特表2023-512242ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）によるムコ多糖症ＩＩの治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-24
(54)【発明の名称】ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）によるムコ多糖症ＩＩの治療
(51)【国際特許分類】
A61K 48/00 20060101AFI20230316BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20230316BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20230316BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/505 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/42 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/155 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/136 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/122 20060101ALI20230316BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230316BHJP
A61B 5/055 20060101ALI20230316BHJP
A61K 31/436 20060101ALI20230316BHJP
A61K 38/46 20060101ALN20230316BHJP
C12N 15/55 20060101ALN20230316BHJP
C12N 15/85 20060101ALN20230316BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20230316BHJP
C12N 15/864 20060101ALN20230316BHJP
【ＦＩ】
A61K48/00
A61K35/76 ZNA
A61P3/00
A61P43/00 105
A61P43/00 111
A61K31/573
A61K31/505
A61K31/42
A61K31/155
A61K31/136
A61K31/122
A61K45/00
A61B5/055 380
A61K31/436
A61K38/46
C12N15/55
C12N15/85 Z
C12N15/113 Z
C12N15/864 100Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022546049
(86)(22)【出願日】2021-01-28
(85)【翻訳文提出日】2022-09-22
(86)【国際出願番号】 US2021015446
(87)【国際公開番号】W WO2021154963
(87)【国際公開日】2021-08-05
(31)【優先権主張番号】63/066,625
(32)【優先日】2020-08-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/967,494
(32)【優先日】2020-01-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/088,305
(32)【優先日】2020-10-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518362720
【氏名又は名称】レジェンクスバイオ インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100097456
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 徹
(72)【発明者】
【氏名】スティーブン ジョセフ パコーラ
(72)【発明者】
【氏名】パウロ ファラベーラ
(72)【発明者】
【氏名】マリー‐ロール ネボレ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C087
4C096
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA13
4C084AA22
4C084BA01
4C084BA08
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4C084BA34
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4C084MA66
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4C084ZC211
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4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086BC67
4C086CB22
4C086DA10
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZB08
4C086ZB35
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC83
4C087CA08
4C087CA12
4C087MA66
4C087NA10
4C087NA14
4C087ZB21
4C087ZC19
4C087ZC21
4C087ZC41
4C096AB41
4C096AC01
4C096AD14
4C096DC22
4C096DC24
4C206AA01
4C206AA02
4C206CB27
4C206HA10
4C206JA20
4C206KA01
4C206MA03
4C206MA04
4C206NA05
4C206ZB35
(57)【要約】
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載している。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって送達され、前記組換えヌクレオチド発現ベクターは、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、前記脳質量は、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定される、前記方法。
【請求項2】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記ヒト対象者の脳質量が、前記ヒト対象者の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象者の脳体積から変換され、前記ヒト対象者の脳体積は、前記ヒト対象者の脳ＭＲＩから得られる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記ヒト対象者が、５歳以上、かつ１８歳未満である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、以下の表に記載の用量で投与される、請求項１５に記載の方法：【表1】
【請求項18】
前記ヒト対象が、４か月齢以上、かつ５歳未満である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、以下の表に従って、用量１または用量２から選択される用量で投与される、請求項１８に記載の方法：【表2】
【請求項20】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、以下の表に記載の用量で投与される、請求項１８に記載の方法：【表3】
【請求項21】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項22】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与される請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与される、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施し、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記１つ以上のコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル；（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
【請求項32】
前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、請求項３１に記載の方法。
【請求項34】
前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項36】
前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、請求項３１～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項37】
前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、請求項３１～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、請求項３１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項39】
前記測定のステップが、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、請求項３１～３８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本願は、２０２０年１０月０６日出願の米国仮出願第６３／０８８，３０５号、２０２０年８月１７日出願の米国仮出願第６３／０６６，６２５号、及び２０２０年１月２９日出願の米国仮出願第６２／９６７，４９４号の利益を主張し、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
本願は、２０２０年１０月０６日出願の米国仮出願第６３／０８８，３０５号、２０２０年８月１７日出願の米国仮出願第６３／０６６，６２５号、及び２０２０年１月２９日出願の米国仮出願第６２／９６７，４９４号の利益を主張し、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
【0002】
電子的に提出した配列表の援用
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２１年１月１２日に作成した、１７２，３３９バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１２９－２２８．ＴＸＴ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２１年１月１２日に作成した、１７２，３３９バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１２９－２２８．ＴＸＴ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
【0003】
１．前書き
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載する。
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載する。
【背景技術】
【0004】
２．発明の背景
ハンター症候群／ＭＰＳ ＩＩは、出生男児１０万人当たり０．５～１．３人に認められる稀少なＸ連鎖劣性遺伝性疾患である。進行性であり、かつ深刻なこの疾患は、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸のリソソーム異化作用に必要な酵素であり、また、リソソーム貯蔵酵素であるイズロン酸－２－スルファターゼの欠損を招くＩＤＳ遺伝子の遺伝子変異に起因している。ＧＡＧ（グリコサミノグリカン）と称するこれらの普遍的な多糖類は、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織及び臓器に蓄積し、その結果、特徴的な貯蔵病変と、多様な疾患後遺症をもたらす。この患者集団での罹患率及び死亡率は高く、重度の表現型（神経認知の悪化を特徴とする）の患者での平均寿命は１１．７歳であり、軽度または弱度の表現型の患者での平均寿命は２１．７歳である、と報告されている。（Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．２ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｍｉｌｄ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｆｏｒｍｓ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９：４０８－４１１）。患者の大多数（３分の２）が、この疾患の重症型であると報告されている。（Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ ａｎｄ ａｒｅ ｙｏｕｎｇｅｒ ｔｈａｎ ５ ｙｅａｒｓ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－Ｌ－Ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ （Ｌａｒｏｎｉｄａｓｅ）．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。この疾患は、主に男児が罹患するが、罹患した女性は、遺伝子の双方の対立遺伝子での非ランダムＸ不活性化、及び／または変異に起因すると報告されている。（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ ＩＩ （Ｈｕｎｔｅｒ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２１：ｅ３７７）。しかしながら、女性でのＭＰＳ ＩＩは非常に稀であり、２％未満の確率でしか発生しない。
ハンター症候群／ＭＰＳ ＩＩは、出生男児１０万人当たり０．５～１．３人に認められる稀少なＸ連鎖劣性遺伝性疾患である。進行性であり、かつ深刻なこの疾患は、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸のリソソーム異化作用に必要な酵素であり、また、リソソーム貯蔵酵素であるイズロン酸－２－スルファターゼの欠損を招くＩＤＳ遺伝子の遺伝子変異に起因している。ＧＡＧ（グリコサミノグリカン）と称するこれらの普遍的な多糖類は、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織及び臓器に蓄積し、その結果、特徴的な貯蔵病変と、多様な疾患後遺症をもたらす。この患者集団での罹患率及び死亡率は高く、重度の表現型（神経認知の悪化を特徴とする）の患者での平均寿命は１１．７歳であり、軽度または弱度の表現型の患者での平均寿命は２１．７歳である、と報告されている。（Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．２ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｍｉｌｄ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｆｏｒｍｓ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９：４０８－４１１）。患者の大多数（３分の２）が、この疾患の重症型であると報告されている。（Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ ａｎｄ ａｒｅ ｙｏｕｎｇｅｒ ｔｈａｎ ５ ｙｅａｒｓ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－Ｌ－Ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ （Ｌａｒｏｎｉｄａｓｅ）．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。この疾患は、主に男児が罹患するが、罹患した女性は、遺伝子の双方の対立遺伝子での非ランダムＸ不活性化、及び／または変異に起因すると報告されている。（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ ＩＩ （Ｈｕｎｔｅｒ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２１：ｅ３７７）。しかしながら、女性でのＭＰＳ ＩＩは非常に稀であり、２％未満の確率でしか発生しない。
【0005】
ＭＰＳ ＩＩの患者は、出生時には正常に見えるが、疾患の徴候及び症状は、一般的には、重症型では１８か月齢～４歳の間に、軽症型では４～８歳の間に出現する。罹患したすべての患者に共通する徴候及び症状として、低身長、顔表面の粗雑化、巨頭症、巨大舌、難聴、肝腫大及び脾腫、多発異骨症、関節性拘縮、脊柱管狭窄、及び手根管症候群がある。上気道及び耳の感染症は、大抵の患者で認められることが多く、また、進行性の気道閉塞が一般的に認められており、睡眠時無呼吸を招いて、死に至ることがよくある。心臓病が、この集団での主な死因であり、左右の心室肥大と心不全を招く弁膜機能障害を特徴としている。一般的な死亡原因は、閉塞性気道疾患または心不全である。
【0006】
重症型の疾患では、初期発達の重要な段階には達し得るが、発達遅延が１８～２４か月齢で容易に認められる。一部の患者は、１歳時の聴力スクリーニング検査に合格することができず、また、他の発達段階、例えば、補助なしに座る能力、歩行する能力、発話に遅れが認められる。発達の進行は、３歳～５歳の間に停滞し始め、約６．５歳から退行が始まると報告されている。トイレの練習を行ったＭＰＳ ＩＩの子供の約５０％の内、すべてではないにしても、大多数の子供が、疾患が進行するにつれて、トイレを使うことができなくなってしまう。（Ｗｒａｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２００７（上記）、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８（上記））。
【0007】
著しい神経疾患を有する患者は、多動性、頑固さ、及び攻撃性などの重度の行動障害を示し、この障害は、２歳から始まり、神経変性が、この行動を弱める８～９歳まで続く。（Ｍｕｅｎｚｅｒ，ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ：Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ １２３（１）：１９－２９）。
【0008】
１０歳に達する重症患者の半数以上で発作が報告されており、死亡時までに、ＣＮＳ疾患を有するほとんどの患者は、重度の精神障害を有しており、また、常に世話をする必要がある。（Ｗｒａｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２００７（上記）、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８（上記））。重症でない疾患を有する患者は、知的機能は正常であるが、ＭＲＩ画像は、ＭＰＳ ＩＩの全患者について、白質病変、脳室肥大、及び脳萎縮などの脳全体での異常を明らかにする。（Ｍｕｅｎｚｅｒ，ｅｔ ａｌ．，２００９（上記））。
【0009】
ＨＴ１０８０（線維肉腫）細胞が産生する組換えイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）は、ハンター症候群の治療用に承認を受けた唯一の製品であり、これは、毎週注入して投与される。（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（イデュルスルファーゼ）注射薬［添付文書］，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ：Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Ｉｎｃ；２０１３，ｈｔｔｐ：／／ｐｉ．ｓｈｉｒｅｃｏｎｔｅｎｔ．ｃｏｍ／ＰＩ／ＰＤＦｓ／Ｅｌａｐｒａｓｅ＿ＵＳＡ＿ＥＮＧ．ｐｄｆから入手可能である）。
【0010】
しかしながら、現在実施されているＥＲＴは、血液脳関門を通過せず、したがって、重症型の疾患、すなわち、ＣＮＳ／神経認知及び行動に影響が及ぶＭＰＳ ＩＩを有する患者に対処できない。この問題に対処するために設計された最近の臨床試験では、脊椎に埋め込んだ、くも膜下腔内薬物送達装置（下肋骨を切開してアクセスポートを移植して、Ｌ４／Ｌ５のレベルでカテーテルを挿入する）を使用して、くも膜下腔内投与用製剤されたイデュルスルファーゼ（Ｅｌａｐｒａｓｅ）を、小児患者に、月１回投与した。また、患者には、週１回、イデュルスルファーゼを同時に静脈内に注射した。Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄ １８：７３－８１，ｅｓｐ．ｐ．７４を参照されたい。要約は、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２５８３４９４８？ｄｏｐｔ＝Ａｂｓｔｒａｃｔから入手可能である。装置の誤動作があり、治療を受けた１２名の患者の内の６名（５０％）で装置の一部変更、外科的全変更、または除外があった。特記すべきは、１４件のＳＡＥ（重度の有害事象）の内の１２件は、装置関連（装置挿入に起因する合併症、装置の移動／接続の問題、装置の破損／誤動作／故障、インプラント部位感染、処置痛、及び創傷離開）によるものであった。（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ｐ．７５（第２段及び図１））。装置破損、及び脊柱管からのカテーテル移動は、この小児集団での活動レベルの大きさに起因して悪化した。（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６ ａｔ ｐ．７８ Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ）。
【発明の概要】
【0011】
３．発明の概要
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者を含むが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者を含むが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。
【0012】
好ましい実施形態では、治療は、遺伝子治療を介して、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）、またはｈＩＤＳの誘導体をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、継続的に導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入した神経細胞、及び／またはグリア細胞の永続的なデポーを作り出すことで達成する。神経細胞／グリア細胞デポーからＣＳＦに分泌されたｒｈＩＤＳは、ＣＮＳで細胞によって取り込まれて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正」する。さらに、予期せぬことに、ＣＮＳにある形質導入した神経細胞及びグリア細胞のデポーが、組換え酵素をＣＮＳ及び全身の両方に送達することができ、全身治療、例えば、毎週、酵素を静脈内注射する必要性を緩和または解消し得ることが判明した。
【0013】
代替の実施形態では、ｈＩＤＳを、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞の細胞培養物（例えば、バイオリアクター）において生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、ＣＳＦに、ＣＮＳに直接に、及び／または全身に酵素を注入することにより、投与することができる。しかしながら、酵素は血液脳関門を通過できないので、酵素の全身送達ではＣＮＳの治療をもたらさず、本発明の遺伝子治療手法とは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達は、大きな負担を強いるだけでなく、感染のリスクを招く反復注射が必要となるので、遺伝子治療手法は、ＥＲＴを上回る幾つかの利点を提供する。
【0014】
導入遺伝子がコードするｈＩＤＳは、限定するものではないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、及びアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定するものではないが、図２に示すＩＤＳのオーソログに対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換などのｈＩＤＳの誘導体を含むことができる。ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まない（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示すように、または、各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ、及びＰ４８０Ｑ、及び「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されているような、重度、重度－中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定されている変異を含まないことを条件とする。
【0015】
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２に配置させて示したＩＤＳオーソログでの当該位置に認められる対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができる。ただし、図３に示したような、または、その各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６（上記）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８（上記）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１（上記）で報告されているような、いかなる有害な変異も含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験動物で、インビトロでの従来のアッセイを使用して試験し、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのためのインビトロでの従来のアッセイで試験して、ＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものであるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として、例えば、４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３、Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力を、細胞培養で評価することができ、例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入すること、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、導入遺伝子産物または誘導体を加えること、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作したヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養し、ＭＰＳ ＩＩ培養細胞の欠陥の修正を例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞でのＩＤＳ酵素活性、及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより決定すること（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）により、評価することができる。好ましい実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）貯蔵の減少である。別の実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、デルマタン硫酸（ＤＳ）貯蔵の減少である。別の実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、ＨＳ貯蔵及びＤＳ貯蔵の両方の減少である。
【0016】
ＭＰＳ ＩＩのための動物モデルは、本明細書に記載する治療薬を評価するために使用することができることが記載されている。例えば、ＭＰＳ ＩＩのノックアウトマウスモデル（ＩＤＳノックアウト）が、ＩＤＳ遺伝子のエクソン４及び５を、ネオマイシン耐性遺伝子で置換して開発された。（Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４）。このＩＤＳノックアウトマウスは、骨格異常、肝脾腫大症、尿及び組織ＧＡＧの上昇、及び脳貯蔵病変などのＭＰＳ ＩＩの数多くの特徴を示しており（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９）、ＥＲＴの臨床試験を支援するためにＭＰＳ ＩＩでの酵素補充療法の効果を評価するために使用された。したがって、このマウスモデルは、ＭＰＳ ＩＩの治療法として、神経細胞またはグリア細胞が産生するｒＩＤＳを送達する遺伝子療法の効果を研究するための適切なモデルである（例えば、参照により、全内容を本明細書で援用する、Ｐｏｌｉｔｏ ａｎｄ Ｃｏｓｍａ，２００９，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．８５（２）：２９６－３０１を参照されたい）。
【0017】
好ましくは、ヒト神経細胞／ヒトグリア細胞が産生するｈＩＤＳ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター、及びＣＭＶエンハンサー）で制御されるべきであり、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン、及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈＩＤＳ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中プロセシング及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞で使用するそのようなシグナルペプチドとして、限定されないが、以下が挙げられ得る。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
【0018】
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞など、これらに限定されない、ＣＮＳでの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特に、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。限定するものではないが、全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎが記載した、特に好ましくは、ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有するＡＡＶバリアントキャプシド、ならびに、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅが記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクトと称する非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、その他のウイルスベクターを使用することができる。
【0019】
ある実施形態では、コンストラクト１を、導入遺伝子を送達するために使用することができる。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシドであり、発現は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、ニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）のハイブリッドにより誘導され、当該ＩＤＳ発現カセットは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接しており、当該導入遺伝子は、ニワトリベータアクチンイントロンと、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。好ましい実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。ある実施形態では、コンストラクト１は、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
【0020】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒｈＩＤＳベクターの懸濁液を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔への注入に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0021】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下投与を介して（すなわち、くも膜下腔へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。これは、いくつかの方法、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができる、または、患者に実行し得る場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔への注入を実施することができる、または、腰椎穿刺（一般的には、ＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接に脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達し得る。
【0022】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体でのｒｈＩＤＳの濃度を直接に測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒｈＩＤＳの濃度から外挿によって推定することができる。
【0023】
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与される、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり２．０×１０１１ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、ヒト対象の脳質量は、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じることにより、ヒト対象の脳体積から変換され、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩから得られる。
【0024】
背景として、ヒトＩＤＳは、図１に記載する８つの潜在的なＮ－グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）を含む５５０個のアミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内前駆体が、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へと処理される。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）、及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
【0025】
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後事象または共翻訳事象として、小胞体で、ほぼ確かに起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続され、複合シアル酸含有グリカンを取り入れ、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基の取得を含む。（参照により、その全内容を本明細書で援用する簡潔な考察については、Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素は、あったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
【0026】
本発明は、部分的には、以下の原理に基づく。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生について報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾について、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することが明らかになった：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の内の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、横断修正を達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切にプロセシングした非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）を遙かに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表１にまとめる）。
（ｉｖ）本明細書に記載する遺伝子治療手法は、酵素的に活性であるポリアクリルアミドゲル電気泳動（使用するアッセイによる）で測定して約９０ｋＤａのｈＩＤＳ糖タンパク質前駆体の連続分泌をもたらすであろう。まず、ＩＤＳ活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾に関与する酵素であるＦＧｌｙ生成酵素（ＦＧＥ、別名、ＳＵＭＦ１）は、ヒト脳の大脳皮質で発現する（ＳＵＭＦ１の遺伝子発現データは、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄｓのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇでアクセス可能である）。次に、インサイチュで形質導入した神経細胞及びグリア細胞が産生して分泌したグリコシル化／リン酸化ｒＩＤＳは、ＣＮＳでの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ、そして、的確にプロセシングを受けるであろう。いかなる理論の拘束をも受けるものではないが、遺伝子治療によってインサイチュで産生されて分泌されたｒｈＩＤＳ前駆体は、ＣＮＳに投与した場合、ＥＲＴに使用する従来の組換え酵素よりも、ＣＮＳでのレシピエント細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得る。例えば、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）（線維肉腫細胞株であるＨＴ１０８０で作成）は、精製タンパク質であり、約７６ｋＤａの分子量を有すると報告がされており、神経細胞及びグリア細胞が分泌する高度にリン酸化を受けたと考えられる９０ｋＤａ種のものではない。８つのＮ結合型グリコシル化部位は、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）で完全に占有されており、そして、２つのビスマンノース－６－リン酸末端グリカン、ならびに、高度にシアル酸付加したグリカン複合体を含むことが報告されているが、酵素活性の絶対要件であるＣ８４からＦＧｌｙへの翻訳後修飾は、約５０％にすぎない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７；Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標） Ｆｕｌｌ Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＭＡ ｆｉｌｉｎｇ）。別の組換え産物であるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）は、ＣＨＯ細胞で作成される。Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）よりもＦＧｌｙの多さと活性の高さが報告されているが、マンノース－６－リン酸化と、取り込みには差異は無かった。（Ｃｈｕｎｇ，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記表１に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、これが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善されるので、この活性を改善し得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐをより高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測され、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化しており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的な分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化では大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって一般的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）が免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促進することが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップになり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において十分に表されていない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生について報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾について、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することが明らかになった：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の内の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、横断修正を達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切にプロセシングした非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）を遙かに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表１にまとめる）。
【表1】
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記表１に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、これが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善されるので、この活性を改善し得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐをより高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測され、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化しており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的な分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化では大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって一般的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）が免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促進することが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップになり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において十分に表されていない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
【0027】
上記した理由のために、ヒト神経細胞及び／またはヒトグリア細胞によるｒｈＩＤＳの生産は、例えば、ＭＰＳ ＩＩ疾患（ハンターを含むが、これらに限定されない）と診断されている患者（ヒト対象）のＣＳＦにｒｈＩＤＳをコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給する、ＣＮＳでの永続的なデポーを作成することによる、遺伝子治療によって達成するＭＰＳ ＩＩの治療のための「バイオベター」分子をもたらすであろう。デポーからＣＳＦ中に分泌されるｈＩＤＳ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によりエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ ＩＩレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
【0028】
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産される全てのｒｈＩＤＳ分子が完全にグリコシル化され、リン酸化され、及び硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質の集団は、有効性を示すのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を遅延させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または減少）；ＣＳＦ及び／または血清の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＳ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0029】
遺伝子治療に対する代替治療または追加治療として、ｒｈＩＤＳ糖タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生することができ、また、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に、及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与することができる）。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株として、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣｌ１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがあるが、これらに限定されない（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説に関するＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作して強化することができる。
【0030】
ｒｈＩＤＳの送達が、免疫反応を最小化するであろう一方で、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する最も明白な潜在的毒性源は、遺伝的にＩＤＳを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを寛容しない可能性のあるヒト対象において、発現したｒｈＩＤＳタンパク質に対する免疫を生じることである。
【0031】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特に、ＩＤＳのレベルがゼロに近い重度の疾患を有する患者を治療する場合には適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）とミコフェノール酸との組み合わせ、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レジメンが関係する免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与され得、ある特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処置が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合に、例えば、１８０日後に中止され得る。
【0032】
他の利用可能な治療の送達を伴う、ＣＳＦに対するｒｈＩＤＳの送達との組み合わせが、本発明の方法に含まれる。さらなる治療を、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に実施することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ得るＭＰＳ ＩＩのために利用可能な治療として、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）を全身的に、またはＣＳＦに対して投与する酵素補充療法、及び／または、ＨＳＣＴ療法があるが、これらに限定されない。
【0033】
一態様では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した治療有効量のグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与することにより送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定される。
【0034】
別の態様では、本明細書ではＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、（ａ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すこと、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを測定すること、及び（ｃ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを、参照集団でのヘパラン硫酸のレベルと比較することを、この順序で含み、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体はヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、参照集団は、（ａ）少なくとも１、２、３、４、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、２５０、３００、４００、５００、または１０００名のＭＰＳ ＩＩではない健常者からなり、好ましくは、当該ヒト対象と同様の年齢、体重、及び／または同じ性別の健常者からなる。
【0035】
別の態様では、本明細書ではＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、（ａ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルの第１の測定を行うこと、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生されたグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること、及び（ｃ）一定期間の後に、ヘパラン硫酸のレベルの第２の測定を行うことを、この順序で含み、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、期間は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、１１か月、または１年である。
【0036】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施態様では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒト対象のＣＮＳでの細胞のリソソームに送達される。
【0037】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト対象の脳質量は、ヒト対象の脳体積に１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じることにより、ヒト対象の脳体積ｃｍ３から変換され、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩにより決定される。
【0038】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与される。
【0039】
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、５歳以上かつ１８歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、表７に記載した用量で投与される。
【0040】
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、４か月齢以上かつ５歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表５に従って用量１または用量２から選択される用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表６に記載した用量で投与される。
【0041】
本明細書に記載する治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与される。本明細書に記載する方法の他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与される。
【0042】
本明細書に記載する方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与される。
【0043】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、検出可能なレベルで分泌される。
【0044】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する。
【0045】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入される。
【0046】
好ましい態様では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである。
【0047】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現される。
【0048】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現される。
【0049】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである。
【0050】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ホルミルグリシンを含有する。
【0051】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施態様では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン硫酸化を含む、及び／または（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている。
【0052】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
【0053】
本明細書で提供するある特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＳ前駆体治療の前に、または同時に免疫抑制療法をヒト対象に対して実施し、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む。
【0054】
一部の実施形態では、免疫抑制療法は、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、１つ以上のコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである。
【0055】
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗生物質をヒト対象に対して投与することをさらに含む。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。
【0056】
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法をヒト対象に対して実施することをさらに含む。
【0057】
一部の実施形態では、当該方法は、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーの１つ以上を測定するステップをさらに含む：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル；（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。特定の実施形態では、ＣＳＦ内のＧＡＧは、ＣＳＦ内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、ＣＳＦ内のＧＡＧは、ＣＳＦ内のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、血漿内のＧＡＧは、血漿内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、血漿内のＧＡＧは、血漿内のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、尿内のＧＡＧは、尿内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、尿内のＧＡＧは、尿内のヘパリン硫酸である。特定の実施形態では、測定するステップは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む。別の特定の実施形態では、測定するステップは、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む。
３．１ 例示実施形態
３．１．１．セット１
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、及び前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施すること、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ１８～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２１に記載の方法。
２３．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
２５．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４に記載の方法。
２６．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４に記載の方法。
２７．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．前記測定のステップが、白血球１２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３１のいずれか１つに記載の方法。
３．１．２．セット２
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１８．前記ヒト対象が、４か月齢以上、かつ５歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に従って、用量１または用量２から選択される用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
２１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施し、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ２５に記載の方法。
２７．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ２６に記載の方法。
２８．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ２５～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．１つ以上の前記抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２８に記載の方法。
３０．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ２５～２９のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～３０のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
３２．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１に記載の方法。
３４．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３６．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３７のいずれか１つに記載の方法。
３９．前記測定のステップが、白血球１２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３８のいずれか１つに記載の方法。
３．１ 例示実施形態
３．１．１．セット１
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、及び前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施すること、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ１８～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２１に記載の方法。
２３．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
２５．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４に記載の方法。
２６．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４に記載の方法。
２７．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．前記測定のステップが、白血球１２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３１のいずれか１つに記載の方法。
３．１．２．セット２
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
【表2】
１９．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に従って、用量１または用量２から選択される用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
【表3】
【表4】
２２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施し、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ２５に記載の方法。
２７．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ２６に記載の方法。
２８．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ２５～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．１つ以上の前記抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２８に記載の方法。
３０．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ２５～２９のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～３０のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
３２．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１に記載の方法。
３４．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３６．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３７のいずれか１つに記載の方法。
３９．前記測定のステップが、白血球１２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３８のいずれか１つに記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【0058】
４．図面の簡単な説明
【図1】ヒトＩＤＳのアミノ酸配列である。Ｃ８４の翻訳後ホルミルグリシン修飾（図１に太字で示す）は、酵素活性に必要である。８つのＮ結合型グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）は、太字であり、枠で囲む。１つのチロシン－Ｏ－硫酸化部位（Ｙ）を太字で表しており、そして、全硫酸化部位配列（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を枠で囲む。Ｎ末端の成熟４２ｋＤａ及び成熟１４ｋＤａポリペプチドを、横方向矢印で示す。脳内では、Ｎ末端の成熟４２ｋＤａ形態は、図１に示すように、次のように、３４位または３６位から始まる：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ、及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２を参照されたい）。８つのＮ－結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告される）。
【0059】
【図2】公知のオーソログとのｈＩＤＳとの複数配列アラインメントである。種名及びタンパク質ＩＤは、次の通りである：ＳＰ｜Ｐ２２３０４｜ＩＤＳ＿ＨＵＭＡＮ［ヒト］；ＴＲ｜Ｋ６ＺＧＩ９＿ＰＡＮＴＲ［Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー）］；ＴＲ｜Ｋ７ＢＫＶ４＿ＰＡＮＴＲ［Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー）］；ＴＲ｜Ｈ９ＦＴＸ２＿ＭＡＣＭＵ［Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ（アカゲザル）］、ＴＲＦ７ＥＪＧ２＿ＣＡＬＪＡ［Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ（シロフサミミマーモセット）］、ＴＲ｜Ｕ３ＤＴＬ８＿ＣＡＬＪＡ［Ｃａｌｌｉｔｈｒｉｘ ｊａｃｃｈｕｓ（シロフサミミマーモセット）］、ＴＲ｜Ｇ７ＮＲＸ７＿ＭＡＣＭＵ［Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ（アカゲザル）］、ＴＲ｜Ｇ７Ｑ１Ｖ９＿ＭＡＣＦＡ［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル：シノモログサル）］、ＴＲ｜Ｈ２ＰＸ１０＿ＰＯＮＡＢ［Ｐｏｎｇｏ ａｂｅｌｉｉ（スマトラオランウータン）］、ＴＲ｜Ａ０Ａ０Ｄ９Ｒ４Ｄ１＿ＣＨＬＳＢ［Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ｓａｂａｅｕｓ（ミドリザル）］、ＴＲ｜Ｇ１ＲＳＴ８｜Ｇ１ＲＳＴ８＿Ｎ０ＭＬＥ［Ｎｏｍａｓｃｕｓ ｌｅｕｃｏｇｅｎｙｓ（キタホオジロテナガザル）］、ＵＰＩ００００Ｄ９Ｆ６２５［Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ（アカゲザル）］、ＵＰＩ０００２７４３５８Ｂ［Ｐａｎ ｐａｎｉｓｃｕｓ（ピグミーチンパンジー、ボノボ）］、ＵＰＩ０００２７Ｆ６ＦＣ５［Ｐａｐｉｏ Ａｎｕｂｉｓ（オリーブヒヒ）］、ＵＰＩ０００２７ＦＡＥ０３［Ｓａｉｍｉｒｉ ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ（ボリビアリスザル）］、ＵＰＩ０００３ＡＢＢＦ２８［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、シノモログサル）］、ＵＰＩ０００５３３２９７Ｆ［Ｒｈｉｎｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ｒｏｘｅｌｌａｎａ（キンシコウ（Ｇｏｌｄｅｎ ｓｎｕｂ－ｎｏｓｅｄ ｍｏｎｋｅｙ）、キンシコウ（Ｐｙｇａｔｈｒｉｘ ｒｏｘｅｌｌａｎａ））］、ＵＰＩ０００５Ｆ４０ＢＤ２［Ｃｏｌｏｂｕｓ ａｎｇｏｌｅｎｓｉｓ ｐａｌｌｉａｔｅｓ（ピーターズアンゴラコロブス）］（配列番号２７～４４）。
【0060】
【図3】ｈＩＤＳ、及び対応する軽度、中等度または重度の疾患表現型でのＭＰＳ ＩＩ変異である（Ｕｎｉｐｒｏｔから得た）。
【0061】
【0062】
【図5】コンストラクト１の概略図である。
【0063】
【図6】ＡＡＶキャプシド１～９のＣｌｕｓｔａｌ多重配列アラインメントである（配列番号１６～２６）。アラインメントを行った他のＡＡＶキャプシドでの対応する位置からアミノ酸残基を「動員して」、ＡＡＶ９及びＡＡＶ８キャプシドにアミノ酸置換（一番下の列に太字で示す）を行うことができる。「ＨＶＲ」と表記した配列領域＝超可変領域。
【発明を実施するための形態】
【0064】
５．発明の詳細な説明
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者であるが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。本明細書に記載する発明に従って使用することができる組成物及び方法に関して、全内容を、参照により、本明細書で援用する２０１７年４月１４日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７７７０号（２０１７年１０月１９日にＷＯ／２０１７／１８１１１３として公開された）も参照されたい。
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者であるが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。本明細書に記載する発明に従って使用することができる組成物及び方法に関して、全内容を、参照により、本明細書で援用する２０１７年４月１４日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７７７０号（２０１７年１０月１９日にＷＯ／２０１７／１８１１１３として公開された）も参照されたい。
【0065】
好ましい実施形態では、治療は、遺伝子治療を介して行う、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）、またはｈＩＤＳの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、形質導入した神経細胞、及び／またはグリア細胞の永続的なデポーを作り出すことで、継続的に導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する。神経細胞／グリア細胞デポーからＣＳＦに分泌されるｒｈＩＤＳは、ＣＮＳでの細胞に取り込まれて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正」する。さらに、予期せぬことに、ＣＮＳでの形質導入した神経細胞及びグリア細胞のデポーが、組換え酵素を、ＣＮＳ及び全身の両方に送達することを可能とし、全身治療、例えば、酵素の毎週の静脈内注射の必要性を緩和または解消し得ることが判明した。
【0066】
代替の実施形態では、ｈＩＤＳを、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞の細胞培養物（例えば、バイオリアクター）において生産することができ、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注射して、ＣＳＦに、ＣＮＳに直接に、及び／または全身に投与することができる。しかしながら、酵素は血液脳関門を通過できず、酵素の全身送達ではＣＮＳの治療をもたらさず、本発明の遺伝子治療手法とは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担を強いるだけでなく、感染のリスクを招く反復注射が必要となるので、遺伝子治療手法は、ＥＲＴを上回る幾つかの利点を提供する。
【0067】
導入遺伝子がコードするｈＩＤＳは、限定されないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、及びアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定をされないが、図２に示すＩＤＳのオーソログに対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換などを有するｈＩＤＳの誘導体を含むことができるが、ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まないことを条件とし（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示すように、または、各々を、参照により全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ、及びＰ４８０Ｑ；及び「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されているような、重度、重度－中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において特定された変異を含まないことを条件とする。
【0068】
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２に配置して示したＩＤＳオーソログでの当該位置に認められる対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができるが、ただし、図３に示すような、または、各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，ｓｕｐｒａ；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８（上記）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ｓｕｐｒａで報告されているようなあらゆる有害な変異を含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、インビトロで細胞培養または試験動物で、従来のアッセイを使用して試験して、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのためのインビトロでの従来のアッセイで試験して、ＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものであるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として、例えば、４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３，Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力を、細胞培養で評価することができる。例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入する、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、導入遺伝子産物または誘導体を加える、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作されたヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養して、ＭＰＳ ＩＩ培養細胞の欠陥の修正を決定する、例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞でのＩＤＳ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することによる。（例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）。
【0069】
本明細書に記載する治療薬を評価するために使用することができる、ＭＰＳ ＩＩのための動物モデルが記載されている。例えば、ＭＰＳ ＩＩのノックアウトマウスモデル（ＩＤＳノックアウト）は、ＩＤＳ遺伝子のエクソン４及び５を、ネオマイシン耐性遺伝子で置換して遺伝子操作された。（Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４）。このＩＤＳノックアウトマウスは、骨格異常、肝脾腫大症、尿及び組織ＧＡＧの上昇、及び脳貯蔵病変などのＭＰＳ ＩＩの数多くの特徴を示し（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９）、そして、ＥＲＴの臨床試験を支援するためにＭＰＳ ＩＩでの酵素補充療法の効果を評価するために使用された。したがって、このマウスモデルは、ＭＰＳ ＩＩの治療法として、神経細胞またはグリア細胞が産生するｒＩＤＳを送達する遺伝子療法の効果を研究するための適切なモデルである（例えば、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｐｏｌｉｔｏ ａｎｄ Ｃｏｓｍａ，２００９，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．８５（２）：２９６－３０１を参照されたい）。
【0070】
好ましくは、ヒト神経細胞／ヒトグリア細胞が産生するｈＩＤＳ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御するべきであり、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈＩＤＳ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中プロセシング及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞で使用するそのようなシグナルペプチドとして、以下が挙げられるが、それらに限定されない。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）。
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称され得る。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）。
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称され得る。
【0071】
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞などであるが、これらに限定されない、ＣＮＳでの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特に、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。限定されないが、全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎが記載した、特に好ましくはＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、ならびにその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅが記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクトと称するレンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
【0072】
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒｈＩＤＳベクターの懸濁液を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔への注入に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。
【0073】
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下投与を介して（すなわち、くも膜下腔へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。このことは、いくつかの方法、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができ、または、患者に実行可能であれば、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（一般的には、ＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接に脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達し得る。
【0074】
小児の成長過程の早期に起こる比較的急速な脳成長のために、ＩＣに投与されるＡＡＶ９．ｈＩＤＳの総用量は、異なる年齢層において推定した脳質量に応じて変わる、例えば、以下の表２を参照されたい。治験対象の年齢での脳質量については、例えば、ＡＳ Ｄｅｋａｂａｎ，Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，１９７８ Ｏｃｔ；４（４）：３４５－５６を参照されたい。
【0075】
【表5】
【0076】
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られたＣＳＦ流体でのｒｈＩＤＳの濃度を直接に測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒｈＩＤＳの濃度から外挿によって推定することができる。
【0077】
背景として、ヒトＩＤＳは、図１に記載した８つの潜在的なＮ－グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）を含む５５０個のアミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へと処理される。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面について、図４を参照されたい、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）、及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
【0078】
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後に起こる、または共翻訳事象として起こる、小胞体では、ほぼ確実に起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続し、複合シアル酸含有グリカンを取り入れる、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基を得る。（参照により、簡潔な考察については、全内容を本明細書で援用するＣｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生される、酵素は、あったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
【0079】
本発明は、部分的には、以下の原理に基づく。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、その他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８；及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾については、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することを明らかにした：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ；及び、Ａ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の内の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、クロスコレクションを達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切に処理した非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）を遙かに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表３にまとめる）。
（ｉｖ）本明細書に記載する遺伝子治療手法は、酵素的に活性であるポリアクリルアミドゲル電気泳動（使用するアッセイによる）で測定して約９０ｋＤａのｈＩＤＳ糖タンパク質前駆体の連続分泌をもたらすであろう。まず、ＩＤＳ活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾に関与する酵素であるＦＧｌｙ生成酵素（ＦＧＥ、別名、ＳＵＭＦ１）は、ヒト脳の大脳皮質で発現する（ＳＵＭＦ１の遺伝子発現データは、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄｓのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇでアクセス可能である）。次に、インサイチュで形質導入した神経細胞及びグリア細胞が産生して分泌したグリコシル化／リン酸化ｒＩＤＳは、ＣＮＳでの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ、そして、的確にプロセシングされるであろう。いかなる理論の拘束も受けるものではないが、遺伝子治療によってインサイチュで産生して分泌したｒｈＩＤＳ前駆体は、ＣＮＳに投与した場合、ＥＲＴに使用する従来の組換え酵素よりも、ＣＮＳでのレシピエント細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得る。例えば、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）（線維肉腫細胞株であるＨＴ１０８０で作成）は、精製タンパク質であり、約７６ｋＤａの分子量を有すると報告がされており、神経細胞及びグリア細胞が分泌する高度にリン酸化したと考えられる９０ｋＤａ種のものではない。８つのＮ結合型グリコシル化部位は、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）で完全に占有されており、そして、２つのビスマンノース－６－リン酸末端グリカン、ならびに、高度にシアル化したグリカン複合体を含むことが報告されているが、酵素活性の絶対要件であるＣ８４からＦＧｌｙへの翻訳後修飾は、約５０％にすぎない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７；Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標） Ｆｕｌｌ Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＭＡ ｆｉｌｉｎｇ）。別の組換え産物であるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）は、ＣＨＯ細胞で作成される。Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）よりもＦＧｌｙの多さと活性の高さが報告されているが、マンノース－６－リン酸化と、取り込みについての差異は無かった。（Ｃｈｕｎｇ，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記した表３に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、このものが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善しているので、この活性を高め得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐを高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測されており、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化を受けており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的を分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化で大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を高め、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは、２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込んでいるが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）は組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有しておらず；また、ＣＨＯ細胞が、二等分したＧｌｃＮＡｃも産生せず、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに、ヒトにとって一般的でない（かつ、潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３，ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（“「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」”）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発することができる免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も産生することができる。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｒｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ有効性を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残渣、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特徴物、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（目視不可粒子）が、免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性も高め得る。プロセス関連不純物、及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いによる影響を受ける、また、それらは、商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼす。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産する、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、また、タンパク質産物は、組換え技術で生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝剤系を使用した精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促すこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、例えば、ストレスを負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝剤及び賦形剤での不純物に起因して発生する。インビボで発現するタンパク質は、ストレスを負荷した条件下でも酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより、酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させる。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、薬物動態（クリアランス）に影響を及ぼし得る、また、免疫原となる懸念を増大させる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞での堅牢な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、その他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、そして、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことを示している。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において過小評価される。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、その他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８；及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾については、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することを明らかにした：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ；及び、Ａ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の内の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、クロスコレクションを達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切に処理した非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）を遙かに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表３にまとめる）。
【表6】
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記した表３に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、このものが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善しているので、この活性を高め得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐを高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測されており、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化を受けており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的を分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化で大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を高め、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは、２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込んでいるが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）は組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有しておらず；また、ＣＨＯ細胞が、二等分したＧｌｃＮＡｃも産生せず、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに、ヒトにとって一般的でない（かつ、潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３，ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（“「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」”）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発することができる免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も産生することができる。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｒｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ有効性を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残渣、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特徴物、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（目視不可粒子）が、免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性も高め得る。プロセス関連不純物、及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いによる影響を受ける、また、それらは、商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼす。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産する、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、また、タンパク質産物は、組換え技術で生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝剤系を使用した精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促すこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、例えば、ストレスを負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝剤及び賦形剤での不純物に起因して発生する。インビボで発現するタンパク質は、ストレスを負荷した条件下でも酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより、酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させる。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、薬物動態（クリアランス）に影響を及ぼし得る、また、免疫原となる懸念を増大させる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞での堅牢な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、その他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、そして、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことを示している。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において過小評価される。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
【0080】
上記した理由のために、ヒト神経細胞及び／またはグリア細胞によるｒｈＩＤＳの産生は、例えば、ＭＰＳ ＩＩ疾患（ハンターなどがあるが、これに限定はされない）の診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに、ｒｈＩＤＳをコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給する、ＣＮＳでの永続的なデポーを作成することによる、遺伝子治療を達成するＭＰＳ ＩＩの治療のための「バイオベター」分子をもたらすであろう。デポーからＣＳＦに分泌されるｈＩＤＳ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ ＩＩレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
【0081】
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産される全てのｒｈＩＤＳ分子が完全にグリコシル化する、リン酸化する、及び硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質の集団は、有効性を示すのに十分なグリコシル化（２，６－シアル化、及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を遅延させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または抑制）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患のバイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候、及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
【0082】
遺伝子治療に対する代替治療または追加治療として、ｒｈＩＤＳ糖タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞神経細胞またはグリア細胞が生産することができ、また、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に、及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与することができる）。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株として、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがあるが、これらに限定されない（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説に関するＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
【0083】
ｒｈＩＤＳの送達が、免疫反応を最小化するであろう一方で、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する最も明白な潜在的毒性源は、遺伝的にＩＤＳを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを寛容しない可能性のあるヒト対象において、発現したｒｈＩＤＳタンパク質に対する免疫を生じることである。
【0084】
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特に、ＩＤＳのレベルがゼロに近い重度の疾患を有する患者を治療する場合には適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）とミコフェノール酸との組み合わせ、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レジメンが関係する免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与され得、ある特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処置が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止され得る。
【0085】
他の利用可能な治療の送達を伴う、ＣＳＦに対するｒｈＩＤＳの送達との組み合わせが、本発明の方法に含まれる。さらなる治療を、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に実施することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ得るＭＰＳ ＩＩのために利用可能な治療として、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）を全身的に、またはＣＳＦに対して投与する酵素補充療法、及び／または、ＨＳＣＴ療法があるが、これらに限定されない。
【0086】
特定の態様では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含む。
【0087】
特定の態様では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、当該前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、検出可能なＮｅｕＧｃを含まず、マンノース－６－リン酸化を受けている。
【0088】
特定の態様では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）糖タンパク質前駆体の治療有効量を送達することを含み、当該前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌを含まず、マンノース－６－リン酸化を受けている。
【0089】
ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳ前駆体は、当該ＩＤＳ前駆体をＣＳＦに分泌するように遺伝子操作された中枢神経系の細胞のデポーからＣＳＦに送達する。ある特定の実施形態では、デポーを、当該対象の脳内で形成する。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、ＩＤＳ活性を欠損している。ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
【0090】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与することを含み、当該発現ベクターは、培養物での初代ヒト神経細胞を形質導入するために使用する場合、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、マンノース－６－リン酸化を受けている。
【0091】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳の脊髄液に向けて、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、α２，６－シアル化を受けている、そして、マンノース－６－リン酸化を受けている組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌するデポーを当該対象の中枢神経系に形成する。
【0092】
ある特定の実施形態では、α２，６－シアル化した当該組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体の分泌を、細胞培養で、ヒト神経細胞株に当該組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。ある特定の実施形態では、マンノース－６－リン酸化した前記組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体の分泌を、細胞培養で、ヒト神経細胞株に当該組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。ある特定の実施形態では、マンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で分泌を確認する。
【0093】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳の脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、α２，６－シアル化グリカンを含有するグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、α２，６－シアル化グリカンを含む当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
【0094】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象を治療する方法であり、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、マンノース－６－リン酸を含むグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、マンノース－６－リン酸化した当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
【0095】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象を治療する方法であり、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、ホルミルグリシンを含むグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、ホルミルグリシンを含有する当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
【0096】
ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ導入遺伝子は、リーダーペプチドをコードする。ある特定の実施形態では、発現ベクターは、複製欠損ＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、発現ベクターは、くも膜下内（例えば、大槽内、患者に対して実施可能であればＣ１－２穿刺、または腰椎穿刺）、脳室内、または鼻腔内投与によって、当該対象のＣＳＦに送達する。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、ＩＤＳ活性が欠損している。
【0097】
好ましい実施形態では、グリコシル化ＩＤＳは、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌを含まない。本明細書で使用する「検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ」という表現は、当該技術分野で公知の標準的なアッセイ方法によって検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ部分のことを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、ＮｅｕＧｃを検出する方法に関して、参照により、本明細書で援用する、Ｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，“Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌ－ａｎｄ Ｎ－Ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｕｒｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｔ Ｓｅｒｕｍ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－Ｐｈａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．” Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄ．３７７：１１１－１１９に従ってＨＰＬＣで検出し得る。あるいは、ＮｅｕＧｃは、質量分析で検出し得る。α－Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡを使用して検出し得、例えば、Ｇａｌｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，“Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｌｐｈａ－Ｇａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－Ｇａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．” Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．６５（８）：１１２９－３２を参照されたい、または、質量分析を使用して検出し得、例えば、Ａｙｏｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１３，“Ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｂｙ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ，ｍｉｄｄｌｅ－ｕｐ，ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｗｎ ａｎｄ ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ ＥＳＩ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．” Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．５（５）：６９９－７１０を参照されたい。また、Ｐｌａｔｔｓ－Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，“Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｉｄｅ－Ｃｈａｉｎ Ａｌｐｈａ－ｇａｌ” Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．３５（２）：２４７－２６０で引用している文献も参照されたい。
【0098】
一態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、ヒトの神経細胞またはグリア細胞が産生する治療有効量のグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して誘導し、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで脳質量を決定する。
【0099】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、ヒト対象の脳質量を、ヒト対象の脳ＭＲＩで決定して、続いて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量をヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。
【0100】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供して、（ａ）ヒト対象の脳ＭＲＩからヒト対象の脳質量を決定すること、（ｂ）ヒト対象の脳質量に基づいて用量を計算すること、及び（ｃ）続いて、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの当該用量を、当該対象のＣＳＦに投与することを含む。
【0101】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、（ａ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること（ｂ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを測定すること、及び（ｃ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを、参照集団でのヘパラン硫酸のレベルと比較することを、この順序で含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって誘導し、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で脳質量を決定する。ある特定の実施形態では、参照集団は、（ａ）少なくとも１、２、３、４、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、２５０、３００、４００、５００、または１０００名のＭＰＳ ＩＩでない健常者からなり、好ましくは、ヒト対象と同様の年齢、体重、及び／または同じ性別の健常者からなる。
【0102】
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、（ａ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルに関する第１の測定を行うこと、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること、及び（ｃ）一定期間の後に、ヘパラン硫酸のレベルに関する第２の測定を行うことを、この順序で含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって誘導すし、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で脳質量を決定する。ある特定の実施形態では、当該期間は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、１１か月、または１年である。
【0103】
好ましい実施態様では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＮＳでの細胞が取り込む。好ましい実施態様では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＮＳでの細胞のリソソームに送達する。
【0104】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積ｃｍ３からヒト対象の脳質量に変換し、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
【0105】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。
【0106】
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、５歳以上、かつ１８歳未満である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、約５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、表７に記載した用量で投与する。
【0107】
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、４か月齢以上、かつ５歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表５に従って用量１または用量２から選択する用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表６に記載した用量で投与する。
【0108】
本明細書に記載する治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する。本明細書に記載する方法の他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する。
【0109】
本明細書に記載する方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する。
【0110】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される。
【0111】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する。
【0112】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞を、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する。
【0113】
好ましい態様では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである。
【0114】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する。
【0115】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する。
【0116】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである。
【0117】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ホルミルグリシンを含有する。
【0118】
本明細書に記載する治療方法の特定の実施態様では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン硫酸化を含む、及び／または（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている。
【0119】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
【0120】
本明細書で提供するある特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＳ前駆体治療の前に、または同時に免疫抑制療法をヒト対象に対して実施し、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む。
【0121】
一部の実施形態では、免疫抑制療法は、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、１つ以上のコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである。
【0122】
特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１１ｍｇ／ｋｇ、０．１２ｍｇ／ｋｇ、０．１３ｍｇ／ｋｇ、０．１４ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１６ｍｇ／ｋｇ、０．１７ｍｇ／ｋｇ、０．１８ｍｇ／ｋｇ、０．１９ｍｇ／ｋｇ、０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．２１ｍｇ／ｋｇ、０．２２ｍｇ／ｋｇ、０．２３ｍｇ／ｋｇ、０．２４ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２６ｍｇ／ｋｇ、０．２７ｍｇ／ｋｇ、０．２８ｍｇ／ｋｇ、０．２９ｍｇ／ｋｇ、０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．３１ｍｇ／ｋｇ、０．３２ｍｇ／ｋｇ、０．３３ｍｇ／ｋｇ、０．３４ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．３６ｍｇ／ｋｇ、０．３７ｍｇ／ｋｇ、０．３８ｍｇ／ｋｇ、０．３９ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇ、０．４１ｍｇ／ｋｇ、０．４２ｍｇ／ｋｇ、０．４３ｍｇ／ｋｇ、０．４４ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．４６ｍｇ／ｋｇ、０．４７ｍｇ／ｋｇ、０．４８ｍｇ／ｋｇ、０．４９ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．１０ｍｇ／ｋｇ～約０．２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．２０ｍｇ／ｋｇ～約０．３０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．３０ｍｇ／ｋｇ～約０．４０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．４０ｍｇ／ｋｇ～約０．５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．５０ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、これらの用量は、毎日投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、０．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与することを含む。別の特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、０．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与することを含み、漸減及び中止する。
【0123】
ある特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約０．５０ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約２．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約３．０ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約５．０ｍｇ／ｋｇ～約１０．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１０．０ｍｇ／ｋｇ～約１５．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１５．０ｍｇ／ｋｇ～約２０．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを１度投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、静脈内投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、最大で５００ｍｇ投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、少なくとも３０分間にわたって投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量で、少なくとも３０分間にわたって、最大で５００ｍｇを投与することを含む。
【0124】
ある特定の実施形態では、免疫抑制療法は、１～３ｎｇ／ｍＬの標的血中レベルを維持する用量でシロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約０．２５ｍｇ／ｍ２／日、０．３ｍｇ／ｍ２／日、０．４ｍｇ／ｍ２／日、０．５ｍｇ／ｍ２／日、０．６ｍｇ／ｍ２／日、０．７ｍｇ／ｍ２／日、０．８ｍｇ／ｍ２／日、０．９ｍｇ／ｍ２／日、１ｍｇ／ｍ２／日、１．２５ｍｇ／ｍ２／日、１．５ｍｇ／ｍ２／日、１．７５ｍｇ／ｍ２／日、２ｍｇ／ｍ２／日、２．２５ｍｇ／ｍ２／日、２．５ｍｇ／ｍ２／日、２．７５ｍｇ／ｍ２／日、３ｍｇ／ｍ２／日、３．２５ｍｇ／ｍ２／日、３．５ｍｇ／ｍ２／日、３．７５ｍｇ／ｍ２／日、４ｍｇ／ｍ２／日、４．２５ｍｇ／ｍ２／日、４．５ｍｇ／ｍ２／日、４．７５ｍｇ／ｍ２／日、または５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、０．２５ｍｇ／ｍ２／日～約０．５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約０．５０ｍｇ／ｍ２／日～約１．０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１．０ｍｇ／ｍ２／日～約１．５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１．５ｍｇ／ｍ２／日～約２ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約２ｍｇ／ｍ２／日～約５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、用量を、ＢＩＤ投与用に分割する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１ｍｇ／ｍ２／日の用量で、４時間ごとに投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、ＢＩＤ投与用に分割した約０．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与することを含む。
【0125】
特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、２～４ｎｇ／ｍＬの標的血中レベルを維持する用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、または０．１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０１ｍｇ／ｋｇ～０．０２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０２ｍｇ／ｋｇ～０．０３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０３ｍｇ／ｋｇ～０．０５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０５ｍｇ／ｋｇ～０．０７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０７ｍｇ／ｋｇ～０．１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、当該用量を、１日２回投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、約０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回投与することを含む。
【0126】
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。別の特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、及び／またはスルファメトキサゾールである。別の特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約１ｍｇ／ｋｇ～２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約２ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約５ｍｇ／ｋｇ～７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約７ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、週に約３回の用量で投与する。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎を予防するために投与する。
【0127】
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法をヒト対象に実施することをさらに含む。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗真菌療法は、絶対好中球数が５００ｍｍ３未満であれば開始する。
【0128】
一部の実施形態では、当該方法は、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーの１つ以上を測定するステップをさらに含む：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル；（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。特定の実施形態では、ＣＳＦ中のＧＡＧは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、ＣＳＦ中のＧＡＧは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、血漿中のＧＡＧは、血漿中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、血漿中のＧＡＧは、血漿中のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、尿中のＧＡＧは、尿中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、尿中のＧＡＧは、尿中のヘパリン硫酸である。特定の実施形態では、測定するステップは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定すること含む。別の特定の実施形態では、測定するステップは、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む。
【0129】
本明細書に記載する治療方法の特定の実施態様では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、液体組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結乾燥組成物、または再構成凍結乾燥組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＩＣまたはＩＣＶ投与のための様々な剤形で製剤し得る。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、本明細書に提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、単位投与量製剤または複数投与量製剤で提供し得る。本明細書で使用する単位投与量製剤とは、ヒト及び動物対象への投与に適した物理的に別個の単位のことを指しており、当該技術分野で公知の包装方法で個別に包装する。それぞれの単位投与量製剤は、必要な医薬担体または賦形剤と共同して所望の治療効果を奏する上で十分な所定量の当該組換えヌクレオチド発現ベクター、及び／またはその他の成分（複数可）を含む。単位投与量製剤の例として、アンプル、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。
【0130】
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、単位投与量を、その一部またはその倍数の用量で投与し得る。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、複数単位投与量とは、単一の容器に同一の単位投与量が複数入れてあり、当該単位投与量に分けて投与する。複数単位投与量の例として、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、８．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．８×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．７×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．２×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．９×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、５．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、６．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、７．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、８．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．０×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．０×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．２×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．４×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．５×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．６×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．７×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．８×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．９×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．０×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．１×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．２×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．３×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．４×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．５×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．６×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。
【0131】
本明細書で使用する用語「約」は、所定の値または範囲の±１０％以内にあることを意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±２％以内であることを意味する、また、この数値は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する用量である、そして、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±５％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±７％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１０％以内であることを意味する、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。しかしながら、本明細書では、用語「約」が、その用語に接続している正確な数値の詳細を示すことも理解されたい。例えば、「約１０」は、数字の「１０」に関する詳細を的確に提供する。
【0132】
５．１ プロセシング、Ｎ－グリコシル化、及びチロシン硫酸化
５．１．１．プロセシング
ヒトＩＤＳは、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内ＩＤＳ前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ ＩＤＳ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へとプロセシングされる。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）；及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
５．１．１．プロセシング
ヒトＩＤＳは、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内ＩＤＳ前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ ＩＤＳ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へとプロセシングされる。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）；及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
【0133】
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後事象、または共翻訳事象として、小胞体では、ほぼ確かに起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続され、複合シアル酸含有グリカンを取り入れ、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基の取得を含む。（参照により、その全内容を本明細書で援用する簡潔な考察については、Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。
【0134】
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞において、インビボまたはインビトロで発現する場合、９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）の酵素のマンノース－６－リン酸化形態とすることができる。神経細胞及びグリア細胞から産生したＩＤＳは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５が報告しているように、Ｍ６Ｐをより高含量で含み得る（このことは、ヒトの脳が、他の組織よりも（定量的及び定性的の双方の意味で）Ｍ６Ｐ糖タンパク質を多く含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているようにして行うことができる。
【0135】
したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、非神経細胞またはグリア細胞において発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。特に、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、ＨＴ１０８０またはＣＨＯ細胞で発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。ある特定の実施形態では、発現したＩＤＳのマンノース－６－リン酸化レベルは、Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ Ｍ６Ｐ）の存在下でのヒト神経細胞によるＩＤＳの取り込みによって測定する。ある特定の実施形態では、インビボまたはインビトロで神経細胞またはグリア細胞で発現させると、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％は、マンノース－６－リン酸化を受ける。
【0136】
５．１．２ Ｎ－グリコシル化
ＣＮＳでの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化など、分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ｈＩＤＳは、図１に示す８つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位を有する（Ｎ３１ＳＴ、Ｎ１１５ＦＳ、Ｎ１４４ＨＴ、Ｎ２４６ＩＴ、Ｎ２８０ＩＳ、Ｎ３２５ＳＴ、Ｎ５１３ＦＳ、Ｎ５３７ＤＳ）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素、合ったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
ＣＮＳでの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化など、分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ｈＩＤＳは、図１に示す８つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位を有する（Ｎ３１ＳＴ、Ｎ１１５ＦＳ、Ｎ１４４ＨＴ、Ｎ２４６ＩＴ、Ｎ２８０ＩＳ、Ｎ３２５ＳＴ、Ｎ５１３ＦＳ、Ｎ５３７ＤＳ）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素、合ったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
【0137】
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産する全ての分子が完全にグリコシル化され、硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産した糖タンパク質の集団には、有効性を示す上で十分なグリコシル化及び硫酸化を与えるであろう。
【0138】
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、そのＮ－グリコシル化部位の１００％でグリコシル化し得る。しかしながら、当業者であれば、グリコシル化のメリットが達成するためには、必ずしも全てのＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位がＮ－グリコシル化する必要はないことを認識する。むしろ、グリコシル化のメリットは、Ｎ－グリコシル化部位の一定の割合のみがグリコシル化する場合、及び／または発現したＩＤＳ分子の一定の割合のみがグリコシル化する場合に実現し得る。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、その利用可能なＮ－グリコシル化部位の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％でグリコシル化する。ある特定の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％が、それらの利用可能なＮ－グリコシル化部位の少なくとも１つでグリコシル化する。
【0139】
特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＳを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳに存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または、その他の関連した残基）でグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％が、グリコシル化する。
【0140】
別の特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＳを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子に存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または、その他の関連した残基）に結合する同一の結合したグリカンによってグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、同一の結合したグリカンを有する。
【0141】
重要なことに、本明細書に記載する方法に従って使用するＩＤＳタンパク質が神経細胞またはグリア細胞において発現する場合、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）でのインビトロ生産の必要性が回避される。その代わりに、本明細書に記載する治療方法（例えば、ＩＤＳを発現させるための神経細胞またはグリア細胞の使用）の結果、ＩＤＳタンパク質のＮ－グリコシル化部位は、有利なことに、ヒトの治療に適切で、及び有益なグリカンで修飾され、特に、治療の標的箇所で修飾される。ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉをタンパク質生産に利用する場合、そのような利点は得られない。なぜなら、例えば、ＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトランスフェラーゼを発現せず、したがって、Ｎ－グリコシル化の間、２，６シアル酸を付加することができず、（２）シアル酸としてＮｅｕ５Ａｃの代わりにＮｅｕ５Ｇｃを付加し得るからであり、Ｅ．ｃｏｌｉは、天然にはＮ－グリコシル化に必要な構成要素を含まないからである。さらに、このような利点は、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞を、タンパク質産生のために利用しても達成し得ない。したがって、一実施形態では、神経細胞またはグリア細胞において発現して、本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、ＣＨＯ細胞においてタンパク質がグリコシル化する様式ではグリコシル化しない。別の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞で発現して本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、そのようなグリコシル化は、原核生物宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉを使用した場合は自然には達成できない。一実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞で発現して、本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、タンパク質がヒト神経細胞またはヒトグリア細胞においてＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞においてタンパク質がグリコシル化を受ける様式ではグリコシル化されない。
【0142】
タンパク質のグリコシル化パターンを決定するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、ヒドラジン分解は、グリカンを分析するために使用することができる。まず、多糖を、ヒドラジンとインキュベーションして、会合するタンパク質から放出させる（Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｉｂｅｒａｔｅ Ｈｙｄｒａｚｉｎｏｌｙｓｉｓ Ｇｌｙｃａｎ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｋｉｔ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジンは、多糖とキャリアタンパク質との間のグリコシド結合を攻撃して、結合したグリカンを放出させる。Ｎ－アセチル基が、この処理の間に失われ、再度のＮ－アセチル化によって再構成しなくてはならない。遊離グリカンは、炭素カラム上で精製され、続いて、蛍光色素分子である２－アミノベンズアミドを使用して還元末端を標識することができる。標識多糖は、Ｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２，３０４（１）：７０－９０のＨＰＬＣプロトコールに従って、ＧｌｙｃｏＳｅｐ－Ｎカラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で分離することができる。結果として生じる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さ、及び繰り返し単位の数を示す。構造情報は、個々のピークを収集する、続いて、ＭＳ／ＭＳ分析を実施して集めることができる。それにより、繰り返し単位の単糖の組成及び配列を確認することができ、さらに多糖の組成の均一性を特定することができる。低分子量の特定のピークは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ／ＭＳによって分析でき、その結果を使用してグリカン配列を確認することができる。それぞれのピークは、ある特定の数の繰り返し単位、及びそのフラグメントからなるポリマーに対応する。このように、クロマトグラムを使用すれば、ポリマー長の分布の測定が可能となる。溶出時間は、ポリマー長の指標である一方で、蛍光強度は、それぞれのポリマーのためのモル存在量と相関する。
【0143】
タンパク質と関連するグリカンパターンの均一性は、グリカン長、及びグリコシル化部位全体に存在するグリカンの数と関係しているので、この均一性は、当該技術分野で公知の方法、例えば、グリカン長と流体力学半径を測定する方法を使用して評価することができる。サイズ排除ＨＰＬＣは、流体力学半径の測定を可能にする。タンパク質でのグリコシル化部位の数が多いほど、グリコシル化部位がより少ないキャリアと比較して、流体力学半径のばらつきがより大きくなる。しかしながら、単一のグリカン鎖を分析する場合、それらは、長さがより高度に制御されるために、より均一になり得る。グリカン長は、ヒドラジン分解、ＳＤＳ ＰＡＧＥ、及びキャピラリーゲル電気泳動によって測定することができる。加えて、均一であることは、ある特定のグリコシル化部位の使用パターンがより広い／より狭い範囲に変化することも意味し得る。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ－ＭＳ／ＭＳで測定することができる。
【0144】
Ｎ－グリコシル化は、本明細書に記載する方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳに多くのメリットを与える。そのようなメリットは、Ｅ．ｃｏｌｉでのタンパク質生産では得られない。それはすなわち、Ｅ．ｃｏｌｉは、Ｎ－グリコシル化に必要とする構成要素を天然には有しないためである。さらに、一部のメリットは、例えば、ＣＨＯ細胞でのタンパク質生産では得られない。それは、ＣＨＯ細胞が、特定のグリカン（例えば、２，６シアル酸）の付加に必要な構成要素を欠いており、ヒトにとって一般的でないグリカン、例えば、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及び大部分の個体において免疫原性であり、高濃度ではアナフィラキシーを誘発し得るα－Ｇａｌ抗原を付加し得るからである。さらに、一部のメリットは、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞でのタンパク質産生では得られない。したがって、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞でのＩＤＳの発現は、有益なグリカンを含むＨｕＧｌｙＩＤＳを生産するが、このものと、ＣＨＯ細胞、またはＥ．ｃｏｌｉ、または神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞が産生したタンパク質との関連性はない。
【0145】
５．１．３ チロシン硫酸化
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に関するＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である－しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を止めるＲ、Ｋ、またはＨではない）。
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に関するＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である－しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を止めるＲ、Ｋ、またはＨではない）。
【0146】
重要なことに、チロシン硫酸化タンパク質は、チロシン硫酸化に求められる酵素を天然には有しないＥ．ｃｏｌｉでは生産することができない。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシン硫酸化について欠陥がある。この細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化のための能力が限られている。例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７を参照されたい。有利なことに、本明細書で提供する方法は、分泌型であり、かつチロシン硫酸化のための能力を備える神経細胞またはグリア細胞でのＩＤＳ、例えば、ＨｕＧｌｙＩＤＳの発現を必要とする。チロシン硫酸化を検出するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４を参照されたい。
【0147】
ヒトＣＮＳ細胞での堅実な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させる。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていないが、他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が高まり、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６、及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに、脳において高レベルで（ｍＲＮＡに基づいて）発現する（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認め得る）。
【0148】
５．２ コンストラクト及び製剤
イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。本明細書で提供するウイルスベクター、及び他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。本明細書で提供するウイルスベクター、及び他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
【0149】
一部の態様では、本開示は、使用のための核酸を提供をし、当該核酸は、ＩＤＳ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１アルファプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリベータ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター、及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターと機能的に連結されているｈＩＤＳをコードする。
【0150】
ある特定の実施形態では、本明細書では、１つ以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベクターを提供する。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡとの組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、関心対象の遺伝子配列（導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）、非翻訳領域、及び終止配列からなる群から選択される１つ以上の配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、関心対象の遺伝子と機能的に連結したプロモーターを含む。
【0151】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示する核酸（例えば、ポリヌクレオチド）及び核酸配列は、例えば、当業者に公知のあらゆるコドン－最適化技術を介して、コドン最適化することができる（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９：１４９－１６１を参照されたい）。
【0152】
別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを含む製剤を提供し、当該製剤は、ヒト脳の脳脊髄液への投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。例えば、製剤は、ヒト脳の脳脊髄液への投与に適した緩衝液（例えば、特定のｐＨを有する緩衝液、または特定の成分を含有する緩衝液）を含有し得、それにより、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌するデポーを、ヒト中枢神経系で形成する。特定の実施形態では、緩衝液は、生理学的に適合する水性緩衝液、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む。
【0153】
別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクター、及び医薬として許容可能な担体を含むキットを提供し、当該組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト脳の脳脊髄液（ＣＳＦ）への投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを含む製剤を含むキットを提供し、当該製剤は、ヒト脳のＣＳＦへの投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。本明細書に記載するキットは、１つ以上の容器中に組換えヌクレオチド発現ベクター、または製剤を含む。そのような１つ以上の容器には、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が任意に伴い、この通知は、当該機関が、ヒトへの投与に関して、製造、使用、または販売を承認していることを反映している。
【0154】
本明細書が包含する製剤及びキットは、本開示で提供するヒト患者の治療方法に従って使用することができる。
【0155】
５．２．１．ｍＲＮＡ
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、全内容を参照により本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳをコードする修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、全内容を参照により本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳをコードする修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
【0156】
５．２．２．ウイルスベクター
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）をベースとしたベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように改変されている。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置されるＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）をベースとしたベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように改変されている。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置されるＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
【0157】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＨＩＶをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＨＩＶをベースとしたベクターは少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、ｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子はＨＩＶゲノム由来であり、ｅｎｖ遺伝子は、別のウイルス由来である。
【0158】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、単純ヘルペスウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供する単純ヘルペスウイルスをベースとしたベクターは、１つ以上の前初期（ＩＥ）遺伝子を含まず、そのために細胞傷害性がなくなるように改変されている。
【0159】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＭＬＶをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＭＬＶをベースとしたベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに最大で８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
【0160】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、レンチウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、レンチウイルスキャプシドにパッケージングされる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、以下のエレメントうちの１つ以上を含む：長い末端反復配列、プライマー結合部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、及びキャプシド化部位。
【0161】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、アルファウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターは、組換え、複製欠損アルファウイルスである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターのアルファウイルスレプリコンは、それらのビリオン表面に機能的な異種リガンドを提示することで、特定の細胞種が標的とされる。
【0162】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶをベースとしたウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０をベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０をベースとしたウイルスベクターは、ＣＮＳ細胞への向性を保持する。複数のＡＡＶ血清型が特定されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型に由来する成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１のうちの１つ以上に由来する成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１血清型の１つ以上に由来する成分を含む。ＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターが、本明細書に記載する方法で使用される。ＡＡＶをベースとしたウイルスベクターの核酸配列ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャプシドの作製方法は、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号で教示している。ある態様では、導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０）をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、ＩＤＳをコードするＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。なおも特定の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。
【0163】
特定の実施形態では、（ｉ）調節エレメントの制御下にあり、ＩＴＲと隣接している導入遺伝子を含む発現カセット、及び（ｉｉ）ＡＡＶ９キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有する、またはＡＡＶ９キャプシドタンパク質（配列番号２６）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％が同一であり、同時にＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシドを含む人工ゲノムを含むＡＡＶ９ベクターを提供する。ある特定の実施形態では、コードされたＡＡＶ９キャプシドは、配列番号２６の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有し、ＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持する。図６は、ＳＵＢＳと表示した列での比較に基づいて配置した配列の特定の位置で置換し得る潜在的アミノ酸を有する異なるＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アラインメントを提供する。したがって、特定の実施形態では、ＡＡＶ９ベクターは、ネイティブＡＡＶ９配列での当該位置に存在しない図６のＳＵＢＳ列において特定される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有するＡＡＶ９キャプシドバリアントを含む。
【0164】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、全内容を、参照により、本明細書で援用するＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８に記載の、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の、以下のアミノ酸挿入のうちの１つを含む：ＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９，４５８，５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の、ＡＡＶ．７ｍ８である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号で開示される任意のＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する以下の特許及び特許出願のいずれかで開示するＡＡＶである：米国特許第７，９０６，１１１号、第８，５２４，４４６号、第８，９９９，６７８号、第８，６２８，９６６号、第８，９２７，５１４号、第８，７３４，８０９号、米国第９，２８４，３５７号、第９，４０９，９５３号、第９，１６９，２９９号、第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号、及び第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、第２０１５／０１２６５８８号、第２０１７／００６７９０８号、第２０１３／０２２４８３６号、第２０１６／０２１５０２４号、第２０１７／００５１２５７号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５。
【0165】
ある特定の実施形態では、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）は、上記した通りにして使用することができる。ある特定の実施形態では、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＷｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２，ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６（１２４８～１２５４ページ）、及び米国特許第６，５９６，５３５号、第７，１２５，７１７号、及び第７，４５６，６８３号を参照されたい）。
【0166】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するウイルスベクターは、アデノウイルスをベースとしたウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、ＩＤＳの導入に使用し得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有する、Ｅ３欠失を有していてもいなくてもよく、かついずれかの欠失した領域に発現カセットが挿入された第一世代のベクターであり得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全または部分的欠失を含む第二世代のベクターであり得る。ヘルパー依存型アデノウイルスは、アデノウイルス逆方向末端反復及びパッケージングシグナル（ｐｈｉ）だけを保持する。導入遺伝子は、パッケージングシグナル及び３’ＩＴＲの間に挿入され、人工ゲノムのサイズをおよそ３６ｋｂの野生型サイズに近く維持するスタッファー配列の有無は問わない。アデノウイルスベクターの生産のための例示的なプロトコールは、全内容を、参照により、本明細書で援用するＡｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７に見出すことができる。
【0167】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するウイルスベクターは、レンチウイルスをベースとしたウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターを、ＩＤＳの導入に使用することができる。４つのプラスミドが、コンストラクトを作成するために使用される：Ｇａｇ／ｐｏｌ配列を含むプラスミド、Ｒｅｖ配列を含むプラスミド、エンベロープタンパク質を含むプラスミド（すなわち、ＶＳＶ－Ｇ）、ならびにパッケージングエレメント、及びＩＤＳ遺伝子を有するＣｉｓプラスミド。
【0168】
レンチウイルスベクター産生のために、４つのプラスミドが、細胞（すなわち、ＨＥＫ２９３をベースとした細胞）と共トランスフェクションされ、それにより特に、ポリエチレンイミンまたはリン酸カルシウムをトランスフェクション薬剤として使用し得る。続いて、レンチウイルスは上清で採取される（レンチウイルスは、細胞から出芽させて活性を保つ必要があるので、細胞の回収を行う必要はない／すべきではない）。上清を濾過し（０．４５μｍ）、続いて、塩化マグネシウム及びベンゾナーゼを加える。さらに下流のプロセスは、非常に様々であり、ＴＦＦ及びカラムクロマトグラフィーの使用が最もＧＭＰに適合するプロセスである。他のプロセスでは、カラムクロマトグラフィーを使用する／使用しない超遠心分離を使用する。レンチウイルスベクターの作製のための例示的なプロトコールは、両方とも全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ２９３Ｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：５３１－５３８、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＧＭＰ－Ｇｒａｄｅ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１０（２）：３２－４３に見出すことができる。
【0169】
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するベクターはＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または適切な細胞（例えば、インビボまたはインビトロで神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＳのグリコシル化バリアントを形質導入した細胞が発現する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するベクターはＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（例えば、インビボまたはインビトロの神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＳの硫酸化バリアントを細胞が発現する。
【0170】
５．２．３．遺伝子発現のプロモーター及び修飾因子
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合または細胞への標的化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能なマーカーまたは選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合または細胞への標的化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能なマーカーまたは選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
【0171】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。代替の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ネイティブのＩＤＳ遺伝子は、大部分のハウスキーピング遺伝子と同様に、主にＧＣリッチプロモーターを使用する。好ましい実施形態では、ｈＩＤＳの持続的な発現を提供する強力な構成的プロモーターを使用する。そのようなプロモーターには、「Ｃ」－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント、「Ａ」－ニワトリベータアクチン遺伝子のプロモーターならびに第一エキソン及びイントロン、ならびに「Ｇ」－ウサギベータ－グロビン遺伝子のスプライスアクセプターを含む「ＣＡＧ」合成プロモーターがある（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７９：２６９－２７７、及びＮｉｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９を参照されたい）。
【0172】
ある特定の実施形態では、プロモーターはＣＢ７プロモーターである（全内容を、参照により、本明細書で援用するＤｉｎｃｕｌｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：６４９－６６３を参照されたい）。一部の実施形態では、ＣＢ７プロモーターは、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメントを含む。ある特定の実施形態では、その他の発現制御エレメントには、ニワトリβ－アクチンイントロン及び／またはウサギβ－グロビンｐｏｌＡシグナルがある。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、１つ以上のエレメントを含む。ある特定の実施形態では、１つ以上のプロモーターエレメントは、互いに対して逆向きにしても、位置を変えてもよい。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、協働的に機能するように配置される。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、独立して機能するように配置される。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）長鎖末端反復配列、及びラットインスリンプロモーターからなる群から選択される１つ以上のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＡＡＶ、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２ ＬＴＲからなる群から選択される１つ以上の長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、１つ以上の組織特異的プロモーター（例えば、神経細胞特異的プロモーター）を含む。
【0173】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、プロモーター以外の１つ以上の調節エレメントを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、エンハンサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、リプレッサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を含む。
【0174】
５．２．４．シグナルペプチド
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）が細胞内で適切に局在化することを可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）を細胞から分泌することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表４に見出すことができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）が細胞内で適切に局在化することを可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）を細胞から分泌することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表４に見出すことができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
【表7】
【0175】
５．２．５．非翻訳領域
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、所望のレベルのタンパク質発現に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造に関して最適化される。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、所望のレベルのタンパク質発現に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造に関して最適化される。
【0176】
５．２．６．逆方向末端反復
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
【0177】
５．２．７．導入遺伝子
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＳ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＳは、神経細胞での発現のために、好適な発現制御エレメントによって制御される。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一であるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＳ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＳは、神経細胞での発現のために、好適な発現制御エレメントによって制御される。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一であるアミノ酸配列を含む。
【0178】
導入遺伝子がコードするＨｕＧｌｙＩＤＳは、限定されないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、ならびにアミノ酸の置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳの誘導体、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログにおいて対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含む当該誘導体を含むことができるが、ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まない（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）；及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において特定された変異を含まないことを条件とする。
【0179】
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２でアラインメントしたＩＤＳオーソログでの当該位置に認める対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができるが、ただし、そのような置換は、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６（上記）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，（上記）、または、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１（上記）で報告されたような有害な変異のいずれも含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、インビトロでの細胞培養、または試験動物で、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証するための従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、インビトロでの細胞培養、または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのための従来のアッセイによって試験するＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用できる例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３、Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力は、細胞培養において評価することができる。例えば、培養において、ＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入すること、培養において、ＭＰＳ ＩＩ細胞に、当該導入遺伝子または誘導体を加えること、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作されたヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養することにより、及び、ＭＰＳ ＩＩ細胞培養での欠陥の修正を、例えば、培養でのＭＰＳ ＩＩ細胞のＩＤＳ酵素活性、及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出して決定することにより、評価することができる（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）。
【0180】
５．２．８．コンストラクト
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列。
【0181】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを次の順序で含む：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列。ここで、導入遺伝子はシグナルペプチドを含む。
【0182】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。
【0183】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。ここで、導入遺伝子は、シグナルペプチドを含み、導入遺伝子はｈＩＤＳをコードする。
【0184】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載するウイルスベクターは、図５に例示したエレメントを例示した順序で含む。
【0185】
５．２．９．ベクターの製造及び試験
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター由来の宿主細胞を使用して製造することができる。
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター由来の宿主細胞を使用して製造することができる。
【0186】
宿主細胞は、導入遺伝子及び関連するエレメント（すなわち、ベクターゲノム）、及びウイルスを宿主細胞で生産する手段、例えば、複製及びキャプシド遺伝子（例えば、ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）をコードする配列を使用して安定的に形質転換される。ＡＡＶ８キャプシドを有する組換えＡＡＶベクターを生産する方法については、その全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号の詳細な説明の第ＩＶ節を参照されたい。上記ベクターのゲノムコピー力価は、例えば、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析によって決定することができる。ビリオンは、例えば、ＣｓＣｌ２沈降によって回収することができる。
【0187】
インビトロアッセイ、例えば、細胞培養アッセイを、本明細書に記載するベクターからの導入遺伝子発現を測定するために使用することができ、したがって、例えば、ベクターの効力を示すことができる。例えば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ細胞株、または神経細胞またはグリア細胞、または神経細胞またはグリア細胞の前駆細胞に由来するその他の細胞株を、導入遺伝子発現を評価するために使用することができる。発現すると、ＨｕＧｌｙＩＤＳと関連したグリコシル化及びチロシン硫酸化のパターンの決定など、発現産物（すなわち、ＨｕＧｌｙＩＤＳ）の特性を決定することができる。
【0188】
５．２．１０．組成物
本明細書に記載する導入遺伝子をコードするベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な（例えば、ＣＳＦ、及び、例えば、神経細胞への投与のための）担体は、当業者により容易に選択されるであろう。
本明細書に記載する導入遺伝子をコードするベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な（例えば、ＣＳＦ、及び、例えば、神経細胞への投与のための）担体は、当業者により容易に選択されるであろう。
【0189】
５．３ 遺伝子治療
ＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象への治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ ＩＩを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するための方法、特に、ＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法を、ハンター症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
ＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象への治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ ＩＩを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するための方法、特に、ＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法を、ハンター症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
【0190】
５．３．１．標的患者集団
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、軽度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、ハンター症候群の診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、軽度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、ハンター症候群の診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。
【0191】
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者、すなわち、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳを使用する治療に応答を示すことが認められた患者に投与する。
【0192】
ある特定の態様では、組換えベクターの治療有効量を、小児患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、３歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、２～４歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、４か月齢以上、かつ５歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、重度のＭＰＳ ＩＩを有している、４か月齢以上、かつ５歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５歳以上、かつ１８歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している、５歳以上、かつ１８歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１８か月齢以上、かつ８歳以下の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、小児男性患者である、１８か月齢以上、かつ８歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、３～８歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、８～１６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５～１８歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１０歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、重度のＭＰＳ ＩＩを有する、１０歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１８歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５歳以上の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１０歳超の患者に投与する。
【0193】
特定の態様では、組換えベクターの治療有効量を、４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１か月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２か月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１、２、３、４、または５歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳の患者に投与する。
【0194】
特定の態様では、組換えベクターの治療有効用量を、思春期の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、成人患者に投与する。一部の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、男性患者に投与する。その他の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、女性患者に投与する。
【0195】
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ ＩＩと診断され、遺伝子治療処置の前にＣＳＦに注入したＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳによる治療に反応することを確認した患者に投与する。
【0196】
５．３．２．投与量及び投与様式
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、くも膜下投与（すなわち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。これは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽内または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。ある特定の実施形態では、くも膜下投与は、大槽内（ＩＣ）（例えば、大槽内への）注入により実施する。ある特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。ある特定の実施形態では、くも膜下注入は、腰椎穿刺で行う。ある特定の実施形態では、患者に対して実行できるのであれば、くも膜下腔への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援型ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。ある特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施態様では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知の任意の手段、例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示される任意の手段で、ＣＳＦに投与する。
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、くも膜下投与（すなわち、くも膜下腔に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。これは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽内または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。ある特定の実施形態では、くも膜下投与は、大槽内（ＩＣ）（例えば、大槽内への）注入により実施する。ある特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。ある特定の実施形態では、くも膜下注入は、腰椎穿刺で行う。ある特定の実施形態では、患者に対して実行できるのであれば、くも膜下腔への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援型ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。ある特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施態様では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知の任意の手段、例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示される任意の手段で、ＣＳＦに投与する。
【0197】
好ましい実施形態では、くも膜下投与（ＩＣ及びＩＣＶ投与など）のために、治療有効用量の組換えベクターを、全ＣＳＦ量の１０％を超えない注入量でＣＳＦに投与し、その全ＣＳＦ量は、乳児では約５０ｍｌであり、成人では約１５０ｍｌである。くも膜下注入に好適な担体、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔｓ Ｂ溶液を、組換えベクターのためのビヒクルとして使用すべきである。Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ溶液（一般名：塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、無水デキストロース、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びリン酸ナトリウム）は、静菌保存剤を含んでいない無菌で、かつ非発熱性の等張溶液であり、化学療法薬のくも膜下投与のための希釈剤として使用する。
【0198】
ある実施形態では、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を発現する非複製組換えＡＡＶ９ベクターを、治療のために使用する。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ発現カセットは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接しており、そして、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーとニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）とのハイブリッドが発現を駆動する。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、ニワトリベータアクチンイントロンと、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。
【0199】
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。好ましい実施形態では、脳質量は、対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する。ある特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換し、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
【0200】
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＳは、約５～２０ｍｌの体積において、１．４×１０１３ＧＣ（脳質量１ｇあたり１．１×１０１０ＧＣ）～７．０×１０１３ＧＣ（脳質量１ｇあたり５．６×１０１０ＧＣ）の範囲の単回固定用量を、ＩＣ（後頭下注射で）投与する。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有している場合には、高い範囲の用量を使用し得る。
【0201】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの範囲の単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。別のある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合は）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。
【0202】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。
【0203】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ脳質量～約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ脳質量の単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。
【0204】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。
【0205】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの範囲の単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合は）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。
【0206】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４か月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。
【0207】
【表8】
【0208】
【表9】
【0209】
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）以下の表７に記載する、及び表７に従った単回固定用量で、くも膜下に投与し得る。
【0210】
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）以下の表７に記載した、及び表７に従った単回固定用量で、ＩＣ投与で投与し得る。
【0211】
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）以下の表７に記載した、及び表７に従った単回固定用量で、ＩＣＶ投与で投与し得る。
【0212】
【表10】
【0213】
５．４ 併用療法
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＳの投与、及びこれに伴う他の利用可能な治療の実施との組み合わせを、本発明の方法は包含する。さらなる治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行い得る。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ ＩＩのための利用可能な治療として、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与されるイズルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／または、ＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株が産生したｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株は、限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがある。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで、強化することができる。
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＳの投与、及びこれに伴う他の利用可能な治療の実施との組み合わせを、本発明の方法は包含する。さらなる治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行い得る。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ ＩＩのための利用可能な治療として、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与されるイズルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／または、ＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株が産生したｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株は、限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがある。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで、強化することができる。
【0214】
５．５ バイオマーカー／試料採取／有効性のモニタリング
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または低減）、ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸などのＧＡＧ）の低下、及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングし得る。
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または低減）、ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸などのＧＡＧ）の低下、及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングし得る。
【0215】
５．５．１．疾患マーカー
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血清において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血漿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の尿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。好ましい実施形態では、疾患バイオマーカーは、ヘパラン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、デルマタン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＳ酵素活性である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血清において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血漿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の尿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。好ましい実施形態では、疾患バイオマーカーは、ヘパラン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、デルマタン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＳ酵素活性である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
【0216】
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者由来の試料での次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定してモニタリングする：（ａ）ＣＳＦ中のＧＡＧのレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のＩ２Ｓのレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル、（ｇ）ＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベル、及び（ｈ）ＣＳＦ中のデルマタン硫酸のレベル。
【0217】
一部の実施形態では、ＣＳＦ中のヘパラン硫酸（ＨＳ）グリコサミノグリカン（ＣＡＧ）を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、ＣＮＳ中のヘパラン硫酸非還元末端、及び総ヘパラン硫酸を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、血漿中のヘパラン硫酸非還元末端、及び総ヘパラン硫酸を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、尿中のＨＳ ＣＡＧを、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、尿での総ＣＡＧ濃度を、比色アッセイを使用して測定する。一部の実施形態では、使用可能なアッセイに関するより詳細な説明を、本開示のセクション６で提供する。
【0218】
５．５．２．神経認知機能の試験
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知の任意の方法で測定することができる。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて知能指数（ＩＱ）を測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて記憶力を測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて注意力を測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて、ＩＱ、記憶力、及び注意力のうちの１つ以上を測定する。
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知の任意の方法で測定することができる。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて知能指数（ＩＱ）を測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて記憶力を測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて注意力を測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて、ＩＱ、記憶力、及び注意力のうちの１つ以上を測定する。
【0219】
５．５．３．身体的変化
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。ある特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大、及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
配列表
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。ある特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大、及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
配列表
【表11】
【実施例】
【0220】
６．実施例
６．１ 実施例１：ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
６．１ 実施例１：ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
【0221】
６．２実施例２：置換ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを、配列番号１のｈＩＤＳ配列と比較して、アミノ酸置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳを含むベクターを構築する。ｈＩＤＳは、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログでの対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含み、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まず（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定された変異を含まないことを条件とする。また、導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、プロモーターをさらに含む。
ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを、配列番号１のｈＩＤＳ配列と比較して、アミノ酸置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳを含むベクターを構築する。ｈＩＤＳは、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログでの対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含み、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まず（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定された変異を含まないことを条件とする。また、導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、プロモーターをさらに含む。
【0222】
６．３ 実施例３：ｈＩＤＳまたは置換ｈＩＤＳを有する動物モデルでのＭＰＳ ＩＩの治療
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩのための動物モデル、例えば、Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４、またはＭｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９に記載されたマウスモデルに対して、くも膜下に、ｈＩＤＳをコードする組換えベクターを、動物のＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩのための動物モデル、例えば、Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４、またはＭｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９に記載されたマウスモデルに対して、くも膜下に、ｈＩＤＳをコードする組換えベクターを、動物のＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
【0223】
６．４ 実施例４：ｈＩＤＳまたは置換ｈＩＤＳによるＭＰＳ ＩＩの治療
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩを呈する対象に対して、くも膜下に、ｈＩＤＳをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクター（例えば、コンストラクト１（以下を参照されたい）などを、ＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、対象を、ＭＰＳ ＩＩの症状の改善について評価する。
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩを呈する対象に対して、くも膜下に、ｈＩＤＳをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクター（例えば、コンストラクト１（以下を参照されたい）などを、ＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、対象を、ＭＰＳ ＩＩの症状の改善について評価する。
【0224】
６．５ 実施例５：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．５．１．概要
治験薬、用量、及び投与経路
６．５．１．概要
治験薬、用量、及び投与経路
【0225】
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。段落（００１９）及び図 ５を参照されたい。
【0226】
治験薬を、単回大槽内（ＩＣ）用量として送達する。
【0227】
２つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）（用量１）、及び脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）を評価する。投与総用量は、治験対象の年齢に基づいて推定した脳サイズを考慮に含める。投与する治験薬の総体積は、５ｍＬを超えない。
【0228】
目的
【0229】
主要目的：
【0230】
重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ投与をして２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
【0231】
副次目的：
【0232】
コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
【0233】
脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
【0234】
認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
【0235】
ＣＳＦ、血漿、及び尿でのベクターの切断を評価する。
【0236】
探索目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳの物理的変化に対するコンストラクト１の影響を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象の血漿及び尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳの物理的変化に対するコンストラクト１の影響を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象の血漿及び尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
【0237】
治験デザインと方法
【0238】
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（一次試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
【0239】
最初の３名の適格対象者が、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）が、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討し、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）へ移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、最後に投与した対象者に関して最初の８週間で得たすべての安全性データ（８週目の受診時に得たデータを含む）を検討した後に決めた後続の各対象者に関する用量を使用して、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの第３の対象者の８週目での受診後にＩＤＭＣが評価する。
【0240】
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣ用量の投与を受け、観察のために、投薬後の約３０～３６時間は病院に留まる。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第１２週、第４０週、第６４週目の受診は、在宅保健師が行い得る。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、ＡＥと併用療法の評価だけを行う。
【0241】
すべての対象者は、動物で実施した非臨床安全性／毒物学治験での潜在的免疫原性の知見に基づいて、まず、本治験では免疫抑制（ＩＳ）を受け、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週目まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
【0242】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0243】
有効性評価は、神経認知機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及びＣＳＦ、血漿、そして尿での薬力学（ＰＤ）バイオマーカーのレベルの測定を含む。治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価尺度または適応評価尺度も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって収集し得る。
【0244】
評価項目
【0245】
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及び重度の有害事象（ＳＡＥ）
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及び重度の有害事象（ＳＡＥ）
【0246】
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるＣＳＦ、血漿、尿中のベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるＣＳＦ、血漿、尿中のベクター濃度
【0247】
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩ及び超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩ及び超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
【0248】
本治験の全期間を、投与後の１０４週間であり得、安全性の主要評価時点は、２４週間目である。スクリーニングには、最長で３５日を要し得る。
【0249】
診断、及び採用と除外の基準
【0250】
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
【0251】
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている
９．イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３か月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００／マイクロリットル（μＬ）未満である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消していない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている
９．イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３か月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００／マイクロリットル（μＬ）未満である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消していない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
【0252】
統計的手法
【0253】
すべてのデータを、対象者データ表に記載する。カテゴリ変数を、頻度とパーセンテージを使用してまとめ、連続変数を、記述統計（ｎ、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値）を使用してまとめる。必要に応じて、グラフ表示を使用する。安全性及びＰＤ評価項目を、用量群で報告し、また、２つの用量群の組み合わせも報告し得る。
【0254】
サンプルサイズと検出力の計算：試料の大きさを決定するための正式な計算は行わなかった。
６．５．２．略語と用語
６．５．２．略語と用語
【表12】
【0255】
６．５．３．治験計画
評価項目
評価項目
【0256】
主要評価項目：
●第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
【0257】
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）中のバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）中のバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
【0258】
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
【0259】
治験デザイン
【0260】
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（一次試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
【0261】
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院する、そして、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣ用量の投与を受ける、そして、観察のために、投与後の約３０～３６時間は病院に留まる。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第１２週、第４０週、第６４週目の受診は、在宅保健師が行い得る。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、ＡＥと併用療法の評価だけを行う。
【0262】
すべての対象者は、動物で実施した非臨床安全性での知見に基づいて、まず、本治験ではＩＳを受ける。ＩＳには、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回ＩＶに前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日を１日に２回に分けて、第４８週目まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
【0263】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0264】
コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重大な有害事象（ＳＡＥ）、化学分析、血液学分析、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、及び神経学的評価などの身体診察を介してモニタリングする。
【0265】
有効性評価は、神経認知及び適応機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及びＣＳＦ、血漿、そして尿でのＰＤバイオマーカーのレベルの測定を含む。
【0266】
６．５．４．対象者集団と選択
治験集団の選択
治験集団の選択
【0267】
約６名の４か月齢以上、５歳未満の小児対象者で、ＭＰＳ ＩＩに起因する神経認知障害が確定している者、または重度のＭＰＳ ＩＩの遺伝型からなる遺伝子型及び家族歴を有する者を治験薬（ＩＰ）で治療する。
【0268】
採用基準
【0269】
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準を満足していること：
ａ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが、５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４か月齢以上５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がいる、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準を満足していること：
ａ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４か月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが、５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４か月齢以上５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がいる、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
【0270】
除外基準
【0271】
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼの投与を受けている
９．ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３か月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、＜１００，０００／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である、ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼの投与を受けている
９．ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３か月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、＜１００，０００／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である、ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
【0272】
６．５．５．治療
実施する治療
実施する治療
【0273】
治験薬（ＩＰ）、コンストラクト１（図５を参照されたい）を、単一用量ＩＣ投与として投与する。２つの用量レベル：脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）。投与する総用量（総ＧＣ）は、年齢による脳の大きさの違いを考慮して調整する。投与する治験薬の総体積は、５ｍＬを超えない。
【0274】
この治験の間は、参照療法は実施しない。以下に説明するように、ＩＳ療法は、ＩＰに加えて行う。
【0275】
治験薬
【0276】
コンストラクト１は、ｈＩＤＳ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶである。段落（００１９）を参照されたい。
【表13】
【0277】
コンストラクト１は、くも膜下腔（ＩＴ）に投与した後の中枢神経系（ＣＮＳ）においてヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）産物の効率的な発現を許容する非複製組換えＡＡＶ９ベクターである。このベクターゲノムは、ＡＡＶ２逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接するｈＩＤＳ発現カセットを含む。カセットからの発現は、ＣＢ７プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時早期エンハンサーとニワトリβ－アクチンプロモーターとの間のハイブリッドが駆動する。このプロモーターからの転写は、ニワトリβ－アクチンイントロン（ＣＩ）の存在によって高まる。発現カセットのポリアデニル化シグナルは、ウサギβ－グロビン（ＲＢＧ）遺伝子に由来する。コンストラクト１の概略を、図５に示す。
【0278】
最終的なＩＰを、ＡＡＶベクター活性成分（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）の凍結溶液を入れた０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８を含む改変Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ（登録商標）溶液として供給し、２ｍｌをＣＲＹＳＴＡＬ ＺＥＮＩＴＨ（登録商標）（ＣＺ）バイアルに充填し、そして、ラテックス不含のゴム栓と、アルミニウムフリップオフシールとで密封する。バイアルは、－６０℃以下で貯蔵すべきである。それぞれのＩＰロットの濃度（ＧＣ／ｍｌ）を分析証明書（ＣｏＡ）で報告する。治験薬の濃度に基づいた詳細な投与指示は、管理マニュアルに記載している。
【0279】
免疫抑制療法
【0280】
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0281】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
【0282】
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、１ｍｇの用量で開始する、２４週間にわたり４～８ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。投薬調整は、本開示で説明を行っている（例えば、段落（０１２４）～（０１２５）、（０２２０）～（０２２２）、セクション６）。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、１ｍｇの用量で開始する、２４週間にわたり４～８ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。投薬調整は、本開示で説明を行っている（例えば、段落（０１２４）～（０１２５）、（０２２０）～（０２２２）、セクション６）。
【0283】
治療に供する対象者を割り当てる方法
【0284】
適格な対象者を登録し、ＩＤＭＣによる安全性データの検討を経てから、用量コホートに順次に割り当てる。最初の３名は、脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣの用量コホート、次の３名は、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの用量コホートに割り当てる。
【0285】
投薬に関する考慮事項
【0286】
治験薬
【0287】
本開示では、個々の対象者の間での安全性データの検討、及びそれぞれのコホートが任意の用量レベルで投与を受けた後の安全性データの検討など、対象者に対して順次に投与する計画についての説明を開示する（例えば、（０２３７）～（０２６５）；（０１７５）～（０１８６））。
【0288】
免疫抑制療法
【0289】
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始して、第１２週目の受診まで漸減する。
【0290】
タクロリムスの用量調節は、最初の２４週間の間、４～８ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。２４週目で、用量は約５０％減らす。２８週目で、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、３２週目に中止する。シロリムスの用量調節は、４～８ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。大部分の対象者において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象者は、濃度モニタリングによってさらなる用量調整が行われるまで、少なくとも７～１４日間は、新たな維持用量を継続すべきである。
【0291】
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●スクリーニングから６か月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない。
●ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬。
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
●スクリーニングから６か月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない。
●ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬。
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
【0292】
許可する投薬及び処置
【0293】
対象者が、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者が、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、または感覚誘発電位）のために全身麻酔を受けることを許可する。
【0294】
対象者の安全及び健康の上で必要であると考えられる（例えば、高血圧症の）場合には、地域の標準治療に従って、治験責任医師の裁量で、上記した以外の投薬を行い得る、そして、ＣＲＦの適切なセクションに記録し得る。
【0295】
６．６ 実施例６：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象者でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
上記したように、コンストラクト１は、ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）である。段落（００１９）、図５、及びセクション５．５（実施例５）を参照されたい。
上記したように、コンストラクト１は、ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）である。段落（００１９）、図５、及びセクション５．５（実施例５）を参照されたい。
【0296】
コンストラクト１を、単回大槽内（ＩＣ）または単回脳室内（ＩＣ）用量として送達する。
【0297】
２つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）（用量１）、及び脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）を評価する。投与する総用量は、対象者のスクリーニング磁気共鳴画像（ＭＲＩ）に基づいて推定した治験対象者の脳サイズを考慮に含める。投与する治験薬の総体積は、ＣＳＦの総体積（乳幼児の脳では約５０ｍＬ、そして、成人の脳では約１５０ｍＬと推定する）の１０％を超えない。
【0298】
６．６．１．目標：
主要目的：
●重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ、またはＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶを投与して２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
主要目的：
●重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ、またはＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶを投与して２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
【0299】
副次目的：
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
【0300】
探索目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●静脈内（ＩＶ）ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる
●睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●転帰に関して臨床医が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●転帰に関して介護士が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●静脈内（ＩＶ）ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる
●睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●転帰に関して臨床医が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●転帰に関して介護士が報告したコンストラクト１の効果を調べる
【0301】
６．６．２．治験デザインと方法
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあた１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣまたはＩＣＶ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあた１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣまたはＩＣＶ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
【0302】
最初の３名の適格対象者は、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）が、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討し、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。次の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、前の対象者の観察期間中に進め得る。
【0303】
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）へ移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、最後に投与した対象者に関して最初の８週間で得たすべての安全性データ（８週目の受診時に得たデータを含む）を検討した後に決めた後続の各対象者に関する用量を使用して、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの第３の対象者に関する８週目での受診後に、ＩＤＭＣが評価する。ＩＤＭＣの承認が得られると、治験薬が利用可能となり、そして、スポンサーも承認しており、ＩＳＣまたはＩＤＭＣのいずれかに従って登録の停止が認められる安全事象が無い限りは、さらなる対象者を、用量２の拡大コホートで投与し得る。拡大コホートでのそれぞれの対象者には、少なくとも２週間の間隔で交互に投与する。
【0304】
あらゆる所与のＩＤＭＣ会合において、用量コホートの終了時に計画しているものである、または、ＳＲＴが要請したものであるかに関係なく、ＩＤＭＣは、試験の中止、現在の用量のさらなる対象者に対する投与、次の用量コホートへの進行、または低用量での進行を勧告し得る。最後の用量２コホート対象者から８週間のデータが利用可能になり、用量２コホート対象者において何らのＳＲＴ事象も認められない場合、治験への登録は完了したとみなす。拡大コホートへの登録は、上記に定めた通りに継続し得る。拡大コホートに登録した最後の対象者が第２週目の受診を完了すると、前回の対象者の第２週目の受診からのデータを含めて、拡大コホートのすべての安全性データをＩＤＭＣが評価する。
【0305】
いずれかの事象が、停止規則の基準に該当する場合、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ、及び外部ＩＤＭＣが、すべての安全性データを詳細に検討するまで、新規対象者に対する投与は停止する。
【0306】
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した後にスクリーニング評価するが、この機会以外では、治験責任医師が決定し、かつメディカルモニターが承認した場合には許可し得る。スクリーニング機会以外で実施する評価は、メディカルモニターの判断で繰り返して行う。対象者は、当初に登録を済ましていなければ、治験のために１度の再スクリーニングを行い得る；対象者の再スクリーニングには、スポンサーの承認が必要である。再スクリーニングは、対象者の初期スクリーニングを行い得なかった時点から少なくとも３か月が経過した後にすることができる。
【0307】
適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣまたはＩＣＶ用量の投与を受け、観察のために、投薬後の約１～２日間は入院する。治験責任医師が２泊以上の入院延長は不要と判断した後に対象者は退院する。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第６４週目の受診は、ＩＶ ＥＲＴを中止した対象者に対してのみ実施する。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、有害事象（ＡＥ）と併用療法の評価だけを行う。
【0308】
すべての対象者は、まず、本試験では免疫抑制（ＩＳ）を受けて、導入遺伝子を発現する組織に対するあらゆる免疫媒介反応のリスクを最小化し、かつ有効性の低下を招き得るＩＤＳに対する抗体の形成または増加に関連するあらゆるリスクを最小限に抑える。ＩＳレジメンは、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回ＩＶに前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週目まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
【0309】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0310】
非臨床的安全性／毒物学治験で認められた後根神経節及び関連する軸索障害の組織病理学的所見、及びＩＣ投与手順による潜在的な安全性リスクを考慮して、焦点を絞った神経学的評価、及び体性感覚誘発電位（ＳＳＥＰ）試験などの綿密な神経学的モニタリングを使用する。
【0311】
動物データは、ＩＣ及びＩＣＶでのコンストラクト１の投与が全身的利益を提供し得ることを示唆しているので、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を服用している対象者には、第５２週目の受診後に、ＥＲＴを中止する選択肢を提供し得る。ＥＲＴを中止する決定は、ＰＩの臨床的判断に委ねられており、治験スポンサーと合意した通りに行われる。ＥＲＴを停止する決定に有用な追加情報は、第５２週目の受診までに得た血漿Ｉ２Ｓ及び血漿及び尿ＧＡＧのトラフ測定（ＥＲＴ投薬に基づいたもの）、ならびに超音波による肝臓及び脾臓サイズの測定結果である。第５２週、第５６週、第６０週、第６４週、及び第７８週目での受診には、ＥＲＴの中止を選択した対象者の血漿Ｉ２Ｓ、それに、対象者の血漿及び尿ＧＡＧレベルのさらなるモニタリングが含まれる。ＩＶ ＥＲＴを中止した対象者は、６４週目に追加の腹部超音波検査を受けて、肝臓及び脾臓サイズの測定を行う。ＩＶ ＥＲＴは、以下の基準のいずれかに該当した場合に再開する：第５２週目の受診時に測定した尿中ＧＡＧレベルよりも２倍にまで尿中ＧＡＧが高まっている、または第５２週目での肝臓径の数値よりも＞２０％も大きくなっている、またはＩＶ ＥＲＴの再開を許可するにあたって、内部安全委員会及び／またはＩＤＭＣが考慮したその他の安全パラメーターに変更があったとき。しかしながら、ＰＩが必要と判断した場合にはいつでも、対象者に対してＥＲＴを再開し得る。
【0312】
コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重大な有害事象（ＳＡＥ）、化学分析、血液学分析、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、ＳＳＥＰ検査、及び神経学的評価などの身体診察の評価を介してモニタリングする。循環ウイルスゲノム（ＥＢＶ及びＣＭＶ）を検出するための連続ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）も、対象者がＩＳを受けている間に行う。
【0313】
有効性評価は、薬力学（ＰＤ）バイオマーカー（ＣＳＦ及び血漿中のＧＡＧ及びＩ２Ｓ、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性、及び尿でのＧＡＧ）のレベルの測定、ならびに神経認知機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及び心エコー図による心臓評価を含む。治験に参加する一方で、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって収集し得る。
【0314】
６．６．３．評価項目
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
【0315】
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
○Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
○Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
【0316】
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による、弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による、弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
【0317】
６．６．４．計画した対象者の数と実施期間
最大で１２名の対象者を登録する。
●用量１コホートの対象者３名
●用量２コホートの対象者３名
●用量２拡大コホートで最大６名の対象者
●ＩＤＭＣは、対象者の追加を勧め得る。
最大で１２名の対象者を登録する。
●用量１コホートの対象者３名
●用量２コホートの対象者３名
●用量２拡大コホートで最大６名の対象者
●ＩＤＭＣは、対象者の追加を勧め得る。
【0318】
本治験の総期間は、投与後の１０４週間であり、一次安全性評価は２４週間目で行う。スクリーニングには、最長で３５日を要し得る。
【0319】
６．６．５．診断、及び採用と除外の基準
罹患している血縁者に関する以下の情報は、利用可能であれば、血縁者のインフォームドコンセントを得た後に収集する。
●人口統計（年齢、性別）
●医学的及び外科的病歴（例えば、心臓病、手根管症候群、股関節形成不全、または亜脱臼など）
●重度のＭＰＳ ＩＩの診断時の年齢、及び診断に至るまでの経緯
●遺伝子型決定の結果
●認知、発話及び言語、微細運動及び粗大運動などの神経発達検査の結果（利用可能であり、かつ重度のＭＰＳ ＩＩの診断は神経発達検査で行った）
●脳ＭＲＩの結果
●ＥＲＴまたはＨＳＣＴなどのＭＰＳ ＩＩの治療
●現在服用している薬
罹患している血縁者に関する以下の情報は、利用可能であれば、血縁者のインフォームドコンセントを得た後に収集する。
●人口統計（年齢、性別）
●医学的及び外科的病歴（例えば、心臓病、手根管症候群、股関節形成不全、または亜脱臼など）
●重度のＭＰＳ ＩＩの診断時の年齢、及び診断に至るまでの経緯
●遺伝子型決定の結果
●認知、発話及び言語、微細運動及び粗大運動などの神経発達検査の結果（利用可能であり、かつ重度のＭＰＳ ＩＩの診断は神経発達検査で行った）
●脳ＭＲＩの結果
●ＥＲＴまたはＨＳＣＴなどのＭＰＳ ＩＩの治療
●現在服用している薬
【0320】
対象者は、当初に登録を済ましていなければ、治験のために１度の再スクリーニングを行い得る。対象者の再スクリーニングには、スポンサーの承認が必要である。再スクリーニングは、対象者の初期スクリーニングを行い得なかった時点から少なくとも３か月が経過した後にすることができる。再スクリーニングを受けた参加者は、新たなＩＣＦに署名する必要がある。ＭＲＩを除いた全スクリーニング手順を繰り返して、神経放射線科医／神経外科医が再試験について決定をする。
【0321】
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
●１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
●２．４か月齢以上、５歳未満の男児である
●３．以下のいずれかの基準に該当していること：
○ａ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
○ｂ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ３～３６か月の間隔で受けた神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で、１以上の標準偏差の低下を示している、または
○ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる、または
○ｄ．遺伝学者の意見では、神経障害性表現型（例えば、完全な欠失、または大きな欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え）を招くことが知られているＩＤＳの変異（複数可）が文書に記録されており、かつ、臨床医の意見では、重症型のＭＰＳ ＩＩである
●４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
●１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
●２．４か月齢以上、５歳未満の男児である
●３．以下のいずれかの基準に該当していること：
○ａ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
○ｂ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ３～３６か月の間隔で受けた神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で、１以上の標準偏差の低下を示している、または
○ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる、または
○ｄ．遺伝学者の意見では、神経障害性表現型（例えば、完全な欠失、または大きな欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え）を招くことが知られているＩＤＳの変異（複数可）が文書に記録されており、かつ、臨床医の意見では、重症型のＭＰＳ ＩＩである
●４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
【0322】
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
●１．ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
○ａ．治験（１名の神経放射線科医または神経外科医／施設）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
○ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
○ｃ．コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
○ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
○ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。検査所見から、クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判断した場合には、下限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
○ｆ．治験責任医師、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
●２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
●３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
●４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
●５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
●６．ＨＳＣＴを受けている
●７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
●８．ＩＣＦに署名する４か月以内に、くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））の投与を受けている
●９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯメディカルモニターとの協議が必要である。
●１０．ＩＣＦの署名日である１日目から３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
●１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
●１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
●１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない。
●１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
●１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
●１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
●１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
●１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
●１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
●１．ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
○ａ．治験（１名の神経放射線科医または神経外科医／施設）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
○ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
○ｃ．コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
○ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
○ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。検査所見から、クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判断した場合には、下限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
○ｆ．治験責任医師、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
●２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
●３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
●４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
●５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
●６．ＨＳＣＴを受けている
●７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
●８．ＩＣＦに署名する４か月以内に、くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））の投与を受けている
●９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯメディカルモニターとの協議が必要である。
●１０．ＩＣＦの署名日である１日目から３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
●１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
●１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
●１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない。
●１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
●１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
●１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
●１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
●１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
●１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
【0323】
免疫抑制療法に関連する除外基準：
●２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
●２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
●２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
●２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
●２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
●２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
●２６．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
●２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
●２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う
●２９．好中球数の絶対数が１．０×１０３未満／μＬである
●３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
●２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
●２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
●２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
●２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
●２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
●２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
●２６．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
●２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
●２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う
●２９．好中球数の絶対数が１．０×１０３未満／μＬである
●３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
【0324】
６．６．６．提案用量
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、あるいは潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与のために一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコールで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、あるいは潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与のために一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコールで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。
【0325】
ＭＰＳ ＩＩＩマウスに対してコンストラクト１を使用して行った薬理学的研究は、ＡＡＶ９ベクターをベースとした治験薬の生体分布と導入遺伝子発現プロファイルが、ＩＣＶ及びＩＣ経路に匹敵することを示しており、ＩＣ投与が困難であること、または潜在的に安全でないことを証明されれば、投与の代替経路としてのＩＣＶの使用を支持する。ＩＣ及びＩＣＶ手順の詳細については、それぞれの管理マニュアルに概説されている。
【0326】
投与する治験薬の総体積は、ＣＳＦの総体積（乳幼児の脳では約５０ｍＬ、そして、成人の脳では約１５０ｍＬと推定する）の１０％を超えない。
【0327】
発達過程の子供で早期に起こる比較的に迅速な脳の成長が故に、コンストラクト１をＩＣまたはＩＣＶで投与する総投与量は、治験対象者のスクリーニングＭＲＩから得た推定脳質量に応じて変化する。対象者のＭＲＩから得た治験対象者の推定脳体積は、表５、セクション５．３．２に示すように、脳質量に変換され、投与する正確な用量を計算するために使用される。
【0328】
６．６．７．免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣまたはＩＣＶ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣまたはＩＣＶ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0329】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
【0330】
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
【0331】
用量調整
【0332】
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日で開始する、そして、第１２週目の受診まで漸減する。
【0333】
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。対象者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
【0334】
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｂａｃｔｒｉｍ（商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例、月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量から開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
【0335】
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0336】
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
【0337】
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
【0338】
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0339】
６．６．８．禁止薬物と処置
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●ＩＣＦに署名をして４か月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない
●ＩＣＦに署名する前、３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●ＩＣＦに署名をして４か月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない
●ＩＣＦに署名する前、３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
【0340】
６．６．９．許可する投薬及び処置
対象者は、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者は、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、またはＳＳＥＰ）のために全身麻酔を受けることが許可される。
対象者は、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者は、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、またはＳＳＥＰ）のために全身麻酔を受けることが許可される。
【0341】
対象者の安全及び健康の上で必要であると考えられる（例えば、高血圧症の）場合には、地域の標準治療に従って、治験責任医師の裁量で、上記した以外の投薬を行い得る、そして、ＣＲＦの適切なセクションに記録し得る。
【0342】
６．６．１０．有効性評価
バイオマーカー
●ＣＳＦ：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ
●血漿：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの血漿バイオマーカーを採取する。
●白血球Ｉ２Ｓ酵素活性。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの全血を採取する。
●尿：ＧＡＧ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの尿中ＧＡＧを採取する。
バイオマーカー
●ＣＳＦ：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ
●血漿：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの血漿バイオマーカーを採取する。
●白血球Ｉ２Ｓ酵素活性。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの全血を採取する。
●尿：ＧＡＧ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの尿中ＧＡＧを採取する。
【0343】
認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ）
●治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって採取し得る。
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ）
●治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって採取し得る。
【0344】
画像評価
●脳のＭＲＩを、ある特定の受診時に行う。推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）は、ガドリニウムを使用するスクリーニングＭＲＩの前に文書記録しなくてはならない。治験責任医師は、ｅＧＦＲが、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２でああれば、スクリーニングＭＲＩを行う前に、メディカルモニターと相談しなくてはらない。
●腹部の超音波検査を、ある特定の受診時に行って、鎖骨中央線での頭尾方向の肝臓直径を確認し（Ｋｒａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ． ２２：１１５５－１１６１）、扁長楕円体式（０．５２×長さ×前後方向の寸法×幅）を使用して、脾臓の体積を計算する。
●２－Ｄ心エコーを、ある特定の受診時に行って、弁膜症及び左室心筋重量係数を評価する。
●聴覚能力の変化は、行動聴力試験及び耳音響放射試験で測定する。行動聴力の測定が無理な場合には、ＡＢＲ試験を行う。聴覚能力は、特定の受診時に評価する。治験責任医師が臨床的に必要と判断した場合には、第２４週目の受診時でのさらなる評価が許可される。
●ＰｅｄｓＱＬを使用したＱＯＬ評価
●睡眠評価
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●ＡＤＬ
●病気の負担
●脳のＭＲＩを、ある特定の受診時に行う。推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）は、ガドリニウムを使用するスクリーニングＭＲＩの前に文書記録しなくてはならない。治験責任医師は、ｅＧＦＲが、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２でああれば、スクリーニングＭＲＩを行う前に、メディカルモニターと相談しなくてはらない。
●腹部の超音波検査を、ある特定の受診時に行って、鎖骨中央線での頭尾方向の肝臓直径を確認し（Ｋｒａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ． ２２：１１５５－１１６１）、扁長楕円体式（０．５２×長さ×前後方向の寸法×幅）を使用して、脾臓の体積を計算する。
●２－Ｄ心エコーを、ある特定の受診時に行って、弁膜症及び左室心筋重量係数を評価する。
●聴覚能力の変化は、行動聴力試験及び耳音響放射試験で測定する。行動聴力の測定が無理な場合には、ＡＢＲ試験を行う。聴覚能力は、特定の受診時に評価する。治験責任医師が臨床的に必要と判断した場合には、第２４週目の受診時でのさらなる評価が許可される。
●ＰｅｄｓＱＬを使用したＱＯＬ評価
●睡眠評価
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●ＡＤＬ
●病気の負担
【0345】
６．６．１１．臨床検査
以下のＣＳＦ安全性検査、及び抗体試験で評価する：
●ＣＳＦ炎症のマーカー：ＣＳＦ圧力、赤血球細胞数、差異が認められるＷＢＣ計数、総タンパク質、及びグルコース
●免疫応答モニタリング：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：コンストラクト１濃度
以下のＣＳＦ安全性検査、及び抗体試験で評価する：
●ＣＳＦ炎症のマーカー：ＣＳＦ圧力、赤血球細胞数、差異が認められるＷＢＣ計数、総タンパク質、及びグルコース
●免疫応答モニタリング：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：コンストラクト１濃度
【0346】
以下の臨床検査所見を評価する：
●化学：グルコース、血中尿素窒素、クレアチニン、ナトリウム、カリウム、塩化物、二酸化炭素、カルシウム、マグネシウム、リン、総タンパク質、アルブミン、総ビリルビン、直接ビリルビン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ、及びクレアチンキナーゼ
●脂質パネル：総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、及びトリグリセリド
●血液学：差次ＣＢＣ、及び、血小板の計数、例えば、ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球（ＲＢＣ）、ＷＢＣ、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球の計数。
●凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）。
●尿検査：グルコース、ケトン、タンパク質、及び血液に関する尿試験紙検査（検査の妥当性を保証する場合には、顕微鏡評価を行う）
●免疫原性測定：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体；ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞応答；ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞に対するフローサイトメトリー
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：血清及び尿でのコンストラクト１の濃度
●血清学及びゲノム検出のためのウイルス検査：
○ＶＺＶ：Ａｂ力価（ベースライン）
○ＥＢＶ及びＣＭＶ：ウイルスゲノム（ベースライン及び連続的）ＰＣＲ検査
●Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎コア抗体、抗Ｃ型肝炎、及びＨＩＶ：スクリーニング目的に限る
●Ｑｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－Ｇｏｌｄ＿ＴＢ Ｐｌｕｓ：スクリーニング目的に限る
●血漿バイオマーカー
●尿バイオマーカー
●化学：グルコース、血中尿素窒素、クレアチニン、ナトリウム、カリウム、塩化物、二酸化炭素、カルシウム、マグネシウム、リン、総タンパク質、アルブミン、総ビリルビン、直接ビリルビン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ、及びクレアチンキナーゼ
●脂質パネル：総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、及びトリグリセリド
●血液学：差次ＣＢＣ、及び、血小板の計数、例えば、ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球（ＲＢＣ）、ＷＢＣ、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球の計数。
●凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）。
●尿検査：グルコース、ケトン、タンパク質、及び血液に関する尿試験紙検査（検査の妥当性を保証する場合には、顕微鏡評価を行う）
●免疫原性測定：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体；ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞応答；ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞に対するフローサイトメトリー
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：血清及び尿でのコンストラクト１の濃度
●血清学及びゲノム検出のためのウイルス検査：
○ＶＺＶ：Ａｂ力価（ベースライン）
○ＥＢＶ及びＣＭＶ：ウイルスゲノム（ベースライン及び連続的）ＰＣＲ検査
●Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎コア抗体、抗Ｃ型肝炎、及びＨＩＶ：スクリーニング目的に限る
●Ｑｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－Ｇｏｌｄ＿ＴＢ Ｐｌｕｓ：スクリーニング目的に限る
●血漿バイオマーカー
●尿バイオマーカー
【0347】
適切な臨床検討を確実にするために、検査結果が適時にＰＩに提供される。ＰＩは、すべての検査報告書の確認と署名を行う責任を負う。
【0348】
６．６．１２．バイタルサイン及び心電図
バイタルサイン（収縮期／拡張期ＢＰ、脈拍数、体温、呼吸数）、頭囲、身長、体重、及びＥＣＧの評価は、受診時に取得／実施する。
バイタルサイン（収縮期／拡張期ＢＰ、脈拍数、体温、呼吸数）、頭囲、身長、体重、及びＥＣＧの評価は、受診時に取得／実施する。
【0349】
６．６．１３．神経学的評価
神経学的評価は、次を含む：
●意識レベル
●脳神経検査
●運動機能
●感覚機能
●協調運動と歩行
神経学的評価は、次を含む：
●意識レベル
●脳神経検査
●運動機能
●感覚機能
●協調運動と歩行
【0350】
ＳＳＥＰ試験も、選択した時点で実行する。ＳＳＥＰ試験のプロトコール要件の詳細については、ＳＳＥＰマニュアルを参照されたい。
【0351】
６．７ 実施例７：ＭＰＳ ＩＩマウスモデル試験
ＭＰＳ ＩＩまたはハンター症候群は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する、組織でのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらす。重度のＭＰＳ ＩＩは、組換えＩ２Ｓ酵素を使用する静脈内投与酵素補充療法で対応できない不可逆的な神経認知機能低下と行動症状をもたらす。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセット（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）を含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド（ＡＡＶ９）である。ＭＰＳ ＩＩマウスモデルでは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与したコンストラクト１は、用量依存的なＩ２Ｓ活性、ＧＡＧレベルの低下、中枢神経系での貯蔵病態の改善、及び神経行動機能の改善を実証した。ベクター分布、及びＧＡＧレベルの低下が末梢臓器で認められ、また肝臓のサイズ及び重量の正常化も認められた。
ＭＰＳ ＩＩまたはハンター症候群は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する、組織でのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらす。重度のＭＰＳ ＩＩは、組換えＩ２Ｓ酵素を使用する静脈内投与酵素補充療法で対応できない不可逆的な神経認知機能低下と行動症状をもたらす。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセット（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）を含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド（ＡＡＶ９）である。ＭＰＳ ＩＩマウスモデルでは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与したコンストラクト１は、用量依存的なＩ２Ｓ活性、ＧＡＧレベルの低下、中枢神経系での貯蔵病態の改善、及び神経行動機能の改善を実証した。ベクター分布、及びＧＡＧレベルの低下が末梢臓器で認められ、また肝臓のサイズ及び重量の正常化も認められた。
【0352】
６．８ 実施例８：第１／２相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、用量漸増試験
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）は、リソソーム酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する稀少なＸ連鎖劣勢疾患であり、ヘパリン硫酸（ＨＳ）などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらし、最終的には、細胞、組織、及び臓器の機能障害をもたらす。この疾患の重症型では、初期発育の重要な段階には達し得るが、発達の遅延が、１８～２４か月齢で明らかになる。ＭＰＳ ＩＩの患者は、全身酵素補充療法が利用可能であるにもかかわらず、認知発達障害などの中枢神経系（ＣＮＳ）での疾患の症状には対応できないなど、依然として大きな困難を抱えている。ＭＰＳ ＩＩの神経学的症状に対応する、そして、認知機能低下を予防または安定化させるための特定の治療は、依然として課題が残っている重要な医療ニーズである。ＭＰＳ ＩＩ患者でのＩ２Ｓ酵素活性の主要なバイオマーカーとして、その基質ＨＳがあり、これは、障害の神経認知症状と相関することが示されている。
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）は、リソソーム酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する稀少なＸ連鎖劣勢疾患であり、ヘパリン硫酸（ＨＳ）などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらし、最終的には、細胞、組織、及び臓器の機能障害をもたらす。この疾患の重症型では、初期発育の重要な段階には達し得るが、発達の遅延が、１８～２４か月齢で明らかになる。ＭＰＳ ＩＩの患者は、全身酵素補充療法が利用可能であるにもかかわらず、認知発達障害などの中枢神経系（ＣＮＳ）での疾患の症状には対応できないなど、依然として大きな困難を抱えている。ＭＰＳ ＩＩの神経学的症状に対応する、そして、認知機能低下を予防または安定化させるための特定の治療は、依然として課題が残っている重要な医療ニーズである。ＭＰＳ ＩＩ患者でのＩ２Ｓ酵素活性の主要なバイオマーカーとして、その基質ＨＳがあり、これは、障害の神経認知症状と相関することが示されている。
【0353】
進行中の第１／２相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、用量漸増試験では、コンストラクト１を、４か月齢～５歳の重度ＭＰＳ ＩＩの参加者の大槽に１度だけ注射をして投与した。コンストラクト１は、ＡＡＶ９ベクターを使用してＩ２Ｓ酵素をコードする遺伝子をＣＮＳに直接に送達するようにデザインしており、分泌したＩ２Ｓが血液脳関門を越えて恒久的に供給源を提供することで、ＣＮＳ全体の細胞の長期的なクロスコレクションを可能ならしめることを目的としている。
【0354】
評価には、第１０４週目までの安全性及び忍容性；ＣＳＦ、血漿、及び尿バイオマーカー；免疫原性；神経発達尺度（Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ）；聴力測定；脳、肝臓、及び脾臓のイメージング；臨床医及び患者が報告した転帰尺度が含められる。
【0355】
コホート１は、登録を完了しており、少なくとも１名の患者が、１６か月の追跡調査を完了していた。第１／２相試験のコホート１では、３名の患者が、５か月齢（患者１）、３５か月齢（患者２）、及び７か月齢（患者３）の年齢で、脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）で大槽内に投与を受けた。コンストラクト１を投与した後の安全性追跡調査を、１２週間～６８週間の範囲で行う。コンストラクト１投与の忍容性は良好であり、薬物に関連する重度の有害事象（ＳＡＥ）は報告されていない。プロトコールに従って、患者は、４８週間の免疫抑制レジメンを受けて、免疫媒介反応の可能性を最小限に抑え、重要なことに、患者１は、免疫抑制レジメンを完了した。
【0356】
コホート１では、Ｉ２Ｓ酵素活性の主要なバイオマーカーであり、かつ、ＭＰＳ ＩＩでの神経認知機能低下の主要なＧＡＧバイオマーカーであるＨＳのＣＳＦレベルを測定したところ、４８週目まで、一貫した持続性の低下が認められた。ＨＳは、コンストラクト１を投与した後に、この第１／２相試験での脳脊髄液（ＣＳＦ）で測定した。ＭＰＳ ＩＩ患者では、大量のＨＳがＣＮＳに蓄積しており、神経認知機能低下と密接に相関している。コホート１に登録した３名の患者全員のＣＳＦにおいて、ＨＳレベルは、第８週目までに、ベースラインから平均で３３．３％低下した。患者１は、ＣＳＦ中のＨＳレベルの持続的な低下を経時的に示しており、第８週目では、ベースラインから２７．４％低下しており、直近の第４８週目では、ベースラインから４３．６％低下している。患者２も、ＣＳＦ中のＨＳレベルの低下を示しており、直近の第８週目では、ベースラインから３０．９％低下している。患者３は、ＣＳＦ中のＨＳレベルの低下を示しており、直近の第８週目では、ベースラインから４１．６％低下している。
【0357】
加えて、初期の神経発達パラメーターは、継続した技能習得を実証した。第２４週目以降に進行した２名の患者について、予備データが、神経認知発達の安定性を示している。患者１は、最後の評価の時点である第４８週目で、予想した通りの正常な認知発達の継続を示した。患者２は、コンストラクト１の投与前に神経認知機能低下と診断されており、発達遅延が残ったままであるが、予備的評価は、投薬した後の安定した神経認知発達を示唆している。
【0358】
コホート１の３名の患者全員から得た安全性及び有効性データの検討に続いて、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相試験について、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅは、コホート２への移行と、用量漸増を承認した。続いて、コンストラクト１を、コホート２の第１の患者に、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの用量で投与した。コホート２は、積極的に登録をして、投薬を受けている。
【0359】
結論として、ＭＰＳ ＩＩを治療するためのコンストラクト１について実施している第１／２相試験の最初のコホートから得た中間データは、（１）コンストラクト１を、１度、大槽内に投与した後は、ＭＰＳ ＩＩ患者において良好な忍容性を示す、（２）コンストラクト１を使用する治療は、コンストラクト１を投与した後の第４８週間目まで、ＭＰＳ ＩＩでのＩ２Ｓ酵素活性の重要なバイオマーカーであるヘパラン硫酸のＣＳＦレベルを、一貫して持続的に低下させる、及び、（３）コンストラクト１を使用する治療は、以前に発達遅延の診断を受けた患者での神経認知安定性の初期徴候を達成し、若年患者では、患者は正常な認知発達を継続した。
【0360】
６．９ 実施例９：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の５歳以上の小児でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．９．１．概要
治験デザイン
６．９．１．概要
治験デザイン
【0361】
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）は、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。
【0362】
主要目的：
●神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有する年長児（５歳超）に対して、単回ＩＣ投与、またはＩＣ経路が禁忌である場合にはＩＣＶ投与をした後に、２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
●神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有する年長児（５歳超）に対して、単回ＩＣ投与、またはＩＣ経路が禁忌である場合にはＩＣＶ投与をした後に、２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
【0363】
副次目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した参加者の血漿及び尿中のバイオマーカーに関するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１が生活の質（ＱＯＬ）に及ぼす影響を調査する
●睡眠尺度に対するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●日常の身体機能を捕捉するためにビデオ録画を使用する
●微細な運動機能に対するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した参加者の血漿及び尿中のバイオマーカーに関するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１が生活の質（ＱＯＬ）に及ぼす影響を調査する
●睡眠尺度に対するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●日常の身体機能を捕捉するためにビデオ録画を使用する
●微細な運動機能に対するコンストラクト１の効果を調査する
【0364】
診断、及び主な採用基準：
【0365】
この治験に参加するにあたって、参加者は、５歳以上、１８歳未満の男性であり、
●神経認知機能低下を伴うＭＰＳ ＩＩの文書による診断を受けていること、または
●ＭＰＳ ＩＩの神経障害性形態を招くことが公知のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、または
●神経症性ＭＰＳ ＩＩを有する血縁者の変異と同一のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、を満たしていなくてはならない。
●神経認知機能低下を伴うＭＰＳ ＩＩの文書による診断を受けていること、または
●ＭＰＳ ＩＩの神経障害性形態を招くことが公知のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、または
●神経症性ＭＰＳ ＩＩを有する血縁者の変異と同一のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、を満たしていなくてはならない。
【0366】
加えて、参加者は、ＩＣまたはＩＣＶ注射、及び免疫抑制を安全に受けることができなくてはならない。
【0367】
治験薬、用量、及び投与経路
【0368】
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。段落（００１９）及び図 ５を参照されたい。
【0369】
治験薬を、単回ＩＣまたはＩＣＶ用量として送達する。
【0370】
１つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣを評価する。投与する総用量は、対象者のスクリーニングＭＲＩに基づいて推定した治験対象者の脳のサイズに依る。投与する治験薬の総体積は、推定ＣＳＦ体積の１０％を超えない。
【0371】
６．９．２．安全性及び有効性の評価基準
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
【0372】
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
●Ｍｕｌｌｅｎ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｌｅａｒｎｉｎｇ（ＭＳＥＬ）（Ｍｕｌｌｅｎ，Ｃｉｒｃｌｅ Ｐｉｎｅｓ，ＭＮ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｉｎｃ．；１９９５）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
●Ｍｕｌｌｅｎ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｌｅａｒｎｉｎｇ（ＭＳＥＬ）（Ｍｕｌｌｅｎ，Ｃｉｒｃｌｅ Ｐｉｎｅｓ，ＭＮ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｉｎｃ．；１９９５）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
【0373】
探索評価項目：
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
－酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●正中神経運動感覚性遠位伝導速度及び潜伏期間
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｓｌｅｅｐ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ－ＳＤＳＣ）（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●臨床医が感じた全体的な重症度の印象、及び臨床医が感じた全体的な変化の印象
●介護者が感じた全体的な重症度の印象、及び介護者が感じた全体的な変化の印象
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｅｓｔ （ＰＥＤＩ ＣＡＴ）
●９－Ｈｏｌｅ Ｐｅｇ Ｔｅｓｔ
●ビデオで捕捉した運動機能性
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
－酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●正中神経運動感覚性遠位伝導速度及び潜伏期間
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｓｌｅｅｐ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ－ＳＤＳＣ）（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●臨床医が感じた全体的な重症度の印象、及び臨床医が感じた全体的な変化の印象
●介護者が感じた全体的な重症度の印象、及び介護者が感じた全体的な変化の印象
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｅｓｔ （ＰＥＤＩ ＣＡＴ）
●９－Ｈｏｌｅ Ｐｅｇ Ｔｅｓｔ
●ビデオで捕捉した運動機能性
【0374】
統計的手法
【0375】
すべてのデータを、記述統計を使用して分析する。カテゴリ変数を、頻度とパーセンテージを使用してまとめる。連続変数を、記述統計を、見落としのない観察数、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値を使用してまとめる。必要に応じて、グラフ表示を使用する。参加者データリストも表示する。
【0376】
サンプルサイズと検出力の計算
【0377】
正式な計算を行って、試料の大きさを決定することはしなかった。
６．９．３．略語と用語の定義の表
６．９．３．略語と用語の定義の表
【表14】
【0378】
６．９．４．全体的な治験デザイン
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）が、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、参加者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、参加者には、長期追跡調査への参加を促す。
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）が、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、参加者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、参加者には、長期追跡調査への参加を促す。
【0379】
最初の２名の適格な参加者が、時間を置いて登録される。第１の参加者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）は、ＩＳＣ規約に従って、この参加者に関して、試験の最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討する、そして、安全性の懸念が無ければ、第２の参加者に投与し得る。第２の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、第１の対象者の観察期間中に進め得る。
【0380】
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、２名の参加者について、第２の参加者の第８週目の受診時までに得た利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。続行が決定されると、次の４名の参加者を登録する。
【0381】
利用可能なすべての安全性データを、６番目の参加者の８週目の受診後に、治験独自のＩＤＭＣ規約に規定した間隔でＩＤＭＣが評価する。
【0382】
あらゆるＩＤＭＣ会合において、ＳＲＴによる計画または要請の有無に関係なく、ＩＤＭＣは、試験の中止、さらなる参加者への投与の遅延、または低用量での進行を薦め得る。６番目の参加者から８週間のデータが利用できるようになれば、試験への登録が完了する。
【0383】
何らかの事象が、事前に指定した停止規則の基準に該当すると、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ、及び外部のＩＤＭＣが安全性データのすべての完全な検討を行うまで、新規の参加者に対する投与は停止される。
【0384】
適格基準を満たす参加者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。参加者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣまたはＩＣＶ用量の投与を受け、観察のために、投薬後に一晩病院に留まる。参加者は、退院の準備ができており、かつ、入院の延長は必要ないと治験責任医師が判断した後に退院する。一次治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第１週、第２週、第３週、第４週、第１２週、及び第２４週目に実施する。第８週と第１６週の評価は、電話で聞き取りをして、有害事象（ＡＥ）と併用療法の評価だけを行う。一次治験期間の後に、第３８週、第５２週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第３０週目の受診は、第２４週からＩＶ ＥＲＴを中止した参加者に対してのみ行う。
【0385】
発達過程の子供で起こる脳の成長と、ＭＰＳ ＩＩにおいて起こり得る脳の成長の差異のために、コンストラクト１をＩＣまたはＩＣＶで投与する総投与量は、治験参加者のスクリーニングＭＲＩから得た推定脳質量に応じて変化する。参加者のＭＲＩから得た治験参加者の推定脳体積は、表１０に示すように、脳質量に変換され、投与する正確な用量を計算するために使用される。
【表15】
【0386】
コンストラクト１は、コンストラクト１の治験薬概要書の情報に精通しており、かつ、臨床試験の実施経験のある選ばれた治験研究者だけが、治験用途においてのみ使用することが意図される。コンストラクト１は、スポンサーが支援／承認した臨床試験に登録しており、かつ、同意書を提出したヒト参加者だけに投与し得る。
【0387】
６．９．５．採用基準
本治験に参加する資格を得るにあたって、参加者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．参加者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．５歳以上、１８歳未満の男性である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、基準平均（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ：７７、及びＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ：３５）から１ １／２以上の標準偏差の低下がある、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６か月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査スコア（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ、またはＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ．参加者と同じＩＤＳ変異を有する神経障害性ＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ．文書記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者がの意見で、それは神経障害性表現型に起因するものであり、かつ、臨床医の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している。
本治験に参加する資格を得るにあたって、参加者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．参加者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．５歳以上、１８歳未満の男性である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、基準平均（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ：７７、及びＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ：３５）から１ １／２以上の標準偏差の低下がある、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６か月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査スコア（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ、またはＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ．参加者と同じＩＤＳ変異を有する神経障害性ＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ．文書記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者がの意見で、それは神経障害性表現型に起因するものであり、かつ、臨床医の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している。
【0388】
６．９．６．除外基準
以下の除外基準のいずれかに該当する参加者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める。
ｃ．全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見が示した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ．治験研究者及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｇ．頭蓋内圧が上昇している（≧３０ｃｍ Ｈ２Ｏ）
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、参加者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
７．ＩＣＦに署名した時点で、くも膜下腔内（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている。参加者は、治験期間中のＩＴイデュルスルファーゼの中止に同意しなければならず、ＩＣＦに署名した直後から履行する。
８．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
９．抗ＩＤＳ抗体が中和されているので、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶに対して応答を示さず、尿中ＧＡＧレベルの高まりが認められる。免疫調節を受けており、かつ、現在のところ、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））に反応しておれば、当該参加者は登録し得る
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、参加者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１５．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１６．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１７．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねる、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１８．ＰＩの見解では、参加者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１９．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２０．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴がある
２１．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２２．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２３．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２４．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２５．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２７．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２８．好中球数の絶対数が、１．０×１０３未満／μＬである
２９．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
以下の除外基準のいずれかに該当する参加者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める。
ｃ．全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見が示した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ．治験研究者及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｇ．頭蓋内圧が上昇している（≧３０ｃｍ Ｈ２Ｏ）
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、参加者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
７．ＩＣＦに署名した時点で、くも膜下腔内（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている。参加者は、治験期間中のＩＴイデュルスルファーゼの中止に同意しなければならず、ＩＣＦに署名した直後から履行する。
８．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
９．抗ＩＤＳ抗体が中和されているので、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶに対して応答を示さず、尿中ＧＡＧレベルの高まりが認められる。免疫調節を受けており、かつ、現在のところ、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））に反応しておれば、当該参加者は登録し得る
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、参加者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１５．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１６．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１７．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねる、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１８．ＰＩの見解では、参加者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１９．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２０．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴がある
２１．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２２．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２３．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２４．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２５．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２７．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２８．好中球数の絶対数が、１．０×１０３未満／μＬである
２９．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
【0389】
６．９．７．免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
【0390】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
【0391】
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
【0392】
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。参加者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
【0393】
免疫抑制剤薬物の説明責任、ＩＳ分注、シロリムス及びタクロリムス全血トラフ濃度は、通常の治験受診の間に治験研究者の方で完了させる。
【0394】
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、ＰＩが適切な免疫抑制レジメンを決定する。
【0395】
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｓｅｐｔｒａ（登録商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例；月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量から開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
【0396】
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0397】
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
【0398】
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
【0399】
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0400】
６．１０ 実施例１０：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象者でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．１０．１．概要
治験デザイン
６．１０．１．概要
治験デザイン
【0401】
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約１２名の小児対象者を、３つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）、または脳質量１ｇあたり２．０×１０１１ＧＣ（用量３）に登録することができ、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣまたはＩＣＶ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
【0402】
最初の３名の適格対象者が、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）は、ＩＳＣ規約に従って、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討する、そして、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。次の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、前の対象者の観察期間中に進め得る。
【0403】
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、用量２コホートでの第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの３番目の対象者に関する８週目での受診後に、ＩＤＭＣが評価する。
【0404】
ＩＤＭＣの承認が得られると、治験薬が利用可能となり、そして、スポンサーの承認を得ており、かつ、ＩＳＣまたはＩＤＭＣのいずれかに従って登録を妨げる安全事象がない限りは、最大で６名の対象者に対して用量２拡大コホートで投与し得る。
【0405】
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められず、かつ、ＩＤＭＣが承認をしておれば、第３の用量コホート（２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量）の登録を開始する。ＩＳＣは、第１の対象者について、第８週目の受診に至るまでに、及び第８週目の受診で利用可能なすべての安全性データを検討する。安全性の懸念が無ければ、第２の対象者に投与をする。ＩＳＣは、用量３コホートでの第２の対象者の第２週目の受診までに得た全対象者の安全性データを検討する、そして、この評価の直後に、第３の対象者の投与に移行することが安全であるとの判断をし得る。
【0406】
主要目的：
【0407】
重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ投与、または、ＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶをして２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
【0408】
副次目的：
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、尿でのバイオマーカーでコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターでコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、尿でのバイオマーカーでコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターでコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
【0409】
探索目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーでコンストラクト１の効果を調査する
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすコンストラクト１の効果を調査する
●睡眠尺度に関するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーでコンストラクト１の効果を調査する
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすコンストラクト１の効果を調査する
●睡眠尺度に関するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
【0410】
診断、及び主要な採用基準：
【0411】
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．≧４か月齢以上、５歳未満の男児である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６か月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ） 対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者がの意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ）文書に記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者の意見で、それは神経障害性表現型［例えば、完全な欠失、または大規模な欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え］に起因するものである、または、臨床医の意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを有している。
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．≧４か月齢以上、５歳未満の男児である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６か月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ） 対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者がの意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ）文書に記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者の意見で、それは神経障害性表現型［例えば、完全な欠失、または大規模な欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え］に起因するものである、または、臨床医の意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを有している。
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
【0412】
診断、及び主要な除外基準：
【0413】
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ）治験に参加している神経放射線科医／神経外科医（施設あたり１名の神経放射線科医／神経外科医）のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｃ）コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ）ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ）クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見から判断した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ）治験研究者及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＨＳＣＴを受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．ＩＣＦに署名する４か月以内に、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））のくも膜下腔内（ＩＴ）投与を受けたことがある
９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒとの協議が必要である。
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内の、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への円滑な参加を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ）治験に参加している神経放射線科医／神経外科医（施設あたり１名の神経放射線科医／神経外科医）のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｃ）コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ）ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ）クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見から判断した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ）治験研究者及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＨＳＣＴを受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．ＩＣＦに署名する４か月以内に、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））のくも膜下腔内（ＩＴ）投与を受けたことがある
９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒとの協議が必要である。
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内の、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への円滑な参加を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
【0414】
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．２日目の４週間前から何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２９．好中球数の絶対数が、１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．２日目の４週間前から何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６か月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２９．好中球数の絶対数が、１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
【0415】
治験薬
【0416】
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。段落（００１９）、及び図５を参照されたい。
【0417】
投与量
【0418】
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入、または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも好都合であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。
【0419】
【表16】
【0420】
コンストラクト１は、コンストラクト１の治験薬概要書の情報に精通しており、かつ、臨床試験の実施経験のある選ばれた治験研究者だけが、治験用途においてのみ使用することが意図される。コンストラクト１は、スポンサーが支援／承認した臨床試験に登録しており、かつ、同意書を提出したヒト対象者だけに投与し得る。
【0421】
６．１０．２．安全性及び有効性の評価基準
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
【0422】
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
－ Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
－ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血清、尿でのベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
－ Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
－ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血清、尿でのベクター濃度
【0423】
探索評価項目：
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
●酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
●酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
【0424】
６．１０．３．略語と用語の定義の表
【表17】
【0425】
６．１０．４．免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●注記：プレドニゾロンは、治験責任者の裁量で、１：１の変換率でプレドニゾンに置換し得る。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●注記：プレドニゾロンは、治験責任者の裁量で、１：１の変換率でプレドニゾンに置換し得る。
【0426】
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
【0427】
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
【0428】
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日で開始する、そして、第１２週目の受診まで漸減する。
【0429】
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。対象者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
【0430】
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｂａｃｔｒｉｍ（商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例；月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量から開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
【0431】
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0432】
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
【0433】
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
【0434】
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
【0435】
均等物
本発明を、そのある特定の実施形態に関して詳細に記載しているが、本発明の範囲内に機能的に等価である変形があることが理解される。実際、本明細書に記載しており、説明をしている発明に加えて、本発明の様々な修正が、上記した明細書及び添付した図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、添付した特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。当業者であれば、本明細書に記載する発明のある特定の実施形態の数多くの均等物を認識する、または、日常的な実験を用いてこれを確認することが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
本発明を、そのある特定の実施形態に関して詳細に記載しているが、本発明の範囲内に機能的に等価である変形があることが理解される。実際、本明細書に記載しており、説明をしている発明に加えて、本発明の様々な修正が、上記した明細書及び添付した図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、添付した特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。当業者であれば、本明細書に記載する発明のある特定の実施形態の数多くの均等物を認識する、または、日常的な実験を用いてこれを確認することが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【0436】
本明細書に記載するすべての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれの個別の刊行物、特許、または特許出願の全内容を、参照により、本明細書で援用することが、具体的かつ個別的に示されるのと同程度にまで、参照により、本明細書で援用する。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図2-4】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図6-3】
【図6-4】
【図6-5】
【手続補正書】
【提出日】2022-11-09
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】