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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-16
(54)【発明の名称】癌の治療のための組み合わせおよびその用途
(51)【国際特許分類】
A61K 31/365 20060101AFI20230309BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230309BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230309BHJP
A61K 31/192 20060101ALI20230309BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230309BHJP
A61K 31/7068 20060101ALI20230309BHJP
A61K 33/243 20190101ALI20230309BHJP
A61K 31/4745 20060101ALI20230309BHJP
A61K 31/337 20060101ALI20230309BHJP
A61K 31/282 20060101ALI20230309BHJP
A61K 31/513 20060101ALI20230309BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230309BHJP
【ＦＩ】
A61K31/365
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K31/192
A61K45/00 101
A61K31/7068
A61K33/243
A61K31/4745
A61K31/337
A61K31/282
A61K31/513
A61P35/02
【審査請求】有
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2022543427
(86)(22)【出願日】2021-01-14
(85)【翻訳文提出日】2022-09-12
(86)【国際出願番号】 CN2021071685
(87)【国際公開番号】W WO2021143754
(87)【国際公開日】2021-07-22
(31)【優先権主張番号】62/961,131
(32)【優先日】2020-01-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516308788
【氏名又は名称】長弘生物科技股▲ふん▼有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100109634
【弁理士】
【氏名又は名称】舛谷 威志
(74)【代理人】
【識別番号】100129263
【弁理士】
【氏名又は名称】中尾 洋之
(72)【発明者】
【氏名】邱 紫文
(72)【発明者】
【氏名】韓 鴻志
(72)【発明者】
【氏名】林 欣栄
(72)【発明者】
【氏名】李 睿豪
(72)【発明者】
【氏名】劉 人▲い▼
(72)【発明者】
【氏名】林 思吟
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084NA05
4C084NA06
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZC751
4C086BA02
4C086BA17
4C086BC43
4C086CB22
4C086EA17
4C086HA12
4C086HA24
4C086HA26
4C086HA28
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA06
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206DA17
4C206JB16
4C206KA01
4C206MA02
4C206MA04
4C206NA05
4C206NA06
4C206ZB26
4C206ZB27
4C206ZC75
(57)【要約】
第１の成分および第２の成分の組み合わせであって、前記第１の成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記第２の成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【選択図】 図３
【選択図】 図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗癌剤と組み合わせて、前記抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、前記抗癌剤の副作用を軽減し、前記抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために用いられる、医薬組成物の製造における有効成分の使用であって、前記有効成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記抗癌剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする有効成分の使用。
【請求項2】
癌を治療するための医薬組成物の製造における第１の活性成分および第２の活性成分の使用であって、前記第１の活性成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記第２の活性成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする第１の活性成分および第２の活性成分の使用。
【請求項3】
ＡがＣ１－６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１が存在しない、請求項１または２に記載の使用。
【請求項4】
Ａがカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１がＨである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項5】
ＡがＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項３に記載の使用。
【請求項6】
Ａが、カルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項４に記載の使用。
【請求項7】
前記薬学的に許容される塩が、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩のうちの少なくとも1つである、請求項４に記載の使用。
【請求項8】
前記抗癌剤が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項9】
前記第２の活性成分が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項10】
前記癌が、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、胆管癌、直腸癌、乳癌、多発性骨髄腫、婦人科腫瘍、脳癌、精巣癌、白血病、リンパ腫、胸膜中皮腫、胃癌、肝臓癌のうちの少なくとも１つである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項11】
第１の成分および第２の成分の組み合わせであって、前記第１の成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記第２の成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする第１の成分および第２の成分の組み合わせ。
【請求項12】
ＡがＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１が存在しない、請求項１１に記載の組み合わせ。
【請求項13】
Ａがカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１がＨである、請求項１１に記載の組み合わせ。
【請求項14】
ＡがＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項１２に記載の組み合わせ。
【請求項15】
Ａが、カルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項16】
前記薬学的に許容される塩が、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩のうちの少なくとも1つである、請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項17】
前記第２の成分が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の組み合わせ。
【請求項18】
前記組み合わせが、医薬組成物またはキットの形態である、請求項１１ないし１７のいずれか１項に記載の組み合わせ。
【請求項19】
癌を治療するために使用される、請求項１１ないし１７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項20】
請求項１１ないし１８のいずれか一項に記載の組み合わせを、必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法。
【請求項21】
前記癌が、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、胆管癌、直腸癌、乳癌、多発性骨髄腫、婦人科腫瘍、脳癌、精巣癌、白血病、リンパ腫、胸膜中皮腫、胃癌、肝臓癌のうちの少なくとも１つである、請求項２０に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は癌治療に関する。より具体的には、本発明は、癌治療のための抗癌剤と組み合わせて、特に抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減する、式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の使用に関する。
ここで、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成する。
【背景技術】
【0002】
医学では、腫瘍は細胞の異常な病変のことを指す。遺伝的に、さまざまな発癌因子の作用により、体内の局部組織の細胞が正常に増殖を制御できなくなり、細胞が異常に増殖して塊になる「腫瘍」が発生する。癌は悪性腫瘍とも呼ばれる。異常に増殖した癌細胞は、塊になるだけでなく、さらに拡散し、体内の他の組織や臓器に転移する。癌細胞の増殖と転移は、完全に治癒するのが難しい深刻な生理機能障害を引き起こすため、近年、癌は世界的な死亡原因のトップになっている。
【0003】
癌の治療に関して、現在の一般的な臨床療法は、手術、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法などを含み、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、および/または代謝拮抗剤を化学療法で使用して、急速に増殖する癌細胞を死滅させる。しかし、化学療法で使用される薬剤のほとんどは、正常な細胞にも影響を及ぼし、その増殖に影響を与え、吐き気、嘔吐、食欲不振、脱毛、疲労、出血、貧血、白血球減少など、癌患者に深刻な副作用を引き起こす。患者の生活の質に影響を与えるだけでなく、悪液質、感染症、または心不全を引き起こし、それによって死亡のリスクにつながる可能性がある。さらに、癌悪液質は包括的なメタボリック シンドロームであり、カロリー摂取量の減少、静的エネルギー消費の増加、およびタンパク質、脂肪、炭水化物の異常な代謝に関連している。癌悪液質は、体重減少、脱力感、食欲不振、疲労などを特徴とし、患者の食事摂取量や栄養摂取量を高めても継続的な体重減少は避けられない。
【0004】
癌細胞の免疫抑制も癌の発生と関連していることを示す研究がある。一部の癌細胞は、免疫細胞が活性化されないように、免疫細胞の免疫抑制を引き起こすために、その表面抗原（例えば、プログラム死－リガンド１、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）を介して免疫細胞に結合して、誘導する。前述のプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）や細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）などの癌細胞の表面抗原は、「免疫チェックポイント抗原」とも呼ばれる。また、一部の抗癌剤（ゲムシタビンなど）が腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の免疫抑制を引き起こし、それによって癌細胞が免疫系に抵抗することを示す研究もある。「ゲムシタビン治療は、マクロファージの浸潤、成長、および極性化をサポートすることにより、膵臓腫瘍の免疫抑制性微小環境を促進する」（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１８年８月１０日；８（１）：１－１０．）などを参照することができ、この内容は本明細書に組み込まれる。
【0005】
したがって、業界は依然として、癌を治療するための医薬品や治療法を研究することに力を注いでいる。癌細胞の抗癌剤に対する感受性を効果的に高めたり、抗癌剤の投与量を減らすことができれば、抗癌剤の副作用を軽減することができ、患者の負担を軽減し、悪液質の症状を軽減する。また、抗癌剤による免疫抑制を逆転させることができれば、抗癌剤の治療効果がさらに高まり、癌治療に有益となる。
【発明の概要】
【0006】
本発明の発明者らは、抗癌剤を単独で使用する場合と比較して、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその塩を抗癌剤と組み合わせて使用することにより、癌細胞の抗癌剤に対する感受性を高め、抗癌剤の投与量を効果的に減少させることができ、これにより、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、癌患者の悪液質の症状を軽減するという目的を達成することを見出した。
【0007】
したがって、本発明の目的は、抗癌剤と組み合わせて、抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために用いられる、医薬組成物の製造における有効成分の使用を提供することであり、有効成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ここで、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、抗癌剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0008】
本発明の別の目的は、癌を治療するための医薬組成物の製造における第１の活性成分および第２の活性成分の使用を提供することであり、第１の活性成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ここで、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、第２の活性成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0009】
本発明のさらに別の目的は、第１の成分および第２の成分を含む組み合わせを提供することであり、第１の成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ここで、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、第２の成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。好ましくは、組み合わせは、医薬組成物またはキットの形態である。本発明の組合せの実施形態によれば、組合せは癌の治療に使用するためのものである。
【0010】
本発明のさらに別の目的は、癌を治療するための方法を提供することであり、この方法は、上記の組み合わせを必要とする対象に投与することを含む。
【0011】
本発明の前記使用、組み合わせ、または方法において、式（Ｉ）の化合物に関して、Ａが好ましくはＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ａがより好ましくはＣ５アルキルまたはアルケニルであり、Ｒ１が存在しない、または、Ａが好ましくはカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ａがより好ましくはカルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニルであり、Ｒ１がＨである。
【0012】
本発明の前記使用、組み合わせ、または方法において、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩が含まれる場合に、薬学的に許容される塩は、好ましくは、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩の少なくとも１つである。
【0013】
本発明の前記使用、組合せ、または方法において、抗癌剤、第２の活性成分、および第２の成分は、好ましくは、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される。
【0014】
本発明の前述の使用、組合せまたは方法において、癌は、好ましくは、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、胆管癌、直腸癌、乳癌、多発性骨髄腫、婦人科腫瘍、脳癌、精巣癌、白血病、リンパ腫、胸膜中皮腫、胃癌、肝臓癌のうちの少なくとも１つである。
【図面の簡単な説明】
【0015】
【図1】図１は、異なる濃度の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドで処理したＰａｎｃ０２細胞におけるＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、およびＧＡＰＤＨタンパク質の発現をウェスタンブロッティングで解析した画像を示す。
【図2】図２は、「コントロール」群、「ＬＤ」群（低用量）、「ＨＤ」群（高用量）、「Ｇｅｍ」群（ゲムシタビン）、「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群、「ＴＳ－１」群、および「ＬＤ＋ＴＳ－１」群の結果を含む各群のマウスの膵臓腫瘍画像（点線で囲った部分が腫瘍を表す）を示し、係る画像は、Ｐａｎｃ０２細胞をマウスに注入してから１５日目に撮影した画像である。
【発明を実施するための形態】
【0016】
本発明の詳細な技術およびいくつかの実施形態は、当業者が本発明の特徴を理解できるように、以下に記載される。しかしながら、本発明の精神から逸脱することなく、本発明は様々な実施形態で具現化することができ、本明細書に記載された実施形態に限定されるべきではない。
【0017】
本明細書で別段の指示がない限り、明細書（特に特許請求の範囲）で引用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」などの表現は、単数形と複数形の両方を含むべきである。「対象」という用語は、ヒトおよびヒト以外の哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ）を指す。
【0018】
「応答率」の定義は、観察期間の任意の１つの期間内に治療に応答した患者の比率を指し、応答レベル（腫瘍サイズが縮小する程度）は、完全応答（腫瘍消失）と部分応答（腫瘍サイズが少なくとも５０％縮小する）とに分けることができる。例えば、「応答率４０％」の抗癌剤とは、薬剤が、薬剤で治療された４０％の患者に抗癌効果をもたらすことができ、抗癌効果には、腫瘍サイズを少なくとも５０％減少させ、腫瘍を完全に排除することさえ含まれることを意味する。
【0019】
一部の患者には、薬剤の反応率が低く、化学療法による細胞毒性/組織毒性が高いという問題を経験していることを示す臨床研究がある。
【0020】
本発明の発明者らは、抗癌剤を単独で使用する場合と比較して、本発明の化合物（すなわち、式（Ｉ）の化合物）またはその塩を抗癌剤と組み合わせて使用することにより、癌細胞の抗癌剤に対する感受性を高め、抗癌剤の投与量を効果的に減少させることができ、これにより、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、癌患者の悪液質の症状を軽減するという目的を達成することを見出した。
【0021】
したがって、本発明は、癌を治療するための式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の使用に関する。
ここで、Ａは任意にカルボニルを有するＣ１－Ｃ８脂肪族ヒドロカルビルであり、ＸはＨまたはＯＨであり、ＹはＯであり、Ｒ１はＨまたは存在しないが、Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成する。
【0022】
使用には以下が含まれる。
（ｉ）抗癌剤と組み合わせて、抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために用いられる、医薬組成物の製造における式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の使用
（ｉｉ）癌を治療するための医薬組成物の製造における、第１の活性成分としての式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩および第２の活性成分としての抗癌剤の使用
（ｉｉｉ）第１の成分としての式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩および第２の成分としての抗癌剤を含む組み合わせ
（ｉｖ）前記組み合わせを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法
（ｉ）抗癌剤と組み合わせて、抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために用いられる、医薬組成物の製造における式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の使用
（ｉｉ）癌を治療するための医薬組成物の製造における、第１の活性成分としての式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩および第２の活性成分としての抗癌剤の使用
（ｉｉｉ）第１の成分としての式（Ｉ）の化合物および／または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩および第２の成分としての抗癌剤を含む組み合わせ
（ｉｖ）前記組み合わせを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療するための方法
【0023】
本発明の使用において、式（Ｉ）の化合物に関して、Ａは好ましくはＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビル（より好ましくは、ＡはＣ５アルキルまたはアルケニル）であり、Ｒ１は存在しない。または、Ａは好ましくはカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビル（より好ましくは、Ａはカルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニル）であり、Ｒ１はＨである。例えば、本発明の使用のいくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸またはブチルフタリドである。
【0024】
本発明の使用において、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩が挙げられる。本発明の使用のいくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウムなどのナトリウム塩である。
【0025】
本発明の使用において、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、市販されているか、または本発明の分野で知られている合成方法によって調製することができる。
【0026】
本発明の使用に適した抗癌剤としては、例えば、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせが挙げられる。好ましくは、抗癌剤は、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、テガフール、ＴＳ－１（すなわち、５－ＦＵ、テガフールのプロドラッグを含む複合薬剤）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、アザチオプリン（すなわち、６－ＭＰのプロドラッグ）、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。本発明の使用のいくつかの実施形態では、抗癌剤は、イリノテカン、５－フルオロウラシル、ＴＳ－１、ゲムシタビン、シスプラチン、オキサリプラチン、およびパクリタキセルのうちの１つまたは複数である。
【0027】
本発明に従って提供される組み合わせは、医薬組成物またはキットであってもよい。本発明による組合せの実施形態では、組合せは癌治療に使用される。本発明による組み合わせがキットである場合、（１）第１の成分としての式（Ｉ）の化合物および／または薬学的に許容される塩、および（２）第２の成分としての抗癌剤が、個別に異なる容器（例えば、ビニール袋、ペットボトル、ガラス瓶、アンプル）に包装され、保存され、単独で、またはセットとして組み合わせて輸送または販売することができる。加えて、キットは、使用者がさらなる処理および適用のために現場で成分を混合するための手順およびプログラムを提供する取扱説明書をさらに含むことができる。
【0028】
本発明の使用において、癌としては、例えば、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌（非小細胞肺癌など）、膵臓癌、膀胱癌、胆管癌、直腸癌、乳癌、多発性骨髄腫、婦人科腫瘍（子宮頸癌、卵巣癌、子宮癌、外陰癌など）、脳癌（膠芽腫など）、精巣癌、白血病（急性骨髄性白血病など）、リンパ腫、胸膜中皮腫、胃癌、肝臓癌などが挙げられる。
【0029】
本発明に従って提供される医薬組成物またはキットの構成成分は、全身または局所的に投与することができ、様々な薬物送達システム（ＤＤＳ）によって送達することができ、適切な薬物送達システムには、経口薬物送達システム、経皮薬物送達システム、注射薬物送達システム、吸入薬物送達システム、および経粘膜薬物送達システムなどが含まれる。たとえば、生体利用効率（バイオアベイラビリティ）を高め、薬物放出速度を制御し、病変を正確に標的とし、副作用を軽減するために、本発明に従って提供される医薬組成物またはキットの構成成分は、リポソーム、マイクロカプセル、ナノ粒子、またはマイクロニードルによって送達することができるが、これらに限定されない。
【0030】
所望の目的に応じて、本発明による医薬組成物またはキットの構成成分は、特定の制限なしに任意の適切な形態で提供することができる。例えば、医薬組成物またはキットの構成成分は、経口投与、経皮投与（パッチ、軟膏など）、皮質脊髄路注射、髄腔内注射、脳内注射、静脈内注射（点滴、ボーラス注射を含む）、筋肉内注射、皮下注射、動脈内注射、腹腔内注射、皮下移植、間質注射埋め込み、経気道（例えば、スプレー、点鼻薬など）、経粘膜（例えば、口腔溶解錠など）によって必要とする対象に投与することができるが、これに限定されない。形態および目的に応じて、適切な担体を選択し、薬学的組成物またはキットの構成成分を提供するために使用することができ、賦形剤、希釈剤、助剤、安定剤、吸収促進剤、崩壊剤、ヒドロトロープ剤、乳化剤、酸化防止剤、接着剤、結合剤、粘着付与剤、分散剤、懸濁剤、滑沢剤、吸湿剤などを含む担体は、当該技術分野で公知であり、採用される。
【0031】
経口投与のための剤形として、医薬組成物またはキットの構成成分は、経口投与に適した形態で提供することができ、経口投与に適した液体形態としては、シロップ、内服液、懸濁液、エリキシルなどが挙げられ、経口投与に適した固体形態としては、散剤、顆粒剤、トローチ剤、糖衣錠、腸溶錠、チュアブル錠、発泡錠、フィルムコーティング錠、カプセル剤、長時間作用型徐放剤などが挙げられる。本発明に従って提供される薬学的組成物またはキットの構成成分は、抗癌剤および式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の少なくとも１つの所望の効果に悪影響を及ぼさない任意の薬学的に許容される担体を含むことができる。例えば、前述の液体形態の薬学的に許容される担体には、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールまたはその類似体、油（例えば、オリーブ油、ヒマシ油、綿実油、ピーナッツ油、コーン油、および胚芽油）、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。また、前述の固体形態の薬学的に許容される担体には、セルロース、デンプン、カオリナイト、ベントナイト、クエン酸ナトリウム、ゼラチン、寒天、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム、海藻ゲル、モノステアリン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウム、およびそれらの組み合わせが含まれる。
【0032】
経皮投与のための剤形として、本発明の医薬組成物またはキットの構成成分は、水、鉱油、プロピレングリコール、ポリエチレンオキシド、液体ペトロラタム、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０のような、抗癌剤、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩のうちの少なくとも１つの所望の効果に悪影響を及ぼさない薬学的に許容される担体を含むこともできる。医薬組成物またはキットの構成成分は、エマルジョン、クリーム、オイル、ゲル（ハイドロゲルなど）、ペースト（分散ペースト、軟膏など）、ローション、スプレー、パッチ（マイクロニードルパッチ）のような経皮投与に適した形態で、任意の適切な方法によって提供することができるが、これに限定されない。
【0033】
注射または点滴に適した形態に関しては、薬学的組成物またはキットの構成成分は、等張液、塩緩衝生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水またはクエン酸緩衝生理食塩水）、ヒドロトロープ剤、乳化剤、５％の砂糖溶液、および薬学的組成物またはキットの構成成分を静脈内注入、乳化静脈内注入、注射用粉末、注射用懸濁液、または注射用粉末懸濁液などとして提供するための他の担体等の１つまたは複数の成分を含むことができる。あるいは、医薬組成物またはキットの構成成分は、注射前の固体として調製することができ、所望の注射は、注射を必要とする対象に投与する前に、注射前の固形物を別の溶液または懸濁液に溶解するか、または乳化することによって提供される。
【0034】
皮下移植または間質移植に適した剤形として、本発明によって提供される薬学的組成物またはキットの構成成分は、ウエハース、錠剤、丸薬、カプセルなどの形態で調製されるように賦形剤、安定剤、緩衝剤、その他の担体などの１つまたは複数の成分をさらに含むことができ、その結果、医薬組成物またはキットの構成要素を対象に移植することができ、また、含まれる抗癌剤、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の少なくとも１つが、周囲の組織にゆっくりと連続的に放出されて、局所的に安定した高用量で癌細胞を殺す効果を達成することができる。例えば、本発明によって提供される薬学的組成物またはキットの構成要素は、生体適合性ポリマーを含み、皮下移植または介在用のウエハーの形態で薬学的組成物またはキットの構成要素を調製することができるが、それによって限定されるものではない。生体適合性ポリマーは、市販されているか、または本発明の分野で知られている合成方法によって調製することができる。例えば、生体適合性ポリマーは、ビス（ｐ－カルボキシルフェノキシ）プロパンおよびセバシン酸から調製されるｐ（ＣＰＰ－ＳＡ）コポリマーなどのポリ無水物であり得る。
【0035】
経気道投与用の医薬組成物またはキットの構成要素に関して、薬学的組成物またはキットの構成要素は、気道への薬学的組成物またはキットの成分の侵入を促進するために、任意の適切なアプローチによって任意にエアロゾル化することができる。例えば、薬学的組成物またはキットの構成要素は、ネブライザーまたは加圧容器（例えば、鼻スプレー）を通して投与することができるが、これに限定されない。あるいは、キットの医薬組成物または成分は、点鼻薬として調製することができる。
【0036】
経粘膜投与用の医薬組成物またはキットの構成要素に関しては、本発明によって提供される医薬組成物またはキットの構成要素は、浸透剤、界面活性剤、粘度調整剤、pH調整剤、防腐剤、安定剤、浸透圧調節剤およびその他の担体などの１つまたは複数の成分を含むことができ、点眼薬、眼軟膏、口腔溶解錠、座薬、点鼻薬、点鼻薬などの形態で、医薬組成物またはキットの構成要素を提供することができる。
【0037】
また、場合によっては、本発明に従って提供される医薬組成物またはキットの構成要素は、適切な量の、医薬組成物またはキットの嗜好性および視覚を向上させるためのトナーおよび／または着色剤、ならびに緩衝剤、保存剤、防腐剤、抗菌剤および／または医薬組成物またはキットの安定性および保存性を改善するため抗真菌剤などの添加剤をさらに含むことができる。
【0038】
本発明に従って提供されるキットの医薬組成物または成分は、他の有効成分が、本発明の医薬組成物またはキットに含まれる抗癌剤および／または式（Ｉ）の化合物、および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の所望の効果に悪影響を及ぼさない限り、組成物またはキットの効果をさらに高めるため、または提供される製剤の適用の柔軟性および適応性を高めるため、場合により、１つまたは複数の他の有効成分を含むことができる。
【0039】
本発明に従って提供される医薬品組成には、組成物の総重量に基づいて、０．０００１、０．０００２、０．０００３、０．０００４、０．０００５、０．００１、０．００１５、０．００２、０．００２５、０．００３、０．００３５、０．００４、０．００４５、０．００５、０．００５５、０．００６、０．００６５、０．００７、０．００６５、０．００７、０．００７５、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ｗｔ％の式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の少なくとも１つを含むことができ、有用な範囲は、これらの値の任意の２つから選択することができ、例えば、約０．０００１ｗｔ％～約９０ｗｔ％、約０．００１ｗｔ％～約２５ｗｔ％、約０．０１ｗｔ％～約１０ｗｔ％、約０．０１ｗｔ％～約５重量％、約０．０５重量％～約１重量％、および約０．０５重量％～約０．５重量％である。
【0040】
対象の必要性、年齢、体重、および健康状態、ならびに適用の目的に応じて、本発明に従って提供される医薬組成物またはキットは、１日に１回、１日に複数回、または数日に１回など、様々な頻度で服用することができる。本発明に従って提供される医薬組成物またはキット中の抗癌剤および／または式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の少なくとも１つの量は、例えば、実際の用途の必要性に応じて、毎日摂取または外用する量に調整することができる。
【0041】
本発明によって提供される方法において、医薬組成物またはキットの投与経路、投与頻度、および投与量の範囲は、すべて上記の説明に沿っている。
【0042】
本発明は、以下の特定の実施例を用いてさらに詳細に説明される。しかしながら、以下の実施例は、本発明を説明するためだけに提供され、本発明の範囲はそれによって限定されない。本発明の範囲は、特許請求の範囲によって示される。
【実施例】
【0043】
以下の調製例において、使用した材料および装置は以下のとおりである。
１．ヒト膵臓癌細胞株：Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ウェブサイト：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｃｒｃ．ｆｉｒｄｉ．ｏｒｇ．ｔｗ／ｗｗｗｂｃｒｃ／ｉｎｄｅｘ．ｄｏ）から購入，ＢＣＲＣ６０３１９）、ＰＡＮＣ－１細胞（生物資源収集研究センターから購入，ＢＣＲＣ６０４９４）、ＡｓＰＣ－１細胞（生物資源収集研究センターから購入，ＢＣＲＣ６０４９４）。
２．マウス膵臓癌細胞株：Ｐａｎｃ０２細胞（Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供）。
３．肺癌細胞株：Ａ５４９細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６００７４）。
４．脳腫瘍細胞株：ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞（生物資源収集研究センターより購入，ＢＣＲＣ６０３８０）。
５．結腸直腸癌細胞株：ＨＴ－２９細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６７００３）。
６．肝癌細胞株：ＨｅｐＧ２（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６０１７７）。
７．Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞の細胞培地：Ｌ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入）、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ；Ｇｉｂｃｏから購入，製品番号：１９３９７６０）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ；Ｓｉｍｐｌｙから購入，製品番号：ＣＣ５０２－０１００）、および２．３％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏから購入，製品番号：１６０５０１２２）。
８．ＰＡＮＣ－１細胞の細胞培地：１０％牛胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ－ＨＧ培地。
９．ＡｓＰＣ－１細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓより購入，製品番号：１９４５４９）、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＨｙＣｌｏｎｅより購入）。
１０．Ｐａｎｃ０２細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１１．Ａ５４９細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地。
１２．ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１３．ＨＴ－２９細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１４．ＨｅｐＧ２の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地。
１５．（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド（Ｚ－ＢＰ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．８％。
１６．（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド（Ｅ－ＢＰ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９８．０１％。
１７．２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．６％。
１８．２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．７％。
１９．ブチルフタリド：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度≧９７％。
２０．ゲムシタビン（ＧＥＭ）：ＡＰＥＸＢｉｏから購入，品番：Ａ８４３７。
２１．５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：Ｆ６６２７。
２２．イリノテカン（ＣＰＴ－１１）：Ｓｉｇｍａから購入。品番：Ｉ１４０６。
２３．シスプラチン（ＣＤＤＰ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：Ｃ２２１００００。
２４．オキサリプラチン（ＯＸＡ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：６１８２５－９４－３。
２５．パクリタキセル（ＰＴＸ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：３３０６９－６２－４。
２６．ＴＳ－１：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供
２７．ＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド、３－［４，５－ジメチルチアチアゾール－２－イル］－２，４－ジフェニル－テトラゾリウムブロミド）：ＡＬＦＡ ＡｅｓａｒＴＭから購入，品番：Ｌ１１９３９－００００００－１６ＡＦ。
２８．ＥＬＩＳＡリーダー：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入，型番：２２６６２。
２９．Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（体重：１８～２２ｇ）：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ、台北、台湾から購入。
３０．ウェスタンブロッティング用抗体：抗Ａｋｔ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙより購入、製品番号：＃９２７２），ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入，製品番号：＃９２７１）、抗ＣＤ４４抗体（Ａｂｃａｍから購入，製品番号：＃ａｂ２４５０４）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ａｂｃａｍから購入，製品番号：＃ａｂ２３８６９７）、抗ＰＤ－１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄより購入，品番：＃３６７４０２）、抗ＧＡＰＤＨ抗体（Ｇｅｎｅｔｅｘから購入，品番：ＧＴＸ１００１１８）。
１．ヒト膵臓癌細胞株：Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（ウェブサイト：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｃｒｃ．ｆｉｒｄｉ．ｏｒｇ．ｔｗ／ｗｗｗｂｃｒｃ／ｉｎｄｅｘ．ｄｏ）から購入，ＢＣＲＣ６０３１９）、ＰＡＮＣ－１細胞（生物資源収集研究センターから購入，ＢＣＲＣ６０４９４）、ＡｓＰＣ－１細胞（生物資源収集研究センターから購入，ＢＣＲＣ６０４９４）。
２．マウス膵臓癌細胞株：Ｐａｎｃ０２細胞（Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供）。
３．肺癌細胞株：Ａ５４９細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６００７４）。
４．脳腫瘍細胞株：ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞（生物資源収集研究センターより購入，ＢＣＲＣ６０３８０）。
５．結腸直腸癌細胞株：ＨＴ－２９細胞（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６７００３）。
６．肝癌細胞株：ＨｅｐＧ２（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒから購入，ＢＣＲＣ６０１７７）。
７．Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞の細胞培地：Ｌ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入）、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ；Ｇｉｂｃｏから購入，製品番号：１９３９７６０）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ；Ｓｉｍｐｌｙから購入，製品番号：ＣＣ５０２－０１００）、および２．３％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏから購入，製品番号：１６０５０１２２）。
８．ＰＡＮＣ－１細胞の細胞培地：１０％牛胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ－ＨＧ培地。
９．ＡｓＰＣ－１細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓより購入，製品番号：１９４５４９）、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＨｙＣｌｏｎｅより購入）。
１０．Ｐａｎｃ０２細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１１．Ａ５４９細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地。
１２．ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１３．ＨＴ－２９細胞の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地。
１４．ＨｅｐＧ２の細胞培地：１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地。
１５．（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド（Ｚ－ＢＰ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．８％。
１６．（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド（Ｅ－ＢＰ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９８．０１％。
１７．２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．６％。
１８．２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度９９．７％。
１９．ブチルフタリド：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供，純度≧９７％。
２０．ゲムシタビン（ＧＥＭ）：ＡＰＥＸＢｉｏから購入，品番：Ａ８４３７。
２１．５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：Ｆ６６２７。
２２．イリノテカン（ＣＰＴ－１１）：Ｓｉｇｍａから購入。品番：Ｉ１４０６。
２３．シスプラチン（ＣＤＤＰ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：Ｃ２２１００００。
２４．オキサリプラチン（ＯＸＡ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：６１８２５－９４－３。
２５．パクリタキセル（ＰＴＸ）：Ｓｉｇｍａから購入，品番：３３０６９－６２－４。
２６．ＴＳ－１：Ｅｖｅｒｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．提供
２７．ＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド、３－［４，５－ジメチルチアチアゾール－２－イル］－２，４－ジフェニル－テトラゾリウムブロミド）：ＡＬＦＡ ＡｅｓａｒＴＭから購入，品番：Ｌ１１９３９－００００００－１６ＡＦ。
２８．ＥＬＩＳＡリーダー：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入，型番：２２６６２。
２９．Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（体重：１８～２２ｇ）：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ、台北、台湾から購入。
３０．ウェスタンブロッティング用抗体：抗Ａｋｔ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙより購入、製品番号：＃９２７２），ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏ－Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入，製品番号：＃９２７１）、抗ＣＤ４４抗体（Ａｂｃａｍから購入，製品番号：＃ａｂ２４５０４）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ａｂｃａｍから購入，製品番号：＃ａｂ２３８６９７）、抗ＰＤ－１抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄより購入，品番：＃３６７４０２）、抗ＧＡＰＤＨ抗体（Ｇｅｎｅｔｅｘから購入，品番：ＧＴＸ１００１１８）。
【0044】
実施例１：癌細胞の死滅に対する本発明の化合物および異なる抗癌剤の効果
本実施例では、癌細胞の死滅に対する本発明の化合物および異なる抗癌剤の効果を、ＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド、３－［４，５－ジメチルチアヒアゾール－２－イル］－２，４－ジフェニル－テトラゾリウムブロミド）の細胞生存率分析によって検討した。
本実施例では、癌細胞の死滅に対する本発明の化合物および異なる抗癌剤の効果を、ＭＴＴ（チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド、３－［４，５－ジメチルチアヒアゾール－２－イル］－２，４－ジフェニル－テトラゾリウムブロミド）の細胞生存率分析によって検討した。
【0045】
１－１．膵臓癌細胞の死滅に対する本発明の化合物および異なる抗癌剤の効果
膵臓癌細胞株、ＰＡＮＣ－１細胞、Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞、ＡｓＰＣ－１細胞、およびＰａｎｃ０２細胞を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、上記各細胞株を、ゲムシタビン、シスプラチン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、パクリタキセル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム、ブチルフタリドを含有する細胞培地で、それぞれ２４時間、４８時間、７２時間培養した。次に、ＭＴＴを９６ウェルプレートの各ウェルに独立して添加し（各ウェルの細胞培地中のＭＴＴの最終濃度は０．５ｍｇ／ｍｌであった。）、９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターで１．５時間培養した。細胞培地を除去した後、１００μＬのジメチルスルホキシドを添加し、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、膵臓癌細胞株のそれぞれにおいてゲムシタビン、シスプラチン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、パクリタキセル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウムおよびブチルフタリドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。その結果を表１に示す。
膵臓癌細胞株、ＰＡＮＣ－１細胞、Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞、ＡｓＰＣ－１細胞、およびＰａｎｃ０２細胞を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、上記各細胞株を、ゲムシタビン、シスプラチン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、パクリタキセル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム、ブチルフタリドを含有する細胞培地で、それぞれ２４時間、４８時間、７２時間培養した。次に、ＭＴＴを９６ウェルプレートの各ウェルに独立して添加し（各ウェルの細胞培地中のＭＴＴの最終濃度は０．５ｍｇ／ｍｌであった。）、９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターで１．５時間培養した。細胞培地を除去した後、１００μＬのジメチルスルホキシドを添加し、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、膵臓癌細胞株のそれぞれにおいてゲムシタビン、シスプラチン、５－フルオロウラシル、イリノテカン、オキサリプラチン、パクリタキセル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウムおよびブチルフタリドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。その結果を表１に示す。
【0046】
１－２．本発明の化合物および５－フルオロウラシルの癌細胞死滅効果
肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、結腸直腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳癌細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、上記各細胞株を、５－フルオロウラシル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸を含有する細胞培地で、２４時間、４８時間、７２時間培養した。次に、ＭＴＴを９６ウェルプレートの各ウェルに独立して添加し（０．５ｍｇ／ｍｌ）、９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターで１．５時間培養した。細胞培地を除去した後、１００μＬのジメチルスルホキシドを添加し、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、膵臓癌細胞株のそれぞれにおいて５－フルオロウラシル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。その結果を表２に示す。
肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、結腸直腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳癌細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、上記各細胞株を、５－フルオロウラシル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸を含有する細胞培地で、２４時間、４８時間、７２時間培養した。次に、ＭＴＴを９６ウェルプレートの各ウェルに独立して添加し（０．５ｍｇ／ｍｌ）、９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターで１．５時間培養した。細胞培地を除去した後、１００μＬのジメチルスルホキシドを添加し、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、膵臓癌細胞株のそれぞれにおいて５－フルオロウラシル、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリド、２－ペンタノイル安息香酸の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。その結果を表２に示す。
【0047】
実施例２：本発明の化合物と抗がん剤との併用効果
【0048】
２－１．（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドおよび５－フルオロウラシル
膵臓癌細胞株（ＰＡＮＣ－１細胞、Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞、ＡｓＰＣ－１細胞）、肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、大腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳腫瘍細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドと５－フルオロウラシルとの両方を各細胞株の細胞培地に同時に添加した。３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに９６ウェルプレートを１．５時間載置した後、細胞培地を除去し、１００μＬのジメチルスルホキシドを加えた。次に、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、上記プロセスに対する各癌細胞株の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。最後に、組み合わせ指数（ＣＩ）を式Ａによって計算した。その結果を表３に示す。
膵臓癌細胞株（ＰＡＮＣ－１細胞、Ｍｉａ－ＰａＣａ２細胞、ＡｓＰＣ－１細胞）、肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、大腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳腫瘍細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を９６ウェルプレート（１×１０４細胞／ウェル，９６ウェルプレートを３７°Ｃ、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに播種）の各ウェルで２４時間培養した。その後、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドと５－フルオロウラシルとの両方を各細胞株の細胞培地に同時に添加した。３７℃、５％ＣＯ２に保たれたインキュベーターに９６ウェルプレートを１．５時間載置した後、細胞培地を除去し、１００μＬのジメチルスルホキシドを加えた。次に、その５９５ｎｍにおける吸光度をＥＬＩＳＡリーダーで測定することにより、細胞生存率を計算し、上記プロセスに対する各癌細胞株の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。最後に、組み合わせ指数（ＣＩ）を式Ａによって計算した。その結果を表３に示す。
【0049】
【0050】
（Ｄ）１、（Ｄ）２は独立して、薬剤１と薬剤２を併用した場合のＩＣ５０を表し、（Ｄｘ）１、（Ｄｘ）２は独立して、上記２つの薬剤を単独で使用した場合のＩＣ５０を表す。組み合わせ指数（ＣＩ）が１未満である場合、２つの薬剤を組み合わせて使用することは相乗効果を有すると考えられる。
【0051】
【0052】
表３の結果は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを５－フルオロウラシルと併用して癌細胞を死滅させる全てのＣＩ値が１未満であり、したがって相乗効果をもたらすことができることを示している。
【0053】
２－２．（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドおよびその他の抗癌剤
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドと他の抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表４に示す。
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドと他の抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表４に示す。
【0054】
【0055】
表４の結果は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを他の抗癌剤と併用して膵臓癌細胞を死滅させるＣＩ値が１未満であり、したがって相乗効果をもたらすことができることを示している。
【0056】
２－３．（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリドおよび抗癌剤
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリドとオキサリプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、５－フルオロウラシルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表５～表７に示す。
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリドとオキサリプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、５－フルオロウラシルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表５～表７に示す。
【0057】
【0058】
【0059】
【0060】
表５～表７の結果は、（Ｅ）－ｎ－ブチリデンフタリドを抗癌剤と併用して膵臓癌細胞を死滅させるＣＩ値が１未満であり、したがって相乗効果をもたらすことができることを示している。
【0061】
２－４．２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）および抗癌剤
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞（ＰＡＮＣ－１、Ｍｉａ－ＰａＣａ２、ＡｓＰＣ－１、Ｐａｎｃ０２）、肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、結腸直腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳癌細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）と５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、各癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表８～表１１に示す。
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞（ＰＡＮＣ－１、Ｍｉａ－ＰａＣａ２、ＡｓＰＣ－１、Ｐａｎｃ０２）、肺癌細胞株（Ａ５４９細胞）、肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２細胞）、結腸直腸癌細胞株（ＨＴ－２９細胞）、および脳癌細胞株（ＤＢＴＲＧ－０５ＭＧ細胞）を２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）と５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、各癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表８～表１１に示す。
【0062】
【0063】
【0064】
【0065】
【0066】
表８～表１１の結果は、２－ペンタノイル安息香酸（ＢＰ－ＯＨ）を抗癌剤と併用して癌細胞を死滅させるＣＩ値が１未満であり、したがって相乗効果をもたらすことができることを示している。
【0067】
２－４．２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）および抗癌剤
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）とオキサリプラチン、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、パクリタキセルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表１２～表１４に示す。
実施例２－１の方法に従って、膵臓癌細胞を２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）とオキサリプラチン、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、パクリタキセルなどの抗癌剤とを併用して処理し、実験データを計算して、膵臓癌細胞を死滅させるための上記併用時のＣＩ値を求めた。その結果を表１２～表１４に示す。
【0068】
【0069】
【0070】
【0071】
表１２～表１４の結果は、２－ペンタノイル安息香酸ナトリウム（ＢＰＯＮａ）を抗癌剤と併用して膵臓癌細胞を死滅させるＣＩ値が１未満であり、したがって相乗効果をもたらすことができることを示している。
【0072】
これらの実施例の結果から分かるように、抗癌剤を単独で使用する場合と比較して、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその塩を抗癌剤と組み合わせて使用することにより、抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、抗癌剤の投与量を効果的に減少させることができ、これにより、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、癌患者の悪液質の症状を軽減するという目的を達成する。
【0073】
実施例３：ＣＤ４４およびＰＤ－Ｌ１の発現低下に対する本発明の化合物の効果
癌細胞表面のプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）が免疫細胞表面のプログラム死－１（ＰＤ－１）と結合し、免疫細胞を死滅させることが知られている。さらに、ＣＤ４４およびＣＤ４４ＩＣＤはＰＤ－Ｌ１の発現を高めることができ、ＣＤ４４のダウンレギュレーションは癌細胞の増殖を阻害することができる。ＣＤ４４がＰＤ－Ｌ１発現を促進し、乳癌および肺癌においてその腫瘍固有の機能を促進すること（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０２０年２月１日；８０（３）：４４４－４５７）などを参照することができ、その内容は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。
癌細胞表面のプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）が免疫細胞表面のプログラム死－１（ＰＤ－１）と結合し、免疫細胞を死滅させることが知られている。さらに、ＣＤ４４およびＣＤ４４ＩＣＤはＰＤ－Ｌ１の発現を高めることができ、ＣＤ４４のダウンレギュレーションは癌細胞の増殖を阻害することができる。ＣＤ４４がＰＤ－Ｌ１発現を促進し、乳癌および肺癌においてその腫瘍固有の機能を促進すること（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０２０年２月１日；８０（３）：４４４－４５７）などを参照することができ、その内容は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【0074】
Ｐａｎｃ０２細胞（膵臓癌細胞株）をそれぞれ３７．５および７５μｇ／ｍｌの（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドで６時間培養した（３時間培養後に細胞の一部を回収した）。その後、細胞のタンパク質を抽出し、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドで処理した癌細胞におけるＣＤ４４細胞内ドメイン（ＣＤ４４ＩＣＤ）タンパク質とＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現をウェスタンブロッティングにより測定した。さらに、内部コントロール（対照）としてＧＡＰＤＨタンパク質の発現を測定した。その結果を図１に示す。
【0075】
図１から、Ｐａｎｃ０２細胞におけるＣＤ４４ＩＣＤタンパク質およびＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドの濃度が増加するにつれていずれも減少し、ＣＤ４４ＩＣＤタンパク質は６時間で完全に阻害されたことが分かる。前述の結果は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドが癌細胞の増殖を阻害することに加えて、癌細胞のＣＤ４４ＩＣＤタンパク質を阻害するのにさらに効果的であり、それによって免疫チェックポイント抗原の発現を阻害する効果を達成することを示している。したがって、癌細胞と免疫細胞の結合を遮断することができ、抗癌剤によって誘発される免疫抑制を逆転させることができる。
【0076】
実施例４：癌を治療するための抗癌剤と組み合わせた本発明の化合物の使用
４－１．動物モデルの確立
東華大学の施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）の要求に従って、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは東華大学の実験動物センターで８～１ 週齢まで飼育された。次に、Ｌｕｃ－ｅＧＦＰによってトランスフェクトされた安定に構築されたＰａｎｃ０２細胞を、同所的にマウスの膵臓に注入した（１×１０６細胞／０．０２ｍｌ／マウス）。その後、マウスの膵臓の腫瘍サイズを動物のイメージング結果から分析し、マウスを腫瘍サイズに応じて９つの群に均等に分け、次の条件で３～４週間治療した。
４－１．動物モデルの確立
東華大学の施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）の要求に従って、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは東華大学の実験動物センターで８～１ 週齢まで飼育された。次に、Ｌｕｃ－ｅＧＦＰによってトランスフェクトされた安定に構築されたＰａｎｃ０２細胞を、同所的にマウスの膵臓に注入した（１×１０６細胞／０．０２ｍｌ／マウス）。その後、マウスの膵臓の腫瘍サイズを動物のイメージング結果から分析し、マウスを腫瘍サイズに応じて９つの群に均等に分け、次の条件で３～４週間治療した。
【0077】
（１）「コントロール（Ｃｔｌ．）」群（マウス５匹）：無処置、ビヒクル（本発明の化合物および他の抗癌剤を含まない）を毎日経口投与のみ。
（２）「ＬＤ」群（マウス５匹）：低用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ体重）の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを毎日経口投与。
（３）「ＨＤ」群（マウス５匹）：高用量（２５ｍｇ／ｋｇ体重）の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを毎日経口投与。
（４）「Ｇｅｍ」群（マウス５匹）：１００ｍｇ／ｋｇ体重のゲムシタビン（ＧＥＭ）を３日毎に腹腔内注射。
（５）「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群（マウス５匹）：１２．５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与、および５０ｍｇ／ｋｇ体重のゲムシタビン（ＧＥＭ）を３日毎に腹腔内注射。
（６）「ＴＳ－１」群（マウス５匹）：１００ｍｇ／ｋｇ体重のＴＳ－１を５日間連日経口投与後、２日間ＴＳ－１の経口投与を中止。
（７）「ＬＤ＋ＴＳ－１」群（マウス２匹）：１２．５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与後、５０ｍｇ／ｋｇ体重のＴＳ－１を１日１回経口投与後、ＴＳ－１の経口投与を２日間中止。
（８）「シスプラチン」群（マウス３匹）：２．５ｍｇ／ｋｇ体重のシスプラチンを７日間腹腔内注射。
（９）「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群（マウス３匹）：６．２５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与し、１．２５ｍｇ／ｋｇ体重のシスプラチンを７日間腹腔内注射。
（２）「ＬＤ」群（マウス５匹）：低用量（１２．５ｍｇ／ｋｇ体重）の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを毎日経口投与。
（３）「ＨＤ」群（マウス５匹）：高用量（２５ｍｇ／ｋｇ体重）の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを毎日経口投与。
（４）「Ｇｅｍ」群（マウス５匹）：１００ｍｇ／ｋｇ体重のゲムシタビン（ＧＥＭ）を３日毎に腹腔内注射。
（５）「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群（マウス５匹）：１２．５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与、および５０ｍｇ／ｋｇ体重のゲムシタビン（ＧＥＭ）を３日毎に腹腔内注射。
（６）「ＴＳ－１」群（マウス５匹）：１００ｍｇ／ｋｇ体重のＴＳ－１を５日間連日経口投与後、２日間ＴＳ－１の経口投与を中止。
（７）「ＬＤ＋ＴＳ－１」群（マウス２匹）：１２．５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与後、５０ｍｇ／ｋｇ体重のＴＳ－１を１日１回経口投与後、ＴＳ－１の経口投与を２日間中止。
（８）「シスプラチン」群（マウス３匹）：２．５ｍｇ／ｋｇ体重のシスプラチンを７日間腹腔内注射。
（９）「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群（マウス３匹）：６．２５ｍｇ／ｋｇ体重の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドを連日経口投与し、１．２５ｍｇ／ｋｇ体重のシスプラチンを７日間腹腔内注射。
【0078】
４－２．腫瘍の大きさの観察（Ｔ２強調ＭＲＩ）
Ｌｕｃ－ｅＧＦＰによってトランスフェクトされた安定に構築されたＰａｎｃ０２細胞を、実施例４－１の各群のマウスに同所注射し、ｉｎ－ｓｉｔｕでの膵臓腫瘍の増殖を測定した後、薬物治療を１４日間（すなわち、１５日目）行った。この期間中、各郡のマウスの膵臓腫瘍を分析し、Ｔ２強調ＭＲＩで観察し、記録のために写真を撮った。その結果を図２に示す。また、図２の各群のマウスの腫瘍（点線で囲った部分）の大きさをアミドソフトで解析した。その結果を図３に示す。
Ｌｕｃ－ｅＧＦＰによってトランスフェクトされた安定に構築されたＰａｎｃ０２細胞を、実施例４－１の各群のマウスに同所注射し、ｉｎ－ｓｉｔｕでの膵臓腫瘍の増殖を測定した後、薬物治療を１４日間（すなわち、１５日目）行った。この期間中、各郡のマウスの膵臓腫瘍を分析し、Ｔ２強調ＭＲＩで観察し、記録のために写真を撮った。その結果を図２に示す。また、図２の各群のマウスの腫瘍（点線で囲った部分）の大きさをアミドソフトで解析した。その結果を図３に示す。
【0079】
ゲムシタビン（ＧＥＭ）およびＴＳ－１は、臨床において癌を治療するための薬剤である。しかし、図３に示すように、「Ｇｅｍ」群と「ＴＳ－１」群のマウスの腫瘍サイズは、無処置の「コントロール」群（「Ｃｔｌ．」群とも呼ばれる）よりも大きい。以上の結果から、ゲムシタビン（ＧＥＭ）およびＴＳ－１が腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫抑制を誘導し、それによって免疫系に対する癌細胞の薬剤耐性を引き起こすことが分かる。
【0080】
図３は、「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群の腫瘍サイズが「Ｇｅｍ」群の腫瘍サイズよりも有意に小さく、「ＬＤ＋ＴＳ－１」群の腫瘍サイズが「ＴＳ－１」群の腫瘍サイズよりも有意に小さいことも示している。以上の結果から、本発明の化合物またはその塩を抗癌剤と併用することにより、抗癌剤による免疫抑制を効果的に逆転させ、腫瘍増殖をより効果的に阻害できることがわかる。
【0081】
４－３．腫瘍の大きさの観察（ＩＶＩＳイメージングシステム）
実施例４－１の各群のマウスに、安定に構築されたＬｕｃ－ｅＧＦＰを導入したＰａｎｃ０２細胞を同所注射して１日目、１５日目、２２日目に、「シスプラチン」群および「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群のマウスの腫瘍サイズが、ＩＶＩＳイメージングシステムによって検出された（光量子束（Ｐｈｏｔｏｎ Ｆｌｕｘ）の測定により検出、単位：ｐｈ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）。その結果を図４に示す。
実施例４－１の各群のマウスに、安定に構築されたＬｕｃ－ｅＧＦＰを導入したＰａｎｃ０２細胞を同所注射して１日目、１５日目、２２日目に、「シスプラチン」群および「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群のマウスの腫瘍サイズが、ＩＶＩＳイメージングシステムによって検出された（光量子束（Ｐｈｏｔｏｎ Ｆｌｕｘ）の測定により検出、単位：ｐｈ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ）。その結果を図４に示す。
【0082】
図４から、「シスプラチン」群と比較して、２２日目の「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群から得られた光量子束が有意に低いことが分かる。つまり、「Ｚ－ＢＰ＋シスプラチン」群の腫瘍サイズは、「シスプラチン」群よりも有意に小さくなっている。上記の結果はまた、本発明の化合物またはその塩を抗癌剤と併用することにより、抗癌剤の腫瘍増殖抑制効果を有効に増強できることを示している。
【0083】
【0084】
表１５および図５Ａ～図５Ｄから、「ＬＤ」群のマウスの生存日数は、「コントロール」群（「Ｃｔｌ」群とも呼ばれる）および「ＴＳ－１」群よりも長いことが分かる。また、「ＬＤ」群と「Ｇｅｍ」群のマウスの生存日数は「コントロール」群の１．８倍であり、「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群のマウスの生存日数は、「コントロール」群の２．１倍である。
【0085】
４－５．タンパク質発現の観察
実施例４－２～４－３の観察を行った後、各群のマウスを殺処分し、その膵臓腫瘍組織を採取してタンパク質を抽出した。次に、各群のタンパク質試料中のＣＤ４４タンパク質、ＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ｐ－Ａｋｔタンパク質、およびＡｋｔタンパク質の発現をウェスタンブロッティングにより検出した。さらに、ＧＡＰＤＨタンパク質の発現は、内部コントロールとして機能する。その結果を図６に示す。
実施例４－２～４－３の観察を行った後、各群のマウスを殺処分し、その膵臓腫瘍組織を採取してタンパク質を抽出した。次に、各群のタンパク質試料中のＣＤ４４タンパク質、ＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ｐ－Ａｋｔタンパク質、およびＡｋｔタンパク質の発現をウェスタンブロッティングにより検出した。さらに、ＧＡＰＤＨタンパク質の発現は、内部コントロールとして機能する。その結果を図６に示す。
【0086】
図６から、「Ｇｅｍ」群および「ＴＳ－１」群のマウスにおけるＰＤ－１タンパク質およびＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現は、未処理の「コントロール」群（「Ｃｔｌ」群とも呼ばれる）よりも多いことがわかる。上記の結果は、ゲムシタビン（ＧＥＭ）およびＴＳ－１が腫瘍微小環境（ＴＭＥ）で免疫抑制を誘発し、それによって免疫系に対する癌細胞の薬剤耐性を引き起こすことも示している。
【0087】
図６はまた、「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群のＣＤ４４タンパク質、ＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－１タンパク質、およびＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現が「Ｇｅｍ」群の発現よりも有意に少なく、また、「ＬＤ＋ＴＳ－１」群のＣＤ４４タンパク質、ＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－１タンパク質、およびＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現が「ＴＳ－１」群の発現よりも有意に少ないことを示している。上記の結果は、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドが癌細胞におけるＣＤ４４タンパク質およびＣＤ４４ＩＣＤタンパク質の発現を阻害し、さらにＰＤ－１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質などの免疫チェックポイント抗原の発現を阻害するのに有効であることを示している。したがって、（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドは、癌細胞と免疫細胞の結合をブロックすることができ、それによって抗癌剤によって誘発される免疫抑制を逆転させることができる。上記の結果はまた、本発明の化合物またはその塩を抗癌剤と組み合わせて使用することにより、抗癌剤によって誘導された免疫抑制を効果的に逆転させることができること、および、抗がん剤の治療効果を高めるのに有益である可能性があることを示している。
【0088】
さらに、図６から、ＰＤ－Ｌ１タンパク質のダウンレギュレーションに応じて、ｐ－Ａｋｔタンパク質（すなわち、活性化Ａｋｔタンパク質）の発現が減少することも分かる。上記の結果は、ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路が阻害されたことを証明することができる。
【0089】
本実施例の動物実験に見られるように、本発明の化合物またはその塩を抗がん剤と併用することにより、動物体内で抗がん剤に対するがん細胞の感受性を高め、投与量を効果的に低減することができ、これにより、抗癌剤の副作用を軽減し、抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、癌患者の悪液質の症状を軽減するという目的を達成する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2022-09-12
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0004】
癌細胞の免疫抑制も癌の発生と関連していることを示す研究がある。一部の癌細胞は、免疫細胞が活性化されないように、免疫細胞の免疫抑制を引き起こすために、その表面抗原（例えば、プログラム死－リガンド１）を介して免疫細胞に結合して、誘導する。前述のプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）などの癌細胞の表面抗原は、「免疫チェックポイント抗原」とも呼ばれる。また、一部の抗癌剤（ゲムシタビンなど）が腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の免疫抑制を引き起こし、それによって癌細胞が免疫系に抵抗することを示す研究もある。「ゲムシタビン治療は、マクロファージの浸潤、成長、および極性化をサポートすることにより、膵臓腫瘍の免疫抑制性微小環境を促進する」（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１８年８月１０日；８（１）：１－１０．）などを参照することができ、この内容は本明細書に組み込まれる。。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0015】
【図1】図１は、異なる濃度の（Ｚ）－ｎ－ブチリデンフタリドで処理したＰａｎｃ０２細胞におけるＣＤ４４ＩＣＤタンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、およびＧＡＰＤＨタンパク質の発現をウェスタンブロッティングで解析した画像を示す。
【図2】図２は、「コントロール」群、「ＬＤ」群（低用量）、「ＨＤ」群（高用量）、「Ｇｅｍ」群（ゲムシタビン）、「ＬＤ＋Ｇｅｍ」群、「ＴＳ－１」群、および「ＬＤ＋ＴＳ－１」群の結果を含む各群のマウスの膵臓腫瘍画像（点線で囲った部分が腫瘍を表す）を示し、係る画像は、マウスの膵臓に同所的にＰａｎｃ０２細胞を注入してから１５日目に撮影した画像である。
【手続補正3】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗癌剤と組み合わせて、前記抗癌剤に対する癌細胞の感受性を高め、前記抗癌剤の副作用を軽減し、前記抗癌剤によって誘発された免疫抑制を逆転させ、および/または癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために用いられる、医薬組成物であって、前記医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される有効成分を含有し、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、
（ｉ）Ｒ １ がＨである場合、前記抗癌剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
（ｉｉ）Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記抗癌剤は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、イリノテカン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項2】
癌を有する対象における悪液質の症状を軽減するために前記抗癌剤と組み合わせて使用される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
第１の活性成分および第２の活性成分を含有する、癌を治療するための医薬組成物であって、前記第１の活性成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、
（ｉ）Ｒ １ がＨである場合、前記第２の活性成分は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
（ｉｉ）Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記第２の活性成分は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、イリノテカン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする医薬組成物。
【請求項4】
ＡがＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１が存在しない、請求項１または３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
Ａがカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１がＨである、請求項１または３に記載の医薬組成物。
【請求項6】
ＡがＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項7】
Ａが、カルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記薬学的に許容される塩が、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩のうちの少なくとも1つである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項9】
Ｒ
１
がＨである場合、前記抗癌剤が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項10】
Ｒ
１
がＨである場合、前記第２の活性成分が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記癌が、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、胆管癌、直腸癌、乳癌、多発性骨髄腫、婦人科腫瘍、脳癌、精巣癌、白血病、リンパ腫、胸膜中皮腫、胃癌、肝臓癌のうちの少なくとも１つである、請求項１または３に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記癌が、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、直腸癌、脳癌、および肝臓癌の少なくとも１つである、請求項１または３に記載の医薬組成物。
【請求項13】
第１の成分および第２の成分の組み合わせであって、前記第１の成分は、式（Ｉ）の化合物、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
ＸはＨまたはＯＨであり、
ＹはＯであり、
Ｒ１はＨまたは存在しないが、
（ｉ）Ｒ１がＨである場合、前記抗癌剤は、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管集合阻害剤、白金ベースの薬剤、代謝拮抗剤、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、
（ｉｉ）Ｒ１が存在しない場合、ＹとＡとが結合して５員環を形成し、前記第２の成分は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、イリノテカン、オキサリプラチン、ゲムシタビン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする第１の成分および第２の成分の組み合わせ。
【請求項14】
ＡがＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１が存在しない、請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項15】
Ａがカルボニルを有するＣ１－Ｃ６脂肪族ヒドロカルビルであり、Ｒ１がＨである、請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項16】
ＡがＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項１４に記載の組み合わせ。
【請求項17】
Ａが、カルボニルを有するＣ５アルキルまたはアルケニルである、請求項１５に記載の組み合わせ。
【請求項18】
前記薬学的に許容される塩が、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、および亜鉛塩のうちの少なくとも1つである、請求項１５に記載の組み合わせ。
【請求項19】
Ｒ
１
がＨである場合、前記第２の成分が、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ミトキサントロン、テニポシド、アザシチジン、５－フルオロウラシル、テガフール、ＴＳ－１、６－メルカプトプリン、アザチオプリン、カペシタビン、クラドリビン、クロファラビン、シトシンアラビノシド、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、ペントスタチン、プララトレキサート、チオグアニン、トリフルリジン／チピラシル配合剤、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１３に記載の組み合わせ。
【請求項20】
前記組み合わせが、医薬組成物またはキットの形態である、請求項１３ないし１９のいずれか１項に記載の組み合わせ。
【請求項21】
癌を治療するために使用される、請求項１３ないし１９のいずれか一項に記載の組み合わせ。【国際調査報告】