特表 2023-516195 Ｃ１９ Ｃ３８二特異性抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-18

(54)【発明の名称】Ｃ１９ Ｃ３８二特異性抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230411BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230411BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230411BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230411BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230411BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230411BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230411BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230411BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230411BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230411BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230411BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230411BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230411BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20230411BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C12P21/08

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/04

A61K39/395 T

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022552176

(86)(22)【出願日】2021-02-25

(85)【翻訳文提出日】2022-10-26

(86)【国際出願番号】 US2021019685

(87)【国際公開番号】W WO2021173844

(87)【国際公開日】2021-09-02

(31)【優先権主張番号】62/981,990

(32)【優先日】2020-02-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/990,330

(32)【優先日】2020-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/094,838

(32)【優先日】2020-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＵＮＩＸ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522340657

【氏名又は名称】バイオグラフ ５５，インク．

(74)【復代理人】

【識別番号】110003797

【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100082072

【弁理士】

【氏名又は名称】清原 義博

(72)【発明者】

【氏名】プレスタ，レナード

(72)【発明者】

【氏名】トゥメ，ポール

(72)【発明者】

【氏名】ロンバーグ，ニルス

(72)【発明者】

【氏名】デュラマド，オマール

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD61

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

二特異性または多価標的化分子を用いて免疫抑制性Ｂ細胞集団を標的化することは、抗腫瘍免疫応答を有効にモジュレートして治療アウトカムを向上させる治療的介入のための潜在的な経路を提示する。よって、がんの処置のために免疫抑制性Ｂ細胞集団を有効におよび選択的に標的化することができる操作された抗体ベースの治療剤に対する必要性が依然として存在する。提供されるのは、免疫抑制性Ｂ細胞を標的化する複合体結合性分子である。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ１９に結合するように構成されたＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するように構成されたＣＤ３８結合性成分を含む複合体結合性分子であって、前記ＣＤ１９結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含み、かつ前記ＣＤ３８結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含む、複合体結合性分子。

【請求項2】

前記ＣＤ１９結合性成分および／または前記ＣＤ３８結合性成分が、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（Ｖ_ＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（Ｖ_ＨＨ）を含む、請求項１に記載の複合体結合性分子。

【請求項3】

前記ＣＤ１９結合性成分または前記ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、請求項２に記載の複合体結合性分子。

【請求項4】

前記ＣＤ１９結合性成分および前記ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、請求項３に記載の複合体結合性分子。

【請求項5】

前記ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記ＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項6】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３もしくは５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含み、かつ／または前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１もしくは６に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項５に記載の複合体結合性分子。

【請求項7】

前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ／または前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは６に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の複合体結合性分子。

【請求項8】

共通軽鎖二特異性ＩｇＧである、請求項１～７のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項9】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項10】

前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の複合体結合性分子。

【請求項11】

前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号３または５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１または７に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の複合体結合性分子。

【請求項12】

前記ＣＤ１９結合性成分または前記ＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項13】

前記ＣＤ１９結合性成分がｓｃＦｖを含む、請求項１２に記載の複合体結合性分子。

【請求項14】

前記ＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、請求項１２に記載の複合体結合性分子。

【請求項15】

前記ＣＤ１９結合性成分または前記ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、請求項９～１４のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項16】

前記ＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、請求項１５に記載の複合体結合性分子。

【請求項17】

前記ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、請求項１５に記載の複合体結合性分子。

【請求項18】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列Ｐ－Ｘ１－ＬＧ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２が、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から各々選択される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項19】

Ｘ１がＨであり、かつＸ２がＴである、請求項１８に記載の複合体結合性分子。

【請求項20】

ＣＤ１９に結合する重鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＡ８４ＳおよびＡ１０８Ｌ改変を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項21】

ＣＤ３８に結合する軽鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＷ３２Ｈ改変を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項22】

複合体結合性分子が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ３８に結合するＣＤ３８抗原結合性成分および抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ１９に結合するＣＤ１９抗原結合性成分を含み、前記ＣＤ３８抗原結合性成分が、
ａ）配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
ｂ）配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
ｃ）配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
ｄ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
ｅ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／または
ｆ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
を含み、
前記ＣＤ１９抗原結合性成分が、
ｇ）配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
ｈ）配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
ｉ）配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
ｊ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
ｋ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／または
ｌ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
を含む、
複合体結合性分子。

【請求項23】

前記ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列Ｐ－Ｘ１－Ｌ－Ｇ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２が、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から各々選択される、請求項２２に記載の複合体結合性分子。

【請求項24】

Ｘ１がＨであり、かつＸ２がＴである、請求項２３に記載の複合体結合性分子。

【請求項25】

前記ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項26】

前記ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の複合体結合性分子。

【請求項27】

前記ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項28】

前記抗ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の複合体結合性分子。

【請求項29】

前記抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域が第１の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、請求項２２～２８のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項30】

前記抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、請求項２２～２９のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項31】

前記抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域が第２の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、請求項２２～３０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項32】

第１の免疫グロブリン重鎖定常領域および／または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化に不利に働きかつ／または第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を促進する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項２２～３１のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項33】

前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの１つがＴ３６６Ｗ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの他のものがＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換（ＥＵナンバリング）を含み、その結果、前記第１および前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のヘテロ二量体化が、前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化と比較して助長される、請求項３２に記載の複合体結合性分子。

【請求項34】

前記ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号２０１に記載される重鎖免疫グロブリン配列および配列番号２１３に記載される軽鎖免疫グロブリン配列を含み、かつ前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号２０２に記載される重鎖免疫グロブリン配列および配列番号２１３に記載される軽鎖免疫グロブリン配列を含む、請求項２２～３３のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項35】

ＣＤ１９に結合する重鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＡ８４ＳおよびＡ１０８Ｌ改変を含む、請求項２２～３４のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項36】

ＣＤ３８に結合する軽鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＷ３２Ｈ改変を含む、請求項２２～３５のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項37】

単一の二特異性結合性分子が前記ＣＤ３８抗原結合性成分および前記ＣＤ１９抗原結合性成分から形成されている、請求項２２～３６のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項38】

ＣＤ１９に結合するＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するＣＤ３８結合性成分を含む複合体結合性分子であって、前記ＣＤ１９結合性成分が、ＣＤ１９に結合するｓｃＦＶを含み、かつ前記ＣＤ３８結合性成分が、ＣＤ３８に結合する軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含むＦａｂ領域を含む、複合体結合性分子。

【請求項39】

ＣＤ１９に結合する前記ｓｃＦｖが第１の免疫グロブリン重鎖定常領域に連結されている、請求項３８に記載の複合体結合性分子。

【請求項40】

前記ＣＤ３８結合性成分の前記重鎖可変領域が第２の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、請求項３８または３９に記載の複合体結合性分子。

【請求項41】

前記ＣＤ３８結合性成分の前記軽鎖可変領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、請求項３８～４０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項42】

前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項43】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項３８～４２のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項44】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列Ｐ－Ｘ１－Ｌ－Ｇ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２が、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から各々選択される、請求項４３に記載の複合体結合性分子。

【請求項45】

Ｘ１がＨであり、かつＸ２がＴである、請求項４４に記載の複合体結合性分子。

【請求項46】

前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１または７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項47】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３または５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項48】

前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１または７に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列、および配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、請求項３８～４７のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項49】

前記ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３または５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列、および配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、請求項３８～４８のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項50】

前記第１の免疫グロブリン重鎖定常領域および／または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域が、前記抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化に不利に働きかつ／または前記第１の重鎖定常領域および前記第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を促進する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項３８～４９のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項51】

前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの１つがＴ３６６Ｗ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの他のものがＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換（ＥＵナンバリング）を含み、その結果、前記第１および前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のヘテロ二量体化が、前記第１または前記第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化を上回って助長される、請求項５０に記載の複合体結合性分子。

【請求項52】

前記ＣＤ１９結合性成分が、配列番号のいずれか１つに記載される配列を含み、かつ前記ＣＤ３８結合性成分が、それぞれ配列番号２１３および２０２に記載される軽鎖および重鎖を含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項53】

ＣＤ１９に結合する重鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＡ８４ＳおよびＡ１０８Ｌ改変を含む、請求項３８～５２のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項54】

ＣＤ３８に結合する軽鎖可変領域が、ＫａｂａｔナンバリングにしたがってＷ３２Ｈ改変を含む、請求項３８～５３のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項55】

単一の二特異性結合性分子がＣＤ３８抗原結合性成分およびＣＤ１９抗原結合性成分から形成されている、請求項３８～５４のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項56】

二特異性抗体またはその二重抗原結合性断片である、請求項１～５５のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項57】

ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基を含むＦｃ領域を含む、請求項１～５５のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項58】

前記ネイティブな炭水化物または前記非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基が、ＥＵナンバリングにしたがってアスパラギン２９７に対応する、請求項５７に記載の複合体結合性分子。

【請求項59】

ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞に結合する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項60】

Ｆｃ領域を含むＣＤ１９またはＣＤ３８単一特異性抗体と比較して低減された赤血球凝集を呈する、請求項１～５９のいずれか１項に記載の複合体結合性分子。

【請求項61】

請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸または複数の核酸。

【請求項62】

前記複合体結合性分子をコードする前記ポリヌクレオチド配列が真核性調節配列に機能的に連結されている、請求項６１に記載の核酸。

【請求項63】

請求項６１または６２に記載の核酸を含む細胞。

【請求項64】

原核細胞を含む、請求項６３に記載の細胞。

【請求項65】

大腸菌細胞である、請求項６４に記載の原核細胞。

【請求項66】

真核細胞を含む、請求項６３に記載の細胞。

【請求項67】

チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはヒトＰＥＲ．Ｃ６細胞である、請求項６６に記載の真核細胞。

【請求項68】

請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子および医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む、組成物。

【請求項69】

静脈内投与のために製剤化されている、請求項６８に記載の組成物。

【請求項70】

皮下投与のために製剤化されている、請求項６８に記載の組成物。

【請求項71】

個体において腫瘍またはがんを処置する方法における使用のための、請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項72】

前記がんまたは前記腫瘍が血液がんである、請求項７１に記載の使用。

【請求項73】

前記血液がんがＢ細胞悪性腫瘍である、請求項７２に記載の使用。

【請求項74】

前記Ｂ細胞悪性腫瘍がＢ細胞急性リンパ球性白血病である、請求項７３に記載の使用。

【請求項75】

前記Ｂ細胞悪性腫瘍が、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である、請求項７４に記載の使用。

【請求項76】

前記血液がんが血漿悪性腫瘍である、請求項７２に記載の使用。

【請求項77】

前記血漿悪性腫瘍が多発性骨髄腫である、請求項７６に記載の使用。

【請求項78】

前記血液がんがＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する、請求項７２～７７のいずれか１項に記載の使用。

【請求項79】

前記がんまたは前記腫瘍が固形組織がんである、請求項７１に記載の使用。

【請求項80】

前記固形組織がんが、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、脳のがん、または頭頸部がんを含む、請求項７９に記載の使用。

【請求項81】

前記乳がんがトリプルネガティブ乳がんであり、前記肺がんが非小細胞肺がんであり、前記頭頸部がんが頭頸部扁平細胞がんであり、前記腎臓がんが腎細胞癌であり、前記脳のがんが多形膠芽腫であり、または前記皮膚がんが黒色腫である、請求項８０に記載の使用。

【請求項82】

個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある腫瘍浸潤性Ｂ細胞および／または免疫抑制性Ｂ細胞の機能を低減させかつ／またはモジュレートする方法における使用のための、請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項83】

個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞の機能を低減させかつ／またはモジュレートする方法における使用のための、請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項84】

免疫抑制性Ｂ細胞の前記機能が、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの放出を含む、請求項８２または８３に記載の使用。

【請求項85】

免疫抑制性Ｂ細胞による免疫抑制を低減させる方法における使用のための、請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項86】

前記腫瘍浸潤性Ｂ細胞または前記免疫抑制性Ｂ細胞が、ＣＤ１９陽性Ｂ細胞、ＣＤ３８^＋陽性Ｂ細胞、ＣＤ１９、ＣＤ３８二重陽性Ｂ細胞、またはこれらの組合せを含む、請求項８２～８５のいずれか１項に記載の使用。

【請求項87】

がんまたは腫瘍に罹患した個体を処置する方法であって、前記がんまたは前記腫瘍に罹患した前記個体に請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物を投与し、それにより前記がんまたは腫瘍を処置することを含む、方法。

【請求項88】

前記がんまたは腫瘍が血液がんである、請求項８７に記載の方法。

【請求項89】

前記血液がんがＢ細胞悪性腫瘍である、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

前記Ｂ細胞悪性腫瘍がＢ細胞急性リンパ球性白血病である、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記Ｂ細胞悪性腫瘍が、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である、請求項８９に記載の方法。

【請求項92】

前記血液がんが血漿悪性腫瘍である、方法８８の使用。

【請求項93】

前記血漿悪性腫瘍が多発性骨髄腫である、方法９２の使用。

【請求項94】

前記血液がんがＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する、請求項８８～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

前記がんまたは腫瘍が固形組織がんである、請求項８７に記載の方法。

【請求項96】

前記固形組織がんが、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記乳がんがトリプルネガティブ乳がんであり、前記肺がんが非小細胞肺がんであり、前記頭頸部がんが頭頸部扁平細胞がんであり、前記腎臓がんが腎細胞癌であり、前記脳のがんが多形膠芽腫であり、または前記皮膚がんが黒色腫である、請求項９６に記載の方法。

【請求項98】

腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させる方法であって、前記腫瘍または前記がんに罹患した前記個体に請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物を投与し、それにより前記腫瘍中の腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法。

【請求項99】

腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、前記腫瘍または前記がんに罹患した前記個体に請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物を投与し、それにより前記腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法。

【請求項100】

腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞の機能を阻害する方法であって、前記腫瘍または前記がんに罹患した前記個体に請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物を投与し、それにより前記腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞による免疫抑制を低減させることを含む、方法。

【請求項101】

腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞の機能を阻害する方法であって、前記免疫抑制性Ｂ細胞を請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子または請求項６８～７０のいずれか１項に記載の組成物と接触させ、それにより前記腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞による免疫抑制を低減させることを含む、方法。

【請求項102】

免疫抑制性Ｂ細胞の前記機能が、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの放出を含む、請求項１００または１０１に記載の方法。

【請求項103】

前記腫瘍浸潤性Ｂ細胞または前記免疫抑制性Ｂ細胞が、ＣＤ１９陽性Ｂ細胞、ＣＤ３８^＋陽性Ｂ細胞、ＣＤ１９、ＣＤ３８二重陽性Ｂ細胞、またはこれらの組合せを含む、請求項９８～１０２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項104】

請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子を製造する方法であって、請求項６６または６７に記載の細胞を細胞培養培地中で前記複合体結合性分子の発現、アセンブリー、および前記細胞培養培地への分泌を可能とするために十分な条件下でインキュベートすることを含む、方法。

【請求項105】

前記細胞培養培地から前記分子を単離および精製することを含む、請求項１０４に記載の方法。

【請求項106】

個体のためのがん処置を調製する方法であって、請求項１～６０のいずれか１項に記載の複合体結合性分子を医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と混合することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０２０年２月２６日に出願された米国特許仮出願第６２／９８１，９９０号、２０２０年３月１６日に出願された米国特許仮出願第６２／９９０，３３０号、および２０２０年１０月２１日に出願された米国特許仮出願第６３／０９４，８３８号の利益を主張し、これらの出願は参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

抗体治療剤は様々な疾患を処置するために成功裏に使用されてきたが、それらの適用は、がんなどの複雑な疾患における臨床的有効性に関して限定されたものであり得る。標的結合親和性および価数を変更するための抗体ベースの治療剤の操作は、増加された有効性の達成および処置アウトカムの向上に向けた潜在的な経路を提供する。二特異性または多価抗体は、そのため、複雑な疾患の多因子的な性質に結び付けられた課題を解決するための潜在的なアプローチを与える。２つの異なる抗原分子または同じ抗原の異なるエピトープに結合することにより、二特異性抗体はより大きな機能性を与え、多数の疾患の処置のための標的化剤として多様な応用を与える。

【発明の概要】

【0003】

がん生物学と免疫系との動的な関係性は、臨床アウトカムと関連付けられる要因である。免疫応答は、がん発症の間の腫瘍微環境の調節において意義深い役割を果たす。Ｔ細胞およびＢ細胞などの免疫細胞は、そのため、がんの進行または転移のモジュレーターおよびエフェクターとして作用する。顕著なことに、免疫抑制細胞は抗腫瘍免疫応答において重要な役割を果たし、それにおいて、免疫抑制は、腫瘍成長および浸潤と一般に関連付けられ、負のアウトカムと相関する。Ｂ細胞は免疫応答を正にモジュレートすることが公知であるが、免疫抑制性Ｂ細胞の集団は、抗腫瘍免疫応答を抑制して腫瘍成長を促すように機能する。

【0004】

本明細書において提供されるのは、二特異性または多価標的化分子を用いて免疫抑制性Ｂ細胞集団を標的化するある特定の結合性分子である。免疫抑制性Ｂ細胞集団の標的化は、抗腫瘍免疫応答を有効にモジュレートして、（例えば上皮がん細胞集団の選択的な枯渇とは対照的に）処置アウトカムを向上させるがんにおける治療的介入のための経路を提示する。本明細書において提供される結合性分子は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、および／またはＣＤ２０）ならびに免疫抑制性Ｂ細胞の表面マーカー（例えば、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、および／または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））に結合する二特異性抗体を含むことができる。ある特定の特有の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ１９およびＣＤ３８に結合し、そのため特異的な免疫抑制性Ｂ細胞集団に対する選択性を有する。

【0005】

本明細書において提供および記載されるように、ＣＤ１９およびＣＤ３８に結合する二特異性抗体は、ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する細胞（例えば免疫抑制性Ｂ細胞集団）の選択的な結合において利点を提供する。さらには、ＣＤ１９およびＣＤ３８に結合する、本明細書に開示される二特異性抗体は、特に単一特異性ＣＤ１９またはＣＤ３８抗体と比較した場合に、溶血も赤血球凝集も促進しないという点において利点を実証する。そのため、単一特異性ＣＤ１９またはＣＤ３８抗体（例えば、ＳＡＲＣＬＩＳＡ（登録商標）（イサツキシマブ－ｉｒｆｃ））で見られる重度の副作用、例えば貧血が克服される。ＣＤ１９およびＣＤ３８に結合する二特異性抗体はまた、特に単一特異性対照と比較した場合に、ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する細胞の有利な標的細胞アポトーシスを有効に促進するという点において利点を実証する。さらには、ＣＤ１９およびＣＤ３８に結合する二特異性抗体は、特異的な免疫抑制性Ｂ細胞集団をより有効に標的化して、より大きな有効性および他のＢ細胞標的化モノクローナル抗体（例えば、リツキシマブ）で見られる副作用、例えばリンパ球減少症が潜在的により低いことに繋がるという点において、ＣＤ３８およびＣＤ１９を独立して標的化する２つの独立したモノクローナル抗体の単なる使用を上回る利点をさらに提供する。

【0006】

本明細書に記載されるのは、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含む複合体結合性分子であって、第１の標的がＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的が免疫抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含み、第１の標的および第２の標的が同一でない、複合体結合性分子である。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分はポリペプチドを含む。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分はポリペプチドからなる。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分はポリペプチドを含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分はポリペプチドからなる。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。

【0007】

一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５を含む。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、免疫抑制性Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ）を含む。一部の実施形態において、免疫抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。一部の実施形態において、免疫抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0008】

一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（Ｖ_ＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（Ｖ_ＨＨ）を含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（Ｖ_ＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（Ｖ_ＨＨ）を含む。

【0009】

一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。一部の実施形態において、複合体結合性分子は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖は、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、免疫グロブリン重鎖は、配列番号３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、免疫グロブリン重鎖は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、複合体結合性分子は共通軽鎖二特異性ＩｇＧである。

【0010】

一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。一部の実施形態において、複合体結合性分子は二特異性抗体またはその二重抗原結合性断片である。

【0011】

一部の実施形態において、二特異性抗体は、以下のフォーマット：共通軽鎖二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、およびＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧのうちの１つから選択される。一部の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。一部の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧである。一部の実施形態において、二特異性抗体はｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。一部の実施形態において、複合体結合性分子は、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基は、ＥＵナンバリングにしたがってアスパラギン２９７に対応する。

【0012】

一部の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0013】

一部の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１および配列番号２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0014】

一部の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１および配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。

【0015】

一部の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0016】

一部の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号３および配列番号４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号３および配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。

【0017】

一部の実施形態において、複合体結合性分子は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞に結合する。

【0018】

開示されるのは、複合体結合性分子をコードする核酸を含む細胞である。一部の実施形態において、複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列は真核性調節配列に機能的に連結されている。一部の実施形態において、細胞は原核細胞を含む。一部の実施形態において、原核細胞は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）細胞である。一部の実施形態において、細胞は真核細胞を含む。一部の実施形態において、真核細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはヒトＰＥＲ．Ｃ６細胞である。

【0019】

開示されるのは、複合体結合性分子および医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む組成物である。一部の実施形態において、組成物は静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、組成物は皮下投与のために製剤化される。

【0020】

提供されるのは、個体において腫瘍またはがんを処置する方法における使用のための複合体結合性分子である。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0021】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、脳のがん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんであり、肺がんは非小細胞肺がんであり、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんであり、腎臓がんは腎細胞癌であり、脳のがんは多形膠芽腫であり、または皮膚がんは黒色腫である。

【0022】

提供されるのは、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、もしくはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞または腫瘍部位から遠位にある個体の抗腫瘍免疫応答に影響する免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法における使用のための複合体結合性分子である。提供されるのは、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法における使用のための複合体結合性分子である。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞はＣＤ１９＋ ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。さらに提供されるのは、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、もしくはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞および／または腫瘍部位から遠位にある個体の抗腫瘍免疫応答に影響する免疫抑制性Ｂ細胞の機能を低減させるか、または阻害する方法における使用のための複合体結合性分子である。一部の実施形態において、免疫抑制性Ｂ細胞の機能は、抗炎症性または免疫抑制性サイトカイン、例えばＩＬ－１０、ＩＬ ３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの放出を含む。

【0023】

開示されるのは、がんまたは腫瘍に罹患した個体を処置する方法であって、がんまたは腫瘍に罹患した個体に複合体結合性分子を投与し、それによりがんまたは腫瘍を処置することを含む、方法である。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0024】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんであり、肺がんは非小細胞肺がんであり、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんであり、腎臓がんは腎細胞癌であり、脳のがんは多形膠芽腫であり、または皮膚がんは黒色腫である。

【0025】

開示されるのは、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍に対する抗腫瘍免疫応答に影響する免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に複合体結合性分子を投与し、それにより、抗腫瘍免疫応答に影響する免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。さらに開示されるのは、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に複合体結合性分子を投与し、それにより、腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。

【0026】

さらに開示されるのは、個体のためのがん処置を調製する方法であって、複合体結合性分子を医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と混合することを含む、方法である。

【0027】

開示されるのはまた、複合体結合性分子を製造する方法であって、複合体結合性分子をコードする核酸配列を含む発現ベクターを含む細胞を細胞培養培地中で複合体結合性分子の発現、アセンブリーおよび細胞培養培地への分泌を可能とするために十分な条件下でインキュベートすることを含む、方法である。一部の実施形態において、方法は、細胞培養培地から分子を単離および精製することを含む。そのような単離および精製は、細胞培養培地または１つもしくは複数の精製ステップに供された細胞培養培地を、プロテイン、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＡ／Ｇ、またはこれらの任意の組合せを含む樹脂またはカラムと接触させること、および任意選択的に樹脂またはカラムを洗浄して、１つまたは複数の非複合体結合性分子を細胞培養培地または１つもしくは複数の精製ステップに供された細胞培養培地から除去することを含むステップを伴うことができる。

【0028】

本明細書において提供されるのは、ＣＤ１９に結合するように構成されたＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するように構成されたＣＤ３８結合性成分を含む複合体結合性分子であって、ＣＤ１９結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含み、かつＣＤ３８結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含む、複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９および／またはＣＤ３８結合性成分が、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９またはＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９およびＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0029】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含み、かつ／またはＣＤ１９結合性成分が、配列番号１に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ／または免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは６に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0030】

一部の実施形態において、提供されるのは、共通軽鎖二特異性ＩｇＧである、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0031】

一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３または５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン重鎖が、配列番号１または７に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分またはＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分またはＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0032】

さらに提供されるのは、複合体結合性分子が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ３８に結合するＣＤ３８抗原結合性成分および抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ１９に結合するＣＤ１９抗原結合性成分を含み、ＣＤ３８抗原結合性成分が、ａ）配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｂ）配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｃ）配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｄ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｅ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／またはｆ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、複合体結合性分子である。

【0033】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９抗原結合性成分が、ｇ）配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｈ）配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｉ）配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｊ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｋ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／またはｌ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0034】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0035】

一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域が第１の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域が第２の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、第１の免疫グロブリン重鎖定常領域および／または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化に不利に働きかつ／または第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を促進する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの１つがＴ３６６Ｗ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの他のものがＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換（ＥＵナンバリング）を含み、その結果、第１および第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のヘテロ二量体化が、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化と比較して助長される、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、単一の二特異性結合性分子がＣＤ３８抗原結合性成分およびＣＤ１９抗原結合性成分から形成されている、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0036】

参照による組込み
本明細書において言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることを特におよび個々に指し示された場合と同じ程度まで参照により本明細書に組み込まれる。

【0037】

本発明の新規の特色は、添付の請求項において精密に記載される。本発明の特色および利点のより良好な理解は、本発明の原理が利用される実例的な実施形態を記載する以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することにより得られる。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】共通軽鎖二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図2】Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図3】Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図4】Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図5】Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図6】Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図7】ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図8】Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図9】Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図10】Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図11】ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧの構造を図示する図である。

【図12A】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図12B】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図12C】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図12D】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図12E】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図12F】ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合データを示す図である。図１２ＡはＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を示す。図１２Ｂおよび図１２ＣはＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の結合プロファイルを示す。図１２Ｄおよび図１２ＥはＣＤ１９およびＣＤ３８対照の結合を示す。図１２ＦはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しない細胞の結合プロファイルを示す。

【図13A】Ｄａｕｄｉ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図13B】Ｄａｕｄｉ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図14A】ＲＥＨ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図14B】ＲＥＨ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図15A】ＣＤ１９をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図15B】ＣＤ１９をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図16A】ＣＤ３８をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図16B】ＣＤ３８をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図17A】非トランスフェクトＣＨＯ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図17B】非トランスフェクトＣＨＯ細胞に対する抗体の結合データを示す図である。

【図18A】抗体試験品についてのＤａｕｄｉ細胞における直接的なアポトーシスについてのデータを示す図である。

【図18B】抗体試験品についてのＤａｕｄｉ細胞における直接的なアポトーシスについてのデータを示す図である。

【図19A】抗体試験品についてのＤａｕｄｉ細胞における架橋誘導性アポトーシスについてのデータを示す図である。

【図19B】抗体試験品についてのＤａｕｄｉ細胞における架橋誘導性アポトーシスについてのデータを示す図である。

【図20A】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図20B】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図20C】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図21A】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図21B】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図21C】抗体試験品にわたる３人のドナーについてのＡＤＣＣデータを示す図である。

【図22A】試験品にわたるＣＤＣプロファイルを示す図である。

【図22B】試験品にわたるＣＤＣプロファイルを示す図である。

【図23】抗体試験品にわたるＡＤＣＰデータを示す図である。

【図24】抗体試験品にわたるＲＢＣ結合データを示す図である。

【図25A】抗体試験品についての赤血球凝集プロファイルを示す図である。

【図25B】抗体試験品についての赤血球凝集プロファイルを示す図である。

【図26】抗体試験品にわたる溶血データを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0039】

抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫抑制性Ｂ細胞集団は、１つより多くの細胞表面バイオマーカーの存在により一般に定義され得る。したがって、免疫抑制性Ｂ細胞を有効におよび特異的に標的化する治療剤は、腫瘍中にあるか、それに隣接するか、もしくはその周囲において、または腫瘍環境内で免疫抑制を予防するためおよび／または免疫抑制を除去するために使用され得る。本明細書において提供されるのは、免疫抑制性Ｂ細胞を標的化する複合体結合性分子である。さらには、提供されるのは、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含む複合体結合性分子であって、第１の標的がＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的が抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含む、複合体結合性分子である。本明細書に開示されるのは、抗腫瘍応答の負のモジュレーションまたは免疫抑制と関連付けられるＢ細胞集団に特異的に結合する多価抗体である。免疫抑制性Ｂ細胞は、細胞表面バイオマーカーＣＤ１９およびＣＤ３８を含み得るか、またはそれらにより定義され得る。本明細書において提供される二特異性抗体は、ＣＤ１９およびＣＤ３８の両方を標的化して免疫抑制性Ｂ細胞の機能を阻害することができる。ある特定の事例において、免疫抑制性Ｂ細胞の機能は、ＩＬ １０、ＩＬ ３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの放出を含む。ＣＤ１９およびＣＤ３８を標的化する多価または二特異性抗体はまた、免疫抑制性Ｂ細胞および／または免疫機能障害と関連付けられる腫瘍形成性状態および／またはがんを処置するために使用され得る。

【0040】

「免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）」もしくは「免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）」または「負の免疫モジュレーション」という用語は、本明細書において使用される場合、免疫系機能の低減または抑制を指し、すなわち、免疫抑制は、免疫系機能が低減されているか、または存在しない状態を一般に表す。ある特定の事例において、免疫抑制は、腫瘍に対する、または腫瘍微環境内、その周囲、もしくはそれに隣接する免疫系機能が低減されているか、または存在しない状態を一般に表す。全体的な免疫応答が抑制されてもよく、局所的もしくは特異的な領域内の免疫応答が低減されてもよく、または免疫学的に活性のリンパ球の特定の集団が選択的に影響されていてもよい。抗原特異的な免疫抑制は、抗原特異的な細胞の特定の集団の欠失もしくは抑制の結果、または抗原特異的な抑制細胞による免疫応答の増強された調節の結果であってもよい。免疫抑制性Ｂ細胞への言及は、免疫応答に対する負のモジュレーションを発揮するＢ細胞またはＢ細胞集団を指し、そのような集団と関連付けられる特異的な表面マーカー、例えばＣＤ３８により同定され得る。ある特定の事例において、免疫抑制は、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの存在または放出により同定され得る。ある特定の事例において、免疫抑制は、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－ベータ、またはこれらの組合せの存在またはＢ細胞による放出により同定され得る。

【0041】

本明細書において使用される場合、「がん」という用語は、調節されない細胞増殖により典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指すまたは記載することができる。がんはまた、血液腫瘍および／または固形腫瘍を含むことができるが、これらに限定されない。がんは、膀胱、血液、骨、脳、乳房、子宮頸部、胸部、結腸、子宮内膜、食道、目、頭部、腎臓、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、口、頸部、卵巣、膵臓、前立腺、直腸、腎臓、皮膚、胃、精巣、咽頭および子宮が挙げられるがこれらに限定されない、血液、骨、臓器、皮膚組織および血管系の疾患を指すことができる。特有のがんとしては、白血病（急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病、成熟Ｂ細胞腫瘍（小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えばワルデンシュトレーム巨大球状腫瘍（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ ｇｉａｎｔ ｂａｌｌ））、タンパク質血症または無痛性リンパ腫）、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞白血病、形質細胞腫、インプラント周囲免疫グロブリン沈着、重鎖病、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫）、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、胃腸腫瘍（例えば、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ））、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫／白血病、びまん性Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、およびバーキットのリンパ腫（バーキットリンパ腫）、成熟Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ）腫瘍（前リンパ球性白血病、Ｔ細胞大リンパ球性白血病（Ｔ－ｃｅｌｌ ｌａｒｇｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、浸潤性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症（セザリー症候群）、原発性皮膚変性性大細胞リンパ腫（ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｋｉｎ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢Ｔ細胞リンパ腫および変性性大細胞リンパ腫（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｌａｒｇｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキンリンパ腫（結節硬化型、混合細胞型、リンパ球リッチ型、リンパ球枯渇または非低減型、結節性リンパ球型）、骨髄腫（多発性骨髄腫、不活性型骨髄腫（ｉｎｅｒｔ ｍｙｅｌｏｍａ）、くすぶり型骨髄腫））、慢性骨髄増殖性疾患、脊髄形成異常症／骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、免疫不全と関連付けられるリンパ増殖性障害、組織球性および樹状細胞性腫瘍、白血球増加症、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、悪性巨細胞腫瘍、骨髄腫骨疾患、骨肉腫、乳がん（ホルモン依存性、非ホルモン依存性）、婦人科がん（小児子宮頸部、子宮内膜、卵管、妊娠性栄養膜疾患、卵巣、腹膜、子宮、膣および外陰部）、基底細胞癌（ＢＣＣ）、扁平細胞癌（ＳＣＣ）、悪性黒色腫、隆起性（ｐｒｏｔｕｂｅｒｏｕｓ）皮膚線維肉腫、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、星細胞腫、有毛細胞性星細胞腫、胚性毛成長神経上皮新形成（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｈａｉｒ ｇｒｏｗｔｈ ｎｅｕｒｏｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、乏突起膠腫、上衣腫、多形膠芽腫、混合神経膠腫、乏突起膠細胞・星細胞腫（ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ）、髄芽腫、網膜芽腫、神経芽腫、胚性組織腫瘍、奇形腫、悪性中皮腫（腹膜中皮腫、心膜中皮腫、胸膜中皮腫）、胃－腸－膵臓または胃腸膵臓神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍、膵臓内分泌腫瘍（ＰＥＴ））、結腸直腸腺癌、結腸直腸がん（ｋｎｏｔ Ｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ）、浸潤性神経内分泌腫瘍、平滑筋肉腫、粘液性腺癌、印環細胞腺癌、肝細胞癌、肝胆道肝臓がん（ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、肝臓芽細胞腫、血管腫、肝臓腺腫、限局性結節性過形成（結節性再生性過形成、過誤腫）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（扁平細胞肺がん、腺癌、大細胞肺がん）、小細胞肺がん、甲状腺がん、前立腺がん（ホルモン難治性、非アンドロゲン依存性（ｎｏｎ－ａｎｄｒｏｇｅｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓｅｘ）、アンドロゲン依存性、ホルモン非感受性）、腎細胞癌および軟組織肉腫（線維肉腫、悪性繊維性組織球腫、皮膚線維肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍／神経線維肉腫、骨外性骨肉腫）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0042】

「ＣＤ１９」または「分化クラスター１９」（Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２、およびＣＶＩＤ３としても公知）という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＣＤ１９によりコードされるＢ細胞系列表面バイオマーカーまたは膜貫通タンパク質を指す。ＣＤ１９は、下流のシグナル伝達経路の活性化のためおよび抗原に対するＢ細胞応答のトリガーとなるための閾値を減少させる、Ｂリンパ球上のＢ細胞抗原受容体複合体（ＢＣＲ）のための補助受容体として機能することができる。構造的に、ＣＤ１９アミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１１７８０９８．２→ＮＰ＿００１１７１５６９．１またはＮＭ＿００１７７０．６→ＮＰ＿００１７６１．３の、アミノ酸配列と、少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００個のアミノ酸の配列長さにかけて、またはポリペプチドの全長にかけて、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。構造的に、ＣＤ１９核酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＧ＿００７２７５．１またはＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ ９３０の、核酸配列と、少なくとも３００、５００、７５０、１０００、１２５０、１５００個の核酸の配列長さにかけて、またはポリヌクレオチドの全長にかけて、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。配列アライメントは、当該技術分野において公知の任意のアライメントアルゴリズム、例えば、デフォルトの設定に設定されたＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮを使用して行われ得る。

【0043】

「ＣＤ３８」または「分化クラスター３８」（ＡＤＰＲＣ１としても公知）という用語は、ヒトにおいて遺伝子ＣＤ３８によりコードされるＢ細胞表面バイオマーカーまたは膜貫通タンパク質を指す。ＣＤ３８は、細胞の活性化および増殖に繋がるＢ細胞シグナル伝達において機能することができる。構造的に、ＣＤ３８アミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１７７５．４→ＮＰ＿００１７６６．２の、アミノ酸配列と、少なくとも５０、１００、１５０、２００、２５０個のアミノ酸の配列長さにかけて、またはポリペプチドの全長にかけて、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。構造的に、ＣＤ３８核酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００４．１２またはＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ ９５２の、核酸配列と、少なくとも３００、５００、７５０個の核酸の配列長さにかけて、またはポリヌクレオチドの全長にかけて、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。配列アライメントは、当該技術分野において公知の任意のアライメントアルゴリズム、例えば、デフォルトの設定に設定されたＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮを使用して行われ得る。

【0044】

本明細書における「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、多価または二特異性抗体およびモノクローナル抗体、例えばインタクトな抗体およびその機能的な（抗原結合性）抗体断片、例えば断片、抗原結合性（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、単鎖抗体断片、例えば単鎖可変断片（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）、および単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を含む。該用語は、遺伝子操作されたおよび／または他に改変された形態の免疫グロブリン、例えばイントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多特異性抗体、例えば、二特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖを包含する。他に記載されなければ、「抗体」という用語は、その機能的抗体断片を包含すると理解されるべきである。該用語はまた、インタクトなまたは全長抗体、例えば任意のクラスまたはサブクラス、例えばＩｇＧおよびそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ならびにＩｇＤの抗体を包含する。抗体はヒトＩｇＧ１定常領域を含むことができる。抗体はヒトＩｇＧ４定常領域を含むことができる。

【0045】

提供される抗体の中には、多特異性または多価抗体（例えば、二特異性抗体および多反応性抗体）ならびにその抗体断片がある。抗体としては、抗体コンジュゲートおよび抗体を含む分子、例えばキメラ分子が挙げられる。そのため、抗体としては、全長およびネイティブな抗体の他に、その結合特異性を保持するその断片および部分、例えばその任意の特異的結合性部分、例えば任意の数の免疫グロブリンクラスおよび／またはアイソタイプ（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭ）を有するもの、ならびに生物学的に関連する（抗原結合性）断片またはその特異的結合性部分、以下に限定されないが例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ（単鎖または関連する実体）が挙げられるがこれらに限定されない。モノクローナル抗体は、一般に、実質的に均質な抗体の組成物内にあるものであり、そのため、モノクローナル抗体組成物内に含まれる任意の個々の抗体は、微量で存在し得る起こり得る天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体はヒトＩｇＧ１定常領域またはヒトＩｇＧ４定常領域を含むことができる。

【0046】

「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義である「相補性決定領域」、および「ＣＤＲ」という用語は当該技術分野において公知であり、抗原特異性および／または結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の連続しない配列を指す。一般に、各々の重鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）および各々の軽鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）がある。「フレームワーク領域」および「ＦＲ」は当該技術分野において公知であり、重鎖および軽鎖の可変領域の非ＣＤＲ部分を指す。一般に、各々の全長重鎖可変領域中に４つのＦＲ（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、およびＦＲ－Ｈ４）、ならびに各々の全長軽鎖可変領域中に４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、およびＦＲ－Ｌ４）がある。所与のＣＤＲまたはＦＲの精密なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔら、（１９９１）、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、第５版 Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７） ＪＭＢ ２７３、９２７～９４８頁（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２：７３２～７４５頁（１９９６）、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ： Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ」、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２、７３２～７４５頁」（「コンタクト」ナンバリングスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰら、「ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｖ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ」、Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ２００３ Ｊａｎ；２７（１）：５５～７７頁（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）；Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ＡおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ、「Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ： ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ」、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２００１ Ｊｕｎ ８；３０９（３）：６５７～７０頁（「Ａｈｏ」ナンバリングスキーム）；およびＷｈｉｔｅｌｅｇｇ ＮＲおよびＲｅｅｓ ＡＲ、「ＷＡＭ： ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｆｏｒ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ＷＥＢ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ２０００ Ｄｅｃ；１３（１２）：８１９～２４頁（「ＡｂＭ」ナンバリングスキーム）に記載されるものを含む、多数の周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定され得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、Ａｈｏ、ＡｂＭ、またはこれらの組合せから選択される方法により定義され得る。

【0047】

所与のＣＤＲまたはＦＲの境界は、同定のために使用されるスキームに依存して変動し得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造アライメントに基づくが、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造情報に基づく。ＫａｂａｔスキームおよびＣｈｏｔｈｉａスキームの両方のナンバリングは、最も共通する抗体領域配列長さに基づき、挿入文字、例えば、「３０ａ」により挿入が適用され、一部の抗体において欠失が現れる。２つのスキームは、ある特定の挿入および欠失（「インデル」）を異なる位置に置いて、差次的なナンバリングを結果としてもたらす。コンタクトスキームは複合体結晶構造の分析に基づき、多くの点でＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに類似している。

【0048】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗原への抗体の結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブな抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶ_ＨおよびＶ_Ｌ）は一般に類似した構造を有し、各々のドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つのＣＤＲを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔら、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第６版、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、９１頁（２００７）を参照）。単一のＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。さらには、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からのＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインを使用してそれぞれ相補的なＶ_ＬまたはＶ_Ｈドメインのライブラリーをスクリーニングすることにより単離されてもよい（例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０：８８０～８８７頁（１９９３）； Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８頁（１９９１）を参照）。

【0049】

提供される抗体の中には、抗体断片がある。「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指すことができる。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖまたはｓＦｖ）、および抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、抗体は、可変重鎖領域および／または可変軽鎖領域を含む単鎖抗体断片、例えばｓｃＦｖである。抗体断片は、インタクトな抗体のタンパク質消化分解の他に、組換え宿主細胞による製造が挙げられるがこれらに限定されない、様々な技術により製造され得る。一部の実施形態において、抗体は、組換えにより製造された断片、例えば天然に存在しない構成を含む断片、例えば合成リンカー、例えば、ポリペプチドリンカーにより接合された２つもしくはより多くの抗体領域もしくは鎖を有するもの、および／または天然に存在するインタクトな抗体の酵素消化によっては製造されないものである。

【0050】

本明細書において、分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片は、文法的等価物を含む「二特異性」または「二重特異性」として参照され得る。二特異性分子は、少なくとも２つの構造的に別個の標的に特異的に結合する能力を有する。特異的結合は、別個の非同一のアミノ酸配列が挙げられるがそれに限定されない、分子レベルで構造的に別個の２つの別個の結合性部分、または高い親和性（例えば、約１ｘ１０^－６未満のＫＤ）で２つの構造的に別個の標的に特異的に結合することができる単一の結合性部分の結果であってもよい。「多特異性」として参照される分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片は、少なくとも３つの構造的に別個の標的に特異的に結合する能力を有する分子を指す。文法的等価物を含む「二特異性抗体」は、標的に特異的に結合することができる抗体の少なくとも１つの断片、例えば、可変領域、重鎖または軽鎖、または抗体分子からの１つもしくは複数の相補性決定領域を保存する二特異性分子を指す。文法的等価物を含む「多特異性抗体」は、標的と特異的に結合することができる抗体の少なくとも１つの断片、例えば、可変領域、重鎖または軽鎖、または抗体分子からの相補性決定領域を保存する多特異性分子を指す。

【0051】

本明細書において「リンカー」はまた、「リンカー配列」、「スペーサー」、「テザリング配列」またはこれらの文法的等価物として参照される。本明細書において参照される「リンカー」は、それら自体が標的結合性、触媒活性を有するか、または天然に発現され、別々のポリペプチドとして集合させられる２つの別個の分子を接続する、例えば、２つの別個の結合性部分または重鎖／軽鎖ペア。多数の戦略が、分子を共有結合的に連結させるために使用され得る。これらとしては、タンパク質またはタンパク質ドメインのＮ末端とＣ末端との間のポリペプチド連結、ジスルフィド結合を介する連結、および化学架橋試薬を介する連結が挙げられるがこれらに限定されない。この実施形態の１つの態様において、リンカーは、組換え技術またはペプチド合成により生成されるペプチド結合である。リンカーペプチドは、以下のアミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒを主に含んでもよい。リンカーペプチドは、２つの分子が互いに対して相対的に正確なコンホメーションをとり、その結果、所望される活性を保持するように２つの分子を連結するために十分な長さを有するべきである。１つの実施形態において、リンカーは、約１～５０個のアミノ酸の長さまたは約１～３０個のアミノ酸の長さである。１つの実施形態において、１～２０個のアミノ酸の長さのリンカーが使用されてもよい。有用なリンカーとしては、グリシン－セリンポリマー、例えば（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および他の柔軟性リンカーが挙げられる。抗体断片または単鎖可変断片を連結するための例示的なリンカーは、ＡＡＥＰＫＳＳ、ＡＡＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ、ＧＧＧＧ、またはＧＧＧＧＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰを含むことができる。代替的に、様々な非タンパク質性ポリマー、以下に限定されないが例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーは、リンカーとしての用途を有し得るリンカーとしての用途を有し得る。

【0052】

本開示の「断片ベース」の二特異性抗体または「単鎖可変断片」もしくは「ｓｃＦｖ」を含む二特異性抗体は、２つの結合性部分および２つの結合性部分を接続するリンカーを含む単鎖抗体、またはその断片を指すことができる。リンカーは、ポリペプチドリンカーまたはいずれかの標的化部分の結合を阻害しないような好適な柔軟性の他のリンカーであってもよい。断片ベースの二特異性抗体フォーマットとしては、タンデムＶ_ＨＨ抗体、タンデムｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、二重親和性再標的化抗体（ＤＡＲＴ）が挙げられる。そのような断片ベースの抗体は、所与の標的に対して特異性を有する追加の結合性部分、例えば、Ａ_２：Ｂ_１、Ａ_１：Ｂ_２もしくはＡ_２：Ｂ_２を含むように、または薬物動態を向上させ、もしくはＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、もしくはＣＤＣを促進するためのＦｃ領域の断片を用いてさらにマニピュレートされ得る。

【0053】

「結合性部分」は、記載される標的または抗原またはエピトープに対する特異的結合を媒介する分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片の部分を指す。例として、抗体の結合性部分は、重鎖／軽鎖可変領域ペアまたは１つもしくは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでもよい。

【0054】

本明細書において参照される「標的」は、分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片の結合性部分と関与する分子の部分を指す。標的は、アミノ酸配列および／または炭水化物、脂質または他の化学的実体を含むことができる。「抗原」は、適応免疫分子、例えば抗体もしくは抗体断片、Ｂ細胞受容体、またはＴ細胞受容体により結合され得る部分を含む標的である。

【0055】

二特異性または多特異性分子の「価数」は、記載される分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片が結合することができる標的の数を指す。例えば、一価である分子は、特異的な標的の１つの分子に結合することができ、二価分子は２つの分子に結合することができ、四価分子は４つの標的に結合することができる。例えば、二特異性の二価の分子は、２つの標的にかつ２つの構造的に異なる標的に結合することができる分子である。例えば、二特異性の二価の分子は、標的Ａおよび標的Ｂを含む溶液と接触させた場合、Ａ_２、Ｂ_２またはＡ：Ｂに結合し得る。

【0056】

「ヒト化」抗体は、すべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲアミノ酸残基が非ヒトＣＤＲに由来し、かつすべてのまたは実質的にすべてのＦＲアミノ酸残基がヒトＦＲに由来する抗体である。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも部分を含むことができる。「ヒト化型」の非ヒト抗体は、典型的には、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながらヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化を受けた非ヒト抗体のバリアントを指す。一部の実施形態において、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基の由来となる抗体）からの対応する残基で置換される。

【0057】

提供される抗体の中には、ヒト抗体がある。「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞、またはヒト抗体ライブラリーを含むヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コーディング配列を利用する非ヒト供給源により製造される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。該用語は、非ヒト抗原結合性領域、例えばすべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲが非ヒトであるものを含むヒト化型の非ヒト抗体を除外する。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製されてもよい。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン座位を置き換えるか、または染色体外に存在するか、または動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン座位の全体または部分を含有する。そのようなトランスジェニック動物において、内因性免疫グロブリン座位は一般に不活性化されている。ヒト抗体はまた、ヒトレパートリーに由来する抗体コーディング配列を含有する、ファージディスプレイおよび無細胞ライブラリーを含む、ヒト抗体ライブラリーに由来してもよい。

【0058】

「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」は、本明細書において使用される場合、ＦｃγＲを発現する非特異的な細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合した抗体を認識し、その後に標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合と相関することができ、ＦｃγＲＩＩＩａに対する結合の増加はＡＤＣＣ活性における増加に繋がる。「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシスは、本明細書において使用される場合、ＦｃγＲを発現する非特異的な細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合した抗体を認識し、その後に標的細胞のファゴサイトーシスを引き起こす細胞媒介性反応を指すことができる。

【0059】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小の長さに限定されない。提供される抗体および抗体鎖ならびに他のペプチド、例えば、リンカーおよび結合性ペプチドを含む、ポリペプチドは、天然および／または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含むことができる。該用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、およびリン酸化などを含む。一部の態様において、ポリペプチドは、タンパク質が所望される活性を維持する限り、ネイティブまたは天然配列に対して改変を含有することができる。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発を通じたものなど、故意的なものであることができるか、またはタンパク質を産生する宿主の突然変異もしくはＰＣＲ増幅に起因するエラーを通じたものなど、偶発的なものであることができる。

【0060】

参照ポリペプチド配列に対する配列同一性パーセント（％）は、配列をアライメントし、必要な場合にはギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成した後の、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージである。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、例えば、公開されているコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、公知の様々な方法で達成され得る。比較されている配列の全長にかけて最大のアライメントを達成するために必要とされるアルゴリズムを含む、配列をアライメントするための適切なパラメーターが決定可能である。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ， Ｉｎｃ．により作成され、ソースコードは、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９にユーザードキュメンテーションと共に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ， Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆ．から公開されており、またはソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。すべての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ－２プログラムにより設定され、変更しない。ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較のために用いられる状況において、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとのまたはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとのまたはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含む所与のアミノ酸配列Ａとしても表現され得る）は以下のように算出される：比率Ｘ／Ｙを１００倍する（ここで、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によりＡおよびＢのそのプログラムのアライメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされるアミノ酸残基の数であり、ＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％はＡに対するＢのアミノ酸配列同一性％に等しくないことが認められる。他に特に記載されなければ、本明細書において使用されるすべてのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られる。

【0061】

本明細書において提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが想定および想起され得る。バリアントは、典型的には、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入において本明細書に特に開示されるポリペプチドから異なる。そのようなバリアントは天然に存在するものであり得るか、または、例えば、本発明の上記ポリペプチド配列の１つもしくは複数を改変し、本明細書に記載されるようにおよび／もしくは多数の公知の技術のいずれかを使用してポリペプチドの１つもしくは複数の生物学的活性を評価することにより、合成的に生成され得る。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を向上させることが望ましいことがあり、抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成により調製され得る。そのような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、および／または挿入および／または置換を含む。最終構築物が所望される特徴、例えば、抗原結合性を有する限り、欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行って最終構築物に到達することができる。１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供され得る。置換による突然変異誘発のための関心対象の部位としては、ＣＤＲおよびＦＲが挙げられる。アミノ酸置換を関心対象の抗体に導入し、生成物を所望される活性、例えば、抗原結合性の保持／向上、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの向上についてスクリーニングすることができる。

【0062】

本開示はまた、１つまたは複数の異種分子にコンジュゲートされた抗体を指す「イムノコンジュゲート」または「抗体コンジュゲート」または「抗体－薬物コンジュゲート」を提供する。例えば、イムノコンジュゲートは、１つまたは複数の細胞傷害剤、例えば化学療法剤もしくは薬物、増殖阻害剤、タンパク質ドメイン、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性の毒素、もしくはその断片）、または放射活性同位体にコンジュゲートされた抗体を含むことができる。一部の実施形態において、イムノコンジュゲートは、本明細書に開示される複合体結合性分子、またはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含むことができる。

【0063】

本明細書に記載される抗体は核酸によりコードされ得る。核酸は、２つ以上のヌクレオチド塩基を含むポリヌクレオチドの一種である。ある特定の実施形態において、核酸は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを細胞に移入するために使用され得るベクターの成分である。本明細書において使用される場合、「ベクター」という用語は、それに連結された別の核酸を輸送する能力を有する核酸分子を指す。ベクターの１つの種類は、ゲノム組込み型ベクター、または「組込み型ベクター」であり、これは宿主細胞の染色体ＤＮＡに組み込まれ得る。ベクターの別の種類は、「エピソーム」ベクター、例えば、染色体外複製の能力を有する核酸である。機能的に連結された遺伝子の発現を指令する能力を有するベクターは本明細書において「発現ベクター」として参照される。好適なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、およびウイルスベクターなどを含む。発現ベクターにおいて、転写の制御における使用のためのプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルなどの調節エレメントは、哺乳動物、微小生物、ウイルスまたは昆虫遺伝子に由来し得る。複製起点により通常は付与される、宿主中で複製する能力、および形質転換体の認識を促すための選択遺伝子が追加的に組み込まれてもよい。ウイルス、例えばレンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなどに由来するベクターが用いられてもよい。プラスミドベクターは、染色体位置への組込みのために線状化され得る。ベクターは、ゲノム中の定義された位置または制限されたセットの部位への部位特異的組込み（例えば、ＡｔｔＰ－ＡｔｔＢ組換え）を指令する配列を含むことができる。追加的に、ベクターは、転位可能なエレメントに由来する配列を含むことができる。

【0064】

本明細書において使用される場合、参照配列と比べてアミノ酸配列または核酸配列を記載するために本明細書において使用される場合の「相同的」、「相同性」または「相同性パーセント」という用語は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７： ２２６４～２２６８頁、１９９０；Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：５８７３～５８７７頁、１９９３において改変）により記載される式を使用して決定され得る。そのような式は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３～４１０頁、１９９０）のｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）プログラムに組み込まれている。配列の相同性パーセントは、本出願の出願日時点のＢＬＡＳＴの最新バージョンを使用して決定され得る。

【0065】

本明細書に記載される抗体をコードする核酸は、好適な細胞を感染、トランスフェクト、形質転換して、または他の仕方で好適な細胞を該核酸についてトランスジェニックとして、商業的または治療的使用のための抗体の製造を可能にするために使用され得る。大スケール細胞培養からの抗体の製造のための標準的な細胞株および方法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｌｉら、「Ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．」、Ｍａｂｓ． ２０１０ Ｓｅｐ－Ｏｃｔ； ２（５）： ４６６～４７７頁を参照。ある特定の実施形態において、細胞は真核細胞である。ある特定の実施形態において、真核細胞は哺乳動物細胞である。ある特定の実施形態において、哺乳動物細胞は、抗体を製造するために有用な細胞株であり、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞である。ある特定の実施形態において、抗体をコードする核酸は、抗体を製造するために有用な細胞のゲノム座位に組み込まれる。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、抗体を製造する方法であって、抗体をコードする核酸を含む細胞を、前記抗体の製造および分泌を可能とするために十分なｉｎ ｖｉｔｒｏの状態下で培養することを含む、方法である。

【0066】

本明細書において使用される場合、「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、記載される組成物および方法がその処置のために有用である少なくとも１つの疾患を有すると診断されたか、それに罹患していることが疑われるか、またはそれを発症するリスクがある個体を指す。ある特定の実施形態において、個体は哺乳動物である。ある特定の実施形態において、哺乳動物は、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマ、アルパカ、またはヤクである。ある特定の実施形態において、個体はヒトである。

【0067】

本明細書において使用される場合、特有の数を修飾するために使用される「約」という用語は、その数プラスまたはマイナスその数の１０％を指す。範囲を修飾する「約」という用語は、その最小値のマイナス１０％からその最大値のプラス１０％までに及ぶ範囲を指す。

【0068】

本明細書において使用される場合、「処置」または「処置する」という用語は、レシピエントにおいて有益なまたは所望される結果を得るために使用される医薬的または他の介入レジメンに関して使用される。有益なまたは所望される結果としては、治療的な利益および／または予防的な利益が挙げられるがこれらに限定されない。治療的な利益は、症状の、または処置されている基礎となる障害の根絶または寛解を指すことができる。また、治療的な利益は、対象が基礎となる障害に依然として罹患している可能性があるにもかかわらず、改善が対象において観察されるような、基礎となる障害と関連付けられる生理学的な症状の１つまたは複数の根絶または寛解と共に達成され得る。予防効果は、疾患もしくは状態の出現の遅延、予防、もしくは排除、疾患もしくは状態の症状の開始の遅延もしくは排除、疾患もしくは状態の進行の緩慢化、停止、もしくは逆転、またはこれらの任意の組合せを含む。予防的な利益のために、特定の疾患を発症するリスクがある対象、または疾患の生理学的な症状の１つもしくは複数を報告する対象は、この疾患の診断が為されていなかったとしても、処置を受けることができる。処置のための潜在的な個体の所与の集団のすべてが処置に応答するか、または等しく応答するわけではないことを当業者は認識する。そのような個体は処置されたと考えられる。

【0069】

本明細書において使用されるセクションの見出しは文書編成上の目的のために過ぎず、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0070】

二特異性分子
本明細書において提供されるのは、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含む二特異性または多価または複合体結合性分子であって、第１の標的がＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的が抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含む、二特異性または多価または複合体結合性分子である。免疫抑制性Ｂ細胞またはＢ細胞集団は、Ｂ細胞系列表面バイオマーカーおよび抑制性Ｂ細胞表面バイオマーカーを含むことができる。Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５を含むことができる。免疫抑制性Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ）を含むことができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。ある特定の実施形態において、複合体結合性分子はＣＤ３８およびＣＤ１９に結合する。

【0071】

多価または二特異性または複合体結合性分子は、少なくとも２つの構造的に別個の標的に特異的に結合する能力を有する。特異的結合は、別個の非同一のアミノ酸配列が挙げられるがこれに限定されない、分子レベルで構造的に別個の２つの別個の結合性部分、または２つの構造的に別個の標的に特異的に結合することができる単一の結合性部分の結果であってもよい。「多特異性」または「多価」または「二特異性」として参照される分子、ペプチド、ポリペプチド、抗体、または抗体断片は、少なくとも２つの構造的に別個の標的に特異的に結合する能力を有する分子を指すことができる。一部の実施形態において、複合体結合性分子の第１または第２の結合性成分はポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の結合性成分はポリペプチドからなる。一部の実施形態において、複合体結合性分子の第１および第２の結合性成分はポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分はポリペプチドからなる。ある特定の実施形態において、第１または第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。

【0072】

二特異性分子は、標的と特異的に結合することができる抗体の少なくとも１つの断片、例えば、可変領域、重鎖または軽鎖、または抗体分子からの１つもしくは複数の相補性決定領域を保存する二特異性抗体であることができる。一部の実施形態において、本明細書に記載される複合体結合性分子は、二特異性抗体および／またはその二重抗原結合性断片である。二特異性抗体は、２つの構造的に別個の標的または抗原に結合する能力を有する。一部の実施形態において、二特異性抗体は、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含み、第１の標的はＢ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）を含み、かつ第２の標的は抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を含む。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0073】

免疫抑制性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞集団は、細胞表面バイオマーカーＣＤ１９およびＣＤ３８を含むことができる。本明細書にさらに開示されるのは、ＣＤ１９およびＣＤ３８を標的化する二特異性抗体である。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ１領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号２５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ２領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、または配列番号３５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。

【0074】

一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号２を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４５、または配列番号４５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ１領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、または配列番号５５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ２領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、または配列番号６５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。

【0075】

一部の実施形態において、二特異性抗体は第１の結合性成分を含み、第１の結合性成分は、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0076】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0077】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ１９の第１の結合性成分は、配列番号１２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３２に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５２に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６２に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0078】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５５に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６５に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0079】

一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、イネビリズマブ、タファシタマブ、タプリツモマブ、オベキセリマブ、ブリナツモマブ、コルツキシマブ、デニンツズマブ、またはロンカスツキシマブ、ＭＯＲ２０８、ＭＥＤＩ－５５１、ＸｍＡｂ ５８７１、ＭＤＸ－１３４２、またはＡＦＭ１１に対応するか、または由来する可変重鎖および軽鎖またはＣＤＲを含む。

【0080】

一部の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号３を含む可変重鎖（ＶＨ）を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７５、または配列番号７５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ１領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、または配列番号８５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ２領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、または配列番号９５のいずれか１つを含むＶＨ ＣＤＲ３領域を含む。

【0081】

一部の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号４を含む可変軽鎖（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、または配列番号１０５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ１領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、または配列番号１１５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ２領域を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、または配列番号１２５のいずれか１つを含むＶＬ ＣＤＲ３領域を含む。

【0082】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0083】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８２に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９２に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１２に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２２に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0084】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９５に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１５に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２５に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0085】

一部の実施形態（例えば、先行する任意の実施形態）において、ＣＤ３８結合性成分のＣＤＲ－Ｈ２はアミノ酸残基Ｐ（Ｘ１）ＬＧ（Ｘ２）Ａを含み、Ｘ１およびＸ２はＣＤ３８への結合を維持しながらアミノ酸置換を許容する。ある特定の実施形態において、Ｘ１およびＸ２は、ＣＤＲＨ２アミノ酸配列の疎水性を低減させるアミノ酸から選択される。ある特定の実施形態において、疎水性を低減させるアミノ酸は、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥを含む。ある特定の実施形態において、Ｘ１はＨであり、かつＸ２はＴである。

【0086】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。

【0087】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号３と同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号２と同一のアミノ酸配列を含む。

【0088】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号３、２１５、または２１８～２２３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号４または２２３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号１、２０１、または２１６～２１７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、Ａ８４およびＡ１０８において置換を含むＶＨアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、置換はＡ８４ＳおよびＡ１０８Ｌを含む。

【0089】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号３、２１５、または２１８～２２３と同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号４または２２３と同一のアミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分はＶＨアミノ酸配列およびＶＬアミノ酸配列を含み、ＶＨアミノ酸配列は、配列番号１、２０１、２１６～２１７と同一のアミノ酸配列を含み、かつＶＬは、配列番号２と同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分は、Ａ８４およびＡ１０８において置換を含むＶＨアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、置換はＡ８４ＳおよびＡ１０８Ｌを含む。

【0090】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分は、配列番号１１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0091】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８２に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９２に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１２に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２２に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分は、配列番号１２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３２に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５２に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６２に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0092】

一部の実施形態において、二特異物（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）がＦａｂまたは二特異性フォーマットのために軽鎖定常領域を要求する他の構造を含む場合、ＶＬは、配列番号２１０および／または２１１のいずれか１つに対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、二特異物がＦａｂまたは二特異性フォーマットのために軽鎖定常領域を要求する他の構造を含む場合、ＶＬは、配列番号２１０および／または２１１のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む。

【0093】

一部の実施形態において、二特異性抗体はＣＤ３８結合性成分およびＣＤ１９結合性成分を含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９５に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１５に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２５に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分は、配列番号１５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５に記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５５に記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６５に記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。

【0094】

一部の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分は、ダラツムマブまたはイサツキシマブに対応するか、または由来する可変重鎖および軽鎖またはＣＤＲを含む。

【0095】

置換、挿入、または欠失が１つまたは複数のＣＤＲ内で起こってもよく、該置換、挿入、または欠失は、抗原に対する抗体の結合を実質的に低減させない。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的置換がＣＤＲ中で行われてもよい。そのような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット」の外側であってもよい。バリアントＶ_ＨおよびＶ_Ｌ配列の一部の実施形態において、各々のＣＤＲは改変されていない。アミノ酸配列の挿入および欠失としては、１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲内のアミノおよび／またはカルボキシル末端融合の他に、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入および欠失が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの抗体のＮまたはＣ末端の融合が挙げられる。抗体分子の配列内挿入バリアントの例としては、軽鎖中の３つのアミノ酸の挿入が挙げられる。末端欠失の例としては、軽鎖の末端における７つまたはそれより少ないアミノ酸の欠失を有する抗体が挙げられる。

【0096】

変更（例えば、置換）は、例えば、抗体の親和性を向上させるために、ＣＤＲ中で為されてもよい。そのような変更は、体細胞の成熟の間に高い突然変異率を有するコドンをコードするＣＤＲにおいて為されてもよく（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２０７：１７９～１９６頁（２００８）を参照）、結果としてもたらされるバリアントは結合親和性について試験され得る。親和性成熟（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、ＣＤＲの無作為化、またはオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発を使用する）は、抗体の親和性を向上させるために使用され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１～３７頁（２００１）を参照）。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に同定されてもよい（例えば、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１～１０８５頁（１９８９）を参照）。ＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３は特に、多くの場合に標的化される。代替的に、または追加的に、抗体と抗原との間の接触点を同定するために抗原－抗体複合体の結晶構造がある。そのような接触残基および隣接する残基は、置換用の候補として標的化または排除されてもよい。バリアントは、所望される特性を含有するかどうかを決定するためにスクリーニングされてもよい。

【0097】

抗体は、それらのグリコシル化を増加または減少させるように変更され得る（例えば、１つまたは複数のグリコシル化部位が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによる）。抗体のＦｃ領域に取り付けられた炭水化物は変更されてもよい。哺乳動物細胞からのネイティブな抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ_２９７にＮ連結により取り付けられた分枝状の二分岐オリゴ糖を含む（例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６～３２頁（１９９７）を参照）。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の基部中のＧｌｃＮＡｃに取り付けられたマンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、フコースであることができる。抗体中のオリゴ糖の修飾は、例えば、ある特定の向上された特性を有する抗体バリアントを作出するために為され得る。抗体グリコシル化バリアントは、向上されたＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ機能を有し得る。一部の実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）取り付けられたフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に取り付けられたすべての糖鎖構造の合計に対する、Ａｓｎ_２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することにより決定される（例えば、国際公開第０８／０７７５４６号パンフレットを参照）。Ａｓｎ_２９７は、Ｆｃ領域中の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指す（例えば、Ｅｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９６９ Ｍａｙ； ６３（１）：７８～８５頁を参照）。しかしながら、Ａｓｎ_２９７はまた、抗体中の軽微な配列バリエーションに起因して、２９７位の約±３アミノ酸だけ上流または下流、すなわち、２９４位～３００位に位置してもよい。そのようなフコシル化バリアントは、向上されたＡＤＣＣ機能を有することができる（例えば、Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３６：１２３９～１２４９頁（２００４）；およびＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４頁（２００４）を参照）。細胞株、例えば、ノックアウト細胞株およびそれらの使用方法は、脱フコシル化抗体、例えば、タンパク質フコシル化を欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞およびアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）ノックアウトＣＨＯ細胞を製造するために使用され得る（例えば、Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２４９：５３３～５４５頁（１９８６）； Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４頁（２００４）； Ｋａｎｄａ， Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０～６８８頁（２００６）を参照）。他の抗体グリコシル化バリアントもまた含まれる（例えば、米国特許第６，６０２，６８４号明細書を参照）。

【0098】

一部の実施形態において、本明細書において提供される複合体結合性分子は、抗体の標的に対して約１０μＭ、１μＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭまたはそれ未満（例えば、１０^－８Ｍまたはそれ未満、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。抗体の標的は、ＣＤ１９標的、ＣＤ３８標的、またはＣＤ１９およびＣＤ３８の両方を含む標的であることができる。Ｋ_Ｄは、任意の好適なアッセイにより測定され得る。ある特定の実施形態において、ＫＤは、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され得る（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００またはＯｃｔｅｔを使用する）。

【0099】

一部の実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸改変が、本明細書において提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域バリアントが生成されてもよい。Ｆｃ領域は、本明細書において、定常領域の少なくとも部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域である。Ｆｃ領域としては、ネイティブ配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域が挙げられる。Ｆｃ領域バリアントは、１つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。

【0100】

一部の事例において、免疫グロブリンのＦｃ領域は、多くの重要な抗体機能（例えばエフェクター機能）、例えば、異なる機序によるが、標的細胞の殺傷を結果としてもたらす、抗原依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、および抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）のために重要である。よって、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、意図される使用のために抗体の生物学的活性に基づいて選択された、異なるＦｃ領域を含む定常ドメインと組み合わせられた本発明の可変ドメインを含む。ある特定の事例において、ヒトＩｇＧは、例えば、４つのサブクラス、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に分類可能であり、これらの各々は、Ｆｃγ受容体（活性化受容体ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＣ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６）および阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢ）のうちの１つまたは複数に対する結合ならびに補体の第１の成分（Ｃ１ｑ）についての独特のプロファイルを有するＦｃ領域を含む。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３はすべてのＦｃγ受容体に結合し、ＩｇＧ２はＦｃγＲＩＩＡ_Ｈ１３１、およびより低い親和性でＦｃγＲＩＩＡ_Ｒ１３１、ＦｃγＲＩＩＩＡ_Ｖ１５８に結合し、ＩｇＧ４はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＣ、およびＦｃγＲＩＩＩＡ_Ｖ１５８に結合し、阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、すべての他のＦｃγ受容体よりも低いＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３に対する親和性を有する。ＦｃγＲＩはＩｇＧ２に結合せず、ＦｃγＲＩＩＩＢはＩｇＧ２にもＩｇＧ４にも結合しないことを研究は示している。同上。一般に、ＡＤＣＣ活性に関して、ヒトＩｇＧ１≧ＩｇＧ３＞＞ＩｇＧ４≧ＩｇＧ２。

【0101】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ１９または抗ＣＤ３８可変領域は、１つまたは複数の活性化Ｆｃ受容体（ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４、ＦｃγＲＩＩａ／ＣＤ３２またはＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６）に結合するＦｃに連結されており、それにより、ＡＤＣＣを刺激し、一部の事例において、標的枯渇を引き起こす。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ１９または抗ＣＤ３８可変領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３ Ｆｃに連結されており、すなわち、抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプの抗体である。一部の事例において、Ｆｃ領域中の改変は、親Ｆｃと比べて（ａ）増加した抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、（ｂ）増加した補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）、（ｃ）Ｃ１ｑに対する増加した親和性および／または（ｄ）Ｆｃ受容体に対する増加した親和性を有するＦｃバリアントを生成する。一部の実施形態において、Ｆｃ領域バリアントは、Ｆｃ領域中に少なくとも１つのアミノ酸改変を含む。アミノ酸改変の組合せもまた有用である。例えば、バリアントＦｃ領域は、例えば本明細書において同定される特有のＦｃ領域位置の、２、３、４、５個などの置換を含んでもよい。

【0102】

一部の実施形態において、ＡＤＣＣ活性は、Ｆｃ領域を改変することにより増加され得る。ＡＤＣＣ活性に関して、一部の事例において、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ＩｇＧ４およびＩｇＧ２と比較した場合に増加したＡＤＣＣ活性化を示すため、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ではなくＩｇＧ１またはＩｇＧ３定常ドメインが、ＡＤＣＣが所望される場合の抗体における使用のために選択される。一部の実施形態において、ＩｇＧ３は、ＦｃγＲＩＩＩＡ発現ＮＫ細胞、単球、マクロファージの活性化のために選択される。ある特定の事例において、異なるＩｇＧアイソタイプはまた差次的なＣＤＣ活性を呈し、ＩｇＧ３およびＩｇＧ１は、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４と比較してより大きいＣＤＣ活性化を示す。代替的に、一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、以下の位置：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９（Ｋａｂａｔナンバリング）における１つまたは複数のアミノ酸を改変することにより抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）、補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｃ１ｑに対する親和性を増加させるため、および／またはＦｃγ受容体に対する親和性を増加させるために改変される。関心対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号明細書および同第５，８２１，３３７号明細書に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ方法が用いられてもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ）。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球、マクロファージ、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。

【0103】

抗体は、増加した半減期および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する向上された結合を有することができる（例えば、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号明細書を参照）。そのような抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合を向上させる１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含むことができ、ＥＵナンバリングシステムにしたがってＦｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４のうちの１つまたは複数における置換を有するＦｃ領域を含むことができる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号明細書を参照）。Ｆｃ領域バリアントの他の例もまた想定される（例えば、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８～４０頁（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号明細書および同第５，６２４，８２１号明細書、ならびに国際公開第９４／２９３５１号パンフレットを参照）。

【0104】

一部の実施形態において、抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作型抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作出することが望ましいことがある。一部の実施形態において、置換される残基は、抗体の接近可能な部位に存在する。反応性チオール基は、イムノコンジュゲートを作出するために、他の部分、例えば薬物部分またはリンカー薬物部分へのコンジュゲーションのための部位に配置され得る。一部の実施形態において、以下の残基のうちの任意の１つまたは複数がシステインで置換されてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。

【0105】

一部の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、公知および利用可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変されてもよい。抗体の誘導体化のために好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるがこれに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して生産における利点を有し得る。ポリマーは任意の分子量であってもよく、分枝状または非分枝状であってもよい。抗体に取り付けられるポリマーの数は変動可能であり、２つ以上のポリマーが取り付けられる場合、それらは同じまたは異なる分子であることができる。

【0106】

複合体結合性分子または二特異性抗体は、これらの分子と関連付けられる結合性部分に基づいて異なることができ、適用可能かつ本明細書において想定されるいくつかの異なるフォーマットもある。複合体結合性分子または二特異性抗体は、抗体断片、実質的にインタクトな抗体、またはこれらの組合せを含むことができる。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。

【0107】

本開示による二特異性抗体は、インタクトな抗体分子または実質的に完全にインタクトな抗体分子を含み、非対称的または対称的であってもよい。

【0108】

非対称的な二特異性抗体は、一般に、標的Ａに特異的な抗体からの重鎖／軽鎖（ＨＣ／ＬＣ）ペアおよび標的Ｂに特異的な抗体からのＨＣ／ＬＣペアを含み、ヘテロ二機能性抗体を作出している。これらのようなヘテロ二機能性抗体は、製造されている時の分子の非生産的な形成という問題に直面する。ＨＣ／ＬＣ－Ａ：ＨＣ／ＬＣ－Ｂは望ましいが、すべての可能な組合せから通常は熱力学的にまたは統計的に不都合である。この問題を回避するために複数のスキームが導入されている。一部の事例において、Ａに対する特異性を有する抗体からのＨＣ／ＬＣペアおよびＢに対する特異性を有する抗体からのＨＣ／ＬＣペアは、ＨＣ／ＬＣ－Ａ：ＨＣ／ＬＣ－Ｂを有する抗体の形成の確率を増加させるためにＦＣ領域に対する突然変異をさらに含む。これは、ＨＣ－ＡとＨＣ－Ｂとの間のヘテロ二量体の形成を促進する構造的特色の操作、例えばＨＣ－ＡのＦＣ領域への「ノブ」、およびＨＣ－Ｂへの「ホール」、またはその逆により達成され得る。ＨＣ－Ａ：ＨＣ－Ｂヘテロ二量体を促進するための別のスキームは、ＨＣ－ＢとＨＣ－Ａとの間の静電相互作用を助長する電荷ペアを含むようにＨＣ－ＡおよびＨＣ－ＢのＦＣ部分中のアミノ酸残基を操作することである。鎖会合の問題に対処するための別のスキームは、ＨＣ／ＬＣペアのうちの１つの可変領域を一本鎖結合性分子（例えば、Ｖ_ＨＨまたはｓｃＦｖ）で置き換えることである。その結果、分子の半分は古典的なＨＣ／ＬＣペアを含み、他方は、一本鎖結合性分子に融合または他に接続されたＨＣ定常領域を含む。さらなる改変が、適切なＨＣ／ＬＣペア形成を促進するために可能であり、これには、ＡまたはＢのいずれかのＨＣおよびＬＣに対して突然変異を操作して適切なＨＣ／ＬＣペアの形成を助長すること、ＨＣ／ＬＣペアの対応する定常領域の交換を活用するＣｒｏｓｓＭａｂ技術が含まれる。対称的な二特異性抗体は、ヘテロ二機能性分子の形成に依拠しないことにより鎖会合の問題を回避する。そのような例としては、異なる特異性のスタックされた可変領域を含む、二重可変ドメイン分子、古典的な抗体分子の重鎖のｃ末端に融合した異なる特異性のｓｃＦｖを含む、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ分子、ＩｇのＦｃ領域により接続された２つのｓｃＦｖを含む、（ｓｃＦＶ）_４－ＦＣ（Ｆｃは二量体化して、二特異性の四価分子を作出する）、ＤＡＲＴ－Ｆｃおよびｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅが特に挙げられる。

【0109】

複合体結合性分子または二特異性抗体の構造は、複合体結合性分子または二特異性抗体の機能性または結合特性を変更するように想起および設計され得る（例えば、「Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｐｅｌｉｎｅ．」、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ． ２０１９ Ａｕｇ；１８（８）：５８５～６０８頁を参照）（例えば、「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁を参照）。例えば、二特異性抗体は、以下のフォーマット：共通軽鎖二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ、およびＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧのうちの１つから選択され得る。

【0110】

共通軽鎖二特異性ＩｇＧ
共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体が本発明において使用され得る。図１は、共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は第１および第２のＩｇＧ重鎖を含む。各々の重鎖は、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含む。第１の重鎖は、ＶＨ １０２、ＣＨ１ １０４、ＣＨ２ １０６、およびＣＨ３ １０８を含む。第２の重鎖は、ＶＨ １１２、ＣＨ１ １１４、ＣＨ２ １１６、およびＣＨ３ １１８を含む。共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン１２０およびＣＬドメイン１２２を含む軽鎖を含む。一般に、第１の重鎖は、第１の特異性を有する抗体の重鎖に由来する配列を含み、第２の重鎖は、第２の特異性を有する抗体からの重鎖を含む。第１および第２の重鎖とペア形成する軽鎖は同一であり、いずれかの特異性、または別々の特異性を有する抗体の軽鎖に由来することができる。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合１３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合１３４および／または１３６）を介して別の重鎖に連結され得る。共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１および第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの第１の重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害、「ノブ」・イントゥ・「ホール」）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。例示的なノブ・イントゥ・ホール突然変異は、１つの重鎖中のＴ３６６Ｗ（ＥＵナンバリング）および第２の重鎖中のＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ（ＥＵナンバリング）を含むことができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、国際公開第２００９０８９００４号パンフレット、米国特許第８，６４２，７４５号明細書、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子１４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0111】

共通軽鎖二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、第１の重鎖は、Ｂ細胞系列表面マーカーに結合するように構成されており、かつ第２の重鎖は、抑制性Ｂ細胞表面マーカーに結合するように構成されている。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0112】

一部の実施形態において、第１の重鎖は、ＣＤ１９結合性成分を含むＶＨ配列を含み、かつ第２の重鎖は、ＣＤ３８結合性成分を含むＶＨ配列を含む。ある特定の実施形態において、重鎖ＣＤ１９結合性成分は、配列番号２０１、１、または配列番号２０１のＡ８４およびＡ１０８のうちの１つもしくは両方において突然変異を含むバリアントを含み、かつ重鎖ＣＤ３８結合性成分は、配列番号２０２、２１５、２１８～２２１を含む。ある特定の実施形態において、バリアントは突然変異Ａ８４ＳおよびＡ１０８Ｌを含む。一部の実施形態において、二特異性抗体は共通軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、共通軽鎖配列はＣＤ１９結合性成分（例えば配列番号２）を含む。ある特定の実施形態において、共通軽鎖配列はＣＤ３８結合性成分（例えば配列番号４または配列番号２２２）を含む。

【0113】

本明細書に記載されるＢＳ１は、ＣＤ１９に結合するように構成されたＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するように構成されたＣＤ３８結合性成分を有する共通軽鎖フォーマットを含み、ＣＤ１９結合性成分は抗体またはその抗原結合性断片を含み、かつＣＤ３８結合性成分は抗体またはその抗原結合性断片を含み、ＣＤ３８抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつＣＤ１９抗体または抗原結合性断片は、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、ＣＤ３８抗体または抗原結合性成分は、ａ）配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｂ）配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｃ）配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｄ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｅ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／または）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含み、かつＣＤ１９抗原結合性成分は、ｇ）配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｈ）配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｉ）配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｊ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｋ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／またはｌ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８抗原結合性成分は、配列Ｐ－Ｘ１－Ｌ－Ｇ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２は、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から各々選択される。ある特定の実施形態において、Ｘ１はＨであり、かつＸ２はＴである。一部の実施形態において、ＣＤ１９重鎖配列はＡ８４Ｓおよび／またはＡ１０８Ｌ置換を含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８軽鎖はＷ３２Ｈ置換を含む。

【0114】

Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体が本発明において使用され得る。図２は、Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は、第１の重鎖分子および単鎖可変断片を含む改変された第２のＩｇＧ重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨ ２０２、ＣＨ１ ２０４、ＣＨ２ ２０６、およびＣＨ３ ２０８を含む。改変された第２の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へ単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）２１０、ＣＨ２ ２１６、およびＣＨ３ ２１８を含む。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、可変軽鎖ドメインに対応する第１のドメイン２１２、またはその断片、可変重鎖に対応する第２のドメイン２１４、またはその断片、およびリンカーポリペプチド２１５を含むことができる。Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン２２０およびＣＬドメイン２２２を含む軽鎖を含む。第１の重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合２３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。第１の重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合２３４および／または２３６）を介して改変された第２の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１のおよび改変された第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの第１の重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子２４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0115】

Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５、例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0116】

Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖は、ＣＤ１９結合性成分を含むＶＨ配列を含み、かつ第２の重鎖は、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８単鎖可変断片を含む重鎖は配列番号２０５または配列番号２０６を含む。ある特定の実施形態において、ＶＬ配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。一部の実施形態において、第１の重鎖は、ＣＤ３８結合性成分を含むＶＨ配列を含み、かつ第２の重鎖は、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９単鎖可変断片を含む重鎖は、配列番号２０３または配列番号２０４または配列番号２１７を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0117】

Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖は、ＣＤ３８結合性成分を含むＶＨ配列を含み、かつ第２の重鎖は、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列を含む。ある特定の実施形態において、ＶＬ配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0118】

本明細書に記載されるＢＳ２は、ＣＤ１９に結合するように構成されたＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するように構成されたＣＤ３８結合性成分を含み、ＣＤ１９結合性成分は抗体またはその抗原結合性断片を含み、かつＣＤ３８結合性成分は抗体またはその抗原結合性断片を含み、ＣＤ３８抗原結合性成分は、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ３８に結合するＦａｂを含み、かつＣＤ１９抗原結合性成分は、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ１９に結合するｓｃＦｖを含み、ＣＤ３８結合性成分は、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分は、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８抗原結合性成分は、配列Ｐ－Ｘ１－Ｌ－Ｇ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２は、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、Ｘ１はＨであり、かつＸ２はＴである。一部の実施形態において、ＣＤ１９重鎖配列はＡ８４Ｓおよび／またはＡ１０８Ｌ置換を含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８軽鎖はＷ３２Ｈ置換を含む。

【0119】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図３は、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は、第１の重鎖分子および改変されたＩｇＧ重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン３０２、ＣＨ１ドメイン３０４、ＣＨ２ドメイン３０６、ＣＨ３ドメイン３０８、リンカー３１０、第２のＶＨドメイン３１２、および第２のＣＨ１ドメイン３１４を含む。改変された重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＣＨ２ドメイン３１６、およびＣＨ３ドメイン３１８を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン３２０およびＣＬドメイン３２２を含む第１の軽鎖を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン３２４およびＣＬドメイン３２６を含む第２の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合３３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。第１の重鎖はまた、共有結合（例えばジスルフィド結合３３２）を介して第１および第２の鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖および軽鎖は、第１の重鎖のＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインが第１の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。第１の重鎖および第２の軽鎖は、第１の重鎖の第２のＶＨドメインおよび第２のＣＨ１ドメインが第２の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。第１の重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合３３４および／または３３６）を介して改変された第２の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１のおよび改変された第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの第１の重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子３４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0120】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５、例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0121】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば３０２）およびＶＬドメイン（例えば３２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば３１２）およびＶＬドメイン（例えば３２４）はＣＤ３８結合性成分を含む。一部の実施形態において、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ重鎖は配列番号２０７を含み、かつＦｃ重鎖は配列番号２０８を含む。

【0122】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば３０２）およびＶＬドメイン（例えば３２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば３１２）およびＶＬドメイン（例えば３２４）はＣＤ１９結合性成分を含む。

【0123】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図４は、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は２つの第１の重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン４０２、ＣＨ１ドメイン４０４、ＣＨ２ドメイン４０６、ＣＨ３ドメイン４０８、リンカー４１０、および単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）４１２を含む。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、可変軽鎖ドメインに対応する第１のドメイン４１４、またはその断片、可変重鎖に対応する第２のドメイン４１６、またはその断片、および第２のリンカーポリペプチド４１５を含むことができる。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン４２０およびＣＬドメイン４２２を含む第１の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合４３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合４３４および／または４３６）を介して別の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子４４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0124】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５、例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0125】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば４０２）およびＶＬドメイン（例えば４２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば４１２）配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。

【0126】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば４０２）およびＶＬドメイン（例えば４２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば４１２）配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。一部の実施形態において、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ重鎖は配列番号２０９を含む。

【0127】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図５は、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は、第１の重鎖分子および第２のＩｇＧ重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン５０２、ＣＨ１ドメイン５０４、ＣＨ２ドメイン５０６、ＣＨ３ドメイン５０８、リンカー５１０、および単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）５１２を含む。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、可変軽鎖ドメインに対応する第１のドメイン５１４、またはその断片、可変重鎖に対応する第２のドメイン５１６、またはその断片、および第２のリンカーポリペプチド５１５を含むことができる。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン５２０およびＣＬドメイン５２２を含む第１の軽鎖を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン５２４およびＣＬドメイン５２６を含む第２の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合５３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合５３４および／または５３６）を介して別の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１のおよび改変された第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子５４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0128】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５、例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0129】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば５０２）およびＶＬドメイン（例えば５２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば５１２）配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。

【0130】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば５０２）およびＶＬドメイン（例えば５２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば５１２）配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0131】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図６は、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は、第１の重鎖分子および第２のＩｇＧ重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン６０２、ＣＨ１ドメイン６０４、ＣＨ２ドメイン６０６、ＣＨ３ドメイン６０８、リンカー６１０、第２のＶＨドメイン６１２、および第２のＣＨ１ドメイン６１４を含む。第２の重鎖は、第１の重鎖におけるように、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン６５２、ＣＨ１ドメイン６５４、ＣＨ２ドメイン６５６、およびＣＨ３ドメイン６５８を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン６２０およびＣＬドメイン６２２を含む第１の軽鎖を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン６２４およびＣＬドメイン６２６を含む第２の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合６３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。第１の重鎖および第１の軽鎖は、第１の重鎖のＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインが第１の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。第１の重鎖および第２の軽鎖は、第１の重鎖の第２のＶＨドメインおよび第２のＣＨ１ドメインが第２の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合６３４および／または６３６）を介して別の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１および第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの第１の重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子またはその追加の修飾を含むことができる。

【0132】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0133】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば６０２）およびＶＬドメイン（例えば６２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば６１２）およびＶＬドメイン（例えば６２４）はＣＤ３８結合性成分を含む。

【0134】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば６０２）およびＶＬドメイン（例えば６２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば６１２）およびＶＬドメイン（例えば６２４）はＣＤ１９結合性成分を含む。

【0135】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図７は、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は２つの第１の重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へ単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）７１２、リンカー７１０、ＶＨドメイン７０２、ＣＨ１ドメイン７０４、ＣＨ２ドメイン７０６、およびＣＨ３ドメイン７０８を含む。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、可変軽鎖ドメインに対応する第１のドメイン７１４、またはその断片、可変重鎖に対応する第２のドメイン７１６、またはその断片、および第２のリンカーポリペプチド７１５を含むことができる。ＳｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン７２０およびＣＬドメイン７２２を含む第１の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合７３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合７３４および／または７３６）を介して別の重鎖に連結され得る。ＳｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子７４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0136】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0137】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば７０２）およびＶＬドメイン（例えば７２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば７１２）配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。

【0138】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば７０２）およびＶＬドメイン（例えば７２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば７１２）配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0139】

Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図８は、Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は２つの重鎖分子を含む。重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へ追加のＶＨドメイン８１２、および追加のＣＨ１ドメイン８１４、リンカー８１０、ＶＨドメイン８０２、ＣＨ１ドメイン８０４、ＣＨ２ドメイン８０６、およびＣＨ３ドメイン８０８を含む。Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン８２０およびＣＬドメイン８２２を含む第１の軽鎖を含む。Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン８２４およびＣＬドメイン８２６を含む第２の軽鎖を含む。重鎖分子は、共有結合（例えばジスルフィド結合８３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖および第１の軽鎖は、重鎖のＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインが第１の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。重鎖および第２の軽鎖は、重鎖の追加のＶＨドメインおよび追加のＣＨ１ドメインが第２の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合８３４および／または８３６）を介して改変された第２の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子８４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0140】

Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0141】

Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１のＶＨドメイン（例えば８０２）およびＶＬドメイン（例えば８２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば８１２）およびＶＬドメイン（例えば８２４）はＣＤ３８結合性成分を含む。

【0142】

Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、ＶＨドメイン（例えば８０２）およびＶＬドメイン（例えば８２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば８１２）およびＶＬドメイン（例えば８２４）はＣＤ１９結合性成分を含む。

【0143】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図９は、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を図示する。構造は２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む。重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン９０２、ＣＨ１ドメイン９０４、ＣＨ２ドメイン９０６、ＣＨ３ドメイン９０８、リンカー９１０、第２のＶＨドメイン９１２、および第２のＣＨ１ドメイン９１４を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン９２０およびＣＬドメイン９２２を含む第１の軽鎖を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン９２４およびＣＬドメイン９２６を含む第２の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合９３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖および第１の軽鎖は、重鎖のＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインが第１の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。重鎖および第２の軽鎖は、重鎖の第２のＶＨドメインおよび第２のＣＨ１ドメインが第２の軽鎖のＶＬドメインおよびＣＬドメインとペア形成する方式で連結され得る。重鎖はまた、共有結合（例えばジスルフィド結合９３４および９３６）を介して別の重鎖分子に共有結合的に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子９４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0144】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0145】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１のＶＨドメイン（例えば９０２）およびＶＬドメイン（例えば９２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば９１２）およびＶＬドメイン（例えば９２４）はＣＤ３８結合性成分を含む。

【0146】

Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、ＶＨドメイン（例えば９０２）およびＶＬドメイン（例えば９２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、第２のＶＨドメイン（例えば９１２）およびＶＬドメイン（例えば９２４）はＣＤ１９結合性成分を含む。

【0147】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図１０は、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を実証する。構造は第１の重鎖分子および第２のＩｇＧ重鎖分子を含む。第１の重鎖は、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン１００２、ＣＨ１ドメイン１００４、ＣＨ２ドメイン１００６、ＣＨ３ドメイン１００８、リンカー１０１０および単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）１０１２を含む。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、可変軽鎖ドメインに対応する第１のドメイン１０１４、またはその断片、可変重鎖に対応する第２のドメイン１０１６、またはその断片、および第２のリンカーポリペプチド１０１５を含むことができる。第２の重鎖は、第１の重鎖におけるように、それぞれＮ末端からＣ末端へＶＨドメイン１００２、ＣＨ１ドメイン１００４、ＣＨ２ドメイン１００４、およびＣＨ３ドメイン１００８を含む。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、ＶＬドメイン１０２０およびＣＬドメイン１０２２を含む第１の軽鎖を含む。重鎖は、共有結合（例えばジスルフィド結合１０３０）を介して軽鎖分子に共有結合的に連結され得る。重鎖は、１つまたは複数の共有結合（例えばジスルフィド結合１０３４および／または１０３６）を介して別の重鎖に連結され得る。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１および第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、２つの第１の重鎖分子または２つの第２の重鎖分子の連結を物理的（例えば立体的妨害）または生化学的（例えば静電相互作用）に予防することができる。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子１０４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0148】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0149】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば１００２）およびＶＬドメイン（例えば１０２０）はＣＤ１９結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば１０１２）配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ３８結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。

【0150】

Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメイン（例えば１００２）およびＶＬドメイン（例えば１０２０）はＣＤ３８結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（例えば１０１２）配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0151】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ
ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する操作された二特異性抗体が本発明において使用され得る。図１１は、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体を実証する。構造は、ｓｃＦｖ、ＶＨ、およびＦｃ領域を含む第１の重鎖分子およびＦｃを含む第２の重鎖分子を含む。ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１および第２の重鎖の連結を促進しかつ／または第１の重鎖の別の第１の重鎖へのもしくは第２の重鎖の別の第２の重鎖への連結を予防するＣＨ３ドメイン内の突然変異をさらに含む第１および第２の重鎖分子を含むことができる。突然変異は、第１の重鎖分子の第２の重鎖分子への会合を物理的（例えばノブ・イン・ホール構造）または生化学的（例えば静電相互作用）に促進することができる。ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位を作出する第１の重鎖分子と会合した軽鎖分子を含む。第２の抗原結合性部位は、第１の重鎖のＮ末端に連結されたｓｃＦｖ断片により提供される。第１および第２の重鎖分子の連結を促す例示的な突然変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１４０３２２７５６号明細書および「Ｔｈｅ ｍａｋｉｎｇ ｏｆ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＭＡｂｓ． ２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ； ９（２）： １８２～２１２頁に開示されている。ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、それに連結された炭水化物分子１１４０またはその追加の修飾を含むことができる。

【0152】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造を有する二特異性抗体は、Ｂ細胞系列表面マーカー（例えばＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５）、および抑制性Ｂ細胞表面マーカー（例えばＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ））を標的化することができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９からなる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８からなる。

【0153】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造は、第１の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、第１の重鎖ＶＨドメインおよびＶＬドメインはＣＤ１９結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列はＣＤ３８結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ３８結合性成分、またはそのＣＤ３８結合性断片を含む。

【0154】

ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ構造はまた、第１の抗原結合性部位がＣＤ３８を標的化し、かつ第２の抗原結合性部位がＣＤ１９を標的化するように操作され得る。一部の実施形態において、重鎖ＶＨドメインおよびＶＬドメインはＣＤ３８結合性成分を含み、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列はＣＤ１９結合性成分を含む。ある特定の実施形態において、ＣＤ１９結合性成分を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）配列は、抗体重鎖および軽鎖可変配列に対応するＣＤ１９結合性成分、またはそのＣＤ１９結合性断片を含む。

【0155】

ある特定の実施形態において、第１の重鎖分子は、配列番号２１２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第１の重鎖分子は、配列番号２１２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。

【0156】

ある特定の実施形態において、軽鎖分子は、配列番号２１３に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、軽鎖分子は、配列番号２１３に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。

【0157】

ある特定の実施形態において、第２の重鎖分子は、配列番号２１４に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第１の重鎖分子は、配列番号２１４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。

【0158】

フレームワーク領域
重鎖および軽鎖のフレームワーク領域内で為される生殖系列配列への突然変異または復帰突然変異は、本明細書に記載されるＣＤ１９およびＣＤ３８結合性分子の薬物動態的および薬力学的特性を向上させるために有利であり得る。ある特定の事例において、重鎖および／または軽鎖内で為される生殖系列配列への突然変異または復帰突然変異は、ＣＤ１９およびＣＤ３８結合性分子（例えば本明細書に記載される二特異性抗体）の安定性を向上させる。ある特定の事例において、重鎖および／または軽鎖内で為される生殖系列配列への突然変異または復帰突然変異は、ＣＤ１９およびＣＤ３８結合性分子（例えば本明細書に記載される二特異性抗体）の免疫原性を低減させる。よって、一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る１、２、３、４、５、８、または１０個の突然変異または復帰突然変異を含む。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る１個の突然変異または復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異または復帰突然変異までを含む。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る少なくとも１個の突然変異または復帰突然変異を含む。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る最大１０個の突然変異または復帰突然変異を含む。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異まで、または生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異から生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異までを含む。一部の実施形態において、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、生殖系列配列に戻る１個の突然変異もしくは復帰突然変異、生殖系列配列に戻る２個の突然変異もしくは復帰突然変異、生殖系列配列に戻る３個の突然変異もしくは復帰突然変異、生殖系列配列に戻る４個の突然変異もしくは復帰突然変異、生殖系列配列に戻る５個の突然変異もしくは復帰突然変異、生殖系列配列に戻る８個の突然変異もしくは復帰突然変異、または生殖系列配列に戻る１０個の突然変異もしくは復帰突然変異を含む。一部の実施形態において、ＣＤ３８結合性部分は、配列番号５に記載される重鎖フレームワーク領域を含む。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合性部分は、配列番号６または７に記載される重鎖フレームワーク領域を含む。

【0159】

医薬的に許容される賦形剤、担体、および希釈剤
本開示の複合体結合性分子を含む組成物は、１つまたは複数の医薬的に許容される賦形剤、担体、および希釈剤を含む医薬組成物中に含まれる。ある特定の実施形態において、本開示の抗体は、無菌および／または等張溶液中に懸濁されて投与される。ある特定の実施形態において、溶液は約０．９％のＮａＣｌを含む。ある特定の実施形態において、溶液は約５．０％のデキストロースを含む。ある特定の実施形態において、溶液は、緩衝剤、例えば、酢酸（塩）、クエン酸（塩）、ヒスチジン、コハク酸（塩）、リン酸（塩）、重炭酸（塩）およびヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）、およびポロキサマー１８８、ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、およびデキストラン４０、アミノ酸、例えば、グリシンもしくはアルギニン、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン、またはキレート剤、例えば、ＥＤＴＡもしくはＥＧＴＡのうちの１つまたは複数をさらに含む。

【0160】

抗体の投与のための皮下製剤は、緩衝剤、例えば、酢酸（塩）、クエン酸（塩）、ヒスチジン、コハク酸（塩）、リン酸（塩）、重炭酸（塩）およびヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）、およびポロキサマー１８８、ポリオール／二糖／多糖、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、およびデキストラン４０、アミノ酸、例えば、グリシンもしくはアルギニン、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン、またはキレート剤、例えば、ＥＤＴＡもしくはＥＧＴＡのうちの１つまたは複数を含むことができる。追加的に、注射部位における疼痛を緩和する化合物または分子、例えば約２，０００Ｕ／ｍｌ～約１２，０００Ｕ／ｍｌの濃度のヒアルロニダーゼなどが含まれ得る。

【0161】

ある特定の実施形態において、本開示の複合体結合性分子は、凍結乾燥されて輸送／貯蔵され、投与の前に再構成される。ある特定の実施形態において、凍結乾燥された抗体製剤は、充填剤、例えば、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、デキストラン４０、またはこれらの組合せを含む。凍結乾燥製剤は、ガラスまたは他の好適な非反応性材料から構成されるバイアル中に含有され得る。抗体は、製剤化される場合、再構成されるか否かによらず、ある特定のｐＨ、一般に７．０未満のｐＨに緩衝化され得る。ある特定の実施形態において、ｐＨは、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、または５．０～６．０であることができる。

【0162】

本明細書に記載されるのはまた、好適な容器中の本明細書に記載される複合体結合性分子のうちの１つまたは複数ならびに使用のための指示書、希釈剤、賦形剤、担体、および投与用のデバイスから選択される１つまたは複数の追加の成分を含むキットである。

【0163】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、がん処置を調製する方法であって、１つまたは複数の医薬的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤および本開示の複合体結合性分子を混合することを含む、方法である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、貯蔵または輸送のためにがん処置を調製する方法であって、１つまたは複数の本開示の抗体を凍結乾燥することを含む、方法である。

【0164】

製造および生産
本明細書に記載される複合体結合性分子（例えば二特異性抗体）をコードする核酸は、好適な細胞を感染、トランスフェクト、形質転換して、または他の仕方で好適な細胞を該核酸についてトランスジェニックとして、商業的または治療的使用のための複合体結合性分子の製造を可能にするために使用され得る。大スケール細胞培養からの抗体の製造のための標準的な細胞株および方法は当該技術分野において公知である。例えば、Ｌｉら、「Ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．」、Ｍａｂｓ． ２０１０ Ｓｅｐ－Ｏｃｔ； ２（５）： ４６６～４７７頁を参照。

【0165】

ある特定の実施形態において、核酸配列は、本明細書に開示される複合体結合性分子または二特異性抗体をコードする。ある特定の実施形態において、複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列は真核性調節配列に機能的に連結されている。一部の実施形態において、細胞は核酸配列を含む。

【0166】

一部の実施形態において、細胞は、本明細書に開示される複合体結合性分子をコードする核酸を含む。ある特定の実施形態において、細胞は原核細胞を含む。ある特定の実施形態において、原核細胞は大腸菌細胞である。ある特定の実施形態において、細胞は真核細胞を含む。ある特定の実施形態において、真核細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはヒトＰＥＲ．Ｃ６細胞である。

【0167】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、複合体結合性分子を製造する方法であって、複合体結合性分子をコードする核酸を含む細胞を、複合体結合性分子の製造および分泌を可能とするために十分なｉｎ ｖｉｔｒｏの条件下で培養することを含む、方法である。

【0168】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、（ａ）ゲノム位置において組み込まれた本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞株、および（ｂ）凍結保護剤を含む、マスターセルバンクである。ある特定の実施形態において、凍結保護剤はグリセロールを含む。ある特定の実施形態において、マスターセルバンクは、（ａ）ゲノム位置において組み込まれた複合体結合性分子をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞株、および（ｂ）凍結保護剤を含む。ある特定の実施形態において、凍結保護剤はグリセロールを含む。ある特定の実施形態において、マスターセルバンクは、液体窒素による凍結に耐えることができる好適なバイアルまたは容器中に含有される。

【0169】

本明細書に記載されるのはまた、本明細書に記載される複合体結合性分子を製造する方法である。そのような方法は、複合体結合性分子をコードする核酸を含む細胞または細胞株を細胞培養培地中で複合体結合性分子の発現および分泌を可能とするために十分な条件下でインキュベートすること、およびさらに細胞培養培地から複合体結合性分子を採取することを含む。採取は、生細胞、細胞デブリ、非複合体結合性分子タンパク質またはポリペプチド、望ましくない塩、緩衝剤、および培地成分を除去するための１つまたは複数の精製ステップをさらに含むことができる。ある特定の実施形態において、追加の精製ステップは、遠心分離、超遠心分離、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、もしくはプロテインＬ精製、および／またはイオン交換クロマトグラフィーを含む。

【0170】

使用方法
免疫調節細胞による免疫応答の抑制は、腫瘍成長、遊走、および転移を促すことができる。免疫抑制または負の免疫モジュレーションは、免疫応答の全体的または部分的な低減を結果としてもたらすプロセスまたは経路を含むことができる。免疫抑制は、全身性のもの、または対象もしくは患者の身体の特有の部位（例えば腫瘍微環境）、組織、もしくは領域に局在化したものであることができる。Ｂ細胞は主に、病原体の中和を促す抗体の産生を通じた正の免疫モジュレーターとして公知であるが、Ｂ細胞のある特定の集団は、免疫応答を抑制または負に調節するように機能することができる。Ｂ細胞のそのような集団は、１つより多くの細胞表面バイオマーカーの発現により定義され得る。免疫抑制性Ｂ細胞またはＢ細胞集団は、Ｂ細胞系列表面バイオマーカーおよび抑制性Ｂ細胞表面バイオマーカーを含むことができる。Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５を含むことができる。Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ）を含むことができる。免疫抑制性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞集団は、抗炎症性メディエーター、例えばサイトカインの分泌を通じて、Ｔ細胞を含む、細胞サブタイプの多様なセットを抑制することにより免疫応答を抑制するように機能することができる。免疫抑制性Ｂ細胞はまた、リンパ様構造を負にモジュレートすることおよび／またはＴ細胞の制御性Ｔ細胞への変換を促すことにより免疫応答の減弱において機能することができる。そのため、本明細書に開示されるのは、免疫抑制性Ｂ細胞集団を標的化して応答を有効にモジュレートする方法である。

【0171】

免疫抑制性Ｂ細胞またはＢ細胞集団の標的化は、腫瘍または腫瘍形成性細胞に対する免疫活性化または免疫応答の正のモジュレーションを結果としてもたらすことができる。本明細書において提供されるのは、がんまたは腫瘍に罹患した個体を処置する方法であって、がんまたは腫瘍に罹患した個体に本明細書に開示される複合体結合性分子を投与することを含む、方法である。本明細書において提供されるのはまた、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に本明細書に開示される複合体結合性分子を投与し、それにより、腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。さらに開示されるのは、対象中の免疫抑制性Ｂ細胞を複合体結合性分子と接触させる方法であって、複合体結合性分子を対象に投与することを含む、方法である。ある特定の実施形態において、対象は腫瘍またはがんを有する。

【0172】

腫瘍またはがんの種類、サブタイプ、または形態は、処置戦略および方法における重要な因子であり得る。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む。

【0173】

免疫抑制性Ｂ細胞は抗腫瘍免疫応答を抑制することができる。一部の実施形態において、腫瘍またはがんは、Ｂ細胞系列表面バイオマーカーおよび抑制性Ｂ細胞表面バイオマーカーを含むＢ細胞を含む。Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５を含むことができる。Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、またはＴＧＦＢを含むことができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ１９（例えばＣＤ１９＋）およびＣＤ３８（例えばＣＤ３８＋）を含む。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。

【0174】

ある特定の実施形態において、本明細書に開示されるのは、がんまたは腫瘍の処置のために有用な二特異性抗体である。処置は、処置されている状態を改善または寛解させようとする方法を指す。がんに関して、処置としては、腫瘍体積の低減、腫瘍体積の増大における低減、無増悪生存期間、または全体的な平均余命における増加が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態において、処置は、処置されているがんの寛解に影響する。ある特定の実施形態において、処置は、以前に処置されたがんまたは腫瘍の再発または進行を予防することが意図される予防または維持用量としての使用を包含する。すべての個体が投与された処置に対して等しくまたは確実に応答するわけではないが、それにもかかわらずこれらの個体は処置されると考えられることが当業者により理解される。

【0175】

ある特定の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形がんまたは腫瘍である。ある特定の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんまたは腫瘍である。ある特定の実施形態において、がんまたは腫瘍は、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、および肝臓腫瘍を含む。ある特定の実施形態において、本発明の抗体で処置され得る腫瘍は、腺腫、腺癌、血管肉腫、星細胞腫、上皮癌、胚細胞腫、膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫および／または奇形腫を含む。ある特定の実施形態において、腫瘍／がんは、末端黒子型黒色腫、光線性角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞腫瘍、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細血管カルチノイド（ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｉｄ）、癌腫、癌肉腫、胆管癌、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜過形成、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、上衣肉腫（ｅｐｅｎｄｙｍａｌ ｓａｒｃｏｍａ）、ユーイング肉腫（Ｓｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、限局性結節性過形成、ガストリノーマ（ｇａｓｔｒｏｎｏｍａ）、生殖系列腫瘍、膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽腫、血管内皮腫、血管腫、肝臓腺腫、肝臓腺腫症、肝細胞癌、インスリナイト（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｅ）、上皮内異常増殖、上皮内扁平細胞異常増殖、浸潤性扁平細胞癌、大細胞癌、脂肪肉腫、肺癌、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘膜上皮癌、骨髄性白血病、神経芽腫、神経上皮腺癌、結節性黒色腫、骨肉腫、卵巣癌、乳頭状漿液性腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺癌、肺芽細胞腫、腎細胞癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌腫、扁平細胞癌、小細胞癌、軟組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平癌、扁平細胞癌、未分化癌、ぶどう膜黒色腫、疣状癌、膣／外陰部癌、ＶＩＰオーマ（ＶＩＰｐｏｍａ）、およびウィルムス腫瘍の群から選択される。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本発明の抗体で処置される腫瘍／がんは、脳のがん、頭頸部がん、結腸直腸癌、急性骨髄性白血病、プレＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、膀胱がん、星細胞腫、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩもしくはＩＶ星細胞腫、膠芽腫、多形膠芽腫、小細胞がん、および非小細胞がん、好ましくは非小細胞肺がん、肺腺癌、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺がん、アンドロゲン依存性転移性前立腺がん、前立腺癌、および乳がん、好ましくは乳腺管がん、および／または乳癌を含む。ある特定の実施形態において、本開示の抗体で処置されるがんは膠芽腫を含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本開示の抗体で処置されるがんは膵臓がんを含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本開示の抗体で処置されるがんは卵巣がんを含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本開示の抗体で処置されるがんは肺がんを含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本開示の抗体で処置されるがんは前立腺がんを含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の本開示の抗体で処置されるがんは結腸がんを含む。ある特定の実施形態において、処置されるがんは、膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、または肺がんを含む。ある特定の実施形態において、がんは他の処置に対して難治性である。ある特定の実施形態において、処置されるがんは再発性である。ある特定の実施形態において、がんは、再発性／難治性の膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、または肺がんである。

【0176】

ある特定の実施形態において、本明細書における複合体結合性分子で処置されるがんおよびまたは腫瘍は、成熟Ｂ細胞新生物：慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫、または原発性中枢神経系リンパ腫である。

【0177】

ある特定の実施形態において、本明細書における複合体結合性分子で処置されるがんおよびまたは腫瘍は、Ｔ細胞新生物、例えばＴ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞ＡＬＬ、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、Ｔリンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病、急性単球性白血病、およびその他である。

【0178】

ある特定の実施形態において、抗体は、それを必要とする対象に抗体含有医薬組成物の投与のために好適な任意の経路、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、または脳内などの経路により投与され得る。ある特定の実施形態において、抗体は静脈内に投与される。ある特定の実施形態において、抗体は皮下に投与される。ある特定の実施形態において、抗体は腫瘍内に投与される。ある特定の実施形態において、抗体は、好適な投薬スケジュール、例えば、週毎、週に２回、月毎、月に２回、２週毎に１回、３週毎に１回、または月に１回などで投与される。ある特定の実施形態において、抗体は３週毎に１回投与される。抗体は任意の治療有効量で投与され得る。ある特定の実施形態において、治療的に許容される量は約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態において、治療的に許容される量は約１ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態において、治療的に許容される量は約５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。治療有効量は、処置されるべき疾患または病気と関連付けられる１つまたは複数の症状を寛解させるために十分な量を含む。

【0179】

例示的な実施形態
本明細書において提供されるのは、ＣＤ１９に結合するように構成されたＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するように構成されたＣＤ３８結合性成分を含む複合体結合性分子であって、ＣＤ１９結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含み、かつＣＤ３８結合性成分が抗体またはその抗原結合性断片を含む、複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９および／またはＣＤ３８結合性成分が、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９またはＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９およびＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0180】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含み、かつ／またはＣＤ１９結合性成分が、配列番号１に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ／または免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは６に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0181】

一部の実施形態において、提供されるのは、複合体結合性分子が共通軽鎖二特異性ＩｇＧである、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつＣＤ１９結合性成分が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３もしくは５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／または免疫グロブリン重鎖が、配列番号１もしくは７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0182】

一部の実施形態において、提供されるのは、免疫グロブリン重鎖が、配列番号３または５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン重鎖が、配列番号１または７に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分またはＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分がｓｃＦｖを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分またはＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアを含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0183】

さらに提供されるのは、複合体結合性分子が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ３８に結合するＣＤ３８抗原結合性成分および抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域とペア形成した抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域を含むＣＤ１９に結合するＣＤ１９抗原結合性成分を含み、ＣＤ３８抗原結合性成分が、ａ）配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｂ）配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｃ）配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｄ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｅ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／またはｆ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、複合体結合性分子である。

【0184】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９抗原結合性成分が、ｇ）配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ｈ）配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、ｉ）配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、ｊ）配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ｋ）配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および／またはｌ）配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0185】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８抗原結合性成分が、配列番号３または５と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0186】

一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ１９抗原結合性成分が、配列番号１または６と同一のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖可変領域が、配列番号４と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖可変領域が第１の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ３８免疫グロブリン軽鎖可変領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、抗ＣＤ１９免疫グロブリン重鎖可変領域が第２の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、第１の免疫グロブリン重鎖定常領域および／または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化に不利に働きかつ／または第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を促進する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの１つがＴ３６６Ｗ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの他のものがＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換（ＥＵナンバリング）を含み、その結果、第１および第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のヘテロ二量体化が、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化と比較して助長される、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、単一の二特異性結合性分子がＣＤ３８抗原結合性成分およびＣＤ１９抗原結合性成分から形成されている、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0187】

提供されるのはまた、ＣＤ１９に結合するＣＤ１９結合性成分およびＣＤ３８に結合するＣＤ３８結合性成分を含む複合体結合性分子であって、ＣＤ１９結合性成分が、ＣＤ１９に結合するｓｃＦＶを含み、かつＣＤ３８結合性成分が、ＣＤ３８に結合する軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含む免疫グロブリン可変領域を含む、複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖが第１の免疫グロブリン重鎖定常領域に連結されている、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分の重鎖可変領域が第２の免疫グロブリン重鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分の軽鎖可変領域が免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0188】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１または７に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３または５に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列、および配列番号４に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分が、配列番号１または７に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列、および配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列番号３または５に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列、および配列番号４に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0189】

一部の実施形態において、提供されるのは、第１の免疫グロブリン重鎖定常領域および／または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域が、抗ＣＤ３８免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化に不利に働きかつ／または第１の重鎖定常領域および第２の重鎖定常領域のヘテロ二量体化を促進する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの１つがＴ３６６Ｗ置換（ＥＵナンバリング）を含み、かつ第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のうちの他のものがＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換（ＥＵナンバリング）を含み、その結果、第１および第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のヘテロ二量体化が、第１または第２の免疫グロブリン重鎖定常領域のホモ二量体化を上回って助長される、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、単一の二特異性結合性分子がＣＤ３８抗原結合性成分およびＣＤ１９抗原結合性成分から形成されている、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0190】

一部の実施形態において、提供されるのは、二特異性抗体またはその二重抗原結合性断片である、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基を含むＦｃ領域を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基が、ＥＵナンバリングにしたがってアスパラギン２９７に対応する、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0191】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞に結合する、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、Ｆｃ領域を含むＣＤ１９またはＣＤ３８単一特異性抗体と比較して低減された赤血球凝集を呈する、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0192】

提供されるのは、先行する実施形態の複合体結合性分子のいずれか１つの複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）である。実施形態４９：複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列が真核性調節配列に機能的に連結されている、実施形態４７の核酸。一部の実施形態において、提供されるのは、先行する実施形態のいずれか１つの実施形態に記載の核酸を含む細胞である。一部の実施形態において、提供されるのは、原核細胞を含む、先行する実施形態のいずれかの細胞である。一部の実施形態において、提供されるのは、原核細胞が大腸菌細胞である、先行する実施形態のいずれかの細胞である。一部の実施形態において、提供されるのは、真核細胞を含む、先行する実施形態のいずれかの細胞である。一部の実施形態において、提供されるのは、真核細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはヒトＰＥＲ．Ｃ６細胞である、先行する実施形態のいずれかの細胞である。

【0193】

提供されるのはまた、医薬組成物、例えば、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子および医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む組成物である。一部の実施形態において、組成物は静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、組成物は皮下投与のために製剤化される。

【0194】

提供されるのは、個体において腫瘍またはがんを処置する方法における使用のための、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物である。一部の実施形態において、腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0195】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、固形組織がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、脳のがん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんであり、肺がんは非小細胞肺がんであり、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんであり、腎臓がんは腎細胞癌であり、脳のがんは多形膠芽腫であり、または皮膚がんは黒色腫である。

【0196】

提供されるのはまた、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法における使用のための、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物である。一部の実施形態において、さらに提供されるのは、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法における使用のための、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物である。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。

【0197】

一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、配列Ｐ－Ｘ１－ＬＧ－Ｘ２－Ａを含むＨＣＤＲ２アミノ酸配列を含み、Ｘ１およびＸ２が、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｓ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｋ、Ｄ、またはＥからなる群から各々選択される、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。ある特定の実施形態において、Ｘ１はＨであり、かつＸ２はＴである。一部の実施形態において、提供されるのは、Ｘ１がＨであり、かつＸ２がＴである、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。一部の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ１９結合性成分の重鎖定常領域がＡ８４Ｓおよび／またはＡ１０８Ｌ改変を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。ある特定の実施形態において、提供されるのは、ＣＤ３８結合性成分が、Ｗ３２Ｈ置換を含む軽鎖配列を含む、先行する実施形態のいずれかの複合体結合性分子である。

【0198】

さらに提供されるのは、がんまたは腫瘍に罹患した個体を処置する方法であって、がんまたは腫瘍に罹患した個体に先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それによりがんまたは腫瘍を処置することを含む、方法である。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0199】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、固形組織がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんであり、肺がんは非小細胞肺がんであり、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんであり、腎臓がんは腎細胞癌であり、脳のがんは多形膠芽腫であり、または皮膚がんは黒色腫である。

【0200】

提供されるのは、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それにより腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。

【0201】

提供されるのはまた、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子または先行する実施形態のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それにより腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。

【0202】

本明細書において提供されるのはまた、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子を製造する方法であって、先行する実施形態の細胞を細胞培養培地中で複合体結合性分子の発現、アセンブリー、および細胞培養培地への分泌を可能とするために十分な条件下でインキュベートすることを含む、方法である。一部の実施形態において、方法は、細胞培養培地から分子を単離および精製することを含む。個体のためのがん処置を調製する方法であって、先行する実施形態のいずれか１つに記載の複合体結合性分子を医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と混合することを含む、方法もまた提供される。

【0203】

そのため、本明細書において提供されるのは、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含む複合体結合性分子であって、第１の標的がＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的が抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含み、第１の標的および第２の標的が同一でない、複合体結合性分子である。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分はポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の結合性成分はポリペプチドからなる。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分はポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分はポリペプチドからなる。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分のポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸残基の長さのアミノ酸配列を含む。

【0204】

Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＩｇＡ、またはＣＤ４５を含むことができる。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９を含む。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１９である。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＩｇＡである。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＩｇＡである。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１３８である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ１３８である。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ４５である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーはＣＤ４５である。一部の実施形態において、Ｂ細胞系列表面マーカーは、ＩｇＡ、ＣＤ１９、ＣＤ１３８、ＣＤ４５、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

【0205】

抑制性Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、または潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ）を含むことができる。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＩｇＤを含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＩｇＤである。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ１を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ１である。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ５を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ５である。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２１を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２１である。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２４を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ２４である。一部の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８を含む。ある特定の実施形態において、抑制性Ｂ細胞表面マーカーはＣＤ３８である。一部の実施形態において、Ｂ細胞表面マーカーは、ＩｇＤ、ＣＤ１、ＣＤ５、ＣＤ２１、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＨＭ１３、ＳＬＡＭＦ７、ＡＱＰ３、潜在型ＴＧＦ－ベータ（例えば、ＴＧＦ－ベータＬＡＰ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

【0206】

複合体結合性分子は、抗体またはその標的結合性断片を含むことができる。一部の実施形態において、第１または第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む。一部の実施形態において、第１および第２の結合性成分は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペア、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）_２、単一ドメイン抗体、免疫グロブリン新抗原受容体からの可変領域断片（ＶＮＡＲ）、または重鎖抗体に由来する可変領域（ＶＨＨ）を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分は免疫グロブリン重鎖および軽鎖ペアを含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態において、第１および第２の結合性成分はｓｃＦｖを含む。

【0207】

二特異性抗体またはその二重抗原結合性断片である、本明細書に記載される複合体結合性分子。

【0208】

一部の実施形態において、複合体結合性分子は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含み、免疫グロブリン重鎖は、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、または１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、免疫グロブリン重鎖は、配列番号３に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号２に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、免疫グロブリン重鎖は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、かつ免疫グロブリン軽鎖は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、複合体結合性分子は共通軽鎖二特異性ＩｇＧである。

【0209】

複合体結合性分子は二特異性抗体であることができる。一部の実施形態において、二特異性抗体は、以下のフォーマット：共通軽鎖二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ、Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧ、およびＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧのうちの１つから選択される。ある特定の実施形態において、二特異性抗体は共通軽鎖二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆａｂ－Ｆａｂ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＦａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ：Ｆａｂ－Ｆｃ－Ｆａｂ二特異性ＩｇＧである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体はＩｇＧ－ｓｃＦｖである。

【0210】

複合体結合性分子は翻訳後修飾を含むことができる。一部の実施形態において、複合体結合性分子は、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基を含むＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態において、ネイティブな炭水化物または非フコシル化炭水化物で修飾されたアミノ酸残基は、ＥＵナンバリングにしたがってアスパラギン２９７に対応する。

【0211】

一部の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１１～１５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１～２５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号３１～３５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号４１～４５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５１～５５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号６１～６５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１および配列番号２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第１の結合性成分は、配列番号１および配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0212】

一部の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号７１～７５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８１～８５、もしくは１５０～１５５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号９１～９５のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号１０１～１０５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１１～１１５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および／または配列番号１２１～１２５のいずれか１つに記載されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号３および配列番号４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、第２の結合性成分は、配列番号３および配列番号４に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％の同一性を含むか、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0213】

複合体結合性分子は第１の標的および第２の標的に結合することができ、第１の標的はＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的は抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含む。一部の実施形態において、複合体結合性分子はＣＤ１９陽性（ＣＤ１９＋またはＣＤ１９^ｈｉｇｈ）およびＣＤ３８陽性（ＣＤ３８＋またはＣＤ１９^ｈｉｇｈ）Ｂ細胞に結合する。

【0214】

複合体結合性分子は核酸分子によりコードされ得る。本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸である。一部の実施形態において、複合体結合性分子をコードするポリヌクレオチド配列は真核性調節配列に機能的に連結されている。

【0215】

細胞は、複合体結合性分子をコードする核酸を含むことができる。一部の実施形態において、細胞は原核細胞を含む。ある特定の実施形態において、原核細胞は大腸菌細胞である。一部の実施形態において、細胞は真核細胞を含む。ある特定の実施形態において、真核細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはヒトＰＥＲ．Ｃ６細胞である。

【0216】

本明細書に開示されるのはまた、複合体結合性分子および医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含む組成物である。一部の実施形態において、組成物は静脈内投与のために製剤化される。一部の実施形態において、組成物は皮下投与のために製剤化される。

【0217】

本明細書に開示される複合体結合性分子は、抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫抑制性Ｂ細胞を阻害しかつ／またはその数を低減させることができる。そのため、本明細書における複合体結合性分子は、個体において腫瘍またはがんを処置する方法において使用され得る。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0218】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、がんは乳がんである。一部のある特定の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態において、がんは肺がんである。ある特定の実施形態において、肺がんは非小細胞肺がんである。一部の実施形態において、がんは頭頸部がんである。ある特定の実施形態において、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんである。一部の実施形態において、がんは腎臓がんである。ある特定の実施形態において、腎臓がんは腎細胞癌である。一部の実施形態において、がんは脳のがんである。一部の実施形態において、脳のがんは多形膠芽腫である。一部の実施形態において、がんは皮膚がんである。ある特定の実施形態において、皮膚がんは黒色腫である。

【0219】

本明細書における複合体結合性分子は、腫瘍浸潤性Ｂ細胞および／または個体の腫瘍に対する抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法において使用され得る。本明細書における複合体結合性分子は、腫瘍浸潤性Ｂ細胞および／または個体の腫瘍に対する抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫抑制性Ｂ細胞の機能を阻害する方法において使用され得る。複合体結合性分子は、個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある抑制性Ｂ細胞を低減させる方法において使用され得る。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。

【0220】

本明細書にさらに開示されるのは、がんまたは腫瘍に罹患した個体を処置する方法であって、がんまたは腫瘍に罹患した個体に本明細書に開示される複合体結合性分子を投与し、それによりがんまたは腫瘍を処置することを含む、方法である。一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は血液がんである。一部の実施形態において、血液がんはＢ細胞悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はＢ細胞急性リンパ球性白血病である。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫）である。一部の実施形態において、血液がんは血漿悪性腫瘍である。ある特定の実施形態において、血漿悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。先行する実施形態のいずれかの一部の実施形態において、血液がんはＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する（例えばがんの細胞はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する）。

【0221】

一部の実施形態において、がんまたは腫瘍は固形組織がんである。一部の実施形態において、がんは、乳がん、前立腺がん、膵臓がん、肺がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、皮膚がん、結腸直腸がん、または頭頸部がんを含む。一部の実施形態において、がんは乳がんである。一部のある特定の実施形態において、乳がんはトリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態において、がんは肺がんである。ある特定の実施形態において、肺がんは非小細胞肺がんである。一部の実施形態において、がんは頭頸部がんである。ある特定の実施形態において、頭頸部がんは頭頸部扁平細胞がんである。一部の実施形態において、がんは腎臓がんである。ある特定の実施形態において、腎臓がんは腎細胞癌である。一部の実施形態において、がんは脳のがんである。一部の実施形態において、脳のがんは多形膠芽腫である。一部の実施形態において、がんは皮膚がんである。ある特定の実施形態において、皮膚がんは黒色腫である。

【0222】

開示されるのはまた、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に本明細書に開示される複合体結合性分子を投与し、それにより腫瘍中の腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。開示されるのはまた、腫瘍またはがんに罹患した個体の腫瘍中にあるか、それに隣接するか、またはその周囲にある免疫抑制性Ｂ細胞を低減させる方法であって、腫瘍またはがんに罹患した個体に本明細書に開示される複合体結合性分子を投与し、それにより腫瘍中の免疫抑制性Ｂ細胞を低減させることを含む、方法である。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞または免疫抑制性Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋、ＣＤ３８＋ Ｂ細胞を含む。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させることは、免疫抑制性Ｂ細胞の腫瘍環境または微環境中への動員を低減および／または遮断および／または予防および／または阻害することを含む。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させることは、免疫抑制性Ｂ細胞により媒介される細胞間接触誘導性免疫抑制を低減および／または遮断および／または予防および／または阻害することを含む。一部の実施形態において、腫瘍浸潤性Ｂ細胞を低減させることは、免疫抑制性Ｂ細胞の分化を低減および／または遮断および／または予防および／または阻害することを含む。

【0223】

本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される複合体結合性分子を製造する方法であって、本明細書に開示される細胞を細胞培養培地中で複合体結合性分子の発現、アセンブリーおよび細胞培養培地への分泌を可能とするために十分な条件下でインキュベートすることを含む、方法である。一部の実施形態において、方法は、細胞培養培地から分子を単離および精製することを含んだ。

【0224】

本明細書に開示される複合体結合性分子は、がんまたは腫瘍の処置において使用され得る。そのため、開示されるのは、個体のためのがん処置を調製する方法であって、本開示の複合体結合性分子を医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と混合することを含む、方法である。

【実施例】

【0225】

以下の実施例は、実例的な目的のためにのみ含まれ、本発明の範囲を限定することは意図されない。

【0226】

実施例１：ＣＤ１９およびＣＤ３８抗体の細胞結合特性
本明細書における開示を例示して、第１の標的に結合するように構成された第１の結合性成分および第２の標的に結合するように構成された第２の結合性成分を含む複合体結合性分子であって、第１の標的がＢ細胞系列表面マーカーを含み、かつ第２の標的が抑制性Ｂ細胞表面マーカーを含む、複合体結合性分子を、ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現する細胞に対する結合について試験した。ＣＤ１９およびＣＤ３８軽鎖および重鎖を含む抗体の、ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現するＲａｊｉ細胞に対する結合特性。図１２Ａは、Ｒａｊｉ細胞におけるＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現データを示す。ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現するＲａｊｉ細胞を、ＣＤ１９およびＣＤ３８軽鎖および重鎖を含む抗体とインキュベートした。細胞を１１の異なる濃度にわたり３０μｇ／ｍＬの抗体とインキュベートして、各々の試料についての結合プロファイルを生成した。商業的に入手可能な抗体を使用してＣＤ１９およびＣＤ３８の発現を検証した。試験された試料は、（Ａ）マッチしたＣＤ１９重鎖および軽鎖であって、ＣＤ１９重鎖が配列番号１を含み、かつＣＤ１９軽鎖が配列番号２を含むもの、（Ｂ）スワップさせたＣＤ１９重鎖およびＣＤ３８軽鎖であって、ＣＤ１９重鎖が配列番号１を含み、かつＣＤ３８軽鎖が配列番号４を含むもの、（Ｃ）スワップさせたＣＤ３８重鎖およびＣＤ１９軽鎖であって、ＣＤ３８重鎖が配列番号３を含み、かつＣＤ１９軽鎖が配列番号２を含むもの、（Ｄ）マッチしたＣＤ３８重鎖および軽鎖であって、ＣＤ３８重鎖が配列番号３を含み、かつＣＤ３８軽鎖が配列番号４を含むもの、（Ｅ）配列番号１～２を含むＣＤ１９単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、（Ｆ）配列番号３～４を含むＣＤ３８単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダラザレックス（ＣＤ３８対照）、抗ＣＤ１９ ＰＥ（ＣＤ１９対照）、抗ＣＤ３８ ＰＥ（ＣＤ３８対照）、ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照を含む。

【0227】

図１２Ｂおよび図１２Ｃは、試料Ａ～Ｆ、ダラザレックス、およびＩｇＧ１アイソタイプ対照の結合プロファイルを示す。表１および表２は、試料Ａ～Ｆ、ダラザレックス、およびＩｇＧ１アイソタイプ対照のＥＣ_５０値および最大平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。試料Ａ～Ｆの各々は、ＣＤ１９およびＣＤ３８を発現するＲａｊｉ細胞に対する結合を実証し、試料Ａ～Ｆの結合プロファイルは試料間でばらついた。図１２Ｄおよび図１２Ｅは、対照抗ＣＤ１９（図１１Ｄ）および抗ＣＤ３８抗体（図１１Ｅ）の結合を示す。図１２Ｆは、試験された抗体はＣＤ１９およびＣＤ３８を発現しないＣＨＯ細胞に結合しなかったことを示す。

【0228】

【表1】

【0229】

【表2】

【0230】

実施例２：Ｏｃｔｅｔ結合データ
バイオレイヤー干渉法を使用して親および二特異性抗体の結合親和性を決定した。結合実験は、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６上で２５℃で０．１％のＢＳＡ、１ＸＰＢＳ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、０．０５％のＮａＮ３からなるアッセイ緩衝液を使用して行った。抗体を抗ｈＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅバイオセンサーに３００秒間ロードした。リガンドをロードしたセンサーを抗原の段階希釈液（３００ｎＭで開始：ＣＤ１９について２倍段階希釈、ＣＤ３８について３倍段階希釈）に会合（ＣＤ１９について２００秒、ＣＤ３８について１５０秒）、続いて解離（ＣＤ１９について６００秒、ＣＤ３８について４００秒）のために浸漬した。一価（１：１）結合モデルを使用して速度定数を算出した。

【0231】

親試験品は以下を含んだ：

【0232】

８５１Ａ＝抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０

【0233】

８５１Ｂ＝抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０重鎖＆抗ＣＤ３８ ００３軽鎖

【0234】

８５１Ｃ＝抗ＣＤ３８ ００３重鎖＆抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０軽鎖

【0235】

８５１Ｄ＝抗ＣＤ３８ ００３

【0236】

８５１Ｅ＝抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０（ｓｃＦｖ－Ｆｃ）２

【0237】

８５１Ｆ＝抗ＣＤ３８ ００３（ｓｃＦｖ－Ｆｃ）２

【0238】

抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０ ＶＨおよびＶＬを有する２つの親抗体（８５１Ａ／８５１Ｅ）は、類似したＫＤでＣＤ１９に結合した。抗ＣＤ３８ ＶＬでの抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０ ＶＬの置換（８５１Ｂ）は、約５倍のＣＤ１９に対する結合の低減を結果としてもたらした。予想されたように、抗ＣＤ３８ ００３ ＶＨおよびＶＬを有する親抗体（８５１Ｄ／８５１Ｆ）はＣＤ１９に結合しなかった。

【0239】

表３は結合データを示す。抗ＣＤ３８ ００３ ＶＨおよびＶＬを有する２つの親抗体（８５１Ｄ／８５１Ｆ）は、類似したＫＤでＣＤ３８に結合した。抗ＣＤ１９ ＶＬでの抗ＣＤ３８ ００３ ＶＬの置換（８５１Ｃ）は、ＣＤ３８に対する結合の大きい低減を結果としてもたらした。予想されたように、抗ＣＤ１９ ＶＨおよびＶＬを有する親抗体（８５１Ａ／８５１Ｅ）はＣＤ３８に結合せず、８５１ＢもまたＣＤ３８に結合しなかった。このデータは、抗ＣＤ３８ ００３ ＶＬのみが抗ＣＤ１９ ３Ｃ１０ ＶＨのための共通軽鎖として機能できることを示す。

【0240】

【表3】

【0241】

二特異性抗体（フォーマット）試験品は以下を含んだ：

【0242】

ＢＳ１＝１：１：２の比の００３ＨＣ：３Ｃ１０ＨＣ：００３ＬＣ（共通軽鎖）

【0243】

ＢＳ１ｂ＝２：１：２の比の００３ＨＣ：３Ｃ１０ＨＣ：００３ＬＣ（共通軽鎖）

【0244】

ＢＳ２＝１：１：１の比の００３Ｋｎｏｂ：３Ｃ１０ｓｃＦｖＨｏｌｅ：００３ＬＣ（Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ１）

【0245】

ＢＳ２ｂ＝４：１：４の比の００３Ｋｎｏｂ：３Ｃ１０ｓｃＦｖＨｏｌｅ：００３ＬＣ（Ｆａｂ－Ｆｃ：ｓｃＦｖ－Ｆｃ二特異性ＩｇＧ１）

【0246】

ＢＳ３＝１：１：１の比の３Ｃ１０ｓｃＦｖ－００３Ｆａｂ－ＦｃＫｎｏｂ：ＦｃＨｏｌｅ：００３ＬＣ）（ｓｃＦｖ－Ｆａｂ－Ｆｃ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ１）

【0247】

ＢＳ４＝１：１：１の比の００３Ｆａｂ－ＦｃＫｎｏｂ－３Ｃ１０ｓｃＦｖ：ＦｃＨｏｌｅ（Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ１）

【0248】

ＢＳ４ｂ＝４：１：４の比の００３Ｆａｂ－ＦｃＫｎｏｂ－３Ｃ１０ｓｃＦｖ：ＦｃＨｏｌｅ（Ｆａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ：Ｆｃ二特異性ＩｇＧ１）

【0249】

ＣＭ１＝１：１：２の比の３Ｃ１０Ｈｏｌｅ：ＶＺＶＫｎｏｂ：００３ＬＣ抗ＣＤ１９対照抗体

【0250】

ＣＭ１ｂ＝１：３：３の比の３Ｃ１０Ｈｏｌｅ：ＶＺＶＫｎｏｂ：００３ＬＣ

【0251】

ＣＭ２＝１：１：２の比の００３Ｋｎｏｂ：ＶＺＶＨｏｌｅ：００３ＬＣ抗ＣＤ３８対照抗体

【0252】

ＣＭ２ｂ＝３：１：３の比の００３Ｋｎｏｂ：ＶＺＶＨｏｌｅ：００３ＬＣ

【0253】

表４は、単一抗原フォーマットにおける二特異性試験品についての結合データを示す。二特異性抗体ＢＳ１／ＢＳ２／ＢＳ４は、親抗体の４倍以内のＫＤで両方の標的抗原に結合した（灰色の陰影で示される）。ＢＳ３はＣＤ１９にのみ結合し、ＣＤ３８には結合せず、抗ＣＤ３８ Ｆａｂ結合性部位が抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ Ｎ末端融合物により遮断されたか、または抗ＣＤ３８は結合のために遊離のＶＨ Ｎ末端を要求するかのいずれかであることを示唆した。１アーム対照抗体（ＣＭ１、ＣＭ２）は、それらの意図される標的抗原にのみ結合した。

【0254】

【表4】

【0255】

２抗原フォーマットについて、抗体を抗ｈＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅバイオセンサーに３００秒間ロードした。リガンドをロードしたセンサーを５００ｎＭの第１の抗原で５００秒間、続いて３００ｎＭの第２の抗原で２４０秒間飽和させた。一価（１：１）結合モデルを使用して速度定数を算出した。表５は、二特異性抗体ＢＳ１／ＢＳ２／ＢＳ４は親抗体（８５１Ｂ、８５１Ｄ、および８５１Ｅ）の２倍以内のｋａ（１／Ｍｓ）で両方の標的抗原に同時に結合できたことを示す。１抗原フォーマットの場合と同様に、ＢＳ３はＣＤ１９にのみ結合し、ＣＤ３８に結合しなかった。

【0256】

【表5】

【0257】

ＣＤ１９および／またはＣＤ３８に結合する能力についてバリアントをさらに試験した。結合実験をＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ上で２５℃で行った。抗体を抗ｈＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサーに３００秒間ロードした。リガンドをロードしたセンサーを抗原（ＣＤ１９およびＣＤ３８）の２倍段階希釈液（３００ｎＭで開始）に会合のためにＣＤ１９について２４０秒間、ＣＤ３８について１５０秒間、続いて解離のためにＣＤ１９について６００秒間、ＣＤ３８について１３０秒間浸漬した。一価（１：１）結合モデルを使用して速度定数を算出した。表６は抗ＣＤ３８ ＣＤＲＨ２バリアントの結合を示す。表７はＣＤ３８軽鎖Ｗ３２Ｈバリアントの結合を示す。表８はＣＤ１９重鎖フレームワーク突然変異体Ａ８４Ｓ Ａ１０８Ｌの結合を示す。

【0258】

【表6】

【0259】

【表7】

【0260】

【表8】

【0261】

実施例３：細胞結合研究
細胞結合研究プロトコール：５つの細胞株（ＨＥＫ２９３－ＣＤ１９、ＨＥＫ２９３－ＣＤ３８、ＨＥＫ２９３－ＣＤ１９／ＣＤ３８、Ｄａｕｄｉ、およびＲＥＨ）を、無処理対照に加えて、１３３ｎＭ、続いて３倍希釈系列（計７点）の試験品と３連でインキュベートした。ＨＥＫ２９３細胞株への一過的なトランスフェクトを行った。

【0262】

Ｄａｕｄｉ、ＲａｊｉおよびＲＥＨ細胞株上のＣＤ１９およびＣＤ３８の細胞表面発現を評価するための研究を行った。商業的に入手可能なＰＥにコンジュゲートされた抗体を用いて細胞を３連で染色し、洗浄し、フローサイトメトリーを介する取得を行った。細胞の表面上の分子発現を定量化するために、Ｂａｎｇｓ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＱｕａｎｔｕｍ Ｓｉｍｐｌｙ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ ｋｉｔ（カタログ ＃８１５－Ａ）を使用して、分子数／細胞値に対してＭＦＩを補間するための標準曲線を生成した（表９）。

【0263】

【表9】

【0264】

図１３Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）ならびに２つの対照二特異性抗体（ＣＤ１９またはＣＤ３８に対する１つのアームおよび水痘帯状疱疹ウイルスに対する他のアームを各々有する）のＤａｕｄｉ細胞に対する結合を示す。Ｄａｕｄｉ細胞は表面上にＣＤ３８を約１００万コピー有するがＣＤ１９を約２００，０００コピーしか有さないことを考慮すれば、図１３Ａは、抗ＣＤ３８ ８５１Ｄおよび３８Ｋ－ＶＺＶＨの結合は効率的であるが、抗ＣＤ１９ ８５１Ａ、８５１Ｂ、１９Ｈ－ＶＺＶＫの結合は中等度に過ぎないことを示す。なお、２つのＣＤ３８結合性Ｆａｂを有する８５１Ｄは、ＣＤ３８のための１つの結合性Ｆａｂしか有さない３８Ｋ－ＶＺＶＨよりも約５倍良好に結合する。

【0265】

図１３Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２およびＢＳ４のＤａｕｄｉ細胞に対する結合を示す。ＣＤ３８およびＣＤ１９の両方に結合する二特異性抗体のアビディティは、ＣＤ３８にのみ結合する３８Ｋ－ＶＺＶＨに対してそれらの結合を比較することにより明らかとなる。

【0266】

図１４Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）ならびに２つの対照二特異性抗体（ＣＤ１９またはＣＤ３８に対する１つのアームおよび水痘帯状疱疹ウイルスに対する他のアームを各々有する）のＲＥＨ細胞に対する結合を示す。ＲＥＨ細胞は表面上にＣＤ３８を約３００，０００コピー有するがＣＤ１９を約５０，０００コピーしか有さないことを考慮すれば、図１４Ａは、抗ＣＤ３８ ８５１Ｄおよび３８Ｋ－ＶＺＶＨの結合は効率的であるが、抗ＣＤ１９ ８５１Ａ、８５１Ｂ、１９Ｈ－ＶＺＶＫの結合は中等度に過ぎないことを示す。ＭＦＩの規模は、ＲＥＨ細胞上のＣＤ３８およびＣＤ１９の両方のより低い発現レベルに起因して、Ｄａｕｄｉ細胞と比較して有意により低い（図２Ａ、２Ｂ）。なお、２つのＣＤ３８結合性Ｆａｂを有する８５１Ｄは、ＣＤ３８のための１つの結合性Ｆａｂしか有さない３８Ｋ－ＶＺＶＨよりも約５倍良好に結合する。

【0267】

図１４Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２およびＢＳ４のＲＥＨ細胞に対する結合を示す。ＣＤ３８およびＣＤ１９の両方に結合する二特異性抗体のアビディティは、ＣＤ３８にのみ結合する３８Ｋ－ＶＺＶＨに対してそれらの結合を比較することにより明らかとなる。

【0268】

図１５Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）および２つの対照二特異性抗体（３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＫ）の、ＣＤ１９をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する結合を示す。予想されたように、２つの抗ＣＤ３８抗体はこれらの細胞に結合しない。なお、２つのＣＤ１９結合性Ｆａｂを各々有する８５１Ａおよび８５１Ｂは、ＣＤ１９のための１つの結合性Ｆａｂしか有さない１９Ｈ－ＶＺＶＫよりも有意に良好に結合する。

【0269】

図１５Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２およびＢＳ４の、ＣＤ１９をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する結合を示す。ＢＳ２およびＢＳ４はＢＳ１よりもわずかに良好に結合し、ＢＳ１は抗ＣＤ３８軽鎖を有するので、ＢＳ２およびＢＳ４はＢＳ１よりも約１０倍良好にＣＤ１９に結合する（Ｔａｂｌｅ Ｏｃｔｅｔデータを参照）。

【0270】

図１６Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）および２つの対照二特異性抗体（３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＫ）の、ＣＤ３８をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する結合を示す。予想されたように、３つの抗ＣＤ１９抗体はこれらの細胞に結合しない。なお、２つのＣＤ３８結合性Ｆａｂを有する８５１Ｄは、ＣＤ３８のための１つの結合性Ｆａｂしか有さない３８Ｋ－ＶＺＶＨよりも良好に結合する。

【0271】

図１６Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２およびＢＳ４の、ＣＤ３８をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に対する結合を示す。

【0272】

細胞結合研究プロトコール － 非特異的バックグラウンド結合：ＣＨＯ－ＳおよびＥｘｐｉ２９３Ｔ細胞株に対する３つの親モノクローナル抗体（抗ＣＤ１９クローン８５１Ａおよび８５１Ｂおよび抗ＣＤ３８クローン８５１Ｄ）、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照、ならびにダラツムマブの結合を評価するための研究を行った。２つの細胞株をｖｉａｂｉｌｉｔｙ色素で染色し、次に無処理対照の他に、無処理、無二次対照に加えて、１，２５０ｎＭの最高濃度、続いて５倍希釈系列（計４点）の試験品と３連でインキュベートした。

【0273】

図１７Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）の、非トランスフェクトＣＨＯ－Ｓ細胞に対する結合を示す。非特異的結合が、２５０ｎＭに開始して３つすべての親抗体について見られ、抗ＣＤ３８ ８５１Ｄでより著しかった。

【0274】

図１７Ｂは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）の、非トランスフェクトＥｘｐｉ２９３Ｔ細胞に対する結合を示す。非特異的結合が、２５０ｎＭに開始して３つすべての親抗体について見られ、抗ＣＤ３８ ８５１Ｄでより著しかった。

【0275】

実施例４：直接的なおよび架橋によるアポトーシス
直接的なアポトーシスの評価のために、細胞を試験品で処理し、４８時間３７℃／５％のＣＯ_２でインキュベートした。架橋誘導性アポトーシスの評価のために、細胞を試験品と氷上で３０分間インキュベートした後に、５μｇ／ｍＬのウサギ抗ヒトＦｃガンマ特異的Ｆ（ａｂ’）_２を加えた。細胞を次に４８時間３７^oＣ／５％のＣＯ_２でインキュベートした。インキュベーション後に、細胞を洗浄し、アネキシンＶで染色し、次にｖｉａｂｉｌｉｔｙ色素（ヨウ化プロピジウム；ＰＩ）を含有するアネキシンＶ緩衝液に再懸濁した後に、フローサイトメトリー取得を行った。早期アポトーシス細胞をアネキシンＶ＋／ＰＩ－単一細胞として定義し、後期アポトーシス／壊死細胞をアネキシンＶ＋／ＰＩ＋単一細胞として定義した。アネキシンＶ＋／ＰＩ－およびアネキシンＶ＋／ＰＩ－の和を全アポトーシス／壊死細胞として定義した。アネキシンＶ＋／ＰＩ－細胞またはアネキシンＶ＋／ＰＩ＋のパーセンテージをプロットして様々なアポトーシス条件を比較した。

【0276】

直接的なアポトーシスの評価のために、非処理対照に加えて、試験品を３３ｎＭの最終最高濃度、続いて７点の５倍希釈系列で各々３連で試験した。架橋誘導性アポトーシスのために、ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照に加えて、個々の試験品（ＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４、８５１Ａ、８５１Ｂ、および８５１Ｄ）ならびに試験品の組合せ（８５１Ａおよび８５１Ｄ、８５１Ｂおよび８５１Ｄ、および３８Ｋ－ＶＺＶＨおよび１９Ｈ－ＶＺＶＫ）を、非処理対照に加えて、３３ｎＭの最終最高濃度、続いて７点の５倍希釈系列で３連で各々試験した。アネキシンＶ染色の陽性対照として、細胞を５ｍＭのスタウロスポリンで処理した。

【0277】

図１８Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）、２つの対照二特異性抗体（３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＫ）、ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照についてのＤａｕｄｉ細胞における直接的なアポトーシスを示す。ダラツムマブは最も高いレベルのアポトーシスを呈した。両方の抗ＣＤ１９親（８５１Ａ、８５１Ｂ）は、ダラツムマブと比較してより低いレベルのアポトーシスを呈した。２つの二特異性対照および抗ＣＤ３８親抗体８５１Ｄは、認識可能な直接的なアポトーシスを示さなかった。

【0278】

図１８Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４、ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照についてのＤａｕｄｉ細胞における直接的なアポトーシスを示す。ＢＳ１およびＢＳ２フォーマットは、ダラツムマブと比較して有意により高いレベルの直接的なアポトーシスを示した。二特異性フォーマットＢＳ４は、親抗ＣＤ１９ ８５１Ａ／８５１Ｂ抗体と同等のレベルの直接的なアポトーシスを示し（図１２Ａの比較）、これは、ＢＳ４フォーマットはアポトーシスを開始させるためにＣＤ１９およびＣＤ３８を近接させることができないことに起因し得る。

【0279】

図１９Ａは、親抗体（８５１Ａ、８５１Ｂ、８５１Ｄ）、親抗体の２つの組合せ（８５１Ａ＋８５１Ｄ、８５１Ｂ＋８５１Ｄ）、ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照についてのＤａｕｄｉ細胞における架橋誘導性アポトーシスを示す。架橋は、ダラツムマブ駆動性アポトーシスのレベルを増加させた（図１２Ａおよび図７Ａの比較）。架橋は、直接的なアポトーシスを示さなかった抗ＣＤ３８ ８５１Ｄについてアポトーシスのレベルを有意に増加させた（図１２Ａおよび図７Ａの比較）。抗ＣＤ１９親抗体８５１Ａおよび８５１Ｂを架橋した場合のアポトーシスのレベルにおける増加は、恐らくはＤａｕｄｉ細胞上のＣＤ３８と比較したＣＤ１９のより低いレベルに起因して、ＣＤ３８抗体についてより小さかった（表９を参照）。抗ＣＤ３８ ８５１Ｄとの抗ＣＤ１９ ８５１Ａまたは８５１Ｂの組合せの架橋は、８５１Ｄ単独と比較してアポトーシスのレベルを増加させなかった。

【0280】

図１９Ｂは、二特異性抗体ＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４、（３８Ｋ－ＶＺＶＨ＋１９Ｈ－ＶＺＶＫ）、ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照についてのＤａｕｄｉ細胞における架橋誘導性アポトーシスを示す。架橋された場合、ＢＳ１およびＢＳ２フォーマットは、ダラツムマブと同等のレベルのアポトーシスを示した。顕著なことに、二特異性フォーマットＢＳ４は、ＢＳ１、ＢＳ２およびダラツムマブと同等のレベルの架橋誘導性アポトーシスを示し、架橋なしで、ＢＳ４はアポトーシスを示さなかった（図６Ｂを参照）。２つの対照抗体、３８Ｋ－ＶＺＶＨおよび１９Ｈ－ＶＺＶＫの組合せは、有意なアポトーシスを呈したが二特異性フォーマットのいずれよりも低く、単一の抗体中に抗ＣＤ１９および抗ＣＤ３８結合性部位を含むことは独立した抗体におけるよりも有利であることを示す。

【0281】

実施例５：細胞傷害性
Ｄａｕｄｉ標的細胞を試験品の用量応答で処理し、１５分間３７Ｃ／５％のＣＯ２でインキュベートした。０ｎＭの対照に加えて、試験品を１３３ｎＭの最終最高濃度、続いて７点の５倍希釈系列で試験した。ダラツムマブおよびＩｇＧ１アイソタイプ対照を陽性および陰性対照として使用した。

【0282】

予備処理した標的細胞をｎ＝３のドナーからのヒトＰＢＭＣと共培養した（Ｅ：Ｔ ２５：１）。ＰＢＭＣは、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２で終夜「プライム」してあった。ＰＢＭＣをＶｉａＦｌｕｏｒ ４０５標識した。試料を４時間３７Ｃ／５％のＣＯ２でインキュベートした後に、細胞傷害性についてのフローサイトメトリー分析を行った。細胞傷害性分析のために、細胞をヨウ化プロピジウム（Ｐ．Ｉ．）で染色し、ハイスループットフローサイトメトリーにより分析した。ＶＦ４０５－集団内のＰ．Ｉ．＋細胞のパーセンテージを標的細胞の細胞傷害性の指標として分析した。

【0283】

図２０Ａ、図２０Ｂ、および図２０Ｃは３人のドナーについての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す。３人すべてのドナーについて、結果は類似していた。３つの二特異性フォーマットであるＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４と、ダラツムマブは、類似したレベルのＡＤＣＣを呈した。恐らくは標的Ｄａｕｄｉ細胞上のＣＤ１９の低いレベルに起因して、抗ＣＤ１９二特異性対照１９Ｈ－ＶＺＶＫはＡＤＣＣを誘導せず、ＩｇＧ１対照抗体と同等であった（表９を参照）。対照的に、可能性としてはＣＤ１９と比較してＤａｕｄｉ細胞上のＣＤ３８のはるかにより高いレベルに起因して、抗ＣＤ３８二特異性対照３８Ｋ－ＶＺＶＨは、二特異物およびダラツムマブと同等のＡＤＣＣを呈した。

【0284】

図２１Ａ～Ｃは３人のドナーについてのＡＤＣＣを示す。３人すべてのドナーについて、結果は類似していた。３つの二特異性フォーマットであるＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４は、類似したレベルのＡＤＣＣを呈した。ＢＳ１、ＢＳ２、ＢＳ４の非フコシル化バージョンは、フコシル化バージョンと比較して約１０倍の増加したＡＤＣＣを示した。

【0285】

補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイもまた行った。標的細胞を以下の試験品：ＢＳ１、ＢＳ２、３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＨ、３８Ｋ－ＶＺＶＨ／１９Ｈ－ＶＺＶＨの組合せの他に、対照となるダラザレックス、抗ＣＤ２０、ＷＴ ＩｇＧ１タファシタマブ（Ｔａｆａｓｉｔｉｍａｂ）、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照の用量応答で処理した。無処理対照に加えて、すべてを１３３ｎＭの最高濃度、続いて計７点の５倍希釈系列で試験した。３７Ｃ、５％のＣＯ２での１５分のインキュベーション後に、補体を２５％の最終濃度で処理された細胞に加えた。細胞を次に補体とさらに２時間３７Ｃ、５％のＣＯ２でインキュベートした。補体インキュベーション後に、細胞を洗浄し、５μｇ／ｍＬのｖｉａｂｉｌｉｔｙ色素、ヨウ化プロピジウム（Ｐ．Ｉ．）と共に再懸濁し、ハイスループットフローサイトメトリーを介して取得した。

【0286】

図２２Ａおよび図２２Ｂは補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイの結果を示す。陽性技術的対照、抗ＣＤ２０は、堅牢な用量依存性のＣＤＣ活性を誘導した。３８Ｋ－ＶＺＶＨおよび１９Ｈ－ＶＺＶＨ（単独または組合せのいずれか）、抗ＣＤ１９タファシタマブ（ｗｔ ＩｇＧ１）、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照はいかなるＣＤＣ活性も誘導しなかった。ダラザレックス、ＢＳ１、およびＢＳ２はすべてＣＤＣ活性を示した（但し、文献から予想されるように、抗ＣＤ２０と同じ規模ではなかった）。ダラザレックスの最大細胞傷害性はＢＳ１およびＢＳ２の両方のそれよりも高かった。

【0287】

試験品の用量応答で処理され、１５分間３７Ｃ、５％のＣＯ２でインキュベートされたｐＨｒｏｄｏ Ｇｒｅｅｎ ＡＭ（ｐＨＧ）標識Ｒａｊｉ細胞により抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）をさらにアッセイした。ｐＨＧはｐＨ感受性色素であり、中性ｐＨにおいて弱い蛍光性に過ぎないが、マクロファージの成熟ファゴソームにおける低いｐＨにおいて高度に蛍光性である。抗ＣＤ２０抗体およびＩｇＧ１アイソタイプ対照を用いたｐＨＧ標識Ｒａｊｉ標的細胞を陽性対照および陰性対照として使用し、１３３ｎＭの最高濃度、７点の５倍希釈系列、および０ｎＭの対照を用いた。予備処理された標的細胞をｎ＝３のドナーからのヒトマクロファージ（単球からｉｎ ｖｉｔｒｏで分化させた）と共培養した（Ｅ：Ｔ １：２）。マクロファージをＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識した。試料を４時間３７Ｃ、５％のＣＯ２でインキュベートした後に、ファゴサイトーシスについてフローサイトメトリー分析を行った。ｐＨＧｈｉ／ＣＴＶ＋細胞のパーセンテージを標的細胞ファゴサイトーシスの指標として分析した。パーセンテージをＸＹチャート上で試験品濃度の対数に対してプロットし、ＥＣ５０を算出した４パラメーター非線形回帰曲線に対してデータをフィッティングした。

【0288】

図２３は、標的としてＲａｊｉ細胞およびドナーマクロファージを使用した抗体依存性細胞ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）アッセイの結果を示す。陽性対照、抗ＣＤ２０は、４時間後に３人すべてのドナーについて用量依存性ファゴサイトーシスを実証した（５～１０％の最大ファゴサイトーシス）。陰性対照、ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、４時間後に３人すべてのドナーについて用量依存性ファゴサイトーシスを実証しなかった。ダラザレックスは、４時間後に３人すべてのドナーについて用量依存性ファゴサイトーシスを実証した（４～１０％の最大ファゴサイトーシス）。ＢＳ－１、ＢＳ－２、非フコシル化ＢＳ－１、および非フコシル化ＢＳ－２は、わずかな用量依存性ファゴサイトーシスを示し、非フコシル化フォーマットはＡＤＣＰにおける増加を結果としてもたらした。

【0289】

実施例６：ＲＢＣとの相互作用
ｎ＝３のカニクイザルおよびｎ＝３のヒトドナーからの赤血球細胞に対する試験品の結合を評価するためにフローサイトメトリーベースの赤血球細胞（ＲＢＣ）結合研究を行った。全血を１Ｘ ＰＢＳで洗浄し、次にＰＢＳで２０倍に希釈した後に、試験品で処理した。０ｎＭの対照に加えて、二特異物（ＢＳ１、ＢＳ２）、親モノクローナル（８５１Ａ、８５１Ｄ）および対照（抗ＣＤ３８ダラザレックス、組換え抗ＣＤ１９タファシタマブ、ＩｇＧ１アイソタイプ対照、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７にコンジュゲートされた抗ＣＤ４７）を１３３ｎＭの最高最終濃度、続いて計７点の５倍段階希釈で３連で試験した。単一アーム対照（３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＫ）を組合せで、共に１３３ｎＭの最高濃度および同じ用量応答で、試験した。

【0290】

一次抗体との３０分間の氷上でのインキュベーション後に、細胞を洗浄し、５ｕｇ／ｍＬの二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識されたヤギ抗ヒトＦｃγ Ｆ（ａｂ’）_２）で染色して赤血球細胞上の試験品の結合を検出した。二次抗体は抗ＣＤ４７－Ａ６４７染色細胞のために使用しなかった。二次抗体とのさらなる３０分間の氷上でのインキュベーション後に、染色された細胞を洗浄し、希釈し、ハイスループットフローサイトメトリーにより取得した。単一細胞集団のＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を算出した。ＡＦ６４７のＭＦＩをＸＹチャート上にプロットし、濃度の対数に対してＭＦＩをグラフ化し、ＥＣ５０を算出した非線形回帰曲線にデータをフィッティングした。

【0291】

図２４は、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ＣＤ４７は３人すべてのヒトドナーの赤血球細胞を用いて用量応答結合曲線を示したことを示す。ダラザレックスもまた３人すべてのドナーとの結合における用量依存性の増加を示したが、最大ＭＦＩは抗ＣＤ４７よりも低い桁であった。抗ＣＤ３８ ８５１Ｄはダラザレックスの次に高い最大ＭＦＩを示し、続いてＢＳ１、ＢＳ２、３８Ｋ－ＶＺＶＨ＆１９Ｈ－ＶＺＶＫの組合せ、および抗ＣＤ１９タファシタマブであった。最後に、抗ＣＤ１９ ８５１ＡおよびＩｇＧ１アイソタイプは、最も高い濃度においてのみＭＦＩにおけるわずかな増加を示すに過ぎなかった。

【0292】

計３匹の健常（ｎ＝３）カニクイザル（Ｃｙｎｏ）ドナーおよび３人の健常（ｎ＝３）ヒトドナーからの赤血球細胞においてｉｎ ｖｉｔｒｏ赤血球凝集アッセイを行った。全血を研究の日に獲得し、凝固について点検した。血液を次にＰＢＳで洗浄し、１：５０に希釈して「全血基質」を得た。全血基質を９６ウェル丸底プレートにプレーティングし、０ｎＭの対照に加えて、１３３ｎＭの最高最終濃度、続いて６点の５倍段階希釈のＰＢＳ中の試験品（ＢＳ１、ＢＳ２、３８Ｋ－ＶＺＶＨ＋１９Ｈ－ＶＺＶＫ、８５１Ａ、および８５１Ｄ）、対照（野生型ＩｇＧ１を有するタファシタマブ）、ダラザレックス、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照）、または陽性技術的対照（ＩＧＭ－５５．５）を用いて３連で処理した。３７Ｃ、５％のＣＯ２での１時間のインキュベーション後に、プレートを写真撮影して赤血球凝集のレベルを確認した。参照として写真を使用して、各々のウェルを０～５の特有の赤血球凝集スケールでスコア付けした。各々のスコアの特有の現れは、個々のドナーに対してある程度相対的なものである。

【0293】

図２５Ａはヒトドナー３についての赤血球凝集アッセイの結果を示す。陽性対照、抗ＣＤ４７は、０．０４～１．１ｎＭで開始して、３人すべてのヒトドナーについて赤血球凝集を誘導した。ＢＳ１、ＢＳ２、３８Ｋ－ＶＺＶＨ＋１９Ｈ－ＶＺＶＫ、ダラザレックス、タファシタマブ、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照はすべて、３人すべてのドナーについていかなる濃度でも赤血球凝集の誘導を示さなかった。モノクローナル抗体８５１Ａ（抗ＣＤ１９）および８５１Ｄ（抗ＣＤ３８）の両方は、各々について０．２または１．１ｎＭで開始して、３人すべてのドナーについて赤血球凝集を誘導し、応答は技術的対照（抗ＣＤ４７）と規模において類似していた。親モノクローナル抗体とは対照的に、ＢＳ１およびＢＳ２は、いかなる濃度においても赤血球凝集のいかなる誘導も示さなかった。

【0294】

図２５Ｂは、カニクイザルドナー３についての赤血球凝集アッセイの結果を示す。陽性対照、ＩＧＭ－５５．５（抗ｌｉｔｔｌｅ ｉ抗原ＩｇＭ抗体）は、０．０４または０．２ｎＭで開始して、３匹すべてのカニクイザルドナーについて赤血球凝集を誘導した。ＢＳ１、ＢＳ２、３８Ｋ－ＶＺＶＨ＋１９Ｈ－ＶＺＶＫ、ダラザレックス、タファシタマブ、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照はすべて、３匹すべてのドナーについていかなる濃度でも赤血球凝集の誘導を示さなかった。モノクローナル抗体８５１Ａ（抗ＣＤ１９）および８５１Ｄ（抗ＣＤ３８）の両方は、各々１．１ｎＭで開始して、３匹すべてのドナーについて赤血球凝集を誘導した。親モノクローナル抗体とは対照的に、ＢＳ１およびＢＳ２は、いかなる濃度においても赤血球凝集のいかなる誘導も示さなかった。

【0295】

３匹（ｎ＝３）の健常カニクイザル（ｃｙｎｏ）および３人（ｎ＝３）の健常ヒトドナーからの赤血球細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ溶血アッセイも行った。全血を研究の日に獲得し、凝固について点検した。血液をＰＢＳで洗浄し、１：１０に希釈して「全血基質」を得た。全血基質をＰＢＳ中の試験品および対照で処理した。０ｎＭの対照に加えて、二特異物（ＢＳ１、ＢＳ２）、親モノクローナル（８５１Ａ、８５１Ｄ）および対照（抗ＣＤ３８ダラザレックス、組換え抗ＣＤ１９タファシタマブ、ＩｇＧ１アイソタイプ対照）を１３３ｎＭの最高最終濃度、続いて計７点の５倍段階希釈で３連で試験した。単一アーム対照（３８Ｋ－ＶＺＶＨ、１９Ｈ－ＶＺＶＫ）を組合せで、両方とも１３３ｎＭの最高濃度および同じ用量応答で、試験した。サポニンを０．１％の最高濃度、計７点の３倍段階希釈で試験した。３７Ｃ、５％のＣＯ２での１時間のインキュベーション後に、プレートを遠心分離し、上清を収集した。上清をプレートリーダーを介して５４０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）について分析した。陽性対照、サポニンは、すべての種およびドナーについて、０．００１％で開始して０．１０％まで、用量依存的な溶血を誘導した。いずれの試験品も、試験されたいかなる濃度においてもいかなる溶血も誘導しなかった。

【0296】

図２６は、試験品のいずれも、試験されたいかなる濃度においてもいかなる溶血も誘導しなかったことを示す。陽性対照、サポニンは、すべての種およびドナーについて、０．００１％で開始して０．１０％まで、用量依存的な溶血を誘導した。

【0297】

本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載したが、そのような実施形態は例示のためにのみ提供されていることは当業者に明らかであろう。多数のバリエーション、変更、および置換が、本発明から離れることなく当業者に今や想起されるであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する様々な代替が本発明の実施において用いられ得ることが理解されるべきである。以下の請求項は本発明の範囲を定義すること、ならびにこれらの請求項の範囲内の方法および構造およびそれらの均等はそれによりカバーされることが意図される。

【0298】

【表10-1】

【0299】

【表10-2】

【0300】

【表10-3】

【0301】

【表10-4】

【0302】

【表10-5】

【0303】

【表10-6】

【0304】

【表10-7】

【0305】

【表10-8】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図12E】

【図12F】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21A】

【図21B】

【図21C】

【図22A】

【図22B】

【図23】

【図24】

【図25A】

【図25B】

【図26】

【配列表】

2023516195000001.app

【国際調査報告】