▶ サイファーム ソシエテ ア レスポンサビリテ リミテの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-17
(54)【発明の名称】７－デアセチル－フォルスコリンとＰＶＰの複合体
(51)【国際特許分類】
A61K 31/35 20060101AFI20230310BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20230310BHJP
A61K 9/72 20060101ALI20230310BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230310BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230310BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20230310BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20230310BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20230310BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230310BHJP
A61K 47/58 20170101ALI20230310BHJP
C07D 311/78 20060101ALN20230310BHJP
【ＦＩ】
A61K31/35
A61K47/32
A61K9/72
A61K9/08
A61P9/00
A61P11/06
A61P3/04
A61P27/06
A61P19/02
A61K47/58
C07D311/78
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022544732
(86)(22)【出願日】2021-01-22
(85)【翻訳文提出日】2022-09-22
(86)【国際出願番号】 EP2021051499
(87)【国際公開番号】W WO2021148633
(87)【国際公開日】2021-07-29
(31)【優先権主張番号】20153429.4
(32)【優先日】2020-01-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】512031482
【氏名又は名称】サイファーム ソシエテ ア レスポンサビリテ リミテ
【氏名又は名称原語表記】ＳｃｉＰｈａｒｍ Ｓ．ａ ｒ．ｌ．
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】クービン，アンドレアス
【テーマコード（参考）】
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA11
4C076AA93
4C076BB01
4C076BB13
4C076BB27
4C076CC10
4C076CC11
4C076CC15
4C076CC21
4C076CC41
4C076CC50
4C076EE16
4C076EE16A
4C076EE16E
4C076EE59
4C076FF15
4C076FF31
4C076FF34
4C076FF68
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA08
4C086MA02
4C086MA05
4C086MA17
4C086MA52
4C086MA55
4C086MA66
4C086NA02
4C086NA05
4C086NA11
4C086ZA33
4C086ZA36
4C086ZA59
4C086ZA70
4C086ZA96
(57)【要約】
本発明の目的は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）とポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体である。さらに、本発明は、このような７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を調製するための方法およびこのような複合体を含有する医薬組成物にも関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体。
【請求項2】
ＰＶＰが、１～４０ｋＤ、好ましくは２～２５ｋＤ、特に好ましくは約２．５ｋＤの、重量平均モル質量に対する平均モル質量を有することを特徴とする、請求項１に記載の複合体。
【請求項3】
７－ＤＡＦＳＫが、合成フォルスコリンに由来することを特徴とする、請求項１又は２に記載の複合体。
【請求項4】
複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０重量％の範囲内、好ましくは３０重量％以上であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項5】
７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度に加熱されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の複合体の調製のためのプロセス。
【請求項6】
溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、及び／又は酢酸エチル、より好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、及び／又はジクロロメタン、さらにより好ましくは水及び／若しくはエタノール又はその混合物が、７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする、請求項５に記載のプロセス。
【請求項7】
前記混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度で、少なくとも５分間保たれることを特徴とする、請求項５又は６に記載のプロセス。
【請求項8】
ａ）７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを該混合物に加えるステップ、ｂ）水又は水溶液を加えるステップ、
ｃ）混合物を、ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）混合物を冷却し、水又は水溶液に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ
を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
請求項１～４のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。
【請求項10】
医薬としての使用のための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ、１０００ｍｇ／ｍＬ、２０００ｍｇ／ｍＬ、３０００ｍｇ／ｍＬ、又は４０００ｍｇ／ｍＬ、特に好ましくは４０００ｍｇ／ｍＬの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含有することを特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項12】
静脈内、経口、又は吸入投与のための、請求項９又は１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
治療法における使用のための、請求項９～１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、又は変形性関節症／関節炎の治療における使用のための、請求項９～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）とポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体およびこのような複合体を調製するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ジテルペンフォルスコリンは、Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ ｂａｒｂａｔｕｓ（コレウス・フォルスコリ）由来の実質的に水不溶性植物化合物である。フォルスコリンは、心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障の治療、肺疾患、関節の炎症、および変形性関節症／関節炎を含む多目的な医学的適用に主眼を置いている。フォルスコリンは、関節における軟骨形成を促進し、同時に骨化および石灰化を予防する。さらに、フォルスコリンは、分化および多能性への回帰に関する幹細胞研究において検討されている。
【0003】
フォルスコリンは、膜結合酵素であるアデニリルシクラーゼを活性化する。アデニリルシクラーゼは、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）に変換し、ｃＡＭＰを細胞質基質内に放出して、大半の細胞および組織におけるｃＡＭＰの細胞内濃度を増加する（Ｍｅｔｚｇｅｒ Ｈ．他、１９８１、Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２４８～５０ページ）。ｃＡＭＰは、細胞のシグナル伝達におけるセカンドメッセンジャーとして働き、多くのペプチドホルモン（プロテインキナーゼ）を活性化する役割を果たす。
【0004】
フォルスコリンは、１および９位に２つのα－ヒドロキシ基、６位にβ－ヒドロキシ基、ならびに７位にβ－アセトキシ基を有するジテルペンである。この１および９位の２つのα－ヒドロキシ基は、アデニリルシクラーゼへの結合のために必須である。フォルスコリンは、水に対する溶解性が低いため（０．０１ｍｇ／ｍＬ、ＷＯ２００５０２５５００Ａ２）、診断用薬剤または治療用薬剤として使用されるための異なる製剤処方を必要としている。このような製剤処方は、アルコールまたはＤＭＳＯのような種々の溶媒を含有し、これらの溶媒は、忍容性が高くないことが多く、副作用を招く。
【0005】
文献米国特許第６３４６２７３Ｂ１号は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のような非イオン性ポリマーとの複合体形成によって、フォルスコリンのような水溶性の低い薬学的活性物質の水溶性を向上させるための方法を考察している。この文献は、フォルスコリンの水溶性における向上について述べている。
【0006】
フォルスコリンをシクロデキストリンと複合化することによって、フォルスコリンの水溶性の向上が達成される。ＷＯ２００５０２５５００Ａ２は、水性媒体中でフォルスコリンをシクロデキストリンと複合化するための方法について述べている。
【0007】
ＷＯ２０１７１０３８４０Ａ１は、とりわけＰＶＰのような水溶性ポリマーとの複合体形成による水溶性フォルスコリン組成物について述べている。フォルスコリンをそのようなポリマーと混合した後、デンプン溶液を加え、この混合物を加熱し、次に、冷却して噴霧乾燥する。
【0008】
ＷＯ２０１８１２７６００Ａ１は、フォルスコリン－シクロデキストリン複合体を調製するための方法であって、焼結処理に基づいており、この複合体におけるフォルスコリンの含有量の増加、および水溶性の向上を可能にする方法を開示している。
【0009】
フォルスコリンの水溶性を向上させるための別の手法は、化学的誘導体化である。フォルスコリンに比べてより高い水溶性を有するフォルスコリン誘導体は、７－デアセチルフォルスコリンであり、これは、アデニリルシクラーゼに対してフォルスコリンと同様の効果を示す（Ｌａｕｒｅｎｚａ Ａ．他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１９８７、３２（１）、１３３～１３９ページ、Ｐｉｎｔｏ Ｃ．他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ２００９、７８（１）、６２～６９ページ）。しかし、フォルスコリンの７位の脱アセチル化は、限られた程度までしか水溶性を向上できない（１ｍｇ／ｍＬまで）。
【0010】
したがって、高い水溶性と、それによって改善されたバイオアベイラビリティの両方を特徴とし、高いフォルスコリン誘導体含有量を有する、水溶性が改善されたフォルスコリン誘導体の形態の必要性が存在する。
【0011】
このため、水に対する溶解性を高め、同時に７－デアセチル－フォルスコリンの高い含有量を有する７－デアセチル－フォルスコリンの形態を提供することは、本発明の目的である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明の特許請求の範囲および実施形態に記載されるとおり、本発明の目的は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）とポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体によって解決される。
【0013】
本発明は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）とポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体を開示する。
一実施形態において、本発明による複合体は、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０ｗｔ％の範囲内、好ましくは５、１０、１５、２０、または２５ｗｔ％、より好ましくは３０ｗｔ％、３５ｗｔ％、４０ｗｔ％、４５ｗｔ％以上であることを特徴とする。
一実施形態において、本発明による複合体は、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０ｗｔ％の範囲内、好ましくは５、１０、１５、２０、または２５ｗｔ％、より好ましくは３０ｗｔ％、３５ｗｔ％、４０ｗｔ％、４５ｗｔ％以上であることを特徴とする。
【0014】
一実施形態において、複合体におけるＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの平均モル比は、０．１以上、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０以上、より好ましくは３以上である。
【0015】
一実施形態において、本発明による複合体は、ＰＶＰが１～４０ｋＤの平均モル質量を有することを特徴とする。前記ＰＶＰは、好ましくは１～２５ｋＤ、より好ましくは約２～３ｋＤ、最も好ましくは約２．５ｋＤの平均モル質量を有する。
【0016】
さらなる実施形態において、本発明による複合体は、７－ＤＡＦＳＫが合成フォルスコリンに由来することを特徴とする。
一実施形態において、７－ＤＡＦＳＫは、少なくとも９８．５％の純度で存在する。
一実施形態において、７－ＤＡＦＳＫは、少なくとも９８．５％の純度で存在する。
【0017】
驚くべきことに、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体における７－ＤＡＦＳＫの特に高い質量分率は、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物を、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度に加熱することによって得られ得ることがわかった。特に、前記混合物は、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回る、少なくとも２０℃、好ましくは、少なくとも２５℃、３０℃、４０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、１００℃の温度に加熱される。特に、前記温度は、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回る、約２５～５０℃の範囲まで高められる。
【0018】
したがって、本発明は、本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を調製するための方法であって、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度に加熱されることを特徴とする方法も提供する。
【0019】
一実施形態において、本発明によるプロセスは、溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、および／または酢酸エチル、さらにより好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、および／またはジクロロメタンが、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする。
特に好ましくは、水および／もしくはエタノールまたはその混合物が、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えられる。
特に好ましくは、水および／もしくはエタノールまたはその混合物が、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えられる。
【0020】
特定の実施形態において、本発明による混合物は、使用されるＰＶＰのガラス転移温度よりも高い温度で、少なくとも５分間保たれる。
一実施形態において、本発明による方法は、次のステップを含む。
一実施形態において、本発明による方法は、次のステップを含む。
【0021】
ａ）７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを前記混合物に加えるステップ、
ｂ）水を加えるステップ、
ｃ）前記混合物を、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）前記混合物を冷却し、水に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ。
ｂ）水を加えるステップ、
ｃ）前記混合物を、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）前記混合物を冷却し、水に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ。
【0022】
ある特定の適用形態において、前記混合物は、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回る、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、１００℃に加熱される。
【0023】
本発明による方法の適用は、７－ＤＡＦＳＫの水溶性を顕著に向上させ、高い質量分率の７－ＤＡＦＳＫを含有することもあり、診断および／または治療における７－ＤＡＦＳＫの有益な適用を可能する７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の効率的で簡単な調製を可能にする。
【0024】
本発明による７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰとの複合体を用いることで、７－ＤＡＦＳＫの水溶性は、向上され得る。本発明による複合体における７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率を使用することによって、７－ＤＡＦＳＫの水溶性は、それによって不都合に大量のＰＶＰを必要とすることなく向上され得る。フォルスコリン誘導体を用いた製剤処方は、このため、以前より材料をより節約した方法で組み立てられることも可能である。大量のＰＶＰおよびそれに伴う副作用を回避することによって、本発明は、診断および／または治療における７－ＤＡＦＳＫの使用を容易にし、また改善する。
【0025】
したがって、本発明は、本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を含有する医薬組成物も提供する。
一実施形態において、前記医薬組成物は、その組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、７５ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ、３００ｍｇ／Ｌ、４００ｍｇ／Ｌ、５００ｍｇ／Ｌ、６００ｍｇ／Ｌ、８００ｍｇ／Ｌ、１０００ｍｇ／Ｌ、２０００ｍｇ／Ｌ、３０００ｍｇ／Ｌ、または４０００ｍｇ／Ｌ、好ましくは４０００ｍｇ／Ｌの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含むことを特徴とする。
一実施形態において、前記医薬組成物は、その組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、７５ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ、３００ｍｇ／Ｌ、４００ｍｇ／Ｌ、５００ｍｇ／Ｌ、６００ｍｇ／Ｌ、８００ｍｇ／Ｌ、１０００ｍｇ／Ｌ、２０００ｍｇ／Ｌ、３０００ｍｇ／Ｌ、または４０００ｍｇ／Ｌ、好ましくは４０００ｍｇ／Ｌの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含むことを特徴とする。
【0026】
本発明の一態様は、経口、静脈内、または吸入投与のための医薬組成物に関する。
特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、治療法に使用される。
別の特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、または変形性関節症／関節炎の治療のために使用される。
特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、治療法に使用される。
別の特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、または変形性関節症／関節炎の治療のために使用される。
【0027】
本発明の一態様は、医薬としての使用のための本発明による医薬組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図1】炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）によるフォルスコリンの７－ＤＡＦＳＫへの脱アセチル化に関する反応スキームを示す図である。
【図2】加熱法および溶解法によって調製されたサンプル中の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２および７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ２５複合体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率の比較を示す図である。
【図3】使用されるＰＶＰ Ｋ１２に対するＤＡＦＳＫの異なる重量比における変換された７－ＤＡＦＳＫの割合を示す図である。
【図4】ＰＶＰ Ｋ１２に対する７－ＤＡＦＳＫの異なる重量比において７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率の比較を示す図である。
【図5】７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体における７－ＤＡＦＳＫの水溶性と質量分率の間の関係を示す図である。
【図6】ＥＰ２、ＥＰ４、およびＩＰ受容体を含有するＨＥＫ２９３細胞を使用したｃＡＭＰアッセイを示す図である。細胞は、対照サンプル（トレプロスチニル）、３０μＭのフォルスコリンＤＭＳＯ溶液、１００μＭの７－ＤＡＦＳＫ水溶液、および１００μＭの７－ＤＡＦＳＫを含む７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体水溶液を用いて刺激された。
【発明を実施するための形態】
【0029】
７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）は、図１に示される構造式によって表され得る。７－ＤＡＦＳＫは、その分子形態以外の形態、例えば塩の形態、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩のようなアルカリ金属塩のような他の形態で存在する場合もある。本発明の文脈において、「７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）」という用語は、図１の構造式で示されるような分子形態および７－ＤＡＦＳＫの塩、好ましくはアルカリ金属塩、特に好ましくはナトリウム塩またはカリウム塩のような全ての他の可能性のある形態のいずれも指す。
【0030】
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、同様にポリビドンまたはポビドンは、化合物ビニルピロリドンのポリマーである。ＰＶＰは、様々な重合度で市販されている。重合度は、ポリマーの平均モル質量で決まる。本明細書で使用する場合、「平均モル質量」という用語は、モル質量の質量平均を指す。
【0031】
本発明の文脈において、１～４０ｋＤの平均モル質量を有するＰＶＰは、このサイズのポリマーが、依然として腎臓によって十分に排出され得、腎臓による代謝を受けないことから好ましい。
【0032】
一実施形態において、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、そのＰＶＰが、１～６０ｋＤ、特に１～４０ｋＤの平均モル質量を有することを特徴とする。好ましくは、ＰＶＰは、１～２５ｋＤ、好ましくは約２～９ｋＤ、２～８ｋＤ、２～７ｋＤ、２～６ｋＤ、２～５ｋＤ、２～４ｋＤ、より好ましくは２～３ｋＤ、最も好ましくは約２．５ｋＤの平均モル質量を有する。
【0033】
本明細書で「約」という用語は、特定の値、または特定の値から＋／－１０％逸脱した値を指す。
ＰＶＰの分子量は、モル質量の質量平均を明記する代わりに、粘度測定によって得られ、前記モル質量の粘度平均によって決まるＫ値によっても定義され得る。約２．５ｋＤの質量平均の分子量を有するＰＶＰは、本明細書では「ＰＶＰ Ｋ１２」として示される約１２のＫ値を有するＰＶＰに相当する（Ｋ．Ｋｏｌｔｅｒ他、「Ｈｏｔ－Ｍｅｌｄ Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ＢＡＳＦ Ｐｈａｒｍａ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ」、ＩＳＢＮ９７８－３－００－０３９４１５－７、２０１２）。約２４ｋＤの重量平均の分子量を有するＰＶＰは、本明細書では「ＰＶＰ Ｋ２５」として示される約２５のＫ値を有するＰＶＰに相当する。
ＰＶＰの分子量は、モル質量の質量平均を明記する代わりに、粘度測定によって得られ、前記モル質量の粘度平均によって決まるＫ値によっても定義され得る。約２．５ｋＤの質量平均の分子量を有するＰＶＰは、本明細書では「ＰＶＰ Ｋ１２」として示される約１２のＫ値を有するＰＶＰに相当する（Ｋ．Ｋｏｌｔｅｒ他、「Ｈｏｔ－Ｍｅｌｄ Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ＢＡＳＦ Ｐｈａｒｍａ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ」、ＩＳＢＮ９７８－３－００－０３９４１５－７、２０１２）。約２４ｋＤの重量平均の分子量を有するＰＶＰは、本明細書では「ＰＶＰ Ｋ２５」として示される約２５のＫ値を有するＰＶＰに相当する。
【0034】
本発明の文脈において、「７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体」という用語は、７－ＤＡＦＳＫおよびＰＶＰを含有する化学生成物を指し、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの間に結合が存在する事実を特徴とする。「複合体」という用語は、化合物の性質を限定することは全くないが、１つまたは複数の７－ＤＡＦＳＫ分子と１つまたは複数のＰＶＰ分子の間に結合が存在することを単に意味する。前記結合は、例えば、共有結合または、好ましくは、例えば、ファンデルワールス結合または水素結合を介した７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰへの非共有結合的付着であってもよい。「７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ」または「７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体」という用語は、前記化学生成物を全体として含み、分子レベルで単独の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体ではないことを理解されるべきである。
【0035】
「質量分率」および「モル比」という用語は、本明細書において、常に平均値として理解されるべきである。それらの用語は、分子レベルで各個別の複合体を指すのではなく、その化学生成物全体の平均値を指す。
【0036】
本発明において百分率（％）は、別段の指示がない限り、それぞれの場合において重量パーセント（ｗｔ％）を指す。
一実施形態において、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率は、１～５０ｗｔ％、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５ｗｔ％、より好ましくは３０ｗｔ％、３５ｗｔ％、４０ｗｔ％、４５ｗｔ％以上である。前記質量分率は、本明細書において、複合体全体（７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ）の質量に対する７－ＤＡＦＳＫの質量の相対的割合を反映する。
一実施形態において、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率は、１～５０ｗｔ％、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５ｗｔ％、より好ましくは３０ｗｔ％、３５ｗｔ％、４０ｗｔ％、４５ｗｔ％以上である。前記質量分率は、本明細書において、複合体全体（７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ）の質量に対する７－ＤＡＦＳＫの質量の相対的割合を反映する。
【0037】
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体における７－ＤＡＦＳＫの割合は、モル比としても表記され得る。例えば、分子の７－ＤＡＦＳＫ（モル質量：３６８．５ｇ／ｍｏｌ）および約２．５ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ１２」）の平均モル質量を有するＰＶＰからなる７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が３０ｗｔ％である７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体、複合体におけるＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの平均モル比が約３である７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体。前記平均モル比は、本明細書において、ＰＶＰのモル量に対する７－ＤＡＦＳＫのモル量の比率を反映する。
【0038】
本発明の一実施形態において、複合体におけるＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの平均モル比は、０．１以上、好ましくは３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０以上、より好ましくは３以上である。
【0039】
複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの割合（モル比と同様に質量分率も）は、本明細書において、常に平均割合として理解されるべきである。複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均割合を測定するための適当な方法は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。当業者は、このような測定の作業に精通している。
【0040】
７－ＤＡＦＳＫは、本発明の特定の実施例において説明されるとおり、脱アセチル化反応、例えば、炭酸塩鹸化を使用してフォルスコリンから調製され得る。天然および合成フォルスコリンは、いずれも反応物として使用され得る。天然フォルスコリンは、典型的には富化抽出物として存在し、使用前に精製される。本発明の文脈において、合成フォルスコリンは、高純度で市販されており、好ましくは、７－ＤＡＦＳＫ合成のための反応物として使用される。
【0041】
したがって、一実施形態において、本発明による複合体は、７－ＤＡＦＳＫが合成フォルスコリンに由来することを特徴とする。好ましい実施形態において、７－ＤＡＦＳＫは、少なくとも９８．５％の純度で存在する。
【0042】
本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、非複合化７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰに比べて向上された水溶性を特徴とし、これは医薬的適用のために有利である。
驚くべきことに、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、７－ＤＡＦＳＫおよびＰＶＰを、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度に加熱することによって合成することで、容易に入手可能であることが見出された。驚くべきことに、この手順は、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率をももたらす。
驚くべきことに、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、７－ＤＡＦＳＫおよびＰＶＰを、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度に加熱することによって合成することで、容易に入手可能であることが見出された。驚くべきことに、この手順は、複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率をももたらす。
【0043】
したがって、本発明は、本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を調製するためのプロセスを含み、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度に加熱されることを特徴とする。
【0044】
非晶質物質として、ＰＶＰは、融点を持たないが、いわゆるガラス転移温度を示す。ガラス転移温度は、とりわけ、ＰＶＰの重合度、すなわち平均モル質量によって異なる（表１参照）。
【0045】
【表1】
【0046】
この文脈において、「使用されるＰＶＰのガラス転移温度」は、７－ＤＡＦＳＫとの本発明の混合物中のＰＶＰのガラス転移が生じる温度として理解されるべきである。使用されるＰＶＰのガラス転移温度は、例えば、溶媒または水が前記混合物に加えられている場合など、混合物の組成によって影響され得る。前記ガラス転移温度を測定するための方法は、当業者に知られている。好ましくは、前記ガラス転移温度は、対応するＤＩＮ規格（Ｗａｍｐｆｌｅｒ Ｂ．、他、Ｍｅｓｓｕｎｓｉｃｈｅｒｈｅｉｔ ｉｎ ｄｅｒ Ｋｕｎｓｔｓｔｏｆｆａｎａｌｙｔｉｋ－Ｅｒｍｉｔｔｌｕｎｇ ｍｉｔ Ｒｉｎｇｖｅｒｓｕｃｈｓｄａｔｅｎ．Ｃａｒｌ Ｈａｎｓｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｍｕｎｉｃｈ２０１７、ＩＳＢＮ－１０：３４４６４５２８６９）の手順に従って測定され得る。
【0047】
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製のための本発明によるプロセスの特に好ましい実施形態は、使用されるＰＶＰの平均モル質量が約２．５ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ１２」）であり、その混合物が９３℃を上回る温度に加熱されることを特徴とする。具体的には、ＰＶＰ Ｋ１２のガラス転移温度を上回る、少なくとも２５℃、特に３０℃、４０℃、４５℃以上の温度に加熱が行われる。
【0048】
別の好ましい実施形態は、使用されるＰＶＰの平均モル質量が約９ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ１７」）であり、その混合物が１３０℃を上回る温度に加熱されることを特徴とする。より具体的には、前記混合物は、ＰＶＰ Ｋ１７のガラス転移温度を上回る、少なくとも２５℃、特に３０℃、４０℃、４５℃以上の温度に加熱される。
【0049】
別の好ましい実施形態は、使用されるＰＶＰの平均モル質量が約２４ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ２５」）であり、その混合物が１５５℃を上回る温度に加熱されることを特徴とする。より具体的には、前記混合物は、ＰＶＰ Ｋ２５のガラス転移温度を上回る、少なくとも２５℃、特に３０℃、４０℃、４５℃以上の温度に加熱される。
【0050】
別の好ましい実施形態は、使用されるＰＶＰの平均モル質量が約４０ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ３０」）であり、その混合物が１７５℃を上回る温度に加熱されることを特徴とする。より具体的には、前記混合物は、ＰＶＰ Ｋ３０のガラス転移温度を上回る、少なくとも２５℃、特に３０℃、４０℃、４５℃以上の温度に加熱される。
【0051】
溶媒または溶媒の混合物を、本発明による７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えることは、有利であることが見出されている。好ましくは、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物は、少量の溶媒中でペーストのように撹拌される。溶媒の添加は、７－ＤＡＦＳＫおよびＰＶＰを均一に分散させる助けとなり得、より多くの量の７－ＤＡＦＳＫをＰＶＰに付着させることができる。適当な溶媒は、水、エタノール、メタノール、プロパノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、および／または酢酸エチルのような、水性溶媒、アルコール溶媒、または他の有機溶媒である。
【0052】
一実施形態において、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製のための本発明によるプロセスは、溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、および／または酢酸エチル、さらにより好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、ジクロロメタン、および／またはピリジンが、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする。特に好ましくは、水および／もしくはエタノールまたはその混合物が、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物に加えられる。水および／またはエタノールの添加は、同時または順次であってもよい。
【0053】
製造プロセスで、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物を、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度で、一定時間保つことは、有用であることが見出されている。前記混合物が、前記ガラス転移温度を上回る温度で、少なくとも５分間保たれた場合、良好な結果が得られた。
【0054】
したがって、本発明によるプロセスの特定の実施形態において、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物は、使用されるＰＶＰのガラス転移温度より高い温度で、少なくとも５分間保たれる。
【0055】
特定の実施形態において、本発明による方法は、順次行われる次のステップを含む。
ａ）７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを前記混合物に加えるステップ、
ｂ）水を加えるステップ、
ｃ）前記混合物を、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）前記混合物を冷却し、水に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ。
ａ）７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを前記混合物に加えるステップ、
ｂ）水を加えるステップ、
ｃ）前記混合物を、前記ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）前記混合物を冷却し、水に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ。
【0056】
一実施形態において、７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰの混合物は、重量比が２：１～１：４、好ましくは２：１、２：１．５、１：１、２：３、１：２、１：３、および１：４、最も好ましくは１：１または１：２で調製される。
【0057】
本発明による方法の適用は、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の効率的で簡単な調製を可能にする。
本発明によるプロセスは、７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率を有する７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製を可能にする。ＰＶＰ複合体を調製するための従来の方法は、溶媒または溶媒混合物に成分を溶解することを含み、この混合物はＰＶＰのガラス転移温度を上回って加熱されない。本明細書で説明される具体的な実施例において、本発明のプロセスは、従来の複合体形成プロセスに比べて、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体における８～９％高い７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率を得られた。
本発明によるプロセスは、７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率を有する７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製を可能にする。ＰＶＰ複合体を調製するための従来の方法は、溶媒または溶媒混合物に成分を溶解することを含み、この混合物はＰＶＰのガラス転移温度を上回って加熱されない。本明細書で説明される具体的な実施例において、本発明のプロセスは、従来の複合体形成プロセスに比べて、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体における８～９％高い７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率を得られた。
【0058】
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体における７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率は、診断および／または治療における医薬的適用のために特に有利である。本発明による複合体における７－ＤＡＦＳＫの高い質量分率を使用することによって、７－ＤＡＦＳＫの水溶性は、不都合に大量のＰＶＰを必要とすることなく向上され得る。フォルスコリン誘導体を用いた製剤処方は、このため、以前より材料をより節約した方法で組み立てられることも可能である。大量のアジュバント（ＰＶＰ）およびそれに伴う副作用を回避することによって、本発明は、診断および／または治療における７－ＤＡＦＳＫの使用を容易にし、また改善する。
【0059】
本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、フォルスコリンおよび／または７－ＤＡＦＳＫが適用可能である任意の食事療法目的または医学的目的のために使用され得る。
したがって、本発明は、有効成分として７－ＤＡＦＳＫを用いた本発明の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を含有する医薬組成物にも関する。
したがって、本発明は、有効成分として７－ＤＡＦＳＫを用いた本発明の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を含有する医薬組成物にも関する。
【0060】
「医薬組成物」という用語は、有効成分として７－ＤＡＦＳＫを用いた本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体であって、任意選択で、追加の成分および／または有効成分と組み合わせた７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体に関して本明細書で使用される。
【0061】
本発明による医薬組成物は、様々な全身製剤および局所製剤で存在する場合がある。本発明の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体を含有する全身製剤または局所製剤の非限定的な例は、経口、口腔内、肺内、直腸、子宮内、皮内、局所、皮膚、非経口、腫瘍内、頭蓋内、頬側、舌下、経鼻、皮下、血管内、髄腔内、吸入可能、呼吸可能、関節内、腔内、埋め込み可能、経皮、イオン導入、眼内、膣内、光学的、静脈内、筋肉内、腺内、臓器内、リンパ管内製剤、腸溶コーティング、または徐放性製剤を含む。
【0062】
前記組成物は、１日に１回または複数回投与されてもよい。好ましい実施形態は、経口、静脈内、または吸入投与のための本発明による医薬組成物に関する。
経口投与のための製剤は、粉末または顆粒として製剤を含有するカプセル、錠剤、またはトローチのような個別の単位で提供されてもよい。経口投与のための製剤は、水性もしくは非水性媒体中の溶液または懸濁液として、あるいはエマルジョンでとして提供されてもよい。
経口投与のための製剤は、粉末または顆粒として製剤を含有するカプセル、錠剤、またはトローチのような個別の単位で提供されてもよい。経口投与のための製剤は、水性もしくは非水性媒体中の溶液または懸濁液として、あるいはエマルジョンでとして提供されてもよい。
【0063】
静脈内投与のための製剤は、水性媒体中の溶液または懸濁液、例えば、生理食塩液として提供され得る。
治療効果または予防効果を得るための７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の具体的な投薬量は、具体的な適用、例えば、投与経路、個々の患者の年齢、体重、および状態、治療される疾患、ならび症状の重症度によって異なる。
治療効果または予防効果を得るための７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の具体的な投薬量は、具体的な適用、例えば、投与経路、個々の患者の年齢、体重、および状態、治療される疾患、ならび症状の重症度によって異なる。
【0064】
本発明による組成物中の７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰの用量は、好ましくは、望ましくない副作用を招くことなく、治療効果または予防効果を得られる有効用量であり、前記組成物は、１回用量としてか、または複数単位で投与され得る。
【0065】
特定の実施形態において、本発明による組成物は、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも５０ｍｇ／Ｌ、７５ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ、２００ｍｇ／Ｌ、３００ｍｇ／Ｌ、４００ｍｇ／Ｌ、５００ｍｇ／Ｌ、６００ｍｇ／Ｌ、８００ｍｇ／Ｌ、または１０００ｍｇ／Ｌの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含む溶液またはエアロゾルとして提供される。好ましい実施形態において、組成物は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、または４ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは４ｍｇ／ｍＬの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含有する。
【0066】
別の特定の実施形態において、本発明による組成物は、薬学的有効量、例えば、１０ｍｇ～２０００ｍｇ、好ましくは、少なくとも２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、または１０００ｍｇ、より好ましくは５００ｍｇで７－ＤＡＦＳＫを含有するカプセルまたは錠剤として提供される。
【0067】
特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、治療法に使用される。
フォルスコリンおよび７－ＤＡＦＳＫが、非特異的ｃＡＭＰ刺激薬であることは知られている。本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、フォルスコリンおよび／または７－ＤＡＦＳＫを用いて治療され得る任意の疾患または障害を治療するために使用され得る。このような疾患の非限定的な例は、神経変性疾患、アルツハイマー病、運動機能障害、急性および慢性の心血管疾患、喘息のような肺疾患、嚢胞性線維症、嚢胞性線維症に伴う血管疾患、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満症、緑内障、関節の炎症、変形性関節症／関節炎、特発性肺線維症のような線維性変性、外傷後肺線維症、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、ＶＰＤまたは肝硬変のような中毒後肝疾患、ならびにレイノー病および強皮症を含む末梢循環障害を含む。
フォルスコリンおよび７－ＤＡＦＳＫが、非特異的ｃＡＭＰ刺激薬であることは知られている。本発明による７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体は、フォルスコリンおよび／または７－ＤＡＦＳＫを用いて治療され得る任意の疾患または障害を治療するために使用され得る。このような疾患の非限定的な例は、神経変性疾患、アルツハイマー病、運動機能障害、急性および慢性の心血管疾患、喘息のような肺疾患、嚢胞性線維症、嚢胞性線維症に伴う血管疾患、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満症、緑内障、関節の炎症、変形性関節症／関節炎、特発性肺線維症のような線維性変性、外傷後肺線維症、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）、ＶＰＤまたは肝硬変のような中毒後肝疾患、ならびにレイノー病および強皮症を含む末梢循環障害を含む。
【0068】
特定の実施形態において、本発明による医薬組成物は、心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、または変形性関節症／関節炎の治療のために使用される。
【0069】
本発明の別の態様は、医薬としての使用のための本発明による医薬組成物に関する。
本発明は、以下に限定されないが、以下の実施例および図によってさらに例示される。
本発明は、以下に限定されないが、以下の実施例および図によってさらに例示される。
【実施例】
【0070】
以下の実施例は、７－ＤＡＦＳＫの合成および７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰとの複合体形成について記載されており、そこにおいて、約２．５ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ１２」）および約２４ｋＤ（「ＰＶＰ Ｋ２５」）の平均モル質量を有するＰＶＰが選択され、ＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの量の比率は変動された。これらの実施例は、７－ＤＡＦＳＫの含有量、その水溶性、およびｃＡＭＰアッセイにおけるｃＡＭＰ活性化剤としての効果という観点から、得られた複合体の特性評価をさらに検討する。これらの実施例は、ＨＰＬＣによる含有量測定の実施、またはＮＭＲスペクトルの測定のような定法の詳細な説明を含まない。このような方法は当業者に周知である。
【0071】
実施例１
７－デアセチルフォルスコリンの合成
Ｍｅｒｃａｃｈｅｍ社の合成フォルスコリン（ＧＭＰ－材料）、バッチＭＡＭＡ０７－０２４－５は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）の合成のための反応物として使用された。フォルスコリンの脱アセチル化は、古典的な炭酸塩鹸化を介して行われた。
７－デアセチルフォルスコリンの合成
Ｍｅｒｃａｃｈｅｍ社の合成フォルスコリン（ＧＭＰ－材料）、バッチＭＡＭＡ０７－０２４－５は、７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）の合成のための反応物として使用された。フォルスコリンの脱アセチル化は、古典的な炭酸塩鹸化を介して行われた。
【0072】
脱アセチル化は、図１に示される反応スキームに従って行われた。最初に、２５０ｍＬ丸底フラスコ内で、２００ｍｇのフォルスコリン（合成フォルスコリン、Ｍｅｒｃａｃｈｅｍ社、バッチＭＡＭＡ０７－０２４－５）および２００ｍｇの焼成されたＮａ２ＣＯ３を、１０ｍＬのメタノール中、室温で４時間撹拌した。次に、反応混合物を一晩（２０時間）静置した。
【0073】
次に、前記フラスコからメタノールを留去し（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）、約２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で溶解状態とした。これを、短時間超音波で処理した（１分）。形成された７－ＤＡＦＳＫを、ＣＨ２Ｃｌ２で溶解状態とし、その塩を沈殿させた。前記塩を濾去した（中速濾過）。次に、分液漏斗で、濾液を２ｎのＨＣｌを用いて洗浄した。ジクロロメタン画分を回収し、ｒｏｔａｖａｐｏｒでその溶媒を留去した。得られた白色粉末を、ＨＰＬＣによって分析した。９９％を超える純度が測定された。
【0074】
７－ＤＡＦＳＫの構造は、１Ｈ ＮＭＲ １３Ｃ ＮＭＲによって確認された。得られた７－ＤＡＦＳＫの測定された１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、この化合物の過去に公表されたスペクトルと同じである（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００６、７１、４６１９～４６２４ページ）。これは、図１に示される反応スキームに従ったフォルスコリンの望ましい脱アセチル化を明確にした。
【0075】
得られた７－ＤＡＦＳＫをＨＰＬＣによってさらに特徴付けた。デアセチルフォルスコリンおよびフォルスコリンを、アセトニトリル／水（５５／４５ｖ／ｖ）の移動相を用いて、０．６ｍＬ／分の流速で溶出した（固定相：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ１２０ ３Ｃ１８、２５０×４ｍｍ）。ＰＶＰとの複合体中の７－ＤＡＦＳＫ含有量の定量のために、検量線を用意した。７－ＤＡＦＳＫ濃度が０．０１４、０．０２８、０．０５６、および０．５６ｍｇ／ｍＬの較正溶液を較正のために使用した。
【0076】
実施例２
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製
７－デアセチル－フォルスコリン自体は、水に対して中程度にのみ可溶性であるため、７－ＤＡＦＳＫは、その水溶性を向上させるためにＰＶＰと複合化された。７－ＤＡＦＳＫ複合体は、これ以降「加熱法」と言われる本発明の方法によって調製され、加熱しない従来の溶解（「溶解法」）と比較された。
１．ＰＶＰをそのガラス転移温度を上回って加熱することによる７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製（「加熱処理」）
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体（７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰ Ｋ１２との複合体）
７－デアセチル－フォルスコリンのＰＶＰ Ｋ１２（「Ｋｏｌｌｉｄｏｎ」１２ＰＦ、欧州薬局方、米国薬局方、日本薬局方；ＢＡＳＦ、平均モル質量：約２．５ｋＤ）との複合体形成のため、磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび２０ｍｇのＰＶＰ Ｋ１２を粉砕し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、乾燥炉内で、この溶液を４０分以内に１４０℃に加熱し、乾燥炉内に合計４５分間放置した。冷却後、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。測定のために、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体溶液を、現行の媒体（ｒｕｎｎｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて１：１０に希釈した。３５ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製
７－デアセチル－フォルスコリン自体は、水に対して中程度にのみ可溶性であるため、７－ＤＡＦＳＫは、その水溶性を向上させるためにＰＶＰと複合化された。７－ＤＡＦＳＫ複合体は、これ以降「加熱法」と言われる本発明の方法によって調製され、加熱しない従来の溶解（「溶解法」）と比較された。
１．ＰＶＰをそのガラス転移温度を上回って加熱することによる７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製（「加熱処理」）
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体（７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰ Ｋ１２との複合体）
７－デアセチル－フォルスコリンのＰＶＰ Ｋ１２（「Ｋｏｌｌｉｄｏｎ」１２ＰＦ、欧州薬局方、米国薬局方、日本薬局方；ＢＡＳＦ、平均モル質量：約２．５ｋＤ）との複合体形成のため、磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび２０ｍｇのＰＶＰ Ｋ１２を粉砕し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、乾燥炉内で、この溶液を４０分以内に１４０℃に加熱し、乾燥炉内に合計４５分間放置した。冷却後、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。測定のために、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体溶液を、現行の媒体（ｒｕｎｎｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ）を用いて１：１０に希釈した。３５ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
【0077】
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ２５複合体（７－ＤＡＦＳＫのＰＶＰ Ｋ２５との複合体）
７－デアセチル－フォルスコリンのＰＶＰ Ｋ２５（ＦＬＵＫＡ８１３９９、平均モル質量：約２４ｋＤ）との複合体形成のため、磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび２０ｍｇのＰＶＰ Ｋ２５を粉砕し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、乾燥炉内で、この溶液を４０分以内に１８５℃に加熱し、乾燥炉内に合計４５分間放置した。冷却後、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。測定のために、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ ２５複合体溶液を、現行の媒体を用いて１：１０に希釈した。１７ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
２．溶解プロセスによる７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体
磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ Ｋ１２をすり潰し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。２４ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
７－デアセチル－フォルスコリンのＰＶＰ Ｋ２５（ＦＬＵＫＡ８１３９９、平均モル質量：約２４ｋＤ）との複合体形成のため、磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび２０ｍｇのＰＶＰ Ｋ２５を粉砕し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、乾燥炉内で、この溶液を４０分以内に１８５℃に加熱し、乾燥炉内に合計４５分間放置した。冷却後、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。測定のために、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ ２５複合体溶液を、現行の媒体を用いて１：１０に希釈した。１７ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
２．溶解プロセスによる７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の調製
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体
磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ Ｋ１２をすり潰し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。２４ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
【0078】
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ２５複合体
磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５をすり潰し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。８ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
磁製るつぼ内で、２０ｍｇの７－ＤＡＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５をすり潰し、３００μＬのエタノールを加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解された７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。８ｗｔ％の複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率が測定された。
【0079】
実施例３
水溶性の測定
溶解度試験には、ロータリーエバポレーターを使用して乾燥させたそれぞれの複合体が使用された。規定した量の水を加え、次に、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰが過剰となるまで複合体を加える。この過飽和溶液を超音波で処理し、撹拌し、わずかに加熱する（水浴４０℃）。次に、この懸濁液を濾過し（０．４５μｍフィルター）、この濾液中の７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定する。
水溶性の測定
溶解度試験には、ロータリーエバポレーターを使用して乾燥させたそれぞれの複合体が使用された。規定した量の水を加え、次に、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰが過剰となるまで複合体を加える。この過飽和溶液を超音波で処理し、撹拌し、わずかに加熱する（水浴４０℃）。次に、この懸濁液を濾過し（０．４５μｍフィルター）、この濾液中の７－ＤＡＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定する。
【0080】
実施例４
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の特性評価
複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率
図２は、２０対２０のＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの比率が選択された７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２および７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ ２５複合体中の測定された７－ＤＡＦＳＫ含有量の図表を示す。ここでは、加熱法と溶解法に区別される。全ての複合体において、７－ＤＡＦＳＫの塩に関して、この２つの方法の間に明確な差異が認められる。加熱法を使用して、最終的な複合体中、７－ＤＡＦＳＫの塩の８～９％高い含有量が得られ得る。７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体は、７－ＤＡＦＳＫの最も高い含有量を示す（約３５ｗｔ％）。
７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ複合体の特性評価
複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの質量分率
図２は、２０対２０のＰＶＰに対する７－ＤＡＦＳＫの比率が選択された７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２および７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ ２５複合体中の測定された７－ＤＡＦＳＫ含有量の図表を示す。ここでは、加熱法と溶解法に区別される。全ての複合体において、７－ＤＡＦＳＫの塩に関して、この２つの方法の間に明確な差異が認められる。加熱法を使用して、最終的な複合体中、７－ＤＡＦＳＫの塩の８～９％高い含有量が得られ得る。７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体は、７－ＤＡＦＳＫの最も高い含有量を示す（約３５ｗｔ％）。
【0081】
複合体全体中の７－ＤＡＦＳＫの含有量を最適化するため、使用された７－ＤＡＦＳＫとＰＶＰ Ｋ１２の重量比を変動した（図３）。図３からわかるとおり、７－ＤＡＦＳＫ／ＰＶＰ Ｋ１２の比率を変動したとしても、この方法によって７－ＤＡＦＳＫ（２０ｍｇ）と複合化され得るのは、使用された材料の５０～６０％以下であった。ＰＶＰ １２の量を増加したにもかかわらず、最終的な複合体中の複合化された７－ＤＡＦＳＫの最終的な量があまり変わらないことは明白である。加熱による調製後、溶解プロセスの間に、非複合化７－ＤＡＦＳＫがどれくらい溶解状態になるかを確認するため、複合体サンプルと同じ方法で処理された対照サンプル（ＰＶＰ １２を含まず、７－ＤＡＦＳＫのみ）が検討された。ここで、使用された７－ＤＡＦＳＫの４分の１未満が溶解状態になり得ると考えられる。したがって、ＰＶＰとの複合体形成は、７－ＤＡＦＳＫの溶解性の向上を成し遂げる。
【0082】
加熱前に、溶媒の量を増加することによっても、ＰＶＰ Ｋ１２との複合体中により多くの量の７－ＤＡＦＳＫを組み込むことは不可能であった。
図４は、極めて少量のＰＶＰを用いたにもかかわらず、同程度の結果を得ることができたことを示す。
図４は、極めて少量のＰＶＰを用いたにもかかわらず、同程度の結果を得ることができたことを示す。
【0083】
報告された７－ＤＡＦＳＫの含有量ｗｔ％は、ＨＰＬＣによって測定された。計算上、６ｍＬのＨ２Ｏで溶解した場合、ＰＶＰの全量が溶解状態になると仮定された。
水溶性
表２は、７－ＤＡＦＳＫの水溶性における顕著な向上が、ＰＶＰとの複合体形成によって可能であることを示す。ＰＶＰとの複合体中の７－ＤＡＦＳＫの溶解性は、非複合化７－ＤＡＦＳＫの溶解性より最大３倍高い。７－ＤＡＦＳＫとは対照的に、フォルスコリンは、その立体構造のためにＰＶＰとはほとんど溶解されず、ＰＶＰとの複合化もし得ない。
水溶性
表２は、７－ＤＡＦＳＫの水溶性における顕著な向上が、ＰＶＰとの複合体形成によって可能であることを示す。ＰＶＰとの複合体中の７－ＤＡＦＳＫの溶解性は、非複合化７－ＤＡＦＳＫの溶解性より最大３倍高い。７－ＤＡＦＳＫとは対照的に、フォルスコリンは、その立体構造のためにＰＶＰとはほとんど溶解されず、ＰＶＰとの複合化もし得ない。
【0084】
図５は、ＤＡＦＳＫ／ＰＶＰの比率を変えても、その水溶性はあまり変わることがないことを示す。その値は、２．５ｍｇ／ｍＬ～３．５ｍｇ／ｍＬの間で変動する。これは、各比率において、複合体のほぼ同じ割合の７－ＤＡＦＳＫ（５０～６０％）が複合化され、各比率は、その複合体の水溶性をあまり変えることはないという事実に起因する。
【0085】
【表2】
【0086】
実施例５
細胞培養試験：ｃＡＭＰアッセイ
ｃＡＭＰアッセイは、プロスタグランジン受容体ＥＰ２もしくはＥＰ４、またはプロスタサイクリン受容体ＩＰを有するＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎細胞、１９７０）を使用して実施された。ＨＥＫ２９３細胞を、ＦＣＳおよび放射性リガンド（［３Ｈ］アデニン）と共にインキュベートした。ｃＡＭＰ（［３Ｈ］ｃＡＭＰ）の形成を実験的にモニターした。
細胞培養試験：ｃＡＭＰアッセイ
ｃＡＭＰアッセイは、プロスタグランジン受容体ＥＰ２もしくはＥＰ４、またはプロスタサイクリン受容体ＩＰを有するＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎細胞、１９７０）を使用して実施された。ＨＥＫ２９３細胞を、ＦＣＳおよび放射性リガンド（［３Ｈ］アデニン）と共にインキュベートした。ｃＡＭＰ（［３Ｈ］ｃＡＭＰ）の形成を実験的にモニターした。
【0087】
フォルスコリン（ＤＭＳＯに溶解）、ならびに水に溶解された７－ＤＡＦＳＫおよび７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰによるアデニリルシクラーゼ（ＡＣ）の活性化が比較された。ＥＰ２およびＥＰ４受容体を介したＡＣの活性化における３種のフォルスコリン誘導体間には、わずかな違いがあり、ＩＰ受容体の活性化には、有意差がない（図６）。
【0088】
３種全てのフォルスコリン誘導体が、トレプロスチニルの存在下でさえも、前述の受容体を介してアデニリルシクラーゼを活性化する。トレプロスチニル単独（対照サンプル）では、ＡＣの活性化を示さない。フォルスコリン、７－ＤＡＦＳＫ、および７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰが対照を上回って活性を増強したことは、図６において明白である。したがって、これらの結果は、７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰがアデニリルシクラーゼの適当な刺激薬であることを示唆している。
【0089】
アッセイは、以下のとおり実施された。
１日目：ＥＰ２、ＥＰ４、またはＩＰ受容体のいずれかを安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を、６－ウェルプレートの１０％ＦＣＳおよび２μＣｉ［３Ｈ］－アデニンを含有する２ｍＬのＤＭＥＭ培地中で増殖させ、１６時間培養した。
１日目：ＥＰ２、ＥＰ４、またはＩＰ受容体のいずれかを安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を、６－ウェルプレートの１０％ＦＣＳおよび２μＣｉ［３Ｈ］－アデニンを含有する２ｍＬのＤＭＥＭ培地中で増殖させ、１６時間培養した。
【0090】
２日目：細胞を、３０μＭのトレプロスチニル単独で、または３０μｍのフォルスコリンＤＭＳＯ溶液、１００μＭの７－ＤＡＦＳＫ水溶液、もしくは１００μＭの７－ＤＡＦＳＫを含む７－ＤＡＦＳＫ－ＰＶＰ Ｋ１２複合体水溶液と組み合わせて刺激した（新たな培地中、室温で３０分間）。次に、２．５％過塩素酸（ＰＣＡ）を用いて、細胞を氷冷下で３０分間溶解した。このＰＣＡ抽出物を、ＫＯＨを用いて中和し、ＤＯＷＥＸおよびアルミナカラムを使用した連続クロマトグラフィーによって、［３Ｈ］ｃＡＭＰを分離した。次に、シンチレータを使用して放射能を測定した。
【0091】
各ウェルからの一定量のＰＣＡ抽出物を使用して放射能を測定した。
実施例６
溶解法によってフォルスコリン－ＰＶＰ複合体を調製する試み
磁製るつぼ内で、２０ｍｇのＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５を粉砕し、３００μＬのエタノール（代替としてプロパノール）を加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解されたＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。０．０１ｗｔ％未満の複合体全体におけるＦＳＫの質量分率が測定された。ＦＳＫは、ＨＰＬＣによって濾液中に検出できなかった。
実施例６
溶解法によってフォルスコリン－ＰＶＰ複合体を調製する試み
磁製るつぼ内で、２０ｍｇのＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５を粉砕し、３００μＬのエタノール（代替としてプロパノール）を加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解されたＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。０．０１ｗｔ％未満の複合体全体におけるＦＳＫの質量分率が測定された。ＦＳＫは、ＨＰＬＣによって濾液中に検出できなかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2022-09-26
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体。
【請求項2】
ＰＶＰが、１～４０ｋＤ、好ましくは２～２５ｋＤ、特に好ましくは約２．５ｋＤの、重量平均モル質量に対する平均モル質量を有することを特徴とする、請求項１に記載の複合体。
【請求項3】
７－ＤＡＦＳＫが、合成フォルスコリンに由来することを特徴とする、請求項１又は２に記載の複合体。
【請求項4】
複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０重量％の範囲内、好ましくは３０重量％以上であることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項5】
７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度に加熱されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の複合体の調製のためのプロセス。
【請求項6】
溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、及び／又は酢酸エチル、より好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、及び／又はジクロロメタン、さらにより好ましくは水及び／若しくはエタノール又はその混合物が、７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする、請求項５に記載のプロセス。
【請求項7】
前記混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度で、少なくとも５分間保たれることを特徴とする、請求項５又は６に記載のプロセス。
【請求項8】
ａ）７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを該混合物に加えるステップ、ｂ）水又は水溶液を加えるステップ、
ｃ）混合物を、ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）混合物を冷却し、水又は水溶液に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ
を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
請求項１～４のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。
【請求項10】
医薬としての使用のための、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ、１０００ｍｇ／ｍＬ、２０００ｍｇ／ｍＬ、３０００ｍｇ／ｍＬ、又は４０００ｍｇ／ｍＬ、特に好ましくは４０００ｍｇ／ｍＬの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含有することを特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項12】
静脈内、経口、又は吸入投与のための、請求項９又は１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、又は変形性関節症／関節炎の治療における使用のための、請求項９～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0091】
各ウェルからの一定量のＰＣＡ抽出物を使用して放射能を測定した。
実施例６
溶解法によってフォルスコリン－ＰＶＰ複合体を調製する試み
磁製るつぼ内で、２０ｍｇのＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５を粉砕し、３００μＬのエタノール（代替としてプロパノール）を加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解されたＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。０．０１ｗｔ％未満の複合体全体におけるＦＳＫの質量分率が測定された。ＦＳＫは、ＨＰＬＣによって濾液中に検出できなかった。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体。
［態様２］ＰＶＰが、１～４０ｋＤ、好ましくは２～２５ｋＤ、特に好ましくは約２．５ｋＤの、重量平均モル質量に対する平均モル質量を有することを特徴とする、態様１に記載の複合体。
［態様３］７－ＤＡＦＳＫが、合成フォルスコリンに由来することを特徴とする、態様１又は２に記載の複合体。
［態様４］複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０重量％の範囲内、好ましくは３０重量％以上であることを特徴とする、態様１～３のいずれか１に記載の複合体。
［態様５］７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度に加熱されることを特徴とする、態様１～４のいずれか１に記載の複合体の調製のためのプロセス。
［態様６］溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、及び／又は酢酸エチル、より好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、及び／又はジクロロメタン、さらにより好ましくは水及び／若しくはエタノール又はその混合物が、７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする、態様５に記載のプロセス。
［態様７］前記混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度で、少なくとも５分間保たれることを特徴とする、態様５又は６に記載のプロセス。
［態様８］ａ）７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを該混合物に加えるステップ、
ｂ）水又は水溶液を加えるステップ、
ｃ）混合物を、ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）混合物を冷却し、水又は水溶液に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ
を含む、態様５～７のいずれか１に記載の方法。
［態様９］態様１～４のいずれか１に記載の複合体を含む、医薬組成物。
［態様１０］医薬としての使用のための、態様９に記載の医薬組成物。
［態様１１］前記組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ、１０００ｍｇ／ｍＬ、２０００ｍｇ／ｍＬ、３０００ｍｇ／ｍＬ、又は４０００ｍｇ／ｍＬ、特に好ましくは４０００ｍｇ／ｍＬの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含有することを特徴とする、態様９に記載の医薬組成物。
［態様１２］静脈内、経口、又は吸入投与のための、態様９又は１１に記載の医薬組成物。
［態様１３］治療法における使用のための、態様９～１２に記載の医薬組成物。
［態様１４］心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、又は変形性関節症／関節炎の治療における使用のための、態様９～１３のいずれか１に記載の医薬組成物。
実施例６
溶解法によってフォルスコリン－ＰＶＰ複合体を調製する試み
磁製るつぼ内で、２０ｍｇのＦＳＫおよび４０ｍｇのＰＶＰ ２５を粉砕し、３００μＬのエタノール（代替としてプロパノール）を加えて撹拌した。１０分後、１００μＬのＨ２Ｏを加え、撹拌し、再度１０分間静置した。次に、この溶液を室温で４５分間静置し、３ｍＬのＨ２Ｏを加え、２０～３０分間撹拌した。次に、この懸濁液をシリンジで吸い上げ、０．４５μｍフィルター（親水性）を通して濾過した。前記るつぼを、３ｍＬのＨ２Ｏで再洗浄し、この洗浄溶液も前記フィルターを通して濾過した。６ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解されたＦＳＫの含有量を、ＨＰＬＣによって測定した。０．０１ｗｔ％未満の複合体全体におけるＦＳＫの質量分率が測定された。ＦＳＫは、ＨＰＬＣによって濾液中に検出できなかった。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］７－デアセチル－フォルスコリン（７－ＤＡＦＳＫ）及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）の複合体。
［態様２］ＰＶＰが、１～４０ｋＤ、好ましくは２～２５ｋＤ、特に好ましくは約２．５ｋＤの、重量平均モル質量に対する平均モル質量を有することを特徴とする、態様１に記載の複合体。
［態様３］７－ＤＡＦＳＫが、合成フォルスコリンに由来することを特徴とする、態様１又は２に記載の複合体。
［態様４］複合体全体における７－ＤＡＦＳＫの平均質量分率が、１～５０重量％の範囲内、好ましくは３０重量％以上であることを特徴とする、態様１～３のいずれか１に記載の複合体。
［態様５］７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度に加熱されることを特徴とする、態様１～４のいずれか１に記載の複合体の調製のためのプロセス。
［態様６］溶媒、好ましくは水、エタノール、メタノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジクロロメタン、及び／又は酢酸エチル、より好ましくは水、エタノール、メタノール、プロパノール、及び／又はジクロロメタン、さらにより好ましくは水及び／若しくはエタノール又はその混合物が、７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物に加えられることを特徴とする、態様５に記載のプロセス。
［態様７］前記混合物が、使用されるＰＶＰのガラス転移温度を上回る温度で、少なくとも５分間保たれることを特徴とする、態様５又は６に記載のプロセス。
［態様８］ａ）７－ＤＡＦＳＫ及びＰＶＰの混合物を調製し、溶媒、好ましくはアルコール、好ましくはエタノールを該混合物に加えるステップ、
ｂ）水又は水溶液を加えるステップ、
ｃ）混合物を、ＰＶＰのガラス転移温度を上回って、少なくとも５分間加熱するステップ、
ｄ）混合物を冷却し、水又は水溶液に溶解するステップ、
ｅ）溶解しなかった成分を、任意選択で、濾過することによって除去するステップ
を含む、態様５～７のいずれか１に記載の方法。
［態様９］態様１～４のいずれか１に記載の複合体を含む、医薬組成物。
［態様１０］医薬としての使用のための、態様９に記載の医薬組成物。
［態様１１］前記組成物が、少なくとも２５ｍｇ／Ｌ、好ましくは、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ、１０００ｍｇ／ｍＬ、２０００ｍｇ／ｍＬ、３０００ｍｇ／ｍＬ、又は４０００ｍｇ／ｍＬ、特に好ましくは４０００ｍｇ／ｍＬの濃度で７－ＤＡＦＳＫを含有することを特徴とする、態様９に記載の医薬組成物。
［態様１２］静脈内、経口、又は吸入投与のための、態様９又は１１に記載の医薬組成物。
［態様１３］治療法における使用のための、態様９～１２に記載の医薬組成物。
［態様１４］心血管疾患、気管支喘息、肥満症、緑内障、肺疾患、関節の炎症、又は変形性関節症／関節炎の治療における使用のための、態様９～１３のいずれか１に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】