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▶ シージェイ チェイルジェダン コーポレーションの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-05
(54)【発明の名称】低温加工性脂肪族ポリエステル
(51)【国際特許分類】
C08G 63/06 20060101AFI20230329BHJP
C12P 7/625 20220101ALI20230329BHJP
C12N 15/54 20060101ALI20230329BHJP
C08L 101/16 20060101ALI20230329BHJP
C12N 15/53 20060101ALN20230329BHJP
【ＦＩ】
C08G63/06
C12P7/625 ZNA
C12N15/54
C08L101/16 ZBP
C12N15/53
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022547890
(86)(22)【出願日】2021-03-30
(85)【翻訳文提出日】2022-08-05
(86)【国際出願番号】 KR2021003923
(87)【国際公開番号】W WO2021215685
(87)【国際公開日】2021-10-28
(31)【優先権主張番号】16/854,070
(32)【優先日】2020-04-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513178894
【氏名又は名称】シージェイ チェイルジェダン コーポレーション
(74)【代理人】
【識別番号】110001818
【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ
(72)【発明者】
【氏名】チョイ，ジン・ウ
(72)【発明者】
【氏名】ジャン，ユンジェ
(72)【発明者】
【氏名】パク，ソユン
(72)【発明者】
【氏名】チャン，ドン‐ユン
(72)【発明者】
【氏名】リカタ，ジョン
【テーマコード（参考）】
4B064
4J029
4J200
【Ｆターム（参考）】
4B064AD83
4B064CA19
4B064CC24
4B064CD01
4B064CD06
4B064CD09
4B064CD19
4B064DA01
4J029AA02
4J029AB01
4J029AB04
4J029AC01
4J029AD01
4J029AD02
4J029AD06
4J029AD10
4J029AE01
4J029AE14
4J029AE18
4J029EA02
4J029EA05
4J029KA02
4J029KD17
4J029KE17
4J029KH05
4J029LA20
4J200AA02
4J200AA11
4J200AA12
4J200AA13
4J200AA28
4J200BA06
4J200BA15
4J200DA19
4J200DA22
4J200EA05
4J200EA10
4J200EA11
(57)【要約】
本発明は、低温加工性脂肪族ポリエステルに関するものであって、４－ヒドロキシ酪酸（４ＨＢ）の含量が調節されたポリヒドロキシアルカン酸共重合体を含む高分子素材を提供する。本発明による高分子素材を活用すれば、短期間の生体支持体としてバインダーの役割を行うことができ、熱に非常に敏感な素材に対する点接着機能性を付与するためのホットメルト素材及び不織布材料として適用が可能であり、多様な分野に容易に応用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子として、３－ヒドロキシ酪酸モノマーと４－ヒドロキシ酪酸モノマーとを含み、前記４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量が、７６～９８ｍｏｌ％である、低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項2】
前記分子の重量平均分子量が、２００～８００ｋＤａである、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項3】
前記４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量が、８５～９５ｍｏｌ％である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項4】
融点（Ｔｍ）が、３０～１００℃であり、分解温度（Ｔｄ）が、２００～４００℃である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項5】
酸価が、０．５～４である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項6】
色差ｂ＊が、１～１５である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項7】
溶融流動指数（ＭＦＩ）が、３～１０である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項8】
延伸率が、１０００～２５００％以上である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項9】
引張強度が、１～２０ＭＰａである、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項10】
屈折率（ｎＤ２５）が、１．３～１．７である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項11】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子として、３－ヒドロキシ酪酸モノマーと４－ヒドロキシ酪酸モノマーとを含み、前記４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量が、７６～９８ｍｏｌ％である、低温加工性脂肪族ポリエステルを製造する方法において、
（ａ）１つ以上の炭素原料が、３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡに変換され、（ｂ）３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡが重合されて、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を形成する条件で１つ以上の炭素原料の存在下に生物体を培養する工程を含む方法でポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を形成する、低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項12】
前記生物体は、前記生物体のゲノム内に遺伝子の統合、生物体内に遺伝子を含む１つ以上の安定したプラスミド導入のうちの１つ以上によって、ポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、アセチル－ＣｏＡアセチル転移酵素、アセトアセチル－ＣｏＡ還元酵素、コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、コハク酸セミアルデヒド還元酵素、及び、ＣｏＡ転移酵素をコードする遺伝子の安定した組み入れによりポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、アセチル－ＣｏＡアセチル転移酵素、アセトアセチル－ＣｏＡ還元酵素、コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、コハク酸セミアルデヒド還元酵素、及びＣｏＡ転移酵素の酵素活性を含むように遺伝学的に操作され、ＮＡＤ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素またはＮＡＤＰ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、若しくは、両方の酵素活性を含まない、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項13】
前記１つ以上の炭素原料の和が、≧５０％のバイオベース含量を有する、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項14】
前記生物体は、追加的に、（ａ）（ｉ）α－ケトグルタル酸脱炭酸酵素または２－オキソグルタル酸脱炭酸酵素及び（ｉｉ）Ｌ－１，２－プロパンジオール酸化還元酵素の酵素活性を含むように、そして、（ｂ）（ｉ）チオエステラーゼＩＩ、（ｉｉ）多機能性アシル－ＣｏＡチオエステラーゼＩ及びプロテアーゼＩ及びリゾホスホリパーゼＬ、（ｉｉｉ）アシル－ＣｏＡチオエステラーゼ、及び（ｉｖ）アルデヒド脱水素酵素のうち、１つ以上の酵素活性を含まないように遺伝学的に操作された、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項15】
前記１つ以上の炭素原料は、グルコース、レボグルコサン、蔗糖、乳糖、果糖、キシロース、マルトース、アラビノース、及びこれらの混合物からなる群から選択された炭素源を含む、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項16】
前記１つ以上の炭素原料は、糖蜜、澱粉、脂肪酸、植物性油、リグノセルロース物質、エタノール、酢酸、グリセロール、バイオマス由来合成ガス、及び埋立ガスから由来するメタンのうち、１つ以上を含む、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項17】
前記１つ以上の炭素原料は、γ－ブチロラクトン、１，４－ブタンジオール、４－ヒドロキシ酪酸、３－ヒドロキシ酪酸、α－ケトグルタル酸、オキサロ酢酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、コハク酸、または３－ヒドロキシ酪酸を含まない、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項18】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体組成物に生物体が実質的に含まないように生物体からポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を分離する工程をさらに含む、請求項１１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステルの製造方法。
【請求項19】
請求項１１に記載の方法で製造された、低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項20】
菌株の発酵を利用した４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量が、７６～９８ｍｏｌ％である、請求項１９に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【請求項21】
前記低温加工性脂肪族ポリエステルが、生分解性ワックス、医療機器、低温ホットメルト、不織布、バイオプラスチック、薬物担体、医療用ラップ、医療用繊維、医療用フィラメント、医療用ステントまたは整形外科用補綴の用途である、請求項１に記載の低温加工性脂肪族ポリエステル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、弾性度、透明度などの物性を調節した低温加工性脂肪族ポリエステルに関する。
【0002】
本願は、２０２０年４月２１日付の米国特許出願第１６／８５４，０７０号に基づいた優先権の利益を主張し、当該米国特許出願の文献に開示されたあらゆる内容は、本明細書の一部として含まれる。
【背景技術】
【0003】
現在、生分解性高分子の活用に対する要求は、全世界を問わず、今になってこそさらに注目されている状況に直面している。プラスチックごみの処理問題が、既に国家的な問題として台頭してメディアを通じて頻繁に報道されていると認識することができ、このような深刻性に対する根本的な解決方案が、何れかの時よりも必要な状況なので、政府主導の規制政策や既存の合成プラスチックに対する使用制限を実施しようとする法案が進行中である状況（ＥＵの場合、生分解袋のように既に施行されている部分も存在する）である。また、１つの深刻な問題点として注目されている部分は、微細プラスチックによる環境汚染で海洋生態系に悪影響を与えているということであって、最近５年以来引き続き問題として指摘されている状況である。
【0004】
このような問題点を解決するために、現在開発された素材は、ポリヒドロキシアルカン酸（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏａｔｅ）の脂肪族ポリエステル（ａｌｉｐｈａｔｉｃ ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ）であり、その中でも、特に、３－ヒドロキシ酪酸（３－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ、３ＨＢ）と４－ヒドロキシ酪酸（４－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ、４ＨＢ）の２個のモノマー（ｍｏｎｏｍｅｒ）を基本反復構造で有するランダム型２成分系共重合体がある。このような高分子は、分子量変化及び４－ヒドロキシ酪酸の比率によって高分子の機械的／熱的特性が大きく変わるという特徴を有している。特に、ポリヒドロキシアルカン酸は、合成高分子と同じ機械的、熱的特性を有しており、生分解が可能であって、従来の問題点を解決することができる代案として十分に活用が可能であるという長所がある。
【0005】
したがって、高分子の特性を活用して家庭で堆肥化することができ、海水で堆肥化することができ、１００％生分解可能なバイオ高分子に関する開発が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明は、前記問題点を解決するために、物性が調節された生分解性低温加工性脂肪族ポリエステルを提供する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明は、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子として、３－ヒドロキシ酪酸モノマーと４－ヒドロキシ酪酸モノマーとを含む低温加工性脂肪族ポリエステルを提供する。
【0008】
本発明の実施例の他の特定の詳細事項は、次の詳細な説明に含まれる。
【発明の効果】
【0009】
本発明の低温加工性脂肪族ポリエステルによれば、熱に敏感な分野及び低温加工性が要求される分野に容易に適用可能である。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】本発明による４－ヒドロキシ酪酸（４ＨＢ）単位の含量が１０％であるＰＨＡのひずみ率（ｓｔｒａｉｎ）による試料の応力（ｓｔｒｅｓｓ）を示すグラフである。グラフは、ひずみ率の１０％前後での弾性領域を示し、降伏点を超えて応力が低くなる現象を示し、以後、ネッキング現象（高分子が引張応力を受けて局部的に膨張する現象）が発生しながら一定の引張強度を示す。鎖配向が極限点に近くなることによって、引張強度が降伏引張強度以上に増加しながら破断される曲線を示す。
【図2】本発明による４ＨＢ含量が５０％であるＰＨＡのひずみ率による試料の応力を示すグラフである。明らかな降伏点を示せず、初期に最大引張強度を有し、以後にネッキング現象が起こり、引張感度が次第に減少しながら破断される傾向の曲線を示す。
【図3】本発明による４ＨＢ含量が９０％であるＰＨＡのひずみ率による試料の応力を示すグラフである。ひずみ率基準に８０％地点で降伏点を示し、ネッキング現象が起こり、引張強度が減少する傾向を示す。鎖配向が極限点に近くなり、引張強度が増加し、降伏引張強度以前に破断される現象が起こる。
【発明を実施するための形態】
【0011】
本発明を具体的に説明すれば、次の通りである。
【0012】
一方、本発明で開示されたそれぞれの説明及び実施形態は、それぞれの他の説明及び実施形態にも適用可能である。すなわち、本発明で開示された多様な要素のあらゆる組み合わせが、本発明の範疇に属す。また、下記記述された具体的な叙述によって、本発明の範疇が制限されると見ることができない。また、本発明を説明するに当って、関連した公知技術についての具体的な説明が、本発明の要旨を不明にする恐れがあると判断される場合、その詳細な説明を省略する。
【0013】
本明細書内で単数の表現は、取り立てて明示しない限り、複数の表現を含む。
【0014】
本明細書内で特別な言及がない限り、「ないし」という表現は、当該数値を含む表現として使われる。具体例を挙げれば、「１ないし２」という表現は、１及び２を含むだけではなく、１と２との間の数値を何れも含むことを意味する。
【0015】
本明細書内の用語「ＰＨＡ共重合体」は、少なくとも２個の異なるヒドロキシアルカン酸モノマーからなるポリマーを意味する。
【0016】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体組成物が提供される。この組成物は、複数のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を含む。組成物は、例えば、バイオマス組成物、例えば、生産された生物体であり、多数のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を生成し、それを内部に含み、非－ポリヒドロキシアルカン酸（ｎｏｎ－ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏａｔｅ）バイオマスを含まず、例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を生成した生物体から単離及び／または精製されたポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を含む組成物、または、バイオプラスチック組成物、例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を含み、バイオプラスチックとしての使用に適した均質またはブレンド組成物である。
【0017】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、３－ヒドロキシ酪酸モノマーと４－ヒドロキシ酪酸モノマーとを含む。したがって、それぞれのポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、３－ヒドロキシ酪酸モノマー及び４－ヒドロキシ酪酸モノマーを両方含む。このような分子は、例えば、３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡのＰＨＡ－合成酵素（ＰＨＡ－ｓｙｎｔｈａｓｅ）媒介共重合によって合成されて、例えば、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－４－ヒドロキシ酪酸）共重合体分子を生成することができる。
本発明による高分子素材は、全体高分子反復構造で４－ヒドロキシ酪酸（４ＨＢ）の比率を高含量で調節することにより、１００％生分解と堆肥化とが同時に可能であり、特に、１００℃以下の低温で加工が可能であり、特に、身体温度で溶ける性質を有することができ、生分解が可能である。
本発明による高分子素材は、全体高分子反復構造で４－ヒドロキシ酪酸（４ＨＢ）の比率を高含量で調節することにより、１００％生分解と堆肥化とが同時に可能であり、特に、１００℃以下の低温で加工が可能であり、特に、身体温度で溶ける性質を有することができ、生分解が可能である。
【0018】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、７６～９８％の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率を有する。したがって、３－ヒドロキシ酪酸モノマーを含む残りのモノマーの含量が、２～２４％である。また、例えば、前記４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量は、８０～９５ｍｏｌ％、例えば、８２ｍｏｌ％以上、また８５ｍｏｌ％以上、また９０ｍｏｌ％以上、例えば、９５ｍｏｌ％以下、また９３ｍｏｌ％以下である。
【0019】
一具現例によれば、残りの２～２４％の単量体単位のうち、≧９５％または≧９９％は、３－ヒドロキシ酪酸モノマーに該当し、残りは、付加的な単量体に該当する。
【0020】
一実施形態において、単量体単位の残りの２～２４％何れもは、３－ヒドロキシ酪酸モノマーに相応して、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子が追加の単量体をさらに含まない。したがって、例えば、特に、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－４－ヒドロキシ酪酸）共重合体と関連して、７６～９８％単量体ｍｏｌ百分率の４－ヒドロキシ酪酸モノマーを有するポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の場合、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の単量体単位の残りの２～２４％は、３－ヒドロキシ酪酸モノマーに相応する。
【0021】
一具現例によれば、本発明による高分子素材は、全体高分子反復構造で４－ヒドロキシ酪酸（４ＨＢ）の比率を、例えば、７６％以上、また８０％以上、また９０％以上、例えば、９８％以下、また９５％以下、また９３％以下の範囲にして、色差、弾性度、低温加工及び生分解のような物性を向上させ得る。
【0022】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率は、例えば、溶融温度、破断延伸率、ガラス転移温度などと関連して、その組成物の特性に影響を及ぼす。したがって、前記開示された多様な範囲のそれぞれで４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率を有するポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、特定の所望の特性を有するように組成物の形成に使われる。
【0023】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、バイオベース含量が≧５０％、例えば、≧８０％である。本明細書で使われる用語としてバイオベース含量は、これに参照として含まれた、放射性炭素分析（ＡＳＴＭ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕ．Ｓ．，２０１２）を使用して、固体、液体及びガスサンプルのバイオベース含量を決定するためのＡＳＴＭ Ｄ６８６６－１２、標準試験法に定義されたように、物質または製品の総有機炭素重量（質量）のパーセントとして物質または製品内のバイオベース炭素の量を意味する。ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－１２で言及されたように、総有機炭素には、バイオベース炭素と化石炭素とが何れも含まれ得る。バイオベースの炭素は、放射性炭素、つまり １４Ｃを、生物圏での最近の循環を示す量で、 例えば、既知のパーセンテージの１４Ｃを含む大気中のＣＯ2が最近の有機炭素に取り込まれた量で、含む有機炭素に該当する。
【0024】
化石炭素は、大気中ＣＯ２が含まれた日から測定した化石炭素の年齢が１４Ｃの半減期よりも遥かに長いために、すなわち、取り込まれた１４Ｃの全部または本質的に全部が崩壊するので、放射性炭素をほとんどまたは全く含まない有機炭素に該当する。したがって、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子に適用されるように、バイオベースの含量は、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の全体有機炭素の重量（質量）に対する百分率であって、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子内のバイオベース炭素の量を意味する。例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子のバイオベース含量は、ポリヒドロキシアルカン酸の燃焼によって誘導されたＣＯ２の１４Ｃと１２Ｃとの含量を決定し、１９５０年以後、大気中への１４Ｃ注入を補正する方法などに基づいて、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－１２によってバイオベース含量を測定することができる。したがって、例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－１２によって測定時に、≧５０％、例えば、≧８０％のバイオベース含量を有し得る。当該技術分野に公知されたように、バイオベース含量を測定するための他の適した接近法がまた使われる。異なるポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子間のバイオベース含量の差は、構造的差、すなわち、異なるポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子間の１４Ｃ対１２Ｃ比率の差を示す。
【0025】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子のバイオベース含量は、ＡＳＴＭ Ｄ６８６６－１２によって、例えば、５０％以上、また８０％以上、また９０％以上、また９５％以上、また１００％である。
【0026】
前述したバイオベース含量を有するポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、環境的利点を伴いながら化石炭素のほとんどまたは全体が再生可能なバイオベース炭素に置き換えられたバイオベースプラスチックの製造に使われる。また、前述したバイオベース含量を有するポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、規制の恩恵を伴いながらバイオベース含量の差と関連した前述した構造的差に基づいて、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子及びその他の重合体及び前述したバイオベース含量を有さない化合物と容易に区別される。
【0027】
本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の重量平均分子量は、例えば、２００ｋＤａ以上、また２５０ｋＤａ以上、また３００ｋＤａ以上、また４００ｋＤａ以上、また４４０ｋＤａ以上であり、例えば、２ＭＤａ以下、また１ＭＤａ以下、また８００ｋＤａ以下、また７００ｋＤａ以下、また６００ｋＤａ以下、また５７０ｋＤａ以下である。また、例えば、前記重量平均分子量は、ポリスチレン標準物質を使用したゲル浸透クロマトグラフィーを使用して決定することができる。
【0028】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、分子量による分布で存在することができ、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子組成の物性及びレオロジー的性質は、前記分布に依存することができる。重合体の分子量は、多様な方法で計算することができる。Ｍｗとも称する重量平均分子量は、多様な長さの鎖重量の和に鎖の分子量を乗算し、あらゆる鎖の総重量で割ったものである（ΣＮｉＭｉ
２／ΣＮｉＭｉ）。Ｍｎとも称する数平均分子量は、与えられた長さの鎖数の和に鎖の分子量を乗算したものを、総鎖数（ΣＮｉＭｉ／ΣＮｉ）で割ったものである。多分散度指数は、重合体の分子量分布の幅を測定したものであって、重量平均分子量を数平均分子量で割った値で計算される。本願に使われた用語、分子量は、文脈で異なるように示さない限り、重量平均分子量を称する。
【0029】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の重量平均分子量は、例えば、ポリスチレン標準を使用したゲル浸透クロマトグラフィーを使用して測定することができる。クロロホルムは、ゲル浸透クロマトグラフィーの溶離液とポリヒドロキシアルカン酸の溶離液として使用することができる。分子量を測定するための検量線は、線形ポリスチレンを分子量標準として使用し、溶出体積の関数としてｌｏｇ分子量を基盤とする補正方法を使用して作成することができる。
【0030】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の融点（Ｔｍ）は、３０～１００℃、例えば、３５℃以上、例えば、８０℃以下、また７０℃以下、また６０℃以下、また５５℃以下である。前記融点は、ＤＳＣ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）で測定することができる。
【0031】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の分解温度（Ｔｄ）は、２００～４００℃、例えば、２３０℃以上、また２８０℃以上、例えば、３５０℃以下、また３３０℃以下である。前記分解温度は、ＴＧＡ（Ｔｈｅｒｍａｌｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ）で測定することができる。
【0032】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の酸価は、０．５～４．５、例えば、０．８以上、また１以上、例えば、４以下、また３以下、また２以下であり、例えば、０．５～２である。前記酸価は、試料１ｇ中に含有された遊離脂肪酸の中和に必要な水酸化カリウムのｍｇ数で示すことができる。
【0033】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の色差は、１～１５、例えば、３以上、また５以上、例えば、１３以下、また１２以下であり、例えば、１～１２である。
【0034】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の溶融流動指数（ＭＦＩ）は、３～１０、例えば、４．５以上、また５以上、例えば、８以下、また６以下である。
【0035】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の延伸率は、１０００～２５００％、例えば、１０００％以上、例えば、１３００％以上、また１５００％以上、また１７００％以上、例えば、２５００％以下、また２０００％以下、また１９００％以下であり、例えば、１０００～２０００％、また１７００～１９００％である。
【0036】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の引張強度（ｔｅｎｓｉｌｅ ｓｔｒｅｎｇｔｈ）は、１～２０ＭＰａ、例えば、３ＭＰａ以上、また５ＭＰａ以上、例えば、１５ＭＰａ以下、また１０ＭＰａ以下であり、例えば、５～２０ＭＰａ、また５～８ＭＰａである。
【0037】
前記延伸率及び引張強度は、例えば、ＡＳＴＭ－Ｄ８８２の規定によって、３００ ｍｉｃｒｏｎ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｓｈｅｅｔで測定することができる。
【0038】
一具現例によれば、本発明のポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の屈折率（Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ、ｎＤ２５）は、１．３～１．７、例えば、１．４以上、また１．４５以上、また１．４８以上、例えば、１．６以下、また１．５以下、また１．４９以下であり、例えば、１．３～１．５である。前記屈折率（ｎＤ２５）は、２５ ｍｉｃｒｏｎ ｆｉｌｍ基準に測定することができる。
【0039】
前記組成物は、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率がポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の分子量の増加によって減少しないものである。前記のように、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、分子量に対する分布で形成し得る。４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率は、それぞれのポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子ごとに異なり得る。ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率がポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の分子量の増加によって減少しない組成物は、例えば、分子量分布の上限にあるポリヒドロキシアルカン酸共重合体の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率が、分子量分布の下限にあるポリヒドロキシアルカン酸共重合体の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率よりは低くない。したがって、前記組成物は、例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーのｍｏｌ百分率が大きく異なっていない、例えば、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の分子量の増加、例えば、分子量分布の上限にあるポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率と本質的に同一であり、例えば、分子量分布の下限でポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子と同一である。また、例えば、前記組成物は、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率がポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の分子量が増加することができ、例えば、分子量分布の上限にあるポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の４－ヒドロキシ酪酸モノマーの単量体ｍｏｌ百分率は、分子量分布の下限にあるポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子よりも高い。
【0040】
前記組成物は、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子が≧５０％、例えば、≧８０％のバイオベース含量を有する１つ以上の炭素原料を使用する発酵工程で１つに合わせられて生成されるものである。１つ以上の炭素原料は、糖蜜、澱粉、脂肪酸、植物性油、リグノセルロース物質、エタノール、酢酸、グリセロール、バイオマス由来合成ガス、及び埋立ガスから由来するメタン、グルコース、レボグルコサン、蔗糖、乳糖、果糖、キシロース、マルトース、アラビノース、及びこれらの混合からなる群から選択された炭素源を含む。また、収率は、炭素源１ｇ当たりポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子０．２５ｇ超過である。例えば、一実施形態において、炭素源１ｇ当たりポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の収率は、０．３０ｇ超過、または０．３５ｇ超過、または０．４０ｇ超過である。
【0041】
言及したように、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、バイオマス組成物の５０重量％以上に存在する。本発明に使われたように、バイオマス組成物の重量％は、バイオマス組成物の乾燥重量、例えば、細胞乾燥重量である。ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、例えば、バイオマス組成物の≧６０、≧７０、≧８０、≧８５、または≧９０重量％に存在することができる。
【0042】
前記方法は、（ａ）１つ以上の炭素原料が、３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡに変換され、（ｂ）３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡが重合されて、ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を形成する条件で、１つ以上の炭素原料の存在下に生物体を培養して組成物を形成するものを含み得る。
【0043】
培養は、例えば、発酵による生物体培養、振盪フラスコ培養などを含み得る。発酵は、例えば、１Ｌの実験室規模、例えば、２０，０００～１００，０００Ｌの産業製造規模で行われる。
【0044】
生物体は、例えば、微生物菌株または藻類菌株である。適した微生物菌株は、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）菌株またはＲａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ菌株を含む。適した藻類菌株は、例えば、クロレラ菌株を含む。追加の適した生物体は、下記の実施例に記載されている。
【0045】
１つ以上の炭素原料は、産業工程で使われる炭素原料を含み得る。例えば、発酵過程の細胞に炭素またはその他のエネルギー源を供給及び／または再生可能である。例えば、生きている生物体から派生された物質またはバイオマスから派生された物質を含む代謝副産物、籾殻またはストーバのように、活用度が低い構成要素で構成される場合が多い。例えば、１つ以上の炭素原料は、グルコース、レボグルコサン、蔗糖、乳糖、果糖、キシロース、マルトース、アラビノース、及びこれらの混合物からなる群から選択された炭素源を含み得る。また、例えば、１つ以上の炭素原料は、糖蜜、澱粉、脂肪酸、植物性油、リグノセルロース物質、エタノール、酢酸、グリセロール、バイオマス由来合成ガス、及び埋立ガスから由来するメタンのうち、１つ以上を含み得る。
【0046】
１つ以上の炭素原料をさらに考慮すれば、一実施形態において、１つ以上の炭素原料は、グルコース、レボグルコサン、蔗糖、乳糖、果糖、キシロース、マルトース、アラビノース、及びこれらの混合物からなるグループから選択された炭素源で本質的になされ得る。一実施形態において、１つ以上の炭素原料は、グルコース、レボグルコサン、蔗糖、乳糖、果糖、キシロース、マルトース、アラビノース、及びこれらの混合物からなる群から選択された炭素源からなり得る。したがって、一実施形態において、１つ以上の炭素源は、本質的に単一炭素源、例えば、グルコースで構成することができる。また、一実施形態において、１つ以上の炭素原料物質は、単一炭素源、再び例を挙げれば、グルコースで構成することができる。
【0047】
１つ以上の炭素原料物質は、また４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡの直接的な前駆体化合物及び／または一般的に再生不可能な資源、例えば、再生可能な資源、例えば、農作物から製造するものと比較して非常に低いコストに基づいて石油から製造される特定の化合物を排除することができる。ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子の生産のためのこのような化合物の混入は、特に、例えば、２０，０００～１００，０００Ｌ使用する発酵による産業的製造規模において、コストが多く必要し、追加供給及びこれによるインフラ構造及び品質管理が必要であり、構造的一貫性を有するポリヒドロキシアルカン酸共重合体組成物を果たすために、より厳格な制御が必要である。１つ以上の炭素原料は、例えば、γ－ブチロラクトン、１，４－ブタンジオール、４－ヒドロキシ酪酸、３－ヒドロキシ酪酸、α－ケトグルタル酸、オキサロ酢酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、コハク酸、または３－ヒドロキシ酪酸を含まないので、これらの化合物のそれぞれを除くものである。したがって、例えば、生物体の培養は、γ－ブチロラクトン、１，４－ブタンジオール、４－ヒドロキシ酪酸、３－ヒドロキシ酪酸、α－ケトグルタル酸、オキサロ酢酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、コハク酸、及び３－ヒドロキシ酪酸の不在下に、すなわち、培養前、培養間、または培養後に外因性でこれらの化合物を添加せずに行われる。
【0048】
前記の条件は、例えば、生物体の培養のための典型的な、及び／または最適の、例えば、温度、酸素供給、生物体の初期力価、培養時間などと関連して生物体培養に適した条件である。適切な条件の例示は、下記の実施例に提供される。
【0049】
１つ以上の炭素原料は、生物体によって発現される酵素によって３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡに変換される。３－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡ及び４－ヒドロキシブチリル－ＣｏＡは、また重合されてポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を形成することができ、したがって、生物体によって発現される酵素によって組成物を形成し得る。
【0050】
このような方法によれば、生物体は、ポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、アセチル－ＣｏＡアセチル転移酵素、アセトアセチル－ＣｏＡ還元酵素、コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、コハク酸セミアルデヒド還元酵素、及びＣｏＡ転移酵素の酵素活性を含むように遺伝的に操作され、ＮＡＤ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素またはＮＡＤＰ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、若しくは、両方の酵素活性を含まない。
【0051】
生物体は、例えば、それぞれの酵素活性をコードする１つ以上の遺伝子で生物体を形質転換することにより、ポリヒドロキシアルカン酸合成酵素、アセチル－ＣｏＡアセチル転移酵素、アセトアセチル－ＣｏＡ還元酵素、コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、コハク酸セミアルデヒド還元酵素、及びＣｏＡ転移酵素の酵素活性を含むように遺伝的に操作される。例えば、遺伝子は、１つ以上の安定したプラスミドへの導入及び／または生物体のゲノムへの統合によって生物体に安定して含まれ得る。生物体は、また、例えば、天然発生プロモーターをさらに強いプロモーターに置き換え、及び／または、抑制因子配列を除去することにより、例えば、それぞれの酵素活性をコードする１つ以上の遺伝子のプロモーター領域を変更することにより、酵素活性を含むように遺伝的に操作される。また、このようなアプローチなどを組み合わせて使用することができる。このようなアプローチを使用すれば、生物体に遺伝子を高い安定性でもって統合することができ、例えば、５０世代以上の生物体及び高い発現、例えば、２０，０００～１００，０００Ｌの容器を使用した発酵による産業的生産に十分である。適した例示的なアプローチは、下記でさらに詳細に論議される。
【0052】
生物体は、またＮＡＤ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素またはＮＡＤＰ＋依存性コハク酸セミアルデヒド脱水素酵素、若しくは、両方の酵素活性を含まないように、例えば、生物体に１つ以上の抑制突然変異または配列を導入して何れかまたは両方の活性の発現を抑制することによって、生物体のゲノムから活性のうちの何れかまたは両方をコードする相応遺伝子を欠失させることによって、相同組み換えによって相応する遺伝子のうちの何れかまたは両方を部分的または完全に破壊することによって、及び／または相応する遺伝子の発現を干渉するｓｉＲＮＡを発現させる等により相応する遺伝子のうちの何れかまたは両方の発現を干渉することによって、遺伝的に操作される。適した例示的なアプローチは、下記でさらに詳細に論議される。
【0053】
前記方法によれば、生物体は、α－ケトグルタル酸デカルボキシラーゼまたは２－オキソグルタル酸デカルボキシラーゼ、及びＬ－１，２－プロパンジオール酸化還元酵素の酵素活性を含むように遺伝的に追加操作される。生物体は、またチオエステラーゼＩＩ、多機能性アシル－ＣｏＡチオエステラーゼＩ及びプロテアーゼＩ及びリゾホスホリパーゼＬ、アシル－ＣｏＡチオエステラーゼ、及びアルデヒド脱水素酵素のうち、１つ以上の酵素活性を含まないように遺伝的に操作される。
【0054】
前記方法は、また生物体からポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子を分離してポリヒドロキシアルカン酸共重合体組成物に生物体が実質的に含まないようにすることを含み得る。このような分離のための適切な例示的なアプローチは、当業者に公知されている。
【0055】
一具現例によれば、本発明は、前記のような方法によって製造された低温加工性脂肪族ポリエステルを提供する。本発明の低温加工性脂肪族ポリエステルは、菌株の発酵を利用した４－ヒドロキシ酪酸モノマーの含量を７６～９８ｍｏｌ％含み得る。
【0056】
本発明による高分子素材は、従来の素材に比べて融点（Ｔｍ）の温度を有効に低下させることができるので、それを活用して短期間の生体支持体としてバインダー（ｂｉｎｄｅｒ）の役割を行うことができ、熱に非常に敏感な素材に対する点接着機能性を付与するためのホットメルト素材及び不織布材料として適用が可能であり、熱に敏感な分野と低温加工性が必要な分野とに容易に応用することができる。
【0057】
具体的に、本発明は、ホットメルト接着剤、反応性ホットメルト接着剤、生分解性ワックス、医療機器、低温ホットメルト、不織布、バイオプラスチック、薬物担体、医療用ラップ、医療用繊維、医療用フィラメント、医療用ステント、整形外科用補綴の用途として使われる。
【0058】
一具現例によれば、本発明のホットメルト接着剤または反応性ホットメルト接着剤は、ホットメルト接着剤組成物の総重量について、本発明によるポリヒドロキシアルカン酸を０．１～９０重量％、例えば、１重量％以上、また５重量％以上、また１０重量％以上、また２０重量％以上、また３０重量％以上、また４０重量％以上、例えば、８０重量％以下、また７０重量％以下、また５０重量％以下に含み得る。
【0059】
一具現例によれば、本発明の生分解性ワックス組成物は、ポリヒドロキシアルカン酸オリゴマーと共に少なくとも１つのワックス成分などの他の成分を含有することができる。
一具現例によれば、本発明のホットメルト接着剤組成物は、反応性モノマーまたはオリゴマー成分、ワックス成分、粘着化樹脂及び他の添加剤のうち、選択的に少なくとも１つ以上を含み得る。一具現例によれば、反応性モノマーまたはオリゴマーは、本発明のホットメルト接着剤組成物の全体重量に対して約５～９５重量％、例えば、約３５～５５重量％の量で含まれ得る。
一具現例によれば、本発明のホットメルト接着剤組成物は、反応性モノマーまたはオリゴマー成分、ワックス成分、粘着化樹脂及び他の添加剤のうち、選択的に少なくとも１つ以上を含み得る。一具現例によれば、反応性モノマーまたはオリゴマーは、本発明のホットメルト接着剤組成物の全体重量に対して約５～９５重量％、例えば、約３５～５５重量％の量で含まれ得る。
【0060】
また、例えば、ホットメルト接着剤組成物の６０重量％以下に粘着化樹脂を含み、４０重量％以下にワックス成分を含み得る。具体的に、ワックス成分は、例えば、パラフィンワックス、微結晶性ワックス、高密度低分子量ポリエチレンワックス、副生成物ポリエチレンワックス、フィッシャー・トロプシュ（Ｆｉｓｃｈｅｒ－Ｔｒｏｐｓｃｈ）ワックス、酸化フィッシャー・トロプシュワックス、ハイドロキネシスステアラミドワックス（ｈｙｄｒｏｋｉｎｅｓｉｓ ｓｔｅａｒａｍｉｄｅ ｗａｘ）、脂肪酸アミドワックス、合成高融点ワックスなどの機能化ワックスを含み得る。高密度低分子量ポリエチレンワックスの例としては、Ｐｅｔｒｏｌｉｔｅ，Ｉｎｃ．（Ｔｕｌｓａ，Ｏｋｌａ．）から入手可能なエチレンホモポリマー、ＰｏｌｙｗａｘＴＭ５００、ＰｏｌｙｗａｘＴＭ１５００及びＰｏｌｙｗａｘＴＭ２０００が挙げられる。ＰｏｌｙｗａｘＴＭ２０００は、分子量約２０００，Ｍｗ／Ｍｎ約１．０、１６℃での密度約０．９７ｇ／ｃｍ３及び融点約１２６℃を有する。パラフィンワックスは、約５５～８５℃の環球法による軟化点を有するものであって、例えば、Ｄｏｒａｖｉｌｌｅ，Ｇａ．にあるＡｓｔｏｒ Ｗａｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能なＯｋｅｒｉｎＲ２３６ＴＰ；Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．のＰｅｎｎｚｏｉｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏ．から入手可能なＰｅｎｒｅｃｏＲ４９１３；Ｓｈｅｌｔｏｎ，Ｃｏｎｎ．のＭｏｏｒｅ ＆ Ｍｕｎｇｅｒから入手可能なＲ－７１５２ Ｐａｒａｆｆｉｎ Ｗａｘ；及びＯｎｔａｒｉｏ，ＣａｎａｄａのＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗａｘｅｓ，Ｌｔｄ．から入手可能なＰａｒａｆｆｉｎ Ｗａｘ１２９７を含み得る。さらに他のパラフィンワックスとしては、例えば、製品番号１２３０、１２３６、１２４０、１２４５、１２４６、１２５５、１２６０及び１２６２の下に、ＣＰ Ｈａｌｌから入手可能なワックスを含み得る。また、微結晶性ワックスは、炭素長さ３０～１００を有する環状または分枝型アルカンを５０重量％以上有するものを含み得る。
【0061】
これらは、一般的にパラフィン及びポリエチレンワックスよりも結晶性が低く、約７０℃よりも大きな融点を有する。その例としては、Ｔｕｌｓａ，Ｏｋｌａ．にあるＰｅｔｒｏｌｉｔｅ Ｃｏｒｐ．から入手可能な融点７０℃のワックス、ＶｉｃｔｏｒｙＲ，ＡｍｂｅｒＷａｘ；Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ．のＢａｒｅｃｏから入手可能な融点７０℃のワックス、ＢａｒｅｃｏＲＢＳ－７９６Ａｍｂｅｒ Ｗａｘ；Ａｓｔｏｒ Ｗａｘ Ｃｏｒｐ．から入手可能な融点８０℃のワックス、ＯｋｅｒｉｎＲ１７７；Ｔｕｌｓａ，Ｏｋｌａ．のＰｅｔｒｏｌｉｔｅ Ｃｏｒｐ．から入手可能な融点８０℃及び９０℃の微結晶性ワックス、ＢｅｓｑｕａｒｅＲ１７５及び１９５ Ａｍｂｅｒ Ｗａｘ；Ｓｍｅｔｈｐｏｒｔ，Ｐａ．にあるＩｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｒａｗ Ｍａｔｅｒｉａｌｓから入手可能な融点９０℃のワックス、ＩｎｄｒａｍｉｃＲ９１；及びＮｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．にあるＰｅｔｒｏｗａｘ ＰＡ．Ｉｎｃ．から入手可能な融点９０℃のワックス、ＰｅｔｒｏｗａｘＲ ９５０８Ｌｉｇｈｔが挙げられる。また、合成高融点（ＨＭＰ）ワックスは、高密度低分子量ポリエチレンワックス、副生成物ポリエチレンワックス及びフィッシャー・トロプシュワックスを含み得る。例えば、Ｐｅｔｒｏｌｉｔｅ Ｃｏｒｐ．から入手可能な低分子量ポリエチレンワックス、ＰｅｔｒｏｌｉｔｅＲＣ－４０４０、ＰｏｌｙｗａｘＲ１０００、２０００及び３０００；Ｅｘｘｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能な変性ポリエチレンワックス、ＥｓｃｏｍｅｒＲＨ－１０１；Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．にあるＨ．Ｒ．Ｄ．Ｃｏｒｐ．の子会社、Ｍａｒｃｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能な低分子量副生成物ポリエチレンワックス、ＭａｒｃｕｓＲ１００、２００及び３００；Ｓｈｅｌｔｏｎ，Ｃｏｎｎ．のＳａｓｏｌ－ＳＡ／Ｍｏｏｒｅ ＆ Ｍｕｎｇｅｒから入手可能なフィッシャー・トロプシュワックス、ＰａｒａｆｌｉｎｔＲＨ－１、Ｈ－４及びＨ－８；及びＢａｒｅｃｏから入手可能なフィッシャー・トロプシュワックス、ＰｅｔｒｏｌｉｔｅＲＰＸ－１００を含み得る。それ以外にも、Ｈｏｅｃｈｓｔ Ｃｅｌａｎｅｓｅ及びＥａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手可能なポリプロピレンワックス、エチレン酢酸ビニルワックス、酸化ポリエチレンワックス、エチレンアクリレートワックス及び他のワックスを含み得るが、特に制限されるものではない。含まれるワックスの含量は、例えば、ホットメルト接着剤組成物のうち、０～４０重量％、例えば、１５～３５重量％、例えば、２０～３０重量％含み得るが、当業者によって適切に調節される。
【0062】
一具現例によれば、ホットメルト接着剤組成物に粘着性を付与するために、粘着化樹脂を含み得る。粘着化樹脂は、有用な多種の炭化水素系組成物を含み、例えば、脂肪族Ｃ５樹脂、ポリテルペン樹脂、水素化樹脂、混合脂肪族－芳香族樹脂、ロジンエステル及び水素化ロジンエステルを含み得る。具体例を挙げれば、脂肪族、環状脂肪族及び芳香族炭化水素及び変性炭化水素及び水素化物；テルペン及び変性テルペン及び水素化物；ロジン及びロジン誘導体及び水素化物；これらの混合物を含み得る。これらの粘着化樹脂は、７０～１５０℃の環球法による軟化点を有し、一般的にＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度計で測定して、３５０゜Ｆ（１７７℃で粘度２０００センチポアズ（ｃｅｎｔｉｐｏｉｓｅ）（２０ｇ／（ｃｍ秒）））以下を有する。これらは、また水素化または飽和程度が異なるものであって、入手可能である。例えば、Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ，Ｔｅｎｎ．のＥａｓｔｍａｎ ＣｈｅｍｉｃａｌのＥａｓｔｏｔａｃＲＨ－１００、Ｈ－１１５及びＨ－１３０を含み得る。これらの粘着化樹脂は、それぞれ軟化点１００℃、１１５℃及び１３０℃を有する部分的水素化環状脂肪族石油系炭化水素樹脂である。これらの粘着化樹脂は、水素化程度が異なるＥグレード、Ｒグレード、Ｌグレード及びＷグレードとして入手可能であり、Ｅは、水素化が最も小さく、Ｗは、水素化が最も大きい。Ｅグレードは、臭素値１５を有し、Ｒグレードは、臭素値５、Ｌグレードは、臭素値３、及びＷグレードは、臭素値１を有する。Ｅａｓｔｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．のＥａｓｔｏｔａｃＲＨ－１４２ Ｒは、約１４０℃の軟化点を有する。さらに他の粘着化樹脂の種類を例とすれば、Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．のＥｘｘｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から何れも入手可能なＥｓｃｏｒｅｚＲ５３００及び５４００、部分水素化環状脂肪族石油系炭化水素樹脂及びＥｓｃｏｒｅｚＲ５６００、部分水素化芳香族変性石油系炭化水素樹脂；Ａｋｒｏｎ，ＯｈｉｏのＧｏｏｄｙｅａｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能な脂肪族、芳香族石油系炭化水素樹脂であるＷｉｎｇｔａｃｋＲＥｘｔｒａ；Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．のＨｅｒｃｕｌｅｓ．Ｉｎｃ．から入手可能な部分水素化環状脂肪族石油系炭化水素樹脂、ＨｅｒｃｏｌｉｔｅＲ２１００；及びｄ－リモネンで製造され、Ｐａｎａｍａ Ｃｉｔｙ，Ｆｌａ．のＡｒｉｚｏｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能なスチレン化テルペン樹脂であるＺｏｎａｔａｃＲ １０５及び５０１ Ｌｉｔｅを含み得る。他種の水素化グレードを有する市販の入手可能な製品としては、Ａｒｉｚｏｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能なペンタエリスリトールロジンエステル、ＳｙｌｖａｔａｃＲ１１０３；Ｗａｙｎｅ，ＮＪのＵｎｉｏｎ Ｃａｍｐからペンタエリスリトールロジンエステル、ＵｎｉｔａｃＲＲ－１００ Ｌｉｔｅ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓから入手可能なエリスリトール変性ウッドロジン、ＰｅｒｍａｌｙｎＲ３０５及びＨｅｒｃｕｌｅｓから入手可能な高度水素化ペンタエリスリトールロジンエステル、Ｆｏｒａｌ１０５；Ａｒｉｚｏｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能な融点８５℃及び９５℃のロジン酸であるＳｙｌｖａｔａｃＲＲ－８５及び２９５；及びＨｅｒｃｕｌｅｓ Ｉｎｃ．から入手可能な融点７０℃の水素化ロジン酸であるＦｏｒａｌＡＸを含み得る。Ｎｉｒｅｚ Ｖ－２０４０は、Ａｒｉｚｏｎａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から入手可能なフェノール系変性テルペン樹脂である。また、他の粘着化樹脂としては、α－メチルスチレン樹脂及び脂肪族または芳香族炭化水素を含有することができる水素化炭化水素樹脂、例えば、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，Ｉｎｃ．から入手可能なこれらの樹脂種類が挙げられる。
【0063】
脂肪族樹脂の例としては、ＥｓｃｏｒｅｚＴＭ、ＰｉｃｃｏｔａｃＴＭ、ＭｅｒｃｕｒｅｓＴＭ、ＷｉｎｇｔａｃｋＴＭ、Ｈｉ－ＲｅｚＴＭ、ＱｕｉｎｔｏｎｅＴＭ、ＴａｃｋｉｒｏｌＴＭなどの商標名で入手可能なものを含み得る。ポリテルペン樹脂の例としては、ＮｉｒｅｚＴＭ、ＰｉｃｃｏｌｙｔｅＴＭ、ＷｉｎｇｔａｃｋＴＭ、ＺｏｎａｒｅｚＴＭなどの商標名下に入手可能なものを含み得る。水素化樹脂の例としては、ＥｓｃｏｒｅｚＴＭ、ＡｒｋｏｎＴＭ、ＣｌｅａｒｏｎＴＭなどの商標名下に入手可能なものを含み得る。混合脂肪族－芳香族樹脂の例としては、ＥｓｃｏｒｅｚＴＭ、ＲｅｇａｌｉｔｅＴＭ、ＨｅｒｃｕｒｅｓＴＭ、ＡＲＴＭ、ＩｍｐｒｅｚＴＭ、ＮｏｒｓｏｌｅｎｅＴＭ、Ｍ．ＭａｒｕｋａｒｅｚＴＭ、ＡｒｋｏｎＴＭ、Ｍ．ＱｕｉｎｔｏｎｅＴＭなどの商標名下に入手可能なものを含み得る。他の粘着化剤は、これらが均質線形または実質的に線形であるエチレン／α－オレフィンインターポリマー及びワックスと適合性を有するならば、使用しても良い。
【0064】
一実施形態において、ホットメルト接着剤組成物は、粘着化樹脂を使用せず、あるいは少量の粘着化剤を使用して調剤することができる。粘着化剤は、一般的に高温で分解されるために、粘着化剤の使用を最小限にするホットメルト接着剤は、改善された熱安定性を示すことができる。粘着化樹脂の含量は、例えば、２０重量％以下、例えば、１５重量％以下、例えば、１０重量％以下に含み得る。さらに他の例として、低い塗布温度で使用するのに適した本発明のホットメルト接着剤において、本発明の粘着化樹脂は、ホットメルト接着剤組成物のうち、例えば、１０～６０重量％、例えば、２０～５５重量％、例えば、２５～５０重量％、例えば、３０～４５重量％の量で含み得る。
【0065】
本発明は、多様な変換を加え、さまざまな実施例を有することができるので、特定実施例を図面に例示し、詳細な説明で詳細に説明する。しかし、これは、本発明を特定の実施形態に対して限定しようとするものではなく、本発明の思想及び技術範囲に含まれる、あらゆる変換、均等物または代替物を含むものと理解しなければならない。
【0066】
適した宿主菌株
一実施形態において、宿主菌株は、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ－１２菌株ＬＳ５２１８（Ｓｐｒａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１４６（３）：１１６６－１１６９（１９８１）；Ｊｅｎｋｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｎｎ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１）：４２－５２（１９８７））または菌株ＭＧ１６５５（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ．Ｈａｒｂ．Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．４５：１３５－１４０（１９８１））である。他の適したＥ．ｃｏｌｉ Ｋ－１２宿主菌株は、ＷＧ１及びＷ３１１０（Ｂａｃｈｍａｎｎ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．３６（４）：５２５－５７（１９７２））を含むが、これらに制限されるものではない。代案として、Ｅ．ｃｏｌｉ菌株Ｗ（Ａｒｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣｇｅｎｏｍｉｃｓ ２０１１，１２：９ ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７１－２１６４－１２－９）またはＥ．ｃｏｌｉ菌株Ｂ（Ｄｅｌｂｒｕｃｋ ａｎｄ Ｌｕｒｉａ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１：１１１－１４１（１９４６））及びＲＥＬ６０６（Ｌｅｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｎａｔ．１３８：１３１５－１３４１（１９９１））のようなこれらの誘導体は、他の適したＥ．ｃｏｌｉ宿主菌株である。
一実施形態において、宿主菌株は、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｋ－１２菌株ＬＳ５２１８（Ｓｐｒａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１４６（３）：１１６６－１１６９（１９８１）；Ｊｅｎｋｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｎｎ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１）：４２－５２（１９８７））または菌株ＭＧ１６５５（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ．Ｈａｒｂ．Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．４５：１３５－１４０（１９８１））である。他の適したＥ．ｃｏｌｉ Ｋ－１２宿主菌株は、ＷＧ１及びＷ３１１０（Ｂａｃｈｍａｎｎ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．３６（４）：５２５－５７（１９７２））を含むが、これらに制限されるものではない。代案として、Ｅ．ｃｏｌｉ菌株Ｗ（Ａｒｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣｇｅｎｏｍｉｃｓ ２０１１，１２：９ ｄｏｉ：１０．１１８６／１４７１－２１６４－１２－９）またはＥ．ｃｏｌｉ菌株Ｂ（Ｄｅｌｂｒｕｃｋ ａｎｄ Ｌｕｒｉａ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１：１１１－１４１（１９４６））及びＲＥＬ６０６（Ｌｅｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｎａｔ．１３８：１３１５－１３４１（１９９１））のようなこれらの誘導体は、他の適したＥ．ｃｏｌｉ宿主菌株である。
【0067】
他の例示的な微生物宿主菌株は、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｅｕｔｒｏｐｈａ、Ｚｏｏｇｌｏｅａ ｒａｍｉｇｅｒａ、Ａｌｌｏｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ ｖｉｎｏｓｕｍ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｕｂｅｒ、Ｄｅｌｆｔｉａ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ ６８０３、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｅｌｏｎｇａｔｕｓ ＰＣＣ ７９４２、Ｔｈｉｏｃａｐｓａ ｐｆｅｎｉｇｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｙｌｙｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｅｘｔｏｒｑｕｅｎｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｃｏｒｒａｌｉｎａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓａｌｍｏｎｉｃｏｌｏｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．６－１９、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．６１－３ ａｎｄ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｌａｔｕｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ、Ａｎａｅｒｏｂｉｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｓｕｃｃｉｎｉｃｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｓｕｃｃｉｎｉｃｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｅｔｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ ｍｏｂｉｌｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ、及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍを含むが、これらに制限されるものではない。例示的な酵母または真菌は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ及びＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｅｒｉｓから選択された種を含む。
【0068】
例示的な藻類菌株は、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅｍｅｒｓｏｎｉｉ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅｌｈｐｓｏｉｄｅａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ．、またはＣｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｒｏｔｏｔｈｅｃｏｉｄｅｓから選択される種であるクロレラ菌株を含むが、これらに制限されるものではない。
【0069】
４ＨＢ生産のための形質転換宿主の生産
ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢを生産するための形質転換宿主は、当業者に公知の通常の技術を使用して遺伝的に操作される。ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢを生産する宿主菌株に対してクローニング及び／または評価された遺伝子は、適切なＥＣ番号（Ｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ）及び参照と共に下記の表１に記載されている。一部遺伝子は、コドン最適化のために合成された一方、他の遺伝子は、天然または野生型宿主のゲノムＤＮＡからＰＣＲを通じて複製される。本明細書に使われた用語「異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）」は、他の宿主からのものを意味する。宿主は、同種であるか、異種でもある。
ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢを生産するための形質転換宿主は、当業者に公知の通常の技術を使用して遺伝的に操作される。ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢを生産する宿主菌株に対してクローニング及び／または評価された遺伝子は、適切なＥＣ番号（Ｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ）及び参照と共に下記の表１に記載されている。一部遺伝子は、コドン最適化のために合成された一方、他の遺伝子は、天然または野生型宿主のゲノムＤＮＡからＰＣＲを通じて複製される。本明細書に使われた用語「異種（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）」は、他の宿主からのものを意味する。宿主は、同種であるか、異種でもある。
【0070】
【表1】
【0071】
適した染色体外ベクター及びプラスミド
本願に使われた「ベクター」は、プラスミド、ファージまたはコスミドのような染色体外レプリコン（ｒｅｐｌｉｃｏｎ）であり、挿入されたセグメントの複製のために、他のＤＮＡセグメントが挿入される。ベクターは、複製起点とサイズとによって複製数が異なる。複製起点が異なるベクターは、ｐＭＢ１及びＣｏｌＥ１のように密接に関連しない限り、同じ微生物細胞から伝播される。組換えタンパク質を発現するのに適したベクターは、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）プラスミド精製ハンドブックに記載されたように、細胞当たり５００～７００個コピーを有するｐＭＢ１複製起点があるｐＵＣベクター、細胞当たり３００～５００個コピーを有するＣｏｌＥ１複製起点があるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、細胞当たり１５～２０個コピーを有するｐＭＢ１複製起点を有するｐＢＲ３２２及び誘導体、細胞当たり１０～１２個コピーを有するｐ１５Ａ複製起点を有するｐＡＣＹＣ及び誘導体、及び細胞当たり約５個コピーを有するｐＳＣ１０１複製起点があるｐＳＣ１０１及び誘導体で構成することができる（／／ｋｉｒｓｈｎｅｒ．ｍｅｄ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｆｉｌｅｓ／ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ／ＱＩＡＧＥＮ＿ＱＩＡＧＥＮＰｌａｓｍｉｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ＿ＥＮ．ｐｄｆ参照）。広く使われるベクターは、ＩＰＴＧ－誘導性ｔｒｃプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から組換え遺伝子発現を許容するｐＳＥ３８０である。
本願に使われた「ベクター」は、プラスミド、ファージまたはコスミドのような染色体外レプリコン（ｒｅｐｌｉｃｏｎ）であり、挿入されたセグメントの複製のために、他のＤＮＡセグメントが挿入される。ベクターは、複製起点とサイズとによって複製数が異なる。複製起点が異なるベクターは、ｐＭＢ１及びＣｏｌＥ１のように密接に関連しない限り、同じ微生物細胞から伝播される。組換えタンパク質を発現するのに適したベクターは、ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）プラスミド精製ハンドブックに記載されたように、細胞当たり５００～７００個コピーを有するｐＭＢ１複製起点があるｐＵＣベクター、細胞当たり３００～５００個コピーを有するＣｏｌＥ１複製起点があるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、細胞当たり１５～２０個コピーを有するｐＭＢ１複製起点を有するｐＢＲ３２２及び誘導体、細胞当たり１０～１２個コピーを有するｐ１５Ａ複製起点を有するｐＡＣＹＣ及び誘導体、及び細胞当たり約５個コピーを有するｐＳＣ１０１複製起点があるｐＳＣ１０１及び誘導体で構成することができる（／／ｋｉｒｓｈｎｅｒ．ｍｅｄ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｆｉｌｅｓ／ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ／ＱＩＡＧＥＮ＿ＱＩＡＧＥＮＰｌａｓｍｉｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ＿ＥＮ．ｐｄｆ参照）。広く使われるベクターは、ＩＰＴＧ－誘導性ｔｒｃプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から組換え遺伝子発現を許容するｐＳＥ３８０である。
【実施例】
【0072】
実施例１
４ＨＢ含量が９０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
４ＨＢ含量が９０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
【0073】
唯一の炭素供給源としてグルコースから９０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの生産
本実施例は、操作された大腸菌宿主菌株で唯一の炭素源としてグルコースから９０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造を示す。菌株は、前記に記載されたよく知られた生命工学ツール及び方法を使用して構成された。前記菌株は、ｙｎｅＩ、ｇａｂＤ、ｔｅｓＢ、ｔｅｓＡ、ｙｃｉＡ及びａｓｔＤの染色体欠失を含む（ＵＳ １０，３２３，２６１Ｂ２参照）。
本実施例は、操作された大腸菌宿主菌株で唯一の炭素源としてグルコースから９０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造を示す。菌株は、前記に記載されたよく知られた生命工学ツール及び方法を使用して構成された。前記菌株は、ｙｎｅＩ、ｇａｂＤ、ｔｅｓＢ、ｔｅｓＡ、ｙｃｉＡ及びａｓｔＤの染色体欠失を含む（ＵＳ １０，３２３，２６１Ｂ２参照）。
【0074】
実施例１に使われた菌株１．
【0075】
菌株オペロン構成
Ｐｘ－ｐｈａＣ３／Ｃ５－ＴｔｒｐＬ－ＰｕｓｐＡ－ｓｕｃＤ＊－ｓｓａＲＡｔ＊、ＰｕｓｐＡ－ｐｈａＡ５－ｐｈａＢ５、ＰｒｐｓＵ－ｏｒｆＺ
Ｐｘ－ｐｈａＣ３／Ｃ５－ＴｔｒｐＬ－ＰｕｓｐＡ－ｓｕｃＤ＊－ｓｓａＲＡｔ＊、ＰｕｓｐＡ－ｐｈａＡ５－ｐｈａＢ５、ＰｒｐｓＵ－ｏｒｆＺ
【0076】
生産培地は、１×Ｅ２最小塩、５ｍＭ ＭｇＳＯ４及び１×Ｔｒａｃｅ Ｓａｌｔｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎで構成された。２０～３０ｇ／Ｌグルコースで構成された初期炭素源５０×Ｅ２ストック溶液は、１．２８Ｍ ＮａＮＨ４ＨＰＯ４・４Ｈ２Ｏ、１．６４Ｍ Ｋ２ＨＰＯ４及び１．３６Ｍ ＫＨ２ＰＯ４で構成された。１０００×Ｔｒａｃｅ Ｓａｌｔｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎは、１．５Ｎ ＨＣｌ １Ｌ当たりＦｅＳＯ４・７Ｈ２０ ５０ｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １１ｇ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ２．５ｇ、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ ５ｇ、（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ ０．５ｇ、Ｎａ２Ｂ４Ｏ７ ０．１ｇ、及び１０ｇ ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏを添加して製造する。
【0077】
９０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢを生産するために、菌株を５０ｍＬのＬＢ及び適切な抗生剤を含有する２５０ｍＬバッフルフラスコ（ｂａｆｆｌｅｄ ｆｌａｓｋ）で３７℃に２５０ｒｐｍで振盪しながら培養した。培養液が６００ｎｍからＯＤが１に到達すれば、培養液６～１２ｍｌを生産培地５４００ｍｌが入っている２０Ｌ発酵器に移す。発酵器内の細胞は、６００ｎｍからＯＤが１０～１２に到達するまで２５０～８００ｒｐｍで撹拌し、通気１ｖｖｍで３７℃で培養した。次いで、温度は、３７℃から２７～３０℃に１～３時間にわたって降下した。水酸化ナトリウムまたはその他の非アンモニア塩基を使用してｐＨを６．０と７．０との間に保持した。バイオマス生産を制限し、ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢ生産を促進するために、パルス供給アンモニアによってアンモニア制限条件を保持した。エアフロー及び背圧は、それぞれ１．０～２．０ｖｖｍ及び４～１０ｐｓｉｇで一定に保持された。溶存酸素を空気飽和度の１０％以上に保持するために、撹拌を２５０～８００ｒｐｍの間で調整した。グルコースを５～１０ｇ／Ｌ超過に保持するために、グルコースを培養液に持続的に供給した。温度降下後、３５時間後に培養物を収穫した。
【0078】
次いで、重合体含量に対して培養液を分析した。実験が終われば、培養液を４１５０ｒｐｍで回転させ、蒸留水で１回洗浄し、－８０℃で３０分以上凍結した後、一晩中凍結乾燥した。翌日、測定された量の凍結乾燥された細胞ペレットをガラス管に添加した後、２ｍｇ／ｍＬジフェニルメタンを内部標準としてジオキサンのうち、９９．９％ ｎ－ブタノール及び４．０Ｎ ＨＣｌの同一体積混合物で構成されたブタノール分解試薬３ｍＬを添加した。チューブにキャップを被せた後、しばらくボルテックシング（ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ）し、周期的にボルテックシングしながら９３℃に設定されたヒーティングブロック（ｈｅａｔ ｂｌｏｃｋ）上に置いた。次いで、チューブを室温に冷却させた後、３ｍＬの蒸留水を添加した。チューブを約１０秒間ボルテックシングした後、２分間６２０ｒｐｍ（Ｓｏｒｖａｌｌ Ｌｅｇｅｎｄ ＲＴベンチトップ遠心分離機）で回転を減らした。１ｍＬの有機相をＧＣバイアルにピペッティングした後、それをガスクロマトグラフィー－水素炎イオン化検出（ＧＣ－ＦＩＤ）（Ｈｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ ５８９０ Ｓｅｒｉｅｓ ＩＩ）で分析した。細胞ペレット内のＰＨＡの量は、３ＨＢ及び４ＨＢ（ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢ分析の場合）何れもに対する標準曲線と比較して決定される。４ＨＢ標準曲線は、ブタノール分解反応を区分するために、ブタノールのうち、γ－ブチロラクトン（ＧＢＬ）の１０％溶液の他の量を追加して作成した。３ＨＢ標準曲線は、９９％エチル３－ヒドロキシ酪酸の他の量を追加してブタノール分解反応を区分することで作成した。
【0079】
比較例１
４ＨＢ含量が１０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
１０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ ４ＨＢは、菌株１２を使用し、温度降下後、空気飽和度の０～１０％の間で溶存酸素を保持するために、背圧を適用していないことを除き、実施例１に記載されたように製造した。
４ＨＢ含量が１０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
１０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ ４ＨＢは、菌株１２を使用し、温度降下後、空気飽和度の０～１０％の間で溶存酸素を保持するために、背圧を適用していないことを除き、実施例１に記載されたように製造した。
【0080】
菌株１２
【0081】
菌株オペロン構成
Ｐｘ－ｐｈａＣ３／Ｃ５－ＴｔｒｐＬ－ＰｕｓｐＡ－ｐｈａＡ５－ｐｈａＢ５－Ｔ１００６－ｓｕｃＤ＊－ｓｓａＲＡｔ＊、ＰｒｐｓＵ－ｏｒｆＺ
Ｐｘ－ｐｈａＣ３／Ｃ５－ＴｔｒｐＬ－ＰｕｓｐＡ－ｐｈａＡ５－ｐｈａＢ５－Ｔ１００６－ｓｕｃＤ＊－ｓｓａＲＡｔ＊、ＰｒｐｓＵ－ｏｒｆＺ
【0082】
比較例２
４ＨＢ含量が５０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
５０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ ４ＨＢは、温度降下後、空気飽和度の０～１０％の間で溶存酸素を保持するために、背圧を適用していないことを除き、実施例１に記載されたように製造した。
４ＨＢ含量が５０％であるＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢの製造
５０％ ４ＨＢ共単量体含量を有するＰＨＢ－ｃｏ ４ＨＢは、温度降下後、空気飽和度の０～１０％の間で溶存酸素を保持するために、背圧を適用していないことを除き、実施例１に記載されたように製造した。
【0083】
精製工程：
水中発酵培地を遠心分離機で処理して水を除去した後、脱イオン水を３回（２００ｍＬ×３）添加して凍結乾燥された細胞及び基質を除去した後、あらゆる固体物質が完全に溶解されるまで粗湿潤重合体溶液（ｃｒｕｄｅ ｗｅｔ ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）にクロロホルムを添加した。生成された溶液を多量のエタノールに注いで、白色粉末で沈殿させた。機械的物性評価実験と熱的物性とを何れも測定するために、残っている湿潤ポリマーを乾燥するまで放置した（水の量は、約２５００ｐｐｍであった）。
水中発酵培地を遠心分離機で処理して水を除去した後、脱イオン水を３回（２００ｍＬ×３）添加して凍結乾燥された細胞及び基質を除去した後、あらゆる固体物質が完全に溶解されるまで粗湿潤重合体溶液（ｃｒｕｄｅ ｗｅｔ ｐｏｌｙｍｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）にクロロホルムを添加した。生成された溶液を多量のエタノールに注いで、白色粉末で沈殿させた。機械的物性評価実験と熱的物性とを何れも測定するために、残っている湿潤ポリマーを乾燥するまで放置した（水の量は、約２５００ｐｐｍであった）。
【0084】
【表2】
【0085】
実験例１：ガラス転移温度の測定
ＰＨＡ組成物を分析するために、共重合体を利用した。ガラス転移温度（Ｔｇ）は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）分析を用いて測定した。表１は、４ＨＢ含量と共重合体から測定されたＴｇとを記載する。ガラス転移温度は、共重合体内の４ＨＢ含量が高いほど減少した。
ＰＨＡ組成物を分析するために、共重合体を利用した。ガラス転移温度（Ｔｇ）は、示差走査熱量計（ＤＳＣ）分析を用いて測定した。表１は、４ＨＢ含量と共重合体から測定されたＴｇとを記載する。ガラス転移温度は、共重合体内の４ＨＢ含量が高いほど減少した。
【0086】
実験例２：ＰＨＢ－ｃｏ－４ＨＢ共重合体のバイオベース含量
前記のように菌株１から精製された共重合体を使用してＢｅｔａ Ａｎａｌｙｔｉｃ（米国フロリダ州マイアミ所在）のＡＳＴＭ Ｄ６８６６を基盤とした放射性炭素年代測定を通じてバイオベース含量を測定した。菌株１から精製された共重合体は、９７％のバイオベース含量を含有すると測定された。
前記のように菌株１から精製された共重合体を使用してＢｅｔａ Ａｎａｌｙｔｉｃ（米国フロリダ州マイアミ所在）のＡＳＴＭ Ｄ６８６６を基盤とした放射性炭素年代測定を通じてバイオベース含量を測定した。菌株１から精製された共重合体は、９７％のバイオベース含量を含有すると測定された。
【0087】
実験例３：酸価分析
総酸価（ＴＡＮ）は、ＭＥＴＲＯＨＭの８８８ Ｔｉｔｒａｎｄｏで測定した。実験手続きは、滴定剤として水酸化カリウム（ＫＯＨ）を使用する酸－塩基滴定によってサンプルに存在するあらゆる酸化合物の和を測定する。ＴＡＮは、サンプルｇ当たりＫＯＨ ｍｇで表示した。
総酸価（ＴＡＮ）は、ＭＥＴＲＯＨＭの８８８ Ｔｉｔｒａｎｄｏで測定した。実験手続きは、滴定剤として水酸化カリウム（ＫＯＨ）を使用する酸－塩基滴定によってサンプルに存在するあらゆる酸化合物の和を測定する。ＴＡＮは、サンプルｇ当たりＫＯＨ ｍｇで表示した。
【0088】
ポリヒドロキシアルカン酸共重合体分子は、非水性なので、クロロホルムに希釈される。試料を準備するために、試料をほぼ濃度（０．１ｇ／ｍｌ）程度のクロロホルムに溶解した。
【0089】
ＫＯＨの溶媒は、メタノール（メタノールのうち、０．１Ｎ水酸化カリウム）である。主に酸化及び加水分解程度を示すＴＡＮは、サンプル１ｇの酸の中和に必要なＫＯＨの質量（ミリグラム）で表示される。また、ＴＡＮは、電位差計を使用して酸性成分を測定して最終当量点（ＥＰ）を分析する。電位差計出力がモニタリングされる間にＫＯＨが溶液で滴定される。
【0090】
ＴＡＮ（ＫＯＨ／ｇのｍｇ）＝（ＥＰｎ－Ｃ３１）×Ｃ０１×Ｃ０３／Ｃ００
ここで、ＥＰｎは、最終当量点（ｍＬ）でＫＯＨの消費量、Ｃ００は、試料の重量（ｇ）、Ｃ０１は、０．１（滴定剤の濃度、ｍｏｌ／Ｌ）、Ｃ０３は、５６．１０６［ｇ／ｍｏｌ内のＭ（ＫＯＨ）］であり、Ｃ３１は、ゼロ滴定での消耗量（ｍＬ）である。
その結果、４ＨＢが、９０％である実施例１による組成物の酸価が１．１８ｍｇ／ｇであることを確認した。
ここで、ＥＰｎは、最終当量点（ｍＬ）でＫＯＨの消費量、Ｃ００は、試料の重量（ｇ）、Ｃ０１は、０．１（滴定剤の濃度、ｍｏｌ／Ｌ）、Ｃ０３は、５６．１０６［ｇ／ｍｏｌ内のＭ（ＫＯＨ）］であり、Ｃ３１は、ゼロ滴定での消耗量（ｍＬ）である。
その結果、４ＨＢが、９０％である実施例１による組成物の酸価が１．１８ｍｇ／ｇであることを確認した。
【0091】
実験例４：色差及び屈折率の分析
色差ｂ＊ ＡＰＨＡは、黄色度を示す測定指数であり、Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ製品ＣＭ－５分光光度計を使用して測定した。測定前、製造社から提供するｗｈｉｔｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓｈｅｅｔを使用してｚｅｒｏ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎを設定し、ＳＣＩ（Ｓｐｅｃｕｌａｒ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｉｎｃｌｕｄｅｄ）モードで設定して準備した。測定しようとするサンプルを３０ｍｍの直径を有するｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈに満たし、５回測定を進行して偏差が大きな値２個を捨て、残りの３個の平均値を取った。屈折率も、Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ社の製品を使用して前記方法で測定を進めた。その結果、実施例１による組成物の色差は、１１．０（ＡＰＨＡ）であり、屈折率（ＲＩ）は、１．４２であることを確認した。
色差ｂ＊ ＡＰＨＡは、黄色度を示す測定指数であり、Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ製品ＣＭ－５分光光度計を使用して測定した。測定前、製造社から提供するｗｈｉｔｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓｈｅｅｔを使用してｚｅｒｏ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎを設定し、ＳＣＩ（Ｓｐｅｃｕｌａｒ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｉｎｃｌｕｄｅｄ）モードで設定して準備した。測定しようとするサンプルを３０ｍｍの直径を有するｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈに満たし、５回測定を進行して偏差が大きな値２個を捨て、残りの３個の平均値を取った。屈折率も、Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ社の製品を使用して前記方法で測定を進めた。その結果、実施例１による組成物の色差は、１１．０（ＡＰＨＡ）であり、屈折率（ＲＩ）は、１．４２であることを確認した。
【0092】
実験例５：融点、分解温度、溶融流動指数の分析、分子量の測定
固体ポリマーサンプルの熱重量分析（ＴＧＡ）は、窒素雰囲気で１０℃ ｍｉｎ－１の加熱速度でＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）のＴＧＡ ２９５０を使用して行われた。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）のＤＳＣ ２９２０を使用して窒素雰囲気で加熱速度１０℃ ｍｉｎ－１で固体状態示差走査熱量計（ＤＳＣ）実験を行った。
固体ポリマーサンプルの熱重量分析（ＴＧＡ）は、窒素雰囲気で１０℃ ｍｉｎ－１の加熱速度でＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）のＴＧＡ ２９５０を使用して行われた。ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）のＤＳＣ ２９２０を使用して窒素雰囲気で加熱速度１０℃ ｍｉｎ－１で固体状態示差走査熱量計（ＤＳＣ）実験を行った。
【0093】
示差走査熱量計（ＤＳＣ）実験は、ＴＡ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓのＤＳＣ ４５０で行われ、超過熱容量曲線を得るために、製造社から提供したＭｉｃｒｏＣａｌ Ｏｒｉｇｉｎ ＤＳＣソフトウェアバージョン５．０を使用して分析した基準線を引いた。
【0094】
ポリマーのＧＰＣ分析は、２個のＰＬｇｅｌ ５μｍ ＭＩＸＥＤ－Ｃと１個のＰＬｇｅｌ ５μｍ １０００Åカラムが直列連結されたＡｇｉｌｅｎｔ １１００クロマトグラフで行われ、クロロホルムを移動相として使用し、ポリスチレン内部標準物質に対して計算した（Ｍｗ ３００～２，０００，０００）。
【0095】
その結果、実施例１による組成物の融点（Ｔｍ）は、４０℃であり、分解温度（Ｔｄ）は、２７９℃であり、溶融流動指数（ＭＦＩ）は、５～６ｇ／１０ｍｉｎであり、分子量は、４００Ｍｗ（１０３）であり、ＰＤＩ ２．２５であることを確認した。
【0096】
実験例６：延伸率及び引張強度の分析
実施例及び比較例として使用したＰＨＡの４ＨＢ含量は、それぞれ１０％（比較例１）、５０％（比較例２）、９０％（実施例１）であり、重量平均分子量は、４４０～５５０ＫＤａレベルと確認された高分子を適用して機械的物性評価を進めた。ＰＨＡの溶解度パラメータ値と類似した値を有するクロロホルムまたはメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）にレジンを１０ｐｈｒ（ｐａｒｔ）添加して６０℃で３時間以上撹拌して完全に溶解させた以後に、ＰＥＴ離型フィルム上にＤｒ．Ｂｌａｄｅスピンコータを用いてコーティングし、常温で２４時間乾燥して厚さ約２００μｍのフィルムを製作した。該製作されたサンプルをＡＳＴＭ－Ｄ８８２規格によってＬＬｌｏｙｄ社のＬＲ３０Ｋモデルのｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｔｅｎｓｉｌｅ ｔｅｓｔｅｒ（ＵＴＭ）装備を用いて引張強度及び破断伸率の機械的物性を測定した。幅１０ｍｍ及び長さ５０ｍｍの試片は、５００Ｎのｌｏａｄ ｃｅｌｌを使用して製作し、ｇａｇｅ ｌｅｎｇｔｈ ３０ｍｍにして２００ｍｍ／ｍｉｎの速度で引張強度、破断伸率を測定した。このような方式で同じフィルムを７回以上測定して、最も偏差が大きな２個の値を捨て、残りの平均値で示した。その結果、実施例１による組成物の延伸率は、１７００～１９００％であり、引張強度は、５～８ＭＰａであることを確認した。また、ひずみ率による試料の応力を示すグラフを図１～図３に示した。図１は、比較例１（４ＨＢ含量１０％）、図２は、比較例２（４ＨＢ含量５０％）、図３は、実施例１（４ＨＢ含量９０％）に関するものである。図１～図３に示されたように、４ＨＢ含量によって物性の変化を確認することができ、このような物性の変化は、４ＨＢモノマーの含量によって比例するものではないので、４ＨＢの含量と物性の変化は、予測可能なレベルではないことが分かる。
実施例及び比較例として使用したＰＨＡの４ＨＢ含量は、それぞれ１０％（比較例１）、５０％（比較例２）、９０％（実施例１）であり、重量平均分子量は、４４０～５５０ＫＤａレベルと確認された高分子を適用して機械的物性評価を進めた。ＰＨＡの溶解度パラメータ値と類似した値を有するクロロホルムまたはメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）にレジンを１０ｐｈｒ（ｐａｒｔ）添加して６０℃で３時間以上撹拌して完全に溶解させた以後に、ＰＥＴ離型フィルム上にＤｒ．Ｂｌａｄｅスピンコータを用いてコーティングし、常温で２４時間乾燥して厚さ約２００μｍのフィルムを製作した。該製作されたサンプルをＡＳＴＭ－Ｄ８８２規格によってＬＬｌｏｙｄ社のＬＲ３０Ｋモデルのｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｔｅｎｓｉｌｅ ｔｅｓｔｅｒ（ＵＴＭ）装備を用いて引張強度及び破断伸率の機械的物性を測定した。幅１０ｍｍ及び長さ５０ｍｍの試片は、５００Ｎのｌｏａｄ ｃｅｌｌを使用して製作し、ｇａｇｅ ｌｅｎｇｔｈ ３０ｍｍにして２００ｍｍ／ｍｉｎの速度で引張強度、破断伸率を測定した。このような方式で同じフィルムを７回以上測定して、最も偏差が大きな２個の値を捨て、残りの平均値で示した。その結果、実施例１による組成物の延伸率は、１７００～１９００％であり、引張強度は、５～８ＭＰａであることを確認した。また、ひずみ率による試料の応力を示すグラフを図１～図３に示した。図１は、比較例１（４ＨＢ含量１０％）、図２は、比較例２（４ＨＢ含量５０％）、図３は、実施例１（４ＨＢ含量９０％）に関するものである。図１～図３に示されたように、４ＨＢ含量によって物性の変化を確認することができ、このような物性の変化は、４ＨＢモノマーの含量によって比例するものではないので、４ＨＢの含量と物性の変化は、予測可能なレベルではないことが分かる。
【0097】
以上、本発明の実施例を説明したが、本発明は、前記実施例に限定されるものではなく、互いに異なる多様な形態に製造可能であり、当業者は、本発明の技術的思想や必須的な特徴を変更せずとも、他の具体的な形態で実施可能であるということを理解できるであろう。したがって、前述した実施例は、あらゆる面で例示的なものであり、限定的ではないということを理解しなければならない。
【0098】
次の配列リストも、「５１０７．５５ＵＳ０１＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」題目の．ｔｘｔファイルで提出され、これは、参照として本明細書に統合される。
【0099】
配列リスト
Ｇｅｎｅ ＩＤ ００１ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｋｌｕｙｖｅｒｉ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｇｅｎｅ ｓｕｃＤ＊
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Ｇｅｎｅ ＩＤ ００１ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｋｌｕｙｖｅｒｉ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｇｅｎｅ ｓｕｃＤ＊
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【0100】
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【0101】
Ｇｅｎｅ ＩＤ ００２ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｓｕｃｃｉｎｉｃ ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ ｓｓａＲＡｔ＊
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【0102】
Ｇｅｎｅ ＩＤ ００２ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｓｕｃｃｉｎｉｃ ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ ＳｓａＲＡｔ＊
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【0103】
Ｇｅｎｅ ＩＤ ００４ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ／Ｚｏｏｇｌｏｅａ ｒａｍｉｇｅｒａ ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅ ｐｈａＣ３／Ｃ５
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【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】