(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-13
(54)【発明の名称】高速ワクチンプラットフォーム
(51)【国際特許分類】
C12N 5/10 20060101AFI20230406BHJP
A61K 39/215 20060101ALI20230406BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20230406BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20230406BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230406BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20230406BHJP
A61K 38/19 20060101ALI20230406BHJP
A61K 9/16 20060101ALI20230406BHJP
A61K 47/46 20060101ALI20230406BHJP
C12N 15/85 20060101ALN20230406BHJP
【ＦＩ】
C12N5/10 ZNA
A61K39/215
A61P31/14
A61P37/04
A61P43/00 105
A61K38/16
A61K38/19
A61K9/16
A61K47/46
C12N15/85 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022548519
(86)(22)【出願日】2021-02-10
(85)【翻訳文提出日】2022-10-06
(86)【国際出願番号】 US2021017506
(87)【国際公開番号】W WO2021163222
(87)【国際公開日】2021-08-19
(31)【優先権主張番号】62/975,044
(32)【優先日】2020-02-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/014,002
(32)【優先日】2020-04-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522316700
【氏名又は名称】サイトナス セラピューティクス，インク．
(74)【代理人】
【識別番号】100082072
【弁理士】
【氏名又は名称】清原 義博
(72)【発明者】
【氏名】ムーミアイ，レモ
(72)【発明者】
【氏名】クレムケ，リチャード
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA01
4B065BD09
4B065BD11
4B065BD15
4B065CA24
4B065CA45
4C076AA31
4C076CC06
4C076EE57
4C084AA02
4C084BA44
4C084DA19
4C084DC50
4C084NA05
4C084ZC412
4C085AA03
4C085AA38
4C085BA71
4C085CC08
4C085DD23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE06
(57)【要約】
【解決手段】除核細胞をベースとするプラットフォームを使用してワクチン組成物を作製し送達する方法を提供する。除核細胞をベースとするプラットフォームを使用して対象の病原性感染症を取り除く方法も提供する。かかる除核細胞をベースとするプラットフォームは、従来の生体ワクチンと比較してワクチン開発のタイムラインが減少し、ワクチンの有効性を改善するものである。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
核のない状態での重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンの合成または分泌のために１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞。
【請求項2】
前記１または複数の細胞内小器官が、小胞体またはゴルジ体である、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項3】
前記ワクチンが、前記無核細胞の表面に結合される、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項4】
前記ワクチンが、該ワクチンを前記無核細胞の前記表面に結合する膜貫通ドメインを含む、請求項３に記載の無核細胞。
【請求項5】
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項6】
（ａ）ロイコシアリン、（ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、
（ｃ）最晩期抗原－４、
（ｄ）（ａ）～（ｃ）のいずれか１つの部分、または
（ｅ）（ａ）～（ｄ）のあらゆる組合せ
を含むホーミング受容体をさらに含む、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項7】
直径が約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項8】
前記直径が約８μｍである、請求項７に記載の無核細胞。
【請求項9】
生存度を（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、
（ｂ）前記細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、
（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および
（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に前記複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数すること
により測定したとき、少なくとも２４時間の凍結休眠後に生存可能である、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項10】
生存度を（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、
（ｂ）前記細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、
（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および
（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に前記複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数すること
により測定したとき、少なくとも２４時間の凍結保存後に生存可能である、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項11】
凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項12】
単離または生成される、請求項１に記載の無核細胞。
【請求項13】
医薬製剤であって、（ａ）請求項１に記載の無核細胞、または複数の請求項１に記載の無核細胞と、
（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体と
を含む医薬製剤。
【請求項14】
ワクチンを産生する方法であって、（ａ）細胞から核を除去することで、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンの合成または分泌のために１または複数の細胞内小器官を含む除核細胞を産生する工程と、
（ｂ）前記ワクチンをコードする外来性ｍＲＮＡを前記除核細胞に導入する工程であって、該除核細胞は前記核のない状態で前記ワクチンを発現する、工程と
を含む方法。
【請求項15】
前記除核細胞が、除核細胞の生体活性を可逆的に遅くするか停止させるために４℃以下で保管され、その後（ｂ）に導入する前に解凍される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記無核細胞が凍結乾燥され、その後（ｂ）に導入する前に再水和される、請求項１４に記載の方法。
【請求項17】
前記除核細胞が、除核細胞の生体活性を可逆的に遅くするか停止させるために－１２０℃以下で保管され、その後（ｂ）に導入する前に解凍される、請求項１４に記載の方法。
【請求項18】
（ａ）において前記細胞から前記核を除去することが、前記細胞の分化を行うことなく行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項19】
前記１または複数の細胞内小器官が、小胞体またはゴルジ体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項20】
直径が約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である、請求項１４に記載の方法。
【請求項21】
前記直径が約８μｍである、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
（ａ）で前記核を除去する前に、前記細胞に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする核酸配列を有する外来性核酸分子を導入する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項23】
（ａ）で前記核を除去する前に、前記細胞に、ａ）ロイコシアリン、
ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、
ｃ）最晩期抗原－４、
ｄ）Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、
ｅ）ＣＤ４４抗原、
ｆ）Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、
ｇ）（ａ）～（ｆ）のいずれか１つの部分、または
ｈ）（ａ）～（ｇ）のあらゆる組合せ
を含むホーミング受容体をコードする核酸配列を有する外来性核酸分子を導入する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項24】
前記無核細胞に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする配列を含む外来性ｍＲＮＡ分子を導入する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項25】
前記無核細胞に、（ａ）ロイコシアリン、
（ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、
（ｃ）最晩期抗原－４、
（ｄ）Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、
（ｅ）ＣＤ４４抗原、
（ｆ）Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、
（ｇ）（ａ）～（ｆ）のいずれか１つの部分、または
（ｈ）（ａ）～（ｇ）のあらゆる組合せ
を含むホーミング受容体をコードする配列を含む外来性ｍＲＮＡ分子を導入する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項26】
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンを対象に送達する方法であって、前記対象に、核のない状態でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞を投与する工程を含む方法。
【請求項27】
前記１または複数の細胞内小器官が、小胞体またはゴルジ体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記無核細胞が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項29】
前記無核細胞が、（ａ）ロイコシアリン、
（ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、
（ｃ）最晩期抗原－４、
（ｄ）（ａ）～（ｃ）のいずれか１つの部分、または
（ｅ）（ａ）～（ｄ）のあらゆる組合せ
を含むホーミング受容体をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項30】
前記無核細胞の直径が約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項31】
前記直径が約８μｍである、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記投与する工程が全身投与を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項33】
前記無核細胞が、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項34】
前記無核細胞が、少なくとも１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１日、２日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、２年、３年、または４年以内に、前記対象に２回投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項35】
前記対象がヒトである、請求項２６に記載の方法。
【請求項36】
アジュバントを投与する工程をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項37】
（ａ）実質的に核を含まない複数の細胞であって、その少なくとも１個の無核細胞が、核のない状態での重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む、複数の細胞と、（ｂ）実質的に核を含まない前記複数の細胞を対象に投与するための指示書と
を含むキット。
【請求項38】
実質的に核を含まない前記複数の細胞が、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される、請求項３７に記載のキット。
【請求項39】
実質的に核を含まない前記複数の細胞を前記対象に投与する前に、実質的に核を含まない前記複数の細胞の生体活性を修復するための指示書をさらに含む、請求項３８に記載のキット。
【請求項40】
前記ワクチンをコードする外来性ｍＲＮＡを除核細胞に導入するための指示書をさらに含む、請求項３７に記載のキット。
【請求項41】
核のない状態での病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体の合成のための１または複数の細胞内小器官であって、前記受容体またはその発現レベルが前記無核細胞に対して外因性である、細胞内小器官を含む無核細胞。
【請求項42】
前記１または複数の細胞内小器官が、小胞体またはゴルジ体である、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項43】
前記病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する前記受容体が、前記無核細胞の表面に結合される、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項44】
前記病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する前記受容体が、前記無核細胞の細胞膜内に膜貫通ドメインを含む、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項45】
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする配列を有する外来性ｍＲＮＡ分子、またはその一部をさらに含む、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項46】
直径が約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項47】
前記直径が約８μｍである、請求項４６に記載の無核細胞。
【請求項48】
生存度を（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、
（ｂ）前記細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、
（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および
（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に前記複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数すること
により測定したとき、少なくとも２４時間の凍結休眠または凍結保存後に生存可能である、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項49】
凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項50】
単離または精製される、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項51】
病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する中和抗体をさらに含む、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項52】
前記中和抗体が、前記無核細胞の１または複数の細胞内小器官により合成される、請求項５１に記載の無核細胞。
【請求項53】
（ａ）ロイコシアリン、（ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、
（ｃ）最晩期抗原－４、
（ｄ）Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、
（ｅ）ＣＤ４４抗原、
（ｆ）Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、
（ｇ）（ａ）～（ｆ）のいずれか１つの部分、または
（ｈ）（ａ）～（ｇ）のあらゆる組合せ
を含むホーミング受容体をさらに含む、請求項４１に記載の無核細胞。
【請求項54】
（ａ）請求項４１から５３に記載の無核細胞、または複数の請求項４１から５３に記載の無核細胞と、（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体と
を含む医薬製剤。
【請求項55】
対象における病原体による感染症、または前記対象を感染させるプロセスにある病原体を減らす方法であって、請求項１から５３に記載の無核細胞、または請求項５４に記載の医薬製剤を前記対象に投与することにより、前記細胞中で病原体抗原を有する病原体を捉えて、前記病原体が前記細胞内を伝播するのを防止する工程を含む方法。
【請求項56】
前記病原体が、投与後約１４日以下で前記対象から取り除かれる、請求項５５に記載の方法。
【請求項57】
前記無核細胞が、中和抗体またはナノボディを放出することにより、前記病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する、請求項５５に記載の方法。
【請求項58】
前記投与が全身投与を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項59】
前記無核細胞が、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量で投与される、請求項５５に記載の方法。
【請求項60】
前記無核細胞が、少なくとも１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１日、２日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、２年、３年、または４年以内に、前記対象に２回投与される、請求項５５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本出願は、２０２０年２月１１日出願の米国仮特許出願第６２／９７５，０４４号、および２０２０年４月２２日出願の米国仮特許出願第６３／０１４，００２号に基づく利益を主張するものであり、これら文献はそれぞれ、それらの全体を参照することで本明細書に引用される。
本出願は、２０２０年２月１１日出願の米国仮特許出願第６２／９７５，０４４号、および２０２０年４月２２日出願の米国仮特許出願第６３／０１４，００２号に基づく利益を主張するものであり、これら文献はそれぞれ、それらの全体を参照することで本明細書に引用される。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照により本明細書で引用される配列表を含んでいる。２０２１年２月９日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、５３７１２－７０６＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは１，６９５，９２７バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照により本明細書で引用される配列表を含んでいる。２０２１年２月９日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、５３７１２－７０６＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは１，６９５，９２７バイトである。
【背景技術】
【0003】
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の流行、およびそれに付随する罹患率と死亡率に対して、保護的で持続性のある免疫応答を誘導する安全で有効なワクチンの必要性が強調される。この流行により、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の広範な感染など、緊急の医学的ニーズに対処するための世界中の従来のワクチン開発のパイプラインにおける深刻な欠点が明らかになった。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などの病原体を急速に発達させることにより生じる疾患または疾病を処置するのに安全で有効なワクチンおよび治療薬を商品化するのに要する時間を改善できる新たなワクチン開発プラットフォームの必要性が、緊急であり、未だ満たされていない。
【発明の概要】
【0004】
本明細書中のいくつかの実施形態では、核のない状態での病原体に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞が、記載される。いくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、病原体は細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、病原体は毒素である。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、１または複数の細胞内小器官は、小胞体またはゴルジ体である。いくつかの実施形態では、ワクチンは、無核細胞の表面に結合される。いくつかの実施形態では、ワクチンは、無核細胞の表面にワクチンを結合させる膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、（ａ）ロイコシアリン、（ｂ）Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、（ｃ）最晩期抗原－４、（ａ）～（ｃ）のいずれか１つの部分、または（ａ）～（ｄ）のあらゆる組合せを含むホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、この直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも２４時間の凍結休眠（ｃｒｙｏｈｉｂｅｒｎａｔｉｏｎ）後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。
【0005】
本明細書のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の無核細胞または複数の無核細胞と、薬学的に許容可能は賦形剤、希釈剤、または担体とを含む医薬製剤が、記載される。
【0006】
本明細書のいくつかの実施形態では、ワクチンを産生する方法であって、（ａ）細胞から核を除去して、病原体に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む除核細胞を産生する工程と、（ｂ）ワクチンをコードする外来性ｍＲＮＡを除核細胞に導入する工程であって、該除核細胞は核のない状態でワクチンを発現する、工程とを含む方法が、記載される。いくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、病原体は細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、病原体は毒素である。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、除核細胞は、除核細胞の生体活性を可逆的に遅くするか停止させるために４℃以下で保管され、その後（ｂ）に導入する前に解凍される。いくつかの実施形態では、無核細胞は凍結乾燥され、その後（ｂ）に導入する前に再水和される。いくつかの実施形態では、除核細胞は、除核細胞の生体活性を可逆的に遅くするか停止させるために－１２０℃以下で保管され、その後（ｂ）に導入する前に解凍される。いくつかの実施形態では、（ａ）において細胞から核を除去することは、細胞の分化を行うことなく行われる。いくつかの実施形態では、１または複数の細胞内小器官は、小胞体またはゴルジ体である。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、この直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、上記方法は、（ａ）で核を除去する前に、細胞に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする核酸配列を有する外来性核酸分子を導入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、（ａ）で核を除去する前に、細胞に、ロイコシアリン、Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、最晩期抗原－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、それらのホーミング受容体のいずれか１つの部分、またはそれらのホーミング受容体のいずれか１つのあらゆる組合せを含むホーミング受容体をコードする核酸配列を有する外来性核酸分子を導入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、無核細胞に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする配列を含む外来性ｍＲＮＡ分子を導入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、無核細胞に、ロイコシアリン、Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、最晩期抗原－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、それらのホーミング受容体のいずれか１つの部分、またはそれらのホーミング受容体のいずれか１つのあらゆる組合せを含むホーミング受容体をコードする配列を含む外来性ｍＲＮＡ分子を導入する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。
【0007】
本明細書のいくつかの実施形態では、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するワクチンを対象に送達する方法であって、対象に、核のない状態でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞を投与する工程を含む方法が、記載される。いくつかの実施形態では、１または複数の細胞内小器官は、小胞体またはゴルジ体である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、ロイコシアリン、Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、最晩期抗原－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、それらのホーミング受容体のいずれか１つの部分、またはそれらのホーミング受容体のいずれか１つのあらゆる組合せを含むホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、この直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、投与は全身投与を含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１日、２日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、２年、３年、または４年以内に、対象に２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、上記方法は、アジュバントを投与する工程さらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。
【0008】
本明細書のいくつかの実施形態では、実質的に核を含まない複数の細胞であって、そのうち少なくとも１個の無核細胞が、核のない状態での病原体に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む、複数の細胞と、実質的に核を含まない複数の細胞を対象に投与するための指示書とを含むキットが、記載される。いくつかの実施形態では、実質的に核を含まない複数の細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、上記キットは、実質的に核を含まない複数の細胞を対象に投与する前に、実質的に核を含まない複数の細胞の生体活性を修復するための指示書をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記キットは、ワクチンをコードする外来性ｍＲＮＡを除核細胞に導入するための指示書をさらに含む。
【0009】
本明細書中のいくつかの実施形態では、無核細胞であって、核のない状態での病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体の合成のための１または複数の細胞内小器官であって、受容体またはその発現レベルは、無核細胞に対して外因性である、細胞内小器官を含む無核細胞が、記載される。いくつかの実施形態では、１または複数の細胞内小器官は、小胞体またはゴルジ体である。いくつかの実施形態では、病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体は、無細胞の表面に結合される。いくつかの実施形態では、病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体は、無核細胞の細胞膜内に膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をコードする配列を有する外来性ｍＲＮＡ分子、またはその一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、この直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも２４時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する中和抗体を含む。いくつかの実施形態では、中和抗体は、無核細胞の１または複数の細胞内小器官により合成される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、ロイコシアリン、Ｌ－セレクチンすなわちリンパ球機能関連抗原１、最晩期抗原－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、それらのホーミング受容体のいずれか１つの部分、またはそれらのホーミング受容体のいずれか１つのあらゆる組合せを含むホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、病原体は細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、病原体は毒素である。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、本明細書に記載のワクチンである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。
【0010】
本明細書のいくつかの実施形態では、対象における病原体による感染症を減らす方法、または対象を感染させるプロセスにある病原体を減らす方法であって、本明細書に記載の無核細胞、または本明細書に記載の医薬製剤を対象に投与することにより、細胞中で病原体抗原を有する病原体を捉えて、病原体が細胞内を伝播するのを防止する工程を含む方法が、記載される。いくつかの実施形態では、病原体は、投与後約１４日以下で対象から取り除かれる。いくつかの実施形態では、無核細胞は、中和抗体またはナノボディを放出することにより、病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する。いくつかの実施形態では、投与は全身投与を含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１日、２日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、２年、３年、または４年以内に、対象に２回投与される。いくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、病原体は細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、病原体は毒素である。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、本明細書に記載のワクチンである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、リンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも２４時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。
【0011】
本明細書に開示される態様は、無核細胞であって、配列番号１、３０１～３４７、もしくは５０１～５１２のうち１または複数に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する配列によりコードされるウイルスに対するワクチンを、核のない状態で合成または分泌するための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞を提供する。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。いくつかの実施形態では、無核細胞は、１または複数の細胞内小器官が内因性である有核親細胞から得られる。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、抗原ペプチド、弱毒化生ウイルス、または非活化ウイルスである、あるいはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、抗原ペプチドは、配列番号２、３～７、１５１～１５４、２５１～２６０、４０１～４４７、５５１～５６２、６５１～６６０、７５１～７６１、８５１～８５９、９５１～９８４、１０５１～１０５７、もしくは１１５１～１１５３のうち１または複数に対して、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原ペプチドは、配列番号２、８、４０１～４４７、もしくは５５１～５６３のうち１または複数に対して、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原ペプチドは、配列番号１０１～１０４、２０１～２０９、３０１～３４７、５０１～５１２、６０１～６１０、７０１～７１１、８０１～８０９、９０１～９３４、１００１～１００７、もしくは１１０１～１１０３のうち１または複数に対して、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列からコードされる。いくつかの実施形態では、抗原ペプチドは、アルブミンをコードするアミノ酸配列、またはその一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、ワクチンは、細胞の表面に結合される。いくつかの実施形態では、ワクチンは分泌性である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、リンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも２４時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、核がない状態でのワクチンの合成または分泌は、無核細胞により約３日以上の間、行われる。いくつかの実施形態では、無核細胞は、薬学的に許容可能な担体にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき少なくともまたは約１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき多くともまたは約１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離かつ精製される。
【0012】
本明細書に開示される態様は、無核細胞であって、核のない状態での細菌または毒素に対するワクチンの合成または分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞を提供する。いくつかの実施形態では、無核細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。いくつかの実施形態では、無核細胞は、１または複数の細胞内小器官が内因性である有核親細胞から得られる。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、細胞の表面に結合される。いくつかの実施形態では、ワクチンは分泌性である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、リンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、無核細胞の直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも２４時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結休眠後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結保存後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、核がない状態でのワクチンの合成または分泌は、無核細胞により約３日以上の間、行われる。いくつかの実施形態では、無核細胞は、薬学的に許容可能な担体にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき約１０３個の細胞～体重１ｋｇにつき約１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき少なくともまたは約１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、体重１ｋｇにつき多くともまたは約１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２個の細胞の間の投与量にある。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離かつ精製される。
【0013】
本明細書に開示される態様は、本明細書に記載の無核細胞を複数含む細胞集団を提供する。
【0014】
本明細書に開示される態様は、対象にワクチンを送達する方法であって、本明細書に記載の複数の細胞のうち１個の細胞の第１の用量を対象に投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、投与後にワクチン接種済となる（ｂｅｃｏｍｅ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ）。いくつかの実施形態では、投与は、凍結休眠または凍結保存から細胞を除去した後少なくとも２４時間で行われる。いくつかの実施形態では、投与は、凍結休眠または凍結保存から細胞を除去した後少なくとも４８時間で行われる。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、細胞は、核がない状態で対象において、約３日以上の間、ワクチンを合成または分泌する。いくつかの実施形態では、細胞は、核がない状態で対象において、約３～５日の間にわたり、ワクチンを合成または分泌する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞の第１の用量を投与後少なくとも１か月で、細胞集団の第２の細胞の第２の用量を対象に投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、細胞の第１の用量を投与後少なくとも２か月で、細胞集団の第２の細胞の第３の用量を対象に投与する工程をさらに含む。
【0015】
本明細書に開示される態様は、投与を必要とする対象に、核のない状態で治療薬を合成または分泌する無核細胞を投与する工程を含む方法であって、治療薬は、配列番号１に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する配列によりコードされるウイルスによる感染症に関連する疾患または疾病を処置するのに治療上有効である。いくつかの実施形態では、方法は、対象の疾患または疾病を処置する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療薬は、（ａ）インターロイキン１０のアゴニスト、（ｂ）インターロイキン１０のアンタゴニスト、（ｃ）インターロイキン６、（ｄ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、（ｅ）（ａ）～（ｄ）のいずれか１つの部分、または（ｅ）（ａ）～（ｄ）のいずれかの組合せである。いくつかの実施形態では、インターロイキン１０のアゴニスト、またはその部分は、配列番号１３に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、インターロイキン１０のアゴニストまたはその部分は、アルブミンをコードするアミノ酸配列またはその一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療薬は細胞により分泌される。いくつかの実施形態では、インターロイキン６のアゴニスト、またはその部分は、配列番号１４に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％ ８８％、８９％ ９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦのアゴニストは、配列番号１５に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、対象の肺組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド－１、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体２、またはＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体４、あるいはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、無細胞は、対象のリンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、疾患または疾病は、呼吸器の疾患または疾病である。いくつかの実施形態では、疾患または疾病は、コロナウイルス疾患（ＣＯＶＩＤ）の症状を含む。いくつかの実施形態では、ＣＯＶＩＤはＣＯＶＩＤ－１９である。
【0016】
本明細書に開示される態様は、投与を必要とする対象に、核のない状態で治療薬を合成または分泌する無核細胞を投与する工程を含む方法であって、治療薬は、病原体による感染症により少なくとも部分的に生じる疾患または疾病を処置するのに治療上有効である。いくつかの実施形態では、病原体は、ウイルス、細菌、真菌、または毒素である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、治療薬は、（ａ）インターロイキン１０のアゴニスト、（ｂ）インターロイキン１０のアンタゴニスト（例えば、ＧＩＴ２７、ＡＳ１０１、メソプラム、またはリツキシマブ）、（ｃ）インターロイキン６、（ｄ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、（ｅ）（ａ）～（ｄ）のいずれか１つの部分、または（ｅ）（ａ）～（ｄ）のいずれかの組合せいくつかの実施形態では、インターロイキン１０のアゴニスト、またはその部分は、配列番号１３に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、インターロイキン１０のアゴニストまたはその部分は、アルブミンをコードするアミノ酸配列またはその一部をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療薬は細胞により分泌される。いくつかの実施形態では、インターロイキン６のアゴニスト、またはその部分は、配列番号１４に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％ ８８％、８９％ ９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦのアゴニストは、配列番号１５に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、対象の肺組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｐ－セレクチン糖タンパク質リガンド－１、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体２、またはＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体４、あるいはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、無細胞は、対象のリンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体をさらに含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、無核細胞は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む免疫変調成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、疾患または疾病は、表３～表６に提供される。
【0017】
本明細書に開示される態様は、病原体に関連する疾患または疾病を処置する方法であって、（ａ）病原体による感染症を患う対象に、実質的に核を含まない複数の細胞を投与することで、（ｉ）（ａ）にて対象に投与された複数の細胞のうち少なくとも１つの無核細胞の感染症を病原体により許容し、（ｉｉ）（ｉ）の後、少なくとも１つの無核細胞内での病原体の伝播を防止することにより病原体を対象からｉｎ ｖｉｖｏで隔離する工程と、（ｂ）病原体に関連する疾患または疾病を、（ｉ）複数の細胞のうち少なくとも１つの細胞から病原体をｉｎ ｖｉｖｏで除去するか減らすこと、および（ｉｉ）対象から少なくとも１つの無核細胞を実質的に除去することのうち少なくとも１つにより処置する工程とを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞は、対象のリンパ組織中の１または複数の細胞に発現されるリガンドに対し特異的なホーミング受容体を含む。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、病原体はコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、配列番号１に対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞は、（ａ）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、（ｂ）サイトカイン、（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）の一部、または（ｄ）（ａ）～（ｃ）のあらゆる組合せを含む免疫変調成分を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞は、（ａ）～（ｄ）のうち１または複数を合成あるいは分泌するのに十分な、１または複数の細胞内小器官を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１３、１４、または１５、あるいはそれらの組合せに対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは分泌性である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞の直径は、約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞の直径は約８μｍである。いくつかの実施形態では、方法は、（ａ）における投与の前に、凍結休眠または凍結保存から実質的に核を含まない複数の細胞を除去する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、実質的に核を含まない複数の細胞は、凍結休眠、凍結保存、または凍結乾燥から実質的に核を含まない複数の細胞を除去した後、少なくとも２４時間生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、少なくとも４８時間の凍結乾燥後に生存可能である。いくつかの実施形態では、無核細胞は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、無核細胞は、単離または精製される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、トリパンブルー色素排除は、（ａ）複数の無核細胞のアリコートを懸濁液中で遠心分離して細胞ペレットを作り出すこと、（ｂ）細胞ペレットを無血清培地に再懸濁させて無血清細胞懸濁液を産生すること、（ｃ）一部のトリパンブルー染料と一部の無血清細胞懸濁液を混合すること、および（ｄ）（ｃ）から３～５分以内に複数の無核細胞を計数することであって、該複数の無核細胞の少なくとも一部が、生存度を示すトリパンブルー染料で染色されていない、計数することにより実施される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。いくつかの実施形態では、（ｂ）において病原体関連の疾患または疾病を処置することは、複数の細胞のうち少なくとも１つの細胞から病原体を除去するか減らすことにより行われる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞は、少なくとも１つの細胞から病原体を減らすか除去するのに十分な抗ウイルス薬を含む。いくつかの実施形態では、（ｂ）において病原体関連の疾患または疾病を処置することは、対象から少なくとも１つの無核細胞を実質的に除去することにより行われる。いくつかの実施形態では、複数の細胞は、赤血球または赤血球前駆体ではない。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの無核細胞は、病原体と、対象の細胞が発現する病原体認識型受容体との結合を遮断する中和抗体をコードする異種ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、方法は、核のない状態で、少なくとも１つの無核細胞により中和抗体を分泌することで、病原体と対象の細胞の病原体認識型部分との結合を減少するか改善する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、病原体は、ウイルス、細菌、毒素、または真菌である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはその変異体である。いくつかの実施形態では、毒素は、クロストリディウム・ボツリナム毒素、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、またはトウゴマ由来のリシン毒素、あるいはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、細菌は、バチルス・アントラシス、エルシニア・ペスチス、フランシセラ・ツラレンシス、ブルセラ菌、サルモネラ菌、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、クラミジア・シタッシ、コクシエラ・ブルネッティ、発疹チフスリケッチア、ビブリオ・コレラエ、またはクリプトスポリジウム・パルバム、あるいはそれらのあらゆる組合せである。
【0018】
参照による引用
本明細書で言及される刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により引用されるように具体的かつ個々に示されるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に引用される。引用により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれる開示に矛盾する程度にまで、本明細書は、そのような矛盾のある題材に取って代わる、および／または、それに先行するように意図される。
本明細書で言及される刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により引用されるように具体的かつ個々に示されるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に引用される。引用により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれる開示に矛盾する程度にまで、本明細書は、そのような矛盾のある題材に取って代わる、および／または、それに先行するように意図される。
【図面の簡単な説明】
【0019】
本明細書に開示される方法と組成物のいくつかの新規な特徴が、本開示に明記される。本明細書に開示される方法と組成物の特徴と利点は、開示された組成物と方法の原理が用いられている例示的な実施形態を明記する以下の詳細な記載と、添付の図面とを参照することにより、より良く理解されるであろう。
【0020】
【図1】本開示の一実施形態による高速ウイルス・ワクチン・プラットフォームにおいて細胞を操作するプロセスを示す図である。
【図2】本開示の実施形態による高速ウイルス・ワクチン・プラットフォームを使用したワクチン産生のタイムラインを、従来のワクチン開発タイムラインと比較した図である。
【図3】本開示の一実施形態による新たに同定されたウイルスを取り扱うために高速ウイルス・ワクチン・プラットフォームを配置するプロセスを示す図である。
【図4】本明細書に記載の細胞質体が、本開示の一実施形態によるウイルス（例えばコロナウイルス）を捕捉して取り除くプロセスを示す図である。
【図5】本明細書に記載の高速ウイルス・ワクチン・プラットフォームによる利益の非限定的な例を示す図である。
【図6A】４℃で指定の時間にわたる凍結休眠から回復した直後の、ＭＳＣおよびＭＳＣ由来の細胞質体の生存度を示す代表的な線グラフである。生存度は、自動細胞計数器（ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）（Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｓｓ）中、トリパンブルー色素排除を使用して査定し、入力細胞の数との比として表示した。
【図6B】４℃で指定の時間にわたる凍結休眠から回復した直後、ボイデン・チャンバ・アッセイにおいて移動したＭＳＣとＭＳＣ由来の細胞質体とを比較する代表的な棒グラフである。細胞と細胞質体は、ボトムチャンバ中、血清を含まないか（陰性対照）、または化学遊走物質として１０％プレミアムＦＢＳ（Ｐ－ＦＢＳ）を伴って、３時間移動することを可能とされ、数はローディングコントロールに正規化した。
【図7A】ＭＳＣおよび細胞質体へとトランスフェクトされたインターロイキン１０（ＩＬ－１０）ｍＲＮＡの略図である。コザック配列を、ＩＬ－１０ｍＲＮＡコーディング領域（ＣＤＳ）の開始コドンの前に追加した。ヒトβグロビン（ＨＢＢ）ｍＲＮＡの５’ＵＴＲと３’ＵＴＲは、それぞれＩＬ－１０ ＣＤＳの５’末端と３’末端に追加した。人工５’キャップをＩＬ－１０ ｍＲＮＡの５’末端に追加し、シュードウリジン修飾を操作してｍＲＮＡ安定性を増加した。
【図7B】トランスフェクトした（＋＋）もしくはトランスフェクトしていない（－－）ＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体を含む培養培地中のＩＬ－１０濃度を示す棒グラフである。ＭＳＣ由来の細胞質体をＩＬ－１０ ｍＲＮＡでトランスフェクトし、次いで２４ウェルプレート中、２．５×１０４細胞／ウェルで播種した。調整培地（ＣＭ）をトランスフェクションの２４時間後に集め、ＩＬ－１０濃度をＥＬＩＳＡにより求めた。
【図7C】図７Ｂのように１時間処置したＭＳＣまたは細胞質体から得た指定の調整培地（ＣＭ）で処置した血清飢餓状態のＲＡＷマクロファージ細胞における、Ｓｔａｔ３およびリン酸化Ｓｔａｔ３（Ｐ－Ｓｔａｔ３、ＩＬ－１０活性化のマーカー）のタンパク質発現を示す免疫ブロットである。未処置＝ＣＭで処置しなかった対照。完全培地＝ＭＳＣ完全培養培地で処置したＲＡＷ細胞。ＭＳＣ Ｃｔｒｌ＝トランスフェクトしていないＭＳＣから得たＣＭで処置したＲＡＷ細胞。ＭＳＣ ＩＬ－１０＝ＩＬ－１０ ｍＲＮＡでトランスフェクトしたＭＳＣから得たＣＭで処置したＲＡＷ細胞。細胞質体Ｃｔｒｌ＝トランスフェクトしていない細胞質体から得たＣＭで処置したＲＡＷ細胞。細胞質体ＩＬ－１０＝ＩＬ－１０ ｍＲＮＡでトランスフェクトした細胞質体から得たＣＭで処置したＲＡＷ細胞。
【図7D】ＥＬＩＳＡにより判定したときの、マウス血液中に分泌されたＩＬ－１０サイトカインの濃度を示す棒グラフである。ＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体は図７Ｂのように処置し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。注射の２時間後、動物を屠殺し、血液試料を心穿刺により採取した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝３。
【図8A】ボイデン・チャンバ・アッセイにおいてクリスタルバイオレットで染色したＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体が、基底膜抽出物（ＢＭＥ）で被覆した８．０μｍ多孔質フィルタの下面に侵入して、２４時間にわたり化学遊走物質として１０％ＦＢＳに向かったことを表す明視野顕微鏡画像である。陰性＝ＦＢＳなし（陰性対照）。スケールバー＝５０μｍ。
【図9A】懸濁液培地中のＭＳＣおよび細胞質体の代表的な落射蛍光顕微鏡画像（上部パネル）と位相差顕微鏡画像（下部パネル）である。アクチン皮質はＬｉｆｅａｃｔ ＲＦＰで染色し、一方で細胞核はＶｙｂｒａｎｔ（登録商標）Ｄｙｅｃｙｃｌｅ（商標）Ｇｒｅｅｎで染色した。矢印は細胞質体、矢頭（ａｒｒｏｗｈｅａｄ ｐｏｉｎｔｓ）はＭＳＣ核を指す。スケールバー＝２０μｍ。
【図9B】Ｎｉｋｏｎ Ｅｌｅｍｅｎｔソフトウェアで測定したときの、ＭＳＣおよび細胞質体のサイズ分布を示す代表的な散布図である。平均±ＳＥＭ；ｎ＝８０。
【図9C】肺に検出された、Ｖｙｂｒａｎｔ（登録商標）ＤｉＤで標識したＭＳＣまたは細胞質体を示す代表的な棒グラフである。ＭＳＣまたは細胞質体をＤｉＤ色素で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。組織を２４時間後に採取し、細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより解析した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝３。
【図9D】肝臓に検出された、Ｖｙｂｒａｎｔ（登録商標）ＤｉＤで標識したＭＳＣまたは細胞質体を示す代表的な棒グラフである。平均±ＳＥＭ；ｎ＝３。ＭＳＣまたは細胞質体をＤｉＤ色素で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。組織を２４時間後に採取し、細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより解析した。
【図10A】肺に検出された、ＤｉＤで標識したＭＳＣまたは細胞質体の数を示す代表的な散布図である。ＭＳＣを標準接着条件下で（２Ｄ）、または水滴法（ｈａｎｄｉｎｇ ｄｒｏｐ ｍｅｔｈｏｄ）（３Ｄ）により懸濁液中で培養し、３Ｄ細胞質体を生成する。ＭＳＣおよび細胞質体をＶｙｂｒａｎｔ（登録商標）ＤｉＤ色素で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。組織を２４時間後に採取し、細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより解析した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝２。
【図10B】肝臓に検出された、ＤｉＤで標識したＭＳＣまたは細胞質体の数を示す代表的な散布図である。ＭＳＣを標準接着条件下で（２Ｄ）、または水滴法（３Ｄ）により懸濁液中で培養し、３Ｄ細胞質体を生成する。ＭＳＣおよび細胞質体をＶｙｂｒａｎｔ（登録商標）ＤｉＤ色素で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。組織を２４時間後に採取し、細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより解析した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝２。
【図10C】脾臓に検出された、Ｖｙｂｒａｎｔで標識したＭＳＣまたは細胞質体の数を示す代表的な散布図である。ＭＳＣを標準接着条件下で（２Ｄ）、または水滴法（３Ｄ）により懸濁液中で培養し、３Ｄ細胞質体を生成する。ＭＳＣおよび細胞質体をＤｉＤ色素で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脈管構造に後眼窩注射した。組織を２４時間後に採取し、細胞懸濁液をフローサイトメトリーにより解析した。平均±ＳＥＭ；ｎ＝２。
【図11A】感染の１２時間後、ＭＯＩ ０．０５でＶＳＶ－ＧＦＰ（矢印）に感染させた有核親ＭＳＣ（上部）とＭＳＣ由来の細胞質体（下部）の落射蛍光顕微鏡画像を例示する図である。ＧＦＰ抗原は、除核細胞における、ウイルス複製および抗原産生を示す無核ＭＳＣにより明確かつしっかりと発現された。スケールバー＝５０μｍ。
【図11B】感染の１２時間後、ＭＯＩ ０．１でＶＳＶ－ＧＦＰ（矢頭）に感染させたＭＳＣ由来の無核細胞の高倍率落射蛍光顕微鏡画像である。核がないことを例示するために、ローダミンファロイジン（矢印）および核染色法ＤＡＰＩを使用して、細胞質体をさらにＦ－アクチンフィラメントに対して染色した。
【図12A】感染の４８時間後、ＭＯＩ ０．０５で、ＧＦＰ抗原をコードするｏＨＳＶに感染させたＭＳＣと無核ＭＳＣの落射蛍光顕微鏡画像である。無核ＭＳＣ（細胞質体）は、ｏＨＳＶ－ＧＦＰを接種して１８時間後にＭＳＣから生成した。スケールバー＝５０μｍ。
【図12B】ｌｉｆｅａｃｔ－ＲＦＰを発現するＭＳＣまたは無核ＭＳＣが、ＧＦＰをコードする腫瘍溶解性単純疱疹ウイルス（ｏＨＳＶ－ＧＦＰ）０．０５ＭＯＩに感染し、その後、ヌードマウス中で成長する樹立Ｕ８７膠芽腫腫瘍に注射されたことを例示する図である。画像は、注射の７日後に取得した。ＭＳＣと無核ＭＳＣはともに、強いＧＦＰシグナルが示すように、ｏＨＳＶを腫瘍細胞に送達した。特筆すべきことに、無核ＭＳＣは７日後に腫瘍中に検出されたが、多くのＭＳＣは、中心（注射部位）の中、および増殖する腫瘍の外縁に存在した。
【図12D】図１２Ｄは、ＩＬ－１２（アジュバント）で操作した無核ＭＳＣとｏＨＳＶで操作した無核ＭＳＣとの組合せで処置した樹立膠芽腫腫瘍に存在するＣＤ８＋エフェクターＴ細胞と、ＰＢＳを注射した対照との比の上昇を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0021】
本明細書には、病原体感染症（例えば、ウイルス、真菌、寄生虫、細菌）またはかかる病原体感染症に関連する疾患もしくは疾病を処置するか予防するための組成物および組成物およびキット、ならびにそれらの使用方法が開示される。本開示の組成物は細胞質体を含み、この細胞質体は、病原体感染症に関連する疾患もしくは疾病を処置する、および／または病原体感染症を予防するのに有効な治療薬を含有する、および場合によってはそれを産生するよう操作された除核細胞である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬は、ワクチン（例えば、弱毒化ウイルス抗原）、急性ウイルス感染症の処置に有効なウイルス標的化薬、またはこの２つの組合せであってよい。いくつかの実施形態では、細胞質体はさらに、病原体を（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで）捕捉し、それらを不活性化して急性感染症を処置するとともにさらなる感染症を予防するように操作されてもよい。いくつかの実施形態では、病原体は、コロナウイルスなどの１または複数のウイルスである。
【0022】
既存の細胞療法薬には多くの欠点がある。有効な細胞療法薬の開発には、遺伝子操作、およびｅｘ ｖｉｖｏでの新たな遺伝物質の細胞ゲノムへの導入が必要となることが多い。しかし、このプロセスは、ゲノムに危険な突然変異を導入し、特に操作された細胞が身体へと恒久的に生着して宿主細胞と融合する場合に、癌および他の生命を脅かす疾患を生み出すおそれがある。多くの既存の細胞療法薬に伴う他の顕著な課題は、身体への送達後、細胞が制御不能に増殖して身体に恒久的に生着する可能性があるというものであり、これにより生命が脅かされる可能性がある。また、対象への投与後に細胞に対する制御が欠如すると、治療細胞、およびその生体活性産物の正確な用量の送達が、困難となる（例えば、薬物動態が不十分となる）おそれがある。このため、治療薬または他の生体分子を送達するのに安全で制御可能な細胞療法薬が必要とされている。
【0023】
患者または対象に送達する前、従来の細胞療法薬は、所望の細胞機能と治療機能を生成するよう一般的に修飾されるか、またはｅｘ ｖｉｖｏで遺伝子改変される。しかし、これら細胞が対象に導入されると、新たな宿主環境が大幅にリプログラミングされ、負に改質、またはその他の方法で細胞を無効にしてしまう可能性がある。このため、リプログラミングおよび有害な外部シグナルに応答できない、さらに予測可能な細胞療法薬が必要とされている。
【0024】
現存する細胞療法は、癌または他の疾患に対する治療薬として対象に送達するために細胞療法に充填可能なＤＮＡ損傷薬／遺伝子標的化薬の量によって制限される。ＤＮＡ損傷薬／遺伝子標的化薬としては、ＤＮＡ損傷化学療法薬、ＤＮＡ統合ウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、および、限定されるものではないがクラスタ化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、Ｃａｓの小クラスタ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系）、およびプラスミドを含む遺伝子療法用途／送達が挙げられるが、これらに限定されるものではない。このため、かかる限定のない細胞療法薬が必要とされ、この細胞療法薬は、高用量の細胞毒性治療薬を配達する理想的なプラットフォームであってよい。
【0025】
本開示の細胞質体を使用して、治療薬を対象に送達することにいくつかの利点がある。ＤＮＡをその核（例えば、核をコードされた遺伝子、異物、または突然変異ＤＮＡ）から宿主細胞へと意図せずに転移させる従来の細胞療法薬と異なり、本開示の細胞質体は、核なしでその転移を行うことはできない。加えて、本明細書に記載の細胞質体を使用した治療薬の対象への送達は、制御可能で有限であり（例えば、１４日以下）、理由として、少なくともこの細胞質体は、核のない状態で他の細胞型へと増殖も分化もできないからである。本開示の細胞質体は、核のない状態で、本明細書に記載の治療薬または他の生体分子を発現および／または分泌するほか、標的細胞、標的組織、またはｉｎ ｖｉｖｏ環境へと遊走するか帰巣する（ｈｏｍｅ）場合がある。この少なくとも一部は、本明細書に記載の方法を使用した親化合物を除核し、そうして得られた細胞質体が、正常な生体機能（例えば、タンパク質産生／分泌、細胞運動、ケモカイン感知など）に十分な親細胞由来の細胞小器官を保持することにより、達成される。本明細書に記載の細胞質体は、対象に全身送達されたときでも、安全で制御可能な形で治療薬を対象の標的組織または標的細胞（例えば、リンパ組織、肺組織）に効率的かつ有効に送達する。さらに、従来の細胞療法薬の大量製造は非常に時間とコストを要するため、それらの臨床応用が制限されてしまう。核を伴う不死化細胞（例えば、ｈＴＥＲＴ）を使用して製造力を増大させることで、製造規模を大きくし製造コストを下げることができると考えられているが、不死化細胞は染色体異常を被りやすく、腫瘍または異所性組織形成を促進させるため、臨床応用には安全ではないという懸念が存在する。本開示の実施形態によるこのような細胞、またはあらゆる細胞型を除核することにより、細胞質体の製造に伴う規模の拡大とコスト低下が達成され、その一方で、従来の細胞療法薬がもたらす人体の健康に対するリスクが軽減される場合がある。
【0026】
本明細書に記載の組成物における製造の規模とコスト、安全性プロファイル、および有効性の改善は、ワクチン開発において重要な利益を伴う。本明細書に記載の組成物を産生する方法は、通常産生細胞株からのワクチン（例えば、抗原、ｍＲＮＡ）の単離と精製を必要とする従来のワクチン開発のタイムラインよりも速く行われる。対照的に、本開示の細胞質体は、ワクチンの単離と精製を必要とすることなく、継続的に抗ウイルス組成物を産生するよう操作される。必要な時点で、本明細書に記載の組成物は、筋肉内注射ではなく全身（例えば、吸入）投与されてよく、これによりワクチン投与のための医療施設が必要となくなり、患者経験が改善する。リンパ組織（または他の標的組織）に速やかに帰巣するという細胞質体の能力のため、ワクチンは、特定の従来の細胞療法薬（例えばエキソソーム）を全身投与するのに要する時間と比べわずかな時間で、対象のリンパ系に展開される場合がある。加えて、細胞質体の大きさが小さいことで（例えば、約８マイクロメートル）、細胞質体は血管系および組織実質中の小さな開口部に確実に捕捉されず、それにより従来の細胞療法薬と比較して体内分布が改善する。本明細書に開示される細胞質体は、事実上あらゆる種類のワクチンまたは抗ウイルス薬（例えば、抗ウイルス抗体および／または中和抗体）を発現して活動性感染症に対抗することに加え、将来の感染症を予防するように操作されてよい。加えて、本明細書に記載の細胞質体は、１種類より多くのワクチン（例えば、１種類より多くの病原体に対する）を発現して、ひとまとまりの（ａ ｐａｎｅｌ ｏｆ）ワクチンを単回投与形態で対象に投与するのを可能にするように操作されてよいこれは特に、有効な免疫化戦略において将来複数のワクチンを必要する場合のある、急速に発達する病原体（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対して有益である。
【0027】
本明細書に開示される細胞質体は、医療において至急に必要とされる場合の容易に利用可能な解決策である。細胞質体は、除核の前または後に、標的化部分（例えば、ホーミング受容体）、免疫回避部分（例えば、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナル伝達ペプチド）、とりわけ、到達前に免疫系によるクリアランスのリスクを伴うことなく細胞質体をリンパ組織に対し標的とするのに十分な他の生体分子を発現するよう操作されてよい。細胞質体は、凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥（ｃｒｙｏｄｅｓｉｃｃａｔｅｄ）され、およびその生体活性を遅くするか停止させて長期間貯蔵されてよい。医療において至急に必要とされるとき、細胞質体の生体機能は回復され（例えば、再水和、解凍）、送達前に必要に応じて（例えば、ワクチンまたは抗ウイルス薬を発現するための）さらなる操作を行うために最大５日間生存可能である。かかる生体機能として、治療用表面タンパク質、免疫刺激抗原、または受容体の発現、サイトカイン、ホルモン、またはタンパク質の分泌、エキソソームの放出、膜粒子のシェディング、死滅プロセスを介した免疫系の刺激、またはトンネリングナノチューブの作製が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本開示の細胞質体は、意図した細胞質体機能に負に影響を及ぼすことなく、製造および流通のプロセスの間に複数回冷凍かつ解凍されてよく、そうすることで迅速なワクチン展開に理想的なプラットフォームとなる。
【0028】
いくつかの実施形態では、本開示の細胞質体は、本明細書に記載の外来性ワクチンまたは他の生体分子を産生または送達するよう操作されることのない治療薬であり得る。例えば、例えば、目的の病原体に対し免疫のある対象から取得した細胞から得られる細胞質体など、未操作の細胞質体自体は、患者または対象に送達したときに、回復期血漿療法の手法と同様の治療特性を有する可能性がある。かかる細胞は、病原体と宿主受容体との係合を遮断する中和抗体を自然に産生する場合がある。いくつかの実施形態では、未操作の細胞質体は、本明細書に記載の治療薬または生体分子のうちいずれか１つを自然に産生することができ、これらは、処置を必要とする対象に治療効果を達成するのに使用される場合がある。
【0029】
本明細書に記載の高速ワクチンプラットフォームにおける多くの利益の非限定的な例を、図５に提供する。細胞質体の産生は急速に拡大されてよく、ウイルス抗原を発現するよう操作された何億もの細胞質体は、容易に製造され、必要となるまで貯蔵される場合がある。本明細書に記載の細胞質体は、ウイルス抗原を発現するよう操作されることに加えて、トラップとして作用する場合がある。かかる技術的特徴により、操作された細胞質体を病原体に感染させ、こうして病原体を隔離して他の細胞に感染するのを防止することが可能になる。例えば、本明細書に記載の細胞質体は、スパイクタンパク質を発現するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに感染することとなるＡＣＥ２受容体を発現するよう操作されることができる。感染に際して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは細胞質体に捕捉され、これ以上複製しない場合がある。感染した細胞質体は、分解のため免疫系により標的とされる場合がある。細胞質体は、細胞質体を標的組織またはリンパ節などの微小環境に帰巣させるためにケモカイン受容体を発現するよう操作されてよい。
【0030】
本明細書には、対象の病原性感染症の予防または処置のための組成物、方法、およびキットが提供される。いくつかの実施形態では、病原性感染症は、コロナウイルスまたはインフルエンザウイルスの感染症などのウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、病原性感染症は細菌感染症である。本明細書には、ウイルスの感染もしくはアウトブレイクを予防する、または急性感染症を処置するのに適切な抗ウイルス組成物を発現するように操作される細胞質体である。この細胞質体は、対象に送達されると、細胞質体の表面上に抗ウイルス組成物を提示することにより、または標的組織を取り囲む細胞外空間へと抗ウイルス組成物を分泌することにより、標的組織に抗ウイルス組成物を送達する。
【0031】
いくつかの実施形態では、本開示の細胞質体はさらに、病原体による細胞質体の感染を許容し、ｉｎ ｖｉｖｏでの病原体の伝播を防止することにより、対象の病原体を捕捉するのに適している。図４に示すように、本明細書に記載の細胞質体は、病原体が認識可能なウイルス受容体を発現し、細胞質体の感染を促進することができる。この病原体は、細胞質体を感染させると、核ゲノムがない状態で複製も伝播もできない細胞質体にて隔離される。５日以内に、細胞質体は、食作用の自然過程を使用して対象から取り除かれる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象におけるウイルスのクリアランスを加速させるべく免疫系を活性化する。ｉｎ ｖｉｖｏでの病原体の伝播を防止するための本明細書に開示される細胞質体に対する少なくとも１つの利点は、細胞質体は、複製対象である多くの病原体に必要な遺伝子情報を含む核を欠いているということである。
【0032】
図１を参照すると、いくつかの実施形態は、対象のリンパ組織（例えばリンパ節）や肺組織などの標的細胞または組織を標的とする接着分子、ケモカインもしくは保持受容体、またはその両方を発現するよう、除核前に遺伝子操作される細胞（例えば幹細胞）である（ＳＴＥＰ１）。次に、操作された細胞は、細胞質体を産生するために本明細書に記載の方法を使用して除核される（ＳＴＥＰ２）。その後、細胞質体は、対象の適応免疫反応を向上させるために、ワクチンまたは他の生体分子（例えば治療薬、中和抗体）および／あるいは免疫変調成分（例えば免疫賦剤）を発現、ならびにいくつかの実施形態ではそれらを分泌するように操作されてよい（ＳＴＥＰ３）。細胞質体は、意図した機能により必要に応じてさらに操作される。結果生じる細胞質体は、ウイルスを捉えるトラップとして、またはワクチンを配するために使用されてよい。ウイルストラップの非限定的な例では、細胞質体は、治療（例えばワクチン）ペイロードによって操作されない場合がある。しかし、場合により、将来のウイルス感染症を防止するために、目的の病原体に対する中和抗体を発現および／または分泌することが有利な場合もある。いくつかの実施形態では、この例のウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのコロナウイルスである。しかし、図１のワークフローは、ヒトの健康に多大なリスクをもたらす病原菌（例えば炭疽菌）または毒素を含む、本明細書に記載のあらゆる病原体に適用可能であってよい。
【0033】
新たな病原体（例えばウイルス）の特定から流通まで、本開示の細胞質体を製造するプロセスの期間はおよそ２か月であり、これに対し従来のワクチン開発では１２か月以上である。図２に示すように、本開示の細胞質体は、ウイルスのアウトブレイクより前に調製され、一定期間にわたり保管されてよい。これが意味するところでは、本開示の細胞質体（例えば、ホーミング受容体すなわち免疫賦活剤を発現するように操作される）は、次のウイルスのアウトブレイクに対処するべく速やかに配置される場合がある。図３を参照すると、事前に調製され凍結保存された細胞質体は、弱毒化ウイルスタンパク質を分泌するように操作される。この細胞質体は、それを必要とする対象に投与されると、対象においてウイルスに対する中和抗体の免疫活性化と産生を誘導する。
【0034】
本開示の細胞質体を産生する方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞をサイトカラシンＢで処理し、皮質アクチン細胞骨格を軟化することができる。次いで、核をフィコール勾配での高速遠心分離により細胞体から物理的に抽出し、核のない（除核）細胞質体を生成することができる。細胞質体および無傷の有核細胞はフィコール勾配で異なる層に沈降するので、いくつかの実施形態では、細胞質体は、治療目的のために、または他の細胞（有核または除核）への融合のために容易に単離かつ調製可能である。除核プロセスは、何千万もの細胞を処理するほど臨床的にスケーラブル（ｓｃａｌａｂｌｅ）であり得る。
【0035】
本明細書には、本開示の細胞質体を使用または送達する方法が開示される。細胞質体は、健康な個体を処置（例えばエネルギー改善、運動からの回復、もしくは天然物の送達のために）、または各種疾患（例えば本明細書に記載の疾患のいずれか）を処置するために、臨床的に関連するカーゴ（ｃａｒｇｏｓ）／ペイロードを送達するホーミング受容体として使用可能である。例えば、細胞質体は、健康な個体、例えば送達した治療薬が有効となる特定の障害と診断されていない個体に、サプリメント、老化防止因子、予防処置などを送達するために使用されてよい。
【0036】
また本明細書には、本明細書に記載のあらゆる組成物を含むキットも提供される。例えば、キットは、本明細書に記載の組成物または方法のいずれかを使用するための指示書を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載のいずれかの組成物の少なくとも一回量を含むことができる。
【0037】
Ｉ．組成物
本明細書には、対象における病原体関連の疾患もしくは疾病を処置または予防するのに有用な組成物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、病原体関連の疾患もしくは疾病を処置または予防するのに適した活性薬剤を発現するよう操作された細胞質体（例えば除核細胞）を含む。いくつかの実施形態では、病原体関連の疾患または疾病は、コロナウイルス感染症などのウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、弱毒化したウイルス抗原または抗ウイルス抗体などの抗ウイルス組成物、またはそれらの組合せを発現するよう操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面（例えば抗原提示）に抗ウイルス組成物を含む。いくつかの実施形態では、抗ウイルス組成物は、標的組織にて細胞質体により細胞外空間へと分泌される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の感染を許容しｉｎ ｖｉｖｏでの病原体の伝播を予防することにより、ｉｎ ｖｉｖｏで病原体を捉えるか捕捉し、それにより急性病原性感染症または病原体関連の疾患もしくは疾病を処置するように、操作される。
本明細書には、対象における病原体関連の疾患もしくは疾病を処置または予防するのに有用な組成物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、病原体関連の疾患もしくは疾病を処置または予防するのに適した活性薬剤を発現するよう操作された細胞質体（例えば除核細胞）を含む。いくつかの実施形態では、病原体関連の疾患または疾病は、コロナウイルス感染症などのウイルス感染症である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、弱毒化したウイルス抗原または抗ウイルス抗体などの抗ウイルス組成物、またはそれらの組合せを発現するよう操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面（例えば抗原提示）に抗ウイルス組成物を含む。いくつかの実施形態では、抗ウイルス組成物は、標的組織にて細胞質体により細胞外空間へと分泌される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の感染を許容しｉｎ ｖｉｖｏでの病原体の伝播を予防することにより、ｉｎ ｖｉｖｏで病原体を捉えるか捕捉し、それにより急性病原性感染症または病原体関連の疾患もしくは疾病を処置するように、操作される。
【0038】
本明細書に記載の細胞質体は、制限されたか規定された（例えば、既知の、またはプログラム可能な）寿命を有するように操作される。本明細書に記載の細胞質体のサイズは、いくつかの実施形態で体内分布を改善する他の一部の細胞療法（例えばエキソソーム、赤血球、養子細胞治療）の細胞と比較して小さい。
【0039】
本明細書に記載の細胞質体は、凍結休眠または凍結保存後の生存度を維持するため、広範囲の導入において薬物送達のプラットフォームとして他に類を見ないほど適切なものとなる。凍結保存は、生体材料（例えば細胞、細胞質体）を短期間または長期間、非常に低温（例えば、固形ＣＯ２で－８０℃、液体窒素で－１９６℃など）で冷却または冷凍し、保管することを含む。凍結休眠は、仮死状能にある生体材料（例えば細胞、細胞質体）を不凍温度、例えば４℃で短期間冷却して保管することを含む。細胞質体の凍結休眠は、以下の理由：凍結休眠は凍結保存ほど労力を要するものではない、凍結休眠を受けた細胞質体は運搬（例えば、輸送）可能である、のうち１または複数により有利な可能性がある。いくつかの実施形態では、細胞質体は凍結保存される。いくつかの実施形態では、細胞質は凍結休眠される。細胞質体を凍結休眠または凍結保存から取り除いた後、細胞質体は、本明細書に記載の方法に従い使用されてよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、凍結休眠または凍結保存から取り除いた後、少なくともまたは約２４時間、４８時間、７２時間、あるいは２４時間から７３時間の間にあるあらゆる時間増分にわたり生存可能である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、約２４～約４８時間の間にわたり生存可能である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、約４８～約７２時間の間にわたり生存可能である。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるトリパンブルー色素排除を使用して測定される。いくつかの実施形態では、生存度は、本明細書に記載されるアネキシン－５細胞表面染色を使用して測定される。
【0040】
本明細書に記載の細胞質体は、所与の治療用途への適合が最良となるよう広く操作される。例えば、標的病原体による細胞質体の感染を増大させる細胞質体が、操作される（例えば細胞表面受容体により）。いくつかの実施形態では、細胞質体は、急性ウイルス感染症の処置に使用されるワクチンまたは抗ウイルス抗体としての使用において弱毒化ウイルス抗原を発現するよう操作される。別の例では、細胞質体は、困難な（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ）組織（例えば、筋肉）、および弱毒化ウイルス抗原や抗ウイルス抗体などの活性薬剤を特異的に標的とするタンパク質を産生するか発現するよう操作される。加えて、いくつかの実施形態では、細胞質体は、宿主における抗原応答を回避するべく免疫回避部分（例えばＣＤ３４＋）により操作される。細胞質体はさらに、細胞ホーミング、ケモカイン感知、および、主に影響を受けた領域にある損傷組織を標的とするのに必須の他の生物学的機能に使用される細胞表面受容体（例えば接着分子、ケモカイン受容体）を発現するよう操作される。
【0041】
いくつかの実施形態では、細胞質体の規定された寿命は、１時間未満～１４日（例えば、１時間未満～１時間、１時間未満～６時間、６時間～１２時間、１２時間～１日、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１３日、１４日、１～１４日、１～１２日、１～１０日、１～９日、１～８日、１～７日、１～６日、１～５日、１～４日、１～３日、１～２日、２～１４日、２～１２日、２～１０日、２～８日、２～７日、２～６日、２～５日、２～４日、２～３日、３～１４日、３～１２日、３～１０日、３～８日、３～７日、３～６日、３～５日、３～４日、４～１４日、４～１２日、４～１０日、４～８日、４～７日、４～６日、４～５日、４～７日、５～１４日、５～１２日、５～１０日、５～８日、５～７日、５～６日、６～１４日、６～１２日、６～１０日、６～８日、６～７日、７～１４日、７～１２日、７～１０日、７～８日、８～１４日、８～１２日、８～１０日、１０～１４日、１０～１２日、１２～１４日、１４日未満、１２日未満、１０日未満、８日未満、７日未満、６日未満、５日未満、４日未満、３日未満、２日未満、１日未満、１２時間未満、または６時間未満）である。いくつかの実施形態では、細胞質体集団の寿命は、細胞質体集団の一部（例えば、集団の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％）が死滅したと判定された平均時間を判定することにより評価することができる。細胞の死滅は、当該技術分野で公知のあらゆる方法により判定可能である。いくつかの実施形態では、例えば１または複数の時点での細胞質体の生存度は、形態測定学的または機能的パラメータがインタクトであるかどうかを判定することにより評価可能である（例えば、トリパンブルー色素排除により、無傷の細胞膜を評価する、（例えば、付着性の細胞質体における）プラスチックへの接着を評価する、細胞質体の移動を評価する、アポトーシス性マーカーによりネガティブ染色を行うなど）。いくつかの実施形態では、細胞質体の寿命は、細胞質体が得られた細胞の寿命に関連する場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージから得た細胞質体は、１２～２４時間生存する場合がある。
【0042】
いくつかの実施形態では、細胞質体の直径は、少なくとも１μｍ以上である。いくつかの実施形態では、細胞質体の直径は、１μｍを超える。いくつかの実施形態では、細胞質体の直径は、１～１００μｍ（例えば、１～９０μｍ、１～８０μｍ、１～７０μｍ、１～６０μｍ、１～５０μｍ、１～４０μｍ、１～３０μｍ、１～２０μｍ、１～１０μｍ、１～５μｍ、５～９０μｍ、５～８０μｍ、５～７０μｍ、５～６０μｍ、５～５０μｍ、５～４０μｍ、５～３０μｍ、５～２０μｍ、５～１０μｍ、１０～９０μｍ、１０～８０μｍ、１０～７０μｍ、１０～６０μｍ、１０～５０μｍ、１０～４０μｍ、１０～３０μｍ、１０～２０μｍ、１０～１５μｍ、１５～９０μｍ、１５～８０μｍ、１５～７０μｍ、１５～６０μｍ、１５～５０μｍ、１５～４０μｍ、１５～３０μｍ、１５～２０μｍ）である。いくつかの実施形態では、細胞質体の直径は、１０～３０μｍである。いくつかの実施形態では、細胞質体の直径は、５～２５μｍの間（例えば、５～２０μｍ、５～１５μｍ、５～１０μｍ、１０～２５μｍ、１０～２０μｍ、１０～１５μｍ、１５～２５μｍ、１５～２０μｍ、または２０～２５μｍ）である。いくつかの実施形態では、細胞質体はエキソソームではない。いかなる特定の理論にも縛られるものではないが、いくつかの実施形態では、一部の細胞質体は、有利には、より良好な体内分布を可能にするほど、または対象の肺に捕捉されにくくなるほど十分に小さい可能性があると考えられる。
【0043】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、その特性を改質するために細胞（例えば、異種培養された（ｘｅｎｏｃｕｌｔｕｒｅｄ）細胞）に適用されるか、またはこの細胞を用いて培養される可能性がある。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体（例えば、未操作の細胞質体または操作された細胞質体）は、異種培養された細胞において健康促進因子を上方調節することができ、いくつかの実施形態では、異種培養された細胞は、それらが得られた対象へと戻ることができる。
【0044】
Ａ．細胞
本明細書には、本開示の細胞質体を産生するように操作される細胞および細胞株が提供される。細胞質体は、有核親細胞などの対応する親細胞にから得られてよい。親細胞の非限定的な例として、不死化細胞、癌細胞（例えば、あらゆる癌細胞）、初代（例えば、宿主由来）細胞、または細胞株が挙げられる。いくつかの実施形態では、親細胞は、Ｈｕａｎｇらによる「Ｊ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．２０１０ Ｏｃｔ．２２ｌ ２（５）：２０２－２１７」に記載のものなど、適切な方法を使用して不死化された細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、全体を参照により本明細書に引用される米国特許出願第１６／７１５，８５９号明細書に提供される適切な方法を使用して、親細胞から得られる。
本明細書には、本開示の細胞質体を産生するように操作される細胞および細胞株が提供される。細胞質体は、有核親細胞などの対応する親細胞にから得られてよい。親細胞の非限定的な例として、不死化細胞、癌細胞（例えば、あらゆる癌細胞）、初代（例えば、宿主由来）細胞、または細胞株が挙げられる。いくつかの実施形態では、親細胞は、Ｈｕａｎｇらによる「Ｊ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．２０１０ Ｏｃｔ．２２ｌ ２（５）：２０２－２１７」に記載のものなど、適切な方法を使用して不死化された細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、全体を参照により本明細書に引用される米国特許出願第１６／７１５，８５９号明細書に提供される適切な方法を使用して、親細胞から得られる。
【0045】
いくつかの実施形態では、細胞は、１または複数の細胞を有するあらゆる生物体から生じる可能性がある。一部の非限定的な例として、原核細胞、真核細胞、細菌細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、原生動物細胞、植物細胞、藻細胞、真菌細胞、動物細胞、無脊椎動物細胞、脊椎動物細胞、哺乳動物（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）細胞などが挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞は体細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は間葉系幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は間葉系間質細胞である。細胞は、１または複数の細胞を有するあらゆる生物体から生じる可能性がある。
【0046】
細胞の一部の非限定的な例として、原核細胞、真核細胞、細菌細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、原生動物細胞、植物細胞（例えば、作物、果実、野菜、穀類、大豆、コーン、トウモロコシ、小麦、種子、トマト、米、キャッサバ、サトウキビ、カボチャ、まぐさ、ジャガイモ、綿、カンナビス、タバコ、顕花植物、球果植物、裸子植物、シダ類、ヒカゲノカズラ類、ツノゴケ類、苔類、蘚類）、藻細胞（例えば、Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ ｂｒａｕｎｉｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｔｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈなど）、海草（例えばケルプ）、真菌細胞（例えば酵母菌、キノコ由来の細胞）、動物細胞、無脊椎動物（例えば、ショウジョウバエ、刺胞動物、棘皮動物、線虫など）細胞、脊椎動物（例えば、魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物）、哺乳動物（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）細胞などが挙げられる。時に、細胞は、天然の生物体から生じるものではない（例えば、細胞は合成により作られる場合があり、時に人工細胞と称される）。いくつかの実施形態では、細胞は体細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は間葉系幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は造血性幹細胞または前駆細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、筋細胞、皮膚細胞、血液細胞、または免疫細胞である。他の例示的な細胞として、Ｂ細胞、Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞）、ナチュラルキラー細胞、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞などのリンパ球細胞；顆粒球（好塩基性顆粒球、好酸性顆粒球、好中性顆粒球／過分葉好中球）、単球／マクロファージ、赤血球（網状赤血球）、肥満細胞、血小板／巨核球、樹状細胞などの骨髄性細胞；甲状腺（甲状腺上皮細胞、瀘胞傍細胞）、副甲状腺（上皮小体主細胞、好酸性細胞）、副腎（クロム親和性細胞）、松果体（松果体実質細胞）細胞を含む内分泌系由来の細胞；グリア細胞（星状細胞、小膠細胞）、大形細胞性神経分泌細胞、星細胞、ベッチェル細胞、下垂体（性腺刺激ホルモン分泌細胞、副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン産生細胞、成長ホルモン産生細胞、乳腺刺激ホルモン分泌細胞）を含む神経系の細胞；肺細胞（Ｉ型肺細胞、ＩＩ型肺細胞）、クララ細胞、杯状細胞、塵埃細胞を含む呼吸器系の細胞；心筋細胞（Ｍｙｏｃａｒｄｉｏｃｙｔｅ）や周皮細胞を含む循環系の細胞；胃（胃主細胞、壁細胞）、杯状細胞、パネート細胞、Ｇ細胞、Ｄ細胞、ＥＣＬ細胞、Ｉ細胞、Ｋ細胞、Ｓ細胞を含む消化器系の細胞；腸クロム親和性細胞、ＡＰＵＤ細胞、肝臓（肝細胞、クッパー細胞）、軟骨／骨／筋肉を含む腸内分泌細胞；骨芽細胞、骨細胞、破骨細胞、歯（セメント芽細胞、エナメル芽細胞）を含む骨細胞；軟骨芽細胞、軟骨細胞を含む軟骨細胞（ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｃｅｌｌ）；毛胞、角化細胞、黒色素細胞（母斑細胞）を含む皮膚細胞；筋細胞を含む筋肉細胞；有足細胞、傍糸球体細胞、糸球体内メサンギウム細胞／糸球体外メサンギウム細胞、腎臓近位尿細管刷子縁細胞、緻密斑細胞を含む泌尿器系細胞；精子、セルトリ細胞、ライディッヒ細胞、卵子を含む生殖器系細胞；および、他の細胞、脂肪細胞、線維芽細胞、腱細胞、上皮角化細胞（分化上皮細胞）、上皮基底細胞（幹細胞）、指の爪や足指の爪の角化細胞、爪床基底細胞（幹細胞）、骨髄毛幹細胞、皮質毛幹細胞、表皮毛幹細胞、表皮毛根鞘細胞、ハックスリー層の毛根鞘細胞、ヘンレ層の毛根鞘細胞、外部毛根鞘細胞、毛母基細胞（幹細胞）、湿潤重層障壁上皮細胞（Ｗｅｔ ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ ｂａｒｒｉｅｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道および膣の重層扁平上皮の表層上皮細胞、角膜、舌、口腔、食道、肛門管、遠位尿道および膣の上皮の基底細胞（幹細胞）、泌尿器上皮細胞（膀胱および尿道を裏打ちする）、外分泌上皮細胞、唾液腺粘液細胞（多糖リッチ分泌）、唾液腺漿液細胞（糖タンパク質酵素リッチ分泌）、舌のフォン・エブネル腺細胞（味蕾を濡らす）、乳腺細胞（乳汁分泌）、涙腺細胞（涙液分泌）、耳の耳道腺細胞（耳垢分泌）、エクリン汗腺暗細胞（糖タンパク質分泌）、エクリン汗腺明細胞（小分子分泌）、アポクリン汗腺細胞（発香性分泌、性ホルモン感受性）、眼瞼のモル腺細胞（特殊化した汗腺）、皮脂腺細胞（脂質リッチ皮脂分泌）、鼻のボーマン腺細胞（嗅上皮を濡らす）、十二指腸のブルンナー腺細胞（酵素およびアルカリ性粘液）、精嚢細胞（遊泳精子のためのフルクトースを含む精液構成要素を分泌する）、前立腺細胞（精液構成要素を分泌する）、尿道球腺細胞（粘液分泌）、バルトリン腺細胞（膣液分泌）、リトル腺細胞（粘液分泌）、子宮内膜細胞（糖質分泌）、気道および消化管の孤立杯細胞（Ｉｓｏｌａｔｅｄ ｇｏｂｌｅｔ ｃｅｌｌ）（粘液分泌）、胃内壁粘液細胞（粘液分泌）、胃腺酵素分泌細胞（ペプシノーゲン分泌）、胃腺酸分泌細胞（塩酸分泌）、膵腺房細胞（炭酸水素塩および消化酵素分泌）、小腸のパネート細胞（リゾチーム分泌）、肺のＩＩ型肺細胞（サーファクタント分泌）、肺のクララ細胞、ホルモン分泌細胞、下垂体前葉細胞、成長ホルモン分泌細胞、プロラクチン分泌細胞、甲状腺刺激ホルモン分泌細胞、性腺刺激ホルモン分泌細胞、副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、脳下垂体中葉細胞、巨大神経分泌細胞、腸および気道細胞、甲状腺細胞、甲状腺上皮細胞、傍濾胞細胞、副甲状腺細胞、上皮小体主細胞、好酸性細胞、副腎細胞、クロム親和性細胞、精巣のライディッヒ細胞、卵胞の内卵胞膜細胞、破裂卵胞の黄体細胞、顆粒層ルテイン細胞、卵胞膜黄体細胞、傍糸球体細胞（レニン分泌）、腎臓のマクラデンサ細胞、代謝および貯蔵細胞、障壁機能細胞（肺、腸、外分泌腺、および尿生殖路）、腎臓、Ｉ型肺細胞（肺の気泡を裏打ちする）、膵管細胞（腺房中心細胞）、（汗腺、唾液腺、乳腺などの）非横紋導管細胞、（精嚢、前立腺などの）導管細胞、閉じた体内体腔を裏打ちする上皮細胞、推進機能を持つ繊毛細胞、細胞外マトリクス分泌細胞、収縮細胞；骨格筋細胞、幹細胞、心筋細胞、血液細胞および免疫系細胞、エリスロサイト（赤血球）、巨核球（血小板前駆体）、単球、結合組織マクロファージ（様々なタイプ）、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞（骨中）、樹状細胞（リンパ組織中）、ミクログリア細胞（中枢神経系中）、好中性顆粒球、好酸性顆粒球、好塩基性顆粒球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、網状赤血球、血液および免疫系の幹細胞および委任前駆細胞（様々なタイプ）、多能性幹細胞、全能性幹細胞、誘導多能性幹細胞、成体幹細胞、感覚トランスデューサー細胞、自律性ニューロン細胞、感覚器および末梢性ニューロン支持細胞、中枢神経系ニューロンおよびグリア細胞、水晶体細胞、顔料細胞、メラノサイト、網膜色素上皮細胞、生殖細胞、卵原細胞／卵母細胞、精細胞、精母細胞、精原細胞（精母細胞の幹細胞）、精子、ナース細胞、卵胞細胞、セルトリ細胞（精巣中）、胸腺上皮細胞、間質細胞、および間質腎臓細胞が挙げられる。
【0047】
真核細胞の非限定的な例として、哺乳動物（例えば、げっ歯類、非ヒト霊長類、またはヒト）、非哺乳動物（例えば、魚類、鳥類、爬虫類、または両生類）、無脊椎動物、昆虫、真菌、または植物の細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、真核細胞は、サッカロミセス・セレビシエなどの酵母菌である。いくつかの実施形態では、真核細胞は、哺乳動物、鳥類、植物、または昆虫の細胞などのより高度な真核生物である。いくつかの実施形態では、有核細胞は初代細胞である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、免疫細胞（例えば、リンパ球（例えばＴ細胞、Ｂ細胞）、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、好中球、肥満細胞、好塩基性細胞、樹状細胞、単球、骨髄誘導サプレッサ細胞、好酸球）である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、食細胞または白血球である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、幹細胞（例えば、成体幹細胞（例えば、造血幹細胞、乳腺幹細胞、腸幹細胞、間葉系幹細胞、内皮幹細胞、神経幹細胞、嗅覚成体幹細胞、神経冠幹細胞、睾丸細胞）、胚性幹細胞、誘導可能な多能性幹細胞（ｉＰＳ））である。いくつかの実施形態では、有核細胞は始原細胞である。いくつかの実施形態では、有核細胞は細胞株由来である。いくつかの実施形態では、有核細胞は懸濁細胞である。いくつかの実施形態では、有核細胞は粘着細胞である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、癌遺伝子の発現により不死化された細胞である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）またはあらゆる癌遺伝子の発現により不死化される。いくつかの実施形態では、有核細胞は、患者または対象由来の細胞（例えば、自己由来の患者由来細胞、または同種異系患者由来細胞）である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、本明細書に記載され当該技術分野で公知の除核技法のいずれかを使用して除核される前に、ベクター（例えば、ウイルスベクター（例えばレトロウイルスベクター（例えばレンチウイルスベクター）、アデノ関連性ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、小胞性ウイルスベクター（例えば水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）ベクター）、またはハイブリッドウイルスベクター）、プラスミド）を用いてトランスフェクトされる。
【0048】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象に対して自己由来の細胞から得ることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象に対し同種異系の細胞から得ることができる。
【0049】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、免疫細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、マクロファージ、リンパ球、線維芽細胞、成体幹細胞（例えば造血幹細胞、乳腺幹細胞、腸幹細胞、間葉系幹細胞、間充織間質細胞、内皮幹細胞、神経幹細胞、嗅覚成体幹細胞、神経冠幹細胞、皮膚幹細胞、または睾丸細胞）、肥満細胞、好塩基球、好酸球、または誘導可能な多能性幹細胞から得られる。
【0050】
いくつかの実施形態では、除核前に、２つ以上の細胞（例えば、本明細書に開示される細胞のいずれか）は、本明細書に開示されるか当該技術分野で公知であるあらゆる方法により融合される。融合生成物の除核により、細胞質体を得ることができる。
【0051】
いくつかの実施形態では、第１の細胞質体は、細胞または第２の細胞質体に融合される。いくつかの実施形態では、細胞は、あらゆる有核細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、または本明細書に記載のあらゆる哺乳動物細胞）、原生動物細胞（例えば、アメーバ細胞）、藻細胞、植物細胞、真菌細胞、無脊椎動物細胞、魚類細胞、両生類細胞、爬虫類細胞、または鳥類細胞）である。いくつかの実施形態では、第２の細胞は合成細胞である。したがって、本明細書に記載の細胞質体のいずれかに細胞を融合させることを含む、細胞の挙動を改質する方法が提供される。本明細書にはさらに、細胞質体が融合されている細胞を治療上有効量で対象に投与することを含む方法も提供される。
【0052】
いくつかの実施形態では、第２の細胞質体は、第１の細胞質体と同じタイプの細胞から得られる。いくつかの実施形態では、第２の細胞質体は、第１の細胞質体と異なるタイプの細胞から得られる。いくつかの実施形態では、第２の細胞質体は、少なくとも１つの治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、治療用遺伝子編集因子、治療用ナノ粒子、または、第１の細胞質体が含有するか発現する治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、治療用遺伝子編集因子、治療用ナノ粒子と同じ他の活性薬剤を含有するか、それらを発現する。いくつかの実施形態では、第２の細胞質体は、少なくとも１つの治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、治療用遺伝子編集因子、治療用ナノ粒子、または、第１の細胞質体が含有するか発現する治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、治療用遺伝子編集因子、治療用ナノ粒子とは異なる他の活性薬剤を含有するか、それらを発現する。いくつかの実施形態では、第１の細胞質体は、当該技術分野で公知のあらゆる方法、例えばウイルス系細胞表面ペプチドを用いた電気細胞融合またはウイルス融合を使用して、細胞または第２の細胞質体に融合することができる。
【0053】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、自然発生の除核細胞ではない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、自然に除核を受ける細胞からは得られない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象の身体中で除核された細胞ではない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象の身体中で除核された細胞からは得られない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、赤芽細胞から得られない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、（例えば、本明細書に記載の除核などの操作がない場合）その寿命にわたり核を維持する細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、無核細胞（例えば、赤血球（赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ））、血小板、水晶体細胞、またはそれらの即時有核（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｎｕｃｌｅａｔｅｄ）前駆体）として対象に見出される細胞ではない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、小胞体、ゴルジ体、ミトコンドリア、リボソーム、プロテアソーム、またはスプライソソームからなる群から選択される１または複数の構成成分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、以下の特徴：接着、トンネルナノチューブ形成、アクチン媒介型伝播（２Ｄおよび／または３Ｄ）、移動、化学遊走物質勾配感知、ミトコンドリア輸送、ｍＲＮＡ翻訳、タンパク質合成、ならびにエキソソームおよび／または他の生体活性分子の分泌のうち１または複数を特徴とする。いくつかの実施形態では、（例えば、エキソソームを使用して）細胞質体は、タンパク質を分泌する能力を特徴とする。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ｅｘ ｖｉｖｏで除核されている。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで除核されている。いくつかの実施形態では、細胞質体は、（例えば、遠心分離により）物理的に除核されている。いくつかの実施形態では、細胞質体は、操作された除核細胞である。いくつかの実施形態では、細胞質体は赤血球ではない。いくつかの実施形態では、細胞質体はヘモグロビンを含有しない。いくつかの実施形態では、細胞質体は両凹形状を呈さない。
【0054】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、赤芽細胞から得られない。いくつかの実施形態では、細胞質体は、赤血球（ＲＢＣ）にならない細胞から得られる。ＲＢＣと異なり、細胞質体は、多くの活性な生物学的プロセスおよび細胞小器官（例えばＥＲ／ゴルジ、ミトコンドリア、核内体、リソソーム、細胞骨格など）すべてを保持できる、生細胞様の実体であり得る。このため、細胞質体は、有核細胞のように機能し、接着、トンネルナノチューブ形成、アクチン媒介型伝播（２Ｄおよび３Ｄ）、移動、化学遊走物質勾配感知、ミトコンドリア輸送、ｍＲＮＡ翻訳、タンパク質合成、ならびにエキソソームおよび／または他の生体活性分子の分泌などの重要な生体機能を呈することができる。これらの機能のうち１または複数は、ＲＢＣにより提示されない場合がある。赤芽細胞から得られるＲＢＣと比較して、細胞質体は、ｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）、あらゆる不死化細胞、幹細胞、初代細胞（宿主由来細胞）、細胞株、あらゆる免疫細胞、癌細胞を含むがこれらに限定されないあらゆるタイプの有核細胞、あるいはあらゆる真核細胞から得ることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、リンパ性始原細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、リンパ球から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、（例えば、骨髄由来の）間葉系幹細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、内皮幹細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、神経幹細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、皮膚幹細胞から得られる。
【0055】
Ｂ．病原体
本明細書に記載の細胞質体、およびこの細胞質体を含有する組成物は、いくつかの実施形態では、病原体を標的とするおよび／または死滅させるか、あるいはその他の方法で病原体を実行不能なものとする生体分子（例えば、ワクチン、治療薬、標的化部分）を含む。いくつかの実施形態では、病原体は、細菌、ウイルス、真菌、または毒素である。いくつかの実施形態では、病原体は自然発生のものである。いくつかの実施形態では、病原体は合成されたものである。
本明細書に記載の細胞質体、およびこの細胞質体を含有する組成物は、いくつかの実施形態では、病原体を標的とするおよび／または死滅させるか、あるいはその他の方法で病原体を実行不能なものとする生体分子（例えば、ワクチン、治療薬、標的化部分）を含む。いくつかの実施形態では、病原体は、細菌、ウイルス、真菌、または毒素である。いくつかの実施形態では、病原体は自然発生のものである。いくつかの実施形態では、病原体は合成されたものである。
【0056】
いくつかの実施形態では、病原体はウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは、動物ウイルス、植物ウイルス、細菌ウイルス、または古細菌ウイルスである。いくつかの実施形態では、動物ウイルスは、同じまたは異なる動物に疾患または疾病を生じさせる。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ＲＮＡウイルスまたはＤＮＡウイルスである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡまたはＤＮＡウイルスは、一本鎖または二本鎖である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡウイルスは、プラス鎖またはマイナス鎖のウイルスである。
【0057】
いくつかの実施形態では、二本鎖ウイルス（ｄｓＤＮＡ）ウイルスは、以下の科：ミオウイルス科、ポドウイルス科、サイフォウイルス科、アロヘルペスウイルス科、ヘルペスウイルス科、マラコヘルペスウイルス科、リポスリクスウイルス科、ルディウイルス科、アデノウイルス科、アムプラウイルス科（Ａｍｐｕｌｌａｖｉｒｉｄａｅ）、アスコウイルス科、アスファウイルス科、バキュロウイルス科、ビカウダウイルス科、クラバウイルス科（Ｃｌａｖａｖｉｒｉｄａｅ）、コルチコウイルス科、フセロウイルス科、グロブロウイルス科、グッタウイルス科、ヒトロサウイルス科（Ｈｙｔｒｏｓａｖｉｒｉｄａｅ）、イリドウイルス科、マルセイユウイルス科、ミミウイルス科、ニマウイルス科、パンドラウイルス科、パピローマウイルス科、フィコドナウイルス科、プラズマウイルス科、ポリドナウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、スファエロリポウイルス科（Ｓｐｈａｅｒｏｌｉｐｏｖｉｒｉｄａｅ）、およびテクティウイルス科に由来する。
【0058】
いくつかの実施形態では、一本鎖（ｓｓＤＮＡ）ウイルスは、以下の科：アネロウイルス科、バシラリオドナウイルス科（Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ビドナウイルス科（Ｂｉｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、サーコウイルス科、ジェミニウイルス科、イノウイルス科、ミクロウイルス科、ナノウイルス科、パルボウイルス科、およびスピラウイルス科（Ｓｐｉｒａｖｉｒｉｄａｅ）に由来する。
【0059】
ｓｓとｄｓ両方のＤＮＡ領域を含有するＤＮＡウイルスは、ポリオウイルスの群に由来し得る。いくつかの実施形態では、ポリオウイルスとして、Ｈａｌｏａｒｃｕｌａ ｈｉｓｐａｎｉｃａ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｇｅｏｍｅｔｒｉｃｕｍ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス２、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス３、およびＨａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス６が挙げられる。
【0060】
いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡウイルスは、以下の科：ビルナウイルス科、クリソウイルス科、シストウイルス科、エンドルナウイルス科、ハイポウイルス科、メガビルナウイルス科、パルティティウイルス科、ピコビルナウイルス科、レオウイルス科、ロタウイルス科、およびトティウイルス科に由来する。
【0061】
いくつかの実施形態では、プラス鎖ｓｓＲＮＡウイルスは、以下の科：アルファフレキシウイルス科、アルファテトラウイルス科、アルベルナウイルス科、アルテリウイルス科、アストロウイルス科、バルナウイルス科、ベータフレキシウイルス科、ブロモウイルス科、カリチウイルス科、カルモテトラウイルス科、クロステロウイルス科、コロナウイルス科、ジシストロウイルス科、フラビウイルス科、ガンマフレキシウイルス科、イフラウイルス科、レヴィウイルス科、ルテオウイルス科、マルナウイルス科、メソニウイルス科、ナルナウイルス科、ノダウイルス科、ペルムトテトラウイルス科、ピコルナウイルス科、ポチウイルス科、ロニウイルス科、セコウイルス科、トガウイルス科、トンブスウイルス科、ティモウイルス科、およびビルガウイルス科に由来する。
【0062】
いくつかの実施形態では、マイナス鎖ｓｓＲＮＡウイルスは、以下の科：ボルナウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ラプドウイルス科、ニヤミウイルス科、アレナウイルス科、ブンヤウイルス科、オフィオウイルス科、およびオルソミクソウイルス科に由来する。
【0063】
ウイルスの非限定的な例として、以下が挙げられる：エーベルソン白血病ウイルス、エーベルソンマウス白血病ウイルス、エーベルソンウイルス、急性喉頭気管気管支炎ウイルス、アデレードリバーウイルス、アデノ関連ウイルス群、アデノウイルス、アフリカウマ症ウイルス、アフリカ豚熱ウイルス、ＡＩＤＳウイルス、アリューシャンミンク病パルボウイルス、アルファレトロウイルス、アルファウイルス、ＡＬＶ関連ウイルス、アマパリウイルス、アフトウイルス、アクアレオウイルス、アルボウイルス、アルボウイルス群Ｃ、アルボウイルス群Ａ、アルボウイルス群Ｂ、アレナウイルス群、アルゼンチン出血熱ウイルス、アルゼンチン出血熱ウイルス、アルテリウイルス、アストロウイルス、クモザルヘルペスウイルス群、オーエスキー病ウイルス、アウラウイルス、Ａｕｓｄｕｋ病ウイルス、オーストラリアバットリッサウイルス、アビアデノウイルス、トリ赤芽球症ウイルス、トリ伝染性気管支炎ウイルス、トリ白血病ウイルス、トリ白血症ウイルス、トリリンパ腫症ウイルス、トリ骨髄芽細胞症ウイルス、トリパラミクソウイルス、トリ肺脳炎ウイルス、トリ網内皮症ウイルス、トリ肉腫ウイルス、トリＣ型レトロウイルス群、アビヘパドナウイルス、アビポックスウイルス、Ｂウイルス、Ｂ１９ウイルス、ババンキウイルス、ヒヒヘルペスウイルス、バキュロウイルス、バーマフォレストウイルス、ベバルウイルス、ベリマー（Ｂｅｒｒｉｍａｈ）ウイルス、ベータレトロウイルス、ビルナウイルス、ビトナーウイルス、ＢＫウイルス、ブラッククリークカナルウイルス、ブルータングウイルス、ボリビア出血熱ウイルス、ボルナ病（Ｂｏｍａ ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス、ヒツジボーダー病ウイルス、ボルナウイルス、ウシアルファヘルペスウイルス１、ウシアルファヘルペスウイルス２、ウシコロナウイルス、ウシ流行熱ウイルス、ウシ免疫不全ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ウシ白血症ウイルス、ウシ乳頭炎ウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、ウシ丘疹性口内炎ウイルス、ウシパルボウイルス、ウシ多核体ウイルス、ウシＣ型オンコウイルス、ウシウイルス性下痢症ウイルス、バギークリーク（Ｂｕｇｇｙ Ｃｒｅｅｋ）ウイルス、弾丸形状ウイルス群、ブニヤムウェラウイルスの超群（ｓｕｐｅｒｇｒｏｕｐ）、ブンヤウイルス、バーキットリンパ腫ウイルス、ブワンバ熱、ＣＡウイルス、カリチウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、ラクダ痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌコロナウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌ微小ウイルス、イヌパルボウイルス、カーニョ・デルガディト（Ｃａｎｏ Ｄｅｌｇａｄｉｔｏ）ウイルス、ヤギ関節炎ウイルス、ヤギ脳炎ウイルス、ヤギヘルペスウイルス、ヤギポックスウイルス、カルジオウイルス、テンジクネズミ科ヘルペスウイルス１、サルヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス２、チャンディプラウイルス、チャンギノラウイルス、アメリカナマズウイルス、チャールビルウイルス、水痘ウイルス、チクングニヤウイルス、チンパンジーヘルペスウイルス、ウグイレオウイルス、シロザケウイルス、球菌ウイルス、ギンザケレオウイルス、媾疹ウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、コルチウイルス、コロンビアＳＫウイルス、カゼウイルス、伝染性膿瘡ウイルス、伝染性膿胞性皮膚炎ウイルス、コロナウイルス、コリパルタウイルス、鼻風邪ウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、ＣＰＶ（細胞質多角体病ウイルス）、クリケット麻痺（ｃｒｉｃｋｅｔ ｐａｒａｌｙｓｉｓ）ウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、偽膜性喉頭炎随伴ウイルス、クリプトウイルス、サイポウイルス、サイトメガロウイルス、サイトメガロウイルス群、細胞質多角体病ウイルス、シカ乳頭腫ウイルス、デルタレトロウイルス、デング熱ウイルス、デンソウイルス、デペンドウイルス、ドーリウイルス、ディプロマ（ｄｉｐｌｏｍａ）ウイルス、Ｃ型ショウジョウバエウイルス、Ｂ型アヒル肝炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス１、アヒル肝炎ウイルス２、デュオウイルス（ｄｕｏｖｉｒｕｓ）、デュベンヘイジウイルス、変形翼ウイルス（Ｄｅｆｏｒｍｅｄ ｗｉｎｇ ｖｉｒｕｓ）ＤＷＶ、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ＥＢウイルス、エボラウイルス、エボラ様ウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス１０、エコーウイルス２８、エコーウイルス９、エクトロメリアウイルス、ＥＥＥウイルス、ＥＩＡウイルス、ＥＩＡウイルス、脳炎ウイルス、脳心筋炎群ウイルス、脳心筋炎ウイルス、エンテロウイルス、酵素上昇ウイルス、酵素上昇ウイルス（ＬＤＨ）、流行性出血熱ウイルス、伝染性出血性疾患ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ウマアルファヘルペスウイルス１、ウマアルファヘルペスウイルス４、ウマヘルペスウイルス２、ウマ流産ウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ウマ大脳症ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス、ウマモルビリウイルス、ウマ鼻腔肺炎ウイルス、ウマリノウイルス、ユーベナンジーウイルス、ヨーロッパエルク乳頭腫ウイルス、ヨーロッパ豚コレラウイルス、エバーグレーズウイルス、アイア（Ｅｙａｃｈ）ウイルス、ネコヘルペスウイルス１、ネコカリチウイルス、ネコ線維肉腫ウイルス、ネコヘルペスウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ白血病／肉腫ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコパルボウイルス、ネコ肉腫ウイルス、ネコ多核体ウイルス、フィロウイルス、フランダースウイルス、フラビウイルス、口蹄疫ウイルス、フォートモーガンウイルス、フォーコーナーズ・ハンタウイルス、家禽アデノウイルス１、鶏痘ウイルス、フレンドウイルス、ガンマレトロウイルス、ＧＢ肝炎ウイルス、ＧＢウイルス、風疹ウイルス、ゲタウイルス、テナガザル白血病ウイルス、腺熱ウイルス、ヤギ痘ウイルス、ゴールデンシャイナーウイルス、ゴノメタ（Ｇｏｎｏｍｅｔａ）ウイルス、ガチョウパルボウイルス、顆粒病ウイルス、グロスウイルス、リスＢ型肝炎ウイルス、Ａ群アルボウイルス、グアナリトウイルス、モルモットサイトメガロウイルス、モルモットＣ型ウイルス、ハンタンウイルス、ハンタウイルス、ボンビノスガイレオウイルス（ｈａｒｄ ｃｌａｍ ｒｅｏｖｉｒｕｓ）、野兎線維腫ウイルス、ＨＣＭＶ（ヒトサイトメガロウイルス）、赤血球吸着ウイルス２、日本血球凝集性ウイルス、出血熱ウイルス、ヘンドラウイルス、ヘニパウイルス、ヘパドナウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス群、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス、肝炎ウイルス、肝炎ウイルス（非ヒト）、肝因性脳脊髄炎レオウイルス３、ヘパトウイルス、アオサギＢ型肝炎ウイルス、Ｂ型ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、ヘルペスウイルス、ヘルペスウイルス７、ヘルペスウイルス・アテレス、ヘルペスウイルス・ホミニス、ヘルペスウイルス感染症、ヘルペスウイルス・サイミリ、ヘルペスウイルス・スイス、水痘・帯状疱疹ウイルス、高地Ｊウイルス（Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ Ｊ ｖｉｒｕｓ）、ヒラメラブドウイルス、ブタコレラウイルス、ヒトアデノウイルス２、ヒトアルファヘルペスウイルス１、ヒトアルファヘルペスウイルス２、ヒトアルファヘルペスウイルス３、Ｂ型ヒトリンパ向性ウイルス、ヒトベータヘルペスウイルス５、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス群、ヒトフォーミーウイルス、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトガンマヘルペスウイルス６、ヒトＡ型肝炎ウイルス、ヒトヘルペスウイルス１群、ヒトヘルペスウイルス２群、ヒトヘルペスウイルス３群、ヒトヘルペスウイルス４群、ヒト疱疹ウイルス６、ヒト疱疹ウイルス８、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１、ヒト免疫不全ウイルス２、ヒトパピローマウイルス、ヒトＴ細胞白血球ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩＩ、ヒトＴ細胞リンパ腫ウイルスＩ、ヒトＴ細胞リンパ腫ウイルスＩＩ、１型ヒトＴリンパ球好性ウイルス、２型ヒトＴリンパ球好性ウイルス、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩ、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩＩ、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩＩＩ、イクノウイルス、幼児胃腸炎ウイルス、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、伝染性造血性壊死ウイルス、伝染性膵臓壊死症ウイルス、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、インフルエンザウイルスＤ、インフルエンザウイルスｐｒ８、昆虫イリデツセント（ｉｎｓｅｃｔ ｉｒｉｄｅｓｃｅｎｔ）ウイルス、昆虫ウイルス、イリドウイルス、日本Ｂウイルス、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ケメロボウイルス、キラムラットウイルス、クラマスウイルス、コロンゴ（Ｋｏｌｏｎｇｏ）ウイルス、韓国型出血熱ウイルス、クンバ（ｋｕｍｂａ）ウイルス、キャヌサール森林病ウイルス、キジラガッチ（Ｋｙｚｙｌａｇａｃｈ）ウイルス、ラクロスウイルス、乳酸デヒドロゲナーゼ上昇ウイルス、乳酸脱水素酵素ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ラングールウイルス、ウサギパルボウイルス、ラッサ熱ウイルス、ラッサウイルス、潜伏性ラットウイルス、ＬＣＭウイルス、リーキー（Ｌｅａｋｙ）ウイルス、レンチウイルス、レポリポックスウイルス、白血病ウイルス、ロイコウイルス、ランピースキン病ウイルス、リンパ節腫関連ウイルス、リンホクリプトウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、リンパ増殖性ウイルス群、マチュポウイルス、狂犬病恐怖症ウイルス、Ｂ型哺乳動物オンコウイルス群、Ｂ型哺乳動物レトロウイルス、Ｃ型哺乳動物レトロウイルス群、Ｄ型哺乳動物レトロウイルス、乳癌ウイルス、マプエラウイルス、マールブルグウイルス、マールブルク様ウイルス、マソンファイザーサルウイルス、マストアデノウイルス、マヤロウイルス、ＭＥウイルス、麻疹ウイルス、メナングルウイルス、メンゴウイルス、メンゴウイルス、ミデルビュルフウイルス、授乳者小結節ウイルス、ミンク腸炎ウイルス、マウスの微小ウイルス、ＭＬＶ関連ウイルス、ＭＭウイルス、モコラウイルス、モルシポックスウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サルＢウイルス、サル痘ウイルス、モノネガウイルス、モルビリウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、マウスサイトメガロウイルス、マウス脳脊髄炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウスＫウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス乳癌ウイルス、マウス微小ウイルス、マウス肺炎ウイルス、マウスポリオウイルス、マウスポリオーマウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス痘ウイルス、モザンビークウイルス、ムカンボウイルス、粘膜病ウイルス、ムンプスウイルス、マウスベータヘルペスウイルス１、マウスサイトメガロウイルス２、マウスサイトメガロウイルス群、マウス脳脊髄炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス小結節誘導ウイルス、マウスポリオーマウイルス、マウス肉腫ウイルス、ムロメガロウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、ミキソーマウイルス、ミクソウイルス、ミクソウイルスの多形、耳下腺炎ミクソウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス、ナイロウイルス、ナニルナウイルス（Ｎａｎｉｒｎａｖｉｒｕｓ）、ナリバ（Ｎａｒｉｖａ）ウイルス、ヌドゥムウイルス、ニースリングウイルス、ネルソンベイウイルス、神経向性ウイルス、ニューワールドアレナウイルス、新生児肺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、非細胞病原性ウイルス、ノーウォークウイルス、核多角体病ウイルス（ＮＰＶ）、ニップルネックウイルス、オニョンニョンウイルス、オケルボ（Ｏｃｋｅｌｂｏ）ウイルス、腫瘍形成性ウイルス、腫瘍形成性ウイルス様粒子、オンコルナウイルス、オルビウイルス、オルフウイルス、オロポーシェウイルス、オルトヘパドナウイルス、オルトミクソウイルス、オルトポックスウイルス、オルトレオウイルス、オルンゴ（Ｏｒｕｎｇｏ）、ヒツジパピローマウイルス、ヒツジカ
タル熱ウイルス、フクロウ・サル・ヘルペスウイルス、パリアムウイルス、パピローマウイルス、ウサギパピローマウイルス（Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、パポバウイルス、パラインフルエンザウイルス、１型パラインフルエンザウイルス、２型パラインフルエンザウイルス、３型パラインフルエンザウイルス、４型パラインフルエンザウイルス、パラミクソウイルス、パラポックスウイルス、パラワクシニアウイルス、パルボウイルス、パルボウイルスＢ１９、パルボウイルス群、ペスチウイルス、フレボウイルス、アザラシジステンパーウイルス、ピコドナウイルス、ピコルナウイルス、ブタサイトメガロウイルス－鳩痘ウイルス、ピリウイルス、ピクスナウイルス、マウス肺炎ウイルス、肺炎ウイルス、灰白脊髄炎ウイルス、ポリオウイルス、ポリドナウイルス、多角性ウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス・ボビス、ポリオーマウイルス・セルコピテシ、ポリオーマウイルス・ホミニス（ｈｏｍｉｎｉｓ）２、ポリオーマウイルス・マカセア（ｍａｃｃａｃａｅ）１、ポリオーマウイルス・ムリス（ｍｕｒｉｓ）１、ポリオーマウイルス・ムリス２、ポリオーマウイルス・パピオニス（ｐａｐｉｏｎｉｓ）１、ポリオーマウイルス・パピオニス２、ポリオーマウイルス・シルビラジ（ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、オランウータンヘルペスウイルス１、ブタ伝染性下痢ウイルス、ブタ血球凝集脳脊髄炎ウイルス、ブタパルボウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ブタＣ型ウイルス、ポックスウイルス、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、プロスペクトヒルウイルス、プロウイルス、偽牛痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、オウム痘（ｐｓｉｔｔａｃｉｎｅｐｏｘ）ウイルス、ウズラ痘（ｑｕａｉｌｐｏｘ）ウイルス、ウサギ線維腫ウイルス、ウサギ腎臓空胞化ウイルス、ウサギパピローマウイルス、狂犬病ウイルス、アライグマパルボウイルス、アライグマポックスウイルス、ラニケットウイルス、ラットサイトメガロウイルス、ラットパルボウイルス、ラットウイルス、ローシャーウイルス、組換え型ワクシニアウイルス、組替え型ウイルス、レオウイルス、レオウイルス１、レオウイルス２、レオウイルス３、爬虫類Ｃ型ウイルス、呼吸器感染症ウイルス、呼吸系発疹ウイルス、呼吸系ウイルス、細網内皮症ウイルス、ラブドウイルス、ラブドウイルス・カルピア（ｃａｒｐｉａ）、ラジノウイルス、ライノウイルス、リジディオウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ライリーウイルス、牛疫ウイルス、ＲＮＡ腫瘍ウイルス、ロスリバーウイルス、ロタウイルス、麻疹（ｒｏｕｇｅｏｌｅ）ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ルベラウイルス、ルベオラウイルス、ルビウイルス、ロシア秋脳炎ウイルス、ＳＡ １１シミアンウイルス、ＳＡ２ウイルス、サビアウイルス、サギヤマウイルス、サイミリンヘルペスウイルス１、唾液腺ウイルス、パパタシ熱ウイルス群、サンジンバ（Ｓａｎｄｊｉｍｂａ）ウイルス、ＳＡＲＳウイルス、ＳＤＡＶ（唾液腺炎ウイルス）、シールポックス（ｓｅａｌｐｏｘ）ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、ソウルウイルス、ヒツジ痘ウイルス、ショープ線維腫ウイルス、ショープ乳頭腫ウイルス、シミアンフォーミーウイルス、シミアンＡ型肝炎ウイルス、シミアン・ヒト免疫不全ウイルス、シミアン免疫不全ウイルス、シミアンパラインフルエンザウイルス、シミアンＴ細胞リンパ増殖性ウイルス、シミアンウイルス、シミアンウイルス４０、単純ウイルス、シンノンブルウイルス、シンドビスウイルス、天然痘ウイルス、南アメリカ出血熱ウイルス、スズメ痘ウイルス、スプマウイルス、リス線維腫ウイルス、リスザルレトロウイルス、ＳＳＶ １ウイルス群、Ｉ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、丘疹性口炎ウイルス、顎下腺ウイルス、ブタアルファヘルペスウイルス１、ブタヘルペスウイルス２、スイポックスウイルス、沼地熱ウイルス、ブタ痘ウイルス、スイスマウス白血病ウイルス、ＴＡＣウイルス、タカリベウイルス群、タカリベウイルス、タナ痘ウイルス、タテラポックス（Ｔａｔｅｒａｐｏｘ）ウイルス、テンチレオウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、タイラーウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤム（Ｔｈｏｔｔａｐａｌａｙａｍ）ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、チオマンウイルス、トガウイルス、トロウイルス、腫瘍ウイルス、ツパイウイルス、七面鳥鼻気管炎ウイルス、七面鳥痘ウイルス、Ｃ型レトロウイルス、Ｄ型オンコウイルス、Ｄ型レトロウイルス群、潰瘍性疾患ラブドウイルス、ウナウイルス、ウークニエミウイルス群、ワクシニアウイルス、空胞形成ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、バリセロウイルス、バリコラ（Ｖａｒｉｃｏｌａ）ウイルス、大痘瘡ウイルス、痘瘡ウイルス、ウアシン・ギシュウー病ウイルス、ＶＥＥウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ベシクロウイルス、ビリュイスクウイルス、クサリヘビレトロウイルス、ウイルス性造血性敗血症ウイルス、ビスナマエディウイルス、ビスナウイルス、ハタネズミ痘（ｖｏｌｅｐｏｘ）ウイルス、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）、ウォーラルウイルス、ウォリゴウイルス、疣ウイルス、ＷＥＥウイルス、西ナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ワタロアウイルス、冬季嘔吐ウイルス、ウッドチャックＢ型肝炎ウイルス、ウーリーモンキー肉腫ウイルス、創傷腫瘍ウイルス、ＷＲＳＶウイルス、ヤーバサル腫瘍ウイルス、ヤーバウイルス、ヤタポックスウイルス、黄熱ウイルス、およびユグボグダノヴァツ（Ｙｕｇ Ｂｏｇｄａｎｏｖａｃ）ウイルス。
タル熱ウイルス、フクロウ・サル・ヘルペスウイルス、パリアムウイルス、パピローマウイルス、ウサギパピローマウイルス（Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、パポバウイルス、パラインフルエンザウイルス、１型パラインフルエンザウイルス、２型パラインフルエンザウイルス、３型パラインフルエンザウイルス、４型パラインフルエンザウイルス、パラミクソウイルス、パラポックスウイルス、パラワクシニアウイルス、パルボウイルス、パルボウイルスＢ１９、パルボウイルス群、ペスチウイルス、フレボウイルス、アザラシジステンパーウイルス、ピコドナウイルス、ピコルナウイルス、ブタサイトメガロウイルス－鳩痘ウイルス、ピリウイルス、ピクスナウイルス、マウス肺炎ウイルス、肺炎ウイルス、灰白脊髄炎ウイルス、ポリオウイルス、ポリドナウイルス、多角性ウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス・ボビス、ポリオーマウイルス・セルコピテシ、ポリオーマウイルス・ホミニス（ｈｏｍｉｎｉｓ）２、ポリオーマウイルス・マカセア（ｍａｃｃａｃａｅ）１、ポリオーマウイルス・ムリス（ｍｕｒｉｓ）１、ポリオーマウイルス・ムリス２、ポリオーマウイルス・パピオニス（ｐａｐｉｏｎｉｓ）１、ポリオーマウイルス・パピオニス２、ポリオーマウイルス・シルビラジ（ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、オランウータンヘルペスウイルス１、ブタ伝染性下痢ウイルス、ブタ血球凝集脳脊髄炎ウイルス、ブタパルボウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ブタＣ型ウイルス、ポックスウイルス、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、プロスペクトヒルウイルス、プロウイルス、偽牛痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、オウム痘（ｐｓｉｔｔａｃｉｎｅｐｏｘ）ウイルス、ウズラ痘（ｑｕａｉｌｐｏｘ）ウイルス、ウサギ線維腫ウイルス、ウサギ腎臓空胞化ウイルス、ウサギパピローマウイルス、狂犬病ウイルス、アライグマパルボウイルス、アライグマポックスウイルス、ラニケットウイルス、ラットサイトメガロウイルス、ラットパルボウイルス、ラットウイルス、ローシャーウイルス、組換え型ワクシニアウイルス、組替え型ウイルス、レオウイルス、レオウイルス１、レオウイルス２、レオウイルス３、爬虫類Ｃ型ウイルス、呼吸器感染症ウイルス、呼吸系発疹ウイルス、呼吸系ウイルス、細網内皮症ウイルス、ラブドウイルス、ラブドウイルス・カルピア（ｃａｒｐｉａ）、ラジノウイルス、ライノウイルス、リジディオウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ライリーウイルス、牛疫ウイルス、ＲＮＡ腫瘍ウイルス、ロスリバーウイルス、ロタウイルス、麻疹（ｒｏｕｇｅｏｌｅ）ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ルベラウイルス、ルベオラウイルス、ルビウイルス、ロシア秋脳炎ウイルス、ＳＡ １１シミアンウイルス、ＳＡ２ウイルス、サビアウイルス、サギヤマウイルス、サイミリンヘルペスウイルス１、唾液腺ウイルス、パパタシ熱ウイルス群、サンジンバ（Ｓａｎｄｊｉｍｂａ）ウイルス、ＳＡＲＳウイルス、ＳＤＡＶ（唾液腺炎ウイルス）、シールポックス（ｓｅａｌｐｏｘ）ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、ソウルウイルス、ヒツジ痘ウイルス、ショープ線維腫ウイルス、ショープ乳頭腫ウイルス、シミアンフォーミーウイルス、シミアンＡ型肝炎ウイルス、シミアン・ヒト免疫不全ウイルス、シミアン免疫不全ウイルス、シミアンパラインフルエンザウイルス、シミアンＴ細胞リンパ増殖性ウイルス、シミアンウイルス、シミアンウイルス４０、単純ウイルス、シンノンブルウイルス、シンドビスウイルス、天然痘ウイルス、南アメリカ出血熱ウイルス、スズメ痘ウイルス、スプマウイルス、リス線維腫ウイルス、リスザルレトロウイルス、ＳＳＶ １ウイルス群、Ｉ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、丘疹性口炎ウイルス、顎下腺ウイルス、ブタアルファヘルペスウイルス１、ブタヘルペスウイルス２、スイポックスウイルス、沼地熱ウイルス、ブタ痘ウイルス、スイスマウス白血病ウイルス、ＴＡＣウイルス、タカリベウイルス群、タカリベウイルス、タナ痘ウイルス、タテラポックス（Ｔａｔｅｒａｐｏｘ）ウイルス、テンチレオウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、タイラーウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤム（Ｔｈｏｔｔａｐａｌａｙａｍ）ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、チオマンウイルス、トガウイルス、トロウイルス、腫瘍ウイルス、ツパイウイルス、七面鳥鼻気管炎ウイルス、七面鳥痘ウイルス、Ｃ型レトロウイルス、Ｄ型オンコウイルス、Ｄ型レトロウイルス群、潰瘍性疾患ラブドウイルス、ウナウイルス、ウークニエミウイルス群、ワクシニアウイルス、空胞形成ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、バリセロウイルス、バリコラ（Ｖａｒｉｃｏｌａ）ウイルス、大痘瘡ウイルス、痘瘡ウイルス、ウアシン・ギシュウー病ウイルス、ＶＥＥウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ベシクロウイルス、ビリュイスクウイルス、クサリヘビレトロウイルス、ウイルス性造血性敗血症ウイルス、ビスナマエディウイルス、ビスナウイルス、ハタネズミ痘（ｖｏｌｅｐｏｘ）ウイルス、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）、ウォーラルウイルス、ウォリゴウイルス、疣ウイルス、ＷＥＥウイルス、西ナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ワタロアウイルス、冬季嘔吐ウイルス、ウッドチャックＢ型肝炎ウイルス、ウーリーモンキー肉腫ウイルス、創傷腫瘍ウイルス、ＷＲＳＶウイルス、ヤーバサル腫瘍ウイルス、ヤーバウイルス、ヤタポックスウイルス、黄熱ウイルス、およびユグボグダノヴァツ（Ｙｕｇ Ｂｏｇｄａｎｏｖａｃ）ウイルス。
【0064】
いくつかの実施形態では、ウイルスはコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、アルファコロナウイルス、ベータコロナウイルス、デルタコロナウイルス、およびガンマコロナウイルスからなる群から選択することができる。アルファコロナウイルスの例として、コウモリコロナウイルスＣＤＰＨＥ１５、コウモリコロナウイルスＨＫＵ１０、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ、ヒトコロナウイルスＮＬ６３、ユビナガコウモリコロナウイルス１、ユビナガコウモリコロナウイルスＨＫＵ８、ミンクコロナウイルス１、ブタ伝染性下痢ウイルス、キクガシラコウモリコロナウイルスＨＫＵ２、およびスコトフィラスコウモリコロナウイルス５１２を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ベータコロナウイルスの例として、ベータコロナウイルス１、ハリネズミコロナウイルス１、ヒトコロナウイルスＨＫＵ１、中東呼吸器症候群関連コロナウイルス、マウスコロナウイルス、アブラコウモリコロナウイルスＨＫＵ５、ルーセットコウモリコロナウイルスＨＫＵ９、重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス、タケコウモリコロナウイルスＨＫＵ４を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。デルタコロナウイルスの例として、ヒヨドリコロナウイルスＨＫＵ１１、バンコロナウイルスＨＫＵ２１、コロナウイルスＨＫＵ１５、キンパラ（Ｍｕｎｉａ）コロナウイルスＨＫＵ１３、ゴイサギコロナウイルスＨＫＵ１９、ツグミコロナウイルスＨＫＵ１２、メジロコロナウイルスＨＫＵ１６、ヒドリガモコロナウイルスＨＫＵ２０を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ガンマコロナウイルスの例として、鳥類コロナウイルス、ベルーガコロナウイルスＳＷ１を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。コロナウイルスのさらなる例として、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を挙げることができる。いくつかの実施形態では、コロナウイルスはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。
【0065】
いくつかの実施形態では、病原体は、人から人へと伝播しやすい、または伝染しやすく、死亡率が高く、公衆衛生に多大な影響が及ぶ可能性があり、公衆のパニックと社会混乱を引き起こし、公衆衛生の警戒態勢に特別な活動が必要となるおそれがある。これら病原体の例として、炭疽（バチルス・アントラシス）、ボツリスム（クロストリジウム・ボツリヌム毒素）、ペスト（エルシニア・ペスチス）、天然痘（大痘瘡）、野兎病（フランシセラ・ツラレンシス）、またはフィロウイルス（エボラ、マールブルク）やアレナウイルス（ラッサ、マチュポ）を含むウイルス性出血熱を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【0066】
いくつかの実施形態では、病原体は、中等度に伝播しやすく、罹病率が中等度で死亡率が低く、診断性能の特異的な向上と疾患監視の向上が必要となるおそれがある。これら病原体の例として、ブルセラ症（ブルセラ菌種）、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、食品安全性脅威（例えば、サルモネラ菌種、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、または赤痢菌）、鼻疽（バークホルデリア・マレイ）、類鼻疽（バークホルデリア・シュードマレイ）、オウム病（クラミジア・シタッシ）、Ｑ熱（コクシエラ・ブルネッティ）、トウゴマ（ヒマの種子）由来のリシン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、発疹チフス（リケッチア・プロワツェキイ）、ウイルス脳炎（東部ウマ脳炎、ベネズエラウマ脳炎、西部ウマ脳炎などのアルファウイルス）、または水安全性脅威（例えば、コレラ菌およびクリプトスポリジウム・パルバム）を挙げることができる。
【0067】
いくつかの実施形態では、病原体は、まだ同定されていない配列を有する新たな病原体である。いくつかの実施形態では、新たな病原体には、罹患率と死亡率が高く、健康に多大な影響を及ぼす可能性がある。これら病原体の例として、ニパウイルスやハンタウイルスを挙げることができる。
【0068】
いくつかの実施形態では、病原体は毒素を含む可能性がある。いくつかの実施形態では、毒素は、本明細書に記載の病原体のうちいずれか１つにより分泌される可能性がある。
【0069】
いくつかの実施形態では、病原体は細菌を含む。いくつかの実施形態では、細菌はグラム陽性細菌の場合がある。いくつかの実施形態では、細菌はグラム陰性細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ｓ－ラクタマーゼに耐性を呈する株である。いくつかの実施形態では、抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、志賀毒素産生大腸菌（ＳＴＥＣ）、カンピロバクター・ジェジュニ、シュードモナス・エルジノーサ、アシネトバクター・バウマンニ、ストレプトコッカス・ミュータンス、ヘリコバクター・ピロリ、またはバチルス・アントラシスから得られる。
【0070】
病原体、および、本明細書に記載の除核細胞、組成物、もしくは医薬組成物により処置可能なこれら病原体に関連する疾患または疾病の例示的な列記は、表３～表６に見出すことができる。
【0071】
【表1】
【0072】
【表2】
【0073】
【表3】
【0074】
【表4】
【0075】
Ｃ．活性薬剤
本開示の細胞質体は、抗ウイルス組成物（例えば、病原体に対するワクチン、中和抗体）などの活性薬剤を発現するか、これを含有する。活性薬剤は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質（例えば、酵素、抗体、抗原、毒素、サイトカイン、タンパク質ホルモン、成長因子、細胞表面受容体、またはワクチン）、治療用ペプチド（例えば、ペプチドホルモンまたは抗原）、小分子活性薬剤（例えば、ステロイド、ポリケチド、アルカロイド、毒素、抗生物質、抗ウイルス剤、コルヒチン、タキソール、マイトマイシン、またはエムタンシン）、および治療用遺伝子編集因子のうち少なくとも１つを含むことができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、または治療用遺伝子編集成分のうち少なくとも１つを産生する（例えば、発現する、いくつかの実施形態では分泌する）ように操作することができる。代替的に、または付加的に、有核細胞（本明細書で使用するとき、「親」細胞）は、細胞質体への除核前に、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子活性薬剤、および遺伝子編集因子のうち少なくとも１つを産生するように操作される場合がある。
本開示の細胞質体は、抗ウイルス組成物（例えば、病原体に対するワクチン、中和抗体）などの活性薬剤を発現するか、これを含有する。活性薬剤は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質（例えば、酵素、抗体、抗原、毒素、サイトカイン、タンパク質ホルモン、成長因子、細胞表面受容体、またはワクチン）、治療用ペプチド（例えば、ペプチドホルモンまたは抗原）、小分子活性薬剤（例えば、ステロイド、ポリケチド、アルカロイド、毒素、抗生物質、抗ウイルス剤、コルヒチン、タキソール、マイトマイシン、またはエムタンシン）、および治療用遺伝子編集因子のうち少なくとも１つを含むことができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、治療用小分子、または治療用遺伝子編集成分のうち少なくとも１つを産生する（例えば、発現する、いくつかの実施形態では分泌する）ように操作することができる。代替的に、または付加的に、有核細胞（本明細書で使用するとき、「親」細胞）は、細胞質体への除核前に、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子活性薬剤、および遺伝子編集因子のうち少なくとも１つを産生するように操作される場合がある。
【0076】
治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子活性薬剤、または治療用遺伝子編集因子は、標的化部分を含むことができる。細胞質体により産生されるか細胞質体に含まれる可能性のある標的化部分の非限定的な例として、ケモカイン受容体、接着分子、および抗原が挙げられる。
【0077】
本開示の細胞質体は対象に投与される場合があり、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質（例えば、酵素、抗体、抗原、毒素、サイトカイン、タンパク質ホルモン、成長因子、細胞表面受容体、ワクチン、または現在利用可能か開発中であるあらゆる治療用タンパク質）、治療用ペプチド（例えば、ペプチドホルモンもしくは抗原、または現在利用可能か開発中であるあらゆる治療用ペプチド）、小分子活性薬剤（例えば、ステロイド、ポリケチド、アルカロイド、毒素、抗生物質、抗ウイルス剤、鎮痛剤、抗凝固剤、抗うつ薬、抗癌薬、抗てんかん薬、抗精神病薬、鎮静剤、コルヒチン、タキソール、マイトマイシン、エムタンシン、または現在利用可能か開発中であるあらゆる小分子活性薬剤）、治療用遺伝子編集因子、治療用ナノ粒子、または他の活性薬剤（例えば、細菌、細菌胞子、バクテリオファージ、細菌成分、ウイルス（例えば、腫瘍溶解性ウイルス）、エキソソーム、脂質、またはイオン）を含有する場合がある。腫瘍溶解性ウイルスの非限定的な例として、タリモジーン・ラハーパレプベック、Ｏｎｙｘ－０１５、ＧＬ－ＯＮＣ１、ＣＶ７０６、Ｖｏｙａｇｅｒ－Ｖ１、およびＨＳＶ－１７１６が挙げられる。一部の野生型ウイルスはさらに、ワクシニアウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ポリオウイルス、レオウイルス、セネカウイルス、ＥＣＨＯ－７、セムリキ森林ウイルスなどの腫瘍溶解性挙動を呈する。
【0078】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、組換え発現される。いくつかの実施形態では、細胞質体が由来するか得られる細胞は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子のうち１または複数を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体が由来するか得られる細胞は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子のうち１または複数を安定して（例えば、恒久的に）発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体が由来するか得られる細胞は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子のうち１または複数を一時的に発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体が由来するか得られる細胞は、除核前に操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子の１または複数を一時的に発現するように操作される（例えば、除核後に操作される）。
【0079】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、細胞質体が由来するか得られる細胞において自然に（例えば、操作なしに）発現されない（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、細胞質体に対し外因性である）。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象において自然に発現されない（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象に対し外因性である）。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象における意図した治療部位（例えば、腫瘍、または脳、腸管、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、筋肉、眼などの特定の組織）には自然に発現されない（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、意図した治療部位に対し外因性である）。
【0080】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、細胞質体が由来するか得られる細胞において自然に（例えば、操作なしに）発現される（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、細胞質体に対し先天的に内因性である）（例えば、細胞質体が由来するか得られる細胞の操作がない状態で）。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象において自然に発現される（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象に対し内因性である）。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、対象における意図した治療部位（例えば、腫瘍、または脳、腸管、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、筋肉、眼などの特定の組織）に自然に発現される（例えば、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、意図した治療部位に対し内因性である）。
【0081】
いくつかの実施形態では、治療用の例えばＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子は、合成細胞から得られて細胞質体に充填される。
【0082】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体が由来するか得られる細胞と比較して、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、タンパク質、ペプチド、小分子活性薬剤、および／または遺伝子編集因子に対して調整されるか、トランケートされるか、または変異なしのバージョンおよび／もしくはコピーを発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、あらゆる有核細胞（例えば、真核細胞、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、または本明細書に記載のあらゆる哺乳動物細胞）、原生動物細胞（例えば、アメーバ細胞）、藻細胞、植物細胞、真菌細胞、無脊椎動物細胞、魚類細胞、両生類細胞、爬虫類細胞、または鳥類細胞）から得られる。
【0083】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、あらゆる組合せで少なくとも２つ（例えば少なくとも２、３、４、または５つ以上）の異なる治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子活性薬剤、または治療用遺伝子編集因子を産生するか、含有する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体は、治療用ＤＮＡ分子および小分子活性薬剤を産生するか、含有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体は、２の異なる小分子活性薬剤を産生するか、含有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体は、ケモカイン受容体（例えば、標的化用）および小分子活性薬剤を産生するか、含有することができる。
【0084】
いくつかの実施形態では、治療用ＲＮＡ分子は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、長鎖ノンコーディングＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、またはＲＮＡウイルスである。いくつかの実施形態では、治療用ＤＮＡ分子は、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド、プラスミド、細菌ＤＮＡ分子、またはＤＮＡウイルスである。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、サイトカイン、成長因子、ホルモン、抗体、小ペプチド系薬物、または酵素である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、および／または治療用遺伝子編集因子を一時的に発現する。いくつかの実施形態では、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、および／または治療用遺伝子編集因子の発現は、誘導可能である。いくつかの実施形態では、有核細胞は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、および／または治療用遺伝子編集因子を発現するように恒久的に操作される。いくつかの実施形態では、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、および／または治療用遺伝子編集因子の発現。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、細胞質体は、活性薬剤またはナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、活性薬剤は、小分子、細菌、またはエキソソームである。
【0085】
治療用細胞の全身投与において、病変組織へのホーミングを完遂させるのに２つの主要な問題が存在する。先ず、細胞の大半は、肺または他の組織にある小さな毛細管に捕捉される場合があり、これにより肺塞栓症などの重篤な副作用が生じるおそれがある。いくつかの実施形態では、細胞質体は、その親細胞よりも遥かに小さく（例えば、親細胞の約６０％の直径、１／８の体積）、強固な核を有していないため、細胞質体は、その親細胞よりも良好に、小さな毛細管および管を通過することができる。次に、病変組織への細胞の特異的なホーミングは、ＳＤＦ－１α／ＣＸＣＲ４、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２、およびＰＳＧＬ－１などの接着分子といったケモカイン受容体シグナル伝達に依存する可能性がある。本明細書に示すように、細胞質体は、機能的なＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２のほか、グリコシル化ＰＳＧＬ－１を特異的に発現するように操作することができ、こうして操作された細胞質体の特異的なホーミングを大いに促進することができる。
【0086】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の細胞表面に発現される標的化部分（例えばＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＰＳＧＬ－１）を（例えば、細胞質体が得られる細胞を操作することにより、またはその細胞から）さらに含むことができる。細胞質体の細胞表面に発現され得る細胞表面タンパク質の非限定的な例として、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ１などのケモカインを含む。ホーミング受容体として細胞質体の細胞表面に発現可能な細胞表面タンパク質の他の例として、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組合せを挙げることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体により分泌されるか、または細胞外マトリクス、例えばＳＤＦ１αやＣＣＬ２に固定される細胞標的化部分を（例えば、細胞質体が得られる細胞を操作することにより、またはその細胞から）さらに含むことができる。細胞ホーミングにおいて細胞質体により分泌され得るタンパク質の非限定的な例として、ＳＤＦ１α、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ１１、およびＣＸＣＬ１２が挙げられる。標的化部分は、細胞質体を標的細胞、標的組織、または標的環境に向ける場合がある。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ケモカイン／ケモカイン受容体感知に基づき細胞質体を配向する。いくつかの実施形態では、標的化部分は、直接の結合に基づき細胞質体を配向する。例えば、標的化部分は、標的細胞により発現される抗原に結合し得る抗体を含む場合がある。
【0087】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、以下からなる群から選択されるサイトカインのうち少なくとも１つを発現および／または分泌することができる：４－１ＢＢＬ、アシル化刺激タンパク質、アディポカイン、アルブインターフェロン、ＡＰＲＩＬ、Ａｒｈ、ＢＡＦＦ、Ｂｃｌ－６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１／ＴＣＡ３、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２／ＭＣＰ－５、ＣＣＬ１３／ＭＣＰ－４、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２／ＭＣＰ－１、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２／ＭＤＣ、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ４Ｌ１／ＬＡＧ－１、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１７８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＤ７０、ＣＤ９５Ｌ／ＣＤ１７８、Ｃｅｒｂｅｒｕｓ（タンパク質）、ケモカイン、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、コロニー刺激因子、共通ｂ鎖（ＣＤ１３１）、共通ｇ鎖（ＣＤ１３２）、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ２／ＭＩＰ－２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＥＤＡ－Ａ１、Ｅｐｏ、エリスロポエチン、ＦＡＭ１９Ａ１、ＦＡＭ１９Ａ２、ＦＡＭ１９Ａ３、ＦＡＭ１９Ａ４、ＦＡＭ１９Ａ５、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド、Ｆｏｘｐ３、ＧＡＴＡ－３、ＧｃＭＡＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＩＴＲＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、肝細胞増殖因子、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５／ＩＦＮａＧ、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＺ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮω／ＩＦＮＷ１、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ファミリー、ＩＬ－１０様、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１４、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７ファミリー、ＩＬ－１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－１Ａ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１Ｆ３／ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１Ｆ５、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１様、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－１ＲＬ２、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－３、ＩＬ－３１、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－６様、ＩＬ－７、ＩＬ－８／ＣＸＣＬ８、ＩＬ－９、インフラマソーム、インターフェローム、インターフェロン、インターフェロンβ－１ａ、インターフェロンβ－１ｂ、インターフェロンγ、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、インターフェロン、インターロイキン、インターロイキン１受容体アンタゴニスト、インターロイキン８、ＩＲＦ４、レプチン、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、白血球促進因子、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＡ／ＴＮＦＢ、ＬＴ－β、リンホカイン、リンホトキシン、リンホトキシンα、リンホトキシンβ、マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージ炎症タンパク質、マクロファージ活性化因子、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＨＣクラスＩＩＩ、様々なヘマトポエチン、モノカイン、ＭＳＰ、ミオカイン、ミオネクチン、ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、オプレルベキン、ＯＸ４０Ｌ、血小板因子４、プロメガポエチン、ＲＡＮＫＬ、ＳＣＦ、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ６、間質細胞由来因子１、ＴＡＬＬ－１、ＴＢＸ２１、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１２、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－β、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＮＣＥ、ＴＷＥＡＫ、血管内皮成長阻害薬、ＸＣＬ１、またはＸＣＬ２。
【0088】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、少なくとも１つのサイトカインを発現および／または分泌して、骨髄性細胞、Ｔ細胞、例えばαβ細胞傷害性Ｔ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、肥満細胞、内皮細胞、線維芽細胞、または様々な間質細胞のうちいずれか１つの生体活性を調節することができる。
【0089】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、対象の免疫系における回避を補助する表面マーカーを（例えば、細胞質体が得られる細胞を操作することにより、またはその細胞から）さらに含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体はＣＤ４７マーカーを含むことができる。いかなる特定の理論にも縛られるものではないが、ＣＤ４７マーカーは、細菌がマクロファージにより貪食されるのを防止するのを助けると考えられている。細胞マトリクス受容体および細胞間接着分子の非限定的な例として、インテグリン、カドヘリン、糖タンパク質、およびヘパリン硫酸プロテオグリカンが挙げられる。治療用分子の非限定的な例として、腫瘍抗原および免疫修飾のペプチド、ポリアミン、ならびにＡＴＰが挙げられる。
【0090】
１．ワクチン組成物
本明細書中のいくつかの実施形態では、ワクチン組成物である活性薬剤を発現または送達するように操作される細胞質体が記載される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物をコードする核酸分子は、本明細書に記載の方法を使用して、細胞質体またはその親細胞へと導入される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、対応する親細胞に対し内因的な細胞機構（例えば、ｍＲＮＡ翻訳機構、タンパク質合成）を使用して、細胞質体中で発現される。対象に投与された後、いくつかの実施形態では、細胞質体は、ワクチン組成物を細胞外空間へと分泌するために、対応する親細胞の内因的なタンパク質分泌機構を利用する。細胞質体はさらに、ワクチン組成物が分泌される対象の標的組織（例えば、肺、リンパ）に特異的なホーミング受容体により操作される場合がある。細胞質体はさらに、本明細書に記載の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、あるいはサイトカインまたはその受容体のうちいずれか１つなどの免疫系活性化剤を発現するように操作される場合がある。
本明細書中のいくつかの実施形態では、ワクチン組成物である活性薬剤を発現または送達するように操作される細胞質体が記載される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物をコードする核酸分子は、本明細書に記載の方法を使用して、細胞質体またはその親細胞へと導入される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、対応する親細胞に対し内因的な細胞機構（例えば、ｍＲＮＡ翻訳機構、タンパク質合成）を使用して、細胞質体中で発現される。対象に投与された後、いくつかの実施形態では、細胞質体は、ワクチン組成物を細胞外空間へと分泌するために、対応する親細胞の内因的なタンパク質分泌機構を利用する。細胞質体はさらに、ワクチン組成物が分泌される対象の標的組織（例えば、肺、リンパ）に特異的なホーミング受容体により操作される場合がある。細胞質体はさらに、本明細書に記載の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、あるいはサイトカインまたはその受容体のうちいずれか１つなどの免疫系活性化剤を発現するように操作される場合がある。
【0091】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、病原体の抗原に対抗する。抗原の非限定的な例として、天然配列を含むタンパク質、天然もしくは非天然アミノ酸を含むおよび／またはグリコシル化、パルミトイル化、ミリストイル化などの修飾を伴うポリペプチド、ならびに天然もしくは非天然塩基を含む核酸が挙げられる。病原体は、哺乳動物に感染症を引き起こすあらゆる細菌、ウイルス、または真菌の可能性がある。いくつかの実施形態では、病原体はウイルスの可能性がある。いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、ウイルスタンパク質、ウイルスタンパク質のフラグメント、またはウイルスタンパク質もしくはウイルスタンパク質のフラグメントをコードする核酸から調製することができる。いくつかの実施形態では、ワクチンは、本明細書に記載のウイルスの不活性化バージョンを含む。いくつかの実施形態では、ワクチンは、本明細書に記載のウイルスの生弱毒化バージョンを含む。生弱毒ウイルスは、いくつかの実施形態では、生存しているが複製が不足しているウイルスである。生弱毒ウイルスは、他の場合では、生存しているが伝染性でないウイルスである。
【0092】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体を含むワクチンは、ワクチン組成物を含む細胞質体の対象への投与後、対象に適応免疫反応を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のワクチンは、ウイルスによる感染症に対して対象を免疫化するか、ウイルスによる感染症により生じる疾患または疾病の重症度を低減するのに十分な適応免疫反応を誘導する。
【0093】
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に開示される病原体のウイルス抗原に対するワクチン組成物を発現するように操作された細胞質体が提供される。ウイルスは、ＤＮＡウイルスまたはＲＮＡウイルスの可能性がある。ＤＮＡウイルスは、一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス、二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス、またはｓｓとｄｓ両方のＤＮＡ領域を含有するＤＮＡウイルスの可能性がある。ＲＮＡウイルスは、一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡウイルスまたは二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡウイルスの可能性がある。ｓｓＲＮＡウイルスは、プラス鎖ＲＮＡウイルスまたはマイナス鎖ＲＮＡウイルスへとさらに分類することができる。
【0094】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、インフルエンザのあらゆる属、株、またはサブタイプによりコードされるインフルエンザタンパク質に対し、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。例示的なインフルエンザ属として、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、およびインフルエンザウイルスＤを挙げることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体は、赤血球凝集素（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）のインフルエンザウイルスタンパク質の組合せを呈するように操作できる。本明細書に記載の細胞質体により発現可能なインフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）として、ＨＡサブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、またはＨ１８を挙げることができる。本明細書に記載の細胞質体により発現可能なインフルエンザノイラミニダーゼ（ＮＡ）として、ＮＡサブタイプＮ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、Ｎ５、Ｎ６、Ｎ７、Ｎ８、Ｎ９、Ｎ１０、またはＮ１１を挙げることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体は、本明細書に記載のＨＡおよびＮＡのサブタイプのうちいずれか１つの組合せを発現することができる。１つの細胞質体により発現可能な例示的な組合せとして、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ１Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、またはＨ６Ｎ１を挙げることができる。他のさらなる例示的な組合せとして、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ３、Ｈ１Ｎ４、Ｈ１Ｎ５、Ｈ１ＮＧ、Ｈ１Ｎ７、Ｈ１Ｎ８、Ｈ１Ｎ９、Ｈ１Ｎ１０、Ｈ１Ｎ１１、Ｈ２Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ２Ｎ３、Ｈ２Ｎ４、Ｈ２Ｎ５、Ｈ２ＮＧ、Ｈ２Ｎ７、Ｈ２Ｎ８、Ｈ２ＮＢ、Ｈ２Ｎ１Ｄ、Ｈ２Ｎ１１、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ３、Ｈ３Ｎ４、Ｈ３Ｎ５、Ｈ３ＮＢ、Ｈ３Ｎ７、Ｈ３Ｎ８、Ｈ３ＮＢ、Ｈ３Ｎ１Ｄ、Ｈ３Ｎ１１、Ｈ４Ｎ１、Ｈ４Ｎ２、Ｈ４Ｎ３、Ｈ４Ｎ４、Ｈ４Ｎ５、Ｈ４ＮＢ、Ｈ４Ｎ７、Ｈ４Ｎ８、Ｈ４Ｎ９、Ｈ４Ｎ１０、Ｈ４Ｎ１１、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ４、Ｈ５Ｎ５、Ｈ５ＮＢ、Ｈ５Ｎ７、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ３、Ｈ５Ｎ１Ｄ、Ｈ５Ｎ１１、ＨＢＮ１、ＨＢＮ２、ＨＢＮ３、ＨＢＮ４、ＨＢＮ５、ＨＢＮＢ、ＨＢＮ７、ＨＢＮ８、ＨＢＮ９、ＨＢＮ１０、ＨＢＮ１１、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ４、Ｈ７Ｎ５、Ｈ７ＮＢ、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ８、Ｈ７Ｎ９、Ｈ７Ｎ１０、Ｈ７Ｎ１１、Ｈ８Ｎ１、Ｈ８Ｎ２、Ｈ８Ｎ３、Ｈ８Ｎ４、Ｈ８Ｎ５、Ｈ８ＮＧ、Ｈ８Ｎ７、Ｈ８Ｎ８、５ Ｈ８Ｎ９、Ｈ８Ｎ１０、ＨＢＮ１１、ＨＢＮ１、Ｈ９Ｎ２、ＨＢＮ３、Ｈ９Ｎ４、Ｈ３Ｎ５、Ｈ３Ｎ７、Ｈ３Ｎ８、Ｈ３Ｎ３、Ｈ９Ｎ１Ｄ、ＨＢＮ１１、Ｈ１ＤＮ１、Ｈ１０Ｎ２、Ｈ１ＤＮ３、Ｈ１ＤＮ４、Ｈ１ＤＮ５、Ｈ１ＤＮＧ、Ｈ１ＤＮ７、Ｈ１ＤＮ８、Ｈ１ＤＮ３、Ｈ１０Ｎ１０、Ｈ１ＤＮ１１、Ｈ１１Ｎ１、Ｈ１１Ｎ２、Ｈ１１Ｎ３、Ｈ１１Ｎ４、Ｈ１１Ｎ５、ＨＵＮＧ、Ｈ１１Ｎ７、ＨＵＮＳ、Ｈ１１ＮＳ、Ｈ１１Ｎ１０、Ｈ１１Ｎ１１、Ｈ１２Ｎ１、Ｈ１２Ｎ２、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ４、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１２ＮＢ、Ｈ１２Ｎ７、Ｈ１２Ｎ８、Ｈ１２Ｎ３、Ｈ１２Ｎ１Ｄ、Ｈ１２Ｎ１１、Ｈ１３Ｎ１、Ｈ１３Ｎ２、Ｈ１３Ｎ３、Ｈ１３Ｎ４、Ｈ１３Ｎ５、Ｈ１３ＮＢ、Ｈ１３Ｎ７、Ｈ１３Ｎ８、Ｈ１３Ｎ３、Ｈ１３Ｎ１Ｄ、Ｈ１３Ｎ１１、Ｈ１４Ｎ１、Ｈ１４Ｎ２、Ｈ１４Ｎ３、Ｈ１４Ｎ４、Ｈ１４Ｎ５、Ｈ１４ＮＢ、Ｈ１４Ｎ７、Ｈ１４Ｎ８、Ｈ１４Ｎ９、Ｈ１４Ｎ１０、Ｈ１４Ｎ１１、Ｈ１５Ｎ１、Ｈ１５Ｎ２、Ｈ１５Ｎ３、Ｈ１５Ｎ４、Ｈ１５Ｎ５、Ｈ１５ＮＢ、Ｈ１５Ｎ７、Ｈ１５Ｎ８、Ｈ１５Ｎ３、Ｈ１５Ｎ１Ｄ、Ｈ１５Ｎ１１、Ｈ１ＢＮ１、Ｈ１ＢＮ２、Ｈ１ＢＮ３、Ｈ１ＢＮ４、Ｈ１ＢＮ５、Ｈ１ＢＮＢ、Ｈ１ＢＮ７、Ｈ１ＢＮ８、Ｈ１ＧＮ３、Ｈ１ＢＮ１０、Ｈ１ＢＮ１１、Ｈ１７Ｎ１、Ｈ１７Ｎ２、Ｈ１７Ｎ３、Ｈ１７Ｎ４、Ｈ１７Ｎ５、Ｈ１７ＮＢ、Ｈ１７Ｎ７、Ｈ１７Ｎ８、Ｈ１７Ｎ３、Ｈ１７Ｎ１０、Ｈ１７Ｎ１１、Ｈ１ＢＮ１、Ｈ１８Ｎ２、Ｈ１８Ｎ３、Ｈ１８Ｎ４、Ｈ１８Ｎ５、Ｈ１ＢＮＢ、Ｈ１８Ｎ７、Ｈ１８Ｎ８、Ｈ１８Ｎ３、Ｈ１ＢＮ１０、またはＨ１ＢＮ１１を挙げることができる。
【0095】
本明細書中のいくつかの実施形態では、細菌抗原に対するワクチン組成物を発現するように操作された細胞質体が提供される。いくつかの実施形態では、細菌抗原は、炭疽（バチルス・アントラシス）、ボツリスム（クロストリジウム・ボツリナム毒素）、ペスト（エルシニア・ペスチス）、野兎病（フランシセラ・ツラレンシス）、ブルセラ症（ブルセラ菌種）、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、サルモネラ菌種、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌、鼻疽（バークホルデリア・マレイ）、類鼻疽（バークホルデリア・シュードマレイ）、オウム病（クラミジア・シタッシ）、Ｑ熱（コクシエラ・ブルネッティ）、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、発疹チフス（リケッチア・プロワツェキイ）、ビブリオ・コレラエ、クリプトスポリジウム・パルバムから得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、トウゴマ（ヒマの種子）由来のリシン毒素に対するワクチン組成物を発現するように操作される。
【0096】
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に開示される腫瘍抗原に対するワクチン組成物を発現するように操作された細胞質体が提供される。「腫瘍抗原」は、本明細書で使用するとき、癌細胞により産生される抗原を表す。本開示に使用される、癌細胞または腫瘍細胞の非限定的な例として、棘細胞腫、小葉癌、聴神経腫、末端性黒子性黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、成熟を伴う急性骨髄芽球白血病、急性骨髄性樹状細胞白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、アダマンチノーム、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連性癌、ＡＩＤＳ関連性リンパ腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル芽細胞線維腫、肛門癌、未分化大細胞リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂癌、星細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、基底様癌、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ベリニ管癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、ブレンナー腫瘍、気管支腫瘍、細気管支肺胞上皮癌、褐色腫、バーキットリンパ腫、原発部位不明の癌、カルチノイド腫瘍、癌腫、上皮内癌、陰茎癌腫、原発部位不明の癌腫、癌肉腫、カストルマン病、中枢神経系胚芽腫、小脳星状細胞腫、大脳星細胞腫、子宮頚癌、肝内胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、慢性リンパ性白血病、慢性単球性白血病、慢性骨髄性白血病細胞、慢性骨髄増殖性疾患、慢性好中球性白血病、明細胞腫瘍、結腸癌、大腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、デゴス病、隆起性皮膚線維肉腫、類皮嚢胞、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、胎児性癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜癌、子宮内膜子宮癌、子宮内膜性腫瘍、腸疾患関連性Ｔ細胞性リンパ腫、上衣芽細胞腫、上衣腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道癌、感覚神経芽腫、腫瘍のユーイングファミリー、ユーイングファミリー肉腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、乳腺外ページェット病、ファロピウス管癌、封入奇形胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、胆嚢癌、胆嚢癌、神経細胞神経膠腫、節神経腫、胃癌、胃リンパ腫、消化器系癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、胚細胞腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性絨毛腫瘍、骨巨細胞腫、多形神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠腫症、グロムス腫瘍、グルカゴノーマ、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫、ヘアリー細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、頭頚部癌、頭頚部癌、心臓癌、血管芽細胞腫、血管周皮腫、血管肉腫、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、遺伝性乳房卵巣癌症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、下咽頭癌、視床下部神経膠腫、炎症性乳癌、眼球内黒色腫、島細胞癌、島細胞腫、若年性骨髄単球性白血病、カポジ肉腫、カポジ肉腫（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、腎臓癌、クラッツキン腫瘍、クルッケンベルク腫瘍、喉頭癌、喉頭癌、悪性黒子型黒色腫、白血病、白血病、口唇・口腔癌、脂肪肉腫、肺癌、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性ラブドイド腫瘍、悪性トリトン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞腫瘍、縦隔腫瘍、骨髄甲状腺癌、髄芽腫、髄芽腫、髄様上皮腫、黒色腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞腫、中皮腫、中皮腫、原発不明の転移性頸部扁平上皮癌、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、単球性白血病、口腔癌、ムチン性腫瘍、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、骨髄異形成疾患、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性肉腫、骨髄増殖性疾患、粘液腫、鼻腔癌、上咽頭癌、上咽頭癌腫、新生物、ノイリノーマ、神経芽細胞腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節型黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫性皮膚癌、非小細胞肺癌、眼腫瘍、乏突起星細胞腫、乏突起神経膠腫、膨大細胞腫、視神経鞘髄膜腫、口腔癌、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵巣性胚細胞腫瘍、低悪性度卵巣癌、乳房のパジェット病、パンコースト腫瘍、膵臓癌、膵臓癌、乳頭状甲状腺癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭癌、クロム親和性細胞腫、中間型松果体実質腫瘍、松果体芽腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍、胸膜肺芽腫、多胚腫、前駆体Ｔ－リンパ芽球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、原発性肝細胞性癌、原発性肝臓癌、原発性腹膜癌、原始神経上皮腫瘍、前立腺癌、腹膜偽性粘液腫、直腸癌、腎細胞癌、染色体１５上のＮＵＴ遺伝子に関与する気道癌腫、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒター形質転換、仙尾部奇形腫、唾液腺癌、肉腫、神経鞘腫症、脂腺癌、続発性新生物、精上皮腫、漿液性腫瘍、セルトリ－ライディッヒ細胞腫、性器索間質腫瘍、セザリー症候群、シグネット環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、小腸癌、軟部組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性疣贅、脊髄腫瘍、脊椎腫瘍、脾辺縁帯リンパ腫、扁平上皮癌、胃癌、表在拡大型黒色腫、テント上原始神経上皮腫瘍、表層上皮性間質性腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞大顆粒リンパ球白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞性リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、奇形腫、末梢リンパ腺癌（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、莢膜腫、喉頭癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行性細胞癌、移行性細胞癌、尿膜管癌、尿管癌、泌尿生殖器腫瘍、子宮肉腫、ブドウ膜黒色腫、膣癌、ヴァーナー－モリソン症候群、疣状癌、視神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、ならびにそれらの組合せを含む癌の細胞を挙げることができる。いくつかの実施形態では、標的とされた癌細胞は、癌幹細胞などの癌細胞集団内に部分集団を表す。いくつかの実施形態では、癌はリンパ腫などの造血系統である。いくつかの実施形態では、癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、または他のあらゆる肺癌の種類を含む肺癌であってよい。例えば、肺癌として、腺癌、扁平上皮癌、大細胞（未分化）癌腫、大細胞神経内分泌腫瘍、腺扁平上皮癌、肉腫様癌、肺カルチノイド、または腺様嚢胞癌を挙げることができる。他の例示的な肺癌として、リンパ腫、肉腫、良性肺腫瘍、または過誤腫を挙げることができる。
【0097】
ａ．抗原
本明細書中のいくつかの実施形態では、細胞質体により発現される少なくとも１つの抗原またはその部分を含む細胞質体が記載される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、癌細胞により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、病原体により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ウイルスにより発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、細菌により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、真菌により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドによりコードすることができ、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ウイルスベクターまたはプラスミドを含んでよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織に異種ポリヌクレオチドを送達する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原を含むか少なくとも１つの抗原をコードする異種ポリヌクレオチドを含む細胞質体は、本明細書に記載されるワクチンの部分であってよい。
本明細書中のいくつかの実施形態では、細胞質体により発現される少なくとも１つの抗原またはその部分を含む細胞質体が記載される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、癌細胞により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、病原体により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ウイルスにより発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、細菌により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、真菌により発現または放出される抗原の場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドによりコードすることができ、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ウイルスベクターまたはプラスミドを含んでよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織に異種ポリヌクレオチドを送達する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原を含むか少なくとも１つの抗原をコードする異種ポリヌクレオチドを含む細胞質体は、本明細書に記載されるワクチンの部分であってよい。
【0098】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原またはその部分は、癌細胞とともに発現されるか癌細胞に付随する癌抗原であってよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上で少なくとも１つの癌抗原を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、少なくとも１つの癌抗原を放出または分泌する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの癌抗原は、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的細胞または組織に少なくとも１つの癌抗原を送達する。癌抗原は、本明細書に記載の癌細胞のうちいずれか１つにより発現される場合がある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体が対象に投与されると、細胞質体により発現または放出される癌抗原は、免疫応答（例えばＢ細胞活性化）を誘発するのに十分な場合がある。
【0099】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、少なくとも１つの癌抗原またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、１００００個以上の癌抗原を含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、癌細胞により発現されるかそれに付随する抗原のペプチジル配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。
【0100】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、１００００個以上の抗原を含む。いくつかの実施形態では、抗原は、本明細書に記載の抗原のペプチジル配列に対して約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、抗原またはその部分は、約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸の間のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、抗原またはその部分は約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸の間の、アミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個の、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、多くとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、少なくとも約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、少なくとも約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸の、アミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、抗原またはその部分は、少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最低で少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個の、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最低で多くとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、抗原またはその部分は、多くとも約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、多くとも約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２００個のアミ
ノ酸、約２５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸の、アミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、多くとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最大で少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個の、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最大で多くとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸長さを含む。
ノ酸、約２５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約１，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約２，０００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸～約５，０００個のアミノ酸の、アミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、多くとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最大で少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個の、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、または約２，０００個のアミノ酸のアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、癌抗原は、最大で多くとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、または約５，０００個のアミノ酸長さを含む。
【0101】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上で抗原を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、抗原を放出または分泌する。いくつかの実施形態では、抗原は、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的細胞または組織に抗原を送達する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体が対象に投与されると、細胞質体により発現または放出される抗原は、免疫応答（例えばＢ細胞活性化）を誘発するのに十分な場合がある。
【0102】
いくつかの実施形態では、抗原またはその部分は、癌抗原である。いくつかの実施形態では、癌抗原は、癌細胞へと導入される病原体抗原である。例えば、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのスパイクタンパク質を癌細胞へ導入するように操作可能である。このようなシナリオでは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対してワクチン接種を受けた対象は、癌細胞を標的とし死滅させることが可能な適応免疫系を獲得することになる。いくつかの実施形態では、癌抗原は、ベクター（細胞質体へと充填される）として腫瘍溶解性ウイルスを利用することにより癌細胞へと導入されて、ｍＲＮＡを癌細胞へ導入することができる。
【0103】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、病原体抗原であってよい。いくつかの実施形態では、病原体抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、または毒素抗原である。抗原は、本明細書に記載されるもののうちいずれか１つ（例えば、表３～表６の病原体のうちいずれか１つ）により発現される場合がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原は、ウイルス抗原であってよい。ウイルス抗原は、本明細書に記載のウイルス（例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の抗原であってよい。いくつかの実施形態では、抗原はコロナウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、コロナウイルスのスパイクタンパク質（Ｓタンパク質）またはそのフラグメントである少なくとも１つのウイルス抗原を含む。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、単量体または三量体であってよい。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質は、融合前に安定化したスパイクタンパク質である。いくつかの実施形態では、コロナウイルスはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
【0104】
いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、配列番号１または８に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含むウイルス抗原は、全体が本明細書に引用されるＳｉｌｖａ Ｆｉｌｉｐｅ，Ａ．、Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，Ｊ．Ｇ．、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｔらによる「Ｇｅｎｏｍｉｃ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｒｅｖｅａｌｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｆｒｏｍ ｍａｉｎｌａｎｄ Ｅｕｒｏｐｅ ｉｎｔｏ Ｓｃｏｔｌａｎｄ． Ｎａｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ６，１１２－１２２（２０２１）」に記載されるような少なくとも１つの突然変異または変異を含む。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含むウイルス抗原は、配列番号２に関連してＡｓｐ６１４Ｇｌｙを含む少なくとも１つの突然変異を含む。
【0105】
いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、少なくとも５個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、２５個のアミノ酸、５０個のアミノ酸、１００個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体の表面に発現される。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により分泌される。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体のカーゴである。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、対象に免疫応答を誘導可能である。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症への適応免疫を誘導し、それを与えることができる。いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を処置または予防することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上でスパイクタンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、スパイクタンパク質を分泌する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織にスパイクタンパク質を送達する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上にスパイクタンパク質を発現し、スパイクタンパク質を分泌し、および／または標的組織にスパイクタンパク質を送達する。
【0106】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）またはＮタンパク質のフラグメントである少なくとも１つのウイルス抗原を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、配列番号９に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、少なくとも５個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、２５個のアミノ酸、５０個のアミノ酸、１００個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体の表面に発現される。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により分泌される。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体のカーゴである。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、対象に免疫応答を誘導可能である。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症への適応免疫を誘導し、それを与えることができる。いくつかの実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を処置または予防することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上でヌクレオキャプシドタンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ヌクレオカプシドタンパク質を分泌する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織にヌクレオカプシドタンパク質を送達する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上にヌクレオカプシドタンパク質を発現し、ヌクレオカプシドタンパク質を分泌し、および／または標的組織にヌクレオカプシドタンパク質を送達する。
【0107】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、膜タンパク質（Ｍタンパク質）またはＮタンパク質のフラグメントである少なくとも１つのウイルス抗原を含む。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、配列番号１０に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、少なくとも５個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、２５個のアミノ酸、５０個のアミノ酸、１００個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体の表面に発現される。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により分泌される。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体のカーゴである。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、対象に免疫応答を誘導可能である。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症への適応免疫を誘導し、それを与えることができる。いくつかの実施形態では、膜タンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を処置または予防することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上で膜タンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、膜タンパク質を分泌する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織に膜タンパク質を送達する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上に膜タンパク質を発現し、膜タンパク質を分泌し、および／または標的組織に膜タンパク質を送達する。
【0108】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、エンベロープタンパク質（Ｅ）またはＮタンパク質のフラグメントである少なくとも１つのウイルス抗原を含む。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、配列番号１１に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントのウイルス抗原は、少なくとも５個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、２５個のアミノ酸、５０個のアミノ酸、１００個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸長さを含む。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体の表面に発現される。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により分泌される。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体のカーゴである。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントは、細胞質体により標的組織に送達される。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、対象に免疫応答を誘導可能である。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症への適応免疫を誘導し、それを与えることができる。いくつかの実施形態では、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントを含む細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を処置または予防することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上でエンベロープタンパク質を発現する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、エンベロープタンパク質を分泌する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、標的組織にエンベロープタンパク質を送達する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上にエンベロープタンパク質を発現し、エンベロープタンパク質を分泌し、および／または標的組織にエンベロープタンパク質を送達する。
【0109】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、配列番号４～７のいずれか１つのフラグメントに対し少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、配列番号４～７のいずれか１つのフラグメントに対し１００％同一の核酸配列によりコードされる少なくとも１つのウイルス抗原を含む。
【0110】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、コロナウイルス変異体から得られる。いくつかの実施形態では、コロナウイルス変異体抗原は、配列番号４０１～４４７もしくは５５１～５６２のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コロナウイルス変異体抗原は、配列番号３０１～３４７もしくは５０１～５１２のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コロナウイルス変異体から得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてコロナウイルス変異体による感染症に対する免疫性を与えるか、またはコロナウイルス変異体により生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0111】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、鳥類コロナウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、鳥類コロナウイルス抗原は、配列番号２５１～２６０のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、鳥類コロナウイルス抗原は、配列番号２０１～２０９のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、鳥類コロナウイルスから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象において鳥類コロナウイルスによる感染症に対する免疫性を与えるか、または鳥類コロナウイルスにより生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0112】
いくつかの実施形態では、抗原はエボラウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、抗原は、エボラウイルス糖タンパク質、マトリクスタンパク質、核タンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質（例えば、ＶＰ３０、ＶＰ３５、もしくはＶＰ２４）、またはポリメラーゼ（Ｌ）タンパク質に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、鳥類抗原は、配列番号２５１～２６０のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、鳥類抗原は、配列番号２０１～２０９のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、鳥類から得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象において鳥類による感染症に対する免疫性を与えるか、または鳥類により生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0113】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、ハンタウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、抗原は、ハンタウイルスポリメラーゼに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であり、Ｍセグメントは２つのウイルス表面糖タンパク質（ＧｎおよびＧｃ）に対して前駆体（ＧＰＣ）をコードし、Ｓセグメントはヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、抗原は、配列番号１５１～１５４のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原は、配列番号１０１～１０４のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ハンタウイルスから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてハンタウイルスによる感染症に対する免疫性を与えるか、またはハンタウイルスにより生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0114】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）から得られる。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、配列番号６５１～６６０のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ抗原は、配列番号６０１～６１０のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＶから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてＨＩＶによる感染症に対する免疫性を与えるか、またはＨＩＶにより生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0115】
いくつかの実施形態では、ウイルス抗原は、ＲＳＶメンフィス３７などの呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）から得られる。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ抗原は、配列番号７５１～７６１のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶ抗原は、配列番号７０１～７１１のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてＲＳＶによる感染症に対する免疫性を与えるか、またはＲＳＶにより生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0116】
いくつかの実施形態では、細胞質体は複数のウイルス抗原を含むことができ、このウイルス抗原は同じものである（例えば、ウイルス抗原としてスパイクタンパク質のみを含む細胞質体）。いくつかの実施形態では、細胞質体は複数のウイルス抗原を含むことができ、このウイルス抗原は異なるものである。例えば、細胞質体は、スパイクタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、膜タンパク質、またはエンベロープタンパク質の組合せを含むウイルス抗原を含むことができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面に発現され、細胞質体により封入され、および／または細胞質体により分泌され得るウイルス抗原の組合せを含むことができる。
【0117】
いくつかの実施形態では、抗原は細菌から得られる。細菌はグラム陽性細菌の場合がある。いくつかの実施形態では、細菌はグラム陰性細菌である。いくつかの実施形態では、細菌は、ｓ－ラクタマーゼに耐性を呈する株である。いくつかの実施形態では、抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、志賀毒素産生大腸菌（ＳＴＥＣ）、カンピロバクター・ジェジュニ、シュードモナス・エルジノーサ、アシネトバクター・バウマンニ、ストレプトコッカス・ミュータンス、ヘリコバクター・ピロリ、またはバチルス・アントラシスから得られる。
【0118】
いくつかの実施形態では、細菌抗原は、バチルス・アントラシス（例えば炭疽）から得られる。いくつかの実施形態では、細菌抗原は、保護抗原（ＰＡ）および２つの酵素成分として浮腫因子（ＥＦ）と致死因子（ＬＦ）に対して約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、細菌抗原は、配列番号１１５１～１１５３のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細菌抗原は、配列番号１１０１～１１０３のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、バチルス・アントラシスから得た細菌抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、バチルス・アントラシスによる感染症から対象を免疫化する、またはバチルス・アントラシスによる感染症により生じる疾患もしくは疾病の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0119】
いくつかの実施形態では、細菌抗原は、クロストリジウムから得られる。いくつかの実施形態では、クロストリジウム抗原は、配列番号９５１～９８４のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、クロストリジウム抗原は、配列番号９０１～９３４のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、クロストリジウムから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてクロストリジウムによる感染症に対する免疫性を与えるか、またはクロストリジウムにより生じる疾患の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0120】
いくつかの実施形態では、ワクチン抗原は、リシンから得られる。いくつかの実施形態では、リシン抗原は、配列番号１０５１～１０５７のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リシン抗原は、配列番号１００１～１００７のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リシンから得た抗原を発現する細胞質体の対象への投与は、対象においてリシンにより生じる毒性作用に対する免疫性を与えるか、またはその毒性作用を低下させるのに治療上有効である。
【0121】
いくつかの実施形態では、抗原は融合タンパク質であってよく、本明細書に記載のタンパク質のうちいずれか１つまたはそのフラグメントは、別のペプチドと融合可能である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原は、細胞膜タンパク質または膜貫通タンパク質と融合可能である。例示的な細胞膜タンパク質または膜貫通タンパク質として、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ４７、ヘテロ三量体Ｇタンパク質、ＭＨＣクラスＩ、インテグリン、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）、ＬＡＭＰ１／２、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＡＤＡＭ１０、ＧＰＩ固定５’ヌクレオチダーゼ、ＣＤ７３、補体結合タンパク質ＣＤ５５とＣＤ５９、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）、ＴＳＰＡＮ８、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ９、ＰＥＣＡＭ１、ＥＲＢＢ２、ＥＰＣＡＭ、ＣＤ９０、ＣＤ４５、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、グリコホリンＡ、ＣＤ１４、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ３、アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ、ＡＣｈＥ－Ｅ、アミロイドβＡ４／ＡＰＰ、および多剤耐性関連タンパク質を挙げることができる。
【0122】
いくつかの実施形態では、抗原は、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質の尾部と融合可能である。いくつかの実施形態では、抗原はアルブミンと融合可能である。いくつかの実施形態では、抗原は、分子クランプを含むポリペプチドとともに発現可能である。いくつかの実施形態では、分子クランプは、同じ細胞質体中で抗原とともに発現されると、抗原を融合前の形態に維持する。いくつかの実施形態では、分子クランプは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上のアミノ酸残基の後に繰返しを行うパターンをコードするポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、分子クランプ（ｃｌａｍ）をコードするポリペプチドは、長さが少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上のアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、分子クランプ自体は集まって二重らせんとなり、一本の鎖は前方に、もう一本の鎖はその逆に向かう。いくつかの実施形態では、鎖の中でのアミノ酸の対合は、疎水性および親水性のアミノ酸のパターンにより確実となる。いくつかの実施形態では、このパターンは、いずれのクランプもウイルス抗原に結合しないように配置される。いくつかの実施形態では、分子クランプ自体は集まって硬い杆体となる。いくつかの実施形態では、分子クランプは、リンカーによりウイルス抗原の所望の部分に連結されて、分子クランプを発現する細胞質体が混合物から精製されるのを可能にするなど他の機能を果たすことができる。
【0123】
いくつかの実施形態では、抗原は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ０１２５、ＭＵＣ－１、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）などの腫瘍抗原またはその部分である。いくつかの実施形態では、抗原は、一般に知られているあらゆる癌エピトープに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原またはその部分を発現する細胞質体の対象への投与は、腫瘍ウイルスによる感染症に対して対象を免疫化する、または腫瘍ウイルスにより生じる癌の重症度を低下させるのに治療上有効である。
【0124】
ｂ．異種核酸
本明細書中のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドを含むワクチンが記載される。異種であり得るポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子または遺伝子フラグメントのコーディングドまたは非コーディング領域、連鎖解析から定められる座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、自己増幅ＲＮＡ、ウリジン含有ＲＮＡ（ｕＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列の単離ＤＮＡ、あらゆる配列の単離ＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）や無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、およびプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により妨げられる場合がある。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、対象に免疫応答を誘導することができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、本明細書に記載の病原体のうちいずれか１つにより生じる感染症に対する適応免疫を対象に与えることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、対象において、本明細書に記載の病原体のうちいずれか１つにより生じる病原性感染症を処置または予防することができる。
本明細書中のいくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドを含むワクチンが記載される。異種であり得るポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子または遺伝子フラグメントのコーディングドまたは非コーディング領域、連鎖解析から定められる座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、自己増幅ＲＮＡ、ウリジン含有ＲＮＡ（ｕＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列の単離ＤＮＡ、あらゆる配列の単離ＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）や無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、およびプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により妨げられる場合がある。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、対象に免疫応答を誘導することができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、本明細書に記載の病原体のうちいずれか１つにより生じる感染症に対する適応免疫を対象に与えることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドから翻訳される抗原は、対象において、本明細書に記載の病原体のうちいずれか１つにより生じる病原性感染症を処置または予防することができる。
【0125】
いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の免疫変調成分のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、本明細書に記載の抗原のうちいずれか１つにより誘導される免疫応答を増大させる。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、Ｉｉ－キー／ＭＨＣクラスＩＩエピトープペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、本明細書に記載のサイトカインのうちいずれか１つである。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のホーミング受容体のホーミングタンパク質のうち１または複数、あるいはホーミング受容体のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、ホーミングタンパク質は、細胞質体により分泌されてよい。いくつかの実施形態では、ホーミング受容体は、細胞質体の表面に発現されてよい。いくつかの実施形態では、１または複数のホーミング受容体は、リンパ組織中の１または複数の細胞に発現される１または複数のリガンドに特異的な場合があり、リンパ組織中の細胞は、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せを含むことができる。
【0126】
いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の標的化部分のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の免疫変調成分のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のホーミング受容体のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のホーミングタンパク質のうち１または複数をコードすることができる。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗ウイルス組成物のうち１または複数をコードすることができる。
【0127】
いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ウイルス抗原をコードする異種ＤＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、異種ＤＮＡ配列は、ｏｒｆ１ａ、ｏｒｆ１ａｂ、スパイクタンパク質（Ｓタンパク質）、３ａ、３ｂ、エンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）、膜タンパク質（Ｍタンパク質）、ｐ６、７ａ、７ｂ、８ｂ、９ｂ、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）、ｏｒｆ１４、ｎｓｐ１（リーダータンパク質）、ｎｓｐ２、ｎｓｐ３、ｎｓｐ４、ｎｓｐ５（３Ｃ様プロテイナーゼ）、ｎｓｐ６、ｎｓｐ７、ｎｓｐ８、ｎｓｐ９、ｎｓｐ１０（成長因子様タンパク質）、ｎｓｐ１２（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼすなわちＲｄＲｐ）、ｎｓｐ１３（ＲＮＡ５’－トリホスファターゼ）、ｎｓｐ１４（３’～５’のエキソヌクレアーゼ）、ｎｓｐ１５（ｅｎｄｏＲＮＡｓｅ）、およびｎｓｐ１６（２’－Ｏリボースメチルトランスフェラーゼ）のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、細胞質体は、スパイクタンパク質またはそのフラグメントをコードする異種ＤＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードする異種ＤＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、膜タンパク質またはそのフラグメントをコードする異種ＤＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントをコードする異種ＤＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、１または複数の抗原をコードする１または複数の異種ＤＮＡ配列を含むことができる。例えば、異種ポリヌクレオチドは、Ｓタンパク質抗原およびＮタンパク質抗原をコードすることができる。いくつかの実施形態では、異種ＤＮＡ配列は、本明細書に記載の様々なウイルス抗原のうちいずれか１つをコードすることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、異種ＤＮＡ配列を転写し、ウイルス抗原へと翻訳する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、異種ＤＮＡ配列を標的組織に送達し、そこでは、異種ＤＮＡ配列は転写されて、標的組織によりウイルス抗原へと翻訳される。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗原のうちいずれか１つをコードする異種ＤＮＡ配列を含むプラスミドを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質から得られる抗原をコードする核酸を含むＤＮＡワクチン（ＧＸ－１９）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。
【0128】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号４～７のいずれか１つのフラグメントに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号４～７のいずれか１つのフラグメントに対して約１００％同一である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号８のフラグメントに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号８のフラグメントに対して１００％同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号９のフラグメントに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号９のフラグメントに対して約１００％同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号１０のフラグメントに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号１０のフラグメントに対して約１００％同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号１１のフラグメントに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるウイルス抗原をコードする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドは、配列番号１１のフラグメントに対して約１００％同一であるウイルス抗原をコードする。
【0129】
いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、ウイルス抗原をコードする異種ＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、異種ＲＮＡ配列は、ウイルス抗原をコードするｍＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ｏｒｆ１ａ、ｏｒｆ１ａｂ、スパイクタンパク質（Ｓタンパク質）、３ａ、３ｂ、エンベロープタンパク質（Ｅタンパク質）、膜タンパク質（Ｍタンパク質）、ｐ６、７ａ、７ｂ、８ｂ、９ｂ、ヌクレオカプシドタンパク質（Ｎタンパク質）、ｏｒｆ１４、ｎｓｐ１（リーダータンパク質）、ｎｓｐ２、ｎｓｐ３、ｎｓｐ４、ｎｓｐ５（３Ｃ様プロテイナーゼ）、ｎｓｐ６、ｎｓｐ７、ｎｓｐ８、ｎｓｐ９、ｎｓｐ１０（成長因子様タンパク質）、ｎｓｐ１２（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼすなわちＲｄＲｐ）、ｎｓｐ１３（ＲＮＡ５’－トリホスファターゼ）、ｎｓｐ１４（３’～５’のエキソヌクレアーゼ）、ｎｓｐ１５（ｅｎｄｏＲＮＡｓｅ）、およびｎｓｐ１６（２’－Ｏリボースメチルトランスフェラーゼ）のうちいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、細胞質体は、スパイクタンパク質またはそのフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ヌクレオカプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、膜タンパク質またはそのフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、エンベロープタンパク質またはそのフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、１または複数のｍＲＮＡ配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、本明細書に記載の様々なウイルス抗原のうちいずれか１つをコードすることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ｍＲＮＡをウイルス抗原へと翻訳する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ｍＲＮＡを標的組織に送達し、そこではｍＲＮＡは標的組織によりウイルス抗原へと翻訳される。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、自己増幅ｍＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ウリジン（ｕＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、完全長で融合前に安定したスパイク（Ｓ）タンパク質（ｍＲＮＡ－１２７３）をコードするｍＲＮＡを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗原のうち１または複数をコードする１または複数の異種ＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のタンパク質から得られる抗原をコードするｍＲＮＡを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ｍＲＮＡ－ＬＮＰワクチン）を含む。ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子の使用により封入されて送達される。
【0130】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、ウイルス抗原をコードする少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドを含むＤＮＡまたはＲＮＡベクターを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターは、プラスミドであってよい。いくつかの実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターは、ウイルスベクターであってよい。ウイルスベクター、具体的にレトロウイルスベクターは、本明細書に記載のウイルス抗原のうちいずれか１つをコードする核酸配列を含むように操作されるとともに、細胞質体により標的組織へと送達することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純疱疹ウイルスＩ、アデノウイルス、アデノ関連性ウイルスなどから得ることができる。例示的なウイルスベクターとして、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター（ＡＡＶ）、複製欠損性チンパンジーアデノウイルス、ＣｈＡｄＯｘ１、ニューカッスル病ウイルスベクター、Ｍ２欠損性単一複製（Ｍ２ＳＲ）インフルエンザベクター、痘ベクター、パルボウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）ベクター、または単純疱疹ウイルスベクター（ＨＳＶ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクターとして、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ、ＭＭＬＶ、ＭｕＬＶ、またはＭＬＶ）またはマウス幹（Ｓｔｅａｍ）細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）ゲノムから得られるベクターなどのγレトロウイルスベクターが挙げられる。いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクターとして、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ゲノムから得たものなどのレンチウイルスベクターも挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９の血清型を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、２つ以上のウイルス由来のウイルス部分を含むキメラ・ウイルスベクターである。さらなる例では、ウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（Ｇａｍ－ＣＯＶＩＤ－ＶａｃまたはＧａｍ－ＣＯＶＩＤ－Ｖａｃ ｌｙｏ）非複製ウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、核酸配列を含むアデノウイルスベクターを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン、すなわちＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質（Ａｄ５－ｎＣｏＶ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質を発現するように操作される複製欠損性チンパンジーアデノウイルスＣｈＡｄＯｘ１を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のタンパク質から得られる抗原をコードする核酸を含む非複製型アデノウイルスベクター（ＡｄＶａｃ）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、ＡｄＶａｃワクチンは、ＰＥＲ．Ｃ６細胞とともに調製される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、挿入物としてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質をコードする核酸とともにＩＮＯ－４８００ ｐＧＸ ＤＮＡプラスミドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＢＮＴ１６２）のスパイク（Ｓ）タンパク質またはそのフラグメントを発現するように、ｍＲＮＡまたは修飾ｍＲＮＡを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸を含む麻疹ベクターを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、注射により対象の筋肉に送達された後にエレクトロポレーションが行われるスパイクタンパク質をコードするＤＮＡを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。
【0131】
ｃ．不活性化病原体とその部分
いくつかの実施形態では、細胞質体は、不活性化病原体（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫、または真菌）、またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、不活性化病原体は、不活性化ウイルスまたはその一部である。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、本明細書に記載のウイルスのうちいずれか１つである。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、コロナウイルス、ハンタウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、肝炎ウイルス、または豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、コロナウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのベータコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
いくつかの実施形態では、細胞質体は、不活性化病原体（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫、または真菌）、またはその部分を含む。いくつかの実施形態では、不活性化病原体は、不活性化ウイルスまたはその一部である。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、本明細書に記載のウイルスのうちいずれか１つである。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、コロナウイルス、ハンタウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、肝炎ウイルス、または豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、コロナウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのベータコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。
【0132】
いくつかの実施形態では、細胞質体は不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ウーハン株に対する完全長アミノ酸配列と比較して、Ａｓｐ６１４Ｇｌｙ、Ｐｒｏ３２３Ｌｅｕ、Ｉｌｅ５９９Ｖａｌ、ｐｒｏ５８５Ｓｅｒ、Ｐｈｅ３０８Ｔｙｒ、Ｔｈｒ１４１Ｉｌｅ、Ａｓｐ２４８Ｇｌｕ、Ｔｈｒ８５Ｉｌｅ、Ａｌａ１８Ｖａｌ、Ａｓｎ４３９Ｌｙｓ、Ｇｌｕ２５１Ｖａｌ、Ｐｒｏ１０Ｓｅｒ、Ｓｅｒ１９４Ｌｅｕ、Ｓｅｒ１９７Ｌｅｕ、Ｇｌｙ１９６Ｖａｌ、Ｌｅｕ１０８Ｐｈｅ、Ｇｌｎ２１３Ｌｙｓ、Ｌｅｕ８４Ｓｅｒ、Ｔｈｒ１７５Ｍｅｔ、Ｓｅｒ５６３Ｌｅｕ、Ｖａｌ１３Ｌｅｕ、Ｇｌｎ５７Ｈｉｓ、またはＴｈｒ１４Ｉｌｅを含む突然変異を含む。
【0133】
いくつかの実施形態では、不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む細胞質体は、不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む細胞質体が対象の免疫細胞により飲み込まれると、対象においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答および適応免疫を誘導する。細胞質体を飲み込む際、免疫細胞は、不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に接触し、続いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する適応免疫応答を発する。いくつかの実施形態では、不活性化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、ホルマリンで不活性化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスである。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ｖｅｒｏ細胞培養物から得られる、ホルマリンで不活性化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ＰｉＣｏＶａｃｃ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ０－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質を発現するように操作されるビフィズス菌を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ｂａｃＴＲＬ－スパイク）を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、マイクロニードルアレイの使用によりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク（Ｓ）タンパク質またはそのフラグメントを送達することを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ＰｉｔｔＣｏＶａｃｃ）を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質の融合前形態を含む多重組換えナノ粒子ワクチンを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ＮＶＸ－ＣｏＶ２３７３）を含む。いくつかの実施形態では、ＮＶＸ－ＣｏＶ２３７３を含む細胞質体は、アジュバントまたは免疫変調成分を含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス構造を模倣するウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含み、そこではＶＬＰは、植物由来の生産方法から製造される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質をコードするｍＲＮＡを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（ＬＵＮＡＲ－ＣＯＶ１９）を含む。ｍＲＮＡは、脂質媒介型送達系の使用により封入されて送達される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、スパイクタンパク質から得られる抗原を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含み、このワクチンは、ｇｐ９６とＯＸ４０Ｌ、すなわちＴ細胞の共刺激物質をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸を含む複製欠損性アデノウイルス５（ＲＤ－Ａｄ５）ベクターを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチン（Ｔ－ＣＯＶＩＤＴＭ）を含み、Ｔ－ＣＯＶＩＤＴＭワクチンは鼻腔内の送達のために製剤化される。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンを含む細胞質体は、あらゆる適切な経路、例えば、皮下、静脈内、動脈、眼、経口、筋肉内、鼻腔内（例えば吸入）、腹腔内、局所、粘膜、硬膜外麻酔、舌下、上皮、羊膜外、関節内、皮内、骨内、鞘内、子宮内、膣内、膀胱内、硝子体内、血管周囲、および／または直腸投与、あるいは公知の投与方法のあらゆる組合せによる投与のために製剤化される。
【0134】
いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、フィロウイルス（エボラ、マールブルク）やアレナウイルス（ラッサ、マチュポ）を含むウイルス性出血熱を生じさせるウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、ウイルス脳炎（東部ウマ脳炎、ベネズエラウマ脳炎、西部ウマ脳炎などのアルファウイルス）を生じさせるウイルスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化ウイルスは、ハンタウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、肝炎ウイルス、または豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルスから得られる。
【0135】
いくつかの実施形態では、不活性化病原体は、不活性化細菌またはその部分である。いくつかの実施形態では、抗原は不活性化細菌から得られる。不活性化細菌は、グラム陽性細菌から得られる場合がある。いくつかの実施形態では、不活性化細菌は、グラム陰性細菌から得られる。いくつかの実施形態では、不活性化細菌は、ｓ－ラクタマーゼに耐性を呈する株から得られる。いくつかの実施形態では、不活性化細菌は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、志賀毒素産生大腸菌（ＳＴＥＣ）、カンピロバクター・ジェジュニ、シュードモナス・エルジノーサ、アシネトバクター・バウマンニ、ストレプトコッカス・ミュータンス、ヘリコバクター・ピロリ、またはバチルス・アントラシスから得られる。いくつかの実施形態では、不活性化細菌は、ブルセラ症（ブルセラ菌種）、クロストリジウム・パーフリンジェンスのイプシロン毒素、食品安全性脅威（サルモネラ菌種、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、赤痢菌）、鼻疽（バークホルデリア・マレイ）、類鼻疽（バークホルデリア・シュードマレイ）、オウム病（クラミジア・シタッシ）、Ｑ熱（コクシエラ・ブルネッティ）、トウゴマ（ヒマの種子）由来のリシン毒素、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、発疹チフス（リケッチア・プロワツェキイ）、水安全性脅威（例えば、コレラ菌およびクリプトスポリジウム・パルバム）、炭疽（バチルス・アントラシス）、ボツリスム（クロストリジウム・ボツリナム毒素）、ペスト（エルシニア・ペスチス）、天然痘（大痘瘡）、野兎病（フランシセラ・ツラレンシス）から得られる。
【0136】
２．追加の外生薬剤（Ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ Ａｇｅｎｔｓ）
本開示の細胞質体は、免疫変調成分などの追加の外生薬剤を発現するように操作される場合がある。いくつかの実施形態では、細胞質体は、本明細書に記載の免疫変調成分のうち１または複数を含む。免疫変調成分は、対象に免疫応答を直接または間接的に刺激する分子であってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、対象に適応免疫反応を誘発する免疫活性化剤であってよい。いくつかの実施形態では、免疫活性化剤は、対象、例えば増殖性疾患または障害を患う対象の過活動免疫系を抑える免疫サプレッサであってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体の表面に発現されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体により放出されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体により分泌されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、本明細書に記載の抗原と融合されるペプチドまたはタンパク質であってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、アジュバントであってよい。
本開示の細胞質体は、免疫変調成分などの追加の外生薬剤を発現するように操作される場合がある。いくつかの実施形態では、細胞質体は、本明細書に記載の免疫変調成分のうち１または複数を含む。免疫変調成分は、対象に免疫応答を直接または間接的に刺激する分子であってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、対象に適応免疫反応を誘発する免疫活性化剤であってよい。いくつかの実施形態では、免疫活性化剤は、対象、例えば増殖性疾患または障害を患う対象の過活動免疫系を抑える免疫サプレッサであってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体の表面に発現されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体により放出されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体により分泌されてよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、細胞質体のカーゴであってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、本明細書に記載の抗原と融合されるペプチドまたはタンパク質であってよい。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、アジュバントであってよい。
【0137】
非限定的な例では、免疫変調成分は、免疫細胞の表面上で同族受容体に結合することにより免疫応答を直接刺激し、免疫細胞にサイトカインを放出させることで免疫細胞を活性化する場合がある。免疫細胞の活性化は、いくつかの実施形態では、ウイルスに対する適応免疫の発達を助長する。別の例として、免疫変調成分は、ＩＬ－１０産生および標的細胞による分泌を抑える、ならびに／または制御性Ｔ細胞の活性を抑えることにより免疫応答を間接的に刺激して、例えば、免疫細胞による抗腫瘍応答を増大させる。対照的に、免疫サプレッサとして作用する免疫変調成分は、対象の免疫応答を直接または間接的に阻害することができる。
【0138】
ある実施形態では、免疫変調成分は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）を標的とする。これらの受容体は、病原体などの感染因子に応答して免疫系の活性化をプライミングすることのできる膜貫通タンパク質またはエンドソーム内（ｉｎｔｒａ－ｅｎｄｏｓｏｍａｌ）タンパク質であってよい。ＰＲＲは、病原体関連型分子パターン（ＰＡＭＰ）分子および損傷関連型分子パターン（ＤＡＭＰ）分子を認識することができる。ＰＲＲは、膜結合されてよい。ＰＲＲは、細胞質性であってよい。膜結合型ＰＲＲは、マンノース受容体やアシアロ糖タンパク質受容体などのトール様受容体およびＣ型レクチン受容体が挙げられる。細胞質ＰＲＲは、ＮＯＤ様受容体およびＲＩＧ－Ｉ－様受容体を含む。
【0139】
ある実施形態では、免疫変調成分は、ＤＡＭＰアゴニストやＰＡＭＰアゴニストなど、損傷関連型分子パターン（ＤＡＭＰ）分子または病原体関連型分子パターン（ＰＡＭＰ）分子である。ＤＡＭＰ分子とＰＡＭＰ分子は、トール様受容体（ＴＬＲ）、Ｎｏｄ様受容体、Ｃ型レクチン、およびＲＩＧ－Ｉ－様受容体などの先天性免疫系受容体により認識可能である。ある実施形態では、免疫調節剤は、トール様受容体アゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、またはＲＩＧ－Ｉアゴニストである。ＤＡＭＰ分子の例として、クロマチン関連タンパク質高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）などのタンパク質、ヒアルロナンフラグメントやグリカンコンジュゲートなどのタンパク質およびグリカンのカルシウム調節ファミリーのＳ１００分子を挙げることができる。ＤＡＭＰ分子はさらに、アポトーシスまたは壊死の後に腫瘍細胞から放出されたとき、ＤＮＡなどの核酸であってよい。追加のＤＡＭＰ核酸の例として、核またはミトコンドリアの外部に存在するＡＴＰ、アデノシン、尿酸などのＲＮＡおよびプリン代謝産物を挙げることができる。
【0140】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分は細胞質ゾルＤＮＡであり、細菌性核酸は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）またはインターフェロン遺伝子の刺激物質（ＳＴＩＮＧ）により認識される環状ジヌクレオチドと呼ばれ、細胞質ゾルＤＮＡセンサとして作用することができる。インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）により認識される化合物は、ＴＬＲおよび他のパターン認識受容体による免疫制御において役割を果たすことができる。
【0141】
免疫変調成分は、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストであってよい。免疫調節剤は、ＲＩＧ－Ｉ－様受容体リガンドであってよい。免疫調節剤は、Ｃ型レクチン受容体リガンドであってよい。免疫調節剤は、ＮＯＤ様受容体リガンドであってよい。
【0142】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分はＴＬＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、動物種によりＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、またはＴＬＲ１３のアゴニストからなる群から選択される。
【0143】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分活性化剤は、以下：（ａ）加熱死菌産物、好ましくはＨＫＡＬ、ＨＫＥＢ、ＨＫＨＰ、ＨＫＬＭ、ＨＫＬＰ、ＨＫＬＲ、ＨＫＭＦ、ＨＫＰＡ、ＨＫＰＧ、またはＨＫＳＡ、ＨＫＳＰ、および（ｂ）細胞壁構成成分産物、好ましくはＬＡＭ、ＬＭ、ＬＰＳ、ＬＩＡ、ＬＩＡ、ＰＧＮ、ＦＳＬ、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、Ｐａｍ３ＣＳＫ４、またはザイモサンを含むＴＬＲ２のリガンドである。
【0144】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、以下：リンタトリモド、ポリ－ＩＣＬＣ、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）、Ａｐｏｘｘｉｍ、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）、ＩＰＨ－３３、ＭＣＴ－４６５、ＭＣＴ－４７５、およびＮＤ－１．１からなる群から選択されるＴＬＲ３のリガンドである。
【0145】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、国際公開第２０１４／０５２８２８号に記載のもの（Ｕ ｏｆ Ｃａｌ）、ＡＺ１２６（Ｎ－（２－（シクロペンチルアミノ）－２－オキソ－１－（ピリジン－４－イル）エチル）－Ｎ－（４－メトキシフェニル）－３－メチル－５－フェニル－１Ｈ－ピロール－２－カルボキサミド）、またはＡＺ３６８（（Ｅ）－３－（４－（２－（シクロペンチルアミノ）－１－（Ｎ－（４－イソプロピルフェニル）－１，５－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－３－カルボキサミド）－２－オキソエチル）フェニル）アクリル酸）などの、ＬＰＳ、ＭＰＬＡ、またはピリミド［５，４－ｂ］インドールからなる群から選択されるＴＬＲ４のリガンドである。
【0146】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、ＦＬＡおよびフラジェリンからなる群から選択されるＴＬＲ５のリガンドである。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、ＴＬＲ６のリガンドである。ある実施形態では、免疫変調成分は、ＴＬＲ７アゴニストおよび／またはＴＬＲ８アゴニストである。ある実施形態では、免疫変調成分はＴＬＲ７アゴニストである。ある実施形態では、免疫変調成分はＴＬＲ８アゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、ＴＬＲ８ではなくＴＬＲ７を選択的に刺激する（ａｇｏｎｉｚｅｓ）。他の実施形態では、免疫刺激物質は、ＴＬＲ７ではなくＴＬＲ８を刺激する。
【0147】
ある実施形態では、免疫変調成分はＴＬＲ７アゴニストである。ある実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－２，４－ジアミン、ピリミジン－２，４－ジアミン、２－アミノイミダゾール、１－アルキル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－２，２－ジオキシド、ベンゾナフチリジン、グアノシンアナログ、アデノシンアナログ、チミジンホモポリマー、ｓｓＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ＰｏｌｙＧ１０、およびＰｏｌｙＧ３から選択される。ある実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、イミダゾキノリン、イミダゾキノリンアミン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－２，４－ジアミン、ピリミジン－２，４－ジアミン、２－アミノイミダゾール、１－アルキル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、ヘテロアロチアジアジド－２，２－ジオキシド、またはベンゾナフチリジンから選択されるが、グアノシンアナログ、アデノシンアナログ、チミジンホモポリマー、ｓｓＲＮＡ、ＣｐＧ－Ａ、ＰｏｌｙＧ１０、およびＰｏｌｙＧ３は除く。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、非天然型化合物である。ＴＬＲ７モジュレータの例として、ＧＳ－９６２０、ＧＳＫ－２２４５０３５、イミキモド、レシキモド、ＤＳＲ－６４３４、ＤＳＰ－３０２５、ＩＭＯ－４２００、ＭＣＴ－４６５、ＭＥＤＩ－９１９７、３Ｍ－０５１、ＳＢ－９９２２、３Ｍ－０５２、Ｌｉｍｔｏｐ、ＴＭＸ－３０Ｘ、ＴＭＸ－２０２、ＲＧ－７８６３、ＲＧ－７７９５、ならびに、米国特許出願公開第２０１６０１６８１６４号（Ｊａｎｓｅｎ）、米国特許出願公開第２０１５０２９９１９４号（Ｒｏｃｈｅ）、米国特許出願公開第２０１１００９８２４８号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、米国特許出願公開第２０１００１４３３０１号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、および米国特許出願公開第２００９００４７２４９号（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に開示される化合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、ＴＮＦαまたはＩＦＮα産生を測定するＰＢＭＣアッセイによりＥＣ５０値が５００ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、ＴＮＦαまたはＩＦＮα産生を測定するＰＢＭＣアッセイによりＥＣ５０値が１００ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、ＴＮＦαまたはＩＦＮα産生を測定するＰＢＭＣアッセイによりＥＣ５０値が５０ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、ＴＮＦαまたはＩＦＮα産生を測定するＰＢＭＣアッセイによりＥＣ５０値が１０ｎＭ以下である。
【0148】
ある実施形態では、免疫変調成分はＴＬＲ８アゴニストである。ある実施形態では、ＴＬＲ８アゴニストは、ベンザゼピン、イミダゾキノリン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－２，４－ジアミン、ピリミジン－２，４－ジアミン、２－アミノイミダゾール、１－アルキル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－アミン、テトラヒドロピリドピリミジン、またはｓｓＲＮＡからなる群から選択される。ある実施形態では、ＴＬＲ８アゴニストは、ベンザゼピン、イミダゾキノリン、チアゾキノリン、アミノキノリン、アミノキナゾリン、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－２，４－ジアミン、ピリミジン－２，４－ジアミン、２－アミノイミダゾール、１－アルキル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－アミン、テトラヒドロピリドピリミジンからなる群から選択されるが、ｓｓＲＮＡは除く。いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、天然型ＴＬＲ８アゴニストまたはＴＬＲ８のベンザゼピンアゴニストを除くＴＬＲ８アゴニストである。
【0149】
一実施形態では、本明細書に記載の細胞質体は、免疫細胞の完全な活性化に重要な非抗原特異的シグナルである共刺激リガンドを含む、少なくとも１つの免疫変調成分を発現および／または分泌することができる。共刺激リガンドとして、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンド、サイトカイン（ＩＬ－２、ＩＬ－１２、１Ｌ－１５、またはＩＬ２１など）、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドが挙げられるが、これらに限定されるものではない。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）は、全身性炎症に関与するサイトカインであり、急性期反応を刺激する。その初期の役割は、免疫細胞の調節にある。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドは、多数の共通の特徴を共有する。大多数のリガンドは、短い細胞質セグメントと比較的長い細胞外領域を含有するＩＩ型膜貫通タンパク質として合成される。ＴＮＦリガンドとして、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４ＯＬ（ＣＤ４ＯＬ）／ＣＤ１５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦａ）、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４ＯＬ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３ＯＬ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子ｆ３（ＴＮＦ（３）／リンホトキシン－α（ＬＴａ）、リンホトキシン－β（ｕｒ（３）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）／Ｂｌｙｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａ１１－１、グルココルチコイド誘導型ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、および腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合、または接着のプロセスに関与する細胞表面および可溶性タンパク質の大きな群である。これらタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、これらは免疫グロブリンドメイン（フォールド（ｆｏｌｄ））を有する。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドとして、ともにＣＤ２８に対するリガンドであるＣＤ８０とＣＤ８６が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0150】
いくつかの実施形態では、免疫変調成分は、アジュバントであってよい。いくつかの実施形態では、アジュバントは、鎮痛性アジュバントを含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、ミョウバン、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、またはリン酸カルシウム水酸化物などの無機化合物を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、鉱油またはパラフィン油を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、不活性化百日咳菌、ウシ結核菌、またはトキソイド（ｏｘｏｉｄｓ）などの細菌性生成物を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、スクアレンのような非細菌性有機体を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、洗浄剤（Ｑｕｉｌ Ａ）などの送達システムの使用を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、キラヤ、大豆、またはヒロハセネガから得られるサポニンなどの植物サポニンを含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、フロイント完全アジュバントまたはフロイント不完全アジュバントを含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバントは、落花生油のような食物系油を含むことができる。
【0151】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、本明細書に記載の抗ウイルスの組成物などの１または複数の追加の治療薬を含む。いくつかの実施形態では、１または複数の追加の治療薬は、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質（例えば、酵素、抗体、抗原、毒素、サイトカイン、タンパク質ホルモン、成長因子、細胞表面受容体、またはワクチン）、治療用ペプチド（例えば、ペプチドホルモンまたは抗原）、小分子活性薬剤（例えば、ステロイド、ポリケチド、アルカロイド、毒素、抗生物質、抗ウイルス剤、コルヒチン、タキソール、マイトマイシン、またはエムタンシン）、および治療用遺伝子編集因子のうちいずれか１つ、あるいはそれらのあらゆる組合せであってよい。
【0152】
Ｄ．医薬組成物、製剤、投与量、および投与経路
本明細書には、細胞質体（例えば、本明細書に記載のあらゆる細胞から得られる細胞質体）を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、様々な投与経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、眼窩後方、腹腔内、リンパ節内）のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を含むことができる。「医薬組成物」という用語は、本明細書に開示される細胞質体と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を表す。医薬組成物は、生物体への化合物の投与を容易にすることができる。
本明細書には、細胞質体（例えば、本明細書に記載のあらゆる細胞から得られる細胞質体）を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、様々な投与経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、眼窩後方、腹腔内、リンパ節内）のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）を含むことができる。「医薬組成物」という用語は、本明細書に開示される細胞質体と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を表す。医薬組成物は、生物体への化合物の投与を容易にすることができる。
【0153】
一般的に、本明細書に開示される方法は、全身投与により細胞質体組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、経口投与により細胞質体組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、腹腔内注射により細胞質体組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、坐薬の形態で細胞質体組成物を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、静脈内（「ｉ．ｖ．」）投与により細胞質体組成物を投与する工程を含む。皮下注射、筋肉内注射、皮内注射、経皮注射、経皮投与、鼻腔内投与、リンパ内注射、直腸投与、胃内投与、眼内投与、脳室内投与、鞘内投与、または他のあらゆる適切な非経口投与など他の経路により、本明細書に開示される細胞質体組成物を投与してもよいことも、想到される。いくつかの実施形態では、損傷または炎症の部位にさらに近づき局所投与を行うための経路は、全身経路よりも好ましい。治療薬を投与する経路、投与量、時点、および期間は調整されてよい。いくつかの実施形態では、治療薬の投与は、病原体関連疾患または疾病の急性症状と慢性症状のいずれか、あるいは両方の発症の前、または後に行われる。
【0154】
本明細書に開示される疾患もしくは疾病を予防または処置するのに有効な、本明細書に開示される細胞質体の用量と投与量は、疾患または疾病に関連して観察された有益な応答、あるいは疾患または疾病の症状により定められる。有益な応答は、疾患もしくは疾病、または疾患もしくは疾病の症状を予防、緩和、阻止、あるいは治癒することを含む。いくつかの実施形態では、有益な応答は、対象のバイオマーカ、トランスクリプトームのリスクプロファイル、または腸マイクロバイオームの存在、レベル、もしくは活性における測定可能な改善を検出することにより測定されてよい。「改善」は、本明細書で使用するとき、前述の存在、レベル、または活性が、正常な個体（例えば、疾患または疾病を患っていない個体）に観察される存在、レベル、または活性へと移行することを表す。細胞質体組成物が治療上有効でない、あるいは疾患もしくは疾病、または疾患もしくは疾病の症状の十分な緩和を提供していない場合、投与の投与量および／または経路が変更される場合があるか、追加の薬剤が細胞質体組成物とともに対象に投与される場合がある。いくつかの実施形態では、患者が細胞質体組成物のレジメンを開始すると、患者は第２の処置レジメンを中止される（例えば、投与量が漸減される）。
【0155】
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞質体組成物の送達のほか、様々な処置レジメンにおいて本明細書に記載の特定の組成物を使用するために適切な投与と処置レジメンに適している薬学的に許容可能な賦形剤と担体溶液の製剤が開示される。いくつかの実施形態において、治療に有用な組成物それぞれにおける治療用遺伝子発現産物の量は、適切な投与量が化合物のあらゆる所与の用量で取得されるように調合されてよい。溶解度、バイオアベイラビリティ、生体半減期、投与経路、生成物貯蔵寿命のほか、他の薬学的考慮事項などの因子は、かかる医薬製剤を調製する当業者により企図され、そのため、様々な投与量および処置レジメンが望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、細胞質体組成物は、眼内、硝子体内、非経口、皮下、静脈内、脳室内、筋肉内、鞘内、経口、腹腔内、経口もしくは経鼻吸入、または直接注射のいずれかにより１または複数の細胞、組織、あるいは器官に送達されるように、適切に製剤化された本明細書に開示される医薬組成物である。
【0156】
いくつかの実施形態では、注射可能な使用に適した細胞質体組成物の剤形として、滅菌注射溶液または分散体の即席調製のための滅菌水溶液または分散体および滅菌粉体が挙げられる。担体は、溶媒和物、あるいは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および／または植物油を含有する分散媒であってよい。適切な流動性は、例えば、分散の場合に要求される粒径を維持することでレシチンなどのコーティングを使用すること、および界面活性剤を使用することにより維持される場合がある。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤と抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）により生じる可能性がある。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射可能な組成物の長期間の吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムとゼラチンからなる組成物での使用により生じる可能性がある。
【0157】
いくつかの実施形態では、例えば注射用水溶液の投与において、この溶液は、必要な場合に適切に緩衝化されてよく、最初に希釈液が十分な生理食塩水またはグルコースにより等張化される。これら特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内の投与に特に適している。投与量のいくらかの変動は、処置されている対象の状態に応じて必然的に生じる。投与の担当者は、いかなる場合も、個々の対象に対する適切な用量を判定することとなる。さらに、ヒトへの投与において、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ標準により要求される滅菌性、発熱性、および全体的な安全性、ならびに純度の標準を満たす必要がある。
【0158】
他の医薬組成物は、微生物の活性を阻害する１または複数の防腐剤を任意選択で含む。適切な防腐剤として、メルフェン（ｍｅｒｆｅｎ）やチオメルサールなどの水銀含有物質、安定した二酸化塩素、および塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジウムなどの第四アンモニウム化合物が挙げられる。
【0159】
一実施形態では、本明細書に記載の懸濁水溶液および分散体は、少なくとも４時間均質な状態を保つ。一実施形態では、懸濁水溶液は、１分未満持続する物理的撹拌により均質な懸濁液へと再懸濁される。また別の実施形態では、均質な分散水溶液を維持するために撹拌は必要とされない。
【0160】
経鼻投与用のエアロゾル製剤は、全体として滴剤またはスプレーに入れて鼻路に投与されるように設計された水溶液である。鼻溶液は、全体として等張であり、約５．５～約６．５のｐＨを維持するべくわずかに緩衝されるが、この範囲外のｐＨ値も付加的に使用可能であるという点で、鼻の分泌物と同様の可能性がある。抗菌薬または防腐剤も、製剤に含めることができる。
【0161】
吸入用のエアロゾル製剤、および吸入薬は、薬剤または薬剤同士の組合せが、経鼻または経口の呼吸経路により投与されると、対象の呼吸樹へと運ばれるように設計することができる。吸入溶液は、例えば噴霧器により投与可能である。微粉化薬物または液体薬物を含む吸入剤または吹送剤は、例えば分配を補助するために、噴射剤中の薬剤または薬剤同士の組合せの溶液あるいは懸濁液の医薬用エアロゾルとして、呼吸器系に送達可能である。噴射剤は、ハロゲン化炭素、例えばフッ素化塩素化炭化水素、ヒドロクロロフルオロカーボン、およびヒドロクロロカーボンなどのフルオロカーボンのほか、炭化水素および炭化水素エーテルを含む液化ガスであってよい。
【0162】
ハロゲン化炭素噴射剤として、水素がすべてフッ素と置き換えられるフルオロカーボン噴射剤、水素がすべて塩素および少なくとも１つのフッ素と置き換えられるクロロフルオロカーボン噴射剤、水素含有フルオロカーボン噴射剤、ならびに水素含有クロロフルオロカーボン噴射剤を挙げることができる。有用な炭化水素噴射剤は、例えば、プロパン、イソブタン、ｎ－ブタン、ペンタン、イソペンタン、およびネオペンタンを含む。炭化水素の配合物も、噴射剤として使用可能である。エーテル噴霧剤は、例えばジメチルエーテルのほか、エーテルも含む。エアロゾル製剤はまた、１より多くの噴射剤を含むことができる。例えば、エアロゾル製剤は、２以上のフルオロカーボンなど、同じクラスから１より多くの噴射剤、あるいはフッ化炭化水素や炭化水素などの様々なクラスからの１より多く、２より多く、および３より多くの噴射剤を含むことができる。本開示の医薬組成物はまた、圧縮ガス、例えば二酸化炭素、亜酸化窒素、または窒素などの不活性ガスで分注することができる。
【0163】
エアロゾル製剤はまた、他の成分、例えばエタノール、イソプロパノール、プロピレングリコールのほか、界面活性剤、または油や洗浄剤などの他の成分を含むこともできる。これらの成分は、製剤を安定させる、および／またはバルブ要素を潤滑させる役割を果たすことができる。
【0164】
エアロゾル製剤は、圧力下で包装することができるとともに、溶液、懸濁液、エマルジョン、粉末、および半固形調製物を使用してエアロゾルとして製剤化することができる。例えば、エアロゾル製剤溶液は、（実質的に）純粋な噴射剤に入れて、または噴射剤と溶媒の混合物として、輸送体、担体、またはイオンチャネル阻害剤などの薬剤の溶液を含むことができる。溶媒は、薬剤を溶解するために、および／または噴射剤の蒸発を遅らせるために使用可能である。溶媒は、例えば水、エタノール、およびグリコールを含むことができる。あらゆる適切な溶媒の組合せが使用可能であり、任意選択で防腐剤、抗酸化剤、および／または他のエアロゾル成分と組み合わされる。
【0165】
エアロゾル製剤は、分散液または懸濁液であってよい。エアロゾル製剤懸濁液は、薬剤または薬剤同士の組合せ、例えば輸送体、担体、イオンチャネル阻害剤、および分散剤からなる懸濁液を含むことができる。分散剤は、例えばソルビタントリオレアート、オレイルアルコール、オレイン酸、レシチン、およびトウモロコシ油を含むことができる。エアロゾル製剤懸濁液は、潤滑剤、防腐剤、抗酸化剤、および／または他のエアロゾル成分を含むことができる。
【0166】
エアロゾル製剤は、同様にエマルジョンとして製剤化することができる。エアロゾル製剤エマルジョンは、例えばエタノールなどのアルコール、界面活性剤、水、および噴射剤のほか、薬剤または薬剤同士の組合せ、例えば輸送体、担体、イオンチャネルを含むことができる。使用される界面活性剤は、非イオン性、陰イオン性、または陽イオン性であってよい。エアロゾル製剤エマルジョンの一例は、例えばエタノール、界面活性剤、水、および噴射剤を含む。エアロゾル製剤エマルジョンの別の例は、例えば植物油、モノステアリン酸グリセリル、およびプロパンを含む。
【0167】
本明細書には、本明細書に開示される細胞質体組成物を含む滅菌注射溶液であって、適切な溶媒に必要な量で本明細書に開示される細胞質体組成物を、上記に列挙した他の成分のいくつかに組み込み、必要に応じてその後に滅菌濾過を行うことにより調製される滅菌注射溶液が開示される。一般に、分散剤は、塩基性分散媒と、上記に列挙したものから他の必要な成分とを含有する滅菌ビヒクルに、滅菌された様々な有効成分を組み込むことにより調製される。滅菌注射溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および冷凍乾燥技法であり、この技法により、以前に滅菌濾過された溶液の追加の所望成分を加えた有効成分の粉末が得られる。
【0168】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、中性または塩の形態でも製剤化されてよい。薬学的に許容可能な塩として、例えば塩酸またはリン酸などの無機酸、あるいは酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸のような有機酸で形成される酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）が挙げられる。遊離カルボキシル基で形成される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、あるいは水酸化第２鉄などの無機塩基と、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から得ることもできる。製剤化に際して、溶液は、投与製剤に適合する形で、かつ治療上有効な量で投与される。製剤は、注射溶液や薬物放出カプセル剤などの様々な投与形態で容易に投与される。
【0169】
対象に投与される適切な用量および投与量は、特定の細胞質体組成物、疾患状態とその重症度、処置が必要とされる対象のアイデンティティ（例えば体重、性別、年齢）などの要因により判定されるとともに、例えば投与される特定の薬剤、投与経路、処置される疾病、および処置される対象または宿主を含む、症例を取り囲む特定の状況に応じて判定することができる。
【0170】
細胞質体組成物の量、およびかかる組成物の投与回数は、本発明による教示の利益を得る当業者の考え得る範囲内にある。しかし、治療上有効量の開示された組成物の投与は、かかる処置を受ける患者に治療利益をもたらすほど十分な数の細胞質体の単回注射など、単回投与により達成され得る可能性が高い。
【0171】
代替的に、いくつかの状況では、比較的短期間または比較的長期間のいずれかにわたり、細胞質体組成物の複数回または連続投与を提供することが望ましい場合があり、この投与は、かかる組成物の投与を監視する医療従事者が判定してもよい。例えば、哺乳動物に投与される細胞質体の数は、約１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、またはそれよりもさらに多くの桁の細胞質体であってよく、この細胞質体は、処置されている特定の疾患または障害の治療を達成するのに必要とされる場合があるように一回量として、または２回以上の投与に分けて投与される。実際、ある実施形態では、２つ以上の異なる細胞質体組成物を単独で、または１もしくは複数の他の治療薬と組み合わせて投与し、特定の治療レジメンの所望の効果を達成することが、望ましい場合がある。様々な実施形態では、１日量と単位用量は、使用される細胞質体組成物の活性、処置される疾患または疾病、投与の様式、個々の対象の要件、処置されている疾患または疾病の重症度、および主治医の判断を含むがこれらに限定されない多くの変数に応じて変更される。
【0172】
いくつかの実施形態では、細胞質体組成物の投与は、１時間に１回、２時間に１回、３時間に１回、４時間に１回、５時間に１回、６時間に１回、７時間に１回、８時間に１回、９時間に１回、１０時間に１回、１１時間に１回、１２時間に１回、１３時間に１回、１４時間に１回、１５時間に１回、１６時間に１回、１７時間に１回、１８時間に１回、１９時間に１回、２０時間に１回、２１時間に１回、２２時間に１回、２３時間に１回、１日に１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、７日に１回、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、１１日に１回、１２日に１回、１３日に１回、１４日に１回、１５日に１回、１か月に１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回、１年に１回、２年に１回、３年に１回、４年に１回、または５年に１回、あるいは１０年に１回である。有効な投与量範囲は、対象の処置に対する応答に基づき調整されてよい。いくつかの投与経路は、他の経路よりも高濃度の有効量の治療薬を必要とする。
【0173】
本開示の利点を考慮すると予想外ではあるが、患者の状態が改善されないある実施形態では、患者の疾患もしくは疾病の症状を改善、またはその他の方法で抑制もしくは制限するために、医師の裁量により細胞質体組成物の投与は、慢性的に、つまり、患者の生存期間全体を含む長期間にわたり投与される。患者の状態が改善するある実施形態では、投与される細胞質体組成物の用量は、一定期間にわたり一時的に減らされるか、一時的に停止されてもよい（すなわち「休薬期間」）。特定の実施形態では、休薬期間の長さは、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、または２８日以上を含む、２日から１年の間である。休薬期間中の用量減少は、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、および１００％を含む、ほんの一例として１０％～１００％である。ある実施形態では、投与される薬物の用量は、一定期間にわたり一時的に減らされるか、または一時的に停止されてもよい（すなわち「薬物転用」）。特定の実施形態では、薬物転用の長さは、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、または２８日間以上を含む、２日間～１年間の間である。薬物転用中の投与量の減少は、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、および１００％を含む、ほんの一例として１０％～１００％である。適切な期間の経過後、任意選択で正常な投薬スケジュールに戻される。
【0174】
いくつかの実施形態では、一旦患者の状態が改善すると、必要に応じて維持量が投与される。その後、特定の実施形態では、投与の用量もしくは頻度、またはその両方は、症状に応じて、疾患、障害、または疾病の改善が保持される程度にまで減少される。しかし、ある実施形態では、患者は、症状の再発後に長期間にわたり間欠的処置を必要とする。
【0175】
こうした治療レジメンの毒性と治療効果は、ＬＤ５０とＥＤ５０の判定を含むがこれらに限定されない、細胞培養物または実験動物における標準的な製薬手順により判定される。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、これはＬＤ５０とＥＤ５０との比として表される。ある実施形態では、細胞培養アッセイと動物試験から得たデータは、ヒトを含む哺乳動物に使用するための治療上有効な１日量の範囲および／または治療上有効な単位用量を製剤化するのに使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞質体組成物の１日量は、毒性が最小限のＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内にある。ある実施形態では、１日量の範囲および／または単位用量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動する。
【0176】
Ｅ．細胞質体を捕捉する病原体
本明細書中のいくつかの実施形態では、病原体が細胞質体を感染させるのを許容し、病原体が細胞質体内で伝播または複製するのを防止することにより、病原体を捕捉するように操作された細胞質体が開示される。細胞質体のライフスパンは制御可能で有限であるため、細胞質体は死滅時に中に病原体を捕捉して死滅すると、病原体を死滅させることが可能となる。細胞質体の死滅は、アポトーシスまたはオートファジーなどを介する自然過程であってよい。病原体を捕捉するように操作された細胞質体は、病原体による細胞質体の感染を促進させる宿主受容体などの病原体認識部分を発現するように操作可能である。加えて、または代替的に、細胞質体は、対象の細胞中で病原体による感染症を処置または予防するのに治療上有効である本明細書に記載の活性薬剤を発現するか、これを含有するように操作することができる。かかる活性薬剤は、例えば、細胞質体から分泌されると、細胞外空間中の病原体と宿主細胞との結合を機能的に遮断する中和抗体であってよい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防する場合、中和抗体は、感染症予防のために宿主細胞上で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質とヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）との結合を遮断する。
本明細書中のいくつかの実施形態では、病原体が細胞質体を感染させるのを許容し、病原体が細胞質体内で伝播または複製するのを防止することにより、病原体を捕捉するように操作された細胞質体が開示される。細胞質体のライフスパンは制御可能で有限であるため、細胞質体は死滅時に中に病原体を捕捉して死滅すると、病原体を死滅させることが可能となる。細胞質体の死滅は、アポトーシスまたはオートファジーなどを介する自然過程であってよい。病原体を捕捉するように操作された細胞質体は、病原体による細胞質体の感染を促進させる宿主受容体などの病原体認識部分を発現するように操作可能である。加えて、または代替的に、細胞質体は、対象の細胞中で病原体による感染症を処置または予防するのに治療上有効である本明細書に記載の活性薬剤を発現するか、これを含有するように操作することができる。かかる活性薬剤は、例えば、細胞質体から分泌されると、細胞外空間中の病原体と宿主細胞との結合を機能的に遮断する中和抗体であってよい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防する場合、中和抗体は、感染症予防のために宿主細胞上で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質とヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）との結合を遮断する。
【0177】
病原体は、本明細書に開示されるものなど、複製または伝播のために核遺伝子情報を少なくとも部分的に必要とする本明細書に記載の細胞を感染させることが可能なあらゆる細菌、ウイルス、または真菌であってよい。感染した細胞質体は、宿主細胞の核に複製段階がある病原体の複製または伝播に必要な核成分を欠いており、こうして対象における病原体による感染症の予防または処置を減少させる。
【0178】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を低減または予防する場合、細胞質体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する病原体認識部分（例えばＡＣＥ２）を発現するように操作され、細胞質体がスパイクタンパク質およびＡＣＥ２結合を介してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染すると、細胞質体は、マクロファージ食作用のためにマクロファージを自然に動員するか、または動員を行うように操作することができる。図４に見られるように、非限定的な例として、感染した細胞質体の食作用は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体を生成するために、ヘルパーＴ細胞およびＢ細胞などの免疫細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、感染した細胞質体の食作用は、ウイルス感染を処置するためにＴ細胞を活性化することができる。
【0179】
本明細書に記載の細胞質体は、いくつかの実施形態では、病原体認識部分を発現、および場合により表示するように操作される。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、病原体と宿主細胞との結合を促進するのに十分な宿主受容体（目的の病原体における同族受容体）、またはその部分である。病原体認識部分は、細胞質体の表面上で細胞質体により発現される場合がある。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、細胞外環境に少なくとも一部がさらされるタンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、細胞表面受容体または膜貫通タンパク質をコードするポリペプチドから得られる。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、ウイルス感染中にウイルスタンパク質により結合されるタンパク質から得られる。例えば、病原体認識部分は、ウイルス感染中にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質により結合されるアンジオテンシンＩ転換酵素２（ＡＣＥ２）から得られてよい。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、本明細書に記載のウイルスのいずれか１つにより認識かつ制限可能である細胞表面受容体または膜貫通タンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、本明細書に記載のコロナウイルスのうちいずれか１つにより認識かつ結合可能な細胞表面受容体または膜貫通タンパク質から得られる。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、糖である。いくつかの実施形態では、病原体認識部分は、ポリペプチドである。コロナウイルスにより認識される非限定的な受容体として、ＡＣＥ２、アラニンアミノペプチダーゼ（ＡＮＰＥＰ）、癌胎児抗原関連細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ１）、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）、または糖が挙げられる。
【0180】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、ヒトアンジオテンシン転換酵素２（ＡＣＥ２）またはその部分を発現するように操作され、これらは、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＮＬ６３などの、ＡＣＥ２に特異的なコロナウイルスにより認識かつ結合可能である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞質体の表面上にＡＣＥ２またはその部分を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、完全長のＡＣＥ２を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ＡＣＥ２のフラグメントを発現するように操作される。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２ポリペプチドのアミノ酸配列の約５～約８０５の間のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分を含む病原体認識部分は、細胞外ドメイン、または細胞の外部に発現されるＡＣＥ２の部分から得られる。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２のアミノ酸配列のＮ末端部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２のアミノ酸配列のＣ末端部分を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、約５個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約２００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約４００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約５００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約６００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸、または約６００個のアミノ酸～約８０５個のアミノ酸の間を含む、ＡＣＥ２ポリペプチドのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２ポリペプチドのアミノ酸配列の、約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸、または約８０５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２ポリペプチドのアミノ酸配列の、少なくとも約５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、または約６００個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２の部分は、ＡＣＥ２ポリペプチドのアミノ酸配列の、多くとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、約２００個のアミノ酸、約４００個のアミノ酸、約５００個のアミノ酸、約６００個のアミノ酸、または約８０５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２はヒトＡＣＥ２（ｈｕＡＣＥ２）である。いくつかの実施形態では、ｈｕＡＣＥ２のアミノ酸配列は、配列番号１２に提供される。
【0181】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、配列番号１２に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である異種ポリペプチドを発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、配列番号１２のフラグメントに対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％以上同一である異種ポリペプチドを発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、配列番号１２に対して１００％同一である異種ポリペプチドを発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、配列番号１２のフラグメントに対して１００％同一である異種ポリペプチドを発現するように操作される。
【0182】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、内因的レベルでＡＣＥ２を発現する細胞と比較してより多くのＡＣＥ２を発現するように操作可能であるとともに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させることが可能である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、内因的レベルでＡＣＥ２を発現する細胞と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上のＡＣＥ２を発現することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、内因的レベルでＡＣＥを発現する細胞と比較して、少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５０００倍、１００００倍以上のＡＣＥ２を発現可能であるとともに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させることが可能である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞の表面上に内因的レベルでＡＣＥ２を発現する細胞と比較して、細胞質体の表面上により多くのＡＣＥ２を発現するように操作することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞の表面上に内因的なレベルでＡＣＥ２を発現する細胞と比較して、表面または細胞質体上に少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上のＡＣＥ２を発現することができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細胞の表面上に内因的なレベルでＡＣＥ２を発現する細胞と比較して、表面または細胞質体上に少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５０００倍、１００００倍以上のＡＣＥ２を発現することができる。
【0183】
いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２を発現する細胞質体のウイルス感染価は、対照細胞よりも高くてよい。本文脈での「対照細胞」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染させることが可能な天然型細胞（例えば、自然にＡＣＥ２を発現する）であってよい。いくつかの実施形態では、対照細胞は、細胞質体と同じ細胞型である。いくつかの実施形態では、対照細胞は、ＡＣＥ２を発現しないという点を除くその他の点で細胞質体と同一である。ウイルス感染価は、一般に知られるアッセイにより測定かつ判定することができる。ウイルス感染価の例示的な測定として、ウイルスプラークアッセイ、蛍光焦点アッセイ（ＦＦＡ）、およびエンドポイント希釈アッセイ（ＴＣＩＤ５０）を挙げることができる。これらのアッセイはそれぞれ、ウイルス感染価を測定するために細胞質体および／または細胞に付加される連続ウイルス希釈に左右される可能性がある。ウイルス感染価を判定するための他の例示的な測定として、一連の細胞質体および／または細胞を感染させるのに必要なウイルスのゲノムまたは粒子の量を定量化するためのｑＰＣＲあるいはＥＬＩＳＡを挙げることができる。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２を発現する細胞質体のウイルス感染価は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の可能性がある。いくつかの実施形態では、ＡＣＥ２を発現する細胞質体のウイルス感染価は、基準細胞より少なくとも約２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５０００倍、または１００００倍以上高い可能性がある。
【0184】
本明細書中のいくつかの実施形態では、ホーミングタンパク質または受容体などの少なくとも１つの標的化部分を発現するように操作された細胞質体が記載される。いくつかの実施形態では、標的化部分は細胞質体により分泌される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のケモカイン受容体のリガンドである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のサイトカインである。いくつかの実施形態では、標的化部分はホーミング受容体である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞質体の表面に発現される。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のケモカイン受容体である。いくつかの実施形態では、標的化部分は、本明細書に記載のサイトカインのうちいずれか１つに対する受容体である。
【0185】
いくつかの実施形態では、標的化部分は、リンパ組織中の１または複数の細胞に発現される１または複数のリガンドに特異的な可能性があり、リンパ組織中の細胞は、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せを含むことができる。分泌された標的化部分の非限定的な例として、ＳＤＦ１α、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、またはそれらの組合せを挙げることができる。いくつかの実施形態では、標的化部分は、細胞質体の表面に発現される。細胞質体の表面に発現される標的化部分の非限定的な例として、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、またはＰＳＧＬ－１が挙げられる。細胞表面に発現される場合がある細胞表面タンパク質の非限定的な例として、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ１、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ１、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型、ロイコシアリン、ＣＤ４４抗原、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型、Ｌ－セレクチン、リンパ球機能関連抗原１、または最晩期抗原－４、あるいはそれらの組合せを挙げることができる。
【0186】
いくつかの実施形態では、標的化部分（例えば、ホーミングタンパク質またはホーミング受容体）を発現する細胞質体は、本明細書に開示される活性薬剤も発現する。いくつかの実施形態では、活性薬剤は、本明細書に記載される追加の外因性薬剤である。いくつかの実施形態では、活性薬剤は、本明細書に記載の病原体認識部分である。いくつかの実施形態では、活性薬剤は、以下：病原体が発現するエピトープ、病原体に関連する微小環境に関連するエピトープ、または病原体が放出する生体分子に関連するエピトープに結合する抗体または単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体または単一ドメイン抗体のエピトープへの結合により、病原体に対する治療特性またはワクチン接種特性が付与される。いくつかの実施形態では、抗体または単一ドメイン抗体のエピトープへの結合は、免疫細胞を動員して免疫応答を活性化させ、病原体に対する治療特性を付与する。
【0187】
ＩＩ．処置と予防の方法
本明細書には、処置または予防を必要とする対象に、本開示の細胞質体またはこの細胞質体を含有する医薬組成物を投与することにより、病原体関連の疾患または疾病を処置あるいは予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞質体およびその医薬組成物は、本明細書に記載の疾患または疾病を処置するのに適している。このような疾患または疾病は、場合により、本明細書に記載の病原体による感染症により（少なくとも部分的に）生じる場合がある。いくつかの実施形態では、疾患または疾病は、例えば腫瘍溶解性ウイルスによる感染症などにより生じる癌である。
本明細書には、処置または予防を必要とする対象に、本開示の細胞質体またはこの細胞質体を含有する医薬組成物を投与することにより、病原体関連の疾患または疾病を処置あるいは予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞質体およびその医薬組成物は、本明細書に記載の疾患または疾病を処置するのに適している。このような疾患または疾病は、場合により、本明細書に記載の病原体による感染症により（少なくとも部分的に）生じる場合がある。いくつかの実施形態では、疾患または疾病は、例えば腫瘍溶解性ウイルスによる感染症などにより生じる癌である。
【0188】
いくつかの実施形態では、方法は、細胞質体またはこの細胞質体を含有する医薬組成物を対象に全身投与する工程を含む。
【0189】
本明細書中のいくつかの実施形態では、処置を必要とする対象に細胞質体、またはこの細胞質体を含有する医薬組成物を投与することにより癌を処置する方法が開示される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、抗癌活性薬剤をコードする外因性核酸を含む。いくつかの実施形態では、抗癌活性薬剤は、腫瘍溶解性ウイルスに対するワクチンである。いくつかの実施形態では、細胞質体は、癌細胞に特異的な抗体または小分子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、抗体は中和抗体の場合があり、癌細胞を標的とし、続いて適応免疫系を活性化させて癌細胞を中和する場合がある。いくつかの実施形態では、抗体は単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）の場合がある。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために細胞障害性薬物などの薬物にコンジュゲートされる場合がある。いくつかの実施形態では、細胞質体は、癌細胞と直接接触することにより治療特性を付与する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、癌細胞への免疫応答（例えば免疫細胞）を動員して活性化することにより、治療特性を付与する。
【0190】
本明細書に記載の病原体に対するワクチンを対象に接種させる方法も開示される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、病原体ワクチンとして使用するために病原体抗原を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、病原体は、表３～表６から選択される病原体のうちいずれか１つであってよい。いくつかの実施形態では、細胞質体は、表３～表６から選択される病原体のうちいずれか１つの抗原を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、抗原は、配列番号１、３～７、１５１～１５４、２５１～２６０、４０１～４４７、５５１～５６２、６５１～６６０、７５１～７６１、８５１～８５９、９５１～９８４、１０５１～１０５７、または１１５１～１１５３のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原は、配列番号２、８、１０１～１０４、２０１～２０９、３０１～３４７、５０１～５１２、６０１～６１０、７０１～７１１、８０１～８０９、９０１～９３４、１００１～１００７、または１１０１～１１０３のうち１または複数に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上同一であるアミノ酸配列からコードされる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、ウイルスワクチンとして使用するためにウイルス抗原を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、細菌ワクチンとして使用するために細菌抗原を発現するように操作される。
【0191】
本明細書には、対象の病原体感染症を処置する方法も記載される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、処置を必要とする対象の病原体を減少するのに有効である、病原体に特異的な抗体または小分子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、抗体は、病原体を標的とし、続いて適応免疫系を活性化させて病原体を中和する場合がある中和抗体であってよい。いくつかの実施形態では、抗体は単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）であってよい。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために細胞障害性薬物などの薬物にコンジュゲートすることができる。いくつかの実施形態では、細胞質体は、病原体と直接接触することにより治療特性を付与する。いくつかの実施形態では、細胞質体は、病原体への免疫応答（例えば免疫細胞）を動員して活性化することにより、治療特性を付与する。
【0192】
本明細書中のいくつかの実施形態では、細胞質体またはこの細胞質体を含有する医薬組成物を対象に投与することにより、対象における病原体による感染症を処置する方法が開示され、細胞質体は、対象のあらゆる組織（例えば、血液、筋肉、またはリンパ）において病原体を捕捉し、対象における病原体の伝播を防止し、および任意選択で、例えば食作用などにより対象から病原体を取り除くように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、病原体関連の疾患または疾病を処置するのに有効な治療薬を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、癌を処置するのに有効な治療薬を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、上記方法は、対象に１または複数の追加の治療薬を投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、１または複数の追加の治療薬は、以下からなる群から選択される：細胞療法薬、小分子、免疫療法薬、化学療法薬、放射線療法薬、遺伝子療法薬、および手術。追加の治療薬は、本開示の細胞質体と同時に対象に投与されてよい。追加の治療薬は、本開示の細胞質体よりも前または後に投与されてよい。
【0193】
Ａ．疾患または疾病
本明細書に開示される病原体関連の疾患または疾病として、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、および原虫感染症、ならびに本明細書に開示される感染症に関連する疾患または疾病が挙げられる。いくつかの実施形態では、病原体は、表３～表６に列記される病原体のうちいずれか１つから選択されてよい。本明細書に記載の組成物およびこの組成物を利用する方法により処置または予防され得る感染症の非限定的な例として、アシネトバクター感染症、アクチノミセス症、アフリカ睡眠病（アフリカトリバノソーマ症）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、アメーバ症、アナプラズマ症、アンギオストロンギルス症、アニキサス症、炭疽、溶血性アルカノバクテリア感染症、アルゼンチン出血熱、回虫症、アスペルギルス症、アストロウイルス感染症、バベシア病、バチルス・セレウス感染症、細菌性肺炎、細菌性膣疾患、バクテロイデス感染症、バランチジウム症、バルトネラ症、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ感染症、ＢＫウイルス感染症、黒色砂毛症、ブラストシスティス症、ブラストミセス症、ポリビア出血熱、ボツリヌス症（および乳児ボツリヌス症）、ブラジル出血熱、ブルセラ症、腺ペスト、バークホルデリア感染症、ブルーリ潰瘍、カリチウイルス感染症（ノロウイルスおよびサポウイルス）、カンピロバクター症、カンジダ症（モニリア症；鵞口瘡）、毛頭虫症、キャリオン病、猫ひっかき病、蜂巣炎、シャガス病（アメリカトリパノソーマ症）、軟性下疳、水痘、チクングンヤ熱、クラミジア症、クラミドフィラ・ニューモニエｃ感染症（台湾急性呼吸器因子すなわちＴＷＡＲ）、コレラ、黒色分芽菌症、ツボカビ症、肝吸虫症、クロストリジウム・ディフィシレ大腸炎、コクシジオイデス症、コロラドダニ熱（ＣＴＦ）、風邪（急性ウイルス性鼻咽頭炎；急性鼻感冒）、コロナウイルス感染症、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、クリミア・コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）、クリプトコックス症、クリプトスポリジウム症、皮膚幼虫移行症（ＣＬＭ）、サイクロスポーラ症、嚢虫症、サイトメガロウイルス感染症、デング熱、デスモデスムス感染症、二核アメーバ症、ジフテリア、裂頭条虫症、メジナ虫症、エボラ出血熱、エキノコックス症、エーリキア症、蟯虫症（蟯虫感染）、エンテロコッカス感染症、エンテロウイルス感染症、発疹チフス、伝染性紅斑（第５病）、突発性発疹（第６病）、肝蛭症、肥大吸虫症、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、フィラリア症、ウェルシュ菌による食中毒、自由生活性アメーバ感染症、フゾバクテリウム感染症、ガス壊疽（クロストリジウム性筋壊死）、ジオトリクム症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、ジアルジア症、鼻疽、顎口虫症、淋病、鼠径肉芽腫（ドノヴァン症）、Ａ群レンサ球菌感染症、Ｂ群レンサ球菌感染症、ヘモフィルス感染症、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ハートランドウイルス疾患、ヘリコバクター・ピロリ感染症、溶血尿毒症症候群（ＨＵＳ）、腎症候性出血熱（ＨＦＲＳ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒストプラズマ症、鉤虫感染症、ヒトボカウイルス感染症、ヒト顆粒球性エールリヒア症（Ｈｕｍａｎ ｅｗｉｎｇｉｉ ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）、ヒト顆粒白血球アナプラズマ症（ＨＧＡ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトメタニューモウイルス感染症、ヒト単球性エールリヒア症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、ヒトパラインフルエンザウイルス感染症、膜様条虫症、エプスタイン・バーウイルス感染性単核症（モノ）、インフルエンザ（インフルエンザ（ｆｌｕ））、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、インフルエンザウイルスＤ、インフルエンザウイルスｐｒ８、イソスポーラ症、川崎病、角膜炎、キンゲラ・キンゲ感染症、クールー病、ラッサ熱、レジオネラ症（レジオネラ症（Ｌｅｇｉｏｎｎａｉｒｅｓ’ｄｉｓｅａｓｅ））、レジオネラ症（ポンティアック熱）、リーシュマニア症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病（ライムボレリア症）、リンパ管フィラリア症（象皮病）、リンパ球性脈絡髄膜炎、マラリア症、マールブルク出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、類鼻疽（ホイットモア病）、脳膜炎、髄膜炎菌性疾患、メタゴニムス症、微胞子虫症、伝染性軟属腫（ＭＣ）、サル痘、耳下腺炎、発疹熱（地方性発疹チフス）、マイコプラズマ肺炎、マイコプラズマ・ジェニタリウム感染症、足菌腫（明確化（ｄｉｓａｍｂｉｇｕａｔｉｏｎ））、ハエウジ病、新生児結膜炎（新生児眼炎）、ノロウイルス（小児および乳児）、（新型）変異クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ）、ノカルジア症、オンコセルカ症（河川盲目症）、オピストルキス症、パラコクシジオイデス症（南米ブラストミセス症）、肺吸虫症、パスツレラ症、アタマジラミ寄生虫（アタマジラミ）、コロモジラミ寄生虫（ヒトジラミ）、ケジラミ寄生症（陰部シラミ、ケジラミ）、骨盤炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ））、ペスト、肺炎球菌感染症、ニューモシスティス性肺炎（ＰＣＰ）、肺炎、小児麻痺、プレボテラ感染症、初代アメーバ髄膜脳炎（ＰＡＭ）、進行性多病巣性白質脳症、オウム病、Ｑ熱、狂犬病、回帰熱、呼吸合包体ウイルス感染症、リノスポリジウム症、ライノウイルス感染症、リケッチア感染症、リケッチア痘、リフトバレー熱（ＲＶＦ）、ロッキー山斑点熱（ＲＭＳＦ）、ロタウイルス感染症、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、猩紅熱、住血吸虫症、敗血症、シゲラ症（細菌性赤痢）、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、スポロトリクム症、ブドウ球菌食中毒、ブドウ球菌感染症、糞線虫症、亜急性硬化性全脳炎、梅毒、条虫症、テタヌス（破傷風）、白癬性毛瘡（床屋疹）、頭部白癬（頭皮白癬）、体部白癬（身体白癬）、股部白癬（陰金）、手白癬（手の白癬）、黒色癬、足部白癬（足白癬）、爪白癬（爪真菌症）、癜風（でん風）、トキソカラ症（眼幼虫移行症（ＯＬＭ））、トキソカラ症（内臓幼虫移行症（ＶＬＭ））、トキソプラズマ症、トラコーマ、旋毛虫症、トリコモナス症、鞭虫症（鞭虫感染症）、結核、野兎病、腸チフス、発疹チフス、ウレアプラズマ・ウレアリチカム感染症、コクシジオイデス症、ベネズエラウマ脳炎、ベネズエラ出血熱、ビブリオ・バルニフィカス感染症、ビブリオ・パラヘモリチカス腸炎、ウイルス性肺炎、西ナイル熱、白色砂毛症（チネア・ブランカ（Ｔｉｎｅａ ｂｌａｎｃａ））、エルシニア・シュードツベルクローシス感染症、エルシニア症、黄熱病、ジカ熱、および接合菌症が挙げられる場合がある。
本明細書に開示される病原体関連の疾患または疾病として、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、および原虫感染症、ならびに本明細書に開示される感染症に関連する疾患または疾病が挙げられる。いくつかの実施形態では、病原体は、表３～表６に列記される病原体のうちいずれか１つから選択されてよい。本明細書に記載の組成物およびこの組成物を利用する方法により処置または予防され得る感染症の非限定的な例として、アシネトバクター感染症、アクチノミセス症、アフリカ睡眠病（アフリカトリバノソーマ症）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、アメーバ症、アナプラズマ症、アンギオストロンギルス症、アニキサス症、炭疽、溶血性アルカノバクテリア感染症、アルゼンチン出血熱、回虫症、アスペルギルス症、アストロウイルス感染症、バベシア病、バチルス・セレウス感染症、細菌性肺炎、細菌性膣疾患、バクテロイデス感染症、バランチジウム症、バルトネラ症、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ感染症、ＢＫウイルス感染症、黒色砂毛症、ブラストシスティス症、ブラストミセス症、ポリビア出血熱、ボツリヌス症（および乳児ボツリヌス症）、ブラジル出血熱、ブルセラ症、腺ペスト、バークホルデリア感染症、ブルーリ潰瘍、カリチウイルス感染症（ノロウイルスおよびサポウイルス）、カンピロバクター症、カンジダ症（モニリア症；鵞口瘡）、毛頭虫症、キャリオン病、猫ひっかき病、蜂巣炎、シャガス病（アメリカトリパノソーマ症）、軟性下疳、水痘、チクングンヤ熱、クラミジア症、クラミドフィラ・ニューモニエｃ感染症（台湾急性呼吸器因子すなわちＴＷＡＲ）、コレラ、黒色分芽菌症、ツボカビ症、肝吸虫症、クロストリジウム・ディフィシレ大腸炎、コクシジオイデス症、コロラドダニ熱（ＣＴＦ）、風邪（急性ウイルス性鼻咽頭炎；急性鼻感冒）、コロナウイルス感染症、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、クリミア・コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ）、クリプトコックス症、クリプトスポリジウム症、皮膚幼虫移行症（ＣＬＭ）、サイクロスポーラ症、嚢虫症、サイトメガロウイルス感染症、デング熱、デスモデスムス感染症、二核アメーバ症、ジフテリア、裂頭条虫症、メジナ虫症、エボラ出血熱、エキノコックス症、エーリキア症、蟯虫症（蟯虫感染）、エンテロコッカス感染症、エンテロウイルス感染症、発疹チフス、伝染性紅斑（第５病）、突発性発疹（第６病）、肝蛭症、肥大吸虫症、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、フィラリア症、ウェルシュ菌による食中毒、自由生活性アメーバ感染症、フゾバクテリウム感染症、ガス壊疽（クロストリジウム性筋壊死）、ジオトリクム症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、ジアルジア症、鼻疽、顎口虫症、淋病、鼠径肉芽腫（ドノヴァン症）、Ａ群レンサ球菌感染症、Ｂ群レンサ球菌感染症、ヘモフィルス感染症、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、ハートランドウイルス疾患、ヘリコバクター・ピロリ感染症、溶血尿毒症症候群（ＨＵＳ）、腎症候性出血熱（ＨＦＲＳ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒストプラズマ症、鉤虫感染症、ヒトボカウイルス感染症、ヒト顆粒球性エールリヒア症（Ｈｕｍａｎ ｅｗｉｎｇｉｉ ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）、ヒト顆粒白血球アナプラズマ症（ＨＧＡ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、ヒトメタニューモウイルス感染症、ヒト単球性エールリヒア症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、ヒトパラインフルエンザウイルス感染症、膜様条虫症、エプスタイン・バーウイルス感染性単核症（モノ）、インフルエンザ（インフルエンザ（ｆｌｕ））、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、インフルエンザウイルスＤ、インフルエンザウイルスｐｒ８、イソスポーラ症、川崎病、角膜炎、キンゲラ・キンゲ感染症、クールー病、ラッサ熱、レジオネラ症（レジオネラ症（Ｌｅｇｉｏｎｎａｉｒｅｓ’ｄｉｓｅａｓｅ））、レジオネラ症（ポンティアック熱）、リーシュマニア症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病（ライムボレリア症）、リンパ管フィラリア症（象皮病）、リンパ球性脈絡髄膜炎、マラリア症、マールブルク出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、類鼻疽（ホイットモア病）、脳膜炎、髄膜炎菌性疾患、メタゴニムス症、微胞子虫症、伝染性軟属腫（ＭＣ）、サル痘、耳下腺炎、発疹熱（地方性発疹チフス）、マイコプラズマ肺炎、マイコプラズマ・ジェニタリウム感染症、足菌腫（明確化（ｄｉｓａｍｂｉｇｕａｔｉｏｎ））、ハエウジ病、新生児結膜炎（新生児眼炎）、ノロウイルス（小児および乳児）、（新型）変異クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ）、ノカルジア症、オンコセルカ症（河川盲目症）、オピストルキス症、パラコクシジオイデス症（南米ブラストミセス症）、肺吸虫症、パスツレラ症、アタマジラミ寄生虫（アタマジラミ）、コロモジラミ寄生虫（ヒトジラミ）、ケジラミ寄生症（陰部シラミ、ケジラミ）、骨盤炎症性疾患（ＰＩＤ）、百日咳（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ））、ペスト、肺炎球菌感染症、ニューモシスティス性肺炎（ＰＣＰ）、肺炎、小児麻痺、プレボテラ感染症、初代アメーバ髄膜脳炎（ＰＡＭ）、進行性多病巣性白質脳症、オウム病、Ｑ熱、狂犬病、回帰熱、呼吸合包体ウイルス感染症、リノスポリジウム症、ライノウイルス感染症、リケッチア感染症、リケッチア痘、リフトバレー熱（ＲＶＦ）、ロッキー山斑点熱（ＲＭＳＦ）、ロタウイルス感染症、呼吸系発疹ウイルス（ＲＳＶ）、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、猩紅熱、住血吸虫症、敗血症、シゲラ症（細菌性赤痢）、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、スポロトリクム症、ブドウ球菌食中毒、ブドウ球菌感染症、糞線虫症、亜急性硬化性全脳炎、梅毒、条虫症、テタヌス（破傷風）、白癬性毛瘡（床屋疹）、頭部白癬（頭皮白癬）、体部白癬（身体白癬）、股部白癬（陰金）、手白癬（手の白癬）、黒色癬、足部白癬（足白癬）、爪白癬（爪真菌症）、癜風（でん風）、トキソカラ症（眼幼虫移行症（ＯＬＭ））、トキソカラ症（内臓幼虫移行症（ＶＬＭ））、トキソプラズマ症、トラコーマ、旋毛虫症、トリコモナス症、鞭虫症（鞭虫感染症）、結核、野兎病、腸チフス、発疹チフス、ウレアプラズマ・ウレアリチカム感染症、コクシジオイデス症、ベネズエラウマ脳炎、ベネズエラ出血熱、ビブリオ・バルニフィカス感染症、ビブリオ・パラヘモリチカス腸炎、ウイルス性肺炎、西ナイル熱、白色砂毛症（チネア・ブランカ（Ｔｉｎｅａ ｂｌａｎｃａ））、エルシニア・シュードツベルクローシス感染症、エルシニア症、黄熱病、ジカ熱、および接合菌症が挙げられる場合がある。
【0194】
コロナウイルス感染症は、αコロナウイルスまたはβコロナウイルスによる感染症の場合がある。αコロナウイルスの非限定的な例として、２２９ＥやＮＬ６３が挙げられる。βコロナウイルスの非限定的な例として、ＯＣ４３、ＨＫＵ１、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス、または中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）コロナウイルスが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、またはそれらの変異体である。いくつかの実施形態では、ＭＥＲＳコロナウイルスは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶまたはその変異体である。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳコロナウイルスは、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）などの疾患または疾病を引き起こす。
【0195】
本明細書に記載のコロナウイルスは、いくつかの実施形態では、配列番号１および３～７のいずれか１つに提供される核酸配列によりコードされる。いくつかの実施形態では、コロナウイルス（またはその変異体）は、配列番号１および３～７のいずれか１つに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である核酸配列によりコードされる。
【0196】
いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、配列番号２または８に提供されるアミノ酸配列によりコードされるスパイクタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｓタンパク質は、配列番号２または８に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列によりコードされる。
【0197】
いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、配列番号９に提供されるアミノ酸配列によりコードされるヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｎタンパク質は、配列番号９に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列によりコードされる。
【0198】
いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、配列番号１０に提供されるアミノ酸配列によりコードされる膜（Ｍ）タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｍタンパク質は、配列番号１０に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列によりコードされる。
【0199】
いくつかの実施形態では、コロナウイルスは、配列番号１１に提供されるアミノ酸配列によりコードされるエンベロープ（Ｅ）タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｅタンパク質は、配列番号１１に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列によりコードされる。
【0200】
Ｂ．対象
いくつかの実施形態では、対象は、処置を必要としている、処置を必要としていると判定される、または処置を必要としている疑いがある。本明細書で使用するとき、「対象」という用語はあらゆる生物体を表す。例えば、対象は、哺乳動物、両生類、魚類、爬虫類、無脊椎動物、鳥類、植物、古細菌、真菌、または細菌の可能性がある。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット）、イヌ（例えば、イヌ（ｄｏｇ））、ネコ（例えば、ネコ（ｃａｔ））、ウマ（例えば、ウマ（ｈｏｒｓｅ））、ヒツジ、ウシ、ブタ、非ヒト霊長類、例えば、サル（例えば猿）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであってよい。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、０～１２０歳の間（例えば、出生時～１か月の間（例えば新生児）、１か月～２歳の間（例えば乳児）、２歳～１２歳の間（例えば小児）、１２歳～１６歳の間（例えば青年）、１歳～１２０歳の間。１～１１５歳の間、１～１１０歳の間、１～１０５歳の間、１～１００歳の間、１～９５歳の間、１～９０歳の間、１～８５歳の間、１～８０歳の間、１～７５歳の間、１～７０歳の間、１～６５歳の間、１～６０歳の間、１～５０歳の間、１～４０歳の間、１～３０歳の間、１～２５歳の間、１～２０歳の間、１～１５歳の間、１～１０歳の間、５～１２０歳の間、５～１１０歳の間、５～１００歳の間、５～９０歳の間、５～６０歳の間、５～５０歳の間、５～４０歳の間、５～３０歳の間、５～２０歳の間、５～１０歳の間、１０～１２０歳の間、１０～１１０歳の間、１０～１００歳の間、１０～９０歳の間、１０～８０歳の間、１０～６０歳の間、１０～５０歳の間、１０～４０歳の間、１０～３０歳の間、１０～２０歳の間、２０～１２０歳の間、２０～１１０歳の間、２０～１００歳の間、２０～９０歳の間、２０～７０歳の間、２０～６０歳の間、２０～５０歳の間、２０～４０歳の間、２０～３０歳の間、３０～１２０歳の間、３０～１１０歳の間、３０～１００歳の間、３０～９０歳の間、３０～７０歳の間、３０～６０歳の間、３０～５０歳の間、４０～１２０歳の間、４０～１１０歳の間、４０～１００歳の間、４０～９０歳の間、４０～８０歳の間、４０～６０歳の間、４０～５０歳の間、５０～１２０歳の間、５０～１１０歳の間、５０～１００歳の間、５０～９０歳の間、５０～８０歳の間、５０～７０歳の間、５０～６０歳の間、６０～１２０歳の間、６０～１１０歳の間、６０～１００歳の間、６０～９０歳の間、６０～８０歳の間、６０～７０歳の間、７０～１２０歳の間、７０～１１０歳の間、７０～１００歳の間、７０～９０歳の間、７０～８０歳の間、８０～１２０歳の間、８０～１１０歳の間、８０～１００歳の間、８０～９０歳の間、９０～１２０歳の間、９０～１１０歳の間、９０～１００歳の間、１００～１２０歳の間、または１１０～１２０歳の間）である。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象はまだ生まれていない、例えば子宮内にいる。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１か月齢（例えば、少なくとも２歳、少なくとも１２歳、少なくとも１６歳、または少なくとも１８歳）である。本明細書に記載の方法のうちいずれかは、対象、例えば罹患した対象（すなわち、疾患を患う、例えば疾患を患っていると診断された対象）、または無症状の対象（すなわち、臨床的に健康と提示される、すなわち疾患を患うと診断されない対象）を処置するために使用可能である。本明細書で使用するとき、処置は、疾患のリスクのある対象の疾患の徴候もしくは症状の発生を低減、または徴候もしくは症状を防止（すなわちそのリスクを低減）することを意味する「予防的処置」、および疾患と診断された対象において疾患の徴候または症状を低減、疾患の進行を低減、疾患の重症度を低減、再発を低減することを意味する「治療的処置」を含む。本明細書で使用するとき、「処置する」という用語は、疾患の少なくとも１つの臨床的パラメータを改善すること、および／または利益（例えば、老化防止、抗瘢痕化、創傷治癒、抗うつ、抗炎症、体重減少）を提供することを意味する。
いくつかの実施形態では、対象は、処置を必要としている、処置を必要としていると判定される、または処置を必要としている疑いがある。本明細書で使用するとき、「対象」という用語はあらゆる生物体を表す。例えば、対象は、哺乳動物、両生類、魚類、爬虫類、無脊椎動物、鳥類、植物、古細菌、真菌、または細菌の可能性がある。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット）、イヌ（例えば、イヌ（ｄｏｇ））、ネコ（例えば、ネコ（ｃａｔ））、ウマ（例えば、ウマ（ｈｏｒｓｅ））、ヒツジ、ウシ、ブタ、非ヒト霊長類、例えば、サル（例えば猿）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであってよい。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、０～１２０歳の間（例えば、出生時～１か月の間（例えば新生児）、１か月～２歳の間（例えば乳児）、２歳～１２歳の間（例えば小児）、１２歳～１６歳の間（例えば青年）、１歳～１２０歳の間。１～１１５歳の間、１～１１０歳の間、１～１０５歳の間、１～１００歳の間、１～９５歳の間、１～９０歳の間、１～８５歳の間、１～８０歳の間、１～７５歳の間、１～７０歳の間、１～６５歳の間、１～６０歳の間、１～５０歳の間、１～４０歳の間、１～３０歳の間、１～２５歳の間、１～２０歳の間、１～１５歳の間、１～１０歳の間、５～１２０歳の間、５～１１０歳の間、５～１００歳の間、５～９０歳の間、５～６０歳の間、５～５０歳の間、５～４０歳の間、５～３０歳の間、５～２０歳の間、５～１０歳の間、１０～１２０歳の間、１０～１１０歳の間、１０～１００歳の間、１０～９０歳の間、１０～８０歳の間、１０～６０歳の間、１０～５０歳の間、１０～４０歳の間、１０～３０歳の間、１０～２０歳の間、２０～１２０歳の間、２０～１１０歳の間、２０～１００歳の間、２０～９０歳の間、２０～７０歳の間、２０～６０歳の間、２０～５０歳の間、２０～４０歳の間、２０～３０歳の間、３０～１２０歳の間、３０～１１０歳の間、３０～１００歳の間、３０～９０歳の間、３０～７０歳の間、３０～６０歳の間、３０～５０歳の間、４０～１２０歳の間、４０～１１０歳の間、４０～１００歳の間、４０～９０歳の間、４０～８０歳の間、４０～６０歳の間、４０～５０歳の間、５０～１２０歳の間、５０～１１０歳の間、５０～１００歳の間、５０～９０歳の間、５０～８０歳の間、５０～７０歳の間、５０～６０歳の間、６０～１２０歳の間、６０～１１０歳の間、６０～１００歳の間、６０～９０歳の間、６０～８０歳の間、６０～７０歳の間、７０～１２０歳の間、７０～１１０歳の間、７０～１００歳の間、７０～９０歳の間、７０～８０歳の間、８０～１２０歳の間、８０～１１０歳の間、８０～１００歳の間、８０～９０歳の間、９０～１２０歳の間、９０～１１０歳の間、９０～１００歳の間、１００～１２０歳の間、または１１０～１２０歳の間）である。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象はまだ生まれていない、例えば子宮内にいる。本明細書に記載の方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１か月齢（例えば、少なくとも２歳、少なくとも１２歳、少なくとも１６歳、または少なくとも１８歳）である。本明細書に記載の方法のうちいずれかは、対象、例えば罹患した対象（すなわち、疾患を患う、例えば疾患を患っていると診断された対象）、または無症状の対象（すなわち、臨床的に健康と提示される、すなわち疾患を患うと診断されない対象）を処置するために使用可能である。本明細書で使用するとき、処置は、疾患のリスクのある対象の疾患の徴候もしくは症状の発生を低減、または徴候もしくは症状を防止（すなわちそのリスクを低減）することを意味する「予防的処置」、および疾患と診断された対象において疾患の徴候または症状を低減、疾患の進行を低減、疾患の重症度を低減、再発を低減することを意味する「治療的処置」を含む。本明細書で使用するとき、「処置する」という用語は、疾患の少なくとも１つの臨床的パラメータを改善すること、および／または利益（例えば、老化防止、抗瘢痕化、創傷治癒、抗うつ、抗炎症、体重減少）を提供することを意味する。
【0201】
Ｃ．投薬頻度と投与
本明細書に提供される方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、一定期間（例えば、毎日、２日ごと、週２回、週１回、毎週、月に３回、月に２回、月に１回、２か月ごと、３か月ごと、４か月ごと、５か月ごと、６か月ごと、７か月ごと、８か月ごと、９か月ごと、１０か月ごと、１１か月ごと、年１回）にわたり少なくとも１回（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００回）投与される。さらに、毎月の処置、例えば、少なくとも１か月（例えば、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月以上、例えば１２か月以上）にわたり月に少なくとも１回の投与、および年１回の処置（例えば、１年以上にわたり年に１回の投与）が企図される。投与の頻度は、特定の事象、例えば、病原体関連の疾患または障害の最初の症状、ワクチン組成物の初回投与、他の州、郡、国、または大陸への移動などに相関する場合がある。
本明細書に提供される方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、一定期間（例えば、毎日、２日ごと、週２回、週１回、毎週、月に３回、月に２回、月に１回、２か月ごと、３か月ごと、４か月ごと、５か月ごと、６か月ごと、７か月ごと、８か月ごと、９か月ごと、１０か月ごと、１１か月ごと、年１回）にわたり少なくとも１回（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００回）投与される。さらに、毎月の処置、例えば、少なくとも１か月（例えば、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月、少なくとも６か月以上、例えば１２か月以上）にわたり月に少なくとも１回の投与、および年１回の処置（例えば、１年以上にわたり年に１回の投与）が企図される。投与の頻度は、特定の事象、例えば、病原体関連の疾患または障害の最初の症状、ワクチン組成物の初回投与、他の州、郡、国、または大陸への移動などに相関する場合がある。
【0202】
投与は、あらゆる適切な経路、例えば、皮下、静脈内、動脈、眼、経口、筋肉内、鼻腔内（例えば吸入）、腹腔内、局所、粘膜、硬膜外麻酔、舌下、上皮、羊膜外、関節内、皮内、骨内、鞘内、子宮内、膣内、膀胱内、硝子体内、血管周囲、および／または直腸投与、あるいは公知の投与方法のあらゆる組合せを介して行うことができる。
【0203】
いくつかの実施形態では、細胞質体の死滅プロセスは、対象に対する治療効果を呈することができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞質体の死滅プロセスは、免疫賦活の可能性がある。したがって、本明細書には、細胞質体を対象に投与する方法であって、細胞質体の死滅には対象に対する治療効果がある、方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象に投与される細胞質体は、死滅している。いくつかの実施形態では、対象に投与される細胞質体は、投与されると、残りのライフスパンが５日未満（例えば、４日未満、３日未満、２日未満、３６時間未満、１日未満、１８時間未満、１２時間未満、６時間未満、２時間未満、または１時間未満）となる。
【0204】
いくつかの実施形態では、細胞は、対象から除去し、除核することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、除核前に（例えば、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、治療用遺伝子を編集因子、治療用ナノ粒子、および／または他の治療薬を産生または含有するように）操作される。いくつかの実施形態では、対象の細胞は、除核された後に（例えば、治療用ＤＮＡ分子、治療用ＲＮＡ分子、治療用タンパク質、治療用ペプチド、小分子、治療薬、治療用遺伝子を編集因子、治療用ナノ粒子、および／または他の治療薬を産生または含有するように）操作される。いくつかの実施形態では、細胞質体（操作されたか否かにかかわらず）は、細胞を除去された対象に投与される。
【0205】
いくつかの実施形態では、細胞質体が培養および／または貯蔵される培地（「調整培地」）は、治療利益を呈することができる。いくつかの実施形態では、（例えば、除核後に）細胞質体が細胞とともに共培養および／または貯蔵される培地（「調整培地」）は、治療利益を呈することができる。いくつかの実施形態では、細胞と融合された細胞質体が細胞とともに培養および／または貯蔵される培地（「調整培地」）は、治療利益を呈することができる。
【0206】
したがって、本明細書には、対象を処置する、防止する、または予防的に処置する、あるいは対象の健康を促進させる方法であって、対象に調製培地を投与する工程を含む方法が、提供される。いかなる特定の理論にも縛られるものではないが、いくつかの実施形態では、培養培地の治療利益は、細胞質体が分泌するエキソソームの培地（例えば、治療用タンパク質を含有する）における存在に起因し得ると考えられる。
【0207】
本明細書に提供される方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、１または複数の追加の治療（例えば、あらゆる薬物（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症性薬剤）、または化学療法（例えば、化学療法剤（例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、シクロホスファミド）、あるいは本明細書に記載の小分子治療薬のうちいずれか）、細胞系療法、放射線療法、免疫療法、小分子、阻害核酸（例えば、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ）、エキソソーム系療法、遺伝子治療、または手術）とともに投与される。いくつかの実施形態では、１または複数の追加の治療は、ＰＤ－１／ＰＤＣＤ１／ＣＤ２７９、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ１５２、ＴＩＭ－３／ＨＡＶＣＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ／Ｃ１０ｏｒｆ５４、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、Ａ２ＡＲ、ＫＩＲ、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０／ＣＤ１３４／ＴＮＦＲＳＦ４、ＧＩＴＲ、またはＳＩＲＰαなどの免疫チェックポイントタンパク質を阻害する併用療法を含む。
【0208】
本明細書に提供されるいくつかの実施形態では、組成物は、１または複数の追加の治療（例えば、あらゆる薬物（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤）、または化学療法（例えば、化学療法剤（例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、シクロホスファミド））、細胞系療法、放射線療法、免疫療法、小分子、阻害核酸（例えば、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ）、または手術）をさらに含む。
【0209】
ＩＩＩ．製造方法
本開示は、本明細書に開示される抗ウイルス組成物および細胞質体を製造する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、免疫系（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、マクロファージ、リンパ球、肥満細胞、好塩基球、好酸球）、幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）、成体幹細胞（例えば間葉系幹細胞）および胚性幹細胞を含む）、ならびに線維芽細胞から由来する（例えば、取得される）一般的に用いられる治療用細胞を含むがこれらに限定されない、身体から除去した正常細胞、癌細胞、またはあらゆる初代細胞から由来する（例えば、取得される）あらゆる有核細胞から、細胞核を除去する（除核とも呼ばれる）ための方法を提供する。細胞の除核は、制限期間、例えば最大５日間にわたり生存可能な治療用細胞質体を作製することができる。そのため、本開示は、いくつかの態様では、以下の作用：増殖、分化、対象への恒久的なグラフト化、癌性への変化（ｂｅｃｏｍｅ ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）、コードされたＤＮＡ／遺伝子の対象への移行（例えば、危険な核によりコードされたＤＮＡ／遺伝子の対象への移行）のうち１または複数を実施できない安全な治療用ビヒクルとしての細胞質体の新たな使用を提供する。
本開示は、本明細書に開示される抗ウイルス組成物および細胞質体を製造する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、免疫系（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、マクロファージ、リンパ球、肥満細胞、好塩基球、好酸球）、幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ（人工多能性幹細胞）、成体幹細胞（例えば間葉系幹細胞）および胚性幹細胞を含む）、ならびに線維芽細胞から由来する（例えば、取得される）一般的に用いられる治療用細胞を含むがこれらに限定されない、身体から除去した正常細胞、癌細胞、またはあらゆる初代細胞から由来する（例えば、取得される）あらゆる有核細胞から、細胞核を除去する（除核とも呼ばれる）ための方法を提供する。細胞の除核は、制限期間、例えば最大５日間にわたり生存可能な治療用細胞質体を作製することができる。そのため、本開示は、いくつかの態様では、以下の作用：増殖、分化、対象への恒久的なグラフト化、癌性への変化（ｂｅｃｏｍｅ ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）、コードされたＤＮＡ／遺伝子の対象への移行（例えば、危険な核によりコードされたＤＮＡ／遺伝子の対象への移行）のうち１または複数を実施できない安全な治療用ビヒクルとしての細胞質体の新たな使用を提供する。
【0210】
細胞系療法において、ＦＤＡの承認は、場合により、細胞が安定するという証拠に向けられており、このことが、細胞は一旦対象の中に入ると変化しないか、危険なものにならないということを意味している。しかし、初代細胞、照射された細胞、または「ｄｅａｔｈ－ｓｗｉｔｃｈ」制御された細胞を含む、現行の細胞生成物には依然として、ｉｎ ｖｉｖｏ環境で応答するか変化する可能性がある。重要なことに、現行の治療は依然として、ｉｎ ｖｉｖｏで制御可能に応答しない新たな遺伝子を転写する可能性を保持する可能性がある。この遺伝子転写により、規制要件を満たす能力が妨げられる。対照的に、核を欠いた細胞質体は、一般的に、大いに異なるｉｎ ｖｉｖｏ微小環境でも新たな遺伝子転写の可能性がないため、さらに制御されかつ安全な細胞系療法である。
【0211】
今日まで、細胞系療法は、一般的に正常なまたは操作された有核細胞を使用している。一部の細胞系療法は、細胞増殖および誘導された致死的なＤＮＡ損傷を防止するために、対象への投与前に細胞を照射する。しかし、この手法は突然変異を誘導し、細胞タンパク質およびＤＮＡを不可逆的に損傷させるおそれのある想到量の活性酸素種を生じさせ、これにより対象の身体に大量の損傷／突然変異ＤＮＡが放たれるおそれがある。このような産物は、他の細胞へと統合する、および／または不要な抗ＤＮＡ免疫応答を誘導する場合、危険となる可能性がある。照射された細胞も、細胞間の融合によりその突然変異ＤＮＡおよび遺伝子を宿主細胞に移行する可能性があるため、危険な可能性がある。細胞から核全体を除去することは、対象への核ＤＮＡのあらゆる導入を排除することのできる、細胞のライフスパンを制限する損傷の少ない有意に安全な方法である。さらに、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）などの多くの幹細胞は、放射線誘導型の死滅に対して高度な耐性を呈するため、この方法を使用して安全性を付与することはできない。他の場合、治療用細胞は、細胞のライフスパンを制限するように、薬物誘導可能な自滅への切換えにより操作されている。しかし、ｉｎ ｖｉｖｏでの切換えの活性化は、強力ではあるが不要な副作用を伴う可能性のある有害な薬物を対象に投与することを必要とする可能性がある。この方法は培養細胞に自滅を誘導する可能性があるが（例えば９５％超）、臨床施設へと移されたときに非効率的であると予測される。いかなる特定の理論にも縛られるものではないが、薬物により誘導可能な自滅への切換えは、対象の細胞がすべて薬剤性死滅を受ける場合があるものではないため、臨床診療において不十分な安全対策であり得ると考えられている。そのため、広範囲に操作された細胞または幹細胞あるいは癌細胞の場合、薬剤性自滅への切換えは、臨床診療において危険または不十分であると考慮することができる。さらに、治療用細胞の死滅は、大量のＤＮＡ（正常または遺伝子改変済）を放つ可能性があり、こうしてＤＮＡは宿主細胞へと統合されるか、危険な全身性抗ＤＮＡ免疫応答を誘導する可能性がある。細胞が突然変異する、および／または自滅への切換えを失うもしくは不活性化させる場合、細胞は制御不能な突然変異細胞となる可能性がある。加えて、これらの細胞は、対象中で宿主細胞と融合することで、ＤＮＡ（例えば突然変異ＤＮＡ）を移行することができる。宿主細胞がすべて自滅遺伝子を継承するため、このような融合細胞は危険な可能性があるが、染色体の再編成および細胞ハイブリダイゼーションの間に治療用細胞の遺伝子／ＤＮＡの一部を継承することができる。加えて、同じ理由により、自滅への切換えを伴う治療用細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞融合のパートナーとして使用するのに理想的ではない場合がある。治療用細胞のライフスパンを制限する他の方法は、治療用途に有益な生体機能（例えば、タンパク質翻訳）を終結させる重度の損傷を引き起こす熱誘導型死滅である。細胞質体とは異なり、有核細胞療法、および上記方法により不活性化される一部の細胞までもが、その核および遺伝子材料を保持することから、依然としてＤＮＡを対象に移行することができる。化学療法薬やマイトマイシンＣなどを含む多数の化学物質は、治療上の使用前に細胞増殖を阻害し、および／または細胞死を引き起こす。しかし、かかる薬物には、細胞を著しく損傷させる顕著なオフターゲット効果がある可能性があり、この効果は、毒性が高いことで臨床用途には望まれない。多くの抗増殖性で死滅誘導型の薬物は、耐性に起因して細胞を１００％有効に阻害せず、細胞質体と異なり、多くの薬物効果が可逆的である。このため、この手法は、ｉｎ ｖｉｖｏで不死化細胞または癌細胞の細胞増殖を防止するのに適切でない。
【0212】
本明細書には、本開示の細胞質体を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、有核細胞（例えば、本明細書で「親細胞」と称される）は、皮質のアクチン細胞骨格を軟化させるためにサイトカラシンＢで処置される。いくつかの実施形態では、方法は、有核細胞にウイルスペプチドまたはタンパク質などの活性薬剤を導入する工程と、細胞質体を産生するために親細胞から核を機械的に除去する工程（除核）とを含む。いくつかの実施形態では、親細胞はさらに、除核前に第２の活性薬剤に導入される。いくつかの実施形態では、親細胞は、除核後に第２の活性薬剤に導入される。第２の活性薬剤は、細胞質体により標的細胞に送達される治療薬であってよい。例示的な標的細胞は、筋芽細胞や成熟筋細胞などの筋細胞である。
【0213】
活性薬剤は、適切な一時的トランスフェクション方法（例えば、エレクトロポレーション）または形質導入（例えば、ウイルス媒介型）を使用して親細胞に導入される。いくつかの実施形態では、活性薬剤をコードする導入遺伝子を含むプラスミドが、親細胞へとトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、活性薬剤をコードする導入遺伝子を含むウイルスベクターが、親細胞へと形質導入される。プラスミドは、細菌プラスミド（例えば、大腸菌）であってよい。いくつかの実施形態では、親細胞はさらに、同様の方法により第２の活性薬剤に導入される。いくつかの実施形態では、第２の活性薬剤は、治療薬である。
【0214】
活性薬剤、および任意選択で第２の活性薬剤を発現する親細胞の核は、機械的な除核を用いて除去される。いくつかの実施形態では、親細胞壁は、細胞透過性マイコトキシンを用いて透過性とされる。機械的な除核は、不連続のフィコール勾配を用いる密度勾配遠心分離、すなわち高速遠心分離を実施して細胞質体を形成することを含む場合がある。細胞質体は、標準の精製プロトコルを用いて単離かつ精製される。細胞質体は、外因性核酸（例えばｍＲＮＡ、ＤＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド）によりさらに操作されてよい。
【0215】
本開示は、ＤＮＡ／遺伝子（例えば、プラスミド）ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、タンパク質、ペプチド、小分子治療薬（例えば、小分子薬物）、遺伝子編集成分、ナノ粒子、および他の治療薬（例えば、細菌、細菌胞子、バクテリオファージ、細菌性成分、ウイルス（例えば、腫瘍溶解性ウイルス）、エキソソーム、脂質、またはイオン）を含むがこれらに限定されない、治療機能を持つ生体分子の天然もしくは誘導可能な発現および／または取込みにより細胞質体を製造するための方法を提供する。
【0216】
生体分子（例えば、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ）、ＤＮＡ分子（例えば、プラスミド）、タンパク質、遺伝子編集因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集因子）、ペプチド、プラスミド）を細胞質体（例えば、本明細書に記載のあらゆる細胞から得た細胞質体）へと導入するのに使用可能な様々な方法が、当該技術分野で公知である。生体分子を細胞質体へ導入するのに使用可能な方法の非限定的な例として、エレクトロポレーション、微量注射、リポフェクション、トランスフェクション、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマーを用いるトランスフェクション、カチオンポリマーのトランスフェクション、細胞圧搾、超音波処理、光学的トランスフェクション、インペールフェクション（ｉｍｐａｌｅｃｔｉｏｎ）、流体力学的送達、マグネトフェクション、およびナノ粒子トランスフェクションが挙げられる。遺伝子編集因子の非限定的な例として、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびジンクフィンガーヌクレアーゼが挙げられる。
【0217】
細胞（例えば、本明細書に記載の細胞のうちいずれかれ）を培養する方法は、当該技術分野で公知である。細胞は、三次元培養、低酸素環境、規定された細胞外マトリクス成分での培養、化学物質、サイトカイン、成長因子での処理、あるいは、特定の望ましい細胞応答を誘導するあらゆる天然または合成の外因性薬剤への曝露を含むがこれらに限定されない、治療能力／利益を備えた特異的な生体機能の成長、増殖、生存度、分化、および／または誘導を好む条件下、ｉｎ ｖｉｔｒｏで維持することができる。
【0218】
方法は、あらゆる有核細胞型（例えば、哺乳動物細胞、ヒト細胞）、原生動物細胞（例えば、アメーバ細胞）、藻細胞、植物細胞、真菌細胞、無脊椎動物細胞、魚類細胞、両生類細胞、爬虫類細胞、または鳥類細胞）から由来する（例えば、取得される）細胞質体のｉｎ ｖｉｔｒｏでの大規模産生を包含する。例えば、細胞は、自然に、または遺伝子操作により不死化されるか、および／あるいは発癌的に形質転換されている可能性がある。
【0219】
本明細書には、細胞質体の生体活性が遅くなるか完全に停止するように、本開示の精製かつ単離された細胞質体を貯蔵する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、最大１０℃の温度で懸濁アニメーションに貯蔵される。いくつかの実施形態では、温度は約４℃である。いくつかの実施形態では、温度は４℃である。いくつかの実施形態では、温度は最大４℃である。いくつかの実施形態では、細胞質体は、最大または約９６時間貯蔵される。時間経過後、細胞質体は、細胞質体の生体活性を回復させるべく懸濁アニメーションから除去される。結果生じる細胞質体は生存可能であり、それを必要とする対象への送達に適している。いくつかの実施形態では、４℃～１０℃の間で貯蔵される細胞質体は、４℃～１０℃の間で貯蔵する前の細胞質体と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上の生存率を呈する。
【0220】
本明細書に提供される組成物と方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、細胞質体は、後の使用のために冷却または冷凍される。細胞を保存する様々な方法が当該技術分野で公知であり、極めて低温での血清（例えばウシ胎仔血清）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の使用（冷凍保存）、および４℃での貯蔵のための休眠培地の使用（凍結休眠）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本明細書に提供される組成物と方法のうちいずれかのいくつかの実施形態では、細胞質体は使用前に解凍される。
【0221】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、約－８０℃～約１６℃の間の温度（例えば、約－８０℃～約１２℃、－８０℃～約１０℃、約－８０℃～約８℃、約－８０℃～約６℃、約－８０℃～約４℃、約－８０℃～約２℃、約－８０℃～約０℃、約－８０℃～約－４℃、約－８０℃～約－１０℃、約－８０℃～約－１６℃、約－８０℃～約－２０℃、約－８０℃～約－２５℃、約－８０℃～約－３０℃、約－８０℃～約－３５℃、約－８０℃～約－４０℃、約－８０℃～約－４５℃、約－８０℃～約－５０℃、約－８０℃～約－５５℃、約－８０℃～約－６０℃、約－８０℃～約－６５℃、約－８０℃～約－７０℃、約－６０℃～約１６℃、約－６０℃～約１２℃、約－６０℃～約１０℃、約－６０℃～約８℃、約－６０℃～約６℃、約－６０℃～約４℃、約－６０℃～約２℃、約－６０℃～約０℃、約－６０℃～約－４℃、約－６０℃～約－１０℃、約－６０℃～約－１０℃、約－６０℃～約－１６℃、約－６０℃～約－２０℃、約－６０℃～約－２５℃、約－６０℃～約－３０℃、約－６０℃～約－３５℃、約－６０℃～約－４０℃、約－６０℃～約－５０℃、約－５０℃～約１６℃、約－５０℃～約１２℃、約－５０℃～約１０℃、約－５０℃～約８℃、約－５０℃～約６℃、約－５０℃～約４℃、約－５０℃～約２℃、約－５０℃～約０℃、約－５０℃～約－４℃、約－５０℃～約－１０℃、約－５０℃～約－１６℃、約－５０℃～約－２０℃、約－５０℃～約－３０℃、約－５０℃～約－４０℃、約－２０℃～約１６℃、約－２０℃～約１２℃、約－２０℃～約１０℃、約－２０℃～約８℃、約－２０℃～約６℃、約－２０℃～約４℃、約－２０℃～約２℃、約－２０℃～約０℃、約－２０℃～約－４℃、約－２０℃～約－１０℃、約－２０℃～約－１５℃、約－１０℃～約１６℃、約－１０℃～約１２℃、約－１０℃～約１０℃、約－１０℃～約８℃、約－１０℃～約６℃、約－１０℃～約４℃、約－１０℃～約２℃、約－１０℃～約０℃、約－１０℃～約－４℃、約－１０℃～約－６℃、約－４℃～約１６℃、約－４℃～約１０℃、約－４℃～約６℃、約－４℃～約４℃、約－４℃～約２℃、約－４℃～約０℃、約－２℃～約１６℃、約－２℃～約１２℃、約－２℃～約１０℃、約－２℃～約６℃、約－２℃～約４℃、約－２℃～約２℃、約－２℃～約０℃、約０℃～約１６℃、約０℃～約１４℃、約０℃～約１２℃、約０℃～約１０℃、約０℃～約８℃、約０℃～約６℃、約０℃～約４℃、約２℃～約１６℃、約２℃～約１２℃、約２℃～約１０℃、約２℃～約８℃、約２℃～約６℃、約２℃～約４℃、約４℃～約１６℃、約４℃～約１２℃、約４℃～約１０℃、約４℃～約８℃、約４℃～約６℃、約６℃～約１６℃、約６℃～約１２℃、約６℃～約１０℃、約６℃～約８℃、約８℃～約１６℃、約８℃～約１２℃、約８℃～約１０℃、約１０℃～約１６℃、約１０℃～約１２℃、または約１２℃～約１６℃）で、約１日～約７日間（例えば、約１日～約６日、約１日～約５日、約１日～約４日、約１日～約３日、約１日～約２日、約２日～約７日、約２日～約６日、約２日～約５日、約２日～約４日、約２日～約３日、約３日～約７日、約３日～約６日、約３日～約５日、約３日～約４日、約４日～約７日、約４日～約６日、約４日～約５日、約５日～約７日、約５日～約６日、または約６日～約７日）、貯蔵することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の温度範囲で貯蔵される細胞質体は、同じ温度範囲で貯蔵される細胞質体と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上の生存率を呈する。
【0222】
いくつかの実施形態では、細胞質体は、凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、貯蔵のために凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、少なくとも１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１２日間、１４日間、１６日間、１８日間、２０日間、２２日間、２４日間、２６日間、２８日間、３０日間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１８か月間、２４か月間、３０か月間、３年間、４年間、５年間、または１０年間以上にわたり凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、細胞質体は、凍結乾燥前の細胞質体と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％以上の生存率を呈する。
【0223】
ＩＶ．キット
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または細胞質体を使用するためのキットが開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるキットは、対象の疾患または疾病を予防または処置する、あるいは本明細書に開示される疾患または疾病に対する予防または処置のために対象を選択するために使用される場合がある。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物、組成物、または細胞質体を含み、これらは本明細書に記載の方法を行うために使用される場合がある。キットは、材料または成分の集合体を含む。このため、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の疾患または疾病の処置用に、医薬組成物または細胞質体を含む組成物を含有している。
本明細書中のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、医薬組成物、または細胞質体を使用するためのキットが開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるキットは、対象の疾患または疾病を予防または処置する、あるいは本明細書に開示される疾患または疾病に対する予防または処置のために対象を選択するために使用される場合がある。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物、組成物、または細胞質体を含み、これらは本明細書に記載の方法を行うために使用される場合がある。キットは、材料または成分の集合体を含む。このため、いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の疾患または疾病の処置用に、医薬組成物または細胞質体を含む組成物を含有している。
【0224】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキットは、細胞質体の均質集団を選択するための成分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキットは、細胞質体の異種集団を選択するための成分を含む。いくつかの実施形態では、キットは、細胞質体が合成または放出する外因性治療薬のユニット数をアッセイするための成分を含む。いくつかの実施形態では、キットは、細胞質体の表面に発現される外因性治療薬のユニット数をアッセイするための成分を含む。いくつかの実施形態では、キットは、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、単一分子配列（Ｓｉｍｏａ）、ＰＣＲ、ｑＰＣＲなどのアッセイを実行するための成分を含む。キットに構成される構成部分の正確な性質は、その意図した目的に左右される。例えば、一部の実施形態は、対象における本明細書に開示される疾患または疾病（例えば呼吸器疾患）に対するワクチン接種を行う、またはこれらを処置する目的のために構成される。いくつかの実施形態では、キットは、特に哺乳動物対象にワクチン接種を行う、または処置するために構成される。いくつかの実施形態では、キットは、特にヒト対象にワクチン接種を行う、または処置するために構成される。
【0225】
キットには指示書が含まれる場合がある。例えば、この指示書は、医療施設または臨床現場においてキットの成分を用いて対象にいかにしてワクチン接種を行うかを医療従事者に指示する場合がある。任意選択で、キットはさらに、希釈剤、緩衝剤、薬学的に許容可能な担体、シリンジ、カテーテル、塗布具、ピペッティングツール、測定ツール、包帯材料、またはその他の有用な道具一式など、他の有用な成分を含む。キット内で組み立てられる材料または成分は、医療従事者に提供され、その操作性および有用性を保つのに都合が良く適切な方法で保管される場合がある。例えば、成分は、溶解、脱水、または凍結乾燥された形態にあってよく、これらは室温、冷却温度、または冷凍温度で提供される場合がある。成分は、一般的には適切な包装材料に包含される。本明細書で利用するとき、「包装材料」という句は、組成物などのキットの内容物を収容するために使用される１または複数の物理的構造を指す。包装材料は、好ましくは汚染物質がない滅菌環境を提供するために周知の方法により構築される。キットに利用される包装材料は、遺伝子発現アッセイ、および処置の実施において慣例的に利用されるものである。本明細書で使用するとき、「包装」という用語は、個々のキット成分を保持可能である、ガラス、プラスチック、紙、ホイルなどの適切な固形マトリクスまたは材料を表す。このため、例えばパッケージは、適切な量の医薬組成物を包含するために使用されるガラスバイアルまたはプレフィルドシリンジであってよい。包装材料には、キットとその成分の内容物および／または目的を示す外部ラベルがある。
【0226】
Ｖ．定義
別段の定めのない限り、当該技術分野におけるすべての用語、表記、ならびにその他本明細書で使用される技術的および科学的な用語または専門用語は、主張された発明特定事項が属する技術分野の当業者が共通して理解するものと同じ意味を有するように意図される。いくつかの実施形態では、共通して理解される意味を有する用語は、明瞭さおよび／または即時参照のために本明細書で定義され、本明細書中のこのような定義を含めることは、必ずしも当該技術分野で一般に理解されるものとは実質的に異なるものを表すことと解釈されるべきではない。
別段の定めのない限り、当該技術分野におけるすべての用語、表記、ならびにその他本明細書で使用される技術的および科学的な用語または専門用語は、主張された発明特定事項が属する技術分野の当業者が共通して理解するものと同じ意味を有するように意図される。いくつかの実施形態では、共通して理解される意味を有する用語は、明瞭さおよび／または即時参照のために本明細書で定義され、本明細書中のこのような定義を含めることは、必ずしも当該技術分野で一般に理解されるものとは実質的に異なるものを表すことと解釈されるべきではない。
【0227】
本出願の全体にわたって、様々な実施形態が範囲の形式で提示される場合がある。範囲の形式にある記載は、単に利便性と簡潔さのためのものであり、本開示の範囲に対する確固たる制限として解釈されるべきでないことを、理解されたい。したがって、範囲の記載は、起こり得るすべての部分範囲、同様にその範囲内の個々の数値を具体的に開示したものと考慮されねばならない。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６といった、具体的に開示された部分範囲のほか、その範囲内にある個々の数、例えば１、２、３、４、５、および６を有すると考慮する必要がある。このことは、範囲の広さに関係なく適用される。
【0228】
本明細書と特許請求の範囲で使用するとき、「ａ」、「ａｎｄ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを表していない限り複数の対象物を含む。例えば、「試料」という用語は、複数の試料を含み、その混合物も含む。
【0229】
絶対的または連続的な用語、例えば「ｗｉｌｌ」、「ｗｉｌｌ ｎｏｔ」、「ｓｈａｌｌ」、「ｓｈａｌｌ ｎｏｔ」、「ｍｕｓｔ」、「ｍｕｓｔ ｎｏｔ」、「第１の（ｆｉｒｓｔ）」、「最初に（ｉｎｉｔｉａｌｌｙ）」、「次に（ｎｅｘｔ）」、「の前に（ｂｅｆｏｒｅ）」、「の後に（ａｆｔｅｒ）」、「最後に（ｌａｓｔｌｙ）」、および「最終的に（ｆｉｎａｌｌｙ）」の使用は、本明細書に開示される本実施形態の範囲を限定するものではなく、例示的なものであることが意図される。
【0230】
本明細書で使用するとき、「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ）」、「１または複数の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、ならびに「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」という句は、使用時（ｉｎ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）に接続的かつ弁別的である。例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣのうち少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、またはＣのうち少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、およびＣのうち１または複数」、「Ａ、Ｂ、またはＣのうち１または複数」、ならびに「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」という表現はそれぞれ、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、ＡとＢ、ＡとＣ、ＢとＣ、あるいはＡとＢとＣを意味する。
【0231】
「少なくとも（ａｔ ｌｅａｓｔ）」、「～を超える（ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ）」、または「～以上（ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｏｒ ｅｑｕａｌ ｔｏ）」という用語が、一連の２つ以上の数値において最初の数値の前に付けられる場合は常に、「少なくとも」、「～を超える」、または「～以上」という用語は、一連の数値における数値それぞれに適用される。例えば、１、２、または３以上は、１以上、２以上、または３以上と同等の意味である。
【0232】
「多くとも（ｎｏ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ）」、「～未満（ｌｅｓｓ ｔｈａｎ）」、または「～以下（ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｏｒ ｅｑｕａｌ ｔｏ）」が、一連の２つ以上の数値において最初の数値の前に付けられる場合は常に、「多くとも」、「～未満」、または「～以下」という用語は、一連の数値における数値それぞれに適用される。例えば、３、２、または１以下は、３以下、２以下、または１以下と同等の意味である。
【0233】
本明細書に記載のあらゆるシステム、方法、ソフトウェア、組成物、およびプラットフォームは、モジュール式であり、連続的な工程に限定されない。したがって、「第１の」および「第２の」などの用語は、必ずしも優先順、重要度順、または作用順を示すものではない。
【0234】
「増加した（ｉｎｃｒｅａｓｅｄ）」または「増加する（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」という用語は、概して統計的に有意な量の増加を意味するように本明細書で使用される。いくつかの実施形態では、「増加した」または「増加する」という用語は、基準値と比較して少なくとも１０％の増加、例えば、基準値、標準、または対照と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または最大１００％の増加、あるいは１０～１００％の間でのいずれかの増加を意味する。他の「増加する」の例として、基準値と比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、またはそれより多くの増加が挙げられる。
【0235】
「減少した（ｄｅｃｒｅａｓｅｄ）」または「減少する（ｄｅｃｒｅａｓｅ）」という用語は、概して統計的に有意な量の減少を意味するように本明細書で使用される。いくつかの実施形態では、「減少した」または「減少する」という用語は、基準値と比較して少なくとも１０％の減少、例えば、基準値と比較して少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または最大１００％の減少（例えば、基準値と比較して存在しないまたは検出不能な値）、あるいは１０～１００％の間でのいずれかの減少を意味する。マーカーまたは症状の文脈では、これらの用語は、かかる値の統計的に有意な減少を意味する。この減少は、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％以上の可能性があり、好ましくは所与の疾患がない個体に対して正常な範囲内で容認される値に低下する。他の「減少する」の例として、基準値と比較して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍、またはそれより多くの減少が挙げられる。
【0236】
本明細書で使用するとき、「細胞」は、概して生物体の生物学的単位を表す。
【0237】
本明細書で使用するとき、「真核細胞」という用語は、別個の膜結合型の核を有する細胞を表す。かかる細胞として、例えば、哺乳動物（例えば、げっ歯類、非ヒト霊長類、またはヒト）、非哺乳動物（例えば、魚類、鳥類、爬虫類、または両生類）、無脊椎動物、昆虫、真菌、または植物の細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、真核細胞は、サッカロミセス・セレビシエなどの酵母菌である。いくつかの実施形態では、真核細胞は、哺乳動物、鳥類、植物、または昆虫の細胞などのより高度な真核生物である。
【0238】
本明細書で使用するとき、「細胞質体」、「無核細胞」、または「除核細胞」という用語は、以前は有核の細胞（例えば、本明細書に記載のあらゆる細胞）から得た核のない細胞を表すよう互換的に使用される。いくつかの実施形態では、有核細胞は細胞小器官を含み、有核細胞由来の細胞質体はかかる細胞小器官を保持し、これにより場合によっては、細胞運動、タンパク質合成、タンパク質分泌などの細胞機能が可能となる。いくつかの実施形態では、「得ること（ｏｂｔａｉｎｉｎｇ）」は、自然過程またはその他の過程を使用して有核細胞を除核細胞へと分化するのを必要としない。
【0239】
「ヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用するとき、概して塩基－糖－リン酸塩の組合せを指す。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチドを含む場合がある。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチドアナログを含む場合がある。ヌクレオチドは、核酸配列（例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ））の単量体単位であってよい。ヌクレオチドという用語は、リボヌクレオシド三リン酸アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）、シトシン三リン酸（ＣＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、およびｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＩＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、またはこれらの誘導体といったデオキシリボヌクレオシド三リン酸を含むことができる。このような誘導体として、例えば、［αＳ］ｄＡＴＰ、７－デアザ－ｄＧＴＰおよび７－デアザ－ｄＡＴＰ、ならびにこれらを含有する核酸分子にヌクレアーゼ耐性を付与するヌクレオチド誘導体を挙げることができる。ヌクレオチドという用語は、本明細書で使用するとき、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄｄＮＴＰｓ）およびそれらの誘導体を表す可能性がある。ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸の例示的な例として、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＩＴＰ、ｄｄＴＴＰを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。ヌクレオチドには、ラベルが付されない、または周知の技法により検出可能にラベルを付すことができる。ラベル付けは、量子ドットによっても行うことができる。検出可能なラベルとして、例えば、放射性同位体、蛍光ラベル、化学発光ラベル、生物発光ラベル、および酵素ラベルを挙げることができる。ヌクレオチドの蛍光ラベルとして、フルオレセイン、５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、２’７’－ジメトキシ－４’５－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、ローダミン、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、４－（４’ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、カスケードブルー、オレゴングリーン、テキサスレッド、シアニン、および５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。蛍光標識したヌクレオチドの特異的な例として、カリフォルニア州フォスターシティのＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから入手可能な［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＵＴＰ、［Ｒ１１０］ｄＣＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＣＴＰ、［ＪＯＥ］ｄｄＡＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ＦＡＭ］ｄｄＣＴＰ、［Ｒ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、［ＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、［ｄＲ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ｄＲ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ｄＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、および［ｄＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ；イリノイ州アーリントンハイツのＡｍｅｒｓｈａｍから入手可能なＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋデオキシヌクレオチド、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｆｌｕｏｒ Ｘ－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＵＴＰ、およびＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＵＴＰ；インディアナ州インディアナポリスのＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能なフルオレセイン－１５－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、テトラメチル－ローダミン－６－ｄＵＴＰ、ＩＲ７７０－９－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、およびフルオレセイン－１５－２’－ｄＡＴＰ；ならびにオレゴン州ユージーンのＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓから入手可能なクロモソーム標識ヌクレオチド、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ｄＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ｄＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ＵＴＰ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ－７－ｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ４８８－５－ｄＵＴＰ、ローダミンＧｒｅｅｎ－５－ＵＴＰ、ローダミンＧｒｅｅｎ－５－ｄＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ｄＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ＵＴＰ、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ－５－ｄＵＴＰ、およびＴｅｘａｓ Ｒｅｄ－１２－ｄＵＴＰを挙げることができる。ヌクレオチドはさらに、化学的修飾によりラベル付けまたはマーク付けすることができる。化学修飾された単一ヌクレオチドは、ビオチン－ｄＮＴＰの可能性がある。ビオチン化ｄＮＴＰの一部の非限定的な例として、ビオチン－ｄＡＴＰ（例えばｂｉｏ－Ｎ６－ｄｄＡＴＰ、ビオチン－１４－ｄＡＴＰ）、ビオチン－ｄＣＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＣＴＰ、ビオチン－１４－ｄＣＴＰ）、およびビオチン－ｄＵＴＰ（例えばビオチン－１１－ｄＵＴＰ、ビオチン－１６－ｄＵＴＰ、ビオチン－２０－ｄＵＴＰ）を挙げることができる。
【0240】
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語は、一本鎖、二本鎖、または多重鎖の形態にあるあらゆる長さのヌクレオチド、すなわち、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、あるいはそれらのアナログの高分子形態を表すように互換的に使用される。ポリヌクレオチドは、細胞に対して外因性または内因性であってよい。ポリヌクレオチドは、無細胞環境に存在してよい。ポリヌクレオチドは、遺伝子またはそのフラグメントであってよい。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡであってよい。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡであってよい。ポリヌクレオチドは、あらゆる三次元構造を有し、既知または未知の機能を実行することができる。ポリヌクレオチドは、１または複数のアナログ（例えば、改質されたバックボーン、糖、または核酸塩基）を含む場合がある。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの集合の前または後に与えることができる。アナログの一部の非限定的な例として、５－ブロモウラシル、ペプチド核酸、ゼノ核酸、モルホリノ、ロックド核酸、グリコール核酸、トレオース核酸、ジデオキシヌクレオチド、コルジセピン、７－デアザ－ＧＴＰ、フルオロフォア（例えば糖に結合されるローダミンまたはフルオレセイン）、チオール含有ヌクレオチド、ビオチン結合ヌクレオチド、蛍光塩基アナログ、ＣｐＧ島、メチル－７－グアノシン、メチル化ヌクレオチド、イノシン、チオウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、キューオシン、およびワイオシンが挙げられる。ポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子または遺伝子フラグメントのコード領域または非コーディング領域、連鎖解析から規定された座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、いずれかの配列から単離されたＤＮＡ、いずれかの配列から単離されたＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）および無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、およびプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により妨げられる可能性がある。
【0241】
「トランスフェクション」または「トランスフェクトされた」という用語は、概して非ウイルス系またはウイルス系の方法による核酸の細胞への導入を表す。核酸分子は、完全タンパク質またはその機能部分をコードする遺伝子配列の可能性がある。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらによる１９８９年の「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１８．１－１８．８８」を参照されたい。
【0242】
用語「遺伝子」は、本明細書で使用するとき、任意選択でプロモータ、オペレータ、ターミネータなどの関連制御領域とともに、個々のタンパク質またはＲＮＡをコードする核酸の部分（「コード配列」または「コード領域」とも称される）を表し、この関連制御領域は、コード配列の上流または下流に位置していてもよい。「遺伝子」という用語は、広く解釈されるものであり、遺伝子のｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ、およびゲノムＤＮＡ形態を包含する可能性がある。一部の用途では、「遺伝子」という用語は、５’および３’の未翻訳領域（５’－ＵＴＲおよび３’－ＵＴＲ）を含む転写された配列、エクソン、およびイントロンを包含する。いくつかの遺伝子では、転写された領域は、ポリペプチドをコードする「オープンリーディングフレーム」を包含する。この用語の一部の用途では、「遺伝子」は、ポリペプチドをコードするのに必要なコード配列（例えば「オープンリーディングフレーム」または「コード領域」）のみを含む。いくつかの態様では、遺伝子は、ポリペプチド、例えばリボソームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ）や転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）遺伝子をコードしない。いくつかの態様では、「遺伝子」という用語は、転写された配列以外に、上流および下流の制御領域を含む非転写領域、エンハンサ、およびプロモータを含む。「遺伝子」という用語は、遺伝子のｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、およびゲノム形態を包含する可能性がある。
【0243】
「突然変異」という用語は、本明細書で使用するとき、配列、例えば核酸またはアミノ酸配列内の残基を別の残基に置き換えること、すなわち配列内での１または複数の残基の欠失または挿入を表すことがある。１または複数の突然変異は、元の残基、続いて配列内の残基の位置を同定することにより、および新たに置換された残基の同一性により記述することができる。突然変異は、参照配列に対する配列（例えば、核酸配列、ゲノム配列、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質配列などの遺伝子配列）の変化または改質であってよい。参照配列は、野生型配列、健康または正常細胞の配列、または疾患もしくは障害に関連しない配列であってよい。参照配列は、癌に関連しない配列であってよい。突然変異の非限定的な例として、点変異、１または複数のヌクレオチドの置換、１または複数のヌクレオチドの欠失、１または複数のヌクレオチドの挿入、１または複数のヌクレオチドの融合、フレームシフト突然変異、異常、選択的スプライシング、異常メチル化、ミスセンス変異、保存的突然変異、非保存的突然変異、ナンセンス突然変異、スプライス変異、代替的なスプライス変異、遷移、移転位、デノボ突然変異、有害突然変異、疾患を引き起こす突然変異、エピ変異、創始者突然変異、生殖細胞系列突然変異、体細胞突然変異、素因となる突然変異、スプライス部位突然変異、または感受性遺伝子突然変異が挙げられる。突然変異は、特定の疾患または障害に対する個体の感受性または素因性を増加させる病原性変異または突然変異の可能性がある。突然変異は、ドライバ突然変異（例えば、細胞にその環境中でフィットネスアドバンテージ（ｆｉｔｎｅｓｓ ａｄｖａｎｔａｇｅ）を与えることにより細胞系統を癌に誘導することのできる突然変異）の可能性がある。ドライバ突然変異は、損失機能突然変異（ｌｏｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）の可能性がある。突然変異は、損失機能突然変異の可能性がある。突然変異は、パッセンジャ突然変異（例えば、ドライバ突然変異によりゲノム中に生じ、クローン拡大に関連する可能性のある突然変異）の可能性がある。本明細書で使用するとき、「遺伝子」という用語は、ポリヌクレオチド要素の組合せを表す可能性があり、この組合せは、天然または組換え式に操作可能に連結されると、一部の生成物または機能を提供する。
【0244】
本明細書で使用するとき、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーに関連して本明細書で互換的に使用される。タンパク質は、コーディングオープンリーディングフレームから翻訳されるか、その成熟形態へと処理されるような完全長のポリペプチドを表し、一方でポリペプチドまたはペプチドは、特定のタンパク質へと固有にまたは同一にマッピングされるタンパク質の分解フラグメントまたは処理フラグメントを表すことができる。ポリペプチドは、隣接したアミノ酸残基のカルボキシル基とアミノ基とのペプチド結合により一体的に結合されるアミノ酸の単一の線状ポリマー鎖であり得る。ポリペプチドは、例えば、炭水化物の付加やリン酸化などにより修飾することができる。タンパク質は、１または複数のポリペプチドを含むことができる。
【0245】
本明細書で使用するとき、「部分」もしくは「フラグメント」という用語、またはその同義語は、実体（例えばタンパク質）の一部を表すことができる。タンパク質またはポリペプチドの場合、部分またはフラグメントは、タンパク質またはポリペプチドの全長よりも小さい。いくつかの実施形態では、部分またはフラグメントは、完全長のタンパク質に意図された機能を維持する。
【0246】
「補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）」、「補体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｓ）」、「相補的」、および「相補性」という用語は、本明細書で使用するとき、概して所与の配列に対して完全に相補的であるとともにハイブリダイズ可能な配列を表す。いくつかの実施形態では、例えばＡ－Ｔ、Ａ－Ｕ、Ｇ－Ｃ、およびＧ－Ｕの塩基対が形成されるように、所与の領域にわたり塩基の配列が、その結合パートナーの配列と相補的に結合可能である場合、所与の核酸でハイブリダイズされる配列は、所与の分子の「補体」または「逆補体」と称される。一般に、第２の配列にハイブリダイズ可能な第１の配列は、第２の配列に特異的または選択的にハイブリダイズ可能であり、その結果、第２の配列またはそのセットに対するハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション反応中に非標的配列とのハイブリダイゼーションより優先される（例えば、当該技術分野で一般的に使用される厳密な条件など、所与の一連の条件下で熱力学的により安定する）。典型的に、ハイブリダイズ可能な配列は、少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列相補性を含む、２５％～１００％の相補性など、それぞれの長さの全体または一部にわたり配列相補性の程度を共有している。相補性の割合を評価する目的のためなどの配列同一性は、あらゆる適切なアライメントアルゴリズムにより測定可能であり、このアルゴリズムとして、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにて利用可能なＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅアライナを参照）、ＢＬＡＳＴアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉにて利用可能なＢＬＡＳＴアライメントツールを参照）、またはＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（例えば、任意選択でデフォルト設定を伴うｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｗａｔｅｒ／ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ．ｈｔｍｌにて利用可能なＥＭＢＯＳＳ Ｗａｔｅｒアライナを参照）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。最適なアライメントは、デフォルトパラメータを含む、選択されたアルゴリズムのあらゆる適切なパラメータを使用して評価することができる。
【0247】
「パーセント（％）同一性」という用語は、本明細書で使用するとき、概して候補となる配列のアミノ酸（または核酸）残基の割合を指し、この残基は、必要に応じて最大のパーセント同一性を達成するべく配列のアライメントおよびギャップの導入後の参照配列のアミノ酸（または核酸）残基と同一である（すなわち、ギャップは、最適なアライメントのために候補配列および参照配列のうち１つまたは両方に導入することができ、比較目的のために非相同的な配列は無視される場合がある）。パーセント同一性を決定するためのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野内にある様々な方法で達成することができる。２つの配列のパーセント同一性は、ＢＬＡＳＴを用いて被験配列を比較配列とアライメントさせ、比較配列の同じ位置にあるアミノ酸またはヌクレオチドと同一であるアライメントされた被験配列におけるアミノ酸またはヌクレオチドの数を判定し、および同一のアミノ酸またはヌクレオチドの数を、比較配列中のアミノ酸またはヌクレオチドの数で割ることにより、算出することができる。
【0248】
「判定すること」、「測定すること」、「評価すること」、「査定すること」、および「解析すること」という用語は、しばしば測定の形式を表すように本明細書で互換的に使用される。これらの用語は、要素が存在するか否かを判定（例えば検出）することを含む。これらの用語は、量的、質的、または定的および質的な測定を含むことができる。査定は、相対的または絶対的なものであってよい。「～の存在を検出すること」は、状況に応じて、存在する物の量を判定することに加えて、それが存在するか否かを判定することも含むことができる。
【0249】
「対象」および「個体」という用語は、発現された遺伝子材料を含有する生体実態を表すように本明細書でしばしば互換的に使用される。本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、あらゆる生物体を表す。例えば、対象は、哺乳動物、両生類、魚類、爬虫類、無脊椎動物、鳥類、植物、古細菌、真菌、または細菌の可能性がある。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット）、イヌ（例えば、イヌ（ｄｏｇ））、ネコ（例えば、ネコ（ｃａｔ））、ウマ（例えば、ウマ（ｈｏｒｓｅ））、ヒツジ、ウシ、ブタ、非ヒト霊長類、例えば、サル（例えば猿）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであってよい。対象は、ｉｎ ｖｉｖｏで取得またはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された生体実体の組織、細胞、およびそれらの子孫であってよい。対象は哺乳動物であってよい。哺乳動物はヒトであってよい。対象は「患者」であってよく、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の疾患または疾病を有すると診断された、またはそれらを有している対象を表す。いくつかの実施形態では、対象は診断されていないが、疾患または疾病を進行させるか有するリスクが高いと予測される。
【0250】
「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、対象の身体に生じる事象を説明するために使用される。
【0251】
「ｅｘ ｖｉｖｏ」という用語は、対象の身体の外部に生じる事象を説明するために使用される。ｅｘ ｖｉｖｏアッセイは、対象に対して実施されない。むしろ、対象とは別の試料に対して実施される。試料に対し実施されるｅｘ ｖｉｖｏアッセイの一例は、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」アッセイである。
【0252】
「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、検査試薬を保持するための容器に包含されて生じる事象を説明するために使用され、それにより、検査試薬は材料が得られる生体源から分離される。ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、生存または死滅している細胞を利用する細胞系アッセイを包含することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイはさらに、無傷の細胞を利用しない無細胞アッセイを包含することができる。
【0253】
本明細書で使用するとき、「約」という用語の付く数は、その数のプラスまたはマイナス１０％の数を表す。「約」という用語の付く範囲は、最低値のマイナス１０％および最大値のプラス１０％の範囲を表す。
【0254】
本明細書で使用するとき、「処置」または「処置すること」という用語は、レシピエントに対し有益または所望の結果を得るための医薬的またはその他の介入レジメンに関連して使用される。有益または所望の結果として、治療利益および／または予防利益が挙げられるが、これらに限定されるものではない。治療利益は、処置される症状、または根底にある障害の根絶あるいは寛解を表す場合がある。また、治療利益は、対象が依然として根底にある障害による影響を受ける場合があるにもかかわらず、対象に改善が観察されるように、根底にある障害に関連した生理学的症状のうち１または複数の根絶あるいは寛解により達成することができる。予防効果は、疾患もしくは疾病の出現を遅延、予防、または排除すること、疾患もしくは疾病の症状の発症を遅延または排除すること、疾患もしくは疾病の進行を遅くする、停止する、または逆転させること、あるいはそれらのあらゆる組合せを含む。予防利益において、特定の疾患を発症するリスクのある対象、または、疾患の生理学的症状のうち１または複数を報告する対象は、この疾患の診断が行われなかったとしても、処置を受ける場合がある。
【0255】
「適応免疫応答」という用語は、本明細書で使用するとき、抗原を制限する形で応答する免疫応答の成分を表し、Ｔリンパ球および体液に起因する細胞免疫応答、またはＢ細胞およびプラズマ細胞に起因する抗体応答を包含する。「細胞免疫応答」は、以下：Ｔ細胞によるサイトカイン／ケモカイン放出、二次リンパ器官へのＴ細胞ホーミング、Ｔ細胞増殖、および細胞傷害性Ｔ細胞応答のうちいずれか１つまたは複数により示される。いくつかの方法は、Ｔリンパ球のｅｘ ｖｉｖｏ抗原刺激アッセイ、およびＴリンパ球の四量体染色などのｉｎ ｖｉｖｏアッセイを含む、抗原特異性細胞免疫反応を検証するために使用可能である。「抗体応答」は、Ｂ細胞増殖、Ｂ細胞サイトカイン／ケモカイン放出、二次リンパ器官へのＢ細胞ホーミング、抗体分泌、ＩｇＧ型抗体への切換えを行うアイソタイプ、または形質細胞分化のうち１または複数により示される。抗体応答は、いくつかの方法により検証可能であるが、優勢的な方法は、ワクチン接種を受けた個体の血清または血漿中での抗原特異性抗体の検出である。
【0256】
「アジュバント」は、本明細書で使用するとき、抗原と併用したときに抗原に対する適応免疫応答を促進させる物質を表す。「免疫刺激化合物」は、最終的に免疫応答の適応性成分（例えばＢ細胞、Ｔ細胞）の発達を生じさせる「危険シグナル」を開始するために自然免疫系と特異的に相互作用する物質を表す。免疫刺激化合物は、天然型または合成のいずれかで、ｄｓＲＮＡ、リポ多糖、およびＣｐＧ ＤＮＡなどの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を含む。免疫刺激化合物は、トール様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ様受容体、ＲＩＧ－１またはＭＤＡ－５受容体、またはＣ－型レクチン受容体、あるいはＳＴＩＮＧ経路を含む様々な自然免疫受容体のアゴニストである。
【0257】
「薬学的に許容可能な担体」、「薬学的に許容可能な賦形剤」、「生理学的に許容可能な担体」、または「生理学的に許容可能な賦形剤」という用語は、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶剤、あるいは封入材料など、薬学的に許容可能な材料、組成物、または溶媒を表す。化合物は、医薬製剤の他の成分と適合可能という意味で「薬学的に許容可能」な可能性がある。化合物はさらに、合理的なベネフィット・リスク比と比例して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、あるいはその他の問題または合併症がないヒトおよび動物の組織または器官に接して使用するのに適切な場合がある。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎによる「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ」、「Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５」、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ」、Ｒｏｗｅら編「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００５」、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ」、ＡｓｈおよびＡｓｈ編「Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７」、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００４」を参照されたい。
【0258】
「医薬組成物」という用語は、本明細書に開示される化合物と、希釈剤または担体などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物は、生物体への化合物の投与を容易にすることができる。化合物投与のあらゆる技法が当該技術分野に存在しており、経口投与、注射、エアロゾル投与、非経口投与、および局所投与が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書で使用される章の見出しは、単に構成上の目的のために付したものであり、記載される発明特定事項を制限するものと解釈されるべきではない。
【0259】
ＶＩ．実施形態
組成物
本明細書には、下記実施形態による組成物が開示される：
組成物
本明細書には、下記実施形態による組成物が開示される：
【0260】
実施形態１．除核されており抗ウイルス薬を含む細胞を含む組成物。
【0261】
実施形態２．抗ウイルス薬が、ウイルス抗原、ウイルス、またはウイルス抗原に特異的な抗体を弱毒化したものである、実施形態１に記載の組成物。
【0262】
実施形態３．ウイルス抗原が、ウイルスタンパク質、ペプチドフラグメント、核酸、または糖部であり、ウイルス抗原に特異的な抗体が、ウイルスタンパク質、ペプチドフラグメント、核酸、または糖部に対して特異的である、実施形態２に記載の組成物。
【0263】
実施形態４．細胞が、抗ウイルス薬のｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質合成またはタンパク質分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む、実施形態２に記載の組成物。
【0264】
実施形態５．１または複数の細胞内小器官が、ゴルジ体、リボソーム、小胞体から選択される、実施形態４に記載の組成物。
【0265】
実施形態６．細胞直径が、長さ約１マイクロメートル～１００マイクロメートルである、実施形態１から５のいずれかに記載の組成物。
【0266】
実施形態７．細胞が幹細胞である、実施形態１から６のいずれかに記載の組成物。
【0267】
実施形態８．幹細胞が間葉系幹細胞または人工多能性幹細胞である、実施形態７に記載の組成物。
【0268】
実施形態９．間葉系幹細胞が、脂肪組織または骨から得られる、実施形態８に記載の組成物。
【0269】
実施形態１０．人工多能性幹細胞が、尿、唾液、頭髪、皮膚、または糞便から得られる、実施形態８に記載の組成物。
【0270】
実施形態１１．ウイルス抗原、または該ウイルス抗原に特異的な抗体は、細胞の表面にて発現されるか、分泌性である、実施形態２から１０のいずれかに記載の組成物。
【0271】
実施形態１２．ウイルスのウイルス抗原が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより細胞の表面に固着される、実施形態１から１１のいずれかに記載の組成物。
【0272】
実施形態１３．抗ウイルス薬が、
ｂ）二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス）、
ｃ）一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス（＋鎖または「センス」）ＤＮＡ（例えば、パルボウイルス）、
ｄ）ｄｓＲＮＡウイルス（例えば、レオウイルス）、
ｅ）（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、ピコルナウイルス、トガウイルス）、
ｆ）（－）ｓｓＲＮＡウイルス（－鎖またはアンチセンス）ＲＮＡ（例えば、オルソミクソウイルス、ラブドウイルス）、
ｇ）生活環にＤＮＡ中間体を伴うｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、レトロウイルス）、または
ｈ）生活環にＲＮＡ中間体を伴うｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルスＤＮＡ（例えば、ヘパドナウイルス）
から選択されるウイルスに対して特異的であるか、またはこのウイルスから得られる、実施形態１から１２のいずれかに記載の組成物。
ｂ）二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス）、
ｃ）一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス（＋鎖または「センス」）ＤＮＡ（例えば、パルボウイルス）、
ｄ）ｄｓＲＮＡウイルス（例えば、レオウイルス）、
ｅ）（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、ピコルナウイルス、トガウイルス）、
ｆ）（－）ｓｓＲＮＡウイルス（－鎖またはアンチセンス）ＲＮＡ（例えば、オルソミクソウイルス、ラブドウイルス）、
ｇ）生活環にＤＮＡ中間体を伴うｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、レトロウイルス）、または
ｈ）生活環にＲＮＡ中間体を伴うｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルスＤＮＡ（例えば、ヘパドナウイルス）
から選択されるウイルスに対して特異的であるか、またはこのウイルスから得られる、実施形態１から１２のいずれかに記載の組成物。
【0273】
実施形態１４．抗ウイルス薬が、呼吸系ウイルス、皮膚ウイルス、食品媒介型ウイルス、性感染症ウイルス、または腫瘍溶解性ウイルス、あるいはそれらの組合せから得られる、実施形態１から１３のいずれかに記載の組成物。
【0274】
実施形態１５．呼吸系ウイルスが、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス、およびコロナウイルスから選択される、実施形態１４に記載の組成物。
【0275】
実施形態１６．皮膚ウイルスが、伝染性軟属腫、単純ヘルペスウイルス－１、および水痘－帯状疱疹ウイルスから選択される、実施形態１４に記載の組成物。
【0276】
実施形態１７．食品媒介型ウイルスが、Ａ型肝炎、ノロウイルス、およびロタウイルスから選択される、実施形態１４に記載の組成物。
【0277】
実施形態１８．性感染症ウイルスが、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎、陰部ヘルペス、およびヒト免疫不全ウイルスから選択される、実施形態１４に記載の組成物。
【0278】
実施形態１９．腫瘍溶解性ウイルスが、ヒトパピローマウイルス感染症またはＢ型肝炎である、実施形態１４に記載の組成物。
【0279】
実施形態２０．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態１２に記載の組成物。
【0280】
実施形態２１．ウイルス抗原が、細胞に発現される膜貫通ペプチドである、実施形態３に記載の組成物。
【0281】
実施形態２２．ウイルス抗原がヒトに対し免疫原性である、実施形態３から２１のいずれかに記載の組成物。
【0282】
実施形態２３．ウイルス抗原が、コロナウイルスから得られるペプチドである、実施形態３から２２のいずれかに記載の組成物。
【0283】
実施形態２４．コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）またはその変異体である、実施形態２３に記載の組成物。
【0284】
実施形態２５．ペプチドが、コロナウイルスから得られるスパイクタンパク質、膜タンパク質、または核タンパク質から選択される、実施形態２３または２４に記載の組成物。
【0285】
実施形態２６．細胞が、ペプチドをコードするｍＲＮＡを含む、実施形態２５に記載の組成物。
【0286】
実施形態２７．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２６に記載の組成物。
【0287】
実施形態２８．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８５％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２６に記載の組成物。
【0288】
実施形態２９．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２６に記載の組成物。
【0289】
実施形態３０．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２６に記載の組成物。
【0290】
実施形態３１．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも１００％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２６に記載の組成物。
【0291】
実施形態３２．ペプチドが、配列番号２または８に対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２３から２６のいずれかに記載の組成物。
【0292】
実施形態３３．ｍＲＮＡの半減期が３～５日である、実施形態２６から３２に記載の組成物。
【0293】
実施形態３４．ｍＲＮＡが、アルブミンペプチドを含む融合タンパク質をコードする、実施形態２６から３２のいずれかに記載の組成物。
【0294】
実施形態３５．ｍＲＮＡが、免疫変調成分を含む融合タンパク質をコードする、実施形態２６から３２のいずれかに記載の組成物。
【0295】
実施形態３６．免疫変調成分が、対象における免疫応答の活性化因子である、実施形態３５に記載の組成物。
【0296】
実施形態３７．免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）またはサイトカイン、あるいはそれらの組合せである、実施形態３６に記載の組成物。
【0297】
実施形態３８．細胞が、１または複数のホーミング受容体をさらに含む、実施形態１から３７のいずれかに記載の組成物。
【0298】
実施形態３９．１または複数のホーミング受容体が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより細胞の表面に固着される、実施形態３８に記載の組成物。
【0299】
実施形態４０．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態３９に記載の組成物。
【0300】
実施形態４１．１または複数のホーミング受容体が細胞の表面に発現される、実施形態３８に記載の組成物。
【0301】
実施形態４２．１または複数のホーミング受容体が、細胞の表面上での１または複数のホーミング受容体の発現を増大させるように遺伝子組換えされている、実施形態４１に記載の組成物。
【0302】
実施形態４３．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織中の１または複数の細胞上に発現される１または複数のリガンドに対し特異的である、実施形態３８から４２のいずれかに記載の組成物。
【0303】
実施形態４４．リンパ組織中の１または複数の細胞が、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せを含む、実施形態４３に記載の組成物。
【0304】
実施形態４５．１または複数のホーミング受容体が、同じものでない２つ以上のリガンドに対し特異的な２つ以上のホーミング受容体を含む、実施形態３８から４４のいずれかに記載の組成物。
【0305】
実施形態４６．１または複数のホーミング受容体が、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型（ＣＸＣＲ３）、ロイコシアリン（ＣＤ４３）、ＣＤ４４抗原（ＣＤ４４）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、または最晩期抗原－４（ＶＬＡ４）から選択される、実施形態３８から４５のいずれかに記載の組成物。
【0306】
実施形態４７．１または複数のホーミング受容体が、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）およびＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）を含む、実施形態３８から４６のいずれかに記載の組成物。
【0307】
実施形態４８．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織の内皮細胞中に発現されるリガンドに対し特異的であり、組成物を対象に投与したとき、ウイルス抗原が、コロナウイルスに対する対象の免疫応答を活性化させるのに有効である、実施形態３８から４６のいずれかに記載の組成物。
【0308】
実施形態４９．細胞が、１または複数の免疫変調成分をさらに含む、実施形態１から３８のいずれかに記載の組成物。
【0309】
実施形態５０．１または複数の免疫変調成分が、細胞の表面に固着される、実施形態４９に記載の組成物。
【0310】
実施形態５１．１または複数の免疫変調成分が、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含むリンカーを使用して、細胞の表面に固着される、実施形態５０に記載の組成物。
【0311】
実施形態５２．１または複数の免疫変調成分が細胞の表面に発現される、実施形態４９から５１のいずれかに記載の組成物。
【0312】
実施形態５３．１または複数の免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、リンホトキシンα（ＬＴＡ）、リンホトキシンβ（ＬＴＢ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬＧ）、ｆａｓリガンド（ＦＡＳＬＧ）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー８（ＴＮＦＳＦ８）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＳＦ９）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＴＮＦＳＦ１１）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＮＦＳＦ１２）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３（ＴＮＦＳＦ１３）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１５（ＴＮＦＳＦ１５）、ＴＮＦスーパーファミリー１８（ＴＮＦＳＦ１８）、エクトジスプラシンＡ（ＥＤＡ）、サイトカイン、およびウイルス抗原タンパク質からなる群から選択される、実施形態４９から５２のいずれかに記載の組成物。
【0313】
実施形態５４．１または複数の免疫変調成分が、アルブミンペプチドを含む融合タンパク質である、実施形態４９から５３のいずれかに記載の組成物。
【0314】
実施形態５５．単離される、実施形態１から５４のいずれかに記載の組成物。
【0315】
実施形態５６．精製される、実施形態１から５４のいずれかに記載の組成物。
【0316】
実施形態５７．懸濁液、または細胞培養液、あるいはその両方に複数の細胞を含む、実施形態１から５４のいずれかに記載の組成物。
【0317】
実施形態５８．組成物が凍結保存されるか、既に少なくとも４８時間凍結保存されている、実施形態１から５７のいずれかに記載の組成物。
【0318】
実施形態５９．実施形態１から５８のいずれかに記載の組成物を送達する方法であって、送達を必要とする対象に組成物を全身送達または直接送達により投与する工程を含む組成物。
【0319】
実施形態６０．全身送達が、静脈内送達または吸入を含み、直接送達が、筋肉内送達、腹腔内送達、およびリンパ節内送達を含む、実施形態５９に記載の方法。
【0320】
実施形態６１．送達後、組成物を含む生ウイルスにより対象を感染症から実質的に免疫化する工程をさらに含む、実施形態５９または６０に記載の方法。
【0321】
実施形態６２．対象のウイルス感染症を予防する方法であって、実施形態１から５８の組成物を対象に投与することで、組成物を含む生ウイルスにより対象を感染症から実質的に免疫化する工程を含む方法。
【0322】
実施形態６３．対象の急性ウイルス感染症を処置する方法であって、実施形態１から５８に記載の組成物を対象に投与することで、対象のウイルス負荷をへらす工程を含む方法。
【0323】
実施形態６４．対象におけるコロナウイルスにより生じる疾患を予防する方法であって、実施形態１から５８のいずれかに記載の組成物を対象に投与することで、コロナウイルスによる生じる疾患を予防する工程を含む方法。
【0324】
実施形態６５．対象におけるコロナウイルスにより生じる疾患を処置する方法であって、実施形態１から５８のいずれかに記載の組成物を対象に投与することで、コロナウイルスによる生じる疾患を処置する工程を含む方法。
【0325】
実施形態６６．疾患が、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）である、実施形態６４および６５に記載の方法。
【0326】
実施形態６７．
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された組成物を受け取る工程であって、該組成物の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から組成物を除去することで、組成物の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態５９から６６のいずれかに記載の方法。
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された組成物を受け取る工程であって、該組成物の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から組成物を除去することで、組成物の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態５９から６６のいずれかに記載の方法。
【0327】
製造方法
本明細書には、下記実施形態による、細胞質体を利用して組成物を産生する方法が開示される：
本明細書には、下記実施形態による、細胞質体を利用して組成物を産生する方法が開示される：
【0328】
実施形態１．組成物を製造する方法であって、
（ａ）第１のウイルス抗原または抗ウイルスの抗体をコードする第１の核酸を親細胞に導入する工程であって、親細胞は、
ｉ）核、および
ｉｉ）タンパク質合成またはタンパク質分泌のための１または複数の細胞内小器官
を含む、工程と、
（ｂ）親幹細胞から核を機械的に除去して除核幹細胞を産生する工程であって、除核幹細胞は１または複数の細胞内小器官を含む、工程と
を含む方法。
（ａ）第１のウイルス抗原または抗ウイルスの抗体をコードする第１の核酸を親細胞に導入する工程であって、親細胞は、
ｉ）核、および
ｉｉ）タンパク質合成またはタンパク質分泌のための１または複数の細胞内小器官
を含む、工程と、
（ｂ）親幹細胞から核を機械的に除去して除核幹細胞を産生する工程であって、除核幹細胞は１または複数の細胞内小器官を含む、工程と
を含む方法。
【0329】
実施形態２．組成物を製造する方法であって、
（ａ）第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体をコードする第１の核酸を除核幹細胞に導入する工程であって、除核幹細胞は、第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体のタンパク質合成またはタンパク質分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む、工程と、
（ｂ）除核幹細胞中に第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体を発現する工程と
を含む方法。
（ａ）第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体をコードする第１の核酸を除核幹細胞に導入する工程であって、除核幹細胞は、第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体のタンパク質合成またはタンパク質分泌のための１または複数の細胞内小器官を含む、工程と、
（ｂ）除核幹細胞中に第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体を発現する工程と
を含む方法。
【0330】
実施形態３．第１のウイルス抗原が、除核幹細胞の表面に発現される、実施形態１および２に記載の方法。
【0331】
実施形態４．第１のウイルス抗原または抗ウイルス抗体が分泌性である、実施形態１から３のいずれかに記載の方法。
【0332】
実施形態５．懸濁液の凍結温度未満の温度で少なくとも２４時間、４８時間、または９６時間、除核細胞を懸濁液に貯蔵する工程をさらに含む、実施形態１から４のいずれかに記載の方法。
【0333】
実施形態６．第２のウイルス抗原をコードする第２の核酸を導入する工程であって、第１の核酸と第２の核酸は同一ではなく、第１のウイルス抗原と第２のウイルス抗原は同一ではない、実施形態１から５のいずれかに記載の方法。
【0334】
実施形態７．第１のウイルス抗原とは異なる複数のウイルス抗原をコードする複数の核酸を導入する工程をさらに含む、実施形態１から６のいずれかに記載の方法。
【0335】
実施形態８．核酸がメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、実施形態１から７のいずれかに記載の方法。
【0336】
実施形態９．核酸がＤＮＡである、実施形態１から８のいずれかに記載の方法。
【0337】
実施形態１０．第１のウイルス抗原が哺乳動物から得られる、実施形態１から９のいずれかに記載の方法。
【0338】
実施形態１１．抗ウイルス抗体がコロナウイルスに対し特異的である、実施形態１から１０のいずれかに記載の方法。
【0339】
実施形態１２．第１のウイルス抗原が、コロナウイルスから得られる弱毒化ウイルス粒子である、実施形態１から１１のいずれかに記載の方法。
【0340】
実施形態１３．第１のウイルス抗原が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより除核幹細胞の表面に固着される、実施形態１から１２のいずれかに記載の方法。
【0341】
実施形態１４．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態１３に記載の方法。
【0342】
実施形態１５．第１のウイルス抗原が、除核幹細胞中で発現される膜貫通ペプチドである、実施形態１から１４のいずれかに記載の方法。
【0343】
実施形態１６．第１のウイルス抗原がヒトに対し免疫原性である、実施形態１から１５のいずれかに記載の方法。
【0344】
実施形態１７．第１のウイルス抗原が、コロナウイルスから得られるペプチドである、実施形態１から１６のいずれかに記載の方法。
【0345】
実施形態１８．ペプチドが、コロナウイルスから得られるスパイクタンパク質、膜タンパク質、または核タンパク質から選択される、実施形態１７に記載の方法。
【0346】
実施形態１９．コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）またはその変異体である、実施形態１８に記載の方法。
【0347】
実施形態２０．除核幹細胞が、ペプチドをコードするｍＲＮＡを含む、実施形態１７から１９のいずれかに記載の方法。
【0348】
実施形態２１．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２０に記載の方法。
【0349】
実施形態２２．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８５％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２０に記載の方法。
【0350】
実施形態２３．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２０に記載の方法。
【0351】
実施形態２４．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２０に記載の方法。
【0352】
実施形態２５．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも１００％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２０に記載の方法。
【0353】
実施形態２６．ペプチドが、配列番号２に対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１７から２０のいずれかに記載の方法。
【0354】
実施形態２７．ｍＲＮＡの半減期が３～５日である、実施形態２０から２６のいずれかに記載の方法。
【0355】
実施形態２８．ｍＲＮＡが、アルブミンペプチドを含む融合タンパク質をコードする、実施形態２０から２６のいずれかに記載の方法。
【0356】
実施形態２９．ｍＲＮＡが、免疫変調成分を含む融合タンパク質をコードする、実施形態２０から２６のいずれかに記載の方法。
【0357】
実施形態３０．免疫変調成分が、対象における免疫応答の活性化因子である、実施形態２９に記載の方法。
【0358】
実施形態３１．免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）またはサイトカイン、あるいはそれらの組合せである、実施形態３０に記載の方法。
【0359】
実施形態３２．除核幹細胞が、１または複数のホーミング受容体をさらに含む、実施形態１から３１のいずれかに記載の方法。
【0360】
実施形態３３．１または複数のホーミング受容体が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより除核幹細胞の表面に固着される、実施形態３２に記載の方法。
【0361】
実施形態３４．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態３３に記載の方法。
【0362】
実施形態３５．１または複数のホーミング受容体が、除核幹細胞の表面に発現される、実施形態３２に記載の方法。
【0363】
実施形態３６．１または複数のホーミング受容体が、除核幹細胞の表面上での１または複数のホーミング受容体の発現を増大させるように遺伝子組換えされている、実施形態３２から３５のいずれかに記載の方法。
【0364】
実施形態３７．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織中の１または複数の細胞上に発現される１または複数のリガンドに対し特異的である、実施形態３２から３６のいずれかに記載の方法。
【0365】
実施形態３８．リンパ組織中の１または複数の細胞が、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せから選択される、実施形態３７に記載の方法。
【0366】
実施形態３９．１または複数のホーミング受容体が、同じものでない２つ以上のリガンドに対し特異的な２つ以上のホーミング受容体を含む、実施形態３２から３８のいずれかに記載の方法。
【0367】
実施形態４０．１または複数のホーミング受容体が、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型（ＣＸＣＲ３）、ロイコシアリン（ＣＤ４３）、ＣＤ４４抗原（ＣＤ４４）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、または最晩期抗原－４（ＶＬＡ４）から選択される、実施形態３２から３９のいずれかに記載の方法。
【0368】
実施形態４１．１または複数のホーミング受容体が、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）およびＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）を含む、実施形態３２から４０のいずれかに記載の方法。
【0369】
実施形態４２．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織の内皮細胞中に発現されるリガンドに対し特異的であり、ウイルス抗原を対象に投与したとき、ウイルス抗原が、コロナウイルスに対する対象の免疫応答を活性化させるのに有効である、実施形態３２から４１のいずれかに記載の方法。
【0370】
実施形態４３．除核幹細胞が、１または複数の免疫変調成分をさらに含む、実施形態１から４２のいずれかに記載の方法。
【0371】
実施形態４４．１または複数の免疫変調成分が、除核幹細胞の表面に固着される、実施形態４３に記載の方法。
【0372】
実施形態４５．１または複数の免疫変調成分が、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含むリンカーを使用して、除核幹細胞の表面に固着される、実施形態４４に記載の方法。
【0373】
実施形態４６．１または複数の免疫変調成分が、除核幹細胞の表面に発現される、実施形態４３から４５のいずれかに記載の方法。
【0374】
実施形態４７．１または複数の免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、リンホトキシンα（ＬＴＡ）、リンホトキシンβ（ＬＴＢ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬＧ）、ｆａｓリガンド（ＦＡＳＬＧ）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー８（ＴＮＦＳＦ８）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＳＦ９）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＴＮＦＳＦ１１）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＮＦＳＦ１２）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３（ＴＮＦＳＦ１３）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１５（ＴＮＦＳＦ１５）、ＴＮＦスーパーファミリー１８（ＴＮＦＳＦ１８）、エクトジスプラシンＡ（ＥＤＡ）、サイトカイン、およびウイルス抗原タンパク質からなる群から選択される、実施形態４３から４６のいずれかに記載の組成物。
【0375】
実施形態４８．１または複数の免疫変調成分が、アルブミンペプチドを含む融合タンパク質である、実施形態４３から４７のいずれかに記載の方法。
【0376】
実施形態４９．除核幹細胞を単離する工程をさらに含む、実施形態１から４８のいずれかに記載の方法。
【0377】
実施形態５０．除核幹細胞を精製する工程をさらに含む、実施形態１から４８のいずれかに記載の方法。
【0378】
実施形態５１．除核幹細胞が、懸濁液、または細胞培養液、あるいはその両方における複数の除核幹細胞である、実施形態１から４８のいずれかに記載の方法。
【0379】
実施形態５２．除核幹細胞を少なくとも４８時間凍結保存する工程をさらに含む、実施形態１から４８のいずれかに記載の方法。
【0380】
実施形態５３．対象におけるコロナウイルスにより生じる疾患を予防する方法であって、実施形態１から４８のいずれかに記載の組成物を対象に投与することで、コロナウイルスによる生じる疾患を予防する工程を含む方法。
【0381】
実施形態５４．対象におけるコロナウイルスにより生じる疾患を処置する方法であって、実施形態１から４８のいずれかに記載の組成物を対象に投与することで、コロナウイルスによる生じる疾患を処置する工程を含む方法。
【0382】
実施形態５５．疾患が、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）である、実施形態５３および５４に記載の方法。
【0383】
実施形態５６．
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された除核幹細胞を受け取る工程であって、該除核幹細胞の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から除核幹細胞を除去することで、除核幹細胞の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態１から５５のいずれかに記載の方法。
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された除核幹細胞を受け取る工程であって、該除核幹細胞の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から除核幹細胞を除去することで、除核幹細胞の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態１から５５のいずれかに記載の方法。
【0384】
ウイルス捕捉方法
実施形態１．対象の病原体を取り除く方法であって、
（ａ）病原体を取り除くことを必要とする対象に、実質的に核を含まない複数の細胞を投与する工程と、
（ｂ）対象の組織中の病原体を、
ｉ．（ａ）で対象に投与した複数の細胞のｉｎ ｖｉｖｏ感染症を病原体により許容すること、および
ｉｉ．複数の細胞が感染した後、病原体の伝播を防止すること、
ｉｉｉ．食作用により対象から複数の細胞を除去することで対象から病原体を排除すること
により隔離する工程と
を含む方法。
実施形態１．対象の病原体を取り除く方法であって、
（ａ）病原体を取り除くことを必要とする対象に、実質的に核を含まない複数の細胞を投与する工程と、
（ｂ）対象の組織中の病原体を、
ｉ．（ａ）で対象に投与した複数の細胞のｉｎ ｖｉｖｏ感染症を病原体により許容すること、および
ｉｉ．複数の細胞が感染した後、病原体の伝播を防止すること、
ｉｉｉ．食作用により対象から複数の細胞を除去することで対象から病原体を排除すること
により隔離する工程と
を含む方法。
【0385】
実施形態２．多くの病原体が、（ａ）での複数の細胞の投与に対して用量依存的な形で減少する、実施形態１に記載の方法。
【0386】
実施形態３．複数の細胞が、１または複数の免疫変調成分を発現し、１または複数の免疫変調成分が、複数の細胞中の１個の細胞の表面に発現されるか、複数の細胞中の１個の細胞により分泌される、実施形態１または２に記載の方法。
【0387】
実施形態４．１または複数の免疫変調成分が、複数の細胞中の１個の細胞の表面に固着される、実施形態３に記載の方法。
【0388】
実施形態５．１または複数の免疫変調成分が、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含むリンカーを使用して、細胞の表面に固着される、実施形態４に記載の方法。
【0389】
実施形態６．１または複数の免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、リンホトキシンα（ＬＴＡ）、リンホトキシンβ（ＬＴＢ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬＧ）、ｆａｓリガンド（ＦＡＳＬＧ）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー８（ＴＮＦＳＦ８）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＳＦ９）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＴＮＦＳＦ１１）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＮＦＳＦ１２）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３（ＴＮＦＳＦ１３）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１５（ＴＮＦＳＦ１５）、ＴＮＦスーパーファミリー１８（ＴＮＦＳＦ１８）、エクトジスプラシンＡ（ＥＤＡ）、１または複数のサイトカイン、およびウイルス抗原タンパク質からなる群から選択される。
【0390】
実施形態７．１または複数のサイトカインが、インターロイキン１０およびインターロイキン１２から選択される、実施形態６に記載の方法。
【0391】
実施形態８．複数の細胞が、標的組織に対し特異的な１または複数のホーミング受容体を発現するように操作され、１または複数のホーミング受容体が、複数の細胞中の１個の細胞の表面に発現されるか、複数の細胞中の１個の細胞により発現される、実施形態１から７のいずれかに記載の方法。
【0392】
実施形態９．標的組織が肺組織またはリンパ組織である、実施形態８に記載の方法。
【0393】
実施形態１０．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織中で、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せを標的とする、実施形態９に記載の方法。
【0394】
実施形態１１．１または複数のホーミング受容体が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより、複数の細胞中の１個の細胞の表面に固着される、実施形態８から１０のいずれかに記載の方法。
【0395】
実施形態１２．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態１１に記載の方法。
【0396】
実施形態１３．１または複数のホーミング受容体が、複数の細胞中の１個の細胞の表面上での１または複数のホーミング受容体の発現を増大させるように遺伝子組換えされている、実施形態８から１２のいずれかに記載の方法。
【0397】
実施形態１４．１または複数のホーミング受容体が、同じものでない２つ以上の標的組織に対し特異的な２つ以上のホーミング受容体を含む、実施形態８から１３のいずれかに記載の方法。
【0398】
実施形態１５．１または複数のホーミング受容体が、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型（ＣＸＣＲ３）、ロイコシアリン（ＣＤ４３）、ＣＤ４４抗原（ＣＤ４４）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、または最晩期抗原－４（ＶＬＡ４）から選択される、実施形態８から１４のいずれかに記載の方法。
【0399】
実施形態１６．複数の細胞中の１個の細胞がウイルス抗原を含む、実施形態１に記載の方法。
【0400】
実施形態１７．ウイルス抗原が、複数の細胞中の１個の細胞の表面に発現される、実施形態１６に記載の方法。
【0401】
実施形態１８．ウイルス抗原が、化学リンカー、ペプチドリンカー、ポリマーから選択されるリンカーにより、複数の細胞中の１個の細胞の表面に固着される、実施形態１６に記載の方法。
【0402】
実施形態１９．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態１８に記載の方法。
【0403】
実施形態２０．ウイルス抗原が、複数の細胞中の１個の細胞中に発現される膜貫通ペプチドである、実施形態１６から１９のいずれかに記載の方法。
【0404】
実施形態２１．ウイルス抗原がヒトに対し免疫原性である、実施形態１６から２０のいずれかに記載の方法。
【0405】
実施形態２２．ウイルス抗原が、コロナウイルスから得られるペプチドである、実施形態１６から２１のいずれかに記載の方法。
【0406】
実施形態２３．ペプチドが、コロナウイルスから得られるスパイクタンパク質、膜タンパク質、または核タンパク質から選択される、実施形態２２に記載の方法。
【0407】
実施形態２４．コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）またはその変異体である、実施形態２３に記載の方法。
【0408】
実施形態２５．複数の細胞中の１個の細胞が、ペプチドをコードするｍＲＮＡを含む、実施形態２２から２４のいずれかに記載の方法。
【0409】
実施形態２６．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【0410】
実施形態２７．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも８５％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【0411】
実施形態２８．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９０％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【0412】
実施形態２９．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【0413】
実施形態３０．ｍＲＮＡが、配列番号１に対し少なくとも１００％同一であるｍＲＮＡ配列を含む、実施形態２５に記載の方法。
【0414】
実施形態３１．ペプチドが、配列番号２に対し少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２２から２５のいずれかに記載の方法。
【0415】
実施形態３２．ｍＲＮＡの半減期が３～５日である、実施形態２５から３１のいずれかに記載の方法。
【0416】
実施形態３３．ｍＲＮＡが、アルブミンペプチドを含む融合タンパク質をコードする、実施形態２５から３１のいずれかに記載の方法。
【0417】
実施形態３４．ｍＲＮＡが、免疫変調成分を含む融合タンパク質をコードする、実施形態２５から３１のいずれかに記載の方法。
【0418】
実施形態３５．免疫変調成分が、対象における免疫応答の活性化因子である、実施形態３４に記載の方法。
【0419】
実施形態３６．免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）またはサイトカイン、あるいはそれらの組合せである、実施形態３４に記載の方法。
【0420】
実施形態３７．病原体が、呼吸系ウイルス、皮膚ウイルス、食品媒介型ウイルス、性感染症ウイルス、または腫瘍溶解性ウイルス、あるいはそれらの組合せから選択される生ウイルスである、実施形態１から３６のいずれかに記載の方法。
【0421】
実施形態３８．呼吸系ウイルスが、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸系発疹ウイルス、およびコロナウイルスから選択される、実施形態３７に記載の方法。
【0422】
実施形態３９．コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）またはその変異体である、実施形態３８に記載の方法。
【0423】
実施形態４０．皮膚ウイルスが、伝染性軟属腫、単純ヘルペスウイルス－１、および水痘－帯状疱疹ウイルスから選択される、実施形態３７に記載の方法。
【0424】
実施形態４１．食品媒介型ウイルスが、Ａ型肝炎、ノロウイルス、およびロタウイルスから選択される、実施形態３７に記載の方法。
【0425】
実施形態４２．性感染症ウイルスが、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎、陰部ヘルペス、およびヒト免疫不全ウイルスから選択される、実施形態３７に記載の方法。
【0426】
実施形態４３．腫瘍溶解性ウイルスが、ヒトパピローマウイルス感染症またはＢ型肝炎である、実施形態３７に記載の方法。
【0427】
実施形態４４．（ａ）における投与が、腹膜内投与、腫瘍内投与、静脈内投与、リンパ内投与、筋肉内投与、または吸入である、実施形態１から４３のいずれかに記載の方法。
【0428】
実施形態４５．病原体が、
ａ）二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス）、
ｂ）一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス（＋鎖または「センス」）ＤＮＡ（例えば、パルボウイルス）、
ｃ）ｄｓＲＮＡウイルス（例えば、レオウイルス）、
ｄ）（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、ピコルナウイルス、トガウイルス）、
ｅ）（－）ｓｓＲＮＡウイルス（－鎖またはアンチセンス）ＲＮＡ（例えば、オルソミクソウイルス、ラブドウイルス）、
ｆ）生活環にＤＮＡ中間体を伴うｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、レトロウイルス）、または
ｇ）生活環にＲＮＡ中間体を伴うｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルスＤＮＡ（例えば、ヘパドナウイルス）
から選択される生ウイルスである、実施形態１に記載の方法。
ａ）二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス）、
ｂ）一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス（＋鎖または「センス」）ＤＮＡ（例えば、パルボウイルス）、
ｃ）ｄｓＲＮＡウイルス（例えば、レオウイルス）、
ｄ）（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、ピコルナウイルス、トガウイルス）、
ｅ）（－）ｓｓＲＮＡウイルス（－鎖またはアンチセンス）ＲＮＡ（例えば、オルソミクソウイルス、ラブドウイルス）、
ｆ）生活環にＤＮＡ中間体を伴うｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（＋鎖またはセンス）ＲＮＡ（例えば、レトロウイルス）、または
ｇ）生活環にＲＮＡ中間体を伴うｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルスＤＮＡ（例えば、ヘパドナウイルス）
から選択される生ウイルスである、実施形態１に記載の方法。
【0429】
実施形態４６．病原体が、細菌、ウイルス、寄生虫、フグ、自己抗体、抗体、劇毒物、毒性物質、またはそれらの組合せである、実施形態１から３６のいずれかに記載の方法。
【0430】
実施形態４７．
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された複数の細胞を受け取る工程であって、該複数の細胞の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から複数の細胞を除去することで、複数の細胞の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態１から４６のいずれかに記載の方法。
（ａ）４℃で少なくとも４８時間、懸濁液に貯蔵された複数の細胞を受け取る工程であって、該複数の細胞の生体活性は遅くなっているか停止されている、工程と、
（ｂ）懸濁液から複数の細胞を除去することで、複数の細胞の生体活性を回復する工程と
をさらに含む、実施形態１から４６のいずれかに記載の方法。
【0431】
病原体を捕捉するための組成物
実施形態１．核のない状態での病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体の合成のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞。
実施形態１．核のない状態での病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体の合成のための１または複数の細胞内小器官を含む無核細胞。
【0432】
実施形態２．１または複数の細胞内小器官が、小胞体またはゴルジ体である、実施形態１に記載の無核細胞。
【0433】
実施形態３．病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体が、無核細胞の表面に結合される、実施形態１から２のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0434】
実施形態４．病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体が、病原体抗原またはその病原体抗原結合性フラグメントに対する受容体を無核細胞の表面に結合させる膜貫通ドメインを含む、実施形態１から３のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0435】
実施形態５．顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む免疫変調成分をさらに含む、実施形態１から４のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0436】
実施形態６．直径が約１マイクロメートル（μｍ）～１００μｍの間である、実施形態１から５のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0437】
実施形態７．直径が約８μｍである、実施形態６に記載の無核細胞。
【0438】
実施形態８．少なくとも２４時間の凍結休眠の後に生存可能である、実施形態１から７のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0439】
実施形態９．少なくとも２４時間の凍結保存の後に生存可能である、実施形態１から７のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0440】
実施形態１０．凍結保存、凍結休眠、または凍結乾燥される、実施形態１から９のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0441】
実施形態１１．単離または精製される、実施形態１から１０のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0442】
実施形態１２．病原体抗原が、コロナウイルスの抗原である、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0443】
実施形態１３．コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態１２に記載の無核細胞。
【0444】
実施形態１４．病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する中和抗体をさらに含む、実施形態１から１３のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0445】
実施形態１５．１または複数の免疫変調成分をさらに含む、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0446】
実施形態１６．１または複数の免疫変調成分が、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含むリンカーを使用して、無核細胞の表面に固着される、実施形態１５に記載の無核細胞。
【0447】
実施形態１７．１または複数の免疫変調成分が、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、リンホトキシンα（ＬＴＡ）、リンホトキシンβ（ＬＴＢ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬＧ）、ｆａｓリガンド（ＦＡＳＬＧ）、ＣＤ７０分子（ＣＤ７０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー８（ＴＮＦＳＦ８）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＳＦ９）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１１（ＴＮＦＳＦ１１）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１２（ＴＮＦＳＦ１２）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３（ＴＮＦＳＦ１３）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー１５（ＴＮＦＳＦ１５）、ＴＮＦスーパーファミリー１８（ＴＮＦＳＦ１８）、エクトジスプラシンＡ（ＥＤＡ）、１または複数のサイトカイン、およびウイルス抗原タンパク質からなる群から選択される、実施形態１５に記載の無核細胞。
【0448】
実施形態１８．標的組織に対し特異的な１または複数のホーミング受容体をさらに含む、実施形態１から１７のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0449】
実施形態１９．１または複数のホーミング受容体が、リンパ組織中で、内皮細胞、リンパ球、マクロファージ、または細網細胞、あるいはそれらの組合せを標的とする、実施形態１８に記載の無核細胞。
【0450】
実施形態２０．１または複数のホーミング受容体が、化学リンカー、ペプチドリンカー、またはポリマーから選択されるリンカーにより、複数の細胞中の１個の細胞の表面に固着される、実施形態１８に記載の無核細胞。
【0451】
実施形態２１．リンカーが、グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）またはＢ７－１抗原（Ｂ７－１）細胞質尾部を含む、実施形態２０に記載の無核細胞。
【0452】
実施形態２２．１または複数のホーミング受容体が、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体３型（ＣＸＣＲ３）、ロイコシアリン（ＣＤ４３）、ＣＤ４４抗原（ＣＤ４４）、Ｃ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、または最晩期抗原－４（ＶＬＡ４）から選択される、実施形態１８から２１のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0453】
実施形態２３．ウイルス抗原を含む、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞。
【0454】
実施形態２４．
実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞、または複数の実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞と、
薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体と
を含む、医薬製剤。
実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞、または複数の実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞と、
薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体と
を含む、医薬製剤。
【0455】
実施形態２５．対象における病原体による感染症を減らす方法であって、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の無核細胞、または実施形態２４に記載の医薬製剤を対象に投与することにより、細胞中で病原体抗原を有する病原体を捉えて、病原体が細胞内を伝播するのを防止する工程を含む方法。
【0456】
実施形態２６．病原体が、投与後１４日以下で対象から取り除かれる、実施形態２５に記載の方法。
【0457】
実施形態２７．無核細胞が、中和抗体を放出することにより、病原体抗原と宿主細胞が産生するその天然受容体との結合を遮断する、実施形態２６から２７のいずれか１つに記載の方法。
【0458】
実施形態２８．無核細胞が、ウイルス抗原を提示することで、対象を病原体による感染症から免疫化する、実施形態２６から２８のいずれか１つに記載の方法。
【実施例】
【0459】
ＶＩＩ．実施例
以下の実施例は、例示目的のためだけに含まれるものであり、本発明の範囲を制限することを意図したものではない。
以下の実施例は、例示目的のためだけに含まれるものであり、本発明の範囲を制限することを意図したものではない。
【0460】
実施例１．コロナウイルスに対する抗ウイルス組成物を産生する方法
弱毒化したコロナウイルス抗原をコードする異種核酸による幹細胞（例えば間葉系幹細胞）のレンチウイルス媒介型トランスフェクションを実施する。次に、実施例７に記載の方法により幹細胞の除核を実施する。細胞表面に弱毒化コロナウイルス抗原を発現する除核幹細胞を、フローサイトメトリーを使用して検証する。弱毒化コロナウイルス抗原を発現する除核を完遂した幹細胞（本実施例では、「細胞質体」と称する）を、既知の方法に従い単離かつ精製する。任意選択で、実施例４で提供する方法を使用して細胞質体を凍結保存する。上述の細胞質体は、コロナウイルス感染症の予防用のワクチンとして有用である。
弱毒化したコロナウイルス抗原をコードする異種核酸による幹細胞（例えば間葉系幹細胞）のレンチウイルス媒介型トランスフェクションを実施する。次に、実施例７に記載の方法により幹細胞の除核を実施する。細胞表面に弱毒化コロナウイルス抗原を発現する除核幹細胞を、フローサイトメトリーを使用して検証する。弱毒化コロナウイルス抗原を発現する除核を完遂した幹細胞（本実施例では、「細胞質体」と称する）を、既知の方法に従い単離かつ精製する。任意選択で、実施例４で提供する方法を使用して細胞質体を凍結保存する。上述の細胞質体は、コロナウイルス感染症の予防用のワクチンとして有用である。
【0461】
コロナウイルスに対する第２の抗ウイルス組成物を上記と同様の方法を用いて産生するが、弱毒化コロナウイルス抗原の代わりに、コロナウイルスに対する抗体を幹細胞に発現させる。代替的に、または付加的に、エレクトロポレーション（または当該技術分野で公知のこれに匹敵する方法）を使用して、コロナウイルスに対する小分子を除核幹細胞へと充填する。コロナウイルスに対する抗ウイルス抗体および／またはコロナウイルスに対する小分子を発現する除核を完遂した幹細胞（本実施例では、「細胞質体」と称する）を、既知の方法に従い単離かつ精製する。任意選択で、実施例４で提供する方法を使用して細胞質体を凍結保存する。上述の細胞質体は、急性コロナウイルス感染症を処置するのに有用である。
【0462】
実施例２．対象のコロナウイルス感染症の予防
弱毒化コロナウイルスまたはコロナウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを発現する、実施例１に記載の抗ウイルス組成物を、静脈内投与のために製剤化する。弱毒化コロナウイルスまたはコロナウイルスタンパク質のペプチドフラグメントは、本明細書に記載の細胞質体に封入されるｍＲＮＡからコードしてもよい。いくつかの実施形態では、抗ウイルス組成物は、筋肉内投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、対象には、第１および第２の用量の抗ウイルス組成物を投与する。いくつかの実施形態では、第２の用量の抗ウイルス組成物は、第１の用量の投与の少なくとも１日、２日、３日、４日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、または４か月後に投与される。この製剤を対象に静脈内投与する。例えば、対象が小児であると、ヒト対象への投与を少なくとも５回実施することとなる。いくつかの実施形態では、対象が２か月齢、４か月齢、６か月齢、１５～１８か月齢の間、および４～６歳の間であるときに、製剤は対象に投与される。本実施例では、対象は、コロナウイルス感染症から免疫化されるようになる。
弱毒化コロナウイルスまたはコロナウイルスタンパク質のペプチドフラグメントを発現する、実施例１に記載の抗ウイルス組成物を、静脈内投与のために製剤化する。弱毒化コロナウイルスまたはコロナウイルスタンパク質のペプチドフラグメントは、本明細書に記載の細胞質体に封入されるｍＲＮＡからコードしてもよい。いくつかの実施形態では、抗ウイルス組成物は、筋肉内投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、対象には、第１および第２の用量の抗ウイルス組成物を投与する。いくつかの実施形態では、第２の用量の抗ウイルス組成物は、第１の用量の投与の少なくとも１日、２日、３日、４日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、または４か月後に投与される。この製剤を対象に静脈内投与する。例えば、対象が小児であると、ヒト対象への投与を少なくとも５回実施することとなる。いくつかの実施形態では、対象が２か月齢、４か月齢、６か月齢、１５～１８か月齢の間、および４～６歳の間であるときに、製剤は対象に投与される。本実施例では、対象は、コロナウイルス感染症から免疫化されるようになる。
【0463】
実施例３．対象の急性コロナウイルス感染症の処置
コロナウイルスに対する抗コロナウイルス抗体（例えば、中和抗体）または小分子を発現する実施例１に記載の抗ウイルス組成物を、静脈内投与のために製剤化する。この製剤は、コロナウイルスに感染したか、感染の疑いのある対象に静脈内投与する。いくつかの実施形態では、投与は１回より多く実施する。例えば、投与は、一定期間（例えば、１年間）にわたり毎日、２日ごと、毎週、２週ごと、毎月、２か月ごとに実施してよい。本実施例では、対象のコロナウイルス感染症が低減する。
コロナウイルスに対する抗コロナウイルス抗体（例えば、中和抗体）または小分子を発現する実施例１に記載の抗ウイルス組成物を、静脈内投与のために製剤化する。この製剤は、コロナウイルスに感染したか、感染の疑いのある対象に静脈内投与する。いくつかの実施形態では、投与は１回より多く実施する。例えば、投与は、一定期間（例えば、１年間）にわたり毎日、２日ごと、毎週、２週ごと、毎月、２か月ごとに実施してよい。本実施例では、対象のコロナウイルス感染症が低減する。
【0464】
代替的に、または付加的に、ペイロードのない除核幹細胞（例えば、間葉系幹細胞）を、静脈内投与のために製剤化する。この製剤は、コロナウイルスに感染したか、感染の疑いのある対象に静脈内投与する。いくつかの実施形態では、投与は１回より多く実施する。例えば、投与は、一定期間（例えば、１年間）にわたり毎日、２日ごと、毎週、２週ごと、毎月、２か月ごとに実施してよい。本実施例では、細胞質体をｉｎ ｖｉｖｏでコロナウイルスに感染させると、細胞質体中でコロナウイルスを捕捉するようになる。核を欠いた細胞質体は、コロナウイルスの複製と伝播に必要な遺伝子材料を欠いており、これによりコロナウイルスをさらなる感染症から阻む。本実施例では、コロナウイルス感染症は低減する。
【0465】
実施例４．哺乳動物細胞からの細胞質体の産生
細胞質体は、同種異系または自己のドナー由来細胞から生成されるとともに、疾患の処置に加え診断にも使用可能である。概念実証として、様々な種類の哺乳動物細胞（例えば、間葉系幹細胞、好中球、線維芽細胞、およびナチュラルキラー細胞）の除核効率と回復速度を判定した。細胞培養プレートからの哺乳動物細胞を除去した後、不連続Ｆｉｃｏｌｌ勾配の高速遠心分離を使用した密度勾配遠心分離により、哺乳動物細胞を除核した。表１には、懸濁液プロトコルを使用した除核の結果を要約する。除核効率と細胞生存率は、形質転換されたｈＴＥＲＴと初代間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の両方に加え、線維芽細胞および好中球においても最高であった。表２には、接着プロトコルを使用した除核の結果を要約する。除核効率は、間葉系幹細胞とマクロファージの両方において７０％を超えていた。この実験が示すところでは、様々な種類の哺乳動物細胞は、本明細書に記載の方法のうちいずれかを使用して除核を受けることができた。
細胞質体は、同種異系または自己のドナー由来細胞から生成されるとともに、疾患の処置に加え診断にも使用可能である。概念実証として、様々な種類の哺乳動物細胞（例えば、間葉系幹細胞、好中球、線維芽細胞、およびナチュラルキラー細胞）の除核効率と回復速度を判定した。細胞培養プレートからの哺乳動物細胞を除去した後、不連続Ｆｉｃｏｌｌ勾配の高速遠心分離を使用した密度勾配遠心分離により、哺乳動物細胞を除核した。表１には、懸濁液プロトコルを使用した除核の結果を要約する。除核効率と細胞生存率は、形質転換されたｈＴＥＲＴと初代間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の両方に加え、線維芽細胞および好中球においても最高であった。表２には、接着プロトコルを使用した除核の結果を要約する。除核効率は、間葉系幹細胞とマクロファージの両方において７０％を超えていた。この実験が示すところでは、様々な種類の哺乳動物細胞は、本明細書に記載の方法のうちいずれかを使用して除核を受けることができた。
【0466】
【表5】
【0467】
【表6】
【0468】
次に、９６時間にわたる細胞質体の生存を判定した。ＭＳＣは経時的に増殖した一方、細胞質体は増殖しなかった。代わりに、生存可能な細胞質体における相対的な倍率変化は、９６時間で下落する前に７２時間は極めて一定のままであった。このため、細胞質体生存は３～４日間に及んだ。大半の細胞系療法を直ちに使用しないとき、凍結保存後の細胞質体の生存度を判定した。驚くことに、凍結保存後の細胞質体の生存度は、凍結保存後のＭＳＣの生存度より高かった。除核直後に播種した細胞質体、および凍結保存から回復した細胞質体は、２４時間後に同様の相対的細胞生存度を呈した。この実験が示すところでは、細胞質体の生存は凍結保存による影響を受けなかった。加えて、凍結休眠後の細胞質体の生存度は、凍結休眠後のＭＳＣの生存度と同様であった（図６Ａ）。様々な期間にわたる凍結休眠後に回復した細胞質体は、凍結休眠後に回復したＭＳＣと同様、ボイデン・チャンバ・アッセイにおいて誘導型の移動を受けることができた（図６Ｂ）
【0469】
次に、細胞の大規模産生をｅｘ ｖｉｖｏで設定し、続いて大容量の密度勾配遠心分離と除核を行い、治療用細胞質体を生成する。一実施形態では、治療用細胞質体に、疾患の処置用の治療用カーゴ（例えば、ｍＲＮＡ、薬物、ペプチドなど）を充填する。別の実施形態では、治療用細胞質体は、診断用に直ちに使用するため（例えば、静脈内注射（ＩＶ）、腹腔内注射（ＩＰ）、組織、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ用途のため）に調製される。
【0470】
実施例５．細胞質体は細胞小器官を有し、細胞外マトリクスと相互に作用し、細胞生体機能を実施し、カーゴを運ぶ
細胞質体が凍結保存後に生存度を保持することができたかどうかを判定した後、フローサイトメトリー解析を行い、ＭＳＣ由来の細胞質体の細胞表面マーカープロファイルが骨髄由来のＭＳＣと相違するかどうかを判定した。ＭＳＣ由来の細胞質体と骨髄由来ＭＳＣはともに、ＣＤ４５、ＣＤ９０、ＣＤ４４、ＣＤ１４６、およびＣＤ１６６の細胞表面発現を維持した。細胞質体は、細胞骨格に付いてこれを再編成し、２Ｄおよび３Ｄの培養系中のマトリクスタンパク質上で拡散し、同じまたは異なる起源の細胞間でバイオプロダクトを移行することができるトンネリングナノチューブを形成した。細胞小器官の染色により、ゴルジ、ＥＲ、Ｆ－アクチン細胞骨格、リソソーム、エンドソーム、微小管、およびミトコンドリアが細胞質体中で無傷のままであったのを認めた。さらに、細胞質体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで潜在的な帰巣を呈した。細胞質体は、細胞外マトリクスタンパク質上で容易に移動し、（化学探知を介して）可溶性ケモカイン勾配の方へと指向的に移動した。顕著なことに、精製ｍＲＮＡにより外因的にトランスフェクトされた細胞質体は、機能的細胞内タンパク質を産生し、こうして、様々な臨床用途および疾患状態に対して開発されている治療用ｍＲＮＡの用途を模倣することができる。これによりさらに、ｍＲＮＡ翻訳およびタンパク質合成における機構は、核がない場合に細胞質体において正常に作動するため、治療的価値を持つ生体活性分子の産生に使用可能であることが実証される。
細胞質体が凍結保存後に生存度を保持することができたかどうかを判定した後、フローサイトメトリー解析を行い、ＭＳＣ由来の細胞質体の細胞表面マーカープロファイルが骨髄由来のＭＳＣと相違するかどうかを判定した。ＭＳＣ由来の細胞質体と骨髄由来ＭＳＣはともに、ＣＤ４５、ＣＤ９０、ＣＤ４４、ＣＤ１４６、およびＣＤ１６６の細胞表面発現を維持した。細胞質体は、細胞骨格に付いてこれを再編成し、２Ｄおよび３Ｄの培養系中のマトリクスタンパク質上で拡散し、同じまたは異なる起源の細胞間でバイオプロダクトを移行することができるトンネリングナノチューブを形成した。細胞小器官の染色により、ゴルジ、ＥＲ、Ｆ－アクチン細胞骨格、リソソーム、エンドソーム、微小管、およびミトコンドリアが細胞質体中で無傷のままであったのを認めた。さらに、細胞質体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで潜在的な帰巣を呈した。細胞質体は、細胞外マトリクスタンパク質上で容易に移動し、（化学探知を介して）可溶性ケモカイン勾配の方へと指向的に移動した。顕著なことに、精製ｍＲＮＡにより外因的にトランスフェクトされた細胞質体は、機能的細胞内タンパク質を産生し、こうして、様々な臨床用途および疾患状態に対して開発されている治療用ｍＲＮＡの用途を模倣することができる。これによりさらに、ｍＲＮＡ翻訳およびタンパク質合成における機構は、核がない場合に細胞質体において正常に作動するため、治療的価値を持つ生体活性分子の産生に使用可能であることが実証される。
【0471】
既知の分泌タンパク質をコードする精製ｍＲＮＡにより外因的にトランスフェクトされた細胞質体は、調整培養培地において機能的細胞外タンパク質を産生し、これにより、ＥＲ／ゴルジおよび分泌経路は核がない場合に細胞質体において正常に作動することが認められる。加えて、分泌タンパク質を含有する細胞質体調整培地を用いたマクロファージおよび内皮細胞の処置は、これらの細胞において重要なシグナル伝達応答を活性化させた。これにより、細胞質体は、治療的価値を持つ分泌タンパク質および生体分子を産生かつ送達するのに新規なビヒクルとして使用可能であるという概念実証を得た。細胞質体には、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＤＮＡプラスミド、ペプチド、および化学療法剤を含むがこれらに限定されない様々なカーゴを充填可能である。
【0472】
実施例６．操作された細胞質体は機能細胞表面タンパク質を発現することができる
フローサイトメトリーにより判定すると、ＣＸＣＲ４を発現する操作されたＭＳＣ、およびＣＸＣＲ４を発現する操作されたＭＳＣ由来の細胞質体は、同等の量のＣＸＣＲ４を発現する。操作された細胞質体が機能細胞表面タンパク質を発現できるかどうかを判定するために、ＣＸＣＲ４受容体を発現するＭＳＣおよびＭＳＣ由来の細胞質体を、様々な濃度のＳＤＦ－１αの方へと移動させた。機能的ＣＸＣＲ４を発現するよう操作されたＭＳＣ由来の細胞質体は、ＳＤＦ－１αの方への遊走可能であり、細胞移動はＳＤＦ－１αの濃度が増加するにつれて上昇する。さらに、遊走するＭＳＣ由来の細胞質体の数は、ＣＸＣＲ４を発現する遊走するＭＳＣの数よりも多かった。
フローサイトメトリーにより判定すると、ＣＸＣＲ４を発現する操作されたＭＳＣ、およびＣＸＣＲ４を発現する操作されたＭＳＣ由来の細胞質体は、同等の量のＣＸＣＲ４を発現する。操作された細胞質体が機能細胞表面タンパク質を発現できるかどうかを判定するために、ＣＸＣＲ４受容体を発現するＭＳＣおよびＭＳＣ由来の細胞質体を、様々な濃度のＳＤＦ－１αの方へと移動させた。機能的ＣＸＣＲ４を発現するよう操作されたＭＳＣ由来の細胞質体は、ＳＤＦ－１αの方への遊走可能であり、細胞移動はＳＤＦ－１αの濃度が増加するにつれて上昇する。さらに、遊走するＭＳＣ由来の細胞質体の数は、ＣＸＣＲ４を発現する遊走するＭＳＣの数よりも多かった。
【0473】
ＭＳＣ由来の細胞質体は、炎症を起こした血管系への細胞接着を媒介すると知られる機能細胞接着タンパク質を発現するように操作可能である。ＭＳＣ由来の細胞質体は、治療用細胞のマクロファージ相互作用と食作用を調節すると知られる細胞タンパク質を発現するように操作可能である。
【0474】
実施例７－操作された細胞質体はｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で機能することができる。
理論に縛られるものではないが、本実施例は、「カーゴ」、例えば外因性ｍＲＮＡ分子を発現するように操作された細胞質体が産生可能であることを示す。図７Ｂと図７Ｃは、ＭＳＣ由来の細胞質帯が、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび静脈内注射後の前臨床マウスにおいて治療レベルの機能的抗炎症性サイトカインインターロイキン１０（ＩＬ－１０）を産生かつ分泌するように操作可能であることを示す。図７Ｂは、ＩＬ－１０ ｍＲＮＡによりトランスフェクトされた細胞質体が、高レベルのＩＬ－１０を分泌可能であることを示す。分泌ＩＬ－１０が活性であるかどうかを判定するために、血清飢餓状態のマクロファージを、未処置のＭＳＣ、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣ、未処置の細胞質体、およびＩＬ－１０を発現する細胞質体から得た調整培地（ＣＭ）でインキュベートした。リン酸化ＳＴＡＴ３は、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣから得たＣＭでのインキュベーション後、およびＩＬ－１０を発現する細胞質体から得たＣＭでのインキュベーション後のマクロファージ中で検出されたが、ＳＴＡＴ３活性は、未処置のＭＳＣおよび未処置の細胞質体から得たＣＭでのインキュベーション後にマクロファージ中で検出されなかった（図７Ｃ）。細胞質体から分泌されたＩＬ－１０がｉｎ ｖｉｖｏで検出可能であるかどうかを判定するために、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの後眼窩に、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体を注射した。注射の２時間後、血液を採取してＩＬ－１０の濃度を判定した。ＩＬ－１０は、未処置のＭＳＣを注射したマウスの血液中でほとんどまたは全く検出されなかった（図７Ｄ）。図７Ｄに示すように、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣ由来の細胞質体を注射したマウスで検出したＩＬ－１０の濃度は、未処置のＭＳＣを注射したマウスでの濃度と比較して高かった。
理論に縛られるものではないが、本実施例は、「カーゴ」、例えば外因性ｍＲＮＡ分子を発現するように操作された細胞質体が産生可能であることを示す。図７Ｂと図７Ｃは、ＭＳＣ由来の細胞質帯が、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび静脈内注射後の前臨床マウスにおいて治療レベルの機能的抗炎症性サイトカインインターロイキン１０（ＩＬ－１０）を産生かつ分泌するように操作可能であることを示す。図７Ｂは、ＩＬ－１０ ｍＲＮＡによりトランスフェクトされた細胞質体が、高レベルのＩＬ－１０を分泌可能であることを示す。分泌ＩＬ－１０が活性であるかどうかを判定するために、血清飢餓状態のマクロファージを、未処置のＭＳＣ、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣ、未処置の細胞質体、およびＩＬ－１０を発現する細胞質体から得た調整培地（ＣＭ）でインキュベートした。リン酸化ＳＴＡＴ３は、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣから得たＣＭでのインキュベーション後、およびＩＬ－１０を発現する細胞質体から得たＣＭでのインキュベーション後のマクロファージ中で検出されたが、ＳＴＡＴ３活性は、未処置のＭＳＣおよび未処置の細胞質体から得たＣＭでのインキュベーション後にマクロファージ中で検出されなかった（図７Ｃ）。細胞質体から分泌されたＩＬ－１０がｉｎ ｖｉｖｏで検出可能であるかどうかを判定するために、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの後眼窩に、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体を注射した。注射の２時間後、血液を採取してＩＬ－１０の濃度を判定した。ＩＬ－１０は、未処置のＭＳＣを注射したマウスの血液中でほとんどまたは全く検出されなかった（図７Ｄ）。図７Ｄに示すように、ＩＬ－１０を発現するＭＳＣ由来の細胞質体を注射したマウスで検出したＩＬ－１０の濃度は、未処置のＭＳＣを注射したマウスでの濃度と比較して高かった。
【0475】
これらのデータは、遺伝子操作した細胞質体系細胞療法が、正常組織および病変組織を処置する臨床的に関連性のある治療用サイトカインを産生かつ分泌する可能性を例示する。
【0476】
ＭＳＣ由来の細胞質体が基底膜を通って侵入可能であるかどうかを判定するために、ＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体を、２４時間かけて基底膜を通って１０％ＦＢＳへと侵入させた。図８Ａと図８Ｂに示すように、ＭＳＣ由来の細胞質体はまさに、１０％ＦＢＳの存在下で未処置のＭＳＣとして基底膜に侵入するのに効率的であった。注目すべきことに、未処置のＭＳＣは化学遊走物質の不在下で基底膜に侵入可能であったが、ＭＳＣで処置した細胞質体は、化学遊走物質の不在下では基底膜にはさほど侵入することができなかった。これらのデータは、ＭＳＣ由来の細胞質体が基底膜を通って消化かつ侵入可能であることを例示する。これらのデータは、細胞質体系の細胞療法が、組織内でカーゴを運ぶ複合細胞外マトリクス障壁を通って浸透かつ遊走する固有の可能性を例示する。
【0477】
図９Ａと図９Ｂに示すように、ＭＳＣ由来の細胞質体は平均直径１２μｍであり、一方でＭＳＣは平均直径２０μｍである。ＭＳＣ由来の細胞質体の体内分布を判定するために、マウスの後眼窩にＭＳＣまたはＭＳＣ由来の細胞質体を注射した。図９Ｃと図９Ｄに示すように、肝臓に検出したＭＳＣ由来の細胞質体数は、肝臓に検出したＭＳＣ数より多かった。これらのデータは、細胞質体系の細胞療法が、広範囲の疾患を処置するために循環に直接送達される可能性を例示する。
【0478】
実施例８．細胞質体を生成する例示的な方法
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の除核
このプロトコルは、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙの１９７６年１４巻の８７～９３頁にある第７章「Ｅｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ」（Ｍｉｃｈａｅｌ Ｈ．Ｗｉｇｌｅｒ，Ａｌｆｒｅｄ Ｉ．Ｎｅｕｇｕｔ，Ｉ．Ｂｅｒｎａｒｄ Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ）から改変したものである。
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の除核
このプロトコルは、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙの１９７６年１４巻の８７～９３頁にある第７章「Ｅｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ」（Ｍｉｃｈａｅｌ Ｈ．Ｗｉｇｌｅｒ，Ａｌｆｒｅｄ Ｉ．Ｎｅｕｇｕｔ，Ｉ．Ｂｅｒｎａｒｄ Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ）から改変したものである。
【0479】
５０％フィコール溶液の調製：遮光を施したガラスビーカ中、数グラムの（ｇｒａｍｓ ｏｆ）フィコール（ＰＭ４００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ １７－０３００－５００）を、室温で２４時間の連続磁気撹拌により、同等数のミリリットルの超純水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １０９７７－０１５）に溶解した。次いで、混合物を７５℃で３０分間オートクレーブした。混合物を降温した後、再び撹拌して均等な一貫性を確保した。屈折率を屈折計（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ １３９４００００）で測定すると、１．４２３０～１．４２９０の範囲内であった。アリコートを－２０℃で貯蔵した。
【0480】
２倍のＭＥＭの調製：各５０ｍｌの量で、１０ｍＬの１０Ｘ ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、１１４３０－０３０）、２．９４ｍＬの正確な炭酸水素ナトリウム（７．５％、Ｇｉｂｃｏ、２５０８０－０９４）、１ｍＬの１００Ｘ Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ １５１４０－１２２）、および３６ｍＬの超純水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １０９７７－０１５）を使用した。次いで、溶液を０．２２ｕｍ膜フラスコ（Ｏｌｙｍｐｕｓ ２５－２２７）に通して濾過し、４℃で貯蔵した。
【0481】
除核の前日、２０ｍＬ ＭＳＣ培地［ＭＥＭ １Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １２５６１－０５６）、１６．５％プレミアムＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｓ１１５０）、１％ＨＥＰＥＳ １Ｍ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－８０）、１％抗－抗１００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １５２４０－０６２）、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５０－０６１）］中、１５ｃｍプレート（Ｏｌｙｍｐｕｓ ２５－２０３）につき２．５ＭでＭＳＣを蒔いた。次に、サイトカラシンＢ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃ６７６２）を２倍のＭＥＭ（最終濃度１ｍＬにつき２μＭ）に添加した。
【0482】
フィコール勾配の調製：２倍のＣｙｔｏＢを５０％フィコールアリコートに１：１希釈で添加して、２５％のフィコールストック濃度を作製した。次に、１７％、１６％、１５％、および１２．５％のフィコールを、２５％フィコールを適切な体積の１倍のＭＥＭ緩衝液（１：１希釈で超純水にサイトカラシンＢを添加した２倍のＭＥＭ）で希釈することにより作製した。希釈は、ＣＯ２インキュベータ中で少なくとも１時間平衡化し、緩くキャップをして覆った。次いで、フィコール勾配を１３．２ｍＬ超透明管（Ｂｅｃｋｍａｎ、３４４０５９）に注ぎ入れ、ＣＯ２インキュベータ中で一晩（６～１８時間）インキュベートした。
【0483】
除核を行う当日、１２～２５ＭのＭＳＣ（理想的には２０Ｍ）を集めて除核のために各管に入れた。培地を吸引し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＧＩＢＣＯ １４１９０－１４４）で１回洗浄した。５ｍＬのＴｒｙｐＬＥ－Ｓｅｌｅｃｔ（Ｇｉｂｃｏ、１２５６３０１１）を各プレートに添加し、最大５分間インキュベートした。細胞の９０％を切り離したときに５ｍＬの完全ＭＳＣ培地を添加し、細胞を集めて５０ｍｌ管（３～４つのプレート／管）に入れた。次いで、管を１，２００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。ペレットを１０ｍＬ ＰＢＳ中で再懸濁した。細胞を計数し、ペレット状にし、１２．５％フィコールで再懸濁させた。次に、細胞フィコール混合物を滴下により４０ｕｍセルストレーナ（Ｆａｌｃｏｎ ３５２３４０）に通して、新たな５０ｍＬ管に移した。シリンジを使用して、細胞懸濁液３．２ｍＬを、事前に作製した勾配へと徐々に充填させた。１ｍＬの１Ｘ ＭＥＭの緩衝液をシリンジにより最終（上部）層で添加した。次いで、管をロータバケットに充填して平衡化し、２６，０００ｒｐｍ、３１℃、Ａｃｃｅｌ７、Ｄｅｃｃｅｌ７で６０分間、超遠心分離（Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｌ８Ｍ）を行った。遠心分離の終了時、次の３つの層：１２．５％の上部に近い層（細胞質体およびデブリ）１、１２．５／１５％の界面に近い層（細胞質体）、および２５％の下部にあるペレット（核体）が存在した。１５％を超えるフィコール溶液の層を集め、１５ｍｌ円錐管に入れた。次いで、集めた層を、４体積を超える温かい無血清ＭＳＣ培地（すなわち、３ｍＬのフィコール、および最大１５ｍＬの培地で満たしたもの）で希釈した。軽く混合した後、混合物を１，２００ｒｐｍで１０分間かけてペレット状にした。温かい無血清ＭＳＣ培地で３回洗浄した後、実験プロトコルによる培地、例えば、トランスフェクション培地ｖｓ遊走培地ｖｓ無血清培地ｖｓ完全培地で細胞を再懸濁した。１２ウェルプレート中、１：２０００希釈Ｖｙｂｒａｎｔ（登録商標）Ｄｙｅｃｙｃｌｅ（商標）Ｇｒｅｅｎ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｖ３５００４）または１：５０００希釈Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２で完全ＭＳＣ培地を添加することにより、除核の効率を判定した。小さな体積の各層を各ウェルに添加し、インキュベータ中で１０分間かけて付着／染色を行った。集団ごとの陰性細胞質体のパーセンテージを、落射蛍光顕微鏡により判定した。
【0484】
細胞質体ｍＲＮＡのトランスフェクション
１Ｍの細胞質体を、温かい無アミノ酸α－ＭＥＭ完全培地１ｍｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ１２５６１０５６、１６．５％プレミアムウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５００６１）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ １５６３００８０））で懸濁した。１μｇのｍＲＮＡを、温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。４μｌのリポフェクトアミン－３０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｌ３０００１５）を、４６μｌの温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ３１９８５０６２）に添加し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。ｍＲＮＡとリポフェクトアミン－３０００の比は１：４（ｗ／ｖ）であった。ｍＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の希釈物を、ピペットを用いて少なくとも２０回混合し、室温で１５分間インキュベートした。ｍＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の混合物を細胞質体懸濁液に添加してよく混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞が群生するのを防ぐべく、懸濁液を５分ごとに振盪させた。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、正常α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）またはＰＢＳに再懸濁させた。
１Ｍの細胞質体を、温かい無アミノ酸α－ＭＥＭ完全培地１ｍｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ１２５６１０５６、１６．５％プレミアムウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５００６１）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ １５６３００８０））で懸濁した。１μｇのｍＲＮＡを、温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。４μｌのリポフェクトアミン－３０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｌ３０００１５）を、４６μｌの温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ３１９８５０６２）に添加し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。ｍＲＮＡとリポフェクトアミン－３０００の比は１：４（ｗ／ｖ）であった。ｍＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の希釈物を、ピペットを用いて少なくとも２０回混合し、室温で１５分間インキュベートした。ｍＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の混合物を細胞質体懸濁液に添加してよく混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞が群生するのを防ぐべく、懸濁液を５分ごとに振盪させた。インキュベーション後、細胞を遠心分離し、正常α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）またはＰＢＳに再懸濁させた。
【0485】
細胞質体ｓｉＲＮＡのトランスフェクション
１Ｍの細胞質体を、温かい１ｍｌの無Ａ／Ａ α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）で懸濁した。２μｌのｓｉＲＮＡを、温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。８μｌのリポフェクトアミン－３０００を、９２μｌの温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。ｓｉＲＮＡとリポフェクトアミン－３０００の比は１：４（ｖ／ｖ）であった。ｓｉＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の希釈物を、ピペットを用いて少なくとも２０回混合し、室温で１５分間インキュベートした。ｓｉＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の混合物を細胞質体懸濁液に添加してよく混合し、３７℃で２０分間インキュベートした。細胞が群生するのを防ぐべく、懸濁液を５分ごとに振盪させた。２０分間のインキュベーション後、細胞を遠心分離し、正常α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）で再懸濁させた。
１Ｍの細胞質体を、温かい１ｍｌの無Ａ／Ａ α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）で懸濁した。２μｌのｓｉＲＮＡを、温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。８μｌのリポフェクトアミン－３０００を、９２μｌの温かいｏｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、ピペットを用いて少なくとも２０回混合した。ｓｉＲＮＡとリポフェクトアミン－３０００の比は１：４（ｖ／ｖ）であった。ｓｉＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の希釈物を、ピペットを用いて少なくとも２０回混合し、室温で１５分間インキュベートした。ｓｉＲＮＡおよびリポフェクトアミン－３０００の混合物を細胞質体懸濁液に添加してよく混合し、３７℃で２０分間インキュベートした。細胞が群生するのを防ぐべく、懸濁液を５分ごとに振盪させた。２０分間のインキュベーション後、細胞を遠心分離し、正常α－ＭＥＭ完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）で再懸濁させた。
【0486】
腫瘍溶解性ウイルスに感染した細胞質体の生成
除核の１日前（通常は除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６ｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５ｃｍ皿に蒔いた。播種の約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより異なるＭＯＩ（例えば０．０５または０．５）で、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞を時折振盪させながら３７℃で２時間インキュベートした。次いで、ウイルス接種物を廃棄した。２０ｍＬの事前に温めた完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ））を各ウェルに添加した。細胞は除核まで３７℃でインキュベートした。図１１は、親細胞または参照細胞（無核細胞）、および本明細書に記載の除核細胞へと直接ポリペプチド（ＶＳＶ－ＧＦＰ）を導入する蛍光画像を例示する。図１２は、ＧＦＰ抗原をコードする腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶ）によるＭＳＣの感染を例示する。図１２Ｃは、除核されたＭＳＣによる標的癌細胞へのカーゴ（例えばＧＦＰレポータ）の送達増加を例示する。図１２Ｄは、本明細書に記載の除核ＭＳＣに接触した標的癌細胞への免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）の動員増加を例示する。
除核の１日前（通常は除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６ｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５ｃｍ皿に蒔いた。播種の約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより異なるＭＯＩ（例えば０．０５または０．５）で、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞を時折振盪させながら３７℃で２時間インキュベートした。次いで、ウイルス接種物を廃棄した。２０ｍＬの事前に温めた完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ））を各ウェルに添加した。細胞は除核まで３７℃でインキュベートした。図１１は、親細胞または参照細胞（無核細胞）、および本明細書に記載の除核細胞へと直接ポリペプチド（ＶＳＶ－ＧＦＰ）を導入する蛍光画像を例示する。図１２は、ＧＦＰ抗原をコードする腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶ）によるＭＳＣの感染を例示する。図１２Ｃは、除核されたＭＳＣによる標的癌細胞へのカーゴ（例えばＧＦＰレポータ）の送達増加を例示する。図１２Ｄは、本明細書に記載の除核ＭＳＣに接触した標的癌細胞への免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）の動員増加を例示する。
【0487】
細胞質体中で機能タンパク質を過剰発現するレンチウイルス
標的細胞を、６ウェルプレート中の１つのウェルに１－２×１０５細胞／ウェルの密度で、または１０ｃｍプレート中に０．５－１Ｍ ＭＳＣで播種した。翌日、濃縮した組換えレンチウイルスを３７℃の水槽中で解凍し、解凍直後に水槽から取り出した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。２００μＬの無血清遊離培地または２ｍＬの無血清培地（１：１２５０ ＳｕｒｅＥＮＴＲＹ）を添加した。標的細胞を６ウェルプレート中、ＭＯＩ １０：１に感染させた。翌日、ウイルスの上清を除去し、適切な完全成長培地を細胞に添加した。７２時間のインキュベーション後、細胞を２×１００ｍｍ皿の中で二次培養した。安定した細胞株生成のため、適量の選択薬物（すなわち、ピューロマイシン）を添加した。選択の１０～１５日後、拡張のためにクローンを採集し（ｐｉｃｋｅｄ）、陽性クローンをスクリーニングした。選択した陽性クローンを除核のために拡張させた。上記で概説するように操作した細胞質体を調製した。通常の生化学方法または機能アッセイ、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、ウエスタンブロット、ボイデン・チャンバ・アッセイにより、細胞質体上での標的タンパク質発現を判定した。
標的細胞を、６ウェルプレート中の１つのウェルに１－２×１０５細胞／ウェルの密度で、または１０ｃｍプレート中に０．５－１Ｍ ＭＳＣで播種した。翌日、濃縮した組換えレンチウイルスを３７℃の水槽中で解凍し、解凍直後に水槽から取り出した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。２００μＬの無血清遊離培地または２ｍＬの無血清培地（１：１２５０ ＳｕｒｅＥＮＴＲＹ）を添加した。標的細胞を６ウェルプレート中、ＭＯＩ １０：１に感染させた。翌日、ウイルスの上清を除去し、適切な完全成長培地を細胞に添加した。７２時間のインキュベーション後、細胞を２×１００ｍｍ皿の中で二次培養した。安定した細胞株生成のため、適量の選択薬物（すなわち、ピューロマイシン）を添加した。選択の１０～１５日後、拡張のためにクローンを採集し（ｐｉｃｋｅｄ）、陽性クローンをスクリーニングした。選択した陽性クローンを除核のために拡張させた。上記で概説するように操作した細胞質体を調製した。通常の生化学方法または機能アッセイ、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、ウエスタンブロット、ボイデン・チャンバ・アッセイにより、細胞質体上での標的タンパク質発現を判定した。
【0488】
細胞質体へのペプチド充填
１ウェルにつき１×１０５／ｍｌの細胞を、４－チャンバスライドガラス（ＬａｂＴｅｋ ＩＩの４－チャンバスライドガラス、１５５３８３）上、完全ＭＳＣ培地［ＭＥＭ １Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １２５６１－０５６）、１６．５％プレミアムＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｓ１１５０）、１％ ＨＥＰＥＳ １Ｍ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－８０）、１％抗－抗１００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １５２４０－０６２）、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５－０６１）］に蒔いた。細胞を少なくとも１時間、または一晩中取り付けた。次いで、細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １４１９０－１４４）ですすいだ。Ａｒｇ９（ＦＡＭ）（配列番号１１５４）（１０ｍＭ、Ａｎａｓｐｅｃ、ＡＳ－６１２０７）を、完全培地中、１：１００（１００ｕＭ）の完全濃度に希釈した。次いで、細胞質体を１～２時間インキュベートし、ＰＢＳで３回すすいだ。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、１：５０００の希釈で、完全培地中、少なくとも１０分間かけて添加した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、落射蛍光顕微鏡により撮像した。図１３は、Ａｒｇ９と共培養したときの目的のポリペプチドにおけるペプチドの取込みまたは充填の増加を例示する。
１ウェルにつき１×１０５／ｍｌの細胞を、４－チャンバスライドガラス（ＬａｂＴｅｋ ＩＩの４－チャンバスライドガラス、１５５３８３）上、完全ＭＳＣ培地［ＭＥＭ １Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １２５６１－０５６）、１６．５％プレミアムＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｓ１１５０）、１％ ＨＥＰＥＳ １Ｍ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－８０）、１％抗－抗１００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １５２４０－０６２）、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５－０６１）］に蒔いた。細胞を少なくとも１時間、または一晩中取り付けた。次いで、細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １４１９０－１４４）ですすいだ。Ａｒｇ９（ＦＡＭ）（配列番号１１５４）（１０ｍＭ、Ａｎａｓｐｅｃ、ＡＳ－６１２０７）を、完全培地中、１：１００（１００ｕＭ）の完全濃度に希釈した。次いで、細胞質体を１～２時間インキュベートし、ＰＢＳで３回すすいだ。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、１：５０００の希釈で、完全培地中、少なくとも１０分間かけて添加した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、落射蛍光顕微鏡により撮像した。図１３は、Ａｒｇ９と共培養したときの目的のポリペプチドにおけるペプチドの取込みまたは充填の増加を例示する。
【0489】
実施例９．細胞質体はｉｎ ｖｉｖｏでより良好な体内分布を呈する
ＭＳＣを３Ｄ懸滴（３Ｄ ＭＳＣ）中で培養し、次いで除核することで、３Ｄ細胞質体を生成した。懸滴によるＭＳＣの３Ｄ培養プロトコルは、「Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１４ Ｆｅｂ ６；２８：Ｕｎｉｔ－２Ｂ．６．」（Ｔｈｏｍａｓ Ｊ．Ｂａｒｔｏｓｈ１ ａｎｄ Ｊｏｎｉ Ｈ．Ｙｌｏｓｔａｌｏ）から改変されている。
ＭＳＣを３Ｄ懸滴（３Ｄ ＭＳＣ）中で培養し、次いで除核することで、３Ｄ細胞質体を生成した。懸滴によるＭＳＣの３Ｄ培養プロトコルは、「Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１４ Ｆｅｂ ６；２８：Ｕｎｉｔ－２Ｂ．６．」（Ｔｈｏｍａｓ Ｊ．Ｂａｒｔｏｓｈ１ ａｎｄ Ｊｏｎｉ Ｈ．Ｙｌｏｓｔａｌｏ）から改変されている。
【0490】
健康なＭＳＣを、トリプシンにより２Ｄ培養したプレートから採取し、１４３万個の細胞／ｍｌで新鮮なα－ＭＥＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ １２５６１０５６）完全培地（１６．５％プレミアムＦＢＳ、１％抗生物質－抗真菌剤、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）中で再懸濁させた。１５ｃｍプレートの蓋を完全に開き、２０ｍｌのＰＢＳをプレートに添加した。マルチチャネルピペットを使用して、一滴につき３５μｌ（約５０，０００個の細胞／一滴）で、プレートの蓋に液滴を生じさせた。約１００～１２０個の液滴を各蓋に配した。蓋を閉じ、プレートをインキュベータに戻した。液滴を２日間培養後、セルリフタで採取し、集めて１５ｍｌ管に入れた（管１つにつき約３００個の液滴）。管を１，２００ｒｐｍで５分間遠心分した。上清を除去し、管をＰＢＳで２回洗浄した。次いで、ＰＢＳをすべて除去し、新たに解凍した０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ２５２００１１４）７．５ｍｌを各管に添加した。管を水槽中で４分間インキュベートした。液滴は、ローリテンションチップを備えた１ｍｌピペットにより約１０～２０回優しくピペッティングし、水槽中でさらに４分間インキュベートした。液滴の大半が分離されるまで、液滴は、ローリテンションチップを備えた１ｍｌピペットにより再度優しくピペッティングした。７．５ｍｌの完全血清培地（ＧｌｕｔａＭＡＸ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５００６１）、ウシ胎仔血清－Ｐｒｅｍｉｕｍ Ｓｅｌｅｃｔ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｓ１１５５０）、ＨＥＰＥＳ（１Ｍ）（Ｇｉｂｃｏ １５６３００８０）、抗生物質－抗真菌剤（１００Ｘ）（Ｇｉｂｃｏ １５２４００６２））を各管に添加し、管を１，２００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。分離した細胞を１０ｍｌの完全血清培地で洗浄し、この細胞を５ｍｌの完全血清培地で再懸濁させた。細胞を７０μｍ細胞フィルタに通した後、フィルタを５ｍｌの完全血清培地で洗浄した。細胞を計数し、事前処理した１２．５％フィコールにより１０Ｍ／ｍｌ超で再懸濁させた。３０～４０Ｍの細胞を各除核管において使用した。続いて、上述の除核プロトコルに従った。
【0491】
ＤｉＤ標識した正常な２Ｄ培養ＭＳＣ（２Ｄ ＭＳＣ）、３Ｄ ＭＳＣ、または３Ｄ細胞質体を、それぞれＢａｌＢ／Ｃマウスの後眼窩に注射した。示された組織を注射の２４時間後に採取し、ＤｉＤ標識した細胞をＦＡＣＳにより解析した。図１０Ａ～図１０Ｃは、３Ｄ培養ＭＳＣから３Ｄ由来細胞質体の生成の完遂を示すとともに、３Ｄ由来細胞質体は、循環への注射後、２Ｄ培養細胞と比較して肺捕捉が少なく、末梢器官への体内分布が良好であったことも示す。これは、カーゴを組織へと位置づけて運ぶ治療上の能力を大いに改善すると推測される。
【0492】
実施例１０：感染症により生じる疾患を処置する方法
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の症状を呈し始めた。ＣＯＶＩＤ－１９の呼吸器症状として、息切れ、および／または呼吸困難が挙げられる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者は、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の症状を呈し始めた。ＣＯＶＩＤ－１９の呼吸器症状として、息切れ、および／または呼吸困難が挙げられる。
【0493】
インターロイキン１０（ＩＬ－１０）のアゴニストを発現する本明細書に記載の細胞質体、またはその一部を含有する、対象のＣＯＶＩＤ－１９の呼吸器症状を処置するのに十分である医薬製剤を、患者に投与する。本実施例では、細胞質体は、細胞質体のリンパ系への効率的な帰巣を可能にするべくリンパ組織を標的とするホーミング受容体も発現する。細胞質体はさらに、リンパ系への到達前に細胞質体が確実に対象から取り除かれないように、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルペプチドなどの免疫回避部分も発現する。投与後、対象の呼吸器症状は軽減される。
【0494】
実施例１１：腫瘍溶解性ウイルスに感染した細胞質体の生成
除核の１日前（通常、除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６のｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５－ｃｍ皿に蒔いた。蒔いてから約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、様々なＭＯＩ（例えば、０．０５または０．５）で、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞をたまに振盪させながら、３７℃で２時間インキュベートした。その後、ウイルス接種材料を破棄した。事前に温めた２０ｍＬ完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％Ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）を各ウェルに添加した。除核を行うまで細胞を３７℃でインキュベートした。図１１Ａと図１１Ｂは、親細胞または基準細胞（無核細胞）に直接、および本明細書に記載の除核細胞にポリペプチド（ＶＳＶ－ＧＦＰ）を導入する蛍光画像を例示する。感染後１２時間、ＭＯＩ０．０５でＶＳＶ－ＧＦＰ（矢印）に感染した除核親ＭＳＣ（上部）とＭＳＣ由来無核細胞（下部）との落射蛍光顕微鏡画像は、レポーターペプチドＧＦＰのＭＳＣへの導入を例示した。ＧＦＰ抗原は無核ＭＳＣにより明白かつ強力に発現され、除核細胞におけるウイルス複製と抗原産生が示される。スケールバー＝５０μｍ。図１１Ｂは、感染後１２時間、ＭＯＩ０．１で、ＶＳＶ－ＧＦＰ（矢頭）に感染したＭＳＣ由来の無核細胞の高倍率落射蛍光顕微鏡画像を例示する。核の欠如を例示するために、ローダミンファイロジン（矢印）と各染色ＤＡＰＩを使用して、除核細胞のＦ－アクチンフィラメントをさらに染色した。図１１は、細胞質体が抗原ペプチドなどの外因性ペプチドを発現するために腫瘍溶解性ウイルスで操作されて形質転換することができることを例示する。図１１はさらに、ウイルス捕捉を目的に細胞質体はウイルスに感染させることができることを例示する。
除核の１日前（通常、除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６のｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５－ｃｍ皿に蒔いた。蒔いてから約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、様々なＭＯＩ（例えば、０．０５または０．５）で、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞をたまに振盪させながら、３７℃で２時間インキュベートした。その後、ウイルス接種材料を破棄した。事前に温めた２０ｍＬ完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％Ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）を各ウェルに添加した。除核を行うまで細胞を３７℃でインキュベートした。図１１Ａと図１１Ｂは、親細胞または基準細胞（無核細胞）に直接、および本明細書に記載の除核細胞にポリペプチド（ＶＳＶ－ＧＦＰ）を導入する蛍光画像を例示する。感染後１２時間、ＭＯＩ０．０５でＶＳＶ－ＧＦＰ（矢印）に感染した除核親ＭＳＣ（上部）とＭＳＣ由来無核細胞（下部）との落射蛍光顕微鏡画像は、レポーターペプチドＧＦＰのＭＳＣへの導入を例示した。ＧＦＰ抗原は無核ＭＳＣにより明白かつ強力に発現され、除核細胞におけるウイルス複製と抗原産生が示される。スケールバー＝５０μｍ。図１１Ｂは、感染後１２時間、ＭＯＩ０．１で、ＶＳＶ－ＧＦＰ（矢頭）に感染したＭＳＣ由来の無核細胞の高倍率落射蛍光顕微鏡画像を例示する。核の欠如を例示するために、ローダミンファイロジン（矢印）と各染色ＤＡＰＩを使用して、除核細胞のＦ－アクチンフィラメントをさらに染色した。図１１は、細胞質体が抗原ペプチドなどの外因性ペプチドを発現するために腫瘍溶解性ウイルスで操作されて形質転換することができることを例示する。図１１はさらに、ウイルス捕捉を目的に細胞質体はウイルスに感染させることができることを例示する。
【0495】
実施例１２：細胞質体に接触する細胞を標的とするための免疫応答の動員と活性化
除核の１日前（通常、除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６のｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５－ｃｍ皿に蒔いた。蒔いてから約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、様々なＭＯＩ（例えば、０．０５または０．５）で、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞をたまに振盪させながら、３７℃で２時間インキュベートした。その後、ウイルス接種材料を破棄した。事前に温めた２０ｍＬ完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％Ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）を各ウェルに添加した。除核を行うまで細胞を３７℃でインキュベートした。図１２Ａ～図１２ＢＤは、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶ）コード化ＧＦＰ抗原にＭＳＣを感染させることを例示する。ＭＳＣと無核ＭＳＣの落射蛍光顕微鏡画像は、感染後４８時間、ＭＯＩ０．０５で、ｏＨＳＶコード化ＧＦＰ抗原への感染を例示する。ｏＨＳＶ－ＧＦＰを接種して１８時間後、無核ＭＳＣをＭＳＣから生成した。スケールバー＝５０μｍ。図１２Ｂは、０．０５ＭＯＩの腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスコード化ＧＦＰ（ｏＨＳＶ－ＧＦＰ）に感染させ、次いでヌードマウス中で成長する樹立Ｕ８７神経膠芽腫へと注射した後の、ｌｉｆｅａｃｔ－ＲＦＰを発現するＭＳＣまたは無核ＭＳＣを例示する。注射の７日後に画像を取得した。ＭＳＣと無核ＭＳＣはともに、強力なＧＦＰシグナルが示すようにｏＨＳＶを腫瘍細胞に送達した。留意すべきは、７日後の腫瘍には無核ＭＳＣをごくわずかしか検出できなかったが、成長する腫瘍の中心（注射部位）と外縁に多数のＭＳＣが存在していたことである。図１２Ｃは、ＧＦＰで覆われた腫瘍領域の割合を示す棒グラフであり、ｏＨＳＶ－ＧＦＰウイルスを保因するＭＳＣまたは無核ＭＳＣに感染した腫瘍細胞の部分を表す。図１２Ｄは、ＰＢＳを注射した対照と比較したときの、ＩＬ－１２（アジュバント）操作した無核とｏＨＳＶ操作した無核ＭＳＣとの組合せにより処置した樹立神経膠芽腫腫瘍に存在するＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の比の増加を示すグラフである。図１２は、本明細書に記載の細胞質体が、操作した細胞質体の部位に免疫細胞を動員することにより十分な免疫応答を導入可能であることを例示する。このようなシナリオでは、細胞質体、および細胞質体に封入されるあらゆるカーゴ（例えば、細胞質体内部に捕捉されるウイルス）は、動員された免疫応答により破壊を受けることになる。
除核の１日前（通常、除核の１８時間前）、２．５＊１０＾６のｈＴＥＲＴ－ＭＳＣを１５－ｃｍ皿に蒔いた。蒔いてから約２時間後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した。次いで、様々なＭＯＩ（例えば、０．０５または０．５）で、８ｍＬの無血清ｏｐｔｉ－ＭＥＭにより、細胞をｏＨＳＶ－ＧＦＰ（Ｉｍａｎｉｓ ＯＶ３００１）に感染させた。次に、細胞をたまに振盪させながら、３７℃で２時間インキュベートした。その後、ウイルス接種材料を破棄した。事前に温めた２０ｍＬ完全培養培地（α－ＭＥＭ、１６．５％Ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ、１％Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ＨＥＰＥＳ）を各ウェルに添加した。除核を行うまで細胞を３７℃でインキュベートした。図１２Ａ～図１２ＢＤは、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶ）コード化ＧＦＰ抗原にＭＳＣを感染させることを例示する。ＭＳＣと無核ＭＳＣの落射蛍光顕微鏡画像は、感染後４８時間、ＭＯＩ０．０５で、ｏＨＳＶコード化ＧＦＰ抗原への感染を例示する。ｏＨＳＶ－ＧＦＰを接種して１８時間後、無核ＭＳＣをＭＳＣから生成した。スケールバー＝５０μｍ。図１２Ｂは、０．０５ＭＯＩの腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスコード化ＧＦＰ（ｏＨＳＶ－ＧＦＰ）に感染させ、次いでヌードマウス中で成長する樹立Ｕ８７神経膠芽腫へと注射した後の、ｌｉｆｅａｃｔ－ＲＦＰを発現するＭＳＣまたは無核ＭＳＣを例示する。注射の７日後に画像を取得した。ＭＳＣと無核ＭＳＣはともに、強力なＧＦＰシグナルが示すようにｏＨＳＶを腫瘍細胞に送達した。留意すべきは、７日後の腫瘍には無核ＭＳＣをごくわずかしか検出できなかったが、成長する腫瘍の中心（注射部位）と外縁に多数のＭＳＣが存在していたことである。図１２Ｃは、ＧＦＰで覆われた腫瘍領域の割合を示す棒グラフであり、ｏＨＳＶ－ＧＦＰウイルスを保因するＭＳＣまたは無核ＭＳＣに感染した腫瘍細胞の部分を表す。図１２Ｄは、ＰＢＳを注射した対照と比較したときの、ＩＬ－１２（アジュバント）操作した無核とｏＨＳＶ操作した無核ＭＳＣとの組合せにより処置した樹立神経膠芽腫腫瘍に存在するＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の比の増加を示すグラフである。図１２は、本明細書に記載の細胞質体が、操作した細胞質体の部位に免疫細胞を動員することにより十分な免疫応答を導入可能であることを例示する。このようなシナリオでは、細胞質体、および細胞質体に封入されるあらゆるカーゴ（例えば、細胞質体内部に捕捉されるウイルス）は、動員された免疫応答により破壊を受けることになる。
【0496】
実施例１３：細胞質体へのペプチド負荷
ウェルごとに１ｘ１０５／ｍｌを、完全ＭＳＣ培地［ＭＥＭ １Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １２５６１－０５６）；１６．５％ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｓ１１５０）；１％ＨＥＰＥＳ １Ｍ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－８０）；１％Ａｎｔｉ－Ａｎｔｉ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １５２４０－０６２）；１％ Ｇｌｕｔａｍａｘ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５０－０６１）］中、４－チャンバガラススライド（ＬａｂＴｅｋ ＩＩ ４－チャンバガラススライド、１５５３８３）上に播種した。細胞を少なくとも１時間または一晩かけて付着させた。次いで、細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １４１９０－１４４）ですすいだ。Ａｒｇ９（ＦＡＭ）（配列番号１１５４）（１０ｍＭ、Ａｎａｓｐｅｃ、ＡＳ－６１２０７）を完全培地中で希釈して、総濃度を１：１００（１００ｕＭ）とした。次いで、細胞質体を１～２時間インキュベートし、ＰＢＳで３回すすいだ。Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を完全培地中、少なくとも１０分かけて１：５０００の希釈で添加した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、落射蛍光顕微鏡で撮像した。図１３Ａと１３Ｂは、Ａｒｇ９と同時にインキュベートしたときに目的のポリペプチドのペプチド取込みまたは負荷が増大したことを例示する。図１３Ａに示すように、ＭＳＣ（左側）と除核ＭＳＣ（右側）は、１００μＭの細胞透過性抗原ペプチド（Ａｒｇ）９－ＦＡＭ（６－カルボキシフルオレセイン、ＦＡＭ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＯＨ）でインキュベートしたＭＳＣを例示する。スケールバー＝５０μｍである。矢印はＨｏｅｃｈｓｔ染色した核、矢頭は陽性（Ａｒｇ）９－ＦＡＭを示す。図１３Ｂは、ＩｍａｇｅＪで測定された相対蛍光強度を表す棒グラフを例示する。訂正した細胞蛍光の総数＝統合密度－（背景読取りの選択された細胞Ｘ平均蛍光の領域）。平均±ＳＥＭ；ｎ＝１０。全体として、図１３は、本明細書に記載の細胞質体（例えば、核のないＭＳＣ）に、目的のポリペプチドを直接負荷可能であることを例示する。例えば、抗原およびＡｒｇ９（ＦＡＭ）と細胞質体との同時接種により抗原を細胞質体に導入することができる。その後、これらの細胞質体は、本明細書に記載のワクチンとして機能することができる。
ウェルごとに１ｘ１０５／ｍｌを、完全ＭＳＣ培地［ＭＥＭ １Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １２５６１－０５６）；１６．５％ｐｒｅｍｉｕｍ ＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｓ１１５０）；１％ＨＥＰＥＳ １Ｍ（Ｇｉｂｃｏ １５６３０－８０）；１％Ａｎｔｉ－Ａｎｔｉ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ １５２４０－０６２）；１％ Ｇｌｕｔａｍａｘ １００Ｘ（Ｇｉｂｃｏ ３５０５０－０６１）］中、４－チャンバガラススライド（ＬａｂＴｅｋ ＩＩ ４－チャンバガラススライド、１５５３８３）上に播種した。細胞を少なくとも１時間または一晩かけて付着させた。次いで、細胞をＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １４１９０－１４４）ですすいだ。Ａｒｇ９（ＦＡＭ）（配列番号１１５４）（１０ｍＭ、Ａｎａｓｐｅｃ、ＡＳ－６１２０７）を完全培地中で希釈して、総濃度を１：１００（１００ｕＭ）とした。次いで、細胞質体を１～２時間インキュベートし、ＰＢＳで３回すすいだ。Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を完全培地中、少なくとも１０分かけて１：５０００の希釈で添加した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、落射蛍光顕微鏡で撮像した。図１３Ａと１３Ｂは、Ａｒｇ９と同時にインキュベートしたときに目的のポリペプチドのペプチド取込みまたは負荷が増大したことを例示する。図１３Ａに示すように、ＭＳＣ（左側）と除核ＭＳＣ（右側）は、１００μＭの細胞透過性抗原ペプチド（Ａｒｇ）９－ＦＡＭ（６－カルボキシフルオレセイン、ＦＡＭ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＯＨ）でインキュベートしたＭＳＣを例示する。スケールバー＝５０μｍである。矢印はＨｏｅｃｈｓｔ染色した核、矢頭は陽性（Ａｒｇ）９－ＦＡＭを示す。図１３Ｂは、ＩｍａｇｅＪで測定された相対蛍光強度を表す棒グラフを例示する。訂正した細胞蛍光の総数＝統合密度－（背景読取りの選択された細胞Ｘ平均蛍光の領域）。平均±ＳＥＭ；ｎ＝１０。全体として、図１３は、本明細書に記載の細胞質体（例えば、核のないＭＳＣ）に、目的のポリペプチドを直接負荷可能であることを例示する。例えば、抗原およびＡｒｇ９（ＦＡＭ）と細胞質体との同時接種により抗原を細胞質体に導入することができる。その後、これらの細胞質体は、本明細書に記載のワクチンとして機能することができる。
【0497】
本発明の好ましい実施形態の本明細書中で示し記述してきたが、かかる実施形態は単なる一例として提供されるものであることは当業者には明白であろう。現時点で、本発明から逸脱することなく多数の変動、変更、および置換えが当業者により相当される。本明細書に記載の本発明の実施形態に代わる様々な代案が本発明の実施に利用されてよいことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を規定するものであり、この特許請求項の範囲内の方法と構造、およびそれらの等価物はそれにより包含されることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図12D】
【図13A】
【図13B】
【配列表】
【国際調査報告】