▶ ビーブ、ヘルスケア、ユーケー、（ナンバー５）、リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-25
(54)【発明の名称】ヒト免疫不全ウイルスの複製阻害剤
(51)【国際特許分類】
C07D 471/04 20060101AFI20230418BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20230418BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20230418BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/4985 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/513 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/537 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/5365 20060101ALI20230418BHJP
【ＦＩ】
C07D471/04 118Z
C07D471/04 CSP
A61P31/18
A61P43/00 121
A61K31/519
A61K45/00
A61K31/4985
A61K31/496
A61K31/513
A61K31/537
A61K31/5365
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022553214
(86)(22)【出願日】2021-03-03
(85)【翻訳文提出日】2022-11-01
(86)【国際出願番号】 IB2021051765
(87)【国際公開番号】W WO2021176367
(87)【国際公開日】2021-09-10
(31)【優先権主張番号】62/985,946
(32)【優先日】2020-03-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520218040
【氏名又は名称】ビーブ、ヘルスケア、ユーケー、（ナンバー５）、リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＶＩＩＶ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ ＵＫ （ＮＯ．５） ＬＩＭＩＴＥＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100120031
【弁理士】
【氏名又は名称】宮嶋 学
(74)【代理人】
【識別番号】100120617
【弁理士】
【氏名又は名称】浅野 真理
(74)【代理人】
【識別番号】100172557
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 啓靖
(72)【発明者】
【氏名】エリック、ピー、ギリス
(72)【発明者】
【氏名】クリスティアナ、イワグウ
【テーマコード（参考）】
4C065
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C065AA04
4C065BB11
4C065CC01
4C065DD03
4C065EE02
4C065HH01
4C065JJ03
4C065KK06
4C065KK10
4C065LL04
4C065PP03
4C065PP04
4C065PP18
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZB331
4C084ZB332
4C084ZC551
4C084ZC552
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC42
4C086CB05
4C086CB09
4C086CB22
4C086GA05
4C086GA07
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB33
4C086ZC55
4C086ZC75
(57)【要約】
式Ｉの化合物（その薬学的に許容可能な塩を含む）：
【化１】
並びにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症を処置するための組成物及び方法が記載される。
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の化合物：【化1】
【請求項2】
請求項１に記載の化合物又は塩を含む医薬組成物。
【請求項3】
薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
経口投与、筋肉内注射又は皮下注射に適した、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
請求項１又は２に記載の化合物又は塩の投与を含む、ヒトにおけるＨＩＶ感染症を処置する方法。
【請求項6】
前記投与が経口投与である、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記投与が筋肉内注射又は皮下注射である、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
前記方法が、ヒトにおけるＡＩＤＳ又はＨＩＶ感染症の処置に使用される少なくとも１種のその他の薬剤の投与をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項9】
前記少なくとも１種のその他の薬剤が、ドルテグラビル、ビクテグラビル、ラミブジン、ホステムサビル及びカボテグラビルからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
療法に使用するための、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項11】
ヒトにおけるＨＩＶ感染症の処置に使用するための、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項12】
ヒトにおけるＨＩＶ感染症の処置のための医薬の製造に使用するための、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症の処置のための化合物、組成物、及び方法に関する。より具体的には、本発明は、新規のＨＩＶの阻害剤、そのような化合物を含む医薬組成物、及びＨＩＶ感染症の処置においてこれらの化合物を使用する方法を提供する。本発明はまた、以下に記載される化合物を製造するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、ＨＩＶによる感染の結果である。ＨＩＶは世界の主要な公衆衛生問題であり続けている。２０１５年には、推定３，６７０万人がＨＩＶとともに生きており（１８０万人の子供を含む）、世界のＨＩＶ罹患率（global HIV prevalence）は０．８％である。この数の大部分は、低中所得国に住んでいる。同じ年に、１１０万人がエイズ関連疾患で死亡した。
【0003】
ＨＩＶ感染者に対する現在の療法は、承認された抗レトロウイルス薬の組み合わせで構成されている。現在、単剤、固定用量の組み合わせ、又は単一錠剤のレジメン（後者の２種は、２～４種の承認された薬剤を含む）のいずれかとして、４ダース近くの薬物がＨＩＶ感染症に対して承認されている。これらの薬剤は、ウイルス酵素、又はウイルス複製サイクル中のウイルスタンパク質の機能のいずれかを標的とする、いくつかの異なるクラスに属している。したがって、薬剤は、核酸系逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、非核酸系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）、プロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）、インテグラーゼ鎖転移阻害剤（ＩＮＳＴＩ）又は侵入阻害剤（そのうちの１種の薬剤はマラビロクであり、宿主ＣＣＲ５タンパク質を標的とする一方、別の薬剤はエンフビルチドであり、ウイルスｇｐ１６０タンパク質のｇｐ４１領域を標的とするペプチドである）のいずれかとして分類される。加えて、薬物動態エンハンサー（コビシスタット又はリトナビル）を、ブーストを必要とする抗レトロウイルス剤（ＡＲＶ）と組み合わせて使用することができる。
【0004】
薬剤と薬物の組み合わせとの医療装備にもかかわらず、新しい抗レトロウイルス薬の医学的必要性が依然として存在する。高いウイルス不均質性、薬物関連毒性、忍容性問題及び付着性不良はすべて、処置失敗につながる可能性があり、クラス全体からの１種若しくは２種以上の抗レトロウイルス剤又はさらに複数の薬物に対する耐性を付与する変異を有するウイルスを選択する結果となり得る（Beyrer, C., Pozniak A. HIV drug resistance - an emerging threat to epidemic control. N. Engl. J. Med. 2017, 377, 1605-1607; Gupta, R. K., Gregson J., et al. HIV-1 drug resistance before initiation or re-initiation of first-line antiretroviral therapy in low-income and middle-income countries: a systematic review and meta-regression analysis. Lancet Infect. Dis. 2017, 18, 346-355; Zazzi, M., Hu, H., Prosperi, M. The global burden of HIV-1 drug resistance in the past 20 years. PeerJ. 2018, DOI 10.7717/peerj.4848）。結果として、より摂取しやすく、耐性の発現に対して高い遺伝的障壁を有し、現在の薬剤よりも安全性が向上した新しい薬物が必要とされている。この多数の選択肢において、好ましい抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）の一部として使用され得る新規の作用機序（ＭＯＡ）は、現在の薬剤に耐性のウイルスに対して有効なはずであるので、なお果たすべき主要な役割を有し得る。長期間又は生涯にわたって薬物の服用を容易にする改善には、以下の改善：副作用の低減；薬物－薬物相互作用の低減；投与間期間の延長；又は別個の患者の好適性に一致する代替的な投与経路のうちのすべて又は一部が含まれ得る。安全性の向上の目標には、投薬の中止を引き起こす毒性に対して高い治療指数が確実に含まれ、副作用の低減又は薬物－薬物相互作用の低減も含まれ得る。併用レジメンにおいて使用する全体の薬物が少なくなる可能性もまた、コンプライアンス及び安全性の向上につながり得る。抗ウイルス標的に対する効力の増強は、特にヒト血漿及び血清アルブミンの存在下で維持される場合には、投与量の減少にもつながり、投与期間と副作用及び毒性に対する治療指数とに直接的且つ肯定的に影響を与え得る。要約すると、新しい作用機序を備え、長期的なコンプライアンス及び安全性を促進する上記のその他の利点も備えた抗ＨＩＶ薬が見出されると、ＨＩＶ感染患者にとって最大の利益が得られる。
【0005】
ＨＩＶウイルスキャプシドの正常な機能を妨害することによって作用すると考えられている、特定の治療可能性を有する化合物が、当技術分野において記載されている。現在承認されている薬物には、この機序によって作用する薬物はなく、したがって、この機序を通じて作用する化合物は、ＨＩＶ感染症の処置のために利用可能な選択肢に対する有用な追加選択肢である。ＨＩＶキャプシドを標的とすると考えられる化合物は、これまでの最も重要な研究の多くを説明する最近の総説の対象となっている。これらの総説には以下の総説：“HIV-1 Capsid Inhibitors as Antiretroviral Agents” Thenin-Houssier, Suzie; Valente, Susana T. Current HIV Research, 2016, 14, 270; “Inhibitors of the HIV-1 capsid, a target of opportunity” Carnes, Stephanie K.; Sheehan, Jonathan H.; Aiken, Christopher, Current Opinion in HIV & AIDS 2018, 13, 359-365; “HIV Capsid Inhibitors Beyond PF74” McArthur, Carole, Diseases, 2019, 7, 22; and “Insights into HIV-1 capsid inhibitors in preclinical and early clinical development as antiretroviral agents” Cevik, Muge; Orkin, Chloe Expert Opin Inv. Drugs, 2019, 28, 1021が含まれる。関連する特許出願は、ＷＯ２０１２０６５０６２、ＷＯ２０１３００６７３８、ＷＯ２０１３００６７９２、ＷＯ２０１４１１０２９６、ＷＯ２０１４１１０２９７、ＷＯ２０１４１１０２９８、ＷＯ２０１４１３４５６６、ＷＯ２０１５０６１５１８、ＷＯ２０１５１３０９６４、ＷＯ２０１５１３０９６６、ＷＯ２０１６０４００８４、ＷＯ２０１６０３３２４３、ＷＯ２０１６１７２４２４、ＷＯ２０１６１７２４２５、ＷＯ２０１８０３５３５９、ＷＯ２０１８２０３２３５、ＷＯ２０１９０３５９０４、ＷＯ２０１９０３５９７３、ＷＯ２０１９１６１０１７、ＷＯ２０１９１６１２８０及びＷＯ２０１９１９８０２４である。
【0006】
当技術分野において現在必要とされている化合物は、新規であり且つＨＩＶの処置において有用であるさらなる化合物である。加えて、これらの化合物は、例えば、それらの作用機序、結合性、阻害効力、標的選択性、溶解度、安全性プロファイル、バイオアベイラビリティ及び／又は投与頻度の低減のうちの１又は２以上に関して、医薬用途に関する利点を提供すべきである。これらの化合物を利用する新しい製剤及び処置方法もまた、必要とされている。
【発明の概要】
【0007】
簡潔には、一態様において、本発明は、以下の化合物：
【0008】
【化1】
及びそれらの薬学的に許容可能な塩からなる群から選択される化合物又は塩を開示する。
【0009】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物又は塩を含む医薬組成物を開示する。
【0010】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物又は塩を投与することを含む、ヒトにおけるＨＩＶ感染症を処置する方法を開示する。
【0011】
別の態様において、本発明は、療法に使用するための、本発明の化合物又は塩を開示する。
【0012】
別の態様において、本発明は、ヒトにおけるＨＩＶ感染症の処置に使用するための、本発明の化合物又は塩を開示する。
【0013】
別の態様において、本発明は、ヒトにおけるＨＩＶ感染症の処置のための医薬の製造における、本発明の化合物又は塩の使用を開示する。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明の塩は薬学的に許容可能である。そのような塩は、酸付加塩又は塩基付加塩であり得る。適切な薬学的に許容可能な塩の概説については、例えば、Berge et al, J. Pharm, Sci., 66, 1-19, 1977を参照されたい。
【0015】
代表的な薬学的に許容可能な酸付加塩としては、限定するものではないが、４－アセトアミド安息香酸塩、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、安息香酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、酪酸塩、エデト酸カルシウム、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩（カンシル酸塩）、カプリン酸塩（デカン酸塩）、カプロン酸塩（ヘキサン酸塩）、カプリル酸塩（オクタン酸塩）、桂皮酸塩、クエン酸塩、シクラミン酸塩、ジグルコン酸塩、２，５－ジヒドロキシ安息香酸塩、ジコハク酸塩、ドデシル硫酸塩（エストール酸塩）、エデト酸塩（エチレンジアミン四酢酸塩）、エストール酸塩（ラウリル硫酸塩）、エタン－１，２－ジスルホン酸塩（エジシル酸塩）、エタンスルホン酸塩（エシル酸塩）、ギ酸塩、フマル酸塩、ガラクタル酸塩（ムチン酸塩）、ゲンチジン酸塩（２，５－ジヒドロキシ安息香酸塩）、グルコヘプトン酸塩（グルセプト酸塩）、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、馬尿酸塩、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ’－ジ（デヒドロアビエチル）－エチレンジアミン）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、イソ酪酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸塩（ナパジシル酸塩）、ナフタレン－２－スルホン酸塩（ナプシル酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ｐ－アミノベンゼンスルホン酸塩、ｐ－アミノサリチル酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルエチルバルビタール酸塩、リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）、ピログルタミン酸塩、ピルビン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、スバセチン酸塩、コハク酸塩、スルファミン酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（８－クロロテオフィリナート）、チオシアン酸塩、トリエチオジド、ウンデカン酸塩、ウンデシレン酸塩及び吉草酸塩が挙げられる。
【0016】
代表的な薬学的に許容可能な塩基付加塩としては、限定するものではないが、アルミニウム、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－１，３－プロパンジオール（ＴＲＩＳ、トロメタミン）、アルギニン、ベネタミン（Ｎ－ベンジルフェネチルアミン）、ベンザチン（Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン）、ビス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、ビスマス、カルシウム、クロロプロカイン、コリン、クレミゾール（１－ｐ－クロロベンジル－２－ピロリルジン－１’－イルメチルベンズイミダゾール）、シクロヘキシルアミン、ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエチルトリアミン、ジメチルアミン、ジメチルエタノールアミン、ドーパミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｌ－ヒスチジン、鉄、イソキノリン、レピジン、リチウム、リシン、マグネシウム、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）、ピペラジン、ピペリジン、カリウム、プロカイン、キニーネ、キノリン、ナトリウム、ストロンチウム、ｔ－ブチルアミン、及び亜鉛が挙げられる。
【0017】
一実施形態において、本発明の組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。本発明の方法において、好ましい投与経路は、皮下又は筋肉内に送達するための経口及び注射による投与である。したがって、好ましい医薬組成物には、経口投与に適した組成物（例えば、錠剤）及び皮下又は筋肉内注射に適した組成物が含まれる。
【0018】
別の態様において、本発明は、ヒトにおけるＨＩＶ感染を予防するか又は感染のリスクを低減する方法であって、本発明の化合物又は塩を投与することを含む、方法を開示する。暴露前予防（又はＰｒＥＰ：pre-exposure prophylaxis）は、ＨＩＶ感染のリスクがある人々が、ＨＩＶ感染の可能性を下げるために毎日薬を服用する場合である。ＰｒＥＰは、感染のリスクを低減するのに効果的であることが示されている。
【0019】
本発明の化合物及び塩は、それらの生物学的標的としてＨＩＶキャプシドを有すると考えられており、したがって、それらの作用機序は、ＨＩＶキャプシドの機能を１又は２以上の方法で変更することである。
【0020】
本発明の化合物及び塩は、単独で、又はその他の治療薬と組み合わせて使用することができる。したがって、本発明による併用療法は、本発明の少なくとも１種の化合物又は塩の投与、及びＨＩＶ感染症の処置に有用であり得るその他の少なくとも１種の薬剤の投与を含む。本発明の化合物又は塩、及びその他の薬剤は、単一の医薬組成物に一緒に調合され、投与されてもよいし、或いは、別個に調合され、投与され得る。別個に調合され、投与される場合には、同時に又は任意の順序で順次に投与され得る。適切なその他の薬剤には、例えば、アバカビル、アタザナビル、ビクテグラビル、カボテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ジデオキシイノシン、ドルテグラビル、ドラビリン、エファビレンツ、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エタビリン（etavirine）、フォサンプレナビル、ホステムサビル、インジナビル、スラトラビル（slatravir）、ラミブジン、ロピナビル、マラビロク、ネルフィナビル、ネビラピン、ラルテグラビル、リルピベリン（rilpiverine）、リトナビル、サキナビル、スタブジン、チプラナビル、テノホビル、テノホビルアラフェナミド、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩、ザルシタビン及びジドブジンが含まれる。好ましい薬剤には、例えば、イスラトラビル、ラミブジン、ホステムサビル及びカボテグラビルが含まれる。特に好ましい薬剤には、例えば、ドルテグラビル、ビクテグラビル、ラミブジン、ホステムサビル及びカボテグラビルが含まれる。
【実施例】
【0021】
ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オールの調製
【0022】
【化2】
【0023】
Ｎ２雰囲気下、０～５℃で、シクロペント－３－エノール（１３０ｇ、１５４５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ撹拌溶液に、ジエチル亜鉛のヘキサン溶液（１．０Ｍ、３０９１ｍＬ、３０９１ｍｍｏｌ）を３時間かけて滴下した。０℃で、溶液に、ジヨードメタン（２４９ｍＬ、３０９１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３００ｍＬ）溶液を１時間かけて滴下した。反応混合物を２７℃まで加温すると、白色沈殿物の形成が観察された。混合物を１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％ＥｔＯＡｃ／ｐｅｔ、Ｒｆ＝０．３、ＵＶインアクティブ（UV-inactive）、ＰＭＡアクティブ（PMA-active））によりモニターした。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１．５Ｌ）の慎重な添加によりクエンチした。混合物を、セライトパッドを通じて濾過した。水層をＤＣＭ（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮して、粗製のビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オールを赤色の液体（１８０ｇ）として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.41 - 4.35 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 1.73 (d, J = 13.9 Hz, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 2H), 1.21 - 1.14 (m, 1H), 0.57 - 0.43 (m, 2H). GCMS: m/z = 98.1).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.41 - 4.35 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 1.73 (d, J = 13.9 Hz, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 2H), 1.21 - 1.14 (m, 1H), 0.57 - 0.43 (m, 2H). GCMS: m/z = 98.1).
【0024】
ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オンの調製
【0025】
【化3】
【0026】
Ｎ２雰囲気下、０℃で、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オール（２１０ｇ、２０５４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０００ｍＬ）撹拌溶液に、デス－マーチンペルヨージナン（９５４ｇ、２２５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。混合物を２７℃まで加温し、次いで、１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％アセトン／Ｈｅｘ、Ｒｆ＝０．３、ＵＶインアクティブ、ＰＭＡアクティブ）によりモニターした。反応混合物を、セライトパッドを通じて濾過し、濾液をＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、８×１Ｌ）で洗浄した。合わせた水相をＤＣＭ（５×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下（浴温度：２０℃）で濃縮して、粗製のビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オンを褐色の液体として得た。液体を７０℃での下方蒸留によりさらに精製して、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オンを淡黄色の粘性液体（１２５ｇ、６２％）として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 2.61 - 2.54 (m, 2H), 2.17 - 2.12 (m, 2H), 1.54 - 1.46 (m, 2H), 0.92 - 0.86 (m, 1H), -0.01 - -0.08 (m, 1H); GCMS: M/Z = 96.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 2.61 - 2.54 (m, 2H), 2.17 - 2.12 (m, 2H), 1.54 - 1.46 (m, 2H), 0.92 - 0.86 (m, 1H), -0.01 - -0.08 (m, 1H); GCMS: M/Z = 96.1.
【0027】
２－（２，２－ジフルオロアセチル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オンの調製
【0028】
【化4】
【0029】
Ｎ２雰囲気下、－７８℃で、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オン（１２５ｇ、１２７４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５００ｍＬ）撹拌溶液に、ＬＤＡ（２．０ＭのＴＨＦ溶液、０．７０１Ｌ、１４０２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を－７８℃で１時間撹拌した。溶液に、－７８℃の温度を維持しながらジフルオロ酢酸エチル（１７４ｇ、１４０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を３０分間かけてゆっくりと加えた。反応混合物を２７℃まで加温し、次いで、１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％アセトン／ヘキサン、Ｒｆ＝０．３、ＵＶアクティブ）によりモニターした。反応混合物をＨＣｌ水溶液（１Ｎ、２０００ｍＬ）の添加によりクエンチした。混合物を３０分間撹拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（３×１０００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮して、２－（２，２－ジフルオロアセチル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オンを淡黄色の粘性液体（１８０ｇ、７１％）として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.18 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.35 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 2.14 (br s, 1H), 1.26 - 1.21 (m, 1H), 1.04-1.03 (m, 1H), 0.22-0.21 (m, 1H), LCMS: M/Z = 173.17).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.18 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.35 (d, J = 19.4 Hz, 1H), 2.14 (br s, 1H), 1.26 - 1.21 (m, 1H), 1.04-1.03 (m, 1H), 0.22-0.21 (m, 1H), LCMS: M/Z = 173.17).
【0030】
エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテートの調製
【0031】
【化5】
【0032】
Ｎ２雰囲気下、２７℃で、２－（２，２－ジフルオロアセチル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン－３－オン（１８０ｇ、９１０ｍｍｏｌ）のエタノール（２Ｌ）撹拌溶液に、エチル２－ヒドラジニルアセテート塩酸塩（４２２ｇ、２７２９ｍｍｏｌ）、次いで、硫酸（２０ｍＬ、３７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、次いで、１００℃に加熱し、１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％アセトン／ヘキサン、Ｒｆ＝０．３、ＵＶアクティブ（UV-active））によりモニターした。反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２０００ｍＬ）に溶解させ、水（２×１Ｌ）、ブライン（１．０Ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮した。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｐｅｔ．：アセトン １００：０→９８：２）に供して、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテートをオフホワイトの固体（１１０ｇ、４６％）として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.86 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.14 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 1H), 2.76 - 2.68 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.10 - 1.03 (m, 1H), 0.14 (q, J = 4.3 Hz, 1H).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.86 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.14 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 1H), 2.76 - 2.68 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.10 - 1.03 (m, 1H), 0.14 (q, J = 4.3 Hz, 1H).
【0033】
エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－５－オキソ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテートの調製
【0034】
【化6】
【0035】
０℃で、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテート（１１０ｇ、４２２ｍｍｏｌ）及びセライト（３９５ｇ）のシクロヘキサン（３．５Ｌ）撹拌溶液に、二クロム酸ピリジニウム（７９４ｇ、２１１０ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。窒素雰囲気下、混合物に、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（３５５ｍＬ、２１３０ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。反応混合物を２７℃まで加温し、次いで、その温度で４８時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、３０％アセトン／ｐｅｔ、Ｒｆ＝０．４、ＵＶアクティブ）によりモニターした。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）で抽出した。濾液を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２×５００ｍＬ）、飽和ＦｅＳＯ４水溶液（３００ｍＬ）、次いで、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗製の表題化合物（１５０ｇ）を得た。
【0036】
エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－４，４ａ－ジヒドロスピロ［シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－５，２’－［１，３］ジチオラン］－１（３ｂＨ）－イル）アセテートの調製
【0037】
【化7】
【0038】
窒素雰囲気下、２７℃で、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－５－オキソ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテート（７５ｇ、２６９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５００ｍＬ）撹拌溶液に、エタン－１，２－ジチオール（４３．０ｍＬ、５１１ｍｍｏｌ）を加え、次いで、三フッ化ホウ素酢酸（７２．６ｍＬ、５１１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％アセトン／Ｐｅｔ、Ｒｆ＝０．３５、ＵＶアクティブ）によりモニターした。完了後、反応混合物を０℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）の添加によりクエンチした。混合物をＤＣＭ（２×１０００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン（１０００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、褐色の液体を得た。この物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｐｅｔ．：ＥｔＯＡｃ ９５：５→９０：１０）に供して、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－４，４ａ－ジヒドロスピロ［シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－５，２’－［１，３］ジチオラン］－１（３ｂＨ）－イル）アセテートをオフホワイトの固体（８０ｇ、７４％）として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.61 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 2H), 3.55 - 3.46 (m, 4H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 1H), 1.30 - 1.24 (m, 4H), 0.65 - 0.60 (m, 1H). LCMS M+H = 346.9.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.61 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 2H), 3.55 - 3.46 (m, 4H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 1H), 1.30 - 1.24 (m, 4H), 0.65 - 0.60 (m, 1H). LCMS M+H = 346.9.
【0039】
エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテートの調製
【0040】
【化8】
【0041】
Ｎ２雰囲気下、－７０℃で、１，３－ジブロモ－５，５－ジメチルイミダゾリジン－２，４－ジオン（２６．３ｇ、９２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌溶液に、ＨＦ－ピリジン（２．４６０ｇ、２４．８３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３０分間撹拌した。溶液に、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－４，４ａ－ジヒドロスピロ［シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－５，２’－１，３］ジチオラン］－１（３ｂＨ）－イル）アセテート（１０ｇ、２５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を－４０℃まで加温し、次いで、その温度で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、３０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ、Ｒｆ＝０．３、ＵＶインアクティブ）によりモニターした。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）の添加によりクエンチした。混合物を室温まで加温し、次いで、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、褐色の固体を得た。この物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｐｅｔ．：ＥｔＯＡｃ １００：０→７５－２５）に供して、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテートを淡黄色の固体（８．５ｇ、９１％）として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.62 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 1.42 - 1.35 (m, 1H), 1.31 - 1.23 (m, 3H), 1.14 - 1.08 (m, 1H). LCMS M+H = 293.07.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.62 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 1.42 - 1.35 (m, 1H), 1.31 - 1.23 (m, 3H), 1.14 - 1.08 (m, 1H). LCMS M+H = 293.07.
【0042】
２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸の調製
【0043】
【化9】
【0044】
Ｎ２雰囲気下、０℃で、エチル２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセテート（１５ｇ、５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７ｍＬ）及びＭｅＯＨ（６６ｍＬ）の撹拌溶液に、ＬｉＯＨ（１．７８８ｇ、７４．７ｍｍｏｌ）の水（６６ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を２７℃まで加温し、次いで、その温度で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、Ｒｆ＝０．２、ＵＶアクティブ）によりモニターした。完了後、反応混合物を減圧下で濃縮し、水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で洗浄して、不純物を除去した。水層を、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）を使用してｐＨ２～３に調整し、次いで、ＥｔＯＡｃ（３×１０００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸をオフホワイトの固体（１４ｇ、９８％）として得た。
LCMS M+H = 265.15.
LCMS M+H = 265.15.
【0045】
得られた２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸及び２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸の分離
【0046】
【化10】
【0047】
２－（３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸（５．５ｇ）をイソプロパノール（２０ｍＬ）に溶解させた。溶液を以下のとおり、ＳＦＣキラル分離に少量ずつ供した：機器＝Ｔｈａｒ ８０；カラム＝Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ ３０×２５０ｍｍ、５ミクロン；溶媒Ａ＝超臨界ＣＯ２；溶媒Ｂ＝０．５％イソプロピルアミン含有イソプロパノール（ｖ／ｖ）；溶離液組成＝７０％Ａ：３０％Ｂ；流速＝６５ｇ／分；背圧＝１００ｂａｒ；温度＝３０℃；注入体積＝２．５ｍＬ；検出＝２２０ｎｍ。２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸を、７．５分～１４分で溶出するピークとして収集し、２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸を、２．７分～５．８分で溶出するピークとして収集した。それぞれのエナンチオマーについて、得られた溶液を減圧下で濃縮し、得られた固体をＥｔＯＡｃに溶解させ、次いで、クエン酸水溶液（１Ｍ）、続いて水、続いてブラインで２回洗浄した。有機溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、真空引きにより濃縮して、分離したエナンチオマーを回収率８０～９０％で得た。
【0048】
２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸及び２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸の調製
【0049】
【化11】
【0050】
２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸及び２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－（ジフルオロメチル）－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸を調製するために使用する経路及び手順に従って、ジフルオロ酢酸エチルの代わりにシクロプロパンカルボニルクロリドを使用して、表題化合物を調製した。経路は以下のスキームに示される。
【0051】
合成スキーム：
【0052】
【化12】
【0053】
Ｎ－（７－アミノ－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミドの調製
【0054】
【化13】
【0055】
合成スキーム：
【0056】
【化14】
【0057】
工程１：２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒドの調製
【0058】
【化15】
【0059】
０～５℃の丸底フラスコ中の硫酸（Ｈ２ＳＯ４）（５．６３Ｌ、４．５Ｖ）溶液に、２，６－ジクロロベンズアルデヒド（１．２５ｋｇ、７．１０ｍｏｌ、１．０当量）を１５℃未満で少しずつ加えた。反応物を０～５℃で３０分間撹拌した。新たに調製したニトロ化混合物の溶液［０℃で濃Ｈ２ＳＯ４（０．４２５Ｌ、０．３４Ｖ）及び７０％ ＨＮＯ３（０．８５ｋｇ、１３．４９ｍｏｌ、１．３０当量）から調製］を、上記の反応混合物に１０℃未満で加えた［注：わずかに発熱反応（３～６℃）であり、そのため、低温での添加が好ましい］。反応混合物を５～１０℃で２～３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、２５℃未満で、氷冷水（１８．７５Ｌ、１５Ｖ）でクエンチした。次いで、反応物を室温まで加温し、２時間撹拌した。固体を濾過により単離し、次いで、水（２．５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。粗湿固体を最初に空気雰囲気下で乾燥させた。次いで、５０～５５℃の熱風オーブンで１０～１２時間（含水率が５．０％以下になるまで）、乾燥させた表題生成物である２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒド（１．４４ｋｇ、９２％収率）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10. 44 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10. 44 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H).
【0060】
工程２：２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリルの調製
【0061】
【化16】
【0062】
（工程－２ａ）
丸底フラスコ中のＤＭＳＯ（５．９Ｌ、５．０Ｖ）溶液に、２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒド（１．１７ｋｇ、５．３１ｍｏｌ、１．０当量）を室温で加えた。室温で３０分間撹拌した後、塩酸ヒドロキシルアミン（０．６３ｋｇ、９．０４ｍｏｌ、１．７０当量）を加え、反応物を室温で３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、温度を３０℃未満に維持するのに十分な速度で加える氷冷水（１８．０Ｌ、１５．０Ｖ）の添加により、反応物をクエンチした（観察：水添加時に形成された固体）。反応物を室温で６０～９０分間撹拌した。固体を濾過により単離し、水（２．５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、次いで、アセトン及びヘキサンの混合物（６．０Ｌ、１：１の比率）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った固体を先ず風乾し、次いで、５０～５５℃の熱風オーブンで１０～１２時間（水分含有量が１．０％以下になるまで）最終乾燥させて、乾燥した標的生成物である２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒドオキシム（１．２２ｋｇ、９２％収率）をオフホワイトの固体として得た。粗生成物（２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリルを１０～２０％含む）を、さらに精製することなく次の工程に直接使用した。
丸底フラスコ中のＤＭＳＯ（５．９Ｌ、５．０Ｖ）溶液に、２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒド（１．１７ｋｇ、５．３１ｍｏｌ、１．０当量）を室温で加えた。室温で３０分間撹拌した後、塩酸ヒドロキシルアミン（０．６３ｋｇ、９．０４ｍｏｌ、１．７０当量）を加え、反応物を室温で３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、温度を３０℃未満に維持するのに十分な速度で加える氷冷水（１８．０Ｌ、１５．０Ｖ）の添加により、反応物をクエンチした（観察：水添加時に形成された固体）。反応物を室温で６０～９０分間撹拌した。固体を濾過により単離し、水（２．５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、次いで、アセトン及びヘキサンの混合物（６．０Ｌ、１：１の比率）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った固体を先ず風乾し、次いで、５０～５５℃の熱風オーブンで１０～１２時間（水分含有量が１．０％以下になるまで）最終乾燥させて、乾燥した標的生成物である２，６－ジクロロ－３－ニトロベンズアルデヒドオキシム（１．２２ｋｇ、９２％収率）をオフホワイトの固体として得た。粗生成物（２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリルを１０～２０％含む）を、さらに精製することなく次の工程に直接使用した。
【0063】
（工程－２ｂ）
０～５℃で、粗オキシム（上記の調製物、１．１３ｋｇ、４．８０ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（９．０４Ｌ、８．０Ｖ）撹拌溶液に、トリエチルアミン（「ＴＥＡ」、１．０２ｋｇ、１０．０９ｍｏｌ、２．１当量）を加えた。５分間撹拌した後、メタンスルホニルクロリド（０．６０ｋｇ、５．２９ｍｏｌ、１．１当量）を１５℃でゆっくりと加えた（観察：添加中に発熱が認められた）。次いで、反応物を室温で３０～４５分間撹拌した。反応の完了後（反応の進行はＴＬＣでモニターされた。移動相：２０％酢酸エチルのヘキサン溶液）、反応物を水（６．７８Ｌ、６．０Ｖ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３．４Ｌ、３．０Ｖ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５．６５Ｌ、５．０Ｖ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。得られた粗固体を、室温でヘキサン（４．５０Ｌ、４．０Ｖ）によりトリチュレーションした。湿った物質を５０～５５℃の熱風オーブンで５～６時間乾燥させて、乾燥生成物である２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリル（０．９５ｋｇ、９１％収率）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H).
０～５℃で、粗オキシム（上記の調製物、１．１３ｋｇ、４．８０ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（９．０４Ｌ、８．０Ｖ）撹拌溶液に、トリエチルアミン（「ＴＥＡ」、１．０２ｋｇ、１０．０９ｍｏｌ、２．１当量）を加えた。５分間撹拌した後、メタンスルホニルクロリド（０．６０ｋｇ、５．２９ｍｏｌ、１．１当量）を１５℃でゆっくりと加えた（観察：添加中に発熱が認められた）。次いで、反応物を室温で３０～４５分間撹拌した。反応の完了後（反応の進行はＴＬＣでモニターされた。移動相：２０％酢酸エチルのヘキサン溶液）、反応物を水（６．７８Ｌ、６．０Ｖ）で希釈し、有機層を分離し、水層をＤＣＭ（３．４Ｌ、３．０Ｖ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５．６５Ｌ、５．０Ｖ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。得られた粗固体を、室温でヘキサン（４．５０Ｌ、４．０Ｖ）によりトリチュレーションした。湿った物質を５０～５５℃の熱風オーブンで５～６時間乾燥させて、乾燥生成物である２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリル（０．９５ｋｇ、９１％収率）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H).
【0064】
工程３：４－クロロ－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミンの調製
【0065】
【化17】
【0066】
１５～２０℃で、２，６－ジクロロ－３－ニトロベンゾニトリル（７５０．０ｇ、３．４５ｍｏｌ、１．０当量）のエタノール（７．５Ｌ、１０．０Ｖ）撹拌溶液に、反応物を２５℃未満に維持しながら、ヒドラジン水和物（５１９．０ｇ、１０．３６ｍｏｌ、３．０当量）をゆっくりと加えた（観察：添加によりわずかに発熱し、添加すると固体形成が始まる）。反応混合物の温度をゆっくりと室温に上げ、次いで、混合物を３時間撹拌した（観察：この時間の間に固体量が増加する）。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、混合物を水（７．５Ｌ、１０．０Ｖ）で希釈し、さらに室温で１時間撹拌した。固体を濾過により単離し、次いで、水（２．２５Ｌ、３．０Ｖ）で洗浄した。湿った固体を、アセトン（１．８７５Ｌ、２．５Ｖ）及びヘキサン（１．８７５Ｌ、２．５Ｖ）の１：１の比率の混合物で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。最後に、湿った固体を５０℃の熱風オーブンで７～８時間（水分含有量が１．５％未満になるまで）乾燥させて、乾燥生成物である４－クロロ－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミン（５４９．０ｇ、７５％収率）を赤レンガ色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.36 (bs, 1H), 8.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 4.73 (bs, 2H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.36 (bs, 1H), 8.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 4.73 (bs, 2H).
【0067】
工程４：４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミンの調製
【0068】
【化18】
【0069】
５～１０℃で、４－クロロ－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミン（５００ｇ、０．４２ｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（５．０Ｌ、１０．０Ｖ）撹拌溶液に、反応物を１０℃未満に維持しながら、炭酸セシウム（Ｃｓ２ＣＯ３）（１．９１ｋｇ、５．８８ｍｏｌ、２．５当量）をゆっくりと加えた。５～１０分間撹拌した後、反応物を１０℃未満に維持しながら硫酸ジメチル（３２６．３ｇ、２．５９ｍｏｌ、１．１当量）を加えた（注：より好ましい位置選択性を得るには、ゆっくりと加えることが好ましい）。次いで、反応温度をゆっくりと室温まで上げ、同じ温度でさらに２時間撹拌を続けた。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、氷冷水（１５．０Ｌ、３０．０Ｖ）の添加により反応物をクエンチし、得られた混合物を室温で６～８時間撹拌した。固体を濾過により単離し、次いで、水（１．５Ｌ、３．０Ｖ）で洗浄した。湿った固体をＩＰＡ（１．５Ｌ、３．０Ｖ）、次いで、ヘキサン（１．０Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った固体を５０℃の熱風オーブンで７～８時間（水分含有量が１．０％未満になるまで）乾燥させた。単離された物質、４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミン（３１９．０ｇ、６０％収率）を、さらに精製することなく次の工程で使用した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.97 (d, J = 8.32 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 4.63 (bs, 2H), 3.96 (s, 3H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.97 (d, J = 8.32 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 4.63 (bs, 2H), 3.96 (s, 3H).
【0070】
工程５：Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミドの調製
【0071】
【化19】
【0072】
（工程５ａ）
０～５℃で、４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミン（６２５．０ｇ、２．７６ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（８３７．０ｇ、８．２７ｍｏｌ、３．０当量）を加え、次いで、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２０．６０ｇ、０．１６５ｍｏｌ、０．０６当量）を加えた。反応物を５～１０分間撹拌し、次いで、反応物を１０℃未満に維持しながら、メタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ）（７９０．０ｇ、６．８９ｍｏｌ、２．５当量）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温まで加温し、次いで、１．５～２．０時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、混合物を水（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）で希釈し、次いで、室温で１５分間撹拌した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗固体を得た。固体を室温でヘキサン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）によりトリチュレーションして、中間体であるＮ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）メタンスルホンアミドを得、次の工程で直接使用した。
０～５℃で、４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－アミン（６２５．０ｇ、２．７６ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（８３７．０ｇ、８．２７ｍｏｌ、３．０当量）を加え、次いで、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２０．６０ｇ、０．１６５ｍｏｌ、０．０６当量）を加えた。反応物を５～１０分間撹拌し、次いで、反応物を１０℃未満に維持しながら、メタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ）（７９０．０ｇ、６．８９ｍｏｌ、２．５当量）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温まで加温し、次いで、１．５～２．０時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、混合物を水（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）で希釈し、次いで、室温で１５分間撹拌した。有機層を分離し、水層をＤＣＭ（６．２５Ｌ、１０．０Ｖ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗固体を得た。固体を室温でヘキサン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）によりトリチュレーションして、中間体であるＮ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）メタンスルホンアミドを得、次の工程で直接使用した。
【0073】
（ｉｉ）
室温で、Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）メタンスルホンアミド（上記で調製）のエタノール（１０．５Ｌ、２０．０Ｖ）撹拌溶液に、ゆっくりと５％ ＮａＯＨ水溶液（４．３８Ｌ、７．０Ｖ）を加えた［注：滴下漏斗を介してゆっくりと添加することが好ましい］。反応物を同じ温度で３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）［ＴＬＣ分析用のサンプル調製：約１．０ｍＬのサンプルを２．０Ｎ ＨＣｌ水溶液でｐＨ２～３になるまで酸性化し、酢酸エチルで抽出し、有機層をＴＬＣで分析する］、反応物を０～５℃に冷却した。反応温度を１０℃未満に維持しながら、２．０Ｎ ＨＣｌ水溶液（３．１３Ｌ、５．０Ｖ）の添加により、ｐＨを２～３に調整した［注：沈殿はＨＣｌの添加時に生じ、撹拌により増加した］。反応混合物を室温まで加温し、次いで、１．５～２．０時間撹拌した。得られた固体を濾過により単離し、次いで、水（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、次いで、ヘキサン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った物質を５０℃の熱風オーブンで６～７時間（水分含有量が１．０％未満になるまで）乾燥させて、乾燥生成物Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（６４０．０ｇ、７６％）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.05 (d, J = 8.32 Hz, 1H), 7.32 (bs, 1H), 7.17 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.45 (s, 3H).
室温で、Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（メチルスルホニル）メタンスルホンアミド（上記で調製）のエタノール（１０．５Ｌ、２０．０Ｖ）撹拌溶液に、ゆっくりと５％ ＮａＯＨ水溶液（４．３８Ｌ、７．０Ｖ）を加えた［注：滴下漏斗を介してゆっくりと添加することが好ましい］。反応物を同じ温度で３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）［ＴＬＣ分析用のサンプル調製：約１．０ｍＬのサンプルを２．０Ｎ ＨＣｌ水溶液でｐＨ２～３になるまで酸性化し、酢酸エチルで抽出し、有機層をＴＬＣで分析する］、反応物を０～５℃に冷却した。反応温度を１０℃未満に維持しながら、２．０Ｎ ＨＣｌ水溶液（３．１３Ｌ、５．０Ｖ）の添加により、ｐＨを２～３に調整した［注：沈殿はＨＣｌの添加時に生じ、撹拌により増加した］。反応混合物を室温まで加温し、次いで、１．５～２．０時間撹拌した。得られた固体を濾過により単離し、次いで、水（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄し、次いで、ヘキサン（１．２５Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った物質を５０℃の熱風オーブンで６～７時間（水分含有量が１．０％未満になるまで）乾燥させて、乾燥生成物Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（６４０．０ｇ、７６％）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.05 (d, J = 8.32 Hz, 1H), 7.32 (bs, 1H), 7.17 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.45 (s, 3H).
【0074】
工程６：Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミドの調製
【0075】
【化20】
【0076】
室温で、Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（６３５．０ｇ、２．０８ｍｏｌ、１．０当量）及び１－（クロロメチル）－４－メトキシベンゼン（３５９．０ｇ、２．３０ｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＦ（６．３５Ｌ、１０．０Ｖ）溶液に、炭酸カリウム（３７４．７ｇ、２．７０ｍｏｌ、１．３当量）を加えた。反応混合物を８０～９０℃に加熱し、その温度で３時間維持した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、混合物を氷冷水（１９．０５Ｌ、３０．０Ｖ）に注いだ［注：生成物が沈殿する際の凝集を避けるために、激しく撹拌しながらゆっくりとクエンチすることが好ましい］。得られた固体を濾過により単離し、水（１．９０Ｌ、３．０Ｖ）で洗浄し、次いで、固体をヘキサン（１．２７Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を６０～９０分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。単離した固体を酢酸エチル（１２．７Ｌ、２０．０Ｖ）に溶解させ、炭（６３．５ｇ）を加えた。混合物を６０～７０℃に加熱し、次いで、その温度で３０～４５分間撹拌した。まだ熱いうちに（４０～５０℃）、セライトパッドを通じて混合物を濾過し、次いで、セライトパッドを酢酸エチル（３．１７Ｌ、５．０Ｖ）で抽出した。合わせた濾液を減圧下、５０℃未満で濃縮乾固に供した。酢酸エチル（０．６３５Ｌ、１．０Ｖ）を室温で固体に加えた。得られた固体懸濁液を３０分間撹拌した。固体を濾過により単離し、次いで、ヘキサン（１．２７Ｌ、２．０Ｖ）で洗浄した。真空濾過を４５～６０分間維持することにより、固体から残留水を除去して、生成物Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミド（７０５．０ｇ、８０％収率）を黄色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.99 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.68 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.44 Hz, 2H), 4.95-4.76 (m, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.01 (s, 3H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.99 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.68 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.24 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.44 Hz, 2H), 4.95-4.76 (m, 2H), 4.17 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.01 (s, 3H).
【0077】
工程７：Ｎ－（７－アミノ－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミドの調製
【0078】
【化21】
【0079】
室温で、亜鉛粉末（５４０．０ｇ、８．２３ｍｏｌ、１０．０当量）の、ＴＨＦ（３．５０Ｌ、１０．０Ｖ）及び水（７．０Ｌ、２０．０Ｖ）混合液の撹拌懸濁液に、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）（４４９．０ｇ、８．２３ｍｏｌ、１０．０当量）を加えた。混合物に、Ｎ－（４－クロロ－１－メチル－７－ニトロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミド（３５０ｇ、０．８２３ｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（７．０Ｌ、２０．０Ｖ）溶液を加えた。反応混合物を室温で３～４時間撹拌した。反応の完了後（インプロセスＴＬＣ／ＨＰＬＣでモニター）、混合物を酢酸エチル（３．５Ｌ、１０．０Ｖ）及び水（１．１２Ｌ、２．５Ｖ）で希釈した。混合物を１５分間撹拌した。反応物を酢酸エチル（１．７５Ｌ、５．０Ｖ）で洗浄するセライトベッドのパッドを通じて濾過した。二相性濾液を収集し、相を分離した。水層を酢酸エチル（３．５０Ｌ、１０．０Ｖ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３．５０Ｌ、１０Ｖ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、次いで、真空引きにより濃縮して、粗固体を得た。粗生成物にＭＴＢＥ（３．２５Ｌ、１０Ｖ）を加え、懸濁液を室温で３０分間撹拌した。固体を濾過により単離した。真空濾過を３０～４５分間維持することにより、固体からバルク残留水を除去した。湿った生成物を熱風オーブン（５０℃）で２時間乾燥させて、表題生成物Ｎ－（７－アミノ－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミド（２７６．０ｇ、８５％収率）をオフホワイトの固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.29-7.26 (m, 2H), 6.86-6.79 (m, 2H), 6.42 (d, J = 7.80 Hz, 1H), 4.99-4.70 (m, 2H), 4.25 (s, 3H), 3.77 (s, 5H), 2.98 (s, 3H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.29-7.26 (m, 2H), 6.86-6.79 (m, 2H), 6.42 (d, J = 7.80 Hz, 1H), 4.99-4.70 (m, 2H), 4.25 (s, 3H), 3.77 (s, 5H), 2.98 (s, 3H).
【0080】
３，３－ジフルオロブタン－１－オールの調製
【0081】
【化22】
【0082】
合成スキーム：
【0083】
【化23】
【0084】
工程１：３－オキソブチルベンゾエートの調製
【0085】
【化24】
【0086】
窒素雰囲気下、－７０℃で、ベンゾイルクロリド（０．３９６Ｌ、３４０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１Ｌ）撹拌溶液に、ピリジン（４７０ｍＬ）を１時間かけて滴下した。同じ温度で３０分間撹拌した後、４－ヒドロキシブタン－２－オン（２５０．０ｇ、２８３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍＬ）溶液を１時間かけて滴下した。反応混合物を２６℃まで加温し、次いで、１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、３０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ． Ｒｆ＝０．４）でモニターした。完了したら、反応混合物を水（２×１０００ｍＬ）、１Ｎ ＨＣｌ（２×５００ｍＬ）、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、３－オキソブチルベンゾエートを淡黄色の液体として得た（４００ｇ、収率＝６９％）。
1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.05 - 7.94 (m, 2H), 7.60 - 7.51 (m, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 2H), 4.65 - 4.54 (t, 2H), 2.97 - 2.84 (t, 2H), 2.28 - 2.13 (s, 3H). HPLC purity = 94.1%.
1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ = 8.05 - 7.94 (m, 2H), 7.60 - 7.51 (m, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 2H), 4.65 - 4.54 (t, 2H), 2.97 - 2.84 (t, 2H), 2.28 - 2.13 (s, 3H). HPLC purity = 94.1%.
【0087】
工程２：３，３－ジフルオロブチルベンゾエートの調製
【0088】
【化25】
【0089】
窒素雰囲気下、０℃で、３－オキソブチルベンゾエート（９０ｇ、４２７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７００ｍＬ）撹拌溶液に、ＤＡＳＴ（６７７ｍＬ、５１２５ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下した。反応混合物を２６℃まで加温し、１６時間撹拌した。
反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ． Ｒｆ＝０．６）でモニターした。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、冷飽和ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）水溶液にゆっくりと注いだ。有機層を分離し、ブライン溶液（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗化合物（９５ｇ）を黄色の液体として得た。この物質をシリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製し、０～５％ＥｔＯＡｃのｐｅｔ．溶液で溶出した。生成物を含む画分を回収し、減圧下で濃縮して、３，３－ジフルオロブチルベンゾエート（６０ｇ、収率＝５９％）を褐色の液体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.06 - 8.01 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 2H), 4.54 - 4.48 (t, 2H), 2.43 - 2.29 (m, 2H), 1.77 - 1.64 (m, 3H). LCMS purity = 89.74%; m/z = 215.33.
反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ． Ｒｆ＝０．６）でモニターした。完了したら、反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、冷飽和ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）水溶液にゆっくりと注いだ。有機層を分離し、ブライン溶液（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗化合物（９５ｇ）を黄色の液体として得た。この物質をシリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用するカラムクロマトグラフィーにより精製し、０～５％ＥｔＯＡｃのｐｅｔ．溶液で溶出した。生成物を含む画分を回収し、減圧下で濃縮して、３，３－ジフルオロブチルベンゾエート（６０ｇ、収率＝５９％）を褐色の液体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.06 - 8.01 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 2H), 4.54 - 4.48 (t, 2H), 2.43 - 2.29 (m, 2H), 1.77 - 1.64 (m, 3H). LCMS purity = 89.74%; m/z = 215.33.
【0090】
工程３：３，３－ジフルオロブタン－１－オールの調製
【0091】
【化26】
【0092】
窒素雰囲気下、０℃で、３，３－ジフルオロブチルベンゾエート（１００ｇ、４６７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８００ｍＬ）撹拌溶液に、水酸化リチウム一水和物（１３７ｇ、３２６８ｍｍｏｌ）の水（８００ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を２６℃まで加温し、次いで、１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、２０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ． Ｒｆ＝０．６、ＫＭｎＯ４アクティブ）でモニターした。完了したら、反応混合物をジエチルエーテル（４００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、水層をジエチルエーテル（３００ｍＬ）で再抽出した。合わせた有機物をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して（揮発性生成物、浴温度＝２５℃）、粗化合物を黒色の液体として得た。この物質をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、炭で処理した。混合物をセライトのパッドを通じて濾過した。セライトパッドをジエチルエーテル（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた濾液を減圧下で濃縮して（揮発性生成物、浴温度＝２５℃）、３，３－ジフルオロブタン－１－オール（４０ｇ、収率＝７１％）を淡黄色の液体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 3.87 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.22 - 2.07 (m, 2H), 1.73 - 1.57 (m, 3H). GCMS Purity = 91.3%; m/z = 110.0.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 3.87 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.22 - 2.07 (m, 2H), 1.73 - 1.57 (m, 3H). GCMS Purity = 91.3%; m/z = 110.0.
【0093】
２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸の調製
【0094】
【化27】
【0095】
合成スキーム：
【0096】
【化28】
【0097】
工程１：２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸の調製
【0098】
【化29】
【0099】
Ｎ２雰囲気下、２６℃で、２－アミノ－６－クロロニコチン酸（２００ｇ、１１５９ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（１４００ｍＬ、１３４６４ｍｍｏｌ）撹拌溶液に、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３９０ｇ、３４７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１２０℃まで加熱し、その温度で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、１０％ ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液、Ｒｆ＝０．５）でモニターした。完了したら、反応混合物を水（３Ｌ）で希釈し、ジエチルエーテル（２×１０００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、クエン酸水溶液（０．５Ｍ）を使用して水層をｐＨ４に酸性化した。沈殿した固体を濾過により回収し、次いで、減圧下で乾燥させて、２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸（２２０ｇ、収率＝７２％）をオフホワイトの固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.56 - 12.32 (m, 1H), 7.97 - 7.91 (m, 1H), 7.52 - 7.41 (m, 2H), 7.38 - 7.11 (m, 5H), 6.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.39 - 5.31 (m, 2H). LCMS Purity = 93%; m/z = 245.29 (M+H).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.56 - 12.32 (m, 1H), 7.97 - 7.91 (m, 1H), 7.52 - 7.41 (m, 2H), 7.38 - 7.11 (m, 5H), 6.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.39 - 5.31 (m, 2H). LCMS Purity = 93%; m/z = 245.29 (M+H).
【0100】
工程２：２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸メチルの調製
【0101】
【化30】
【0102】
Ｎ２雰囲気下、２６℃で、２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸（２２０ｇ、９０１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５Ｌ）撹拌溶液に、炭酸カリウム（３７３ｇ、２７０２ｍｍｏｌ）及びヨードメタン（０．２８２Ｌ、４５０４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応混合物を２７℃で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、４０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ．、Ｒｆ＝０．６）でモニターした。完了したら、反応混合物を水（５Ｌ）で希釈した。沈殿した固体を濾過によって単離し、次いで、真空引きにより乾燥させて、２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸メチル（２２０ｇ、収率＝９２％）をオフホワイトの固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42-7.40 (m, 2H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.34-7.31 (m, 1H), 6.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.33 (s, 2H), 3.84 (s, 3H). LCMS Purity = 97%, m/z = 259.30 (M+H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42-7.40 (m, 2H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.34-7.31 (m, 1H), 6.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.33 (s, 2H), 3.84 (s, 3H). LCMS Purity = 97%, m/z = 259.30 (M+H).
【0103】
工程３：２－アミノ－６－ヒドロキシニコチン酸メチルの調製
【0104】
【化31】
【0105】
Ｎ２雰囲気下、２６℃で、２－アミノ－６－（ベンジルオキシ）ニコチン酸メチル（５０ｇ、１９０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍＬ）撹拌溶液に、ＴＦＡ（８００ｍＬ）及びトリフルオロメタンスルホン酸（２５ｍＬ、２８２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応混合物を２６℃で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．２）でモニターした。完了したら、揮発性物質を真空引きにより除去して、粗生成物を得た。この物質をジエチルエーテル（３×１０００ｍＬ）でトリチュレーションし、次いで、沈殿した固体を濾過により単離した。固体に水（２Ｌ）を加え、次いで、混合物を５時間撹拌した。固体を濾過により回収し、水で洗浄した。固体を真空引きにより乾燥させて、２－アミノ－６－ヒドロキシニコチン酸メチル（２５ｇ、収率＝７８％）をオフホワイトの固体として得た。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ = 10.92-10.76 (m, 1H), 7.65 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.43-6.87 (m, 2H), 5.51 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H). LCMS Purity = 99.32%; m/z = 169.32 (M+H).
生成物中にＴＦＡ及びトリフルオロメタンスルホン酸が存在しないことを、１９Ｆ－ＮＭＲによって確認した。生成物をさらに精製することなく次の工程で直接使用した。
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ = 10.92-10.76 (m, 1H), 7.65 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.43-6.87 (m, 2H), 5.51 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H). LCMS Purity = 99.32%; m/z = 169.32 (M+H).
生成物中にＴＦＡ及びトリフルオロメタンスルホン酸が存在しないことを、１９Ｆ－ＮＭＲによって確認した。生成物をさらに精製することなく次の工程で直接使用した。
【0106】
工程４：２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸メチルの調製
【0107】
【化32】
【0108】
Ｎ２雰囲気下、０℃で、２－アミノ－６－ヒドロキシニコチン酸メチル（２５ｇ、１４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３７５ｍＬ）撹拌溶液に、トリフェニルホスフィン（７７ｇ、２９４ｍｍｏｌ）を加え、次いで、ＤＩＡＤ（５７．２ｍＬ、２９４ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で１５分間撹拌し、次いで、混合物に３，３－ジフルオロブタン－１－オール（２５．３ｇ、２２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２５ｍＬ）溶液を０℃で滴下した。反応混合物を２７℃にし、次いで、５時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．５）でモニターした。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。この物質をＭＴＢＥ：ｐｅｔ．（１：１、１Ｌ）に撹拌した。混合物を濾過し、フィルターパッドをＭＴＢＥ：ｐｅｔ．（１：１、４×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた濾液を減圧下で濃縮して、淡黄色のゴム状固体を得た。シリカゲル（１００～２００メッシュ）を使用するカラムクロマトグラフィーによりこの物質を精製し、１０～２０％ ＥｔＯＡｃのｐｅｔ．溶液で溶出した。生成物を含む画分を回収し、減圧下で濃縮して、２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸メチル（２０ｇ、収率＝４８％）を淡黄色の液体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.05 - 7.95 (m, 1H), 6.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.40 - 2.22 (m, 2H), 1.68 (t, J = 18.6 Hz, 3H). LCMS purity = 91.1%, m/z = 261.25 (M+H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.05 - 7.95 (m, 1H), 6.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.40 - 2.22 (m, 2H), 1.68 (t, J = 18.6 Hz, 3H). LCMS purity = 91.1%, m/z = 261.25 (M+H).
【0109】
工程５：２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸の調製
【0110】
【化33】
【0111】
２６℃で、２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸メチル（５．７ｇ、２０．８１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２０ｍＬ）及びメタノール（３０ｍＬ）の撹拌溶液に、ＬｉＯＨ（２．４９１ｇ、１０４ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を７０℃まで加熱し、その温度で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、５０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ Ｒｆ＝０．２）でモニターした。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残留物を水（６０ｍＬ）に溶解させ、１Ｎ ＨＣｌを使用してｐＨ４に酸性化した。混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸（４．６ｇ、収率＝８７％）を褐色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 11.66 - 10.84 (m, 1H), 8.12 - 7.97 (m, 1H), 6.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.52 - 4.36 (m, 2H), 2.41 - 2.28 (m, 2H), 1.68 (t, J = 18.6 Hz, 3H). LCMS Purity = 97.68%, m/z = 247.24 (M+H).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 11.66 - 10.84 (m, 1H), 8.12 - 7.97 (m, 1H), 6.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.52 - 4.36 (m, 2H), 2.41 - 2.28 (m, 2H), 1.68 (t, J = 18.6 Hz, 3H). LCMS Purity = 97.68%, m/z = 247.24 (M+H).
【0112】
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（３－（４－クロロ－３－（Ｎ－（４－メトキシベンジル）メチルスルホンアミド）－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）カルバメートの調製
【0113】
【化34】
【0114】
Ｎ２雰囲気下、－２５℃で、（Ｓ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３－（３，５－ジフルオロフェニル）プロパン酸（５０ｇ、１６６ｍｍｏｌ）及び２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸（４１．３ｇ、１６６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１０００ｍＬ）撹拌溶液に、ピリジン（４７．０ｍＬ、５８１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物に、２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキシド（「Ｔ３Ｐ」、５０重量％ ＥｔＯＡｃ溶液、４９４ｍＬ、８３０ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下した。溶液を１３℃まで加温し、次いで、５時間撹拌した。１３℃の溶液に、Ｎ－（７－アミノ－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－Ｎ－（４－メトキシベンジル）メタンスルホンアミド（６２．３ｇ、１５８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応塊を２７℃までゆっくりと加温し、次いで、その温度で４８時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、５０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ．、Ｒｆ＝０．４）でモニターした。完了したら、反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０００ｍＬ）に０℃で滴下した。白色の沈殿物が形成され、これを真空濾過によって回収した。単離された固体を水（２Ｌ）で洗浄した。ほとんどの残留水が固体から除去されるまで真空濾過を維持した。次いで、固体をＤＣＭ（２Ｌ）に溶解させた。溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。５０－６５％ ＥｔＯＡｃのＰｅｔ溶液で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって、この物質を精製した。所望の生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（３－（４－クロロ－３－（Ｎ－（４－メトキシベンジル）メチルスルホンアミド）－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）カルバメート（５０ｇ、収率＝３１％）を黄色の泡状固体として得た。上記手順を同じスケールでさらに７回繰り返して、合計５９２ｇの生成物を生成した。合わせた生成物（５９２ｇ）をＭｅＯＨ（１Ｌ）に溶解させた。溶液をｎ－ヘキサン（６Ｌ）で希釈した。オフホワイトの固体が沈殿し、次いで、懸濁液を２０分間撹拌した。固体を真空濾過により回収しつつ、濾液を確保した。固体を真空引きにより乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（３－（４－クロロ－３－（Ｎ－（４－メトキシベンジル）メチルスルホンアミド）－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）カルバメート（３００ｇ、収率＝４８％）をオフホワイトの固体として得た。この生成物は、ホモキラルアトロプ異性体（ジアステレオマー）の混合物である。ＬＣＭＳ分析方法：カラム＝Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ Ｃ１８（５０ｍｍ×４．６ｍｍ、２．５μｍ粒子）；移動相Ａ＝５ｍＭ 重炭酸アンモニウム；移動相Ｂ＝アセトニトリル；勾配プロファイル（時間（分）／％Ｂ）＝０／５、０．５／５、１．５／１５、７／９８、９／９８、９．５／５、１０／５；カラム温度＝３５℃；流速＝１．３ｍＬ／分。ＬＣＭＳの結果：保持時間＝６．２０分。観測されたイオン＝８８８．０９（Ｍ＋Ｈ）；ＬＣＭＳ純度＝９５％。注：確保した濾液を濃縮し、真空引きにより乾燥させて、生成物（１２０ｇ、淡黄色の固体）を得て、これもまた上記の生成物とは別個で下流の化学で使用した。
【0115】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミドの調製
【0116】
【化35】
【0117】
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（３－（４－クロロ－３－（Ｎ－（４－メトキシベンジル）メチルスルホンアミド）－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）カルバメート（純度９５％、３００ｇ、３２１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０００ｍＬ）撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（９００ｍＬ）、次いで、トリフルオロメタンスルホン酸（１５８ｍＬ、１７８２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。溶液を２７℃まで加温し、次いで、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（ＳｉＯ２、８０％ ＥｔＯＡｃ／Ｐｅｔ． Ｒｆ＝０．３）でモニターした。完了したら、穏やかな窒素ガス流の下で揮発性物質を除去した。残留物を０℃で飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０００ｍＬ）に加えた。固体のＮａＨＣＯ３を加えることにより、溶液のｐＨを約８に調整した。混合物をＥｔＯＡｃ（５×１０００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。５～１０％ ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって、この物質を精製した。所望の生成物を含む画分をプールし、減圧下で濃縮して、（Ｓ）－Ｎ－（７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３）－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（２１１ｇ、褐色の泡状固体）をホモキラルアトロプ異性体の混合物（ジアステレオマー、ＬＣＭＳでメジャー：７９％、マイナー：１０％）として得た。この物質をメタノール：アセトニトリル（８０：２０、１８００ｍＬ）に溶解させ、以下の方法を使用する分取ＳＦＣ（カラム＝（Ｒ，Ｒ）ＷＨＥＬＫ－０１（３０×２５０ｍｍ、５μｍ粒子）、溶離液＝ＣＯ２：ＭｅＯＨ（６０：４０）；流速＝９０ｇ／分；背圧＝１００ｂａｒ；検出＝２１４ｎｍ（ＵＶ）；スタック時間＝１５．５分；インジェクションあたりの投入量＝１．１２５グラム）によって精製した。純粋なメジャーピークを回収し、減圧下で濃縮して、（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（１５１ｇ、収量＝６９％）を褐色の固体として得た。生成物は単一の立体異性体である。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 22.4, 7.9 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.03-6.98 (m, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.66-4.63 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.28-3.23 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.88-2.82 (m, 1H), 2.56-2.52 (m, 1H), 2.47-2.44 (m, 1H), 1.73 (t, J = 19.0 Hz, 3H)；
ＬＣＭＳの方法：カラム＝Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７μｍ粒子）；移動相Ａ＝０．１％ ギ酸水溶液；移動相Ｂ＝０．１％ ギ酸のＭｅＣＮ溶液。勾配プロファイル（時間（分）／％Ｂ）：０／３、０．４／３、３．２／９８、３．８／９８、４．２／３、４．５／３；カラム温度＝３５℃；流速：０．６ｍＬ／分。ＬＣＭＳの結果：保持時間＝１．９３分；観測されたイオン＝６６８．０５（Ｍ＋Ｈ）；HPLC Purity = 98%; Chiral HPLC Purity = 96.9%.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 22.4, 7.9 Hz, 2H), 7.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.03-6.98 (m, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.66-4.63 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.28-3.23 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 2.88-2.82 (m, 1H), 2.56-2.52 (m, 1H), 2.47-2.44 (m, 1H), 1.73 (t, J = 19.0 Hz, 3H)；
ＬＣＭＳの方法：カラム＝Ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．７μｍ粒子）；移動相Ａ＝０．１％ ギ酸水溶液；移動相Ｂ＝０．１％ ギ酸のＭｅＣＮ溶液。勾配プロファイル（時間（分）／％Ｂ）：０／３、０．４／３、３．２／９８、３．８／９８、４．２／３、４．５／３；カラム温度＝３５℃；流速：０．６ｍＬ／分。ＬＣＭＳの結果：保持時間＝１．９３分；観測されたイオン＝６６８．０５（Ｍ＋Ｈ）；HPLC Purity = 98%; Chiral HPLC Purity = 96.9%.
【0118】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－４－オキソ－７－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミドの調製
【0119】
【化36】
【0120】
（（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミドを調製するために使用する経路及び手順に従って、２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸の代わりに２－アミノ－６－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）ニコチン酸を使用して、表題化合物を調製した。２－アミノ－６－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）ニコチン酸は、２－アミノ－６－（３，３－ジフルオロブトキシ）ニコチン酸を調製するために使用する経路及び手順に従って、３，３－ジフルオロブタン－１－オールの代わりに３，３，３－トリフルオロプロパン－１－オールを使用して、調製された。
【0121】
ＨＰＬＣ精製：
以下に示される条件の１つを使用して、ＨＰＬＣ精製を実施し、任意選択で、以下に示される異なる条件を使用する第２のＨＰＬＣ精製を続いて実施した。粗反応混合物で得られた分析的ＨＰＬＣデータに基づいて、初期の溶媒Ａ：溶媒Ｂ比、グラジエント時間、最終の溶媒Ａ：溶媒Ｂ比、及び最終の溶媒Ａ：溶媒Ｂ濃度での保持時間を変更することにより、各標的化合物に関する精製条件を最適化した。
以下に示される条件の１つを使用して、ＨＰＬＣ精製を実施し、任意選択で、以下に示される異なる条件を使用する第２のＨＰＬＣ精製を続いて実施した。粗反応混合物で得られた分析的ＨＰＬＣデータに基づいて、初期の溶媒Ａ：溶媒Ｂ比、グラジエント時間、最終の溶媒Ａ：溶媒Ｂ比、及び最終の溶媒Ａ：溶媒Ｂ濃度での保持時間を変更することにより、各標的化合物に関する精製条件を最適化した。
【0122】
ＨＰＬＣ条件Ａ：
カラム：Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ１８、２１．２×１００ｍｍ、５μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ギ酸（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝アセトニトリル；
流速＝４０ｍＬ／分；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ；
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
カラム：Ｚｏｒｂａｘ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓ Ｃ１８、２１．２×１００ｍｍ、５μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ギ酸（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝アセトニトリル；
流速＝４０ｍＬ／分；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ；
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
【0123】
ＨＰＬＣ条件Ｂ：
カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、５μｍ粒子；
溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ（水：ＭｅＣＮ（９５：５ｗ／）溶液）；
溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ（ＭｅＣＮ：水 ９５：５ ｗ／）；
流速＝４２ｍＬ／分。
波長＝２２０及び２５４ｎｍ。
カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、５μｍ粒子；
溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ（水：ＭｅＣＮ（９５：５ｗ／）溶液）；
溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ（ＭｅＣＮ：水 ９５：５ ｗ／）；
流速＝４２ｍＬ／分。
波長＝２２０及び２５４ｎｍ。
【0124】
ＨＰＬＣ条件Ｃ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｔｅｒｒａ Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、１０μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ ＮＨ４ＯＨ（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝アセトニトリル；
流速＝４０ｍＬ／分；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ；
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｔｅｒｒａ Ｃ１８、１９×１００ｍｍ、１０μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ ＮＨ４ＯＨ（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝アセトニトリル；
流速＝４０ｍＬ／分；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ；
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
【0125】
ＬＣＭＳの一般分析方法：
ＬＣＭＳ 方法Ａ：
カラム＝Ａｃｑｕｉｔｙ ＣＳＨ Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、１．７μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ギ酸（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝０．１％ギ酸（１００％アセトニトリル溶液）；
流速＝０．８ｍＬ／分；
開始％Ｂ＝５、最終％Ｂ＝９５；
グラジエント時間＝１．７分、次いで、９５％Ｂで０．２分保持；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ。
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
システム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ
ＬＣＭＳ 方法Ａ：
カラム＝Ａｃｑｕｉｔｙ ＣＳＨ Ｃ１８、２．１×３０ｍｍ、１．７μｍ粒子；
溶媒Ａ＝０．１％ギ酸（１００％水溶液）；
溶媒Ｂ＝０．１％ギ酸（１００％アセトニトリル溶液）；
流速＝０．８ｍＬ／分；
開始％Ｂ＝５、最終％Ｂ＝９５；
グラジエント時間＝１．７分、次いで、９５％Ｂで０．２分保持；
波長＝２１５及び２５４ｎｍ。
ＥＳＩ＋範囲：１５０～１５００ダルトン。
システム：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ
【0126】
実施例１：Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドの調製
【0127】
【化37】
【0128】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（０．０３ｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、２－（３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン－３－イル）－１，１，３，３－テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（「ＨＡＴＵ」、０．０１８ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）及び２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸（１０．３ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）混合液に、Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（０．０２４ｍＬ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＭＦに溶解させ、濾過した。濾液をＨＰＬＣ精製に供して、Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドを得た。ＬＣＭＳ方法Ａを使用してサンプルを分析した：保持時間＝１．５分；観測されたイオン＝９０４．４（Ｍ＋Ｈ）。
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.34 - 8.40 (m, 1 H) 7.17 - 7.24 (m, 1 H) 7.06 - 7.13 (m, 1 H) 6.92 - 7.01 (m, 1 H) 6.62 - 6.73 (m, 1 H) 6.43 - 6.52 (m, 2 H) 4.61 - 4.76 (m, 3 H) 4.26 - 4.40 (m, 2 H) 3.48 - 3.53 (m, 3 H) 3.29 - 3.37 (m, 1 H) 3.15 - 3.16 (m, 3 H) 2.96 - 3.01 (m, 1 H) 2.37 - 2.47 (m, 2 H) 2.10 - 2.23 (m, 2 H) 1.68 - 1.75 (m, 1 H) 1.59 - 1.68 (m, 3 H) 1.16 - 1.20 (m, 1 H) 0.75 - 0.82 (m, 4 H) 0.64 - 0.68 (m, 2 H).
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.34 - 8.40 (m, 1 H) 7.17 - 7.24 (m, 1 H) 7.06 - 7.13 (m, 1 H) 6.92 - 7.01 (m, 1 H) 6.62 - 6.73 (m, 1 H) 6.43 - 6.52 (m, 2 H) 4.61 - 4.76 (m, 3 H) 4.26 - 4.40 (m, 2 H) 3.48 - 3.53 (m, 3 H) 3.29 - 3.37 (m, 1 H) 3.15 - 3.16 (m, 3 H) 2.96 - 3.01 (m, 1 H) 2.37 - 2.47 (m, 2 H) 2.10 - 2.23 (m, 2 H) 1.68 - 1.75 (m, 1 H) 1.59 - 1.68 (m, 3 H) 1.16 - 1.20 (m, 1 H) 0.75 - 0.82 (m, 4 H) 0.64 - 0.68 (m, 2 H).
【0129】
実施例２：Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドの調製
【0130】
【化38】
【0131】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（０．０３ｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、２－（３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン－３－イル）－１，１，３，３－テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（「ＨＡＴＵ」、０．０１８ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）及び２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸（１０．３ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）混合液に、Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（０．０２４ｍＬ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＭＦに溶解させ、濾過した。濾液をＨＰＬＣ精製に供して、Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－７－（３，３－ジフルオロブトキシ）－４－オキソ－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドを得た。ＬＣＭＳ方法Ａを使用してサンプルを分析した：保持時間＝１．５１分；観測されたイオン＝９０４．４（Ｍ＋Ｈ）。
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.34 - 8.42 (m, 1 H) 7.19 - 7.26 (m, 1 H) 7.11 - 7.18 (m, 1 H) 6.92 - 6.99 (m, 1 H) 6.62 - 6.72 (m, 1 H) 6.40 - 6.49 (m, 2 H) 4.70 - 4.74 (m, 1 H) 4.62 - 4.68 (m, 2 H) 4.29 - 4.38 (m, 2 H) 3.50 - 3.53 (m, 3 H) 3.29 - 3.34 (m, 1 H) 3.15 - 3.17 (m, 3 H) 2.94 - 3.00 (m, 1 H) 2.36 - 2.48 (m, 2 H) 2.10 - 2.22 (m, 2 H) 1.70 - 1.78 (m, 1 H) 1.58 - 1.68 (m, 3 H) 1.13 - 1.17 (m, 1 H) 0.76 - 0.86 (m, 4 H) 0.64 - 0.73 (m, 2 H).
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.34 - 8.42 (m, 1 H) 7.19 - 7.26 (m, 1 H) 7.11 - 7.18 (m, 1 H) 6.92 - 6.99 (m, 1 H) 6.62 - 6.72 (m, 1 H) 6.40 - 6.49 (m, 2 H) 4.70 - 4.74 (m, 1 H) 4.62 - 4.68 (m, 2 H) 4.29 - 4.38 (m, 2 H) 3.50 - 3.53 (m, 3 H) 3.29 - 3.34 (m, 1 H) 3.15 - 3.17 (m, 3 H) 2.94 - 3.00 (m, 1 H) 2.36 - 2.48 (m, 2 H) 2.10 - 2.22 (m, 2 H) 1.70 - 1.78 (m, 1 H) 1.58 - 1.68 (m, 3 H) 1.13 - 1.17 (m, 1 H) 0.76 - 0.86 (m, 4 H) 0.64 - 0.73 (m, 2 H).
【0132】
実施例３：Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－４－オキソ－７）－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドの調製
【0133】
【化39】
【0134】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－４－オキソ－７－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（０．０５ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１ｍＬ）／Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（０．２ｍＬ）撹拌溶液に、２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸（０．０２０ｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）、２－（３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン－３－イル）－１，１，３，３－テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（「ＨＡＴＵ」、０．０３４ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．０１９ｍＬ、０．１１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応物に、アンモニアのメタノール溶液（２Ｍ、１ｍＬ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させ、濾過した。濾液をＨＰＬＣ精製に供して、Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－４－オキソ－７）－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＳ，４ａＲ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドを得た。ＬＣＭＳ方法Ａを使用してサンプルを分析した：保持時間＝１．４８分；観測されたイオン＝９０８．４（Ｍ＋Ｈ）。
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.50 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.05 Hz, 1 H) 7.21 (d, J=8.05 Hz, 1 H) 7.07 (d, J=8.94 Hz, 1 H) 6.75 - 6.81 (m, 1 H) 6.58 (dd, J=8.20, 2.24 Hz, 2 H) 4.77 - 4.83 (m, 3 H) 4.38 - 4.48 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 3.43 (dd, J=14.16, 4.32 Hz, 1 H) 3.25 (s, 3 H) 3.08 (dd, J=14.01, 9.54 Hz, 1 H) 2.79 - 2.91 (m, 2 H) 2.19 - 2.33 (m, 2 H) 1.77 - 1.85 (m, 1 H) 1.22 - 1.30 (m, 1 H) 0.86 - 0.93 (m, 3 H) 0.76 (dt, J=5.22, 2.01 Hz, 2 H).
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.50 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.05 Hz, 1 H) 7.21 (d, J=8.05 Hz, 1 H) 7.07 (d, J=8.94 Hz, 1 H) 6.75 - 6.81 (m, 1 H) 6.58 (dd, J=8.20, 2.24 Hz, 2 H) 4.77 - 4.83 (m, 3 H) 4.38 - 4.48 (m, 2 H) 3.60 (s, 3 H) 3.43 (dd, J=14.16, 4.32 Hz, 1 H) 3.25 (s, 3 H) 3.08 (dd, J=14.01, 9.54 Hz, 1 H) 2.79 - 2.91 (m, 2 H) 2.19 - 2.33 (m, 2 H) 1.77 - 1.85 (m, 1 H) 1.22 - 1.30 (m, 1 H) 0.86 - 0.93 (m, 3 H) 0.76 (dt, J=5.22, 2.01 Hz, 2 H).
【0135】
実施例４：Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－４－オキソ－７）－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドの調製
【0136】
【化40】
【0137】
（Ｓ）－Ｎ－（（６Ｐ）－７－（２－（１－アミノ－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－４－オキソ－７－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－３（４Ｈ）－イル）－４－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インダゾール－３－イル）メタンスルホンアミド（０．０２５ｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液に、２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）酢酸（９．４６ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０１９ｍＬ、０．１１２ｍｍｏｌ）及び２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキシド（「Ｔ３Ｐ」、５０重量％ ＥｔＯＡｃ溶液、０．０４４ｍＬ、０．０７４ｍｍｏｌ）。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させ、濾過した。濾液をＨＰＬＣ精製に供して、Ｎ－（（Ｓ）－１－（（３Ｐ）－３－（４－クロロ－１－メチル－３－（メチルスルホンアミド）－１Ｈ－インダゾール－７－イル）－４－オキソ－７）－（３，３，３－トリフルオロプロポキシ）－３，４－ジヒドロピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－２－イル）－２－（３，５－ジフルオロフェニル）エチル）－２－（（３ｂＲ，４ａＳ）－３－シクロプロピル－５，５－ジフルオロ－３ｂ，４，４ａ，５－テトラヒドロ－１Ｈ－シクロプロパ［３，４］シクロペンタ［１，２－ｃ］ピラゾール－１－イル）アセトアミドを得た。ＬＣＭＳ方法Ａを使用してサンプルを分析した：保持時間＝１．４９分；観測されたイオン＝９０８．４（Ｍ＋Ｈ）。
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.50 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 7.32 (d, J=7.75 Hz, 1 H) 7.23 - 7.27 (m, 1 H) 7.07 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 6.74 - 6.81 (m, 1 H) 6.52 - 6.59 (m, 2 H) 4.80 (br dd, J=6.26, 2.09 Hz, 4 H) 4.39 - 4.47 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.40 - 3.44 (m, 1 H) 3.26 (s, 3 H) 3.07 (dd, J=14.31, 9.54 Hz, 1 H) 2.80 - 2.90 (m, 2 H) 2.19 - 2.31 (m, 2 H) 1.83 (tt, J=8.49, 5.07 Hz, 1 H) 1.21 - 1.28 (m, 1 H) 0.88 - 0.94 (m, 3 H) 0.74 - 0.84 (m, 2 H).
1H NMR (500 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 8.50 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 7.32 (d, J=7.75 Hz, 1 H) 7.23 - 7.27 (m, 1 H) 7.07 (d, J=8.64 Hz, 1 H) 6.74 - 6.81 (m, 1 H) 6.52 - 6.59 (m, 2 H) 4.80 (br dd, J=6.26, 2.09 Hz, 4 H) 4.39 - 4.47 (m, 2 H) 3.61 (s, 3 H) 3.40 - 3.44 (m, 1 H) 3.26 (s, 3 H) 3.07 (dd, J=14.31, 9.54 Hz, 1 H) 2.80 - 2.90 (m, 2 H) 2.19 - 2.31 (m, 2 H) 1.83 (tt, J=8.49, 5.07 Hz, 1 H) 1.21 - 1.28 (m, 1 H) 0.88 - 0.94 (m, 3 H) 0.74 - 0.84 (m, 2 H).
【0138】
生物学的方法
ＨＩＶ細胞培養アッセイ
ＭＴ－２細胞、２９３Ｔ細胞及びＮＬ４－３ウイルスのプロウイルスＤＮＡクローンを、ＮＩＨのＡＩＤＳ研究及び標準試薬プログラム（NIH AIDS Research and Reference Reagent Program）から入手した。ＭＴ－２細胞を、１０％の熱非働化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００ｍｇ／ｍＬのペニシリンＧ及び最大１００ユニット／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。２９３Ｔ細胞を、１０％の熱不活性化ＦＢＳ、１００ｍｇ／ｍＬのペニシリンＧ及び最大１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地中で増殖させた。ｎｅｆ遺伝子の一部分をウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子に置き換えた組換えＮＬ４－３プロウイルスクローンを使用して、これらの研究において使用する参照ウイルスを作製した。Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ ＬＬＣ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製のＴｒａｎｓｉｔ－２９３トランスフェクション試薬を使用する、２９３Ｔ細胞への組換えＮＬ４－３プロウイルスクローンのトランスフェクションにより、組換えウイルスを調製した。２～３日後に上清を回収し、ルシフェラーゼ酵素活性をマーカーとして使用してルシフェラーゼ酵素活性を測定することにより、存在するウイルス量をＭＴ－２細胞において力価測定した。ルシフェラーゼは、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製のＥｎｄｕＲｅｎ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅを使用して定量した。段階希釈された化合物の存在下において組換えウイルスに４～５日間感染させたＭＴ－２細胞でルシフェラーゼ活性を測定することによって、組換えウイルスに対する化合物の抗ウイルス活性を定量化した。
ＨＩＶ細胞培養アッセイ
ＭＴ－２細胞、２９３Ｔ細胞及びＮＬ４－３ウイルスのプロウイルスＤＮＡクローンを、ＮＩＨのＡＩＤＳ研究及び標準試薬プログラム（NIH AIDS Research and Reference Reagent Program）から入手した。ＭＴ－２細胞を、１０％の熱非働化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００ｍｇ／ｍＬのペニシリンＧ及び最大１００ユニット／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。２９３Ｔ細胞を、１０％の熱不活性化ＦＢＳ、１００ｍｇ／ｍＬのペニシリンＧ及び最大１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地中で増殖させた。ｎｅｆ遺伝子の一部分をウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子に置き換えた組換えＮＬ４－３プロウイルスクローンを使用して、これらの研究において使用する参照ウイルスを作製した。Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ ＬＬＣ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製のＴｒａｎｓｉｔ－２９３トランスフェクション試薬を使用する、２９３Ｔ細胞への組換えＮＬ４－３プロウイルスクローンのトランスフェクションにより、組換えウイルスを調製した。２～３日後に上清を回収し、ルシフェラーゼ酵素活性をマーカーとして使用してルシフェラーゼ酵素活性を測定することにより、存在するウイルス量をＭＴ－２細胞において力価測定した。ルシフェラーゼは、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製のＥｎｄｕＲｅｎ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅを使用して定量した。段階希釈された化合物の存在下において組換えウイルスに４～５日間感染させたＭＴ－２細胞でルシフェラーゼ活性を測定することによって、組換えウイルスに対する化合物の抗ウイルス活性を定量化した。
【0139】
（Ｆａ）＝１／［１＋（ＥＤ５０／薬物濃度）ｍ］であるメジアン効果式(median effect equation)の指数形式を使用することにより、５０％有効濃度（ＥＣ５０）を算出した(Johnson VA, Byington RT. Infectivity Assay. In Techniques in HIV Research. ed. Aldovini A, Walker BD. 71-76. New York: Stockton Press.1990)。阻害パーセント＝１／［１＋（ＥＣ５０／薬物濃度）ｍ］（式中、ｍは濃度応答曲線の傾きを反映するパラメータである）であるメジアン効果式の指数形式を使用することにより、５０％阻害濃度（ＥＣ５０）を算出した。
【0140】
化合物細胞毒性及び対応するＣＣ５０値は、非感染細胞を使用したこと以外は抗ウイルスアッセイに記載のプロトコールと同じプロトコールを使用して決定した。細胞毒性は、ＸＴＴ（２，３－ビス［２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル］－２Ｈ－テトラゾリウム－５－カルボキシアニリド分子内塩）に基づく比色アッセイ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）を使用することにより、非感染ＭＴ－２細胞において４日目に評価した。
【0141】
【表1】
【国際調査報告】