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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-06
(54)【発明の名称】１－フェニル－テトラリン誘導体の農薬組成物
(51)【国際特許分類】
A01N 31/08 20060101AFI20230330BHJP
A01P 3/00 20060101ALI20230330BHJP
A01N 33/04 20060101ALI20230330BHJP
A01N 31/14 20060101ALI20230330BHJP
【ＦＩ】
A01N31/08
A01P3/00
A01N33/04
A01N31/14
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022546677
(86)(22)【出願日】2021-01-31
(85)【翻訳文提出日】2022-08-26
(86)【国際出願番号】 IL2021050110
(87)【国際公開番号】W WO2021152598
(87)【国際公開日】2021-08-05
(31)【優先権主張番号】62/969,111
(32)【優先日】2020-02-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522048786
【氏名又は名称】メタボリック インサイツ エルティーディー．
【氏名又は名称原語表記】ＭＥＴＡＢＯＬＩＣ ＩＮＳＩＧＨＴＳ ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】パニック、ダビデ
(72)【発明者】
【氏名】コルマン、イド
【テーマコード（参考）】
4H011
【Ｆターム（参考）】
4H011AA01
4H011AA03
4H011BB03
4H011BB04
4H011BC07
4H011DA13
4H011DD03
(57)【要約】
１‐フェニル‐テトラリンの誘導体は、いくつかの担子菌、子嚢菌及び不等毛藻）真菌及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のプロトバクテリア（Ｐｒｏｔｏｂａｃｔｅｒｉａ）に対して高い有効性を有する農薬活性があることが判明した。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
植物、植物器官、植物部分又は植物繁殖材料の植物病原体の侵襲の事例を防除するため、予防するため、低減するため、又は根絶するための方法であって、植物、植物部分、植物器官若しくは植物繁殖材料、又は前記植物の周囲の土壌に、農薬有効量の少なくとも１種の化学式（Ｉ）の化合物若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を適用することを含む、方法：【化1】
Ｒ５及びＲ６が、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；かつ
Ｒ７が、水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシから選択される。
【請求項2】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２が、独立して、水素原子及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素であり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２が、独立して、水素原子及び塩素原子から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素であり；かつ
Ｒ７が、メチルアミノ基である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記化合物が、（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリドである、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基、並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５及びＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択され；Ｒ５及びＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、ヒドロキシ及びメトキシから選択され；Ｒ５及びＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記化合物が、５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール；
（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール；
４－（７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール；及び
４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール、
又はそれらの組み合わせから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記化合物が、（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオールである、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記化合物が、４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記化合物が適用される植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌（Ｂａｓｉｄｏｍｙｃｅｔｅ）；Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又は、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ属及びＦｕｓａｒｉｕｍ属から選択される、子嚢菌（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）；並びにＯｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔｏｐｈｙｔａ）から選択されるメンバーである、請求項４に記載の方法。
【請求項12】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ目のＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱植物病原体のメンバーである、請求項１１記載の方法。
【請求項13】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ植物病原体がＰｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ属種のメンバーである、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａから選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記植物病原体が、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ種のＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属のメンバーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項17】
前記植物病原体が、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ目のＤｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項18】
前記Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体が、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属のメンバーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ植物病原体が、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ及びＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記植物病原体が、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ種のＢｏｔｒｙｔｉｓ属のメンバーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項22】
前記植物病原体が、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ種のＦｕｓａｒｉｕｍ属のメンバーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項23】
前記植物病原体が、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ目の卵菌（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）のメンバーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項24】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科又はＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ属のＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ植物病原体が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓである、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ属のＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項２４に記載の方法。
【請求項28】
前記Ｐｙｔｈｉｕｍ植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍである、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記化合物が適用される植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌（Ｂａｓｉｄｏｍｙｃｅｔｅ）；Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔｏｐｈｙｔａ）；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウム（ｐｒｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）から選択されるメンバーである、請求項９に記載の方法。
【請求項30】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ目のＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ属種のメンバーである、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａから選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記植物病原体が、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ種のＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属のメンバーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項35】
前記植物病原体が、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ目のＯｏｍｙｃｏｔａ綱のメンバーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項36】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科又はＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ属のＰｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
前記Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ植物病原体が、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓである、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ属のＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項３６に記載の方法。
【請求項40】
前記Ｐｙｔｈｉｕｍ植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍである、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ科のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のメンバーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項42】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のものである、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
前記植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅである、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記化合物が適用される植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌（Ｂａｓｉｄｏｍｙｃｅｔｅ）；Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ科の不等毛藻（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔｏｐｈｙｔａ）；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウム（ｐｒｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）から選択されるメンバーである、請求項１０に記載の方法。
【請求項45】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ目のＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱植物病原体のメンバーである、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項４５に記載の方法。
【請求項47】
前記Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ属種のメンバーである、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａから選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記植物病原体が、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ種のＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属のメンバーである、請求項３３に記載の方法。
【請求項50】
前記植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ属のＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである、請求項４４に記載の方法。
【請求項51】
前記Ｐｙｔｈｉｕｍ植物病原体が、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍである、請求項５０に記載の方法。
【請求項52】
前記植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ科のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のメンバーである、請求項４４に記載の方法。
【請求項53】
前記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のものである、請求項５２に記載の方法。
【請求項54】
前記植物病原体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅである、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
少なくとも１種の化学式（Ｉ）の化合物、その立体異性体又はその農業上許容される塩を含有する、農薬組成物：【化2】
Ｒ５及びＲ６が、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【請求項56】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２が、独立して、水素原子及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が、水素であり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項５５に記載の農薬組成物。
【請求項57】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２は、独立して、水素原子及び塩素原子から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が、水素であり；かつ
Ｒ７が、メチルアミノ基である、請求項５６に記載の農薬組成物。
【請求項58】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリドである、請求項５７に記載の農薬組成物。
【請求項59】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基、並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５とＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項５５に記載の農薬組成物。
【請求項60】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択され；Ｒ５及びＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される、請求項５９に記載の農薬組成物。
【請求項61】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、ヒドロキシ、及びメトキシから選択され；Ｒ５及びＲ６が、メチルであり；かつ
Ｒ７が、水素である、請求項６０に記載の農薬組成物。
【請求項62】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール；
（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール；
４－（７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール；及び
４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール；又は
それらの組み合わせ、から選択される、請求項６１に記載の農薬組成物。
【請求項63】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオールである、請求項６２に記載の農薬組成物。
【請求項64】
前記化学式（Ｉ）の化合物が、４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである、請求項６２に記載の農薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願への相互参照］
本出願は２０２０年２月２日に出願された米国特許出願第６２／９６９，１１１号に対する優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は２０２０年２月２日に出願された米国特許出願第６２／９６９，１１１号に対する優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
［技術分野］
本発明は、概して、農業利用のための殺真菌特性及び殺菌特性を有する化合物に関する。
本発明は、概して、農業利用のための殺真菌特性及び殺菌特性を有する化合物に関する。
【背景技術】
【0003】
植物病害生物は、現代農業の生産性に対する大きな課題である。さび病は、数十の属及び数千の種を含む多様な植物病原体群である。これらは、経済的に非常に重大であり、穀類、トウモロコシ及び大豆の収量に数十パーセントの損失を与える恐れがある（Ｇｅｓｓｅｓｅ ２０１９；Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｈｅｒｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。
【0004】
Ｐｕｃｃｉｎｉａ属種は、偏性病原性真菌であり、担子菌綱の系統学的系列に属する植物サビ菌類の中の主要な属である。Ｐｕｃｃｉｎｉａ属種は、穀類（例えば、コムギにおける黄さび病）及びトウモロコシ（一般的なさび病）において商業的に重大な広範囲の植物病の原因となる（Ｇｅｓｓｅｓｅ ２０１９；Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９８）。
【0005】
土壌伝染性植物病原体は、農作物に対して重大な被害をもたらす。植物病原性真菌であるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ（リゾクトニア）属種は、担子菌綱の系統学的系列に属し、野菜におけるブラウンパッチ、苗立枯病、根腐れ及び腹腐れ、イネの紋枯れ病などの広範囲の商業的に重大な植物病の原因となる。植物におけるすべてのリゾクトニア病及びその後の二次感染は、防除が難しい（Ｅｒｌａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。
【0006】
Ｐｙｔｈｉｕｍ属種は、タバコ、トマト、マスタード、トウガラシ及びクレソン実生に広く「立ち枯れ病」（「ｄｕｍｐｌｉｎｇ ｏｆｆ」病）の原因となる卵菌（Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ）と呼ばれる真核微生物の系統学的系列に属する植物病原性の真菌様生物である（Ｍａｒｔｉｎ ＆ Ｌｏｐｅｒ、２０１０）。
【0007】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ属種は、卵菌と呼ばれる真核微生物の系統学的系列に属する偏性植物真菌様病原体である。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓは、葉腐病及び塊茎の腐敗をもたらすジャガイモの胴枯れ病として知られるジャガイモの深刻な病気である。この病気によって、ジャガイモの収穫が完全に失われることがある（Ｓｅｄｌａｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａは、多くの植物種の地上部を攻撃し、葉枯れ病、トマト、カボチャ及び他の作物における果実腐れかいよう病（ｃａｎｋｅｒ ｆｒｕｉｔ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ）の主な原因である。
【0008】
Ｂｏｔｒｙｔｉｓ属種は、子嚢菌類の系統に属する広範な植物種の遍在性糸状菌病原体である。Ｂｏｔｒｙｔｉｓは宿主植物のすべての地上部にある程度感染することができる。Ｂｏｔｒｙｔｉｓは、ブドウ、トマト、イチゴ、キュウリ、球根花、切り花及び観葉植物などの、農業上重要な作物及び商品植物の多様な場合において、灰色カビと呼ばれる疾患を引き起こす（Ｊ．Ａ．Ｌｖａｎ Ｋａｎ、２００５）。
【0009】
Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種は、子嚢菌類の系統に属する糸状菌の大きな属である。Ｆｕｓａｒｉｕｍ属の多くの種は植物に対して病原性であり、経済的に重要な植物、主に野菜の萎凋（ｗｉｌｔ）又は「腐れ（ｒｏｔ）」などの深刻な病気を引き起こす。さらに、Ｆｕｓａｒｉｕｍ種は、穀類に感染して、トウモロコシにおいて頭枯れ（ｈｅａｄ ｂｌｉｇｈｔ）及び穂腐れ（ｅａｒ ｒｏｔ）を引き起こし、ある特定の条件下においてマイコトキシンを蓄積させる（Ｊ．Ｅ．Ｅ．Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｙ．Ｓ．Ｃｌａｒｋ ａｎｄ Ａ．Ｅ．Ｂｕｃｋｌｅ，１９９８）。
【0010】
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属種は、穀物、果実及び野菜－リンゴ、ジャガイモ、トマト等、を含む農産物に著しい損傷を引き起こす多数の種を有する、遍在性の真菌属である（Ｐａｔｒｉａｒｃａ、Ａ．，＆ Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ Ｐｉｎｔｏ，Ｖ．２０１８）。
【0011】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種は、多様な作物植物において毒性のある植物病原菌属であり、葉及び茎に著しい病変をもたらす。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種は、経済的に重要な作物植物及び果樹において以下のような病気の原因となる：パースニップ及びトマトにおける髄壊死、イネにおける褐色斑点病及び葉鞘褐色腐敗病、アーモンドにおける細菌性かいよう病、並びにオリーブにおけるオリーブがんしゅ病（Ｍｏｏｒｅ Ｌ．Ｗ．，１９８８；Ｈｏｆｔｅ Ｍ．ａｎｄ Ｄｅ Ｖｏｓ Ｐ．，２００６）。
【0012】
作物植物におけるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属種の管理について種々の方法が試験された。それらとしては、栽培上の管理、宿主抵抗性、微生物アンタゴニストによる生物学的防除、及び化学的防除が挙げられる。それらのいずれも完全な防除はできない。
【0013】
これらの病気から作物を保護する目的で利用可能な活性成分の数は、害虫の抵抗性が高まっていること、気候条件が不安定であること、及び規制圧力が高まっていることに起因して、年々減少している。環境的に持続可能な新規の作物保護の解決法を開発するために、新しい活性成分が至急必要となっている。
【発明の概要】
【0014】
本発明の一態様は、植物、植物器官、植物部分又は植物繁殖材料の植物病原体の侵襲の事例を防除するため、予防するため、低減するため、又は根絶するための方法であって、植物、植物部分、植物器官若しくは植物繁殖材料、又は前記植物の周囲の土壌に、農薬有効量の少なくとも１種の化学式（Ｉ）の化合物若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を適用する工程を含む、方法である：
式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基、並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５及びＲ６が、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；Ｒ７が、水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシから選択される。
【化1】
【0015】
特定の実施形態において、本発明の方法において適用される化学式（Ｉ）の化合物は：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド、
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール、及び
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである。
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド、
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール、及び
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである。
【0016】
いくつかの実施形態において、化合物３は、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌（Ｂａｓｉｄｏｍｙｃｅｔｅ）；Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱の子嚢菌（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）又はＢｏｔｒｙｔｉｓ及びＦｕｓａｒｉｕｍから選択される属；及び、Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔｏｐｈｙｔａ）から選択されるメンバーである植物病原体に適用される。
【0017】
他の実施形態において、化合物１は、以下から選択されるメンバーである植物病原体に適用される：Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウム（ｐｒｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）。
【0018】
さらに他の実施形態において、化合物２は、以下から選択されるメンバーである植物病原体に適用される：Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ科の不等毛藻；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウム。
【0019】
本発明の別の態様では、農薬組成物は、少なくとも１種の化学式（Ｉ）若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を含む：
式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基、メトキシ基及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；かつＲ７は、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【化2】
【0020】
特定の実施形態において、本発明の組成物の化学式（Ｉ）の化合物は：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド、
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール、及び
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである。
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド、
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール、及び
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオールである。
【図面の簡単な説明】
【0021】
【図1】Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉによるトウモロコシ葉の感染に対する化合物１の効果を示し、それはこの真菌によって覆われた葉の表面の割合（％）として決定される。＊＊＊，ｐ＜０．００１。ｐｐｍ、百万分率。（実験３４３）
【0022】
【図2】２つの独立した実験における、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ（葉さび病）によるコムギ葉感染に対する化合物１の効果を示し、それは感染１０日後の胞子発芽の割合（％）（病害重症度）として求めたものである。Ｓｉｇｎｕｍ（登録商標）（ＢＡＳＦ）－２６．７％ ｗ／ｗボスカリド及び６．７％ ｗ／ｗピラクロストロビン（陽性対照）を含む参照殺真菌剤。試験例９において－製剤１の配合及び調製を参照；＊＊＊、ｐ＜０．００１。（実験９５２）
【図3】２つの独立した実験におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ（葉さび病）によるコムギ葉感染に対する化合物１の効果を示しており、感染１０日後の胞子発芽（病害重症度）の割合（％）として求めたものである。Ｓｉｇｎｕｍ（登録商標）（ＢＡＳＦ）－２６．７％ ｗ／ｗのボスカリド及び６．７％ ｗ／ｗのピラクロストロビン（陽性対照）を含む参照殺真菌剤。試験例９－製剤１の配合及び調製を参照；＊＊＊、ｐ＜０．００１（実験９７３）。
【0023】
【図4】３つの独立した実験における、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉによるトウモロコシ葉の感染に対する化合物３の効果を示し、それは真菌によって覆われた葉の表面の割合（％）として決定される。＊＊＊，ｐ＜０．００１。製剤１～５－試験例１０を参照。（実験２７０）
【図5】３つの独立した実験における、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉによるトウモロコシ葉の感染に対する化合物３の効果を示し、それは真菌によって覆われた葉の表面の割合（％）として決定される。＊＊＊，ｐ＜０．００１。製剤１～５－試験例１０を参照。（実験２８４）
【図6】３つの独立した実験における、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉによるトウモロコシ葉の感染に対する化合物３の効果を示し、それは真菌によって覆われた葉の表面の割合（％）として決定される。＊＊＊，ｐ＜０．００１。製剤１～５－試験例１０を参照。（実験２９４）
【0024】
【図7】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、胞子発芽の％として決定された感染コムギ植物のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ病の重症度に対する化合物３の効果を示す。製剤２－試験例９を参照；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－有意差なし（対未処理対照）。（実験１３５）
【図8】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、胞子発芽の％として決定された感染コムギ植物のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ病の重症度に対する化合物３の効果を示す。製剤２－試験例９を参照；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－有意差なし（対未処理対照）。（実験１５３）
【図9】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、胞子発芽の％として決定された感染コムギ植物のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ病の重症度に対する化合物３の効果を示す。製剤２－試験例９を参照；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－有意差なし（対未処理対照）。（実験２０８）
【0025】
【図10】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験２５４）
【図11】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験２６２ａ）
【図12】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験２６２ｂ）
【図13】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験２７５ａ）
【図14】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験２７５ｂ）
【図15】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験３１２ａ）
【図16】治療的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、温室条件下でのトマト植物に対するＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの病害の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９参照；Ａｃｒｏｂａｔ（登録商標）（５０％ジメトモルフ、ＢＡＳＦ）；＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；及びｎ．ｓ．－未処理対照に対して有意差なし。（実験３１２ｂ）
【0026】
【図17】予防的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、トマト植物に対するＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ病の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤２－試験例９を参照；＊はｐ値が＜０．０５であることを意味し；＊＊はｐ値が＜０．０１であることを意味し；＊＊＊はｐ値が＜０．００１であることを意味し、ｎ．ｓ．は未処理対照に対して有意差がないことを意味する。（実験３２７）
【0027】
【図18】予防的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、トマト植物に対するＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ病の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤１及び２－試験例９を参照；＊はｐ値が＜０．０５であることを意味し；＊＊はｐ値が＜０．０１であることを意味し；＊＊＊はｐ値が＜０．００１であることを意味し、ｎ．ｓ．は未処理対照に対して有意差がないことを意味する。（実験３１４ａ。）
【図19】予防的アプローチ及び噴霧による適用を用いて、トマト植物に対するＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ病の重症度に対する化合物３の効果を、病害の重症度％として決定したものである。製剤１及び２－試験例９を参照；＊はｐ値が＜０．０５であることを意味し；＊＊はｐ値が＜０．０１であることを意味し；＊＊＊はｐ値が＜０．００１であることを意味し、ｎ．ｓ．は未処理対照に対して有意差がないことを意味する。（実験３１４ｂ。）
【発明を実施するための形態】
【0028】
本発明によれば、下記の化学式（Ｉ）の１－フェニル－テトラリン誘導体若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩が、いくつかの担子菌、子嚢菌及び不等毛藻の真菌類並びにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のプロトバクテリウムに対する強力な農薬であることが見出された：
式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基、メトキシ基及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；
Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；かつ
Ｒ７は、水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシから選択される。
【化3】
Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；かつ
Ｒ７は、水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシから選択される。
【0029】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５及びＲ６はメチルであり；かつＲ７は、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【0030】
より特定の実施形態において、本発明の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択され；Ｒ５及びＲ６はメチルであり；かつＲ７は、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【0031】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、化学式（Ｉ）のコンパウンドであり、化合物であり、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシ及びメトキシから選択され；Ｒ５及びＲ６はメチルであり；かつＲ７は水素である。
【0032】
本発明の特定の実施形態において、前記化合物は以下のものである：
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール：
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール：
化合物４：５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール：
化合物５：
４－（７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール：
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール：
【化4】
【化5】
【化6】
４－（７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール：
【化7】
【0033】
さらなる特定の実施形態では、本発明の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２は、独立して、水素原子及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は水素であり；かつＲ７は水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【0034】
なおさらなる特定の実施形態では、本発明の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２は、独立して、水素原子及び塩素原子から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は水素であり；かつＲ７はメチルアミノ基である。
【0035】
上記実施形態に係る本発明の特定の化合物は：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド：
【化8】
【0036】
一般に、化合物１は１－フェニル－テトラリン誘導体であり、これは、１－アリールテトラリンリグナン類の一員である。化合物２は別の１－フェニル－テトラリン誘導体であり、これはまた、１－アリールテトラリンリグナンのクラスのメンバーでもある。化合物３は塩酸セルトラリンとして知られ、選択的セロトニン再取り込み阻害性（ＳＳＲＩ）抗うつ薬である。これらの３つの特定の化合物は、化学式（Ｉ）の立体異性体１－フェニル－テトラリン誘導体である。
【0037】
本発明は、１つの態様において、植物、植物器官、植物部分、又は植物繁殖材料への植物病原体の侵襲又はその事例を防除するため、予防するため、低減するため、又は根絶するための方法であって、植物、植物器官、又は植物繁殖材料、又は前記植物の周囲の土壌に、農薬有効量の化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩の少なくとも１つの化合物を有効農薬成分として適用することを含み、
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱の子嚢菌又はＢｏｔｒｙｔｉｓ及びＦｕｓａｒｉｕｍから選択される属；及び、Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻から選択される、方法を提供する。
前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱の子嚢菌又はＢｏｔｒｙｔｉｓ及びＦｕｓａｒｉｕｍから選択される属；及び、Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻から選択される、方法を提供する。
【0038】
別の態様において、本発明は、植物、植物器官、植物部分、又は植物繁殖材料への植物病原体の侵襲の事例を防除、予防、低減、又は根絶するための方法であって、植物、植物部分、植物器官若しくは植物繁殖材料、又は前記植物の周囲の土壌に、農薬有効量の化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を適用することを含み、前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｏｏｍｙｃｏｔａ綱の不等毛藻；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウムから選択される、方法を提供する。
【0039】
さらなる態様において、本発明は、植物、植物器官、植物部分、又は植物繁殖材料への植物病原体の侵襲の事例を防除、予防、低減、又は根絶するための方法であって、植物、植物部分、植物器官、又は植物繁殖材料、又は前記植物の周囲の土壌に、農薬有効量の化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を適用することを含み、前記植物病原体が、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱又はＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属の担子菌；Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ科の不等毛藻；及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｌｅｓ目のプロトバクテリウムから選択される、方法を提供する。
【0040】
本明細書に開示される実施形態のいずれかによる本発明の処理方法は、例えば、以下の病害に対して有用である：トウモロコシのさび病；オーツ麦及びライグラスの冠さび病；コムギ及びケンタッキーブルーグラスの茎さび病、又は穀物の黒さび病；デイリリー（ｄａｙｌｉｌｙ）さび病；穀類の「小麦さび病」：褐さび病又は赤さび病；穀物の「黄さび病」；サトウキビの「褐さび病」又は「オレンジさび病」；オオムギの葉茎さび病；ジャガイモの胴枯れ病；カカオのＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖｏｒａ；トマト及びカボチャにおける果実腐れかいよう病（ｃａｎｋｅｒ ｆｒｕｉｔ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ）；Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ属種のナシ状果（ｐｏｍｅ）及び核果（ｓｔｏｎｅ ｆｒｕｉｔ）における冠腐れ及び頸領腐れ病（ｃｒｏｗｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｒ ｒｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ）；Ｐｙｔｈｉｕｍ属種によって引き起こされる、タバコ、トマト、キュウリ、マスタード、トウガラシ及びクレソン実生の「立ち枯れ（ｄａｍｐｉｎｇ ｏｆｆ）」病；食用・ワイン用ブドウ、イチゴ及び野菜の灰色かび病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）；Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種が引き起こす野菜やバナナの萎凋病や「腐れ（ｒｏｔ）」；Ｆｕｓａｒｉｕｍ属種が引き起こすトウモロコシの頭枯れや穂枯れ（ｅａｒ ｒｏｔ）、小穀物の赤かび病（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ ｈｅａｄ ｂｌｉｇｈｔ）；Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属種が引き起こす野菜のブラウンパッチ、苗立枯病、根腐れと腹腐れ、イネの紋枯れ病など；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属種が引き起こす葉や果実に斑点、腐れ、胴枯れ病。
【0041】
特定の実施形態では、植物病原体は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｓｉｄｉａｌｅｓ、Ｐａｃｈｎｏｃｙｂａｌｅｓ、Ｐｌａｔｙｇｌｏｅａｌｅｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ及びＳｅｐｔｏｂａｓｉｄｉａｌｅｓから選択される目のＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである。特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ目のメンバーである。
【0042】
いくつかの実施形態において、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ植物病原体は、Ｃｈａｃｏｎｉａｃｅａｅ、Ｃｏｌｅｏｓｐｏｒｉａｃｅａｅ、Ｃｒｏｎａｒｔｉａｃｅａｅ、Ｍｅｌａｍｐｓｏｒａｃｅａｅ、Ｍｉｋｒｏｎｅｇｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａｃｅａｅ、Ｐｈｒａｇｍｉｄｉａｃｅａｅ、Ｐｉｌｅｏｌａｒｉａｃｅａｅ、Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ、Ｐｕｃｃｉｎｉｏｓｉｒａｃｅａｅ、Ｐｕｃｃｉｎｉａｓｔｒａｃｅａｅ、Ｒａｖｅｎｅｌｉａｃｅａｅ、Ｓｐｈａｅｒｏｐｈｒａｇｍｉａｃｅａｅ、Ｕｎｃｏｌａｃｅａｅ、Ｕｒｏｐｙｘｉｄａｃｅａｅ、ｍｉｔｏｓｐｏｒｉｃ Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ及びＰｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ ｉｎｃｅｒｔａｅ ｓｅｄｉｓ．から選択される科のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｕｃｃｉｎｉａｌｅｓ植物病原体は、Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ科のメンバーである。
【0043】
他の実施形態では、Ｐｕｃｃｉｎｉａｃｅａｅ植物病原体は、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｃｏｒｏｎａｔｅ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｄｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｈｅｍｅｒｏｃａｌｌｉｄｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｓ ｓｕｂｓｐ． Ｔｒｉｔｉｃｉｎａ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃｅｐｈａｌａ、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｋｕｅｈｎｉｉ及びＨｅｍｉｌｅｉａ ｖａｓｔａｔｒｉｘなどのＰｕｃｃｉｎｉａ属のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｕｃｃｉｎｉａ植物病原体は、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａから選択される。
【0044】
さらなる態様において、本発明の方法は化合物３、１若しくは２のいずれか１つ、又はそれらの任意の組み合わせを上記のように適用することにより、上記のＰｕｃｃｉｎｉｏｍｙｃｅｔｅｓ植物病原体、特にＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａのいずれか１つを防除、予防、低減又は根絶するのに有用である。
【0045】
いくつかの実施形態において、植物病原体は、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属（Ｃａｎｔｈａｒｅｌｌａｌｅｓ目のＣｅｒａｔｏｂａｓｉｄｉａｃｅａｅ科に属する）のメンバー、例えば、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｂａｔａｔｉｃｏｌａ、Ｆｉｂｕｌｏｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃａｒｏｔａｅとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃａｒｏｔａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ、Ｔｈａｎａｔｏｐｈｙｔｕｍ ｃｒｏｃｏｒｕｍとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｒｏｃｏｒｕｍ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｆｒａｇａｒｉａｅ、Ｃｅｒａｔｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｃｏｒｎｉｇｅｒｕｍとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｇｏｏｄｙｅｒａｅ－ｒｅｐｅｎｔｉｓ、Ｗａｉｔｅａ ｃｉｒｃｉｎａｔｅとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｏｒｙｚａｅ、及びＣｅｒａｔｏｒｈｉｚａ ｒａｍｉｃｏｌａとしても知られるＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒａｍｉｃｏｌａが挙げられる。特定の実施形態において、植物病原体は、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉである。
【0046】
さらなる実施形態では、本発明の方法が化合物３、１若しくは２のいずれか１つ、又はそれらの任意の組合せを上記のように適用することによって、上記のＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ植物病原体、特にＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａのいずれか１つを防除、予防、低減又は根絶するのに有用である。
【0047】
さらにさらなる態様において、植物病原体は、Ｃａｐｎｏｄｉａｌｅｓ、Ｄｏｔｈｉｄｅａｌｅｓ、Ｍｙｒｉａｎｇｉａｌｅｓ、Ｈｙｓｔｅｒｉａｌｅｓ、Ｊａｈｎｕｌａｌｅｓ、Ｍｙｔｉｌｉｎｉｄｉａｌｅｓ、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ、Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ、Ｍｉｃｒｏｔｈｙｒｉａｌｅｓ、Ｐａｔｅｌｌａｒｉａｌｅｓ及びＴｒｙｐｅｔｈｅｌｉａｌｅｓから選択される目のＤｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである。特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ目のメンバーである。
【0048】
他の実施態様において、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体は、Ａｉｇｉａｌａｃｅａｅ、Ａｍｎｉｃｕｌｉｃｏｌａｃｅａｅ、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｒｉａｃｅａｅ、Ｄｅｌｉｔｓｃｈｉａｃｅａｅ、Ｄｉａｄｅｍａｃｅａｅ、Ｄｉｄｙｍｅｌｌａｃｅａｅ、Ｄｉｄｙｍｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ、Ｈａｌｏｊｕｌｅｌｌａｃｅａｅ、Ｌｅｎｔｉｔｈｅｃｉａｃｅａｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ、Ｌｉｎｄｇｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ、Ｌｏｐｈｉｏｓｔｏｍａｔａｃｅａｅ、Ｍａｓｓａｒｉａｃｅａｅ、Ｍａｓｓａｒｉｎａｃｅａｅ、Ｍｅｌａｎｏｍｍａｔａｃｅａｅ、Ｍｏｎｔａｇｎｕｌａｃｅａｅ、Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐｈａｅｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ、Ｐｌｅｏｍａｓｓａｒｉａｃｅａｅ、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｓｐｏｒｏｒｍｉａｃｅａｅ、Ｖｅｎｔｕｒｉａｃｅａｅ、Ｔｅｉｃｈｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｔｅｔｒａｐｌｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ、Ｔｅｓｔｕｄｉｎａｃｅａｅ、Ｔｒｅｍａｔｏｓｐｈａｅｒｉａｃｅａｅ及びＺｏｐｆｉａｃｅａｅから選択される科のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体は、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ科のメンバーである。
【0049】
いくつかの実施形態において、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ、Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ、Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ、Ｃｒｉｖｅｌｌｉａ、Ｄｅｃｏｒｏｓｐｏｒａ、Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ、Ｆａｌｃｉｆｏｒｍｉｓｐｏｒａ、Ｋｒｉｅｇｅｒｉｅｌｌａ、Ｌｅｗｉａ、Ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ、Ｍｏｎａｓｃｏｓｔｒｏｍａ、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ、Ｐｌａｔｙｓｐｏｒｏｉｄｅｓ、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａ、Ｐｓｅｕｄｏｙｕｃｏｎｉａ、Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ、Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａ及びＺｅｕｃｔｏｍｏｒｐｈａから選択される属のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｌｅｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ属のメンバーである。
【0050】
さらに他の実施態様において、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ植物病原体は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｎｔｈｅｒａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｒｂｕｓｔｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｌｕｍｅａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｕｒｎｓｉｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃａｒｏｔｉｉｎｃｕｌｔａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃａｒｔｈａｍｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃｅｌｏｓｉａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃｉｎｅｒａｒｉａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃｉｔｒｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃｏｎｊｕｎｃｔａ、種々のウリ科植物で生育するＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｃｕｃｕｍｅｒｉｎａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｄａｕｃｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｄｉａｎｔｈｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｄｉａｎｔｈｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｅｉｃｈｈｏｒｎｉａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｅｕｐｈｏｒｂｉｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｇａｉｓｅｎ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｈｅｌｉａｎｔｈｉｎ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｈｅｌｉａｎｔｈｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｈｕｎｇａｒｉｃａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｉｎｆｅｃｔｏｒｉａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｉｍｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｉｎｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｍａｌｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｍｏｌｅｓｔａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐａｎａｘ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｅｒｐｕｎｃｔｕｌａｔａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｏｒｒｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｑｕｅｒｃｉｃｏｌａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｒａｄｉｃｉｎａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｒａｐｈａｎｉｎ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａｅ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｅｌｉｎｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｅｎｅｃｉｏｎｉｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｍｙｒｎｉｉ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｖｅｎｔｒｉｃｏｓａ及びＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｚｉｎｎｉａから選択される。さらなる特定の実施形態では、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ植物病原体は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ及びＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉから選択される。
【0051】
他の実施形態では、本発明の方法は、上記のように適用することによって、上記のＤｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ植物病原体のいずれか１つを防除、予防、低減又は根絶するために有用であり、特に上記のように化合物３を適用することによりＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａを；上記のように化合物３、１若しくは２のいずれか１つ、又はそれらの任意の組合せを適用することによりＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉを防除、予防、低減又は根絶するのに有用である。
【0052】
さらに他の実施形態では、植物病原体は、Ｃｙｔｔａｒｉａｌｅｓ、Ｅｒｙｓｉｐｈａｌｅｓ、Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ、Ｌｅｏｔｉａｌｅｓ及びＲｈｙｔｉｓｍａｔａｌｅｓ、Ｔｈｅｌｅｂｏｌａｌｅｓから選択される目のＬｅｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである。
【0053】
さらなる実施形態では、植物病原体は、Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ目のメンバーである。さらにさらなる実施態様では、Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ植物病原体は、Ａｓｃｏｃｏｒｔｉｃｉａｃｅａｅ、Ｄｅｒｍａｔｅａｃｅａｅ、Ｈｅｌｏｔｉａｃｅａｅ、Ｈｅｍｉｐｈａｃｉｄｉａｃｅａｅ、Ｈｙａｌｏｓｃｙｐｈａｃｅａｅ、Ｌｏｒａｍｙｃｅｔａｃｅａｅ、Ｐｈａｃｉｄｉａｃｅａｅ、Ｒｕｔｓｔｒｏｅｍｉａｃｅａｅ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎａｃｅａｅ及びＶｉｂｒｉｓｓｅａｃｅａｅから選択される科のメンバーである。特定の実施形態では、Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ植物病原体は、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｃｅａｅ科のメンバーである。他の特定の実施形態では、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｃｅａｅ植物病原体は、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ属のメンバーである。
【0054】
ある実施態様では、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ植物病原体は、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｃｌａｄａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｌｌｉｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｌｌｉｉ－ｆｉｓｔｕｌｏｓｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｍｐｅｌｏｐｈｉｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｎａｃａｒｄｉｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｎｔｈｏｐｈｉｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｒｇｉｌｌａｃｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｒｉｓａｅｍａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｒｔｏｃａｒｐｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｂｉｆｕｒｃａｔａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｂｒｙｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃａｐｓｕｌａｒｕｍ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃａｒｎｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃａｒｏｌｉｎｉａｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃａｒｔｈａｍｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａｅｃｏｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｃｏｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｔｒｉｃｏｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｔｒｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｒｏｃｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｄｅｎｓａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｄｉｏｓｐｙｒｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｅｌｌｉｐｔｉｃａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｆａｂａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｆａｂｉｏｐｓｉｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｇａｌａｎｔｈｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｇｌａｄｉｏｌｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｇｏｓｓｙｐｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｈｏｒｍｉｎｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｈｙａｃｉｎｔｈｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｉｓａｂｅｌｌｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｌａｔｅｂｒｉｃｏｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｌｉｌｉｏｒｕｍ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｌｉｍａｃｉｄａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｌｕｔｅｏｂｒｕｎｎｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｌｕｔｅｓｃｅｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｍａｌｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｍｏｎｉｌｉｏｉｄｅｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｎｅｃａｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐａｅｏｎｉａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒｏｉｄｅｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｉｓｔｉａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｒｕｉｎｏｓａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｓｅｕｄｏｃｉｎｅｒｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｐｙｒａｍｉｄａｌｉｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｒｉｖｏｌｔａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｒｏｓｅａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｒｕｂｅｓｃｅｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｒｕｄｉｃｕｌｏｉｄｅｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｅｋｉｍｏｔｏｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｅｐｔｏｓｐｏｒａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｅｔｕｌｉｇｅｒａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｉｎｏａｌｌｉｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｏｎｃｈｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｌｅｎｄｉｄａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｑｕａｍｏｓａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｔａｘｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｔｒｉｆｏｌｉｉ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｔｕｌｉｐａｅ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖｉｃｉａｅ－ｈｉｒｓｕｔａｅ及びＢｏｔｒｙｔｉｓ ｙｕａｅから選択される。いくつかの実施形態では、植物病原体は、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａである。
【0055】
他の実施形態では、植物病原体は、Ｃｏｒｏｎｏｐｈｏｒａｌｅｓ、Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａｌｅｓ、Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ、Ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ、Ｍｉｃｒｏａｓｃａｌｅｓ、Ｂｏｌｉｎｉａｌｅｓ、Ｃａｌｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ、Ｃｈａｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓ、Ｃｏｎｉｏｃｈａｅｔａｌｅｓ、Ｄｉａｐｏｒｔｈａｌｅｓ、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈａｌｅｓ、Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａｔａｌｅｓ、Ｓｏｒｄａｒｉａｌｅｓ、Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ、Ｋｏｒａｌｉｏｎａｓｔｅｔａｌｅｓ、Ｌｕｌｗｏｒｔｈｉａｌｅｓ、Ｍｅｌｉｏｌａｌｅｓ、Ｐｈｙｌｌａｃｈｏｒａｌｅｓ及びＴｒｉｃｈｏｓｐｈａｅｒｉａｌｅｓから選択される目のＳｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ綱のメンバーである。
【0056】
さらに他の実施形態では、植物病原体は、Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ目のメンバーである。特定の実施形態では、Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ植物病原体は、Ｂｉｏｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ、Ｃｏｒｄｙｃｉｐｉｔａｃｅａｅ、Ｃｌａｖｉｃｉｐｉｔａｃｅａｅ、Ｈｙｐｏｃｒｅａｃｅａｅ、Ｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ、Ｎｉｅｓｓｌｉａｃｅａｅ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｉｐｉｔａｃｅａｅ及びＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙａｃｅａｅから選択される科のメンバーである。特定の実施形態では、Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ植物病原体は、Ｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ科のメンバーである。
【0057】
さらなる実施形態では、Ｎｅｃｔｒｉａｃｅａｅ植物病原体は、Ｆｕｓａｒｉｕｍ属のメンバーである。ある実施形態では、Ｆｕｓａｒｉｕｍ植物病原体は、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｃａｃｉａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｃａｃｉａｅ－ｍｅａｒｎｓｉｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｃｕｔａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｄｅｒｈｏｌｄｉｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｃｒｅｍｏｎｉｏｐｓｉｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｆｆｉｎｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｒｔｈｒｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｖｅｎａｃｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｂｕｂｉｇｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｉｒｃｉｎａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｒｏｏｋｗｅｌｌｅｎｓｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｉｎｃａｒｎａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｎｇｓｅｔｈｉａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｅｒｉｓｍｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐａｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｏａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｅｄｏｌｅｎｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓａｃｃｈａｒｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｔｅｒｉｌｉｈｙｐｈｏｓｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｂｇｌｕｔｉｎａｎｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｎｅｎａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ及びＦｕｓａｒｉｕｍ ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅから選択される。いくつかの実施形態では、植物病原体は、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ種である。
【0058】
さらにさらなる実施形態では、植物病原体は、Ｌａｇｅｎｉｄｉａｌｅｓ、Ｌｅｐｔｏｍｉｔａｌｅｓ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ、Ｒｈｉｐｉｄｉａｌｅｓ及びＳａｐｒｏｌｅｇｎｉａｌｅｓから選択される目のＯｏｍｙｃｏｔａ綱のメンバーである。特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ目のＯｏｍｙｃｏｔａ綱のメンバーである。
【0059】
いくつかの実施形態では、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｌｅｓ植物病原体は、Ｌａｇｅｎｉｄｉａｃｅａｅ、Ｏｌｐｉｄｉｏｓｉｄａｃｅａｅ、Ｓｉｒｏｌｐｉｄｉａｃｅａｅ、Ｌｅｐｔｏｍｉｔａｃｅａｅ、Ａｌｂｕｇｉｎａｃｅａｅ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ、Ｒｈｉｐｉｄａｃｅａｅ、Ｅｃｔｒｏｇｅｌｌａｃｅａｅ、Ｈａｌｉｐｈｔｈｏｒａｃｅａｅ、Ｌｅｐｔｏｌｅｇｎｉｅｌｌａｃｅａｅ及びＳａｐｒｏｌｅｇｎｉａｃｅａｅから選択される科のメンバーである。特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ又はＰｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである。
【0060】
ある実施形態では、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体は、Ｂａｏｂａｂｏｐｓｉｓ、Ｂａｓｉｄｉｏｐｈｏｒａ、Ｂｅｎｕａ、Ｂｒｅｍｉａ、Ｃａｌｙｃｏｆｅｒａ、Ｅｒａｐｈｔｈｏｒａ、Ｇｒａｍｉｎｉｖｏｒａ、Ｈｙａｌｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｎｏｔｈｏｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｎｏｖｏｔｅｌｎｏｖａ、Ｐａｒａｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｒｏｆａｓｃｉａ、Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ、Ｐｌａｓｍｏｖｅｒｎａ、Ｐｒｏｔｏｂｒｅｍｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ、Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ， Ｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ及びＶｉｅｎｎｏｔｉａから選択される属のメンバーである。
【0061】
ある実施形態では、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ属のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ植物病原体は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｃｅｒｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｇａｔｈｉｄｉｃｉｄａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｌｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ａｌｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｌｔｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｍａｒａｎｔｈｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｍｎｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｍｎｉｃｏｌａ × ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｎｄｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｑｕｉｍｏｒｂｉｄａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｒｅｃａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｒｅｎａｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ａｒｅｎａｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ａｒｅｎａｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｓｉａｔｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｓｐａｒａｇｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ａｓｐａｒａｇｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｔｔｅｎｕａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｕｓｔｒｏｃｅｄｒａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂａｌｙａｎｂｏｏｄｊａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂａｔｅｍａｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｉｌｏｒｂａｎｇ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｉｓｈｅｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｉｓｈｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｏｅｈｍｅｒｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｏｏｄｊｅｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｏｒｅａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｏｔｒｙｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｂｏｔｒｙｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｂｏｔｒｙｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｒｕｍ ｖａｒ． ａｐｐｌａｎａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｒｕｍ × ｈｅｄｒａｉａｎｄｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｊａｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｍｂｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｃａｐｓｉｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｔｉｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｓｔａｎｅａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｓｔａｎｅｔｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｃｈｏｒｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｃｉｃｈｏｒｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｍｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｍｉ ｖａｒ． ｃｉｎｎａｍｏｍｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｍｉ ｖａｒ． ｐａｒｖｉｓｐｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｎｎａｍｏｍｉ ｖａｒ． ｒｏｂｉｎｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｔｒｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｃｉｔｒｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｖａｒ． ｃｌｅｍｅｎｔｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｌａｎｄｅｓｔｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｃｏｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｌｏｃａｓｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｎｄｉｌｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｎｓｔｒｉｃｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｏｏｌｊａｒｌｏｏ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｒａｓｓａｍｕｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｒｙｐｔｏｇｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｃｒｙｐｔｏｇｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｕｙａｂｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｙｐｅｒｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｄａｕｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｄａｕｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ ｖａｒ． ｃａｊａｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｅｌｏｎｇａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｅｌｏｎｇａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｅｒｙｔｈｒｏｓｅｐｔｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｅｒｙｔｈｒｏｓｅｐｔｉｃａ ｖａｒ． ｐｉｓｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｅｒｙｔｈｒｏｓｅｐｔｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｅｓｔｕａｒｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｅｕｒｏｐａｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆａｌｌａｘ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｌｅｘｕｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｌｕｖｉａｌｉｓ × ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｏｌｉｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｏｒｍｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｏｒｍｏｓａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｒａｇａｒｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｒａｇａｒｉａｅｆｏｌｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｆｒｉｇｉｄａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇａｌｌｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｅｍｉｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｉｂｂｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｌｏｖｅｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｏｎａｐｏｄｙｉｄｅｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｏｎｄｗａｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｇｒｅｇａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｇｒｅｇａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｅｄｒａｉａｎｄｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｈｅｄｒａｉａｎｄｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｈｅｔｅｒｏｈｙｂｒｉｄａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｅｖｅａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｉｂｅｒｎａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｉｍａｌａｙｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｉｍａｌｓｉｌｖａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｈｉｍａｌｓｉｌｖａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｈｕｍｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｙｄｒｏｇｅｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｄａｅｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｌｉｃｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｉｎｃｒａｓｓａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｓｏｌｉｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｉｎｓｏｌｉｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｔｅｒｃａｌａｒｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｔｒｉｃａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｕｎｄａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｐｏｍｏｅａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｒａｎｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｒｒｉｇａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｋａｔｓｕｒａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｋｅｌｍａｎｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｋｅｒｎｏｖｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｋｗｏｎｇｏｎｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌａｃｔｕｃａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌａｃｕｓｔｒｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌａｃｕｓｔｒｉｓ × ｒｉｐａｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌａｔｅｒａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌｉｌｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌｉｔｃｈｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌｉｔｏｒａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｌｉｔｏｒａｌｉｓ × ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｉｌｅｎｔｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｒｏｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅａｄｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｍｅａｄｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ × ｃｒｙｐｔｏｇｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｇａｋａｒｙａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｇａｓｐｅｒｍａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｌｏｎｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｎｇｅｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｉｓｓｉｓｓｉｐｐｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｏｒｉｎｄａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｏｙｏｏｔｊ × ｆｌｕｖｉａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｏｙｏｏｔｊ × ｌｉｔｏｒａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｏｙｏｏｔｊ × ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｕｌｔｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎａｇａｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｅｍｏｒｏｓａ ［１１］、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ ｖａｒ． ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ × ｃａｃｔｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｅｄｅｒｈａｕｓｅｒｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｎｉｅｄｅｒｈａｕｓｅｒｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｏｂｓｃｕｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｏｃｃｕｌｔａｎｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｏｌｅａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｏｒｎａｍｅｎｔａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｃｈｙｐｌｅｕｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖｏｒａ ｖａｒ． ｐａｌｍｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ｖａｒ． ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ｖａｒ． ｐｉｐｅｒｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒｓｉａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｐａｒｓｉａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒｖｉｓｐｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｐｅｌｇｒａｎｄｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｈａｓｅｏｌｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｉｎｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｉｎｉｆｏｌｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｉｓｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｉｓｔａｃｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｌｕｒｉｖｏｒａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｏｌｏｎｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｏｒｒｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｒｉｍｕｌａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｐｒｉｍｕｌａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｅｕｄｏｃｒｙｐｔｏｇｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｅｕｄｏｌａｃｔｕｃａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｅｕｄｏｒｏｓａｃｅａｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｅｕｄｏｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｑｕｅｒｃｅｔｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｑｕｅｒｃｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｑｕｉｎｉｎｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｍｏｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒｈｉｚｏｐｈｏｒａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒｉｃｈａｒｄｉａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒｉｐａｒｉａ、Ｐｈｙｔｏｐｈ
ｔｈｏｒａ ｒｏｓａｃｅａｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｒｏｓａｃｅａｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒｕｂｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓａｎｓｏｍｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓａｎｓｏｍｅａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｓａｎｓｏｍｅａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｓｅｒｅｎｄｉｐｉｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｉｓｋｉｙｏｕｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｔｒｉｃｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｕｌａｗｅｓｉｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔａｂａｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｅｎｔａｃｕｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｅｒｍｉｎａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ × ａｍｎｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ × ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｕｂｕｌｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｙｒｒｈｅｎｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｌｉｇｉｎｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｎｄｕｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｇｎａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｇｎａｅ ｆ． ｓｐ． ａｄｚｕｋｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ及びＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｕｌｃａｎｉｃａから選択される。他の特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ種である。
ｔｈｏｒａ ｒｏｓａｃｅａｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｒｏｓａｃｅａｒｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒｕｂｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓａｎｓｏｍｅａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓａｎｓｏｍｅａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｆｆ． ｓａｎｓｏｍｅａｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ × ｓｅｒｅｎｄｉｐｉｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｉｓｋｉｙｏｕｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｔｒｉｃｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｕｌａｗｅｓｉｅｎｓｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔａｂａｃｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｅｎｔａｃｕｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｅｒｍｉｎａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ × ａｍｎｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ × ｍｏｙｏｏｔｊ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｆ． ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｕｂｕｌｉｎａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｙｒｒｈｅｎｉｃａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｌｉｇｉｎｏｓａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｎｄｕｌａｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｕｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｇｎａｅ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｇｎａｅ ｆ． ｓｐ． ａｄｚｕｋｉｃｏｌａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ及びＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｖｕｌｃａｎｉｃａから選択される。他の特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ種である。
【0062】
さらに他の実施形態では、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ植物病原体は、Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ科のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ植物病原体は、Ｃｙｓｔｏｓｉｐｈｏｎ、Ｄｉａｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ、Ｇｌｏｂｉｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ、Ｌａｇｅｎｉｄｉｕｍ、Ｍｙｚｏｃｙｔｉｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｐｙｔｈｉｕｍ及びＴｒａｃｈｙｓｐｈａｅｒａから選択される属のメンバーである。
【0063】
さらなる実施形態では、Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ植物病原体はＰｙｔｈｉｕｍ属のメンバーである。特定の実施形態では、Ｐｙｔｈｉｕｍ植物病原体は、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｃａｎｔｈｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｃａｎｔｈｏｐｈｏｒｏｎ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｃｒｏｇｙｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｄｈａｅｒｅｎｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｍａｓｃｕｌｉｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｎａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｎｇｕｓｔａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｌｅｒｏｔｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｑｕａｔｉｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｒｉｓｔｏｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｒｒｈｅｎｏｍａｎｅｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｔｔｒａｎｔｈｅｒｉｄｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｂｉｆｕｒｃａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｂｏｒｅａｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｂｕｉｓｍａｎｉａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｂｕｔｌｅｒｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｍｕｒａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｍｐａｎｕｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｎａｒｉｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｐｉｌｌｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｒｂｏｎｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｒｏｌｉｎｉａｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｈａｍａｅｈｙｐｈｏｎ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｈｏｎｄｒｉｃｏｌａ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｉｔｒｉｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｏｌｏｒａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｏｎｉｄｉｏｐｈｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｏｎｔｉｇｕａｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｒｙｐｔｏｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｙｌｉｎｄｒｏｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｃｙｓｔｏｇｅｎｅｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｌｉｃｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｓｔｒｕｅｎｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｉｃｌｉｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｉｍｏｒｐｈｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｉｓｓｉｍｉｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｉｓｓｏｔｏｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｅｃｈｉｎｕｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｅｍｉｎｅｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｅｒｉｎａｃｅｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｆｌｅｖｏｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｆｏｌｌｉｃｕｌｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｌｏｍｅｒａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｎｄｉｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｕｉｙａｎｇｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｅｌｉｃａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｅｌｉｃｏｉｄｅｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｅｔｅｒｏｔｈａｌｌｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｙｄｎｏｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｈｙｐｏｇｙｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｎｆｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｗａｙａｍａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｊａｓｍｏｎｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｌｉｔｏｒａｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｌｏｎｇａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｌｏｎｇｉｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｌｕｔａｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍａｃｒｏｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍａｍｉｌｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍａｒｉｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍａｒｓｕｐｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍａｓｔｏｐｈｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｅｇａｃａｒｐｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｉｄｄｌｅｔｏｎｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｉｎｕｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｏｎｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｏｎｔａｎｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｕｌｔｉｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｍｙｒｉｏｔｙｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｎａｇａｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｎｕｎｎ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｅｄｏｃｈｉｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｋａｎｏｇａｎｅｎｓｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｌｉｇａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｏｐａｐｉｌｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｒｎａｃａｒｐｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｒｔｈｏｇｏｎｏｎ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｏｓｔｒａｃｏｄｅｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｃｈｙｃａｕｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｃｈｙｃａｕｌｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｄｄｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｒｏｅｃａｎｄｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｅｃｔｉｎｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｅｒｉｉｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｅｒｉｐｌｏｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｅｒｎｉｃｉｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｅｒｐｌｅｘｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｈｒａｇｍｉｔｉｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｌｅｒｏｔｉｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｌｕｒｉｓｐｏｒｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｏｌａｒｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｏｌｙｍａｓｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｏｒｐｈｙｒａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｒｏｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｕｌｃｈｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｐｙｒｉｌｏｂｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｑｕｅｒｃｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒａｄｉｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒａｍｉｆｉｃａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒｅｇｕｌａｒｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒｈｉｚｏ－ｏｒｙｚａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒｏｓｔｒａｔｉｆｉｎｇｅｎｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｒｏｓｔｒａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓａｌｐｉｎｇｏｐｈｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｃｌｅｒｏｔｅｉｃｈｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｅｇｎｉｔｉｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｅｃｕｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｉｎｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｔｅｒｉｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｔｉｐｉｔａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｕｌｃａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｓｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ ｖａｒ． ｕｌｔｉｍｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｎｃｉｎｕｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｎｄｕｌａｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖａｎｔｅｒｐｏｏｌｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖｉｎｉｆｅｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖｉｏｌａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｖｏｌｕｔｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ及びＰｙｔｈｉｕｍ ｚｉｎｇｉｂｅｒｕｍから選択される。他の特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ種である。
【0064】
本発明の他の実施形態では、本発明の方法は、上記の卵菌（Ｏｏｍｙｃｏｔａ）植物病原菌のいずれか１つに適用することにより上記の卵菌植物病原体を防除、予防、低減又は根絶するために有用であり、特に上記の化合物３を適用することによりＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓを、上記の化合物３若しくは１、又はそれらの組み合わせのいずれか１つを適用することによりＰｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍを、防除、予防、低減又は根絶するために有用である。
【0065】
さらなる実施形態では、植物病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅなどのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属のメンバーである。特定の実施形態では、植物病原体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ種である。なおさらなる実施形態において、本発明の方法は、上記化合物１若しくは２、又はそれらの組み合わせを上記のように適用することによって、上記のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ病原体のいずれか１つ、特にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅを防除、予防、低減又は根絶するのに有用である。
【0066】
別の局面において、本発明は農薬有効量の少なくとも１つの化学式（Ｉ）の化合物若しくはその立体異性体、又はそれらの農業上許容される塩を含む農薬組成物を提供し、
式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基、並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素、メチル及びエチルから選択され；Ｒ７はは、水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシから選択される。
【化9】
【0067】
さらなる実施形態では、本発明は化学式（Ｉ）の化合物を含有する農薬組成物を提供し、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、メチル基、ヒドロキシ基及びメトキシ基、並びにハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され、Ｒ５及びＲ６は、メチルであり、かつＲ７は、水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【0068】
さらに別の実施形態では、本発明は化学式（Ｉ）の化合物を含有する農薬組成物を提供し、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択され、Ｒ５及びＲ６はメチルであり、かつＲ７は水素、メチル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ヒドロキシ基及びメトキシ基から選択される。
【0069】
特定の実施形態において、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物を含有する農薬組成物を提供し、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、独立して、水素、ヒドロキシ及びメトキシから選択され、Ｒ５及びＲ６はメチルであり、かつ、Ｒ７は水素である。
【0070】
特定の実施形態では、本発明の農薬組成物は、以下を含む：
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール：
又は、
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール：
化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール：
【化10】
化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール：
【化11】
【0071】
別の実施形態では、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物を含有する農薬組成物を提供し、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２は、独立して水素原子及びハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は水素であり；並びにＲ７は水素、メチル、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ヒドロキシ及びメトキシ基から選択される。
【0072】
特定の実施形態では、本発明は、化学式（Ｉ）の化合物を含有する農薬組成物を提供し、式中、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２は、独立して、水素及び塩素原子から選択され；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は水素であり；Ｒ７はメチルアミノ基である。
【0073】
別の具体的な実施形態では、本発明の農薬組成物は、以下を含有する：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド：
化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド：
【化12】
【0074】
特定の実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれか１つの農薬組成物又は製剤は、農業上適切な又は許容可能な溶媒又は可溶化剤をさらに含む。他の特定の実施形態では、農業上許容される溶媒又は可溶化剤が１－フェニル－テトラリン化合物を溶解又は可溶化することができる水混和性溶媒である。
【0075】
いくつかの実施形態では、１－フェニル－テトラリン化合物を溶解又は可溶化することができる水混和性溶媒は、アルコール、ケトン、ラクトン、ケトアルコール、グリコール、グリコエーテル、アミド、アルカノールアミン、スルホキシド及びピロリドンなどの極性溶媒である。特定の実施形態では、上記実施形態のいずれか１つの組成物は、ジメチルスルホキシド又はエタノールから選択される溶媒を含む。特定の実施形態では、組成物は、ポリソルベート２０などのポリソルベート型非イオン性界面活性剤をさらに含む。
【0076】
本発明の農薬組成物は、農薬活性成分の適用を容易にするために製剤に製剤化することができる。製剤は、懸濁剤濃縮物（ＳＣ）、カプセル懸濁剤（ＣＳ）、水分散性顆粒剤（ＷＧ）、乳化性濃縮物（ＥＣ）、水和剤（ｗｅｔｔａｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）（ＷＰ）、可溶性（液体）濃縮物（ＳＬ）又は水溶剤（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）（ＳＰ）であり得る。
【0077】
本発明の組成物又は製剤は、少なくとも１つのアジュバント、担体、希釈剤、及び／又は界面活性剤をさらに含み得る。アクチベーターアジュバント、例えば、陽イオン性、陰イオン性又は非イオン性界面活性剤；農薬製品の活性を改善できる油及び窒素ベースの肥料である。油は、イネ科植物を防除するために使用される、パラフィン又はナフサベースの石油、乳化可能な石油ベースの油に基づく作物油濃縮物、及び種子油（通常は綿実油、亜麻仁油、大豆油、又はヒマワリ油）から得られる植物油濃縮物であり得る。窒素ベースの肥料は、硫酸アンモニウム又は尿素－硝酸アンモニウムであり得る。
【0078】
本実施形態の組成物においてチキソトロピー剤としても使用される多糖アジュバントの非限定的な例は、キサンタンガム（ＣＰ Ｋｅｌｃｏにより商標ＫＥＬＺＡＮ（登録商標）で市販されている）が挙げられ、これは、発酵プロセスを使用して単糖から製造され、使用されるバクテリア種Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓにその名称が由来する。アジュバントとして使用される油は、パラフィン又はナフサベースの石油、乳化可能な石油ベースの油に基づく作物油濃縮物、及び種子油（通常は綿実油、亜麻仁油、大豆油、又はヒマワリ油）から得られる植物油濃縮物であり得る。窒素ベースの肥料は、硫酸アンモニウム又は尿素－硝酸アンモニウムであり得る。
【0079】
可溶化剤又は溶媒の非限定的な例は、石油系溶媒、前述の油、脂肪酸の液体混合物、エタノール、グリセロール及びジメチルスルホキシドが挙げられる。農業上許容される溶媒又は可溶化剤は、１－フェニル－テトラリン化合物を溶解又は可溶化することができる水混和性溶媒、例えば、極性溶媒、例えば、アルコール、ケトン、ラクトン、ケトアルコール、グリコール、グリコエーテル、アミド、アルカノールアミン、スルホキシド及びピロリドンであり得る。担体の非限定的な例は、沈降シリカ、コロイダルシリカ、アタパルジャイト、チャイナクレー、タルク、カオリン及びそれらの組合せである。
【0080】
本発明の農薬組成物又は製剤は、ラクトース、デンプン、尿素、水溶性無機塩及びそれらの組み合わせなどの希釈剤をさらに含んでもよい。農薬組成物又は製剤は、例えばポリソルベート型非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０又はトリシロキサン非イオン性界面活性剤、スチレンアクリル分散剤ポリマー、酸性樹脂共重合体ベースの分散剤、ポリカルボン酸カリウム、アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウムブレンド、ジイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム、ナフタレンスルホン酸縮合物のナトリウム塩、リグニンスルホン酸塩及びそれらの組み合わせなどの１つ以上の界面活性剤をさらに含み得る。
【0081】
トリシロキサン非イオン性界面活性剤又はポリエーテルジメチルシロキサン（ＰＥＭＳ）は、しばしばスーパースプレッダ又はスーパーウェッタと呼ばれ、農薬に添加して、葉の疎水性表面上への迅速な広がりを促進することによって活性物質の活性を促進し、雨に対する堅牢性を高める。変性トリシロキサンタイプのいくつかのスプレッダーは、超低分子量のトリシロキサンをポリエーテル基と組み合わせ、表面張力を低減し、濡れにくい表面でも急速に展着させることができる。
【0082】
活性剤、組成物、又はそれを含む製剤は、上記実施形態のいずれか１つの方法において、植物若しくはその部分、器官又は植物繁殖材料に、噴霧、浸漬、包帯、コーティング、ペレット化又は浸漬によって適用される。
【0083】
特定の実施形態では、本発明の１－フェニル－テトラリン化合物の、それを含む組成物又は製剤中の濃度は、１０～２０００、１０～１５００、１０～１０００、１０～９００、１０～８００、１０～７００、１０～６００、１０～５００、１０～４００、１０～３００、１０～２００、１０～１００、１０～９０、１０～８０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２０、２０～２０００、２０～１５００、２０～１０００、２０～９００、２０～８００、２０～７００、２０～６００、２０～５００、２０～４００、２０～３００、２０～２００、２０～１００、２０～９０、２０～８０、２０～７０、２０～６０、２０～５０、２０～４０、２０～３０、２０～２０、３０～２０００、３０～１５００、３０～１０００、３０～９００、３０～８００、３０～７００、３０～６００、３０～５００、３０～４００、３０～３００、３０～２００、３０～１００、３０～０、３０～１００、３０～９０、３０～８０、３０～７０、３０～６０、３０～５０、３０～４０、４０～２０００、４０～１５００、４０～１０００、４０～９００、４０～８００、４０～７００、４０～６００、４０～５００、４０～４００、４０～３００、４０～２００、４０～１００、４０～９０、４０～８０、４０～７０、４０～６０、４０～５０、５０～２０００、５０～１５００、５０～１０００、５０～９００、５０～８００、５０～７００、５０～６００、５０～５００、５０～４００、５０～３００、５０～２００、５０～１００、５０～９０、５０～８０、５０～７０、５０～６０、６０～２０００、６０～１５００、６０～１０００、６０～９００、６０～８００、６０～７００、６０～６００、６０～５００、６０～４００、６０～３００、６０～２００、６０～１００、６０～９０、６０～８０、６０～７０、７０～２０００、７０～１５００、７０～１０００、７０～９００、７０～８００、７０～７００、７０～６００、７０～５００、７０～４００、７０～３００、７０～２００、７０～１００、７０～９０、７０～８０、８０～２０００、８０～１５００、８０～１０００、８０～９００、８０～８００、８０～７００、８０～６００、８０～５００、８０～４００、８０～３００、８０～２００、８０～１００、８０～９０、９０～２０００、９０～１５００、９０～１０００、９０～９００、９０～８００、９０～７００、９０～６００、９０～５００、９０～４００、９０～３００、９０～２００、９０～１００、１００～２０００、１００～１５００、１００～１０００、１００～９００、１００～８００、１００～７００、１００～６００、１００～５００、１００～４００、１００～３００、１００～２００、２００～２０００、２００～１５００、２００～１０００、２００～９００、２００～８００、２００～７００、２００～６００、２００～５００、２００～４００、２００～３００、３００～２０００、３００～１５００、３００～１０００、３００～９００、３００～８００、３００～７００、３００～６００、３００～５００、３００～４００、４００～２０００、４００～１５００、４００～１０００、４００～９００、４００～８００、４００～７００、４００～６００、４００～５００、５００～２０００、５００～１５００、５００～１０００、５００～９００、５００～８００、５００～７００、５００～６００、６００～２０００、６００～１５００、６００～１０００、６００～９００、６００～８００、６００～７００、７００～２０００、７００～１５００、７００～１０００、７００～９００、７００～８００、８００～２０００、８００～１５００、８００～１０００、８００～９００、９００～２０００、９００～１５００、９００～１０００、１０００～２０００又は１０００～１５００ｐｐｍの範囲であり得る。
【0084】
特に、１－フェニル－テトラリン化合物を含有する組成物又は製剤における１－フェニル－テトラリン化合物の濃度は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、１０００、１５００又は２０００ｐｐｍであり得る。
【0085】
上記の濃度範囲又は濃度のいずれか１つは、上記の病原体のいずれか１つに対するもの及び組成物又は製剤を適用するいずれか１つの上記手段によるものを含む、上記実施形態のいずれか１つに従って使用することができる。
【0086】
定義
本明細書で使用される「植物器官」という用語は、葉、茎、根、及び生殖構造を指す。用語「植物部分」は本明細書で使用される場合、挿し木若しくは塊茎などの栄養性植物材料；葉、花、樹皮又は茎のことを指す。本明細書で使用される「植物繁殖材料」という用語は、種子、根、果実、塊茎、鱗茎、根茎、又は植物の一部のことを指す。本明細書で使用される「農薬有効量」という用語は、少なくとも１つの有害生物（ｐｅｓｔ）を死滅させることができるか、又は有害生物の成長、摂食又は正常な生理学的発達を顕著に減少させることができる農薬の量を指す。「綱」、「目」、「科」、「属」、及び「種」という用語は、本明細書において、藻類、真菌、及び植物に対する国際命名規約のＡｒｔ３．１に従って本明細書中で使用される。
本明細書で使用される「植物器官」という用語は、葉、茎、根、及び生殖構造を指す。用語「植物部分」は本明細書で使用される場合、挿し木若しくは塊茎などの栄養性植物材料；葉、花、樹皮又は茎のことを指す。本明細書で使用される「植物繁殖材料」という用語は、種子、根、果実、塊茎、鱗茎、根茎、又は植物の一部のことを指す。本明細書で使用される「農薬有効量」という用語は、少なくとも１つの有害生物（ｐｅｓｔ）を死滅させることができるか、又は有害生物の成長、摂食又は正常な生理学的発達を顕著に減少させることができる農薬の量を指す。「綱」、「目」、「科」、「属」、及び「種」という用語は、本明細書において、藻類、真菌、及び植物に対する国際命名規約のＡｒｔ３．１に従って本明細書中で使用される。
【0087】
特許請求の範囲で使用される「含む」という語は「オープンエンド」であり、記載のエレメント又はそれらの構造若しくは機能の等価物に加え、記載されていない他の任意のエレメントを意味する。それは、本明細書中以後列挙される意味に限定されると解釈されるべきでなく；他のエレメント又は工程を排除しない。それは、述べられている特徴、整数、工程又は構成要素の存在を言及されているとおりに明示していると解釈される必要があるが、１つ以上の他の特徴、整数、工程若しくは構成要素又はそれらの群の存在又は追加を排除しない。したがって、「ｘ及びｚを含む組成物」という表現の範囲は、化合物ｘ及びｚだけからなる組成物に限定されるべきでない。また、「工程ｘ及びｚを含む方法」という表現の範囲は、これらの工程だけからなる方法に限定されるべきでない。
【0088】
特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての数字は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。特に明記しない限り、本明細書で使用する場合、「約」という用語は当技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均値の２標準偏差内であると理解される。一実施形態では、「約」という語がそれが使用されている番号の報告された数値の１０％以内、好ましくは報告された数値の５％以内の手段である。例えば、「約」という用語は、記載された値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以内として直ちに理解することができる。他の実施形態では、用語「約」は、例えば、使用される実験技術に応じて、より高い変動許容度を意味することができる。特定の値の前記変形は、当業者によって理解され、本発明の文脈内である。例示として、「約１～約５」の数値範囲は、約１～約５の明示的に列挙された値を含むだけでなく、示された範囲内の個々の値及び部分範囲も含むと解釈されるべきである。したがって、この数値範囲には、２、３、及び４などの個々の値、並びに、例えば、１～３、２～４、及び３～５、並びに１、２、３、４、５、又は６の部分範囲が個々に含まれる。この同じ原理は、最小値又は最大値として１つの数値のみを列挙する範囲にも適用される。
【0089】
文脈から他に明らかでない限り、本明細書に提供される全ての数値は、用語「約」によって修飾される。「実質的に」、「一般的に」、「まで」などの他の同様の用語は、絶対的ではないように用語又は値を修正するものとして解釈されるべきである。そのような用語はそれらの用語が当業者によって理解されるように、それらが修飾する状況及び用語によって定義される。これには、少なくとも、所与の実験、技法又は値を測定するために使用される器具に関する予想される実験誤差、技術誤差及び器具誤差の程度が含まれる。
【0090】
本明細書中で使用されるとき、用語「及び／又は」は、列挙されている関連項目の１つ以上の任意の組み合わせ及びすべての組み合わせを含む。別段定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての用語（専門用語及び科学用語を含む）は、本発明が属する分野の当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。通常使用される辞書に定義されている用語などの用語は、本明細書及び関連技術の文脈におけるそれらの意味と一致した意味を有すると解釈されるべきであって、理想的な意味又は過度に正式な意味として本明細書中で明確に定義されない限り、そのように解釈されるべきでない。周知の機能又は構成は、簡潔及び／又は明確にするために詳細に記載されていないかもしれない。
【0091】
ここで、本発明を、以下の非限定的な実施例によって説明する。
【実施例】
【0092】
略語一覧：
ＲＰＭ－毎分回転数
ＲＣＦ－相対遠心力
ＣＦＵ－コロニー形成単位
ＰＤＢＣ－２０μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含むポテトデキストロースブロス
ＰＤＡＣ－２０μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含むポテトデキストロース寒天
ＰＤＡＴ－１２μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含むポテトデキストロース寒天
ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド
ＬＢ－ＬＢブロス
ＬＢＡ－ＬＢ寒天
ＳＣＨ－Ｓｃｈｍｉｔｔｎｅｒ培地
２：ＰＤＢＣ－滅菌蒸留水によって２倍に希釈したＰＤＢＣ
ＰＤＡ－ポテトデキストロース寒天培地
ＰＤＢＴ－１２μｇ／ｍｌのテトラサイクリンを含むポテトデキストロースブロス
ＲＰＭ－毎分回転数
ＲＣＦ－相対遠心力
ＣＦＵ－コロニー形成単位
ＰＤＢＣ－２０μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含むポテトデキストロースブロス
ＰＤＡＣ－２０μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを含むポテトデキストロース寒天
ＰＤＡＴ－１２μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含むポテトデキストロース寒天
ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド
ＬＢ－ＬＢブロス
ＬＢＡ－ＬＢ寒天
ＳＣＨ－Ｓｃｈｍｉｔｔｎｅｒ培地
２：ＰＤＢＣ－滅菌蒸留水によって２倍に希釈したＰＤＢＣ
ＰＤＡ－ポテトデキストロース寒天培地
ＰＤＢＴ－１２μｇ／ｍｌのテトラサイクリンを含むポテトデキストロースブロス
【0093】
試験例１．Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉに対する１－フェニル‐テトラリン化合物の生物活性のマイクロプレートによるアッセイ
背景： Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉは担子菌類に属する真菌であり、空気感染性の病原体である。栽培室内でＰｕｃｃｉｎｉａ胞子をトウモロコシ植物上で生育させ、各実験のために感染したトウモロコシ葉から新鮮な胞子懸濁液を調製した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉは必要的病原体（ｏｂｌｉｇａｔｏｒｙ ｐａｔｈｏｇｅｎ）であり、合成培地上では増殖しないので、１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性の指標として胞子の発芽をモニターした。
背景： Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉは担子菌類に属する真菌であり、空気感染性の病原体である。栽培室内でＰｕｃｃｉｎｉａ胞子をトウモロコシ植物上で生育させ、各実験のために感染したトウモロコシ葉から新鮮な胞子懸濁液を調製した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉは必要的病原体（ｏｂｌｉｇａｔｏｒｙ ｐａｔｈｏｇｅｎ）であり、合成培地上では増殖しないので、１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性の指標として胞子の発芽をモニターした。
【0094】
要旨：ＤＭＳＯで希釈した１－フェニル－テトラリン化合物（化合物１：（５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ）－５－（３，４－ジヒドロキシフェニル）－６，７－ジメチル－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２，３－ジオール、化合物２：４－（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メトキシ－２，３－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル）ベンゼン－１，２－ジオール、及び化合物３：（１Ｓ，４Ｒ）－４－（３，４－ジクロロフェニル）－Ｎ－メチル－１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－アミニウムクロリド）をマイクロプレートの各ウェルに加え、新鮮な調製胞子懸濁液と混合して使用した。胞子の発芽を、顕微鏡下での目視によってモニターした。
【0095】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0096】
材料：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（Ｔｉｄｅａ Ｃｏｍｐａｎｙ ＩＮＣ）非イオン性洗浄剤、ＤＭＳＯ－ジメチルスルホキシド（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ－ポーランド）溶液、クロラムフェニコール（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ－英国）
【0097】
装置：遠心機、振盪機、インキュベーター、顕微鏡、濾過システム
【0098】
方法：
Ａ．Ｐｕｃｃｉｎｉａ胞子の調製
接種用トウモロコシ苗の調製：
１）１２０×８０×８０ｍｍのポットを使用する。
２）肥料を含む標準的な庭用土壌を使用する。
３）感受性品種のトウモロコシ種子を使用する。
４）ポットを小さなトレーに入れる。
５）ポットの上まで土を入れる。
６）種子のための小さな丸い溝を作る。
７）各ポットに約１０種のトウモロコシを植える。
８）種子を追加の土で覆う。
９）トレーに水を入れる。ポットごとに約１００ｍｌである。土壌は湿らせ、２４時間後に水がトレーに残らないようにする。
１０）２番目の葉が出現するまで、トウモロコシを２２℃の栽培室で７日間栽培する。
Ａ．Ｐｕｃｃｉｎｉａ胞子の調製
接種用トウモロコシ苗の調製：
１）１２０×８０×８０ｍｍのポットを使用する。
２）肥料を含む標準的な庭用土壌を使用する。
３）感受性品種のトウモロコシ種子を使用する。
４）ポットを小さなトレーに入れる。
５）ポットの上まで土を入れる。
６）種子のための小さな丸い溝を作る。
７）各ポットに約１０種のトウモロコシを植える。
８）種子を追加の土で覆う。
９）トレーに水を入れる。ポットごとに約１００ｍｌである。土壌は湿らせ、２４時間後に水がトレーに残らないようにする。
１０）２番目の葉が出現するまで、トウモロコシを２２℃の栽培室で７日間栽培する。
【0099】
Ｂ．接種及び発芽試験のための［トウモロコシ葉からの］胞子懸濁液の調製
１）胞子付きのトウモロコシの葉２０枚を滅菌した５０ｍｌのチューブに入れる。
２）氷冷した０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液５０ｍｌを加える。
３）チューブを密閉した氷冷のプラスチック製ボックスに挿入する。
４）３００ＲＰＭで１５分間、振盪機を用いてボックスを振盪する。
５）懸濁液（葉を含まない）を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに移す。
６）胞子懸濁液の入ったチューブを氷上に置いておく。
１）胞子付きのトウモロコシの葉２０枚を滅菌した５０ｍｌのチューブに入れる。
２）氷冷した０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液５０ｍｌを加える。
３）チューブを密閉した氷冷のプラスチック製ボックスに挿入する。
４）３００ＲＰＭで１５分間、振盪機を用いてボックスを振盪する。
５）懸濁液（葉を含まない）を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに移す。
６）胞子懸濁液の入ったチューブを氷上に置いておく。
【0100】
Ｃ．接種製剤
１）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０水溶液を用いて胞子懸濁液を３００ｍｌに希釈する。
２）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約６００胞子／ｍｌで、懸濁液は淡褐色であるべきである。
３）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
１）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０水溶液を用いて胞子懸濁液を３００ｍｌに希釈する。
２）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約６００胞子／ｍｌで、懸濁液は淡褐色であるべきである。
３）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
【0101】
Ｄ．発芽評価
１）５ミクロンのメンブレンを備えた濾過システムを準備し、滅菌した冷水でメンブレンを洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブから濾過システムの膜の中心にゆっくりと懸濁・デカントする－胞子は膜上に蓄積するはずである。
３）胞子を洗浄し、細菌や他の菌類の胞子を捨て、真空を止め、冷滅菌水をスプレーして胞子を懸濁し、洗浄し、真空を再開する。
４）胞子の洗浄をさらに２回繰り返す。
５）胞子を含むメンブレンを３０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０の入ったチューブに挿入し、チューブを手で振盪する。
６）メンブレンを取り出し、廃棄する。
７）濾過された液体を流しにデカントし、濾過システムを水道水で洗浄し、乾燥させる。
８）３０μｌのクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）を胞子懸濁液に最終濃度２０μｇ／ｍｌで添加する。
９）８層のガーゼを通して胞子懸濁液を５０ｍｌチューブに濾過する。
１０）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約７．５×１０３胞子／ｍｌであり、褐色であるべきである。３０ｍｌの胞子懸濁液は、２０個のマイクロプレートのスクリーニングに十分であるべきである。
１１）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
１）５ミクロンのメンブレンを備えた濾過システムを準備し、滅菌した冷水でメンブレンを洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブから濾過システムの膜の中心にゆっくりと懸濁・デカントする－胞子は膜上に蓄積するはずである。
３）胞子を洗浄し、細菌や他の菌類の胞子を捨て、真空を止め、冷滅菌水をスプレーして胞子を懸濁し、洗浄し、真空を再開する。
４）胞子の洗浄をさらに２回繰り返す。
５）胞子を含むメンブレンを３０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０の入ったチューブに挿入し、チューブを手で振盪する。
６）メンブレンを取り出し、廃棄する。
７）濾過された液体を流しにデカントし、濾過システムを水道水で洗浄し、乾燥させる。
８）３０μｌのクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）を胞子懸濁液に最終濃度２０μｇ／ｍｌで添加する。
９）８層のガーゼを通して胞子懸濁液を５０ｍｌチューブに濾過する。
１０）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約７．５×１０３胞子／ｍｌであり、褐色であるべきである。３０ｍｌの胞子懸濁液は、２０個のマイクロプレートのスクリーニングに十分であるべきである。
１１）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
【0102】
Ｅ．実生の感染
１）胞子懸濁液を２５０ｍｌビーカーに移す。
２）撹拌機を用いて胞子の懸濁液を５００ＲＰＭで混合し、胞子を懸濁させたままにする。
３）ポット内のすべての実生の葉を胞子懸濁液に１０分間浸漬する。
４）接種した苗を入れたポットを、２２℃、湿度９９％の温水を入れた湿ったチャンバーに２４時間入れる（水は３２℃に加熱）。
５）２４時間後、ポットを栽培室に移し、実生をプラスチック袋で覆う
６）２２℃の栽培室でトウモロコシを育成する。
７）接種から７日後には、葉に褐色斑点が観察されるはずである。
８）接種から１１日後、菌類の混入を防ぐためにビニール袋を取り除き、輪ゴムで苗を固定する。
９）接種から１２日後、胞子のついた葉を、胞子懸濁液調製のために収集することができる。
１）胞子懸濁液を２５０ｍｌビーカーに移す。
２）撹拌機を用いて胞子の懸濁液を５００ＲＰＭで混合し、胞子を懸濁させたままにする。
３）ポット内のすべての実生の葉を胞子懸濁液に１０分間浸漬する。
４）接種した苗を入れたポットを、２２℃、湿度９９％の温水を入れた湿ったチャンバーに２４時間入れる（水は３２℃に加熱）。
５）２４時間後、ポットを栽培室に移し、実生をプラスチック袋で覆う
６）２２℃の栽培室でトウモロコシを育成する。
７）接種から７日後には、葉に褐色斑点が観察されるはずである。
８）接種から１１日後、菌類の混入を防ぐためにビニール袋を取り除き、輪ゴムで苗を固定する。
９）接種から１２日後、胞子のついた葉を、胞子懸濁液調製のために収集することができる。
【0103】
Ｆ．Ｐｕｃｃｉｎｉａ胞子の発芽アッセイに基づく生物活性スクリーニングのためのマイクロプレートの調製
１）－２０℃の冷凍庫からＤＭＳＯ溶媒に１％ １－フェニル－テトラリン化合物を溶かした原液をプレートにとり、少なくとも２０分間卓上で解凍する。
２）また、－２０℃の冷凍庫から材料を含む対照プレートを取り出し、少なくとも２０分間、卓上で解凍する。
３）全てのマイクロプレートは、１０μｌの１－フェニル－テトラリン化合物の原液を含むべきである。
４）１５μｌのＰｕｃｃｉｎｉａ胞子懸濁液をマイクロプレートの全てのウェルに添加する。２５ｐｐｍの最終濃度を得るために、胞子懸濁液をウェルに移す前に、ピペットで胞子を懸濁させる（上下）。
５）すべてのプレートを透明シーラーで密閉する。
６）全ての試験プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止してプレートの底部に液体を収集する。
７）すべてのプレートを１０００ＲＰＭで１０秒間振盪し、ウェル中の胞子の分散をチェックする。
８）すべてのプレートをプラスチック製の箱に入れ、２５℃で一晩インキュベーターに入れる。
１）－２０℃の冷凍庫からＤＭＳＯ溶媒に１％ １－フェニル－テトラリン化合物を溶かした原液をプレートにとり、少なくとも２０分間卓上で解凍する。
２）また、－２０℃の冷凍庫から材料を含む対照プレートを取り出し、少なくとも２０分間、卓上で解凍する。
３）全てのマイクロプレートは、１０μｌの１－フェニル－テトラリン化合物の原液を含むべきである。
４）１５μｌのＰｕｃｃｉｎｉａ胞子懸濁液をマイクロプレートの全てのウェルに添加する。２５ｐｐｍの最終濃度を得るために、胞子懸濁液をウェルに移す前に、ピペットで胞子を懸濁させる（上下）。
５）すべてのプレートを透明シーラーで密閉する。
６）全ての試験プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止してプレートの底部に液体を収集する。
７）すべてのプレートを１０００ＲＰＭで１０秒間振盪し、ウェル中の胞子の分散をチェックする。
８）すべてのプレートをプラスチック製の箱に入れ、２５℃で一晩インキュベーターに入れる。
【0104】
Ｇ．プレートのスクリーニング
１）１０×１０倍率の顕微鏡を用いて、懸濁液調製後１２～２４時間のプレートをスクリーニングする。
２）各ウェルの胞子発芽を、対照プレートウェル（市販の殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含有するウェル）の胞子発芽と比較する。
３）エクセルシートにより胞子発芽をレポートする：
タイプ１－胞子が正常に発芽した場合（正常な管伸長）；
タイプ２－胞子が発芽不良であるか、又は何らかの形で正常でない場合（非常に短い発芽管、胞子の発芽の頻度が低い、管が損傷している）；
タイプ３－胞子が全く発芽していない場合（健全な胞子、管なし）。
４）各材料のスコア２又は３の反復数を計算する。
５）各材料のスコア２と３の合計を計算する。
６）最良スコア：反復数＝４、スコアの合計＝１２。
試験例９の結果を参照のこと。
１）１０×１０倍率の顕微鏡を用いて、懸濁液調製後１２～２４時間のプレートをスクリーニングする。
２）各ウェルの胞子発芽を、対照プレートウェル（市販の殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含有するウェル）の胞子発芽と比較する。
３）エクセルシートにより胞子発芽をレポートする：
タイプ１－胞子が正常に発芽した場合（正常な管伸長）；
タイプ２－胞子が発芽不良であるか、又は何らかの形で正常でない場合（非常に短い発芽管、胞子の発芽の頻度が低い、管が損傷している）；
タイプ３－胞子が全く発芽していない場合（健全な胞子、管なし）。
４）各材料のスコア２又は３の反復数を計算する。
５）各材料のスコア２と３の合計を計算する。
６）最良スコア：反復数＝４、スコアの合計＝１２。
試験例９の結果を参照のこと。
【0105】
試験例２．Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉに対する１‐フェニル‐テトラリン化合物の生理活性のマイクロプレートに基づくアッセイ
まとめ：ＤＭＳＯで希釈した１－フェニル－テトラリン化合物（化合物１、２又は３）を別々にマイクロプレートウェルに添加し、５０μｌの菌糸懸濁液と混合し、混合菌糸から出発して、プレートリーダー及び目視によって真菌の増殖をモニターした。
まとめ：ＤＭＳＯで希釈した１－フェニル－テトラリン化合物（化合物１、２又は３）を別々にマイクロプレートウェルに添加し、５０μｌの菌糸懸濁液と混合し、混合菌糸から出発して、プレートリーダー及び目視によって真菌の増殖をモニターした。
【0106】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0107】
材料：ＰＤＡＣ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
【0108】
装置：プレートリーダー、遠心機、振盪機、インキュベーター。
【0109】
方法：
Ａ．Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ菌糸の接種調製物
１）ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａをＰＤＡＣ上で９０ｍｍペトリ皿で培養し、１～４日以内に成長する菌糸を得る。
２）ＰＤＢＣ培地５０ｍｌを滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに加える。
３）メスで固体培地を数個の小片に切断し、エルレンマイヤーフラスコに入れる。
４）２７℃、１５０ＲＰＭで振盪機を用いて２～４日間培養する。
５）液体を捨て、空のペトリ皿に菌糸を注ぐ。
６）メスを使用して菌糸から多数の小片を切断し、滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに入れ、５０ｍｌのＰＤＢＣ培地を加える。
７）４本のボトルを培養して調製し、１５０ＲＰＭで２７℃で振とうしながら３日間増殖させる。
８）冷蔵庫で培養液を１時間冷やす。
９）冷たい培養液を２５０ｍｌのビーカーに入れる。
１０）混合物がブレンダーナイフを覆うように、２０ｍｌの冷ＰＤＢＣを添加する。
１１）氷上で最高速度で２分間、ブレンダーを数回上下に動かしながら、培養物を混合する。
１２）混合物を氷上に保持する。
１３）ブレンドした混合物約５ｍｌを氷上の１５ｍｌチューブに移す。
１４）必要に応じてチューブを上下に動かしながら、培養物を１５ｍｌチューブ中で、氷上で２分間ホモジナイズする。
１５）必要量を調製するために、上記のように５ｍｌのいくつかのバッチをホモジナイズする（５ｍｌのホモジナイズした培養物で、約１００ｍｌの接種物ができる）。
１６）ホモジネートの一部を１０倍に希釈し、ホモジネートの濃度を確認する。懸濁液の濃度は、４×１０４ＣＦＵ／ｍｌとする（１０倍希釈濃度は４０００ＣＦＵ／ｍｌとなるはずである）。
１７）接種材料ストックをＰＤＢＣで１：２０に希釈－１ｍｌを２０ｍｌに希釈するか、又は必要な希釈率を計算して、２０００ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度を調製する。各ウェル中の量は約１００ＣＦＵであるべきである。
Ａ．Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ菌糸の接種調製物
１）ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａをＰＤＡＣ上で９０ｍｍペトリ皿で培養し、１～４日以内に成長する菌糸を得る。
２）ＰＤＢＣ培地５０ｍｌを滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに加える。
３）メスで固体培地を数個の小片に切断し、エルレンマイヤーフラスコに入れる。
４）２７℃、１５０ＲＰＭで振盪機を用いて２～４日間培養する。
５）液体を捨て、空のペトリ皿に菌糸を注ぐ。
６）メスを使用して菌糸から多数の小片を切断し、滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに入れ、５０ｍｌのＰＤＢＣ培地を加える。
７）４本のボトルを培養して調製し、１５０ＲＰＭで２７℃で振とうしながら３日間増殖させる。
８）冷蔵庫で培養液を１時間冷やす。
９）冷たい培養液を２５０ｍｌのビーカーに入れる。
１０）混合物がブレンダーナイフを覆うように、２０ｍｌの冷ＰＤＢＣを添加する。
１１）氷上で最高速度で２分間、ブレンダーを数回上下に動かしながら、培養物を混合する。
１２）混合物を氷上に保持する。
１３）ブレンドした混合物約５ｍｌを氷上の１５ｍｌチューブに移す。
１４）必要に応じてチューブを上下に動かしながら、培養物を１５ｍｌチューブ中で、氷上で２分間ホモジナイズする。
１５）必要量を調製するために、上記のように５ｍｌのいくつかのバッチをホモジナイズする（５ｍｌのホモジナイズした培養物で、約１００ｍｌの接種物ができる）。
１６）ホモジネートの一部を１０倍に希釈し、ホモジネートの濃度を確認する。懸濁液の濃度は、４×１０４ＣＦＵ／ｍｌとする（１０倍希釈濃度は４０００ＣＦＵ／ｍｌとなるはずである）。
１７）接種材料ストックをＰＤＢＣで１：２０に希釈－１ｍｌを２０ｍｌに希釈するか、又は必要な希釈率を計算して、２０００ＣＦＵ／ｍｌの最終濃度を調製する。各ウェル中の量は約１００ＣＦＵであるべきである。
【0110】
Ｂ．１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性実験のためのマイクロプレート調製
１）－２０℃の冷凍庫から精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物をＤＭＳＯに溶かした原液を取り出し、卓上で解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した２５０ｐｐｍ １－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）４０μｌの激しく混合した胞子液を、マルチピペットを用いてマイクロプレートの各ウェルに加える。
５）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振とうし、１－フェニル－テトラリン化合物を菌糸懸濁液と混合する。
６）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心して停止し、プレートの底の液体を回収する。
７）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
８）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る。
９）プレートを卓上に回収する。
１０）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２７℃のインキュベーターに入れる。
１）－２０℃の冷凍庫から精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物をＤＭＳＯに溶かした原液を取り出し、卓上で解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した２５０ｐｐｍ １－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）４０μｌの激しく混合した胞子液を、マルチピペットを用いてマイクロプレートの各ウェルに加える。
５）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振とうし、１－フェニル－テトラリン化合物を菌糸懸濁液と混合する。
６）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心して停止し、プレートの底の液体を回収する。
７）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
８）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る。
９）プレートを卓上に回収する。
１０）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２７℃のインキュベーターに入れる。
【0111】
Ｃ．プレートのスクリーニング
１）プレートのスクリーニングをもう３日実施する：アッセイ開始後、３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄ。
２）各スクリーンとゼロ時間での読み取りとの間の吸光度の差を計算する。
３）各時点での各ウェルの増殖阻害率を計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
１）プレートのスクリーニングをもう３日実施する：アッセイ開始後、３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄ。
２）各スクリーンとゼロ時間での読み取りとの間の吸光度の差を計算する。
３）各時点での各ウェルの増殖阻害率を計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
【0112】
試験例３．Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍに対する生物活性が期待できる１‐フェニル－テラリン（ｔｅｒａｌｉｎ）化合物のマイクロプレートベースのスクリーニング
要旨：ＤＭＳＯで希釈した１－フェニル－テトラリン化合物（化合物１、２又は３）を別々にマイクロプレートの各ウェルに別々に添加し、ＰＤＢＣ懸濁液中の遊走子５０μｌと混合し、遊走子から出発して真菌の増殖をプレートリーダー及び目視によってモニターした。
要旨：ＤＭＳＯで希釈した１－フェニル－テトラリン化合物（化合物１、２又は３）を別々にマイクロプレートの各ウェルに別々に添加し、ＰＤＢＣ懸濁液中の遊走子５０μｌと混合し、遊走子から出発して真菌の増殖をプレートリーダー及び目視によってモニターした。
【0113】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0114】
材料：ＳＣＨ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
【0115】
装置：プレートリーダー、遠心機、振盪機、インキュベーター。
【0116】
方法：
Ａ．Ｐｙｔｈｉｕｍ菌糸の接種材料調製
１）Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍを９０ｍｍペトリ皿でＳＣＨ上に増殖させ、胞子形成菌糸を得る。各プレートは５０ｍｌの遊走子懸濁液を生成し、これは１０個の９６ウェルプレートの生物活性スクリーニングに十分である。
２）滅菌水６０ｍｌを滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに加える。
３）プレート２枚の固体培地をメスで１２枚（各プレート）に切断し、エルレンマイヤーフラスコに入れる（固体は水で覆う）。
４）菌糸を１７℃で一晩胞子形成させる。
５）エルレンマイヤーフラスコを手で振り、遊走子を懸濁させる。
６）懸濁液を１６層ガーゼを通して５０ｍｌチューブに濾過する。
７）懸濁液を滅菌５００ｍｌボトルに移す。
８）固形物を捨て、次亜塩素酸塩でエルレンマイヤーフラスコを消毒する。
９）遊走子懸濁液を氷上で冷却する。
１０）懸濁液中の遊走子濃度を評価する（濃度は１０００～４０００胞子／ｍｌであるべきである）。
１１）滅菌冷蔵蒸留水を滅菌５００ｍｌボトルに入れて、懸濁液を希釈する。
１２）５００～２０００胞子／ｍｌの接種材料を得るために、滅菌済みの冷蔵庫で冷やした２：ＰＤＢＣを（（懸濁液と）同じ量加える。この希釈は、各ウェル中に２５～１００個の遊走子の量をもたらす。
１３）遊走子懸濁液接種材料を氷上に保持する。
Ａ．Ｐｙｔｈｉｕｍ菌糸の接種材料調製
１）Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍを９０ｍｍペトリ皿でＳＣＨ上に増殖させ、胞子形成菌糸を得る。各プレートは５０ｍｌの遊走子懸濁液を生成し、これは１０個の９６ウェルプレートの生物活性スクリーニングに十分である。
２）滅菌水６０ｍｌを滅菌２５０ｍｌエルレンマイヤーフラスコに加える。
３）プレート２枚の固体培地をメスで１２枚（各プレート）に切断し、エルレンマイヤーフラスコに入れる（固体は水で覆う）。
４）菌糸を１７℃で一晩胞子形成させる。
５）エルレンマイヤーフラスコを手で振り、遊走子を懸濁させる。
６）懸濁液を１６層ガーゼを通して５０ｍｌチューブに濾過する。
７）懸濁液を滅菌５００ｍｌボトルに移す。
８）固形物を捨て、次亜塩素酸塩でエルレンマイヤーフラスコを消毒する。
９）遊走子懸濁液を氷上で冷却する。
１０）懸濁液中の遊走子濃度を評価する（濃度は１０００～４０００胞子／ｍｌであるべきである）。
１１）滅菌冷蔵蒸留水を滅菌５００ｍｌボトルに入れて、懸濁液を希釈する。
１２）５００～２０００胞子／ｍｌの接種材料を得るために、滅菌済みの冷蔵庫で冷やした２：ＰＤＢＣを（（懸濁液と）同じ量加える。この希釈は、各ウェル中に２５～１００個の遊走子の量をもたらす。
１３）遊走子懸濁液接種材料を氷上に保持する。
【0117】
Ｂ．１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性実験のためのマイクロプレート調製
１）精製した１％ １－フェニル－テトラリン化合物（１、２又は３）のＤＭＳＯ原液をとり、卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）マルチピペットを使用して、４０μｌの遊走子懸濁液接種材料をマイクロプレートのウェルに添加する。胞子懸濁液を手で激しく混合し、１枚のプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントして、遊走子を十分に懸濁させておく。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、１－フェニル－テトラリン化合物を菌糸懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部の液体を回収する。
８）プレートリーダーがマイクロプレートを読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
９）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る。
１０）プレートを卓上に回収する。
１１）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２７℃のインキュベーターに入れる。
１）精製した１％ １－フェニル－テトラリン化合物（１、２又は３）のＤＭＳＯ原液をとり、卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）マルチピペットを使用して、４０μｌの遊走子懸濁液接種材料をマイクロプレートのウェルに添加する。胞子懸濁液を手で激しく混合し、１枚のプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントして、遊走子を十分に懸濁させておく。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、１－フェニル－テトラリン化合物を菌糸懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部の液体を回収する。
８）プレートリーダーがマイクロプレートを読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
９）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る。
１０）プレートを卓上に回収する。
１１）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２７℃のインキュベーターに入れる。
【0118】
Ｃ．プレートのスクリーニング
１）アッセイ開始後、さらに３日：３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄにプレートを読み取る。
２）各読み出しとゼロ時間における読み出しとの間の吸光度の差を計算する。
３）各時点での各ウェルの増殖阻害率を計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
１）アッセイ開始後、さらに３日：３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄにプレートを読み取る。
２）各読み出しとゼロ時間における読み出しとの間の吸光度の差を計算する。
３）各時点での各ウェルの増殖阻害率を計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
【0119】
試験例４．Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａに対する生物活性が期待される１－フェニル－テトラリン化合物のマイクロプレートベースのスクリーニング
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３を含むマイクロプレートを凍結胞子懸濁液と混合し、凍結胞子から開始した真菌の増殖を目視によりモニターした。
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３を含むマイクロプレートを凍結胞子懸濁液と混合し、凍結胞子から開始した真菌の増殖を目視によりモニターした。
【0120】
背景：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａは子嚢菌類に属する真菌であり、空気感染性の病原体である。Ｂｏｔｒｙｔｉｓ胞子は－２０℃の６０％グリセロール液中で生存し、大量生産することは非常に容易である。したがって、本発明者らは、それぞれの実験のために新鮮な胞子を調製するのではなく、生物活性スクリーニング実験において凍結胞子のストックを使用した。
【0121】
目的：１－フェニル－テトラリン化合物がＢｏｔｒｙｔｉｓの生存及び増殖に及ぼす影響を決定すること。
【0122】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
材料：ＰＤＡＣ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
機器：遠心機－Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５８１０Ｒ；振盪機－Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｍｕｌｔｉ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｇｅｎｉｅ；インキュベーター－Ｐｏｌ－Ｅｃｏ Ａｐａｒａｔｕｒａ；プレートリーダー。
材料：ＰＤＡＣ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
機器：遠心機－Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５８１０Ｒ；振盪機－Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｍｕｌｔｉ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｇｅｎｉｅ；インキュベーター－Ｐｏｌ－Ｅｃｏ Ａｐａｒａｔｕｒａ；プレートリーダー。
【0123】
方法：
Ａ．Ｂｏｔｒｙｔｉｓ胞子懸濁液の調製
１）ＰＤＡＣ平板の中央にＢｏｔｒｙｔｉｓのＰＤＡＣブロックを置き、２２℃で１２日間培養する。
２）プレートは冷蔵庫で少なくとも１時間冷やす。
３）冷蔵庫で冷やした滅菌済みの６０％グリセロール溶液２５ｍｌをチューブに加える。
４）菌糸と胞子を入れた寒天を８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子は氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過して菌糸を廃棄する：約２０ｍｌを回収すべきである。
９）胞子濃度を計算し、２×１０５胞子／ｍｌとなるように、冷やした滅菌６０％グリセロール溶液で希釈する。
１０）１ｍｌの胞子懸濁液を１．５ｍｌの試験管に分注する。各アリコートは、スクリーニング用の２０枚のプレートに十分な量とする。
１１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
Ａ．Ｂｏｔｒｙｔｉｓ胞子懸濁液の調製
１）ＰＤＡＣ平板の中央にＢｏｔｒｙｔｉｓのＰＤＡＣブロックを置き、２２℃で１２日間培養する。
２）プレートは冷蔵庫で少なくとも１時間冷やす。
３）冷蔵庫で冷やした滅菌済みの６０％グリセロール溶液２５ｍｌをチューブに加える。
４）菌糸と胞子を入れた寒天を８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子は氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過して菌糸を廃棄する：約２０ｍｌを回収すべきである。
９）胞子濃度を計算し、２×１０５胞子／ｍｌとなるように、冷やした滅菌６０％グリセロール溶液で希釈する。
１０）１ｍｌの胞子懸濁液を１．５ｍｌの試験管に分注する。各アリコートは、スクリーニング用の２０枚のプレートに十分な量とする。
１１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
【0124】
Ｂ．スクリーニング用の胞子懸濁液の調製
１）凍結した胞子懸濁液２００μｌを冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）胞子懸濁液を氷冷ＰＤＢＣ２０ｍｌと５０ｍｌチューブ中で混合し、１ｍｌあたり２×１０５個の胞子液を作製し、４マイクロプレート分とする。
３）この懸濁液をスクリーニング実験に使用する。
１）凍結した胞子懸濁液２００μｌを冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）胞子懸濁液を氷冷ＰＤＢＣ２０ｍｌと５０ｍｌチューブ中で混合し、１ｍｌあたり２×１０５個の胞子液を作製し、４マイクロプレート分とする。
３）この懸濁液をスクリーニング実験に使用する。
【0125】
Ｃ．オートクレーブで滅菌する：５０ｍｌチューブ×３６、リザーバ×４、４００ｍｌ ＰＤＢＣ。
【0126】
Ｄ．１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性実験のためのマイクロプレート調製
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）４０μｌの胞子懸濁接種材料をマイクロプレートのウェルに添加し、胞子懸濁液を手で激しく混合し、１つのプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントし、胞子を十分に懸濁した状態に保つ。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振とうして、材料を菌糸懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離して停止し、プレートの底部の液体を回収する。
８）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
９）プレートリーダー及び目視を用いて、プレートの真菌増殖を評価する。
１０）プレートを卓上に回収する。
１１）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２２℃のインキュベーターに入れる。
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）４０μｌの胞子懸濁接種材料をマイクロプレートのウェルに添加し、胞子懸濁液を手で激しく混合し、１つのプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントし、胞子を十分に懸濁した状態に保つ。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振とうして、材料を菌糸懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離して停止し、プレートの底部の液体を回収する。
８）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく。
９）プレートリーダー及び目視を用いて、プレートの真菌増殖を評価する。
１０）プレートを卓上に回収する。
１１）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２２℃のインキュベーターに入れる。
【0127】
Ｅ．プレートの読み出し
１）アッセイ開始後、もう３日測定し、プレートの読み取り値を取得する：３ｄ、７ｄ、１４ｄ、及び２１ｄ。
２）各測定点の読み取り値とゼロ点における読み取り値との間の吸光度の差を計算する。
３）各時点における各ウェルの増殖阻害率を計算し、対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
４）「ヒット」は、ＤＭＳＯ ０．５％溶液と比較して、４回繰り返して「清澄なウェル」を有するか、又は病原体増殖が２０％未満である化合物である。
試験例９の結果を参照のこと。
１）アッセイ開始後、もう３日測定し、プレートの読み取り値を取得する：３ｄ、７ｄ、１４ｄ、及び２１ｄ。
２）各測定点の読み取り値とゼロ点における読み取り値との間の吸光度の差を計算する。
３）各時点における各ウェルの増殖阻害率を計算し、対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％増殖として使用する。
４）「ヒット」は、ＤＭＳＯ ０．５％溶液と比較して、４回繰り返して「清澄なウェル」を有するか、又は病原体増殖が２０％未満である化合物である。
試験例９の結果を参照のこと。
【0128】
試験例５．Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍに対する生物活性が期待できる１－フェニル－テトラリン化合物のマイクロプレートベースのスクリーニング
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３をマイクロプレートウェルに添加し、新しく調製した胞子懸濁液と混合し、凍結胞子から出発した真菌の増殖をて、プレートリーダーを使用して、目視によりモニターした。
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３をマイクロプレートウェルに添加し、新しく調製した胞子懸濁液と混合し、凍結胞子から出発した真菌の増殖をて、プレートリーダーを使用して、目視によりモニターした。
【0129】
背景：Ｆｕｓａｒｉｕｍは子嚢菌類に属する菌類であり、土壌媒介病原菌である。Ｆｕｓａｒｉｕｍの胞子を大量に生産することは非常に容易であり、６０％グリセロールの液体中で－２０℃で生存する。したがって、本発明者らは、それぞれの実験のために新鮮な胞子を調製するのではなく、生物活性スクリーニング実験において凍結した胞子のストックを使用した。
目的：Ｆｕｓａｒｉｕｍの生存と成長に対する１－フェニル－テトラリン化合物の効果を決定すること。
以下の材料、方法及び装置を使用した：
材料：ＰＤＡＣ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
装置：プレートリーダー、遠心分離機、振盪機、インキュベーター。
方法：
Ａ．Ｆｕｓａｒｉｕｍ胞子懸濁液の調製
１）ＰＤＡＣプレートの中央に、ＰＤＡＣ上に生育中のＦｕｓａｒｉｕｍの寒天ブロックを置き、２５℃で９日間生育させる。
２）冷蔵庫のプレートを少なくとも１時間冷やす。
３）冷凍冷蔵６０％グリセロール溶液３０ｍｌを５０ｍｌチューブに加える。
４）菌糸と胞子を含む寒天を１枚のプレートから小片にメスで切り、６０％グリセロール３０ｍｌの入った５０ｍｌチューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子を氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する。
９）胞子濃度（４０×１０倍率）を計算し、冷滅菌６０％グリセロール溶液で希釈して、２×１０５胞子／ｍｌを得る。
１０）１ｍｌの胞子懸濁液を１．５ｍｌの試験管に分注する－各アリコートは、スクリーニング用プレート２０枚が得られるはずである。
１１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
目的：Ｆｕｓａｒｉｕｍの生存と成長に対する１－フェニル－テトラリン化合物の効果を決定すること。
以下の材料、方法及び装置を使用した：
材料：ＰＤＡＣ、ＰＤＢＣ、ＤＭＳＯ。
装置：プレートリーダー、遠心分離機、振盪機、インキュベーター。
方法：
Ａ．Ｆｕｓａｒｉｕｍ胞子懸濁液の調製
１）ＰＤＡＣプレートの中央に、ＰＤＡＣ上に生育中のＦｕｓａｒｉｕｍの寒天ブロックを置き、２５℃で９日間生育させる。
２）冷蔵庫のプレートを少なくとも１時間冷やす。
３）冷凍冷蔵６０％グリセロール溶液３０ｍｌを５０ｍｌチューブに加える。
４）菌糸と胞子を含む寒天を１枚のプレートから小片にメスで切り、６０％グリセロール３０ｍｌの入った５０ｍｌチューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子を氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する。
９）胞子濃度（４０×１０倍率）を計算し、冷滅菌６０％グリセロール溶液で希釈して、２×１０５胞子／ｍｌを得る。
１０）１ｍｌの胞子懸濁液を１．５ｍｌの試験管に分注する－各アリコートは、スクリーニング用プレート２０枚が得られるはずである。
１１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
【0130】
Ｂ．スクリーニング用の胞子懸濁液の調製
１）冷凍庫から冷凍胞子懸濁液１ｍｌをとり、氷上で解凍する。
２）５０ｍｌチューブ中で２００μｌの胞子懸濁液を冷蔵庫で冷やした２０ｍｌ ＰＤＢＣと混合し、２０００胞子／ｍｌ懸濁液を作製する。
３）この量を用いて、ウェル当たり１００個の胞子を有する４つのマイクロプレートをスクリーニングする。
１）冷凍庫から冷凍胞子懸濁液１ｍｌをとり、氷上で解凍する。
２）５０ｍｌチューブ中で２００μｌの胞子懸濁液を冷蔵庫で冷やした２０ｍｌ ＰＤＢＣと混合し、２０００胞子／ｍｌ懸濁液を作製する。
３）この量を用いて、ウェル当たり１００個の胞子を有する４つのマイクロプレートをスクリーニングする。
【0131】
Ｃ．１－フェニル－テトラリン化合物の生物活性実験のためのマイクロプレートの調製
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）マルチピペットを使用して、４０μｌの胞子懸濁接種材料をマイクロプレートのウェルに添加する。
５）胞子懸濁液を手で激しく混合し、１枚のプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントし、胞子をよく懸濁させておく
６）透明シーラーでプレートを密閉する
７）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、材料を菌糸懸濁液と混合する
８）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心し、停止してプレートの下部に液体を回収する
９）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく
１０）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る
１１）プレートを卓上に回収する
１２）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２５℃のインキュベーターに入れる。
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに入れる。
４）マルチピペットを使用して、４０μｌの胞子懸濁接種材料をマイクロプレートのウェルに添加する。
５）胞子懸濁液を手で激しく混合し、１枚のプレート（５ｍｌ）に必要な量をデカントし、胞子をよく懸濁させておく
６）透明シーラーでプレートを密閉する
７）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、材料を菌糸懸濁液と混合する
８）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心し、停止してプレートの下部に液体を回収する
９）プレートリーダーで読み取るまで、マイクロプレートを卓上に置いておく
１０）プレートリーダーを使用してプレートを読み取る
１１）プレートを卓上に回収する
１２）回収したプレートを布で覆ったプラスチックボックスに入れ、２５℃のインキュベーターに入れる。
【0132】
Ｄ．プレートの読み出し
アッセイ開始後、さらに３日、プレートの読み取り値を取得する：３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄ
１）各読み取り値とゼロ点での読み取り値との間の吸光度の差を計算する
２）各時点における各ウェルの増殖阻害のパーセンテージを計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％成長として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
アッセイ開始後、さらに３日、プレートの読み取り値を取得する：３ｄ、７ｄ、１４ｄ及び２１ｄ
１）各読み取り値とゼロ点での読み取り値との間の吸光度の差を計算する
２）各時点における各ウェルの増殖阻害のパーセンテージを計算する。対照プレートのＤＭＳＯ処理の結果を１００％成長として使用する。
試験例９の結果を参照のこと。
【0133】
試験例６．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する生物活性が期待される１－フェニル－テトラリン化合物のマイクロプレートベースのスクリーニング
背景：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓは、合成培地での増殖が非常に困難な卵菌由来の偏性病原体である。そこで、剥離したトマト葉から調製したリーフディスクに基づく生物活性スクリーニングシステムを使用した。
背景：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓは、合成培地での増殖が非常に困難な卵菌由来の偏性病原体である。そこで、剥離したトマト葉から調製したリーフディスクに基づく生物活性スクリーニングシステムを使用した。
【0134】
要旨：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａに感染したトマトのリーフディスクにＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３を添加し、目視により疾患の進行をモニターした。
【0135】
一般的説明：トマト葉への接種及び維持、胞子懸濁液の調製、マイクロプレートにおけるリーフディスク上でのそれらの増殖、及びＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの感染重症度の拡大鏡による検査。
【0136】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0137】
方法：
Ａ．接種用の葉の生産のためのトマト苗の調製
１）１２０×８０×８０サイズの苗鉢を使用する。
２）肥料を含む標準的な土壌を使用する。
３）４週齢のトマト苗を使用する。
４）小さなトレーに６ポット入れる。
５）１つのポットに１つの苗を入れる。
６）トレーに水を入れる。ポットごとに約１００ｍｌである。土は湿った状態で、２４時間後に水はトレーに残らないようにする。
７）トマト植物は２２℃、１６時間の明／暗条件で、栽培室で生育させる
８）植物が成長したら（植え付け４週間後）、５Ｌのポットに移し、１週間毎に施肥する。
Ａ．接種用の葉の生産のためのトマト苗の調製
１）１２０×８０×８０サイズの苗鉢を使用する。
２）肥料を含む標準的な土壌を使用する。
３）４週齢のトマト苗を使用する。
４）小さなトレーに６ポット入れる。
５）１つのポットに１つの苗を入れる。
６）トレーに水を入れる。ポットごとに約１００ｍｌである。土は湿った状態で、２４時間後に水はトレーに残らないようにする。
７）トマト植物は２２℃、１６時間の明／暗条件で、栽培室で生育させる
８）植物が成長したら（植え付け４週間後）、５Ｌのポットに移し、１週間毎に施肥する。
【0138】
Ｂ．接種用トマト葉の調製
１）滅菌紙２枚を四角シャーレに入れる。
２）無菌状態で作業する。
３）５週齢以上のトマトの葉を使用する。
４）無菌メスで葉を切断する。
５）２０ｍｌの滅菌蒸留水を加えて、濾紙を濡らす（濾紙は最大限に濡らすが、水滴が垂れないようにする）。
６）四角いシャーレに、およそ６枚の葉を（葉の下側を上にして）濡れた紙の上に置く。
７）プレートを蓋で覆う。
１）滅菌紙２枚を四角シャーレに入れる。
２）無菌状態で作業する。
３）５週齢以上のトマトの葉を使用する。
４）無菌メスで葉を切断する。
５）２０ｍｌの滅菌蒸留水を加えて、濾紙を濡らす（濾紙は最大限に濡らすが、水滴が垂れないようにする）。
６）四角いシャーレに、およそ６枚の葉を（葉の下側を上にして）濡れた紙の上に置く。
７）プレートを蓋で覆う。
【0139】
Ｃ．接種材料の準備及びリーフディスク感染
胞子嚢懸濁液の調製
１）Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａに感染させたトマト葉１０葉（感染４～６日後）を滅菌した５０ｍｌチューブに入れ、冷たい滅菌蒸留水４０ｍｌを入れる。
２）チューブを手で穏やかに混合し、葉の崩壊はしないように胞子嚢を水中に移す。
３）１６層のガーゼを通して胞子懸濁液を５０ｍｌのチューブに濾過する。
４）胞子濃度を計算する－２００×倍率の顕微鏡を使用する。６０００胞子嚢／ｍｌの濃度が予想される。
５）氷上でチューブを冷やす。
胞子嚢懸濁液の調製
１）Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａに感染させたトマト葉１０葉（感染４～６日後）を滅菌した５０ｍｌチューブに入れ、冷たい滅菌蒸留水４０ｍｌを入れる。
２）チューブを手で穏やかに混合し、葉の崩壊はしないように胞子嚢を水中に移す。
３）１６層のガーゼを通して胞子懸濁液を５０ｍｌのチューブに濾過する。
４）胞子濃度を計算する－２００×倍率の顕微鏡を使用する。６０００胞子嚢／ｍｌの濃度が予想される。
５）氷上でチューブを冷やす。
【0140】
Ｄ．胞子嚢の洗浄・濾過濃縮
１）メンブレン（０．６５ミクロン～５ミクロン）で濾過システムを調製し、滅菌冷水でメンブレンを洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブからゆっくりと懸濁し、濾過システムに移す。低真空を使用し、メンブレンを乾燥させない。フィルター上に４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
３）胞子を洗い、細菌や他の菌類の胞子を捨てる（洗浄には４０ｍｌの水を用いる）－冷滅菌水を噴霧して胞子を懸濁し、洗浄する。
４）胞子の洗浄をさらに５回繰り返す。メンブレンを乾燥させない。４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
５）１０００μｌピペッターを用いて胞子懸濁液を清浄な５０ｍｌチューブに回収する。
６）５０ｍｌの試験管に静かに膜を挿入し、膜に付着した胞子嚢を浮遊させる。
７）オートクレーブ処理する膜を廃棄する。
８）液体を捨て、次亜塩素酸塩を用いて濾過システムを３０分間消毒する。
９）濾過システムを水道水で洗浄し、濾過システムをプラスチック製バスケットの中で、紙の上で乾燥させる。
１０）胞子嚢濃度を計算する－倍率２００Ｘの顕微鏡を使用する－１０，０００～５０，０００胞子嚢／ｍｌの濃度が期待される。
１１）胞子嚢の懸濁液を氷上に置く。
１）メンブレン（０．６５ミクロン～５ミクロン）で濾過システムを調製し、滅菌冷水でメンブレンを洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブからゆっくりと懸濁し、濾過システムに移す。低真空を使用し、メンブレンを乾燥させない。フィルター上に４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
３）胞子を洗い、細菌や他の菌類の胞子を捨てる（洗浄には４０ｍｌの水を用いる）－冷滅菌水を噴霧して胞子を懸濁し、洗浄する。
４）胞子の洗浄をさらに５回繰り返す。メンブレンを乾燥させない。４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
５）１０００μｌピペッターを用いて胞子懸濁液を清浄な５０ｍｌチューブに回収する。
６）５０ｍｌの試験管に静かに膜を挿入し、膜に付着した胞子嚢を浮遊させる。
７）オートクレーブ処理する膜を廃棄する。
８）液体を捨て、次亜塩素酸塩を用いて濾過システムを３０分間消毒する。
９）濾過システムを水道水で洗浄し、濾過システムをプラスチック製バスケットの中で、紙の上で乾燥させる。
１０）胞子嚢濃度を計算する－倍率２００Ｘの顕微鏡を使用する－１０，０００～５０，０００胞子嚢／ｍｌの濃度が期待される。
１１）胞子嚢の懸濁液を氷上に置く。
【0141】
Ｅ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａの維持のための剥離葉への胞子の接種
１）Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａの胞子懸濁液１０００μｌを１つの正方形の皿の葉のすべてに噴霧し、ディッシュを覆う。
２）葉に菌を感染させ、１７℃の暗インキュベーターに２４時間静置する。
３）胞子嚢の増殖するように、プレートを２２℃、１２時間照明のインキュベーターに移し、さらに３～５日間置く。
１）Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａの胞子懸濁液１０００μｌを１つの正方形の皿の葉のすべてに噴霧し、ディッシュを覆う。
２）葉に菌を感染させ、１７℃の暗インキュベーターに２４時間静置する。
３）胞子嚢の増殖するように、プレートを２２℃、１２時間照明のインキュベーターに移し、さらに３～５日間置く。
【0142】
Ｆ．スクリーニング用のトマトリーフディスクマイクロプレートの調製
１）４８ウェルプレートを用意する。
２）滅菌水寒天０．５％を調製し、予熱し、だが冷たいものを使用する。
３）１００μｌの滅菌水寒天０．５％をマイクロプレートウェルに加える。
４）第３、第４又は第５葉から調製されたトマトリーフディスクをマイクロプレートウェルに入れる。ディスクを軽く押して、液体寒天溶液と確実に最大限に接触させる。
１）４８ウェルプレートを用意する。
２）滅菌水寒天０．５％を調製し、予熱し、だが冷たいものを使用する。
３）１００μｌの滅菌水寒天０．５％をマイクロプレートウェルに加える。
４）第３、第４又は第５葉から調製されたトマトリーフディスクをマイクロプレートウェルに入れる。ディスクを軽く押して、液体寒天溶液と確実に最大限に接触させる。
【0143】
Ｇ．材料スクリーニングのためのリーフディスクマイクロプレートへの胞子の接種
１）試験用マイクロプレートに胞子懸濁液を入れる。
２）化学薬品マイクロプレートを透明シーラーで密封する。
３）マイクロプレートを２０００ＲＰＭで１０分間振盪し、材料と添加した胞子懸濁液を混合する。
４）マイクロプレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部に液体を回収する。
５）５μｌの胞子懸濁液をマイクロプレートの各ディスクの中央に加える。
６）透明シーラーでリーフディスクを密封する。
７）密封したリーフディスクプレートを、暗所で１７℃で２４時間、次に２２℃で、１２時間の明暗条件で３～５日間、インキュベーターに入れる。
８）生物活性評価を行う。
１）試験用マイクロプレートに胞子懸濁液を入れる。
２）化学薬品マイクロプレートを透明シーラーで密封する。
３）マイクロプレートを２０００ＲＰＭで１０分間振盪し、材料と添加した胞子懸濁液を混合する。
４）マイクロプレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部に液体を回収する。
５）５μｌの胞子懸濁液をマイクロプレートの各ディスクの中央に加える。
６）透明シーラーでリーフディスクを密封する。
７）密封したリーフディスクプレートを、暗所で１７℃で２４時間、次に２２℃で、１２時間の明暗条件で３～５日間、インキュベーターに入れる。
８）生物活性評価を行う。
【0144】
Ｈ．生物活性評価
１）１つの時点（×５倍率ガラスを用いた懸濁液調製の５日後）でプレートスクリーニングする
２）感染したディスクをエクセルシートでレポートする：
タイプ１－ディスクが完全に感染している場合；
タイプ２－不確定；
タイプ３－ディスクが全く感染していない場合。
３）各材料について３のスコアの繰り返しの数を計算する。
４）各材料のスコア３の合計を計算する。
５）ベストスコアは以下のように計算した：反復数＝４、スコアの合計＝１２。
６）「ヒット」は４又は３回の繰り返し、及び合計が６～１２回の材料である。
試験例９の結果を参照のこと。
１）１つの時点（×５倍率ガラスを用いた懸濁液調製の５日後）でプレートスクリーニングする
２）感染したディスクをエクセルシートでレポートする：
タイプ１－ディスクが完全に感染している場合；
タイプ２－不確定；
タイプ３－ディスクが全く感染していない場合。
３）各材料について３のスコアの繰り返しの数を計算する。
４）各材料のスコア３の合計を計算する。
５）ベストスコアは以下のように計算した：反復数＝４、スコアの合計＝１２。
６）「ヒット」は４又は３回の繰り返し、及び合計が６～１２回の材料である。
試験例９の結果を参照のこと。
【0145】
試験例７．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅに対して生物活性を期待できる１－フェニル－テトラリン化合物のマイクロプレートに基づくスクリーニング
背景：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは桿状のグラム陰性細菌である。６０％グリセロール中の凍結細菌ストックを、生物活性スクリーニング実験のための接種材料として使用した。
背景：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは桿状のグラム陰性細菌である。６０％グリセロール中の凍結細菌ストックを、生物活性スクリーニング実験のための接種材料として使用した。
【0146】
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１又は２をマイクロプレートのウェルに添加し、凍結細菌懸濁液と混合し、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの増殖を目視によりモニターした。
【0147】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0148】
材料：ＬＢ、ＬＢＡ、ＤＭＳＯ。
【0149】
装置：遠心機、振盪機、インキュベーター。
【0150】
方法：
Ａ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ懸濁液の調製：
１）ＬＢＡプレート上で２８℃で２日間Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓを増殖させ、単一のコロニーを得る。
２）５ｍｌのＬＢを入れた５０ｍｌ滅菌チューブに滅菌爪楊枝を用いて単一コロニーを移し、２８℃、１５０ＲＰＭで２４時間増殖させる。
３）チューブを冷蔵庫で１時間冷やす。
４）７．５ｍｌの冷蔵庫で冷やしたグリセロール溶液をチューブに加え、６０％グリセロール溶液を得る。
５）十分にしかしおだやかに混合し、完全な混合する－１０００ＲＰＭのボルテックスを使用する。
６）６０％グリセロール中の細菌懸濁液１００μｌを１．５ｍｌの試験管に分注する。各アリコートは１０枚のマイクロプレートのスクリーニングに十分である。
７）バクテリアの６０％グリセロール懸濁液を－２０℃で保存する。
Ａ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ懸濁液の調製：
１）ＬＢＡプレート上で２８℃で２日間Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓを増殖させ、単一のコロニーを得る。
２）５ｍｌのＬＢを入れた５０ｍｌ滅菌チューブに滅菌爪楊枝を用いて単一コロニーを移し、２８℃、１５０ＲＰＭで２４時間増殖させる。
３）チューブを冷蔵庫で１時間冷やす。
４）７．５ｍｌの冷蔵庫で冷やしたグリセロール溶液をチューブに加え、６０％グリセロール溶液を得る。
５）十分にしかしおだやかに混合し、完全な混合する－１０００ＲＰＭのボルテックスを使用する。
６）６０％グリセロール中の細菌懸濁液１００μｌを１．５ｍｌの試験管に分注する。各アリコートは１０枚のマイクロプレートのスクリーニングに十分である。
７）バクテリアの６０％グリセロール懸濁液を－２０℃で保存する。
【0151】
Ｂ．生理活性スクリーニング実験用Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ懸濁液の調製：
１）凍結したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ懸濁液１００μｌを入れた１．５ｍｌの試験管を冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）フード内にて、５０ｍｌのチューブに４０ｍｌの冷蔵庫で冷やしたＬＢでを入れたものを調製する。
３）４０μｌの細菌懸濁液を、５０ｍｌチューブ中の４０ｍｌの冷蔵庫で冷やしたＬＢと混合する。この量は、１０個のマイクロプレートの活性スクリーニングに十分である。
４）この懸濁液を生物活性スクリーニング実験に使用する。
１）凍結したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ懸濁液１００μｌを入れた１．５ｍｌの試験管を冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）フード内にて、５０ｍｌのチューブに４０ｍｌの冷蔵庫で冷やしたＬＢでを入れたものを調製する。
３）４０μｌの細菌懸濁液を、５０ｍｌチューブ中の４０ｍｌの冷蔵庫で冷やしたＬＢと混合する。この量は、１０個のマイクロプレートの活性スクリーニングに十分である。
４）この懸濁液を生物活性スクリーニング実験に使用する。
【0152】
Ｃ．生物活性スクリーニング実験用マイクロプレート調製物：
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物１又は２の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに分注する。
４）マルチピペットを使用して、増殖培地を含む細菌懸濁液８０μｌをマイクロプレートの各ウェルに添加する。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）プレートを２０００ＲＰＭで１０分間振盪して、１－フェニル－テトラリン化合物を細菌懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部に液体を回収する。
８）プレートをカバー付きのプラスチックボックスに入れ、２８℃のインキュベーターに入れる。
１）ＤＭＳＯ中の精製１％ １－フェニル－テトラリン化合物１又は２の原液を取り、それを卓上で少なくとも２０分間解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液１０μｌを、マルチピペットを用いてマイクロプレートのウェルに分注する。
４）マルチピペットを使用して、増殖培地を含む細菌懸濁液８０μｌをマイクロプレートの各ウェルに添加する。
５）透明シーラーでプレートを密閉する。
６）プレートを２０００ＲＰＭで１０分間振盪して、１－フェニル－テトラリン化合物を細菌懸濁液と混合する。
７）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離し、停止して、プレートの底部に液体を回収する。
８）プレートをカバー付きのプラスチックボックスに入れ、２８℃のインキュベーターに入れる。
【0153】
Ｄ．マイクロプレートの生物活性スクリーニング：
１）５日においてマイクロプレートをスクリーニングする：接種後３、５、７、１４、２１日。
２）ランプを使用して、細菌の増殖を目視で評価する。
３）スクリーニング用のプレートを調製する：２０００ＲＰＭで２分間プレートを振とうして細菌を懸濁させ、次いで１０００ ＲＣＦで数秒間プレートを遠心分離する。
４）マイクロプレートのカバーを外した後、カバーに液体が付いている場合は（内側から）、６０℃の加熱ブロックを使用して液体を蒸発させてスクリーニングする。
５）各ウェルの透明度を対照ウェル（対照殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含むウェル）の透明度と比較する。
６）以下の解釈を用いて結果を記録する：清澄＝３（細菌の増殖なし）、混濁＝１（正常な細菌増殖）、不確定＝２（０．５％ ＤＭＳＯ溶液中での増殖と比較して非常に低い濁度）。
試験例９の結果を参照のこと。
１）５日においてマイクロプレートをスクリーニングする：接種後３、５、７、１４、２１日。
２）ランプを使用して、細菌の増殖を目視で評価する。
３）スクリーニング用のプレートを調製する：２０００ＲＰＭで２分間プレートを振とうして細菌を懸濁させ、次いで１０００ ＲＣＦで数秒間プレートを遠心分離する。
４）マイクロプレートのカバーを外した後、カバーに液体が付いている場合は（内側から）、６０℃の加熱ブロックを使用して液体を蒸発させてスクリーニングする。
５）各ウェルの透明度を対照ウェル（対照殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含むウェル）の透明度と比較する。
６）以下の解釈を用いて結果を記録する：清澄＝３（細菌の増殖なし）、混濁＝１（正常な細菌増殖）、不確定＝２（０．５％ ＤＭＳＯ溶液中での増殖と比較して非常に低い濁度）。
試験例９の結果を参照のこと。
【0154】
試験例８．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａに対する期待される生物活性についての１－フェニル－テトラリン化合物のマイクロプレートベースの試験
背景： Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａは主要な植物病原体であり、多くの農作物に大きな被害をもたらす。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａは子嚢菌類に属する菌類で、空気感染性の病原体である。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａの胞子を大量に生産することは非常に容易であり、－２０℃の液体６０％グリセロール中で生存することから、このスクリーニングでは、各実験のために新鮮な胞子を調製するのではなく、凍結胞子ストックを使用することを決定した。
背景： Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａは主要な植物病原体であり、多くの農作物に大きな被害をもたらす。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａは子嚢菌類に属する菌類で、空気感染性の病原体である。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａの胞子を大量に生産することは非常に容易であり、－２０℃の液体６０％グリセロール中で生存することから、このスクリーニングでは、各実験のために新鮮な胞子を調製するのではなく、凍結胞子ストックを使用することを決定した。
【0155】
要旨：ＤＭＳＯで希釈した化合物１、２又は３をマイクロプレートウェルに添加し、凍結細菌懸濁液と混合し、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａの増殖を目視によりモニターした。
【0156】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0157】
材料：ＬＢ、ＬＢＡ、ＤＭＳＯ。
【0158】
装置：遠心機、振盪機、インキュベーター。
【0159】
方法：
Ａ．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ胞子懸濁液の調製
１）ＡｌｔｅｒｎａｒｉａのＰＤＡＴブロックをＰＤＡＴプレートの中央に置き、シリカゲルを入れた箱の中で２５℃で２１日間増殖させる。
２）プレートを冷蔵庫で少なくとも１時間冷やす。
３）冷蔵庫で冷やした滅菌水２５ｍｌを加える。
４）１枚のプレートから１枚の菌糸と胞子のついた寒天をメスで８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子は氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移す－約２５ｍｌが回収されるはずである
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な無菌の５０ｍｌチューブに直接濾過する。菌糸が約２０ｍｌ回収されるはずである。
９）胞子の予想濃度は２５，０００胞子／ｍｌである。
１０）胞子の入った５０ｍｌチューブを４５００ＲＣＦで５分間遠心分離すると、試験管の底部に小さな暗色のペレットが見られるはずである。
１１）液体を静かに捨て、各チューブに約３ｍｌの液体が入った状態で胞子のペレットを保つ。
１２）氷上に置く。
１３）ボルテックスで胞子を浮遊させる。
１４）すべてのチューブから懸濁液を１本の５０ｍｌチューブに採取する。
１５）胞子濃度を計算する（２０×１０倍率で、×１０希釈した物をカウント）。
１６）胞子の入った５０ｍｌチューブを４５００ＲＣＦで５分間遠心分離すると、試験管の底部に小さな暗色のペレットが見られるはずである。
１７）遠心後の胞子濃度を調整する（計算には体積比を使用する）。濃度は５×１０５とし、水を加えるか、又は胞子ペレットが入ったチューブの水の量を減らすことにより、胞子の濃度を調整する。
１８）冷滅菌グリセロール（１００％）を加え、６０％グリセロール溶液を得る。最終的な胞子濃度は２×１０５とする。
１９）胞子懸濁液をよく混ぜる。
２０）１ｍｌの胞子懸濁液のアリコートを１．５ｍｌチューブに分注する。
２１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
Ａ．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ胞子懸濁液の調製
１）ＡｌｔｅｒｎａｒｉａのＰＤＡＴブロックをＰＤＡＴプレートの中央に置き、シリカゲルを入れた箱の中で２５℃で２１日間増殖させる。
２）プレートを冷蔵庫で少なくとも１時間冷やす。
３）冷蔵庫で冷やした滅菌水２５ｍｌを加える。
４）１枚のプレートから１枚の菌糸と胞子のついた寒天をメスで８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）すべての過程で胞子は氷上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移す－約２５ｍｌが回収されるはずである
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な無菌の５０ｍｌチューブに直接濾過する。菌糸が約２０ｍｌ回収されるはずである。
９）胞子の予想濃度は２５，０００胞子／ｍｌである。
１０）胞子の入った５０ｍｌチューブを４５００ＲＣＦで５分間遠心分離すると、試験管の底部に小さな暗色のペレットが見られるはずである。
１１）液体を静かに捨て、各チューブに約３ｍｌの液体が入った状態で胞子のペレットを保つ。
１２）氷上に置く。
１３）ボルテックスで胞子を浮遊させる。
１４）すべてのチューブから懸濁液を１本の５０ｍｌチューブに採取する。
１５）胞子濃度を計算する（２０×１０倍率で、×１０希釈した物をカウント）。
１６）胞子の入った５０ｍｌチューブを４５００ＲＣＦで５分間遠心分離すると、試験管の底部に小さな暗色のペレットが見られるはずである。
１７）遠心後の胞子濃度を調整する（計算には体積比を使用する）。濃度は５×１０５とし、水を加えるか、又は胞子ペレットが入ったチューブの水の量を減らすことにより、胞子の濃度を調整する。
１８）冷滅菌グリセロール（１００％）を加え、６０％グリセロール溶液を得る。最終的な胞子濃度は２×１０５とする。
１９）胞子懸濁液をよく混ぜる。
２０）１ｍｌの胞子懸濁液のアリコートを１．５ｍｌチューブに分注する。
２１）胞子懸濁液は－２０℃で保存する。
【0160】
Ｂ．スクリーニング用の胞子懸濁液の調製
１）凍結した胞子懸濁液４００μｌを冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）胞子懸濁液を氷冷したＰＤＢＣ２０ｍｌと５０ｍｌ試験管中で混合し、１ｍｌあたり２×１０３個の胞子の濃度とし、マイクロプレート４枚に使用する。
３）この懸濁液をスクリーニング実験に使用する。
１）凍結した胞子懸濁液４００μｌを冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
２）胞子懸濁液を氷冷したＰＤＢＣ２０ｍｌと５０ｍｌ試験管中で混合し、１ｍｌあたり２×１０３個の胞子の濃度とし、マイクロプレート４枚に使用する。
３）この懸濁液をスクリーニング実験に使用する。
【0161】
Ｃ．５０ｍｌチューブ×３６本、リザーバ×４本、ＰＤＢＣ４００ｍｌをオートクレーブで蒸気滅菌する。
【0162】
Ｄ．スクリーニング実験のためのマイクロプレート調製
１）精製した１％ １－フェニル－テトラリン化合物のＤＭＳＯ原液を－２０℃の冷凍庫から取り出し、卓上で解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液を、マルチピペットを用いて１０μｌずつマイクロプレートのウェルに入れる。
４）激しく混合した胞子懸濁接種材料を、マルチピペットを用いて４０μｌずつマイクロプレートのウェルに添加し、透明シーラーでプレートを密封する。
５）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、材料を菌糸懸濁液と混合する。
６）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離した後、停止して、プレートの底部の液体を回収する。
７）すべてのプレートの培養の準備ができるまで、卓上のプレートを回収する。
８）回収したプレートをプラスチックボックスに入れ、２５℃のインキュベーターに入れる。
１）精製した１％ １－フェニル－テトラリン化合物のＤＭＳＯ原液を－２０℃の冷凍庫から取り出し、卓上で解凍する。
２）１％ １－フェニル－テトラリン化合物の原液１μｌをとり、水３９μｌで２５０ｐｐｍまで希釈する。
３）希釈した（２５０ｐｐｍ）１－フェニル－テトラリン化合物溶液を、マルチピペットを用いて１０μｌずつマイクロプレートのウェルに入れる。
４）激しく混合した胞子懸濁接種材料を、マルチピペットを用いて４０μｌずつマイクロプレートのウェルに添加し、透明シーラーでプレートを密封する。
５）２０００ＲＰＭで１０分間プレートを振盪して、材料を菌糸懸濁液と混合する。
６）プレートを１０００ＲＣＦで１秒間遠心分離した後、停止して、プレートの底部の液体を回収する。
７）すべてのプレートの培養の準備ができるまで、卓上のプレートを回収する。
８）回収したプレートをプラスチックボックスに入れ、２５℃のインキュベーターに入れる。
【0163】
Ｅ．プレートのスクリーニング
１）３日においてスクリーニングする：摂取後７、１４、２１日後。
２）経時的な真菌増殖に対する化合物の影響を視覚的に評価するためにランプを使用する。
３）プレートのカバーを外した後に、カバーに液体がある場合（内側から）、６０℃のヘッドブロックで液体を蒸発させ、スクリーニングする。
４）各ウェルの菌糸成長を、対照プレートウェル（市販の殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含有するウェル）の菌糸成長と比較する。
５）結果は以下のグレードを用いて解釈した：清澄＝３（菌糸の成長なし）、正常な菌糸構造＝０（正常な成長）、不確定＝２（予想外のタイプの固体構造、又は領域の部分的被覆）。
試験例９の結果を参照のこと。
１）３日においてスクリーニングする：摂取後７、１４、２１日後。
２）経時的な真菌増殖に対する化合物の影響を視覚的に評価するためにランプを使用する。
３）プレートのカバーを外した後に、カバーに液体がある場合（内側から）、６０℃のヘッドブロックで液体を蒸発させ、スクリーニングする。
４）各ウェルの菌糸成長を、対照プレートウェル（市販の殺菌剤又は０．５％ ＤＭＳＯ溶液を含有するウェル）の菌糸成長と比較する。
５）結果は以下のグレードを用いて解釈した：清澄＝３（菌糸の成長なし）、正常な菌糸構造＝０（正常な成長）、不確定＝２（予想外のタイプの固体構造、又は領域の部分的被覆）。
試験例９の結果を参照のこと。
【0164】
試験例９．試験例１～８のプロトコールに基づくインビトロ実験の結果
インビトロスクリーニングマトリックス
１－フェニル－テトラリン化合物を、選択された農業有害生物に対してスクリーニングした（以下の表に示す）。生物活性値は％であり、標的有害生物を根絶する可能性を反映する。
生物活性の相対値の算出規則（最大値に対する％で表示）
ａ．Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ－活性グレード（１／２／３）×反復数＃／１２（最大値３×４＝１２）×１００
ｂ．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ －活性グレード（１／２／３）×反復数＃×活性の日数／２５２（最大値３×４×２１＝２５２）×１００
ｃ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒａｔｏｖｏｒｕｍ－活性グレード（１／２／３）×反復数＃×活性の日数／１６８（最大値３×４×１４＝１６８）×１００
インビトロスクリーニングマトリックス
１－フェニル－テトラリン化合物を、選択された農業有害生物に対してスクリーニングした（以下の表に示す）。生物活性値は％であり、標的有害生物を根絶する可能性を反映する。
生物活性の相対値の算出規則（最大値に対する％で表示）
ａ．Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ－活性グレード（１／２／３）×反復数＃／１２（最大値３×４＝１２）×１００
ｂ．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ －活性グレード（１／２／３）×反復数＃×活性の日数／２５２（最大値３×４×２１＝２５２）×１００
ｃ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒａｔｏｖｏｒｕｍ－活性グレード（１／２／３）×反復数＃×活性の日数／１６８（最大値３×４×１４＝１６８）×１００
【0165】
【表1】
【0166】
【表2】
【0167】
【表3】
【0168】
要約すると、１－フェニル－テトラリン化合物は、以下の有害生物に対して有効な農薬であることが実証された：Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ（植物内の結果の項でポジティブな結果を示す）、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ（トマト剥離葉検証実験及び温室でのインビボ検証実験でポジティブな結果を示す）、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ（温室条件下でのトマトインビボ検証実験でポジティブな結果を示す）、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ。
【0169】
検証実験に用いる統計解析
対照植物（感染しているが処理されていない）と比較して、感染植物における試験化合物の効果を評価するために、スチューデントのｔ検定によりデータを分析し、ｐ値を算出した。各実験における反復の最小数は３であった。結果はｐ＜０．０５であれば有意とした。データは、生物学的レプリケートの平均の標準誤差平均で示した。＊はｐ値が＜０．０５であることを示す、＊＊はｐ値が＜０．０１であることを示す、＊＊＊はｐ値が＜０．００１であることを示す、＃はｐ値が＜０．１であることを示す、ｎ．ｓは対照に対して有意でない効果であることを示す。
対照植物（感染しているが処理されていない）と比較して、感染植物における試験化合物の効果を評価するために、スチューデントのｔ検定によりデータを分析し、ｐ値を算出した。各実験における反復の最小数は３であった。結果はｐ＜０．０５であれば有意とした。データは、生物学的レプリケートの平均の標準誤差平均で示した。＊はｐ値が＜０．０５であることを示す、＊＊はｐ値が＜０．０１であることを示す、＊＊＊はｐ値が＜０．００１であることを示す、＃はｐ値が＜０．１であることを示す、ｎ．ｓは対照に対して有意でない効果であることを示す。
【0170】
バリデーション実験に用いる製剤処方
製剤１の調製
４００ｐｐｍでの最終１－フェニル－テトラリン化合物製剤調製のために３種類の原液を使用した（製剤１）：
（Ａ）１－フェニル－テトラリン化合物の水・酢酸溶液。
１－フェニル－テトラリン化合物を水に溶解して０．２％水溶液を得た後、２％酢酸を添加した。最終溶液を室温で５分間超音波処理した。溶液は透明で無色であるはずである。
（Ｂ）０．４％キサンタンガム水溶液（ｗ／ｗ）。
（Ｃ）水中０．６％ Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）（ｗ／ｗ）。トウモロコシ植物に適用された最終製剤は、２０％の原液Ａ、１０％の原液Ｂ及びＣ、並びに６０％の水から構成される。
最終的に配合された１－フェニル－テトラリン化合物を４００ｐｐｍとして、又は必要な濃度に希釈して植物に適用した。
製剤１の調製
４００ｐｐｍでの最終１－フェニル－テトラリン化合物製剤調製のために３種類の原液を使用した（製剤１）：
（Ａ）１－フェニル－テトラリン化合物の水・酢酸溶液。
１－フェニル－テトラリン化合物を水に溶解して０．２％水溶液を得た後、２％酢酸を添加した。最終溶液を室温で５分間超音波処理した。溶液は透明で無色であるはずである。
（Ｂ）０．４％キサンタンガム水溶液（ｗ／ｗ）。
（Ｃ）水中０．６％ Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）（ｗ／ｗ）。トウモロコシ植物に適用された最終製剤は、２０％の原液Ａ、１０％の原液Ｂ及びＣ、並びに６０％の水から構成される。
最終的に配合された１－フェニル－テトラリン化合物を４００ｐｐｍとして、又は必要な濃度に希釈して植物に適用した。
【0171】
製剤２の調製
４００ｐｐｍ １－フェニル－テトラリン化合物製剤の最終調製のために３種類の原液を使用した：
（Ａ）水中の１－フェニル－テトラリン化合物の水懸濁液。
１－フェニル－テトラリン化合物をグラインダーを用いて粉砕し、粉砕した化合物を用いて滅菌水中の化合物の１％懸濁液を得た。１－フェニル－テトラリン化合物原体の重量は５０ｍｇであるべきである。１－フェニル－テトラリン化合物を１ｍｌの体積（５０振動／秒、１分間）で粉砕し、５回繰り返して、５ｍｌの懸濁液の最終体積及び１％の最終濃度を得た。
（Ｂ）０．４％キサンタンガム水溶液（ｗ／ｗ）。
（Ｃ）０．６％ Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）水溶液（ｗ／ｗ）。
コムギ植物に適用された最終製剤は：
原液（Ａ）４％、原液（Ｂ）１０％、原液（Ｃ）３．３％、水８２．７％。
最終的に製剤化された１－フェニル－テトラリン化合物は、４００ｐｐｍとして、又は必要な濃度に希釈して植物に適用した。
４００ｐｐｍ １－フェニル－テトラリン化合物製剤の最終調製のために３種類の原液を使用した：
（Ａ）水中の１－フェニル－テトラリン化合物の水懸濁液。
１－フェニル－テトラリン化合物をグラインダーを用いて粉砕し、粉砕した化合物を用いて滅菌水中の化合物の１％懸濁液を得た。１－フェニル－テトラリン化合物原体の重量は５０ｍｇであるべきである。１－フェニル－テトラリン化合物を１ｍｌの体積（５０振動／秒、１分間）で粉砕し、５回繰り返して、５ｍｌの懸濁液の最終体積及び１％の最終濃度を得た。
（Ｂ）０．４％キサンタンガム水溶液（ｗ／ｗ）。
（Ｃ）０．６％ Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）水溶液（ｗ／ｗ）。
コムギ植物に適用された最終製剤は：
原液（Ａ）４％、原液（Ｂ）１０％、原液（Ｃ）３．３％、水８２．７％。
最終的に製剤化された１－フェニル－テトラリン化合物は、４００ｐｐｍとして、又は必要な濃度に希釈して植物に適用した。
【0172】
試験例１０．トウモロコシの植物での検証
プロトコール名：トウモロコシ実生試験におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ感染
一般的説明：トウモロコシへの接種、回収、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ胞子懸濁液の調製及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉに対する１－フェニル－テトラリン化合物１又は３の生物活性評価。
プロトコール名：トウモロコシ実生試験におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ感染
一般的説明：トウモロコシへの接種、回収、Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ胞子懸濁液の調製及びＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉに対する１－フェニル－テトラリン化合物１又は３の生物活性評価。
【0173】
以下の材料、方法及び装置を使用した：
【0174】
方法：
Ａ．接種用トウモロコシ実生の調製
１）１２０×８０×８０ｍｍポット、標準的な園芸用土壌、肥料、さび病感受性品種のトウモロコシの種子を使用する。
２）ポットをトレーに入れ、ポットの上まで土を入れる。
３）種子のために小さな溝を作る。
４）各ポットに約１０種のトウモロコシを植える。
５）種子を追加の土で覆う。
６トレーに水を入れる。１つのポットにつき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
７）２２℃の栽培室で８日間トウモロコシを生育させる（第２葉が出現するまで）。
Ａ．接種用トウモロコシ実生の調製
１）１２０×８０×８０ｍｍポット、標準的な園芸用土壌、肥料、さび病感受性品種のトウモロコシの種子を使用する。
２）ポットをトレーに入れ、ポットの上まで土を入れる。
３）種子のために小さな溝を作る。
４）各ポットに約１０種のトウモロコシを植える。
５）種子を追加の土で覆う。
６トレーに水を入れる。１つのポットにつき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
７）２２℃の栽培室で８日間トウモロコシを生育させる（第２葉が出現するまで）。
【0175】
Ｂ．接種のための［トウモロコシ葉からの］胞子懸濁液の調製
１）胞子の付いた２０枚の感染トウモロコシ葉を滅菌した５０ｍｌのチューブに入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液５０ｍｌを加える。
３）チューブを密閉された氷の冷たいプラスチック製の箱に挿入する。
４）３０００ＲＰＭで１５分間、振盪機を用いてボックスを振盪する。
５）懸濁液（葉を含まない）を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに移す。
６）１６層のガーゼを通して、胞子懸濁液を別の滅菌５０ｍｌチューブに濾過する。
７）胞子懸濁液の入ったチューブを氷上に置いておく。
８）胞子を洗浄し、５ミクロンのメンブレンフィルターで濃縮する。氷冷した滅菌水で４回洗浄し、胞子を０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液に採取する。
９）接種のために、胞子懸濁溶液を冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて希釈し、８０００胞子／ｍｌの胞子を得る。
１）胞子の付いた２０枚の感染トウモロコシ葉を滅菌した５０ｍｌのチューブに入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液５０ｍｌを加える。
３）チューブを密閉された氷の冷たいプラスチック製の箱に挿入する。
４）３０００ＲＰＭで１５分間、振盪機を用いてボックスを振盪する。
５）懸濁液（葉を含まない）を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに移す。
６）１６層のガーゼを通して、胞子懸濁液を別の滅菌５０ｍｌチューブに濾過する。
７）胞子懸濁液の入ったチューブを氷上に置いておく。
８）胞子を洗浄し、５ミクロンのメンブレンフィルターで濃縮する。氷冷した滅菌水で４回洗浄し、胞子を０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液に採取する。
９）接種のために、胞子懸濁溶液を冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて希釈し、８０００胞子／ｍｌの胞子を得る。
【0176】
Ｃ．栽培室実験
１）上記のように調製した８日齢の実生を使用する。
２）噴霧処理剤を植物あたり１ｍｌ程度準備する。
３）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を０．０５％まで処理剤に添加する。
４）処理剤を十分に飽和するまで（スプレーボトルを使用）葉に噴霧し、栽培室で乾燥させる。
５）２日目に再度散布し、乾燥させる。
６）２日目（処理剤散布から約４時間後）に、Ｐｕｃｃｉｎｉａ胞子懸濁液を植物に接種する。
７）スプレーボトルを用いて、９日齢のトウモロコシ実生の葉に約１ｍｌ（完全に飽和するまで）の胞子懸濁液を散布する。
８）接種した実生を入れたポットを、暗い湿潤チャンバーに入れ、底部に温水を入れる。チャンバーは、室内で湿度９９％の２２℃が２４時間保持されるべきである（加熱された水温は３２℃であるべきである）。
９）２４時間後、ポットを成長室に移す。
１０）２２℃の栽培室でトウモロコシを栽培する。
１１）接種から７日後、葉に褐色斑点が見られるはずである。
１２）接種から９日後のＰｕｃｃｉｎｉａ褐色斑点の葉被覆率を記録する。
１３）処理実生の葉被覆率を水処理実生と比較する。
１）上記のように調製した８日齢の実生を使用する。
２）噴霧処理剤を植物あたり１ｍｌ程度準備する。
３）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を０．０５％まで処理剤に添加する。
４）処理剤を十分に飽和するまで（スプレーボトルを使用）葉に噴霧し、栽培室で乾燥させる。
５）２日目に再度散布し、乾燥させる。
６）２日目（処理剤散布から約４時間後）に、Ｐｕｃｃｉｎｉａ胞子懸濁液を植物に接種する。
７）スプレーボトルを用いて、９日齢のトウモロコシ実生の葉に約１ｍｌ（完全に飽和するまで）の胞子懸濁液を散布する。
８）接種した実生を入れたポットを、暗い湿潤チャンバーに入れ、底部に温水を入れる。チャンバーは、室内で湿度９９％の２２℃が２４時間保持されるべきである（加熱された水温は３２℃であるべきである）。
９）２４時間後、ポットを成長室に移す。
１０）２２℃の栽培室でトウモロコシを栽培する。
１１）接種から７日後、葉に褐色斑点が見られるはずである。
１２）接種から９日後のＰｕｃｃｉｎｉａ褐色斑点の葉被覆率を記録する。
１３）処理実生の葉被覆率を水処理実生と比較する。
【0177】
実験３４３のための化合物１製剤（図１を参照）
化合物１を、１：９の重量対重量比でジメチルスルホキシド溶媒に溶解し、次いで、二重蒸留水で検証に使用する最終体積にした。噴霧前に、非イオン性界面活性剤Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を０．０５％の最終濃度となるように添加した。
化合物１を、１：９の重量対重量比でジメチルスルホキシド溶媒に溶解し、次いで、二重蒸留水で検証に使用する最終体積にした。噴霧前に、非イオン性界面活性剤Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を０．０５％の最終濃度となるように添加した。
【0178】
実験２７０，２８４、２９４用の化合物３製剤１～５（図４～６参照）
化合物３を、１：３６の重量対重量比の無水エタノール又は１：１７の重量対重量比を有するジメチルスルホキシドに溶解し、５分間超音波処理し、次いで、化合物３に対する重量対重量比１：４．５のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０又は化合物３に対する重量対重量比１：１のＳｉｌｗｅｔ（登録商標）のいずれかの非イオン性界面活性剤を別途追加し、最終的な製剤とした。場合によっては、Ｎａ２ＣＯ３を使用してｐＨを６に調整した。
化合物３を、１：３６の重量対重量比の無水エタノール又は１：１７の重量対重量比を有するジメチルスルホキシドに溶解し、５分間超音波処理し、次いで、化合物３に対する重量対重量比１：４．５のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０又は化合物３に対する重量対重量比１：１のＳｉｌｗｅｔ（登録商標）のいずれかの非イオン性界面活性剤を別途追加し、最終的な製剤とした。場合によっては、Ｎａ２ＣＯ３を使用してｐＨを６に調整した。
【0179】
結果
栽培室において、いくつかの実験を制御された環境下で行い、化合物１及び化合物３のトウモロコシ植物におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉを予防及び防除する可能性を推定した（図１、４、５及び６）。化合物１及び化合物３は非常に良好に機能し、制御された生育条件下で非常に良好な効果を示した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉの予防及び防除における１－フェニル－テトラリン化合物の平均有効率は、２００ｐｐｍで９５．１７％、４００ｐｐｍで９７．０６％であった。
栽培室において、いくつかの実験を制御された環境下で行い、化合物１及び化合物３のトウモロコシ植物におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉを予防及び防除する可能性を推定した（図１、４、５及び６）。化合物１及び化合物３は非常に良好に機能し、制御された生育条件下で非常に良好な効果を示した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉの予防及び防除における１－フェニル－テトラリン化合物の平均有効率は、２００ｐｐｍで９５．１７％、４００ｐｐｍで９７．０６％であった。
【0180】
試験例１１．葉さび病（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）に感染したコムギにおけるグロースチャンバー条件下での植物体実験による検証
一般的説明：コムギに葉さび病菌の接種、感染を制御するために潜在的に生理活性のある化合物の噴霧、感染レベルを評価するための手順。
一般的説明：コムギに葉さび病菌の接種、感染を制御するために潜在的に生理活性のある化合物の噴霧、感染レベルを評価するための手順。
【0181】
方法：
Ａ．接種用コムギ実生の調製
１）使用：９０×８０×８０の大きさの苗鉢、肥料を含む標準的な園芸用土、及び高感受性品種のコムギ種子（バイト・ハシタ農場、イスラエル）。
２）１２ポットを大きなトレーに入れ、ポットの上部に土を入れる。
３）２５０ｍｌのボトルを使用して種子のための溝を作る。
４）各ポット（円形内）にコムギ１０個を入れる。
５）種子を土で覆い、強く押す。
６）トレーに水を入れる。１つの容器につき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
７）接種前に２４℃の栽培室で２週間、コムギを生育させる。
Ａ．接種用コムギ実生の調製
１）使用：９０×８０×８０の大きさの苗鉢、肥料を含む標準的な園芸用土、及び高感受性品種のコムギ種子（バイト・ハシタ農場、イスラエル）。
２）１２ポットを大きなトレーに入れ、ポットの上部に土を入れる。
３）２５０ｍｌのボトルを使用して種子のための溝を作る。
４）各ポット（円形内）にコムギ１０個を入れる。
５）種子を土で覆い、強く押す。
６）トレーに水を入れる。１つの容器につき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
７）接種前に２４℃の栽培室で２週間、コムギを生育させる。
【0182】
Ｂ．胞子懸濁液の調製
１）無菌の５０ｍｌチューブに、胞子をもつコムギの葉３０個を入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液４０ｍｌを加える。
３）ボルテックス上でチューブを最大速度で２分間振る。
４）懸濁液（葉を含まない）を、氷上の清潔な無菌の５０ｍｌチューブに移す。
５）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する－約３０ｍｌを回収する。
６）胞子を５ミクロンの孔のメンブレンで洗浄し、細菌や他の真菌の胞子を捨てる。真空ポンプを止め、冷滅菌水をスプレーして胞子を浮遊させ、洗浄し、真空ポンプを再び始動する。
７）胞子洗浄をもう一度繰り返す。
８）胞子を１０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液で５０ｍｌチューブに懸濁する－胞子を含むメンブレンをＴｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液の入ったチューブに挿入し、手でチューブをゆする。
９）メンブレンを取り除き、廃棄する。
１０）濾過された液体を流しに落とし、濾過システムを上水で洗浄し、乾燥させる。
１１）［任意］最終濃度２０μｇ／ｍｌでクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加する。
１２）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約３０，０００胞子／ｍｌであり、褐色であるべきである。
１３）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて、胞子懸濁溶液を４０００胞子／ｍｌに希釈する。
１４）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
１）無菌の５０ｍｌチューブに、胞子をもつコムギの葉３０個を入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液４０ｍｌを加える。
３）ボルテックス上でチューブを最大速度で２分間振る。
４）懸濁液（葉を含まない）を、氷上の清潔な無菌の５０ｍｌチューブに移す。
５）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する－約３０ｍｌを回収する。
６）胞子を５ミクロンの孔のメンブレンで洗浄し、細菌や他の真菌の胞子を捨てる。真空ポンプを止め、冷滅菌水をスプレーして胞子を浮遊させ、洗浄し、真空ポンプを再び始動する。
７）胞子洗浄をもう一度繰り返す。
８）胞子を１０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液で５０ｍｌチューブに懸濁する－胞子を含むメンブレンをＴｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液の入ったチューブに挿入し、手でチューブをゆする。
９）メンブレンを取り除き、廃棄する。
１０）濾過された液体を流しに落とし、濾過システムを上水で洗浄し、乾燥させる。
１１）［任意］最終濃度２０μｇ／ｍｌでクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加する。
１２）懸濁液中の胞子濃度を確認する－濃度は約３０，０００胞子／ｍｌであり、褐色であるべきである。
１３）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて、胞子懸濁溶液を４０００胞子／ｍｌに希釈する。
１４）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
【0183】
Ｃ．感染実験のためのコムギ植物への接種
１）第１葉が完全に発育するまで、約２週間植物を育成する。
２）９～１０の植物を入れたポットを使用する。
３）胞子懸濁液４０００胞子／ｍｌを植物当たり０．１ｍｌでコムギ植物に噴霧する。
４）０．５ｍｍオリフィスのコンプレッサーペイントブラシシステムを使用して、４０ＰＳＩで胞子懸濁液を噴霧し、回転トレー上に４ポットを一度に噴霧し、それを２回行う。
５）コムギを接種した植物のポットを、２０℃［温水３０℃、室温は１８℃］の湿潤チャンバーに一晩入れる。
６）湿潤チャンバーの直後、シリンダーをポットに載せ、栽培室に移す。
７）室温２４℃、１６時間明期／８時間暗期でコムギを栽培する。
１）第１葉が完全に発育するまで、約２週間植物を育成する。
２）９～１０の植物を入れたポットを使用する。
３）胞子懸濁液４０００胞子／ｍｌを植物当たり０．１ｍｌでコムギ植物に噴霧する。
４）０．５ｍｍオリフィスのコンプレッサーペイントブラシシステムを使用して、４０ＰＳＩで胞子懸濁液を噴霧し、回転トレー上に４ポットを一度に噴霧し、それを２回行う。
５）コムギを接種した植物のポットを、２０℃［温水３０℃、室温は１８℃］の湿潤チャンバーに一晩入れる。
６）湿潤チャンバーの直後、シリンダーをポットに載せ、栽培室に移す。
７）室温２４℃、１６時間明期／８時間暗期でコムギを栽培する。
【0184】
Ｄ．感染レベルの分析
１）約２週間後に感染レベルの分析を行う。
２）最初の葉だけの感染レベルを分析する。
３）感染レベルは胞子パッチの葉被覆度に従ってスコア化する。
４）胞子パッチの１００％の被覆率を実験前に決定しておき、そのような葉の写真を感染レベルの評価に用いる。
１）約２週間後に感染レベルの分析を行う。
２）最初の葉だけの感染レベルを分析する。
３）感染レベルは胞子パッチの葉被覆度に従ってスコア化する。
４）胞子パッチの１００％の被覆率を実験前に決定しておき、そのような葉の写真を感染レベルの評価に用いる。
【0185】
Ｅ．試験化合物の適用
１）スプレーによる接種の１日前に製剤化された化合物１の処理を行った。
２）各植物に、製剤化された化合物１（試験例９参照）１００ｕｌずつ散布した。
３）各処理には、ポットあたり９～１０個の植物を有する４つのポットが含まれる。
１）スプレーによる接種の１日前に製剤化された化合物１の処理を行った。
２）各植物に、製剤化された化合物１（試験例９参照）１００ｕｌずつ散布した。
３）各処理には、ポットあたり９～１０個の植物を有する４つのポットが含まれる。
【0186】
結果
栽培室の制御された環境下で２つの実験を行い、化合物１のトウモロコシ植物におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉの予防及び防除に対する生物活性の可能性を評価した（図２及び３）。化合物１は非常に良好に機能し、制御された成長条件下で非常に良好な有効性を示した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａの予防及び防除における化合物１の平均有効率は、２００ｐｐｍで９５．１７％、４００ｐｐｍで９７．０６％であった。
栽培室の制御された環境下で２つの実験を行い、化合物１のトウモロコシ植物におけるＰｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉの予防及び防除に対する生物活性の可能性を評価した（図２及び３）。化合物１は非常に良好に機能し、制御された成長条件下で非常に良好な有効性を示した。Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａの予防及び防除における化合物１の平均有効率は、２００ｐｐｍで９５．１７％、４００ｐｐｍで９７．０６％であった。
【0187】
試験例１２．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに感染したトマト剥離葉を用いた検証実験
概要：トマトの剥離葉を１‐フェニル‐テトラリン化合物で処理し、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの胞子に感染させた。
概要：トマトの剥離葉を１‐フェニル‐テトラリン化合物で処理し、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓの胞子に感染させた。
【0188】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ胞子懸濁液調製物：試験例６に従って胞子を調製し、水によって１０００胞子／ｍｌに希釈する。
【0189】
Ａ．接種用トマト葉の調製：
１）滅菌紙２枚を四角シャーレに入れる。
２）無菌状態で作業する。
３）上から３～５枚目の葉を使用する。
４）滅菌蒸留水を加えて濾紙を濡らす。
５）無菌メスで葉から小片を切り取る。
６）四角いシャーレに１０枚の葉を入れ、湿った濾紙の上に、葉の下側が濾紙に向くように置く。
７）プレートを蓋で覆う。
１）滅菌紙２枚を四角シャーレに入れる。
２）無菌状態で作業する。
３）上から３～５枚目の葉を使用する。
４）滅菌蒸留水を加えて濾紙を濡らす。
５）無菌メスで葉から小片を切り取る。
６）四角いシャーレに１０枚の葉を入れ、湿った濾紙の上に、葉の下側が濾紙に向くように置く。
７）プレートを蓋で覆う。
【0190】
Ｂ．剥離葉上の胞子の処理と接種
１）１枚の正方形のディッシュのすべての葉に１ｍｌの処理液を（スプレーシリンジを用いて）葉の上側にスプレーし、葉を化学フード内で乾燥させる。
２）１ｍｌのＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ胞子懸濁液を、１枚の正方形のディッシュの全ての葉の上側に（スプレーツールを用いて）スプレーする。
３）ディッシュに蓋をして、伸縮ナイロンで密封し、試験例６に従って葉上で真菌を増殖させ、７日後の感染レベルを記録する。
１）１枚の正方形のディッシュのすべての葉に１ｍｌの処理液を（スプレーシリンジを用いて）葉の上側にスプレーし、葉を化学フード内で乾燥させる。
２）１ｍｌのＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ胞子懸濁液を、１枚の正方形のディッシュの全ての葉の上側に（スプレーツールを用いて）スプレーする。
３）ディッシュに蓋をして、伸縮ナイロンで密封し、試験例６に従って葉上で真菌を増殖させ、７日後の感染レベルを記録する。
【0191】
実験４８７、４９２、５００で使用した製剤の製法（下記表４～６参照）
化合物３を、１：３６の重量対重量比の無水エタノール又は１：１７の重量対重量比のジメチルスルホキシドで溶解し、５分間超音波処理し、次いで、化合物３に対する重量対重量比１：４．５のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０又は化合物３に対する重量対重量比１：１のＳｉｌｗｅｔ（登録商標）のいずれかの非イオン性界面活性剤を別途添加し、最終的な製剤とした。適宜、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）を用いてｐＨを６に調整した。
化合物３を、１：３６の重量対重量比の無水エタノール又は１：１７の重量対重量比のジメチルスルホキシドで溶解し、５分間超音波処理し、次いで、化合物３に対する重量対重量比１：４．５のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０又は化合物３に対する重量対重量比１：１のＳｉｌｗｅｔ（登録商標）のいずれかの非イオン性界面活性剤を別途添加し、最終的な製剤とした。適宜、炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３）を用いてｐＨを６に調整した。
【0192】
結果
３つの独立した実験を、トマトの剥離葉において実施し、そこで、化合物３のＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する予防及び防除の生物活性の可能性を推定した（以下の表４～６の結果を参照されたい）。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａによる感染の重症度を、真菌に覆われた葉の面積を表す以下のグレードを用いて評価した：０＝透明；１＝低被覆；２＝中被覆；３＝高被覆。
化合物３は、２００ｐｐｍで７３％～８３％の間の有効性でＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染を制御した。
３つの独立した実験を、トマトの剥離葉において実施し、そこで、化合物３のＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する予防及び防除の生物活性の可能性を推定した（以下の表４～６の結果を参照されたい）。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａによる感染の重症度を、真菌に覆われた葉の面積を表す以下のグレードを用いて評価した：０＝透明；１＝低被覆；２＝中被覆；３＝高被覆。
化合物３は、２００ｐｐｍで７３％～８３％の間の有効性でＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染を制御した。
【0193】
【表4】
【0194】
【表5】
【0195】
【表6】
【0196】
試験例１３．温室条件下でＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｔｃｉｎａに感染したコムギにおけるインビボ実験による検証
一般的説明：葉さび病のコロニーを有するコムギの葉に、配合された化合物３を噴霧し（処理）、胞子発芽の割合を、処理後の３つの時点（１、７及び１４ｄ）で評価した。
一般的説明：葉さび病のコロニーを有するコムギの葉に、配合された化合物３を噴霧し（処理）、胞子発芽の割合を、処理後の３つの時点（１、７及び１４ｄ）で評価した。
【0197】
サブプロトコール：１）胞子堆（ｐｕｓｔｕｌｅ）発芽；２）コムギへのＰｕｃｃｉｎｉａ接種。
【0198】
方法：
１）高感受性品種由来のコムギ植物（バイト・ハシタ、ハザラ、イスラエル）にＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａを事前接種し、温室又は栽培室／温室／圃場に移した。異なる年齢及び成熟からのコロニー／胞子堆が生じた。
２）製剤化された化合物３を、対応する濃度で、葉を完全に流すまで散布した（５ｍｌ／ポット）。詳細については、下記参照のこと。
３）処理後の１ｄ、７ｄ、１４ｄにおいて、葉を回収し、湿潤チャンバーに保管し、分析のために実験室に送る。
４）胞子発芽アッセイ用９６ウェルプレートの調製：
ａ）採取した葉から２０コロニー（胞子堆）／処理を行う。各コロニーは、実験用メスで別々に切断されるべきである。
ｂ）胞子の発芽には９６ウェルプレートを用いる。
ｃ）各ウェルにＰｕｃｃｉｎｉａの胞子堆を１つずつ挿入する。各処理で試験したコロニー数が２０であることを確認する。
ｄ）対照として、化合物３で処理せずに実験室で栽培したＰ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａが増殖したコムギの葉を採取する。
ｅ）それぞれのウェルに１５０μｌの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を入れる。
ｆ）プレートをプレートカバーで密封し、２０００ｒｐｍで１０分間、振盪機にかける。
ｇ）各ウェルから葉を取り出す。
ｈ）溶液１２０μｌを取り出し、各ウェルに２５～３０ｕｌを残す。
ｉ）プレートは振らないこと。
５）１７℃暗所で一晩インキュベートする。
６）翌日、対照サンプル中で胞子が発芽したことを確認する。
７）顕微鏡（×１０倍）を用いて、各ウェル中の１０個の胞子のうちの発芽胞子の数をカウントする。各ウェルのすべての胞子を数えないで、測定する胞子を１０個だけ選び、選んだ１０個の中から発芽した胞子を数える。
８）発芽胞子／処理の平均パーセンテージを計算する。
９）全２０試料／処理の平均値を実行する。
１０）未処理対照と比較して統計解析を行う。
１）高感受性品種由来のコムギ植物（バイト・ハシタ、ハザラ、イスラエル）にＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａを事前接種し、温室又は栽培室／温室／圃場に移した。異なる年齢及び成熟からのコロニー／胞子堆が生じた。
２）製剤化された化合物３を、対応する濃度で、葉を完全に流すまで散布した（５ｍｌ／ポット）。詳細については、下記参照のこと。
３）処理後の１ｄ、７ｄ、１４ｄにおいて、葉を回収し、湿潤チャンバーに保管し、分析のために実験室に送る。
４）胞子発芽アッセイ用９６ウェルプレートの調製：
ａ）採取した葉から２０コロニー（胞子堆）／処理を行う。各コロニーは、実験用メスで別々に切断されるべきである。
ｂ）胞子の発芽には９６ウェルプレートを用いる。
ｃ）各ウェルにＰｕｃｃｉｎｉａの胞子堆を１つずつ挿入する。各処理で試験したコロニー数が２０であることを確認する。
ｄ）対照として、化合物３で処理せずに実験室で栽培したＰ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａが増殖したコムギの葉を採取する。
ｅ）それぞれのウェルに１５０μｌの０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を入れる。
ｆ）プレートをプレートカバーで密封し、２０００ｒｐｍで１０分間、振盪機にかける。
ｇ）各ウェルから葉を取り出す。
ｈ）溶液１２０μｌを取り出し、各ウェルに２５～３０ｕｌを残す。
ｉ）プレートは振らないこと。
５）１７℃暗所で一晩インキュベートする。
６）翌日、対照サンプル中で胞子が発芽したことを確認する。
７）顕微鏡（×１０倍）を用いて、各ウェル中の１０個の胞子のうちの発芽胞子の数をカウントする。各ウェルのすべての胞子を数えないで、測定する胞子を１０個だけ選び、選んだ１０個の中から発芽した胞子を数える。
８）発芽胞子／処理の平均パーセンテージを計算する。
９）全２０試料／処理の平均値を実行する。
１０）未処理対照と比較して統計解析を行う。
【0199】
Ａ．Ｐ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａを予め接種した植物の作製のためのコムギ実生の作製
１）１２０×８０×８０サイズの苗鉢を使用する。
２）肥料（ココナッツ５０％、ピット４４％、石英６％、スターター１８－２４－５肥料５ｋｇ／ｍ３、徐放１４－１４－１４肥料）を混合した標準的な園芸用土を使用する。
３）感受性品種のコムギ種子（バイト・ハシタ農場から使用）を使用する。
４）１２個のポットを大きなトレーに入れ、ポットの上に土を入れ、少し押す。
５）種子のための溝を作る。
６）１つのポットに１２種のトウモロコシの種子を入れ（丸で囲んで）、追加の土壌混合物で種子を覆い、強くおさえる。
７）トレーに水を入れる－１ポットにつき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
８）接種前にコムギを２４℃の栽培室で３週間生育させる。
９）コムギの苗を温に移し、さらに成長させる。
１０）清潔な場所（周囲に病気や接種した植物がいない）で苗を育てる。
１）１２０×８０×８０サイズの苗鉢を使用する。
２）肥料（ココナッツ５０％、ピット４４％、石英６％、スターター１８－２４－５肥料５ｋｇ／ｍ３、徐放１４－１４－１４肥料）を混合した標準的な園芸用土を使用する。
３）感受性品種のコムギ種子（バイト・ハシタ農場から使用）を使用する。
４）１２個のポットを大きなトレーに入れ、ポットの上に土を入れ、少し押す。
５）種子のための溝を作る。
６）１つのポットに１２種のトウモロコシの種子を入れ（丸で囲んで）、追加の土壌混合物で種子を覆い、強くおさえる。
７）トレーに水を入れる－１ポットにつき約１００ｍｌ（トレーを３回満タンにする）。
８）接種前にコムギを２４℃の栽培室で３週間生育させる。
９）コムギの苗を温に移し、さらに成長させる。
１０）清潔な場所（周囲に病気や接種した植物がいない）で苗を育てる。
【0200】
Ｂ．Ｐ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａを予め接種したコムギ植物の調製
１）３０～４０枚の感染コムギの葉と胞子を滅菌した５０ｍｌの試験管に入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液４０ｍｌを加える。
３）チューブをボルテックス上で最大速度で２分間振る。
４）懸濁液（葉を含まない）を、氷上の清潔な無菌の５０ｍｌチューブに移す。
５）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する（約３０ｍｌを回収すべきである）。
６）真空ポンプを用いて５ミクロンの孔のメンブレン上に胞子を洗浄し、細菌及び他の真菌胞子を捨てる－真空ポンプを停止し、冷滅菌水を噴霧して胞子を懸濁及び洗浄し、その後、真空ポンプを再び開始する。
７）胞子洗浄をもう一度繰り返す。
８）メンブレンを注意深くポンプから新しい５０ｍｌチューブに移し、１０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液で胞子を懸濁し、チューブを手で振り、胞子を膜から放出させる。
９）メンブレンを除去し、廃棄する。
１０）濾過された液体を流しにデカントし、濾過システムを上水で洗浄し、乾燥させる。
１１）［任意］最終濃度２０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加する。
１２）懸濁液中の胞子濃度を顕微鏡下で血球計数盤を用いて確認する。濃度は約３０，０００胞子／ｍｌであるべきであり、胞子は褐色のはずである。
１３）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて、胞子懸濁溶液を４０００胞子／ｍｌに希釈する。
１４）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
１５）３週間のコムギ実生に胞子懸濁液（１ｍｌ／実生）を噴霧する。
１６）噴霧された実生を、暗い湿気のあるチャンバーに一晩移動させる。
１７）植物を暗い湿気のある箱から取り出す。各ポットを透明なプラスチック製の円筒で覆い、コムギの葉の周囲を湿潤にする。感染した実生をグロースチャンバーに移し、さらに生育させる。
１８）７～１０日以内にＰ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａの胞子堆がコムギの葉に観察されるはずである。
１）３０～４０枚の感染コムギの葉と胞子を滅菌した５０ｍｌの試験管に入れる。
２）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液４０ｍｌを加える。
３）チューブをボルテックス上で最大速度で２分間振る。
４）懸濁液（葉を含まない）を、氷上の清潔な無菌の５０ｍｌチューブに移す。
５）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する（約３０ｍｌを回収すべきである）。
６）真空ポンプを用いて５ミクロンの孔のメンブレン上に胞子を洗浄し、細菌及び他の真菌胞子を捨てる－真空ポンプを停止し、冷滅菌水を噴霧して胞子を懸濁及び洗浄し、その後、真空ポンプを再び開始する。
７）胞子洗浄をもう一度繰り返す。
８）メンブレンを注意深くポンプから新しい５０ｍｌチューブに移し、１０ｍｌの滅菌冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液で胞子を懸濁し、チューブを手で振り、胞子を膜から放出させる。
９）メンブレンを除去し、廃棄する。
１０）濾過された液体を流しにデカントし、濾過システムを上水で洗浄し、乾燥させる。
１１）［任意］最終濃度２０μｇ／ｍｌのクロラムフェニコール原液（２０ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加する。
１２）懸濁液中の胞子濃度を顕微鏡下で血球計数盤を用いて確認する。濃度は約３０，０００胞子／ｍｌであるべきであり、胞子は褐色のはずである。
１３）冷０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０溶液を用いて、胞子懸濁溶液を４０００胞子／ｍｌに希釈する。
１４）胞子の懸濁液を氷上に保つ。
１５）３週間のコムギ実生に胞子懸濁液（１ｍｌ／実生）を噴霧する。
１６）噴霧された実生を、暗い湿気のあるチャンバーに一晩移動させる。
１７）植物を暗い湿気のある箱から取り出す。各ポットを透明なプラスチック製の円筒で覆い、コムギの葉の周囲を湿潤にする。感染した実生をグロースチャンバーに移し、さらに生育させる。
１８）７～１０日以内にＰ．ｔｒｉｔｉｃｉｎａの胞子堆がコムギの葉に観察されるはずである。
【0201】
製剤の調製
試験例９の製剤の項の製剤２の調製を参照のこと。
試験例９の製剤の項の製剤２の調製を参照のこと。
【0202】
結果
化合物３のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ胞子の発芽を阻害する生物活性の可能性を推定する３つの実験を温室条件下で行った（図７～１０）。化合物３は非常に良好に奏功し、温室条件下で非常に良好な有効性を示した。化合物３のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ胞子発芽抑制における有効性は、４００ｐｐｍで最大７２．８％であった。
化合物３のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ胞子の発芽を阻害する生物活性の可能性を推定する３つの実験を温室条件下で行った（図７～１０）。化合物３は非常に良好に奏功し、温室条件下で非常に良好な有効性を示した。化合物３のＰｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ胞子発芽抑制における有効性は、４００ｐｐｍで最大７２．８％であった。
【0203】
試験例１４．温室条件下でＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓに感染したトマトにおけるインビボ実験による検証
一般的記述：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓによる晩枯病の重症度を、１‐フェニル‐テトラリン誘導体処理後に評価した。胞子嚢を用いて、１－フェニル－テトラリン誘導体による治療的処理後に３～４週齢のトマト幼植物に感染させた。
一般的記述：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓによる晩枯病の重症度を、１‐フェニル‐テトラリン誘導体処理後に評価した。胞子嚢を用いて、１－フェニル－テトラリン誘導体による治療的処理後に３～４週齢のトマト幼植物に感染させた。
【0204】
Ａ．病原体胞子嚢の調製（プレート／固形培地上で増殖させたもの）
胞子嚢懸濁液の調製
１）４日齢のＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染トマト葉１０葉を滅菌５０ｍｌチューブに入れる。
２）冷滅菌蒸留水４ｍｌを４０ｍｌをチューブに充填する
３）水中に胞子嚢を放出するが葉組織に損傷を与えないように、チューブを手で穏やかに混合する
４）胞子懸濁液を１６層のミラクロスを通して５０ｍｌチューブに濾過する。
５）２００×倍率の顕微鏡を用いて胞子濃度を算出する。３０００胞子嚢／ｍｌと予想される。
６）氷上でチューブを冷やす。
胞子嚢懸濁液の調製
１）４日齢のＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染トマト葉１０葉を滅菌５０ｍｌチューブに入れる。
２）冷滅菌蒸留水４ｍｌを４０ｍｌをチューブに充填する
３）水中に胞子嚢を放出するが葉組織に損傷を与えないように、チューブを手で穏やかに混合する
４）胞子懸濁液を１６層のミラクロスを通して５０ｍｌチューブに濾過する。
５）２００×倍率の顕微鏡を用いて胞子濃度を算出する。３０００胞子嚢／ｍｌと予想される。
６）氷上でチューブを冷やす。
【0205】
Ｂ．胞子嚢の洗浄・濾過による濃縮
１）濾過膜（孔径０．４５μＭ～５μＭの範囲）を用いて濾過システムを調製し、滅菌冷水で膜を洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブから濾過システムにゆっくりと懸濁し、デカントする。低真空を使用し、メンブレンを乾燥させないように、フィルター上に４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
３）胞子を洗浄し、細菌及び他の真菌胞子を滅菌冷却蒸留水４０ｍｌで捨てる。
４）洗浄工程を５回繰り返す。洗浄ステップの間にメンブレンが乾燥しないことを確かめておく。
５）胞子懸濁液を清潔な５０ｍｌチューブに集める。
６）濾過用のメンブレンを胞子嚢と共に試験管に挿入し、メンブレン上に残った胞子嚢を静かに浮遊させる。
７）メンブレンを捨て、次亜塩素酸溶液（０．１％）で濾過真空システムを洗浄・滅菌する－次亜塩素酸塩溶液中に少なくとも１時間放置する。
８）×２００倍率の顕微鏡用血球計算盤スライドを用いて胞子嚢の濃度を計算する。接種に必要な最終濃度は６０００胞子／ｍｌである。
９）冷蔵庫に胞子嚢を保存する。
１）濾過膜（孔径０．４５μＭ～５μＭの範囲）を用いて濾過システムを調製し、滅菌冷水で膜を洗浄する。
２）胞子懸濁液を５０ｍｌチューブから濾過システムにゆっくりと懸濁し、デカントする。低真空を使用し、メンブレンを乾燥させないように、フィルター上に４ｍｌの未濾過懸濁液を残す。
３）胞子を洗浄し、細菌及び他の真菌胞子を滅菌冷却蒸留水４０ｍｌで捨てる。
４）洗浄工程を５回繰り返す。洗浄ステップの間にメンブレンが乾燥しないことを確かめておく。
５）胞子懸濁液を清潔な５０ｍｌチューブに集める。
６）濾過用のメンブレンを胞子嚢と共に試験管に挿入し、メンブレン上に残った胞子嚢を静かに浮遊させる。
７）メンブレンを捨て、次亜塩素酸溶液（０．１％）で濾過真空システムを洗浄・滅菌する－次亜塩素酸塩溶液中に少なくとも１時間放置する。
８）×２００倍率の顕微鏡用血球計算盤スライドを用いて胞子嚢の濃度を計算する。接種に必要な最終濃度は６０００胞子／ｍｌである。
９）冷蔵庫に胞子嚢を保存する。
【0206】
Ｃ．植物／実生の発芽条件
１）トマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感受性）を、標準的な温室用土壌混合物を用いて育苗トレー中で発芽させた。１２時間明期／１２時間暗記条件下で、温度２４℃、清浄なグロースチャンバーで実生を生育させた。４本の本葉を有する３～４週齢の実生を実験に使用した。
２）各処理に必要な植物を、育苗トレーから専用の実験トレーに移した。
３）各実生上の２枚の葉を小さなプラスチックタグで標識した。標識された各葉について、最も大きいほうから３つの葉を実験に使用した。
１）トマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感受性）を、標準的な温室用土壌混合物を用いて育苗トレー中で発芽させた。１２時間明期／１２時間暗記条件下で、温度２４℃、清浄なグロースチャンバーで実生を生育させた。４本の本葉を有する３～４週齢の実生を実験に使用した。
２）各処理に必要な植物を、育苗トレーから専用の実験トレーに移した。
３）各実生上の２枚の葉を小さなプラスチックタグで標識した。標識された各葉について、最も大きいほうから３つの葉を実験に使用した。
【0207】
Ｄ．接種適用（治療的アプローチ）
１）実験手順のために、若いトマト実生を温室に移動させた。
２）治療的アプローチでは、接種材料を適用し、次いで、接種の２４時間後に、処理を適用した：
ａ）１０μｌのＰｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓを各標識した小葉に滴下した。
ｂ）ラベル付けされた接種葉を有するトレーを、湿潤状態の暗箱に入れ、底部に低水位で水を張った。箱を１７℃で２４時間保持した。
ｃ）２４時間後、接種された植物をいれたトレーを温室のテーブルに移動させて、疾患を発症させた。
１）実験手順のために、若いトマト実生を温室に移動させた。
２）治療的アプローチでは、接種材料を適用し、次いで、接種の２４時間後に、処理を適用した：
ａ）１０μｌのＰｈｙｔｏｐｈｔｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓを各標識した小葉に滴下した。
ｂ）ラベル付けされた接種葉を有するトレーを、湿潤状態の暗箱に入れ、底部に低水位で水を張った。箱を１７℃で２４時間保持した。
ｃ）２４時間後、接種された植物をいれたトレーを温室のテーブルに移動させて、疾患を発症させた。
【0208】
Ｅ．治療適用（治療的アプローチ）
１）１－フェニル－テトラリン化合物を、接種の２４時間後に適用した。植物を湿潤な箱から取り出した。
２）１－フェニル－テトラリン化合物製剤を、トマト葉が完全に排液されるまで、ハンドスプレーを用いて適用した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
３）各２植物につき３．５ｍｌの製剤化処理を適用した。
４）初回処理の２４時間後、再度処理を行った。
１）１－フェニル－テトラリン化合物を、接種の２４時間後に適用した。植物を湿潤な箱から取り出した。
２）１－フェニル－テトラリン化合物製剤を、トマト葉が完全に排液されるまで、ハンドスプレーを用いて適用した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
３）各２植物につき３．５ｍｌの製剤化処理を適用した。
４）初回処理の２４時間後、再度処理を行った。
【0209】
Ｆ．接種用途（予防的アプローチ）
予防的アプローチでは、化合物３による２回の反復処理の後に接種を適用した：
ａ）１０μｌの新しく調製したＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ胞子懸濁液（６０００胞子／ｍｌ）を滴下し、ラベルされた各小葉（各植物上の６つの小葉）に適用した。
ｂ）接種した植物を湿潤な箱に２４時間入れた。
ｃ）２４時間後、接種された植物を有するトレーを湿潤な箱から取り出し、温室に置いて、さらに生育及び疾患発症を進めた。
予防的アプローチでは、化合物３による２回の反復処理の後に接種を適用した：
ａ）１０μｌの新しく調製したＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ胞子懸濁液（６０００胞子／ｍｌ）を滴下し、ラベルされた各小葉（各植物上の６つの小葉）に適用した。
ｂ）接種した植物を湿潤な箱に２４時間入れた。
ｃ）２４時間後、接種された植物を有するトレーを湿潤な箱から取り出し、温室に置いて、さらに生育及び疾患発症を進めた。
【0210】
Ｇ.処理剤の適用（予防的アプローチ）
１）４週齢の健康なトマト実生（４本の本葉を有する）を使用した。各植物上の２つの成熟葉の最新の最も大きい３つの葉を、小さなプラスチックタグでラベルした。
２）接種の４８時間前（－２日目）に、ハンドスプレーを用いて、植物を葉の上面及び下面にトマト葉（１ｍｌ／植物）が完全に排出されるまで、製剤化された化合物３及びそれぞれの対照で処理を行った。
３）接種２４時間前（－１日目）に、再度同じ処理を行った。
１）４週齢の健康なトマト実生（４本の本葉を有する）を使用した。各植物上の２つの成熟葉の最新の最も大きい３つの葉を、小さなプラスチックタグでラベルした。
２）接種の４８時間前（－２日目）に、ハンドスプレーを用いて、植物を葉の上面及び下面にトマト葉（１ｍｌ／植物）が完全に排出されるまで、製剤化された化合物３及びそれぞれの対照で処理を行った。
３）接種２４時間前（－１日目）に、再度同じ処理を行った。
【0211】
Ｈ．生育と分析
１）処理及び接種後、植物を通常の温室条件下で生育させ、必要に応じて給水した。
２）接種５日後、ラベル葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉を切り取って採取し、それぞれの処理を別々に行い、実験室に移動させ、疾患重症度（％）として、腐敗率を測定した。
４）晩枯病の症状は感染した地点上に現れる褐緑色の斑点として観察され、その後、葉の広い領域が完全に褐色に変色するはずである。
１）処理及び接種後、植物を通常の温室条件下で生育させ、必要に応じて給水した。
２）接種５日後、ラベル葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉を切り取って採取し、それぞれの処理を別々に行い、実験室に移動させ、疾患重症度（％）として、腐敗率を測定した。
４）晩枯病の症状は感染した地点上に現れる褐緑色の斑点として観察され、その後、葉の広い領域が完全に褐色に変色するはずである。
【0212】
製剤の調製
試験例９の製剤の項の製剤調製を参照のこと。
試験例９の製剤の項の製剤調製を参照のこと。
【0213】
結果
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａに感染したトマト植物において７回の独立した実験を実施し、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓを予防及び防除する化合物３の可能性を推定した（図１０～１６）。
化合物３は、最大１００％の有効性でＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染を制御した。
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａに感染したトマト植物において７回の独立した実験を実施し、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓを予防及び防除する化合物３の可能性を推定した（図１０～１６）。
化合物３は、最大１００％の有効性でＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ感染を制御した。
【0214】
試験例１５．温室条件下でＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉに感染したトマトにおけるインビボ実験による検証
一般的記述：化合物３による処理後に、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉに起因する早期立枯病の重症度を評価した。１‐フェニル‐テルトラリン（ｔｅｒｔｒａｌｉｎ）化合物による予防的処理後の３～４週齢のトマト幼植物の葉に胞子分離物を用いて感染させた。
一般的記述：化合物３による処理後に、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉに起因する早期立枯病の重症度を評価した。１‐フェニル‐テルトラリン（ｔｅｒｔｒａｌｉｎ）化合物による予防的処理後の３～４週齢のトマト幼植物の葉に胞子分離物を用いて感染させた。
【0215】
Ａ．Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ胞子懸濁液の調製
１）ＡｌｔｅｒｎａｒｉａのＰＤＡＴブロックをＰＤＡＴプレートの中央に置き、２５℃で９日以上増殖させる。
２）冷蔵庫で冷やした無菌ＰＤＢ２５ｍｌを５０ｍｌチューブに加える。
３）菌糸と胞子を含む寒天をメスで１枚から８枚に切り、５０ｍｌ滅菌チューブに挿入する。
４）１分間振盪する。
５）すべての過程で胞子を氷上に置いておく。
６）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
７）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を捨てる（約２０ｍｌを回収する）。
８）胞子濃度を計算し（２０×１０倍率で×１０希釈をカウント）、記録する。
９）濃度は１０４～１０５胞子／ｍｌとなるはずである。
１）ＡｌｔｅｒｎａｒｉａのＰＤＡＴブロックをＰＤＡＴプレートの中央に置き、２５℃で９日以上増殖させる。
２）冷蔵庫で冷やした無菌ＰＤＢ２５ｍｌを５０ｍｌチューブに加える。
３）菌糸と胞子を含む寒天をメスで１枚から８枚に切り、５０ｍｌ滅菌チューブに挿入する。
４）１分間振盪する。
５）すべての過程で胞子を氷上に置いておく。
６）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移し、約２５ｍｌを回収する。
７）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を捨てる（約２０ｍｌを回収する）。
８）胞子濃度を計算し（２０×１０倍率で×１０希釈をカウント）、記録する。
９）濃度は１０４～１０５胞子／ｍｌとなるはずである。
【0216】
Ｂ．トマト植物の調製
１）Ａｌｔｅｒｎａｒｉａに感受性のトマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種を、一般的な温室用土壌混合物（土壌の構成：４４％のピス（ｐｉｔｈ）、５０％のココナッツ、６％の石英、長期肥料［オスモコート１４：１４：１４］及びＮＰＫ肥料１８：２４：５ ５ｋｇ／Ｍ３）を用いた育苗トレーで試験の４週間前に発芽させた。実生の発芽と成長は、２４℃の清浄なグロースチャンバー内で、１２時間明期／１２時間暗期で行われる。３～４週齢の実生（４本の本葉を有する）を実験に使用する。
２）実験に必要な植物を専用の実験トレーに移した。
３）各トマト植物上の２枚の葉を小さなプラスチックタグでラベルした。ラベルされた葉の最新の最大の３つの葉を、実験に使用した。
１）Ａｌｔｅｒｎａｒｉａに感受性のトマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種を、一般的な温室用土壌混合物（土壌の構成：４４％のピス（ｐｉｔｈ）、５０％のココナッツ、６％の石英、長期肥料［オスモコート１４：１４：１４］及びＮＰＫ肥料１８：２４：５ ５ｋｇ／Ｍ３）を用いた育苗トレーで試験の４週間前に発芽させた。実生の発芽と成長は、２４℃の清浄なグロースチャンバー内で、１２時間明期／１２時間暗期で行われる。３～４週齢の実生（４本の本葉を有する）を実験に使用する。
２）実験に必要な植物を専用の実験トレーに移した。
３）各トマト植物上の２枚の葉を小さなプラスチックタグでラベルした。ラベルされた葉の最新の最大の３つの葉を、実験に使用した。
【0217】
Ｃ．処理へ適用（予防的アプローチ）
１）４週齢のトマト実生で、４本の本葉を有し、清潔で健康なものを、実験操作のために温室に移動させた。
２）接種４８時間前（－２日目）に、実験計画に従って適切な処理を施した。
３）実験計画は、化合物３を含み、上記の濃度で適用した。化学的参照処理及び非処理植物もまた、実験に含めた。
４）製剤化された化合物３を、トマト葉が完全に排液されるまで（１ｍｌ／植物）、ハンドスプレーを使用して噴霧により植物に適用した。処理は、葉の上面及び下面に適用した。
５）接種の２４時間前（－１日目）に、第２の処理を植物に適用した。
６）平均値、標準誤差の算出及び統計分析を行った。
１）４週齢のトマト実生で、４本の本葉を有し、清潔で健康なものを、実験操作のために温室に移動させた。
２）接種４８時間前（－２日目）に、実験計画に従って適切な処理を施した。
３）実験計画は、化合物３を含み、上記の濃度で適用した。化学的参照処理及び非処理植物もまた、実験に含めた。
４）製剤化された化合物３を、トマト葉が完全に排液されるまで（１ｍｌ／植物）、ハンドスプレーを使用して噴霧により植物に適用した。処理は、葉の上面及び下面に適用した。
５）接種の２４時間前（－１日目）に、第２の処理を植物に適用した。
６）平均値、標準誤差の算出及び統計分析を行った。
【0218】
Ｄ．成長と分析
１）接種及び処理の後、植物を通常の温室条件に移し、季節に応じて必要に応じて、給水レジームで生育させた。
２）接種１０～１４日後に、ラベルした葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉はそれぞれの処理から別々に採取され、病斑発生に関するデータを収集するために実験室に移した。
４）初期の立枯症状（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）は、感染斑点上に現れた黄褐色の斑点として観察された。ラベルされた各小葉上の腐敗の黄褐色直径を測定した。全体の小葉サイズも同様に測定した。
５）各ラベルされた小葉上の腐敗の黄褐色の直径及び疾患の重症度を、ラベルされた葉の総面積に対する腐敗面積の割合として推定した。
１）接種及び処理の後、植物を通常の温室条件に移し、季節に応じて必要に応じて、給水レジームで生育させた。
２）接種１０～１４日後に、ラベルした葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉はそれぞれの処理から別々に採取され、病斑発生に関するデータを収集するために実験室に移した。
４）初期の立枯症状（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）は、感染斑点上に現れた黄褐色の斑点として観察された。ラベルされた各小葉上の腐敗の黄褐色直径を測定した。全体の小葉サイズも同様に測定した。
５）各ラベルされた小葉上の腐敗の黄褐色の直径及び疾患の重症度を、ラベルされた葉の総面積に対する腐敗面積の割合として推定した。
【0219】
製剤調製
試験例９の製剤の項の製剤２の調製を参照のこと。
試験例９の製剤の項の製剤２の調製を参照のこと。
【0220】
結果
実験はＡｌｔｅｒｎａｒｉａに感染したトマト植物において行われ、そこでは化合物３のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉの予防及び防除の生物活性の可能性が推定された（図１７参照）。
化合物３は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ感染を最大７５．８％の有効性で防除した。
実験はＡｌｔｅｒｎａｒｉａに感染したトマト植物において行われ、そこでは化合物３のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉの予防及び防除の生物活性の可能性が推定された（図１７参照）。
化合物３は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ感染を最大７５．８％の有効性で防除した。
【0221】
試験例１６．温室条件下でＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａに感染させたトマトにおけるインビボ実験による検証
Ａ．Ｂｏｔｒｙｔｉｓ胞子懸濁液の調製
１）ＢｏｔｒｙｔｉｓのＰＤＡＴブロックを小さなペトリＰＤＡＴプレートの中央に置き、２３℃で１２日間増殖させる。蓋をしたプレートを逆さまにしておく（乾燥の影響を受け、胞子形成を促進する）。Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ菌糸は、分生子がプレート全体にわたって成長した後、増殖し（白色－淡灰色）、接種物上の胞子を発達させる（灰色）はずである。
２）プレートを冷蔵庫で１時間冷やす。
３）１枚のプレートから菌糸と胞子をメスで寒天を８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
４）冷凍冷蔵８Ｘ－ＰＤＢ溶液２５ｍｌをチューブに加える。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）処理中は胞子を氷の上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移す－約２５ｍｌが回収されるはずである。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する－約２０ｍｌが回収されるはずである。
９）胞子濃度（４０×１０倍率で計数×１０希釈）を計算し、冷滅菌８×－ＰＤＢ溶液で希釈して、２×１０５胞子／ｍｌの原液を得る（希釈前の濃度は３×１０５個であると予想される）。
１０）８×ＰＤＢ溶液で希釈し、接種胞子懸濁溶液１×１０５胞子／ｍｌを得る。
１１）直ちにトマトの葉に感染させるか、４℃で最長１週間保管する。
Ａ．Ｂｏｔｒｙｔｉｓ胞子懸濁液の調製
１）ＢｏｔｒｙｔｉｓのＰＤＡＴブロックを小さなペトリＰＤＡＴプレートの中央に置き、２３℃で１２日間増殖させる。蓋をしたプレートを逆さまにしておく（乾燥の影響を受け、胞子形成を促進する）。Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ菌糸は、分生子がプレート全体にわたって成長した後、増殖し（白色－淡灰色）、接種物上の胞子を発達させる（灰色）はずである。
２）プレートを冷蔵庫で１時間冷やす。
３）１枚のプレートから菌糸と胞子をメスで寒天を８個に切断し、５０ｍｌの滅菌チューブに入れる。
４）冷凍冷蔵８Ｘ－ＰＤＢ溶液２５ｍｌをチューブに加える。
５）３０００ＲＰＭで１分間振盪する。
６）処理中は胞子を氷の上に置いておく。
７）新しい５０ｍｌ滅菌チューブに液体を移す－約２５ｍｌが回収されるはずである。
８）１６層のガーゼ布を通して胞子懸濁液を清潔な滅菌５０ｍｌチューブに直接濾過し、菌糸を廃棄する－約２０ｍｌが回収されるはずである。
９）胞子濃度（４０×１０倍率で計数×１０希釈）を計算し、冷滅菌８×－ＰＤＢ溶液で希釈して、２×１０５胞子／ｍｌの原液を得る（希釈前の濃度は３×１０５個であると予想される）。
１０）８×ＰＤＢ溶液で希釈し、接種胞子懸濁溶液１×１０５胞子／ｍｌを得る。
１１）直ちにトマトの葉に感染させるか、４℃で最長１週間保管する。
【0222】
Ｂ．植物／苗の発芽条件
１）トマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種を、通常の温室用土壌混合物（土壌の構成は：４４％ピス（Ｐｉｔｈ）、５０％ココナッツ、６％石英、長期肥料［オスモコート１４：１４：１４］及びＮＰＫ肥料１８：２４：５ ５ｋｇ／Ｍ３）を用いて育苗トレーで発芽させた。温度２４℃、１２時間明期／１２時間暗期条件の清浄な栽培室で実生の発芽と成長を行う。４つの本葉を有する３～４週齢の実生を実験に使用した。
２）各処理に必要な植物を専用の実験トレーに移した。
３）各実生上の２枚の葉を小さなプラスチックタグでラベルした。最後の３つの小葉を実験に使用した。
１）トマトＩｋｒａｍ／Ｂｒｉｇａｄｅ／Ｓｈａｎｉ栽培品種を、通常の温室用土壌混合物（土壌の構成は：４４％ピス（Ｐｉｔｈ）、５０％ココナッツ、６％石英、長期肥料［オスモコート１４：１４：１４］及びＮＰＫ肥料１８：２４：５ ５ｋｇ／Ｍ３）を用いて育苗トレーで発芽させた。温度２４℃、１２時間明期／１２時間暗期条件の清浄な栽培室で実生の発芽と成長を行う。４つの本葉を有する３～４週齢の実生を実験に使用した。
２）各処理に必要な植物を専用の実験トレーに移した。
３）各実生上の２枚の葉を小さなプラスチックタグでラベルした。最後の３つの小葉を実験に使用した。
【0223】
Ｃ．治療適用（予防的アプローチ）
４）４本の本葉を有する４週齢のトマト実生で、清潔で健康なものを、実験手順のために温室に移動させた。各植物の２つの成熟葉の最後の３つの葉をプラスチックタグでラベルした。
５）接種の４８時間前（－２日目）に、実験計画に従って適切な濃度で製剤化した化合物３で植物を処理した。
６）化学的参照処理及び非処理植物もまた、実験に含めた。
７）製剤化された化合物３を、トマト葉（５ｍｌ／２植物）から完全に排液されるまで、ハンドスプレーを用いて植物に適用した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
８）接種の２４時間前（－１日目）に、２回目の噴霧を植物に適用した。
４）４本の本葉を有する４週齢のトマト実生で、清潔で健康なものを、実験手順のために温室に移動させた。各植物の２つの成熟葉の最後の３つの葉をプラスチックタグでラベルした。
５）接種の４８時間前（－２日目）に、実験計画に従って適切な濃度で製剤化した化合物３で植物を処理した。
６）化学的参照処理及び非処理植物もまた、実験に含めた。
７）製剤化された化合物３を、トマト葉（５ｍｌ／２植物）から完全に排液されるまで、ハンドスプレーを用いて植物に適用した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
８）接種の２４時間前（－１日目）に、２回目の噴霧を植物に適用した。
【0224】
Ｄ．接種適用
１）ラベルの付いた各小葉に、細いマーカーで黒い点をつける。
２）２００μｌのチップを使用し、葉を引き裂かないように、ラベルの付いた箇所の近くにやさしく小さな傷をつける。
３）治療的アプローチでは、接種を適用し、次いで接種後７２時間後に、以下のＭＩ処理を適用する：
ａ）ラベルされた各小葉上の黒点に、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ １０μｌを滴下する。液滴を組織に浸すために、３０分間放置する。
ｂ）ラベルされた植物を入れたトレーを、箱の底に水を貼った湿潤な箱に入れる。接種した植物を箱に入れて７２時間放置する。
ｃ）３日後、箱の蓋をゆっくり開き（半開）、箱と環境との間の湿度レベルの違いをゆっくりと均衡させる。湿度をバランスさせた後、植物のトレーを取り出し、処理を適用する。
１）ラベルの付いた各小葉に、細いマーカーで黒い点をつける。
２）２００μｌのチップを使用し、葉を引き裂かないように、ラベルの付いた箇所の近くにやさしく小さな傷をつける。
３）治療的アプローチでは、接種を適用し、次いで接種後７２時間後に、以下のＭＩ処理を適用する：
ａ）ラベルされた各小葉上の黒点に、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ １０μｌを滴下する。液滴を組織に浸すために、３０分間放置する。
ｂ）ラベルされた植物を入れたトレーを、箱の底に水を貼った湿潤な箱に入れる。接種した植物を箱に入れて７２時間放置する。
ｃ）３日後、箱の蓋をゆっくり開き（半開）、箱と環境との間の湿度レベルの違いをゆっくりと均衡させる。湿度をバランスさせた後、植物のトレーを取り出し、処理を適用する。
【0225】
Ｅ．治療適用（治療的アプローチ）
１）接種７２時間後に処理を行った。
２）製剤化された化合物３を、トマトの葉から完全に排液されるまで、ハンドスプレーを使用して植物に散布した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
１）接種７２時間後に処理を行った。
２）製剤化された化合物３を、トマトの葉から完全に排液されるまで、ハンドスプレーを使用して植物に散布した。処理は、葉の上面及び下面に施された。
【0226】
Ｆ．生育及び分析
１）処理及び接種の後、植物を栽培テーブルに移動させ、通常の温室条件下、季節に応じて必要に応じて給水方式で維持した。
２）接種１０～１４日後に、ラベルした葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉は、各処理から別々に回収され、各葉のサイズ及び腐敗サイズを測定するために実験室に移した。
４）灰色かび病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）症状は、古い葉に観察され、緑色又は緑黄色の染みがあり、それが壊死に発展する。
５）各小葉の病変の直径及び小葉のサイズを測定した。
６）平均値、標準誤差の算出及び統計分析を行った。
１）処理及び接種の後、植物を栽培テーブルに移動させ、通常の温室条件下、季節に応じて必要に応じて給水方式で維持した。
２）接種１０～１４日後に、ラベルした葉に病害が観察された。
３）ラベルした葉は、各処理から別々に回収され、各葉のサイズ及び腐敗サイズを測定するために実験室に移した。
４）灰色かび病（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）症状は、古い葉に観察され、緑色又は緑黄色の染みがあり、それが壊死に発展する。
５）各小葉の病変の直径及び小葉のサイズを測定した。
６）平均値、標準誤差の算出及び統計分析を行った。
【0227】
製剤調製
試験例９の製剤の項の製剤１及び２の調製を参照のこと。
試験例９の製剤の項の製剤１及び２の調製を参照のこと。
【0228】
結果
Ｂｏｔｒｙｔｉｓに感染したトマト植物を用いて２つの独立した実験を実施し、化合物３のＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａを予防及び防除する可能性が推測された（図１８～１９参照）。
化合物３はＢｏｔｒｙｔｉｓ感染を最大１００％の有効性で防除した。
Ｂｏｔｒｙｔｉｓに感染したトマト植物を用いて２つの独立した実験を実施し、化合物３のＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａを予防及び防除する可能性が推測された（図１８～１９参照）。
化合物３はＢｏｔｒｙｔｉｓ感染を最大１００％の有効性で防除した。
【0229】
［参考文献］
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【国際調査報告】