特表 2023-516941 抗ＣＤ１３７コンストラクト、多重特異性抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-21

(54)【発明の名称】抗ＣＤ１３７コンストラクト、多重特異性抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230414BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230414BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230414BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230414BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230414BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230414BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230414BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230414BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230414BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230414BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230414BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230414BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20230414BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230414BHJP

   A61K 49/00 20060101ALN20230414BHJP

   A61K 51/10 20060101ALN20230414BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N15/62 Z

C12P21/08

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N1/15

C07K16/46

C07K16/28

A61P35/00

A61K39/395 T

A61K47/68

A61P35/02

A61K49/00

A61K51/10 200

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022551596

(86)(22)【出願日】2021-02-26

(85)【翻訳文提出日】2022-10-25

(86)【国際出願番号】 CN2021078055

(87)【国際公開番号】W WO2021170071

(87)【国際公開日】2021-09-02

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/077146

(32)【優先日】2020-02-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522033726

【氏名又は名称】上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＬＩＵＳ ＢＩＯＴＥＣＨ， ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ３３０， Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｎｏ．２２２ Ｋａｎｇｎａｎ Ｒｏａｄ， Ｃｈｉｎａ （Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｐｕｄｏｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２１０， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(74)【代理人】

【識別番号】100218268

【弁理士】

【氏名又は名称】及川 健太郎

(72)【発明者】

【氏名】シュエ，ジエ

(72)【発明者】

【氏名】ジアン，ウェイ－ドン

(72)【発明者】

【氏名】シュー，ウェンフォン

(72)【発明者】

【氏名】フォン，ウェイジュン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076BB13

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C085AA14

4C085AA21

4C085BB01

4C085BB11

4C085BB41

4C085BB43

4C085EE01

4C085GG02

4C085HH03

4C085HH11

4C085KA27

4C085KA29

4C085KB82

4C085LL18

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA70

4H045BA71

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＣＤ１３７と一つ又は複数の別の抗原に対して結合特異性を有する多重特異性抗ＣＤ１３７抗体を含む、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７コンストラクト、及びそれらを使用する方法に関する。いくつかの実施例において、一つ又は複数の別の抗原は、ヒト表皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）を含む。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ１３７及びＨＥＲ２に結合する多重特異性抗体であって、ＣＤ１３７に結合する第１の抗体部分とＨＥＲ２に結合する第２の抗体部分とを含む、多重特異性抗体。

【請求項2】

前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、
ｉ）ＧＦＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＴＹＩＸ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ｎ又はＣであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｐ、Ｌ又はＭであり、Ｘ_３＝Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ又はＱであり、Ｘ_４＝Ｈ又はＱであるＨＣ－ＣＤＲ１と、
ｉｉ）Ｘ_１ＩＤＰＡＮＧＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ｋ又はＲであり、Ｘ_２＝Ｎ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｍ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｓ又はＴであり、Ｘ_４＝Ｅ又はＭであるＨＣ－ＣＤＲ２と、
ｉｉｉ）ＧＮＬＨＹＸ_１ＬＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ａ又はＧであるＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ
ｂ）前記Ｖ_Ｌは、
ｉ）ＫＡＳＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＴＹＸ_４Ｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｐ又はＴであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｔ又はＰであり、Ｘ_３＝Ｎ又はＡであり、Ｘ_４＝Ｌ、Ｇ又はＨであるＬＣ－ＣＤＲ１と、
ｉｉ）ＲＸ_１ＮＲＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｙ、Ｖ又はＤであり、Ｘ_２＝Ｍ、Ｋ、Ｖ又はＡであり、Ｘ_３＝Ｖ、Ｐ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_４＝Ｄ又はＧであるＬＣ－ＣＤＲ２と、
ｉｉｉ）ＬＱＸ_１Ｘ_２ＤＦＰＹＸ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_２＝Ｄ、Ｖ、Ｌ、Ｒ、Ｅ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｔ又はＫであるＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１に記載の多重特異性抗体。

【請求項3】

ａ）前記ＨＣ－ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、２３１及び２４１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、
ｂ）前記ＨＣ－ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、２３２及び２４２のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、
ｃ）前記ＨＣ－ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、２３３及び２４３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、
ｄ）前記ＬＣ－ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、２３４及び２４４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、
ｅ）前記ＬＣ－ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、２３５及び２４５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、且つ
ｆ）前記ＬＣ－ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６及び２４６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含む、請求項２に記載の多重特異性抗体。

【請求項4】

前記第１の抗体部分は、ＣＤ１３７に対する結合について、参照抗ＣＤ１３７コンストラクトと交差競合し、前記参照抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域は、以下のものからなる群から選択され、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｆ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｇ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｈ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｉ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｊ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｋ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｌ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｍ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｎ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｏ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｐ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項5】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈと前記Ｖ_Ｌは、以下のものからなる群から選択され、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｆ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｇ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｈ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｉ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｊ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｋ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｌ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｍ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｎ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｏ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｐ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項6】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項7】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項8】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項9】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項10】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項11】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項12】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項13】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項14】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項15】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項16】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項17】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項18】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項19】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項20】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項21】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項22】

前記第１の抗体部分は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項23】

前記第１の抗体部分は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｈ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｉ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｊ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｋ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｌ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｍ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｎ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｏ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３、又は
ｐ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項24】

前記第１の抗体部分は、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｏ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、又は
（ｐ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項25】

前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、
ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１－１５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、
ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４－１５６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、
ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７－１５９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｌは、
ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０－１６３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、
ｉｉ）前記ＬＣ－ＣＤＲ２包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４－１６６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、
ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７－１６９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項26】

前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、又は
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項27】

前記第１の抗体部分は、全長抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、Ｖ_ＨＨ、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディからなる群から選択された抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項28】

前記第１の抗体部分は、ヒト化抗ＣＤ１３７全長抗体を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項29】

前記第１の抗体部分は、ヒト化抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項30】

前記第１の抗体部分は、ＣＤ１３７アゴニスト抗体である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項31】

前記第１の抗体部分は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域を含む抗ＣＤ１３７抗体部分を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項32】

前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのＦｃ領域からなる群から選択される、請求項３１に記載の多重特異性抗体。

【請求項33】

前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域からなる群から選択される、請求項３２に記載の多重特異性抗体。

【請求項34】

前記第１の抗体部分は、ヒトＣＤ１３７及びサルＣＤ１３７に結合する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項35】

前記第１の抗体部分は、マウスＣＤ１３７に結合しない、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項36】

前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片を含み、且つ
前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体を含み、ここで、前記重鎖は、それぞれ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）を含み、且つ前記軽鎖は、それぞれ第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含み、
ここで、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖又は軽鎖のうちの少なくとも一本と融合する、請求項１～３５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項37】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の重鎖のＣ端と融合する、請求項３６に記載の多重特異性抗体。

【請求項38】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の重鎖のＮ端と融合する、請求項３６に記載の多重特異性抗体。

【請求項39】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の軽鎖のＣ端と融合する、請求項３６に記載の多重特異性抗体。

【請求項40】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の軽鎖のＮ端と融合する、請求項３６に記載の多重特異性抗体。

【請求項41】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片のＶ_ＨとＶ_Ｌは、第１のペプチドリンカーを介して融合する、請求項１～４０のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項42】

前記第１のペプチドリンカーは、約四から約十五個のアミノ酸を含む、請求項４１に記載の多重特異性抗体。

【請求項43】

前記第１のペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含むリンカーを含む、請求項４１又は４２に記載の多重特異性抗体。

【請求項44】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、第２のペプチドリンカーを介して全長抗体と融合する、請求項１～４３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項45】

前記第２のペプチドリンカーは、約四から約十五個のアミノ酸を含む、請求項４４に記載の多重特異性抗体。

【請求項46】

前記第２のペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含むリンカーを含む、請求項４４又は４５に記載の多重特異性抗体。

【請求項47】

前記第２の抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択されたＦｃ領域を含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項48】

前記Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域を含む、請求項４７に記載の多重特異性抗体。

【請求項49】

前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択される、請求項４７又は４８に記載の多重特異性抗体。

【請求項50】

前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項４９に記載の多重特異性抗体。

【請求項51】

前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異と、Ｌ２３５Ａ突然変異とを含む、請求項５０に記載の多重特異性抗体。

【請求項52】

前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、請求項４９に記載の多重特異性抗体。

【請求項53】

前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ａ突然変異と、Ｌ２３５Ａ突然変異とを含む、請求項５２に記載の多重特異性抗体。

【請求項54】

前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含む、請求項５２又は５３に記載の多重特異性抗体。

【請求項55】

前記ＨＥＲ２は、ヒトＨＥＲ２である、請求項１～５４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項56】

前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合し、且つＨＥＲ２の結合エピトープについて、第３の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－３）と第３の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－３）とを含む抗体又は抗体断片と競合する全長抗体を含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｌ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項57】

前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合する全長抗体を含み、且つ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項58】

前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～５７のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項59】

前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列を含む、請求項１～５８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項60】

ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、
ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む、請求項１～５９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項61】

ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、
ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む、請求項１～５９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項62】

ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、
ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む、請求項１～５９のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項63】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～６２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項64】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項65】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項66】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項67】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項68】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項69】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項70】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項71】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項72】

前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４のアミノ酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項73】

含まれている抗ＨＥＲ２全長抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項74】

前記抗ＨＥＲ２全長抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～７３のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項75】

免疫コンジュゲートであって、治療剤又はマーカーに連結される請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を含む、免疫コンジュゲート。

【請求項76】

前記マーカーは、放射性同位体、蛍光色素及び酵素からなる群から選択される、請求項７５に記載の免疫コンジュゲート。

【請求項77】

薬物組成物であって、請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体又は請求項７５又は７６に記載の免疫コンジュゲートと薬学的に許容されるキャリア剤を含む、薬物組成物。

【請求項78】

単離した核酸であって、請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体をコードする、単離した核酸。

【請求項79】

ベクターであって、請求項７８に記載の単離した核酸を含む、ベクター。

【請求項80】

単離した宿主細胞であって、請求項７８に記載の単離した核酸又は請求項７９に記載のベクターを含む、単離した宿主細胞。

【請求項81】

多重特異性抗体を産生する方法であって、
ａ）前記多重特異性抗体を有効的に発現する条件で、請求項８０に記載の単離した宿主細胞を培養することと、
ｂ）発現された多重特異性抗体を前記宿主細胞から取得することとを含む、多重特異性抗体を産生する方法。

【請求項82】

個体疾患を治療又は予防する方法であって、前記個体に、有効量の請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、請求項７５又は７６に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項７７に記載の薬物組成物を投与することを含む、個体疾患を治療又は予防する方法。

【請求項83】

前記疾患は、癌又は腫瘍である、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

前記癌は、乳癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、中皮腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、食道癌、膀胱癌、唾液腺癌、精巣癌、腎臓癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胸腺癌、副腎癌、頭頸癌、脳癌、甲状腺癌、肉腫、骨髄腫と白血病からなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記癌又は腫瘍は、ＨＥＲ２陽性である、請求項８２又は８３に記載の方法。

【請求項86】

前記癌又は腫瘍におけるＨＥＲ２発現は、ＳＫ－Ｈｅｐ１におけるＨＥＲ２発現レベルより高い、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記癌は、乳癌又は胃癌である、請求項８３～８６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項88】

前記多重特異性抗体、免疫コンジュゲート又は薬物組成物は、前記個体に非経口投与される、請求項８２～８７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項89】

前記多重特異性抗体、免疫コンジュゲート又は薬物組成物は、前記個体に静脈内投与される、請求項８８に記載の方法。

【請求項90】

前記個体は、ヒトである、請求項８２～８９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項91】

薬物として用いられる、請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項92】

癌の治療に用いられる、請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。

【請求項93】

前記癌は、乳癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、中皮腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、食道癌、膀胱癌、唾液腺癌、精巣癌、腎臓癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胸腺癌、副腎癌、頭頸癌、脳癌、甲状腺癌、肉腫、骨髄腫と白血病からなる群から選択される、請求項９２に記載の多重特異性抗体。

【請求項94】

キットでって、請求項１～７４のいずれか一項に記載の多重特異性抗体と、請求項７５又は７６に記載の免疫コンジュゲートと、請求項７７に記載の薬物組成物と、請求項７８に記載の核酸と、請求項７９に記載のベクター又は請求項８０に記載の宿主細胞とを含む、キット。

【請求項95】

癌又は腫瘍を治療及び／又は予防するためのマニュアルをさらに含む、請求項９４に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月２８日に提出された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／０７７１４６号の優先権を主張しており、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれ、その優先権を主張する。

【0002】

本出願は、ＣＤ１３７に結合する抗体（抗ＣＤ１３７単一特異性抗体と多重特異性抗体とを含む）、調製方法及びその使用に関するものであり、前記使用は、疾患又は病症の治療を含む。

【背景技術】

【0003】

ＣＤ１３７（４－１ＢＢとＴＮＦＲＳＦ９とも呼ばれる）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳ）の膜貫通タンパク質である。現在、ＣＤ１３７についての理解より、発現が、通常、活性化依存的であり、且つ活性化されたＮＫとＮＫＴ細胞と、制御性Ｔ細胞と、樹状細胞（ＤＣ）と、刺激を受けた肥満細胞と、分化中の骨髓細胞と、単球と、好中球と、好酸球とを含む免疫細胞の広範な亜群に存在することが示された（Ｗａｎｇ，２００９，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２２９：１９２－２１５）。さらに腫瘍脈管系（Ｂｒｏｌｌ，２００１，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．１１５（４）：５４３－５４９、Ｓｅａｍａｎ，２００７，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １１：５３９－５５４）及び炎症又はアテローム性動脈硬化の内皮細胞部位（Ｄｒｅｎｋａｒｄ，２００７ ＦＡＳＥＢ Ｊ．２１：４５６－４６３、Ｏｌｏｆｓｓｏｎ，２００８，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １１７：１２９２－１３０１）においてＣＤ１３７の発現を確認した。ＣＤ１３７を刺激するリガンド、即ちＣＤ１３７リガンド（４－１ＢＢＬ）は、活性化抗原提示細胞（ＡＰＣ）、骨髄系前駆細胞と造血幹細胞に発現する。

【0004】

ヒトＣＤ１３７は、２５５個のアミノ酸のタンパク質である。該受容体は、単量体と二量体の形態で細胞表面に発現し、ＣＤ１３７リガンドと三量化して下流シグナルを活性化する可能性がある。マウスとヒトＴ細胞についての研究は、ＣＤ１３７が細胞増殖、生存とサイトカイン産生の増強を促進することを表した（Ｃｒｏｆｔ，２００９，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：２７１－２８５）。研究によれば、いくつかのＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは、共刺激分子の発現を増加し、細胞溶解性Ｔリンパ球応答を著しく増強することによって、様々なモデルにおいて抗腫瘍効果を果たすことができる。ＣＤ１３７アゴニストｍＡｂは予防的及び治療的環境において効果を有することが確認された。また、ＣＤ１３７単剤療法と併用療法の腫瘍モデルは、持続的抗腫瘍保護Ｔ細胞記憶応答を確立した（Ｌｙｎｃｈ，２００８，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２：２７７－２８６）。本分野で一般的に認められる様々な自己免疫モデル（Ｖｉｎａｙ，２００６，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ８４：７２６－７３６）において、ＣＤ１３７アゴニストは自己免疫応答を阻害することも示している。ＣＤ１３７のこのような二重活性は、潜在的な抗腫瘍活性を提供するとともに、免疫寛容を破壊する免疫療法に関連する可能性がある自己免疫副作用を阻害することができる。

【0005】

本出願に援用される全ての刊行物、特許、特許出願と開示された特許出願の内容のすべては、参照として本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【0006】

本開示は、抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体と抗ＣＤ１３７多重特異性抗体）、抗ＣＤ１３７コンストラクトをコードするポリヌクレオチド、キット、細胞組成物を調節する方法及び前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを用いて個体を治療する方法を提供した。本発明は、臨床試験における従来の抗ＣＤ１３７抗体に比べて改善された安全性と増強された抗腫瘍効果を示す抗ＣＤ１３７単一特異性抗体と多重特異性抗体の発見に部分的に基づくものである。

【0007】

本開示は、ＣＤ１３７とＨＥＲ２に結合する多重特異性抗体を提供した。いくつかの実施例において、本明細書に開示される多重特異性抗体は、ＣＤ１３７に結合する第１の抗体部分と、ＨＥＲ２に結合する第２の抗体部分とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈは、ｉ）ＧＦＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＴＹＩＸ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ｎ又はＣであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｐ、Ｌ又はＭであり、Ｘ_３＝Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ又はＱであり、Ｘ_４＝Ｈ又はＱであるＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）Ｘ_１ＩＤＰＡＮＧＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ｋ又はＲであり、Ｘ_２＝Ｎ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｍ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｓ又はＴであり、Ｘ_４＝Ｅ又はＭであるＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＧＮＬＨＹＸ_１ＬＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ａ又はＧであるＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌは、ｉ）ＫＡＳＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＴＹＸ_４Ｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｐ又はＴであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｔ又はＰであり、Ｘ_３＝Ｎ又はＡであり、Ｘ_４＝Ｌ、Ｇ又はＨであるＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＲＸ_１ＮＲＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｙ、Ｖ又はＤであり、Ｘ_２＝Ｍ、Ｋ、Ｖ又はＡであり、Ｘ_３＝Ｖ、Ｐ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_４＝Ｄ又はＧであるＬＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＬＱＸ_１Ｘ_２ＤＦＰＹＸ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_２＝Ｄ、Ｖ、Ｌ、Ｒ、Ｅ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｔ又はＫであるＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、ＨＣ－ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、２３１及び２４１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、ＨＣ－ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、２３２及び２４２のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、ＨＣ－ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、２３３及び２４３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、ＬＣ－ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、２３４及び２４４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、ＬＣ－ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、２３５及び２４５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含み、そしてＬＣ－ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６及び２４６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含む。

【0008】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ＣＤ１３７への結合について、参照抗ＣＤ１３７コンストラクトと交差競合し、前記参照抗ＣＤ１３７コンストラクトは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域はＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域はＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、それは、以下のものから選択される
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｆ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｇ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｈ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｉ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｊ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｋ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｌ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｍ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｎ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｏ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｐ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0009】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域はＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域はＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、ここで、前記Ｖ_Ｈと前記Ｖ_Ｌは、以下のものから選択される。
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｆ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｇ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｈ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｉ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｊ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｋ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｌ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｍ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｎ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｏ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｐ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0010】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含む
ＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメインを含む）とを含み、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0011】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、
ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｃ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｄ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｅ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｆ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｇ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｈ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｉ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｊ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｋ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｌ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｍ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｎ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３と、
ｏ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３、又は
ｐ）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３、及びそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0012】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、
（ｏ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、又は
（ｐ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0013】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈは、Ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１－１５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４－１５６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７－１５９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含む ＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、ｂ）前記Ｖ_Ｌは、Ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０－１６３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４－１６６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７－１６９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0014】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、
ａ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｂ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｃ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、
ｄ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含み、又は
ｅ）前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つ前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0015】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、全長抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、Ｖ_ＨＨ、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディからなる群から選択された抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ヒト化抗ＣＤ１３７全長抗体を含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ヒト化抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ＣＤ１３７アゴニスト抗体である。

【0016】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域を含む抗ＣＤ１３７抗体部分を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのＦｃ領域からなる群から選択される。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域からなる群から選択される。

【0017】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ヒトＣＤ１３７及びサルＣＤ１３７に結合する。いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、マウスＣＤ１３７に結合しない。

【0018】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片を含み、前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体を含み、ここで、前記重鎖は、それぞれ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）を含み、且つ前記軽鎖は、それぞれ第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含み、ここで前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖又は軽鎖のうちの少なくとも一本と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の重鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の重鎖のＮ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の軽鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の各本の軽鎖のＮ端と融合する。

【0019】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片のＶ_ＨとＶ_Ｌは、第１のペプチドリンカーを介して融合する。いくつかの実施例において、前記第１のペプチドリンカーは、約４～約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、前記第１のペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含むリンカーを含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、第２のペプチドリンカーを介して全長抗体と融合する。いくつかの実施例において、前記第２のペプチドリンカーは、約４～約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、前記第２のペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含むリンカーを含む。

【0020】

いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択される。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異とＬ２３５Ａ突然変異とを含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ａ突然変異とＬ２３５Ａ突然変異とを含む。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含む。

【0021】

いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２は、ヒトＨＥＲ２である。

【0022】

いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合し、且つＨＥＲ２の結合エピトープについて、第３の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－３）と第３の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－３）とを含む抗体又は抗体断片と競合する全長抗体を含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0023】

いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分は、ＨＥＲ２に結合する全長抗体を含み、且つ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0024】

いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列を含む。

【0025】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0026】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0027】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0028】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含む。

【0029】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、含まれている抗ＨＥＲ２全長抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の序列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施例において、前記抗ＨＥＲ２全長抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0030】

本開示は、治療剤又はマーカーに連結される、本明細書により開示された任意の多重特異性抗体を含む免疫コンジュゲートをさらに提供した。いくつかの実施例において、前記マーカーは、放射性同位体、蛍光色素及び酵素からなる群から選択される。

【0031】

本開示は、本明細書に開示された任意の多重特異性抗体又は任意の免疫コンジュゲート及び薬学的に許容されるキャリア剤を含む薬物組成物をさらに提供した。

【0032】

本開示は、本明細書に開示された任意の多重特異性抗体をコードする単離した核酸、本明細書に開示された任意の単離した核酸を含むベクター、及び本明細書に開示された任意の単離した核酸又は任意のベクターを含む単離した宿主細胞をさらに提供した。

【0033】

本開示は、多重特異性抗体を産生する方法をさらに提供した。いくつかの実施例において、前記方法は、ａ）前記多重特異性抗体を効果的に発現する条件で、本明細書に開示された任意の宿主細胞を培養することと、ｂ）発現された多重特異性抗体を前記宿主細胞から取得することとを含む。

【0034】

本開示は、個体の疾患を治療又は予防する方法をさらに提供した。いくつかの実施例において、前記方法は、前記個体に、有効量の本明細書に開示された任意の多重特異性抗体、任意の免疫コンジュゲート又は任意の薬物組成物を投与することを含む。いくつかの実施例において、前記疾患は、癌又は腫瘍である。いくつかの実施例において、前記癌は、乳癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、中皮腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、食道癌、膀胱癌、唾液腺癌、精巣癌、腎臓癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胸腺癌、副腎癌、頭頸癌、脳癌、甲状腺癌、肉腫、骨髄腫と白血病からなる群から選択される。いくつかの実施例において、前記癌又は腫瘍は、ＨＥＲ２陽性である。いくつかの実施例において、前記癌又は腫瘍におけるＨＥＲ２発現は、ＳＫ－Ｈｅｐ１におけるＨＥＲ２発現レベルより高い。いくつかの実施例において、前記癌は、乳癌又は胃癌である。

【0035】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体、免疫コンジュゲート又は薬物組成物は、前記個体に非経口投与される。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体、免疫コンジュゲート又は薬物組成物は、前記個体に静脈内投与される。いくつかの実施例において、前記被験体はヒトである。

【0036】

本開示は、本明細書に開示された、薬物として用いられる任意の多重特異性抗体を提供した。本開示は、本明細書に開示された、癌を治療するための任意の多重特異性抗体をさらに提供した。いくつかの実施例において、前記癌は、乳癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、中皮腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、食道癌、膀胱癌、唾液腺癌、精巣癌、腎臓癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胸腺癌、副腎癌、頭頸癌、脳癌、甲状腺癌、肉腫、骨髄腫と白血病からなる群から選択される。

【0037】

本開示は、本明細書に開示された任意の多重特異性抗体、任意の免疫コンジュゲート、任意の薬物組成物、任意の核酸、任意のベクター又は任意の宿主細胞を含むキットをさらに提供した。いくつかの実施例において、前記キットは、癌又は腫瘍を治療及び／又は予防するためのマニュアルをさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1A】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図1B】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図1C】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図1D】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図1E】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図1F】ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７に対する例示的な抗ＣＤ１３７抗体クローン２－９変異体の結合親和性を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｂは、カニクイザルＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｃは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９ ＩｇＧ２ｗｔの結合を示す。図１Ｄは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｅは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの結合を示す。図１Ｆは、ヒトＣＤ１３７に対するクローン２－９－２ ＩｇＧ４ｗｔの結合を示す。

【図2A】ＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在しない場合（２Ａ）、又はＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在する場合（２Ｂ）に、ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイにおけるルシフェラーゼ活性を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。αＣＤ１３７ Ａｂクローンは、異なる抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体を示す。

【図2B】ＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在しない場合（２Ａ）、又はＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在する場合（２Ｂ）に、ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイにおけるルシフェラーゼ活性を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。αＣＤ１３７ Ａｂクローンは、異なる抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体を示す。

【図3A】ＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在しない場合（３Ａ）、又はＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在する場合（３Ｂと３Ｃ）に、ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイにおけるルシフェラーゼ活性を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ１ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ２ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９ ＩｇＧ２ｗｔは、野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む。２－９－２ ＩｇＧ４は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。

【図3B】ＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在しない場合（３Ａ）、又はＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在する場合（３Ｂと３Ｃ）に、ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイにおけるルシフェラーゼ活性を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ１ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ２ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９ ＩｇＧ２ｗｔは、野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む。２－９－２ ＩｇＧ４は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。

【図3C】ＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在しない場合（３Ａ）、又はＦｃγＲＩＩＢを発現する２９３Ｆ細胞が存在する場合（３Ｂと３Ｃ）に、ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイにおけるルシフェラーゼ活性を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ１ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ２ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９ ＩｇＧ２ｗｔは、野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む。２－９－２ ＩｇＧ４は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。

【図4A】異なる濃度の異なる抗ＣＤ１３７抗体が存在する場合、ドナーから得られたＰＢＭＣのＩＦＮ－γ（４Ａ）とＩＬ２（４Ｂ）の生成量を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ１ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ２ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９ ＩｇＧ２ ｗｔは、野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む。２－９－２ ＩｇＧ４は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。

【図4B】異なる濃度の異なる抗ＣＤ１３７抗体が存在する場合、ドナーから得られたＰＢＭＣのＩＦＮ－γ（４Ａ）とＩＬ２（４Ｂ）の生成量を示す。参照Ａｂ １と参照Ａｂ ２は、具体例２に記載の参照抗ＣＤ１３７抗体である。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ１ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、ＩｇＧ２ Ｆｃと突然変異Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆとを含む。２－９ ＩｇＧ２ ｗｔは、野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃを含む。２－９－２ ＩｇＧ４は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。

【図5A】ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおける２－９変異体のインビボ研究結果を示す。図５Ａは、ベクター対照群と治療群の腫瘍増殖曲線を示す。図５Ｂは、治療におけるマウスの体重変化を示す。

【図5B】ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおける２－９変異体のインビボ研究結果を示す。図５Ａは、ベクター対照群と治療群の腫瘍増殖曲線を示す。図５Ｂは、治療におけるマウスの体重変化を示す。

【図6A】ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおけるウトミルマブ類似薬のインビボ研究結果を示す。図６Ａは、ＩｇＧ対照群と治療群の腫瘍増殖曲線を示す。図６Ｂは、治療におけるマウスの体重変化を示す。

【図6B】ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおけるウトミルマブ類似薬のインビボ研究結果を示す。図６Ａは、ＩｇＧ対照群と治療群の腫瘍増殖曲線を示す。図６Ｂは、治療におけるマウスの体重変化を示す。

【図7A】例示的な二重特異性抗体の設計を示し、ここで抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、腫瘍関連抗原（７Ａ）に一般的に結合し及びＨＥＲ２（７Ｂ）に特異的に結合する全長抗体と融合する。αＴＡＡは、腫瘍関連抗原に対する抗体を代表する。αＣＤ１３７は、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖを代表する。

【図7B】例示的な二重特異性抗体の設計を示し、ここで抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、腫瘍関連抗原（７Ａ）に一般的に結合し及びＨＥＲ２（７Ｂ）に特異的に結合する全長抗体と融合する。αＴＡＡは、腫瘍関連抗原に対する抗体を代表する。αＣＤ１３７は、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖを代表する。

【図8A】ＣＤ１３７（８Ａ）及びＨＥＲ２（８Ｂ）に対する例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の結合親和性を示し、例えば、Ｏｃｔｅｔ二重結合アッセイによって測定される。αＨＥＲ２は、トラスツズマブのアミノ酸配列から派生した全長抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を代表する。２－９ｓｃＦｖ＿αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＣ端と融合する。

【図8B】ＣＤ１３７（８Ａ）及びＨＥＲ２（８Ｂ）に対する例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の結合親和性を示し、例えば、Ｏｃｔｅｔ二重結合アッセイによって測定される。αＨＥＲ２は、トラスツズマブのアミノ酸配列から派生した全長抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を代表する。２－９ｓｃＦｖ＿αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＣ端と融合する。

【図9A】ＣＤ１３７（９Ａ）とＨＥＲ２（９Ｂ）に対する例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体と抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体の結合親和性を示し、例えば、全細胞結合アッセイにより測定される。αＨＥＲ２は、トラスツズマブのアミノ酸配列から派生した抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を代表する。αＥＧＦＲは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体を代表する。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ１」と「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ１アイソタイプ又はＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体とそれぞれ融合する。

【図9B】ＣＤ１３７（９Ａ）とＨＥＲ２（９Ｂ）に対する例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体と抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体の結合親和性を示し、例えば、全細胞結合アッセイにより測定される。αＨＥＲ２は、トラスツズマブのアミノ酸配列から派生した抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を代表する。αＥＧＦＲは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体を代表する。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ１」と「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ１アイソタイプ又はＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体とそれぞれ融合する。

【図10A】ＣＤ１３７とＨＥＲ２の両方を結合する例示的な二重特異性抗体の架橋効果を示す。図１０Ａは、実験ステップを示し、架橋効果は、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体が存在する場合にトリガするが（左側小さい図、底部）、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合にトリガしない（左側小さい図、頂部）。図１０Ｂ－１０Ｃは、様々な形式（ＨＣ－Ｃ、ＨＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ、ＬＣ－Ｎ）を有する抗ＣＤ１３７ ｘ Ｈｅｒ２二重特異性抗体が存在する場合に、ＨＥＲ２高ＮＣＩ－Ｎ８７細胞又はＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＮ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＮ端と融合する。

【図10B】ＣＤ１３７とＨＥＲ２の両方を結合する例示的な二重特異性抗体の架橋効果を示す。図１０Ａは、実験ステップを示し、架橋効果は、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体が存在する場合にトリガするが（左側小さい図、底部）、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合にトリガしない（左側小さい図、頂部）。図１０Ｂ－１０Ｃは、様々な形式（ＨＣ－Ｃ、ＨＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ、ＬＣ－Ｎ）を有する抗ＣＤ１３７ ｘ Ｈｅｒ２二重特異性抗体が存在する場合に、ＨＥＲ２高ＮＣＩ－Ｎ８７細胞又はＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＮ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＮ端と融合する。

【図10C】ＣＤ１３７とＨＥＲ２の両方を結合する例示的な二重特異性抗体の架橋効果を示す。図１０Ａは、実験ステップを示し、架橋効果は、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体が存在する場合にトリガするが（左側小さい図、底部）、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合にトリガしない（左側小さい図、頂部）。図１０Ｂ－１０Ｃは、様々な形式（ＨＣ－Ｃ、ＨＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ、ＬＣ－Ｎ）を有する抗ＣＤ１３７ ｘ Ｈｅｒ２二重特異性抗体が存在する場合に、ＨＥＲ２高ＮＣＩ－Ｎ８７細胞又はＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＮ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｃは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＣ端と融合する。αＣＤ１３７－αＨＥＲ２－ＬＣ－Ｎは、二重特異性抗体を代表し、ここで、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、全長抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖のＮ端と融合する。

【図11A】Ｆｃ突然変異を有するか又は有しない例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の架橋効果を示す。図１１Ａは、ＨＥＲ２高ＳＫＢＲ３細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。図１１Ｂは、ＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。本実施例で使用される抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体は、ＨＣ－Ｃ形式を有する。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ１」と「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、トラスツズマブから派生した、ＩｇＧ１アイソタイプ又はＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。「αＣＤ１３７ ｍＡｂ－ＩｇＧ２」は、クローン２－９から派生したモノクローナル抗ＣＤ１３７抗体を代表し、それはＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【図11B】Ｆｃ突然変異を有するか又は有しない例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の架橋効果を示す。図１１Ａは、ＨＥＲ２高ＳＫＢＲ３細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。図１１Ｂは、ＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞と接触した後の２９３Ｔ細胞におけるＣＤ１３７活性化レベルを示す。本実施例で使用される抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体は、ＨＣ－Ｃ形式を有する。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ１」と「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、トラスツズマブから派生した、ＩｇＧ１アイソタイプ又はＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。「αＣＤ１３７ ｍＡｂ－ＩｇＧ２」は、クローン２－９から派生したモノクローナル抗ＣＤ１３７抗体を代表し、それはＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【図12】様々な濃度の抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体又はＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合、ＨＥＲ２高ＳＫＢＲ３細胞又はＨＥＲ２低ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞と接触した後のエフェクター細胞のＩＦＮγとＩＬ－２産生を示す。本実施例で使用される抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体は、ＨＣ－Ｃ形式を有する。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ１」と「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ１アイソタイプ又はＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。

【図13】ａ）抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ ＨＣＣ－Ｌ７、１０ｍｇ／ｋｇ）とｂ）抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（２－９ ｍＡｂ、７．５ｍｇ／ｋｇ）と抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２、７．５ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを投与した後、媒体対照と比較した、ＬｏＶｏ／ｈＰＢＭＣ異種移植ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの腫瘍体積変化を示す。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。

【図14A】ａ）抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ ＨＣＣ－Ｌ７、０．４ｍｇ／ｋｇ）、ｂ）抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（２－９ ｍＡｂ，、０．３ｍｇ／ｋｇ）と抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２、０．３ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ及びｃ）抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２、０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与した後、媒体対照と比較した、ＯＥ１９／ｈＰＢＭＣ異種移植ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの腫瘍体積変化を示す。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。図１４Ａは、各群の腫瘍増殖曲線を示す。図１４Ｂは、２１日目の各治療群の個体腫瘍体積を示す。

【図14B】ａ）抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ ＨＣＣ－Ｌ７、０．４ｍｇ／ｋｇ）、ｂ）抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（２－９ ｍＡｂ，、０．３ｍｇ／ｋｇ）と抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２、０．３ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ及びｃ）抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２、０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与した後、媒体対照と比較した、ＯＥ１９／ｈＰＢＭＣ異種移植ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの腫瘍体積変化を示す。「αＣＤ１３７ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＩｇＧ４－ＦＡＬＡ」は、二重特異性抗体を代表し、クローン２－９から派生したその抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、ＩｇＧ４アイソタイプを有する（Ｆｃ ＦＡＬＡ突然変異を有する）全長抗ＨＥＲ２抗体と融合する。図１４Ａは、各群の腫瘍増殖曲線を示す。図１４Ｂは、２１日目の各治療群の個体腫瘍体積を示す。

【発明を実施するための形態】

【0039】

本出願は、ＣＤ１３７に特異的に結合する新型抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体と多重特異性抗体）、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを調製する方法、前記コンストラクトを使用する方法（例えば、疾患又は病症を治療する方法、免疫応答を調節する方法又は細胞組成物を調節する方法）を提供した。本発明は、臨床試験における従来の抗ＣＤ１３７抗体に比べて改善された安全性と増強された抗腫瘍効果を示す抗ＣＤ１３７単一特異性抗体と多重特異性抗体の発見に部分的に基づくものである。

【0040】

Ｉ．定義
「抗体」という用語は、その最も広い意味で使用され、且つ様々なの抗体構造をカバーし、これらの抗体構造は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、全長抗体及びその抗原結合断片を含むが、それらに限られず、それらは、所望の抗原結合活性を示せばよい。「抗体部分」という用語は、全長抗体又はその抗原結合断片を指す。

【0041】

全長抗体は、二本の重鎖と、二本の軽鎖とを含む。軽鎖と重鎖の可変領域は、抗原結合の役割を担当する。重鎖と軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「Ｖ_Ｈ」と「Ｖ_Ｌ」と呼ばれてもよい。二本の鎖における可変領域は、一般的には、三つの高度に可変なループを含み、これは、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣ－ＣＤＲ１と、ＬＣ－ＣＤＲ２と、ＬＣ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１と、ＨＣ－ＣＤＲ２と、ＨＣ－ＣＤＲ３とを含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）と呼ばれる。本明細書に開示された抗体と抗原結合断片のＣＤＲ境界は、慣例Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９、Ｋａｂａｔ １９８７、Ｋａｂａｔ １９９１）によって定義又は同定されてもよい。重鎖又は軽鎖の三つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるフランキングセグメントの間に挿入され、それらは、ＣＤＲよりも保存性がさらに高く、高可変ループを支援する足場を形成した。重鎖と軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、複数のエフェクター機能を示す。抗体重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、抗体を分類する。抗体の五つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭであり、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμ重鎖が存在することを特徴とする。いくつかの主要な抗体クラスは、サブクラス、例えば、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）又はｌｇＡ２（α２重鎖）に分けられる。

【0042】

本明細書で使用される用語「抗原結合断片」は、抗体断片を指し、それは、例えば、二重特異性抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド結合が安定した二重特異性抗体（ｄｓ二重特異性抗体）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、一つ又は複数のＣＤＲを含む抗体部分で形成された多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノ抗体、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）結合が同じである抗原に結合することができる。いくつかの実施例において、抗原結合断片は、特定のヒト抗体からの一つ又は複数のＣＤＲを含んでもよく、前記ＣＤＲは、一つ又は複数の異なるヒト抗体からのフレームワーク領域にグラフトされている。

【0043】

「Ｆｖ」は、最小抗体断片であり、それは、完全な抗原認識部位と、抗原結合部位とを含有する。この断片は、密に非共有結合した一つの重鎖可変領域ドメインと一つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。この二つのドメインの折り畳みから、六つの高可変ループ（それぞれ重鎖と軽鎖からの３つのループ）が放出され、この高可変ループは、抗原結合のためのアミノ酸残基に提供し、抗原に対する抗体の結合特異性を付与する。しかしながら、通常、完全な結合部位よりも低い親和性で行われるが、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異性を有する三つのＣＤＲのみを含む半分のＦｖ）でさえ、抗原を認識しそれに結合する能力を有する。

【0044】

「一本鎖Ｆｖ」（略語は「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」でもある）は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶ_ＨとＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施例において、ｓｃＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨとＶ_Ｌドメインの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、このポリペプチドリンカーは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖに関する概説は、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇとＭｏｏｒｅによる編集Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク、ページ２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。

【0045】

本明細書に使用されるように、用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖と軽鎖ポリペプチドの可変領域内に発見された不連続な抗原結合部位を意味することが意図される。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔら，米国保健社会福祉省，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）、ＡｂｈｉｎａｎｄａｎとＭａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ら，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒとＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、ここで相互比較の時、アミノ酸残基を含む重複又はサブセットが定義される。しかしながら、いずれか一つの定義を応用して抗体又は移植した抗体又はその変異体を指すＣＤＲは、本明細書で定義されて使用される用語の範囲内であることが意図される。上記各参照文献に定義されているＣＤＲをカバーするアミノ酸残基は、下記表１に入れられて比較に用いられる。ＣＤＲ予測アルゴリズムとインターフェースは、当分野で公知のものであり、例えば、ＡｂｈｉｎａｎｄａｎとＭａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）、及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）を含む。本章節において参照される参照文献の内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれ、本明細書に用いられ、且つ本明細書の一つ又は複数の請求項に含まれる可能性がある。

【0046】

【表1】

【0047】

表現「例えば、Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基番号付け」又は「例えば、Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」及びその変異体は、上記Ｋａｂａｔらの抗体アセンブラの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又は高可変領域（ＨＶＲ）の短縮又は挿入に対応するより少なく又は別のアミノ酸を含んでもよい。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一アミノ酸挿入（Ｋａｂａｔの残基５２ａに基づくものである）及び重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔの残基８２ａ、８２ｂと８２ｃなどに基づくものである）を含んでもよい。抗体配列を「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列と相同性領域で比較することによって、所与の抗体の残基のＫａｂａｔ番号付けを決定することができる。

【0048】

本明細書で特に説明されていない限り、全長抗体（例えば、本明細書に開示された抗ＣＤ１３７抗体）のＣＤＲをカバーするアミノ酸残基は、上記ＫａｂａｔらのＫａｂａｔ命名法に基づいて定義され、且つ免疫グロブリン重鎖例えば、Ｆｃ領域における残基番号付けは、上記Ｋａｂａｔらに記載のＥＵインデックスの番号付けであり、任意の共有配列のＣＤＲをカバーするアミノ酸残基以外は、Ｋａｂａｔ命名法に基づいて定義され、ここで修飾は実験条件に基づく。「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けである。

【0049】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＣＤＲ残基以外のそれらの可変ドメイン残基である。

【0050】

「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、げっ歯類動物）抗体は、キメラ抗体であり、それは非ヒト抗体から派生した最小配列を含む。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（受容体抗体）であり、ここで、受容体高可変領域（ＨＶＲ）からの残基は、非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類）からの、所望の抗原特異性、親和性と容量を有する高可変領域（ドナー抗体）の残基に置換される。いくつかの具体例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置換される。また、ヒト化抗体は、受容体抗体又はドナー抗体で発見されていない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに改善するために行われる。通常、ヒト化抗体は、少なくとも一つ及び通常は二つの可変ドメインを実質的に全て含み、ここで全て又は実質的に全ての高可変ループは、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、且つ全て又は実質的に全てのＦＲは、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、さらに免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を任意選択的に含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５，（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。

【0051】

「ヒト抗体」は、アミノ酸配列を有する抗体であり、このアミノ酸配列は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応し、及び／又は、本明細書に開示されるヒト抗体の調製のための任意の技術によって調製された。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に排除する。当分野の既知の種々の技術（ファージディスプレイライブラリーを含む）を用いてヒト抗体を生成してもよい。ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍとＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。モノクローナル抗体の調製にも使用可能であるものは、Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ページ７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載の方法である。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋとｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）を参照されたい。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効になったトランスジェニック動物（例えば、免疫したｘｅｎｏｍｉｃｅ）に抗原を投与することによって調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ^（商標）技術に関わる米国特許第６，０７５，１８１号と第６，１５０，５８４号を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されるヒト抗体は、さらに、例えば、Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。

【0052】

「本明細書によって同定されるポリペプチドと抗体配列に関わるアミノ酸酸配列同一性パーセント（％）」又は「相同性」を、配列の整列（配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮する）の後、候補配列における、比較されるポリペプチドにおけるアミノ酸残基と同じであるアミノ酸残基のパーセントと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するという目的のために、当分野の技術における種々の方法で比較を実現させることができ、例えば、公衆に取得可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアを用いてもよい。当業者は、比較される配列の全長範囲内に最大比較を実現させる任意のアルゴリズムを含み、測定比較に用いられる適当なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを用いて、アミノ酸配列同一性％の値を産生する（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４）。

【0053】

「相同」は、二つのポリペプチド間又は二つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。二つの比較配列の一つの位置が同じ塩基又はアミノ酸モノマーサブユニットによって占有される時、例えば、二つのＤＮＡ分子のそれぞれの一つの位置がアデニンによって占有される時、この分子は、この位置で相同である。二つの配列間の相同性パーセントは、二つの配列が共有するマッチするか又は相同な位置の数を比較される位置の数で割って１００を掛けた関数である。例えば、二つの配列における１０個の位置のうちの６個は、マッチするか又は相同なものであれば、二つの配列は、６０％相同である。例えば、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を有する。通常、二つの配列が最大相同性を与えるように整列される時に、比較が行われる。

【0054】

「定常ドメイン」という用語は、免疫グロブリン分子の一部を指し、それは、免疫グロブリンの別の部分、即ち可変ドメインに対して、保存性がより高いアミノ酸配列を有し、それは、抗原結合部位を含む。定常ドメインは、重鎖のＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメイン（Ｃ_Ｈと総称される）と、軽鎖のＣＨＬ（又はＣ_Ｌ）ドメインとを含む。

【0055】

任意の哺乳動物種の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、いずれも、その定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、二つの明らかに異なるタイプのうちの一つとして指定することができ、それぞれｋａｐｐａ（「κ」）とｌａｍｂｄａ（「λ」）と呼ばれる。

【0056】

「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５（ＥＵ番号付けシステム）である。

【0057】

「ヒンジ領域」は、通常、ＩｇＧにおける、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０に対応する領域と定義される（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：１６１－２０６（１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間のＳ－Ｓ結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによってＩｇＧ１配列と整列させることができる。

【0058】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）の「ＣＨ２ドメイン」は、通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０である。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密にペアリングしていないため、ユニークである。代わりに、二つのＮ連結した分岐炭水化物鎖が、完全な天然ＩｇＧ分子の二つのＣＨ２ドメインの間に挿入される。推測によれば、炭水化物は、ドメイン－ドメインペアリングした代替物を提供し、ＣＨ２ドメインの安定化に寄与することができる。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２：１６１－２０６（１９８５）。

【0059】

「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域においてＣＨ２ドメインのＣ末端に近い残基領域（即ち約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端（典型的にはＩｇＧのアミノ酸残基４４６又は４４７にある）まで）を含む。

【0060】

本明細書における「Ｆｃ領域」又は「断片結晶可能領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するためのものであり、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域とを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界が変化可能であるが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域をＣｙｓ２２６位置でのアミノ酸残基又はＰｒｏ２３０からそのカルボキシル基末端まで延びるものと定義する。例えば、抗体の生産又は精製期間又は抗体重鎖をコードする核酸に対して組換えてエンジニアリングを行うことによって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムの残基４４７に基づくものである）を除去することができる。従って、完全な抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基を除去した抗体群群、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体群及びＫ４４７残基を有するか又は有しない抗体混合物を有する抗体群を含んでもよい。本明細書に記載の抗体に用いられる適切な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。

【0061】

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好ましいＦｃＲは、天然ヒトＦｃＲである。なお、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むＦｃＲであり、対立遺伝子変異体又はこれらの変異体のスプライス形式を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）とＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、それは、類似するアミノ酸配列を有し、主な区別は、その細胞質ドメインにある。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインにおいて、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインにおいて、免疫受容体チロシンに基づく阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照されたい。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈとＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌら，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）、及びｄｅ Ｈａａｓら，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）に概説される。本明細書の「ＦｃＲ」という用語は、他のＦｃＲをカバーし、将来同定されるＦｃＲを含む。

【0062】

本明細書に使用されるように、「エピトープ」という用語は、抗体又は抗体部分が結合される抗原上の特定の原子又はアミノ酸基を指す。二つの抗体又は抗体部分が、抗原に対して競合的結合を有すれば、それらは、抗原内の同じエピトープに結合できる。

【0063】

本明細書で使用されるように、等モル濃度の第１の抗体又はその断片が存在する場合、第１の抗体又はその断片が、第２の抗体又はその断片の標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）を阻害する時、前記第１の抗体又はその断片は、前記標的抗原との結合について、前記第２の抗体又はその断片と「競合」し、又はその逆も同様である。ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０３／４８７３１において、抗体の交差競合に基づいて、これらの抗体を「箱分け」するハイスループット方法が記述されている。

【0064】

本明細書に使用されるように、「特異的に結合」、「特異的に認識」及び「……に対して特異性を有する」という用語は、測定と再現が可能である相互作用を指し、例えば、標的と抗体又は抗体部分との結合であり、これは、ヘテロ分子（生体分子を含む）群が存在する時の標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープであってもよい）を特異的に認識する抗体又は抗体部分は、前記標的に結合する抗体又は抗体部分であり、その親和性、結合性、レディー及び／又は持続時間は、他の標的との結合よりも長い。いくつかの実施例において、抗体と関係のない標的との結合程度は、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される抗体と標的との結合程度よりも約１０％小さい。いくつかの実施例において、標的に特異的に結合する抗体の解離定数（Ｋ_Ｄ）≦１０^－５ Ｍ、≦１０^－６ Ｍ、≦１０^－７ Ｍ、≦１０^－８ Ｍ、≦１０^－９ Ｍ、≦１０^－１０ Ｍ、≦１０^－１１ Ｍ、又は≦１０^－１２ Ｍである。いくつかの実施例において、抗体は、異なる種のタンパク質から保存されたタンパク質に対するエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施例において、特異的結合は、排他的結合を含んでもよいが、これに限定しない。抗体又は抗原結合ドメインの結合特異性は、当分野で公知の方法で実験によって決定されてもよい。このような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡＣＯＲＥ^ＴＭ－検定とペプチド走査を含むが、それらに限らない。

【0065】

「単離した」抗体（又はコンストラクト）は、その生産環境の成分（例えば、天然又は組換え）から同定、単離及び／又は回収された抗体である。好ましくは、単離したポリペプチドは、その産生環境における全ての他の成分に会合しない。

【0066】

本明細書に記載のコンストラクト、抗体又はその抗原結合断片をコードする「単離した」核酸分子は、その生産環境において、通常、それに関連する少なくとも一つの汚染物核酸分子から同定されて単離された核酸分子である。好ましくは、単離した核酸は、産生環境に関する全ての成分に会合しない。本明細書に記載のポリペプチドと抗体をコードする単離した核酸分子の形式は、天然に存在する形式又はバックグラウンドと異なる。従って、単離した核酸分子は、細胞に天然に存在する本明細書に記載のポリペプチドと抗体をコードする核酸と異なる。単離した核酸は、核酸分子を通常、含む細胞に含まれるこの核酸分子を含むが、この核酸分子は、染色体外又はその天然染色体位置と異なる染色体位置に存在する。

【0067】

「制御配列」という用語は、特定の宿主生物において、操作可能に連結されたコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に適用される制御配列は、プロモーター、任意選択的なオペロン配列及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞がプロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。

【0068】

核酸が別の核酸配列と機能的関係にある場合、核酸は「操作可能に連結されている」。例えば、プレ配列又は分泌リーダー配列のＤＮＡをポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現させる場合、このプレ配列又は分泌リーダー配列のＤＮＡは、このポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結され、プロモーター又はエンハンサーがコード配列の転写に影響を与える場合、このプロモーター又はエンハンサーは、この配列に操作可能に連結され、又は、リボソーム結合部位が翻訳に役立つように位置決めされる場合、このリボソーム結合部位は、コード配列に操作可能に連結される。通常、「操作可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、且つ分泌リーダーの場合には連続しており、リーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、必ずしも連続的である必要はない。便利な制限部位で連結を行うことで、連結を実現させる。このような部位が存在しなければ、通常の実践に基づいて、合成したオリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを用いる。

【0069】

本明細書に使用されるように、「ベクター」という用語は、それに連結される別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造とするベクター、及びそれが導入された宿主細胞ゲノムに組み込まれたベクターを含む。いくつかのベクターは、それに操作可能に連結される核酸の発現を指導することができる。このようなベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼ばれる。

【0070】

本明細書に使用されるように、「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」という用語は、外来核酸を宿主細胞に転移又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」細胞は、外来核酸を用いて、トランスフェクト、形質転換又は形質導入した細胞である。この細胞は、初代標的細胞及びその子孫を含む。

【0071】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」は、互換使用可能であり、外来核酸を導入した細胞を指し、このような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」と、「形質転換細胞」とを含み、それは、初代形質転換細胞及びそれから派生する子孫を含むが、継代回数とは無関係である。子孫の核酸含有量は親細胞とは異なる可能性があり、且つ突然変異を含有する可能性がある。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択された機能又は生物学的活性と同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異子孫が本明細書に含まれる。

【0072】

本明細書に使用されるように、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益又は所望の結果（臨床結果を含む）を得るための方法である。本出願の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、疾患によって引き起こされる一つ又は複数の症状を軽減すること、疾患の程度を減少させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を予防又は遅延させること）、疾患の伝播（例えば、移転）を予防又は遅延させること、疾患の再現を予防又は遅延させること、疾患の進行の速度を遅延又は緩めること、疾患状態を改善すること、疾患の軽減（一部又は全部）を提供すること、疾患の治療に必要な一つ又は複数の他の薬物の投与量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加又は改善すること、体重増加を増加させること及び／又は生存期間を延長することのうちの一つ又は複数を含むが、それらに限らない。「治療」は、癌の病理的結果（例えば、腫瘍体積）を減少させることをさらにカバーする。本出願の方法は、これらの治療の方面のうちのいずれか一つ又は複数を考慮する。

【0073】

癌の文脈では、「治療」という用語は、癌細胞の増殖の阻害、癌細胞の複製の阻害、全般的な腫瘍負担の軽減及び疾患に関する一つ又は複数の症状の改善のいずれか一つ又は全てを含む。

【0074】

「阻害（「ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」又は「ｉｎｈｉｂｉｔ」）」という用語は、任意の表現型特徴の減少又は停止を指し、又はこの特徴の発生率、程度又は可能性の減少又は停止を指す。参照に比べて、「低下」又は「阻害」は、活性、機能及び／又は量を減少、低下又は阻止することを指す。いくつかの実施例において、「低下」又は「阻害」は、２０％以上の全般的な減少を引き起こす能力を指す。別の実施例において、「低下」又は「阻害」は、５０％以上の全般的な減少を引き起こす能力を指す。さらに別の実施例において、「低下」又は「阻害」は、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全般的な減少を引き起こす能力を指す。

【0075】

本明細書で使用されるように、「参照」は、比較のために用いられる任意のサンプル、標準又はレベルを指す。参照は、健康な及び／又は未罹患サンプルから得られる。いくつかの実施例において、参照は、未治療サンプルから得られる。いくつかの実施例において、参照は、個体の未罹患又は未治療サンプルから得られる。いくつかの具体例において、参照は、前記個人又は患者ではない一つ又は複数の健康な個体から得られる。

【0076】

本明細書で使用されるように、「疾患の進行を遅延させる」とは、疾患（例えば、癌）の進行を遅らせ、抑制し、減速させ、安定させ、阻害し及び／又は遅くすることを指す。この遅延は、疾患の歴史及び／又は治療される個体に応じて、異なる時間長を有してもよい。前記個体が前記疾患に罹患していないため、十分又は有意な遅延は、実際的には、予防を含んでもよい。例えば、進行癌（例えば、転移の進行）を遅延させる可能性がある。

【0077】

本明細書で使用されるように、「予防」は、疾患に罹患しやすい可能性があるが前記疾患にかかっていると診断されていない個体における前記疾患の発症又は再発に対して予防を提供することを含む。

【0078】

本明細書で使用されるように、機能又は活性を「阻害」することは、興味のある条件又はパラメータ以外の他の同じ条件に比べて、又は代替的に別の条件に比べて、機能又は活性を低下させることである。例えば、抗体が存在しない場合の腫瘍増殖速度に比べて、腫瘍増殖を阻害する抗体は、腫瘍の増殖速度を低下させた。

【0079】

「被験体」、「個体」及び「患者」という用語は、本明細書において、互換使用可能であり、哺乳動物を指し、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類動物又は霊長類動物を含むが、それらに限らない。いくつかの実施例において、個体はヒトである。

【0080】

薬剤の「有効量」は、必要な投与量と期間内に、必要な治療又は予防効果を効果的に達する量を指す。具体的な投与量は、選択された特定の薬剤、従うべき投与方案、他の化合物と組み合わせて投与するかどうか、投与時間、結像対象組織及びそれを有する物理的伝達システムのうちの一つ又は複数に応じて変わってもよい。

【0081】

本出願の物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療有効量」は、例えば、疾患状態、年齢、性別及び個体の体重及びこの物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストが個体において所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変わってもよい。治療有効量はさらに、この物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの毒性又は有害作用のいずれもが治療上の有益な効果によって打ち消される量である。治療有効量は、一回または複数回の投与で送達することができる。

【0082】

「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するのに必要な用量及び期間での有効量を指す。典型的には、必須ではなく、予防の投与量は、疾患の前又は初期に被験体において使用されるため、そのような予防有効量は、治療有効量よりも小さい。

【0083】

「薬物製剤」と「薬物組成物」という用語は、一つ又は複数の活性成分の生物学的活性が有効であることを許容する形態にあり、且つ前記製剤が投与される個体に対して許容されない毒性を有する他の成分を含まない製剤である。このような製剤は、無菌であってもよい。

【0084】

「薬学的に許容されるキャリア剤」は、治療剤と共に用いられる当分野の慣用的な毒性のない固体、半固体、又は液体充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤助剤又はキャリア剤を指し、両者は個体に投与するための「薬物組成物」を共同で構成する。薬学的に許容されるキャリア剤は、採用される投与量と濃度で、レシピエントに対して無毒であり、且つ製剤の他の成分と適合する。薬学的に許容されるキャリア剤は、採用される製剤に適す。

【0085】

「無菌」製剤は、無菌であり又は生きている微生物及びその胞子を実質的に含まない。

【0086】

一つ又は複数の他の治療剤との「組み合わせ」投与は、同時（並行）及び連続的な投与又は任意の順序での逐次的な投与を含む。

【0087】

「並行」という用語は、本明細書において、二つ又はより多くの治療剤を投与し、ここで投与の少なくとも一部は時間的に重複するか又は一つの治療剤の投与は別の治療剤の投与に対する短い時間帯内にあることを指すために用いられる。例えば、二つ又はより多くの治療剤は、約６０分間を超えない（例えば、約３０、１５、１０、５又は１分間のうちのいずれか一つを超えない）任意の時間間隔で投与される。

【0088】

「逐次的」という用語は、本明細書において、二つ又はより多くの治療剤を投与し、ここで一つ又は複数の試薬の投与を中止した後に、続いて一つ又は複数の他の薬剤を投与することを指すために用いられる。例えば、二つ又はより多くの治療剤の投与は、約１５分間より大きい（例えば、約２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、又は６０分間、１日、２日、３日、１週、２週又は１ヶ月又はより長い時間のうちのいずれか一つ）時間間隔で投与される。

【0089】

本明細書で使用されるように、「……と結合する」とは、一つの治療法以外の別の治療法を投与することである。同様に、「……と結合する」とは、一つの治療法を個体に投与することの前、間又は後、別の治療法を投与することである。

【0090】

「包装インサート」という用語は、通常、治療用製品の商業包装に含まれるマニュアルを指し、これらのマニュアルは、このような治療用製品を使用する適応症、使用方法、投与量、投与、併用療法、禁忌症及び／又は警告に関する情報を含む。

【0091】

「製造物品」は、少なくとも一つの試薬を含む任意の製品（例えば、包装又は容器）又はキットであり、前記試薬は、例えば、疾患又は障害（例えば、癌）を治療するための薬物又は本明細書に記述されるバイオマーカを特異的に検出するためのプローブである。いくつかの実施例において、製品又はキットは、本明細書に記述される方法を実行するためのユニットとして、普及、流通又は販売される。

【0092】

理解すべきこととして、本明細書に記載の出願の実施例は、「……からなる」及び「実質的に……からなる」を含む。

【0093】

本明細書において、「約」値又はパラメータに対する引用は、この値又はパラメータ自体に対する変化を含む（且つ記述する）。例えば、「約Ｘ」に関する記述は、「Ｘ」の記述を含む。

【0094】

本明細書で使用されるように、「ではない」値又はパラメータに対する言及は、通常、「異なる」値又はパラメータを意味し且つ記述する。例えば、Ｘ型癌を治療するための方法ではないことは、前記方法がＸ型と異なる癌の治療に用いられることを意味する。

【0095】

本明細に用いられる「約Ｘ－Ｙ」という用語は、「約Ｘから約Ｙ」と同じ意味を有する。

【0096】

本明細書と添付される請求項に用いられる時、単数形「一つ／種（ａ）」、「又は（ｏｒ）」及び「これら／この（ｔｈｅ）」は、文脈が他の状況を明確に示しない限り、複数の指示対象を含む。

【0097】

ＩＩ．ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）は、腫瘍壊死受容体（ＴＮＦ－Ｒ）遺伝子ファミリーのメンバーであり、前記ファミリーは、細胞増殖、分化及びプログラム細胞死の調節に関するタンパク質を含む。ＣＤ１３７は、３０ｋＤａのＩ型膜糖タンパク質であり、５５ｋＤａのホモ二量体として発現される。前記受容体は、最初にマウスに記述され（Ｂ．Ｋｗｏｎら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ，８６：１９６３－７（１９８９））、その後、ヒトで同定された（Ｍ．Ａｌｄｅｒｓｏｎら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２２１９－２７（１９９４）、Ｚ．Ｚｈｏｕら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，４５：６７（１９９５））（公開されたＰＣＴ出願ＷＯ９５／０７９８４とＷＯ９６／２９３４８、及び米国特許第６，５６９，９９７号も参照されたく、それは参照として本明細書に組み込まれる（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２．を参照されたい））。ＣＤ１３７のヒトとマウス形態は、アミノ酸レベルにおいて６０％が同じである。保存配列が細胞質ドメイン及び分子の他の５個の領域に現れることは、これらの残基がＣＤ１３７分子の機能にとって重要である可能性があることを示す（Ｚ．Ｚｈｏｕら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，４５：６７（１９９５））。ＣＤ１３７は主にリンパ系細胞（例えば、活性化されたＴ細胞、活性化されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞）に発現され、且つ活性化された胸腺細胞と上皮内リンパ球にも発現されることが示されている。また、さらにＣＤ１３７は樹状細胞、単球、好中球と好酸球のような骨髄起源の細胞に発現されることが示されている。ＣＤ１３７の発現が主に免疫／炎症細胞に限定されているが、炎症部位及び腫瘍の少量の組織に関連する内皮細胞でのＣＤ１３７の発現が報道に記述されている。

【0098】

Ｔ細胞でのＣＤ１３７の機能活性は十分に特徴づけられている。既に、準最適投与量の抗ＣＤ３が存在する場合、ＣＤ１３７を介してシグナル伝達を行ってＴ細胞の増殖とサイトカインの合成（主にＩＦＮ－γ）を誘導し、活性化された細胞死を阻害することができると証明された。これらの作用は、マウスとヒトＴ細胞のいずれかにも観察された（Ｗ．Ｓｈｕｆｏｒｄら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８６（ｌ）：４７－５５（１９９７）、Ｄ．Ｖｉｎａｙら，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０（６）：４８１－９（１９９８）、Ｄ．Ｌａｄｅｒａｃｈら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４（１０）：１１５５－６７（２００２））。ヒトとマウスにおいて、共刺激は、いずれも抗原特異性とエフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増加させることによって、エフェクター機能を増強し、例えば、ＩＦＮ－γの産生と細胞毒性である。抗ＣＤ３シグナル伝達がない場合、ＣＤ１３７による刺激は、Ｔ細胞の機能を変化させず、これはＣＤ１３７が共刺激分子であることを示す。

【0099】

マウス中にアゴニスト抗マウスＣＤ１３７モノクローナル抗体を利用し、インビボ効果研究により、癌治療におけるＣＤ１３７標的療法の作用が示唆された。Ｍｅｌｅｒｏらの論文において、アゴニスト抗マウスＣＤ１３７抗体は、Ｐ８１５肥満細胞腫腫瘍で治癒をもたらし、低免疫原性腫瘍モデルＡｇｌ０４で治癒をもたらす（Ｉ．Ｍｅｌｅｒｏら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３（６）：６８２－５（１９９７））。各亜群の選択的インビボ枯渇がいずれも抗腫瘍作用の低下又は完全な喪失を招く可能性があるため、抗腫瘍作用には、ＣＤ４＋とＣＤ ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方が必要である。最小の免疫応答誘導は抗ＣＤ１３７療法が効くことに必要であることも証明された。いくつかの研究者は、抗ＣＤ１３７抗体を用いて癌治療におけるこのような方法の実行可能性を証明した（Ｊ．Ｋｉｍら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６１（５）：２０３１－７（２００１）、Ｏ．Ｍａｒｔｉｎｅｔら，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，９（１２）：７８６－９２（２００２）、Ｒ．Ｍｉｌｌｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６９（４）：１７９２－８００（２００２）、Ｒ．Ｗｉｌｃｏｘら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６２（１５）：４４１３－８（２００２））。

【0100】

癌に対する免疫発達における作用以外、実験データは、さらに自己免疫とウイルス性疾患の治療におけるＣＤ１３７アゴニスト抗体の使用を支援する（Ｂ．Ｋｗｏｎら，Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，３５（１）：８－１６（２００３）、Ｈ．Ｓａｌｉｈら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６７（７）：４０５９－６６（２００１）、Ｅ．Ｋｗｏｎら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ，９６：１５０７４－７９（１９９９）、Ｊ．Ｆｏｅｌｌら，Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９８７：２３０－５（２００３）、Ｙ．Ｓｕｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，８（１２）：１４０５－１３（２００２）Ｓ．Ｋ．Ｓｅｏら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１０；１０９９－９４（２００４））。

【0101】

ＩＩＩ．抗ＣＤ１３７コンストラクト
一つの態様において、本発明は、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体部分を含む新たなＣＤ１３７特異的コンストラクト（例えば、単離した抗ＣＤ１３７コンストラクト）を提供する。抗ＣＤ１３７コンストラクトの特異性は、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分に起源し、例えば、全長抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施例において、言及された、ＣＤ１３７に特異的に結合する部分（例えば、抗体部分）は、前記部分が、非標的に対する結合親和性の少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約１０、１０^２、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６又は１０^７倍のうちのいずれか一つを含む）の親和性で、ＣＤ１３７に特異的に結合することを指す。いくつかの実施例において、非標的は、ＣＤ１３７ではない抗原である。結合親和性は、当分野で公知の方法で決定することができ、前記方法は、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析又は放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＡ）である。Ｋ_ｄは、当分野で公知の方法で決定することができ、前記方法は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ機器の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイなどを利用するか又はＳａｐｉｄｙｎｅ機器の結合平衡除外法（ＫｉｎＥｘＡ）などを利用する。

【0102】

所望の抗ＣＤ１３７コンストラクトは、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ、抗ＣＤ１３７抗体部分と半減期延長ドメイン（例えば、Ｆｃ領域、アルブミンに結合するドメイン）を含む融合タンパク質、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体、多重特異性抗ＣＤ１３７分子（例えば、二重特異性抗体）を含むが、これらに限定されない。以上の例示的な抗ＣＤ１３７コンストラクトは、相互に拡張せず、且つ以下の各部分でさらに論じられる。

【0103】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７（例えば、ヒトＣＤ１３７）を特異的に認識する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、ここで前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、本明細書に記述される抗ＣＤ１３７抗体部分のうちのいずれか一つであってもよい。

【0104】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈは、ｉ）ＧＦＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＴＹＩＸ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７７）のアミノ酸配列を含む ＨＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ｎ又はＣであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｐ、Ｌ又はＭであり、Ｘ_３＝Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ又はＱであり、Ｘ_４＝Ｈ又はＱである ＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）アミノ酸配列Ｘ_１ＩＤＰＡＮＧＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７８）を含むＨＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ｋ又はＲであり、Ｘ_２＝Ｎ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｍ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｓ又はＴであり、Ｘ_４＝Ｅ又はＭであるＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＧＮＬＨＹＸ_１ＬＭＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７９）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ａ又はＧであるＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌは、ｉ）ＫＡＳＱＸ_１Ｘ_２Ｘ_３ＴＹＸ_４Ｓ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８０）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｐ又はＴであり、Ｘ_２＝Ｉ、Ｔ又はＰであり、Ｘ_３＝Ｎ又はＡであり、Ｘ_４＝Ｌ、Ｇ又はＨである ＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＲＸ_１ＮＲＸ_２Ｘ_３Ｘ_４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８１）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２であって、Ｘ_１＝Ａ、Ｙ、Ｖ又はＤであり、Ｘ_２＝Ｍ、Ｋ、Ｖ又はＡであり、Ｘ_３＝Ｖ、Ｐ、Ｙ又はＧであり、Ｘ_４＝Ｄ又はＧであるＬＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＬＱＸ_１Ｘ_２ＤＦＰＹＸ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８２）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３であって、Ｘ_１＝Ｙ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_２＝Ｄ、Ｖ、Ｌ、Ｒ、Ｅ又はＱであり、Ｘ_３＝Ｔ又はＫであるＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0105】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、２３１と２４１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含む ＨＣ－ＣＤＲ１と、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、２３２と２４２のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、２３３と２４３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ３と、ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、２３４と２４４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、２３５と２４５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６と２４６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、アミノ酸の置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施例において、アミノ酸の置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0106】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクトを提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＣＤ１３７への結合について、参照抗ＣＤ１３７コンストラクトと交差競合し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）（前記重鎖可変領域はＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３ドメイン）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）（前記軽鎖可変領域はＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３ドメイン）とを含み、それは、以下のものからなる群から選択され、ａ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｂ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｃ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含み、ｄ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｅ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｆ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｇ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｈ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｉ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｊ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｋ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｌ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体
と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｍ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｎ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体をと含み、ｏ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、ｐ）Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含み、且つＶ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、又は約３つ（例えば、３、２又は１個）までのアミノ酸の置換を含むその変異体とを含む。

【0107】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈは、ｉ）ＤＴＹＩＨ又はＧＦＮＩＱＤＴのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＤＰＡＮＧＮのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＧＮＬＨＹＡＬＭＤのアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌは、ｉ）ＮＴＹＬＳのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＲＶＮＲＫＶのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＬＱＹＬＤＦＰＹのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0108】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、ａ）それぞれＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３と、ｂ）それぞれＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域におけるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0109】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７に示す配列を有するＶ_Ｈ鎖領域又はその変異体、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有する変異体、及びｂ）ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８に示す配列を有するＶ_Ｌ鎖領域又はその変異体、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有する変異体を含む。いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈ鎖領域とＶ_Ｌ鎖領域は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）を介して連結される。

【0110】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７に示す配列を有するＶ_Ｈ領域、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８に示す配列を有するＶ_Ｌ領域を含む。

【0111】

本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｏ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、又は（ｐ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４７に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４８に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0112】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）を提供し、前記抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、２３９又は２４９に示す配列を有する重鎖（ＨＣ）、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２４０又は２５０に示す配列を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0113】

本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４９に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５０に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む。

【0114】

本出願の別の態様において、ＣＤ１３７に結合する抗体部分を含む、単離した抗ＣＤ１３７コンストラクトを提供し、前記抗体部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１－１５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４－１５６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７－１５９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、且つｂ）前記Ｖ_Ｌは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０－１６３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４－１６６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７－１６９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は約３つまでのアミノ酸の置換を含むその変異体を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0115】

いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４を含み、且つ前記ＨＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７を含み、且つＶ_Ｌは、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４を含み、且つ前記ＬＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７を含む。

【0116】

いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４を含み、且つ前記ＨＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５７を含み、且つＶ_Ｌは、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６２を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６を含み、且つ前記ＬＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９を含む。

【0117】

いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５を含み、且つ前記ＨＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５８を含み、且つＶ_Ｌは、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６６を含み、且つ前記ＬＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６９を含む。

【0118】

いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６を含み、且つ前記ＨＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９を含み、且つＶ_Ｌは、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６０を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６４を含み、且つ前記ＬＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６７を含む。

【0119】

いくつかの実施例において、Ｖ_Ｈは、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２とＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３を含み、前記ＨＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５６を含み、且つ前記ＨＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５９を含み、且つＶ_Ｌは、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２とＬＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ１はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１を含み、前記ＬＣ－ＣＤＲ２はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６５を含み、且つ前記ＬＣ－ＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６８を含む。

【0120】

本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトのうちのいずれか一つに基づくいくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７０に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７６に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７３に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７１に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７４に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域、又は（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７２に示す配列を有するアミノ酸を含む重鎖可変領域、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７５に示す配列を有するアミノ酸を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0121】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、全長抗体、二重特異性抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、Ｖ_ＨＨ、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディからなる群から選択される抗体又はその抗原結合断片を含むか又はそれらからなる群から選択される抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施例において、抗体又は抗原結合断片は、キメラ、ヒト、部分ヒト化、完全ヒト化又は半合成である。いくつかの実施例において、抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤとＩｇＥからなる群から選択される免疫グロブリンアイソタイプを含む。いくつかの実施例において、抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する。

【0122】

いくつかの実施例において、コンストラクトは、ヒト化抗ＣＤ１３７全長抗体を含む。

【0123】

いくつかの実施例において、コンストラクトは、ヒト化抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片を含む。

【0124】

いくつかの実施例において、前記コンストラクトは、ヒトＣＤ１３７に結合する。いくつかの実施例において、前記コンストラクトは、哺乳動物ＣＤ１３７（例えば、サルＣＤ１３７）に結合する。いくつかの実施例において、前記コンストラクトは、ヒトＣＤ１３７とサルＣＤ１３７のいずれかにも結合する。いくつかの実施例において、前記コンストラクトは、マウスＣＤ１３７に結合しない。

【0125】

以上に記載したように、本明細書により開示された抗ＣＤ１３７コンストラクトは、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７抗体部分を含む。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分は、ヒトとサルＣＤ１３７に結合する。

【0126】

いくつかの実施例において、本明細書に開示された抗ＣＤ１３７コンストラクトに含まれる抗ＣＤ１３７抗体部分は、ＣＤ１３７アゴニストであり、ここで前記抗体部分とＣＤ１３７との結合は、ＣＤ１３７により媒介される免疫シグナル伝達経路を増強することができる。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との結合は、前記抗体部分／ＣＤ１３７複合物の架橋及び／又はクラスタがない場合、ＣＤ１３７により媒介される免疫シグナル伝達経路を増強できない。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との結合は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞を活性化することができない。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との結合は、前記抗体部分／ＣＤ１３７複合物の架橋及び／又はクラスタがない場合、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞を活性化することができない。いくつかの実施例において、前記抗体部分／ＣＤ１３７複合物の架橋及び／又はクラスタは、本明細書に開示された抗ＣＤ１３７コンストラクトの第２の部分により媒介されてもよい。いくつかの実施例において、前記抗体部分／ＣＤ１３７複合物の架橋及び／又はクラスタは、Ｆｃ受容体と抗ＣＤ１３７コンストラクトのＦｃ領域との結合により媒介されてもよい。いくつかの実施例において、前記抗体部分／ＣＤ１３７複合物の架橋及び／又はクラスタは、抗ＣＤ１３７コンストラクトの第２の抗体部分と腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）との結合により媒介されてもよい。

【0127】

いくつかの実施例において、前記抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからのＦｃ領域及びその任意の組み合わせとヘテロコンジュゲートからなる群から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧから派生する。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又は組み合わせ又はハイブリッドＩｇＧのＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＣＨ２とＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２のＣＨ２とＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４のＣＨ２とＣＨ３ドメインを含む。ＩｇＧ４ Ｆｃのエフェクター活性がＩｇＧ１又はＩｇＧ２ Ｆｃより低いことが知られているため、いくつかの使用にとっては理想的である可能性がある。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、マウス免疫グロブリンから派生する。

【0128】

いくつかの実施例において、抗体部分はＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、抗体部分はＦｃ領域と融合するｓｃＦｖである。いくつかの実施例において、抗体部分は、ペプチドリンカーを介してＦｃ領域と融合するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、クリアランスを増加させるか又は半減期を減少させるために、一つ又は複数の突然変異を含む。

【0129】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域（Ｃｙｓ２２６から）、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンＩｇＧ重鎖定常領域を含む。本明細書で使用されるように、「ヒンジ領域」又は「ヒンジ配列」という用語は、リンカーとＣＨ２ドメインとの間に位置するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施例において、融合タンパク質は、ヒンジ領域を含むＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、融合タンパク質のＦｃ領域は、ヒンジ領域から開始しＩｇＧ重鎖のＣ末端まで延びる。いくつかの実施例において、融合タンパク質は、ヒンジ領域を含まないＦｃ領域を含む。

【0130】

いくつかの実施例において、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは、Ａｌａ２３１から開始する。いくつかの実施例において、ＣＨ３ドメインは、Ｇｌｙ３４１から開始する。ヒトＩｇＧのＣ末端Ｌｙｓ残基は、任意選択的に存在しなくてもよいと理解できる。さらに理解すべきこととして、Ｆｃの必要な構造及び／又は安定性に影響を与えない場合、Ｆｃ領域の保存アミノ酸の置換は、本発明の範囲内にあると考えられる。

【0131】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域の各本の鎖は、同じ抗体部分と融合する。いくつかの実施例において、ｓｃＦｖ－Ｆｃは、本明細書に記載の二つの同じｓｃＦｖを含み、それぞれＦｃ領域の一本の鎖と融合する。いくつかの実施例において、ｓｃＦｖ－Ｆｃはホモ二量体である。

【0132】

いくつかの実施例において、ｓｃＦｖ－Ｆｃは、二つの異なるｓｃＦｖを含み、それぞれＦｃ領域の一本の鎖と融合する。いくつかの実施例において、ｓｃＦｖ－Ｆｃはヘテロ二量体である。ｓｃＦｖ－Ｆｃにおける異なるポリペプチドのヘテロ二量体化は、当分野で公知の方法によって促進することができ、それはノブインホール技術によるヘテロ二量体化を含むが、それに限定されない。ノブインホール技術の構造と組み立て方法は、例えば、ＵＳ５，８２１，３３３、ＵＳ７，６４２，２２８、ＵＳ ２０１ １／０２８７００９とＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５９８１０に見出すことができ、その内容の全ては、ここに参照として取り込まれる。この技術は、一つのＦｃのＣＨ３ドメインにおいて、小さいアミノ酸残基を大きいアミノ酸残基で置換することによって「ノブ」（又は突起）を導入し、及び別のＦｃのＣＨ３ドメインにおいて、一つ又は複数の大きいアミノ酸残基を比較的小さいアミノ酸残基で置換することによって「ホール」（又は空洞）を導入するというステップ行われる。いくつかの実施例において、融合タンパク質におけるＦｃ領域の一つの鎖はノブを含み、且つＦｃ領域の２番目の鎖はホールを含む。

【0133】

ノブを形成するための好ましい残基は、通常、天然に存在するアミノ酸残基であり、且つ好ましくは、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）とトリプトファン（Ｗ）から選択される。最も好ましくは、トリプトファンとチロシンである。一実施例において、ノブを形成するための元の残基は、小さい側鎖体積を有し、例えば、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン又はバリンである。ノブを形成するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸の置換は、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ又はＦ４０５Ｗ置換を含むが、これらに限定されない。

【0134】

ホールを形成するための好ましい残基は、通常、天然に存在するアミノ酸残基であり、且つ好ましくは、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）とバリン（Ｖ）から選択される。一実施例において、ホールを形成するための元の残基は、大きい側鎖体積を有し、例えば、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン又はトリプトファンである。ホールを産生するためのＣＨ３ドメインにおける例示的なアミノ酸の置換は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７ＴとＹ４０７Ｖ置換を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施例において、ノブはＴ３６６Ｗ置換を含み、且つホールはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換を含む。理解すべきこととして、ヘテロ二量体化に寄与する、当分野で公知のＦｃ領域に対する他の修飾も、本出願において考慮され含まれる。

【0135】

本明細書に記述される変異体のうちのいずれか一つ（例えば、Ｆｃ変異体、エフェクター機能変異体、グリコシル化変異体、システイン操作変異体）又はその組み合わせを含む他のｓｃＦｖ－Ｆｃ変異体（単離した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ－Ｆｃの変異体を含み、例えば、全長抗ＣＤ１３７抗体変異体）も考慮される。

【0136】

ａ）抗体親和性
抗体部分の結合特異性は、当分野で公知の方法で実験によって決定されてもよい。このような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡＣＯＲＥ^ＴＭ－検定とペプチド走査を含むが、それらに限らない。

【0137】

いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_Ｄは、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－８ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－９ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ、約１０^－１０ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－１１ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－１０ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ又は約１０^－７ Ｍ～約１０^－９ Ｍである。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_Ｄは、約１０^－７ Ｍ、１０^－８ Ｍ、１０^－９ Ｍ、１０^－１０ Ｍ、１０^－１１ Ｍ又は１０^－１２ Ｍのうちのいずれか一つよりも強い。いくつかの実施例において、ＣＤ１３７はヒトＣＤ１３７である。

【0138】

いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１又は約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１である。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１又は約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１である。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１又は１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１のうちのいずれか一つを超えない。いくつかの実施例において、ＣＤ１３７はヒトＣＤ１３７である。

【0139】

いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_ｏｆｆは、約１ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１ ｓ^－１～約１０^－２ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－３ ｓ^－１、約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－４ ｓ^－１、約１０^－４ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１、約１０^－５ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－４ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１又は約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１である。いくつかの実施例において、前記抗体部分とＣＤ１３７との間の結合のＫ_ｏｆｆは、約１ ｓ^－１、１０^－２ ｓ^－１、１０^－３ ｓ^－１、１０^－４ ｓ^－１、１０^－５ ｓ^－１又は１０^－６ ｓ^－１のうちの少なくとも一つである。いくつかの実施例において、ＣＤ１３７はヒトＣＤ１３７である。

【0140】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分又は抗ＣＤ１３７コンストラクトの結合親和性は、従来の抗ＣＤ１３７抗体（例えば、抗ヒトＣＤ１３７抗体、例えば、ＢＭＳ－６６３５１３（ウレルマブ）又はＰＦ－０５０８２５６６（ウトミルマブ））よりも高い（例えば、より小さいＫｄ値を有する）。

【0141】

ｂ）キメラ抗体又はヒト化抗体
いくつかの実施例において、抗体部分はキメラ抗体である。いくつかのキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号と、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記述されている。いくつかの実施例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウスに起源する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。いくつかの実施例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから改変した「クラス転換」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0142】

いくつかの実施例において、キメラ抗体はヒト化抗体であり、通常、非ヒト抗体に対してヒト化を行い、ヒトに対する免疫原性を減少させると共に、親非ヒト抗体の特異性と親和性を残す。通常、ヒト化抗体は、一つ又は複数の可変ドメインを含み、ここで、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）は、非ヒト抗体から派生し、ＦＲ（又はその部分）は、ヒト抗体配列に起源する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部をさらに含んでもよい。いくつかの実施例において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基に起源する抗体）からの該当する残基によって置換され、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善する。

【0143】

ヒト化抗体及びその調製方法は、例えば、ＡｌｍａｇｒｏとＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７、７，５２７，７９１、６，９８２，３２１と７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）移植が記述された）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「表面の再修飾」が記述された）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」が記述された）、及びＯｓｂｏｕｒｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）とＫｌｉｍｋａら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングの「指導選択」方法が記述された）においてさらに記述されている。

【0144】

ヒト化に用いることができるヒトフレームワーク領域は、「最適フィッティング」方法で選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定サブクラスのヒト抗体の共有配列に起源するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））を参照されたい）、ヒトの成熟した（体細胞突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、ＡｌｍａｇｒｏとＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリーをスクリーニングすることで得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及び Ｒｏｓｏｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。

【0145】

ｃ）ヒト抗体
いくつかの実施例において、抗体部分はヒト抗体（ヒトドメイン抗体又はヒトＤＡｂと称される）である。ヒト抗体は、当分野の既知の異なる技術を用いて産生されてもよい。ヒト抗体は、一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋとｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）、及びＣｈｅｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７（４）：９１２－２１（２０１０）に記述されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（又はＤＡｂ）を産生できるトランスジェニックマウス又はラットは、当分野の既知のものである。例えば、ＵＳ ２００９０３０７７８７ Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ ２０１５０２８９４８９ Ａ１、ＵＳ ２０１００１２２３５８ Ａ１、及びＷＯ ２００４０４９７９４を参照されたい。

【0146】

抗原攻撃に応答して、完全ヒト抗体又はヒト可変領域を有する完全抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって、ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）を調製することができる。このような動物は、通常、全部又は一部のヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有し、それらが内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換しており、又は、染色体外に存在し、又は動物の染色体にランダムに組み込まれる。このようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説について、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。さらに、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ^ＴＭ技術を記述する米国特許第６，０７５，１８１と６，１５０，５８４号、ＨｕＭａｂ^{（登録商標）}技術を記述する米国特許第５，７７０，４２９、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ^{（登録商標）}技術を記述する米国特許第７０４１８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ^{（登録商標）}技術を記述する米国特許第ＵＳ ２００７／００６１９００号を参照されたい。このような動物によって産生された完全抗体からのヒト可変領域は、（例えば、異なるヒト定常領域に結合することで）さらに修飾されてもよい。

【0147】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ハイブリドーマに基づく方法で調製されてもよい。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫とマウスのヒト異種骨髄腫細胞株（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）が記述された。Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されるヒトがさらに記述されている。別の方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からモノクローナルヒトＩｇＭを産生することが記述された）とＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマが記述された）に記述のそれらの方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）は、ＶｏｌｌｍｅｒｓとＢｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓとＢｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記述されている。

【0148】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ヒトファージディスプレイライブラリーから選ばれるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで産生されてもよい。そして、このような可変ドメイン配列を必要なヒト定常ドメインに結合させてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術に関する記述は、以下のとおりである。

【0149】

ｄ））ライブラリーによって派生される抗体
組み合わせライブラリーにおいて、所望の活性又は複数の活性を有する抗体をスクリーニングすることで、抗体部分を単離することができる。例えば、当分野において、ファージディスプレイライブラリーを産生し、及び所望の結合特徴を有する抗体を得るために、このようなライブラリーをスクリーニングするための複数の方法が知られている。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎらによる編集 ，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）において概説されており、且つ、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）、ＭａｒｋｓとＢｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，編集，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）、Ｌｅｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）、及びＬｅｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）の文献にさらに記述されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築するための方法が記述されており、例えば、米国特許第７３７１８４９．号を参照されたい。

【0150】

いくつかのファージディスプレイ方法において、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、Ｖ_ＨとＶ_Ｌ遺伝子ライブラリーをそれぞれクローニングし、ファージライブラリーにおいて、ランダムに組換えを行い、そして、Ｗｉｎｔｅｒら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）における記載に応じて、抗原結合ファージをスクリーニングしてもよい。ファージは、通常、抗体断片をｓｃＦｖ断片又はＦａｂ断片としてディスプレイする。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することなく、免疫原に対する高親和性抗体を提供することができる。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載のように、自然ライブラリー（例えば、ヒトから得られる）を、いかなる免疫も必要とすることなくクローニングして、広範囲の非自己及び自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍとＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載のように、細胞から再構成されていないＶ遺伝子断片をクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いて高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を完了することによって、天然ライブラリーを合成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許出版物は、米国特許第５，７５０，３７３号と米国特許第２００５／００７９５７４、２００５／０１１９４５５、２００５／０２６６０００、２００７／０１１７１２６、２００７／０１６０５９８、２００７／０２３７７６４、２００７／０２９２９３６及び２００９／０００２３６０号を含む。

【0151】

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書において、ヒト抗体又はヒト抗体断片と考えられる。

【0152】

ｅ）置換、挿入、欠失と変異
いくつかの実施例において、一つ又は複数のアミノ酸の置換を有する抗体変異体を提供した。置換変異誘発の標的部位は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）とＦＲを含む。保存的置換は、表２における「好ましい置換」というテーマの下に示される。表２において、「例示的な置換」というテーマの下では、より実質的な変化が提供され、且つ以下において、アミノ酸側鎖クラスを参照しながら、さらに記述される。アミノ酸の置換は、ターゲット抗体に導入され、所望の活性（例えば、保持／改善した抗原結合、低下した免疫原性、又は改善したＡＤＣＣ又はＣＤＣ）に対して、生成物をスクリーニングすることができる。

【0153】

【表2】

【0154】

アミノ酸は、一般的な側鎖特性、（１）疏水性：ノルロイシ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、（４）アルカリ性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅに従ってグループ化されてもよい。

【0155】

非保存的置換は、これらのクラスにおける一つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。

【0156】

置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の一つ又は複数の高可変領域残基の置換に係る。通常、更なる研究に用いられる、得られた変異体を選択し、親抗体に対して、いくつかの生物学的特性（例えば、増加した親和性、低下した免疫原性）で修飾（例えば、改善）し、及び／又は、親抗体のいくつかの生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換変異体は、親和性が成熟した抗体であり、この抗体は、生成しやく、例えばファージディスプレイに基づく、親和性が成熟した技術（例えば、本明細書に記載のもの）を用いる。簡単に言えば、一つ又は複数のＨＶＲ（又はＣＤＲ）残基に対して突然変異を行い、且つ変異体抗体をファージにディスプレイし、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングを行う。

【0157】

ＨＶＲ（又はＣＤＲ）において、改変（例えば、置換）を行い、例えば、抗体親和性を改善することができる。このような改変は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）「ホットポイント」（即ち、体細胞成熟過程期間に高頻度で突然変異したコドンによってコードされる残基）において行われ（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８））を参照されたい）及び／又はＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われ、得られた変異体Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌの結合親和性を試験することができる。二次ライブラリーからの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎによる編集，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ニュージャージー州（ＮＪ），（２００１））に記述されている。親和性成熟のいくつかの実施例において、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のうちのいずれか一つによって、多様性を、成熟のために選択された可変遺伝子に導入する。そして、二次ライブラリーを産生する。そして、ライブラリーをスクリーニングし、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法は、ＨＶＲ配向方法に関し、ここで、若干のＨＶＲ（又はＣＤＲ）残基（例えば、一度に４－６個の残基）をランダム化する。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を用いて、抗原結合に関与するＨＶＲ（又はＣＤＲ）残基を特異的に同定することができる。特に、ＣＤＲ－Ｈ３とＣＤＲ－Ｌ３は、常に標的となる。

【0158】

いくつかの実施例において、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、置換、挿入又は欠失は、一つ又は複数のＨＶＲ（又はＣＤＲ）内に発生してもよい。例えば、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）において、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書による保存的置換）を行ってもよい。このような改変は、ＨＶＲ「ホットポイント」又はＣＤＲ外にある可能性がある。以上に提供される変異体Ｖ_ＨＨ配列のいくつかの実施例において、各ＨＶＲ（又はＣＤＲ）は、改変されてないものであるか、又は、一つ、二つ又は三つを超えないアミノ酸の置換を含むものである。

【0159】

ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍとＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載のように、標的変異誘発を行うことができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。このような方法において、ターゲットの残基又は残基群（例えば、荷電残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ）を同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）を用いて置換を行うことで、抗体と抗原の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。アミノ酸の位置に別の置換を導入することで、初期置換に対する機能的感受性を実証することができる。代替的に又は付加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造は、抗体と抗原との接触点を同定するためのものである。このような接触残基と隣接残基は、置換候補として標的化又は排除されてもよい。変異体は、所望の属性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされてもよい。

【0160】

アミノ酸配列の挿入は、長さが一つの残基から百個又はより多くの残基を含むポリペプチドの範囲内にあるアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合と、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入とを含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端又はＣ末端と、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）又はポリペプチドとの融合を含む。

【0161】

ｆ）グリコシル化変異体
いくつかの実施例において、コンストラクトのグリコシル化の程度を増加又は減少させるために、抗体部分を改変する。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、アミノ酸配列を改変して一つ又は複数のグリコシル化部位を産生又は除去することで、容易に実現可能である。

【0162】

抗体部分にＦｃ領域（例えば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ）が含まれる場合、それに連結される炭水化物は、改変可能である。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、通常、分岐型バイ接触角オリゴ糖を含み、それは、通常、Ｎ－結合によって、Ｆｃ領域Ｃ_Ｈ２ドメインのＡｓｎ２９７に連結される。例えば、ＷｒｉｇｈｔらＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースとびシアル酸、及びバイ接触角オリゴ糖の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含んでもよい。いくつかの実施例において、抗体部分におけるオリゴ糖に対して修飾を行って、いくつかの改善した特性を有する抗体変異体を産生することができる。

【0163】

いくつかの実施例において、抗体部分は、炭水化物構造を有し、この炭水化物構造は、（直接又は間接に）Ｆｃ領域に付着したフコースを欠く。例えば、このような抗体におけるフコースの含有量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％又は２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定されたＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体化、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７糖鎖におけるフコースの平均量を計算することにより決定され、例えば、ＷＯ ２００８／０７７５４６に記載のとおりである。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位にあるアスパラギン残基（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号）を指し、しかしながら、抗体における微小配列変化のため、Ａｓｎ２９７は、位置２９７の約±３個のアミノ酸上流又は下流、即ち、位置２９４と３００の間に位置してもよい。このようなフコシル化変異体は、改善したＡＤＣＣ機能を有してもよい。例えば、米国特許第ＵＳ ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、ＵＳ ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損型」抗体変異体に関わる出版物の例として、ＵＳ ２００３／０１５７１０８、ＷＯ ２０００／６１７３９、ＷＯ ２００１／２９２４６、ＵＳ ２００３／０１１５６１４、ＵＳ ２００２／０１６４３２８、ＵＳ ２００４／００９３６２１、ＵＳ ２００４／０１３２１４０、ＵＳ ２００４／０１１０７０４、ＵＳ ２００４／０１１０２８２、ＵＳ ２００４／０１０９８６５、ＷＯ ２００３／０８５１１９、ＷＯ ２００３／０８４５７０、ＷＯ ２００５／０３５５８６、ＷＯ ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０ 、Ｏｋａｚａｋｉら Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－ＯｈｎｕｋｉらＢｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例として、タンパク質フコシル化作用欠損型Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（ＲｉｐｋａらＡｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）、米国特許第ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ ２００４／０５６３１２ Ａ１、Ａｄａｍｓら、特に具体例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）、及びＷＯ ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。

【0164】

いくつかの実施例において、抗体部分は、二等分されるオリゴ糖を有し、例えば、ここで、抗体のＦｃ領域に付着したバイ接触角オリゴ糖は、ＧｌｃＮＡｃにより二等分される。このような抗体変異体は、減少したフコシル化及び／又は改善したＡＤＣＣ機能を有してもよい。このような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）及びＵＳ ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。オリゴ糖においてＦｃ領域に連結される少なくとも一つのガラクトース残基を有する抗体変異体をさらに提供する。このような抗体変異体は、改善したＣＤＣ機能を有してもよい。このような抗体変異体は、例えば、ＷＯ １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記述されている。

【0165】

ｇ）Ｆｃ領域変異体
いくつかの実施例において、一つ又は複数のアミノ酸修飾を抗体部分のＦｃ領域（例えばｓｃＦｖ－Ｆｃ）に導入することによって、Ｆｃ領域変異体を産生することができる。Ｆｃ領域変異体は、一つのヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよく、この配列は、一つ又は複数のアミノ酸位置にあるアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む。

【0166】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、いくつかの（全部ではない）エフェクター機能を有し、このような機能により、この断片が応用に適する望ましい候補となり、前記応用において、インビボでの抗体部分の半減期が重要であるが、いくつかのエフェクター機能（例えば、補体とＡＤＣＣ）は、必要でないか又は有害である。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを実施することによって、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行うことにより、抗体がＦｃγＲ結合能力を有しない（従ってＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能を保持できることを保証することができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単核細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲの発現は、ＲａｖｅｔｃｈとＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）のページ４６４の表２にまとめられている。米国特許第５，５００，３６２において、関心のある分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例が記載されている（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３：７０５９－７０６３（１９８６））及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ′ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：１４９９－１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照されたい）を参照されたい）。代替的に、非放射性アッセイ（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ^（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（細胞技術社（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）マウンテンビュー（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ），カリフォルニア州、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６^{（登録商標）}非放射性細胞毒性アッセイ（プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ）、マディソン、ウィスコンシン州を参照されたい）を用いてもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とを含む。代替的に又は付加的に、インビボで、例えば、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に記載のものにおいて、ターゲット分子のＡＤＣＣ活性を評価してもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイを行うことにより、抗体がＣ１ｑに結合できず、且つそのためＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、ＷＯ ２００６／０２９８７９とＷＯ ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑとＣ３ｃのＥＬＩＳＡへの結合を参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．とＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。当分野の既知の方法で、ＦｃＲｎ結合とインビボクリアランス／半減期アッセイを行ってもよい（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照されたい）。

【0167】

低下したエフェクター機能を有する抗体は、（米国特許第６，７３７，０５６号）Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの一つ又は複数の置換を有する抗体を含む。このようなＦｃ突然変異体は、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの二つ又はより多くの置換を有するＦｃ突然変異体を含み、残基２６５と２９７がアラニンによって置換されるいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む。

【0168】

本明細書において、ＦｃＲへの結合性が向上又は低下したいくつかの抗体変異体が記述されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。

【0169】

いくつかの実施例において、抗体部分は、一つ又は複数のアミノ酸の置換を有するＦｃ領域を含み、これらの置換（例えば、Ｆｃ領域内の位置２９８、３３３及び／又は３３４にある置換（残基のＥＵ番号））は、ＡＤＣＣを改善する。

【0170】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域内に改変が発生することによって、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）の改変（即ち、向上又は低下）を引き起こし、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ ９９／５１６４２及びＩｄｕｓｏｇｉｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記述のとおりである。

【0171】

いくつかの実施例において、抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ）変異体は、変異体Ｆｃ領域を含み、この変異体Ｆｃ領域は、半減期を改変し、及び／又は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改変する一つ又は複数のアミノ酸の置換を含む。延長した半減期と新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善した結合を有する抗体は、母体ＩｇＧの胎児への転移を担当し（Ｇｕｙｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）とＫｉｍら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））、例えば、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１に記述の（Ｈｉｎｔｏｎら）のとおりである。それらの抗体は、一つ又は複数のアミノ酸の置換を有するＦｃ領域を含み、ここで、これらの置換は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改変する。このようなＦｃ変異体は、一つ又は複数のＦｃ領域残基において、置換（例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換）を有するそれらの変異体（米国特許第７，３７１，８２６号）を含む。

【0172】

さらに、ＤｕｎｃａｎとＷｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＦｃ領域変異体の他の例に関わるＷＯ ９４／２９３５１を参照されたい。

【0173】

ｈ）システインエンジニアリング抗体変異体
いくつかの実施例において、システインエンジニアリング抗体部分、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」の産生を必要とする可能性があり、ここで、抗体の一つ又は複数の残基は、システイン残基によって置換される。具体的な実施例において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。システイン残基を用いてそれらの残基を置換することで、反応性チオール基は、抗体のアクセス可能な部位に位置し、本明細書にさらに記載するように、他の部分、例えば薬物部分又はリンカー－薬物部分と抗体をカップリングして、免疫コンジュゲートを産生するために用いられてもよい。いくつかの実施例において、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号）と、重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号）とのうちのいずれか一つ又は複数の残基は、システイン残基によって置換されてもよい。システインエンジニアリング抗体部分は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載のように産生されてもよい。

【0174】

ｉ）抗体誘導体
いくつかの実施例において、本明細書に記載の抗体部分は、当分野に知られており且つ容易に得られる他の非タンパク質部分を含むように、さらに修飾されてもよい。抗体誘導体化に適した部分は、水溶性ポリマーを含むが、それに限らない。水溶性ポリマーの非限定的な例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）とデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール及びそれらの混合物が挙げられるが、それらに限らない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のために調製において優位性を有する可能性がある。ポリマーは、任意の分子量を有してもよく、且つ分岐状又は非分岐状であってもよい。抗体に連結されるポリマーの数は、変わってもよく、且つ連結されるポリマーが一種よりも多いと、それらは、同じ又は異なる分子であってもよい。一般的には、誘導体化に用いられるポリマーの数及び／又はタイプは、以下の考慮要因に基づいて決定されてもよく、それらの要因は、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体を決定された診断条件のために用いられるかどうか等が含まれるが、それらに限らない。

【0175】

いくつかの実施例において、抗体部分は、一つ又は複数の生物活性タンパク質、ポリペプチド又はその断片を含むように、さらに修飾されてもよい。本明細書で互換的に使用されるように、「生物学的活性の」又は「生物学的活性を有する」は、特定の機能を果たすためにインビボで示される生物学的活性を指す。例えば、それは、特定の生物分子（例えば、タンパク質、ＤＮＡなど）に結合し、そして、このような生物分子の活性を促進又は阻害することを意味する可能性がある。いくつかの実施例において、生物学的活性タンパク質又はその断片は、活性薬物物質として患者に投与されるタンパク質又はポリペプチド、疾患又は病症の予防又は治療及び診断の目的のためのタンパク質とポリペプチド（例えば、診断試験又はインビトロアッセイに用いられる酵素）、及び疾患を予防するために患者に投与されるタンパク質とポリペプチド（例えば、ワクチン）を含む。

【0176】

ｊ）抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ
いくつかの実施例における抗ＣＤ１３７コンストラクトは、本明細書に記述される抗ＣＤ１３７抗体部分を含むｓｃＦｖ（以下では「抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ」と称する）である。抗ＣＤ１３７－ｓｃＦｖは、本明細書に記述される抗ＣＤ１３７抗体部分（「抗ＣＤ１３７抗体部分」部分を参照されたい）のうちのいずれか一つを含んでもよい。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）の配置（Ｎ－末端からＣ－末端まで）を有する。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）の配置（Ｎ－末端からＣ－末端まで）を有し、Ｌはリンカー（例えば、ペプチドリンカー）である。

【0177】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、キメラ、ヒト、部分ヒト化、完全ヒト化又は半合成である。

【0178】

いくつかの実施例において、ｓｃＦｖにおける抗ＣＤ１３７ Ｖ_Ｌと抗ＣＤ１３７ Ｖ_Ｈは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）を介して連結される。いくつかの実施例において、リンカーは、約４～約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、リンカーはＧＳリンカーである。いくつかの実施例において、リンカーはＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含む。

【0179】

ｋ）抗ＣＤ１３７融合タンパク質
いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、抗ＣＤ１３７抗体部分と半減期延長部分とを含む。いくつかの実施例において、半減期延長部分はＦｃ領域である。いくつかの実施例において、半減期延長部分はアルブミン結合部分（例えば、アルブミン結合抗体部分）である。

【0180】

いくつかの実施例において、半減期延長部分はＦｃ領域（例えば、本明細書に記述されるＦｃ領域のうちのいずれか一つ又はその変異体）である。用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ－末端非抗原結合領域を指す。前記用語は、天然Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域とを含む。いくつかの実施例において、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から重鎖のカルボキシル基末端まで延びる。しかし、Ｆｃ領域の構造又は安定性に影響を与えない場合、Ｆｃ領域のＣ－末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しても又はしなくてもよい。本明細書に特に明記しない限り、ＩｇＧ又はＦｃ領域におけるアミノ酸残基番号付けは、抗体に対するＥＵ番号付けシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に基づくものであり、例えば、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ベセスダ，メリーランド州，１９９１に記述されている。

【0181】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭのＦｃ領域、及びその任意の組み合わせとヘテロコンジュゲートからなる群から選択される。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のＦｃ領域、及びその任意の組み合わせとヘテロコンジュゲートからなる群から選択される。

【0182】

いくつかの実施例において、対応する野生型Ｆｃ領域に比べて、前記Ｆｃ領域は、低下したエフェクター機能を有する（例えば、依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）レベルをアッセイして、エフェクター機能は、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％又は９５％低下する）。

【0183】

いくつかの実施例において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域はＬ２３４Ａ突然変異及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。

【0184】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７抗体部分と半減期延長部分は、リンカー（例えば、「リンカー」部分に記述されるリンカーのうちのいずれか一つ）を介して連結される。

【0185】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７融合タンパク質は、第２の抗体をさらに含む。いくつかの実施例において、前記第２の抗体は腫瘍抗原（例えば、本明細書に記述される腫瘍抗原のうちのいずれか一つ）に結合する。

【0186】

ｌ）多重特異性抗体
本明細書は、ＣＤ１３７と第２の抗原の両者に結合する多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）をさらに提供した。いくつかの実施例において、第２の抗原もＣＤ１３７であるが、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体部分と異なるエピトープを含む。いくつかの実施例において、第２の抗原はＣＤ１３７ではない。いくつかの実施例において、第２の抗原は腫瘍関連抗原である。

【0187】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）本明細書に記述される任意の抗ＣＤ１３７コンストラクトを含む第１の抗体部分、及びｂ）非ＣＤ１３７の第２の抗原に結合する第２の抗体部分を含む。いくつかの実施例において、前記第２の抗原は腫瘍関連抗原を含む。

【0188】

いくつかの実施例において、前記第１の抗体部分は、ＣＤ１３７に結合する一本鎖Ｆｖ断片を含む。いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分は、腫瘍関連抗原に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体を含み、ここで、前記重鎖は、それぞれ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）を含み、且つ前記軽鎖は、それぞれ第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含み、ここで前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖又は軽鎖のうちの少なくとも一本と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の軽鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の軽鎖のＮ端と融合する。

【0189】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）ＣＤ１３７に結合する、第１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－１）と第１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－１）とを含む一本鎖Ｆｖ断片を含む第１の抗体部分と、ｂ）第２の抗原（例えば、腫瘍関連抗原）に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体を含む第２の抗体部分であって、前記重鎖は、それぞれ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）を含み、且つ前記軽鎖は、それぞれ第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含む第２の抗体部分とを含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の一本又は二本の重鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の一本又は二本の重鎖のＮ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の一本又は二本の軽鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の一本又は二本の軽鎖のＮ端と融合する。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片のＶ_Ｈ－１とＶ_Ｌ－１は、第１のリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー）を介して全長抗体と融合する。いくつかの実施例において、前記第１のリンカーは約１～約３０（例えば、約４～２０、約３～２０、約６～１８又は約１０～１５）個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、前記第１のリンカーは、ＧＳリンカーである。いくつかの実施例において、前記リンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を有する。いくつかの実施例において、全長抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択されたＦｃ領域を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択される。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧｌ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ａ突然変異とＬ２３５Ａ突然変異とを含む。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ突然変異をさらに含む。

【0190】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）本明細書に記載の任意の抗ＣＤ１３７コンストラクトを含む全長抗体を含む第１の抗体部分と、ｂ）第２の抗原（例えば、腫瘍関連抗原）を認識する一本鎖Ｆｖ断片を含む第２の抗体部分とを含む。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、抗ＣＤ１３７全長抗体の一本又は二本の重鎖と融合する。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、抗ＣＤ１３７全長抗体の一本又は二本の重鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、抗ＣＤ１３７全長抗体の重鎖の一つ又は二つのＮ端と融合する。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、抗ＣＤ１３７全長抗体の一本又は二本の軽鎖と融合する。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、抗ＣＤ１３７全長抗体の一本又は二本の軽鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の一本又は二本の抗ＣＤ１３７軽鎖のＮ端と融合する。

【0191】

本明細書に記述されるように、「腫瘍関連抗原」は、例えば、腫瘍細胞（例えば、癌細胞）の発現が非腫瘍細胞（例えば、非癌細胞）の発現より著しく高い（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％又は７０％高い）任意の抗原を指す。

【0192】

本明細書に記述される第２の抗体部分により認識可能な例示的な腫瘍関連抗原は、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＣＡ１５－３、ＣＡ２７－２９、ＣＡ１９－９、ＣＡ－１２５、カルレチニン、癌胎児性抗原、ＣＤ３４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、ミオゲニン、上皮性膜タンパク質（ＥＭＡ）、因子ＶＩＩＩ、ＣＤ３１ ＦＬ１、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、嚢胞性疾患液体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＨＭＢ－４５、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インヒビン、ケラチン、ＣＤ４５、リンパ球マーカ、ＭＡＲＴ－１（Ｍｅｌａｎ－Ａ）、Ｍｙｏ Ｄｌ、筋特異的アクチン（ＭＳＡ）、ニューロフィラメント、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、前立腺特異抗原、Ｓ１００タンパク質、平滑筋アクチン（ＳＭＡ）、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子－１、腫瘍Ｍ２－ＰＫ、及びビメンチンを含むが、それらに限られない。

【0193】

いくつかの実施例において、前記腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ－２、ＥＧＦＲ、ＰＤ－Ｌ１、ｃ－Ｍｅｔ、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）、上皮糖タンパク質（ＥＧＰ２）、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンキナーゼｅｒｂ－Ｂ２、３、４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－ａ、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、Ｌｅｗｉｓ Ａ（ＣＡ １．９．９）、Ｌｅｗｉｓ Ｙ（ＬｅＹ）、ホスファチジルイノシトールプロテオグリカン－３（ＧＰＣ３）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ＮＧ２Ｄリガンド、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、封入タンパク質１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、腎芽細胞腫タンパク質（ＷＴ－１）、１型チロシンキナーゼ膜貫通型受容体（ＲＯＲ１）及びその任意の組み合わせからなる群から選ばれる。いくつかの実施例において、腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ－２、ＥＧＦＲ、Ｂ７Ｈ３、ｃ－Ｍｅｔ又はＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施例において、腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ－２、ＥＧＦＲ、Ｂ７Ｈ３、ｃ－Ｍｅｔ又はＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される。

【0194】

ｍ）抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２多重特異性抗体
いくつかの実施例において、本明細書に開示される多重特異性抗体は、ａ）本明細書に開示された任意の抗ＣＤ１３７コンストラクトを構成する、一本鎖Ｆｖ断片である第１の抗体部分と、ｂ）ＨＥＲ２に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体を含む第２の抗体部分であって、前記重鎖は、それぞれ第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）を含み、且つ前記軽鎖は、それぞれ第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含み、ここで前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は全長抗体と融合する第２の抗体部分とを含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖のＮ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の軽鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の軽鎖のＮ端と融合する。いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２は、ヒトＨＥＲ２である。いくつかの実施例において、ＨＥＲ２に結合する全長抗体又は抗ＨＥＲ２抗体部分は、ＨＥＲ２の結合エピトープについて、第３の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－３）と第３の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－３）とを含む抗体又は抗体断片と競合し、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、ｂ）前記Ｖ_Ｌ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。

【0195】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0196】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0197】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ａ）重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含む前記第１の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第１の抗体部分と、ｂ）第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む前記第２の抗体部分であって、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含む第２のＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含む第２のＬＣ－ＣＤＲ３とを含む前記第２の抗体部分とを含む。

【0198】

いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３と少なくとも約８０％の配列同一性を有するその変異体を含む。いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列を含み、前記Ｖ_Ｌ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列を含む。

【0199】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含み、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３又は２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列の変異体を含む。いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分に含まれる全長抗体は、軽鎖を含み、前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含み、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列の変異体を含む。

【0200】

いくつかの実施例において、多重特異性抗体を提供し、それは、ａ）本明細書に開示された、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片であって、前記一本鎖Ｆｖ断片は、第１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－１）と第１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－１）とを含み、ここで前記Ｖ_Ｈ－１は、ｉ）ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、前記Ｖ_Ｌは、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と、ｂ）ＨＥＲ２に結合し、且つ二本の抗体重鎖と二本の抗体軽鎖とを含む全長抗体であって、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖と融合し、ＨＥＲ２に結合する全長抗体は、第２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）と第２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）とを含む全長抗体とを含み、ここで、ａ）前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲｌと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３とを含み、ｂ）前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖のＣ端と融合する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、全長抗体の重鎖のＮ端と融合する。

【0201】

いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、２３７又は２４７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、２３８又は２４８と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含む。

【0202】

いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含む。

【0203】

いくつかの実施例において、前記Ｖ_Ｈ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含み、及び／又は前記Ｖ_Ｌ－３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３のアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するその変異体を含む。

【0204】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、前記抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖と融合し、ここで、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片と融合する抗ＨＥＲ２全長抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３及び２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含み、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３、１８４、２０４、２０５、２５１、２５２、２５３及び２５４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の序列同一性を有するアミノ酸配列の変異体を含む。いくつかの実施例において、前記第２の抗体部分に含まれる全長抗体は、軽鎖を含み、前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列を含み、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５のアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列の変異体を含む。

【0205】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８３に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８４に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０４に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０５に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５１に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５２に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５３に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５４に示すアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗ＨＥＲ２重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８５に示すアミノ酸配列を含む抗ＨＥＲ２軽鎖とを含む。

【0206】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片のＶ_Ｈ－１とＶ_Ｌ－１は、第１のリンカー（例えば、第１のペプチドリンカー）を介して融合する。いくつかの実施例において、前記第１のリンカーは約１～約３０（例えば、約４～２０、約３～２０、約６～１８又は約１０～１５）個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、前記第１のリンカーは、ＧＳリンカーである。いくつかの実施例において、前記リンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６０－２３０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を有する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７一本鎖Ｆｖ断片は、第２のリンカー（例えば、第２のペプチドリンカー）を介して全長抗体の重鎖と融合する。いくつかの実施例において、前記第２のペプチドリンカーは、約１～約３０（例えば、約４～２０、約３～２０、約６～１８又は約１０～１５）個のアミノ酸を含む。いくつかの実施例において、前記第２のペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０６－２３０のうちのいずれか一つの配列を含むリンカーである。

【0207】

いくつかの実施例において、全長抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭからのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択されたＦｃ領域を有する。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からのＦｃ領域及びそれらの任意の組み合わせとハイブリッドから選択される。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧｌ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域である。いくつかの実施例において、前記ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４ＡとＬ２３５Ａ突然変異を含む。

【0208】

ｏ）多重特異性抗体特性
いくつかの実施例において、本明細書に記載の多重特異性抗体は、ＣＤ１３７と第２の抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＰＤ－Ｌ１）に結合する参照多重特異性抗体に対して改善された臨床的特性を有する。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、参照多重特異性抗体のＡＤＣＣ活性に比べて改善されたＡＤＣＣ活性（例えば、ＡＤＣＣ依存性細胞毒性が少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％又は７０％高い）を示す。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、参照多重特異性抗体のＡＤＣＣ活性に比べてより高い抗腫瘍作用（例えば、腫瘍負荷を低下させ又は生存率を少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％又は７０％以上向上させる）を示す。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、参照多重特異性抗体の毒性に比べてより小さい毒性を示す。

【0209】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、ＣＤ１３７と腫瘍関連抗原の両者に結合し、且つ示した腫瘍関連抗原に対して陽性であり又は高レベルの腫瘍関連抗原を発現する腫瘍細胞のＡＤＣＣ活性は、参照多重特異性抗体のＡＤＣＣ活性に比べて向上した（例えば、非腫瘍細胞におけるＴＡＡ発現より少なくとも約２５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０－倍、１５－倍、２０－倍高い）。いくつかの実施例において、細胞特異的多重特異性抗体に対するＥＣ５０は、参照多重特異性抗体の約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％を超えない。

【0210】

いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、癌又は腫瘍を有しない個体において有意なサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α）放出を誘導しない。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、癌又は腫瘍を有する個体における非癌組織において、有意なサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α）放出を誘導しない。いくつかの実施例において、有意なサイトカイン放出は、サイトカインの放出レベルがＣＤ１３７及び同じ第２の抗原に結合する参照多重特異性抗体により誘導されるレベルの少なくとも約７０％、６０％、５０％、４０％、３０％又は２０％である。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、癌又は腫瘍を有しない個体において、より少ないサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α）放出（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％サイトカイン放出が少ない）を誘導する。いくつかの実施例において、前記多重特異性抗体は、癌又は腫瘍を有する個体における非癌組織において、より少ないサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α）放出（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％のサイトカイン放出が少ない）を誘導する。

【0211】

ｎ）タンデムｓｃＦｖ
いくつかの実施例における多重特異性抗ＣＤ１３７分子は、タンデムｓｃＦｖ（本明細書において、「タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体」とも呼ばれる）であり、それは第１のｓｃＦｖと第２のｓｃＦｖとを含み、前記第１のｓｃＦｖは、ＣＤ１３７を特異的に認識する抗ＣＤ１３７抗体部分（本明細書において「抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ」と呼ばれる）を含み、前記第２ｓｃＦｖは、第２の抗原を特異的に認識する。いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、少なくとも一つの（例えば、少なくとも約２、３、４、５又はそれ以上のうちのいずれか一つ）別のｓｃＦｖをさらに含む。

【0212】

いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ１３７抗体を提供し、それは、ａ）ＣＤ１３７を特異的に認識する第１のｓｃＦｖ、及び ｂ）第２の抗原（例えば、腫瘍関連抗原）を特異的に認識する第２のｓｃＦｖを含み、ここでタンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、タンデム二－ｓｃＦｖ又はタンデム三－ｓｃＦｖである。いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、タンデム二－ｓｃＦｖである。いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーである。いくつかの実施例において、第２のｓｃＦｖは、異なるＣＤ１３７エピトープに結合する。いくつかの実施例において、第２のｓｃＦｖは、非ＣＤ１３７の第２の抗原を特異的に認識する。いくつかの実施例において、第２のｓｃＦｖは、第２の抗原、例えば、腫瘍関連抗原を特異的に認識する。いくつかの実施例において、第１の抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、キメラ、ヒト、部分ヒト化、完全ヒト化又は半合成である。いくつかの実施例において、第２のｓｃＦｖは、キメラ、ヒト、部分ヒト化、完全ヒト化又は半合成である。いくつかの実施例において、第１と第２のｓｃＦｖは、いずれもキメラ、ヒト、部分ヒト化、完全ヒト化又は半合成である。いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、少なくとも一つの（例えば、少なくとも約２、３、４、５又はそれ以上のうちのいずれか一つ）別のｓｃＦｖをさらに含む。いくつかの実施例において、第１の抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと第２のｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）を介して連結される。いくつかの実施例において、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）_ｎのアミノ酸配列を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上である。いくつかの実施例において、リンカーは、ＴＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、第１の抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖのＮ－末端に連結される。いくつかの実施例において、第１の抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖのＣ－末端に連結される。いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ１３７抗体は、タグ（例えば、精製目的のペプチドタグ）をさらに含む。いくつかの実施例において、タグは、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ１３７抗体のＮ－末端に連結される。いくつかの実施例において、タグは、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ１３７抗体のＣ－末端に連結される。いくつかの実施例において、タグは、ＨＨＨＨＨＨのアミノ酸配列を含む。

【0213】

いくつかの実施例において、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、二つのｓｃＦｖを含むタンデム二－ｓｃＦｖ（本明細書において、「タンデム二－ｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ１３７抗体」と呼ばれる）である。タンデム二－ｓｃＦｖ二重特異性抗ＣＤ１３７抗体は、任意の配置、例えば、以下に列挙される配置（Ｎ－末端からＣ－末端まで）で組み立てられるＶ_ＨとＶ_Ｌを有してもよく、ここでは、Ｘは、第２のｓｃＦｖにより結合される第２の抗原であり、Ｌ１、Ｌ２、とＬ３は、任意選択的なリンカー（例えば、ペプチドリンカー）である。全ての適すリンカーについては、「リンカー」部分を参照されたい。いくつかの実施例において、リンカー（Ｌ１、Ｌ２又はＬ３）は、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、リンカー（Ｌ１、Ｌ２又はＬ３）は、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ配列であるか又は（ＧＧＧＧＳ）_ｎ配列を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上である。いくつかの実施例において、リンカー（Ｌ１、Ｌ２又はＬ３）は、ＴＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施例において、リンカー（Ｌ１、Ｌ２又はＬ３）は、ＧＥＧＴＳＴＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＡＤのアミノ酸配列を含む。

【0214】

Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（Ｘ）、
Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（Ｘ）、
Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（Ｘ）、
Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（Ｘ）、
Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）、
Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（Ｘ）、
Ｖ_Ｌ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｈ（Ｘ）、
Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（Ｘ）、又は
Ｖ_Ｈ（Ｘ）－Ｌ１－Ｖ_Ｌ（ＣＤ１３７）－Ｌ２－Ｖ_Ｈ（ＣＤ１３７）－Ｌ３－Ｖ_Ｌ（Ｘ）。

【0215】

ｏ）リンカー
いくつかの実施例において、本明細書に記述される抗ＣＤ１３７コンストラクトは、二つの部分（例えば、本明細書に記述される二重特異性抗体における抗ＣＤ１３７抗体部分と半減期延長部分、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと全長抗体）の間に一つ又は複数のリンカーを含む。二重特異性抗体に使用される一つ又は複数のリンカーの長さ、柔軟性及び／又は他の特性は、特性に何らかの影響を与える可能性があり、前記特性は、一つ又は複数の特定抗原又はエピトープに対する親和性、特異性又は結合性を含むが、これらに限定されない。例えば、隣接する二つのドメインが空間的に互いに干渉しないよう確保するために、より長いリンカーを選択してもよい。いくつかの実施例において、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）は、柔軟な残基（例えば、グリシンとセリン）を含み、それによって隣接するドメインは、互いに自由に移動する。例えば、グリシン－セリン二剤は、適切なペプチドリンカーであってもよい。いくつかの実施例において、リンカーは、非ペプチドリンカーである。いくつかの実施例において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施例において、リンカーは、切断不可能なリンカーである。いくつかの実施例において、リンカーは、切断可能なリンカーである。

【0216】

他のリンカー考慮要因は、得られた化合物の物理的又は薬物動態的特性、例えば、溶解性、親油性、親水性、疎水性、安定性（より安定的又はより不安定的及び計画された分解）、剛性、柔軟性、免疫原性に対する影響、抗体結合の調節、ミセルへの組込み又はリポソームの能力などを含む。

【0217】

二つの部分のカップリングは、以下の任意の化学反応によって完了することができ、前記化学反応は、二つの分子を、この二つの成分がいずれもそれぞれの活性を保持する限り、二重特異性抗体に結合させ、例えば、それぞれＣＤ１３７と二種目の抗原に結合させる。この連結は、多くの化学メカニズムを含んでもよく、例えば、共有結合、親和性結合、挿入、配位結合と錯化である。いくつかの実施例において、結合は、共有結合である。共有結合は、従来の側鎖の直接縮合又は外部架橋分子の組込みによって実現してもよい。この場合、多くの二価又は多価リンカーは、タンパク質分子をカップリングするために用いられてもよい。例えば、代表的なカップリング剤は、有機化合物を含んでもよく、例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミジル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾフェニル及びヘキサメチレンジアミンである。このリストは、当分野の既知の様々なカップリング剤を網羅することを意図したものではなく、より一般的なカップリング剤の例である（ＫｉｌｌｅｎとＬｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）、Ｊａｎｓｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）、及びＶｉｔｅｔｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照されたい）。

【0218】

本出願で適用できるリンカーは、文献において記述される（例えば、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）を参照されたく、それにはＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル）の使用が記述されている）。いくつかの実施例において、本明細書に使用される非ペプチドリンカーはは、（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノ－プロピル）カルボジイミド塩酸塩、（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジル－ジチオ）－トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．、カタログ番号（２１５５８Ｇ）、（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸エステル（ピアース化学会社、カタログ番号＃２１６５１Ｇ）、（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸エステル（ピアース化学会社、カタログ番号＃２１６５－Ｇ）、（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートするスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミジル、ピアース化学会社、カタログ番号＃２４５１０）を含む。

【0219】

本明細書に記述されるリンカーは、異なる属性を有する成分を含むため、異なる物理化学的特性を有する二重特異性抗体をもたらす可能性がある。例えば、アルキルカルボン酸塩のスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボン酸塩のスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定的である。ＮＨＳエステルを含むリンカーの可溶性は、スルホ－ＮＨＳエステルより低い。また、リンカーＳＭＰＴは、立体障害ジスルフィド結合を含み、且つ増強された安定性を有する抗体融合タンパク質を形成することができる。ジスルフィド結合は、通常、他の結合より不安定であり、ジスルフィド結合がインビトロで切断され、利用可能な抗体融合タンパク質がより少なくなるためである。特に、スルホ－ＮＨＳは、カルボジイミドカップリングの安定性を増強することができる。スルホ－ＮＨＳと併用する時、カルボジイミドカップリング（例えば、ＥＤＣ）は、単独なカルボジイミドカップリング反応よりも加水分解に対する耐性がより大きいエステルを形成する。

【0220】

ペプチドリンカーは、天然に存在する配列又は非天然に存在する配列を有してもよい。例えば、重鎖のみを有する抗体のヒンジ領域から派生した配列は、リンカーとして用いられてもよい。例えば、ＷＯ １９９６／３４１０３を参照されたい。

【0221】

ペプチドリンカーは、任意の適切な長さを有してもよい。いくつかの実施例において、ペプチドリンカーの長さは、少なくとも約、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００個又はそれ以上のアミノ酸のうちのいずれか一つである。いくつかの実施例において、ペプチドリンカーの長さは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５個又はそれ以下のアミノ酸のうちのいずれか一つを超えなく、いくつかの実施例において、ペプチドリンカーの長さは、約１個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、又は約１個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸のうちのいずれか一つである。

【0222】

このようなペプチドリンカーの基本的な技術的特徴は、前記ペプチドリンカーがいかなる重合活性も含まないことである。ペプチドリンカーの特徴（それは二次構造促進作用の欠失を含む）は、当分野の既知のものであり、且つ例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）３７，９２６６－９２７３）、Ｃｈｅａｄｌｅら（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２９，２１－３０）及びＲａａｇとＷｈｉｔｌｏｗ（ＦＡＳＥＢ（１９９５）９（１），７３－８０）に記述されている。「ペプチドリンカー」については、特に好ましくは、アミノ酸はＧｌｙである。また、いかなる二次構造も促進しないペプチドリンカーが好ましい。ドメインの相互に対する連結は、例えば、遺伝子工学によって提供されてもよい。融合され機能的に連結された二重特異性単鎖構築物を調製しそれらを哺乳動物細胞または細菌において発現させる方法は、当分野で周知である（例えば、ＷＯ ９９／５４４４０，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ］，ニューヨーク １９８９年と１９９４年又はＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，コールド・スプリング・ハーバー，ニューヨーク，２００１年）。

【0223】

ペプチドリンカーは、安定的なリンカーであってもよく、それはプロテアーゼ、特にマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）によって切断されない。

【0224】

前記リンカーは、柔軟なリンカーであってもよい。例示的な柔軟なリンカーは、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ及び（ＧＧＧＳ）_ｎを含み、ここで、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー及び当分野の既知の他の柔軟なリンカーを含む。グリシンとグリシン－セリンポリマーは、比較的構造化されていないため、成分の間の中性テザーとして機能することができる。グリシンは、アラニンに対してさえ、明らかにより多くのｐｈｉ－ｐｓｉ 空間に入り込み、且つ側鎖が長い残基よりも制限がはるかに少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ、Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１ １７３－１４２（１９９２）を参照されたい）。抗体融合タンパク質の設計には、全体的に又は部分的に柔軟なリンカーを含んでもよく、それによりリンカーは、所望の抗体融合タンパク質構造を提供するために柔軟なリンカー部分及びより柔軟性の低い構造を付与する一つ又は複数の部分を含んでもよいことが当業者には認識されよう。

【0225】

ｐ）免疫コンジュゲート
本明細書に提供されるものは、免疫コンジュゲートをさらに含み、前記免疫コンジュゲートは、治療剤又はマーカーに連結する本明細書に記載の任意の抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、多重特異性抗体）を含む。いくつかの実施例において、前記マーカーは、放射性同位体、蛍光色素と酵素からなる群から選択される。

【0226】

ｑ）核酸
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗ＣＤ１３７抗体部分をコードする核酸分子も考慮した。いくつかの実施例において、全長抗ＣＤ１３７抗体をコードする核酸（又は一群の核酸）を提供した。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖをコードする核酸（又は一群の核酸）を提供した。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸（又は一群の核酸）を提供した。いくつかの実施例において、多重特異性抗ＣＤ１３７分子（例えば、多重特異性抗ＣＤ１３７抗体又は二重特異性抗ＣＤ１３７抗体）又はそのポリペプチド部分をコードする核酸（又は一群の核酸）を提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクトをコードする核酸（又は一群の核酸）は、ペプチドタグ（例えば、タンパク質精製タグであり、例えば、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグである）をコードする核酸配列をさらに含んでもよい。

【0227】

本明細書は、抗ＣＤ１３７コンストラクトを含む単離した宿主細胞、抗ＣＤ１３７コンストラクトポリペプチド成分をコードする単離した核酸、又は本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクトポリペプチド成分をコードする核酸を含むベクターをさらに考慮した。

【0228】

本出願は、これらの核酸配列の変異体をさらに含む。例えば、前記変異体は、少なくとも中程度の厳格なハイブリダイズ条件で、本出願の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗ＣＤ１３７抗体部分をコードする核酸配列とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。

【0229】

本発明は、本発明の核酸に挿入されるベクターをさらに提供した。

【0230】

標準遺伝子送達方案を用いて、本発明の核酸は、核酸免疫と遺伝子療法にも用いられてもい。遺伝子送達に用いられる方法は、当分野の既知のものである。例えば、米国特許第５，３９９，３４６、５，５８０，８５９、５，５８９，４６６号を参照されたく、全体として参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施例において、本発明は、遺伝子療法ベクターを提供した。

【0231】

核酸を複数タイプのベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸をベクターにクローニングすることができ、このベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体動物ウイルスとコスミドを含むが、これらに限定されない。特に関心のあるベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及び配列決定ベクターを含む。

【0232】

また、発現ベクターをウイルスベクターの形態で細胞に提供してもよい。ウイルスベクター技術は、当分野でよく知られ、且つ例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、及び他のウイルス学と分子生物学マニュアルに記述される。ベクターとして機能できるウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及び慢性ウイルスを含むが、これらに限定されない。通常、適切なベクターは、少なくとも一つの生物において機能する複製起点、プロモーター配列、都合のいい制限エンドヌクレアーゼ部位、と一つ又は複数の選択マーカー（例えば、ＷＯ ０１／９６５８４、ＷＯ ０１／２９０５８、米国特許第６，３２６，１９３号）を含む。

【0233】

ＩＩＩ．調製方法
いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗体部分を調製する方法、及び前記抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗体部分を調製する過程で産生した組成物、例えば、ポリヌクレオチド、核酸コンストラクト、ベクター、宿主細胞又は培地を提供した。本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗体部分又は組成物は、一般的に記載される以下の複数の方法によって調製することができ、且つ具体例により具体的に記述されている。

【0234】

抗体発現と産生
本明細書に記載の抗体（抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体、抗ＣＤ１３７二重特異性抗体と抗ＣＤ１３７抗体部分を含む）は、当分野の既知の任意の方法で調製することができ、以下及び具体例に記載の方法を含む。

【0235】

モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に同質の抗体群から得られ、即ち前記群を構成する各抗体は、少量に存在する可能性のあり自然に発生する突然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。そのため、前記修飾語「モノクローナル」は、個別抗体の混合物ではないという前記抗体の特徴を示す。例えば、前記モノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５））により記述されたハイブリドーマ法で調製してもよく、又は組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって調製してもよい。前記ハイブリドーマ方法において、マウス又は他の適切な宿主動物、例えば、ハムスター又はラマは、免疫化のためのタンパク質に特異的結合する抗体を産生するか又は産生できるリンパ球を誘導するために、以上に記載のように免疫化を行う。代替的に、リンパ球をインビトロで免疫化してもよい。そして、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）でリンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ページ５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。また具体例１におけるラクダ免疫を参照されたい。

【0236】

前記免疫剤は、典型的には、抗原タンパク質又はその融合変異体を含む。通常、ヒト起源の細胞が所望される場合、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）を用い、又は非ヒト哺乳動物供給源が所望される場合、脾臓細胞又はリンパ節細胞を用いる。そして、ハイブリドーマ細胞を形成するために、リンパ球を適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）で不死化細胞株と融合させる。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６），ページ５９－１０３）。

【0237】

不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類動物、ウシとヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウス骨髄腫細胞株を用いる。このように調製されたハイブリドーマ細胞を適切な培地に播種し、増殖させ、前記培地は、好ましくは、融合していない親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する一つ又は複数の物質を含む。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠損する場合、ハイブリドーマ用の培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損型細胞の増殖を阻害する物質であるヒポキサンチン、メトトレキサートとチミジン（ＨＡＴ培地）を含む。

【0238】

好ましい不死化骨髄腫細胞株は、効果的に融合し、選択された、抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの産生を支援し、且つ培地（例えば、ＨＡＴ培地）に対して感受性であるものである。ここで、好ましくは、マウス系骨髄腫細胞株であり、例えば、米国カリフォルニア州サンディエゴのソークインディデュートセルディストリビューションセンター（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ）から得られたＭＯＰＣ－２１とＭＰＣ－１１マウス腫瘍、及び米国バージニア州マナサスのアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から得られたＳＰ－２細胞（及びその誘導体、例えば、Ｘ６３－Ａｇ８－６５３）に起源する細胞株である。ヒト骨髄腫とマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生に用いられるように記述される（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。

【0239】

ハイブリドーマ細胞が増殖する培地における抗原に対するモノクローナル抗体の産生をアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合アッセイによって決定し、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。

【0240】

ハイブリドーマ細胞を培養する培地に所望の抗原に対するモノクローナル抗体が存在するか否かをアッセイしてもよい。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性と特異性は、免疫沈降又はインビトロ結合アッセイ、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定することができる。このような技術とアッセイは、当分野の既知のものである。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．］，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定することができる。

【0241】

所望の特異性、親和性及び／又は活性を有する抗体を産生できるハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを、限界希釈法によってサブクローンし、標準的な方法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ、同上）。この目的に用いられる適切な培地は、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０培地を含む。また、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物において腫瘍としてインビボで増殖させることができる。

【0242】

慣用的な免疫グロブリン精製法（例えば、タンパク質Ａ－アガロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィー）により、サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体を、培地、腹水又は血清から適切に単離する。

【0243】

また、モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記述され且つ本明細書に記載のもののような組換えＤＮＡ法来によって調製されてもよい。慣用的な方法を用いて（例えば、マウス系抗体をコードする重鎖及び軽鎖の遺伝子と特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡを、容易に単離し配列決定する。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されると、ＤＮＡを発現ベクターに入れることができ、そして、免疫グロブリンを追加的に産生しない宿主細胞（例えば、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は骨髄腫細胞）にこれらのベクターをトランスフェクトして、このような組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関するコメント文献は、Ｓｋｅｒｒａ ら．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６－２６２（１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－１８８（１９９２）を含む。

【0244】

別の実施例において、抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載の技術を用いて、産生された抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）は、それぞれファージライブラリーを用いたマウスとヒト抗体の単離を記述している。その後の刊行物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２））、及び非常に大きいファージライブラリーを構築する方策（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１：２２６５－２２６６（１９９３））としてのコンビナトリアル感染とインビボ組換えによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生を記述している。そのため、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の的実行可能な代替法である。

【0245】

さらに、例えば、ヒト重鎖と軽鎖の定常ドメインのコード配列で相同なマウス配列を代替し（米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、又は非免疫グロブリンポリペプチドの全て又は一部のコード配列を免疫グロブリンコード配列に共有結合することなどによって、ＤＮＡを修飾してもよい。通常、このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインを置換し、又は抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインを置換して、抗原に対して特異性を有する一つの抗原結合部位と異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を産生する。

【0246】

本明細書に記載のモノクローナル抗体は、一価であってもよく、その調製は、当分野で周知である。例えば、一つの方法としては、免疫グロブリン軽鎖と修飾された重鎖の組換え発現に関する。通常、重鎖の架橋を防止するために、重鎖をＦｃ領域における任意の点で切断する。代替的に、関連するシステイン残基を、別のアミノ酸残基で置換してもよく、又は架橋を防止するために欠失させてもよい。インビトロ法もまた一価抗体の調製に適している。抗体の断片（特にＦａｂ断片）を産生するための抗体消の化は、当分野の既知の慣用的な技術を用いて完了してもよい。

【0247】

また、キメラ又はハイブリッド抗体は、合成タンパク質化学における既知の方法（架橋剤に関するそれらの方法を含む）を用いてインビトロで調製することができる。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド結合交換反応又はチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的に対して適切な試薬の具体例は、イミノチオレート（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｔｅ）及び４－メルカプトブチリミデート（ｍｅｔｈｙｌ－４－ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）を含む。

【0248】

また、モノクローナル抗体の産生については、具体例を参照されたい。

【0249】

多重特異性抗体
本明細書は、本明細書に記載の多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を調製する方法をさらに提供した。多重特異性抗体は、当分野の既知の又は本明細書に記載の任意の方法（例えば、具体例１と３）を用いて調製してもよい。

【0250】

本出願の多重特異性抗体の調製方法は、ＷＯ ２００８１１９３５３（Ｇｅｎｍａｂ社）、ＷＯ ２０１１１３１７４６（Ｇｅｎｍａｂ社）とｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ－Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７年９月１４日；３１７（５８４４）：１５５４－７）による報告に記述されているものを含む。二重特異性抗体を調製するための他のプラットフォームの実施例は、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ社）、ＦｃａｂとＭａｂ２（Ｆ－ｓｔａｒ社）、ＦｃエンジニアリングＩｇＧｌ（Ｘｅｎｃｏｒ社）又はＤｕｏＢｏｄｙを含むが、これらに限定されない。

【0251】

伝統的な方法、例えば、前記ハイブリダイズハイブリドーマと化学コンジュゲート方法（ＭａｒｖｉｎとＺｈｕ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｉｎ ２６：６４９）も用いてもよい。宿主細胞における二つの成分の共発現（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖと融合する抗腫瘍関連抗原全長抗体の重鎖及び抗腫瘍関連抗原抗体の軽鎖）により、所望の二重特異性抗インビトロ以外、抗体生成物の混合物の存在も可能であり、そして、前記多重特異性抗体は、例えば、アフィニティークロマトグラフィー又は類似した方法によって単離されてもよい。

【0252】

抗体部分をコードする核酸分子
いくつかの実施例において、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗体部分におけるいずれか一つをコードするポリヌクレオチドを提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の方法を用いて調製したポリヌクレオチドを提供した。いくつかの実施例において、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施例において、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）の重鎖と軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施例において、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、且つ第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施例において、ｓｃＦｖ（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ）をコードする核酸分子を提供した。

【0253】

このようないくつかの実施例において、前記重鎖と軽鎖は、一つの核酸分子又は二つの単離した核酸分子から、二つの単離したポリペプチドとして発現される。いくつかの実施例において、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドは、連結される重鎖と軽鎖を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0254】

いくつかの実施例において、抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、前記リーダー配列は、翻訳時に、前記重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置する。以上に記載したように、前記リーダー配列は、天然な重鎖又は軽鎖リーダー配列であってもよく、又は、別の異種リーダー配列であってもよい。

【0255】

いくつかの実施例において、前記ポリヌクレオチドはＤＮＡである。いくつかの実施例において、前記ポリヌクレオチドはＲＮＡである。いくつかの実施例において、前記ＲＮＡはｍＲＮＡである。

【0256】

核酸分子は、当分野の慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて構築することができる。いくつかの実施例において、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適する発現ベクターである。

【0257】

核酸コンストラクト
いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意のポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトを提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の方法を用いて調製した核酸コンストラクトを提供した。

【0258】

いくつかの実施例において、前記核酸コンストラクトは、ポリヌクレオチドに操作可能に連結されるプロモーターをさらに含む。いくつかの実施例において、ポリヌクレオチドは、遺伝子に対応し、ここで、プロモーターは、遺伝子の野生型プロモーターである。

【0259】

ベクター
いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）の重鎖及び／又は軽鎖をコードする任意のポリヌクレオチド又は本明細書に記載の核酸コンストラクトを含むベクターを提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の方法を用いて調製したベクターを提供した。任意の抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗体、ｓｃＦｖ、融合タンパク質）又は本明細書に記載の他の形態のコンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖ））をコードするポリヌクレオチドを含むベクターをさらに提供した。このようなベクターは、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施例において、ベクターは、重鎖のコードする第１のポリヌクレオチド配列と軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列とを含む。いくつかの実施例において、前記重鎖と軽鎖は、ベクターから、二つの単離したポリペプチドとして発現される。いくつかの実施例において、前記重鎖と軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリペプチドの一部として発現される。

【0260】

いくつかの実施例において、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、且つ第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施例において、第１のベクターと第２のベクターを、類似した量（例えば、類似したモル量又は類似した質量）で、宿主細胞内にトランスフェクトする。いくつかの実施例において、第１のベクターと第２のベクターを、５：１～１：５のモル比又は質量比で、宿主細胞内にトランスフェクトする。いくつかの実施例において、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターに対して、１：１～１：５の質量比を用いる。いくつかの実施例において、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターに対して、１：２の質量比を使用する。

【0261】

いくつかの実施例において、ＣＨＯ又はＣＨＯ起源の細胞又はＮＳＯ細胞におけるポリペプチド発現に対して最適化を行うベクターを選択する。例示的に、このようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記述されている。

【0262】

宿主細胞
いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意のポリペプチド、核酸コンストラクト及び／又はベクターを含む宿主細胞を提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の方法を用いて調製した宿主細胞を提供した。いくつかの実施例において、前記宿主細胞は、発酵条件で、本明細書に記載の任意の抗体部分を産生することができる。

【0263】

いくつかの実施例において、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）は、原核細胞（例えば、細菌細胞）、又は真核細胞（例えば、真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、昆虫細胞と哺乳動物細胞）で発現させることができる。このような発現は、例えば、当分野の既知の方法に従って行われてもよい。ポリペプチドを発現させるための例示的な真核細胞は、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ ７細胞を含む）、２９３細胞（２９３－６Ｅ細胞を含む）、ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ、ＤＧ４４、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞とＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞を含む）、ＰＥＲ．Ｃ６^{（登録商標）}細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、及びＮＳＯ細胞を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施例において、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＣＤ１３７抗体部分）は、酵母で発現させることができる。例えば、米国特許第ＵＳ ２００６／０２７００４５ Ａ１号を参照されたい。いくつかの実施例において、特定の真核宿主細胞は、抗体部分の重鎖及び／又は軽鎖に対して所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施例において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生された同じポリペプチドよりも高いシアリル化度を有するポリペプチドを産生する。

【0264】

所望の宿主細胞への一つ又は複数の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクト、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクト、カチオン性脂質媒介トランスフェクト、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むが、これらに限定されない、任意の方法によって完了してもよい。非限定的で例示的な方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記述されている。核酸は、任意の適切な方法に基づいて、所望の宿主細胞内で、瞬間的又は安定的にトランスフェクトすることができる。

【0265】

本発明は、本明細書に記載の任意のポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞をさらに提供した。いくつかの実施例において、本発明は、抗ＣＤ１３７抗体を含む宿主細胞を提供した。異種ＤＮＡを過剰発現し得る任意の宿主細胞は、いずれも目的抗体、ポリペプチド又はタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的のために用いられてもよい。哺乳動物宿主細胞の非限定的な実施例は、ＣＯＳ、ＨｅＬａとＣＨＯ細胞を含むが、これらに限定されない。また、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ８７／０４４６２を参照されたい。適切な非哺乳動物宿主細胞は、原核生物（例えば、大腸菌又は枯草菌）と酵母（例えば、サッカロマイセス・セレビッシェ、シゾサッカロマイセス・ポンベ、又はクルイベロマイセス・ラクティス）とを含む。

【0266】

いくつかの実施例において、前記抗体部分は、無細胞系で産生する。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）、Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）、Ｅｎｄｏ ら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記述されている。

【0267】

培地
いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の抗体部分、ポリヌクレオチド、核酸コンストラクト、ベクター及び／又は宿主細胞を含む培地を提供した。いくつかの実施例において、本明細書に記載の任意の方法を用いて調製した培地を提供した。

【0268】

いくつかの実施例において、前記培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン及び／又はチミジン（例えば、ＨＡＴ培地）を含む。いくつかの実施例において、前記培地は、血清を含まない。いくつかの実施例において、前記培地は、血清を含む。いくつかの実施例において、前記培地は、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０培地である。

【0269】

抗体部分の精製
抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体又は二重特異性抗体）は、任意の適切な方法によって精製してもよい。このような方法は、アフィニティーマトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用を含むが、これらに限定されない。適切な親和性リガンドは、ＲＯＲ１ ＥＣＤ及び抗体の定常領域に結合するリガンドを含む。例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ又は抗体アフィニティーカラムは、前記定常領域に結合し、Ｆｃ領域を含む抗ＣＤ１３７コンストラクトを精製するために用いられてもよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルカラム又はフェニルカラムも、いくつかのポリペプチド、例えば、抗体の精製に適用してもい。イオン交換クロマトグラフィー（例えば、アニン交換クロマトグラフィー及び／又はカチオン交換クロマトグラフィー）も、いくつかのポリペプチ、例えば、抗体の精製に適用してもい。混合モードクロマトグラフィー（例えば、反相／アニン交換、反相／カチオン交換、疎水性相互作用／アニン交換、疎水性相互作用／カチオン交換など）も、いくつかのポリペプチド、例えば、抗体の精製に適用してもい。ポリペプチドを精製する多数の方法は、当分野の既知のものである。

【0270】

ＩＶ．細胞組成物を調節する方法
本明細書に記載の任意の抗ＣＤ１３７コンストラクト（任意の多重特異性抗体を含む）は、細胞組成物（例えば、Ｔ細胞組成物）を調節する方法に用いられてもよい。前記方法は、細胞組成物を抗ＣＤ１３７コンストラクトと接触させることを含む。いくつかの実施例において、接触又は少なくとも一部の接触は、エクスビボで行われる。いくつかの実施例において、接触又は少なくとも一部の接触は、インビボで行われる。

【0271】

接触
いくつかの実施例において、前記接触は薬剤の存在で行われる。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３（例えば、抗ＣＤ３抗体）に結合する。いくつかの実施例において、前記薬剤は、（例えば、抗ＣＤ２８抗体）に結合するＣＤ２８。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３に結合する薬剤を含み、且つＣＤ２８に結合する薬剤を含む。いくつかの実施例において、前記薬剤は、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮγ）である。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３に結合する薬剤、ＣＤ２８、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α及びＩＦＮγに結合する薬剤からなる群から選択される一つ又は複数（例えば、一つ、二つ、三つ、四つ又は五つの薬剤）の薬剤を含む。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）、ＩＬ－２及びＩＦＮγを含む。

【0272】

いくつかの実施例において、前記薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）の濃度は、少なくとも約０．０１μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．０７５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．１２５μｇ／ｍｌ、０．２５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、又は１μｇ／ｍｌである。

【0273】

いくつかの実施例において、前記接触は、少なくとも約１時間、２時間、４時間、８時間又は一晩で行われる。いくつかの実施例において、前記接触は、少なくとも約１日、２日又は３日間行われる。いくつかの実施例において、前記接触は、約２４時間、１２時間又は８時間未満で行われる。いくつかの実施例において、前記接触は、約１４日、１０日、７日、５日又は３日未満で行われる。いくつかの実施例において、前記接触は、約０－４８時間、１－２４時間、２－２０時間、４－１６時間又は８－１２時間行われる。

【0274】

いくつかの実施例において、前記接触は、約０－２０℃の温度で行われる。いくつかの実施例において、前記接触は約２℃－８℃の温度で行われる。

【0275】

細胞組成物
いくつかの実施例において、前記細胞組成物は、免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）を含む。いくつかの実施例において、前記免疫細胞は、Ｔ細胞を含む（例えば、濃縮されたＴ細胞であり、例えば、前記組成物における細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％のＴ細胞を有する）。いくつかの実施例において、前記Ｔ細胞は、濃縮されたＣＤ４＋Ｔ細胞である（例えば、前記組成物におけるＴ細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％のＣＤ４＋Ｔ細胞を有する）。いくつかの実施例において、前記Ｔ細胞は、濃縮されたＣＤ８＋Ｔ細胞である（例えば、前記組成物におけるＴ細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％のＣＤ８＋Ｔ細胞を有する）。いくつかの実施例において、前記Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）を含む。例えば、前記Ｔ細胞は、少なくとも２．５％、５％、７．５％、１０％、１５％又は２０％の制御性Ｔ細胞を含む。いくつかの実施例において、前記Ｔ細胞は、システインエンジニアリングＴ細胞であり、それは組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体）を含む。いくつかの実施例において、前記免疫細胞は、ＮＫ細胞を含む（例えば、濃縮されたＮＫ細胞であり、例えば、前記組成物における細胞は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％のＮＫ細胞を有する）。いくつかの実施例において、前記組成物における細胞は、サイトカインにより誘導されたキラー（ＣＩＫ）細胞を含む。いくつかの実施例において、前記細胞は、いずれか一つ又は複数のタイプの免疫細胞を含み、例えば、Ｂ細胞、樹状細胞又はマクロファージである。

【0276】

いくつかの実施例において、前記細胞を、前処理するか又は薬剤で同時に処理する。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３（例えば、抗ＣＤ３抗体）に結合する。いくつかの実施例において、前記薬剤は、（例えば、抗ＣＤ２８抗体）に結合するＣＤ２８。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３に結合する薬剤を含み、且つＣＤ２８に結合する薬剤を含む。いくつかの実施例において、前記薬剤は、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮγ）である。いくつかの実施例において、前記薬剤は、ＣＤ３に結合する薬剤、ＣＤ２８、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α及びＩＦＮγに結合する薬剤からなる群から選択される一つ又は複数（例えば、一つ、二つ、三つ、四つ又は五つの薬剤）の薬剤を含む。

【0277】

いくつかの実施例において、前記薬剤（例えば、抗ＣＤ３抗体）の濃度は、少なくとも約０．０１μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．０７５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．１２５μｇ／ｍｌ、０．２５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、又は１μｇ／ｍｌである。

【0278】

いくつかの実施例において、前記接触後に、前記組成物における細胞を個体に投与する。

【0279】

Ｖ．個体免疫応答の治療又は調節方法
本明細書は、個体疾患又は病症を治療するか又は個体免疫応答を調節する方法をさらに提供した。前記方法は、本明細書に記載の任意の抗ＣＤ１３７コンストラクトを個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に投与することを含む。

【0280】

いくつかの実施例において、本明細書に開示された抗ＣＤ１３７コンストラクトを有効量で前記個体に投与することを含む、個体疾患又は病症を治療するか又は個体免疫応答を調節する方法をさらに提供した。いくつかの実施例において、前記コンストラクトは、本明細書に記載の任意の多重特異性抗体である。

【0281】

いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は癌である。いくつかの実施例において、前記癌は、黒色腫、膠芽腫、卵巣癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、口腔咽頭癌、結腸直腸癌、乳癌、頭頸癌又は白血病（例えば、ＡＭＬ）からなる群から選択される。いくつかの実施例において、個体はヒトである。いくつかの実施例において、前記抗体部分はキメラ又はヒト化である。いくつかの実施例において、前記抗体部分は全長抗体である。いくつかの実施例において、前記抗体部分は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤとＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプを有する。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトの有効量は、個体総重量の約０．００５μｇ／ｋｇ～約５μｇ／ｋｇである。いくつかの実施例において、前記抗体薬剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下又は経口投与される。

【0282】

いくつかの実施例において、前記個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非霊長類動物、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施例において、個体はヒトである。いくつかの実施例において、前記個体は、臨床患者、臨床試験ボランティア、実験動物などである。いくつかの実施例において、前記個体は、約６０歳未満（例えば、約５０、４０、３０、２５、２０、１５又は１０歳未満のうちのいずれか一つを含む）である。いくつかの実施例において、前記個体年齢は、約６０歳より大きい（包括例えば、７０、８０、９０又は１００歳より大きいいずれか一つを含む）。いくつかの実施例において、前記個体は、本明細書に記載の一つ又は複数の疾患又は障害（例えば、癌、自己免疫性疾患又は移植）に罹患しているか、又はそれに対する遺伝的な傾向を持っていると診断される。いくつかの実施例において、前記個体は、本明細書に記載の一つ又は複数の疾患又は障害に関連する一つ又は複数の危険因子を有する。

【0283】

免疫応答の調節
いくつかの実施例において、免疫応答の調節は、個体における細胞群を調節することを含む。いくつかの実施例において、前記細胞群は、Ｔ細胞群である。いくつかの実施例において、前記細胞群は、樹状細胞である。いくつかの実施例において、前記細胞群は、マクロファージである。いくつかの実施例において、前記細胞群は、Ｂ細胞である。いくつかの実施例において、前記細胞群は、ＮＫ細胞である。いくつかの群において、前記細胞群は、エフェクターＴ細胞及び／又は記憶Ｔ細胞である。いくつかの実施例において、前記細胞群は、ＣＤ４４が高くＣＤ６２Ｌが低い表現型により定義されたエフェクター／記憶Ｔ細胞である。

【0284】

いくつかの実施例において、前記調節は、細胞群の増殖を促進することを含む。いくつかの実施例において、対照コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７に結合しない抗体）を投与した後の参照細胞の増殖に比べて、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを投与した後、前記細胞群の増殖は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％増加した。いくつかの実施例において、対照コンストラクト（例えば、ＣＤ１３７に結合しない抗体）を投与した後の参照細胞の増殖に比べて、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを投与した後、前記細胞群の増殖は、少なくとも約１倍、１．２倍、１．５倍、１．７倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、又は６倍増加した。

【0285】

抗ＣＤ１３７多重特異性抗体の使用
いくつかの実施例において、本明細書に開示された多重特異性抗体を有効量で前記個体に投与することを含む、個体の疾患又は病症（例えば、癌）を治療する方法を提供した。

【0286】

いくつかの実施例において、本明細書に開示された多重特異性抗体を有効量で個体に投与することを含む、腫瘍又は癌を治療する方法を提供した。

【0287】

ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２多重特異性抗体の使用
いくつかの実施例において、ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２多重特異性抗体（例えば、本明細書に記載の任意のＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体）を前記個体に投与することを含む、個体におけるＨＥＲ２＋癌を治療する方法を提供した。

【0288】

いくつかの実施例において、前記癌は、ＨＥＲ２陽性である。いくつかの実施例において、前記癌は、ＨＥＲ２^高である。いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２陽性癌又はＨＥＲ２^高癌は、乳癌、胃癌、卵巣癌、黒色腫、頭頸癌、ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫と子宮頸癌から選択される。

【0289】

いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２陽性癌又はＨＥＲ２^高癌は、乳癌又は胃癌である。いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２^高癌は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞又はＳＫＢＲ３細胞と同等以上の平均ＨＥＲ２発現を有する。

【0290】

いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２^高癌は、ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の平均ＨＥＲ２発現よりも少なくとも５０％、７５％、１－倍、２－倍、３－倍、４－倍、５－倍、６－倍、７－倍、８－倍、９－倍、１０－倍、１２－倍、１５－倍、２０－倍、２５－倍又は３０－倍高い平均ＨＥＲ２発現を有する。いくつかの実施例において、前記癌は、少なくとも約１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００又は２５００の平均ＨＥＲ２発現（ＭＦＩ）を有する。いくつかの実施例において、前記ＨＥＲ２^高細胞は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞又はＳＫＢＲ３細胞と同等（例えば、その約５０％～約２００％、約６７％～約１５０％、約７５％～約１２５％の発現レベル内にある）のＨＥＲ２発現レベルを有する。

【0291】

疾患又は病症
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクトは、任意の疾患又は病症の治療に用いられてもよい。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は、感染（例えば、細菌感染又はウイルス感染）である。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は、自己免疫障害である。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は、癌である。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は移植である。

【0292】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトは、癌を治療する方法に用いられる。本明細書に記載の任意の方法を用いて治療できる癌は、血管化されていないか、又は十分に血管化されていない腫瘍及び血管化された腫瘍を含む。本出願に記載されているように、抗ＣＤ１３７コンストラクトで治療する癌のタイプは、上皮癌、芽細胞腫、肉腫、良性と悪性腫瘍及び悪性腫（例えば、肉腫、上皮癌と黒色腫）を含むが、これらに限定されない。成人腫瘍／癌と儿科腫瘍／癌も含まれている。いくつかの実施例において、前記癌は、固形腫瘍である。

【0293】

各実施例において、前記癌は、早期癌、非転移性癌、原発性癌、進行癌、局所進行癌、転移性癌、寛解癌癌、再発癌、アジュバント療法における癌、ネオアジュバント療法における癌又は実質的に治療困難な癌である。

【0294】

本出願の方法によって治療できる癌の具体例は肛門癌、星状細胞腫（例えば、小脳と脳）、基底細胞癌、膀胱癌、骨癌、（骨肉腫と悪性線維性組織細胞腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、脳幹神経膠腫、小脳又は脳星状細胞腫（例えば、星状細胞腫、悪性神経膠腫、髓芽細胞腫、と膠芽腫））、乳癌、中枢神経系リンパ腫、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌（例えば、子宮癌）、食道癌、眼癌（例えば、眼内黒色腫と網膜芽細胞腫）、胃（胃部）癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸癌、肝細胞癌（肝）癌（例えば、肝上皮癌と肝細胞腫）、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、と肺扁平上皮癌）、リンパ系腫瘍（例えば、リンパ瘤）、髄芽細胞腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症候群、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、卵巣癌、膵臓癌、副甲状腺癌、腹膜癌、下垂体腫、リンパ腫、直腸癌、腎臓癌、腎盂癌と尿管癌（移行細胞癌）、横紋筋肉腫、皮膚癌（例えば、非黒色腫（例えば、扁平上皮癌）、黒色腫、とメルケル細胞癌）、小腸癌、扁平上皮癌、精巣癌、甲状腺癌、結節性硬化症と移植後リンパ球増殖障害（ＰＴＬＤ）を含むが、これらに限定されない。

【0295】

いくつかの実施例において、前記癌は、黒色腫、膠芽腫、卵巣癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、口腔咽頭癌、結腸直腸癌、乳癌、頭頸癌又は白血病（例えば、ＡＭＬ）からなる群から選択される。

【0296】

前記抗ＣＤ１３７コンストラクトの投与方法
本明細書に記載の疾患又は障害を治療するために個体に投与される抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の投与量は、特定の抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）、投与方式及び治療中の疾患又は障害のタイプによって変化することができる。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症のタイプは、癌である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、客観的応答（例えば、部分的応答又は完全応答）をもたらすのに有効な量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、個体における完全応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、個体における部分的応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）で治療される個体集団で約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％又は９０％のうちのいずれか一つよりも大きい総応答率を生成するのに十分な量である。例えば、本明細書に記載の方法の治療に対する個体の応答は、ＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。

【0297】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、個体の無進行生存期間を延長するのに十分な量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、個体の総生存期間を延長するのに十分な量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）で治療される個体集団の約５０％、６０％、７０％又は７７％より大きいいずれか一つにおいて臨床的利益を生成するのに十分な量である。

【0298】

いくつかの実施例において、単独又は第２、第３及び／又は第４の薬剤と組み合わせる前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、治療前の同じ被験体の対応する腫瘍大きさ、癌細胞の数又は腫瘍増殖速度、又は治療を受けていない他の被験体（例えば、プラセボ治療を受ける）の対応する活性に比べて、腫瘍大きさを減少させ、癌細胞の数を減少させ、又は腫瘍増殖速度を少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％のうちのいずれか一つ低下せるのに十分な量である。前記エフェクターの大きさは、例えば、精製酵素を用いたインビトロアッセイ、細胞に基づくアッセイ、動物モデル又はヒト試験のような標準方法を用いて測定することができる。

【0299】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトの有効量（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）は、毒理学的エフェクター（即ち、臨床的に許容される毒性レベルより高いエフェクター）を誘導するレベルより低い量であり、又は組成物を個体に投与する時に、潜在的な副作用を制御又は寛容できるレベルにある量である。

【0300】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、同じ投与量方案に基づく前記組成物の最大寛容投与量（ＭＴＤ）に近い量である。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、前記ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％又は９８％のうちのいずれか一つよりも大きい。

【0301】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、治療を受けていない個体に比べて、前記疾患又は病症の進行（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％減速又は阻害する）を減速又は阻害する量である。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は、自己免疫性疾患である。いくつかの実施例において、前記疾患又は病症は、感染である。

【0302】

いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、治療を受けていない個体に比べて、病症（例えば、移植）の副作用（自己免疫応答）（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％又は５０％減少させる）を減少させる量である。

【0303】

以上のいずれかの態様のいくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクト（例えば、抗ＣＤ１３７モノクローナル又は二重特異性抗体）の有効量は、総重量の約０．００１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり、例えば、約０．００５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ又は約０．０１μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇである。

【0304】

いくつかの実施例において、前記治療は、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを一回以上投与する（例えば、抗ＣＤ１３７コンストラクトを約二回、三回、四回、五回、六回、七回、八回、九回又は十回投与する）ことを含む。いくつかの実施例において、約一週間内で二回投与する。いくつかの実施例において、一回目の投与が完了してから少なくとも約１、２、３、４、５、６又は７日後に二回目の投与を行う。いくつかの実施例において、一回目の投与が完了してから約１－１４日、１－１０日、１－７日、２－６日又は３－５日後に二回目の投与を行う。いくつかの実施例において、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトは、週に約１－３回（例えば、約週に一回、約週に二回又は約週に三回）投与される。

【0305】

様々な経路（例えば、静脉内、動脈内、腹膜内、肺内、経口、吸入、嚢内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜と経皮を含む）によって、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを個体（例えば、ヒト）に投与することができる。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、個体に投与される時に、薬物組成物に含まれる。いくつかの実施例において、組成物の持続的連続的な放出製剤を使用してもよい。いくつかの実施例において、組成物は、静脉内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、腹膜内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、静脉内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、腹膜内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、筋肉内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、皮下に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、静脉内に投与される。いくつかの実施例において、組成物は、経口投与される。

【0306】

組み合わせ療法
本出願は、個体に抗ＣＤ１３７コンストラクトを投与して、疾患又は病症（例えば、癌）を治療する方法をさらに提供し、ここで前記方法は、第２の薬剤又は療法の投与をさらに含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、疾患又は病症を治療する標準的又はよく使用される薬剤又は療法である。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、化学的治療剤を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、手術を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、放射線療法を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、免疫療法を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ホルモン療法を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、血管新生阻害剤を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、チロシンキナーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、感染体を含む。

【0307】

いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、第２の薬剤又は療法と同時に投与される。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、第２の薬剤又は療法と並行して投与される。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、第２の薬剤又は療法と連続して投与される。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、第２の薬剤又は療法と同じ単位剤形で投与される。いくつかの実施例において、抗ＣＤ１３７コンストラクトは、第２の薬剤又は療法と異なる単位剤形で投与される。

【0308】

いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ＨＥＲ２に結合する薬剤（例えば、トラスツズマブ又はトラスツズマブエムタンシン（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｅｍｔａｎｓｉｎｅ））である。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ＥＧＦＲに結合する薬剤である。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－１（例えば、抗ＰＤ－１抗体）を標的とする。いくつかの実施例において、第２の薬剤は、ＣＴＬＡ－４を標的とする薬剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）である。いくつかの実施例において、第２の薬剤は、Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤は、サイトカインを含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、カルボプラチン、パクリタキセル及び／又は放射線療法を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ワクチン、例えば、ＨＰＶワクチンを含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）を含む。いくつかの実施例において、第２の薬剤又は療法は、抗腫瘍酵素阻害剤（例えば、イリノテカン）を含む。次の表３における例示的な組み合わせ療法を参照されたい。

【0309】

【表3】

【0310】

ＶＩ．組成物、キット及び製品
本明細書は、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗ＣＤ１３７抗体部分のうちのいずれか一つを含む組成物（例えば、製剤）、前記抗体部分をコードする核酸、前記抗体部分をコードする核酸を含むベクター又は前記核酸又はベクターを含む宿主細胞をさらに提供した。

【0311】

本明細書に記載の適切な抗ＣＤ１３７コンストラクト製剤は、所望の純度を有する前記抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗ＣＤ１３７抗体部分を、任意選択的な薬学的に許容されるキャリア剤、賦形剤又は安定剤と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で得ることができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版Ｏｓｏｌ、Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。許容されるキャリア剤、賦形剤又は安定剤は、用いられる投与量と濃度で、受容体に対して無毒であり、且つ緩衝液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩と他の有機酸、アスコルビン酸とメチオニンを含む酸化防止剤）と、防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブタノール、又はベンジルアルコール、メチルパラベン又はプロピルパラベンなどのパラオキシ安息香酸アルキルエステル、カテキン、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びメタクレゾール）と、低分子量（約１０個より少ない残基）ポリペプチドと、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質と、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマーと、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリシンなどのアミノ酸と、単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物と、ＥＤＴＡなどのキレート剤と、スクロース、マンニトール、トレハロース、又はソルビトールなどの糖類と、ナトリウムなどの塩形成対イオンと、金属錯体（例えば、亜鉛タンパク質錯体）と、及び／又はＴＷＥＥＮ^（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ^（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤とを含む。皮下投与に適する凍結乾燥製剤は、ＷＯ ９７／０４８０１に記述されている。このような凍結乾燥製剤を、適切な希釈剤で高タンパク質濃度に再構成することができ、且つ前記再構成された製剤を、ここで結像、診断又は治療する個体に皮下投与することができる。

【0312】

インビボ投与用の製剤は、無菌である必要がある。これは、例えば、無菌濾過膜を通して濾過することによって容易に実現することができる。

【0313】

本明細書に記載の抗ＣＤ１３７コンストラクト又は抗ＣＤ１３７抗体部分のうちのいずれか一つを含むキットをさらに提供した。前記キットは、本明細書に記載の細胞組成物の調節又は治療に用いられる任意の方法に用いられてもよい。

【0314】

いくつかの実施例において、ＣＤ１３７に結合する抗ＣＤ１３７コンストラクトを含むキットを提供した。

【0315】

いくつかの実施例において、前記キットは、前記抗ＣＤ１３７コンストラクトを個体に送達できる装置をさらに含む。例えば、非経口送達使用のための一つのタイプの装置は、前記組成物を被験体インビボに注入するための注射器である。吸引装置は、またいくつかの使用に用いられてもよい。

【0316】

いくつかの実施例において、前記キットは、疾患又は病症（例えば、癌、感染症、自己免疫疾患又は移植）を治療するための治療剤をさらに含む。

【0317】

本出願のキットは、適切な包装内にある。適切な包装は、バイアル、ボルト、缶、フレキシブル包装（例えば、密封されたポリエステルフィルム又はプラスチック袋）などを含むが、これらに限定されない。キットは、任意選択的に、緩衝液と説明情報などの他の成分を提供することができる。

【0318】

そのため、本出願は、製品をさらに提供した。前記製品は、容器及び前記容器にあるか又は前記容器に関連するマーカー又は包装インサートを含んでもよい。適切な容器は、バイアル（例えば、密封されたバイアル）、ボルト、缶、フレキシブル包装などを含む。通常、前記容器は、組成物を収容し、且つ無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、前記容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。前記マーカー又は包装インサートは、前記組成物が個体における特定の病症の結像、診断又は治療に用いられることを指示する。前記マーカー又は包装インサートは、前記組成物を個体に投与し及び個体を結像するための説明をさらに含む。前記マーカーは、組換え及び／又は使用に関する指導を指示することができる。前記組成物を収容する容器は、前記再構成製剤の繰り返し投与（例えば、２－６回投与）を許容する複数回使用のバイアルであってもよい。包装インサートは、通常、診断製品の商業包装に含まれるマニュアルを指し、これらのマニュアルは、このような診断製品を使用する適応症、使用方法、投与量、投与、禁忌症及び／又は警告に関する信息を含む。また、前記製品は、第２の容器をさらに含んでもよく、前記容器は、包含薬学的に許容される緩衝液、例えば、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。

【0319】

前記キット又は製品は、薬局（例えば、病院薬局と調剤薬局）での保管と使用に十分な量で包装された、複数の単位投与量の前記組成物と使用マニュアルを含んでもよい。

【0320】

当業者であれば、本発明の範囲と趣旨内で、複数の実施例が可能であることを認識できる。以下の非限定的な具体例を参照して、本発明をより詳細に記述する。以下の具体例は、本発明をさらに説明するが、その範囲を少しも限定するように解釈すべきではないことが当然である。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【表4-5】

【表4-6】

【表4-7】

【表4-8】

【表4-9】

【表4-10】

【表4-11】

【表4-12】

【表4-13】

【表4-14】

【表4-15】

【表4-16】

【表4-17】

【表4-18】

【表4-19】

【表4-20】

【表4-21】

【実施例】

【0321】

以下の具体例は、本出願の例に過ぎないため、本出願を少しも限定するものと見なされべきではない。以下の具体例と詳細な記述は、説明として提供されるものであり、限定として提供されるものではない。

【0322】

具体例１：抗ＣＤ１３７抗体の産生
Ａ．マウスハイブリドーマからの抗ＣＤ１３７抗体の産生
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて、ヒトＣＤ１３７（４－１ＢＢ）受容体に対する完全ヒトモノクローナル抗体が産生された。ＲＩＢＩアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ）において、ヒトＣＤ１３７の細胞外ドメインは、ＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫化に用いられる。融合する前、同じ量の抗原は、静脉内（ｉ．ｖ．）経由のマウスに対する追加免疫に用いられる。標準的な方法に基づいて、十分なｈｕＣＤ１３７抗体力価を有する免疫化マウスからのリンパ節を、マウス骨髄腫細胞と融合させる。

【0323】

ハイブリドーマスクリーニング。ＥＬＩＳＡによってｈｕＣＤ１３７との結合を検出する。抗ヒトＣＤ１３７抗体を分泌するハイブリドーマを同定するために、ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、ＰＢＳにおける１μｇ／ｍｌヒトＣＤ１３７－Ｆｃ融合タンパク質において４℃で一晩コーティングする。そして、プレートを、０．５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ－Ｔ）で３回洗浄し、次に、室温でＰＢＳ－Ｔに５％ミルクを加えて６０分間ブロッキングする。ＰＢＳにおいて１：３に希釈された３０マイクロリットルの上澄み液を、前記プレートに加え、環境温度で１－２時間インキュベートする。その後、前述のようにプレートを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートしたヤギＦ（ａｂ′）_２抗ヒトＩｇＧによって抗体の結合を検出する。プレートをＴＭＢで現像し、４５０ｎｍで読み取る。前記スクリーニングから同定された最適な抗ＣＤ１３７ハイブリドーマ抗体（クローニング番号２９．３９、４４．２１、３．１０、３０．１９、６．６２）のアミノ酸配列は、配列表（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５１－１７６）及び表４に示されている。

【0324】

【表5】

【0325】

Ｂ．抗ＣＤ１３７抗体のヒト化
代表的なクローン２９．３９は、フレームワークのヒト化のために選択された。簡単に言えば、クローンの配列は、Ｉｇｂｌａｓｔを行ってヒト生殖系列遺伝子のデータベースを検索するために用いられる。望ましい生殖系列配列を選択し、フレームワーク配列に対して突然変異を行って、フレームワーク配列をマウス配列からヒト配列に変化させる。重鎖については、ヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－４６＊０１を用い、フレームワークにおいて、Ｅ１Ｑ、Ｋ３Ｑ、Ｍ５Ｖ、Ｅ６Ｑ、Ｌ１１Ｖ、２０Ｖ、Ｔ２３Ｋ、Ｋ３８Ｒ、Ｒ４０Ａ、Ｅ４２Ｇ、Ｉ４８Ｍ、Ｄ６０Ａ、Ｌ６１Ｑ、Ｎ６２Ｋ、Ａ６７Ｖ、Ｉ６９Ｍ、Ａ７１Ｒ、Ｓ７５Ｔ、Ｎ７６Ｓ、Ａ７８Ｖ、Ｌ８０Ｍ、Ｑ８１Ｅ、Ｔ８３Ｒ、Ｓ１１１Ｖ、Ｌ１１２Ｓ、とＥ１１３Ｓの突然変異を行った。軽鎖については、ヒト生殖系列ＩＧＫＶ１－１２＊０１を用い、フレームワークにおいて、Ｖ３Ｑ、Ｍ１１Ｖ、Ｙ１２Ｓ、Ｌ１５Ｖ、Ｅ１７Ｄ、Ｆ３６Ｙ、Ｓ４３Ａ、Ｔ４６Ｌ、Ｑ６９Ｔ、Ｙ７１Ｆ、Ｓ７２Ｔ、Ｄ７９Ｑ、Ｙ８０Ｐ、Ｍ８３Ｆ、Ｇ８４Ａ、とＩ８５Ｔの突然変異を行った。コンストラクトを、発現ベクターにクローニングし、ＳＳ３２０細胞から抗体タンパク質を産生する。

【0326】

Ｃ．親和性成熟、選択及び修飾
ヒト化された２９．３９クローンに対して親和性成熟を行う。各ＣＤＲ領域のアミノ酸を単一突然変異させるためのプライマーを設計した。アセンブルＰＣＲを用いて突然変異ライブラリーを調製し、ファージミドベクターにクローニングする。形質転換されたＴＧ１細胞とクローンのＤＮＡ配列決定によって、ライブラリーの品質を測定した。ヘルパーファージを用いてファージ産生を行い、ビオチン化したヒトＣＤ１３７ ＥＣＤ又はカニクイザルＣＤ１３７ ＥＣＤでコーティングしたストレプトアビジン結合ダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）を用いてファージのパニングを行った。三回のパニングの後、パニング生成物を、ＳＳ３２０細胞の感染のために溶出させ、コロニーを取り出し、ＩＰＴＧを有する２ＹＴ培地で培養した。ＥＬＩＳＡアッセイにより上澄み液におけるＦａｂの結合親和性を検査した。ヒトとカニクイザルＣＤ１３７に対する陽性クローンを選択した。最適１４結合体（クローン番号３、９、２３、２５、３３、３５、５、６、１７、１８、１９、２０、２-９、２-１１）とそのＣＤＲ（Ｋａｂａｔ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）は、配列表（ＳＥＱＩＤＮＯ：１-１４０）に示されている。これらのＣＤＲ（わずかに変化したＫａｂａｔ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）の共有序列は、序列表（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１－１５０）に示されている。また、異なるＩｇＧサブタイプを含む２－９のサブクローンを合成した。それらのＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ）、ＶＨ、ＶＬ、重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）は、序列表（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２３１－２５０）に示されている。

【0327】

具体例２：例示的な抗ＣＤ１３７抗体の特徴づけ
Ａ．親和性評価
バイオレイヤー干渉測定を用いて、抗ＣＤ１３７抗体の結合動力学会合と解離定数を測定する。３０℃で、ＦｏｒｔｉｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ９６において、結合動力学を測定し、ＦｏｒｔｉｅＢｉｏデータ分析（ＦｏｒｔｉｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ）９．０ソフトウェアで分析する。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＡＨＣ）センサは、抗ＣＤ１３７抗体又は対照抗体を捕捉するために用いられる。データ処理の間、動力学的緩衝液のホールのみは、バックグラウンドを減算するための参照ホールとして設定される。各抗体－抗原結合については、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルで、会合と解離に対して、Ｒｍａｘ連結の全体的フィッティングを用いて、データをフィッティングする。ヒトＣＤ１３７－ｈｉｓは、ヒトＣＤ１３７抗原のＣ末端と融合するポリヒスチジンタグを有する組換えＣＤ１３７抗原（北京義翹神州バイオテクノロジー株式会社（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、１００４１－Ｈ０８Ｈ）である。カニクイザルＣＤ１３７－ｈｉｓは、カニクイザルＣＤ１３７抗原のＣ末端と融合するポリヒスチジンタグを有する組換えＣＤ１３７抗原（北京義翹神州バイオテクノロジー株式会社、９０８４７－Ｋ０２Ｈ－１００）である。

【0328】

図１Ａ－１Ｂと表５に示されるように、抗ＣＤ１３７クローン２－９ ＩｇＧ２は、ヒトＣＤ１３７とカニクイザルＣＤ１３７に有効に結合し、そのＫＤは、それぞれ０．９３３ｎＭと２．７６ｎＭである。マウスＣＤ１３７を用いたアッセイでは、有効な結合は示されていない（データは示されていない）。

【0329】

【表6】

【0330】

図１Ｃ－１Ｄと表６は、別のＯｃｔｅｃｔ結合試験における抗ＣＤ１３７クローンの結合結果を示し、ここで、２－９ ＩｇＧ２と２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦは、ヒトＣＤ１３７に有効に結合し、そのＫＤは、それぞれ５．５０ｎＭと６．５５ｎＭである。この結果は、クローン２－９ ＩｇＧ２と２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦが、ヒトＣＤ１３７に対して類似した結合親和性を有することを証明した。

【0331】

【表7】

【0332】

Ｏｃｔｅｃｔ結合試験は、図１Ｅ－１Ｆと表７に示されるように、クローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦと２－９－２ ＩｇＧ４の結合親和性の比較に用いられ、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦと２－９－２ ＩｇＧ４は、ヒトＣＤ１３７に有効に結合し、そのＫＤは、それぞれ１１．１ｎＭと１２．９ｎＭである。この結果は、クローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦと２－９－２ ＩｇＧ４が、ヒトＣＤ１３７に対して類似した結合親和性を有することを証明した。

【0333】

【表8】

【0334】

Ｂ．ＣＤ１３７レポーター遺伝子アッセイ
現在、複数の従来の抗ＣＤ１３７抗体は臨床的に実行されている。しかし、これらの抗体は、潜在的安全リスクがあるか、有効性を欠いている。例えば、第ＩＩ相臨床試験において、ＣＤ１３７に対する強力なアゴニスト抗体であるウレルマブは、ＣＤ１３７の活性化に非常に有効であるが、抗体／抗原複合体を架橋又は凝集しない場合のＣＤ１３７シグナル伝達を活性化するその能力のため、低投与量（≧１ｍｇ／ｋｇ）では、重篤な肝毒性を引き起こす可能性がある。（Ｓｅｇａｌ ＮＨら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７年４月１５日；２３（８）：１９２９－１９３６）。別の従来の抗ＣＤ１３７抗体は、同様に、第ＩＩ相臨床試験において、ＣＤ１３７に対する弱いアゴニスト抗体であるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）として、最大１０ｍｇ／ｋｇの投与量で安全であると示されているが、臨床試験では限定された有効性を示した。（Ｔｏｌｃｈｅｒ ＡＷら．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７年９月１５日；２３（１８）：５３４９－５３５７．）。これらの発見に基づいて、前記次世代抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体は、腫瘍部位のみで、高いＣＤ１３７シグナル活性化を特異的に実現させるべきである。低毒性と高有効性を示した抗ＣＤ１３７抗体を選択するために、二つの参照抗体は比較に用いられる。参照抗体Ａｂ １は、米国特許第７，２８８，６３８号に開示されたウレルマブの配列に基づいて内部で合成された。参照抗体Ａｂ １は、国際公開第ＷＯ ２０１２／０３２４３３号に開示されたウトミルマブの配列に基づいて内部で合成された。

【0335】

まず、レポーター遺伝子アッセイにおいて、具体例１に記述された抗ＣＤ１３７単一特異性抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を評価する。ＮＦ－κＢレポーター遺伝子細胞株は、２９３Ｔ細胞にＣＤ１３７とＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定的にトランスフェクトすることによって樹立された。ＦｃγＲＩＩＢ ２９３Ｆ細胞は、２９３Ｆ細胞にＦｃγＲＩＩＢを安定的にトランスフェクトすることによって樹立された。このアッセイにおいて、ＦｃγＲＩＩＢをトランスフェクトした２９３Ｆ細胞は、前記単球とマクロファージを模倣するために用いられ、それらは、阻害性Ｆｃγ受容体である高レベルのＦｃγＲＩＩＢを発現し、且つそれらは末梢組織ではなく腫瘍の微小環境に集中している。前記ＮＦ－κＢレポーター遺伝子とＣＤ１３７が二重トランスフェクトされたレポーター遺伝子細胞株２９３Ｔは、その表面にＣＤ１３７を発現し下流シグナル伝達のためのＮＦ－κＢを発現するＴ細胞を模倣するために用いられる。そのため、前記ＣＤ１３７／ＮＦ－κＢレポーター遺伝子細胞株と前記ＦｃγＲＩＩＢ ２９３Ｆ細胞との共培養は、腫瘍微小環境におけるＴ細胞を模倣するが、単独に培養したＣＤ１３７／ＮＦ－κＢレポーター遺伝子細胞株は、末梢組織におけるＴ細胞を模倣する。

【0336】

このレポーター遺伝子システムに用いられる二つの参照抗体において、参照抗体１は、ウリルマブを代表し、強い活性を示したが、肝毒性もある。参照抗体２は、ウトミルマブを代表し、弱い活性を示したが、肝毒性がない。本明細書では、前記二つの参照抗体を用いて、抗ＣＤ１３７クローンの活性及び潜在的な安全性特徴を評価する。

【0337】

培養条件は、ＡＴＣＣが推奨する培地と条件に基づく。ＦｃγＲＩＩＢ ２９３Ｆ細胞を９６ウェルプレートに接種し一晩培養する。接種には、６０，０００個の細胞／ウェル／１００ｕｌ培地を用いた。いくつかの実験において、模倣した２９３Ｆ細胞を９６ウェルプレートに接種して、ＦｃγＲＩＩＢ架橋がない場合の抗体エフェクターを観察する。翌日、３７℃で、一連の濃度の抗体を２０分間添加した。そして、１２０，０００個のＦｃγＲＩＩＢ ２９３Ｔレポーター遺伝子細胞を、ＤＭＥＭ培地（ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号１６７７７－２００）における２９３Ｔ細胞に添加した。陰性対照は、抗体処理がなく、及び／又は架橋又はエフェクター細胞がないサンプルの形態で提供される。５時間後、メーカーの提案に従って、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ^（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６１０）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。

【0338】

結果により、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合、ルシフェラーゼ活性が投与量依存性を有することが示された。図２Ａは、前記抗体で処理された単独のＣＤ１３７／ＮＦ－κＢレポーター遺伝子細胞を示し、それは末梢組織（ここで阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは高度に発現されず且つ前記抗体のＦｃ領域に結合して架橋／ＣＤ１３７クラスタを促進することができない）におけるＣＤ１３７の活性化を模倣する。

【0339】

図２Ｂは、ＦｃγＲＩＩＢ ２９３Ｆ細胞と培養し前記抗体で処理されたＣＤ１３７／ＮＦ－κＢレポーター遺伝子細胞を示し、それは腫瘍部位（ここで阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは高発現している）でのＣＤ１３７活性化を模倣する。

【0340】

参照Ａｂ １（強いＣＤ１３７アゴニスト）は、ＦｃγＲＩＩＢにより媒介され又は媒介されない架橋／ＣＤ１３７クラスタで、ＮＦ－κＢ活性化を示し、この参照抗体が、末梢組織におけるＣＤ１３７シグナル伝達を活性化し末梢毒性を引き起こすことができることを示した。参照抗体２（弱いＣＤ１３７アゴニスト）が、ＦｃγＲＩＩＢにより媒介される架橋／ＣＤ１３７クラスタのみで、ＮＦ－κＢ活性化を示し、これはこの参照抗体の臨床試験におけるより良好な安全性特徴と一致する。図２Ａにおいて、本明細書に開示された抗ＣＤ１３７ ｍＡｂの挙動は参照抗体２と類似しており、参照抗体１に比べて、比較的安全な臨床スペクトルを有することを示した。図２Ｂにおいて、前記抗ＣＤ１３７ ｍＡｂは、参照抗体Ａｂ ２に比べて、より強い免疫活性化を示し、参照抗体Ａｂ ２に比べて、より優れた治療効果を有することを示した。特に、クローン２－９は、ＦＣγＲＩＩＢにより媒介されない架橋／ＣＤ１３７クラスタで、ほとんど活性を示さないが、ＦｃγＲＩＩＢにより媒介される架橋／ＣＤ１３７クラスタで優れた活性を示す。

【0341】

Ｃ．Ｆｃ修正抗ＣＤ１３７抗体を有する場合のＣＤ１３７レポーター遺伝子アッセイ
最近の公開により、ヒトＩｇＧヒンジとＦｃは、治療性抗体機能、特にアゴニスト抗体に影響を与えることが示されている。例えば、Ｆｃ突然変異によって増強されたＦｃγＩＩＢ結合は、アゴニスト抗体機能を増強することができる。Ｆｃ領域のインビボＦｃγＲＩＩＢ結合で、ＣＤ１３７クラスタを媒介することによって標的細胞において強い下流シグナル伝達を誘導することができるようである。（Ｗｈｉｔｅ ＡＬ ら Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１３年５月；６２（５）：９４１－８）。文献は、ＩｇＧ２ Ｆｃヒンジ領域のコンホメーションと柔軟性が、免疫共刺激抗体（例えば、抗ＣＤ４０抗体と抗ＣＤ１３７抗体）のアゴニスト活性に影響を与える可能性をさらに強調した（Ｗｈｉｔｅ ＡＬら．Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；３８２：３５５－７２）。これらの発見に基づいて、他のタイプ（例えば、ＩｇＧ２野生型）に比べて、ＦｃγＲＩＩＢ結合を増強するためにＦｃ突然変異を有する抗ＣＤ１３７ ｍＡｂ ＩｇＧ１とＩｇＧ２は効果を向上させることができると推測された。また、ＦｃγＲＩＩＢの腫瘍部位でのより高い発現により、前記Ｆｃ操作ＣＤ１３７モノクローナル抗体は、比較的低い末梢毒性を維持するとともに、腫瘍部位でより高い効果を誘導することができる。

【0342】

そのため、ＦｃγＲＩＩＢ結合を増強するためにＦｃ突然変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）を有する抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性（Ｃｈｕ ＳＹら．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８年９月；４５（１５）：３９２６－３３）を、レポーター遺伝子アッセイにおいて評価し、親ＩｇＧ２野生型抗体と比較した。

【0343】

また、ＩｇＧ４サブタイプは、比較的弱いエフェクター結合を有し、末梢毒性を弱めるとともに腫瘍部位で抗腫瘍治療効果を引き起こす可能性があることが知られている。そのため、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体は、またＩｇＧ４のサブタイプで試験される。

【0344】

結果により、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体が存在する場合、ルシフェラーゼ活性は、投与量依存性を有することが示された。図３Ａに示されるように、ＦＣγＲＩＩＢにより媒介される架橋／ＣＤ１３７クラスタがない場合、２－９からの全てのクローン（Ｆｃ突然変異があるか又はない）は、いずれも活性がないと示し、安全な臨床スペクトルを示した。図３Ｂにより、ＦｃγＲＩＩＢにより媒介される架橋／ＣＤ１３７クラスタの場合のＮＦ－κＢレポーター遺伝子シグナルは、腫瘍部位（ここで阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは高発現している）のＣＤ１３７活性化を模倣することが示された。ＩｇＧ２野生型親抗体に比べて、クローン２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦとＩｇＧ２ ＳＥＬＦは、より高いＣＤ１３７活性化を示し、増強されたＦＣγＲＩＩＢ結合によってＣＤ１３７活性化が増強されたことが示された。図３Ｃは、ＦｃγＲＩＩＢにより媒介された架橋／ＣＤ１３７クラスタの場合での、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ と２－９－２ ＩｇＧ４のＮＦ－κＢレポーター遺伝子シグナルの比較を示す。この二つのクローンはいずれも高いＣＤ１３７活性化を示し、且つ２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ は２－９－２ ＩｇＧ４よりも高い活性化量を示した。

【0345】

Ｄ．サイトカイン放出アッセイ
そして、ヒト末梢血単球（ＰＢＭＣ）を用いて、抗ＣＤ１３７マブがサイトカイン放出に与える影響を試験する。ＰＢＭＣは、ＣＤ１３７陽性Ｔ細胞とＮＫ細胞とを含み、それらは抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体の標的細胞であり、且つＦｃγＲＩＩＢを発現する単球とマクロファージも前記ＰＢＭＣに存在する。Ｔ細胞が抗ＣＤ１３７抗体に活性化されると、抗腫瘍効果の指標として、抗腫瘍サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ又はＩＬ－２）を分泌する。このレポーター遺伝子システムにおいて、以上に記載の二つの参照抗体を用いて、前記抗ＣＤ１３７クローンの活性を評価する。

【0346】

Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ^{（登録商標）} ＰＬＵＳ（カタログ番号１７－１４４０－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ヒトＰＢＭＣを単離する。１ｕｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）と抗ＣＤ１３７ｍＡｂの一連の希釈液をＧｉｂｃｏ ＲＰＭＩ培地１６４０（カタログ番号Ａ１０４９１０１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）におけるＰＢＭＣに添加する。４８時間後、培地を収集し、ＥＬＩＳＡ方法（ヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^（商標） Ｄｅｌｕｘｅ、カタログ番号４３０１０６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社、ヒトＩＬ２ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^（商標） Ｄｅｌｕｘｅ、カタログ番号４２１６０１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）を用いて、ＩＦＮγとＩＬ２レベルを決定する。

【0347】

図４Ａに示されるように、抗ＣＤ１３７抗体が存在する場合、ＩＦＮγに対するエフェクター細胞（即ちＰＢＭＣ）の投与量依存性分泌を観察した。予想されるように、弱いアゴニスト参照抗体２に比べて、強いアゴニスト参照抗体１は、より高いＩＦＮ－γを誘導する。また、前記二つの参照抗体に比べて、異なるＦｃ領域（例えば、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ、２－９－１ ＩｇＧ２野生型と２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦ）を有するクローン２－９は、いずれも有意に高いＩＦＮ－γ最大放出を示す。異なるドナーで実験を三回繰り返し、類似した結果が観察された。

【0348】

図４Ｂに示されるように、抗ＣＤ１３７抗体が存在する場合、ＩＬ２に対するエフェクター細胞（即ちＰＢＭＣ）の投与量依存性分泌を観察した。予想されるように、強いアゴニスト参照抗体１は、ＩＬ２分泌を誘導した。また、参照抗体１に比べて、異なるＦｃ領域を有するクローン２－９、即ち２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦと２－９－２ ＩｇＧ４は、いずれも有意に高いＩＬ２最大放出を示す。

【0349】

要するに、抗ＣＤ１３７抗体は、投与量依存の方式でサイトカイン産生を誘導し、且つ二つの参照抗体に比べて、ＩＦＮ－γとＩＬ２レベルがより高い。ＩＦＮ－γとＩＬ２が重要な抗腫瘍サイトカインであるため、データにより、二つの参照抗体に比べて、クローン２－９抗体（Ｆｃ突然変異と野生型とを含む）は、より高い抗腫瘍効果を有することが示されている。

【0350】

Ｅ．インビボ抗腫瘍治療効果の研究
２－９変異体は、バイオサイトジェンの施設においてさらにインビボ試験されて、それらの抗腫瘍治療効果を評価する。ヒトＣＤ１３７（別名４－１ＢＢ）ノックインＣ５７ＢＬ／６マウスとＭＣ３８マウス結腸癌モデルを利用し、２－９ ＩｇＧ２ｗｔ、２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦと２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの治療効果をベクター対照群と比較した。ＭＣ３８腫瘍細胞は、治療の一週間前に移植された。腫瘍体積が約１００ｍｍ^３に達する時に治療を開始し、薬物を腹腔注射の形態で、週に二回、合計四週投与する。２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ抗体の毎回の投与量は、１０、１と０．３ｍｇ／ｋｇである。２－９－１－ＩｇＧ２ ＳＥＬＦと２－９－ＩｇＧ２抗体の毎回の投与量は１ｍｇ／ｋｇである。治療後２４日目に、対照群における複数のマウスの腫瘍体積が上限（２０００ｍｍ^３）に達して試験を終了した。他の群は２８日まで試験と腫瘍測定を続ける。治療後２８日目は、データ分析の終点となる。図５Ａと表８に示されるように、ベクター対照群に比べて、２－９ ＩｇＧ２ｗｔ、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ と２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦの治療は、腫瘍の増殖を有意に減少させた。２－９ ＩｇＧ２ｗｔ、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦ と２－９－１ ＩｇＧ２ ＳＥＬＦの同じ投与量（１ｍｇ／ｋｇ）での治療群を比較し、腫瘍が１００ｍｍ^３以下に減少する各群の動物の数は、各群の総数においてそれぞれ２／８、５／８と５／８である。異なる群の動物の体重は、研究において有意に変化せず（図５Ｂ）、治療が良好な耐性を得たことを示した。

【0351】

【表9】

【0352】

また、バイオサイトジェンは、以前、ヒトＣＤ１３７（別名４－１ＢＢ）ノックインＣ５７ＢＬ／６マウスを利用して、ＭＣ３８マウス結腸癌モデルにおいて、前述の２－９変異体研究と近似した条件でウトミルマブ類似薬を試験した。図６Ａに示されるように、ウトミルマブ類似薬は、１ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇの二つの投与量で試験された。ＩｇＧ対照抗体に比べて、１ｍｇ／ｋｇ治療群の腫瘍阻害は６０．０％であるが、１０ｍｇ／ｋｇ治療群の腫瘍阻害は８５．４％である（このデータはｗｗｗ．ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ．ｃｏｍでも見られる）。ウトミルマブは、比較的安全な毒性データがあることが知られており、図６Ｂは、ウトミルマブ治療で、マウス体重に有意な変化がないことを示している。

【0353】

この研究が２－９変異体に対する研究条件と類似するため、２－９変異体のデータとウトミルマブ類似薬のデータは比較可能である。具体的には、ウトミルマブ類似薬に比べて、いずれの投与量条件においても、２－９変異体は、より高い腫瘍阻害（図５Ａ、６Ａと表８）引き起こした。１０ｍｇ／ｋｇの同じ投与量で比較すると、２－９－１ ＩｇＧ１ ＳＥＬＦの腫瘍阻害（１０３．８％）は、ウトミルマブ類似薬の腫瘍阻害（８５．４％）より有意に高い。これらのデータは、各２－９変異体のインビボ治療効果がいずれもウトミルマブ類似薬より高いことを示した。

【0354】

具体例３：抗ＣＤ１３７ ｘ ＴＡＡ（即ち、腫瘍関連抗原）二重特異性抗体の構築
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）は、ＴとＮＫ細胞で発現して細胞活性化、増殖と生存を支援する共刺激分子である。しかしながら、現在の臨床研究における基準抗体は、安全上の問題に関連していたリ、効き目を欠いていたりする。例えば、ＣＤ１３７に対する強力アゴニスト抗体Ｕｒｅｌｕｍａｂは、ＩＩ期臨床試験において非常に有効であるが、投与量≧１ｍｇ／ｋｇ時に、肝毒性に制限されていた。（Ｓｅｇａｌ ＮＨら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７ Ａｐｒ １５；２３（８）：１９２９－１９３６）。ＩＩ期臨床試験における別の参照抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）は、ＣＤ１３７に対する弱いアゴニスト抗体であり、１０ｍｇ／ｋｇまでは安全であることが示されているが、臨床での効き目は限られている。（Ｔｏｌｃｈｅｒ ＡＷら Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７ Ｓｅｐ １５；２３（１８）：５３４９－５３５７．）。これらの発見に基づいて、次世代抗ＣＤ１３７治療性抗体は、腫瘍部位のみで、高いＣＤ１３７活性化を特異的実現させるべきである。これらの問題を解決するために、一つのアームがＣＤ１３７を標的とするが、もう一つのアームが腫瘍関連抗原を標的とする二重特異性抗体を設計した。

【0355】

具体例１と２に記述された抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体クローン２－９を選択して一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を構築する。抗ＴＡＡ抗体は、ＩｇＧ形態を維持する。二重特異性抗体を構築するために、抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖは、重鎖Ｎ端（ＨＣ－Ｎ）、重鎖Ｃ端（ＨＣ－Ｃ）、軽鎖Ｎ端（ＬＣ－Ｎ）又は軽鎖Ｃ端（ＬＣ－Ｃ）において、リンカー（例えば、（ＧＳＧ）４）を介して抗ＴＡＡ抗体と融合する。図７を参照されたい。

【0356】

具体的には、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖを、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＮ端又はＣ端（ＨＣ－Ｎ，ＨＣ－Ｃ、例えば、２－９ｓｃＦｖ－αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃ）又は軽鎖のＮ端又はＣ端（ＬＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ）において、リンカーを介して例示的な抗ＨＥＲ２全長抗体（それはトラスツズマブのアミノ酸配列から派生した）と融合させる。

【0357】

いくつかの実施例において、ＩｇＧ１（ＬＡＬＡ突然変異）とＩｇＧ４（ＦＡＬＡ突然変異）のような低下したエフェクター機能を有するＦｃ骨格、又はＳ２２８Ｐ突然変異を有するＩｇＧ４を用いた。ＩｇＧ１ ＬＡＬＡ突然変異は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域におけるＬｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ突然変異であり、それによりエフェクター機能を減少させる（Ｌｕｎｄ，Ｊら．，（１９９２）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２９，５３－５９）。ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ突然変異は、ＩｇＧ４ ＦｃにおけるＳｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異及びＰＨＥ２３４ＡｌａとＬｅｕ２３５Ａｌａ突然変異であり、そのエフェクター機能は減弱している（Ｖａｆａ Ｏら，Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２０１４）６５：１１４－２６．１０．１０１６）。

【0358】

ｐＡＳ ｐｕｒｏプラスミドを用い、メーカーの提案に基づいて、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）において、組換え免疫グロブリン変異体を発現する。重鎖と軽鎖を１：２の割合でトランスフェクトする。ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞培養物は、通常、トランスフェクト後約１０－１２日で収穫される。ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞培養物を清澄し、濾過する。ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において、タンパク質Ａ精製（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ^（商標） ＬＸ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって培養上澄み液を精製する。まず、このカラムは、ＰＢＳで５個のカラム体積（ＣＶ）をバランスさせる。そして、滞留時間が５分間になる時に、培養物上澄み液をカラムにローディングする。その後、５ ＣＶ高塩緩衝液（１００ｍＭ酢酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．５）と５ ＣＶ低塩緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５）で、カラムを洗浄する。３ ＣＶ溶出緩衝液（１００ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５）で抗体を溶出させ、次いで１ Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５で中和する。タンパク質Ａによって精製されたタンパク質は、インビトロ機能アッセイに用いられる。

【0359】

カチオン交換精製（Ｃａｐｔｏ Ｓ ＩｍｐＡｃｔ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって、タンパク質Ａによって精製されたタンパク質サンプルをさらに精製する。緩衝液Ａは、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５である。緩衝液Ｂは、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．５である。ローディング前に、タンパク質Ａによって精製されたサンプルを緩衝液Ａに類似したｐＨと電気伝導率に調節する。ローディング滞留時間は４分間である。勾配が３０％－８０％である緩衝液Ｂを溶出させ、１５ ＣＶ持続する。最小凝集を有する画分を統合する。２ステップ精製タンパク質は、安定性研究とインビボ効き目モデルに用いられる。

【0360】

具体例４：抗ＣＤ１３７ ｘ Ｈｅｒ－２二重特異性抗体の特徴づけ
具体例３に記載したように、クローン２－９から派生した抗ＣＤ１３７ ｓｃＦｖを、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖のＮ端とＣ端（ＨＣ－Ｎ、ＨＣ－Ｃ）及び軽鎖のＮ端とＣ端（ＬＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ）において、トラスツズマブのアミノ酸配列から派生した抗－ＨＥＲ２全長抗体と融合させる。

【0361】

Ａ．親和性測定
バイオレイヤー干渉測定は、二重特異性抗体の結合動力学会合と解離定数を測定するために用いられる。結合動力学は、ＦｏｒｔｉｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ９６において、３０℃で測定し、ＦｏｒｔｉｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ９．０ソフトウェアで分析する。抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＡＨＣ）センサは、二重特異性抗体又は対照抗体を捕捉するために用いられる。双重結合するは以下のように行われ、第１の抗原と会合し、そして解離し、第２の抗原と会合し、そして解離する。異なる抗体サイクル間において、２０ ｍＭグリシン、ｐＨ １．５で再生サイクルを行う。ベースラインに対して、１ｘ動力学的緩衝液（Ｆｏｒｔｉｅ Ｂｉｏ）を用いる。ヒトＨＥＲ２－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ カタログ番号：１０００１－Ｈ０８Ｂ）とヒトＣＤ１３７－Ｈｉｓタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ カタログ番号：１００４１－Ｈ０８Ｈ）を一連の濃度で動力学的緩衝液に希釈する。動力学緩衝ホールのみを参照ホールに設定し、データ処理中の減算に用いられる。各抗体－抗原結合に対して、Ｒｍａｘ連結のグローバルフィッティングを用い、データを会合と解離の１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルでフィッティングする。１）第１のＣＤ１３７－Ｈｉｓ、第２のＨＥＲ２－Ｈｉｓ、及び２）第１のＨＥＲ２－Ｈｉｓ、第２のＣＤ１３７－Ｈｉｓという二つの順次結合順序で実験を繰り返す。以下の図８Ａ－８Ｂと表９を参照されたい。ヒトＣＤ１３７－ｈｉｓは、ポリヒスチジンタグがヒトＣＤ１３７抗原のＣ端（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１００４１－Ｈ０８Ｈ）に融合する組換えＣＤ１３７タンパク質である。ヒトＨＥＲ２－ｈｉｓは、ポリヒスチジンタグがヒトＨＥＲ２抗原のＣ端（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ，ＨＥ２－Ｈ５２２５－１００ｕｇ）に融合する組換えＨＥＲ２タンパク質である。

【0362】

【表10】

【0363】

要するに、例示的なＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（即ち、２－９ｓｃＦｖ＿αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃ）の各抗原結合部分は、所望の標的結合親和性を維持し、ここで、結合動力学はモノクローナル抗体に類似する。

【0364】

さらに、全細胞結合アッセイにおいて、細胞表面受容体に対する二重特異性抗体の結合親和性を定量する。ＨＥＲ２結合親和性を測定するために、１０，０００個のＨＥＲ２陽性細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ）又はＣＤ１３７が安定的にトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞（特注）の細胞を、一連の濃度の二重特異性抗体と、ＦＡＣＳ緩衝液（１ ｘ ＰＢＳ、２％ ＦＢＳ）において、４℃で１時間インキュベートする。その後、細胞をＰＢＳで二回洗浄し、そして、二級Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ^{（登録商標）}４８８ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆ（ａｂ′）２断片特異性抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、コード１０９－５４５－００６）と、ＦＡＣＳ緩衝液において、４℃で３０分間インキュベートする。そして、細胞をＰＢＳで二回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁する。フローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、ＣｙｔｏＦｌｅｘ）は、結合した抗体の定量に用いられ、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔを用いて結果を分析する。ＧｒａｐｈＰａｄ８．０を有する非線形モデルを用いてメジアン蛍光強度をフィッティングする。

【0365】

図９Ａに示されるように、例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（即ち、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４ ＦＡＬＡ突然変異を有する２－９ｓｃＦｖ＿αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃ）は、全細胞が、投与量依存性方式で、ＣＤ１３７陽性細胞（ＣＤ１３７／ＮＦκＢがトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞）と結合することを示している。図９Ｂに示されるように、例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（即ち、２－９ｓｃＦｖ＿αＨＥＲ２－ＨＣ－Ｃ）は、ＨＥＲ２陽性細胞（ＳＫＢＲ３）に対して、親抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（αＨＥＲ２ ｍＡｂ、トラスツズマブから派生した）に類似した結合親和性を示している。抗ＥＧＦＲ ｍＡｂは、陰性対照として用いられる。このアッセイは、ＩｇＧＦｃ突然変異が二重特異性抗体の結合に影響を与えないことを示している。

【0366】

Ｂ．レポーターアッセイ
まず、ＮＦ－κＢレポーターアッセイにおいて、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を評価する。推測によれば、腫瘍細胞における高レベルのＨＥＲ２は、二重特異性抗体を腫瘍部位に位置決めし、近傍のＴ細胞でＣＤ１３７を過剰架橋することができるため、強力なＴ細胞活性化を誘導する。この仮設を検証するために、このアッセイにおいて、ＣＤ１３７とＮＦκＢルシフェラーゼレポーター遺伝子で安定的にトランスフェクトしたレポーター細胞株、高ＨＥＲ２発現細胞株Ｎ８７（ＡＴＣＣ）と低ＨＥＲ２発現細胞株ＳＫＨｅｐ１（ＡＴＣＣ）を用いる。ＨＥＲ２高細胞株Ｎ８７は、標的腫瘍細胞の模倣に用いられ、ＨＥＲ２低細胞株ＳＫＨｅｐ１は、末梢又は非標的細胞の模倣に用いられ、ＣＤ１３７／ＮＦκＢレポーター２９３Ｔ細胞は、Ｔ細胞の模倣に用いられる。Ｎ８７細胞とＣＤ１３７／ＮＦκＢレポーター２９３Ｔ細胞との共インキュベートは、腫瘍微小環境を模倣し、ここで高レベルのＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞とＴ細胞は共存する。推測によれば、Ｎ８７細胞における高レベルのＨＥＲ２は、二重特異性抗体を腫瘍部位に位置決めし、レポーター細胞株でＣＤ１３７を過剰架橋することができるため、強いＮＦκＢシグナルの伝達と活性化を誘導する。ＳＫＨｅｐ１細胞と２９３Ｔレポーター細胞との共インキュベートはは、末梢又は非標的部位を模倣し、二重特異性抗体の安全性プロファイルを試験するために用いられる。

【0367】

ＡＴＣＣが推薦した培地と条件は、細胞培養に用いられる。各細胞株を、９６－ウェルプレートに単独に接種し一晩培養する。１ホールと１００ｕｌ培地あたりに１５，０００個のＮ８７又はＳＫ－Ｈｅｐ１細胞を用いて接種に用いられる。翌日、細胞を洗浄し、一連の濃度の抗体を用いて３７℃で２０分間処理する。その後、抗体を洗い流す。このステップは、過剰な抗体を除去し、フック効果を回避するためである。そして、１２０，０００個の２９３Ｔ ＣＤ１３７／ＮＦκＢレポーター細胞を、ＤＭＥＭ培地（ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号１６７７７－２００）におけるＮ８７又はＳＫ－Ｈｅｐ１細胞に添加する。単一特異性親クローン２－９抗体と抗ＨＥＲ２抗体との組み合わせは対照として用いられる。このアッセイにおいて、ＴＮＦαが直接ＮＦ－κＢ活性化剤であるため、２０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦαを陽性対照として用いる。ＰＢＳは、陰性対照として用いられる。５時間後、メーカーの提案に従って、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ^（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６１０）を用いてルシフェラーゼ活性を測定する。

【0368】

結果により、ＨＥＲ２高ＮＣＩ－Ｎ８７細胞が存在する場合、全ての形式（ＨＣ－Ｃ、ＨＣ－Ｎ、ＬＣ－Ｃ及びＬＣ－Ｎ）の例示的なＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の投与量依存性ＣＤ１３７は活性化する（図１０Ｂ）が、ＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞が存在する場合、そうではなく（図１０Ｃ）、単一特異性親クローン２－９抗体と抗ＨＥＲ２抗体との組み合わせは、いかなるＣＤ１３７活性化も誘導しない（図１０Ｂと図１０Ｃ）ことが示される。結果により、二重特異性抗体の腫瘍部位における効き目優位性及び二重特異性抗体の末梢又は非標的部位における安全性プロファイルが示される。二重特異性抗体の四つの形式において、他の三つの形式に比べて、ＨＣ－Ｃ形式は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞が存在する場合に、優れた活性化を示す。

【0369】

さらに、類似したレポーターアッセイにおいて、Ｆｃ突然変異を有する抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体のＣＤ１３７アゴニスト活性を評価する。本実験において、高ＨＥＲ２発現細胞株ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ）と低ＨＥＲ２発現細胞株ＳＫＨｅｐ１（ＡＴＣＣ）を用いる。ＡＴＣＣが推薦した培地と条件は、細胞培養に用いられる。各細胞株を、９６－ウェルプレートに単独に接種し一晩培養する。１ホールと１００ｕｌ培地あたりに１５，０００個のＳＫＢＲ３又はＳＫ－Ｈｅｐ１細胞を用いて接種に用いられる。翌日、細胞を洗浄し、一連の濃度の抗体を用いて３７℃で２０分間処理する。その後、抗体を洗い流す。このステップは、過剰な抗体を除去し、フック効果を回避するためである。そして、１２０，０００個の２９３Ｔ ＣＤ１３７／ＮＦκＢレポーター細胞を、ＤＭＥＭ培地（ＨｙＣｌｏｎｅ、カタログ番号１６７７７－２００）における癌細胞に添加する。単一特異性親クローン２－９抗体と参照抗体Ａｂ １は、対照として用いられる。このアッセイにおいて、ＴＮＦαが直接ＮＦ－κＢ活性化剤であるため、２０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦαを陽性対照として用いる。５時間後、メーカーの提案に従って、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ^（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６１０）を用いてルシフェラーゼ活性を測定する。

【0370】

結果に示されるように、ＨＥＲ２高ＳＫＢＲ３細胞が存在する場合、異なるＦｃ領域を有する例示的な抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の投与量依存性ＣＤ１３７は活性化する（図１１Ａ）が、ＨＥＲ２低ＳＫ－Ｈｅｐ１細胞が存在する場合、そうではない（図１１Ａ）。ＨＥＲ２高細胞（ＳＫＢＲ３）が存在する場合、Ｆｃエフェクター機能は、レポーターの活性に影響を与えない。ＨＥＲ２低細胞（ＳＫ－Ｈｅｐ１）が存在する場合、前記二重特異性抗体は、有意なＣＤ１３７活性化を誘導せず、末梢又は非標的部位での安全性プロファイルを示した。

【0371】

Ｃ．サイトカイン放出アッセイ
サイトカイン放出によってＨＥＲ２依存性Ｔ細胞活性化に対する二重特異性抗体の効果をさらに測定する。本実験において、高ＨＥＲ２発現細胞株ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ）と低ＨＥＲ２発現細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣ）を用いる。ＡＴＣＣが推薦した培地と条件は、細胞培養に用いられる。各細胞株を、９６－ウェルプレートに単独に接種し一晩培養する。１ホールと１００ｕｌ培地あたりに１５，０００個のＳＫＢＲ３又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を用いて接種に用いられる。Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ^{（登録商標）} ＰＬＵＳ（カタログ番号１７－１４４０－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてヒトＰＢＭＣを単離する。単離したＰＢＭＣを培養皿で少なくとも３時間培養することによって、単球を付着させて単球を枯渇させる。翌日、ＳＫＢＲ３又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を洗浄し、且つ３７℃で、一連の濃度の抗体で２０分間処理する。その後、抗体を洗い流す。このステップは、過剰な二重特異性抗体を除去し、フック効果を回避するためである。そして、ＰＢＭＣをＧｉｂｃｏ ＲＰＭＩ培地１６４０（カタログ番号Ａ１０４９１０１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ）におけるＳＫＢＲ３又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に添加する。単一特異性親クローン２－９抗体は、対照として用いられる。全てのアッセイにおいて、１０：１の割合のエフェクター細胞（ＰＢＭＣ）と標的細胞（ＳＫＢＲ３又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）を使用する。２４時間後、培地を収集し、ＥＬＩＳＡ方法（ヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^（商標） Ｄｅｌｕｘｅ，カタログ番号４３０１０６，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ヒトＩＬ－２ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ^（商標） Ｄｅｌｕｘｅ，カタログ番号４３１８０４，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて、ＩＦＮγとＩＬ－２レベルをアッセイする。

【0372】

図１２に示されるように、ＨＥＲ２高細胞が存在する場合、ＩＦＮγとＩＬ－２に対するエフェクター細胞（即ち、ＰＢＭＣ）の投与量依存性分泌を観察したが、ＨＥＲ２低細胞が存在する場合に観察しなかった。抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体に比べて、ＨＥＲ２高細胞（ＳＫＢＲ３）が存在する場合、二重特異性抗体は、より高いサイトカイン放出を示し、二重特異性抗体の腫瘍部位での効き目優位性を示した。ＨＥＲ２低細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）が存在する場合、二重特異性抗体は、有意なサイトカイン放出を誘導せず、二重特異性抗体の末梢又は非標的部位での安全性プロファイルを示した。このアッセイを異なるドナーで複数回繰り返し、類似した結果を観察した。要するに、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体治療は、ＨＥＲ２依存性方式でサイトカイン産生を誘導する。

【0373】

Ｅ．インビボＬｏＶｏ異種移植モデル
ＬｏＶｏ／ＰＢＭＣ異種移植モデルにおいて、二重特異性抗体のインビボ効き目を研究する。ＬｏＶｏモデルにおいて、５００万個のＬｏＶｏヒト結腸癌細胞を、３：１の割合で、新たに単離されたヒトＰＢＭＣと混合し、そして、免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスに皮下注射する。移植後３日目に、週に二回の腹膜内注射によって、二重特異性抗体で動物を４週間治療する。一回目の治療後二十日目に、抗腫瘍作用を観察した。ノギスで腫瘍の大きさを測定し、式ＴＶ＝ａ×ｂ^２／２で腫瘍体積（ＴＶはｍｍ^３で表記する）を推定し、ここで「ａ」と「ｂ」はそれぞれ腫瘍の長径と短径である。ＴＶは、式ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔ_ｔ－Ｔ_０）／（Ｃ_ｔ－Ｃ_０）］×１００％を用いて腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ、抗腫瘍有効性の指標）を計算するために用いられ、ただしＴ_ｔ＝治療被験体の時間ｔにおける平均ＴＶ、Ｔ_０＝治療被験体の時間０における平均ＴＶ（ベースライン）、Ｃ_ｔ＝対照の時間ｔにおける平均ＴＶ、Ｃ_０＝対照の時間０における平均ＴＶ（ベースライン）である。

【0374】

図１３と表１０に示されるように、ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ突然変異を有する抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（ＨＣＣ）で治療したマウスは、５２．５％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を示すが、親抗ＨＥＲ２抗体と親抗ＣＤ１３７抗体との組み合わせで治療したマウスは１９．４％ ＴＧＩを示す。ＰＢＭＣがない治療群では、各群において、腫瘍阻害の有意差（データは示されていない）は観察されなかった。結果により、単一特異性抗ＣＤ１３７抗体と抗ＨＥＲ２抗体との組み合わせに比べて、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の治療効き目が優れていることが示された。

【0375】

【表11】

【0376】

Ｆ．インビボＯＥ－１９異種移植モデル
さらに、ＯＥ１９／ＰＢＭＣ異種移植モデルにおいて、二重特異性抗体のインビボ効き目を研究する。ＯＥ－１９は、ヒト胃癌細胞株である。ＯＥ－１９モデルにおいて、５００万個のＯＥ－１９細胞を、３：１の割合で、新たに単離されたヒトＰＢＭＣと混合し、そして、免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスに皮下注射する。移植後１日目に、週に二回の腹膜内注射によって、二重特異性抗体で動物を３週間治療する。一回目の治療後二十一日目に、抗腫瘍効果を観察した。ノギスで腫瘍の大きさを測定し、式ＴＶ＝ａ×ｂ^２／２で腫瘍体積（ｍｍ^３）を推定し、ここで「ａ」と「ｂ」はそれぞれ腫瘍の長径と短径である。ＴＶは、式ＴＧＩ（％）＝［１－（Ｔ_ｔ－Ｔ_０）／（Ｃ_ｔ－Ｃ_０）］×１００％を用いて腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ、抗腫瘍有効性の指標）を計算するために用いられる。ただし、Ｔ_ｔ＝治療者の時間ｔにおける平均ＴＶ、Ｔ_０＝治療者の時間０における平均ＴＶ（ベースライン）、Ｃ_ｔ＝対照の時間ｔにおける平均ＴＶ、Ｃ_０＝対照の時間０における平均ＴＶ（ベースライン）である。

【0377】

図１４Ａと表１１に示されるように、親抗ＨＥＲ２抗体と親抗ＣＤ１３７抗体との組み合わせで治療したマウスに示されるものに比べて、ＩｇＧ４ ＦＡＬＡ突然変異を有する抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体（ＨＣＣ）で治療したマウスは、有意な腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）（ｐ＜０．０５）を示した。図１４Ｂは、２１日目の異なる治療群の個体腫瘍体積を示す。結果により、単一特異性抗ＣＤ１３７抗体と抗ＨＥＲ２抗体との組み合わせに比べて、抗ＣＤ１３７ ｘ ＨＥＲ２二重特異性抗体の治療効き目が優れていることが示された。

【0378】

【表12】

【0379】

開示されたテーマの精神又は範囲から逸脱することなく、開示されたテーマの構成と方法に対する様々な修正と変更を行うことができることは、当業者には明らかであろう。従って、開示されたテーマは、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内にある修正と変更を含むことが意図される。

【0380】

様々な刊行物、特許、及び特許出願が、本明細書に援用され、その内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【配列表】

2023516941000001.app

【国際調査報告】