特表 2023-511656 ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-22

(54)【発明の名称】ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07H 19/10 20060101AFI20230314BHJP

   C07F 9/6558 20060101ALI20230314BHJP

【ＦＩ】

C07H19/10

C07F9/6558 CSP

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022537892

(86)(22)【出願日】2020-12-17

(85)【翻訳文提出日】2022-06-16

(86)【国際出願番号】 KR2020018514

(87)【国際公開番号】W WO2021125819

(87)【国際公開日】2021-06-24

(31)【優先権主張番号】10-2019-0169482

(32)【優先日】2019-12-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522242498

【氏名又は名称】チョングンダン ファーマスーティカル株式会社

【氏名又は名称原語表記】ＣＨＯＮＧ ＫＵＮ ＤＡＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯＲＰ．

【住所又は居所原語表記】８， Ｃｈｕｎｇｊｅｏｎｇ－ｒｏ， Ｓｅｏｄａｅｍｕｎ－ｇｕ， Ｓｅｏｕｌ ０３７４２， Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ

(74)【代理人】

【識別番号】110001999

【氏名又は名称】弁理士法人はなぶさ特許商標事務所

(72)【発明者】

【氏名】リーム，ヒョンジョン

(72)【発明者】

【氏名】リー，セヨンウク

(72)【発明者】

【氏名】チョ，ギョンヒ

(72)【発明者】

【氏名】カン，スンコン

(72)【発明者】

【氏名】リム，ジョンラエ

【テーマコード（参考）】

4C057

4H050

【Ｆターム（参考）】

4C057AA22

4C057BB02

4C057DD03

4C057LL10

4C057LL18

4C057LL22

4H050AA01

4H050AA02

4H050AB20

4H050AB84

4H050WA17

4H050WA23

(57)【要約】

本発明のウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法は、（ステップ１）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）の塩を酸で脱塩し、化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を製造するステップ；（ステップ２）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を３級アミン、カルボジイミド類の縮合剤およびイミダゾールと反応させ、化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを製造するステップ；および（ステップ３）化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを一リン酸化剤および３級アミンと反応させ、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物を製造するステップを含む。これによれば、イオン交換樹脂を用いた脱塩工程を経ないため工程を簡素化することができ、さらには、別途の生産設備を設けることなく比較的に簡単な工程で大量生産が可能であるため商業的に有用に利用することができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ステップ１）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）の塩を酸で脱塩し、化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を製造するステップ；
（ステップ２）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を３級アミン、カルボジイミド類の縮合剤およびイミダゾールと反応させ、化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを製造するステップ；および
（ステップ３）化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを一リン酸化剤および３級アミンと反応させ、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物を製造するステップ
を含む、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法：
［化学式２ａ］

【化1】

［化学式２ｂ］

【化2】

［化学式３ａ］

【化3】

。

【請求項2】

前記ステップ１の酸は、硫酸または塩酸である、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項3】

前記ステップ１は、反応溶媒として水とアルコールの混合溶媒を用いる、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項4】

前記ステップ２のカルボイミド類の縮合剤は、
１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボイミド（ＥＤＣＩ）またはその塩、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）からなる群から選択される少なくともいずれか一つである、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項5】

前記ステップ２の３級アミンは、トリエチルアミン、トリブチルアミンおよびジイソプロピルエチルアミンからなる群から選択される少なくともいずれか一つである、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項6】

前記ステップ３は、反応溶媒としてアセトン、アルコール、アセトニトリルおよびＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドからなる群から選択される少なくともいずれか一つを用いる、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項7】

前記ステップ３の一リン酸化剤および３級アミンは、それぞれ化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド１モル当量に対して１．０モル当量～１０．０モル当量で用いられる、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項8】

前記ステップ３の一リン酸化剤および３級アミンのモル当量の比は１：１である、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはそ
の水和物の製造方法。

【請求項9】

前記ステップ３の後に、
（ステップ４－１）化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を吸着精製および溶出により化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を製造するステップ；
（ステップ４－２）化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）をその金属塩に転換して固体化するステップ；および
（ステップ４－３）ウリジン５’－二リン酸の金属塩を化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物に転換するステップをさらに含む、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項10】

前記ステップ４－１の吸着精製に用いられる吸着剤は、活性炭である、請求項９に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項11】

前記ステップ４－１の溶出に用いられる溶出液は、薄い塩酸、薄いアンモニア水および塩化ナトリウム水溶液からなる群から選択される少なくともいずれか一つである、請求項９に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項12】

前記ステップ４－２で製造されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の金属塩は、２価のカチオン金属塩である、請求項９に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【請求項13】

化学式３ｂで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）カルシウム塩。
［化学式３ｂ］

【化4】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ジヌクレオシドポリリン酸化合物の製造に用いられる中間体化合物であるウリジン５’－二リン酸（以下、ＵＤＰと表記）の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

一般に、下記式１で表される化合物であるＰ^１，Ｐ^４－ジ（ウリジン５’－）四リン酸（以下、「ＵＰ_４Ｕ」と表記）またはその塩は、眼球乾燥症または涙液分泌減少症に伴う角結膜上皮障害の治療剤として用いられており、痰排出誘導作用を有するため、去痰剤または肺炎治療剤として開発が期待されている化合物である。
［化学式１］

【化1】

国際公開公報第１９９９／０５１５５号には、ウリジン、ウリジン５’－一リン酸（以下、ＵＭＰと表記）、ＵＤＰまたはウリジン５’－三リン酸（以下、ＵＴＰと表記）およびこれらのそれぞれの塩とウリジンヌクレオチド化合物を極性非プロトン性有機溶媒および疎水性アミンに溶解させ、一リン酸化剤または二リン酸化剤をリン酸化剤として用いてリン酸化反応させ、カルボジイミド、活性カルボニルまたは活性インを活性化剤として用いてＵＰ_４Ｕを製造する方法について報告されている。
また、大韓民国公開特許第１０－２０１８－００９１６７２号（２０１８．０８．１６．公開）によれば、下記化学式２ａ、３ａ、４ａで表されるヌクレオシドリン酸化合物を出発物質としてカルボジイミド類の縮合剤および金属イオンを環境に優しい溶媒である水の存在下で反応させ、高収率および高純度のＵＰ_４Ｕを製造する方法について報告されている。
［化学式２ａ］

【化2】

［化学式３ａ］

【化3】

［化学式４ａ］

【化4】

Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７、５２、１７９４－１８０１には、ウリジンと二リン酸化剤を反応してＵＤＰを合成する方法が報告されているが、収率が低く、別のイオン交換樹脂精製が必要であるため、商業的に生産するには難しさがある。
また、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ３６：３３９３－３３９９、２００６には、ＵＭＰをウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドに転換した後、リン酸およびトリアルキルアミン塩と反応してＵＤＰを合成する方法が報告されている。しかし、このような製造方法は、収率が低く、副産物が多く生成されてアニオン交換樹脂および高速タンパク質液体クロマトグラフィー（Ｆａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＦＰＬＣ）を用いた精製がさらに必要であるため、商業的に生産するには難しさがある。
したがって、上記のような理由で、ＵＤＰを経済的に合成するために、効率的な精製を介して商業的にＵＤＰを合成可能な製造方法が求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】国際公開公報第１９９９／０５１５５号

【特許文献2】韓国公開特許第１０－２０１８－００９１６７２号

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ３６、３３９３－３３９９、２００６（２００６．１１．２３．公開）

【非特許文献2】Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７、５２、１７９４－１８０１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、純度および収率を向上させながらも、大量生産に好適であり、経済的な、ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明においては、高価なＵＤＰを経済的に合成するために、ＵＭＰを出発物質としてウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを合成した後、それを一リン酸化剤および３級アミンと反応して粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを合成し、イオン交換樹脂精製を経ない効率的な精製を介して商業的にＵＤＰを合成可能な製造方法を提供しようとする。
本発明に係る化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法は、
（ステップ１）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）の塩を酸で脱塩し、化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を製造するステップ；
（ステップ２）化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を３級アミン、カルボジイミド類の縮合剤およびイミダゾールと反応させ、化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを製造するステップ；および
（ステップ３）化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを一リン酸化剤および３級アミンと反応させ、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物を製造するステップを含む。
［化学式２ａ］

【化5】

［化学式２ｂ］

【化6】

［化学式３ａ］

【化7】

【0007】

ステップ１
前記ステップ１の化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）の塩は、ＵＭＰ金属塩であってもよい。前記ＵＭＰ金属塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、セリウム、鉄、ニッケル、銅、亜鉛およびホウ素からなる群から選択されてもよく、好ましくは、リチウム、ナトリウムまたはカリウムのアルカリ金属塩、およびカルシウムまたはマグネシウムのアルカリ土類金属塩であってもよい。

【0008】

一実施形態において、前記ステップ１の脱塩工程で用いられる酸は、硝酸、硫酸または塩酸であってもよい。この際、酸は、ＵＭＰ １モル当量に対して０．８モル当量～１．２モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、０．９モル当量～１．１モル当量の量で用いられてもよい。

【0009】

一実施形態において、前記ステップ１の反応溶媒としてアルコールと水の混合溶媒を用いてもよく、アルコールと水の混合比率は、４：１～１０：１の範囲であってもよく、好ましくは、６：１～８：１であってもよい。前記反応に用いられるアルコールの種類は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノールまたはイソブタノールであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上混合して用いられてもよい。前記ステップ１の反応溶媒として用いられるアルコールは、好ましくは、メタノールまたはエタノールであってもよい。
前記ステップ１の反応温度は、１０℃～４０℃の範囲であってもよく、好ましくは、２０℃～３０℃の範囲であってもよい。また、前記ステップ１の反応時間は、１０分～６０分の範囲であってもよく、好ましくは、２０分～４０分であってもよい。ただし、これに限定されない。

【0010】

一実施形態において、前記ＵＭＰ金属塩がＵＭＰナトリウム塩である場合、前記ステップ１の反応は、下記反応式１のように表すことができる。
［反応式１］

【化8】

前記ステップ１によれば、ＵＭＰ金属塩を、イオン交換樹脂を用いることなく、アルコールと水の混合溶媒下で酸で脱塩し、容易にＵＭＰ遊離酸に転換することができる。
前記ステップ１においては、イオン交換樹脂を用いることなく、化学式２ａで表されるウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）を製造することができるため、反応ステップおよび反応時間を減らすことができ、それに応じた不純物の発生を最小化することができる。

【0011】

ステップ２
前記ステップ２は、前記ステップ１により得られたＵＭＰ遊離酸を用いて、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを製造するステップである。
前記ステップ２のカルボジイミド類の縮合剤は、Ｒ_１－Ｎ＝Ｎ－Ｒ_２（この際、Ｒ_１およびＲ_２は、互いに同一または異なり、それぞれ独立して、炭素数１～６の直鎖、分岐鎖もしくは環状のアルキル基であり、前記アルキル基は、アルキルアミン基で選択的に置換されていてもよい）で表される化合物であって、縮合反応において反応助剤として添加される。

【0012】

前記ステップ２におけるカルボジイミド類の縮合剤は、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボイミド（ＥＤＣＩ）またはその塩、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上混合して用いられてもよい。この際、カルボジイミド類の縮合剤は、ＵＭＰ１モル当量（ｍｏｌｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）に対して１モル当量～３モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、１．５モル当量～２．５モル当量で用いられてもよい。

【0013】

前記ステップ２における３級アミンは、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上混合して用いられてもよい。好ましくは、前記ステップ２における３級アミンは、トリブチルアミンであってもよい。この際、用いられる３級アミンは、ＵＭＰ１モル当量に対して１モル当量～２モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、１．４モル当量～１．６モル当量で用いられてもよい。
前記ステップ２におけるイミダゾールは、ＵＭＰ１モル当量に対して１モル当量～３モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、１．５モル当量～２．５モル当量で用いられてもよい。

【0014】

前記ステップ２の反応溶媒は、アルコールと水の混合溶媒であってもよい。この際、アルコールと水の混合比率は、４：１～１０：１の範囲であってもよく、好ましくは、６：１～８：１であってもよい。前記反応に用いられるアルコールの種類は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノールまたはイソブタノールであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上混合して用いられてもよい。前記ステップ２の反応溶媒といて用いられるアルコールは、好ましくは、メタノールまたはエタノールであってもよい。

【0015】

前記ステップ２の反応温度は、６０℃～８０℃の範囲であってもよく、好ましくは、６５℃～７５℃の範囲であってもよい。また、前記ステップ２の反応時間は、３０分～１２
０分の範囲であってもよく、好ましくは、６０分～９０分であってもよい。ただし、これに限定されない。

【0016】

一実施形態において、前記化学式２ｂで表されるウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを製造するステップであるステップ２は、下記反応式２のように表すことができる。
［反応式２］

【化9】

【0017】

ステップ３
前記ステップ３で用いられる一リン酸化剤は、リン酸（Ｈ_３ＰＯ_４）またはＢｕ_３ＮＨ・Ｈ_２ＰＯ_４などのようなリン酸の３級アミン塩であってもよい。前記ステップ３の一リン酸化剤は、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド１モル当量に対して１モル当量～１０モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、２モル当量～４モル当量の量で用いられてもよい。

【0018】

前記ステップ３の３級アミンに関する説明は、前記ステップ２にて説明したものと実質的に同様であるため、重複する詳細な説明は省略する。前記ステップ３の３級アミンとしては、前記ステップ２で用いられた３級アミンと同一種類のものを用いてもよく、他種類のものを用いてもよい。この際、前記ステップ３の３級アミンは、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド１モル当量に対して１モル当量～１０モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、２モル当量～４モル当量の量で用いられてもよい。

【0019】

一実施形態において、前記ステップ３の一リン酸化剤および３級アミンのモル当量の比は１：１であってもよい。

【0020】

前記ステップ３の反応溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノールなどのアルコール、アセトン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミドなどであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上を混合して用いられてもよい。一実施形態において、前記ステップ３の反応溶媒は、メタノールまたはアセトンであってもよい。

【0021】

前記ステップ３の反応温度は、２０℃～５０℃の範囲であってもよく、好ましくは、３０℃～４０℃の範囲であってもよい。また、前記ステップ３の反応時間は、３０分～１８０分の範囲であってもよく、好ましくは、６０分～１２０分であってもよい。

【0022】

一実施形態において、前記ステップ３は、下記反応式３のようにウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドを一リン酸化剤および３級アミンと反応させて行われてもよい。前記ステップ３の結果として、前記化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを得ることができる。
［反応式３］

【化10】

【0023】

精製工程：ステップ４－１～４－３
一実施形態において、本発明に係る化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法は、前記ステップ３を行った後、前記ステップ３で得られた粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを精製し、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を得るステップをさらに含んでもよい。
具体的に、本発明に係る化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法は、前記ステップ３を行った後、
（ステップ４－１）化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を吸着精製および溶出により化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を製造するステップ；
（ステップ４－２）化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）をその金属塩に転換して固体化するステップ；および
（ステップ４－３）ウリジン５’－二リン酸の金属塩を化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物に転換するステップをさらに含んでもよい。

【0024】

ステップ４－１
前記ステップ４－１においては、前記ステップ３で得られた粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを用いて、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を製造することができる。この際、吸着精製および溶出により、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を製造することができる。前記ステップ３において、粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰの合成時に反応を完結させるために過量の３級アミンおよびリン酸化剤を用いるが、この過程で、ＵＶに検出されないリン酸副産物が多く残存し得るため、前記ステップ４－１においてこれらを除去してもよい。

【0025】

一実施形態において、前記ステップ４－１の吸着精製および溶出においては吸着剤を用いてもよく、前記吸着剤は活性炭であってもよい。

【0026】

一実施形態において、前記溶出時に用いられる溶出液は、薄い塩酸、塩化ナトリウム水溶液、炭酸アンモニウム水溶液、薄いアンモニア水、水酸化ナトリウム水溶液からなる群から選択されてもよく、好ましくは、薄いアンモニア水であってもよい。溶出液の濃度は、０．５ｍｏｌ／Ｌ～２．５ｍｏｌ／Ｌの範囲であってもよく、好ましくは、１．０ｍｏｌ／Ｌ～２．０ｍｏｌ／Ｌであってもよい。

【0027】

一実施形態において、前記ステップ４－１は、前記粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを水に溶かした後に活性炭に吸着させ、濾過により不純物を除去し、吸着した活性炭を溶出させることで行われてもよい。例えば、粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを水に溶かした後、少量の薄い塩酸を加えてｐＨ２～３において完全に溶かした後、活性炭を用いて粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰを活性炭に吸着させてもよい。この際、希釈する水の体積（ｍＬ）は、ＵＤＰの重量（ｇ）に対して４０倍数～６０倍数の範囲であってもよく、好ましくは、４５倍数～５５倍数であってもよい。この際、活性炭の使用量（重量）は、ＵＤＰの重量に対して３倍数～７倍数の範囲であってもよく、好ましくは、４倍数～６倍数であってもよい。

【0028】

ステップ４－２
前記ステップ４－２のＵＤＰの金属塩（以下、ＵＤＰ金属塩）は、２価のカチオン金属塩であってもよい。
一実施形態において、前記ＵＤＰ金属塩は、下記化学式３ｂで表されるＵＤＰカルシウム塩であってもよい。
［化学式３ｂ］

【化11】

【0029】

一実施形態において、前記ステップ４－２は、前記ステップ４－１で溶出された化学式３ａで表されるＵＤＰにカルシウム化剤を添加して化学式３ｂで表されるＵＤＰカルシウム塩に転換し、結晶化により固体として得る工程で行われてもよい。

【0030】

一実施形態において、前記ステップ４－２のＵＤＰ金属塩がＵＤＰカルシウム塩である場合の反応は、下記反応式４のように表すことができる。
［反応式４］

【化12】

【0031】

一実施形態において、前記ステップ４－２でカルシウム化剤を用いる場合、カルシウム化剤は、塩化カルシウム、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウムまたはリン酸カルシウムであってもよく、好ましくは、塩化カルシウムまたは炭酸カルシウムであってもよい。この際、カルシウム化剤は、ＵＤＰ１モル当量に対して２モル当量～６モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、３モル当量～５モル当量の量で用いられてもよい。

【0032】

前記ステップ４－２の結晶化は、アルコール溶媒を用いて行われてもよく、前記アルコール溶媒の例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノールなどが挙げられ、好ましくは、メタノールであってもよい。前記結晶化工程におけるメタノールの量（体積）は、ＵＤＰ溶出液の体積に対して０．２倍数～０．４倍数の範囲であってもよく、好ましくは、０．２５倍数～０．３５倍数であってもよい。

【0033】

ステップ４－３
前記ステップ４－３において、前記ステップ４－２を介して固相として得られたＵＤＰ金属塩を転換し、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）を製造することができる。

【0034】

一実施形態において、前記ステップ４－３は、前記ステップ４－２で得られた、固体化したウリジン５’－二リン酸の金属塩を脱塩させ、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）に転換させるステップを含んでもよい。この際、前記ステップ４－３は、脱塩により得られた化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）に対して水酸化ナトリウムを加え、化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）のナトリウム塩を得るステップをさらに含んでもよい。

【0035】

具体的に、前記ステップ４－３は、前記ステップ４－２を介して固相として得られた化学式３ｂで表されるＵＤＰカルシウム塩に対して酸を用いてＵＤＰ遊離酸に転換し、さらに水酸化ナトリウムを加えてＵＤＰナトリウム塩に転換する工程により行われてもよい。前記ステップ４－３は、下記反応式５のように表すことができる。
［反応式５］

【化13】

【0036】

前記ステップ４－３の脱塩に使用可能な酸は、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸のような強酸であってもよく、好ましくは、硫酸または塩酸であってもよい。この際、用いられる酸は、ＵＤＰカルシウム塩１モル当量に対して０．８モル当量～１．２モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、０．９モル当量～１．１モル当量の量で用いられてもよい。

【0037】

前記ステップ４－３の反応温度は、１０℃～４０℃の範囲であってもよく、好ましくは、２０℃～３０℃の範囲であってもよい。また、前記ステップ４－３の反応時間は、３０分～９０分の範囲であってもよく、好ましくは、５０分～７０分であってもよい。

【0038】

前記ステップ４－３において水酸化ナトリウムを用いてＵＤＰナトリウム塩に転換され、この際、反応ｐＨ４～ｐＨ５の範囲であってもよく、好ましくは、ｐＨ４．４～ｐＨ４．６であってもよい。

【0039】

前記ステップ４－３において、ナトリウム塩を得る反応に結晶化溶媒が用いられてもよく、前記結晶化溶媒として用いられるメタノールの体積（ｍＬ）は、ＵＤＰカルシウム塩の重量（ｇ）に対して５倍数～１３倍数の範囲であってもよく、好ましくは、８倍数～１０倍数であってもよい。

【発明の効果】

【0040】

本発明によれば、簡素化された工程によりジクアホソルの前駆物質であるＵＤＰを大量生産することができるため、商業的に利用可能である。本発明においては、イオン交換樹脂を用いた脱塩工程を経ることなく、粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰの精製時にイオン交換樹脂の代わりに活性炭を用いて精製することで工程を簡素化することができる。また、精製後、難溶性のＵＤＰ金属塩に転換して固体化させることで高収率および高純度のＵＤＰを得ることができ、よって、別途の生産設備を設けることなく比較的に簡単な工程で大量生産が可能であるため、商業的に有用に利用することができる。

【図面の簡単な説明】

【0041】

【図1】実施例１のステップ２で合成されたウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの核磁気共鳴分析（^１Ｈ ＮＭＲ）結果である。

【図2】実施例２のステップ４－３で合成されたＵＤＰナトリウム塩の^１Ｈ ＮＭＲ結果である。

【図3】実施例１のステップ２で合成されたウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの液体クロマトグラフィー分析（ＨＰＬＣ）結果である。

【図4】実施例１のステップ３で合成された粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰのＨＰＬＣ結果である。

【図5】実施例２のステップ４－１で得られたＵＤＰのＨＰＬＣ結果である。

【図6】実施例２のステップ４－２で得られたＵＤＰカルシウム塩のＨＰＬＣ結果である。

【図7】実施例２のステップ４－３で得られたＵＤＰナトリウム塩のＨＰＬＣ結果である。

【発明を実施するための形態】

【0042】

本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。ただし、下記の実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、下記の実施例により本発明の内容が限定されるものではない。
また、以下に言及された試薬および溶媒は、特に言及しない限り、Ｓｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈおよびＴＣＩから購入したものであり、^１Ｈ ＮＭＲデータは、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＰＸ ４００を用いて測定し、ＨＬＰＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社の１２００ Ｓｅｒｉｅｓを用いて測定した。
本発明で用いられたＨＰＬＣ条件は次のとおりであり、反応後または反応混合物中の純度を測定した。
検出器：紫外部吸光光度計（測定波長：２６０ｎｍ）
カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍ）
移動相：リン酸二水素カリウム４０ｇを水１Ｌに溶解
流量：０．８００～１．２００ｍＬ／分

【表1】

試料：１０ｍｇ／移動相１０ｍＬ
注入量：１０μｌ

【0043】

実施例１：粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の合成
（ステップ１）ウリジン５’－一リン酸（ＵＭＰ）の合成

【化14】

ＵＭＰナトリウム塩２０ｇ（５４．３ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ－三口ラウンドフラスコに入れ、エタノール（ＥｔＯＨ）８０ｍｌ、精製水１０ｍｌ、硫酸２．９ｍｌ（５４．３ｍｍｏｌ）を投入した。室温で３０分間撹拌および濾過した後、エタノール５ｍｌ、精製水０．６３ｍｌを混合して洗浄し、濾液を次の反応にｉｎ－ｓｉｔｕで用いた。
（ステップ２）ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成

【化15】

ＵＭＰ１７．６ｇ（５４．３ｍｍｏｌ）が含まれたステップ１の濾液にトリブチルアミン１９．４ｍｌ（８１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）１６．８ｍｌ（１０８．６ｍｍｏｌ）、イミダゾール７．４ｇ（１０８．６ｍｍｏｌ）を順次投入した後、７０℃に昇温後、７０℃で１時間撹拌した。反応終了後、反応液を１０℃以下に冷却し、１０℃以下で３０分間撹拌した後、生成された固体を濾過して除去した。別の１Ｌ－三口ラウンドフラスコにアセトン４００ｍＬを投入し、上記で濾過した濾液を徐々に逆滴加した。ＮａＣｌＯ_４ １Ｈ_２Ｏ ８．３８ｇ（５９．７ｍｍｏｌ）を投入し、室温で３０分間撹拌し結晶化させた後に生成された固体を濾過し、アセトン２５ｍｌで洗浄した後に窒素乾燥した。
純度９７．０％（ＨＰＬＣ）
^１Ｈ ＮＭＲ （Ｄ_２Ｏ， ４００ ＭＨｚ）： δ ３．９５ （ｍ， １Ｈ）， ４．０４ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１９ （ｍ， １Ｈ）， ５．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０３ （ｍ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄ， １Ｈ）， ７．８４ （ｓ， １Ｈ）
（ステップ３）粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の合成

【化16】

ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド１６ｇ（４２．８ｍｍｏｌ）、アセトン１６０ｍｌを２５０ｍｌ－三口ラウンドフラスコに投入した。別の２５０ｍｌ－三口ラウンドフラスコにアセトン８０ｍｌ、８５％リン酸５．８７ｍｌ（８５．５ｍｍｏｌ）、トリブチルアミン２０．４ｍｌ（８５．５ｍｍｏｌ）を投入し、１０分間撹拌した後に逆滴加した。塩化カルシウム二水和物６．２９ｇ（４２．８ｍｍｏｌ）を投入し、４０℃に昇温後、４０℃で１～２時間撹拌した。反応終了後、ＮａＣｌＯ_４ １Ｈ_２Ｏ １２．５７ｇ（８５．５ｍｍｏｌ）を投入し、室温で１時間撹拌した後に生成された固体を濾過し、アセトン４０ｍｌで洗浄した後に乾燥した。乾燥物にメタノール１００ｍｌ、精製水５０ｍｌを投入し、室温で１時間スラリー撹拌した。固体を濾過し、アセトン４０ｍｌで洗浄した後
に窒素乾燥した。
収量２１．９２ｇ、ＵＤＰの含量６２．６％、ＵＤＰの純度８８．８％（ＨＰＬＣ）

【0044】

実施例２
（ステップ４－１）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の精製
前記実施例１のステップ３で得られた粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）に対して、２Ｌ－三角フラスコに粗（ｃｒｕｄｅ）ＵＤＰ１６ｇ（ＵＤＰ１０ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）、精製水１Ｌを投入し撹拌しつつ、６Ｎ塩酸をｐＨ２．５になるまで徐々に加えた。きれいに溶解された後に活性炭１００ｇを投入し、室温で３０分間撹拌して吸着させた。濾過して不純物を濾液で除去させた後、精製水１Ｌで洗浄して不純物を除去した後、１．４Ｎアンモニア水でＵＤＰを溶出して精製した。
溶出液０．６Ｌ、純度９５．３％（ＨＰＬＣ）
（ステップ４－２）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）カルシウム塩の合成

【化17】

ステップ４－１で溶出されたＵＤＰ（４９．５ｍｍｏｌ）溶液０．６Ｌに塩化カルシウム二水和物２９．１ｇ（１９８ｍｍｏｌ）を投入し、メタノール２４０ｍｌを加えた。室温で１時間撹拌し、生成された固体を濾過してＵＤＰカルシウム塩を得た後に窒素乾燥した。
収率９６％、含量８０％、純度９４．９％（ＨＰＬＣ）
（ステップ４－３）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）ナトリウム塩の合成

【化18】

２５０ｍｌ－三口ラウンドフラスコにＵＤＰカルシウム塩１２．３ｇ（２７．９ｍｍｏｌ）、精製水３０ｍｌを投入した後に室温で撹拌した。薄い硫酸をｐＨ２．５になるまで徐々に滴加した後、室温で１時間撹拌した。濾過して生成された固体を除去し、濾液に５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液をｐＨ４．５になるまで徐々に滴加した。この溶液をメタノール１００ｍｌに逆滴加し、室温で１時間撹拌した後、生成された固体を濾過してＵＤＰナトリウム塩を得た後に窒素乾燥した。
収率８６．６％、含量９９．１％、純度９９．０％（ＨＰＬＣ）
^１Ｈ ＮＭＲ （Ｄ_２Ｏ， ４００ ＭＨｚ）： δ４．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１９ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８９ （ｍ， ２Ｈ），
７．９１ （ｄ， １Ｈ）
前記ステップ１～ステップ４－３の反応結果を下記表２に示す。

【表2】

^１実際収率×ＵＤＰの含量／１００

【0045】

比較実験例１：粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の合成
（ステップＡ）ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成：先行製法テスト
ＵＭＰ遊離酸（１モル当量）にＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２０ｍｌ／ｇ）、ＴＥＡ（６．６モル当量）を投入し、１０分間撹拌した。次いで、イミダゾール（４モル当量）、２，２’－ジチオジピリジン（１．６モル当量）、トリフェニルホスフィン（１．６モル当量）を順次投入した。２５℃で３時間反応した後、アセトン（１４０ｍｌ／ｇ）、ＮａＣｌＯ_４（４モル当量）を投入し、４℃に冷却後、３０分間撹拌して濾過および乾燥した。
収率８４．２％、純度９４．１％（ＨＰＬＣ）
（ステップＢ）粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の合成：先行製法テスト
前記ステップＡで合成されたウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド（１モル当量）にＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（３４ｍｌ／ｇ）、リン酸（４モル当量）、トリブチルアミン（４モル当量）を投入し、１０分間撹拌した。次いで、ＺｎＣｌ_２（０．７モル当量）を投入し、２５℃で１５時間撹拌した。前記反応液をＨＰＬＣで分析し、反応溶液中のＵＤＰおよびＵＭＰ、ＵＰ_３Ｕ、ＵＰ_２Ｕ、ＵＭＰ－ＩＭＤの純度を確認した。その結果を下記表３に示す。

【表3】

本願発明の実施例１に係るステップ１～３の合成工程結果を比較実験例１に係る先行文献工程と比べて表４に示す。本発明の合成工程が、収率および純度が大幅に向上したことを確認した。

【表4】

^１実際収率×ＵＤＰの含量／１００

【0046】

実験例１：ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成：縮合剤に対する効果
ＵＭＰ遊離酸（１モル当量）に８８％エタノール（４．５ｍｌ／ｇ）、ＴＢＡ（トリブチルアミン、１．５モル当量）、縮合剤（２モル当量）、イミダゾール（２モル当量）を順次投入し、７０℃に昇温後、７０℃で１時間反応させた。
前記反応液をＨＰＬＣで分析し、反応溶液中のＵＭＰ、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドおよびＵＰ_２Ｕの純度を確認した。その結果を下記表５に示す。

【表5】

前記［表５］の結果から、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成において、縮合剤の種類に応じて反応性およびダイマー（Ｄｉｍｅｒ）の生成に差が発生した。ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド）を用いた際に、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの転換に最も優れ、ダイマー（Ｄｉｍｅｒ）の生成も最小化可能であることを確認した。

【0047】

実験例２：ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成：３級アミンに対する効果
ＵＭＰ遊離酸（１モル当量）に８８％エタノール（４．５ｍｌ／ｇ）、３級アミン（１．５モル当量）、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（２モル当量）、イミダゾール（２モル当量）を順次投入し、７０℃に昇温後、７０℃で１時間反応させた。３級アミンとしては、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、トリブチルアミン（ＴＢＡ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）をそれぞれ用いた。
前記反応液をＨＰＬＣで分析し、反応溶液中のＵＭＰ、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドおよびＵＰ_２Ｕの純度を確認した。その結果を下記表６に示す。

【表6】

前記［表６］の結果から、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成において、３級アミンとしてＴＥＡ、ＴＢＡ、ＤＩＰＥＡを用いる場合、目的とするＵＭＰ－ＩＭＤの純度が９５％以上を示すことを確認した。

【0048】

実験例３：粗（ｃｒｕｄｅ）ウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）の合成：一リン酸化剤および３級アミンのモル当量の効果
三口ラウンドフラスコにアセトン（１５ｍｌ／ｇ）に該当するモル当量の８５％リン酸、トリブチルアミンを投入し、１０分間撹拌した。次いで、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリド（１モル当量）、塩化カルシウム二水和物（１モル当量）を順次投入した後に３０℃に昇温して１時間反応させた。
前記反応液をＨＰＬＣで分析し、反応溶液中のＵＤＰ、ＵＭＰおよびＵＰ_３Ｕの純度を確認した。その結果を下記表７に示す。

【表7】

前記［表７］の結果から、ＵＤＰの合成において、一リン酸化剤およびＴＢＡのモル当量を１～１０まで用いた際の反応性およびダイマー（Ｄｉｍｅｒ）類縁物質（ＵＰ_３Ｕ）の生成を確認した。一リン酸化剤およびＴＢＡを２モル当量以上用いた際に８５％以上のＵＤＰを合成することができ、モル当量が増加するにつれてＵＤＰの純度が増加し、未反応および副反応が減少することを確認した。しかし、リン酸のモル当量がＴＢＡのモル当量よりも多くて酸性の（Ａｃｉｄｉｃ）環境で反応をすると、純度が減少することを確認した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【手続補正書】

【提出日】2022-06-16

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】請求項４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【請求項4】

前記ステップ２のカルボジイミド類の縮合剤は、
１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）またはその塩、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）からなる群から選択される少なくともいずれか一つである、請求項１に記載の化学式３ａで表されるウリジン５’－二リン酸（ＵＤＰ）、その塩またはその水和物の製造方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0012】

前記ステップ２におけるカルボジイミド類の縮合剤は、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）またはその塩、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などであってもよく、これらは、それぞれ単独でまたは２以上混合して用いられてもよい。この際、カルボジイミド類の縮合剤は、ＵＭＰ１モル当量（ｍｏｌｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）に対して１モル当量～３モル当量の量で用いられてもよく、好ましくは、１．５モル当量～２．５モル当量で用いられてもよい。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４６

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0046】

実験例１：ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成：縮合剤に対する効果
ＵＭＰ遊離酸（１モル当量）に８８％エタノール（４．５ｍｌ／ｇ）、ＴＢＡ（トリブチルアミン、１．５モル当量）、縮合剤（２モル当量）、イミダゾール（２モル当量）を順次投入し、７０℃に昇温後、７０℃で１時間反応させた。
前記反応液をＨＰＬＣで分析し、反応溶液中のＵＭＰ、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドおよびＵＰ_２Ｕの純度を確認した。その結果を下記表５に示す。

【表5】

前記［表５］の結果から、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの合成において、縮合剤の種類に応じて反応性およびダイマー（Ｄｉｍｅｒ）の生成に差が発生した。ＤＩＣ（Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド）を用いた際に、ウリジン－５’－ホスホロイミダゾリドの転換に最も優れ、ダイマー（Ｄｉｍｅｒ）の生成も最小化可能であることを確認した。

【国際調査報告】