▶ サイオート バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-17
(54)【発明の名称】自閉症および関連障害を処置または改善するための方法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/747 20150101AFI20230310BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230310BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20230310BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230310BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20230310BHJP
A61P 1/06 20060101ALI20230310BHJP
A61P 1/12 20060101ALI20230310BHJP
A61P 1/14 20060101ALI20230310BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20230310BHJP
A61P 25/22 20060101ALI20230310BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230310BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230310BHJP
【ＦＩ】
A61K35/747
A61P25/00
A61K47/36
A61P43/00 111
A61P1/00
A61P1/06
A61P1/12
A61P1/14
A61P25/24
A61P25/22
A61K47/26
A61P1/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022542910
(86)(22)【出願日】2021-01-13
(85)【翻訳文提出日】2022-09-09
(86)【国際出願番号】 US2021013280
(87)【国際公開番号】W WO2021146316
(87)【国際公開日】2021-07-22
(31)【優先権主張番号】62/960,331
(32)【優先日】2020-01-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/960,328
(32)【優先日】2020-01-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522279302
【氏名又は名称】サイオート バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ハイマン， マーク
【テーマコード（参考）】
4C076
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C076AA22
4C076AA29
4C076BB01
4C076CC01
4C076CC09
4C076CC29
4C076DD67
4C076EE30
4C076FF63
4C076FF70
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC56
4C087MA05
4C087MA21
4C087MA43
4C087MA52
4C087NA03
4C087NA14
4C087ZA02
4C087ZA05
4C087ZA12
4C087ZA66
4C087ZC51
(57)【要約】
本開示は、部分的には、プロバイオティクス細菌、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む細菌製剤を使用して疾患を処置または予防する方法に関する。本発明は、例えば、自閉症スペクトラム障害を処置または改善する方法であって、それを必要とする対象において、前記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と、生体適合性ミクロスフェアと、必要に応じてプレバイオティクスと、を含む治療有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
自閉症スペクトラム障害を処置または改善する方法であって、それを必要とする対象において、前記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と、生体適合性ミクロスフェアと、必要に応じてプレバイオティクスと、を含む治療有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項2】
前記自閉症スペクトラム障害が、自閉症障害、アスペルガー症候群、ヘラー症候群、レット症候群、および広汎性発達障害、ならびに特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤ－ＮＯＳ）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記組成物が、デキストラノマー微粒子と、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉと、ＡＴＣＣ２３２７２と、プレバイオティクスと、を含む、請求項１～２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項4】
前記組成物の少なくとも１つの１日用量を前記対象への投与の際に、前記対象がオキシトシンレベルの上方制御を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記対象が、小児患者である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記対象が、胃腸障害も有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
胃腸障害について患者を処置する方法であって、デキストラノマー微粒子、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、ＡＴＣＣ２３２７２、およびプレバイオティクスを含む組成物を投与することを含む方法。
【請求項8】
前記患者が、自閉症スペクトラムであるか、または自閉症である、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記胃腸障害が、抗生物質投与に関連する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項10】
胃腸障害に罹患している自閉症患者を処置する方法であって、デキストラノマー微粒子、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、ＡＴＣＣ２３２７２、およびプレバイオティクスを含む組成物を投与することを含む方法。
【請求項11】
前記胃腸障害が、便秘、腹痛、鼓腸および下痢のうちの１または複数である、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
未熟児における早産に関連する発達障害を処置する方法であって、前記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を前記未熟児に投与することを含む、方法。
【請求項13】
オキシトシンを誘導する方法であって、それを必要とする未熟児において、前記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を前記未熟児に投与することを含む、方法。
【請求項14】
前記組成物が、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスをさらに含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項15】
前記組成物が、デキストラノマー微粒子と、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉと、ＡＴＣＣ２３２７２と、プレバイオティクスと、を含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記組成物の少なくとも１つの１日用量を前記未熟児への投与の際に、前記未熟児がオキシトシンレベルの上方制御を有する、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
抗生物質レジメンの投与による患者の胃腸炎症を処置する方法であって、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェア、および／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項18】
経口抗生物質レジメンの投与に関連する胃腸炎症を有するかまたは有すると予想される患者を処置する方法であって、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェア、および／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項19】
前記組成物が、前記抗生物質レジメンの投与前、前記抗生物質レジメンの投与中、および／または前記抗生物質レジメンの投与後に投与される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項20】
経口抗生物質関連の有害作用を実質的に予防または減少させる方法であって、それを必要とする対象において、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアを含む治療有効量の組成物を投与することを含み、前記対象が、前記経口抗生物質による処置を受けている、方法。
【請求項21】
うつ病または不安障害を処置する方法であって、それを必要とする対象において、前記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項22】
うつ病が、臨床的うつ病、産後または分娩後うつ病、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、双極性障害、非定型うつ病、メランコールうつ病、精神病性大うつ病（ＰＭＤ）、緊張型うつ病、季節性情動障害（ＳＡＤ）、気分変調症、二重うつ病、うつ病性人格障害（ＤＰＤ）、再発性短期うつ病（ＲＢＤ）、軽度うつ病性障害、双極性障害または躁病性うつ病性障害、処置抵抗性うつ病、難治性うつ病、自殺念慮、希死念慮および自殺行動からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記患者が、産後または分娩後うつ病を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項24】
前記組成物が、１回投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記組成物が、毎日投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記プレバイオティクスが水溶性炭水化物を含み、前記水溶性炭水化物が、イヌリン、オリゴフルクトース、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、グルコース、デンプン、マルトース、マルトデキストリン、ポリデキストロース、アミロース、スクロース、フルクトース、ラクトース、イソマルツロース、ポリオール、グリセロール、カーボネート、チアミン、コリン、ヒスチジン、トレハロース、窒素、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、リン、リン酸塩、ヒドロキシアパタイト、カリウム、炭酸カリウム、硫黄、ホモ多糖、ヘテロ多糖、セルロース、キチン、ビタミン、またはそれらの組み合わせのうちの１または複数を含む、請求項１～２５に記載の方法。
【請求項27】
前記プレバイオティクスが、マルトースである、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０２０年１月１３日に出願された米国特許出願番号第６２／９６０，３２８号および２０２０年１月１３日に出願された米国特許出願番号第６２／９６０，３３１号に基づく優先権を主張し、これらの内容は参考として本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年１月１３日に出願された米国特許出願番号第６２／９６０，３２８号および２０２０年１月１３日に出願された米国特許出願番号第６２／９６０，３３１号に基づく優先権を主張し、これらの内容は参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【0002】
背景
プロバイオティクスは、十分な量で摂取されると宿主に健康上の利益を与える生きた微生物である（国際連合食糧農業機関および世界保健機関、「Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｍｉｌｋ ｗｉｔｈ Ｌｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ」（２００１））。結果として、プロバイオティクスは、疾患を処置するための実行可能な選択肢として牽引力を得ている（Ｈｅｍａｒａｊａｔａ，Ｐ．ら．（２０１３）；Ｔｈｅｒａｐ Ａｄｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．；６（１）：３９－５１）。細菌は、プランクトン様（自由生物）とは対照的に、既にバイオフィルムの活性化形態（表面および／または自己接着性コミュニティ）である場合、より容易に定着し、持続する。プロバイオティクス細菌のプラスの効果は、それらを活性化状態で提供することによって増強することができる。これは、細菌を生体適合性で非毒性のミクロスフェアの表面に曝露することによって容易に達成することができる。
プロバイオティクスは、十分な量で摂取されると宿主に健康上の利益を与える生きた微生物である（国際連合食糧農業機関および世界保健機関、「Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｐｏｗｄｅｒｅｄ Ｍｉｌｋ ｗｉｔｈ Ｌｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ」（２００１））。結果として、プロバイオティクスは、疾患を処置するための実行可能な選択肢として牽引力を得ている（Ｈｅｍａｒａｊａｔａ，Ｐ．ら．（２０１３）；Ｔｈｅｒａｐ Ａｄｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．；６（１）：３９－５１）。細菌は、プランクトン様（自由生物）とは対照的に、既にバイオフィルムの活性化形態（表面および／または自己接着性コミュニティ）である場合、より容易に定着し、持続する。プロバイオティクス細菌のプラスの効果は、それらを活性化状態で提供することによって増強することができる。これは、細菌を生体適合性で非毒性のミクロスフェアの表面に曝露することによって容易に達成することができる。
【0003】
オキシトシンは、泌乳および分娩におけるその古典的な役割を超えて重要な精神神経系および代謝ホルモンとして最近関心を集めている視床下部由来の下垂体後葉保存ノナペプチドである。オキシトシンは、愛着、社会的探求、および認識などの複雑な社会的認知および行動の認識の中心である。健康なヒトでは、オキシトシンは、扁桃体および前帯状皮質などの社会的脳領域の受容体に結合する（Ｂｏｃｃｉａ，Ｍ．ら（２０１３）；Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．；２５３，１５５－１６４）。それは、社会的ストレスの調節、感情認識および記憶形成などの社会的脳機能を調節するネットワークの重要な構成要素である（Ｍｅｙｅｒ－Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇ，Ａ．ら（２０１１）；Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｒｕｏｓｃｉ．；１２，５２４）。自閉症障害では、いくつかの研究において、オキシトシンの鼻腔内投与は、感情認識を改善することを報告した。さらに、オキシトシンは、鼻腔内投与による送達を促す血液－脳関門を通過しない。しかしながら、鼻腔内オキシトシンは、持続的な生理学的レベルの拍動性オキシトシンシグナル伝達を達成することができない。自閉症患者はまた、胃腸障害の発生率が増加し得る。
【0004】
さらに、多くの患者において、抗生物質の使用は、軽度（例えば、胃の不調、悪心、下痢および嘔吐など）から重度（例えば、腹痛、シュードモナス大腸炎）の範囲の胃腸障害の副作用を伴う。これらの副作用は、抗生物質処置を受けている小児および高齢者（６５歳以上の患者）集団においてさらに顕著であり得る。これらの抗生物質レジメンに関連する胃腸副作用は、腸の正常な消化過程を促進するのに必要な有益な細菌叢の排除から生じることが報告されている。科学的研究は、抗生物質の使用が腸の正常な生態系の破壊をもたらし、有益な細菌の集団の減少および有害な細菌の異常かつ有害な増加を引き起こすことを示している。
したがって、自閉症、ならびに自閉症および／または抗生物質の使用に関連する胃腸障害を処置または改善するための安全で効果的な治療法が必要とされている。
したがって、自閉症、ならびに自閉症および／または抗生物質の使用に関連する胃腸障害を処置または改善するための安全で効果的な治療法が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｈｅｍａｒａｊａｔａ，Ｐ．ら．（２０１３）；Ｔｈｅｒａｐ Ａｄｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．；６（１）：３９－５１
【非特許文献2】Ｂｏｃｃｉａ，Ｍ．ら（２０１３）；Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．；２５３，１５５－１６４
【非特許文献3】Ｍｅｙｅｒ－Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇ，Ａ．ら（２０１１）；Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｒｕｏｓｃｉ．；１２，５２４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
要旨
本開示は、一部は、自閉症スペクトラム障害を処置または改善する方法であって、それを必要とする対象において、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と、生体適合性ミクロスフェアと、必要に応じてプレバイオティクス（例えば、デキストラノマー微粒子を含む組成物；寄託物＃ＡＴＣＣ２３２７２を有するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ；およびプレバイオティクス）を含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む方法に関し、提供される方法による処置のための企図される自閉症スペクトラム障害には、自閉症障害、アスペルガー症候群、ヘラー症候群、レット症候群、および特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤ－ＮＯＳ）が含まれ得る。
本開示は、一部は、自閉症スペクトラム障害を処置または改善する方法であって、それを必要とする対象において、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と、生体適合性ミクロスフェアと、必要に応じてプレバイオティクス（例えば、デキストラノマー微粒子を含む組成物；寄託物＃ＡＴＣＣ２３２７２を有するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ；およびプレバイオティクス）を含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む方法に関し、提供される方法による処置のための企図される自閉症スペクトラム障害には、自閉症障害、アスペルガー症候群、ヘラー症候群、レット症候群、および特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤ－ＮＯＳ）が含まれ得る。
【0007】
例えば未熟児における早産に関連し得る発達障害および／または自閉症を処置する方法であって、それを必要とする患者、例えば未熟児に、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を投与することを含む方法が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、組成物は、デキストラノマー微粒子と、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉと、ＡＴＣＣ２３２７２と、プレバイオティクスと、を含む。特定の実施形態では、組成物の少なくとも１つの１日用量を対象に投与すると、対象はオキシトシンレベルの上方制御を有する。
【0008】
一実施形態では、抗生物質レジメンの投与による患者の胃腸炎症を処置する方法であって、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェア、および／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、方法が、本明細書で提供される。例えば、経口抗生物質レジメンの投与に関連する胃腸炎症を有するかまたは有すると予想される患者を処置する方法であって、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェア、および／またはプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）を含む治療有効量の組成物を患者に投与することを含む、方法が、本明細書で提供される。そのような組成物は、抗生物質レジメンの投与前、抗生物質レジメンの投与中、および／または抗生物質レジメンの投与後に投与され得る。経口抗生物質関連の有害作用を実質的に予防または減少させる方法であって、それを必要とする対象において、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアを含む治療有効量の組成物を投与することを含み、対象が、経口抗生物質による処置を受けている方法も、一実施形態では、提供される。
【0009】
うつ病または不安障害を処置する方法であって、それを必要とする対象において、上記方法が、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）を含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、方法も、本明細書において企図され、提供される。例えば、本明細書では、開示される方法を使用して、臨床的うつ病、産後または分娩後うつ病、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、双極性障害、非定型うつ病、メランコールうつ病、精神病性大うつ病（ＰＭＤ）、緊張型うつ病、季節性情動障害（ＳＡＤ）、気分変調症、二重うつ病、うつ病性人格障害（ＤＰＤ）、再発性短期うつ病（ＲＢＤ）、軽度うつ病性障害、双極性障害または躁病性うつ病性障害、処置抵抗性うつ病、難治性うつ病、自殺念慮、希死念慮および自殺行動のうちの１または複数を処置する方法が提供される。特定の実施形態では、患者は、産後または分娩後うつ病を有する。
【0010】
いくつかの実施形態では、本明細書で企図される処置方法は、必要とする男性または女性対象を対象とし得る。いくつかの実施形態では、本明細書で企図される処置方法は、乳児、小児、または成人を対象とし得る。特定の実施形態では、本明細書で企図される処置方法は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を投与することを含み、組成物は単位用量として投与される。特定の他の実施形態では、組成物は複数用量で投与される。特定の実施形態では、組成物は、少なくとも毎日投与される。特定の実施形態では、組成物は１回投与される。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【0012】
【0013】
【0014】
【0015】
【0016】
【0017】
【0018】
【0019】
【0020】
【0021】
【0022】
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【0028】
【0029】
【発明を実施するための形態】
【0030】
詳細な説明
本開示は、部分的には、プロバイオティクス細菌、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む細菌製剤を使用して疾患または障害を処置または予防する方法に関する。
本開示は、部分的には、プロバイオティクス細菌、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む細菌製剤を使用して疾患または障害を処置または予防する方法に関する。
【0031】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で引用されるすべての技術刊行物および特許刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0032】
本技術の実施は、別段の指示がない限り、当業者の技能の範囲内である、組織培養、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学および組換えＤＮＡの従来の技術を使用する。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ編集．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ａｕｓｕｂｅｌら編集（２００７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら（１９９１）ＰＣＲ １：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら（１９９５）ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ編集（１９９９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（２００５）Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｇａｉｔ ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ編集（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ編集（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８６））；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ編集（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍａｋｒｉｄｅｓ ｅｄ．（２００３）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ編集（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；およびＨｅｒｚｅｎｂｅｒｇら編集（１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙを参照のこと。
【0033】
範囲を含むすべての数値表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度および分子量は、必要に応じて１．０もしくは０．１の増分で、または代替では＋／－１５％、または代替では１０％、または代替では５％、または代替では２％の変動で（＋）または（－）変動する近似値である。常に明示的に述べられているわけではないが、すべての数値指定の前に「約」という用語があることを理解されたい。また、常に明示的に述べられているわけではないが、本明細書に記載される試薬は、単なる例示であり、そのような試薬の均等物は、当技術分野で公知であることも理解されるべきである。
【0034】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「細菌」という用語は、その混合物を含む複数の細菌を含む。
【0035】
本明細書で使用される場合、「製剤」という用語は、「組成物」と互換的に使用され得る。
【0036】
以下の定義は、本主題を理解する目的および添付の特許請求の範囲を構成する目的で含まれる。本明細書で使用される略語は、化学および生物学の分野における従来の意味を有する。
定義
定義
【0037】
本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」などの用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味するために本明細書で使用される。効果は、障害またはその徴候もしくは病徴を完全にまたは部分的に予防するという点で予防的であってよく、および／または障害および／または障害に起因する有害作用の部分的または完全な治癒という点で治療的であり得る。
【0038】
「予防する」ことは、障害または作用を受けやすい系または対象において、インビトロまたはインビボで障害または作用を予防することを意図する。そのような例は、対象において満腹状態を達成することによって肥満を予防することである。
【0039】
本明細書に記載の「対象」または「患者」は、哺乳動物、霊長類、およびヒトを含むがこれらに限定されない、疾患または障害（例えば、自閉症スペクトラム障害、うつ病、不安障害、または発達障害）のリスクがある、疾患または障害に罹患している、または疾患または障害について診断された任意の動物を指す。特定の実施形態では、対象は、例えば、ネコ、ラット、イヌまたはウマなどの非ヒト哺乳動物であり得る。特定の実施形態では、対象は、ヒト対象である。特定の実施形態では、対象は、男性または女性である。いくつかの実施形態では、対象は、乳児、小児、または成人である。特定の実施形態では、対象は、分娩後の女性、妊娠中の女性、または授乳中の女性であり得る。
【0040】
「プレバイオティクス」は、プロバイオティクス細菌の栄養補助食品を意図している。プレバイオティクスは、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物によって）によって消化されず、１またはそれを超える有益な細菌の増殖もしくは活性を刺激し、および／または１またはそれを超える病原性細菌の増殖もしくは活性を阻害する食品成分、例えばオリゴ糖である。プレバイオティクスは、対象における１つまたは限られた数の細菌の増殖および／または活性を選択的に刺激し得る。
【0041】
「ミクロスフェア」は、列挙された特定のサイズ範囲内の多孔質および／または半透過性バイオフィルム担持および／または化合物担持（例えば、薬物担持）粒子状または粒状材料を意図する。本明細書で使用される場合、直径５０ミリメートルまたはそれ未満、および直径約１ミクロンまたはそれを超える（例えば、約１～約１００、または、約１～約７５ミクロン、または、約１～約５０、または、約１～約２５、または、約１～約１０ミクロン、または、約０．５～約２００ミクロン、または、約０．５～約７００ミクロン、または、約１～約６００ミクロン、または、約７００ミクロン未満、または、約６００ミクロン未満、または、５００ミクロン未満、または、約４００ミクロン未満、または、約３００ミクロン未満、または、約２００ミクロン未満、または、約１００ミクロン未満）の粒子からなるミクロスフェア。そのようなものの非限定的な例としては、多孔質および／または半透過性であり、いくつかの態様では、医薬または薬物、マイクロカプセル（賦形剤が、薬物、化学還元剤、または吸収性もしくは吸着性分子などのカーゴを取り囲んで収容する皮膚またはシェルを形成する）、および微粒子を含有することができる中空ミクロスフェアが挙げられ、これらの用語は、球形であろうとなかろうと、列挙されたサイズ範囲の任意の粒子の総称として使用され、これらの用語は当技術分野で典型的に使用される。
【0042】
「生分解性ポリマー」は、生体適合性であり、身体プロセスによってインビボで分解して、身体によって容易に使い捨て可能であり、体内に蓄積すべきではない製品になることができるポリマーを意図する。
【0043】
「生体適合性のある」とは、送達システムの構成要素がヒト生体系に組織傷害または傷害を引き起こさないだろうことを意味する。生体適合性を付与するために、ヒトまたはＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）状態での安全な使用の履歴を有するポリマーおよび賦形剤が優先的に使用される。生体適合性とは、組成物に使用される成分および賦形剤が、最終的に身体に有害な影響を及ぼすことなく身体によって「生体吸収」または除去されることを意味する。組成物が生体適合性であり、非毒性であると見なされるためには、組成物は細胞に対して毒性を引き起こしてはならない。同様に、「生体吸収性のある」という用語は、患者における材料の長期蓄積が回避されるような期間にわたってインビボで生体吸収を受ける材料から作製されたミクロスフェアを指す。生体適合性ナノ粒子は、２年未満、１年未満、または例えば６ヶ月未満の期間にわたって生体吸収され得る。生体吸収速度は、粒子のサイズ、使用される材料、および当業者によってよく認識される他の要因に関連する。生体吸収性、生体適合性の材料の混合物を使用して、本開示で使用される製剤中にミクロスフェアを形成することができる。
【0044】
「薬学的に許容される担体」は、本開示の組成物に使用され得る任意の希釈剤、賦形剤または担体を指す。薬学的に許容される担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。適切な医薬担体は、この分野の標準参考文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。それらは、好ましくは、意図された投与形態、すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などに関して選択され、従来の薬務と一致する。
【0045】
「投与」は、動物またはヒトなどの対象への物質の送達を意図する。投与は、処置の過程を通して連続的または断続的に、１回の用量で行うことができる。最も有効な投与手段および投与量を決定する方法は当業者に公知であり、治療に使用される組成物、治療の目的、ならびに処置される対象の年齢、健康状態または性別によって異なる。単回投与または複数回投与は、用量レベルおよびパターンが処置医によって選択されるか、またはペットおよび動物の場合、処置獣医によって選択されて実施され得る。適切な投与製剤および薬剤を投与する方法は、当技術分野で公知である。投与経路も決定することができ、最も有効な投与経路を決定する方法は、当業者に公知であり、処置に使用される組成物、処置の目的処置される対象の健康状態または疾患段階、および標的細胞または組織によって異なる。投与経路の非限定的な例としては、経口投与、膣投与、経腸投与、経鼻投与（吸入）、注射、局所適用および坐剤による投与が挙げられる。
【0046】
「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果または効果を達成するのに十分な量を指す。治療的または予防的適用の状況では、有効量は、問題となっている症状の種類および重症度、ならびに個々の対象の特徴、例えば、一般的な健康状態、年齢、性別、体重、および医薬組成物に対する耐性に依存する。治療用組成物との関連において、いくつかの実施形態では、有効量は、病原体に対する防御応答をもたらすのに十分な量、または健康状態を支持するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、その量は、１）病原体を排除する、２）健康な微生物叢を回復させる、３）免疫系を調節する、４）代謝および代謝経路を維持する、５）カロリー摂取を減らす、６）社会的行動を改善する、のうちの１または複数を達成するのに十分である。
【0047】
インビトロまたはエクスビボ用途の場合、いくつかの実施形態では、有効量は、問題の用途のサイズおよび性質に依存する。それはまた、インビトロ標的および使用中の方法の性質および感度に依存する。当業者は、これらおよび他の考慮事項に基づいて有効量を決定することができる。有効量は、実施形態に応じて組成物の１またはそれを超える投与を含み得る。
【0048】
薬剤および組成物は、医薬組成物中の活性成分などの従来の手順に従う投与によって、医薬品の製造において、ならびにヒトおよび他の動物の処置のために使用することができる。
組成物
組成物
【0049】
開示された方法で使用するための組成物は、薬学的に許容される賦形剤、例えばミクロスフェア、プロバイオティクス細菌（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）、およびプレバイオティクスを含んでよく、プレバイオティクスはプロバイオティクス細菌の栄養補助食品を含む。一態様では、組成物は、バイオフィルム、プレバイオフィルム、ミクロスフェアの表面上の治療薬物または薬剤のコーティング、化学還元剤、吸着を促進する分子、吸収を支援する分子のうちの１または複数をさらに含む。開示されるミクロスフェアは、中実コア、中空コア、または多孔質コアを有してもよく、一態様では、ミクロスフェアは、プレバイオティクスを中空コアまたは多孔質コア内に封入する。ミクロスフェアは、生体適合性および／または半透過性であり得る。一態様では、ミクロスフェアは、ミクロスフェアの外面上にバイオフィルム層またはコーティングを含む。一態様では、ミクロスフェアは、持続性および機能を増強する細菌を活性化する。
【0050】
企図される生体適合性ミクロスフェアは、生分解性ポリマーおよび／または非分解性ポリマーの群から選択される材料を含んでよく、そのような開示されたミクロスフェアは、約０．５ミクロン～約１０００ミクロンを有し得る。さらなる好ましい範囲は本明細書に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。ミクロスフェアは、多孔性および／または半透過性であり得る。
【0051】
生分解性ポリマーの非限定的な例は、デキストラン、デキストラノマー、例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（エピクロロヒドリンで架橋されたデキストラン）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）またはＰＬＧＡ、ポリカプロラクトンまたはＰＬＣ、キトサン、ゼラチン、アセタール化デキストラン、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）、ポリ（ラクチド）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（グリコリド）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（乳酸）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（グリコール酸）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）／ポリ（エチレングリコール）コポリマー、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（ラクチド－コ－カプロラクトン）、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリアンドライド、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキレンアルキレート）、ポリエチレングリコール／ポリオルトエステルコポリマー、ポリウレタン、ポリ（アミノ酸）、ポリエーテルエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、ポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）コポリマー、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）コポリマーおよび／またはそれらの組み合わせ以下のうちの１または複数から選択される。
【0052】
非生分解性ポリマーの非限定的な例は、ポリ（エチレンビニルアセタート）、ポリ（ビニルアセタート）、シリコーンポリマー、ポリウレタン、多糖類、例えばセルロースポリマーおよびセルロース誘導体、アシル置換セルロースアセタートおよびその誘導体、ポリ（エチレングリコール）とポリ（ブチレンテレフタレート）とのコポリマー、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、ならびにそれらのコポリマーおよびブレンドのうちの１または複数から選択される。
【0053】
開示された方法で使用するための企図される組成物は、プレバイオティクス、例えば、水溶性炭水化物、イヌリン、オリゴ糖、オリゴフルクトース、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、グルコース、デンプン、マルトース、マルトデキストリン、ポリデキストロース、アミロース、スクロース、フルクトース、ラクトース、イソマルツロース、ポリオール、グリセロール、カーボネート、チアミン、コリン、ヒスチジン、トレハロース、窒素、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、ベータグルカン、リン、リン酸塩、ヒドロキシアパタイト、カリウム、炭酸カリウム、硫黄、ホモ多糖、ヘテロ多糖、セルロース、キチン、ビタミン、およびそれらの組み合わせのうちの１または複数を含み得る。
【0054】
別の態様では、プレバイオティクスは、トレハロース、硝酸ナトリウム中などの窒素、硝酸アンモニウム、ヒドロキシアパタイトなどのリン酸塩中などのリン、炭酸カリウム中などのカリウム、硫黄、オリゴ糖、ホモ多糖、ヘテロ多糖、セルロース、キチン、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、デンプン、ポリデキストロース、アミロース、グリセロール、カーボネート、およびそれらの組み合わせのうち、１または複数から選択される。例えば、マルトースおよび／またはＬ．ｒｅｕｔｅｒｉを含む組成物が本明細書に開示される。
【0055】
開示された方法で使用するための組成物は、抗菌性免疫の支持、対象の健康状態の増進もしくは支持、胃腸障壁の増強もしくは支持、または疾患関連細菌感染症の拮抗のうちの１または複数を提供するように選択されたプロバイオティクス細菌を含み得る。別の態様では、プロバイオティクス細菌は、病原体のコロニー形成を防止し、ならびに／または病原体を制限および／もしくは排除し、ならびに／またはサイトカインおよびケモカイン産生を下方制御することによって過剰な炎症応答を制限するように選択される。特定の実施形態では、プロバイオティクス細菌は、良好な身体的、精神的および社会的健康に寄与する、社会的結合、エネルギー代謝、創傷治癒における役割を有するホルモンを誘導するように選択される。プロバイオティクス細菌の非限定的な例は、Ｌ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ．クリスパータス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、Ｌ．ガセリ（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ）、グループＬ．デルブルエクイ（Ｌ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ．カゼイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、Ｌ．パラカゼイ（Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）、Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、Ｌ．ラムノーサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、Ｂ．ドラデセンティス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、Ｂ．アンギュレーション（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ．ブレベ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）、Ｂ．カテヌラム（Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、Ｂ．インファンティス（Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）、Ｂ．ラクチス（Ｂ．ｌａｃｔｉｓ）、Ｂ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）、Ｂ．シュードカテニュラタム（Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ，）、Ｓ．サーモフィレス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、Ｐ．プロテゲン（Ｐ．ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ）、Ｐ．ブラシカセラム（Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｒｕｍ）、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）；アゾスピリラム．ブラブラサイレンセ（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ．ｂｒａｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ）、Ａ．リップフェルム（Ａ．ｌｉｐｆｅｒｕｍ）、Ａ．イラケンセ（Ａ．ｉｒａｋｅｎｓｅ）；アセトバクター・ジアゾトロフィカス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、ヘルペス．セロペディカス（Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ）；バチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、シュードモナス・スツッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、フルオレセンス（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、Ｐ．プチダ（Ｐ．ｐｕｔｉｄａ）、Ｐ．セパシアン（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａｎ）、Ｐ．ベシクラリス（Ｐ．ｖｅｓｉｃｕｌａｒｉｓ）、Ｐ．パウシモビリス（Ｐ．ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓ）；バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、Ｂ．スファエリクス（Ｂ．ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ）；シェワネラ・オネイデンシス（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓ）；ゲオバクター・ベミジエンシス（Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ ｂｅｍｉｄｊｉｅｎｓｉｓ）、Ｇ．メタリデューセンス（Ｇ．ｍｅｔａｌｌｙｌｒｅｄｕｃｅｎｓ）、Ｇ．サルファレデューセンス（Ｇ．ｓｕｌｆｕｒｒｅｄｕｃｅｎｓ）、Ｇ．ウラニレデュセンス（Ｇ．ｕｒａｎｉｉｒｅｄｕｃｅｎｓ）、Ｇ．ロヴリー（Ｇ．ｌｏｖｌｅｙｉ）；セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、デスルホビブリオ・ブルガリス（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、デクロロモナス（Ｄ．ｄｅｓｕｌｆｕｒｉｃａｎｓ）、デクロロモナス・アロマティック（Ｄｅｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ ａｒｏｍａｔｉｃ）、デイノコッカス・ラジオデュランス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ）、メチリビウム・ペトロリフィラム（Ｍｅｔｈｙｌｉｂｉｕｍ ｐｅｔｒｏｌｅｉｐｈｉｌｕｍ）、アルカニボラックス・ボルクメンシス（Ａｌｃａｎｉｖｏｒａｘ ｂｏｒｋｕｍｅｎｓｉｓ）、アルケグロブス・フルギダス（Ａｒｃｈａｅｇｌｏｂｕｓ ｆｕｌｇｉｄｕｓ）、ハロフェラックス（Ｈａｌｏｆｅｒａｘｓｐ．）、ハロバクテリウム属（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種およびそれらの組み合わせのうちの１または複数である。特定の実施形態では、提供される開示された処置方法に使用するための組成物は、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（ＡＴＣＣ（登録商標）２３２７２（商標））を含む。
【0056】
開示される組成物は、さらなる薬剤、例えば、プロバイオティクス生物と競合し得る病原体に対して選択的な薬剤を含み得る。そのような相補的薬剤は、コア中、ミクロスフェアを含有する組成物中のミクロスフェアの表面上に存在し得る。そのような非限定的な例としては、化学還元剤吸着を促進する分子および／または表面（ミクロスフェアのコア内または表面上）；吸収を促進する分子および／または表面（コア内またはミクロスフェアの表面上）が挙げられる。一態様では、吸収を促進する化学還元剤および分子および／または表面は、ミクロスフェアの表面にコーティングされる。
【0057】
例えば、開示される組成物は、例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉを含む微粒子の外面にバイオフィルム層を形成し得る活性化細菌のコロニーを含み得る。そのような層は、深さが約０．５ミクロン～約１ミリメートルであってよく、例えば、約１ミクロン～約５００ミクロン、約１ミクロン～約２５０ミクロン、約１ミクロン～約２００ミクロン、約１ミクロン～約１００ミクロン、約１ミクロン～約５０ミクロン、約１ミクロン～約４０ミクロン、約１ミクロン～約３０ミクロン、約２ミクロン～約１００ミクロン、約２ミクロン～約５０ミクロン、約２ミクロン～約４０ミクロン、約２ミクロン～約３０ミクロン、約３ミクロン～約１００ミクロン、約３ミクロン～約５０ミクロン、約３ミクロン～約４０ミクロン、約３ミクロン～約３０ミクロン、約５ミクロン～約１００ミクロン、約５ミクロン～約５０ミクロン、約５ミクロン～約４０ミクロン、および約５ミクロン～約３０ミクロンの範囲であり得る。他の実施形態では、企図される組成物は、対象または処置される環境への投与時に細菌（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の活性化を支援する能力を有するための足場またはマトリックスを含む。
【0058】
本明細書で企図されるように、開示される方法で使用するための組成物は、担体、例えば薬学的に許容される担体または生体適合性足場と組み合わせて１つまたは複数のミクロスフェア組成物を含み得る。薬学的に許容される担体の非限定的な例としては、本開示の組成物に使用され得る希釈剤、賦形剤または担体が挙げられる。薬学的に許容される担体としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。
【0059】
開示される組成物は、バイオフィルム生成活性化プロバイオティクス細菌の剤形に製剤化することができ、または最終使用のための有効量のミクロスフェア組成物、例えば約１×１０５～１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌ、または代替では約１×１０５～約１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０５～約１×１０９ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０６～約１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０６～約１×１０９ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０７～約１×１０１１ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０７～約１×１０１０ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０７～約１×１０９ ＣＦＵ／ｍｌ、または約１×１０８ ＣＦＵ／ｍｌを提供することができる。
【0060】
特定の実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、約６、１２、１８、２４、３６、４８、および７２時間で投与することができるか、または処置のために単回投与で投与することができる。特定の実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、経口、膣、局所、吸入、静脈内、筋肉内、または坐剤によって投与することができる。それらは、任意の適切な製剤で投与することができる。
【0061】
組成物は、投与、貯蔵および適用を容易にするために、例えば、凍結、凍結乾燥、懸濁（懸濁製剤）または粉末化して、坐剤、錠剤、液剤、懸濁剤、丸剤、カプセル剤、徐放製剤として加工されて、製剤化または処理することができる。
【0062】
有効量の治療用組成物は、意図される目標に基づいて決定される。「単位用量」または「投与量」という用語は、対象での使用に適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、その投与、すなわち適切な経路およびレジメンに関連して上述した所望の応答を生じるように計算された所定量の組成物を含む。投与される量は、処置の回数および単位用量の両方に応じて、所望される結果および／または保護に依存する。組成物の正確な量も施術者の判断に依存し、各個人に固有である。用量に影響する因子としては、対象の身体的および臨床的状態、投与経路、意図される処置目標（病徴の緩和対治癒）、ならびに特定の組成物の効力、安定性および毒性が挙げられる。製剤化されると、溶液は、投与製剤と適合する様式で、治療的または予防的に有効であるような量で投与されるであろう。製剤は、上記の注射液の種類などの様々な剤形で容易に投与される。
【0063】
特定の実施形態では、本開示は、治療有効量の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与による処置方法を提供する。特定の実施形態では、細菌製剤は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェア、および／またはプレバイオティクスを含む。
方法
方法
【0064】
本明細書では、それを必要とする対象において細菌製剤によって適切に処置される疾患または障害を処置または予防する方法が提供される。この方法は、特定の治療のために選択された成分を有する、本明細書に開示される有効量の細菌製剤を対象に投与することを含む。本開示は、一実施形態では、治療有効量の細菌製剤（例えば、；Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与によってオキシトシンを誘導する方法を提供する。特定の実施形態では、オキシトシンは、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物の投与によって対象において誘導される。特定の実施形態では、治療有効量の細菌製剤（例えば、；Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与は、オキシトシン受容体を活性化する。
【0065】
特定の実施形態では、本開示は、一実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の薬学的に許容される組成物を対象に投与することによって、対象における自閉症障害、アスペルガー症候群、ヘラー症候群、レット症候群、および特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤ－ＮＯＳ）を含むがこれらに限定されない自閉症スペクトラム障害を処置、改善および／または予防する方法を提供する。
【0066】
必要とする対象において細菌製剤によって適切に処置される抗生物質レジメンの投与による疾患または障害（例えば、胃腸炎症）を処置または予防する方法も本明細書で提供される。この方法は、特定の治療のために選択された成分を有する、本明細書に開示される有効量の細菌製剤を対象に投与することを含む。疾患の非限定的な例としては、胃腸障害、例えば胃腸炎症、または抗生物質の使用によって引き起こされ、病原性細菌が健康な細菌を置換する、腸運動不全を伴う疾患もしくは障害、または疾患関連細菌感染に拮抗する慢性および／または再発性疾患のいずれかが挙げられる。
【0067】
本開示は、一実施形態では、治療有効量の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与によって、抗生物質レジメン（例えば、アジスロマイシン）の投与に起因する患者の胃腸炎症を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、胃腸炎症は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物の投与によって、対象において軽減または緩和される。
【0068】
特定の実施形態では、本開示は、経口抗生物質レジメンの投与に関連する胃腸炎症を有するかまたは有すると予想される患者を、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物を必要とする患者に投与することによって、処置する方法を提供する。特定の実施形態では、胃腸炎症は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物の投与によって有意に低減される。そのような経口抗生物質レジメンは、以下の一般的なクラス、例えばサルファ剤；葉酸類似体；ペニシリンおよびセファロスポリンを含むベータラクタム；テトラサイクリン；マクロライド；リンコサミド；ストレプトグラミン；フルオロキノロンを含むキノロン；ポリミキシンなどのポリペプチド；アミノシクリトール；糖ペプチド；オキサゾリジノン；などの経口抗生物質投与を含み得る。「抗生物質」は、抗生物質、抗菌薬、抗菌剤、抗感染剤などを意味する。
【0069】
例示的な抗生物質としては、アモキシシリン、アモキシシリンとクラブラン酸カリウムとの組み合わせ、アンピシリン、アンピシリンとスルバクタムとの組み合わせ、アトバコン、アジスロマイシン、カルベニシリン、セファクロル、セフジニル、セフォニシド、セフチブテン、セフォテタン、セフポドキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セファレキシン、セファロチン、セファマイシン、クロルテトラサイクリン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、クラリスロマイシン、サイクロセリン、ダルフォプリスチン、ジクロキサシリン、ドキシサイクリン、エリトマイシン、レボフロキサシン、リネゾリド、モキシフロキサシン、ムピロシン、オキシテトラサイクリン、ペニシリン、リファンピン、キヌプリスチン、ダルフォプリスチンとキヌプリスチンの組み合わせ、スペクチノマイシン、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルファメトロール、スルファモキソール、スルファレン、スルファニルアミド、テトラサイクリン、トリメトプリム、トリメトプリムとスルファメトキサゾールの組み合わせ、バンコマイシン、前述のうちの少なくとも１つのものを含む組み合わせなどを含む。特定の実施形態では、抗生物質レジメンはアジスロマイシンを含む。
【0070】
特定の実施形態では、本開示は、胃腸障害について患者を処置する方法であって、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む組成物を投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、胃腸障害は、便秘、腹痛、鼓腸、および下痢のうちの１または複数である。
【0071】
特定の実施形態では、本開示は、胃腸障害について患者を処置する方法であって、患者が自閉症スペクトラムであるかまたは自閉症である方法を提供する。
【0072】
経口抗生物質関連の有害作用を実質的に予防または減少させる方法であって、それを必要とする対象において、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）を含む治療有効量の組成物を使用する、方法が本明細書で提供される。
【0073】
特定の実施形態では、本開示に記載される細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、偽膜性大腸炎（クロストリジウム・ディフィシルの過剰増殖による大腸の炎症）、悪心、痙攣、下痢および嘔吐を含むがこれらに限定されない有害な胃腸（ＧＩ）副作用（例えば、ＧＩ副作用を有する別の医薬品、例えば抗生物質投与からのもの）を予防および／または改善および／または処置するために使用され得る。これらは、抗生物質に関連するいくつかの副作用である。しかしながら、これらの条件に対する本開示の文脈で使用される製剤の効果は、体重に対する効果を介して全体的または部分的に媒介され得るか、またはそれとは無関係であり得る。特定の実施形態では、開示の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、前述の障害および／または疾患を予防するための医薬品として使用することができる。いくつかの実施形態では、投与は、症状の１またはそれを超える病徴の軽減もしくは排除、症状の１またはそれを超える病徴の重症度の上昇の予防、および／またはさらなる疾患もしくは症状の軽減、予防、もしくは排除のうちの１または複数を引き起こす。
【0074】
特定の実施形態では、本開示に記載される細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の薬学的に許容される組成物の投与は、対象の胃腸炎症の減少を引き起こす。特定の実施形態では、投与は、患者の胃腸炎症の少なくとも５％の減少（例えば、少なくとも７％、１０％、２０％、３０％、５０％、７５％またはそれを超える減少）を引き起こす。
【0075】
特定の実施形態では、細菌組成物（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、抗生物質レジメンの投与前、抗生物質レジメンの投与中、および／または抗生物質レジメンの後に投与される。
【0076】
本開示は、一実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の薬学的に許容される組成物を対象に投与することによって、対象のうつ病または不安障害を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、うつ病または不安障害には、臨床的うつ病、産後または分娩後うつ病、産後強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、例えば、産後心的外傷後ストレス障害、産後双極性障害、非定型うつ病、うつ病性うつ病、精神病性大うつ病（ＰＭＤ）、緊張性うつ病、季節性情動障害（ＳＡＤ）、気分変調症、二重うつ病、うつ病性人格障害（ＤＰＤ）、再発性短期うつ病（ＲＢＤ）、軽度うつ病性障害、双極性障害または躁うつ病性障害、処置抵抗性うつ病、難治性うつ病、自殺念慮、希死念慮、および自殺行動が含まれる。いくつかの実施形態では、対象は、不安障害に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、うつ病に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、産後または分娩後うつ病に罹患している。
【0077】
本開示は、一実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の薬学的に許容される組成物を未熟児に投与することによって、早産に関連する発達障害を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、処置に使用される細菌製剤は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を含む。
【0078】
特定の実施形態では、本開示は、気管支肺異形成（ＢＰＤ）；知能欠陥、脳性麻痺、白質疾患；および未熟児網膜症が含まれるが、これらに限定されない早産に関連する発達障害の処置方法を提供する。
【0079】
特定の実施形態では、本開示は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）と薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の組成物量を未熟児に投与することによって、オキシトシンを必要とする未熟児において誘導する方法を提供する。特定の実施形態では、オキシトシンは、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物の投与によって未熟児において誘導される。
【0080】
特定の実施形態では、対象への細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の少なくとも１つの１日用量の投与は、オキシトシンレベルの上方制御をもたらす。特定の実施形態では、オキシトシンは、投与後の対象において少なくとも５％上方制御（例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、５０％、７５％またはそれを超える上方制御）される。
【0081】
特定の実施形態では、本開示は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、生体適合性ミクロスフェアおよび／またはプレバイオティクスを含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、必要としている対象において、泌乳を増強する方法を提供する。特定の実施形態では、本開示の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与後の泌乳の増強は、母乳の催乳および分泌に関与することが知られているオキシトシンのレベルの増加に起因する（Ｐａｎｇ，Ｗ．Ｗ．ら；（２００７）；Ｊ Ｍａｍｍａｒｙ Ｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌ Ｎｅｏｐｌａｓｉａ １２，２１１－２２１を参照のこと）。
【0082】
特定の実施形態では、本開示の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与は、オキシトシンレベルを増加させる（例えば、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２０％、約１４０％、約１６０％、約１８０％、約２００％、約２２０％、約２４０％、約２６０％、約２８０％、または約３００％）。特定の実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の単回投与は、数時間（例えば、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、または約９６時間）にわたってオキシトシンレベルを上昇させる。特定の実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の複数用量は、数時間（例えば、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、または約９６時間）にわたってオキシトシンレベルを上昇させる。特定の実施形態では、本開示の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）の投与は、プロラクチンレベル（レベル（例えば、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１２０％、約１４０％、約１６０％、約１８０％、約２００％、約２２０％、約２４０％、約２６０％、約２８０％、または約３００％）を増加させる。
【0083】
いくつかの実施形態では、単回投与の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）を対象に投与する。他の実施形態では、数時間、数日、数週間（例えば、約６時間後、約１２時間後、約１８時間後、約２４時間後、約３６時間後、約４８時間後、約７２時間後）に分けて、複数用量を２またはそれを超える時点にわたって投与する。いくつかの実施形態では、細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、長期間にわたって（例えば、慢性的に）、例えば、数ヶ月または数年（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月またはそれを超える月または年）の期間にわたって投与される。特定の実施形態では、細菌製剤（例えば、；Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、長期間にわたって定期的に（例えば、毎日、毎週など）摂取され得る。
【0084】
いくつかの実施形態では、方法の組成物は、約１×１０７～約１×１０１０ ＣＦＵ／ｍｌ（例えば、約１．５×１０７、約２×１０７、約２．５×１０７、約３×１０７、約３．５×１０７、約４×１０７、約４．５×１０７、約５×１０７、約５．５×１０７、約６×１０７、約６．５×１０７、約７×１０７、約７．５×１０７、約８×１０７、約８．５×１０７、約９×１０７、約９．５×１０７、約１×１０８、約１．５×１０８、約２×１０８、約２．５×１０８、約３×１０８、約３．５×１０８、約４×１０８、約４．５×１０８、約５×１０８、約５．５×１０８、約６×１０８、約６．５×１０８、約７×１０８、約７．５×１０８、約８×１０８、約８．５×１０８、約９×１０８、約９．５×１０８、１×１０９、約１．５×１０９、約２×１０９、約２．５×１０９、約３×１０９、約３．５×１０９、約４×１０９、約４．５×１０９、約５×１０９、約５．５×１０９、約６×１０９、約６．５×１０９、約７×１０９、約７．５×１０９、約８×１０９、約８．５×１０９、９×１０９、または約９．５×１０９）の活性化されたバイオフィルム生成プロバイオティクス細菌を提供するように投与される。
【0085】
特定の実施形態では、本開示の文脈で使用される開示の細菌製剤（例えば、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤）は、本開示で論じられる疾患または障害を処置するための少なくとも１つの他の薬剤との併用療法の一部として投与され得る。
【0086】
現在一般的に説明されている本開示は、本開示の特定の態様および実施形態の説明の目的のためにのみ含まれ、いかなる方法によっても決して本開示を限定することを意図するものではない以下の実施例を参照することによってより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【0087】
以下の実施例は単なる例示であり、決して本開示の範囲または内容を限定することを意図するものではない。
実施例１－ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）の製剤
実施例１－ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）の製剤
【0088】
製剤は、液体に再構成するための粉末として提供され、経口投与される。製剤Ａの各ｍＬは、７４ｍＭマルトース中に１．９×１０９コロニー形成単位のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉおよび１８．５ｍｇのＳｅｐｈａｄｅｘを含有する。用量は、７４ｍＭマルトース中１．９×１０１０コロニー形成単位のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉおよび１８５ｍｇのＳｅｐｈａｄｅｘの１日用量について、１日１回、１０ｍＬの製剤である。
実施例２－ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）製剤の研究
実施例２－ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）製剤の研究
【0089】
Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の研究を行った。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の前臨床安全性研究設計は、２４μモルのプレバイオティクスマルトースおよび６×１０９ ＣＦＵ Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（ＡＴＣＣ２３２７２）を担持した６０ｍｇのデキストラノマー微粒子（エピクロロヒジンを含む架橋デキストラン）を含む。［製剤Ａ］。簡潔には、天然に送達された新生仔ラットを以下の処置群に分けた。（１）処方グレードの生理食塩水（Ｒｘ生理食塩水）および（２）製剤Ａ。各処置群は、２４匹の雄および２４匹の雌の仔からなっていた。１５日目に、各仔は、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの単一経腸用量を受けた。研究期間中、仔は、母親（雌親）と一緒にいた。仔は、栄養のために母乳を与えられた。仔が２１日目に近づくと、製剤Ａで処置した仔のみが、母親のために入れた固形飼料を消費し始めた。仔（各処置群からＮ＝８（雄８匹および雌８匹））を、投与の２４時間後、４８時間後および７日後に安楽死させた。組織学的研究は、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、近位結腸、遠位結腸、直腸、肺、腎臓および肝臓で行った。Ｒｘ生理食塩水および製剤Ａで処置した仔の両方におけるＧＩ管全体の組織病理学は、正常に見えた。光学顕微鏡画像化は、経口経管栄養後４８時間までにミクロスフェアが糞便中でインタクトで除去されたことを示す。前臨床毒性学研究は、製剤Ａ処方が安全であることを実証している。仔ラットの肉眼的評価は、製剤Ａで処置した仔が生理食塩水で処置した仔よりも早く固形飼料を消費するが、カロリーは１７および２１日目で同等であることを示す。１７日目に、仔は、カロリー密度が高いほどより少ない量を消費したにもかかわらず、それらのカロリーは、より小さいカロリー密度でより多くの食物摂取（総質量）がある２１日目に等しい。これは、確立された視床下部設定点調節エネルギーバランスを示唆している。これらの写真は、母乳を与えることを固形食品で補っていた仔を示す。
実施例３－自然離乳：Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を新生仔ラットに投与することの効果
実施例３－自然離乳：Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を新生仔ラットに投与することの効果
【0090】
新生仔ラットの離乳研究設計は、以下の通りである。簡潔には、天然に送達された仔を以下の処置群に分けた。（１）処方グレードの生理食塩水（Ｒｘ生理食塩水）および（２）製剤Ａ。各処置群は、２０匹の雄および２０匹の雌の仔からなっていた。１８日目に、各仔は、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの単一経腸用量を受けた。仔（各処置群からＮ＝１０（雄１０匹および雌１０匹））を投与の４８時間後および７２時間後に安楽死させた。体幹血液、胃、空腸、回腸、盲腸、近位結腸および遠位結腸を２０および２１日目に採取した。さらに、体組成、胸腺質量および脾臓質量を各仔について分析した。
カロリー摂取に対する効果
カロリー摂取に対する効果
【0091】
図１Ａ～図１Ｂは、生理食塩水で処置した雌および雄の仔における胃内容物乾燥質量をそれぞれ示す。図１Ｃは、１７日目（Ｄ１７）および２１日目（Ｄ２１）の雄仔の総胃カロリーを示す。全胃カロリーは、雌仔で同じであった。乳から固形飼料に移行して、総カロリーを維持した。図１Ａ～図１Ｃは、カロリーがＤ１７およびＤ２１で同等であることを示す。１７日目に、仔は、カロリー密度が高いほどより少ない量を消費したにもかかわらず、それらのカロリーは、より小さいカロリー密度でより多くの食物摂取（総質量）がある２１日目に等しい。これは、確立された視床下部設定点調節エネルギーバランスを示唆している。図１Ｄ～図１Ｅは、生理食塩水で処置した雌および雄の仔におけるカロリー密度をそれぞれ示す。図１Ａ～図１Ｅは、離乳に近づくにつれて生理食塩水で処置した仔において胃内容物の質量が増加する一方でカロリー密度が減少することを示す。図２Ａ～図２Ｂは、製剤Ａで処置した仔とＲｘ生理食塩水で処置した仔の胃内容物乾燥質量を比較する（Ｄ２１の雌およびＤ２１の雄の仔からのデータをそれぞれ図２Ａ～図２Ｂに示す）。図２Ｃ～図２Ｄでは、製剤Ａで処置した仔とＲｘ生理食塩水で処置した仔の胃カロリー含有量を比較する（Ｄ２１の雌およびＤ２１雄の仔からデータをそれぞれ図６Ｃおよび図６Ｄに示す）。図２Ｅ～図２Ｆは、製剤Ａで処置した仔とＲｘ生理食塩水で処置した仔の胃ラクトース含有量を比較する（Ｄ２１の雌およびＤ２１の雄の仔からのデータをそれぞれ図２Ｅ～図２Ｆに示す）。図２Ａ～図２Ｆは、確立されたカロリー摂取設定点にもかかわらず、製剤Ａが食物摂取を減少させることを示す。図２Ａ～図２Ｆはまた、製剤Ａ処置が、雄において乳から固形飼料への切り替えをより早く促進し得ることを示唆している。
胃酸への影響
胃酸への影響
【0092】
胃内ｐＨ測定を行って、胃酸に対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の効果を試験した。簡潔には、動物を安楽死させ、アッセイのために胃内容物を除去した。１６～１９日目のデータ、および２２匹の仔を実施例２に記載の安全性研究から得た。図３Ａに記載されるデータは、生理食塩水処置または無処置の仔ラットからのものである。図３Ａは、生理食塩水で処置した雌仔ラットの胃内容物ｐＨを示す。図３Ｂ～図３Ｃは、製剤Ａで処置した仔とＲｘ生理食塩水で処置した仔の胃内容物ｐＨを比較する（Ｄ２０の雌およびＤ２１雄の仔のデータをそれぞれ図３Ｂ～図３Ｃに示す）。図３Ａ～図３Ｃは、胃酸の産生が１８日齢後に増加することを示す。図３Ａ～図３Ｃはまた、製剤Ａの投与が胃酸産生を増加させることによって離乳を促進しないことを示す。
空腸タンパク質濃度に対する影響
空腸タンパク質濃度に対する影響
【0093】
空腸は栄養素の吸収に特化している。簡潔には、安楽死させた仔から空腸を単離した。空腸の内容物をバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。図４Ａは、血中グルコースレベルおよび空腸グルコースレベルを示す。図４Ｂは、雌仔ラットにおける空腸タンパク質濃度を示す。図４Ａはまた、血中グルコースが空腸グルコース濃度に依存することを示す。図４Ａは、腸内グルコース輸送体（ＳＧＬＴ－１、ＧＬＵＴ－２）およびフルクトース輸送体（ＧＬＵＴ５）の機能が１６日目から仔ラットにおいて活性であることを示す。図４Ｂは、空腸タンパク質濃度が胃酸の産生に依存し、結果として１８日齢後に減少することを示す。
血清ペプチドグリカン濃度に対する効果
血清ペプチドグリカン濃度に対する効果
【0094】
血清ペプチドグリカンレベルを、製剤Ａで処置した雌仔において測定した。簡潔には、仔を断頭によって安楽死させ、体幹血液をチューブに採取し、氷に入れて凝固させた。血清を遠心分離によって分離し、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってペプチドグリカンについてアッセイされるまで－２０℃で保存した。図５Ａ～図５Ｃは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後の１６日齢雌仔（２４時間）（図５Ａ）、１７日齢仔（４８時間）（図５Ｂ）および２１日齢仔（７日）（図５Ｃ）における血清ペプチドグリカンレベルを比較する。図５Ｄは、成体雌ラットにおける血清ペプチドグリカンレベルを示す。
ビタミンＢ１２産生に対する効果
ビタミンＢ１２産生に対する効果
【0095】
回腸ビタミンＢ１２含有量を、雌および雄の仔において製剤ＡまたはＲｘ生理食塩水のいずれかによる処置後２日目および３日目に測定する。簡潔には、安楽死させた仔から回腸を単離した。回腸の内容物をバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。ビタミンＢ１２をＥＬＩＳＡによって測定した。図６Ａ～図６Ｂは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａのいずれかによる処置後２日目（図６Ａ）および３日目（図６Ｂ）の雌仔ラットの回腸中のビタミンＢ１２の濃度を比較する。図６Ｃ～図６Ｄは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａのいずれかによる処置後２日目（図６Ｃ）および３日目（図６Ｄ）の雄仔ラットの回腸中のビタミンＢ１２の濃度を比較する。図６Ａおよび図６Ｃは、製剤Ａの投与が仔ラット（雄および雌）の回腸におけるビタミンＢ１２濃度を増加させることを示す。ビタミンＢ１２は、回腸においてＬ．ｒｅｕｔｅｒｉによって合成される。図６Ｂは、製剤Ａで処置した雌仔ラットの回腸におけるビタミンＢ１２濃度の減少があることを示す。図６Ｄは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雄仔におけるビタミンＢ１２濃度に統計的差異がないことを示す。これらのグラフは、ビタミンＢ１２が３日目までに回腸から除去されることを示している。ビタミンＢ１２は、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉによって産生される強力な抗微生物化合物であるロイテリンのマーカーとしても使用される。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）に対する効果
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）に対する効果
【0096】
ＳＣＦＡ（アセタート、プロピオナート、およびブチラート）の測定は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）によって行った。簡潔には、安楽死させた仔から盲腸を単離した。盲腸の内容物をバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。試料を０．５％リン酸（２００ｍｇ／ｍｌ）中で超音波処理し、遠心分離して固体の未抽出物質を除去し、０．６μｍフィルタを通して濾過して大きな粒子を除去した。これらの試料を、Ｓｔａｂｉｌｗａｘ－ＤＡカラムを備えたＧＣ／ＭＳに注入した（１μｌ）。６つの短鎖脂肪酸の標準溶液を使用して試料を較正した。図７Ａ～図７Ｃは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後２日目のＲｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雌仔における様々なＳＣＦＡ（図７Ａに示す盲腸アセタート、図７Ｂに示す盲腸プロピオナート、図７Ｃに示す盲腸ブチラート）の濃度を比較する。図７Ｄ～図７Ｆは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後２日目のＲｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雄仔における様々なＳＣＦＡ（図７Ｄに示す盲腸アセタート、図７Ｅに示す盲腸プロピオナート、図７Ｆに示す盲腸ブチラート）の濃度を比較する。図７Ａ～図７Ｆは、製剤Ａの投与が仔ラット（雄および雌）の盲腸でのＳＣＦＡ産生を変化させず、その結果、離乳効果はＳＣＦＡ産生を介していないことを示す。
糞便排出量への影響
糞便排出量への影響
【0097】
安楽死させた仔から遠位結腸を単離した。遠位結腸内の糞便ペレットをバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。乾燥質量および水質量を測定するために、糞便ペレットを凍結乾燥して水を除去した。湿質量と乾燥質量との差を水質量とした。図８Ａ～図８Ｂは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後２日目および３日目のＲｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雌仔（図８Ａ）および雄仔（図８Ｂ）の遠位結腸糞便塊を比較する。図８Ｂは、製剤Ａで処置した雄仔における糞便排出量の増加を示す。図８Ｂから得られたデータはまた、製剤Ａを使用して不規則性を処置できることを示している。図８Ｃ～図８Ｄは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後２日目および３日目のＲｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雌仔ラット（図８Ｃ）および雄仔ラット（図８Ｄ）の糞便水塊を比較する。図８Ｃ～図８Ｄは、製剤Ａの投与が雄または雌の仔ラットに下痢または便秘を引き起こさないことを示す。
【0098】
実施例３に示されるデータは、製剤Ａが腸機能を変化させるよりもむしろ視床下部レベルで離乳および満腹を促進することを示している。
実施例４－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を成体ラットに投与する効果
実施例４－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を成体ラットに投与する効果
【0099】
図９Ａは、仔の離脱後の雌親における血清オキシトシン濃度を示す。グラフは、血清オキシトシンレベルが、製剤Ａで処置した成体の雌親において授乳中の仔を引き離した後、約１１日間上昇したままであることを示す。データは、母乳を与えている間に観察された上昇したオキシトシンレベルが、雌親の仔が引き離された後約１１日後に低下することを示す。これらの結果は、製剤Ａが雌ラットの分娩後うつ病を調節し得ることを示している。図９Ｂは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与から２４時間後の１６日齢の雄仔における血清オキシトシンレベルを比較する。図９Ｃは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与から４８時間後の２０日齢の雄仔における血清オキシトシンレベルを比較する。図９Ｂ～図９Ｃは、血清オキシトシンレベルが、投与の２４時間後に製剤Ａで処置した雄仔において増大することを示しており、このことは、増大したオキシトシンレベルが、小児期における食物摂取ならびに社会的および探索的行動を調節するのに役立ち得ることを示している。図９Ｂ～図９Ｃに示すデータは、製剤Ａの１回の投与後であった。製剤Ａの複数用量は、オキシトシンレベルの上昇を維持するのに役立ち得る。
実施例５－デキストラノマー微粒子（ＤＭ）によるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉの活性化
実施例５－デキストラノマー微粒子（ＤＭ）によるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉの活性化
【0100】
マルトースおよびＤＭを含むＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤は、生物活性の増強を示す。インビトロ活性化は、微生物がムチンのグリカンに結合した場合の胃腸管における活性化を模倣する。ＤＭは、ムチンのＯ結合グリカンに類似するデキストランを含有する生体適合性多孔質半透過性固体粒子である。本開示のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ株は、細胞外グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）酵素を発現する。インビトロ活性化プロセスは、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉが回腸のムチンのグリカンと接触して結合するときに誘導される生物学的変化のシミュレーションである。したがって、活性化は、非活性化Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉを上回る利点を提供して、コロニー形成をより良好に開始させる。
実施例６－血漿オキシトシンレベルに対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の投与の効果
実施例６－血漿オキシトシンレベルに対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の投与の効果
【0101】
凍結乾燥したＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ（ＡＴＣＣ２３２７２株）を１．７×１０１１ＣＦＵ／ｇで含むバイアルに、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉを供給した。１ｍＬの滅菌生理食塩水を凍結乾燥細菌に添加し、室温で５分間再水和させ、次いで、ＤＭ－マルトーススラリーに添加した。ＤＭ－マルトーススラリーは、オートクレーブした乾燥 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅミクロスフェア（ＤＭ）を秤量し、フィルタ滅菌した１Ｍマルトース溶液（２５％ ｗ／ｖ懸濁液）に添加することによって調製した。活性化工程を開始するために、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉとＤＭ－マルトーススラリーの混合物を、使用前に室温で６０分間一緒にインキュベートした。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の投与あたりの最終用量は、５００μＬの２×１０９ＣＦＵ Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、２０ｍｇのＤＭ、および２８．８ｍｇのマルトース（１ｍＬの生理食塩水中）であった［「製剤Ｂ」］。プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉを同様に調製したが、ＤＭ－マルトーススラリーを添加しなかった。
【0102】
血漿オキシトシンレベルに対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の効果を調査するために、成体Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ雌ラットに、処方グレードのアジスロマイシンの単回投与の２日後に、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（Ｌｒ）または生理食塩水の単回経口投与を与えた。（４５ｍｇ／ｋｇ、経口経管栄養を介した投与）を使用して、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉのニッチを作成した（抗生物質と処置の間に２日間の洗い出し期間を使用した）。投与後１日目、２日目および３日目に、アプロチニン（５００カリクレイン不活性化剤ユニット（Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｏｒ Ｕｎｉｔｓ：ＫＩＵ）／ｍＬの血液；血液中のオキシトシンの半減期が短いために使用される）を含有するチューブに血液を採取し、血漿オキシトシンレベルを酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ；アッセイ設計）によって決定した。図１０は、製剤Ｂ、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（Ｌｒ）または生理食塩水による処置後の雌ラットにおける血漿オキシトシンレベルを示すグラフである。オキシトシンレベルを、処置後の最初の３日間（上記のバーで示される日）についての平均±標準誤差平均として示す。ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ多重比較を使用して群を比較した。図１０に示されるように、製剤Ｂで処置した動物における１日目の血漿オキシトシンレベルは、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉまたは生理食塩水で処置した動物の血漿オキシトシンレベルよりも有意に高かった。群間のオキシトシンレベルは、３日目までに横ばいになった。この研究は、製剤Ｂが１日目に循環オキシトシンを刺激するのに有効であり、２日目に維持されることを示した。さらに、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉは、２日目にオキシトシンレベルを刺激するその能力の傾向を示したが、レベルは生理食塩水で処置した群と有意に異ならなかった。
【0103】
仔の血漿オキシトシンレベルに対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の効果を調べるために、仔に生理食塩水、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉまたは３００μＬの製剤Ｂ（上記のように調製した）を投与した。未成熟仔ラットは、低いベースライン循環オキシトシンレベルを有し、ベースラインレベルまたは製剤Ｂに応答して性差はない。すべての動物を、１５日齢に経口経管栄養によって一回処置した。処置後１日目、２日目および３日目に血液を採取し、血漿オキシトシンを上記の方法を用いて測定した。図１１Ａは、製剤Ｂ、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（Ｌｒ）または生理食塩水による処置後の雌仔における血漿オキシトシンレベルを示すグラフである。図１１Ｂは、製剤Ｂ、プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（Ｌｒ）または生理食塩水による処置後の雄仔における血漿オキシトシンレベルを示すグラフである。値は、処置後最初の３日間（上記のバーで示された日）の平均±標準誤差平均として示されている。ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙ多重比較検定を使用して群を比較した。この研究は、製剤Ｂが循環オキシトシンレベルを増加させることができることを確認した。
実施例７－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の評価
実施例７－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の評価
【0104】
この実施例は、製剤中のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉによる乳酸、ヒスタミン、ビタミンＢ－１２およびグリセロールの産生の測定、ならびにその糖利用を含む、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤に対する様々な調製方法の影響を記載する。実施例では、２つのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤：１）製剤Ｂ（２×１０９ ＣＦＵ Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、２０ｍｇのＤＭおよび２８．８ｍｇのマルトース（１ｍＬの生理食塩水中）；および２）製剤Ｃ（製剤Ｂと同量のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ（２×１０９ ＣＦＵ）を含むが、ＤＭおよびマルトースは１０倍である（２００ｍｇのＤＭおよび２８８ｍｇのマルトース）。培地中の様々な分析物について評価する前に、細菌とＤＭ－マルトーススラリーとのインキュベーションを様々な時点（１時間、６時間、２４時間、９６時間）で行ったことを除いて、実施例６に記載したように製剤調製のためのプロセスを行った。これらの研究の結果を表１に要約する。
実施例８－血漿オキシトシンレベルを増加させるためのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の同定
【表1】
【0105】
実施例６に記載される仔ラットモデルを使用して、血漿オキシトシンレベルを増加させるための最適なＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤および投薬戦略を同定する。生理食塩水で処置した動物と比較して初期４８時間中の血漿オキシトシンの有意な刺激を定義した最小有効用量を同定するために、様々な濃度およびレジメンのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤による処置を行う。次いで、最適なＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤および用量を活性化Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤で評価し、続いてＬ．ｒｅｕｔｅｒｉを溶解するプロトコルを用いて、インタクトのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉを含有する製剤で見られるのと同様の有効性が達成されるかどうかを決定する。最小有効用量を提供する製剤を成体非妊娠ラットで試験して、成熟雌における有効性を確実にする。
【0106】
１５日齢の雄性および雌性未成熟仔ラットを、以下の処置を受けるために無作為化する。１群あたり５匹の雄および５匹の雌の仔ラットをランダムに割り当てた。１）生理食塩水、２）プランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ、または３）Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤およびプランクトン様Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉは、実施例６に記載されるように調製され、２×１０９ ＣＦＵのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ／１ｍＬ生理食塩水を含む。２×１０９ＣＦＵのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ／１ｍＬ生理食塩水と共に、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤はまた、１４．４ｍｇのマルトースを含む１０ｍｇのＤＭ、２８．８ｍｇのマルトースを含む２０ｍｇのＤＭ、１４４ｍｇのマルトースを含む１００ｍｇのＤＭ、または２８８ｍｇのマルトースを含む２００ｍｇのＤＭを含む。実施例６に記載されるように、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の活性化を１時間行い、用量を３００μＬで経口経管栄養によって１回与える。この研究は、２×１０９ＣＦＵ／ｍＬのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ、２００ｍｇのＤＭおよび２８８ｍｇのマルトースを含む製剤の最初の評価を含む減少アプローチを使用する。投与後、より低いレベルのＤＭおよびマルトースを含む製剤を使用し、血漿オキシトシンレベルを統計的に刺激する有効性が観察されなくなるまで製剤を減少させる。テールスニップによって２４時間および４８時間で血液を採取し、オキシトシンをアッセイする（Ｇｒｅｗｅｎ，Ｋ．Ｍ．ら（２０１０）；Ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ４７，６２５－６３２を参照のこと）。群を、多重比較のために１元配置ＡＮＯＶＡおよびＴｕｋｅｙ検定を使用して比較する。次いで、最小有効性Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を、活性化Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤、引き続いてＬ．ｒｅｕｔｅｒｉを溶解するプロトコルで評価する。溶解プロトコルは、細胞膜および壁を切断するためのリゾチームを含むＳＴＥＴ緩衝液；浸透圧を維持するためのスクロース；細胞壁の切断を助けるためのトリトンＸ、キレート剤としてのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、および緩衝するためのトリスＨＣｌを利用する。先の研究に記載された雄および雌の未成熟仔ラット（１群あたり雄５匹および雌５匹の仔ラット）ならびに対照としてＳＴＥＴ緩衝液を含む生理食塩水または生理食塩水を受けた動物を使用して、インタクトなＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を溶解したＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤と比較する。次いで、オキシトシンレベルの統計学的に有意な増加を提供する最小有効性Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤（溶解またはインタクト）を成体の雌Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットで評価して、仔ラットで見られる活性が成体に変換されることを確認する。群あたり８匹の雌成体ラットを、経口経管栄養（５００μｌ）によって、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤、プランクトン様Ｌ ｒｅｕｔｅｒｉまたは生理食塩水で処置し、実施例６に記載されるように、投与後２４時間、４８時間および７２時間でオキシトシンレベルについて評価する。最小有効用量は、２つの時点のうちの１つ（２４時間または４８時間）におけるオキシトシンの有意な刺激である。オキシトシンの刺激は、最高レベルのＤＭおよびマルトース（最大有効用量）を含有する製剤で７２時間持続し得る。オキシトシンレベルを、一元配置ＡＮＯＶＡおよび多重比較のためのＴｕｋｅｙ検定を使用して生理食塩水で処置した群と比較する。
実施例９－アジスロマイシン投与後のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤投与の効果
実施例９－アジスロマイシン投与後のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤投与の効果
【0107】
図１２は、処方グレードのアジスロマイシン（Ｒｘアジスロマイシン）の投与後３日目の朝に、４００μｍｏｌのプレバイオティクスマルトースおよび１×１０９ＣＦＵのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ（ＡＴＣＣ ２３２７２）［製剤Ａ］を担持した１００ｍｇのデキストラノマー微粒子（エピクロロリジンを有する架橋デキストラン）を含むＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を投与する効果を評価するための実験研究設計を示す。簡潔には、Ｔｅｋｌａｄ ２９２０Ｘ固形飼料を与えた雌性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（体重１７０ｇ）に、実験研究の０日目にアジスロマイシン（４５ｍｇ／ｋｇ、経口投与）を投与した。アジスロマイシン投与後３日目の朝に、６匹の雌ラットに単一経腸用量の処方グレードの生理食塩水（再建生理食塩水）を投与し、７匹の雌ラットに単一経腸用量の処方グレードの製剤Ａ（Ｒｘ製剤Ａ）を投与した。糞便ペレットを、アジスロマイシンの４、５、および６日後に雌ラットから収集したが、生理食塩水または製剤Ａのいずれかの１、２、および３日後に採取した。４、５、および６日目に血糖を測定した。雌ラットを５日目および６日目に安楽死させた。組織（胃、空腸、回腸、盲腸、近位結腸、および遠位結腸）を６日目に採取した。
胃内容物の評価
胃内容物の評価
【0108】
図１３Ａ～図１３Ｄは、Ｒｘ生理食塩水で処置した雌ラットおよび製剤Ａで処置した雌ラットのそれぞれにおけるアジスロマイシンまたはＲｘ生理食塩水のいずれかの投与後３日目の朝の胃内容物乾燥質量、胃含水量、胃カロリー含有量、および胃内容物のｐＨを示す。図１３Ｂは、アジスロマイシン投与後の雌ラットへの製剤Ａの投与が胃の含水量を増加させたことを示す。
糞便試料の分析による腸炎症の評価
糞便試料の分析による腸炎症の評価
【0109】
腸の炎症は、糞便中のカルプロテクチンおよびラクトトランスフェリンレベルを分析することによって評価することができる。図１４Ａ～図１４Ｂは、生理食塩水で処置した雌ラットおよび製剤Ａで処置した雌ラットのそれぞれにおける糞便中カルプロテクチンおよび糞便中ラクトトランスフェリンレベルを示す。図１４Ａは、投与後２日目の生理食塩水で処置した雌ラットと比較した、製剤Ａで処置した雌ラットにおける糞便中カルプロテクチンレベルの減少を示す。図１４Ｂは、投与後３日目の生理食塩水で処置した雌ラットと比較した、製剤Ａで処置した雌ラットにおける糞便中ラクトトランスフェリンレベルの減少を示す。図１４Ｃ～図１４Ｄは、生理食塩水で処置した雌ラットおよび製剤Ａで処置した雌ラットのそれぞれにおける糞便中ＩＬ－２２および糞便中ＩＬ－６レベルを示す。図１４Ｃは、投与後２日目の生理食塩水で処置した雌ラットと比較した、製剤Ａで処置した雌ラットにおける糞便中ＩＬ－２２レベルの減少を示す。図１４Ｄは、糞便中ＩＬ－６レベルが製剤Ａの投与によって変化しなかったことを示す。図１４Ａ～図１４Ｄに示すデータを、Ｒｘアジスロマイシンの投与後３～４日目の間、４～５日目の間および５～６日目の間に収集した。
回腸における炎症促進性および抗炎症性サイトカインの評価
回腸における炎症促進性および抗炎症性サイトカインの評価
【0110】
回腸の炎症は、炎症の糞便中マーカーを使用して評価することができる。ＩＬ－１０およびＩＬ－２２は、抗炎症性サイトカインである。簡潔には、安楽死させた雌ラットから回腸を単離した。回腸の内容物をバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。図１５Ａ～図１５Ｃは、生理食塩水または生理食塩水のいずれかの投与後３日目のＲｘ生理食塩水で処置した雌ラットおよび製剤Ａで処置した雌ラットの回腸におけるＩＬ－６、ＩＬ－１０およびＩＬ－２２レベルをそれぞれ示す。図１５Ａは、製剤Ａの投与が、製剤Ａで処置した雌ラットの回腸における炎症促進性サイトカインであるＩＬ－６のレベルの低下を引き起こすことを示す。図１５Ｂは、製剤Ａの投与が、製剤Ａで処置した雌ラットの回腸において抗炎症性サイトカインであるＩＬ－１０のレベルの低下を引き起こすことを示す。図１５Ｃは、製剤Ａの投与が、製剤Ａで処置した雌ラットの回腸において抗炎症性サイトカインであるＩＬ－２２のレベルの増加を引き起こすことを示す。
腸修復の評価
腸修復の評価
【0111】
グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ－２）は、密着結合を促進し、小腸および大腸の成長、ならびにグルコースおよび脂肪酸の取り込みのための輸送体を刺激する。腸修復を評価するために、近位結腸でＧＬＰ－２レベルを測定した。近位結腸を、製剤Ａまたは生理食塩水のいずれかの投与後３日目に安楽死させた雌ラットから得た。図１６Ａは、生理食塩水で処置した雌ラットおよび製剤Ａで処置した雌ラットの近位結腸におけるＧＬＰ－２レベルを示す。図１６Ａは、製剤Ａの投与が近位結腸内のＧＬＰ－２レベルの増加を引き起こすことを示す。
腸漏出性の評価
腸漏出性の評価
【0112】
血清ペプチドグリカンレベルを、製剤Ａで処置した雌ラットおよび生理食塩水で処置した雌ラットにおいて測定した。簡潔には、成体雌ラットを、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａのいずれかを投与の３日後に、断頭によって安楽死させ、体幹血液をチューブに採取し、氷に入れて凝固させた。血清を遠心分離によって分離し、ＥＬＩＳＡによってペプチドグリカンについてアッセイするまで－２０℃で保存した。図１６Ｂは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａの投与後３日目の雌ラットにおける血清ペプチドグリカンレベルを比較する。図１６Ｂは、製剤Ａの投与が、アジスロマイシンの投与に起因して上昇した血清ペプチドグリカンレベルを変化させなかったことを示す。
腸保護の評価
腸保護の評価
【0113】
糞便中分泌免疫グロブリンＡ（ｓＩｇＡ）は、酵素による分解に抵抗し、胃腸管などの過酷な環境で生存する能力のために、潜在的に病原性の微生物に対する保護を提供する。ＩｇＡレベルが低い患者は、粘膜表面の感染症、食物アレルギー、セリアック様腸症、および自己免疫障害のリスクが高い。糞便中ｓＩｇＡレベルを、製剤Ａで処置した雌ラットおよび生理食塩水で処置した雌ラットにおいて測定して、腸保護を評価した。図１７は、腸保護を評価するための雌ラットへのＲｘ製剤ＡまたはＲｘ生理食塩水の投与後１、２、および３日目（または、アジスロマイシン投与後４、５、および６日目）に測定した糞便ｓＩｇＡレベルを示す。図１７は、製剤Ａの投与後３日目の雌ラットにおいて糞便ｓＩｇＡレベルが増加することを示す。製剤Ａの投与後の成体雌ラットの腸内腔における糞便中ｓＩｇＡレベルのこの増加は、腸保護の証拠を提供する。
ＳＣＦＡ生産の評価
ＳＣＦＡ生産の評価
【0114】
ＳＣＦＡ（アセタート、プロピオナート、およびブチラート）の測定は、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）によって行った。簡潔には、製剤Ａで処置した雌ラットと生理食塩水で処置した雌ラットの両方から、３日目～４日目、４日目～５日目、５日目～６日目の間に糞便ペレットを回収した。アッセイするまで糞便ペレットを－２０℃で保存した。試料を０．５％リン酸（２００ｍｇ／ｍｌ）中で超音波処理し、遠心分離して固体の未抽出物質を除去し、０．６μｍフィルタを通して濾過して大きな粒子を除去した。これらの試料を、Ｓｔａｂｉｌｗａｘ－ＤＡカラムを備えたＧＣ／ＭＳに注入した（１μｌ）。６つの短鎖脂肪酸の標準溶液を使用して試料を較正した。図１８Ａ～図１８Ｃは、Ｒｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雌ラットにおける様々なＳＣＦＡ（図１８Ａに示す糞便アセタート、図１８Ｂに示す糞便プロピオナート、図１８Ｃに示す糞便ブチラート）の濃度を比較する。図１８Ａおよび図１８Ｃは、それぞれ製剤Ａの投与後２日目と３日目との間に排泄された糞便ペレット中のアセタートおよびブチラートレベルが増加することを示す。図１８Ｂに示すように、製剤Ａで処置した成体雌ラットと生理食塩水で処置した成体雌ラットとの間でプロピオナートレベルに統計学的差異はない。
【0115】
採取した糞便ペレットからのＳＣＦＡの測定に加えて、製剤Ａまたは生理食塩水の投与後３日目に、安楽死させた雌ラットの遠位結腸の糞便中の様々なＳＣＦＡレベルも測定した。簡潔には、遠位結腸内の糞便ペレットをバイアルに採取し、アッセイするまで－２０℃で保存した。図１９Ａ～図１９Ｄは、生理食塩水または製剤Ａのいずれかの投与後３日目のＲｘ生理食塩水または製剤Ａで処置した雌ラットにおける様々なＳＣＦＡ（図１９Ａに示す糞便アセタート、図１９Ｂに示す糞便プロピオナート、図１９Ｃに示す糞便ブチラート、図１９Ｄに示す糞便イソバレラート）の濃度を比較する。図１９Ａおよび図１９Ｄに示すように、アセタートおよびイソバレラートレベルは、製剤Ａの投与後３日目に雌ラットにおいて増加した。図１９Ｂは、プロピオナートレベルが、製剤Ａの投与後３日目に雌ラットにおいて低下したことを示す。図１９Ｃに示すように、製剤Ａで処置した成体雌ラットと生理食塩水で処置した成体雌ラットとの間にブチラートレベルの統計学的差異はない。
【0116】
実施例３に提示されたデータは、製剤Ａの単回投与が投与の２～３日後に腸炎症を有意に減少させ、アジスロマイシンの副作用を軽減するのに有効であったことを示す。
実施例１０－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を評価する研究
実施例１０－Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を評価する研究
【0117】
この実施例は、健康な成人ボランティアにおける単回投与のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）およびマルトースを含むＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ）の安全性および忍容性を評価するための無作為化の二重盲検プラセボ対照の単回投与研究を記載する。そのような研究は、健康な成人における胃腸（ＧＩ）管からのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉおよびＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）の排除を監視し、健康な成人におけるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の単一経口投与後の微生物叢機能、免疫調節および消化のバイオマーカーの評価を含む。
【0118】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）およびマルトースを含むＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒ（ＡＴＣＣ２３２７２）を、２００ｍｇのＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）および１Ｍのマルトースを含む２×１０１０コロニー形成単位（ＣＦＵ）の用量で、１０ｍＬの最終容量で経口投与する［「製剤Ｂ」］。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒは、滅菌生理食塩水中で再構成するための凍結乾燥粉末として提供される。再構成後、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ ＫａｎｄｌｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）およびマルトースのスラリーと混合する。
【0119】
製剤Ｂまたはプラセボ（生理食塩水）のいずれかによる処置を受けるために、３０人の適格対象を１：１の比でランダムに割り当てる。製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの投与前１４日以内に対象をスクリーニングする。すべての対象は、任意の研究特異的手順を実施する前に、書面によるインフォームドコンセントを提供する必要がある。研究に対する対象の適格性は、組み入れ基準および除外基準の評価によってスクリーニング時に決定される。対象は、将来の分析のために生物学的試料のバイオバンキングを可能にするための同意を提供するように求められる。適格対象には、製剤Ｂまたはプラセボを投与される前の４８時間以内に前処理便試料をサンプリングするための便サンプリングキットが提供される（採取のタイミングは対象の便通の頻度によって決定される）。
【0120】
対象は、８時間の一晩の絶食後１日目に研究現場に戻る。適格基準の確認後、対象は、割り当てられた処置群に従って製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの単回経口投与を受け、続いて１００ｍＬの水を受ける。製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの投与後１時間まで絶食を維持する。対象は、事象のスケジュールに従って１日目に研究特異的手順を受ける。バイタルサイン（脈拍数、収縮期および拡張期血圧、呼吸数、ならびに口腔温）を、製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの投与前および投与後１時間に測定する。ベースライン便試料を、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉおよびＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ミクロスフェアの存在および探索的バイオマーカー分析を決定するために初回投与の４８時間前に収集する。対象は、すべての１日目の評価が完了した後に退院させる。対象は、以下のスケジュールに従って自宅で４つの便試料を採取するように指示される。対象には、自宅で便試料を採取するためのサンプリングキットが提供される。キットは、試料が得られた日時を記入する試料容器用のラベルを含む。対象は、事前に標識された輸送用容器を使用してすべての便試料を戻すように指示される。便試料を戻すための代替的な戦略もまた、調査者および対象によって議論することができる。
【0121】
追跡調査訪問を８および１５日目に行う。対象は、３０日目に研究終了時に来院する。
【0122】
適格対象は、割り当てられた処置群に従って製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの単回投与を受ける。製剤Ｂまたはプラセボのいずれかを１日目に絶食条件下で研究現場で投与する。投与後、対象は１００ｍＬの水を与えられて飲む。製剤Ｂおよびプラセボの両方は、研究を盲検に維持するために、内容物が見えないように不透明プラスチックシリンジで対象に提供される。対象は、製剤Ｂまたはプラセボのいずれかの投与前に少なくとも８時間絶食する必要がある。対象は、研究関与の期間中、他のプロバイオティクスおよび任意の抗生物質の使用を控える必要がある。安全性エンドポイントには、処置下で発現したＡＥ（ＴＥＡＥ）、重篤なＡＥ（ＳＡＥ）、ＡＥＳＩ、および研究の中止につながるＡＥの発生率および重症度が含まれる。実験室結果（血液学［分画および赤血球沈降速度を伴う全血球計算］、生化学および尿検査）、バイタルサイン結果、および身体検査所見；便中におけるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ミクロスフェアおよび白血球の存在の発生率；Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｓｔｏｏｌチャートのスコア；陽性Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ同定を伴う症候性菌血症の発生率が含まれる。研究のための他のエンドポイントには、微生物叢機能のためのバイオマーカー：短鎖脂肪酸（アセタート、ブチラート、プロピオナート）、ラクタートおよびｐＨ；免疫調節のためのバイオマーカー：炎症促進性および抗炎症性サイトカイン（インターフェロン－γ、インターロイキン［ＩＬ］－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－２２、ケモカインリガンド１、腫瘍壊死因子－α）、ならびにカルプロテクチン、ラクトフェリン、および分泌性免疫グロブリンＡ；消化のためのバイオマーカー：グルコース、トリグリセリド、総胆汁酸、タンパク質、ラクトースの糞便含量が含まれる。
【0123】
人口統計学的およびベースライン特性（年齢、性別、人種、民族、体重、身長、およびボディーマス指数を含む）を記述統計学を用いて要約し、便試料中のＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ミクロスフェアおよび白血球のレベルの定性的評価を行い、結果を記述統計学を用いて要約する。
【0124】
全研究期間は、１ヶ月の積極的登録および１ヶ月の追跡調査を含む。研究期間の順序および最大期間は以下の通りである。スクリーニング：１４日間；処置：１日；追跡調査：３０日間。各対象の最大研究期間は、約６週間までである。各対象の最大処置期間は、１日である。
【0125】
実施例１１－自閉症障害に対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の投与の効果
【0126】
この実施例は、自閉症障害の処置におけるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の投与の効果を評価する研究設計を詳述している。未成熟で未発達の胃腸（ＧＩ）系で生まれたＮＥＣを発症するリスクのある未熟な乳児と比較して、標的集団のＧＩ系は、はるかによく発達している（Ｙａｔｓｕｎｅｎｋｏ，Ｔ．ら（２０１２）；Ｎａｔｕｒｅ．；４８６，２２２－２２７を参照のこと）。しかしながら、便秘、腹痛、鼓腸および下痢を含むＧＩ病徴は、２３％～７０％の範囲の有病率で自閉症障害に関連することが多い（Ｃｈａｉｄｅｚ，Ｖ．ら（２０１４）；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ａｕｔｉｓｍ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．；４４（５），１１１７－１１２７；Ｈｏｌｉｎｇｕｅ，Ｃａｌｌｉｏｐｅら（２０１８）；Ａｕｔｉｓｍ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ａｕｔｉｓｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．；１１（１），２４－３６を参照のこと）。組織学的検査後のＧＩ病理も、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を使用した前臨床研究における糞便の硬さおよび糞便排出量の変化も、観察されていない。さらに、ＧＩ炎症の臨床バイオマーカーである糞便中カルプロテクチンレベルの減少が観察されており、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤が臨床的または不顕性の腸炎症を軽減し、自閉症障害に一般的に関連するＧＩ病徴を改善し得ることを示唆している。
【0127】
最初のスクリーニング後、対象をそれぞれ８人の対象からなる２つの群のうちの１つに無作為化する。グループＡは、２８日間にわたってＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を投与され、一方、グループＢは、プラセボ（生理食塩水）を投与される。最初の投与後、対象がＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤もプラセボも投与されない１４日間の洗い出し期間がある。洗い出し期間の後、Ａ群にはプラセボ（生理食塩水）を２８日間投与し、Ｂ群にはＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤を投与する。主な結果は、有害事象および検査異常の頻度および重症度によって評価されるように、２８日間にわたって毎日投与されるＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の安全性および忍容性を評価することである。副次的結果には、循環オキシトシンレベル、宿主および微生物由来代謝産物の全身および糞便レベル、腸炎症の血液および糞便バイオマーカー、ならびに自閉症障害との関連における行動のための検証された機器に対するＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ製剤の効果の評価が含まれる。総研究期間は、約７０日間である。
【0128】
対象がＤＳＭ－５基準を用いたゴールドスタンダード臨床インタビューおよび自閉症診断観察スケジュール－２の投与によって確認された自閉症障害の診断的確認を有すれば、研究参加資格がある。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒを、１８５ｍｇのＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）および７４ｍＭのマルトースを含む２×１０１０コロニー形成単位の用量で、１０ｍＬの最終容量で経口投与する。対象は、２８日間、１日に単回投与を受ける。Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒは、（提供される）生理食塩水中で再構成するための凍結乾燥粉末として提供される。再構成後、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ ＫａｎｄｌｅｒをＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）およびマルトースのスラリーと混合する。参照製品／プラセボは、生理食塩水である。対象は、１０ｍＬの対応する生理食塩水の単回経口投与を２８日間受ける。
【0129】
適格対象は、割り当てられた処置群に従って２８日間毎日、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒまたはプラセボの一回投与を受ける。２８回分の用量が対象に提供され、自宅で調製され、好ましい飲料またはソフトフード（例えば、アップルソース、ヨーグルト、プリン）と組み合わされる。最初の用量のＩＰは、診療所で投与される。対象は、研究関与の期間中、プロバイオティクスの使用を控える必要がある。
【0130】
臨床医および介護者は、結果尺度分析を、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ Ｋａｎｄｌｅｒ対プラセボの２つの対応のあるｔ検定から構成されると報告する。各対象の測定値は、ＣＧＩ－Ｓ、ＣＧＩ－Ｉ、ＡＢＣ、ＣＦＱＬ－２、ＷＪ３空間的関係および聴覚注意の下位検査、ＫｉＴａｐ、ＲＢＡＮＳ、視線追跡、および心理物理学的尺度を含む連続尺度の変化である。各対象について、プラセボに対する変化からの連続結果尺度スコアの変化間の差を導き出す。これらの対象内差について１試料（対）ｔ検定を行う。偽発見率（ＦＤＲ）アプローチを使用した多重度の補正により両側ｐ値が０．０５未満である場合、結果は統計的に有意であると見なされる。さらに、２処置クロスオーバー設計の線形混合モデルが解析される。このモデルに対する応答は、期間終了時の関心対象の連続結果尺度である。固定効果共変量は、処置、期間、性別およびキャリーオーバーである。
【0131】
研究期間の順序および最大期間は以下の通りである。スクリーニング：１４日間；処置期間１：２８日間；洗い出し１４日間；処置期間２：２８日間；追跡調査：３０日間；各対象の研究期間は、およそ１７週間までである。視線追跡測定は、ＡＳＤの参加者のスクリーニングまたはベースライン訪問のいずれかで行われる。ＡＤＯＳ－２＝自閉症診断観察スケジュールモジュール３または４；ＷＡＳＩ－ＩＩ＝Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ Ｓｃａｌｅ－Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、ＳＣＱ＝社会的コミュニケーションアンケート；ＣＧＩ－Ｓ＝臨床全般印象重症度スケール、ＣＧＩ－Ｉ＝臨床全般印象改善度スケール；Ｖｉｎｅｌａｎｄ－３＝Ｖｉｎｌａｎｄ適応挙動スケール第３版；ＰＫ＝薬物動態；ＥＥＧ＝脳波プロトコル；ＷＪ３＝Ｗｏｏｄｃｏｃｋ Ｊｏｈｎｓｏｎの空間的関係および聴覚的注意のサブテスト；ＲＢＡＮＳ＝神経心理学的状態の再現可能なバッテリー；ＫｉＴａｐ＝小児の注意行動のコンピュータ化試験；ＡＢＣ＝異常行動チェックリスト；ＣＦＱＬ－２＝子供および家族の生活の質第２版
均等物
均等物
【0132】
本開示の特定の実施形態を説明したが、上記の明細書は例示的なものであり、限定的なものではない。本明細書を検討することにより、本開示の多くの変形が当業者に明らかになるであろう。本開示の全範囲は、特許請求の範囲、その均等物の全範囲、および明細書、ならびにそのような変形例を参照することによって決定されるべきである。
【0133】
別段の指示がない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される成分の量、反応条件などを表すすべての数字は、すべての場合において「約」という用語によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、反対のことが示されない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲に記載の数値パラメータは、本開示によって得ようとする所望の特性に応じて変化し得る近似値である。
参照による組み込み
参照による組み込み
【0134】
本明細書で引用されるすべての特許、公開特許出願、ウェブサイト、および他の参考文献の全内容は、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14-1】
【図14-2】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18-1】
【図18-2】
【図19】
【国際調査報告】