(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-15
(54)【発明の名称】免疫細胞関与効果を調節するための手段および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20230308BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230308BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20230308BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230308BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230308BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230308BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230308BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20230308BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230308BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230308BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 E
C12N15/63 Z ZNA
C07K16/46
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/13
A61K39/395 U
A61K39/395 T
A61P35/00
A61P43/00 105
A61P43/00 111
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022541676
(86)(22)【出願日】2021-01-28
(85)【翻訳文提出日】2022-07-05
(86)【国際出願番号】 NL2021050051
(87)【国際公開番号】W WO2021154073
(87)【国際公開日】2021-08-05
(31)【優先権主張番号】2024786
(32)【優先日】2020-01-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】510340757
【氏名又は名称】メルス ナムローゼ フェンノートシャップ
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】ピーテル・フォッコ・ファン・ロー
(72)【発明者】
【氏名】マーク・スロスビー
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AB01
4B065AC14
4B065AC15
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA13
4C085AA14
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4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA40
4H045CA42
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本発明は、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含む組成物に関し、この組成物は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む。本発明はまた、多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキット、ならびにがんの治療を必要とする対象に多価抗体および第２の結合分子を投与することを含む、がんの治療のための手段および方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療用組成物であって、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含み、前記組成物が、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む、治療用組成物。
【請求項2】
前記多価抗体が、Ｆｃ領域を含む、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項3】
免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する前記第３の可変ドメイン、および第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する前記第２の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する前記第１の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する前記第３の可変ドメインに連結される、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項4】
免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する前記第３の可変ドメイン、および第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する前記第１の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する前記第２の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する前記第３の可変ドメインに連結される、請求項１または２に記載の治療用組成物。
【請求項5】
前記第１、第２、および／または第３の可変ドメインが、共通の軽鎖可変領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項6】
免疫細胞関与抗原に結合する前記可変ドメインが、ＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ６４、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、またはＮＫｐ３０、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、またはＣＤ５、より好ましくはＣＤ３に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項7】
第１の腫瘍関連抗原（ＴＡ１）に結合する前記可変ドメインが、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＣＤ４７、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ７、またはＳｉｇｌｅｃ－１５、好ましくはＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、より好ましくはＰＤ－Ｌ１に結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項8】
第２の腫瘍関連抗原（ＴＡ２）に結合する前記可変ドメインが、ＣＬＥＣ１２ＡまたはＥＧＦＲ、好ましくはＥＧＦＲに結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項9】
前記第１の腫瘍関連抗原（ＴＡ１）が、非腫瘍細胞上で発現される、請求項１～８のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項10】
前記第２の結合分子が、ＴＡ１に結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項11】
前記第２の結合分子が、二価の単一特異性抗体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項12】
前記第２の結合分子が、前記多価抗体の前記第１の可変ドメインもしくは第２の可変ドメインのＴＡ１もしくはＴＡ２に対する結合親和性と同等である、それと等しい、またはそれよりも低いＴＡ１またはＴＡ２に対する結合親和性を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項13】
前記第２の結合分子が、低減されたエフェクタ－機能を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の治療用組成物。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む、部分のキット。
【請求項15】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物、および前記組成物を投与することを必要とする対象にそれを行うための説明書を含む、部分のキット。
【請求項16】
前記キットが、同時にまたは連続的に前記多価抗体および第２の結合分子を投与することを必要とする対象に、それを行うための説明書を含む、請求項１４または１５に記載の部分のキット。
【請求項17】
前記キットが、前記多価抗体を投与する前に、前記第２の結合分子を投与するための説明書を含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の部分のキット。
【請求項18】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項19】
非腫瘍細胞への前記多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または前記多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の部分のキット、または請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項20】
薬剤として使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の部分のキット、または請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項21】
治療を必要とする対象、特にがんを有する対象の治療に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の部分のキット、または請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項22】
がんの治療のための薬剤の製造における、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の部分のキット、または請求項１８に記載の薬学的組成物の、使用。
【請求項23】
ＴＡ１またはＴＡ２を発現する非腫瘍細胞への、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体の結合を軽減または低減するための方法であって、前記方法が、前記多価抗体と併せてＴＡ１またはＴＡ２に結合する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の第２の結合分子を使用することを含む、方法。
【請求項24】
前記非腫瘍細胞がＴＡ１を発現し、前記第２の結合分子がＴＡ１に結合する、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
ＴＡ１またはＴＡ２を発現する非腫瘍細胞への前記多価抗体の結合が、前記第２の結合分子を使用しない方法において、ＴＡ１またはＴＡ２を発現する非腫瘍細胞への前記多価抗体の結合と比較して低減される、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項26】
がんの治療の方法であって、前記方法が、－それを必要とする対象に、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体を投与すること、および前記対象に、請求項１～１３のいずれか一項に記載の第２の結合分子を追加で投与すること、
－それを必要とする対象に、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、請求項１～１３のいずれか一項に記載の治療用組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、請求項１８に記載の薬学的組成物を投与すること、を含む、方法。
【請求項27】
前記多価抗体および第２の結合分子が、単一の組成物として、または２つの別個の組成物として同時に投与される、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ、組成物、治療用組成物、もしくは部分のキット、または請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記多価抗体が、前記第２の結合分子の前に投与される、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ、組成物、治療用組成物、もしくは部分のキット、または請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記第２の結合分子が、前記多価抗体の前に投与される、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ、組成物、治療用組成物、もしくはキット、または請求項２３～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体の前記第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含むベクタ－であって、前記ベクタ－が、請求項１～１３のいずれか一項に記載の第２の結合分子の前記重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、ベクタ－。
【請求項31】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体の前記第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含む宿主細胞であって、前記宿主細胞が、請求項１～１３のいずれか一項に記載の第２の結合分子の前記重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、宿主細胞。
【請求項32】
前記宿主細胞が、請求項１～１３のいずれか一項に記載の多価抗体の前記第１、第２、および第３の可変ドメインの前記軽鎖可変領域、ならびに第２の結合分子の前記軽鎖可変領域をコ－ドする核酸をさらに含む、請求項３１に記載の宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、対象における免疫細胞を活性化する手段および方法、ならびに免疫細胞関与結合分子を用いて対象におけるがんを治療する方法に関する。一態様では、本発明は、２つ以上の結合分子を含む組成物に関し、第１は、免疫細胞活性化分子に結合する可変ドメイン、および２つの腫瘍抗原（ＴＡ１およびＴＡ２）に結合する２つの可変ドメインを有する多価抗体である。第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する結合分子である。本発明はまた、当該抗体を含む部分のキット、および当該結合分子を用いてがんを治療するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
がんは、依然として主要な死因の１つである。様々な第一線での治療の進歩は、ある特定の適応症および患者集団における治療および生存率の改善をもたらした。有望な方向は、腫瘍標的化療法の開発である。腫瘍に指向された抗体は、いくつかの方法で、腫瘍の成長および継続的な存在を妨害することができる。いくつかは、腫瘍を標的とし、宿主の免疫系が腫瘍細胞を破壊することができるようにそれをマ－クする。いくつかは、がん状態に関連するシグナル伝達経路を標的とする。他は、腫瘍細胞または腫瘍細胞を宿主とする環境に対して宿主免疫系から隠れるかまたは下方調節する腫瘍細胞の能力を妨害する。他の様々な作用様式が説明されている。
【0003】
抗体は、有効性および副作用の種類および重症度の低減の両方において、従来のがん治療方法よりも顕著な進歩である。比較的新しいことは、多重特異性抗体の開発である。かかる抗体は、典型的には、複数の標的に結合するように設計される。多重特異性抗体は、多重特異性抗体のそれぞれの結合特性を有する２つ以上の単一特異性抗体の単純な組み合わせとは異なる活性スペクトルを有し得る。つまり、２つ以上の抗原を標的とする多重特異性抗体の使用から、それらの抗原の各々を標的とする単一特異性抗体の組み合わせの使用から、異なる作用機序および結果を得ることができる。その一例は、Ｔ細胞関与多重特異性抗体である。かかる抗体は、例えば、Ｔ細胞の膜上のＣＤ３または別のＴ細胞活性化抗原に結合する可変ドメイン、および腫瘍抗原に結合する可変ドメインを有する。理論に拘束されることなく、Ｔ細胞関与抗体は、（腫瘍）標的細胞の近傍にＴ細胞をもたらし／保持し、Ｔ細胞の活性化を通じて、腫瘍に対する免疫応答を誘導／刺激すると考えられている。
【0004】
これらの治療の多くは依然として改善可能である。改善され得る態様は、例えば、抗体に対する患者におけるより高い傷害性または忍容性の低下を含む、望ましくない副作用をもたらす可能性がある多重特異性抗体の正常細胞に対する効果を低下させることである。多くの腫瘍抗原は、厳密には腫瘍細胞上で発現されない。実際、腫瘍抗原の多くは、本明細書で「正常」とも称される非腫瘍細胞上にも発現される。例えば、タンパク質のＥｒｂＢファミリ－は、様々ながんにおいて過剰発現および／または変異されるが、個体の様々な正常細胞上にも通常発現される。かかる腫瘍抗原を切除抗体（ａｂｌａｔｉｖｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）で標的化することは、典型的には、正常な非腫瘍細胞に影響を及ぼし、それによって、抗体の腫瘍攻撃態様に関連しない効果を少なくとも潜在的に引き起こす。かかる標的特異的な副作用は、重症例では、衰弱させる傷害性、死亡さえもたらす可能性があり、より一般的には、生活の質の低下、ならびに特定の治療の減少、中断、または中止をもたらす可能性がある。例えば、ＥＧＦＲへの抗体の標的化は、ＥＧＦＲが通常、皮膚などの生理学的機能を調節するために発現される組織で最も明らかである反応をもたらし得る。ＥＧＦＲ阻害剤で治療された患者は、丘疹膿疱性発疹、乾燥皮膚、かゆみ、ならびに毛髪および爪周囲（爪を取り囲む領域）の変化を発達させる可能性があることが報告されている（Ｌａｃｏｕｔｕｒｅ ２００６，ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ：ｃａｎｃｅｒ Ｖｏｌ ６，ｐｐ ８０３－８１２：ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ１９７０）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｌａｃｏｕｔｕｒｅ ２００６，ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ：ｃａｎｃｅｒ Ｖｏｌ ６，ｐｐ ８０３－８１２：ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ１９７０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、多価、特に多重特異性抗体治療の有効性および／または傷害性ウィンドウを改善するための手段および方法を提供する。治療有効性は、本発明の手段および方法の不在下での類似の用量の多価抗体と比較した場合に、増強され、傷害性が低下し、忍容性が増加し得るか、またはこれらの結果の各々であり得る。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明は、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含む組成物を提供し、この組成物は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む。
本明細書に記載の多価抗体と第２の結合分子との組み合わせは、多価抗体単独の投与とは対照的に、多価抗体のオフタ－ゲット効果が第２の結合分子と組み合わせて投与される場合に軽減される、より大きな治療ウィンドウを提供する。
本明細書に記載の多価抗体と第２の結合分子との組み合わせは、多価抗体単独の投与とは対照的に、多価抗体のオフタ－ゲット効果が第２の結合分子と組み合わせて投与される場合に軽減される、より大きな治療ウィンドウを提供する。
【0008】
本発明の多価抗体は、当該技術分野で既知の任意の抗体形式を有し得る。当技術分野で既知の抗体形式の例としては、限定されないが、図１２に示され、例えば、ＷＯ２０１９／１９０３２７に開示されているものが挙げられる。本発明の多価抗体は、多重特異性抗体である。
【0009】
本発明の多価抗体の例は、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、またはＴＣＲ－β鎖に結合する可変ドメイン、およびＴＡ２に結合する可変ドメインを含む塩基抗体を含む。ＴＡ１に結合する多価抗体の可変ドメインは、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する可変ドメインに連結されるか、またはＴＡ２に結合する可変ドメインに連結される追加の可変ドメインであり得る。本発明の多価抗体の別の例は、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、またはＴＣＲ－β鎖に結合する可変ドメイン、およびＴＡ１に結合する可変ドメインを含む塩基抗体を含む。ＴＡ２に結合する多価抗体の可変ドメインは、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する可変ドメインに連結されるか、またはＴＡ１に結合する可変ドメインに連結される追加の可変ドメインであり得る。本発明の多価抗体のさらなる例は、ＴＡ１に結合する可変ドメイン、およびＴＡ２に結合する可変ドメインを含む塩基抗体を含む。免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、またはＴＣＲ－β鎖に結合する多価抗体の可変ドメインは、ＴＡ１に結合する可変ドメインに連結されるか、またはＴＡ２に結合する可変ドメインに連結される追加の可変ドメインであり得る。
【0010】
可変ドメインは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のうちの少なくとも１つ、好ましくは少なくとも重鎖可変領域、より好ましくは重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方を含む。
【0011】
参照を容易にするために、多価または多特異性抗体上の可変ドメインは、ドメイン１、ドメイン２、およびドメイン３と呼ばれ得る。異なる重鎖可変領域は、ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３などの異なる番号によって参照され得る。したがって、本発明は、塩基抗体の可変ドメインおよび追加の可変ドメインが重鎖可変領域ＶＨ１、ＶＨ２、およびＶＨ３を含む、多価抗体を含む組成物または部分のキットを提供する。ある特定の実施形態では、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する上述の塩基抗体可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ２を含む。ある特定の実施形態では、ＴＡ２に結合する塩基抗体可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ３を含む。ある特定の実施形態では、ＴＡ１に結合する追加の可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ１を含む。ある特定の実施形態では、ＶＨ１を有する可変ドメインは、好適には、リンカ－によって、ＶＨ２を有する可変ドメインに連結される。ある特定の実施形態では、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する塩基抗体の可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ２を含み、ＴＡ２に結合する塩基抗体可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ３を含み、ＴＡ１に結合する追加の可変ドメインは、重鎖可変領域ＶＨ１を含み、ＶＨ１を有する可変ドメインは、好適には、リンカ－によって、ＶＨ２を有する可変ドメインに連結される。多価抗体の好適な形式の一例は、図１に概略図として提供される。図１２に含まれるその他は、本明細書に記載されており、参照により組み込まれるＷＯ２０１９／１９０３２７に提供されている。異なる軽鎖可変領域は、ＶＬ１、ＶＬ２、およびＶＬ３などの異なる番号によっても参照され得る。本発明で使用される多価または多重特異性抗体は、３つの異なる重鎖可変領域を有する共通の軽鎖、３つの異なる軽鎖可変領域を有する共通の重鎖、または３つの異なる可変ドメイン（各々が互いに異なる重鎖および軽鎖可変領域を含むドメインなど）を含み得る。
【0012】
本発明の第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する単一特異性結合分子である。第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２に対する特異性を有する任意の結合分子であってもよく、これには、当該抗体の結合特異性を維持する抗体またはその断片もしくはバリアント、あるいは当該断片を含む構造が含まれるが、これらに限定されない。第２の結合分子は、好ましくは、全長抗体、Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、またはｓｃＦｖである。
【0013】
第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合し、それにより、多価抗体によるＴＡ１もしくはＴＡ２の結合を防止するか、またはそれと競合する。これは、ＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない場合、またはＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない場合に、細胞の殺滅を防止または低減する。細胞がＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する場合、多価抗体がＴＡ２に結合し、それによってＴＡ１に結合するための第２の結合分子に対して競合優位性が増強されるか、または多価抗体がＴＡ１に結合し、それによってＴＡ２に結合するための第２の結合分子に対して競合優位性が増強される。したがって、多価抗体は、ＴＡ１またはＴＡ２のいずれかを単独で発現する細胞と比較して、ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞に対して増強された効果を示すと考えられる。
【0014】
本発明は、本発明の多価抗体および本発明の第２の結合分子を含む部分のキットをさらに提供する。
【0015】
本発明は、本発明の多価抗体および本発明の第２の結合分子を含む治療用組成物をさらに提供する。
【0016】
本発明は、本発明の多価抗体、本発明の第２の結合分子、ならびに薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む薬学的組成物をさらに提供する。本発明の多価抗体および第２の結合分子は、一緒にまたは別個に製剤化および／または投与され得る。
【0017】
本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせをさらに提供する。本発明は、薬剤として使用するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせをさらに提供する。本発明は、治療を必要とする対象の治療における使用、特にがんの治療における使用のための、本発明の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせをさらに提供する。多価抗体および第２の結合分子は、多価抗体の投与の前または後に、第２の結合分子と同時に、または連続して投与され得る。
【0018】
本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物をさらに提供する。本発明は、薬剤として使用するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物をさらに提供する。本発明は、治療を必要とする対象の治療における使用、特にがんの治療における使用のための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物をさらに提供する。
【0019】
第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含む組成物（組成物は、手段、方法、本発明の任意の形態または組み合わせでの使用に記載されるように、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む）は、好ましくは治療用組成物である。
【0020】
本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む治療用組成物をさらに提供する。本発明は、薬剤として使用するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む治療用組成物をさらに提供する。本発明は、治療を必要とする対象の治療における使用、特にがんの治療における使用のための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む治療用組成物をさらに提供する。
【0021】
本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットをさらに提供する。本発明は、薬剤として使用するための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットをさらに提供する。本発明は、治療を必要とする対象の治療における使用、特にがんの治療における使用のための、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットをさらに提供する。多価抗体および第２の結合分子は、多価抗体の投与の前または後に、第２の結合分子と同時に、または連続して投与され得る。
【0022】
本発明は、非腫瘍細胞への本発明の多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための方法をさらに提供し、方法は、多価抗体と併せて本明細書に記載される第２の結合分子を使用することを含む。
【0023】
本発明は、がんの治療の方法をさらに提供し、方法は、それを必要とする対象に、本発明の多価抗体を投与すること、および、対象に、本発明の第２の結合分子を追加で投与することを含む。
【0024】
以下に例示されるもの以外の本発明の特徴および態様は、添付の図面と併せた詳細な説明から明らかであり、添付の図面は、例として、本発明の実施形態による特徴を図示することに留意されたい。提供される図面の各々は、例示的であり、本明細書に記載の発明を説明し、可能にする、特許請求の範囲、態様、および本開示の完全な範囲によって定義される、提供される本発明の範囲を限定することを企図するものではない。
参照の容易さのために、本明細書における本発明の多価抗体を説明する場合、以下の形式を使用する：ＴＡ１＝ＩＥＡｘＴＡ２は、腫瘍関連抗原１結合ドメイン（ＴＡ１）、リンカ－（＝）、腫瘍関連抗原２結合ドメイン（ＴＡ２）を用いて二量体化（ｘ）された免疫細胞関与抗原結合ドメイン（ＩＥＡ）を表し、そのため、ＴＡ１＝ＩＥＡが「長いア－ム」を構成し、一方、ｘは二量体化を示し、続いて、多価抗体の「短いア－ム」を指定するＴＡ２を示す。多価抗体が共通の軽鎖を含む場合、対応するＶＨ領域は以下の通りである：ＴＡ１（ＶＨ１）＝ＩＥＡ（ＶＨ２）ｘＴＡ２（ＶＨ３）。
参照の容易さのために、本明細書における本発明の多価抗体を説明する場合、以下の形式を使用する：ＴＡ１＝ＩＥＡｘＴＡ２は、腫瘍関連抗原１結合ドメイン（ＴＡ１）、リンカ－（＝）、腫瘍関連抗原２結合ドメイン（ＴＡ２）を用いて二量体化（ｘ）された免疫細胞関与抗原結合ドメイン（ＩＥＡ）を表し、そのため、ＴＡ１＝ＩＥＡが「長いア－ム」を構成し、一方、ｘは二量体化を示し、続いて、多価抗体の「短いア－ム」を指定するＴＡ２を示す。多価抗体が共通の軽鎖を含む場合、対応するＶＨ領域は以下の通りである：ＴＡ１（ＶＨ１）＝ＩＥＡ（ＶＨ２）ｘＴＡ２（ＶＨ３）。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】多価抗体の例の概略図である。ＶＨは重鎖可変領域であり、ＣＨは重鎖定常領域であり、ＣＬは軽鎖定常領域であり、ＶＬは軽鎖可変領域である。この特定の実施形態では、共通の軽鎖は、結合ドメインの各々に用いられる。軽鎖またはＶＬは、結合ドメインのうちの１つ以上に関して共通であり、別の結合ドメインまたは他の結合ドメインに関して異なり得る。この特定の実施形態では、ＴＡ１に結合するＶＨ１を有する追加の結合ドメインは、ＣＨ１およびＣＬドメインを含む。多価抗体はまた、例えば、これらのドメインの一方または両方を欠いてもよいか、またはＣＨ１およびＣＬドメインを入れ替えてもよい。この特定の実施形態では、多価抗体は、ＴＡ１に結合するＶＨ１を有する追加の結合ドメインのＣＨ１ドメインと、ＶＨ２を有するＩＥＡ結合ドメインのＶＨドメインとの間にリンカ－を含む。リンカ－はまた、ＴＡ１に結合するＶＨ１を有する追加の結合ドメインのＣＬドメインと、ＶＨ２を有するＩＥＡ結合ドメインのＶＬとの間に、追加のリンカ－として、または単一のリンカ－として存在し得る。
【図2】ＰＤ－Ｌ１、ＥＧＦＲ、およびＣＤ３の結合ドメインを有する多価抗体の例の概略図である。ＶＨは重鎖可変領域であり、ＣＨは重鎖定常領域であり、ＣＬは軽鎖定常領域であり、ＶＬは軽鎖可変領域である。この特定の実施形態では、共通軽鎖は、結合ドメインの各々に用いられる。軽鎖またはＶＬは、結合ドメインのうちの１つ以上に関して共通であり、別の結合ドメインまたは他の結合ドメインに関して異なり得る。この特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する追加の結合ドメインは、ＣＨ１およびＣＬドメインを含む。多価抗体はまた、例えば、これらのドメインの一方または両方を欠いてもよいか、またはＣＨ１およびＣＬドメインを入れ替えてもよい。この特定の実施形態では、多価抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する追加の結合ドメインのＣＨ１ドメインとＣＤ３結合ドメインのＶＨドメインとの間にリンカ－を含む。リンカ－はまた、ＰＤ－Ｌ１に結合する追加の結合ドメインのＣＬドメインとＣＤ３結合ドメインのＶＬとの間に、追加のリンカ－として、または単一のリンカ－として存在し得る。
【図3A】ａ）共通の軽鎖のアミノ酸配列、ｂ）共通の軽鎖可変領域ＤＮＡ配列および翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）、ｃ）共通の軽鎖定常領域ＤＮＡ配列および翻訳。
【図3B】ｄ）ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５、共通の軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ｅ）Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９のアミノ酸配列、ｆ）共通の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３アミノ酸配列。
【図4A】二重特異性分子の生成に好適な例示的なＩｇＧ重鎖核酸およびアミノ酸配列。ａ）ＣＨ１領域。ｂ）ヒンジ領域。ｃ）ＣＨ２領域。
【図4B】二重特異性分子の生成に好適な例示的なＩｇＧ重鎖核酸およびアミノ酸配列。ｄ）バリエ－ションＬ３５１ＫおよびＴ３６６Ｋ（ＫＫ）を含むＣＨ３ドメイン。ｅ）バリエ－ションＬ３５１ＤおよびＬ３６８Ｅ（ＤＥ）を含むＣＨ３ドメイン。
【図5】パネルＡは、ＰＤ－Ｌ１陽性およびＥＧＦＲ陰性、またはＥＧＦＲ陽性およびＰＤ－Ｌ１陰性のいずれかである正常な非腫瘍細胞を示す。かかる細胞は、単一特異的ＰＤ－Ｌ１結合分子の存在下で、三重特異的ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体によって効率的に溶解されない。矢印上の十字（Ｘ）は、溶解なしまたは弱溶解を意味する。 単一特異性ＰＤ－Ｌ１結合分子は、例えば、ＰＤ－Ｌ１結合分子の二価性および／またはＰＤ－Ｌ１に対する三重特異性抗体の親和性と比較してＰＤ－Ｌ１結合分子のより高い親和性に起因して、ＰＤ－Ｌ１陽性およびＥＧＦＲ陰性細胞上で三重特異性抗体を上回る。三重特異性抗体は、例えば、結合の一価の特性のために、活性を誘導しないか、または比較的弱い活性を誘導するＥＧＦＲ陽性およびＰＤ－Ｌ１陰性細胞に結合する。しかしながら、腫瘍細胞などのＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１の両方を発現する細胞では、三重特異性抗体は、ＥＧＦＲを介して細胞にドッキングし、ＰＤ－Ｌ１標的化ア－ムは、単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１結合分子に関して競合優位性が増強される（パネルＢ）。三重特異性抗体は、単一特異性ＰＤ－Ｌ１結合分子と比較して、ＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１の両方への結合を介したアビディティによって達成される、かかるＰＤ－Ｌ１陽性およびＥＧＦＲ陽性細胞へのより大きな結合を有する。これは、ＥＧＦＲ標的化ア－ムの高い親和性を使用することによってさらに増強され得る。
【図6A-1】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し、もう１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ａ）、または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ｂ）の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、異なる濃度で使用した：２０ｎＭ、２．０５ｎＭ、０．２０５ｎＭ、０．０２０５ｎＭ、０．００２０５ｎＭ、および０ｎＭ（左から右列）。各プロットのｙ軸は、抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のナノモル（ｎＭ）での量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図6A-2】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し、もう１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ａ）、または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ｂ）の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、異なる濃度で使用した：２０ｎＭ、２．０５ｎＭ、０．２０５ｎＭ、０．０２０５ｎＭ、０．００２０５ｎＭ、および０ｎＭ（左から右列）。各プロットのｙ軸は、抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のナノモル（ｎＭ）での量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図6B-1】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し、もう１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ａ）、または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ｂ）の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、異なる濃度で使用した：２０ｎＭ、２．０５ｎＭ、０．２０５ｎＭ、０．０２０５ｎＭ、０．００２０５ｎＭ、および０ｎＭ（左から右列）。各プロットのｙ軸は、抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のナノモル（ｎＭ）での量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図6B-2】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し、もう１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ａ）、または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体（図６Ｂ）の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、異なる濃度で使用した：２０ｎＭ、２．０５ｎＭ、０．２０５ｎＭ、０．０２０５ｎＭ、０．００２０５ｎＭ、および０ｎＭ（左から右列）。各プロットのｙ軸は、抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のナノモル（ｎＭ）での量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図7A】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞（上部パネル）またはＨＴＣ１１６細胞（下部パネル）を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体、または配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、三重特異性抗体の１０倍の濃度で使用した。各プロットのｙ軸は、三重特異性抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のｎｇ／ｍｌでの量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体および三重特異性モック＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図7B】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞（上部パネル）またはＨＴＣ１１６細胞（下部パネル）を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体、または配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、三重特異性抗体の１０倍の濃度で使用した。各プロットのｙ軸は、三重特異性抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のｎｇ／ｍｌでの量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体および三重特異性モック＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図7C】ヒトＴ細胞と共培養したＢｘＰＣ３細胞（上部パネル）またはＨＴＣ１１６細胞（下部パネル）を使用して行った細胞傷害性研究の結果を示す。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体、または配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメインを有する単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で試験した。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、三重特異性抗体の１０倍の濃度で使用した。各プロットのｙ軸は、三重特異性抗体を含まない対照試料と比較した標的細胞殺滅％を示す。各プロットのｘ軸は、試料中のそれぞれの三重特異性抗体のｎｇ／ｍｌでの量を示す。パネルは、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック対照抗体および三重特異性モック＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ対照抗体と比較する。モック可変ドメインは、配列番号６８の重鎖可変領域を有し、これは、共通の軽鎖と共に破傷風トキソイド結合可変ドメイン（ＴＴ）を形成する。ＴＴ可変ドメインは、様々なインキュベ－ションにおいて結合パ－トナ－を有せず、したがって、モックドメインとして機能する。
【図8A-1】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。図８Ａは、配列番号４６の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加された場合の結果を示し、図８Ｂは、配列番号５１の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加されたときの結果を示す。
【図8A-2】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。図８Ａは、配列番号４６の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加された場合の結果を示し、図８Ｂは、配列番号５１の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加されたときの結果を示す。
【図8B-1】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。図８Ａは、配列番号４６の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加された場合の結果を示し、図８Ｂは、配列番号５１の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加されたときの結果を示す。
【図8B-2】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘ ＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。図８Ａは、配列番号４６の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加された場合の結果を示し、図８Ｂは、配列番号５１の重鎖を含む二価単一特異性抗体が添加されたときの結果を示す。
【図9A】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。使用される二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。
【図9B】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。使用される二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。
【図9C】ヒトＴ細胞およびＢｘＰＣ３細胞を使用してＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を決定するための細胞傷害性アッセイにおいて、単一特異性二価ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体。３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体を試験した。１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（左列）、１つは、配列番号３８を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有し（中央列）、１つは、配列番号４２を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を含むＥＧＦＲ結合ドメインを有する（右列）。使用される二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号４６に記載のアミノ酸配列を有する重鎖を含む。ｘ軸は、三重特異性抗体の量をｎＭで示す。ｙ軸は、抗体が添加されていない場合の細胞殺滅％を示す。一番上の段は、二価の単一特異性抗体が存在しない（ビヒクル）場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す。中央の段は、二価の単一特異性抗体を等量で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺滅活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１である）。一番下の段は、二価単一特異性抗体を１０倍過剰で添加した場合の、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ抗体またはモック対照の細胞殺傷活性を示す（三重特異性：単一特異性比は１：１０である）。
【図10】ベクタ－ＭＶ３０３２のマップである。
【図11】ベクタ－ＭＶ１６２５のマップである。
【図12A】好適な多価抗体形式の例の概略図である。これらの多価抗体形式は、さらなる追加の結合ドメインを含み得る。Ｆｃ領域を含む多価抗体形式の例を示す。ＢＤ１、ＢＤ２、およびＢＤ３は、結合ドメイン１、２、および３である。これらの例におけるある特定の結合ドメインは、Ｆａｂドメインとして示されるが、例えば、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、Ｆｖ、ＶＨＨ２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ＣＯＤＶなどの他の種類のドメイン、ならびにそれらの組み合わせも使用され得る。これらの例におけるある特定の結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインとして示されるが、例えば、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、Ｆｖ、ＶＨＨ２、Ｆａｂ、ダイアボディ、ＣＯＤＶなどの他の種類のドメイン、ならびにそれらの組み合わせも使用され得る。結合ドメインのうちの１つ以上は、ＣＨ２に連結され得るか、またはＣＨ１、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３の領域で操作され得る。多価抗体形式は、共通の重鎖、共通の軽鎖、直交重鎖、および直交ＨＣ：ＬＣを含む、任意の種類の重鎖ならびに軽鎖を含み得る。多価抗体形式におけるリンカ－の位置およびまたは性質は、当該技術分野で既知であるものに従って変化し得る。
【図12B】好適な多価抗体形式の例の概略図である。これらの多価抗体形式は、さらなる追加の結合ドメインを含み得る。以下を含む多価抗体形式の追加の例を示す：Ｖドメイン、ＦｖおよびＦａｂベ－スの多重特異性抗体（ＶＨＨ３、トリプルボディ、タンデムＦａｂ３）、Ｆｖベ－スのＩｇＧ多重特異性抗体（ＣＯＤＶ－Ｆａｂ ＴｓＡｂ、ｓｃＦｖ－ＩｇＧ ＴｓＡｂ）、Ｆａｂベ－スのＩｇＧ多重特異性抗体（ｏｒｔｈｏＴｓＡｂ）、ならびにＣｒｏｓｓＭａｂ ２：１ ＴＣＢ。
【発明を実施するための形態】
【0026】
本説明をより容易に理解することができるように、ある特定の用語が最初に定義される。追加の定義が発明を実施するための形態全体を通して記載される。別途記載されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有し、免疫学、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学の従来の方法が用いられる。
【0027】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の１つまたは１つより多く（すなわち、１つまたは少なくとも１つ）の文法的目的語を指すために本明細書で使用される。
【0028】
本明細書および添付の特許請求の範囲および態様を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という単語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの変形は、包括的に解釈されるものとする。すなわち、これらの単語は、内容が許容する場合、具体的に列挙されていない他の要素または整数の可能な包含を伝えることを意図している。
【0029】
本明細書で使用される「結合ドメイン」という用語は、可変ドメインを含むタンパク質を意味するか、もしくは可変ドメインを含み得るか、またはそれは、可変ドメインと配列相同性を共有する。可変ドメインを含む結合ドメインの非限定的な例は、Ｆｖドメイン、Ｆａｂドメイン、および修飾Ｆａｂドメインである。典型的な変動は、相補性決定領域またはＣＤＲである、ＶＨおよびＶＬドメイン内の３つの表面的なル－プ形成領域に見られる。本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原上のエピト－プに結合する１つ以上のドメインを含有する、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、かかるドメインは、抗体の可変ドメインであるか、それに由来するか、またはそれと配列相同性を共有する。抗体は、典型的には、各々２つの重鎖および２つの軽鎖を有する基本的な構造単位から構成される。治療的使用のための抗体は、可能な限り治療される対象の天然抗体に近いことが好ましい（例えば、ヒト対象のためのヒト抗体）。本発明による抗体は、任意の特定の形式またはその産生方法に限定されない。
【0030】
「塩基抗体」または「塩基抗体部分」は、２つの結合ドメインを含む。好ましくは、２つの重鎖および２つの軽鎖が結合して「Ｙ」型分子を形成する、４つのポリペプチドからなる。Ｙの塩基は、重鎖、典型的にはＣＨ３およびＣＨ２ドメインを対合する多量体化ドメインを含有する。Ｙの２つの分岐は、２つの可変ドメインに連結された２つのＣＨ１ドメインを含有する。ＣＨ３配列の一方は、適合性ヘテロ二量体化ドメインの一部分を有し、他方のＣＨ３配列は、ヘテロ二量体化ドメインの相補的な部分を有する。
【0031】
一実施形態では、塩基抗体は、各々重鎖可変領域、ＣＨ１、軽鎖可変領域、およびＣＬを含む２つの結合ドメインを含み、各結合ドメインは、それらのＣＨ１領域とヒンジおよびＦｃ領域に関連している。
【0032】
抗体結合は、特異性、親和性、およびアビディティを含む異なる特質を有する。特異性は、どの抗原またはそのエピト－プが結合ドメインによって特異的に結合されるかを決定する。親和性は、特定の抗原またはエピト－プへの結合の強度の尺度である。抗体の「特異性」は、特定の抗原に対するその選択性を指すが、「親和性」は、抗体の抗原結合部位とそれが結合するエピト－プとの相互作用の強度を指すことに留意するのが便利である。
【0033】
したがって、本明細書で使用される「結合特異性」は、個々の抗体結合部位が抗原決定基と反応する能力を指す。典型的には、本発明の抗体の結合部位は、Ｆａｂドメインの可変ドメイン内に位置し、重鎖および／または軽鎖の超可変領域から構築される。
【0034】
「親和性」は、単一抗原結合部位とその抗原との間の相互作用の強度である。抗原に対する本発明の抗体の単一抗原結合部位は、解離定数（ｋｄ）に関して表され得る。
【0035】
「アビディティ」は、二価または多価結合分子とその抗原との間の相互作用の蓄積された強度を指す。アビディティは、複数の抗原結合部位の統合した親和性によって決定され、標的細胞上の各抗原の発現レベルに依存する。二価または多価結合分子がアビディティ結合を示す能力は、二価または多価結合分子がそれらの抗原に同時に結合する能力に依存し、交差結合能力と呼ばれる。
【0036】
「エピト－プ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位である。エピト－プは、タンパク質の三次フォ－ルディング（それぞれ、いわゆる直鎖状エピト－プおよび立体構造エピト－プ）によって並置された隣接アミノ酸または非隣接アミノ酸から形成することができる。隣接直鎖状アミノ酸から形成されたエピト－プは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次フォ－ルディングによって形成されたエピト－プは、典型的には、変性溶媒での処理時に立体構造が失われる。エピト－プは、典型的には、特有の空間的立体構造内に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸を含み得る。
【0037】
「重鎖」または「免疫グロブリン重鎖」という用語は、任意の生物からの免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含み、特に明記しない限り、重鎖可変ドメインを含む。重鎖可変ドメインという用語は、特に明記しない限り、３つの重鎖ＣＤＲおよび４つのＦＲ領域を含む。重鎖の断片には、ＣＤＲ、ＣＤＲおよびＦＲ、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。典型的な重鎖は、可変ドメインに続いて、（Ｎ末端からＣ末端に）ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを有する。重鎖の機能的断片は、抗原を特異的に認識することができ、少なくとも１つのＣＤＲを含む断片を含む。
【0038】
「軽鎖」という用語は、任意の生物由来の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインまたはＶＬ（またはその機能的断片）、ならびに免疫グロブリン定常ドメイン、たはＣＬ（またはその機能的断片）配列を含む。特に明記しない限り、軽鎖という用語は、ヒトカッパ、ラムダ、およびそれらの組み合わせから選択される軽鎖を含み得る。軽鎖可変（ＶＬ）ドメインには、特に明記しない限り、典型的には、３つの軽鎖ＣＤＲおよび４つのフレ－ムワ－ク（ＦＲ）領域が含まれる。一般に、全長軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含むＶＬドメイン、および軽鎖定常ドメインを含む。本発明で使用され得る軽鎖には、例えば、重鎖によって選択的に結合されたエピト－プに選択的に結合しないものが含まれる。
【0039】
多価抗体本発明に使用するのに好適な軽鎖には、共通の軽鎖、例えば、既存の抗体ライブラリ（湿潤ライブラリまたはインシリコ）における最も共通して用いられている軽鎖についてスクリ－ニングすることによって特定することができるものが含まれ、これらの軽鎖は、重鎖のエピト－プ結合ドメインの親和性および／または選択性を実質的に妨害しないが、重鎖のアレイとの対合にも好適である。例えば、好適な軽鎖には、抗原への曝露時に、ゲノムに組み込まれる共通の軽鎖を含み、かつ重鎖で多様性を有する共通の軽鎖抗体の大パネルを生成するために使用することができる、トランスジェニック動物、例えば、トランスジェニックゲッ歯類由来のものが含まれる（ＷＯ２００９／１５７７７１）。多価抗体の一部である共通の軽鎖は、第２の抗体の軽鎖として使用することもできる。
【0040】
本発明による「共通の軽鎖」という用語は、同一であり得るか、またはいくつかのアミノ酸配列差を有し得るが、本発明の抗体の結合特異性が影響を受けない、すなわち、差が機能的結合領域の形成に実質的に影響を及ぼさない軽鎖を指す。
【0041】
例えば、本明細書で使用される共通の鎖の定義の範囲内で、例えば、保存的アミノ酸変化、同族鎖と対合されたときに結合特異性に寄与しないか、または部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入して試験することにより、同一ではないが、依然として機能的に等価である可変鎖を調製するか、または見つけることが可能である。それ故に、かかるバリアントは、異なる同族鎖に結合し、機能的抗原結合ドメインを形成することもできる。したがって、本明細書で使用される「共通軽鎖」という用語は、同一であり得るか、またはいくつかのアミノ酸配列差を有し得るが、重鎖と対になった後に結果として得られた抗体の結合特異性を保持する軽鎖を指す。ある特定の共通軽鎖とかかる機能的に等価なバリアントとの組み合わせは、「共通軽鎖」という用語に包含される。
【0042】
好ましい共通の軽鎖は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１と称される。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。ＩｇＶκ１－３９の好ましいアミノ酸配列が図４に提示される。この図は、Ｖ領域の配列を列記する。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。図４は、Ｊ領域と組み合わせたＩｇＶκ１－３９の２つの好ましい配列を記載する。合わせられた配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１およびＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替名は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１またはＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデ－タベ－スワ－ルドワイドウェブによる命名）である。
【0043】
当業者であれば、「共通」が、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物も指すことを認識するであろう。機能的結合領域の形成に実質的に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、付加）が存在する当該軽鎖の多くのバリアントが存在する。
【0044】
「Ｆｖドメイン」とは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する可変ドメインを含む結合ドメインを意味する。
【0045】
「Ｆａｂドメイン」とは、可変領域を含む結合ドメイン、典型的には、対合した重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む結合ドメインを意味する。Ｆａｂドメインは、ＣＨ１を含む定常領域ドメイン、および定常軽ドメイン（ＣＬ）と対合されたＶＨドメイン、およびＶＬドメインを含み得る。かかる対合は、例えば、ＣＨ１およびＣＬドメインにおけるジスルフィド架橋を介した共有結合として行われ得る。
【0046】
「修飾Ｆａｂドメイン」とは、ＣＨ１およびＶＨドメインを含む結合ドメインを意味し、ＶＨは、ＶＬドメインと対合され、ＣＬドメインは存在しない。あるいは、修飾Ｆａｂドメインは、ＣＬおよびＶＬドメインを含む結合ドメインであり、ＶＬは、ＶＨドメインと対合され、ＣＨ１ドメインは存在しない。ＣＨ１またはＣＬ領域が非対合形態で存在することができるためには、疎水性の領域を除去するか、またはその長さを短縮する必要があり得る。一本鎖抗体を天然に発現する種の動物由来のＣＨ１領域、例えば、ラマもしくはラクダなどのラクダ科動物由来のＣＨ１領域、またはサメ由来のＣＨ１領域を使用してもよい。修飾Ｆａｂドメインの他の例としては、定常領域（同族領域と対合されていないＣＨ１またはＣＬ、かつ／または同族領域と対対合されていないＶＨもしくはＶＬが存在する）を含むＦａｂ、およびＦａｂ（ＶＨがＶＬと入れ替えられ、対の一方のポリペプチドはＶＬ－ＣＨ１を含み、他方のポリペプチドはＶＨ－ＣＬを含む）が挙げられる。
【0047】
本明細書で使用される「免疫エフェクタ－細胞」または「エフェクタ－細胞」という用語は、標的細胞の生存率に影響を与えるように活性化され得る、哺乳類免疫系における細胞の天然レパ－トリ－内の細胞を指す。免疫エフェクタ－細胞は、ナチュラルキラ－（ＮＫ）細胞などのリンパ系統の細胞、細胞傷害性Ｔ細胞を含むＴ細胞、またはＢ細胞を含むが、単球またはマクロファ－ジ、樹状細胞、および好中性顆粒球などの骨髄系統の細胞も、免疫エフェクタ－細胞とみなすことができる。当該エフェクタ－細胞は、好ましくは、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファ－ジ、樹状細胞、または好中性顆粒球である。
【0048】
本明細書で使用される「免疫細胞関与抗原」という用語は、当該免疫エフェクタ－細胞の細胞膜上に発現される分子または部分を指し、そのリガンドまたは本発明の活性化抗体に結合すると、免疫細胞の活性化、刺激、または共刺激がもたらされ、標的とされるかかる抗原の非限定的な例としては、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ５、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａが挙げられる。
【0049】
本明細書における核酸配列またはアミノ酸配列に関する「同一性パ－セント（％）」は、最適比較目的のために配列を整列させた後の、選択された配列内の残基と同一の候補配列内の残基のパ－センテ－ジとして定義される。これらの２つの配列間のアラインメントを最適化するために、比較されるこれらの２つの配列のうちのいずれかにギャップが導入され得る。かかるアラインメントは、比較される配列の全長にわたって行うことができる。あるいは、アラインメントは、より短い長さ、例えば、約２０、約５０、約１００、またはそれ以上の核酸／ベ－スまたはアミノ酸にわたって行われ得る。配列同一性は、報告された整列した領域にわたるこれらの２つの配列間の完全な一致のパ－センテ－ジである。
【0050】
配列の比較および２つの配列間の配列同一性のパ－センテ－ジの決定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。当業者であれば、２つの配列を整列し、２つの配列間の同一性を決定するためのいくつかの異なるコンピュ－タプログラムが利用可能であるという事実を認識するであろう（Ｋｒｕｓｋａｌ，Ｊ．Ｂ．（１９８３）Ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｉｎ Ｄ．Ｓａｎｋｏｆｆ ａｎｄ Ｊ．Ｂ．Ｋｒｕｓｋａｌ，（ｅｄ．），Ｔｉｍｅ ｗａｒｐｓ，ｓｔｒｉｎｇ ｅｄｉｔｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，ｐｐ．１－４４ Ａｄｄｉｓｏｎ Ｗｅｓｌｅｙ）。２つのアミノ酸配列または核酸配列間の配列同一性パ－セントは、２つの配列のアラインメントのためのＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈアルゴリズムを使用して決定され得る。（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３－４５３）。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムは、コンピュ－タプログラムＮＥＥＤＬＥに実装されている。本発明の目的のために、ＥＭＢＯＳＳパッケ－ジからのＮＥＥＤＬＥプログラムを使用して、アミノ酸および核酸配列の同一性パ－セントを決定する（バ－ジョン２．８．０またはそれ以上、ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ（２０００）Ｒｉｃｅ，Ｐ．ＬｏｎｇｄｅｎＪ．ａｎｄ Ｂｌｅａｓｂｙ，Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６，（６）ｐｐ２７６－ ２７７，ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｎｌ／）。タンパク質配列については、ＥＢＬＯＳＵＭ６２が置換マトリックスに使用される。ＤＮＡ配列については、ＤＮＡＦＵＬＬが使用される。使用されるパラメ－タは、ギャップオ－プンペナルティ１０およびギャップ伸長ペナルティ０．５である。
【0051】
上述のようにプログラムＮＥＥＤＬＥによるアラインメントの後、クエリ配列と本発明の配列との間の配列同一性のパ－センテ－ジは、以下のように計算される：アラインメントにおける対応する位置の数は、両方の配列内の同一のアミノ酸または同一のヌクレオチドを、アラインメントにおけるギャップの総数の減算後のアラインメントの総長で除したものを示す。
【0052】
本明細書において、「接続された」または「連結された」という用語は、一次アミノ酸配列でペプチド結合によって互いに結合されているドメインを指す。例えば、ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３を含む塩基抗体部分の重鎖は、１つのポリペプチド鎖を一緒に構成するリンカ－（ＣＨ１における追加の結合ドメインの重鎖を塩基抗体部分のＶＨ領域に接続する）を介して、追加の結合ドメインＶＨ－ＣＨ１（または追加の結合ドメインへの追加の結合ドメイン）の重鎖に接続され得る。同様に、ＣＨ１ドメインは、可変重領域に接続されてよく、ＣＬドメインは、可変軽領域に接続され得る。抗体ドメインはまた、例えば、単一のポリペプチドの一部としてなど、リンカ－を必要としない手段によって「接続」され得る。
【0053】
「対合」は、本発明の多価抗体を構成するポリペプチド間の相互作用を指し、そのため、それらは多量体化することができる。例えば、追加の結合ドメインは、軽鎖領域（ＶＬ－ＣＬ）に対合される重鎖領域（ＶＨ－ＣＨ１）を含み得、ＣＨ１およびＣＬは、対合して当該結合ドメインを形成する。本明細書に記載されるように、抗体ドメイン（例えば、重および軽）の対合は、非共有結合相互作用に起因して、またジスルフィド結合を介しても生じ、本明細書に開示される技法および当該技術分野で既知の方法によって操作することもできる。かかる非共有結合相互作用は、典型的には、ＣＨ１およびＣＬに加えて、ＶＨとＶＬとの間の抗体で生じる。
【0054】
「二重特異性抗体」は、抗体の１つの可変ドメインが第１の抗原に結合する一方で、抗体の第２の可変ドメインが第２の抗原に結合する、本明細書に記載の抗体であり、当該第１および第２の抗原は同一ではない。「二重特異性抗体」という用語は、二重パラトピック抗体も包含し、抗体の１つの可変ドメインが抗原上の第１のエピト－プに結合する一方で、抗体の第２の可変ドメインが抗原上の第２のエピト－プに結合する。この用語は、少なくとも１つのＶＨが、第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変ドメイン内の少なくとも１つのＶＨと対合されるＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる抗体をさらに含む。得られたＶＨ／ＶＬ対は、抗原１または抗原２のいずれかに結合し、例えば、ＷＯ２００８／０２７２３６、ＷＯ２０１０／１０８１２７、およびＳｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０，４７２－４８６，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１）に記載される「ツ－－イン－ワン抗体」と呼ばれる。本発明による二重特異性抗体は、任意の特定の二重特異性形式またはその産生の方法に限定されない。
【0055】
本明細書に記載される三重特異性抗体などの多重特異性抗体は、抗体の１つの可変ドメインが第１の抗原に結合し、抗体の第２の可変ドメインが第２の抗原に結合し、三重特異性抗体の場合、抗体の第３の可変ドメインが第３の抗原に結合し、当該第１、第２、および第３の抗原が同一ではないか、またはそれらが結合するエピト－プが同一ではない、抗体である。すなわち、三重特異性抗体は、同じ抗原上の３つの異なるエピト－プ、または１つの抗原上の２つのエピト－プおよび第２の抗原上の１つのエピト－プに結合するという点で、三重特異性であり得る。
【0056】
二重特異性または三重特異性抗体などの多価抗体は、２つ以上の結合ドメインを有する。結合ドメインは、可変ドメインおよびＣＨ１／ＣＬ領域を含み得る。しかしながら、結合ドメインのいくつかまたはすべては、同じ抗原に指向され得るが、典型的には、本発明の場合と同様に、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つの結合ドメインが、異なる抗原に結合する。三重特異性抗体の場合、３つの結合ドメインは典型的には、すべて異なる抗原に結合する。したがって、結合ドメインは、好ましくはすべて異なる抗原に結合する。そのような場合、結合ドメインもすべて、異なる配列を有する。
【0057】
多価抗体は、細胞融合、化学コンジュゲ－ト、または組換えＤＮＡ技法を含む様々な技術を使用して生成され得る。多価抗体形式は、当該技術分野で既知である。例は、２つの異なる抗原、または同じ抗原内の２つの異なるエピト－プに結合し得る、二重特異性抗体などの２つの異なる結合ドメインを有する抗体である。かかる形式は、多価抗体が、１つの抗原を発現する健全な細胞を標的としない一方で、腫瘍細胞などの２つの抗原もしくはエピト－プを発現する細胞もしくは標的を選択的に標的とすることを可能にするか、または低い発現レベルで１つの抗原を発現するかかる健全な細胞を標的とすることを可能にする、較正された結合の使用を可能にし得る。同様に、二重特異性抗体などの多価抗体上の２つの異なる結合ドメインを有することは、異なる抗原の結合を可能にし得るため、当該多価抗体を使用して、単一の細胞または２つの相互作用する細胞上の阻害分子および刺激分子の両方を標的化して、多価抗体の効力を増強させることができる。多価抗体を使用して、腫瘍に再指向され得る細胞、例えば免疫調節細胞を再指向することもできる。多価抗体の非限定的な例は、当技術分野に記載される。多価抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１９／１９０３２７にも記載される。
【0058】
一態様では、本発明は、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合するＶＨ１を有する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合するＶＨ３を有する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合するＶＨ２を有する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含む組成物を提供し、組成物は、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む。
【0059】
免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合するＶＨ２を有する多価抗体の可変ドメインは、例えば、ＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、またはＴＣＲ－β鎖などの免疫エフェクタ－細胞の表面上に発現される任意の分子に結合することができる。他の好適な免疫細胞関与抗原は、例えば、限定されないが、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ６４、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、およびＮＫｐ３０である。好ましくは、この可変ドメインは、ＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、またはＣＤ５に結合する。この可変ドメインは、好ましくはＣＤ３に結合する。結合は、好ましくは、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）の細胞外部分に結合する。好ましくは、ＩＥＡへの多価抗体の結合は、免疫エフェクタ－細胞を活性化するか、または共刺激シグナルを提供する。好ましくは、ＩＥＡへの多価抗体の結合は、免疫エフェクタ－細胞を活性化する。
【0060】
用語「ＣＤ３」（分化クラスタ－３）は、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、ＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）、およびＣＤ３ゼ－タ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ２０９６３）から構成されるタンパク質複合体を指す。ＣＤ３εは、様々な別名で知られており、そのいくつかは以下である：「ＣＤ３ｅ分子、エプシロン（ＣＤ３－ＴＣＲ複合体）」；「ＣＤ３ｅ抗原、エプシロンポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）」；Ｔ細胞表面抗原Ｔ３／Ｌｅｕ－４エプシロン鎖；Ｔ３Ｅ；Ｔ細胞抗原受容体複合体、Ｔ３のエプシロンサブユニット；ＣＤ３ｅ抗原；ＣＤ３－エプシロン３；ＩＭＤ１８；ＴＣＲＥ。ＣＤ３Ｅ遺伝子のＩｄは、ＨＧＮＣ：１６７４、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９１６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９８８５１；ＯＭＩＭ：１８６８３０およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ０７７６６である。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびζ鎖と関連して、有糸分裂シグナル伝達時に活性化シグナルをＴリンパ球内で生成することができるＴＣＲ複合体を形成する。ＣＤ３は、Ｔ細胞およびＮＫ Ｔ細胞上で発現される。本明細書でＣＤ３について言及される場合、別途記載されない限り、参照はヒトＣＤ３について言及される。
【0061】
ＣＤ３結合ドメインは、親和性、エピト－プ、および他の特徴が様々であり得る。ＣＤ３の細胞外部分に結合することができる特定の可変ドメインは、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変ドメインである。
【0062】
ＣＤ３抗原結合ドメインは、配列番号２、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１６、配列番号２０、または配列番号２３の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１７、または配列番号２４の重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２１、または配列番号２５の重鎖ＣＤＲ３を含むことができる。
【0063】
ＣＤ３抗原結合ドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含むことができる：配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号６、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５。
【0064】
ＣＤ３抗原結合ドメインは、以下の群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖可変領域配列を含むことができる：配列番号１、配列番号５、配列番号８、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、および配列番号２２。
【0065】
ＣＤ３結合ドメインは、配列番号１、配列番号５、配列番号８、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、および配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、ならびに０～１０、好ましくは０～５のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、またはそれらの組み合わせを有する、配列番号９３または配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
【0066】
ＣＤ３抗原結合ドメインは、配列番号１、配列番号５、配列番号８、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、および配列番号２２の重鎖可変領域、ならびに配列番号９３または配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
【0067】
ある特定の実施形態では、ＶＨ１を有する多価抗体の可変ドメインは、ＴＡ１に結合する。
【0068】
ＴＡ１は、腫瘍細胞上に発現される任意の抗原であり得る。ＴＡ１は、好ましくは、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＣＤ４７、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ７、またはＳｉｇｌｅｃ－１５である。
【0069】
ＴＡ１は、好ましくは、例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２などの免疫チェックポイント受容体／リガンド対のメンバ－である。可変ドメインは、対のシグナル伝達経路を阻害し、それにより、そうでなければ少なくともある程度抑制されるであろう免疫応答を刺激する。
【0070】
ＰＤ－Ｌ１は、妊娠、組織同種移植片、自己免疫疾患、および肝炎などの他の疾患状態などの特定の事象の間、免疫応答を抑制する役割を果たす１型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－１またはＢ７．１（ＣＤ８０）へのＰＤ－Ｌ１の結合は、ＰＤ－１発現Ｔ細胞の増殖を低減する阻害シグナルを伝達する。ＰＤ－１は、アポト－シスを介して外来抗原特異的Ｔ細胞の蓄積を制御することができると考えられている。ＰＤ－Ｌ１は様々ながん細胞によって発現され、その発現は、がん細胞に対する免疫応答の減衰に少なくとも部分的に関与していると考えられている。ＰＤ－Ｌ１は、タンパク質のＢ７ファミリ－のメンバ－であり、ＣＤ２７４分子、ＣＤ２７４抗原、Ｂ７ホモログ１、ＰＤＣＤ１リガンド１、ＰＤＣＤ１ＬＧ１、ＰＤＣＤ１Ｌ１、Ｂ７Ｈ１、ＰＤＬ１、プログラム細胞死１リガンド１、プログラム死リガンド１、Ｂ７－Ｈ１、およびＢ７－Ｈなどの様々な他の名称で知られている。ＣＤ２７４の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：１７６３５、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２９１２６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１２０２１７；ＯＭＩＭ：６０５４０２；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＮＺＱ７である。
【0071】
ＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ－１の第２のリガンドである。ＰＤ－Ｌ２によるＰＤ－１の関与は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）媒介性増殖およびＣＤ４＋Ｔ細胞によるサイトカイン産生を阻害する。低抗原濃度では、ＰＤ－Ｌ２／ＰＤ－１結合は、Ｂ７－ＣＤ２８シグナルを阻害する。高い抗原濃度では、ＰＤ－Ｌ２／ＰＤ－１結合は、サイトカイン産生を低減する。ＰＤ－Ｌ発現は、インタ－フェロンガンマ処理によって抗原提示細胞上で上方調節される。それは、いくつかの正常組織および様々な腫瘍で発現される。ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２は、重複する機能を有し、Ｔ細胞応答を調節すると考えられている。タンパク質は、プログラム細胞死１リガンド２、Ｂ７樹状細胞分子、プログラム死リガンド２、ブチロフィリンＢ７－ＤＣ、ＰＤＣＤ１リガンド２、ＰＤ－１リガンド２、ＰＤＣＤ１Ｌ２、Ｂ７－ＤＣ、ＣＤ２７３、Ｂ７ＤＣ、ＰＤＬ２、ＰＤ－１－リガンド２、ＣＤ２７３抗原、ＢＡ５７４Ｆ１１．２、およびＢｔｄｃなどのいくつかの他の名称で知られている。ＰＤ－Ｌ２の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：１８７３１、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：８０３８０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９７６４６；ＯＭＩＭ：６０５７２３；およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＢＱ５１である。
【0072】
腫瘍壊死因子受容体ス－パ－ファミリ－メンバ－１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）およびＣＤ２７０としても知られるＨＶＥＭは、ＴＮＦ受容体（腫瘍壊死因子）ス－パ－ファミリ－のヒト細胞表面受容体である。ヒトにおいて、タンパク質は、ＴＮＦＲＳＦ１４遺伝子によってコ－ドされる。ＨＶＥＭは、少なくとも４つの異なるリガンド、ＴＮＦＳＦメンバ－ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）およびＴＮＦβ／ＬＴα（腫瘍壊死因子β／リンホトキシンα）、ならびに免疫グロブリンス－パ－ファミリ－メンバ－Ｂ－およびＴ－リンパ球減衰器（ＢＴＬＡ）、ならびにＣＤ１６０に関与し得る。ヒトＨＶＥＭの参照配列については、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ番号Ｑ９２９５６．３；ａａ１－２８３を参照されたい。参照は、ＨＶＥＭ遺伝子／タンパク質を特定するためだけに行われる。本明細書に記載されるＨＶＥＭを、デ－タベ－スエントリの特定の配列に限定することは意図されていない。ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、およびＴＮＦβに結合することができ、本明細書に記載される抗体によって結合され得るＨＶＥＭの天然のバリアントは、本発明の範囲内である。
【0073】
ＣＤ４７は、ヒトにおいてＣＤ４７遺伝子によってコ－ドされる膜貫通タンパク質である。このタンパク質は、インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、ＭＥＲ６、ＯＡ３、およびＣＤ４７分子などのいくつかの他の名称で知られている。ＣＤ４７は、免疫グロブリンス－パ－ファミリ－に属し、リガンドトロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）およびシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に結合することができる。ＣＤ４７は、ヒト細胞において普遍的に発現され、多くの異なる腫瘍細胞において過剰発現されることが見出されている。代替的にスプライスされたＣＤ４７のアイソフォ－ムは４つある。ＣＤ４７の外部ＩＤは、ＨＧＮＣ：１６８２、ＯＭＩＭ：６０１０２８、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：９６１、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９６７７６、およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ０８７２２である。
【0074】
免疫チェックポイント分子であるＢ７－Ｈ３は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、およびＩＣＯＳなどのＣＤ２８ファミリ－分子を通してシグナル伝達する共刺激Ｂ７分子である。このタンパク質は、分化クラスタ－２７６（ＣＤ２７６）、４Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７ＲＰ－２、およびＣＤ２７６分子などのいくつかの他の名称で知られている。Ｂ７－Ｈ３は、固形腫瘍によって過剰発現されることが見出されている。Ｂ７－Ｈ３の外部ＩＤは、ＨＧＮＣ：１９１３７、ＯＭＩＭ：６０５７１７、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：８０３８１、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１０３８５５、およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ５ＺＰＲ３である。
【0075】
Ｂ７－Ｈ４は、免疫チェックポイント分子であり、共刺激分子のＢ７ファミリ－に属する。ヒトにおいて、タンパク質は、ＶＴＣＮ１遺伝子によってコ－ドされる。このタンパク質は、Ｖ－ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１（ＶＴＣＮ１）、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７Ｓ１、Ｂ７Ｘ、Ｂ７ｈ．５、ＰＲＯ１２９１、ＶＣＴＮ１などのいくつかの他の名称で知られている。Ｂ７－Ｈ４の外部ＩＤは、ＨＧＮＣ：２８８７３、ＯＭＩＭ：６０８１６２、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：７９６７９、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１３４２５８、およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ７Ｚ７Ｄ３である。
【0076】
Ｂ７－Ｈ７は、以前は、ヒト内因性レトロウイルスＨ長末端反復関連２（ＨＨＬＡ２）として知られており、共刺激分子のＢ７ファミリ－に属する。Ｂ７－Ｈ７は、一緒にＣＤ４＋Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を促進するヒトＣＤ２８Ｈの特異的リガンドとして特定されている。Ｂ７－Ｈ７の外部ＩＤは、ＨＧＮＣ：４９０５、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１１１４８、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１１４４５５、ＯＭＩＭ：６０４３７１およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＵＭ４４である。
【0077】
Ｓｉｇｌｅｃ－１５、シアル酸結合免疫グロブリン型レクチンは、シアル酸に結合する細胞表面タンパク質であり、主に免疫細胞の表面上に見出される。このタンパク質は、ＣＤ３３抗原様３、ＣＤ３３分子様３、ＣＤ３３Ｌ３、およびシアル酸結合Ｉｇ様レクチン１５などのいくつかの他の名称で知られている。Ｓｉｇｌｅｃ－１５の外部ＩＤは、ＨＧＮＣ：２７５９６、ＯＭＩＭ：６１８１０５、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８４２６６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１９７０４６、およびＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ６ＺＭＣ９である。
【0078】
ある特定の実施形態では、多価抗体のＴＡ１結合ドメインは、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。多価抗体のＰＤ－Ｌ１結合ドメインまたは可変ドメインは、親和性、エピト－プ、および他の特徴が様々であり得る。ＰＤ－Ｌ１の細胞外部分に結合することができる特定の可変ドメインは、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４４、および配列番号４５からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む可変ドメインである。
【0079】
ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、配列番号２７、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３９、または配列番号４３の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８、配列番号３２、配列番号３６、配列番号４０、または配列番号４４の重鎖ＣＤＲ２、および配列番号２９、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、または配列番号４５の重鎖ＣＤＲ３を含むことができる。
【0080】
ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含むことができる：配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４４、および配列番号４５。
【0081】
ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、以下の群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖可変領域配列を含むことができる：配列番号２６、配列番号３０、配列番号３４、配列番号３８、および配列番号４２。
【0082】
ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、０～１０、好ましくは０～５のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、またはそれらの組み合わせを有する、配列番号２６、配列番号３０、配列番号３４、配列番号３８、および配列番号４２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むことができる。
【0083】
ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、配列番号２６、配列番号３０、配列番号３４、配列番号３８、または配列番号４２の重鎖可変領域、および配列番号９３または配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
【0084】
ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号５１のアミノ酸配列、またはＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ－１０１４（ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ－０７２（ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．７：３（Ｍａｒｃｈ ２０１７）を参照されたい）、ＬＹ３３０００５４（例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、ならびにＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ：Ａｂｓｔｒａｃｔ ４６０６（Ａｐｒ ２０１６））および１２Ａ４もしくはＭＤＸ－１１０５（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）について開示されているアミノ酸配列を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１抗体の重鎖ならびに／または軽鎖、特に重鎖可変領域を含む。
【0085】
ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号５１を有する重鎖を含むＰＤ－Ｌ１抗体、またはＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ－１０１４（ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ－０７２（ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．７：３（Ｍａｒｃｈ ２０１７）を参照されたい）、ＬＹ３３０００５４（例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、およびＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ：Ａｂｓｔｒａｃｔ ４６０６（Ａｐｒ ２０１６））、ならびに１２Ａ４もしくはＭＤＸ－１１０５（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）の重鎖および／または軽鎖可変領域と同じエピト－プに結合する。
【0086】
ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗原結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６（ＵＳ２０１０／０２０３０５６ Ａ１を参照されたい）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＷＯ２０１１／０６６３８９を参照されたい）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ－１０１４（ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ－０７２（ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．７：３（Ｍａｒｃｈ ２０１７）を参照されたい）、ＬＹ３３０００５４（例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、およびＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ：Ａｂｓｔｒａｃｔ ４６０６（Ａｐｒ ２０１６））、ならびに１２Ａ４もしくはＭＤＸ－１１０５（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）の重鎖および軽鎖可変領域を有するＰＤ－Ｌ１に結合について競合する。
【0087】
ある特定の実施形態では、ＶＨ３を有する多価抗体の可変ドメインは、ＴＡ２に結合する。
【0088】
ＴＡ２は、任意の腫瘍関連抗原であり得るが、好ましくは、ＣＬＥＣ１２Ａまたはタンパク質のＥｒｂＢファミリ－のメンバ－であり、好ましくはＥＧＦＲである。
【0089】
ＣＬＥＣ１２Ａはまた、Ｃ型レクチンドメインファミリ－１２、メンバ－Ａ、Ｃ型レクチンタンパク質ＣＬＬ－１、ＭＩＣＬ、樹状細胞関連レクチン２、Ｃ型レクチンス－パ－ファミリ－、骨髄阻害性Ｃ型レクチン様受容体、Ｃ型レクチン様分子－１、ＣＬＬ－１、ＤＣＡＬ２、ＣＬＬ１、Ｃ型レクチン様分子１、ＤＣＡＬ－２、キラ－細胞レクチン様受容体サブファミリ－Ｌ、メンバ－１（ＫＬＲＬ１）、ＣＤ３７１（Ｂａｋｋｅｒ Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００４，６４，ｐ８８４３ ５０、ＧｅｎＢａｎｋＴＭ受入番号ＡＹ５４７２９６、Ｚｈａｎｇ Ｗ．ｅｔ ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋＴＭ受入番号ＡＦ２４７７８８、Ａ．Ｓ．Ｍａｒｓｈａｌｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００４，２７９，ｐ１４７９２－８０２、ＧｅｎＢａｎｋＴＭ受入番号ＡＹ４９８５５０、Ｙ．Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２００４，１０４，ｐ２８５８ ６６、Ｈ．Ｆｌｏｙｄ，ｅｔ ａｌ．ＧｅｎＢａｎｋＴＭ受入番号ＡＹ４２６７５９、Ｃ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２００６，１０７，ｐ１４５９ ６７）とも呼ばれる。Ｉｄ：ＨＧＮＣ：３１７１３、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：１６０３６４、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１７２３２２；ＯＭＩＭ：６１２０８８；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ５ＱＧＺ９。ＣＬＥＣ１２Ａは、ＣＤ３４陰性またはＣＤ３４低発現白血病幹細胞（サイドポピュレ－ション）を含む、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）における白血病芽細胞および白血病幹細胞上に発現される抗原である（Ａ．Ｂ．Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４，６４，ｐ８４４３ ５０、Ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ．２００７ Ｂｌｏｏｄ １１０：２６５９、Ｍｏｓｈａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２６：３０５９）。ＣＬＥＣ１２Ａの発現は、そうでなければ、造血系統、特に末梢血および骨髄、すなわち、顆粒球、単球、および樹状細胞前駆体における骨髄細胞に限定されると考えられている。より重要なことに、ＣＬＥＣ１２Ａは造血幹細胞上には存在しない。この発現プロファイルにより、ＣＬＥＣ１２Ａは、ＡＭＬにおいて特に好ましい標的となる。ＣＬＥＣ１２Ａの全長形態は、他のほとんどのアイソフォ－ムでは存在しない１０個のアミノ酸の追加の細胞内ストレッチを含む２７５個のアミノ酸残基を含み、厳密には骨髄発現プロファイル（表面発現およびｍＲＮＡレベル）を示す。「ＣＬＥＣ１２Ａまたはその機能的等価物」という用語は、Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４，６４，ｐ８４４３－５０およびＭａｒｓｈａｌｌ ２００４－Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９（１５），ｐ１４７９２－８０２に記載されているように、（表面発現レベルおよびｍＲＮＡレベルの両方で）厳密な骨髄発現プロファイルを保持する、上記で参照されるすべての（スプライスおよび変異などの）バリアントおよびそのアイソフォ－ムを意味する。本発明のＣＬＥＣ１２Ａ結合抗体は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに結合する。本明細書でＣＬＥＣ１２Ａについて言及される場合、別途記載されない限り、ヒトＣＬＥＣ１２Ａについて言及される。
【0090】
「ＥｒｂＢ１」または「ＥＧＦＲ」は、Ｈｅｒ－またはｃＥｒｂＢ－１、－２、－３、および－４という名称の４つの受容体チロシンキナ－ゼ（ＲＴＫ）のファミリ－のメンバ－である。ＥＧＦＲは、４つのサブドメインから構成される細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有し、そのうちの２つはリガンド結合に関与し、そのうちの１つはホモ二量体化およびヘテロ二量体化に関与する。このセクションで使用する参照番号は、「明細書で引用される参考文献」の欄の参照番号の付番を指す。ＥＧＦＲは、様々なリガンドからの細胞外シグナルを統合し、多様な細胞内応答をもたらす。ＥＧＦＲによって活性化される主要なシグナル伝達経路は、Ｒａｓ－マイトジェン活性化プロテインキナ－ゼ（ＭＡＰＫ）有糸分裂シグナル伝達カスケ－ドから構成される。この経路の活性化は、Ｇｒｂ２のチロシンリン酸化ＥＧＦＲへの動員によって開始される。これにより、Ｇｒｂ２結合Ｒａｓ－グアニンヌクレオチド交換因子セブンレスの息子（Ｓｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ）（ＳＯＳ）によるＲａｓの活性化がもたらされる。加えて、ＰＩ３－キナ－ゼ－Ａｋｔシグナル伝達経路はＥＧＦＲによっても活性化されるが、Ｈｅｒ３の共発現がある場合には、この活性化は非常に強い。ＥＧＦＲは、いくつかのヒト上皮悪性腫瘍、特に乳房、膀胱、非小細胞肺がん肺、結腸、卵巣、頭頸部、および脳のがんに関与している。遺伝子における活性化変異、ならびに受容体およびそのリガンドの過剰発現が見出され、自己分泌活性化ル－プを生じる。したがって、このＲＴＫは、がん療法の標的として広く使用されている。ＲＴＫを標的とする小分子阻害剤および細胞外リガンド結合ドメインに指向されるモノクロ－ナル抗体（ｍＡｂ）の両方が開発され、これまでにいくつかの臨床的成功が示されているが、ほとんどが選択された患者群に対してである。ヒトＥＧＦＲタンパク質およびそれをコ－ドする遺伝子のデ－タベ－ス受入番号は、（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００５２２８．３）である。受入番号は、主に、ＥＧＦＲタンパク質を標的として特定するさらなる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＧＦＲタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコ－ド遺伝子における変異のため、変化し得る。本明細書でＥＧＦＲについて言及される場合、別途記載されない限り、参照はヒトＥＧＦＲについて言及される。ＥＧＦＲに結合する抗原結合部位は、ＥＧＦＲおよびその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥＧＦＲ陽性腫瘍上に発現されるものに結合する。
【0091】
本明細書で使用される「ＥｒｂＢ－２」または「ＨＥＲ２」は、ヒトにおいてＥＲＢＢ－２遺伝子によってコ－ドされるタンパク質を指す。遺伝子またはタンパク質の代替名としては、ＣＤ３４０、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＬＮ１９、ＮＥＵ、ＮＧＬ、ＴＫＲ１が挙げられる。ＥＲＢＢ－２遺伝子は、（ヒト上皮成長因子受容体２から）ＨＥＲ２と呼ばれることが多い。本明細書においてＥｒｂＢ－２が参照される場合、参照はヒトＥｒｂＢ－２を指す。ＥｒｂＢ－２に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ヒトＥｒｂＢ－２に結合する。ＥｒｂＢ－２抗原結合部位は、ヒトと他の哺乳類オ－ソログとの間の配列および三次構造の類似性に起因して、かかるオ－ソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。ヒトＥｒｂＢ－２タンパク質およびそれをコ－ドする遺伝子のデ－タベ－ス受入番号は、（ＮＰ＿００１００５８６２．１、ＮＰ＿００４４３９．２ ＮＣ＿００００１７．１０ ＮＴ＿０１０７８３．１５ ＮＣ＿０１８９２８．２）である。受入番号は、主に、ＥｒｂＢ－２を標的として特定するさらなる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥｒｂＢ－２タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコ－ド遺伝子における変異のため、変化し得る。ＥｒｂＢ－２抗原結合部位は、ＥｒｂＢ－２およびその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥｒｂＢ－２陽性腫瘍細胞によって発現されるものに結合する。
【0092】
本明細書で使用される「ＥｒｂＢ－３」または「ＨＥＲ３」は、ヒトにおいてＥＲＢＢ－３遺伝子によってコ－ドされるタンパク質を指す。遺伝子またはタンパク質の代替名は、ＨＥＲ３、ＬＣＣＳ２、ＭＤＡ－ＢＦ－１、ｃ－ＥｒｂＢ－３、ｃ－ｅｒｂｂ－３、ｅｒｂｂ－３－Ｓ、ｐ１８０－Ｅｒｂｂ－３、ｐ４５－ｓＥｒｂｂ－３、およびｐ８５－ｓＥｒｂｂ－３である。本明細書においてＥｒｂＢ－３が参照される場合、参照はヒトＥｒｂＢ－３を指す。ＥｒｂＢ－３に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ヒトＥｒｂＢ－３に結合する。ＥｒｂＢ－３抗原結合部位は、ヒトと他の哺乳類オ－ソログとの間の配列および三次構造の類似性に起因して、かかるオ－ソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。ヒトＥｒｂＢ－３タンパク質およびそれをコ－ドする遺伝子のデ－タベ－ス受入番号は、（ＮＰ＿００１００５９１５．１、ＮＰ＿００１９７３．２ ＮＣ＿００００１２．１１ ＮＣ＿０１８９２３．２ ＮＴ＿０２９４１９．１２）である。受入番号は、主に、ＥｒｂＢ－３を標的として特定するさらなる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥｒｂＢ－３タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコ－ド遺伝子における変異のため、変化し得る。ＥｒｂＢ－３抗原結合部位は、ＥｒｂＢ－３およびその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥｒｂＢ－２陽性腫瘍細胞によって発現されるものに結合する。
【0093】
ある特定の実施形態では、標的細胞抗原結合は、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に特異的に結合する。ＥＧＦＲ結合ドメインは、親和性、エピト－プ、および他の特徴が様々であり得る。ＥＧＦＲの細胞外部分に結合することができる特定の可変ドメインは、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、および配列番号６３からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む可変ドメインである。
【0094】
ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、配列番号５３の重鎖ＣＤＲ１、配列番号５４の重鎖ＣＤＲ２、および配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、または配列番号６３の重鎖ＣＤＲ３を含むことができる。
【0095】
ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含むことができる：配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、および配列番号６３。
【0096】
ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、以下の群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖可変領域配列を含むことができる：配列番号５２、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、および配列番号６２。
【0097】
ＥＧＦＲ結合ドメインは、０～１０、好ましくは０～５のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、またはそれらの組み合わせを有する、配列番号５２、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、および配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むことができる。
【0098】
ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、配列番号５２、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、または配列番号６２の重鎖可変領域、および配列番号９３または配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
【0099】
ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲ抗体セツキシマブまたはパニツムマブの重鎖および／または軽鎖可変領域を含む。
【0100】
ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲ抗体セツキシマブまたはパニツムマブの重鎖および軽鎖可変領域と同じエピト－プに結合する。
【0101】
ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲへの結合について、ＥＧＦＲ抗体セツキシマブまたはパニツムマブの重鎖および軽鎖可変領域と競合する。
【0102】
ある特定の実施形態では、標的細胞抗原結合は、ヒトＣＬＥＣ１２Ａに特異的に結合する。ＣＬＥＣ１２Ａ結合ドメインは、親和性、エピト－プ、および他の特徴が様々であり得る。ＣＬＥＣ１２Ａの細胞外部分に結合し得る特定の可変ドメインは、配列番号６５、配列番号６６、および配列番号６７からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含む可変ドメインである。
【0103】
ＣＬＥＣ１２Ａ抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号６５、配列番号６６、および配列番号６７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得る。
【0104】
ＣＬＥＣ１２Ａ抗原結合ドメインは、配列番号６５、配列番号６６、または配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列を含むことができる。
【0105】
ＣＬＥＣ１２Ａ抗原結合ドメインは、配列番号６４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である重鎖可変領域配列を含むことができる。
【0106】
ＣＬＥＣ１２Ａ結合ドメインは、０～１０、好ましくは０～５のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、またはそれらの組み合わせを有する、配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むことができる。
【0107】
ＣＬＥＣ１２Ａ抗原結合ドメインは、配列番号６４の重鎖可変領域、および配列番号９３または配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むことができる。
【0108】
一実施形態では、本発明の多価抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合するＶＨ１を有する第１の可変ドメイン、ＣＤ３に結合するＶＨ２を有する第２の可変ドメイン、およびＥＧＦＲに結合するＶＨ３を有する第３の可変ドメインを含み、可変ドメインは、本明細書に定義される通りである。第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２、好ましくはＴＡ１に対する特異性を有する任意の結合分子であり得る。ＴＡ１は、好ましくはＰＤ－Ｌ１である。かかる結合分子は、当該抗体の結合特異性を維持する抗体またはその断片もしくはバリアント、あるいは当該断片を含む構造が含まれるが、これらに限定されない。
【0109】
多価抗体を第２の結合分子と組み合わせることにより、多価抗体が、腫瘍細胞などの両方の抗原であるＴＡ１およびＴＡ２（例えば、ＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲ）を発現する細胞の細胞殺滅を誘発することのみ、または主にそれを誘発することを可能にする。多価抗体は、非腫瘍細胞などのＴＡ１もしくはＴＡ２のみを発現する（例えば、ＰＤ－Ｌ１を発現するがＥＧＦＲは発現しないか、またはＥＧＦＲを発現するがＰＤ－Ｌ１は発現しない）細胞の細胞殺滅を誘導してはならないか、または少なくとも第２の結合分子が存在しない場合よりも程度が小さくなければならない。
【0110】
多価抗体と第２の結合分子との組み合わせは、ＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない非腫瘍細胞、およびＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない非腫瘍細胞が存在し、多価抗体のアビディティが、ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞の細胞殺滅のみを誘導する、または主に誘導するのに不十分である状況において特に有用である。多価抗体が依然としてＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない非腫瘍細胞に結合し、かつ／またはその細胞殺滅を誘導する場合、本明細書に記載される第２の結合分子はＴＡ１に結合する。これにより、本明細書に記載される多価抗体の、ＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない非腫瘍細胞への結合が防止もしくは低減され、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅が低減される。同様に、多価抗体が依然としてＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない非腫瘍細胞に結合し、かつ／またはその細胞殺滅を誘導する場合、本明細書に記載される第２の結合分子はＴＡ２に結合する。これにより、本明細書に記載される多価抗体の、ＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない非腫瘍細胞への結合が防止もしくは低減され、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅が低減される。
【0111】
ＴＡ１またはＴＡ２に結合する本発明の第２の結合分子は、ＴＡ１またはＴＡ２への結合について多価抗体と競合する。二重陽性ＴＡ１、ＴＡ２発現細胞に対する選択的活性は、多価抗体および第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインの親和性、第２の結合分子の原子価、多価抗体および第２の結合分子のエピト－プ特異性、第２の結合分子に起因する標的抗原の内在化もしくは脱落、またはこれらの態様の組み合わせに起因して、これらの細胞への多価抗体の優れた結合によって引き起こされ得る。したがって、第２の結合分子は、多価抗体のＴＡ１もしくはＴＡ２への結合を軽減するか、あるいはＴＡ２の発現を欠くか、もしくは発現が低減したＴＡ１細胞、またはＴＡ１の発現を欠くか、もしくは発現が低減したＴＡ２細胞への多価抗体の結合を低減させる。
【0112】
多価抗体のＴＡ１およびＴＡ２結合ドメインの親和性は、腫瘍細胞および非腫瘍細胞上のＴＡ１およびＴＡ２の発現レベルに基づいて選択され得る。例えば、腫瘍細胞上のＴＡ２の発現レベルがＴＡ１よりも高い場合、多価抗体のＴＡ２結合ドメインの親和性は、例えば、２桁または３桁のｎＭなどの低いまたは中の下の親和性であってもよく、多価抗体のＴＡ１結合ドメインの親和性は、例えば、１桁または２桁のｎＭなどの中または中の高の親和性であってもよい。同様に、腫瘍細胞上のＴＡ１の発現レベルがＴＡ２よりも高い場合、多価抗体のＴＡ１結合ドメインの親和性は、例えば、２桁または３桁のｎＭなどの低いまたは中の下の親和性であってもよく、多価抗体のＴＡ２結合ドメインの親和性は、例えば、１桁または２桁のｎＭなどの中または中の高の親和性であってもよい。腫瘍細胞上のＴＡ２の発現レベルがＴＡ１の発現レベルと同等である場合、多価抗体のＴＡ２結合ドメインおよびＴＡ１結合ドメインの親和性は、例えば、高、中の高、中、中の下、または低の親和性の範囲などの同じ範囲内であることが好ましい。腫瘍細胞上のＴＡ２の発現レベルがＴＡ１の発現レベルよりも低い場合、多価抗体のＴＡ２結合ドメインの親和性は、高の中または高の親和性であってもよく、多価抗体のＴＡ１結合ドメインは、低、中の下、または中の親和性であってもよい。同様に、腫瘍細胞上のＴＡ１の発現レベルが、ＴＡ２の発現レベルよりも低い場合、多価抗体のＴＡ１結合ドメインの親和性は、高の中または高の親和性であってもよく、多価抗体のＴＡ２結合ドメインは、低、中の下、または中の親和性であってもよい。
【0113】
第２の結合分子は、好ましくは、全長抗体、Ｆａｂ、修飾Ｆａｂ、またはｓｃＦｖである。第２の結合分子は、好ましくは、ＴＡ２結合可変ドメインを含まない。好ましくは、それは、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する結合ドメインを含まない。多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインは、第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインと同じであり得る。第２の結合分子は、少なくとも１つのＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインを含むが、複数のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインも含み得る。第２の結合分子は、好ましくは２つのＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインを含む。第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインは、便宜的に同じであるが、必ずしも同じではない。第２の結合分子は、好ましくは、２つの同一のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインを含む二価単一特異性抗体である。ある特定の実施形態では、第２の結合分子は、同じアッセイで測定されるとき、多価抗体よりも低いアビディティを有する。好適なアッセイの例は、ＦＡＣＳ結合アッセイである。
【0114】
第２の結合分子は、例えば、アテゾリズマブもしくはデュルバルマブなどの市販の抗体、またはそれらの類似体もしくはバリアントであり得る。使用され得る別の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、配列番号４７を有する重鎖、またはその機能的等価物を含む抗体である。さらなる例としては、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ－１０１４（ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ－０７２（ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．７：３（Ｍａｒｃｈ ２０１７）を参照されたい）、ＬＹ３３０００５４（ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、およびＣＫ－３０１（Ｇｏｒｅｌｉｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＣＲ：Ａｂｓｔｒａｃｔ ４６０６（Ａｐｒ ２０１６））を参照されたい）、ならびに１２Ａ４（ＭＤＸ－１１０５としても知られる）（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0115】
一実施形態では、第２の結合分子は、配列番号４６、４７、または５１を有する２つの重鎖を含む。
【0116】
多価抗体は、ＴＡ１またはＴＡ２への結合について第２の結合分子と競合するはずである。多価抗体は、ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞への結合のための第２の結合分子を上回ることができるはずであり、第２の結合分子は、第２の結合分子によって標的とされる抗原（ＴＡ１またはＴＡ２）のうちの１つのみを発現する結合細胞のための多価分子を上回ることができるはずである。
【0117】
正しい標的化（例えば、より高い比率で単一抗原発現細胞に結合する第２の結合分子および二重抗原細胞に結合する多価抗体）を得ることは、本明細書に記載の発明によって達成され得る。
【0118】
これは、多価抗体のＴＡ１もしくはＴＡ２結合ドメインおよび／または第２の結合分子のＴＡ１もしくはＴＡ２結合ドメインの親和性を調節することによって達成され得る。多価抗体のＴＡ１もしくはＴＡ２結合ドメインおよび／または第２の結合分子のＴＡ１もしくはＴＡ２結合ドメインの親和性の調節は、腫瘍細胞および非腫瘍細胞上のＴＡ１およびＴＡ２の発現レベルに基づき得る。ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子のｋｄは、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインのｋｄと同等である、それと等しい、またはそれよりも低いことが好ましい。Ｋｄは、ｋｏｎレ－トおよびｋｏｆｆレ－トによって決定される。ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子のｋｏｎは、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインのｋｏｎと同等である、それと等しい、またはそれよりも低いことが好ましい場合がある。また、ＴＡ１に結合する第２の結合分子のｋｏｆｆが、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインのｋｏｆｆと同等である、それと等しい、またはそれよりも低いことが好ましい場合がある。また、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子のｋｏｎレ－トが、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインのｋｏｎレ－トと同等である、それと等しい、またはそれよりも高く、ＴＡ１に結合する第２の結合分子のｋｏｆｆレ－トが、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合ドメインのｋｏｆｆレ－トと同等である、それと等しい、またはそれよりも低いことが好ましい場合がある。これにより、第２の結合分子が、多価抗体よりもＴＡ１もしくはＴＡ２により強く結合すること、および／または多価抗体よりも多くのＴＡ１もしくはＴＡ２を占有することが可能となり、それにより、多価抗体がＴＡ１またはＴＡ２に結合することを防止する。細胞がＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する場合、多価抗体は、第２の結合分子によって結合されない腫瘍関連抗原（ＴＡ１またはＴＡ２）に結合し、より高いアビディティに起因して、それに結合される腫瘍関連抗原への結合について第２の結合分子を上回る。
【0119】
これは、第２の結合分子によって結合されない腫瘍関連抗原が第２の結合分子によって標的化された腫瘍関連抗原に対して過剰に存在するような方法でＴＡ１およびＴＡ２を選択すること、および／もしくは第２の結合分子によって標的化されない腫瘍関連抗原に対して高い親和性を有する多価抗体の結合ア－ムを選択することにより、または両方の組み合わせにより増強され得る。本明細書に例示されるが、限定されないこれらの作用様式は、ＴＡ１もしくはＴＡ２のみを発現する非腫瘍細胞への結合について多価抗体を軽減するか、またはＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する標的腫瘍細胞よりも小さい程度に軽減する。
【0120】
二重抗原発現細胞の多価標的化に対する親和性およびアビディティ駆動選択性に加えて、他の機械的手段を用いることができる。第２の結合分子が、標的化抗原（ＴＡ１またはＴＡ２）の内在化または脱落を引き起こすことが好ましい場合がある。結合されると内在化または脱落する能力を有する多くの腫瘍関連抗原が当技術分野で既知である。第２の結合分子のこの特徴は、単一発現細胞について多価分子の抗原標的を除去するが、二重発現細胞については、多価分子は、結合分子によって標的とされない第２の抗原上にドッキングし、次いで、経時的に再出現する第２の結合分子によって標的とされる抗原に固定される。
【0121】
同様に、多価分子は、第２の結合分子が抗原を標的とすることができなくなるように、結合時に抗原を変化させる標的化ドメインを有するように設計することができる。いずれにしても、１つの分子（多価分子または第２の結合分子）の標的化は、第２の分子が、第１の分子によって既に結合されている同じ抗原を標的とする可能性を妨げるべきである。
【0122】
一態様では、第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性は、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性と同等である。これにより、多価抗体が、ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞上で、第２の結合分子を上回るか、またはＴＡ１もしくはＴＡ２への結合が増強されることが可能になる。ＴＡ１およびＴＡ２のうちの１つのみを発現する細胞上のＴＡ１またはＴＡ２への第２の結合分子の結合を増加させるために、第２の結合分子の原子価および／または親和性を増加させてもよい。
【0123】
一態様では、第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性は、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性と等しい。これにより、多価抗体が、ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞上で、第２の結合分子を上回るか、またはＴＡ１もしくはＴＡ２への結合が増強されることが可能になる。ＴＡ１およびＴＡ２のうちの１つのみを発現する細胞上のＴＡ１またはＴＡ２への第２の結合分子の結合を増加させるために、第２の結合分子の原子価および／または親和性を増加させてもよい。
【0124】
一態様では、第２の結合分子のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性は、多価抗体のＴＡ１またはＴＡ２結合可変ドメインの親和性よりも高い。これにより、第２の結合分子が、ＴＡ１またはＴＡ２への結合について多価抗体を上回ることが可能になる。ＴＡ１およびＴＡ２の両方を発現する細胞上のＴＡ１への多価抗体の結合を増加させ、したがって、ＴＡ１への結合について第２の結合分子を上回るために、多価抗体のＴＡ２結合可変ドメインの親和性を増加させてもよい。
【0125】
本明細書に記載される可変ドメインのｋｄまたはｋｏｎまたはｋｏｆｆは、好ましくはｂｉａｃｏｒｅで、好ましくは二重特異性一価形式で、すなわち、ｋｄまたはｋｏｎまたはｋｏｆｆが決定される１つの可変ドメイン、および無関係な標的に結合する１つの可変ドメインを有する二重特異性抗体を使用して測定される。本出願では、この無関係な標的は、好ましくは、配列番号６８の同じ共通の軽鎖およびＶＨ鎖を有する、好適には破傷風トキソイド結合ドメインである。
【0126】
ＴＡ１に結合する多価抗体の追加の可変ドメインは、好ましくは、ｓｃＦｖドメイン、Ｆａｂドメイン、または修飾Ｆａｂドメインの一部として存在する。好ましくは、追加の変数は、そのＣ末端のＣＨ１領域と関連し、好ましくはリンカ－によって、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する可変ドメインのＮ末端に連結される。好ましくは、追加の結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むＦａｂドメインであり、当該Ｆａｂドメインの当該重鎖可変領域は、ＣＨ１領域（ＶＨ－ＣＨ１）を含み、当該Ｆａｂの当該軽鎖可変領域は、ＣＬ領域（ＶＬ－ＣＬ）を含む。追加の結合ドメインはまた、ＶＨ－ＣＨ１およびＶＬからなる修飾Ｆａｂドメインであり得る。あるいは、追加の結合ドメインは、ＶＬ－ＣＬおよびＶＨからなる修飾Ｆａｂドメインである。かかる修飾Ｆａｂドメインでは、同族領域と対合していない定常領域ＣＨ１またはＣＬが存在し、かつ／または、同族領域と対合していない可変領域ＶＨもしくはＶＬが存在する。
【0127】
免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する多価抗体の可変ドメインおよび／またはＴＡ２に結合する多価抗体の可変ドメインは、好ましくはＣＨ１領域と関連する。好ましくは、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する結合ドメインおよび／またはＴＡ２に結合する結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むＦａｂドメインであり、当該Ｆａｂドメインの当該重鎖可変領域は、ＣＨ１領域（ＶＨ－ＣＨ１）を含み、当該Ｆａｂの当該軽鎖可変領域は、ＣＬ領域（ＶＬ－ＣＬ）を含む。免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する結合ドメインおよび／またはＴＡ２に結合する結合ドメインはまた、ＶＨ－ＣＨ１およびＶＬからなる修飾Ｆａｂドメインであり得る。あるいは、追加の結合ドメインは、ＶＬ－ＣＬおよびＶＨからなる修飾Ｆａｂドメインである。そのような修飾Ｆａｂドメインでは、その同族領域と対合していない定常領域ＣＨ１またはＣＬが存在し、かつ／または、その同族領域と対合していない可変領域ＶＨもしくはＶＬが存在する。
【0128】
リンカ－を使用して、追加の結合ドメインを塩基抗体に接続してもよい。リンカ－は、当該技術分野で既知の任意の好適なリンカ－であり得、好ましくは、ペプチド領域、例えば、１つ以上のヒンジ領域および／またはヒンジ領域に由来する１つ以上の領域を含む。リンカ－とそれが接続される定常領域（例えば、ＣＨ１）との組み合わせは、多価抗体の特性を決定し得る。リンカ－は、抗体の正しい機能性および／または塩基抗体に対する１つ以上の追加の結合ドメインの配向を可能にし得る。結合ドメインにおけるＣＨ１領域の組み合わせは、抗体の機能性および／または塩基抗体に対する結合ドメインの配向を改善し得る。所与のサブタイプのヒンジに基づくリンカ－配列は、好ましくは、追加の結合ドメインにおける同じサブタイプの定常領域と組み合わせられる。
【0129】
好ましくは、リンカ－は、自然に発生する配列であるか、または自然に発生する配列に基づく。より具体的には、当該リンカ－は、好ましくはヒンジ配列であるか、またはヒンジ配列に基づく配列を含む。より具体的には、当該リンカ－は、ＩｇＧ１ヒンジ領域、ＩｇＧ２ヒンジ領域、ＩｇＧ３ヒンジ領域、またはＩｇＧ４ヒンジ領域に基づくヒンジ領域を含み得る。リンカ－は、好ましくは、７～３０個のアミノ酸残基のペプチドである。リンカ－は、好ましくは、本明細書に記載される抗体のヒンジ配列を含む。
【0130】
あるいは、当該リンカ－は、以下の配列のうちの１つ以上を含む７～３０個のアミノ酸残基のペプチドを含む：
１：ＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号６９）、
２：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号７０）、
３：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７１）、
４：ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰ配列番号７２）、
５：ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰ（配列番号７３）、
６：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ（配列番号７４）、
７：ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰ（配列番号７５）、
８：ＥＲＫＳＳＶＥＡＰＰＶＡＧ（配列番号７６）、
９：ＥＲＫＣＳＶＥＡＰＰＶＡＧ（配列番号７７）、
１０：ＥＳＫＹＧＰＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号７８）、
１１：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ（配列番号７９）、
１２：ＥＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８０）、
１３：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＰＶＡＧ（配列番号８１）、
１４：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号８２）、
１５：ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号８３）、
１６：ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号８４）、
１７：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号８５）、
１８：ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号８６）、
１９：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号８７）、
２０：ＥＲＫＳＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ（配列番号８８）、
２１：ＥＲＫＣＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ（配列番号８９）、
２２：ＥＳＫＹＧＰＰＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号９０）、
２３：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号９１）、
２４：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号９２）、
またはそれらのいずれか１つに対して少なくとも約８５％の配列同一性を有する配列。
１：ＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号６９）、
２：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号７０）、
３：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７１）、
４：ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰ配列番号７２）、
５：ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰ（配列番号７３）、
６：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ（配列番号７４）、
７：ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰ（配列番号７５）、
８：ＥＲＫＳＳＶＥＡＰＰＶＡＧ（配列番号７６）、
９：ＥＲＫＣＳＶＥＡＰＰＶＡＧ（配列番号７７）、
１０：ＥＳＫＹＧＰＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号７８）、
１１：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ（配列番号７９）、
１２：ＥＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８０）、
１３：ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＰＶＡＧ（配列番号８１）、
１４：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号８２）、
１５：ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号８３）、
１６：ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ（配列番号８４）、
１７：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号８５）、
１８：ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号８６）、
１９：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号８７）、
２０：ＥＲＫＳＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ（配列番号８８）、
２１：ＥＲＫＣＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ（配列番号８９）、
２２：ＥＳＫＹＧＰＰＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号９０）、
２３：ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＬＬＧＧ（配列番号９１）、
２４：ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ（配列番号９２）、
またはそれらのいずれか１つに対して少なくとも約８５％の配列同一性を有する配列。
【0131】
塩基抗体を１つ以上の追加の結合ドメインに接続するリンカ－は、好ましくは、ペプチド配列１～２４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチド、またはペプチド配列１～２４と少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【0132】
多価抗体の結合ドメインは、任意の好適な軽鎖を有し得る。それらは各々、異なる軽鎖を有し得るか、または２つ以上の結合ドメインは、同じまたは類似の軽鎖を有し得る。かかる軽鎖は、本明細書では、共通の軽鎖と呼ばれ、これは、共通の軽鎖可変領域を含む軽鎖である。軽鎖定常領域（ＣＬ）は、かかる共通の軽鎖において、必ずしも同じまたは類似していない。好ましくは、多価抗体のすべての結合ドメインは、共通の軽鎖を含む。第２の結合分子はまた、共通の軽鎖を含み得る。典型的には、これは、多価抗体で使用されるのと同じ共通の軽鎖である。
【0133】
共通の軽鎖または軽鎖可変領域を有することは、免疫グロブリン鎖の関連時に形成され得る異なる分子の数を制限するため、多価抗体の産生を容易にする。産生細胞は、ここで、２つの重鎖および１つの軽鎖または１つの軽鎖可変領域のみを産生する必要がある。当該軽鎖が、３つ以上の重鎖可変領域を有する２つの重鎖をコ－ドするＤＮＡを含む宿主細胞内で発現される場合、当該軽鎖は、各利用可能な重鎖可変領域またはＣＨ１－ＶＨ１領域と対合することができ、それによって少なくとも３つの機能的抗原結合ドメインを形成する。
【0134】
共通の軽鎖または共通軽鎖可変領域は、異なる重鎖または重鎖可変領域、例えば、重鎖をＶＨ１、ＶＨ２、および／またはＶＨ３と対合することができる。かかる共通の軽鎖または共通の軽鎖可変領域の例は、ＷＯ２００４／００９６１８およびＷＯ２００９／１５７７７１に記載されている。共通の軽鎖または共通の軽鎖可変領域は、好ましくは生殖系列配列を有する。好ましい生殖系列配列は、ヒトレパ－トリ－で頻繁に使用され、良好な熱力学的安定性、収率、および溶解性を有する軽鎖可変領域である。好ましい生殖系列軽鎖は、ＩｇＶκ１－３９可変領域Ｖセグメントを含む。共通の軽鎖は、好ましくは、再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖可変領域ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１を含む（図３Ｂ）。それは、０～５のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、またはそれらの組み合わせを含み得る。共通の軽鎖は、好ましくは、軽鎖定常領域をさらに含む。これは、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域、好ましくはカッパ軽鎖定常領域であり得る（図３Ｃ）。
【0135】
好ましくは、本発明の多価抗体は、カッパ軽鎖可変領域ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１またはＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む。好ましくは、多価抗体における共通の軽鎖可変領域は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（配列番号９３）である。
【0136】
好ましくは、本発明の第２の結合分子は、カッパ軽鎖可変領域ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１またはＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１も含む。好ましくは、第２の結合分子における共通の軽鎖可変領域は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（配列番号９３）である。
【0137】
他の共通の軽鎖可変領域が当該技術分野で既知であり、使用することができ、例えば、ＩｇＶκ３－２０／ＩｇＪκ１、ＩｇＶκ３－１５／ＩｇＪκ１、およびＩｇＶλ３－２１／ＩｇＪλ３を含む。
【0138】
ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。ＩｇＶκ１－３９の好ましいアミノ酸配列は、配列番号１０７として提示される。これは、Ｖ領域の配列である。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。２つの好ましい合わせられた配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１およびＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替名は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１またはＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデ－タベ－スワ－ルドワイドウェブによる命名）である。これらの名称は、例示的なものであり、遺伝子セグメントの対立遺伝子バリアントを包含する。
【0139】
ＩｇＶκ３－２０は、免疫グロブリン可変カッパ３－２０遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変３－２０、ＩＧＫＶ３２０、ＩＧＫＶ３－２０としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５８１７、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９１２、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２３９９５１である。ＩｇＶκ３－２０の好ましいアミノ酸配列は、配列番号１０８である。これは、Ｖ領域の配列である。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましい合わせられた配列は、ＩＧＫＶ３－２０／ｊｋ１と示され、代替名は、ＩｇＶκ３－２０＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデ－タベ－スワ－ルドワイドウェブによる命名）である。この名称は、例示的なものであり、遺伝子セグメントの対立遺伝子バリアントを包含する。
【0140】
ＩｇＶκ３－１５は、免疫グロブリン可変カッパ３－１５遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変３－１５、ＩＧＫＶ３１５、ＩＧＫＶ３－１５としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５８１６、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９１３、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４４４３７である。ＩｇＶκ３－１５の好ましいアミノ酸配列は、配列番号１０９として提示される。これは、Ｖ領域の配列である。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましい合わせられた配列は、ＩＧＫＶ３－１５／ｊｋ１と示され、代替名は、ＩｇＶκ３－１５＊０１／ＩＧＪκ１＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデ－タベ－スワ－ルドワイドウェブによる命名）である。この名称は、例示的なものであり、遺伝子セグメントの対立遺伝子バリアントを包含する。
【0141】
ＩｇＶλ３－２１は、免疫グロブリン可変ラムダ３－２１遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンラムダ可変３－２１、ＩＧＬＶ３２０、ＩＧＬＶ３－２１としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５９０５、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８７９６、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２１１６６２．２である。ＩｇＶλ３－２１の好ましいアミノ酸配列は、配列番号１１０として提示される。これは、Ｖ領域の配列である。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。好ましい合わせられた配列は、ＩＧλＶ３－２１／ｊｋ３と示され、代替名は、ＩｇＶλ３－２１／ＩＧＪκ３（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデ－タベ－スワ－ルドワイドウェブによる命名）である。この名称は、例示的なものであり、遺伝子セグメントの対立遺伝子バリアントを包含する。
【0142】
多価抗体は、好ましくは、定常領域を含む全長抗体である。好ましくは、多価抗体は、重鎖のヘテロ二量体化のために最適化される定常領域を含む全長抗体である。重鎖のヘテロ二量体化を最適化するための技法は、当技術分野で既知であり、ノブインホ－ル変異の使用、およびＤＥＫＫ変異の使用が挙げられるが、これらに限定されない（ＷＯ２０１３／１５７９５４およびＤｅ Ｎａｒｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１７）２９２（３５）１４７０６－１４７１７、参照により本明細書に組み込まれる）。
【0143】
多価抗体は、エフェクタ－機能を誘導する抗体であり得る。多価抗体はまた、エフェクタ－機能を誘導しないか、または低減したエフェクタ－機能を誘導する抗体であってもよい。多価抗体は、好ましくは、Ｆｃ受容体を介してエフェクタ－機能を誘導することができない。第２の結合分子は、好ましくは、エフェクタ－機能を誘導しないか、または低減したエフェクタ－機能を誘導する。
【0144】
当該技術分野で既知のエフェクタ－機能の１つのタイプは、多くの場合、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）と称され、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性とも称される。ＡＤＣＣは、細胞媒介性免疫防御機構であり、それにより、免疫系のエフェクタ－細胞が、膜表面抗原が特定の抗体によって結合された標的細胞を能動的に溶解する。ＡＤＣＣエフェクタ－機能は、典型的には、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）によって媒介される。これらの受容体は、抗体媒介性（体液性）免疫応答を細胞エフェクタ－機能に接続する主要な免疫調節受容体である。ＦｃγＲ（ＩｇＧ）、ＦｃεＲＩ（ＩｇＥ）、ＦｃαＲＩ（ＩｇＡ）、ＦｃμＲ（ＩｇＭ）、およびＦｃδＲ（ＩｇＤ）を含むすべてのクラスの免疫グロブリンの受容体が特定されている。白血球上に見られるヒトＩｇＧの３つのクラスの受容体：ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩｃ）、およびＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ）が存在する。ＦｃγＲＩが高親和性受容体（ナノモル範囲のＫＤ）に分類される一方で、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、低～中間親和性（マイクロモル範囲のＫＤ）である。抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）では、エフェクタ－細胞（ナチュラルキラ－細胞、マクロファ－ジ、単球、および好酸球）の表面上のＦｃｖＲは、それ自体が標的細胞に結合するＩｇＧのＦｃ領域に結合する。結合時、標的細胞の破壊を媒介する溶解酵素、パ－フォリン、グランザイム、および腫瘍壊死因子などの様々な物質の分泌をもたらすシグナル伝達経路が引き起こされる。ＡＤＣＣエフェクタ－機能のレベルは、ヒトＩｇＧサブタイプによって異なる。これは、簡単に言えば、アロタイプおよび特定のＦｃｖＲに依存するが、ＡＤＣＣエフェクタ－機能は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３では高く、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４では低い。ＦｃｖＲの結合部位が抗体上に存在するという知識により、ＡＤＣＣエフェクタ－機能を有しない操作された抗体がもたらされた。
【0145】
エフェクタ－機能の別のタイプは、エフェクタ－細胞に依存せず、しばしば、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）と称される。これは、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体のエフェクタ－機能である。治療用抗体または抗体断片が抗腫瘍効果を達成することができる別の作用機序である。ＣＤＣは、古典的な補体経路の開始成分であるＣ１ｑが標的結合抗体のＦｃ部分に固定されたときに開始される。これは、最終的に抗体標識細胞の溶解をもたらすことができる複合体補体活性化カスケ－ドの最初のステップである。
【0146】
第２の結合分子は、好ましくは、抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を低減するように操作される定常領域を含む単一特異性抗体である。抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を低減する技法が当該技術分野で既知であり、本発明で好適に用いることができる。第２の結合分子がＩｇＧ１抗体である場合、それは修飾ＣＨ２領域を含むことが好ましく、修飾は、抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性が低減または無効化されるようなものであることが好ましい。いくつかの抗体は、例えば、Ｆｃ受容体相互作用を低減するか、またはＣ１ｑ結合を低減するように、ＣＨ２／下部ヒンジ領域が修飾される。本発明の第２の結合分子は、第２の結合分子とＦｃ受容体、好ましくはＦｃ－ガンマ受容体との相互作用が低減されるような、変異体ＣＨ２および／または下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体であり得る。
【0147】
多価抗体は、抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を低減するように操作される定常領域を有することができる。多価抗体がＩｇＧ１抗体である場合、それは修飾ＣＨ２領域を含むことが好ましく、修飾は、抗体のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性が低減または無効化されるようなものであることが好ましい。いくつかの抗体は、例えば、Ｆｃ受容体相互作用を低減するか、またはＣ１ｑ結合を低減するように、ＣＨ２／下部ヒンジ領域が修飾される。本発明の多価抗体は、多価抗体とＦｃ受容体、好ましくはＦｃ－ガンマ受容体との相互作用が低減されるように、変異体ＣＨ２および／または下部ヒンジドメインを有するＩｇＧ抗体であり得る。低減したエフェクタ－機能を示す多価抗体は、免疫細胞関与抗原との結合を通じて、エフェクタ－細胞に結合することが可能なままであり、ＴＡ１および／またはＴＡ２結合可変ドメインを介して結合したときに、これらをがん細胞などの異常細胞の近傍で活性化する。
【0148】
したがって、本発明は、本明細書で定義される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物を提供する。組成物は、好ましくは、多価抗体および第２の結合分子を含む治療用組成物、または多価抗体、第２の結合分子、ならびに薬学的に許容される担体および／もしくは希釈剤を含む薬学的組成物である。患者に投与される、本発明による組成物中の多価抗体および第２の結合分子の量は、典型的には、治療ウィンドウ内にあり、治療効果を得るために十分な量が使用されることを意味するが、量は、許容できない程度の副作用をもたらす閾値を超えない。
【0149】
本明細書で定義される本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットも提供される。部分のキットは、単一の組成物として、または別個の組成物として（すなわち、１つの組成物が多価抗体を含み、別の組成物が第２の結合分子を含む）、本発明の多価抗体および第２の結合分子を含むことができる。ある特定の実施形態では、キットは、同時にまたは連続的に多価抗体および第２の結合分子を投与することを必要とする対象に、それを行うための説明書を含む。ある特定の実施形態では、キットは、多価抗体を投与する前に第２の結合分子を投与するための説明書を含む。
【0150】
本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、組成物、または部分のキットは、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、および／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減または低減するために使用され得る。
【0151】
特に、本発明の文脈において、非腫瘍細胞は、例えば、ＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない細胞、およびＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない細胞などの、多価抗体が結合する腫瘍関連抗原のうちの１つのみを発現する。ＴＡ１を発現するがＴＡ２を発現しない非腫瘍細胞、およびＴＡ２を発現するがＴＡ１を発現しない非腫瘍細胞は、同時に存在することができる。低減した結合および低減した細胞殺滅とは、第２の結合分子の不在下での多価抗体の結合または細胞殺滅活性と比較した場合、低減した結合および細胞殺滅活性を指す。
【0152】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への本明細書に記載される多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または本明細書に記載される多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための方法に関し、方法は、多価抗体と併せてＴＡ１またはＴＡ２に結合する、本明細書に記載される第２の結合分子を使用することを含む。
【0153】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への本明細書に記載される多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または本明細書に記載される多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される第２の結合分子の使用に関する。
【0154】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせの使用に関する。
【0155】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減するため、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物の使用に関する。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される治療用組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される薬学的組成物である。
【0156】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減する際に使用するための、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせに関する。
【0157】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減する際に使用するための、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される第２の結合分子に関する。ある特定の実施形態では、多価抗体は、本明細書に記載される多価抗体である。
【0158】
ある特定の実施形態では、本発明は、非腫瘍細胞への多価抗体の結合を軽減もしくは低減する際に使用するための、かつ／または多価抗体によって誘導された非腫瘍細胞の細胞殺滅を軽減もしくは低減するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物に関する。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される治療用組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される薬学的組成物である。
【0159】
それらの臨床使用に加えて、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、本明細書に記載される方法、および本明細書に記載される使用は、治療用抗体の研究および開発、ならびにかかる抗体を含む組成物において有用である。これには、インビトロアッセイにおける使用、インビボ実験（インビトロアッセイを含む）、および前臨床的特徴付けにおけるインビボ実験が含まれるが、これらに限定されない。
【0160】
本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、組成物、または部分のキットは、医学的適応症、特にがんに罹患しているヒトまたは動物の治療方法において使用することができ、この方法は、それを必要とするヒトまたは動物に、治療有効量の本明細書に定義される本発明の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせを投与することを含む。
【0161】
がんの治療の方法が提供され、方法は、
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗体を投与すること、および対象に、本明細書に記載される第２の結合分子を追加で投与すること、
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される組成物を投与すること、
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される治療用組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む。
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗体を投与すること、および対象に、本明細書に記載される第２の結合分子を追加で投与すること、
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される組成物を投与すること、
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される治療用組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む。
【0162】
がんの治療において使用するための、本明細書で定義される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、または本明細書に定義される多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットがさらに提供される。
【0163】
ある特定の実施形態では、本発明は、がんの治療において使用するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせの使用に関する。
【0164】
ある特定の実施形態では、本発明は、がんの治療において使用するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物の使用に関する。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される治療用組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される薬学的組成物である。
【0165】
ある特定の実施形態では、本発明は、がんの治療において使用するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせに関する。
【0166】
ある特定の実施形態では、本発明は、がんの治療において使用するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む組成物に関する。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される治療用組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される薬学的組成物である。
【0167】
がんを有する個体の治療のための薬剤の製造のための、本明細書で定義される本発明の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、本明細書で定義される本発明の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、または本明細書で定義される多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットの使用がさらに提供される。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される治療用組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載される薬学的組成物である。
【0168】
がんの治療の方法がさらに提供され、これには、それを必要とする対象に、本明細書で定義される本発明の多価抗体を投与すること、および対象に、本明細書で定義される本発明の第２の結合分子を追加で投与することが含まれる。
【0169】
本発明の多価抗体および第２の結合分子は、１つの組成物として、または別個の組成物として、同時に投与することができる。本発明の多価抗体および第２の結合分子はまた、順次投与することができ、第２の結合分子が最初に投与され、続いて多価抗体が投与されるか、またはその逆も同様である。好ましくは、第２の結合分子は、多価抗体の前に投与される。
【0170】
がんは、任意の固形がんまたは血液がんであり得る。固形がんの例としては、上皮由来のもの、卵巣および子宮内膜がん、乳がんなどの婦人科がん、前立腺がん、および脳がんが挙げられる。
【0171】
血液がんは、好ましくは骨髄由来の白血病または前白血病疾患であり得るが、Ｂ細胞リンパ腫であってもよい。本発明によって治療することができる疾患としては、骨髄性白血病または前白血病疾患、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびにホジキンリンパ腫およびほとんどの非ホジキンリンパ腫が挙げられる。また、Ｂ－ＡＬＬ、Ｔ－ＡＬＬ、マントル細胞リンパ腫はまた、本発明の組成物または部分のキットで治療するための好ましい標的である。
【0172】
したがって、本発明は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、または好ましくは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療における医薬品として使用するための、添付の特許請求の範囲による組成物または部分のキットを提供する。ＭＤＳ、ＣＭＬ、ＭＭ、または好ましくはＡＭＬの治療または予防のための薬剤の調製における、特許請求の範囲に記載の組成物または部分のキットの使用も提供される。腫瘍抗原がＣＬＥＣ１２Ａであることが好ましい。
【0173】
本発明は、本明細書に記載される多価抗体の重鎖および軽鎖をコ－ドする核酸を含む発現ベクタ－、ならびに本明細書に記載される第２の結合分子の重鎖および軽鎖をコ－ドする核酸を含む発現ベクタ－をさらに提供する。多価抗体および第２の結合分子の両方のための単一の発現ベクタ－の使用も想定される。
【0174】
したがって、本発明はまた、本明細書で定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含む発現ベクタ－に関し、ベクタ－は、本明細書で定義される第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸をさらに含む。第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸とは異なる核酸である。例えば、例示的な多価抗体は、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する結合ドメインおよびＴＡ１に結合する結合ドメインを含むポリペプチド、およびＴＡ２に結合する結合ドメインを含むポリペプチドを含む。したがって、第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、ＴＡ２に対して特異性を有する重鎖可変領域ではなく、ＴＡ１に対して特異性を有する重鎖可変領域をコ－ドする。
【0175】
したがって、多価抗体において、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインおよび第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインがＦｃ領域と関連し、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインが免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される実施形態では、第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、ＴＡ１に対して特異性を有する重鎖可変領域をコ－ドする。多価抗体において、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインおよび第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインがＦｃ領域と関連し、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインが免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される実施形態では、第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、ＴＡ２に対して特異性を有する重鎖可変領域をコ－ドする。
【0176】
本明細書に定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸、および本明細書に定義される第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、好ましくはＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖定常領域をさらにコ－ドし得る。
【0177】
発現ベクタ－は、本明細書で定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの軽鎖可変領域をコ－ドする核酸、および本明細書で定義される第２の結合分子の軽鎖可変領域をコ－ドする核酸をさらに含み得る。かかる核酸は、軽鎖定常領域（ＣＬ）をさらにコ－ドし得る。
【0178】
本発明はさらに、本明細書で定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含む宿主細胞に関し、宿主細胞は、本明細書で定義される第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸をさらに含む。第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、発現ベクタ－について上記で説明したように、多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸とは異なる核酸である。
【0179】
本明細書に定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸、および本明細書に定義される第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする核酸は、好ましくはＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖定常領域をさらにコ－ドし得る。
【0180】
宿主細胞は、本明細書で定義される多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの軽鎖可変領域をコ－ドする核酸、および本明細書で定義される第２の結合分子の軽鎖可変領域をコ－ドする核酸をさらに含み得る。かかる核酸は、軽鎖定常領域（ＣＬ）をさらにコ－ドし得る。
【0181】
宿主細胞は、単一細胞からの多価抗体および第２の結合分子の両方の発現を可能にする。
【0182】
好適なベクタ－の例としては、原核宿主細胞もしくは真核宿主細胞、例えば、哺乳類細胞内で複製可能なプラスミド、ファ－ジミド、コスミド、ウイルス、およびファ－ジ核酸、または他の核酸分子が挙げられる。ベクタ－は、重鎖および軽鎖をコ－ドする核酸が発現制御要素に作動可能に連結されている発現ベクタ－であり得る。典型的な発現ベクタ－は、ポリヌクレオチドの発現の調節に有用な転写および翻訳タ－ミネ－タ－、開始配列、およびプロモ－タ－を含む。
【0183】
多価抗体の重鎖をコ－ドする核酸は、重鎖のヘテロ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含むことが好ましい。かかる修飾は、当技術分野で既知であり、本明細書に提供される修飾の例を含むが、これに限定されない。第２の結合分子の１つ以上の重鎖をコ－ドする核酸は、好ましくは、ヘテロ二量体化を促進する修飾を有しない。代わりに、ホモ二量体化を促進する１つ以上の修飾を含み得る。
【0184】
当該技術分野では、抗体および他の種類の結合分子を産生するための様々な方法が存在する。抗体および結合分子は、典型的には、抗体または結合分子をコ－ドする核酸を発現する細胞によって産生される。したがって、本発明は、本発明の抗体および／または第２の結合分子を産生および／または含む単離された細胞、または組織培養物中の細胞も提供する。典型的には、これは、インビトロ細胞、単離された細胞、または組換え細胞である。かかる細胞は、本発明の抗体および／または第２の結合分子をコ－ドする核酸を含む。この細胞は、好ましくは動物細胞、より好ましくは哺乳類細胞、より好ましくは霊長類細胞、最も好ましくはヒト細胞である。本発明の目的のために、好適な細胞は、本発明による抗体を含むことができ、好ましくは産生することができ、かつ／または本発明による核酸を含むことができる任意の細胞である。好ましくは、この細胞は、ハイブリド－マ細胞、チャイニ－ズハムスタ－卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞、またはＰＥＲ．Ｃ６細胞である。細胞がＣＨＯ細胞であることが特に好ましい。
【0185】
本発明による細胞を含む細胞培養物または細胞株がさらに提供される。タンパク質および抗体の工業規模産生のために開発された細胞株は、本明細書でさらに工業的細胞株と称される。
【0186】
本発明は、本発明の多価抗体および／または第２の結合分子を産生するための方法をさらに提供し、方法は、本発明の細胞を培養すること、ならびに多価抗体および／または第２の結合分子を当該培養物から採取することを含む。当該細胞は、無血清培地中で培養され得る。好ましくは、当該細胞は、浮遊増殖に適している。多価抗体および／または第２の結合分子は、培養物の培地から精製され得る。好ましくは、当該多価抗体および／または第２の結合分子は、親和性精製される。
【0187】
本発明は、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子、ならびに薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的組成物をさらに提供する。
【0188】
本発明の多価抗体および／または第２の結合分子が点滴用の注射溶液または注入溶液として使用されるように製剤化される場合、注射溶液または注入溶液は、任意の形態の水溶液、懸濁液、もしくは乳濁液であり得るか、またはその薬剤が使用時に溶媒中に溶解されるか、懸濁されるか、もしくは乳化されるように、薬学的に許容される担体と一緒に固体薬剤として製剤化され得る。点滴用の注射溶液または注入溶液に使用される溶媒の例には、注射用蒸留水、生理食塩水、グルコ－ス溶液、および等張溶液（例えば、その中で、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニト－ル、ソルビト－ル、ホウ酸、ホウ砂、プロピレングリコ－ルなどが可溶性である）が挙げられる。
【0189】
薬学的に許容される担体の例には、安定剤、可溶化剤、懸濁剤、乳化剤、鎮静剤、緩衝剤、防腐剤、消毒剤、ｐＨ調整剤、および抗酸化剤が挙げられる。安定剤として、様々なアミノ酸、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マンニト－ル、グルコ－ス、デキストラン、エチレングリコ－ル、プロピレングリコ－ル、ポリエチレングリコ－ル、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエンなどを使用することができる。可溶化剤として、アルコ－ル（例えば、エタノ－ル）、ポリオ－ル（例えば、プロピレングリコ－ルおよびポリエチレングリコ－ル）、非イオン性界面活性剤（例えば、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０（登録商標）、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（登録商標）、およびＨＣＯ－５０）などを使用することができる。懸濁剤として、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロ－ス、カルボキシメチルセルロ－ス、ヒドロキシメチルセルロ－ス、ラウリル硫酸ナトリウムなどを使用することができる。乳化剤として、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、トラガカントなどを使用することができる。鎮静剤として、ベンジルアルコ－ル、クロロブタノ－ル、ソルビト－ルなどを使用することができる。緩衝剤として、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸緩衝液、イプシロンアミノカプロン酸緩衝液などを使用することができる。防腐剤として、パラヒドロキシ安息香酸メチル、パラヒドロキシ安息香酸エチル、パラヒドロキシ安息香酸プロピル、パラヒドロキシ安息香酸ブチル、クロロブタノ－ル、ベンジルアルコ－ル、塩化ベンザルコニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂などを使用することができる。消毒剤として、塩化ベンザルコニウム、パラヒドロキシ安息香酸、クロロブタノ－ルなどを使用することができる。ｐＨ調整剤として、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸などを使用することができる。抗酸化剤として、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水性抗酸化剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソ－ル、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、およびα－トコフェロ－ルなどの油溶性抗酸化剤、または（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビト－ル、酒石酸、およびリン酸などの金属キレ－ト剤を使用することができる。
【0190】
点滴用の注入溶液または注入溶液は、最終プロセスで滅菌、または無菌操作、例えば、フィルタ－での濾過による滅菌を行い、その後、無菌容器に充填することによって生産することができる。点滴用の注射溶液または注入溶液は、使用時に真空乾燥または凍結乾燥した無菌粉末（薬学的に許容される担体粉末を含み得る）を適切な溶媒中に溶解させることによって使用され得る。
【0191】
本発明は、対象におけるがんを治療する方法をさらに提供し、これには、それを必要とする対象に、有効量の、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子、または薬学的組成物を投与することが含まれる。したがって、本発明は、対象におけるがんの治療に使用するための、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子の組み合わせを提供する。本発明は、がんを予防する、がんの症状進行もしくは再発を抑制する、および／またはがんを治療する際に使用するための薬学的薬剤をさらに提供し、薬学的薬剤は、本明細書に記載される多価抗体および第２の結合分子を含む。
【0192】
特許文献または背景として与えられる他の事柄への本明細書における言及は、その文献または事柄が既知であったこと、またはその中に含まれる情報が、特許請求の範囲のいずれかの優先日における共通の一般知識の一部であったことを認めるものとみなされるべきではない。
【0193】
本明細書に記載される各参照文献の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0194】
明確さおよび簡潔な説明の目的のために、特徴は、同じまたは別個の実施形態の一部として本明細書に記載されるが、本発明の範囲は、記載される特徴のすべてまたはいくつかの組み合わせを有する実施形態を含み得ることが理解されるであろう。
【実施例】
【0195】
実施例１
細胞および細胞株
ＨＣＴ１１６（ＥＣＡＣＣ９１０９１００５）は、ヒト結腸がん細胞株である。ＢｘＰＣ３（ＢｘＰＣ－３ ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１６８７）は、ヒト膵臓がん細胞である。ＢｘＰＣ３細胞は、比較的高レベルのＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＨＣＴ１１６は、より低レベルのＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１を発現する。
細胞および細胞株
ＨＣＴ１１６（ＥＣＡＣＣ９１０９１００５）は、ヒト結腸がん細胞株である。ＢｘＰＣ３（ＢｘＰＣ－３ ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１６８７）は、ヒト膵臓がん細胞である。ＢｘＰＣ３細胞は、比較的高レベルのＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＨＣＴ１１６は、より低レベルのＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１を発現する。
【0196】
抗体
本明細書で調製される多価抗体は、図１に示される一般的な構造を有する２つの重鎖を有する三重特異性抗体である。
本明細書で調製される多価抗体は、図１に示される一般的な構造を有する２つの重鎖を有する三重特異性抗体である。
【0197】
異なるＶＨ１およびＶＨ２領域、ならびに同じＶＨ３領域を含む異なる三重特異性抗体を産生した。単一のＶＨ３領域をＥＧＦＲに特異的なＦａｂから選択し（配列番号５６）、２つのＶＨ２領域をＣＤ３に特異的なＦａｂから選択し（配列番号８および２２）、２つのＶＨ１領域をＰＤ－Ｌ１に特異的なＦａｂから選択した（配列番号３８および４２）。選択された２つのＰＤ－Ｌ１ Ｆａｂは、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体（配列番号４７を含む）のうちの１つに使用されたＰＤ－Ｌ１ Ｆａｂよりも高い相対親和性を有し、配列番号４６を有する重鎖を含む単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体よりも低い。
【0198】
重鎖は、ＷＯ２０１３／１５７９５４およびＷＯ２０１３／１５７９５３に記載されるヘテロ二量体化ドメインを有する。ＶＨ３を有する重鎖は、ＤＥ残基３５１Ｄおよび３６８Ｅを有するＣＨ３ドメインを有する。ＶＨ２およびＶＨ１を有する重鎖は、ＥＵ付番によりＣＨ３領域にＫＫ残基（３５１Ｋ、３６６Ｋ）を有する相補ＣＨ３ドメインを有する。異なる技術の使用を通じて、またはＶＨ３側にＫＫ残基、そしてＶＨ２およびＶＨ１側にＤＥ残基を有することのいずれかで、ヘテロ二量体化ＣＨ３領域の代替的な包含を適用することができる。細胞における２つの重鎖の産生は、両方の重鎖のＩｇＧ重鎖ヘテロ二量体の生成につながる（ＷＯ２０１３／１５７９５４およびＷＯ２０１３／１５７９５３）。
【0199】
ＫＫ－重鎖は、次のＮからＣ末端の構造ＶＨ１－ＣＨ１－リンカ－－ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を有する。発現ベクタ－をＭＶ３０３２（図１０）に基づいて作製し、細胞において重鎖および軽鎖を発現させた。本明細書で使用される軽鎖は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１可変領域を含む共通軽鎖（図３に示す配列）であった。
【0200】
ＤＥ－重鎖は、次のＮからＣ末端の構造ＶＨ３－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を有する。細胞において重鎖および軽鎖を発現する発現ベクタ－は、ＭＶ１６２５に基づいて作製した（図１１）。このベクタ－によってコ－ドされる軽鎖は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１可変領域を含む共通の軽鎖（図３に示す配列）であった。
【0201】
３つの二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を産生した：１）配列番号４６に記載されるアミノ酸を有する２つの重鎖、および配列番号１０５に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、２）配列番号４７に記載されるアミノ酸を有する２つの重鎖、および配列番号９８に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、ならびに３）配列番号５１に記載されるアミノ酸を有する２つの重鎖、および配列番号１０６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体。
【0202】
抗体の産生
Ｈｅｋ２９３細胞を、配列番号４７を有する重鎖および配列番号９８を有する軽鎖を含む三重特異性抗体および単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の発現に使用した。トランスフェクションの２日前に、Ｈｅｋ２９３細胞ストックを１：１の比率で２９３培地に分割し、１５５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２で一晩インキュベ－トした。細胞を、トランスフェクションの前日に、５×１０ｅ５細胞／ｍＬの密度に希釈した。懸濁細胞をプレ－トに播種し、通気性シ－ルで覆い、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２で一晩インキュベ－トした。トランスフェクションの日に、２９３－Ｆ培養培地をポリエチレンイミン（ＰＥＩ）直鎖状（ＭＷ ２５，０００）と混合した。産生される各ＩｇＧについて、２９３Ｆ培養培地－ＰＥＩミックスを、それぞれの発現ベクタ－ＤＮＡ（ＩｇＧヘテロ二量体については、各重鎖をコ－ドするＤＮＡ）に添加した。混合物を室温で２０分間インキュベ－トした後、穏やかに細胞に添加した。トランスフェクションの翌日、２９３－Ｆ培地で希釈したペニシリン－ストレプトマイシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ）を各培養物に添加した。培養物を、トランスフェクションの７日後の採取まで、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２でインキュベ－トした。培養物を５分間、５００ｇで遠心分離し、ＩｇＧを含有する上清を、１０～１２μｍのメルトブロ－ポリプロピレンフィルタ－プレ－トを使用して濾過し、精製前に－２０℃で保管した。
Ｈｅｋ２９３細胞を、配列番号４７を有する重鎖および配列番号９８を有する軽鎖を含む三重特異性抗体および単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の発現に使用した。トランスフェクションの２日前に、Ｈｅｋ２９３細胞ストックを１：１の比率で２９３培地に分割し、１５５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２で一晩インキュベ－トした。細胞を、トランスフェクションの前日に、５×１０ｅ５細胞／ｍＬの密度に希釈した。懸濁細胞をプレ－トに播種し、通気性シ－ルで覆い、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２で一晩インキュベ－トした。トランスフェクションの日に、２９３－Ｆ培養培地をポリエチレンイミン（ＰＥＩ）直鎖状（ＭＷ ２５，０００）と混合した。産生される各ＩｇＧについて、２９３Ｆ培養培地－ＰＥＩミックスを、それぞれの発現ベクタ－ＤＮＡ（ＩｇＧヘテロ二量体については、各重鎖をコ－ドするＤＮＡ）に添加した。混合物を室温で２０分間インキュベ－トした後、穏やかに細胞に添加した。トランスフェクションの翌日、２９３－Ｆ培地で希釈したペニシリン－ストレプトマイシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ）を各培養物に添加した。培養物を、トランスフェクションの７日後の採取まで、２８５ｒｐｍの軌道振盪速度で、３７℃および８％ ＣＯ２でインキュベ－トした。培養物を５分間、５００ｇで遠心分離し、ＩｇＧを含有する上清を、１０～１２μｍのメルトブロ－ポリプロピレンフィルタ－プレ－トを使用して濾過し、精製前に－２０℃で保管した。
【0203】
上清を、１ＭのＴｒｉｚｍａ ｐＨ８およびＰｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂビ－ズ（５０％ ｖ／ｖ、Ｇ．Ｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）と混合し、６００ｒｐｍの軌道振盪で、２５℃で２時間インキュベ－トした。ビ－ズを真空濾過し、ＰＢＳ ｐＨ７．４で２回洗浄した。抗体の溶出を、クエン酸緩衝液０．１Ｍ、ｐＨ３を添加し、続いて１ＭのＴｒｉｚｍａ ｐＨ８で中和することによって行った。精製されたＩｇＧ画分を、直ちにＰＢＳ ｐＨ７．４に緩衝液交換した。ＩｇＧ試料を３０ｋＤａフィルタ－、ポリエ－テルスルホン膜に移し、１５００ｇ、４℃で遠心分離し、ＰＢＳを残留物に添加し、試料を５００ｒｐｍで３分間混合した後、ＩｇＧを収集し、４℃で保管した。ＩｇＧ濃度を、ＯｃｔｅｔおよびＰｒｏｔｅｉｎ Ａバイオセンサ－（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）によって決定した。ヒトＩｇＧを、７回の２倍希釈において標準として使用した。ＩｇＧ試料の濃度を二つ組で決定した。
【0204】
配列番号４６に記載されるアミノ酸を有する２つの重鎖、および配列番号１０５に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体、ならびに配列番号５１に記載されるアミノ酸を有する２つの重鎖、および配列番号１０６に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を、ＣＨＯ細胞において産生した。
【0205】
細胞傷害性アッセイ
ＢｘＰＣ３およびＨＣＴ１１６細胞株を使用して、Ｔ細胞媒介性細胞殺滅活性を測定する。
ＢｘＰＣ３およびＨＣＴ１１６細胞株を使用して、Ｔ細胞媒介性細胞殺滅活性を測定する。
【0206】
標準的な技法に従いＦｉｃｏｌｌおよびＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キットを使用して、静置Ｔ細胞を健康なドナ－からの全血から単離し、フロ－サイトメトリ－分析を使用して抗ＣＤ３抗体により９５％超のＴ細胞純度をチェックし、その後凍結保存した。凍結保存したＴ細胞を解凍し、その生存率が解凍時に９０％を超えた場合に使用し、標準的なトリパンブル－染色によって決定した。
【0207】
短時間解凍した静置Ｔ細胞およびＢｘＰＣ３またはＨＣＴ１１６標的細胞における細胞傷害性アッセイを、５：１のＥ：Ｔ比で４８時間共培養した。標的細胞溶解を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって評価されたＡＴＰレベルを測定することにより、生細胞の画分を測定することによって決定した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅリ－ダ－で発光によって測定されたＡＴＰレベルは、相対光単位（ＲＬＵ）値をもたらし、これらはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して分析された。
【0208】
各試料の標的細胞溶解を以下のように計算した：
殺滅率＝（１００－（ＲＬＵ試料／ＲＬＵ ＩｇＧなし）×１００）。
殺滅率＝（１００－（ＲＬＵ試料／ＲＬＵ ＩｇＧなし）×１００）。
【0209】
第１の実験では、ＢｘＰＣ３細胞傷害性アッセイを使用して、標的細胞の殺滅を誘導する三重特異性抗体の能力に対する単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１抗体の添加の効果を示した。三重特異性抗体および対照については、２０．５ｎＭの濃度から開始して、２０倍の４段階希釈系列を使用した。
【0210】
ヒトＴ細胞をＢｘＰＣ３標的細胞と共培養し、２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３×ＥＧＦＲ三重特異性抗体と共にインキュベ－トした。第１の三重特異性抗体は、配列番号３８を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。第２の三重特異性抗体は、配列番号４２を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。細胞殺滅のパ－センテ－ジは、陰性対照破傷風毒素（ＴＴ）＝ＣＤ３ｘＴＴ三重特異性抗体に対して相殺され、ＴＴ結合ア－ムは、配列番号６８を有する重鎖可変領域を含み、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８または配列番号２２を有する重鎖可変領域を含む。第１および第２の三重特異性抗体の細胞殺滅活性を、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体の細胞殺滅活性と比較し、モックア－ムはＴＴに対して特異性を有した。
【0211】
図６は、第１の三重特異性抗体および三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体の両方が、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の不在下で同様のレベルでＴ細胞媒介性細胞殺滅を誘導することを示す（図６Ａ；右列）。同じことが第２の三重特異性抗体にも当てはまる（図６Ｂ；右列）。したがって、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む三重特異性抗体、ならびにＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含むが、ＥＧＦＲ結合ドメインを欠く三重特異性抗体の両方は、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の不在下で、Ｔ細胞媒介性細胞殺滅を誘導する。これは、抗体のＴ細胞媒介性細胞殺滅活性が、ＥＧＦＲへの結合から独立して生じることを示し、これは、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＥＧＦＲを発現しないかまたはそのレベルが低い細胞（非腫瘍細胞を含むであろう）が、ＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲ結合ドメインを含む三重特異性抗体を含む、これらの抗体によって殺滅されることを意味する。
【0212】
単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の量を増加させることは、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体の活性に影響を与えるが、ＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲ結合ドメインを含む三重特異性抗体の活性には影響を及ぼさない。ＰＤ－Ｌ１結合ドメインおよびＥＧＦＲ結合ドメインを含む三重特異性抗体は、依然として、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下でＴ細胞媒介性細胞殺滅を誘導するが、ＰＤ－Ｌ１結合ドメインを含むが、ＥＧＦＲ結合ドメインを欠く三重特異性抗体は、誘導しないか、またはあまり効率的に誘導しない。これは、抗体の細胞殺滅活性が、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下でＥＧＦＲへの結合に依存することを示す。これは、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＥＧＦＲを発現しないか、またはその発現が低量の細胞（例えば、非腫瘍細胞）は、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体が存在する場合、ＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲ結合ドメインを含む三重特異性抗体によって殺滅されないかまたはあまり効率的に殺滅されないことを意味する。
【0213】
結果は、このアッセイにおいて、ＥＧＦＲが三重特異性抗体によって結合されていないかまたはその程度が低い場合、二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体が、三重特異性抗体によるＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を防止することができることを示している。換言すれば、二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＥＧＦＲを発現しないか、または低量のＥＧＦＲのみを発現する細胞のＴ細胞媒介性細胞殺滅を低減することができる。三重特異性抗体を二価単一特異性抗体と組み合わせることにより、三重特異性抗体は、所望のＴＡ１、ＴＡ２陽性標的細胞に対してより特異的に標的化される。
【0214】
第２の実験では、細胞傷害性アッセイを使用して、ＨＣＴ１１６細胞およびＢｘＰＣ３細胞のＴ細胞媒介性殺滅を誘導するための三重特異性抗体の能力に対する単一特異性抗体の効果を決定した。三重特異性抗体および対照については、２０．５ｎＭの濃度から開始して、８倍の８段階希釈を使用した。
【0215】
ヒトＴ細胞を、３つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の存在下で、ＢｘＰＣ３またはＨＣＴ１１６標的細胞と共培養した。第１の三重特異性抗体は、配列番号３８を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。第２の三重特異性抗体は、配列番号３８［５３５９］を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。第３の三重特異性抗体は、配列番号４２を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＴＴ陰性対照とは別に、ＴＴ＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ対照も含めた。陰性対照ＴＴ＝ＣＤ３ｘＴＴ三重特異性抗体、配列番号６８を含むＴＴ結合ア－ム、および配列番号８または２２を含むＣＤ３結合ドメインに対して細胞殺滅のパ－センテ－ジを再び相殺する。
【0216】
図７は、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体が、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の不在下でＴ細胞媒介性細胞殺滅を誘導することを示す。このＴ細胞媒介性標的細胞殺滅は、ＰＤ－Ｌ１を発現するが、ＥＧＦＲを発現しないか、またはその発現が低量である正常な非腫瘍細胞、ならびにＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲの両方を発現する腫瘍細胞上にあり得るＰＤ－Ｌ１のみに結合する抗体に起因するものである。このＴ細胞媒介性標的細胞殺滅は、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で強く低減または減少する。これは、ＰＤ－Ｌ１が、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体と競合しなければならないため、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体に対してあまり利用可能ではないことに起因すると考えられる。
【0217】
ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体はまた、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の不在下で、Ｔ細胞媒介性細胞殺滅を誘発する。このＴ細胞媒介性細胞殺滅は、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で、三重特異性ＰＤＬ１＝ＣＤ３ｘモック抗体と比較して、低減しないかまたは低減の程度が小さい。また、ここでは、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体に起因して、三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体の結合に利用可能なＰＤ－Ｌ１が少ない。しかしながら、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体は、ＥＧＦＲにも結合するため、ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体は、ＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１の両方を発現する細胞に対してその細胞殺滅効果を示すことができるが、ＥＧＦＲを発現しないかまたは低量のＥＧＦＲのみを発現する細胞には、効果がないか、または効果の程度が小さい。
【0218】
配列番号４６に記載される配列を有する重鎖を含む二価単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１抗体との三重特異性抗体の組み合わせを、三重特異性抗体のみの使用と比較した。二価単一特異性抗ＰＤ－Ｌ１抗体を、単一特異性抗体が三重特異性抗体に対して常に顕著な余剰で存在するように、三重特異性抗体対単一特異性抗体を固定比１：１０で添加した。機能性ＰＤ－Ｌ１可変ドメインを欠くＴＴ＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ対照抗体は、ある程度Ｔ細胞媒介性標的細胞殺滅を誘導するが、機能性ＰＤ－Ｌ１可変ドメインを有する三重特異性抗体よりも効果ははるかに低い（図７を参照されたい；ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲまたはＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＴＴ）。ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲ陰性ＰＤ－Ｌ１陽性細胞に結合しないかまたは結合の程度が低いにもかかわらず、依然として、二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下でＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を誘導する。これは、二価単一特異性抗体の存在下でＴ細胞媒介性標的細胞殺滅活性の大部分を失うＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘモック抗体とは対照的である。それらが活性を失うという事実は、二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体が三重特異性ＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ抗体の作用に顕著な特異性を付加することを示す。単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、三重特異性抗体の治療ウィンドウを改善する。
【0219】
平均して、ＨＣＴ１１６細胞は、ＢｘＰＣ３細胞よりも低いＥＧＦＲおよびＰＤ－Ｌ１レベルを有する。これは、三重特異性抗体のＴ細胞媒介性細胞殺滅活性の量が、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下ではある程度低いにもかかわらず（図７の下部パネル）、三重特異性抗体のより特異的な細胞標的化に対する単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の効果を変化させるものではない。
【0220】
第３の実験では、ＢｘＰＣ３細胞傷害性アッセイを使用して、ＢｘＰＣ３細胞を殺滅する能力に対する異なる比率の三重特異性抗体対単一特異性抗体の効果を決定した。三重特異性抗体および対照については、２０．５ｎＭの濃度から開始して、３倍の８段階希釈を使用した。
【0221】
ヒトＴ細胞を、２つの異なるＰＤ－Ｌ１＝ＣＤ３ｘＥＧＦＲ三重特異性抗体の存在下で、ＢｘＰＣ３標的細胞と共培養した。第１の三重特異性抗体は、配列番号３８を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号８を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。第２の三重特異性抗体は、配列番号４２［５４２６］を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含んだ。２つの異なる二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体を試験した。１つは配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含み（図８Ａ）、もう１つは配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む（図８Ｂ）。
【0222】
図８は、二価単一特異性抗体の存在が、ＥＧＦＲ結合ア－ムを欠く三重特異性抗体のＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を低減させるが、ＥＧＦＲ結合ア－ムを含む三重特異性抗体のＴ細胞媒介性標的細胞殺滅を低減させないことを示す。これは、三重特異性抗体が二価単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下でＰＤ－Ｌ１のみに結合する場合と比較して、三重特異性抗体がＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲの両方を発現する細胞上のＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲに結合する場合、Ｔ細胞媒介性細胞殺滅がより高いことを示す。このことから、単一特異性ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｔ細胞媒介性標的細胞殺滅が、主に、またはより高い程度に、ＰＤ－Ｌ１およびＥＧＦＲ陽性細胞に結合する抗体によって誘導され、ＰＤ－Ｌ１陽性およびＥＧＦＲ陰性細胞に結合する抗体によって誘導されないことを確実にすると結論付けることができる。結果は、試験した２つの異なる二価単一特異性抗体と同様であった。
【0223】
第４の実験は、第３の実験の繰り返しであるが、配列番号３８を有する重鎖可変領域を含むＰＤ－Ｌ１結合ドメイン、配列番号２２を有する重鎖可変領域を含むＣＤ３結合ドメイン、および配列番号５６を有する重鎖可変領域を含むＥＧＦＲ結合ドメインを含む別の三重特異性抗体を含み、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む二価単一特異性抗体のみを使用する。三重特異性抗体および対照については、２０．５ｎＭの濃度から開始して、８倍の８段階希釈を使用した。
【0224】
図９は、この三重特異性抗体が他の２つの三重特異性抗体と同様の結果をもたらすことを示す。したがって、異なるＰＤ－Ｌ１および／またはＣＤ３結合ドメインを有する三重特異性抗体が、同じ結果を達成すると結論付けることができる。
【0225】
本発明の態様
１．組成物であって、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含み、組成物が、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む、組成物。
２．免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメイン、および第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される、態様１に記載の組成物。
３．免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメイン、および第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される、態様１に記載の組成物。
４．第１、第２、および／または第３の可変ドメインが、共通の軽鎖可変領域を含む、態様１～３のいずれか一項に記載の組成物。
５．免疫細胞関与抗原に結合する可変ドメインが、ＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ６４、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、またはＮＫｐ３０、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、またはＣＤ５、より好ましくはＣＤ３に結合する、態様１～４のいずれか一項に記載の組成物。
６．第１の腫瘍関連抗原（ＴＡ１）に結合する可変ドメインが、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＣＤ４７、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ７、またはＳｉｇｌｅｃ－１５、好ましくはＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、より好ましくはＰＤ－Ｌ１に結合する、態様１～５のいずれか一項に記載の組成物。
７．第２の腫瘍関連抗原（ＴＡ２）に結合する可変ドメインが、ＣＬＥＣ１２ＡまたはＥＧＦＲ、好ましくはＥＧＦＲに結合する、態様１～６のいずれか一項に記載の組成物。
８．第２の結合分子が、ＴＡ１に結合する、態様１～７のいずれか一項に記載の組成物。
９．第２の結合分子が、二価の単一特異性抗体である、態様１～８のいずれか一項に記載の組成物
１０．第２の結合分子が、低減されたエフェクタ－機能を有する、態様９に記載の組成物。
１１．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む、部分のキット。
１２．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む、薬学的組成物。
１３．治療を必要とする対象、特にがんを有する対象の治療に使用するための、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、態様１～１０のいずれか一項に記載の組成物、態様１１に記載の部分のキット、または態様１２に記載の薬学的組成物。
１４．がんの治療の方法であって、
－それを必要とする対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体を投与すること、および対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子を追加で投与すること、または
－それを必要とする対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、態様１２に記載の薬学的組成物を投与すること、を含む、方法。
１５．がんを有する個体の治療のための医薬品の製造のための、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、または態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットの、使用。
１６．多価抗体および第２の結合分子が、単一の組成物として、または２つの別個の組成物として同時に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１７．多価抗体が、第２の結合分子の前に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１８．第２の結合分子が、多価抗体の前に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１９．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含むベクタ－であって、ベクタ－が、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、ベクタ－。
２０．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含む宿主細胞であって、宿主細胞が、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、宿主細胞。
１．組成物であって、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメイン、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメイン、および免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインを含む多価抗体を含み、組成物が、ＴＡ１またはＴＡ２に結合する第２の結合分子をさらに含む、組成物。
２．免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメイン、および第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される、態様１に記載の組成物。
３．免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメイン、および第１の腫瘍抗原（ＴＡ１）に結合する第１の可変ドメインが、Ｆｃ領域と関連し、第２の腫瘍抗原（ＴＡ２）に結合する第２の可変ドメインが、免疫細胞関与抗原（ＩＥＡ）に結合する第３の可変ドメインに連結される、態様１に記載の組成物。
４．第１、第２、および／または第３の可変ドメインが、共通の軽鎖可変領域を含む、態様１～３のいずれか一項に記載の組成物。
５．免疫細胞関与抗原に結合する可変ドメインが、ＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ６４、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４４、またはＮＫｐ３０、好ましくはＣＤ３、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖、ＣＤ２、またはＣＤ５、より好ましくはＣＤ３に結合する、態様１～４のいずれか一項に記載の組成物。
６．第１の腫瘍関連抗原（ＴＡ１）に結合する可変ドメインが、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＣＤ４７、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ７、またはＳｉｇｌｅｃ－１５、好ましくはＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２、より好ましくはＰＤ－Ｌ１に結合する、態様１～５のいずれか一項に記載の組成物。
７．第２の腫瘍関連抗原（ＴＡ２）に結合する可変ドメインが、ＣＬＥＣ１２ＡまたはＥＧＦＲ、好ましくはＥＧＦＲに結合する、態様１～６のいずれか一項に記載の組成物。
８．第２の結合分子が、ＴＡ１に結合する、態様１～７のいずれか一項に記載の組成物。
９．第２の結合分子が、二価の単一特異性抗体である、態様１～８のいずれか一項に記載の組成物
１０．第２の結合分子が、低減されたエフェクタ－機能を有する、態様９に記載の組成物。
１１．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む、部分のキット。
１２．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む、薬学的組成物。
１３．治療を必要とする対象、特にがんを有する対象の治療に使用するための、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子の組み合わせ、態様１～１０のいずれか一項に記載の組成物、態様１１に記載の部分のキット、または態様１２に記載の薬学的組成物。
１４．がんの治療の方法であって、
－それを必要とする対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体を投与すること、および対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子を追加で投与すること、または
－それを必要とする対象に、態様１～１０のいずれか一項に記載の組成物を投与すること、または
－それを必要とする対象に、態様１２に記載の薬学的組成物を投与すること、を含む、方法。
１５．がんを有する個体の治療のための医薬品の製造のための、態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む組成物、または態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体および第２の結合分子を含む部分のキットの、使用。
１６．多価抗体および第２の結合分子が、単一の組成物として、または２つの別個の組成物として同時に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１７．多価抗体が、第２の結合分子の前に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１８．第２の結合分子が、多価抗体の前に投与される、態様１３に記載の治療に使用するための組み合わせ、態様１４に記載の治療の方法、または態様１５に記載の使用。
１９．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含むベクタ－であって、ベクタ－が、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、ベクタ－。
２０．態様１～１０のいずれか一項に記載の多価抗体の第１、第２、および第３の可変ドメインの重鎖可変領域をコ－ドする核酸を含む宿主細胞であって、宿主細胞が、態様１～１０のいずれか一項に記載の第２の結合分子の重鎖可変領域をコ－ドする異なる核酸をさらに含む、宿主細胞。
【0226】
配列
配列番号１：重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＦＧＩＳ
配列番号３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ
配列番号５：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＫＴＦＴＩＳ
配列番号７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＲＴＦＴＩＳ
配列番号１０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１１：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＡＬＳ
配列番号１３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ
配列番号１５：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＲＦＷＩＧ
配列番号１７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ
配列番号１８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶ
配列番号１９：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＲＹＷＩＧ
配列番号２１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶ
配列番号２２：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＤＹＴＭＨ
配列番号２４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号２５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ
配列番号２６：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＤＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＶＲＧＹＳＡＹＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＡＩＳ
配列番号２８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＩＦＤＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号２９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＮＶＲＧＹＳＡＹＤＬＤＹ
配列番号３０：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＤＦＲＴＧＲＡＦＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＳＭＮ
配列番号３２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧ
配列番号３３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＨＤＦＲＴＧＲＡＦＤＩ
配列番号３４：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＳＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＲＧＬＰＩＴＭＶＲＧＡＹＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＭＨ
配列番号３６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号３７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＬＰＩＴＭＶＲＧＡＹＳＦＤＹ
配列番号３８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＮＴＹＳＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＳＩＶＰＩＦＧＴＩＮＮＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＴＭＶＲＧＶＤＹＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号３９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＳＩＴ
配列番号４０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＳＩＶＰＩＦＧＴＩＮＮＡＱＫＦＱＧ
配列番号４１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＮＴＭＶＲＧＶＤＹＹＹＭＤＶ
配列番号４２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＲＳＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＲＧＹＳＮＰＨＷＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＩＴ
配列番号４４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＩＦＧＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号４５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＲＲＧＹＳＮＰＨＷＬＤＰ
配列番号４６：重鎖配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＧＲＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
配列番号４７：重鎖ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＲＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＲＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＳＡＤＫＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＦＹＣＡＫＤＥＴＧＹＳＳＳＮＦＱＨＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＧＲＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
配列番号４８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＡＩＮ
配列番号４９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＲＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号５０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＥＴＧＹＳＳＳＮＦＱＨ
配列番号５１：重鎖配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶ
ＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＩＳ
配列番号５４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ
配列番号５５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号５６：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＬＹＧＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号５８：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＰＧＳＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＰＧＳＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号６０：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＧＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＧＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号６２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＨＷＨＷＷＬＤＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＧＦＤＹ
配列番号６４：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＴＴＧＤＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＹＭＨ
配列番号６６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号６７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ
配列番号６８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＴＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＤＹＩＦＴＫＹＤＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＭＳＡＮＴＧＮＴＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＧＤＴＡＶＹＦＣＡＲＳＳＬＦＫＴＥＴＡＰＹＹＨＦＡＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号６９：リンカ－１
ＥＳＫＹＧＰＰ
配列番号７０：リンカ－２
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ
配列番号７１：リンカ－３
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号７２：リンカ－４
ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰ
配列番号７３：リンカ－５
ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰ
配列番号７４：リンカ－６
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ
配列番号７５：リンカ－７
ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰ
配列番号７６：リンカ－８
ＥＲＫＳＳＶＥＡＰＰＶＡＧ
配列番号７７：リンカ－９
ＥＲＫＣＳＶＥＡＰＰＶＡＧ
配列番号７８：リンカ－１０
ＥＳＫＹＧＰＰＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号７９：リンカ－１１
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ
配列番号８０：リンカ－１２
ＥＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号８１：リンカ－１３
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＰＶＡＧ
配列番号８２：リンカ－１４
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号８３：リンカ－１５
ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ
配列番号８４：リンカ－１６
ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ
配列番号８５：リンカ－１７
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号８６：リンカ－１８
ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号８７：リンカ－１９
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号８８：リンカ－２０
ＥＲＫＳＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ
配列番号８９：リンカ－２１
ＥＲＫＣＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ
配列番号９０：リンカ－２２
ＥＳＫＹＧＰＰＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号９１：リンカ－２３
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号９２：リンカ－２４
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号９３：軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９４：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ１
ＱＳＩＳＳＹ
配列番号９５：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ２
ＡＡＳ
配列番号９６：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ３
ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ
配列番号９７：軽鎖定常領域
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９８：軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９９：ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
配列番号１００：ＣＨ１配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ
配列番号１０１：ヒンジ
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
配列番号１０２：ＣＨ２配列
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
配列番号１０３：修飾ＣＨ３配列
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＫＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＫＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０４：修飾ＣＨ３配列
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＤＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＥＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０５：軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１０６：軽鎖配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１０７：ＩｇＶｋ１－３９ Ｖ領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰ
配列番号１０８：ＩｇＶｋ ３－２０ Ｖ領域
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰ
配列番号１０９：ＩｇＶｋ３－１５ Ｖ領域
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＮＷＰ
配列番号１１０：ＩｇＶＬ３－２１ Ｖ領域
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＥＴＡＲＩＴＣＧＧＤＮＩＧＲＫＳＶＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＧＳＳＤＨ
配列番号１：重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＲＳＦＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＩＡＤＫＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＦＧＩＳ
配列番号３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＦＩＰＶＬＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＲＧＮＷＮＰＦＤＰ
配列番号５：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＡＦＫＳＫＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＫＴＦＴＩＳ
配列番号７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＬＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＶＴＦＮＳＲＴＦＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＬＧＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＦＭＥＬＴＳＬＲＳＥＤＴＡＩＹＹＣＴＲＲＧＮＷＮＰＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＲＴＦＴＩＳ
配列番号１０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＳＩＩＰＩＦＧＴＩＴＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号１１：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＫＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＡＬＳ
配列番号１３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＳＧＳＧＲＴＴＷＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号１４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＧＧＹＳＹＧＰＹＷＹＦＤＬ
配列番号１５：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＦＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＴＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＧＭＹＹＣＶＲＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＲＦＷＩＧ
配列番号１７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ
配列番号１８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＨＩＲＹＦＤＷＳＥＤＹＨＹＹＬＤＶ
配列番号１９：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＲＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＶＲＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＲＹＷＩＧ
配列番号２１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＮＩＲＹＦＶＷＳＥＤＹＨＹＹＭＤＶ
配列番号２２：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＮＦＤＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＷＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＦＣＡＫＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＤＹＴＭＨ
配列番号２４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＤＩＳＷＳＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号２５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＨＲＧＹＧＤＹＥＧＧＧＦＤＹ
配列番号２６：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＤＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＶＲＧＹＳＡＹＤＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＡＩＳ
配列番号２８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＩＦＤＴＰＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号２９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＮＶＲＧＹＳＡＹＤＬＤＹ
配列番号３０：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＤＦＲＴＧＲＡＦＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＳＭＮ
配列番号３２：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧ
配列番号３３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＨＤＦＲＴＧＲＡＦＤＩ
配列番号３４：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＳＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＲＧＬＰＩＴＭＶＲＧＡＹＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＭＨ
配列番号３６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号３７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＬＰＩＴＭＶＲＧＡＹＳＦＤＹ
配列番号３８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＮＴＹＳＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＳＩＶＰＩＦＧＴＩＮＮＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＡＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＮＴＭＶＲＧＶＤＹＹＹＭＤＶＷＧＫＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号３９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＳＩＴ
配列番号４０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＳＩＶＰＩＦＧＴＩＮＮＡＱＫＦＱＧ
配列番号４１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＮＴＭＶＲＧＶＤＹＹＹＭＤＶ
配列番号４２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＲＳＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＲＧＹＳＮＰＨＷＬＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＩＴ
配列番号４４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＧＩＩＰＩＦＧＴＴＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号４５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＲＲＧＹＳＮＰＨＷＬＤＰ
配列番号４６：重鎖配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＧＲＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
配列番号４７：重鎖ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＲＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＶＧＲＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＳＡＤＫＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＦＹＣＡＫＤＥＴＧＹＳＳＳＮＦＱＨＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＧＲＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
配列番号４８：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＴＹＡＩＮ
配列番号４９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＲＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号５０：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＥＴＧＹＳＳＳＮＦＱＨ
配列番号５１：重鎖配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶ
ＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＧＩＳ
配列番号５４：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧ
配列番号５５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号５６：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＬＹＧＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＬＹＧＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号５８：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＰＧＳＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５９：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＰＧＳＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号６０：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＧＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６１：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＧＷＨＷＷＬＤＡＦＤＹ
配列番号６２：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＡＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＨＷＨＷＷＬＤＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６３：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＤＲＨＷＨＷＷＬＤＧＦＤＹ
配列番号６４：重鎖可変領域ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＴＴＧＤＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号６５：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ１
ＳＹＹＭＨ
配列番号６６：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ２
ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号６７：ＫａｂａｔによるＨＣＤＲ３
ＧＴＴＧＤＷＦＤＹ
配列番号６８：重鎖可変領域ＥＶＱＬＶＥＴＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＤＹＩＦＴＫＹＤＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＭＳＡＮＴＧＮＴＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＧＤＴＡＶＹＦＣＡＲＳＳＬＦＫＴＥＴＡＰＹＹＨＦＡＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号６９：リンカ－１
ＥＳＫＹＧＰＰ
配列番号７０：リンカ－２
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ
配列番号７１：リンカ－３
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号７２：リンカ－４
ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰ
配列番号７３：リンカ－５
ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰ
配列番号７４：リンカ－６
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ
配列番号７５：リンカ－７
ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰ
配列番号７６：リンカ－８
ＥＲＫＳＳＶＥＡＰＰＶＡＧ
配列番号７７：リンカ－９
ＥＲＫＣＳＶＥＡＰＰＶＡＧ
配列番号７８：リンカ－１０
ＥＳＫＹＧＰＰＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号７９：リンカ－１１
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰ
配列番号８０：リンカ－１２
ＥＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号８１：リンカ－１３
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＰＰＶＡＧ
配列番号８２：リンカ－１４
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号８３：リンカ－１５
ＥＲＫＳＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ
配列番号８４：リンカ－１６
ＥＲＫＣＳＶＥＳＰＰＳＰＡＰＰＶＡＧ
配列番号８５：リンカ－１７
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号８６：リンカ－１８
ＥＳＫＹＧＰＰＳＰＳＳＰＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号８７：リンカ－１９
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＳＰＰＳＰＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号８８：リンカ－２０
ＥＲＫＳＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ
配列番号８９：リンカ－２１
ＥＲＫＣＳＶＥＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＰＶＡＧ
配列番号９０：リンカ－２２
ＥＳＫＹＧＰＰＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号９１：リンカ－２３
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＬＬＧＧ
配列番号９２：リンカ－２４
ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡＰＥＦＬＧＧ
配列番号９３：軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９４：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ１
ＱＳＩＳＳＹ
配列番号９５：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ２
ＡＡＳ
配列番号９６：ＩＭＧＴによるＬＣＤＲ３
ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ
配列番号９７：軽鎖定常領域
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９８：軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９９：ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
配列番号１００：ＣＨ１配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶ
配列番号１０１：ヒンジ
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ
配列番号１０２：ＣＨ２配列
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ
配列番号１０３：修飾ＣＨ３配列
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＫＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＫＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０４：修飾ＣＨ３配列
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＤＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＥＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１０５：軽鎖配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１０６：軽鎖配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１０７：ＩｇＶｋ１－３９ Ｖ領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰ
配列番号１０８：ＩｇＶｋ ３－２０ Ｖ領域
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰ
配列番号１０９：ＩｇＶｋ３－１５ Ｖ領域
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＮＷＰ
配列番号１１０：ＩｇＶＬ３－２１ Ｖ領域
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＥＴＡＲＩＴＣＧＧＤＮＩＧＲＫＳＶＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＧＳＳＤＨ
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6A-1】
【図6A-2】
【図6B-1】
【図6B-2】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8A-1】
【図8A-2】
【図8B-1】
【図8B-2】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【配列表】
【国際調査報告】