特表 2023-516753 ＧＬＡ遺伝子の突然変異を有する患者におけるファブリー病を治療する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-20

(54)【発明の名称】ＧＬＡ遺伝子の突然変異を有する患者におけるファブリー病を治療する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/445 20060101AFI20230413BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230413BHJP

   C12N 15/56 20060101ALN20230413BHJP

【ＦＩ】

A61K31/445

A61P43/00 111

C12N15/56 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022553583

(86)(22)【出願日】2021-03-05

(85)【翻訳文提出日】2022-10-27

(86)【国際出願番号】 US2021020984

(87)【国際公開番号】W WO2021178737

(87)【国際公開日】2021-09-10

(31)【優先権主張番号】62/986,297

(32)【優先日】2020-03-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】507170099

【氏名又は名称】アミカス セラピューティックス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ベンジャミン， エルフリダ

(72)【発明者】

【氏名】ウー， シャオヤン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC21

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZC51

(57)【要約】

ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者を治療する方法及びファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法が提供される。特定の方法は、α－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの治療有効用量を患者に投与することであって、患者がα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列にミスセンス突然変異を有することを含む。更に記載されるのは、ファブリー病を治療するための薬理学的シャペロンの使用及びファブリー病の治療において使用するための組成物についても記載される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とするヒト患者におけるファブリー病を治療するための方法であって、前記患者に治療有効用量のミガラスタット又はその塩を投与することを含み、前記患者は：Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄからなる群から選択されるα－ガラクトシダーゼＡ突然変異を有する、方法。

【請求項2】

前記ミガラスタット又はその塩が前記患者に１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記患者が約１００～約１５０ｍｇ遊離塩基当量の前記ミガラスタット又はその塩を１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記患者が約１２３ｍｇ遊離塩基当量の前記ミガラスタット又はその塩を１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記患者が約１２３ｍｇのミガラスタット遊離塩基を１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記患者が約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩を１日おきに投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記ミガラスタット又はその塩が経口投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ミガラスタット又はその塩が注射によって投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ミガラスタット又はその塩がα－ガラクトシダーゼＡ活性を増強する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記患者が男性である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記患者が女性である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記突然変異がＡ２９Ｄである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記突然変異がＲ３８Ｓである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記突然変異がＮ５３Ｙである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記突然変異がＹ８８Ｃである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記突然変異がＶ１２４Ｇである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記突然変異がＩ１３３Ｆである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記突然変異がＡ１４３Ｖである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記突然変異がＹ１５２Ｎである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記突然変異がＦ１５９Ｃである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記突然変異がＡ１６０Ｄである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記突然変異がＤ１６５Ｎである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記突然変異がＦ１６９Ｉである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記突然変異がＬ１８０Ｖである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記突然変異がＤ１８２Ｇである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記突然変異がＲ１９６Ｔである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記突然変異がＷ２０９Ｒである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記突然変異がＡ２５７Ｔである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記突然変異がＰ２５９Ｓである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記突然変異がＧ２７１Ａである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記突然変異がＳ２７６Ｔである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記突然変異がＭ２９０Ｖである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記突然変異がＡ２９１Ｓである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記突然変異がＩ３０３Ｔである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記突然変異がＩ３０３Ｖである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記突然変異がＬ３１０Ｖである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記突然変異がＧ３６０Ａである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記突然変異がＧ３６０Ｒである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記突然変異がＧ３７５Ａである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記突然変異がＬ３９４Ｐである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記突然変異がＧ４１１Ｓである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記突然変異がＮ４１９Ｄである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記突然変異が薬理学的参照表に開示されている、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記薬理学的参照表がファブリー病を治療するために承認されたミガラスタット製品のための添付文書に提供されている、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記薬理学的参照表がＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標）のための添付文書に提供されている、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

前記薬理学的参照表がウエブサイトで提供されている、請求項４３に記載の方法。

【請求項47】

前記ウエブサイトがｗｗｗ．ｇａｌａｆｏｌｄａｍｅｎａｂｉｌｉｔｙｔａｂｌｅ．ｃｏｍ又はｗｗｗ．ｆａｂｒｙｇｅｎｅｖａｒｉａｎｔｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍの１つ以上である、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

ファブリー病を有すると診断された、又はファブリー病を有すると疑われる患者におけるα－ガラクトシダーゼＡを増強する方法であって、前記患者に治療有効用量のミガラスタット又はその塩を投与することを含み、前記患者は：Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄからなる群から選択されるα－ガラクトシダーゼＡ突然変異を有する、方法。

【請求項49】

前記ミガラスタット又はその塩が前記患者に１日おきに投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記患者が約１００～約１５０ｍｇ遊離塩基当量の前記ミガラスタット又はその塩を１日おきに投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項51】

前記患者が約１２３ｍｇ遊離塩基当量の前記ミガラスタット又はその塩を１日おきに投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項52】

前記患者が約１２３ｍｇのミガラスタット遊離塩基を１日おきに投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項53】

前記患者が約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩を１日おきに投与される、請求項４８に記載の方法。

【請求項54】

前記ミガラスタット又はその塩が経口投与される、請求項４８～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記ミガラスタット又はその塩が注射によって投与される、請求項４８～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記患者が男性である、請求項４８～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記患者が女性である、請求項４８～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記突然変異がＡ２９Ｄである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記突然変異がＲ３８Ｓである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記突然変異がＮ５３Ｙである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記突然変異がＹ８８Ｃである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項62】

前記突然変異がＶ１２４Ｇである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記突然変異がＩ１３３Ｆである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記突然変異がＡ１４３Ｖである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記突然変異がＹ１５２Ｎである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記突然変異がＦ１５９Ｃである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記突然変異がＡ１６０Ｄである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記突然変異がＤ１６５Ｎである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

前記突然変異がＦ１６９Ｉである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

前記突然変異がＬ１８０Ｖである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記突然変異がＤ１８２Ｇである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

前記突然変異がＲ１９６Ｔである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

前記突然変異がＷ２０９Ｒである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記突然変異がＡ２５７Ｔである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記突然変異がＰ２５９Ｓである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記突然変異がＧ２７１Ａである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

前記突然変異がＳ２７６Ｔである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

前記突然変異がＭ２９０Ｖである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記突然変異がＡ２９１Ｓである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記突然変異がＩ３０３Ｔである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記突然変異がＩ３０３Ｖである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記突然変異がＬ３１０Ｖである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記突然変異がＧ３６０Ａである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記突然変異がＧ３６０Ｒである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

前記突然変異がＧ３７５Ａである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項86】

前記突然変異がＬ３９４Ｐである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

前記突然変異がＧ４１１Ｓである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項88】

前記突然変異がＮ４１９Ｄである、請求項４８～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項89】

前記突然変異が薬理学的参照表に開示されている、請求項４８～８８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項90】

前記薬理学的参照表がファブリー病を治療するために承認されたミガラスタット製品のための添付文書に提供されている、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記薬理学的参照表がＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標）のための添付文書に提供されている、請求項８９に記載の方法。

【請求項92】

前記薬理学的参照表がウエブサイトで提供されている、請求項８９に記載の方法。

【請求項93】

前記ウエブサイトはｗｗｗ．ｇａｌａｆｏｌｄａｍｅｎａｂｉｌｉｔｙｔａｂｌｅ．ｃｏｍ又はｗｗｗ．ｆａｂｒｙｇｅｎｅｖａｒｉａｎｔｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍの１つ以上である、請求項９２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明の原理及び実施形態は、概して、特にα－ガラクトシダーゼ（ＧＬＡ）遺伝子における突然変異又は変異体を有する患者におけるファブリー病の治療への薬理学的シャペロンの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

多くのヒト疾患は、突然変異が引き起こすタンパク質のアミノ酸配列の変化によりタンパク質の安定性が低下し、その適切な折り畳みが妨げられ得ることに起因する。タンパク質は概して、小胞体、又はＥＲとして知られる細胞の特異的な領域内で折り畳まれる。細胞は、概してタンパク質トラフィッキングと称されるプロセスである、タンパク質がその正しい三次元形状に折り畳まれた後にＥＲから細胞内の適切な行き先へと移動できることを確実にする品質管理機構を有する。誤って折り畳まれたタンパク質は、当初ＥＲに保持された後に品質管理機構によって排除されることが多い。場合によっては、誤って折り畳まれたタンパク質が排除される前にＥＲに蓄積し得る。誤って折り畳まれたタンパク質がＥＲに保持されていると、その適切なトラフィッキングの妨げになり、結果として生物学的活性が低下することにより細胞機能が損なわれ、最終的に疾患につながり得る。加えて、誤って折り畳まれたタンパク質がＥＲに蓄積すると、細胞に各種のストレスがかかることになる可能性もあり、これもまた細胞機能不全及び疾患の一因となり得る。

【0003】

かかる突然変異は、リソソーム酵素をコードする遺伝子の突然変異に起因するリソソーム酵素の欠損を特徴とするリソソーム蓄積障害（ＬＳＤ）につながり得る。結果として生じる疾患が、脂質、炭水化物、及び多糖類を含めたこの酵素の基質の病的蓄積を引き起こす。それぞれのＬＳＤに関連して多くの異なる突然変異遺伝子型が存在するが、これらの突然変異の多くは、安定性の低い酵素の産生につながり得るミスセンス突然変異である。こうした安定性の低い酵素は、時にＥＲ関連分解経路によって早まって分解される。その結果、リソソームに酵素欠損が起こり、基質が病的に蓄積する。かかる突然変異酵素は、時に関連技術分野において「フォールディング突然変異体」又は「コンホメーション突然変異体」と称される。

【0004】

ファブリー病は、酵素α－ガラクトシダーゼＡ（α－Ｇａｌ Ａ）をコードするＧＬＡ遺伝子の突然変異によって引き起こされるＬＳＤである。α－Ｇａｌ Ａはスフィンゴ糖脂質代謝に必要である。この突然変異は様々な組織及び器官において基質グロボトリアオシルセラミド（ＧＬ－３）の蓄積を引き起こす。疾患遺伝子はＸ染色体にコードされるため、ファブリー病の男性はヘミ接合体である。ファブリー病は４０，０００人及び６０，０００人に１人の男性に発症すると推定され、女性では発生頻度が低い。

【0005】

ファブリー病の治療手法は幾つか存在している。ファブリー病の治療に承認されている一つの療法は酵素補充療法（ＥＲＴ）であり、これは典型的には精製された形態の対応する野生型タンパク質の静脈内注入を伴う。ファブリー病の治療には、現在２つのα－Ｇａｌ Ａ製剤：アガルシダーゼアルファ（Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）及びアガルシダーゼベータ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）；Ｓａｎｏｆｉ Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が利用可能である。しかしながら、ＥＲＴには幾つかの欠点がある。

【0006】

ＥＲＴが複雑化する主な要因の一つは、注入されたタンパク質の急速な分解であり、これは何回もの高額な費用のかかる高用量注入につながる。ＥＲＴには更に注意しておくべき点が幾つかあり、例えば、適切に折り畳まれたタンパク質の大規模な産生、精製、及び貯蔵が困難；グリコシル化された天然タンパク質の入手；抗タンパク質免疫応答の発生；及びタンパク質が血液脳関門を通過できず、中枢神経系の病変を軽減できないこと（即ち、低いバイオアベイラビリティ）などである。加えて、補充酵素は、ファブリー病変に顕著にみられる腎タコ足細胞又は心筋細胞における基質蓄積を減少させるのに十分な量を心臓又は腎臓に浸透させることができない。

【0007】

ある種の酵素欠損についての別の治療手法は、小分子阻害薬を使用して欠損酵素タンパク質の天然基質の産生を抑え、それにより病変を軽減することを伴う。この「基質抑制」手法は、特にスフィンゴ糖脂質貯蔵障害を含む約４０のＬＳＤのクラスについて記載されている。療法として使用が提案されている小分子阻害薬は、糖脂質の合成に関わる酵素の阻害に特異的であり、欠損酵素によって分解される必要のある細胞性糖脂質の量を減少させる。

【0008】

３つ目のファブリー病治療手法は、薬理学的シャペロン（ＰＣ）と呼ばれるものによる治療となっている。かかるＰＣはα－Ｇａｌ Ａの小分子阻害薬を含み、これはα－Ｇａｌ Ａに結合して突然変異酵素及び対応する野生型の両方の安定性を増加させることができる。しかしながら、ＰＣ療法のための患者は、安定化されてＥＲからのトラフィッキングを許容するコンホメーションに折り畳まれる可能性を有する酵素の産生を生じさせる、適用可能突然変異又は変異体を有していなければならない。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

従って、ファブリー病が血漿又は末梢白血球（ＷＢＣ）における欠損α－Ｇａｌ Ａ活性の検出によって診断される場合でさえ、特定のファブリー患者がＰＣを用いた治療に応答するかどうかを予測することは、極めて難しい。従って、ＰＣに応答性であろう新規なＧＬＡ突然変異又は変異体を同定し、これらの突然変異又は変異体を有するファブリー患者に新規な治療方法を利用可能にする必要が依然としてある。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明の一態様は、ファブリー病と診断された患者を治療する方法に関する。本方法は、α－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの治療有効用量を患者に投与することを含むが、ここで患者はα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列のミスセンス突然変異を有する。１つ以上の実施形態において、突然変異はＡ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄである。

【0011】

様々な実施形態において、これらの突然変異は配列番号２に関連する。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ３８Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ５３Ｙである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ８８Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＶ１２４Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ１３３Ｆである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１４３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ１５２Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１５９Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１６０Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１６５Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１６９Ｉである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ１８０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１８２Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ１９６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＷ２０９Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２５７Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＰ２５９Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ２７１Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＳ２７６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＭ２９０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３１０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３７５Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３９４Ｐである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ４１１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ４１９Ｄである。

【0012】

一部の実施形態において、薬学的シャペロンは、ミガラスタット又はその塩を含む。１つ以上の実施形態において、ミガラスタット又はその塩の用量は、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ遊離塩基当量（ＦＢＥ）である。一部の実施形態において、ミガラスタットの塩は、ミガラスタット塩酸塩である。１つ以上の実施形態において、用量は、１日おきに約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩である。一部の実施形態において、ミガラスタット又はその塩は経口投与される、又は注射によって投与される。これらの実施形態は、相互に、又は本発明の他の実施形態と、例えばファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロン並びに適用可能突然変異、好適なＰＣ及び用量、製剤及びそれらの投与経路に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0013】

本発明の別の態様は、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法に関する。本方法は、α－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの治療有効用量を患者に投与することを含むが、ここで患者はα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列にミスセンス突然変異を有する。１つ以上の実施形態において、突然変異はＡ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄである。

【0014】

様々な実施形態において、これらの突然変異は配列番号２に関連する。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ３８Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ５３Ｙである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ８８Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＶ１２４Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ１３３Ｆである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１４３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ１５２Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１５９Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１６０Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１６５Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１６９Ｉである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ１８０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１８２Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ１９６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＷ２０９Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２５７Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＰ２５９Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ２７１Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＳ２７６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＭ２９０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３１０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３７５Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３９４Ｐである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ４１１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ４１９Ｄである。

【0015】

一部の実施形態において、薬学的シャペロンは、ミガラスタット又はその塩を含む。１つ以上の実施形態において、ミガラスタット又はその塩の用量は、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ ＦＢＥである。一部の実施形態において、ミガラスタットの塩は、ミガラスタット塩酸塩である。１つ以上の実施形態において、用量は、１日おきに約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩である。一部の実施形態において、ミガラスタット又はその塩は経口投与される、又は注射によって投与される。これらの実施形態は、相互に、又は本発明の他の実施形態と、例えばファブリー病を有する患者の治療方法、ファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロン並びに適用可能突然変異、好適なＰＣ及び用量、製剤及びそれらの投与経路に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0016】

本発明の別の態様は、ファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用であって、患者がα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列にミスセンス突然変異を有する使用に関する。１つ以上の実施形態において、突然変異はＡ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄである。

【0017】

様々な実施形態において、これらの突然変異は配列番号２に関連する。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ３８Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ５３Ｙである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ８８Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＶ１２４Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ１３３Ｆである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１４３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ１５２Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１５９Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１６０Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１６５Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１６９Ｉである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ１８０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１８２Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ１９６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＷ２０９Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２５７Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＰ２５９Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ２７１Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＳ２７６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＭ２９０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３１０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３７５Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３９４Ｐである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ４１１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ４１９Ｄである。

【0018】

一部の実施形態において、薬学的シャペロンは、ミガラスタット又はその塩を含む。１つ以上の実施形態において、ミガラスタット又はその塩の用量は、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ ＦＢＥである。一部の実施形態において、ミガラスタットの塩は、ミガラスタット塩酸塩である。１つ以上の実施形態において、用量は、１日おきに約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩である。一部の実施形態において、ミガラスタット又はその塩は経口投与される、又は注射によって投与される。これらの実施形態は、相互に、又は本発明の他の実施形態と、例えばファブリー病を有する患者の治療方法、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロン並びに適用可能突然変異、好適なＰＣ及び用量、製剤及びそれらの投与経路に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0019】

本発明の別の態様は、ファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンに関するが、ここで患者はα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列にミスセンス突然変異を有する。１つ以上の実施形態において、突然変異はＡ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄである。

【0020】

様々な実施形態において、これらの突然変異は配列番号２に関連する。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ３８Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ５３Ｙである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ８８Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＶ１２４Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ１３３Ｆである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１４３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＹ１５２Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１５９Ｃである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ１６０Ｄである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１６５Ｎである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＦ１６９Ｉである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ１８０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＤ１８２Ｇである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＲ１９６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＷ２０９Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２５７Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＰ２５９Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ２７１Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＳ２７６Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＭ２９０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＡ２９１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｔである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＩ３０３Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３１０Ｖである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３６０Ｒである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ３７５Ａである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＬ３９４Ｐである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＧ４１１Ｓである。１つ以上の実施形態において、この突然変異は配列番号２に関連するＮ４１９Ｄである。

【0021】

一部の実施形態において、薬学的シャペロンは、ミガラスタット又はその塩を含む。１つ以上の実施形態において、ミガラスタット又はその塩の用量は、約１００ｍｇ～約１５０ｍｇ ＦＢＥである。一部の実施形態において、ミガラスタットの塩は、ミガラスタット塩酸塩である。１つ以上の実施形態において、用量は、１日おきに約１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩である。一部の実施形態において、ミガラスタット又はその塩は経口投与される、又は注射によって投与される。これらの実施形態は、相互に、又は本発明の他の実施形態と、例えばファブリー病を有する患者の治療方法、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法又はファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用並びに適用可能突然変異、好適なＰＣ及び用量、製剤及びそれらの投与経路に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0022】

以下に様々な実施形態を挙げる。以下に挙げる実施形態は、以下に挙げるとおりに限らず、本発明の範囲における他の好適な組み合わせで組み合わされてもよいことは理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1A】ヒト野生型ＧＬＡ遺伝子（配列番号１）の完全ＤＮＡ配列を示す。

【図1B】ヒト野生型ＧＬＡ遺伝子（配列番号１）の完全ＤＮＡ配列を示す。

【図1C】ヒト野生型ＧＬＡ遺伝子（配列番号１）の完全ＤＮＡ配列を示す。

【図1D】ヒト野生型ＧＬＡ遺伝子（配列番号１）の完全ＤＮＡ配列を示す。

【図1E】ヒト野生型ＧＬＡ遺伝子（配列番号１）の完全ＤＮＡ配列を示す。

【図2】野生型α－Ｇａｌ Ａタンパク質（配列番号２）を示す。

【図3】野生型α－Ｇａｌ Ａタンパク質（配列番号３）をコードする核酸配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本発明の幾つかの例示的実施形態を説明する前に、本発明が以下の説明に示される構築又は方法ステップの詳細に限定されないことが理解されるべきである。本発明は、他の実施形態が可能であり、及び様々な方法で実施されること又は実行されることが可能である。

【0025】

本発明の様々な態様は、薬理学的シャペロンを用いた治療に応答するであろうファブリー患者における新規なＧＬＡ突然変異の同定に関する。本発明の他の態様は、同様にこれらのファブリー患者の治療に関する。例えば、予想外にもα－Ｇａｌ Ａのミスセンス突然変異Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄの結果として生じた低α－Ｇａｌ Ａ活性は、薬理学的シャペロンに曝露させた場合に増加させられることが発見された。拡張して考えると、これらの突然変異を有する患者は薬理学的シャペロンによる治療に応答するであろう。

【0026】

定義
本明細書で使用される用語は、本発明の文脈の中で、及び各用語が使用される具体的な文脈において、概して当該技術分野におけるその通常の意味を有する。本発明の組成物及び方法並びにそれをどのように作成及び使用すればよいかを説明するにおいて実施者に更なる手引きを与えるため、特定の用語を以下で、又は本明細書中の他の箇所で考察する。

【0027】

用語「ファブリー病」は、リソソームα－Ｇａｌ Ａ活性欠損に起因するスフィンゴ糖脂質異化作用のＸ連鎖性先天異常を指す。この欠陥により、心臓、腎臓、皮膚、及び他の組織の血管内皮リソソームに基質グロボトリアオシルセラミド（「ＧＬ－３」、別名Ｇｂ_３又はセラミドトリヘキソシド）及び関連するスフィンゴ糖脂質の蓄積が引き起こされる。この酵素の別の基質は血漿グロボトリアオシルスフィンゴシン（「血漿ｌｙｓｏ－Ｇｂ_３」）である。

【0028】

「保因者」は、一方のＸ染色体が欠陥α－Ｇａｌ Ａ遺伝子を含んで一方のＸ染色体が正常な遺伝子を含む、且つ１つ以上の細胞型に正常な対立遺伝子のＸ染色体不活性化が存在する女性である。保因者は多くの場合にファブリー病と診断される。

【0029】

「患者」は、特定の疾患と診断されているか、又はそれを有する疑いがある対象を指す。患者はヒト又は動物であってよい。

【0030】

「ファブリー患者」は、ファブリー病と診断されているか、又はそれを有する疑いのある、以下に更に定義するとおりの突然変異型α－Ｇａｌ Ａを有する個体を指す。ファブリー病の特徴マーカーはヘミ接合男性及び女性保因者に同じ有病率で出現し得るが、典型的には女性の方が発症しても重症度が低い。

【0031】

ヒトα－ガラクトシダーゼＡ（α－Ｇａｌ Ａ）は、ヒトＧＬＡ遺伝子によってコードされる酵素を指す。イントロン及びエクソンを含むα－Ｇａｌ Ａの完全ＤＮＡ配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ１４４４８．１で利用可能であり、図１Ａ～Ｅ（配列番号１）に示される。ヒトα－Ｇａｌ Ａ酵素は４２９アミノ酸からなり、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ１４４４８．１及びＵ７８０２７．１で利用可能であり、配列番号２及び図１５に示される。配列番号１のコーディング領域（即ち、エクソン）だけを含む核酸配列は、図３に示した（配列番号３）。

【0032】

用語「突然変異タンパク質」は、タンパク質をコードする遺伝子に、ＥＲに通常存在する条件下ではそのタンパク質が安定したコンホメーションを実現できなくなるような突然変異を有するタンパク質を含む。安定したコンホメーションを実現できないと、相当量の酵素がリソソームに輸送されず、むしろ分解されることになる。かかる突然変異は時に「コンホメーション突然変異体」と呼ばれる。かかる突然変異としては、限定はされないが、ミスセンス突然変異、及びインフレーム小欠失及び挿入が挙げられる。本明細書で使用されるとき、欠失は、略語「ｄｅｌ」によって指示され、挿入は、略語「ｉｎｓ」によって指示される。従って、ヌクレオチド変化「ｃ．１８４＿１８５ｉｎｓＴＡＧ」は、ヌクレオチド１８４～１８５の間のヌクレオチド配列ＴＡＧを指し、タンパク質配列変化「Ｓ６２ｄｅｌｉｎｓＬＡ」は、６２位でのアミノ酸Ｓ（セリン）の欠失及びアミノ酸配列ＬＡ（ロイシン及びアラニン）の挿入を指す。

【0033】

本明細書で一実施形態において使用されるとき、用語「突然変異α－Ｇａｌ Ａ」は、α－Ｇａｌ Ａをコードする遺伝子に、ＥＲに通常存在する条件下ではその酵素が安定したコンホメーションを実現できなくなるような突然変異を有するα－Ｇａｌ Ａを含む。安定したコンホメーションを実現できないと、相当量の酵素がリソソームに輸送されず、むしろ分解されることになる。

【0034】

本明細書で使用されるとき、用語「特異的薬理学的シャペロン」（「ＳＰＣ」）又は「薬理学的シャペロン」（「ＰＣ」）は、タンパク質に特異的に結合する、且つ以下の効果のうちの１つ以上を有する：（ｉ）タンパク質の安定した分子コンホメーションの形成を増進する；（ｉｉ）ＥＲから別の細胞部位、好ましくは天然の細胞部位へのタンパク質のトラフィッキングを誘導し、即ちタンパク質のＥＲ関連分解を防止する；（ｉｉｉ）誤って折り畳まれたタンパク質の凝集を防止する；及び／又は（ｉｖ）タンパク質に少なくとも一部の野生型機能及び／又は活性を回復させる又は増強する、小分子、タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物等を含めた任意の分子を指す。例えばα－Ｇａｌ Ａに特異的に結合する化合物とは、それが一般的な関連する又は無関係の酵素群でなく、その酵素に結合してシャペロン効果を及ぼすことを意味する。より具体的には、この用語は、ＢｉＰなどの内因性シャペロン、又はグリセロール、ＤＭＳＯ若しくは重水など、様々なタンパク質に対する非特異的シャペロン活性を実証している非特異的作用物質、即ち化学的シャペロンは指さない。本発明の１つ以上の実施形態において、ＰＣは可逆的競合阻害薬であってもよい。１つ以上の実施形態において、ＰＣは、ミガラスタット又はその塩である。別の実施形態において、ＰＣは、ミガラスタット遊離塩基（例えば、１２３ｍｇのミガラスタット遊離塩基）である。更に別の実施形態において、ＰＣは、ミガラスタットの塩（例えば、１５０ｍｇのミガラスタットＨＣｌ）である。

【0035】

酵素の「競合阻害薬」は、酵素基質の化学構造及び分子構造に構造的に類似していて、基質とほぼ同じ位置でその酵素に結合する化合物を指し得る。従って、阻害薬は基質分子と同じ活性部位に関して競合し、ひいてはＫｍを増加させる。競合阻害は、通常、阻害薬に取って代わるのに十分な基質分子が利用可能であるならば可逆的であり、即ち競合阻害薬は可逆的に結合することができる。従って、酵素阻害の量は、阻害薬濃度、基質濃度、並びに活性部位に対する阻害薬及び基質の相対的親和性に依存する。

【0036】

本明細書で使用されるとき、用語「特異的に結合する」は、薬理学的シャペロンとα－Ｇａｌ Ａなどのタンパク質との相互作用、具体的には、薬理学的シャペロンとの接触に直接関与するタンパク質中のアミノ酸残基との相互作用を指す。薬理学的シャペロンは標的タンパク質、例えばα－Ｇａｌ Ａに特異的に結合して、一般的な関連する又は無関係のタンパク質群でなく、そのタンパク質にシャペロン効果を及ぼす。所与の薬理学的シャペロンと相互作用するタンパク質中のアミノ酸残基は、タンパク質の「活性部位」の範囲内にあっても、又はなくてもよい。特異的結合は、ルーチンの結合アッセイによるか、又は構造研究、例えば共結晶化、ＮＭＲなどによって評価することができる。α－Ｇａｌ Ａの活性部位は基質結合部位である。

【0037】

「α－Ｇａｌ Ａ活性欠損」は、ファブリー病又は任意の他の疾患（特に血液疾患）を有しない又はそれを有する疑いがない正常な個体の活性と（同じ方法を用いて）比較したとき正常範囲を下回る患者からの細胞のα－Ｇａｌ Ａ活性を指す。

【0038】

本明細書で使用されるとき、用語「α－Ｇａｌ Ａ活性を増強する」又は「α－Ｇａｌ Ａ活性を増加させる」は、α－Ｇａｌ Ａに特異的な薬理学的シャペロンと接触していない細胞（好ましくは同じ細胞型のもの、又は同じ細胞であって、例えばより早い時期のもの）における量と比べて、α－Ｇａｌ Ａに特異的な薬理学的シャペロンと接触した細胞において安定したコンホメーションをとるα－Ｇａｌ Ａの量を増加させることを指す。この用語はまた、そのタンパク質に特異的な薬理学的シャペロンと接触していないα－Ｇａｌ Ａのトラフィッキングと比べて、α－Ｇａｌ Ａに特異的な薬理学的シャペロンと接触した細胞においてリソソームへのα－Ｇａｌ Ａのトラフィッキングを増加させることも指す。これらの用語は、野生型及び突然変異体の両方のα－Ｇａｌ Ａを指す。一実施形態において、細胞におけるα－Ｇａｌ Ａ量の増加は、ＰＣで処理した細胞からのライセート中の人工基質の加水分解を測定することにより測定される。加水分解の増加がα－Ｇａｌ Ａ活性の増加の指標である。

【0039】

用語「α－Ｇａｌ Ａ活性」は、細胞における野生型α－Ｇａｌ Ａの正常な生理学的機能を指す。例えば、α－Ｇａｌ Ａ活性にはＧＬ－３の加水分解が含まれる。

【0040】

「奏効例」は、例えばファブリー病など、リソソーム蓄積障害と診断された、又はそれ有する疑いがある個体であって、その細胞がＰＣとの接触に応答して、それぞれ、α－Ｇａｌ Ａ活性の十分な増加、及び／又は症状の軽減又は代用マーカーの増強を呈する個体である。ファブリーの代用マーカーの増強の非限定的な例は、ｌｙｓｏ－ＧＢ_３及び米国特許出願公開第２０１０／０１１３５１７号明細書（本明細書によって全体として参照により援用される）に開示されるものである。

【0041】

米国特許出願公開第２０１０／０１１３５１７号明細書に開示されるファブリー病の代用マーカーの改善の非限定的な例としては、細胞（例えば、線維芽細胞）及び組織におけるα－Ｇａｌ Ａレベル又は活性の増加；ＧＬ－３蓄積の減少；ホモシステイン及び血管細胞接着分子－１（ＶＣＡＭ－１）の血漿濃度の低下；心筋細胞及び弁線維細胞内におけるＧＬ－３蓄積の低下；血漿ｌｙｓｏ－Ｇｂ_３の減少；心肥大（特に左心室）の減少、弁閉鎖不全、及び不整脈の軽減；タンパク尿の軽減；ＣＴＨ、ラクトシルセラミド、セラミドなどの脂質の尿中濃度の低下、並びにグルコシルセラミド及びスフィンゴミエリンの尿中濃度の増加；糸球体上皮細胞に層状封入体（ゼブラ小体）なし；腎機能の改善；発汗低下の緩和；被角血管腫なし；及び高周波感音難聴、進行性難聴、突発性難聴、又は耳鳴りなどの聴力異常の改善が挙げられる。神経症状の改善としては、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）又は脳卒中の予防；及び先端感覚異常（肢端の灼熱痛又は刺痛）として現れる神経因性疼痛の軽減が挙げられる。ファブリー病を判定し得る別種の臨床マーカーは、有害心血管症状の有病率である。ファブリー病によく見られる心臓関連の徴候及び症状としては、左室肥大、弁膜症（特に僧帽弁逸脱及び／又は逆流）、早期冠動脈疾患、アンギナ、心筋梗塞、伝導異常、不整脈、うっ血性心不全が挙げられる。

【0042】

前述の応答のうちの１つ以上を実現する用量が、「治療有効用量」である。

【0043】

語句「薬学的に許容可能」は、生理学的に忍容可能な、且つ典型的にはヒトへの投与時に有害な反応を生じさせない分子実体及び組成物を指す。一部の実施形態において、本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能」は、動物、より詳細にはヒトにおける使用が連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されている、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められている薬局方に掲載されていることを意味する。医薬担体に関して用語「担体」は、化合物がそれと共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又は媒体を指す。かかる医薬担体は、水及び油などの滅菌液であってもよい。担体としては好ましくは、特に注射溶液用に、水又は水溶液、生理食塩溶液並びにデキストロース及びグリセロール水溶液が利用される。好適な医薬担体については、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ” ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、又は他の版に記載されている。

【0044】

本明細書で使用されるとき、用語「単離された」は、言及されている材料が、それが通常見出される環境から取り出されることを意味する。従って、単離された生物学的材料は、細胞成分、即ちその材料が見出される又は産生される細胞の構成成分を含まないものであり得る。核酸分子の場合、単離核酸には、ＰＣＲ産物、ゲル上のｍＲＮＡバンド、ｃＤＮＡ、又は制限酵素断片が含まれる。別の実施形態において、単離核酸は、好ましくは、それが見出され得る染色体から切り出され、より好ましくは、染色体中に見出されるときその単離核酸分子に含まれる遺伝子の上流又は下流に位置する非調節領域、非コード領域、又は他の遺伝子ともはやつながっていない。更に別の実施形態において、単離核酸は１つ以上のイントロンを欠いている。単離核酸は、プラスミド、コスミド、人工染色体などに挿入される配列を含む。従って、具体的な実施形態において、組換え核酸は単離核酸である。単離タンパク質は、他のタンパク質又は核酸、又は両方と、細胞においてそれが結び付いているものと、又はそれが膜結合性タンパク質である場合には細胞膜と結び付いていてもよい。単離細胞小器官、細胞、又は組織は、生物においてそれが見出される解剖学的部位から取り出される。単離材料は、必須ではないが、精製されてもよい。

【0045】

用語「約」及び「近似的に」は、概して、計測の性質又は精度を所与として、計測した量の許容可能な誤差程度を意味するものとする。典型的な例示的誤差程度は、所与の値又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、及びより好ましくは５％以内である。或いは、特に生体系において、用語「約」及び「近似的に」は、所与の値のオーダー内、好ましくは１０倍又は５倍以内、及びより好ましくは２倍以内の値を意味し得る。本明細書に提供される数量は、特に明記しない限り近似であり、つまり、明示的に記載されないときも用語「約」又は「近似的に」が暗示され得る。

【0046】

用語「酵素補充療法」又は「ＥＲＴ」は、非天然の精製酵素をかかる酵素が欠損した個体に導入することを指す。投与されるタンパク質は、天然の供給源から又は組換え発現によって（以下に更に詳細に記載するとおり）入手されてもよい。この用語はまた、本来であれば精製酵素の投与が必要な、又はそれから利益を得る個体、例えば酵素欠乏を患っている個体において精製酵素を導入することも指す。導入される酵素は、インビトロで作製された精製組換え酵素であってもよく、又は単離された組織又は体液、例えば胎盤又は動物乳等から精製された、又は植物から精製されたタンパク質であってもよい。

【0047】

本明細書で使用されるとき、用語「遊離塩基当量」又は「ＦＢＥ」は、ミガラスタット又はその塩に存在するミガラスタットの量を指す。換言すれば、用語「ＦＢＥ」は、ミガラスタット遊離塩基の量、又はミガラスタットの塩によって提供されるミガラスタット遊離塩基の当量のいずれかを意味する。例えば、塩酸塩の重量に起因して、僅か１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩が、１２３ｍｇの遊離塩基形態のミガラスタットと同程度のミガラスタットを提供する。他の塩は、塩の分子量に応じて異なる換算係数を有することが予想される。

【0048】

用語「ミガラスタット」は、具体的に反する旨が指示されない限り、ミガラスタット遊離塩基又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、ミガラスタットＨＣｌ）を包含する。

【0049】

用語「突然変異」及び「変異体」（例えば、「適用可能突然変異又は変異体」におけるような）は、遺伝子又は染色体のヌクレオチド配列の変化を指す。本明細書で言及した２つの用語は、典型的には一緒に－例えば、穿孔配列において言及したヌクレオチド配列の変化を言及する「突然変異又は変異体」として使用される。これら２つの用語の一方だけが何らかの理由から言及される場合は、欠けている用語は含まれており、かかるものとして理解すべきである。更に、用語「適用可能突然変異」及び「適用可能変異体」は、ＰＣ療法に適用可能である、例えばミガラスタット療法に適用可能である突然変異又は変異体を指す。特定タイプの適用可能突然変異又は変異体は、本明細書に記載したインビトロＨＥＫアッセイにおける基準に従ってミガラスタット療法に適用可能であると決定された突然変異又は変異体である「ＨＥＫアッセイ適用可能突然変異又は変異体」である。

【0050】

ファブリー病
ファブリー病は、まれな進行性の重篤なＸ連鎖性リソソーム蓄積障害である。ＧＬＡ遺伝子の突然変異が、スフィンゴ糖脂質代謝に必要なリソソーム酵素α－Ｇａｌ Ａの欠損を引き起こす。幼児期に始まるα－Ｇａｌ Ａ活性の低下が、ＧＬ－３及び血漿ｌｙｓｏ－Ｇｂ_３を含めたスフィンゴ糖脂質の蓄積を引き起こし、疼痛、胃腸症状、腎不全、心筋症、脳血管イベント、及び早期の死亡を含めたファブリー病の症状及び致死的続発症につながる。早期の療法開始及び生涯にわたる治療が、疾患の進行を遅らせ、平均余命を延ばす機会を提供する。

【0051】

ファブリー病は様々な疾患重症度及び発症年齢を包含するが、従来、２つの主要な表現型、「古典型」及び「遅発型」に分けられている。古典型表現型は主に、α－Ｇａｌ Ａ活性が検出不能乃至低く、且つ腎臓、心臓及び／又は脳血管症状の発症が早い男性のものと見なされている。遅発型表現型は主に、残存α－Ｇａｌ Ａ活性がより高く、これらの疾患症状の発症がより遅い男性のものと見なされている。ヘテロ接合女性保因者は、典型的には遅発型表現型を発現するが、Ｘ染色体不活性化のパターンに応じて古典型表現型もまた呈し得る。

【0052】

ファブリー病の原因となるＧＬＡ突然変異は１，０００超同定されている。約６０％が、α－Ｇａｌ Ａ酵素に単一アミノ酸置換をもたらすミスセンス突然変異である。ミスセンスＧＬＡ突然変異は、多くの場合に、異常に折り畳まれた不安定な形態のα－Ｇａｌ Ａの産生をもたらし、その大部分が古典型表現型に関連している。小胞体における正常な細胞品質管理機構は、これらの異常なタンパク質がリソソームに移動するのを阻止し、それらを早期分解及び除去の標的とする。多くのミスセンス突然変異形態が、α－Ｇａｌ Ａ特異的薬理学的シャペロンであるミガラスタットの標的である。

【0053】

ファブリー病の臨床症状は幅広い重症度にわたり、患者の残存α－ＧＡＬレベルとおおよそ相関している。現在治療を受けている患者の大多数は古典型ファブリー病患者と称され、そのほとんどが男性である。これらの患者は、腎臓、心臓及び脳を含む様々な器官に疾患を生じ、疾患症状は初め青年期に出現し、典型的には３０歳代又は４０歳代に死亡するまで重症度が進行する。幾つもの最近の研究から、心機能又は腎機能障害及び脳卒中など、通常は成人期に初めて出現する様々なファブリー病症状を有する診断未確定の男性及び女性が多数いることが示唆される。遅発型ファブリー病と称されるこの種のファブリー病者は、古典型ファブリー病患者よりも残存α－ＧＡＬレベルが高い傾向がある。遅発型ファブリー病者は、典型的には成人期に初めて疾患症状を経験し、左心室の肥大又は進行性腎不全など、単一の器官に集中した疾患症状を有することが多い。加えて、遅発型ファブリー病はまた、原因不明の脳卒中の形でも見られ得る。

【0054】

ファブリー患者は進行性腎臓機能障害を有し、未治療の患者は４０歳代までに末期腎機能障害を呈する。α－Ｇａｌ Ａ活性の欠損は、腎臓の細胞を含め、多くの細胞型におけるＧＬ－３及び関連するスフィンゴ糖脂質の蓄積につながる。ＧＬ－３は、タコ足細胞、遠位尿細管及びヘンレ係締の上皮細胞及び尿細管細胞に蓄積する。腎機能の機能障害はタンパク尿及び糸球体濾過率の低下として現れ得る。

【0055】

ファブリー病はまれであり、多くの臓器が関わり、発症年齢の範囲が幅広く、及び不均一であるため、適切な診断は難題である。医療専門家の間でも認知度が低く、誤診が頻繁に起こる。ファブリー病の診断は、ほとんどの場合、患者が症状を示した後に、突然変異解析と併せて血漿又は末梢白血球（ＷＢＣ）におけるα－Ｇａｌ Ａ活性の低下に基づき確認される。女性では、保因者の一部の細胞におけるランダムなＸ染色体不活性化に起因して保因者女性の酵素的同定の信頼性が低いため、診断は更に一層難題である。例えば、一部の絶対的保因者（古典型罹患男性の娘）は、正常から極めて低い活性にまで及ぶα－Ｇａｌ Ａ酵素活性を有する。保因者は白血球では正常なα－Ｇａｌ Ａ酵素活性を有し得るため、正確な保因者同定及び／又は診断を与えるのは、遺伝子検査によるα－Ｇａｌ Ａ突然変異の同定のみである。

【0056】

更に上述したように、ファブリー病の発症年齢、進行及び重症度は、少なくとも一部には、リソソーム内の酵素活性と相関する基質蓄積速度に依存する。従って、残留活性の完全な欠如は迅速な基質蓄積に相当する可能性があり、このため、疾患（初期の発症及び迅速な進行）のより重篤な形態であり得る。しかしながら、少量の残留活性さえ大量の基質を分解させるために十分な可能性がある。これは順に、緩徐化された基質蓄積のために後の発症及び緩徐な進行を伴うより軽度の疾患を導くであろう。これらの要素を考慮に入れると、酵素活性における穏当な増加さえ重度の臨床的表現型の影響を低減し得ると考えられる。データは、大多数のＬＳＤについて、ちょうど１％～６％の正常活性が疾患の発症を遅延若しくは予防する、又は疾患のより軽度の形態を生じさせるために十分であると推定されてきた。つまり、活性におけるまさに少しの増加が基質レベルに、従って疾患の重症度及び疾患進行の速度に有意な衝撃を及ぼす可能性がある。これとは逆に、インビトロでの反応を全く示さない突然変異リソソーム酵素はインビボでも応答しないであろうと予測されている。

【0057】

１つ以上の実施形態において、ミガラスタットが適用可能と見なされるα－Ｇａｌ Ａの突然変異又は変異体は、優良試験所基準（ＧＬＰ）でバリデーションされたインビトロアッセイ（ＧＬＰ ＨＥＫ又はミガラスタット適用可能性アッセイ）に従いＨＥＫ－２９３細胞で突然変異形態のα－Ｇａｌ Ａを発現させたとき（「ＨＥＫアッセイ」と称される）、野生型の≧１．２０倍の相対的増加（＋１０μＭミガラスタット）及び≧３．０％の絶対的増加（＋１０μＭミガラスタット）を示すものとして定義される。かかる突然変異又は変異体は、本明細書では「ＨＥＫアッセイ適用可能」突然変異又は変異体とも称される。

【0058】

治療開始前に酵素の増強を判定する先行のスクリーニング方法が提供されている。例えば、ＨＥＫ－２９３細胞を使用したアッセイが、所与の突然変異が薬理学的シャペロン（例えばミガラスタット）治療に応答性かどうかを予測するため臨床試験において利用されている。このアッセイでは、ｃＤＮＡコンストラクトを作成する。ＨＥＫ－２９３細胞において対応するα－Ｇａｌ Ａ突然変異形態を一過性に発現させる。次に細胞を±ミガラスタット（１７ｎＭ～１ｍＭ）で４～５日間インキュベートする。その後、合成蛍光発生基質（４－ＭＵ－α－Ｇａｌ）を使用するか、又はウエスタンブロットにより、細胞ライセート中のα－Ｇａｌ Ａレベルを測定する。これは、疾患を引き起こす公知のミスセンス又は小型インフレーム挿入／欠失突然変異について行われている。これまでにこれらの方法を用いてＰＣ（例えばミガラスタット）に応答性であると同定されている突然変異が、米国特許第８，５９２，３６２号明細書（本明細書によって全体として参照により援用される）に列挙されている。

【0059】

ＨＥＫアッセイ適用可能突然変異としては、薬理学的参照表に列挙した少なくともそれらの突然変異（例えば、ＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標）等のミガラスタット製品に対する米国若しくは国際添付文書に列挙されたもの）が挙げられる。本明細書で使用されるとき、「薬理学的参照表」は、ミガラスタット製品（例えば、ＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標））の包装内又は医療提供者であればアクセス可能な特定の突然変異又は変異体がミガラスタット（例えば、ＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標））ＰＣ療法に応答性であるかどうかを伝える、及び表の形式で提示される文書記録に必ずしも限定されないウエブサイト内の添付文書のいずれかに含まれる任意の好適にアクセス可能な文書記録若しくは電子記録を指す。従って、本発明の一実施形態において、「薬理学的参照表」は、１つ以上の適用可能突然変異又は変異体を含む任意の上方の保管場所を指す。別の実施形態において、「薬理学的参照表」は、本明細書に開示した新規な突然変異又は変異体を含む適用可能突然変異又は変異体（即ち、Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ又はＮ４１９Ｄ）の更新された保管場所を指す。ＨＥＫアッセイ適用可能突然変異についての例示的な薬理学的参照表は、ＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標）が使用のために承認されている様々な国において、又はそれぞれがこれにより全体として本明細書に組み込まれる、ｗｗｗ．ｇａｌａｆｏｌｄａｍｅｎａｂｉｌｉｔｙｔａｂｌｅ．ｃｏｍ又はｗｗｗ．ｆａｂｒｙｇｅｎｅｖａｒｉａｎｔｓｅａｒｃｈ．ｃｏｍ等のウエブサイトでＧＡＬＡＦＯＬＤ（登録商標）についての製品特徴及び／又は処方情報の概要において見いだすことができる。

【0060】

しかしながら、ミガラスタットによる治療に対しては特定の突然変異だけが適用可能であるので、新規な突然変異を同定し、かかる突然変異がミガラスタット療法に対して適用可能であるかどうかを決定する必要がある。下記の実施例において記載するように、幾つかの新規な突然変異が同定され、ミガラスタット療法に対して適用可能突然変異であると決定されている。これらの突然変異としては、Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄが挙げられる。

【0061】

従って、１つ以上の実施形態において、ミガラスタットは、ファブリー病を治療するため且つ／又はＡ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ及びＤ１６５Ｎからなる群から選択されるα－Ｇａｌ Ａ突然変異を有する患者においてα－Ｇａｌ Ａ活性を増強するために使用される。１つ以上の実施形態において、ミガラスタットは、ファブリー病を治療するため且つ／又はＦ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ及びＭ２９０Ｖからなる群から選択されるα－Ｇａｌ Ａ突然変異を有する患者においてα－Ｇａｌ Ａ活性を増強するために使用される。１つ以上の実施形態において、ミガラスタットは、ファブリー病を治療するため且つ／又はＡ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄからなる群から選択されるα－Ｇａｌ Ａ突然変異を有する患者においてα－Ｇａｌ Ａ活性を増強するために使用される。

【0062】

１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ａ２９Ｄを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｒ３８Ｓを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｎ５３Ｙを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｙ８８Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｖ１２４Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｉ１３３Ｆを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ａ１４３Ｖを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｙ１５２Ｎを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｆ１５９Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ａ１６０Ｄを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｄ１６５Ｎを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｆ１６９Ｉを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｌ１８０Ｖを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｄ１８２Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｒ１９６Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｗ２０９Ｒを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ａ２５７Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｐ２５９Ｓを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｇ２７１Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｓ２７６Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｍ２９０Ｖを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ａ２９１Ｓを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｉ３０３Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｉ３０３Ｖを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｌ３１０Ｖを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｇ３６０Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｇ３６０Ｒを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｇ３７５Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｌ３９４Ｐを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｇ４１１Ｓを有する。１つ以上の実施形態において、患者は突然変異Ｎ４１９Ｄを有する。様々な実施形態において、これらのα－Ｇａｌ Ａ突然変異は配列番号２に示したアミノ酸配列に関連する。

【0063】

これらの新規な突然変異に関連する例示的ヌクレオチド変化は、下記の表１に示した。

【0064】

【表1】

【0065】

従って、様々な実施形態において、ミガラスタットは、ファブリー病を治療するため且つ／又はｃ．８６Ｃ＞Ａ、ｃ．１１４Ｇ＞Ｃ、ｃ．１５７Ａ＞Ｔ、ｃ．２６３Ａ＞Ｇ、ｃ．３７１Ｔ＞Ｇ、ｃ．３９７Ａ＞Ｔ、ｃ．４２８Ｃ＞Ｔ、ｃ．４５４Ｔ＞Ａ、ｃ．４７６Ｔ＞Ｇ、ｃ．４７９Ｃ＞Ａ、ｃ．４９３Ｇ＞Ａ、ｃ．５０５Ｔ＞Ａ、ｃ．５３８Ｔ＞Ｇ、ｃ．５４５Ａ＞Ｇ、ｃ．５８７Ｇ＞Ｃ、ｃ．６２５Ｔ＞Ａ、ｃ．７６９Ｇ＞Ａ、ｃ．７７５Ｃ＞Ｔ、ｃ．８１２Ｇ＞Ｃ、ｃ．８２７Ｇ＞Ｃ、ｃ．８６８Ａ＞Ｇ、ｃ．８７１Ｇ＞Ｔ、ｃ．９０８Ｔ＞Ｃ、ｃ．９０７Ａ＞Ｇ、ｃ．９２８Ｃ＞Ｇ、ｃ．１０７９Ｇ＞Ｃ、ｃ．１０７８Ｇ＞Ｃ、ｃ．１１２４Ｇ＞Ｃ、ｃ．１１８１Ｔ＞Ｃ、ｃ．１２３１Ｇ＞Ａ及びｃ．１２５５Ａ＞Ｇからなる群から選択されるＧＬＡ突然変異を有する患者においてα－Ｇａｌ Ａ活性を増強するために使用される。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．８６Ｃ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１１４Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１５７Ａ＞Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．２６３Ａ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．３７１Ｔ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．３９７Ａ＞Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．４２８Ｃ＞Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．４５４Ｔ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．４７６Ｔ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．４７９Ｃ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．４９３Ｇ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．５０５Ｔ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．５３８Ｔ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．５４５Ａ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．５８７Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．６２５Ｔ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．７６９Ｇ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．７７５Ｃ＞Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．８１２Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．８２７Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．８６８Ａ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．８７１Ｇ＞Ｔを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．９０８Ｔ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．９０７Ａ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．９２８Ｃ＞Ｇを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１０７９Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１０７８Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１１２４Ｇ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１１８１Ｔ＞Ｃを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１２３１Ｇ＞Ａを有する。１つ以上の実施形態において、患者はＧＬＡ突然変異ｃ．１２５５Ａ＞Ｇを有する。様々な実施形態において、これらのＧＬＡ突然変異は配列番号３に示したアミノ酸配列に関連する。

【0066】

更にその上、本発明の様々な実施形態は、α－Ｇａｌ Ａをコードする遺伝子の突然変異を有する患者のファブリー病を治療するためのＰＣを提供するが、ここで患者は、配列番号１及び／又は配列番号３に規定した核酸配列によってコードされるヒトα－Ｇａｌ Ａのミスセンス突然変異を有すると同定されている。本発明の別の態様は、ファブリー病と診断された患者を治療する方法に関する。１つ以上の実施形態において、本方法は、治療有効用量のα－Ｇａｌ ＡのＰＣを患者に投与することを含む。別の実施形態では、患者はα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列にミスセンス突然変異を有する。本発明の別の態様は、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法に関する。１つ以上の実施形態において、本方法は、患者に治療有効用量のα－Ｇａｌ ＡのＰＣを投与することを含み、ここで患者は配列番号１及び／又は配列番号３と比べてミスセンス突然変異を有する核酸配列によってコードされる突然変異α－Ｇａｌ Ａを有する。これらの使用及び方法の詳細及び又別の実施形態を下記に記す。患者が配列番号１及び／又は配列番号３に規定の核酸配列セットによってコードされるヒトα－Ｇａｌにおけるミスセンス突然変異を有すると同定されているファブリー病の患者を治療する方法、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法、ファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａ に対する薬理学的シャペロンの使用又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用に関する実施形態のいずれかは、本発明の他の実施形態のいずれかと、例えば、ＰＣ及び適切なそれらの用量に関する実施形態と結び付けることができる。

【0067】

１つ以上の実施形態において、患者はそれらのＧＬＡ遺伝子に他の突然変異を有する可能性がある。例えば、結果として生じるα－Ｇａｌ Ａ酵素に影響を及ぼすか、又は及ぼさない可能性があるイントロン領域内の突然変異が存在し得る。従って、１つ以上の実施形態において、患者は配列番号１との少なくとも９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８若しくは９９．９％の同一性を有する核酸配列によってコードされる突然変異を有する。更にその上、患者はＧＬＡ遺伝子のコーディング領域内に１つ以上の追加の突然変異α－Ｇａｌ Ａを有する可能性がある。従って、１つ以上の実施形態において、患者は配列番号３との少なくとも９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８若しくは９９．９％の同一性を有する核酸配列によってコードされる突然変異α－Ｇａｌ Ａを有する。更に、１つ以上の実施形態において、患者は配列番号１又は配列番号３に比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０又は３０個の突然変異を有する。更に、配列番号１又は配列番号３における一部の核酸突然変異は多数の核酸配列によって様々な核酸がコードされるので、結果として生じるタンパク質に対してアミノ酸の変化を生じさせ得ないことも留意されたい。更に、これらの実施形態はいずれも、本発明の他の実施形態のいずれか、例えば、適用可能突然変異、ＰＣ及びそれらの好適な用量に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0068】

薬理学的シャペロン
ＬＳＤに関連する酵素の小分子阻害薬の結合は、突然変異酵素及び対応する野生型酵素の両方の安定性を増加させることができる（米国特許第６，２７４，５９７号明細書；同第６，５８３，１５８号明細書；同第６，５８９，９６４号明細書；同第６，５９９，９１９号明細書；同第６，９１６，８２９号明細書、及び同第７，１４１，５８２号明細書を参照のこと、全て参照により本明細書に援用される）。詳細には、幾つかの標的リソソーム酵素の特異的で選択的な競合阻害薬であるグルコース及びガラクトースの小分子誘導体を投与すると、インビトロで細胞内の酵素の安定性が有効に増加し、ひいてはリソソームへの酵素のトラフィッキングが増加した。従って、リソソーム内の酵素量が増加することにより、酵素基質の加水分解が増加するものと予想される。この戦略の背後にあった当初の理論は以下のとおりであった：突然変異酵素タンパク質はＥＲにおいて不安定であるため（Ｉｓｈｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９６；２２０：８１２－８１５）、酵素タンパク質は正常な輸送経路（ＥＲ→ゴルジ体→エンドソーム→リソソーム）において遅れ、早まって分解される。従って、突然変異酵素に結合してその安定性を増加させる化合物が酵素の「シャペロン」として働き、ＥＲを出てリソソームに移ることのできる量を増加させ得る。加えて、一部の野生型タンパク質のフォールディング及びトラフィッキングは不完全で、場合によっては一部の野生型タンパク質の最大７０％がその最終的な細胞部位に到達する前に分解されるため、シャペロンを野生型酵素の安定化に使用して、ＥＲを出てリソソームに輸送されることのできる酵素の量を増加させることができる。

【0069】

１つ以上の実施形態において、薬理学的シャペロンはミガラスタット又はその塩を含む。１－デオキシガラクトノジリマイシン（１－ＤＧＪ）又は（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）ピペリジン（ｐｉｐｅｒｄｉｎｅ）－３，４，５－トリオールとしても知られる化合物ミガラスタットは、以下の化学式を有する化合物である：

【化1】

【0070】

本明細書で考察するとおり、ミガラスタットの薬学的に許容可能な塩もまた本発明において使用し得る。ミガラスタットの塩が使用されるとき、塩の投薬量は、ミガラスタット遊離塩基が使用されたならば受け取ったであろう量と等価な用量のミガラスタットを患者が受け取るように調整されることになる。ミガラスタットの薬学的に許容可能な塩の一例は、ミガラスタットＨＣｌである：

【化2】

【0071】

ミガラスタットは低分子量イミノ糖であり、ＧＬ－３の末端ガラクトースの類似体である。インビトロ及びインビボでの薬理学的研究から、ミガラスタットが薬理学的シャペロンとして働き、野生型α－Ｇａｌ Ａ及び特異的突然変異形態のα－Ｇａｌ Ａの活性部位に高親和性で選択的且つ可逆的に結合することが実証されている。ミガラスタットが結合すると、これらの突然変異形態のα－Ｇａｌ Ａが小胞体において安定し、リソソームへのその適切なトラフィッキングが促進され、リソソームでミガラスタットが解離することにより、α－Ｇａｌ ＡがＧＬ－３及び他の基質レベルを低下させることが可能になる。

【0072】

特定の実施形態において、ＰＣは、ミガラスタット又はその塩である。別の実施形態において、ＰＣは、ミガラスタット塩酸塩を含む。

【0073】

α－Ｇａｌ Ａに対するこれらのＰＣのいずれかは、本発明の他の実施形態のいずれかと、例えばファブリー病の患者を治療する方法に関する、ファブリー病と診断されたか、又はそれを有する疑いのある患者においてα－Ｇａｌ Ａを増強する方法に関する、ファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用に関する、又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンに関する実施形態並びにＰＣ、適用可能突然変異の好適な用量に関する、及びα－Ｇａｌ Ａをコードする核酸配列における特定の突然変異を有するファブリー患者の治療に関する実施形態と組み合わされてもよい。

【0074】

用量設定、製剤化及び投与
１つ以上の実施形態において、ファブリー患者にミガラスタット又はその塩が１日おきに１回（「ＱＯＤ」とも称される）の頻度で投与される。様々な実施形態において、本明細書に記載される用量は、ミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩に関する。一部の実施形態において、これらの用量はミガラスタットの遊離塩基に関する。代替的実施形態において、これらの用量はミガラスタットの塩に関する。更なる実施形態において、ミガラスタットの塩はミガラスタット塩酸塩である。ミガラスタット又はミガラスタットの塩の投与は、本明細書では「ミガラスタット療法」と称される。

【0075】

ミガラスタット又はその塩の有効量は約１００ｍｇ ＦＢＥ～約１５０ｍｇ ＦＢＥの範囲であり得る。例示的用量としては、約１００ｍｇ ＦＢＥ、約１０５ｍｇ ＦＢＥ、約１１０ｍｇ ＦＢＥ、約１１５ｍｇ ＦＢＥ、約１２０ｍｇ ＦＢＥ、約１２３ｍｇ ＦＢＥ、約１２５ｍｇ ＦＢＥ、約１３０ｍｇ ＦＢＥ、約１３５ｍｇ ＦＢＥ、約１４０ｍｇ ＦＢＥ、約１４５ｍｇ ＦＢＥ又は約１５０ｍｇ ＦＢＥが挙げられる。

【0076】

ここでもまた、１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩は１２３ｍｇの遊離塩基形態のミガラスタットと等価であることが注記される。従って、１つ以上の実施形態において、用量は、１日おきに１回の頻度で投与される１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩である。上記に示されるとおり、この用量は１２３ｍｇ ＦＢＥのミガラスタットと称される。更なる実施形態において、用量は、１日おきに１回の頻度で投与される１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩である。他の実施形態において、用量は、１日おきに１回の頻度で投与される１２３ｍｇのミガラスタット遊離塩基である。

【0077】

様々な実施形態において、有効量は、約１２２ｍｇ、約１２８ｍｇ、約１３４ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４６ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５２ｍｇ、約１５９ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７１ｍｇ、約１７７ｍｇ又は約１８３ｍｇのミガラスタット塩酸塩である。

【0078】

従って、様々な実施形態において、ミガラスタット療法は、１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩を１日おきなど、１２３ｍｇ ＦＢＥを１日おきに１回の頻度で投与することを含む。

【0079】

ミガラスタット又はその塩の投与は、ある一定の期間にわたり得る。１つ以上の実施形態において、ミガラスタット又はその塩は、少なくとも２８日、例えば少なくとも３０、６０又は９０日又は少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、２０、２４、３０又は３６ヵ月又は少なくとも１、２、３、４又は５年の継続期間にわたって投与される。様々な実施形態において、ミガラスタット療法は、少なくとも６ヵ月、例えば少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、２０、２４、３０又は３６ヵ月又は少なくとも１、２、３、４又は５年の長期ミガラスタット療法である。

【0080】

本発明に係るミガラスタット又はその塩の投与は、任意の投与経路に好適な製剤であってよく、しかし好ましくは、錠剤、カプセル又は溶液などの経口剤形で投与される。一例として、患者には、各々１５０ｍｇのミガラスタット塩酸塩又は等価な用量のミガラスタット若しくは塩酸塩以外のその塩を含有するカプセルが経口投与される。

【0081】

一部の実施形態において、ＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）は経口投与される。１つ以上の実施形態において、ＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）は注射によって投与される。ＰＣは薬学的に許容可能な担体を伴うこともあり、これは投与方法に依存し得る。

【0082】

１つ以上の実施形態において、ＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）は単剤療法として投与され、例えば、錠剤又はカプセル又は液体の形態で経口的に、又は注射用に滅菌水溶液でなど、任意の投与経路に好適な形態であり得る。他の実施形態において、ＰＣは、投与前にインビトロで酵素凝集を防ぐため再構成中又は再構成直後に補充酵素の製剤に加えられる凍結乾燥粉末で提供される。

【0083】

ＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）が経口投与用に製剤化される場合、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤と共に従来手段によって錠剤又はカプセルが調製されてもよい。錠剤は当該技術分野において周知の方法によってコーティングされてもよい。経口投与用の液体調合物は、例えば、溶液、シロップ又は懸濁液の形態をとってもよく、又は使用前に水又は別の好適な媒体で構成するための乾燥製剤として調製されてもよい。かかる液体調合物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は硬化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）；非水性媒体（例えば、扁桃油、油性エステル類、エチルアルコール又は分画植物油）；及び保存剤（例えば、ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはプロピル又はソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加剤と共に従来手段によって調製されてもよい。調合物はまた、緩衝塩、香味剤、着色剤及び甘味剤も適宜含有し得る。経口投与用の調合物は、活性シャペロン化合物の制御放出をもたらすように好適に製剤化されてもよい。

【0084】

非経口／注射使用に好適なＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）の医薬製剤としては、概して、滅菌水溶液（水溶性の場合）、又は滅菌注射用溶液若しくは分散液の即時調製用の分散液及び滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合にも、形態は無菌でなければならず、及び易注射針通過性が存在する程度の流動性がなければならない。これは製造及び保管条件下で安定していなければならず、且つ細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコールなど）、これらの好適な混合物、及び植物油を含有する溶媒又は分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物作用の防止は、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ベンジルアルコール、ソルビン酸などによってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば糖類又は塩化ナトリウムを含めることが妥当となり得る。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に使用することにより、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。

【0085】

滅菌注射用溶液は、適切な溶媒中に必要な量の精製酵素（存在する場合）及びＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）を、必要に応じて上記に列挙される種々の他の成分と共に配合し、続いてろ過又は最終滅菌することにより調製される。概して、分散液は、基礎分散媒及び上記に列挙されるものからの他の必要な成分を含有する滅菌媒体中に様々な滅菌活性成分を配合することにより調製される。滅菌注射用溶液の調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分＋任意の追加的な所望の成分の粉末を予め滅菌ろ過されたその溶液から生じさせる真空乾燥法及び凍結乾燥法である。

【0086】

製剤は賦形剤を含有し得る。製剤に含まれ得る薬学的に許容可能な賦形剤は、緩衝液、例えば、クエン酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液、重炭酸塩緩衝液、アミノ酸、尿素、アルコール類、アスコルビン酸、及びリン脂質；血清アルブミン、コラーゲン、及びゼラチンなどのタンパク質；ＥＤＴＡ又はＥＧＴＡなどの塩、及び塩化ナトリウム；リポソーム；ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｏｌｌｉｄｏｎｅ）；デキストラン、マンニトール、ソルビトール、及びグリセロールなどの糖類；プロピレングリコール及びポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ－４０００、ＰＥＧ－６０００）；グリセロール；グリシン又は他のアミノ酸；及び脂質である。製剤と使用する緩衝液系としては、クエン酸塩；酢酸塩；重炭酸塩；及びリン酸塩緩衝液が挙げられる。リン酸塩緩衝液が好ましい実施形態である。

【0087】

シャペロン化合物の投与経路は、静脈内、皮下、動脈内、腹腔内、眼内、筋肉内、頬側、直腸、腟内、眼窩内、脳内、皮内、頭蓋内、脊髄内、脳室内、髄腔内、大槽内、嚢内、肺内、鼻腔内、経粘膜、経皮、又は吸入によることを含め、経口又は非経口であってよい。

【0088】

上述の非経口製剤のシャペロン化合物の投与は、調合物のボーラスの定期的注射によってもよく、又は外部（例えば、点滴静注バッグ）若しくは内部（例えば、生体内分解性インプラント）のリザーバからの静脈内若しくは腹腔内投与によって投与されてもよい。

【0089】

医薬製剤及び投与に関する実施形態は、本発明の他の実施形態、例えば、ファブリー病患者を治療する方法、ファブリー病と診断された患者の治療用医薬品を製造するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンの使用に関する、又はファブリー病と診断された患者の治療において使用するためのα－Ｇａｌ Ａに対する薬理学的シャペロンに関する実施形態並びに適用可能突然変異、ＰＣ及びその好適な投薬量に関する実施形態のいずれかと組み合わされてもよい。

【0090】

１つ以上の実施形態において、ＰＣ（例えば、ミガラスタット又はその塩）はＥＲＴと併用して投与される。ＥＲＴは、野生型酵素又は生物学的に機能性の酵素を注入によって外因的に導入することによりタンパク質の量を増加させる。この療法は、上述のとおり、ファブリー病などのＬＳＤを含めた多くの遺伝的障害向けに開発された。注入後、外因性酵素は非特異的又は受容体特異的機構を介して組織により取り込まれるものと想定される。一般に、取込み効率は高くなく、外因性タンパク質の循環時間は短い。加えて、外因性タンパク質は不安定で、急速な細胞内分解を受けるとともに、続く治療との有害な免疫反応の可能性もある。１つ以上の実施形態において、シャペロンは補充酵素（例えば、補充α－Ｇａｌ Ａ）と同時に投与される。一部の実施形態において、シャペロンは補充酵素（例えば、補充α－Ｇａｌ Ａ）と共に製剤化される。

【0091】

本明細書全体を通じて、「一実施形態」、「特定の実施形態」、「様々な実施形態」、「１つ以上の実施形態」又は「ある実施形態」という表現は、その実施形態に関連して記載される詳細な特徴、構造、材料、又は特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。従って、本明細書全体を通じて様々な場所に「１つ以上の実施形態において」、「特定の実施形態において」、「様々な実施形態において」、「一実施形態において」又は「ある実施形態において」などの語句が出現するが、それが本発明の同じ実施形態に言及しているとは限らない。更に、詳細な特徴、構造、材料、又は特性は、１つ以上の実施形態において任意の好適な方法で組み合わされてもよい。

【0092】

本明細書では本発明が詳細な実施形態を参照して記載されているが、これらの実施形態は単に本発明の原理及び応用の例示に過ぎないことが理解されるべきである。当業者には、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく本発明の方法及び装置に様々な改良及び変形がなされ得ることは明らかであろう。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内にある改良例及び変形例を包含することが意図される。

【実施例】

【0093】

ミガラスタットがα－Ｇａｌ Ａの突然変異に及ぼす作用
α－Ｇａｌ Ａ活性は、指示したα－Ｇａｌ Ａの突然変異型を用いて一過性でトランスフェクトしたＨＥＫ－２９３細胞から調製したライセート中で測定し、１０μＭミガラスタットの非存在下若しくは存在下で５日間インキュベートした。α－Ｇａｌ Ａ活性は、単位時間当たりタンパク質１ｍｇ当たり遊離したｎｍｏｌの遊離４－ＭＵ（ｎｍｏｌ／ｍｇ／ｈｒ）として表示した。ベースラインα－Ｇａｌ Ａ活性及びｌ０μＭミガラスタットと共にインキュベーションした後のα－Ｇａｌ Ａ活性は、追加してベースライン野生型α－Ｇａｌ Ａ活性に対するパーセンテージ（％ ＷＴ）として表示した。これらのパーセンテージを計算するために使用した野生型α－Ｇａｌ Ａ活性は、ミガラスタットの非存在下でインキュベートし、並行して測定した野生型トランスフェクト細胞からのライセート中で測定した平均活性であった。

【0094】

新規な突然変異Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄについて試験したα－Ｇａｌ Ａ活性試験の結果は、下記の表２に示した：

【0095】

【表2】

【0096】

表２では、平均±平均（ＳＥＭ）の標準誤差についての数値を計算した。ｎｍｏｌ／ｍｇ／ｈｒは、「１時間当たりタンパク質１ｍｇ当たり放出された遊離４－ＭＵのｎｍｏｌ数を指す。ＷＴは、「野生型」を指す。ＮＣは、「計算不能」を表す。Ｎ／Ａは、「非適用」を表す。

【0097】

ベースライン及び１０μＭミガラスタットα－Ｇａｌ Ａ活性：１０μＭミガラスタットの非存在下及び存在下においてインキュベートしたライセート間のα－Ｇａｌ Ａ活性におけるミガラスタットの差は、片側マンホイットニーＵ検定を用いて決定した；ｐ＜０．０５を伴う１０μＭミガラスタットでの増加が統計的有意と見なされた。「ＢＬＤ」は、平均α－Ｇａｌ Ａ活性が検出限界未満（＜１４２ｎｍｏｌ／ｍｇ／ｈｒ）であったことを示している。

【0098】

ベースラインα－Ｇａｌ Ａ活性（％ ＷＴ）＝（ミガラスタットを用いていない突然変異体トランスフェクト細胞ライセート中のα－Ｇａｌ Ａ活性÷ミガラスタットを用いていない野生型トランスフェクト細胞からのライセート中のα－Ｇａｌ Ａ活性）^＊１００。

【0099】

１０μＭミガラスタットα－Ｇａｌ Ａ活性（％ ＷＴ）＝（ミガラスタットを用いてインキュベートした突然変異体トランスフェクト細胞ライセート中のα－Ｇａｌ Ａ活性÷ミガラスタットを用いていない野生型トランスフェクト細胞ライセート中のα－Ｇａｌ Ａ活性）^＊１００。

【0100】

絶対的増加（％ ＷＴ）＝は、１０μＭミガラスタットα－Ｇａｌ Ａ活性（％ ＷＴ）－ベースラインα－Ｇａｌ Ａ活性（％ ＷＴ）である。

【0101】

相対的増加は、突然変異体トランスフェクト細胞ライセート中の１０μＭミガラスタットα－Ｇａｌ Ａ活性÷ミガラスタットを含めずにインキュベートした突然変異体トランスフェクト細胞ライセート中のベースラインα－Ｇａｌ Ａ活性である。

【0102】

表２から明らかに見て取れるように、新規なα－Ｇａｌ Ａ突然変異Ａ２９Ｄ、Ｒ３８Ｓ、Ｎ５３Ｙ、Ｙ８８Ｃ、Ｖ１２４Ｇ、Ｉ１３３Ｆ、Ａ１４３Ｖ、Ｙ１５２Ｎ、Ｆ１５９Ｃ、Ａ１６０Ｄ、Ｄ１６５Ｎ、Ｆ１６９Ｉ、Ｌ１８０Ｖ、Ｄ１８２Ｇ、Ｒ１９６Ｔ、Ｗ２０９Ｒ、Ａ２５７Ｔ、Ｐ２５９Ｓ、Ｇ２７１Ａ、Ｓ２７６Ｔ、Ｍ２９０Ｖ、Ａ２９１Ｓ、Ｉ３０３Ｔ、Ｉ３０３Ｖ、Ｌ３１０Ｖ、Ｇ３６０Ａ、Ｇ３６０Ｒ、Ｇ３７５Ａ、Ｌ３９４Ｐ、Ｇ４１１Ｓ及びＮ４１９Ｄは、順守基準に合致したミガラスタットとのインキュベーションに対するインビトロ応答を証明した。従って、これらの突然変異を有する患者は、本明細書に記載したミガラスタット療法により治療可能であると予測されている。

【0103】

本明細書において言及される特許及び科学論文は、当業者に利用可能な知識を確立する。本明細書に引用される全ての米国特許及び公開されている又は未公開の米国特許出願は、参照によって援用される。本明細書に引用される全ての公開されている外国特許及び特許出願は、本明細書によって参照により援用される。本明細書に引用される他の全ての公開されている参考文献、文書、論稿及び科学論文は、本明細書によって参照により援用される。

【0104】

本発明は特にその好ましい実施形態を参照して図示及び説明されているが、当業者は、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなくそれらにおいて形態及び詳細の様々な変更を行い得ることを理解するであろう。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2】

【図3】

【配列表】

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【国際調査報告】