(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-16
(54)【発明の名称】ＡＴＰ結合部位に結合するイソインドリン誘導体
(51)【国際特許分類】
C07D 209/44 20060101AFI20230309BHJP
G01N 33/68 20060101ALI20230309BHJP
G01N 33/533 20060101ALI20230309BHJP
【ＦＩ】
C07D209/44 CSP
G01N33/68
G01N33/533
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022569300
(86)(22)【出願日】2021-01-20
(85)【翻訳文提出日】2022-09-16
(86)【国際出願番号】 GB2021050122
(87)【国際公開番号】W WO2021148786
(87)【国際公開日】2021-07-29
(31)【優先権主張番号】2000789.4
(32)【優先日】2020-01-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(31)【優先権主張番号】2003559.8
(32)【優先日】2020-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522288821
【氏名又は名称】ネオフォア・リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＮＥＯＰＨＯＲＥ ＬＩＭＩＴＥＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100099623
【弁理士】
【氏名又は名称】奥山 尚一
(74)【代理人】
【識別番号】100125380
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 綾子
(74)【代理人】
【識別番号】100142996
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 聡二
(74)【代理人】
【識別番号】100166268
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 祐
(74)【代理人】
【識別番号】100180231
【弁理士】
【氏名又は名称】水島 亜希子
(72)【発明者】
【氏名】ブラッグ，ジュリアン
(72)【発明者】
【氏名】ロフェイ，ジョナソン・リチャード・アンソニー
(72)【発明者】
【氏名】ウィンシップ，ポール・コリン・マイケル
(72)【発明者】
【氏名】ラングレー，ガレス・ウィリアム
【テーマコード（参考）】
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G045DA36
2G045GC15
(57)【要約】
本発明は、本明細書に定義された式Ｉおよび式ＩＩの新規プローブ化合物に関する。本発明はまた、これらの新規プローブ化合物を合成する方法、ならびに例えばミスマッチ修復（ＭＭＲ）構成タンパク質ＰＭＳ２およびＭＬＨ１等の標的タンパク質のＡＴＰ結合部位への試験分子の結合を決定する、または生体試料中のそのような標的タンパク質の位置および／もしくは量を決定するためのアッセイおよびスクリーニングにおけるそれらの使用にも関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩【化1】
Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～６Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１～２Ｃ）アルキル基であり、その各々が、ハロ、シアノまたはヒドロキシから選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されており；
Ｌは、リンカーであり；
Ｑは、検出部分であり；
Ｌｘは、リンカーであり；
Ｘは、官能基である。）。
【請求項2】
Ｒ１が、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１～２Ｃ）アルキル基であり、その各々が、１つまたは複数のハロ置換基によって任意選択的に置換されている、請求項１に記載のプローブ化合物。
【請求項3】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロブチル、トリフルオロメチルから選択される、請求項１または請求項２に記載のプローブ化合物。
【請求項4】
Ｒ１が、イソプロピルである、請求項１～３のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項5】
Ｌが、（２～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、アルキレン鎖が、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～１０の－Ｏ－結合および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０が、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている、
請求項１～４のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項6】
Ｌが、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、アルキレン鎖が、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０が、水素または（１～２Ｃ）アルキルである、請求項１～５のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項7】
Ｌが、式：－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（１～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは１～１０であり、ｂは１～４である）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである、請求項１～４のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項8】
Ｌが、式：－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである、請求項１～４のいずれか１項または請求項７に記載のプローブ化合物。
【請求項9】
Ｌが、式：－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず；
Ｌ３は、存在せず；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである、請求項１～４または請求項７または請求項８のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項10】
Ｌが、式：－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である）の基であり；
Ｘ２は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである、請求項１～４または請求項７～９のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項11】
Ｑが、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される検出部分である、請求項１～１０のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項12】
Ｑが、フルオロフォアである、請求項１～１１のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項13】
Ｌｘが、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、アルキレン鎖が、アルキレン鎖内かおよび／もしくはその終端の一方のいずれかに位置する１つもしくは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素もしくは（１～２Ｃ）アルキルである；またはＬｘが、アルキレン鎖内かおよび／もしくはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的に含む（１～６Ｃ）アルキレンリンカーである、
請求項１～４のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項14】
Ｘが、ハロ、Ｎ３、またはエチニルから選択される官能基である、請求項１～４または請求項１３のいずれか１項に記載のプローブ化合物。
【請求項15】
以下のいずれか１つ：１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム；
３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸；
１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマート；
２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸；
５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウム；
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロパンアミド；
１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド；
４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド；
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩；
（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン；
から選択されるプローブ化合物またはその塩。
【請求項16】
標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおける、請求項１～１５のいずれか１項に記載の式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の使用。
【請求項17】
前記標的タンパク質が、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である、請求項１６に記載の使用。
【請求項18】
標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定するアッセイであって、（ｉ）請求項１～１２および１５のいずれか１項に記載の式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、前記試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が前記標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているかを決定するステップと
を含むアッセイ。
【請求項19】
標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する方法であって、（ｉ）請求項１～１２および１５のいずれか１項に記載の式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を前記標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が前記標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているかを決定するステップと
を含む方法。
【請求項20】
生体試料中の標的タンパク質の量および位置を決定するアッセイであって、（ｉ）前記生体試料を、請求項１～１２または１５のいずれか１項に記載の式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）前記生体試料中の前記式Ｉの化合物の位置および分布を検出および定量することによって、前記試料内の前記式Ｉの化合物の分布および量を決定するステップと
を含むアッセイ。
【請求項21】
生体試料中の標的タンパク質の量および位置を決定するアッセイであって、（ｉ）前記生体試料を、請求項１～４または１３～１５のいずれか１項に記載の式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）前記生体試料を、前記式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで請求項１～１２および１５のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物を形成できる検出部分と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）前記生体試料中の前記式Ｉの化合物の位置および分布を検出および定量することによって、前記試料内の前記式Ｉの化合物の分布および量を決定するステップと
を含むアッセイ。
【請求項22】
前記標的タンパク質がＭＬＨ１またはＰＭＳ２である、請求項１８、２０もしくは２１に記載のアッセイ、または請求項１９に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新規プローブ分子に関する。本発明はまた、これらの新規プローブ分子を合成する方法、ならびに、例えばミスマッチ修復（ＭＭＲ）構成タンパク質ＰＭＳ２およびＭＬＨ１等の標的タンパク質のＡＴＰ結合部位への試験分子の結合を決定する、または生体試料中のそのような標的タンパク質の位置および／もしくは量を決定するためのアッセイおよびスクリーニングにおけるそれらの使用にも関する。
【背景技術】
【0002】
ＡＴＰアーゼのＧＨＫＬファミリーは、シャペロンタンパク質ＨＳＰ９０［１］と、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）構成タンパク質ＰＭＳ２およびＭＬＨ１［２］と、二本鎖ＤＮＡのスーパーコイルを触媒するＤＮＡジャイレース－細菌ＩＩ型トポイソメラーゼ酵素［３］を含む。ＧＨＫＬファミリーの各メンバーはＡＴＰ結合部位を有し、ＡＴＰ結合はＧＨＫＬファミリータンパク質の機能にとって重要であることが知られている［４］。
【0003】
ＨＳＰ９０のＡＴＰ競合的阻害剤は、抗がん剤としての有用性を示しており［５，６］、ＡＴＰ競合的蛍光プローブについては、ＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合し蛍光プローブを置換する化合物の発見が報告されている［７］。このようなアッセイにおいて、発光前に偏光面を高速回転させ、撹乱する小さなリガンド（いわゆる蛍光プローブ分子）に結合された蛍光色素分子は、低い蛍光分極をもたらす。ＨＳＰ９０などのゆっくり回転するタンパク質へのプローブ分子の結合は、高い蛍光分極をもたらす。試験リガンドによるプローブ分子の置換は、蛍光分極の濃度依存的減少をもたらす。それ故に、蛍光分極は、Ｈｓｐ９０［７、８］またはＤＮＡジャイレース［９］等のタンパク質への試験化合物の結合の程度を直接定量的に読み取るのに適用され得る。
【0004】
驚くべきことに、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－ＡＴＰ－ガンマ－Ｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＥＤＡ－ＡＭＰＰＮＰ－５／６－ＴＡＭＲＡ（Ｊｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ）およびＥＤＡ－ＡＭＰＰＮＰ－Ｃｙ５（Ｊｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ）等の市販のＡＴＰ由来蛍光プローブは、本明細書に例示するプロトコルのタイプに従って行われた蛍光分極アッセイではシグナルを示さず、また表面プラズモン共鳴によるＭＬＨ１のＮ末端ドメインへの極めて弱い結合を示すことが発見された。したがって、これらの蛍光は、蛍光分極スクリーニングツールとしての使用に適さない。
【0005】
このように、ＧＨＫＬファミリーメンバーＭＬＨ１およびＰＭＳ２のＡＴＰ結合部位への結合の改善をもたらし、蛍光分極スクリーニングツールとしての使用に適した更なるプローブ化合物が必要とされている。
【0006】
本発明は、上記を念頭に置いてなされたものである。
【発明の概要】
【0007】
本発明は、ＧＨＫＬファミリータンパク質ＭＬＨ１およびＰＭＳ２のＡＴＰ結合部位に効果的に結合するプローブ化合物について、新たなシリーズを見出したことによるものである。これらのプローブ化合物は、ＭＬＨ１およびＰＭＳ２のＡＴＰ結合部位に対する試験化合物の結合親和性を評価するためのアッセイおよび方法において使用できる。また、これらのプローブ化合物は、生体試料中のＭＬＨ１またはＰＭＳ２の位置および／または量を決定するのに使用できる。
【0008】
第１の態様にて、本発明は、本明細書に定義された式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩を提供する。
【0009】
別の一態様にて、本発明は、本明細書に定義された式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩を合成する方法を提供する。
【0010】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおける式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の使用を提供する。一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。
【0011】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおいて使用するための式Ｉのプローブ化合物、またはその塩を提供する。一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。
【0012】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定するアッセイであって、
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）式Ｉのプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）式Ｉのプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。
【0013】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する方法であって、
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）式Ｉのプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）式Ｉのプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0014】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定するアッセイであって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0015】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定するアッセイであって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0016】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定する方法であって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
【0017】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定する方法であって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、該試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
【0018】
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1】（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノンの調製のための合成スキームを示す図である（実施例６）。
【図2】（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩の調製のための合成スキームを示す図である。
【図3】２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸の調製のための合成スキームを示す図である。
【図4】（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノンの調製のための合成スキームを示す図である。
【図5】４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（ＡＡ）および（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（ピペラジン－１－イルメチル）イソインドリン－２－イル）メタノン塩酸塩（ＡＢ）の調製のための合成スキームを示す図である。
【図6】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．１．０でプロットされ、分析された実施例１のデータを示す図である。
【図7】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．１．０でプロットされ、分析された実施例３のデータを示す図である。
【図8】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．１．０でプロットされ、分析された実施例４のデータを示す図である。
【図9】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．１．０でプロットされ、分析された実施例５のデータを示す図である。
【図10】アッセイプロトコルＡを使用して決定された化合物ＡＢ、ＩＣ５０に関する阻害データを示す図である。
【図11】アッセイプロトコルＣを使用して決定された化合物ＡＢ、ＩＣ５０に関する阻害データを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0020】
［定義］
本明細書および特許請求の範囲で使用される用語は、特に記載のない限り、以下の意味を有する。
本明細書および特許請求の範囲で使用される用語は、特に記載のない限り、以下の意味を有する。
【0021】
「アルキル」は、直鎖および分岐鎖アルキル基の両方を含む。「プロピル」などの個々のアルキル基への言及は直鎖バージョンに対してのみのものであり、「イソプロピル」などの個々の分岐鎖アルキル基への言及は分岐鎖バージョンに対してのみのものである。例えば、「（１～６Ｃ）アルキル」には、（１～４Ｃ）アルキル、（１～３Ｃ）アルキル、プロピル、イソプロピルおよびｔ－ブチルが含まれる。同様の慣例が他のラジカルに適用され、例えば「シクロアルキル（１～２Ｃ）アルキル」には、シクロプロピル－メチル、１－シクロプロピルエチル、２－シクロプロピルエチルなどが含まれる。
【0022】
「（ｍ～ｎＣ）」もしくは「Ｃｍ～ｎ」または「（ｍ～ｎＣ）基」もしくは「Ｃｍ～ｎ」は、単独でまたは接頭辞として使用され、ｍ～ｎ個の炭素原子を有する任意の基を指す。
【0023】
「アルキレン」基は、２つの他の化学基の間に位置し、これを連結する役目を果たすアルキル基である。例えば、「（３～２０Ｃ）アルキレン」は、１～３個の炭素原子の直鎖飽和二価炭化水素ラジカルまたは３個の原子の分岐飽和二価炭化水素ラジカル、例えば、メチレン、エチレン、プロピレンなどを意味する。
【0024】
「（ｍ～ｎＣ）シクロアルキル」は、ｍ～ｎ個の炭素原子を含有する炭化水素環を意味し、例えば、「（３～６Ｃ）シクロアルキル」は、３～６個の炭素原子を含有する炭化水素環、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルを意味する。「（ｍ～ｎＣ）シクロアルキル」は、非芳香族飽和または部分飽和単環式炭素環系も包含する。
【0025】
「ハロ」または「ハロゲノ」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを指す。
【0026】
「任意選択的に置換された」は、置換されている基、構造、または分子、および置換されていない基、構造、または分子のいずれかを指す。
【0027】
任意選択的な置換基が「１つまたは複数の」基から選択される場合、この定義は、指定された基の１つから選択される全ての置換基、または指定された基の２つ以上から選択される置換基を含むと理解される。
【0028】
「本発明に係る化合物」は、一般的および具体的に本明細書に開示する化合物を意味する。
【0029】
［プローブ化合物］
本発明は、式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩に関する：
本発明は、式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩に関する：
【0030】
【化1】
Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～６Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１～２Ｃ）アルキル基であり、その各々は、ハロ、シアノまたはヒドロキシから選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されており；
Ｌは、リンカーであり；
Ｑは、検出部分であり；
Ｌｘは、リンカーであり；および
Ｘは、官能基である。）。
【0031】
本発明に係るプローブ化合物は、特に、式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩が含まれる。式中、Ｒ１、Ｌ、Ｑ、ＬｘおよびＸは、それぞれ、本明細書で定義された通り、または以下のパラグラフ（１）～（５６）のいずれか１つに定義された通りである：
（１）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１～２Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のハロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（２）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のハロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（３）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（４）Ｒ１は、フルオロ、クロロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（５）Ｒ１は、（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（６）Ｒ１は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている（１～６Ｃ）アルキル基である；
（７）Ｒ１は、（１～４Ｃ）アルキル基である；
（８）Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロブチル、トリフルオロメチルから選択される；
（９）Ｒ１は、イソプロピルである；
（１０）Ｌは、（２～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれか（either）に位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１１）Ｌは、（３～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１２）Ｌは、（２～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～８つの－Ｏ－結合および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１３）Ｌは、（３～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～８つの－Ｏ－結合および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１４）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合；および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１５）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合；および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１６）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１７）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１８）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（１９）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２０）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２１）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２２）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２３）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしく－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２４）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２５）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２６）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合；および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２７）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合；および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２８）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２９）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはアルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置するトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（３０）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、ここでＲ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３１）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３２）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３３）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３４）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３５）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３６）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（１～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは１～１０であり、ｂは２～４である）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
ここでＲ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３７）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（１～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～６Ｃ）アルキレンであり；
ここでＲ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３８）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３９）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４０）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず；
Ｘ１は、存在せず；
Ｌ２は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４１）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４２）Ｑは、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される検出部分である。
（４３）Ｑは、フルオロフォアである。
（４４）Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ色素、シアニン色素、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹまたはＢＯＤＩＰＹ誘導体（例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ）、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン色素、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。
（４５）Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－４８８、シアニン－５Ｂ、シアニン－３Ｂ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹまたはＢＯＤＩＰＹ誘導体（例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ）、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５１４、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。
（４６）Ｘは、検出部分を式ＩＩの化合物に共有結合させるように、検出部分に存在する官能基と反応できる官能基である。
（４７）Ｘは、検出部分を式ＩＩの化合物に共有結合させるように、検出部分に存在する官能基と反応できる官能基であり、検出部分は、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される。
（４８）Ｘは、フルオロフォアを式ＩＩの化合物に共有結合させるように、フルオロフォアに存在する官能基と反応できる官能基Ｘである。
（４９）Ｘは、フルオロフォアを式ＩＩの化合物に共有結合させるように、フルオロフォアに存在する官能基と反応できる官能基であり、フルオロフォアは上記パラグラフ（４４）または（４５）に定義された通りである。
（５０）Ｘは、ハロ、Ｎ３、またはエチニル（
）から選択される官能基である。
（５１）Ｘは、エチニル（
）またはＮ３である。
（５２）Ｌｘは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義されているリンカー基Ｌである。
（５３）Ｌｘは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（５４）Ｌｘは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（５５）Ｌｘは、（１～５Ｃ）アルキレンリンカーである。
（５６）Ｌｘは、（１～３Ｃ）アルキレンリンカーである。
（１）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１～２Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のハロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（２）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のハロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（３）Ｒ１は、ハロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（４）Ｒ１は、フルオロ、クロロまたは（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（５）Ｒ１は、（１～６Ｃ）アルキル、（３～４Ｃ）シクロアルキルもしくは（３～４Ｃ）シクロアルキル－（１Ｃ）アルキル基であり、その各々は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている；
（６）Ｒ１は、１つまたは複数のフルオロ置換基によって任意選択的に置換されている（１～６Ｃ）アルキル基である；
（７）Ｒ１は、（１～４Ｃ）アルキル基である；
（８）Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロブチル、トリフルオロメチルから選択される；
（９）Ｒ１は、イソプロピルである；
（１０）Ｌは、（２～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれか（either）に位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１１）Ｌは、（３～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１２）Ｌは、（２～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～８つの－Ｏ－結合および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１３）Ｌは、（３～２０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～８つの－Ｏ－結合および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１４）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合；および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１５）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合；および／または１～４つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１６）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１７）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（１８）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（１９）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～５つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２０）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２１）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２２）Ｌは、（２～１８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２３）Ｌは、（３～１２Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしく－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（２４）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２５）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２６）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合；および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２７）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合；および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２８）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（２９）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはアルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置するトリアゾール環結合をさらに含み；
Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり、アルキレン鎖は、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、（１～２Ｃ）アルキル、（１～２Ｃ）ヒドロキシアルキル、（１～２Ｃ）ハロアルキルまたは（１～２Ｃ）アルコキシから独立して選択される１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されている。
（３０）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、ここでＲ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３１）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～４つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３２）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３３）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１～３つの－Ｏ－結合および／または１～３つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３４）Ｌは、（２～１７Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３５）Ｌは、（３～１０Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－結合および／または１つの－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－もしくは－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－結合または１つのトリアゾール環結合をさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（３６）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（１～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは１～１０であり、ｂは２～４である）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～８Ｃ）アルキレンであり；
ここでＲ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３７）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（１～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～６Ｃ）アルキレンであり；
ここでＲ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３８）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～１０Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（１～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（３９）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、存在せず、または－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－もしくはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４０）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、存在せず；
Ｘ１は、存在せず；
Ｌ２は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、存在せず、または（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４１）Ｌは、式：
－Ｌ１－Ｘ１－Ｌ２－Ｘ２－Ｌ３－
（式中、
Ｌ１は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｘ１は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ２は、（２～６Ｃ）アルキレン、または式－［ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ］ａ－［ＣＨ２］ｂ－もしくは－［ＣＨ２］ｂ－［Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２］ａ－（式中、ａは２～１０であり、ｂは２～４である。）の基であり；
Ｘ２は、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－またはトリアゾール環から選択され；
Ｌ３は、（２～６Ｃ）アルキレンであり；
Ｒ１０は、水素またはメチルであり；
ただし、Ｘ１またはＸ２のうちの少なくとも１つが存在することを条件とする。）
を有するリンカーである。
（４２）Ｑは、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される検出部分である。
（４３）Ｑは、フルオロフォアである。
（４４）Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ色素、シアニン色素、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹまたはＢＯＤＩＰＹ誘導体（例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ）、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン色素、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。
（４５）Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－４８８、シアニン－５Ｂ、シアニン－３Ｂ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹまたはＢＯＤＩＰＹ誘導体（例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ）、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５１４、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。
（４６）Ｘは、検出部分を式ＩＩの化合物に共有結合させるように、検出部分に存在する官能基と反応できる官能基である。
（４７）Ｘは、検出部分を式ＩＩの化合物に共有結合させるように、検出部分に存在する官能基と反応できる官能基であり、検出部分は、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される。
（４８）Ｘは、フルオロフォアを式ＩＩの化合物に共有結合させるように、フルオロフォアに存在する官能基と反応できる官能基Ｘである。
（４９）Ｘは、フルオロフォアを式ＩＩの化合物に共有結合させるように、フルオロフォアに存在する官能基と反応できる官能基であり、フルオロフォアは上記パラグラフ（４４）または（４５）に定義された通りである。
（５０）Ｘは、ハロ、Ｎ３、またはエチニル（
【化2】
（５１）Ｘは、エチニル（
【化3】
（５２）Ｌｘは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義されているリンカー基Ｌである。
（５３）Ｌｘは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（５４）Ｌｘは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
（５５）Ｌｘは、（１～５Ｃ）アルキレンリンカーである。
（５６）Ｌｘは、（１～３Ｃ）アルキレンリンカーである。
【0032】
適切には、ハロ基は、存在する場合、フルオロおよび／またはクロロ、特にフルオロである。
【0033】
適切には、Ｒ１は、上記いずれか１つのパラグラフ（１）～（９）に定義されている通りである。より適切には、Ｒ１は、上記パラグラフ（８）および（９）のいずれかに定義された通りである。式Ｉまたは式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｒ１はイソプロピルである。
【0034】
リンカー基Ｌは、検出部分Ｑを式Ｉのプローブ化合物の残りの部分に、または官能基Ｘを式ＩＩのプローブ化合物の残りの部分に連結する任意の適切なリンカー部分であってもよい。適切には、リンカー基Ｌは、３～３０原子長、より適切には４～２０原子長、さらにより適切には５～１８原子長である。本明細書に定義された式Ｉまたは式ＩＩのプローブ化合物の基では、特にＬは５～１２原子長である。
【0035】
適切には、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。より適切には、上記パラグラフ（２４）～（３５）または（３９）～（４１）のいずれかに定義された通りである。式Ｉまたは式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｌは、上記パラグラフ（４０）または（４１）に定義された通りである。
【0036】
検出部分Ｑは、式Ｉのプローブ化合物を検出および定量できるようにし得る任意の部分であってもよい。以下に記載するように、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物は、置換アッセイで使用されるように設計され、それによって、標的タンパク質（例えばＭＬＨ１またはＰＭＳ２）のＡＴＰ結合部位から式Ｉのプローブ化合物を置換する試験化合物の能力が、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対するその試験化合物の結合親和性を決定するのに使用され得る。したがって、検出部分Ｑは、容易に検出および定量できる任意の部分であってもよい。特定の状況では、検出部分Ｑは、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されている（すなわち「結合していない」）式Ｉの任意のプローブ化合物を検出および定量できるようにする。本発明の特定の実施形態では、これは、式Ｉの任意の置換された、または「結合していない」化合物を試験試料から回収し、試料をアッセイして結合していないプローブ化合物がどれぐらい存在するかを決定することによって達成され得る。これは次に、試料中に存在するプローブ化合物が試験化合物によってどれぐらい置換されているかの指標となるであろう。
【0037】
このように、検出部分Ｑの性質は、試料中に存在する式Ｉのプローブ化合物の量を決定できるようにするために使用できる限り重要ではないことが理解されよう。当業者であれば、試料中の式Ｉの化合物の量を検出および定量するための、特に、試験化合物によって標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されている式Ｉのプローブ化合物の量を検出するための、適切な検出部分Ｑおよび適切な方法論を選択できるであろう。
【0038】
適切には、検出部分Ｑは、フルオロフォア、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドからなる群から選択される。
【0039】
検出部分Ｑが、オリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドである実施形態では、存在するオリゴヌクレオチド、生体分子、分子センサー、タンパク質、またはペプチドの量を検出および定量するための当技術分野において公知の任意の適切な手法が利用され得る。例えば、式Ｉのプローブ化合物の検出部分Ｑに特異的に結合できる蛍光標識二次プローブが使用されてもよく、全ての過剰な二次プローブが除去されれば、式Ｉの化合物の検出部分Ｑに対する二次プローブの結合量が検出および定量され得、それにより式Ｉのプローブ化合物の量を決定できるようにする。
【0040】
例えば、Ｑがオリゴヌクレオチドであるならば、適切な検出可能な標識を有する二次プローブ、例えば、フルオロフォアまたは放射性標識、およびＱにハイブリダイズできる相補的オリゴヌクレオチド配列が、試料中に存在する式Ｉのプローブ化合物の量（およびより適切には、試験化合物によって標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されたプローブ化合物の量）を検出および定量するのに使用されてもよい。同様に、Ｑがタンパク質またはペプチドであるならば、二次プローブは、そのタンパク質またはペプチドおよび適切な検出可能な標識、例えば、フルオロフォアまたは放射性標識に選択的に結合できる抗体であってもよい。
【0041】
より適切には、検出部分Ｑは、フルオロフォアである。このような場合、式Ｉの化合物は、蛍光分極アッセイで使用できる。式Ｉのプローブ化合物の基では、特に検出部分Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ色素、シアニン色素、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹまたはＢＯＤＩＰＹ誘導体（例えばＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ）、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン色素、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。式Ｉのプローブ化合物の更なる基では、検出部分Ｑは、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ－４８８、シアニン－５Ｂ、シアニン－３Ｂ、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ ＴＭＲ、ＴＡＭＲＡ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５１４、ＦＩＴＣ、Ｒｕ（ｂｐｙ）３、ローダミン色素、アクリジンオレンジ、およびテキサスレッドからなる群から選択されるフルオロフォアである。
【0042】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（１）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0043】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（２）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0044】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（３）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0045】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（４）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0046】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（５）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0047】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（６）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0048】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（７）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0049】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（８）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0050】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）～（４１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0051】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１０）に定義された通りである。
【0052】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１１）に定義された通りである。
【0053】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１４）に定義された通りである。
【0054】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１５）に定義された通りである。
【0055】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１８）に定義された通りである。
【0056】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（１９）に定義された通りである。
【0057】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（２２）に定義された通りである。
【0058】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（２３）に定義された通りである。
【0059】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（２６）に定義された通りである。
【0060】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（２７）に定義された通りである。
【0061】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３０）に定義された通りである。
【0062】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３１）に定義された通りである。
【0063】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３４）に定義された通りである。
【0064】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３５）に定義された通りである。
【0065】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３６）に定義された通りである。
【0066】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３７）に定義された通りである。
【0067】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３８）に定義された通りである。
【0068】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（３９）に定義された通りである。
【0069】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（４０）に定義された通りである。
【0070】
式Ｉのプローブ化合物の基では、特に、Ｑは、フルオロフォアであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌは、上記パラグラフ（４１）に定義された通りである。
【0071】
適切には、Ｘは、上記パラグラフ（４６）～（５１）のいずれか１つに定義された通りである。
【0072】
Ｘは、検出部分に存在する官能基Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と反応して検出部分を式ＩＩの化合物に共有結合させ、それによって本明細書に定義された式Ｉの化合物を形成できる任意の適切な官能基であり得ることが理解されよう。
【0073】
当業者であれば、適切な検出部分との共有結合を形成するのに使用できる適当な官能基に詳しいであろう。例えば、Ｘは、ハロ、Ｎ３またはエチニル（
）から選択されてもよい。
【化4】
【0074】
特定の実施形態では、Ｘは、Ｎ３またはエチニルである。
【0075】
適切には、Ｘは、検出部分に存在する官能基と反応して、検出部分と式ＩＩの化合物の間に結合またはトリアゾール結合を形成できる官能基である。特定の実施形態では、形成される結合は、トリアゾール結合（ＣＬＩＣＫ化学によって形成され得る。）である。
【0076】
適切には、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）～（５６）のいずれか１つに定義された通りである。
【0077】
本発明の特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物を、式：
Ｑ－Ｌｙ－Ｙ
（式中、
Ｑは、上記に定義される検出部分であり：
Ｌｙは、存在せず、または式ＩＩの化合物の基Ｌｘに共有結合される場合、式Ｉの化合物のリンカーＬを形成するリンカー基であり；
Ｙは、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して、Ｑ－Ｌ２を式ＩＩの化合物のＬｘに共有結合させることができる官能基である。）
の基と反応させることによって形成される。
Ｑ－Ｌｙ－Ｙ
（式中、
Ｑは、上記に定義される検出部分であり：
Ｌｙは、存在せず、または式ＩＩの化合物の基Ｌｘに共有結合される場合、式Ｉの化合物のリンカーＬを形成するリンカー基であり；
Ｙは、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して、Ｑ－Ｌ２を式ＩＩの化合物のＬｘに共有結合させることができる官能基である。）
の基と反応させることによって形成される。
【0078】
一実施形態では、Ｌｙは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つまたは複数の－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
【0079】
別の一実施形態では、Ｌｙは、（１～８Ｃ）アルキレンリンカーであり、ここで、アルキレン鎖は、アルキレン鎖内かおよび／またはその終端の一方のいずれかに位置する１つの－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０－、－ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－またはトリアゾール環結合を任意選択的にさらに含み、Ｒ１０は、水素または（１～２Ｃ）アルキルである。
【0080】
更なる実施形態では、Ｌｙは、（１～５Ｃ）アルキレンリンカーである。
【0081】
別の一実施形態では、Ｌｙは、（１～３Ｃ）アルキレンリンカーである。
【0082】
Ｙは、式ＩＩのプローブ化合物に存在する官能基Ｘと反応して基Ｑ－Ｌｙを式ＩＩの化合物に共有結合させ、それによって本明細書に定義された式Ｉの化合物を形成できる任意の適切な官能基であり得ることが理解されよう。
【0083】
当業者であれば、式ＩＩの化合物の官能基Ｘとの共有結合を形成するのに使用できる適当な官能基に詳しいであろう。例えば、Ｙは、ハロ、Ｎ３またはエチニルから選択されてもよい。
【0084】
特定の実施形態では、Ｘがエチニルである場合にＹはＮ３である、またはＸがＮ３である場合にＹはエチニルである。
【0085】
適切には、Ｙは、式ＩＩのプローブ化合物に存在する官能基Ｘと反応して、結合またはトリアゾール結合を形成できる官能基である。特定の実施形態では、形成される結合はトリアゾール結合（ＣＬＩＣＫ化学によって形成され得る。）である。
【0086】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（１）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0087】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（２）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0088】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（３）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0089】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（４）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0090】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（５）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0091】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（６）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0092】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（７）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0093】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（８）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0094】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）、（５３）または（５４）に定義された通りである。
【0095】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５２）に定義された通りである。
【0096】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５３）に定義された通りである。
【0097】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５４）に定義された通りである。
【0098】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５５）に定義された通りである。
【0099】
式ＩＩのプローブ化合物の基では、特に、Ｘは、上記パラグラフ（５０）に定義された通りであり、Ｒ１は、上記パラグラフ（９）に定義された通りであり、Ｌｘは、上記パラグラフ（５６）に定義された通りである。
【0100】
本発明に係る化合物には、特に、以下のいずれか１つが含まれる：
１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）；
３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸（実施例２）；
１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマート（実施例３）；
２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例４）；
５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウム（benzoate ammonium）（実施例５）；
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロペンアミド（実施例７）；
１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（実施例８）；
４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド（実施例９）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン（実施例１０）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド（実施例１１）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド（実施例１２）；
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩；
Ｔｅｒｔ－ブチル（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン。
１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）；
３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸（実施例２）；
１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマート（実施例３）；
２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例４）；
５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウム（benzoate ammonium）（実施例５）；
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロペンアミド（実施例７）；
１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（実施例８）；
４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド（実施例９）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン（実施例１０）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド（実施例１１）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド（実施例１２）；
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩；
Ｔｅｒｔ－ブチル（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン。
【0101】
本発明に係るプローブ化合物には、特に、以下のいずれか１つが含まれる：
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）；
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩；
（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン。
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）；
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩；
（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル；
（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン。
【0102】
本発明に係るプローブ化合物には、特に、以下のいずれか１つが含まれる：
１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）；
３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸（実施例２）；
１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマート（実施例３）；
２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例４）；
５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウム（実施例５）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロペンアミド（実施例７）；
１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（実施例８）；
４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド（実施例９）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン（実施例１０）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド（実施例１１）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド（実施例１２）。
１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）；
３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸（実施例２）；
１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマート（実施例３）；
２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例４）；
５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウム（実施例５）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロペンアミド（実施例７）；
１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド（実施例８）；
４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド（実施例９）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン（実施例１０）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド（実施例１１）；
３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５λ４，６λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド（実施例１２）。
【0103】
本発明に係るプローブ化合物の適切な塩は、例えば、十分に塩基性である本発明に係る化合物の酸付加塩、例えば、無機酸または有機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、ギ酸、クエン酸、メタンスルホン酸またはマレイン酸との酸付加である。さらに、十分に酸性である本発明に係る化合物の適切な塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩もしくはマグネシウム塩、アンモニウム塩または有機塩基との塩である。
【0104】
本発明はまた、１つまたは複数の同位体置換を含む、本明細書により定義された本発明に係るプローブ化合物も包含する。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）および３Ｈ（Ｔ）を含む任意の同位体型であってもよく、Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃを含む任意の同位体型であってもよく、Ｏは、１６Ｏおよび１８Ｏを含む任意の同位体型であってもよいなどである。
【0105】
式（Ｉ）のプローブ化合物は、例えば水和形態などの溶媒和形態および非溶媒和形態で存在し得ることも理解されるべきである。
【0106】
式（Ｉ）のプローブ化合物は、多形性を示し得ること、および本発明は全てのそのような多形形態を包含することも理解されるべきである。
【0107】
式（Ｉ）のプローブ化合物は、いくつかの異なる互変異性形態でも存在してもよく、式（Ｉ）の化合物への言及には全てのそのような形態が含まれる。
【0108】
［プローブ化合物の合成］
別の一態様にて、本発明は、本明細書に定義された式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩を合成する方法を提供する。
別の一態様にて、本発明は、本明細書に定義された式Ｉもしくは式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩を合成する方法を提供する。
【0109】
本発明に係るプローブ化合物は、当技術分野において公知の任意の適切な手法によって調製できる。これらの化合物を調製するための特定のプロセスは、添付の例でさらに記載する。
【0110】
本明細書に記載の合成方法の説明、および出発物質を調製するのに使用される任意の言及された合成方法において、溶媒の選択、反応雰囲気、反応温度、実験手順およびワークアップ手順の持続時間を含む全ての提案された反応条件は、当業者によって選択できることが理解されるべきである。
【0111】
分子の様々な部分に存在する官能性が利用される試薬および反応条件に適合しなければならないことは、有機合成における当業者であれば理解され得る。
【0112】
本明細書により定義されたプロセスによって本発明に係る化合物を合成する間、または特定の出発物質の合成中、特定の置換基を保護することが、それらの望ましくない反応を防ぐために望ましい場合があることが理解されよう。熟練した化学者であれば、そのような保護がいつ必要とされるか、およびそのような保護基がどのように導入され、後で除去され得るかを理解するであろう。
【0113】
保護基の例については、このテーマに関する多くの一般的なテキストの１つ、例えば、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’ ｂｙ Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｇｒｅｅｎ；４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ；２００６（ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）を参照されたい。保護基は、文献に記載され、または問題とされた保護基の除去に適していると熟練した化学者に知られている任意の簡便な方法によって除去でき、このような方法は、分子中の他の部分では基の妨害を最小限にしながら保護基の除去をもたらすように選択され得る。
【0114】
一態様にて、本発明は、本明細書に定義された式Ｉの化合物を合成するプロセスであって、本明細書に定義された式ＩＩの化合物を本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と反応させて式Ｉの化合物を形成するステップ；ならびに任意選択的にその後：
（ｉ）存在する任意の保護基を除去するステップ；
（ｉｉ）式Ｉの化合物の塩を形成するステップ；および／または
（ｉｉｉ）式Ｉの化合物を単離し、精製するステップ
を含むプロセスを提供する。
（ｉ）存在する任意の保護基を除去するステップ；
（ｉｉ）式Ｉの化合物の塩を形成するステップ；および／または
（ｉｉｉ）式Ｉの化合物を単離し、精製するステップ
を含むプロセスを提供する。
【0115】
［プローブ化合物の適用］
一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおける、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の使用を提供する。
一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおける、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の使用を提供する。
【0116】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する置換アッセイにおいて使用するための式Ｉのプローブ化合物、またはその塩を提供する。
【0117】
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。また特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１である。更なる特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＰＭＳ２である。
【0118】
置換アッセイは、当技術分野において公知である。Ｑがフルオロフォアである本発明の実施形態では、置換アッセイは蛍光分極アッセイである。蛍光分極アッセイは、当技術分野において公知である（例えば、本明細書における参考文献［７、８、９］を参照されたい。）。
【0119】
試験化合物は、標的タンパク質（例えばＭＬＨ１またはＰＭＳ２）のＡＴＰ結合部位への結合についてスクリーニングされるべき任意の生体分子または小分子化合物であってもよい。
【0120】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定するアッセイであって、
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているかを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているかを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0121】
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１である。更なる特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＰＭＳ２である。
【0122】
適切には、アッセイは、置換アッセイである。置換アッセイは、当技術分野において公知である。Ｑがフルオロフォアである本発明の実施形態では、置換アッセイは、蛍光分極アッセイである。蛍光分極アッセイは、当技術分野において公知である（例えば、本明細書における参考文献［７、８、９］を参照されたい。）。
【0123】
任意のプローブ化合物が、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているかを決定するステップは、試験化合物が、ＡＴＰ結合部位に結合していない式Ｉのプローブ化合物の割合の増加をもたらすかを検出するステップを適切には含む。これは、結合していないプローブ化合物の量に増加が認められるかを検出する（対照と比べて）か、または、結合プローブ化合物の量が容易に検出できるならば（例えば蛍光分極によって）、結合プローブ化合物の量に減少が認められるかを検出する（やはり対照と比べて）かのいずれかによって達成できる。
【0124】
結合していない量と比べた、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に結合しているプローブ化合物の割合の決定は、当技術分野において公知の手法によって達成できる。利用される特定の手法は、式Ｉの化合物中の検出部分Ｑの性質に依存するものであろう。適切には、Ｑは、フルオロフォアであり、アッセイは、蛍光分極アッセイである。このようなアッセイでは、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位からのプローブ化合物の置換に起因する蛍光の差が検出され、任意の置換プローブ化合物の量を定量し、それによって標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験化合物の結合親和性を決定するのに使用され得る。
【0125】
別の一態様にて、本発明は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に対する試験分子の結合親和性を決定する方法であって、
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩の存在下で、試験分子を標的タンパク質とインキュベートするステップと、
（ｉｉ）任意のプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0126】
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。また特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１である。更なる特定の実施形態では、標的タンパク質はＰＭＳ２である。
【0127】
適切には、方法は、置換アッセイである。置換アッセイは、当技術分野において公知である。Ｑがフルオロフォアである本発明の実施形態では、置換アッセイは、蛍光分極アッセイである。蛍光分極アッセイは、当技術分野において公知である（例えば、本明細書における参考文献［７、８、９］を参照されたい。）。
【0128】
任意のプローブ化合物が標的タンパク質のＡＴＰ結合部位から置換されているか否かを決定するステップは、上記した方法で行うことができる。
【0129】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定するアッセイであって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0130】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定するアッセイであって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式ＩＩのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含むアッセイを提供する。
【0131】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定する方法であって、
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
（ｉ）生体試料を、本明細書に定義された式Ｉのプローブ化合物、またはその塩と接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
【0132】
別の一態様にて、本発明は、生体試料内に存在する標的タンパク質の位置および／または量を決定する方法であって、
（ｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物とＭＬＨ１またはＰＭＳ２接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
（ｉ）生体試料を、式ＩＩの化合物に存在する官能基Ｘと反応して生体試料内にｉｎ ｓｉｔｕで式Ｉの化合物を形成できる検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物とＭＬＨ１またはＰＭＳ２接触させるステップと、
（ｉｉ）生体試料内に存在する式Ｉの化合物の検出部分の位置および／または強度を検出することによって、試料内に存在する式Ｉの化合物の位置および／または量を決定するステップと
を含む方法を提供する。
【0133】
一実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１、ＰＭＳ２またはＨＳＰ９０から選択される。特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２である。また特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＭＬＨ１である。更なる特定の実施形態では、標的タンパク質は、ＰＭＳ２である。
【0134】
適切には、生体試料を式Ｉまたは式ＩＩのプローブ化合物と接触させるステップ（上記のアッセイおよび方法のステップ（ｉ））は、標的タンパク質（例えば、ＭＬＨ１またはＰＭＳ２）のＡＴＰ結合部位にプローブ化合物が結合できるようにする条件下で、生体試料をプローブ化合物とインキュベートするステップを伴う。
【0135】
生体試料内の式Ｉの化合物の分布および量の決定は、当技術分野において公知の手法によって達成できる。利用される特定の手法は、式Ｉの化合物中の検出部分Ｑの性質に依存するものであろう。適切には、Ｑはフルオロフォアであり、生体試料内の式Ｉの化合物の位置および量は、蛍光顕微鏡法／イメージングによって達成できる。試料内の様々な位置の式Ｉの化合物の量を決定するために、蛍光強度の適当な較正が使用され得る。
【0136】
本明細書により定義された本発明に係るアッセイおよび方法は、過剰な式Ｉまたは式ＩＩのプローブ化合物を生体試料から除去するためにステップ（ｉ）後に行われる、１つまたは複数の洗浄ステップを任意選択的にさらに含むことができる。
【0137】
プローブ化合物が式ＩＩの化合物である実施形態では、本明細書により定義されたアッセイおよび方法は、標的タンパク質のＡＴＰ結合部位に結合できるように生体試料を式ＩＩの化合物と接触させるステップ、任意選択的に、生体試料を１回または複数回洗浄して任意の結合していない式ＩＩのプローブ化合物を除去するステップ、次いで、生体試料内で式ＩＩのプローブ化合物とｉｎ ｓｉｔｕで反応して式Ｉの化合物を形成できる適切な検出部分Ｑ、または本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物と生体試料を接触させるステップを伴う。試料は、任意の結合していない／未反応検出部分を試料から除去するために、検出部分とのインキュベーション後に任意選択的に洗浄されてもよい。検出部分は、式ＩＩのプローブ化合物の官能基Ｘと反応できる適切な官能基を担持する、本明細書に定義された基Ｑであってもよい。または検出部分は、式ＩＩの化合物と反応して本明細書に定義された式Ｉの化合物を形成する、本明細書に定義された式Ｑ－Ｌ２－Ｙの化合物であってもよい。
【実施例】
【0138】
＜分析方法＞
実施例１～６および関連する中間体の調製のために、市販の出発物質、試薬および乾燥溶媒を供給された通りに使用した。Ｍｅｒｃｋシリカゲル２３０～４００メッシュサイズを使用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーを行った。ガラスカラムクロマトグラフィーまたはフラッシュクロマトグラフィーを使用して、カラムクロマトグラフィーも行った。フラッシュクロマトグラフィーは、コンビフラッシュＲＦ Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ機で行った。分取ＴＬＣはＭｅｒｃｋプレートで行った。１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ－４００で記録した。試料を適切な重水素化溶媒溶液として調製し、適当な内部非重水素化溶媒ピークまたはテトラメチルシランを基準とした。化学シフトはテトラメチルシランのｐｐｍ（δ）低磁場で記録した。
実施例１～６および関連する中間体の調製のために、市販の出発物質、試薬および乾燥溶媒を供給された通りに使用した。Ｍｅｒｃｋシリカゲル２３０～４００メッシュサイズを使用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーを行った。ガラスカラムクロマトグラフィーまたはフラッシュクロマトグラフィーを使用して、カラムクロマトグラフィーも行った。フラッシュクロマトグラフィーは、コンビフラッシュＲＦ Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ機で行った。分取ＴＬＣはＭｅｒｃｋプレートで行った。１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ－４００で記録した。試料を適切な重水素化溶媒溶液として調製し、適当な内部非重水素化溶媒ピークまたはテトラメチルシランを基準とした。化学シフトはテトラメチルシランのｐｐｍ（δ）低磁場で記録した。
【0139】
実施例７～１２の調製のために、溶媒をＳｉｇｍａ ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、精製することなく使用した。ＮａｎｏＢＲＥＴ（登録商標）５９０ ＳＥ、ＮａｎｏＢＲＥＴ（登録商標）５９０－Ｏ４－ＳＥ、およびＮａｎｏＢＲＥＴ（登録商標）５９０－Ｃ４－ＳＥを、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩから入手した。質量スペクトルはＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｖａｎｑｕｉｓｈ（商標）（ＬＣ－ＭＳ）で記録し、純度（≧９５％）は、Ｋｉｎｅｔｅｘ ５μｍ ＥＶＯ Ｃ１８ １００Å ＬＣ Ｃｏｌｕｍｎ ３０×２．１ｍｍカラムまたは Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ ２．５μｍ Ｍａｘ－ＲＰ １００Å ＬＣカラムを使用して、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）によって決定した。化合物を「標準的方法１」：最初の移動相：９０％水溶液（０．１％ＴＦＡ／Ｈ２０）、１０％アセトニトリル；最終移動相：０％水溶液、１００％アセトニトリル；３０分直線勾配に従って、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ＯＢＤ ３０×２５０ｍｍカラムを使用してＷａｔｅｒｓ ＬＣ Ｐｒｅｐ １５０で精製した。
【0140】
［ＨＰＬＣ方法］
（方法－Ａ）
以下の条件を使用して試料を分析した：ＰＤＡ検出器を備えるＡｇｉｌｅｎｔシリーズ１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ－ＩＩ、カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８、１５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：室温、オートサンプラー温度：１５℃、移動相Ａ：０．０５％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸／Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水（ｐＨ約２．５）、移動相Ｂ：１００％アセトニトリル；移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９０％ Ａ、１０％ Ｂ；ｔ＝７分までの勾配（１０％ Ａ、９０％ Ｂ）；ｔ＝９分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝１４分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝１４．０１分までの勾配（９０％ Ａ、１０％ Ｂ）；ｔ＝１７分でのラン終了（９０％ Ａ、１０％ Ｂ）、流速：１ｍＬ／分、分析時間１７分。
（方法－Ａ）
以下の条件を使用して試料を分析した：ＰＤＡ検出器を備えるＡｇｉｌｅｎｔシリーズ１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ－ＩＩ、カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８、１５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：室温、オートサンプラー温度：１５℃、移動相Ａ：０．０５％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸／Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水（ｐＨ約２．５）、移動相Ｂ：１００％アセトニトリル；移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９０％ Ａ、１０％ Ｂ；ｔ＝７分までの勾配（１０％ Ａ、９０％ Ｂ）；ｔ＝９分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝１４分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝１４．０１分までの勾配（９０％ Ａ、１０％ Ｂ）；ｔ＝１７分でのラン終了（９０％ Ａ、１０％ Ｂ）、流速：１ｍＬ／分、分析時間１７分。
【0141】
［ＬＣ－ＭＳ方法］
（方法－Ａ）
バイナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡパフォーマンス質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、カラム：Ｙｍｃ ｔｒｉ－ａｒｔ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．９ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃、移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）、移動相Ｂ：０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
（方法－Ａ）
バイナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡパフォーマンス質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、カラム：Ｙｍｃ ｔｒｉ－ａｒｔ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．９ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃、移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）、移動相Ｂ：０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
【0142】
（方法－Ｂ）
クォータナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡ質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、カラム：Ｙｍｃ ｔｒｉ－ａｒｔ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．９ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃、移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）、移動相Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：プローブはＥＳＩキャピラリープローブであり、イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替えた。ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
クォータナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡ質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、カラム：Ｙｍｃ ｔｒｉ－ａｒｔ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．９ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃、移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）、移動相Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：プローブはＥＳＩキャピラリープローブであり、イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替えた。ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
【0143】
（方法－Ｃ）
ＰＤＡ検出器およびＳＱ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ、カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：２５℃、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝７．３５）、移動相Ｂ：ＭｅＯＨ、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝０．７５分（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝３分までの勾配（３０％ Ａ、７０％ Ｂ）ｔ＝３．７５分までの勾配（５％ Ａ、９５％ Ｂ）；ｔ＝４．２０分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝５．２０分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝５．２１分までの勾配（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝７分でのラン終了（９２％ Ａ、８％ Ｂ）、流速：１ｍＬ／分、分析時間７分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに３．２５ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
ＰＤＡ検出器およびＳＱ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ、カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：２５℃、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝７．３５）、移動相Ｂ：ＭｅＯＨ、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝０．７５分（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝３分までの勾配（３０％ Ａ、７０％ Ｂ）ｔ＝３．７５分までの勾配（５％ Ａ、９５％ Ｂ）；ｔ＝４．２０分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝５．２０分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）；ｔ＝５．２１分までの勾配（９２％ Ａ、８％ Ｂ）；ｔ＝７分でのラン終了（９２％ Ａ、８％ Ｂ）、流速：１ｍＬ／分、分析時間７分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに３．２５ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
【0144】
（方法－Ｄ）
ＰＤＡ検出器およびＳＱ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ、カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：２５℃、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝７．３５）、移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝０．２分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：０．７ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：０．７ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．５ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに３．２５ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
ＰＤＡ検出器およびＳＱ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ、カラム：Ｘ－ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン、カラム温度：２５℃、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝７．３５）、移動相Ｂ：アセトニトリル；移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝０．２分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：０．７ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：０．７ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．５ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．５ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに３．２５ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
【0145】
（方法－Ｅ）
バイナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡパフォーマンス質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ｗｉｔｈ、カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃；移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）；移動相Ｂ：０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
バイナリーソルベントマネージャー、ＰＤＡ検出器およびＡｃｑｕｉｔｙ ＱＤＡパフォーマンス質量検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ｗｉｔｈ、カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５ミクロン、カラム温度：３５℃、オートサンプラー温度：５℃；移動相Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸／ｄｄＨ２Ｏ（ｐＨ＝２．７０）；移動相Ｂ：０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）／水：アセトニトリル（１０：９０）、移動相勾配詳細：ｔ＝０分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝０．７５分（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝２．７分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝３分までの勾配（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５分（０％ Ａ、１００％ Ｂ）フロー：１ｍＬ／分；ｔ＝３．５１分までの勾配（９７％ Ａ、３％ Ｂ）フロー：０．８ｍＬ／分；ｔ＝４分でのラン終了（９７％ Ａ、３％ Ｂ）、流速：０．８ｍＬ／分、分析時間４分。質量検出器パラメーター：イオン化モードは、コーン電圧１０Ｖおよび３０Ｖならびに０．８ｋＶキャピラリー電圧でポジティブおよびネガティブモードにより周期的に切り替え、ソースおよびプローブの温度は、それぞれ１２０℃および６００℃であった。
【0146】
［分取ＨＰＬＣ方法（Ｘ用）］
Ｗａｔｅｒｓ ２４８９－ＵＶ／可視波長検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ－２５４５勾配モジュール、カラム：ＹＭＣ－ＴＲＩ ＡＲＴ Ｃ１８、２５０×２１．２ｍｍ、５ミクロン、カラム温度：室温、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／水、移動相Ｂ：１００％アセトニトリル；移動相勾配詳細：Ｔ＝０．０１分（５０％ Ａ、５０％ Ｂ；ｔ＝１７分までの勾配（４０％ Ａ、６０％ Ｂ）；ｔ＝１７．０１分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）；Ｔ＝１９分（２％ Ａ、９８％ Ｂ）；ｔ＝１９．０１分までの勾配（５０％ Ａ、５０％ Ｂ）；ｔ＝２１分でのラン終了（５０％ Ａ、５０％ Ｂ）、流速：１７ｍＬ／分、分析時間２１分。
Ｗａｔｅｒｓ ２４８９－ＵＶ／可視波長検出器を備えるＷａｔｅｒｓ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ－２５４５勾配モジュール、カラム：ＹＭＣ－ＴＲＩ ＡＲＴ Ｃ１８、２５０×２１．２ｍｍ、５ミクロン、カラム温度：室温、移動相Ａ：５ｍＭ重炭酸アンモニウム／水、移動相Ｂ：１００％アセトニトリル；移動相勾配詳細：Ｔ＝０．０１分（５０％ Ａ、５０％ Ｂ；ｔ＝１７分までの勾配（４０％ Ａ、６０％ Ｂ）；ｔ＝１７．０１分までの勾配（２％ Ａ、９８％ Ｂ）；Ｔ＝１９分（２％ Ａ、９８％ Ｂ）；ｔ＝１９．０１分までの勾配（５０％ Ａ、５０％ Ｂ）；ｔ＝２１分でのラン終了（５０％ Ａ、５０％ Ｂ）、流速：１７ｍＬ／分、分析時間２１分。
【0147】
［実施例１］
＜１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムの調製＞
＜１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムの調製＞
【0148】
【化5】
【0149】
［実施例２］
＜３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸の調製＞
＜３－（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｚ）－３－（５－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－５－オキソペンチル）－３－メチル－５－スルホ－１－（３－スルホプロピル）インドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３，３－ジメチル－５－スルホ－３Ｈ－インドール－１－イウム－１－イル）プロパン－１－スルホン酸の調製＞
【0150】
【化6】
【0151】
［実施例３］
＜１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマートの調製＞
＜１－（６－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウムホルマートの調製＞
【0152】
【化7】
【0153】
［実施例４］
＜２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸の調製＞
＜２－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－５－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸および５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－ヒドロキシ－３－オキソ－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸の調製＞
【0154】
【化8】
【0155】
［実施例５］
＜５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウムの調製＞
＜５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸アンモニウムの調製＞
【0156】
【化9】
【0157】
［実施例６］
＜（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン＞
＜（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン＞
【0158】
【化10】
【0159】
［合成スキーム（図１参照）］
［Ｔｅｒｔ－ブチル－５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）］
５－ブロモイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（ＣＡＳ＃２０１９４０－０８－１）（１０．０ｇ、３３．５ミリモル）のＭｅＯＨ：ＤＭＦ（９：１、１００ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（１４ｍＬ、１３７．８１ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を、Ｎ２を使用して１０～１５分間脱気した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（４．９１ｇ、６．７１ミリモル）を反応混合物に室温で添加した。反応混合物に３０ｋｇ／ｃｍ２のＣＯ（ガス）圧をかけ、１２０℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた粗物質を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層をブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して粗物質を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１２％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製し、２－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）を茶色固体として得た（１０ｇ）。
［Ｔｅｒｔ－ブチル－５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）］
５－ブロモイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（ＣＡＳ＃２０１９４０－０８－１）（１０．０ｇ、３３．５ミリモル）のＭｅＯＨ：ＤＭＦ（９：１、１００ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（１４ｍＬ、１３７．８１ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を、Ｎ２を使用して１０～１５分間脱気した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（４．９１ｇ、６．７１ミリモル）を反応混合物に室温で添加した。反応混合物に３０ｋｇ／ｃｍ２のＣＯ（ガス）圧をかけ、１２０℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた粗物質を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層をブライン溶液（２００ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して粗物質を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１２％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製し、２－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）を茶色固体として得た（１０ｇ）。
【0160】
LCMS (方法B): 2.657分, MS: ES+ 278.18 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.45 (s, 9H), 3.84 (s, 3H), 4.61(t, J = 7.6 Hz, 4H), 7.43 - 7.47 (m, 1H), 7.86 - 7.91 (m, 2H).
【0161】
［５－（ヒドロキシメチル）イソインドリン－２－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｂ）］
ＬｉＡｌＨ４溶液（ＴＨＦ中１Ｍ）（３６ｍＬ、３６．１０ミリモル）を、２－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）（１０ｇ、３６．０７ミリモル）のＴＨＦ（２００ｍＬ）撹拌溶液に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで冷たい飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、５－（ヒドロキシメチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｂ）を茶色固体として得た（５ｇ、５６％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
LCMS (方法B): 2.061分, MS: ES+ 250.18 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.45 (s, 9H), 4.48 - 4.55 (m, 6H), 5.21 (br. s, 1H), 7.19 - 7.26 (m, 3H).
ＬｉＡｌＨ４溶液（ＴＨＦ中１Ｍ）（３６ｍＬ、３６．１０ミリモル）を、２－（ｔｅｒｔ－ブチル）５－メチルイソインドリン－２，５－ジカルボン酸（Ａ）（１０ｇ、３６．０７ミリモル）のＴＨＦ（２００ｍＬ）撹拌溶液に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで冷たい飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮し、５－（ヒドロキシメチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｂ）を茶色固体として得た（５ｇ、５６％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
LCMS (方法B): 2.061分, MS: ES+ 250.18 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.45 (s, 9H), 4.48 - 4.55 (m, 6H), 5.21 (br. s, 1H), 7.19 - 7.26 (m, 3H).
【0162】
［５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）］
５－（ヒドロキシメチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｂ）（３ｇ、１２．０４ミリモル）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、活性化ＭｎＯ２（１０．３６ｇ、１２０．４０ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をセライト床に通して濾過し、１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）を灰色固体として得た（２．６ｇ、８６％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップで使用した。
５－（ヒドロキシメチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｂ）（３ｇ、１２．０４ミリモル）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、活性化ＭｎＯ２（１０．３６ｇ、１２０．４０ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をセライト床に通して濾過し、１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）を灰色固体として得た（２．６ｇ、８６％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップで使用した。
【0163】
LCMS (方法B): 2.387分, MS: ES+ 248.18 (M+1); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 1.54 (s, 9H), 4.73 - 4.76 (m, 4H), 7.40 - 7.45 (dd, J = 8.4, 7.6 Hz, 1H), 7.77 - 7.82 (m, 2H), 10.20 (s, 1H).
【0164】
［４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｄ）］
ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１５ｇ、８０．５１ミリモル）のアセトニトリル（３００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２２．２６ｇ、１６１．３０ミリモル）を０℃で添加した。臭化プロパルギル（８０％（ｗ／ｖ）トルエン溶液）（１２ｍＬ、８０．５１ミリモル）を反応混合物に０℃で滴下した。得られた反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、アセトニトリル（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、得られた粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製し、４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを茶色固体として得た（１２．５ｇ、７１％）。
ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１５ｇ、８０．５１ミリモル）のアセトニトリル（３００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２２．２６ｇ、１６１．３０ミリモル）を０℃で添加した。臭化プロパルギル（８０％（ｗ／ｖ）トルエン溶液）（１２ｍＬ、８０．５１ミリモル）を反応混合物に０℃で滴下した。得られた反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、アセトニトリル（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮し、得られた粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製し、４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを茶色固体として得た（１２．５ｇ、７１％）。
【0165】
LCMS (方法A): 0.937分, MS: ES+ 225.20 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.38 (s, 9H), 2.36 (t, J = 4.8Hz, 4H), 3.18 (t, J = 2.4Hz, 1H), 3.27 - 3.34 (m, 6H).
【0166】
［１－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン（Ｅ）］
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）を、４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｄ）（２ｇ、８．９３ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に０℃、窒素雰囲気で滴下した。反応混合物を０℃で１０～１５分間撹拌した。反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で２時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮し、メタノール性アンモニア（ｐＨ７）の滴下を使用して中和した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥し、１－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン（Ｅ）を茶色油として得た（１．４５ｇ）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）を、４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｄ）（２ｇ、８．９３ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に０℃、窒素雰囲気で滴下した。反応混合物を０℃で１０～１５分間撹拌した。反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で２時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮し、メタノール性アンモニア（ｐＨ７）の滴下を使用して中和した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥し、１－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン（Ｅ）を茶色油として得た（１．４５ｇ）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
【0167】
LCMS (方法A): 0.295分, MS: ES+ 125.00 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 2.36 - 2.38 (m, 4H), 2.73 (t, J = 4.8Hz, 4H), 3.16 (t, J = 2.4Hz, 1H), 3.22 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.58 (br. s, 1H).
【0168】
［５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｆ）］
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（０．９９６ｇ、４．０３ミリモル）および１－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン（Ｅ）（０．５ｇ、４．０３ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）混合物に、酢酸（４～５滴）を室温で添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２．１３ｇ、１０．０５ミリモル）を、反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で２４時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｆ）をオフホワイトの固体として得た（０．５５０ｇ、７７％）。
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（０．９９６ｇ、４．０３ミリモル）および１－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン（Ｅ）（０．５ｇ、４．０３ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍＬ）混合物に、酢酸（４～５滴）を室温で添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２．１３ｇ、１０．０５ミリモル）を、反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、室温で２４時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｆ）をオフホワイトの固体として得た（０．５５０ｇ、７７％）。
【0169】
LCMS (方法A): 1.588分, MS: ES+ 356.27 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.45 (s, 9H), 2.32 - 2.43 (m, 8H), 3.14 (s, 1H), 3.23 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 4.54 - 4.55 (m, 4H), 7.18 - 7.25 (3H).
【0170】
［５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン塩酸塩（Ｇ）］
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５ｍＬ）を、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｆ）（０．５５ｇ、１５．４８ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で１０～１５分間撹拌した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（２×１０ｍＬ）で粉砕し、得られた固体物質を高真空下で濃縮して、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン塩酸塩（Ｇ）を白色固体として得た（０．５５ｇ）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５ｍＬ）を、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｆ）（０．５５ｇ、１５．４８ミリモル）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で１０～１５分間撹拌した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（２×１０ｍＬ）で粉砕し、得られた固体物質を高真空下で濃縮して、５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン塩酸塩（Ｇ）を白色固体として得た（０．５５ｇ）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
【0171】
LCMS (方法D): 1.24分, MS: ES+ 256.46(M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 3.24 - 3.43 (m, 6H), 3.69 (br. s, 1H), 3.90 (br s, 2H), 4.36 (br. s, 3H), 4.50 - 4.51 (m, 4H), 7.48 (d, J = 7.6Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.8Hz, 2H), 10.13 (br. s, 1H), 11.70 (br. s, 1H).
【0172】
［（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）］
５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン塩酸塩（Ｇ）（０．０５８ｇ、０．１９８ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．０３２ｇ、０．１６３ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．０６３ｇ、０．３３ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．０３３ｇ、０．２４ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．０５７ｍＬ、０．３３ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波下にて１２０℃で３時間照射した。得られた反応混合物を氷冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、６．８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）をオフホワイトの固体として得た（０．０３２ｇ、４３％）。
５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン塩酸塩（Ｇ）（０．０５８ｇ、０．１９８ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．０３２ｇ、０．１６３ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．０６３ｇ、０．３３ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．０３３ｇ、０．２４ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．０５７ｍＬ、０．３３ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波下にて１２０℃で３時間照射した。得られた反応混合物を氷冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、６．８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（（４－（プロプ－２－イン－１－イル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）メタノン（実施例６）をオフホワイトの固体として得た（０．０３２ｇ、４３％）。
【0173】
LCMS (方法A): 1.340分, MS: ES+ 434.22 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): 1.07 - 1.13 (dd, J = 7.5, 6.8Hz, 6H), 2.32 - 2.45 (m, 8H), 3.05 - 3.11 (m, 1H), 3.14 (s, 1H), 3.23 (s, 2H), 3.43 (s, 2H), 4.74 - 4.76 (m, 4H), 6.39 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 7.20 - 7.29 (m, 3H), 9.62 (br. s, 1H), 10.32 - 10.10 (m, 1H).
【0174】
［実施例７］
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロパンアミド＞
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）プロパンアミド＞
【0175】
【化11】
【0176】
Ｃ４４Ｈ５３ＢＦ５Ｎ７Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：７９２．４を算出し、７９２．５を観測した。
【0177】
［実施例８］
＜１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド＞
＜１－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４λ４，５λ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－アミド＞
【0178】
【化12】
【0179】
Ｃ５５Ｈ７４ＢＦ２Ｎ８Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：１０３９．６を算出し、１０３９．７を観測した。
【0180】
［実施例９］
＜９－４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５ｌ４，６ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド＞
＜９－４－（３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５ｌ４，６ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）プロパンアミド）－Ｎ－（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）ブタンアミド＞
【0181】
【化13】
【0182】
Ｃ４８Ｈ６０ＢＦ２Ｎ８Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：８７７．５を算出し、８７７．６を観測した。
【0183】
［実施例１０］
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４ｌ４，５ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン＞
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４ｌ４，５ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－１－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン＞
【0184】
【化14】
【0185】
Ｃ３９Ｈ４２ＢＦ２Ｎ６Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）を算出し：７０７．３、７０７．４を観測した。
【0186】
［実施例１１］
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４ｌ４，５ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド＞
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－４ｌ４，５ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（１５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデシル）プロパンアミド＞
【0187】
【化15】
【0188】
Ｃ５０Ｈ６３ＢＦ２Ｎ７Ｏ９［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）を算出し：９５４．５、９５４．６を観測した。
【0189】
［実施例１２］
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５ｌ４，６ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド＞
＜３－（５，５－ジフルオロ－７－（１Ｈ－ピロール－２－イル）－５Ｈ－５ｌ４，６ｌ４－ジピロロ［１，２－ｃ：２’，１’－ｆ］［１，３，２］ジアザボリニン－３－イル）－Ｎ－（４－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）－４－オキソブチル）プロパンアミド＞
【0190】
【化16】
【0191】
Ｃ４３Ｈ４９ＢＦ２Ｎ７Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋のＭＳ（ＥＳＩ、ｍ／ｚ）を算出し：７９２．４、７９２．５を観測した。
【0192】
＜中間体の調製＞
＜（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩の調製（図２）＞
［（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）］
（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（ＣＡＳ＃１３９１１５－９１－６）（５．２ｇ、２５．３６ミリモル）のＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（７．９８ｇ、３０．４３ミリモル）およびイミダゾール（０．５６９ｇ、８．３６ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を０℃に冷却した。ヨード（８．３６ｇ、３２．９２ミリモル）を反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、２０時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質にジメチルエーテル（１００ｍＬ）を添加し、得られた沈殿物を濾過し、ジメチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）を無色油として得た（７．８ｇ、９８％）。
＜（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩の調製（図２）＞
［（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）］
（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（ＣＡＳ＃１３９１１５－９１－６）（５．２ｇ、２５．３６ミリモル）のＤＣＭ（６０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（７．９８ｇ、３０．４３ミリモル）およびイミダゾール（０．５６９ｇ、８．３６ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を０℃に冷却した。ヨード（８．３６ｇ、３２．９２ミリモル）を反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、２０時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質にジメチルエーテル（１００ｍＬ）を添加し、得られた沈殿物を濾過し、ジメチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧下で濃縮し、粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）を無色油として得た（７．８ｇ、９８％）。
【0193】
LCMS (方法B): 2.254分, MS: ES+ 316.13 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6 ,400 MHz): δ 1.36 (s, 9H), 3.04 - 3.08 (m, 2H), 3.30 (t, J = 6.4Hz, 2H), 3.40 (t, J = 6.4Hz, 2H), 3.62 (t, J = 6.4Hz, 2H), 6.08 (s, 1H).
【0194】
［４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｉ）］
（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）（２．０ｇ、６．３５ミリモル）およびベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ＃３１１６６－４４－６）（１．２５ｇ、５．７２ミリモル）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２．４５ｇ、１７．７５ミリモル）およびＮａＩ（０．３８ｇ、２．５４ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を１６時間、７０℃に加熱した。反応混合物を真空下で濃縮し、水（１００ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｉ）を黄色油として得た（２．０ｇ、７７％）。
（２－（２－ヨードエトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｈ）（２．０ｇ、６．３５ミリモル）およびベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ＃３１１６６－４４－６）（１．２５ｇ、５．７２ミリモル）のアセトン（２０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２．４５ｇ、１７．７５ミリモル）およびＮａＩ（０．３８ｇ、２．５４ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を１６時間、７０℃に加熱した。反応混合物を真空下で濃縮し、水（１００ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｉ）を黄色油として得た（２．０ｇ、７７％）。
【0195】
LCMS (方法A): 1.640分, MS: ES+ 408.32 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1. 35 (s, 9H), 2.38 (t, J = 4.8Hz, 4H), 2.44 - 2.47 (m, 2H), 3.02 - 3.06 (m, 2H), 3.33 - 3.36 (m, 6H), 3. 48 (t, J = 5.6Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 6.80 (t, J = 5.2Hz, 1H), 7.29 - 7.39 (m, 5H).
【0196】
［（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｊ）］
４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｉ）（１．５ｇ、３．６８ミリモル）および酢酸（０．２３ｍＬ、４．０３ミリモル）のＭｅＯＨ（７ｍＬ）混合物に、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／炭素（０．４５ｇ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で４時間バブリングした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を真空下で濃縮し、その後凍結乾燥して、（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｊ）を油として得た（０．９７１ｇ、９６％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｉ）（１．５ｇ、３．６８ミリモル）および酢酸（０．２３ｍＬ、４．０３ミリモル）のＭｅＯＨ（７ｍＬ）混合物に、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／炭素（０．４５ｇ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で４時間バブリングした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を真空下で濃縮し、その後凍結乾燥して、（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｊ）を油として得た（０．９７１ｇ、９６％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【0197】
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1. 36 (s, 9H), 2.39 - 2.42 (m, 6H), 2.71 (t, J = 4.8Hz, 4H), 3.02 - 3.06 (m, 2H), 3.34 (t, J = 6.0Hz, 2H), 3.45 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 5.76 (s, 1H), 6.80 (t, J = 5.2Hz, 1H).
【0198】
［イソインドリン－５－カルバルデヒド塩酸塩（Ｋ）］
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン溶液（２０ｍＬ）を、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（１．３ｇ、５．２６ミリモル）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。反応混合物を室温にゆっくり温め、６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗物質をジメチルエーテル（３×２０ｍＬ）で粉砕して精製した。得られた固体物質を高真空下で乾燥して、イソインドリン－５－カルバルデヒド塩酸塩（Ｋ）をオフホワイトの固体として得た（０．８ｇ、８３％）。
４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン溶液（２０ｍＬ）を、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（１．３ｇ、５．２６ミリモル）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。反応混合物を室温にゆっくり温め、６時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗物質をジメチルエーテル（３×２０ｍＬ）で粉砕して精製した。得られた固体物質を高真空下で乾燥して、イソインドリン－５－カルバルデヒド塩酸塩（Ｋ）をオフホワイトの固体として得た（０．８ｇ、８３％）。
【0199】
LCMS (方法C): 2.154分, MS: ES+ 148.18 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.57 (d, J = 4.0Hz, 4H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 10.21 (s, 1H), 10.63 (s, 1H).
【0200】
［５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｌ）］
イソインドリン－５－カルバルデヒド塩酸塩（Ｋ）（０．８ｇ、４．３７ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（２．３０ｍＬ、１３．０２ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を０℃に冷却した。クロロギ酸ベンジル（０．７４５ｇ、４．３８ミリモル）を反応混合物に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、２Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｌ）を黄色固体として得た（１．０ｇ、８２％）。
イソインドリン－５－カルバルデヒド塩酸塩（Ｋ）（０．８ｇ、４．３７ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（２．３０ｍＬ、１３．０２ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を０℃に冷却した。クロロギ酸ベンジル（０．７４５ｇ、４．３８ミリモル）を反応混合物に０℃で滴下した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、２Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｌ）を黄色固体として得た（１．０ｇ、８２％）。
【0201】
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 4.72 - 4.80 (m, 4H), 5.15 (s, 2H), 7.32 - 7.43 (m, 5H), 7.53 - 7.58 (m, 1H), 7.84 - 7.88 (m, 2H), 9.99 (d, J = 1.6Hz, 1H).
【0202】
［５－（（４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｍ）］
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｌ）（１．０ｇ、３．５６ミリモル）および酢酸（０．１ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｊ）（０．９７１ｇ、３．５６ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（４．５２ｇ、２１．３５ミリモル）を反応混合物に添加して、混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｍ）を茶色油として得た（０．９ｇ、４８％）。
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｌ）（１．０ｇ、３．５６ミリモル）および酢酸（０．１ｍＬ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、（２－（２－（ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｊ）（０．９７１ｇ、３．５６ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（４．５２ｇ、２１．３５ミリモル）を反応混合物に添加して、混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｍ）を茶色油として得た（０．９ｇ、４８％）。
【0203】
LCMS (方法C): 4.34分, MS: ES+ 539.64 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1. 34 (s, 9H), 2.32 - 2.43 (m, 8H), 3.02 - 3.04 (m, 2H), 3.31 - 3.34 (m, 2H), 3.42 - 3.46 (m, 4H), 4.48 - 4.49 (m, 1H), 5.22 (t, J = 5.6Hz, 1H), 4.62 - 4.68 (m, 4H), 5.14 (s, 2H), 6.72 - 6.77 (t, J = 5.2Hz, 1H), 7.20 - 7.42 (m, 8H).
【0204】
［（２－（２－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｎ）］
５－（（４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｍ）（０．１ｇ、０．１８６ミリモル）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．０２０ｇ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で１２時間バブリングした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×５ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮して、（２－（２－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｎ）を茶色油として得た（０．０７６ｇ、１００％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップで使用した。
５－（（４－（２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｍ）（０．１ｇ、０．１８６ミリモル）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．０２０ｇ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で１２時間バブリングした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×５ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で濃縮して、（２－（２－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｎ）を茶色油として得た（０．０７６ｇ、１００％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップで使用した。
【0205】
ＬＣＭＳ（方法Ａ）：１．０３６分、ＭＳ：ＥＳ＋ ４０５．３２（Ｍ＋１）
【0206】
［（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｏ）］
（２－（２－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｎ）（０．０７６ｇ、０．１８７ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．０３０ｇ、０．１５３ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．０５９ｇ、０．３０７ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．０２０ｇ、０．１４８ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ、０．３０５ミリモル）をマイクロ波ガラス管、室温で添加した。管を封止して、マイクロ波下にて１２０℃で１時間照射した。得られた反応混合物氷冷水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５×３０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、真空下で濃縮して粗物質を得、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｏ）を茶色油として得た（０．０２０ｇ、１８％）。
（２－（２－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｎ）（０．０７６ｇ、０．１８７ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．０３０ｇ、０．１５３ミリモル）のＤＭＦ（２ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．０５９ｇ、０．３０７ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．０２０ｇ、０．１４８ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ、０．３０５ミリモル）をマイクロ波ガラス管、室温で添加した。管を封止して、マイクロ波下にて１２０℃で１時間照射した。得られた反応混合物氷冷水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５×３０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、真空下で濃縮して粗物質を得、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｏ）を茶色油として得た（０．０２０ｇ、１８％）。
【0207】
LCMS (方法A): 1.728分, MS: ES+ 583.5 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.12 (d, J = 6 Hz, 6H), 1.34 (s, 9H), 2.23 - 2.33 (m, 10H), 3.04 (s, 4 H), 3.46 (s, 4H), 4.75 (s, 4H), 6.39 (s, 1H), 6.78(br. s, 1H), 7.02 (br. s, 1H), 7.20 - 7.28 (m, 4H), 9.63 (s, 1H), 10.09 (d, J = 24.4Hz, 1H).
【0208】
［（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩］
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｏ）（０．０１５ｇ、０．０２５７ミリモル）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（０．２ｍＬ）を０℃、窒素雰囲気で添加した。反応混合物を０℃で４時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮して粗物質を得、これをジメチルエーテル（２×１０ｍＬ）で粉砕し、高真空下で乾燥して、（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩を茶色油として得た（０．０１２ｇ、９０％）。
（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｏ）（０．０１５ｇ、０．０２５７ミリモル）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（０．２ｍＬ）を０℃、窒素雰囲気で添加した。反応混合物を０℃で４時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮して粗物質を得、これをジメチルエーテル（２×１０ｍＬ）で粉砕し、高真空下で乾燥して、（５－（（４－（２－（２－アミノエトキシ）エチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン塩酸塩を茶色油として得た（０．０１２ｇ、９０％）。
【0209】
LCMS (方法B): 1.456分, MS: ES+ 483.5 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.12 (d, J = 6.8Hz, 6H), 1.29 - 1.30 (m, 4H), 2.99 - 3.07 (m, 4H), 3.25 - 3.30 (m, 4H), 3.62 - 3.63 (m, 3H), 3.76 - 3.77 (m, 2H), 4.32 - 4.37 (br. s, 2H), 4.75 - 4.80 (m, 4H), 6.43 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.38 - 7.52 (m, 3H), 8.10 (br. s, 3H), 9.68 (bs, 1H), 10.03 (bs, 1H).
【0210】
＜２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸の調製（図３）＞
［２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（Ｐ）］
２，４－ジヒドロキシ安息香酸（１００ｇ、６４９．３５ミリモル）のメタノール（４００ｍＬ）撹拌溶液に、濃縮Ｈ２ＳＯ４（５０ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を１００℃に加熱し、１２時間撹拌した。得られた溶液を真空下で濃縮して、水（５００ｍＬ）に注いだ。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥して、２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（Ｐ）をオフホワイトの固体として得た（１７０ｇ、７８％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
［２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（Ｐ）］
２，４－ジヒドロキシ安息香酸（１００ｇ、６４９．３５ミリモル）のメタノール（４００ｍＬ）撹拌溶液に、濃縮Ｈ２ＳＯ４（５０ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を１００℃に加熱し、１２時間撹拌した。得られた溶液を真空下で濃縮して、水（５００ｍＬ）に注いだ。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥して、２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（Ｐ）をオフホワイトの固体として得た（１７０ｇ、７８％）。この物質を、これ以上精製することなく次のステップに使用した。
【0211】
LCMS (方法C): 4.24分, MS: ES+ 169. 19(M+1); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.39 (s, 3H), 5.72 (br. s, 1H), 6.38 - 6.42 (m, 2H), 7.74 (d, J = 8.8Hz, 1 H), 11.02 (s, 1H).
【0212】
［２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸メチル（Ｑ）］
２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（８０ｇ、４７５．７６ミリモル）のＤＣＭ（１２００ｍＬ）溶液に、無水ＡｌＣｌ３（１２６．８７ｇ、９５１．４８ミリモル）を添加し、その後イソプロピルブロマイド（３５１．０９ｇ、２８５４．６２ミリモル）を３等分（各１１７．０３ｇ）にして６時間ごとに５０℃で添加した。イソプロピルブロマイドの添加の完了後、反応を５０℃で６時間加熱した。合計反応時間は２４時間であった。反応混合物を真空下で濃縮し、粗物質を水（１０００ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（４×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。得られた粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）によって３回精製して、２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸メチル（Ｑ）を黄色固体として得た（２５．５ｇ、２６％）。
２，４－ジヒドロキシ安息香酸メチル（８０ｇ、４７５．７６ミリモル）のＤＣＭ（１２００ｍＬ）溶液に、無水ＡｌＣｌ３（１２６．８７ｇ、９５１．４８ミリモル）を添加し、その後イソプロピルブロマイド（３５１．０９ｇ、２８５４．６２ミリモル）を３等分（各１１７．０３ｇ）にして６時間ごとに５０℃で添加した。イソプロピルブロマイドの添加の完了後、反応を５０℃で６時間加熱した。合計反応時間は２４時間であった。反応混合物を真空下で濃縮し、粗物質を水（１０００ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（４×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。得られた粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）によって３回精製して、２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸メチル（Ｑ）を黄色固体として得た（２５．５ｇ、２６％）。
【0213】
LCMS (方法A): 2.069分, MS: ES+ 211.11 (M+1); 1H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 1.13 (d, J = 7.6Hz, 6H), 3.03 - 3.16 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 6.35 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 10.48 (s, 1H), 10.57 (s, 1H).
【0214】
［２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸］
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸メチル（Ｑ）（２３．０ｇ、１０９．４０ミリモル）のＭｅＯＨ：水（２：１、３００ｍＬ）溶液に、ＮａＯＨ（２１．８８ｇ、５４７．００ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を７０℃に４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、氷冷水（５００ｍＬ）で希釈して、１Ｍ ＨＣｌ（ｐＨ５）を使用して酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥して、２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸を白色固体として得た（１３ｇ、６１％）。
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸メチル（Ｑ）（２３．０ｇ、１０９．４０ミリモル）のＭｅＯＨ：水（２：１、３００ｍＬ）溶液に、ＮａＯＨ（２１．８８ｇ、５４７．００ミリモル）を室温で添加した。反応混合物を７０℃に４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、氷冷水（５００ｍＬ）で希釈して、１Ｍ ＨＣｌ（ｐＨ５）を使用して酸性化した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、高真空下で乾燥して、２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸を白色固体として得た（１３ｇ、６１％）。
【0215】
LCMS : (方法B) 2.044分, MS: ES+ 197.22 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.02 (d, J = 6.8Hz, 6H), 3.02 - 3.09 (m, 1H), 6.34 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 10.44 (s, 1H), 11.24 (s, 1H), 13.33 (br. s, 1H).
【0216】
＜（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノンの調製（図４）＞
［（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）］
５－アミノペンタン－１－オール（ＣＡＳ＃２５０８－２９－４）（５ｇ、４８．５４ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍＬ）混合物を０℃に冷却した。Ｂｏｃ無水物（１１．１６ｍＬ、４８．４６ミリモル）を反応混合物に０℃で添加した。得られた反応を室温に温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、１８％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）を淡黄色油として得た（１５ｇ、７６％）。
［（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）］
５－アミノペンタン－１－オール（ＣＡＳ＃２５０８－２９－４）（５ｇ、４８．５４ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍＬ）混合物を０℃に冷却した。Ｂｏｃ無水物（１１．１６ｍＬ、４８．４６ミリモル）を反応混合物に０℃で添加した。得られた反応を室温に温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。得られた粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、１８％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）を淡黄色油として得た（１５ｇ、７６％）。
【0217】
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 1.34 - 1.40 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.46 - 1.51 (m, 2H), 1.54 - 1.61 (m, 2H), 1.97 (br. s, 1H), 3.10 - 3.11 (m, 2H), 6.63 (t, J = 6.40 Hz, 2H), 4.63 (bs, 1H).
【0218】
［（５－ブロモペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）］
（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）（８ｇ、３９．４１ミリモル）のＴＨＦ（８０ｍＬ）混合物に、トリフェニルホスフィン（１５．４８ｇ、５９．１１ミリモル）およびＣＢｒ４（１９．６０ｇ、５９．１１ミリモル）を０℃で添加した。得られた反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（５－ブロモペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）を無色油として得た（９ｇ、８６％）。
（５－ヒドロキシペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）（８ｇ、３９．４１ミリモル）のＴＨＦ（８０ｍＬ）混合物に、トリフェニルホスフィン（１５．４８ｇ、５９．１１ミリモル）およびＣＢｒ４（１９．６０ｇ、５９．１１ミリモル）を０℃で添加した。得られた反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０％（ｖ／ｖ）酢酸エチル／ヘキサンで溶出）によって精製して、（５－ブロモペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）を無色油として得た（９ｇ、８６％）。
【0219】
LCMS (方法A): 2.150分, MS: ES+ 210.1, 212.1 (M-56); 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 1.32 - 1.36 (m, 13H), 1.75 - 1.79 (m, 2H), 2.88 - 2.90 (m, 2H), 3.51 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 6.81 (t, J = 5.6 Hz, 1H).
【0220】
［４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｔ）］
ベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ＃３１１６６－４４－６）（４．１３５ｇ、１８．７９ミリモル）のアセトン（５０ｍＬ）混合物に、Ｋ２ＣＯ３（７．７８ｇ、５６．３８ミリモル）およびＮａＩ（１．４０ｇ、９．３９ミリモル）を室温で添加した。反応を室温で１５分間撹拌した。（５－ブロモペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）（５ｇ、１８．７９ミリモル）を反応混合物に室温で添加した。反応混合物を７０℃で１６時間加熱した。得られた反応混合物を室温に冷却し、水（１５０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｔ）を茶色油として得た（６．５ｇ、８５％）。
ベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ＃３１１６６－４４－６）（４．１３５ｇ、１８．７９ミリモル）のアセトン（５０ｍＬ）混合物に、Ｋ２ＣＯ３（７．７８ｇ、５６．３８ミリモル）およびＮａＩ（１．４０ｇ、９．３９ミリモル）を室温で添加した。反応を室温で１５分間撹拌した。（５－ブロモペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）（５ｇ、１８．７９ミリモル）を反応混合物に室温で添加した。反応混合物を７０℃で１６時間加熱した。得られた反応混合物を室温に冷却し、水（１５０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｔ）を茶色油として得た（６．５ｇ、８５％）。
【0221】
LCMS (方法A): 1.492分, MS: ES+ 406.42 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.21 - 1.23 (m, 2H), 1.35 (s, 11H), 2.28 - 2.32 (m, 6H), 2.85 - 2.90 (m, 2H), 3.32 - 3.34 (m, 6H), 5.06 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 7.31 - 7.38 (m, 5H).
【0222】
［（５－（ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｕ）］
４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｔ）（６．４ｇ、１５．８０ミリモル）のＭｅＯＨ（７０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．６４０ｇ、１０％ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で５時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過し、ＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して、（５－（ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｕ）を茶色油として得た（４ｇ、９３％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップに使用した。
４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（Ｔ）（６．４ｇ、１５．８０ミリモル）のＭｅＯＨ（７０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．６４０ｇ、１０％ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で５時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過し、ＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して、（５－（ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｕ）を茶色油として得た（４ｇ、９３％）。この物質を、さらに精製することなく次のステップに使用した。
【0223】
MS: ES+ 272.20 (M+1). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 1.28 - 1.35 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.43 - 1.50 (m, 2 H), 2.14 (br. s, 3H), 2.29 - 2.33 (m, 2H), 2.42 (bs, 4H), 2.90 - 2.92 (m, 3H), 3.10 - 3.11 (m, 2H), 3.47 (s, 1H), 4.61 (bs, 1H).
【0224】
［５－（（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｖ）］
ベンジル５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸（Ｌ）（１．６ｇ、５．６９ミリモル）および（５－（ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｕ）（１．５４ｇ、５．６９ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍＬ）混合物に、酢酸（０．２ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．６１８ｇ、１７．０７８ミリモル）を反応混合物に０℃で添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｖ）を茶色油として得た（２．２ｇ、７２％）。
ベンジル５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸（Ｌ）（１．６ｇ、５．６９ミリモル）および（５－（ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｕ）（１．５４ｇ、５．６９ミリモル）のＤＣＭ（５０ｍＬ）混合物に、酢酸（０．２ｍＬ）を室温で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．６１８ｇ、１７．０７８ミリモル）を反応混合物に０℃で添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）によって精製して、５－（（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｖ）を茶色油として得た（２．２ｇ、７２％）。
【0225】
LCMS (方法A): 1.552分, MS: ES+ 537.41 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.15 - 1.23(m, 2H), 1.36 (s, 11H), 1.51 (br. s, 2H), 1.90 (s, 1H), 2.32 - 2.39 (m, 2H), 2.88 - 2.95 (m, 7H), 3.53 (br. s, 2H), 4.63 - 4.69 (m, 4H), 5.14 (s, 2H), 6.82 (br. s, 1H), 7.23 - 7.42 (m, 8H), 10.04 (br. s, 1H), 11.99 (br. s, 1H).
【0226】
［（５－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｗ）］
５－（（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｖ）（２．１ｇ、３．９２ミリモル）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．４２０ｇ、２０％ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で５時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×２０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を真空下で濃縮して、（５－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｗ）を茶色油として得た（１．７ｇ、定量）。この物質をさらに精製することなく使用した。
５－（（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ベンジル（Ｖ）（２．１ｇ、３．９２ミリモル）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．４２０ｇ、２０％ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物をＨ２（ｇ）で５時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過して、ＭｅＯＨ（２×２０ｍＬ）で洗浄し、合わせた濾液を真空下で濃縮して、（５－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｗ）を茶色油として得た（１．７ｇ、定量）。この物質をさらに精製することなく使用した。
【0227】
LCMS (方法A): 0.757分, MS: ES+ 403.37 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.19 - 1.22 (m, 2H), 1.36 (s, 13H), 2.19 - 2.21 (m, 2H), 2.23 - 2.27 (m, 3H), 2.28 - 2.32 (m, 3H), 2.86 - 2.87 (m, 2H), 2.96 - 2.97 (m, 1H), 3.40 - 3.43 (m, 4H), 4.32 - 4.33 (m, 4H), 6.77 - 6.79 (m, 1H), 7.15 - 7.29 (m, 3H).
【0228】
［（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｘ）］
（５－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｗ）（０．５０４ｇ、１．２５３ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．２０５ｇ、１．０４６ミリモル）のＤＭＦ（８ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．３９９ｇ、２．０８１ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．１４１ｇ、１．０４２ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．４２８ｍＬ、２．５０２ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波下、１２０℃で３時間照射した。得られた反応混合物を冷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、真空下で濃縮して粗物質（２７０ｍｇ）を得た。１８０ｍｇ粗物質をＨＰＬＣ（水／ＭｅＣＮ中５ｍＭ重炭酸アンモニウム）によって精製した。単離した画分を凍結乾燥して、（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｘ）をオフホワイトの固体として得た（０．０３２ｇ、５％）。
（５－（４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｗ）（０．５０４ｇ、１．２５３ミリモル）および２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．２０５ｇ、１．０４６ミリモル）のＤＭＦ（８ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．３９９ｇ、２．０８１ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．１４１ｇ、１．０４２ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．４２８ｍＬ、２．５０２ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波下、１２０℃で３時間照射した。得られた反応混合物を冷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、真空下で濃縮して粗物質（２７０ｍｇ）を得た。１８０ｍｇ粗物質をＨＰＬＣ（水／ＭｅＣＮ中５ｍＭ重炭酸アンモニウム）によって精製した。単離した画分を凍結乾燥して、（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｘ）をオフホワイトの固体として得た（０．０３２ｇ、５％）。
【0229】
LCMS (方法A): 1.728分, MS: ES+ 583.5 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.12 (d, J = 6 Hz, 6H), 1. 20 - 1.23 (m, 4H), 1.34 (s, 9H), 2.33 - 2.50 (m, 10H), 3.03 - 3.04 (m, 4H), 3.35 - 3.46 (m, 4H), 4.74 - 4.75 (m, 4H), 6.39 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.20 - 7.28 (m, 3H), 9.63 (s, 1H), 10.03 - 10.09 (d, J = 24.4 Hz, 1H).
【0230】
［（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノン］
（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｘ）（０．０６０ｇ、０．１０３ミリモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（０．６ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（２×５ｍＬ）で粉砕した。得られた固体を凍結乾燥で乾燥して、（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノンを茶色粘性固体として得た（０．０４３ｇ、８０％）。
（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｘ）（０．０６０ｇ、０．１０３ミリモル）のＤＣＭ（２ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（０．６ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。得られた反応混合物を真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（２×５ｍＬ）で粉砕した。得られた固体を凍結乾燥で乾燥して、（５－（（４－（５－アミノペンチル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－イル）（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）メタノンを茶色粘性固体として得た（０．０４３ｇ、８０％）。
【0231】
LCMS (方法B): 1.625分, MS: ES+ 481.50 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.32 - 1.34 (m, 2H), 1.52 - 1.57 (m, 2H), 1.70 - 1.72 (m, 2H), 2.81 - 2.83 (m, 2H), 3.20 - 3.30 (m, 5H), 3.40 - 3.50 (m, 3H), 4.35 (m, 2H), 4.77 - 4.80 (m, 4H), 6.45 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 7.40 - 7.54 (m, 3H), 7.93 (br. s, 3H), 9.68 (bs, 1H), 10.38 (br. s, 1H), 11.78 - 12.09 (br. s, 2H).
【0232】
＜４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（ＡＡ）および（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（ピペラジン－１－イルメチル）イソインドリン－２－イル）メタノン塩酸塩（ＡＢ）の調製（図５）＞
［５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）］
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（実施例６参照）（３．０ｇ、１２．１３ミリモル）およびベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ：３１１６６－４４－６）（３．２ｇ、１４．５４ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）混合物を、４０℃で蒸発乾固した（凝集水を除去するために）。残留物をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解して、蒸発乾固した（微量のメタノールを除去するために）。このプロセスを１回繰り返してメタノールの除去を完了した。得られた残留物をＤＣＭ（９０ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置き、０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．８ｇ、１７．９３ミリモル）を、反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。以前の調製を２つの並行バッチで行い、合わせた反応混合物を水（２００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×２５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１００ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサンで溶出）によって精製して、５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）を茶色油として得た（５．０ｇ、４６％）。
［５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸Ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）］
５－ホルミルイソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ）（実施例６参照）（３．０ｇ、１２．１３ミリモル）およびベンジルピペラジン－１－カルボン酸塩（ＣＡＳ：３１１６６－４４－６）（３．２ｇ、１４．５４ミリモル）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）混合物を、４０℃で蒸発乾固した（凝集水を除去するために）。残留物をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解して、蒸発乾固した（微量のメタノールを除去するために）。このプロセスを１回繰り返してメタノールの除去を完了した。得られた残留物をＤＣＭ（９０ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下に置き、０℃に冷却した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．８ｇ、１７．９３ミリモル）を、反応混合物に０℃で少しずつ添加した。反応混合物を室温にゆっくり温め、１６時間撹拌した。以前の調製を２つの並行バッチで行い、合わせた反応混合物を水（２００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×２５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１００ｍＬ）で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、真空下で濃縮して粗物質を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサンで溶出）によって精製して、５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）を茶色油として得た（５．０ｇ、４６％）。
【0233】
LCMS (方法A): 1.631分, MS: ES+ 452.32 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.45 (s, 9H), 2.30 - 2.33 (m, 4H), 3.33 - 3.39 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 4.56 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 5.07 (s, 2H), 7.22 - 7.37 (m, 8H).
【0234】
［４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル塩酸塩（Ｚ）］
５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）（１．０ｇ、２．２１ミリモル）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５．０ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（３×１０ｍＬ）で粉砕した。得られた固体を高真空下で乾燥して、４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル塩酸塩（Ｚ）を緑色固体として得た（０．９９ｇ、定量）。
５－（（４－（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン－１－イル）メチル）イソインドリン－２－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（Ｙ）（１．０ｇ、２．２１ミリモル）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサン（５．０ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して、粗物質をジメチルエーテル（３×１０ｍＬ）で粉砕した。得られた固体を高真空下で乾燥して、４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル塩酸塩（Ｚ）を緑色固体として得た（０．９９ｇ、定量）。
【0235】
LCMS (方法E): 0.865分, MS: ES+ 352.22 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 3.02 - 3.04 (m, 2H), 3.26 - 3.29 (m, 2H), 3.36 - 3.46 (m, 2H), 3.60 - 3.62 (m, 4H), 4.06 - 4.10 (m, 2H), 4.32 - 4.34 (m, 2H), 4.50 - 4.52 (m, 4H), 5.11 (s, 2H), 7.32 - 7.40 (m, 5H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8 Hz, 1H), 10.23 (br. s, 2H), 11.71 (br s, 1H).
【0236】
［４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（ＡＡ）］
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．２０５ｇ、１．０４６ミリモル）のＤＭＦ（１０ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．９７ｇ、５．０６ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．３４０ｇ、２．５１ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．６５ｇ、５．０３ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル塩酸塩（Ｚ）（０．９８０ｇ、２．５２ミリモル）を反応に室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波を１２０℃で１時間照射した。得られた反応混合物を冷水（６０ｍＬ）に注ぎ、固体物質が沈殿したらすぐに単離し、真空下で乾燥して、０．８ｇ粗物質を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）による精製は、４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジルをオフホワイトの固体としてもたらした（０．３９５ｇ、３０％）。
２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピル安息香酸（０．２０５ｇ、１．０４６ミリモル）のＤＭＦ（１０ｍＬ）混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．９７ｇ、５．０６ミリモル）、ＨＯＢｔ（０．３４０ｇ、２．５１ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（０．６５ｇ、５．０３ミリモル）をマイクロ波ガラス管中、室温で添加した。４－（イソインドリン－５－イルメチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル塩酸塩（Ｚ）（０．９８０ｇ、２．５２ミリモル）を反応に室温で添加した。マイクロ波ガラス管を封止し、マイクロ波を１２０℃で１時間照射した。得られた反応混合物を冷水（６０ｍＬ）に注ぎ、固体物質が沈殿したらすぐに単離し、真空下で乾燥して、０．８ｇ粗物質を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出）による精製は、４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－カルボン酸ベンジルをオフホワイトの固体としてもたらした（０．３９５ｇ、３０％）。
【0237】
LCMS (方法E): 1.567分, MS: ES+ 530.22 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.10 - 1.19 (m, 6H), 2.30 - 2.32 (m, 4H), 3.06 - 3.13 (m, 1H), 3.39 - 3.43 (m, 4H), 3.48 (s, 2H), 4.66 - 4.76 (m, 4H), 5.07 (s, 2H), 6.39 (s, 1H), 7.04 (s, 2H), 7.22 - 7.28 (m, 2H), 7.30 - 7.39 (m, 5H), 9.61 (s, 1H), 10.06 (s, 1H).
【0238】
［（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（ピペラジン－１－イルメチル）イソインドリン－２－イル）メタノン塩酸塩（ＡＢ）］
４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）－ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（ＡＢ）（０．３０ｇ、０．５６ミリモル）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、ＡｃＯＨ（０．６ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．２０ｇ、２０％ ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物を１０℃～１５℃に冷却し、Ｈ２（ｇ）で２時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過し、１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄して粗物質（０．４０ｇ）を得、これを（０．０５％ＨＣｌ／水およびアセトニトリル）を使用した分取ＨＰＬＣによって精製した。得られた画分を凍結乾燥して、（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（ピペラジン－１－イルメチル）イソインドリン－２－イル）メタノン塩酸塩をオフホワイトの固体として得た（０．２０ｇ、８２％）。
４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）－ピペラジン－１－カルボン酸ベンジル（ＡＢ）（０．３０ｇ、０．５６ミリモル）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、ＡｃＯＨ（０．６ｍＬ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％水分）（０．２０ｇ、２０％ ｗ／ｗ）を室温で添加した。反応混合物を１０℃～１５℃に冷却し、Ｈ２（ｇ）で２時間パージした。反応混合物をセライト床に通して濾過し、１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄して粗物質（０．４０ｇ）を得、これを（０．０５％ＨＣｌ／水およびアセトニトリル）を使用した分取ＨＰＬＣによって精製した。得られた画分を凍結乾燥して、（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）（５－（ピペラジン－１－イルメチル）イソインドリン－２－イル）メタノン塩酸塩をオフホワイトの固体として得た（０．２０ｇ、８２％）。
【0239】
LCMS (方法E): 1.072分, MS: ES+ 396.27 (M+1); 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.12 - 1.14 (m, 6H), 3.07 - 3.10 (m, 1H), 3.40 - 3.47 (m, 8H), 4.36 - 4.37 (m, 2H), 4.77 - 4.49 (m, 4H), 6.49 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 7.38 - 7.59 (m, 3H), 9.73 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 10.05 (s, 1H).
【0240】
＜蛍光分極のタンパク質依存性＞
アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）でのタンパク質（組換えＮ末端ＰＭＳ２（残基１～３６５）または組換えＮ末端ＭＬＨ１（残基１５～３４０）のいずれか）の１１段階１／２連続希釈（11 point 1 in 2 serial dilution）を、透明なポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８４２０１）で構築した。連続希釈の最高濃度は２μＭであった。１２番目の濃度点は緩衝液のみであった（タンパク質対照なし）。
アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）でのタンパク質（組換えＮ末端ＰＭＳ２（残基１～３６５）または組換えＮ末端ＭＬＨ１（残基１５～３４０）のいずれか）の１１段階１／２連続希釈（11 point 1 in 2 serial dilution）を、透明なポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８４２０１）で構築した。連続希釈の最高濃度は２μＭであった。１２番目の濃度点は緩衝液のみであった（タンパク質対照なし）。
【0241】
連続希釈物を２×タンパク質として使用し、２０μＬをＢｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に添加した。プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で３０分間インキュベートした後、２×（５ｎＭまたは２ｎＭのいずれか）のプローブ２０μＬを、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でアッセイ緩衝液（１００μＭ ＤＭＳＯストックから調製）に添加した。
【0242】
化合物プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で１時間インキュベートした後、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳＸ（３８４ウェルアパーチャースプーン（aperture spoon））および適当なＦＰモジュールを装着した）で読み取った。各プレートを読み取る前に、ゲインおよびフォーカスをタンパク質対照なしの分極が３５ｍＰと等しくなるように調整した。データをプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．１．０で分析した（図６～９）。
【0243】
＜アッセイプロトコル＞
（アッセイＡ：ＭＬＨ１の蛍光分極アッセイ）
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用してＢｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用し、アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ｍｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）中の組換えＮ末端ＭＬＨ１（残基１５～３４０）の２×溶液（２００ｎＭ）２０μＬをカラム１～２３の全てのウェルに添加して、２０μＬアッセイ緩衝液をカラム２４の全てのウェルに添加した。プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（１ｍＭ ＤＭＳＯストックから調製）中の１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）の２×（１０ｎＭ）２０μＬをＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で添加した。Ｎ末端ＭＬＨ１の最終濃度は１００ｎＭであり、１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）の最終濃度は５ｎＭであった。化合物プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で１時間インキュベートした後、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳＸ（３８４ウェルアパーチャースプーンおよび５９０ ６７５ ６７５ ＦＰ光学モジュールを装着した）で読み取った。各プレートを読み取る前に、ゲインおよびフォーカスを酵素対照なし（カラム２４）の分極が３５ｍＰと等しくなるように調整した。データを、阻害剤対照なし（カラム２３）および酵素対照なし（カラム２４）に対して正規化した。
（アッセイＡ：ＭＬＨ１の蛍光分極アッセイ）
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用してＢｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用し、アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ｍｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）中の組換えＮ末端ＭＬＨ１（残基１５～３４０）の２×溶液（２００ｎＭ）２０μＬをカラム１～２３の全てのウェルに添加して、２０μＬアッセイ緩衝液をカラム２４の全てのウェルに添加した。プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（１ｍＭ ＤＭＳＯストックから調製）中の１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）の２×（１０ｎＭ）２０μＬをＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で添加した。Ｎ末端ＭＬＨ１の最終濃度は１００ｎＭであり、１－（６－（（２－（２－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）エトキシ）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）－３，３－ジメチル－２－（（１Ｅ，３Ｅ）－５－（（Ｅ）－１，３，３－トリメチルインドリン－２－イリデン）ペンタ－１，３－ジエン－１－イル）－３Ｈ－インドール－１－イウム（実施例１）の最終濃度は５ｎＭであった。化合物プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で１時間インキュベートした後、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳＸ（３８４ウェルアパーチャースプーンおよび５９０ ６７５ ６７５ ＦＰ光学モジュールを装着した）で読み取った。各プレートを読み取る前に、ゲインおよびフォーカスを酵素対照なし（カラム２４）の分極が３５ｍＰと等しくなるように調整した。データを、阻害剤対照なし（カラム２３）および酵素対照なし（カラム２４）に対して正規化した。
【0244】
（アッセイＢ：ＭＬＨ１の蛍光分極アッセイ）
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用してＢｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。シングルポイントスクリーニングのために、試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。効力判定のために、試験化合物の連続希釈物をカラム３～２２のウェルに添加し、ＤＭＳＯ容量はプレート全体にわたって正規化した。
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用してＢｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。シングルポイントスクリーニングのために、試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。効力判定のために、試験化合物の連続希釈物をカラム３～２２のウェルに添加し、ＤＭＳＯ容量はプレート全体にわたって正規化した。
【0245】
アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ｍｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）中の組換えＮ末端ＭＬＨ１（残基１５～３４０）の２×溶液（２００ｎＭ）２０μＬを、効力判定用にはカラム２～２３、またはシングルポイントスクリーニング用にはカラム１～２３の全てのウェルに添加した。２０μＬアッセイ緩衝液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してカラム１および２４（シングルポイントスクリーニングについてはカラム２４のみ）の全てのウェルに添加した。プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（１００μＭ ＤＭＳＯストックから調製）中の５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例５）の２×（１０ｎＭ）２０μＬをＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で添加した。Ｎ末端ＭＬＨ１の最終濃度は１００ｎＭであり、５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例５）の最終濃度は５ｎＭであった。
【0246】
化合物プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で１５分間インキュベートした後、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳＸ（３８４ウェルアパーチャースプーンおよび５４０ ５９０ ５９０ ＦＰ光学モジュールを装着した）で読み取った。各プレートを読み取る前に、ゲインおよびフォーカスを酵素対照なし（カラム２４）の分極が３５ｍＰと等しくなるように調整した。データを、阻害剤対照なし（カラム２３）および酵素対照なし（カラム２４）に対して正規化した。
【0247】
（アッセイＣ：ＰＭＳ２の蛍光分極アッセイ）
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用して、Ｂｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。シングルポイントスクリーニングのために、試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。効力判定のために、試験化合物の連続希釈物をカラム３～２２のウェルに添加し、ＤＭＳＯ容量はプレート全体にわたって正規化した。
１０ｍＭ ＤＭＳＯストックとしての試験化合物を、Ｌａｂｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ音響液体ハンドラーを使用して、Ｂｌａｃｋ Ｆｌｕｏｔｒａｃ ２００ ３８４ウェル培地結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ、商品番号７８１０７６）に分注した。シングルポイントスクリーニングのために、試験化合物をカラム１～２２のウェルに添加し、一方ＤＭＳＯは、プレートを正規化するためにカラム２３および２４のウェルに添加した。効力判定のために、試験化合物の連続希釈物をカラム３～２２のウェルに添加し、ＤＭＳＯ容量はプレート全体にわたって正規化した。
【0248】
アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ｍｇＣｌ２、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、５ｍＭジチオスレイトール）中の組換えＮ末端ＰＭＳ２（残基１～３６５）の２×溶液（２００ｎＭ）２０μＬを、効力判定用にはカラム２～２３、またはシングルポイントスクリーニング用にはカラム１～２３の全てのウェルに添加した。２０μＬアッセイ緩衝液を、ＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してカラム１および２４（シングルポイントスクリーニングについてはカラム２４のみ）の全てのウェルに添加した。プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（１００μＭ ＤＭＳＯストックから調製）中の５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例５）の２×（１０ｎＭ）２０μＬをＭｕｌｔｉＤｒｏｐ Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で添加した。Ｎ末端ＰＭＳ２の最終濃度は１０ｎＭであり、５－（（５－（４－（（２－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルベンゾイル）イソインドリン－５－イル）メチル）ピペラジン－１－イル）ペンチル）カルバモイル）－２－（６－（ジメチルアミノ）－３－（ジメチルイミノ）－３Ｈ－キサンテン－９－イル）安息香酸（実施例５）の最終濃度は５ｎＭであった。
【0249】
化合物プレートを２５０×ｇで１分間遠心分離し、室温で１時間間インキュベートした後、ＰｈｅｒａＳｔａｒ ＦＳＸ（３８４ウェルアパーチャースプーンおよび５４０ ５９０ ５９０ ＦＰ光学モジュールを装着した）で読み取った。各プレートを読み取る前に、ゲインおよびフォーカスを酵素対照なし（カラム２４）の分極が３５ｍＰと等しくなるように調整した。データを、阻害剤対照なし（カラム２３）および酵素対照なし（カラム２４）に対して正規化した。
【0250】
上記のアッセイは、ＭＬＨ１および／またはＰＭＳ２に結合する化合物をスクリーニングするのに使用できる。例えば、化合物ＡＢのＩＣ５０は、アッセイプロトコルＡ（図１０）を使用すると１０．７μＭと決定され、化合物ＡＢのＩＣ５０は、アッセイプロトコルＣ（図１１）を使用すると０．１７９μＭと決定される。
【0251】
【表1】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【国際調査報告】