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特表2023-511382完全ヒトグリコシル化ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を用いたムコ多糖症Ｉ型の治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-17
(54)【発明の名称】完全ヒトグリコシル化ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を用いたムコ多糖症Ｉ型の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 38/47 20060101AFI20230310BHJP
A61K 31/365 20060101ALI20230310BHJP
A61K 31/436 20060101ALI20230310BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20230310BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20230310BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230310BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230310BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230310BHJP
C12N 15/55 20060101ALN20230310BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20230310BHJP
【ＦＩ】
A61K38/47 ZNA
A61K31/365
A61K31/436
A61K31/573
A61K48/00
A61P25/00
A61P37/06
A61P43/00 121
C12N15/55
C12N15/63 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022544318
(86)(22)【出願日】2021-01-20
(85)【翻訳文提出日】2022-08-29
(86)【国際出願番号】 US2021014129
(87)【国際公開番号】W WO2021150570
(87)【国際公開日】2021-07-29
(31)【優先権主張番号】63/086,145
(32)【優先日】2020-10-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/964,351
(32)【優先日】2020-01-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518362720
【氏名又は名称】レジェンクスバイオ インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100097456
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 徹
(72)【発明者】
【氏名】スティーブン ジョセフ パコーラ
(72)【発明者】
【氏名】パウロ ファラベーラ
(72)【発明者】
【氏名】マリー‐ロール ネボレ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA13
4C084BA44
4C084CA53
4C084DC22
4C084MA17
4C084MA66
4C084NA06
4C084NA14
4C084ZA011
4C084ZA012
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA17
4C086CB22
4C086DA10
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA06
4C086ZB08
4C086ZC75
(57)【要約】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液に、完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達する組成物及び方法を記載する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒト神経細胞が産生した治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含み、前記ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与により送達され、前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、前記脳質量は、前記対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定される、前記方法。
【請求項2】
ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトグリア細胞が産生した治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含み、前記ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与により送達され、前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、前記脳質量は、前記対象の脳の脳ＭＲＩで決定される、前記方法。
【請求項3】
前記ヒト対象の脳質量は、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換され、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、前記ヒト対象の全脳脊髄液量の１０％を超えない体積で投与される、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記ヒトＩＤＵＡ治療の前に、または前記ヒトＩＤＵＡ治療と同時に、前記ヒト対象に免疫抑制療法を実施し、その後、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記免疫抑制療法が、前記ヒトＩＤＵＡ治療の前に、または前記ヒトＩＤＵＡ治療と同時に、（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えば、プレドニゾロン、及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記ヒト対象に対して投与する、その後、継続することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記免疫抑制療法を、１８０日後に中止する、請求項８または９に記載の方法。
【請求項11】
前記ヒトＩＤＵＡが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、以下の表に記載した用量で投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。【表1】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０２０年１０月１日出願の米国仮出願第６３／０８６，１４５号、及び２０２０年１月２２日出願の米国仮出願第６２／９６４，３５１号の利益を主張する、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
本願は、２０２０年１０月１日出願の米国仮出願第６３／０８６，１４５号、及び２０２０年１月２２日出願の米国仮出願第６２／９６４，３５１号の利益を主張する、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
【0002】
電子的に提出した配列表の援用
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２１年１月１１日に作成した、８６，２３４バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１２８－２２８．ｔｘｔ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２１年１月１１日に作成した、８６，２３４バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１２８－２２８．ｔｘｔ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
【0003】
１．前書き
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液に、完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達するための組成物及び方法を記載する。
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液に、完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達するための組成物及び方法を記載する。
【背景技術】
【0004】
２．発明の背景
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）は、発生率が１００，０００件の出生のうち１件と推定する稀な劣性遺伝疾患である（Ｍｏｏｒｅ Ｄ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３）。ＭＰＳ Ｉは、遍在する複合多糖類、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム異化に必要な酵素である、α－ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）の欠損によって生じる。これらの多糖類はグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と呼ばれ、ＭＰＳ Ｉ患者の組織に蓄積されて、特徴的な貯蔵病変及び多様な疾患後遺症をもたらす。患者は、低身長、骨及び関節の変形、顔の特徴の粗雑化、肝脾腫、心臓弁膜疾患、閉塞性睡眠時無呼吸、再発性上気道感染症、聴覚障害、手根管症候群、及び角膜混濁による視覚障害を呈し得る（Ｂｅｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＭＰＳ Ｉ：ｇｌｏｂａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＭＰＳ Ｉ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６（１０）：７５９－７６５）。さらに、多くの患者は水頭症、脊髄圧迫症、及び一部の患者では認知障害を含み得る中枢神経系でのＧＡＧの貯蔵に関連した症状を発症する。
ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）は、発生率が１００，０００件の出生のうち１件と推定する稀な劣性遺伝疾患である（Ｍｏｏｒｅ Ｄ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ３）。ＭＰＳ Ｉは、遍在する複合多糖類、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸のリソソーム異化に必要な酵素である、α－ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）の欠損によって生じる。これらの多糖類はグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と呼ばれ、ＭＰＳ Ｉ患者の組織に蓄積されて、特徴的な貯蔵病変及び多様な疾患後遺症をもたらす。患者は、低身長、骨及び関節の変形、顔の特徴の粗雑化、肝脾腫、心臓弁膜疾患、閉塞性睡眠時無呼吸、再発性上気道感染症、聴覚障害、手根管症候群、及び角膜混濁による視覚障害を呈し得る（Ｂｅｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ＭＰＳ Ｉ：ｇｌｏｂａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＭＰＳ Ｉ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６（１０）：７５９－７６５）。さらに、多くの患者は水頭症、脊髄圧迫症、及び一部の患者では認知障害を含み得る中枢神経系でのＧＡＧの貯蔵に関連した症状を発症する。
【0005】
ＭＰＳ Ｉ患者は、広範囲の疾患重症度及びＣＮＳ障害の程度に及ぶ。この重症度の多様性は、残存するＩＤＵＡの発現と相関する；活性酵素の発現をもたらさない２つの突然変異を有する患者（ナンセンス突然変異、欠失、及び一部のミスセンス突然変異を含む）は、典型的に２歳になる前に症状を示す、正常な発達初期の後に例外なく重度の認知機能低下を示す（Ｔｅｒｌａｔｏ ＮＪ ＆ Ｃｏｘ ＧＦ，２００３，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ５（４）：２８６－２９４）。この重症型形態のＭＰＳ Ｉは、ハーラー（Ｈ）症候群とも称する。少量の活性ＩＤＵＡの生産をもたらす少なくとも１つの突然変異を有する患者は、ハーラー－シャイエ（ＨＳ）症候群またはシャイエ症候群と称する軽症型表現型を示す。これらの患者は、幼少期の初期に症状を示し得る、または人生の最初の１０年を経た後まで特定できない場合もある。概して、発症が遅れ、重症度が低下し得るものの、軽症形態のＭＰＳ Ｉを有する患者は、ハーラー症候群を有する患者と同じあらゆる身体的特徴を経験し得る（Ｖｉｊａｙ Ｓ＆Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，２００５，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃａ ９４（７）：８７２－８７７）。また、減弱型ＭＰＳ Ｉを有する患者は、高い割合で脊髄圧迫及び水頭症を含む神経学的合併症を経験する。減弱型ＭＰＳ Ｉを有すると分類した患者のおよそ３０％において、認知障害が報告する（Ｂｅｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６（１０）：７５９－７６５）。
【0006】
酵素補充療法（ＥＲＴ）［Ａｌｄｕｒａｚｙｍｅ（登録商標）（ラロニダーゼ）］は、ＭＰＳ Ｉの全身症状の標準治療として認められているが、ＣＮＳ症状発現を治療しない（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）は、ＭＰＳ Ｉの神経認知症状に影響を与えるが、手順に重大な制約がある。ＭＰＳ ＩのためのＨＳＣＴは、相当な病的状態及び最大２０％の死亡率に関連付けられ、ＩＤＵＡ発現が安定してもなお患者はＨＳＣＴの最長１年後に神経認知機能の低下に直面するため、治療は不完全である（ｄｅ Ｒｕ ＭＨ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ６：９；Ｆｌｅｍｉｎｇ ＤＲ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２（４）：２９９－３０４；Ｂｏｅｌｅｎｓ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４０（３）：２２５－２３３；Ｓｏｕｉｌｌｅｔ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ３１（１２）：１１０５－１１１７；Ｗｈｉｔｌｅｙ ＣＢ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４６（２）：２０９－２１８）。移植に成功した患者において、知性は典型的には、正常より著しく下回ったままである。
【発明の概要】
【0007】
３．発明の概要
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群の診断を受けた患者を含むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態では、治療は遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成する。デポーからＣＳＦに分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注入することにより投与することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要となるであろう。
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群の診断を受けた患者を含むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態では、治療は遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成する。デポーからＣＳＦに分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注入することにより投与することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要となるであろう。
【0008】
導入遺伝子がコードするＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、限定を意図するものではないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならびにアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定を意図するものではないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示す（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、またはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）が報告した、重度の、中程度に重度の、中程度の、または軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定したいずれの突然変異も含まないことを条件とする）。
【0009】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は図２（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、図Ｓ８に報告したオーソログのアラインメントを示す）に示すＩＤＵＡオーソログでのその位置に認められる対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができる（ただし、そのような置換は図３に示す、または上記したＶｅｎｔｕｒｉ ２００２またはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告する有害な突然変異のいずれも含まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのインビトロでの従来のアッセイを使用して試験することができる。選択する好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ Ｉのためのインビトロでの従来のアッセイによって試験するＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものとすべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイについては、例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｈｏｐｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒｉｆ ５：２２５－２３２を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正する能力は、例えば、培養においてＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を加えることにより、またはＭＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を発現及び分泌するように操作したヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養において評価する、例えば、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞でのＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照されたい）。
【0010】
ＭＰＳ Ｉのための動物モデルは、マウス（例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照されたい）、短毛の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照されたい）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８を参照されたい）について記載する。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと（図２のアラインメントを参照されたい）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であることを意味する、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
【0011】
好ましくは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御するべきであり、かつベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞で使用するそのようなシグナルペプチドとして：
●オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
●Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
●Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
●プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
●ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
●インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）とし得るが、これらに限定されない。シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
●オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
●Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
●Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
●プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
●ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
●インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）とし得るが、これらに限定されない。シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
【0012】
導入遺伝子を送達するために使用する組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。これらに限定されないが、その全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載した、特に好ましくはＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、ならびにその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照されたい）と称するレンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、その他のウイルスベクターを使用することができる。
【0013】
ある実施形態では、ＡＡＶ－コンストラクト１は、導入遺伝子を送達するために使用することができる。ＡＡＶ－コンストラクト１は、ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシドである、また、当該カセットからの発現は、ＣＢ７プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期エンハンサーと、ニワトリベータアクチンプロモーターとのハイブリッドで駆動する、また、当該ＩＤＵＡ発現カセットは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接しており、そして、当該発現カセットは、ニワトリベータアクチンイントロンと、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。好ましい実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。ＡＡＶ－コンストラクト１のベクターゲノムの概略図を図６に示す。ある実施形態では、ＡＡＶ－コンストラクト１は、配列番号２７のヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
【0014】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。ある実施形態では、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下への注入に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0015】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下投与を介して（すなわち、くも膜下へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよい。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、または９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
【0016】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度を直接測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態では、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであることは、ＣＳＦでのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態では、組換えベクターは、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0017】
特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、また、脳質量は、対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する。特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した、約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換する、また、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
【0018】
背景として、ヒトＩＤＵＡは、６５３アミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、図１において示す６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化する。シグナル配列が除去され、ポリペプチドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングする：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時間で７２ｋＤａにまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態にプロセシングする。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまたは８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトーシスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングする。（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照されたい）。
【0019】
ｈＩＤＵＡの全体の構造は、３つのドメインからなる：残基４２－３９６は、古典的な（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成する、残基２７－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）を有するβ－サンドイッチドメインを形成する、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメインを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド架橋によって連結する。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合する。β－ヘアピン（β１２－β１３）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入され、これは基質結合及び酵素活性に要求するＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１、及びその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結晶構造を参照されたい）。
【0020】
本発明は部分的に、以下の原理に基づく：
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳでのロバストなプロセスである、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、その各々の全体が参照により組み込まれている、例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳がその他の組織に認めるよりはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞が分泌したチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１で特定している６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマンノース－６リン酸化した、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えば、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のレベルに近いレベルまで減少すると予測する。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば、神経細胞及びグリア細胞によって生成する酵素前駆体の取り込みは、取り込み量がコントロール細胞より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように高レベルを維持すると予測する。このアッセイを用いると、脳細胞によって生成する酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測する、特に、異なる種類の細胞によって生成する酵素前駆体でのＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛することも意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加する。重要なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加するグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない高度にプロセシングした複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求する２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製するラロニダーゼには存在しない。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限する』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、その他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が増大する、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進することが示す。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認めることができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７、特にｐ．１５３７の考察を参照されたい）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導し得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業生産するＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産するタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳでのロバストなプロセスである、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、その各々の全体が参照により組み込まれている、例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳がその他の組織に認めるよりはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞が分泌したチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１で特定している６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマンノース－６リン酸化した、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えば、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のレベルに近いレベルまで減少すると予測する。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば、神経細胞及びグリア細胞によって生成する酵素前駆体の取り込みは、取り込み量がコントロール細胞より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように高レベルを維持すると予測する。このアッセイを用いると、脳細胞によって生成する酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測する、特に、異なる種類の細胞によって生成する酵素前駆体でのＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛することも意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加する。重要なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加するグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない高度にプロセシングした複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求する２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製するラロニダーゼには存在しない。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限する』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、その他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が増大する、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進することが示す。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認めることができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７、特にｐ．１５３７の考察を参照されたい）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導し得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業生産するＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産するタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
【0021】
上記した理由のために、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの生産は、例えば、ＭＰＳ Ｉ疾患（ハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断する患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給するＣＮＳでの永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成するＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーからＣＳＦ中に分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によりエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
【0022】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産する全てのｈＩＤＵＡ分子が完全にグリコシル化され、硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産する糖タンパク質の集団は、有効性を実証する上で十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または減少）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0023】
遺伝子治療に対する代替または追加治療として、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質は組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は、これらに限定されないが、数例を挙げればＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥを含む（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
【0024】
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがってタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容しないヒト対象において、発現したｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
【0025】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えば、ミコフェノール酸と組合わせた、またはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンなどのコルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用するその他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態では、免疫抑制治療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止し得る。
【0026】
その他の利用可能な治療の送達を伴うＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達の組合わせは、本発明の方法に包含する。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与するラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法がある。
【0027】
ある態様では、ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、ヒトの神経細胞が産生する治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、当該ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して誘導する、また、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、また、対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で脳質量を決定する。
【0028】
別の態様では、ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、ヒトのグリア細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、当該ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して誘導する、また、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、また、対象の脳の脳ＭＲＩで脳質量を決定する。
【0029】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積ｃｍ３からヒト対象の脳質量に変換する、また、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
【0030】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、ＭＲＩで決定した約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、またはＭＲＩで決定した約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。
【0031】
本明細書に記載した治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する。本明細書に記載した方法のその他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する。
【0032】
本明細書に記載した方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の全脳脊髄液量の１０％を超えない体積で投与する。
【0033】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＵＡ治療の前に、またはヒトＩＤＵＡ治療と同時に、免疫抑制療法をヒト対象に対して投与する、その後、免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えば、プレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンなどの組み合わせを、ヒトＩＤＵＡ治療の前に、またはヒトＩＤＵＡ治療と同時に、ヒト対象に対して投与する、その後、免疫抑制療法を継続する、ことを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、１８０日後に中止する。
【0034】
本明細書に記載した方法の特定の実施形態では、ヒトＩＤＵＡは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
３．１ 例示的実施形態
１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒト神経細胞が産生した治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、前記脳質量を、前記対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトグリア細胞が産生した治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、前記脳質量は、前記対象の脳の脳ＭＲＩによって決定する、前記方法。
３．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換して得る、また、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の全脳脊髄液量の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～６のいずれか１項に記載の方法。
８．ヒトＩＤＵＡ治療の前に、またはヒトＩＤＵＡ治療と同時に、ヒト対象に免疫抑制療法を実施する、その後、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡ治療の前に、または前記ヒトＩＤＵＡ治療と同時に、（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えば、プレドニゾロン、及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に対して投与する、その後、継続することを含む、パラグラフ８に記載の方法。
１０．前記免疫抑制治療を、１８０日後に中止する、パラグラフ８または９に記載の方法。
１１．前記ヒトＩＤＵＡが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載した用量で投与する、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
３．１ 例示的実施形態
１．ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒト神経細胞が産生した治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、前記脳質量を、前記対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトグリア細胞が産生した治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、前記脳質量は、前記対象の脳の脳ＭＲＩによって決定する、前記方法。
３．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換して得る、また、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の全脳脊髄液量の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～６のいずれか１項に記載の方法。
８．ヒトＩＤＵＡ治療の前に、またはヒトＩＤＵＡ治療と同時に、ヒト対象に免疫抑制療法を実施する、その後、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記免疫抑制治療が、前記ヒトＩＤＵＡ治療の前に、または前記ヒトＩＤＵＡ治療と同時に、（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸、または（ｃ）タクロリムス、ラパマイシン、及びコルチコステロイド、例えば、プレドニゾロン、及び／またはメチルプレドニゾロンの組合わせを前記対象に対して投与する、その後、継続することを含む、パラグラフ８に記載の方法。
１０．前記免疫抑制治療を、１８０日後に中止する、パラグラフ８または９に記載の方法。
１１．前記ヒトＩＤＵＡが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載した用量で投与する、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
【表1】
【図面の簡単な説明】
【0035】
【図1】ヒトＩＤＵＡのアミノ酸配列である。６つのＮ－結合型グリコシル化部位（Ｎ）は、太字にして下線を引いてある；１つのチロシン－Ｏ－硫酸化部位（Ｙ）は太字にして下線を引き、完全な硫酸化部位配列は網掛けを付けてある；そして、ジスルフィド結合（２つのシステイン残基；Ｃ）は、太字にして、下線を引いてある。ＣＨＯ細胞において作製する分泌型組換え産物のＮ末端はＡ２６であるが、ヒト肝臓のネイティブ細胞内酵素のＮ末端はＥ２７である（Ｋａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒｉｆ ５：２２５－２３２，ｐ．２３０を参照されたい）。
【0036】
【図2】ｈＩＤＵＡの公知のオーソログとのマルチプル配列アラインメントである。配列は、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒ．２を使用してアラインした（Ｌａｒｋｉｎ ＭＡ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３（２１）：２９４７－２９４８）。種の名前及びタンパク質ＩＤは、以下の通りである：ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ；ＮＰ＿０００１９４．２）、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ；Ｍ８１８９３．１）、ウシ（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ；ＸＰ＿００２６８８４９２．１）、マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ；ＮＰ＿０３２３５１．２）、ラット（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ；ＮＰ＿００１１６５５５５．１）、カモノハシ（Ｏｒｎｉｔｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ａｎａｔｉｎｕｓ；ＸＰ＿００１５１４１０２．２）、ニワトリ（Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ；ＮＰ＿００１０２６６０４．１）、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ；ＮＰ＿００１０８７０３１．１）、ゼブラフィッシュ（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ；ＸＰ＿００１９２３６８９．３）、ウニ（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｃｅｎｔｒｏｔｕｓ ｐｕｒｐｕｒａｔｕｓ；ＸＰ＿７９６８１３．３）ユウレイボヤ（Ｃｉｏｎａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ；ＸＰ＿００２１２０９３７．１）、及びショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ；ＮＰ＿６０９４８９．１）。ヒトタンパク質（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｔ３７４、Ｎ４１５、Ｎ４５１）のＮ－グリコシル化部位；基質結合に関与する残基（Ｒ８９、Ｈ９１、Ｎ１８１、Ｅ１８２、Ｈ２６２、Ｋ２６４、Ｅ２９９、Ｄ３４９、及びＲ３６３）及びＮ３７２でのＮ－グリカンとの相互作用に関与する残基（Ｐ５４、Ｈ５８、Ｗ３０６、Ｓ３０７、Ｙ３５５、Ｒ３６８及びＱ３７０）は、網掛けによって示す。（適応元：Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３；Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ Ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｆｉｇ．Ｓ８）。
【0037】
【図3】ＭＰＳ Ｉ突然変異、ＩＤＵＡの構造変化及び表現型である。（Ｓａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２，Ｔａｂｌｅ ３より）。
【0038】
【図4】ＣＨＯ細胞が分泌した組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼの６つのグリコシル化部位のオリゴ糖である。Ｃは複合型；Ｍはハイマンノース型；Ｐは、リン酸化したハイマンノース型である。大文字はよく識別した、主要なオリゴ糖を意味するが、小文字は軽微なまたは不完全に特徴づけた構成要素を意味する。（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５より）。
【0039】
【図5】ＡＡＶキャプシド１～９のＣｌｕｓｔａｌマルチプル配列アラインメントである（配列番号１６～２６）。その他のアラインしたＡＡＶキャプシドの対応する位置からアミノ酸残基を「動員する」ことで、アミノ酸置換（一番下の列に太字で示す）がＡＡＶ９及びＡＡＶ８キャプシドになし得る。「ＨＶＲ」＝超可変領域と称する配列領域である。
【0040】
【図6】ＡＡＶ－コンストラクト１のベクターゲノムの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【0041】
５．発明の詳細な説明
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群の診断を受けた患者を含むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態では、治療は遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成する。デポーからＣＳＦに分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注入することにより投与することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要となるであろう。
本発明はハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエ症候群の診断を受けた患者を含むが、これらに限定されないムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系の脳脊髄液（ＣＳＦ）に完全ヒトグリコシル化（ＨｕＧｌｙ）α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）を送達することを含む。好ましい実施形態では、治療は遺伝子治療を介して、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）またはｈＩＤＵＡの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に完全ヒトグリコシル化導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入細胞の永続的なデポーを作製することにより、達成する。デポーからＣＳＦに分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正（ｃｒｏｓｓ－ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）」する。代替の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを細胞培養で生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注入することにより投与することができる。しかしながら、遺伝子治療アプローチは、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する－酵素は血液脳関門を通過することができないため、酵素の全身送達によってはＣＮＳは治療されず；かつ本発明の遺伝子治療アプローチとは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担となるだけでなく感染のリスクを生む反復注入が必要となるであろう。
【0042】
導入遺伝子がコードするＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、限定を意図するものではないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならびにアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定を意図するものではないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異を、図３に示す（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、またはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）が報告した、重度の、中程度に重度の、中程度の、または軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定したいずれの突然変異も含まないことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
【0043】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は図２（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、図Ｓ８に報告したオーソログのアラインメントを示す）に示すＩＤＵＡオーソログでのその位置に認める対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができる（ただし、そのような置換は図３に示す、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２またはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告する有害な突然変異のいずれも含まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのインビトロでの従来のアッセイを使用して試験することができる。選択する好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ Ｉのためのインビトロでの従来のアッセイによって試験するＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものとすべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイについては、例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｈｏｐｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒｉｆ ５：２２５－２３２を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正する能力は、例えば、培養においてＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を加えることにより、またはＭＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を発現及び分泌するように操作したヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養において評価する、例えば、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞でのＩＤＵＡ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照されたい）。
【0044】
ＭＰＳ Ｉのための動物モデルは、マウス（例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１を参照されたい）、短毛の雑種ネコ（例えば、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １３（１１）：１２９４－９７を参照されたい）、及びいくつかの品種のイヌ（例えば、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８；Ｓｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８を参照されたい）について記載する。イヌのＭＰＳ Ｉモデルは、ＩＤＵＡ突然変異により検出可能なタンパク質が喪失するため、ＭＰＳ Ｉの最も重度の形態であるハーラー症候群に類似している。ＩＤＵＡタンパク質間の遺伝子相同性が高いこと（図２のアラインメントを参照されたい）は、ｈＩＤＵＡが動物において機能的であることを意味する、ｈＩＤＵＡを包含する治療はこれらの動物モデルで試験することができる。
【0045】
好ましくは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御するべきであり、かつベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈｕＩＤＵＡ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞によって使用するそのようなシグナルペプチドには：
●オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
●Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
●Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
●プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
●ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
●インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限定されない。シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
●オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
●Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
●Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
●プロトカドヘリンα－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
●ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
●インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）があり得るが、これらに限定されない。シグナルペプチドは本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
【0046】
導入遺伝子を送達するために使用する組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞を含むがこれらに限定されない、ＣＮＳの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特にＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。これらに限定されないが、その全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎによって記載した、特に好ましくはＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、ならびにその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅによって記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクト（５．２節を参照されたい）と称するレンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、その他のウイルスベクターを使用することができる。
【0047】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡベクターの懸濁液を含む。ある実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下への注入に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、髄腔内投与に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0048】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下投与を介して（すなわち、くも膜下へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができ、または、患者に実行できそうな場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（典型的にＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達してもよい。ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎ、または９．２５～２７７μｇ／ｍＬの範囲の濃度に維持する用量を使用すべきである。
【0049】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度を直接測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。ある実施形態では、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであることは、ＣＳＦでのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。ある実施形態では、組換えベクターは、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0050】
背景として、ヒトＩＤＵＡは、６５３アミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、図１において示す６つの可能性のある部位（Ｎ１１０、Ｎ１９０、Ｎ３３６、Ｎ３７２、Ｎ４１５、及びＮ４５１）でＮ－グリコシル化する。シグナル配列が除去され、ポリペプチドはリソソーム内で成熟形態にプロセシングする：７５ｋＤａの細胞内前駆体は数時間で７２ｋＤａまでトリミングされ、最終的に、４～５日かけて６６ｋＤａの細胞内形態にプロセシングする。ＩＤＵＡの分泌形態（使用するアッセイに応じて７６ｋＤａまたは８２ｋＤａ）は、マンノース－６－リン酸受容体を介して細胞に容易にエンドサイトーシスされ、より小さい細胞内形態と同様にプロセシングする。（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２５９：１９９－２０８；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２７４：２６３－２６８；及びＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：２２７５８－２２７６５を参照されたい）。
【0051】
ｈＩＤＵＡの全体の構造は、３つのドメインからなる：残基４２－３９６は、古典的な（β／α）トリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＩＭ）バレルドメインを形成する、残基２７－４２及び３９７－５４５は、短いへリックス－ループ－へリックス（４８２－５０８）を有するβ－サンドイッチドメインを形成する、かつ残基５４６－６４２は、Ｉｇ様ドメインを形成する。最後に挙げた２つのドメインは、Ｃ５４１及びＣ５７７間のジスルフィド架橋によって連結する。β－サンドイッチ及びＩｇ様ドメインは、ＴＩＭバレルの１番目、７番目、及び８番目のα－へリックスに結合する。β－ヘアピン（β１２－β１３）は、ＴＩＭバレルの８番目のβ－ストランド及び８番目のα－へリックスの間に挿入され、これは基質結合及び酵素活性に要求するＮ－グリコシル化Ｎ３７２を含む。（図１、及びその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８－１４６３３，及びＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２に記載の結晶構造を参照されたい）。
【0052】
本発明は部分的に、以下の原理に基づく：
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳでのロバストなプロセスである、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、その各々の全体が参照により組み込まれている、例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳がその他の組織に認めるよりはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞が分泌したチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１で特定している６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞に取り込まれる。（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマンノース－６リン酸化した、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えば、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のレベルに近いレベルまで減少すると予測する。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば、神経細胞及びグリア細胞によって生成する酵素前駆体の取り込みは、取り込み量がコントロール細胞より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように高レベルを維持すると予測する。このアッセイを用いると、脳細胞によって生成する酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測する、特に、異なる種類の細胞によって生成する酵素前駆体でのＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛することも意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加する。重要なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加するグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない高度にプロセシングした複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求する２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製するラロニダーゼには存在しない。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限する』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、その他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が増大する、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進することが示す。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こり得る）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認めることができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７、特にｐ．１５３７の考察を参照されたい）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導し得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業生産するＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産するタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、商業生産した製品と比較して免疫原性が低下したｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞はＣＮＳでのロバストなプロセスである、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ヒトＣＮＳ細胞が行う翻訳後修飾についての、その各々の全体が参照により組み込まれている、例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）グリコプロテオームについて記載され、脳がその他の組織に認めるよりはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質及びマンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、ならびに神経細胞が分泌したチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。
（ｉｉ）ｈＩＤＵＡは、図１で特定している６つのアスパラギン（「Ｎ」）のグリコシル化部位を有する（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞に取り込まれる。（Ｍｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，上記）。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって測定した場合に７６～８２ｋＤａの（使用するアッセイに応じて）、２，６－シアル酸付加され、及びマンノース－６リン酸化した、ＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
（ｉｉｉ）リソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２においてイズロン酸－２－スルファターゼ酵素について行われたように、分泌タンパク質のＭ６Ｐ含有量を測定することは、可能である。（例えば、５ｍＭの）抑制性Ｍ６Ｐの存在下では、非神経細胞または非グリア細胞、例えば、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のレベルに近いレベルまで減少すると予測する。抑制性Ｍ６Ｐの存在下であっても、脳細胞、例えば、神経細胞及びグリア細胞によって生成する酵素前駆体の取り込みは、取り込み量がコントロール細胞より４倍高く、抑制性Ｍ６Ｐの非存在下で遺伝子操作した腎細胞によって生成した酵素前駆体の酵素活性（すなわち、取り込み）のレベルと同等であったＤａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように高レベルを維持すると予測する。このアッセイを用いると、脳細胞によって生成する酵素前駆体のＭ６Ｐ含有量を予測する、特に、異なる種類の細胞によって生成する酵素前駆体でのＭ６Ｐ含有量を比較することが可能となる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、そのようなアッセイにおいて抑制性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得る、ｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
（ｉｖ）Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛することも意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
（ｖ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加する。重要なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加するグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない高度にプロセシングした複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求する２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製するラロニダーゼには存在しない。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限する』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
（ｖｉ）ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、その他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が増大する、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進することが示す。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こり得る）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認めることができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼにおいて少数しか存在しない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後チロシン硫酸化のための能力が限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７、特にｐ．１５３７の考察を参照されたい）。
（ｖｉｉ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導し得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）は免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス：商業生産するＩＤＵＡ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびに特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防衛システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産するタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチは、商業生産した製品と比較して免疫原性が低下したｈＩＤＵＡの継続的分泌をもたらすべきである。
【0053】
上記した理由のために、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの生産は、例えば、ＭＰＳ Ｉ疾患（ハーラー、ハーラー－シャイエ、またはシャイエを含むが、これらに限定はされない）と診断する患者（ヒト対象）のＣＳＦにＨｕＧｌｙＩＤＵＡをコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給するＣＮＳでの永続的なデポーを作製することによる、遺伝子治療によって達成するＭＰＳ Ｉの治療のための「バイオベター」分子をもたらすべきである。デポーからＣＳＦ中に分泌するＨｕＧｌｙＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によりエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ Ｉレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
【0054】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産する全てのｈＩＤＵＡ分子が完全にグリコシル化され、硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産する糖タンパク質の集団は、有効性を実証する上で十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を減速させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または減少）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0055】
遺伝子治療に対する代替または追加治療として、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質は組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株で生産することができ、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は、これらに限定されないが、幾つかの例として、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥがある（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ： ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（またはα－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
【0056】
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する毒性の最も明白な潜在的源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがってタンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容しないヒト対象において、発現したｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。
【0057】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患（例えば、ハーラー）を有する患者を治療する場合に、適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、例えば、ミコフェノール酸と組合わせた、及び／またはプレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンなどのコルチコステロイドと組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用するその他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を、利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、ある実施形態では、免疫抑制治療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止し得る。
【0058】
ある実施形態では、免疫抑制は、コルチコステロイド、例えば、プレドニゾロン及び／またはメチルプレドニゾロンの投与、ならびに任意にＭＭＦとともに投与するタクロリムス及び／またはシロリムスのレジメンを含む。例えば、１回のコルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロンを注入する、その後、経口コルチコステロイドを投与する、１２週の経過にわたり段階的に漸減する、続いて中止する。同時に、タクロリムス及びシロリムスを組合わせで低用量（例えば、４～８ｎｇ／ｍＬの血清濃度を維持する）で、またはラベル用量で単独で、２４～４８週にわたって経口投与することができる。タクロリムスまたはシロリムスは、ＭＭＦと組合わせてラベル用量で投与することもできる。したがって、患者は直ちに利用可能なステロイドの初期の注入を受け、このステロイドは続いて経口投与によって維持されて、１２週までに漸減する。さらなる免疫抑制は、任意にＭＭＦと組合わせて、タクロリムス及び／またはシロリムスによって４８週を通じて維持する。
【0059】
その他の利用可能な治療の送達を伴うＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達の組合わせは、本発明の方法に包含する。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に投与することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与するラロニダーゼを使用する酵素補充療法及び／またはＨＳＣＴ療法がある。
【0060】
ある態様では、本明細書では、ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、ヒト神経細胞が産生する治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、当該脳質量を、当当該対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する。
【0061】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、ヒト神経細胞が産生する治療有効量の組換えヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを送達するステップは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、当該脳質量を、当当該対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。
【0062】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、ヒトグリア細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡをヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、当該脳質量を、当当該対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。
【0063】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、ヒトグリア細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡをヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡを送達するステップは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する、そして、当該脳質量を、当当該対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。
【0064】
ある態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、対象の脳ＭＲＩから対象の脳質量を決定する、続いて、ヒト神経細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡをヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。
【0065】
ある態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、当該方法は、対象の脳ＭＲＩから対象の脳質量を決定する、続いて、ヒトグリア細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡをヒトの脳の脳脊髄液に送達することを含む、また、ヒトＩＤＵＡは、ヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達する、また、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、当該ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。
【0066】
ある態様では、本明細書では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供しており、（ａ）対象の脳ＭＲＩから対象の脳質量を決定する、（ｂ）ヒト対象の脳質量に基づいて用量を算出する、及び（ｃ）続いて、ヒトＩＤＵＡをコードする当該用量の組換えヌクレオチド発現ベクターを、対象の脳の脳脊髄液に投与することを含む。
【0067】
好ましい実施態様では、ヒトＩＤＵＡ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によるエンドサイトーシスである。好ましい実施態様では、ヒトＩＤＵＡ導入遺伝子産物を、ＣＮＳの細胞のリソソームに送達する。
【0068】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換する、また、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、当該方法は、ヒト対象の脳ＭＲＩからヒト対象の脳体積を得る、ことをさらに含む。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、当該方法は、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換する、ことをさらに含む。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、当該方法は、ヒト対象の脳ＭＲＩからヒト対象の脳体積を得る、そして、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換する、ことをさらに含む。
【0069】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量、ＭＲＩで決定した約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、またはＭＲＩで決定した約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。
【0070】
本明細書に記載した治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する。本明細書に記載した治療方法のその他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する。
【0071】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の全脳脊髄液量の１０％を超えない体積で投与する。
【0072】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＵＡ治療の前に、またはヒトＩＤＵＡ治療と同時に、免疫抑制療法をヒト対象に投与する、その後、免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む
【0073】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、液体組成物である。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結組成物である。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結乾燥組成物、または再構成凍結乾燥組成物である
【0074】
本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、本明細書に提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＩＣまたはＩＣＶ投与のための様々な投与形態に製剤し得る。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、単位用量または複数単位用量で提供し得る。本明細書で使用する単位用量とは、ヒト及び動物対象への投与に適した物理的に分離した単位のことを指しており、当該技術分野で公知の通り、個々に包装する。それぞれの単位用量は、所望の治療効果を獲得する上で十分な所定量の当該組換えヌクレオチド発現ベクター、及び／またはその他の成分（複数可）を、必要とする医薬担体または賦形剤と一緒に含む。単位用量製剤の形態の例として、アンプル、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、単位用量を、その一部またはその倍数の用量で投与し得る。本明細書に記載した治療方法の特定の実施形態では、複数単位用量は、単位用量を分離させて投与する単一の容器に入れた複数の同一の単位用量である。複数単位用量の例として、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、６．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、７．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、８．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．７５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．８×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１２×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、３．２５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、３．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、３．７５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、３．８×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．２５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．８８×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．９×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、５．０×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、６．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約６．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約７．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約８．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約９．７５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約９．８×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約１．１２×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約１．１×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約１．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約３．２５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約３．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約３．７５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約３．８×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約４．２５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約４．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約４．８８×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約４．９×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、約６．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。
【0075】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書に記載しており、当該方法は、ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒト神経細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含む。特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書に記載しており、当該方法は、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトグリア細胞が産生する治療有効量の組換えヒトＩＤＵＡを送達することを含む。
【0076】
特定の実施形態では、ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）の診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のα２，６－シアル化ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）を送達する；及び、ヒトＩＤＵＡを使用する治療前に、または治療と同時に、免疫抑制療法を当該対象に施す、そして、その後も免疫抑制療法を継続する、ことを含む。
【0077】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達する；及び、ヒトＩＤＵＡを使用する治療の前に、または治療と同時に、免疫抑制療法を当該対象に施す、そして、その後も免疫抑制療法を継続する、ことを含む。
【0078】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、検出可能なＮｅｕＧｃ、及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない治療有効量のグリコシル化ヒトＩＤＵＡを送達する；及び、ヒトＩＤＵＡを使用する治療の前に、または治療と同時に、免疫抑制療法を当該対象に施す、そして、その後も免疫抑制療法を継続する、ことを含む。
【0079】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、チロシン硫酸化を含む治療有効量のヒトＩＤＵＡを送達する；及び、ヒトＩＤＵＡを使用する治療の前に、または治療と同時に、免疫抑制療法を当該対象に施す、そして、その後も免疫抑制療法を継続する、ことを含む。
【0080】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳に、ヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与する、また、当該ＩＤＵＡが、ヒト不死化神経細胞において当該発現ベクターから発現する際にα２，６－シアル化する；及び、当該発現ベクターを投与する前に、または投与と同時に、免疫抑制療法を当該対象に施す、そして、その後も免疫抑制療法を継続する、ことを含む。
【0081】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳に、ヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与する、また、当該ＩＤＵＡが、ヒト不死化神経細胞において当該該発現ベクターから発現する際にグリコシル化するが、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない；及び、当該発現ベクターを投与する前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ことを含む。
【0082】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：ａ）当該ヒト対象の脳に、ヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与する、また、当該ヒトＩＤＵＡが、ヒトまたは不死化神経細胞において当該発現ベクターから発現する際に、グリコシル化するが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない；及び、ｂ）当該発現ベクターの投与の前に、及び／または投与と同時に、及び／またはその後に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ステップを含む。
【0083】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳に、ヒトＩＤＵＡをコードする発現ベクターを投与する、また、当該ＩＤＵＡが、ヒト不死化神経細胞において当該発現ベクターから発現する際にチロシン硫酸化する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ことを含む。
【0084】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、α２，６－シアル化グリカンを含む該ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ことを含む。
【0085】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続すること、を含む。
【0086】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ことを含む。
【0087】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、チロシン硫酸化を含む当該ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続する、ことを含む。
【0088】
特定の実施形態では、α２，６－シアル化グリカンを含むＩＤＵＡの生産は、細胞培養において、ヒト神経細胞株に組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。特定の実施形態では、検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化ＩＤＵＡの生産は、細胞培養において、ヒト神経細胞株に組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。特定の実施形態では、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡの生産は、細胞培養において、ヒト神経細胞株に組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。特定の実施形態では、チロシン硫酸化を含むＩＤＵＡの生産は、細胞培養において、ヒト神経細胞株に組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。特定の実施形態では、ＩＤＵＡ導入遺伝子は、シグナルペプチドをコードする。特定の実施形態では、ヒト神経細胞株は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭである。
【0089】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、α２，６－シアル化グリカンを含む当該ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続することを含む、また、当該組換えベクターを、培養においてヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養において当該α２，６－シアル化グリカンを含む当該ＩＤＵＡを生産する。特定の実施形態では、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0090】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、検出可能なＮｅｕＧｃを含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続することを含む、また、当該組換えベクターは、培養においてヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養においてグリコシル化するが検出可能なＮｅｕＧｃを含まない該ＩＤＵＡを生産する。特定の実施形態では、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0091】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まないグリコシル化ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続することを含む、また、当該組換えベクターを、培養においてヒト神経細胞への形質導入に使用すると、当該細胞培養においてグリコシル化するが検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ抗原を含まない当該ＩＤＵＡを生産する。特定の実施形態では、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0092】
特定の実施形態では、ＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の治療方法を本明細書で提供しており、当該方法は：当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、治療有効量のヒトＩＤＵＡをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与する、その結果、チロシン硫酸化を含む当該ＩＤＵＡを放出するデポーを形成する；及び、当該発現ベクターの投与の前に、または投与と同時に、当該対象に免疫抑制治療を施す、かつその後も免疫抑制治療を継続することを含む、また、当該組換えベクターを、培養においてヒト神経細胞への形質導入に使用すると、当該細胞培養においてチロシン硫酸化を含む該ＩＤＵＡを生産する。特定の実施形態では、ヒト神経細胞は、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌＶＭ細胞である。
【0093】
特定の実施形態では、ヒトＩＤＵＡは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、または治療と同時に、（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸の組合わせを対象に投与する、かつその後も継続することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、１８０日後に中止する。
【0094】
好ましい実施形態では、グリコシル化ＩＤＵＡは、検出可能なＮｅｕＧｃ、及び／またはα－Ｇａｌを含まない。本明細書で使用する語句「検出可能なＮｅｕＧｃ、及び／またはα－Ｇａｌ」は、ＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ部分が、当該技術分野において公知である標準アッセイ方法で検出可能であることを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、ＮｅｕＧｃを検出する方法について、参照により、本明細書で援用する、Ｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，“Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌ－ａｎｄ Ｎ－Ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｕｒｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｔ Ｓｅｒｕｍ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－Ｐｈａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．” Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄ．３７７：１１１－１１９に従ったＨＰＬＣによって検出することができる。あるいは、ＮｅｕＧｃは、質量分析によって検出することができる。α－Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡを使用して（例えば、Ｇａｌｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，“Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｌｐｈａ－Ｇａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－Ｇａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．６５（８）：１１２９－３２を参照されたい）、または質量分析により（例えば、Ａｙｏｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１３，“Ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｂｙ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ，ｍｉｄｄｌｅ－ｕｐ，ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｗｎ ａｎｄ ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ ＥＳＩ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．” Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．５（５）：６９９－７１０を参照されたい）検出することができる。また、Ｐｌａｔｔｓ－Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，“Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｉｄｅ－Ｃｈａｉｎ Ａｌｐｈａ－ｇａｌ” Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．３５（２）：２４７－２６０において引用する参考文献も参照されたい。
【0095】
本明細書で使用する用語「約」は、所定の値または範囲の±１０％以内にあることを意味する。特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±２％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±５％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±７％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１０％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。しかしながら、本明細書では、用語「約」が、その用語に接続している正確な数値の詳細を示すことも理解されたい。例えば、「約１０」は、数字の「１０」に関する詳細を的確に提供する。
【0096】
５．１ Ｎ－グリコシル化及びチロシン硫酸化
５．１．１．Ｎ－グリコシル化
ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を備える分泌細胞である。ｈＩＤＵＡは、図１において特定する６つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）を有する。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチでは、２，６シアル酸付加され、かつマンノース－６リン酸化したＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
５．１．１．Ｎ－グリコシル化
ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を備える分泌細胞である。ｈＩＤＵＡは、図１において特定する６つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位（Ｎ１１０ＦＴ；Ｎ１９０ＶＳ；Ｎ３３６ＴＴ；Ｎ３７２ＮＴ；Ｎ４１５ＨＴ；Ｎ４５１ＲＳ）を有する。Ｎ３７２のＮ－グリコシル化は、基質との結合及び酵素活性に要求され、かつマンノース－６－リン酸化は分泌した酵素の細胞取り込み及びＭＰＳ Ｉ細胞の横断修正に要求する。Ｎ－結合型グリコシル化部位は、複合型、ハイマンノース型、及びリン酸化マンノース糖質部分を含むが（図４）、分泌形態のみが細胞によって取り込まれる。本明細書に記載した遺伝子治療アプローチでは、２，６シアル酸付加され、かつマンノース－６リン酸化したＩＤＵＡ糖タンパク質の継続的分泌をもたらすべきである。分泌したグリコシル化／リン酸化ＩＤＵＡは、ＣＮＳの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞によって取り込まれ、かつ正しくプロセシングすべきである。
【0097】
ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＵＡのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望まない凝集を減らすことができるグリカンが付加する。重要なことに、本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡに付加するグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体ＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない高度にプロセシングした複合型二分岐Ｎ－グリカンである。そのようなグリカンは、この翻訳後修飾を行うのに要求する２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって典型的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸であるＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加するＣＨＯ細胞において作製するラロニダーゼには存在しない。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカン、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のＨｕＧｌｙＩＤＵＡのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるべきである。
【0098】
遺伝子治療またはタンパク質治療アプローチにおいて生産する全ての分子が完全にグリコシル化され、硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産する糖タンパク質の集団は、有効性を実証する上で十分なグリコシル化及び硫酸化を受けるべきである。
【0099】
特定の実施形態では、本明細書に記載した方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、そのＮ－グリコシル化部位の１００％でグリコシル化し得る。しかしながら、当業者であれば、グリコシル化のメリットが達成するためには、必ずしも全てのＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位がＮ－グリコシル化する必要はないことを認識されよう。むしろ、グリコシル化のメリットは、Ｎ－グリコシル化部位の一定の割合のみがグリコシル化する場合、及び／または発現したＩＤＵＡ分子の一定の割合のみがグリコシル化する場合に実現し得る。したがって、特定の実施形態では、本明細書に記載した方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、その利用可能なＮ－グリコシル化部位の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％でグリコシル化する。特定の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載した方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％は、それらの利用可能なＮ－グリコシル化部位の少なくとも１つでグリコシル化する。
【0100】
特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載した方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡに存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％はＮ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（またはその他の関連した残基）でグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％は、グリコシル化する。
【0101】
別の特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載した方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡ分子に存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％は、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（またはその他の関連した残基）に結合する同一の結合したグリカンによりグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％は、同一の結合したグリカンを有する。
【0102】
重要なことに、本明細書に記載した方法に従って使用するＩＤＵＡタンパク質が神経細胞またはグリア細胞において発現する場合、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）でのインビトロ生産の必要性は回避する。その代わりに、本明細書に記載した治療方法の結果（例えば、ＩＤＵＡを発現させるための神経細胞またはグリア細胞の使用）、ＩＤＵＡタンパク質のＮ－グリコシル化部位は、有利なことにヒトの治療に関連及び有益なグリカンで修飾する。ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉがタンパク質生産に利用する場合、そのような利点には到達できない；それは、例えば、ＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトランスフェラーゼを発現せず、したがってＮ－グリコシル化の間、２，６シアル酸を付加することができず、かつ（２）シアル酸としてＮｅｕ５Ａｃの代わりにＮｅｕ５Ｇｃを付加することができるためであり、ならびにＥ．ｃｏｌｉは天然にはＮ－グリコシル化に必要な構成要素を含まないためである。したがって、特定の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞において発現され、本明細書に記載した治療方法において使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、ヒト神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化するが、ＣＨＯ細胞においてタンパク質がグリコシル化する様式でグリコシル化するのではない。別の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞において発現されて本明細書に記載した治療方法において使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡを生じるＩＤＵＡタンパク質は、神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化され、そのようなグリコシル化は、原核生物宿主細胞を使用して、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉを使用した場合は手を加えずには不可能である。
【0103】
タンパク質のグリコシル化パターンを決定するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、ヒドラジン分解は、グリカンを分析するために使用することができる。第一に、多糖を、ヒドラジンとのインキュベーションによって、その会合するタンパク質から放出させる（Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｉｂｅｒａｔｅヒドラジン分解グリカン放出キット，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジンは、多糖及びキャリアタンパク質間のグリコシド結合を攻撃して、結合したグリカンを放出させる。Ｎ－アセチル基は、この処理の間、失われて、再Ｎ－アセチル化によって再構成されなければならない。遊離グリカンは、炭素カラム上で精製され、続いて蛍光色素分子である２－アミノベンズアミドを使用して還元末端を標識することができる。標識多糖は、Ｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２，３０４（１）：７０－９０のＨＰＬＣプロトコルに従ってＧｌｙｃｏＳｅｐ－Ｎカラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で分離することができる。結果として生じる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さ及び繰り返し単位の数を示す。構造情報は、個々のピークを収集する、引き続きＭＳ／ＭＳ分析を実施することで集めることができる。それにより、繰り返し単位の単糖の組成及び配列を確認することができ、さらに多糖の組成の均一性を特定することができる。低分子量の特定のピークは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ／ＭＳによって分析でき、その結果を使用してグリカン配列を確認することができる。各ピークは、特定の数の繰り返し単位及びその断片からなるポリマーに対応する。したがって、クロマトグラムを用いれば、ポリマー長の分布の測定が可能となる。溶出時間はポリマー長の指標である一方、蛍光強度はそれぞれのポリマーのためのモル存在量と相関する。
【0104】
タンパク質と会合するグリカンパターンの均一性は、グリカン長及びグリコシル化部位全体に存在するグリカンの数と関係しているため、この均一性は当該技術分野で公知の方法、例えば、グリカン長及び流体力学半径を測定する方法を使用して評価することができる。サイズ排除ＨＰＬＣは、流体力学半径の測定を可能にする。タンパク質でのグリコシル化部位の数が多いほど、グリコシル化部位がより少ないキャリアと比較して、流体力学半径のばらつきがより大きくなる。しかしながら、単一のグリカン鎖が分析する場合、それらは長さがより高度に制御するために、より均一になり得る。グリカン長は、ヒドラジン分解、ＳＤＳ ＰＡＧＥ、及びキャピラリーゲル電気泳動によって測定することができる。さらに、また、均一であることは、特定のグリコシル化部位の使用パターンがより広い／より狭い範囲に変化することを意味し得る。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ－ＭＳ／ＭＳで測定することができる。
【0105】
Ｎ－グリコシル化は、本明細書に記載した方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＵＡに多くのメリットを付与する。そのようなメリットは、Ｅ．ｃｏｌｉでのタンパク質生産によっては到達不能である。それは、Ｅ．ｃｏｌｉは、Ｎ－グリコシル化に必要とする構成要素を天然には有しないためである。さらに、いくつかのメリットは、例えば、ＣＨＯ細胞でのタンパク質生産によっては到達不能である。それは、ＣＨＯ細胞が特定のグリカン（例えば、２，６シアル酸）の付加に必要な構成要素を欠いており、かつヒトにとって典型的でないグリカン、例えば、Ｎｅｕ５Ｇｃ及び大部分の個体において免疫原性であり、かつ高濃度ではアナフィラキシーを誘発し得るα－Ｇａｌ抗原を付加し得るためである。したがって、ヒト神経細胞またはグリア細胞でのＩＤＵＡの発現により、そうせずにＣＨＯ細胞または、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて生産した場合はタンパク質と会合していないであろう有益なグリカンを含むＨｕＧｌｙＩＤＵＡが生産する。
【0106】
５．１．２．チロシン硫酸化
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることを意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＵＡは、結合及び活性のために要求するＮ３７２を含有するドメインの近くに、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＡＤＴＰＩＹ２９６ＮＤＥＡＤＰＬＶＧＷＳ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析についてのＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下の通りに要約することができる：Ｙ残基がＹの＋５～－５位内にＥまたはＤを有する、かつＹの－１位が中性または酸性荷電アミノ酸であるが、硫酸化を無効化する塩基性アミノ酸、例えば、Ｒ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論に束縛されることを意図するものではないが、チロシン硫酸化領域内の突然変異（例えば、Ｗ３０６Ｌ）が酵素活性の減少及び疾患と関連することは公知であるため、ｈＩＤＵＡのこの部位の硫酸化は活性にきわめて重要となり得る。（Ｍａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、ｐｐ．１４６３２－１４６３３を参照されたい）。
【0107】
重要なことに、チロシン硫酸化タンパク質は、チロシン硫酸化に要求する酵素を天然には有しないＥ．ｃｏｌｉでは生産することができない。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシン硫酸化について欠陥がある－この細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化のための能力が限られている。例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ＆Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７を参照されたい。有利なことに、本明細書で提供する方法は、分泌型であり、かつチロシン硫酸化のための能力を備える神経細胞またはグリア細胞でのＩＤＵＡ、例えば、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡの発現を必要とする。チロシン硫酸化を検出するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４を参照されたい。
【0108】
ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスである、ｈＩＤＵＡのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させるべきである。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていない；しかし、その他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が増大する、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）が促進することが示す。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＵＡプロセシングの最終ステップとして起こる場合がある）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに脳（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅにてアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認めることができる）でより高いレベル（ｍＲＮＡに基づいて）で発現する。そのような翻訳後修飾は、最高でも、ＣＨＯ細胞産物であるラロニダーゼにおいて少数しか存在しない。
【0109】
５．２ コンストラクト及び製剤
α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトは、本明細書で提供する方法での使用のためのものである。本明細書で提供するウイルスベクター及びその他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的化ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
α－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトは、本明細書で提供する方法での使用のためのものである。本明細書で提供するウイルスベクター及びその他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的化ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
【0110】
一部の態様では、本開示は、使用のための核酸のために提供をしており、当該核酸は、ＩＤＵＡ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１アルファプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリベータ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター、及びオプシンプロモーターからなる群から選択するプロモーターと機能的に連結するｈＩＤＵＡをコードする。
【0111】
特定の実施形態では、本明細書では、１つ以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベクターを提供する。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡ及びＲＮＡの組合わせを含むことができる。特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、関心対象の遺伝子配列（導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）、非翻訳領域、及び終結配列からなる群から選択する１つ以上の配列を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、関心対象の遺伝子と機能的に連結したプロモーターを含む。
【0112】
特定の実施形態では、本明細書に開示した核酸（例えば、ポリヌクレオチド）及び核酸配列は、例えば、当業者に公知のあらゆるコドン－最適化技術を介して、コドン最適化することができる（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９：１４９－１６１を参照されたい）。
【0113】
５．２．１．ｍＲＮＡ
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。特定の実施形態では、ＩＤＵＡ、例えば、ｈＩＤＵＡをコードしている修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＵＡ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。特定の実施形態では、ＩＤＵＡ、例えば、ｈＩＤＵＡをコードしている修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
【0114】
５．２．２．ウイルスベクター
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベースのベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように、改変する。特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置するＡＡＶベクターである。特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベースのベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように、改変する。特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置するＡＡＶベクターである。特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
【0115】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＨＩＶベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するＨＩＶベースのベクターは少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、ｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子はＨＩＶゲノム由来のものとする、ｅｎｖ遺伝子は、別のウイルス由来のものとする。
【0116】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、単純ヘルペスウイルスベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供する単純ヘルペスウイルスベースのベクターは、１つ以上の前初期（ＩＥ）遺伝子を含まず、そのために細胞傷害性がなくなるように改変する。
【0117】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＭＬＶベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するＭＬＶベースのベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに最高８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
【0118】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、レンチウイルスベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、レンチウイルスキャプシドにパッケージングする。特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、以下のエレメント：長い末端反復配列、プライマー結合部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、及びキャプシド化部位の１つ以上を含む。
【0119】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、アルファウイルスベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターは、組換え、複製欠損アルファウイルスである。特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターのアルファウイルスレプリコンは、それらのビリオン表面に機能的な異種リガンドを提示することで、特定の細胞種に標的化する。
【0120】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶベースのウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベースのウイルスベクターは、ＣＮＳ細胞への向性を保持する。複数のＡＡＶ血清型を特定している。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型に由来する成分を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、またはＡＡＶ１１の１つ以上に由来する成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１血清型の１つ以上に由来する成分を含む。ＡＡＶ９ベースのウイルスベクターは、本明細書に記載した方法で使用する。ＡＡＶベースのウイルスベクターの核酸配列ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャプシドの作製方法は、例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号で教示している。ある態様では、導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０）ベースのウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、ＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを、本明細書で提供する。より特定の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを、本明細書で提供する。
【0121】
ある実施形態では、ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療のために使用する。ＡＡＶ９血清型は、投与（例えば、大槽内投与及び脳室内投与などのくも膜下投与）した後に、ＣＮＳでのｈＩＤＵＡタンパク質の効率的な発現を可能にする。特定の実施形態では、ベクターゲノムは、ＡＡＶ２－逆方向末端反復（ＩＴＲ）が隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、好ましくは、強力な構成的プロモーターが駆動する。
【0122】
特定の実施形態では、（ｉ）調節エレメントの制御下にあり、ＩＴＲと隣接している導入遺伝子を含む発現カセット；及び（ｉｉ）ＡＡＶ９キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有する、またはＡＡＶ９キャプシドタンパク質（配列番号２６）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％が同一であり、同時にＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシド：を含む人工ゲノムを含むＡＡＶ９ベクターを提供する。特定の実施形態では、コードしたＡＡＶ９キャプシドは、配列番号２６の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有する、かつＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持する。図５は、ＳＵＢＳと表示した列での比較に基づくアラインした配列の特定の位置で置換し得る潜在的アミノ酸を有する異なるＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アラインメントを提供する。したがって、特定の実施形態では、ＡＡＶ９ベクターは、ネイティブＡＡＶ９配列でのその位置に存在しない図５のＳＵＢＳ列において特定する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有するＡＡＶ９キャプシドバリアントを含む。
【0123】
特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するＡＡＶは、全内容を、参照により、本明細書で援用するＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８に記載の通り、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するＡＡＶは、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の通り、以下のアミノ酸挿入：ＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰのうちの１つを含む。特定の実施形態では、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９，４５８，５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の通り、本明細書に記載した方法で使用するＡＡＶは、ＡＡＶ．７ｍ８である。特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号で開示する任意のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ）である。特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するＡＡＶは、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する以下の特許及び特許出願：米国特許第７，９０６，１１１号；第８，５２４，４４６号；第８，９９９，６７８号；第８，６２８，９６６号；第８，９２７，５１４号；第８，７３４，８０９号；米国第９，２８４，３５７号；第９，４０９，９５３号；第９，１６９，２９９号；第９，１９３，９５６号；第９４５８５１７号；及び第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号；第２０１５／０１２６５８８号；第２０１７／００６７９０８号；第２０１３／０２２４８３６号；第２０１６／０２１５０２４号；第２０１７／００５１２５７号；及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９；ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５のいずれかで開示するＡＡＶである。
【0124】
特定の実施形態では、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）は、上記した通りにして使用することができる。特定の実施形態では、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＷｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２，ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６，Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４；及び米国特許第６，５９６，５３５号；第７，１２５，７１７号；及び第７，４５６，６８３号を参照されたい）。
【0125】
特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するウイルスベクターは、アデノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、ＩＤＵＡの導入に使用することができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有する、Ｅ３欠失を有していてもいなくてもよく、かつ発現カセットがいずれかの欠失した領域に挿入する第一世代のベクターとし得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全または部分的欠失を含む第二世代のベクターとし得る。ヘルパー依存型アデノウイルスは、アデノウイルス逆方向末端反復及びパッケージングシグナル（ｐｈｉ）のみを保持する。導入遺伝子は、パッケージングシグナル及び３’ＩＴＲの間に挿入され、およそ３６ｋｂの野生型のサイズの近くに人工ゲノムを維持するスタッファー配列があってもなくてもよい。アデノウイルスベクターの生産のための例示的なプロトコルは、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＡｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７に認めることができる。
【0126】
特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するウイルスベクターは、レンチウイルスベースのウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターは、ＩＤＵＡの導入に使用することができる。４つのプラスミドを、コンストラクト：Ｇａｇ／ｐｏｌ配列を含むプラスミド、Ｒｅｖ配列を含むプラスミド、エンベロープタンパク質を含むプラスミド（すなわち、ＶＳＶ－Ｇ）、ならびにパッケージングエレメント及びＩＤＵＡ遺伝子を有するＣｉｓプラスミドを作製するために使用する。
【0127】
レンチウイルスベクター作製のため、とりわけポリエチレンイミンまたはリン酸カルシウムをトランスフェクション薬剤として使用し得ることにより、４つのプラスミドを細胞（すなわち、ＨＥＫ２９３ベースの細胞）に共トランスフェクションする。続いて、上清でのレンチウイルスを採取する（レンチウイルスは、細胞から出芽させて活性を保つ必要があるので、細胞の回収を行う必要はない／すべきではない）。上清を濾過し（０．４５μｍ）、続いて、塩化マグネシウム及びベンゾナーゼを加える。さらに下流のプロセスには、非常に様々なものがあり、ＴＦＦ及びカラムクロマトグラフィーの使用が最もＧＭＰに適合するプロセスである。その他のプロセスでは、カラムクロマトグラフィーを使用する／使用しない超遠心分離を使用する。レンチウイルスベクターの作製のための例示的なプロトコルは、その両方とも全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ２９３Ｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：５３１－５３８、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＧＭＰ－Ｇｒａｄｅ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１０（２）：３２－４３に認めることができる。
【0128】
特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するベクターはＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（例えば、インビボまたはインビトロで神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＵＡのグリコシル化バリアントを形質導入した細胞によって発現するようになっている。特定の実施形態では、本明細書に記載した方法で使用するベクターはＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（例えば、インビボまたはインビトロの神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＵＡの硫酸化バリアントが細胞によって発現するようになっている。
【0129】
５．２．３．遺伝子発現のプロモーター及び修飾因子
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合に影響を及ぼす、または細胞を標的とする構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能な、または選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合に影響を及ぼす、または細胞を標的とする構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能な、または選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
【0130】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のプロモーターを含む。特定の実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。代替の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ネイティブのＩＤＵＡ遺伝子は、大部分のハウスキーピング遺伝子と同様に、主にＧＣリッチプロモーターを使用する。好ましい実施形態では、ｈＩＤＵＡの持続的な発現を提供する強力な構成的プロモーターを使用する。そのようなプロモーターには、「Ｃ」－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント；「Ａ」－ニワトリβアクチン遺伝子のプロモーターならびに第一エキソン及びイントロン；ならびに「Ｇ」－ウサギβ－グロビン遺伝子のスプライスアクセプターを含む「ＣＡＧ」合成プロモーターがある（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７９：２６９－２７７、及びＮｉｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９を参照されたい）。
【0131】
特定の実施形態では、プロモーターはＣＢ７プロモーターである（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＤｉｎｃｕｌｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：６４９－６６３を参照されたい）。一部の実施形態では、ＣＢ７プロモーターは、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメントを含む。特定の実施形態では、その他の発現制御エレメントには、ニワトリβ－アクチンイントロン及び／またはウサギβ－グロビンｐｏｌＡシグナルがある。特定の実施形態では、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。特定の実施形態では、プロモーターは、１つ以上のエレメントを含む。特定の実施形態では、１つ以上のプロモーターエレメントは、互いに対して逆向きにしても、位置を変えてもよい。特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、協働的に機能するように配置する。特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、独立して機能するように配置する。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）長鎖末端反復配列、及びラットインスリンプロモーターからなる群から選択する１つ以上のプロモーターを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＡＡＶ、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２ ＬＴＲからなる群から選択する１つ以上の長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、１つ以上の組織特異的プロモーター（例えば、神経細胞特異的プロモーター）を含む。
【0132】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のプロモーター以外の調節エレメントを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、エンハンサーを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、リプレッサーを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を含む。
【0133】
５．２．４．シグナルペプチド
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を達成することを可能にする。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞内で適切な局在化を達成することを可能にする。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞からの分泌を達成することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表１に認めることができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を達成することを可能にする。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞内で適切な局在化を達成することを可能にする。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＵＡ）が細胞からの分泌を達成することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表１に認めることができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
【表2】
【0134】
５．２．５．非翻訳領域
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。特定の実施形態では、ＵＴＲは、タンパク質発現の所望のレベルのために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期のために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性のために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造のために最適化する。
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。特定の実施形態では、ＵＴＲは、タンパク質発現の所望のレベルのために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期のために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性のために最適化する。特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造のために最適化する。
【0135】
５．２．６．逆方向末端反復
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９；米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９；米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
【0136】
５．２．７．導入遺伝子
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＵＡ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＵＡは、神経細胞での発現に適当な発現制御エレメントによって制御する：特定の実施形態では、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＵＡ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＵＡは、神経細胞での発現に適当な発現制御エレメントによって制御する：特定の実施形態では、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一のアミノ酸配列を含む。
【0137】
導入遺伝子がコードするＨｕＧｌｙＩＤＵＡは、限定を意図するものではないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）（図１に示す）、ならびにアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定を意図するものではないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログ中に対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含む、ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる（ただし、そのような突然変異が、図３に示す（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２の５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異を列記する表３より）、またはその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（「Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２」）、またはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（「Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１」）によって報告した、重度の、中程度に重度の、中程度の、または軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定したいずれの突然変異も含まないことを条件とする）ｈＩＤＵＡの誘導体を含むことができる。
【0138】
例えば、ｈＩＤＵＡの特定位置でのアミノ酸置換は、図２（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＭａｉｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１４６２８、図Ｓ８に報告したオーソログのアラインメントを示す）に示すＩＤＵＡオーソログでのその位置に認める対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができる（ただし、そのような置換は図３に示す、または上記Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２またはＢｅｒｔｏｌａ ２０１１において報告する有害な突然変異のいずれも含まないことを条件とする）。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験動物で、突然変異がＩＤＵＡ機能を損なわないことを保証するためのインビトロでの従来のアッセイを使用して試験することができる。選択する好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ Ｉのためのインビトロでの従来のアッセイによって試験するＩＤＵＡの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものとすべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は基質として４－メチルウンベリフェリルα－Ｌ－イズロニドを用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＵＡ酵素アッセイについては、例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｈｏｐｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ９２：２５７－２６５；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １５２：２１－２８；及びＫａｋｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔ Ｅｘｐ Ｐｕｒｉｆ ５：２２５－２３２を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ Ｉ表現型を修正する能力は、例えば、培養においてＭＰＳ Ｉ細胞にｈＩＤＵＡまたは誘導体をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入することにより、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞にｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を加えることにより、またはＭＰＳ Ｉ細胞をｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡまたは誘導体を発現及び分泌するように操作したヒト宿主細胞と共培養することにより、細胞培養において評価する、例えば、培養でのＭＰＳ Ｉ細胞でのＩＤＵＡ酵素活性、及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより、ＭＰＳ Ｉ培養細胞の欠陥の修正を決定することができる（例えば、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＭｙｅｒｏｗｉｔｚ＆Ｎｅｕｆｅｌｄ，１９８１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５６：３０４４－３０４８；及びＡｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ３：３７１－３７９を参照されたい）。
【0139】
５．２．８．コンストラクト
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列を含む。
【0140】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含む。
【0141】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列を含む。
【0142】
特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、以下の順序で次のエレメント：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＵＡ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列を含み、ここで導入遺伝子はシグナルペプチドを含み、かつ導入遺伝子はｈＩＤＵＡをコードする。
【0143】
特定の実施形態では、本明細書に記載したウイルスベクターは、図６に例示したエレメントと順序を含む。
【0144】
５．２．９．ベクターの製造及び試験
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスターから宿主細胞を使用して製造することができる。
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスターから宿主細胞を使用して製造することができる。
【0145】
宿主細胞は、導入遺伝子及び関連するエレメント（すなわち、ベクターゲノム）、及びウイルスを宿主細胞で生産する手段、例えば、複製及びキャプシド遺伝子（例えば、ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）をコードする配列を使用して安定的に形質転換する。ＡＡＶ８キャプシドを有する組換えＡＡＶベクターを生産する方法については、その全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号の詳細な説明の第ＩＶ節を参照されたい。上記ベクターのゲノムコピー力価は、例えば、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析によって決定することができる。ビリオンは、例えば、ＣｓＣｌ２沈降によって回収することができる。
【0146】
インビトロアッセイ、例えば、細胞培養アッセイは、本明細書に記載したベクターからの導入遺伝子発現を測定するために使用することができる、したがって、例えば、ベクターの効力を示すことができる。例えば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ細胞株、または神経細胞またはグリア細胞、または神経細胞またはグリア細胞の前駆細胞に由来するその他の細胞株を、導入遺伝子発現を評価するために使用することができる。発現すると、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡと関連したグリコシル化及びチロシン硫酸化のパターンの決定を含む、発現した産物（すなわち、ＨｕＧｌｙＩＤＵＡ）の特徴を決定することができる。
【0147】
５．２．１０．組成物
本明細書に記載した導入遺伝子をコードしているベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な担体（例えば、ＣＳＦ、及び例えば、神経細胞への投与のために）は、当業者であれば容易に選択する。
本明細書に記載した導入遺伝子をコードしているベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な担体（例えば、ＣＳＦ、及び例えば、神経細胞への投与のために）は、当業者であれば容易に選択する。
【0148】
５．３．遺伝子治療
ＭＰＳ Ｉを有するヒト対象への、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ Ｉを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するため、特にＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法は、ハーラー症候群またはハーラー－シャイエ症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
ＭＰＳ Ｉを有するヒト対象への、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ Ｉを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するため、特にＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法は、ハーラー症候群またはハーラー－シャイエ症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
【0149】
５．３．１．標的患者集団
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、ハーラー－シャイエ症候群の診断を受けていた。特定の実施形態では、患者は、シャイエ症候群の診断を受けていた。特定の実施形態では、患者は、ハーラー症候群の診断を受けていた。
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターをＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、ハーラー－シャイエ症候群の診断を受けていた。特定の実施形態では、患者は、シャイエ症候群の診断を受けていた。特定の実施形態では、患者は、ハーラー症候群の診断を受けていた。
【0150】
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、重度のＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、減弱型ＭＰＳ Ｉの診断を受けた患者に投与する。
【0151】
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ Ｉと診断され、ＩＤＵＡ（例えば、ｈＩＤＵＡ）を用いた治療に反応することを確認した患者に投与する。
【0152】
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、小児患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、２～４歳の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、３～８歳の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、８～１６歳の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、６～１８歳の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、６歳以上の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、３歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、１８ヶ月以上～３歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、１０歳を超える患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、４ヶ月齢を超える患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、６歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、青年期の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、成人の患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを小児患者に投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを幼乳児の患者に投与する。
【0153】
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ Ｉと診断され、遺伝子治療処置の前にＣＳＦに注入したＩＤＵＡ、例えば、ｈＩＤＵＡによる治療に反応することを確認した患者に投与する。
【0154】
５．３．２．投与量及び投与様式
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、くも膜下投与（すなわち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。このことは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。特定の実施形態では、くも膜下投与は、大槽内（ＩＣ）注入（例えば、大槽に）により実施する。特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。特定の実施形態では、くも膜下注入は、腰椎穿刺で行う。特定の実施形態では、患者に実行し得る場合は、くも膜下腔への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援方ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施態様では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知のあらゆる手段、例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示した任意の手段によって、ＣＳＦに投与する。
特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、くも膜下投与（すなわち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。このことは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。特定の実施形態では、くも膜下投与は、大槽内（ＩＣ）注入（例えば、大槽に）により実施する。特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。特定の実施形態では、くも膜下注入は、腰椎穿刺で行う。特定の実施形態では、患者に実行し得る場合は、くも膜下腔への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援方ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施態様では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知のあらゆる手段、例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示した任意の手段によって、ＣＳＦに投与する。
【0155】
組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５～２７７μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与すべきである。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５、１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）のＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５、１６、４６、９２、１８５、または２７７μｇ／ｍＬ）のＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９．２５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも４６μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも９２μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも１８５μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、組換えベクターは、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡのＣＳＦ濃度を少なくとも２７７μｇ／ｍＬのＣｍｉｎに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0156】
特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．００～３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．００、１．７４、５．００、１０．００、２０．００、または３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．７４ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦ中に総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの５．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、小児患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの３０．００ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。
【0157】
特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．２９～３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．２９、２．２５、８．４０、１２．９６、２５．９３、または３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１．２９ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２．２５ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの８．４０ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの１２．９６ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの２５．９３ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。特定の実施形態では、成人患者の場合、組換えベクターは、ＣＳＦでの総ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ３８．８８ｍｇを維持する用量でＣＳＦに投与する。
【0158】
好ましい実施形態では、くも膜下投与（ＩＣ及びＩＣＶ投与など）のために、治療有効用量の組換えベクターを、全ＣＳＦ量の１０％を超えない注入量でＣＳＦに投与する、当該全ＣＳＦ量は、乳児では約５０ｍｌである、そして、成人では約１５０ｍｌである。くも膜下注入に好適な担体、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液は、組換えベクターのためのビヒクルとして使用すべきである。Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ溶液（一般名：塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、無水デキストロース、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びリン酸ナトリウム）は、静菌保存剤を含んでいない無菌の、非発熱性の等張溶液であり、化学療法薬のくも膜下投与のための希釈剤として使用する。
【0159】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度を直接測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの濃度から外挿によって推定することができる。特定の実施形態では、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬであることは、ＣＳＦでのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡが１～３０ｍｇであることを示す。特定の実施形態では、組換えベクターは、血清でのｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡを、１０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬに維持する用量で、ＣＳＦに投与する。
【0160】
特定の実施形態では、投与量は、患者のＣＳＦに投与する（例えば、後頭下穿刺または腰椎穿刺を介して注入する）ゲノムコピーの数により測定する。特定の実施形態では、約１×１０１２～約２×１０１４ゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約５×１０１２～約２×１０１４のゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約１×１０１３～約１×１０１４のゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約１×１０１３～約２×１０１３のゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約６×１０１３～約８×１０１３のゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約１．２×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約２．０×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約２．２×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約６．０×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約３．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約５．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約５．５×１０１３のゲノムコピーを投与する。特定の実施形態では、約１．２×１０１２～約６．０×１０１２のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約２．０×１０１２～約１．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約２．２×１０１２～約１．１×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約６．０×１０１２～約３．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約１．０×１０１３～約５．０×１０１３のゲノムコピーを投与する。別の特定の実施形態では、約１．１×１０１３～約５．５×１０１３のゲノムコピーを投与する。
【0161】
特定の実施形態では、約１×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約１×１０１２～約５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約１×１０１３～約５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約１．２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約２．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約２．２×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約６．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約１．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約１．１×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約３．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約５．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約１．２×１０１２～約６．０×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約２．０×１０１２～約１．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約２．２×１０１２～約１．１×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約６．０×１０１２～約３．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約１．０×１０１３～約５．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。別の特定の実施形態では、約１．１×１０１３～約５．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、小児患者に投与する。特定の実施形態では、約２．６×１０１２のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約１．３×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約１．４×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約１．４×１０１３～約７．０×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約１×１０１２～約５．６×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約１×１０１２～約６．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。特定の実施形態では、約６．５×１０１２～約６．５×１０１３のゲノムコピーの固定用量を、成人患者に投与する。
【0162】
特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。好ましい実施形態では、脳質量は、対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する。特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換する、また、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
【0163】
特定の実施形態では、患者のＣＳＦに投与する（例えば、後頭下穿刺または腰椎穿刺を介して注入する）ゲノムコピー数／脳質量グラムで、用量を測定する。特定の実施形態では、約２×１０９のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約１×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約５×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約１×１０９～約２×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約２×１０９～約１×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約５×１０９～約２×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約９×１０９～約１×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約１×１０１０～約１．５×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約１×１０１０～約５×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。特定の実施形態では、約５×１０１０～約６×１０１０のゲノムコピー／脳質量グラムを投与する。
【0164】
特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の単一固定用量で、くも膜下内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量で、くも膜下内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量で、くも膜下内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量で、くも膜下内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表２に記載した、及び、表２の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量で、くも膜下内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表３に記載した、及び、表３の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量で、くも膜下内に投与し得る。
【0165】
特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の単一固定用量を、ＩＣ投与によって投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表２に記載した、及び、表２の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量を、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表３に記載した、及び、表３の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量を、ＩＣ投与で投与し得る。
【0166】
特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量～約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の単一固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）は、約５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の単一の固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表２に記載した、及び、表２の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクター）を、以下の表３に記載した、及び、表３の記載にしたがった用量１及び用量２の単一の固定用量を、ＩＣＶ投与で投与し得る。
【0167】
【表3】
【0168】
【表4】
【0169】
特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約１．４×１０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～約７．０×１０１３ＧＣ（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高用量の範囲で使用し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約２．６×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量）～約１．３×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。患者が４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の場合、特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約６．０×１０１２ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～約３．０×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣで投与し得る、そして、別の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約１．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量）～約６．０×１０１２ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。患者が９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の場合、特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約１．０×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～約５．０×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、ＩＣで（後頭下注入で）投与し得る、そして、別の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約２．０×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量）～約１．０×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。患者が１８ヶ月齢以上～３歳未満の場合、特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約１．１×１０１３ＧＣ（１．０×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）～約５．５×１０１３ＧＣ（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、ＩＣで（後頭下注入で）投与し得る、そして、別の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、約２．２×１０１２ＧＣ（２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量）～約１．１×１０１３ＧＣ（１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の範囲での単回固定用量（好ましくは、約５～２０ｍｌの体積、または約５ｍｌ以下の体積）で、（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表４に記載した、及び、表４の記載にしたがった用量１または用量２で、単回固定用量で（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載した組換えベクター（例えば、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）は、以下の表５に記載した、及び、表４の記載にしたがった用量１または用量２で、単回固定用量で（後頭下注入で）ＩＣ投与し得る。
【0170】
【表5】
【0171】
【表6】
【0172】
５．４ 併用療法
５．４．１．免疫抑制との併用療法
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する毒性の最も明白な潜在的供給源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容しないヒト対象において、発現したｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患を有する患者（例えば、ハーラー症候群を有する患者）を治療する場合に望ましい。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、ミコフェノール酸と組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用するその他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止し得る。
５．４．１．免疫抑制との併用療法
ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡの送達が免疫反応を最小化すべきである一方、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する毒性の最も明白な潜在的供給源は、遺伝的にＩＤＵＡを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを潜在的に寛容しないヒト対象において、発現したｈＩＤＵＡタンパク質に対する免疫が発生する。したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特にＩＤＵＡのレベルが０に近い重度の疾患を有する患者（例えば、ハーラー症候群を有する患者）を治療する場合に望ましい。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）を、ミコフェノール酸と組合わせたレジメン、または組織移植手順において使用するその他の免疫抑制レジメンを伴う免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与することができ、特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処理が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止し得る。
【0173】
特定の実施形態では、本明細書で提供する治療方法は、プレドニゾロン、ミコフェノール酸、及びタクロリムスを含む免疫抑制レジメンと一緒に施す。特定の実施形態では、本明細書で提供する治療方法は、プレドニゾロン、ミコフェノール酸、及びラパマイシン（シロリムス）を含む免疫抑制レジメンと一緒に施す。特定の実施形態では、本明細書で提供する治療方法は、タクロリムスを含まない免疫抑制レジメンと一緒に施す。特定の実施形態では、本明細書で提供する治療方法は、１つ以上のコルチコステロイド、例えば、メチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾロン、ならびにタクロリムス及び／またはシロリムスを含む免疫抑制レジメンと一緒に施す。特定の実施形態では、免疫抑制治療は、ヒトＩＤＵＡによる治療の前に、またはそれと同時に、対象に（ａ）タクロリムス及びミコフェノール酸、または（ｂ）ラパマイシン及びミコフェノール酸の組合わせを投与する、かつその後も継続することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は１８０日後に中止する。特定の実施形態では、免疫抑制治療は、３０、６０、９０、１２０、１５０、または１８０日後に中止する。
【0174】
特定の実施形態では、タクロリムスは、血清濃度を５～１０ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、タクロリムスは、血清濃度を４～８ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、特に、患者が３歳未満である場合、タクロリムスは、血清濃度を２～４ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、ＭＭＦは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、タクロリムスは、血清濃度を５～１０ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する、かつＭＭＦは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、血清濃度は、タクロリムス及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、タクロリムス及び／またはＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
【0175】
特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量で１回静脈内投与する。特定の実施形態では、プレドニゾロンは、０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投与する。特定の実施形態では、プレドニゾロンは、段階的に漸減する、その後中止する。特定の実施形態では、タクロリムスは、４～８ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを維持するために、１日２回１ｍｇを経口投与する。特定の実施形態では、特に、患者が３歳未満である場合、タクロリムスは、２～４ｎｇ／ｍｌの目標血中レベルを維持するために１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇを経口投与する。特定の実施形態では、シロリムスも投与する。患者にシロリムスを事前投与する、続いてレジメンの間、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌに維持する。しかしながら、特定の実施形態では、患者が３歳未満である場合、好ましくは患者にシロリムスを事前投与する、続いてレジメンの間、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌに維持する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを１０ｍｇ／ｋｇの用量で１回静脈内投与する、プレドニゾロンを０．５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投与する、タクロリムスを１日１回０．２ｍｇ／ｋｇ経口投与する、かつシロリムスを投与する。
【0176】
特定の実施形態では、ラパマイシンを２または４ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投与する。特定の実施形態では、ＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する。特定の実施形態では、ラパマイシンを２または４ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回経口投与する、かつＭＭＦを２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回経口投与する。特定の実施形態では、ラパマイシンは、血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、ＭＭＦは、血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、ラパマイシンは血清濃度を５～１５ｎｇ／ｍＬとする用量で投与する、かつＭＭＦは血清濃度を２～３．５μｇ／ｍＬとする用量で投与する。特定の実施形態では、血清濃度は、ラパマイシン及び／またはＭＭＦのトラフレベルの測定後、ラパマイシン及び／またはＭＭＦのタイトレーションによって達成する。
【0177】
５．４．２．標準治療を含むその他の治療との共治療
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの投与、及びこれに伴うその他の利用可能な治療を施すことの組合わせは、本発明の方法に包含する。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行うことができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与するラロニダーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／またはＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株において生産したｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は、これらに限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥがある（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＵＡの投与、及びこれに伴うその他の利用可能な治療を施すことの組合わせは、本発明の方法に包含する。追加治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行うことができる。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ Ｉのための利用可能な治療には、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与するラロニダーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／またはＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞株において生産したｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株は、これらに限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、ＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ、ヒト胎児腎２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、線維肉腫ＨＴ－１０８０、ＨＫＢ－１１、ＣＡＰ、ＨｕＨ－７、及び網膜細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６、またはＲＰＥがある（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＵＡ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説についてのＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特にシアル酸付加及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株をチロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
【0178】
５．５ バイオマーカー／採取／モニタリング効率
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または抑制）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または抑制）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＵＡ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0179】
５．５．１．疾患マーカー
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者のＣＳＦにおいて測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の血清において測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の尿において測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＵＡ酵素活性である。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者のＣＳＦにおいて測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の血清において測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルは、患者の尿において測定する。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＵＡ酵素活性である。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
【0180】
５．５．２．神経認知機能の試験
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知のあらゆる方法で測定することができる。特定の実施形態では、認知機能は、知能指数（ＩＱ）を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、記憶力を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、注意力を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、ＩＱ、記憶力、及び注意力の１つ以上を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知のあらゆる方法で測定することができる。特定の実施形態では、認知機能は、知能指数（ＩＱ）を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、記憶力を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、注意力を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。特定の実施形態では、認知機能は、ＩＱ、記憶力、及び注意力の１つ以上を測定するための検証を受けた機器を介して測定する。
【0181】
５．５．３．身体的変化
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
配列表
特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
配列表
【表7】
【実施例】
【0182】
６．実施例
６．１ 実施例１：ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＵＡ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。また、導入遺伝子は、表１に列記する群から選択するシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
６．１ 実施例１：ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＵＡ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。また、導入遺伝子は、表１に列記する群から選択するシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
【0183】
６．２ 実施例２：置換ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡ
配列番号１のｈＩＤＵＡ配列と比較してアミノ酸置換、欠失、または付加を有する、例えば、これに限定はされないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログでの対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含むｈＩＤＵＡを含む、導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する（ただし、そのような突然変異が図３に示す（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２、５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異を列記する表３より）；または、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（“Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２”）、またはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（“Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１”）によって報告した、重度の、中程度に重度の、中程度の、または軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定したいずれの突然変異も含まないことを条件とする）。また、導入遺伝子は、表１に列記する群から選択するシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
配列番号１のｈＩＤＵＡ配列と比較してアミノ酸置換、欠失、または付加を有する、例えば、これに限定はされないが、図２に示すＩＤＵＡのオーソログでの対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含むｈＩＤＵＡを含む、導入遺伝子を含むｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する（ただし、そのような突然変異が図３に示す（その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ １１１：１０７－１１２、５７個のＭＰＳ Ｉ突然変異を列記する表３より）；または、その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＶｅｎｔｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ＃５２２ Ｏｎｌｉｎｅ（“Ｖｅｎｔｕｒｉ ２００２”）、またはＢｅｒｔｏｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ３２：Ｅ２１８９－Ｅ２２１０（“Ｂｅｒｔｏｌａ ２０１１”）によって報告した、重度の、中程度に重度の、中程度の、または軽症型ＭＰＳ Ｉ表現型において同定したいずれの突然変異も含まないことを条件とする）。また、導入遺伝子は、表１に列記する群から選択するシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
【0184】
６．３ 実施例３：ｈＩＤＵＡまたは置換ｈＩＤＵＡを用いた動物モデルでのＭＰＳ Ｉの治療
導入遺伝子として発現する場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターはＭＰＳ Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉのための動物モデル、例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１（マウス）、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １３（１１）：１２９４－９７（雑種のイエネコ）、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８（イヌ）、またはＳｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８（イヌ）に記載する動物モデルに、導入遺伝子産物を送達する、動物のＣＳＦにおいてＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持する上で十分な用量で、くも膜下にｈＩＤＵＡをコードする組換えベクターを投与する。治療の後、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
導入遺伝子として発現する場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターはＭＰＳ Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉのための動物モデル、例えば、Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ６（４）：５０３－５１１（マウス）、Ｈａｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ １３（１１）：１２９４－９７（雑種のイエネコ）、Ｍｅｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４（３）：７６３－７６８（イヌ）、またはＳｈｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １０９（２）：２４４－２４８（イヌ）に記載する動物モデルに、導入遺伝子産物を送達する、動物のＣＳＦにおいてＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持する上で十分な用量で、くも膜下にｈＩＤＵＡをコードする組換えベクターを投与する。治療の後、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
【0185】
６．４ 実施例４：ｈＩＤＵＡまたは置換ｈＩＤＵＡを用いたＭＰＳ Ｉの治療
導入遺伝子として発現する場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターはＭＰＳ Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉを呈する対象に導入遺伝子産物を送達する、ＣＳＦにおいてＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持する上で十分な用量で、くも膜下にｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクターを投与する。治療の後、対象を、ＭＰＳ Ｉの症状の改善について評価する。ｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクターの投与の前に、それと同時に、またはその後に、患者に、ラパマイシン、ＭＭＦ、及びプレドニゾロンを含む免疫抑制治療薬を投与する。
導入遺伝子として発現する場合、ｈＩＤＵＡ ｃＤＮＡをベースとしたベクターはＭＰＳ Ｉの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ Ｉを呈する対象に導入遺伝子産物を送達する、ＣＳＦにおいてＣｍｉｎを少なくとも９．２５μｇ／ｍＬの濃度に維持する上で十分な用量で、くも膜下にｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクターを投与する。治療の後、対象を、ＭＰＳ Ｉの症状の改善について評価する。ｈＩＤＵＡをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクターの投与の前に、それと同時に、またはその後に、患者に、ラパマイシン、ＭＭＦ、及びプレドニゾロンを含む免疫抑制治療薬を投与する。
【0186】
６．５ 実施例５：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0187】
患者集団。治療を受ける患者は：
●血漿、線維芽細胞、または白血球において測定した酵素活性によって確認するＭＰＳ Ｉの診断、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、記憶力、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での標準偏差が＞１低下していることを証明する文書化した過去の証拠（医療記録）、を有する男性または女性を含み得る。
●血漿、線維芽細胞、または白血球において測定した酵素活性によって確認するＭＰＳ Ｉの診断、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、記憶力、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での標準偏差が＞１低下していることを証明する文書化した過去の証拠（医療記録）、を有する男性または女性を含み得る。
【0188】
患者には、ＥＲＴ（例えば、ＡＬＤＵＲＡＺＹＭＥ［ラロニダーゼ］ＩＶ）の安定レジメンを受けている患者を含み得る。妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。性交を希望する対象（女性及び男性の両方とも）は、ベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法（例えば、コンドーム、ダイアフラム、または禁欲法）を使用すべきである。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入に関する禁忌として、以下のいずれかを含むことができる：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0189】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。
【0190】
主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有するあらゆる患者に対して使用すべきである。
【0191】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0192】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去にギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0193】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）試験陽性の既往歴、活動性または再発性のＢ型肝炎またはＣ型肝炎、またはＢ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはＨＩＶスクリーニング試験陽性の既往歴；治療前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0194】
ある実施形態では、患者は、成人の患者である。別の実施形態では、患者は、小児患者である。
【0195】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日目に、６０ｍｇを１日１回、経口）、ＭＭＦ（－２～６０日目に、１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（－２日に、６ｍｇを経口で、その後、－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整の前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。好中球減少症を発症する場合（絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ）、ＭＭＦの投与は中止する、または用量を低下させるべきである。
【0196】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後に、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0197】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量として投与する：１．４×１０１３ＧＣ（１．１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の低用量、または７．０×１０１３ＧＣ（５．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）の高用量を、約５～２０ｍｌの量で使用することができる。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有する場合、高用量を使用することができる。
【0198】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。腰椎穿刺を行い、最初にＣＳＦを５ｃｃ除去する、その後、造影剤をＩＴ注入して大槽の視覚化を助ける。ＣＴ（造影剤を伴う）を利用して、針挿入及び後頭下空間への選択した用量のｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与をガイドする。
【0199】
６．６ 実施例６：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0200】
患者集団。治療を受ける患者は：
●血漿、線維芽細胞、または白血球において測定した酵素活性によって確認するＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去にＨＳＣＴを受けたことがあり、または過去または現在に、ラロニダーゼ治療を受けている患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する６歳以上の男性または女性を含み得る。
●血漿、線維芽細胞、または白血球において測定した酵素活性によって確認するＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去にＨＳＣＴを受けたことがあり、または過去または現在に、ラロニダーゼ治療を受けている患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する６歳以上の男性または女性を含み得る。
【0201】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0202】
妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。性交を希望するすべての対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性交を希望する女性は、スクリーニング受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺について禁忌である対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌として、以下のいずれかを含むことができる：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0203】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。代替免疫抑制レジメンは、シロリムス、ＭＭＦ、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有するあらゆる患者に対して使用すべきである。
【0204】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前の少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解に至らない限り、治療すべきではない。
【0205】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0206】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0207】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0208】
３０日以内または５半減期前のいずれか長い方の期間内に、いずれかの治験薬を投与した患者は、事前にいつでも投与可能なＩＴラロニダーゼを投与した患者を除き、治療すべきではない。
【0209】
妊婦の患者、産後６週未満の患者、スクリーニング時に授乳している患者、または５２週目までの間に妊娠を予定している患者は、治療すべきではない。
【0210】
臨床的に重要なＥＣＧ異常があり、対象の安全が損なわれるような患者は、治療すべきではない。対象の安全を損なうような重篤または不安定な医学的または精神的状態の患者は、治療すべきではない。
【0211】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、プレドニゾロン（－２～８日目に、６０ｍｇを１日１回、経口）、ＭＭＦ（－２～６０日目に、１ｇを１日２回、経口）、及びシロリムス（－２日目に６ｍｇを経口で、その後、－１日～第４８週まで２ｍｇを１日１回）を含む。シロリムスの用量は、全血トラフ濃度を１６～２４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。
【0212】
免疫抑制レジメンの基本的原則は、免疫を完全に抑制するためにコルチコステロイドを投与することである－用量を負荷するためのＩＶメチルプレドニゾロンから始まり、徐々に漸減する経口プレドニゾロンが続き、患者は１２週までにステロイドをやめる。コルチコステロイド治療は、タクロリムス（２４週間）及び／またはシロリムス（１２週間）によって補なわれ、さらにＭＭＦで補うことができる。タクロリムス及びシロリムスの両方を使用する場合、それぞれの用量は、４～８ｎｇ／ｍｌの血中トラフレベルを維持するように調整した低用量であるべきである。薬剤を１つだけ使用する場合は、ラベル用量（高用量）を使用するべきであり、例えば、タクロリムスを０．１５～０．２０ｍｇ／ｋｇ／日を１２時間ごとに２回に分けて投与、及び１ｍｇ／ｍ２／日でシロリムス；その負荷用量は３ｍｇ／ｍ２であるべきである。ＭＭＦをレジメンに追加した場合、作用機序が異なるため、タクロリムス及び／またはシロリムスの用量を維持することができる。
【0213】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0214】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれかで投与する。用量は、約５～２０ｍｌの量にすることができる。
【0215】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0216】
６．７ 実施例７：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0217】
患者集団。治療を受ける患者は：
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性で確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在にＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する男性または女性を含み得る。
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性で確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在にＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する男性または女性を含み得る。
【0218】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0219】
妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。性交を希望するすべての対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性交を希望する女性は、スクリーニング受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺について禁忌である対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌として、以下のいずれかを含むことができる：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0220】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0221】
代替免疫抑制レジメンは、タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有するあらゆる患者に対して使用すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間で完治していない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするあらゆる感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0222】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0223】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0224】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0225】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0226】
特定の実施形態では、患者は、成人の患者である。別の実施形態では、患者は、小児患者である。
【0227】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は予定しない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。
【0228】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0229】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれかで投与する。用量は、約５～２０ｍｌの量にすることができる。
【0230】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0231】
６．８ 実施例８：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0232】
●患者集団。治療を受ける患者は：
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在にＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性を含み得る。
血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在にＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性を含み得る。
【0233】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0234】
妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。性交を希望するすべての対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性交を希望する女性は、スクリーニング受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺について禁忌である対象が含まれ得る。ＩＣ注入のための禁忌として、以下のいずれかを含むことができる：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0235】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0236】
代替免疫抑制レジメンは、タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有するあらゆる患者に対して使用すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするあらゆる感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0237】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0238】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0239】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0240】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0241】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は予定していない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。
【0242】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0243】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれかで投与する。用量は、約５～２０ｍｌの量にすることができる。
【0244】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0245】
６．９ 実施例９：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0246】
患者集団。治療を受ける患者は：
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性、及び３歳未満の男性または女性を含み得る。
●３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群を引き起こすことが知られている突然変異（複数可）によって確認する重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有する。
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性、及び３歳未満の男性または女性を含み得る。
●３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群を引き起こすことが知られている突然変異（複数可）によって確認する重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有する。
【0247】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0248】
妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性交を希望する対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性交を希望する女性は、スクリーニング受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入に関する禁忌として、以下のいずれかを含み得る：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0249】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0250】
代替免疫抑制レジメンは、あらゆる患者に使用すべきである、またはタクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有する患者を除外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするあらゆる感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0251】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0252】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0253】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0254】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0255】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対する、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。そのような免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対する、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は予定していない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。
【0256】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0257】
６歳以上の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれかで投与する。用量は、約５ｍｌ以下の量にすることができる。
【0258】
３歳未満の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については１．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については３．０×１０１３ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については５．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については５．５×１０１３ＧＣ）のいずれかで投与する。用量は、約５ｍｌ以下の量にすることができる。
【0259】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0260】
６．１０ 実施例１０：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0261】
患者集団。治療を受ける患者は：
●ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関連する突然変異のホモ接合性または複合ヘテロ接合性の存在によって確認する重度ＭＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
●５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
●ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関連する突然変異のホモ接合性または複合ヘテロ接合性の存在によって確認する重度ＭＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
●５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
【0262】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0263】
大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入に関する禁忌として、以下のいずれかを含み得る：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0264】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、そして、ヘモグロビンを評価する。
【0265】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきである、またはタクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有する患者を除外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間で完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするあらゆる感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0266】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0267】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0268】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0269】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0270】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。プレドニゾンの投与は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、第１２週の受診まで段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。さらなる詳細については以下を参照されたい。
【0271】
コルチコステロイド
【0272】
ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤による前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
【0273】
第１２週までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0274】
シロリムス
【0275】
ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
【0276】
－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
【0277】
シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
【0278】
タクロリムス
【0279】
２日目（ＩＰ投与の翌日）にタクロリムスを１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
【0280】
タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
【0281】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与後に、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0282】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については１×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については３×１０１３ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については５×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については５．５×１０１３ＧＣ）のいずれかで投与する。用量は、約５～２０ｍｌの量にすることができる。
【0283】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0284】
６．１１ 実施例１１：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0285】
患者集団。治療を受ける患者は：
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未満の男性または女性を含み得る。
●３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られている突然変異（複数可）で確認する重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有する。
●血漿、線維芽細胞、または白血球で測定した酵素活性によって確認したＭＰＳ Ｉの診断（これには、過去または現在ＨＳＣＴまたはラロニダーゼ治療を受けた可能性のある患者を含む）、
●その他のあらゆる神経学的または精神医学的な因子によって説明可能でない場合、以下のいずれかとして定義するＭＰＳ Ｉに起因する初期段階の神経認知機能低下：
○ＩＱ試験での、または神経心理的機能（言語理解、注意力、または知覚推理）の１つの領域において平均を下回る標準偏差≧１のスコア、
○逐次試験での＞１の標準偏差の低下、を有する、６歳以上の男性または女性及び３歳未満の男性または女性を含み得る。
●３歳未満の患者は、神経認知機能低下を伴うハーラー症候群をもたらすことが知られている突然変異（複数可）で確認する重度形態のＭＰＳ Ｉ（ハーラー症候群）を有する。
【0286】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0287】
妊娠が疑わしい女性は、治療の日に血清妊娠試験陰性であるべきである。全ての性交を希望する対象は、スクリーニング受診からベクター投与の２４週間後まで医学的に認めたバリア避妊法を進んで使用しなければならない。性交を希望する女性は、スクリーニング受診からシロリムスの最後の投与後１２週間のいずれか遅い方まで、効果的な避妊方法を進んで使用しなければならない。大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入に関する禁忌として、以下のいずれかを含み得る：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0288】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではない（例えば、好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ、及びヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬ［男性］または＜１０ｇ／ｄＬ［女性］）。
【0289】
代替免疫抑制レジメンは、あらゆる患者に使用すべきである、またはタクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応のあらゆる既往歴を有する患者を除外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするあらゆる感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0290】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0291】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0292】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビンの＜３５％の抱合型ビリルビンを示す分画ビリルビンを有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0293】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0294】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。そのような免疫抑制治療は、６歳以上の患者に対する、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。そのような免疫抑制治療は、３歳未満の患者に対する、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量は、目標範囲の血中レベルを維持するように調整する。４８週の経過後は、免疫抑制治療は予定していない。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。
【0295】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0296】
６歳以上の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（２．６×１０１２ＧＣ）の用量、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（１．３×１０１３ＧＣ）の用量のいずれかで投与する。用量は、約５ｍｌ以下の量にすることができる。
【0297】
３歳未満の患者の場合、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については１．２×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１０１２ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については１．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）のいずれかで投与する。用量は、約５ｍｌ以下の量にすることができる。
【0298】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0299】
６．１２ 実施例１２：ＭＰＳ Ｉ治療の臨床プロトコル
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
以下の実施例は、ヒト対象をｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターで治療してＭＰＳ Ｉを治療するために使用し得るプロトコルを説明している。
【0300】
患者集団。治療を受ける患者は：
●ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関連する突然変異のホモ接合性または複合ヘテロ接合性の存在によって確認する重度ＭＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
●５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
●ＭＰＳ Ｉ－Ｈに適合する臨床的徴候及び症状、及び／または重度表現型に排他的に関連する突然変異のホモ接合性または複合ヘテロ接合性の存在によって確認する重度ＭＰＳ Ｉ－ハーラーの診断、
●５５以上の知能指数（ＩＱ）スコア、を有する３歳未満の男性または女性を含み得る。
【0301】
患者は、補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコル試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、利用可能な場合には、試験日に進んで補助器具を着用すべきである。
【0302】
大槽内（ＩＣ）治療から除外し得る患者には、ＩＣ注入または腰椎穿刺についての禁忌を有する対象が含まれ得る。ＩＣ注入に関する禁忌として、以下のいずれかを含み得る：
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
●過去の頭部／頸部手術の既往歴の結果、ＩＣ注入が禁忌である。
●ＣＴ（または造影剤）または全身麻酔に対して禁忌である。
●ＭＲＩ（またはガドリニウム）に対して禁忌である。
●推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２である。
【0303】
あらゆる時点でＩＴ治療を受けており、ＩＴ投与に関係すると考えられる重大な有害反応を経験した患者は、ＩＣで治療すべきではない。主治医が免疫抑制治療に適当でないと考えるあらゆる病態を有する患者は、治療を受けるべきではなく（例えば、好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬ、血小板数＜１００×１０３／μＬ）、ヘモグロビンを評価する。
【0304】
代替免疫抑制レジメンは、任意の患者に使用すべきである、またはタクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対する過敏性反応の任意の既往歴を有する患者を除外すべきである。原発性免疫不全症、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすい基礎疾患の既往歴のある患者は、免疫抑制療法で治療すべきではない。帯状疱疹、サイトメガロウイルス、またはエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）感染症の患者で、スクリーニング前の少なくとも１２週間は完全に解消されていない場合は、免疫抑制療法で治療すべきではない。（１）２回目の受診の少なくとも８週間前に消散しておらず、入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とする任意の感染症を有する患者、または（２）２回目の受診前１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするあらゆる活動性の感染症、または活動性の結核の既往歴を有する患者、または（３）スクリーニングの間のＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ＿ＴＢ Ｇｏｌｄ試験で陽性となった患者、または（４）インフォームドコンセント用紙に署名をする前の８週間以内にあらゆる生ワクチンを受けた患者、または（５）インフォームドコンセントに署名をする前の８週間以内に大手術を行った患者、または（６）試験期間中に大手術を予定している患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。好中球数の絶対数が＜１．３×１０３／μＬである患者は、免疫抑制治療で治療すべきではない。
【0305】
リンパ腫または皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの病歴を有する患者は、治療前少なくとも３ヶ月にわたって完全寛解にない限り、治療すべきではない。
【0306】
最大限の医学的治療にもかかわらず、コントロール不良高血圧症（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）の患者は治療すべきではない。
【0307】
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が＞３×正常値上限（ＵＬＮ）である、または総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮである患者は、対象が過去ギルバート症候群の病歴を有することが分かっている場合を除いては、治療すべきではない。
【0308】
感染症または薬物乱用の既往歴を有する患者は、治療の候補とすることはできない。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験陽性の既往歴；スクリーニング前１年以内のアルコールまたは薬物乱用の既往歴である。
【0309】
施す治療－免疫抑制治療による前治療。遺伝子治療の前に、患者は、導入遺伝子、及び／またはＡＡＶキャプシドへの免疫反応を防止するために、免疫抑制治療で治療すべきである。プレドニゾンの投与は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、第１２週の受診まで段階的に漸減させる。タクロリムスの用量は、最初の２４週にわたり全血中トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。シロリムスの用量は、全血中トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するように調整する。大部分の対象において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象は、さらなる用量調整前に、濃度をモニタリングしながら少なくとも７～１４日間にわたり新しい維持用量を継続すべきである。さらなる詳細については以下を参照されたい。
【0310】
コルチコステロイド
【0311】
ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤による前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
【0312】
第１２週までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0313】
シロリムス
【0314】
ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
【0315】
－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
【0316】
シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
【0317】
タクロリムス
【0318】
２日目（ＩＰ投与の翌日）にタクロリムスを１日２回０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
【0319】
タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
【0320】
遺伝子治療。ｈＩＤＵＡ発現カセット（ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡ）を含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶを、治療に使用する。ＡＡＶ９血清型を用いると、ＩＣ投与の後、ＣＮＳにおいてｈＩＤＵＡタンパク質の効率的発現が可能となる。ベクターゲノムは、ＡＡＶ２の逆方向末端反復（ＩＴＲ）と隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。カセットからの発現は、強力な構成的ＣＡＧプロモーターによって駆動する。ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡベクターは、くも膜下注入のためのＥｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液に懸濁させる。
【0321】
ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＵＡは、ＩＣ投与による単回固定用量：２×１０９ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については１．２×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については２．０×１０１２ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については２．２×１０１２ＧＣ）、または１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量（４ヶ月齢以上～９ヶ月齢未満の患者については６．０×１０１２ＧＣ；９ヶ月齢以上～１８ヶ月齢未満の患者については１．０×１０１３ＧＣ；１８ヶ月以上～３歳未満の患者については１．１×１０１３ＧＣ）のいずれかで投与する。用量は、約５～２０ｍｌの量にすることができる。
【0322】
ｒＡＡＶ９．ＩＤＵＡの投与のために、対象を全身麻酔下におく。
【0323】
６．１３ 実施例１３：ＭＰＳ Ｉの臨床プロトコル治療
以下の実施例では、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用してヒト対象を治療して、ＭＰＳ Ｉを治療し得るプロトコルを説明する。ＡＡＶ－コンストラクト１は、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９のキャプシドの非複製組換えＡＡＶであり、当該発現カセットは、ＣＢ７プロモーター、ニワトリベータアクチンイントロン、及びウサギベータ－グロビンポリアデニル化シグナルを含む。ＡＡＶ－コンストラクト１のベクターゲノムの概略を、図６に示す。
以下の実施例では、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用してヒト対象を治療して、ＭＰＳ Ｉを治療し得るプロトコルを説明する。ＡＡＶ－コンストラクト１は、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９のキャプシドの非複製組換えＡＡＶであり、当該発現カセットは、ＣＢ７プロモーター、ニワトリベータアクチンイントロン、及びウサギベータ－グロビンポリアデニル化シグナルを含む。ＡＡＶ－コンストラクト１のベクターゲノムの概略を、図６に示す。
【0324】
ＡＡＶ９血清型は、ＩＣ投与した後のＣＮＳでのｈＩＤＵＡタンパク質の効率的な発現を可能にする。このベクターゲノムは、ＡＡＶ２－逆方向末端反復（ＩＴＲ）が隣接したｈＩＤＵＡ発現カセットを含む。このカセットに由来する発現はＣＢ７プロモーター、ＣＭＶ前初期エンハンサー（Ｃ４）と、ニワトリベータアクチンプロモーターとのハイブリッドによって駆動する。ニワトリベータアクチンイントロンが存在がしていると、このプロモーターからの転写は促される。この発現カセットのポリアデニル化シグナルは、ウサギベータ－グロビン遺伝子に由来する。
【0325】
最終的な治験薬を、ＡＡＶベクター活性成分（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＵＡ）の凍結溶液を入れた０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８を含む改変Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ（登録商標）溶液として出荷し、２ｍｌをＣＲＹＳＴＡＬ ＺＥＮＩＴＨ（登録商標）（ＣＺ）バイアルに充填し、そして、ラテックス不含のゴム栓と、アルミニウムフリップオフシールとで密封した。バイアルは、－６０℃以下で貯蔵すべきである。それぞれの治験薬ロットの濃度（ＧＣ／ｍｌ）を報告する。適切な希釈を投与前に行った後に、低用量及び高用量の両方を送達する生成物の総体積は、総ＣＳＦ体積の１０％を超えない（乳幼児脳では約５０ｍｌであり、そして、成人脳では１５０ｍであると推定する）。
【0326】
ＭＰＳ Ｉ疾患の治療に好適な遺伝子治療は、現在利用可能な治療法よりも優れた次の幾つかの利点：治療用導入遺伝子産物の長期的発現をもたらす、それにより、慢性的な、長期間の治療の必要性を回避する（または、有意に短縮させる）；ＭＰＳ ＩのＣＮＳ発現を、より迅速に休止させる、または顕著に遅延させる；許容可能な安全性、及び忍容性プロフィールを提供する。
【0327】
６．１３．１． 研究目的（主要エンドポイント）
２４週間にわたる安全性及び忍容性：有害事象（ＡＥ）及び重大な有害事象（ＳＡＥ）。
２４週間にわたる安全性及び忍容性：有害事象（ＡＥ）及び重大な有害事象（ＳＡＥ）。
【0328】
６．１３．２． 研究目的（二次エンドポイント）
１０４週間にわたる安全性：ＡＥ報告、臨床検査所見、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、物理的検査、及び神経学的評価。
１０４週間にわたる安全性：ＡＥ報告、臨床検査所見、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、物理的検査、及び神経学的評価。
【0329】
神経認知試験のための臨床的に検証を受けた機器（Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ ［ＷＡＳＩ－ＩＩ］）， Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｂａｙｌｅｙ－ＩＩＩ） 及び／または ｔｈｅ Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ｐｒｅｓｃｈｏｏｌ ａｎｄ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ， Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＷＰＰＳＩ－ＩＶ）］、適応行動（Ｖｉｎｅｌａｎｄ－３）。
【0330】
６歳以上の対象に注意を与えるための臨床的に検証を受けた機器（Ｔｅｓｔｓ ｏｆ Ｖａｒｉａｂｌｅｓ ｏｆ Ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ［ＴＯＶＡ］）。
【0331】
ウイルス排出：ＣＳＦ、血清、及び尿でのベクター濃度（ＡＡＶ－コンストラクト１ ＤＮＡに対するｑＰＣＲ）。
【0332】
６．１３．３． 研究目的（調査エンドポイント）
免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＣＳＦ及び血清でのＩＤＵＡに対して結合する抗体
●ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩＤＵＡに対するＴ細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ－及びＩＤＵＡ－特異的調節性Ｔ細胞
免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＣＳＦ及び血清でのＩＤＵＡに対して結合する抗体
●ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩＤＵＡに対するＴ細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ－及びＩＤＵＡ－特異的調節性Ｔ細胞
【0333】
ＣＮＳ構造異常を、脳のＭＲＩで評価した。
【0334】
聴覚能力の変化を、聴覚的脳幹応答試験、または行動聴覚検査、及び耳音響放射試験で測定する。
【0335】
生活の質を、Ｐｅｄｓ ＱＬで測定した。
【0336】
睡眠評価
【0337】
弁膜症及び左心室質量指標に関する心エコー図による心臓評価。
【0338】
ＰＤバイオマーカー、すなわち、血漿（ＧＡＧ及びＩＤＵＡ）、白血球（ＩＤＵＡ）、ＣＳＦ（ＧＡＧ、ＩＤＵＡ、及びスペルミンレベル）、及び尿（ＧＡＧ）でのＰＤバイオマーカー。
【0339】
ＩＶ ＥＲＴを中止した対象でのＰＤバイオマーカー、すなわち、血漿（ＧＡＧ及びＩＤＵＡ）、ＣＳＦ（ＧＡＧ、及びＩＤＵＡ）、及び尿（ＧＡＧ）でのＰＤバイオマーカー。
【0340】
物理的症状スコア。
【0341】
腹部超音波で評価した肝臓及び脾臓の大きさ。
【0342】
疾病の臨床的評価。
【0343】
患者に報告した疾患の結果評価。
【0344】
日常生活での活動。
【0345】
６．１３．４． 治験デザイン
このものは、ＭＰＳ Ｉ及びＣＮＳの関与が明らかな証拠を有する対象（４ヶ月齢以上）を、ＡＡＶ－コンストラクト１のＩ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アームの用量増量研究である。ＩＶラロニダーゼ治療を従前に、または現在受けている対象が、参加可能である。ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療は、この集団では、潜在的に、神経認知の面で有益である。ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２回用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一用量を、大槽内（ＩＣ）または脳室（ＩＣＶ）注入で投与する。安全性は、治療した後の最初の２４週間（初期研究期間）での第１の関心事である。初期研究期間に続いて、対象については、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療に続いて、合計で１０４週間まで（安全性及び有効性の）評価を継続する。治験の最後に、すべての対象に対して、長期観察追跡調査への参加を促す。
このものは、ＭＰＳ Ｉ及びＣＮＳの関与が明らかな証拠を有する対象（４ヶ月齢以上）を、ＡＡＶ－コンストラクト１のＩ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アームの用量増量研究である。ＩＶラロニダーゼ治療を従前に、または現在受けている対象が、参加可能である。ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療は、この集団では、潜在的に、神経認知の面で有益である。ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２回用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一用量を、大槽内（ＩＣ）または脳室（ＩＣＶ）注入で投与する。安全性は、治療した後の最初の２４週間（初期研究期間）での第１の関心事である。初期研究期間に続いて、対象については、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療に続いて、合計で１０４週間まで（安全性及び有効性の）評価を継続する。治験の最後に、すべての対象に対して、長期観察追跡調査への参加を促す。
【0346】
第１のコホートは、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量を受ける２名の適格対象を含んでおり、そして、第２のコホートは、５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量を受ける３名の適格対象を含んでいる。ＡＡＶ－コンストラクト１を、それぞれのコホートの第１の対象（センチネル）に投与した後に、安全性評価のための８週間の観察期間を設ける。スポンサーの内部安全委員会（ＩＳＣ）が、コホート１の第１の対象に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週間の間に行った受診で得たデータを含む）を検討する、そして、ＩＳＣが安全上の懸念を認めなければ、第２の対象は、ＡＡＶ－コンストラクト１を受け得る。
【0347】
潜在的対象については、治験に対する適格性を決定するために、投与の－６０～－２日目にスクリーニングを行う。適格性基準を満たす対象は、（実施機関の規則に従って）－２日目と１日目の朝との間に病院に赴くことが認められる、そして、ベースライン評価を投与前に行う。スクリーニングが完了した部位以外の部位に投与する必要がある対象については、当該対象について変更を行う前に、当該２箇所に関する医療情報を共有する通信計画を作成する。投与する前に、投与部位の適格性を確認する。対象は、１日目にＡＡＶ－コンストラクト１の単一のＩＣ用量またはＩＣＶ用量の投与を受ける、そして、観察のために、投与した後に、約３０～３６時間、病院内に留まる。初期研究期間（すなわち、２４週間）の後の評価は、４週目までは毎週、そして、８週目、１２週目、１６週目、２０週目、及び２４週目に行う。初期評価期間の後に、２８週目、３２週目、４０週目、４８週目、５２週目、５６週目、６４週目、７８週目、及び１０４週目に受診を行う。２０週目、及び２８週目の評価は、電話で、ＡＥと、それに付随する治療の評価に限って聞き取りをする。
【0348】
すべての対象は、治験でまず免疫抑制（ＩＳ）を受けて、（有効性を低下し得る）ＩＤＵＡに対する抗体の形成または増加に関連するリスク、及び導入遺伝子を発現するキャプシドまたは組織に対するあらゆる免疫媒介反応を最小限にする。ＩＳ療法は、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇをＩＶに前投与する、そして、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的に、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけて８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日を、１日２回に分けて、第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血液レベルを維持するように調節する。
【0349】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニターを確認しながら、ＰＩが適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0350】
６．１３．５． 治験集団の選択
ＭＰＳ Ｉに起因する神経認知的欠損が確認された４ヶ月齢以上の約５名を、治験薬で治療を行う。
ＭＰＳ Ｉに起因する神経認知的欠損が確認された４ヶ月齢以上の約５名を、治験薬で治療を行う。
【0351】
６．１３．５．１ 採用基準
対象は、以下の全基準を満たさないと、この治験の参加資格は得られない。
１）男性または女性で、≧４ヶ月齢。
２）治験内容の説明を受けた後で、かつ、治験関連の手順が開始される以前に、記入、署名がされたインフォームドコンセントを提出する意志があり、かつ、そうすることが可能であること。対象がインフォームドコンセントの提出が不可能である場合には、インフォームドアセントを得て、そして、対象の法定代理人が、インフォームドコンセントを提出しなくてはならない。
３）従前にＭＰＳ Ｉの診断を受けており、白血球及び線維芽細胞でのＩＤＵＡ欠損が確認されていること。
４）その他の神経学的因子または精神医学的因子によって説明できない場合には、以下の基準の１つに基づいたＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与が確認されていること：
ａ）神経認知試験での平均値よりも低い≧１の標準偏差のスコア、または神経心理学的機能の１ドメインにあること。
ｂ）逐次神経認知検定での＞１の標準偏差の減少、または３～３６ヶ月間の間に投与する神経心理学的機能の１ドメインでの減少。
ｃ）重度のＭＰＳ Ｉの診断を受けており、重篤な表現型を予測する両アレル突然変異によって確認されていること、または、重度のＭＰＳ Ｉ及び同じＩＤＵＡ突然変異をもってして、相対的に臨床的な診断を受けている。この対象は、神経認知欠損の明確な証拠を持っている必要はない。
５）造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けた対象は、治験責任医師（ＰＩ）、医療モニター、及びスポンサーが、対象が安全かつ首尾よく治験に参加できることに同意していれば、対象を治験に登録し得る。
６）補助器具の有無に関係なく、十分な聴覚及び視覚を有しており、必要とするプロトコル試験を完了する、そして、利用可能であれば、補助器具を試験日に使って必要なプロトコル試験を完了する意志があること。
７）妊娠が疑わしい女性は、スクリーニング受診時の妊娠試験がネガティブ血清でなくてはならず、１日目にネガティブ尿の結果であり、そして、治験の間にさらなる妊娠試験を行うことが望ましい。
８）性交を希望する男性対象は、スクリーニング受診から、ベクターを投与して２４週間になるまで、医学的に許容されたバリヤー避妊法（例えば、コンドーム、または女性用ダイヤフラム）を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊は、対象の主治医と相談するべきである。
９）性交を希望する女性対象は、スクリーニング受診から、シロリムスまたはタクロリムスの最後の服用のいずれか遅い方から１２週間後まで、効果的な避妊方法を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊の中止は、対象の主治医と相談するべきである。避妊の効果的な方法として、二重バリア法（例えば、男性のコンドームとダイヤフラムの併用）、避妊リング、またはホルモン避妊薬がある。長期間にわたる禁欲は、許容できる；しかしながら、定期禁欲、周期避妊法、及び膣外射精は、許容可能な避妊方法ではない。
対象は、以下の全基準を満たさないと、この治験の参加資格は得られない。
１）男性または女性で、≧４ヶ月齢。
２）治験内容の説明を受けた後で、かつ、治験関連の手順が開始される以前に、記入、署名がされたインフォームドコンセントを提出する意志があり、かつ、そうすることが可能であること。対象がインフォームドコンセントの提出が不可能である場合には、インフォームドアセントを得て、そして、対象の法定代理人が、インフォームドコンセントを提出しなくてはならない。
３）従前にＭＰＳ Ｉの診断を受けており、白血球及び線維芽細胞でのＩＤＵＡ欠損が確認されていること。
４）その他の神経学的因子または精神医学的因子によって説明できない場合には、以下の基準の１つに基づいたＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与が確認されていること：
ａ）神経認知試験での平均値よりも低い≧１の標準偏差のスコア、または神経心理学的機能の１ドメインにあること。
ｂ）逐次神経認知検定での＞１の標準偏差の減少、または３～３６ヶ月間の間に投与する神経心理学的機能の１ドメインでの減少。
ｃ）重度のＭＰＳ Ｉの診断を受けており、重篤な表現型を予測する両アレル突然変異によって確認されていること、または、重度のＭＰＳ Ｉ及び同じＩＤＵＡ突然変異をもってして、相対的に臨床的な診断を受けている。この対象は、神経認知欠損の明確な証拠を持っている必要はない。
５）造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けた対象は、治験責任医師（ＰＩ）、医療モニター、及びスポンサーが、対象が安全かつ首尾よく治験に参加できることに同意していれば、対象を治験に登録し得る。
６）補助器具の有無に関係なく、十分な聴覚及び視覚を有しており、必要とするプロトコル試験を完了する、そして、利用可能であれば、補助器具を試験日に使って必要なプロトコル試験を完了する意志があること。
７）妊娠が疑わしい女性は、スクリーニング受診時の妊娠試験がネガティブ血清でなくてはならず、１日目にネガティブ尿の結果であり、そして、治験の間にさらなる妊娠試験を行うことが望ましい。
８）性交を希望する男性対象は、スクリーニング受診から、ベクターを投与して２４週間になるまで、医学的に許容されたバリヤー避妊法（例えば、コンドーム、または女性用ダイヤフラム）を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊は、対象の主治医と相談するべきである。
９）性交を希望する女性対象は、スクリーニング受診から、シロリムスまたはタクロリムスの最後の服用のいずれか遅い方から１２週間後まで、効果的な避妊方法を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊の中止は、対象の主治医と相談するべきである。避妊の効果的な方法として、二重バリア法（例えば、男性のコンドームとダイヤフラムの併用）、避妊リング、またはホルモン避妊薬がある。長期間にわたる禁欲は、許容できる；しかしながら、定期禁欲、周期避妊法、及び膣外射精は、許容可能な避妊方法ではない。
【0352】
６．１３．５．２ 排除基準
以下の排除基準のいずれかに該当する対象は、治験の参加に関しては適格ではない。
１）ＭＲＩ、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌である。
ａ）ガドリニウムに対して禁忌である。
ｂ）クレアチニンに基づいた推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２で決定する腎不全を有している。臨床試験で、クレアチニンレベルが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判定した場合、最小のカットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
２）以下のいずれかを含み、ＩＣまたはＩＣＶ注入に対して禁忌である。
ａ）治験（１施設の）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、ベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注入の禁忌を認める。
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
ｃ）治験責任者、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見が、かつての臨床的に顕著な頭蓋内出血の経験が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
３）ＭＰＳ Ｉに起因しないあらゆる神経認知欠損を有している、またはＰＩの見解として、治験結果を誤って解釈し得る神経精神状態の診断を受けている。
４）腰椎穿刺に対して禁忌である。
５）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＴ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
６）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＶ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
７）スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する。
８）最大限の医療処置にもかかわらず、制御できない高血圧（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）を有する。
９）対象が、ギルバート症候群の従前に公知の既往歴を有していなければ、スクリーニング時に、ＡＬＴまたはＡＳＴ＞３×ＵＬＮ、または全ビリルビン＞１．５×ＵＬＮを有しており、また、コンジュケートしたビリルビンが、全ビリルビンの＜３５％であることを示す分別したビリルビンを有する。
１０）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験の陽性結果。
１１）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する３０日前または５半減期前、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けたこと。
１２）臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人。
１３）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名してから５２週目までのあらゆる時点において、妊婦である、分娩の＜６週間後である、スクリーニング時点で母乳を与えている、または（自身が、またはパートナーが）出産を考えている。５２週後の妊娠の計画については、対象の主治医と相談すべきである。
１４）スクリーニングの１年以内にアルコールまたは薬物乱用の既往歴を有している。
１５）ＰＩの見解において、対象の安全性を損ないかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している。
１６）ＰＩの見解において、対象の安全性、または研究へ首尾良く参加させること、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している。
以下の排除基準のいずれかに該当する対象は、治験の参加に関しては適格ではない。
１）ＭＲＩ、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌である。
ａ）ガドリニウムに対して禁忌である。
ｂ）クレアチニンに基づいた推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２で決定する腎不全を有している。臨床試験で、クレアチニンレベルが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判定した場合、最小のカットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
２）以下のいずれかを含み、ＩＣまたはＩＣＶ注入に対して禁忌である。
ａ）治験（１施設の）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、ベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注入の禁忌を認める。
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
ｃ）治験責任者、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見が、かつての臨床的に顕著な頭蓋内出血の経験が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
３）ＭＰＳ Ｉに起因しないあらゆる神経認知欠損を有している、またはＰＩの見解として、治験結果を誤って解釈し得る神経精神状態の診断を受けている。
４）腰椎穿刺に対して禁忌である。
５）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＴ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
６）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＶ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
７）スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する。
８）最大限の医療処置にもかかわらず、制御できない高血圧（収縮期ＢＰ＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）を有する。
９）対象が、ギルバート症候群の従前に公知の既往歴を有していなければ、スクリーニング時に、ＡＬＴまたはＡＳＴ＞３×ＵＬＮ、または全ビリルビン＞１．５×ＵＬＮを有しており、また、コンジュケートしたビリルビンが、全ビリルビンの＜３５％であることを示す分別したビリルビンを有する。
１０）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験の陽性結果。
１１）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する３０日前または５半減期前、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けたこと。
１２）臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人。
１３）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名してから５２週目までのあらゆる時点において、妊婦である、分娩の＜６週間後である、スクリーニング時点で母乳を与えている、または（自身が、またはパートナーが）出産を考えている。５２週後の妊娠の計画については、対象の主治医と相談すべきである。
１４）スクリーニングの１年以内にアルコールまたは薬物乱用の既往歴を有している。
１５）ＰＩの見解において、対象の安全性を損ないかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している。
１６）ＰＩの見解において、対象の安全性、または研究へ首尾良く参加させること、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している。
【0353】
免疫抑制療法に関連する排除基準
１７）タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾンに対する過敏症反応の既往歴。
１８）重篤な免疫不全（例えば、分類不能型免疫不全症）、脾臓摘出、または対象を予め感染に曝してしまうあらゆる基礎的条件。
１９）スクリーニングの少なくとも１２週間前に治癒していない水痘帯状ヘルペスウイルス、帯状疱疹（ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）（帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ））、ＣＭＶ、またはＥＢＶ感染。
２０）受診２の少なくとも８週間前に完治していない入院または非経口抗感染剤による治療を必要とするあらゆる感染症。
２１）受診２の１０日以内での経口抗感染症薬（抗ウイルス剤など）を必要とするあらゆる活動性感染症。
２２）スクリーニングの間での活動性結核（ＴＢ）または陽性ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験の既往歴。
２３）２日目から４週間以内でのあらゆる生ワクチン。
２４）ＩＣＦに署名する８週間以内に受けた大手術、または治験期間の間に計画した大手術。
２５）絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ
２６）ＰＩが、免疫抑制療法に適していないと確信するあらゆる条件または臨床検査での異常。
１７）タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾンに対する過敏症反応の既往歴。
１８）重篤な免疫不全（例えば、分類不能型免疫不全症）、脾臓摘出、または対象を予め感染に曝してしまうあらゆる基礎的条件。
１９）スクリーニングの少なくとも１２週間前に治癒していない水痘帯状ヘルペスウイルス、帯状疱疹（ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）（帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ））、ＣＭＶ、またはＥＢＶ感染。
２０）受診２の少なくとも８週間前に完治していない入院または非経口抗感染剤による治療を必要とするあらゆる感染症。
２１）受診２の１０日以内での経口抗感染症薬（抗ウイルス剤など）を必要とするあらゆる活動性感染症。
２２）スクリーニングの間での活動性結核（ＴＢ）または陽性ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験の既往歴。
２３）２日目から４週間以内でのあらゆる生ワクチン。
２４）ＩＣＦに署名する８週間以内に受けた大手術、または治験期間の間に計画した大手術。
２５）絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ
２６）ＰＩが、免疫抑制療法に適していないと確信するあらゆる条件または臨床検査での異常。
【0354】
６．１３．６． 治療投与
ＡＡＶ－コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与する、ＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことが証明されておれば、当該ＩＣＶ注入による、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。子宮頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。このことは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ Ｉの患者は、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２くも膜下腔（ＩＴ）空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与で一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１７， Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；及び Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコルで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。ＡＡＶ－コンストラクト１を有するＭＰＳ ＩＩマウスで実施した薬理学的研究は、ＡＡＶ９ベクターをベースとした治験薬の生体分布と導入遺伝子発現プロファイルは、ＩＣＶ及びＩＣ経路に匹敵することを示しており、投与の代替経路としてのＩＣＶの使用は、ＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことを証明する、ことを支持している。
ＡＡＶ－コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与する、ＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことが証明されておれば、当該ＩＣＶ注入による、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。子宮頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。このことは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ Ｉの患者は、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２くも膜下腔（ＩＴ）空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与で一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１７， Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；及び Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．， ２０１８， Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコルで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。ＡＡＶ－コンストラクト１を有するＭＰＳ ＩＩマウスで実施した薬理学的研究は、ＡＡＶ９ベクターをベースとした治験薬の生体分布と導入遺伝子発現プロファイルは、ＩＣＶ及びＩＣ経路に匹敵することを示しており、投与の代替経路としてのＩＣＶの使用は、ＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことを証明する、ことを支持している。
【0355】
２つの用量レベルで研究する：１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、及び５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量。１用量を超えるＩＰ投与を受ける対象はいない。
【0356】
発達過程の子供で早期に起こる比較的に迅速な脳の成長が故に、ＡＡＶ－コンストラクト１をＩＣで投与する総投与量は、研究対象のスクリーニング脳ＭＲＩから得た推定脳質量に応じて変化する。対象のＭＲＩから得た研究対象の推定脳体積は、表２に示すように、脳質量に変換して、投与する正確な用量を計算するために使用する。適切な用量を決定するステップは：（１）対象の脳体積ｃｍ３をスクリーニング脳ＭＲＩから取得する；（２）対象のＭＲＩ脳体積を、次のように、脳質量に変換する：脳質量＝（脳体積ｃｍ３）×１．０４６ｇ／ｃｍ３（脳密度を、ｉｔｉｓ．ｓｗｉｓｓ／ｖｉｒｔｕａｌ－ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ／ｔｉｓｓｕｅ－ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ／ｄａｔａｂａｓｅ／ｄｅｎｓｉｔｙから得た）；及び（３）表２に示すように、適切な用量を同定する、ことにある。
【0357】
６．１３．７． 免疫抑制療法投与
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）を静脈内投与（ＩＶ）で与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）を静脈内投与（ＩＶ）で与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0358】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
●シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
●シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
【0359】
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
●タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血液レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
●タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血液レベルをモニタリングする。
【0360】
６．１３．１．有効性評価
神経認知試験のための有効な器具：ＷＡＳＩ－ＩＩ、Ｂａｙｌｅｙ－ＩＩＩ、及び／またはＷＰＰＳＩ－ＩＶ、適応行動（Ｖｉｎｅｌａｎｄ－３）、及び注意変数試験（ＴＯＶＡ）
神経認知試験のための有効な器具：ＷＡＳＩ－ＩＩ、Ｂａｙｌｅｙ－ＩＩＩ、及び／またはＷＰＰＳＩ－ＩＶ、適応行動（Ｖｉｎｅｌａｎｄ－３）、及び注意変数試験（ＴＯＶＡ）
【0361】
血漿でのバイオマーカー（ＧＡＧ及びＩＤＵＡ）、白血球（ＩＤＵＡ）、ＣＳＦ（ＧＡＧ、ＩＤＵＡ、及びスペルミンレベル）、及び尿（ＧＡＧ）。
【0362】
腰椎穿刺は、治験施設での標準的な手法で行う。
【0363】
物理的症状スコア
【0364】
脳のＭＲＩは、受診時に行う。推定糸球体濾過速度は、ガドリニウムを使用するスクリーニングＭＲＩの前に確認しなくてはならない。治験責任医師は、ｅＧＦＲが、＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２でああれば、スクリーニングＭＲＩを行う前に、医療モニターと相談しなくてはらない。
【0365】
腹部の超音波検査で、鎖骨中央線での頭尾方向の肝臓直径を確認する（Ｋｒａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ ２２：１１５５－１１６１， ２００３）、そして、扁長楕円体式（０．５２×長さ×前後方向の寸法×幅）を使用して、脾臓の体積を計算する。
【0366】
６．１４ 実施例１４：ムコ多糖症Ｉ型の対象に関するくも膜下ＡＡＶ－１コンストラクト１遺伝子治療の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価するためのＩ／ＩＩ相多施設、非盲検研究
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉ及びＣＮＳの関与が明らかな証拠を有する対象（４ヶ月齢以上）を、ＡＡＶ－コンストラクト１のＩ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アームの用量増量研究である。ＩＶラロニダーゼ治療を従前に、または現在受けている対象は、参加可能である。ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療は、この集団では、潜在的に、神経認知の面で有益である。ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２回用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、ＩＣまたはＩＣＶ注入で、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一用量を投与する。安全性は、治療した後の最初の２４週間（初期研究期間）での第１の関心事である。初期研究期間に続いて、対象については、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療の後に、合計で１０４週間まで（安全性及び有効性の）評価を継続する。治験の最後に、すべての対象に対して、長期観察追跡調査への参加を促す。
以下の実施例は、ＭＰＳ Ｉ及びＣＮＳの関与が明らかな証拠を有する対象（４ヶ月齢以上）を、ＡＡＶ－コンストラクト１のＩ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アームの用量増量研究である。ＩＶラロニダーゼ治療を従前に、または現在受けている対象は、参加可能である。ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療は、この集団では、潜在的に、神経認知の面で有益である。ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２回用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、ＩＣまたはＩＣＶ注入で、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一用量を投与する。安全性は、治療した後の最初の２４週間（初期研究期間）での第１の関心事である。初期研究期間に続いて、対象については、ＡＡＶ－コンストラクト１を使用した治療の後に、合計で１０４週間まで（安全性及び有効性の）評価を継続する。治験の最後に、すべての対象に対して、長期観察追跡調査への参加を促す。
【0367】
第１のコホートは、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量を受ける２名の適格対象を含んでおり、そして、第２のコホートは、５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量を受ける３名の適格対象を含んでいる。ＡＡＶ－コンストラクト１を、それぞれのコホートの第１の対象（センチネル）に投与した後に、安全性評価のための８週間の観察期間を設ける。スポンサーの内部安全委員会（ＩＳＣ）が、コホート１の第１の対象に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週間の間に行った受診で得たデータを含む）を検討する、そして、ＩＳＣが安全上の懸念を認めなければ、第２の対象はＡＡＶ－コンストラクト１を受け得る。コホート１の第２の対象とコホート２の第１の対象との間の安全性については、４週間の観察期間を設ける。投与したそれぞれの対象での安全性と忍容性を検討する。ＳＲＴ事象が認められなければ、第２の対象に関する４週間の観察を含めて、第１のコホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２のコホート（５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に進むべきとの決定が出されると、後続の３名の対象は、最初のコホートと同様の投与計画（コホート２での第１の対象の後の８週間の観察期間、及びコホート２での対象２及び３の後の４週間の観察期間）に従う、または、特記しなければ、臨床データ、及び／またはＩＤＭＣの検討内容が示した方法に従う。
【0368】
潜在的対象については、治験に対する適格性を決定するために、投与の－６０～－２日目にスクリーニングを行う。適格性基準を満たす対象は、（実施機関の規則に従って）－２日目と１日目の朝との間に病院に赴くことが認められる、そして、ベースライン評価を投与前に行う。対象は、１日目にＡＡＶ－コンストラクト１の単一のＩＣ用量またはＩＣＶ用量の投与を受ける、そして、観察のために、投与した後に、約３０～３６時間、病院内に留まる。初期研究期間（すなわち、２４週間）の後の評価は、４週目までは毎週、そして、８週目、１２週目、１６週目、２０週目、及び２４週目に行う。初期評価期間の後に、２８週目、３２週目、４０週目、４８週目、５２週目、５６週目、６４週目、７８週目、及び１０４週目に受診を行う。２０週目、及び２８週目の評価は、電話で、ＡＥと、それに付随する治療の評価に限って聞き取りをする。
【0369】
すべての対象は、治験で、まずＩＳを受けて、導入遺伝子を発現するキャプシドまたは組織に対するあらゆる免疫媒介反応のリスクを最小限にする、ならびに、有効性を低下し得るＩＤＵＡに対する抗体の形成または増加に関連するあらゆるリスクを最小限にする。免疫抑制療法は、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを静脈（ＩＶ）に前投与する、そして、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減して、第１２週までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週まで１日２回［ＢＩＤ］、０．０５ｍｇ／ｋｇを経口的［ＰＯ］に投与して、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけて８週間にわたって漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目からシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日を、ＢＩＤで投与して、第４８週まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする）を含む。神経学的評価と、タクロリムス／シロリムス血中レベルのモニタリングを行う。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血液レベルを維持するように調節する。
【0370】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニターを確認しながら、ＰＩが適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0371】
ＮＨＰ安全性研究での知見及びＩＣ手順での潜在的安全性リスクを考慮して、集中的な神経学的評価や体性感覚誘発電位試験など、徹底した神経学的モニタリングを使用する。
【0372】
ＡＡＶ－コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重大な有害事象（ＳＡＥ）、化学分析、血液学分析、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、及び神経学的評価などの物理的検査を介してモニタリングする。血中ウイルスゲノム（エプスタイン－バーウイルス［ＥＢＶ］、及びサイトメガロウイルス［ＣＭＶ］）の検出のための連続ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）も、対象がＩＳを受けている間に実施する。
【0373】
二次的な有効性の評価として、神経認知度の低下、それに、ＣＳＦ、血漿、及び尿でのバイオマーカーレベルの測定がある。
【0374】
治験薬、用量、及び投与経路
●ＡＡＶコンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＵＡ（ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）
●２つの用量レベル：１×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量
●大槽内（ＩＣ）を介して単一用量を投与する、または、この投与経路が選択肢になければ、脳室内（ＩＣＶ）投与を行う。
●ＡＡＶコンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＵＡ（ヒトα－Ｌ－イズロニダーゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）
●２つの用量レベル：１×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）／ｇ脳質量、または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量
●大槽内（ＩＣ）を介して単一用量を投与する、または、この投与経路が選択肢になければ、脳室内（ＩＣＶ）投与を行う。
【0375】
第１目的：
●ＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与を確認した対象に対して単一のＩＣまたはＩＣＶ用量を投与した後に、ＡＡＶ－コンストラクト１の安全性及び耐容性を２４週間にわたって評価する。
●ＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与を確認した対象に対して単一のＩＣまたはＩＣＶ用量を投与した後に、ＡＡＶ－コンストラクト１の安全性及び耐容性を２４週間にわたって評価する。
【0376】
第２目的：
●ＡＡＶ－コンストラクト１の長期安全性及び耐容性を１０４週間にわたって評価する
●ＡＡＶ－コンストラクト１の効果を、認知力及び適応機能の神経発達パラメータに関して、１０４週間にわたって評価する
●ＣＳＦ、血漿、及び尿でのベクター切断を評価する
●ＡＡＶ－コンストラクト１の長期安全性及び耐容性を１０４週間にわたって評価する
●ＡＡＶ－コンストラクト１の効果を、認知力及び適応機能の神経発達パラメータに関して、１０４週間にわたって評価する
●ＣＳＦ、血漿、及び尿でのベクター切断を評価する
【0377】
調査目的：
●ＡＡＶ－コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳ画像でＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の影響を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、及び尿でのバイオマーカーに及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の薬物動態（ＰＤ）効果を調べる
●疾患の全身的発現に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●睡眠検査に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●臨床医が報告した結果に基づいてＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●患者が報告した結果評価に基づいてＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●ＡＡＶ－コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳ画像でＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の影響を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、及び尿でのバイオマーカーに及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の薬物動態（ＰＤ）効果を調べる
●疾患の全身的発現に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●睡眠検査に及ぼすＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●臨床医が報告した結果に基づいてＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
●患者が報告した結果評価に基づいてＡＡＶ－コンストラクト１の効果を調べる
【0378】
６．１４．１． 採用及び排除のための診断及び基準
対象は、以下の全基準を満たさないと、この治験の参加資格は得られない。
１）男性または女性で、≧４ヶ月齢。
２）治験内容の説明を受けた後で、かつ、治験関連の手順が開始される以前に、記入、署名がされたインフォームドコンセントを提出する意志があり、かつ、そうすることが可能であること。対象がインフォームドコンセントの提出が不可能である場合には、インフォームドアセントを得て、そして、対象の法定代理人が、インフォームドコンセントを提出しなくてはならない。
３）従前にＭＰＳ Ｉの診断を受けており、白血球及び線維芽細胞でのＩＤＵＡ欠損が確認されていること。
４）その他の神経学的因子または精神医学的因子によって説明できない場合には、以下の基準の１つに基づいたＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与が確認されていること：
ａ）神経認知試験での平均値よりも低い≧１の標準偏差のスコア、または神経心理学的機能の１ドメインにあること。
ｂ）逐次神経認知検定での＞１の標準偏差の減少、または３～３６ヶ月間の間に投与する神経心理学的機能の１ドメインでの減少。
ｃ）重度のＭＰＳ Ｉの診断を受けており、重篤な表現型を予測する両アレル突然変異によって確認されていること、または、重度のＭＰＳ Ｉ及び同じＩＤＵＡ突然変異をもってして、相対的に臨床的な診断を受けている。この対象は、神経認知欠損の明確な証拠を持っている必要はない。
５）ＨＳＣＴを受けた対象は、ＰＩ、医療モニター、及びスポンサーが、対象が安全かつ首尾よく治験に参加できることに同意していれば、対象を治験に登録し得る。
６）補助器具の有無に関係なく、十分な聴覚及び視覚を有しており、必要とするプロトコル試験を完了する、そして、利用可能であれば、補助器具を試験日に使って必要なプロトコル試験を完了する意志があること。
７）妊娠が疑わしい女性は、スクリーニング受診時の妊娠試験がネガティブ血清でなくてはならず、１日目にネガティブ尿の結果であり、そして、治験の間にさらなる妊娠試験を行うことが望ましい。
８）性交を希望する男性対象は、スクリーニング受診から、ベクターを投与して２４週間になるまで、医学的に許容されたバリヤー避妊法（例えば、コンドーム、または女性用ダイヤフラム）を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊は、対象の主治医と相談するべきである。
９）性交を希望する女性対象は、スクリーニング受診から、シロリムスまたはタクロリムスの最後の服用のいずれか遅い方から１２週間後まで、効果的な避妊方法を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊の中止は、対象の主治医と相談するべきである。避妊の効果的な方法として、二重バリア法（例えば、男性のコンドームとダイヤフラムの併用）、避妊リング、またはホルモン避妊薬がある。長期間にわたる禁欲は、許容できる；しかしながら、定期禁欲、周期避妊法、及び膣外射精は、許容可能な避妊方法ではない。
対象は、以下の全基準を満たさないと、この治験の参加資格は得られない。
１）男性または女性で、≧４ヶ月齢。
２）治験内容の説明を受けた後で、かつ、治験関連の手順が開始される以前に、記入、署名がされたインフォームドコンセントを提出する意志があり、かつ、そうすることが可能であること。対象がインフォームドコンセントの提出が不可能である場合には、インフォームドアセントを得て、そして、対象の法定代理人が、インフォームドコンセントを提出しなくてはならない。
３）従前にＭＰＳ Ｉの診断を受けており、白血球及び線維芽細胞でのＩＤＵＡ欠損が確認されていること。
４）その他の神経学的因子または精神医学的因子によって説明できない場合には、以下の基準の１つに基づいたＭＰＳ Ｉに起因するＣＮＳの関与が確認されていること：
ａ）神経認知試験での平均値よりも低い≧１の標準偏差のスコア、または神経心理学的機能の１ドメインにあること。
ｂ）逐次神経認知検定での＞１の標準偏差の減少、または３～３６ヶ月間の間に投与する神経心理学的機能の１ドメインでの減少。
ｃ）重度のＭＰＳ Ｉの診断を受けており、重篤な表現型を予測する両アレル突然変異によって確認されていること、または、重度のＭＰＳ Ｉ及び同じＩＤＵＡ突然変異をもってして、相対的に臨床的な診断を受けている。この対象は、神経認知欠損の明確な証拠を持っている必要はない。
５）ＨＳＣＴを受けた対象は、ＰＩ、医療モニター、及びスポンサーが、対象が安全かつ首尾よく治験に参加できることに同意していれば、対象を治験に登録し得る。
６）補助器具の有無に関係なく、十分な聴覚及び視覚を有しており、必要とするプロトコル試験を完了する、そして、利用可能であれば、補助器具を試験日に使って必要なプロトコル試験を完了する意志があること。
７）妊娠が疑わしい女性は、スクリーニング受診時の妊娠試験がネガティブ血清でなくてはならず、１日目にネガティブ尿の結果であり、そして、治験の間にさらなる妊娠試験を行うことが望ましい。
８）性交を希望する男性対象は、スクリーニング受診から、ベクターを投与して２４週間になるまで、医学的に許容されたバリヤー避妊法（例えば、コンドーム、または女性用ダイヤフラム）を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊は、対象の主治医と相談するべきである。
９）性交を希望する女性対象は、スクリーニング受診から、シロリムスまたはタクロリムスの最後の服用のいずれか遅い方から１２週間後まで、効果的な避妊方法を使用する意志を持たなくてはならない。この時点の後での避妊の中止は、対象の主治医と相談するべきである。避妊の効果的な方法として、二重バリア法（例えば、男性のコンドームとダイヤフラムの併用）、避妊リング、またはホルモン避妊薬がある。長期間にわたる禁欲は、許容できる；しかしながら、定期禁欲、周期避妊法、及び膣外射精は、許容可能な避妊方法ではない。
【0379】
以下の排除基準のいずれかに該当する対象は、治験の参加に関しては適格ではない。
１）ＭＲＩ、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌である。
ａ）ガドリニウムに対して禁忌である。
ｂ）クレアチニンに基づいた推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２で決定する腎不全を有している。臨床検査で、クレアチニンレベルが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判定した場合、最小のカットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
２）以下のいずれかを含み、ＩＣまたはＩＣＶ注入に対して禁忌である。
ａ）施設の神経放射線科医／神経外科医、及び少なくとも２つのさらなるスポンサーが指定した資格を有する神経放射線科医（複数可）／神経外科医（複数可）が、ベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注入の禁忌を認める。
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
ｃ）治験責任者、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見が、かつての臨床的に顕著な頭蓋内出血の経験が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
３）ＭＰＳ Ｉに起因しないあらゆる神経認知欠損を有している、またはＰＩの見解として、治験結果を誤って解釈し得る神経精神状態の診断を受けている。
４）腰椎穿刺に対して禁忌である。
５）くも膜下腔（ＩＴ）ラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＴ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
６）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＶ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
７）スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する。
８）最大限の医療処置にもかかわらず、制御できない高血圧（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）を有する。
９）対象が、ギルバート症候群の従前に公知の既往歴を有していなければ、スクリーニング時に、ＡＬＴまたはＡＳＴ＞３×ＵＬＮ、または全ビリルビン＞１．５×ＵＬＮを有しており、また、コンジュケートしたビリルビンが、全ビリルビンの＜３５％であることを示す分別したビリルビンを有する。
１０）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験の陽性結果。
１１）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する３０日前または５半減期前、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けたこと。
１２）臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人。
１３）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名してから５２週目までのあらゆる時点において、妊婦である、分娩の＜６週間後である、スクリーニング時点で母乳を与えている、または（自身が、またはパートナーが）出産を考えている。５２週後の妊娠の計画については、対象の主治医と相談すべきである。
１４）スクリーニングの１年以内にアルコールまたは薬物乱用の既往歴を有している。
１５）ＰＩの見解において、対象の安全性を損ないかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している。
１６）ＰＩの見解において、対象の安全性、または研究へ首尾良く参加させること、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している。
１）ＭＲＩ、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌である。
ａ）ガドリニウムに対して禁忌である。
ｂ）クレアチニンに基づいた推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）＜３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２で決定する腎不全を有している。臨床検査で、クレアチニンレベルが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判定した場合、最小のカットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
２）以下のいずれかを含み、ＩＣまたはＩＣＶ注入に対して禁忌である。
ａ）施設の神経放射線科医／神経外科医、及び少なくとも２つのさらなるスポンサーが指定した資格を有する神経放射線科医（複数可）／神経外科医（複数可）が、ベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注入の禁忌を認める。
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
ｃ）治験責任者、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見が、かつての臨床的に顕著な頭蓋内出血の経験が、ＩＣまたはＩＣＶ注入は禁忌であることを認める。
３）ＭＰＳ Ｉに起因しないあらゆる神経認知欠損を有している、またはＰＩの見解として、治験結果を誤って解釈し得る神経精神状態の診断を受けている。
４）腰椎穿刺に対して禁忌である。
５）くも膜下腔（ＩＴ）ラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＴ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
６）ＩＴラロニダーゼをいつの時点で受けても、ＰＩの見解では、対象を過度のリスクに曝しかねないＩＶ投与に関連するものと考えられる有意なＡＥを経験した。
７）スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する。
８）最大限の医療処置にもかかわらず、制御できない高血圧（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）を有する。
９）対象が、ギルバート症候群の従前に公知の既往歴を有していなければ、スクリーニング時に、ＡＬＴまたはＡＳＴ＞３×ＵＬＮ、または全ビリルビン＞１．５×ＵＬＮを有しており、また、コンジュケートしたビリルビンが、全ビリルビンの＜３５％であることを示す分別したビリルビンを有する。
１０）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験の陽性結果。
１１）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する３０日前または５半減期前、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けたこと。
１２）臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人。
１３）インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名してから５２週目までのあらゆる時点において、妊婦である、分娩の＜６週間後である、スクリーニング時点で母乳を与えている、または（自身が、またはパートナーが）出産を考えている。５２週後の妊娠の計画については、対象の主治医と相談すべきである。
１４）スクリーニングの１年以内にアルコールまたは薬物乱用の既往歴を有している。
１５）ＰＩの見解において、対象の安全性を損ないかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している。
１６）ＰＩの見解において、対象の安全性、または研究へ首尾良く参加させること、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している。
【0380】
免疫抑制療法に関連する排除基準
１７）タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾンに対する過敏症反応の既往歴。
１８）重篤な免疫不全（例えば、分類不能型免疫不全症）、脾臓摘出、または対象を予め感染に曝してしまうあらゆる基礎的条件。
１９）スクリーニングの少なくとも１２週間前に治癒していない水痘帯状ヘルペスウイルス、帯状疱疹（ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）（帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ））、ＣＭＶ、またはＥＢＶ感染。
２０）受診２の少なくとも８週間前に完治していない入院または非経口抗感染剤による治療を必要とするあらゆる感染症。
２１）受診２の１０日以内での経口抗感染症薬（抗ウイルス剤など）を必要とするあらゆる活動性感染症。
２２）スクリーニングの間での活動性結核（ＴＢ）または陽性ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験の既往歴。
２３）２日目から４週間以内でのあらゆる生ワクチン。
２４）ＩＣＦに署名する８週間以内に受けた大手術、または治験期間の間に計画した大手術。
２５）絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ
２６）ＰＩが、免疫抑制療法に適していないと確信するあらゆる条件または臨床検査での異常。
１７）タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾンに対する過敏症反応の既往歴。
１８）重篤な免疫不全（例えば、分類不能型免疫不全症）、脾臓摘出、または対象を予め感染に曝してしまうあらゆる基礎的条件。
１９）スクリーニングの少なくとも１２週間前に治癒していない水痘帯状ヘルペスウイルス、帯状疱疹（ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）（帯状疱疹（ｓｈｉｎｇｌｅｓ））、ＣＭＶ、またはＥＢＶ感染。
２０）受診２の少なくとも８週間前に完治していない入院または非経口抗感染剤による治療を必要とするあらゆる感染症。
２１）受診２の１０日以内での経口抗感染症薬（抗ウイルス剤など）を必要とするあらゆる活動性感染症。
２２）スクリーニングの間での活動性結核（ＴＢ）または陽性ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験の既往歴。
２３）２日目から４週間以内でのあらゆる生ワクチン。
２４）ＩＣＦに署名する８週間以内に受けた大手術、または治験期間の間に計画した大手術。
２５）絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ
２６）ＰＩが、免疫抑制療法に適していないと確信するあらゆる条件または臨床検査での異常。
【0381】
６．１４．２． 略語の一覧
【表8】
【0382】
６．１４．３． 脳重量に基づいて投与した全用量
ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２つ用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、以下の表７に従って、ＩＣまたはＩＣＶ注入で、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一投与量の投与を受ける。
ＭＰＳ Ｉを有する約５名の対象を、２つ用量のコホート、１×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量または５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量で治療を行い、そして、以下の表７に従って、ＩＣまたはＩＣＶ注入で、ＡＡＶ－コンストラクト１の単一投与量の投与を受ける。
【0383】
【表9】
【0384】
６．１４．４． 免疫抑制療法投与
コルチコステロイド
コルチコステロイド
【0385】
ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
【0386】
第１２週までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
●２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
●第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
●第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
●第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
●プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
●第３週及び４週：０．３５ ｍｇ／ｋｇ／日
●第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
●第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
●プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0387】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
●シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする、１日２回の投与に分割した０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムス。
●シロリムスを、第４８週の受診後に中止する。
【0388】
タクロリムス
●２日目（治験薬投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
●タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血液レベルをモニタリングする。
●２日目（治験薬投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整した。
●タクロリムスは第２４週の受診から開始する、８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血液レベルをモニタリングする。
【0389】
プレドニシンの用量は、０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、そして、１２週目の受診から漸減する。
【0390】
タクロリムスの用量調節は、最初の２４週間の間、２～４ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。２４週目で、用量は約５０％減らす。２８週目で、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、３２週目に中止する。シロリムスの用量調節は、１～３ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。用量調節は、臨床薬剤師が行うべきである。対象は、濃度モニタリングによってさらなる用量調整が行われるまで、少なくとも７～１４日間は、新たな維持用量を継続すべきである。
【0391】
トリメトプリム／スルファメトキサゾールを原因とするニューモシスチティス肺炎の予防のために、週３回（例えば、投与スケジュール；月曜日、水曜日、金曜日）に、５ｍｇ／ｋｇの用量から始めて、－２日目から第４８週目まで継続する。サルファ剤アレルギーを有する患者については、他の薬剤：ペンタミジン、ダプソーン、及びアトバクオンを使うことができる。
【0392】
抗真菌予防薬は、絶対好中球数が＜５００ｍｍ３である場合に投与すべきである。治療レジメンは、適切な超専門医と相談して、現地施設の標準治療を介して決定する。
【0393】
ＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの増加が一連の試験で検出された場合には、適切な専門家と相談して、現地施設の標準治療を介して、ＩＳの解除、または、抗ウイルス治療の開始を決定する。
【0394】
カルシニューリン阻害剤をラパマイシンと併用すると、カルシニューリン阻害剤誘発性血栓性細小血管障害のリスクを高め得る。細小血管障害は、血小板減少症、特発性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害のグループである。これらの中で顕著なものは、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）である。
【0395】
一般的に、ＴＴＰとは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）を示す微小血管症性溶血性貧血であり、血液塗抹標本での破砕赤血球、網状赤血球数の多さ（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸脱水素酵素レベルの上昇、それに、皮膚及び粘膜の出血、脱力感、及び呼吸困難の兆候を特徴とする。ＴＴＰは、迅速な診断と、緊急の対処を必要とする。治療は、タクロリムスの中止と、血漿の交換の開始を含む。治療に対する完全な応答は、１５０×１０９／Ｌを超える血小板数が２日間連続するもの、と定義する。
【0396】
均等物
本発明がその特定の実施形態に関して詳細に記載するにもかかわらず、機能的に等価である変形が本発明の範囲内にあることが理解されよう。実際、本明細書において示され、説明する発明に加え、本発明の様々な修正が、上記明細書及び添付する図面から当業者にとって明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることを意図する。当業者であれば、本明細書に記載した発明の特定の実施形態との多くの等価物を認識するかまたは定型的な実験の範囲の域でこれを使用する、確認することが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含することを意図する。
本発明がその特定の実施形態に関して詳細に記載するにもかかわらず、機能的に等価である変形が本発明の範囲内にあることが理解されよう。実際、本明細書において示され、説明する発明に加え、本発明の様々な修正が、上記明細書及び添付する図面から当業者にとって明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることを意図する。当業者であれば、本明細書に記載した発明の特定の実施形態との多くの等価物を認識するかまたは定型的な実験の範囲の域でこれを使用する、確認することが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含することを意図する。
【0397】
この明細書に言及のある全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願の全内容を、参照により、本明細書で援用することが具体的かつ個別的に示すのと同程度に、明細書中に参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図2-4】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図5-5】
【図5-6】
【図5-7】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2022-10-26
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】