(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-06
(54)【発明の名称】多価不飽和脂肪酸の塩基性アミノ酸固形塩の調製方法
(51)【国際特許分類】
C11B 3/12 20060101AFI20230330BHJP
C07C 57/03 20060101ALI20230330BHJP
C07C 51/41 20060101ALI20230330BHJP
C07C 229/26 20060101ALI20230330BHJP
C07C 227/18 20060101ALI20230330BHJP
C07C 279/14 20060101ALI20230330BHJP
C07C 277/00 20060101ALI20230330BHJP
【ＦＩ】
C11B3/12
C07C57/03
C07C51/41
C07C229/26
C07C227/18
C07C279/14
C07C277/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022545131
(86)(22)【出願日】2021-01-29
(85)【翻訳文提出日】2022-08-29
(86)【国際出願番号】 CA2021050094
(87)【国際公開番号】W WO2021151199
(87)【国際公開日】2021-08-05
(31)【優先権主張番号】62/967,657
(32)【優先日】2020-01-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521163477
【氏名又は名称】シリサイクル インコーポレイティド
(74)【代理人】
【識別番号】100147485
【弁理士】
【氏名又は名称】杉村 憲司
(74)【代理人】
【識別番号】230118913
【弁護士】
【氏名又は名称】杉村 光嗣
(74)【代理人】
【識別番号】100181847
【弁理士】
【氏名又は名称】大島 かおり
(72)【発明者】
【氏名】シアオウェイ ウー
(72)【発明者】
【氏名】クリストフ メロン
【テーマコード（参考）】
4H006
4H059
【Ｆターム（参考）】
4H006AA02
4H006AC47
4H006BB14
4H006BS10
4H006NB23
4H059BA26
4H059BB05
4H059CA18
4H059EA01
(57)【要約】
本開示は、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の塩基性アミノ酸塩、およびその製造方法であって、酸の形態の１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸を、第１の有機溶媒と水の混合物中で、０℃超程度から第１の有機溶媒の沸点程度の間の温度で混合することと；第１の有機溶媒と水の混合物に、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を沈殿させるために有効な量の第２の有機溶媒を加えることと；第１および第２の有機溶媒ならびに水を蒸発させてＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を回収することとを含む方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
１つまたは複数の多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の、少なくとも１つの塩基性アミノ酸塩を製造するための方法であって、酸の形態の１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸を、第１の有機溶媒と水の混合物中で、０℃超程度から前記第１の有機溶媒の沸点程度の間の温度で混合することと、
前記第１の有機溶媒と水の前記混合物に、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を沈殿させるために有効な量の第２の有機溶媒を加えることと、
前記第１および第２の有機溶媒ならびに水を蒸発させて前記ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を回収することと、
を含む方法。
【請求項2】
前記ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は固形である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＰＵＦＡはオメガ３ＰＵＦＡおよびオメガ６ＰＵＦＡの少なくとも１つを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記オメガ３ＰＵＦＡはドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６ｎ－３）（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）（ＥＰＡ）およびアルファ－リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ－３）（ＡＬＡ）の少なくとも１つを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記オメガ３ＰＵＦＡはさらに、エイコサトリエン酸（Ｃ２０：３（ｎ－３））（ＥＴＥ）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０：４（ｎ－３））（ＥＴＡ）、ヘネイコサペンタエン酸（Ｃ２１：５（ｎ－３））（ＨＰＡ）、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５（ｎ－３））（ＤＰＡ）、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－３））およびテトラコサヘキサエン酸（Ｃ２４：６（ｎ－３））の少なくとも１つを含む、請求項３または４に記載の方法。
【請求項6】
前記オメガ６ＰＵＦＡはリノール酸（Ｃ１８：２ｎ－６）およびアラキドン酸（Ｃ２０：４ｎ－６）の少なくとも１つを含む、請求項３～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記オメガ６ＰＵＦＡはさらに、エイコサジエン酸（Ｃ２０：２（ｎ－６））、ジホモ－ガンマ－リノレン酸（Ｃ２０：３（ｎ－６））（ＤＧＬＡ）、ドコサジエン酸（Ｃ２２：２（ｎ－６））、アドレン酸（Ｃ２２：４（ｎ－６））、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５（ｎ－６））、テトラコサテトラエン酸（Ｃ２４：４（ｎ－６））およびテトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－６））の少なくとも１つを含む、請求項３～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記ＰＵＦＡは脂肪および／または油に含まれる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記ＰＵＦＡはＥＰＡを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記ＰＵＦＡはＤＨＡを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記ＰＵＦＡはマグロ油に含まれる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５０～５５％のＤＨＡと２０～２５％のＥＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して４５～６０％のＤＨＡと１８～２７％のＥＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項14】
前記ＰＵＦＡはアザラシ油に含まれる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５～４０％のＤＨＡと、５～４５％のＥＰＡと、３～１０％のＤＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記第１の有機溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノン、アセトンおよびＴＨＦまたはそれらの混合物を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記第１の有機溶媒と水の混合物中における、前記１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸の前記混合は、均質な溶液が得られるまで行われる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
混合ステップは、前記第１の有機溶媒中に酸の形態の前記１つまたは複数のＰＵＦＡを含む有機溶液を提供することと、前記塩基性アミノ酸と水とを含む水溶液を提供することと、前記有機溶液と前記水溶液を混合することとを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記塩基性アミノ酸はＬ－リジンである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記塩基性アミノ酸はＬ－アルギニンである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記第２の有機溶媒は、エタノール、アセトンまたはそれらの混合物の少なくとも１つである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の塩基性アミノ酸塩、およびその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【0002】
１９８０年代に、海洋哺乳類および魚を豊富に含むグリーンランドの伝統的な食事によって、イヌイット集団およびデンマーク人入植者の虚血性心疾患（ＩＨＤ）による死亡率が、レベルは異なるが大幅に低下したことが、いくつかの論文で明らかにされた。このような事実は、伝統的な海洋食に含まれる多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の効果に寄与すると信じられている。
【0003】
オメガ３については、抗炎症作用および抗血液凝固作用、トリグリセリド（ＴＡＧ）レベルの低下、血圧の低下、ならびに糖尿病、いくつかのがんなどのリスクの低減など、ヒトに対する多くの好ましい効果のために、近年関心が高まっている。
【0004】
しかしながら、食品添加物または食品サプリメントとしてのＰＵＦＡの使用は、安定性の問題、ならびに不快な味および臭いによってしばしば制限される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
一態様は、１つまたは複数の多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の、少なくとも１つの塩基性アミノ酸塩を製造するための方法であって：酸の形態の１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸を、第１の有機溶媒と水の混合物中で、０℃超程度から前記第１の有機溶媒の沸点程度の間の温度で混合することと；前記第１の有機溶媒と水の前記混合物に、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を沈殿させるために有効な量の第２の有機溶媒を加えることと；前記第１および第２の有機溶媒ならびに水を蒸発させて前記ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を回収することとを含む方法に関する。
【0006】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は固形である。
【0007】
さらなる実施形態において、ＰＵＦＡはオメガ３ＰＵＦＡおよびオメガ６ＰＵＦＡの少なくとも１つを含む。
【0008】
別の実施形態において、オメガ３ＰＵＦＡはドコサヘキサエン酸（Ｃ２２：６ｎ－３）（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（２０：５ｎ－３）（ＥＰＡ）およびアルファ－リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ－３）（ＡＬＡ）の少なくとも１つを含む。
【0009】
一実施形態において、前記オメガ３ＰＵＦＡはさらに、エイコサトリエン酸（Ｃ２０：３（ｎ－３））（ＥＴＥ）、エイコサテトラエン酸（Ｃ２０：４（ｎ－３））（ＥＴＡ）、ヘネイコサペンタエン酸（Ｃ２１：５（ｎ－３））（ＨＰＡ）、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５（ｎ－３））（ＤＰＡ）、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－３））およびテトラコサヘキサエン酸（Ｃ２４：６（ｎ－３））の少なくとも１つを含む。
【0010】
さらなる実施形態において、前記オメガ６ＰＵＦＡはリノール酸（Ｃ１８：２ｎ－６）およびアラキドン酸（Ｃ２０：４ｎ－６）の少なくとも１つを含む。
【0011】
別の実施形態において、前記オメガ６ＰＵＦＡはさらに、エイコサジエン酸（Ｃ２０：２（ｎ－６））、ジホモ－ガンマ－リノレン酸（Ｃ２０：３（ｎ－６））（ＤＧＬＡ）、ドコサジエン酸（Ｃ２２：２（ｎ－６））、アドレン酸（Ｃ２２：４（ｎ－６））、ドコサペンタエン酸（Ｃ２２：５（ｎ－６））、テトラコサテトラエン酸（Ｃ２４：４（ｎ－６））およびテトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－６））の少なくとも１つを含む。
【0012】
一実施形態において、前記ＰＵＦＡは脂肪および／または油に含まれる。
【0013】
さらなる実施形態において、前記ＰＵＦＡはＥＰＡを含む。
【0014】
別の実施形態において、前記ＰＵＦＡはＤＨＡを含む。
【0015】
一実施形態において、前記ＰＵＦＡはマグロ油に含まれる。
【0016】
さらなる実施形態において、前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５０～５５％のＤＨＡと２０～２５％のＥＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む。
【0017】
別の実施形態において、前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して４５～６０％のＤＨＡと１８～２７％のＥＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む。
【0018】
一実施形態において前記ＰＵＦＡはアザラシ油に含まれる。
【0019】
さらなる実施形態において、前記ＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５～４０％のＤＨＡと、５～４５％のＥＰＡと、３～１０％のＤＰＡ ｗｔ／ｗｔとを含む。
【0020】
別の実施形態において、第１の有機溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノン、アセトンおよびＴＨＦまたはそれらの混合物を含む。
【0021】
一実施形態において、前記第１の有機溶媒と水の混合物中における、前記１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸の前記混合は、均質な溶液が得られるまで行われる。
【0022】
さらなる実施形態において、混合ステップは、前記第１の有機溶媒中に酸の形態の前記１つまたは複数のＰＵＦＡを含む有機溶液を提供することと、前記塩基性アミノ酸と水とを含む水溶液を提供することと、前記有機溶液と前記水溶液を混合することとを含む。
【0023】
別の実施形態において、前記塩基性アミノ酸はＬ－リジンである。
【0024】
一実施形態において、前記塩基性アミノ酸はＬ－アルギニンである。
【0025】
一実施形態において、前記第２の有機溶媒は、エタノール、アセトンまたはそれらの混合物の少なくとも１つである。
【図面の簡単な説明】
【0026】
【発明を実施するための形態】
【0027】
本開示は、１ステップでの自由流動性粉末の形成をもたらす、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を製造するための方法に関する。
【0028】
本明細書で使用される用語「多価不飽和脂肪酸」または「ＰＵＦＡ」は、炭素骨格中に２つ以上のエチレン性炭素－炭素二重結合を含む脂肪酸化合物を意味する。ＰＵＦＡの２つの主要なクラスは、オメガ３およびオメガ６ＰＵＦＡであり、ＰＵＦＡの化学構造における最終二重結合の位置によって特徴付けられる。
【0029】
オメガ３ＰＵＦＡは、最終二重結合の位置を示し、オメガ３では、二重結合は分子鎖の「オメガ」つまり末端から３番目と４番目の炭素原子の間にある。
【0030】
３つの最も重要なオメガ３ＰＵＦＡは、２２個の炭素およびメチル末端から３番目の炭素から始まる６つの二重結合を有し（Ｃ２２：６ｎ－３）と示されるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、（２０：５ｎ－３）と示されるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、および（Ｃ１８：３ｎ－３）と示されるアルファ－リノレン酸（ＡＬＡ）である。
【0031】
他のオメガ３ＰＵＦＡとしては、エイコサトリエン酸（ＥＴＥ）（Ｃ２０：３（ｎ－３））、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）（Ｃ２０：４（ｎ－３））、ヘネイコサペンタエン酸（ＨＰＡ）（Ｃ２１：５（ｎ－３））、ドコサペンタエン酸（クルパノドン酸）（ＤＰＡ）（Ｃ２２：５（ｎ－３））、テトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－３））、およびテトラコサヘキサエン酸（ニシン酸）（Ｃ２４：６（ｎ－３））が挙げられる。
【0032】
オメガ６ＰＵＦＡは、オメガ６位と呼ばれる位置に末端二重結合を有する、つまり脂肪酸分子のオメガ末端から６番目の炭素に最終二重結合が生じる。
【0033】
オメガ６ＰＵＦＡのうち、リノール酸（Ｃ１８：２ｎ－６）およびアラキドン酸（Ｃ２０：４ｎ－６）は、主要なオメガ６の２つである。
【0034】
他のオメガ６ＰＵＦＡとしては、エイコサジエン酸（Ｃ２０：２（ｎ－６））、ジホモ－ガンマ－リノレン酸（ＤＧＬＡ）（Ｃ２０：３（ｎ－６））、ドコサジエン酸（Ｃ２２：２（ｎ－６））、アドレン酸（Ｃ２２：４（ｎ－６））、ドコサペンタエン酸（オスボンド酸）（Ｃ２２：５（ｎ－６））、テトラコサテトラエン酸（Ｃ２４：４（ｎ－６））、およびテトラコサペンタエン酸（Ｃ２４：５（ｎ－６））が挙げられる。
【0035】
本明細書で使用される用語「脂肪」および／または「油」は、本明細書に記載の方法における使用に適したレベルのＰＵＦＡを含む任意の脂肪および／または油を指す。脂肪または油中に存在するＰＵＦＡエステルは、アルキルエステル、トリグリセリド、ジグリセリドもしくはモノグリセリドまたはそれらの混合物として存在する。ジグリセリドまたはトリグリセリドの場合、グリセロール単位は任意にリン誘導体を有していてもよい（それ故、脂肪および／または油はリン脂質であるか、またはリン脂質を含む可能性がある）。
【0036】
本明細書で使用される「第１の有機溶媒」は、任意の有機溶媒を指す。また、該第１の有機溶媒は、少なくとも約０～２０（ｗ／ｗ）超の割合で、１つまたは複数のＰＵＦＡを溶解させることが可能である。そのような媒体の例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノン、アセトンおよびＴＨＦが挙げられる。好ましくは、第１の有機溶媒は、エタノール、メタノールまたはそれらの混合物である。
【0037】
本明細書で使用される「塩基性アミノ酸」は、カルボン酸と塩を形成することが可能なアミン官能基を側鎖に有する任意のアミノ酸を指す。塩基性アミノ酸は水に溶解すると、塩基性水溶液を形成する。
【0038】
本明細書で使用される「第２の有機溶媒」は、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩の沈殿を生じさせることが可能な溶媒を意味する。
【0039】
前述のとおり、一態様は、１つまたは複数の多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）の、少なくとも１つの塩基性アミノ酸塩を製造するための方法であって：酸の形態の１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸を、第１の有機溶媒と水の混合物中で、０℃超程度から前記第１の有機溶媒の沸点程度の間の温度で混合することと；前記第１の有機溶媒と水の前記混合物に、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を沈殿させるために有効な量の第２の有機溶媒を加えることと；前記第１および第２の有機溶媒ならびに水を蒸発させて前記ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を回収することとを含む方法に関する。
【0040】
一実施形態において、本方法は大気圧下で行われる。
【0041】
一実施形態において、本方法は不活性ガスを使用せずに行われる。
【0042】
一実施形態において、本方法は不活性ガスを使用して行われる。
【0043】
一実施形態において、第１の有機溶媒と水の混合物中における、前記１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸の前記混合は、均質な溶液が得られるまで行われる。
【0044】
一実施形態において、混合ステップは、前記第１の有機溶媒中に酸の形態の前記１つまたは複数のＰＵＦＡを含む有機溶液を提供することと、前記塩基性アミノ酸を含む水溶液を提供することと、前記有機溶液と前記水溶液を混合することとを含む。
【0045】
一実施形態において、第１の有機溶媒と水の混合物中における、酸の形態の１つまたは複数のＰＵＦＡと塩基性アミノ酸の混合ステップは、５０℃未満または「大気条件」（すなわち室温（例えば約２０～２５℃）および大気圧）下で実施されることが好ましい。
【0046】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は、例えば粉末のような固形である。さらなる実施形態においては、該粉末は、自由流動性粉末である。
【0047】
一実施形態において、本方法はさらに、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を少なくとも１日間粗引きポンパーに付すステップを含む。
【0048】
一実施形態において、１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して９０％ｗｔ／ｗｔ超のオメガ３ＰＵＦＡ ＥＰＡを含むＥＰＡである。
【0049】
一実施形態において、１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して９０％ｗｔ／ｗｔ超のオメガ３ＰＵＦＡ ＤＨＡを含むＤＨＡである。
【0050】
一実施形態において、オメガ３ＰＵＦＡは、オメガ３ＰＵＦＡの総量に対して５０～５５％ｗｔ／ｗｔのＤＨＡと２０～２５％ｗｔ／ｗｔのＥＰＡとを、あるいは４５～６０％ｗｔ／ｗｔのＤＨＡと１８～２７％ｗｔ／ｗｔのＥＰＡとを含むマグロ油由来のものである。
【0051】
一実施形態において、オメガ３ＰＵＦＡは、オメガ３ＰＵＦＡの総量に対して５～４０％ｗｔ／ｗｔのＤＨＡと、５～４５％のＥＰＡと、３～１０％ｗｔ／ｗｔのＤＰＡとを含むアザラシ油由来のものである。
【0052】
一実施形態において、第１の有機溶媒はエタノールである。
【0053】
一実施形態において、第１の有機溶媒はメタノールである。
【0054】
一実施形態において、第１の有機溶媒はイソプロパノールである。
【0055】
一実施形態において、第１の有機溶媒はブタノンである。
【0056】
一実施形態において、第１の有機溶媒はアセトンである。
【0057】
一実施形態において、塩基性アミノ酸はＬ－リジンである。
【0058】
一実施形態において、塩基性アミノ酸はＬ－アルギニンである。
【0059】
水溶液と塩基性アミノ酸の重量比は、塩基性アミノ酸の性質に依存する。水性成分は、アミノ酸を溶解するための最小量から、最大でその１０倍まで使用することが可能であり、該溶解は、室温（すなわち約２０～２５℃）で行われる場合、水性成分中に相当量の固体塩基性アミノ酸が視覚的に存在していないときに達成される。一実施形態においては、使用量は最小量の２倍、あるいは最小量の４倍、さらには最小量の５倍である。
【0060】
一実施形態において、水溶液とＬ－リジンの重量比は、０．９から１．１の間である。さらなる実施形態においては、該重量比は１である。
【0061】
一実施形態において、第２の有機溶媒はエタノールである。
【0062】
一実施形態において、第２の有機溶媒はアセトンである。
【0063】
あるいは、第２の有機溶媒はエタノールとアセトンの混合物である。
【0064】
一実施形態において、第２の有機溶媒と１つまたは複数のＰＵＦＡの重量比は１０：１から１００：１、１０：１から７０：１、１０：１から５０：１であり、好ましくは１０：１から３０：１である。
【0065】
遊離酸形態の１つまたは複数のＰＵＦＡに対する塩基性アミノ酸の正確な化学量論は、脂肪または油を使用する場合、例えば魚油の分子量が不定であるため、確実に確立することが困難である。また、魚油の供給元は互いに異なり、多様な割合のオメガ３組成物、オメガ６組成物および飽和脂肪酸など、異なる種の割合が含まれ得る。しかしながら当業者は、本発明を実施するために、脂肪酸組成物の炭素長がＣ１４～Ｃ２４の範囲であると仮定することによって、容易に分子量を推定することが可能である。したがって、本明細書に包含されるとおり、脂肪酸はＣ１９の平均炭素鎖長を有する。よって、脂肪酸塩の形成に使用する塩基性アミノ酸の量を推定するために、本明細書では３００ｇ／ｍｏｌの分子量を使用する。
【0066】
脂肪酸塩の製造に必要な塩基性アミノ酸の量は、脂肪酸１モルに対して１～１．５モルであり、好ましくは１モルで十分である。
【0067】
混合プロセスには、ローターステータホモジナイザが使用される。通常、ホモジナイザの回転数は５０ｒｐｍから１０００ｒｐｍであり、好ましくは１００～２００ｒｐｍである。
【0068】
粉末形態の最終生成物は、反応混合物から第１および第２の有機溶媒ならびに水を蒸発させ、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩を回収することによって単離される。好ましくは、蒸発ステップは、使用される装置の特性に依存して約０℃～７０℃の間で、減圧下で行われる。本明細書に記載の蒸発ステップは、噴霧ノズルが１００℃を超える入口空気温度をしばしば必要とする噴霧乾燥のような方法の使用を想定していない。蒸発ステップはまた、凍結乾燥法を含むことも想定していない。蒸発ステップでは、第１／第２の有機溶媒および水が液状である必要があり、そのことによって溶媒を凍結させる必要がある凍結乾燥法は除外される。得られた最終生成物の酸化状態は、過酸化物価（ＰＶ）、アニシジン価（ＡＶ）およびトトックス価によって定量化される。ＰＶは生成物中の一次酸化生成物（脂質ヒドロペルオキシド）のレベルの指標で、試料１ｋｇあたりのＯ２ミリ当量で規定され、ＡＶは飽和および不飽和カルボニル化合物の不特定の指標である。トトックスは、式トトックス＝２＊ＰＶ＋ＡＶによって計算される。
【0069】
ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩、エステル形態の出発物質および遊離酸形態の魚油の酸化状態の比較は、ＰＶおよびＡＶを測定することによって評価し、次にすべての試料を一定期間にわたって同じ酸化条件に付し、その後、試料のＰＶおよびＡＶを測定する。酸化条件は、以下のいずれかから選択される：１）大気条件で密閉容器に保管し、最初の１ヶ月は毎日１回、２ヶ月目は週に２回、３ヶ月目は週に１回、６ヶ月目までは月に２回開封する；２）４５℃の空気に曝露された緩い密閉容器で１ヶ月間保管する。
【0070】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は、一般的手順（１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して９０％ｗｔ／ｗｔ超の濃度のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を含む）に従って合成される。塩基性アミノ酸に対するＥＰＡのモル％の範囲は、それぞれ３０～５０％／７０～５０％、４０～５０％／６０～５０％、および４５～５０％／５５～５０％であり、優先的にはモル％比は５０％／５０％である。溶媒は、減圧０～７０ｍｍＨｇ、０℃～７０℃、優先的には３０ｍｍＨｇ、４０℃で除去され、その後少なくとも１日間粗引きポンプにかけられる。
【0071】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は、一般的手順（１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して９０％ｗｔ／ｗｔ超の濃度のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む）に従って合成される。塩基性アミノ酸に対するＤＨＡのモル％の範囲は、それぞれ３０～５０％／７０～５０％、４０～５０％／６０～５０％、および４５～５０％／５５～５０％であり、優先的にはモル％比は５０％／５０％である。溶媒は、減圧０～７０ｍｍＨｇ、０℃～７０℃、優先的には３０ｍｍＨｇ、４０℃で除去され、その後少なくとも１日間粗引きポンプにかけられる。
【0072】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は、一般的手順（１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５０～５６％のＤＨＡおよび２０～２５％のＥＰＡ ｗｔ／ｗｔを含む、遊離酸としてのマグロ油である）に従って合成される。塩基性アミノ酸に対するマグロ油のモル％の範囲は、それぞれ３０～５０％／７０～５０％、４０～５０％／６０～５０％、および４５～５０％／５５～５０％であり、優先的にはモル％比は５０％／５０％である。溶媒は、減圧０～７０ｍｍＨｇ、０℃～７０℃、優先的には３０ｍｍＨｇ、４０℃で除去され、その後少なくとも１日間粗引きポンプにかけられる。
【0073】
一実施形態において、ＰＵＦＡの塩基性アミノ酸塩は、一般的手順（１つまたは複数のＰＵＦＡは、ＰＵＦＡの総量に対して５～４０％のＤＨＡ、５～４５％のＥＰＡ、および３～１０％のＤＰＡ ｗｔ／ｗｔを有する、遊離酸としてのアザラシ油である）に従って合成される。塩基性アミノ酸に対する遊離酸としてのアザラシ油のモル％の範囲は、それぞれ３０～５０％／７０～５０％、４０～５０％／６０～５０％、および４５～５０％／５５～５０％であり、優先的にはモル％比は５０％／５０％である。溶媒は、減圧０～７０ｍｍＨｇ、０℃～７０℃、優先的には３０ｍｍＨｇ、４０℃で除去され、その後少なくとも１日間粗引きポンプにかけられる。
【0074】
〔試料特性評価〕
本明細書で使用されるすべての試薬および溶媒は、さらに精製することなく商業的に利用可能である。ここで使用したＧＣ－ＭＳはＡｇｉｌｅｎｔ５９７７Ｂ／７８９０Ｂであり、カラムはＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰ－５ｍｓ－ＵＩである。
本明細書で使用されるすべての試薬および溶媒は、さらに精製することなく商業的に利用可能である。ここで使用したＧＣ－ＭＳはＡｇｉｌｅｎｔ５９７７Ｂ／７８９０Ｂであり、カラムはＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰ－５ｍｓ－ＵＩである。
【0075】
Ｆｏｏｄ Ｌａｂアナライザ：当該技術分野において周知の、試料の酸化レベルを決定するためのいくつかの技術のうち、本明細書ではＰＶおよびＡＶを決定するためにＣＤＲ ＦｏｏｄＬａｂ（登録商標） Ｊｕｎｉｏｒアナライザを使用した。その手順を以下に記載する。
【0076】
固体生成物０．５ｇを、１：１０（ｖ／ｖ）の比率のＭｅＯＨおよびＨＣｌ溶液２ｍＬに溶解させた。該混合物を５分間撹拌し、次いで５ｍＬの水を加えた。混合物を、１００ｐｐｍのブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）を含む３ｍＬのヘキサンで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下、０～７０℃の温度で蒸発させて遊離酸形態の魚油を得、これをＣＤＲ ＦｏｏｄＬａｂ（登録商標） Ｊｕｎｉｏｒアナライザを使用して評価しアニシジンおよび過酸化物価を得た。
【0077】
ガスクロマトグラフィ質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）：最終生成物のＰＵＦＡ濃縮物をガスクロマトグラフィ質量分析法（ＧＣ－ＭＳ）により決定した。
【0078】
ＰＵＦＡのエステル化：約２５ｍｇのＦＦＡまたはＦＦＡ塩（遊離脂肪酸）を封管に装填し、２％Ｈ２ＳＯ４溶液２ｍＬを加えて均一な溶液を生成し、これを８０℃で３０分間撹拌せずに加熱し、次いで溶液を室温まで冷却した後に飽和ＮａＨＣＯ３水溶液２ｍＬを加えた。エステル形態のＦＦＡを、８～１０ｍＬの１００ｐｐｍ ＢＨＴヘキサンで一度抽出した。その後、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ＧＣ－ＭＳにより分析した。
【0079】
球状オルガノシロキサンサブミクロン／ナノ粒子（カールフィッシャー）中の水分定量化：メトラー・トレド社製の滴定装置Ｃｏｍｐａｃｔ Ｖ２０ｓを使用して、水分率を推定した。
【0080】
流動性：流動性は、一般情報番号１１７４（粉体流８０１）から、米国薬局方の方法を使用して決定した。
【実施例】
【0081】
実施例１：マグロ油のＰＵＦＡエチルエステルからの遊離酸形態のマグロ油の調製。
【0082】
２Ｌの３首丸ビンガラス器具にエタノール２００ｍＬを装填し、次いで５０％ＮａＯＨ水溶液６４ｇを加えた。その後、窒素下で該混合物にＡＶが６．８Ａ／ｇ、ＰＶが１３ｍｅｑＯ２／ｋｇのマグロ油のＰＵＦＡエチルエステルを滴下し、オーバーヘッドスターラを用いて１５０ｒｐｍの回転数で攪拌した。得られた溶液を室温で１．５時間攪拌した。室温まで冷却した後、Ｈ２Ｏ６００ｍＬおよびＨ３ＰＯ４６０ｍＬ（８５％）を加え、１０分間攪拌した。その後、有機相を６０ｍＬのヘキサンで一度抽出し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。有機溶媒を除去した後、ＰＶが０．９６ｍｅｑＯ２／ｋｇ、ＡＶが１．５Ａ／ｇの油として、２３．７％のＥＰＡおよび５５．６％のＤＨＡを有する遊離酸形態のマグロ油１７０ｇを生成させた。
【0083】
実施例２：エイコサペンタエン酸のＬ－リジン塩（ＥＰＡ－Ｌｙｓ）の調製。
【0084】
２５０ｍＬ丸ビンフラスコに、まず５０ｍｅｑＯ２／ｋｇ超のＰＶおよび１００Ａ／ｇ超のＡＶを示すＥＰＡ３ｇならびにエタノール３ｇを装填し、次いで５０％Ｌ－リジン水溶液３ｇを加えた。ＥＰＡとＬ－リジンのモル比は１：１であった。この混合物を大気条件で５分間攪拌し、均一な溶液を得た。３０ｍＬのエタノールを加え、Ｌ－リジンアミノ酸塩を沈殿させた。その後、減圧３０ｍｍＨｇ、４０℃で溶媒を蒸発させて最終生成物を茶色粉末として得、これをさらに１日間粗引きポンパーに付して、ＰＶが６．０ｍｅｑＯ２／ｋｇ、ＡＶが９．５Ａ／ｇのＥＰＡ－Ｌｙｓを生成させた。ＥＰＡ－Ｌｙｓ約４．５ｇを直径２７ｍｍの２０ｍＬ透明バイアルに保管し、蓋を閉めて室温のベンチに置き、９０日間の安定性試験を行った。その結果を表１にまとめた。
【0085】
実施例３：ドコサヘキサエン酸のＬ－リジン塩（ＤＨＡ－Ｌｙｓ）の調製。
【0086】
２５０ｍＬ丸ビンフラスコに、まずＰＶが５０ｍｅｑＯ２／ｋｇ超、ＡＶが１００Ａ／ｇ超のＤＨＡ３ｇ、エタノール３ｇを装填し、次いで５０％Ｌ－リジン水溶液３ｇを加えた。ＤＨＡとＬ－リジンのモル比は１：１であった。この混合物を大気条件で５分間攪拌し、均一な溶液を得た。３０ｍＬのエタノールを加え、Ｌ－リジンアミノ酸塩を沈殿させた。その後、減圧３０ｍｍＨｇ、４０℃で溶媒を蒸発させて最終生成物を茶色粉末として得、これをさらに１日間粗引きポンパーに付して、ＰＶが１６．０ｍｅｑＯ２／ｋｇ、ＡＶが２９．３Ａ／ｇのＤＨＡ－Ｌｙｓを生成させた。ＥＰＡ－Ｌｙｓ約４．５ｇを直径２７ｍｍの２０ｍＬ透明バイアルに保管し、蓋を閉めて室温のベンチに置き、９０日間の安定性試験を行った。その結果を表１にまとめた。
【0087】
【表1】
【0088】
実施例４：遊離酸形態のマグロ油のＬ－リジン塩の調製（ＥＰＡ２３．７％およびＤＨＡ５５．６％）（ＰＵＦＡ－Ｌｙｓ）。
【0089】
１Ｌ丸ビンフラスコに、まず実施例１から調製した遊離酸形態のマグロ油１０ｇおよびエタノール１０ｇを装填し、次いで５０％Ｌ－リジン水溶液１０．６ｇを加えた。遊離酸形態のマグロ油とＬ－リジンのモル比は１：１であった。この混合物を大気条件で５分間攪拌し、均一な溶液を得た。３００ｍＬのエタノールを加え、Ｌ－リジンアミノ酸塩を沈殿させた。その後、減圧３０ｍｍＨｇ、４０℃で溶媒を蒸発させて最終生成物をベージュ色粉末として得、これをさらに１日間粗引きポンパーに付して、ＰＶが１．８ｍｅｑＯ２／Ｋｇ、ＡＶが０．５Ａ／ｇのＰＵＦＡ－Ｌｙｓを生成させた。ＥＰＡ－Ｌｙｓ約１５ｇを直径４８ｍｍの１２０ｍＬ透明ビンに保管し、蓋を閉めて室温のベンチに置き、１８３日間の安定性試験を行った。その結果を表１に示した。
【0090】
実施例５：遊離酸形態のアザラシ油のＬ－リジン塩の調製（ＥＰＡ２０．２％、ＤＨＡ ２５．３％およびＤＰＡ７．７％）（アザラシ油－Ｌｙｓ）。
【0091】
２５０ｍＬ丸ビンフラスコに、まず１０．６ｍｅｑＯ２／ｋｇのＰＶおよび５．７Ａ／ｇのＡＶを示す遊離酸形態のアザラシ油３ｇならびにエタノール３ｇを装填し、次いで５０％Ｌ－リジン水溶液６ｇを加えた。遊離酸形態のアザラシ油とＬ－リジンのモル比は１：１であった。この混合物を大気条件で５分間攪拌し、均一な溶液を得た。３５ｍＬのエタノールを加え、Ｌ－リジンアミノ酸塩を沈殿させた。その後、減圧３０ｍｍＨｇ、４０℃で溶媒を蒸発させて最終生成物をベージュ色粉末として得、これをさらに１日間粗引きポンパーに付して、ＰＶが１．５ｍｅｑＯ２／ｋｇ、ＡＶが０．５Ａ／ｇ未満のＰＵＦＡのアミノ酸塩を生成させた。アザラシ油－Ｌｙｓの安定性は表１のとおりである。
【0092】
実施例６：遊離酸形態のマグロ油のＬ－アルギニン塩の調製（ＥＰＡ２３．７％およびＤＨＡ５５．６％）（ＰＵＦＡ－Ａｒｇ）。
【0093】
２５０ｍＬ丸ビンフラスコに、まず実施例１から調製した遊離酸形態のマグロ油３ｇおよびエタノール３０ｇを装填し、次いで６３％Ｌ－アルギニン水溶液２．７０ｇを加えた。遊離酸形態のマグロ油とＬ－アルギニンのモル比は１：１であった。この混合物を均質な溶液が得られるまで大気条件で撹拌した。３００ｍＬのアセトンを加え、Ｌ－アルギニンアミノ酸塩を沈殿させた。その後、溶媒を濾過して最終生成物をピンク色がかった粉末として生成させ、これをさらに１日間粗引きポンパーに付して、ＰＶが２．６ｍｅｑＯ２／Ｋｇ、ＡＶが０．７Ａ／ｇのＰＵＦＡ－Ｌｙｓを生成させた。
【0094】
実施例７：ＰＵＦＡのアミノ酸塩（ＰＵＦＡ－Ｌｙｓ）ならびにエステル形態（ＰＵＦＡ－ＯＥｔ）および遊離酸形態（ＰＵＦＡ－ＯＨ）のＰＵＦＡの安定性評価。
【0095】
約５ｇの、実施例１で使用した液状マグロ油エチルエステル（ＰＵＦＡ－ＯＥｔ）、実施例１で得られた遊離酸形態のマグロ油（ＰＵＦＡ）およびそのＬ－リジン塩（ＰＵＦＡ－Ｌｙｓ）を直径２７ｍｍの２０ｍＬ透明バイアルに加えた。３つのバイアルは蓋を閉めて室温のベンチに置いた。３０日後に分析を行った。その結果に基づいて、蓋を開けた該バイアルを換気された４５℃のオーブン中にさらに３０日間保管することによって、オメガ３のＬ－リジン塩の安定性をさらに評価した。得られた結果を表２にまとめた。
【0096】
【表2】
【0097】
本開示は、その特定の実施形態に関連して記載されているが、さらなる修正が可能であり、当該技術分野において既知または通例の慣行の範囲内にあり、本明細書において先に記載された本質的特徴に適用可能で、かつ添付の特許請求の範囲に従う本開示からの逸脱を含んだ任意の変形、使用または適応を、本出願は網羅することが意図されることが理解されよう。
【図1】
【国際調査報告】