特表 2023-512450 抗ＴＲＥＭ２抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-27

(54)【発明の名称】抗ＴＲＥＭ２抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230317BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230317BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230317BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230317BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230317BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230317BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20230317BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230317BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230317BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P25/00

A61P25/14

A61P25/16

A61P25/28

A61P21/00

A61P43/00 111

A61P43/00 105

A61K39/395 N

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022542652

(86)(22)【出願日】2021-01-13

(85)【翻訳文提出日】2022-08-08

(86)【国際出願番号】 US2021013200

(87)【国際公開番号】W WO2021146256

(87)【国際公開日】2021-07-22

(31)【優先権主張番号】62/960,663

(32)【優先日】2020-01-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/070,728

(32)【優先日】2020-08-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/091,717

(32)【優先日】2020-10-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518086619

【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】デニス マーク エス．

(72)【発明者】

【氏名】グー ジェンユ

(72)【発明者】

【氏名】カリオリス ミハリス エス．

(72)【発明者】

【氏名】マホン キャサル エス．

(72)【発明者】

【氏名】モンロー キャスリン エム．

(72)【発明者】

【氏名】パーク ジョシュア アイ．

(72)【発明者】

【氏名】プロロク レイチェル

(72)【発明者】

【氏名】シルバーマン アダム ピー．

(72)【発明者】

【氏名】ヴァン レンゲリッチ ベティーナ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C085GG08

(57)【要約】

一態様では、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）タンパク質に特異的に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを低下させる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ａ）ｉ．Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α_６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号２８）（配列中、α_６はＤまたはＮである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
ｉｉ．Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β_５－β_６－Ｎ－β_８－Ｙ－Ｔ－β_１１－β_１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号２９）（配列中、β_５はＫまたはＲであり、β_６はＡまたはＰであり、β_８はＧまたはＡであり、β_１１はＡまたはＴであり、β_１２はＧまたはＤである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
ｉｉｉ．γ_１－Ｒ－Ｌ－γ_４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号３０）（配列中、γ_１はＡまたはＴであり、γ_４はＴまたはＳである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
ｉｖ．Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ_１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号３１）（配列中、δ_１０はＮまたはＴである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
ｖ．ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
ｖｉ．Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ_６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号３２）（配列中、φ_６はＹまたはＦである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列
を含む、可変領域、
（ｂ）トランスフェリン受容体に特異的に結合するように修飾された第１のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）第２のＦｃポリペプチド
を含む、前記抗体。

【請求項2】

前記ＣＤＲ－Ｈ１配列が、配列番号４または１２から選択される、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記ＣＤＲ－Ｈ２配列が、配列番号５、１３、または２５から選択される、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項4】

前記ＣＤＲ－Ｈ３配列が、配列番号６、１４、または１７から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項5】

前記ＣＤＲ－Ｌ１配列が、配列番号７または２３から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項6】

前記ＣＤＲ－Ｌ３配列が、配列番号９または１８から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項7】

前記可変領域が、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項8】

前記可変領域が、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項9】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項８に記載の抗体。

【請求項10】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項９に記載の抗体。

【請求項11】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号１５を含む、請求項１０に記載の抗体。

【請求項12】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項８に記載の抗体。

【請求項13】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１２に記載の抗体。

【請求項14】

前記Ｖ_Ｈ配列が、配列番号２４を含む、請求項１３に記載の抗体。

【請求項15】

前記可変領域が、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項16】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１５に記載の抗体。

【請求項17】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１６に記載の抗体。

【請求項18】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号１６を含む、請求項１７に記載の抗体。

【請求項19】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１５に記載の抗体。

【請求項20】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１９に記載の抗体。

【請求項21】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２２を含む、請求項２０に記載の抗体。

【請求項22】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１５に記載の抗体。

【請求項23】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２２に記載の抗体。

【請求項24】

前記Ｖ_Ｌ配列が、配列番号２７を含む、請求項２３に記載の抗体。

【請求項25】

前記可変領域が、
（ａ）配列番号１５を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号１６を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｂ）配列番号１９を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｃ）配列番号２１を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｄ）配列番号１９を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｅ）配列番号２１を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｆ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｇ）配列番号２６を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｈ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｉ）配列番号２６を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｊ）配列番号２を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号３を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｋ）配列番号１０を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号１１を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｌ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２７を含むＶ_Ｌ配列
を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項26】

前記第１のＦｃポリペプチドが、ＥＵ付番に従って、位置３８０のＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、位置３８４のＴｙｒまたはＰｈｅ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、Ａｌａ、またはＶａｌ、位置３９０のＳｅｒまたはＡｓｎ、位置４１３のＴｈｒまたはＳｅｒ、位置４１５のＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項27】

前記第１のＦｃポリペプチドが、前記トランスフェリン受容体のアピカルドメインに結合する、請求項２６に記載の抗体。

【請求項28】

野生型Ｆｃ二量体を有する抗体と比較して、脳への取り込みが改善されている、請求項２６または２７に記載の抗体。

【請求項29】

ＥＵ付番に従って、前記第１のＦｃポリペプチドがＴ３６６Ｗ置換を有し、前記第２のＦｃポリペプチドがＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有する、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項30】

ＥＵ付番に従って、前記第１のＦｃポリペプチドがＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有し、前記第２のＦｃポリペプチドがＴ３６６Ｗ置換を有する、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項31】

前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、エフェクター機能を低下させる修飾を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項32】

エフェクター機能を低下させる前記修飾が、ＥＵ付番に従って、位置２３４のＡｌａ及び位置２３５のＡｌａである置換を含む、請求項３１に記載の抗体。

【請求項33】

前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、
血清半減期を延長する、天然Ｆｃ配列に対するアミノ酸修飾
を含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項34】

前記アミノ酸修飾が、ＥＵ付番に従って、位置４２８のＬｅｕ及び位置４３４のＳｅｒである置換を含む、請求項３３に記載の抗体。

【請求項35】

前記第１のＦｃポリペプチドが配列番号４１または配列番号６４の配列を含み、前記第２のＦｃポリペプチドが配列番号３９または配列番号６３の配列を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項36】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４１を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項３５に記載の抗体。

【請求項37】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６４を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項３５に記載の抗体。

【請求項38】

（ｉ）配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項３５または３６に記載の抗体。

【請求項39】

（ｉ）配列番号６５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項３５または３７に記載の抗体。

【請求項40】

前記第１のＦｃポリペプチドが配列番号４４または配列番号６６の配列を含み、前記第２のＦｃポリペプチドが配列番号３９または配列番号６３の配列を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項41】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４４を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項４０に記載の抗体。

【請求項42】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６６を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項４０に記載の抗体。

【請求項43】

（ｉ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項４０または４１に記載の抗体。

【請求項44】

（ｉ）配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項４０または４２に記載の抗体。

【請求項45】

前記第１のＦｃポリペプチドが配列番号４７または配列番号６８の配列を含み、前記第２のＦｃポリペプチドが配列番号３９または配列番号６３の配列を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項46】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項４５に記載の抗体。

【請求項47】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６８を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項４５に記載の抗体。

【請求項48】

（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項４５または４６に記載の抗体。

【請求項49】

（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項４５または４７に記載の抗体。

【請求項50】

前記第１のＦｃポリペプチドが配列番号４７または配列番号６８の配列を含み、前記第２のＦｃポリペプチドが配列番号６１または配列番号８４の配列を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項51】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６１を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項５０に記載の抗体。

【請求項52】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６８を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号８４を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項５０に記載の抗体。

【請求項53】

（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項５０または５１に記載の抗体。

【請求項54】

（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項５０または５２に記載の抗体。

【請求項55】

前記第１のＦｃポリペプチドが配列番号５０または配列番号７０の配列を含み、前記第２のＦｃポリペプチドが配列番号３９または配列番号６３の配列を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項56】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号５０を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項５５に記載の抗体。

【請求項57】

（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号７０を含む前記第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む前記第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、請求項５５に記載の抗体。

【請求項58】

（ｉ）配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項５５または５６に記載の抗体。

【請求項59】

（ｉ）配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項５５または５７に記載の抗体。

【請求項60】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４１を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項61】

（ｉ）配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項６０に記載の抗体。

【請求項62】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項63】

（ｉ）配列番号６５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項６２に記載の抗体。

【請求項64】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項65】

（ｉ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項６４に記載の抗体。

【請求項66】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６６を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項67】

（ｉ）配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項６６に記載の抗体。

【請求項68】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項69】

（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項６８に記載の抗体。

【請求項70】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項71】

（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項７０に記載の抗体。

【請求項72】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６１を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項73】

（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項７２に記載の抗体。

【請求項74】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６１を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項75】

（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項７４に記載の抗体。

【請求項76】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号５０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項77】

（ｉ）配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項７６に記載の抗体。

【請求項78】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体であって、
（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号７０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖
を含む、前記抗体。

【請求項79】

（ｉ）配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、
（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに
（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）
を含む、請求項７８に記載の抗体。

【請求項80】

可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる、請求項１～７９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項81】

ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１～８０のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項82】

食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する、請求項１～８１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項83】

神経炎症を増加させずにミクログリア機能を増強する、請求項１～８２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項84】

Ｓｙｋリン酸化を増強する、請求項１～８３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項85】

ＴＲＥＭ２リガンドの存在下でＳｙｋリン酸化を増強する、請求項８４に記載の抗体。

【請求項86】

カニクイザルＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す、請求項１～８５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項87】

請求項１～８６のいずれか１項に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項88】

請求項１～８６のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項８７に記載の医薬組成物と、
その使用説明書と
を含む、キット。

【請求項89】

対象における神経変性疾患を処置する方法であって、請求項１～８６のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項90】

前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）からなる群から選択される、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法であって、請求項１～８６のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項92】

神経変性疾患を有する対象においてＴＲＥＭ２活性を増強する方法であって、請求項１～８６のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項93】

請求項１～８６のいずれか１項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項94】

配列番号４２、４５、４８、５１、５３、５４、及び６１のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項95】

配列番号４２、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項96】

配列番号４５、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項97】

配列番号４８、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項98】

配列番号４８、５２、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項99】

配列番号５１、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項100】

請求項９３～９９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項101】

請求項９３～９９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１００に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項102】

ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体を発現させる方法であって、請求項１０１に記載の宿主細胞を、前記抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／９６０，６６３号、２０２０年８月２６日に出願された米国特許仮出願第６３／０７０，７２８号、及び２０２０年１０月１４日に出願された米国特許仮出願第６３／０９１，７１７号の優先権を主張し、その開示は、その全体があらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

背景
骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、ミクログリアに発現する膜貫通受容体であり、食作用の調節、細胞の生存、及び炎症性サイトカインの産生において機能すると考えられている。ＴＲＥＭ２の突然変異は、アルツハイマー病、那須・ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、及び前頭側頭型認知症を含む神経変性疾患で同定されている。さらに、可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベルの変化が、ＴＲＥＭ２に突然変異を有するアルツハイマー病患者または前頭側頭型認知症患者の脳脊髄液において報告されている。

【0003】

ＴＲＥＭ２活性またはｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する治療剤が依然として求められている。

【発明の概要】

【0004】

概要
一態様では、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、トランスフェリン受容体タンパク質に結合することができる修飾Ｆｃポリペプチドを含む。本明細書に開示される実施形態のいずれにおいても、抗体は、本明細書で提供される例示的な配列のいずれかに従うＣＤＲ、Ｖ_Ｈ、及び／またはＶ_Ｌを含み得、本明細書に記載のトランスフェリン受容体結合変異を含む修飾されたＦｃポリペプチドをさらに含み得る。

【0005】

いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体は、以下を含む：
（ａ）ｉ．Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α_６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号２８）（配列中、α_６はＤまたはＮである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
ｉｉ．Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β_５－β_６－Ｎ－β_８－Ｙ－Ｔ－β_１１－β_１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号２９）（配列中、β_５はＫまたはＲであり、β_６はＡまたはＰであり、β_８はＧまたはＡであり、β_１１はＡまたはＴであり、β_１２はＧまたはＤである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
ｉｉｉ．γ_１－Ｒ－Ｌ－γ_４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号３０）（配列中、γ_１はＡまたはＴであり、γ_４はＴまたはＳである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
ｉｖ．Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ_１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号３１）（配列中、δ_１０はＮまたはＴである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
ｖ．ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
ｖｉ．Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ_６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号３２）（配列中、φ_６はＹまたはＦである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、可変領域、
（ｂ）トランスフェリン受容体に特異的に結合するように修飾された第１のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）第２のＦｃポリペプチド。

【0006】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは、会合してＦｃ二量体を形成する。

【0007】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１配列は、配列番号４または１２から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２配列は、配列番号５、１３、または２５から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３配列は、配列番号６、１４、または１７から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ１配列は、配列番号７または２３から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３配列は、配列番号９または１８から選択される。

【0008】

いくつかの実施形態では、可変領域は、以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。

【0009】

いくつかの実施形態では、可変領域は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列を含む。

【0010】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号１５を含む。

【0011】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ配列は、配列番号２４を含む。

【0012】

本態様のいくつかの実施形態では、可変領域は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列を含む。

【0013】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号１６を含む。

【0014】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２２を含む。

【0015】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ配列は、配列番号２７を含む。

【0016】

本態様のいくつかの実施形態では、可変領域は、以下を含む：
（ａ）配列番号１５を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号１６を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｂ）配列番号１９を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｃ）配列番号２１を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｄ）配列番号１９を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｅ）配列番号２１を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｆ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｇ）配列番号２６を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｈ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｉ）配列番号２６を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｊ）配列番号２を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号３を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｋ）配列番号１０を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号１１を含むＶ_Ｌ配列、または
（ｌ）配列番号２４を含むＶ_Ｈ配列、及び配列番号２７を含むＶ_Ｌ配列。

【0017】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＥＵ付番に従って、位置３８０のＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、位置３８４のＴｙｒまたはＰｈｅ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、Ａｌａ、またはＶａｌ、位置３９０のＳｅｒまたはＡｓｎ、位置４１３のＴｈｒまたはＳｅｒ、位置４１５のＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体のアピカルドメインに結合する。特定の実施形態では、抗体は、野生型Ｆｃ二量体を有する抗体と比較して、脳への取り込みが改善されている。

【0018】

ある特定の実施形態では、ＥＵ付番に従って、第１のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｗ置換を有し、第２のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有する。

【0019】

他の実施形態では、ＥＵ付番に従って、第１のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有し、第２のＦｃポリペプチドはＴ３６６Ｗ置換を有する。

【0020】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低下させる修飾を含む。ある特定の実施形態では、エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵ付番に従って、位置２３４のＡｌａ及び位置２３５のＡｌａである置換を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、血清半減期を延長する、天然Ｆｃ配列に対するアミノ酸修飾を含む。ある特定の実施形態では、アミノ酸修飾は、ＥＵ付番に従って、位置４２８のＬｅｕ及び位置４３４のＳｅｒである置換を含む。

【0022】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは配列番号４１または配列番号６４の配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは配列番号３９または配列番号６３の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４１を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0023】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは配列番号４４または配列番号６６の配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは配列番号３９または配列番号６３の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６６を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0024】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは配列番号４７または配列番号６８の配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは配列番号３９または配列番号６３の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0025】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは配列番号４７または配列番号６８の配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは配列番号６１または配列番号８４の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６１を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号８４を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0026】

本態様のいくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは配列番号５０または配列番号７０の配列を含み、第２のＦｃポリペプチドは配列番号３９または配列番号６３の配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号５０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号７０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0027】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４１を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0028】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0029】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４４を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0030】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６６を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0031】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0032】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0033】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号４７を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号６１を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、（ｉ）配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）。

【0034】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６８を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６１を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0035】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号５０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶ_Ｈと配列番号３９を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶ_Ｌをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0036】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、当該抗体は、（ｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号７０を含む第１のＦｃポリペプチドとを含む、第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号２４を含むＶＨと配列番号６３を含む第２のＦｃポリペプチドとを含む、第２の重鎖（ＨＣ）、ならびに（ｉｉｉ）配列番号２２を含むＶＬをそれぞれ含む２つの軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第１の重鎖（ＨＣ）、（ｉｉ）配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる第２のＨＣ、ならびに（ｉｉｉ）配列番号５４に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ含むかまたはそれからなる第１及び第２の軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0037】

本明細書に記載の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する。いくつかの実施形態では、抗体は、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する。いくつかの実施形態では、抗体は、神経炎症を増加させずにミクログリア機能を増強する。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｓｙｋリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下でＳｙｋリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザルＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。

【0038】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。

【0039】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の単離された抗体または本明細書に記載の医薬組成物と、その使用説明書とを含む、キットを提供する。

【0040】

別の態様では、本開示は、対象における神経変性疾患を処置する方法であって、本明細書に記載の単離された抗体または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症（ｔａｎｇｌｅ ｏｎｌｙ ｄｅｍｅｎｔｉａ）からなる群から選択される。

【0041】

別の態様では、本開示は、神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法であって、本明細書に記載の単離された抗体または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0042】

別の態様では、本開示は、神経変性疾患を有する対象においてＴＲＥＭ２ 活性を増強する方法であって、本明細書に記載の単離された抗体または本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0043】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0044】

別の態様では、本開示は、配列番号４２、４５、４８、５１、５３、５４、及び６１のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0045】

別の態様では、本開示は、配列番号４２、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0046】

別の態様では、本開示は、配列番号４５、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0047】

別の態様では、本開示は、配列番号４８、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0048】

別の態様では、本開示は、配列番号４８、５２、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0049】

別の態様では、本開示は、配列番号５１、５３、及び５４をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0050】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0051】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたは本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0052】

別の態様では、本開示は、ヒト骨髄細胞発現トリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体を発現させる方法であって、本明細書に記載の宿主細胞を、当該抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む、方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0053】

【図1A】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1B】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1C】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1D】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1E】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1F】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1G】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図1H】ヒトＴＲＥＭ２－Ｄａｐ１２過剰発現ＨＥＫ細胞における、代表的な抗ＴＲＥＭ２抗体（ＣＬ００２０１８８）のヒト化し配列最適化したバリアントについて用量設定した細胞結合曲線を示す。

【図2】ＨＥＫ２９３細胞における、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２及び非トランスフェリン結合Ｆｃを有する対応する抗ＴＲＥＭ２抗体（「抗ＴＲＥＭ２」）のヒトＴＲＥＭ２に対する用量反応結合曲線を示す。

【図3】ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ２９３細胞における、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２及び対応する抗ＴＲＥＭ２抗体（ＴＲＥＭ２ ＩｇＧ）によるｐＳｙｋシグナル活性化の用量反応結合曲線を示す。

【図4A】ｉＰＳＣミクログリアにおける、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２による処置に応じた脂質クリアランスの用量反応曲線を示す。

【図4B】ｉＰＳＣミクログリアにおける、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２による処置に応じた脂質クリアランスの用量反応曲線を示す。

【図5A】オレイン酸刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における脂質蓄積の代表的画像を示す。

【図5B】処置した細胞の脂質蓄積の定量を示す。

【図5C】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞におけるトリグリセリド、アシルカルニチン、及びＴＣＡ回路中間体種のレベルの調節を示すヒートマップである。

【図5D】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における代表的なトリグリセリド種レベルのレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図5E】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における代表的なアシルカルニチン種レベルのレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図5F】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における代表的なＴＣＡ回路中間体種レベルのレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図6A】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における特定のトリグリセリド種のレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図6B】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における特定のセラミド種のレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図6C】ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における特定のアシルカルニチン種のレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図7A】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるｍＴＯＲシグナル経路標的のウエスタンブロットの代表的な画像である。

【図7B】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるｍＴＯＲシグナル経路標的のレベル変化を示すプロットを示す。

【図7C】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるｍＴＯＲシグナル経路標的のレベル変化を示すプロットを示す。

【図7D】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるｍＴＯＲシグナル経路標的のレベル変化を示すプロットを示す。

【図7E】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるｍＴＯＲシグナル経路標的のレベル変化を示すプロットを示す。

【図8】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおけるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）のレベル変化を示す棒グラフである。

【図9】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおける代表的なビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）種のレベル変化を示すグラフである。

【図10A】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリアにおける酸素消費の代表的なカイネティクスグラフである。

【図10B】ＣＰＴ１阻害剤の存在下及び非存在下で、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞の最大呼吸能力を示す棒グラフである。

【図11A】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したヒトマクロファージ細胞における細胞生存率の用量反応曲線である。

【図11B】図１１Ａにおける用量反応曲線のＥＣ５０を示す棒グラフを示す。

【図11C】図１１Ａにおける用量反応曲線のＥｍａｘを示す棒グラフを示す。

【図12】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したヒトマクロファージ細胞における相対的サイトカイン放出のヒートマップである。

【図13A】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞におけるトリグリセリド種の相対変化を示すボルケーノプロットを示す。

【図13B】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞におけるトリグリセリド種の相対変化を示すボルケーノプロットを示す。

【図13C】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞におけるトリグリセリド種の相対変化を示すボルケーノプロットを示す。

【図13D】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における代表的なトリグリセリド種のレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図13E】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞における代表的なトリグリセリド種のレベル変化を示す棒グラフを示す。

【図14A】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞の細胞溶解物における抗体濃度に対するＴＲＥＭ２レベルのプロットである。

【図14B】抗ＴＲＥＭ２抗体で処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞の細胞培養培地における抗体濃度に対するＴＲＥＭ２レベルのプロットである。

【図15】カニクイザルに投与した抗ＴＲＥＭ２抗体の薬物動態プロファイルを示すプロットである。

【図16】Ａ及びＢは、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかで処置したＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの脳内における１ｍｍ^２あたりのＥｄＵ^＋Ｉｂａ^＋細胞（Ａ）及び相対Ｉｂａ^＋領域（Ｂ）を示すプロットである。

【図17】Ａ及びＢは、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２、対応するＴＲＥＭ２抗体、参照抗体＃２、またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかで処置したＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの脳内における１ｍｍ^２あたりのＥｄＵ^＋Ｉｂａ^＋細胞（Ａ）及び相対Ｉｂａ^＋領域（Ｂ）を示すプロットである。グラフは、平均±ＳＥＭ及びｐ値を示す：一元配置ＡＮＯＶＡとテューキーの多重比較検定；＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。

【図18】Ａ及びＢは、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２、対応するＴＲＥＭ２抗体、参照抗体＃２、またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかで処置したＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの脳内におけるサイトカインＩＰ－１０レベル（Ａ）及びサイトカインＭＣＰ－５レベル（Ｂ）を示すプロットである。グラフは、反復実験の±ＳＥＭの平均値を示す。グラフは、平均±ＳＥＭ及びｐ値を示す：一元配置ＡＮＯＶＡとテューキーの多重比較検定；＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。

【図19】ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２、対応するＴＲＥＭ２抗体、参照抗体＃２、またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかで処置したＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの脳内におけるグリアマーカーＣＳＦ１Ｒレベルを示すプロットである。グラフは、平均±ＳＥＭ及びｐ値を示す：一元配置ＡＮＯＶＡとテューキーの多重比較検定；＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。

【図20】ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスにおけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２、対応するＴＲＥＭ２抗体、参照抗体＃２、またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかの血漿中ＰＫプロファイルを示すプロットである。

【図21】ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスにおけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２、対応するＴＲＥＭ２抗体、参照抗体＃２、またはＡＴＶ：ＲＳＶのいずれかの脳内ＰＫプロファイルを示すプロットである。

【発明を実施するための形態】

【0054】

詳細な説明
Ｉ．緒言
ＴＲＥＭ２は、ミクログリア、樹状細胞、マクロファージ、及び破骨細胞の細胞表面に発現する膜貫通受容体である。特定の理論に束縛されるものではないが、リガンド結合後、ＴＲＥＭ２は膜貫通アダプタータンパク質であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）とシグナル伝達複合体を形成し、次に、プロテインキナーゼＳＲＣによってチロシンリン酸化されると考えられている。活性化ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体は、Ｓｙｋキナーゼなどのキナーゼを動員しリン酸化することにより、細胞内シグナル伝達を媒介すると考えられている。ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達は、食作用、細胞の増殖及び生存、炎症性サイトカイン分泌などの活性、ならびにミクログリア及びマクロファージなどの細胞の遊走を調節する。ＴＲＥＭ２は調節された膜内タンパク質分解を受け、膜結合性完全長ＴＲＥＭ２が、メタロプロテアーゼＡＤＡＭ１０によって、細胞からシェディングされるｓＴＲＥＭ２部分と、ガンマセクレターゼによってさらに分解される膜に保持されたＣ末端断片とに切断される。ｓＴＲＥＭ２のレベルの変化が、アルツハイマー病または前頭側頭型認知症を有し、かつＴＲＥＭ２に突然変異を有する患者において報告されている。さらに、ＴＲＥＭ２の突然変異は、食作用の障害及びミクログリア機能の低減などの機能の変化に関連する。

【0055】

以下の実施例セクションに詳述するように、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合し、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体の１つ以上の下流の機能を調節する抗体を作製した。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃポリペプチドのトランスフェリン受容体（例えば、ヒト由来のＴｆＲ）への結合を可能にする変異を含有するＦｃポリペプチドをさらに含む。いくつかの態様において、本明細書で開示される抗体は、修飾されたＦｃポリペプチドを介してトランスフェリン受容体タンパク質（例えば、脳内皮細胞（ＢＥＣ）の表面上に発現するもの）に結合することができ、それにより、ＴｆＲ結合Ｆｃ変異を欠く抗体よりも効果的に血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、Ｆｃポリペプチド中にエフェクター機能を低下させるまたは排除する変異、及び例えば、抗体ＦｃのＦｃ胎児性受容体（ＦｃＲｎ）への結合を増加させることによって、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を増加させる変異を含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する（例えば、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの分化、機能、遊走、もしくは生存を増強する）。したがって、別の態様では、ＴＲＥＭ２活性を、例えば、神経変性疾患を有する対象において増強する方法が提供される。

【0057】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のシェディングを低減させる。したがって、別の態様では、ｓＴＲＥＭ２のレベルを、例えば、神経変性疾患を有する対象において減少させる方法が提供される。

【0058】

ＩＩ．定義
本明細書で使用する場合、文脈上明らかに別段に示されている場合を除き、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」という単数形には、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のそのような分子などの組み合わせを任意選択的に含む。

【0059】

本明細書で使用する場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または範囲で指定された量を修正するために使用される場合、その数値及び当業者に公知の値からの妥当な偏差、例えば、±２０％、±１０％または±５％が、記載された値の意図する意味の範囲内であることを示す。

【0060】

本明細書で使用する場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」という用語は、遺伝子ＴＲＥＭ２によってコードされる骨髄細胞発現トリガー受容体２タンパク質を指す。本明細書で使用する場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」は、任意の脊椎動物、例えば、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、及び他の哺乳動物の天然の（すなわち、野生型）ＴＲＥＭ２タンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、ＵｎｉｐｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２（配列番号１）に同定される配列を有するヒトＴＲＥＭ２タンパク質である。

【0061】

本明細書で使用する場合、「抗ＴＲＥＭ２抗体」という用語は、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体を指す。

【0062】

本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリンフォールドを有するタンパク質であって、その可変領域を介して抗原と特異的に結合するタンパク質を指す。この用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体などの多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体を包含する。「抗体」という用語はまた、本明細書で使用する場合、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖを含むがこれらに限定されない抗体断片であって、その可変領域を介して結合特異性を保持する抗体断片も含む。抗体は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される軽鎖を含有し得る。抗体は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類される重鎖を含有し得、これらは順に、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンクラスをそれぞれ定義する。

【0063】

本明細書で使用する場合、「抗ＴＲＥＭ２抗原結合部分」という用語は、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗原結合セグメントまたは全体を指す。「抗原結合部分」及び「抗原結合断片」という用語は、本明細書において互換的に使用され、その可変領域を介して抗原（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する能力を保持した１つ以上の抗体の断片を指す。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ断片（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）_２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片から構成される二価断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、Ｖ_Ｌ（軽鎖可変領域）、ならびにＶ_Ｈ（重鎖可変領域）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0064】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖系列可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または結合（Ｊ）遺伝子に由来し（かつ定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントには由来せず）抗体に抗原と結合する特異性を与える、抗体重鎖または軽鎖中のドメインを指す。通常、抗体可変領域は、３つの超可変「相補性決定領域」が散在する４つの保存された「フレームワーク」領域を含む。

【0065】

「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域によって構築された４つのフレームワーク領域に割り込む、各鎖中の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの抗体結合を主として担っている。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から順番に付番してＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称され、通常、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別される。したがって、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３またはＣＤＲ－Ｈ３は、それが見出される抗体重鎖の可変領域に位置し、一方、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１またはＣＤＲ－Ｌ１は、それが見出される抗体軽鎖の可変領域に由来するＣＤＲ１である。

【0066】

異なる軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を組み合わせたものは、ＣＤＲを３次元空間に配置し整列させるように機能する。フレームワーク配列は、生殖系列抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースまたは公開されている参照文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列に関する「ＶＢＡＳＥ２」生殖系列可変遺伝子配列データベースに見出すことができる。

【0067】

ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野における様々な周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）を使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５（１９９６）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ定義の組み合わせにより決定される。

【0068】

「エピトープ」という用語は、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の区域または領域を指し、数個のアミノ酸または数個のアミノ酸の一部、例えば、５個または６個以上、例えば、２０個以上のアミノ酸、またはそれらのアミノ酸の一部を含み得る。例えば、標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続したアミノ酸（例えば、線状エピトープ）、またはタンパク質フォールディングによって近接するタンパク質の異なる部分からのアミノ酸（例えば、不連続エピトープもしくは立体構造的エピトープ）で構成され得る。いくつかの実施形態では、エピトープは、１つのアミノ酸において（例えば、セリンまたはスレオニン残基において）リン酸化される。

【0069】

本明細書で使用する場合、「エピトープを認識する」という語句は、抗ＴＲＥＭ２抗体に関して使用する場合、抗体ＣＤＲが、抗原（すなわち、ＴＲＥＭ２タンパク質）と、そのエピトープにおいて、またはそのエピトープを含有する抗原の部分において相互作用するか、またはそれに特異的に結合することを意味する。

【0070】

「モノクローナル抗体」は、細胞の単一クローンまたは単一細胞株より産生され、それらの一次アミノ酸配列と同一の抗体分子からなるか、またはそれから本質的になる抗体を指す。

【0071】

「ポリクローナル抗体」は、集団中の異なる抗体が抗原の異なるエピトープに結合する、不均一な抗体集団から得られた抗体を指す。

【0072】

「キメラ抗体」は、定常領域またはその一部が、変化されているか、置換されているか、または交換されており、その結果、抗原結合部位（すなわち、可変領域、ＣＤＲ、またはその一部）が異なるまたは変化されたクラス、エフェクター機能、及び／または種の定常領域に連結しているか、あるいは可変領域またはその一部が、異なるまたは変化された抗原特異性（例えば、異なる種に由来するＣＤＲ及びフレームワーク領域）を有する可変領域によって変化されているか、置換されているか、または交換されている抗体分子を指す。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、ある供給源または種（例えば、マウス）に由来する可変領域と、別の供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域とを含むモノクローナル抗体である。キメラ抗体を作製する方法は、当該技術分野において説明されている。

【0073】

「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ外の非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含有する非ヒト供給源（例えば、マウス）に由来するキメラ免疫グロブリンである。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の抗原結合可変ドメイン（複数可）を含み、ＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に対応し、フレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に対応する。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリン配列の少なくとも一部を含み得る。抗体ヒト化の方法は、当該技術分野において公知である。

【0074】

「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、典型的にはヒト生殖系列遺伝子に由来する、ヒト重鎖及び軽鎖配列を有する抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト細胞によって、ヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス）によって、またはファージディスプレイプラットフォームによって産生される。

【0075】

「特異的に結合する」という用語は、試料中のエピトープまたは標的に対して、別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、より高い親和性で、より高い結合力で、及び／またはより長い持続時間、エピトープまたは標的に結合する分子（例えば、抗体またはその抗原結合部分）を指す。いくつかの実施形態では、エピトープまたは標的に特異的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）は、他のエピトープまたは非標的化合物よりも少なくとも５倍高い親和性、例えば、少なくとも５倍、１０倍、１００倍、１，０００倍、または１０，０００倍以上の親和性で、エピトープまたは標的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）である。本明細書で使用する場合、特定のエピトープまたは標的「への特異的な結合」、「に特異的に結合する」または「に特異的である」という用語は、例えば、結合するエピトープまたは標的に対して、例えば、１０^－４Ｍ以下、例えば、１０^－５Ｍ、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、または１０^－１２Ｍの平衡解離定数Ｋ_Ｄを有する分子によって示され得る。ある種に由来する標的（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する抗体が、その標的（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）のオルソログにも特異的に結合し得ることが、当業者には理解されよう。

【0076】

「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子間、例えば、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の非共有結合相互作用の強度を指すものとして使用される。したがって、例えば、別途示さない限り、または文脈から明らかでない限り、この用語は、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を指し得る。結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を測定することにより定量化することができ、これは、結合速度定数（ｋ_ａ、時間^－１ Ｍ^－１）で除した解離速度定数（ｋ_ｄ、時間^－１）を指す。Ｋ_Ｄは、複合体形成及び解離のカイネティクスを、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えばＢｉａｃｏｒｅ（商標）システム）、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外法、及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームの使用）を使用して測定することにより決定することができる。本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間の１：１の相互作用を反映するような正式な結合親和性のみならず、強力な結合を反映し得るＫ_Ｄ値が算出される見かけの親和性をも含む。

【0077】

「交差反応する」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体を産生させた抗原とは別の抗原に結合する、抗体の能力を指す。いくつかの実施形態では、交差反応性は、抗体を産生させた抗原とは別の種に由来する抗原に結合する、抗体の能力を指す。非限定的な例として、ヒトＴＲＥＭ２ペプチドに対して産生された本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体は、異なる種（例えば、サルまたはマウス）に由来するＴＲＥＭ２ペプチドまたはタンパク質との交差反応性を示し得る。

【0078】

本明細書で使用する場合、「トランスフェリン受容体」または「ＴｆＲ」は、トランスフェリン受容体タンパク質１を指す。ヒトトランスフェリン受容体１ポリペプチド配列は、配列番号６２に記載される。他の種に由来するトランスフェリン受容体タンパク質１配列も知られている（例えば、チンパンジー：アクセッション番号ＸＰ＿００３３１０２３８．１、アカゲザル：ＮＰ＿００１２４４２３２．１、イヌ：ＮＰ＿００１００３１１１．１、ウシ：ＮＰ＿００１１９３５０６．１、マウス：ＮＰ＿０３５７６８．１、ラット：ＮＰ＿０７３２０３．１、及びニワトリ：ＮＰ＿９９０５８７．１）。「トランスフェリン受容体」という用語は、トランスフェリン受容体タンパク質１染色体遺伝子座にある遺伝子によってコードされる例示的な参照配列、例えば、ヒト配列のアレルバリアントも包含する。完全長のトランスフェリン受容体タンパク質は、短いＮ末端細胞内領域、膜貫通領域及び大きな細胞外ドメインを含む。細胞外ドメインは、プロテアーゼ様ドメイン、ヘリカルドメイン、及びアピカルドメインの３つのドメインを特徴とする。ヒトトランスフェリン受容体１のアピカルドメイン配列は、配列番号５５に記載される。

【0079】

本明細書で使用する場合、「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン定常領域ドメインポリペプチドを指す。ＩｇＧ抗体の文脈では、ＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って付番された位置３４１前後～位置４４７前後のアミノ酸のセグメントを指し、ＣＨ２ドメインポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って付番したとき、位置２３１前後～位置３４０前後のアミノ酸のセグメントを指す。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインポリペプチドはまた、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）付番スキームによって付番することもでき、ＩＭＧＴ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃチャートナンバリング（ＩＭＧＴウェブサイト）に従うと、ＣＨ２ドメイン付番は１～１１０であり、ＣＨ３ドメイン付番は１～１０７である。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。ＩｇＧ抗体の文脈では、Ｆｃ領域は、ＥＵ付番スキームに従って付番したとき、位置２３１前後～位置４４７前後のアミノ酸セグメントを指す。本明細書で使用する場合、「Ｆｃ領域」という用語は、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部も含み得る。例示的な部分ヒンジ領域配列は、配列番号５７に記載される。

【0080】

ポリペプチド配列中の所与のアミノ酸残基を同定する文脈で使用する場合、「～に対応する」、「～を参照して決定される」、または「～を参照して付番される」という用語は、所与のアミノ酸配列を参照配列に対して最大限アライメントして比較したときの、特定の参照配列の残基の位置を指す。したがって、例えば、配列番号３８に最適にアライメントした場合、配列番号３８のアミノ酸と残基がアライメントする場合、ポリペプチド中のアミノ酸残基は、配列番号３８のアミノ酸１１１～２１７の領域のアミノ酸「に対応する」。参照配列にアライメントされるポリペプチドは、参照配列と同じ長さである必要はない。

【0081】

本明細書で使用する場合、「Ｆｃポリペプチド」という用語は、構造ドメインとしてのＩｇフォールドを特徴とする、天然免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、少なくともＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを含む定常領域配列を含有し、ヒンジ領域の少なくとも一部を含有し得るが、可変領域は含有しない。

【0082】

「修飾されたＦｃポリペプチド」は、野生型免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列と比較して、少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失または挿入を有するが、天然Ｆｃポリペプチドの全体的なＩｇフォールドまたは構造を保持するＦｃポリペプチドを指す。

【0083】

「単離された」という用語は、核酸またはタンパク質（例えば、抗体）に関して使用する場合、核酸またはタンパク質が、その天然状態において会合していた他の細胞成分を本質的に含まないことを示す。純度及び均一性は、通常、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）などの分析化学技法を使用して判定される。いくつかの実施形態では、単離された核酸またはタンパク質（例えば、抗体）は、少なくとも８５％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、または少なくとも９９％純粋である。

【0084】

「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様の形で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を指す。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびにそれらのアミノ酸が後で修飾されたもの、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート、及びＯ－ホスホセリンである。天然α－アミノ酸には、限定されないが、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが含まれる。天然α－アミノ酸の立体異性体には、限定されないが、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが含まれる。「アミノ酸類似体」とは、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基及びＲ基に結合している、α炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造を保持する。「アミノ酸模倣物」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の形で機能する化学化合物を指す。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかにより言及されている場合がある。

【0085】

「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は本明細書において互換的に使用され、単一鎖中のアミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、全てがＬ－アミノ酸のもの、全てがＤ－アミノ酸のもの、またはＬ－アミノ酸及びＤ－アミノ酸の混合物を含み得る。

【0086】

本明細書で使用する場合、「タンパク質」という用語は、単一鎖ポリペプチドの１つのポリペプチドまたは二量体（すなわち、２つ）または多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の単一鎖ポリペプチドは、共有結合（例えば、ジスルフィド結合）または非共有結合相互作用によって連結され得る。

【0087】

「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を互換的に指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼにより鎖に組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。本明細書において企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖ＤＮＡ及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖ＤＮＡと、二本鎖ＤＮＡと、一本鎖ＲＮＡと、二本鎖ＲＮＡとの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。

【0088】

「保存的置換」、「保存的突然変異」という用語は、あるアミノ酸の、類似の特徴を有すると分類され得る別のアミノ酸による置換をもたらす変化を指す。このように定義された保存的アミノ酸グループの分類の例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含む「荷電／極性グループ」、Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）を含む「芳香族グループ」、ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（スレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含む「脂肪族グループ」を挙げることができる。各グループ内で、サブグループを特定することもできる。例えば、荷電または極性アミノ酸のグループは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓで構成される「正に荷電したサブグループ」、Ｇｌｕ及びＡｓｐで構成される「負に荷電したサブグループ」、ならびにＡｓｎ及びＧｌｎで構成される「極性サブグループ」を含むサブグループに細分することができる。別の例では、芳香族または環状のグループは、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ及びＴｒｐから構成される「窒素環サブグループ」、ならびにＰｈｅ及びＴｙｒから構成される「フェニルサブグループ」を含むサブグループに細分することができる。さらなる別の例では、脂肪族グループは、サブグループ、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ及びＡｌａから構成される「脂肪族非極性サブグループ」、ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＣｙｓから構成される「脂肪族微極性サブグループ」に細分することができる。保存的突然変異の分類の例としては、前述のサブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、限定されないが、正電荷を維持することができるような、Ａｒｇの代わりにＬｙｓまたはその逆；負電荷を維持することができるような、Ａｓｐの代わりにＧｌｕまたはその逆；遊離－ＯＨを維持することができるような、Ｔｈｒの代わりにＳｅｒまたはその逆；及び遊離－ＮＨ_２を維持することができるような、Ａｓｎの代わりにＧｌｎまたはその逆、が挙げられる。いくつかの実施形態では、疎水性アミノ酸は、疎水性を保持するために、例えば活性部位中で天然疎水性アミノ酸に対して置換される。

【0089】

２つ以上のポリペプチド配列との関連における「同一の」またはパーセント「同一性」という用語は、比較ウィンドウにわたって、または配列比較アルゴリズムを使用して、もしくは手動アラインメント及び目視検査により測定される指定領域にわたって、最大限一致するように比較及びアラインメントされる場合に、同じであるかまたは特定のパーセンテージ、例えば、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％以上、特定の領域にわたって同一であるアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。

【0090】

ポリペプチドの配列比較では、通常、１つのアミノ酸配列が参照配列として機能し、これを候補配列と比較する。最大アラインメントを得るために、当業者が利用可能な様々な方法、例えば、視覚的アラインメントまたは公知のアルゴリズムを使用した公的に利用可能なソフトウェアを使用してアラインメントを実施することができる。そのようなプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。最大アラインメントを得るためのアラインメントに用いられるパラメータは、当業者によって決定され得る。本出願の目的のためのポリペプチド配列の配列比較では、デフォルトパラメータを用いて２つのタンパク質配列をアラインメントするための、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムの標準タンパク質ＢＬＡＳＴを使用する。

【0091】

本明細書で互換的に使用される「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス及びモルモット）、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ウマならびに他の哺乳動物種を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。一実施形態では、対象、個体、または患者はヒトである。

【0092】

本明細書で使用される「処置する」、「処置」などの用語は、一般に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味する。「処置する」または「処置」は、患者の生存における緩和、寛解、向上、生存期間もしくは生存率の増加、症状を減少させることもしくは疾患を患者がより耐えられるものにすること、変性もしくは減退の速度を緩慢にすること、または患者の身体的もしくは精神的幸福を向上させることなどのあらゆる客観的及び主観的パラメータを含む、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病または本明細書に記載の別の神経変性疾患）の処置または改善における成功のあらゆる兆候を指し得る。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメータに基づき得る。処置の効果を、処置を受けていない個体または個体のプールと、または処置前もしくは処置の間の異なる時点での同じ患者と比較することができる。

【0093】

「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、限定されないが、緩衝液、担体、または保存剤などの、ヒトまたは動物における使用に生物学的または薬理学的に適合する非活性医薬品成分を指す。

【0094】

本明細書で使用する場合、薬剤（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」または「治療有効量」は、対象における疾患の症状の重症度を処置するか、軽減させるか、緩和するか、または低減させる薬剤の量である。薬剤（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」は、患者の生存の向上、生存期間もしくは生存率の増加、症状を減少させること、損傷、疾患もしくは状態（例えば、神経変性疾患）をより耐えられるものにすること、変性もしくは減退の速度を緩慢にすること、または患者の身体的もしくは精神的幸福を向上させることが可能である。

【0095】

「投与する」という用語は、生物学的作用の所望の部位に薬剤、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、静脈内投与される。

【0096】

「対照」または「対照値」という用語は、基準値またはベースライン値を指す。適切な対照は、当業者により決定され得る。場合によっては、対照値は、同じ対象または実験内のベースラインに対して決定される場合があり、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体による処置前に採取したｓＴＲＥＭ２の測定値は、同じ対象におけるｓＴＲＥＭ２レベルの処置後測定値に対する対照値であり得る。他の場合では、対照値は、対照対象（例えば、健常対照もしくは疾患対照）に対して、または対照対象の集団（例えば、健常対照もしくは疾患対照、例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００以上の対照対象の集団）における平均値に対して決定される場合があり、例えば、ベースライン時または処置後のいずれかの対象のｓＴＲＥＭ２レベルの測定値は、健常対照の値と比較され得る。

【0097】

ＩＩＩ．抗ＴＲＥＭ２抗体
一態様では、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、他のＴＲＥＭ様受容体（例えば、ＴＲＥＭ１）に比べてＴＲＥＭ２に対して選択的である。

【0098】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示される１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を含む抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示される１つ以上のＣＤＲ配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を含み、本明細書に開示される１つ以上の機能特性、例えば、ＴＲＥＭ２活性を増強する（例えば、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージなどの細胞の遊走、分化、機能もしくは生存を増強する）抗体、あるいはｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の１つ以上の修飾を含むＦｃポリペプチドを含む。

【0099】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト化及び／または親和性成熟抗体である。

【0100】

抗ＴＲＥＭ２配列
いくつかの実施形態では、重鎖配列もしくはその一部、及び／または軽鎖配列もしくはその一部は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、またはクローンＣＬ００２０３０７）に由来する。これらのクローンのＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域アミノ酸配列は、表８に記載されている。

【0101】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４及び１２のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４及び１２のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）配列、
（ｂ）配列番号５、１３、及び２５のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５、１３、及び２５のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）配列、
（ｃ）配列番号６、１４、及び１７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号６、１４、及び１７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）配列、
（ｄ）配列番号７及び２３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７及び２３のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）配列、
（ｅ）配列番号８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）配列、ならびに
（ｆ）配列番号９及び１８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９及び１８のいずれか１つのアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）配列。

【0102】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）～（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ全てを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）のＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）のＣＤＲ－Ｈ２、及び （ｃ）のＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）のＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）のＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）のＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列に対して１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列に対して２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、最大２つのアミノ酸置換は、保存的置換である。

【0103】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４及び１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）配列番号５、１３、及び２５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）配列番号６、１４、及び１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）配列番号７及び２３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）配列番号８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号９及び１８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。

【0104】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）～（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ全てを含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）のＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）のＣＤＲ－Ｈ２、及び （ｃ）のＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）のＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）のＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）のＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、または
（ｇ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３。

【0106】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下を含む：
（ａ）配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｂ）配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｃ）配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｄ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｅ）配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｆ）配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｇ）配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｈ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｉ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｊ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｋ）配列番号２６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列、または
（ｌ）配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｈ配列、及び配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＶ_Ｌ配列。

【0110】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に開示されるコンセンサス配列により包含される１つ以上の配列を含む。非限定的な例として、コンセンサス配列は、重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）を、同じ（または類似の）生殖系列に由来する抗体に対してアラインメントすることにより同定することができる。いくつかの実施形態では、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）長さの配列及び／または少なくとも１つの極めて類似したＣＤＲ（例えば、極めて類似したＣＤＲ３）を有する配列を含有する抗体から生成され得る。いくつかの実施形態では、それらの抗体におけるそのような配列は、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得る場所）及び／または変異が配列に存在する領域（すなわち、配列の変異がタンパク質機能に著しく影響を与える可能性が低い場所）を同定するためにアラインメント及び比較され得る。あるいは、コンセンサス配列は、重鎖配列または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）を、同じまたは類似の（例えば、重複する）エピトープに結合する抗体に対してアラインメントして、保存されたアミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列における変化がタンパク質機能を変化させ得る場所）及び変異が配列のアラインメントに存在する領域（すなわち、配列の変異がタンパク質機能に著しく影響を与える可能性が低い場所）を決定することにより同定され得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のコンセンサス配列は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体と同じまたは類似のエピトープを認識する抗体に対して同定され得る。例示的なコンセンサス配列は、配列番号２８～３２を含む。配列番号２８～３２のコンセンサス配列において、大文字は、アラインメントした配列（例えば、アラインメントしたＣＤＲ配列）間で完全に保存されているアミノ酸残基を表しており、一方、「Ｘ」またはギリシア文字（例えば、「α」、「β」、「γ」、「δ」、「ε」、または「φ」）は、アラインメントした配列間で完全には保存されていないアミノ酸残基を表す。「Ｘ」またはギリシア文字によって記された位置に挿入するためにアミノ酸を選択する場合、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、アラインメントした配列中の対応する位置に見られるアミノ酸から選択されることが理解されるであろう。

【0111】

クローンＣＬ００２０１８８、ＣＬ００２０３０６、ＣＬ００２０３０７、及びＣＬ００２０１８８のバリアント
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下を含む：
（ａ）Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－α_６－Ｆ－Ｙ－Ｍ－Ｓ（配列番号２８）（配列中、α_６はＤまたはＮである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、
（ｂ）Ｖ－Ｉ－Ｒ－Ｎ－β_５－β_６－Ｎ－β_８－Ｙ－Ｔ－β_１１－β_１２－Ｙ－Ｎ－Ｐ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ（配列番号２９）（配列中、β_５はＫまたはＲであり、β_６はＡまたはＰであり、β_８はＧまたはＡであり、β_１１はＡまたはＴであり、β_１２はＧまたはＤである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、
（ｃ）γ_１－Ｒ－Ｌ－γ_４－Ｙ－Ｇ－Ｆ－Ｄ－Ｙ（配列番号３０）（配列中、γ_１はＡまたはＴであり、γ_４はＴまたはＳである）の配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、
（ｄ）Ｑ－Ｓ－Ｓ－Ｋ－Ｓ－Ｌ－Ｌ－Ｈ－Ｓ－δ_１０－Ｇ－Ｋ－Ｔ－Ｙ－Ｌ－Ｎ（配列番号３１）（配列中、δ_１０はＮまたはＴである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、
（ｅ）ＷＭＳＴＲＡＳ（配列番号８）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び
（ｆ）Ｑ－Ｑ－Ｆ－Ｌ－Ｅ－φ_６－Ｐ－Ｆ－Ｔ（配列番号３２）（配列中、φ_６はＹまたはＦである）の配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列。

【0112】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４及び１２から選択されるＣＤＲ－Ｈ１配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５、１３、及び２５から選択されるＣＤＲ－Ｈ２配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６、１４、及び１７から選択されるＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７及び２３から選択されるＣＤＲ－Ｌ１配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９及び１８から選択されるＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２、１０、１５、１９、２１、２４、及び２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３、１１、１６、２０、２２、及び２７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0115】

クローンＣＬ００２０１８８
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、５、１７、７、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と結合を競合する。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号４、２５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。

【0126】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、２５、１７、２３、８、及び１８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と結合を競合する。

【0127】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号４、２５、及び１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２７に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、または９７％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、２５、１７、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と結合を競合する抗体である。

【0133】

クローンＣＬ００２０３０６
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0136】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0137】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号４、５、６、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と結合を競合する。

【0139】

クローンＣＬ００２０３０７
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１配列、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２配列、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３配列、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１配列、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２配列、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体または抗原結合部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0142】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１２、１３、及び１４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１～３を含み、かつ配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有する、軽鎖可変領域を含む。

【0144】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、配列番号１２、１３、１４、７、８、及び９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１～３及び軽鎖ＣＤＲ１～３を含む抗体、または配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体）と結合を競合する抗体である。

【0145】

抗ＴＲＥＭ２抗体の結合特性
いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、細胞（例えば、ヒトマクロファージなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株）上に発現するＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、精製もしくは組換えＴＲＥＭ２タンパク質もしくはその一部に結合するか、またはＴＲＥＭ２もしくはその一部を含むキメラタンパク質（例えば、ＴＲＥＭ２を含むＦｃ融合タンパク質もしくはＴＲＥＭ２の外部ドメインを含むＦｃ融合タンパク質）に結合する。

【0146】

いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、別の種の１つ以上の他のＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）ＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、マウスＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ｃｙｎｏ ＴＲＥＭ２、及びマウスＴＲＥＭ２との交差反応性を示す。

【0147】

結合親和性、結合カイネティクス、及び交差反応性を分析するための方法は、当該技術分野において公知である。これらの方法としては、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降法、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））、結合平衡除外法（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ））、及びウエスタンブロット分析が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡを使用して、結合親和性及び／または交差反応性を判定する。ＥＬＩＳＡアッセイを実施するための方法は当該技術分野において公知であり、以下の実施例セクションにも記載されている。いくつかの実施形態では、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。いくつかの実施形態では、結合平衡除外法を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。いくつかの実施形態では、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法アッセイを使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を判定する。

【0148】

抗ＴＲＥＭ２抗体によって認識されるエピトープ
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。本明細書で使用する場合、「実質的に同じ」という用語は、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープに関して使用する場合、本明細書に記載の抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるか、そのエピトープ内にあるか、またはそれとほぼ同一であるか（例えば、そのエピトープに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、またはそのエピトープに対して１つ、２つもしくは３つのアミノ酸置換、例えば保存的置換を有する）、あるいはそのエピトープと実質的に重複する（例えば、そのエピトープと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％重複する）エピトープを抗ＴＲＥＭ２抗体が認識することを意味する。

【0149】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、クローンＣＬ００２０３０６、クローンＣＬ００２０１８８、クローンＣＬ００２０３０７、及びそれらのバリアントからなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じかまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。

【0150】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１の残基１２９～１７２または残基１３１～１６９を含むか、その中にあるか、またはそれからなるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１の残基１２９～１４８（例えば、配列番号１の１４３～１４８）を含むか、その中にあるか、またはそれからなるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（例えば、Ｓｙｋなどのキナーゼのリン酸化を誘導することによって）ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達を活性化し、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合するアゴニストである。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２のストーク領域内のエピトープでヒトＴＲＥＭ２に結合し、プロテアーゼ（例えば、ＡＤＡＭ１７）によるＴＲＥＭ２の切断を阻害する。

【0151】

抗ＴＲＥＭ２抗体の機能特性
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、開示されている１つ以上のＣＤＲ配列、重鎖可変領域配列、及び／または軽鎖可変領域配列を有する抗体）は、本明細書に開示される１つ以上のＴＲＥＭ２活性において機能する。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２タンパク質のレベル（例えば、細胞表面から細胞外試料にシェディングされたｓＴＲＥＭ２のレベル）を調節し、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）の動員もしくはリン酸化を調節し、及び／または食作用、細胞増殖、細胞生存、細胞分化、サイトカイン分泌、もしくは細胞遊走などのシグナル伝達複合体の下流の１つ以上の活性を調節する。

【0152】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、本明細書に記載のもの）を増強する。いくつかの実施形態では、リガンドは、脂質リガンドである。ＴＲＥＭ２脂質リガンドの例としては、１－パルミトイル－２－（５’－オキソ－バレロイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２－アラキドノイルグリセロール（２－ＡＧ）、７－ケトコレステロール（７－ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７－ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α－ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド－１－リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２－リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ－アシル－ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ－アシル－セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸－９－ヒドロキシ－ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン－１－リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン－１－リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドが挙げられるが、これらに限定されない。

【0153】

ｓＴＲＥＭ２シェディングの調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、試料中のｓＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、例えば、細胞表面から細胞外試料にシェディングされたｓＴＲＥＭ２のレベルを変化させる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。

【0154】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処置した試料中のｓＴＲＥＭ２の量が対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上減少する場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処置した試料中のｓＴＲＥＭ２の量が対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上減少する場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態では、対照値は、無処置試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていないＴＲＥＭ２発現細胞からの上清、もしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対象からの試料）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処置された試料中のｓＴＲＥＭ２の量である。

【0155】

いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２のシェディングは、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む試料を使用して測定される。いくつかの実施形態では、試料は、脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態では、試料は、細胞培養物からの上清（例えば、ヒトマクロファージなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株からの、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株からの上清）を含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、試料中のｓＴＲＥＭ２のレベルは、免疫測定法を使用して測定される。免疫測定法は、当該技術分野において公知であり、限定されないが、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）などの酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、及び電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）が含まれる。いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２レベルは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。いくつかの実施形態では、ｓＴＲＥＭ２レベルは、以下の実施例セクションに記載されているＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。

【0157】

キナーゼの動員またはリン酸化の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体（例えば、限定されないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂ）と相互作用するキナーゼのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導されるＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を誘導または増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導または増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処置試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていないＴＲＥＭ２発現細胞を含む試料、もしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない対象からの試料）、またはＴＲＥＭ２リガンドで処置されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処置されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処置された試料中のＳｙｋリン酸化のレベルである。

【0158】

試料中のリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸化）を検出及び／または定量化するために、いくつかの実施形態では、免疫測定法が使用される。いくつかの実施形態では、免疫測定法は、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、または電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）である。いくつかの実施形態では、リン酸化は、増幅発光近似均質アッセイ（ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ ａｓｓａｙ）（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｉｎｃ．）を利用する免疫測定法を使用して検出及び／または定量化される。

【0159】

いくつかの実施形態では、リン酸化は、１つ以上の細胞、例えば、１つ以上のＴＲＥＭ２発現細胞（例えば、ヒトマクロファージもしくはｉＰＳＣ由来ミクログリアなどの内在的にＴＲＥＭ２を発現する一次細胞もしくは細胞株、または例えば、以下の実施例セクションに記載されているようなＴＲＥＭ２を発現するように操作されている一次細胞もしくは細胞株）を含む試料を使用して測定される。いくつかの実施形態では、試料は、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態では、試料は、組織（例えば、肺、脳、腎臓、脾臓、神経組織、もしくは骨格筋）またはそのような組織からの細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、（例えば、ヒト対象または非ヒト対象からの）内因性体液、組織または細胞を含む。

【0160】

食作用の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、死細胞デブリ、組織デブリ、アミロイドベータ粒子、または異物の食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導される食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中の食作用のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中の食作用のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処置試料、ＴＲＥＭ２リガンドで処置されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処置されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処置された試料中の食作用のレベルである。

【0161】

いくつかの実施形態では、食作用は、標識基質を用いた食作用アッセイを使用して測定される。食作用アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージまたはミクログリアを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、食作用は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ食作用アッセイを使用して測定される。

【0162】

細胞の分化、機能、遊走、及び生存の調節
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ならびにｉＰＳＣ由来ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを含むミクログリアの）細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。疾患関連ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを検出する方法は、Ｋｅｒｅｎ－Ｓｈａｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１７，１６９：１２７６－１２９０に記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞遊走を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞生存を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞機能を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞タイプ（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨髄細胞の遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリア活性化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、疾患関連ミクログリアの遊走、生存、機能、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、天然ＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断せずに、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、脂質リガンド）によって誘導される細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。

【0163】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルが、対照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％以上増加する場合、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置した試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルが、対照値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍以上増加する場合、細胞遊走、細胞生存、細胞機能、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態では、対照値は、無処置試料（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処置されていない試料）、ＴＲＥＭ２リガンドで処置されているが抗ＴＲＥＭ２抗体では処置されていない試料、または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処置された試料中の活性（例えば、遊走、生存、機能、または分化）のレベルである。

【0164】

いくつかの実施形態では、細胞遊走は、走化性アッセイを使用して測定される。走化性アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞遊走は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ走化性アッセイを使用して測定される。

【0165】

いくつかの実施形態では、細胞生存は、細胞生存率アッセイを使用して測定される。細胞生存率アッセイは、当該技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージを含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含む試料で実施される。いくつかの実施形態では、細胞生存は、以下の実施例セクションに記載されているヒトマクロファージ生存率アッセイを使用して測定される。

【0166】

いくつかの実施形態では、細胞機能は、その細胞に適した機能アッセイを使用して測定される。例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージ細胞機能は、例えば、以下の実施例セクションに記載されているように、食作用アッセイを使用して評価される。

【0167】

いくつかの実施形態では、細胞分化は、ＴＲＥＭ２を内在的に発現する細胞の分化能力を評価することにより測定される。例えば、いくつかの実施形態では、細胞分化は、例えば、実施例セクションに記載されているように、単球から分化するマクロファージの能力を評価することにより測定される。

【0168】

いくつかの実施形態では、ミクログリアの活性化は、ｉｎ ｖｉｖｏで測定される。いくつかの実施形態では、ミクログリア活性化は、ＴＳＰＯ－ＰＥＴイメージングを使用して測定される。ＴＳＰＯ－ＰＥＴイメージング法は、当該技術分野において公知である。

【0169】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、神経炎症を増加させずにミクログリア機能を増強する。神経炎症のレベルは、限定されないが、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｒａ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１５、またはＩＦＮ－γなどのサイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン）のレベルを測定することにより判定され得る。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルは、免疫測定法、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、免疫細胞化学法、キャピラリー電気泳動免疫測定法（ＣＥＩＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光免疫測定法（ＣＬ）、または電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬ）を使用して測定される。

【0170】

ＩＶ．抗ＴＲＥＭ２抗原結合部分を有するタンパク質のＦｃポリペプチド変異
いくつかの態様において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み、その一方または両方は、独立して選択される修飾（例えば、変異）をそれぞれ含んでもよいし、野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドであってもよい。一方または両方のＦｃポリペプチドに導入することができる変異の非限定的な例としては、例えば、Ｆｃポリペプチド（またはそれを含む抗体）のＢＢＢ受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）タンパク質（例えば、脳内皮細胞上に発現し得るものなどのヒトまたはカニクイザルＴｆＲ）への結合を可能にする変異、血清安定性を増加させる、エフェクター機能を調節する、グリコシル化に影響を与える、ヒトにおける免疫原性を低減させる、及び／またはＦｃポリペプチドのノブ及びホールのヘテロ二量体化をもたらすための変異が挙げられる。

【0171】

トランスフェリン受容体結合変異
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＦｃポリペプチドのＴｆＲタンパク質への結合を可能にする修飾（例えば、アミノ酸置換）を含むＦｃポリペプチドを含む。簡潔に述べると、例えば、脳内皮細胞上に発現するＴｆＲタンパク質（例えば、そのアピカルドメイン）への結合は、いくつかの実施形態では、本開示の修飾されたＦｃポリペプチドまたはそれを含む抗体が受容体媒介トランスサイトーシスを介して血液脳関門を通過することを可能にし得る。ある特定の実施形態では、受容体媒介トランスサイトーシスは、Ｆｃポリペプチドを含むタンパク質が脳内（すなわち、血液脳関門の管腔側上）に存在する能力を増強または改善することができ、これにより、ＣＮＳにおけるＴＲＥＭ２への結合、及び他の機能、例えば、クリアランス、中和、または標的の免疫枯渇などを改善することを可能にし得る。

【0172】

Ｆｃ（例えば、ＣＨ２及び／またはＣＨ３部分、断片、またはドメイン）への例示的なＴｆＲ結合アミノ酸修飾、ならびにアミノ酸修飾を含むＦｃポリペプチド及びその部分は、ＰＣＴ特許公開第ＷＯ２０１８／１５２３２６Ａ１号に記載されている。これらのアミノ酸修飾、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド配列及びＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド、ならびにそれらを作製及び試験する技術は、参照により本明細書に組み込まれる。本開示のＦｃ二量体の１つまたは２つのＦｃポリペプチドは、ＴｆＲへの結合を可能にする修飾を含むように操作することができる。ある特定の実施形態では、Ｆｃ二量体の一方のＦｃポリペプチドはＴｆＲへの結合を可能にする修飾を含み、他方のＦｃポリペプチドは含まない。

【0173】

いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＹｘＴＥＷＳＳ（配列番号５８）モチーフを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＴｘｘＥｘｘｘｘＦ（配列番号５９）モチーフを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＹｘＴＥＷＳＳ（配列番号５８）及びＴｘｘＥｘｘｘｘＦ（配列番号５９）モチーフを含む。

【0174】

いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵ付番に従って、位置３８０、３８９、３９０、及び４１５に野生型アミノ酸残基を含み、野生型アミノ酸残基は、配列番号３８の対応する位置に見出される。

【0175】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＵ付番に従って、以下のアミノ酸：位置３８０のＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、位置３８４のＴｙｒまたはＰｈｅ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、Ａｌａ、またはＶａｌ、位置３９０のＳｅｒまたはＡｓｎ、位置４１３のＴｈｒまたはＳｅｒ、位置４１５のＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを有するＦｃポリペプチドを含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＵ付番に従って、以下のアミノ酸：位置３８０のＴｒｐ、位置３８４のＴｙｒ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、位置３９０のＳｅｒ、位置４１３のＴｈｒ、位置４１５のＧｌｕ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを有するＦｃポリペプチドを含む。

【0177】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＵ付番に従って、以下のアミノ酸：位置３８０のＧｌｕ、位置３８４のＰｈｅ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、位置３９０のＡｓｎ、位置４１３のＳｅｒ、位置４１５のＧｌｕ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを有するＦｃポリペプチドを含む。

【0178】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＵ付番に従って、以下のアミノ酸：位置３８０のＧｌｕ、位置３８４のＴｙｒ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＶａｌ、位置３９０のＡｓｎ、位置４１３のＴｈｒ、位置４１５のＧｌｕ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを有するＦｃポリペプチドを含む。

【0179】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＵ付番に従って、以下のアミノ酸：位置３８０のＧｌｕ、位置３８４のＴｙｒ、位置３８６のＴｈｒ、位置３８７のＧｌｕ、位置３８８のＴｒｐ、位置３８９のＳｅｒ、位置３９０のＡｓｎ、位置４１３のＳｅｒ、位置４１５のＧｌｕ、位置４１６のＧｌｕ、及び位置４２１のＰｈｅを有するＦｃポリペプチドを含む。

【0180】

いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号４０、４３、４６、及び４９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号４１、４４、４７、及び５０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

【0181】

修飾されたＦｃポリペプチドの追加の例は、表８に記載されている。

【0182】

Ｆｃポリペプチドのヘテロ二量体化を促進する変異
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される抗ＴＲＥＭ２抗体に存在するＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体の形成を促進し、ホモ二量体の形成を妨げる、ノブ及びホール変異を含む。一般に、この修飾は、第１のポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）を導入し、第２のポリペプチドの界面に対応する空隙（「ホール」）を導入するものであり、ヘテロ二量体の形成が促進され、ホモ二量体の形成が妨げられるように、突起を空隙内に配置することができる。突起は、第１のポリペプチドの界面からの小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換することにより構成される。突起に対し同一または類似のサイズの補完的なくぼみは、大きなアミノ酸側鎖をより小さな側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面上に作成される。いくつかの実施形態では、そのような追加の変異は、ＦｃポリペプチドのＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲへの結合に悪影響を及ぼさない（例えば、阻害しない）、Ｆｃポリペプチド中の位置にある。

【0183】

二量体化のためのノブホールアプローチの例示的な一実施形態では、本明細書に記載のタンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方の位置３６６（ＥＵ付番スキームに従う付番）は、天然スレオニンの代わりにトリプトファンを含む。二量体中のもう一方のＦｃポリペプチドは、位置４０７（ＥＵ付番スキームに従う付番）に、天然チロシンの代わりにバリンを有する。もう一方のＦｃポリペプチドは、位置３６６（ＥＵ付番スキームに従う付番）の天然スレオニンがセリンに置換されている置換、及び位置３６８（ＥＵ付番スキームに従う付番）の天然ロイシンがアラニンに置換されている置換をさらに含み得る。したがって、本開示の抗ＴＲＥＭ２タンパク質のＦｃポリペプチドの一方は、Ｔ３６６Ｗのノブ変異を有し、もう一方のＦｃポリペプチドは、典型的にＴ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａのホール変異を伴う、Ｙ４０７Ｖ変異を有する。

【0184】

いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化のための他の修飾を含有するように操作されてもよく、例えば、天然の荷電性であるＣＨ３－ＣＨ３界面内の接触残基の静電的操作または疎水性パッチ修飾がある。

【0185】

いくつかの実施形態では、血清半減期を増強するための修飾が導入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２タンパク質に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って付番したとき、位置２５２にチロシン、位置２５４にスレオニン、及び位置２５６にグルタミン酸を含み得る。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換を有し得る。あるいは、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ付番に従って、Ｍ４２８Ｌ及び／またはＮ４３４Ｓ置換を有し得る。あるいは、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ置換を有し得る。

【0186】

Ｆｃエフェクター機能
いくつかの実施形態では、本明細書で開示される抗ＴＲＥＭ２タンパク質の一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低下させる修飾、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞上に発現されるＦｃ受容体に結合すると、ある特定の生物学的機能を誘導する能力を低下させる修飾を含み得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合と補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるが、これらに限定されない。エフェクター機能は、抗体クラスによって変化し得る。例えば、天然ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性を惹起することができ、天然ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫系細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＰ機能を惹起することができる。

【0187】

いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を調節する修飾を含み得る。

【0188】

いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低下させるまたは排除する修飾を含み得る。エフェクター機能を低下させる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメイン中の置換、例えば、ＥＵ付番スキームに従って、位置２３４及び２３５での置換が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、位置２３４及び２３５にアラニン残基を含み得る。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）置換を有し得る。

【0189】

エフェクター機能を調節する追加のＦｃポリペプチド変異としては、以下のもの、すなわち、位置３２９で、プロリンが、グリシン、アルギニン、セリン、またはＦｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換されている変異を有し得ることが挙げられるが、これらに限定されない。追加の例示的な置換としては、ＥＵ付番スキームに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、及びＰ３３１Ｓが挙げられる。複数の置換が存在してもよく、例えば、ＥＵ付番スキームに従って、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｓ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ、ならびにヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅがある。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵ付番スキームに従って、位置２９８、３３３、及び／または３３４の置換を有し得る。

【0190】

ＦｃＲｎ結合部位及び血清半減期を延長させる変異
ある特定の態様では、本開示の抗ＴＲＥＭ２タンパク質に存在するＦｃポリペプチド（例えば、修飾されたＦｃポリペプチド）は、ＦｃＲｎ結合部位を含み得る。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、Ｆｃポリペプチドまたはその断片中にある。

【0191】

いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、天然ＦｃＲｎ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、天然ＦｃＲｎ結合部位のアミノ酸配列に対するアミノ酸変化を含まない。いくつかの実施形態では、天然ＦｃＲｎ結合部位は、ＩｇＧ結合部位、例えば、ヒトＩｇＧ結合部位である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、ＦｃＲｎ結合を改変する修飾を含む。

【0192】

いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、変異された、例えば、置換されたアミノ酸残基を１つ以上有し、この変異（複数可）は、血清半減期を延長させるか、または血清半減期を実質的に低下させない（すなわち、血清半減期の低下が、変異位置に野生型残基を有する同等物のＦｃポリペプチドと比較して、同じ条件下でアッセイした場合、２５％以下である）ものである。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位は、ＥＵ付番スキームに従って、位置２５１～２５６、４２８、及び４３３～４３６に置換された１つ以上のアミノ酸残基を有する。

【0193】

いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎ結合部位の残基またはその近傍の残基の１つ以上は、ポリペプチドの血清半減期を延長させるために、天然のヒトＩｇＧ配列に対して変異されている。いくつかの実施形態では、変異は、位置２５２、２５４、及び２５６のうちの１つ、２つまたは３つに導入されている。いくつかの実施形態では、変異はＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、変異Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅをさらに含む。特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２タンパク質に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って付番したとき、位置２５２にチロシン、位置２５４にスレオニン、及び位置２５６にグルタミン酸を含み得る。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ置換を有し得る。

【0194】

いくつかの実施形態では、変異は、Ｍ４２８Ｌ及び／またはＮ４３４Ｓである。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらず、変異Ｎ４３４Ｓをさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って、位置Ｔ３０７、Ｅ３８０、及びＮ４３４の１つ、２つまたは３つ全てに変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ａである。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、変異Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って、位置Ｔ２５０及びＭ４２８に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、変異Ｔ２５０Ｑ及び／またはＭ４２８Ｌを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ＥＵ付番スキームに従って、位置Ｍ４２８及びＮ４３４に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み得、２つのＦｃポリペプチドのそれぞれは、Ｍ４２８Ｌ及び／またはＮ４３４Ｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み得、２つのＦｃポリペプチドのそれぞれは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａ置換を含む。

【0195】

Ｖ．抗体の調製
いくつかの実施形態では、抗体は、抗体応答を誘導するための抗原または抗原混合物で動物（複数可）（例えば、マウス、ウサギ、またはラット）を免疫化することにより調製される。いくつかの実施形態では、抗原または抗原混合物は、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント）と併せて投与される。初回免疫化後、抗体産生を向上させるために、１回以上の後続する抗原（複数可）の追加免疫注射が投与され得る。免疫化後、抗原特異的Ｂ細胞が、例えば、脾臓及び／またはリンパ組織から回収される。モノクローナル抗体を作製するために、Ｂ細胞を骨髄腫細胞と融合させ、続いて、抗原特異性についてスクリーニングする。抗体を調製する方法は、以下の実施例セクションにも記載されている。

【0196】

目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を細胞からクローニングすることができ、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子を、ハイブリドーマからクローニングして組換えモノクローナル抗体を産生させるために使用することができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリもまた、ハイブリドーマまたは形質細胞から作製される。あるいは、ファージまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択した抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を同定することができる。抗体はまた、二重特異性にすることができる。すなわち、２つの異なる抗原を認識することができる。抗体はまた、異種コンジュゲート、例えば、２つの共有結合的に連結した抗体または免疫毒素であり得る。

【0197】

抗体は、原核生物発現系及び真核生物発現系を含む、任意数の発現系を使用して産生され得る。いくつかの実施形態では、発現系は、哺乳動物細胞の発現、例えば、ハイブリドーマまたはＣＨＯ細胞発現系である。多数のそのような系が、商業的供給元から広く入手可能である。抗体がＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域の両方を含む実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、例えば、ジシストロン性発現ユニット中で、または異なるプロモーターの制御下で、単一のベクターを使用して発現され得る。他の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載のＶ_ＨまたはＶ_Ｌ領域は、任意選択で、Ｎ末端にメチオニンを含み得る。

【0198】

いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体を作製する方法は当該技術分野において公知である。例えば、マウスなどの１つの種の抗原結合領域（重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）が、ヒトなどの別の種のエフェクター領域（定常ドメイン）に融合されたキメラ抗体を作製することができる。別の例として、抗体のエフェクター領域が異なる免疫グロブリンクラスまたはサブクラスのエフェクター領域で置換された、「クラススイッチされた」キメラ抗体を作製することができる。

【0199】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。一般に、非ヒト抗体は、その免疫原性を低減させるためにヒト化される。ヒト化抗体は、通常、非ヒト（例えば、マウス可変領域配列に由来する）である１つ以上の可変領域（例えば、ＣＤＲ）またはその一部、及び場合により非ヒトであるいくつかのフレームワーク領域またはその一部を含み、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の定常領域をさらに含む。非ヒト抗体をヒト化させる方法は、当該技術分野において公知である。トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物などの他の生物を使用して、ヒト化抗体またはヒト抗体を発現させることができる。抗体をヒト化させる他の方法としては、例えば、可変ドメインリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）、ＣＤＲグラフティング、特異性決定残基（ＳＤＲ）グラフティング、ガイド選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、及びフレームワークシャッフリングが挙げられる。

【0200】

ヒト化の代替として、完全ヒト抗体を作製することができる。非限定的な例として、免疫化時に、内在性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生させることができる。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失により、内在性抗体産生が完全に阻害されることが説明されている。そのような生殖系列突然変異マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの導入により、抗原曝露の際にヒト抗体の産生がもたらされる。別の例として、ヒト抗体は、ヒトモノクローナル抗体を産生する細胞株を作製するための初代ヒトＢ細胞を使用するなどの、ハイブリドーマベースの方法により産生され得る。

【0201】

ヒト抗体はまた、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイ技術を使用して産生され得る。ファージディスプレイでは、可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子のレパートリーは、ファージディスプレイベクター中で増幅され、発現される。いくつかの実施形態では、抗体ライブラリは、ヒト源から増幅された天然のレパートリーである。いくつかの実施形態では、抗体ライブラリは、重鎖配列及び軽鎖配列をクローニングし、組換えて、様々な抗原特異性を有する抗体の大型プールを作製することにより作られた合成ライブラリである。ファージは通常、抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ断片）を提示し、これは、次いで目的の抗原への結合についてスクリーニングされる。

【0202】

いくつかの実施形態では、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、またはＶ_ＨＨなど）が作製される。抗体断片を産生するための様々な技法が開発されている。従来、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化により得られていた。しかしながら、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞を使用して直接産生され得る。例えば、抗体断片は、抗体ファージライブラリから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞から直接回収され、化学的にカップリングされてＦ（ａｂ’）_２断片を形成し得る。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体断片を産生するための他の技法は、当業者には明らかであろう。

【0203】

いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片は、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期の延長をもたらすために、別の分子、例えば、ポリエチレングリコールにコンジュゲート（ペグ化）されるか、または血清アルブミンにコンジュゲートされる。

【0204】

ＶＩ．核酸、ベクター及び宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体は、組換え法を使用して調製される。したがって、いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれか（例えば、本明細書に記載のＣＤＲ、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のうちのいずれか１つ以上）をコードする核酸配列を含む単離された核酸；そのような核酸を含むベクター；ならびに抗体をコードする核酸を複製するため及び／または抗体を発現するために使用される核酸が導入された宿主細胞、を提供する。

【0205】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載の抗体（例えば、「抗ＴＲＥＭ２抗体配列」の表題で前述のセクションに記載されているもの）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の表８に開示されている１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ配列、重鎖配列または軽鎖配列）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の表８に開示されている配列（例えば、ＣＤＲ配列、重鎖配列、または軽鎖配列）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、異種核酸、例えば、異種プロモーターに作動可能に連結されている。

【0206】

本開示の抗体、またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含有する好適なベクターには、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。選択されるクローニングベクターは使用される予定の宿主細胞によって異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一の標的を有し得、及び／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を保有し得る。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。

【0207】

発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可分の一部としてのいずれかで宿主細胞内で複製し得る。好適な発現ベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター（アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含む）、及び他の任意のベクターが挙げられるが、これらに限定されない。

【0208】

本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核生物である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞である。

【0209】

別の態様では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体の発現に適した条件下で本明細書に記載の宿主細胞（例えば、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、その後宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。

【0210】

ＶＩＩ．抗ＴＲＥＭ２抗体を使用する治療方法
別の態様では、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗ＴＲＥＭ２抗体）を使用する治療方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を（例えば、神経変性疾患を有する対象において）調節する方法が提供される。

【0211】

いくつかの実施形態では、神経変性疾患を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、１７番染色体に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）、大脳皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性英国型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、球状グリア性タウオパチー、認知症を伴うグアドループ型パーキンソニズム、グアドループ型ＰＳＰ、ハラーフォルデン・シュパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球橋黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、那須・ハコラ病である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、前頭側頭型認知症である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、パーキンソン病である。いくつかの実施形態では、本方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体）、または本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0212】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体（またはその抗原結合部分もしくは医薬組成物）は、ＴＲＥＭ２の突然変異を特徴とする神経変性疾患の処置に使用される。いくつかの実施形態では、ＴＲＥＭ２の突然変異を特徴とする神経変性疾患は、アルツハイマー病、例えば、ＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ突然変異を特徴とするアルツハイマー病である。

【0213】

いくつかの実施形態では、対象（例えば、神経変性疾患を有する対象）において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを調節すること、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）の動員またはリン酸化を調節すること、食作用（例えば、細胞デブリ、アミロイドベータ粒子などの食作用）を調節すること、細胞遊走（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアの遊走）を調節すること、及び／または（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアの）細胞分化を調節することを含む。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強する方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象においてｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象において１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体）、または本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0214】

いくつかの実施形態では、処置される対象は、ヒト、例えば成人ヒトまたは小児ヒトである。

【0215】

いくつかの実施形態では、神経変性疾患を有する対象においてプラーク蓄積を低減させる方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載の抗体または医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、アルツハイマー病を有する。いくつかの実施形態では、対象は、神経変性疾患の動物モデル（例えば、５ＸＦＡＤまたはＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデル）である。いくつかの実施形態では、プラーク蓄積は、例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャニングを使用してアミロイドプラークイメージング及び／またはタウイメージングによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、ベースライン値（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与前の対象におけるプラーク蓄積のレベル）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、プラークの蓄積を低減させる。

【0216】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、治療有効量または治療有効用量で対象に投与される。しかしながら、投与量は、選択した投与経路、組成物の配合、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、及び処方医の判断を含む、いくつかの要因によって変化し得る。投与量は、個々の患者による必要に応じて経時的に増加または減少され得る。特定の場合では、患者に最初に低用量を与え、次いで、患者が耐えられる有効な投与量まで増量する。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0217】

本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸内、眼もしくは耳への送達、または当該技術分野で公知の他の任意の方法であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与される。

【0218】

いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体（及び任意選択で別の治療剤）は、長時間にわたり、例えば、少なくとも３０日間、４０日間、５０日間、６０日間、７０日間、８０日間、９０日間、１００日間、１５０日間、２００日間、２５０日間、３００日間、または３５０日間以上対象に投与される。

【0219】

ＶＩＩＩ．医薬組成物及びキット
別の態様では、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患の処置に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、例えば、Ｓｙｋリン酸化の調節（例えば、増強または阻害）に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物及びキットは、ｓＴＲＥＭ２レベルの調節（例えば、減少）に使用するためのものである。

【0220】

医薬組成物
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗体またはその抗原結合断片である。

【0221】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、１つ以上の薬学的に許容可能な担体及び／または賦形剤をさらに含む。薬学的に許容可能な担体には、生理学的に適合性があり、活性剤の活性を妨害しないか、またはさもなければ阻害しない任意の溶媒、分散媒またはコーティング剤が含まれる。様々な薬学的に許容可能な賦形剤が、当該技術分野において周知である。

【0222】

いくつかの実施形態では、担体は、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、腹腔内投与、髄腔内投与、経皮投与、局所投与または皮下投与に適している。薬学的に許容可能な担体は、例えば、組成物を安定化させるように、または活性剤（複数可）の吸収を増加もしくは減少させるように作用する、１つ以上の生理学的に許容可能な化合物（複数可）を含み得る。生理学的に許容可能な化合物としては、例えば、グルコース、スクロースもしくはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスもしくは加水分解を低減させる組成物、または賦形剤または他の安定剤及び／または緩衝液を挙げることができる。その他の薬学的に許容可能な担体及びその製剤は、当該技術分野において周知である。

【0223】

本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に公知の様式で、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、乳化、カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスによって製造することができる。以下の方法及び賦形剤は、単に例示的なものであり、決して限定するものではない。

【0224】

経口投与のために、抗ＴＲＥＭ２抗体を、当該技術分野で周知の薬学的に許容可能な担体と組み合わせることにより製剤化することができる。そのような担体によって、処置される患者の経口摂取用に、化合物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、エマルション、親油性懸濁液及び親水性懸濁液、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能となる。経口使用のための医薬調製物は、化合物と固体賦形剤とを混合し、任意選択で得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を加工して、所望により適切な助剤を添加後に錠剤または糖衣錠芯を得ることにより、得ることができる。好適な賦形剤としては、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が挙げられる。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を添加することができる。

【0225】

抗ＴＲＥＭ２抗体を、例えば、ボーラス注射または持続注入によるなど、注射による非経口投与用に製剤化することができる。注射の場合、化合物（複数可）を水性または非水性溶媒、例えば、植物性または他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールに溶解、懸濁または乳化させることによって、ならびに必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存剤などの従来の添加剤とともに、調製物に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、水溶液、例えば、ハンクス液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性のある緩衝液中で製剤化することができる。注射用製剤は、保存剤を添加した単位剤形、例えばアンプルまたは複数回用量の容器で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションなどの形態をとることができ、また、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤化剤を含有することができる。

【0226】

通常、ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するための医薬組成物は、滅菌されている。滅菌は、当該技術分野において公知の方法、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、滅菌濾過、または照射によって実現され得る。

【0227】

本開示の医薬組成物の投与量及び望ましい薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて変動し得る。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。好適な投与量は、前述のセクションＶＩＩにも記載されている。

【0228】

キット
いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、前述のセクションＩＩＩに記載されている抗体またはその抗原結合断片である。

【0229】

いくつかの実施形態では、キットは、１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。例えば、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病の処置に使用するための１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、神経変性疾患の認知症状または行動症状の処置に使用するための薬剤（例えば、抗うつ薬、ドパミンアゴニスト、または抗精神病薬）である。いくつかの実施形態では、治療剤は、神経保護剤（例えば、カルビドパ／レボドパ、抗コリン剤、ドパミン作用薬、モノアミンオキシダーゼＢ（ＭＡＯ－Ｂ）阻害剤、カテコール－Ｏ－メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、グルタミン酸作動性薬、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、カンナビノイド、カスパーゼ阻害剤、メラトニン、抗炎症剤、ホルモン（例えば、エストロゲンもしくはプロゲステロン）、またはビタミン）である。

【0230】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ｓＴＲＥＭ２レベルを測定するための１つ以上の試薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ＴＲＥＭ２活性を測定するための（例えば、Ｓｙｋリン酸化を測定するための）１つ以上の試薬をさらに含む。

【0231】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法の実施のための指示書（すなわち、プロトコル）を含む説明用資料（例えば、前述のセクションＶＩに記載されている治療方法のためのキットを使用するための説明書）をさらに含む。説明用資料は通常、書面または印刷物で構成されるが、そのようなものに限定されない。そのような説明書を保管することができ、それらをエンドユーザーに伝達することができる任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、磁気テープ、磁気カートリッジ、磁気チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。そのような媒体には、そのような説明用資料を提供するインターネットサイトへのアドレスが含まれ得る。

【実施例】

【0232】

ＩＸ．実施例
本開示を、具体的な実施例によってより詳細に説明する。以下の実施例は、例証目的で提示されるにすぎず、決して本開示を限定するようには意図されていない。

【0233】

実施例１．抗ＴＲＥＭ２抗体の作製及び初期特徴付け
マウスＦｃが融合したヒトＴＲＥＭ２ ＥＣＤの組換え発現及び精製
ヒトＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｑ９ＮＺＣ２）の外部ドメイン（残基１９～１７２）を、Ｎ末端領域にマウスＩｇＧカッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）に由来する分泌シグナル、及びＣ末端領域にマウスＦｃタグ（ＴＲＥＭ２ ＥＣＤとＦｃの間にＧＧＧＧＳ（配列番号３４）を有する）を含めて、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。

【0234】

Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔを製造業者の指示に従って使用して、精製したプラスミドをＥｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。Ｎ－結合型グリカンの成熟を阻害し、グリコシル化の不均一性を低減させるために、高マンノシダーゼＩの阻害剤であるキフネンシン（Ｓｉｇｍａ）をトランスフェクション直後に１μｇ／ｍＬの濃度で培養物に添加した。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、６％ＣＯ_２の湿潤雰囲気中、３７℃、１２５ｒｐｍでインキュベートした。トランスフェクションの１６時間後に、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ１及び２を細胞に添加し、培地上清をトランスフェクションの９６時間後に回収した。清澄化した上清にＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）を補充して、－８０℃で保管した。

【0235】

ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃの単離のために、清澄化した培地上清をＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）にロードし、２００ｍＭのアルギニン及び１３７ｍＭのコハク酸塩緩衝液（ｐＨ５．０）で洗浄した。融合タンパク質を、ｐＨ３．０の１００ｍＭ ＱＢクエン酸塩緩衝液及び５０ｍＭ ＮａＣｌ中に溶出させた。溶出直後に、ｐＨ８．０の１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液をタンパク質溶液に添加してｐＨを中和した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、タンパク質凝集体を分離した。ＳＥＣ移動相の緩衝液を、タンパク質保存緩衝液でもあるｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１００ｍＭ ＮａＣｌ及び５０ｍＭアルギニンで保持した。全てのクロマトグラフィーステップを、ＡＫＴＡ ｐｕｒｅシステムまたはＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）により実施した。

【0236】

Ｈｉｓタグ付きＴＲＥＭ２ ＥＣＤの組換え発現及び精製
ＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＺＣ２）の外部ドメイン（残基１９～１７２）を、Ｎ末端領域にマウスＩｇカッパ鎖Ｖ－ＩＩＩ、アミノ酸１～２０（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ ＩＤ－Ｐ０１６６１）に由来する分泌シグナル、及びＣ末端領域に６Ｘ－Ｈｉｓタグ（配列番号３５）を含めて、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。配列決定によって挿入を確認し、マキシプレッププラスミド精製を実施した。

【0237】

Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔを製造業者の指示に従って使用して、精製したプラスミドをＥｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ ＨＴ Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）内で、６％ＣＯ_２の湿潤雰囲気中、３７℃、１２５ｒｐｍでインキュベートした。トランスフェクションの１６時間後に、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ１及び２を細胞に添加し、培地上清をトランスフェクションの９６時間後に回収した。

【0238】

回収した培地にｐＨ８．０の１Ｍイミダゾールを１０ｍＭの最終濃度まで補充し、孔径０．４ミクロンのＮａｌｇｅｎｅ（商標）Ｒａｐｉｄ－Ｆｌｏｗ（商標）使い捨てフィルターユニット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して濾過した。ＨｉｓＰｕｒ（商標）Ｎｉ－ＮＴＡ Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）をＭＱ水で洗浄し、ロード緩衝液（ｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び１０ｍＭイミダゾール）で平衡させた。グラビティフロー（ｇｒａｖｉｔｙ ｆｌｏｗ）法を使用してアフィニティー精製を実施した。回収した培地を樹脂にロードし、非特異的に結合したタンパク質を５０ｍＭ及び１００ｍＭイミダゾールを補充したロード緩衝液で洗浄した。結合したＨｉｓタグ付きＴＲＥＭ２外部ドメインをｐＨ８．０の２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び２００ｍＭイミダゾールで溶出させた。溶出したタンパク質をＡｍｉｃｏｎ １０ｋＤａコンセントレータを使用して濃縮し、濃縮したタンパク質をＡＫＴＡ Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したゲル濾過クロマトグラフィーでさらに精製した。このタンパク質を、１×ＰＢＳで平衡させたＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムにロードし、１×ＰＢＳを泳動用緩衝液として使用して溶出させ分画した。溶出画分を、変性及び天然条件下でのポリアクリルアミド（ＰＡＧＥ）ゲルでの電気泳動によって分析した。溶出画分を、分析用サイズ排除クロマトグラフィー及びインタクトタンパク質質量測定によりさらに特徴付けた。ＰＡＧＥ及び分析的特徴付けからの結果を使用して、高度にグリコシル化されたタンパク質画分をプールし、これらを分取して－８０℃で保管した。

【0239】

抗体の作製
げっ歯類（マウス及びラット）を、ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃ免疫原または完全長Ｔｒｅｍ２受容体を発現するＢＷＺ細胞を用いた標準プロトコルを使用して免疫化した。様々な時点で採取した血清を使用して、免疫化全体を通して力価を測定した。抗原特異的免疫応答の検出を、ｒｈＴＲＥＭ２－Ｆｃ免疫原及び完全長ＴＲＥＭ２を発現するＢＷＺ生細胞を用いたフローサイトメトリーを使用して実施した。候補抗体の選択基準には、フローサイトメトリーで検出したげっ歯類抗体の産生及びＴＲＥＭ２への結合の特異性を含めた。抗体分泌細胞を、脾臓、リンパ節、及び骨髄を含む動物の免疫組織から単離した。

【0240】

単一細胞懸濁液を分析し、分泌された抗体の結合特性を判定した。抗体分泌細胞をマイクロ流体デバイスにロードし、ナノリットル容量の反応チャンバー中に単離し、蛍光及び明視野画像ベースの顕微鏡アッセイを使用して分泌された抗体の検出を可能にした（例えば、米国特許第９，１８８，５９３号を参照されたい）。抗原をコートしたマイクロビーズに結合する抗体の検出、ビーズ上に固定化した抗体に結合する可溶性蛍光標識抗原の検出、及び細胞表面発現抗原に結合する抗体の検出を含む、結合アッセイを実施した。細胞表面発現抗原には、細胞表面に提示された組換え型と天然型の両方の抗原が含まれた。

【0241】

画像分析を使用して、所望の特性を有する抗体を産生する単一細胞の存在を示している陽性の蛍光シグナルを呈するチャンバーを同定し、チャンバーの内容物を回収して、３８４ウェルプレート中で溶解した（例えば、米国特許第１０，０８７，４０８号を参照されたい）。次いで、単一細胞溶解物をＲＴ－ＰＣＲに供し、重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を増幅した。次いで、得られたアンプリコンを配列決定し、選択した単一細胞から対形成した重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のｃＤＮＡ配列を決定した。得られた配列を手動で検査及び分析して、配列多様性及び体細胞超変異を判定した。スクリーニングデータ及び配列多様性に基づいて、発現のために配列を選択した。発現した抗体を試験して、抗原結合特異性を確認した。

【0242】

実施例２．抗ＴＲＥＭ２抗体の配列最適化及びヒト化
例示的な抗ＴＲＥＭ２抗体を配列最適化し、ヒト化してから、結合カイネティクス及び結合特異性について特徴付けした。

【0243】

配列最適化を、化学修飾を受けやすい残基（例えば、アスパラギン脱アミド化モチーフ（ＮＧ）、アスパラギン酸異性化モチーフ（ＤＳ））、ならびに酸化される可能性のある残基（トリプトファン（Ｗ）及びメチオニン（Ｍ））のＣＤＲ配列内を探索することにより、ならびにそのような配列の傾向を取り除くために保存的及び生殖系列残基によってアミノ酸置換することにより行った。次いで、ヒト化し配列最適化した抗ＴＲＥＭ２抗体のバリアントを、Ｂｉａｃｏｒｅ及びＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞への用量設定した細胞結合を使用して、結合カイネティクスについて分析した（代表的なプロトコルについては、実施例５を参照されたい）。

【0244】

実施例３．修飾されたＦｃポリペプチドを有する抗ＴＲＥＭ２抗体（「ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２」）の作製
ヒト化親和性成熟抗ＴＲＥＭ２抗体のＦｄ（Ｖ_Ｈ＋ＣＨ１）領域（配列番号２２及び２４）を、ヒトトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合するように操作したＦｃポリペプチドをコードする配列（ＣＨ３Ｃ．３５．２３．１．１、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．３、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．３ ｃｉｓＬＡＬＡ、またはＣＨ３Ｃ．３５．２４）またはカニクイザルトランスフェリン受容体に結合するＦｃポリペプチドをコードする配列（ＣＨ３Ｃ．３５．２１）を含む発現ベクターにクローニングした。Ｆｃポリペプチドをコードする配列は、ホモ二量体化を妨げ、「ホール」（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）変異を含むＦｃポリペプチドとのヘテロ二量体化を促進する「ノブ」（Ｔ３６６Ｗ）変異を含有した。また、Ｆｄ領域を、ホール変異を有するが、ＴｆＲ結合変異を欠くＦｃポリペプチドをコードする配列を含む対応する「ホール」ベクターにクローニングした。コーディング配列（Ｆｄ－ノブ－ＦｃとＦｄ－ホール－Ｆｃの両方のコンストラクト）はまた、エフェクター機能を低下させるヒンジ領域中の「ＬＡＬＡ」（Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ）変異（Ｗｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５３１３－５３１８（２０００）及びＦｃＲｎへの結合を増加させるＦｃＣＨ３領域中の「ＬＳ」（Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓ）変異（例えば、Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８（２）：１５７－１５９（２０１０）を参照されたい）も含有した。ベクターによって発現される、最終的にコードされた重鎖配列を表１に記載する。

【0245】

（表１）ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２配列

【0246】

対応する上記のノブ及びホールベクターを、対応する軽鎖ベクター（配列番号５４）とともに１：１：２のノブ：ホール：軽鎖の比でＥｘｐｉＣＨＯ細胞またはＥｘｐｉ２９３細胞にコトランスフェクトした。発現したタンパク質を、プロテインＡクロマトグラフィー、続いて、分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製して、精製された抗ＴＲＥＭ２タンパク質を単離した。

【0247】

抗ＴＲＥＭ２タンパク質のヒトトランスフェリン受容体への結合は、以下のように決定した。抗ヒトＦａｂをＣＭ５チップ上に固定し、抗ＴＲＥＭ２タンパク質を捕捉した。全長ヒトＴｆＲまたはヒトＴｆＲアピカルドメインを連続希釈（例えば、１～１，０００ｎＭの濃度）でチップ上に流し（１８０秒の会合時間）、次いで解離させた。１：１結合モデルを使用してフィッティングを実施した。

【0248】

実施例４．抗ＴＲＥＭ２抗体の特徴付け
以下のセクションは、作製した抗ＴＲＥＭ２抗体の結合特性及び機能特性を評価するために実施した様々なアッセイについて記載する。

【0249】

Ｂｉａｃｏｒｅカイネティクス測定による親和性測定
表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）８Ｋ機器）を使用して、ヒト及びカニクイザルＴＲＥＭ２ ＥＣＤについて抗ＴＲＥＭ２抗体の親和性を測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体を、Ｈｕｍａｎ Ｆａｂ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２８９５８３２５）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号２９１４９６０４）上で捕捉した。組換えヒトＴＲＥＭ２または組換えカニクイザルＴＲＥＭ２の３倍段階希釈液を、３０μＬ／分の流量で注入した。抗体の結合を３００秒間モニタリングした後、ＨＢＳ－ＥＰ＋泳動用緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＲ１００６６９）中で６００秒以上抗体の解離をモニタリングした。結合応答は、空のフローセルからＲＵ値を差し引くことによって補正した。カイネティクス分析には、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを使用した。Ｋ_Ｄ結合値をｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆから算出した。

【0250】

ＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞におけるＴＲＥＭ２結合の評価
抗ＴＲＥＭ２抗体の結合特性を、ヒトＴＲＥＭ２を発現するＨＥＫ２９３細胞で以下の通り評価した。

【0251】

ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞株を、野生型ヒトＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を発現するベクター、ならびにＤＡＰ１２のみを発現するベクターでそれぞれ細胞をトランスフェクトすることにより作製した。安定発現クローンを選択し、細胞表面ＴＲＥＭ２の発現をフローサイトメトリーで評価した。ＡＰＣコンジュゲートラット抗ヒト／マウス－ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号ＭＡＢ１７２９１）を使用して、表面ＴＲＥＭ２の発現を検出した。最も高い野生型ＴＲＥＭ２の発現レベルを示すクローンを選択し、「ＨＥＫ２９３－Ｈ６」と命名した。ＤＡＰ１２を安定して発現しているクローンをウエスタンブロットにより分析し、選択したクローンを「ＨＥＫ２９３－ＤＡＰ１２＃１」と命名した。

【0252】

ヒトＴＲＥＭ２を高発現するＨＥＫ２９３（ＨＥＫ２９３－Ｈ６）及びＧＦＰを高発現するＨＥＫ２９３（Ｂ５）を０．０５％トリプシンにより回収し、３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ）で２回洗浄した。混合細胞を、ヒトＴｒｕｓｔａｉｎ ＦｃＸ溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）を含むＦＡＣＳ緩衝液に、細胞株あたり１０^６／ｍＬの密度で再懸濁させた。混合した細胞株を９６ウェル丸底プレートにウェルあたり２００，０００細胞で播種し、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、用量設定の抗ＴＲＥＭ２抗体とともに氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。次いで、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号１０９－６０６－０８８、１：８００希釈）とともに、氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、フローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）により分析し、各試料につき３０，０００事象を得た。細胞あたりの平均蛍光強度をＦｌｏｗＪｏソフトウェアで算出し、用量反応結合曲線の作成に使用した。

【0253】

ＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達の活性化
ＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達の活性化を、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒの市販のＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを使用して、ヒトマクロファージ細胞中またはＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞中で測定した。

【0254】

７０％ＤＯＰＣ及び３０％ＰＯＰＳを含有する脂質小胞の使用を含む全ての実験では、脂質小胞を実験から２週間以内に次のように調製した：７ｍｇのＤＯＰＣ（１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）及び３ｍｇのＰＯＰＳ（１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン）をガラスバイアル内のクロロホルム中に合わせ、Ｎ_２ガス流下で１～２時間、または完全に乾燥するまで乾燥させた。脂質混合物を１ｍＬ ＨＢＳＳに（最終脂質濃度が約１０ｍｇ／ｍＬになるように）再懸濁させ、２～３分間ボルテックスした。続いて、脂質懸濁液を、１つの１００ｎｍ孔径の膜で構成されたＡｖａｎｔｉミニエクストルーダを使用して押し出し、１０ｍｇ／ｍＬで小さな単層小胞を形成した。

【0255】

１．細胞への抗体の投与
アッセイの前日、ヒトマクロファージ細胞またはＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞を、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェルプレートに、それぞれ１００，０００細胞／ウェルまたは４０，０００細胞／ウェルで播種した。抗体を１０段階の連続希釈で、段階間は３倍でＰＢＳに希釈した。アンタゴニストの用量反応曲線については、７０％のＤＯＰＣ及び３０％のＰＯＰＳを最終濃度１ｍｇ／ｍＬで含有する脂質小胞も抗体／ＰＢＳ混合物に含めた。Ｂｉｏｔｅｋ４０５／４０６プレート洗浄機を使用して細胞をＨＢＳＳで３回洗浄した後、Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用してウェルあたり５０μＬの抗体／ＰＢＳ（小胞を含むかまたは含まない）溶液を添加した。次いで、細胞プレートを３７℃のインキュベータに５分間移した。プレートをはじいてリポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して１μＭのＰＭＳＦを含有する４０μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＳＴ）を添加した。次いで、溶解物を－８０℃で凍結するか、またはＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイで直ちにアッセイした。

【0256】

ヒトマクロファージ細胞を以下の通りアッセイ用に調製した。ヒト単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、参照＃１５０６８）に従って新鮮血液から単離した。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４９２）に再懸濁させ、赤血球を溶解させた。２０ｍＬの洗浄緩衝液を添加して細胞溶解を停止させ、試料を遠心分離し、培地（ＲＰＭＩ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、１％ピルビン酸ナトリウム、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％非必須アミノ酸、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン）でもう一度洗浄した。次いでヒト単球を、２５０ｍＬフラスコで、５０ｎｇ／ｍＬのヒト組換えＭ－ＣＳＦ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号ＰＨＣ９５０１）の存在下の培地中でマクロファージ細胞に分化させた。新鮮ヒトＭ－ＣＳＦを３日目に添加し、続いてヒトマクロファージを５日目に回収してアッセイに使用した。

【0257】

２．ＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイ
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｐＳｙｋ ＡｌｐｈａＬｉｓａキットの標準プロトコルを使用して、細胞溶解物をｐＳｙｋについてアッセイした。簡潔に述べると、１０μＬのライセート／ウェルを不透明な白色の３８４ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に移した。次に、５μＬのＡｃｃｅｐｔｏｒ Ｍｉｘ（アクセプタービーズの使用溶液（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を含有する）をウェルごとに添加し、続いてプレートをホイルシールで密封し、室温で１時間インキュベートした。続いて、５μＬのＤｏｎｏｒ Ｍｉｘ（ドナービーズの使用溶液を含有する）を、減光条件下で各ウェルに添加した。プレートを再度密封し、室温で１時間インキュベートした。最後に、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーでＡｌｐｈａＬｉｓａの設定を使用してプレートを読み取った。

【0258】

ヒトマクロファージ細胞における生存アッセイ
ヒト単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１５０６８）に従って単離した。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１０４９２）に再懸濁させ、赤血球を溶解させた。２０ｍＬの洗浄緩衝液を添加して溶解を停止させた。細胞懸濁液を遠心分離し、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン）で１回洗浄した。細胞を１０^６細胞μＬ／ｍＬの密度で培地に再懸濁させ、以下に記載する生存アッセイに使用した。

【0259】

アッセイの前日、９６ウェルプレートに抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプ対照を、用量設定（４５μＬ／ウェル、合計１２段階）で予めコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。一晩インキュベートした後、予めコーティングしたプレートをＰＢＳで２回洗浄し、次いで低濃度のヒトＭ－ＣＳＦ（５ｎｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号ＰＨＣ９５０１）の存在下で、ヒト単球（１０^５細胞／ウェル）をプレートにロードした。３７℃で５日後、培地を吸引し、１００μＬ ＰＢＳ＋１００μＬ Ｃｅｌｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ培地（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７１）を各ウェルに添加した。１０分間のインキュベーション後、細胞培地をルミノメーターの使用に適合したマルチウェルプレートに移し、細胞生存率に関する発光を記録した。

【0260】

脂質貯蔵アッセイ
アッセイの前に、ヒト多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）をまず、市販のキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＳＴＥＭｄｉｆｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｋｉｔ）を使用して、造血前駆細胞（ＨＰＣ）に分化させた。ＨＰＣを初代ヒトアストロサイトを含有するプレートに移し、１４～２１日間共培養した。共培養物中の浮遊細胞が主に（＞８０％）成熟ミクログリアであると同定してから、ミクログリアをアッセイに使用した。

【0261】

細胞（ｉＰＳＣ由来ヒトミクログリア、３０，０００細胞／ウェル）を、完全血清培地入りのＰＤＬコーティング９６ウェルプレートに播種した。３７℃で２４時間後、培地を、オレイン酸アルブミン（最終濃度１０μＭまたは３３μＭ、Ｓｉｇｍａ Ｏ３００８）または精製した非標識ミエリン（最終濃度５０μｇ／ｍＬ、Ｓａｆａｉｙａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１９（８）：９９５－９９８）に記載されている方法を使用して野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウス脳（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から精製）を含有する完全血清培地に交換した。３７℃で２４時間脂質処置した後、培地を抗ＴＲＥＭ２抗体を含有する培地と交換した。一点の実験について、使用した抗ＴＲＥＭ２抗体の濃度は、１００ｎＭであった。用量反応曲線のために、１００ｎＭの抗ＴＲＥＭ２抗体を含有する培地を合計１０段階で３倍連続希釈した。ＲＳＶを、対照として使用した。細胞を３７℃でさらに４８時間インキュベートしてから、以下に記載されるように、Ｂｏｄｉｐｙ染色を使用して細胞をイメージングするか、またはリピドミックのために細胞を抽出した。

【0262】

Ｂｏｄｉｐｙイメージングでは、上清を除去し、１：２５００のＤＭＳＯ中の１ｍｇ／ｍＬのＢｏｄｉｐｙ４９３／５０３溶液（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｄ３９２２）及び１滴／ｍＬのＮｕｃｂｌｕｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｒ３７６０５）を含有する生細胞イメージング緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ａ１４２９１ＤＪ）中で、細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション期間後、染色溶液を除去し、細胞を生きたままイメージングするか、または４％パラホルムアルデヒドで固定した。Ｏｐｅｒａ Ｐｈｏｅｎｉｘハイコンテント共焦点イメージャーで、ＢｏｄｉｐｙのためのＡｌｅｘａ ４８８チャネル及びＤＡＰＩ照射設定を使用して、細胞をイメージングした。機器に付属のＨａｒｍｏｎｙソフトウェアのスポット検出アルゴリズムを使用して、脂質スポットを分析した。

【0263】

リピドミック分析のために、細胞を氷上に保持しながらＰＢＳで１回洗浄した。１：１００の内部標準物質を含有する７０μＬ容量の９：１メタノール：水溶液を、９６ウェルプレート中の細胞に添加した。プレートを振盪器で４℃、１２００ｒｐｍで２０分間撹拌した後、３００×ｇで５分間遠心分離した。上清の５０μＬ試料をＬＣＭＳバイアルに移し、機器で分析するまで－８０℃で保持した。

【0264】

エレクトロスプレー質量分析法（ＱＴＲＡＰ ６５００＋Ｓｃｉｅｘ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）と連結した液体クロマトグラフィー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ Ｘ２システム、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ，ＵＳＡ）によって、脂質レベルを分析した。各分析のために、試料５μＬを、５５℃で０．２５ｍＬ／分の流量を用いてＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、２．１×１００ｍｍカラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）に注入した。陽イオン化モードの場合、移動相Ａを１０ｍＭギ酸アンモニウム＋０．１％ギ酸を含む６０：４０のアセトニトリル／水（ｖ／ｖ）で構成し、移動相Ｂを１０ｍＭギ酸アンモニウム＋０．１％ギ酸を含む９０：１０のイソプロピルアルコール／アセトニトリル（ｖ／ｖ）で構成した。陰イオン化モードの場合、移動相Ａを１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む６０：４０のアセトニトリル／水（ｖ／ｖ）で構成し、移動相Ｂを１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む９０：１０のイソプロピルアルコール／アセトニトリル（ｖ／ｖ）で構成した。勾配を、０．０～８．０分で４５％Ｂから９９％Ｂへ、８．０～９．０分を９９％Ｂで、９．０～９．１分で４５％Ｂへ、９．１～１０．０分を４５％Ｂ、のようにプログラムした。エレクトロスプレーイオン化を、次の設定：カーテンガス：３０、コリジョンガス：中等度に設定、イオンスプレー電圧：５５００（陽性モード）または４５００（陰性モード）、温度：２５０℃（陽性モード）または６００℃（陰性モード）、イオン源ガス１：５０、イオン源ガス２：６０、を適用して陽イオンモードまたは陰イオンモードのいずれかで実施した。Ａｎａｌｙｓｔ １．６．３（Ｓｃｉｅｘ）を、多重反応モニタリングモード（ＭＲＭ）で使用して、以下のパラメータ：滞留期間（ｍｓｅｃ）及びコリジョンエネルギー（ＣＥ）、デクラスタリング電位（ＤＰ）：８０、エントランス電位（ＥＰ）：１０（陽性モード）または－１０（陰性モード）、及びコリジョンセルイグジット電位（ＣＸＰ）：１２．５（陽性モード）または－１２．５（陰性モード）を用い、データ取得を実施した。非内在性の内部標準物質の混合物を使用して、脂質を定量化した。脂質を、それらの保持時間及び市販の参照標準物質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡ）のＭＲＭ特性に基づいて同定した。

【0265】

ＴＲＥＭ２依存性ｍＴＯＲシグナル伝達の活性化
野生型ｉＰＳＣ由来ヒトミクログリアを培養し、抗ＴＲＥＭ２抗体（最終濃度１００ｎＭ）及びＤＭＳＯまたは市販のｍＴＯＲ阻害剤（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ、カタログ番号ＡＺＤ８０５５、最終濃度２０ｎＭ）のいずれかで９６時間処置した。その後、処置した細胞を溶解し、ｍＴＯＲ経路における主要なシグナル伝達標的のリン酸化を調査するために、細胞溶解物をウエスタンブロット用に調製した。ウエスタンブロットの一次抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した：（１）ホスホ－ｍＴＯＲ（Ｓｅｒ２４４８）、製品番号５５３６Ｔ；（２）ｍＴＯＲ（７Ｃ１０）、製品番号２９８３Ｔ；（３）ホスホ－ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、製品番号９２７１Ｔ；（３）ホスホ－ＧＳＫ－３ｂｅｔａ（Ｓｅｒ９）、製品番号５５５８Ｔ；（４）ホスホ－Ｓ６リボソームタンパク質（Ｓ２３５／２３６）、製品番号４８５８Ｔ；（５）ホスホ－４Ｅ－ＢＰ１（Ｔｈｒ３７／４６）、製品番号２８５５Ｔ；（６）ベータ－アクチン、製品番号５８１６９Ｓ。

【0266】

実施例５．結果
ヒト化し配列最適化した抗体ＣＬ００２０１８８のバリアントの結合特性の分析結果を表２及び図１Ａ～１Ｈに示す。ＣＬ００２０１８８ＣＤＲ－Ｈ２配列（配列番号５）及びＣＤＲ－Ｌ１配列（配列番号７）中のＮＧモチーフを修飾し、ヒトフレームワーク領域上にグラフトして分析した。表２は、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞における、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定したＫ_Ｄ値、及び用量設定した結合アッセイによって測定したＥＣ_５０値を示す。図１Ａ～１Ｈは、ヒト化し配列最適化したバリアントに関する、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞によって発現されたＴＲＥＭ２への結合の代表的な用量反応曲線を含む。バリアントは塗りつぶした黒丸（●）で表され、アイソタイプ対照は白丸（○）で表される。

【0267】

（表２）配列最適化しヒト化したＣＬ００２０１８８のバリアントの結合特性

【0268】

表２に示すように、ヒト化し配列最適化したＣＬ００２０１０８８のクローンは、Ｂｉａｃｏｒｅで測定した場合、親抗体（Ｋ_Ｄ＝９．５ｎＭ）と比較してｈＴＲＥＭ２に対して同様の親和性値を示した。これは、表１に示すＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞の細胞結合の結果と一致しており、対応する用量反応曲線を図１Ａ～１Ｈに示す。親抗体（ＥＣ_５０＝０．４４ｎＭ）と比較して、ヒト化し配列最適化したクローンは、ＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞中で発現したＴＲＥＭ２に対して同等かつナノモル以下の親和性を示した。総合すると、結果は、親抗体と、ヒト化し配列最適化したバリアントとの間の同等の結合カイネティクスを示す。

【0269】

実施例３に記載のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアントについての結果を以下の表３にまとめる。ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞への結合及びＦＡＣＳによる分析に基づく例示的な細胞結合曲線を図２に示す。

【0270】

（表３）ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２特性の概要

【0271】

ＨＥＫ－Ｈ６細胞におけるＴＲＥＭ２依存性ｐＳｙｋシグナル伝達、ヒトマクロファージ細胞の生存を促進する能力、及びｉＰＳＣ由来ヒトミクログリア細胞（以下、「ｉＰＳＣミクログリア」または「ｉＭＧ」と称する）における脂質蓄積を調節する能力に関して、抗体を評価した。図３は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアント（ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３）及び対応する抗ＴＲＥＭ２抗体の結果を示す。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、対応するＴＲＥＭ２抗体よりも有意に大きな程度で、ＴＲＥＭ２を発現するＨＥＫ２９３－Ｈ６細胞におけるｐＳｙｋシグナル伝達を活性化することができ、これは、分子にＡＴＶを付加することで、その効力を高めることができることを示している（図３）。さらに、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、マクロファージの生存を誘導し、ＥＣ_５０は４．１＋０．３ｎＭであった。最後に、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミエリン処置したｉＭＧにおける脂質蓄積を低減させる能力を示し（図４Ａ及び４Ｂ）、脂質貯蔵の阻害に対するＩＣ_５０は０．２０ｎＭ（９７．７＋０．３％最大阻害）であった。

【0272】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２が脂質蓄積を低減させる能力を調査するために、追加の研究を実施した。図５Ａ～５Ｆ及び図６Ａ～６Ｃは、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアント（ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３）が脂質蓄積を低減させる一方、脂肪酸酸化中間体を増大させることを示しており、これは、ミトコンドリア機能の増強におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の潜在的役割を示唆している。オレイン酸脂質刺激（３３μＭ）で処置した後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２とインキュベーションした細胞（ｉＭＧ）は、Ｂｏｄｉｐｙ染色によって示されるように、脂質蓄積を低減することが可能であった（図５Ａ及び５Ｂ）。ミエリンで２４時間処置した後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２と４８時間インキュベーションしたｉＭＧのＬＣＭＳ分析は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２がトリグリセリド（ＴＧ）種を減少させる一方で、同時にベータ酸化中間体（アシルカルニチン）及びＴＣＡ回路中間体（図５Ｃ～５Ｆ）を増加させることを示した。図５Ｃは、１．５倍を超える変化倍率（ｐ＜０．０５）を示した全てのＴＧ、アシルカルニチン、及びＴＣＡ回路中間体種を示すヒートマップを提供する。一方、図５Ｄ～５Ｆは、刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照とインキュベートしたビヒクル及びミエリン刺激ｉＭＧにおける代表的な種の変化を示す。図６Ａ～６Ｃは、ミエリン刺激後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２またはアイソタイプ対照とインキュベートしたｉＭＧにおける特定のＴＧ、アシルカルニチン、及びＴＣＡ回路中間体種の変化を示す。図６Ａ～６Ｃに示すように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、ＴＧ及びセラミドの全ての種を低減させる一方で、ある特定の短鎖アシルカルニチン種を増加させることから、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２がミトコンドリア機能を増強させ得ることを示している。

【0273】

ミクログリア細胞増殖は、ｍＴＯＲシグナルの活性化及び連携と関連する。したがって、ｍＴＯＲ経路シグナル伝達の下流におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の役割を探索した。ｍＴＯＲシグナル経路標的のリン酸化状態を、ｍＴＯＲ阻害剤の存在下及び非存在下で、代表的なＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアント（ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３）とインキュベートした野生型ｉＰＳＣミクログリアにおけるウエスタンブロットによって分析した。図７Ａは、ｍＴＯＲシグナル経路標的の代表的なウエスタンブロット画像を示す。ウエスタンブロットデータの定量化を図７Ｂ～７Ｅに示す（ベータ－アクチンローディング対照に対して正規化したリン酸化レベル）。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置した試料のぞれぞれのリン酸化レベルを、各独立した実験について、アイソタイプ抗体対照で処置した試料と比較した（ｎ＝６）。結果は、アイソタイプ対照と比べてＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置した試料において、ｍＴＯＲのセリン^２４８８、ＡＫＴのセリン^４７３、リボソームタンパク質Ｓ６（ＲＰＳ６）のセリン^{２３５／２３６}、及びＧＳＫ３ｂのセリン９のリン酸化レベルの上昇によって証明されるように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２がｍＴＯＲ経路シグナル伝達を活性化することを示している（図７Ｂ－７Ｅ；統計概要：「ｎｓ」（ｐ＞０．０５）；「^＊」（ｐ＜０．０１）；「^＊＊」（ｐ＜０．００１））。ＲＰＳ６は、ｍＴＯＲＣ１複合体の下流にあるシグナル標的であり、ＧＳＫ３ｂは、ｍＴＯＲＣ２複合体の下流にあるシグナル標的である。図５Ａ～図７Ｅで生成された全てのデータについて、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３のアイソタイプコントロール（「ＩＳＯ」）は、表５に示す配列を含有する。

【0274】

実施例６．リソソーム機能不全におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の役割
リソソーム機能におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の役割を調査した。リソソーム機能への影響を評価するために、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアントで処置したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞（「ｉＭＧ」）におけるプログラニュリン（ＰＧＲＮ）及びビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）のレベルを測定した。

【0275】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２のＰＧＲＮレベルへの影響を評価するために、９６ウェルプレートに１ウェルあたり３０，０００細胞の密度でｉＭＧを播種し、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３（１００ｎＭ）と７２時間インキュベートした後、細胞上清及び細胞溶解物を回収し、比色サンドイッチＥＬＩＳＡを使用してプログラニュリン（ＰＧＲＮ）レベルを分析した。

【0276】

ＰＧＲＮレベルの測定には、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ３８４ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレートを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した４μｇ／ｍＬの捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ 抗ＰＧＲＮ抗体、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット、カタログ番号ＤＹ２４２０）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。試料ウェルを３％ＢＳＡ含有ＰＢＳで９０分間ブロッキングした。細胞試料を３％ＢＳＡ含有ＰＢＳで１：１０に希釈し、プレート上の各試料ウェルに加え、続いて、室温で９０分間インキュベーションした。その後、１２５ｎｇ／ｍＬに希釈した検出抗体（Ｒ＆Ｄ ＰＧＲＮ抗体、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット、カタログ番号ＤＹ２４２０）を各試料ウェルに加え、プレートを室温で９０分間インキュベートした。最後にＨＲＰ結合ストレプトアビジン（Ｒ＆Ｄ ＳＡ－ＨＲＰ、ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット、カタログ番号ＤＹ２４２０）を１：２００に希釈し、各試料ウェルに加えた。プレートを室温で２０分間インキュベートした。試料ウェルをＰＢＳで洗浄した後、発色試薬（ＴＭＢ基質）を加え、５分間反応させた後、反応を４Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４で停止した。ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｎｅｏ２プレートリーダーを使用して吸光度を測定し、４パラメータロジスティック曲線にあてはめた標準曲線からの補間よってＰＧＲＮレベルを決定した。図８に示すように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２とのインキュベーションにより、アイソタイプ対照と比べて、上清及び細胞溶解物の両方でＰＧＲＮレベルが上昇した。

【0277】

ＢＭＰレベルへの影響を評価するために、ｉＭＧをミエリンまたはビヒクルで２４時間刺激し、続いて、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３（１００ｎＭ）と４８時間インキュベーションした。内部標準混合物を含有するメタノールの添加により細胞脂質を抽出し、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２０／１１２８８９号に記載のものと同様のＱ－ｔｒａｐ ６５００（ＳＣＩＥＸ）で液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）によりＢＭＰ存在量を測定した。ＢＭＰ種を、内部標準のＢＭＰ（１４：０＿１４：０）を使用して定量し、その保持時間及びＭＲＭ特性に基づいて同定した。定量化は、同位体のオーバーラップの補正後、ＭｕｌｔｉＱｕａｎｔ ３．０２（Ｓｃｉｅｘ）を使用して実施した。ＢＭＰ種は、測定された全ての脂質種含有量の中央値に対して正規化した。タンパク質濃度をビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）を使用して測定した。代表的なＢＭＰ結果を図９に示す。図９に示すように、ミエリンで刺激した後にＡＴＶ：ＴＲＥＭ２で処置したｉＭＧは、ＢＭＰ種のレベルが低減したことから、ミエリンによって誘導されたリソソーム刺激に対する潜在的な救済が示唆される。

【0278】

図８及び図９に示すように、ｉＭＧをＡＴＶ：ＴＲＥＭ２とインキュベーションすることで、ＰＧＲＮレベルが上昇し、ミエリン誘導ＢＭＰレベルが修正されたことから、リソソーム効果の調節におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の役割が示される。図８及び図９において、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３のアイソタイプ対照（ＩＳＯ）は、表５に示す配列を含有する。

【0279】

実施例７．ミトコンドリア呼吸におけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の役割
ミトコンドリア呼吸に対する影響を評価するために、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアントまたはアイソタイプ対照で処置されたｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞（「ｉＭＧ」）において、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦｅ９６アナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用し、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ Ｐａｌｍｉｔａｔｅ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｓｔｒｅｓｓ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ１０３６９３）の材料及びプロトコルを使用して、酸素消費を測定した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ実験の前に、ＸＦ９６マイクロプレート（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号１０２４１６）上で、細胞をＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３（１００ｎＭ）またはアイソタイプ対照と７２時間培養した。Ｓｅａｈｏｒｓｅ実験の１６時間前に、０．５ｍＭ グルコース（Ａｇｉｌｅｎｔ １０３５７７）、１ｍＭ グルタミン（Ａｇｉｌｅｎｔ １０３５７９）、０．５ｍＭ Ｌ－カルニチン（Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ Ｐａｌｍｉｔａｔｅ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｓｔｒｅｓｓ Ｋｉｔの一部）、及び１％ Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳを加えたＳｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ ＲＰＭＩ（Ａｇｉｌｅｎｔ １０３５７６）からなる基質制限培地に細胞を曝した。実験直前に、細胞に、パルミチン酸塩－ＢＳＡコンジュゲート（１６６μＭ）またはＢＳＡ対照のいずれかを投与した。（１）エトモキシル（４μＭ）（カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ１）阻害剤）またはビヒクル、（２）オリゴマイシン（１．５μＭ）（ＡＴＰシンターゼ複合体Ｖ阻害剤）、（３）カルボニルシアニド４－（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ、ミトコンドリア脱共役剤、１μＭ）、及び（４）ロテノン／アンチマイシン（各０．５ｍＭ、それぞれ複合体Ｉ及び複合体ＩＩＩ阻害剤）の逐次注入を使用して、細胞のミトコンドリア呼吸能力を評価した。Ｓｅａｈｏｒｓｅアナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって、実験中の酸素消費率を測定した。ミトコンドリア呼吸を評価するための実験条件の概要を表４に示す。

【0280】

（表４）実験条件

【0281】

酸素消費の代表的なカイネティクスグラフを図１０Ａに示し、細胞の最大呼吸能力を示す棒グラフを図１０Ｂに示す。図に示すように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、脂肪酸基質のパルミチン酸（ＰＡＬ）と同程度に最大呼吸を増加させる。この作用は、ＣＰＴ１阻害剤の存在下で減少した。結果は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２が最大ミトコンドリア呼吸を増大させ、この効果が脂肪酸酸化能力の増大によって付与されるようであることを示している。

【0282】

実施例８．ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２特性比較
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃１及びＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の特性をＷＯ２０１９／０２８２９２に記載されている、ＴＲＥＭ２に結合する参照抗体の特性と比較した。参照抗体＃１（「Ｒｅｆ．Ａｂ．＃１」）の重鎖及び軽鎖配列は、それぞれ配列番号７４及び７５で表されるものである。参照抗体＃２（「Ｒｅｆ．Ａｂ．＃２」）の重鎖及び軽鎖配列は、それぞれ配列番号７６及び７５で表されるものである。各抗ＴＲＥＭ２抗体のアイソタイプ対照の重鎖及び軽鎖配列を表５に示す。

【0283】

（表５）アイソタイプ対照配列

【0284】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、参照Ａｂよりも、ｉｎ ｖｉｔｒｏでより強力であり、炎症の誘導が少ない（サイトカイン放出が少ない）。
実施例４に記載されるヒトマクロファージ細胞生存アッセイを使用して、抗ＴＲＥＭ２抗体を評価した。図１１Ａは、抗ＴＲＥＭ２抗体による細胞生存率用量反応曲線を示し、「ＩＳＯ」は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３のアイソタイプ対照（表５）を指す。用量反応曲線から決定された対応する効力（ＥＣ５０）及び最大反応（Ｅｍａｘ）の値を図１１Ｂ及び図１１Ｃに示す。個々のマークは、ヒト細胞ドナー（ｎ＝３）から得た単一の値を表す。図１１Ａ～１１Ｃに示す結果は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３が、参照抗体＃１及び＃２よりもｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトマクロファージ生存の促進により強力であることを示している。

【0285】

別の実験において、ヒトマクロファージ細胞を１００ｎＭの表面固定化抗ＴＲＥＭ２抗体で５日間処置し、その後、各細胞セットの細胞培養培地を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘ ｘＭＡＰ技術及び市販のビーズベースマルチプレックスアッセイキット（Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ４２－Ｐｌｅｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ａｓｓａｙ（登録商標）、Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．）を使用して、サイトカイン放出について分析した。相対的なサイトカイン放出レベルのヒートマップを図１２に示す（プロッティングにＺスコアを使用）。図１２の結果は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３が、参照抗体＃１及び＃２よりもヒトマクロファージ細胞における炎症の誘導が少ないことを示している。

【0286】

まとめると、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３、参照抗体＃１、及び参照抗体＃２は、ヒトマクロファージの生存及び増殖を促進することが可能である（図１１Ａ）。しかしながら、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３は、細胞生存に対してより強い効力を示し、参照抗体＃１及び＃２と比べて、全体的なサイトカインシグネチャーを低減させた（図１１Ｂ、１１Ｃ、及び１２）。

【0287】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、刺激後のトリグリセリド種レベルを低減させることができる。
抗ＴＲＥＭ２抗体を、実施例４に記載したように、脂質貯蔵アッセイ（１０μＭ オレイン酸刺激を使用）によって評価した。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３、参照抗体＃１、及び参照抗体＃２の結果を図１３Ａ～１３Ｅに示す。

【0288】

図１３Ａ～１３Ｃは、ＬＣＭＳによって定量したｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞（「ｉＭＧ」）におけるトリグリセリド種について、ｐ＜０．０５のカットオフ及び１．５倍を超える変化倍率を有するボルケーノプロットを示す。データを各抗体のアイソタイプ対照に対して正規化した。図１３Ａ～１３Ｃに示すように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３は、オレイン酸投与後のトリグリセリド（ＴＧ）種を調節することが可能であるが、参照抗体では、オレイン酸刺激後のＴＧ種の変化レベルは有意に変化しなかった。図１３Ｄ及び１３Ｅは、データをＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３のアイソタイプ対照に対して正規化した、代表的なＴＧ種の測定の棒グラフを示す。

【0289】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＲＥＭ２レベルを調節することができる。
抗ＴＲＥＭ２抗体がｉＰＳＣ由来ミクログリア細胞（「ｉＭＧ」）のＴＲＥＭ２レベルにどのように影響するかを評価するために、ｉＭＧをＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３または参照抗体＃１と様々な濃度で７２時間インキュベートし、続いて、ｉＭＧ細胞溶解物及び細胞培養培地のＴＲＥＭ２レベルを測定した。ＴＲＥＭ２を以下の通り測定した。簡潔に述べると、ＭＳＤスモールスポットストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、ビオチン化ヤギ抗ｈＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＢＡＦ１８２８）で室温で１時間コーティングした。次いで、プレートをＭＳＤ Ｂｌｏｃｋ Ａ緩衝液（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）により室温で１時間ブロッキングした。試料及び標準をアッセイ緩衝液（ＴＢＳＴ中の２５％ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋ Ａ緩衝液）で調製／希釈し、ブロッキングした後、３０μＬの試料及び標準をプレートにローディングした。室温で１時間インキュベーションした後、プレートをＴＢＳＴで洗浄し、一次抗体（ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３）に室温で１時間結合させた。その後、希釈したスルホタグ付きヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、２０４９－０１）をプレートに加え、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄後、２×ＭＳＤ読み取り用緩衝液Ｔを使用してＭＳＤプレートを発色させ、続いてＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒプレートリーダーを使用して検出した。Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ソフトウェア（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ）を使用して標準曲線をフィッティングすることにより、ＭＳＤ値をＴＲＥＭ２の絶対定量に変換した。

【0290】

図１４Ａ及び１４Ｂは、抗ＴＲＥＭ２抗体とのインキュベーション後のｉＭＧ細胞溶解物及び細胞培養培地における抗体濃度に対するＴＲＥＭ２レベルのプロットを示す。各抗体のＴＲＥＭ２レベルをその固有のアイソタイプ対照に対して正規化した。図１４Ａ及び１４Ｂにおいて、「ＩＳＯ」は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３のアイソタイプ対照を表す。図１４Ａに示すように、全ＴＲＥＭ２のレベルは、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３及び参照抗体＃１で処置したｉＭＧの細胞溶解物において、抗体の量が増加するにつれて増加した。対照的に、可溶性ＴＲＥＭ２のレベルは、抗体で処置した細胞の細胞培養培地において、抗体の量が増加するにつれて減少した。

【0291】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、非ヒト霊長類において優れた薬物動態プロファイルを示す。
抗ＴＲＥＭ２抗体の薬物動態（ＰＫ）特性を非ヒト霊長類において検討した。簡潔に述べると、３６～５３ヶ月の範囲の月齢の若年成体／成体のオスのカニクイザルに３０ｍｇ／ｋｇの試験物質を単回投与で静脈内投与した（表６、１コホートにつきｎ＝５）。投与後２４、１６８、及び３３６時間にＣＳＦ試料を採取した。

【0292】

結果を表６及び図１５に示す。表６は、非ヒト霊長類の脳脊髄液（ＣＳＦ）における抗ＴＲＥＭ２抗体のＰＫ値を示す。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２バリアントのＰＫ値は、これらの抗体が、ＣＳＦにおいて、ＴＲＥＭ２ Ａｂ（トランスフェリン受容体の結合能力なし；配列番号８３及び５４でそれぞれ表される重鎖及び軽鎖配列）及び参照抗体＃１と比べてより高い曝露を有することを示している。

【0293】

（表６）非ヒト霊長類における抗ＴＲＥＭ２抗体のＣＳＦ薬物動態プロファイル

【0294】

図１５は、投与した非ヒト霊長類のＣＳＦ中における抗ＴＲＥＭ２抗体のＰＫプロファイルを示す。図１５及び表６に示すように、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、参照抗体＃１と比較して、ＣＳＦ ＰＫにおいて少なくとも２倍の増加を示す。

【0295】

実施例９．ヒト化ＴＲＥＭ２マウスにおけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の特性
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２のｉｎ ｖｉｖｏにおける影響を調査するために、ヒトＴＲＥＭ２を発現するＢＡＣトランスジェニックマウスを作製した。これらのマウスを米国特許第１０，１４３，１８７号に記載のヒトトランスフェリン受容体ノックインマウスと交配し、本明細書に記載のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２分子の特徴付けをできるようにした。

【0296】

ヒトＴＲＥＭ２ ＢＡＣトランスジェニックモデルの作製
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２のｉｎ ｖｉｖｏにおける影響を調査するために、修飾されたＢＡＣ ＤＮＡ ＣＴＤ－２２１０Ｄ２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログ番号９６０１２）を使用することによって、ヒトＴＲＥＭ２を発現するいくつかのトランスジェニックマウス系統を作製した。元のＢＡＣ ＤＮＡ ＣＴＤ－２２１０Ｄ２では、ヒトＴＲＥＭ２コード領域及びその調節エレメントが２つの他のＴＲＥＭ様遺伝子ＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２に挟まれている。これらのＴＲＥＭ様遺伝子からの干渉を回避するために、ＴＲＥＭＬ１からエクソン１及びＴＲＥＭＬ２からエクソン３を欠失させることによって、その発現を停止した。この操作したＢＡＣ ＣＴＤ－２２１０Ｄ２ ＤＮＡコンストラクトをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの受精マウス卵子の前核に注入した。２つの独立したファウンダー系統（ＴＢ３６及びＴＢ４５と呼ばれる）が得られ、生殖細胞系列への伝達があることが示された。

【0297】

これらの２つのトランスジェニック系統の特徴付け及び比較を行うために、ヘミ接合性トランスジェニック動物及び野生型非トランスジェニック同腹子対照を分析に使用した。ヒトＴＲＥＭ２のコピー数は、テールゲノムＤＮＡのｑＰＣＲ分析を使用して決定した。脳、肝臓、肺、及び脾臓におけるヒトＴＲＥＭ２ ｍＲＮＡ及びタンパク質レベルをｑＲＴ－ＰＣＲ及びａｎＭＳＤアッセイによって測定した。ヒトＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２ ｍＲＮＡを、ｑＲＴ－ＰＣＲによって、脳選別したミクログリアで分析した。骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）の表面ＴＲＥＭ２発現をＦＡＣＳによって定量した。ヒトＴＲＥＭ２機能をｉｎ ｖｉｔｒｏ ＢＭＤＭ生存アッセイによって評価した。

【0298】

ヒトＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２は、ＴＢ３６またはＴＢ４５のいずれにおいても検出されなかったことから、これらの遺伝子の欠失の成功を示している。ｑＰＣＲ分析は、ＴＢ３６及びＴＢ４５にはそれぞれ２コピー及び１コピーのヒトＴＲＥＭ２導入遺伝子があり、脳及び末梢組織において、ＴＢ４５と比べてＴＢ３６でのヒトＴＲＥＭ２発現のほうが高いことと対応している。ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存アッセイでは、ヒトＴＲＥＭ２アゴニスト抗体がＴＢ４５系統よりもＴＢ３６系統でより強い反応を誘発することが示された。

【0299】

このｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏでの特徴付けに基づいて、以下の育種及びｉｎ ｖｉｖｏ試験にはＴＢ３６を選択した。ヘミ接合性ＴＢ３６マウスをＣ５７ＢＬ／６Ｊにさらに３回戻し交配し、次いで、ｈＴｆＲ ＫＩマウス（米国特許第１０，１４３，１８７号に記載）と交配してヒトＴＲＥＭ２ ＢＡＣヘミ接合性；ｈＴｆＲ ＫＩヘミ接合性マウスマウスをｉｎ ｖｉｖｏ試験用に作製した。

【0300】

ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスにおけるＡＴＶ：ＴＲＥＭ２による薬物動態及び薬力学反応
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２がｉｎ ｖｉｖｏにおいてミクログリア反応を誘発することができるかどうかを決定するために、単回投与のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３または対応するアイソタイプ対照（ＡＴＶ：ＲＳＶ）（１００ｍｇ／ｋｇ）をＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスに０日目に静脈投与し、ｅｘ ｖｉｖｏ分析のために投与後１日目または４日目にマウスを屠殺した。屠殺時には、２．５％Ａｖｅｒｔｉｎの腹腔内注射により動物に麻酔をかけた。終末血を心臓穿刺からＥＤＴＡチューブに採取し、ゆっくり反転させ（１０回）、次いで、１５，３５０ｇで７分間、４℃で遠心分離した。血漿（上層）を１．５ｍｌエッペンドルフチューブに移し、測定まで－８０℃で保管した。採血後、ＣＳＦ試料を大槽から事前に引き出したガラスキャピラリーチューブによって採取し、次いで、０．５ｍＬのＰｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに移し、１２，７００ｒｐｍで７分間、４℃で遠心分離した。ＣＳＦ試料の上清をドライアイス上で急速凍結し、測定まで－８０℃で保管した。次いで、動物を冷ＰＢＳで灌流し、脳を解剖し、２つの半球を分離した。右半脳を４％パラホルムアルデヒドに４℃で２４時間浸漬固定し、次いで、０．１％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液に移し、３０％スクロース処理及び切片化の準備が整うまで保存した。左半脳を２つに切断し、ＰＫ測定及び他の標的の連携／サイトカイン分析のために、それぞれ２つのチューブに急速凍結した。

【0301】

投与後１日目及び４日目にヒトＩｇＧの血漿中及び脳内レベルを評価した。それを以下の表７に示す。

【0302】

（表７）ＴＢ３６／ｈＴｆＲ－ＫＩマウスにおける血漿中及び脳内薬物動態プロファイル

【0303】

ミクログリア増殖に対するＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の影響
新たに合成されたＤＮＡに組み込まれ得るチミジン類似体の５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ、８０ｍｇ／ｋｇ）の４用量を、０日目のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３またはＡＴＶ：ＲＳＶの処置後、０日目、１日目、２日目及び３日目にマウスに腹腔内投与した。

【0304】

増殖ミクログリア（ＥｄＵ＋Ｉｂａ１＋）を検出するために、投与後４日目の脳切片をＣｌｉｃｋ－ｉＴ ＥｄＵイメージングキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃ１０６３７）で処置した後、Ｉｂａ１免疫染色した。ＥｄＵ－Ｉｂａ１染色は、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２が脳内の新生ミクログリア数（ＥｄＵ＋Ｉｂａ１＋；図１６Ａ）及び総ミクログリア被覆領域（Ｉｂａ１＋領域；図１６Ｂ）をアイソタイプ対照と比較して劇的に増加させることを示しており、したがって、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２が対照と比較してミクログリア増殖を有意に増加させることを証明している。

【0305】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、マウスモデルにおけるミクログリア増殖について、非ＡＴＶ ＴＲＥＭ２抗体よりも劇的に強力である。
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の最低有効量を決定し、非ＡＴＶ ＴＲＥＭ２抗体と比較するために、単回投与のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３（１、３、１０、３０ｍｇ／ｋｇ）または対応するＴＲＥＭ２参照抗体（「ＴＲＥＭ２ Ａｂ」；３０ｍｇ／ｋｇ）、参照抗体＃２（３０ｍｇ／ｋｇ）もしくはアイソタイプ対照（ＡＴＶ：ＲＳＶ；３０ｍｇ／ｋｇ）を０日目にＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスに静脈内投与した。ミクログリア増殖を測定するために、抗体処置後０日目、１日目、２日目、３日目にマウスにＥｄＵをＩＰ投与した。分析のためにマウスを１日目及び４日目に屠殺した。ＥｄＵ－Ｉｂａ１二重染色は、４日目において、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２を投与した動物の新生ミクログリアの投与量依存的な増加を示し、１０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、ミクログリア増殖に対して最大効果を示す（図１７Ａ及び１７Ｂ）。さらに、ミクログリア増殖に対する１ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の効果は、３０倍高い投与にもかかわらず、抗ＴＲＥＭ２または参照抗体＃２のいずれよりもわずかに高い（統計的に有意ではない）。

【0306】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスにおいて、脳内サイトカインレベルを一過性に上昇させる。
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２のサイトカイン（例えば、ケモカイン）レベルに対する影響を決定するために、Ｍｏｕｓｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ａｒｒａｙ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ａｒｒａｙ ４４－Ｐｌｅｘ（ＭＤ４４）を使用して、ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの終末血漿及び脳溶解物（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ 溶解緩衝液＃９８０３により調製）中のサイトカインレベルを測定した。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３による処置は、血漿中で測定されるサイトカインレベルを変えなかったが、投与後２４時間に脳内で測定されるいくつかのサイトカインレベル（例えば、ＩＰ－１０及びＭＣＰ－５）は急激に増加し、これらのサイトカインレベルは投与後９６時間にベースラインレベルに戻ったことが明らかになった。３ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３が脳サイトカインレベルに対して最大効果を有した（図１８Ａ及び１８Ｂ）。

【0307】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２は、ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスにおいて、脳内ＣＳＦ１Ｒレベルを上昇させる。
ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２のグリアマーカーＣＳＦ１Ｒレベルに対する影響を決定するために、市販のＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ ａｂ２４０６８１）を使用して、ＴＢ３６／ｈＴｆＲ ＫＩマウスの脳溶解物（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ溶解緩衝液＃９８０３により調製）中のＣＳＦ１Ｒタンパク質レベルを測定した。ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の投与量を増量すると、処置後１日目及び処置後４日目でＣＳＦ１Ｒタンパク質レベルが増加することがわかった（図１９）。

【0308】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の血漿中ＰＫプロファイル
１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３では、血漿中ＰＫの比例的な増加が観察された。２４時間における血漿中濃度は、３０ｍｇ／ｋｇの用量で一致するＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３、参照抗体＃２、及びＴＲＥＭ２ Ａｂで有意差はなかった。参照抗体＃２は、同じ用量のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３及びＴＲＥＭ２ Ａｂと比較して低いクリアランスを有するようであった（図２０）。

【0309】

ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２の脳ＰＫプロファイル
２４時間で、１０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の脳内濃度は、３０ｍｇ／ｋｇのＴＲＥＭ２ Ａｂと同様であり、１～３ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の脳内濃度は、３０ｍｇ／ｋｇの参照抗体＃２と同様であった。３ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの用量のＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３では比例的な増加を超える増加が観察され、他の用量では比例的な増加が観察された。９６時間で、１０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の脳濃度は、３０ｍｇ／ｋｇのＴＲＥＭ２ Ａｂ及び参照抗体＃２と同様であった（図２１）。全体として、ＡＴＶ：ＴＲＥＭ２＃３の脳の取り込みは、ＴＲＥＭ２ Ａｂ及び参照抗体＃２よりも効果的である。

【0310】

（表８）略式の配列表

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図1G】

【図1H】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図13E】

【図14A】

【図14B】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【配列表】

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【国際調査報告】