特表 2023-515219 抗ヒトＣＤ１９抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-12

(54)【発明の名称】抗ヒトＣＤ１９抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230405BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230405BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230405BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230405BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230405BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230405BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230405BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230405BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230405BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230405BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230405BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C12P21/08 ZNA

C07K16/28

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P43/00

A61P37/06

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022551767

(86)(22)【出願日】2021-02-22

(85)【翻訳文提出日】2022-10-20

(86)【国際出願番号】 US2021018989

(87)【国際公開番号】W WO2021173471

(87)【国際公開日】2021-09-02

(31)【優先権主張番号】62/983,093

(32)【優先日】2020-02-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100150500

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 靖

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(72)【発明者】

【氏名】アラン，バレット

(72)【発明者】

【氏名】ボイルズ，ジェフリー ストリートマン

(72)【発明者】

【氏名】ブーデルスキー，アリソン リー シム

(72)【発明者】

【氏名】ナ，ソンチン

(72)【発明者】

【氏名】ルツォバ，キーラ ウラジーミロヴナ

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，グイフェン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA08

4B065AA93X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085BB11

4C085CC03

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA20

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ヒトＣＤ１９に結合する抗体（「抗ヒトＣＤ１９抗体」または「抗ヒトＣＤ１９抗体」）、そのような抗ヒトＣＤ１９抗体を含む組成物、およびそのような抗ヒトＣＤ１９抗体を使用する方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３３を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３４を含む、抗体。

【請求項2】

前記ＶＨが、配列番号３７を含み、前記ＶＬが、配列番号４１を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号３９を含む軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項4】

前記抗体が、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号３９を含むＬＣを含む、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項5】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４３を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号４４を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号４５を含む、抗体。

【請求項6】

前記ＶＨが、配列番号３７を含み、前記ＶＬが、配列番号４８を含む、請求項５に記載の抗体。

【請求項7】

前記抗体が、配列番号３５を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む、請求項５または６に記載の抗体。

【請求項8】

前記抗体が、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む、請求項５または６に記載の抗体。

【請求項9】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１５を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１６を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１８を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１９を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２０を含む、抗体。

【請求項10】

前記ＶＨが、配列番号２３を含み、前記ＶＬが、配列番号２７を含む、請求項９に記載の抗体。

【請求項11】

配列番号２１を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む、請求項９または１０に記載の抗体。

【請求項12】

配列番号５４を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む、請求項９または１０に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が非枯渇抗体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項14】

配列番号３５、５２、３９、４６、２１、５４、または２５をコードする配列を含む、核酸。

【請求項15】

請求項１４に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項16】

配列番号３５または５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９または４６をコードする第２の核酸配列を含む、請求項１５に記載のベクター。

【請求項17】

配列番号２１または５４をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含む、請求項１５に記載のベクター。

【請求項18】

配列番号３５または５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、組成物。

【請求項19】

配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、組成物。

【請求項20】

請求項１６または１７に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項21】

配列番号３５または５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、細胞。

【請求項22】

配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、細胞。

【請求項23】

前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項24】

抗体を調製するための方法であって、前記抗体が発現するような条件下で、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の細胞を培養し、次いで発現した抗体を培養培地から回収することを含む、方法。

【請求項25】

請求項２４に記載の方法によって調製された、抗体。

【請求項26】

請求項１～１３および２５のいずれか一項に記載の抗体、および薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含む、医薬組成物。

【請求項27】

Ｂ細胞関連疾患の治療を必要とする患者において、それを治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～１３および２５のいずれか一項に記載の抗体または請求項２６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項28】

前記Ｂ細胞関連疾患が、自己免疫疾患である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記Ｂ細胞関連疾患が、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、または重症筋無力症から選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

療法に使用するための、請求項１～１３または２５のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項31】

Ｂ細胞関連疾患の治療における使用のための、請求項１～１３もしくは２５のいずれか一項に記載の抗体、または請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項32】

前記Ｂ細胞関連疾患が、自己免疫疾患である、請求項３１に記載の抗体または医薬組成物。

【請求項33】

前記Ｂ細胞関連疾患が、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、または重症筋無力症から選択される、請求項３１に記載の抗体または医薬組成物。

【請求項34】

Ｂ細胞関連疾患の治療のための薬物の製造における、請求項１～１３または２５のいずれか一項に記載の抗体の使用。

【請求項35】

前記Ｂ細胞関連疾患が、自己免疫疾患である、請求項３４に記載の使用。

【請求項36】

Ｂ細胞関連疾患が、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、または重症筋無力症から選択される、請求項３４に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、ヒトＣＤ１９に結合する抗体（「抗ヒトＣＤ１９抗体」または「抗ＣＤ１９抗体」）、そのような抗ヒトＣＤ１９抗体を含む組成物、およびそのような抗ヒトＣＤ１９抗体を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｂ細胞は様々な抗原に対する抗体を産生することができるため、体液性免疫応答において重要な役割を果たす。さらに、Ｂ細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）としても機能し、サイトカインを分泌する。Ｂ細胞は、その細胞膜上にＢ細胞受容体（ＢＣＲ）を発現し、ＢＣＲは、Ｂ細胞が特定の抗原に結合することを可能にし、それに対して抗体応答を開始する。Ｂ細胞の調節不全は、様々な疾患に関連している。

【0003】

ヒトＢリンパ球抗原ＣＤ１９（分化クラスター１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２、またはＣＶＩＤ３としても知られる）は、最終的に形質細胞に分化するまで、Ｂ細胞発達のすべての段階の間に広く発現する膜貫通タンパク質である。したがって、ヒトＣＤ１９は汎Ｂ細胞マーカーである。ＣＤ１９は、補体受容体であるＣＤ２１、およびテトラスパンファミリーのメンバーであるＣＤ８１と関連して見出される（Ｃａｒｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２６：４５－５４，２００２）。ＣＤ１９はＢＣＲの共受容体であり、細胞質シグナル伝達タンパク質をＢＣＲ複合体にリクルートするアダプタータンパク質として機能する。ＣＤ１９は、正常なＢ細胞機能に必要であり、Ｂ細胞の生存、増殖、活性化、および分化を含む多様なＢ細胞応答に関与している。

【0004】

抗ヒトＣＤ１９抗体は以前に記載されており、臨床試験において試験されている。多くの既知の抗ヒトＣＤ１９抗体はＢ細胞枯渇抗体である。例えば、第ＩＩＩ相臨床試験におけるイネビリズマブ（ＭＥＤＩ－５５１としても知られる）およびタファシタマブ（ＭＯＲ２０８またはＸｍＡｂ５５７４としても知られる）、第ＩＩ相臨床試験におけるロンカツキシマブ、第Ｉ相臨床試験における４Ｇ７ＳＤＩＥおよびＤＩ－Ｂ４はすべて、Ｂ細胞枯渇抗体であると報告された（Ｃｒｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ．３９４（１０２０６）：１３５２－１３６３，２０１９；Ｋｅｌｌｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２７（７）：１５９５－１５９８，２０１３；Ｋａｐｌｏｎ，ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．１２（１）：１７０３５３１，２０２０；Ｓｅｉｄｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２４（９）：１６３４－４３，２０１６；ＷＯ２００７０７６９５０）。

【0005】

オベキセリマブ（ＸｍＡｂ５８７１としても知られる）は、ＣＤ１９とＦｃγＲＩＩｂの両方に結合するＦｃ改変抗体であり、抑制性ＦｃγＲＩＩｂ受容体シグナル伝達に関与することによってＢ細胞機能を阻害する（Ｓｚｉｌｉ，ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．６（４）：９９１－９９９，２０１４）。しかしながら、ＦｃγＲＩＩｂに対するオベキセリマブの高親和性結合は、他の細胞型への非特異的結合をもたらす可能性がある。ヒト患者において、オベキセリマブの半減期は短く、Ｔ_１／２は３．５±１．０日であり、ベースラインレベルの約３０～４０％の平均減少で、末梢ヒトＢ細胞数を減少させると報告された（Ｊａｒａｃｚｅｗｓｋａ－Ｂａｕｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（ＥＵＬＡＲ）２０１５ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｐｏｓｔｅｒ：Ａ Ｐｈａｓｅ １ｂ／２ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ，Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ＸｍＡｂ（登録商標）５８７１ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｊｕｎｅ １２，２０１５、ｈｔｔｐｓ：／／ｉｎｖｅｓｔｏｒｓ．ｘｅｎｃｏｒ．ｃｏｍ／ｓｔａｔｉｃ－ｆｉｌｅｓ／００１７ｄｃｆ１－ｄｅｂ２－４６ｅｂ－９３ｆｆ－９０ｂａ１６４ｅｃ５０ｃで入手可能）。

【発明の概要】

【0006】

したがって、Ｂ細胞関連疾患を治療するために、ヒトＢ細胞を枯渇させることなく、ヒトＢ細胞に特異的に結合して阻害する代替的な抗ヒトＣＤ１９抗体が依然として必要とされている。

【図面の簡単な説明】

【0007】

【図1A】抗ヒトＣＤ１９親抗体Ｃ３２３（図１Ａ）および最適化された抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆ（図１Ｂ）の表面疎水性プロファイルを示す。

【図1B】抗ヒトＣＤ１９親抗体Ｃ３２３（図１Ａ）および最適化された抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆ（図１Ｂ）の表面疎水性プロファイルを示す。

【図2】ＥＬＩＳＡアッセイにおける抗ヒトＣＤ１９抗体のヒトＣＤ１９への結合を示す。

【図3】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆ による初代Ｂ細胞増殖の阻害を示す。

【図4】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによる全血中のＢ細胞活性化の阻害を示す。

【図5】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによるＢ細胞の形質芽細胞への分化の阻害を示す。

【図6A】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆがＣＤＣ（図６Ａ）およびＡＤＣＣ（図６Ｂ）活性を欠いていることを示す。

【図6B】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆがＣＤＣ（図６Ａ）およびＡＤＣＣ（図６Ｂ）活性を欠いていることを示す。

【図7】ヒト全血中の細胞に対する抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆおよびオベキセリマブの結合特異性を示す。

【図8】オベキシリマブと抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによるＢ細胞アポトーシスの誘導における違いを示す。

【図9A】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスにおける処理後６日目（図９Ａ）および１０日目（図９Ｂ）のヒトＩｇＭの減少を示す。

【図9B】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスにおける処理後６日目（図９Ａ）および１０日目（図９Ｂ）のヒトＩｇＭの減少を示す。

【図10】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスのヒトＢ細胞におけるＣＤ８６発現の減少を示す。

【図11】抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスにおけるＢ細胞の頻度を示す。

【図12】初代ヒトＢ細胞における抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ１（ＣＢ３ｆ）および抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ２（Ｃ３２３．Ｃ１）の内在化を示す。

【図13A】マウスコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂと枯渇ＣＤ２０代替Ａｂの有効性の比較を示す。図１３Ａは、マウスＣＩＡモデルにおいて、半確立モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる処理が、枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも臨床スコアを大きく低下させたことを示す。試験の２１日目～４２日目のマウスの臨床スコア（ｎ＝１２／群、アイソタイプ対照で処理した非疾患対照群のｎ＝５を除く）。記号は群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は１９日目から投与を開始した。

【図13B】マウスコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂと枯渇ＣＤ２０代替Ａｂの有効性の比較を示す。図１３Ｂは、マウスＣＩＡモデルにおいて、非枯渇ＣＤ１９代用Ａｂによる処理が、枯渇ＣＤ２０代用Ａｂよりも臨床スコアＡＵＣ（２４日目～４２日目）を大きく低下させたことを示す。試験の２４日目～４２日目のマウスの臨床スコアＡＵＣ（ｎ＝１２／群、アイソタイプ対照で処理した非疾患対照群のｎ＝５を除く）。バーは群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は１９日目から投与を開始した。共通の文字を共有しないバーは、互いに有意に異なる（ｐ＜０．０５、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、Ｔｕｋｅｙの事後検定）。

【図14】１型糖尿病のＮＯＤモデルにおいて、半治療モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる処理が、糖尿病の発生を枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも大きく遅らせ、かつ低減させたことを示す。糖尿病の発生率（血糖値が２４０ｍｇ／ｄｌを超えるマウスを糖尿病であるとみなした。＞ｎ＝１０／群、未処理群のｎ＝９を除く）。動物は１２週齢から投与を開始した。

【図15】マウスＥＡＥモデルにおいて、半治療モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる半処理が、枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも臨床スコアを大きく低下させたことを示す。試験の６日目～４２日目のマウスの臨床スコア（ｎ＝１２／群）。記号は群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は６日目から投与を開始した。＊同日のアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５

【発明を実施するための形態】

【0008】

本明細書に提供されるのは、Ｂ細胞を枯渇させることなく、ヒトＣＤ１９に結合してＢ細胞応答（例えば、増殖、活性化、および分化）を阻害する抗体（すなわち、「非枯渇抗ヒトＣＤ１９抗体」）である。そのような非枯渇抗ヒトＣＤ１９抗体は、これらの重要な免疫細胞を破壊することなく、Ｂ細胞関連疾患、例えば自己免疫疾患を治療するために使用することができ、したがって、問題のある同時免疫不全、長期の免疫抑制、およびＢ細胞の枯渇に起因する他の合併症が回避される。本明細書に提供される抗ヒトＣＤ１９抗体は、以下の特性のうちの１つ以上を有する：１）ヒトＣＤ１９（および場合によってはカニクイザルＣＤ１９）に望ましい結合親和性および／もしくは会合および解離速度で結合する、２）ヒトＢ細胞に特異的に結合し、初代ヒトＢ細胞の増殖、活性化および／もしくは分化を阻害する、３）ヒトＢ細胞を枯渇させない、４）ヒトＢ細胞に内在化される、５）免疫原性のリスクが低い、６）低疎水性である、ならびに／または７）自己免疫疾患の治療における開発および使用のための良好な安定性、溶解性、粘度、および薬物動態特性。以下に記載するように、並べて比較すると、そのような抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆの１つは、全血アッセイでヒトＢ細胞に高い特異性で結合することが示されるのに対し、オベキセリマブは、Ｂ細胞結合に加えてヒト好中球への非特異的結合を示す。好中球はヒトにおいて最も豊富な種類の白血球であるため、好中球への非特異的結合は、ヒト患者に観察されるオベキセリマブの短い半減期を説明する可能性がある。さらに、インビトロＢ細胞アポトーシスアッセイでは、オベキシリマブが初代ヒトＢ細胞アポトーシスを用量依存的に誘導することが示されているが、抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆは同じアッセイにおいて初代ヒトＢ細胞のアポトーシスを誘導しない。

【0009】

一態様では、新規の非枯渇抗ヒトＣＤ１９抗体が本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は完全ヒト抗体である。

【0010】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ１９に結合する抗体が本明細書に提供され、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３１を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３２を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３３を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３４を含む。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、配列番号３７を含むＶＨ、および配列番号４１を含むＶＬを含む。

【0011】

一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、インビボでＩｇＧ４ Ｆａｂアーム交換を減少させるＳ２２８Ｐ突然変異（ＥＵインデックスナンバリングによる）を含む修飾ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域を有する（Ｌａｂｒｉｊｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９，２７（８）：７６７を参照のこと）。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）等のＦｃエフェクター機能を低減または排除した修飾ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域を有する。そのような抗体は、「ＩｇＧ１エフェクターヌル」抗体と称される。

【0012】

一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号３９を含む軽鎖（ＬＣ）を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号５０を含むＨＣ、および配列番号３９を含むＬＣを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１エフェクターヌル抗体である。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号３９を含むＬＣを含む。

【0013】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ１９に結合する抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）が本明細書に提供され、抗体断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３１を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３２を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３３を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３４を含む。一部の実施形態では、抗体断片は、配列番号３７を含むＶＨ、および配列番号４１を含むＶＬを含む。

【0014】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体も本明細書に提供され、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３１を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４３を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４４を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４５を含む。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、配列番号３７を含むＶＨ、および配列番号４８を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号３５を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号５０を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１エフェクターヌル抗体である。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む。

【0015】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ１９に結合する抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）が本明細書に提供され、抗体断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号２９を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号３０を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３１を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４３を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号４４を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４５を含む。一部の実施形態では、抗体断片は、配列番号３７を含むＶＨ、および配列番号４８を含むＶＬを含む。

【0016】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体も本明細書に提供され、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１５を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０を含む。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、配列番号２３を含むＶＨ、および配列番号２７を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ４アイソタイプを有する。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号２１を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１エフェクターヌル抗体である。例えば、一部の実施形態では、抗体は、配列番号５４を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む。

【0017】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ１９に結合する抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）が本明細書に提供され、抗体断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１５を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２０を含む。一部の実施形態では、抗体断片は、配列番号２３を含むＶＨ、および配列番号２７を含むＶＬを含む。

【0018】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体も本明細書に提供され、抗体は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、抗ヒトＣＤ１９抗体は、配列番号９を含むＶＨ、および配列番号１３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７を含むＨＣ、および配列番号１１を含むＬＣを含む。

【0019】

一部の実施形態では、ヒトＣＤ１９に結合する抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）が本明細書に提供され、抗体断片は、ＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６を含む。一部の実施形態では、抗体断片は、配列番号９を含むＶＨ、および配列番号１３を含むＶＬを含む。

【0020】

別の態様では、本明細書に記載の新規抗ヒトＣＤ１９抗体の重鎖または軽鎖、すなわちＶＨまたはＶＬをコードする核酸、およびそのような核酸を含むベクターが本明細書に提供される。

【0021】

一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸が本明細書に提供される。一部の実施形態では、配列番号３５、５２、５０、３９、４６、２１、５４、２５、７または１１をコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。一部の実施形態では、配列番号３５、５２、５０、２１、５４、または７を含む抗体重鎖をコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。例えば、核酸は、配列番号３６、５３、５１、２２、５５、または８から選択される配列を含むことができる。一部の実施形態では、配列番号３９、４６、２５、または１１を含む抗体軽鎖をコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。例えば、核酸は、配列番号４０、４７、２６、または１２から選択される配列を含むことができる。

【0022】

本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体のＶＨまたはＶＬをコードする核酸も本明細書に提供される。一部の実施形態では、配列番号３７、２３、２７、９、４１、４８、１３をコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。一部の実施形態では、配列番号３７、２３、２７、９を含む抗体ＶＨをコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。例えば、核酸は、配列番号３８、２４、２８、１０から選択される配列を含むことができる。一部の実施形態では、配列番号４１、４８、１３を含む抗体ＶＬをコードする配列を含む核酸が本明細書に提供される。例えば、核酸は、配列番号４２、４９、１４から選択される配列を含むことができる。

【0023】

本明細書では、抗体重鎖または軽鎖をコードする核酸配列を含むベクターも提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号３５、５２、５０、３９、４６、２１、５４、２５、７、または１１をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３６、５３、５１、４０、４７、２２、５５、２６、８、または１２を含む。

【0024】

本明細書では、抗体ＶＨまたはＶＬをコードする核酸配列を含むベクターも提供される。例えば、そのようなベクターは、配列番号３７、２３、２７、９、４１、４８、または１３をコードする核酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３８、２４、２８、１０、４２、４９、または１４を含む。

【0025】

抗体重鎖をコードする第１の核酸配列、および抗体軽鎖をコードする第２の核酸配列を含むベクターも本明細書に提供される。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３５、５０、または５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９または４６をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号２１または５４をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含む。

【0026】

一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３５をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号５０をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号３５をコードする第１の核酸配列、および配列番号４６をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号４６をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号５０をコードする第１の核酸配列、および配列番号４６をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号２１をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号５４をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、配列番号７をコードする第１の核酸配列、および配列番号１１をコードする第２の核酸配列を含む。

【0027】

また、抗体重鎖をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および抗体軽鎖をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む組成物も提供される。一部の実施形態では、組成物は、配列番号３５、５２、または５０をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。

【0028】

一部の実施形態では、組成物は、配列番号３５をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号５０をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物、配列番号３５をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号５０をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号２１をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、組成物は、配列番号７をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号１１をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。

【0029】

本開示の核酸は、例えば、核酸が発現制御配列に作動可能に連結された後に、宿主細胞において発現され得る。作動可能に連結された核酸の発現が可能な発現制御配列は、当該技術分野において周知である。発現ベクターは、宿主細胞からのポリペプチド（複数可）の分泌を促進する１つ以上のシグナルペプチドをコードする配列を含み得る。目的の核酸（例えば、抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸）を含む発現ベクターは、周知の方法、例えば、安定的または一過性のトランスフェクション、形質転換、形質導入または感染によって宿主細胞に導入され得る。さらに、発現ベクターは、所望の核酸配列で形質転換された宿主細胞の検出を助けるために、例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼ等の１つ以上の選択マーカーを含み得る。

【0030】

別の態様では、本明細書に記載の核酸、ベクター、または核酸組成物を含む細胞、例えば宿主細胞が本明細書に提供される。宿主細胞は、本明細書に記載の抗体の全部または一部分を発現する１つ以上の発現ベクターで安定的にまたは一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入または感染された細胞であり得る。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、本開示の抗体のＨＣおよびＬＣポリペプチドを発現する発現ベクターで、安定的にまたは一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入または感染され得る。一部の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体のＨＣポリペプチドを発現する第１のベクターおよびＬＣポリペプチドを発現する第２のベクターで安定的または一過性にトランスフェクト、形質転換、形質導入または感染され得る。そのような宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞は、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体を発現することができる。抗体を発現することができることが知られている哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、およびＮＳ０細胞が含まれる。

【0031】

一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号３５、５０、または５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９または４６をコードする第２の核酸配列を含むベクターを含む。一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号２１または５４をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含むベクターを含む。

【0032】

一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号３５、５２、または５０をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。一部の実施形態では、細胞、例えば宿主細胞は、配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む。

【0033】

本開示はさらに、上記の宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞を、抗体が発現するような条件下で培養し、発現した抗体を培養培地から回収することによって、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体を調製するための方法を提供する。抗体が分泌された培地は、従来の技術によって精製され得る。タンパク質精製の種々の方法が用いられてもよく、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８２：８３－８９（１９９０）およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

【0034】

また、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製された抗体も提供される。

【0035】

別の態様では、本明細書に記載の抗体、核酸、またはベクターを含む医薬組成物が本明細書に提供される。そのような医薬組成物はまた、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含み得る。本発明の医薬組成物は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２２ｎｄ ｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ）。

【0036】

本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体、核酸、ベクター、または医薬組成物は、Ｂ細胞関連疾患を治療するために使用することができる。Ｂ細胞は免疫系の調節において重要な役割を果たすため、Ｂ細胞の調節不全は様々な疾患に関連している。Ｂ細胞関連疾患には、自己反応性Ｂ細胞およびＴ細胞の活性化によって引き起こされる自己免疫疾患、ならびに過剰および／または制御不能なＢ細胞増殖によって引き起こされるリンパ腫および白血病が含まれる。Ｂ細胞関連自己免疫疾患の例には、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎（抗好中球細胞質抗体関連血管炎）、重症筋無力症が含まれる。

【0037】

本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体がＢ細胞を枯渇させないことを考慮すると、それらは自己免疫疾患を治療するためのＢ細胞枯渇抗体に勝る利点を提供し、問題のある同時免疫不全、長期の免疫抑制、およびＢ細胞の枯渇に起因する他の合併症を回避することができる。以下に示すように、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体は初代ヒトＢ細胞に内在化される。したがって、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体は、他の治療薬をヒトＢ細胞に送達するためにも使用することができる。

【0038】

一部の実施形態では、治療有効量の本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体、そのような抗ヒトＣＤ１９抗体をコードする核酸、そのような核酸を含むベクター、またはそのような抗ヒトＣＤ１９抗体、核酸もしくはベクターを含む医薬組成物を対象に投与することによって、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者）におけるＢ細胞関連疾患、例えば自己免疫疾患を治療する方法が本明細書に提供される。本明細書に記載の抗体、核酸、ベクター、または医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下および静脈内）によって投与することができる。一部の実施形態では、Ｂ細胞関連疾患は、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、重症筋無力症から選択される。

【0039】

また、療法に使用するための本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体、核酸、ベクター、または医薬組成物も提供される。さらに、本開示はまた、Ｂ細胞関連疾患、例えば例えば、自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、重症筋無力症の治療における使用のための、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体、核酸、ベクター、または医薬組成物を提供する。

【0040】

Ｂ細胞関連疾患、例えば自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、または１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、重症筋無力症の治療のための薬物の製造における、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体、核酸、ベクター、または医薬組成物の使用も本明細書に提供される。

【0041】

本明細書で使用される場合、本開示の文脈で（特に特許請求の範囲の文脈で）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語および同様の用語は、別段の定めがない限り、または文脈によって明らかに矛盾していない限り、単数形および複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。

【0042】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、抗原に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体の実施形態には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはコンジュゲート抗体が含まれる。抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ）、および任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のものであってもよい。

【0043】

例示的な抗体は、４つのポリペプチド鎖：鎖間ジスルフィド結合を介して架橋される２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）から構成された免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）型抗体である。４つのポリペプチド鎖の各々のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１２５個以上のアミノ酸の可変領域を含む。４つのポリペプチド鎖の各々のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域から構成される。ＩｇＧアイソタイプは、さらにサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）に分割され得る。

【0044】

ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存されている領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域にさらに細分され得る。ＣＤＲはタンパク質の表面上に露出しており、抗原結合特異性のための抗体の重要な領域である。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されており、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含有する。アミノ酸残基のＣＤＲへの割り当ては、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７－９４８（１９９７））、Ｎｏｒｔｈ（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，“Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））、またはＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで利用可能な国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９９；２７：２０９－２１２を参照のこと）に記載されているものを含む、周知のスキームに従って行われ得る。Ｎｏｒｔｈ ＣＤＲの定義は、本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体に使用される。

【0045】

本開示の抗体の例示的な実施形態はまた、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｄ断片および線状抗体などの、抗原と特異的に相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部分を含む、抗体断片または抗原結合断片を含む。

【0046】

本明細書で使用される「結合する」という用語は、別段の定めがない限り、ある種の化学結合または別のタンパク質もしくは分子との引力相互作用を形成するタンパク質または分子の能力を意味し、当該分野において既知である一般的な方法によって決定されるように、２つのタンパク質または分子の密接な近接をもたらす。

【0047】

本明細書で使用される「ＣＤ１９」という用語は、別段の記載がない限り、ヒトＢリンパ球抗原ＣＤ１９（分化クラスター１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２、またはＣＶＩＤ３としても知られる）を指す。ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は当該技術分野で既知であり、例えば、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１１７１５６９．１（アイソフォーム１、配列番号５６）またはＮＰ＿００１７６１．３（アイソフォーム２、配列番号５７）である。アイソフォーム２は、アイソフォーム１のスプライス変異体であり、細胞内ドメインのアイソフォーム１よりも１アミノ酸短い。「ＣＤ１９」という用語は、すべての既知のヒトＣＤ１９アイソフォームおよび多形形態を集合的に指すために本明細書で使用される。

【0048】

本明細書で使用される「Ｆｃ領域」という用語は、抗体重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む抗体の領域を指す。任意選択により、Ｆｃ領域は、抗体重鎖のヒンジ領域の一部分またはヒンジ領域全体を含み得る。

【0049】

本明細書で使用される「非枯渇抗体」という用語は、治療前のＢ細胞数と比較して、治療後の対象におけるＢ細胞数を有意に減少させない抗体を指す。Ｂ細胞数は、実施例に記載されているもの等の周知のアッセイを使用して測定することができる。非枯渇抗体は、典型的には、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、またはＢ細胞のアポトーシスを誘導しない。

【0050】

「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で互換的に使用される場合、天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、および／またはヌクレオチドの類似体を組み込んだＤＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＲＮＡ分子等の一本鎖および／または二本鎖ヌクレオチド含有分子を含むヌクレオチドのポリマーを指す。本開示のポリヌクレオチドはまた、例えばＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼ反応または合成反応によってその中に組み込まれた基質も含み得る。

【0051】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモット等を含む哺乳動物を指す。好ましくは、対象はヒトである。

【0052】

本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的応答、例えば、酵素もしくはタンパク質の活性の低下または阻害を誘発するか、あるいは症状を改善するか、状態を緩和するか、疾患の進行を減速もしくは遅延するか、または疾患などを予防する、タンパク質あるいは核酸あるいはベクターあるいは組成物の量を指す。１つの非限定的な実施形態において、「治療有効量」という用語は、対象に投与されたときに、状態、または障害または疾患を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防および／または改善するために有効である、タンパク質または核酸またはベクターまたは組成物の量を指す。

【0053】

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」は、本明細書に開示の障害または疾患症状の進行を減速、制御、遅延、または停止し得るすべてのプロセスを指すが、必ずしもすべての障害または疾患症状の完全な消失を示すわけではない。治療は、患者、特にヒトの疾患または状態の治療のためのタンパク質または核酸またはベクターまたは組成物の投与を含む。

【0054】

図面の簡単な説明
図１Ａ～図１Ｂは、抗ヒトＣＤ１９親抗体Ｃ３２３（図１Ａ）および最適化された抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆ（図１Ｂ）の表面疎水性プロファイルを示す。
図２は、ＥＬＩＳＡアッセイにおける抗ヒトＣＤ１９抗体のヒトＣＤ１９への結合を示す。
図３は、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆ による初代Ｂ細胞増殖の阻害を示す。
図４は、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによる全血中のＢ細胞活性化の阻害を示す。
図５は、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによるＢ細胞の形質芽細胞への分化の阻害を示す。
図６Ａ～図６Ｂは、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆがＣＤＣ（図６Ａ）およびＡＤＣＣ（図６Ｂ）活性を欠いていることを示す。
図７は、ヒト全血中の細胞に対する抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆおよびオベキセリマブの結合特異性を示す。
図８は、オベキシリマブと抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによるＢ細胞アポトーシスの誘導における違いを示す。
図９Ａ～図９Ｂは、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスにおける処理後６日目（図９Ａ）および１０日目（図９Ｂ）のヒトＩｇＭの減少を示す。
図１０は、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスのヒトＢ細胞におけるＣＤ８６発現の減少を示す。
図１１は、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで処理したＮＳＧマウスにおけるＢ細胞の頻度を示す。
図１２は、初代ヒトＢ細胞における抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ１（ＣＢ３ｆ）および抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ２（Ｃ３２３．Ｃ１）の内在化を示す。
図１３Ａ～１３Ｂは、マウスコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂと枯渇ＣＤ２０代替Ａｂの有効性の比較を示す。図１３Ａは、マウスＣＩＡモデルにおいて、半確立モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる処理が、枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも臨床スコアを大きく低下させたことを示す。試験の２１日目～４２日目のマウスの臨床スコア（ｎ＝１２／群、アイソタイプ対照で処理した非疾患対照群のｎ＝５を除く）。記号は群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は１９日目から投与を開始した。図１３Ｂは、マウスＣＩＡモデルにおいて、非枯渇ＣＤ１９代用Ａｂによる処理が、枯渇ＣＤ２０代用Ａｂよりも臨床スコアＡＵＣ（２４日目～４２日目）を大きく低下させたことを示す。試験の２４日目～４２日目のマウスの臨床スコアＡＵＣ（ｎ＝１２／群、アイソタイプ対照で処理した非疾患対照群のｎ＝５を除く）。バーは群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は１９日目から投与を開始した。共通の文字を共有しないバーは、互いに有意に異なる（ｐ＜０．０５、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、Ｔｕｋｅｙの事後検定）。
図１４は、１型糖尿病のＮＯＤモデルにおいて、半治療モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる処理が、糖尿病の発生を枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも大きく遅らせ、かつ低減させたことを示す。糖尿病の発生率（血糖値が２４０ｍｇ／ｄｌを超えるマウスを糖尿病であるとみなした。＞ｎ＝１０／群、未処理群のｎ＝９を除く）。動物は１２週齢から投与を開始した。
図１５は、マウスＥＡＥモデルにおいて、半治療モードでの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる半処理が、枯渇ＣＤ２０代替Ａｂよりも臨床スコアを大きく低下させたことを示す。試験の６日目～４２日目のマウスの臨床スコア（ｎ＝１２／群）。記号は群の平均を表し、エラーバーは平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。動物は６日目から投与を開始した。＊同日のアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５

【実施例】

【0055】

以下の実施例は、特許請求された本発明を説明するために提供され、これを限定するものではない。

【0056】

実施例１．ヒトＣＤ１９に結合する抗体（抗ヒトＣＤ１９抗体）の生成
抗ヒトＣＤ１９抗体Ｃ３２３は、ヒトＣＤ１９（配列番号５６）およびその共受容体ＣＤ２１でコトランスフェクトされたヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞に対する細胞ベースのパニングを用いてファージディスプレイライブラリーから発見される。親ＨＥＫ－２９３細胞に対するネガティブパニングを用いて非特異的な細胞結合剤を除去する。ＣＤ１９特異的結合は、ＣＤ１９細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質を使用してＥＬＩＳＡにより確認する。ＩｇＧフォーマットへの変換および精製の後、ヒトバーキットリンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉおよび単離された初代ヒトＢ細胞を用いて、ＦＡＣＳにより細胞結合を確認する。

【0057】

疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は、抗体変異体の特徴付けに一般的に使用されるタンパク質の分離のための技術であり、目的のタンパク質のＨＩＣカラムへの保持時間は、その全体的な疎水性を反映する（Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｎａｌ．２０１６ １３０：３－１８）。Ｃ３２３は、ＨＩＣカラムの保持時間が長いため、疎水性であると見なされる。抗体の疎水性は、発現不良およびタンパク質凝集等の製造上の問題を引き起こす可能性がある。Ｃ３２３の生物物理学的特性を強化し、その親和性および効力を高めるために、標的化されたランダムな突然変異誘発が用いられる。Ｃ３２３抗ヒトＣＤ１９親ｍＡｂの可変領域の相同性モデルを作製する。次いで、空間的凝集傾向アルゴリズムをモデルに適用して、表面に露出した疎水性パッチを同定する。このプロセスにより、ＬＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３内の表面に露出した８つの疎水性残基が同定される。ＬＣＤＲ１：Ｙ３１、Ｙ３２；ＨＣＤＲ２：Ｉ５２、Ｉ５３およびＦ５４；ＨＣＤＲ３：Ｆ９７、Ｙ９９、およびＹ１００ａ（Ｋａｂａｔナンバリング）（図１Ａ）。これらの残基は、突然変異誘発の標的である。ライブラリーは、ＶＶＫコドンベースの変異原性オリゴヌクレオチドを用いてより親水性の（極性または荷電）アミノ酸を含むように作製され、Ｋｕｎｋｅｌの突然変異誘発を用いて、選択されたＣＤＲ 配列が欠失した元のＣ３２３親抗体をコードするウラシル含有一本鎖ＤＮＡテンプレートに組み込まれる。ファージ発現Ｆａｂは、ビオチン化ヒトＣＤ１９ ＥＣＤ抗原を用いてスクリーニングされる。このようにして同定された親和性中性突然変異のＤＮＡ配列決定を行い、独自のクローンをＥ．ｃｏｌｉで周辺質Ｆａｂとして発現させ、滴定ＥＬＩＳＡによって分析する。このプロセスにより、親和性中性であるが、より親水性の３つアミノ酸置換：ＬＣＤＲ１：Ｙ３１Ｈ、ＨＣＤＲ２：Ｆ５４Ｙ、およびＨＣＤＲ３：Ｙ９９Ｋ（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定された。

【0058】

並行して、親和性を高めるための最適化が、６つすべてのＣＤＲを標的とするＮＮＫコドンベースの変異原性オリゴヌクレオチドを用いて行われ、Ｋｕｎｋｅｌの突然変異誘発を用いて、選択されたＣＤＲ配列が欠失したウラシル含有一本鎖ＤＮＡテンプレートに組み込まれる。ファージ発現Ｆａｂ変異体のスクリーニングは、捕捉リフト（Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８ ２５６（２）：１６９－７７）およびビオチン化ヒトＣＤ１９ ＥＣＤ抗原を用いたＥＬＩＳＡによって行われる。このようにして、親和性の増加をもたらすＣＤＲ置換、ＨＣＤＲ１：Ｆ２９Ｉ、Ｉ３４Ｙ；ＨＣＤＲ２：Ｇ５５Ｄ、ＨＣＤＲ３：Ｇ１００ｂＡ；ＬＣＤＲ１：Ｇ２７ａＫ、Ａ３４Ｈ、ＬＣＤＲ２：Ｓ５２Ｒ、Ａ５５Ｐ、ＬＣＤＲ３：Ｎ９３Ｑ（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定され、これらを組み合わせることでＣ３２３．Ｃ１の生成がもたらされる。

【0059】

上記３つの親水性置換（Ｙ３１Ｈ、Ｆ５４Ｙ、およびＹ９９Ｋ）がＣ３２３．Ｃ１に加えられ、ＮＮＫコドンベースの突然変異誘発を用いたＣＤＲランダム化の最終ラウンドに使用されるＦａｂテンプレートが生成される。有益なＣＤＲ突然変異をライブラリーに組み合わせて、すべての有益な突然変異をランダムに組み合わせるか、または野生型配列に逆突然変異させたりすることができる。このプロセスは、ＣＢ３と称される高親和性変異体を識別する。ＣＢ３は、追加のＣＤＲ残基置換を含む：ＨＣＤＲ１：Ｇ２７Ｈ、ＨＣＤＲ２：Ｇ５０Ｄ、Ｉ５３Ａ、Ｄ５５Ｇ、Ｔ５６Ｓ、Ａ５７Ｐ；ＬＣＤＲ１：Ｋ２７ａＨ、Ｈ３４Ａ、ＬＣＤＲ３：Ｌ９５Ｑ（Ｋａｂａｔナンバリング）。

【0060】

テンプレートとしてＣＢ３を使用して、特定の残基をヒトＩＧＫＶ３－２０生殖細胞系の同一性に戻すために追加のＣＤＲ変更が行われる。ＬＣＤＲ１の１つの残基：Ｎ２９ＳおよびＬＣＤＲ２の５つの残基：Ａ５０Ｇ、Ｔ５１Ａ、Ｒ５２Ｓ、Ｔ５３Ｓ、Ｐ５５Ａは、抗体の機能に対する影響を最小限に抑えながら同時に元に戻される。これにより、ＣＢ３ｆと称される最終的な分子が得られた。

【0061】

（１）配列番号３５のＨＣおよび配列番号３９のＬＣを含むＩｇＧ４アイソタイプ、（２）配列番号５０のＨＣおよび配列番号３９のＬＣを含むＩｇＧ１アイソタイプ、ならびに（３）配列番号５２のＨＣおよび配列番号３９のＬＣを含むＩｇＧ１エフェクターヌル抗体を含む、ＣＢ３ｆのいくつかのバージョンが生成される。別段の指定のない限り、「ＣＢ３ｆ」は、配列番号３５のＨＣおよび配列番号３９のＬＣを含むＩｇＧ４アイソタイプを指す。

【0062】

図１Ａ～図１Ｂは、親抗体Ｃ３２３と比較して改善されたＣＢ３ｆの表面疎水性プロファイルを示す。ＨＩＣカラムでのＣＢ３ｆの保持時間は、親抗体Ｃ３２３と比較して２倍超短縮された。同時に、一過性ＣＨＯ発現からのＣＢ３ｆ抗体の力価は、親Ｃ３２３抗体の力価と比較した場合に２倍超増加した。

【0063】

図２は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｃ３２３およびＣ３２３．Ｃ１と比較した場合の、親和性改変抗体ＣＢ３およびＣＢ３ｆによるヒトＣＤ１９への改善された結合を示す。ＥＬＩＳＡアッセイは以下のように実施される。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で５μｇ／ｍＬに希釈したヤギ抗ヒトカッパポリクローナル抗体５０μＬ／ウェルを用いて、９６ウェルマイクロタイタープレートを４℃で一晩コーティングする。一晩インキュベーションした後、プレートを吸引し、２００μＬのカゼイン緩衝液を用いて室温で１時間ブロックする。ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ）を用いてプレートを３回洗浄する。抗ヒトＣＤ１９抗体をＰＢＳカゼインで５μｇ／ｍＬに希釈し、抗ヒトカッパでコーティングした、カゼインでブロックされたプレートの各カラムに５０μＬを３７℃で１時間加える。ＰＢＳＴを用いてプレートを３回洗浄する。ビオチン化ヒトＣＤ１９細胞外ドメインタンパク質を２０μｇ／ｍＬから９ｎｇ／ｍＬまで段階希釈し、５０μＬをプレートに加え、３７℃で１時間インキュベートする。ＰＢＳＴを用いてプレートを３回洗浄し、次いで１リットルのＰＢＳＴを含むビーカーに移し、３７℃で一晩（約１６時間）撹拌しながらインキュベートする。洗浄緩衝液を吸引し、カゼイン緩衝液で１：１０００に希釈したニュートラアビジンアルカリホスファターゼ複合体５０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベートする。ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを３回洗浄する。脱イオン水で１：３５に希釈したＡＭＰ－ＰＭＰ基質５０μＬを加え、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダーで５６０ｎｍでの吸光度を読み取る。

【0064】

以下に示すように、ＣＢ３ｆは、ヒトＣＤ１９発現ＣＨＯ細胞への高い親和性結合を示し、カニクイザルＣＤ１９発現ＣＨＯ細胞への結合を予想外に獲得した。ＣＢ３ｆは、ヒトＩＧＨＶ１－６９およびＩＧＫＶ３－２０生殖細胞系に対して、それぞれ９２％および９６％の同一性を有する。したがって、抗ヒトＣＤ１９抗体ＣＢ３ｆは、親和性が高く、疎水性が低く、ヒト生殖細胞系の同一性の割合が高い、すなわち免疫原性リスクが低い。

【0065】

ＣＢ３ｆを含むがこれに限定されない本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９抗体は、最適な所定のＨＣ：ＬＣ比、またはＨＣとＬＣの両方をコードする単一のベクター系を用いて、抗体を分泌するための発現系で一過性または安定的にトランスフェクトされた、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ等の哺乳動物細胞株で発現させることができる。抗体が分泌された清澄化培地は、一般的に使用される技術を用いて精製することができる。これらのクロマトグラフィーステップの後、抗体の純度は、９９．０％（モノマー）を超える値を達成し得る。

【0066】

実施例２．抗ヒトＣＤ１９抗体の特徴付け
ＣＤ１９に対する結合親和性
ＣＨＯ細胞上で安定に発現した膜結合型ヒトＣＤ１９およびカニクイザルＣＤ１９への抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆの液相平衡結合親和性を、３７℃のＭＳＤ溶液平衡滴定（ＭＳＤ－ＳＥＴ）アッセイによって測定する。さらに、ＣＤ１９に結合するＣＢ３ｆ Ｆａｂ断片の一価親和性および動力学を、３７℃で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定する。

【0067】

ＭＳＤＳＩ６０００機器（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を使用してＭＳＤプレートを読み取る。ＭＳＤアッセイプレートを、以下のように調製する。マルチアレイ９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐ／ＮＬ１５ＸＡ－３）を、ＰＢＳ中のヤギ抗ヒトＦｃ捕捉抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｐ／Ｎ１０９－００５－０９８）の１μｇ／ｍＬ溶液で４℃で一晩コーティングする。コーティング後、プレートをＴＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０（ＴＢＳＴ）で３回洗浄する。

【0068】

ヒトおよびカニクイザルＣＤ１９細胞を安定に発現するＣＨＯ細胞を、室温で５分間、ＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒドで固定する。ＰＢＳで洗浄してパラホルムアルデヒドを除去し、０．０５％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含む１％ブロッカーＡ（３％ブロッカーＡ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐ／Ｎ Ｒ９３ＡＡ－１から希釈）中に細胞を４℃で保存する。

【0069】

ヒトＣＤ１９親和性測定の場合、４００ｐＭ、８０ｐＭ、１６ｐＭおよび３．２ｐＭの固定抗体濃度でサンプルを２つ調製する。カニクイザルＣＤ１９親和性測定の場合、１０ｎＭ、２ｎＭ、４００ｐＭ、および８０ｐＭの固定抗体濃度でサンプルを２つ調製する。固定ヒトＣＤ１９ＣＨＯ細胞を遠心分離によりペレット化し、２２×１０^６細胞／ｍＬで３％ブロッカーＡ溶液に再懸濁する。固定カニクイザルＣＤ１９ＣＨＯ細胞を遠心分離によりペレット化し、２００×１０^６細胞／ｍＬで３％ブロッカーＡ溶液に再懸濁する。３％ブロッカーＡの円錐底９６ウェルプレートで細胞を２．５倍に段階希釈し、ヒトＣＤ１９の場合は約９００細胞／ｍＬまで、カニクイザルＣＤ１９の場合は８，４００細胞／ｍＬまで、それぞれ合計１２回の細胞希釈を行う。これらを、以前に調製した抗体希釈液と１：１で混合する。ヒトＣＤ１９の場合、最終抗体濃度は２００ｐＭ、４０ｐＭ、８ｐＭ、および１．６ｐＭであり、最終細胞希釈は１１×１０^６細胞／ｍＬから約４５０細胞／ｍＬまでである。カニクイザルＣＤ１９の場合、最終抗体濃度は５ｎＭ、１ｎＭ、２００ｐＭ、および４０ｐＭであり、最終細胞希釈は１００×１０^６細胞／ｍＬから約４，２００細胞／ｍＬまでである。ヒトＣＤ１９は３～４日間、カニクイザルＣＤ１９は２日間、プレートシェーカー上でプレートを３７℃でインキュベートして、結合が平衡に達するようにする。

【0070】

インキュベーション後、遠心分離によって細胞をペレット化する。プレートからの清澄化した上清１００マイクロリットルを、調製したＭＳＤプレートに移し、室温で６０分間、プレートシェーカー上でインキュベートする。インキュベーション後、プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、次いで１％ブロッカーＡ中の１μｇ／ｍＬビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ一次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ２０１０－０８）１００μＬをすべてのウェルに加える。これを室温で６０分間、プレートシェーカー上でインキュベートする。プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、次いで１％ブロッカーＡ中の１μｇ／ｍＬ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧストレプトアビジン（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐ／Ｎ Ｒ３２ＡＤ－１）１００μＬをすべてのウェルに加えた。これを室温で６０分間、プレートシェーカー上でインキュベートした。プレートをＴＢＳＴで３回洗浄し、プレートを読み取る直前に１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐ／ＮＲ９２ＴＣ－１）を加える。細胞上の未知の抗原濃度を説明するための解離定数（Ｋ_Ｄ）および最小公倍数（ＬＣＭ）を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ で非線形回帰を使用して、ＭＳＤ－ＳＥＴデータから平衡結合方程式に全体的に当てはめる（Ｄａｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｂｒａｕｌｔ，２００５，Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ａｓｓａｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ２：６４７－６５７を参照）

【0071】

Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、試薬、およびＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒ ３．１が、ＣＢ３ｆのＦａｂ断片に結合するヒト、マウスおよびカニクイザルＣＤ１９の表面プラズモン共鳴分析に使用される。組換えＣＤ１９－Ｆｃタンパク質は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入する。プロテインＡセンサーチップ（ＧＥプロテインＡチップＰ／Ｎ２９１２７５５）を使用する。泳動用緩衝液は１×ＨＢＳ－ＥＰ＋（Ｔｅｋｎｏｖａ Ｐ／ＮＨ８０２２）であり、泳動温度は３７℃である。

【0072】

ＣＤ１９ Ｆｃ融合タンパク質を泳動用緩衝液で３μｇ／ｍＬに希釈し、各々が約６０ＲＵのヒト、カニクイザル、およびマウスのタンパク質をフローセル（Ｆｃ）２、３、および４にそれぞれ捕捉する。ＣＢ３ｆ Ｆａｂ断片を泳動用緩衝液で１０００ｎＭに希釈し、次いで、泳動用緩衝液で１．６ｎＭまで５倍段階希釈して合計５回希釈する。Ｆａｂまたは緩衝液ブランクを５０μＬ／分で３００秒間注入し、その後に９００秒間の解離相が続く。再生は、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５を３０μＬ／分ですべてのＦｃに注入することによって実施される。参照を差し引いたデータは、Ｆｃ２－Ｆｃ１、Ｆｃ３－Ｆｃ１、およびＦｃ４－Ｆｃ１として収集される。オンレート（ｋ_ｏｎ）およびオフレート（ｋ_ｏｆｆ）を、「１：１結合」モデルを使用して適合させる。親和性（Ｋ_Ｄ）を、関係Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎに従って結合キネティクスから算出する。

【0073】

ＣＢ３ｆは、ＣＨＯ細胞上に発現したヒトおよびカニクイザルＣＤ１９に、それぞれ３．３５ｐＭおよび４５．２ｐＭの親和性（Ｋ_Ｄ）で結合する（表１）。

【0074】

ＣＢ３ｆのＦａｂ断片は、３．２０×１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１のオンレート（ｋ_ｏｎ）、２．３５×１０^－４ ｓ^－１のオフレート（ｋ_ｏｆｆ）、および７６．８ｐＭの親和性（Ｋ_Ｄ）でヒトＣＤ１９に結合する（表２）。ＣＢ３ｆのＦａｂ断片は、１．０４×１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１のオンレート（ｋ_ｏｎ）、９．７８×１０^－２ ｓ^－１のオフレート（ｋ_ｏｆｆ）、および９４．５ｎＭの親和性（Ｋ_Ｄ）でカニクイザルＣＤ１９に結合する（表２）。１μＭのＦａｂ濃度では、マウスＣＤ１９への結合は観察されない。

【表1】

【表2】

【0075】

安定性
ＣＢ３ｆの安定性を、賦形剤を含む５ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）中で高濃度（約１００ｍｇ／ｍＬ）で評価する。濃縮サンプルを５℃および３５℃で４週間の期間にわたってインキュベートする。インキュベーション後、サンプルを、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により高分子量の割合（％ＨＭＷ）について、キャピラリー電気泳動により断片化（ＣＥ－ＳＤＳ）について、およびＬＣ－ＭＳペプチドマッピングにより化学修飾（例えば、脱アミド化、異性化、または酸化）について分析する。３５℃で４週間後、ＣＢ３ｆは、０．５％のΔ％ＨＭＷ、０．６％のΔ％断片を示すが、０．２％を超えるＣＤＲの化学修飾は示さない。

【0076】

同じ条件下での凍結／融解安定性を、－７０℃に置かれた大量のバルク原薬の凍結／融解条件を模倣する、３回繰り返される、緩慢な制御された温度サイクルを用いて評価する。ＣＢ３ｆは、３回の凍結融解サイクル後にＳＥＣで測定した場合、１．９％の％ＨＭＷを示す。他の賦形剤は、％ＨＭＷの増加をさらに低減することができる（データは示さず）。

【0077】

これらの結果は、ＣＢ３ｆが良好な物理的および化学的安定性を有することを示唆している。

【0078】

溶解度
溶解度は、１００ｍｇのＣＢ３ｆを３０ｋＤａの分子量カットオフ遠心フィルター（例えば、Ａｍｉｃｏｎ ＵＣフィルター、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＵＦＣ９０３０２４）で約０．５ｍＬの体積に濃縮することによって評価する。Ｓｏｌｏ ＶＰＥ分光光度計（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ）を使用して、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によってサンプルの最終濃度を測定する。

【0079】

ＣＢ３ｆは、５ｍＭヒスチジンｐＨ６緩衝液で１８３ｍｇ／ｍＬ以上、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）ｐＨ７．４で１７０ｍｇ／ｍＬ以上の溶解度を示す。これらの結果は、ＣＢ３ｆが高い溶解度を示すことを示唆している。

【0080】

粘度
ＣＢ３ｆの粘度を、異なる賦形剤を含むｐＨ６．０の５ｍＭヒスチジン中約１２５ｍｇ／ｍＬの濃度で、１５℃で分析する。粘度測定は、ＶＲＯＣ Ｉｎｉｔｉｕｍ（ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ）で行われる。ＣＢ３ｆは、ｐＨ６の５ｍＭヒスチジン＋２８０ｍＭマンニトール中１３１ｍｇ／ｍＬで１４．２ｃＰ、ｐＨ６．０の５ｍＭヒスチジン＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム中で９．５ｃＰ、および５ｍＭヒスチジンｐＨ６．０＋２８０ｍＭアルギニン中で６．１ｃＰの粘度を示した。これらの結果は、ＣＢ３ｆが低粘度を示し、高濃度投与が可能であることを示唆している。

【0081】

薬物動態（ＰＫ）
ＣＢ３ｆのＰＫ特性を、０．０３、０．３、１および１０ｍｇ／ｋｇのＣＢ３ｆの単回皮下投与、または１ｍｇ／ｋｇのＣＢ３ｆの単回静脈内ボーラス投与後に、カニクイザルにおいて調べる。ＣＢ３ｆは、調べた皮下投与量範囲にわたって線形のＰＫを示し、終末半減期（Ｔ_１／２）が１８２時間～３０１時間の範囲である。１ｍｇ／ｋｇのＣＢ３ｆの単回静脈内ボーラス投与後のＴ_１／２は３２４時間である。

【0082】

オベキセリマブの平均Ｔ_１／２は３．５±１．０日であり、これは６０～１０８時間に相当することが報告されている（Ｊａｒａｃｚｅｗｓｋａ－Ｂａｕｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（ＥＵＬＡＲ）２０１５ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｐｏｓｔｅｒ：Ａ Ｐｈａｓｅ １ｂ／２ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ，Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ＸｍＡｂ（登録商標）５８７１ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｊｕｎｅ １２，２０１５、ｈｔｔｐｓ：／／ｉｎｖｅｓｔｏｒｓ．ｘｅｎｃｏｒ．ｃｏｍ／ｓｔａｔｉｃ－ｆｉｌｅｓ／００１７ｄｃｆ１－ｄｅｂ２－４６ｅｂ－９３ｆｆ－９０ｂａ１６４ｅｃ５０ｃで入手可能）。したがって、ＣＢ３ｆはオベキセリマブより優れたＴ_１／２を有する。

【0083】

実施例３．抗ヒトＣＤ１９抗体のインビトロ機能特性評価。
抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによるＢ細胞増殖のインビトロ阻害。

【0084】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆが初代ヒトＢ細胞の増殖を阻害する能力を、インビトロＢ細胞増殖アッセイで試験する。

【0085】

Ｂ細胞単離キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いたネガティブ選択により、健康なドナーのＰＢＭＣから初代ヒトＢ細胞を単離する。ヒト初代Ｂ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（すべてＣｏｒｎｉｎｇ）および１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレート中、３７℃で培養する。細胞を抗ヒトＣＤ１９抗体で１時間前処理し、マウス抗ヒトＩｇＭ（２μｇ／ｍＬ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）とウサギ抗マウスＩｇＧ（１２μｇ／ｍＬ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で、３７℃および５％ ＣＯ_２で２日間刺激する。次いで、細胞培地の［^３Ｈ］－チミジン（１μＣｉチミジン／ウェル、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で細胞を１８時間パルスする。［^３Ｈ］－チミジンの取り込みレベルを、２４５０ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ （ＭｉｃｒｏＢｅｔａ^２シリアル番号：５１２９１８６、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）によって測定し、１分当たりの細胞数（ｃｃｐｍ）として表す。

【0086】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、初代ヒトＢ細胞の増殖を用量依存的に阻害するが、アイソタイプ対照は、試験したいずれの濃度でも阻害を示さない（図３）。１２人の異なるドナーから得られたＢ細胞を用いてＣＢ３ｆの阻害機能を試験すると、ＣＢ３ｆの平均ＩＣ_５０は０．００７ｎＭである（表３）。データは、抗ヒトＣＤ１９ｍＡｂ ＣＢ３ｆが初代ヒトＢ細胞の増殖を用量依存的に阻害できる一方で、Ｂ細胞増殖はアイソタイプ対照抗体による影響を受けないことを示している。

【表3】

【0087】

ヒト全血におけるＢ細胞活性化のインビトロ阻害
全血中の初代ヒトＢ細胞の活性化を阻害する抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆの能力を、インビトロ全血活性化アッセイで試験する。

【0088】

ＥＤＴＡ処理したヒト全血（健康なドナー、ＴＳＲＩ Ｎｏｒｍａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｄｏｎｏｒ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレートで培養し、ＣＢ３ｆまたはアイソタイプ対照抗体とともに３０分～１時間、３７℃および５％ ＣＯ_２でプレインキュベートする。７ｎＭの各抗体を、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（すべてＣｏｒｎｉｎｇ）および１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で、４倍希釈および１２点滴定による最高濃度として使用する。３７℃および５％ＣＯ_２（ＣｐＧ ＯＤＮ ７９０９（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））で２４時間、２．５μｇ／ｍＬのＴＬＲ９リガンドで全血を刺激する。Ｂ細胞活性化プロファイルをフローサイトメトリーにより測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析する。

【0089】

フローサイトメトリーは、以下のように実施される。処理および活性化したヒト全血を、ＲＢＣ溶解緩衝液（Ｆｉｓｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）で溶解する。適切な組み合わせの蛍光色素結合抗体で４℃で３０分間細胞を染色してＢ細胞活性化マーカーを同定する：ＢｉｏＬｅｇｅｎｄのＣＤ６９ ＢＶ６０５（カタログ番号３１０９３８）。細胞を、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄのＣＤ３ ＦＩＴＣ（カタログ番号３００３０６）、ＣＤ１９ ＡＰＣ（カタログ番号３６３００６）、ＢＤ ＰｈａｒｍｉｎｏｇｅｎのＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（カタログ番号５６０７３６）、および固定可能な生存性色素ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でも染色する。各サンプルについて、生細胞でゲートをかけた少なくとも２５，０００～５０，０００の事象を分析する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でサンプルを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を分析する。

【0090】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、初代ヒトＢ細胞の活性化を用量依存的に阻害し、それはＣＤ６９＋ Ｂ細胞の減少によって測定される。３人の異なるドナーから得られた血液を用いてアッセイを行い、代表的な結果を図４に示す。このアッセイにおけるＣＢ３ｆの平均ＩＣ_５０は０．００８ｎＭである（表４）。アイソタイプ対照抗体は、試験したいずれの濃度でもＣＤ６９発現の阻害を示さなかった。データは、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆが全血中の初代ヒトＢ細胞の活性化を用量依存的に阻害できる一方で、細胞活性化はアイソタイプ対照抗体による影響を受けないことを示している。

【表4】

【0091】

Ｂ細胞の形質芽細胞への分化のインビトロ阻害
メモリーＢ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、健康なドナーのＰＢＭＣからヒトメモリーＢ細胞を単離する。ヒト初代メモリーＢ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（すべてＣｏｒｎｉｎｇ）および１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％β－メルカプトエタノール（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレート中、３７℃で培養する。細胞を抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆで１時間前処理し、５０ｎｇ／ｍＬ抗ＣＤ４０、２００ｎｇ／ｍＬＢＡＦＦ、１ｎｇ／ｍＬＩＬ－２、１００ｎｇ／ｍＬＩＬ－２１（すべてＲ＆Ｄ）で５日間刺激する。細胞を洗浄し、適切な組み合わせの蛍光色素結合抗体で４℃で３０分間染色して、メモリーＢ細胞の形質芽細胞への分化を同定する：ＣＤ３８ ＰＥ、ＣＤ３ ＦＩＴＣ（カタログ番号３００３０６）、ＣＤ１９ ＡＰＣ（カタログ番号３６３００６）（すべてＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＢＤ ＰｈａｒｍｉｎｏｇｅｎのＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（カタログ番号５６０７３６）、および固定可能な生存性色素ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。各サンプルについて、生細胞でゲートをかけた少なくとも２５，０００～５０，０００の事象を分析する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でサンプルを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を分析する｛１］。形質芽細胞のパーセントは、ＣＤ３８^{ｂｒｉｇｈｔ}／ＣＤ２０^ｌｏｗ Ｂ細胞の％として定義される。

【0092】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、初代ヒトメモリーＢ細胞の形質芽細胞への分化を用量依存的に阻害する（図５）。実験は３回繰り返され、代表的なデータが示される。アイソタイプ対照抗体は、試験したいずれの濃度でも形質芽細胞分化の阻害を示さない。データは、ＣＢ３ｆが初代ヒトメモリーＢ細胞の形質芽細胞への分化を用量依存的に阻害できる一方で、分化はアイソタイプ対照抗体による影響を受けないことを示している。

【0093】

ＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、非枯渇ｍＡｂであり、インビトロＣＤＣおよびＡＤＣＣアッセイにおいて活性を欠く。
抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、Ｂ細胞阻害抗体であり、Ｂ細胞の枯渇を引き起こすことなくＢ細胞の機能を阻害するように設計される。インビトロアッセイを行って、ＣＢ３ｆが補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を欠くことを確認するが、それはＣＢ３ｆが枯渇機能を有しないことを意味する。

【0094】

ＣＤ１９およびＣＤ２０を発現するＷｉｌ２－ｓ細胞株を標的細胞として使用し、機能的なＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃを発現するＪｕｒｋａｔ細胞株（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）をエフェクター細胞株として使用する。ＣＢ３ｆを試験し、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの既知の強力なインデューサーであるＩｇＧ１抗体を陽性対照として使用する。

【0095】

ＣＢ３ｆを、ＣＤＣおよびＡＤＣＣアッセイ用に、それぞれ１０μｇ／ｍＬおよび１μｇ／ｍＬの試験濃度から開始して３段階続希釈する。５０μＬ／ウェルの試験化合物またはアッセイ緩衝液を９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３９１６）に加える。Ｗｉｌ２－ｓ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬの濃度に希釈し、５０μＬ／ウェルでプレートに加える。ＣＤＣおよびＡＤＣＣプレートを３７℃で１時間インキュベートする。次に、Ｊｕｒｋａｔ Ｖ１５８細胞を３×１０^６細胞／ｍＬの濃度に希釈してＡＤＣＣプレートに５０μＬ／ウェルで加えるか、またはヒト血清からの事前希釈した補体（Ｑｕｉｄｅｌ Ａ１１３）をＣＤＣプレートに５０μＬ／ウェルで加える。ＣＤＣプレートを３７℃で２時間インキュベートし、続いて１００μＬ／ウェルのＣｅｌｌ－Ｔｉｔｒｅ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７５７１）を加える。ＡＤＣＣプレートを３７℃で４時間インキュベートし、続いて１００μＬ／ウェルのＯＮＥ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｅ８１３０）を加える。低速でプレートシェーカーを使用してプレートの内容物を混合し、０．２ｃｐｓの積分を用いてＥｎｖｉｓｉｏｎ １１マルチモードプレートリーダーで発光シグナルを読み取る。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ８．２を使用して分析する。

【0096】

ＣＤＣおよびＡＤＣＣアッセイの結果を図６Ａ～６Ｂに示す（３回の独立したプレートランからの代表的な結果）。すべての応答レベルは、陽性対照ＩｇＧ１抗体と比較して分類される。抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆは、示された濃度ではＣＤＣ活性（図６Ａ）もＡＤＣＣ活性（図６Ｂ）も有しない。

【0097】

ヒト全血中のＢ細胞に結合する抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂの特異性。
抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆはＢ細胞阻害抗体であり、Ｂ細胞機能を抑制することによって作用する。オベキセリマブは、ＣＤ１９とＦｃγＲＩＩｂの両方に結合する抗体である。しかしながら、ＦｃγＲＩＩｂに対するオベキセリマブの高親和性結合は、ＣＤ１９に依存しない様式で他の細胞型への結合をもたらす可能性がある。したがって、オベキセリマブと抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆの結合特異性を、ヒト全血結合アッセイを使用して比較する。

【0098】

ＥＤＴＡ処理したヒト全血（健康なドナー、ＴＳＲＩ Ｎｏｒｍａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｄｏｎｏｒ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を、ポリスチレン９６ウェルに播種し、異なる濃度のＡｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７結合ＣＢ３ｆ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７結合およびＡｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ（登録商標）６４７結合アイソタイプ対照と、適切な組み合わせの蛍光色素結合細胞外抗体で染色して、リンパ球／顆粒球集団を検出する。７ｎＭの各抗体を、２％ウシ胎児血清（熱不活性化ＦＢＳ）を補充したＣａ^２＋およびＭｇ^２＋不含ＤＰＢＳ１×（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）（どちらもＣｏｒｎｉｎｇ（登録商標））中で、３倍希釈および８点滴定による最高濃度として使用する。このカクテルには、ＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（カタログ番号５６０７３６）、ＣＤ４５ ＢＶ４２１（カタログ番号５６３８７９）、ＣＤ６６ ＦＩＴＣ（カタログ番号５５５７２４）（すべてＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ３ ＢＶ６０５（カタログ番号３１７３２２）、ＣＤ１１ｂ ＰＥ－Ｃｙ７（カタログ番号１０１２１６）（すべてＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅの固定可能な生存性色素ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０（カタログ番号６５－０８６５－１４）が含まれる。全血と抗体を、暗所で３０分間４℃で染色する。死滅した細胞を生存性色素により除外し、生細胞でゲートをかけた少なくとも２５，０００～５０，０００の事象を分析する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でサンプルを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を分析する。

【0099】

フローサイトメトリー分析は、ＣＢ３ｆがすべての試験濃度でヒト全血中のＢ細胞に排他的に結合することを示している（図７）。オベキセリマブは、ＣＤ６６およびＣＤ１１ｂを発現し、したがって好中球として識別されるＣＤ２０陰性細胞（すなわち、非Ｂ細胞）の集団と同様に、ヒトＢ細胞への結合を示す（図７）。したがって、データは、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆがヒト全血中のヒトＢ細胞に高度に特異的に結合するのに対し、オベキセリマブは、Ｂ細胞結合に加えてヒト好中球への非特異的結合を示すことを示唆している。好中球はヒトにおいて最も豊富な種類の白血球であるため、好中球への非特異的結合は、ヒト患者に観察されるオベキセリマブの短い半減期を説明する可能性がある。４人の異なるドナーからの血液を用いて実験を繰り返し、代表的な結果を図７に示す。

【0100】

インビトロアポトーシスアッセイ。
前述のように、オベキシリマブは臨床試験中にヒト患者の Ｂ 細胞数を減少させることが示された（Ｊａｒａｃｚｅｗｓｋａ－Ｂａｕｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，ＥＵＬＡＲ ２０１５ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｐｏｓｔｅｒ：Ａ Ｐｈａｓｅ １ｂ／２ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓａｆｅｔｙ，Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ，Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ＸｍＡｂ（登録商標）５８７１ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｊｕｎｅ １２，２０１５）。

【0101】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆおよびオベキシリマブが初代ヒトＢ細胞のアポトーシスを誘導する能力を、インビトロＢ細胞アポトーシスアッセイを使用して試験する。Ｂ細胞単離キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いたネガティブ選択により、健康なドナーのＰＢＭＣからヒト初代Ｂ細胞を単離する。ヒト初代Ｂ細胞を１×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、完全培地（１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ－１６４０、１×ＭＥＭ－非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１×ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（すべてＣｏｒｎｉｎｇ）および１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％β－メルカプトエタノール（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、ポリスチレン９６ウェルＵ底プレート中、３７℃で培養する。細胞を指定濃度のＣＢ３ｆ、オベキシリマブ、またはアイソタイプ対照抗体で２時間、３７℃および５％ ＣＯ_２で処理する。Ｂ細胞のアポトーシスを、アネキシンＶ染色を生存性色素と組み合わせて使用するフローサイトメトリーによって測定する。適切な組み合わせの蛍光色素結合抗体で４℃で３０分間細胞を染色してＢ細胞活性化マーカーを同定する：ＣＤ１９ ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｏｇｅｎ）、アネキシンＶ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および固定可能な生存性色素ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。アポトーシス細胞は、生きたアネキシンＶ^＋細胞として定義される。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でサンプルを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を分析する｛１］。

【0102】

３人の異なるドナーから得られたＢ細胞を用いて実験を繰り返し、代表的なデータを図８に示す。オベキシリマブはＢ細胞アポトーシスを用量依存的に誘導し（図８）、これは臨床試験で観察されたヒト患者におけるＢ細胞数の減少を説明し得る。対照的に、ＣＢ３ｆは、アイソタイプ対照と比較した場合、ヒトＢ細胞のアポトーシスをほとんどまたは全く誘導しない（図８）。データは、オベキシリマブとは対照的に、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆが、エクスビボで初代ヒトＢ細胞のアポトーシスを誘導しないことを示しており、ＣＢ３ｆの異なる作用機序が示唆される。このデータはさらに、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆが、Ｂ細胞を枯渇させることなく、またはＢ細胞数を有意に減少させることなく、Ｂ細胞機能を阻害することによって作用することを示している。

【0103】

実施例４．抗ヒトＣＤ１９抗体のインビボ機能特性評価。
雌ＮＳＧマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ ／ ＳｚＪ、ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック＃０５５５７）は、７２℃、１２時間の明：暗サイクル下でケージあたり３匹収容され、飼料および水を自由に摂取できる（ｎ＝３３）。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、製造業者の指示（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）に従ってＳｅｐＭａｔｅ ５０ Ｆｉｃｏｌ調製チューブを使用して、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）から得られたＬＲＳチューブから単離する。新たに単離したＰＢＭＣを１．２ｅ^８細胞／ｍＬでＰＢＳに懸濁し、０日目にマウスに１００μＬのＰＢＭＣ懸濁液を静脈内移植する（１．２ｅ^７／マウス、ｎ＝２９）。４匹のマウスには、非移植対照としてＰＢＭＣを投与しない。１日目に、体重が一致するようにマウスを３つの群に分け、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照またはＣＢ３ｆを０．０１または１．０ｍｇ／ｋｇで皮下投与する（２００μＬ／マウス、それぞれｎ＝１０、１０、および９）。投与を、実験の残りの間、週に１回続ける。健康診断および体重測定を定期的に行う。６日目および１０日目に、テールスニップにより、ヘパリンでコーティングされたキャピラリーチューブに血液を採取する。１５日目に、血液を、イソフルラン麻酔下で心臓穿刺によってＦＡＣＳ分析のためにＥＤＴＡチューブに収集し、血漿分析のために遠心分離によって清澄化する。脾臓を回収し、ＦＡＣＳ分析のために単一細胞懸濁液に処理する。

【0104】

マウスの体重を、２～３回／週でＢＳＬ２フードにおいて量り、苦痛の臨床徴候について評価する。このモデルに共通する臨床徴候は、ボサボサの毛、丸まった体、衰弱、および呼吸または運動困難である。体重変化を、それらのベースライン体重のパーセンテージ：（日（ｘ）体重／０日目体重）＊１００として計算する。

【0105】

心臓穿刺からの血液は、ＥＤＴＡコーティングされたチューブに収集し、遠心分離によって清澄化し、得られた血漿は、今後の処理のために－８０℃で保存する。Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙのＨｕｍａｎ Ｉｓｏｔｙｐｉｎｇ Ｐａｎｅｌ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ Ｍａｒｙｌａｎｄ）を製造業者の指示に従って使用して血漿ＩｇＭレベルを測定する。

【0106】

マウス脾臓の単一細胞懸濁液をＦＡＣＳ分析に使用する。細胞を９６ウェルプレートに播種し、適切な組み合わせの蛍光色素結合抗体で４℃で３０分間染色してＢ細胞活性化マーカーを同定する：ｈＣＤ４５－ＢＶ４２１、ＣＤ８６ ＢＶ６５０、ＣＤ３ ＡＰＣ、ＣＤ１９ ＦＴＩＣ（すべてＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２０ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５および固定可能な生存性色素ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０。各サンプルについて、生細胞でゲートをかけた少なくとも２５０，０００の事象を分析する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でサンプルを取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を分析する。

【0107】

データをグラフ化し、Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して統計を計算する。群間の体重の差を、Ｔｕｋｅｙの事後検定を伴う２－ｗａｙ ＲＭ－ＡＮＯＶＡによって決定する。血漿ＩｇＭレベルの差を、Ｔｕｋｅｙの事後検定を伴う一元配置ＡＮＯＶＡによって決定し、ｐ＜０．０５の場合に有意であるとみなす。

【0108】

ヒトＰＢＭＣをＮＳＧマウスに注射すると、末梢へのヒトＩｇＭの分泌によって測定されるように、機能的なＢ細胞の顕著な生着が生じる。ＩｇＧ４アイソタイプ対照で処理した動物におけるヒトＩｇＭは、移植後６日目および１０日目に、検出不能から１．３±０．１および４８．８±６．２μｇ／ｍＬまで、それぞれ急速に増加する。図９Ａ～図９Ｂに示すように、０．０１および１．０ｍｇ／ｋｇ／週で投与されたＣＢ３ｆは、６日目にＩｇＭの分泌を６０％および７８％有意に減弱させる（両方の用量でｐ＜０．０１）。１．０ｍｇ／ｋｇ／週用量のＣＢ３ｆでは、１０日目に循環ＩｇＭの５７％の減少も観察される（ｐ＜０．０５）。マウスの体重に群間差はなく、ＧｖＨＤの徴候を示すマウスもいない。

【0109】

ＮＳＧマウスにおけるヒトＢ細胞の活性化を、活性化マーカーであるＣＤ８６の発現によって測定する。図１０に示されるように、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆによる処理は、ヒトＢ細胞上のＣＤ８６の発現を用量依存的に低下させる。

【0110】

ＣＢ３ｆによる処理は、脾臓Ｂ細胞の割合を軽度に減少させるが、これはおそらくＢ細胞の活性化および増殖の低下によるものである。この事実にもかかわらず、Ｂ細胞はほとんど変化しない数で脾臓に存在し（脾細胞の＞５０％）、抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ ＣＢ３ｆの非枯渇性が示唆される（図１１）。

【0111】

実施例５．初代ヒトＢ細胞における抗ヒトＣＤ１９抗体の内在化
標準的な密度勾配遠心分離法を用いて、健康なボランティアのＬＲＳ－ＷＢＣから末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を収集する。Ｂ細胞単離キットを用いたネガティブ選択により、健康なドナーのＰＢＭＣからヒト初代Ｂ細胞を単離する。内在化試験のために、Ｂ細胞を４×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、５０μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに加える。ヒトＩｇ Ｆｃγ断片を標的とする標識されたＦ（ａｂ’）２（Ｆ（ａｂ’）２－ＴＡＭＲＡ－ＱＳＹ７）を、内在化を追跡するためのプローブとして使用する。試験抗体をプローブとともに４℃で３０分間インキュベートして複合体を形成し、５０μＬを各ウェルのＢ細胞に加える。試験抗体の最終濃度は２μｇ／ｍＬである。細胞をＣＯ_２インキュベーターで、３７℃で２４時間インキュベートする。次いで、細胞を２％ＦＢＳ ＰＢＳで２回洗浄し、生存性色素（ＳＹＴＯＸ Ｇｒｅｅｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む２％ＦＢＳ ＰＢＳに再懸濁する。ＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ－２０でデータを収集し、ＦｌｏｗＪｏで分析する。

【0112】

抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ１（ＣＢ３ｆ）および抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂ２（Ｃ３２３．Ｃ１）の両方が、２４時間で初代ヒトＢ細胞において内在化を示す（図１２）。ＩｇＧ１エフェクターヌルアイソタイプ対照抗体が陰性対照として使用され、ＴＡＭＲＡ＋細胞の割合が低いことによって示されるように有意な内在化を示さない（図１２）。陽性対照ＩｇＧ４ ｍＡｂは、試験した抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂに匹敵する内在化を示す（図１２）。

【0113】

実施例６．動物モデルにおける非枯渇抗マウスＣＤ１９代替抗体とＢ細胞枯渇抗マウスＣＤ２０代替抗体の有効性の比較
マウスＣＩＡモデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替抗体およびＢ細胞枯渇ＣＤ２０代替抗体のインビボ有効性
この試験では、非枯渇抗マウスＣＤ１９代替抗体（ＣＤ１９代替Ａｂ）およびＢ細胞枯渇抗マウスＣＤ２０代替抗体（ＣＤ２０代替Ａｂ）を、アイソタイプ対照抗体とともに、半確立疾患モードのマウスコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルで試験した（すなわち、疾患の誘発後、動物が検出可能な臨床スコアを示し始める前に抗体が導入された）。

【0114】

コラーゲンおよび完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で免疫したアイソタイプ対照処理マウスは、２５日目から関節炎症の観察可能な徴候を発症したが、アイソタイプで処理した非疾患マウスには、試験を通して観察可能な関節炎症が見られなかった（図１３Ａ）。１９日目に開始したＣＤ２０代替Ａｂによる処理（１０ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、週１回）は平均臨床スコアを改善したが、ＣＤ１９代替Ａｂ（５ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、週２回）は平均臨床スコアをさらに低下させた（図１３Ａ）。ＣＤ２０代替Ａｂは、アイソタイプ対照と比較して臨床スコアＡＵＣを有意に低下させなかった（図１３Ｂ）。一方、ＣＤ１９代替Ａｂは、アイソタイプ対照およびＣＤ２０代替Ａｂの両方と比較して、臨床スコアＡＵＣを有意に低下させた（図１３Ｂ）。これらの結果は、半確立モードで実施されたマウス関節炎のＣＩＡモデルにおける臨床スコアＡＵＣによって評価されるように、ＣＤ１９代替Ａｂが疾患の重症度をＣＤ２０代替Ａｂよりも大きく軽減できることを示唆している。

【0115】

１型糖尿病のマウスＮＯＤモデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替ＡｂおよびＢ細胞枯渇ＣＤ２０代替Ａｂのインビボ有効性。
ＮＯＤ／ＳｈｉＬｔＪマウス系統（一般に非肥満糖尿病と呼ばれる）は、自己免疫１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の多遺伝子モデルである。ＮＯＤマウスの糖尿病は、高血糖、および膵島の白血球浸潤である膵島炎によって特徴付けられる。疾患の有病率は、雌のマウスにおいて最も高い。

【0116】

この試験では、非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂを枯渇ＣＤ２０代替Ａｂとともに、半治療的疾患モードの１型糖尿病のマウスＮＯＤモデルで試験した（すなわち、対照動物が臨床スコアを示し始める直前に抗体が導入された）。

【0117】

雌のＮＯＤ－ＬＴＪマウスを未処理のままにし、１２週齢から開始して５ｍｇ／ｋｇ／ＢＩＷのＣＤ１９代替ＡｂまたはＣＤ２０代替Ａｂを投与した。Ａｃｃｕ Ｃｈｅｃｋ Ａｖｉｖａ血糖測定器（Ｒｏｃｈｅカタログ番号０６８７０２８７００１）および試験ストリップ（Ｒｏｃｈｅカタログ番号０６９０８３７３００１、ロット番号４９７０６４）を使用して、すべてのマウスの血糖を毎週検査した。２４０ｍｇ／ｄｌを超える血糖値を有するマウスを糖尿病であると見なした。未処理マウスは、１４週齢から糖尿病を発症した。ＣＤ２０代替Ａｂによる処理（５ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、週２回）は、疾患進行に対して非常に軽度の保護を示したのに対し、ＣＤ１９代替Ａｂ（５ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、週２回）は、糖尿病の発症を遅らせ、かつ軽減した（図１４）。これらの結果は、非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂが、ＮＯＤマウスの１型糖尿病の発生を枯渇抗ＣＤ２０代替Ａｂよりも大きく遅らせ、かつ軽減できることを示唆している。

【0118】

マウスＥＡＥモデルにおける非枯渇ＣＤ１９代替ＡｂおよびＢ細胞枯渇ＣＤ２０代替Ａｂのインビボ有効性
マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）等の炎症性神経変性および脱髄性疾患のモデルとして広く使用されている。

【0119】

この試験では、非枯渇抗ＣＤ１９代替Ａｂを枯渇ＣＤ２０代替Ａｂとともに、半治療的疾患モードのプロテオリピドタンパク質誘発性の再発寛解型（ＲＲ）脱髄性ＥＡＥモデルで試験した（すなわち、疾患の誘発後、動物が検出可能な臨床スコアを示し始める前に抗体が導入された）。

【0120】

平均体重１８～２１ｇの雌の９～１０週齢ＳＪＬマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）を試験に用いた。マウスは、Ｈｏｏｋｅ Ｋｉｔ（商標）ＰＬＰ１３９－１５１／ＣＦＡエマルジョン（カタログ番号ＥＫ－０１２０、Ｈｏｏｋｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｌａｗｒｅｎｃｅ ＭＡ）、および７５ｎｇの百日咳毒素（ＰＴＸ）で免疫した。動物を、体重に基づいて、各群１５匹のマウスを含む試験群に無作為に割り付けた。５ｍｇ／ｋｇの非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂ、枯渇ＣＤ２０代替Ａｂ、またはアイソタイプマウスＩｇＧ１対照を、８日目から開始して週２回皮下投与した。ＥＡＥスコアは、０．５単位の増分でスケール０～６で毎日収集した。４２日目にマウスを屠殺した。非枯渇ＣＤ１９代替Ａｂによる処理は、アイソタイプ対照と比較して３５～４１日目のＥＡＥスコアを有意に低下させ、最終日にはＥＡＥスコアが５１％低下した（図１５）。枯渇ＣＤ２０代替Ａｂによる処理は、試験したいずれの時点でも、アイソタイプ対照と比べて疾患スコアの有意な低下を示さなかった（図１５）。これらの結果は、半治療モードの処理における多発性硬化症のＥＡＥモデルの臨床スコアによって評価されるように、非枯渇ＣＤ１９代替抗体が枯渇ＣＤ２０代替抗体よりも疾患の重症度を大きく低下させることができることを示唆している。
配列表
Ｃ３２３
配列番号１ Ｃ３２３ ＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ
配列番号２ Ｃ３２３ ＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮ
配列番号３ Ｃ３２３ ＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＤＦＧＹＮＹＧＭＤＶ
配列番号４ Ｃ３２３ ＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＧＶＮＳＹＹＬＡ
配列番号５ Ｃ３２３ ＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＴＳＴＲＡＴ
配列番号６ Ｃ３２３ ＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＱＨＹＧＮＳＬＦＴ
配列番号７ Ｃ３２３ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＦＧＹＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号８ Ｃ３２３ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＣＴＡＴＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＧＧＡＴＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＴＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＣＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号９ Ｃ３２３ＨＣ可変領域（ＶＨ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１０ Ｃ３２３ ＨＣ ＶＨ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＴＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＣＧＴＧＴＴＡＡＴＣＣＴＡＡＣＣＧＧＡＧＧＧＧＴＡＣＴＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＧＡＧＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＴＡＧＣＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＣＧＴＧＣＧＡＡＣＴＧＧＣＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣ
配列番号１１ Ｃ３２３ ＬＣＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１２ Ｃ３２３ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＧＧＴＧＴＴＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＧＴＡＴＧＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＡＣＴＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号１３ Ｃ３２３ ＬＣ可変領域（ＶＬ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＧＶＮＳＹＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＭＹＡＴＳＴＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＹＧＮＳＬＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１４ Ｃ３２３ ＬＣ ＶＬ ＤＮＡ
ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＧＧＧＧＴＡＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＡＣＣＡＴＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＧＣＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＴ
Ｃ３２３．Ｃ１
配列番号１５ Ｃ３２３．Ｃ１ ＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＫＡＳＧＧＴＩＳＳＹＡＹＳ
配列番号１６ Ｃ３２３．Ｃ１ ＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＧＩＩＰＩＦＤＴＡＮ
配列番号１７ Ｃ３２３．Ｃ１ ＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＤＦＧＹＮＹＡＭＤＶ
配列番号１８ Ｃ３２３．Ｃ１ ＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＫＶＮＳＹＹＬＨ
配列番号１９ Ｃ３２３．Ｃ１ ＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＴＲＴＲＰＴ
配列番号２０ Ｃ３２３．Ｃ１ ＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＱＨＹＧＱＳＬＦＴ
配列番号２１ Ｃ３２３．Ｃ１ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＩＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＤＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＦＧＹＮＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２２ Ｃ３２３．Ｃ１ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＧＧＡＴＣＡＴＣＣＣＴＡＴＣＴＴＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＣＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＴＡＣＡＡＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＴＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号２３ Ｃ３２３．Ｃ１ ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＤＹＧＤＭＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２４ Ｃ３２３．Ｃ１ ＶＨ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＴＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＴＣＧＴＧＴＴＡＡＴＣＣＴＡＡＣＣＧＧＡＧＧＧＧＴＡＣＴＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＡＡＴＴＣＧＡＧＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＴＡＧＣＣＴＧＣＧＴＴＣＴＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＣＧＴＧＣＧＡＡＣＴＧＧＣＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣ
配列番号２５ Ｃ３２３．Ｃ１ ＬＣ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６ Ｃ３２３．Ｃ１ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＡＧＴＴＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＴＡＣＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＣＡＧＴＣＡＣＴＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号２７ Ｃ３２３．Ｃ１ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＲＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２８ Ｃ３２３．Ｃ１ ＶＬ ＤＮＡ
ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＡＣＣＧＴＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＧＧＧＧＴＴＡＣＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＧＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＧＡＡＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＡＣＣＡＴＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＧＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＴ
ＣＢ３ｆ
配列番号２９ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＨＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＫＡＳＧＨＴＩＳＳＹＡＹＳ
配列番号３０ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＨＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＤＩＩＰＡＹＧＳＰＮ
配列番号３１ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＨＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＡＲＥＤＦＧＫＮＹＡＭＤＶ
配列番号３２ ＣＢ３ｆ ＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＨＶＳＳＨＹＬＡ
配列番号３３ ＣＢ３ｆ ＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＧＡＳＳＲＡＴ
配列番号３４ ＣＢ３ｆ ＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＱＨＹＧＱＳＱＦＴ
配列番号３５ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＨＴＩＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＩＰＡＹＧＳＰＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＦＧＫＮＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号３６ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＨＣ ＩｇＧ４－Ｓ２２８Ｐ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＴＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＣＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＡＧＡＡＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＴＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
配列番号３７ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＤＹＧＤＭＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３８ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＶＨ ＤＮＡ
ＡＣＧＡＡＴＴＣＧＧＣＣＧＴＧＡＣＧＴＴＧＧＡＣＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＣＡＧＡＣＧＣＣＣＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＣＧＴＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＧＴＴＣＴＣＣＴＴＣＡＧＣＡＧＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＴＣＧＣＧＧＧＴＡＴＴＡＧＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＧＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＣＧＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＧＧＣＡＧＡＧＣＡＣＡＧＴＧＡＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＣＴＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＡＧＣＴＧＧＴＴＧＴＡＧＴＧＡＴＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＧＴＡＣＴＣＣＴＧＧＴＡＧＧＡＴＣＧＡＣＧＣＡＴＧＧＧＧＣＣＡＣＧＧＧＡＣＣＧＡＡＧＴＣＡＴＣＧＴＣＴＣＣＴＣＧ
配列番号３９ ＣＢ３ｆ ＬＣ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＮＹＦＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＶＳＲＲＡＦＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＡＳＬＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４０ ＣＢ３ｆ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号４１ ＣＢ３ｆ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＮＹＦＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＶＳＲＲＡＦＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＡＳＬＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
配列番号４２ ＣＢ３ｆ ＶＬ ＤＮＡ
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＣＢ３（ＬＣのみ、ＨＣはＣＢ３ｆと同一）
配列番号４３ ＣＢ３ ＬＣＤＲ１（Ｎｏｒｔｈ）
ＲＡＳＱＨＶＮＳＨＹＬＡ
配列番号４４ ＣＢ３ ＬＣＤＲ２（Ｎｏｒｔｈ）
ＹＡＴＲＴＲＰＴ
配列番号４５ ＣＢ３ ＬＣＤＲ３（Ｎｏｒｔｈ）
ＱＨＹＧＱＳＱＦＴ
配列番号４６ ＣＢ３ ＬＣ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４７ ＣＢ３ ＬＣ ＤＮＡ
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＧＴＴＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＡＣＴＴＡＧＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号４８ ＣＢ３ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＲＳＶＰＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＴＳＡＬＡＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＬＳＮＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号４９ ＣＢ３ ＶＬ ＤＮＡ
ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＣＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＧＧＧＧＴＡＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＧＧＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＴＧＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＡＣＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＡＡＴＣＣＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＴＡＡＣＣＡＴＣＡＣＴＧＧＧＧＴＣＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＧＣＡＡＣＡＧＴＧＧＴＧＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＡＣＡＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＴ
ＣＢ３ｆ／ＣＢ３－ＩｇＧ１
配列番号５０ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＩｇＧ１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＨＴＩＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＩＰＡＹＧＳＰＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＦＧＫＮＹＡＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
配列番号５１ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＩｇＧ１ ＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＴＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＡＣＡＴＣＡＴＣＣＣＴＧＣＣＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＣＧＡＡＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＧＣＡＡＧＡＡＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＴＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴ
ＣＢ３ｆ／ＣＢ３－ＩｇＧ１エフェクターヌル
配列番号５２ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＩｇＧ１エフェクターヌルＨＣ（ＬＣはＣＢ３ｆ／ＣＢ３と同一）（下線部はＩｇＧ１ ＷＴからの変化）

【配列表１】

【0121】

配列番号５３ ＣＢ３ｆ／ＣＢ３ ＩｇＧ１エフェクターヌルＨＣ ＤＮＡ（ＬＣはＣＢ３ｆ／ＣＢ３と同一）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＴＧＴＣＣＡＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＴＡＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＴＴＣＡＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＡＴＧＴＡＡＧＧＣＡＡＧＣＧＧＣＣＡＣＡＣＣＡＴＴＴＣＡＴＣＴＴＡＣＧＣＡＴＡＣＴＣＣＴＧＧＧＴＴＣＧＡＣＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＧＡＴＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＡＧＡＣＡＴＡＡＴＣＣＣＡＧＣＡＴＡＣＧＧＡＴＣＡＣＣＴＡＡＣＴＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＣＡＧＣＣＧＡＣＧＡＧＴＣＴＡＣＴＡＧＣＡＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＧＴＣＴＴＣＡＣＴＴＣＧＧＴＣＡＧＡＧＧＡＴＡＣＡＧＣＡＧＴＴＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＡＡＡＡＴＴＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＴＡＣＴＧＴＡＴＣＡＴＣＴＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
Ｃ３２３．Ｃ１－ＩｇＧ１エフェクターヌル
配列番号５４ Ｃ３２３．Ｃ１ ＩｇＧ１エフェクターヌルＨＣ（ＬＣはＣＢ３．Ｃ１と同一）（下線部はＩｇＧ１ ＷＴからの変化）

【配列表２】

【0122】

配列番号５５ Ｃ３２３．Ｃ１ ＩｇＧ１エフェクターヌルＨＣ ＤＮＡ
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＣＧＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＴＴＣＴＡＧＣＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＴＡＴＡＡＧＣＴＣＴＴＡＴＧＣＴＴＡＴＡＧＴＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＴＡＡＴＡＣＣＣＡＴＡＴＴＣＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＣＡＡＡＡＡＴＴＴＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＡＣＴＡＴＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＡＧＡＧＣＡＣＴＡＧＣＡＣＣＧＣＴＴＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＧＡＧＴＡＧＴＣＴＣＣＧＣＡＧＴＧＡＡＧＡＣＡＣＡＧＣＣＧＴＣＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＴＡＧＧＧＡＧＧＡＣＴＴＴＧＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＴＡＣＴＴＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＡＴＣＴＡＧＴＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号５６ ヒトＣＤ１９アイソフォーム１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１７１５６９．１）
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲＥＡＴＳＬＡＧＳＱＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭＧＴＷＳＴＲ
配列番号５７ ヒトＣＤ１９アイソフォーム２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１７６１．３）
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲＥＡＴＳＬＧＳＱＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭＧＴＷＳＴＲ

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15】

【配列表】

2023515219000001.app

【手続補正書】

【提出日】2022-10-20

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３２を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３３を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３４を含む、抗体。

【請求項2】

前記ＶＨが、配列番号３７を含み、前記ＶＬが、配列番号４１を含む、請求項１に記載の抗体。

【請求項3】

前記抗体が、配列番号３５を含む重鎖（ＨＣ）、および配列番号３９を含む軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項4】

前記抗体が、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号３９を含むＬＣを含む、請求項１または２に記載の抗体。

【請求項5】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２９を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３０を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３１を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号４３を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号４４を含み、ならびに
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号４５を含む、抗体。

【請求項6】

前記ＶＨが、配列番号３７を含み、前記ＶＬが、配列番号４８を含む、請求項５に記載の抗体。

【請求項7】

前記抗体が、配列番号３５を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む、請求項５または６に記載の抗体。

【請求項8】

前記抗体が、配列番号５２を含むＨＣ、および配列番号４６を含むＬＣを含む、請求項５または６に記載の抗体。

【請求項9】

ヒトＣＤ１９に結合する抗体であって、前記抗体が、ＶＨおよびＶＬを含み、前記ＶＨが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１５を含み、
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１６を含み、
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７を含み、
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号１８を含み、
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１９を含み、
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２０を含む、抗体。

【請求項10】

前記ＶＨが、配列番号２３を含み、前記ＶＬが、配列番号２７を含む、請求項９に記載の抗体。

【請求項11】

配列番号２１を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む、請求項９または１０に記載の抗体。

【請求項12】

配列番号５４を含むＨＣ、および配列番号２５を含むＬＣを含む、請求項９または１０に記載の抗体。

【請求項13】

前記抗体が非枯渇抗体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体。

【請求項14】

配列番号３５、５２、３９、４６、２１、５４、または２５をコードする配列を含む、核酸。

【請求項15】

請求項１４に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項16】

配列番号３５または５２をコードする第１の核酸配列、および配列番号３９または４６をコードする第２の核酸配列を含む、請求項１５に記載のベクター。

【請求項17】

配列番号２１または５４をコードする第１の核酸配列、および配列番号２５をコードする第２の核酸配列を含む、請求項１５に記載のベクター。

【請求項18】

配列番号３５または５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、組成物。

【請求項19】

配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、組成物。

【請求項20】

請求項１６または１７に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項21】

配列番号３５または５２をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号３９または４６をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、細胞。

【請求項22】

配列番号２１または５４をコードする核酸配列を含む第１のベクター、および配列番号２５をコードする核酸配列を含む第２のベクターを含む、細胞。

【請求項23】

前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項24】

抗体を生成するための方法であって、前記抗体が発現するような条件下で、請求項２０～２３のいずれか一項に記載の細胞を培養し、次いで発現した抗体を培養培地から回収することを含む、方法。

【請求項25】

請求項２４に記載の方法によって生成された、抗体。

【請求項26】

請求項１～１３および２５のいずれか一項に記載の抗体、および薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含む、医薬組成物。

【請求項27】

療法に使用するための、請求項１～１３または２５のいずれか一項に記載の抗体を含む、医薬組成物。

【請求項28】

Ｂ細胞関連疾患の治療における使用のための、請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項29】

前記Ｂ細胞関連疾患が、自己免疫疾患である、請求項２８に記載の医薬組成物。

【請求項30】

前記Ｂ細胞関連疾患が、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、または重症筋無力症から選択される、請求項２８に記載の医薬組成物。

【請求項31】

Ｂ細胞関連疾患の治療のための薬物の製造における、請求項１～１３または２５のいずれか一項に記載の抗体の使用。

【請求項32】

前記Ｂ細胞関連疾患が、自己免疫疾患である、請求項３１に記載の使用。

【請求項33】

前記Ｂ細胞関連疾患が、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、関節リウマチ、シェーグレン症候群、特発性血小板減少性紫斑病、１型糖尿病、尋常性天疱瘡、視神経脊髄炎、ＡＮＣＡ血管炎、または重症筋無力症から選択される、請求項３１に記載の使用。

【国際調査報告】