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特表2023-512951ＰＤ－Ｌ１タンパク質が含まれた融合タンパク質およびその用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-03-30
(54)【発明の名称】ＰＤ－Ｌ１タンパク質が含まれた融合タンパク質およびその用途
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20230323BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230323BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230323BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230323BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230323BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230323BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 27/12 20060101ALI20230323BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20230323BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230323BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20230323BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230323BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20230323BHJP
A61P 5/14 20060101ALI20230323BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20230323BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230323BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20230323BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20230323BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20230323BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20230323BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230323BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20230323BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20230323BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230323BHJP
C07K 16/00 20060101ALN20230323BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20230323BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K19/00
A61P27/12
A61P27/02
A61P9/00
A61P9/10
A61P29/00 101
A61P21/00
A61P17/00
A61P7/06
A61P1/16
A61P37/06
A61P29/00
A61P5/14
A61P21/04
A61P1/04
A61P25/00
A61P19/02
A61P17/06
A61P17/14
A61P3/10
A61P37/02
A61K38/17
A61K39/395 Y
C07K16/00
C07K16/28
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022544089
(86)(22)【出願日】2021-01-06
(85)【翻訳文提出日】2022-07-20
(86)【国際出願番号】 KR2021000123
(87)【国際公開番号】W WO2021149945
(87)【国際公開日】2021-07-29
(31)【優先権主張番号】10-2020-0008991
(32)【優先日】2020-01-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】516351304
【氏名又は名称】ジェネクシン・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＸＩＮＥ， ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】１７２ Ｍａｇｏｋｊｕｎｇａｎｇ－ｒｏ， Ｇａｎｇｓｅｏ－ｇｕ， Ｓｅｏｕｌ ０７７８９ ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＫＯＲＥＡ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】スン， ヨン チョル
(72)【発明者】
【氏名】シン， ウン チュ
(72)【発明者】
【氏名】ファン， ユリ
(72)【発明者】
【氏名】リ， スン ヒ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA88X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA02
4C084BA22
4C084BA41
4C084CA53
4C084DC50
4C084NA14
4C084ZA011
4C084ZA012
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZA361
4C084ZA362
4C084ZA401
4C084ZA402
4C084ZA451
4C084ZA452
4C084ZA551
4C084ZA552
4C084ZA681
4C084ZA682
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZA891
4C084ZA892
4C084ZA921
4C084ZA922
4C084ZA941
4C084ZA942
4C084ZA961
4C084ZA962
4C084ZB071
4C084ZB072
4C084ZB081
4C084ZB082
4C084ZB111
4C084ZB112
4C084ZB151
4C084ZB152
4C084ZC211
4C084ZC212
4C084ZC351
4C084ZC352
4C085AA33
4C085BB36
4C085BB42
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質およびその用途に関し、前記融合タンパク質は、既存の融合タンパク質に比べて純度および生産収率が顕著に高く、ＰＤ－１に対する結合能が高く、活性化したＴ細胞の増殖を減少させ、活性化したＴ細胞によって生成されるサイトカインの生成を抑制し、Ｔ細胞またはマクロファージの組織への浸潤を抑制する効果があるので、免疫疾患の治療に有用に使用できる。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質。
【請求項2】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）またはその断片である、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項3】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号１～配列番号６からなるグループから選ばれるアミノ酸配列からなるものであるか、配列番号１～配列番号６からなるグループから選ばれるアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有するポリペプチドである、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項4】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端に融合した、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項5】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンのＦｃ領域とリンカーペプチドで連結された、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項6】
前記リンカーペプチドは、ＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０）、ＡＡＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１９）、ＧＧＧＳＧＧ（配列番号２０）、（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＳＳＧＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２１）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２３）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＣＲＲＲＲＲＲＥＡＥＡＣ（配列番号２４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ、ＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号２６）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＡ（配列番号２７）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２８）、（Ａｌａ－Ｐｒｏ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＶＳＱＴＳＫＬＴＲＡＥＴＶＦＰＤＶ（配列番号２９）、ＰＬＧＬＷＡ（配列番号３０）、ＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥ（配列番号３１）、ＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧ（配列番号３２）、ＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３３）、ＧＦＬＧ（配列番号３４）およびＧＳＳＧＧＳＧＳＳＧＧＳＧＧＧＤＥＡＤＧＳＲＧＳＱＫＡＧＶＤＥ（配列番号３５）からなるグループから選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列からなる、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項7】
前記リンカーペプチドは、ＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列からなる、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項8】
前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＤおよびＩｇＧ４のＦｃ領域のうちいずれか一つまたはこれらの組み合わせである、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項9】
前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、Ｎ末端からＣ末端方向にヒンジ領域、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、前記ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含み、
前記ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＤとヒトＩｇＧ４のＣＨ２ドメインのアミノ酸残基の部分を含み、
前記ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基の部分を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項10】
前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項11】
前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、配列番号１６のアミノ酸配列からなるＩｇＧ１ヒンジ領域を含む、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項12】
前記融合タンパク質は、二量体（ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を形成する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項13】
前記融合タンパク質は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項14】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項15】
請求項１４に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項16】
請求項１５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項17】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の融合タンパク質を有効成分として含む免疫疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項18】
前記組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項19】
前記免疫疾患は、自己免疫疾患および炎症性疾患からなる群から選ばれる、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項20】
前記自己免疫疾患は、１型糖尿病、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、抗リン脂質抗体症候群（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、乾癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、乾癬性関節炎（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、アディソン病（Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、グレーブス病（Ｇｒａｖｅｓ’ ｄｉｓｅａｓｅ）、ショグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、橋本甲状腺炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、重症筋無力症（Ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｐｈａｔｈｙ）、自己免疫性血管炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、自己免疫性肝炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、溶血性貧血（ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ）、原発性胆汁性肝硬変（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、皮膚硬化症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、白斑症（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ）およびセリアック病（ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）からなる群から選ばれる、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項21】
前記炎症性疾患は、関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、反応性関節炎（ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ライター症候群（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、結晶性関節症（ｃｒｙｓｔａｌ ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｉｅｓ）、ライム病（Ｌｙｍｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、リウマチ性多発性筋痛（ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、結節性多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、チャーグ・ストラウス症候群（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、サルコイドーシス（ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ）、アテローム硬化性血管疾患（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、アテローム性動脈硬化症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、虚血性心臓疾患（ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、末梢血管疾患（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｉｔｉｓ）、角膜疾患（ｃｏｒｎｅａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、虹彩炎（ｉｒｉｔｉｓ）、虹彩毛様体炎（ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）および白内障（ｃａｔａｒａｃｔｓ）からなる群から選ばれる、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質およびその用途に関する。
【背景技術】
【0002】
ヒトＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）は、ＰＤ－１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－１）に対するリガンドであり、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、樹状細胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ）、またはマクロファージのような造血細胞だけでなく、ケラチン細胞、膵島細胞、肝細胞などのような非造血細胞でも発現する１回膜貫通タンパク質である。一方、Ｔ細胞が活性化するためには、Ｔ細胞受容体（ｒｅｃｅｐｔｏｒ）と抗原の１次シグナル刺激以外に２次シグナル刺激（ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）が同時に必要である。ここで、二つのうち一つのシグナルでもなければ、Ｔ細胞は不活性化（ａｎｅｒｇｙ）状態となる。ＰＤ－１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－１）は、Ｔ細胞の２次シグナル活性を調節する２次シグナル刺激因子（ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋ ｐｏｉｎｔまたはｉｍｍｕｎｅ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）であり、活性化したＴ細胞（ＣＤ８および／またはＣＤ４）や樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ）のように細胞表面で発現するＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｌｉｇａｎｄ １）またはＢ７．１（ＣＤ８０）などと結合することによって、Ｔ細胞の増殖を抑制し、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）発現を減少させるなどＴ細胞の機能を抑制する作用ができる。
【0003】
ＰＤ－１：ＰＤ－Ｌ１間の結合は、制御性Ｔ細胞の活性を誘導することが知られているが（Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１０ Ｊｕｌ；２３６：２１９－４２）、このようなＰＤ－Ｌ１の免疫寛容誘導機能を用いてＩｇＧ１のＦｃが融合したＰＤ－Ｌ１タンパク質（ＰＤ－Ｌ１－Ｉｇ）をＣＩＡ（ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）マウスモデルに注入したとき、関節炎症状が緩和されることが観察されたことがある（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｉｎｔ．２０１１ Ａｐｒ；３１（４）：５１３－９）。ＰＤ－１は、活性化したＴ細胞で発現するので、ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、自己免疫疾患だけでなく、臓器移植における免疫寛容誘導にあたって活性免疫細胞を特異的に標的な治療剤として有用に使用できることが予測される。
【0004】
現在までＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１細胞シグナル体系に対する治療剤は、阻害剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）として免疫寛容を阻害（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｒｅａｋｉｎｇ）してＴ細胞活性を増加させる方向に開発されてきた。しかしながら、活性剤（ａｇｏｎｉｓｔ）を利用したＴ細胞免疫寛容誘導基盤の免疫治療剤は、現在まで開発されていないのが現状である。これは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）の場合、抗体融合技術を用いて容易に開発できるが、可溶性（ｓｏｌｕｂｌｅ）形態のタンパク質として開発されなければならないＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル活性剤（ａｇｏｎｉｓｔ）は、技術的に開発が容易でないためである。
【0005】
免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ）のＦｃ融合技術は、タンパク質治療剤の体内半減期を増加させるための技術の一つである。しかしながら、既存のＩｇ融合技術に用いられるＩｇＧ１の場合、体内で抗体依存性細胞毒性（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＡＤＣＣ）および補体依存性毒性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ＣＤＣ）を起こすので、自己免疫疾患治療剤または臓器移植における免疫寛容誘導剤としてのＩｇ融合タンパク質は、炎症反応を抑制する役割を行わず、かえって炎症を悪化させる問題点がある。
これによって、ＰＤ－Ｌ１の半減期を既存のＩｇ融合タンパク質治療剤と類似に維持しながらも、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘発しないようにすることによって、免疫阻害剤としてのＰＤ－Ｌ１の治療効能を高める技術開発が求められている。
これによって、ＰＤ－Ｌ１の半減期を既存のＩｇ融合タンパク質治療剤と類似に維持しながらも、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘発しないようにすることによって、免疫阻害剤としてのＰＤ－Ｌ１の治療効能を高める技術開発が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１０ Ｊｕｌ；２３６：２１９－４２
【非特許文献2】Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ Ｉｎｔ．２０１１ Ａｐｒ；３１（４）：５１３－９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明の目的は、ＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質を提供することにある。
【0008】
本発明の他の目的は、前記融合タンパク質をコードする核酸分子を提供することにある。
【0009】
本発明のさらに他の目的は、前記核酸分子を含む発現ベクターを提供することにある。
【0010】
本発明のさらに他の目的は、前記発現ベクターを含む宿主細胞を提供することにある。
【0011】
本発明のさらに他の目的は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質を有効成分として含む免疫疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供することにある。
【0012】
本発明のさらに他の目的は、免疫疾患の予防または治療効果を有する医薬製剤を生産するためのＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質の使用を提供することにある。
【0013】
本発明のさらに他の目的は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質と薬学的に許容可能な担体を個体に投与する段階を含む免疫疾患の予防または治療方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0014】
前記目的を達成するために、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質を提供する。
【0015】
また、本発明は、前記融合タンパク質をコードする核酸分子を提供する。
【0016】
また、本発明は、前記核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
【0017】
また、本発明は、前記発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【0018】
また、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質を有効成分として含む免疫疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【0019】
また、本発明は、免疫疾患の予防または治療効果を有する医薬製剤を生産するためのＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質の使用を提供する。
【0020】
また、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質と薬学的に許容可能な担体を個体に投与する段階を含む免疫疾患の予防または治療方法を提供する。
【発明の効果】
【0021】
本発明による融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域がＧＳ配列とＩｇＧ１ヒンジからなる配列で連結された融合タンパク質であって、ＧＳ配列とＩｇＧ１ヒンジからなる配列で連結されることによって、二量体を誘導しつつ柔軟性を維持できるように製造されたという特徴がある。また、本発明による融合タンパク質は、既存の融合タンパク質に比べて純度および生産収率が顕著に高く、ＰＤ－１に対する結合能が高く、活性化したＴ細胞の増殖を減少させ、活性化したＴ細胞によって生成されるサイトカインの生成を抑制し、Ｔ細胞またはマクロファージの組織への浸潤を抑制する効果があるので、免疫疾患の治療に有用に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図2A】図２ａは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を発現する細胞の時間別細胞濃度を分析した結果であり、図２ｂは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を発現する細胞の細胞培養液でＳＥ－ＨＰＬＣを通じて目的タンパク質の純度を分析した結果である。
【図2B】同上。
【図3A】図３ａは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を発現する細胞の時間別細胞濃度を分析した結果であり、図３ｂは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を発現する細胞の細胞培養液でＳＥ－ＨＰＬＣを通じて目的タンパク質の純度を分析した結果である。
【図3B】同上。
【図5B】同上。
【図10A】図１０ａは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質による活性化したヒトＣＤ４ Ｔ細胞増殖抑制能を比較した結果であり、図１０ｂは、活性化したヒトＣＤ４ Ｔ細胞のサイトカイン発現抑制能を比較した結果である。
【図10B】同上。
【図12A】図１２ａは、ＩＭＱ誘導乾癬マウスモデルにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与した後、マウスの耳の厚さを測定した結果であり、図１２ｂは、ＩＭＱ誘導乾癬マウスモデルでＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与した後、マウスの耳の厚さを測定した結果である。
【図12B】同上。
【図13A】図１３ａは、ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与した後、皮膚上皮組織の変化をＨ＆Ｅ染色を通じて確認した結果であり、図１３ｂは、皮膚上皮層の厚さを測定した結果である。
【図13B】同上。
【図14】図１４は、乾癬が誘発されていない対照群（ｒｔＴＡ）または乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルでＴ細胞およびマクロファージの浸潤程度を免疫蛍光分析法を通じて示した結果である（左パネル：ｒｔＴＡ；および右パネル：ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１）。
【図19A】図１９ａは、ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与した後、皮膚上皮組織の変化をＨ＆Ｅ染色を通じて確認した結果であり、図１９ｂは、皮膚上皮層の厚さを測定した結果である。
【図19B】同上。
【発明を実施するための形態】
【0023】
以下、本発明を詳細に説明する。
【0024】
本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域を含む融合タンパク質を提供する。
【0025】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）またはその断片であってもよい。ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、ＰＤ－Ｌ１のＩｇ Ｖ様ドメイン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ）およびＰＤ－Ｌ１のＩｇ Ｃ様ドメイン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｃ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ）を含むポリペプチドであってもよい。
【0026】
具体的に、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、細胞膜外に露出したタンパク質部位であり、配列番号１の１９番～２３８番アミノ酸からなるポリペプチドまたは配列番号１の１９番～２３９番アミノ酸からなるポリペプチドであってもよい。
【0027】
ここで、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、免疫グロブリン（Ｉｇ，ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）のアミノ酸配列と類似した保存配列（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）であるＩｇ Ｖ類似（Ｉｇ Ｖ、Ｉｇ Ｖ ｌｉｋｅ）配列を含んでいて、保存性の高い（ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ）Ｉｇ Ｖ類似配列は、配列番号１の６８番～１１４番のアミノ酸配列である。また、Ｉｇ Ｃ類似（Ｉｇ Ｃ、Ｉｇ Ｃ ｌｉｋｅ）配列を含んでいて、保存性の高い（ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ）配列部位は、配列番号１の１５３番～２１０番のアミノ酸配列である。また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインの断片は、ＰＤ－Ｌ１のＩｇ Ｖ類似配列を含むＩｇ Ｖ様ドメイン全体または一部を含んでもよい。
【0028】
また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインにおいてＩｇ Ｖ様ドメインは、ＰＤ－１と相互作用できる部位であり、配列番号１の１９番～２３９番のアミノ酸配列からなるポリペプチド（配列番号３）であってもよく、配列番号１の２１番～２３９番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、配列番号１の１９番～１３３番のアミノ酸配列からなるポリペプチド（配列番号４）であってもよく、配列番号１の２１番～１３３番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、配列番号１の２１番～１１４番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよく、配列番号１の１９番～１１４番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、配列番号１の２１番～１２０番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよく、配列番号１の１９番～１２０番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、配列番号１の１９番～１２７番のアミノ酸配列からなるポリペプチド（配列番号５）であって、配列番号１の２１番～１２７番のアミノ酸配列からなるポリペプチド（配列番号６）であってもよい。また、配列番号１の２１番～１３０番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよく、配列番号１の１９番～１３０番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、配列番号１の２１番～１３１番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよく、配列番号１の１９番～１３１番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。
【0029】
また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインの断片は、Ｉｇ Ｖ様ドメインまたはその断片を含む場合、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインのＩｇ Ｃ様ドメイン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｃ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ）をさらに含んでもよい。前記Ｉｇ Ｃ様ドメインは、配列番号１の１３３番～２２５番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであるか、または配列番号１の１３４番～２２５番のアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。
【0030】
また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインの断片がＩｇ Ｖ様ドメインまたはその断片を含む場合、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインのＩｇ Ｃ様ドメインを含むポリペプチドまたはその断片をさらに含んでもよい。前記Ｉｇ Ｃ様ドメインを含むポリペプチドは、Ｉｇ Ｖドメインを除くＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインを意味するものであり、配列番号１の１３４番～２３９番のアミノ酸を有するポリペプチド（配列番号７）または配列番号１の１３４番～２３８番のアミノ酸を有するポリペプチド（配列番号８）であってもよい。
【0031】
また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインまたはその断片は、ヒトまたはマウスに由来したものであってもよい。
【0032】
前記ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、配列番号１の１９～２３９番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド（配列番号３）であり、マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、配列番号２の１９～２３９番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドである。また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、配列番号１の１９～２３９番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド配列と約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上の相同性を有するものであってもよい。
【0033】
具体的に、ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、２９０個のアミノ酸残基を有していて、配列番号１（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ：Ｑ９ＮＺＱ７）のアミノ酸配列を含む。配列番号１のアミノ酸配列においてＮ末端の１番～１８番のアミノ酸残基は、シグナル配列であり、成熟したヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号１の１９番～２９０番のアミノ酸配列を含む。ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ）は、配列番号１の１９番～２３８番または配列番号１の１９番～２３９番のアミノ酸配列を含む。
【0034】
ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号１の１９番～１２７番のアミノ酸であるＩｇ Ｖ様ドメインと、配列番号１の１３４番～２２６番アミノ酸であるＩｇ Ｃ様ドメインを含む。
【0035】
マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質は、２９０個のアミノ酸を含むことが報告され、これは、配列番号２（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ：Ｑ９ＥＰ７３）のアミノ酸配列を含む。配列番号２の１番～１８番のアミノ酸残基は、シグナル配列であり、成熟したマウスＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号２の１９番～２９０番のアミノ酸配列を含む。マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、配列番号２の１９番～２３９番のアミノ酸配列を含む。マウスＰＤ－Ｌ１タンパク質は、配列番号２の１９番～１２７番のアミノ酸であるＩｇ Ｖ様タンパク質と配列番号２の１３３番～２２４番のアミノ酸であるＩｇ Ｃ様ドメインを含む。
【0036】
前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインは、Ｉｇ Ｖ様ドメインの全体またはその断片を含んでもよい。また、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインの断片は、追加的にＩｇ Ｃ様ドメインまたはＩｇ Ｃ様ドメインを含むポリペプチド（Ｉｇ Ｖ様ドメインを除くＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメイン）をさらに含んでもよい。
【0037】
ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインまたはその断片は、多様に改変されたタンパク質またはペプチドを含んでもよい。前記改変は、ＰＤ－Ｌ１の機能を改変させない以上、野生型ＰＤ－Ｌ１タンパク質に一つ以上のタンパク質を置換、欠失または追加する方法を通じて行われ得る。このような多様なタンパク質またはペプチドは、野生型タンパク質と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の相同性を有していてもよい。
【0038】
本発明の用語、「ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン」は、「ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインおよびその断片」を含む概念で使用できる。
【0039】
本発明の用語、「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、別途の説明がない限り、相互互換される概念で使用できる。
【0040】
本発明の用語、「ＰＤ－Ｌ１融合タンパク質」および「ＰＤ－Ｌ１－改変された免疫グロブリンのＦｃ領域融合タンパク質」は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインまたはその断片が、改変された免疫グロブリンＦｃ領域と結合した融合タンパク質を意味する。
【0041】
本発明において、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端に融合することができ、好ましくは、前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端に融合することができる。前記ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域とリンカーペプチドで連結されることができる。前記リンカーは、ＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０）、ＡＡＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１８）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１９）、ＧＧＧＳＧＧ（配列番号２０）、（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、（ＧＳＳＧＧＳ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２１）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２２）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号２３）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＣＲＲＲＲＲＲＥＡＥＡＣ（配列番号２４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ、ＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号２５）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号２６）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＡ（配列番号２７）、ＰＡＰＡＰ（配列番号２８）、（Ａｌａ－Ｐｒｏ）ｎ（ｎは、１～１０の整数）、ＶＳＱＴＳＫＬＴＲＡＥＴＶＦＰＤＶ（配列番号２９）、ＰＬＧＬＷＡ（配列番号３０）、ＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥ（配列番号３１）、ＡＧＮＲＶＲＲＳＶＧ（配列番号３２）、ＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３３）、ＧＦＬＧ（配列番号３４）、およびＧＳＳＧＧＳＧＳＳＧＧＳＧＧＧＤＥＡＤＧＳＲＧＳＱＫＡＧＶＤＥ（配列番号３５）などが含まれてもよい。好ましくは、ＰＤ－Ｌ１および免疫グロブリンＦｃ領域がＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列からなるリンカーペプチドで連結されることができる。前記リンカーペプチドを用いてＰＤ－Ｌ１タンパク質と免疫グロブリンＦｃ領域を連結する場合、前記融合タンパク質の活性、安定性および生産性を最適化することができる。
【0042】
また、前記融合タンパク質は、二量体形態で存在することができる。二量体を構成する融合タンパク質間の結合は、リンカー内に存在するシステインによって二硫化結合によってなるものであってもよい。二量体を構成する融合タンパク質は同じものである。すなわち、前記二量体は、ホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）であってもよい。ここで、前記融合タンパク質は、可溶性であってもよく、特に、精製水または生理食塩水に溶解することができる。
【0043】
前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＤおよびＩｇＧ４のＦｃ領域のうちいずれか一つまたはこれらの組み合わせであってもよい。前記Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体と結合および／または補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）結合が起こらないように改変されたものである。特に、前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、Ｎ末端からＣ末端方向にヒンジ領域、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、前記ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号１６）を含み、前記ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＤとヒトＩｇＧ４のＣＨ２ドメインのアミノ酸残基の部分を含み、前記ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４のＣＨ３ドメインのアミノ酸残基の部分を含むものであってもよい。
【0044】
本発明の用語、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ」とは、免疫グロブリンの重鎖不変領域２（ＣＨ２）および重鎖不変領域３（ＣＨ３）を含み、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変領域および軽鎖不変領域１（ＣＬ１）を含まないタンパク質をいう。それは、重鎖不変領域のヒンジ領域をさらに含んでもよい。ハイブリッドＦｃまたはハイブリッドＦｃ断片は、本発明において「ｈＦｃ」または「ｈｙＦｃ」とも称される。
【0045】
また、本発明のＦｃ断片は、天然型糖鎖、天然型に比べて増加した糖鎖、天然型に比べて減少した糖鎖、または糖鎖が除去された形態であってもよい。化学的方法、酵素的方法および微生物を用いた遺伝工学的エンジニアリング方法などのように通常の方法で免疫グロブリンＦｃ糖鎖を改変させることができる。Ｆｃ断片から糖鎖の除去は、１次補体構成要素Ｃ１のＣ１ｑへの結合親和力を急激に減少させ、ＡＤＣＣまたはＣＤＣの減少または欠失をもたらし、そのため、生体内の不要な免疫反応を誘導しない。このような点から、糖鎖が除去されたり（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）非糖鎖化した（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）形態での免疫グロブリンＦｃ断片は、薬物の担体として本発明の目的にさらに適合している。ここで使用される用語「糖鎖の除去（ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」は、Ｆｃ断片から酵素的に糖が除去されることを意味する。また、用語「非糖鎖化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」は、Ｆｃ断片が原核生物、好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉによって糖鎖化しない（ｕｎｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）形態で生成されることを意味する。
【0046】
本発明の一実施例において、前記改変された免疫グロブリンのＦｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列（以下、「ｈｙＦｃ」という）からなるものであってもよい。
【0047】
本発明の一実施例において、前記融合タンパク質は、下記構造式Ｉで表され得る。
【0048】
Ｎ’－Ｘ－Ｌ－Ｙ－Ｃ’（構造式Ｉ）
【0049】
上記式中、
Ｎ’は、融合タンパク質のＮ末端であり、Ｃ’は、融合タンパク質のＣ末端であり；
前記Ｘは、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインまたはその断片であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ｙは、免疫グロブリンＦｃ領域である。
Ｎ’は、融合タンパク質のＮ末端であり、Ｃ’は、融合タンパク質のＣ末端であり；
前記Ｘは、ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメインまたはその断片であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ｙは、免疫グロブリンＦｃ領域である。
【0050】
好ましくは、前記融合タンパク質は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列からなるものであってもよい。また、本発明の融合タンパク質は、配列番号１２のアミノ酸配列と約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上の相同性を有するものであってもよい。
【0051】
また、本発明は、前記融合タンパク質をコードする核酸分子を提供する。
【0052】
好ましくは、前記核酸分子は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする核酸分子であってもよい。また、前記核酸分子は、シグナル配列（またはシグナルペプチド）またはリーダー配列をさらに含んでもよい。
【0053】
本発明の用語、「シグナル配列（またはシグナルペプチド）」は、分泌経路に分類された新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在する短いペプチドをいう。本発明において有用なシグナル配列は、抗体軽鎖シグナル配列、例えば、抗体１４１８（Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ １９８９ １２５：１９１－２０２）、抗体重鎖シグナル配列、例えば、ＭＯＰＣ１４１抗体重鎖シグナル配列（Ｓａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ １９８０ ２８６：６７６－６８３）、および当業界において知られた他のシグナル配列（例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９８４ １２：５１４５－５１６４を参照）を含む。
【0054】
前記シグナルペプチドは、当業界においてその特徴がよく知られていて、通常１６～３０個のアミノ酸残基を含むことが知られていて、それよりさらに多いまたはさらに少ないアミノ酸残基を含んでもよい。通常のシグナルペプチドは、基本Ｎ末端領域、中心の疎水性領域、およびより極性の（ｐｏｌａｒ）Ｃ末端領域の三つの領域で構成される。
【0055】
中心の疎水性領域は、未成熟ポリペプチドが移動する間、膜脂質二重層を介してシグナル配列を固定させる４～１２個の疎水性残基を含む。開始以後に、シグナル配列は、一般的にシグナルペプチダーゼ（ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ）と知られた細胞酵素によってＥＲのルーメン（ｌｕｍｅｎ）内で切断される。ここで、前記シグナル配列は、ｔＰａ（ｔｉｓｓｕｅ Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、ＨＳＶ ｇＤｓ、または成長ホルモンの分泌シグナル配列であってもよい。好ましくは、哺乳動物などを含む高等真核細胞で使用される分泌シグナル配列を使用でき、より好ましくは、ｔＰａ配列または配列番号１の１～１８番目のアミノ酸配列を使用できる。また、本発明のシグナル配列は、宿主細胞において発現頻度の高いコドンに置換して使用できる。
【0056】
また、本発明は、前記核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
【0057】
本発明の用語、「ベクター」は、宿主細胞に導入されて宿主細胞ゲノム内に組換えおよび挿入されることができるか、またはエピソーム（ｅｐｉｓｏｍｅ）として自発的に複製できるヌクレオチド配列を含む核酸手段と理解される。前記ベクターは、線状（ｌｉｎｅａｒ）核酸、プラスミド、ファージミド（ｐｈａｇｅｍｉｄｓ）、コスミド（ｃｏｓｍｉｄｓ）、ＲＮＡベクター、ウイルスベクターおよびその類似体を含む。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）およびアデノ随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）を含むが、これらに限定されない。
【0058】
本発明において、有用な発現ベクターは、ＲｃＣＭＶ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ）またはその変異体であってもよい。有用な発現ベクターは、哺乳類細胞において目的遺伝子の連続的な転写を促進するためのヒトＣＭＶ（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ）プロモーター、および転写後ＲＮＡの安定状態レベルを高めるための牛成長因子（ｂｏｖｉｎｅ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）ポリアデニル化シグナル配列を含んでもよい。本発明の一具体例において、発現ベクターは、ＲｃＣＭＶの改変ベクターであるｐＡＤ１５である。
【0059】
本発明の用語、「宿主細胞」は、組換え発現ベクターが導入されうる原核および真核細胞を示す。
【0060】
本発明において、適切な宿主細胞は、本発明のＤＮＡ配列で形質転換されたり形質感染させることができ、目的タンパク質の発現および／または分泌に用いられ得る。本発明に使用できる現在好ましい宿主細胞は、不死のハイブリドーマ細胞（ｉｍｍｏｒｔａｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌｓ）、ＮＳ／０骨髄腫細胞（ＮＳ／０ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ）、２９３細胞、中国ハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ ｃｅｌｌ）、ＨｅＬａ細胞、ＣａｐＴ細胞（ヒト羊水由来細胞）およびＣＯＳ細胞を含む。
【0061】
本発明の用語、「形質転換」および「形質感染」は、当業界において公知となった様々な技術によって細胞内に核酸（例えば、ベクター）を導入することを意味する。
【0062】
また、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質を有効成分として含む免疫疾患の予防または治療用組成物を提供する。
【0063】
前記免疫疾患は、自己免疫疾患、炎症性疾患、および細胞、組織、または器官の移植拒否（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）疾患からなる群から選択される疾患であってもよい。
【0064】
前記自己免疫疾患は、関節炎［急性関節炎、慢性関節リウマチ、通風性（ｇｏｕｔｙ）関節炎、急性通風性関節炎、慢性炎症性関節炎、退行性関節炎、感染性関節炎、ライム（Ｌｙｍｅ）関節炎、増殖性関節炎、乾癬性関節炎、脊椎関節炎、および若年性関節リウマチ（ｊｕｖｅｎｉｌｅ－ｏｎｓｅｔ ｒｈｅｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、骨関節炎、進行性慢性関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｃｈｒｏｎｉｃａ ｐｒｏｇｒｅｄｉｅｎｔｅ）、変形性（ｄｅｆｏｒｍａｎｓ）関節炎、原発性慢性多発性関節炎（ｐｏｌｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｃｈｒｏｎｉｃａ ｐｒｉｍａｒｉａ）、反応性関節炎（ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、および強直性脊髄炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）のような関節リウマチ］、炎症性過剰増殖皮膚疾患、プラーク乾癬（ｐｌａｑｕｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、滴状乾癬（ｇｕｔａｔｔｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、膿疱性乾癬（ｐｕｓｔｕｌａｒ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、および爪の乾癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎａｉｌｓ）のような乾癬、接触皮膚炎、慢性接触皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、疱疹状皮膚炎（ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、およびアトピー性皮膚炎（ａｔｏｐｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）を含む皮膚炎、Ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群、慢性アレルギー性蕁麻疹および、慢性自己免疫性蕁麻疹を含む、慢性特発性蕁麻疹（ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｕｒｔｉｃａｒｉａ）のような蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、多発性筋炎／皮膚筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ／ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、若年性皮膚筋炎（ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、中毒性表皮壊死症（ｔｏｘｉｃ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｎｅｃｒｏｌｙｓｉｓ）、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）（全身性強皮症を含む）、全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、脊髄－眼ＭＳ（ｓｐｉｎｏ－ｏｐｔｉｃａｌ ＭＳ）、原発性進行性ＭＳ（ｐｒｉｍａｒｙ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ＭＳ；ＰＰＭＳ）、および再発寛解型ＭＳ（ｒｅｌａｐｓｉｎｇ ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ ＭＳ；ＲＲＭＳ）のような多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、進行性全身性硬化症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、アテローム性動脈硬化症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、播種性硬化症（ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔａ）、および失調性硬化症（ａｔａｘｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）を含む硬化症（ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ；ＩＢＤ）［例えば、クローン病、自己免疫介在性胃腸疾患、潰瘍性大腸炎（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｉｔｉｓ）、潰瘍性大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ ｕｌｃｅｒｏｓａ）、顕微鏡的大腸炎（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｏｌｉｔｉｓ）、コラーゲン蓄積大腸炎（ｃｏｌｌａｇｅｎｏｕｓ ｃｏｌｉｔｉｓ）、ポリープ性大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ ｐｏｌｙｐｏｓａ）、新生児壊死性大腸炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ）、および貫壁性大腸炎（ｔｒａｎｓｍｕｒａｌ ｃｏｌｉｔｉｓ）のような大腸炎、および自己免疫性炎症性腸疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）］、壊疽性膿皮症（ｐｙｏｄｅｒｍａ ｇａｎｇｒｅｎｏｓｕｍ）、結節性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｎｏｄｏｓｕｍ）、原発性硬化性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ，ｅｐｉｓｃｌｅｒｉｔｉｓ）を成人または急性呼吸窮迫症候群（ａｄｕｌｔ ｏｒ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＡＲＤＳ）を含む呼吸窮迫症候群（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、髄膜炎（ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）、ブドウ膜（ｕｖｅａ）の全体または一部の炎症、虹彩炎（ｉｒｉｔｉｓ）、脈絡膜炎（ｃｈｏｒｏｉｄｉｔｉｓ）、自己免疫性血液異常（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、リウマチ様脊椎炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、突発性難聴、アナフィラキシー（ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ）およびアレルギー性およびアトピー性鼻炎のようなＩｇＥ介在性疾患、ラスムッセン脳炎（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ’ｓ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）および辺縁系および／または脳幹脳炎（ｌｉｍｂｉｃ ａｎｄ／ｏｒ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）のような脳炎（ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）、前部ブドウ膜炎（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｕｖｅｉｔｉｓ）、急性前部ブドウ膜炎、肉芽腫性ブドウ膜炎（ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ ｕｖｅｉｔｉｓ）、非肉芽腫性ブドウ膜炎（ｎｏｎｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ ｕｖｅｉｔｉｓ）、水晶体抗原性ブドウ膜炎（ｐｈａｃｏａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｕｖｅｉｔｉｓ）、後部ブドウ膜炎（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｅｉｔｉｓ）、または自己免疫性ブドウ膜炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｕｖｅｉｔｉｓ）のようなブドウ膜炎、原発性ＧＮ（ｐｒｉｍａｒｙ ＧＮ）のような慢性または急性糸球体腎炎のようなネフローゼ症候群（ｎｅｐｈｒｏｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）併発するか併発しない糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ；ＧＮ）、免疫介在性ＧＮ、膜性腎症（ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ＧＮ，ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、特発性膜性腎症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）または特発性膜性腎症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ＧＮ）、Ｉ型およびＩＩ型を含む膜性（ｍｅｍｂｒａｎｏ－）または膜性増殖性ＧＮ（ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ＧＮ；ＭＰＧＮ）、および急速進行性ＧＮ、アレルギー疾患、アレルギー反応、アレルギー性またはアトピー性湿疹を含む湿疹（ｅｃｚｅｍａ）、 小気管支喘息（ａｓｔｈｍａ ｂｒｏｎｃｈｉａｌｅ）、気管支喘息（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ）および自己免疫性喘息のような喘息、Ｔ細胞浸潤および慢性炎症反応に関連した疾患、慢性炎症性肺疾患（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性心筋炎（ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、白血球接着不全症（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ；ＳＬＥ）または皮膚ＳＬＥのような全身性エリテマトーデス、亜急性皮膚エリテマトーデス（ｓｕｂａｃｕｔｅ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、新生児ループス症候群（ｎｅｏｎａｔａｌ ｌｕｐｕｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＮＬＥ）、播種性紅斑性狼瘡（ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｕｓ）、ループス［腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、脳炎（ｃｅｒｅｂｒｉｔｉｓ）、小児（ｐｅｄｉａｔｒｉｃ）、腎外性（ｎｏｎ－ｒｅｎａｌ）、腎外（ｅｘｔｒａ－ｒｅｎａｌ）、円盤状（ｄｉｓｃｏｉｄ）、脱毛（ａｌｏｐｅｃｉａ）を含む］、小児インスリン依存性糖尿病（ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ；ＩＤＤＭ）を含む若年型（Ｉ型）糖尿病（ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｏｎｓｅｔ（Ｔｙｐｅ Ｉ）ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、成人期発症糖尿病（ＩＩ型）、自己免疫性糖尿病、特発性糖尿病尿崩症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｓｉｐｉｄｕｓ）、Ｔリンパ球およびサイトカインによって媒介される急性および遅延型過敏症に関連した免疫反応、結核、サルコイドーシス（ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ）、リンパ腫様肉芽腫症（ｌｙｍｐｈｏｍａｔｏｉｄ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）を含む肉芽腫症（ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、ウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、無顆粒球症（ａｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｏｓｉｓ）、血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）［巨細胞性血管炎（リウマチ性多発筋痛（ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）および巨細胞（Ｔａｋａｙａｓｕ’ｓ）動脈炎）を含む］、川崎病、結節性多発性動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓａ）を含む中血管炎、顕微鏡的多発性動脈炎（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、ＣＮＳ関節炎、壊死性、皮膚性、または過敏性血管炎、全身性壊死性血管炎（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、チャーグ・ストラウス血管炎（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）または症候群（ＣＳＳ）のようなＡＮＣＡ関連血管炎）を含む血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｅｒｉｔｉｓ）、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、自己免疫性再生不良性貧血、クームス（ｃｏｏｍｂｓ）良性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血（Ｄｉａｍｏｎｄ Ｂｌａｃｋｆａｎ ａｎｅｍｉａ）、溶血性貧血（ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）または自己免疫性溶血性貧血（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ；ＡＩＨＡ）を含む免疫性溶血性貧血、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ）（ａｎｅｍｉａ ｐｅｒｎｉｃｉｏｓａ）、アジソン病（Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、赤芽球癆貧血（ｐｕｒｅ ｒｅｄ ｃｅｌｌ ａｎｅｍｉａ ａｐｌａｓｉａ；ＰＲＣＡ）、因子ＶＨＩ欠乏症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ）、汎血球減少症（ｐａｎｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、白血球減少症（ｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ）、白血球の血管外遊走（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｄｉａｐｅｄｅｓｉｓ）と関連した疾患、ＣＮＳ炎症性疾患、敗血症（ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、外傷（ｔｒａｕｍａ）、出血（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ）に続発するような多臓器損傷、抗原抗体複合体介在性疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病（Ｂｅｃｈｅｔ’ｓまたはＢｅｈｃｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、キャッスルマン症候群（Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、グッドパスチュア症候群（Ｇｏｏｄｐａｓｔｕｒｅ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍ）、レイノー症候群（Ｒａｙｎａｕｄ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ショグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（Ｓｔｅｖｅｎｓ－Ｊｏｈｎｓｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、水疱性類天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ ｂｕｌｌｏｕｓ）および皮膚類天疱瘡（ｓｋｉｎ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）のような類天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ）［尋常性天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、落葉状天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｆｏｌｉａｃｅｕｓ）、粘膜天疱瘡・類天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｍｕｃｏｕｓ－ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、および紅斑性天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）を含む］、
自己免疫性多腺性内分泌障害（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、ライター病（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）または症候群、免疫複合体腎炎、抗体媒介腎炎、視神経脊髄炎（ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ）、多発性神経障害（ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ）、ＩｇＭ多発性神経障害またはＩｇＭ介在性神経障害のような慢性神経障害（ｃｈｒｏｎｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ；ＴＴＰ）および慢性または急性ＩＴＰを含む特発性血小板減少症（ＩＴＰ）のような自己免疫性または免疫介在性血小板減少症を含む血小板減少症（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）（例えば、心筋梗塞患者に発症するような）、自己免疫性睾丸炎および卵巣炎を含む睾丸および卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症（ｐｒｉｍａｒｙ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、自己免疫性甲状腺炎のような甲状腺炎を含む甲状腺機能低下症、自己免疫性内分泌疾患、橋本病（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、慢性甲状腺炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）；または亜急性甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、特発性甲状腺機能低下症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、グレーブス病（Ｇｒａｖｅ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性多腺性症候群［多腺性内分泌症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）］のような多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ランバート－イートン症候群（Ｌａｍｂｅｒｔ－Ｅａｔｏｎ ｍｙａｓｔｈｅｎｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅまたはＥａｔｏｎ－Ｌａｍｂｅｒｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）のような傍腫瘍性神経症候群を含む傍腫瘍性症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、スティッフマン症候群（ｓｔｉｆｆ－ｍａｎ ｏｒ ｓｔｉｆｆ－ｐｅｒｓｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アレルギー性脳脊髄炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓまたはｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ａｌｌｅｒｇｉｃａ）および実験的アレルギー性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ；ＥＡＥ）のような脳脊髄炎（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、胸腺腫関連重症筋無力症（ｔｈｙｍｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）のような重症筋無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、小脳変性症（ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、ニューロミオトニア（ｎｅｕｒｏｍｙｏｔｏｎｉａ）、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｏｒ ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｍｙｏｃｌｏｎｕｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＯＭＳ）、および感覚神経障害（ｓｅｎｓｏｒｙ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、多巣性運動神経障害（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、シーハン症候群（Ｓｈｅｅｈａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性肝炎、慢性肝炎、ルポイド肝炎（ｌｕｐｏｉｄ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、巨細胞肝炎（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、慢性活性肝炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）または自己免疫性慢性活性肝炎、リンパ球性間質性肺炎（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ）、閉塞性細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ ｏｂｌｉｔｅｒａｎ、非移植）対ＮＳＩＰ、ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ベルガー病（Ｂｅｒｇｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ、ＩｇＡ腎症）、特発性ＩｇＡ腎症、線状ＩｇＡ皮膚病、原発性胆汁性肝硬変（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、肺炎肝硬変（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、自己免疫性腸疾患症候群（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、セリアック病（Ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、 小児脂肪便症（Ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、セリアック・スプルー（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ，ｇｌｕｔｅｎ ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｙ）、難治性スプルー（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｓｐｒｕｅ）、特発性スプルー（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｓｐｒｕｅ）、クリオグロブリン血症 （ｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ；Ｌｏｕ Ｇｅｈｒｉｇ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、冠動脈疾患（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性内耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｉｎｎｅｒ ｅａｒ ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＧＥＤのような自己免疫性耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性難聴、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｍｙｏｃｌｏｎｕｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＯＭＳ）、難治性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）または再発性多発性軟骨炎のような多発性軟骨炎（ｐｏｌｙｃｈｏｎｄｒｉｔｉｓ）、肺胞タンパク症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｌｖｅｏｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ）、アミロイドーシス（ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、強膜炎（ｓｃｌｅｒｉｔｉｓ）、非がん性リンパ球増加症（ｎｏｎ－ｃａｎｃｅｒｏｕｓ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ）、モノクローナルＢ細胞リンパ球増加症［例えば、良性単クローン性免疫グロブリン血症および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｇａｍｍｏｐａｔｈｙ ｏｆ ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ；ＭＧＵＳ）］を含む原発性リンパ球増加症（ｐｒｉｍａｒｙ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ）、末梢神経障害（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、傍腫瘍性症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、偏頭痛（ｍｉｇｒａｉｎｅ）、不整脈（ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ）、筋疾患、難聴（ｄｅａｆｎｅｓｓ）、失明（ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ）、周期性四肢まひ（ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、およびＣＮＳのチャネロパチーのようなチャネロパチー（ｃｈａｎｎｅｌｏｐａｔｈｉｅｓ）、自閉症（ａｕｔｉｓｍ）、炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｐａｔｈｙ）、巣状分節状糸球体硬化症（ｆｏｃａｌ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＦＳＧＳ）、内分泌性眼症（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ）、ブドウ膜網膜炎（ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、自己免疫性肝疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｐａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、線維筋痛（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ）、多発性内分泌疾患（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｆａｉｌｕｒｅ）、シュミット症候群（Ｓｃｈｍｉｄｔ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副腎炎（ａｄｒｅｎａｌｉｔｉｓ）、胃萎縮症（ｇａｓｔｒｉｃ ａｔｒｏｐｈｙ）、初老期認知症（ｐｒｅｓｅｎｉｌｅ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、自己免疫性脱髄疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ）のような脱髄疾患（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、糖尿病性腎症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、ドレスラー症候群（Ｄｒｅｓｓｌｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症（ｃａｌｃｉｎｏｓｉｓ）、レイノー現象（Ｒａｙｎａｕｄ’ｓ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ）、食道運動障害（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｄｙｓｍｏｔｉｌｉｔｙ）、手指硬化症（ｓｃｌｅｒｏｄａｃｔｙｌ）、および毛細血管拡張症（ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ））、男性および女性の不妊、混合性結合組織病、シャーガス病（Ｃｈａｇａｓ’ ｄｉｓｅａｓｅ）、リウマチ熱（ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｆｅｖｅｒ）、反復流産（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ａｂｏｒｔｉｏｎ）、農夫肺（ｆａｒｍｅｒ’ｓ ｌｕｎｇ）、多形性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、心術後症候群（ｐｏｓｔ－ｃａｒｄｉｏｔｏｍｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、クッシング症候群（Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、鳥飼育者肺（ｂｉｒｄ－ｆａｎｃｉｅｒ’ｓ ｌｕｎｇ）、アレルギー性肉芽腫性血管炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ ａｎｇｉｉｔｉｓ）、良性リンパ球性血管炎（ｂｅｎｉｇｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ａｎｇｉｉｔｉｓ）、アルポート症候群（Ａｌｐｏｒｔ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アレルギー性肺胞炎および線維化性肺胞炎のような肺胞炎（ａｌｖｅｏｌｉｔｉｓ）、間質性肺炎（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ）、輸血反応、ハンセン病（ｌｅｐｒｏｓｙ）、マラリア（ｍａｌａｒｉａ）、リーシュマニア症（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）、トリパノソーマ症（ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、住血吸虫症（ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、回虫症（ａｓｃａｒｉａｓｉｓ）、アスペルギルス症（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ）、サムター症候群（Ｓａｍｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、カプラン症候群（Ｃａｐｌａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、デング熱（ｄｅｎｇｕｅ）、心内膜炎（ｅｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、心内膜炎線維症（ｅｎｄｏｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、びまん性間質性肺線維症（ｄｉｆｆｕｓｅ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺線維症（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、嚢胞性線維症（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉｔｉｓ）、持久性隆起性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｅｌｅｖａｔｕｍ ｅｔ ｄｉｕｔｉｎｕｍ）、胎児赤芽球症（ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ ｆｅｔａｌｉｓ）、好酸球性筋膜炎（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｆａｓｃｉｉｔｉｓ）、シュルマン症候群（Ｓｈｕｌｍａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フェルティ症候群（Ｆｅｌｔｙ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フィラリア症（ｆｌａｒｉａｓｉｓ）、慢性毛様体炎、異時性毛様体炎、虹彩毛様体炎（ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）またはフックス毛様体炎（Ｆｕｃｈ’ｓ ｃｙｃｌｉｔｉｓ）のような毛様体炎（ｃｙｃｌｉｔｉｓ）、ヘノッホ・シェンライン紫斑病（Ｈｅｎｏｃｈ－Ｓｃｈｏｎｌｅｉｎ ｐｕｒｐｕｒａ）、ヒト免疫欠乏ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ；ＨＩＶ）感染、エコーウイルス感染、心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、アルツハイマー疾患（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、パルボウイルス感染（ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、風疹ウイルス感染（ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、ワクチン接種後症候群（ｐｏｓｔ－ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、先天性風疹感染、エプスタインバーウイルス感染（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、おたふく風邪（ｍｕｍｐｓ）、エバン症候群（Ｅｖａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性腺機能不全（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｇｏｎａｄａｌ ｆａｉｌｕｒｅ）、シデナム舞踏病（Ｓｙｄｅｎｈａｍ’ｓ ｃｈｏｒｅａ）、連鎖球菌感染後腎炎（ｐｏｓｔｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、閉塞性血栓血管炎（ｔｈｒｏｍｂｏａｎｇｉｉｔｉｓ ｏｂｌｉｔｅｒａｎｓ）、甲状腺機能亢進症（ｔｈｙｒｏｔｏｘｉｃｏｓｉｓ）、脊髄癆（ｔａｂｅｓ ｄｏｒｓａｌｉｓ）、脈絡膜炎（ｃｈｏｒｉｏｉｄｉｔｉｓ）、
巨細胞多発筋腫（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ）、内分泌性眼症（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ）、慢性過敏性肺炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ）、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）、流行性角結膜炎、特発性ネフローゼ症候群（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｎｅｐｈｒｉｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、微少変化ネフローゼ（ｍｉｎｉｍａｌ ｃｈａｎｇｅ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、良性家族性（ｂｅｎｉｇｎ ｆａｍｉｌｉａｌ）および虚血再潅流傷害（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、自己免疫網膜症（ｒｅｔｉｎａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ）、関節炎症（ｊｏｉｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、慢性閉塞性気道疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｉｒｗａｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、珪肺症（ｓｉｌｉｃｏｓｉｓ）、アフタ（ａｐｈｔｈａｅ）、アフタ性口内炎（ａｐｈｔｈｏｕｓ ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ）、動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、精子形成欠如（ａｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）、自己免疫性溶血（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ）、ベック病（Ｂｏｅｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、デュピュイトラン拘縮（Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、水晶体過敏性眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｐｈａｃｏａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃａ）、アレルギー性腸炎（ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｌｌｅｒｇｉｃａ）、癩性結節性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｎｏｄｏｓｕｍ ｌｅｐｒｏｓｕｍ）、特発性顔面神経麻痺（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｆａｃｉａｌ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、慢性疲労症候群（ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、リウマチ熱（ｆｅｂｒｉｓ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、ハンマン・リッチ病（Ｈａｍｍａｎ－Ｒｉｃｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、急性感音難聴（ｓｅｎｓｏｎｅｕｒａｌ ｈｅａｒｉｎｇ ｌｏｓｓ）、ヘモグロビン尿症発作（ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ ｐａｒｏｘｙｓｍａｔｉｃａ）、性腺機能低下症（ｈｙｐｏｇｏｎａｄｉｓｍ）、限局性回腸炎（ｉｌｅｉｔｉｓ ｒｅｇｉｏｎａｌｉｓ）、白血球減少症（ｌｅｕｃｏｐｅｎｉａ）、感染性単核球症（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｓａ）、横断性脊髄炎（ｔｒａｖｅｒｓｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）、原発性特発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｙｘｅｄｅｍａ）、ネフローゼ（ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ）、交感性眼炎（ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｓｙｍｐｈａｔｉｃａ）、肉芽種性睾丸炎（ｏｒｃｈｉｔｉｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓａ）、膵炎（ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ）、急性多発性神経根炎（ｐｏｌｙｒａｄｉｃｕｌｉｔｉｓ ａｃｕｔａ）、壊疽性膿皮症（ｐｙｏｄｅｒｍａ ｇａｎｇｒｅｎｏｓｕｍ）、ケルヴァン甲状腺炎（Ｑｕｅｒｖａｉｎ’ｓ ｔｈｙｒｅｏｉｄｉｔｉｓ）、後天性脾臓萎縮症（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｓｐｅｎｉｃ ａｔｒｏｐｈｙ）、抗精子抗体による不妊（ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｄｕｅ ｔｏ ａｎｔｉｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａｎ ａｎｔｏｂｏｄｉｅｓ）、非悪性胸腺種（ｎｏｎ－ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｈｙｍｏｍａ）、白斑（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、ＳＣＩＤおよびエプスタインバーウイルス関連疾患（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、後天性免疫欠乏症（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＡＩＤＳ）、リーシュマニア症（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）のような寄生虫疾患、毒素性ショック症候群（ｔｏｘｉｃ－ｓｈｏｃｋ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、食中毒（ｆｏｏｄ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ）、Ｔ細胞の浸潤に関連した疾患、白血球接着不全症、サイトカインおよびＴ細胞によって媒介される急性および遅延型過敏症に関連した免疫反応、白血球漏出に関連した疾患、多臓器損傷症候群（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｉｎｊｕｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、抗原抗体複合体介在性疾患、抗糸球体基底膜疾患（ａｎｔｉｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、アレルギー性神経炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、自己免疫多腺性内分泌障害（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、卵巣炎、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ ｍｙｘｅｄｅｍａ）、自己免疫性萎縮性胃炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｔｒｏｐｈｉｃ ｇａｓｔｒｉｔｉｓ）、交感性眼炎（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、リウマチ性疾患（ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、混合性結合組織病 、ネフローゼ症候群（ｎｅｐｈｒｏｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、膵島炎（ｉｎｓｕｌｉｔｉｓ）、多腺性内分泌不全症（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｆａｉｌｕｒｅ）、末梢神経障害（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、自己免疫性多腺性症候群Ｉ型（ａｕｔ ｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｙｐｅ Ｉ）、成人型特発性上皮小体機能低下症（ａｄｕｌｔ－ｏｎｓｅｔ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｈｙｐｏｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ；ＡＯＩＨ）、完全脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ｔｏｔａｌｉｓ）、拡張型心筋症（ｄｉｌａｔｅｄ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、後天性表皮水疱症（ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｉｓｉｓ ｂｕｌｌｏｓａ ａｃｑｕｉｓｉｔａ；ＥＢＡ）、血色素症（ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、心筋炎（ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群、原発性硬化性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、化膿性または非化膿性副鼻腔炎（ｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）、急性または慢性副鼻腔炎、篩骨洞炎（ｅｔｈｍｏｉｄ）、前頭洞炎（ｆｒｏｎｔａｌ）、上顎洞炎（ｍａｘｉｌｌａｒｙ）、またはちょう形骨洞炎（ｓｐｈｅｎｏｉｄ）副鼻腔炎、好酸球増加症のような好酸球障害、肺好酸球増多症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、好酸球増加・筋痛症候群（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ－ｍｙａｌｇｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、レフラー症候群（Ｌｏｆｆｌｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、慢性好酸球性肺炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、局部性肺好酸球増加症（ｔｒｏｐｉｃａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、気管支肺アスペルギルス症（ｂｒｏｎｃｈｏｐｎｅｕｍｏｎｉｃ ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ）、アスペルギルス腫（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｍａ）、または好酸球を含む肉芽種（ｇｒａｎｕｌｏｍａｓ）、アナフィラキシー（ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ）、血清反応陰性脊椎関節症（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｄｅｓ）、多内分泌自己免疫疾患（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、硬化性胆管炎（ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、強膜（ｓｃｌｅｒａ）、上強膜（ｅｐｉｓｃｌｅｒａ）、慢性粘膜皮膚カンジダ症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ）、ブルトン症候群（Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、乳児一過性低ガンマグロブリン血症（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｈｙｐｏｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ ｏｆ ｉｎｆａｎｃｙ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（Ｗｉｓｋｏｔｔ－Ａｌｄｒｉｃｈ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、毛細血管拡張性運動失調症候群（ａｔａｘｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、コラーゲン疾患と関連がある自己免疫障害、リウマチ、神経疾患、虚血再潅流疾患、血圧反応の低下、血管機能不全、血管拡張症（ａｎｇｉｅｃｔａｓｉｓ）、組織傷害、心血管虚血（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｉｓｃｈｅｍｉａ）、痛覚過敏（ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ）、脳虚血（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ）、および血管新生（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を伴う疾患、アレルギー性過敏性疾患、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、再潅流傷害（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、心筋または他組織の再潅流傷害、急性炎症性構成要素を有する皮膚障害（ｄｅｒｍａｔｏｓｅｓ）、急性化膿性髄膜炎（ａｃｕｔｅ ｐｕｒｕｌｅｎｔ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）または他の中枢神経系炎症性疾患、眼球（ｏｃｕｌａｒ ａｎｄ ｏｒｂｉｔａｌ）炎症性疾患、顆粒球輸血関連症候群（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、サイトカイン誘導毒性 、急性の重篤な炎症（ａｃｕｔｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、慢性難治性炎症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、腎盂炎（ｐｙｅｌｉｔｉｓ）、肺炎肝硬変（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、糖尿病網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性巨大動脈疾患（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｌａｒｇｅ－ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、動脈内過形成症（ｅｎｄａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、消化性潰瘍（ｐｅｐｔｉｃ ｕｌｃｅｒ）、弁膜炎（ｖａｌｖｕｌｉｔｉｓ）および子宮内膜症（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ）からなる群から選ばれるものであってもよい。
自己免疫性多腺性内分泌障害（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、ライター病（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）または症候群、免疫複合体腎炎、抗体媒介腎炎、視神経脊髄炎（ｎｅｕｒｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｏｐｔｉｃａ）、多発性神経障害（ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ）、ＩｇＭ多発性神経障害またはＩｇＭ介在性神経障害のような慢性神経障害（ｃｈｒｏｎｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ；ＴＴＰ）および慢性または急性ＩＴＰを含む特発性血小板減少症（ＩＴＰ）のような自己免疫性または免疫介在性血小板減少症を含む血小板減少症（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）（例えば、心筋梗塞患者に発症するような）、自己免疫性睾丸炎および卵巣炎を含む睾丸および卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症（ｐｒｉｍａｒｙ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、自己免疫性甲状腺炎のような甲状腺炎を含む甲状腺機能低下症、自己免疫性内分泌疾患、橋本病（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、慢性甲状腺炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）；または亜急性甲状腺炎、自己免疫性甲状腺疾患、特発性甲状腺機能低下症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ）、グレーブス病（Ｇｒａｖｅ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性多腺性症候群［多腺性内分泌症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）］のような多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ランバート－イートン症候群（Ｌａｍｂｅｒｔ－Ｅａｔｏｎ ｍｙａｓｔｈｅｎｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅまたはＥａｔｏｎ－Ｌａｍｂｅｒｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）のような傍腫瘍性神経症候群を含む傍腫瘍性症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、スティッフマン症候群（ｓｔｉｆｆ－ｍａｎ ｏｒ ｓｔｉｆｆ－ｐｅｒｓｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アレルギー性脳脊髄炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓまたはｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ａｌｌｅｒｇｉｃａ）および実験的アレルギー性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ；ＥＡＥ）のような脳脊髄炎（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）、胸腺腫関連重症筋無力症（ｔｈｙｍｏｍａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）のような重症筋無力症（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、小脳変性症（ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、ニューロミオトニア（ｎｅｕｒｏｍｙｏｔｏｎｉａ）、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｏｒ ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｍｙｏｃｌｏｎｕｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＯＭＳ）、および感覚神経障害（ｓｅｎｓｏｒｙ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、多巣性運動神経障害（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｍｏｔｏｒ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、シーハン症候群（Ｓｈｅｅｈａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性肝炎、慢性肝炎、ルポイド肝炎（ｌｕｐｏｉｄ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、巨細胞肝炎（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、慢性活性肝炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ａｃｔｉｖｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）または自己免疫性慢性活性肝炎、リンパ球性間質性肺炎（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ）、閉塞性細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ ｏｂｌｉｔｅｒａｎ、非移植）対ＮＳＩＰ、ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ベルガー病（Ｂｅｒｇｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ、ＩｇＡ腎症）、特発性ＩｇＡ腎症、線状ＩｇＡ皮膚病、原発性胆汁性肝硬変（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、肺炎肝硬変（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、自己免疫性腸疾患症候群（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、セリアック病（Ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、 小児脂肪便症（Ｃｏｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、セリアック・スプルー（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ，ｇｌｕｔｅｎ ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｙ）、難治性スプルー（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｓｐｒｕｅ）、特発性スプルー（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｓｐｒｕｅ）、クリオグロブリン血症 （ｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ；Ｌｏｕ Ｇｅｈｒｉｇ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、冠動脈疾患（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性内耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｉｎｎｅｒ ｅａｒ ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＧＥＤのような自己免疫性耳疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性難聴、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓ ｍｙｏｃｌｏｎｕｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＯＭＳ）、難治性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）または再発性多発性軟骨炎のような多発性軟骨炎（ｐｏｌｙｃｈｏｎｄｒｉｔｉｓ）、肺胞タンパク症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｌｖｅｏｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ）、アミロイドーシス（ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、強膜炎（ｓｃｌｅｒｉｔｉｓ）、非がん性リンパ球増加症（ｎｏｎ－ｃａｎｃｅｒｏｕｓ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ）、モノクローナルＢ細胞リンパ球増加症［例えば、良性単クローン性免疫グロブリン血症および意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｇａｍｍｏｐａｔｈｙ ｏｆ ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ；ＭＧＵＳ）］を含む原発性リンパ球増加症（ｐｒｉｍａｒｙ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｏｓｉｓ）、末梢神経障害（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、傍腫瘍性症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、偏頭痛（ｍｉｇｒａｉｎｅ）、不整脈（ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ）、筋疾患、難聴（ｄｅａｆｎｅｓｓ）、失明（ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ）、周期性四肢まひ（ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、およびＣＮＳのチャネロパチーのようなチャネロパチー（ｃｈａｎｎｅｌｏｐａｔｈｉｅｓ）、自閉症（ａｕｔｉｓｍ）、炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｐａｔｈｙ）、巣状分節状糸球体硬化症（ｆｏｃａｌ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＦＳＧＳ）、内分泌性眼症（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ）、ブドウ膜網膜炎（ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、自己免疫性肝疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｐａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、線維筋痛（ｆｉｂｒｏｍｙａｌｇｉａ）、多発性内分泌疾患（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｆａｉｌｕｒｅ）、シュミット症候群（Ｓｃｈｍｉｄｔ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、副腎炎（ａｄｒｅｎａｌｉｔｉｓ）、胃萎縮症（ｇａｓｔｒｉｃ ａｔｒｏｐｈｙ）、初老期認知症（ｐｒｅｓｅｎｉｌｅ ｄｅｍｅｎｔｉａ）、自己免疫性脱髄疾患（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ）のような脱髄疾患（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、糖尿病性腎症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、ドレスラー症候群（Ｄｒｅｓｓｌｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症（ｃａｌｃｉｎｏｓｉｓ）、レイノー現象（Ｒａｙｎａｕｄ’ｓ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ）、食道運動障害（ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｄｙｓｍｏｔｉｌｉｔｙ）、手指硬化症（ｓｃｌｅｒｏｄａｃｔｙｌ）、および毛細血管拡張症（ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ））、男性および女性の不妊、混合性結合組織病、シャーガス病（Ｃｈａｇａｓ’ ｄｉｓｅａｓｅ）、リウマチ熱（ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｆｅｖｅｒ）、反復流産（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ａｂｏｒｔｉｏｎ）、農夫肺（ｆａｒｍｅｒ’ｓ ｌｕｎｇ）、多形性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、心術後症候群（ｐｏｓｔ－ｃａｒｄｉｏｔｏｍｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、クッシング症候群（Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、鳥飼育者肺（ｂｉｒｄ－ｆａｎｃｉｅｒ’ｓ ｌｕｎｇ）、アレルギー性肉芽腫性血管炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ ａｎｇｉｉｔｉｓ）、良性リンパ球性血管炎（ｂｅｎｉｇｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ａｎｇｉｉｔｉｓ）、アルポート症候群（Ａｌｐｏｒｔ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アレルギー性肺胞炎および線維化性肺胞炎のような肺胞炎（ａｌｖｅｏｌｉｔｉｓ）、間質性肺炎（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ）、輸血反応、ハンセン病（ｌｅｐｒｏｓｙ）、マラリア（ｍａｌａｒｉａ）、リーシュマニア症（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）、トリパノソーマ症（ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、住血吸虫症（ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、回虫症（ａｓｃａｒｉａｓｉｓ）、アスペルギルス症（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ）、サムター症候群（Ｓａｍｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、カプラン症候群（Ｃａｐｌａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、デング熱（ｄｅｎｇｕｅ）、心内膜炎（ｅｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、心内膜炎線維症（ｅｎｄｏｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、びまん性間質性肺線維症（ｄｉｆｆｕｓｅ ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、間質性肺線維症（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、特発性肺線維症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、嚢胞性線維症（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉｔｉｓ）、持久性隆起性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｅｌｅｖａｔｕｍ ｅｔ ｄｉｕｔｉｎｕｍ）、胎児赤芽球症（ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ ｆｅｔａｌｉｓ）、好酸球性筋膜炎（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｆａｓｃｉｉｔｉｓ）、シュルマン症候群（Ｓｈｕｌｍａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フェルティ症候群（Ｆｅｌｔｙ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、フィラリア症（ｆｌａｒｉａｓｉｓ）、慢性毛様体炎、異時性毛様体炎、虹彩毛様体炎（ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）またはフックス毛様体炎（Ｆｕｃｈ’ｓ ｃｙｃｌｉｔｉｓ）のような毛様体炎（ｃｙｃｌｉｔｉｓ）、ヘノッホ・シェンライン紫斑病（Ｈｅｎｏｃｈ－Ｓｃｈｏｎｌｅｉｎ ｐｕｒｐｕｒａ）、ヒト免疫欠乏ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ；ＨＩＶ）感染、エコーウイルス感染、心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、アルツハイマー疾患（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、パルボウイルス感染（ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、風疹ウイルス感染（ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、ワクチン接種後症候群（ｐｏｓｔ－ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、先天性風疹感染、エプスタインバーウイルス感染（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、おたふく風邪（ｍｕｍｐｓ）、エバン症候群（Ｅｖａｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性腺機能不全（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｇｏｎａｄａｌ ｆａｉｌｕｒｅ）、シデナム舞踏病（Ｓｙｄｅｎｈａｍ’ｓ ｃｈｏｒｅａ）、連鎖球菌感染後腎炎（ｐｏｓｔｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、閉塞性血栓血管炎（ｔｈｒｏｍｂｏａｎｇｉｉｔｉｓ ｏｂｌｉｔｅｒａｎｓ）、甲状腺機能亢進症（ｔｈｙｒｏｔｏｘｉｃｏｓｉｓ）、脊髄癆（ｔａｂｅｓ ｄｏｒｓａｌｉｓ）、脈絡膜炎（ｃｈｏｒｉｏｉｄｉｔｉｓ）、
巨細胞多発筋腫（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ）、内分泌性眼症（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ）、慢性過敏性肺炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｐｎｅｕｍｏｎｉｔｉｓ）、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）、流行性角結膜炎、特発性ネフローゼ症候群（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｎｅｐｈｒｉｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、微少変化ネフローゼ（ｍｉｎｉｍａｌ ｃｈａｎｇｅ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）、良性家族性（ｂｅｎｉｇｎ ｆａｍｉｌｉａｌ）および虚血再潅流傷害（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、自己免疫網膜症（ｒｅｔｉｎａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ）、関節炎症（ｊｏｉｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、慢性閉塞性気道疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｉｒｗａｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、珪肺症（ｓｉｌｉｃｏｓｉｓ）、アフタ（ａｐｈｔｈａｅ）、アフタ性口内炎（ａｐｈｔｈｏｕｓ ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ）、動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、精子形成欠如（ａｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）、自己免疫性溶血（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ）、ベック病（Ｂｏｅｃｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、クリオグロブリン血症（ｃｒｙｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、デュピュイトラン拘縮（Ｄｕｐｕｙｔｒｅｎ’ｓ ｃｏｎｔｒａｃｔｕｒｅ）、水晶体過敏性眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｐｈａｃｏａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃａ）、アレルギー性腸炎（ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ａｌｌｅｒｇｉｃａ）、癩性結節性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｎｏｄｏｓｕｍ ｌｅｐｒｏｓｕｍ）、特発性顔面神経麻痺（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｆａｃｉａｌ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、慢性疲労症候群（ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、リウマチ熱（ｆｅｂｒｉｓ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、ハンマン・リッチ病（Ｈａｍｍａｎ－Ｒｉｃｈ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、急性感音難聴（ｓｅｎｓｏｎｅｕｒａｌ ｈｅａｒｉｎｇ ｌｏｓｓ）、ヘモグロビン尿症発作（ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ ｐａｒｏｘｙｓｍａｔｉｃａ）、性腺機能低下症（ｈｙｐｏｇｏｎａｄｉｓｍ）、限局性回腸炎（ｉｌｅｉｔｉｓ ｒｅｇｉｏｎａｌｉｓ）、白血球減少症（ｌｅｕｃｏｐｅｎｉａ）、感染性単核球症（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｓａ）、横断性脊髄炎（ｔｒａｖｅｒｓｅ ｍｙｅｌｉｔｉｓ）、原発性特発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｍｙｘｅｄｅｍａ）、ネフローゼ（ｎｅｐｈｒｏｓｉｓ）、交感性眼炎（ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｓｙｍｐｈａｔｉｃａ）、肉芽種性睾丸炎（ｏｒｃｈｉｔｉｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓａ）、膵炎（ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ）、急性多発性神経根炎（ｐｏｌｙｒａｄｉｃｕｌｉｔｉｓ ａｃｕｔａ）、壊疽性膿皮症（ｐｙｏｄｅｒｍａ ｇａｎｇｒｅｎｏｓｕｍ）、ケルヴァン甲状腺炎（Ｑｕｅｒｖａｉｎ’ｓ ｔｈｙｒｅｏｉｄｉｔｉｓ）、後天性脾臓萎縮症（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｓｐｅｎｉｃ ａｔｒｏｐｈｙ）、抗精子抗体による不妊（ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｄｕｅ ｔｏ ａｎｔｉｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａｎ ａｎｔｏｂｏｄｉｅｓ）、非悪性胸腺種（ｎｏｎ－ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｈｙｍｏｍａ）、白斑（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、ＳＣＩＤおよびエプスタインバーウイルス関連疾患（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、後天性免疫欠乏症（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＡＩＤＳ）、リーシュマニア症（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）のような寄生虫疾患、毒素性ショック症候群（ｔｏｘｉｃ－ｓｈｏｃｋ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、食中毒（ｆｏｏｄ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ）、Ｔ細胞の浸潤に関連した疾患、白血球接着不全症、サイトカインおよびＴ細胞によって媒介される急性および遅延型過敏症に関連した免疫反応、白血球漏出に関連した疾患、多臓器損傷症候群（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｉｎｊｕｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、抗原抗体複合体介在性疾患、抗糸球体基底膜疾患（ａｎｔｉｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、アレルギー性神経炎（ａｌｌｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、自己免疫多腺性内分泌障害（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、卵巣炎、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ ｍｙｘｅｄｅｍａ）、自己免疫性萎縮性胃炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｔｒｏｐｈｉｃ ｇａｓｔｒｉｔｉｓ）、交感性眼炎（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、リウマチ性疾患（ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、混合性結合組織病 、ネフローゼ症候群（ｎｅｐｈｒｏｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、膵島炎（ｉｎｓｕｌｉｔｉｓ）、多腺性内分泌不全症（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｆａｉｌｕｒｅ）、末梢神経障害（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、自己免疫性多腺性症候群Ｉ型（ａｕｔ ｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｙｐｅ Ｉ）、成人型特発性上皮小体機能低下症（ａｄｕｌｔ－ｏｎｓｅｔ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｈｙｐｏｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ；ＡＯＩＨ）、完全脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ｔｏｔａｌｉｓ）、拡張型心筋症（ｄｉｌａｔｅｄ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、後天性表皮水疱症（ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｉｓｉｓ ｂｕｌｌｏｓａ ａｃｑｕｉｓｉｔａ；ＥＢＡ）、血色素症（ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、心筋炎（ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群、原発性硬化性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、化膿性または非化膿性副鼻腔炎（ｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）、急性または慢性副鼻腔炎、篩骨洞炎（ｅｔｈｍｏｉｄ）、前頭洞炎（ｆｒｏｎｔａｌ）、上顎洞炎（ｍａｘｉｌｌａｒｙ）、またはちょう形骨洞炎（ｓｐｈｅｎｏｉｄ）副鼻腔炎、好酸球増加症のような好酸球障害、肺好酸球増多症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、好酸球増加・筋痛症候群（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ－ｍｙａｌｇｉａ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、レフラー症候群（Ｌｏｆｆｌｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、慢性好酸球性肺炎（ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、局部性肺好酸球増加症（ｔｒｏｐｉｃａｌ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、気管支肺アスペルギルス症（ｂｒｏｎｃｈｏｐｎｅｕｍｏｎｉｃ ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ）、アスペルギルス腫（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｍａ）、または好酸球を含む肉芽種（ｇｒａｎｕｌｏｍａｓ）、アナフィラキシー（ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ）、血清反応陰性脊椎関節症（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｄｅｓ）、多内分泌自己免疫疾患（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、硬化性胆管炎（ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）、強膜（ｓｃｌｅｒａ）、上強膜（ｅｐｉｓｃｌｅｒａ）、慢性粘膜皮膚カンジダ症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ）、ブルトン症候群（Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、乳児一過性低ガンマグロブリン血症（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｈｙｐｏｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ ｏｆ ｉｎｆａｎｃｙ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群（Ｗｉｓｋｏｔｔ－Ａｌｄｒｉｃｈ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、毛細血管拡張性運動失調症候群（ａｔａｘｉａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、コラーゲン疾患と関連がある自己免疫障害、リウマチ、神経疾患、虚血再潅流疾患、血圧反応の低下、血管機能不全、血管拡張症（ａｎｇｉｅｃｔａｓｉｓ）、組織傷害、心血管虚血（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｉｓｃｈｅｍｉａ）、痛覚過敏（ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ）、脳虚血（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ）、および血管新生（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を伴う疾患、アレルギー性過敏性疾患、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、再潅流傷害（ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、心筋または他組織の再潅流傷害、急性炎症性構成要素を有する皮膚障害（ｄｅｒｍａｔｏｓｅｓ）、急性化膿性髄膜炎（ａｃｕｔｅ ｐｕｒｕｌｅｎｔ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）または他の中枢神経系炎症性疾患、眼球（ｏｃｕｌａｒ ａｎｄ ｏｒｂｉｔａｌ）炎症性疾患、顆粒球輸血関連症候群（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、サイトカイン誘導毒性 、急性の重篤な炎症（ａｃｕｔｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、慢性難治性炎症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、腎盂炎（ｐｙｅｌｉｔｉｓ）、肺炎肝硬変（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、糖尿病網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、糖尿病性巨大動脈疾患（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｌａｒｇｅ－ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、動脈内過形成症（ｅｎｄａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、消化性潰瘍（ｐｅｐｔｉｃ ｕｌｃｅｒ）、弁膜炎（ｖａｌｖｕｌｉｔｉｓ）および子宮内膜症（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ）からなる群から選ばれるものであってもよい。
【0065】
好ましくは、前記自己免疫疾患は、１型糖尿病、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ａｒｅａｔａ）、抗リン脂質抗体症候群（ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、関節リウマチ、乾癬または乾癬性関節炎、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、アディソン病（Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、グレーブス病（Ｇｒａｖｅｓ’ ｄｉｓｅａｓｅ）、ショグレン症候群（Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ギラン・バレー症候群（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、橋本甲状腺炎（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ’ｓ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、重症筋無力症（Ｍｙａｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｙｏｐｈａｔｈｙ）、自己免疫性血管炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、自己免疫性肝炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、出血性貧血（ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ）、原発性胆汁性肝硬変（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ）、皮膚硬化症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、白斑症（ｖｉｔｉｌｉｇｏ）、悪性貧血（ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ）およびセリアック病（ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ）からなる群から選ばれたものであってもよい。
【0066】
前記炎症性疾患は、関節炎（ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、反応性関節炎（ｒｅａｃｔｉｖｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ライター症候群（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、結晶性関節症（ｃｒｙｓｔａｌ ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｉｅｓ）、ライム病（Ｌｙｍｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、リウマチ性多発性筋痛（ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、結節性多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ’ｓ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ）、チャーグ・ストラウス症候群（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、サルコイドーシス（ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ）、アテローム硬化性血管疾患（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、アテローム性動脈硬化症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、虚血性心臓疾患（ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、心筋梗塞（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、末梢血管疾患（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｉｔｉｓ）、角膜疾患（ｃｏｒｎｅａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、虹彩炎（ｉｒｉｔｉｓ）、虹彩毛様体炎（ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）および白内障（ｃａｔａｒａｃｔｓ）からなる群から選ばれるものであってもよい。
【0067】
前記移植拒否疾患は、組織または臓器の移植拒否反応であってもよく、前記組織または臓器の移植拒否反応は、骨髓移植、心臓移植、角膜移植、腸移植、肝移植、肺移植、すい臓移植、腎臓移植および皮膚移植の拒否反応の中から選ばれるものであってもよい。
【0068】
本発明の用語、「炎症性皮膚疾患」は、炎症反応によって皮膚に発生する疾患を意味する。皮膚角質形成細胞は、表皮細胞の大部分を構成する成分であり、角質を形成し、様々なサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を生産して多様な炎症反応と免疫反応に関与する。皮膚角質形成細胞が環境的、生理的ストレスに露出すると、炎症反応が起こり、そのため、ＴＮＦ－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α）、ＩＬ－１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１β）、ＩＬ－６およびＣＣＬ（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ（Ｃ－Ｃ ｍｏｔｉｆ）ｌｉｇａｎｄ）のような様々な種類の炎症性サイトカインを分泌することになる。このようなサイトカインは、皮膚角質形成細胞の増殖速度を減少させ、真皮層の器質形成を妨害することによって、損傷した皮膚の治癒速度を低下させることになる。したがって、炎症性皮膚疾患において皮膚角質形成細胞の増殖は、重要な役割を行い、皮膚の老化、アトピー性皮膚炎、乾癬などのような炎症性皮膚疾患と密接な関連がある。したがって、前記炎症性皮膚疾患は、乾癬またはアトピー皮膚炎であってもよく、好ましくは、乾癬であってもよい。
【0069】
本発明の用語、「乾癬」は、皮膚に銀白色の鱗屑で覆われている、境界が明確で、サイズが多様な紅斑性丘疹およびプラークを形成する疾患を意味する。組織学的に上皮の過多増殖を特徴とし、多様な臨床様相を示し、悪化と好転が反復される慢性炎症性皮膚疾患の一つである。
【0070】
前記薬学組成物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾患の程度、薬物形態、投与経路および期間によって異なるが、当業者によって適切に選択できる。本発明の乾癬治療用または予防用薬学組成物においてその有効成分は、乾癬治療活性を示すことができる限り、用途、剤形、配合目的などによって任意の量（有効量）で含まれ得るが、通常の有効量は、組成物の全体重量を基準として、０．００１重量％～２０．０重量％の範囲内で決定される。ここで、「有効量」とは、乾癬治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）効果を誘導できる有効成分の量をいう。このような有効量は、当業者の通常の能力範囲内で実験的に決定できる。
【0071】
本発明の用語、「治療」は、治療学的処理および予防的処理を全部含む意味で使用できる。ここで、予防は、個体の病理学的状態または疾患を緩和させたり減少させる意味で使用できる。一具体例において、用語「治療」は、ヒトを含む哺乳類において疾患を治療するための適用やいかなる形態の投薬を全部含む。また、前記用語は、疾患または疾患の進行を抑制したり遅延させることを含み；損傷したり、欠損した機能を回復させたり、修理して、疾患を部分的または完全に緩和させたり；または非効率的なプロセスを刺激したり；深刻な疾患を緩和する意味を含む。
【0072】
ここで、「治療学的に有効な量」または「薬学的に有効な量」とは、対象疾患を予防または治療するのに有効な化合物または組成物の量であり、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスクの割合で疾患を治療するのに十分であり、副作用を起こさないほどの量を意味する。前記有効量のレベルは、患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与方法、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、配合または同時使用される薬物を含む要素およびその他医学分野によく知られた要素によって決定できる。一具体例において、治療学的に有効な量は、乾癬を治療するのに効果的な薬物の量を意味する。
【0073】
本発明の組成物は、薬学的に許容可能な担体を含んでもよく、前記担体の他に薬学的に許容可能な補助剤、賦形剤または希釈剤をさらに含んでもよい。
【0074】
本発明の用語、「薬学的に許容可能な」とは、生理学的に許容され、ヒトに投与されるとき、通常、胃腸障害、めまいのようなアレルギー反応またはこれと類似した反応を起こさない組成物をいう。前記担体、賦形剤および希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾアート、プロピルヒドロキシベンゾアート、タルク、マグネシウム ステアレートおよび鉱物油が挙げられる。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含んでもよい。
【0075】
本発明の薬学的組成物は、哺乳動物に投与時、活性成分の迅速な放出、または持続または遅延型放出が可能に当業界において公知となった方法を用いて剤形化することができる。剤形は、粉末、顆粒、錠剤、エマルジョン、シロップ、エアロゾル、軟質または硬質ゼラチンカプセル、滅菌注射溶液、滅菌粉末形態を含む。
【0076】
本発明の組成物は、薬学的に許容される担体とともに好適な形態で剤形化することができる。薬学的に許容される担体としては、例えば、水、好適なオイル、食塩水、水性グルコースおよびグリコールなどのような非経口投与用担体などがあり、安定化剤および保存剤をさらに含んでもよい。好適な安定化剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。好適な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、メチル－またはプロピル－パラベンおよびクロロブタノールがある。また、本発明による組成物は、その投与方法や剤形によって、必要な場合、懸濁剤、溶解補助剤、安定化剤、等張剤、保存剤、吸着防止剤、界面活性化剤、希釈剤、賦形剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤、緩衝剤、酸化防止剤などを適切に含んでもよい。上記に例示されたものをはじめとして本発明に適合した薬学的に許容される担体および製剤は、文献［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、最新版］に詳細に記載されている。
【0077】
本発明の組成物は、通常、よく知られた滅菌技術によって滅菌されることができる。組成物は、ｐＨ調節のような生理的条件を調節するために要求される薬学的に許容可能な補助物質および補助剤、毒性調節製剤およびその類似体を含んでもよいが、例えば、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）、塩化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、乳酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｃｔａｔｅ）などがある。このような剤形において融合タンパク質の濃度は非常に多様であり、例えば、重さによって約０．５％以下であってもよく、一般的にまたは少なくとも約１％～１５％または２０％まで可能であり、選択された特定の投与方法によって体液体積、粘度（ｖｉｓｃｏｓｉｔｉｅｓ）などに優先的に基づいて選択できる。
【0078】
本発明の組成物に対する好ましい投与量は、患者の状態、体重、性別、年齢、患者の重症度、投与経路によって１日に０．０１μｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇの範囲、または０．０１ｍｇ／ｋｇ～１ｇ／ｋｇの範囲であってもよい。投与は、１日に１回または数回に分けて行われ得る。このような投与量は、いかなる側面においても、本願発明の範囲を制限すると解釈されるべきものではない。
【0079】
本発明の組成物が適用（処方）可能な対象は、哺乳動物およびヒトであり、特にヒトである場合が好ましい。前記融合タンパク質または融合タンパク質二量体の投与経路、投与量および投与回数は、患者の状態および副作用の有無によって多様な方法および量で対象に投与可能であり、最適な投与方法、投与量および投与回数は、通常の技術者が適切な範囲で選択することができる。
【0080】
本発明の組成物は、いかなる経路にも投与可能である。本発明の組成物は、直接的に（例えば、組織部位に注入、移植または局部的に投与することによって、局所的に）またはシステム的に（例えば、非経口または経口で）任意の適切な手段によって動物に提供されることができる。本発明の組成物が静脈内、皮下、眼（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ）、腹腔内、筋肉内、口腔、直腸、眼窩内（ｉｎｔｒａｏｒｂｉｔａｌ）、脳内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ）、頭蓋内（ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ）、脊椎内（ｉｎｔｒａｓｐｉｎａｌ）、脳室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、髄腔内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ）、槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ）、嚢内（ｉｎｔｒａｃａｐｓｕｌａｒ）、鼻腔内（ｉｎｔｒａｎａｓａｌ）またはエアロゾル投与のように非経口的に提供される場合、組成物は、好ましくは、水性（ａｑｕｅｏｕｓ）であるか、生理学的に適用可能な体液懸濁液または溶液の部分を含むことが好ましい。これによって、担体または運搬体（ｖｅｈｉｃｌｅ）が生理学的に許容可能なので、組成物に添加して患者に伝達されることができ、これは、患者の電解質および／または体積バランス（ｂａｌａｎｃｅ）に悪影響を及ぼさない。したがって、製剤のための体液培地として、一般的に生理食塩水（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｓａｌｉｎｅ）を含んでもよい。
【0081】
本発明の融合タンパク質をコードする核酸を含むＤＮＡ構造物（または遺伝子構造物）は、前記融合タンパク質構造物をコードする核酸を運搬する遺伝子治療プロトコルの一部として使用できる。
【0082】
本発明は、所望の前記融合タンパク質の機能を再構成したり補充するために、特定細胞タイプで前記融合タンパク質を生体内感染および発現させる発現ベクターを任意の生物学的有効担体とともに投与可能であるが、例えば、生体内細胞に所望の融合タンパク質をコードする遺伝子またはその融合タンパク質を効率的に運搬できる任意の剤形または組成物などがそれである。
【0083】
前記融合タンパク質をコードする核酸を用いた遺伝子治療のために、組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、および単純ヘルペスウイルス－１（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ－１）を含むウイルスベクター、または組換えバクテリアプラスミドまたは組換え真核プラスミド内に対象遺伝子を挿入することができる。
【0084】
本発明の融合タンパク質をコードする核酸の投与量は、ヒトにおいて０．１ｍｇ～１００ｍｇの範囲であり、好ましくは、１ｍｇ～１０ｍｇであり、より好ましくは、２ｍｇ～１０ｍｇである。最適量および投与形態は、当業界の技術レベルに属する一般的な実験によって決定することができる。
【0085】
本発明の融合タンパク質の単位投与量は、ヒトにおいて０．１ｍｇ／ｋｇ～１，５００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは、１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは、５ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇである。単位投与量は、治療対象疾患および副作用の有無によって変わることができる。しかし、最適な投与量は、通常の実験を用いて決定できる。融合タンパク質の投与は、周期的なボーラス注入（ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｂｏｌｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ）によるか、外側供給源（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）（例えば、静脈注射バッグ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｂａｇ））または内側（例えば、生分解性インプラント（ｂｉｏｅｒｏｄａｂｌｅ ｉｍｐｌａｎｔ））からの持続的な静脈内、皮下、または腹膜内投与によることができる。
【0086】
本発明の組成物は、予防または治療しようとする疾患の予防または治療効果を有する他の薬物または生理学的活性物質と併用して投与したり、このような他の薬物との組み合わせ製剤（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）形態で剤形化することができる。
【0087】
本発明の融合タンパク質または組成物を用いて疾患を予防または治療する方法は、本発明の融合タンパク質または組成物と併用して疾患の予防または治療効果を有する他の薬物または生理学的活性物質を投与することも含んでもよいが、併用投与の経路、投与時期、および投与容量は、疾患の種類、患者の疾患状態、治療または予防の目的、および併用される他の薬物または生理学的活性物質によって決定できる。
【0088】
また、本発明は、免疫疾患の予防または治療効果を有する医薬製剤を生産するためのＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質の使用を提供する。
【0089】
また、本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質と薬学的に許容可能な担体を個体に投与する段階を含む免疫疾患の予防または治療方法を提供する。
【0090】
前記治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によって他の製剤が使用されるか否かをはじめとする具体的組成物、個体の年齢、体重、一般健康状態、性別および食事、投与時間、投与経路および組成物の分泌率、治療期間、具体的組成物と共に使用されるか、同時使用される薬物をはじめとする多様な因子と医薬分野によく知られた類似因子によって異なるように適用することが好ましい。したがって、本発明の目的に適合した組成物の有効量は、前述した事項を考慮して決定することが好ましい。
【0091】
前記個体は、任意の哺乳動物に適用可能であり、前記哺乳動物は、ヒトおよび霊長類だけでなく、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、イヌおよびネコなどの家畜を含む。
【実施例】
【0092】
以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。これらの実施例は、本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【0093】
実施例１．ＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質生産のための遺伝子コンストラクト製造
ヒトＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域（ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｆｃ ｄｏｍａｉｎ）が融合した融合タンパク質を生産するための遺伝子コンストラクトを製造した。具体的に、ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子は、公知のアミノ酸配列（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：Ｑ９ＮＺＱ７）を用い、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ、１９－２３９ ａａ）が含まれた遺伝子コンストラクトは、ＴＯＰ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｎａｄａ，Ｑｕｅｂｅｃ）で製作した。ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端に融合するように製造した。改変された免疫グロブリンＦｃドメイン（配列番号１１）は、ヒトＩｇＤのＦｃとヒトＩｇＧ４のＦｃのハイブリッド型であり、８個のアミノ酸で構成されたＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号１６）を含むことに特徴がある。
ヒトＰＤ－Ｌ１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １）タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域（ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｆｃ ｄｏｍａｉｎ）が融合した融合タンパク質を生産するための遺伝子コンストラクトを製造した。具体的に、ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子は、公知のアミノ酸配列（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：Ｑ９ＮＺＱ７）を用い、ＰＤ－Ｌ１タンパク質の細胞外ドメイン（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ、１９－２３９ ａａ）が含まれた遺伝子コンストラクトは、ＴＯＰ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｎａｄａ，Ｑｕｅｂｅｃ）で製作した。ヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質は、改変された免疫グロブリンＦｃ領域のＮ末端に融合するように製造した。改変された免疫グロブリンＦｃドメイン（配列番号１１）は、ヒトＩｇＤのＦｃとヒトＩｇＧ４のＦｃのハイブリッド型であり、８個のアミノ酸で構成されたＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号１６）を含むことに特徴がある。
【0094】
本発明の融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質が改変された免疫グロブリンＦｃ領域とペプチドリンカーで連結されるように製造した。本発明では、二量体（ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を誘導しながらも、柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）を維持するために、７個のアミノ酸配列からなるＧＳリンカー（配列番号１０）によって連結されたヒトＰＤ－Ｌ１タンパク質および改変された免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質（以下、「ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１」または「ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質」、配列番号１２または１３）を製造した。対照群としては、配列番号１４のＩｇＤヒンジ領域を含む免疫グロブリンＦｃ領域が含まれた融合タンパク質（以下、「ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５」または「ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質」、配列番号１５）を使用した。
【0095】
前記融合タンパク質をコードするヌクレオチドが含まれた遺伝子コンストラクトを用いて組換え発現ベクターを製作した。製作された組換え発現ベクターは、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞株にＤＮＡ溶液を懸濁し、直流高電圧のパルスを通過させて細胞内にＤＮＡが導入されることを用いた遺伝子導入法（ＮｅｏｎＴＭ ｋｉｔ、１０μＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ．ＭＰＫ１０９６）を用いて形質転換させた。その後、ＨＴ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（ＨＴ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１１０６７－０３０）とＭＴＸ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ，Ｓｉｇｍａ，Ｍ８４０７）増幅段階を行って、高い発現率を示す細胞だけが選別されるように細胞継代を行った。細胞は、３日ごとに０．４× １０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの量で継代を行い、ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ装置（Ｖｉ－ｃｅｌｌ，Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて細胞の数と生存率を測定した。ＨＴ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎは、ｍｅｄｉａにＨＴを除去して形質転換された細胞だけが生存するようにする選別方法であり、ＭＴＸ増幅は、継代培地にＭＴＸを選別した濃度で入れて、遺伝子を増幅させる方法である。選別された細胞ｐｏｏｌは、限界希釈クローニング（Ｌｉｍｉｔｉｎｇ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｃｌｏｎｉｎｇ）方法を用いて単細胞クローニング（Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ Ｃｌｏｎｉｎｇ）を行った。簡単に、９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌになるように細胞を分注した後、０，７および１４日目にＣＳＩ装置（ｃｌｏｎｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｍａｇｅｒ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて細胞イメージを保存して、一つの細胞に由来したクローン（ｃｌｏｎｅ）を逆追跡した。選別された単細胞（ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ）由来細胞株は、Ｆｃ ＥＬＩＳＡ（Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｓｅｔ，Ｂｅｔｈｙｌ，Ｅ８０－１０４）を用いて生産性を確認した。最終選別された５～６個のクローンは、ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔｕｒｅと長期安定性評価を行い、安定性が確認されたクローンをＲＣＢ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋ）で製造した。
【0096】
実施例２．ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の確保
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を大量生産するために、前記実施例１で確保したＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１懸濁細胞株から生産された細胞培養液から目的タンパク質を分離および精製した。
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を大量生産するために、前記実施例１で確保したＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１懸濁細胞株から生産された細胞培養液から目的タンパク質を分離および精製した。
【0097】
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を大量確保するために、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の発現細胞株を同じ流加培養（Ｆｅｄ－ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔｕｒｅ）方法でＧｌａｓｓ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ １５Ｌで２０日間培養して、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を生産した。流加培養の際、融合タンパク質を発現する細胞株の細胞生存率を測定し、目的タンパク質の最終発現量および純度を確認するために、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を行った。
【0098】
発現細胞株の時間別最大細胞濃度および融合タンパク質の最終発現量を確認した結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の発現細胞株は、時間別最大細胞濃度が１３．９×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬであることが確認され（図２ａ）、最終回収された融合タンパク質の発現量は、５．６ｇ／Ｌであることが確認された（図２ｂ）。これに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の発現細胞株は、時間別最大細胞濃度が１６．７×１０６ ｃｅｌｌｓ／ｍＬであることが確認され（図３ａ）、最終回収された融合タンパク質の発現量は、２．２ｇ／Ｌであることが確認された（図３ｂ）。
【0099】
また、融合タンパク質の純度を確認した結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の純度は、７９．５％であり、高分子不純物（ＨＭＷ）が７．７％、低分子不純物（ＬＭＷ）が９．８％含まれたことが確認された（表１）。これに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の純度は、４７．８％であり、高分子不純物（ＨＭＷ）が３１．７％、低分子不純物（ＬＭＷ）が２０．５％含まれたことが確認された（表１）。
【0100】
【表1】
【0101】
その後、高純度のＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を確保するために、下記の３段階の精製工程を行った：培養液⇒タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィー（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）⇒アニオン交換クロマトグラフィー１（Ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ １）⇒アニオン交換クロマトグラフィー２（Ａｎｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ２）⇒限外ろ過／透析ろ過。
【0102】
確保された目的タンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）分析を通じて純度および収得率を確認した。その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の純度は、９７．３％、収得率は、３０．２％であることが確認された。これに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の純度は、９３．２％、収得率は、５．１％であることが確認された（表２）。
【0103】
【表2】
【0104】
前記結果から、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質に比べて約２．５倍の高い生産量を示し、タンパク質の純度も高いことを確認した。
【0105】
実施例３．ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の特性分析
３．１．ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ－ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の分子量を確認するために、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を行った。簡単に、融合タンパク質は、脱イオン水を用いて希釈され、ＮｕＰＡＧＥＴＭ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と混ぜて３μｇ／ｗｅｌｌになるように４－１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にローディング（ｌｏａｄｉｎｇ）して電気泳動を行った。電気泳動が終わったゲルは、クマシー染色法で染色した。
３．１．ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ－ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の分子量を確認するために、ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）を行った。簡単に、融合タンパク質は、脱イオン水を用いて希釈され、ＮｕＰＡＧＥＴＭ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と混ぜて３μｇ／ｗｅｌｌになるように４－１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にローディング（ｌｏａｄｉｎｇ）して電気泳動を行った。電気泳動が終わったゲルは、クマシー染色法で染色した。
【0106】
その結果、精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１およびＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質は、いずれも、非還元条件（ｎｏｎ－ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）でサイズマーカー（ｓｉｚｅ ｍａｒｋｅｒ）９８ｋＤａ付近で確認された（図４）。ただし、精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質では、切断された形態の低分子不純物が含まれていた。
【0107】
３．２．サイズ排除クロマトグラフィー試験法（ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＳＥ－ＨＰＬＣ）
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質でメインピークおよび二量体、多量体または切断された形態の異常ペプチドなどの不純物ピークを分析するために、サイズ排除クロマトグラフィー試験法（Ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＳＥ－ＨＰＬＣ）を行った。簡単に、融合タンパク質は、剤形緩衝液で希釈して１．０ｍｇ／ｍＬで調製した後、ゲルろ過クロマトグラフィーカラム（ＴＯＳＯＨ ＴＳＫ－ＧＥＬ Ｇ３０００ＳＷｘＬ ｃｏｌｕｍｎ、７．８ ｍｍ ｘ ３００ ｍｍ）を用いて分離したピークのうち融合タンパク質のメインピークの面積比（％Ａｒｅａ）を分析した。
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質でメインピークおよび二量体、多量体または切断された形態の異常ペプチドなどの不純物ピークを分析するために、サイズ排除クロマトグラフィー試験法（Ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＳＥ－ＨＰＬＣ）を行った。簡単に、融合タンパク質は、剤形緩衝液で希釈して１．０ｍｇ／ｍＬで調製した後、ゲルろ過クロマトグラフィーカラム（ＴＯＳＯＨ ＴＳＫ－ＧＥＬ Ｇ３０００ＳＷｘＬ ｃｏｌｕｍｎ、７．８ ｍｍ ｘ ３００ ｍｍ）を用いて分離したピークのうち融合タンパク質のメインピークの面積比（％Ａｒｅａ）を分析した。
【0108】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の純度は、９７．３％であることが確認され（図５ａ）、これに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の純度は、９３．２％であることが確認された（図５ｂ）。
【0109】
３．３．等電点電気泳動法（ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇ，ＩＥＦ）
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５およびＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１タンパク質のｃｈａｒｇｅ ｖａｒｉａｎｔｓおよび分布（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を確認するために、等電点電気泳動法（Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇ，ＩＥＦ）を行った。等電点電気泳動法は、タンパク質が有しているｐＩ値を用いて分離したタンパク質を分析する電気泳動法であり、ｐＩ値は、電荷を帯びたタンパク質が電気的中性を帯びることになるｐＨ値を言い、これを等電点という。等電点電気泳動において等電点に到達したタンパク質は、これ以上動かずに、ゲル（ｇｅｌ）上に留まることになって分離される。簡単に、本発明では、ｐＨ ３－１０等電点ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてｐＩ値によって融合タンパク質を分離し、電気泳動が終わったゲルは、１２％ＴＣＡ（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）溶液で固定させた後、クマシー染色法で染色した。
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５およびＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１タンパク質のｃｈａｒｇｅ ｖａｒｉａｎｔｓおよび分布（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を確認するために、等電点電気泳動法（Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇ，ＩＥＦ）を行った。等電点電気泳動法は、タンパク質が有しているｐＩ値を用いて分離したタンパク質を分析する電気泳動法であり、ｐＩ値は、電荷を帯びたタンパク質が電気的中性を帯びることになるｐＨ値を言い、これを等電点という。等電点電気泳動において等電点に到達したタンパク質は、これ以上動かずに、ゲル（ｇｅｌ）上に留まることになって分離される。簡単に、本発明では、ｐＨ ３－１０等電点ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてｐＩ値によって融合タンパク質を分離し、電気泳動が終わったゲルは、１２％ＴＣＡ（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）溶液で固定させた後、クマシー染色法で染色した。
【0110】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１およびＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質は、いずれも、ｐＩ値が５．２～６．０の範囲内であることが確認された（図６）。
【0111】
３．４．示差走査蛍光測定法（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ，ＤＳＦ）
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の熱安定性を分析するために、ＰＲＯＴＥＯＳＴＡＴ（登録商標）熱移動安定性分析キットを用いて実験を行った。分析キットには、タンパク質凝集を感知する蛍光染料が含まれていて、熱ストレス条件で大量のタンパク質が凝集する温度を確認することができる。凝集温度（Ｔａｇｇ）は、タンパク質安定性の指標であり、タンパク質構造の安定性を確認することができる。
精製されたＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の熱安定性を分析するために、ＰＲＯＴＥＯＳＴＡＴ（登録商標）熱移動安定性分析キットを用いて実験を行った。分析キットには、タンパク質凝集を感知する蛍光染料が含まれていて、熱ストレス条件で大量のタンパク質が凝集する温度を確認することができる。凝集温度（Ｔａｇｇ）は、タンパク質安定性の指標であり、タンパク質構造の安定性を確認することができる。
【0112】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の凝集温度は、５５．８℃であることが確認され、これに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の凝集温度は、５０．７℃であることが確認された（図７）。これによって、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質がＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５に比べて構造的に熱に対する安定性がさらに優れていることを確認した。
【0113】
実施例４． ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）活性分析
４．１．ＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ（ＳＨＰ－１）細胞株を用いたＰＤ－１に対する結合能分析
ＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ（ＳＨＰ－１）細胞株を用いてＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質のＰＤ－１に対する結合能を分析した。簡単に、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＪｕｒｋａｔ細胞（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｊｕｒｋａｔ ＰＤ－１（ＳＨＰ－１）、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を分注し、２時間の間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで安定化した。その後、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質をそれぞれ７５および６００ｎＭになるように添加した後、３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで１時間の間反応させた。反応終了後、ＰＤ－１：ＰＤ－Ｌ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｓｐｏｎｓｅによって発現するＳＨＰ－１を探知する試薬（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ，ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を添加してＳＨＰ－１の発光程度（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）を測定した。
４．１．ＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ（ＳＨＰ－１）細胞株を用いたＰＤ－１に対する結合能分析
ＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ（ＳＨＰ－１）細胞株を用いてＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質のＰＤ－１に対する結合能を分析した。簡単に、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＪｕｒｋａｔ細胞（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｊｕｒｋａｔ ＰＤ－１（ＳＨＰ－１）、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を分注し、２時間の間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで安定化した。その後、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質をそれぞれ７５および６００ｎＭになるように添加した後、３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで１時間の間反応させた。反応終了後、ＰＤ－１：ＰＤ－Ｌ１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｓｐｏｎｓｅによって発現するＳＨＰ－１を探知する試薬（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｂｉｏａｓｓａｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ，ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を添加してＳＨＰ－１の発光程度（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）を測定した。
【0114】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を処理したグループでは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループに比べて７５および６００ｎＭの濃度の両方でＳＨＰ－１の発光程度が高いことが示された（図８）。これによって、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質に比べてＰＤ－１に対する結合能がさらに高いことを確認し、特に、濃度が増加するにつれてＰＤ－１に対する結合能がさらに増加したことを確認した。
【0115】
４．２．混合リンパ球反応（Ｍｉｘｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ）の抑制能分析
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質による混合リンパ球反応の抑制能を分析した。簡単に、供与者と授与者のＰＢＭＣ（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ）を準備し、細胞内タンパク質をそめるＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ）およびＣＴＲ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｆａｒ Ｒｅｄ）染色を実施した。それぞれの供与者および授与者ＰＢＭＣを反応細胞と刺激細胞にして１：１の割合で混ぜて９６－ｗｅｌｌ Ｕ－ｂｏｔｔｏｍプレートに入れ、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を０．５μＭ添加した後、３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで５日間反応させた。反応が終了した細胞において反応細胞に染色されたＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ）の蛍光が減少した程度を分析して、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によって混合リンパ球反応が抑制された程度を比較した。
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質による混合リンパ球反応の抑制能を分析した。簡単に、供与者と授与者のＰＢＭＣ（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ）を準備し、細胞内タンパク質をそめるＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ）およびＣＴＲ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｆａｒ Ｒｅｄ）染色を実施した。それぞれの供与者および授与者ＰＢＭＣを反応細胞と刺激細胞にして１：１の割合で混ぜて９６－ｗｅｌｌ Ｕ－ｂｏｔｔｏｍプレートに入れ、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を０．５μＭ添加した後、３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで５日間反応させた。反応が終了した細胞において反応細胞に染色されたＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ）の蛍光が減少した程度を分析して、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によって混合リンパ球反応が抑制された程度を比較した。
【0116】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループでは、対照群（Ａｌｌｏ，ｈｙＦｃ処理群）に比べて混合リンパ球反応による活性化した反応細胞のＣＤ４ Ｔ細胞とＣＤ８ Ｔ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）が減少したことを確認した（図９）。特に、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を処理したグループでは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループに比べて同じ濃度条件で活性化した反応細胞のＣＤ４ Ｔ細胞とＣＤ８ Ｔ細胞の増殖がさらに顕著に減少したことを確認した（図９）。
【0117】
４．３．活性化したヒトＴ細胞の増殖抑制能（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）およびサイトカイン発現抑制能（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）分析
ヒトＰＢＭＣを用いてＴ細胞活性化条件でＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によるヒトＴ細胞の増殖抑制能を比較した。簡単に、抗ＣＤ３抗体とともにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理して４℃で１日間コーティングした。マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，ＭＡＣＳ）を用いて正常ヒトのＰＢＭＣからＣＤ４ Ｔ細胞を分離した後、分離したＣＤ４ Ｔ細胞を細胞内タンパク質を染色するＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ、２．５μＭ）染色を実施した。コーティングが終わったプレートをＰＢＳで洗浄した後、ＣＴＶで染色されたＣＤ４ Ｔ細胞を試験プレートに入れて３日間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。４日が過ぎた後、試験プレートの細胞を収得してフローサイトメトリー装置（ｆｌｏｗ－ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いてＣＴＶの蛍光減少程度を分析した。
ヒトＰＢＭＣを用いてＴ細胞活性化条件でＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によるヒトＴ細胞の増殖抑制能を比較した。簡単に、抗ＣＤ３抗体とともにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理して４℃で１日間コーティングした。マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，ＭＡＣＳ）を用いて正常ヒトのＰＢＭＣからＣＤ４ Ｔ細胞を分離した後、分離したＣＤ４ Ｔ細胞を細胞内タンパク質を染色するＣＴＶ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅＴＭ Ｖｉｏｌｅｔ、２．５μＭ）染色を実施した。コーティングが終わったプレートをＰＢＳで洗浄した後、ＣＴＶで染色されたＣＤ４ Ｔ細胞を試験プレートに入れて３日間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。４日が過ぎた後、試験プレートの細胞を収得してフローサイトメトリー装置（ｆｌｏｗ－ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いてＣＴＶの蛍光減少程度を分析した。
【0118】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループでは、対照群（ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔまたはｈｙＦｃ処理群）に比べて活性化したヒトＴ細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）が減少したことを確認した（図１０ａ）。特に、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を処理したグループでは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループに比べて活性化したヒトＴ細胞の増殖が約２倍程度に顕著に抑制されたことを確認した（図１０ａ）。
【0119】
また、ヒトＰＢＭＣを用いてＴ細胞活性化条件でＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によるヒトＴ細胞のサイトカイン発現抑制能を比較した。簡単に、抗ＣＤ３抗体とともにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を０．５μＭで処理されるように希釈して、４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに４℃で１日間コーティングした。正常ヒトのＰＢＭＣからマイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてＣＤ４ Ｔ細胞を分離した。マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，ＭＡＣＳ）を用いて正常ヒトのＰＢＭＣでＣＤ４ Ｔ細胞を分離した。コーティングが終わったプレートをＰＢＳで洗浄した後、分離したＣＤ４ Ｔ細胞を試験プレートに入れ、３日間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。抗ＩＦＮ－γ抗体（ＤｕｏＳｅｔ Ｈｕｍａｎ ＩＦＮ－ｇａｍｍａ ＥＬＩＳＡ ｓｅｔ，Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ）を試験プレートに入れ、常温でコーティングした。コーティングが完了した試験プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０が添加されたＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で３回洗浄後、１％ＢＳＡが添加されたＰＢＳを添加して２時間の間常温で試験プレートをブロッキングした。試験プレートにＣＤ４細胞に培養液を移して収納し、常温で２時間の間反応させた。ＰＢＳＴで５回洗浄を行い、探知抗体を添加して常温で２時間反応させた後、さらにＰＢＳＴで５回洗浄を行った。洗浄が終わった試験プレートにｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰを添加した後、常温で２０分間反応させた。その後、ＰＢＳＴで５回洗浄し、ＴＭＢ ｓｕｂｓｔｒａｔｅを添加した後、２Ｎ濃度の硫酸（Ｈ２ＳＯ４）を添加して４５０ｎｍで吸光度を測定した。測定された吸光度の値を用いてＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の活性化したＣＤ４ Ｔ細胞によって生成されるＩＦＮ－γ生成抑制能を分析した。
【0120】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループでは、対照群（ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔまたはｈｙＦｃ処理群）に比べて活性化したヒトＣＤ４ Ｔ細胞で生成されたＩＦＮ－γの量が顕著に減少したことを確認した（図１０ｂ）。特に、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を処理したグループでは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループに比べて活性化したヒトＣＤ４ Ｔ細胞で生成されたＩＦＮ－γの量が約３倍程度に顕著に抑制されたことを確認した（図１０ｂ）。
【0121】
４．４．活性化したマウスＴ細胞のサイトカイン発現抑制能（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）分析
マウスＴ細胞活性化条件でＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によるマウスＴ細胞のサイトカイン発現抑制能を比較した。簡単に、５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体とともにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質（０．５μＭ）を試験プレートに入れ、４℃で１日間コーティングした。マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてマウスのリンパ節から分離したリンパ球からＣＤ４ Ｔ細胞を分離した。コーティングしたプレートをＰＢＳで洗浄後、分離したＣＤ４ Ｔ細胞を入れ、３日間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。抗ＩＬ－２抗体（Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－２ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）および抗ＩＦＮ－γ抗体（Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮｇａｍｍａ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を新しい試験プレートに入れ、常温でコーティングした。前日コーティングした試験プレートを洗浄バッファーで４回洗浄後、ａｓｓａｙ ｄｉｌｕｅｎｔ Ａを添加して１時間の間常温でブロッキングした。試験プレートをさらに洗浄バッファーで４回洗浄した後、ＣＤ４ Ｔ細胞培養液を移して収納し、常温で２時間の間反応させた。洗浄バッファーで４回洗浄した後、探知抗体を添加して常温で１時間振とうしつつ反応させ、さらに洗浄バッファーで４回洗浄した。洗浄が終わった試験プレートにｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰを添加した後、常温で３０分間反応させた。洗浄バッファーで５回洗浄し、ＴＭＢ ｓｕｂｓｔｒａｔｅを添加した後、光を遮断した常温で３０分間反応させた。反応終了溶液（ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を添加して１５分以内に４５０ｎｍで吸光度を測定した。測定された吸光度の値を用いてＩＬ－２およびＩＦＮ－γの濃度を計算し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の活性化したＣＤ４ Ｔ細胞によって生成されるＩＬ－２およびＩＦＮ－γ生成抑制能を分析した。
マウスＴ細胞活性化条件でＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質によるマウスＴ細胞のサイトカイン発現抑制能を比較した。簡単に、５μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体とともにＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質（０．５μＭ）を試験プレートに入れ、４℃で１日間コーティングした。マイクロビーズ（ｍｉｃｒｏｂｅａｄ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてマウスのリンパ節から分離したリンパ球からＣＤ４ Ｔ細胞を分離した。コーティングしたプレートをＰＢＳで洗浄後、分離したＣＤ４ Ｔ細胞を入れ、３日間３７℃５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。抗ＩＬ－２抗体（Ｍｏｕｓｅ ＩＬ－２ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）および抗ＩＦＮ－γ抗体（Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮｇａｍｍａ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸＴＭ Ｄｅｌｕｘｅ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を新しい試験プレートに入れ、常温でコーティングした。前日コーティングした試験プレートを洗浄バッファーで４回洗浄後、ａｓｓａｙ ｄｉｌｕｅｎｔ Ａを添加して１時間の間常温でブロッキングした。試験プレートをさらに洗浄バッファーで４回洗浄した後、ＣＤ４ Ｔ細胞培養液を移して収納し、常温で２時間の間反応させた。洗浄バッファーで４回洗浄した後、探知抗体を添加して常温で１時間振とうしつつ反応させ、さらに洗浄バッファーで４回洗浄した。洗浄が終わった試験プレートにｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰを添加した後、常温で３０分間反応させた。洗浄バッファーで５回洗浄し、ＴＭＢ ｓｕｂｓｔｒａｔｅを添加した後、光を遮断した常温で３０分間反応させた。反応終了溶液（ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を添加して１５分以内に４５０ｎｍで吸光度を測定した。測定された吸光度の値を用いてＩＬ－２およびＩＦＮ－γの濃度を計算し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質の活性化したＣＤ４ Ｔ細胞によって生成されるＩＬ－２およびＩＦＮ－γ生成抑制能を分析した。
【0122】
その結果、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１またはＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループでは、対照群（ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔまたはｈｙＦｃ処理群）に比べて活性化したマウスＣＤ４ Ｔ細胞で生成されたＩＬ－２およびＩＦＮ－γの量が顕著に減少したことを確認した（図１１）。特に、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を処理したグループでは、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ５融合タンパク質を処理したグループに比べて活性化したヒトＣＤ４ Ｔ細胞で生成されたＩＬ－２の量が約１．８倍程度に顕著に抑制され、ＩＦＮ－γの量が約４倍程度に顕著に抑制されたことを確認した（図１１）。
【0123】
実施例５．ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）活性分析
５．１．イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）誘導乾癬マウスモデルでＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の効能評価
乾癬が発病すると、ＴＬＲ７／８（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７／８）によって樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）が活性化するが、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８のリガンドであり、マウス皮膚に繰り返し処理すると、乾癬のような炎症反応を起こすことが知られている。イミキモド（ＩＭＱ）は、樹状細胞だけでなく、適応免疫細胞（ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ）であるＴ細胞にも関与するが、このうち、ＩＬ－１７（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１７）を分泌するγδＴ細胞（ｇａｍｍａ ｄｅｌｔａ Ｔ ｃｅｌｌ，γδＴ１７）が優先的に乾癬性炎症（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）に関与する。したがって、ＩＭＱ誘導乾癬マウスモデルは、乾癬患者と類似した表現型を有し、乾癬治療剤の開発に適合したモデルとして使用できる。
５．１．イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）誘導乾癬マウスモデルでＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の効能評価
乾癬が発病すると、ＴＬＲ７／８（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７／８）によって樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）が活性化するが、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）は、ＴＬＲ７とＴＬＲ８のリガンドであり、マウス皮膚に繰り返し処理すると、乾癬のような炎症反応を起こすことが知られている。イミキモド（ＩＭＱ）は、樹状細胞だけでなく、適応免疫細胞（ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ）であるＴ細胞にも関与するが、このうち、ＩＬ－１７（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１７）を分泌するγδＴ細胞（ｇａｍｍａ ｄｅｌｔａ Ｔ ｃｅｌｌ，γδＴ１７）が優先的に乾癬性炎症（ｐｓｏｒｉａｔｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）に関与する。したがって、ＩＭＱ誘導乾癬マウスモデルは、乾癬患者と類似した表現型を有し、乾癬治療剤の開発に適合したモデルとして使用できる。
【0124】
簡単に、マウス動物モデルに乾癬を誘導するために、マウスの両耳にＩＭＱクリームを６日間毎日２０ｍｇ／ｍｏｕｓｅ／ｄａｙで塗布した。ＩＭＱクリームを塗布した０日目から試験終了日である６日目まで毎日７日間キャリパーを用いて各グループのマウスの耳の厚さを測定し、ＩＭＱクリームを塗布しないマウス（ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）の耳の厚さを基準として各グループのマウスにおける変化した耳の厚さの変化を比較した。ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質は、０、１、３、５日目に皮下投与または静脈投与した。またはａｎｔｉ－ＩＬ１２ｐ４０ ａｎｔｉｂｏｄｙは、試験２日目に単回静脈投与（ｉｖ）した。対照群および実験群は、下記表３の通りである。
【0125】
【表3】
【0126】
その結果、ＩＭＱが処理されたグループ（ＩＭＧ－ｖｅｈｉｃｌｅ）では、ＩＭＱが処理されない対照群（Ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べて試験終了日である６日目に耳の厚さが約６８％増加したことを確認した（図１２ａ）。これに対し、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、４日目からマウスの耳の厚さに差異が現れた（図１２ａ）。特に、最低用量である３ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、ＩＭＱが処理されたグループ（ＩＭＧ－ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べて試験終了日である６日目に耳の厚さが５１％程度抑制され、中用量および高用量である１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、ＩＭＱが処理されたグループ（ＩＭＧ－ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べてそれぞれ６７％および６６％の抑制率を示した（図１２ａ）。また、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇを投与したグループと３ｍｇ／ｋｇの低用量を投与したグループの間には、用量による有意差を示したが、１０ｍｇ／ｋｇを投与したグループと３０ｍｇ／ｋｇを投与したグループ間には有意差を示さなかった。
【0127】
また、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したすべてのグループでは、ＩＭＱが処理されたグループ（ＩＭＧ－ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べて試験終了日である６日まで約８７～９２％にマウスの耳の厚さが顕著に抑制される効果があることを確認した（図１２ｂ）。
【0128】
５．２．ドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）誘導Ｐｅｌｉ１遺伝子で形質転換された乾癬マウスモデルでＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の皮下投与による効能評価
本発明者は、慢性炎症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）の乾癬マウスモデルにおけるＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の効能を評価するために、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）誘導乾癬マウスモデルの他にドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）の投与によってＰｅｌｉ１（Ｐｅｌｌｉｎｏ ｈｏｍｏｌｏｇ １）遺伝子が過発現するように形質転換させて、長期間の慢性乾癬症状が誘発された乾癬マウスモデル（以下、「ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデル」という）を用いた。ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルは、乾癬が誘発されるにつれて、上皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）の乾癬病変の発生、炎症性サイトカイン（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の増加のような炎症反応の増加、上皮細胞層の増加、および真皮に食細胞、樹状細胞およびＴｈ１７細胞の浸潤増加を誘発させる。
本発明者は、慢性炎症（ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）の乾癬マウスモデルにおけるＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の効能を評価するために、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ，ＩＭＱ）誘導乾癬マウスモデルの他にドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）の投与によってＰｅｌｉ１（Ｐｅｌｌｉｎｏ ｈｏｍｏｌｏｇ １）遺伝子が過発現するように形質転換させて、長期間の慢性乾癬症状が誘発された乾癬マウスモデル（以下、「ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデル」という）を用いた。ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルは、乾癬が誘発されるにつれて、上皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）の乾癬病変の発生、炎症性サイトカイン（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の増加のような炎症反応の増加、上皮細胞層の増加、および真皮に食細胞、樹状細胞およびＴｈ１７細胞の浸潤増加を誘発させる。
【0129】
簡単に、マウスに乾癬を誘導するために、４週齢のマウスに５％スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）と２ｍｇ／ｍＬのドキシサイクリンが含まれた飲用水を６ヶ月の間飲用するようにした。ドキシサイクリンが含まれた食塩水は、試験期間にも継続して供給された。Ｐｅｌｉ遺伝子で形質転換されないマウス（以下、「ｒｔＴＡ」という）を対照群として使用した。ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質は、８週間週１回皮下投与した。
【0130】
まず、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに皮下投与した後、Ｈ＆Ｅ染色を通じて皮膚上皮組織の変化および皮膚上皮層の厚さを測定する実験を行った。Ｈ＆Ｅ染色結果は、２００Ｘ倍率で観察し、各写真の６部分を任意に指定して測定した。その結果、乾癬が誘発されていない対照群（ｒｔＴＡ）では、上皮層の平均厚さが８．７４μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、上皮層の平均厚さが４８．５６μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）は、対照群に比べて上皮層の厚さが約５．６倍程度増加したことを確認した（図１３ａおよび図１３ｂ）。これに対し、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、上皮層の平均厚さがそれぞれ３８．２９μｍ、４０．１８μｍおよび３１．７４μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べて上皮層の厚さが減少する効果があることを確認した（図１３ａおよび図１３ｂ）。ただし、用量依存的な効果を示されなかった。
【0131】
また、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに皮下投与した後、免疫蛍光染色法を通じて真皮層へのＴ細胞およびマクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）の浸潤程度を比較する実験を行った。Ｔ細胞の検出のためにａｎｔｉ－ＣＤ３抗体を使用し、マクロファージ検出のためにａｎｔｉ－Ｆ４／８０抗体を使用した。結果は、免疫蛍光顕微鏡の４００Ｘ倍率で観察し、同一面積内細胞の数を算出した。
【0132】
その結果、乾癬が誘発されていない対照群（ｒｔＴＡ）では、皮膚組織にＴ細胞とマクロファージがほとんど浸潤されなかったことを確認し、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、皮膚組織に浸潤しているＴ細胞およびマクロファージの数が増加したことを確認した（図１４）。特に、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、皮膚組織に浸潤しているＴ細胞の数が約４７個であることが確認された（図１５）。これに対し、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、皮膚組織に浸潤しているＴ細胞の数がそれぞれ約３２個、１４個および７個であり、用量依存的に浸潤しているＴ細胞の数が顕著に減少したことを確認した（図１５）。
【0133】
また、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに皮下投与した後、ａｎｔｉ－Ｋ１４抗体を用いた免疫蛍光染色法を通じて皮膚組織でケラチン生成細胞の変化を分析した。Ｋ１４（Ｋｅｒａｔｉｎ １４）の発現は、増殖を担当する基底層（ｂａｓａｌ ｌａｙｅｒ）に現れ、これらの発現増加は、ケラチン生成細胞のうち増殖を担当する細胞が増加したと解釈することができる。結果は、同一面積内細胞数を測定して比較した。その結果、乾癬が誘発されていない対照群（ｒｔＴＡ）では、Ｋ１４＋ケラチン生成細胞の数が５９個であり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、ケラチン生成細胞の数が１９７個であり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループでは、対照群に比べてケラチン生成細胞の数が約３．３倍程度増加した（図１６）。これに対し、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を皮下投与したグループでは、ケラチン生成細胞の数がそれぞれ約１７９個、１５０個および９８個であり、用量依存的にケラチン生成細胞の数が減少し、特に、３０ｍｇ／ｋｇの用量では、ケラチン生成細胞の数が顕著に減少したことを確認した（図１６）。
【0134】
５．３．ドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）誘導Ｐｅｌｉ１遺伝子で形質転換された乾癬マウスモデルでＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質の静脈投与による効能評価
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに５週間週１回静脈投与した後、皮膚上皮層の変化をスコア（ｓｃｏｒｅ）指数で分析し、キャリパー（ｃａｌｉｐｅｒ）を用いて腹部の皮膚の厚さを測定する実験を行った。スコア指数は、次のように評価した：０＝ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；１＝ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｉａ ａｐｐｅａｒ；２＝ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｉａ ａｐｐｅａｒ ｏｎ ｈａｌｆ ｏｆ ｂａｃｋ ｓｋｉｎ，ｏｒ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｏｖｅｒｔｏｐ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；３＝ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ａｐｐｅａｒ ｏｎ ｗｈｏｌｅ ｂａｃｋ ｓｋｉｎ，ｏｒ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｏｖｅｒｔｏｐ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；４＝ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １１０，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１９，Ｐａｇｅｓ ２６５－２７４）。
ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに５週間週１回静脈投与した後、皮膚上皮層の変化をスコア（ｓｃｏｒｅ）指数で分析し、キャリパー（ｃａｌｉｐｅｒ）を用いて腹部の皮膚の厚さを測定する実験を行った。スコア指数は、次のように評価した：０＝ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；１＝ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｉａ ａｐｐｅａｒ；２＝ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｉａ ａｐｐｅａｒ ｏｎ ｈａｌｆ ｏｆ ｂａｃｋ ｓｋｉｎ，ｏｒ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｏｖｅｒｔｏｐ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；３＝ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ａｐｐｅａｒ ｏｎ ｗｈｏｌｅ ｂａｃｋ ｓｋｉｎ，ｏｒ ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｏｖｅｒｔｏｐ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｓｋｉｎ；４＝ｓｋｉｎ ｌｅｓｉｏｎｓ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １１０，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１９，Ｐａｇｅｓ ２６５－２７４）。
【0135】
その結果、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、対照群（ｒｔＴＡ）に比べてスコア指数が３近く増加したのに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、スコア指数がｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループに比べて減少したことを確認した（図１７）。また、スコア指数と同様に、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、対照群（ｒｔＴＡ）に比べて腹部の皮膚の厚さが約１００μｍ程度増加したのに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、対照群（ｒｔＴＡ）と類似したレベルに皮膚の厚さが減少したことを確認した（図１８）。ただし、前記結果において、用量依存的な効果は確認されなかった。
【0136】
また、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに静脈投与した後、Ｈ＆Ｅ染色を通じて皮膚上皮組織の変化および皮膚上皮層の厚さを測定する実験を行った。Ｈ＆Ｅ染色結果は、顕微鏡の４００Ｘ倍率で観察し、上皮層の６部分を任意に指定し、Ｉｍａｇｅ Ｊプログラムを用いて皮膚上皮層の厚さを測定した。その結果、乾癬が誘発されていない対照群（ｒｔＴＡ）では、上皮層の平均厚さが２３．８μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、上皮層の平均厚さが１０４．５μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）は、対照群に比べて上皮層の厚さが約４．４倍程度増加したことを確認した（図１９ａおよび図１９ｂ）。これに対し、１、３および１０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、上皮層の平均厚さがそれぞれそれぞれ約９７．９μｍ、８６．３μｍおよび７３．３μｍであり、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）に比べて上皮層の厚さが用量依存的に減少する効果があることを確認した（図１９ａおよび図１９ｂ）。
【0137】
また、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質をｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１乾癬マウスモデルに静脈投与した後、ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－２２のようなＴｈ１７細胞関連遺伝子（Ｔｈ１７ ｃｅｌｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ）とＩＬ－１βおよびＩＬ－２４のような先天性免疫細胞関連遺伝子（ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ）のｍＲＮＡ発現変化を確認するために、ｑＲＴ－ＰＣＲを行った。その結果、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、対照群（ｒｔＴＡ）に比べてＬ－１７ＡおよびＩＬ－２２のようなＴｈ１７細胞関連遺伝子のｍＲＮＡ発現が増加する様相を示したのに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、Ｔｈ１７細胞関連遺伝子のｍＲＮＡ発現が減少したことを確認した（図２０）。また、これと同様に、乾癬が誘発されたｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１グループ（ｒｔＴＡ－Ｐｅｌｉ１ Ｖｅｈｉｃｌｅ）では、対照群（ｒｔＴＡ）に比べてＩＬ－１βおよびＩＬ－２４のような先天性免疫細胞関連遺伝子のｍＲＮＡ発現が増加する様相を示したのに対し、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、Ｔｈ１７細胞関連遺伝子のｍＲＮＡ発現が減少する傾向を示した（図２０）。特に、１０ｍｇ／ｋｇのＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質を静脈投与したグループでは、ＩＬ－２４ ｍＲＮＡの発現が有意に減少した（図２０）。
【0138】
前記結果から、ＰＤ－Ｌ１－ｈｙＦｃ２１融合タンパク質は、皮下投与または静脈投与を通じて乾癬のような自己免疫疾患の病因に重要な要因であるＣＤ４ Ｔ細胞の増殖を抑制と、病変に伴う炎症性サイトカインの発現を抑制する効果があるので、乾癬のような免疫疾患の治療剤として使用できることを確認した。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19A】
【図19B】
【図20】
【配列表】
【国際調査報告】