特表 2023-515707 ＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-13

(54)【発明の名称】ＣＤ１９を標的とするキメラ抗原受容体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230406BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230406BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20230406BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230406BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230406BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230406BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230406BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230406BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20230406BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20230406BHJP

   A61K 35/26 20150101ALI20230406BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230406BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20230406BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20230406BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20230406BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20230406BHJP

   C12P 21/02 20060101ALN20230406BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20230406BHJP

   C12N 5/0735 20100101ALN20230406BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20230406BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K19/00 ZNA

C12N15/867 Z

C12N5/10

A61P35/00

A61P35/02

A61K48/00

A61K35/12

A61K35/17

A61K35/545

A61K35/26

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K35/28

C07K16/28

C07K14/705

C12P21/08

C12P21/02 C

C12N5/0783

C12N5/0735

C12N15/11 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022564649

(86)(22)【出願日】2021-04-26

(85)【翻訳文提出日】2022-12-22

(86)【国際出願番号】 US2021029138

(87)【国際公開番号】W WO2021217130

(87)【国際公開日】2021-10-28

(31)【優先権主張番号】63/015,362

(32)【優先日】2020-04-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/073,133

(32)【優先日】2020-09-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター

(71)【出願人】

【識別番号】500287639

【氏名又は名称】ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＭＩＬＬＥＮＮＩＵＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(71)【出願人】

【識別番号】399026731

【氏名又は名称】スローン － ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ

(71)【出願人】

【識別番号】522023761

【氏名又は名称】メモリアル ホスピタル フォー キャンサー アンド アライド ディジージズ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】フォイヒト， ユディト

(72)【発明者】

【氏名】マンシラ－ソト， ジョージ

(72)【発明者】

【氏名】リヴィエール， イザベル

(72)【発明者】

【氏名】サデライン， ミチェル

(72)【発明者】

【氏名】ビンセント， ロイック

(72)【発明者】

【氏名】シャピロ， ゲイリー

(72)【発明者】

【氏名】ング， メイ ローザ

(72)【発明者】

【氏名】タバレス， ダン

(72)【発明者】

【氏名】ヘ， シンユエ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG20

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA13

4C084MA17

4C084MA21

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA27

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB42

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB43

4C087BB44

4C087BB57

4C087BB65

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA41

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示の主題は、ＣＤ１９を特異的に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそのようなＣＤ１９標的化ＣＡＲを含む細胞を提供する。本開示の主題は、処置のための、例えば、血液がんを処置するための、ＣＤ１９標的化ＣＡＲの使用をさらに提供する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ）_２を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記細胞外抗原結合性ドメインが、
ａ）配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに／または
ｂ）
ｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｖ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖｉ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域
を含む、ＣＡＲ。

【請求項2】

前記細胞外抗原結合性ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ）_２を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。

【請求項3】

前記細胞外抗原結合性ドメインが、ｓｃＦｖを含む、請求項２に記載のＣＡＲ。

【請求項4】

前記ｓｃＦｖが、ヒトｓｃＦｖである、請求項３に記載のＣＡＲ。

【請求項5】

前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１から４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項6】

前記軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｃ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
（ｄ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｅ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｆ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｇ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
（ｈ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項7】

前記軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
（ｃ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含む、請求項１から６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項8】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領が、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；または
（ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、
請求項１から７までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項9】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む；または
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、
請求項１から８までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項10】

前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む、請求項１から９までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項11】

前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１０までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項12】

前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む、請求項１から１１までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項13】

前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１２までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項14】

前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１３までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項15】

前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含み、（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む、請求項１から１４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項16】

前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１５までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項17】

前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４、配列番号１８、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から１６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項18】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む；または
（ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む、
請求項１から１７までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項19】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む；または
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む、
請求項１から１８までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項21】

前記細胞外抗原結合性ドメインが、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域の間にリンカーを含む、請求項１から２０までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項22】

前記リンカーが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項23】

前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域が、Ｎ末端からＣ末端へと、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈで位置づけられている、請求項１から２２までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項24】

前記細胞外抗原結合性ドメインが、配列番号１５、配列番号１９、もしくは配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるｓｃＦｖを含む、または配列番号１５、配列番号１９、もしくは配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるｓｃＦｖである、請求項１から２３までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項25】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、またはＢＴＬＡポリペプチドを含む、請求項１から２４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項26】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、請求項２５に記載のＣＡＲ。

【請求項27】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、請求項１から２６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項28】

前記ＣＤ３ζポリペプチドが、改変されたＣＤ３ζポリペプチドである、請求項２７に記載のＣＡＲ。

【請求項29】

前記改変されたＣＤ３ζポリペプチドが、天然のＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ３を含む、請求項２８に記載のＣＡＲ。

【請求項30】

前記天然のＩＴＡＭ１が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２９に記載のＣＡＲ。

【請求項31】

前記ＩＴＡＭ２バリアントが、配列番号３７に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２９に記載のＣＡＲ。

【請求項32】

前記ＩＴＡＭ３バリアントが、配列番号４１に記載のアミノ酸配列からなる、請求項２９に記載のＣＡＲ。

【請求項33】

前記改変されたＣＤ３ζポリペプチドが、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、請求項２８から３２までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項34】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項１から３３までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項35】

前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含む、請求項３４に記載のＣＡＲ。

【請求項36】

前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチドを含む、請求項３５に記載のＣＡＲ。

【請求項37】

ベクターから発現される、請求項１から３６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項38】

前記ベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項３７に記載のＣＡＲ。

【請求項39】

請求項１から３８までのいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞。

【請求項40】

前記ＣＡＲが形質導入されている、請求項３９に記載の細胞。

【請求項41】

前記ＣＡＲがが、前記細胞の表面上に構成的に発現される、請求項３９または請求項４０に記載の細胞。

【請求項42】

免疫応答性細胞である、請求項３９から４１までのいずれか一項に記載の細胞。

【請求項43】

リンパ系列の細胞または骨髄系列の細胞である、請求項３９から４２までのいずれか一項に記載の細胞。

【請求項44】

Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、リンパ系細胞に分化し得る幹細胞、および骨髄細胞に分化し得る幹細胞からなる群から選択される、請求項３９から４３までのいずれか一項に記載の細胞。

【請求項45】

Ｔ細胞である、請求項３９から４４までのいずれか一項に記載の細胞。

【請求項46】

前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択される、請求項３８または請求項４５に記載の細胞。

【請求項47】

ＮＫ細胞である、請求項３９から４４までのいずれか一項に記載の細胞。

【請求項48】

前記ＮＫ細胞が、幹細胞に由来する、請求項４７に記載の細胞。

【請求項49】

前記幹細胞が、多能性幹細胞である、請求項４４または４８に記載の細胞。

【請求項50】

前記多能性幹細胞が、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞である、請求項４９に記載の細胞。

【請求項51】

請求項１から３８までのいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸分子。

【請求項52】

前記ＣＡＲに作動可能に連結したプロモーターをさらに含む、請求項５１に記載の核酸分子。

【請求項53】

前記プロモーターが、内因性または外因性である、請求項５２に記載の核酸分子。

【請求項54】

前記外因性プロモーターが、延長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、およびユビキチンＣプロモーターからなる群から選択される、請求項５３に記載の核酸分子。

【請求項55】

前記プロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項５１に記載の核酸分子。

【請求項56】

前記誘導性プロモーターが、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、ＩＬ－２プロモーター、４－１ＢＢプロモーター、ＰＤ１プロモーター、およびＬＡＧ３プロモーターからなる群から選択される、請求項５５に記載の核酸分子。

【請求項57】

前記プロモーターが、内因性プロモーターである、請求項５３に記載の核酸分子。

【請求項58】

前記内因性プロモーターが、ＴＣＲアルファプロモーター、ＴＣＲベータプロモーター、およびベータ２－ミクログロブリンプロモーターから選択される、請求項５７に記載の核酸分子。

【請求項59】

請求項５１から５８までのいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項60】

レトロウイルスベクターである、請求項５９に記載のベクター。

【請求項61】

請求項５１から５８までのいずれか一項に記載の核酸分子を発現する細胞。

【請求項62】

Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項６１に記載の細胞。

【請求項63】

請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。

【請求項64】

薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物である、請求項６３に記載の組成物。

【請求項65】

約１×１０^６個から約５×１０^８個の間の細胞を含む、請求項６３または請求項６４に記載の組成物。

【請求項66】

約１×１０^６個から約１×１０^８個の間の細胞を含む、請求項６３または請求項６４に記載の組成物。

【請求項67】

約１×１０^６個から約５×１０^７個の間の細胞を含む、請求項６３または請求項６４に記載の組成物。

【請求項68】

約２．５×１０^７個の細胞を含む、請求項６３から６７までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項69】

対象における腫瘍負荷を減少させる方法であって、前記対象に、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

【請求項70】

前記対象における腫瘍細胞の数を減少させる、腫瘍サイズを縮小させる、および／または腫瘍を根絶するものである、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

新生物を有する対象の生存を増大させるまたは延長する方法であって、前記対象に、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

【請求項72】

対象における新生物を処置および／または防止する方法であって、前記対象に、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。

【請求項73】

前記腫瘍および／または新生物が、ＣＤ１９に関連する、請求項６９から７２までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記腫瘍および／または新生物が、血液がんである、請求項６９から７３までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記血液がんが、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫からなる群から選択される、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記白血病が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、およびＢ細胞性前リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項７５に記載の方法。

【請求項78】

前記腫瘍および／または新生物が、Ｂ細胞悪性病変である、請求項６９から７３までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記Ｂ細胞悪性病変が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、リヒター形質転換を伴うＣＬＬ、およびＣＮＳリンパ腫からなる群から選択される、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記腫瘍および／または新生物が、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項６９から７９までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記Ｂ細胞リンパ腫が、再発または難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞リンパ腫である、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記対象が、ヒト対象である、請求項６９から８１までのいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

治療における使用のための、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項84】

対象における新生物の処置および／または防止における使用のための、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項85】

新生物を有する対象の生存の増大または延長における使用のための、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項86】

対象における新生物の処置および／または防止における使用のための、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞または請求項６３から６８までのいずれか一項に記載の組成物。

【請求項87】

前記腫瘍および／または新生物が、ＣＤ１９に関連する、請求項８４から８６までのいずれか一項に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項88】

前記腫瘍および／または新生物が、血液がんである、請求項８４から８７までのいずれか一項に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項89】

前記血液がんが、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫からなる群から選択される、請求項８８に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項90】

前記白血病が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、およびＢ細胞性前リンパ性白血病からなる群から選択される、請求項８９に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項91】

前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項８９に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項92】

前記腫瘍および／または新生物が、Ｂ細胞悪性病変である、請求項８４から８７までのいずれか一項に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項93】

前記Ｂ細胞悪性病変が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、リヒター形質転換を伴うＣＬＬ、およびＣＮＳリンパ腫からなる群から選択される、請求項９２に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項94】

前記腫瘍および／または新生物が、Ｂ細胞リンパ腫である、請求項８４から９３までのいずれか一項に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項95】

前記Ｂ細胞リンパ腫が、再発または難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞リンパ腫である、請求項９４に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項96】

前記対象が、ヒト対象である、請求項８４から９５までのいずれか一項に記載の使用のための細胞または組成物。

【請求項97】

請求項１から３８までのいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞を作製するための方法であって、前記細胞に、請求項１から３８までのいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を導入するステップを含む、方法。

【請求項98】

対象における腫瘍負荷を減少させるための、対象における新生物を処置および／もしくは防止するための、ならびに／または新生物を有する対象の生存を増大させるもしくは延長するためのキットであって、請求項３９から５０まで、請求項６１および請求項６２のいずれか一項に記載の細胞を含む、キット。

【請求項99】

対象における腫瘍負荷を減少させるための、対象における新生物を処置および／もしくは防止するための、ならびに／または新生物を有する対象の生存を増大させるもしくは延長するための前記細胞の使用に関する説明書をさらに含む、請求項９８に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

１．関連出願との相互参照
本出願は、それぞれの内容全体が参照により組み込まれ、それぞれ優先権が主張される２０２０年４月２４日出願の米国仮特許出願第６３／０１５，３６２号および２０２０年９月１日出願の米国仮特許出願第６３／０７３，１３３号の優先権を主張するものである。

【0002】

２．技術分野
本開示の主題は、ＣＤ１９を特異的に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞を使用して新生物（例えば、がん）を処置するための方法を提供する。

【背景技術】

【0003】

３．背景
細胞に基づく免疫療法は、がんを処置するための治癒潜在性を有する治療である。Ｔ細胞および他の免疫細胞を、腫瘍抗原を標的とするように改変することができ、これは、選択された抗原に対して特異的な、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と称される、抗原に対する人工または合成受容体をコードする遺伝子材料を導入することによる。ＣＡＲを使用した標的化Ｔ細胞治療に関して血液悪性病変の処置に関する最近の臨床的成功が示されている。

【0004】

マウスモノクローナル抗体由来の結合性ドメインを有するＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞により、Ｂ細胞悪性病変が処置されることが示されている。ヒト患者では、ＣＡＲのマウスｓｃＦｖ抗原結合性ドメインに特異的なＴ細胞媒介性免疫応答が発生し、その結果、ＣＡＲ Ｔ細胞が早期に排除され、それにより、腫瘍が再燃するリスクが増大する恐れがある。したがって、低減した毒性および免疫原性ならびに／または改善された安全性および有効性を有する、改善されたＣＤ１９標的化ＣＡＲが必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

４．発明の概要
本開示の主題は、ＣＤ１９標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを含む細胞、および処置のため、例えば、新生物を処置するための、細胞の使用を提供する。

【0006】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ）_２を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、（ａ）配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに／または
（ｂ）
ｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｉｖ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖｉ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；
ｖｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３；または
ｖｉｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域を含む。

【0007】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0008】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0009】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0010】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0011】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0012】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0013】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0014】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0015】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0016】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0017】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0018】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0019】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0020】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0021】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0022】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0023】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0024】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。

【0025】

ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0026】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１４、配列番号１８、または配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0027】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0028】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0029】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0030】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0031】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含む。

【0032】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0033】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0034】

ある特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む。

【0035】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の間にリンカーを含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に記載のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈの位置づけである。

【0036】

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号１５、配列番号１９、もしくは配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるｓｃＦｖを含む、または配列番号１５、配列番号１９、もしくは配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むもしくはそれからなるｓｃＦｖである。

【0037】

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、またはＢＴＬＡポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0038】

ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、改変されたＣＤ３ζポリペプチドである。ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、天然のＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ３を含む。ある特定の実施形態では、天然のＩＴＡＭ１は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列からなる。ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。

【0039】

ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、またはこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８の細胞内ドメインもしくはその一部、４－１ＢＢの細胞内ドメインもしくはその一部、ＯＸ４０の細胞内ドメインもしくはその一部、ＩＣＯＳの細胞内ドメインもしくはその一部、またはＤＡＰ－１０の細胞内ドメインもしくはその一部を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0040】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ベクターから発現される。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。

【0041】

本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲを含む細胞をさらに提供する。ある特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲが形質導入されている。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞の表面上に構成的に発現される。ある特定の実施形態では、細胞は、免疫応答性細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、リンパ系列の細胞または骨髄系列の細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、リンパ系細胞に分化し得る幹細胞、および骨髄細胞に分化し得る幹細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、幹細胞に由来する。ある特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞である。ある特定の実施形態では、多能性幹細胞は、胚性幹細胞（ｅｍｂｒｙｏｉｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）または人工多能性幹細胞である。

【0042】

さらに、本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸分子を提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、ＣＡＲに作動可能に連結したプロモーターをさらに含む。プロモーターは、内因性であっても外因性であってもよい。ある特定の実施形態では、プロモーターは外因性プロモーターである。ある特定の実施形態では、外因性プロモーターは、延長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、およびユビキチンＣプロモーターからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、プロモーターは内因性プロモーターである。ある特定の実施形態では、内因性プロモーターは、ＴＣＲアルファプロモーター、ＴＣＲベータプロモーター、およびベータ２－ミクログロブリンプロモーターから選択される。ある特定の実施形態では、プロモーターは誘導性プロモーターである。ある特定の実施形態では、誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、ＩＬ－２プロモーター、４－１ＢＢプロモーター、ＰＤ１プロモーター、およびＬＡＧ３プロモーターからなる群から選択される。

【0043】

本開示の主題は、本明細書に開示される核酸分子を含むベクターも提供する。ある特定の実施形態では、ベクターはレトロウイルスベクターである。

【0044】

本開示の主題は、本明細書に開示される核酸分子を発現する細胞をさらに提供する。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。

【0045】

本開示の主題は、本明細書に開示される細胞を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、約１×１０^６個から約５×１０^８個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、約１×１０^６個から約１×１０^８個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、約１×１０^６個から約５×１０^７個の間の細胞を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、約２．５×１０^７個の細胞を含む。

【0046】

本開示の主題は、本開示の細胞を使用する様々な方法をさらに提供する。本開示の主題は、対象における腫瘍負荷を減少させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、対象に、本明細書に開示される細胞または組成物を投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、対象における腫瘍細胞の数を減少させる、腫瘍サイズを縮小させる、および／または腫瘍を根絶するものである。

【0047】

本開示の主題は、新生物を有する対象の生存を増大させるまたは延長する方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、対象に、本明細書に開示される細胞または組成物を投与するステップを含む。

【0048】

本開示の主題は、対象における新生物を処置および／または防止する方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、対象に、本明細書に開示される細胞または組成物を投与するステップを含む。

【0049】

本開示の細胞および組成物を治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞および組成物を、対象における新生物の処置および／または防止に使用する。ある特定の実施形態では、本開示の細胞および組成物を、新生物を有する対象の生存の増大または延長に使用する。ある特定の実施形態では、本開示の細胞および組成物を、対象における新生物の処置および／または防止に使用する。

【0050】

ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、ＣＤ１９に関連する。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、血液がんである。ある特定の実施形態では、血液がんは、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、およびＢ細胞性前リンパ性白血病からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、Ｂ細胞悪性病変である。ある特定の実施形態では、Ｂ細胞悪性病変は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、リヒター形質転換を伴うＣＬＬ、およびＣＮＳリンパ腫からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、Ｂ細胞リンパ腫である。ある特定の実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、再発または難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞リンパ腫である。ある特定の実施形態では、対象は、ヒト対象である。

【0051】

さらに、本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲを含む細胞を作製するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、細胞に、本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸分子を導入するステップを含む。

【0052】

さらに、本開示の主題は、対象における腫瘍負荷を減少させるため、対象における新生物を処置および／もしくは防止するため、ならびに／または新生物を有する対象の生存を増大させるもしくは延長するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、本明細書に開示される細胞を含む。ある特定の実施形態では、キットは、対象における腫瘍負荷を減少させるため、対象における新生物を処置および／もしくは防止するため、ならびに／または新生物を有する対象の生存を増大させるもしくは延長するための前記細胞の使用に関する説明書をさらに含む。
５．図面の簡単な説明

【図面の簡単な説明】

【0053】

【図1】図１Ａおよび１Ｂは、ＣＤ１９を発現する細胞に対するＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞の細胞傷害性を示す。図１Ａは、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株に対する死滅を示す。図１Ｂは、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞に対する死滅を示す。陽性対照は１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲである。

【0054】

【図2】図２Ａおよび２Ｂは、フローに基づく死滅評価によって測定された、ＣＤ１９を発現する細胞に対するＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞の細胞傷害性を示す。図２Ａは、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株に対する死滅を示す。図２Ｂは、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞に対する死滅を示す。陽性対照は１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲである。

【0055】

【図3】図３Ａおよび３Ｂは、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＬ－２サイトカイン分泌を示す。図３Ａは、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株と共培養した場合のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＬ－２サイトカイン分泌を示す。図３Ｂは、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞と共培養した場合のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＬ－２サイトカイン分泌を示す。陽性対照は１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲである。

【0056】

【図4】図４Ａおよび４Ｂは、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＦＮ－γサイトカイン分泌を示す。図４Ａは、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株と共培養した場合のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＦＮ－γサイトカイン分泌を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞と共培養した場合のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞によるＩＦＮ－γサイトカイン分泌を示す。陽性対照は１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲである。

【0057】

【図5】図５は、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す。＃１７は陰性対照であり、検出可能なｉｎ ｖｉｖｏ活性を有さないＣＤ１９標的化ＣＡＲである。

【0058】

【図6】図６は、ＣＤ１９－ＨＳＡ－Ｈｉｓ１０のアミノ酸配列を示す。

【0059】

【図7】図７は、＃２ ｓｃＦｖ、ＳＪ２５ｃ１ ｓｃＦｖ、およびＦＭＣ６３ ｓｃＦｖの結合データを示す。可溶性ＣＤ１９抗原内の共通エピトープに対する相対的競合をＢｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイで評価した。可溶性ＣＤ１９特異的抗体（ＦＭＣ６３またはＳＪ２５ｃ１）とＣＤ１９抗原の混合物を、＃２ ｓｃＦｖを含有するチップ上に流して、＃２ ｓｃＦｖがＳＪ２５ｃ１ ｓｃＦｖ、およびＦＭＣ６３ ｓｃＦｖと同じエピトープと交差競合するかどうかを決定した。１９（Ｔ２）は「＃２ ｓｃＦｖ」を表す。

【0060】

【図8】図８は、＃２ ＣＡＲを含むガンマ－レトロウイルスベクターを示す。「１９（Ｔ２）」は「＃２」を表す。＃２ ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的Ｔ２（１９（Ｔ２））ｓｃＦｖ（または「＃２ ｓｃＦｖ」）、ＣＤ８アルファリーダーペプチド、ＣＤ２８遺伝子断片、および改変されたＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ２８遺伝子断片は、その細胞外ヒンジ、膜貫通、および細胞内ドメインを含む。改変されたＣＤ３ζ鎖は、「１ＸＸ」と称される、１つの機能的な野生型および２つの突然変異した免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する。改変されたＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列は、配列番号４３に記載される。ＣＤ３ζ－１ＸＸとＣＤ３ζ－野生型のアミノ酸配列のアラインメントが図９に示されている。２つの配列間のアミノ酸の差異に印がつけられている。

【0061】

【図9】は、ＣＤ３ζ－１ＸＸとＣＤ３ζ－野生型のアミノ酸配列のアラインメントを示す。

【0062】

【図10】図１０は、＃２ ＣＡＲ－Ｔ細胞および１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ｘｘ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0063】

【図11】図１１は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞による腫瘍排除を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ｘｘ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0064】

【図12】図１２は、１９２８ｚ ＣＡＲを含むガンマ－レトロウイルスベクターを示す。野生型ｈＣＤ３ζのアミノ酸配が図９に配列番号３０として示されている。

【0065】

【図13】図１３は、γ－レトロウイルスにより形質導入されたＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0066】

【図14-1】図１４は、表現型１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞および＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【図14-2】図１４は、表現型１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞および＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0067】

【図15】図１５は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞による腫瘍根絶のカイネティクスを示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。各曲線はマウス１匹における腫瘍負荷を表す。

【0068】

【図16】図１６は、ＮＡＬＭ６白血病担持マウスの、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉ．ｖ．注入後の生存を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0069】

【図17】図１７は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの骨髄中のＣＡＲ Ｔ細胞数量化および表現型決定（１７日目）を示す。全てのデータが平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0070】

【図18】図１８は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いた処置後のマウスの体重を示す。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。アスタリスクは、予定外の死亡が生じた時点を示す。短い曲線は示されている時点で全てのマウスが死亡したことを表す。

【0071】

【図19】図１９は、１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの注入後１０日目および２７／２８日目における血清中の肝酵素の数量化を示す。２つのコホート間で同じ日についての統計比較を行った。全てのデータが平均値＋ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0072】

【図20】図２０は、１×１０^６個の＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおける注入後１０日目および２７／２８日目のヒトサイトカインレベルの数量化を示す。全てのデータが平均値＋ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0073】

【図21】１×１０^６個の＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおける注入後１０日目および２７／２８日目のマウスサイトカインレベルの数量化。全てのデータが平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0074】

【図22】図２２は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおける注入後２７／２８日目の必須の血液細胞の数量化を示す。全てのデータが平均値＋ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0075】

【図23】図２３は、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの注入後２７／２８日目の体重および極めて重要な器官の重量の比較を示す。群当たりのマウスの数がグラフ説明文に示されている。全てのデータが平均値＋ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0076】

【図24】図２４は、ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの肝臓、脾臓、および骨髄におけるリンパ球および腫瘍浸潤の数量化を示す。全てのデータが平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を使用してｐ値を算出した。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0077】

【図25】図２５は、ＣＤ１９を発現する野生型Ｒａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞ならびにＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体の例示的なフローサイトメトリークロマトグラムを示す。

【0078】

【図26-1】図２６Ａ～２６Ｃは、ＮＡＬＭ－６細胞上のＣＤ１９に結合する抗ＣＤ１９抗体の例示的な結合曲線を示す。

【図26-2】図２６Ａ～２６Ｃは、ＮＡＬＭ－６細胞上のＣＤ１９に結合する抗ＣＤ１９抗体の例示的な結合曲線を示す。

【発明を実施するための形態】

【0079】

６．詳細な説明
本開示の主題は、ＣＤ１９を特異的に標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそのようなＣＤ１９標的化ＣＡＲを含む細胞を提供する。細胞は、免疫応答性細胞、例えば、遺伝子改変された免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）であり得る。本開示の主題は、処置のため、例えば、新生物を処置するための、細胞およびそれを含む組成物の使用をさらに提供する。本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲは、例えば、持続性がより高いことによって証明される通り（実施例６および７を参照されたい）、他のＣＤ１９標的化ＣＡＲよりも安全であり、かつ／または強力であることが示された。このより大きな持続性により安全性リスクは提起されないことも示されている。したがって、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞は、現行の免疫療法において使用される大多数のＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞よりも低用量で使用することが可能である。本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ Ｔ細胞は、より安全であり、したがって、例えば、これだけに限定されないが、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、および神経毒性（ＮＴ）の発生率が低いことを含め、副作用がより少ないことが予測される。

【0080】

本開示の非限定的な実施形態を本明細書および実施例に記載する。

【0081】

開示を明瞭にするために、また限定するものではなく、詳細な説明を以下のサブセクションに分割する：
５．１． 定義；
５．２． ＣＤ１９；
５．３． キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；
５．４． 細胞；
５．５． 核酸分子およびベクター；
５．６． 製剤および投与；および
５．７． 処置方法
５．１ 定義

【0082】

別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、本開示の主題が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。

【0083】

本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容される誤差範囲内に入ることを指し、その許容される誤差範囲は、その値の測定または決定の仕方、すなわち測定系の限界に一部依存する。例えば、「約」は、当技術分野における慣習に従って、３または３よりも大きい標準偏差内に入ることを意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値に対して最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、およびなおより好ましくは最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に生物系またはプロセスに関して、この用語は、値に対して１桁分以内、好ましくは５倍以内、およびより好ましくは２倍以内を意味し得る。

【0084】

本明細書で使用される場合、「免疫応答性細胞」という用語は、免疫応答に関して機能する細胞またはその前駆体もしくは後代を指す。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、リンパ系列の細胞である。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、骨髄系列の細胞である。

【0085】

本明細書で使用される場合、「免疫応答性細胞を活性化する」という用語は、細胞におけるシグナルトランスダクションまたはタンパク質発現の変化を誘導し、その結果、免疫応答の開始をもたらすことを指す。例えば、リガンド結合および免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）に応答してＣＤ３鎖がクラスターを形成すると、シグナルトランスダクションカスケードが生じる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲが抗原に結合すると、結合した受容体の近くの多くの分子（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ３γ／σ／ε／ζなど）のクラスター形成を含む免疫学的シナプスの形成が生じる。この膜結合シグナル伝達分子のクラスター形成により、ＣＤ３鎖内に含有されるＩＴＡＭモチーフがリン酸化されることが可能になる。このリン酸化により今度はＴ細胞活性化経路が開始され、最終的にＮＦ－κＢおよびＡＰ－１などの転写因子が活性化される。これらの転写因子によりＴ細胞の全体的な遺伝子発現が誘導されて、Ｔ細胞媒介性免疫応答を開始するために、マスター調節因子であるＴ細胞タンパク質の増殖および発現のためのＩＬ－２産生が増大する。

【0086】

本明細書で使用される場合、「免疫応答性細胞を刺激する」という用語は、頑強かつ持続的な免疫応答をもたらすシグナルを指す。ある特定の実施形態では、これは、免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化の後に生じる、または、これだけに限定されないが、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ４０およびＩＣＯＳを含めた受容体を通じて同時に媒介される。頑強かつ長期間にわたるＴ細胞媒介性免疫応答の開始には多数の刺激性シグナルを受け取ることが重要であり得る。Ｔ細胞は、急速に阻害され、抗原に対して不応答性になる。一方、これらの共刺激シグナルの効果は変動し得、一般に、抗原に対して完全かつ持続的な根絶のために頑強に応答する、寿命が長く、増殖性であり、かつ抗アポトーシス性のＴ細胞を生成するために、遺伝子発現の増大をもたらす。

【0087】

本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である、抗体の相補性決定領域アミノ酸配列と定義される。ある特定の実施形態では、可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方の集積、ＡｂＭ、接触、および／またはコンフォメーショナル定義または当技術分野で周知の任意のＣＤＲ決定方法の定義に従って識別される、可変領域内のアミノ酸残基である。抗体ＣＤＲは、元々はＫａｂａｔらによって定義された超可変領域として識別することができる。例えば、Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.を参照されたい。ＣＤＲの位置は、元々はＣｈｏｔｈｉａらよって記載された構造的なループ構造として識別することもできる。例えば、Chothia et al., Nature 342: 877-883, 1989を参照されたい。ＣＤＲ識別のための他の手法としては、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの折衷であり、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ（現Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））によって導かれる「ＡｂＭ定義」、または、MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262: 732-745, 1996に記載されている、観察された抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」、が挙げられる。本明細書ではＣＤＲの「コンフォメーショナル定義」と称される別の手法では、ＣＤＲの位置を、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として識別することができる。例えば、Makabe et al., Journal of Biological Chemistry, 283: 1156-1166, 2008を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記の手法のうちの１つに厳密に従うものではないが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部分が重複するが、特定の残基または残基の群またはさらにはＣＤＲ全体が抗原結合に著しい影響を及ぼさないという予測または実験所見を踏まえて短縮または延長することができる。一部の実施形態では、ＣＤＲは、手法の組合せを含めた、当技術分野で公知の任意の手法によって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法では、これらの手法のいずれかに従って定義されるＣＤＲが利用され得る。１つよりも多くのＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態に関しては、ＣＤＲをＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｘｔｅｎｄｅｄ、ＡｂＭ、接触、および／またはコンフォメーショナル定義のいずれかに従って定義することができる。一般に、抗体は、可変領域内の３つの重鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域および３つの軽鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲにより、抗体の抗原またはエピトープへの結合のための大多数の接触残基がもたらされる。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域はＫａｂａｔ番号付けシステムを使用して表される。

【0088】

本明細書で使用される場合、「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（Ｖ_Ｈ）の可変領域と軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域が共有結合により連結してＶ_Ｈ：：Ｖ_Ｌヘテロ二量体を形成した、融合タンパク質を指す。重鎖（Ｖ_Ｈ）と軽鎖（Ｖ_Ｌ）は、直接接合しているか、または、Ｖ_ＨのＮ末端とＶ_ＬのＣ末端、もしくはＶ_ＨのＣ末端とＶ_ＬのＮ末端を接続するペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５アミノ酸）によって接合している。リンカーは、通常、柔軟性のためにグリシンに富み、ならびに溶解性のためにセリンまたはトレオニンに富む。リンカーにより細胞外抗原結合性ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、その内容全体がこれによって参照により組み込まれるShen et al., Anal. Chem. 80 (6): 1910-1917 (2008)およびＷＯ２０１４／０８７０１０に開示されている。ある特定の実施形態では、リンカーは、Ｇ４Ｓリンカーである。

【0089】

ある特定の実施形態では、リンカーは、以下に提示する配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる：
GGGGSGGGGSGGGGS［配列番号１］

【0090】

ある特定の実施形態では、リンカーは、以下に提示する配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる：
GGGGSGGGGSGGGSGGGGS［配列番号２］

【0091】

ある特定の実施形態では、リンカーは、以下に提示する配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS［配列番号３］

【0092】

ある特定の実施形態では、リンカーは、以下に提示する配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS［配列番号４］

【0093】

本明細書で使用される場合、「実質的に同一の」または「実質的に相同な」という用語は、ポリペプチドまたは核酸分子が、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか）または参照核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか）に対して少なくとも約５０％同一または相同であることを指す。ある特定の実施形態では、そのような配列は、比較のために使用されるアミノ酸配列または核酸配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一または相同である。

【0094】

配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラムの配列解析ソフトウェアパッケージ）を使用することによって測定することができる。そのようなソフトウェアでは、種々の置換、欠失、および／または他の改変に対して相同性の程度を割り当てることによって同一または同様の配列をマッチさせる。保存的置換には、一般には、以下の群内での置換が含まれる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定するための例示的な手法では、ＢＬＡＳＴプログラムを使用し、密接に関連する配列を示すｅ－３からｅ－１００の間の確率スコアを用いることができる。

【0095】

２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているE. Meyers and W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17 (1988))のアルゴリズムを使用し、ＰＡＭ１２０重み付け残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ（ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ）１２およびギャップペナルティ（ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ）４を使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）内のＧＡＰプログラムに組み込まれているNeedleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48: 444-453 (1970))アルゴリズムを使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、ならびにギャップ重みづけ（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）１６、１４、１２、１０、８、６、または４および長さ重みづけ（ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）１、２、３、４、５、または６を使用して決定することができる。それに加えて、またはその代わりに、例えば、関連する配列を同定するために、本開示の主題のアミノ酸配列をさらに「クエリ配列」として使用して、公共のデータベースに対する検索を実施することができる。そのような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-10のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）＝３を用いて実施して、本明細書に開示される指定の配列（例えば、ｓｃＦｖ７０３の重鎖および軽鎖可変領域配列）と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較する目的でギャップが挿入されたアラインメントを得るために、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25 (17): 3389-3402に記載されているＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。

【0096】

本明細書で使用される場合、「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含む本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン）の結合特徴に著しい影響を及ぼさず、変更もさせないアミノ酸の改変を指す。保存的改変には、アミノ酸置換、付加および欠失が含まれる。改変は、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインに、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発などの当技術分野で公知の標準の技法によって導入することができる。アミノ酸は、それらの物理化学特性、例えば電荷および極性などに従って群に分類することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じ群内のアミノ酸で置き換えられた置換である。例えば、アミノ酸を電荷によって分類することができる：正に荷電したアミノ酸にはリシン、アルギニン、ヒスチジンが含まれ、負に荷電したアミノ酸にはアスパラギン酸、グルタミン酸が含まれ、中性電荷のアミノ酸にはアラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが含まれる。さらに、アミノ酸を極性によって分類することができる：極性アミノ酸にはアルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンが含まれる；非極性アミノ酸には、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンが含まれる。したがって、ＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基を同じ群の他のアミノ酸残基で置き換えることができ、変更された抗体を保持されている機能（すなわち、上の（ｃ）から（ｌ）までに記載されている機能）について、明細書に記載の機能アッセイを使用して試験することができる。ある特定の実施形態では、指定の配列またはＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が変更されている。

【0097】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、処置に際して有益なまたは所望の臨床結果をもたらすために十分な量を指す。有効量は、対象に１回または複数回用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、有効量は、疾患の増悪を緩和する、好転させる、安定化する、逆転させるもしくは緩徐化するため、または他のように疾患の病理学的結果を軽減するために十分な量であり得る。有効量は、医師が個々の場合に応じて、また、当業者の技術の範囲内で決定することができる。一般には、有効量を実現するために適当な投薬量を決定する際に、いくつかの因子を考慮に入れる。これらの因子としては、対象の年齢、性別および体重、処置される状態、状態の重症度ならびに投与される細胞の形態および有効濃度が挙げられる。

【0098】

本明細書で使用される場合、「新生物」という用語は、細胞または組織の病理学的増殖およびその後の他の組織または器官への移動または浸潤を特徴とする疾患を指す。新形成成長は、一般には、制御されず、進行性であり、正常な細胞の増殖（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）が引き出されないまたはその休止が引き起こされる条件下で起こる。新生物は、これだけに限定されないが、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群から選択される器官またはその組織または細胞型を含めた、種々の細胞型、組織、または器官に影響を及ぼし得る。新生物には、がん、例えば、肉腫、癌腫、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などが含まれる。新生物は、原発腫瘍または原発がんであり得る。

【0099】

本明細書で使用される場合、「シグナル配列」または「リーダー配列」という用語は、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在する、それらのタンパク質が分泌経路に進入するように方向づけるペプチド配列（例えば、５、１０、１５、２０、２５または３０アミノ酸）を指す。

【0100】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、米国特許法においてそれらに与えられている広範な意味を有するものとし、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得る。

【0101】

本明細書で使用される場合、「処置」は、処置される個体または細胞の疾患経過を変更しようとする臨床的介入を指し、予防のために実施することもでき、臨床病理の過程中に実施することもできる。処置の治療効果としては、限定することなく、疾患の出現または再発を防止すること、症状を和らげること、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果を弱めること、転移を防止すること、疾患増悪の速度を低下させること、病態を好転させるまたは緩和すること、および寛解させることまたは予後を改善することが挙げられる。処置により、疾患または障害の増悪を防止することによって、障害の影響を受けているまたはその診断を受けた対象または障害を有する疑いがある対象における障害に起因する悪化を防止することができるだけでなく、処置により、障害のリスクがあるまたは障害を有する疑いがある対象における障害または障害の症状の発症を防止することもできる。

【0102】

「個体」または「対象」は、本明細書では、ヒトまたは非ヒト動物などの脊椎動物、例えば、哺乳動物である。哺乳動物としては、これだけに限定されないが、ヒト、霊長類、家畜、競技動物、齧歯類および愛玩動物が挙げられる。非ヒト動物対象の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスター、およびモルモットなどの齧歯類；ウサギ；イヌ；ネコ；ヒツジ；ブタ；ヤギ；ウシ；ウマ；および類人猿およびサルなどの非ヒト霊長類が挙げられる。
５．２．ＣＤ１９

【0103】

ＣＤ１９は、形質細胞に分化するまでの発生の初期の正常なＢ細胞に存在する細胞表面９５ｋＤａ糖タンパク質である。ＣＤ１９は、多能性血液幹細胞を含めた他の正常組織には存在しない。ＣＤ１９は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、および急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）のサブセットにおいて発現され、このことから、自己免疫疾患（Ｂ細胞形成不全以外）または不可逆的な骨髄毒性のリスクが最小限である、免疫療法の魅力的な標的となっている。

【0104】

ＣＤ１９は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞受容体を通じたシグナルトランスダクションを正に調節するＬｅｕ１３、ＣＤ８１、およびＣＤ２１を含む細胞表面シグナルトランスダクション複合体の構成成分である。

【0105】

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ヒトＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１７１５６９．１（配列番号５）のアミノ酸配列またはその断片を含むまたはそれからなる。
配列番号５を以下に提示する：
MPPPRLLFFL LFLTPMEVRP EEPLVVKVEE GDNAVLQCLK GTSDGPTQQL TWSRESPLKP
FLKLSLGLPG LGIHMRPLAI WLFIFNVSQQ MGGFYLCQPG PPSEKAWQPG WTVNVEGSGE
LFRWNVSDLG GLGCGLKNRS SEGPSSPSGK LMSPKLYVWA KDRPEIWEGE PPCLPPRDSL
NQSLSQDLTM APGSTLWLSC GVPPDSVSRG PLSWTHVHPK GPKSLLSLEL KDDRPARDMW
VMETGLLLPR ATAQDAGKYY CHRGNLTMSF HLEITARPVL WHWLLRTGGW KVSAVTLAYL
IFCLCSLVGI LHLQRALVLR RKRKRMTDPT RRFFKVTPPP GSGPQNQYGN VLSLPTPTSG
LGRAQRWAAG LGGTAPSYGN PSSDVQADGA LGSRSPPGVG PEEEEGEGYE EPDSEEDSEF
YENDSNLGQD QLSQDGSGYE NPEDEPLGPE DEDSFSNAES YENEDEELTQ PVARTMDFLS
PHGSAWDPSR EATSLAGSQS YEDMRGILYA APQLRSIRGQ PGPNHEEDAD SYENMDNPDG
PDPAWGGGGR MGTWSTR［配列番号５］

【0106】

ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９は、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１７６１．３（配列番号６）のアミノ酸配列またはその断片を含むまたはそれからなる。
配列番号６を以下に提示する：
MPPPRLLFFL LFLTPMEVRP EEPLVVKVEE GDNAVLQCLK GTSDGPTQQL TWSRESPLKP
FLKLSLGLPG LGIHMRPLAI WLFIFNVSQQ MGGFYLCQPG PPSEKAWQPG WTVNVEGSGE
LFRWNVSDLG GLGCGLKNRS SEGPSSPSGK LMSPKLYVWA KDRPEIWEGE PPCLPPRDSL
NQSLSQDLTM APGSTLWLSC GVPPDSVSRG PLSWTHVHPK GPKSLLSLEL KDDRPARDMW
VMETGLLLPR ATAQDAGKYY CHRGNLTMSF HLEITARPVL WHWLLRTGGW KVSAVTLAYL
IFCLCSLVGI LHLQRALVLR RKRKRMTDPT RRFFKVTPPP GSGPQNQYGN VLSLPTPTSG
LGRAQRWAAG LGGTAPSYGN PSSDVQADGA LGSRSPPGVG PEEEEGEGYE EPDSEEDSEF
YENDSNLGQD QLSQDGSGYE NPEDEPLGPE DEDSFSNAES YENEDEELTQ PVARTMDFLS
PHGSAWDPSR EATSLGSQSY EDMRGILYAA PQLRSIRGQP GPNHEEDADS YENMDNPDGP
DPAWGGGGRM GTWSTR［配列番号６］

【0107】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９の細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインは、配列番号５のアミノ酸２０～２９１を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインは、配列番号６のアミノ酸２０～２９１を含むまたはそれからなる。

【0108】

ある特定の実施形態では、ＣＤ１９は、配列番号５に記載のアミノ酸配列またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。

【0109】

ある特定の実施形態では、ＣＤ１９は、配列番号６に記載のアミノ酸配列またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
５．３．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）

【0110】

ＣＡＲは、工学的に操作された受容体であり、目的の特異性を免疫エフェクター細胞に移植または付与する。ＣＡＲを使用して、モノクローナル抗体の特異性を、細胞、例えば免疫応答性細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞に移植することができる；それらのコード配列の移入はレトロウイルスベクターによって容易になる。

【0111】

３世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」ＣＡＲは、一般には、細胞外抗原結合性ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）、それと融合した膜貫通ドメイン、それと融合した細胞内シグナル伝達ドメインで構成される。「第１世代」ＣＡＲは、新規の抗原認識をもたらし、単一の融合分子として、それらのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを通じて、ＨＬＡ媒介性抗原提示とは独立して、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第２世代」ＣＡＲでは、追加的なシグナルを細胞にもたらすために、共刺激分子（これだけに限定されないが、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０を含む）由来の細胞内シグナル伝達ドメインがＣＡＲの細胞質尾部に付加されている。「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）の両方をもたらすものを含む。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）をもたらすものを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ１９標的化ＣＡＲは第１世代ＣＡＲである。ある特定の実施形態では、ＣＤ１９標的化ＣＡＲは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。ある特定の実施形態では、ＣＤ１９標的化ＣＡＲは第２世代ＣＡＲである。ある特定の実施形態では、ＣＤ１９標的化ＣＡＲは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0112】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは膜貫通ドメインと融合しており、膜貫通ドメインは細胞内シグナル伝達ドメインと融合している。
５．３．１．ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメイン

【0113】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖを含むまたはｓｃＦｖである。ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖ、ヒト化ｓｃＦｖ、またはマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖはヒトｓｃＦｖである。ｓｃＦｖは、抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の融合に由来し得る。その代わりにまたはそれに加えて、ｓｃＦｖは、Ｆａｂに由来し得る（抗体由来ではなく、例えば、Ｆａｂライブラリーから得たもの）。

【0114】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、Ｆａｂを含むまたはＦａｂである。ある特定の実施形態では、Ｆａｂは架橋結合している。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、Ｆ（ａｂ）_２を含むまたはＦ（ａｂ）_２である。

【0115】

前述の分子のいずれも、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインを形成するために異種配列と共に融合タンパク質に含めることができる。

【0116】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に、少なくとも約１×１０^－６Ｍ、少なくとも約１×１０^－７Ｍ、少なくとも約１×１０^－８Ｍ、少なくとも約１×１０^－９Ｍ、または少なくとも約１×１０^－１０Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に、少なくとも約２×１０^－８Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に、約２×１０^－８Ｍから約８×１０^－９Ｍの間の解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。

【0117】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に、約１ｎＭから５０ｎＭの間、約５ｎＭから３０ｎＭの間、約５ｎＭから２５ｎＭの間、または約８ｎＭから２０ｎＭの間の解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に、少なくとも約５０ｎＭ、少なくとも約４０ｎＭ、少なくとも約３５ｎＭ、少なくとも約３０ｎＭ、少なくとも約２５ｎＭ、少なくとも約２０ｎＭ、少なくとも約１９ｎＭ、少なくとも約１８ｎＭ、少なくとも約１７ｎＭ、少なくとも約１６ｎＭ、少なくとも約１５ｎＭ、少なくとも約１４ｎＭ、少なくとも約１３ｎＭ、少なくとも約１２ｎＭ、少なくとも約１１ｎＭ、少なくとも約１０ｎＭ、少なくとも約９ｎＭ、少なくとも約８ｎＭ、少なくとも約７ｎＭ、少なくとも約６ｎＭ、または少なくとも約５ｎＭの解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。

【0118】

ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインの結合は、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、またはウエスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイは、それぞれ、一般に、目的の複合体に特異的な標識した試薬（例えば、抗体またはｓｃＦｖ）を使用することによって特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出するものである。例えば、ｓｃＦｖを放射標識し、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）に使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるWeintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986を参照されたい）。放射性同位元素は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用などの手段によって、またはオートラジオグラフィーによって検出することができる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１２７標的化細胞外抗原結合性ドメインを蛍光マーカーで標識する。蛍光マーカーの非限定的な例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、およびｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、およびＣｙＰｅｔ）、ならびに黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、ＣＤ１９標的化ヒトｓｃＦｖをＧＦＰで標識する。

【0119】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。

【0120】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号７～９を以下に提示する。
SYGMH［配列番号７］
LIWYDGSNKYYADSVKG［配列番号８］
PVEGLLRGFDY［配列番号９］

【0121】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１０を以下に提示する。
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTI
SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSS［配列番号１０］

【0122】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号１１～１３を以下に提示する。
RASQSVSSSYLA［配列番号１１］
GASSRAT［配列番号１２］
QQAGAVPIT［配列番号１３］

【0123】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１４を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGAVPITFGGGTKVEIK［配列番号１４］

【0124】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0125】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0126】

Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、例えばリンカーによって、次々に連結していてよい。可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈであり得る。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；ならびに配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。配列番号１５を以下に提示する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃２ ｓｃＦｖ」と称される。

【0127】

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGAVPITFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSS［配列番号１５］

【0128】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号１６および１７を以下に提示する。
RASQSVRSSYLA［配列番号１６］
QQLFDSPYT［配列番号１７］

【0129】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号１８を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQLFDSPYTFGGGTKVEIK［配列番号１８］

【0130】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0131】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0132】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；ならびに配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。配列番号１９を以下に提示する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃８ ｓｃＦｖ」と称される。

【0133】

IVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQLFDSPYTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSS［配列番号１９］

【0134】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号２０および２１を以下に提示する。
GASRRAT［配列番号２０］
QQAGIPPYT［配列番号２１］

【0135】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号２２を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGIPPYTFGGGTKVEIK［配列番号２２］

【0136】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0137】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0138】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。配列番号２３を以下に提示する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃１５ ｓｃＦｖ」と称される。

【0139】

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGIPPYTFGGGTKVEIK［配列番号２３］

【0140】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0141】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号５７を以下に提示する。
QQVDSLHPFT［配列番号５７］

【0142】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号５８に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号５８に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号５８を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVDSLHPFTFGGGTKVEIK［配列番号５８］

【0143】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0144】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含む。

【0145】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃４ ｓｃＦｖ」と称される。

【0146】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0147】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号５９を以下に提示する。
QQAGGVPPLT［配列番号５９］

【0148】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号６０に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号６０を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGGVPPLTFGGGTKVEIK［配列番号６０］

【0149】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0150】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含む。

【0151】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃５ ｓｃＦｖ」と称される。

【0152】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0153】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号６１を以下に提示する。
QQAGVPPLT［配列番号６１］

【0154】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号６２を以下に提示する。
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVPPLTFGGGTKVEIK［配列番号６２］

【0155】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0156】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0157】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃６ ｓｃＦｖ」と称される。

【0158】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0159】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号６３を以下に提示する。
QQAGGVPPFT［配列番号６３］

【0160】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号６４を以下に提示する。
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGGVPPFTFGGGTKVEIK［配列番号６４］

【0161】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0162】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0163】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃７ ｓｃＦｖ」と称される。

【0164】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0165】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。配列番号６６および６７を以下に提示する。
GASNRAT［配列番号６５］
QQAGVFPFT［配列番号６６］

【0166】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖ_Ｌは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む。配列番号６７を以下に提示する。
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGVFPFTFGGGTKVEIK［配列番号６７］

【0167】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列もしくは保存的改変を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列もしくはその保存的改変を含むＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0168】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含む。

【0169】

ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｌは、細胞外抗原結合性ドメインのＮ末端に位置づけられている、すなわち、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈという位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ；配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含むｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、および配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは「＃１ ｓｃＦｖ」と称される。

【0170】

ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って識別される。

【0171】

配列番号１０のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号６８に記載される。配列番号６８を以下に提示する。

【0172】

CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTGATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCGGTGTACTACTGCGCCAAGCCAGTGGAAGGACTATTAAGAGGATTCGATTACTGGGGACAGGGTACATTGGTCACCGTCTCCTCA［配列番号６８］

【0173】

配列番号１４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号６９に記載される。配列番号６９を以下に提示する。

【0174】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGAGCCGTCCCTATCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号６９］

【0175】

配列番号１８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７０に記載される。配列番号７０を以下に提示する。

【0176】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGGAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGCTCTTCGACAGTCCTTACACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７０］

【0177】

配列番号２２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７１に記載される。配列番号７１を以下に提示する。

【0178】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGAAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGCATCCCCCCTTACACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７１］

【0179】

配列番号５８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７２に記載される。配列番号７２を以下に提示する。

【0180】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGTCGACAGTCTCCATCCTTTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７２］

【0181】

配列番号６０のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７３に記載される。配列番号７３を以下に提示する。

【0182】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGAGGCGTCCCTCCTCTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７３］

【0183】

配列番号６２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７４に記載される。配列番号７４を以下に提示する。

【0184】

GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGGAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGAGTCCCCCCTCTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７４］

【0185】

配列番号６４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７５に記載される。配列番号７５を以下に提示する。

【0186】

GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGAGGCGTCCCTCCTTTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７５］

【0187】

配列番号６７のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は配列番号７６に記載される。配列番号７６を以下に提示する。

【0188】

GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGGCCGGAGTCTTCCCTTTCACTTTTGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA［配列番号７６］

【0189】

ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌはリンカーを介して連結している。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。

【0190】

特定の配列（例えば、配列番号１０、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７）に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％（例えば、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％）の相同性または同一性からなるＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌアミノ酸配列は、指定の配列（複数可）と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し得るが、標的抗原（例えば、メソテリン）に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、特定の配列（例えば、配列番号１０、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７）内の合計１～１０アミノ酸が置換されている、挿入されているおよび／または欠失している。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、細胞外抗原結合性ドメインのＣＤＲの外側の領域（例えば、ＦＲ内）に存在する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合性ドメインは、配列番号１０、１４、１８、２２、５９、６１、６３、６５、および６８から選択されるＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌを含み、配列番号１０、配列番号１４、配列番号１８、配列番号２２、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、または配列番号６７の翻訳後修飾を含む。

【0191】

さらに、細胞外抗原結合性ドメインは、新生タンパク質を小胞体内に方向づけるリーダーまたはシグナルペプチドを含み得る。シグナルペプチドまたはリーダーは、ＣＡＲがグリコシル化され、細胞膜に係留される場合に必須であり得る。シグナル配列またはリーダーは、新たに合成されたタンパク質のＮ末端に存在する、それらのタンパク質の分泌経路への進入を方向づけるペプチド配列（約５、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０アミノ酸長）であり得る。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、細胞外抗原結合性ドメインの５’末端（Ｎ末端）に共有結合により接合している。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８ポリペプチドを含み、例えば、ＣＡＲは、短縮型ＣＤ８シグナルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、それが由来する抗体から生成される。ある特定の実施形態では、＃２ ｓｃＦｖに対するシグナルペプチドは配列番号５４に記載される。ある特定の実施形態では、＃８ ｓｃＦｖに対するシグナルペプチドは配列番号５４に記載される。ある特定の実施形態では、＃１５ ｓｃＦｖに対するシグナルペプチドは配列番号５５に記載される。
MDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRC［配列番号５４］
MEFGLSWVFLVALLRGVQC［配列番号５５］
５．３．２．ＣＡＲの膜貫通ドメイン

【0192】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部分にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインにより異なる受容体安定性がもたらされる。抗原認識後、受容体がクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８の天然のまたは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ２８の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ３ζの天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ４の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、４－１ＢＢの天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＯＸ４０の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳの天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ８４の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ１６６の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ８ａの天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ８ｂの天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＩＣＡＭ－１の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ２７の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＣＤ４０の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、ＮＫＧＤ２の天然のもしくは改変された膜貫通ドメイン、またはこれらの組合せを含む。

【0193】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部）を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部を含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００６１３０を有する配列（配列番号２４）もしくはその断片と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％同一もしくは相同であるアミノ酸配列を含んでよいもしくはそれからなってよい、および／または、必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、および／または最大約７０、最大約８０、最大約９０、最大約１００、最大約１５０、最大約２００、または最大約２２０アミノ酸長である、配列番号２４の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５４～１７９、１５０～２００、１５３～１７９、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２４のアミノ酸１５４～１７９のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。配列番号２４を以下に提示する。
MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD
SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP
PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR
SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS［配列番号２４］

【0194】

配列番号２４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列のアミノ酸１５４～１７９は配列番号２５に記載され、それを以下に提示する。
TGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTG［配列番号２５］

【0195】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、マウスＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部を含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３１６６８．３を有する配列（配列番号２６）もしくはその断片と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％同一もしくは相同であるアミノ酸配列からなってよく、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大約２１８アミノ酸長である、配列番号２６の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸１～２１８、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～１７７、または２００～２１８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２６のアミノ酸１５１～１７７のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。配列番号２６を以下に提示する：
MTLRLLFLAL NFFSVQVTEN KILVKQSPLL VVDSNEVSLS CRYSYNLLAK EFRASLYKGV
NSDVEVCVGN GNFTYQPQFR SNAEFNCDGD FDNETVTFRL WNLHVNHTDI YFCKIEFMYP
PPYLDNERSN GTIIHIKEKH LCHTQSSPKL FWALVVVAGV LFCYGLLVTV ALCVIWTNSR
RNRLLQSDYM NMTPRRPGLT RKPYQPYAPA RDFAAYRP［配列番号２６］

【0196】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド（例えば、ＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその一部）を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその一部を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５．１を有する配列（配列番号２７）またはその断片と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれを有する、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大約２３５アミノ酸長である、配列番号２７の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。その代わりにまたはそれに加えて、ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１３７～２０９または２００～２３５のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１３７～２０９のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号２７を以下に提示する。

【0197】

MALPVTALLLPLALLLHAARPSQFRVSPLDRTWNLGETVELKCQVLLSNPTSGCSWLFQPRGAAASPTFLLYLSQNKPKAAEGLDTQRFSGKRLGDTFVLTLSDFRRENEGYYFCSALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVKSGDKPSLSARYV［配列番号２７］

【0198】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、マウスＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその一部を含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＡＡＡ９２５３３．１を有する配列（配列番号２８）またはその断片と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれを有する、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、または少なくとも約７０、または少なくとも約１００、または少なくとも約２００、および最大２４７アミノ酸長である、配列番号２８の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれを有する。その代わりにまたはそれに加えて、ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸１～２４７、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～２１９、または２００～２４７のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２８のアミノ酸１５１～２１９のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号２８を以下に提示する。
MASPLTRFLS LNLLLMGESI ILGSGEAKPQ APELRIFPKK MDAELGQKVD LVCEVLGSVS
QGCSWLFQNS SSKLPQPTFV VYMASSHNKI TWDEKLNSSK LFSAVRDTNN KYVLTLNKFS
KENEGYYFCS VISNSVMYFS SVVPVLQKVN STTTKPVLRT PSPVHPTGTS QPQRPEDCRP
RGSVKGTGLD FACDIYIWAP LAGICVAPLL SLIITLICYH RSRKRVCKCP RPLVRQEGKP
RPSEKIV［配列番号２８］

【0199】

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合性ドメインと膜貫通ドメインを連結するスペーサー領域をさらに含む。スペーサー領域は、ＣＡＲの活性の活性化を保存しながら抗原認識を容易にするために抗原結合性ドメインを異なる方向に向けることを可能にするのに十分に柔軟であり得る。

【0200】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ８４、ＣＤ１６６、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＩＣＯＳ、ＩＣＡＭ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧＤ２、またはこれらの組合せの天然のまたは改変されたヒンジ領域を含む。ヒンジ／スペーサー領域は、ＩｇＧ１、または免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域およびＣＤ３の一部、ＣＤ２８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号２４もしくは配列番号２６の一部）、ＣＤ８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号２７もしくは配列番号２８の一部）に由来するヒンジ領域、これらと少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％同一または相同である、前述のいずれかの変形、または合成スペーサー配列であってよい。

【0201】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ２８の天然のまたは改変されたヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ２８の天然のヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジドメインは、配列番号２４のアミノ酸１１４～１５３のアミノ酸配列を含む。配列番号２４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列のアミノ酸１１４～１５３は配列番号５６に記載され、それを以下に提示する。
ATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTT［配列番号５６］
５．３．３．ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン

【0202】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ＣＤ３ζは、細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化または刺激し得る。野生型（「天然の」）ＣＤ３ζは、３つの機能的な免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）、３つの機能的な塩基性に富むひと続き（ＢＲＳ）領域（ＢＲＳ１、ＢＲＳ２およびＢＲＳ３）を含む。ＣＤ３ζは、抗原が結合した後、活性化シグナルを細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）に伝達する。ＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインは、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要なトランスミッターである。

【0203】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然のＣＤ３ζを含む。ある特定の実施形態では、天然のＣＤ３ζは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０を有するアミノ酸配列（配列番号２９）またはその断片と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大約１６４アミノ酸長である、配列番号２９の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、天然のＣＤ３ζは、配列番号２９のアミノ酸１～１６４、１～５０、５０～１００、５２～１６４、１００～１５０、または１５０～１６４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２９のアミノ酸５２～１６４のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる天然のＣＤ３ζを含む。配列番号２９を以下に提示する：
MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD
APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA
EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPR［配列番号２９］

【0204】

ある特定の実施形態では、天然のＣＤ３ζは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。配列番号３０を以下に提示する：
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR［配列番号３０］

【0205】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、１つ、２つまたは３つのＩＴＡＭを含む。ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、天然のＩＴＡＭ１を含む。ある特定の実施形態では、天然のＩＴＡＭ１は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
QNQLYNELNLGRREEYDVLDKR［配列番号３１］

【0206】

配列番号３１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号３２に記載され、それを以下に提示する。
CAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGA［配列番号３２］

【0207】

ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型突然変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ１バリアントは、２つの機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数（例えば、２つ）の機能喪失突然変異のそれぞれがＩＴＡＭ１のチロシン残基の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ１バリアントは、２つの機能喪失型突然変異からなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ１バリアントは、以下に提示する配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
QNQLFNELNLGRREEFDVLDKR［配列番号３３］

【0208】

配列番号３３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号３４に記載され、それを以下に提示する。
CAGAACCAGCTCTTTAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTTCGATGTTTTGGACAAGAGA［配列番号３４］

【0209】

ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、天然のＩＴＡＭ２を含む。ある特定の実施形態では、天然のＩＴＡＭ２は、以下に提示する配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
QEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK［配列番号３５］

【0210】

配列番号３５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号３６に記載され、それを以下に提示する。
CAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAA［配列番号３６］

【0211】

ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２バリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、１つまたは複数の機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、２つの機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数（例えば、２つ）の機能喪失突然変異のそれぞれが、ＩＴＡＭ２のチロシン残基の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ１バリアントは、２つの機能喪失型突然変異からなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、以下に提示する配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
QEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMK［配列番号３７］

【0212】

配列番号３７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号３８に記載され、それを以下に提示する。
CAGGAAGGCCTGTTCAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTTCAGTGAGATTGGGATGAAA［配列番号３８］

【0213】

ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、天然のＩＴＡＭ３を含む。ある特定の実施形態では、天然のＩＴＡＭ３は、以下に提示する配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
HDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ［配列番号３９］

【0214】

配列番号３９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４０に記載され、それを以下に提示する。
CACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAG［配列番号４０］

【0215】

ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３バリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、２つの機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数（例えば、２つ）の機能喪失突然変異のそれぞれが、ＩＴＡＭ３のチロシン残基の突然変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、２つの機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、以下に提示する配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
HDGLFQGLSTATKDTFDALHMQ［配列番号４１］

【0216】

配列番号４１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４２に記載され、それを以下に提示する。
CACGATGGCCTTTTCCAGGGGCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTTCGACGCCCTTCACATGCAG［配列番号４２］

【0217】

種々の改変されたＣＤ３ζポリペプチドおよび改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含むＣＡＲは、これによりその全体が参照により組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１９／１３３９６９号に開示されている。

【0218】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然のＩＴＡＭ１、１つまたは複数（例えば、２つ）の機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなるＩＴＡＭ２バリアント、および１つまたは複数（例えば、２つ）の機能喪失型突然変異を含むまたはそれからなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然のＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失型突然変異からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる天然のＩＴＡＭ１、配列番号３７に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ２バリアント、および配列番号４１に記載のアミノ酸配列からなるＩＴＡＭ３バリアントを含む改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１ＸＸ」と称される。ある特定の実施形態では、改変されたＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。配列番号４３を以下に提示する：
RVKFSRSADA PAYQQGQNQL YNELNLGRRE EYDVLDKRRG RDPEMGGKPR RKNPQEGLFN ELQKDKMAEA FSEIGMKGER RRGKGHDGLF QGLSTATKDT FDALHMQALP PR［配列番号４３］

【0219】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４３またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい、改変されたＣＤ３ζポリペプチドを含む。

【0220】

配列番号４３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４４に記載され、それを以下に提示する。

【0221】

AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTTCAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTTCAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTTCCAGGGGCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTTCGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC［配列番号４４］

【0222】

別の配列番号４３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４５に記載され、それを以下に提示する。

【0223】

AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTTCAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTTCAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTTCCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTTCGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC［配列番号４５］

【0224】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激領域は、共刺激分子またはその一部を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激領域は、少なくとも１つの共刺激分子の細胞内ドメインまたはその一部を含む。

【0225】

本明細書で使用される場合、「共刺激分子」は、リンパ球の抗原に対する効率的な応答をもたらし得る、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子を指す。ある特定の実施形態では、共刺激分子は、最適なリンパ球活性化をもたらし得る。共刺激分子の非限定的な例としては、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、およびこれらの組合せが挙げられる。共刺激分子は、共刺激リガンドに結合し得る。共刺激リガンドは、細胞表面上に発現され、その受容体に結合すると、共刺激応答、すなわち、抗原を認識する受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））がその標的抗原に結合するともたらされる刺激を有効にする細胞内応答を生じさせるタンパク質である。一例として、４－１ＢＢリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、４－１ＢＢに結合し得、それにより、ＣＡＲシグナルと組み合わさってＣＡＲ^＋Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する細胞内シグナルをもたらす。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインまたはその一部、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部、ＯＸ４０の細胞内ドメインまたはその一部、ＩＣＯＳの細胞内ドメインまたはその一部、またはＤＡＰ－１０の細胞内ドメインまたはその一部を含む。

【0226】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、例えばＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８またはその一部の細胞内ドメインを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0227】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大約２２０アミノ酸長である、配列番号２４の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。その代わりにまたはそれに加えて、ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１８０～２２０、または２００～２２０を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２４のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0228】

配列番号２４のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４６に記載され、それを以下に提示する。
AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC［配列番号４６］

【0229】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、マウスＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２６に記載のアミノ酸配列またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および最大２１８アミノ酸長である、配列番号２６の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸１～２１８、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２１８、１７８～２１８、または２００～２１８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域は、配列番号２６のアミノ酸１７８～２１８のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0230】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢポリペプチド、例えば、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部を含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれる４－１ＢＢは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１５５２を有する配列（配列番号４７）またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる、および／または必要に応じて最大１つまたは最大２つまたは最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれる４－１ＢＢは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、および／または最大約５０、最大約６０、最大約７０、最大約８０、最大約９０、最大約１００、最大約２００、または最大約２５５アミノ酸長である、配列番号４７の連続した一部分であるアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域に含まれる４－１ＢＢポリペプチドは、配列番号４７のアミノ酸１～２５５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２５５のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、配列番号４６のアミノ酸２１４～２５５のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる４－１ＢＢポリペプチドを含む。配列番号４７を以下に提示する。

【0231】

MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR
TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC
CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE
PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG
CSCRFPEEEE GGCEL［配列番号４７］

【0232】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つまたはそれよりも多くの共刺激分子の細胞内ドメインまたはその一部、例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部および４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその一部、またはＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部およびＯＸ４０の細胞内ドメインまたはその一部を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
５．３．４．例示されるＣＡＲ

【0233】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、（ｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号１３に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｌとを含む細胞外抗原結合性ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチドを含むヒンジドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８のヒンジドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１１４～１５３のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）；（ｃ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１５４～１７９のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）、ならびに（ｄ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変されたヒトＣＤ３ζポリペプチド、例えば、配列番号４３に記載のアミノ酸配列からなるもの）と、（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）とを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるリンカーを介して連結している。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈの位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲを「ＣＡＲ＃２」として設計する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、それを以下に提示する。

【0234】

MDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQAGAVPITFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSSRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMKGERRRGKGHDGLFQGLSTATKDTFDALHMQALPPR［配列番号４８］

【0235】

配列番号４８のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号４９に記載され、それを以下に提示する。

【0236】

ATGGATATGAGAGTACCAGCTCAGCTGCTGGGCCTGCTGCTTTTGTGGTTGCCGGACACACGCTGTGAGATTGTCCTGACTCAGTCTCCCGGGACTCTGTCCCTCAGCCCCGGTGAACGCGCTACCCTTTCATGCAGAGCCTCTCAGTCTGTGTCCAGCAGCTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGGCTCCCAGGCTGTTGATCTATGGAGCTAGTAGTCGAGCAACAGGCATCCCAGATCGCTTCTCAGGGAGCGGTTCAGGTACAGACTTCACGCTGACGATTTCAAGGCTGGAACCCGAAGATTTTGCCGTCTATTATTGTCAACAGGCAGGGGCTGTGCCAATCACTTTCGGGGGCGGGACCAAGGTGGAAATCAAAGGAGGCGGAGGAAGTGGAGGAGGAGGGAGCGGTGGAGGAGGGTCACAGGTGCAGCTGGTAGAATCTGGCGGAGGGGTCGTTCAACCAGGGAGGTCATTGCGGTTGAGCTGCGCAGCGAGTGGTTTTACCTTCAGCAGTTATGGAATGCATTGGGTGAGACAAGCACCAGGAAAAGGTCTGGAGTGGGTGGCTTTGATTTGGTACGACGGCAGTAATAAATACTACGCCGATTCTGTTAAGGGCAGATTTACTATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGAGCCGAAGATACAGCAGTGTACTATTGTGCTAAGCCCGTAGAAGGGCTCCTGAGGGGATTCGATTATTGGGGCCAGGGTACGCTTGTGACAGTGTCTAGTCGGGCGGCCGCAATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTTCAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTTCAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTTCCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTTCGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC［配列番号４９］

【0237】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、（ｉｉ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号１７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｌとを含む細胞外抗原結合性ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチドを含むヒンジドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８のヒンジドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１１４～１５３のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）；（ｃ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１１４～１７９のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）、ならびに（ｃ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変されたヒトＣＤ３ζポリペプチド、例えば、配列番号４３に記載のアミノ酸配列からなるもの）と、（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）とを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるリンカーを介して連結している。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈの位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲを「ＣＡＲ＃８」として設計する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含み、それを以下に提示する。

【0238】

MDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRCEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQ
QKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQLFDSPYT
FGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMH
WVRQAPGKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYY
CAKPVEGLLRGFDYWGQGTLVTVSSRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSP
LFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRK
HYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPE
MGGKPRRKNPQEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMKGERRRGKGHDGLFQGLSTATKDTFDAL
HMQALPPR［配列番号５０］

【0239】

配列番号５０のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号５１に記載され、それを以下に提示する。

【0240】

atggatatgagagtaccagctcagctgctgggcctgctgcttttgtggttgccggacacacgctgtgagattgtgctgacacagtctccaggcacactctcccttagcccgggcgagagggccactctgagctgtcgggctagtcagtcagtaaggagctcttatctggcctggtatcagcagaaaccagggcaggctccaaggctgcttatctacggtgcaagttcccgggcaacaggcatcccagatcgctttagcggtagcgggagtgggaccgatttcactctgaccatctcccgccttgagcccgaggatttcgctgtctattattgccagcaactgtttgactcaccctatacgttcggtggagggaccaaagtggagatcaagggaggcggaggaagtggaggaggagggagcggtggaggagggtcacaggtgcagctggtagaatctggcggaggggtcgttcaaccagggaggtcattgcggttgagctgcgcagcgagtggttttaccttcagcagttatggaatgcattgggtgagacaagcaccaggaaaaggtctggagtgggtggctttgatttggtacgacggcagtaataaatactacgccgattctgttaagggcagatttactatttctcgcgacaacagcaagaacacgctgtacctgcagatgaactctctgagagccgaagatacagcagtgtactattgtgctaagcccgtagaagggctcctgaggggattcgattattggggccagggtacgcttgtgacagtgtctagtcgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgttcaatgaactgcagaaagataagatggcggaggccttcagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggccttttccaggggctcagtacagccaccaaggacaccttcgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc［配列番号５１］

【0241】

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号９に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、（ｉｉ）配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２０に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含むＶ_Ｌとを含む細胞外抗原結合性ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチドを含むヒンジドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８のヒンジドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１１４～１５３のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）；（ｃ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１１４～１７９のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）、ならびに（ｃ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変されたヒトＣＤ３ζポリペプチド、例えば、配列番号４３に記載のアミノ酸配列からなるもの）と、（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその一部、例えば、配列番号２４のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列からなるＣＤ２８ポリペプチド）とを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるリンカーを介して連結している。ある特定の実施形態では、Ｖ_ＨとＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈの位置づけである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲを「ＣＡＲ＃１５」として設計する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含み、それを以下に提示する。

【0242】

MEFGLSWVFLVALLRGVQCQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAP
GKGLEWVALIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPVE
GLLRGFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAS
QSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAV
YYCQQAGIPPYTFGGGTKVEIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFP
GPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQ
PYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGG
KPRRKNPQEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMKGERRRGKGHDGLFQGLSTATKDTFDALHMQ
ALPPR［配列番号５２］

【0243】

配列番号５２のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は配列番号５３に記載され、それを以下に提示する。

【0244】

atggaattcggcttgtcatgggtgttcctcgtcgcgctgctgcgcggcgttcagtgccaggtgcagctggtagaatctggcggaggggtcgttcaaccagggaggtcattgcggttgagctgcgcagcgagtggttttaccttcagcagttatggaatgcattgggtgagacaagcaccaggaaaaggtctggagtgggtggctttgatttggtacgacggcagtaataaatactacgccgattctgttaagggcagatttactatttctcgcgacaacagcaagaacacgctgtacctgcagatgaactctctgagagccgaagatacagcagtgtactattgtgctaagcccgtagaagggctcctgaggggattcgattattggggccagggtacgcttgtgacagtgtctagtggaggcggaggaagtggaggaggagggagcggtggaggagggtcagaaatcgtgctcacccagtccccgggaacactgagtctctctccaggggaaagagcaacattgtcctgcagagcatcccagagcgtgagctccagctacctcgcctggtatcagcagaaaccaggccaggcaccccgcctgcttatctacggtgcatccaggagagccactgggatccccgatcgattctctggatcagggtctggcactgactttacattgacgatctcacggctggaacccgaggatttcgccgtgtattactgccaacaggccggaattccaccgtataccttcggaggaggtactaaagtagagattaaacgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgttcaatgaactgcagaaagataagatggcggaggccttcagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggccttttccaggggctcagtacagccaccaaggacaccttcgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc［配列番号５３］
５．４．細胞

【0245】

本開示の主題は、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例えば、セクション５．３に開示されているもの）を含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、細胞は、リンパ系列の細胞および骨髄系列の細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、免疫応答性細胞である。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、リンパ系列の細胞である。

【0246】

ある特定の実施形態では、細胞は、リンパ系列の細胞である。リンパ系列の細胞は、抗体の産生、細胞性免疫系の調節、血液中の外来物質の検出、宿主に対して外来である細胞の検出などをもたらし得る。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞である（例えば、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞）。

【0247】

ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、細胞性免疫を主に担うリンパ球である。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本開示の主題のＴ細胞は、これだけに限定されないが、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）、および２つの型のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲ細胞を含む）、調節性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδＴ細胞を含めた任意の型のＴ細胞であってよい。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。患者自身Ｔ細胞を、ＣＡＲを導入することにより、特異的抗原を標的とするように遺伝子改変することができる。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞であり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞であり、Ｔ細胞のゲノム内の遺伝子座に本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲが組み込まれている。遺伝子座の非限定的な例としては、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、ＴＲＤＣ遺伝子座、およびＴＲＧＣ遺伝子座が挙げられる。ある特定の実施形態では、遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座またはＴＲＢＣ遺伝子座である。Ｔ細胞のゲノム内の部位にＣＡＲをターゲティングする方法は、どちらもその全体が参照により組み込まれるＷＯ２０１７１８０９８９およびEyquem et al., Nature. (2017 Mar 2); 543 (7643): 113-117に開示されている。

【0248】

ある特定の実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞性免疫の一部であり、自然免疫応答の間に作用するリンパ球であり得る。ＮＫ細胞は、それらの標的細胞に対する細胞傷害効果を発揮するために事前に活性化される必要がない。ある特定の実施形態では、細胞は、遺伝子改変されたＮＫ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、編集されたＮＫ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、幹細胞に由来するＮＫ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、多能性幹細胞に由来するＮＫ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞である。

【0249】

細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、自己、非自己（例えば、同種）のものであってもよく、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、工学的に操作された前駆体または幹細胞から引き出されたものであってもよい。

【0250】

本開示の主題の細胞は、骨髄系列の細胞であり得る。骨髄系列の細胞の非限定的な例としては、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好中球、好酸球、巨核球、肥満細胞、赤血球、血小板、および骨髄細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）または人工多能性幹細胞）である。

【0251】

ある特定の実施形態では、細胞に本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを形質導入し、したがって、細胞にＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現させることができる。
５．５．核酸分子およびベクター

【0252】

本開示の主題は、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲ（例えば、セクション５．３に開示されているもの）をコードする核酸分子を提供する。そのような核酸分子を含む細胞も提供される。

【0253】

ある特定の実施形態では、核酸分子は、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲに作動可能に連結したプロモーターをさらに含む。

【0254】

ある特定の実施形態では、プロモーターは、内因性または外因性である。ある特定の実施形態では、外因性プロモーターは、延長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、およびユビキチンＣプロモーターからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、内因性プロモーターは、ＴＣＲアルファプロモーター、ＴＣＲベータプロモーター、およびベータ２－ミクログロブリンプロモーターから選択される。ある特定の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ある特定の実施形態では、誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、ＩＬ－２プロモーター、４－１ＢＢプロモーター、ＰＤ１プロモーター、およびＬＡＧ３プロモーターからなる群から選択される。

【0255】

本開示の主題は、本開示の核酸分子を含むベクターも提供する。

【0256】

核酸分子を、当技術分野で公知の方法によって、または本明細書に記載の通り、細胞に送達することができる。細胞の遺伝子改変は、実質的に均一な細胞組成物に組換えＤＮＡ構築物を形質導入することによって実現することができる。ある特定の実施形態では、レトロウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター）をＤＮＡ構築物の細胞への導入のために使用する。例えば、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドをレトロウイルスベクターにクローニングすることができ、その内因性プロモーターから、レトロウイルス長い末端反復から、または目的の標的細胞型に特異的なプロモーターからの発現を駆動することができる。非ウイルスベクターを使用することもできる。

【0257】

本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含めるための最初の細胞の遺伝子改変のために、レトロウイルスベクターを形質導入に使用することができるが、任意の他の適切なウイルスベクターまたは非ウイルス送達系を使用することができる。ＣＡＲは、単一のマルチシストロニック発現カセット、単一のベクターの複数の発現カセット、または複数のベクターとして構築することができる。ポリシストロニック発現カセットを創出するエレメントの例としては、これだけに限定されないが、種々のウイルスおよび非ウイルス配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－１ ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦ ＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩ ＩＲＥＳ、ＮＦ－κＢ ＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ ＩＲＥＳ、ｐ５３ ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳおよび脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）ならびに切断可能なリンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡおよびＦ２Ａペプチド）が挙げられる。カプシドタンパク質がヒト細胞への感染に関して機能的である場合、レトロウイルスベクターと適当なパッケージング系の組合せも適する。これだけに限定されないが、ＰＡ１２（Miller et al., (1985) Mol Cell Biol (1985)；5: 431-437）；ＰＡ３１７（Miller., et al., Mol Cell Biol (1986)；6: 2895-2902）；およびＣＲＩＰ（Danos et al., Proc Natl Acad Sci USA (1988)；85: 6460-6464）を含めた種々の広宿主性ウイルス産生細胞株が公知である。例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープに対してシュードタイピングされた粒子および任意の他の当技術分野で公知の非広宿主性粒子も適切である。

【0258】

形質導入の可能な方法には、細胞を産生細胞と直接共培養すること（Bregni et al., Blood (1992)；80: 1418-1422）、またはウイルス上清単独または濃縮されたベクターストックと一緒に、適当な増殖因子およびポリカチオンを伴ってまたは伴わずに培養すること（Xu et al., Exp Hemat (1994)；22: 223-230；およびHughes et al. J Clin Invest (1992) ; 89: 1817）も含まれる。

【0259】

他の形質導入ウイルスベクターも細胞の改変のために使用することができる。ある特定の実施形態では、選択されるベクターは、高効率の感染ならびに安定な組込みおよび発現を示すものである（例えば、Cayouette et al., Human Gene Therapy 8: 423-430, 1997；Kido et al., Current Eye Research 15: 833-844, 1996；Bloomer et al., Journal of Virology 71: 6641-6649, 1997；Naldini et al., Science 272: 263-267, 1996；およびMiyoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94: 10319, 1997を参照されたい）。使用することができる他のウイルスベクターとしては、例えば、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、またはエプスタイン・バーウイルスなどのヘルペスウイルスが挙げられる（例えば、Miller, Human Gene Thera (1990) ; 15-14；Friedman, Science 244: 1275-1281, 1989；Eglitis et al., BioTechniques (1988)；6: 608-614；Tolstoshev et al., Cur Opin Biotechnol (1990)；1: 55-61；Sharp, The Lancet (1991)；337: 1277-78；Cornetta et al., Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36: 311-22, 1987；Anderson, Science (1984)；226: 401-409；Moen, Blood Cells 17: 407-16, 1991；Miller et al., Biotechnol (1989)；7: 980-90；LeGal La Salle et al., Science (1993)；259: 988-90；およびJohnson, Chest (1995) 107: 77S-83Sのベクターも参照されたい）。レトロウイルスベクターが特によく開発され、臨床的状況で使用されている（Rosenberg et al., N Engl J Med (1990); 323: 370, 1990；Anderson et al., 米国特許第５，３９９，３４６号）。

【0260】

非ウイルス手法を細胞の遺伝子改変のために使用することもできる。例えば、核酸分子を細胞に、リポフェクションの存在下で核酸を投与することによって（Feigner et al., Proc Natl Acad Sci U.S.A. (1987)；84: 7413；Ono et al., Neurosci Lett (1990)；17: 259；Brigham et al., Am J Med Sci (1989)；298: 278；Staubinger et al., Methods in Enzymol (1983)；101: 512、Wu et al., J Biol Chem (1988)；263: 14621；Wu et al., J Biol Chem (1989)；264: 16985）、または外科的条件下での微量注入によって（Wolff et al., Science (1990)；247: 1465）導入することができる。遺伝子移入のための他のウイルスによらない手段としては、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔、およびプロトプラスト融合を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるトランスフェクションが挙げられる。リポソームも、ＤＮＡの細胞への送達に関して潜在的に有益である。また、正常な核酸を培養可能な細胞型（例えば、自己または異種初代細胞またはその後代）にｅｘ ｖｉｖｏで移入し、その後、細胞（またはその後裔）を標的とする組織に注射するかまたは全身的に注射することにより、対象の患部組織への正常な遺伝子の移植を実現することができる。トランスポザーゼまたは標的化ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して組換え受容体を引き出すまたは得ることもできる。一過性発現をＲＮＡ電気穿孔によって得ることができる。

【0261】

任意の標的化ゲノム編集方法を使用して本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを細胞に送達することもできる。ある特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムを使用して、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを送達する。ある特定の実施形態では、ジンクフィンガーヌクレアーゼを使用して、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを送達する。ある特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮ系を使用して、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを送達する。

【0262】

クラスター化された規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核細胞において発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集のために利用する場合、この系は、Ｃａｓ９（ｃｒＲＮＡをガイドとして利用してＤＮＡを改変することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ。Ｃａｓ９により使用されてＣａｓ９をＣａｓ９と活性な複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般に、ヘアピンループの形態）に結合する領域と一緒に宿主ＤＮＡの正確なセクションにガイドするＲＮＡを含有する）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ。ｃｒＲＮＡと結合し、Ｃａｓ９と活性な複合体を形成する）、および必要に応じたＤＮＡ修復鋳型（特異的ＤＮＡ配列の挿入を可能にする細胞修復プロセスをガイドするＤＮＡ）のセクションを含む。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９では、多くの場合、標的細胞へのトランスフェクトのためにプラスミドを使用する。ｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９が細胞内の標的ＤＮＡを同定し、それに直接結合するために使用する配列であるので、各適用に対して設計される必要がある。ＣＡＲ発現カセットを有する修復鋳型も、カットの両側の配列と重複し、挿入配列をコードするものでなければならないので、各適用に対して設計される必要がある。複数のｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを一緒にパッケージングして単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成することができる。細胞へのトランスフェクトのために、このｓｇＲＮＡをＣａｓ９遺伝子と接合してプラスミドにすることができる。

【0263】

ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、人工制限酵素であり、ジンクフィンガーＤＮＡ結合性ドメインとＤＮＡ切断ドメインを組み合わせることによって生成される。ジンクフィンガードメインは、特定のＤＮＡ配列を標的とするように工学的に操作することができ、それにより、ジンクフィンガーヌクレアーゼがゲノム内の所望の配列を標的とすることが可能になる。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合性ドメインは、一般には、個々のジンクフィンガーリピートを複数含み、それぞれが複数の塩基対を認識することができる。新しいジンクフィンガードメインを生成するための最も一般的な方法は、特異性が分かっている小さなジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。ＺＦＮの最も一般的な切断ドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩ由来の非特異的切断ドメインである。内因性相同組換え（ＨＲ）機構およびＣＡＲ発現カセットを有する相同なＤＮＡ鋳型を使用することにより、ＺＦＮを使用してＣＡＲ発現カセットをゲノム内に挿入することができる。標的化される配列がＺＦＮによって切断されると、ＨＲ機構により、損傷した染色体と相同なＤＮＡ鋳型の相同性が検索され、次いで、その染色体の２つの切断末端間の鋳型の配列がコピーされ、それによって相同なＤＮＡ鋳型がゲノム内に組み込まれる。

【0264】

転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＤＮＡの特定の配列をカットするように工学的に操作することができる制限酵素である。ＴＡＬＥＮ系は、ＺＦＮとほぼ同じ原理で作動する。これらは、転写活性化因子様エフェクターＤＮＡ結合性ドメインとＤＮＡ切断ドメインを組み合わせることによって生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特定のヌクレオチドに対する強力な認識を有する可変部分を２つ有する、３３～３４アミノ酸の反復モチーフで構成される。これらのＴＡＬＥのアレイをアセンブルすることにより、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合性ドメインを、所望のＤＮＡ配列に結合し、それにより、ヌクレアーゼをゲノム内の特定の位置でのカットにガイドするように工学的に操作することができる。ポリヌクレオチド療法における使用のためのｃＤＮＡ発現は、任意の適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、メタロチオネインプロモーター、またはユビキチンＣプロモーター）により方向づけ、任意の適当な哺乳動物調節エレメントまたはイントロン（例えば、延長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節することができる。例えば、所望であれば、特定の細胞型における遺伝子発現を優先的に方向づけることが分かっているエンハンサーを使用して核酸の発現を方向づけることができる。使用されるエンハンサーしては、限定することなく、組織特異的または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものを挙げることができる。あるいは、ゲノムクローンを治療用構築物として使用する場合、調節を同類の調節配列によって、または所望であれば、上記のプロモーターまたは調節エレメントのいずれかを含めた異種供給源に由来する調節配列によって媒介することができる。

【0265】

ゲノム編集作用物質／系を送達するための方法は、必要に応じて変動し得る。ある特定の実施形態では、選択されたゲノム編集方法の構成成分を１つまたは複数のプラスミド中のＤＮＡ構築物として送達する。ある特定の実施形態では、構成成分をウイルスベクターによって送達する。一般的な送達方法としては、これだけに限定されないが、電気穿孔、微量注射、遺伝子銃、インペールフェクション、静水圧、連続的な注入、超音波処理、マグネトフェクション、アデノ随伴ウイルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質シュードタイピング、複製コンピテントベクターシスおよびトランス作用エレメント、単純ヘルペスウイルス、および化学的ビヒクル（例えば、オリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子、および細胞透過性ペプチド）が挙げられる。
５．６．製剤および投与

【0266】

本開示の主題は、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲを含む本開示の細胞を含む組成物も提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物である。

【0267】

本開示の細胞を含む組成物は、滅菌された液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルション、分散、または粘性組成物として都合よく提供することができ、選択されたｐＨに緩衝させることができる。液体の調製物は通常、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物よりも調製が容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するのにいくらか都合がよい。他方では、粘性組成物を、特定の組織とのより長い接触期間をもたらすために適当な粘度範囲内で製剤化することができる。液体または粘性組成物は、担体を含み得、担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）および適切なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。

【0268】

本開示の細胞を含む組成物を、抗原に対する免疫応答を誘導および／もしくは増強するため、ならびに／または新生物を処置および／もしくは防止するために、対象に全身的にまたは直接的に提供することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞またはそれを含む組成物を目的の器官（例えば、新生物の影響を受けている器官）に直接注射する。あるいは、本開示の細胞またはそれを含む組成物は、目的の器官に間接的に、例えば、循環系（例えば、腫瘍脈管構造）に投与することによって提供される。ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおける細胞の産生を増大させるために、細胞または組成物の投与前、投与中または投与後に、増大および分化誘導剤を提供することができる。

【0269】

投与される細胞の数量は、処置を受ける対象によって変動し得る。ある特定の実施形態では、約１０^４個から約１０^１０個の間、約１０^４個から約１０^７個の間、約１０^５個から約１０^７個の間、約１０^５個から約１０^９個の間、または約１０^６個から約１０^８個の間の本開示の細胞を対象に投与する。ある特定の実施形態では、約１×１０^６個から約５×１０^８個の間の本開示の細胞を対象に投与する。より有効な細胞はさらにいっそう少ない数で投与することができる。通常、少なくとも約１×１０^５個の細胞を投与し、最終的に約１×１０^１０個またはそれよりも多くに達する。ある特定の実施形態では、少なくとも約１×１０^５個、５×１０^５個、１×１０^６個、約５×１０^６個、約１×１０^７個、約２．５×１０^７個、約５×１０^７個、約１×１０^８個、約１．５×１０^８個、約２×１０^８個、または約５×１０^８個の本開示の細胞を対象に投与する。ある特定の実施形態では、約１×１０^６個の本開示の細胞を対象に投与する。有効用量とみなされるものの正確な決定は、対象のサイズ、年齢、性別、体重、および特定の対象の状態を含めた、各対象に特有の因子に依存し得る。投薬量は、当業者が本開示および当技術分野における知見から容易に確認することができる。

【0270】

本開示の細胞および組成物は、これだけに限定されないが、静脈内投与、皮下投与、結節内投与、腫瘍内投与、くも膜下腔内投与、胸膜内投与、骨内投与、腹腔内投与、胸膜の投与、および直接投与を含めた当技術分野で公知の任意の方法によって対象に投与することができる。本開示の細胞は、任意の生理的に許容されるビヒクル中、通常血管内に投与することができるが、骨または細胞が再生および分化のための適当な部位を見いだすことができる他の都合のよい部位（例えば、胸腺）に導入することもできる。
５．７．処置方法

【0271】

本開示の主題は、本開示の細胞またはそれを含む組成物を使用する様々な方法を提供する。本開示の細胞およびそれを含む組成物を治療または医薬に使用することができる。例えば、本開示の主題は、それを必要とする対象における免疫応答を誘導するおよび／または増大させるための方法を提供する。本開示の細胞およびそれを含む組成物を対象における腫瘍負荷を減少させるために使用することができる。本開示の細胞およびそれを含む組成物により、対象における腫瘍細胞の数を減少させること、腫瘍サイズを縮小させること、および／または腫瘍を根絶することができる。本開示の細胞およびそれを含む組成物を対象における新生物の処置および／または防止のために使用することができる。本開示の細胞およびそれを含む組成物を、新生物に罹患している対象の生存を延長するために使用することができる。ある特定の実施形態では、上記の方法はそれぞれ、所望の効果、例えば、既存の状態の緩和または再発の防止を実現するために、本開示の細胞またはそれを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む。処置に関しては、投与される量は、所望の効果を生じさせるのに有効な量である。有効量は、１回または一連の投与で提供することができる。有効量はボーラスでまたは連続的な灌流によって提供することができる。

【0272】

ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、ＣＤ１９に関連する。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、ＣＤ１９を発現する。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、ＣＤ１９を過剰発現する。ある特定の実施形態では、本開示の細胞および組成物によって処置することができる腫瘍および／または新生物は、血液がんである。血液がんの非限定的な例としては、多発性骨髄腫、白血病、およびリンパ腫が挙げられる。白血病の非限定的な例としては、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、およびＢ細胞性前リンパ性白血病が挙げられる。リンパ腫は、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫であり得る。ある特定の実施形態では、リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）である。

【0273】

ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、Ｂ細胞悪性病変である。Ｂ細胞悪性病変の非限定的な例としては、Ｂ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、リヒター形質転換を伴うＣＬＬ、およびＣＮＳリンパ腫が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫としては、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）およびＢ細胞ホジキンリンパ腫が挙げられる。ある特定の実施形態では、腫瘍および／または新生物は、Ｂ細胞リンパ腫である。ある特定の実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、再発または難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞リンパ腫である。

【0274】

ある特定の実施形態では、対象は、ヒト対象である。対象は、進行した形態の疾患を有してもよく、その場合、処置の目的には、疾患増悪の緩和もしくは逆転、および／または副作用の好転が含まれ得る。対象は、既に処置を受けた状態歴を有してもよく、その場合、治療目的には、一般には、再発のリスクを低減することまたは再発を遅延させることが含まれる。

【0275】

本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲの表面発現の結果として、養子移入された細胞に、腫瘍部位における強化された選択的な細胞溶解活性が付与される。さらに、それらの細胞の腫瘍への局在化および増殖に引き続いて、それらの細胞により、腫瘍部位が、生理的抗腫瘍応答に関与する広範囲の細胞に対して高度に伝わりやすい環境に変化する。

【0276】

免疫学的併発症（「悪性Ｔ細胞形質転換」として公知）、例えば、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスクを防ぐもしくは最小限にするため、または健康な組織が腫瘍細胞と同じ標的抗原を発現し、それによりＧｖＨＤと同様の結果が導かれる場合、本開示の細胞にさらなる改変を導入することができる。この問題に対する潜在的な解決法は、本開示の細胞に自殺遺伝子を工学的操作で含めることである。適切な自殺遺伝子としては、これだけに限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導性カスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ－９）、および短縮型ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドにより、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによってＴ細胞を排除することが可能になり得る。ＥＧＦＲｔをＣＤ１９標的化ＣＡＲの上流に共有結合により接合することができる。自殺遺伝子は、本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターの中に含めることができる。このように、自殺遺伝子を活性化するように設計されたプロドラッグ（例えば、プロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ－９を活性化し得るＡＰ１９０３）を悪性Ｔ細胞形質転換（例えば、ＧＶＨＤ）の間に投与することにより、自殺遺伝子が活性化された、ＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現する細胞においてアポトーシスが誘発される。本開示のＣＤ１９標的化ＣＡＲへの自殺遺伝子の組み入れにより、大多数の受容体発現細胞を非常に短時間のうちに排除できることで、さらなるレベルの安全性がもたらされる。自殺遺伝子が組み入れられた本開示の細胞を細胞注入後の所与の時点で先制して排除することもでき、毒性の徴候が見られ次第根絶させることもできる。

【実施例】

【0277】

７．実施例
本開示の主題は、本開示の主題を例示するものとして提示され、限定するものではない以下の実施例を参照することにより、よりよく理解されよう。
（実施例１）
抗ＣＤ１９抗体の同定および特徴付け

【0278】

本実施例では、本明細書に開示されるｓｃＦｖのＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗ＣＤ１９抗体の特徴付けを実証する。ヒト抗ＣＤ１９抗体は、Ａｄｉｍａｂ酵母に由来し、Ａｄｉｍａｂ酵母において産生されたものであった。抗原を、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃２１４２５）を使用してビオチン化した。抗原を約１ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、緩衝剤をＰＢＳと交換した後、１：７．５モル比のビオチン化試薬を添加した。混合物を４℃で一晩保持した後、さらに緩衝剤交換を行って、溶液中の遊離のビオチンを除去した。ビオチン化をＦｏｒｔｅＢｉｏでの標識タンパク質とストレプトアビジンセンサーの結合によって確認した。

【0279】

それぞれ約１０^９の多様性を持つ８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリーを以前に記載されている通り増加させた（例えば、Y. Xu et al, PEDS 26 (10), 663-70 (2013)；ＷＯ２００９０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；およびＷＯ２０１２００９５６８を参照されたい）。

【0280】

最初の２ラウンドの選択に関しては、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳ ｓｙｓｔｅｍを利用した磁気ビーズ選別技法を以前に記載されている通り実施した（例えば、Siegel et al, J Immunol Methods 286 (1-2), 141-153 (2004)を参照されたい）。簡単に述べると、酵母細胞（細胞約１０^１０個／ライブラリー）をビオチン化抗原と一緒に、洗浄緩衝剤（リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）／０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））中、３０℃で３０分間インキュベートした。氷冷洗浄緩衝剤４０ｍＬで１回洗浄した後、細胞ペレットを洗浄緩衝剤２０ｍＬに再懸濁させ、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（５００μｌ）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母をペレット化し、洗浄緩衝剤５ｍＬに再懸濁させ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＬＳカラムにローディングした。５ｍＬをローディングした後、カラムを洗浄緩衝剤３ｍＬで３回洗浄した。次いで、カラムを磁場から外し、成長培地５ｍＬを用いて酵母を溶出させ、次いで、一晩成長させた。

【0281】

選択の第３ラウンドをフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して実施した。およそ２×１０^７個の酵母をペレット化し、洗浄緩衝剤で３回洗浄し、１００～２００ｎＭのビオチン化抗原と一緒に、平衡条件下、３０℃でインキュベートした。第４ラウンドおよび第５ラウンドの選択を、ビオチン化ＮＡＬＭ－６およびＲａｊｉ細胞をラウンド３ ＦＡＣＳからの選択された酵母アウトプットと一緒にインキュベートすることによって実施した。インキュベーション後、予洗したＭ－２８０ Ｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｃａｔ＃６０２１０）を酵母／哺乳動物細胞複合体に添加し、インキュベートした。次に、複合体をＤｙｎａＭａｇ－２磁石を使用して分離し、非結合性上清を除去した。ビーズ／細胞複合体を選択された緩衝剤１ｍＬで３回洗浄した。次いで、捕捉された複合体を、増加のために酵母成長培地を含有するフラスコに移した。第６ラウンドの選択において、増加させた酵母を追加的なラウンドのＮＡＬＭ－６／Ｒａｊｉ細胞選択、１００ｎＭの組換えＣＤ１９抗原を用いた選択、または多特異性試薬（ＰＳＲ）を用いた負の選択のいずれかに供して、非特異的抗体を除去した。

【0282】

ＰＳＲ枯渇のために、ライブラリーを、以前に記載されている通り、ビオチン化ＰＳＲ試薬の１：１０希釈物と一緒にインキュベートした（例えば、Y. Xu et al, PEDS 26 (10), 663-70 (2013)を参照されたい）。次いで、酵母を洗浄緩衝剤で２回洗浄し、１：１００希釈したヤギＦ（ａｂ’）_２抗ヒトカッパ－ＦＩＴＣ（ＬＣ－ＦＩＴＣ）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｃａｔ＃２０６２－０２）、および１：５００希釈したストレプトアビジン－ＡＦ６３３（ＳＡ－６３３）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃Ｓ２１３７５）または１：５０希釈したＥｘｔｒａｖｉｄｉｎ－ｐｈｙｃｏｅｒｔｈｙｒｉｎ（ＥＡ－ＰＥ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃Ｅ４０１１）、二次試薬を用い、４℃で１５分間にわたって染色した。氷冷洗浄緩衝剤で２回洗浄した後、細胞ペレットを洗浄緩衝剤０．３ｍＬに再懸濁させ、ストレーナーキャップ付きの選別管に移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して選別を実施し、選別ゲートを決定して、所望の特徴を有する抗体を選択した。選択ラウンドを、所望の特徴を全て有する集団が得られるまで繰り返した。最終ラウンドの選別後、酵母をプレーティングし、個々のコロニーを特徴付けのために選び取った。
軽鎖多様化

【0283】

ナイーブアウトプットからの重鎖を使用して、追加的な選択ラウンドに使用する軽鎖多様化ライブラリーを調製した。重鎖プラスミドを酵母から抽出し、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて増加させ、続いてＥ．ｃｏｌｉから精製し、５×１０^６の多様性を有する軽鎖ライブラリーに導入してそれを形質転換した。これらのライブラリーに対して、上記の通り、すなわち、１ラウンドのＭＡＣＳ、２ラウンドのＲａｊｉ細胞またはＮＡＬＭ－６細胞を用いた細胞選択、その後、組換えＣＤ１９抗原を使用したＦＡＣＳ選択である第４ラウンド選択を実施した。軽鎖多様化に特有に、Ｒａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞選択に、ＣＤ１９遺伝子の標的化遺伝子ノックアウトを受けた工学的に操作されたＲａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞を用いた最初の負の選択を組み入れた。ＣＤ１９ノックアウト細胞の枯渇後、どちらも内因性ＣＤ１９を発現するおよび過剰発現する工学的に操作されたＲａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞を用いた正の選択を実施した。異なるＦＡＣＳ選択ラウンドにおいて、ライブラリーを（多重特異性試薬）ＰＳＲ結合、種交差反応性、および親和性圧力について抗原力価測定によって評価した。所望の特徴を有する集団を得るために選別を実施した。上記の各ＦＡＣＳ選択ラウンドから個々のコロニーを配列決定および特徴付けのために選び取った。
抗体産生および精製

【0284】

酵母クローンを飽和するまで成長させ、次いで、３０℃で振とうしながら４８時間にわたって誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために回収した。ＩｇＧを、プロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０を用いて溶出させた。
ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｋ_Ｄ測定

【0285】

これらの抗ＣＤ１９抗体を、可溶性ＣＤ１９に対する結合親和性についてＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ｓｙｓｔｅｍ（Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４、一般に、以前に記載されている通り（例えば、Estep et al, Mabs 5 (2), 270-278 (2013)を参照されたい）で試験した。簡単に述べると、ＩｇＧをオンラインでＡＨＣセンサーにローディングすることにより、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を実施した。抗体を抗ヒトＩｇＧピンに固定化し、可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質（ヒト血清アルブミンと融合したＣＤ１９細胞外ドメイン）に結合させた。センサーをオフラインでアッセイ緩衝剤中に３０分間にわたって平衡化し、次いで、オンラインで６０秒間、ベースライン確立のためにモニタリングした。ＩｇＧがローディングされたセンサーを１００ｎＭの可溶性ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質抗原に３分間にわたって暴露し、その後、解離速度測定のためにアッセイ緩衝剤に移して３分間置いた。全てのカイネティクスを、１：１結合モデルを使用して解析した。結合カイネティクスの要約を表１に提示する。例示的な抗体の親和性は８ｎＭから２０ｎＭの間にわたった。表１に示されている抗ＣＤ１９抗体は全て、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。

【表1】

【0286】

（実施例２）
ＣＤ１９標的化ＣＡＲの生成およびＣＡＲ発現

【0287】

３種のＣＤ１９標的化ＣＡＲ、「ＣＡＲ＃２」、「ＣＡＲ＃８」、および「ＣＡＲ＃１５」を生成した。細胞表面上のＣＡＲ分子の発現を、ＰＥとコンジュゲートした抗ヒトＬＮＧＦＲ抗体を使用し、その後、フローサイトメトリー分析を行って調査した。ＬＮＧＦＲは、自己切断性リンカー２Ａ配列を通じてＣＡＲを同時発現し、したがって、ＬＮＧＦＲの発現をＣＡＲ発現の指標として使用した。結果を表２に示す。

【表2】

陽性対照は、「１９２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と称される、マウスｓｃＦｖ ＳＪ２５ｃ１およびＣＤ３ζ１ＸＸを含むＣＤ１９標的化ＣＡＲである。
（実施例３）
ＣＤ１９標的化ＣＡＲのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性

【0288】

これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲの、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株およびＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞に対する細胞傷害性を調査した。各標的細胞株を３８４ウェルプレートに播種し、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔまたは形質導入されていないＴ細胞（ＵＴＤ）をエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比４で添加した。標的細胞のみのウェルおよびエフェクター細胞のみのウェルを対照として含めた。２４時間後、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ８４６２）を使用して測定した。標的細胞のパーセント生存率を、共培養ウェルの発光シグナルから、エフェクター細胞のみのウェルのシグナルを引き、次いで、標的細胞のみのウェルのシグナルで割って算出した。パーセント死滅を、１００％から標的細胞のパーセント生存率を引くことによって算出した。図１Ａおよび１Ｂに示されている通り、ＣＡＲ＃２を含むＴ細胞、ＣＡＲ＃８を含むＴ細胞、およびＣＡＲ＃１５を含むＴ細胞の全てで、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞とは対照的に、Ｒａｊｉ細胞に対して細胞死滅活性が実証され、これにより、これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞の死滅活性が抗原依存性であることが示された。

【0289】

抗原依存的細胞傷害性を確認するために、これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞を、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株またはＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞と共培養した。各標的細胞株をｃｅｌｌ ｔｒａｃｅ ｖｉｏｌｅｔ色素で標識し、次いで、９６ウェルプレートに播種し、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔまたは形質導入されていないＴ細胞（ＵＴＤ）をエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比２で添加した。標的細胞のみのウェルおよびエフェクター細胞のみのウェルを対照として含めた。２０時間後、細胞生存率を、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ色素による染色、その後、フローサイトメトリー分析を使用して測定した。標的細胞のパーセント生存率を、フローサイトメトリーによって測定された生細胞から、エフェクター細胞のみのウェルのシグナルを引き、次いで、標的細胞のみのウェルのシグナルで割ることで算出した。パーセント死滅を、１００％から標的細胞のパーセント生存率を引くことによって算出した。図２Ａおよび２Ｂに示されている通り、ＣＡＲ＃２を含むＴ細胞、ＣＡＲ＃８を含むＴ細胞、およびＣＡＲ＃１５を含むＴ細胞の全てで、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞とは対照的に、Ｒａｊｉ細胞に対して細胞死滅活性が実証され、これにより、これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞の死滅活性が抗原依存性であることが確認された。

【0290】

抗原非依存的サイトカイン（ＩＬ－２およびＩＦＮ－γ）分泌を、ＣＡＲ＃２を含むＴ細胞、ＣＡＲ＃８を含むＴ細胞、およびＣＡＲ＃１５を含むＴ細胞を、ＣＤ１９を発現するＲａｊｉがん細胞株およびＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞と共培養して評価した。各標的細胞株を３８４ウェルプレートに播種し、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔまたは形質導入されていないＴ細胞（ＵＴＤ）をエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比４で添加した。標的細胞のみのウェルおよびエフェクター細胞のみのウェルを対照として含めた。２４時間後、上清および上清中に分泌されたＩＦＮ－γおよびＩＬ２を、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ＱＢｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ ＰｌｅｘＳｃｒｅｅｎ ｋｉｔ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、９０７０２）を使用して検出した。ＩＬ－２分泌の結果が図３Ａおよび３Ｂに示されており、ＩＦＮ－γ分泌の結果が図４Ａおよび４Ｂに示されている。これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞では、Ｒａｊｉ細胞と共培養した場合、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞とは対照的に、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γ分泌が示され、これにより、これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞の抗原依存性サイトカイン放出が示される。
（実施例４）
ＣＤ１９標的化ＣＡＲのｉｎ ｖｉｖｏ活性

【0291】

これらのＣＤ１９標的化ＣＡＲを含むＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ活性を次に調査した。

【0292】

ＮＯＤ－ｓｃｉｄ ＩＬ２Ｒｇ^ｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに、ホタルルシフェラーゼを野生型ＣＤ１９レベルで発現するＮＡＬＭ６細胞（Ｂ－ＡＬＬ細胞株）（ＣＤ１９－ＷＴ）または低下したＣＤ１９レベルで発現するＮＡＬＭ６細胞（Ｂ－ＡＬＬ細胞株）（ＣＤ１９－Ｌｏｗ、ＣＤ１９遺伝子のＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９編集、その後のレンチウイルスベクターを使用したＣＤ１９再発現によって生成されたＮａｌｍ６クローン）０．５×１０^６個を静脈内（ＩＶ）注射した。４日後に、ＣＤ１９－ＷＴ（青色、赤色）およびＣＤ１９^－Ｌｏｗ（緑色）ＮＡＬＭ６を担持するマウスを、新鮮な５×１０^４個（赤色）または２×１０^５個（青色、緑色）＃１７、＃８、＃１５または＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞の単回静脈内注射で処置した。ＣＡＲ Ｔ細胞効力の厳密な評価のために、ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したマウスのイメージングを６０～１００日間にわたって繰り返し行って、腫瘍応答および再燃の潜在性を評価した。Ｔ細胞注入後３０日目まで腫瘍負荷を生物発光イメージングによって分析し、各マウスについて図５に示されている時点で実証した。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞により迅速かつ効果的な抗腫瘍活性が実証され、試験した全てのＴ細胞用量においてＮＡＬＭ６ ＷＴおよびＮＡＬＭ６ ＣＤ１９－Ｌｏｗ細胞の完全な腫瘍根絶がもたらされた。＃１７は不十分な腫瘍制御を示し、急速な腫瘍増悪が導かれ、対照としての機能を果たした。
（実施例５）
＃２ ｓｃＦｖの結合性エピトープ

【0293】

ＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ６細胞株に結合する抗ＣＤ１９抗体を段階希釈物およびフローサイトメトリーによって決定した。ＣＤ１９と競合結合するＣＤ１９－Ｔ２結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）、ＳＪ２５ｃ１（１９－２８ｚ ＣＡＲ由来）、およびＦＭＣ６３（Ｋｙｍｒｉａｈの「Ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ」およびＹｅｓｃａｒｔａの「Ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ」由来）ｓｃＦｖをＢｉａｃｏｒｅ ＳＰＲによって評価した。１００ｎＭのＣＤ１９－ＨＳＡ－Ｈｉｓ（Ｔａｋｅｄａ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）と漸増濃度の可溶性ＣＤ１９－Ｔ２ ＳＪ２５ｃ１またはＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（０、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、および８００ｎＭ）の混合物を、ＣＤ１９－Ｔ２ ｓｃＦｖが固定化されたＢｉａｃｏｒｅ ＣＭＳチップに３分間流した。チップ上に結合した複合体の解離を、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝剤（３００ｍＭのＮａＣｌ）を５分間流すことによって評価した。１０デカヒスチジンタグと融合したＣＤ１９細胞外ドメイン、ＴＥＶ切断部位、ＧＳリンカー、およびＨＳＡを発現する遺伝子を含むｐｃＤＮＡ３．４プラスミド（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３からＣＤ１９－ＨＳＡ－Ｈｉｓを精製した。組換えＣＤ１９－ＨＳＡ－Ｈｉｓ１０を、ニッケル－アフィニティークロマトグラフィーを使用することによって精製した。ＣＤ１９－ＨＳＡ－Ｈｉｓ１０のアミノ酸配列が図６に示されている。

【0294】

ＳＪ２５ｃ、ＦＭＣ６３、および＃２ ｓｃＦｖのエピトープ結合データが図７に示されている。図７に示されている通り、＃２ ｓｃＦｖは、ＣＤ１９への結合について、ＦＭＣ６３およびＳＪ２５Ｃ１と競合した。これらの所見から、＃２ ｓｃＦｖ、ＦＭＣ６３、およびＳＪ２５Ｃ１ ｓｃＦｖがＣＤ１９上の重複するエピトープに結合することが確証される。ＣＤ１９に結合しない無関係の抗体（抗ＣＴＬＡ４ ＶＨＨ）は、＃２ ｓｃＦｖとＣＤ１９への結合について競合できなかった。
（実施例６）
薬理学試験
要約

【0295】

ファースト・イン・ヒューマン臨床試験の裏付けとして、一連の試験を行って、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（本実施例では「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）の、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞（以前の臨床試験において広範囲にわたって投与されていたもの）と比べた、低Ｔ細胞用量での抗腫瘍効力の増大および応答の耐久性の増大によって測定される、有効性の改善を実証した。いずれのＣＡＲを発現するように工学的に操作されたＣＡＲ Ｔ細胞も同等のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける細胞溶解活性、サイトカイン分泌、および増殖を示したが、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞では、機能的持続性がより大きいことに起因して、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてより大きな効力が実現された（Feucht, et al. Nature Medicine (2019)；25 (1): 82-88）。
結果

【0296】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性を、１８時間の生物発光アッセイを使用して測定した。これらの２種のＣＡＲは同一であるが、ｓｃＦｖが異なる（＃２対ＳＪ２５ｃ１）。＃２ ＣＡＲを含むレトロウイルスベクターが図８に示されている。組換えレトロウイルス粒子をＨＥＫ２９３ ＧａｌＶ９パッケージング細胞から以前に記載されている通り生成した（Przybylowski et al., (2006)；13 (1): 95-100）。ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬ）を発現するＮＡＬＭ６細胞を標的細胞として使用した。Ｔ細胞を負の選択によってヒトＰＭＢＣから単離し、磁気ビーズに結合させたＣＤ３／ＣＤ２８抗体を用いて４８時間にわたって活性化し、ビーズを除去した後、ＣＡＲを発現するγ－レトロウイルスベクターを用いて形質導入した。ＣＡＲ＋集団を、ＣＡＲ遺伝子と同時発現させたＬＮＧＦＲ検出によって決定した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞を標的ＮＡＬＭ６細胞と一緒に異なるエフェクター（Ｅ）対標的（Ｔ）比で１８時間インキュベートし、その後、ＦＦＬ活性の数量化を行った。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害活性を、ＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ６細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで有効に死滅させることが以前示された１９２８ｚ－１ｘｘ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害活性と比較した（Feucht et al., Nature Medicine (2019)；25 (1): 82-88）。形質導入されていない（ＵＴ）Ｔ細胞を陰性対照として使用した。ＣＤ１９遺伝子のＮＡＬＭ６－ＣＤ１９ＫＯは、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９編集によって生成された細胞株であり（Hamieh et al., Nature (2019)；568 (7750): 112-116）、ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害活性の特異性を実証するために使用した。代表的な実験が示されている（２例の健康なドナーに対するｎ＝２の独立した実験）。図１０に示されている通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞と１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞は同等の細胞傷害性を示した。

【0297】

次に、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）および１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ活性を測定した。正常レベル（ｗｔ）または低レベル（ｌｏｗ）のＣＤ１９抗原を発現する、プレＢ急性リンパ芽球性白血病ヒト腫瘍細胞株であるＮＡＬＭ６に、ホタルルシフェラーゼおよび緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を形質導入した（Zhao et al., Cancer Cell (2015)；28: 415-428）。ＣＤ１９^＋ｌｏｗ（青色）およびＣＤ１９^＋ｌｏｗ（赤色）ＮＡＬＭ６を担持するマウスを、新鮮な２×１０^５個の形質導入されていないＴ細胞、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞、または１９２８ｚ－１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞の単回静脈内注射で処置した。各マウスにおける腫瘍負荷を生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって８５日間モニタリングした。各群マウス５匹とした。各マウスの応答が図１１に示されている。図１１に示されている通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞と１９２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞の腫瘍根絶カイネティクスは同様であった。ＣＡＲ ｃＤＮＡをＬＮＧＦＲレポーターと同時発現させた（Ｔ細胞への形質導入をモニタリングするため）。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」は「＃２ ＣＡＲ」を表す。

【0298】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の活性を試験し、比較した。まず、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞および＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）のＣＡＲ発現および表現型を測定した。１９２８ｚ ＣＡＲを含むベクターが図１２に示されている。ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞に、１９２８ｚ ＣＡＲまたは＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）を発現し、臨床的製造の代表的なプロセスを使用して作製したγ－レトロウイルスベクターを用いた形質導入を行った。ＳＧＦ－１９２８ｚにおけるＳＪ２５ｃ１ ｓｃＦｖはマウスに由来し、＃２ ｓｃＦｖ（「１９（Ｔ２）ｓｃＦｖ」と表される）はヒト化されたものであるので、ＩｇＧ重鎖のマウス（ＧＡＭ）またはヒト（ＧＡＨ）Ｆｃ部分のいずれかに特異的な２つの異なるヤギ抗体を使用して、ＣＡＲ表面発現を検出した。図１３に示されている通り、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の５０％よりも多くがＣＡＲを発現した。

【0299】

次に、ＣＡＲ Ｔ細胞の表現型を、ナイーブＴ細胞、中心メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、およびエフェクターＴ細胞のマーカーならびに疲弊マーカー（ＬＡＧ３、ＰＤ１、およびＴｉｍ３）を認識する抗体を使用したフローサイトメトリーによって決定した。「ＳＦＧ－Ｔ２－１ＸＸ－ＧＡＨ」は、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ（「＃２ ＣＡＲ」と表される）を発現するγ－レトロウイルスベクターを用いて形質導入されたＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞を指し、一方、「ＳＦＧ－１９２８ｚ－ＧＡＭ」は、１９２８ｚ ＣＡＲを発現するγ－レトロウイルスベクターを用いて形質導入されたＴ細胞に由来する。図１４に示されている通り、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞の表現型は同様であった。ＣＤ４／ＣＤ８ Ｔ細胞の比は１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞で同様であり、ＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ４５ＲＡ／ＣＣＲ７染色によって決定されるＴ細胞分化状態も両方のＣＡＲ群間で同等であった（ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞について）。疲弊マーカーＰＤ１、ＬＡＧ３、およびＴＩＭ３の発現により両方のＣＡＲ Ｔ細胞群の間の大きな差異は明らかにならなかった。

【0300】

続いて、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ活性を評価し、比較した。５×１０^５個のＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ６－ＦＦＬｕｃ／ＧＦＰ細胞をマウスの尾静脈に注射した４日後、凍結保存されていたものを解凍した形質導入されていないまたはＣＡＲ Ｔ細胞を与薬した。図１５に示されている通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）により、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比べて優れた腫瘍制御がもたらされた。形質導入されていないＴ細胞またはＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ６を担持するマウスの生存が図１６に示されているカプラン・マイヤー曲線プロットにプロットされている。図１６に示されている通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ６担持マウスは、マウス当たり細胞１×１０^６個を下回る全てのＣＡＲ Ｔ細胞用量で、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスよりも長く生存した。１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞レシピエントは全て２５日目までに死亡し、一方、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を受けた試験群では１匹のマウスのみが死亡した。最高用量（１×１０^６個）では、対照群および試験群の両方で１匹のマウスが死亡した。

【0301】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞のＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ６白血病マウスモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ持続性も測定した。処置後１７日より後のＣＡＲ Ｔ細胞の持続性、および骨髄におけるＣＡＲ Ｔ細胞の数（群当たりｎ＝５）が図１７に示されている。ＣＡＲ Ｔ細胞のＰＤ１、ＬＡＧ３、およびＴＩＭ３発現パーセンテージ、ならびにＣＡＲ Ｔ細胞のＴ_ｎ、Ｔ_ｃｍ、Ｔ_ｅｆｆ、およびＴ_ｅｍパーセンテージが図１７に示されている。

【0302】

図１７に示されている通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）は１７日目まで骨髄において容易に検出され、ＣＤ４^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞およびＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の両方が含まれた。１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞は、それらの限られた持続性と一致して、わずかであった（Zhao et al., Cancer Cell (2015)；28: 415-428）。１７日目に検出されたそれぞれの持続性Ｔ細胞の表現型は同様であり（Ｔｎ、Ｔｃｍ、およびＴｅｍ）、＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）群におけるエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）の画分がわずかに多かったことが示される。後者は、より多くのＰＤ１ならびに同等のレベルのＬＡＧ３およびＴＩＭ３を発現していた。この観察により、ＣＤ２８／ＣＤ３ｚ－１ＸＸシグナル伝達モチーフを発現するＣＡＲ Ｔ細胞の持続性がより大きいことが確証される（Feucht et al., Nature Medicine (2019)；25 (1): 82-88）。

【0303】

これらの結果から、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）の効力が１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比べて大きい（４つの用量レベルにおける腫瘍根絶が高い）ことが確認される。この試験から、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）の表現型が１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の表現型と全体的に同様であり、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）が、寿命がより短い１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比べて持続性が大きいことにより、より良好な腫瘍制御を実現することと一致することがさらに確証される。
方法および材料
細胞溶解性アッセイ

【0304】

ルシフェラーゼに基づくアッセイを使用して、異なるＣＡＲ構築物を用いて形質導入されたＴ細胞の細胞傷害性を測定した。ＦＦＬｕｃ－ＧＦＰを発現するＮＡＬＭ６が標的細胞としての機能を果たした。エフェクター細胞と腫瘍標的細胞を示されているエフェクター／標的比で、黒壁９６ウェルプレートにおいて３連で共培養した。標的細胞５×１０^４個を、５％ヒトＡＢ 血清（Ｇｅｍｉｎｉ）、１０Ｕ／ｍｌのＩＬ７、および１０Ｕ／ｍＬのＩＬ１５（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）を補充したＸ－ＶＩＶＯ１５と共にウェル当たり総体積１００μＬで播種した。同じ細胞密度でプレーティングした標的細胞単独を使用して、最大ルシフェラーゼ発現（相対発光量（ＲＬＵ））を決定した。１８時間共培養した後にルシフェラーゼ基質（Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ；Ｐｒｏｍｅｇａ）１００μＬを各ウェルに直接添加した。放出された光を、発光プレートリーダーを使用して決定した。腫瘍細胞溶解を（１－（ＲＬＵ試料）／（ＲＬＵ最大））×１００として算出した。
遺伝子改変されたヒトＴ細胞の単離、形質導入、および増大

【0305】

匿名化された健康なドナーからのバフィーコートをＮｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒから購入した（施設内倫理委員会を免除された）。全ての血液試料を必要な倫理および安全性手順に従って取り扱った。以前に記載されている通り、末梢血単核細胞の単離を密度勾配遠心分離によって行い、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＣｌｉｎＥｘＶｉｖｏ（商標）ＣＤ３／ＣＤ２８抗体ビーズを用いて活性化を行った後、γ－レトロウイルスベクターを用い、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎをコーティングしたプレート（タカラバイオ株式会社）で遠心分離することによって形質導入を行った（Zhao et al., Cancer Cell (2015)；28: 415-428）。２日後、活性化されたＴ細胞に対してビーズ除去を行い、以前に記載されている通りスピノキュレーションによる形質導入を行った（Hollyman et al., J. Immunotherapy (2009)；32 (2): 160-180）。次いで、形質導入された細胞をＧ－Ｒｅｘ ６Ｍウェルプレートで製造者の指示（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に従って増大させた。形質導入の５日後に形質導入効率を決定した。ＣＡＲ－Ｔ細胞を新鮮にまたは凍結保存から解凍してＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中５０％ＣＳ１０および５％ＨＳＡに入れて使用した。
マウス全身腫瘍モデル

【0306】

６～１２週齢ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ－２Ｒγｎｕｌｌ雄マウスをＭｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ（ＭＳＫＣＣ）Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールの下で使用した。関連する全ての動物使用ガイドラインおよび倫理規制に従った。一般に、マウスに０．５×１０^６個のＮＡＬＭ６（ＣＤ１９^＋ｗｔまたは低発現）－ＦＦＬｕｃ－ＧＦＰ腫瘍細胞を尾静脈注射によって接種し、その後、腫瘍注射の４日後に、マウス毎に特定用量のＣＡＲ－Ｔ細胞での処置を行った。ＮＡＬＭ６細胞は均等の腫瘍負荷でもたらされ、ＣＡＲ－Ｔ細胞処置前に除外されたマウスはいなかった。ランダム化または盲検化方法は使用しなかった。
生物発光イメージング

【0307】

腫瘍負荷を以前に記載されている通り評価した（Gade et al., Cancer Research (2005)；65 (16): 9080-9088）。簡単に述べると、２％イソフルラン麻酔下に１０分間置いたマウスに、ＰＢＳに再懸濁させたＤ－ルシフェリン（Ｘｅｎｏｇｅｎ、マウス当たり３ｍｇ）を腹腔内注射し、イメージングを行った。ＩＶＩＳ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、注射した腫瘍の生物発光のイメージングを行った。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してデータを解析した。
フローサイトメトリーに使用した抗体

【0308】

１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞による処置１７日後の、ｅｘ ｖｉｖｏで生成されたまたはマウス骨髄および脾臓から単離されたＣＡＲ Ｔ細胞からの表面マーカーの発現を、以下のフルオロフォアとコンジュゲートした抗体を使用して検出した：ＡＰＣ－Ｃｙ７抗ヒトＣＤ８（ＳＫ１）、ＡＰＣ－Ｃｙ７マウス抗ヒトＣＤ４５（２Ｄ１）、ＢＵＶ３９５マウス抗ヒトＣＤ４（ＳＫ３）、ＢＶ４２１マウス抗ヒトＣＤ６２Ｌ（ＤＲＥＧ－５６）、ＢＶ６５０マウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００）、ＢＶ４８０またはＢＶ５１０マウス抗ヒトＰＤ－１（ＥＨ１２．１）およびＢＵＶ７３７マウス抗ヒトＣＤ１９（ＳＪ２５Ｃ１）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；ＰＥ－Ｃｙ７抗ヒトＣＤ８（ＳＫ１）およびＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ ７１０抗ヒトＬＡＧ－３（３ＤＳ２２３Ｈ）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；ＰｅｒＣＰ抗ヒトＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ７８５抗ヒトＴｉｍ－３（Ｆ３８－２Ｅ２）およびＰＥ抗ヒトＣＤ１２７（ＩＬ７Ｒａ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）。１９２８ｚ ＣＡＲの発現を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ヤギ抗マウスＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２断片を使用することによって検出した。＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）を検出するために、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７－ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２断片を使用した。７－ＡＡＤ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を生存能色素として使用した。フローサイトメトリーをＣｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｃｙｔｅｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実施した。ＦｌｏｗＪｏ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ．１０．１（ＦｌｏｗＪｏ ＬＬＣ）を用いてデータを解析した。
統計解析

【0309】

全ての統計解析を、Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用して実施した。２つの群間の統計比較を対応のない両側ｔ検定によって決定した。ｉｎ ｖｉｖｏ試験に関しては、カプラン・マイヤー曲線を使用して全生存を提示した。統計的有意性はｐ値＜０．０５と定義される。
（実施例７）
毒性評価
要約

【0310】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）のｉｎ ｖｉｖｏにおける毒性を、ＮＡＬＭ６白血病を担持するＮＳＧマウスにおいて評価した。１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を同じ用量でｉ．ｖ．注射したマウスが対照としての機能を果たした。記録されたパラメータには、全てのマウスについての全体重、腫瘍負荷、および生存が含まれた。より広範囲にわたる毒性学的調査の焦点を、このマウスモデルに対する最小治療（治癒）用量を超え（１０×）、また、レシピエント体重に対する割合として臨床的に使用されるＣＡＲ Ｔ細胞用量も超える（１０～１００×）用量である最高用量（１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞／レシピエント）で処置したマウスに当てた。これらの試験には、主要な腫瘍部位（骨髄）におけるＴ細胞の列挙および表現型決定、血清サイトカイン測定（ヒト、すなわち、Ｔ細胞由来、およびマウス、すなわち、宿主由来の両方）、肝酵素を含めた基本的な血清生化学的検査、末梢血細胞計数および器官重量ならびに試験の最後の（２７～２８日目）包括的な免疫組織化学的検査が含まれた。注入されたＣＡＲ Ｔ細胞は、臨床的に関連性のある様式で産生されたものであり、２つのＣＡＲ Ｔ細胞産物は同等であった。

【0311】

全体重および生存は試験群と対照群の間で有意には異ならなかった。血清サイトカインレベルも同等であり、いずれの群においてもＣＲＳの存在は示唆されなかった。１０日目の、ＡＬＴおよびＡＳＴ酵素レベルは両方の試験群で同等であった。２７／２８日目の、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスの酵素レベルは１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの酵素レベルよりも低かった。

【0312】

予測された通り、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）は１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞よりも長持ちした。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）処置群のマウスのリンパ球計数および網状赤血球計数は１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞群よりも多かった。１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を受けたマウスではびまん性腫瘍の浸潤が示されたが、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）のレシピエントでは示されなかった。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）が持続しているマウスでは軽度～中等度の異種ＧＶＨＤおよび肝細胞壊死が示された。

【0313】

ＧＶＨＤは、高用量のヒトＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したＮＳＧマウスにおいて予測されるものであるが、後者の機構は不明である。試験の異種性（マウス組織に対するヒトＴ細胞の異種反応性を起こしやすい）および単一ドナー（基礎をなすＴ細胞受容体レパートリーが未知である）を使用して実施したことを考慮すると、この有害事象のヒトにおける自己治療に対する意義は不明である。
動物モデルの根拠

【0314】

ＮＳＧマウスにおけるＮＡＬＭ６モデルは、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Zhao et al., Cancer Cell (2015)；28: 415-428、Feucht, et al. Nature Medicine (2019)；25 (1): 82-88、Hamieh et al., Nature (2019)；568 (7750): 112-116、Eyquem et al., Nature (2017)；543 (7643): 113-117）およびその他においてＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ細胞の活性を評価するために広範囲にわたって使用されてきた。ＮＡＬＭ６は、ＣＤ１９を発現するが、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ、または他の主要な共刺激リガンドのいずれも発現しないヒトプレＢ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。
用量およびスケジュールの根拠

【0315】

％形質導入効率および総生存細胞に基づいたものである１×１０^６個の生存可能なＣＡＲ Ｔ細胞の単回静脈内注射は、この動物モデルにおいて１０×最小効果的処置（１×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞）に対応することを考慮して選択された用量である（図１５参照）。ＣＡＲ Ｔ細胞の投薬量は、マウスからヒトに体重で変換した場合に成体に関して承認されたＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞用量（例えば、０．１～１．５×１０^８個の生存可能なＣＡＲ Ｔ細胞という承認された用量）のおよそ１０～１００×である。ヒト臨床試験プロトコールにおいて＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞について提唱された開始一律用量は２５×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞である。
方法
試験物およびビヒクル

【0316】

試験物は、ＭＳＫＣＣにあるＣｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｆａｃｉｌｉｔｙ（ＣＴＣＥＦ）によって調製された、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（本実施例では「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）、および形質導入されていないＴ細胞である。細胞を試験開始まで液体窒素中で凍結させておいた。Ｔ細胞注射の実施日に、細胞を３７℃で解凍し、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中１％ＨＳＡで洗浄した。次いで、細胞を、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ中１％ＨＳＡを使用し、マウス当たり２００μＬの体積中１×１０^６個、５×１０^５個、２×１０^５個、および１×１０^５個のＣＡＲ－Ｔ細胞用量に製剤化した。ＣＡＲ Ｔ細胞の数を、総細胞数に、フローサイトメトリーを使用して予め決定しておいたＣＡＲ^＋パーセンテージを掛けることによって決定した。
試験体系

【0317】

０．５×１０^６個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰ ＮＡＬＭ６がん細胞を注射した６～１２週齢ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ－２Ｒγｎｕｌｌ雄マウスを使用して実験を行った。凍結保存されていたものを解凍した、１９２８ｚ ＣＡＲまたは＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）をγ－レトロウイルスベクターで形質導入された、ＣＤ４／ＣＤ８選択されたＴ細胞１×１０^６個を、腫瘍細胞の注射の４日後にマウスに注入した。無処置のマウスでは、１６～１８日目までに骨髄浸潤性白血病に起因して後肢麻痺が発生することが予測された。

【0318】

野生型ＮＡＬＭ６ヒト腫瘍細胞株は、プレＢ急性リンパ芽球性白血病のよく特徴付けられたモデルであり、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙが多数の査読された刊行物において使用している（Zhao et al., Cancer Cell (2015)；28: 415-428、Feucht, et al. Nature Medicine (2019)；25 (1): 82-88、Hamieh et al., Nature (2019)；568 (7750): 112-116、Eyquem et al., Nature (2017)；543 (7643): 113-117）。
試験設計

【0319】

マウス１１５匹を１９２８ｚ ＣＡＲ群、＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）群、および形質導入されていない群に分けた。全てのマウスがＴ細胞処置の４日前に０．５×１０^６個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰ ＮＡＬＭ６腫瘍細胞を尾静脈注射によって受けた。試験０日目に、マウスを処置群に割り当てた。各群が単一用量（２００μｌ）の試験物を１回、静脈内投与によって受けた。群の割り当てを表３に概説する。

【表3】

毒性学的パラメータ

【0320】

試験物投与後の体重の変化によって毒性をモニタリングした。試験物投与の１０日後および２８日後、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞および＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）の１×１０^６個用量群由来の血液試料を２％イソフルラン下での麻酔後に眼窩静脈叢から採取した。血液試料を、血清分離剤を含有する管の中に採取し、サイトカインおよび肝酵素のレベルの測定に使用した。２７日目および２８日目に、１９２８ｚ ＣＡＲおよび＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）の１×１０^６個用量群のマウスを示されている各日に完全剖検分析に供した。
サイトカイン分析

【0321】

血清をマウスからＣＡＲ Ｔ処置後１０日目および２８日目に、１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞用量を受けた１９２８ｚ ＣＡＲ群および＃２ ＣＡＲ（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ」と表される）群の両方から採取した。試料を分析まで－８０℃で保管した。ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘアッセイを使用して、マウスサイトカイン（ＭＣＰ－１、ＩＬ－６、およびＧ－ＣＳＦ）ならびにヒトサイトカイン（ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＦＮ－ｇ、ＧＭ－ＣＳＦ、グランザイムＢ、およびＴＮＦ－ａ）のレベルを数量化した。本試験におけるＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ関連試薬は全てＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。重症サイトカイン放出症候群のマウスモデル由来の血清を陽性対照として使用した（Giavridis et al., Nature Medicine (2018)；24 (6): 731-738）。個々のサイトカインのシンプレックスキットからのビーズ６０μＬをプールし、ビーズ混合物５０μＬを９６ウェルプレートの各ウェルに製造者のプロトコールに従って分配した。標準物質、品質管理、および普遍的なアッセイ緩衝剤を使用して１：４に希釈した試料をウェルに添加した。プレートを密閉し、室温、５００ｒｐｍで３０分間振とうし、４℃に移した。一晩のインキュベーション後、プレートを室温、５００ｒｐｍでさらに３０分間振とうした。プレートを洗浄し、検出用抗体を各ウェルに添加した。プレートを密閉し、室温、５００ｒｐｍで３０分間振とうした。洗浄後、ストレプトアビジンＲＰＥ溶液を各ウェルに添加した。プレートを密閉し、室温、５００ｒｐｍで３０分間振とうした。最終的な洗浄ステップ後、ビーズを読み取り用緩衝剤に再懸濁させ、アッセイシグナルをＬｕｍｉｎｅｘ ２００ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで取得した。個々のサイトカインについての検量線を５パラメータロジスティック方程式を使用して作成し、各試料中の個々のサイトカインの濃度をｘＰＯＮＥＮＴ ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン４．２．１５０９．０）によって算出した。
統計値

【0322】

全ての統計解析を、Ｐｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用して行った。２つの群間の統計比較を対応のない両側ｔ検定によって決定した。統計的有意性をｐ値＜０．０５と定義した。
結果

【0323】

１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞および＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）による処置中のマウス体重の変化を測定した。ＮＡＬＭ６腫瘍担持マウスを、１×１０^６個、５×１０^５個、２×１０^５個、または１×１０^５個の１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞または＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）で処置し（群当たりｎ＝１０）、一方、形質導入されていないＴ細胞処置が対照群としての機能を果たした（ｎ＝５）。図１８に結果が示されている。図１８に示されている通り、２つのＣＡＲ Ｔ細胞処置間で体重の変化は同様であった。

【0324】

次に、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）および１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの血清中の肝酵素を測定した。１０日目および２７／２８日目における２つのＣＡＲ Ｔ処置マウスからの肝酵素レベルの数量化（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ、群当たりｎ＝１０）が図１９に提示されている。１×１０^６個の１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞または＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したＮＡＬＭ６腫瘍担持マウスを１０日目および２７／２８日目にＡＬＴおよびＡＳＴレベルについて評価した。図１９に示されている通り、１０日目のＡＬＴおよびＡＳＴ酵素レベルは両方の試験群で同等であった。２７／２８日目の＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスの酵素レベルは１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの酵素レベルよりも低かった。

【0325】

１×１０^６個の＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）または１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスにおける注入後１０日目および２７／２９日目の、ヒトおよびマウスサイトカインレベルを測定した。図２０は、１０日目および２７／２８日目に異なるＣＡＲ Ｔ処置マウスの２つの群から得た血清からのヒトサイトカインレベルの数量化を示す（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ、群当たりｎ＝１０）。重症サイトカイン放出症候群のマウスモデルから採取した血清を陽性対照として使用した（ｎ＝２）（Giavridis et al., Nature Medicine (2018)；24 (6): 731-738）。１０日目および２７／２８日目のＩＬ２、ＩＬ３、ＧＭ－ＣＳＦ、グランザイムＢ、およびＴＮＦアルファレベルは２つのＣＡＲ Ｔ細胞群間で同等であった。２７／２８日目の１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ処置群からのＩＦＮ－γレベルは、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を受けたマウスにおけるレベルよりも高かった。

【0326】

図２１は、１０日目および２７／２８日目の、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞または＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ、群当たりｎ＝１０）のいずれかで処置したマウス血清からのマウスサイトカインレベルの数量化の結果を示す。重症サイトカイン放出症候群のマウスモデルから採取した血清を陽性対照として使用した（ｎ＝２）（Giavridis et al., Nature Medicine (2018)；24 (6): 731-738）。１０日目に、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスは、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を注入したマウスよりもわずかに高いレベルのＭＣＰ－１およびＧ－ＣＳＦを有したが、一方、ＩＬ６レベルは両方のＣＡＲ Ｔ細胞群間で同等であった。２７／２８日目に、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスは、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ群におけるレベルと同様のレベルのＭＣＰ－１、ＩＬ－６、およびＧ－ＣＳＦを有した。これらの知見から、いずれの群においてもサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の形跡はなかったことが示唆される。

【0327】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスおよび１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの注入後２７／２８日目における血液細胞計数を測定した。２つの異なるＣＡＲ Ｔ処置群（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ、群当たりｎ＝１０）の２７／２８日目における必須の血液細胞の数量化が図２２に提示されている。好中球計数、リンパ球計数、および単球計数、ならびに網状赤血球計数の比較が示されている。図２２に示されている通り、好中球および単球は２つのＣＡＲ Ｔ群（１×１０^６個の用量レベル）で同等であった。１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞処置群のマウスではリンパ球計数および網状赤血球計数が１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞群よりも多かった。

【0328】

さらに、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスおよび１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの剖検時の体重および器官重量を測定した。２７／２８日目の２つの異なるＣＡＲ Ｔ処置群からの体重および必須器官の重量の比較（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ）。図２３に結果が示されている。図２３に示されている通り、体重、脾臓重量、および腎臓重量は２つの処置群１と２で同等であった。１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ処置群（「ＳＦＧ－１９（Ｔ２）２８ｚ－１ＸＸ」と表示される）のマウスの肝臓重量は１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ群（「ＳＦＧ－１９２８ｚ」と表示される）のマウスよりも軽かった。心臓重量の差異は不均等な技術的取扱が原因であるとみなされた。

【0329】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスおよび１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの肝臓、骨髄、および脾臓のＣＤ３^＋およびＣＤ１９^＋免疫組織化学的測定を行った。ＣＡＲ Ｔ処置後２７／２８日目のマウスからの肝臓、脾臓、および骨髄におけるリンパ球および腫瘍浸潤レベルの評価（用量レベル＝１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ、ｎ＝６）が図２４に示されている。図２４に示されている通り、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ処置群（「ＳＦＧ－１９（Ｔ２）２８ｚ－１ＸＸ」と表示される）マウスは、評価した器官の全てにおいて、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置した動物（「ＳＦＧ－１９２８ｚ」と表示される）よりも高いレベルのＣＤ３＋細胞を有した。１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ群からの試験した器官の全てにおいて腫瘍浸潤が観察されたが、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ群では腫瘍浸潤は観察されなかった。
結論

【0330】

高用量であるレシピエント当たり１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞における＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）の毒性プロファイルを１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の毒性プロファイルと比較した。全体重にも生存にも差異は認められなかった。１０日目に測定された血清サイトカインレベルは２つの群間で同等であり、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）によりサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）が誘導される可能性は１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比べて高くないことが示唆される。肝酵素は１０日目および１７日目に両群で上昇したが＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）のレシピエントでは１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を与薬した群よりも程度が低かった。末梢血液細胞計数により、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）のレシピエントにおけるリンパ球計数が多いことが示され、これは、ＦＡＣｓ分析（１７日目）および組織ＩＨＣ（２７／２８日）によって実証された、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性がより大きいことと一致した。貧血も赤血球増加症も赤血球過形成も伴わない単独の網状赤血球増加症が観察され、したがって、これは有害事象とはみなされなかった。

【0331】

器官重量は、肝臓以外は２つの群間で同様であった。肝臓は実質的な腫瘍増悪が原因で（ＢＬＩおよびＩＨＣ）１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を用いて処置したマウスの方が重かった。対照的に、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスでは、腫瘍が存在しないことがＩＨＣによって示され、これらの同じマウスにおけるＢＬＩ所見が確証された。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）レシピエントマウスにおいて多器官リンパ球浸潤が観察され、これは、異種ＧＶＨＤと一致した。後者は、これらの組織の上皮壊死の所見によって確証された。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を注入したマウスでは軽度～中等度の肝細胞壊死も観察された。この顕微鏡レベルの所見は、一般にはＧＶＨＤに付随するものではなく、したがって、可能性のある有害事象を表す。この所見の肝機能に対する影響は、肝酵素の上昇が穏当であること（ＡＬＴではなくＡＳＴのみ）およびビリルビン値が正常であることを考慮すると、限られたものである。他の病理学的所見は軽微なものであり、２つの処置群間で等しく示され、したがって、重要な所見を表すものとはみなされなかった。Ｔ細胞フローサイトメトリープロファイルは２つの処置群間で同様であり、これは、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）が、ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性が大きいことに起因して治療効力の増大を示すという予測された所見と一致した。

【0332】

＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を臨床的に試験された１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞（Park et al., N. Engl. J. Med. (2018)；378 (5): 449-459）と比較して評価した毒性試験により、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）を用いて処置したマウスにおける軽度～中等度のＧＶＨＤならびに軽度～中等度の肝細胞壊死が明らかになった。

【0333】

本実施例および実施例６において示されたデータから、＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）が、１９２８ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、持続性が大きいことに起因して強力であるが、より大きなリスクは引き起こさないと結論づけられる。＃２ ＣＡＲ Ｔ細胞（「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞」と表される）の比較的増大した効力により、ＣＤ１９を標的とする大多数のＣＡＲ Ｔ細胞試験よりも比較的低用量である２５×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞用量から開始するヒト臨床試験設計が支持される。
（実施例８）
薬理学試験
抗ＣＤ１９抗体の細胞に対する（ｏｎ－ｃｅｌｌ）結合

【0334】

本開示のｓｃＦｖのＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗ＣＤ１９抗体の細胞に対する（ｏｎ－ｃｅｌｌ）結合を、内因性ＣＤ１９を発現するＲａｊｉ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞株に対するフローサイトメトリーによって評価した。各抗体を、ＣＤ１９陽性親株および対応するＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉおよびＮＡＬＭ－６株の両方において試験して、細胞に対する（ｏｎ－ｃｅｌｌ）標的特異的結合を確認した。図２５に示されているフローサイトメトリークロマトグラムにより、ＣＤ１９陽性株における、対応するノックアウト細胞株におけるバックグラウンド結合に対する１～２ログシフトが実証される。

【0335】

図２６Ａ～２６Ｃに示されている段階希釈物のフローサイトメトリー結果から、ＮＡＬＭ－６細胞に対する飽和結合が実証される。曲線から算出されたＥＣ５０値を表４に提示する。例示的な抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９陽性ＮＡＬＭ－６細胞に少なくとも０．２ｎＭからの高い親和性で結合する。ＣＤ１９陽性細胞に対して可溶性タンパク質よりも高い親和性が観察されたことから、これらの抗体が、ＣＤ１９－ＨＳＡ融合タンパク質中に存在するよりもより天然に細胞上に存在するエピトープに結合することが示唆される。表４に示されている抗ＣＤ１９抗体は全て、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。

【表4】

【0336】

（実施例９）
再発または難治性Ｂ細胞悪性病変を有する成人患者に対するＣＤ１９標的化１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞の第Ｉ相試験

【0337】

本実施例では、再発または難治性Ｂ細胞悪性病変を有する成人患者に対するＣＤ１９標的化１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞の第Ｉ相試験を記載する。「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」および「１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ」は、本明細書では互換的に使用される。Ｂ細胞特異的表面抗原であるＣＤ１９を標的とする自己ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、再発または難治性（Ｒ／Ｒ）Ｂ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）に対する好都合な臨床応答が実証されている。しかし、最初の完全奏効（ＣＲ）率が４０～６０％であるにもかかわらず、患者のごく一部でしか寛解が長続きせず、再発を防止し、より深い臨床応答（ＣＲ）を実現することによってＣＡＲ治療の有効性をさらに改善する必要がある。

【0338】

試験設計および方法：本試験は、Ｒ／Ｒ Ｂ細胞悪性病変を有する患者に対する１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸの単一施設第Ｉ相臨床試験である。重要な疾患適格性基準には、Ｒ／Ｒびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、高グレードＢＣＬ、原発性縦隔ＢＣＬ、無痛性ＢＣＬおよび慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれる。ＣＤ１９ ＣＡＲ治療歴を有する患者は、ＣＤ１９の発現が確認される限りは適格である。重要な除外基準には、継続中の免疫抑制、例えば、全身性ＧｖＨＤ治療および活動性ＣＮＳ疾患が含まれる。

【0339】

本試験では、３＋３用量漸増設計を使用して、ＢＣＬに対する最大耐量を同定する。５つの一律用量レベルを計画する：２５×１０^６個、５０×１０^６個、１００×１０^６個、１５０×１０^６個、および２００×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞。患者は、３日間のフルダラビンおよびシクロホスファミド、その後、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞の単回注入からなる前処置化学療法を受ける。用量漸増相では、ＤＬＢＣＬ、高グレードＢＣＬ、および原発性縦隔ＢＣＬを有する患者を参加適格とする。第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）が決定されたら、試験を２つのコホートを用いる用量拡大相を開始する。コホート１には、ＤＬＢＣＬ、高グレードＢＣＬおよび原発性縦隔ＢＣＬ（すなわち、用量漸増相と同じ適格性基準）を含める。コホート２には、無痛性ＢＣＬ、ＣＬＬ、およびリヒター形質転換を有する患者を含める。試験の用量拡大パートは、複数の適応症に対する１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲの安全性、有効性、および薬物動態学をさらに特徴付けるために設計される。最大６０名までの患者を登録する。

【0340】

本試験の主要目的は、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸの安全性および忍容性を評価し、第２相推奨用量を決定することである。重要な副次的目的には、１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸの有効性および薬物動態の評価が含まれる。探索的目的には、Ｂ細胞形成不全および測定可能残存病変（ＭＲＤ）の評価、注入前後の１９（Ｔ２）２８ｚ１ＸＸ ＣＡＲ Ｔ細胞表現型の特徴付け、および血清サイトカインの分析が含まれる。

【0341】

本開示の主題およびある特定の利点が詳細に記載されているが、本開示の主旨および範囲から逸脱することなく種々の変化、置換および変更を行うことができることが理解されるべきである。さらに、本出願の範囲は、本明細書に記載されているプロセス、機械、製造、および組成物の特定の実施形態、ならびに方法に限定されるものではない。当業者には本開示の主題の開示から容易に理解される通り、現在存在するまたは後に開発される、対応する本明細書に記載の実施形態と実質的に同じ機能を果たすまたは実質的に同じ結果を実現するプロセス、機械、製造、組成物、または方法を本開示の主題に従って利用することができる。したがって、添付の特許請求の範囲は、そのようなプロセス、機械、製造、組成物または方法もその範囲内に包含するものとする。

【0342】

種々の特許、特許出願、刊行物、製品説明、プロトコール、および配列受託番号が本出願全体を通して引用されており、その開示全体があらゆる目的に関して参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14-1】

【図14-2】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26-1】

【図26-2】

【配列表】

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【国際調査報告】