特表 2023-513834 ＰＩＬＲＡ抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-03

(54)【発明の名称】ＰＩＬＲＡ抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230327BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230327BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230327BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230327BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230327BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230327BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230327BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230327BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230327BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230327BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230327BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230327BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230327BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230327BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C07K19/00

C07K16/46

A61P43/00 105

A61P35/00

A61P43/00 121

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61P25/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022549422

(86)(22)【出願日】2021-02-17

(85)【翻訳文提出日】2022-09-16

(86)【国際出願番号】 US2021018354

(87)【国際公開番号】W WO2021167964

(87)【国際公開日】2021-08-26

(31)【優先権主張番号】62/978,106

(32)【優先日】2020-02-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/075,440

(32)【優先日】2020-09-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517041235

【氏名又は名称】アレクトル エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】リャン スペンサー

(72)【発明者】

【氏名】ナレ サミュエル

(72)【発明者】

【氏名】レオン リン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG26

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA15X

4B065AA26X

4B065AA41X

4B065AA50X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB11

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメント、ならびに、かかる抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を提供する。特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、リガンドへのＰＩＬＲＡの結合を遮断し、かつ／または細胞表面ＰＩＬＲＡを低減させる。さらなる態様では、前記抗体または抗原結合フラグメントは、骨髄細胞機能不全に関連する疾患または状態を処置するために使用することができる。
【選択図】図６

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断し、かつ細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項2】

ヒトＰＩＬＲＡ（配列番号１）の残基Ａｒｇ１２６の、ＰＩＬＲＡの１つまたは複数のリガンドへの結合を遮断する、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％遮断する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

細胞表面ＰＩＬＲＡを、３７℃にて３０分後、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％下方制御する、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合し、かつ
（ａ）それぞれ配列番号４～９；
（ｂ）それぞれ配列番号１０～１５；
（ｃ）それぞれ配列番号１６～２１；または
（ｄ）それぞれ配列番号２２～２７
の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項6】

ヒトＰＩＬＲＡへの参照抗体の結合を競合的に阻害する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記参照抗体が、
（ａ）それぞれ配列番号２８及び２９；
（ｂ）それぞれ配列番号３０及び３１；
（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３；または
（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項7】

（ａ）それぞれ配列番号２８及び２９；
（ｂ）それぞれ配列番号３０及び３１；
（ｃ）それぞれ配列番号３２及び３３；または
（ｄ）それぞれ配列番号３４及び３５
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体と同じヒトＰＩＬＲＡエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項8】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１からなる群から選択される抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ、ＩＭＧＴ定義ＣＤＲ、またはＡｂＭ定義ＣＤＲである、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項10】

配列番号２８、３０、３２、または３４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項11】

配列番号２９、３１、３３、または３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項12】

（ｅ）それぞれ配列番号２８及び２９；
（ｆ）それぞれ配列番号３０及び３１；
（ｇ）それぞれ配列番号３２及び３３；または
（ｈ）それぞれ配列番号３４及び３５
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項13】

請求項１２に記載の抗体のヒト化型。

【請求項14】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が配列番号２８、３０、３２、または３４のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項15】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号２９、３１、３３、または３５のアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項16】

ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断し、かつ細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する、請求項５～１５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項17】

ヒトＰＩＬＲＡ（配列番号１）のリガンドのうちの１つまたは複数への前記ヒトＰＩＬＲＡの残基Ａｒｇ１２６の結合を遮断する、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項18】

ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％遮断する、請求項１６または１７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項19】

細胞表面ＰＩＬＲＡを、３７℃にて３０分後、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％下方制御する、請求項５～１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項20】

前記下方制御が用量依存的である、請求項１～４及び１６～１９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項21】

前記遮断が用量依存的である、請求項１～４及び１６～２０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項22】

骨髄細胞を活性化する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項23】

骨髄細胞分化を促進する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項24】

骨髄細胞によるＭＩＰ１ｂ産生を増加させる、請求項１～２３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項25】

ＮＰＤＣ１へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項26】

骨髄細胞の活性化、骨髄細胞分化の促進、ＭＩＰ１ｂ産生の増加、及び／またはリガンド結合の遮断が用量依存的である、請求項２２～２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項27】

カニクイザルＰＩＬＲＡに結合する、請求項１～２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項28】

ヒトＰＩＬＲＢに結合しない、請求項１～２７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項29】

配列番号１のアミノ酸２０～１９７内のエピトープに結合する、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項30】

抗体２１７５Ｂが、ヒトＰＩＬＲＡへの前記抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を競合的に阻害しない、請求項１～２９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項31】

重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項32】

前記重鎖定常領域が、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４アイソタイプからなる群から選択されるアイソタイプである、請求項３１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項33】

エフェクター機能を低下させるように操作されたＦｃドメインを含む、請求項３２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項34】

前記抗体または抗原結合フラグメントが重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ_１重鎖定常領域であり、かつ前記軽鎖定常領域がヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である、請求項１～３３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項35】

モノクローナル抗体である、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項36】

マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくはヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項37】

完全長抗体である、請求項１～３６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項38】

抗原結合フラグメントである、請求項１～３６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項39】

Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項３８に記載の抗原結合フラグメント。

【請求項40】

検出可能な標識をさらに含む、請求項１～３９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項41】

請求項１～４０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項42】

前記核酸分子が、配列番号２８、３０、３２、または３４のＶＨをコードする、請求項４１に記載の単離されたポリヌクレオチド。

【請求項43】

請求項１～４０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項44】

前記核酸分子が、配列番号２９、３１、３３、または３５のＶＬをコードする、請求項４３に記載の単離されたポリヌクレオチド。

【請求項45】

請求項１～３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域または重鎖と、請求項１～４０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域または軽鎖とをコードする、核酸分子
を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項46】

請求項４１～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、単離されたベクター。

【請求項47】

（ａ）請求項４１～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、（ｂ）請求項４６に記載のベクター、または（ｃ）請求項４１もしくは４２に記載のポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び請求項４３もしくは４４に記載のポリヌクレオチドを含む第２のベクター
を含む、宿主細胞。

【請求項48】

組織培養物中の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ １、ＣＯＳ ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞
からなる群から選択される、請求項４７に記載の宿主細胞。

【請求項49】

ヒトＰＩＬＲＡに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法であって、核酸分子が発現しかつ前記抗体またはその抗原結合フラグメントが産生されるように請求項４７または４８に記載の宿主細胞を培養することを含み、任意選択で、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを培養物から単離することをさらに含む、前記方法。

【請求項50】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合し、かつ、請求項４１～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるかまたは請求項４９に記載の方法によって産生される、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項51】

請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントならびに医薬的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項52】

細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御するための方法であって、細胞の表面上にＰＩＬＲＡを発現する細胞を、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。

【請求項53】

ＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡの結合を阻害するための方法であって、ＰＩＬＲＡを、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と、前記ＰＩＬＲＡリガンドの存在下で接触させることを含み、任意選択で、前記ＰＩＬＲＡ及び／または前記ＰＩＬＲＡリガンドが細胞上に発現している、前記方法。

【請求項54】

前記ＰＩＬＲＡリガンドがＮＰＤＣ１であり、かつ／または前記ＰＩＬＲＡリガンドがＴ細胞上に発現している、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

骨髄細胞活性化を増加させるための方法であって、前記骨髄細胞を、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。

【請求項56】

骨髄細胞分化を促進させるための方法であって、前記骨髄細胞を、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。

【請求項57】

骨髄細胞のＭＩＰ１ｂ産生を増加させるための方法であって、前記骨髄細胞を、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。

【請求項58】

前記接触させることがインビトロである、請求項５２～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記接触させることが対象内である、請求項５２～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

患者のがんを処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項61】

前記がんが固形腫瘍であり、前記固形腫瘍中の骨髄細胞が腫瘍微小環境に浸潤している、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記がんが、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌（任意選択で、前記腎臓癌が腎明細胞癌である）、膵臓癌、及び乳癌から選択される、請求項６０または請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含み、任意選択で、前記免疫チェックポイント分子がＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１である、請求項６０～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記アンタゴニストがＰＤ－１のアンタゴニストであり、前記ＰＤ－１のアンタゴニストが抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、任意選択で、前記抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、及びスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記アンタゴニストがＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストであり、前記ＰＤ－１のアンタゴニストが抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、任意選択で、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、アテゾリズマブ、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、及びｒＨｉｇＭ１２Ｂ７からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。

【請求項66】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合フラグメント、及び前記阻害性免疫チェックポイント分子の前記アンタゴニストが、同時投与される、請求項６３～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合フラグメント、及び前記阻害性免疫チェックポイント分子の前記アンタゴニストが、逐次投与される、請求項６３～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

患者において骨髄細胞が機能不全または欠損している疾患または状態を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項69】

前記疾患または状態が神経変性疾患である、請求項６８に記載の前記方法。

【請求項70】

前記神経変性疾患がアルツハイマー病であり、任意選択で、前記患者がＰＩＬＲＡのＧ７８変異体を保有する、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

患者の自然免疫系を活性化する方法であって、前記患者に、有効量の請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項72】

試料中のＰＩＬＲＡを検出するための方法であって、前記試料を、請求項１～４０及び５０のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項５１に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。

【請求項73】

前記試料がヒト対象から得られ、任意選択で、前記試料ががん試料である、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記骨髄細胞活性化がＦｃ受容体媒介性である、請求項５５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月１８日に出願された米国仮出願第６２／９７８，１０６号、及び２０２０年９月８日に出願された米国仮出願第６３／０７５，４４０号の利益を主張し、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子提出された配列表についての言及
電子提出された配列表（名称：４５０３＿００９ＰＣ０２＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：５２，０６３バイト；及び作製日：２０２１年２月１２日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0003】

１．分野
本開示は、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体、かかる抗体を含む組成物、ならびにヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体を作製及び使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

２．関連技術の説明
ペア型免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）は、単球、マクロファージ、ミクログリア（ＣＮＳ内）、樹状細胞及び好中球などの骨髄系のさまざまな自然免疫細胞上で発現する細胞表面受容体である。ＰＩＬＲＡは、細胞内ＩＴＩＭドメイン及び細胞外ＩｇＶドメインを含有する阻害性受容体であり、そのリガンドは特定のシアル化Ｏ－グリコシル化タンパク質を含む。ＰＩＬＲＡは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）に対する侵入受容体でもある。ＰＩＬＲＡ遺伝子に天然に存在する対立遺伝子は、コードされたＰＩＬＲＡタンパク質にミスセンス変異体（Ｇ７８からＲ７８）をもたらす。ＰＩＬＲＡのＲ７８変異体は、アルツハイマー病のリスク低下と関連している。この変異体は、ＰＩＬＲＡのシアル酸結合ポケットへのアクセスを変更することにより、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちのいくつかへのＰＩＬＲＡの結合を減少させることも報告されている。この変異体は、ミクログリアにおける阻害性シグナル伝達を減少させ、ＨＳＶ－１再発中のミクログリア感染を減少させることにより、アルツハイマー病から個体を保護することが提案されている。

【0005】

ＰＩＬＲＡの発現及び機能を考慮して、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体を本明細書で提供する。かかる抗体は、リガンドへのＰＩＬＲＡの結合を遮断することによって及び／または細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御することによって、ＰＩＬＲＡの阻害性シグナル伝達を減少させ得る。かかる抗体を使用して、骨髄細胞を活性化し、がん及び神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を含む、骨髄細胞活性化が望まれる疾患を処置し得る。これら及び他の組成物及び方法を本明細書で提供する。

【発明の概要】

【0006】

３．概要
ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体及びその抗原結合フラグメント、ならびにその使用方法を本明細書で提供する。

【0007】

本明細書で提供するいくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＰＩＬＲＡリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断し、かつＰＩＬＲＡは細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する。

【0008】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ（配列番号１）の残基Ａｒｇ１２６の、ＰＩＬＲＡの１つまたは複数のリガンドへの結合を遮断する。

【0009】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％遮断する。

【0010】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞表面ＰＩＬＲＡを、３７℃にて３０分後、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％下方制御する。

【0011】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４～９；それぞれ配列番号１０～１５；それぞれ配列番号１６～２１；またはそれぞれ配列番号２２～２７の、重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む。

【0012】

いくつかの態様では、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡへの参照抗体の結合を競合的に阻害し、参照抗体は、それぞれ配列番号２８及び２９；それぞれ配列番号３０及び３１；それぞれ配列番号３２及び３３；またはそれぞれ配列番号３４及び３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。

【0013】

いくつかの態様では、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２８及び２９；それぞれ配列番号３０及び３１；それぞれ配列番号３２及び３３；またはそれぞれ配列番号３４及び３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体と同じヒトＰＩＬＲＡエピトープに結合する。

【0014】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１からなる群から選択される抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義ＣＤＲ、ＩＭＧＴ定義ＣＤＲ、またはＡｂＭ定義ＣＤＲである。

【0015】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８、３０、３２、または３４のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２９、３１、３３、または３５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0016】

いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２８及び２９；それぞれ配列番号３０及び３１；それぞれ配列番号３２及び３３；またはそれぞれ配列番号３４及び３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２８及び２９；それぞれ配列番号３０及び３１；それぞれ配列番号３２及び３３；またはそれぞれ配列番号３４及び３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むヒト化型または抗体である。

【0017】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号２８、３０、３２、または３４のアミノ酸配列を含む。

【0018】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２９、３１、３３、または３５のアミノ酸配列を含む。

【0019】

細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの態様では、下方制御は、用量依存的である。

【0020】

ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ（配列番号１）の残基Ａｒｇ１２６の、ＰＩＬＲＡの１つまたは複数のリガンドへの結合を遮断する。

【0021】

ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントのいくつかの態様では、遮断は、用量依存的である。

【0022】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄細胞を活性化する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄細胞分化を促進する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄細胞によるＭＩＰ１ｂ産生を増加させる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＮＰＤＣ１へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する。いくつかの態様では、骨髄細胞の活性化、骨髄細胞分化の促進、ＭＩＰ１ｂ産生の増加、及び／またはリガンド結合の遮断は、用量依存的である。

【0023】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＰＩＬＲＡに結合する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＢに結合しない。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡの細胞外ドメインに結合する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸２０～１９７内のエピトープに結合する。

【0024】

いくつかの態様では、抗体２１７５Ｂは、ヒトＰＩＬＲＡへの抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を、競合的に阻害しない。

【0025】

いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４アイソタイプからなる群から選択されるアイソタイプである。いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、エフェクター機能を低下させるように操作されたＦｃドメインを含む。

【0026】

いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ_１重鎖定常領域であり、かつ軽鎖定常領域は、ヒトＩｇＧκ軽鎖定常領域である。

【0027】

いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体である。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくはヒト抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0028】

いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、完全長抗体である。いくつかの態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、抗原結合フラグメントである。いくつかの態様では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ^２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0029】

いくつかの態様では、検出可能な標識をさらに含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【0030】

本明細書で提供するいくつかの態様では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域または重鎖をコードする核酸分子を含む。いくつかの態様では、核酸分子は、配列番号２８、３０、３２、または３４のＶＨをコードする。

【0031】

いくつかの態様では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域または軽鎖をコードする核酸分子を含む。いくつかの態様では、核酸分子は、配列番号２９、３１、３３、または３５のＶＬをコードする。

【0032】

いくつかの態様では、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域または重鎖と、抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域または軽鎖とをコードする、核酸分子含む。

【0033】

本明細書で提供するいくつかの態様では、単離されたベクターは、本明細書で提供するポリヌクレオチドを含む。

【0034】

本明細書で提供するいくつかの態様では、宿主細胞は、（ａ）本明細書で提供するポリヌクレオチド、（ｂ）本明細書で提供するベクター、または（ｃ）本明細書で提供する軽鎖可変領域または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び本明細書で提供する重鎖可変領域または重鎖をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。いくつかの態様では、宿主細胞は、組織培養物中の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ １、ＣＯＳ ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される。

【0035】

本明細書で提供するいくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法は、核酸分子が発現しかつ抗体またはその抗原結合フラグメントが産生されるように、本明細書で提供する宿主細胞を培養することを含む。いくつかの態様では、本方法は、抗体またはその抗原結合フラグメントを培養物から単離することをさらに含む。

【0036】

本明細書で提供するいくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で提供するポリヌクレオチドによってコードされるか、または本明細書で提供する方法によって産生される。

【0037】

本明細書で提供するいくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書で提供する抗体または抗原結合フラグメント、及び医薬的に許容可能な賦形剤を含む。

【0038】

本明細書で提供するいくつかの態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御するための方法は、細胞の表面上にＰＩＬＲＡを発現する細胞を、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と接触させることを含む。

【0039】

いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡの結合を阻害するための方法は、ＰＩＬＲＡを、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と、ＰＩＬＲＡリガンドの存在下で接触させることを含み、任意選択で、ＰＩＬＲＡ及び／またはＰＩＬＲＡリガンドは、細胞上に発現している。いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡリガンドは、ＮＰＤＣ１である。いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡリガンドは、Ｔ細胞上に発現している。

【0040】

いくつかの態様では、骨髄細胞活性化を増加させるための方法は、骨髄細胞を、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、骨髄細胞活性化は、Ｆｃ受容体媒介性である。

【0041】

いくつかの態様では、骨髄細胞分化を促進させるための方法は、骨髄細胞を、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と接触させることを含む。

【0042】

いくつかの態様では、ＭＩＰ１ｂの骨髄細胞産生を増加させるための方法は、骨髄細胞を、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と接触させることを含む。

【0043】

いくつかの態様では、接触させることは、インビトロである。いくつかの態様では、接触させることは、対象内である。

【0044】

いくつかの態様では、患者のがんを処置する方法は、患者に、治療有効量の本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、がんは固形腫瘍であり、固形腫瘍中の骨髄細胞が腫瘍微小環境に浸潤している。いくつかの態様では、がんは、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌（任意選択で、腎臓癌は腎明細胞癌である）、膵臓癌、及び乳癌から選択される。いくつかの態様では、本方法は、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの態様では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１である。いくつかの態様では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗体フラグメントである。いくつかの態様では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、及びスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、アテゾリズマブ、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、及びｒＨｉｇＭ１２Ｂ７からなる群から選択される。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント及び阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストは、同時投与される。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント及び阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストは、逐次投与される。

【0045】

いくつかの態様では、患者において骨髄細胞が機能不全であるかまたは欠損している疾患または状態を処置する方法は、患者に、治療有効量の本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、疾患または状態は、神経変性疾患である。いくつかの態様では、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの態様では、患者は、ＰＩＬＲＡのＧ７８変異体を保有している。

【0046】

いくつかの態様では、患者の自然免疫系を活性化する方法は、患者に、有効量の本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物を投与することを含む。

【0047】

いくつかの態様では、試料中のＰＩＬＲＡを検出するための方法は、試料を、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは本明細書で提供する医薬組成物と接触させることを含む。いくつかの態様では、試料は、ヒト対象から得られる。いくつかの態様では、試料は、がん試料である。

【図面の簡単な説明】

【0048】

４．図面の簡単な説明

【図1】図１Ａは、ＰＩＬＲＡ ＦｃまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照への初代ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＪｕｒｋａｔ細胞の結合を示す。（実施例１を参照されたい。）図１Ｂは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、ＣＤ４＋Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を阻害することを示す。（実施例１を参照されたい。）

【図2A】ビヒクル、ｍＩｇＧ１、またはＰＩＬＲＡ Ｆｃ ｍＩｇＧ１で処理された骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）上のＣＤ１４対ＣＤ８６の発現を示す代表的なＦＡＣＳプロットを示す。（実施例２を参照されたい。）

【図2B】ビヒクル処理細胞と比較した、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照またはＰＩＬＲＡ Ｆｃで処理した後の、３人の異なるドナーからの活性化骨髄細胞のパーセンテージを示す。（実施例２を参照されたい。）

【図3】ＭＤＳＣによるＭＩＰ１ｂの産生に対するＰＩＬＲＡ Ｆｃの効果を示す。（実施例３を参照されたい。）

【図4】マウスＰＩＬＲＡへのＮＰＤＣ１ Ｆｃの結合に対する抗マウスＰＩＬＲＡ抗体の効果を示す。（実施例５を参照されたい。）

【図5】ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合に対する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の効果を示す。（実施例７を参照されたい。）

【図6】細胞表面ＰＩＬＲＡに対する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の効果を示す。（実施例８を参照されたい。）

【図7】腫瘍（各列の左側にあるドット及び塗りつぶされていないボックス）及びそれに対する健常試料（各列の右側にあるドット及び塗りつぶされたボックス）のＰＩＬＲＡ ｍＲＮＡ発現レベルを示す。^＊は、ｐ＜０．０１を示す。（実施例９を参照されたい。）

【図8】同系ＭＣ３８腫瘍モデルにおける抗ＰＤ－Ｌ１と組み合わせたＰＩＬＲＡ Ｆｃの効果を示す。（実施例１０を参照されたい。）

【図9】ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４が、ＰＩＬＲＡ発現細胞への競合的結合を示すのに対し、抗体２１７５Ｂはそうではないことを示す。（実施例１２を参照されたい。）

【図10A】Ｕ９３７親細胞、Ｕ９３７対照細胞、及びＵ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞におけるＰＩＬＲＡの相対量を示すグラフを示す。（実施例１３を参照されたい。）

【図10B】ＩｇＧ、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４で処理されたＵ９３７親細胞、Ｕ９３７対照細胞、及びＵ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞におけるＭＣＰ－１産生を示す。（実施例１３を参照されたい。）

【図10C】ＩｇＧ、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４で処理されたＵ９３７親細胞、Ｕ９３７対照細胞、及びＵ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞におけるＲＡＮＴＥＳ産生を示す。（実施例１３を参照されたい。）

【図11】Ｕ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞におけるＭＣＰ－１産生に対するさまざまな濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体の効果を示す。（実施例１４を参照されたい。）

【図12】ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４が、初代ヒト単球のＦｃ受容体活性化を増強することを示す。（実施例１５を参照されたい。）

【図13】ヒトＰＩＬＲＡ（配列番号１）及びヒトＰＩＬＲＢ（配列番号６８）タンパク質配列のアライメントを提供する。

【図14A】ＰＩＬＲＢ標識とは異なるアミノ酸を伴う、ＰＩＬＲＡ（Ｎ末端にＭｅｔが付加されたアミノ酸３２～１５０）構造（Ｋｕｒｏｋｉ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ １１１：８７７－８８８２（２０１４）；構造コード３ＷＶ０に基づく）を提供する。

【図14B】ＰＩＬＲＢ標識とは異なるアミノ酸を伴う、ＰＩＬＲＡ（Ｎ末端にＭｅｔが付加されたアミノ酸３２～１５０）構造（Ｋｕｒｏｋｉ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ １１１：８７７－８８８２（２０１４）；構造コード３ＷＶ０に基づく）を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0049】

５．詳細な説明
ＰＩＬＲＡ、例えば、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、リガンドへのヒトＰＩＬＲＡの結合を遮断すること及び／または細胞表面ヒトＰＩＬＲＡを下方制御することができる。これらの活性を実証する例示的な抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を本明細書で提供する。リガンドへのヒトＰＩＬＲＡの結合の遮断及び／または細胞表面ヒトＰＩＬＲＡの下方制御は、ＰＩＬＲＡによる阻害性シグナル伝達を減少させ、骨髄細胞の活性化及び分化をもたらす。これらの活性は、抗腫瘍免疫を促進し、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病及び機能不全ミクログリアに関連する他の疾患のメカニズムに対抗し得る。

【0050】

かかる抗体及びその抗原結合フラグメントをコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離された核酸（ポリヌクレオチド）も提供する。かかる抗体及びその抗原結合フラグメントをコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）をさらに提供する。かかる抗体及びその抗原結合フラグメントを作製する方法も提供する。

【0051】

他の態様では、例えば、ＰＩＬＲＡ活性を調節するためにかかる抗体を使用するための方法を本明細書で提供する。ＰＩＬＲＡ活性は、例えば、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を変更することによって調節することができる。いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を使用して、リガンドへのヒトＰＩＬＲＡの結合を遮断しかつ／または細胞表面ヒトＰＩＬＲＡを下方制御する。

【0052】

さらなる態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を使用して、インビトロまたはインビボで、骨髄細胞、例えば、マクロファージ、単球、樹状細胞、好中球、及びミクログリアを活性化する。さらなる態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を使用して、骨髄細胞が機能不全であるかまたは欠損している疾患、例えば、骨髄細胞活性化、骨髄細胞分化、または自然免疫系の活性化が望まれる疾患を処置する。いくつかの態様では、かかる疾患には、限定されないが、がん及び神経変性疾患、例えばアルツハイマー病が含まれる。特に、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちのいくつかへのＰＩＬＲＡの結合を減少させることが報告されているＰＩＬＲＡのＲ７８変異体は、アルツハイマー病のリスクの低下と関連している。それゆえ、いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡ機能を低下させる抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体（例えば、リガンドへのＰＩＬＲＡの結合を遮断すること及び／または細胞表面ヒトＰＩＬＲＡを下方制御することによる）は、アルツハイマー病の処置に有用であるだろう。関連する組成物（例えば、医薬組成物）、キット、及び方法も提供する。

【0053】

５．１ 用語
本明細書で使用する場合、「ＰＩＬＲＡ」という用語は、天然ＰＩＬＲＡポリペプチド及びＰＩＬＲＡポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物ＰＩＬＲＡポリペプチドを指す。「ＰＩＬＲＡ」は、完全長、未プロセシングのＰＩＬＲＡポリペプチド、ならびに細胞内でのプロセシングから生じるＰＩＬＲＡポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用する場合、「ヒトＰＩＬＲＡ」という用語は、配列番号１のアミノ酸配列；配列番号１の天然に存在する変異体、例えば、限定されないが、ＧまたはＲのいずれかが配列番号１の７８位に存在するその変異体；及び配列番号１のプロセシングされた形態、例えば、限定されないが、例えば、配列番号１のアミノ酸１～１９のそのシグナルペプチドを欠く配列番号１を含むポリペプチドを指す。「ＰＩＬＲＡポリヌクレオチド」、「ＰＩＬＲＡヌクレオチド」、または「ＰＩＬＲＡ核酸」は、上記のものを含む、任意のＰＩＬＲＡをコードするポリヌクレオチドを指す。

【0054】

「抗体」という用語は、標的、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせ（例えば、糖タンパク質）を、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、認識し、これに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び抗体が所望の生物学的活性を示す限りにおいて任意の他の免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、５つの主な免疫グロブリンクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）のいずれかであり得る。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元構造を有する。抗体は、裸であるか、融合タンパク質の一部であるか、毒素、放射性同位元素などの他の分子にコンジュゲートしている場合がある。

【0055】

「抗体フラグメント」という用語は、抗体の一部分を指す。「抗原結合フラグメント」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」とは、抗原に結合する抗体の一部分を指す。抗原結合フラグメントは、抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有し得る。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、線状抗体、ならびに一本鎖抗体が挙げられる。抗体の抗原結合フラグメントは、任意の動物種、例えばげっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトに由来することができるか、または人工的に産生することができる。

【0056】

「抗ＰＩＬＲＡ抗体」、「ＰＩＬＲＡ抗体」及び「ＰＩＬＲＡに結合する抗体」という用語は、抗体が診断剤、治療剤及び／またはＰＩＬＲＡ活性の調整剤として有用であるように、十分な親和性でＰＩＬＲＡと結合することができる抗体を指す。無関係の非ＰＩＬＲＡタンパク質への抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合、ＰＩＬＲＡへの抗体の結合の約１０％未満であり得る。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡのみに結合し、ＰＩＬＲＢには結合しないか、または抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ＰＩＬＲＡ及びＰＩＬＲＢに結合することができる。

【0057】

「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントとは、単一の抗原決定基、すなわち、エピトープの高い特異的認識及び結合に関与する均質な抗体または抗原結合フラグメント集団を指す。これは、異なる抗原決定基に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、インタクト及び完全長のモノクローナル抗体ならびに抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の改変された免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合フラグメントは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない多くの方法で作製されるような抗体及びその抗原結合フラグメントを指す。

【0058】

本明細書で使用する場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は交換可能に使用され、当技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部分、一般に、軽鎖または重鎖の一部分、典型的には、成熟重鎖のアミノ末端約１１０～１２０アミノ酸または１１０～１２５アミノ酸及び成熟軽鎖の約９０～１１５アミノ酸を指し、これらは抗体間で配列が大幅に異なり、特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に用いられる。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中しているが、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いずれの特定のメカニズムまたは理論にも拘束されることを望まないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが抗体と抗原との相互作用及び特異性を主に担っていると考えられている。いくつかの態様では、可変領域は、ヒト可変領域である。いくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの態様では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。いくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

【0059】

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、互換可能に使用され、抗体の軽鎖可変領域を指す。

【0060】

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、互換可能に使用され、抗体の重鎖可変領域を指す。

【0061】

「Ｋａｂａｔナンバリング」という用語及び同様の用語は、当技術分野で認知されており、抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖可変領域内のアミノ酸残基の番号付けシステムを指す。ある特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ＆Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ公開番号９１－３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸３１～３５位（任意選択で、３５位に続いて１つまたは２つの追加のアミノ酸を含み得る（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる））（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０～６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５～１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４～３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０～５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９～９７位（ＣＤＲ３）に存在する。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定されている。

【0062】

代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用して番号付けするＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり；３５Ａと３５Ｂのいずれも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。

【0063】

本明細書で使用する場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換可能であり、当技術分野で一般的な意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分であり、この領域は、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、さまざまなエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体との相互作用を呈することができる。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインに比べて、より保存されたアミノ酸配列を有する。ある特定の態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分な定常領域またはその部分を含む。

【0064】

本明細書で使用する場合、抗体に関して使用する場合の「重鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の型、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指し得、これは、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含む、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスの抗体を生じる。重鎖アミノ酸配列は、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、重鎖は、ヒト重鎖である。

【0065】

本明細書で使用する場合、抗体に関して使用する場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の別個の型、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当技術分野で周知である。いくつかの態様では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

【0066】

「キメラ」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を備えた哺乳動物の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの可変領域に対応し、一方で、定常領域は、別種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合フラグメントの配列と相同であり、その種における免疫応答の誘発が回避される。

【0067】

「ヒト化」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、最小非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそのフラグメントである非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合フラグメントの形態を指す。典型的には、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト免疫グロブリンであり、ヒト免疫グロブリン中の相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラフト」）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを、Ｆｖフレームワーク領域及び／または置き換えられた非ヒト残基内での追加の残基の置換によってさらに改変し、抗体またはその抗原結合フラグメントの特異性、親和性、及び／または能力を、精密化及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の少なくとも１つ、及び典型的には２つまたは３つの実質的にすべてを含むＶＨ及びＶＬを含むのに対し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含むことができる。ヒト化抗体を生成するために使用する方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの態様では、「ヒト化抗体」は、再表面形成された抗体である。

【0068】

「ヒト」抗体またはその抗原結合フラグメントという用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを意味し、かかる抗体または抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知の任意の技術を使用して作製される。ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントのこの定義には、インタクトまたは完全長抗体及びそのフラグメントが含まれる。

【0069】

「結合親和性」とは、一般に、分子の単一結合部位（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の合計の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント及び抗原）間の１：１相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の多くの方法で測定及び／または表現することができる。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算されるのに対し、Ｋ_Ａは、ｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば、抗原に対する抗体またはその抗原結合フラグメントの会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば、抗原からの抗体またはその抗原結合フラグメントの解離を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に公知の技術によって決定することができる。

【0070】

「遮断している」もしくは「遮断する」または「阻害性」であるもしくは「阻害する」抗体は、抗体が標的タンパク質に結合したときに、１つもしくは複数のリガンドへのその標的タンパク質の結合を（部分的にまたは完全に）減少もしくは阻害する、及び／または抗体が標的タンパク質に結合したときに標的タンパク質の１つもしくは複数の活性もしくは機能を（部分的にもしくは完全に）減少もしくは阻害する、抗体である。

【0071】

その標的タンパク質を「下方制御する」抗体は、細胞表面上での標的タンパク質の発現を低下させる。

【0072】

本明細書で使用する場合、「エピトープ」とは当技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合フラグメントが特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形または隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、１つまたは複数のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域（立体配座、非線形、不連続または非隣接エピトープ）が一緒になったものであり得る。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントが結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学試験、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニングアッセイ、及び／または突然変異誘発マッピング（例えば、アラニンスキャニングまたは他の部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当技術分野で公知の方法のいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体またはその抗原結合フラグメント及びその抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究でき、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４を参照されたい）及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に公知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

【0073】

参照ＰＩＬＲＡ抗体と「同じエピトープに結合する」ＰＩＬＲＡ抗体は、参照ＰＩＬＲＡ抗体と同じＰＩＬＲＡアミノ酸残基に接触する抗体を指す。参照ＰＩＬＲＡ抗体と同じエピトープに結合するＰＩＬＲＡ抗体の能力は、ペプチドスキャニング突然変異誘発またはハイスループットアラニンスキャニング突然変異誘発を使用して確認される（Ｄａｖｉｄｓｏｎ ａｎｄ Ｄｏｒａｎｚ，２０１４ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４３，１３－２０を参照されたい）。後者の方法論では、各個々のアミノ酸残基をアラニンに（またはアミノ酸残基がアラニンの場合は、セリンなどの別の残基に）突然変異させること及び抗ＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントへの結合について各変異体を試験することにより、ＰＩＬＲＡ、またはその一部分（例えば、細胞外ドメイン）の包括的な突然変異ライブラリを生成することができる。結合に必要とされ、それゆえエピトープ残基であるアミノ酸は、免疫反応性の喪失によって同定される。

【0074】

本明細書で使用する場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントの文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントがその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間に相補性を伴うことを示す。従って、ヒトＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種由来のＰＩＬＲＡ（例えば、カニクイザルＰＩＬＲＡ）及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されるＰＩＬＲＡタンパク質にも結合し得るが、無関係の非ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ＩＴＩＭドメインを含有する他の免疫調節タンパク質）への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合、ＰＩＬＲＡへの抗体の結合の約１０％未満である。

【0075】

抗体は、それがエピトープへの参照抗体の結合をある程度遮断する程度までそのエピトープまたは重複エピトープに優先的に結合する場合、所与のエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイによって測定され得る。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。

【0076】

「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然には見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが天然に見られる形態ではない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの態様では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用する場合、「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋な物質を指す。

【0077】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書で互換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖または分岐鎖であることができ、改変アミノ酸を含み得、非アミノ酸を介在させることができる。これらの用語は、自然に、または介入；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは標識成分とのコンジュゲーションなどのその他の操作もしくは改変によって改変されているアミノ酸ポリマーも包含する。この定義には、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸などを含む）の１つまたは複数の類似体を含有するポリペプチド、ならびに当技術分野で公知の他の改変も含まれる。本開示のポリペプチドは抗体に基づいているため、いくつかの態様では、ポリペプチドは、一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。

【0078】

本明細書で使用する場合、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養物中の細胞、または細胞株からの細胞であり得る。いくつかの態様では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、及びかかる細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。かかる細胞の子孫は、例えば、後続世代で生じ得る突然変異もしくは環境の影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組み込みにより、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではない可能性がある。

【0079】

「医薬製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、製剤を投与するであろう対象にとって許容不可能な毒性を有する追加の成分を含まない調製物を指す。製剤は、無菌であり得る。

【0080】

本明細書で使用する場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、薬物、例えば、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを、所望の生物学的作用部位へと送達するために使用され得る方法を指す。本明細書に記載の作用物質及び方法とともに採用することができる投与技術は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見出される。

【0081】

本明細書で使用する場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換可能に使用される。対象は、哺乳動物、例えば非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類など）であり得る。いくつかの態様では、対象は、カニクイザルである。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。

【0082】

「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を処置するのに有効な薬物、例えば抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントの量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を減少させる；腫瘍サイズもしくは腫瘍量を減少させる；末梢器官へのがん細胞の浸潤を阻害する（すなわち、ある程度減速させる、いくつかの態様では停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度減速させる、いくつかの態様では停止させる）；腫瘍増殖をある程度阻害する；がんに関連する症状のうちの１つもしくは複数をある程度緩和する；及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、もしくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、またはいくつかの場合では、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の低減、腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）の減少、もしくはそれらの任意の組み合わせなどの好ましい応答をもたらすことができる。薬物が、既存のがん細胞の増殖を予防すること及び／または既存のがん細胞を殺傷することができる限り、その薬物は、細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であり得る。

【0083】

「処置する」もしくは「処置」もしくは「処置すること」または「軽減する」もしくは「軽減すること」などの用語は、診断された病理学的状態または障害を治癒する、減速する、その症状を減らす、及び／または進行を止める治療手段を指す。ゆえに、処置を必要とする人々には、障害を有するとすでに診断されているか、またはその疑いがある人々が含まれる。いくつかの態様では、患者が、がん細胞の数の減少または完全な不在；腫瘍サイズの減少；例えば、軟部組織及び骨へのがんの拡散を含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または不在；腫瘍転移の阻害または不在；腫瘍増殖の阻害または不在；特定のがんに関連する１つまたは複数の症状の緩和；罹患率及び死亡率の減少；生活の質の改善；腫瘍の、腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能力の低下；腫瘍内のがん幹細胞の数または頻度の減少；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、もしくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の低減、腫瘍増殖停止時間（ＴＴＰ）の減少、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つまたは複数を示す場合、対象は、本明細書で提供する方法に従ってがんに関して首尾よく「処置される」。

【0084】

「がん」及び「がん性」という用語は、その細胞集団が無秩序な細胞増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すかまたは説明する。かかるがんは、固形腫瘍、例えば、固形腫瘍中の骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、好中球、ミクログリアまたは他の自然免疫細胞）が腫瘍微小環境に浸潤している固形腫瘍を含み得る。かかるがんの例としては、限定されないが、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌（例えば、腎明細胞癌）、膵臓癌、及び乳癌が挙げられる。がんは、「ＰＩＬＲＡ陽性がん」であり得る。この用語は、ＰＩＬＲＡ ｍＲＮＡまたはタンパク質を発現する細胞（例えば、がんに浸潤している骨髄細胞）を含むがんを指す。がんは、「増加したＰＩＬＲＡ」ｍＲＮＡまたはタンパク質を伴うがんであり得る。これは、同じ組織の健常バージョンよりも多くのＰＩＬＲＡを（例えば、がんに浸潤している骨髄細胞上に）有するがんを指す。

【0085】

本開示及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別途指示しない限り、複数の対象物を含む。

【0086】

本明細書中で態様が「含む」という文言で説明される場合は常に、「からなる」及び／または「から本質的になる」という用語で説明される他の類似の実施形態も提供される。本開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」、及び「有する」などは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ；「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、非制限的であり、記載するものよりも多くのものが存在することによって記載するものの基本的または新規な特徴が変化しない限り、記載するものよりも多くのものが存在することを許容するが、先行技術の態様は除外される。

【0087】

本明細書で使用する場合、具体的に述べられているか、または文脈から明らかでない限り、「または」という用語は包括的であると理解される。本明細書中の「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用する「及び／または」という用語は、両「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」を含むと意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様の各々を包含すると意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

【0088】

本明細書で使用する場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を改変するために使用する場合、記載する値または範囲が意図する意味の範囲内で、値または範囲から１０％上方及び１０％下方への偏差が残っていることを示す。本明細書において「約」または「およそ」という文言を伴って態様が記載されている場合は常に、数値または範囲、さもなければ特定の数値または範囲に言及する類似の態様も提供されることが理解される。

【0089】

本明細書で提供する任意の組成物または方法は、本明細書で提供する他の組成物及び方法のいずれかの１つまたは複数と組み合わせることができる。

【0090】

５．２ 抗体
一態様では、ヒト、マウス、またはカニクイザルＰＩＬＲＡなどのＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体）及びその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体）及びその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。ヒト、カニクイザル、及びマウスのＰＩＬＲＡのアミノ酸配列は、当技術分野で公知であり、それぞれ、配列番号１～３により表すように本明細書にも提供する。
ヒトＰＩＬＲＡ：
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＳＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＴＡＰＤＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＲＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＫＳＧＦＬＲＩＳＮＬＱＫＱＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＳＳＧＲＱＱＷＱＳＩＥＧＴＫＬＳＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＷＲＬＳＳＴＴＴＴＴＧＬＲＶＴＱＧＫＲＲＳＤＳＷＨＩＳＬＥＴＡＶＧＶＡＶＡＶＴＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＲＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＬＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＡＰＰＳＨＲＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＡ（配列番号１）

【0091】

いくつかの態様では、上記のヒトＰＩＬＲＡ配列はそのシグナル配列を欠いていると企図される。例えば、ヒトＰＩＬＲＡ配列は、配列番号１のアミノ酸２０～３０３を含むことができる。上記のヒトＰＩＬＲＡ配列（配列番号１）は、アルギニン（Ｒ）が７８位に存在し、アルツハイマー病からの保護に関連する対立遺伝子によってコードされている、変異体配列を表す。いくつかの態様では、７８位をグリシン（Ｇ）が占めている変異体ＰＩＬＲＡ配列が企図される。配列番号１に示すような、ヒトＰＩＬＲＡの他の特徴には、約アミノ酸２０～１９７の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、約アミノ酸３２～１５０のＩｇＶドメイン、ならびに約アミノ酸２６７～２７２及び２９６～３０１のＩＴＩＭモチーフが含まれる。
カニクイザルＰＩＬＲＡ：
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＰＬＬＰＬＬＬＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＡＧＳＧＰＳＧＰＹＧＶＴＱＲＫＨＬＳＡＰＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＨＰＷＥＬＡＡＡＰＮＭＫＩＳＷＲＲＧＮＦＨＧＥＦＦＹＲＴＲＰＡＦＩＨＥＤＹＳＮＲＬＬＬＮＷＴＥＧＱＤＲＧＬＬＲＩＷＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＲＷＱＳＩＥＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＲＲＰＳＳＡＴＴＴＡＧＬＲＶＴＱＧＫＲＨＳＤＳＷＨＬＳＬＫＴＡＶＧＶＴＶＡＶＡＶＬＧＩＭＩＬＧＬＩＣＬＬＲＷＲＲＲＫＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＫＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＰＮＰＫＤＤＧＩＶＹＡＳＬＡＬＳＳＳＴＳＰＲＶＰＰＳＨＨＰＬＫＳＰＱＮＥＴＬＹＳＶＬＫＶ（配列番号２）

【0092】

いくつかの態様では、上記のカニクイザルＰＩＬＲＡ配列はそのシグナル配列を欠いていると企図される。例えば、カニクイザルＰＩＬＲＡ配列は、配列番号２のアミノ酸２４～３０７を含むことができる。
マウスＰＩＬＲＡ
ＭＡＬＬＩＳＬＰＧＧＴＰＡＭＡＱＩＬＬＬＬＳＳＡＣＬＨＡＧＮＳＥＲＳＮＲＫＮＧＦＧＶＮＱＰＥＳＣＳＧＶＱＧＧＳＩＤＩＰＦＳＦＹＦＰＷＫＬＡＫＤＰＱＭＳＩＡＷＲＷＫＤＦＨＧＥＦＩＹＮＳＳＬＰＦＩＨＥＨＦＫＧＲＬＩＬＮＷＴＱＧＱＴＳＧＶＬＲＩＬＮＬＫＥＳＤＱＴＲＹＦＧＲＶＦＬＱＴＴＥＧＩＱＦＷＱＳＩＰＧＴＱＬＮＶＴＮＡＴＣＴＰＴＴＬＰＳＴＴＡＡＴＳＡＨＴＱＮＤＩＴＥＶＫＳＡＮＩＧＧＬＤＬＱＴＴＶＧＬＡＴＡＡＡＶＦＬＶＧＶＬＧＬＩＶＦＬＷＷＫＲＲＲＱＧＱＫＴＫＡＥＩＰＡＲＥＰＬＥＴＳＥＫＨＥＳＶＧＨＥＧＱＣＭＤＰＫＥＮＰＫＤＮＮＩＶＹＡＳＩＳＬＳＳＰＴＳＰＧＴＡＰＮＬＰＶＨＧＮＰＱＥＥＴＶＹＳＩＶＫＡＫ（配列番号３）

【0093】

いくつかの態様では、上記のマウスＰＩＬＲＡ配列はそのシグナル配列を欠いていると企図される。例えば、マウスＰＩＬＲＡ配列は、配列番号３のアミノ酸３２～３０２を含み得る。

【0094】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号１もしくは配列番号１のアミノ酸２０～３０３、または、ＲもしくはＧが７８位に存在する前述の配列のいずれか）に結合する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ及びカニクイザルＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号２または配列番号２のアミノ酸２４～３０７）に結合する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合するが、カニクイザルＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号２または配列番号２のアミノ酸２４～３０７）には結合しない。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合するが、マウスＰＩＬＲＡ（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸３２～３０２）には結合しない。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ（及び任意選択で、カニクイザルＰＩＬＲＡ）及びヒトＰＩＬＲＢ（例えば、配列番号６８、下記に示す、または配列番号６８のアミノ酸２０～２２７）に結合する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡ（及び任意選択で、カニクイザルＰＩＬＲＡ）に結合するが、ヒトＰＩＬＲＢには結合しない。

【0095】

ヒトＰＩＬＲＢの配列は、配列番号６８として以下に提供する。
ＭＧＲＰＬＬＬＰＬＬＬＬＬＱＰＰＡＦＬＱＰＧＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＩＶＰＮＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＥＳＧＦＬＲＩＳＮＬＲＫＥＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＲＳＧＲＱＱＬＱＳＩＫＧＴＫＬＴＩＴＱＡＶＴＴＴＴＴＷＲＰＳＳＴＴＴＩＡＧＬＲＶＴＥＳＫＧＨＳＥＳＷＨＬＳＬＤＴＡＩＲＶＡＬＡＶＡＶＬＫＴＶＩＬＧＬＬＣＬＬＬＬＷＷＲＲＲＫＧＳＲＡＰＳＳＤＦ（配列番号６８）

【0096】

いくつかの態様では、上記のヒトＰＩＬＲＢ配列はそのシグナル配列を欠いていると企図される。例えば、ヒトＰＩＬＲＢ配列は、配列番号６８のアミノ酸２０～２２７を含むことができる。ヒトＰＩＬＲＡ及びヒトＰＩＬＲＢのアミノ酸配列のアラインメントを、図１３に提供する。ＰＩＬＲＡの以下のアミノ酸は、ＰＩＬＲＢのものとは異なる：Ｐ１１（シグナル配列中）、Ｌ１４（シグナル配列中）、Ｓ２２（シグナル配列中）、Ｔ６３、Ａ６４、Ｄ６６、Ｒ７８、Ｋ１０６、Ｑ１１６、Ｑ１１８、Ｓ１３３、Ｗ１３９、Ｅ１４３、Ｓ１４８、Ｔ１５６－Ｍ１６３、Ｌ１６９、Ｔ１７５、Ｔ１７６、Ｑ１８２、Ｇ１８３、Ｒ１８５、Ｒ１８６、Ｄ１８８、Ｉ１９２、及びＥ１９５。

【0097】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡの細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸２０～１９７）に結合する。

【0098】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表１及び２に記載の抗体の６つのＣＤＲ（すなわち、表１に記載の抗体の３つのＶＨ ＣＤＲ及び表２に記載の同じ抗体の３つのＶＬ ＣＤＲ）を含む。

【0099】

（表１）ＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列^１

^１表１のＶＨ ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定する。

【0100】

（表２）ＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列^２

^２表２のＶＬ ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定する。

【0101】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表３に記載の抗体のＶＨを含む。

【0102】

（表３）可変重鎖（ＶＨ）アミノ酸配列

【0103】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表４に記載の抗体のＶＬを含む。

【0104】

（表４）可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列

【0105】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ（すなわち、表３に記載の抗体のＶＨ及び表４に記載の同じ抗体のＶＬ）を含む。

【0106】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表５に記載の抗体のＶＨフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む。

【0107】

（表５）ＶＨ ＦＲアミノ酸配列^３

^３表５に記載されているＶＨフレームワーク領域は、ＣＤＲに関するＫａｂａｔナンバリングシステムの境界に基づいて決定する。言い換えると、ＶＨ ＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式の可変領域中のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。

【0108】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表６に記載の抗体のＶＬフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つまたはすべてを含む。

【0109】

（表６）ＶＬ ＦＲアミノ酸配列^４

^４表６に記載されているＶＬフレームワーク領域は、ＣＤＲに関するＫａｂａｔナンバリングシステムの境界に基づいて決定する。言い換えると、ＶＬ ＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式の可変領域中のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。

【0110】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、表５及び６に記載の抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び４つのＶＬフレームワーク領域（すなわち、表５に記載の抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び表６に記載の同じ抗体の４つのＶＬフレームワーク領域）を含む。

【0111】

ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、そのＶＬドメイン単独、もしくはそのＶＨドメイン単独により、またはその３つのＶＬ ＣＤＲ単独、もしくはその３つのＶＨ ＣＤＲ単独により記載され得る。例えば、Ｒａｄｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ ９５：８９１０－８９１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたく、この文献には、それぞれ、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリから得られる相補的軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性と同程度またはそれ以上の親和性を有するヒト化抗体変異体をもたらすことによるマウス抗αｖβ３抗体のヒト化が記載されている。Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照されたく、この文献には、特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用して特定の抗原に結合する抗体を産生し、相補的可変ドメインに関してライブラリをスクリーニングする方法が記載されている。このスクリーニングにより、特定のＶＨドメインに対する１４個の新規パートナー及び特定のＶＬドメインに対する１３個の新規パートナーが生成されたが、これらはＥＬＩＳＡによって測定した場合、強力なバインダーであった。Ｋｉｍ ＳＪ＆Ｈｏｎｇ ＨＪ，（２００７）Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４５：５７２－５７７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照されたく、この文献には、特定のＶＨドメインを使用して特定の抗原に結合する抗体を産生し、相補的ＶＬドメインに関してライブラリ（例えば、ヒトＶＬライブラリ）をスクリーニングする方法が記載されており；選択されたＶＬドメインは、次に、追加の相補的（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択をガイドするために使用することができる。

【0112】

ある特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲを、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２；及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６～３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、一方でＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用して番号付けするＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２～Ｈ３４で変動する（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり；３５Ａと３５Ｂのいずれも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。

【0113】

ある特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合しかつ表３及び４に記載の抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む、抗体及びその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のＣＤＲを含み、その場合、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ ＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合しかつＫａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの組み合わせを含む、抗体及びその抗原結合フラグメントを、本明細書で提供する。

【0114】

特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２に記載されているＩＭＧＴナンバリングシステムに従って決定することができる。ＩＭＧＴナンバリングスキームによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６～３５位、ＶＨ－ＣＤＲ２は５１～５７位、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３～１０２位、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７～３２位、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０～５２位、及びＶＬ－ＣＤＲ３は８９～９７位に存在する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合し、かつ、例えばＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ（１９９９）上記及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）上記に記載されているような表３及び４に記載の抗体のＩＭＧＴ ＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む、抗体及びその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0115】

ある特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定することができる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照されたい。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合し、かつＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭらの方法により決定された表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0116】

ある特定の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングスキームに従って決定することができ、これは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの折衷を表すＡｂＭ超可変領域を指し、これはＯｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用される。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合し、かつＡｂＭナンバリングスキームによって決定される表３及び４に記載の抗体のＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0117】

いくつかの態様では、重鎖及び軽鎖を含む抗体を本明細書で提供する。重鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖であり得る。いくつかの態様では、記載の抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖を含み得る。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、ここで、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、ここで、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、ここで、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ＩｇＧ２（例えば、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、ここで、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載のアミノ酸配列を含み、重鎖の定常領域は、ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、重鎖を含み、ここで、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、表３に記載の配列を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）上記を参照されたい。

【0118】

軽鎖に関して、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。

【0119】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ここで、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ここで、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ここで、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、表４に記載の配列を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野で記載されている。例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ。，（１９９１）上記を参照されたい。

【0120】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のいずれかのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のいずれかのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ免疫グロブリン分子、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。

【0121】

ヒト定常領域の非限定的な例は、当技術分野で記載されている。例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）上記を参照されたい。

【0122】

例示的なＦｃドメイン
いくつかの態様では、抗ＰＩＬＲＡ抗体、特に、本明細書で提供するような抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、Ｆｃドメインを含み得る。いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／またはＩｇＧ４アイソタイプである。

【0123】

ある特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの態様では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、マウスＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含有する。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、例えば、配列番号６９に提供するような、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ１）を含有する。
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６９）

【0124】

いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、活性化Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の態様では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩＩｃ、ならびにＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂのうちの任意の１つまたは複数から選択される。

【0125】

いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）及び／またはＣ１ｑに結合しないか、または結合が減少している。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、それぞれ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体結合活性が低下しており、各々の場合において、抗ＰＩＬＲＡ抗体が結合する細胞、例えば、骨髄細胞の望ましくない殺傷を減少させ得る。上記の効果は、ある特定のアミノ酸改変、例えば、「ＮＳＬＦ」突然変異によって達成され得、この場合、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、突然変異Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＩｇＧ１ ＦｃドメインのＥＵナンバリングによる）を含有し、例えば、配列番号７０に示す通りである。別の態様では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、Ｋ３２２Ａ（ＥＵナンバリング）に対応する突然変異を含み、例えば、配列番号７１に提供する通りである。
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７０）
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７１）

【0126】

ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに対する例示的な改変を、下の表７に記載する。

【0127】

（表７）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインに対する例示的な改変

【0128】

本明細書で提供する抗ＰＩＬＲＡ抗体のある特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの態様では、抗ＰＩＬＲＡ抗体は、マウスＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、例えば、マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）を含有する。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ２）を含有する。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメインは、活性化Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の態様では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩＩｃ、ならびにＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂのうちの任意の１つまたは複数から選択される。

【0129】

本明細書で提供する抗ＰＩＬＲＡ抗体のある特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ４）を含有し、例えば、配列番号７２に提供する通りである。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、活性化Ｆｃ受容体と結合する。ある特定の態様では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩＩｃ、ならびにＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂのうちの任意の１つまたは複数から選択される。ある特定の態様では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ（ＥＵナンバリングによる）に対応する突然変異を含み、例えば、配列番号７３に提供する通りである。
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号７２）
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号７３）

【0130】

いくつかの態様では、本明細書に記載の定常領域突然変異または改変のいずれかを、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの一方または両方の重鎖定常領域に導入することができる。

【0131】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖及び軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、表１に記載の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、配列番号４～６、１０～１２、１６～１８、または２２～２４）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖は、表２に記載の同じ抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３アミノ酸配列（例えば、配列番号７～９、１３～１５、１９～２１、または２５～２７）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖は、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含み；（ｉｖ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。

【0132】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖及び軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、表３に記載の抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号２８、３０、３２、または３４）を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖は、表４に記載の同じ抗体のアミノ酸配列（例えば、配列番号２９、３１、３３、または３５）を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖は、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含み；（ｉｖ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含む。

【0133】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク領域であるか、またはヒトフレームワーク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインのフレームワーク領域）を含む。ヒトフレームワーク領域の非限定的な例は、当技術分野で記載されており、例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）上記を参照されたい）。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域であるか、または霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域に由来するフレームワーク領域（例えば、ＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインのフレームワーク領域）を含む。

【0134】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記の表５に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号３６～３９、４４～４７、５２～５５、または６０～６３）を有する１つ、２つ、３つまたは４つのＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記の表６に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号４０～４３、４８～５１、５６～５９、または６４～６７）を有する１つ、２つ、３つまたは４つのＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記の表５に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つまたは４つのＶＨフレームワーク領域、及び上記の表６に記載の抗体について本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つまたは４つのＶＬフレームワーク領域を含む（例えば、（ｉ）配列番号３６～３９、４４～４７、５２～５５、または６０～６３及び（ｉｉ）配列番号４０～４３、４８～５１、５６～５９、または６４～６７）。

【0135】

抗体活性
いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する。ＰＩＬＲＡを下方制御する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、それがなければ細胞表面ＰＩＬＲＡとそのリガンドとの会合から生じ得る阻害性シグナル伝達を低減させる効果を有し得る。

【0136】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルと比較して、細胞表面ＰＩＬＲＡ（例えば、２９３細胞上で異所的に発現されるヒトＰＩＬＲＡ）を下方制御する。いくつかの態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡは、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下で３７℃にて３０分後の細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルと比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の存在下で３７℃にて３０分後に、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％下方制御される。いくつかの態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡは、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下で３７℃にて３０分後の細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルと比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の存在下で３７℃にて３０分後に、約１０％～約５０％下方制御される。いくつかの態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下で３７℃にて２時間後の細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルと比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の存在下で３７℃にて２時間後に、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、または少なくとも６０％下方制御される。いくつかの態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下で３７℃にて２時間後の細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルと比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の存在下で３７℃にて２時間後に、約３０％～約６０％下方制御される。パーセント下方制御は、例えば、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の存在下もしくは不在下、または抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくは対照抗体の存在下で、３７℃に対して氷上で示された時点でのインキュベーション後に検出された細胞表面ＰＩＬＲＡのレベルを正規化することによって計算することができる。

【0137】

下方制御は、例えば、実施例８に開示するアッセイを使用して測定することができる。下方制御は、例えば、ヒトＰＩＬＲＡを異所的に発現するシアリダーゼ処理２９３細胞を、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体と、または抗体なしもしくは対照抗体と（例えば、３７℃にて３０分間）インキュベートし、細胞表面ヒトＰＩＬＲＡを検出することによって測定することができる。細胞表面ヒトＰＩＬＲＡは、例えば、ＦＡＣＳを使用して検出することができる。下方制御は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の用量に依存し得る。

【0138】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を遮断する。ＰＩＬＲＡ－Ｆｃに結合し、Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を遮断する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、Ｔ細胞上のＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、遮断していると推定される。この活性を有する抗体は、同様に、ＰＩＬＲＡリガンドへの内因性ＰＩＬＲＡの結合を遮断することにおいて機能し、それにより、内因性ＰＩＬＲＡの阻害性シグナル伝達を抑制すると予想され得る。

【0139】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも７０％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、対照抗体の存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも７５％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも８０％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも８５％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも９０％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を少なくとも９５％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を１００％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、対照抗体またはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、約７０％～約９５％、または約７０％～約９８％遮断する。いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、対照抗体またはフラグメントの存在下でのヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合と比較して、ヒトＴ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、約８０％～約９５％遮断する。

【0140】

結合の遮断は、例えば、実施例７に開示するアッセイを使用して測定することができる。結合の遮断は、例えば、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを、約５μｇ／ｍｌのＰＩＬＲＡ Ｆｃと３０分間４℃にてインキュベートし、次いでヒトＴ細胞を３０分間４℃にて加え、細胞を洗浄し、結合したＰＩＬＲＡ Ｆｃを検出することによって測定することができる。結合したＰＩＬＲＡ Ｆｃは、例えば、フローサイトメトリーを使用して検出できる。結合の遮断は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の用量に依存し得る。

【0141】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡの結合を遮断する。ＰＩＬＲＡリガンドには、ＰＴＰＸＰ、ＰＴＰＸＸＰ、ＰＸＴＰＸＰ、またはＰＸＴＰＸＸＰモチーフを伴うタンパク質などのグリコシル化タンパク質が含まれる。例示的なリガンドには、ＣＯＬＥＣ１２、ＮＰＤＣ１、ＣＬＥＣ４Ｇ、及びＰＩＡＮＰ、ならびにＨＳＶ－１糖タンパク質Ｂが含まれる。ＰＩＬＲＡ（配列番号１）中のアミノ酸Ａｒｇ１２６は、シアル酸相互作用に不可欠であることが周知であり（例えば、Ｒａｔｈｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １４：ｅ１００７４２７（２０１８）を参照されたい）、ＰＩＬＲＢの対応するアミノ酸（図１３を参照されたい）とは異なる、アミノ酸Ａｒｇ７８、Ｔｒｐ１３９、及びＧｌｕ１４３は、Ａｒｇ１２６に近接して位置する（それぞれ、約９．１７Å、約４．４０Å、及び約１２．４０Å）（図１４Ａ及びＢを参照されたい）。図１４Ａ及び１４Ｂに提供する結晶構造中に存在するヒトＰＩＬＲＡとヒトＰＩＬＲＢとの間で分岐する追加のアミノ酸は、Ｔ６３、Ａ６４、Ｄ６６、Ｋ１０６、Ｑ１１６、Ｑ１１８、Ｓ１３３、及びＳ１４８である。

【0142】

いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、１つまたは複数のＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を遮断する抗体の能力を試験することによって同定することができ、かかるリガンドは、可溶性形態で発現するか、または細胞表面上に発現する。いくつかの態様では、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を遮断する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、１つまたは複数のＰＩＬＲＡリガンドへの細胞表面ＰＩＬＲＡを発現する細胞の結合を遮断する抗体の能力を試験することによって同定することができ、かかるリガンドは、可溶性形態で発現するか、または細胞表面上に発現する。

【0143】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での結合と比較して、１つまたは複数のＰＩＬＲＡリガンド（上記に提供するものを含むがこれに限定されない）へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を遮断する。結合の遮断は、例えば、実施例５に開示するアッセイを使用して測定することができる。結合の遮断は、例えば、ＰＩＬＲＡを発現する細胞を（例えば、約３０分間約４℃にて）、約５μｇ／ｍｌのリガンドとインキュベートし、再度（例えば、約３０分間約４℃にて）インキュベートし、細胞を洗浄し、結合したリガンドを検出することによって測定することができる。結合したリガンドは、例えば、フローサイトメトリーを使用して検出できる。結合の遮断は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の用量に依存し得る。

【0144】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄細胞（例えば、マクロファージ（例えば「Ｍ１」マクロファージ）、ミクログリア、樹状細胞、好中球、顆粒球、及び他の骨髄由来細胞、例えば骨髄由来抑制細胞（「ＭＤＳＣ」）を活性化する。骨髄細胞を活性化することにより、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、自然免疫系を活性化することができ、例えば、これは抗腫瘍応答を促進し、ミクログリアの場合では、神経変性状態に対抗するＣＮＳにおける環境を促進することができる。

【0145】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での骨髄細胞の活性化と比較して、骨髄細胞（上記のものなど）を活性化する。実施例２または３に開示するアッセイを使用して、骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の活性化を評価することができる。骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の活性化は、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での活性化と比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントの存在下で細胞によって産生されるＭＩＰ１ｂの量を検出することによって評価することができる。骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の活性化は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の用量に依存し得る。

【0146】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、骨髄細胞の分化を促進する（例えば、単球の、マクロファージ（例えば「Ｍ１」マクロファージ）もしくは樹状細胞への分化を促進する、または他の骨髄前駆細胞の、ミクログリア、樹状細胞、好中球、及び他の骨髄由来細胞、例えば骨髄由来抑制細胞（「ＭＤＳＣ」）への分化を促進する）。骨髄細胞の分化を促進することにより、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、自然免疫系を活性化することができ、例えば、これは（例えば、腫瘍微小環境内のＭ１マクロファージを通して）抗腫瘍応答を促進することができ、ミクログリアの場合では、神経変性状態に対抗するＣＮＳの環境を促進することができる。

【0147】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での骨髄細胞の分化と比較して、（上記のものなどの）骨髄細胞の分化を促進する。実施例２に開示するアッセイを使用して、骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の分化を評価することができる。骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の分化は、例えば、抗体もしくはフラグメントの不在下または対照抗体もしくはフラグメントの存在下での分化と比較して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントの存在下でのＣＤ１４^ｌｏＣＤ８６^ｈｉ細胞の量を検出することにより評価することができる。骨髄細胞（例えば、ＭＤＳＣ）の分化は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の用量に依存し得る。

【0148】

同じエピトープに結合／競争的に阻害する抗体
別の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１）と同じヒトＰＩＬＲＡのエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0149】

別の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１）と重複するヒトＰＩＬＲＡのエピトープに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。重複するエピトープを有する抗体は、ＰＩＬＲＡの同じアミノ酸残基のうちの少なくとも１つまたは複数に接触する。

【0150】

競合結合アッセイを使用して、２つの抗体が重複するエピトープに結合するかどうかを判定することができる。競合的結合は、試験される免疫グロブリンが、ＰＩＬＲＡ（例えば、ヒトＰＩＬＲＡ）などの共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて判定することができる。多くのタイプの競合結合アッセイが知られており、例えば、固相直接または間接放射免疫測定法（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＴＮ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３６１４－９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ＧＡ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５（１）：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ＲＣ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５２）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：７７－８２）である。典型的には、かかるアッセイは、かかる抗原、非標識被験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンを保持する固体表面または細胞に結合させた精製抗原（例えば、ヒトＰＩＬＲＡなどのＰＩＬＲＡ）の使用が含まれる。競合阻害は、被験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することにより測定することができる。通常、被験免疫グロブリンは過剰に存在させる。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、共通抗原への参照抗体の特異的結合は、少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％またはそれ以上阻害される。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレートに固定化する。次いで、抗原への標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を、放射能標識または酵素標識を使用して測定する。さらなる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３０：２３０８－２３１５；Ｗａｇｅｎｅｒ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ６８：２６９－２７４；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５０：４８７２－４８７９；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｎｖｅｓｔ ２１：５２３－５３８；Ｋｕｒｏｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ １１：３９１－４０７ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ ｅｄｉｔｏｒｓ上記、ｐｐ．３８６－３８９を参照されたい。

【0151】

いくつかの態様では、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ ＹＮ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ３８６：１７２－１８０により記載されるような「タンデムアプローチ」により、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を使用して競合アッセイを実施し、これにより、ＰＩＬＲＡ抗原を、チップ、例えば、ＣＭ５センサーチップの表面上に固定化し、次いで抗ＰＩＬＲＡ抗体をチップ上に流す。抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書に記載の抗ＰＩＬＲＡ抗体の結合を競合的に阻害するかどうかを判定するために、まず抗ＰＩＬＲＡ抗体をチップ表面に流して飽和を達成し、次いで潜在的な競合抗体を加える。次いで、競合する抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を、競合しない対照と比較して測定し、定量化することができる。

【0152】

いくつかの態様では、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｏｃｔｅｔ競合結合を使用して、ＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＰＩＬＲＡへの別のＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を競合的に阻害することを判定する。

【0153】

別の態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１）がヒトＰＩＬＲＡに結合することを（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体を本明細書で提供し、これは、当業者に公知であるまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、または懸濁液アレイもしくは表面プラズモン共鳴アッセイ）を使用して確認される。「競合的に阻害する」抗体は、参照抗体への「結合に関して競合する」抗体とも呼ばれ得る。

【0154】

特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡへの抗体の結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供し、抗体は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

【0155】

特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡへの抗体の結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供し、抗体は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

【0156】

特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡへの抗体の結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供し、抗体は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

【0157】

特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡへの抗体の結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供し、抗体は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

【0158】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに結合し、ヒトＰＩＬＲＡへの２１７５Ｂの結合を競合的に阻害しない抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0159】

抗原結合フラグメント
いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体などの本明細書に記載の抗ＰＩＬＲＡ抗体の抗原結合フラグメントを提供する。例示的な抗原結合フラグメントには、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びｓｃＦｖが含まれ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、以下のセクション５．３で論じられるものを含むがこれらに限定されない、当業者に公知の任意の技術によって産生することができる。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合フラグメントは、インビボでの抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。この部分は、「半減期延長部分」とも呼ばれる。インビボでのＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合フラグメントの半減期を延長するための当業者に公知の任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質もしくは化合物を含むことができる。ポリマーには、天然または合成の、任意選択で置換された直鎖または分岐鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレン、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体が含まれ得る。置換基には、１つまたは複数のヒドロキシ、メチル、またはメトキシ基が含まれ得る。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合フラグメントは、半減期延長部分を付着させるための１つまたは複数のＣ末端アミノ酸の付加により、改変することができる。いくつかの態様では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。いくつかの態様では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖなどの抗原結合フラグメントを、Ｆｃ領域に融合させる。

【0160】

抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体）またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識または物質に融合またはコンジュゲート（例えば、共有結合または非共有結合で連結）させることができる。検出可能な標識または物質の例としては、酵素標識、例えばグルコースオキシダーゼ；放射性同位体、例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）；発光標識、例えばルミノール；ならびに蛍光標識、例えば、フルオレセイン及びローダミン、ならびにビオチンが挙げられる。かかる標識抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、ＰＩＬＲＡ（例えば、ヒトＰＩＬＲＡ）タンパク質を検出することができる。例えば、以下のセクション５．４及び５．５を参照されたい。

【0161】

５．３ 抗体産生
ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメントは、例えば、化学合成または組換え発現技術による、抗体及び抗原結合フラグメントの合成のための当技術分野で公知の任意の方法によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、別途指定されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子解析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び改変、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当技術分野の関連分野における従来技術を採用する。これらの技術は、例えば、本明細書中で引用する参考文献に記載されており、それらの文献において十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７及び年報）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７及び年報）；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。

【0162】

ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を培養することを含む、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを作製する方法を本明細書で提供する。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させる（例えば、組換え発現させる）ことを含む、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法を本明細書で提供する。いくつかの態様では、細胞は、単離された細胞である。いくつかの態様では、コードするポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。いくつかの態様では、この方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体または抗原結合フラグメントを精製するステップをさらに含む。

【0163】

ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。

【0164】

モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術、酵母ベースの提示技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野で公知の多種多様な技術を使用して調製することができる。例えば、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、当技術分野で公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ＆Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３ ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に示されるか、またはＫｏｈｌｅｒ Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されているものを含む、ハイブリドーマ技術を使用して産生することができる。本明細書に記載の抗体を選択及び生成するために採用することができる酵母ベースの提示方法の例としては、例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９Ａ２；ＷＯ２０１０／１０５２５６；及びＷＯ２０１２／００９５６８に開示されているものが挙げられ、これらの各文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0165】

いくつかの態様では、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントは、クローン細胞（例えば、組換え抗体または抗原結合フラグメントを産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体または抗原結合フラグメントであり、ここで、抗体または抗原結合フラグメントは、例えば、ＥＬＩＳＡまたは当技術分野で公知のもしくは本明細書で提供する実施例の他の抗原結合アッセイによって決定されるように、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する。いくつかの態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、キメラまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。いくつかの態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＦａｂフラグメントまたはＦ（ａｂ’）２フラグメントであり得る。本明細書に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載のハイブリドーマ法により作製することができるか、または例えば、本明細書に記載の技術を用いてファージライブラリから単離することができる。クローン細胞株ならびにそれにより発現するモノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメントを調製するための他の方法は、当技術分野で周知である（例えば、上記のＳｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ．の第１１章を参照されたい）。

【0166】

本明細書に記載の抗体の抗原結合フラグメントは、当業者に公知の任意の技術によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生する）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生する）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生することができる。Ｆａｂフラグメントは、四量体抗体分子の２つの同一アームの一方に対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって連結された四量体抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。

【0167】

さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、当技術分野で公知のさまざまなファージディスプレイ及び／または酵母ベースの提示方法を使用して生成することができる。ファージディスプレイ法では、タンパク質を、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示させる。特に、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリ（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリ）から増幅させる。ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡを、ＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーとともに組換え、ファージミドベクターにクローニングする。ベクターを大腸菌にエレクトロポレーションし、大腸菌にヘルパーファージを感染させる。これらの方法で使用するファージは、典型的には、ｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインを、通常、組換えにより、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに融合させる。特定の抗原に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するファージは、例えば、標識された抗原または固体表面もしくはビーズに結合または捕捉した抗原を使用して、抗原を用いて選択または同定することができる。本明細書に記載の抗体またはフラグメントを作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ １８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ＆Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号；国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、及び第ＷＯ９７／１３８４４号；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号に開示されている方法が挙げられる。

【0168】

ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択することができる。

【0169】

５．３．１ ポリヌクレオチド
ある特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及びベクター、例えば、宿主細胞（例えば、大腸菌及び哺乳動物細胞）における組換え発現のためのかかるポリヌクレオチドを含むベクターを本明細書で提供する。

【0170】

特定の態様では、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびに（例えば、用量依存的様式で）ヒトＰＩＬＲＡへの結合に関してかかる抗体もしくは抗原結合フラグメントと競合する、またはかかる抗体もしくは抗原結合フラグメントのものと同じエピトープに結合する抗体または抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。

【0171】

配列番号２８～３５からなる群から選択される配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドも本明細書で提供する。いくつかの態様では、ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＰＩＬＲＡに免疫特異的に結合する。

【0172】

（ｉ）配列番号２８をコードするヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）配列番号２９をコードするヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む、キット、ベクター、または宿主細胞も本明細書で提供する。（ｉ）配列番号３０をコードするヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）配列番号３１をコードするヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む、キット、ベクター、または宿主細胞も本明細書で提供する。（ｉ）配列番号３２をコードするヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）配列番号３３をコードするヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む、キット、ベクター、または宿主細胞も本明細書で提供する。（ｉ）配列番号３４をコードするヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド及び（ｉｉ）配列番号３５をコードするヌクレオチド配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む、キット、ベクター、または宿主細胞も本明細書で提供する。かかる第１及び第２のポリヌクレオチドを含むキットでは、第１及び第２のポリヌクレオチドは、同じベクターにあり得るか、または異なるベクターにあり得る。かかる第１及び第２のポリヌクレオチドを含む宿主細胞では、第１及び第２のポリヌクレオチドは、同じベクターにあり得るか、または異なるベクターにあり得る。

【0173】

いくつかの態様では、３つのＶＨドメインＣＤＲ、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含有するポリペプチド（例えば、表１を参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを本明細書で提供し、例えば、３つのＶＨドメインＣＤＲは、ＶＨの文脈にある。いくつかの態様では、３つのＶＬドメインＣＤＲ、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含有するポリペプチド（例えば、表２を参照されたい）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを本明細書で提供し、例えば、３つのＶＬドメインＣＤＲは、ＶＬの文脈にある。いくつかの態様では、（ｉ）３つのＶＨドメインＣＤＲ、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含有するポリペプチド（例えば、表１を参照されたい）、例えば、３つのＶＨドメインＣＤＲはＶＨの文脈にある、ならびに（ｉｉ）３つのＶＬドメインＣＤＲ、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含有するポリペプチド（例えば、表２を参照されたい）、例えば、３つのＶＬドメインＣＤＲは、ＶＬの文脈にある、を含む抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（またはポリヌクレオチドの組み合わせ）を本明細書で提供する。

【0174】

いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、または例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表１及び５を参照されたく、例えば、表中の名称によって特定される特定の抗体のＶＨ ＣＤＲ及びＶＨ ＦＲ）を含む、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含有するＶＨドメインを含むそのフラグメントを本明細書で提供する。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、または例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表２及び６を参照されたく、例えば、表中の名称によって特定される特定の抗体のＶＬ ＣＤＲ及びＶＬ ＦＲ）を含む、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含有するＶＬドメインを含むそのフラグメントを本明細書で提供する。

【0175】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、重鎖可変領域（例えば、配列番号２８、３０、３２、または３４のアミノ酸配列を含むＶＨ）及び重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域をコードする核酸配列を含む。

【0176】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、軽鎖可変領域（例えば、配列番号２９、３１、３３、または３５のアミノ酸配列を含むＶＬ）及び軽鎖定常領域、例えば、ヒトラムダまたはカッパ軽鎖定常領域をコードする核酸配列を含む。

【0177】

例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列を用いた置換、及びｍＲＮＡ不安定化エレメントの排除により最適化される、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするポリヌクレオチドも本明細書で提供する。コドン変化（例えば、遺伝子コードの縮重による同じアミノ酸をコードするコドン変化）の導入及び／またはｍＲＮＡの阻害性領域の排除による、組換え発現のために、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメントもしくはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸の生成方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号；同第６，１７４，６６６号；同第６，２９１，６６４号；同第６，４１４，１３２号；及び同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適合させることにより実施することができる。

【0178】

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング法）を使用して、好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して実行することができる。かかるＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。かかるＰＣＲ増幅法を使用して、抗体またはその抗原結合フラグメントの可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅させた核酸を、宿主細胞での発現及びさらなるクローニングのためにベクターにクローニングして、例えばキメラ及びヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを生成することができる。

【0179】

本明細書で提供するポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡには、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが含まれ、ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖の場合、ＤＮＡは、コーディング鎖または非コーディング（アンチセンス）鎖であり得る。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡまたは１つ以上（ｏｎｅ ｍｏｒｅ）の内因性イントロンを欠くＤＮＡである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、天然に存在しないポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、組換え的に産生される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、単離される。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、天然成分から精製される。

【0180】

５．３．２ 細胞及びベクター
ある特定の態様では、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞内における組換え発現のための抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体及びその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を本明細書で提供する。本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ヒトまたはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント）を組換え発現するためのかかるベクターを含む細胞、例えば宿主細胞も本明細書で提供する。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するための方法を本明細書で提供し、本方法は、宿主細胞においてかかる抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させることを含む。

【0181】

いくつかの態様では、ヒトＰＩＬＲＡに特異的に結合する、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、本明細書に記載の重鎖または軽鎖）の組換え発現には、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメインをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築が含まれる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、重鎖または軽鎖可変ドメイン）をコードするポリヌクレオチドを取得したら、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するためのベクターを、当技術分野で周知の技術を使用して組換えＤＮＡ技術により産生することができる。ゆえに、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）をコードするヌクレオチド配列を含有するポリヌクレオチドを発現させることによるタンパク質の調製方法を本明細書に記載する。当業者に周知の方法を使用して、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはそのドメイン（例えば、軽鎖または重鎖）をコードする配列ならびに適切な転写及び翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが含まれる。また、プロモーターに作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、重鎖もしくは軽鎖、重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターも提供する。かかるベクターは、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号；ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、抗体またはその抗原結合フラグメントの可変ドメインを、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体及び軽鎖全体の両方の発現のために、かかるベクターにクローニングすることができる。

【0182】

発現ベクターを、従来技術により細胞（例えば、宿主細胞）に移入することができ、次いで、得られた細胞を、従来技術によって培養して、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖を含む抗体またはその抗原結合フラグメント）またはそのドメイン（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、または軽鎖）を産生することができる。ゆえに、宿主細胞におけるかかる配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖及び軽鎖を含む抗体またはその抗原結合フラグメント）またはそのドメイン（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、重鎖、または軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を本明細書で提供する。いくつかの態様では、二本鎖抗体またはその抗原結合フラグメントの発現のために、以下に詳述するように、免疫グロブリン全体の発現のために、個別に、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターを、宿主細胞で共発現させることができる。いくつかの態様では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の重鎖及び軽鎖（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の重鎖及び軽鎖）の両方、またはそのドメイン（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＶＨ及びＶＬ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。いくつかの態様では、宿主細胞は、２つの異なるベクター、すなわち、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載の抗体（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の６つのＣＤＲを含む抗体）、またはそのドメインの軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含有する。いくつかの態様では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。いくつかの態様では、第１の細胞が発現する重鎖／重鎖可変領域を、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合させて、本明細書に記載のヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１の６つのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）を形成する。いくつかの態様では、かかる第１の宿主細胞及びかかる第２の宿主細胞を含む宿主細胞集団を本明細書で提供する。

【0183】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含むベクター集団を本明細書で提供する。あるいは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用することができる。

【0184】

さまざまな宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。かかる宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、その後精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換または形質移入すると、ｉｎ ｓｉｔｕで本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現することができる細胞も表す。これらには、限定されないが、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡもしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した微生物、例えば細菌（例えば大腸菌及びＢ．サブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））；抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母（例えば、サッカロマイセス・ピキア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ））；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染させるか、もしくは抗体コード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系（例えば、コナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）などの緑藻）；または哺乳動物細胞のゲノム由来プロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルス由来プロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）が含まれる。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）を発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）由来のＣＨＯ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。いくつかの態様では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。いくつかの態様では、特に組換え抗体分子全体の発現のために、細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）を、組換え抗体分子の発現に使用する。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞は、抗体の効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－１０５；及びＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：６６２－６６７）。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。

【0185】

加えて、挿入した配列の発現を調節するか、または所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に寄与し得る。この目的のために、遺伝子産物の一次転写産物、グリコシル化、及びリン酸化の適切なプロセシングための細胞機構を保有する真核生物宿主細胞を使用することができる。かかる哺乳動物宿主細胞としては、限定されないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリン鎖を内因性に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれる。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、またはｈＰＡ－００１のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合フラグメント）は、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞で産生される。

【0186】

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを組換え発現により産生したら、免疫グロブリン分子の精製のための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、またはタンパク質精製のための他の標準的な技術により、精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを、本明細書に記載またはそうでなければ当技術分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合して、精製を容易にすることができる。

【0187】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離されるまたは精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントとは異なる抗原特異性を有する他の抗体またはその抗原結合フラグメントを実質的に含まないものである。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの調製物は、細胞物質及び／または化学前駆体を実質的に含まない。

【0188】

５．４ 医薬組成物
本明細書に記載のような、抗ＰＩＬＲＡ抗体（例えば、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体）またはその抗原結合フラグメントを含む組成物を本明細書で提供する。いくつかの態様では、所望の程度の純度を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、生理学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤を含む製剤に存在する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容可能な担体、賦形剤、または安定化剤は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。非経口投与に好適な製剤には、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び溶質を含み得る、水性及び非水性の等張性無菌注射液剤、ならびに、懸濁化剤、可溶化剤、粘稠化剤、安定剤及び防腐剤を含み得る、水性及び非水性の無菌懸濁剤が含まれる。

【0189】

いくつかの態様では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント、及び医薬的に許容可能な担体を含む（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。本明細書に記載の医薬組成物は、いくつかの態様では、医薬品として使用するためのものである。インビボ投与に使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより容易に達成される。

【0190】

本明細書に記載の医薬組成物は、インビボまたはインビトロで生物学的効果（複数可）を発揮するために使用することができる。例えば、本明細書に記載の医薬組成物を使用して、骨髄細胞を活性化し、骨髄細胞の分化を促進し、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数及び／もしくはかかるリガンドを発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）へのＰＩＬＲＡの結合を阻害し、かつ／または細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御することができる。

【0191】

本明細書に記載の医薬組成物を使用して、疾患または状態、例えば、骨髄細胞を活性化すること、骨髄細胞の分化を促進すること、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つもしくは複数及び／もしくはかかるリガンドを発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）へのＰＩＬＲＡの結合を阻害すること、ならびに／または細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御することによって軽減され得る疾患または状態を処置することができる。本明細書に記載の医薬組成物を使用して、骨髄細胞が機能不全（例えば、低活性）であるかまたは欠損している疾患または状態、例えば、骨髄細胞の活性化または分化が望まれるか、または自然免疫系の活性化が望まれる疾患または状態を処置することができる。

【0192】

いくつかの態様では、本明細書で提供する医薬組成物を使用して、がんなどの疾患または状態を処置する。本明細書で提供する通りに処置することができるがんの例としては、固形腫瘍、例えば、固形腫瘍中の骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア（ＣＮＳ内）または他の自然免疫細胞）が腫瘍微小環境に浸潤している固形腫瘍が挙げられる。本明細書で提供する医薬組成物によって処置することができるかかる癌の例としては、限定されないが、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌（例えば、腎明細胞癌）、膵臓癌、及び乳癌が挙げられる。他のがんには、限定されないが、卵巣癌、肉腫、結腸直腸癌、肺癌、メラノーマ、膀胱癌、肝臓癌及び子宮癌が含まれる。いくつかの態様では、がんは、造血器がん、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。いくつかの態様では、がんは、初期段階のがんまたは後期段階のがんであり得る。いくつかの態様では、がんは、原発性腫瘍である。いくつかの態様では、がんは、上記がん種のいずれかに由来する、第２の部位での転移性腫瘍である。いくつかの態様では、がんは、ＰＩＬＲＡ陽性がんである。いくつかの態様では、がんは、ＰＩＬＲＡが増加した（例えば、ＰＩＬＲＡ ｍＲＮＡが増加した及び／またはＰＩＬＲＡタンパク質が増加した）がんである。

【0193】

いくつかの態様では、本明細書で提供する医薬組成物を使用して、神経変性疾患を処置する。いくつかの態様では、神経変性疾患は、機能不全（例えば、低活性）または欠損骨髄細胞、例えばミクログリアを特徴とする。いくつかの態様では、神経変性疾患は、免疫媒介性神経変性疾患である。いくつかの態様では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、軽度の認知障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウオパチー病、多発性硬化症、免疫媒介性神経障害（例えば神経障害性疼痛）、那須ハコラ病、小児発症性白質脳症、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）、及び辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される。

【0194】

いくつかの態様では、本明細書で提供する医薬組成物を使用して、ＨＳＶ－１感染を阻害する。いくつかの態様では、本明細書で提供する医薬組成物を使用して、ＨＳＶ－１再発を阻害する。

【0195】

５．５ 使用及び方法
さまざまな態様では、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を使用するインビトロ及びインビボでの方法を本明細書で提供する。一態様では、骨髄細胞を活性化する方法を提供し、本方法は、細胞を、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物に曝露することを含む。別の態様では、骨髄細胞の分化を促進する方法を提供し、本方法は、細胞を、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物に曝露することを含む。別の態様では、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数へのＰＩＬＲＡの結合を阻害する方法を提供し、本方法は、ＰＩＬＲＡを、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物と、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つまたは複数の存在下で接触させることを含む。例示的なリガンドには、グリコシル化タンパク質、例えば、ＰＴＰＸＰ、ＰＴＰＸＸＰ、ＰＸＴＰＸＰ、またはＰＸＴＰＸＸＰモチーフを伴うものが含まれる。例示的なリガンドには、例えば、ＣＯＬＥＣ１２、ＮＰＤＣ１、ＣＬＥＣ４Ｇ、及びＰＩＡＮＰ、ならびにＨＳＶ－１糖タンパク質Ｂが含まれる。ある特定の態様では、ＰＩＬＲＡ及び／またはそのリガンドのうちの１つまたは複数は、細胞上に発現している。別の態様では、細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する方法を提供し、本方法は、細胞の表面上にＰＩＬＲＡを発現する細胞を、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物に曝露することを含む。

【0196】

５．５．１ 治療用途及び方法
いくつかの態様では、骨髄細胞活性化の増加を、それを必要とする対象（例えば、ヒト対象）において行うための方法を本明細書で提供し、本方法は、対象に、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を投与することを含む。いくつかの態様では、骨髄細胞分化の促進を、それを必要とする対象（例えば、ヒト対象）において行うための方法を本明細書で提供し、本方法は、対象に、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を投与することを含む。

【0197】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象（例えば、ヒト対象）に投与して、対象におけるＰＩＬＲＡとそのリガンドのうちの１つまたは複数（例えば、ＮＰＤＣ１）との相互作用を阻害する方法を提供する。いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする対象（例えば、ヒト対象）に投与して、対象における細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する方法を提供する。

【0198】

いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物は、上記効果のいずれか２つ以上を達成するために投与される。

【0199】

いくつかの態様では、骨髄細胞を活性化すること、骨髄細胞の分化を促進すること、ＰＩＬＲＡのリガンドのうちの１つもしくは複数へのＰＩＬＲＡの結合を阻害すること、及び／または細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御することによって軽減され得る疾患または状態を処置する方法を本明細書で提供する。かかる方法は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含み得る。

【0200】

いくつかの態様では、骨髄細胞が機能不全（例えば、低活性）であるかまたは欠損している疾患または状態、例えば、骨髄細胞の活性化または分化が望まれるか、または自然免疫系の活性化が望まれる疾患または状態を処置する方法を本明細書で提供する。かかる方法は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含み得る。骨髄細胞が機能不全である疾患または状態は、がんまたは神経変性疾患を含み得、これは本明細書でさらに説明する。

【0201】

いくつかの態様では、がんを処置する方法を本明細書で提供する。がんを処置する方法は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含み得る。いくつかの態様では、がんを処置する方法を本明細書で提供し、がんは、固形腫瘍である。固形腫瘍には、固形腫瘍中の骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア（ＣＮＳ内）または他の自然免疫細胞）が腫瘍微小環境に浸潤している固形腫瘍が含まれる。本明細書で提供する通りに処置することができるかかるがんの例としては、限定されないが、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌（例えば、腎明細胞癌）、膵臓癌、及び乳癌が挙げられる。他のがんには、限定されないが、卵巣癌、肉腫、結腸直腸癌、肺癌、メラノーマ、膀胱癌、肝臓癌、及び子宮癌が含まれる。

【0202】

いくつかの態様では、本開示の方法によって処置されるがんには、限定するものではないが造血器がん、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫が含まれる。いくつかの態様では、本開示の方法によって処置されるがんは、初期段階のがんまたは後期段階のがんであり得る。いくつかの態様では、がんは、原発性腫瘍であり得る。いくつかの態様では、がんは、上記がん種のいずれかに由来する、第２の部位での転移性腫瘍であり得る。

【0203】

いくつかの態様では、本開示の方法によって処置されるがんは、ＰＩＬＲＡ陽性がんである。いくつかの態様では、本発明の方法によって処置されるがんは、ＰＩＬＲＡが増加した（例えば、ＰＩＬＲＡ ｍＲＮＡが増加した及び／またはＰＩＬＲＡタンパク質が増加した）がんである。

【0204】

いくつかの態様では、がんを処置する方法を提供し、本方法は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を投与することを含み、本方法は、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの態様では、阻害性チェックポイント分子は、ＰＤ－１（プログラムされた細胞死タンパク質－１）またはそのリガンドＰＤ－Ｌ１（プログラムされた死リガンド－１）である。いくつかの態様では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、ＰＤ－１に対する抗体である。ＰＤ－１抗体には、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、またはスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）が含まれる。ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に結合したＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインから構成される組換えタンパク質も、ＰＤ－１受容体に拮抗するために使用できる。いくつかの態様では、ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体である。ＰＤ－Ｌ１抗体には、例えば、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（アテゾリズマブ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｗ０２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が含まれる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物は、放射線療法及び／または化学療法剤と組み合わせて投与される。

【0205】

いくつかの態様では、ＨＳＶ－１感染及び／またはＨＳＶ－１再発を阻害する方法を本明細書で提供する。ＨＳＶ－１感染及び／または再発を阻害する方法は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含むことができる。

【0206】

いくつかの態様では、神経変性疾患を処置する方法を本明細書で提供する。神経変性疾患を処置する方法は、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を、それを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含むことができる。いくつかの態様では、神経変性疾患は、機能不全（例えば、低活性）または欠損骨髄細胞、例えばミクログリアを特徴とする。ミクログリアは、脳内に特異的に存在し、マクロファージとして機能し、食作用の過程を通してデブリ及び死んだニューロンを取り除き、脳の健康を維持するための他の支援機能を提供する自然免疫細胞である。いくつかの態様では、患者は、神経変性疾患の症状を有し、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書に記載のその医薬組成物を投与して、神経変性疾患を処置する。いくつかの態様では、患者は、神経変性疾患を発症するリスクがあり、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメント、または医薬組成物を投与して、神経変性疾患のリスクを低下させる、発症を遅らせるか、または予防する。

【0207】

いくつかの態様では、神経変性疾患は、免疫媒介性神経変性疾患である。いくつかの態様では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、軽度の認知障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウオパチー病、多発性硬化症（ＭＳ）、免疫媒介性神経障害（例えば神経障害性疼痛）、那須ハコラ病、小児発症性白質脳症、軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症性白質脳症（ＡＬＳＰ）、及び辺縁系優位型加齢性ＴＤＰ４３脳症（ＬＡＴＥ）から選択される。

【0208】

アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。この疾患に治療法はなく、進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳を越えた人において診断される。しかしながら、低有病率の、早期発症型のアルツハイマー病は、はるかに若年において生じ得る。アルツハイマー病の一般的症状には、近時事象の想起困難などの行動症状；認知症状、混乱、易刺激性及び攻撃性、気分変動、言語障害、ならびに長期の記憶喪失が含まれる。疾患が進行するにつれて、身体機能が失われ、最終的に死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになるまでに未知の可変時間量で発症し、何年も診断未確定で進行する場合がある。

【0209】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、アルツハイマー病を予防すること、リスクを低下させること、及び／または処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、アルツハイマー病を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0210】

認知症
認知症は、これまでに障害のなかった人において、正常な加齢から予想され得るものを越える全体的認知能力の重度の損失として現れる非特異的症候群（すなわち、一連の徴候及び症状）である。認知症は、固有の全体的な脳損傷の結果として静的である場合もある。あるいは、認知症は進行性であり、身体の損傷または疾患のために長期的な衰退をもたらし得る。認知症は、高齢者集団においてより多く一般的に見られるが、６５歳以前に発症することもある。認知症によって影響を受ける認知領域には、限定するものではないが、記憶、注意持続時間、言語、及び問題解決が含まれる。一般に、個体が認知症と診断されるまでには、少なくとも６ヶ月間、症状が存在する必要がある。

【0211】

認知症の例示的な形態には、限定するものではないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味性認知症及びレビー小体型認知症が含まれる。

【0212】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、認知症を予防すること、そのリスクを低下させること、及び／または認知症を処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、認知症を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0213】

前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性の劣化から生じる病状である。この変性は、時間の経過とともに側頭葉に進む場合がある。罹患率では、ＦＴＤは、アルツハイマー病（ＡＤ）に次いで、初老年性認知症症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床的特徴には、記憶障害、行動異常、人格変化、及び言語障害が含まれる（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆Ｖａｎ Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．２４：１８６－１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５１：１５４６－１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．，Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．＆Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ５８：１６１５－１６２１（２００２））。

【0214】

ＦＴＤ症例のかなりの部分が常染色体優性の様式で遺伝するが、症状は、たとえ１つの家族であっても、行動障害を伴うＦＴＤから、原発性進行性失語まで、大脳皮質基底核神経節変性症までの範囲にわたることがある。ＦＴＤは、ほとんどの神経変性疾患と同様に、罹患脳における特定のタンパク質凝集の病理学的存在によって特徴付けることができる。歴史的に、ＦＴＤに関する最初の記載は、神経原線維変化またはピック球における異常にリン酸化されたタウタンパク質の神経細胞内蓄積の存在を認めたものである。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、いくつかの家族において、タウタンパク質をコードする遺伝子の変異を特定することによって裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３９３：７０２－７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、異常にリン酸化されたタウの蓄積を示さないが、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対して免疫反応性を呈する（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８－１３９４（２００７））。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ－Ｕ）を伴うこれらのＦＴＤ症例の大部分は、プログラニュリン遺伝子に突然変異を持つことが示された。

【0215】

いくつかの態様では、本開示の、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、ＦＴＤを予防すること、そのリスクを低下させること、及び／またはＦＴＤを処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、ＦＴＤを有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0216】

パーキンソン病
パーキンソン病は、特発性または原発性パーキンソニズム、運動低下性硬直症候群（ＨＲＳ）、または麻痺性アジタンと呼ばれることがあり、運動系の制御に影響を与える神経変性脳障害である。脳内のドーパミン産生細胞の進行性死がパーキンソン病の主要な症状をもたらす。ほとんどの場合、パーキンソン病は、５０歳を越えた人において診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人で特発性（原因不明）である。しかしながら、遺伝的要因もこの疾患に関与している。

【0217】

パーキンソン病の症状には、限定するものではないが、手、腕、足、顎及び顔の振戦、四肢及び胴の筋強剛、運動の遅さ（運動緩慢）、姿勢反射障害、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神病、認知症、幻覚ならびに睡眠障害が含まれる。

【0218】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、パーキンソン病を予防すること、そのリスクを低下させること、及び／またはパーキンソン病を処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、パーキンソン病を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0219】

筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）
本明細書で使用する場合、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または運動ニューロン疾患またはルーゲーリック病は、互換可能に使用され、急速な進行性衰弱、筋萎縮及び線維束性収縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、ならびに呼吸困難（呼吸障害）を特徴とするさまざまな病因を有する衰弱性疾患を指す。

【0220】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、ＡＬＳを予防すること、そのリスクを低下させること、及び／またはＡＬＳを処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、筋萎縮性側索硬化症を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0221】

ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチンチン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性突然変異によって引き起こされる遺伝性神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン－アデニン－グアニン（ＣＡＧ）のトリプレットリピートが拡大すると、当該遺伝子によってコードされたハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の突然変異体が産生される。この突然変異ハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性であり、ニューロン死に寄与する。ハンチントン病の症状は、３５～４４歳の間に現れるのが最も一般的であるが、あらゆる年齢で発生し得る。

【0222】

ハンチントン病の症状には、限定するものではないが、運動制御障害、痙攣様不規則運動（舞踏運動）、異常な眼球運動、バランス障害、痙攣発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安、及び強迫的行動が含まれる。

【0223】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、ハンチントン病（ＨＤ）を予防すること、ＨＤのリスクを低下させること、及び／またはＨＤを処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、ハンチントン病を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0224】

タウオパチー病
タウオパチー病またはタウオパチーは、脳内における微小管関連タンパク質タウの凝集によって引き起こされる神経変性疾患の一種である。アルツハイマー病（ＡＤ）が最もよく知られたタウオパチー病であり、タウタンパク質がニューロン内で不溶性神経原線維変化（ＮＦＴ）の形態で蓄積することを伴う。他のタウオパチー病及び障害には、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、１７番染色体に関連する前頭側頭型認知症及びパーキンソニズム、Ｌｙｔｉｃｏ－Ｂｏｄｉｇ病（グアムのパーキンソン－認知症複合）、神経原線維変化優性認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン－スパッツ病、リポフスチン症、ピック病、皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、ならびに前頭側頭葉変性症が含まれる。

【0225】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、タウオパチー病を予防すること、タウオパチー病のリスクを低下させること、及び／またはタウオパチー病を処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、タウオパチー病を有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0226】

多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎と呼ばれることもある。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索を覆う脂質性ミエリン鞘が損傷を受けて、脱髄及び瘢痕化ならびに広範な徴候及び症状が生じる炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄の神経細胞が互いに有効的に情報伝達を行う能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁性物質内に含まれる軸索と呼ばれる長い線維に沿って活動電位と呼ばれる電気信号を送ることによって情報を伝達している。ＭＳでは、身体自体の免疫系がミエリンを攻撃し、損傷を与える。ミエリンが失われると、軸索は、シグナル伝達を有効的に行うことができなくなる。ＭＳ発症は、通常、若年成人で起こり、女性でより一般的である。

【0227】

ＭＳの症状には、限定するものではないが、感覚欠如またはヒリヒリ感などの感覚変化；感覚減退及び感覚異常などの刺痛またはしびれ感；筋力低下；クローヌス；筋痙攣；移動困難；運動失調などの協調及びバランス困難；構音障害などの発語障害、または嚥下障害などの嚥下困難；視覚問題、例えば、眼振、眼閃を含む視神経炎、及び複視；疲労；急性または慢性の疼痛；ならびに膀胱及び腸管障害；さまざまな程度の認知障害；うつ病または気分不安定の感情症状；通常の周辺温度よりも高い温度に曝されることにより現存する症状が憎悪するウートホフ現象；ならびに頸部を曲げると背中から下方に電気が走ったような感覚があるレルミット徴候が含まれる。

【0228】

いくつかの態様では、本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の投与は、ＭＳを予防すること、ＭＳのリスクを低下させること、及び／またはＭＳを処置することができる。いくつかの態様では、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体、抗原結合フラグメントまたは医薬組成物の投与は、ＭＳを有する個体における１つまたは複数のＰＩＬＲＡ活性を調節し得る。

【0229】

投与及び投薬
本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物は、任意の好適な手段、例えば、非経口、肺内、鼻腔内、腫瘍内、病巣内投与、脳脊髄内、頭蓋内、脊髄内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路によって投与され得る。非経口注入には、筋肉内、ボーラスとしてのもしくは所定期間にわたる連続注入による静脈内投与、動脈内、関節内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。いくつかの態様では、投与は、静脈内投与である。いくつかの態様では、投与は、皮下である。

【0230】

本明細書で提供する抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または本明細書で提供するその医薬組成物の適切な投薬量及び投薬レジメンは、単独でまたは１つもしくは複数の他の追加の治療剤と組み合わせて使用する場合、処置される疾患、疾患の重症度及び経過、投与経路ならびにその他の要因に依存するだろう。

【0231】

いくつかの態様では、医薬品として使用するための本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を本明細書で提供する。

【0232】

いくつかの態様では、がんの処置のための方法において使用するための、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を本明細書で提供する。いくつかの態様では、有効量の本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんの処置のための方法において使用するための、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を本明細書で提供する。

【0233】

いくつかの態様では、神経変性疾患の処置のための方法において使用するための、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を本明細書で提供する。いくつかの態様では、有効量の本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における神経変性疾患の処置のための方法において使用するための、本明細書で提供する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物を本明細書で提供する。

【0234】

５．５．２ 検出及び診断用途
本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、セクション５．２を参照されたい）を使用して、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降法、ウェスタンブロット法を含む当業者に公知の古典的な方法を使用して、生体試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）レベルをアッセイすることができる。好適な抗体アッセイ標識は当技術分野で公知であり、酵素標識、例えばグルコースオキシダーゼ；放射性同位体、例えば、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）；発光標識、例えばルミノール；ならびに蛍光標識、例えば、フルオレセイン及びローダミン、ならびにビオチンが含まれる。かかる標識を使用して、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを標識することができる。あるいは、本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントを認識する第２の抗体またはその抗原結合フラグメントを標識し、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントと組み合わせて使用して、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）レベルを検出することができる。

【0235】

ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）の発現レベルに関するアッセイは、第１の生体試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）のレベルを、直接的に（例えば、絶対タンパク質レベルを決定または推定することにより）または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することにより）、定性的または定量的に測定または推定することを含むことを意図している。第１の生体試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）発現レベルを測定または推定し、標準的なＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）レベルと比較することができ、標準は、障害を有していない個体から得た第２の生体試料から取得するか、または障害を有していない個体の集団からのレベルを平均化して決定する。当技術分野で理解されるように、「標準的な」ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）レベルが判明したら、これを比較用の標準として繰り返し使用することができる。

【0236】

本明細書で使用する場合、「生体試料」という用語は、対象、細胞株、組織、またはＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）を潜在的に発現する細胞の他の供給源から得られる任意の生体試料を指す。動物（例えば、ヒト）から組織生検及び体液を採取するための方法は、当技術分野で周知である。

【0237】

本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、当業者には周知でありかつ標準的であり、本明細書の記載に基づいた、インビトロ及びインビボ用途を含む、予後、診断、モニタリング及びスクリーニング用途に使用することができる。免疫系の状態及び／または免疫応答のインビトロアセスメント及び評価のための予後、診断、モニタリング及びスクリーニングアッセイ及びキットを利用して、予測、診断及びモニタリングして、免疫系の機能不全、がんまたは神経変性疾患、例えばアルツハイマー病を有すると判明しているかまたは疑われる患者の試料を含む患者の試料を評価してもよい。

【0238】

本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体及びその抗原結合フラグメントは、検出可能なまたは機能的な標識を保有することができる。蛍光標識を使用する場合、当技術分野で公知の現在利用可能な顕微鏡法及び蛍光活性化細胞選別分析（ＦＡＣＳ）または両方の方法手順の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを同定及び定量してもよい。本明細書に記載の抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントは、蛍光標識を保有することができる。例示的な蛍光標識としては、例えば、反応性及び共役プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン及びテキサスレッド、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素及びＤｙＬｉｇｈｔ色素が挙げられる。抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は、放射性標識、例えば、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、及び１８６Ｒｅを保有することができる。放射性標識を使用する場合、当技術分野で公知の現在利用可能な計数手順を利用して、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体または抗原結合フラグメントのＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）への特異的結合を同定及び定量してよい。標識が酵素である場合、検出は、当技術分野で公知の現在利用されている比色法、分光測光法、蛍光分光光度法、電流測定法またはガス測定法のいずれかによって達成され得る。これは、試料または対照試料を、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体またはその抗原結合フラグメントと、抗体またはその抗原結合フラグメントとＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）との間で複合体の形成を可能にする条件下で接触させることにより達成することができる。抗体またはその抗原結合フラグメントとＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）との間に形成された任意の複合体を検出し、試料及び対照において比較する。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントのヒトＰＩＬＲＡへの特異的結合に照らして、抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、細胞の表面上でのＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、免疫親和性精製を介してＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）を精製することもできる。

【0239】

ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）の存在の程度の定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムも本明細書に含まれる。システムまたは試験キットは、標識された成分、例えば、標識された抗体または抗原結合フラグメント、及び１つまたは複数の追加の免疫化学的試薬を含み得る。キットの詳細については、例えば、以下のセクション５．６を参照されたい。

【0240】

いくつかの態様では、試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）のインビトロ検出のための方法であって、前記試料を、抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることを含む、方法を、本明細書で提供する。いくつかの態様では、試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）のインビトロ検出のための本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を本明細書で提供する。いくつかの態様では、対象または対象から得た試料中のＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）の検出に使用するための本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントまたは組成物を本明細書で提供する。いくつかの態様では、診断用として使用するための本明細書で提供する抗体またはその抗原結合フラグメントを本明細書で提供する。いくつかの態様では、抗体は、検出可能な標識を含む。

【0241】

５．６ キット
本明細書に記載の１つまたは複数の抗体またはその抗原結合フラグメントを含むキットを本明細書で提供する。いくつかの態様では、本明細書で提供する１つまたは複数の抗体またはその抗原結合フラグメントなどの、本明細書に記載の医薬組成物の成分のうちの１つまたは複数を充填した１つまたは複数の容器を含む医薬パックまたはキットを本明細書で提供する。かかる容器（複数可）には、任意選択で、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関により規定される形式の通知書を添付することができ、その通知書は、ヒト投与に関する製造、使用または販売の機関による承認を反映したものである。

【0242】

また、検出方法において使用できるキットも本明細書で提供する。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、好ましくは、精製された抗体またはその抗原結合フラグメントを、１つまたは複数の容器に含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のキットは、対照として使用できる実質的に単離されたＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）を含有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のキットは、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）と反応しない対照抗体またはその抗原結合フラグメントをさらに含む。いくつかの態様では、本明細書に記載のキットは、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）への抗体またはその抗原結合フラグメントの結合を検出するための１つまたは複数の要素を含有する（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な基質、例えば、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物もしくは発光化合物にコンジュゲートすることができるか、または第１の抗体もしくはその抗原結合フラグメントを認識する第２の抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、検出可能な基質にコンジュゲートすることができる）。いくつかの態様では、本明細書で提供するキットは、組換え的に産生された、または化学的に合成されたＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）を含むことができる。キットで提供されるＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）は、固体支持体に付着させることもできる。いくつかの態様では、上記キットの検出手段には、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）が付着する固体支持体が含まれる。かかるキットにはまた、非付着レポーター標識された、抗ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗マウス／ラット抗体もしくはその抗原結合フラグメントが含まれ得る。この態様では、ＰＩＬＲＡタンパク質（例えば、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質）への抗体またはその抗原結合フラグメントの結合は、前記レポーター標識抗体またはその抗原結合フラグメントの結合によって検出することができる。

【実施例】

【0243】

６．実施例
このセクション（すなわち、セクション６）における実施例は、例示として提供され、限定するものではない。

【0244】

実施例１：抗ＰＩＬＲＡ抗体はＴ細胞へのＰＩＬＲＡの結合を阻害する
ヒトＰＩＬＲＡがＴ細胞に結合する能力を試験するために、可溶性ヒトＰＩＬＲＡ ｈＩｇＧ１ Ｆｃ構築物（「ＰＩＬＲＡ Ｆｃ」）を使用した。ＰＩＬＲＡ Ｆｃのアミノ酸配列を、配列番号７４で提供する。
ＱＰＳＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＴＡＰＤＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＫＳＧＦＬＲＩＳＮＬＱＫＱＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＳＳＧＲＱＱＷＱＳＩＥＧＴＫＬＳＩＴＱＧＱＱＲＴＫＡＴＴＰＡＲＥＰＦＱＮＴＥＥＰＹＥＮＩＲＮＥＧＱＮＴＤＰＫＬＮＰＫＬＨＬＴＱＳＴＳＱＰＰＳＰＱＥＰＰＥＲＤＰＶＬＣＬＫＧＬＴＮＧＱＰＳＱＤＡＤＤＤＤＫＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７４）

【0245】

ＰＩＬＲＡ ＦｃまたはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照を、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＪｕｒｋａｔ細胞と３０分間４℃にてインキュベートした。細胞を２回洗浄した後、結合したＰＩＬＲＡ ＦｃまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照を、抗ヒトＩｇＧ１ Ａｌｅｘａ ６４７を用いて検出した。細胞を、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏで取得し、平均蛍光強度を計算した。図１Ａに示すように、ＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＪｕｒｋａｔ細胞上で検出された。

【0246】

Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を阻害する抗ＰＩＬＲＡ抗体の能力を試験した。ＰＩＬＲＡ－Ｆｃに結合し、Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を遮断する抗ＰＩＬＲＡ抗体は、Ｔ細胞上のＰＩＬＲＡリガンドへのＰＩＬＲＡ－Ｆｃの結合を、遮断していると推定される。この活性を有する抗体は、同様に、Ｔ細胞上での内因性ＰＩＬＲＡリガンドへの内因性ＰＩＬＲＡの結合を、遮断することにおいて機能し、それにより、内因性ＰＩＬＲＡの阻害性シグナル伝達を抑制すると予想され得る。

【0247】

抗ＰＩＬＲＡ抗体がＴ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を阻害する能力を試験するために、まずＰＩＬＲＡ Ｆｃを、１０ｕｇ／ｍｌの抗ＰＩＬＲＡ抗体、アイソタイプ対照ＩｇＧ１、またはＦＡＣＳバッファー単独と、３０分間４℃にてインキュベートした。２人の健常ドナーからのＣＤ４^＋Ｔ細胞を加え、追加で３０分間さらにインキュベートした。２回洗浄した後、ＣＤ４^＋Ｔ細胞に結合したＰＩＬＲＡ Ｆｃを、抗ヒトＩｇＧ Ａｌｅｘａ ６４７で検出した。抗ＰＩＬＲＡ抗体またはアイソタイプ対照の存在下でのＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合の程度を、ＦＡＣＳバッファー単独の存在下でのＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合の程度と比較して計算した。抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体２１７５Ｂ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、ＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合を部分的に阻害した（図１Ｂ）。対照的に、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体２１７５Ｄ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、結合に影響を与えず、抗ヒトＰＩＬＲＡヒツジポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、結合を増加させた（図１Ｂ）。結論として、Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合は、使用される抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体に応じて阻害または増強され得る。

【0248】

実施例２：ＰＩＬＲＡは骨髄由来抑制細胞の分化及び活性化を制御する
骨髄細胞活性化及び分化におけるＰＩＬＲＡの役割を決定するために、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を、３人の健常ドナーの単球から、１００ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ及び１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－６と５日間培養することによって生成した。次に、細胞を回収し、ビヒクルまたは漸増用量のｍＩｇＧ１アイソタイプ対照もしくはヒトＰＩＬＲＡ Ｆｃ（ｍＩｇＧ１）構築物（「ＰＩＬＲＡ ｍＦｃ」）を用いて処理した。アミノ酸配列ＰＩＬＲＡ ｍＦｃ構築物を、配列番号７５で提供する。
ＱＰＳＧＳＴＧＳＧＰＳＹＬＹＧＶＴＱＰＫＨＬＳＡＳＭＧＧＳＶＥＩＰＦＳＦＹＹＰＷＥＬＡＴＡＰＤＶＲＩＳＷＲＲＧＨＦＨＧＱＳＦＹＳＴＲＰＰＳＩＨＫＤＹＶＮＲＬＦＬＮＷＴＥＧＱＫＳＧＦＬＲＩＳＮＬＱＫＱＤＱＳＶＹＦＣＲＶＥＬＤＴＲＳＳＧＲＱＱＷＱＳＩＥＧＴＫＬＳＩＴＱＡＶＴＴＴＴＱＲＰＳＳＭＴＴＴＷＲＬＳＳＴＴＴＴＴＧＬＲＶＴＱＧＫＲＲＳＤＳＷＨＩＳＬＥＴＡＧＧＳＧＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＩＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号７５）

【0249】

ＰＩＬＲＡ ｍＦｃは、可溶性アンタゴニストとして作用し、これらの細胞上で発現するＰＩＬＲＡリガンドと結合し、細胞表面の内因性ＰＩＬＲＡ受容体とのその相互作用を防止する。３日間の処理後、細胞を回収し、ＭＤＳＣの活性化を、ＣＤ１４及びＣＤ８６に関して染色することにより調べた。ＣＤ１４は、未成熟骨髄からより成熟した骨髄細胞型への分化時に下方制御される骨髄マーカーである。ＣＤ８６は、骨髄細胞上の活性化マーカーであり、適応免疫応答の強力な活性化因子であり、原型のＭ１遺伝子である。

【0250】

図２Ａは、ビヒクル、ｍＩｇＧ１、またはＰＩＬＲＡ ｍＦｃで処理したＭＤＳＣ上のＣＤ１４対ＣＤ８６発現を示す代表的なＦＡＣＳプロットを提供する。ＰＩＬＲＡ ｍＦｃを用いた処理は、ＣＤ１４^ｌｏＣＤ８６^ｈｉ（活性化）骨髄細胞のパーセンテージを増加させ、このことは、ＰＩＬＲＡの阻害性シグナル伝達を遮断すると、これらの細胞のより成熟した活性化表現型への分化が増強されたことを示す。それゆえ、抗ＰＩＬＲＡ抗体の遮断は、骨髄細胞の活性化及び分化の促進において同等の効果を有する予想され得る。

【0251】

図２Ｂは、３人のドナー（９５５、９５６、及び９５７）からのＭＤＳＣをｍＩｇＧ１アイソタイプ対照またはＰＩＬＲＡ ｍＦｃで処理した後のビヒクル処理細胞と比較した活性化骨髄細胞のパーセンテージを示す。ＰＩＬＲＡ ｍＦｃは、３人のドナーすべてからのＭＤＳＣ試料における、ＣＤ１４^ｌｏＣＤ８６^ｈｉ（活性化）骨髄細胞のパーセンテージによって測定した場合に、活性化骨髄細胞を増加させた。

【0252】

実施例３：ＰＩＬＲＡ ＦｃはＭＩＰ１ｂのＭＤＳＣ産生を誘導する
骨髄細胞活性化におけるＰＩＬＲＡの役割をさらに調査するために、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を、２人のドナーから、血液由来単球を１００ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ及び１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－６と５日間培養することによって生成した。次に、細胞を回収し、ビヒクルで、または漸増用量のｈＩｇＧ１アイソタイプ対照もしくはＰＩＬＲＡ Ｆｃで処理した（実施例１の通り）。ＰＩＬＲＡ Ｆｃは、可溶性アンタゴニストとして作用し、これらの細胞上で発現するＰＩＬＲＡリガンドと結合し、細胞表面の内因性ＰＩＬＲＡとのその相互作用を防止する。３日間の処理後、馴化培地を回収し、ＭＩＰ１ｂ（ＣＣＬ４）に関してアッセイした。ＭＩＰ１ｂは、骨髄細胞及びリンパ球の動員を促進する化学誘引物質である。ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、ＰＩＬＲＡ Ｆｃを使用したＰＩＬＲＡ拮抗作用は、ＭＩＰ１ｂ産生を誘導した。これは、骨髄細胞活性化の増加と一致する（図３）。

【0253】

実施例４：抗マウスＰＩＬＲＡ抗体はヒトＰＩＬＲＡと結合しない
マウスＰＩＬＲＡに対する抗体を以下の通りに生成した。Ｃ５７ＢＬ／７ ＰＩＬＲＡ^－／－ＰＩＬＲＢ１^－／－ＰＩＬＲＢ２^－／－マウスを、マウスＰＩＬＲＡ（ｍＰＩＬＲＡ）タンパク質で免疫付与し、ハイブリドーマを、標準的な方法を使用して調製した。抗体を含有する１３５個の馴化培地試料を、親２９３Ｆ細胞またはヒトＰＩＬＲＡ（ｈＰＩＬＲＡ）、ヒトＰＩＬＲＢ（ｈＰＩＬＲＢ）、カニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃＰＩＬＲＡ）、ｍＰＩＬＲＡ、もしくはマウスＰＩＬＲＢ（ｍＰＩＬＲＢ１）を異所的に発現する２９３細胞への結合についてＦＡＣＳによって評価した。簡潔には、抗体を含有する馴化培地を、２９３細胞と３０分間４℃にてインキュベートし、２回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ Ａｌｅｘａ ６４７を用いて検出した。細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩでフローサイトメトリーにより分析し、すべての細胞株について、２９３親細胞に対するＭＦＩ値を、各馴化培地に関して計算した。結果を、表８に報告する。１５個の抗体が、５倍を超える結合のカットオフを使用してｍＰＩＬＲＡバインダーとして同定された。これらのバインダーのうち、１０個の抗体は、マウスＰＩＬＲＢ（ｍＰＩＬＲＢ）発現細胞への結合（５倍超）も示し、１つの抗体は、カニクイザルＰＩＬＲＡ（ｃＰＩＬＲＡ）発現細胞に結合した（５倍超）。これらの１５個のｍＰＩＬＲＡバインダーはいずれも、ｈＰＩＬＲＡにもｈＰＩＬＲＢ発現細胞にも結合しなかった。

【0254】

（表８）ＰＩＬＲＡ及びＰＩＬＲＢへの抗マウス抗体の結合

【0255】

実施例５：抗マウスＰＩＬＲＡ抗体によってＰＩＬＲＡ発現細胞へのＮＰＤＣ１の結合が増加または低減することができる
上記の実施例４に記載の抗体を含有する１３５個の馴化培地試料を、マウスＰＩＬＲＡを異所的に発現する２９３細胞への神経増殖分化及び制御タンパク質１（ＮＰＤＣ１）Ｆｃの結合の調節に関して評価した。簡潔には、抗体を含有する馴化培地試料を、マウスＰＩＬＲＡを発現する２９３細胞と３０分間４℃にてインキュベートした後、５ｕｇ／ｍｌのＮＰＤＣ１ ｈＩｇＧ１ Ｆｃ（「ＮＰＤＣ Ｆｃ」）をこの混合物に加えた。４℃にて３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、細胞結合ＮＰＤＣ１ ｈＩｇＧ１ Ｆｃを、抗ヒトＩｇＧ Ａｌｅｘａ ６４７を用いて検出した。細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩでフローサイトメトリーにより分析し、すべての細胞株について、ＮＰＤＣ１ Ｆｃ結合単独に対する馴化培地の存在下でのＮＰＤＣ１ Ｆｃ結合のパーセンテージを計算した。結果を、図４に示す。ＮＰＤＣ－１を妨害した１０個のブロッキング抗マウスＰＩＬＲＡ抗体を同定した（ｍＰＡ－００１からｍＰＡ－００９）。ＮＰＤＣ１ Ｆｃ結合を増加させた５つの抗マウスＰＩＲＬＡ抗体を同定した（ｍＰＡ－０１１からｍＰＡ－０１５）。

【0256】

実施例６：抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体の産生
ヒトＰＩＬＲＡに対する抗体を、以下の通りに生成した。Ｃ５７ＢＬ／７ ＰＩＬＲＡ^－／－ＰＩＬＲＢ１^－／－ＰＩＬＲＢ２^－／－マウスを、ヒトＰＩＬＲＡタンパク質で免疫付与し、ハイブリドーマを、標準的な方法を使用して調製した。抗体を含有する３００個の馴化培地試料を、親２９３細胞またはｈＰＩＬＲＡ、ｈＰＩＬＲＢ、ｃＰＩＬＲＡ、ｍＰＩＬＲＡ、もしくはｍＰＩＬＲＢを異所的に発現する２９３細胞への結合についてＦＡＣＳによって評価した。簡潔には、抗体を含有する馴化培地を、２９３細胞と３０分間４℃にてインキュベートし、２回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ Ａｌｅｘａ ６４７を用いて検出した。細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩでフローサイトメトリーにより分析し、すべての細胞株について、２９３親細胞に対するＭＦＩ値を、各馴化培地に関して計算した。結果を、表９に示す。６つの抗体が、５倍を超える結合のカットオフを使用してヒトＰＩＬＲＡバインダーとして同定された。これらのバインダーのうち、１つの抗体は、ヒトＰＩＬＲＢ及びカニクイザルＰＩＬＲＡを発現する２９３細胞への結合も示した。マウスＰＩＬＲＡに結合した抗体は同定されなかった。

【0257】

（表９）ＰＩＬＲＡ及びＰＩＬＲＢへの抗ヒト抗体の結合

【0258】

実施例７：抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体はＴ細胞へのＰＩＬＲＡの結合を阻害する
上の実施例６に記載の抗体を含有する３００個の馴化培地試料が、ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を阻害する能力を評価した。簡潔には、抗体を含有する馴化培地を、１．２５ｕｇ／ｍｌのＰＩＬＲＡ Ｆｃと３０分間４℃にてインキュベートした後、ヒトＴ細胞に加えた。４℃にて３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、結合したＰＩＬＲＡ Ｆｃを、抗ヒトＩｇＧ Ａｌｅｘａ ６４７を用いて検出した。細胞を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩでフローサイトメトリーにより分析し、すべての細胞株について、ＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合単独に対する馴化培地の存在下でのＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合（ＭＦＩ）の量及びＰＩＬＲＡ Ｆｃ結合のパーセンテージを計算した。６つのブロッキング抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を同定した（図５）。

【0259】

実施例８：抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体は細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する
抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体を、細胞表面ＰＩＬＲＡを下方制御する能力について試験した。上の実施例６に開示したハイブリドーマキャンペーン（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃａｍｐａｉｇｎ）からの精製抗体（１０μｇ／ｍｌ）を、ヒトＰＩＬＲＡのＧ７８変異体を異所的に発現するシアリダーゼ処理２９３細胞と、３０分間または２時間氷上でまたは３７℃にてインキュベートした。次に、表面ＰＩＬＲＡを、蛍光標識されたヒツジ抗ヒトＰＩＬＲＡ（１μｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて検出し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩでフローサイトメトリーを使用して分析した。ヒトＰＩＬＲＡ下方制御のパーセンテージを、３７℃と比較して氷上で示された時点のインキュベーション後に検出された表面ＰＩＬＲＡのレベルに関して正規化することによって計算した。図６に示す結果は、抗ヒトＰＩＬＲＡ抗体が、細胞表面ヒトＰＩＬＲＡを下方制御できることを実証する。

【0260】

実施例９：腫瘍におけるＰＩＬＲＡの発現
健常組織と比較した場合の、腫瘍におけるＰＩＬＲＡの発現を比較するために、ＴＣＧＡ由来のがん試料及びＧＴＥＸ由来の正常試料からのＲＮＡｓｅｑデータを、ＰＩＬＲＡ発現に関して分析した。結果を図７に示し、ここで各ドットは、個々の試料を表す。これらの結果は、膠芽腫、頭頸部癌、腎臓癌、及び膵臓癌（各列の左側、ドット及び塗りつぶされていないボックスを示す）が、対応する健常組織（各列の右側、ドット及び塗りつぶされたボックスを示す）と比較して、ＰＩＬＲＡ発現が増加していることを実証する。理論に拘束されないが、発現の増加は、少なくともＰＩＬＲＡ発現骨髄細胞の浸潤に起因する。

【0261】

実施例１０：ＰＩＬＲＡシグナル伝達の遮断は抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせで腫瘍増殖を減少させる
腫瘍増殖に対するＰＩＬＲＡシグナル伝達の遮断の効果を、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせたＰＩＬＲＡ－Ｆｃを使用して調べた。ｍＰＩＬＲＡ ｍＩｇＧ１ Ｆｃは、ＰＩＬＲＡリガンドに結合し、細胞表面ＰＩＬＲＡによるシグナル伝達を防ぐことができるため、ＰＩＬＲＡ経路のアンタゴニストとして機能する。これらのアッセイでは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＭＣ３８結腸癌細胞を皮下接種した。マウスに、抗体アイソタイプ対照（１３ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ－Ｌ１（３ｍｇ／ｋｇ）、またはｍＰＩＬＲＡ ｍＩｇＧ１ Ｆｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体（３ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを、週に２回、３週間にわたって投薬した。

【0262】

図８は、結果として得られた腫瘍体積（左のグラフ）及び生存率（右のグラフ）を示す。抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみを投与したマウスの群と比較して、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせてｍＰＩＬＲＡ ｍＩｇＧ１ Ｆｃを投与したマウスの群において、腫瘍増殖の低減傾向が１７日目及び２０日目に観察された。さらに、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみを投与したマウスの群と比較して、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせてｍＰＩＬＲＡ ｍＩｇＧ１ Ｆｃを投与したマウスの群において、生存率の増加傾向が観察された。これらのデータは、ＰＩＬＲＡシグナル伝達の遮断は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて、腫瘍増殖を低減させ、生存率を増加させることができることを実証する。

【0263】

実施例１１：ｈＰＡ－００２は高度に強力なリガンドブロッカーである
精製された抗ｈＰＩＬＲＡ抗体を、これらの抗体のリガンド遮断力を計算するために、３人の別々のドナーからのヒトＣＤ３＋Ｔ細胞へのＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を遮断するその能力に関して評価した。各抗体に関してＩＣ５０値を計算し（平均＋標準誤差）、それらを表１０に示す。

【0264】

（表１０）リガンド結合遮断に関する抗体ＩＣ５０値

【0265】

ｈＰＡ－００２抗体は、２１７５Ｂ抗体よりも強力にＰＩＬＲＡ Ｆｃの結合を遮断する。ｈＰＡ－００５及びｈＰＡ－００４は、２１７５Ｂと同様の効力を有する。

【0266】

実施例１２：ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４はＰＩＬＲＡと競合的に結合するが、２１７５ＢはＰＩＬＲＡと競合的に結合しない
ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、及び／または２１７５Ｂが、ＰＩＬＲＡに競合的に結合するか否かを調べるために、２９３ＦＳ ｈＰＩＬＲＡ発現細胞を、非標識２１７５Ｂ、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、またはｈＰＡ－００４と３０分間氷上でインキュベートした。次に、Ａｌｅｘａ ６４７コンジュゲートｈＰＡ－００２を５μｇ／ｍｌの濃度にて加え、３０分間さらにインキュベートした。洗浄後、結合したＡ６４７コンジュゲートｈＰＡ－００２の量を、フローサイトメトリーによって評価した。結果は、図９に示し、非標識ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４がｈＰＡ－００２ Ａ６４７の結合を遮断したのに対し、２１７５ＢはｈＰＡ－００２ Ａ６４７の結合を遮断しなかったことを実証する。これらのデータは、ｈＰＡ－００５及びｈＰＡ－００４が、ｈＰＩＬＲＡへのｈＰＡ－００２の結合を競合的に阻害するが、２１７５Ｂは、ｈＰＩＬＲＡへのｈＰＡ－００２の結合を競合的に阻害しないことを実証する。

【0267】

実施例１３：ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４はＦｃ受容体による骨髄細胞の活性化を増強する
Ｆｃ受容体を介した活性化に対する抗ＰＩＬＲＡ抗体の効果を、この実施例に記載するようにＵ９３７骨髄細胞株及び誘導体を使用して評価した。Ｕ９３７親細胞、対照（スクランブルされた）ベクターを発現するＵ９３７細胞（Ｕ９３７対照細胞）、及びヒトＰＩＬＲＡを異所的に発現するＵ９３７細胞（ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞）を生成した。ＦＡＣＳ分析を細胞に対して行って、ＰＩＬＲＡ発現の相対量を決定した。ＦＡＣＳ分析は、ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞が高レベルのＰＩＬＲＡを発現し、Ｕ９３７親細胞またはＵ９３７対照細胞よりも約１７倍高いのに対し、Ｕ９３７親細胞及びＵ９３７対照細胞は最小量のＰＩＬＲＡを発現することを示した。（図１０Ａも参照されたい。）

【0268】

Ｆｃ受容体による骨髄細胞の活性化に対するｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４の効果を判定するために、９６ウェルプレートを、一晩ＰＢＳ中の３０μｇ／ｍＬマウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）でコーティングし、次にＰＢＳで洗浄した。Ｕ９３７親細胞、Ｕ９３７対照細胞、及びＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞を、ｍＩｇＧ２ａでコーティングしたウェルまたは未処理ウェルに加えた。可溶性ＩｇＧ（陰性対照）、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４を、ウェルに１０μｇ／ｍＬで加えた。４８時間後、馴化培地を、ケモカイン産生に関して評価した（ＭＣＰ－１、図１０Ｂ；ＲＡＮＴＥＳ、図１０Ｃ）。

【0269】

ｍＩｇＧ２ａでコーティングしたウェルのＵ９３７親細胞、Ｕ９３７対照細胞、及びＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞は、未処理ウェルの細胞と比較してＭＣＰ－１及びＲＡＮＴＥＳ産生の増加を示し（図１０Ｂ及び図１０Ｃの黒いバーと白いバーを比較）、このことは、ｈＩｇＧ１と挙動が類似する、プレート結合ｍＩｇＧ２ａが、細胞に結合し、Ｆｃ受容体を介して細胞を活性化することを示す。ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルのＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞は、ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルのＵ９３７親細胞及びＵ９３７対照細胞と比較して、ＭＣＰ－１及びＲＡＮＴＥＳ産生の増加が少なく、このことは、ＰＩＬＲＡの過剰発現が骨髄細胞のＦｃを介した活性化を阻害することを示す（図１０Ｂ及び図１０Ｃ）。図１０Ｂ及び図１０Ｃは、抗ＰＩＬＲＡ抗体（ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４）が、対照ＩｇＧまたは培地のみの存在下でのＦｃ受容体活性化を伴うＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞と比較して、（ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルの）Ｆｃ受容体活性化を伴うＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞においてＭＣＰ－１及びＲＡＮＴＥＳ産生を増加させたことも実証する。抗ＰＩＬＲＡ抗体（ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４）はまた、（ｍＩｇＧ２ａで処理されていないウェルの）Ｆｃ受容体活性化を伴わないＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞と比較して、（ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルの）Ｆｃ受容体活性化を伴うＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞においてＭＣＰ－１及びＲＡＮＴＥＳ産生を増加させた。抗ＰＩＬＲＡ抗体は、ｍＩｇＧ２ａ処理の有無にかかわらず、Ｕ９３７親細胞またはＵ９３７対照細胞に対して一致した効果を示さなかった。ゆえに、これらのデータは、ＰＩＬＲＡの過剰発現が、骨髄細胞のＦｃ受容体を介した活性化を阻害し、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４などの抗ＰＩＬＲＡ遮断抗体が、骨髄細胞のＦｃ受容体を介した活性化を増強できることを実証する。

【0270】

実施例１４：ＭＣＰ－１産生に対する抗ＰＩＬＲＡ抗体の用量反応効果
Ｕ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞におけるＭＣＰ－１産生に対する異なる濃度の抗ＰＩＬＲＡ抗体の用量反応効果を調べるために、９６ウェルプレートを一晩ＰＢＳ中の３０μｇ／ｍＬのｍＩｇＧ２ａでコーティングし、次にＰＢＳで洗浄した。Ｕ９３７ ＰＩＬＲＡ ＯＥ細胞を、ｍＩｇＧ２ａでコーティングしたウェルに加え、可溶性ＩｇＧ（陰性対照）、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、ｈＰＡ－００４、及び２１７５Ｂ抗体を、さまざまな濃度にてウェルに加えた（図１１）。４８時間後、馴化培地を、ＭＣＰ－１産生に関して評価した。

【0271】

図１１は、抗ＰＩＬＲＡ抗体ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４が、ＭＣＰ－１産生を用量依存的に増加させるが、抗ＰＩＬＲＡ抗体２１７５Ｂは、ＭＣＰ－１産生を阻害したことを示す。これらのデータは、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４がＰＩＬＲＡアンタゴニストであり、一方で２１７５ＢがＰＩＬＲＡアゴニストであることを示唆している。異なる機能的活性は、実施例１２のデータ（図９）と一致しており、これは、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４が競合的結合を実証するが、２１７５Ｂはそれを実証しないことを示し、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４が、２１７５Ｂとは異なるＰＩＬＲＡの領域に結合することを示唆している。

【0272】

実施例１５：ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４は初代ヒト単球においてＦｃ受容体活性化を増強する
初代ヒト単球におけるＦｃ受容体を介した活性化に対する抗ＰＩＬＲＡ抗体（ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４）の効果を判定するために、９６ウェルプレートを一晩ＰＢＳ中の３０μｇ／ｍＬのｍＩｇＧ２ａでコーティングし、次にＰＢＳで洗浄した。２人の異なるドナーからの初代ヒト単球を、ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルまたは未処理ウェルに加えた。可溶性ＩｇＧ（陰性対照）、ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４抗体を、１０μｇ／ｍＬにてウェルに加えた。４８時間後、馴化培地を、ＭＣＰ－１産生に関して評価した（図１２）。

【0273】

図１２では、ｍＩｇＧ２ａでコーティングされたウェルの初代ヒト単球は、未処理ウェルの初代ヒト単球と比較して、ＭＣＰ－１産生の増加を示し、このことは、プレート結合ｍＩｇＧ２ａがＦｃ受容体を介して初代ヒト単球を活性化したことを示す。抗ＰＩＬＲＡ抗体ｈＰＡ－００２、ｈＰＡ－００５、及びｈＰＡ－００４は、Ｆｃ受容体を介した活性化により、初代ヒト単球におけるＭＣＰ－１産生を増加させ、ｈＰＡ－００２が最も強い効果を示した。これらのデータは、抗ＰＩＬＲＡ抗体が、初代ヒト単球におけるＦｃ受容体を介した活性化を増強できることを実証する。

【0274】

本発明は、本明細書に記載の特定の態様によって範囲を限定されるものではない。実際、記載したものに加えて本発明のさまざまな改変が、前述の説明及び添付の図面から当業者には明らかとなるだろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。

【0275】

本明細書中に引用するすべての参考文献（例えば、刊行物または特許もしくは特許出願）は、あたかも各個々の参考文献（例えば、刊行物または特許もしくは特許出願）があらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれることを具体的かつ個別に示すのと同程度に、あらゆる目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0276】

他の実施形態は、以下の添付の特許請求の範囲内である。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【配列表】

2023513834000001.app

【国際調査報告】