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特表2023-517328呼吸器系のウイルス感染の処置における経口使用のための菌株およびその組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-25
(54)【発明の名称】呼吸器系のウイルス感染の処置における経口使用のための菌株およびその組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 35/747 20150101AFI20230418BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20230418BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230418BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20230418BHJP
【ＦＩ】
A61K35/747
A61P31/14
A61P11/00
A61K47/36
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022554329
(86)(22)【出願日】2021-03-09
(85)【翻訳文提出日】2022-10-27
(86)【国際出願番号】 IB2021051954
(87)【国際公開番号】W WO2021181272
(87)【国際公開日】2021-09-16
(31)【優先権主張番号】102020000005011
(32)【優先日】2020-03-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT
(31)【優先権主張番号】102020000006205
(32)【優先日】2020-03-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516067302
【氏名又は名称】ソファル ソチエタ ペル アツィオニ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(74)【代理人】
【識別番号】100221545
【弁理士】
【氏名又は名称】白江 雄介
(72)【発明者】
【氏名】ビッフィ，アンドレア
(72)【発明者】
【氏名】フィオーレ，ヴァルテル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C076CC35
4C076EE30
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC56
4C087CA09
4C087NA14
4C087ZA59
4C087ZB33
(57)【要約】
本発明は、呼吸器のウイルス感染、例えば重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）などのコロナウイルスによるウイルス感染の処置であって、上記の呼吸器のウイルス感染における炎症過程に関与するサイトカインおよび／またはマーカーを刺激および／または調節する事による処置における使用のための菌株およびその組成物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
必要とする対象における、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）種に属するウイルス、例えば重症急性呼吸器症候群コロナウイルスに起因する呼吸器系のウイルス感染およびそれに関連する疾患または症状の処置方法における使用のための組成物であって、以下：（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物（Ｍ）；および任意には、
（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤
を含む、組成物。
【請求項2】
ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株が、以下：－ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）として特定され、且つ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
－ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項3】
コロナウイルスが、ＣＯＶＩＤ－２０１９疾患の原因となる重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）株のウイルスである、請求項１または請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項4】
経口使用のためのものである、請求項１～３の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項5】
混合物（Ｍ）がラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株からなる、請求項１～４の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項6】
混合物（Ｍ）が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株からなる、請求項１～４の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項7】
混合物（Ｍ）が、以下：－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託された、ビフィドバクテリウム・アニマリス種に属する菌株、
－ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託された、ラクトバチルス・プランタラム種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ＝ＢｂｆＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託された、ビフィドバクテリウム・ビフィダム種に属する菌株、および
－その混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる菌株さらに含む、前述の請求項の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項8】
混合物（Ｍ）が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株、ならびに、以下：ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（＝ＢｂｆＩＢＳ０１）ＤＳＭ ３２７０８およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択されるさらなる菌株をさらに含むかまたはそれからなる、前述の請求項の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項9】
少なくとも１つの菌株が、プロバイオティックな生菌株またはパラプロバイオティクスまたはポストバイオティクスである、前述の請求項の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項10】
組成物が少なくとも１つのプレバイオティクスをさらに含み；好ましくは少なくとも１つのプレバイオティクスが以下：イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、グアーガムおよびその混合物から選択される；好ましくはイヌリンである、前述の請求項の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項11】
関連する疾患または症状が、以下：呼吸器合併症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、咳、百日咳、肺炎、胸膜炎、気管支炎、風邪、副鼻腔炎、鼻炎、気管炎、咽頭炎、喉頭炎、急性喉頭気管気管支炎、喉頭蓋炎、気管支拡張症、呼吸困難、発熱、疲労、筋肉痛、鼻づまり、鼻水、喉の痛み、吐き気、下痢、腎不全および食欲不振から選択される、前述の請求項の何れか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項12】
以下：－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託されたビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託されたラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１；および
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１；
からなる群より選択される、前述の請求項の何れか１項に記載の処置方法における使用のための菌株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、呼吸器のウイルス感染、好ましくは例えば重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）などのコロナウイルスに由来するウイルス感染の処置であって、上記の呼吸器のウイルス感染における炎症過程に関与するサイトカインおよび／またはマーカーを刺激および／または調節する事による処置における使用のための特定の、および選択された菌株およびその組成物に関する。特に、上記の特定の菌株およびその組成物は、少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現を減少させるため、および／または少なくとも１つの抗炎症性マーカーの発現を刺激するための、サイトカインプロファイルおよび／または炎症／免疫経路の刺激および／または調節において使用するためのものである。
【背景技術】
【0002】
呼吸器のウイルス感染は、その名の通り、上気道および／または下気道（ｕｐｐｅｒ ａｎｄ／ｏｒ ｌｏｗｅｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）器官（鼻、咽頭（ｐｈａｒｙｎｘ）、喉頭（ｌａｒｙｎｘ）、気管（ｔｒａｃｈｅａ）、気管支（ｂｒｏｎｃｈｉ）および肺）を侵すウイルスによって起こる感染症である。特に、本発明は、呼吸器のウイルス感染、好ましくは、例えばＳＡＲＳと省略される重症急性呼吸器症候群などの少なくとも１つのコロナウイルスに起因する呼吸器のウイルス感染に関する。
【0003】
本発明の文脈において、「コロナウイルス」という用語は、科：コロナウイルス科、亜科：コロナウイルス亜科、属：ベータコロナウイルス属、種：重症急性呼吸器症候群関連コロナウイルス種（略して、ＳＡＲＳｒ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－コロナウイルスまたはコロナウイルス）、好ましくは、以下の株：（Ｉ）重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）（２００２年に初めて単離および特定された）、（ＩＩ）重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）（２０１９年に初めて単離および特定された）、および（ＩＩＩ）重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－様（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－様）から選択されるウイルスを示すために使用される。
【0004】
（Ｉ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ株は、アジアで約８０００人が感染し、約７００人が死亡した２００２年～２００３年のＳＡＲＳ流行の原因であった。（ＩＩ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株のコロナウイルスは、中国で始まり世界中に広がった２０１９年～２０２０年のＳＡＲＳ流行の原因であり、上記のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２株に起因するＳＡＲＳ流行はＣＯＶＩＤ－１９と称される（コロナウイルス疾患１９（ＣＯｒｏｎａＶＩｒｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ １９）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－、あるいはコロナウイルス疾患２０１９、コロナウイルス症候群２０１９としても知られる）。
【0005】
個人の腸および／または肺の微生物叢の組成に影響し得るある要因として、例えば病原体との接触、食事および生活習慣、薬剤接種、および／または細菌株などがあると考えられている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
熱心で広範な研究開発活動に続き、出願人は、呼吸器（上気道および下気道）のウイルス感染、特にコロナウイルス種の少なくとも１つのウイルス（例えばＳＡＲ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９疾患の原因となるウイルス）に起因する呼吸器のウイルス感染を処置するために、好適なサイトカインプロファイルおよび／または炎症／免疫経路、例えばインターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－アルファおよび／またはインターロイキンＩＬ－１０など、を顕著に刺激および／または調節することが可能であり、腸内の微生物叢のバランスを保ち、且つそれを増強する一方で、病原細菌の腸内移行を限定する事によって、２次的な細菌感染のリスクを低減する、特定の菌株（例えば、プロバイオティックな菌株またはその誘導体）を特定、単離および研究した。
【0007】
本発明において単離および選択された菌株は、１つ以上の炎症誘発性マーカーの発現レベルを低下させる、および／または１つ以上の抗炎症性マーカー（例えば、サイトカインおよびその他のバイオマーカー）の発現レベルを刺激するように、いくつかの炎症／免疫経路を調節することができる。この理由によって、上記の特定の菌株およびその組成物は、呼吸器のウイルス感染の処置のための、炎症過程に関与するサイトカインおよび／またはマーカーの刺激および／または調節において有効に使用される；有利なことには、上記の菌株およびその組成物は、コロナウイルス、好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（例えばＣＯＶＩＤ－１９）に由来する呼吸器のウイルス感染の処置方法において有効に使用される。
【0008】
本発明の目的のため、詳細には、出願人はラクトバチルス属またはビフィドバクテリウム属に属する菌株、好ましくは以下の種：ラクトバチルス・パラカゼイ、ラクトバチルス・プランタラム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、ビフィドバクテリウム・ビフィダムから選択される種に属する菌株、より好ましくは、以下：受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＳＯＦＡＲ Ｓ．ｐ．Ａ．によって登録された商標）（略して、ＤＧ（登録商標））、受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（略して、ＬＰＣ－Ｓ０１）、受託番号ＤＳＭ ３３２３１で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１（略して、ＢｂＩＢＳ０１）、受託番号ＤＳＭ ３３２３２で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２（略して、ＢｂＩＢＳ０２）、受託番号ＤＳＭ ３３２３３で寄託されたビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢ Ｓ０１（略して、ＢｌＩＢＳ０１）、受託番号ＤＳＭ ３３２３４で寄託されたラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１（略して、ＬｐＩＢＳ０１）、および受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇもしくはＢｂｆＩＢＳ０１（略して、ＭＩＭＢｂ２３ｓｇ またはＢｂｆＩＢＳ０１）として特定された菌株（略して、菌株または発明の菌株）を特定、単離および研究した。
【0009】
本発明において言及する全ての菌株は、ブタペスト条約に基づく規定に従って寄託された。本特許出願において記載されるかまたは請求される菌株の寄託者およびその所有者は、当初から、本特許権の全期間にわたって上記すべての菌株を利用可能にすることに同意していることを表明するものである。
【0010】
本発明において特定される、好ましくは経口使用のための本発明の菌株およびその組成物は、炎症／免疫経路の調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として、少なくとも１つの炎症誘発性マーカー、例えばＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ および／またはＴＬＲ－４タンパク質の発現レベルの顕著な減少、および／または少なくとも１つの抗炎症性マーカー、例えばＩＬ－１０の発現レベルの顕著な刺激（または増加）において効果的である。
【0011】
したがって、本発明の菌株およびその組成物は、上記のサイトカインおよび／またはバイオマーカーの発現レベルの調節効果によって、呼吸器のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルスによる、例えば重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳまたはＣＯＶＩＤ－１９）などによる呼吸器のウイルス感染および／または炎症、およびそれに関連する症状および障害の処置において効果的である。
【0012】
特に、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、ＳＡＲ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性を実証した。
【0013】
プロバイオティックな菌株については様々な様式の抗ウイルス作用が提唱されており、菌株とウイルスの直接的な相互作用、抗ウイルス性物質の産生および宿主の免疫系の刺激などを含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の文脈では、プロバイオティックな菌株、好ましくはラクトバチルス属に属する菌株は、様々な機構を介したウイルスの宿主細胞への侵入に対するバリアとして働き得る。さらに、プロバイオティックな菌株をＣＯＶＩＤ－１９の感染前、感染中または感染後に投与することで、対象の自然免疫が向上する。
【0014】
本願明細書において報告する結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ実験によって、本発明の菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株（例えば、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）による抗ウイルス免疫系増強活性、およびＳＡＲ－ＣｏＶ－２の複製阻害能の両者を示す。
【0015】
試験したプロバイオティック株の内、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、好ましくは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、ＩＦＮの発現および、例えばＴＬＲ７、ＩＦＩＨ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７およびＭＡＶＳなどの抗ウイルス応答シグナル伝達経路に関与する遺伝子の発現を誘導することが可能であり、抗ウイルス免疫調節活性の点から最も有望である事が示された。
【0016】
これはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の文脈において特に興味深い。コロナウイルスは自然免疫応答を出し抜く様々なメカニズムを有しており、これは特にＩ型ＩＦＮ応答の改変による。その他の呼吸器ウイルスと比較して、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２は、低いレベルのＩ型ＩＦＮおよび高いケモカインの発現によって特徴づけられる、より低い抗ウイルス転写応答を誘導する。さらに、重症ＣＯＶＩＤ－１９の患者は低減されたＩ型ＩＦＮ応答およびより低いウイルスのクリアランスを示す。さらに、ＴＬＲ７は、マウス感染モデルにおいて、中東呼吸器症候群ＣｏＶ（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）および重症急性呼吸器症候群ＣｏＶ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）のｓｓＲＮＡの認識における、重要なパターン認識受容体として示唆されているため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の中心的なパターン認識受容体として機能する候補である可能性が高い。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の全ゲノムシーケンスによって、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ゲノムが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶゲノムに比べて、より多くのＴＬＲ７と相互作用し得るｓｓＲＮＡパターンを含んでいる事が示され、これはＴＬＲ７シグナル伝達がＣＯＶＩＤ－１９の病因とより関連し得る事を示唆する。ＴＬＲ７Ｘ染色体の機能喪失を伴う珍しい推定変異体－Ｉ型およびＩＩ型ＩＦＮ応答の変化と関連する－が、重症ＣＯＶＩＤ－１９の若い男性患者のいくつかの症例において特定された。
【0017】
Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ－Ｉ）の弱い産生および炎症誘発性サイトカイン放出の悪化によって特徴づけられる不均衡な免疫応答はＣＯＶＩＤ－１９の重症型に寄与する。さらに、慢性低悪性度全身性炎症は、ＣＯＶＩＤ－１９患者の予後に悪影響を及ぼす様々な併存疾患を伴う。
【0018】
本願明細書において報告する結果では、対照と比較してＩＬ－６、ＩＬ８およびＴＳＬＰ１炎症誘発性サイトカインの転写レベルが低下していた事を鑑みて、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏでの予防的処置または同時の共処置が、Ｃａｃｏ－２細胞においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって引き起こされる炎症応答を抑制する事を示す。
【0019】
さらに、菌株ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）の組合せが、ラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株と比較して、より大きな程度で抗ウイルス免疫応答を正に調節する事もまた観察され、さらにウイルス複製の低下およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスによって誘発される炎症誘発性応答の調節においても作用を示し、この場合でもラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株に比べてより大きな程度を示した。
【0020】
よって、本発明の菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株（例えば、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２またはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）の組合せ、の予防的および／または治療的な使用は、ＳＡＲ－ＣｏＶ－２感染によって誘導される過剰な炎症応答の緩和に寄与する。
【0021】
本発明の菌株およびその組成物は、関連する副作用を有さず、高齢者、妊娠中または授乳期間中の女性、小児対象（０～１２歳）、循環器系の合併症を患う対象、または糖尿病を患う対象、免疫不全の対象（先天性または後天性の疾患による、または免疫抑制剤による治療を受けている、または移植手術を受けた対象）、またはその他の併存疾患を患う対象、を含む全てのカテゴリーの必要とする対象に投与し得る。
【0022】
さらに、本発明の菌株およびその組成物は、調製が容易であり、費用対効果に優れている。
【0023】
以下の発明の詳細な説明から明らかになるこれらのおよびその他の目的は、本願明細書において報告され、および添付の特許請求の範囲において主張される技術的特徴をもって本願の菌株、組成物および混合物によって達成される。
【図面の簡単な説明】
【0024】
図面の説明
【0025】
【図2-1】図２Ａ－Ｃは、Ｌ．ラムノーススＧＧ ＡＴＣＣ ５３１０３株の効果と比較した、Ｃａｃｏ－２腸上皮細胞によって産生される抗ウイルス作用を有するかまたは抗ウイルス応答に関与するサイトカイン／ケモカインおよび分子のパネルに対する本発明の菌株の効果を表す。
【図2-2】同上。
【0026】
【図3-1】図３Ａ－Ｃは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス処置に対する本発明の組成物による前処置に続く、Ｃａｃｏ－２腸上皮細胞によって産生される抗ウイルス作用を有するかまたは抗ウイルス応答に関与するサイトカイン／ケモカインおよび分子のパネルに対する本発明の菌株の効果を示す。
【図3-2】同上。
【0027】
【図4-1】図４Ａ－Ｃは、Ｌ．ラムノーススＧＧ ＡＴＣＣ ５３１０３株の効果と比較した、本発明のプロバイオティック菌株で前処置したかまたは処置しない、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をｉｎ ｖｉｔｒｏで感染させたＣａｃｏ－２細胞の、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）および遺伝子Ｅ（ＣｏＶＥ）をコードするウイルス特異的遺伝子の発現レベル、およびサイトカインの発現プロファイル（炎症誘発性および抗炎症性）を示す。
【図4-2】同上。
【0028】
【図5-1】図５Ａ－Ｂは、Ｌ．ラムノーススＧＧ ＡＴＣＣ ５３１０３株の効果と比較した、本発明のプロバイオティック菌株で同時処置したかまたは処置しない、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２をｉｎ ｖｉｔｒｏで感染させたＣａｃｏ－２細胞のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）および遺伝子Ｅ（ＣｏＶＥ）をコードするウイルス特異的遺伝子の発現レベル、および炎症性サイトカインの発現プロファイルを示す。
【図5-2】同上。
【発明を実施するための形態】
【0029】
発明の詳細な記載
本発明の菌株は、呼吸器のウイルス感染における腸管の関与において寄与する事ができると考えられている。事実として、腸の微生物叢は肺の微生物叢と腸－肺軸を通じて密接に連関している。腸－肺軸において、細菌、ウイルスおよび真菌は、直接的および間接的なメカニズムを通じて互いに密接に相互作用しており、特に免疫／炎症細胞に関与する。腸の微生物叢の変化は、腸内の透過性の増加をもたらし、肺の微生物叢に悪影響を及ぼし得る、病原体（例えば、細菌および／またはウイルス）の移動のリスクを上昇させる可能性が有る。
本発明の菌株は、呼吸器のウイルス感染における腸管の関与において寄与する事ができると考えられている。事実として、腸の微生物叢は肺の微生物叢と腸－肺軸を通じて密接に連関している。腸－肺軸において、細菌、ウイルスおよび真菌は、直接的および間接的なメカニズムを通じて互いに密接に相互作用しており、特に免疫／炎症細胞に関与する。腸の微生物叢の変化は、腸内の透過性の増加をもたらし、肺の微生物叢に悪影響を及ぼし得る、病原体（例えば、細菌および／またはウイルス）の移動のリスクを上昇させる可能性が有る。
【0030】
文献において、数人のＣＯＶＩＤ－１９患者の糞便試料中にウイルス核酸が存在する事が報告され、およびウイルスが肺細胞および小腸上皮細胞に見られるＡＣＥ２受容体に結合する事が報告されている。
【0031】
腸－肺軸のクロストークに基づいて、腸の微生物叢の調節がＣＯＶＩＤ－１９の処置において治療的な役割を果たすという直接の臨床的証拠はないものの、プロバイオティックな菌株が腸の微生物叢を調節して腸症状に好ましい影響を与え、および呼吸器系を防御し得ると推測されている。
【0032】
さらに、コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器の感染において、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１ファミリーのＩＬ－１（特にＩＬ－１ｂ）、およびＩＬ－２Ｒ（ＩＬはインターロイキンの略）などのいくつかの炎症誘発性マーカーの上昇、およびＩＬ－１０などの抗炎症性マーカーの減少が観察されており、これは、おそらくラクトバチルス属およびビフィドバクテリウム属に属する細菌の減少によって特徴づけられる腸の微生物叢の変化によるものと思われる。
【0033】
例えば、ＳＡＲ－ＣｏＶ－２ウイルスが上気道および下気道に感染した場合、ＩＬ－１βおよびＩＬ－６を含む炎症誘発性サイトカインの放出をもたらす、軽度のまたは非常に急性の呼吸器症候群を引き起こし得ることが観察されている。
【0034】
さらに、軽症または重症または重篤な疾患の重症度（ｐ＜０．０５）でコロナウイルス感染症を患う患者の血清において、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）およびＩＬ－６の発現レベルに統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）が観察された；血清中のＩＬ－２ＲおよびＩＬ－６の発現の上昇によって、２０１９－ｎＣｏＶ肺炎の重症度および患者の予後を推測し得る。
【0035】
よって、ＩＬ－１ファミリーの炎症誘発性サイトカインおよび特にＩＬ－６インターロイキンの抑制は、呼吸器のウイルス感染を含む、好ましくはコロナウイルスによるものを含む、多くの炎症性疾患において治療効果をもつ事が示されてきた。
【0036】
プロバイオティクスまたはその誘導体などの菌株は、ＳＣＦＡ（短鎖脂肪酸）の産生、オクルディンおよびゾヌリンなどのタイトジャンクションを形成するタンパク質の発現の増加、よってバリア機能の向上、および種々の炎症／免疫経路の正の調節、を通じて、腸の微生物叢のバランスに貢献する事ができ、よって変化した腸内バリアを修復し、細菌およびウイルス病原体の移動を阻害することができる。
【0037】
本発明の目的を形成するものは、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（例えば、ＳＡＲ－ＣｏＶまたはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、およびそれに関連するかまたは由来する疾患または症状または障害の予防的および／または治療的処置方法における使用のための菌株であって、ここで菌株は、ラクトバチルスまたはビフィドバクテリウム属に属する菌株であり、好ましくは、菌株は以下：ラクトバチルス・パラカゼイ種、ラクトバチルス・プランタラム種、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス種およびビフィドバクテリウム・ビフィダム種から選択される種に属する菌株であり、より好ましくは、菌株はラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、例えばラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）および／またはラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）である。
【0038】
本発明の目的を形成するものは、以下：
－（ａ）ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＳＯＦＡＲ Ｓ．ｐ．Ａ．により登録された商標）として特定され、且つ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株（１９９５年５月５日にＳｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって、番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイとして寄託され、その後ラクトバチルス・パラカゼイＣＮＣＭ Ｉ－１５７２として再分類された。ラクトバチルス・カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２またはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２の名称に関係なく依然として排他的に同じ菌株であることが観察されるはずである）、
－（ｂ）ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託された（２０１３年１月１１日にＳｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａにより寄託され、２０１７年５月１５日にブタペスト条約に基づく寄託へと寄託の変換が要請された）、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
－（ｃ）ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－（ｄ）ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－（ｅ）ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・アニマリス種に属する菌株、
－（ｆ）ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１９年７月３１日に寄託された）、ラクトバチルス・プランタラム種に属する菌株、
－（ｇ）ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇまたはＢｂｆＩＢＳ０１として特定され、ビフィドバクテリウム・ビフィダム種に属する菌株、またはその誘導体であって、ここでＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１７年１２月４日に寄託された）菌株、
を含むかまたはそれからなる群より選択された少なくとも１つの菌株（略して、本発明の菌株）であって、
ここで、上記の少なくとも１つの菌株は、少なくとも１つの炎症／免疫経路の調節における使用のためのものであり、ここで上記の調節は、以下：
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ（誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ））、ＮＯ（一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ））、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－αおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、および／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、
を含むかまたはそれからなり、
ここで、上記の少なくとも１つ菌株は、上記の炎症／免疫経路の調節を通じて、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、またはそれに由来する疾患または症状または障害の、予防的および／または治療的処置方法における使用のためのものである。
－（ａ）ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＳＯＦＡＲ Ｓ．ｐ．Ａ．により登録された商標）として特定され、且つ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株（１９９５年５月５日にＳｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって、番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイとして寄託され、その後ラクトバチルス・パラカゼイＣＮＣＭ Ｉ－１５７２として再分類された。ラクトバチルス・カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２またはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２の名称に関係なく依然として排他的に同じ菌株であることが観察されるはずである）、
－（ｂ）ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託された（２０１３年１月１１日にＳｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａにより寄託され、２０１７年５月１５日にブタペスト条約に基づく寄託へと寄託の変換が要請された）、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
－（ｃ）ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－（ｄ）ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－（ｅ）ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａ．によって２０１９年７月３１日に寄託された）、ビフィドバクテリウム・アニマリス種に属する菌株、
－（ｆ）ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１９年７月３１日に寄託された）、ラクトバチルス・プランタラム種に属する菌株、
－（ｇ）ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇまたはＢｂｆＩＢＳ０１として特定され、ビフィドバクテリウム・ビフィダム種に属する菌株、またはその誘導体であって、ここでＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託された（Ｓｏｆａｒ Ｓ．ｐ．Ａによって２０１７年１２月４日に寄託された）菌株、
を含むかまたはそれからなる群より選択された少なくとも１つの菌株（略して、本発明の菌株）であって、
ここで、上記の少なくとも１つの菌株は、少なくとも１つの炎症／免疫経路の調節における使用のためのものであり、ここで上記の調節は、以下：
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ（誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ））、ＮＯ（一酸化窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ））、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－αおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、および／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、
を含むかまたはそれからなり、
ここで、上記の少なくとも１つ菌株は、上記の炎症／免疫経路の調節を通じて、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、またはそれに由来する疾患または症状または障害の、予防的および／または治療的処置方法における使用のためのものである。
【0039】
ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株は、ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）という命名で再分類される
【0040】
本明細書のビフィドバクテリアである対象、例えば、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１（ＤＳＭ ３３２３１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２（ＤＳＭ ３３２３２）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１（ＤＳＭ ３３２３３）はヒト由来であり、ヒトの腸内に天然に存在する；一方で、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１（ＤＳＭ ３３２３４）はヒトの胃腸管から単離された
【0041】
本発明の目的を形成するものは、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、ならびにそれに関連するかまたは由来する疾患または症状または障害の、予防的および／または治療的処置方法における使用のための組成物であって、ここで組成物は、（ｉ）ラクトバチルス属またはビフィドバクテリウム属に属する少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物Ｍであって、好ましくはここで、菌株は以下：ラクトバチルス・パラカゼイ種、ラクトバチルス・プランタラム種、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス種およびビフィドバクテリウム・ビフィダム種から選択される種に属するものであり、より好ましくは、菌株はラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０などのラクトバチルス・パラカゼイ種に属するものである、混合物Ｍを含み、および任意には上記の組成物は、（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤をさらに含む。
【0042】
本発明の目的を形成するものは、以下：
（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４、およびビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇまたはＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８、およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物Ｍ（略して本発明の混合物Ｍ）、および任意には、
（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤、
を含む組成物（略して、本発明の組成物）であって、
ここで、上記の少なくとも１つの組成物は、少なくとも１つの炎症／免疫経路の調節における使用のためのものであり、ここで上記の調節は、以下：
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－αおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、および／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、
を含むかまたはそれからなり、
ここで、上記の組成物は、上記の炎症／免疫経路の調節を通じて、必要とする対象における呼吸器系（または呼吸器）のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、ならびにそれに関連するかまたは由来する疾患または症状または障害の、予防的および／または治療的処置方法における使用のためのものである。
（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４、およびビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇまたはＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８、およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物Ｍ（略して本発明の混合物Ｍ）、および任意には、
（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤、
を含む組成物（略して、本発明の組成物）であって、
ここで、上記の少なくとも１つの組成物は、少なくとも１つの炎症／免疫経路の調節における使用のためのものであり、ここで上記の調節は、以下：
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－αおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、および／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、
を含むかまたはそれからなり、
ここで、上記の組成物は、上記の炎症／免疫経路の調節を通じて、必要とする対象における呼吸器系（または呼吸器）のウイルス感染および／または炎症、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染、ならびにそれに関連するかまたは由来する疾患または症状または障害の、予防的および／または治療的処置方法における使用のためのものである。
【0043】
本発明の目的を形成するものは、治療有効量の上記の本発明の少なくとも１つの菌株またはその組成物の投与（経口または吸入）を通じて、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、好ましくは、コロナウイルスまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ（またはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染および／または炎症、および関連する疾患または症状または障害の予防的および／または治療的処置方法である。
【0044】
本発明の文脈において、「顕著な」減少または上昇または調節または刺激、という表現は、例えば「統計的観点から有意である」または「臨床的観点から意義がある」ことを示すために使用される。さらに、「統計的観点から有意である」（または単に統計的有意）ｐ＜０．１またはｐ＜０．０５またはｐ＜０．０１と理解され得る。
【0045】
好ましくは、本発明の菌株または本発明の組成物は、炎症誘発性サイトカインＩＬ－６および／またはＩＬ－８の発現レベルを顕著に減少させるために使用するためのものである。
【0046】
好ましくは、本発明の菌株または本発明の組成物は、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０の発現レベルを顕著に増加（または刺激）するために使用するためのものである。
【0047】
例えば、本発明の菌株または本発明の組成物は、炎症誘発性サイトカインＩＬ－６および／またはＩＬ－８の発現レベルを顕著に減少させ、および抗炎症性サイトカインＩＬ－１０の発現レベルを顕著に増加（または刺激）するために使用するためのものである。
【0048】
よって、本発明の菌株または本発明の組成物は、Ｔｈ１／Ｔｈ２＜１比１をもたらす炎症／免疫経路の調節因子として使用するためのものであり、例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ およびＴＬＲ－４タンパク質およびＴＮＦ－αから選択される少なくとも１つの発現レベルの変化はＴｈ１について測定され、一方でＩＬ－１０または別の適切なＴｈ２の発現レベルの変化はＴｈ２について測定される。
【0049】
ウイルス感染の場合において、Ｔｈ１／Ｔｈ２比はよりＴｈ１側にシフトし、一旦誘導されると炎症誘発性サイトカイン（例えばＩＬ－６）の放出および抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ－１０）の低下をもたらす事が観察されてきた。したがって、炎症および続く組織損傷を制御し得るように、できるだけ早くＴｈ１応答を抑制し、Ｔｈ１／Ｔｈ２のバランスをとることが必要である。
【0050】
上記の呼吸器のウイルス感染、好ましくはコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－様）、または重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳまたはＣＯＶＩＤ－１９）によるウイルス感染に由来するかまたは関連する症状または障害は以下：呼吸器合併症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、肺気腫（ｅｍｐｈｙｓｅｍａ）、嚢胞性線維症（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、咳、百日咳（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、肺炎（ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、胸膜炎（ｐｌｅｕｒｉｓｙ）、気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ）、風邪、副鼻腔炎（ｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）、鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ）、気管炎（ｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ）、咽頭炎（ｐｈａｒｙｎｇｉｔｉｓ）、喉頭炎（ｌａｒｙｎｇｉｔｉｓ）、急性喉頭気管気管支炎（ａｃｕｔｅ ｌａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｏｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）、喉頭蓋炎（ｅｐｉｇｌｏｔｔｉｔｉｓ）、気管支拡張症（ｂｒｏｎｃｈｉｅｃｔａｓｉｓ）、呼吸困難、発熱、疲労、筋肉痛（ａｃｈｅ ａｎｄ／ｏｒ ｐａｉｎ）、鼻づまり、鼻水、喉の痛み、吐き気（ｎａｕｓｅａ）および下痢（ｄｉａｒｒｈｏｅａ）などの胃腸症状、腎不全、食欲不振および／または全身の倦怠感（ｇｅｎｅｒａｌ ｆｅｅｌｉｎｇ ｏｆ ｍａｌａｉｓｅ）であり得る。
【0051】
ある実施形態では、本発明の上記組成物は、ラクトフェリンまたはその誘導体（例えば、アポラクトフェリン、ラクトフェリシン）、および／またはＮ－アセチルシステインもしくはその塩、および／またはヒアルロン酸もしくはその塩を含まない。
【0052】
本発明の組成物の混合物Ｍ中に存在する上述の菌株は、生菌株（またはプロバイオティクス）、当業者に知られる手法および装置によって得られる、パラプロバイオティクス、ポストバイオティクスの溶解液、チンダル化、および／または不活化などの菌株の誘導体であり得る。
【0053】
「プロバイオティクス」とは、十分量投与された場合に宿主の健康に利益をもたらす、生きている（ｌｉｖｅおよびｖｉａｂｌｅ）微生物（すなわち、菌株）である；「プロバイオティクス」という用語は、食品中に存在するか、添加される微生物を指す（ＦＡＯおよびＷＨＯの定義）。
【0054】
本発明の文脈において、菌株の「誘導体」（または生菌株の「誘導体」）という用語は、チンダル化またはソニケーションまたはその他の当業者に知られる技術を用いて（例えばガンマ線を用いて）不活化された菌株、または菌株の溶解液、または菌株の抽出物（略してパラプロバイオティクス）、または菌株の任意の誘導体および／または成分、好ましくは菌体外多糖、頭頂部画分、菌株によって生成された代謝物または代謝生物産物（略してポストバイオティクス）および／または菌株に由来する他の何れかの産物を示すために使用される。好ましくは、本発明の菌株の「誘導体」という用語はチンダル化または（例えばガンマ線を用いて）不活化された菌株を示すために使用される。
【0055】
言い換えると、本発明の文脈において、プロバイオティックな生菌株の「誘導体」という用語は、実質的にパラプロバイオティクスまたはポストバイオティクスを示すために使用される。
【0056】
本発明の文脈において、「パラプロバイオティクス」という用語は、非生存（すなわち、複製能がない）細菌細胞（無傷または破壊されたもの）または粗細胞抽出物であって、十分量が投与された場合に（それらの元となる生菌株と同様に）宿主の健康に利益をもたらすものを示すために使用される。パラプロバイオティクスの例は、熱不活化菌株（例えば、チンダル化菌株）、ソニケーション（超音波）、ガンマ線照射（ガンマ線）または菌株の溶解液または菌株の抽出物である。
【0057】
本発明の文脈において、「ポストバイオティクス」という用語は、プロバイオティックな生菌株の代謝活動によって放出または産生される何れかの物質を示すために使用され、ここで、上記のポストバイオティクスは、十分量が投与された場合に（それらの元となる生菌株と同様に）宿主の健康に利益をもたらす。ポストバイオティクスの例は、菌体外多糖、頭頂部画分、代謝産物または代謝生物産物である。
【0058】
好ましい態様によると、本発明の組成物の混合物Ｍは、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株を含むかまたはそれからなる。
【0059】
好ましくは、本発明の組成物の混合物Ｍは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株を含むかまたはそれからなる。
【0060】
あるいは、本発明の組成物の混合物Ｍは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株を含むかまたはそれからなり得る。
【0061】
ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株および／またはラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株は、必要とする対象におけるウイルス感染、好ましくはコロナウイルス、より好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳまたはＣＯＶＩＤ－１９）による呼吸器系のウイルス感染の処置方法において有効なように、腸の微生物叢を増強し、適切な炎症／免疫経路を調節する理想的な特徴を有することが示されている。
【0062】
特に、Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株は、これらがインターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１のファミリー（例えば、ＩＬ－１α および／またはＩＬ－１β）、ＩＬ－２、（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ（よってＮＯの放出を制御する）、および／またはＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－αの発現レベルを減少させ得る；さらに、Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株は、インターロイキンＩＬ－１０の発現レベルを刺激し得る事を考慮すると、本発明のウイルス疾患の処置において使用し得る。
【0063】
さらに、以下の事が観察されている：
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０は、消化管の通過の間生存し、生きて、生存可能に（ａｌｉｖｅおよびｖｉａｂｌｅ）腸に到達する。Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は回収試験（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｓｔｕｄｉｅｓ）によって試験された；回収試験は、菌株が実際に消化管を通過し、ヒトの腸内でコロニー形成し得ることの唯一の証明である；
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は、腸の微生物叢の構成／機能を正に調節し、よって統計的に有意にラクトバチルス属（コロナウイルス感染を患う患者において低下している）を増加させ、且つ病原体および／または潜在的な病原細菌集団を減少させることで腸の微生物叢のバランスを好転させる事ができる。
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０は、炎症／免疫経路を正に調節し、ＩＬ－１α、ＩＬ－１５、ＩＬ－６およびＩＬ－８の統計的に有意な減少、およびＩＬ－１０の統計的に有意な上昇を誘導することができる。Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２について、そのような効果は、一種の天然の「マイクロカプセル（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）」のように菌株を覆うその特異的なＥＰＳ（菌体外多糖）の存在に起因し得る；
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は、酢酸、特に酪酸などの短鎖脂肪酸の糞便中のレベルの統計的に有意な上昇を誘導する。
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０は、消化管の通過の間生存し、生きて、生存可能に（ａｌｉｖｅおよびｖｉａｂｌｅ）腸に到達する。Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は回収試験（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｓｔｕｄｉｅｓ）によって試験された；回収試験は、菌株が実際に消化管を通過し、ヒトの腸内でコロニー形成し得ることの唯一の証明である；
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は、腸の微生物叢の構成／機能を正に調節し、よって統計的に有意にラクトバチルス属（コロナウイルス感染を患う患者において低下している）を増加させ、且つ病原体および／または潜在的な病原細菌集団を減少させることで腸の微生物叢のバランスを好転させる事ができる。
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０は、炎症／免疫経路を正に調節し、ＩＬ－１α、ＩＬ－１５、ＩＬ－６およびＩＬ－８の統計的に有意な減少、およびＩＬ－１０の統計的に有意な上昇を誘導することができる。Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２について、そのような効果は、一種の天然の「マイクロカプセル（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）」のように菌株を覆うその特異的なＥＰＳ（菌体外多糖）の存在に起因し得る；
－Ｌ．カゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２は、酢酸、特に酪酸などの短鎖脂肪酸の糞便中のレベルの統計的に有意な上昇を誘導する。
【0064】
混合物Ｍの変化による、本発明の組成物のさらなる例を以下に報告する。
【0065】
上記本発明の混合物Ｍは、以下：（ａ）Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、またはその誘導体、ならびに、さらに（ｃ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、（ｄ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、（ｅ）Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、（ｆ）Ｌ．プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４および任意には、、（ｇ）Ｂ．ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ＝ＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８、またはその誘導体を含む菌株の混合物、を含むかまたはそれからなり得る。
【0066】
上記本発明の混合物Ｍは、以下：（ａ）Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、またはその誘導体、および（ｂ）Ｌ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０、またはその誘導体、ならびに、さらに（ｃ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、（ｄ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、（ｅ）Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、（ｆ）Ｌ．プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４および、任意には、（ｇ）Ｂ．ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８、またはその誘導体を含む菌株の混合物、を含むかまたはそれからなり得る。
【0067】
上記本発明の混合物Ｍは、以下：（ａ）Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２またはその誘導体、ならびに、さらに以下：（ｃ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、（ｄ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、（ｅ）Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、（ｆ）Ｌ．プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４および（ｇ）Ｂ．ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８およびその混合物、から選択される少なくとも１つの菌株（またはその誘導体）を含むかまたはそれからなり得る。
【0068】
上記本発明の混合物Ｍは、以下：（ａ）Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２またはその誘導体および（ｂ）Ｌ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０またはその誘導体、ならびに、さらに以下：（ｃ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、（ｄ）Ｂ．ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、（ｅ）Ｂ．アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、（ｆ）Ｌ．プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４および（ｇ）Ｂ．ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８およびその混合物、から選択される少なくとも１つの菌株（またはその誘導体）を含むかまたはそれからなり得る。
【0069】
本発明の任意の実施形態に従って、上記混合物Ｍを含む本発明の組成物は、好ましくはＬ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株を含むかまたはそれからなり、さらに、例えばイヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、グアーガムおよびその混合物から選択される少なくとも１つのプレバイオティック；好ましくはイヌリンを含み得る。
【0070】
例えば、本発明の組成物は、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株および／またはラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株およびイヌリンを含むかまたはそれからなり得る。
【0071】
さらに、本発明の任意の実施形態に従って、上記混合物Ｍを含む本発明の組成物であって、好ましくはＬ．パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株および／またはＬ．パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株、および任意には少なくとも１つのプレバイオティクス（例えば、イヌリン）を含むかまたはそれからなる本発明の組成物は、さらに以下を含み得る：
－例えばＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＡおよびビタミンＥなどの少なくとも１つのビタミン；および／または
－例えば、グルタチオンなどの抗酸化物質、レスベラトロールおよびトランス－レスベラトロールなどのポリフェノール、コエンザイムＱ１０、アスタキサンチン、リコピン；および／または
－エキナセア、キャッツクロー（Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）、発酵パパイヤ、ベリー、ジンジャー（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）などの植物抽出物（ボタニカル）；および／または
－亜鉛、セレン、マグネシウム、鉄、カリウム、銅などのミネラル；および／または
－グルタミン、アルギニン、トリプトファンなどのアミノ酸；および／または
－オメガ３脂肪酸。
－例えばＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＡおよびビタミンＥなどの少なくとも１つのビタミン；および／または
－例えば、グルタチオンなどの抗酸化物質、レスベラトロールおよびトランス－レスベラトロールなどのポリフェノール、コエンザイムＱ１０、アスタキサンチン、リコピン；および／または
－エキナセア、キャッツクロー（Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）、発酵パパイヤ、ベリー、ジンジャー（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）などの植物抽出物（ボタニカル）；および／または
－亜鉛、セレン、マグネシウム、鉄、カリウム、銅などのミネラル；および／または
－グルタミン、アルギニン、トリプトファンなどのアミノ酸；および／または
－オメガ３脂肪酸。
【0072】
記載された実施形態の何れか１つ従って、本発明の組成物は、経口使用、鼻腔吸入（例えば、スプレーまたはドロップ）、口腔吸入（例えば、スプレー、吸入用乾燥粉末）のために製剤化され得る。本発明の文脈では、経口使用という用語は、経口（または胃腸）投与と舌下（または頬）投与の両方を示すために使用される。
【0073】
本発明の組成物が経口使用のために製剤化される場合、それは錠剤、チュアブル錠、バッカル錠、顆粒、フレーク、可溶性の粉末または顆粒、口内で溶けやすい粉末または顆粒、カプセルから選択される固形に製剤化され得、あるいは溶液、懸濁液、分散液、乳化液、またはスプレー状に吐出可能な液体、シロップから選択される液体状に製剤化され得、あるいは、ソフトゲル、ゲルから選択される半固形に製剤化され得る；好ましくは経口使用のための本発明の組成物は固形または液体状である。
【0074】
上記の少なくとも１つの菌株または菌株混合物（または各菌株）は、本発明の組成物中に、一日の用量として、１０ｘ１０６ＣＦＵから１０ｘ１０１２ＣＦＵ、好ましくは１０ｘ１０８ＣＦＵから１０ｘ１０１０ＣＦＵの範囲に含まれる濃度、より好ましくは、約１０ｘ１０８ＣＦＵ または１０ｘ１０９ＣＦＵの濃度で存在するＣＦＵ：コロニー形成単位）。
【0075】
上述の一日の用量は単回投与（１回投与）または複数回投与、例えば２、３、または４回の一日あたりの投与で、それを必要とする対象に投与され得る。
【0076】
記載される実施形態の何れか１つに記載の本発明の組成物は、呼吸器系のウイルス感染、好ましくは重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）のウイルス感染の処置のためのさらなるアプローチのアジュバントとしての使用のためのものであり得る。
【0077】
本発明の実施形態の何れか１つに記載の上記混合物Ｍを含む本発明の組成物は、上記の少なくとも１つの薬学的または食品グレードの添加物および／または賦形剤、すなわち、薬学的または食品用途に好適な治療活性の無い物質をさらに含み得る。本発明の文脈において、薬学的または食品用途に許容可能な添加物および／または賦形剤は、固形、半固形または液体状の組成物を調製するための当業者に知られる全ての補助物質を含み、例えば、希釈剤、溶媒（水、グリセリン、エチルアルコールを含む）、可溶化剤、酸性化剤、増粘剤、甘味料、風味増強剤、着色料、潤滑剤、界面活性剤、保存料、安定化剤、ｐＨ安定化緩衝剤およびその混合物を含む。
【0078】
別段の特定が無い限り、組成物または混合物またはその他が、ある成分を「ｘからｙの範囲に含まれる」量で含む、という表現は、上記の成分が組成物または混合物またはその他中に上記の範囲に存在する全部の量で存在し得る事を示すために使用され、特定されない場合でもその範囲の端も含む。
【0079】
別段の特定が無い限り、組成物または混合物が１つ以上の成分または物質を「含む」という指示は、具体的に示された１つ以上の成分または物質の他に、その他の成分または物質が存在し得ることを意味する。
【0080】
本発明の文脈において、「処置方法」という表現は、疾患または病気およびその症状または障害を排除、低下／減少または予防する目的で、治療有効量（当業者によって理解される）の菌株または物質の組成物もしくは混合物を投与する事を含む、必要とする患者への介入を示すために使用される。
【0081】
本発明の文脈において、「対象」とはヒトまたは動物対象、好ましくは哺乳類（例えばイヌ、ネコ、ウマ、ヒツジまたはウシなどのペット）を示すために使用される。好ましくは、本発明の組成物は、ヒト対象の処置方法における使用のためのものである。
【0082】
実施例
本発明の組成物の例は、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株を含む、市販製品Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）（Ｓｏｆａｒ ｓｐａ、Ｉｔａｌｙによって登録された商標）である。
本発明の組成物の例は、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株を含む、市販製品Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）（Ｓｏｆａｒ ｓｐａ、Ｉｔａｌｙによって登録された商標）である。
【0083】
本発明の組成物のさらなる例は、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２およびイヌリン（Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）Ｄｕｏ）を含む市販製品Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）Ｄｕｏ（Ｓｏｆａｒ ｓｐａ、Ｉｔａｌｙに代わって登録された商標）（Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）Ｄｕｏ）である。
【0084】
本発明の実施形態ＦＲ－Ａｎを以下に記載する。
【0085】
ＦＲ－Ａ１．必要とする患者に置ける呼吸器系のウイルス感染、およびそれに関連する疾患または症状の処置方法における使用のための組成物であって、ここで該組成物が、（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３２７０８、およびその混合物から選択される少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物（Ｍ）、ならびに任意には（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加剤および／または賦形剤を含む、組成物。
【0086】
ＦＲ－Ａ２．組成物が、コロナウイルス、好ましくはＳＡＲ－ＣｏＶ－２ウイルスによる、必要とする対象における呼吸器系のウイルス感染およびそれに関連する疾患または症状の処置方法における使用のためのものである、ＦＲ－Ａ１に記載の使用のための組成物。
【0087】
ＦＲ－Ａ３．組成物が、必要とする対象における重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳまたはＣＯＶＩＤ－１９）およびそれに関連する疾患または症状の処置方法における使用のためのものである、ＦＲ－Ａ１またはＦＲ－Ａ２に記載の使用のための組成物。
【0088】
ＦＲ－Ａ４．組成物が、
－インターロイキンＩＬ－６および／もしくはインターロイキンＩＬ－８から選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少；ならびに／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、を通じて少なくとも１つの炎症／免疫経路を調節する、
ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ３の何れか１つに記載の使用のための組成物。
－インターロイキンＩＬ－６および／もしくはインターロイキンＩＬ－８から選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少；ならびに／または、
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、を通じて少なくとも１つの炎症／免疫経路を調節する、
ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ３の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0089】
ＦＲ－Ａ５．組成物が、
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－アルファおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、ならびに／または
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、を通じて少なくとも１つの炎症／免疫経路を調節する、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ４の何れか１つに記載の使用のための組成物。
－インターロイキンＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－２（ＩＬ－２Ｒ）受容体、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＬＲ－４タンパク質、ＴＮＦ－アルファおよびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つの炎症誘発性マーカーの発現レベルの減少、ならびに／または
－抗炎症性マーカーＩＬ－１０の発現レベルの増加、を通じて少なくとも１つの炎症／免疫経路を調節する、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ４の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0090】
ＦＲ－Ａ６．関連する疾患または症状が、以下：呼吸器合併症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、咳、百日咳、肺炎、胸膜炎、気管支炎、風邪、副鼻腔炎、鼻炎、気管炎、咽頭炎、喉頭炎、急性喉頭気管気管支炎、喉頭蓋炎、気管支拡張症、呼吸困難、発熱、疲れ、筋肉痛（ａｃｈｅおよび／またはｐａｉｎ）、鼻づまり、鼻水、喉の痛み、吐き気、下痢、腎不全および食欲不振、から選択される、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ５の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0091】
ＦＲ－Ａ７．混合物（Ｍ）がラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株からなる、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ６の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0092】
ＦＲ－Ａ８．混合物（Ｍ）が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株からなる、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ６の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0093】
ＦＲ－Ａ９．組成物が少なくとも１つのプレバイオティクスをさらに含み；好ましくは、該少なくとも１つのプレバイオティクスが以下：イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、グアーガムおよびその混合物から選択され、好ましくはイヌリンである、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ８の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0094】
ＦＲ－Ａ１０．菌株が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２；ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０；ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１；ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２；ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３；ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４；およびビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（＝ＢｂｆＩＢＳ０１）ＤＳＭ ３２７０８からなる群より選択される、ＦＲ－Ａ１～ＦＲ－Ａ６の何れか１つの記載の処置方法における使用のための菌株。
【0095】
本発明の好ましい実施形態ＦＲ－Ｂｎを以下に記載する。
【0096】
ＦＲ－Ｂ１．必要とする対象における、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）種に属するウイルス、例えば重症急性呼吸器症候群コロナウイルスに起因する呼吸器系のウイルス感染およびそれに関連する疾患または症状の処置方法における使用のための組成物であって、以下：
（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物（Ｍ）；および任意には、
（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤
を含む、組成物。
（ｉ）ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株を含むかまたはそれからなる混合物（Ｍ）；および任意には、
（ｉｉ）少なくとも１つの許容できる薬学的グレードの添加物および／または賦形剤
を含む、組成物。
【0097】
ＦＲ－Ｂ２．ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株が、以下：
－ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）として特定され、且つ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
－ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される、ＦＲ－Ｂ１に記載の使用のための組成物。
－ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）として特定され、且つ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
－ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、
およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択される、ＦＲ－Ｂ１に記載の使用のための組成物。
【0098】
ＦＲ－Ｂ３．コロナウイルスが、ＣＯＶＩＤ－２０１９疾患の原因となる重症急性呼吸器症候群コロナウイルス－２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）株のウイルスである、ＦＲ－Ｂ１またはＦＲ－Ｂ２に記載の使用のための組成物。
【0099】
ＦＲ－Ｂ４．組成物が経口使用のためのものである、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ３の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0100】
ＦＲ－Ｂ５．混合物（Ｍ）がラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株からなる、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ４の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0101】
ＦＲ－Ｂ６．混合物（Ｍ）が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株およびラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１ ＤＳＭ ２６７６０株からなる、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ４の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0102】
ＦＲ－Ｂ７．混合物（Ｍ）が、以下：
－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託された、ビフィドバクテリウム・アニマリス種に属する菌株、
－ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託された、ラクトバチルス・プランタラム種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ＝ＢｂｆＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダム種に属する菌株、および
－その混合物、
を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる菌株さらに含む、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ６の何れか１つに記載の使用のための組成物。
－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託された、ビフィドバクテリウム・ブレーベ種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託された、ビフィドバクテリウム・アニマリス種に属する菌株、
－ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託された、ラクトバチルス・プランタラム種に属する菌株、
－ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ＝ＢｂｆＩＢＳ０１として特定され、且つ、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダム種に属する菌株、および
－その混合物、
を含むかまたはそれからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる菌株さらに含む、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ６の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0103】
ＦＲ－Ｂ８．混合物（Ｍ）が、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２株、ならびに、以下：ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３１、ビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２ ＤＳＭ ３３２３２、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３３、ラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１ ＤＳＭ ３３２３４、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（＝ＢｂｆＩＢＳ０１）ＤＳＭ ３２７０８およびその混合物、を含むかまたはそれからなる群より選択されるさらなる菌株をさらに含むかまたはそれからなる、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ７の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0104】
ＦＲ－Ｂ９．少なくとも１つの菌株が、プロバイオティックな生菌株またはパラプロバイオティクスまたはポストバイオティクスである、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ８の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0105】
ＦＲ－Ｂ１０．組成物が少なくとも１つのプレバイオティクスをさらに含み；好ましくは少なくとも１つのプレバイオティクスが以下：イヌリン、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、グアーガムおよびその混合物から選択される；好ましくはイヌリンである、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ９の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0106】
ＦＲ－Ｂ１１．関連する疾患または症状が、以下：呼吸器合併症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎、肺気腫、嚢胞性線維症、咳、百日咳、肺炎、胸膜炎、気管支炎、風邪、副鼻腔炎、鼻炎、気管炎、咽頭炎、喉頭炎、急性喉頭気管気管支炎、喉頭蓋炎、気管支拡張症、呼吸困難、発熱、疲労、筋肉痛、鼻づまり、鼻水、喉の痛み、吐き気、下痢、腎不全および食欲不振から選択される、ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ１０の何れか１つに記載の使用のための組成物。
【0107】
ＦＲ－Ｂ１２．ＦＲ－Ｂ１～ＦＲ－Ｂ１１の何れか１つに記載の処置方法における使用のための菌株であって、ここで該菌株は以下：
－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託されたビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託されたラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１；および
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１、
からなる群より選択される、菌株。
－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｉｎ Ｐａｒｉｓに受託番号ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号ＤＳＭ ２６７６０で寄託されたラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３１で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３２で寄託されたビフィドバクテリウム・ブレーベＢｂＩＢＳ０２；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３３で寄託されたビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＢｌＩＢＳ０１；
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３３２３４で寄託されたラクトバチルス・プランタラムＬｐＩＢＳ０１；および
－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）に受託番号３２７０８で寄託されたビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ ＝ＢｂｆＩＢＳ０１、
からなる群より選択される、菌株。
【実施例】
【0108】
実験部分
１．目的
出願人は、例えばラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）および／またはラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）などの、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株を含む本発明の組成物の、ウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）に起因する呼吸器のウイルス感染に対抗するための、対象における自然抗ウイルス免疫応答を刺激する能力を評価するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの研究を行った。
１．目的
出願人は、例えばラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）および／またはラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）などの、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する少なくとも１つの菌株を含む本発明の組成物の、ウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス（ＣＯＶＩＤ－１９）に起因する呼吸器のウイルス感染に対抗するための、対象における自然抗ウイルス免疫応答を刺激する能力を評価するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの研究を行った。
【0109】
詳細には、以下をｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した：
（１）本発明の組成物の、腸上皮細胞における抗ウイルス応答を増強する能力（抗ウイルス免疫調節効果）；および
（２）本発明の組成物の、ヒト腸上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に影響を与える能力（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のｉｎ ｖｉｔｒｏモデル）。
（１）本発明の組成物の、腸上皮細胞における抗ウイルス応答を増強する能力（抗ウイルス免疫調節効果）；および
（２）本発明の組成物の、ヒト腸上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に影響を与える能力（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のｉｎ ｖｉｔｒｏモデル）。
【0110】
２．材料
２．１．細胞、ウイルス、菌株および試薬
Ｃａｃｏ－２ヒト結腸線がん細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－３７（商標））およびＶｅｒｏ Ｅ６サル腎臓上皮細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５８６（商標））を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１％（ｖ／ｖ）ピルビン酸ナトリウムおよび１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシン（全てＧｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）を添加したＤＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ２を含む湿潤なインキュベーター内で培養した。
２．１．細胞、ウイルス、菌株および試薬
Ｃａｃｏ－２ヒト結腸線がん細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－３７（商標））およびＶｅｒｏ Ｅ６サル腎臓上皮細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１５８６（商標））を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１％（ｖ／ｖ）ピルビン酸ナトリウムおよび１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシン（全てＧｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）を添加したＤＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ２を含む湿潤なインキュベーター内で培養した。
【0111】
－ラクトバチルス・ラムノースス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）、新名称ラクチカゼイバチルス・ラムノースス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）；
－ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２；Ｌ．ｃａｓｅｉ ＤＧ（登録商標）；Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）、ＳＯＦＡＲ ＳｐＡ）、新名称ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）；
－Ｌ．ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）、新名称ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ；および
－ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（またはＢｂｆＩＢＳ０１）（ＤＳＭ ３２７０８）
などの、プロバイオティックな菌株。
－ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２；Ｌ．ｃａｓｅｉ ＤＧ（登録商標）；Ｅｎｔｅｒｏｌａｃｔｉｓ（登録商標）、ＳＯＦＡＲ ＳｐＡ）、新名称ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）；
－Ｌ．ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）、新名称ラクチカゼイバチルス・パラカゼイ；および
－ビフィドバクテリウム・ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（またはＢｂｆＩＢＳ０１）（ＤＳＭ ３２７０８）
などの、プロバイオティックな菌株。
【0112】
菌株は、ＭＲＳプレート（ＤｅＭａｎ Ｒｏｇｏｓａ Ｓｈａｒｐｅ、Ｄｉｆｃｏ、ＢＤ）上で培養し、嫌気条件下で３７℃で７２時間インキュベートした。
【0113】
ＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株はＡＴＣＣ コレクションから購入し、ＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）、ＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）およびＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（ＤＳＭ ３２７０８）株はＳｏｆａｒ ＳｐＡ．（Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）から提供された。
【0114】
２０％グリセロールを添加した高グルコース含有滅菌ＤＭＥＭを対照試験として挿入した。
【0115】
２．２．ウイルスストックの調製および力価測定
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、パドヴァ大学病院の微生物学部門において患者から単離された。ウイルス株はＶｅｒｏ Ｅ６細胞で増殖させ、および全ゲノムのシーケンシングによって特徴付けられた。ウイルスの力価はプラークテスト法を用いて決定した。手短に述べると、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｍｅｒｃｋ、Ｉｔａｌｙ）中のＶＥＲＯ Ｅ６コンフルエント細胞に、１０倍連続希釈のウイルスストックを１時間接種した。そして増殖培地を除去し、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ、Ｍｅｒｃｋ）を含む新鮮な培地で細胞をインキュベートした。感染から７２時間後に５％ｗ／ｖ ホルムアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ）で細胞を固定し、クリスタルバイオレット（Ｍｅｒｃｋ）で染色した。ウイルス力価は、感染後の細胞培養で形成されたプラークに基づき、プラーク形成単位（ＰＦＵ／ｍＬ）として測定された。すべての感染実験は、イタリア、パドヴァのパドヴァ大学分子医学部のバイオセーフティレベル３（ＢＳＬ－３）の実験室で行われた。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、パドヴァ大学病院の微生物学部門において患者から単離された。ウイルス株はＶｅｒｏ Ｅ６細胞で増殖させ、および全ゲノムのシーケンシングによって特徴付けられた。ウイルスの力価はプラークテスト法を用いて決定した。手短に述べると、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｍｅｒｃｋ、Ｉｔａｌｙ）中のＶＥＲＯ Ｅ６コンフルエント細胞に、１０倍連続希釈のウイルスストックを１時間接種した。そして増殖培地を除去し、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ、Ｍｅｒｃｋ）を含む新鮮な培地で細胞をインキュベートした。感染から７２時間後に５％ｗ／ｖ ホルムアルデヒド（Ｍｅｒｃｋ）で細胞を固定し、クリスタルバイオレット（Ｍｅｒｃｋ）で染色した。ウイルス力価は、感染後の細胞培養で形成されたプラークに基づき、プラーク形成単位（ＰＦＵ／ｍＬ）として測定された。すべての感染実験は、イタリア、パドヴァのパドヴァ大学分子医学部のバイオセーフティレベル３（ＢＳＬ－３）の実験室で行われた。
【0116】
２．３．菌株の調製
２．３．１．生存細胞
Ｄｅ Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ、Ｓｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）ブロスにおいて、嫌気条件下で、３７℃で１８時間インキュベートする事でブロス培養を調製した。インキュベーション後、株を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、細胞ペレットを滅菌蒸留水で２回洗浄した。２０μｌ容量で２．５×１０６ＣＦＵとなるように、洗浄した培養物の６００ｎｍにおける光学密度（ＯＤ６００）を０．３に調整した。標準化した洗浄後の培養物を、生菌数測定のために連続希釈し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ペレットを、２０％グリセロール（メルク）を添加した滅菌ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）に再懸濁した。
２．３．１．生存細胞
Ｄｅ Ｍａｎ、Ｒｏｇｏｓａ、Ｓｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）ブロスにおいて、嫌気条件下で、３７℃で１８時間インキュベートする事でブロス培養を調製した。インキュベーション後、株を３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、細胞ペレットを滅菌蒸留水で２回洗浄した。２０μｌ容量で２．５×１０６ＣＦＵとなるように、洗浄した培養物の６００ｎｍにおける光学密度（ＯＤ６００）を０．３に調整した。標準化した洗浄後の培養物を、生菌数測定のために連続希釈し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ペレットを、２０％グリセロール（メルク）を添加した滅菌ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）に再懸濁した。
【0117】
３．方法
３．１．Ｃａｃｏ－２細胞培養および実験設計
Ｃａｃｏ－２細胞を１２ウェルプレートに播種した（２×１０５細胞／ｍＬ）．コンフルエントに達したら、細胞を１×ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）で洗浄し、抗生物質非含有培地（ＡＦＭ）でインキュベートするか、または以下の処置の１つの対象とした（図１）。
３．１．Ｃａｃｏ－２細胞培養および実験設計
Ｃａｃｏ－２細胞を１２ウェルプレートに播種した（２×１０５細胞／ｍＬ）．コンフルエントに達したら、細胞を１×ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）で洗浄し、抗生物質非含有培地（ＡＦＭ）でインキュベートするか、または以下の処置の１つの対象とした（図１）。
【0118】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの非存在下におけるプロバイオティクス単独での処置（図１Ａ）。
【0119】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスによる処置に対して、プロバイオティクスによる前処置（図１Ｂ）
コンフルエントなＣａｃｏ－２細胞に菌株（生菌株；ＭＯＩ １：１０）を添加した。
３時間後、細胞を１×ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）で洗浄し、および抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）を添加した新鮮な培地でインキュベートし、そしてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＭＯＩ １：２）に１時間感染させた。感染から２４時間後にＲＮＡ抽出のために細胞を回収した。
コンフルエントなＣａｃｏ－２細胞に菌株（生菌株；ＭＯＩ １：１０）を添加した。
３時間後、細胞を１×ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）で洗浄し、および抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）を添加した新鮮な培地でインキュベートし、そしてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＭＯＩ １：２）に１時間感染させた。感染から２４時間後にＲＮＡ抽出のために細胞を回収した。
【0120】
プロバイオティクスおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスによる同時処置（図１Ｃ）。
コンフルエントなＣａｃｏ－２細胞に、菌株（生菌株；ＭＯＩ １：１０）をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＭＯＩ １：２）と共に添加した。３時間後、細胞を洗浄し、新鮮な培地でさらに２４時間インキュベートした後、ＲＮＡ抽出のために回収した。
コンフルエントなＣａｃｏ－２細胞に、菌株（生菌株；ＭＯＩ １：１０）をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＭＯＩ １：２）と共に添加した。３時間後、細胞を洗浄し、新鮮な培地でさらに２４時間インキュベートした後、ＲＮＡ抽出のために回収した。
【0121】
３．２．ＲＮＡ抽出およびリアルタイムＰＣＲ
Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．（登録商標）Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｋｉｔ Ｉ（Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ－Ｔｅｋ、ｔｅｂｕ－ｂｉｏ、Ｉｔａｌｙ）を用いて、製造元の説明書に従って全ＲＮＡを単離した。ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ ＤＮａｓｅ Ｉ ｓｅｔｓ（Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ－Ｔｅｋ）と共にインキュベートする事で混入したＤＮＡを除去した。相補的ＤＮＡの合成および増幅を、製造元の推奨に従って、ｉＴａｑ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｂｅｓ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）を使用し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７０００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）システムで実行した。標的遺伝子の発現を、参照遺伝子ＧＡＰＤＨの発現で正規化した。
データは対照に対する平均倍率変化（ｍｅａｎ ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）で表される。
Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．（登録商標）Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｋｉｔ Ｉ（Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ－Ｔｅｋ、ｔｅｂｕ－ｂｉｏ、Ｉｔａｌｙ）を用いて、製造元の説明書に従って全ＲＮＡを単離した。ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ ＤＮａｓｅ Ｉ ｓｅｔｓ（Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ－Ｔｅｋ）と共にインキュベートする事で混入したＤＮＡを除去した。相補的ＤＮＡの合成および増幅を、製造元の推奨に従って、ｉＴａｑ（商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｂｅｓ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）を使用し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７０００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）システムで実行した。標的遺伝子の発現を、参照遺伝子ＧＡＰＤＨの発現で正規化した。
データは対照に対する平均倍率変化（ｍｅａｎ ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）で表される。
【0122】
３．３．統計解析
データは、平均＋／－ＳＤ（ＳＤ：標準偏差）で示した。統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ６．０ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＵＳＡ）を使用して行った。比較は、両側スチューデントのｔ検定（ｔｗｏ－ｔａｉｌｅｄ ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ ｔｅｓｔ）を使用して行った。その差は、ｐ＜０．０５で有意とした（図には以下のキーを示す：＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
データは、平均＋／－ＳＤ（ＳＤ：標準偏差）で示した。統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ６．０ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＵＳＡ）を使用して行った。比較は、両側スチューデントのｔ検定（ｔｗｏ－ｔａｉｌｅｄ ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ ｔｅｓｔ）を使用して行った。その差は、ｐ＜０．０５で有意とした（図には以下のキーを示す：＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【0123】
４．結果
４．１．ラクチカゼイバチルス属のプロバイオティック株がｉｎ ｖｉｔｒｏで抗ウイルス免疫応答を増加させる。
ラクチカゼイバチルス属のプロバイオティック株の抗ウイルス免疫調節効果を、Ｃａｃｏ－２ヒト腸上皮細胞を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。
４．１．ラクチカゼイバチルス属のプロバイオティック株がｉｎ ｖｉｔｒｏで抗ウイルス免疫応答を増加させる。
ラクチカゼイバチルス属のプロバイオティック株の抗ウイルス免疫調節効果を、Ｃａｃｏ－２ヒト腸上皮細胞を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。
【0124】
図２Ａ－２Ｃに示すように、本発明のプロバイオティックな菌株、例えばラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）を用いた処置は、抗ウイルス免疫応答に関与するいくつかの遺伝子の発現プロファイルにおいて顕著な変化を誘導した。
【0125】
Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）株によって、抗ウイルス性サイトカインであるインターフェロンアルファ（ＩＦＮ－アルファ１）のレベルは顕著に向上し、インターフェロンベータ（ＩＦＮ－ベータ１）の上方制御の傾向が見られた（図２Ａ）。
【0126】
さらに、Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、ＲＮＡウイルスの検出に関与するパターン認識受容体ＴＬＲ７、ウイルスＲＮＡの分子センサーであるＭＤＡ５をコードする遺伝子であるＩＦＩＨ１、ならびに応答の抗ウイルスシグナル伝達経路に参加するＩＲＦ３、ＩＲＦ７およびＭＡＶＳの発現を顕著に増加させた（図２Ｂおよび２Ｃ）。
【0127】
抗ウイルス免疫増強活性のこれらの結果に基づいて、Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）をさらなる試験のために選択した。
【0128】
４．２．ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ラクトバチルス・パラカゼイのプロバイオティック株のＳＡＲ－ＣｏＶ－２複製の阻害効果
いくつかのプロバイオティック株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性を評価するために、Ｃａｃｏ－２細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染アッセイを行った。
いくつかのプロバイオティック株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性を評価するために、Ｃａｃｏ－２細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染アッセイを行った。
【0129】
ウイルス感染の前に細胞をプロバイオティック株で３時間前処置し、その後ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に１時間感染させた（図１Ｂ）。回収した細胞から得た全ＲＮＡから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製およびアセンブリに決定的なＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）およびＥ遺伝子（ＣｏＶＥ）をコードするウイルス特異的遺伝子の発現レベルを解析した。
【0130】
Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）を用いて処置したＣａｃｏ－２細胞において、両者の遺伝子（ＲｄＲｐおよびＣｏＶＥ）の発現の顕著な減少が観察され（図４Ａ）、これはプロバイオティック株による前処置が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＳＡＲ－ＣｏＶ－２の複製を阻害し得る事を示唆する。
【0131】
さらに、回収した上清からＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の力価もまた評価した：Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）による前処置は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を４５．８％阻害すると決定され、および広い特異性を持つ抗ウイルス薬であるレムデシビル（Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）と比較した（図３Ａ、値は阻害として示した、および図３Ｂ、値は有効性として示した）。
【0132】
４．３．本発明の菌株による前処置はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に起因する炎症応答をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて防御する。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって炎症誘発性および線維化促進性サイトカインが増加し、および重症例では炎症誘発性サイトカインの過剰産生によって患者の予後が顕著に悪化し得る事が知られている。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって炎症誘発性および線維化促進性サイトカインが増加し、および重症例では炎症誘発性サイトカインの過剰産生によって患者の予後が顕著に悪化し得る事が知られている。
【0133】
プロバイオティック株による前処置がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に起因する炎症応答をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて防御し得るのかを決定するために、Ｌ．パラカゼイ株で前処置した、または処置しない、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染Ｃａｃｏ－２細胞の炎症性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの発現プロファイルを試験した（図４）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染後、測定したサイトカイン全ての転写レベルは上方制御する傾向にあった（データは示していない）。
【0134】
特に、感染したＣａｃｏ－２細胞への、Ｌ．パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）株による前処置は、対照およびラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）と比較して、ＩＬ６、ＩＬ８およびＴＳＬＰ１遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを顕著に減少させ、およびＩＬ１０遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを増加させた（図４Ａ－４Ｃ）。
【0135】
さらに、感染したＣａｃｏ－２細胞への、Ｂ ビフィダムＭＩＭＢｂ２３ｓｇ（＝ＢｂｆＩＢＳ０１）ＤＳＭ ３２７０８による前処置が、対照およびラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）と比較して、ＩＬ６、ＩＬ８およびＴＳＬＰ１遺伝子のｍＲＮＡ発現レベル、ならびにＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）および遺伝子Ｅ（ＣｏＶＥ）をコードするウイルス特異的遺伝子の発現レベルを顕著に減少させる事もまた観察されるべきである（図４Ａ－４Ｃ）。
【0136】
４．４．本発明の菌株による同時処置は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に起因する炎症応答をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて防御する。
段落４．３において報告したものと同様の結果が、Ｃａｃｏ－２細胞の同時処置による研究において得られた（図１Ｃおよび図５Ａ－Ｂ）。
段落４．３において報告したものと同様の結果が、Ｃａｃｏ－２細胞の同時処置による研究において得られた（図１Ｃおよび図５Ａ－Ｂ）。
【0137】
５．結論
得られた結果は、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する本発明の菌株、好ましくは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）が抗ウイルス応答および抗炎症応答を正に調節できる事を示し、よってＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗ウイルス療法における有益なアジュバントである。
得られた結果は、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する本発明の菌株、好ましくは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）が抗ウイルス応答および抗炎症応答を正に調節できる事を示し、よってＳＡＲＳ－ＣｏＶ２抗ウイルス療法における有益なアジュバントである。
【0138】
特に、本研究のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、本発明の組成物を使用することによる抗ウイルス免疫系増強作用および、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を約５０％妨げるその能力の両者について示す。
【0139】
試験したプロバイオティックな菌株の中でも、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、ＩＦＮおよび抗ウイルス応答シグナル伝達経路に関与する遺伝子、例えばＴＬＲ７、ＩＦＩＨ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７およびＭＡＶＳなど、の発現を誘導し得る抗ウイルス免疫調節作用の点で、最も有望である事が証明された。
【0140】
さらに、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する菌株、好ましくは、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおける予防的処置または同時処置は、炎症誘発性サイトカインＩＬ－６、ＩＬ８およびＴＳＬＰ１の転写レベルが対照と比較して減少する事を考慮すると、Ｃａｃｏ－２細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に起因する炎症応答を抑制した。
【0141】
よって、ラクトバチルス・パラカゼイ種に属する本発明の菌株、好ましくはラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）、またはその組成物の予防的な使用は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって誘導される過剰な炎症応答の緩和に寄与する。
【0142】
文献において知られるように、菌株ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、大人および子供の両者において胃腸の通過を生き残る事が示されているプロバイオティック株である。
【0143】
本研究において、菌株ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）は、ラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株と比較して、つまり、文献においてより広く研究され且つ使用されており、免疫調節特性を発揮することが報告されているプロバイオティクスに比して、より向上した活性を示した。
【0144】
本研究において観察されたラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）の抗ウイルス活性を支持するメカニズムは不明だが、この細菌細胞を覆うラムノースに富んだヘテロな菌体外多糖（ＥＰＳ）分子がラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）と宿主細胞間の特有のクロストークに寄与するものと推測されている。
【0145】
さらに、ラクトバチルス・パラカゼイＤＧ（登録商標）（ＣＮＣＭ Ｉ－１５７２）、ラクトバチルス・パラカゼイＬＰＣ－Ｓ０１（ＤＳＭ ２６７６０）の組合せは、ラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株に比べて抗ウイルス免疫応答をより大きな程度に正に調節する事が観察され、さらに、ウイルスの複製を減少させ、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスによって誘導される炎症誘発性応答を調節する作用を示し、この場合においてもラクトバチルス・ラムノーススＧＧ（ＡＴＣＣ ５３１０３）株に比べてより大きな程度を示した。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4-1】
【図4-2】
【図5-1】
【図5-2】
【国際調査報告】