特表 2023-510429 抗ガレクチン－９抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-13

(54)【発明の名称】抗ガレクチン－９抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230306BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230306BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20230306BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230306BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230306BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230306BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230306BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230306BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C07K16/18

A61P35/00

A61P43/00 121

A61P37/04

A61K39/395 T

A61K39/395 N

A61K39/395 U

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022566507

(86)(22)【出願日】2021-01-06

(85)【翻訳文提出日】2022-09-02

(86)【国際出願番号】 CN2021070473

(87)【国際公開番号】W WO2021139682

(87)【国際公開日】2021-07-15

(31)【優先権主張番号】62/957,910

(32)【優先日】2020-01-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522271568

【氏名又は名称】ハイファイバイオ （エイチケー） リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】マルガル デュコス， ジャーメイン

(72)【発明者】

【氏名】パチェリー， レイチェル

(72)【発明者】

【氏名】ベルトラミネリ， ニコラ アルトゥーロ アルド

(72)【発明者】

【氏名】エイドリアン， フランシスコ

(72)【発明者】

【氏名】シュヴァイツァー， リアン

(72)【発明者】

【氏名】デイビッド， ミュリエル

(72)【発明者】

【氏名】ルー， ユン－ユエ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB09

4C084ZB26

4C084ZC75

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA28

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、Ｇａｌ９に対するヒト化モノクローナル抗体、およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントのアンタゴニストとの併用療法を含む、癌を処置するために抗体を用いる方法を提供する。発明の一態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供し、本発明の抗体は、血液癌、例えばＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ、ならびに固形癌、例えば、乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌を処置するために広く用いられる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ガレクチン－９に特異的であり、前記モノクローナル抗体は：
（１ａ）配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（１ｂ）配列番号１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（２ａ）配列番号１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（２ｂ）配列番号２６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（３ａ）配列番号３４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（３ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号４６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（４ａ）配列番号５０のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号５４のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（４ｂ）配列番号５８のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６２のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（５ａ）配列番号６６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６８のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７０のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（５ｂ）配列番号７４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号７６のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（６ａ）配列番号８２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号８４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号８６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（６ｂ）配列番号９０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号９２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号９４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（７ａ）配列番号９８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１００のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１０２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（７ｂ）配列番号１０６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１０８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（８ａ）配列番号１１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（８ｂ）配列番号１２２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

（１ｃ）（１ａ）および（１ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（２ｃ）（２ａ）および（２ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号２１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（３ｃ）（３ａ）および（３ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号３７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号３３のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（４ｃ）（４ａ）および（４ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５３のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号４９のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（５ｃ）（５ａ）および（５ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号６９のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号６５のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（６ｃ）（６ａ）および（６ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号８５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号８１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（７ｃ）（７ａ）および（７ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１０１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号９７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（８ｃ）（８ａ）および（８ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１１７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１１３のＨＦＲ１配列をさらに含む、
請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

（１Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８であり；かつ／もしくは
（１Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１６であるか、または
（２Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号２４であり；かつ／もしくは
（２Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号３２であるか、または
（３Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号４０であり；かつ／もしくは
（３Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号４８であるか、または
（４Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号５６であり；かつ／もしくは
（４Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号６４であるか、または
（５Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号７２であり；かつ／もしくは
（５Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号８０であるか、または
（６Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８８であり；かつ／もしくは
（６Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列は配列番号９６であるか、または
（７Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１０４であり；かつ／もしくは
（７Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１１２であるか、または
（８Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１２０であり；かつ／もしくは
（８Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１２８である、
請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

ヒト化抗体であり、かつ：
（１）配列番号８の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号１６の前記ＬＣＶＲ配列；または、
（２）配列番号７２の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号８０の前記ＬＣＶＲ配列
を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、一本鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がマウスＧａｌ９と交差反応する、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約０．１～０．２ｎＭのＥＣ５０で結合し、かつ／またはマウスＧａｌ９に約０．５～１．０ｎＭのＥＣ５０で結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫ_ｄで結合する、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

Ｇａｌ９に結合して、Ｇａｌ９受容体（例えば、ＴＩＭ３またはＣＤ４４）へのＧａｌ９の結合を阻害する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

Ｔ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞等）のＧａｌ－９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和する、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を抑制する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

異種移植腫瘍を有するマウスにおいて、免疫チェックポイントのアンタゴニストと相乗的に、腫瘍成長をインビボ阻害し、かつ／または生存を延長する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、有効量の、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および免疫チェックポイントのアンタゴニストを前記患者に投与することを含む方法。

【請求項15】

前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントであり、必要に応じて、前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、請求項１４～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

化学療法剤、抗血管形成剤、成長阻害剤、免疫腫瘍治療剤、および／または抗新生物組成物を前記患者に投与することをさらに含む、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

請求項１～１３のいずれか１項に規定の重鎖もしくは軽鎖、またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。

【請求項19】

ヒト細胞内での発現のためにコドン最適化されている、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項20】

請求項１８または１９に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター（例えば、哺乳動物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）等のベクター。

【請求項21】

癌を発症するか、または癌が再発するリスクがある、癌と診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいは癌を有する患者を識別かつ処置する方法であって、前記患者由来のサンプル中のガレクチン－９のレベルが、健康な個体または対照個体におけるガレクチン－９の基準レベルよりも高いと前記患者を識別すると、有効量の、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む方法。

【請求項22】

前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルを前記基準レベルと比較することによって、前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルが前記基準レベルよりも高いと前記患者を識別することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

免疫チェックポイントのアンタゴニストを前記患者に投与することをさらに含み、必要に応じて、前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである、請求項２１または２２に記載の方法。

【請求項24】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、請求項２１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記患者が、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者であるか、または前記患者が、Ｆａｂ Ｍ２もしくはＭ３のＡＭＬ患者ではない、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、または血清サンプルである、請求項２１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

ＡＭＬを発症するか、またはＡＭＬを再発するリスクがある、ＡＭＬと診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいはＡＭＬを有する患者を識別かつ処置する方法であって、前記患者由来の骨髄（ＢＭ）由来単核細胞（ＭＮＣ）サンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルが、健康な個体または対照個体におけるＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４^＋細胞における基準レベルよりも統計的に有意に高いか、または低いと前記患者を識別すると、有効量の、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む方法。

【請求項29】

（１）前記患者がＦａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に高く、または（２）前記患者がＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に低い、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

癌の処置に用いられる、ガレクチン－９に対して向けられるか、またはガレクチン－９に特異的な抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分は、エフェクタＴ細胞増殖を救済し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強し、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、抗体またはその抗原結合部分。

【請求項31】

エフェクタＴ細胞増殖を救済または促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法であって、前記エフェクタＴ細胞を、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、方法。

【請求項32】

対象において免疫記憶を誘導または促進する方法であって、有効量の、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記免疫記憶が、前記対象における腫瘍の進行もしくは再発、または癌細胞の増殖を阻害するか、または低減するのに有効である、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年１月７日に出願された米国仮特許出願第６２／９５７，９１０号に基づく優先権を主張し、その全内容は、全ての配列および図面を含んで、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
ガレクチン－９（またはＧａｌ９）は、脊椎動物において少なくとも１５種のメンバーを有するガレクチン（またはＳ型レクチン）タンパク質ファミリーのメンバーであり、ヒトでは１０種を含む。ガレクチン－９は、リーダーペプチドを有していない可溶性の３４～３９ｋＤａのタンパク質ではあるものの、非古典的機構を介して分泌される。ガレクチン－９は、糖タンパク質および糖脂質のベータ－ガラクトシド残基と優先的に相互作用する。ヒトにおいて、ガレクチン－９は、長型、中型、および短型の３つのアイソフォームが存在する。

【0003】

ガレクチン－９は、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ－３）について最も研究されているリガンドの１つであり、ＣＬＬ、ＭＤＳ、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、ＡＭＬ等の種々の血液学的悪性腫瘍、ならびに肺癌、乳癌、および肝細胞癌等の固形腫瘍において発現される。

【0004】

ＨＡＶＣＲ２／ガレクチン－９相互作用は、腫瘍微環境および慢性感染においてＴ細胞増殖およびエフェクタ機能を減弱させることが見出されている。さらに、ガレクチン－９は、腫瘍細胞形質転換、細胞周期調節、血管形成、および細胞接着による腫瘍形成に寄与している。

【0005】

また、ガレクチン－９は、制御性Ｔリンパ球（またはＴｒｅｇ）によって直接発現され、その発現は、Ｔｒｅｇ活性化の間に増大する。一方、ガレクチン－９は、エフェクタＴリンパ球（ＣＤ８^＋ＣＴＬ等）によって非常に弱く発現され、この発現は、エフェクタＴリンパ球活性化の間に消失する。抗Ｇａｌ９抗体によるガレクチン－９の阻害が、Ｔｒｅｇの抑制活性を阻害することが見出されている。

【0006】

Ｗｕら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４１（２）：２７０－２８２，２０１４）は、Ｇａｌ－９が免疫応答の調節に重要であることを報告した。Ｇａｌ－９は、誘導性制御性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）によって高度に発現される。Ｇａｌ－９は、天然の制御性Ｔ（ｎＴｒｅｇ）細胞ではなくｉＴｒｅｇ細胞の生成および機能にとって重要であった。ｉＴｒｅｇ細胞内でのＧａｌ－９発現が、転写因子Ｓｍａｄ３によって駆動されて、フィードフォワードループを形成し、これがＦｏｘｐ３発現をさらに促進した。Ｇａｌ－９は、ｉＴｒｅｇ細胞の受容体ＣＤ４４に直接結合することによって、その安定性および機能を増大させて、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦ－β）受容体Ｉ（ＴＧＦ－βＲＩ）および活性化されたＳｍａｄ３との複合体を形成した。Ｇａｌ－９シグナル伝達が、Ｆｏｘｐ３遺伝子座のＣＮＳ１領域を介して支配的に作動することによって、ｉＴｒｅｇ細胞誘導を調節することがさらに見出された。外因性Ｇａｌ－９は、Ｔｒｅｇ細胞のエフェクタ分子であることに加えて、ＴＧＦ－βと相乗的に作用して、ｉＴｒｅｇ細胞の分化および維持を強化する。

【0007】

種々のＴリンパ球型が、通常、例えば「エフェクタ」細胞またはエフェクタＴリンパ球に発達し、これが宿主生物を防御するための特殊な免疫機能を果たすこととなる。ゆえに、ＣＤ４^＋Ｔリンパ球または補助Ｔリンパ球は、体液性機能（特異的抗体の産生）において、特にＢリンパ球を、そして細胞傷害活性において、ＣＤ８^＋Ｔリンパ球を補助する主要なサイトカインを分泌する。

【0008】

ＣＤ４^＋Ｔリンパ球の別の集団が、天然の制御性Ｔリンパ球、または「制御性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）」からなる。制御性Ｔリンパ球は、ＣＤ２５分子（それ故に、「ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋」とも呼ばれる）およびＦｏｘｐ３転写因子を構成的に過剰発現する。少しのパーセンテージのＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｔリンパ球が、そのＴＣＲによって種々の自己抗原を認識することとなる免疫応答の作用因子を負に調節するという特殊性を有する。また、調節因子Ｔリンパ球は、特に自己免疫疾患の出現から生物を保護するのに、免疫系の生理学において主要な役割を果たす。換言すれば、Ｔｒｅｇは、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ－４、およびＧＩＴＲを構成する発現を、そして転写因子Ｆｏｘｐ３の特異的発現を特徴とする、天然の制御性Ｔリンパ球（または「ｎＴｒｅｇ」）の亜集団である。

【0009】

Ｔｒｅｇは、エフェクタＴリンパ球に対して免疫抑制活性を発揮する。そのような活性は、腫瘍等の病理学的状況において活性化されると、腫瘍増殖を促進する。ゆえに、Ｔｒｅｇの抑制活性は、エフェクタＴリンパ球の機能を阻害することによって、抗腫瘍免疫応答を低下させる活性として理解することができる。

【0010】

ガレクチン－９は、主に、異なる免疫受容体との相互作用に起因する腫瘍免疫抑制と関連する。例えば、Ｇａｌ９は、Ｇａｌ９ブロック時のＴｈ１アポトーシスの低下、ＣＩＡ（コラーゲン誘導性関節炎）に対するＧａｌ９ノックアウトマウスの感受性の増大、ならびにＧａｌ９投与時の長期移植片生存およびＡＩＤ抑制によって証明されるように、Ｔｈ１応答を阻害し、かつ末梢寛容を誘導する。また、Ｇａｌ９は、末梢ＮＫ細胞機能を調節して、母体－胎児寛容を促進し、ＭＤＳＣの増殖を促進し、かつＴＧＦ－βと相乗作用して、Ｔｒｅｇ増殖を促進する。

【0011】

Ｇａｌ９の循環レベルは、健康な対照と比較して、特定の癌患者において有意に高い。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】ＷＵら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４１（２）：２７０－２８２，２０１４）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0013】

発明の要旨
本明細書中に記載される発明は、ガレクチン－９に対して向けられるヒト化抗体、およびその、制御性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）の抑制因子活性に関連する疾患の処置のための使用に関する。

【0014】

詳細には、本明細書中に記載される発明は、ＴＭＥ（腫瘍微環境）において免疫抑制を解放して、癌患者において抗腫瘍活性および臨床応答をもたらす抗Ｇａｌ９中和抗体を提供する。

【0015】

本発明の抗Ｇａｌ９中和抗体は、米国特許出願公開第２０１７／０２８３４９９Ａ１号（２０１５年６月５日に出願され、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている２つの抗Ｇａｌ９中和抗体（それぞれＡｂ１およびＡｂ２）に基づく派生抗体（ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）であり、これらは双方とも、組換えヒトＧａｌ９にサブｎＭ ＥＣ_５０値で結合して、ＣＤ４^＋Ｔ細胞のヒトＧａｌ９誘導性アポトーシス、または健康なドナーの末梢血由来のＴｒｅｇの増殖をブロックする。しかしながら、これらの２つの抗体は、Ａｂ２が、２つの免疫受容体（Ｒ１およびＲ２）との組換えヒトＧａｌ９相互作用をブロックする一方、Ａｂ１がブロックしないという点で、異なる。

【0016】

本明細書中に記載される発明は、Ａｂ１およびＡｂ２に基づく複数のヒト化モノクローナル抗体を提供する。これらのヒト化モノクローナル抗体は、組換えヒトおよび／またはマウスＧａｌ９に結合し、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１アポトーシスをブロックし、かつＧａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖をブロックする。より重要なことには、本発明のヒト化モノクローナル抗体は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントを標的とする抗体と相乗的に作用することで、免疫療法において遭遇する耐性（例えば、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを用いての、非有効な耐性）を克服するための治療上の利点を提供する。

【0017】

本発明の抗体は、血液癌、例えばＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ、ならびに固形癌、例えば、乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌を処置するのに広く用いられる。

【0018】

ゆえに、本発明の一態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ガレクチン－９に特異的であり、前記モノクローナル抗体は：（１ａ）配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（１ｂ）配列番号１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（２ａ）配列番号１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（２ｂ）配列番号２６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（３ａ）配列番号３４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（３ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号４６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（４ａ）配列番号５０のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号５４のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（４ｂ）配列番号５８のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６２のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（５ａ）配列番号６６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６８のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７０のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（５ｂ）配列番号７４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号７６のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（６ａ）配列番号８２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号８４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号８６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（６ｂ）配列番号９０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号９２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号９４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（７ａ）配列番号９８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１００のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１０２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（７ｂ）配列番号１０６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１０８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または（８ａ）配列番号１１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに（８ｂ）配列番号１２２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。

【0019】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片では、（１ｃ）（１ａ）および（１ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（２ｃ）（２ａ）および（２ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号２１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（３ｃ）（３ａ）および（３ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号３７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号３３のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（４ｃ）（４ａ）および（４ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号５３のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号４９のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（５ｃ）（５ａ）および（５ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号６９のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号６５のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（６ｃ）（６ａ）および（６ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号８５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号８１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（７ｃ）（７ａ）および（７ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号１０１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号９７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または（８ｃ）（８ａ）および（８ｂ）の抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号１１７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１１３のＨＦＲ１配列をさらに含む。

【0020】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片では、（１Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号８であり；かつ／もしくは（１Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号１６であるか、または（２Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号２４であり；かつ／もしくは（２Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号３２であるか、または（３Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号４０であり；かつ／もしくは（３Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号４８であるか、または（４Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号５６であり；かつ／もしくは（４Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号６４であるか、または（５Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号７２であり；かつ／もしくは（５Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号８０であるか、または（６Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号８８であり；かつ／もしくは（６Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号９６であるか、または（７Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号１０４であり；かつ／もしくは（７Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号１１２であるか、または（８Ａ）ＨＣＶＲ配列は配列番号１２０であり；かつ／もしくは（８Ｂ）ＬＣＶＲ配列は配列番号１２８である。

【0021】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化抗体であり、かつ：（１）配列番号８のＨＣＶＲ配列および配列番号１６のＬＣＶＲ配列；または（２）配列番号７２のＨＣＶＲ配列および配列番号８０のＬＣＶＲ配列を含む。

【0022】

特定の実施形態において、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、一本鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、Ｉｇｎａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0023】

一部の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、免疫エフェクタ機能を無効にする操作されたＦｃ領域を有する。例えば、主題の抗体の操作されたＦｃ領域は、「ＬＡＬＡ」二重変異（Ｌｅｕ２３５Ａｌａと共にＬｅｕ２３４Ａｌａ）を有するので、エフェクタ機能が低下し得る。そのような抗体は、ＩｇＧ１上にＬＡＬＡ二重変異を有することについて、Ｇ１ＡＡの名称を有し得る。

【0024】

Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）および補体タンパク質Ｃ１ｑへの結合を部分的または完全に欠くことで免疫エフェクタ機能が無効にされている他の組換えヒトＩｇＧ抗体（ｈＩｇＧ）が、当該技術において知られており、ＦｃγＲ活性化およびＦｃ媒介性毒性を低減するための種々の治療用途に有用である。そのような特定のＦｃ操作抗体／断片は、この目標を部分的に達成する一方、他のものはＦｃγＲ活性化およびＦｃ媒介性毒性を完全に無効にする。特定の実施形態において、本発明の抗体／断片は、ｈＩｇＧ１－Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡまたはｈＩｇＧ４－Ｐ３２９Ｇ ＳＰＬＥ（ＩｇＧ４のヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ変異体）変異を含む操作されたｈＩｇＧ Ｆｃドメインを有し、ＦｃγＲおよびＣ１ｑ相互作用が完全に無効にされ、かつＦｃＲｎ相互作用およびＦｃ安定性の影響を受けない。Ｐ３２９Ｇ Ｆｃ変異は、ＦｃγＲとのプロリンサンドイッチモチーフの形成を破壊する。このモチーフは、全てのＩｇＧ Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の界面に存在するので、その破壊を、全てのヒト、および他の大部分の哺乳動物のＩｇＧサブクラスにもたらして、エフェクタサイレントＩｇＧ分子を作り出すことができる。ゆえに、特定の実施形態において、主題の抗体／断片は、そのようなエフェクタサイレントＦｃ変異を有するいずれか１つのＩｇＧサブクラスを有する。

【0025】

特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、マウスＧａｌ９と交差反応する。

【0026】

特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＧａｌ９に約０．１～０．２ｎＭのＥＣ５０で結合し、かつ／またはマウスＧａｌ９に約０．５～１．０ｎＭのＥＣ５０で結合する

【0027】

特定の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＧａｌ９に約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫＤで結合する。

【0028】

特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、抗体の開発可能性を向上させるように設計された、そのアミノ酸配列の１つまたはそれを超える点変異を含む。例えば、特定の実施形態において、１つまたはそれを超える点変異は、抗体を、その、宿主細胞内での発現中に、その、製造および／もしくは製剤化プロセス中の精製中に、かつ／またはその、対象患者への投与中に、より安定にする。特定の実施形態において、１つまたはそれを超える点変異により、製造および／または製剤化プロセス中に抗体が凝集しにくくなる。

【0029】

特定の実施形態において、本発明は、配列中（例えば、１つまたはそれを超えるＣＤＲ中）の１つまたはそれを超えるアミノ酸を置換することによって、疎水性が除去されたか、もしくは低減された、かつ／または電荷が最適化された等の、開発可能性の問題が最小限に抑えられたか、または低減された治療用抗体を提供する。

【0030】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｇａｌ９に結合して、Ｇａｌ９受容体（例えば、ＴＩＭ３またはＣＤ４４）へのＧａｌ９の結合を阻害する。

【0031】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞等）のＧａｌ９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和する。

【0032】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を抑制する。

【0033】

特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、異種移植（ＸＥＮＯＧＲＡＰＨ）腫瘍を有するマウスにおいて、免疫チェックポイントのアンタゴニストと相乗的に、腫瘍成長をインビボ阻害し、かつ／または生存を延長する。

【0034】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である。

【0035】

本発明の別の態様は、癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および免疫チェックポイントのアンタゴニストを患者に投与することを含む方法を提供する。

【0036】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである。

【0037】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である。

【0038】

特定の実施形態において、抗体は、抗ＰＤ－１抗体、例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、またはペンブロリズマブである。

【0039】

特定の実施形態において、抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１である。

【0040】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＡＵＮＰ１２等のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１；ＣＡ－１７０等のＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤、またはＢＭＳ－９８６１８９等の大環状ペプチドの（非抗体）ペプチド阻害剤である。

【0041】

特定の実施形態において、癌は、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である。

【0042】

特定の実施形態において、方法は、化学療法剤、抗血管形成剤、成長阻害剤、免疫腫瘍治療剤、および／または抗新生物組成物を患者に投与することをさらに含む。

【0043】

本発明の別の態様は、本発明の重鎖もしくは軽鎖、またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0044】

特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ヒト細胞内での発現のためにコドン最適化されている。

【0045】

本発明の別の態様は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0046】

特定の実施形態において、ベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳動物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）である。

【0047】

本発明の別の態様は、癌を発症するか、または癌が再発するリスクがある、癌と診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を促進し、強化し、回復させ、もしくは救済し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいは癌を有する患者を識別かつ処置する方法であって、患者由来のサンプル中のガレクチン－９のレベルが、健康な個体または対照個体におけるガレクチン－９の基準レベルよりも高いと患者を識別すると、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することを含む方法を提供する。

【0048】

特定の実施形態において、本方法は、サンプル中のガレクチン－９のレベルを基準レベルと比較することによって、サンプル中のガレクチン－９のレベルが基準レベルよりも高いと患者を識別することをさらに含む。

【0049】

特定の実施形態において、本方法は、免疫チェックポイントのアンタゴニストを患者に投与することをさらに含む。

【0050】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである。

【0051】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である。

【0052】

特定の実施形態において、抗体は、抗ＰＤ－１抗体、例えば、セミプリマブ、ニボルマブ、またはペンブロリズマブである。

【0053】

特定の実施形態において、抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アベルマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ＫＮ０３５、またはＣＫ－３０１である。

【0054】

特定の実施形態において、免疫チェックポイントのアンタゴニストは、ＡＵＮＰ１２等のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１；ＣＡ－１７０等のＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤、またはＢＭＳ－９８６１８９等の大環状ペプチドの（非抗体）ペプチド阻害剤である。

【0055】

特定の実施形態において、癌は、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である。

【0056】

特定の実施形態において、患者は、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者であるか、または患者は、Ｆａｂ Ｍ２もしくはＭ３のＡＭＬ患者ではない。

【0057】

特定の実施形態において、サンプルは、血液サンプル、血漿サンプル、または血清サンプルである。

【0058】

本発明の別の態様は、ＡＭＬを発症するか、またはＡＭＬを再発するリスクがある、ＡＭＬと診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいはＡＭＬを有する患者を識別かつ処置する方法であって、患者由来の骨髄（ＢＭ）由来単核細胞（ＭＮＣ）サンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルが、健康な個体または対照個体におけるＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４^＋細胞における基準レベルよりも統計的に有意に高いか、または低いと患者を識別すると、有効量の本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を患者に投与することを含む方法を提供する。

【0059】

特定の実施形態において、患者由来のＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルは、患者がＦａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ４、またはＭ５のＡＭＬ患者である場合、基準レベルよりも有意に高い。

【0060】

特定の実施形態において、患者由来のＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルは、患者がＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者である場合、基準レベルよりも有意に低い。

【0061】

本発明の別の態様は、癌の処置に用いられるガレクチン－９に対して向けられるか、またはガレクチン－９に特異的な抗体またはその抗原結合部分であって、エフェクタＴ細胞増殖を救済し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する抗体またはその抗原結合部分を提供する。

【0062】

特定の実施形態において、エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である。

【0063】

本発明の別の態様は、エフェクタＴ細胞増殖を救済または促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法であって、エフェクタＴ細胞を、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法を提供する。

【0064】

特定の実施形態において、エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である。

【0065】

本発明の別の態様は、抗腫瘍（抗癌）活性をもたらす免疫記憶を誘導または促進するための方法および関連する組成物を提供する。特定の実施形態において、方法は、対象における腫瘍または癌の開始、進行、または再発を効果的に低減するか、または阻害する免疫記憶を誘導、刺激、または促進するのに有効な量の組成物（本発明の抗体を含む医薬組成物等）を対象に投与することを含む。

【0066】

実施例または特許請求の範囲にのみ記載されるものを含む、本明細書中に記載される本発明の任意の１つの実施形態は、明示的に否定されない限り、またはそれ以外では不適切でない限り、本発明の任意の１つまたはそれを超える更なる実施形態と組み合わせることができることが理解されるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0067】

【図1】図１は、種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体の配列アラインメントを示す。

【図2】図２は、種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体の配列アラインメントを示す。

【図3】図３は、組換えヒトＧａｌ９に対する種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体の結合親和性（ｎＭでのＥＣ_５０として測定）を示す。異なる抗原に対するアイソタイプマッチ抗体を陰性対照として用いる。ある場合には、元のヒト－マウスキメラ抗体もまた、比較のために含めている。

【図4】図４は、組換えマウスＧａｌ９に対する種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体の結合親和性（ｎＭでのＥＣ_５０として測定）を示す。異なる抗原に対するアイソタイプマッチ抗体を陰性対照として用いる。ある場合には、元のヒト－マウスキメラ抗体もまた、比較のために含めている。

【図5】図５は、本発明の種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体が、ＴＩＭ３およびＣＤＣ４４への結合をブロックすることができることを示す。

【図6】図６は、本発明の種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体が、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１細胞アポトーシスを中和する能力を示す。

【図7】図７は、本発明の種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体が、Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を中和する能力を示す。

【図8】図８は、本発明の種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体が、抗ＰＤ１抗体と組み合わせて用いた場合に長期生存を促進する能力を示す。データは、抗ＰＤ１抗体との併用療法が、腫瘍容積増大の阻害によって測定される、有意に良好な／相乗的な治療有効性をもたらしたことを実証する。

【図9】図９は、本発明の種々の抗ヒトガレクチン－９ヒト化抗体が、抗ＰＤ１抗体と組み合わせて用いた場合に長期生存を促進する能力を示す。データは、抗ＰＤ１抗体との併用療法が、経時的な生存によって測定される、有意に良好な／相乗的な治療有効性をもたらしたことを実証する。

【図10】図１０は、ＡＭＬ患者および健康な個体由来の血清または血漿中のガレクチン－９のレベルを示す。データは、診断時または再発／難治性（Ｒ／Ｒ）段階でのＡＭＬ患者由来の血漿中のガレクチン－９レベルが、化学療法処置後の完全寛解時の健康な患者およびＡＭＬ患者由来の血漿中よりも有意に高かったことを実証する。

【図11】図１１は、Ｆｒｅｎｃｈ－Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｂｒｉｔｉｓｈ（Ｆａｂ）分類に従って層別化したＡＭＬ患者由来の血漿または血清中のガレクチン－９のレベルを示す。データは、診断時のＦａｂ Ｍ２またはＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルが、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、またはＭ５のＡＭＬ患者由来の血漿中で観察されたものよりも有意に低かったことを示す。診断時のＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルは、正常な生理学的範囲内にあった。

【図12】図１２は、Ｆｒｅｎｃｈ－Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｂｒｉｔｉｓｈ（Ｆａｂ）分類に従って層別化したＡＭＬ患者由来、または健康な個体由来の骨髄（ＢＭ）由来単核細胞（ＭＮＣ）中のガレクチン（ＧＡＬＡＣＴＩＮ）－９コードｍＲＮＡ（ＬＧＡＬＳ９）のレベルを示す。データは、診断時のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ（全てＦａｂと考えられる）におけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルが、健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４^＋細胞において観察されるｍＲＮＡレベルよりも高かったことを示す。診断時のＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣにおけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルは、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ、または健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣもしくはＣＤ３４^＋細胞において観察されるものよりも有意に低かった。

【図13】図１３は、単剤療法としての本発明の抗体の抗腫瘍活性を示す。この実験は、本発明の抗Ｇａｌ９モノクローナル抗体が、異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）マウスモデルにおいて腫瘍成長をインビボ阻害するのに有効であることを実証する。詳細には、約５０万個の癌細胞を実験マウスに接種して、腫瘍塊を所定のサイズまで成長させた。次いで、マウスを無作為化して、２つの抗体の１つを腹膜内に（ｉ．ｐ．）注射した：（１）１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＩｇＧアイソタイプ対照、（２）１０ｍｇ／ｋｇの用量での抗Ｇａｌ９抗体ＨＦＢ９－２。種々の群用の抗体の最初の用量を１日目に投与して、その後の用量を３日毎に、抗ＨＦＢ９－２抗体および対照抗体によるあらゆる群に対して合計８回用量投与した。データを平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す（Ｎ＝１０頭／群）。主題の抗Ｇａｌ９抗体は、インビボでの腫瘍成長に及ぶ阻害効果を示したことが明らかである。

【図14】図１４はさらに、生存に関する単剤療法としての本発明の抗体の抗腫瘍活性を示す：対照群内の全てのマウスが死亡し、ＨＦＢ９－２処置群内のマウスの４０％（１０頭中４頭）が、６週目の終わりに腫瘍なしで生存した。

【図15】図１５は、本発明の抗体の抗腫瘍活性の免疫記憶を示す。第１の腫瘍接種／チャレンジ後、無感作動物は腫瘍を生じ、４頭の動物のうち２頭が３１日以内に３０００ｍｍ^３のヒトエンドポイントの腫瘍容積に達した。本発明の抗体であるＨＦＢ９－２によって以前に処置され、かつ治癒された、腫瘍退縮が完了した４頭の動物は、第１の腫瘍チャレンジの６３日後に接種した第２のＷｅｈｉ－１６４腫瘍チャレンジを完全に拒絶した。これらのデータは、ＨＦＢ９－２処置によって誘導される長期免疫記憶を示唆する。

【発明を実施するための形態】

【0068】

発明の詳細な説明
１．概要
免疫チェックポイントを標的とするモノクローナル抗体が、広範な腫瘍型における臨床的成功を実証してきたが、持続的応答は、処置に対する一次耐性または二次耐性に起因して、一部の患者においてしか観察されない。

【0069】

出願人は、ガレクチン９（Ｇａｌ－９）が、腫瘍を現在の免疫療法に対して耐性にする、腫瘍微環境内に存在する重要な因子であると考えている。幾つかある証拠の中で特に、ＡＭＬおよびＡＬＬ等の血液悪性腫瘍、および複数の固形腫瘍を含む様々な癌型において高いＧａｌ－９発現が報告されている。

【0070】

本明細書中に記載される本発明は、癌患者の少なくともサブセットにおいて耐性を克服し、かつ臨床応答を向上させる、Ｇａｌ－９を標的とする抗体を提供する。本発明のモノクローナル抗体は、サブナノモル濃度の親和性でヒトＧａｌ９に特異的に結合し、ヒト腫瘍細胞によって産生される組換えＧａｌ９およびＧａｌ９を認識し、かつマウスおよびサルのＧａｌ９オルソログと交差反応性である。また、本発明のモノクローナル抗体は、Ｇａｌ９の、その受容体ＴＩＭ３およびＣＤ４４との相互作用を、用量依存的にブロックする。これらの２つの受容体は、エフェクタＴ細胞および制御性Ｔ細胞内でＧａｌ９免疫抑制シグナルを媒介することが説明されてきた。健康なドナー由来のヒトＰＢＭＣの、本発明の抗体による処置により、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１細胞アポトーシスが防止されて、制御性Ｔ細胞の増殖が抑制される。

【0071】

本発明の抗体の特定のヒト化バージョンが、安定性および薬物動態（ＰＫ）プロファイルに関して、さらに好適な特徴を示すので、治療用抗体としての更なる開発に比類なく適している。具体的には、そのようなヒト化抗体は、４０℃にて少なくとも１４日間、低ＰＨにて数時間、そして数回の凍結融解サイクルの後に、安定性を示した。一方、Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの１０ｍｇ／ｋｇの単回用量投与後の高い血漿曝露が、ヒト化抗体について観察された。

【0072】

本発明の抗体は、ＡＭＬ等のいくつかの癌を処置するのに用いることができる。Ｇａｌ９は、白血病幹細胞の自己再生因子、および抗癌免疫の抑制因子の双方として、ＡＭＬにおいて二重の役割を果たすことが報告されている。ゆえに、本発明のＧａｌ９中和抗体を用いることによってＧａｌ９機能をアンタゴナイズすることは、ＡＭＬを処置するための魅力的な治療アプローチを表す。

【0073】

まとめると、本明細書中に提示されるデータは、本発明の抗体によるＧａｌ９の中和が、現在の免疫療法の効力を制限することが知られている重要な免疫抑制機構をブロックすることを実証する。

【0074】

本発明の詳細な態様が、以下の種々のセクションにおいてさらに個別に説明される。しかしながら、実施例または図面にのみ記載される実施形態、および以下の１つのセクションにのみ記載される実施形態を含む本発明の任意の１つの実施形態は、本発明の任意の他の実施形態と組み合わせることができることが理解されるべきである。

【0075】

２．定義
用語「抗体」は、最も広い意味で、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）を含むがこれらに限定されない種々の抗体構造を包含する。また、用語「抗体」は、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む分子であって、抗原に結合することができる分子を広く指し得る。また、用語「抗体」は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、およびマウス、ヒト、カニクイザルその他の種々の種の抗体を含むが、これらに限定されない。

【0076】

しかしながら、より狭義には、「抗体」は、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、およびヒトモノクローナル抗体、特に本発明のヒト化モノクローナル抗体を含む種々のモノクローナル抗体を指す。

【0077】

一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域、および重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖（ＨＣ）、ならびに軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖（ＬＣ）を含む。一部の実施形態において、抗体は、２つの重鎖（各重鎖が、重鎖可変領域、および重鎖定常領域の少なくとも一部を含む）および２つの軽鎖（各軽鎖が、軽鎖可変領域、および軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む）を含む。

【0078】

本明細書中で用いられる、例えば６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または任意の他の抗体が、重鎖および軽鎖を有すると考えられる。そのような一部の実施形態において、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。

【0079】

本明細書中で用いられる用語「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」は、少なくとも、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、フレームワーク２（ＨＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、ＦＲ３（ＨＦＲ３）、およびＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む領域を指す。一部の実施形態において、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ－Ｈ１のＮ末端側にあるＦＲ１（ＨＦＲ１）の少なくとも一部（例えば全体）、および／またはＣＤＲ－Ｈ３のＣ末端側にあるＦＲ４（ＨＦＲ４）の少なくとも一部（例えば全体）を含む。

【0080】

本明細書中で用いられる用語「重鎖定常領域」は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的な重鎖定常領域として、γ、δ、およびαを含む。また、非限定的な例示的な重鎖定常領域として、εおよびμを含む。各重定常領域は、抗体アイソタイプに該当する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体であり、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体である。

【0081】

特定のアイソタイプがさらに、サブクラスに細分され得る。例えば、ＩｇＧ抗体として、ＩｇＧ１抗体（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２抗体（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３抗体（γ３定常領域を含む）、およびＩｇＧ４抗体（γ４定常領域を含む）を含むが、これらに限定されない。ＩｇＡ抗体として、ＩｇＡｌ抗体（α１定常領域を含む）およびＩｇＡ２抗体（α２定常領域を含む）を含むが、これらに限定されない。ＩｇＭ抗体として、ＩｇＭ１（μ１定常領域を含む）およびＩｇＭ２（μ２定常領域を含む）を含むが、これらに限定されない。

【0082】

本明細書中で用いられる用語「重鎖」は、リーダー配列のある、またはない、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態において、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書中で用いられる用語「完全長重鎖」は、リーダー配列のある、またはない、そしてＣ末端リジンのある、またはない、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0083】

本明細書中で用いられる用語「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」は、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、フレームワーク（ＦＲ）２（ＬＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、ＦＲ３（ＬＦＲ３）、およびＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む領域を指す。一部の実施形態において、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１（ＬＦＲ１）の少なくとも一部（例えば全体）、および／またはＦＲ４（ＬＦＲ４）の少なくとも一部（例えば全体）を含む。

【0084】

本明細書中で用いられる用語「軽鎖定常領域」は、軽鎖定常ドメインＣ_Ｌを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域として、λおよびκを含む。

【0085】

本明細書中で用いられる用語「軽鎖」は、リーダー配列のある、またはない、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。一部の実施形態において、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書中で用いられる用語「完全長軽鎖」は、リーダー配列のある、またはない、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。

【0086】

用語（抗体の）「抗体断片」または「抗原結合部分」として、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、および（Ｆａｂ’）_２等の抗原に結合することができる断片を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、抗体断片として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、一本鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍａｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

【0087】

用語「Ｆａｂ」は、分子量が約５０，０００ダルトンの抗体断片を指し、抗原に結合する活性を有する。Ｆａｂは、ジスルフィド架橋によって連結された、重鎖のＮ末端側の約半分、および軽鎖全体を含む。Ｆａｂは、特にプロテアーゼであるパパインによる免疫グロブリンの処理によって得ることができる。

【0088】

用語「Ｆ（ａｂ’）_２」は、約１００，０００ダルトンの断片、および抗原への結合活性を示す。当該断片は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋を介して連結された２つのＦａｂ断片よりも僅かに大きい。これらの断片は、免疫グロブリンを、プロテアーゼであるペプシンで処理することによって得られる。Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片から、ヒンジ領域のジスルフィド架橋の切断によって得ることができる。

【0089】

単一のＦｖ鎖「ｓｃＦｖ」は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインをコードする遺伝子、ならびにこれらのドメインに結合することが意図されるペプチドをコードする配列を用いて合成されるＶＨ：ＶＬポリペプチドに該当する。本発明に従うｓｃＦｖは、例えば遺伝子組換え技術を用いて、適切な高次構造で維持されるＣＤＲを含む。

【0090】

「ｓｃＦｖ」の二量体は、ペプチド結合によって互いに連結された２つのｓｃＦｖ分子に該当する。このＦｖ鎖は、ペプチドをコードするリンカー配列によって連結されるＶＨおよびＶＬをコードする遺伝子を含む融合遺伝子の発現の結果であることが多い。ヒトｓｃＦｖ断片は、好ましくは遺伝子組換え技術の使用によって、適切な高次構造で維持されるＣＤＲ領域を含み得る。

【0091】

「ｄｓＦｖ」断片は、ジスルフィド架橋によって安定化されるＶＨ－ＶＬヘテロ二量体である；「ｄｓＦｖ」断片は、二価（ｄｓＦｖ_２）であり得る。二価Ｓｃ（Ｆｖ）_２または多価抗体の断片は、一価ｓｃＦｖの会合によって自発的に形成されてもよいし、ペプチド結合配列によってｓｃＦｖ断片を連結することによって生成されてもよい。

【0092】

Ｆｃ断片は、抗体の生物学的特性、特に免疫エフェクタによって認識される能力または補体を活性化する能力の支持体である。Ｆｃ断片は、ヒンジ領域を越えた重鎖の定常断片からなる。

【0093】

用語「ダイアボディ」は、２つの抗原固定部位を有する小さな抗体断片を意味する。当該断片は、同じＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖内に、可変軽鎖ドメインＶＬに連結された可変重鎖ドメインＶＨを含む。同じ鎖の２つのドメインのマッチングを可能にするには短過ぎる結合配列を用いると、別の鎖の２つの相補的ドメインとのマッチングが必ず起こるので、２つの抗原固定部位が作り出される。

【0094】

基準抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、抗体競合アッセイによって判定することができる。同じエピトープに結合する抗体は、競合アッセイにおいて、抗原に対する基準抗体の結合を５０％またはそれを超えて阻害する抗体を、そして逆に、競合アッセイにおいて、抗原に対する抗体の結合を５０％またはそれを超えて阻害する基準抗体を指す。用語「競合する」は、同じエピトープについて競合する抗体の文脈において用いられる場合、試験されることとなる抗体が、基準抗体の、共通の抗原への特異的結合を防止または阻害するアッセイによって、抗体間の競合が判定されることを意味する。

【0095】

数多くのタイプの競合結合アッセイを用いることができる：例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉら、１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，９：２４２～２５３参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄら、１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９参照）；固相直接標識アッセイ；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ参照）；Ｉ^１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌら、１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２参照）；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）。

【0096】

典型的には、そのようなアッセイは、非標識試験抗原結合タンパク質および標識基準抗体のいずれかを有する固体表面または細胞に結合する精製抗原の使用を含む。競合的阻害は、試験抗体の存在下で、固体表面または細胞に結合した標識の量を求めることによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）として、基準抗体と同じエピトープに結合する抗体、および立体障害が生じるほど、基準抗体によって結合されるエピトープに十分に近位の隣接エピトープに結合する抗体を含む。一部の実施形態において、競合抗体は、過剰に存在する場合、共通の抗原への基準抗体の特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害することとなる。一部の例において、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、もしくは９７％、またはそれを超えて阻害される。

【0097】

用語「抗原」は、抗体またはその免疫学的に機能的な断片等の選択的結合剤が結合することができ、かつ加えて、当該抗原に結合することができる抗体を産生するのに哺乳動物において用いることができる分子または分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用することができる１つまたはそれを超えるエピトープを有し得る。

【0098】

用語「エピトープ」は、抗体またはその断片等の選択的結合剤によって結合される抗原分子の部分である。当該用語は、抗体に特異的に結合することができるあらゆる決定因子を含む。エピトープは、連続的であることも非連続的であることもできる（例えば、ポリペプチドにおける、ポリペプチド配列内で互いに連続していないが、分子の文脈において、抗原結合タンパク質によって結合されるアミノ酸残基）。一部の実施形態において、エピトープは、抗体を作製するのに用いられるエピトープと類似の三次元構造を含むが、抗体を作製するのに用いられるエピトープ内に見出されるアミノ酸残基を含まないか、またはその一部しか含まないという点で、模倣であってもよい。エピトープ決定因子として、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等の分子の化学的に活性な表面基が挙げられ得、かつ特定の三次元構造特性および／または特定の電荷特性を有し得る。

【0099】

一部の実施形態において、「エピトープ」は、エピトープを決定するのに用いられる方法によって定義される。例えば、一部の実施形態において、抗体は、水素－重水素交換（ＨＤＸ）によって判定されるように、抗原の同じ領域に結合するならば、基準抗体と同じエピトープに結合する。

【0100】

例えば、親抗体ＨＦＢ９－１およびＨＦＢ９－２のエピトープ配列が、米国特許出願公開第２０１７／０２８３４９９Ａ１号（参照により本明細書に組み込まれる）において配列番号９として開示されている。この配列は、Ｐ４ペプチドに対応しており、結合ペプチドの終端およびガレクチン－９のＣ末端部分の開始端をカバーしている。これは、ガレクチン－９の３つのアイソフォーム（例えば、Ｓアイソフォームのアミノ酸１６６～１７８、Ｍアイソフォームのアミノ酸１７８～１９０、Ｌアイソフォームのアミノ酸２１０～２２２）に存在する。本発明のヒト化抗体は、ガレクチン－９の少なくとも１つの、好ましくは全てのアイソフォームに結合することができる。

【0101】

特定の実施形態において、抗体は、Ｘ線結晶学によって判定されるように、抗原の同じ領域に結合するならば、基準抗体と同じエピトープに結合する。

【0102】

本明細書中で用いられる「キメラ抗体」は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルその他）由来の少なくとも１つの可変領域、および第２の種（例えば、ヒト、カニクイザル、ニワトリその他）由来の少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。一部の実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域および少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、キメラ抗体の全ての可変領域が、第１の種に由来し、キメラ抗体の全ての定常領域が、第２の種に由来する。

【0103】

本明細書中で用いられる「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリその他）のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２その他である。

【0104】

本明細書中で用いられる「ＣＤＲグラフト抗体」は、第１（非ヒト）の種の１つまたはそれを超える相補性決定領域（ＣＤＲ）が、第２（ヒト）の種のフレームワーク領域（ＦＲ）上にグラフトされているヒト化抗体を指す。

【0105】

本明細書中で用いられる「ヒト抗体」は、ヒトにおいて産生される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体、例えばＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）、およびインビトロ法、例えばファージディスプレイを用いて選択される抗体を指し、抗体レパートリーはヒト免疫グロブリン配列に基づく。

【0106】

「宿主細胞」は、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、またはレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞として、哺乳動物細胞、例えば霊長類または非霊長類動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；および昆虫細胞を含む。非限定的な例示的な哺乳動物細胞として、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびに２９３細胞およびＣＨＯ細胞、ならびにそれらの誘導体、例えばそれぞれ２９３－６Ｅ細胞およびＤＧ４４細胞を含むが、これらに限定されない。

【0107】

本明細書中で用いられる用語「単離された」は、典型的には自然界において見出される成分の少なくとも一部から分離された、または典型的には生成される成分の少なくとも一部から分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、これが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離されている場合には、「単離された」と称される。ポリペプチドが、発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含有する上清を、ポリペプチドを産生した細胞から物理的に分離することが、ポリペプチドを「単離する」ことと考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、これが典型的には自然界で見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ等）の一部ではない場合には、または例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、ポリヌクレオチドが産生された細胞の成分の少なくとも一部から分離されている場合には、「単離された」と称される。ゆえに、宿主細胞内部のベクター内に含有されるＤＮＡポリヌクレオチドは、当該ポリヌクレオチドが自然界で当該ベクター内に見出されない限り、「単離された」と称される場合がある。

【0108】

用語「対象」および「患者」は、本明細書中で、ヒト等の哺乳動物を指すのに互換的に用いられる。一部の実施形態において、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラボ哺乳動物、家畜哺乳動物、スポーツ哺乳動物、およびペット哺乳動物を含むがこれらに限定されない他の非ヒト哺乳動物を処置する方法もまた提供される。一部の例において、「対象」または「患者」は、疾患または障害の処置を必要とする（ヒト）対象または患者を指す。

【0109】

本明細書中で用いられる用語「サンプル」または「患者サンプル」は、例えば、物理的特性、生化学的特性、化学的特性、および／または生理学的特性に基づいて、特徴付けされ、かつ／または同定されることとなる細胞の実体および／または他の分子実体を含有する、注目する対象から得られるか、またはこれに由来する物質を指す。例えば、フレーズ「疾患サンプル」およびその変形は、特徴付けられることとなる細胞の実体および／または分子実体を含有すると予想されるか、または知られている、注目する対象から得られるあらゆるサンプルを指す。

【0110】

「組織サンプルまたは細胞サンプル」とは、対象または患者の組織から得られた類似の細胞の集まりを意味する。組織サンプルまたは細胞サンプルの供給源は、新鮮な、凍結された、かつ／または保存された器官サンプルもしくは組織サンプルまたは生検または吸引物由来の固体組織；血液またはあらゆる血液成分；痰、脳脊髄液、羊水、腹水、または間質液等の体液；対象の妊娠または発達における任意の時点からの細胞であり得る。また、組織サンプルは、初代細胞もしくは細胞株、または培養細胞もしくは細胞株であり得る。必要に応じて、組織サンプルまたは細胞サンプルは、疾患組織／器官から得られる。組織サンプルは、保存剤、抗凝固剤、バッファ、固定剤、栄養素、抗生物質等の、自然界で組織と本来混在しない化合物を含有し得る。

【0111】

本明細書中で用いられる「基準サンプル」、「基準細胞」、または「基準組織」は、本発明の方法または組成物が、識別するのに用いられることとなる、疾患または症状に罹患していないことが知られているか、または考えられている供給源から得られたサンプル、細胞、または組織を指す。一実施形態において、基準サンプル、基準細胞、または基準組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または症状が同定されることとなる同じ対象または患者の身体の健康な部分から得られる。一実施形態において、基準サンプル、基準細胞、または基準組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または症状が同定されることとなる対象でも患者でもない少なくとも１つの個体の身体の健康な部分から得られる。一部の実施形態において、基準サンプル、基準細胞、または基準組織は、疾患もしくは症状を発症する前に、または疾患もしくは症状の初期段階にて、患者から予め得られたものである。

【0112】

「障害」または「疾患」は、本発明の１つまたはそれを超えるＧａｌ－９アンタゴニストによる処置から利益を得るあらゆる症状である。これには、哺乳動物の、問題となっている障害の素因となる病的状態を含む、慢性の障害または疾患および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書中で処置されることとなる障害の非限定的な例として、癌を含む。

【0113】

「制御性Ｔリンパ球の抑制活性と関連する疾患」とは、特に疾患の発症または持続を促進することによって、制御性Ｔリンパ球の抑制活性が役割を果たすあらゆる疾患（自己免疫性ではない）を意味する。特に、制御性Ｔリンパ球の抑制活性が腫瘍の発達を促進することが実証されている。したがって、本発明は、より具体的には、Ｔリンパ球の抑制活性が役割を果たす癌を対象とする。

【0114】

用語「癌」は、本明細書中で、異常に高いレベルの増殖および成長を示す細胞の群を指すのに用いられる。癌は、良性（良性腫瘍とも称される）であっても、前悪性であっても、悪性であってもよい。癌細胞は、固形癌細胞（すなわち、固形腫瘍を形成）であっても白血病癌細胞であってもよい。用語「癌成長」は、本明細書中で、癌のサイズまたは範囲の対応する増大をもたらす癌を含む１つまたはそれを超える細胞による増殖または成長を指すのに用いられる。

【0115】

癌の例として、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病を含むが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な非限定的な例として、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ，ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肝癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、および種々の型の頭頸部癌を含む。

【0116】

急性骨髄性白血病（ＡＬＭ）のＦｒｅｎｃｈ－Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｂｒｉｔｉｓｈ（Ｆａｂ）分類は、ＡＬＭを、疾患の様々な段階に分類する。Ｆａｂサブタイプを表１に示す。

【表1】

【0117】

特定の実施形態において、本明細書中で用いられる癌は、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）を含む。

【0118】

「化学療法剤」は、癌の処置に有用であり得る化合物である。化学療法剤の例として、以下に限定されないが、アルキル化剤、例えばチオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホナート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、およびウレドパ；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロメラミンを含む）；アセトゲニン（とりわけブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９、およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロフォスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、とりわけカリケアマイシンガムオールおよびカリケアマイシンオメガオール（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ ｌｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，３３：１８３－１８６（１９９４）参照）；ダイネマイシン（ダイネマイシンＡを含む）；ビスホスホナート、例えばクロドロナート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトレビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクォン；エルホミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）クレモフォールフリー、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、ならびにＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロナート；イリノテカン（カンプトサー、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵおよびロイコボリンによるイリノテカンの処置レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン（オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む）；細胞増殖を低減するＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えばエルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）））およびＶＥＧＦ－Ａの阻害剤、ならびに薬学的に許容され得る塩、上記のいずれかの酸または誘導体を含む。

【0119】

更なる非限定的な例示的な化学療法剤として、癌に及ぶホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）が挙げられ、例として、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤（副腎におけるエストロゲン産生を調節する）、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常細胞（ａｂｈｅｒａｎｔ ｃｅｌｌ）増殖に関わるシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、およびＨ－Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）およびＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体を含む。

【0120】

「抗血管形成剤」または「血管形成阻害剤」は、直接的または間接的に、血管形成、脈管形成、または不所望の血管透過性を阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管形成剤として、血管形成因子またはその受容体に結合してその血管形成活性をブロックする剤を含むと理解されるべきである。例えば、抗血管形成剤は、血管形成剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａ（例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）））に対する、またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－１受容体）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えばＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達をブロックする小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）／ＳＵｌ １２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、または、例えば国際公開第２００４／１１３３０４号に記載されるもの）である。また、抗血管形成剤として、天然の血管形成阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンその他を含む。例えば、ＫｌａｇｓｂｒｕｎおよびＤ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７－３９；ＳｔｒｅｉｔおよびＤｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２－３１７９（例えば、悪性黒色腫における抗血管形成療法を列挙する表３）；Ｆｅｒｒａｒａ＆Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９－１３６４；Ｔｏｎｉｎｉら（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９－６５５６（例えば、知られている抗血管形成因子を列挙する表２）；およびＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００－２０６（例えば、治験に用いられる抗血管形成剤を列挙する表１）参照。

【0121】

本明細書中で用いられる「成長阻害剤」は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞等）の成長を阻害する化合物または組成物を指す。ゆえに、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞等）の割合を有意に減少させるものであり得る。成長阻害剤の例として、（Ｓ期以外の場所にて）細胞周期進行をブロックする剤、例えばＧ１停止およびＭ期停止を誘導する剤を含むが、これらに限定されない。古典的なＭ期ブロッカーとして、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンを含む。また、Ｇ１を停止させる剤、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、およびａｒａ－Ｃが、Ｓ期停止にまで波及する。更なる情報を、ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、第１章（表題「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」）（Ｍｕｒａｋａｍｉら（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えばｐ．１３）において見出すことができる。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は双方とも、イチイに由来する抗癌薬物である。ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、ヨーロッパイチイに由来し、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管のアセンブリを促進し、そして、解重合を防止することによって微小管を安定化させて、細胞における有糸分裂の阻害をもたらす。

【0122】

用語「抗新生物組成物」は、少なくとも１つの活性治療剤を含む、癌を処置するのに有用な組成物を指す。治療剤の例として、以下に限定されないが、例えば、化学療法剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法に用いられる剤、抗血管形成剤、癌免疫療法剤（免疫腫瘍治療剤とも称される）、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、および癌を処置するための他の剤、例えば、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えばエルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えばＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えばセレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤｌ抗体、ＢＭＳ－９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤（例えば抗ＰＤＬ２抗体）、ＶＩＳＴＡ阻害剤（例えば抗ＶＩＳＴＡ抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、またはＶＥＧＦ受容体の１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ならびに他の生物活性剤および有機化学剤その他を含む。それらの組み合わせもまた本発明に含まれる。

【0123】

「処置」は、例えば、対象が、標的とされる病的状態または障害を減速（軽減）することであり、そして例えば、対象が、症状または障害の再発を阻害することである治療的処置を指す。「処置」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患（本明細書中で「障害」または「症状」とも称される）のための治療薬のあらゆる投与もしくは施用を包含し、疾患もしくは疾患の進行の阻害、疾患もしくはその進行の阻害もしくは遅延、その発症の停止、疾患の部分的もしくは完全な軽減、疾患の１つもしくはそれを超える病徴の部分的もしくは完全な軽減、または失われた、欠損した、もしくは欠陥のある機能の回復もしくは修復；あるいは非効率的なプロセスの刺激を含む。また、用語「処置」は、あらゆる表現型の特徴の重症度の引下げ、および／または当該特徴の発生率、程度、もしくは見込みの引下げを含む。処置を必要とする者として、既に障害を有する者、および障害の再発のリスクがある者、または障害の再発が予防もしくは減速されるべき者を含む。

【0124】

用語「有効量」または「治療有効量」は、対象において疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。一部の実施形態において、有効量は、所望の治療結果または予防結果を達成するための、必要な投薬量および期間での有効量を指す。治療有効量の本発明のＧａｌ９アンタゴニストは、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力等の因子に従って異なり得る。治療有効量は、Ｇａｌ９アンタゴニストのあらゆる毒性または有害作用を、治療的に有益な作用が上回る量を包含する。

【0125】

「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するための、必要な投薬量および期間での有効量を指す。典型的には、必ずしもそうとは限らないが、疾患の前または疾患の初期段階にて予防用量が対象に用いられるので、予防有効量は治療有効量よりも少ないであろう。

【0126】

「薬学的に許容され得る担体」は、対象への投与用の「医薬組成物」を一緒に含む治療剤に用いられる、当該技術において慣用的な非毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤、または担体を指す。薬学的に許容され得る担体は、使用される投薬量および濃度にてレシピエントに非毒性であり、かつ製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容され得る担体は、使用される製剤に適している。例えば、治療剤が経口投与されることとなるならば、担体はゲルカプセルであり得る。治療剤が皮下投与されることとなるならば、担体は理想的には、皮膚に対して刺激性でなく、かつ注射部位反応を引き起こさない。

【0127】

「製品」は、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患もしくは障害の処置用の医薬品、または本明細書中に記載されるバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含むあらゆる製品（例えば、パッケージまたはコンテナ）またはキットである。一部の実施形態において、製品またはキットは、本明細書中に記載される方法を実行するためのユニットとして販売促進、配布、または販売される。

【0128】

３．癌を処置する方法
本明細書中に記載される発明は、ヒトおよび他の非ヒト哺乳動物を処置する方法に用いられるＧａｌ９アンタゴニスト（抗Ｇａｌ９抗体等）を提供する。

【0129】

病理学的状況では、Ｔｒｅｇは、不適切な免疫抑制を引き起こす虞があり、これが例えば腫瘍成長を促進する虞がある。Ｔｒｅｇは、特にエフェクタＴリンパ球の活性を不適切に阻害することによって、抗腫瘍免疫応答を低減することで、多数の癌型の発生を促進することに関連している。

【0130】

活性化中、ガレクチン－９は、Ｔｒｅｇによって直接発現される一方、エフェクタＴリンパ球によって非常に弱くしか発現されないか、または全く発現されない。ゆえに、例えばＧａｌ－９特異的抗体を用いて、ガレクチン－９を標的とすることにより、エフェクタＴリンパ球の枯渇を引き起こすリスクなしに、制御性Ｔリンパ球の抑制活性を特異的に阻害することができる。したがって、ガレクチン－９に対して向けられて、制御性Ｔリンパ球の抑制活性を阻害する、本発明に従う抗体は、制御性Ｔリンパ球の抑制活性に関連する疾患または症状の処置、特に癌の処置に用いることができる。

【0131】

一部の実施形態において、有効量のＧａｌ９アンタゴニストを、癌の処置を必要とする対象に投与することを含む、癌を処置または予防する方法が提供される。

【0132】

一部の実施形態において、癌を処置する方法であって、癌を有する対象にＧａｌ９アンタゴニストを投与することを含む方法が提供される。

【0133】

一部の実施形態において、癌を処置するためのＧａｌ９アンタゴニストの使用が提供される。

【0134】

本発明の方法／使用によって処置可能な癌として、制御性Ｔリンパ球がその抑制活性を発揮する癌、例えば、比較的大量の制御性Ｔリンパ球が腫瘍組織内または循環系内に存在する癌を含む。制御性Ｔリンパ球の増殖（Ｔｒｅｇの頻度によって測定することができる）は、一般に、Ｔｒｅｇ活性化の増大と相関する。制御性Ｔリンパ球の頻度は、当該技術において知られているあらゆる方法によって、例えば腫瘍内リンパ球もしくは循環リンパ球のフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）分析によって、または腫瘍組織の免疫組織学的染色によって評価することができる。

【0135】

Ｇａｌ９アンタゴニストで処置され得る非限定的な例示的な癌が本明細書中に記載されており、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病を含む。そのような癌のより具体的な非限定的な例として、黒色腫、子宮頸癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌、膵癌、神経膠芽腫、卵巣癌、肝癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ，ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、肝癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、および種々の型の頭頸部癌を含む。

【0136】

特定の実施形態において、本発明の方法／使用は、高レベルの制御性Ｔリンパ球が知られている癌を処置するのに用いることができ、かつ／または当該癌／腫瘍は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸癌、黒色腫、子宮の癌、乳癌、膵癌、胃癌、卵巣癌、中枢神経系の原発性リンパ腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、ホジキンリンパ腫、もしくは肝細胞癌を含む予後不良に明確に関連する。

【0137】

特定の実施形態において、本発明の方法／使用を用いて、免疫抑制因子の役割を果たすガレクチン－９を担持する大量のエキソソームを産生する癌を処置することができる。そのような癌の非限定的な例として、ウイルス誘導癌、例えばＥＢＶ（エプスタイン・バーウイルス）に関連する上咽頭癌、またはＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）もしくはＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）に関連する肝細胞癌（ＣＨＣ）を含む。

【0138】

一部の実施形態において、癌は、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である。

【0139】

特定の実施形態において、本発明の方法／使用は、Ｃ型肝炎に起因する線維症の再発を処置するのに用いることができる。というのも、制御性Ｔリンパ球の頻度の増大が、そのような線維症の再発を予測する因子であることも実証されているからである。

【0140】

一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、抗Ｇａｌ９抗体、または単に「Ｇａｌ９抗体」である。

【0141】

一部の実施形態において、癌を処置するためのＧａｌ９アンタゴニストは、Ｇａｌ９とそのリガンドとの相互作用を阻害するＧａｌ９タンパク質またはその一部（例えばＥＣＤ）の可溶性バージョン等の非抗体タンパク質であり得、必要に応じて、融合パートナーをさらに含んで、融合分子の形態である。種々の例示的なＧａｌ９アンタゴニストが、以下のセクションにおいてより詳細に記載されている。

【0142】

一部の実施形態において、本発明のＧａｌ９アンタゴニストは、単独で用いることもできるし、疾患または徴候を処置することができることが知られている他の適切なあらゆる化合物と組み合わせて用いることもできる。

【0143】

ゆえに、本発明の特定の実施形態に従えば、先に定義したようにガレクチン－９に対して向けられ、かつ制御性Ｔリンパ球の抑制活性を阻害する抗体は、制御性Ｔリンパ球の抑制活性に関連する疾患を処置するための第２の治療剤、例えば抗癌剤と組み合わせて用いられる。

【0144】

すなわち、使用が癌の処置である場合、抗体は、癌に対する知られている処置、例えば、外科手術、放射線療法、化学療法、またはそれらの組合せと組み合わせて用いることができる。例えば、抗体は、腫瘍抗原、特にＥＢＶ抗原に対するエフェクタリンパ球の１回またはそれを超える注射からなる養子免疫療法と組み合わせて用いることができる。一部の態様に従えば、癌治療のための本発明に従うガレクチン－９に対して向けられる抗体と組み合わせて用いられる他の抗癌剤は、抗血管形成剤を含む。特定の態様に従えば、抗体は、サイトカイン、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激するサイトカインと同時投与することができる。

【0145】

そのような併用療法において、本発明の抗体は、第２の治療剤の前に、この後に、またはこれと同時に用いることができる。併用療法に関する以下の更なるセクション参照。

【0146】

４．投与経路および担体
種々の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニスト（例えばＧａｌ９ Ａｂ）は、皮下投与または静脈内投与され得る。簡潔にするために、本明細書での「Ｇａｌ９アンタゴニスト」は、狭義には、本発明のＧａｌ１抗体、例えば本発明のヒト化Ｇａｌ９抗体を指す。

【0147】

一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、直腸、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮、および髄腔内を含むがこれらに限定されない種々の経路によって、または他の方法で、例えば植込みによって、インビボ投与され得る。

【0148】

一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、抗Ｇａｌ９抗体またはその抗原結合断片であり、静脈内（ｉ．ｖ．）投与または皮下（ｓ．ｃ．）投与される。

【0149】

主題の組成物は、固体、半固体、液体、または気体の形態の調製物に製剤化され得、以下に限定されないが、タブレット、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐薬、浣腸剤、注射、吸入剤、およびエアロゾルを含む。

【0150】

種々の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストを含む組成物は、多種多様な薬学的に許容され得る担体（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ、第２０版（２００３）；Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版、Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第３版、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）参照）を有する製剤で提供される。ビヒクル、アジュバント、および希釈剤を含む、薬学的に許容され得る種々の担体が利用可能である。さらに、ｐＨ調整剤および緩衝剤、等張性調整剤、安定化剤、ならびに湿潤剤等の、薬学的に許容され得る種々の補助剤も利用可能である。非限定的な例示的な担体として、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組合せを含む。

【0151】

種々の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストを含む組成物は、植物油もしくは他の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコール等の水性溶媒もしくは非水性溶媒中に（所望される場合、従来の添加剤、例えば、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、および保存剤と共に）溶解、懸濁、または乳化されることによって、皮下投与を含む注射用に製剤化され得る。

【0152】

種々の実施形態において、組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、および窒素等の加圧された許容され得る推進剤を用いて、吸入用に製剤化され得る。

【0153】

また、組成物は、種々の実施形態において、例えば生分解性ポリマーまたは非生分解性ポリマーと共に、持続放出マイクロカプセルに製剤化され得る。非限定的な例示的な生分解性製剤は、ポリ乳酸－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを含む。非限定的な例示的な非生分解性製剤は、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。そのような製剤を製造する特定の方法が、例えば欧州特許出願公開第１１２５５８４Ａ１号に記載されている。

【0154】

また、各々が１回またはそれを超える用量のＧａｌ９アンタゴニストを含有する１つまたはそれを超えるコンテナを含む医薬投薬パックが提供される。一部の実施形態において、１つまたはそれを超える更なる剤を伴うか、または伴わない、Ｇａｌ９アンタゴニストを含む所定量の組成物を含有する単位投薬量が提供される。一部の実施形態において、そのような単位投薬量は、注射用の単回使用プレフィルドシリンジにより供給される。種々の実施形態において、単位投薬量内に含有される組成物は、生理食塩水もしくはスクロース等；リン酸バッファ等のバッファを含み得；かつ／または安定かつ有効なｐＨ範囲内で製剤化され得る。これ以外にも、一部の実施形態において、組成物は、適切な液体、例えば滅菌水の添加により再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。一部の実施形態において、組成物は、スクロースおよびアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質凝集を阻害する１つまたはそれを超える物質を含む。一部の実施形態において、本発明の組成物は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。

【0155】

医薬組成物は、特定の徴候の処置または予防に有効な量が投与される。治療有効量は、典型的には、処置されることとなる対象の体重、対象の身体状態もしくは健康状態、処置されることとなる症状の広がり、または処置されることとなる対象の年齢によって決まる。

【0156】

一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約５０μｇ／体重ｋｇ～約５０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ～約５０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約１００μｇ／体重ｋｇ～約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約０．５ｍｇ／体重ｋｇ～約２０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内の量が投与され得る。

【0157】

一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約１０ｍｇ～約１，０００ｍｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約２０ｍｇ～約３００ｍｇの範囲内の量が投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、用量あたり約２０ｍｇ～約２００ｍｇの範囲内の量が投与され得る。

【0158】

Ｇａｌ９アンタゴニスト組成物は、必要がある場合に、対象に投与され得る。一部の実施形態において、有効量のＧａｌ９アンタゴニストが、対象に、１回またはそれを超える回数投与される。種々の実施形態において、有効量のＧａｌ９アンタゴニストが、対象に、１ヶ月に１回、１ヶ月に１回未満、例えば、２ヶ月毎、３ヶ月毎または６ヶ月毎に１回投与される。他の実施形態において、有効量のＧａｌ９アンタゴニストが、月に１回を超えて、例えば、２週毎、毎週、週に２回、週に３回、毎日、または１日に複数回投与される。有効量のＧａｌ９アンタゴニストが、対象に、少なくとも１回投与される。一部の実施形態において、有効量のＧａｌ９アンタゴニストが、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間の期間を含めて、複数回投与され得る。一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、症状の１つまたはそれを超える病徴を緩和する必要がある場合に、対象に投与される。

【0159】

５．併用療法
本発明のＧａｌ９アンタゴニスト（あらゆる抗体およびその機能的断片を含む）は、他の生物学的に活性な物質、または疾患を処置するための他の処置手順と組み合わせて、本発明のＧａｌ９アンタゴニストを必要とする対象に投与され得る。例えば、Ｇａｌ９アンタゴニストは、単独で、または他の処置様式と共に投与され得る。Ｇａｌ９アンタゴニストは、放射線療法等の他の処置様式の前に、これと実質的に同時期に、またはこの後に提供され得る。

【0160】

癌の処置のために、Ｇａｌ９アンタゴニストは、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法剤、成長阻害剤、抗血管形成剤、または抗新生物組成物等の抗癌剤の１つまたは複数と併せて投与されてもよい。

【0161】

特定の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、Ｇａｌ９に特異的に結合する（「Ｇａｌ９結合アンタゴニスト」）。例えば、Ｇａｌ９アンタゴニスト抗体またはその抗原（ａｎｔｉｇｅｒｎ）結合断片は、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１経路の阻害剤）等の第２のアンタゴニストと共に、免疫系の刺激が有益であろう疾患、例えば、癌または感染症を有する対象に投与される。２つのアンタゴニストは、例えば、Ｇａｌ９アンタゴニストの、免疫腫瘍治療剤との組合せについて以下に記載されるように、同時に、または連続的に投与され得る。１つまたはそれを超える更なる治療薬、例えばチェックポイント調節剤が、癌または感染症を処置するためのＧａｌ９結合アンタゴニストによる処置に加えられてもよい。

【0162】

特定の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、対象、例えば癌を有する対象に、別の処置と同時に、または連続して投与される。例えば、Ｇａｌ９アンタゴニストは、放射線療法、外科手術、または化学療法、例えば標的化化学療法、または免疫療法の１つまたは複数と共に投与され得る。

【0163】

免疫療法、例えば癌免疫療法として、癌ワクチンおよび免疫腫瘍治療剤を含む。Ｇａｌ９アンタゴニストとして、例えば、Ｇａｌ９に結合するタンパク質、抗体、抗体断片、または小分子があり得る。Ｇａｌ９アンタゴニストとして、Ｇａｌ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片があり得る。

【0164】

特定の実施形態において、癌を有する対象の処置方法は、癌を有する対象に、Ｇａｌ９アンタゴニスト、例えばＧａｌ９抗体、および免疫チェックポイント阻害剤等の１つまたはそれを超える免疫腫瘍治療剤を投与することを含む。

【0165】

免疫療法、例えば免疫腫瘍治療剤による治療は、対象における免疫応答を増強、刺激、かつ／または上方調節するのに有効である。一態様において、免疫腫瘍治療剤（ＰＤ－１阻害剤等）とのＧａｌ９アンタゴニストの投与は、癌の処置において、例えば腫瘍成長の阻害において、相乗効果を有する。

【0166】

一態様において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、免疫腫瘍治療剤の投与前に、逐次投与される。一態様において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、免疫腫瘍治療剤（ＰＤ－１阻害剤等）と同時に投与される。更なる一態様において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、免疫腫瘍治療剤（ＰＤ－１阻害剤等）の投与後に、逐次投与される。２つの剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、または１週もしくはそれを超える週離れた時点にて開始してもよいし、第２の剤の投与は、例えば、第１の剤が投与されてから３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、または１週もしくはそれを超える週の後に開始してもよい。

【0167】

特定の態様において、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤（例えばＰＤ－１阻害剤）は、同時に投与される、例えば、同時に、例えば３０または６０分間にわたって、患者に注入される。Ｇａｌ９アンタゴニストは、免疫腫瘍治療剤（ＰＤ－１阻害剤等）と同時製剤化され得る。

【0168】

免疫腫瘍治療剤の例として、小分子薬物、抗体もしくはその断片、または他の生体分子もしくは小分子を含む。生物学的免疫腫瘍治療剤の例として、抗体、抗体断片、ワクチン、およびサイトカインを含むが、これらに限定されない。一態様において、抗体はモノクローナル抗体である。特定の態様において、モノクローナル抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。

【0169】

一態様において、免疫腫瘍治療剤は、免疫細胞、例えばＴ細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアンタゴニストであり、これらは双方とも、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。特定の態様において、免疫腫瘍治療剤は、自然免疫に関与する細胞、例えばＮＫ細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体またはリガンド）のアンタゴニストであり、免疫腫瘍治療剤は、自然免疫を増強する。そのような免疫腫瘍治療剤は、多くの場合、免疫チェックポイント調節剤、例えば免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。

【0170】

特定の実施形態において、免疫腫瘍治療剤は、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、およびＢ７－Ｈ６を含む、膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバー、またはＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激性受容体もしくは共阻害性受容体を標的とする（またはこれに特異的に結合する）剤であり得る。免疫腫瘍治療剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバー、またはこれに特異的に結合する共刺激受容体もしくは共阻害受容体、例えばＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーを標的とする剤であり得る。免疫腫瘍治療剤によって標的とされ得る例示的なＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリーメンバーとして、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎｌ４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｆｉＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴΝΡβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦａ、ＬＴｆｉＲ、リンホトキシンα１β２（Ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ ａ １β２）、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ならびにＮＧＦＲを含む。癌を処置するためにＧａｌ９アンタゴニスト剤と組み合わせて用いられ得る免疫腫瘍治療剤として、Ｂ７ファミリーメンバー、Ｂ７受容体ファミリーメンバー、ＴＮＦファミリーメンバー、またはＴＮＦＲファミリーメンバー、例えば上記のものを標的とする剤、例えば抗体があり得る。

【0171】

一態様において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、（ｉ）ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤＩＨ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、およびＰＳＧＬ－１等のＴ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば免疫チェックポイント阻害剤）のアンタゴニスト、ならびに（ｉｉ）Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、およびＣＤ２８Ｈ等のＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストの１つまたは複数と共に投与される。

【0172】

一態様において、免疫腫瘍治療剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、および他の免疫抑制性サイトカイン）を阻害する剤（すなわち、当該サイトカインのアンタゴニスト）、またはＴ細胞活性化を刺激し、かつ免疫応答を刺激する、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、およびＩＦＮα等のサイトカイン（例えば、サイトカインそれ自体）のアゴニストである剤である。

【0173】

免疫系を刺激するために、例えば、癌および感染症の処置のためにＧａｌ９アンタゴニストと組み合わせることができる他の剤として、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞上の受容体を活性化するアゴニストを含む。例えば、抗Ｇａｌ９アンタゴニストは、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。

【0174】

併用療法のためのさらに他の薬剤として、以下に限定されないが、ＲＧ７１５５（国際公開第１１／７００２４号、国際公開第１１／１０７５５３号、国際公開第１１／１３１４０７号、国際公開第１３／８７６９９号、国際公開第１３／１１９７１６号、国際公開第１３／１３２０４４号）またはＦＰＡ００８（国際公開第１１／１４０２４９号；国際公開第１３／１６９２６４；国際公開第１４／０３６３５７号）を含むＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト抗体等のＣＳＦ－ＩＲアンタゴニストを含む、マクロファージまたは単球を阻害するか、または枯渇させる剤を含む。

【0175】

また、免疫腫瘍治療剤として、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する剤を含む。

【0176】

Ｇａｌ９アンタゴニストと組み合わせることができる更なる剤として、腫瘍抗原提示を増強する剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、およびイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えばアントラサイクリン）を含む。

【0177】

Ｇａｌ９アンタゴニストと組み合わせることができるさらに他の療法として、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させるか、またはブロックする療法、例えばＣＤ２５に特異的に結合する剤を含む。

【0178】

Ｇａｌ９アンタゴニストと組み合わせることができる別の療法として、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素等の代謝酵素を阻害する療法がある。

【0179】

用いることができる別のクラスの剤として、アデノシンの形成を阻害する剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する剤を含む。

【0180】

癌を処置するためにＧａｌ９アンタゴニストと組み合わせることができる他の療法として、Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を逆転／予防する療法、ならびに腫瘍部位にて自然免疫活性化および／または炎症をトリガーする療法を含む。

【0181】

Ｇａｌ９アンタゴニストは、複数の免疫腫瘍治療剤（免疫チェックポイント阻害剤等）と組み合わせることができ、例えば、以下の１つまたは複数等の、免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；負の免疫調節を、例えば、ＣＴＬＡ－４および／もしくはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害することによって、かつ／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇させるか、もしくはブロックすることによって、阻害する療法；正の免疫調節を、例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、および／もしくはＧＩＴＲ経路を刺激し、かつ／またはＴ細胞エフェクタ機能を刺激するアゴニストにより刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大させる療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えばダクリズマブ）を用いて、またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって、Ｔｒｅｇ、例えば腫瘍中のＴｒｅｇを枯渇させるか、または阻害する療法；腫瘍において抑制骨髄細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えばアントラサイクリン）；遺伝子修飾された細胞、例えばキメラ抗原受容体によって修飾された細胞を含む養子Ｔ細胞移入またはＮＫ細胞移入（ＣＡＲ－Ｔ療法）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素等の代謝酵素を阻害する療法；Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を逆転／予防する療法；腫瘍部位にて自然免疫活性化および／または炎症をトリガーする療法；免疫刺激性サイトカインの投与または免疫抑制性サイトカインのブロッキング。

【0182】

例えば、Ｇａｌ９アンタゴニストは、陽性共刺激受容体をライゲートする１つまたはそれを超えるアゴニスト剤；腫瘍微環境内の異なる免疫抑制経路を克服する（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２相互作用をブロックする）アンタゴニスト等の、阻害性受容体を介したシグナル伝達を減弱させる１つまたはそれを超えるアンタゴニスト（ブロッキング剤）；Ｔ細胞等の抗腫瘍免疫細胞の頻度を全身的に増大させ、かつＴｒｅｇを枯渇させるかまたは阻害する（例えば、ＣＤ２５を阻害することによる）、１つまたはそれを超える剤；ＩＤＯ等の代謝酵素を阻害する、１つまたはそれを超える剤；Ｔ細胞アネルギーまたは疲弊を逆転／防止する、１つまたはそれを超える剤；ならびに腫瘍部位にて自然免疫活性化および／または炎症をトリガーする、１つまたはそれを超える剤と共に用いることができる。

【0183】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アンタゴニスト性ＣＴＬＡ－４抗体等のＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。適切なＣＴＬＡ－４抗体の例として、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブを含む。

【0184】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アンタゴニスト性ＰＤ－１抗体等のＰＤ－１アンタゴニストである。適切なＰＤ－１抗体の例として、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；国際公開第２０１２／１４５４９３号）を含む。また、免疫腫瘍治療剤として、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）が挙げられ得る。ＰＤ－１受容体を標的とする別のアプローチとして、ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質がある。

【0185】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アンタゴニスト性ＰＤ－Ｌ１抗体等のＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。適切なＰＤ－Ｌ１抗体の例として、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６；国際公開第２０１０／０７７６３４号）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（国際公開第２００７／００５８７４号）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（国際公開第２０１３／７９１７４号）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７を含む。

【0186】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アンタゴニスト性ＬＡＧ－３抗体等のＬＡＧ－３アンタゴニストである。適切なＬＡＧ３抗体の例として、ＢＭＳ－９８６０１６（国際公開第１０／１９５７０号、国際公開第１４／０８２１８号）、またはＩＭＰ－７３１もしくはＩＭＰ－３２１（国際公開第０８／１３２６０１号、国際公開第０９／４４２７３号）を含む。

【0187】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アゴニスト性ＣＤ１３７抗体等のＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストである。適切なＣＤ１３７抗体の例として、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（国際公開第１２／３２４３３号）を含む。

【0188】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アゴニスト性ＧＩＴＲ抗体等のＧＩＴＲアゴニストである。適切なＧＩＴＲ抗体の例として、ＴＲＸ－５１８（国際公開第０６／１０５０２１号、国際公開第０９／００９１１６号）、ＭＫ－４１６６（国際公開第１１／０２８６８３号）、または国際公開第２０１５／０３１６６７号に開示されているＧＩＴＲ抗体を含む。

【0189】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アゴニスト性ＯＸ４０抗体等のＯＸ４０アゴニストである。適切なＯＸ４０抗体の例として、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；国際公開第０６／０２９８７９号）を含む。

【0190】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アゴニスト性ＣＤ４０抗体等のＣＤ４０アゴニストである。特定の実施形態において、免疫腫瘍治療剤は、アンタゴニスト性ＣＤ４０抗体等のＣＤ４０アンタゴニストである。適切なＣＤ４０抗体の例として、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０，８９３、またはＣｈｉ Ｌｏｂ ７／４を含む。

【0191】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、アゴニスト性ＣＤ２７抗体等のＣＤ２７アゴニストである。適切なＣＤ２７抗体の例として、バリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）を含む。

【0192】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（国際公開第１１／１０９４００号）である。

【0193】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、リリルマブ等のＫＩＲアンタゴニストである。

【0194】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。適切なＩＤＯアンタゴニストの例として、ＩＮＣＢ－０２４３６０（国際公開第２００６／１２２１５０号、国際公開第０７／７５５９８号、国際公開第０８／３６６５３号、国際公開第０８／３６６４２号）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（国際公開第０９／７３６２０号、国際公開第０９／１１５６６５２号、国際公開第１１／５６６５２号、国際公開第１２／１４２２３７号）、またはＦ００１２８７を含む。

【0195】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えばＢａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ヒルトノールまたはイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えばレシキモド）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例えばＣｐＧ７９０９）である。

【0196】

一実施形態において、免疫系の刺激から利益を得ることができる疾患、例えば、癌または感染性疾患を有する対象が、Ｇａｌ９アンタゴニストおよび免疫腫瘍治療剤の、対象への投与によって処置され、免疫腫瘍治療剤は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１である。

【0197】

６．例示的なＧａｌ９アンタゴニスト
一部の実施形態において、Ｇａｌ９アンタゴニストは、Ｇａｌ９抗体である。一部の実施形態において、癌を処置するためのＧａｌ９アンタゴニストは、Ｇａｌ９とそのリガンドとの相互作用を阻害する可溶性Ｇａｌ９またはその一部（例えばＥＣＤ）等の非抗体タンパク質であり得、必要に応じて、融合パートナーをさらに含んで、融合分子の形態である。アンタゴニストは、他の実施形態において、小分子であっても小ペプチドであってもよい。

【0198】

Ｇａｌ９抗体
一部の実施形態において、Ｇａｌ９およびそのリガンドの結合をブロックする抗体が提供される。一部の実施形態において、Ｇａｌ９媒介性シグナル伝達を阻害する抗体が提供される。そのような一部の実施形態において、抗体はＧａｌ９抗体である。一部の実施形態において、Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９の、そのリガンドへの結合を阻害する。一部の実施形態において、Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９媒介性シグナル伝達を阻害する。

【0199】

一部の実施形態において、本発明のＧａｌ９抗体は、Ｇａｌ９について、例えばヒトＧａｌ９について、解離定数（Ｋ_ｄ）が≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０^－８Ｍまたはそれ未満、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）である。特定の実施形態において、Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９について、例えばヒトＧａｌ９について、解離定数（Ｋ_ｄ）が≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０^－８Ｍまたはそれ未満、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）である。

【0200】

一部の実施形態において、本明細書中で提供されるあらゆる特徴を有するＧａｌ９抗体は、Ｇａｌ９のシグナル伝達の少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、９０％、または１００％を阻害する。

【0201】

一部の実施形態において、抗体は、複数の種由来のＧａｌ９に結合する。例えば、一部の実施形態において、抗体は、ヒトＧａｌ９に結合し、そしてまた、マウス、ラット、イヌ、モルモット、およびカニクイザルから選択される少なくとも１つの非ヒト哺乳動物由来のＧａｌ９にも結合する。

【0202】

一部の実施形態において、多重特異性抗体が提供される。一部の実施形態において、二重特異性抗体が提供される。非限定的な例示的な二重特異性抗体として、第１の抗原に結合する重鎖／軽鎖の組合せを含む第１のアーム、および第２の抗原に結合する重鎖／軽鎖の組合せを含む第２のアームを含む抗体を含む。非限定的な例示的な更なる多重特異性抗体は、二重可変ドメイン抗体である。一部の実施形態において、二重特異性抗体は、Ｇａｌ９の結合を阻害する第１のアーム、および、例えばＣＤ３に結合することによって、Ｔ細胞を刺激する第２のアームを含む。一部の実施形態において、第１のアームはＧａｌ９に結合する。

【0203】

特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片（ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む）は、抗体の開発可能性を向上させるように設計された、そのアミノ酸配列の１つまたはそれを超える点変異を含む。例えば、Ｒａｙｂｏｕｌｄら（Ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＮＡＳ １１６（１０）：４０２５－４０３０，２０１９）は、可変ドメイン配列のダウンロード可能な相同性モデルを構築して、これらを５つの開発可能性ガイドラインに対して試験して、潜在的な配列障害（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ）およびカノニカル形態を報告する計算ツールである、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ＴＡＰ）を記載した。この著者らはさらに、ｏｐｉｇ．ｓｔａｔｓ．ｏｘ．ａｃ．ｕｋ／ｗｅｂａｐｐｓ／ｓａｂｄａｂ－ｓａｂｐｒｅｄ／ＴＡＰ．ｐｈｐにて自由に入手可能なＴＡＰを提供している。

【0204】

抗原に対する所望の親和性を達成すること以外に、治療的ｍＡｂの開発には多くの障壁がある。障壁として、固有の免疫原性、化学的不安定性および高次構造的不安定性、自己会合、高粘度、多特異性、および発現不良を含む。例えば、特に高度に可変的な相補性決定領域（ＣＤＲ）における、高レベルの疎水性は、凝集、粘度、および多特異性に繰り返し関係している。重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの正味電荷の非対称性もまた、高濃度にて、自己会合および粘度と相関する。ＣＤＲにおける正電荷および負電荷のパッチは、高いクリアランス率および低い発現レベルに関連している。生成物の不均一性（例えば、酸化、異性化、またはグリコシル化による）は、多くの場合、翻訳後修飾または同時翻訳修飾を起こし易い特定の配列モチーフに起因する。配列障害の特定を容易にするための計算ツールが利用可能である。また、Ｗａｒｓｚａｗｓｋｉら（Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ－ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ １５（８）：ｅ１００７２０７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００７２０７）は、可変軽鎖－可変重鎖界面の自動設計によって抗体の親和性および安定性を最適化する方法を記載した。候補抗体の潜在的な開発可能性の問題を特定するための更なる方法が利用可能であり、本発明の好ましい実施形態において、従来の方法を介して候補抗体に１つまたはそれを超える点変異を導入することで、そのような問題に対処して、本発明の最適化された治療用抗体をもたらすことができる。

【0205】

特定の代表的な抗体（軽鎖（ＬＣ）可変領域および重鎖（ＨＣ）可変領域、ＣＤＲ領域、ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む）の配列を、以下に列挙する。

【化1】

【0206】

全ての抗体重鎖配列について、フレームワーク領域配列ＨＦＲ１～ＨＦＲ４は、ＶＨ－ＣＤＲ配列によって定義される。例えば、ＨＦＲ１は、ＶＨ－ＣＤＲ１のＮ末端側にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ２は、ＶＨ－ＣＤＲ１とＶＨ－ＣＤＲ２との間にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ３は、ＶＨ－ＣＤＲ２とＶＨ－ＣＤＲ３との間にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ４は、ＨＣＶＲの最もＣ末端側の配列である。

【0207】

同様に、全ての抗体軽鎖配列について、フレームワーク領域配列ＬＦＲ１～ＬＦＲ４は、ＶＬ－ＣＤＲ配列によって定義される。例えば、ＬＦＲ１は、ＶＬ－ＣＤＲ１のＮ末端側にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ２は、ＶＬ－ＣＤＲ１とＶＬ－ＣＤＲ２との間にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ３は、ＶＬ－ＣＤＲ２とＶＬ－ＣＤＲ３との間にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ４は、ＬＣＶＲの最もＣ末端側の配列である。

【0208】

ＨＦＢ９－１ｈｚ１－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１、３、５、および７である。ＨＦＢ９－１ｈｚ１－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号９、１１、１３、および１５である。

【化2】

【0209】

ＨＦＢ９－１ｈｚ２－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１７、１９、２１、および２３である。ＨＦＢ９－１ｈｚ２－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号２５、２７、２９、および３１である。

【化3-1】

【化3-2】

【0210】

ＨＦＢ９－１ｈｚ３－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号３３、３５、３７、および３９である。ＨＦＢ９－１ｈｚ３－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号４１、４３、４５、および４７である。

【化4】

【0211】

ＨＦＢ９－１ｈｚ４－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号４９、５１、５３、および５５である。ＨＦＢ９－１ｈｚ４－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号５７、５９、６１、および６３である。

【化5-1】

【化5-2】

【0212】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１１－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号６５、６７、６９、および７１である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１１－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号７３、７５、７７、および７９である。

【化6】

【0213】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１２－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号８１、８３、８５、および８７である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１２－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号８９、９１、９３、および９５である。

【化7-1】

【化7-2】

【0214】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１３－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号９７、９９、１０１、および１０３である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１３－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号１０５、１０７、１０９、および１１１である。

【化8】

【0215】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１４－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１１３、１１５、１１７、および１１９である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１４－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号１２１、１２３、１２５、および１２７である。

【0216】

７．ヒト化抗体
一部の実施形態において、Ｇａｌ９抗体はヒト化抗体である。ヒト化抗体は治療分子として有用である。なぜなら、ヒト化抗体は、抗体治療薬に対する免疫応答、および治療薬の有効性の低下をもたらし得る非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答等）を低減するか、または排除するからである。

【0217】

抗体は、標準的なあらゆる方法によってヒト化され得る。ヒト化の非限定的な例示的な方法として、例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，６９３，７６１号；米国特許第５，６９３，７６２号；米国特許第６，１８０，３７０号；Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）；および米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号に記載される方法を含む。全て参照により組み込まれる。

【0218】

ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置由来のアミノ酸で置換されている抗体である。一部の実施形態において、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸が、１つまたはそれを超えるヒトフレームワーク領域内の１つまたはそれを超える、対応する位置由来のアミノ酸で置換されている。

【0219】

一部の実施形態において、置換に用いられる対応する一部のヒトアミノ酸は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。すなわち、そのような一部の実施形態において、非ヒトアミノ酸の１つまたは複数が、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換され得るか、または第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされ得、非ヒトアミノ酸の１つまたは複数が、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換され得るか、または第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされ得、非ヒトアミノ酸の１つまたは複数が、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換され得るか、または第３のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされ得る等々である。さらに、一部の実施形態において、単一のフレームワーク領域、例えばＦＲ２内の置換に用いられることとなる対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワークに由来する必要はない。しかしながら、一部の実施形態において、置換に用いられることとなる対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒト抗体に由来するか、または同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされている。

【0220】

一部の態様において、抗体は、１つまたはそれを超えるフレームワーク領域全体を、対応するヒトフレームワーク領域で置換することによってヒト化される。一部の実施形態において、置換されることとなる非ヒトフレームワーク領域に対して最も高いレベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。一部の実施形態において、そのようなヒト化抗体はＣＤＲグラフト化抗体である。

【0221】

一部の態様において、ＣＤＲグラフティング後、１つまたはそれを超えるフレームワークアミノ酸が、マウスフレームワーク領域内の対応するアミノ酸に戻される。そのような「復帰変異」は、一部の実施形態において、１つもしくはそれを超えるＣＤＲの構造に寄与すると思われ、かつ／または抗原接触に関与し得、かつ／または抗体の構造的完全性の全体に関与すると思われる１つまたはそれを超えるマウスフレームワークアミノ酸を保持するためになされる。一部の実施形態において、ＣＤＲグラフティング後の抗体のフレームワーク領域に対して、１０個もしくはそれ未満、９つもしくはそれ未満、８つもしくはそれ未満、７つもしくはそれ未満、６つもしくはそれ未満、５つもしくはそれ未満、４つもしくはそれ未満、３つもしくはそれ未満、２つもしくはそれ未満、１つ、または０個の復帰変異がなされる。

【0222】

一部の実施形態において、ヒト化抗体はまた、ヒト重鎖定常領域および／またはヒト軽鎖定常領域を含む。

【0223】

８．ヒト抗体
一部の実施形態において、Ｇａｌ９抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、適切なあらゆる方法によって作製することができる。非限定的な例示的な方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することを含む。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号；米国特許第６，７１３，６１０号；米国特許第６，６７３，９８６号；米国特許第６，１６２，９６３号；米国特許第５，５４５，８０７号；米国特許第６，３００，１２９号；米国特許第６，２５５，４５８号；米国特許第５，８７７，３９７号；米国特許第５，８７４，２９９号；および米国特許第５，５４５，８０６号参照。

【0224】

また、非限定的な例示的な方法は、ファージディスプレイライブラリを用いてヒト抗体を作製することを含む。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）；および国際公開第９９／１０４９４号参照。

【0225】

ヒト抗体定常領域
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体は、１つまたはそれを超えるヒト定常領域を含む。一部の実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、およびＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋおよびλから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態において、抗体またはＦｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１定常領域内にＣ２３７Ｓ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。そのような一部の実施形態において、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載されるＰ３３１Ｓ変異を含む。一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。そのような一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域内にＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－１０８（１９９３）参照。一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域およびヒトκ軽鎖を含む。

【0226】

重鎖定常領域の選択により、抗体がエフェクタ機能をインビボで有することとなるか否かを決定することができる。そのようなエフェクタ機能は、一部の実施形態において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合する細胞の死滅をもたらし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３重鎖を含む抗体が、エフェクタ機能を有する。

【0227】

一部の実施形態において、エフェクタ機能は所望されない。例えば、一部の実施形態において、エフェクタ機能は、炎症症状および／または自己免疫障害の処置において所望されない場合がある。そのような一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域が選択または操作される。一部の実施形態において、ＩｇＧ４定常領域がＳ２４１Ｐ変異を含む。

【0228】

本明細書中に記載される抗体のいずれも、好適なあらゆる方法によって精製され得る。そのような方法として、アフィニティマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィの使用を含むが、これらに限定されない。適切なアフィニティリガンドとして、抗体が結合する抗原および／またはエピトープ、ならびに抗体定常領域に結合するリガンドを含む。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティカラムを用いて、定常領域に結合して抗体を精製することができる。

【0229】

一部の実施形態において、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）、例えばブチルまたはフェニルカラムもまた、一部のポリペプチドを精製するのに用いられる。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術において知られている。

【0230】

これ以外にも、一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体は、無細胞系において生成される。非限定的な例示的な無細胞系が、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。

【0231】

９．Ｇａｌ９アンタゴニストをコードする核酸分子
また、本発明は、Ｇａｌ９抗体等の本明細書中に記載される抗体の１つまたはそれを超える鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。一部の実施形態において、核酸分子は、本明細書中に記載される抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、核酸分子は、本明細書中に記載される抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドの双方を含む。一部の実施形態において、第１の核酸分子が、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子が、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。

【0232】

そのような一部の実施形態において、重鎖および軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から、２つの別個のポリペプチドとして発現される。一部の実施形態において、例えば抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドが、一緒に連結された重鎖および軽鎖の双方を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0233】

一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、これは、翻訳される場合、重鎖または軽鎖のＮ末端に位置する。上述のように、リーダー配列は、天然の重鎖リーダー配列であっても軽鎖リーダー配列であってもよいし、別の異種リーダー配列であってもよい。

【0234】

核酸分子は、当該技術において従来の組換えＤＮＡ技術を用いて構築され得る。一部の実施形態において、核酸分子は、哺乳動物細胞等の選択された宿主細胞内での発現に適した発現ベクターである。

【0235】

１０．ベクター
本明細書中に記載される抗体の重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。そのようなベクターとして、以下に限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターその他を含む。一部の実施形態において、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列および軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態において、重鎖および軽鎖は、ベクターから２つの別個のポリペプチドとして発現される。一部の実施形態において、重鎖および軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリペプチドの一部として発現される。

【0236】

一部の実施形態において、第１のベクターが、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターが、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、第１のベクターおよび第２のベクターは、類似の量（類似のモル量または類似の質量等）で宿主細胞中に形質移入される。一部の実施形態において、５：１～１：５のモル比または質量比の第１のベクターおよび第２のベクターが宿主細胞中に形質移入される。一部の実施形態において、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて、１：１～１：５の質量比が用いられる。一部の実施形態において、重鎖をコードするベクターおよび軽鎖をコードするベクターについて、１：２の質量比が用いられる。

【0237】

一部の実施形態において、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞における、またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現用に最適化されたベクターが選択される。そのような例示的なベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。一部の実施形態において、ヒトを含む動物におけるＧａｌ９アンタゴニストのインビボ発現用のベクターが選択される。そのような一部の実施形態において、ポリペプチド（複数可）の発現が、組織特異的に機能するプロモーター（複数可）の制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターが、例えば、国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。

【0238】

１１．宿主細胞
種々の実施形態において、本明細書中に記載される抗体の重鎖および／または軽鎖は、原核細胞、例えば細菌細胞；または真核細胞、例えば真菌細胞（酵母等）、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞において発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術において知られている手順に従って実行され得る。ポリペプチドを発現させるのに用いられ得る例示的な真核細胞として、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ７細胞を含む）；２９３細胞（２９３－６Ｅ細胞を含む）；ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ＳおよびＤＧ４４細胞を含む）；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；およびＮＳＯ細胞を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体の重鎖および／または軽鎖は、酵母内で発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５Ａ１号参照。一部の実施形態において、Ｇａｌ９抗体の重鎖および／または軽鎖に、所望される翻訳後修飾を行う能力に基づいて、特定の真核宿主細胞が選択される。例えば、一部の実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞内で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。

【0239】

所望の宿主細胞中への１つまたはそれを超える核酸の導入を、リン酸カルシウム形質移入、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性形質移入、カチオン性脂質媒介性形質移入、エレクトロポレーション、形質導入、感染その他を含むがこれらに限定されないあらゆる方法によって達成することができ、非限定的な例示的な方法が、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、適切なあらゆる方法に従って、所望の宿主細胞内に一時的に形質移入されても、安定して形質移入されてもよい。

【0240】

一部の実施形態において、１つまたはそれを超えるポリペプチドが、適切なあらゆる方法に従って、ポリペプチドをコードする１つまたはそれを超える核酸分子により操作または形質移入された動物においてインビボ産生され得る。

【実施例】

【0241】

実施例１ ヒト化抗Ｇａｌ９抗体は、ヒトおよびマウスガレクチン－９に対して高い結合親和性を有する
この実施例は、本発明の種々の抗ヒトＧａｌ９ヒト化抗体が、ヒトＧａｌ９およびマウスＧａｌ９の双方に対して高い結合親和性を有することを実証する。

【0242】

抗体結合親和性を、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）から市販されているＯｃｔｅｔシステムを用いて測定した。Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓの説明に従えば、Ｏｃｔｅｔプラットフォームは、９６ウェルマイクロプレートまたは３８４ウェルマイクロプレートにおける生体分子相互作用の評価を支援するための機器、バイオセンサ、試薬、およびアッセイキットを含む系全体を利用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術に基づく。Ｏｃｔｅｔシステムは、ＤＩＰ－ＡＮＤ－ＲＥＡＤアッセイモードを用いて、マイクロ流体の必要性を回避して、親和性および速度論のリアルタイムの、標識フリーの分析を可能にする。抗体相互作用を調べるのに用いることができる３つのバイオセンサベースのアッセイ配向：タンデムブロッキング、プレミックスブロッキング、および古典的サンドイッチがある。Ｂｉａｃｏｒｅと比較して、Ｏｃｔｅｔのディップアンドリードアッセイは、より長い分析物結合工程を可能とし、そしてリガンドコーティングしたセンサへの分析物の再結合を促進する。一方、会合時間が速いほど、消費されるサンプルは少なくなり、貴重なタンパク質が節約される。

【0243】

また、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓの説明に従えば、ＢＬＩ技術の原理は、２つの表面、すなわち固定化されたタンパク質の層および内部基準層から反射された白色光の光学干渉パターンに基づく。バイオセンサ先端部表面上に固定化されたリガンドと、溶液中の分析物との結合は、バイオセンサ先端部にて光学的厚さの増大をもたらし、これは、ナノメートル単位で測定される干渉パターンのシフトをもたらす。波長シフト（ΔΛ）は、生物層の光学的厚さの変化の直接的尺度である。このシフトを一定期間にわたって測定して、その大きさを時間の関数としてプロットすると、古典的な会合／解離曲線が得られる。この相互作用は、リアルタイムで測定されて、結合特異性、会合速度および解離速度、ならびに濃度を、非常に精密かつ正確に監視する能力が提供される。

【0244】

この系を用いて、組換えヒトおよびマウスＧａｌ９に対する抗体親和性を、本発明の選択されたヒト化抗体について測定した。結果を以下の表に要約する。データは、試験したヒト化抗体が、ヒトＧａｌ９タンパク質／抗原およびマウスＧａｌ９タンパク質／抗原の双方に対して、中程度のｎＭ～低いｎＭの範囲の高親和性を有することを示す。

【表2】

【0245】

本発明の選択されたヒト化抗体の配列アラインメントを、標準的な配列アラインメントソフトウェアを用いて実行した。結果を図１および図２に示す。詳細には、図１において、４つのヒト化抗体のＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域をアラインして、ヒト－マウスキメラ抗体ＨＦＢ９－１の元のＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域と比較したアミノ酸残基の変化を示した。ヒト化は主に、重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ）のフレームワーク領域内のアミノ酸配列を変えた。しかしながら、重鎖ＣＤＲ２配列内でも広範囲にわたる変化が存在した（図１参照）。

【0246】

同様に、図２において、６つのヒト化抗体のＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域をアラインして、ヒト－マウスキメラ抗体ＨＦＢ９－２の元のＶ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域と比較したアミノ酸残基の変化を示した。ヒト化は主に、重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ）のフレームワーク領域内のアミノ酸配列を変えた。しかしながら、重鎖ＣＤＲ２配列内でも広範囲にわたる変化が、そして１つのヒト化抗体について重鎖（ｈｅａｃｙ ｃｈａｉｎ）ＣＤＲ１配列内で１残基の変化が存在した（図２参照）。

【0247】

実施例２ 抗Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９に対してサブナノモル（ｎＭ）の親和性を示す
この実験は、本発明のヒト化抗体が組換えヒトＧａｌ９に対して非常に高い（サブナノモルの）親和性を示し、組換えマウスＧａｌ９およびサルＧａｌ９と交差反応することを実証する（データは示さず）。試験した各ヒト化抗体のＥＣ５０値を、各抗体の濃度を上げながら測定して、結果を、組換えヒトＧａｌ９への結合については図３の表に、組換えマウスＧａｌ９への結合については図４の表にまとめた。

【0248】

１ｈｚ４抗体以外、ＨＦＢ９－１の３つのヒト化変異体は全て、ヒトＧａｌ－９およびマウスＧａｌ－９の双方に対してサブｎＭのレベルの親和性を示したことが明らかである（図３および図４参照）。一方、６つのヒト化ＨＦＢ９－２抗体のうち５つ（２ｈｚ１２を除く）が、ヒトＧａｌ９に対してサブｎＭレベルの親和性を示したが、５つのうち４つ（２ｈ１４を除く）しか、マウスＧａｌ９に対してサブｎＭレベルの親和性を維持しなかった。

【0249】

また、サルのオルソログＧａｌ９に対する強い交差反応性が観察された（データは示さず）。

【0250】

これらの代表的な抗体（軽鎖（ＬＣ）可変領域および重鎖（ＨＣ）可変領域、ＣＤＲ領域、ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む）の配列を、以下に列挙する。

【化9】

【0251】

全ての抗体重鎖配列について、フレームワーク領域配列ＨＦＲ１～ＨＦＲ４は、ＶＨ－ＣＤＲ配列によって定義される。例えば、ＨＦＲ１は、ＶＨ－ＣＤＲ１のＮ末端側にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ２は、ＶＨ－ＣＤＲ１とＶＨ－ＣＤＲ２との間にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ３は、ＶＨ－ＣＤＲ２とＶＨ－ＣＤＲ３との間にあるＨＣＶＲの配列である。ＨＦＲ４は、ＨＣＶＲの最もＣ末端側の配列である。

【0252】

同様に、全ての抗体軽鎖配列について、フレームワーク領域配列ＬＦＲ１～ＬＦＲ４は、ＶＬ－ＣＤＲ配列によって定義される。例えば、ＬＦＲ１は、ＶＬ－ＣＤＲ１のＮ末端側にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ２は、ＶＬ－ＣＤＲ１とＶＬ－ＣＤＲ２との間にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ３は、ＶＬ－ＣＤＲ２とＶＬ－ＣＤＲ３との間にあるＬＣＶＲの配列である。ＬＦＲ４は、ＬＣＶＲの最もＣ末端側の配列である。

【0253】

ＨＦＢ９－１ｈｚ１－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１、３、５、および７である。ＨＦＢ９－１ｈｚ１－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号９、１１、１３、および１５である。

【化10】

【0254】

ＨＦＢ９－１ｈｚ２－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１７、１９、２１、および２３である。ＨＦＢ９－１ｈｚ２－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号２５、２７、２９、および３１である。

【化11】

【0255】

ＨＦＢ９－１ｈｚ３－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号３３、３５、３７、および３９である。ＨＦＢ９－１ｈｚ３－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号４１、４３、４５、および４７である。

【化12】

【0256】

ＨＦＢ９－１ｈｚ４－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号４９、５１、５３、および５５である。ＨＦＢ９－１ｈｚ４－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号５７、５９、６１、および６３である。

【化13】

【0257】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１１－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号６５、６７、６９、および７１である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１１－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号７３、７５、７７、および７９である。

【化14】

【0258】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１２－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号８１、８３、８５、および８７である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１２－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号８９、９１、９３、および９５である。

【化15】

【0259】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１３－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号９７、９９、１０１、および１０３である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１３－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号１０５、１０７、１０９、および１１１である。

【化16】

【0260】

ＨＦＢ９－２ｈｚ１４－ｈＧ１ＡＡのＨＦＲ１～ＨＦＲ４配列は、配列番号１１３、１１５、１１７、および１１９である。ＨＦＢ９－２ｈｚ１４－ｈＧ１ＡＡのＬＦＲ１～ＬＦＲ４配列は、配列番号１２１、１２３、１２５、および１２７である。

【0261】

実施例３ 抗Ｇａｌ９抗体による結合は、受容体ＴＩＭ３およびＣＤ４４へのＧａｌ９結合をブロックする
この実験は、本発明の抗Ｇａｌ９抗体が、その受容体ＴＩＭ３およびＣＤ４４へのＧａｌ９結合をブロックするので、Ｇａｌ９からの下流シグナル伝達をアンタゴナイズすることができることを実証する。

【0262】

図５のデータは、本発明のヒト化抗体が、ＴＩＭ３受容体およびＣＤ４４受容体の双方へのＧａｌ９結合を用量依存的にブロックすることを明確に示した。

【0263】

実施例４ 抗Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和する
ＹＡＮＧら（ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＩＯＮ ４０（３）：１０６２－１０７１，２０１７）は、ガレクチン－９の上昇が、Ｔｈ１エフェクタ機能を抑制して、変形性関節症において活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞のアポトーシスを誘導することを報告した。この実験は、本発明の抗Ｇａｌ９抗体が、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和することを実証する。

【0264】

具体的には、ヒトＰＢＭＣを、健康なドナーから単離して、本発明の抗体の不在下でＴ細胞アポトーシスを誘導する量のＧａｌ９の存在下で、本発明の抗体と共に、抗体濃度を上げながらインキュベートした。アポトーシスＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを、抗体濃度範囲にわたって求めて、抗体のＥＣ５０値を求めた。結果を図６にまとめた。データは、健康なドナー由来のヒトＰＢＭＣを本発明の抗体で処理すると、Ｇａｌ９誘導性Ｔｈ１細胞アポトーシスが用量依存的に防止されることを明確に示した。

【0265】

実施例５ 抗Ｇａｌ９抗体は、Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を抑制する
上述のように、ガレクチン－９は、Ｔｒｅｇによって直接発現され、この活性化は、Ｇａｌ９の発現の増大に関連する。この実験は、本発明の抗Ｇａｌ９抗体によるガレクチン－９の阻害が、Ｔｒｅｇ増殖を抑制することを実証する。

【0266】

具体的には、ヒトＰＢＭＣを、健康なドナーから単離して、本発明の抗体の不在下でＴｒｅｇ増殖を刺激する量のＧａｌ９の存在下で、本発明の抗体と共に、抗体濃度を上げながらインキュベートした。全ての生細胞中のＦｏｘｐ３^＋Ｋｉ６７^ＨＩＧＨＴ細胞のパーセンテージを、抗体濃度範囲にわたって求めて、抗体のＥＣ５０値を求めた。結果を図７にまとめた。データは、健康なドナー由来のヒトＰＢＭＣを本発明の抗体で処理すると、Ｆｏｘｐ３マーカー遺伝子およびＫｉ６７マーカー遺伝子の発現に基づいて、抗体濃度が高いほど、低いパーセンテージの増殖Ｔｒｅｇに関連するという点で、Ｇａｌ－９誘導性Ｔｒｅｇ増殖が用量依存的に抑制されることを明確に示した。

【0267】

実施例６ 抗Ｇａｌ９抗体および抗ＰＤ－１抗体による併用処置は、腫瘍成長のインビボ阻害および生存の延長の相乗効果を示した
この実験は、本発明の抗Ｇａｌ９モノクローナル抗体および抗ＰＤ－１抗体が、異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）マウスモデルにおいて腫瘍成長をインビボ阻害するのに相乗効果を有することを実証する。

【0268】

詳細には、約５０万個の癌細胞を実験マウスに接種して、腫瘍塊を所定のサイズまで成長させた。次いで、マウスを無作為化して、４つの抗体または抗体組合せの１つを腹膜内に（ｉ．ｐ．）注射した：（１）１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＩｇＧアイソタイプ対照、（２）１０ｍｇ／ｋｇの用量での抗Ｇａｌ９抗体ＨＦＢ９－２（クローンＲＭＰ１－１４）、（３）１０ｍｇ／ｋｇの用量での抗ｍＰＤ－１抗体、または（４）１０ｍｇ／ｋｇでの抗ｍＰＤ－１抗体および１０ｍｇ／ｋｇでの抗ＨＦＢ９－２抗体の組合せ。

【0269】

種々の群用の抗体の最初の用量を１日目に投与して、その後の用量を３日毎に、抗ｍＰＤ－１抗体によるあらゆる群に対して合計４回用量、抗ＨＦＢ９－２抗体および対照抗体によるあらゆる群に対して合計７回用量投与した。データを平均±ｓ．ｅ．ｍ．として示す（ｎ＝８頭／群）（図８）。

【0270】

主題の抗Ｇａｌ９抗体および抗ｍＰＤ－１抗体は、７週間の研究期間中に併用療法が腫瘍成長を５００ｍｍ^３以下に本質的に完全に抑制するという点で、腫瘍成長のインビボ阻害において相乗効果を示したことが明らかである。一方、対照群および抗ＨＦＢ９－２群における腫瘍成長は、このレベルを早くも２週で超え、そして抗ｍＰＤ－１群は、このレベルを早くも４週で超えた。

【0271】

さらに、生存（図９）に関して、対照群のマウスは全て、第３週の終わり頃に死亡し、抗ＨＦＢ９－２抗体群のマウスは全て、第５週の終わり頃に死亡し、抗ｍＰＤ－１群のマウスの２５％（８頭中２頭）のみが、第７週の終わりに腫瘍なしで生存した。しかしながら、同時に、併用療法群は、８頭のマウスのうち５頭が腫瘍を有さず、１頭が約１００ｍｍ^３の腫瘍を有することを含めて、７５％の生存率を有した。

【0272】

この驚くべき発見は、Ｇａｌ－９機能およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントを同時に阻害することにより、相乗的に、腫瘍成長をインビボ阻害し、かつ生存を延長することができることを強く示唆している。

【0273】

実施例７ 抗Ｇａｌ９抗体は安定している
主題のヒト化抗Ｇａｌ９抗体が貯蔵中に安定していることで、治療薬としての更なる開発に適していることを確認するために、選択されたヒト化抗体について種々の開発可能性アッセイを行った。

【0274】

第１の実験では、１～２．７５ｍｇ／ｍＬの対象ヒト化抗体、ＨＦＢ９－１ｈｚ１－ｈＧ１ＡＡ、ＨＦＢ９－１ｈｚ２－ｈＧ１ＡＡ、ＨＦＢ９－１ｈｚ３－ｈＧ１ＡＡ、ＨＦＢ９－２ｈｚ１１－ｈＧ１ＡＡ、およびＨＦＢ９－２ｈｚ１３－ｈＧ１ＡＡを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中２５または４０℃にて貯蔵して、種々の抗体の安定性を、０、３、７、および１４日目に判定した。結果（示さず）は、試験した全ての抗体が、試験した条件にて安定していることを実証した。

【0275】

第２の実験では、同じ抗体を、低ｐＨ条件下（１００ｍＭ ＡｃＨ、ｐＨ３．５、２５℃）で０、３、および６時間、安定性について試験した。結果（示さず）はここでも、試験した全ての抗体が、試験した条件にて安定していることを実証した。

【0276】

第３の実験では、同じ抗体を、１、２、または３回の凍結解凍サイクルに供した。結果（示さず）はここでも、試験した全ての抗体が、試験した条件にて安定していることを実証した。

【0277】

実施例８ ＡＭＬ患者由来の血漿および血清中のガレクチン－９レベル
患者の血漿および血清中のＧａｌ－９のレベルを判定するために、ＡＭＬ患者由来の末梢血サンプルを、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄが承認したプロトコルに従って、Ｇｕｓｔａｖｅ Ｒｏｕｓｓｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｖｉｌｌｅｊｕｉｆ，ＦＲＡＮＣＥ）のＣｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔから得た。ヘルシンキ宣言に従って、全ての患者からインフォームドコンセントを得た。Ｆｒｅｎｃｈ－Ａｍｅｒｉｃａｎ－Ｂｒｉｔｉｓｈ（Ｆａｂ）分類基準に従って、患者を層別化した。ＡＭＬ患者由来の末梢血由来の血漿または血清を、標準的な手順に従って調製した。健康なドナーについては、血漿サンプルまたは血清サンプルを商業的な供給源から得た。

【0278】

血漿または血清中のガレクチン－９タンパク質レベルを、Ｒ＆Ｄ ＳＹＳＴＥＭＳ（登録商標）の「Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）ＥＬＩＳＡ Ｈｕｍａｎ Ｇａｌｅｃｔｉｎ－９」を用いてＥＬＩＳＡによって評価して、統計分析（対応のない両側ｔ検定）を、Ｗｉｎｄｏｗｓソフトウェア用のＰＲＩＳＭ（登録商標）５を用いて実行した。

【0279】

図１０に示すように、疾患の診断時または再発／難治性段階（Ｒ／Ｒ）でのＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルは、健康な個体由来の血漿中で観察されたものよりも有意に高かった。化学療法後の完全寛解時のＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルは、正常な生理学的範囲に近かった。

【0280】

図１１に示すように、診断時のＦａｂ Ｍ２またはＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルは、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、またはＭ５のＡＭＬ患者由来の血漿中で観察されたものよりも有意に低かった。診断時のＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者の血漿中のガレクチン－９タンパク質レベルは、正常な生理学的範囲内にあった。

【0281】

加えて、ＬＧＡＬＳ９ ｍＲＮＡ発現レベルを、ＡＭＬ患者および健康な個体において調査した。ＬＧＡＬＳ９ ｍＲＮＡ発現レベルを、Ｔｙｎｅｒらによって寄託された、公的に入手可能な「ＡＭＬ＿Ｏｈｓｕ＿Ｎａｔｕｒｅ ２０１８」データセットから抽出した（研究の完全な説明についてはＰＭＩＤ ３０３３３６２７参照）。データを、正規化したｌｏｇ ２ ＲＰＫＭとして図１２に表す。点線はそれぞれ、健康な個体またはＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣにおけるＬＧＡＬＳ９レベルの中央値を表す。

【0282】

図１２に示すように、診断時のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ（全てＦａｂと考えられる）におけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルは、健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４＋細胞において観察されるｍＲＮＡレベルよりも高かった。加えて、診断時のＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣにおけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルは、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ、または健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣもしくはＣＤ３４^＋細胞において観察されるものよりも有意に低かった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

2023510429000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-09-07

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ガレクチン－９に特異的であり、前記モノクローナル抗体は：
（１ａ）配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（１ｂ）配列番号１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（２ａ）配列番号１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（２ｂ）配列番号２６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（３ａ）配列番号３４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（３ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号４６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（４ａ）配列番号５０のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号５４のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（４ｂ）配列番号５８のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６２のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（５ａ）配列番号６６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６８のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７０のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（５ｂ）配列番号７４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号７６のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（６ａ）配列番号８２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号８４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号８６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（６ｂ）配列番号９０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号９２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号９４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（７ａ）配列番号９８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１００のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１０２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（７ｂ）配列番号１０６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１０８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（８ａ）配列番号１１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（８ｂ）配列番号１２２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

（１ｃ）（１ａ）および（１ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（２ｃ）（２ａ）および（２ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号２１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（３ｃ）（３ａ）および（３ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号３７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号３３のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（４ｃ）（４ａ）および（４ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５３のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号４９のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（５ｃ）（５ａ）および（５ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号６９のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号６５のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（６ｃ）（６ａ）および（６ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号８５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号８１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（７ｃ）（７ａ）および（７ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１０１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号９７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（８ｃ）（８ａ）および（８ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１１７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１１３のＨＦＲ１配列をさらに含む、
請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

（１Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８であり；かつ／もしくは
（１Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１６であるか、または
（２Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号２４であり；かつ／もしくは
（２Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号３２であるか、または
（３Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号４０であり；かつ／もしくは
（３Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号４８であるか、または
（４Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号５６であり；かつ／もしくは
（４Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号６４であるか、または
（５Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号７２であり；かつ／もしくは
（５Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号８０であるか、または
（６Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８８であり；かつ／もしくは
（６Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列は配列番号９６であるか、または
（７Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１０４であり；かつ／もしくは
（７Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１１２であるか、または
（８Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１２０であり；かつ／もしくは
（８Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１２８である、
請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

ヒト化抗体であり、かつ：
（１）配列番号８の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号１６の前記ＬＣＶＲ配列；または、
（２）配列番号７２の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号８０の前記ＬＣＶＲ配列
を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、一本鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がマウスＧａｌ９と交差反応する、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約０．１～０．２ｎＭのＥＣ５０で結合し、かつ／またはマウスＧａｌ９に約０．５～１．０ｎＭのＥＣ５０で結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫ_ｄで結合する、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

Ｇａｌ９に結合して、Ｇａｌ９受容体（例えば、ＴＩＭ３またはＣＤ４４）へのＧａｌ９の結合を阻害する、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

Ｔ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞等）のＧａｌ－９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和する、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を抑制する、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

異種移植腫瘍を有するマウスにおいて、免疫チェックポイントのアンタゴニストと相乗的に、腫瘍成長をインビボ阻害し、かつ／または生存を延長する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

癌の処置を必要とする患者において癌を処置するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および免疫チェックポイントのアンタゴニストを含む組合せ物。

【請求項15】

前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントであり、必要に応じて、前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、請求項１４に記載の組合せ物。

【請求項16】

前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、請求項１４～１５のいずれか１項に記載の組合せ物。

【請求項17】

化学療法剤、抗血管形成剤、成長阻害剤、免疫腫瘍治療剤、および／または抗新生物組成物と組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とする、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組合せ物。

【請求項18】

請求項１～１３のいずれか１項に規定の重鎖もしくは軽鎖、またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。

【請求項19】

ヒト細胞内での発現のためにコドン最適化されている、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項20】

請求項１８または１９に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター（例えば、哺乳動物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）等のベクター。

【請求項21】

癌を発症するか、または癌が再発するリスクがある、癌と診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法において使用するため、あるいは癌を有する患者を識別かつ処置する方法において使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、前記方法は、前記患者由来のサンプル中のガレクチン－９のレベルが、健康な個体または対照個体におけるガレクチン－９の基準レベルよりも高いと前記患者を識別すると、前記組成物を前記患者に投与することを含む、組成物。

【請求項22】

前記方法が、前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルを前記基準レベルと比較することによって、前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルが前記基準レベルよりも高いと前記患者を識別することをさらに含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記方法が、免疫チェックポイントのアンタゴニストを前記患者に投与することをさらに含み、必要に応じて、前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである、請求項２１または２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、請求項２１～２４のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項26】

前記患者が、ＦＡＢ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者であるか、または前記患者が、ＦＡＢ Ｍ２もしくはＭ３のＡＭＬ患者ではない、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、または血清サンプルである、請求項２１～２６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項28】

ＡＭＬを発症するか、またはＡＭＬを再発するリスクがある、ＡＭＬと診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法において使用するため、あるいはＡＭＬを有する患者を識別かつ処置する方法において使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、前記方法は、前記患者由来の骨髄（ＢＭ）由来単核細胞（ＭＮＣ）サンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルが、健康な個体または対照個体におけるＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４^＋細胞における基準レベルよりも統計的に有意に高いか、または低いと前記患者を識別すると、前記組成物を前記患者に投与することを含む、組成物。

【請求項29】

（１）前記患者がＦＡＢ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に高く、または（２）前記患者がＦＡＢ Ｍ３のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に低い、請求項２８に記載の組成物。

【請求項30】

癌の処置に用いられる、ガレクチン－９に対して向けられるか、またはガレクチン－９に特異的な抗体またはその抗原結合部分を含む組成物であって、前記抗体またはその抗原結合部分は、エフェクタＴ細胞増殖を救済し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強し、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、組成物。

【請求項31】

エフェクタＴ細胞増殖を救済または促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法において使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、前記方法は、前記エフェクタＴ細胞を、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、組成物。

【請求項32】

対象において免疫記憶を誘導または促進するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、前記免疫記憶が、前記対象における腫瘍の進行もしくは再発、または癌細胞の増殖を阻害するか、または低減するのに有効である、組成物。

【請求項33】

癌の処置を必要とする患者において癌を処置するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、免疫チェックポイントのアンタゴニストと組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。

【請求項34】

癌の処置を必要とする患者において癌を処置するための、免疫チェックポイントのアンタゴニストを含む組成物であって、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２８２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0282】

図１２に示すように、診断時のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ（全てＦａｂと考えられる）におけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルは、健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４＋細胞において観察されるｍＲＮＡレベルよりも高かった。加えて、診断時のＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣにおけるガレクチン－９コードｍＲＮＡレベルは、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者由来のＢＭ由来ＭＮＣ、または健康な個体由来のＢＭ由来ＭＮＣもしくはＣＤ３４^＋細胞において観察されるものよりも有意に低かった。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ガレクチン－９に特異的であり、前記モノクローナル抗体は：
（１ａ）配列番号２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（１ｂ）配列番号１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（２ａ）配列番号１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２０のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（２ｂ）配列番号２６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（３ａ）配列番号３４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号３６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号３８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（３ｂ）配列番号４２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号４４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号４６のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（４ａ）配列番号５０のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号５２のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号５４のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（４ｂ）配列番号５８のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６０のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号６２のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（５ａ）配列番号６６のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号６８のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７０のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（５ｂ）配列番号７４のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号７６のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号７８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（６ａ）配列番号８２のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号８４のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号８６のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（６ｂ）配列番号９０のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号９２のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号９４のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（７ａ）配列番号９８のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１００のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１０２のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（７ｂ）配列番号１０６のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１０８のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１０のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；または
（８ａ）配列番号１１４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１１６のＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１１８のＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；ならびに
（８ｂ）配列番号１２２のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、配列番号１２４のＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、および配列番号１２８のＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目２）
（１ｃ）（１ａ）および（１ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（２ｃ）（２ａ）および（２ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号２１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（３ｃ）（３ａ）および（３ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号３７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号３３のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（４ｃ）（４ａ）および（４ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号５３のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号４９のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（５ｃ）（５ａ）および（５ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号６９のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号６５のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（６ｃ）（６ａ）および（６ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号８５のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号８１のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（７ｃ）（７ａ）および（７ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１０１のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号９７のＨＦＲ１配列をさらに含み；または
（８ｃ）（８ａ）および（８ｂ）の前記抗体もしくはその抗原結合断片が、配列番号１１７のＨＦＲ３配列をさらに含み、必要に応じて、配列番号１１３のＨＦＲ１配列をさらに含む、
項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目３）
（１Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８であり；かつ／もしくは
（１Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１６であるか、または
（２Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号２４であり；かつ／もしくは
（２Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号３２であるか、または
（３Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号４０であり；かつ／もしくは
（３Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号４８であるか、または
（４Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号５６であり；かつ／もしくは
（４Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号６４であるか、または
（５Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号７２であり；かつ／もしくは
（５Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号８０であるか、または
（６Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号８８であり；かつ／もしくは
（６Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列は配列番号９６であるか、または
（７Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１０４であり；かつ／もしくは
（７Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１１２であるか、または
（８Ａ）前記ＨＣＶＲ配列が配列番号１２０であり；かつ／もしくは
（８Ｂ）前記ＬＣＶＲ配列が配列番号１２８である、
項目１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目４）
ヒト化抗体であり、かつ：
（１）配列番号８の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号１６の前記ＬＣＶＲ配列；または、
（２）配列番号７２の前記ＨＣＶＲ配列および配列番号８０の前記ＬＣＶＲ配列
を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目５）
前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） _２ 、Ｆ _ｄ 、一本鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ _ｖ 、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ _２ 、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’） _３ 、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ _２ 、（ｓｃＦｖ） _２ 、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、項目１～４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目６）
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片がマウスＧａｌ９と交差反応する、項目１～５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目７）
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約０．１～０．２ｎＭのＥＣ５０で結合し、かつ／またはマウスＧａｌ９に約０．５～１．０ｎＭのＥＣ５０で結合する、項目１～６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目８）
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＧａｌ９に約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、または１ｎＭ未満のＫ _ｄ で結合する、項目１～７のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目９）
Ｇａｌ９に結合して、Ｇａｌ９受容体（例えば、ＴＩＭ３またはＣＤ４４）へのＧａｌ９の結合を阻害する、項目１～８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目１０）
Ｔ細胞（ＣＤ４ ^＋ Ｔ細胞等）のＧａｌ－９誘導性Ｔｈ１アポトーシスを中和する、項目１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目１１）
Ｇａｌ９誘導性Ｔｒｅｇ増殖を抑制する、項目１～１０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目１２）
異種移植腫瘍を有するマウスにおいて、免疫チェックポイントのアンタゴニストと相乗的に、腫瘍成長をインビボ阻害し、かつ／または生存を延長する、項目１～１１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目１３）
前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片である、項目１～１２のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
（項目１４）
癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法であって、有効量の、項目１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および免疫チェックポイントのアンタゴニストを前記患者に投与することを含む方法。
（項目１５）
前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントであり、必要に応じて、前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、項目１４～１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
化学療法剤、抗血管形成剤、成長阻害剤、免疫腫瘍治療剤、および／または抗新生物組成物を前記患者に投与することをさらに含む、項目１４～１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
項目１～１３のいずれか１項に規定の重鎖もしくは軽鎖、またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。
（項目１９）
ヒト細胞内での発現のためにコドン最適化されている、項目１８に記載のポリヌクレオチド。
（項目２０）
項目１８または１９に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター（例えば、哺乳動物発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）等のベクター。
（項目２１）
癌を発症するか、または癌が再発するリスクがある、癌と診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいは癌を有する患者を識別かつ処置する方法であって、前記患者由来のサンプル中のガレクチン－９のレベルが、健康な個体または対照個体におけるガレクチン－９の基準レベルよりも高いと前記患者を識別すると、有効量の、項目１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む方法。
（項目２２）
前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルを前記基準レベルと比較することによって、前記サンプル中のガレクチン－９の前記レベルが前記基準レベルよりも高いと前記患者を識別することをさらに含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
免疫チェックポイントのアンタゴニストを前記患者に投与することをさらに含み、必要に応じて、前記免疫チェックポイントがＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントである、項目２１または２２に記載の方法。
（項目２４）
前記免疫チェックポイントの前記アンタゴニストが、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体またはその抗原結合断片；ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の（非抗体）ペプチド阻害剤；ＰＤ－Ｌ１の小分子阻害剤；大環状ペプチド；またはそれらの任意の組合せである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記癌が、血液癌（ＡＭＬおよびＤＬＢＣＬ等）または固形腫瘍（乳癌、頭頸部癌、肺癌、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、結腸癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、および前立腺癌等）である、項目２１～２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記患者が、Ｆａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者であるか、または前記患者が、Ｆａｂ Ｍ２もしくはＭ３のＡＭＬ患者ではない、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記サンプルが、血液サンプル、血漿サンプル、または血清サンプルである、項目２１～２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
ＡＭＬを発症するか、またはＡＭＬを再発するリスクがある、ＡＭＬと診断された患者において、エフェクタＴ細胞増殖を救済もしくは促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法、あるいはＡＭＬを有する患者を識別かつ処置する方法であって、前記患者由来の骨髄（ＢＭ）由来単核細胞（ＭＮＣ）サンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡのレベルが、健康な個体または対照個体におけるＢＭ由来ＭＮＣまたはＣＤ３４ ^＋ 細胞における基準レベルよりも統計的に有意に高いか、または低いと前記患者を識別すると、有効量の、項目１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む方法。
（項目２９）
（１）前記患者がＦａｂ Ｍ０、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ４、もしくはＭ５のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に高く、または（２）前記患者がＦａｂ Ｍ３のＡＭＬ患者である場合、前記患者由来の前記ＢＭ由来ＭＮＣサンプル中のガレクチン－９コードｍＲＮＡの前記レベルが前記基準レベルよりも有意に低い、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
癌の処置に用いられる、ガレクチン－９に対して向けられるか、またはガレクチン－９に特異的な抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分は、エフェクタＴ細胞増殖を救済し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強し、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、抗体またはその抗原結合部分。
（項目３１）
エフェクタＴ細胞増殖を救済または促進し、かつ／またはエフェクタＴ細胞活性を増強する方法であって、前記エフェクタＴ細胞を、項目１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、必要に応じて、前記エフェクタＴ細胞はＴｈ１細胞である、方法。
（項目３２）
対象において免疫記憶を誘導または促進する方法であって、有効量の、項目１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記免疫記憶が、前記対象における腫瘍の進行もしくは再発、または癌細胞の増殖を阻害するか、または低減するのに有効である、方法。

【国際調査報告】