特表 2023-512290 異種性を低減させるためにウイルス調製物を処理するためのシステム及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-24

(54)【発明の名称】異種性を低減させるためにウイルス調製物を処理するためのシステム及び方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 7/02 20060101AFI20230316BHJP

   G01N 27/62 20210101ALI20230316BHJP

   G01N 1/28 20060101ALI20230316BHJP

   G01N 1/44 20060101ALI20230316BHJP

【ＦＩ】

C12N7/02

G01N27/62 V

G01N1/28 J

G01N1/44

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022547046

(86)(22)【出願日】2021-02-03

(85)【翻訳文提出日】2022-08-02

(86)【国際出願番号】 US2021016325

(87)【国際公開番号】W WO2021158603

(87)【国際公開日】2021-08-12

(31)【優先権主張番号】62/969,323

(32)【優先日】2020-02-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520477485

【氏名又は名称】ザ・トラスティーズ・オブ・インディアナ・ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100210398

【弁理士】

【氏名又は名称】横尾 太郎

(72)【発明者】

【氏名】ジャロルド，マーティン・エフ

(72)【発明者】

【氏名】クレマー，デヴィッド・イー

(72)【発明者】

【氏名】ドレイパー，ベンジャミン・イー

(72)【発明者】

【氏名】バーンズ，ローレン・エフ

【テーマコード（参考）】

2G041

2G052

4B065

【Ｆターム（参考）】

2G041CA01

2G041DA05

2G041FA11

2G041GA08

2G041GA17

2G041GA18

2G041JA10

2G041LA08

2G052AA28

2G052AB16

2G052AB27

2G052AD06

2G052AD26

2G052AD46

2G052EB11

2G052EB12

2G052GA24

2G052HA17

2G052HC04

2G052HC17

2G052HC22

2G052HC38

2G052JA06

2G052JA08

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA01

4B065BC03

4B065BD08

4B065CA44

4B065CA46

(57)【要約】

ウイルス調製物の異種性を低減させるための方法は、ウイルス調製物からウイルスイオンを発生させることと、ウイルス調製物及び発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの増加させた温度において、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させることと、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することと、それぞれの質量電荷比及び電荷の大きさに基づいて、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において質量スペクトルを決定することと、質量スペクトルに基づいて、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒に最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定することとを含み得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ウイルス調製物の異種性を低減させるための方法であって、
前記ウイルス調製物からウイルスイオンを発生させることと、
前記ウイルス調製物及び前記発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの増加させた温度において、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させることと、
前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することと、
それぞれの質量電荷比及び電荷の大きさの値に基づいて、前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において質量スペクトルを決定することと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒に最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものを決定すること
を含む、方法。

【請求項2】

冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものと共に、最適な冷却プロファイルを決定すること
を更に含む、
請求項１に記載の方法。

【請求項3】

加熱プロファイルを、前記ウイルス調製物及び前記発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの温度が増加される方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものと共に、最適な加熱プロファイルを決定すること
を更に含む、
請求項１に記載の方法。

【請求項4】

冷却プロファイルを、前記増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものと共に、最適な冷却プロファイルを決定すること
を更に含む、
請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することが、電荷検出質量分析計を使用して行われる、
請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することが、質量分析計を使用して行われる、
請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

それぞれの質量スペクトルにおける少なくとも１つの目的の質量ピークの質量分解能に基づいて、前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加においてウイルス集団の異種性を決定すること、
を更に含む、
請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記それぞれの質量スペクトルが、前記ウイルス調製物中の最高質量キャプシドのものよりも大きい質量を有する識別可能な粒子を含む場合に凝集が発生したと決定すること
を更に含み、
前記温度及び前記インキュベーション期間の前記最適なものの少なくとも１つが、凝集が発生したそれぞれの質量スペクトルのそれぞれの温度及びインキュベーション期間未満である、
請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ウイルス調製物の他の試料を、その異種性を最小化するか又は少なくとも低減させるために、前記ウイルス調製物の他の試料の各々を最適なインキュベーション期間にわたって決定された最適温度まで加熱することによって処理すること、
を更に含む、
請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記ウイルス調製物が、ウイルス調製溶液であり、
前記ウイルスイオンを発生させることが、エレクトロスプレーイオン化源を使用して、前記ウイルス調製溶液から前記ウイルスイオンを発生させることを含む、
請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させることが、前記ウイルス調製物に連結された第１の熱エネルギーデバイスを制御して、前記ウイルス調製物を加熱することを含む、
請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させることが、熱エネルギーを発生させたイオンに伝達するように位置付けられた第２の熱エネルギーデバイスを制御して、前記発生させたイオンを加熱することを含む、
請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

ウイルス調製物の異種性を低減させるための方法であって、
前記ウイルス調製物の増加させた温度において温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを順次増加させることと、
前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記ウイルス調製物からウイルスイオンを発生させることと、
前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することと、
それぞれの質量電荷比及び電荷の大きさの値に基づいて、前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、質量スペクトルを決定することと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒に最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものを決定すること
を含む、方法。

【請求項14】

冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものと共に、最適な冷却プロファイルを決定すること
を更に含む、
請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

加熱プロファイルを、前記ウイルス調製物及び前記発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの温度が増加される方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて、前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものと共に、最適な加熱プロファイルを決定することと
を更に含む、
請求項１３に記載の方法。

【請求項16】

冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下させられる方式に対応するように変化させることと、
前記質量スペクトルに基づいて、最適な加熱プロファイル、並びに前記ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、前記ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる前記温度及び前記インキュベーション期間の最適なものと共に、最適な冷却プロファイルを決定することと
を更に含む、
請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することが、電荷検出質量分析計を使用して行われる、
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において前記発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定することが、質量分析計を使用して行われる、
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

それぞれの質量スペクトルにおける少なくとも１つの目的の質量ピークの質量分解能に基づいて、前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加においてウイルス集団の異種性を決定すること
を更に含む、
請求項１３～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、前記それぞれの質量スペクトルが、前記ウイルス調製物中の最高質量キャプシドのものよりも大きい質量を有する識別可能な粒子を含む場合に凝集が発生したと決定すること
を更に含み、
前記温度及び前記インキュベーション期間の前記最適なものの少なくとも１つが、凝集が発生したそれぞれの質量スペクトルのそれぞれの温度及びインキュベーション期間未満である、
請求項１３～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ウイルス調製物の他の試料を、その異種性を最小化するか又は少なくとも低減させるために、前記ウイルス調製物の他の試料の各々を最適なインキュベーション期間にわたって決定された最適温度まで加熱することによって処理すること
を更に含む、
請求項１３～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ウイルス調製物が、ウイルス調製溶液であり、
前記ウイルスイオンを発生させることが、エレクトロスプレーイオン化源を使用して、前記ウイルス調製溶液から前記ウイルスイオンを発生させることを含む、
請求項１３～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記温度及び前記インキュベーション期間のうちの少なくとも１つを順次増加させることが、前記ウイルス調製物に連結された第１の熱エネルギーデバイスを制御して、前記ウイルス調製物を加熱することを含む、
請求項１３～２２のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
[0001]本国際公開出願は、２０２０年２月３日に出願された米国仮特許出願第６２／９６９，３２３号の利益及び優先権を主張するものであり、その仮特許出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
政府の権利
[0002]本発明は、国立衛生研究所によって授与されたＧＭ１３１１００の下で政府の支援により行われた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0002】

[0003]本開示は、概して、質量分光分析に関し、より具体的には、限定されるものではないが、ウイルス粒子が含まれる生物学的混合物粒子の質量を、異なる範囲の温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルにわたって測定及び分析するための機器及び方法に関する。

【背景技術】

【0003】

[0004]アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、その病原性の欠如、低免疫原性及び異なる向性を有する多くの血清型の存在のために、広く受け入れられている遺伝子療法ベクターの一例である。試料調製及び包装技術に関連し得る用量関連免疫毒性の可能性が存在することが見出されている。限定されないが、ＡＡＶなどのウイルス調製物を、そのような調製物の異種性を低減させる方法で処理することは有益であり得る。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

[0005]本開示は、添付の特許請求の範囲に記載された特徴のうちの１つ以上、及び／又は以下の特徴のうちの１つ以上並びにそれらの組み合わせを含み得る。第１の態様では、ウイルス調製物の異種性を低減させるための方法は、ウイルス調製物からウイルスイオンを発生させるステップと、ウイルス調製物及び発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの増加させた温度において、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させるステップと、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップと、それぞれの質量電荷比及び電荷の大きさの値に基づいて、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において質量スペクトルを決定するステップと、質量スペクトルに基づいて、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒に最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを含み得る。

【0005】

[0006]第２の態様は、第１の態様の特徴を含むことができ、冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な冷却プロファイルと共に、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含み得る。

【0006】

[0007]第３の態様は、第１の態様の特徴を含むことができ、加熱プロファイルを、ウイルス調製物及び発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの温度が増加される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な加熱プロファイルと共に、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含み得る。

【0007】

[0008]第４の態様は、第３の態様の特徴を含むことができ、冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な冷却プロファイルと共に、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含み得る。

【0008】

[0009]第５の態様は、第１の態様から第４の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップは、電荷検出質量分析計を使用して行われる。

【0009】

[0010]第６の態様は、第１の態様から第４の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップは、質量分析計を使用して行われる。

【0010】

[0011]第７の態様は、第１の態様から第６の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、それぞれの質量スペクトルにおける少なくとも１つの目的の質量ピークの質量分解能に基づいて、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加においてウイルス集団の異種性を決定するステップを更に含むことができる。

【0011】

[0012]第８の態様は、第１の態様から第７の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、それぞれの質量スペクトルが、ウイルス調製物中の最高質量キャプシドのものよりも大きい質量を有する識別可能な粒子を含む場合に凝集が発生したと決定するステップを更に含むことができ、温度及びインキュベーション期間の最適なものの少なくとも１つは、凝集が発生したそれぞれの質量スペクトルのそれぞれの温度及びインキュベーション期間未満である。

【0012】

[0013]第９の態様は、第１の態様から第８の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、ウイルス調製物の他の試料を、その異種性を最小化するか又は少なくとも低減させるために、ウイルス調製物の他の試料の各々を最適なインキュベーション期間わたって決定された最適温度まで加熱することによって処理するステップを更に含むことができる。

【0013】

[0014]第１０の態様は、第１の態様から第９の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、ウイルス調製物は、ウイルス調製溶液であり、ウイルスイオンを発生させるステップは、エレクトロスプレーイオン化源を使用して、ウイルス調製溶液からウイルスイオンを発生させることを含む。

【0014】

[0015]第１１の態様は、第１の態様から第１０の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させるステップは、ウイルス調製物に連結された第１の熱エネルギーデバイスを制御してウイルス調製物を加熱することを含む。

【0015】

[0016]第１２の態様は、第１の態様から第１１の態様までのいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを繰り返し増加させるステップは、熱エネルギーを発生させたイオンに伝達するように位置付けられた第２の熱エネルギーデバイスを制御して、発生させたイオンを加熱することを含む。

【0016】

[0017]第１３の態様では、ウイルス調製物の異種性を低減させるための方法は、ウイルス調製物の増加させた温度において温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを順次増加させるステップと、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加においてウイルス調製物からウイルスイオンを発生させるステップと、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップと、それぞれの質量電荷比及び電荷の大きさの値に基づいて、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において質量スペクトルを決定するステップと、質量スペクトルに基づいて、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒に最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを含み得る。

【0017】

[0018]第１４の態様は、第１３の態様の特徴を含むことができ、冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な冷却プロファイルと共に、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含むことができる。

【0018】

[0019]第１５の態様は、第１３の態様の特徴を含むことができ、加熱プロファイルを、ウイルス調製物及び発生させたウイルスイオンのうちの少なくとも１つの温度が増加される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な加熱プロファイルと共に、ウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含むことができる。

【0019】

[0020]第１６の態様は、第１５の態様の特徴を含むことができ、冷却プロファイルを、増加させた温度がそれぞれのインキュベーション期間後に低下される方式に対応するように変化させるステップと、質量スペクトルに基づいて、最適な冷却プロファイルと共に、最適な加熱プロファイル、並びにウイルス調製物中のウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を一緒になって最小化するか又は少なくとも低減させる温度及びインキュベーション期間の最適なものを決定するステップとを更に含むことができる。

【0020】

[0021]第１７の態様は、第１３の態様から第１６の態様のいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップは、電荷検出質量分析計を使用して行われる。

【0021】

[0022]第１８の態様は、第１３の態様から第１６の態様のいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において発生させたウイルスイオンの少なくともいくつかの質量電荷比及び電荷の大きさを測定するステップは、質量分析計を使用して行われる。

【0022】

[0023]第１９の態様は、第１３の態様から第１８の態様のいずれかの特徴を含むことができ、それぞれの質量スペクトルにおける少なくとも１つの目的の質量ピークの質量分解能に基づいて、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加においてウイルス集団の異種性を決定するステップを更に含むことができる。

【0023】

[0024]第２０の態様は、第１３の態様から第１９の態様のいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つの各増加において、それぞれの質量スペクトルが、ウイルス調製物中の最高質量キャプシドのものよりも大きい質量を有する識別可能な粒子を含む場合に凝集が発生したと決定するステップを更に含むことができ、温度及びインキュベーション期間の最適なものの少なくとも１つは、凝集が発生したそれぞれの質量スペクトルのそれぞれの温度及びインキュベーション期間未満である。

【0024】

[0025]第２１の態様は、第１３の態様から第２０の態様のいずれかの特徴を含むことができ、ウイルス調製物の他の試料を、その異種性を最小化するか又は少なくとも低減させるために、ウイルス調製物の他の試料の各々を最適なインキュベーション期間にわたって決定された最適温度まで加熱することによって処理するステップを更に含むことができる。

【0025】

[0026]第２２の態様は、第１３の態様から第２１の態様のいずれかの特徴を含むことができ、ウイルス調製物は、ウイルス調製溶液であり、ウイルスイオンを発生させるステップは、エレクトロスプレーイオン化源を使用して、ウイルス調製溶液からウイルスイオンを発生させることを含む。

【0026】

[0027]第２３の態様は、第１３の態様から第２２の態様のいずれかの特徴を含むことができ、温度及びインキュベーション期間のうちの少なくとも１つを連続的に増加させるステップは、ウイルス調製物に連結された第１の熱エネルギーデバイスを制御してウイルス調製物を加熱することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】[0028]ウイルス調製物から荷電粒子を繰り返し発生させて、次いで荷電粒子の質量を決定及び分析するための機器の実施形態の簡略図であり、ウイルス調製物及び／又は荷電粒子は、少なくとも１つの範囲の異なる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルに供される。

【図2】[0029]ウイルス調製物及び／又は荷電粒子を少なくとも１つの範囲の異なる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルに供するために、図１に図示された熱エネルギー源のうちの１つ以上を制御するための、次いで、機器を制御して、ウイルス調製物から荷電粒子を発生させ、温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの各組み合わせにおいて荷電粒子の質量を決定及び分析して、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの少なくとも１つの最適な組み合わせを決定するためのプロセスの実施形態の簡略化フロー図である。

【図3】[0030]調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる目的で、図２に図示されたプロセスを使用してあらかじめ決定された温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの最適なセットに従ってウイルスを処理するためのプロセスの実施形態の簡略化フロー図である。

【図4】[0031]図４Ａは、周囲条件下（２５℃）での例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。[0032]図４Ｂは、１０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって４５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。[0033]図４Ｃは、１０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５０℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。[0034]図４Ｄは、１０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。[0035]図４Ｅは、１０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって６０℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。[0036]図４Ｆは、１０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって６５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対存在量のプロットである。

【図5】[0037]図５Ａは、周囲条件下（２５℃）での別の例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対強度のプロットである。[0038]図５Ｂは、２０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対強度のプロットである。[0039]図５Ｃは、３０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対強度のプロットである。[0040]図５Ｄは、４０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対強度のプロットである。[0041]図５Ｅは、６０分間の例示的なインキュベーション期間にわたって５５℃に上昇させた例示的なウイルス調製物についての図２のプロセスの操作を示す質量対強度のプロットである。

【発明を実施するための形態】

【0028】

[0042]本開示の原理の理解を促進する目的で、添付の図面に示される多くの例示的な実施形態が参照され、それを説明するために特定の言語が使用される。
[0043]本開示は、ウイルス調製物から荷電粒子を繰り返し発生させて、次いで荷電粒子の質量を決定及び分析するための装置及び技術に関し、ウイルス調製物及び／又は荷電粒子は、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの少なくとも１つの最適な組み合わせを決定する目的で、少なくとも１つの範囲の異なる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルに供される。本開示はまた、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、調製物の異種性が最小化されているか、又は少なくとも低減されている処理されたウイルス調製物を生成するために、ウイルス調製物を温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルのあらかじめ決定された最適な組み合わせに供することによる、ウイルス調製物を連続的に処理するための装置及び技術に関する。添付の図面に例示され、本明細書に記載される装置及び技術は、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、かかる調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる目的で、それぞれがウイルスの異なる調製物を処理するための、及び／又は異なるウイルスの調製物を処理するための、温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの最適な組み合わせのライブラリーを構築するために例示として使用され得る。本文書の目的では、「インキュベーション期間」という用語は、ウイルス調製物によって、及び／又はウイルス調製物から発生させた荷電粒子によって特定の温度で費やされる時間の量を意味するものと理解されたい。「凝集」という用語は、典型的には、上昇温度及びインキュベーション期間の様々な組み合わせでウイルス調製物において起こる、２つ以上のウイルスキャプシド又はキャプシドフラグメントの互いに対する接着又は付着を意味するものと理解されたい。本文書の目的では、「イオン（複数可）」及び「荷電粒子（複数可）」という用語は同義であると理解され、したがって、互換的に使用されてもよい。

【0029】

[0044]ここで図１を参照すると、ウイルス調製物から荷電粒子を繰り返し発生させ、次いで荷電粒子の質量を決定及び分析するための機器１０であり、ここでは、ウイルス調製物及び／又は荷電粒子は、少なくとも１つの範囲の異なる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルに供される機器１０の図が示されている。図示した実施形態では、機器１０は、質量分析計１４の入口に連結された出口を有するイオン源領域１２を例示として含む。

【0030】

[0045]イオン源領域１２は、イオン、すなわち荷電粒子を試料１６から発生させるように構成されたイオン発生器１８を例示として含む。図示した実施形態では、イオン発生器１８は、溶液入口で注入管１８Ｂに連結され、かつ溶液出口で機器１０のイオン源領域１２に配置されたキャピラリー出口を有するキャピラリー１８Ｃに連結されたポンプ１８Ａを有する従来のエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源の形態で実装されている。ＥＳＩ源１８は、注入管１８Ｂを通してポンプ１８Ａに、例えば周囲圧で溶液を吸い込み、キャピラリー１８Ｃの出口を介して機器１０のイオン源領域１２に荷電溶液粒子の微細なスプレー又は液滴を放出するために従来の方式で動作可能である。代替実施形態では、イオン発生器１８は、試料からイオンを発生させるための任意の従来のデバイス又は装置であってもよく、イオン源領域１２の外側に位置付けられても、又はイオン源領域１２の内部に位置付けられてもよい。後者の１つの例示的な例として、多少なりとも限定的なものとしてみなされるべきではないが、図１に図示された構造体２５は、従来のマトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）源の形態のイオン発生器１８又はイオン源領域１２の内側に配置された試料１６からイオンを発生させるように構成された他の従来のイオン発生器を表してもよい。いくつかの実施形態では、図１に図示された構造体２５は、代替として又は追加として、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１９年６月４日に出願された同時係属中の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３５３７９号に開示された構造体のいずれかなどのイオン注入インターフェースを表してもよい。他の実施形態では、構造体２５は省略されてもよい。

【0031】

[0046]イオンがそれから発生される試料１６は、例示としては、任意の種類のウイルスの、又はそれらを含む任意の混合物若しくは溶液などの任意のウイルス調製物であってもよく、これらの１つの非限定的な例は、上述したようなＡＡＶである。代替実施形態では、試料１６は、生物学的及び／又は非生物学的成分の任意の混合物、溶液若しくは他の形態であり得る。図１に図示された例では、試料１６は、例えば、容器１６Ｂ内で溶液中１６Ａに溶解され、分散され、又は別の方法で担持されたウイルス調製物であるが、他の実施形態では、試料１６は、溶液又は溶液の一部でなくてもよい。図１に図示された例示的な実施形態では、容器１６Ｂは、ＥＳＩ源１８の注入管１８Ｂから下方にずれて示されており、容器１６Ｂは、注入間１８Ｂが試料溶液１６Ａと流体連通するように方向Ｄで上方に移動可能であることが理解されよう。

【0032】

[0047]例示した実施形態では、電圧源ＶＳ１は、数字Jの単一経路（Jは、任意の正の整数であり得る）を介してプロセッサ２０に電気的に接続され、数字Ｋの単一経路（Ｋは、同様に、任意の正の整数であり得る）を介してイオン発生器１８に更に電気的に接続されている。いくつかの実施形態では、電圧源ＶＳ１は、単一の電圧源の形態で実装されてもよく、他の実施形態では、電圧源ＶＳ１は、任意の数の別個の電圧源を含んでもよい。いくつかの実施形態では、電圧源ＶＳ１は、１つ以上の選択可能な大きさの時不変な（すなわち、ＤＣ）電圧を生成して供給するように構成又は制御され得る。代替として又は追加として、電圧源ＶＳ１は、１つ以上の切り替え可能な時変な電圧、すなわち、１つ以上の切り替え可能なＤＣ電圧を生成して供給するように構成又は制御され得る。代替として又は追加として、電圧源ＶＳ１は、選択可能な形状、デューティサイクル、ピークの大きさ、及び／又は周波数の１つ以上の時変信号を生成して供給するように構成又は制御され得る。

【0033】

[0048]プロセッサ２０は、例示としては従来型のものであり、単一の処理回路又は複数の処理回路を含み得る。プロセッサ２０は、例示としては、プロセッサ２０によって実行されると、プロセッサ２０が、電圧源ＶＳ１を制御して、イオン発生器１８の動作を選択的に制御するための１つ以上の出力を生成させる、その中に保存された命令を有するメモリ２２を含むか、又はそれに連結されている。いくつかの実施形態では、プロセッサ２０は、１つ以上の従来型のマイクロプロセッサ又はコントローラの形態で実装されてもよく、そのような実施形態では、メモリ２２は、１つ以上のマイクロプロセッサ実行可能な命令又は命令セットの形態でその中に保存された命令を有する１つ以上の従来型のメモリユニットの形態で実装され得る。他の実施形態では、プロセッサ２０は、代替として又は追加として、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）又は同様な回路機構の形態で実装されてもよく、そのような実施形態では、メモリ２２は、その中に命令をプログラムして保存することができる、ＦＰＧＡ内に含まれる、及び／又はその外側にあるプログラマブル論理ブロックの形態で実装されてもよい。更に他の実施形態では、プロセッサ２０及び／又はメモリ２２は、１つ以上の特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）の形態で実装されてもよい。当業者であれば、プロセッサ２０及び／又はメモリ２２が実装され得る他の形態を認識するであろうし、実装の任意のそのような他の形態が、本開示によって企図され、かつ本開示の範囲内に入るように意図されることを理解されよう。いくつかの代替実施形態では、電圧源ＶＳ１は、１つ以上の定出力電圧及び／又は時変出力電圧を選択的に生成するように、それ自体プログラム可能であり得る。

【0034】

[0049]例示した実施形態では、電圧源ＶＳ１は、例示としては、プロセッサ２０によって生成された制御信号に応答して１つ以上の電圧を生成し、イオン発生器１８に従来の方法で試料１６からイオンを発生させるように構成される。いくつかの実施形態では、試料１６は、図１に示されるように、イオン源領域１２の外側に位置付けられ、他の実施形態では、イオン源１８は、イオン源領域１２の内部に位置付けられてもよい。例示した実施形態では、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源１８は、ＶＳ１により供給された１つ以上の電圧に応答して、電荷液滴の細かい霧状の形態で試料１６からイオンを発生させるように構成されている。上述したように、ＥＳＩ及びＭＡＬＤＩは、無数にある従来型のイオン発生器の２つの例を表したにすぎないこと、及びイオン発生器１８は、試料が溶液であろうと溶液でなかろうと、試料からイオンを発生させるための任意のそのようなあらゆる従来型のデバイス又は装置であり得るか、又はそのようなあらゆる従来型のデバイス又は装置を含み得る。

【0035】

[0050]少なくとも１つの熱エネルギー源が、試料１６及び／又はイオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内の電荷粒子に熱的に選択的にエネルギーを与える、すなわち、熱エネルギーを伝達するように構成されている。例示した実施形態では、例えば、熱エネルギー源２４は、ウイルス調製物を含有する溶液１６Ａを担持する容器１６Ｂに動作的に連結されて示されており、この実施形態では、熱エネルギー源２４は、熱エネルギーを、容器１６Ｂを介してウイルス調製溶液１６Ａに伝達するように構成されている。代替として又は追加として、熱エネルギー源２４’が、イオン発生器１８に動作的に連結されてもよい。いくつかのそのような実施形態では、熱エネルギー源２４’は、ポンプ１８Ａ及び／又は注入管１８Ｂに連結されてもよく、そのような実施形態では、熱エネルギー源２４’は、例えば、溶液１６Ａのイオン化の前に、ポンプ１８Ａ及び／又は管１８Ｂを介して、熱エネルギーをウイルス調製溶液１６Ａに伝達するように構成されている。他のそのような実施形態では、熱エネルギー源２４’は、キャピラリー１８Ｃに連結されてもよく、そのような実施形態では、熱エネルギー源２４’は、キャピラリー１８Ｃ内の溶液１６Ａに、及び／又はキャピラリー１８Ｃから出る荷電粒子に熱エネルギーを伝達するように構成されている。代替として又は更に追加として、熱エネルギー源２４’’が、機器１０のイオン源領域１２に動作的に連結されてもよく、そのような実施形態では、熱エネルギー源２４’’は、イオン源領域１２内の荷電粒子に、すなわち、イオン発生器１８から出る荷電粒子に、そして質量分析計１４に入る前の荷電粒子に熱エネルギーを伝達するように構成されている。

【0036】

[0051]いくつかの実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’によって生成された熱エネルギーは、エネルギー源２４、２４’、２４’’から試料１６、イオン発生器１８及び／又は荷電粒子まで伝達される熱の形態であり得、他の実施形態では、熱エネルギーは、試料１６、イオン発生器１８及び／又は荷電粒子からエネルギー源２４、２４’、２４’’まで伝達される、すなわち、試料粒子を冷却する熱の形態であり得る。いくつかの実施形態では、エネルギー源２４、２４’、２４’’は、試料温度が、より暖かいからより冷えた温度に、又はより冷えたからより暖かい温度に周囲温度をスイープされ得るように、又は冷えたからより冷えた温度に、より冷えたからあまり冷えていない温度に、冷えた若しくは涼しいから暖かい若しくは熱い温度に、暖かい若しくは熱いから冷えた若しくは涼しい温度に、暖かいからより暖かい温度に、より暖かいからあまり暖かくない温度に、暖かいから熱い温度に、熱いから暖かい温度になどスイープされ得るように加熱能力と冷却能力の両方を含み得る。例示的な熱源２４、２４’、２４’’としては、従来型の溶液ヒーター及び加熱ユニット、１つ以上の放射線源、例えば、赤外、レーザー、マイクロ波、若しくは任意の放射線波長での何らかのもの、１つ以上の加熱ガス又は他の流体（複数可）などが挙げられ得るが、これらに限定されず、例示的な冷却源２４、２４’、２４’’としては、従来型の溶液チラー、１つ以上の冷却ガス又は他の流体（複数可）などが挙げられ得るが、これらに限定されない。熱エネルギー源２４’’のいくつかの例及び荷電粒子を加熱するためのその動作は、その開示が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年１２月５日に出願された、同時係属中の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６４００５号に記載されている。当業者であれば、ウイルス調製物からの荷電粒子の発生前又は発生後に加熱若しくは冷却することによって、ウイルス調製物１６の温度を制御するための他の構造体及び／又は技術を認識するであろうし、任意のそのような他の構造体及び／又は技術が、本開示の範囲内に入るよう意図されることを理解するであろう。

【0037】

[0052]図１の例によって例示される、いくつかの実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、電圧源ＶＳ１に電気的に接続されており、電圧源ＶＳ１は、プロセッサ２０によって生成された１つ以上の制御信号に応答して、１つ以上の対応する電圧を生成して、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’によって生成された熱エネルギーを制御するように構成されている。代替実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、プロセッサ２０によって生成された制御信号に応答して、熱エネルギーを選択的に生成するように構成されてもよく、そのような実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、プロセッサ２０に直接電気的に接続されても、又は従来型の回路機構を介して接続されてもよい。熱エネルギー源２４及び／又は熱エネルギー源２４’を含むいくつかの実施形態では、電圧源ＶＳ１によってそれに供給された電圧／電流又は熱エネルギー源２４、２４’それ自体は、プロセッサ２０によって制御されない場合があり、むしろ、図１で破線の表現で示された別個の従来型の制御回路Ｃによって制御され得る。いくつかの実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、従来型の主導制御された熱エネルギー源、例えば、手動制御ヒーター及び／又は氷浴などであり得、そのような実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’の動作は、プロセッサ２０又は制御回路Ｃによっては制御されず、例えば、熱エネルギー源を手動で制御し、例えば、従来型の温度計又は温度センサーによって温度を手動で監視し、及び／又は従来型のタイマー、ストップウォッチ又は同様なデバイスによってインキュベーション期間を手動で監視することにより、手動で制御される。いずれの場合も、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、１つ以上の従来型のヒーター若しくは加熱素子及び／又は１つ以上の従来型のクーラー若しくは冷却素子の形態で実装され得る。

【0038】

[0053]熱エネルギー源２４、２４’、２４’’がプロセッサ２０によって、又は制御回路Ｃによって制御される実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、電圧源ＶＳ１によって生成された１つ以上の電圧に、及び／又はプロセッサ２０若しくは制御回路Ｃによって生成された１つ以上の制御信号に応答して、試料１６の温度、イオン発生器１８の温度及び／又はイオン源領域１２内の荷電粒子の温度並びにインキュベーション期間、すなわち、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’が任意の特定の温度に制御される持続時間を制御する。

【0039】

[0054]いくつかの実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、電圧源ＶＳ１によって生成された１つ以上の電圧に応答して、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’の物理的制限を考慮して、実行可能な限り迅速に目標の上昇温度を達成するように構成されている。代替実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、プロセッサ２０又は制御回路Ｃによって生成された信号を制御するようにプログラムされ、又は応答して、複数の異なる加熱プロファイルのいずれかに従って目標の上昇温度を達成するように構成され得る。そのような加熱プロファイルの例としては、線形的に増加する、例えば、傾斜温度プロファイル、非線形的若しくは区分線形的に増加する温度プロファイル又はそれらの組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかのそのような実施形態では、加熱プロファイルの持続時間、すなわち、現在の温度から目標の上昇温度までもまた、プロセッサ２０又は制御回路Ｃによって制御され得る。

【0040】

[0055]いくつかの実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、電圧源ＶＳ１によって生成された１つ以上の電圧に応答して、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’の物理的制限を考慮して、実行可能な限り迅速に目標の低減温度を達成するように構成されている。一例として、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’を単純に切るか、又は低くすることによって、目標の低減温度を達成するように構成することができ、この場合、目標の低減温度は、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’並びに試料１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２が一緒に目標の低減温度まで冷える持続時間にわたって達成されるであろう。代替実施形態では、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’は、プロセッサ２０又は制御回路Ｃによって生成された信号を制御するようにプログラムされ、又は応答して、複数の異なる冷却プロファイルのいずれかに従って目標の低減温度を達成するように構成され得る。そのような冷却プロファイルの例としては、線形的に減少する、例えば、傾斜温度プロファイル、非線形的若しくは区分線形的に減少する温度プロファイル又はそれらの組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかのそのような実施形態では、冷却プロファイルの持続時間、すなわち、現在の温度から目標の低減温度までもまた、プロセッサ２０又は制御回路Ｃによって制御され得る。

【0041】

[0056]いくつかの実施形態では、試料１６、イオン源１８及び／又はイオン源領域１２における荷電粒子は、冷却させるか、又は今述べたように能動的に冷却され、その結果、質量分析計１４による分析が周囲温度又は周囲温度近くで荷電粒子に対して行われる。他の実施形態では、試料１６、イオン源１８及び／又はイオン源１２における荷電粒子は、周囲温度未満まで冷却され得、その結果、質量分析計１４による分析が周囲より低い温度まで冷却された荷電粒子で行われる。更に他の実施形態では、試料１６、イオン源１８及び／又はイオン源１２における荷電粒子は、今述べたように、１つ以上の上昇温度まで１つ以上のインキュベーション期間にわたって加熱されるが、その後、質量分析計１４による分析が、１つ以上の上昇温度までそれぞれ１つ以上のインキュベーション期間にわたって加熱された荷電粒子で行われるように、実質的に冷却されない。

【0042】

[0057]質量分析計１４は、例示として、一緒に連結した２つのセクション、イオン処理領域２６及びイオン検出領域２８を含む。第２の電圧源ＶＳ２は、数字Ｌの単一経路（Ｌは、任意の正の整数であり得る）を介してプロセッサ２０に電気的に接続され、数字Ｍの単一経路（Ｍは、同様に任意の正の整数であり得る）を介してイオン処理領域２６に電気的に接続されている。いくつかの実施形態では、電圧源ＶＳ２は、単一の電圧源の形態で実装されてもよく、他の実施形態では、電圧源ＶＳ２は、任意の数の別個の電圧源を含んでもよい。いくつかの実施形態では、電圧源ＶＳ２は、選択可能な大きさの１つ以上の時不変（すなわち、ＤＣ）電圧を生成して供給するように構成又は制御され得る。代替として又は追加として、電圧源ＶＳ２は、１つ以上の切り替え可能な時不変電圧、すなわち、１つ以上の切り替え可能なＤＣ電圧を生成して供給するように構成又は制御され得る。代替として又は追加として、電圧源ＶＳ２は、選択可能な形状、デューティサイクル、ピークの大きさ、及び／又は周波数の１つ以上の時変信号を生成して供給するように構成又は制御可能であり得る。多少なりとも限定するものとみなされるべきではない、後者の実施形態の１つの具体的な例として、電圧源ＶＳ２は、高周波数（ＲＦ）範囲における１つ以上の正弦波（又は他の形状の）電圧の形態で、１つ以上の時変電圧を生成し供給するように構成又は制御可能であり得る。

【0043】

[0058]いくつかの実施形態では、質量分析計１４は、イオン発生器１８によって発生させた荷電粒子の質量電荷比及び電荷の大きさの両方を同時に測定するように構成され、そのため、プロセッサ２０は、次いで、これらの測定値に基づいてイオン質量を決定することができる。そのような実施形態では、イオン検出領域２８は、数字Ｎの電荷検出増幅器ＣＡ（Ｎは、任意の正の整数であり得る）の各々の入力部に電気的に接続され、数字Ｎの電荷検出増幅器ＣＡの出力部は、図１に示されるように、プロセッサ２０に電気的に接続されている。電荷検出増幅器（複数可）ＣＡは、それぞれ、例示としては従来型であり、電荷検出領域２８中に配置された１つ以上のそれぞれの電荷検出器上の荷電粒子によって誘導された電荷に対応して、その出力部において対応する電荷検出信号を生成して、電荷検出信号をプロセッサ２０に供給する。

【0044】

[0059]質量分析計１４がイオン発生器１８によって発生させた電荷粒子の質量電荷比及び電荷の大きさの両方を同時に測定するように構成された質量分析計の形態で提供される一実施形態では、質量分析計１４は、電荷検出質量分析計（ＣＤＭＳ）の形態で実装されることができ、ここでは、イオン処理領域２６は、従来型の質量分析計若しくは質量分析器であるか、又はそれを含み、イオン検出領域２８は、例示として、１つ以上の対応するＣＤＭＳ電荷検出器を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＤＭＳ電荷検出器は、１つ以上の静電イオン線形イオントラップ（ＥＬＩＴ）の形態で提供されてもよく、他の実施形態では、１つ以上のＣＤＭＳ電荷検出器は、少なくとも１つのオービトラップの形態で提供されてもよい。いくつかの実施形態では、ＣＤＭＳ電荷検出器（複数可）は、少なくとも１つのＥＬＩＴと、少なくとも１つのオービトラップとを含んでもよい。ＣＤＭＳは、例示としては、単一イオンの質量電荷比及び電荷の大きさの値を測定するように動作可能な単一粒子技術であるが、一部のＣＤＭＳ検出器は、２つ以上の荷電粒子の質量電荷比及び電荷の大きさを一度に測定するように設計され、及び／又は動作可能になっている。図１の質量分析計１４において、又は質量分析計１４として実装され得るＣＤＭＳ機器及び／又は技術のいくつかの例、並びにＣＤＭＳ電荷検出器及び／又は技術のいくつかの例は、全て２０１９年１月１１日に出願された、同時係属中の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２５１号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２７４号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２７７号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２７８号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２８０号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２８３号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２８４号、及び同第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１３２８５号に開示されており、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に全て組み込まれる。

【0045】

[0060]質量分析計１４がイオン発生器１８によって発生させた電荷粒子の質量電荷比及び電荷の大きさの両方を同時に測定するように構成された質量分析計の形態で提供される別の実施形態では、質量分析計１４は、荷電粒子の質量電荷比を測定するように構成され、荷電粒子の電荷の大きさを同時に測定するように更に構成された質量分析計の形態で実装され得る。そのような実施形態では、イオン処理領域２６は、イオン加速領域及び／又は走査質量電荷比フィルターであるか、又はそれを含み、イオン検出領域２８は、例示として、電界フリードリフト領域又はドリフトチューブ内に配置された電荷検出器アレイを含む。そのような実施形態では、従来型のイオン検出器３０、例えば、従来型のマイクロチャネルプレート検出器又は他の従来型のイオン検出器は、ドリフト領域又はドリフトチューブの出口端部に位置付けられ、図１の破線の表現で示されるように、プロセッサに電気的に接続されている。そのような質量分析計のいくつかの例は、２０２０年１２月１６日に出願された同時係属中の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６５３０１号に開示されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0046】

[0061]質量分析計１４が提供される特定の形態とは無関係に、機器１０の様々なセクションが、その従来通りの動作のために準大気圧に制御される。例示した実施形態では、例えば、いわゆる真空ポンプＰ１は、イオン源領域１２に動作的に連結され、別の真空ポンプＰ２は、質量分析計１４のイオン処理領域２６に動作的に連結され、更に別の真空ポンプＰ２は、質量分析計のイオン検出領域２８に動作的に連結されている。例示した実施形態では、ポンプＰ１、Ｐ２及びＰ３の各々は、プロセッサ２０が、ポンプＰ１、Ｐ２及びＰ３の各々の動作を制御し、したがって、３つのそれぞれの領域１２、２６、及び２８の各々における圧力を個別に制御するよう構成されるように、プロセッサ２０に動作的に連結されている。代替実施形態では、ポンプＰ１、Ｐ２及び／又はＰ３のうちの１つ以上は、手動で制御されてもよい。なお他の実施形態では、機器１０のより多くの又はより少ないそれぞれの部分における圧力を制御するために、より多くの又はより少ないポンプが実装されてもよい。領域１２、２６、及び２８の領域における圧力は、領域２８の方向に正のガス流を提供する従来の方式で例示として設定される。

【0047】

[0062]機器１０は、更に例示として、数字Ｐの単一経路（Ｐは、任意の正の整数であり得る）を介して、プロセッサ２０に動作的に連結される１つ以上の周辺デバイス３２を含む。周辺デバイス（複数可）３２は、例えば、１つ以上のモニター、キーボード、キーパッド、ポイント＆クリックデバイス、プリンター、グラフィカルディスプレイなどが挙げられるが、これらに限定されない従来の周辺デバイスのいずれか１つ又は組み合わせであり得るか、又はそれを含み得る。

【0048】

[0063]ここで図２を参照すると、ウイルス調製物１６及び／又はイオン発生器１８によって発生させた電荷ウイルス調製物粒子を、少なくとも１つの範囲の異なる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルに供するために熱エネルギー源（複数可）２４、２４’、２４’’を制御するための、及びまた機器１０を制御して、ウイルス調製物から荷電粒子を発生させ、温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの各組み合わせにおいて荷電粒子の質量を決定及び分析して、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの少なくとも１つの最適な組み合わせを決定するための、例示的なプロセス１００を描写する簡略化フローチャートが示されている。プロセス１００のステップのいくつかは、以下に記載される対応する機能を実行するために、メモリ２２内に保存され、プロセッサ２０によって実行可能な命令の形態で例示として提供されており、ステップの他のものは、手動で実行されても、又は図１に示された制御回路Ｃで実行されてもよい。

【0049】

[0064]プロセス１００は、ステップ１０２で開始し、ここでは、ウイルス調製物の試料１６が調製されるか、又は得られる。上述したように、ウイルス調製物１６は、限定されることなく、任意の種類のウイルス又はウイルスの組み合わせを含有してよい。以下のプロセス１００の説明の目的で、ウイルス調製物１６は、例示として、図１に描写されたＥＳＩ源が、上記のような霧状ミスト又は液滴の形態でそれから荷電粒子を発生させる形態であるように、溶液のウイルス調製物である。しかしながら、他の実施形態におけるウイルス調製物１６が、非溶液で提供されてもよく、及び／又は他の実施形態におけるイオン発生器が、その例が上述されている別の従来型のイオン発生器であってもよいことが理解されよう。

【0050】

[0065]プロセス１００は、ステップ１０２からステップ１０４に進み、ここでは、プロセッサ２０が、イオン発生器１８を制御して、ウイルス調製物１６から荷電粒子を発生させるために、メモリ２２に保存された対応する命令の実行に従うように動作可能であり、荷電粒子は、機器１０によって、例えば、ＥＳＩ源１８の大気圧とイオン源領域１２の真空状態との間の圧力差を介して、及び／又はイオン源領域１２の真空状態と質量分析計１４のより低い真空状態との間の圧力差を介して、及び／又はインターフェース２５を含む実施形態における注入インターフェースを介して、イオン源領域１２を通って質量分析計１４に向けられる。プロセッサ２０は更に、ステップ１０４で、質量分析器１４を制御して、上記のように発生させた荷電粒子の質量電荷比及び電荷の大きさを測定し、次いで、質量電荷比及び電荷の大きさの測定値に基づいて荷電粒子の質量を算出して、荷電粒子質量の質量スペクトルを生成するように動作可能である。ステップ１０４において、ウイルス調製物は、例示としては、周囲温度、例えば２５℃にあり、上昇温度処理にまだ供されておらず、ステップ１０４で機器１０によって行われる測定は、同様に周囲温度による。代替実施形態では、ウイルス調製物１６及び／又は機器１０によって行われる測定は、周囲温度よりも高くても、又は低くてもよい。

【0051】

[0066]ステップ１０４で生成される質量スペクトル３００の例を、図４Ａに示す。例示的な質量スペクトル３００は、ＥＦ１ａ－ＧＦＰゲノムを伴い、約４．６ＭＤａで広い質量ピークを有するＡＡＶ８を含有するウイルス調製溶液の存在量対質量のプロットとして、図４Ａに表されている。ウイルス調製物１６の温度は２５℃であり、質量スペクトル３００は、機器１０によって、同様に２５℃にあると測定された。いくつかの代替実施形態では、質量スペクトル３００は、測定されたイオン強度対質量の形態を取ってもよく、他の代替実施形態では、質量スペクトル３００は、粒子電荷対粒子質量の形態で表されてもよい（すなわち、散布図）。

【0052】

[0067]ステップ１０４の後に、プロセス１００は、ステップ１０６に進み、ここでは、カウンターの数字、例えば、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ及びＲが、例えば、１などの開始値に例示として設定される。その後、ステップ１０８において、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子が、例示として、加熱プロファイルＰ（例えば、ステップ１０８の最初の実行における加熱プロファイル１）を使用して、上昇温度Ｔ（Ｍ）に（すなわちＴ１はステップ１０８の最初の実行における上昇温度）、インキュベーション期間Ｎ（例えば、ステップ１０８の最初の実行におけるインキュベーション期間１）にわたって加熱される。ステップ１０４で周囲条件、例えば２５℃で取られた測定値と温度Ｔ（１）との間の、並びにステップ１０８の各実行における各Ｔ（Ｍ）間の温度変化（複数可）、すなわち、温度ステップサイズ（複数可）は、任意の整数値又は非整数値を有してもよく、ステップ１０８の各実行で同じ値を有しても又は有さなくてもよい。ステップ１の最初の実行では、Ｔ（１）は、例示としては、ステップ１０４の温度条件よりも高い。ステップ１０８のその後の実行では、Ｔ（Ｍ）は、ステップ１０８の前の実行に対して変化しても変化しなくてもよく、ステップ１０８の任意のそのような後続の実行におけるＴ（Ｍ）における任意の変化は、均一若しくは一定であっても、又はそうでなくともよい。ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子は、図１に関して上述された様々なデバイス、装置及び／又は技術のいずれか１つ又は組み合わせを使用して、ステップ１０８で加熱され得る。いくつかの実施形態では、例えば、プロセッサ２０は、プロセッサ２０に電圧源Ｖ１を制御させて、熱エネルギー源２４が加熱プロファイルＰを使用してウイルス調製物１６を温度Ｔ（Ｍ）に対応するインキュベーション期間Ｎにわたって加熱するように制御するために、メモリ２２に保存された命令を実行するように動作可能であり得る。代替として又は追加として、プロセッサ２０は、プロセッサ２０に電圧源Ｖ１を制御させて、熱エネルギー源２４’が、加熱プロファイルＰを使用して、イオン発生器１８を、その任意の部分に含まれるウイルス調製物１６を加熱する方式で、温度Ｔ（Ｍ）まで対応するインキュベーション期間Ｎにわたって加熱するように制御するために、及び／又はプロセッサ２０に電圧源Ｖ１を制御させて、熱エネルギー源２４’’が、加熱プロファイルＰを使用して、イオン源１８によってイオン源領域１２に放出された荷電粒子を、温度Ｔ（Ｍ）まで対応するインキュベーション期間Ｎにわたって加熱するように制御するために、メモリ２２に保存された命令を実行するように動作可能であり得る。あるいはまた、制御回路Ｃは、熱エネルギー源２４、２４’、２４’’のいずれか１つ又は組み合わせを制御するように、プロセッサ２０によるそれらの制御に代えて、又はそれに加えて、プログラムされてもよい。更に他の実施形態では、ウイルス調製物１６及び／又はイオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２の温度は、加熱プロファイルＰを使用して、温度Ｔ（Ｍ）に対応するインキュベーション期間にわたって手動で制御されてもよい。

【0053】

[0068]インキュベーション期間（複数可）、すなわち、ステップ１０８の各実行において設定された温度Ｔ（Ｍ）でウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子によって費やされた持続期間は、数日、数時間、数分、数秒及び／又はわずか１秒足らずのいずれか１つ若しくは組み合わせの任意の値を有してよく、ステップ１０８の任意の実行時のインキュベーション期間は、ステップ１０８の任意の他の実行時のインキュベーションステップと同じ持続期間を有しても、有さなくてもよい。加熱プロファイル（複数可）、すなわち、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８、イオン発生器１８を出ていく荷電粒子及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子の温度（複数可）が、ステップ１０４でのものよりも高い温度まで、又はステップ１０８の前の実行のものよりも高い温度までステップ１０８で増加される持続期間及び／又は方式は、そのいくつかの非限定的な例が上述されている任意の所望の加熱プロファイルであり得るか、又はそれを有することができ、ステップ１０８の任意の実行時に温度Ｔ（Ｍ）における任意の増加において使用される加熱プロファイルは、ステップ１０８の任意の他の実行時に使用されるものと同じであっても又はそうでなくともよい。

【0054】

[0069]プロセス１００のいくつかの実施形態では、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子は、ステップ１０８に続いて、また機器１０によって処理される前に、ステップ１０８における温度よりも低い温度に冷却される。そのような実施形態では、プロセス１００は、例示として、ステップ１０８の実行後にプロセス１００が進むステップ１１０を含み、ここでは、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子が、冷却プロファイルＱ、例えば、ステップ１１０の最初の実行時での加熱プロファイル１を使用して、低減温度、Ｔ（Ｒ）まで冷却される。冷却プロファイル（複数可）、すなわち、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８、イオン発生器１８を出ていく荷電粒子及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子の温度（複数可）がステップ１０８でのものよりも低い温度までステップ１１０において低減される持続期間及び／又は方式は、そのいくつかの非限定的な例が上述されている任意の所望の冷却プロファイルであり得るか、又はそれを有することができ、ステップ１１０の任意の実行時に温度Ｔ（Ｑ）における任意の減少において使用される冷却プロファイルは、ステップ１１０の任意の他の実行時に使用されるものと同じであっても又はそうでなくともよい。ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子は、図１に関して上述された様々なデバイス、装置及び／又は技術のいずれか１つ又は組み合わせを使用して、ステップ１１０で冷却され得る。

【0055】

[0070]いくつかの実施形態では、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子は、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子が周囲温度よりも高い上昇温度まで加熱されるステップ１０８の各実行後に、周囲温度（複数可）、例えば２５℃まで冷却され、それにより、いずれかの場合における質量分析計１４によって実施される測定が周囲温度、例えば２５℃で、荷電粒子に対して実行される。１つの例示的なそのような実施形態では、ステップ１０８の各実行は、加熱プロファイルＰを使用して、ウイルス調製物１６のみを上昇温度Ｔ（Ｍ）にインキュベーション期間Ｎにわたって加熱することによって実行され、次いで、その後ステップ１１０においてウイルス調製物１６が周囲温度まで冷却され、それにより、加熱、インキュベーション及び冷却ステップが完了するまで、ウイルス調製物が機器１０によって影響を受けない。代替実施形態では、ウイルス調製物１６、イオン発生器１８及び／又はイオン源領域１２内に常在する荷電粒子の各実行ステップ１０８でのＴ（Ｍ）への対応するインキュベーション期間にわたる加熱から生じた荷電粒子が、同じ温度（複数可）Ｔ（Ｍ）で又はその近くで機器１０によって測定されるように、ステップ１１０は省略されてもよい。

【0056】

[0071]ステップ１１０に続いて、ステップ１１０を含む実施形態及びそうでなければステップ１０８に続く実施形態では、プロセス１００は、ステップ１１２に進み、ここでは、プロセッサ２０が、イオン発生器１８を制御して、ウイルス調製物１６から荷電粒子を発生させるために、メモリ２２に保存された対応する命令の実行に従って再び動作可能であり、荷電粒子は、機器１０によって、イオン源領域１２を通って質量分析計１４に向けられ、質量分析器１４を制御して、上記のように発生させた荷電粒子の質量電荷比及び電荷の大きさを測定し、次いで、質量電荷比及び電荷の大きさの測定値に基づいて荷電粒子の質量を算出して、荷電粒子質量の更新された質量スペクトルを生成する。いくつかの実施形態では、上述したように、ウイルス調製物１６は、例示として、周囲温度、例えば２５℃にあり、ステップ１１２での機器１０によって行われる測定が、同様に周囲温度で行われるが、代替実施形態では、ウイルス調製物１６及び／又はステップ１１２での機器１０によって行われる測定が、また上述されたように、周囲温度よりも高い、又は低い温度であってもよい。

【0057】

[0072]ステップ１１２に続いて、プロセス１００はステップ１１４及び１１６に進み、ここでは、ステップ１１２の直近の実行時に決定された更新された質量スペクトルが、直近の以前に決定された質量スペクトルと、例えば、ステップ１１４の最初の実行中にステップ１０４で決定された質量スペクトル及びそうでなければステップ１１４の以前の実行時に決定された質量スペクトルと比較され、更新された質量スペクトルが、改善がウイルスキャプシドの凝集なしの質量ピーク分解能であることを示すかどうかを決定する。いくつかの実施形態では、ステップ１１４及び１１６は、プロセッサ２０によって実行され、他の実施形態では、ステップ１１４及び１１６のいずれか又は両方が、手動で、すなわち、更新された質量スペクトルと以前の質量スペクトルを視覚的に比較することによって、実行され得る。いずれの場合にも、質量ピーク幅は、従来の方式で、プロセッサ２０を介して、又は視覚的に決定することができる。

【0058】

[0073]凝集もまた、プロセッサ２０を介して、又は視覚的に同様に決定され得る。例えば、凝集中に２つ以上のウイルスキャプシド又はキャプシドフラグメントが互いに接着又は付着する場合、これは、一般に、十分に高い温度及びインキュベーション期間の様々な組み合わせで起こるが、接着又は付着したキャプシドは、非凝集キャプシドよりもより高い質量及びより高い電荷を有する荷電粒子を一般にもたらす。したがって、更新された質量スペクトルが、増加した質量及び／又は電荷値を示すかどうかを決定することによって、凝集の開始を、視覚的に、又はプロセッサ２０によって自動的にのいずれかで検出することができる。

【0059】

[0074]いずれの場合も、ステップ１１６において、ステップ１１４で行われた比較が、更新された質量スペクトルが、凝集なしに質量ピーク分解能における改善を提示することを示す場合には、プロセス１００は、ステップ１１８に進み、ここでは、カウンターのうちの１つ以上、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ及び／又はＲが、ステップ１０８にループバックする前に進められる、及び／又はリセットされる。上で詳述したように、ウイルス調製物１６の温度、イオン発生器１８の１つ以上の構成要素の温度、イオン源領域１２内の荷電粒子温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び冷却プロファイルのうちの１つ以上が、ステップ１１８の各実行時に変化されても、又は変化されなくてもよい。２つの異なる例は、図４Ａ～４Ｆ及び図５Ａ～５Ｅに関して以下に説明される。

【0060】

[0075]ステップ１１６において、ステップ１１４で行われた比較が、更新された質量スペクトルが質量ピーク分解能における改善を提示しないか、又は検出可能な量の凝集を提示することを示す場合、プロセスはステップ１２０に進み、ここでは、直近の以前の質量スペクトルを生成した可変値が記録され、例えば、温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル、及びいくつかの実施形態では冷却プロファイルの少なくとも１つの最適な組み合わせ、すなわち、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる目的で、ウイルス調製物などを処理するための条件として、メモリ２２に保存される。温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル、及びいくつかの実施形態では冷却プロファイルの他の組み合わせ、すなわち、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく調製物の異種性をまた最小化するか又は少なくとも低減させるウイルス調製物を処理するための条件があり得ること、そしていくつかの実施形態では、変数のうちの１つ以上の他の値を使用してプロセス１００の実行から得られる冷却プロファイル、条件もまた記録され得ることが理解されよう。

【0061】

[0076]上で簡単に述べたように、プロセス１００は、それぞれが、ウイルスの同じ調製物、ウイルスの異なる調製物及び／又は異なるウイルスの調製物を、調製物中に残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、そのような調製物の異種性を最小化、又は少なくとも低減させる目的で処理するための、温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの最適な組み合わせのライブラリーを構築するために使用され得る。例えば、今説明したようなプロセス１００の実行から得られた温度、インキュベーション期間、加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの少なくとも１つの最適な組み合わせの記録に続いて、別のプロセスが実行され、条件の最適な組み合わせを、まだ未処理である同様なウイルス調製物に適用することができる。ここで図３を参照すると、そのようなプロセス２００の一例の簡略化フロー図が示されている。プロセス２００は、例示として、ステップ２０２で開始し、ここでは、ウイルス調製物が調製又は得られる。ウイルス調製物は、任意の形態、例えば、混合物、溶液、バルク形態などで調製又は得ることができ、限定されないが、任意の種類のウイルス又はウイルスの組み合わせを含有することができる。その後、ステップ２０４で、以前に記録された、温度及びインキュベーション期間、並びにいくつかの実施形態では加熱プロファイル及び／又は冷却プロファイルの最適な組み合わせが得られる。いくつかの実施形態では、２つ以上の最適な組み合わせが以前に記録されていてもよく、そのような実施形態では、そのような複数の最適な組み合わせのうちの１つが、手動で又は自動的に選択されてもよい。その後、ステップ２０６で、ウイルス調製物が、選択された最適な温度に対応するインキュベーション期間にわたって加熱される。いくつかの実施形態では、選択された最適な組み合わせは、最適な加熱プロファイルを含んでもよく、そのような実施形態では、ウイルス調製物は、ステップ２０６で、最適な加熱プロファイルを使用して、最適な温度に加熱され得る。いくつかの実施形態では、選択された最適な組み合わせは、代替として又は追加として、最適な冷却プロファイルを含んでもよく、そのような実施形態では、ウイルス調製物は、ステップ２０６で、最適な温度に最適なインキュベーション期間にわたって加熱され、続いて、最適な冷却プロファイルを使用してウイルス調製物を冷却することができる。いずれの場合も、ステップ２０６に続いて、処理されたウイルス調製物は、残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、最小化されるか、又は少なくとも低減された異種性を有する。

【実施例1】

【0062】

[0077]ここで図４Ａ～４Ｆを参照すると、図２に図示されたプロセス１００のステップ１０２～１１８の例が示されている。上述のように、図４Ａは、ＥＦ１ａ－ＧＦＰゲノムを伴うＡＡＶ８を含有する（プロセス１００によって）以前に処理されていないウイルス調製溶液１６の存在量対質量のプロットの形態で、プロセス１００のステップ１０４で生成された質量スペクトル３００の例を描写する。ウイルス調製物１６の温度は２５℃であり、質量スペクトル３００は、機器１０によって２５℃で同様に測定された。図４Ａの例に図示されるように、質量スペクトル３００は、約４．６ＭＤａで広い質量ピークを有する。

【0063】

[0078]図４Ｂは、ウイルス調製物に連結された従来型の加熱コイル２４を制御して、ウイルス調製物１６の温度を４５℃に可能な限り急速に上昇させることによって、ウイルス調製物１６の温度が増大され、次いで、ウイルス調製物１６の温度が、４５℃で１５分のインキュベーション期間にわたって維持された、プロセス１００のステップ１０８の実行から得られた別の質量スペクトル３０２を描写する。図示した例では、プロセス１００は、インキュベーション期間の終了後に、ウイルス調製物１６が加熱コイルから取り外され、氷上で１分間冷却され、次いで、自然な状態で２５℃に温めるステップ１１０を含んだ。２５℃に冷却後に、ステップ１１２を、２５℃で同様に動作する機器１０を用いて冷却されたウイルス調製物１６で実行した。ステップ１１４で、質量スペクトル３０２を質量スペクトル３００と比較すると、質量スペクトル３０２が、質量スペクトル３００のものを超える質量ピーク分解能における改善を提示することが、図４Ａ及び４Ｂから明らかである。更に、得られた質量スペクトル３０２が、質量スペクトル３００で描写された唯一の質量ピークのものよりも質量がより高い、いかなるピークも提示するようには見えないため、質量スペクトル３０２に凝集が存在するとは思われない。したがって、ステップ１１６はステップ１１８に進み、ここで、この場合には、温度値だけが、それを５℃増加させることによって変更される。

【0064】

[0079]今説明したプロセスステップ１０８～１１８を４回更に繰り返して、ウイルス調製物１６が、それぞれ５０℃、５５℃、６０℃及び６５℃に、各々１５分のインキュベーション期間にわたってさらされる。それぞれ図４Ｃ～４Ｆに示した得られた質量スペクトル３０４、３０６、３０８、３１０は、各々が、識別可能な凝集を有さない以前に決定された質量スペクトルのものを超える質量ピーク分解能における改善を提示する。図４Ａ～４Ｆに示された例は、６５℃を超えて継続せず、したがって、この例では凝集の開始は観察されなかった。したがって、プロセス１００を継続することによって、質量ピーク分解能における何らかの追加の改善を実現することができるかどうかは、図４Ａ～４Ｆからは識別することができず、また同様に、６５℃で１５分の例示的なウイルス調製物１６のためのインキュベーション期間が、残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物１６の異種性を最小化する温度及びインキュベーション期間の最適な組み合わせを表すかどうかを、図４Ａ～４Ｆから識別することはできない。しかしながら、図４Ａ～４Ｆから、６５℃で１５分の例示的なウイルス調製物１６のためのインキュベーション期間が、残存するウイルスキャプシドを凝集させることなく、ウイルス調製物１６の異種性を実質的に低減させることを結論付けることができる。

【実施例2】

【0065】

[0080]ここで図５Ａ～４Ｅを参照すると、ステップ１２０を含む、図２に示されたプロセス１００の別の例が示されている。図示した例では、図５Ａは、例えばＡＡＶを含有し得るウイルス調製物を代表する、以前に処理されておらず（プロセス１００によって）、シミュレートされたウイルス調製物１６の相対的イオン強度対質量のプロットの形態で、プロセス１００のステップ１０４で生成された質量スペクトル４００の例を描写する。シミュレートされたウイルス調製物１６の温度は２５℃であり、質量スペクトル４００を生成するために機器１０によって行われたシミュレートされた測定も、同様に２５℃であった。図５Ａの例によって例示されるように、質量スペクトル４００は、その各々が、ウイルスキャプシドの異なる含有量に相当するいくつかのピークを有する。例えば、約３．８ＭＤａにおける質量ピーク４０２は、中空キャプシド、すなわち、ゲノム又は部分ゲノムを含有しないものに起因し、約４．３ＭＤａ及び４．６ＭＤａにおける質量ピークは、部分キャプシド、すなわち、部分ゲノムを含有するもの又は部分ゲノムに起因し、約５ＭＤａにおける質量ピーク４０６は、完全キャプシド、すなわち、各々、単一ゲノムを含有するものに起因し、約５．２ＭＤａにおける質量ピーク４０８は、オーバーパッケージ化キャプシド、すなわち、目的のゲノム及び目的の別の部分又は完全ゲノムを含有するものに起因する。

【0066】

[0081]図５Ｂは、シミュレートされたウイルス調製物１６の温度が２５℃から５５℃まで、２０分のシミュレートされたインキュベーション期間にわたって段階的に上昇された、プロセス１００のステップ１０８の実行から得られた別の質量スペクトル４１０を描写する。図示した例では、プロセス１００は、インキュベーション期間の終了に続いて、シミュレートされたウイルス調製物１６が、ステップ１１２（ここでは、機器１０によるシミュレートされた測定が、２５℃で動作する機器１０を用いて、シミュレートされ、冷却されたウイルス調製物１６で実行された）を実行するために、５５℃から２５℃に戻すように温度を段階的に低減されたステップ１１０を含んだ。ステップ１１４において質量スペクトル４１０を質量スペクトル４００と比較すると、質量スペクトル４１０が、質量スペクトル４００のものを超えて各キャプシドタイプの質量ピーク分解能における改善を提示することが、図５Ａ及び５Ｂから明らかである。更に、得られた質量スペクトル４１０が、質量スペクトル４００で描写されたオーバーパッケージ化キャプシドに起因するものよりも質量がより高い、いかなるピークも提示するようには見えないため、質量スペクトル４１０に凝集が存在するとは思われない。中空キャプシド及び完全キャプシドの質量ピーク４０２及び４０６が、それぞれ、安定した又は増加した信号強度を伴い、より高質量分解能性であるように見える一方で、部分キャプシド及びオーバーパッケージ化キャプシドの質量ピーク４０４及び４０８はそれぞれ、質量スペクトル４００と比較して信号強度が減少しているように見える。いずれの場合も、ステップ１１６はステップ１１８に進み、ここで、この例では、インキュベーション期間だけが、それを１０分増加させることによって変更される。温度の増加は、５５℃で同じままである。

【0067】

[0082]今説明したプロセスステップ１０８～１１８が更に３回繰り返され、シミュレートされたウイルス調製物１６を、それぞれ３０分、４０分及び６０分の各３回の徐々に増加されたインキュベーション期間で５５℃にさらす。図５Ｃ及び５Ｄに示された得られた質量スペクトル４２０及び４３０は、それぞれ、識別可能な凝集を有さない以前に決定された質量スペクトルのものを超える中空キャプシド４０２及び完全キャプシド４０６の質量ピーク分解能における改善を各々が提示する。図５Ａ～５Ｄもまた実証するように、部分キャプシド及びオーバーパッケージ化キャプシドは、上昇温度でインキュベーション持続期間を増大させた状態で分解し始めて分解し続け、これはそれぞれ、部分キャプシド及びオーバーパッケージ化キャプシドの質量ピーク４０４及び４０８のそのような条件下での強度の減少並びに図５Ｄにおける最終的な消失によって示されるとおりであり、そのようなキャプシドが、上昇温度及びそれぞれのインキュベーション期間の下で安定ではないことを示している。しかしながら、図５Ａ～５Ｄに描写された条件下での部分キャプシド及びオーバーパッケージ化キャプシドのそのような不安定性が、使用される特定の例示的なウイルス調製物１６を代表するものであり得るが、他の種類のウイルス調製物を必ずしも代表する必要はないこと、及び他の種類のウイルス調製物において、キャプシドタイプの１つ又は任意の組み合わせが、残存するキャプシドタイプを安定した状態を保ちながら、そのような不安定性を提示し得ることを理解されたい。

【0068】

[0083]図５Ｅに更に示されるように、得られた質量スペクトル４４０は、同様に、以前に決定された質量スペクトル４３０のものを超える中空キャプシド４０２及び完全キャプシド４０６の質量ピーク分解能における改善を提示するが、質量スペクトル４４０もまた、６～７ＭＤａ範囲における高質量成分、すなわち、オーバーパッケージ化キャプシドに起因する元の最高の質量ピーク４０８のものよりも大きい質量を有する成分を提示し、これは、残存する中空キャプシド及び／又は完全ウイルスキャプシドの少なくともいくつかの凝集の指標である。更に、例えば、０．２～２ＭＤａの間のより低い質量ピーク４４４、４４６及び４８８も、図５Ｅに描写されたスペクトル４４０で観察される。ピーク４４４は、キャプシドのいくつかの分解から得られた一本鎖ＤＮＡに起因し、ピーク４４６は、一本鎖ＤＮＡのいくつかの結合から得られた二本鎖ＤＮＡに起因する。ピーク４４８は、分解された部分キャプシド及び／又はオーバーパッケージ化キャプシドのゲノムと関連するタンパク質に起因する。

【0069】

[0084]図５Ａ～５Ｅに描写されたプロセス１００の例示的な実行において、目的のピークの質量分解能は、５５℃の通常の、上昇したウイルス調製物温度で各々インキュベーション期間を徐々に増加させることで改善するが、凝集の開始が、４０分～６０分のインキュベーション時間に生じるように見える。したがって、このプロセス１００の例示的な実行では、凝集させることなくウイルス調製物の異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる変数の最適な組み合わせは、温度＝５５℃で４０分のインキュベーション期間にわたるものである。加熱プロファイルが変数の最適な組み合わせに含まれるべきである場合、この特定な例における加熱プロファイルは、段階的変化であり、これは、実際の適用では、熱エネルギー源２４を制御して、ウイルス調製物の温度を２５℃から５５℃まで可能な限り迅速に増加させることに相当する。冷却プロファイルが変数の最適な組み合わせに含まれるべきである場合、この特定の例における冷却プロファイルは同様に段階的変化であり、これは、実際の適用では、例えば、氷浴又は他の急速冷却環境におけるウイルス調製物の冷却に相当する。いずれの場合にも、この例における変数の最適な組み合わせは、残存するキャプシドを凝集させることなく、異種性を最小化するか又は少なくとも低減させる目的で、同様なウイルス調製物を熱処理するために、図３に描写されたプロセス３００でその後使用され得る。

【0070】

[0085]本開示は、前述の図面及び説明において詳細に図示され、説明されてきたが、これは例示的であると考えるべきであり、制限される性質のものではなく、その例示的な実施形態だけが示され説明されており、本開示の趣旨の範囲内にある全ての変更及び修正が保護されることが望ましいことが理解される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【国際調査報告】