に開示されたプロテアーゼ基質のアミノ酸配列を含む切断可能なリンカーを含有する。

【0221】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、免疫補体系（補体カスケード）の酵素、例として、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、及びプラスミンであるが、これらに限定されないもの、によって切断されるリンカーを含有する。これらのコンジュゲートの標的指向性部分は、好ましくは、補体を活性化できる抗体を含有し、コンジュゲート中の抗体は、抗原に結合する能力と補体カスケードを活性化する能力の両方を保持する。一実施形態によれば、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、補体による切断を受けやすいリンカーを介して抗体にコンジュゲートされる。したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下で抗原に結合すると、リンカーが切断され、オリゴ－ＨＥＳ複合体がコンジュゲートから放出される。したがって、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、補体カスケードを活性化し、標的部位でオリゴ－ＨＥＳ複合体を放出する。別の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体は、ｕ－プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、プラスミン、またはトリプシンなどのタンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して付着／コンジュゲートされる。

【0222】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、細胞内環境（例えば、リソソームもしくはエンドソームまたはカベオラ内）に存在する切断剤によって切断可能なリンカーを含む。このリンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含むが、これらに限定されない細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、長さが少なくとも２または３アミノ酸残基のペプチドである。切断剤は、カテプシンＢ及びＤならびにプラスミンを含み得、これらのすべてがジペプチド薬物誘導体を加水分解して、標的細胞内での活性薬物の放出をもたらすことが知られている（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ， Ｐｈａｒｍ． Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３ （１９９９） を参照のこと）。最も典型的なものはペプチジルリンカーである。特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、がん組織で高度に発現しているカテプシン－Ｂによって切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列Ｐｈｅ－ＬｅｕまたはＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号９）、または本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２１４，３４５号に開示されているカテプシンＢ切断可能アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ－ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーである（例えば、米国特許第６，２１４，３４５号を参照のこと）。

【0223】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｐＨ感受性切断可能リンカー、すなわち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性のリンカーを含有する。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは酸性条件下で加水分解性である。例えば、リソソーム中で加水分解性である酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ－アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することができる。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号；同第５，６２２，９２９号；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ， Ｐｈａｒｍ． Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３ （１９９９）；及びＮｅｖｉｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４：１４６５３－１４６６１ （１９８９）を参照のこと）。このようなリンカーは、血液中などの中性ｐＨ条件下では比較的安定であるが、リソソームのおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満では不安定である。ある特定の実施形態では、加水分解性リンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介して標的指向性部分に付着したチオエーテルなど）である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照のこと）。

【0224】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、還元条件下で切断可能なリンカー（例えば、ジスルフィドリンカー）を含有する。様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で知られており、例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ （Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ （Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチレート）、及びＳＭＰＴ （Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル） －α－メチル－α－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）－、ＳＰＤＢ及びＳＭＰＴ、を使用して形成できるもの が挙げられる。（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７：５９２４－５９３１ （１９８７）；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ： Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ （Ｃ． Ｗ． Ｖｏｇｅｌ ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ． Ｐｒｅｓｓ， １９８７）を参照のこと ） 。米国特許第４，８８０，９３５号も参照のこと）。

【0225】

他の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、マロネートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １５：１３８７－９３ （１９９５））、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ－Ｍｅｄ－Ｃｈｅｍ． ３（１０）：１２９９－１３０４ （１９９５））、または３’－Ｎ－アミド類似体（Ｌａｕ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ－Ｍｅｄ－Ｃｈｅｍ． ３（１０）：１３０５－１３１２ （１９９５））を含有する。

【0226】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アミノ末端残基またはカルボキシル末端残基にコンジュゲートされたＨ－二量体形成フルオロフォアを有するリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ末端残基及びカルボキシル末端残基にコンジュゲートしたＨ－二量体形成フルオロフォアを有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチドのアミノ末端及びカルボキシル末端にスルフヒドリルまたはアミノ官能基を有する。

【0227】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、オリゴ－ＨＥＳ複合体が標的に送達されるが放出されないように設計され得る。これは、オリゴ－ＨＥＳ複合体を標的指向性部分に直接または切断不可能なリンカーを介して付着させることによって達成することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、切断不可能なリンカーを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的指向性部分に直接連結されたオリゴ－ＨＥＳ複合体を含有する。

【0228】

これらの切断不可能なリンカーは、アミノ酸、ペプチド、Ｄ－アミノ酸、または修飾されて、本明細書に記載の方法によるＡＢへの付着に後で利用することができる官能基を含むことができる他の有機化合物を含み得る。

【0229】

好ましくは、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのリンカーは、正常な血漿環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーとの関係における「正常な血漿環境に対して実質的に感受性ではない」とは、標的化オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート化合物が正常な対象の血漿中に存在する場合、試料中の、標的化オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート化合物のリンカーの約２０％以下、典型的には約１５％以下、より典型的には約１０％以下、さらにより典型的には、約５％以下、約３％以下、または約１％以下が切断されることを意味する。リンカーが正常な血漿環境に対して実質的に感受性ではないかどうかは、例えば、標的化オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを所定の時間（例えば、２、４、８、１６、または２４時間）血漿とインキュベートし、次に、血漿中の遊離オリゴ－ＨＥＳ複合体の量を定量化することによって決定することができる。

【0230】

いくつかの実施形態では、ＡＢ上の複数の部位での単一部位リンカーの付着によって、より高い比活性（またはＡＢに対する薬剤のより高い比率）を達成することができる。この複数の部位は、２つの方法のいずれかによってＡＢに導入され得る。第１に、同じＡＢ内に複数のアルデヒド基及び／またはスルフヒドリル基を生成することができる。第２に、ＡＢのアルデヒドまたはスルフヒドリルに、その後のリンカーへの付着のための複数の官能性部位を有する「分岐鎖リンカー」を付着させることができる。分岐鎖リンカーまたは多部位リンカーの官能性部位は、アルデヒドまたはスルフヒドリル基であってもよく、またはリンカーが付着することができる任意の化学部位であってもよい。この２つのアプローチを組み合わせること、つまり複数の部位を付着させることで、さらに高い比活性が得られる場合がある。加えて、薬剤は、ジスルフィド結合（例えば、システイン分子上のジスルフィド結合）を介してＡＢに付着することができる。多くの腫瘍は高レベルのグルタチオン（還元剤）を天然に放出するため、これによりジスルフィド結合が還元され、その後送達部位で薬剤が放出され得る。いくつかの実施形態では、ＣＭを修飾する還元剤は、コンジュゲートされた活性化可能抗体のリンカーも修飾する。

【0231】

製造方法：
本開示は、オリゴ－ＨＥＳ複合体を標的指向性部分にコンジュゲートするためのいくつかの方法、例えば、（ａ）標的指向性部分（例えば、抗体）の炭水化物部分への付着、（ｂ）標的指向性部分（例えば、抗体）のスルフヒドリル基への付着、（ｃ）標的指向性部分（例えば、抗体）のアミノ基への付着、及び（ｄ）標的指向性部分（例えば、抗体）のカルボキシレート基への付着、を利用する。本開示によれば、標的指向性部分は、１つは標的指向性部分と反応し、もう１つはオリゴ－ＨＥＳ複合体と反応する少なくとも２つの反応性基を有する中間リンカーを介して、オリゴ－ＨＥＳ複合体に共有結合されてもよい。任意の適合性有機化合物を含むことができるリンカーは、標的指向性部分及びオリゴ－ＨＥＳ複合体との反応が、標的指向性部分の反応性及び選択性、またはオリゴ－ＨＥＳ複合体の活性に悪影響を及ぼさないように選択することができる。

【0232】

酸化抗体または酸化抗体断片などの酸化ポリペプチド標的指向性部分との反応に好適なリンカーとしては、第一級アミン、第二級アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、フェニルヒドラジン、セミカルバジド及びチオセミカルバジド基からなる群から選択されるアミンを含有するものが挙げられる。そのような反応性官能基は、リンカーの構造の一部として存在し得るか、またはそのような基を含有しないリンカーの好適な化学修飾によって導入され得る。

【0233】

還元抗体または還元抗体断片などの還元ポリペプチド標的指向性部分との反応に好適なリンカーには、還元抗体または断片のスルフヒドリル基と反応することができるある特定の反応基を有するリンカーが含まれる。そのような反応性基には、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基を含む）、ｐ－メルクリベンゾエート基、及びマイケル型付加反応が可能な基（例えば、マレイミド及びＭｉｔｒａ ａｎｄ Ｌａｗｔｏｎ， １９７９， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １０１： ３０９７－３１１０）によって記載されたタイプの基が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【0234】

抗体または抗体断片などの酸化も還元もされないポリペプチドへの付着に好適なリンカーには、標的指向性部分の非修飾リジン残基に存在する一級アミノ基と反応することができるある特定の官能基を有するリンカーが含まれる。そのような反応性基には、ＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、スルホ－ＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、４－ニトロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、ペンタフルオロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、アシルイミダゾール、イソシアネート、及びイソチオシアネートが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、好適なリンカーには、好適な試薬で活性化された、標的指向性部分のアスパルテート残基またはグルタメート残基に存在するカルボン酸基と反応することができるある特定の官能基を有するリンカーが含まれる。好適な活性化試薬には、ＮＨＳまたはスルホ－ＮＨＳを加えたまたは加えていないＥＤＣ、及びカルボキサミド形成に利用される他の脱水剤が含まれる。これらの場合、好適なリンカーに存在する官能基には、第一級及び第二級アミン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、及びヒドラジドが含まれる。

【0235】

オリゴ－ＨＥＳ複合体は、リンカーを標的指向性部分に付着させる前または付着させた後に、リンカーに付着させることができる。ある特定の用途では、リンカーがオリゴ－ＨＥＳ複合体を含まない標的指向性部分－リンカー中間体を最初に生成することが望ましい場合がある。特定の用途に応じて、オリゴ－ＨＥＳ複合剤をリンカーに共有結合させることができる。

【0236】

治療方法：
本開示はまた、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート、及びコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドによってコードまたは制御される核酸及びタンパク質を調節するための方法も提供する。特定の実施形態では、本開示は、インビボで対象の標的化または局在化細胞（複数可）におけるｍＲＮＡ、低分子非コードＲＮＡ（例えば、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子、またはタンパク質のレベル、発現、プロセシングまたは機能を調節するための組成物及び方法を提供する。

【0237】

いくつかの実施形態では、本開示は、オリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することによって、インビボでオリゴヌクレオチドを細胞にターゲティング及び送達する方法を提供する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、治療用オリゴヌクレオチドである。

【0238】

したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、組成物、例として、（ａ）生理学的条件下で標的核酸配列とハイブリダイズ可能な少なくとも１つのオリゴヌクレオチド、及び（ｂ）標的核酸を含有する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。

【0239】

いくつかの実施形態では、本開示は、それを必要とする対象へのオリゴヌクレオチドの標的化及び／または局所送達のための方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含み、コンジュゲートは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）または標的遺伝子を調節するのに十分な治療有効量のオリゴヌクレオチド、及び標的ＲＮＡまたは標的遺伝子を含有する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含有する。

【0240】

一実施形態によれば、本開示は、対象における標的核酸を調節する方法であって、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、複合体のオリゴヌクレオチドは、核酸に特異的にハイブリダイズして核酸のレベルを調節するか、またはそのプロセシングもしくは機能を妨害する、標的核酸に実質的に相補的な配列を含み、コンジュゲートは、標的核酸を含有する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含有する、方法を提供する。いくつかの実施形態では、標的核酸はＲＮＡであり、さらなる実施形態では、ＲＮＡはｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対象の１つまたは複数の細胞または組織において、標的ＲＮＡのレベルを少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低下させる。いくつかの実施形態では、標的核酸はＤＮＡである。

【0241】

一実施形態によれば、本開示は、対象におけるタンパク質を調節する方法であって、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、複合体のオリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードするか、またはタンパク質の転写、翻訳、産生、プロセシングまたは機能に影響を与える核酸に実質的に相補的な配列、及びタンパク質が調節される細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはＲＮＡに特異的にハイブリダイズする。さらなる実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対象の１つまたは複数の細胞または組織において、タンパク質または標的ＲＮＡのレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低下させる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはＤＮＡに特異的にハイブリダイズする。

【0242】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質（例えば、ｄｓＲＮＡ）、アプタマー、デコイ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現できるプラスミドから選択される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＲＮＡをコードする配列に特異的にハイブリダイズする。その他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡをコードするＤＮＡ配列またはその調節配列に特異的にハイブリダイズする。

【0243】

追加の実施形態では、核酸またはタンパク質の発現は、それを必要とする対象に、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及び核酸またはタンパク質が調節される細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって、対象において調節される。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡに結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。本明細書で使用される場合、「ギャップマー」は、２つの外部隣接領域（「ウイング」または「ウイングセグメント」とも称される）の間に位置する中央領域（「ギャップ」叉は「ギャップセグメント」とも称される）を有するアンチセンス化合物を指す。領域は、それぞれの異なる領域を構成する糖部分のタイプにより区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分のタイプとしては、いくつかの実施形態では、β－Ｄ－リボヌクレオシド、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド、２’－修飾ヌクレオシド（そのような２’－修飾ヌクレオシドとして、例えば、特に、２’－ＭＯＥ、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－－ＣＨ３などを挙げることができる）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドとしては、特に、ＬＮＡ（商標）またはＥＮＡ（商標）を挙げることができる）が挙げられる。

【0244】

いくつかの実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドの各ウイングは、同じ数のサブユニットを含む。他の実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドの一方のウイングは、ギャップマーの他方のウイングとは異なる数のサブユニットを含む。一実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドのウイングは、独立して、１～約５ヌクレオシドを有し、そのうち１，２、３、４または５のウイングヌクレオシドは糖修飾ヌクレオシドである。一実施形態では、中央またはギャップ領域は、８～２５のβ－Ｄ－リボヌクレオシドまたはβ－Ｄ－デオキシリボヌクレオシドを含む（すなわち、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２４または２５ヌクレオシドである）。さらなる実施形態では、中央またはギャップ領域は、１７～２４のヌクレオチドを含む（すなわち、長さが１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４のヌクレオシドである）。いくつかの実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルヌクレオチド間連結、ホスホロチオエートヌクレオチド間連結、またはホスホジエステルヌクレオチド間連結とホスホロチオエートヌクレオチド間連結との組み合わせを含む。特定の実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドの中央領域は、少なくとも２、３、４、５、もしくは１０の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。特定の実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドの中央領域は、少なくとも１０のβ－Ｄ－２’－デオキシ－２’－フルオロリボフラノシルヌクレオシドを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの中央領域中の各ヌクレオシドは、β－Ｄ－２’－デオキシ－２’－フルオロリボフラノシルヌクレオシドである。一実施形態では、ギャップマーオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡとの長さ相補性にわたって完全に相補的である。一実施形態では、ギャップマーの一方または両方のウイングは、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオシドを含有する。一実施形態では、ギャップマーの一方または両方のウイングは、１、２または３個の２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを含有する。一実施形態では、ギャップマーの一方または両方のウイングは、１、２または３個の２’－ＯＣＨ３修飾ヌクレオシドを含有する。別の実施形態では、ギャップマーの一方または両方のウイングは、１、２または３個のＬＮＡまたはアルファ－ＬＮＡヌクレオシドを含有する。いくつかの実施形態では、ギャップマーのウイング中のＬＮＡまたはアルファＬＮＡは、ＬＮＡの６’（２’，４’－拘束－２’－Ｏ－エチルＢＮＡ，Ｓ－ｃＥｔ）または５’位（－５’－Ｍｅ－ＬＮＡまたは－５’－Ｍｅ－アルファＬＮＡ）に（Ｒ）または（Ｓ）配置で１つもしくは複数のメチル基を含むか、またはＬＮＡもしくはアルファＬＮＡ中の２’－酸素原子の代わりに置換された炭素原子を含有する。さらなる実施形態では、ギャップマー中のＬＮＡまたはアルファＬＮＡは、５’位に立体バルク部分（例えば、メチル基）を含有する。さらなる実施形態では、ギャップは、少なくとも１つの２’フルオロ修飾ヌクレオシドを含む。追加の実施形態では、ウィングは、長さがそれぞれ２または３ヌクレオシドであり、ギャップ領域は、長さが１９ヌクレオチドである。追加の実施形態では、ギャップマーは、少なくとも１つの５－メチルシトシンを有する。

【0245】

別の実施形態では、中央領域（ギャップ）のヌクレオシドは、外部ウイング領域の一方または両方の糖部分とは異なる均一な糖部分を含有する。１つの非限定的な例において、ギャップは、第１の２’－修飾ヌクレオシドから均一に構成され、ウイングのそれぞれは、第２の２’－修飾オリゴヌクレオシドから均一に構成される。例えば、一実施形態では、中央領域は、それぞれが２つの２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオチド（２’－ＭＯＥ／２’－Ｆ／２’－ＭＯＥ）を有する外部領域が各末端に隣接する２’－Ｆ修飾ヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、ギャップマーは、ＩＳＩＳ ３９３２０６である。別の実施形態では、中央領域は、それぞれが２つの２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオチド（２’－ＭＯＥ／２’－Ｆ／２’－ＭＯＥ）を有する外部領域が各末端に隣接する２’－Ｆ修飾ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、外部領域はそれぞれ、ギャップマーのウィングに２つのＬＮＡまたはαＬＮＡ修飾ヌクレオチドを有する。さらなる実施形態では、ＬＮＡまたはアルファＬＮＡ修飾ヌクレオチドは、ＬＮＡの６’（２’，４’－拘束－２’－Ｏ－エチルＢＮＡ，Ｓ－ｃＥｔ）または５’位（－５’－Ｍｅ－ＬＮＡまたは－５’－Ｍｅ－アルファＬＮＡ）に（Ｒ）または（Ｓ）配置で１つもしくは複数のメチル基を含むか、あるいはＬＮＡもしくはアルファＬＮＡ中の２’－酸素原子の代わりに置換された炭素原子を含有する。

【0246】

別の実施形態では、本開示は、疾患または障害の治療のための組成物の製造におけるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの使用を提供する。別の実施形態では、本開示は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡファミリーに関連する状態のうちの１つまたは複数を治療するための組成物の製造におけるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの使用を提供する。

【0247】

一実施形態によれば、本方法は、標的遺伝子またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）発現を調節するのに十分な、本明細書で提供される治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与するか、または対象に接触させ、それにより、疾患または障害に関連する１つまたは複数の状態または症状を治療するステップを含む。本明細書で提供される例示的な化合物は、遺伝子、ｍＲＮＡ、または低分子非コードＲＮＡ標的の発現、活性、または機能を効果的に調節する。好ましい実施形態では、低分子非コードＲＮＡ標的は、ｍｉＲＮＡ、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ、またはポリシストロン性もしくはモノシストロン性ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、低分子非コードＲＮＡ標的は、ｍｉＲＮＡファミリーの単一メンバーである。さらなる実施形態では、ｍｉＲＮＡファミリーの２つ以上のメンバーが調節のために選択される。

【0248】

追加の実施形態では、本開示は、対象における標的核酸の活性を阻害する方法であって、核酸を含むかまたはコードする核酸を標的とし、核酸のレベルを低下させ、及び／または細胞内でのその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、コンジュゲートは、標的核酸の活性が阻害される細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分をさらに含む、方法を提供する。

【0249】

特定の実施形態では、標的核酸は、ｍｉＲＮＡなどの低分子非コードＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0250】

いくつかの実施形態では、本開示は、標的ＲＮＡの発現を低下させる必要がある対象において、前記標的ＲＮＡの発現を低下させる方法であって、前記対象にアンチセンスＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、複合体中のオリゴヌクレオチドは、前記標的ｍＲＮＡに結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。本明細書で開示されるように、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、血清半減期の増加を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにおけるオリゴヌクレオチドの血清半減期は、１０分を超える。追加の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにおけるオリゴヌクレオチドの血清半減期は、２０、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、１８０または２００分を超える。追加の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにおけるオリゴヌクレオチドの血清半減期は、３０～３００分、３０～２００分、または３０～１２０分である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドの血清半減期は、血清単独中の裸のオリゴヌクレオチド（すなわち、ＨＥＳを含有しないオリゴヌクレオチド成分）の血清半減期の１．５～４倍、２～４倍、または３～４倍である。他の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドの血清半減期は、血清単独中の裸のオリゴヌクレオチドの血清半減期よりも少なくとも１、２、３、または４時間長い。血清半減期を決定するための技術及び方法は、当技術分野で一般に知られている。

【0251】

追加の実施形態では、本開示は、標的ＲＮＡの発現の低下を必要とする対象において標的ＲＮＡの発現を低下させる方法であって、前記対象に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを前記対象に投与することを含み、アンチセンス配列は、標的ＲＮＡに特異的にハイブリダイズする、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的ＲＮＡに結合した場合にＲＮＡｓｅ Ｈの基質であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。

【0252】

別の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含む。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（例えば、ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズ可能である。追加の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体配列中のオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズ可能である。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列（すなわち、ｍＲＮＡ中のｍｉＲＮＡ ３’ＵＴＲ標的部位）を標的とするように設計される。このような例の１つは、「ｍｉＲ－マスク」または「標的プロテクター」であり、これらは、標的ｍＲＮＡ上のｍｉＲＮＡ結合部位へのｍｉＲＮＡのアクセスを覆う、特異的標的ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲ中の予想されるｍｉＲＮＡ結合部位に対して完全に相補的である１本鎖２’－Ｏ－メチル－修飾（または他の化学修飾）アンチセンスオリゴヌクレオチドである（例えば、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１８：２７１ （２００７））；Ｗａｎｇ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ６７６：４３ （２０１１）、を参照のこと）。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるｍＲＮＡ中の３’非翻訳配列を模倣するように設計される。このような例の１つが、「ｍｉＲＮＡスポンジ」、すなわち、内因性ｍｉＲＮＡの複数のタンデム結合部位を発現する競合的ｍｉＲＮＡ阻害導入遺伝子であり、これは、対応するｍｉＲＮＡと安定に相互作用し、内因性標的ｍＲＮＡと標的ｍｉＲＮＡとの会合を防ぐ。追加の実施形態では、核酸はｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、から成る群から選択されるＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズ可能である。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0253】

別の実施形態では、本開示は、タンパク質の産生を阻害する方法であって、タンパク質をコードする核酸を標的とするか、または対象におけるタンパク質の内因性発現、プロセシングもしくは機能を低下させるオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、タンパク質産生が阻害される細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードする核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0254】

いくつかの実施形態では、本開示は、標的ＲＮＡを発現する細胞を、標的ＲＮＡに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド配列を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと接触させることにより、細胞内の標的細胞ＲＮＡまたは対応するタンパク質の量を減少させる方法であって、標的ＲＮＡまたは対応するタンパク質の量が減少する、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、標的細胞ＲＮＡまたはタンパク質が減少する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質（例えば、ｄｓＲＮＡ）、デコイ、アプタマー、デコイ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。

【0255】

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡに結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。

【0256】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロジアミデートモルホリノを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、標的ＲＮＡはｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択されるｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0257】

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0258】

追加の実施形態では、本開示は、標的ＲＮＡの発現の低下を必要とする対象において標的ＲＮＡの発現を低下させる方法であって、標的ＲＮＡに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド配列を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、対象の細胞または組織における標的ＲＮＡの発現は減少する、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、標的ＲＮＡ発現が低下する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アプタマー、デコイ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。

【0259】

特定の実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。

【0260】

別の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドのそれぞれは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含有する。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、標的ＲＮＡはｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、から成る群から選択される標的ｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0261】

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0262】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与して、腫瘍細胞に対し増殖の利点を提供するか、または微生物の複製を強化する標的核酸（例えば、遺伝子、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの標的化及び／または局所送達を提供する。他の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、疾患に関与しているとされるタンパク質（例えば、タンパク質バリアント）をコードするｍＲＮＡ配列を標的とするアンチセンス、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質またはｍｉＲＮＡの標的化及び／または局所送達を提供するために投与される。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、特異的核酸配列を生細胞に送達して、例えば、異常な遺伝子発現に起因する病的状態に苦しむ生物における遺伝子をサイレンシングするための、標的化及び／または局所化インビボ送達システムを提供する。

【0263】

いくつかの実施形態では、本開示は、細胞中の目的のポリペプチドの量を減少させる方法であって、ポリペプチドまたはその相補体をコードする核酸を発現する細胞を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド配列を有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと接触させて、目的のポリペプチドの発現を低下させることを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、ポリペプチドの量が減少している細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡを発現することができるプラスミド、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドから選択され、オリゴヌクレオチドは、ポリペプチドまたはその相補体をコードする核酸に特異的にハイブリダイズして、こうしてポリペプチドの発現が低下する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、複合体は二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾オリゴヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’修飾（例えば、２’－フルオロ、２－ＯＭＥ及び２－メトキシエチル（２－ＭＯＥ））、ロックド核酸（ＬＮＡ及びアルファＬＮＡ）、ＰＮＡモチーフ及びモルホリノモチーフ、から選択される少なくとも１つの修飾オリゴヌクレオチドモチーフを含む。

【0264】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドはアンチセンス配列であり、標的ＲＮＡに結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、ギャップマーは、キメラオリゴヌクレオチドであるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、キメラオリゴヌクレオチドは、５’及び３’ウイングセグメントの間に位置する２’－デオキシヌクレオチド中央ギャップ領域を含む。ウイングセグメントは、少なくとも１つの２’－修飾糖を含有するヌクレオシドを含有する。ウイングセグメントは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖部分または二環式核酸糖部分から選択される少なくとも１つの２’糖部分を含有するヌクレオシドを有する。いくつかの実施形態では、ギャップセグメントは、長さが１０の２’－デオキシヌクレオチドであり得、ウイングセグメントのそれぞれは、長さが５の２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチドであり得る。キメラオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結から均一に構成され得る。さらに、キメラオリゴヌクレオチドの各シトシンは、５’－メチルシトシンであってもよい。

【0265】

別の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含有する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含有する。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択される標的ｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0266】

さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0267】

追加の実施形態では、本開示は、対象における標的核酸の活性を増加させる方法であって、核酸を含むかもしくはコードするか、または核酸の内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させる（例えば、核酸をコードする遺伝子の制御配列に結合することにより）、及び細胞内で核酸のレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、核酸の活性が増加している細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸を含むかまたはコードする核酸と実質的に同じ配列を含む。

【0268】

別の実施形態では、本開示は、タンパク質の産生を増加させる方法であって、タンパク質をコードするか、または対象におけるタンパク質の内因性発現、プロセシングもしくは機能を増加させるオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードする核酸と実質的に同じ配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードする内因性核酸配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。

【0269】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における核酸の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、核酸を含むかまたはコードする核酸を標的とし、対象における核酸のレベルを低下させる、及び／またはその機能を妨害するように作用するオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、核酸が過剰発現している細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、核酸はＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡであり、コンジュゲートは、タンパク質産生が阻害される細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。

【0270】

特定の実施形態では、核酸はＲＮＡであり、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0271】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含有する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含有する。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、核酸はｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択されるｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0272】

さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0273】

さらなる実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の過剰発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、タンパク質をコードする核酸を標的とするか、対象におけるタンパク質の内因性発現、プロセシング、または機能を低下させるオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含み、コンジュゲートは、タンパク質が過剰発現する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分をさらに含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アプタマー、デコイ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードする内因性核酸配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。

【0274】

特定の実施形態では、標的化核酸はＲＮＡであり、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0275】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含む。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域内の配列に特異的にハイブリダイズ可能である。（例えば、ＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内）これにより翻訳が低減する。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、核酸はｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択されるたんぱく質をコードするｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0276】

さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0277】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の異常な発現を特徴とする疾患または障害を治療する（例えば、軽減する）方法であって、タンパク質をコードするｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズし、標的ＲＮＡのスプライシングを変更する（例えば、エキソンスキッピングを促進する）オリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、タンパク質の発現が異常である細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２’ＯＭＥまたは２’アリルである。追加の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ、アルファＬＮＡ（例えば、５’位に立体バルク部分（例えば、メチル基）を含有するＬＮＡまたはアルファＬＮＡ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含有する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含有する。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択される標的ｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズ可能である。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。

【0278】

特定の実施形態では、疾患または障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、メッセージスプライシングを促進するｍＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズして、ジストロフィン遺伝子のエキソン４４、４５、５０、５１、５２、５３または５５を「読み飛ばす」。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、メッセージスプライシングを促進するｍＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズして、ジストロフィン遺伝子のエキソン５１を「読み飛ばす」。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ＡＶＩ－４６５８（ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）である。他の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ＡＶＩ－４６５８と結合するジストロフィンｍＲＮＡについて競合する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、エテプリルセン（ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ）またはドリサペルセン（ｄｒｉｓａｐｅｒｓｅｎ）である。他の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、エテプリルセンまたはドリサペルセンと結合するジストロフィンｍＲＮＡについて競合する。

【0279】

本開示のさらなる実施形態は、疾患または障害の診断を受けた対象を選択すること、疾患もしくは障害またはそれに関連する状態に関連するタンパク質に会合するかまたはタンパク質をコードすると考えられる核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与すること、及び対象における疾患の進行を監視すること、を含む方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、核酸を含有する細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。

【0280】

いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アプタマー、デコイ、及びアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。

【0281】

特定の実施形態では、核酸はＲＮＡであり、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0282】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドはすべて、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含む。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択されるｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲＮＡのヌクレオチド１～１０（すなわちシード領域）に特異的にハイブリダイズするか、またはオリゴヌクレオチドが結合するとｍｉＲＮＡプロセシングを遮断するｍｉＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）または一次ｍｉＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の中の配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0283】

さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0284】

別の実施形態では、本開示は、タンパク質の過剰発現と相関する疾患または障害に罹患している対象において疾患の進行を遅らせる方法であって、タンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを有する、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与して、ポリペプチドの発現を低下させることを含む、方法を提供する。さらなる実施形態では、投与されるコンジュゲートは、タンパク質が過剰発現している細胞上または細胞の微小環境内の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現することができるプラスミドから選択される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードするＤＮＡもしくはｍＲＮＡの少なくとも１５個の連続するヌクレオチドと、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドと、または全長にわたって、１００％の同一性を共有する。

【0285】

特定の実施形態では、核酸はｍＲＮＡであり、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡにハイブリダイズした場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質である。追加の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１８～２４ヌクレオチドの長さであり、１１より多くの連続する２’－デオキシリボヌクレオチドを有するギャップ領域、ならびにギャップ領域に隣接する第１のウイング領域及び第２のウイング領域を含み、前記第１のウイング領域及び前記第２のウイング領域のそれぞれは独立して１～８個の２’－Ｏ－２－メトキシエチル）リボヌクレオチドを有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２～３０個の連結ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸に実質的に相補的な配列を含む。

【0286】

別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）に結合した場合、ＲＮＡｓｅ Ｈの基質ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’位に修飾を含む少なくとも１つの修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシドは、２’位に修飾を含む修飾糖部分を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＰＮＡモチーフを含む。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ＰＮＡに対応する。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのモルホリノモチーフを含む。いくつかの実施形態では、モルホリノは、ホスホロジアミデートモルホリノである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、モルホリノに対応する。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのモノマー単位は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのＡＵＧ開始コドンの３０ヌクレオチド以内の配列に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡの５’非翻訳領域中の配列に特異的にハイブリダイズ可能である。いくつかの実施形態では、オリゴ－ＨＥＳ複合体中のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡによって結合されるＲＮＡ中の３’非翻訳配列を標的とするように設計される。追加の実施形態では、核酸はｍＲＮＡであり、オリゴヌクレオチド配列は、標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクション、及び標的ＲＮＡのイントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～５０核酸塩基領域、からなる群から選択されるｍＲＮＡの標的領域に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、標的領域は、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の１～１５核酸塩基、イントロン／エキソンジャンクションの５’側の２０～２４核酸塩基、及びイントロン／エキソンジャンクションの５’側の３０～５０の核酸塩基からなる群から選択される。

【0287】

さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１８～３５ヌクレオチドであるｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１９～２９ヌクレオチドのステム及び４～３０ヌクレオチドの間のループサイズを有するｓｈＲＮＡである。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはダイサー基質であり、それぞれ長さが１８～２５ヌクレオチドであり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有する２つの核酸鎖を含有する。特定の実施形態では、ダイサー基質は、長さ２１ヌクレオチドを含有する二本鎖核酸であり、２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。さらなる実施形態では、ダイサー基質の一方または両方の鎖は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオシド間連結、またはそれらの組み合わせを含有する。

【0288】

現在、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡのファミリーによって制御されることが知られている病的状態のいくつかの別個のグループが存在し、これらは、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して標的とすることができる。

【0289】

一実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、感染症に関連する１つまたは複数のｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－１２２を阻害する。ミラビルセン（Ｍｉｒａｖｉｒｓｅｎ）（ＳＰＣ３６４９）は、Ｓａｎｔａｒｉｓ Ｐｈａｒｍａ Ａ／Ｓにより開発されたｍｉＲ－１２２の阻害剤である。Ｍｉｒ－１２２は、Ｃ型肝炎ウイルスが必須の内因性宿主因子として複製のために必要とする肝臓特異的ｍｉＲＮＡである。４週間のミラビルセン単一療法についての臨床試験データは、強力な用量依存性抗ウイルス活性を示している。Ｒｅｇｕｌｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ及びＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（ＧＳＫ）は同様に、前臨床研究において、ｍｉＲ－１２２がＨＣＶの複製において不可欠であることを示しており、抗ｍｉＲ－１２２をＨＣＶ感染の治療のための臨床研究に進めることを計画している。

【0290】

別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、線維症に関連するｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。一実施形態では、このオリゴヌクレオチドはｍｉＲ－２１を阻害する。Ｒｅｇｕｌｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ及びＳａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓによる前臨床試験では、ヒト線維化組織でアップレギュレートされるｍｉＲ－２１を阻害すると、心臓及び腎臓を含む複数の線維症モデルで器官機能を改善することができることが示されている。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－２９に対応するか、またはそれを模倣する。Ｍｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによる模倣物またはｍｉＲＮＡ補充療法であるＭＧＮ－４２２０は、心臓線維症に関与するｍｉＲ－２９を標的としている。

【0291】

別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、脳卒中、心臓疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血栓症、貧血、白血球減少症、好中球減少症、血小板減少症、顆粒球減少症、汎血球減少症、及び特発性血小板減少性紫斑病を含むがこれらに限定されない心血管疾患に関連するｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－３３を阻害する。Ｒｅｇｕｌｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ及びＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａは、前臨床研究で、ｍｉＲ－３３の阻害により動脈プラークサイズが縮小し、ＨＤＬのレベルが上昇することを示した。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－９２、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－２０６及び／またはｍｉＲ－１４３／１４５ファミリーを阻害する。Ｍｉｒａｇｅｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにより開発されたＭＧＮ－６１１４、ＭＧＮ－５８０４、ＭＧＮ－２６７７、ＭＧＮ－８１０７は、それぞれ、末梢動脈疾患に関与するｍｉＲ－９２、心血管代謝疾患に関連するｍｉＲ－３７８、血管疾患に関与するｍｉＲ－１４３／１４５ファミリー、及び筋萎縮性側索硬化症に関連するｍｉＲ－２０６を標的とする。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－２０８／２０９ファミリー及び／またはｍｉＲ－１５／１９５ファミリーを阻害する。Ｍｉｒａｇｅｎ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＭＧＮ－９１０３及びＭＧＮ－１３７４は、それぞれ慢性心不全に関するｍｉＲ－２０８／２０９ファミリー及び心筋梗塞後リモデリングに関するｍｉＲ－１５／１９５ファミリーを標的とするｍｉＲＮＡ阻害剤である。別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１２６及び／またはｍｉＲ９２ａを阻害する。ｍｉＲ－１２６及びｍｉＲ－９２ａは、アテローム硬化性プラークの発症において中心的な役割を果たす。

【0292】

別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、神経疾患または状態に関連するｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－２０６を阻害する。ｍｉＲ－２０６は、ＡＬＳ及び神経筋シナプス再生において重要な役割を果たす。

【0293】

別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、腫瘍学的状態に関連するｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－２１を阻害する。ｍｉＲ－２１は、肝臓、腎臓、乳房、前立腺、肺、及び脳などのがんの発生及び進行に重要な役割を果たすことが、数多くの科学出版物によって示唆されている。肝細胞癌（ＨＣＣ）マウスモデルにおける抗ｍｉＲ－２１は、Ｒｅｇｕｌｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ及びＳａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓによる前臨床研究において、腫瘍進行の遅延を示した。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ－１０ｂを阻害する。Ｒｅｇｕｌｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによる抗ｍｉＲ－１０ｂの前臨床動物研究でも、ＧＢＭモデルにおける治療効果が示された。別の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲ－３４に対応するかまたはそれを模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。Ｍｉｒｎａ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによるｍｉＲ－３４の模倣物またはｍｉＲＮＡ置換療法では、ほとんどの固形及び血液悪性腫瘍は失われるか、または発現レベルが低下しており、ＭＲＸ３４の前臨床試験で種々のタイプのがんの増殖の阻害が示された。

【0294】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｌｅｔ－７ａ、ｍｉＲ－９、ｍｉＲ－１０ｂ、ｍｉＲ－１５ａ－ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－１０３－１０７、ｍｉＲ－１２２、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１８１、ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－２００から選択されるｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、がんとの関連性が報告されているものの一部である。

【0295】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｌｅｔ－７、ｌｅｔ－７ａ、ｌｅｔ－７ｆ、ｍｉＲ－１、Ｍｉｒ－１０ｂ、ｍｉＲ－１５ａ－ｍｉＲ－１６－１、Ｍｉｒ－１７－５ｐ、Ｍｉｒ－１７－９２、ｍｉＲ－２１、Ｍｉｒ－２３－２７、ｍｉＲ－２５、ｍｉＲ－２７ｂ、ｍｉＲ－２９、ｍｉＲ－３０ａ、Ｍｉｒ－３１、ｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－９２－１、ｍｉＲ－１０６ａ、ｍｉＲ－１２５、Ｍｉｒ－１２６、Ｍｉｒ－１３０ａ、Ｍｉｒ－１３２、ｍｉＲ－１３３ｂ、Ｍｉｒ－１５５、ｍｉＲ－２０６、Ｍｉｒ－２１０、Ｍｉｒ－２２１／２２２、ｍｉＲ－２２３、Ｍｉｒ－２９６、ｍｉＲ－３３５、Ｍｉｒ－３７３、Ｍｉｒ－３７８、ｍｉＲ－３８０－５ｐ、Ｍｉｒ－４２４、ｍｉＲ－４５１、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、及びＭｉｒ－５２０ｃから選択されるｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、血管新生、転移及び／またはがんの発症を促進することが報告されているものの一部である。

【0296】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲ－１５ファミリー、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２７、ｍｉＲ－２９、ｍｉＲ－３３、ｍｉＲ－９２ａ、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１９９ｂ、ｍｉＲ－２０８ａ／ｂファミリー、ｍｉＲ－３２０、ｍｉＲ－３２８、ｍｉＲ－４９９から選択されるｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、心血管機能において種々の役割を果たしていることが報告されているものの一部である。

【0297】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｌｅｔ－７ｂ、ｍｉＲ－９、ｍｉＲ１０６ｂ－２５クラスター、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１３２、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１８４から選択されるｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、神経幹細胞（ＮＳＣ）の成体神経発生において種々の役割を果たしていることが報告されているものの一部である。

【0298】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｌｅｔ－７ａ、ｍｉＲ－２１、ｍｉｒ－２６、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉｒ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１９１、ｍｉＲ－１９３ａ、ｍｉＲ－２００ファミリー、ｍｉＲ－２０５、ｍｉＲ－２２１、及びｍｉＲ－２２２から選択されるｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、種々のタイプのがんの診断または予後バイオマーカーとして機能することが報告されているものの一部である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２６、ｍｉＲ－１２５ｂ、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１９３ａ、ｍｉＲ－２００ファミリー、ｍｉＲ－２２１、及びｍｉＲ－２２２から選択されるｍｉＲＮＡを阻害する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｌｅｔ－７ａ、ｍｉｒ－１４５、ｍｉＲ－１９１、及びｍｉＲ－２０５から選択されるｍｉＲＮＡの配列を含有するか、またはこのｍｉＲＮＡを模倣する。

【0299】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲ－１３８、ｍｉｒ－１８２、ｍｉＲ－２１、ｍｉｒ－１０３／１０７、及びｍｉＲ－２９ｃから選択されるｍｉＲＮＡを阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、それぞれ関節炎、狼瘡、アテローム性動脈硬化症、インスリン感受性、及びアルブミン尿において役割を果たすことが報告されているものの一部である。

【0300】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｌｅｔ－７、ｌｅｔ－７－ａ３、ｌｉｎ－２８、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－９－１、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－１７－９２クラスター、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２９ファミリー、ｍｉＲ－３４ファミリー、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２７、及びｍｉＲ－２９０から選択されるｍｉＲＮＡを阻害または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのマイクロＲＮＡは、ｍｉＲＮＡ発現の原因となる遺伝的または後成的制御の異常により、種々のタイプのがんで制御不全になることが報告されているものの一部である。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｌｅｔ－７－ａ３、ｌｉｎ－２８、ｍｉＲ－１７－９２クラスター、及びｍｉＲ－２１から選択されるｍｉＲＮＡを阻害する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－９－１、ｍｉＲ－１５ａ、ｍｉＲ－１６－１、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２９ファミリー、ｍｉＲ－３４ファミリー、ｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－１２７、及びｍｉＲ－２９０から選択されるｍｉＲＮＡの配列を含むか、又はｍｉＲＮＡを模倣する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲ－１３８を阻害するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0301】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ｍｉｒ－２０ａ、Ｍｉｒ－３４、Ｍｉｒ－９２ａ、Ｍｉｒ－２００ｃ、Ｍｉｒ－２１７及びＭｉｒ－５０３から選択されるｍｉＲＮＡの配列（を含有するか）またはｍｉＲＮＡを模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。これらのｍｉＲＮＡは、抗血管新生であると報告されているものの一部である。

【0302】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－２、ｍｉＲ－６、ｍｉＲ－７またはｌｅｔ－７の配列（を含有するか）または模倣するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－Ｒｘ０７、ｍｉＲ－Ｒｘ０６、ｍｉＲ－Ｒｘｌｅｔ－７、ｍｉＲ－Ｒｘ０１、ｍｉＲ－Ｒｘ０２またはｍｉＲ－Ｒｘ０３である。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－４５１に対応するか、またはそれを模倣する。ｍｉＲ－４５１は、インビボで赤血球生成を制御することが実証されており（Ｐａｔｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ．， ２４：１６１４－１６１９ （２０１０））、したがって、真性赤血球増加症、一般的な赤血球障害、または他の造血器悪性腫瘍などの疾患に関与している。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＭＧＮ－４８９３である。

【0303】

追加の実施形態では、目的の核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含有する医薬組成物は、核酸に関連する疾患または障害に罹患している、または罹患しやすい患者を治療するための組成物の調製に使用される。
Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの例示的治療用途

【0304】

当業者に直ちに明らかであるように、部分的には、細胞へのオリゴヌクレオチドの驚くべき非常に効率的な全身インビボ送達により、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、本質的に、標的核酸及びタンパク質のレベル及び活性を調節する無限の用途を有し、治療用途において特に有用である。

【0305】

Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートで治療することができる疾患及び障害の非限定的な例としては、増殖性障害（例えば、がん、例として血液癌（例えば、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＣＬＬ及び多発性骨髄腫）及び固形腫瘍（例えば、黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、ＮＳＣＬＣ）、免疫性疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病、ＩＢＤ、乾癬、喘息、自己免疫疾患、例として関節リウマチ、多発性硬化症、及びＳＬＥ）及び炎症性疾患、神経疾患（例えば、糖尿病性網膜症、デュセンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ハンチントン病及び脊髄性筋委縮病、ならびに他の神経変性疾患）、代謝疾患（例えば、ＩＩ型糖尿病、肥満）、心血管疾患（例えば、凝固障害、血栓症、冠動脈疾患、再狭窄、アミロイドーシス、血友病、貧血、異常ヘモグロビン症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、アテローム性動脈硬化、高コレステロール、高トリグリセライド）、内分泌関連疾患及び障害（例えば、ＮＡＳＨ、糖尿病、尿崩症、アジソン病、ターナー症候群、クッシング症候群、骨粗鬆症）、及び感染症が挙げられる。したがって、一実施形態では、本開示は、対象の疾患を治療する方法であって、疾患と診断された対象に、疾患もしくは障害またはその症状に関連する核酸に特異的にハイブリダイズする治療用オリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することを含む、方法を提供する。

【0306】

追加の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートで治療される疾患または障害は、腎臓、肝臓、リンパ節、脾臓もしくは脂肪組織の疾患または障害である。

【0307】

本開示はまた、対象における細胞または組織への治療用オリゴヌクレオチドの送達を監視する方法であって、治療用オリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与すること、及び対象における細胞または組織の蛍光を監視することを含み、対象の細胞または組織における蛍光の増加は、治療用オリゴヌクレオチドが対象の細胞または組織に送達されたことを示す、方法を提供する。

【0308】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における核酸の過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、核酸を含むかもしくはコードするか、または核酸の内因性発現、プロセシング、もしくは機能を増加させる（例えば、核酸をコードする遺伝子の制御配列に結合することにより）、及び細胞内で核酸のレベルを増加させ、及び／またはその機能を増加させるように作用する、オリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、核酸を含むかまたはコードする核酸と実質的に同じ配列を含む。

【0309】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるタンパク質の過少発現を特徴とする疾患または障害を治療する方法であって、タンパク質をコードするか、または対象におけるタンパク質の内因性発現、プロセシングもしくは機能を増加させるオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0310】

別の実施形態では、本開示は、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートをそれを必要とする対象に投与することによって、がんまたはがんに関連する１つまたは複数の状態を治療する方法を提供する。「がん」、「腫瘍」または「悪性腫瘍」は、本明細書において同義語として使用され、細胞の無秩序な異常増殖、局所的にまたは血流及びリンパ系を通じて体の他の部分に拡散する（転移する）侵された細胞の能力、ならびに多くの既知の特徴的な構造的及び／または分子的特徴のいずれかを特徴とする複数の疾患のうちのいずれかを指す。「がん性腫瘍」または「悪性細胞」は、特定の構造特性を有し、分化を欠き、浸潤及び転移が可能な細胞として理解される。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療され得るがんの例には、固形腫瘍及び血液癌が含まれる。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療することができるがんの追加の例としては、乳癌、肺癌、脳腫瘍、骨癌、肝臓癌、腎臓癌、直腸癌、頭頸部癌、卵巣癌、造血性癌（例えば、白血病）、及び前立腺癌が挙げられる。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療できるがんのさらなる例としては、癌腫、リンパ腫、骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるがこれらに限定されない。そのようながんのより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び種々のタイプの頭頸部癌が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、白血病を治療するために使用される。別の特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、転移性癌を治療するために使用される。

【0311】

追加の実施形態では、血液癌を治療するために、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが投与される。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、リンパ腫、白血病、骨髄腫、リンパ性悪性腫瘍、脾臓の癌、及びリンパ節の癌から選択されるがんを治療するために投与される。追加の実施形態では、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、及びＴ細胞リンパ腫、から選択されるリンパ腫を治療するために、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが投与される。追加の実施形態では、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞性白血病（ＣＤ５＋Ｂリンパ球）、慢性骨髄性白血病、リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、骨髄異形成、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、及び二次性白血病から選択される白血病を治療するために、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが投与される。追加の実施形態では、多発性骨髄腫を治療するために、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートが投与される。Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療することができる他のタイプのがん及び腫瘍は、本明細書に記載されているか、または別様に当技術分野で知られている。

【0312】

特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡＶＩ－４５５７（Ｃｙｐ ３Ａ４ｍ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＩＳＩＳ－２３７２２ （サバイビン；ＩＳＩＳ）；Ｇｅｍ－６４０ （ＸＩＡＰ；Ｈｙｂｒｉｄｏｎ）、Ａｔｕ０２７ （ＰＫＮ３；Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＣＥＱ５０８ （Ｂ カテニン；Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＧＥＭ ２３１ （ＰＫＡ Ｒ１α サブユニット；Ｉｄｅｒａ）、Ａｆｆｉｎｉｔａｋ （アプリノカルセン、ＩＳＩＳ ３５２１／ＬＹ９００００３；ＰＫＣ－α；ＩＳＩＳ／Ｌｉｌｌｙ）；Ａｅｚｅａ （ＯＬ（１）Ｐ５３／ＥＬ－６２５；Ｐ５３；Ｅｌｅｏｓ Ｐｈａｒｍａ）；ＩＳＩＳ ２５０３ （Ｈ－ｒａｓ；ＩＳＩＳ）、ＥＺＮ－２９６８ （ＨＩＦ－１α；Ｅｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；Ｇ４４６０／ＬＲ ３００１ （ｃ－Ｍｙｂ；Ｉｎｅｘ／Ｇｅｎｔａ）；ＬＥｒａｆＡＯＮ （ｃ－Ｒａｆ；ＮｅｏＰｈａｒｍ）、ＩＳＩＳ ５１３２ （ｃ－Ｒａｆ；ＩＳＩＳ）、Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ （オブリメルセン／Ｇ３１３９；Ｂｃｌ２；Ｇｅｎｔａ）；ＳＰＣ２９９６ （Ｂｃｌ２；Ｓａｎｔａｒｉｓ Ｐｈａｒｍａ）、ＯＧＸ－４２７ （Ｈｓｐ２７；ＩＳＩＳ／ＯｎｃｏＧｅｎｅ Ｘ）、ＬＹ２１８１３０８ （サバイビン；Ｌｉｌｌｙ）、ＬＹ２２７５７９６ （ＥＩＦ４Ｅ；Ｌｉｌｌｙ）、ＩＳＩＳ－ＳＴＡＴ３ Ｒｘ （ＳＴＡＴ３；ＩＳＩＳ）、ＯＧＸ－０１１ （カストルセン（Ｃｕｓｔｉｒｓｅｎ）；クラステリン；Ｔｅｖａ）、Ｖｅｇｌｉｎ （ＶＥＧＦ；ＶａｓＧｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＡＰ１２００９ （ＴＧＦ－β２；Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｐｈａｒｍａ）、ＧＴＩ－２５０１ （リボヌクレオチドレダクターゼ Ｒ１；Ｌｏｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、Ｇｅｍ－２２０ （ＶＥＧＦ；Ｈｙｂｒｉｄｏｎ）；Ｇｅｍ－２４０ （ＭＥＭ２；Ｈｙｂｒｉｄｏｎ）、ＣＡＬＡＡ－１９ （Ｍ２サブユニットリボヌクレオチドレダクターゼ；Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、トラベデルセン（Ｔｒａｂｅｄｅｒｓｅｎ） （ＡＰ １２００９；ＴＧＦ－β２；アンチセンス）、ＧＴＩ－２０４０ （リボヌクレオチドレダクターゼＲ２、Ｌｏｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（５’－ＧＧＣＴＡＡＡＴＣＧＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧ－３’）（配列番号９））、ＡＥＧ３５１５６（ＸＩＡＰ；Ａｅｇｅｒａ Ｐｈａｒｍａ）、及びＭＧ９８（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ；ＭｅｔｈｙｌＧｅｎｅ／ＭＧＩ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。

【0313】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ａｔｕ０２７（ＰＫＮ３）、ＴＫＭ－ＰＬＫ１（ＰＬＫ１）、ＡＬＮ－ＶＳＰ０２（ＫＳＰ及びＶＥＧＦ）、ＣＡＬＡＡ－０１（ＲＲＭ２）、ｓｉＧ１２Ｄ ＬＯＤＥＲ（Ｋ－ｒａｓ）、ＩＳＩＳ－ＥＩＦ４ＥＲｘ（ＥＩＦＲ）、ＧＴＩ－２０４０（ＲＲＭ２）、トラベデルセン（ＴＧＦＢ２）、アルケキシン（Ａｒｃｈｅｘｉｎ）（プロテインキナーゼＢアルファ（Ａｋｔ１））、及びセネルセン（Ｐ５３）、から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。

【0314】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、５’－ＧＴＴＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＴＴＴＣＡ－３’（配列番号２）（ＰＫＣ－α）；５’－ＣＣＣＴＧＣＴＣＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣ－３’（配列番号３）（Ｐ５３）；５’－ＴＣＣＧＴＣＡＴＣＧＣＴＣＣＴＣＡＧＧＧ－３’（配列番号４）（Ｈ－ｒａｓ）；５’－ＧＧＧＡＣＴＣＣＴＣＧＣＴＡＣＴＧＣＣＴ－３’（配列番号５）（Ｈ－ｒａｓ）；５’－ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ－３’（配列番号６）（ｃ－Ｒａｆ）；５’－ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ－３’（配列番号７）（Ｂｃｌ２）；及び５’－ＴＧＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＡＣＴＣＧＡＴ－３（配列番号８）（ＴＧＦ－β２）から選択される配列を有するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。

【0315】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、５’－ＴＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴＴＣＧＧＧＣ－３’（配列番号１０）（ｃ－ｍｙｂ）；５’－ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ－３’（配列番号６）（ｃ－ＲＡＦ）；５’－ＣＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＴＣＣＴＴＡＴＴＧＡＴ－３’（配列番号１１）（Ｂｃｒ－ａｂｌ）；５’－ＣＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＴＧＡＡＣＴＧＴＧＣＴＴ－３’（配列番号１２）（Ｂｃｒ－ａｂｌ）；５’－ＧＧＧＡＣＴＣＣＴＣＧＣＴＡＣＴＧＣＣＴ－３’（配列番号５）（Ｈａ－Ｒａｓ）；５’－ＧＣＧＵＧＣＣＴＣＣＴＣＡＣＵＧＧＣ－３’（配列番号１３）（Ｐｋａ－ｒＩＡ）；５’－ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ－３’（配列番号１４）（ｃ－Ｍｙｃ）；５’－ＧＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＡＴＧＧＡＴＧＡＧ－３’（配列番号１５）（ＪＮＫ２）；５’－ＧＧＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＧＡＧＣＣ－３’（配列番号１６）（ＩＧＦ－１Ｒ）；５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ－３’（配列番号１８）（ＴＬＲ－９）；及び５’－ＣＴＧＣＴＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＡ－３’（配列番号１７）（ＰＴＥＮ）から選択される配列を有するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。

【0316】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＴＡＴＴＡＧＧＡＧＴＣＴＴＴＡＴＡＧＴＡＴＡ－３’（配列番号７９）（Ｋ－ｒａｓ）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－［リン酸塩でｄＴの５’ＯＨに付着した５’ジスルフィドＣ６リンカー］［Ｃ６アミノｄＴ］ＡＧＧＡＡＡＡＧ＊Ｃ^１Ｔ＊ＡＴＴＡＧＧＡＧＴＣＴ＊Ｔ＊Ｔ＊ＡＴＡＧＴＡＴ^２Ａ－３’（配列番号７９）を有するオリゴヌクレオチドを含有し、式中、＊はＬＮＡ、^１はＬＮＡ－５Ｍｅ、及び^２はＣ６アミノｄＴである。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、すべての連結中にホスホロチオエート主鎖を含有する。

【0317】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＡＵＡＣＵＡＡＡＵＣＡＵＵＵＧＡＡＧＡＵＡＵＵＣＡＣＣＡＵＴ－３’（配列番号８４）（Ｋ－ｒａｓ）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－Ａ^ＸＵ^ＸＡ^ＸＣＵＡＡＡＵＣＡＵＵＵＧＡＡＧＡＵＡＵＵＣＡＣＣＡ^ＸＵ^Ｘ－［Ｃ６アミノｄＴ］－３’（配列番号８４）を有するオリゴヌクレオチドを含有し、^Ｘは２’－ＭＯＥを示す。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＴＡＵＧＧＵＧＡＡＵＡＵＣＵＵＣＡＡＡＵＧＡＵＵＵＡＧＵＡＵ－３’（配列番号８５）（Ｋ－ｒａｓ）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－［Ｃ６アミノｄＴ］Ａ^ＸＵ^ＸＧＧＵＧＡＡＵＡＵＣＵ^ＸＵＣ^ＸＡＡＡ^ＸＵ^ＸＧ^ＸＡ^ＸＵ^ＸＵ^ＸＵ^ＸＡ^ＸＧ^ＸＵ^ＸＡ^ＸＵ^Ｘ－３’（配列番号８５）を有するオリゴヌクレオチドを含有し、^Ｘは２’－ＭＯＥを示す。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＡＵＡＣＵＡＡＡＵＣＡＵＵＵＧＡＡＧＡＵＡＵＵＣＡＣＣＡＵＴ－３’（配列番号８４）を有する二重鎖オリゴヌクレオチド及び配列５’－ＴＡＵＧＧＵＧＡＡＵＡＵＣＵＵＣＡＡＡＵＧＡＵＵＵＡＧＵＡＵ－３’（配列番号８５）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0318】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＡＧＵＡＣＡＧＵＧＣＡＡＵＧＡＧＧＧＡＣＣＡＧＵＡＣＡＵＧＡＴ－３’（配列番号８６）（Ｋ－ｒａｓ）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－Ａ^ＸＧ^ＸＵ^ＸＡＣＡＧＵＧＣＡＡＵＧＡＧＧＧＡＣＣＡＧＵＡＣＡＵＧ^ＸＡ^Ｘ－［Ｃ６アミノｄＴ］－３’（配列番号８６）を有するオリゴヌクレオチドを含有し、^Ｘは２’－ＭＯＥを示す。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＴＵＣＡＵＧＵＡＣＵＧＧＵＣＣＣＵＣＡＵＵＧＣＡＣＵＧＵＡＣＵ－３’（配列番号８７）（Ｋ－ｒａｓ）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－［Ｃ６アミノｄＴ］Ｕ^ＸＣ^ＸＡＵＧＵＡＣＵＧＧＵＣ^ＸＣＣＵ^ＸＣＡ^ＸＵＵ^ＸＧＣ^ＸＡＣ^ＸＵＧ^ＸＵＡ^ＸＣ^ＸＵ^Ｘ－３’（配列番号８７）を有するオリゴヌクレオチドを含有し、^Ｘは２’－ＭＯＥを示す。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＡＧＵＡＣＡＧＵＧＣＡＡＵＧＡＧＧＧＡＣＣＡＧＵＡＣＡＵＧＡＴ－３’（配列番号８６）を有する二重鎖オリゴヌクレオチド及び配列５’－ＴＵＣＡＵＧＵＡＣＵＧＧＵＣＣＣＵＣＡＵＵＧＣＡＣＵＧＵＡＣＵ－３’（配列番号８７）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0319】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＡＡＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＴ－３’（配列番号８２）（ＢＣＬ２）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0320】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、配列５’－ＣＣＡＣＡＡＡＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＧＴＴＡＴＣＣＴ－３’（配列番号８３）（ＢＣＬ２）を有するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0321】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アポトーシス、細胞生存、血管新生、転移、異常な遺伝子制御、細胞周期、有糸分裂経路及び／または増殖シグナル伝達を調節する核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３、ｃＭｅｔ、ｐ５６ｌｃｋ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦ、ＦＧＦＲ、ＡＮＧ１、ＡＮＧ２、ｂＦＧＦ，ＴＩＥ２、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－アルファ）、ｐ５６ｌｃｋ ＰＫＡ、ＴＧＦ－β、ＩＧＦＩＲ、Ｐ１２、ＭＤＭ２、ＢＲＣＡ、ＩＧＦ１、ＨＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＩＦ１アルファ、フェリチン、トランスフェリン受容体、ＴＭＰＲＳＳ２、ＩＲＥ、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＭＩＴＦ、クラステリン、ＰＡＲＰ１Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｍｙｃ、ｎ－ｍｙｃ、Ｃ－ｒａｆ、Ｂ－ｒａｆ、Ａ１、Ｈ－ｒａｆ、Ｓｋｐ２、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、Ｈ－ｒａｓ、ファレンシルトランスフェラーゼ、ｃ－Ｓｒｃ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、ｃ－Ｋｉｔ、ＥｐｈＡ２、ＰＤＧＦＢ、ＡＲＦ、ＮＯＸ１、ＮＦ１、ＳＴＡＴ３、Ｅ６／Ｅ７、ＡＰＣ、ＷＮＴ、ベータカテニン、ＧＳＫ３ｂ、ＰＩ３ｋ、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、ＰＤＫ－１、ＣＤＫ、Ｍｅｋ１、ＥＲＫ１、ＡＰ－１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｓｙｋ、オステオポンチン、ＣＤ４４、ＭＥＫ、ＭＡＰＫ、ＮＦ－κβ（ＮＦカッパベータ）、Ｅカドヘリン、サイクリンＤ、サイクリンＥ、Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ＢＸＬ－ＸＬ、ＢＣＬ－Ｗ、ＭＣＬ１、ＥＲ、ＭＤＲ、テロメラーゼ、テロメラーゼ逆転写酵素、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ヒストンデアセチラーゼ（例えば、ＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２）、インテグリン、ＩＡＰ、オーロラキナーゼ、メタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９）、プロテアソーム、及びメタロチオネイン遺伝子、から選択されるタンパク質の発現を調節する核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＨＥＲ２核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ｐ５３変異型核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0322】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、以下の群：サバイビン、ＨＳＰＢ１、ＥＩＦ４Ｅ、ＰＴＰＮ１、ＲＲＭ２、ＢＣＬ２、ＰＴＥＮ、Ｂｃｒ－ａｂｌ、ＴＬＲ９、ＨａＲａｓ、Ｐｋａ－ｒＩＡ、ＪＮＫ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＸＩＡＰ、ＴＧＦ－β２、ｃ－ｍｙｂ、ＰＬＫ１、Ｋ－ｒａｓ、ＫＳＰ、ＰＫＮ３、リボヌクレオチドレダクターゼ、リボヌクレオチドレダクターゼＲ１、リボヌクレオチドレダクターゼＲ２、ＭＥＭ２、及びＴＬＲ－９、から選択される核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＢＣＬ２核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ｋ－ＲＡＳ核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0323】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＨＩＦ１－アルファまたはＨＩＦ１－ベータ核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0324】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、チェックポイント阻害剤核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、以下の群：ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４ ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、ＢＴＬＡ、Ａ２ａＲ、及びＣＤ７３から選択される核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0325】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＪＡＫ１／２またはＳＴＡＴ１核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0326】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ｎｒｐ１またはｎｓｐ１２核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。

【0327】

さらなる実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＲｅｃＱヘリカーゼファミリーメンバーの核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、ＲｅｃＱヘリカーゼファミリーメンバーはウェルナータンパク質（ＷＲＮ）である。他の実施形態では、ＲｅｃＱヘリカーゼファミリーメンバーは、ＲｅｃＱＬ１である。他の実施形態では、ＲｅｃＱヘリカーゼファミリーメンバーは、ＢＬＭ、ＲｅｃＱＬ４、ＲｅｃＱ５、及びＲＴＳからのメンバーである。標的核酸配列の例示的なＧｅｎＢａｎｋアクセッション参照は、Ｕ３９８１７、ＮＭ＿００００５７、及びＢＣ０３４４８０のＢＬＭ；ＮＭ＿００２９０７、ＮＭ＿０３２９４１、ＢＣ００１０５２、Ｄ３７９８４、及びＬ３６１４０のＲｅｃＱ１；ＮＭ＿０００５５３、ＡＦ０９１２１４、Ｌ７６９３７、及びＡＬ８３３５７２のＷＲＮ；ＮＭ＿００４２５９、ＡＫ０７５０８４、ＡＢ００６５３３、ＡＢ０４２８２５、ＡＢ０４２８２４、ＡＢ０４２８２３、ＡＦ１３５１８３、及びＢＣ０１６９１１のＲｅｃＱ５；ＮＭ＿００４２６０、ＡＢ００６５３２、ＢＣ０２０４９６、及びＢＣ０１１６０２及びＢＣ０１３２７７のＲＴＳ、である。

【0328】

別の実施形態では、本開示は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、がんもしくはがんに関連する状態の治療に現在使用されている、今までに使用されてきた、または有用であることが知られている１つまたは複数の治療薬と組み合わせて投与することによって、がんもしくはがんに関連する１つまたは複数の状態を治療する方法を提供する。

【0329】

いくつかの実施形態では、本開示は、免疫系の炎症性もしくは他の疾患または障害、または免疫系の炎症性もしくは他の疾患または障害に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、炎症性または他の免疫系疾患または障害を有するか、または有するリスクがある）に、治療有効量の本明細書で提供される１つまたは複数のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。当業者には明らかなように、免疫系もしくは炎症性疾患に起因または関連する任意のタイプの免疫もしくは炎症性疾患または状態は、本明細書に提供される方法に従って治療することができる。特定の実施形態では、本開示は、免疫系の疾患または障害及び／または炎症性疾患または障害、あるいはそのような疾患または障害に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法を提供する。

【0330】

本明細書で使用される「炎症性障害」という用語は、疼痛（痛み（ｄｏｌｏｒ）、有害物質の生成及び神経の刺激による）、熱（熱（ｃａｌｏｒ）、血管拡張による）、発赤（赤み（ｒｕｂｏｒ）、血管拡張及び血流の増加による）、腫れ（腫瘍、液体の過剰な流入または制限された流出による）、及び機能の喪失（機能喪失（ｆｕｎｃｔｉｏ ｌａｅｓａ）、部分的または完全、一時的または永続的であり得るもの）の徴候のうちの１つまたは複数を特徴とする疾患または状態を指す。炎症は多くの形態を採り、以下：急性、癒着性、萎縮性、カタル性、慢性、硬変性、びまん性、播種性、滲出性、線維性、線維化、焦点性、肉芽腫性、過形成性、肥大性、間質性、転移性、壊死性、閉塞性、実質性、可塑性、増殖性（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ）、増殖性（ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｕｓ）、偽膜性、化膿性（ｐｕｒｕｌｅｎｔ）、硬化性、血清形成性、漿液性、単純、特異性、亜急性、化膿性（ｓｕｐｐｕｒａｔｉｖｅ）、毒性、外傷性、及び／または潰瘍性、のうちの１つまたは複数の炎症が挙げられるが、これらに限定されない。炎症性障害にはさらに、血管（多発動脈炎、側頭動脈炎）関節（関節炎：結晶性、骨、乾癬性、反応性、リウマチ性、ライター）；消化管（疾患）；皮膚（皮膚炎）；または複数の器官及び組織（全身性エリテマトーデス）に影響を及ぼすものが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「線維症」または「線維化障害」という用語は、急性または慢性の炎症に続き、細胞及び／またはコラーゲンの異常な蓄積に関連し、心臓、腎臓、関節、肺、または皮膚などの個々の器官または組織の線維症を含むがこれらに限定されない状態を指し、特発性肺線維症及び原因不明の線維化肺胞炎などの障害が含まれまる。特定の実施形態では、炎症性障害は、喘息、アレルギー性障害、及び関節リウマチからなる群から選択される。

【0331】

さらなる実施形態では、免疫系の障害または障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｏｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）は自己免疫疾患である。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療することができる自己免疫疾患、障害または状態としては、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性新生児血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性血球減少症、溶血性貧血、抗リン脂質症候群、皮膚炎、グルテン過敏性腸症、アレルギー性脳脊髄炎、心筋炎、再発性多発軟骨炎、リウマチ性心疾患、糸球体腎炎（例えば、ＩｇＡ腎炎）、多発性硬化症、神経炎、眼ブドウ膜炎、多発性内分泌障害、紫斑病（例えば、ヘノッホ・シェーンライン（Ｈｅｎｌｏｃｈ Ｓｃｏｅｎｌｅｉｎ）紫斑病）、ライター病、全身硬直症候群、自己免疫性肺炎症、心筋炎、ＩｇＡ糸球体腎炎、デンスデポジット病、リウマチ性心疾患、ギランバレー症候群、インスリン依存性糖尿病、自己免疫性炎症性眼、自己免疫性甲状腺炎、甲状腺機能低下症（すなわち、橋本甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、円板状ループス、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、受容体自己免疫（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｉｅｓ）、例えば、（ａ）バセドウ病、（ｂ）重症筋無力症、及び（ｃ）インスリン耐性、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、関節リウマチ、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織病、多発性筋炎／皮膚筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、不妊症、原発性糸球体腎炎及びＩｇＡ腎症などの糸球体腎炎、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、真性糖尿病、及びアドレナリン作動薬耐性（喘息または嚢胞性線維症を伴うアドレナリン作動薬耐性を含む）、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、その他の内分泌腺不全、白斑、血管炎、心筋梗塞後、心臓切開後症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、喘息、炎症性ミオパチー、及びその他の炎症性、肉芽腫性、変性、及び萎縮性障害、が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、自己免疫疾患または障害は、クローン病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、乾癬、糖尿病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、及び関節リウマチから選択される。

【0332】

追加の実施形態では、本開示は、免疫疾患または心血管疾患を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＩＣＡＭ－１、Ｐ５３、ＴＮＦ－α、アデノシンＡ１受容体；ＰＣＳＫ９、ＳＥＲＰＩＮＣ１、ＴＦＲ２、ＴＭＰＲＳＳ６、ＣＣＲ３、ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、Ａｐｏ－Ｂ１００、ＡｐｏＣＩＩＩ、Ａｐｏ（ａ）、Ａｐｏ（ｂ）、第ＶＩＩ因子及び第ＸＩ因子、から選択される核酸標的に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0333】

いくつかの実施形態では、本開示は、免疫疾患または心血管疾患を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、アリカフォルセン（ＩＣＡＭ－１；ＩＳＩＳ ２３０２）、ＱＰＩ－１００２（Ｐ５３；Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｑｕａｒｋ）、ＸＥＮ７０１ （Ｉｓｉｓ／Ｘｅｎｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＳＩＳ １０４８３８（ＴＮＦ－α；ＩＳＩＳ／Ｏｒａｓｅｎｓｅ）、ＥＰＩ－２０１０（ＲＡＳＯＮ；アデノシンＡ１受容体；Ｅｐｉｇｅｎｅｓｉｓ／Ｇｅｎｔａ）、プラゾマイシン（Ｉｓｉｓ／Ａｃｈａｏｇｅｎ）、ＡＬＮ－ＰＣＳ０２（ＰＣＳＫ９；Ａｌｎｙｌａｍ）、ＡＬＮ－ＡＴ３（ＳＥＲＰＩＮＣ１；Ａｌｎｙｌａｍ）、ＡＬＮ－ＨＰＮ（ＴＦＲ２；Ａｌｎｙｌａｍ）、ＡＬＮ－ＨＰＮ（ＴＭＰＲＳＳ６；Ａｌｎｙｌａｍ））、ＡＳＭ８－００３（ＣＣＲ３；Ｔｏｐｉｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＳＩＳ ＣＲＰＲｘ（ＣＲＰ；ＩＳＩＳ）、Ｋｙｎａｍｒｏ（商標）（ＩＳＩＳ３０１０１２；Ａｐｏ－Ｂ１００；ＩＳＩＳ／Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ＩＳＩＳ－ＡＰＯＣＩＩＩ Ｒｘ（ＡｐｏＣＩＩＩ；ＩＳＩＳ）、ＩＳＩＳ－ＡＰＯ（ａ）（Ａｐｏ（ａ）；ＩＳＩＳ）；ＩＳＩＳ－ＦＶＩＩ ｒｘ（第ＶＩＩ因子；ＩＳＩＳ）、及びＩＳＩＳ－ＦＸＩ（第ＸＩ因子；ＩＳＩＳ）、から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0334】

追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡｐｏＢに結合するオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ミポメルセン（ＡｐｏＢ）を含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的ＡｐｏＢ核酸結合についてミポメルセンと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0335】

さらなる実施形態では、本開示は、免疫疾患または心血管疾患を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、５’－ＧＣＣＣＡＡＧＣＴＧＧＣＡＴＣＣＧＴＣＡ－３’（配列番号１９）（ＩＣＡＭ－１）；５’－ＧＣＴＧＡＴＴＡＧＡＧＡＧＡＧＧＴＣＣＣ－３’（配列番号２０）（ＴＮＦ－α）；及び５’－ＧＡＴＧＧＡＧＧＧＣＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧ－３’（配列番号２１）（アデノシンＡ１受容体）、から選択される配列を有するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数と競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0336】

いくつかの実施形態では、本開示は、感染症または感染症に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、感染症を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む治療有効量の１つまたは複数のコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。いくつかの実施形態では、感染症は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生虫感染である。

【0337】

いくつかの実施形態では、本開示は、カテゴリーＡの感染因子または感染症に関連する感染または状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、感染症を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む治療有効量の１つまたは複数のコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。特定の実施形態では、感染因子は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ毒素、ｙｅｒｓｉｎａ ｐｅｓｔｉｓ、大痘瘡、フィロウイルス（例えば、エボラ及びマールブルグ）及びアレナウイルス（例えば、ラッサ及びマチュポ）から選択される。特定の実施形態では、治療される状態は、炭疽菌、ボツリヌス中毒症、ペスト、天然痘、野兎病、及びウイルス性出血熱から選択される。

【0338】

いくつかの実施形態では、本開示は、カテゴリーＢの感染因子または感染症に関連する感染または状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、感染症を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供される治療有効量の１つもしくは複数のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。特定の実施形態では、感染因子は、Ｂａｃｉｌｌａ属種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、サルモネラ属種、Ｅ． ｃｏｌｉ ０１５７：Ｈ７、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｃｈｙａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、ウイルス性脳炎アルファウイルス（例えば、ベネズエラ馬脳炎、東部馬脳炎、西部馬脳炎）、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ及びＣｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍから選択される。特定の実施形態では、治療される状態は、ブルセラ症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓのイプシロン毒素、食中毒、鼻疽、類鼻疽、オウム病、Ｑ熱、リシン毒素中毒、チフス熱、ウイルス性脳炎及び赤痢から選択される。

【0339】

いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染またはウイルス感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、ウイルス感染を有するか、または有するリスクがある）に、治療有効量の本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのうちの１つもしくは複数を投与することを含む、前記方法を提供する。当業者には直ちに明らかなように、任意のタイプのウイルス感染またはウイルス感染に起因もしくは関連する状態（例えば、呼吸状態）を、本明細書に提供される方法に従って治療することができる。特定の実施形態では、ウイルス性疾患または障害は、エボラ、マールブルグ、フニン、デング（Ｄｅｎｇｅ）ウエストナイル、ラッサＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ、日本脳炎、ベネズエラ馬脳炎、セントルイス脳炎、マチュポ（ｍａｎｃｈｕｐｏ）、黄熱病、及びインフルエンザ、から選択されるメンバーに関連する感染または状態である。

【0340】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにより治療することができるウイルス感染及び状態を引き起こすウイルスの例としては、レトロウイルス（例えば、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）Ｉ型及びＩＩ型、ならびにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）Ｉ型及びＩＩ型、エプスタイン－バールウイルス、ＨＨＶ６－ＨＨＶ８、及びサイトメガロウイルス）アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、流行性耳下腺炎、ｈＭＰＶ、及び肺炎ウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コルナウイルス（ｃｏｒｎａｖｉｒｕｓ）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱ウイルス、日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルソミクソウイルス（ｏｒｔｈｏｍｙｏｖｉｒｕｓｅｓ）（例えば、インフルエンザウイルスＡ、Ｂ及びＣ、及びＰＩＶ）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス、及びＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルス）、及びラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0341】

追加の実施形態では、本開示は、感冒、ウイルス性咽頭炎、ウイルス性喉頭炎、ウイルス性クループ、ウイルス性気管支炎、インフルエンザ、パラインフルエンザウイルス性疾患（「ＰＩＶ」）（例えば、クループ、細気管支炎、気管支炎、肺炎）、呼吸器合胞体ウイルス（「ＲＳＶ」）疾患、メタニューモウイルス疾患、及びアデノウイルス疾患（例えば、熱性呼吸器疾患、クループ、気管支炎及び肺炎）と関連するかまたはこれらを引き起こすウイルス性呼吸系感染に関連する状態を治療または緩和する方法を提供する。

【0342】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡＶＩ－４０６５（ＨＣＶ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＶＲＸ４９６（ＨＩＶ；ＶＩＲｘＳＹＳ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ミラビルセン（Ｍｉｒａｖｉｒｓｅｎ）（ａｎｔｉｍｉＲ－１２２、Ｓａｎｔａｒｉｓ）、ＧＥＭ ９１（Ｔｒｅｃｏｒｖｉｒｓｅｎ）／９２（５’－ＣＴＣＴＣＧＣＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴＣＣＴＴＣＴ－３’）（配列番号２２））；Ｇａｇ ＨＩＶ；Ｈｙｂｒｉｄｏｎ）、Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ（ホミビルセン；ＣＭＶ；ＩＳＩＳ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ（５’－ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧ－３’）（配列番号２３））、ＡＬＮ－ＲＳＶ０１（ＲＳＶ；Ａｌｎｙｌａｍ）、ＡＶＩ－６００２（エボラ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＡＶＩ－６００３（エボラ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＭＢＩ－１１２１（ヒトパピローマウイルス；Ｈｙｂｒｉｄｏｎ）、ＡＲＣ－５２０（ＨＰＶ 肝炎；Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、及びＡＶＩ－６００１（インフルエンザ／鳥インフルエンザ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＩＳＩＳ１４８０３（ＨＣＶ；ＩＳＩＳ（５’－ＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＴＧＣＡＣＧＧＴＣＴ－３’）（配列番号２４））及び５’－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３’（配列番号２５）（ＣＭＶ）から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。

【0343】

一実施形態では、本開示は、ＲＳＶ感染またはＲＳＶ感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０のＲＳＶオリゴヌクレオチド配列に結合するオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって、治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳは、ＲＳＶ－Ｎオリゴヌクレオチド５’－ＧＧＣ ＵＣＵＵＡＧＣＡＡＡＧＵＣＡＡＧＵＵＧＡＡＵＧＡＵ－３’（配列番号２６）及び５’－ＡＵＣＡ ＵＵＣＡＡＣＵＵＧＡＣＵＵＵＧＣＵＡＡＧＡＧＣＣＡＵ－３’（配列番号２７）；ＲＳＶ－Ｐオリゴヌクレオチド５’－ＣＧＡＵＡＡＵＡＵＡＡＣＵＧＣＡＡＧＡｄＴｄＴ－３’（配列番号２８）及び３’－ｄＴｄＴＧＣＵＡＵＵＡＵＡＵＵＧＡＣＧＵＵＣＵ－５’（配列番号２９）；及びＲＳＶ－Ｆオリゴヌクレオチド５’－ＵＧＣＵＧＵＡＡＣＡＧＡＡＵＵＧＣＡＧｄＴｄＴ－３’（配列番号３０）及び５’－ＣＵＧＣＡＡＵＵＣＵＧＵＵＡＣＡＧＣａｄＴｄＴ－３’（配列番号３１）、からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0344】

追加の実施形態では、本開示は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの組み合わせを、それを必要とする対象に投与することによって、ウイルス感染またはウイルス感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイズする。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つ、または少なくとも５つが、異なる標的核酸に特異的にハイブリダイズする。

【0345】

一実施形態では、本開示は、フィロウイルス（例えば、エボラ及びマールブルグ（Ｍａｒｂｕｒｙ））感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０のフィロウイルスのＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって、治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ＶＰ３５、ＶＰ２４及び／またはＲＮＡポリメラーゼＬに結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0346】

一実施形態では、本開示は、エボラウイルス感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０のエボラＲＮＡ配列に結合するオリゴヌクレオチドを含有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって、治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ＶＰ２４、ＶＰ３５、及び／またはＲＮＡポリメラーゼＬに結合する。追加の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ＶＰ２４、ＶＰ３０、ＶＰ３５、ＶＰ４０、ＮＰ、ＧＰ及び／またはＲＮＡポリメラーゼＬに結合する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＶＰ３５に結合し、５’－６ＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴＧＴＴＣＴＡＧＴＴＧ６－３’のアンチセンス配列を有する（配列番号３２；ここで、Ｃ６はウリジンの塩基部分に付着したＣ６リンカーアームを指し、Ｇ６は、ウリジンの塩基部分に付着したＧ６リンカーアームを指す）。追加の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＶＰ３５に結合し、５’－ＧＣＧＡＣＡＵＣＵＵＣＵＧＵＧＡＵＡＵＵＧ－３’（配列番号３３）及び５’－ＡＵＡＵＣＡＣＡＧＡＡＧＡＵＧＵＣＧＣＵＵ－３’（配列番号３４）；５－ＣＡＵＵＡＣＧＡＧＵＣＵＵＧＡＧＡＡＵ－３’（配列番号３５）及び５’－ＵＣＵＣＡＡＧＡＣＵＣＧＵＡＡＵＧＣＧ－３’（配列番号３６）；５’－ＧＣＡＡＣＵＣＡＵＵＧＧＡＣＡＵＣＡＵＵＣ－３’（配列番号３７）及び５’－ＡＵＧＡＵＧＵＣＣＡＡＵＧＡＧＵＵＧＣＵＡ－３’（配列番号３８）；５’－ＵＧＡＵＧＡＡＧＡＵＵＡＡＧＡＡＡＡＡ－３’（配列番号３９）及び５’－ＵＵＵＣＵＵＡＡＵＣＵＵＣＡＵＣＡＣＵ－３’（配列番号４０）；５’－ＧＵＧＣＵＧＡＧＡＵＧＧＵＵＧＣＡＡＡ－３’（配列番号４１）及び５’－ＵＧＣＡＡＣＣＡＵＣＵＣＡＧＣＡＣＡＡ－３’（配列番号４２）；５’－ＧＣＵＡＡＵＧＡＣＣＧＧＡＡＧＡＡＵＵ－３’（配列番号４３）及び５’－ＵＵＣＵＵＣＣＧＧＵＣＡＵＵＡＧＣＵＧ－３’（配列番号４４）；及び５’－ＣＣＡＡＵＵＡＧＵＡＣＡＡＧＵＧＡＵＵ－３’（配列番号４５）及び５’－ＵＣＡＣＵＵＧＵＡＣＵＡＡＵＵＧＧＵＧ－３’（配列番号４６）からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＮＰに結合し、５’－６ＧＡＧＡＡＴＣＣＡＴＡＣＴＣＧＧＡＡＴＴ６－３’（配列番号４７）；５’－６ＧＡＣＧＡＧＡＡＴＣＣＡＴＡＣＴＣＧＧＡ６－３’（配列番号４８）；及び５’－６ＧＣＡＴＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＴＧＣＣ６－３’（配列番号４９；「６」は、ウリジンの塩基部分に結合したＣ６リンカーアームを指す）、からなる群から選択されるアンチセンス配列を有する。追加の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＮＰに結合し、５’－ＧＧＣＡＡＡＵＵＣＡＡＧＵＡＣＡＵＧＣｄＴｄＴ－３′（配列番号５０）及び５’－ＧＣＡＵＧＵＡＣＵＵＧＡＡＵＵＵＧＣＣＵＵ（配列番号５１）；５’－ＧＣＡＵＧＧＡＧＡＧＵＡＵＧＣＵＣＣＵＵＵ－３’（配列番号５２）及び５’－ＡＧＧＡＧＣＡＵＡＣＵＣＵＣＣＡＵＧＣＵＵ（配列番号５３）；５’－ＡＴＧＧＴＧＡＴＴＴＴＣＣＧＴＴＴＧＡＴ－３’（配列番号５４）及び５’－ＴＣＡＡＡＣＧＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＴ－３’（配列番号５５）；及び５’－ＧＡＧＡＡＧＣＡＡＣＴＣＣＡＡＣＡＡＴ－３’（配列番号５６）及び５’－ＵＧＵＵＧＧＡＧＵＵＧＣＵＵＣＵＣ－３’（配列番号５７）からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼＬに結合し、５’－６ＴＧＧＧＴＡＴＧＴＴＧＴＧＴＡＧＣＣＡＴ６－３’（配列番号５８）のアンチセンス配列を有する；さらなる実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼＬに結合し、５’－ＧＵＡＣＧＡＡＧＣＵＧＵＡＵＡＵＡＡＡＵＵ－３’（配列番号５９）及び５’－ＵＵＵＡＵＡＵＡＣＡＧＣＵＵＣＧＵＡＣＵＵ－３’（配列番号６０）、からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＶＰ２４に結合し、５’－６ＧＣＣＡＴＧＧＴＴＴＴＴＴＣＴＣＡＧＧ６－３’（配列番号６１）のアンチセンス配列を有する。追加の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドはＶＰ２４に結合し、５’－ＧＣＵＧＡＵＵＧＡＣＣＡＧＵＣＵＵＵＧＡＵ－３’（配列番号６２）及び５’－ＣＡＡＡＧＡＣＵＧＧＵＣＡＡＵＣＡＧＣＵＧ－３’（配列番号６３）；５’－ＡＣＧＧＡＵＵＧＵＵＧＡＧＣＡＧＵＡＵＵＧ－３’（配列番号６４）及び５’－ＡＵＡＣＵＧＣＵＣＡＡＣＡＡＵＣＣＧＵＵＧ－３’（配列番号６５）；及び５’－ＵＣＣＵＣＧＡＣＡＣＧＡＡＵＧＣＡＡＡＧＵ－３’（配列番号６６）及び５’－ＵＵＵＧＣＡＵＵＣＧＵＧＵＣＧＡＧＧＡＵＣ－３’（配列番号６７）からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0347】

一実施形態では、本開示は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ（フラビウイルス科）（例えば、ウエストナイルウイルス、黄熱病、日本脳炎、及びデング熱ウイルス）ウイルス感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、フラビウイルス科のメンバーの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって治療する方法を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ウイルスゲノムの５’または３’領域の高度に保存された非コード配列、またはエンベロープコード遺伝子（Ｅ）に対応する配列に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0348】

一実施形態では、本開示は、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄｅａｅ（アレナウイルス科）（例えば、ラッサウイルス、フニンウイルス、及びマチュポウイルス）科ウィルス感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、アレナウイルス科のメンバーの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって治療する方法を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、Ｚタンパク質（亜鉛結合タンパク質）、Ｌタンパク質（ウイルスポリメラーゼ）、またはＧＰＣ（糖タンパク質前駆体）タンパク質をコードする５’または３’ウイルスｍＲＮＡ転写物中の高度に保存された非コード配列に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0349】

一実施形態では、本開示は、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ）感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ科の核酸配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって治療する方法を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、レプリカｓｅ遺伝子（ｏｒｆ１ａ／１ｂ）、ｏｒｆ１ｂリボソームフレームシフト点、転写調節配列（ＴＲＳ）の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、ＴＲＳ配列の３’ＵＴＲ、スパイクタンパク質コード領域及び／またはＮＳＰ１２領域に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0350】

一実施形態では、本開示は、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（レトロウイルス科）（例えば、ＨＩＶウイルス）科ウィルス感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、レトロウイルス科のメンバーの少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって、治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｉｎｔ、及びＶｐｕ領域の高度に保存された領域に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0351】

別の実施形態では、本開示は、インフルエンザＡ型（例えば、Ｈ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２及びＨ５Ｎ１）感染またはインフルエンザに関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする患者に、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのインフルエンザＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを投与することによって治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ウイルスのＮＰ及びＰＡ核酸配列に結合する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ウイルスのＮＰ、Ｍ２、及び／またはＰＢ２（例えば、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ２、及びＮＰのＡＵＧ開始コドン、またはＮＰの末端領域を標的とする）、ＮＳ１及び／またはＰＡ核酸配列に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0352】

一実施形態では、本開示は、インフルエンザウイルス感染または感染に関連する１つまたは複数の状態を、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチド（複数可）が少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０のインフルエンザウイルスＲＮＡ配列に特異的に結合するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする患者に投与することによって治療する方法、を提供する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＮＰオリゴヌクレオチド５’－ＧＧＡＵＣＵＵＡＵＵＵＣＵＵＣＧＧＡＧ－３’（配列番号６８）及び５’－ＣＵＣＣＧＡＡＧＡＡＡＵＡＡＧＡＵＣＣ－３’（配列番号６９）；ＰＡオリゴヌクレオチド５’－ＧＣＡＡＵＵＧＡＧＧＡＧＵＧＣＣＵＧＡ－３’（配列番号７０）及び５’－ＵＣＡＧＣＧＡＣＵＣＣＵＣＡＡＵＵＧＣ－３’（配列番号７１）；ＰＢ１オリゴヌクレオチド５’－ＧＡＵＣＵＧＵＵＣＣＡＣＣＡＵＵＧＡＡ－３’（配列番号７２）及び５’－ＵＵＣＡＡＵＧＧＵＧＧＡＡＣＡＧＡＵＣ－３’（配列番号７３）；及びＭ２オリゴヌクレオチド５’－ＡＣＡＧＣＡＧＡＡＵＧＣＵＧＵＧＧＡＵ－３’（配列番号７４）及び５’－ＡＵＣＣＡＣＡＧＣＡＵＵＣＵＧＣＵＧＵ－３’（配列番号７５）からなる群から選択されるｓｉＲＮＡ／ダイサー配列対を有する。特定の実施形態では、コンジュゲート中の１つまたは複数のオリゴヌクレオチドは、上記オリゴヌクレオチドのうちの１つと結合する標的核酸について競合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中の１つまたは複数のオリゴヌクレオチドは、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中の１つまたは複数のオリゴヌクレオチドは、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0353】

追加の実施形態では、本開示は、アルファウイルス（ウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）感染またはアルファウイルス感染に関連する１つまたは複数の状態を、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートの治療有効量それを必要とする患者に投与することによって治療する方法であって、オリゴヌクレオチドは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアルファウイルスＲＮＡ配列に特異的にハイブリダイズする、方法を提供する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ウイルスのＮＰ及びＰＡ核酸配列に結合する。特定の実施形態では、コンジュゲートのオリゴヌクレオチドは、ウイルスのｎｓｐ１、ｎｓｐ４及び／またはＥ１ ＲＮＡ配列に結合する。さらなる実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、ＰＭＯまたはＰＰＭＯである。追加の実施形態では、コンジュゲート中のオリゴヌクレオチドのうちの１つまたは複数は、アンチセンス、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。

【0354】

いくつかの実施形態では、本開示は、細菌感染または細菌感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、細菌感染を有するか、または有するリスクがある）に、治療有効量の本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのうちの１つもしくは複数を投与することを含む、前記方法を提供する。任意のタイプの細菌感染、または細菌感染から生ずる、または細菌感染に関連する状態を、本明細書で提供される組成物または方法を使用して治療することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される細菌感染または状態は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（サルモネラ）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ（シゲラ）、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（クラミジア）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ（ヘリコバクター）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ（エルシニア）、Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ（ボルダテラ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（シュードモナス）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ（ナイセリア）、Ｖｉｂｒｉｏ（ビブリオ）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ（ヘモフィルス）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ（マイコプラズマ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ（トレポネーマ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ（コクシエラ）、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ（エーリキア）、Ｂｒｕｃｅｌｌａ（ブルセラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ（ストレプトバチルス）、Ｆｕｓｏｓｐｉｒｏｃｈｅｔａ（フソスピロヘータ）、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ（スピリルム）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ（ウレアプラズマ）、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ（スピロヘータ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ（マイコプラズマ）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ（アクチノマイセス）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ（ボレリア）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（バクテロイデス）、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｒａｓ（トリコモラス）、Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ（ブランハメラ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ（パスツレラ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（クロストリジウム）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ（コリネバクテリウム）、Ｌｉｓｔｅｒｉａ（リステリア）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（バチルス）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ（エリシペロスリックス）、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ（ロドコッカス）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（エシェリキア）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ（クレブシエラ）Ｐｓｅｕｄｏｍａｎａｓ（シュードマナス）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ（エンテロバクター）、Ｓｅｒｒａｔｉａ（セラチア）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（スタフィロコッカス）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ（ストレプトコッカス）、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ（レジオネラ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（マイコバクテリウム）、Ｐｒｏｔｅｕｓ（プロテウス）、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（カンピロバクター）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（エンテロコッカス）、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ（アシネトバクター）、Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ（モルガネラ）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ（モラクセラ）、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ（シトロバクター）、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ（リケッチア）、及びＲｏｃｈｌｉｍｅａｅ（ロクリメエ）、から選択される細菌属のメンバーに関連する。さらなる実施形態では、治療される細菌感染または状態は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、及びＰ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、から選択される細菌属のメンバーに関連する。いくつかの実施形態では、細菌感染は細胞内細菌感染である。追加の実施形態では、本開示は、細菌感染または細菌感染に関連する１つまたは複数の状態を、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートの治療有効量を、それを必要とする患者に投与することによって治療する方法であって、オリゴヌクレオチドは、上記の細菌のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの核酸配列に特異的にハイブリダイズする、方法を提供する。

【0355】

追加の実施形態では、本開示は、真菌感染または真菌感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、真菌感染を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含む、治療有効量の１つまたは複数のコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。任意のタイプの真菌感染、または真菌感染から生ずる、または真菌感染に関連する状態を、本明細書で提供される組成物または方法を使用して治療することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される真菌感染または状態は、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ；Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ；Ａｉｅｌｌｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ；Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ；Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ；Ｃ． ａｌｂｉｃａｎｓ， Ｃ． ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ， Ｃ． ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ， Ｃ． ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ａｎｄ Ｃ． ｋｒｕｓｅｉを含むＣａｎｄｉｄａ（カンジダ）属種、Ａ． ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ． ｆｌａｖｕｓ、及び Ａ． ｎｉｇｅｒ を含むＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（アスペルギルス）属種；Ｒｈｉｚｏｐｕｓ（リゾプス）属種；Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ（リゾムコール）属種；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｍｅｌｌａ（カニンガムラ）属種；Ａ．ｓａｋｓｅｎａｅａ、Ａ．ｍｕｃｏｒ及びＡ．ａｂｓｉｄｉａを含むＡｐｏｐｈｙｓｏｍｙｃｅｓ（アポフィソマイセス）属種；Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ；Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｅｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｇｌａｂｒａｔａ；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ（トリコフィトン）属種、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ（ミクロスポルム）属種及びＤｅｒｍａｔｏｐｈｙｒｅｓ（ダーマトフィレス）属種、または病原性であることが知られているかもしくは特定されている任意の他の真菌（例えば、酵母）、から選択される真菌に関連する。追加の実施形態では、本開示は、真菌感染または真菌感染に関連する状態を、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートの治療有効量を、それを必要とする患者に投与することによって治療する方法であって、オリゴヌクレオチドは、上記の真菌のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの核酸配列に特異的にハイブリダイズする、方法を提供する。

【0356】

追加の実施形態では、本開示は、寄生虫感染または寄生虫感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、寄生虫感染を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含む、治療有効量の１つまたは複数のコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。任意のタイプの寄生虫感染、または寄生虫感染から生ずる、または寄生虫感染に関連する状態を、本明細書で提供される組成物または方法を使用して治療することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される寄生虫感染または状態は、Ａｐｉｃｏｍｐｌｅｘａ（アピコンプレックス）門のメンバー、例として、Ｂａｂｅｓｉａ（バベシア）、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ（トキソプラズマ）、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（プラスモジウム）、Ｅｉｍｅｒｉａ（アイメリア）、Ｉｓｏｓｐｏｒａ（イソスポラ）、Ａｔｏｘｏｐｌａｓｍａ（アトキソプラズマ）、Ｃｙｓｔｏｉｓｏｓｐｏｒａ（シストイソスポラ）、Ｈａｍｍｏｎｄｉａ（ハンモンジア）、Ｂｅｓｎｉｏｔｉａ（ベスニオチア）、Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ（サルコシスチス）、Ｆｒｅｎｋｅｌｉａ（フレンケリア）、Ｈａｅｍｏｐｒｏｔｅｕｓ（ヘモプロテウス）、Ｌｅｕｃｏｃｙｔｏｚｏｏｎ（ロイコシトゾーン）、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ（テイレリア）、Ｐｅｒｋｉｎｓｕｓ（パーキンサス）またはＧｒｅｇａｒｉｎａ（グレガリナ）属種；Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ；Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ（ミクロスポラ）門のメンバー、例として、Ｎｏｓｅｍａ（ノセマ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｏｚｏｏｎ（エンテロシトゾーン）、Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ（エンケファリトゾーン）、Ｓｅｐｔａｔａ（セプタタ）、Ｍｒａｚｅｋｉａ（ムラゼキア）、Ａｍｂｌｙｏｓｐｏｒａ（アムブリオスポラ）、Ａｒｎｅｓｏｎ（アルネソン）、Ｇｌｕｇｅａ（グルゲア）、Ｐｌｅｉｓｔｏｐｈｏｒａ（プレイシトフォラ）及びＭｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ（ミクロスポリジウム）属種；ならびにＡｓｃｅｔｏｓｐｏｒａ（アセトスポラ）門のメンバー、例として、Ｈａｐｌｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ（ハプロスポリジウム）属種、から選択される寄生虫に関連する。さらなる実施形態では、治療される寄生虫感染または状態は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｏｖａｌｅ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａ；Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ；Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌ．ｍａｊｏｒ、Ｌ．ａｅｔｈｉｏｐｉｃａ、Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｔ．ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓ．ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓ．ｊａｐｏｎｉｕｍ；Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ；Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ；Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｌｉ；Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ；Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌｏａｒｕｓ；Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、Ｔ．ｓａｇｉｎａｔａ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｔｉｓ、Ｔ．ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｔ．ｔｅｎａｘ；Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ；Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ；Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｂａｂｅｓｉａ ｂｏｖｉｓ、Ｂ．ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ、Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｅｌｌｉ、Ｌ．ｈｏｍｉｎｉｓ；Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ；Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ；Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ；Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｉｓ；Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ；Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ；Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ；Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ；Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ ｎａｎａ；Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ ｌａｔｕｍ；Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ、Ｅ．ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ；Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｐ．ｃａｌｉｅｎｓｉｓ；Ｃｈｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ；Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｆｅｌｉｎｅａｓ、Ｇ．Ｖｉｖｅｒｉｎｉ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ、Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ ｈｕｍａｎｕｓ；Ｐｈｔｈｉｒｌｕｓ ｐｕｂｉｓ；及びＤｅｒｍａｔｏｂｉａ ｈｏｍｉｎｉｓ及び病原性があることが知られている、または特定されている任意の他の寄生虫から選択される寄生虫属種に関連する。追加の実施形態では、本開示は、寄生虫感染または寄生虫感染に関連する１つまたは複数の状態を、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートの治療有効量を、それを必要とする患者に投与することによって治療する方法であって、オリゴヌクレオチドは、上記の寄生虫のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの核酸配列に特異的にハイブリダイズする、方法を提供する。

【0357】

別の実施形態では、本開示は、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、アマンタジン、オセルタミビル、リバビラン、パリビズマブ、及びアナミビルなどの抗ウイルス剤を含むが、これらに限定されない、ウイルス感染またはウイルス感染に関連する状態の治療に現在使用されている、今までに使用されてきた、または有用であることが知られている１つまたは複数の治療薬と組み合わせて投与することによって、ウイルス感染またはウイルス感染に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含む１つまたは複数のコンジュゲートの治療有効量を、アマンタジン、リマンタジン、オセルタミビル、ザナミビル（ｚｎａｍｉｖｉｒ）、リバビリン（ｒｉｂａｖｉｒａｎ）、ＲＳＶ－ＩＶＩＧ（すなわち、静脈内免疫グロブリン注入）（ＲＥＳＰＩＧＡＭ（商標））、及びパリビズマブなどであるがこれらに限定されない１つまたは複数の抗ウイルス剤と組み合わせて投与する。

【0358】

いくつかの実施形態では、本開示は、呼吸器疾患または呼吸器疾患に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、それを必要とする対象（すなわち、呼吸器疾患を有するか、または有するリスクがある）に、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含む、治療有効量の１つまたは複数のコンジュゲートを投与することを含む、前記方法を提供する。本明細書で使用される「呼吸器疾患」という用語は、鼻、喉、喉頭、気管、気管支、及び肺などの呼吸に関与する器官に影響を与える疾患を指す。本明細書で提供される方法に従って治療することができる呼吸器疾患としては、喘息、成人呼吸窮迫症候群及びアレルギー性（外因性）喘息、非－アレルギー性（内因性）喘息、急性重症喘息、慢性喘息、臨床喘息、夜間喘息、アレルゲン誘発喘息、アスピリン感受性喘息、運動誘発喘息、等炭酸ガス性呼吸過多、小児発症喘息、成人発症喘息、咳喘息、職業喘息、ステロイド耐性喘息、季節性喘息、季節性アレルギー性鼻炎、通年性アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患、例えば慢性気管支炎または肺気腫、肺高血圧、間質性肺線維症及び／または気道炎症、及び嚢胞性線維症、ならびに低酸素症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0359】

さらなる実施形態では、本開示は、呼吸器疾患または呼吸器疾患に関連する１つまたは複数の状態を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＳＴＫ、ＲＳＶヌクレオカプシド、Ａｋｔ１、ＷＴ１、ＩＧＦ－１Ｒ、ＮＵＰＲ、ＰＫＮ３、ＰＩ３Ｋ、ＮＦＫｂ、ＭＭＰ－１２、ＶＥＧＦ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＩＬ８Ｒ、ＩＬ４Ｒ、カスパーゼ３、ＩＫＫ２、Ｓｙｋ、Ｌｙｎ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ６、ＧＡＴＡ３、ＥＺＨ２、ｌｅｔ７、ｍｉＲ－３４、ｍｉＲ－２９、ｍｉＲ－２２３／１２７４ａ、ｍｉＲ１、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１３３ａ、ｌｅｔ７ｄ、ｍｉＲ－２９、ｍｉＲ－２００、ｍｉＲ－１０ａ、ｍｉＲ－３４、ｍｉＲ－１２３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５０、ｍｉＲ－１９９ｂ、ｍｉＲ－２１８、及びｍｉＲ－２２２、から選択される核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0360】

いくつかの実施形態では、本開示は、代謝障害を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、Ｅｘｅｌｌａｉｒ（Ｓｙｋキナーゼ）及びＡＬＮ－ＲＳＶ０１（ＲＳＶヌクレオキャプシド）から選択される核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0361】

さらなる実施形態では、本開示は、神経学的状態または障害を治療する方法であって、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの治療有効量を、それを必要とする対象（すなわち、神経学的状態または障害を有するか、または有するリスクがある）に投与することを含む、方法を提供する。「神経学的状態または障害」という用語は、神経変性状態、中枢神経系もしくは末梢神経系の機能不全または神経細胞もしくは組織の壊死及び／またはアポトーシスを特徴とする神経細胞または組織の障害、及び栄養因子欠損に関連する神経細胞または組織の損傷、を含む状態を指すために本明細書では使用される。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療することができる神経変性疾患の例としては、家族性及び孤発性筋萎縮性側索硬化症（それぞれＦＡＬＳ及びＡＬＳ）、家族性及び孤発性パーキンソン病、ハンチントン病（ハンチントン舞踏病）、家族性及び孤発性アルツハイマー病、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、視神経症、例えば、網膜変性を含む緑内障もしくは関連疾患、糖尿病性神経症、または黄斑変性、内耳知覚細胞またはニューロンの変性による難聴、てんかん、ベル麻痺、１７番染色体に関連するパーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、多発性硬化症、びまん性大脳皮質萎縮症、レビー小体型認知症、ピック病、トリプレットリピート病（ｔｒｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、プリオン病、及びシャイドレーガー症候群、が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、治療される神経変性疾患は、家族性及び孤発性筋萎縮性側索硬化症（それぞれＦＡＬＳ及びＡＬＳ）、家族性及び孤発性パーキンソン病、ハンチントン病（ハンチントン舞踏病）、家族性及び孤発性アルツハイマー病、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、多発性硬化症、びまん性大脳皮質萎縮症、認知症、またはピック病から選択される。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療することができる神経細胞または組織損傷の例としては、鈍的外傷または外科的外傷（術後の認知機能障害及び脊髄または脳幹損傷を含む）の後に見られる急性及び非急性損傷、ならびに全脳または局所脳虚血（脳卒中）に関連するような血流を制限する（一過性または永続性）虚血状態；例えば脳組織または脊髄への切開または切断；神経組織の病変またはプラーク；細胞の増殖及び生存に必要な栄養因子（複数可）の欠乏；化学療法剤などの神経毒への曝露；ならびにまた、糖尿病及び腎機能障害などの慢性代謝疾患など、他の病状に付随するものが含まれるが、これらに限定されない。

【0362】

いくつかの実施形態では、本開示は、神経学的状態または障害を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＤＭＤ核酸配列に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡＶＩ－４６５８（ジストロフィン（エキソンスキッピング）；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＩＳＩＳ－ＳＭＮ Ｒｘ（ＳＭＮ；ＩＳＩＳ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ＡＶＩ－５１２６（ＣＡＢＧ；ＡＶＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）及びＡＴＬ１１０２（ＶＬＡ－４（ＣＤ４９ｄ）；ＩＳＩＳ／Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ）、から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。追加の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、エテプリルセンまたはドリサペルセンを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0363】

いくつかの実施形態では、本開示は、代謝障害を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートオリゴヌクレオチド－ＨＥＳを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＦＧＦＲ４、ＧＣＣ、ＰＴＰ１ＶＢ、ＤＭＥ、ＴＴＲ、ＰＴＰＮ１、ＤＧＡＴ及びＡＡＴから選択される核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＩＳＩＳ－ＦＧＦＲ４（ＦＧＦＲ４；ＩＳＩＳ）、ＩＳＩＳ－ＧＣＣＲ ＲＸ（ＧＣＣ；ＩＳＩＳ）、ＩＳＩＳ－ＧＣＧＲＲＸ（ＧＣＧ；ＩＳＩＳ）、ＩＳＩＳ－ＰＴＰ１Ｂ（ＰＴＰ１ＶＢ；ＩＳＩＳ（５’－ＧＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＴＧＡＴＣＣＴＧＣ－３’）（配列番号７６））、ｉＣｏ－００７（ｃ－Ｒａｆ；Ｉｓｉｓ／ｉＣｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．（５’－ＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＴＴ－３’）（配列番号６））；ＩＳＩＳ－ＤＧＡＴＲＸ （ＤＧＡＴ；ＩＳＩＳ）、ＰＦ－０４５２３６５５（ＤＭＥ；Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａ／Ｐｆｉｚｅｒ／Ｑｕａｒｋ）、ＩＳＩＳ－ＴＴＲ Ｒｘ（ＴＴＲ；ＩＳＩＳ／ＧＳＫ）；ＩＳＩＳ－ＡＡＴ Ｒｘ （ＡＡＴ；ＩＳＩＳ／ＧＳＫ）、ＡＬＮ－ＴＴＲｓｃ（トランスエリトリン（Ｔｒａｎｓｅｒｙｔｈｒｉｎ）；Ａｌｎｙｌａｍ）、ＡＬＮ－ＴＴＲ０１（トランスエリトリン；Ａｌｎｙｌａｍ）、及びＡＬＮ－ＴＴＲ０２（トランスエリトリン；Ａｌｎｙｌａｍ）、から選択される核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0364】

いくつかの実施形態では、本開示は、疾患を治療する方法であって、治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0365】

いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的核酸に結合するオリゴヌクレオチド、及び細胞上、または標的核酸を含有する細胞の微小環境中の細胞表面抗原に特異的に結合する標的指向性部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＧＨｒ、ＣＴＧＦ及びＰＫＮ３から選択される標的核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＡＴＬ１１０３－ＧＨｒ Ｒｘ（ＧＨｒ；ＩＳＩＳ／Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ）、ＥＸＣ ００１（ＣＴＧＦ；ＩＳＩＳ／Ｅｘｃａｌｉａｒｄ）、及びＡｔｕ１１１（ＰＫＮ３；Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａ）から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0366】

上記のものに加えて、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、代謝疾患または障害（例えば、真性疾患、肥満、高コレステロール、高トリグリセライド）の治療、骨格系の疾患及び障害（例えば、骨粗鬆症及び変形性関節症）の治療における、心臓血管系の疾患及び障害（例えば、脳卒中、心臓疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血栓症、貧血、白血球減少症、好中球減少症、血小板減少症、顆粒球減少症、汎血球減少症または特発性血小板減少性紫斑病）の治療における；腎臓（例えば、腎症）、膵臓（例えば、膵炎）、皮膚及び眼（例えば、結膜炎、網膜炎、強膜炎、ブドウ膜炎、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、乳頭結膜炎、緑内障、網膜症、及び眼虚血状態、例えば前部乏血性視神経症、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、虚血性視神経症（ＩＯＮ）、ドライアイ症候群）の治療における；臓器移植による拒絶反応の防止（肺、肝臓、心臓、膵臓、腎臓移植など）における、及び再生医療での使用（例えば、老化防止、創傷治癒の促進、骨、コラーゲン、組織、及び器官の成長及び修復の促進における）、を含むがこれらに限定されない用途を有する。

【0367】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｐ５３、カスパーゼ２、ケラチン６ａ、アドレナリン受容体ベータ２、ＶＥＧＦＲ１、ＲＴＰ８０１、ＡｐｏＢ、及びＶＥＧＦから選択される標的核酸に結合するオリゴヌクレオチドを含有する治療有効量のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む、疾患を治療する方法を提供する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、ＴＫＭ－ＡｐｏＢ（ＡｐｏＢ）、Ｉ５ＮＰ（Ｐ５３）、ＱＰＩ－１００７（カスパーゼ２）、ＴＤ１０１（ケラチン６ａ）、ＳＹＬ０４００１２（アドレナリン受容体ベータ２）、ＡＧＮ－７４５（ＶＥＧＦＲ１）、ＰＦ－６５５（ＲＴＰ８０１）、及びベバシラニブ（ＶＥＧＦ）から選択されるオリゴヌクレオチドを含有する。特定の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、標的結合について上記のオリゴヌクレオチドのうちの１つと競合するオリゴヌクレオチドを含有する。

【0368】

種々の実施形態では、本開示は、細胞内、対象内のインビボ、またはエクスビボでの標的核酸またはタンパク質の調節に使用するための組成物を提供する。本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、例えば、対象におけるインビボまたはエクスビボでの核酸またはタンパク質の過剰発現、過少発現及び／または異常発現を特徴とする疾患または障害の治療における用途を有する。感染症、がん、増殖性疾患または障害、神経疾患または障害、及び炎症性疾患または障害、免疫系の疾患または障害、心血管系の疾患または障害、代謝疾患または障害、骨格系の疾患または障害、ならびに皮膚または目の疾患または障害から選択される例示的な疾患または障害の治療におけるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの使用もまた、本明細書で提供される。特定の態様では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、転移を治療するために使用される。

【0369】

当業者が直ちに理解するように、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートにコンジュゲートされた標的指向性部分を含むコンジュゲートの治療用の使用及びコンパニオン診断用の使用は、本質的に無限である。本明細書では、コンジュゲートの例示的な診断用及び治療用の使用が提供される。しかし、本明細書における説明は、限定を意味するものではなく、コンジュゲートは、核酸配列を検出すること、または細胞及び／または生物内の１つまたは複数の核酸もしくは関連タンパク質のレベルを調節することが望ましい任意の状況においての使用を有することが想定される。

【0370】

複数のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるコンジュゲートは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも１０の異なるオリゴヌクレオチドの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、もしくは少なくとも１０の異なるオリゴヌクレオチドを集合的に含有する複数のコンジュゲートまたは異なるオリゴヌクレオチド配列を有するＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２～１５、２～１０、または２～５の間の異なるオリゴヌクレオチド及び／またはＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを含有する。いくつかの実施形態では、複合体中の異なるオリゴヌクレオチドの少なくとも２または少なくとも３が、同じポリペプチドに対応するＤＮＡ及び／またはｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、複合体中の異なるオリゴヌクレオチドの少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、または少なくとも１０が、異なるポリペプチドに対応するＤＮＡ及び／またはｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、異なるポリペプチドに特異的にハイブリダイズする２～１５、２～１０、または２～５の間のオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、異なるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの１つまたは複数が対象に同時に投与される。他の実施形態では、異なるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの１つまたは複数が対象に別々に投与される。

【0371】

ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の追加の薬剤と同時投与される。ある特定の実施形態では、そのような追加の薬剤は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートとは異なる疾患、障害、または状態を治療するように設計される。いくつかの実施形態では、追加の薬剤をＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと同時投与して、複合体の望ましくない効果を治療する。追加の実施形態では、追加の薬剤をＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと同時投与して、組み合わせ効果をもたらす。さらなる実施形態では、追加の薬剤を、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートと同時投与して、相乗効果を生み出す。ある特定の実施形態では、追加の薬剤を投与して、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの望ましくない副作用を治療する。いくつかの実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、追加の薬剤と同時に投与される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ及び追加の薬剤は、単一医薬製剤で一緒に調製される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド－ＨＥＳ及び追加の薬剤は、別々に調製される。さらなる実施形態では、追加の薬剤は、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートとは異なる時点で投与される。

【0372】

キット
本開示はまた、本明細書に記載のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの投与のためのキットも提供する。キットは、本明細書に記載のＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの少なくとも１つを含む材料または構成要素の集合体である。したがって、いくつかの実施形態では、キットは、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートのうちの少なくとも１つを含有する。

【0373】

キットに構成された構成要素の正確な性質は、その意図された目的に依存する。一実施形態では、キットは、ヒト対象を治療する目的で構成される。

【0374】

使用説明書がキットに含まれていてもよい。使用説明書には、典型的には、例えば、がん、炎症、自己免疫疾患、または神経変性疾患を治療するために、所望の結果に影響を与えるためにキットの構成要素を使用する際に用いられる技術を説明する具体的な表現が含まれる。場合により、キットは、希釈剤、緩衝液、薬学的に許容される担体、注射器、カテーテル、アプリケータ、ピペッティングもしくは測定ツール、包帯材料、または当業者によって容易に認識される他の有用な器具などの他の有用な構成要素も含む。

【0375】

キットに組み立てられた材料及び構成要素は、それらの操作性及び有用性を維持する任意の簡便かつ好適な方法で保存されて医師に提供され得る。例えば、構成要素は、室温、冷蔵または冷凍温度で提供することができる。構成要素は、典型的には、好適な包装材料に含まれている。種々の実施形態では、包装材料は、好ましくは減菌かつ汚染物質のない環境を提供するために、周知の方法によって構築される。包装材料には、キット及び／またはその構成要素の内容及び／または目的を示す外部ラベルが付いていてもよい。

【0376】

治療方法
本明細書に記載の方法及び組成物は、がん、感染、免疫障害、貧血、自己免疫疾患、心血管疾患、創傷治癒、虚血関連疾患、神経変性疾患、代謝疾患、ならびに多くの他の疾患及び障害を含むがこれらに限定されない種々の疾患及び障害の治療に用途を有する。

【0377】

さらに、本発明の薬剤のいずれも、がん、感染、免疫障害、炎症性疾患もしくは状態、及び自己免疫疾患、を含むがこれらに限定されない種々の疾患及び障害の治療、または治療用の医薬の製造における使用のためのものであってもよい。

【0378】

いくつかの実施形態では、本開示は、がん、心不全、自己免疫疾患、鎌状赤血球症、サラセミア、失血、輸血反応、糖尿病、ビタミンＢ１２欠乏症、コラーゲン血管疾患、シュワッハマン症候群、血小板減少性紫斑病、セリアック病、内分泌不全状態、例として甲状腺機能低下症もしくはアジソン病、自己免疫疾患、例としてクローン病、全身性エリテマトーデス、関節リウマチもしくは若年性関節リウマチ、免疫障害、例として潰瘍性大腸炎好酸球性筋膜炎、低免疫グロブリン血症、胸腺腫／胸腺癌、移植片対宿主病、前白血病、非血液症候群（例えば、ダウン症候群、デュボヴィッツ症候群、セッケル症候群）、フェルティ症候群、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、夜間発作性ヘモグロビン尿症、骨髄線維症、汎血球減少症、赤芽球癆、シェーンライン・ヘノッホ紫斑病、マラリア、タンパク質飢餓、月経過多、全身性硬化症、肝硬変、代謝低下状態、うっ血性心不全、のうちの１つまたは複数の治療、またはそれを有する患者の治療に関する。

【0379】

いくつかの実施形態では、本開示は、がんの治療、またはがんを有する患者の治療に関する。本明細書で使用される場合、がんは、体の器官及び系の正常な機能を妨害し得る細胞の任意の無秩序な増殖を指し、原発性及び転移性腫瘍の両方を含む。元の場所から遊走し、重要な器官に播種する原発性腫瘍またはがんによって、影響を受けた器官の機能低下により、最終的に対象の死がもたらされる可能性がある。転移は、原発腫瘍から体の他の部分へのがん細胞の播種に起因する、原発腫瘍の場所とは異なるがん細胞またはがん細胞群である。転移は、最終的に対象の死をもたらす場合がある。例えば、がんには、良性及び悪性の癌、ポリープ、過形成、ならびに休眠腫瘍または微小転移を含むことができる。

【0380】

本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートを使用して治療され得る例示的ながんとしては、癌腫、例えば、腺癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、及び移行上皮癌を含む種々のサブタイプ）、肉腫（例えば、骨及び軟部組織を含む）、白血病（例えば、急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性骨髄性、慢性リンパ性、及び有毛細胞を含む）、リンパ腫及び骨髄腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、軽鎖、非分泌性、ＭＧＵＳ、及び形質細胞腫を含む）、及び中枢神経系の癌（例えば、脳（例えば、神経膠腫（例えば、星状細胞腫、乏突起膠腫、及び上衣腫）を含む）、髄膜腫、下垂体腺腫、神経腫、及び脊髄腫瘍（例えば髄膜腫及び神経線維腫）、が挙げられるが、これらに限定されない。

【0381】

治療され得る例示的ながんとしては、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脳及び中枢神経系の癌；乳癌；腹膜の癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸及び直腸癌；結合組織癌；消化器系の癌；子宮内膜癌；食道癌；眼の癌；頭頸部の癌；胃癌（胃腸癌を含む）；膠芽腫；肝癌；肝臓癌；上皮内腫瘍；腎臓または腎癌；喉頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（唇、舌、口、及び咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系の癌；唾液腺癌；肉腫；皮膚癌；扁平上皮癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮または子宮内膜癌；泌尿器系の癌；外陰癌；ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中等度／濾胞性ＮＨＬ；中等度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非切断細胞性ＮＨＬ；バルキー病ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；エイズ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫及び肉腫；移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに及びファコマトーシスに関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、及びメイグス症候群、が挙げられるが、これらに限定されない

【0382】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、微生物感染及び／または慢性感染を有する患者を治療するために使用される。例示的な感染としては、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、結核、骨髄炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エプスタイン－バーウイルスまたはパルボウイルス、Ｔ細胞白血病ウイルス、細菌過剰増殖症候群、真菌または寄生虫感染が挙げられるが、これらに限定されない。

【0383】

種々の実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の炎症性疾患または状態、例として、炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸器疾患、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、敗血症性ショック、関節リウマチ、炎症性腸疾患、炎症性骨盤疾患、疼痛、眼の炎症性疾患、セリアック病、リー症候群、グリセロールキナーゼ欠損症、家族性好酸球増加症（ＦＥ）、常染色体劣性痙性運動失調症、喉頭炎症性疾患；結核、慢性胆嚢炎、気管支拡張症、珪肺症、及びその他のじん肺症を、治療または予防するために使用される。

【0384】

種々の実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の自己免疫疾患または状態、例として、多発性硬化症、糖尿病、狼瘡、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、ギランバレー症候群、強皮症、グッドパスチャー症候群、ウェゲナー肉芽腫症、自己免疫性てんかん、ラスムッセン脳炎、原発性胆道硬化症、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、アジソン病、橋本甲状腺炎、線維筋痛症、メニエール症候群；移植拒絶反応（同種移植拒絶反応の防止など）悪性貧血、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、ライター症候群、バセドウ病、及びその他の自己免疫疾患を治療または予防するために使用される。

【0385】

種々の実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、心臓及び管系に影響を与える疾患または状態などの心血管疾患、限定するものでないが、例として、冠動脈疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）、大動脈弁狭窄症、末梢血管疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、心筋梗塞（心臓発作）、脳血管疾患（脳卒中）、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、狭心症（安定及び不安定）、心房細動、不整脈、弁膜症（ｖａｖｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、及び／またはうっ血性心不全、を治療、制御、または予防するために使用される。

【0386】

種々の実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の代謝関連障害を治療または予防するために使用される。種々の実施形態では、Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１型及び２型糖尿病を含む糖尿病の治療、制御または予防に有用である。

【0387】

種々の実施形態では、本明細書に提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の呼吸器疾患、例として、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、肺血管収縮、炎症、アレルギー、呼吸障害、呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、肺高血圧症、肺血管収縮、肺気腫、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、レフラー症候群、グッドパスチャー症候群、胸膜炎、肺炎、肺水腫、肺線維症、サルコイドーシス、呼吸器合胞体ウイルス感染に関連する合併症、及びその他の呼吸器疾患、を治療または予防するために使用される。

【0388】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＴ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、１つまたは複数の神経変性疾患を治療または予防するために使用される。例示的な神経変性疾患としては、多発性硬化症（良性多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次進行性多発性硬化症（ＳＰＭＳ）；進行性再発性多発性硬化症（ＰＲＭＳ）；及び原発性進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）が含まれるが、これらに限定されない）、アルツハイマー病（早期発症型アルツハイマー病、遅発性アルツハイマー病、及び家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）、パーキンソン病及びパーキンソニズム（特発性パーキンソン病、血管性パーキンソニズム、薬剤性パーキンソニズム、レビー小体型認知症、遺伝性パーキンソン病、若年性パーキンソン病、が含まれるが、これらに限定されない）、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（孤発性ＡＬＳ、家族性ＡＬＳ、西太平洋ＡＬＳ、若年性ＡＬＳ、ヒラマヤ病を含むがこれらに限定されないＡＬＳ）、が挙げられるが、これらに限定されない。

【0389】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容に別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「方法」への言及は、１つまたは複数の方法、及び／または本明細書に記載の及び／または本開示などを読むと当業者に明らかになるタイプの工程を含む。加えて、「細胞」という用語は、本質的に不均一または均一のいずれかである細胞集団として解釈することができ、細胞の集合体を指すこともできる。さらに、本発明の各制限は、本発明の種々の実施形態を包含することができる。したがって、任意の１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の制限のそれぞれが、本発明の各実施形態に含まれ得ることが想定される。

【0390】

上記の詳細な説明及び以下の実施例は、例示であるに過ぎず、本発明の範囲に対する制限であると解釈されるべきではないことを理解されたい。開示された実施形態に対する種々の変更及び修正は、当業者には明らかであり、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく行うことができる。

【0391】

米国出願第６２／９５９，９２８号、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／４２２０２、及び国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６９２９４のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0392】

さらに、引用される全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、及び受託番号／データベースの配列（ポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列の両方を含む）は、それぞれの個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、または受託番号／データベースの配列が、個別に、参照により組み込まれるのと同程度に、あらゆる目的で、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。これらの出版物は、本出願の出願日以前のそれらの開示にのみ提供される。この点のいかなる内容も、先行発明、または任意の他の理由によって、発明者らがかかる開示に先行する権利がないことを承認すると、解釈するべきではない。日付に関する記載、または、これらの文書の内容の描写のすべては、出願人が利用可能な情報に基づき、日付または、これらの文書の内容の正確性のいかなる承認も構成しない。

【0393】

実施例
以下の実施例は、特許請求される発明を例示するために提供されるのであって、限定するものではない。

【0394】

実施例１
例示的な合成スキームＴ（抗体）－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲート
Ｔ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートは、抗体などの標的指向性部分、リンカー、立体配座特異的ペプチド、及びオリゴヌクレオチド－ＨＥＳ複合体の４つの成分で構成されるコンジュゲートである。この例では、標的指向性部分は、抗体であった。抗体のＦｃドメインのジスルフィドを、最初にトリス（２－カルボキシエチル）－ホスフィン（ＴＣＥＰ）で還元し、続いてリンカーの一端にマレイミドを付加した。リンカーアームは、典型的には、６～５０個の原子の範囲であり、この例では、リンカーアームは２５個の原子に加えてジベンゾシクロオクチンを有していた。次に、クリックケミストリーを使用して、立体配座特異的切断部位（実施例３に記載）を含有し、一端にアジドを有するペプチドを、抗体上のリンカーにコンジュゲートさせた。次に、立体配座特異的切断部位を含有するペプチドは、細胞表面上のプロテアーゼの切断部位として機能することができた（以下の例を参照のこと）。ペプチドは、一本鎖アンチセンスまたは二本鎖ｓｉＲＮＡのいずれか（この場合には、ｋ－ＲＡＳに相補的な配列を有する一本鎖アンチセンス配列）であるオリゴヌクレオチドに、抗体連結の遠位側でコンジュゲートさせることができる。立体配座特異的切断部位を含有するペプチドとオリゴヌクレオチドの両方が、ＨＥＳ、具体的にはペプチドＨＥＳとオリゴヌクレオチドＨＥＳを形成するようにそれぞれ２つのフルオロフォアで事前に誘導体化されており、次に、コンジュゲートを細胞表面に送達して、抗体は細胞表面の抗原に結合することができ（この場合はリツキシマブ）、立体配座特異的ペプチドは、同族プロテアーゼ（この場合はマトリックスメタロプロテアーゼ）によって切断され、オリゴヌクレオチドＨＥＳが細胞内に拡散し、その相補配列（この場合はｋ－ＲＡＳ）とハイブリダイズすることができる。

【0395】

実施例２
リンカーアームで共有結合的に標識された抗体は、その後、アームの存在を確認するためにクリックケミストリーを介してフルオロフォアで誘導体化することができる。抗体を最初にＴＣＥＰで還元し、続いて４つのエチレングリコール基を含む２５原子のリンカーを付加した。次に、ジベンゾシクロオクチン基で終端するリンカーを、アジド含有フルオロフォアとコンジュゲートさせた。１時間の反応時間の後、溶液をゲル濾過カラム（ＢｉｏＧｅｌ Ｐ３０）に通し、コンジュゲートはボイドボリュームの直後に溶出された。図２に示すように、２８０ｎｍのピークは抗体によるものであり、６４１のピークはフルオロフォアの共有結合を示す。Ｔ（例えば、抗体）－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの完全な合成は、複数のステップで、例えば（ａ）最初にリンカーを付加し、次に立体配座依存性切断部位を含有するペプチド及びオリゴヌクレオチドを順次付加することによるか、または（ｂ）立体配座依存性切断部位を含有するペプチド及びオリゴヌクレオチドに既にコンジュゲートしたリンカーを抗体に直接付加することにより、行うことができる。各ステップは、フルオロフォアなどのレポーター基を含有する相補的な官能性化学基を使用して確認することができる。

【0396】

実施例３
立体配座特異的切断部位を含有するペプチドの特異性。アミノ酸配列ＰＬＧＩＡ（配列番号７８）を含有する１８アミノ酸ペプチドを、分子内Ｈ型励起子二量体が形成されてＨＥＳ構造を生じさせるように、各末端近くで同じフルオロフォアで共有結合的に標識した。ＰＬＧＩＡ配列を、マトリックスメタロプロテアーゼ－９（ＭＭＰ－９）によって認識され、ＬＧとＩＡとの間で切断する。２μＭで、ＰＬＧＩＡ（配列番号７７）ペプチドが存在するｐＨ７．５緩衝液中にＭＭＰ－１９を加える。ペプチドの切断により、蛍光強度が増加する。この特異性を、対照ペプチド、すなわち、同じ長さ、同じ標識を含むが、立体配座依存性切断部位を含有していないＨＥＳ担持ペプチドと比較する。後者の蛍光は、ＭＭＰの添加により増加せず、このことは、ＭＭＰ－１９に対するＰＬＧＩＡ（配列番号７７）配列の特異性を示す。図３を参照のこと。

【0397】

実施例４
立体配座依存性切断部位を含有するＨＥＳ－ＰＬＧＩＡ（配列番号：７７）ペプチドの保持時間をＨＰＬＣで測定し、Ｃ１８カラムでの保持時間は逆相条件下、すなわち水性緩衝液に負荷し、アセトニトリル緩衝液で３８分で溶出して、測定した（図４Ａを参照のこと）。ＭＭＰ－９への曝露後、主ピークはおよそ３０分及び３１分にあり、３８分にピークがほぼ完全に消失し（図４Ｂ）、実施例３に示された切断と一致していた。例えば、図３を参照のこと。

【0398】

実施例５
立体配座依存性切断部位を含有するペプチドに連結した抗体の形成。Ｂリンパ球上のＣＤ２０を認識するモノクローナル抗体であるリツキシマブは、リンカー及び立体配座依存性切断部位を含有するペプチドにコンジュゲートしていた。２８０ｎｍでのピークは、抗体の存在を示す。ＨＥＳの存在によるペプチド切断部位の立体配座依存性特異性は、５５２ｎｍでのピークと比較して５２０ｎｍでのより強度なピークによって示される。分子内Ｈ－二量体を形成する２つのフルオロフォアが存在しない場合、５５２のピークは５２０のピークよりも高くなる。したがって、ペプチドの立体配座特異性は、リンカーとの共有結合形成後も維持される。例えば、図５を参照のこと。

【0399】

実施例６
Ｂ細胞によるリツキシマブ－オリゴ－ＨＥＳコンジュゲートの認識。ＣＤ２０＋Ｂリンパ球細胞株であるＲａｊｉ細胞を、リンカーアーム及び立体配座依存性切断部位を含有するペプチドで標識されたリツキシマブに４℃で曝露した。洗浄及び生存率色素の添加後、細胞をフローサイトメトリーにより調査した。修飾リツキシマブコンジュゲートに曝露された細胞は、抗体を認識し、細胞の生存率に影響を与えずに抗体に結合した。したがって、クリックケミストリーによる付加の化学による抗体の修飾によって、モノクローナル抗体の認識機能は低下しなかった。例えば、図６を参照のこと。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【手続補正書】

【提出日】2022-09-16

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2023509979000001.app

【国際調査報告】