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特表2023-517330破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-25
(54)【発明の名称】破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与
(51)【国際特許分類】
A61K 39/08 20060101AFI20230418BHJP
A61K 39/05 20060101ALI20230418BHJP
A61K 39/10 20060101ALI20230418BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20230418BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20230418BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20230418BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230418BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20230418BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20230418BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20230418BHJP
【ＦＩ】
A61K39/08
A61K39/05
A61K39/10
A61K39/39
A61K31/7088
A61K48/00
A61P43/00 121
A61P37/04
A61P31/04
A61K39/00 H
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022554378
(86)(22)【出願日】2021-03-09
(85)【翻訳文提出日】2022-11-04
(86)【国際出願番号】 US2021021532
(87)【国際公開番号】W WO2021183533
(87)【国際公開日】2021-09-16
(31)【優先権主張番号】202011010025
(32)【優先日】2020-03-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(31)【優先権主張番号】202011055399
(32)【優先日】2020-12-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522354344
【氏名又は名称】ダイナヴァックス テクノロジーズ コーポレイション
(71)【出願人】
【識別番号】519067909
【氏名又は名称】セラム インスティテュート オブ インディア プライベート リミティド
(74)【代理人】
【識別番号】100149076
【弁理士】
【氏名又は名称】梅田 慎介
(74)【代理人】
【識別番号】100119183
【弁理士】
【氏名又は名称】松任谷 優子
(74)【代理人】
【識別番号】100173185
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 裕
(74)【代理人】
【識別番号】100162503
【弁理士】
【氏名又は名称】今野 智介
(74)【代理人】
【識別番号】100144794
【弁理士】
【氏名又は名称】大木 信人
(74)【代理人】
【識別番号】100204582
【弁理士】
【氏名又は名称】大栗 由美
(72)【発明者】
【氏名】キャンベル，ジョン ディ．
(72)【発明者】
【氏名】コフマン，ロバート エル．
(72)【発明者】
【氏名】ハイアー，ランダル エヌ．
(72)【発明者】
【氏名】ジャンセン，ロバート エス．
(72)【発明者】
【氏名】ノヴァク，デイヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】ゴルケ，マルティン
(72)【発明者】
【氏名】アーバン，マウリーン
(72)【発明者】
【氏名】ガイロラ，スニル
(72)【発明者】
【氏名】シャリグラム，ウメシュ
(72)【発明者】
【氏名】ガウタム，マニシュ
(72)【発明者】
【氏名】ラオ，ハリシュ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB09
4C084ZB35
4C084ZC75
4C085AA03
4C085BA10
4C085BA12
4C085BA17
4C085BA41
4C085BB11
4C085EE03
4C085EE05
4C085FF02
4C085GG03
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA03
4C086MA04
4C086MA66
4C086NA05
4C086ZB09
4C086ZB35
4C086ZC75
(57)【要約】
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含むオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含み得る。免疫原性組成物は、それを必要とする個体における破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与に好適である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、前記Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与すること
を含み、
前記ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
前記ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、
前記Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
前記Ｔｄａｐ抗原および前記オリゴヌクレオチドが、前記Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、前記免疫原性組成物中に存在する、
方法。
【請求項2】
オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、前記改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、任意選択で、オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含む、またはすべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、請求項３に記載の方法。
【請求項7】
オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、もしくは約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含むか、または０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ、約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、もしくは約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含む、または０．５ｍｌの用量の前記免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項12】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、前記不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項16】
ヒト対象が、少なくとも１０歳またはそれ以上の年齢である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
ヒト対象が、過去３年以内に小児ワクチンも追加免疫ワクチンも受けておらず、前記小児ワクチンが、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含み、
前記追加免疫ワクチンが、破傷風およびジフテリア（Ｔｄ）抗原、または破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を含む、
請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
ヒト対象が、１０～１８歳の年齢である、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
ヒト対象が、１９歳もしくはそれ以上の年齢であるか、またはヒト対象が、１９～６４歳の年齢であるか、または６５歳もしくはそれ以上の年齢である、請求項１７に記載の方法。
【請求項20】
Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、投与の１ヶ月後までにＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在し、前記免疫応答が、少なくとも０．４国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）の濃度の抗ＴＴ抗体および抗ＤＴ抗体、ならびに
投与前のレベルまたは定量限界レベルよりも国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）で少なくとも２倍高い濃度の抗ＰＴ抗体、抗ＦＨＡ抗体、および抗ＰＲＮ抗体
を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項21】
免疫応答が、（ｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも１．０ＩＵ／ｍｌの抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方、ならびに／または
（ｉｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも４倍高い抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含み、
前記抗体濃度が、国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）での投与前のレベルまたは定量限界レベルのいずれかと比べたものである、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
免疫応答が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方を含むか、または抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前の少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型破傷風および／またはジフテリア免疫応答を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項23】
免疫応答が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含むか、または抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前のレベルの少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型百日咳免疫応答を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項24】
免疫原性組成物が、満足できる安全性プロファイルを有する、請求項２０に記載の方法。
【請求項25】
破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための免疫原性組成物であって、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含み、前記ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
前記Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
前記Ｔｄａｐ抗原および前記オリゴヌクレオチドが、ヒト対象において前記Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、前記免疫原性組成物中に存在する、
免疫原性組成物。
【請求項26】
オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
オリゴヌクレオチドが、５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）の配列を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項28】
オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、前記改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項29】
オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであるか、またはオリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項30】
オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含む、またはすべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項31】
オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項32】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、もしくは約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含むか、または０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ、約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、もしくは約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項33】
アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項34】
アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項35】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含むか、または０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項36】
０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項37】
免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項38】
少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項39】
少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項40】
請求項２５から３９のいずれか一項に記載の組成物と、ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための組成物の投与のための説明書とを含む、キット。
【請求項41】
ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントとを含む、第１の組成物と、ｉｉ）ＴＬＲ９アゴニストを含む第２の組成物と、
ｉｉｉ）前記第１の組成物を前記第２の組成物と混合して、請求項２５から３９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を調製するための説明書と、
を含む、キット。
【請求項42】
ｉｖ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための免疫原性組成物の投与のためのさらなる説明書のセットをさらに含む、請求項４１に記載のキット。
【請求項43】
免疫原性組成物の筋肉内注射のためのシリンジおよびニードルをさらに含む、請求項４２に記載のキット。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年３月９日に出願されたインド仮出願第２０２０１１０１００２５号および２０２０年１２月１９日に出願されたインド仮出願第２０２０１１０５５３９９号に対する優先権およびその利益を主張し、これらのそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年３月９日に出願されたインド仮出願第２０２０１１０１００２５号および２０２０年１２月１９日に出願されたインド仮出願第２０２０１１０５５３９９号に対する優先権およびその利益を主張し、これらのそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
ＡＳＣＩＩテキストファイルとしての配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：３７７８８２００６８４２ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年３月８日、サイズ：２ＫＢ）。
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：３７７８８２００６８４２ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年３月８日、サイズ：２ＫＢ）。
【0003】
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含むオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含み得る。免疫原性組成物は、それを必要とする個体における破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与に好適である。
【背景技術】
【0004】
百日咳は、高度に感染性の疾患であり、高いワクチン接種率を維持している国々においてさえも、重要な世界的公衆衛生上の問題のままである。幼児期の免疫付与プログラムが確立されているにもかかわらず、百日咳は、主として小児期以降の免疫の減少、ならびに青年および成人から無防備な幼児への疾患伝播に起因して、流布し続けている。ジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）の混合ワクチンの全細胞性百日咳成分に関する安全上の懸念により、１９９０年代に、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）の混合ワクチンへの切り替えが進められた。しかしながら、小児ＤＴａＰワクチンレジメンが完了している個体における百日咳に対する免疫の低下により、２０００年代中期から百日咳の発症の増加が生じている（Liang et al.,MMWR Recomm Rep,67(2):1-43,2018）。同様に、破傷風およびジフテリア抗毒素のレベルは、小児ＤＴａＰワクチンレジメンを完了している個体において、時間とともに低下する。
【0005】
Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ（ＡＣＩＰ）は、現在、１０歳を上回る年齢の個体への破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの単回追加免疫用量、ならびに１０年間隔または創傷管理の必要性に応じてＴｄａｐワクチンまたは破傷風およびジフテリア（Ｔｄ）ワクチンのいずれかの追加免疫用量の投与を推奨している（Ｌｉａｎｇら、上記、２０１８）。Ｔｄａｐの２回の用量は、安全であり、免疫原性であるが、抗百日咳抗体力価は、急速に低下し、一般に、２～３年以内に百日咳感染に対する保護の喪失をもたらすことが、臨床試験により示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
したがって、現在のワクチンレジメンにおける全細胞性から非細胞性への百日咳抗原の切り替えの結果として観察される免疫の低下に対処するのを補助するために、より高い力価およびより長期間続く百日咳抗原に対する抗体応答を提供するための改善された追加免疫ワクチンが、必要とされている。満足できる安全性プロファイルを有し、破傷風およびジフテリアトキソイド免疫原性に関して現在のワクチンに劣ることのない、改善されたＴｄａｐ追加免疫ワクチンが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含むオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含み得る。免疫原性組成物は、それを必要とする個体における破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与に好適である。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1A】図１Ａ～Ｃは、Ｔｄａｐ抗原での再刺激後のインビトロにおける脾臓細胞によるサイトカイン分泌のレベルを示す。ＩＦＮ－γ（図１Ａ）、ＩＬ－５（図１Ｂ）、およびＩＬ－１７（図１Ｃ）のレベルが、示されている。
【図1B】同上
【図1C】同上
【図2A】図２Ａ～Ｂは、ＴｄａｐワクチンにＣｐＧ １０１８を含めることにより、ワクチン接種したマウスの鼻腔内チャレンジの３日後の肺および気管におけるＢ．パータシス負荷量に実質的な低減が生じることを示す。
【図2B】同上
【図3A】図３Ａ～Ｃは、ＴｄａｐワクチンにＣｐＧ １０１８を含めることにより、鼻腔内チャレンジ前の血清抗体力価に増加が生じることを示す。図３Ａは、Ｂ．パータシス反応性力価を示し、図３Ｂは、ＰＴ反応性力価を示し、図３Ｃは、ＦＨＡ反応性力価を示す。
【図3B】同上
【図3C】同上
【発明を実施するための形態】
【0009】
一般的な技法および定義
本開示の実施には、別途示されない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技法が用いられることになり、これらは、当業者の技能の範囲内である。
本開示の実施には、別途示されない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技法が用いられることになり、これらは、当業者の技能の範囲内である。
【0010】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、別途示されない限り、複数形の参照物を含む。例えば、「１つの」賦形剤は、１つまたは複数の賦形剤を含む。
【0011】
「含む」という語句は、本明細書において使用される場合、オープンエンドであり、かかる実施形態が追加の要素を含んでもよいことを示す。対照的に、「からなる」という語句は、クローズドであり、かかる実施形態が、追加の要素を含まないことを示す（微量の不純物を除く）。「から本質的になる」という語句は、部分的にクローズドであり、かかる実施形態が、かかる実施形態の基本的な特徴を実質的に変化させない要素をさらに含んでもよいことを示す。
【0012】
「約」という用語は、値を参照して本明細書に使用される場合、その値の９０％から１１０％までを包含する（例えば、約３０００μｇのＣｐＧ １０１８は、２７００μｇ～３３００μｇのＣｐＧ １０１８を指す）。
【0013】
本明細書において互換可能に使用されるように、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、および二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、改変されたオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオシド、またはそれらの組合せを含む。オリゴヌクレオチドは、線状もしくは環状で構成されてもよく、またはオリゴヌクレオチドは、線状および環状の両方のセグメントを含み得る。オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドのポリマーが、一般にはホスホジエステル連結によって結合されたものであるが、代替的な連結、例えば、ホスホロチオエートエステルもまた、オリゴヌクレオチドにおいて使用され得る。ヌクレオシドは、プリン（アデニン（Ａ）もしくはグアニン（Ｇ）、またはこれらの誘導体）、またはピリミジン（チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、もしくはウラシル（Ｕ）、またはこれらの誘導体）塩基が糖に結合したものからなる。ＤＮＡにおける４つのヌクレオシド単位（または塩基）は、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、チミジン、およびデオキシシチジンと称される。ヌクレオチドは、ヌクレオシドのリン酸エステルである。
【0014】
「ＣｐＧ」、「ＣｐＧモチーフ」、および「シトシン－ホスフェート－グアノシン」という用語は、本明細書において使用される場合、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシンジヌクレオチドを指し、これは、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、インビトロ、インビボ、および／またはエキソビボにおける測定可能な免疫応答に寄与する。測定可能な免疫応答の例としては、抗原特異的抗体産生、サイトカインの分泌、リンパ球集団、例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋ Ｔリンパ球、ＣＤ８＋ Ｔリンパ球、Ｂリンパ球などの活性化または拡大が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、Ｔｈ１型応答を優先的に活性化する。
【0015】
物質の「有効量」または「十分量」は、臨床結果を含め、有益または所望される結果を達成するのに十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用される状況に依存する。免疫原性組成物を投与する状況において、有効量は、免疫応答（好ましくは、抗原に対する血清保護的レベルの抗体）を刺激するのに十分な抗原およびＴＬＲ９アゴニストを含む。
【0016】
「個体」および「対象」という用語は、哺乳動物を指す。「哺乳動物」としては、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル）、家畜動物、競技動物、げっ歯動物（例えば、マウスおよびラット）、ならびに愛玩動物（例えば、イヌおよびネコ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0017】
「用量」という用語は、免疫原性組成物を参照して本明細書において使用される場合、任意の一時点において、対象によって摂取される（それに投与される、またはそれによって受容される）、免疫原性組成物の測定された部分を指す。
【0018】
「単離された」および「精製された」という用語は、本明細書において使用される場合、ある材料が天然に関連している少なくとも１つの成分から取り出されている（例えば、その本来の環境から取り出されている）材料を指す。「単離された」という用語は、組換えタンパク質を参照して使用される場合、そのタンパク質を産生した宿主細胞の培養培地から取り出されている、タンパク質を指す。
【0019】
応答またはパラメーターの「刺激」には、その応答またはパラメーターを、目的のパラメーターを除いてその他は同じ条件と比較して、または代替的には別の条件と比較して、誘起および／または増強することが含まれる（例えば、ＴＬＲアゴニストの不在下と比較して、ＴＬＲアゴニストの存在下におけるＴＬＲシグナル伝達の増加）。例えば、免疫応答の「刺激」は、応答の増加を意味する。測定されるパラメーターに応じて、増加は、５倍～５００倍もしくはそれ以上、または５倍、１０倍、５０倍、もしくは１００倍から、５００倍、１，０００倍、５，０００倍、もしくは１０，０００倍までであり得る。
【0020】
本明細書において使用される場合、「免疫付与」という用語は、抗原に対する哺乳動物対象の反応を増加させ、したがって、感染に抵抗するかまたはそれを克服するその能力を向上させる、プロセスを指す。
【0021】
「ワクチン接種」という用語は、本明細書において使用される場合、哺乳動物対象の身体へのワクチンの導入を指す。
【0022】
「アジュバント」は、抗原を含む組成物に添加された場合に、曝露時に哺乳動物レシピエントにおける抗原に対する免疫応答を非特異的に増強または強化する、物質を指す。
【0023】
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含むオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物に関する。免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含み得る。免疫原性組成物は、それを必要とする個体における破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与に好適である。
【0024】
Ｉ．免疫原性組成物およびキット
本開示は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための免疫原性組成物であって、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含み、ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧまたはシトシン－ホスフェート－グアノシンとも称される）モチーフを含む、８～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、組成物に関する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。
本開示は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための免疫原性組成物であって、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含み、ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧまたはシトシン－ホスフェート－グアノシンとも称される）モチーフを含む、８～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、組成物に関する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。
【0025】
Ａ．Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、樹状細胞および他の自然免疫細胞に発現され、とりわけ、侵襲する病原体の存在に対する応答を刺激するためのもっとも重要な受容体である。ヒトは、構造が類似しているが、ウイルスまたは細菌の異なる部分を認識する、複数種類のＴＬＲを有する。特定のＴＬＲを活性化することにより、適応応答を増強させるために利用することができる特定の種類の自然免疫応答を刺激および制御することが可能である。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、樹状細胞および他の自然免疫細胞に発現され、とりわけ、侵襲する病原体の存在に対する応答を刺激するためのもっとも重要な受容体である。ヒトは、構造が類似しているが、ウイルスまたは細菌の異なる部分を認識する、複数種類のＴＬＲを有する。特定のＴＬＲを活性化することにより、適応応答を増強させるために利用することができる特定の種類の自然免疫応答を刺激および制御することが可能である。
【0026】
ＴＬＲ９（ＣＤ２８９）は、微生物ＤＮＡにおいて見出される非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを認識し、これは、合成のＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を使用して模倣することができる。ＣｐＧ－ＯＤＮは、抗体産生を増強させ、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）細胞応答を刺激することが知られている（Coffman et al., Immunity,33:492-503,2010）。構造および生物学的機能に基づいて、ＣｐＧ－ＯＤＮは、３つの一般的なクラスに分割されている：ＣｐＧ－Ａ、ＣｐＧ－Ｂ、およびＣｐＧ－Ｃ（Campbell, Methods Mol Biol, 1494:15-27,2017）。Ｂ細胞活性化の程度は、クラス間で変動し、ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮは弱い、ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮは良好な、およびＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮは強力なＢ細胞活性化因子である。本開示のオリゴヌクレオチドＴＬＲ９アゴニストは、好ましくは、良好なＢ細胞活性化因子（ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮ）であるか、またはより好ましくは、強力な（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）Ｂ細胞活性化因子である。
【0027】
最適なオリゴヌクレオチドＴＬＲ９アゴニストは、一般式：５’－プリン－プリン－ＣＧ－ピリミジン－ピリミジン－３’、または５’－プリン－プリン－ＣＧ－ピリミジン－ピリミジン－ＣＧ－３’（米国特許第６，５８９，９４０号）に従う回文構造配列を含むことが多い。ＴＬＲ９アゴニズムは、ある特定の非回文構造ＣｐＧ濃縮型ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドでも観察されるが、ヌクレオチド配列における変化によって影響を受け得る。加えて、ＴＬＲ９アゴニズムは、ＣｐＧジヌクレオチド内のシトシンのメチル化によって破壊される。したがって、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧ－３’を含む、８～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、８ヌクレオチドを上回る、９ヌクレオチドを上回る、１０ヌクレオチドを上回る、１１ヌクレオチドを上回る、１２ヌクレオチドを上回る、１３ヌクレオチドを上回る、１４ヌクレオチドを上回る、１５ヌクレオチドを上回る、１６ヌクレオチドを上回る、１７ヌクレオチドを上回る、１８ヌクレオチドを上回る、１９ヌクレオチドを上回る、または２０ヌクレオチドを上回る長さであり、オリゴヌクレオチドは、３５ヌクレオチドを下回る、３４ヌクレオチドを下回る、３３ヌクレオチドを下回る、３２ヌクレオチドを下回る、３１ヌクレオチドを下回る、３０ヌクレオチドを下回る、２９ヌクレオチドを下回る、２８ヌクレオチドを下回る、２７ヌクレオチドを下回る、２６ヌクレオチドを下回る、２５ヌクレオチドを下回る、または２４ヌクレオチドを下回る長さである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０ヌクレオチドを上回る、１１ヌクレオチドを上回る、１２ヌクレオチドを上回る、１３ヌクレオチドを上回る、１４ヌクレオチドを上回る、１５ヌクレオチドを上回る、１６ヌクレオチドを上回る、１７ヌクレオチドを上回る、１８ヌクレオチドを上回る、１９ヌクレオチドを上回る、または２０ヌクレオチドを上回る長さであり、オリゴヌクレオチドは、３５ヌクレオチドを下回る、３４ヌクレオチドを下回る、３３ヌクレオチドを下回る、３２ヌクレオチドを下回る、３１ヌクレオチドを下回る、３０ヌクレオチドを下回る、２９ヌクレオチドを下回る、２８ヌクレオチドを下回る、２７ヌクレオチドを下回る、２６ヌクレオチドを下回る、２５ヌクレオチドを下回る、または２４ヌクレオチドを下回る長さである。
【0028】
Ｄｙｎａｖａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）の研究者らは、２２量体のホスホロチオエートに連結されたオリゴデオキシヌクレオチド、ＣｐＧ １０１８を特定し、これは、種にまたがって共投与される抗原に対する免疫応答を実質的に増強することができる特定の配列を含む（Campbell,Methods Mol Biol,1494:15-27,2017）。ＣｐＧ １０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’、配列番号１として記載される）を、インビトロおよびインビボでの免疫刺激活性についてオリゴヌクレオチドの広範なパネルをスクリーニングした後に、選択した。ＣｐＧ １０１８は、マウス、ウサギ、イヌ、ヒヒ、カニクイザル、およびヒトにおいて活性であるＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮである。したがって、いくつかの好ましい実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、配列番号１の配列を含むオリゴヌクレオチドである。
【0029】
例示的なオリゴヌクレオチドＴＬＲ９アゴニストであるＣｐＧ １０１８は、ＣｐＧ－ＯＤＮであるが、本開示は、完全ＤＮＡ分子に制限されるものではない。すなわち、いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧおよび回文構造配列が、デオキシリボ核酸であり、これらの領域の外側の１つまたは複数の核酸が、リボ核酸である、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラ分子である。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、線状である。他の実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、環状であるか、またはヘアピンループを含む。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、一本鎖であってもよく、または二本鎖であってもよい。
【0030】
いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、改変を含み得る。改変としては、３’ＯＨまたは５’ＯＨ基の改変、ヌクレオチド塩基の改変、糖成分の改変、およびリン酸基の改変が挙げられるが、これらに限定されない。改変された塩基は、改変された塩基が、ワトソン－クリック塩基対合を通じて、その天然の相補体に対する同じ特異性を維持する限り（例えば、回文構造部分は、依然として、自己相補性である）、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの回文構造配列に含まれてもよい。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、非カノニカル塩基を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、改変されたヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態において、改変されたヌクレオシドは、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含むオリゴヌクレオチドであり、ここで、Ｇ１は、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここで、Ｇ１は、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘは、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む。
【0031】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、リン酸基の改変を含み得る。例えば、ホスホジエステル連結に加えて、リン酸改変としては、メチルホスフェート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート（架橋または非架橋）、ホスホトリエステル、およびホスホロジチオエートが挙げられるがこれらに限定されず、任意の組合せで使用され得る。他の非ホスフェート連結もまた、使用され得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート骨格のみを含む。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル骨格のみを含む。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスフェート骨格においてホスフェート連結の組合せ、例えば、ホスホジエステル連結およびホスホロチオエート連結の組合せを含む。ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル骨格を有するものよりも免疫原性が高くあり得、宿主に注射した後の分解に対する耐性が高いと考えられる（Braun et al., J Immunol,141:2084-2089,1988およびLatimer et al., Mol Immunol,32:1057-1064,1995）。本開示のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つのヌクレオチド間ホスホロチオエートエステル連結を含む。いくつかの実施形態において、複数のＣｐＧオリゴヌクレオチド分子が、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物中に存在する場合、ホスホロチオエートエステル連結の両方の立体異性体が、複数のＣｐＧオリゴヌクレオチド分子に存在する。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間連結のすべてが、ホスホロチオエート連結であるか、または換言すると、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート骨格を有する。
【0032】
典型的には０．５ｍｌの用量である免疫原性組成物の単位用量は、約３７５μｇ～約６０００μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは、約７５０μｇ～約３０００μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態において、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物は、約２５０μｇを上回る、５００μｇを上回る、７５０μｇを上回る、１０００μｇを上回る、または１２５０μｇを上回るＣｐＧオリゴヌクレオチド、かつ約６０００μｇを下回る、５０００μｇを下回る、４０００μｇを下回る、３０００μｇを下回る、または２０００μｇを下回るＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物は、約３７５、７５０、１５００、３０００、または６０００μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物は、約７５０μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物は、約１５００μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物は、約３０００μｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
【0033】
本明細書に記載されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、別途示されない限り、それらの薬学的に許容される塩の形態にある。例示的な塩基性塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム、リチウム、およびカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩、亜鉛塩、有機塩基（例えば、有機アミン）を用いた塩、例えば、Ｎ－Ｍｅ－Ｄ－グルカミン、Ｎ－［１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド、コリン、トロメタミン、ジシクロヘキシルアミン、ｔ－ブチルアミン、ならびにアミノ酸、例えば、アルギニン、リジンなどを用いた塩が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、アンモニウム、ナトリウム、リチウム、またはカリウム塩の形態にある。１つの好ましい実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ナトリウム塩の形態にある。
【0034】
Ｂ．破傷風、ジフテリア、および百日咳抗原
破傷風は、急性の、致命的となることも多い疾患であり、クロストリジウム・テタニという細菌によって産生される神経毒素によって引き起こされる神経筋機能不全を特徴とする。破傷風には、細菌の胞子への曝露を通じて罹患するが、これは、土壌、粉塵、および肥料中に一般に見出される。破傷風神経毒素に対する免疫は、自然に獲得されることは珍しいが、疾患からの保護は、破傷風トキソイド（ＴＴ）含有ワクチンの投与によって付与することができる（Liang et al., MMWR Recomm Rep,67(2):1-43,2018）。中和アッセイにおいて測定される少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌの血清破傷風抗毒素レベルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定された少なくとも０．１ＩＵ／ｍｌの血清破傷風抗毒素レベルと同様に、保護的であると考えられる。本開示の免疫原性組成物は、Ｃ．テタニによって産生される破傷風毒素の化学的無毒化によって得られるＴＴを含む。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、約５～１０凝集限界単位（Ｌｆ）のＴＴ、好ましくは、約５．０ＬｆのＴＴを含む。
破傷風は、急性の、致命的となることも多い疾患であり、クロストリジウム・テタニという細菌によって産生される神経毒素によって引き起こされる神経筋機能不全を特徴とする。破傷風には、細菌の胞子への曝露を通じて罹患するが、これは、土壌、粉塵、および肥料中に一般に見出される。破傷風神経毒素に対する免疫は、自然に獲得されることは珍しいが、疾患からの保護は、破傷風トキソイド（ＴＴ）含有ワクチンの投与によって付与することができる（Liang et al., MMWR Recomm Rep,67(2):1-43,2018）。中和アッセイにおいて測定される少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌの血清破傷風抗毒素レベルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定された少なくとも０．１ＩＵ／ｍｌの血清破傷風抗毒素レベルと同様に、保護的であると考えられる。本開示の免疫原性組成物は、Ｃ．テタニによって産生される破傷風毒素の化学的無毒化によって得られるＴＴを含む。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、約５～１０凝集限界単位（Ｌｆ）のＴＴ、好ましくは、約５．０ＬｆのＴＴを含む。
【0035】
ジフテリアは、コリネバクテリウム・ジフテリエという細菌の毒素産生株によって引き起こされる急性疾患である。ジフテリアは、主として、Ｃ．ジフテリエに感染した個体からのエアロゾル化された細菌との直接的な接触またはその吸入により、罹患する。疾患は、咽頭痛および発熱を特徴とし、重症症例では、気道閉塞を引き起こし得る。加えて、ジフテリア毒素の全身への拡がりにより、心臓および神経学的併発症を引き起こし得る。ジフテリア感染は、保護免疫を付与しない場合がある。しかしながら、疾患からの保護は、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）含有ワクチンにより付与することができる（Liang et al.,MMWR Recomm Rep,67(2):1-43,2018）。中和アッセイにおいて測定される少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌの血清ジフテリア抗毒素レベルは、いくらかの保護を提供し得、一方でＥＬＩＳＡによって測定される少なくとも０．１ＩＵ／ｍｌの血清ジフテリア抗毒素レベルは、保護的であると考えられ、少なくとも１．０ＩＵ／ｍｌのジフテリア抗毒素レベルは、長期保護と関連付けられる。本開示の免疫原性組成物は、Ｃ．ジフテリエによって産生されるジフテリア毒素の化学的無毒化によって得られるＤＴを含む。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、２．０～２．５ＬｆのＤＴ、好ましくは、約２．５ＬｆのＤＴという低減された量のＤＴを含む。
【0036】
百日咳（ｗｈｏｏｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ）としても知られる百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、ボルデテラ・パータシスという細菌によって引き起こされる急性呼吸器疾患である。百日咳は、Ｂ．パータシスに感染した個体からのエアロゾル化された細菌の吸入を通じて拡がる、伝染性の高い疾患である。疾患の重症度は、感染した対象の年齢に逆相関し、乳児および幼児（例えば、出生から２歳まで）は、入院および死亡につながる重症症状の危険性がもっとも高い。小児ワクチンレジメンの導入により、百日咳の発症は減少しており、抗百日咳抗体の存在と疾患からの保護との間の相関性が、ワクチン有効性研究において観察されている（Liang et al.,MMWR Recomm Rep,67(2):1-43,2018）。しかしながら、百日咳に対する保護の血清学的または臨床検査的相関性は、依然として定義されていない。したがって、新しいワクチンの有効性は、それらの安全性プロファイル、および同様に製造された抗原を使用した既存のＦｅｄｅｒａｌ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）に承認されているワクチンに劣らない免疫原性に基づく。本開示の免疫原性組成物は、いくつかのＢ．パータシス抗原、すなわち、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含む。免疫原性組成物は、１つまたは複数の追加の百日咳抗原、例えば、１つまたは複数の百日咳線毛（ＦＩＭ）２型、百日咳ＦＩＭ３型、および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、低減された量の１つまたは複数の百日咳抗原、例えば、約２．５～８．０μｇのＰＴ、約５．０～８．０μｇのＦＨＡ、および約２．５～３．０μｇのＰＲＮ、好ましくは、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む。
【0037】
Ｃ．追加の成分
本開示の免疫原性組成物は、１つまたは複数の追加の成分、例えば、１つまたは複数の賦形剤、別のアジュバント、および／または追加の抗原を含み得る。
本開示の免疫原性組成物は、１つまたは複数の追加の成分、例えば、１つまたは複数の賦形剤、別のアジュバント、および／または追加の抗原を含み得る。
【0038】
１．賦形剤
本開示の薬学的に許容される賦形剤としては、例えば、溶媒、増量剤、緩衝剤、等張化剤、および保存剤が挙げられる（Pramanick et al., Pharma Times,45:65-77,2013）。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、溶媒、増量剤、緩衝剤、および等張化剤のうちの１つまたは複数としての機能を果たす賦形剤を含み得る（例えば、生理食塩水中の塩化ナトリウムは、水性ビヒクルおよび等張化剤の両方としての機能を果たし得る）。
本開示の薬学的に許容される賦形剤としては、例えば、溶媒、増量剤、緩衝剤、等張化剤、および保存剤が挙げられる（Pramanick et al., Pharma Times,45:65-77,2013）。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、溶媒、増量剤、緩衝剤、および等張化剤のうちの１つまたは複数としての機能を果たす賦形剤を含み得る（例えば、生理食塩水中の塩化ナトリウムは、水性ビヒクルおよび等張化剤の両方としての機能を果たし得る）。
【0039】
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、溶媒として、水性ビヒクルを含む。好適なビヒクルとしては、例えば、滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、およびリンガー溶液が挙げられる。いくつかの実施形態において、組成物は、等張性である。
【0040】
免疫原性組成物は、緩衝剤を含み得る。緩衝剤は、処理、保管、および任意選択で再構成の際の活性薬剤の分解を阻害するようにｐＨを制御する。好適な緩衝剤としては、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、または硫酸塩を含む塩が挙げられる。他の好適な緩衝剤としては、例えば、アミノ酸、例えば、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、およびリジンが挙げられる。緩衝剤は、塩酸または水酸化ナトリウムをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態において、緩衝剤は、組成物のｐＨを、６～９の範囲内に維持する。いくつかの実施形態において、ｐＨは、（下限）６を上回る、７を上回る、または８を上回る。いくつかの実施形態において、ｐＨは、（上限）９を下回る、８を下回る、または７を下回る。すなわち、ｐＨは、約６～９の範囲内であり、下限は上限よりも低い。
【0041】
免疫原性組成物は、等張化剤を含み得る。好適な等張化剤としては、例えば、デキストロース、グリセロール、塩化ナトリウム、グリセリン、およびマンニトールが挙げられる。
【0042】
免疫原性組成物は、増量剤を含み得る。増量剤は、医薬組成物を投与前に凍結乾燥させようとする場合に、特に有用である。いくつかの実施形態において、増量剤は、凍結もしくはスプレー乾燥の間、および／または保管の間、活性薬剤の安定化およびその分解の予防を補助する、保護剤である。好適な増量剤は、糖（単糖、二糖、および多糖）、例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、グルコース、およびラフィノースである。
【0043】
免疫原性組成物は、保存剤を含み得る。好適な保存剤としては、例えば、抗酸化剤および抗菌剤が挙げられる。しかしながら、好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、滅菌条件下において調製され、単回使用容器に入っており、したがって、保存剤を含めることは必要ない。
【0044】
２．追加のアジュバント
アジュバントは、当該技術分野において公知であり、ミョウバン（アルミニウム塩）、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、リポソーム、およびマイクロ粒子、例えば、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）マイクロ粒子が挙げられるが、これらに限定されない（Shah et al.,Methods Mol Biol,1494:1-14,2017）。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムのうちの一方または両方を含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムからなる。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋、好ましくは、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む。
アジュバントは、当該技術分野において公知であり、ミョウバン（アルミニウム塩）、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、リポソーム、およびマイクロ粒子、例えば、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）マイクロ粒子が挙げられるが、これらに限定されない（Shah et al.,Methods Mol Biol,1494:1-14,2017）。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムのうちの一方または両方を含む。いくつかの実施形態において、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムからなる。いくつかの実施形態において、単位用量（例えば、約０．５ｍｌ）の免疫原性組成物は、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋、好ましくは、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む。
【0045】
他の実施形態において、免疫原性組成物は、追加のアジュバントをさらに含む。追加の好適なアジュバントとしては、水中スクアレン型エマルジョン（例えば、ＭＦ５９またはＡＳ０３）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、ポリ－ＩＣまたはポリ－ＩＣＬＣ）、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、細菌性リポ多糖誘導体、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、および／またはサポニン、例えば、ＡＳ０１もしくはＡＳ０２にあるようなＱｕｉｌ ＡもしくはＱＳ－２１）、ＴＬＲ５アゴニスト（細菌性フラジェリン）、ならびにＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニスト（イミダゾキノリン誘導体、例えば、イミキモド、およびレシキモド）が挙げられるが、これらに限定されない（Coffman et al., Immunity,33:492-503,2010）。いくつかの実施形態において、追加のアジュバントは、ＭＰＬおよびミョウバン（例えば、ＡＳ０４）を含む。獣医学的使用および非ヒト動物における抗体の産生については、フロイントアジュバント（完全および不完全の両方）の分裂促進性成分を、使用することができる。
【0046】
３．追加の抗原
本開示の免疫原性組成物は、少なくとも１つの追加の抗原、例えば、別のヒト疾患の素因となる病原体に由来する抗原をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、病原体は、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびヘモフィルス・インフルエンザエＢ型（ＨｉＢ）のうちの１つまたは複数から選択されるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、不活性化ポリオウイルスを含み、これは、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含み得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、肺炎球菌抗原および／または髄膜炎菌抗原を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、ヘモフィルスｂ莢膜多糖類（ポリリボシル－リビトール－ホスフェート）を含み得る。いくつかの実施形態において、ヘモフィルスｂ莢膜多糖類は、破傷風トキソイドまたは髄膜炎菌タンパク質にコンジュゲートされる。
本開示の免疫原性組成物は、少なくとも１つの追加の抗原、例えば、別のヒト疾患の素因となる病原体に由来する抗原をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、病原体は、ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびヘモフィルス・インフルエンザエＢ型（ＨｉＢ）のうちの１つまたは複数から選択されるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、不活性化ポリオウイルスを含み、これは、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含み得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、肺炎球菌抗原および／または髄膜炎菌抗原を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの追加の抗原は、ヘモフィルスｂ莢膜多糖類（ポリリボシル－リビトール－ホスフェート）を含み得る。いくつかの実施形態において、ヘモフィルスｂ莢膜多糖類は、破傷風トキソイドまたは髄膜炎菌タンパク質にコンジュゲートされる。
【0047】
Ｄ．キット
本開示はまた、ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物、ならびにｉｉ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために免疫原性組成物を投与するための説明書のセットを含む、キットも提供する。加えて、本開示は、ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントとを含む、第１の組成物と、ｉｉ）ＴＬＲ９アゴニスト、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、第２の組成物と、ｉｉｉ）第１の組成物を第２の組成物と混合して、免疫原性組成物を調製するための説明書と、任意選択で、ｉｖ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために免疫原性組成物を投与するためのさらなる説明書のセットとを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧ－３’を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む。いくつかの好ましい実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）の配列を含む。
本開示はまた、ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドとを含む、免疫原性組成物、ならびにｉｉ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために免疫原性組成物を投与するための説明書のセットを含む、キットも提供する。加えて、本開示は、ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントとを含む、第１の組成物と、ｉｉ）ＴＬＲ９アゴニスト、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む、第２の組成物と、ｉｉｉ）第１の組成物を第２の組成物と混合して、免疫原性組成物を調製するための説明書と、任意選択で、ｉｖ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために免疫原性組成物を投与するためのさらなる説明書のセットとを含む、キットを提供する。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧ－３’を含む。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む。いくつかの好ましい実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）の配列を含む。
【0048】
キットは、適切に包装された免疫原性組成物を含み得る。例えば、免疫原性組成物が、凍結乾燥粉末である場合、弾性ストッパを通じて流体（例えば、滅菌水、生理食塩水など）を注入することによって粉末を容易に再懸濁させることができるように、通常、弾性ストッパを有するバイアルが使用される。いくつかの実施形態において、キットは、投与のためのデバイス（例えば、シリンジおよびニードル）を含む。免疫原性組成物の使用に関する説明書は、一般に、意図される使用方法のための投薬量、投与のスケジュールおよび経路に関する情報を含む。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のためのものである。
【0049】
ＩＩ．使用の方法
本開示は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与することを含み、ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧまたはシトシン－ホスフェート－グアノシン）モチーフを含む、８～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、方法に関する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。
本開示は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与することを含み、ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧまたはシトシン－ホスフェート－グアノシン）モチーフを含む、８～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、方法に関する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。
【0050】
本開示はまた、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与することを含み、ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、方法に関する。Ｔｄａｐ抗原は、単離された抗原または組換え抗原であり、全破傷風、ジフテリア、または百日咳菌を含まない。いくつかの実施形態において、本方法は、百日咳に曝露されているワクチン接種済みの対象の鼻および／または肺組織の百日咳コロニー形成を低減するのに有効である。
【0051】
Ａ．対象
本開示の免疫原性組成物の意図されるレシピエントは、少なくとも３歳の年齢のヒト対象であり、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含む小児ワクチンの少なくとも２回または３回の投薬を受けていてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、４～６歳の年齢であり、１歳の間に小児ＤＴａＰワクチンの投薬を受けていてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、少なくとも７～１０歳またはそれ以上の年齢であり、不完全または不明な小児ワクチン歴を有していてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、１１～１８歳の年齢である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、１９歳もしくはそれ以上の年齢、１９～６４歳の年齢、または６５歳もしくはそれ以上の年齢である。いくつかの好ましい実施形態において、ヒト対象は、少なくとも１０歳の年齢であり、過去３年、４年、または５年以内に小児ワクチンも追加免疫ワクチンも投薬を受けておらず、ここで、小児ワクチンは、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含み、追加免疫ワクチンは、破傷風およびジフテリアトキソイド（Ｔｄ）抗原、または破傷風、ジフテリアおよび非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を含む。
本開示の免疫原性組成物の意図されるレシピエントは、少なくとも３歳の年齢のヒト対象であり、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含む小児ワクチンの少なくとも２回または３回の投薬を受けていてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、４～６歳の年齢であり、１歳の間に小児ＤＴａＰワクチンの投薬を受けていてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、少なくとも７～１０歳またはそれ以上の年齢であり、不完全または不明な小児ワクチン歴を有していてもよい。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、１１～１８歳の年齢である。いくつかの実施形態において、ヒト対象は、１９歳もしくはそれ以上の年齢、１９～６４歳の年齢、または６５歳もしくはそれ以上の年齢である。いくつかの好ましい実施形態において、ヒト対象は、少なくとも１０歳の年齢であり、過去３年、４年、または５年以内に小児ワクチンも追加免疫ワクチンも投薬を受けておらず、ここで、小児ワクチンは、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含み、追加免疫ワクチンは、破傷風およびジフテリアトキソイド（Ｔｄ）抗原、または破傷風、ジフテリアおよび非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を含む。
【0052】
本開示の免疫原性組成物は、母体の免疫付与を通じて新生児における百日咳を予防するのに好適であることが予測される。具体的には、妊娠の第１三半期における妊娠中の女性への免疫原性組成物の投与は、母体抗体の胎児への受動的伝達をもたらすことが予測される。このようにして、乳児は、小児ワクチンレジメンの開始前に、百日咳からのある程度の保護を受容し得る。また、免疫原性組成物を医療従事者に投与することは、医療従事者自身の利益のため、および医療従事者がケアする個体への百日咳の伝播の危険性を減少させるための両方に関して、有利であり得る。
【0053】
Ｂ．用量および投与形態
本開示の免疫原性組成物は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与が意図されている。免疫原性組成物は、約０．５ｍＬの体積（例えば、単位用量）で、単回用量として筋肉内注射によって投与されるものである。いくつかの実施形態において、筋肉内注射は、上腕の三角筋に行われる。免疫原性組成物は、静脈内にも、皮内にも、皮下にも投与すべきではない。
本開示の免疫原性組成物は、破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与が意図されている。免疫原性組成物は、約０．５ｍＬの体積（例えば、単位用量）で、単回用量として筋肉内注射によって投与されるものである。いくつかの実施形態において、筋肉内注射は、上腕の三角筋に行われる。免疫原性組成物は、静脈内にも、皮内にも、皮下にも投与すべきではない。
【0054】
Ｃ．免疫応答の刺激のための方法
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原に対する免疫応答を刺激するための方法であって、本明細書に記載される免疫原性組成物を、哺乳動物対象（例えば、ヒト対象）においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために、哺乳動物対象に投与することを含む、方法に関する。好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、任意選択で約０．５ｍＬの体積（例えば、単位用量）で、筋肉内注射によって投与されるものである。いくつかの実施形態において、筋肉内注射は、それを必要とするヒト対象の上腕の三角筋に行われる。
本開示は、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原に対する免疫応答を刺激するための方法であって、本明細書に記載される免疫原性組成物を、哺乳動物対象（例えば、ヒト対象）においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するために、哺乳動物対象に投与することを含む、方法に関する。好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、任意選択で約０．５ｍＬの体積（例えば、単位用量）で、筋肉内注射によって投与されるものである。いくつかの実施形態において、筋肉内注射は、それを必要とするヒト対象の上腕の三角筋に行われる。
【0055】
免疫応答を「刺激する」とは、免疫応答を増加させることを意味し、これは、デノボ免疫応答を誘起すること（例えば、初期ワクチン接種レジメンの結果として）、または既存の免疫応答を増強させること（例えば、追加免疫ワクチン接種レジメンの結果として）により生じ得る。いくつかの実施形態において、免疫応答を刺激することとしては、サイトカイン産生を刺激すること、Ｂリンパ球増殖を刺激すること、抗体産生を刺激すること、インターフェロン経路に関連する遺伝子の発現を刺激すること、化学誘引物質に関連する遺伝子の発現を刺激すること、および形質細胞様樹状細胞の成熟を刺激することからなる群のうちの１つまたは複数が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、免疫応答を刺激することは、対象における抗原特異的抗体応答を増加させることを含む。好ましくは、抗原特異的抗体応答を増加させることは、投与後１ヶ月の時点において、投与前のレベルよりも少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍高く、および／または投与後６ヶ月の時点において、投与前のレベルを少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍上回って、抗原特異的抗体の濃度を増加させることを含む。好ましくは、抗原特異的抗体応答を増加させることは、投与後１ヶ月の時点において、閾値レベル（例えば、ＩＵ／ｍｌでのＥＬＩＳＡによる検出のレベル）を少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍上回って、および／または投与後６ヶ月の点において、閾値レベルを少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍上回って、抗原特異的抗体の濃度を増加させることを含む。好ましくは、抗原特異的抗体応答を増加させることは、最小血清保護レベル（例えば、破傷風については、中和アッセイによって測定した場合に少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌ、またはＥＬＩＳＡによって測定した場合に少なくとも０．１ＩＵ／ｍｌ）を上回って、抗原特異的抗体の濃度を増加させることを含む。
【0056】
実施形態の列挙
１．破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、
ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与することを含み、
ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、
Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、
方法。
２．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、実施形態１に記載の方法。
３．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）を含む、実施形態１に記載の方法。
４．オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
５．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、任意選択で、オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、実施形態４に記載の方法。
６．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、任意選択で、すべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
７．オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、実施形態１から６のいずれか１つに記載の方法。
８． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、または約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、または約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、実施形態１から７のいずれか１つに記載の方法。
９．アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
１０．アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
１１． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、実施形態９または実施形態１０に記載の方法。
１２． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．０～２．５ＬｆのＤＴ、約２．５～８．０μｇのＰＴ、約５．０～８．０μｇのＦＨＡ、および約２．５～３．０μｇのＰＲＮを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、実施形態１から１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、実施形態１３に記載の方法。
１５．少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、実施形態１３または実施形態１４に記載の方法。
１６．ヒト対象が、少なくとも１０歳またはそれ以上の年齢である、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．ヒト対象が、過去３年以内に小児ワクチンも追加免疫ワクチンも受けておらず、
小児ワクチンが、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含み、
追加免疫ワクチンが、破傷風およびジフテリア（Ｔｄ）抗原、または破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を含む、
実施形態１から１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．ヒト対象が、１０～１８歳の年齢である、実施形態１７に記載の方法。
１９．ヒト対象が、１９歳もしくはそれ以上の年齢であり、任意選択で、ヒト対象が、１９～６４歳の年齢であるか、または６５歳もしくはそれ以上の年齢である、実施形態１７に記載の方法。
２０．Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、投与の１ヶ月後までにＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在し、免疫応答が、
少なくとも０．４国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）の濃度の抗ＴＴ抗体および抗ＤＴ抗体、ならびに
投与前のレベルまたは定量限界レベルよりも国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）で少なくとも２倍高い濃度の抗ＰＴ抗体、抗ＦＨＡ抗体、および抗ＰＲＮ抗体
を含む、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．免疫応答が、
（ｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも１．０ＩＵ／ｍｌの抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方、ならびに／または
（ｉｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも４倍高い抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含み、
抗体濃度が、国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）での投与前のレベルまたは定量限界レベルのいずれかと比べたものである、
実施形態２０に記載の方法。
２２．免疫応答が、
投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方を含み、任意選択で、抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前のレベルの少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型破傷風および／またはジフテリア免疫応答を含む、実施形態２０から２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．免疫応答が、
投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含み、任意選択で、抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前のレベルの少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型百日咳免疫応答を含む、実施形態２０から２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．免疫原性組成物が、満足できる安全性プロファイルを有する、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための免疫原性組成物であって、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含み、
ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、
免疫原性組成物。
２６．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、実施形態２５に記載の組成物。
２７．オリゴヌクレオチドが、５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）の配列を含む、実施形態２５に記載の組成物。
２８．オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、実施形態２５から２７のいずれか１つに記載の組成物。
２９．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、任意選択で、オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、実施形態２８に記載の組成物。
３０．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、任意選択で、すべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、実施形態２５から２９のいずれか１つに記載の組成物。
３１．オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、実施形態２５から３０のいずれか１つに記載の組成物。
３２． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、または約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ、約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、または約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、実施形態２５から３１のいずれか１つに記載の組成物。
３３．アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２５から３２のいずれか１つに記載の組成物。
３４．アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、実施形態２５から３２のいずれか１つに記載の組成物。
３５． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、実施形態２５から３４のいずれか１つに記載の組成物。
３６． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．０～２．５ＬｆのＤＴ、約２．５～８．０μｇのＰＴ、約５．０～８．０μｇのＦＨＡ、および約２．５～３．０μｇのＰＲＮを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、実施形態２５から３５のいずれか１つに記載の組成物。
３７．免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、実施形態２５から３６のいずれか１つに記載の組成物。
３８．少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、実施形態３７に記載の組成物。
３９．少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、実施形態３７または実施形態３８に記載の組成物。
４０．実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物と、ヒト対象におけるＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための組成物の投与のための説明書とを含む、キット。
４１．ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントとを含む、第１の組成物と、
ｉｉ）ＴＬＲ９アゴニストを含む第２の組成物と、
ｉｉｉ）第１の組成物を第２の組成物と混合して、免疫原性組成物を調製するための説明書を含み、
任意選択で、免疫原性組成物が、実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物である、
キット。
４２．ｉｖ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための免疫原性組成物の投与のためのさらなる説明書のセット
をさらに含む、実施形態４１に記載のキット。
４３．免疫原性組成物の筋肉内注射のためのシリンジおよびニードルをさらに含む、実施形態４０から４２のいずれか１つに記載のキット。
４４．ヒト対象において破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原に対する免疫応答を刺激するための、実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４５．Ｂ．パータシスによる感染からヒト対象を保護するための実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４６．ヒト対象が百日咳に罹患するのを予防するための実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４７．組成物が、筋肉内注射によって投与される、実施形態４４から４６のいずれか１つに記載の使用。
１．破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための方法であって、
ヒト対象に、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含む、免疫原性組成物を投与することを含み、
ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
ヒト対象が、３歳またはそれ以上の年齢であり、
Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、Ｔｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、
方法。
２．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、実施形態１に記載の方法。
３．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）を含む、実施形態１に記載の方法。
４．オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
５．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、任意選択で、オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、実施形態４に記載の方法。
６．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、任意選択で、すべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
７．オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、実施形態１から６のいずれか１つに記載の方法。
８． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、または約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、または約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、実施形態１から７のいずれか１つに記載の方法。
９．アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
１０．アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、実施形態１から８のいずれか１つに記載の方法。
１１． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、実施形態９または実施形態１０に記載の方法。
１２． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．０～２．５ＬｆのＤＴ、約２．５～８．０μｇのＰＴ、約５．０～８．０μｇのＦＨＡ、および約２．５～３．０μｇのＰＲＮを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、実施形態１から１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、実施形態１から１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、実施形態１３に記載の方法。
１５．少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、実施形態１３または実施形態１４に記載の方法。
１６．ヒト対象が、少なくとも１０歳またはそれ以上の年齢である、実施形態１から１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．ヒト対象が、過去３年以内に小児ワクチンも追加免疫ワクチンも受けておらず、
小児ワクチンが、ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳（ＤＴａＰ）抗原、またはジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳（ＤＴｗＰ）抗原を含み、
追加免疫ワクチンが、破傷風およびジフテリア（Ｔｄ）抗原、または破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を含む、
実施形態１から１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．ヒト対象が、１０～１８歳の年齢である、実施形態１７に記載の方法。
１９．ヒト対象が、１９歳もしくはそれ以上の年齢であり、任意選択で、ヒト対象が、１９～６４歳の年齢であるか、または６５歳もしくはそれ以上の年齢である、実施形態１７に記載の方法。
２０．Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、投与の１ヶ月後までにＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在し、免疫応答が、
少なくとも０．４国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）の濃度の抗ＴＴ抗体および抗ＤＴ抗体、ならびに
投与前のレベルまたは定量限界レベルよりも国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）で少なくとも２倍高い濃度の抗ＰＴ抗体、抗ＦＨＡ抗体、および抗ＰＲＮ抗体
を含む、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．免疫応答が、
（ｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも１．０ＩＵ／ｍｌの抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方、ならびに／または
（ｉｉ）投与の１ヶ月後までに、少なくとも４倍高い抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含み、
抗体濃度が、国際単位／ｍｌ（ＩＵ／ｍｌ）での投与前のレベルまたは定量限界レベルのいずれかと比べたものである、
実施形態２０に記載の方法。
２２．免疫応答が、
投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方を含み、任意選択で、抗ＴＴ抗体濃度および抗ＤＴ抗体濃度のうちの一方もしくは両方が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前のレベルの少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型破傷風および／またはジフテリア免疫応答を含む、実施形態２０から２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．免疫応答が、
投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点における、投与前のレベルの少なくとも１．５倍、２．０倍、もしくは２．５倍の抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数を含み、任意選択で、抗ＰＴ抗体濃度、抗ＦＨＡ抗体濃度、および抗ＰＲＮ抗体濃度のうちの１つもしくは複数が、投与後約６ヶ月もしくは約１２ヶ月の時点において、投与前のレベルの少なくとも２倍、３倍、もしくは４倍である、持続型百日咳免疫応答を含む、実施形態２０から２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．免疫原性組成物が、満足できる安全性プロファイルを有する、実施形態１から２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．破傷風、ジフテリア、および百日咳に対する能動的追加免疫付与のための免疫原性組成物であって、破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントと、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストとを含み、
ＴＬＲ９アゴニストが、非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン（ＣｐＧ）モチーフを含む、１０～３５ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドであり、
Ｔｄａｐ抗原が、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、百日咳トキソイド（ＰＴ）、百日咳繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、および百日咳パータクチン（ＰＲＮ）を含み、
Ｔｄａｐ抗原およびオリゴヌクレオチドが、ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するのに有効な量で、免疫原性組成物中に存在する、
免疫原性組成物。
２６．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧ－３’（配列番号３）を含む、実施形態２５に記載の組成物。
２７．オリゴヌクレオチドが、５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１）の配列を含む、実施形態２５に記載の組成物。
２８．オリゴヌクレオチドが、改変されたヌクレオシドを含み、任意選択で、改変されたヌクレオシドが、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群から選択される、実施形態２５から２７のいずれか１つに記載の組成物。
２９．オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－３’（配列番号２）を含み、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、任意選択で、オリゴヌクレオチドが、配列５’－ＴＣＧ１ＡＡＣＧ１ＴＴＣＧ１－Ｘ－Ｇ１ＣＴＴＧ１ＣＡＡＧ１ＣＴ－５’、ここでＧ１が、２’－デオキシ－７－デアザグアノシンであり、Ｘが、グリセロールである（５’－配列番号２－３’－Ｘ－３’－配列番号２－５’）を含む、実施形態２８に記載の組成物。
３０．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、任意選択で、すべてのヌクレオチド連結が、ホスホロチオエート連結である、実施形態２５から２９のいずれか１つに記載の組成物。
３１．オリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドである、実施形態２５から３０のいずれか１つに記載の組成物。
３２． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ～約６０００μｇのオリゴヌクレオチド、または約７５０μｇ～約３０００μｇのオリゴヌクレオチドを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約３７５μｇ、約７５０μｇ、約１５００μｇ、約３０００μｇ、または約６０００μｇのオリゴヌクレオチドを含む、実施形態２５から３１のいずれか１つに記載の組成物。
３３．アルミニウム塩アジュバントが、非晶質硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムカリウムからなる群のうちの１つまたは複数を含む、実施形態２５から３２のいずれか１つに記載の組成物。
３４．アルミニウム塩アジュバントが、水酸化アルミニウムを含む、実施形態２５から３２のいずれか１つに記載の組成物。
３５． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ３＋を含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約０．３０～約０．４０ｍｇのＡｌ３＋を含む、実施形態２５から３４のいずれか１つに記載の組成物。
３６． ０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．０～２．５ＬｆのＤＴ、約２．５～８．０μｇのＰＴ、約５．０～８．０μｇのＦＨＡ、および約２．５～３．０μｇのＰＲＮを含み、任意選択で、０．５ｍｌの用量の免疫原性組成物が、約５ＬｆのＴＴ、約２．５ＬｆのＤＴ、約８μｇのＰＴ、約８μｇのＦＨＡ、および約２．５μｇのＰＲＮを含む、実施形態２５から３５のいずれか１つに記載の組成物。
３７．免疫原性組成物が、少なくとも１つの追加の抗原をさらに含む、実施形態２５から３６のいずれか１つに記載の組成物。
３８．少なくとも１つの追加の抗原が、百日咳線毛（ＦＩＭ）抗原および百日咳アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）抗原のうちの一方または両方を含む、実施形態３７に記載の組成物。
３９．少なくとも１つの追加の抗原が、不活性化ポリオウイルスを含み、任意選択で、不活性化ポリオウイルスが、１型ウイルス、２型ウイルス、および３型ウイルスのうちの１つまたは複数を含む、実施形態３７または実施形態３８に記載の組成物。
４０．実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物と、ヒト対象におけるＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための組成物の投与のための説明書とを含む、キット。
４１．ｉ）破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原と、Ｔｄａｐ抗原を吸着させたアルミニウム塩アジュバントとを含む、第１の組成物と、
ｉｉ）ＴＬＲ９アゴニストを含む第２の組成物と、
ｉｉｉ）第１の組成物を第２の組成物と混合して、免疫原性組成物を調製するための説明書を含み、
任意選択で、免疫原性組成物が、実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物である、
キット。
４２．ｉｖ）ヒト対象においてＴｄａｐ抗原に対する免疫応答を刺激するための免疫原性組成物の投与のためのさらなる説明書のセット
をさらに含む、実施形態４１に記載のキット。
４３．免疫原性組成物の筋肉内注射のためのシリンジおよびニードルをさらに含む、実施形態４０から４２のいずれか１つに記載のキット。
４４．ヒト対象において破傷風、ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原に対する免疫応答を刺激するための、実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４５．Ｂ．パータシスによる感染からヒト対象を保護するための実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４６．ヒト対象が百日咳に罹患するのを予防するための実施形態２５から３９のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、方法が、有効量の組成物を対象に投与することを含む、使用。
４７．組成物が、筋肉内注射によって投与される、実施形態４４から４６のいずれか１つに記載の使用。
【0057】
実施例
略語：ＣｐＧ（非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴａＰ（ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳）、ＤＴｗＰ（ジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳）、ＦＨＡ（繊維状ヘマグルチニン）、ＧＭＣ（幾何平均濃度）、ＨＤ（ヒト用量）、Ｌｆ（凝集単位）、ｍｃｇ（マイクログラム）、ＭＶＣ（疑似ワクチン接種、チャレンジ）、ＮＡＬＴ（鼻関連リンパ組織）、ＮＶＮＣ（非ワクチン接種、非チャレンジ）、Ｔｄａｐ（破傷風、弱毒化ジフテリア、および非細胞性百日咳）、ＩＵ／ｍＬ（国際単位／ミリリットル）、ＯＯＲ（範囲外）、ＰＲＮ（パータクチン）、ＰＴ（不活性化百日咳毒素）、ＴＬＲ９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ならびにｗＰ（全細胞性百日咳）。
略語：ＣｐＧ（非メチル化シチジン－ホスホ－グアノシン）、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＤＴａＰ（ジフテリア、破傷風、および非細胞性百日咳）、ＤＴｗＰ（ジフテリア、破傷風、および全細胞性百日咳）、ＦＨＡ（繊維状ヘマグルチニン）、ＧＭＣ（幾何平均濃度）、ＨＤ（ヒト用量）、Ｌｆ（凝集単位）、ｍｃｇ（マイクログラム）、ＭＶＣ（疑似ワクチン接種、チャレンジ）、ＮＡＬＴ（鼻関連リンパ組織）、ＮＶＮＣ（非ワクチン接種、非チャレンジ）、Ｔｄａｐ（破傷風、弱毒化ジフテリア、および非細胞性百日咳）、ＩＵ／ｍＬ（国際単位／ミリリットル）、ＯＯＲ（範囲外）、ＰＲＮ（パータクチン）、ＰＴ（不活性化百日咳毒素）、ＴＬＲ９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、ならびにｗＰ（全細胞性百日咳）。
【0058】
抗原：破傷風、弱毒化ジフテリア、および非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）抗原を、独立して、４つの異なる細菌株の発酵中に産生させる：クロストリジウム・テタニＨａｒｖａｒｄ ４９０２５（破傷風毒素）、コリネバクテリウム・ジフテリアＰＷ８（ジフテリア毒素）、ボルデテラ・パータシス１６５（百日咳毒素）、ならびにボルデテラ・パータシスＴｏｈａｍａ Ｉ（ＦＨＡおよびＰＲＮ）。発酵槽産物を回収し、続いて、抗原を単離し、不活性化し、濾過滅菌して、個々の抗原を得る。ミョウバンを含有する調査用ワクチンの産生については、それぞれの抗原を、さらに、Ａｌ（ＯＨ）３に個別に吸着させた後、ブレンドして、Ｔｄａｐ－ミョウバン産物にする。
【0059】
破傷風トキソイド（ＴＴ）は、Ｃ．テタニ株Ｈａｒｖａｒｄ ４９２０５によって産生される破傷風毒素のホルマリン無毒化によって産生される。ジフテリアトキソイド（ＤＴ）は、Ｃ．ジフテリエＰＷ８（ＣＮ２０００）によって産生されるジフテリア毒素のホルマリン無毒化によって得られる。百日咳トキソイド（ＰＴ）は、Ｂ．パータシス１６５によって産生される百日咳毒素のホルマリン無毒化によって産生される。繊維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）は、Ｂ．パータシスＴｏｈａｍａ Ｉによって産生されるＦＨＡのホルマリン処理によって産生される。パータクチン（ＰＲＮ）は、ＰＲＮを含有するＢ．パータシスＴｏｈａｍａ Ｉ細胞塊の熱不活性化によって産生される。
【実施例1】
【0060】
マウスにおけるＣｐＧアジュバント付加した破傷風、弱毒化ジフテリア、非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの免疫原性
この実施例は、同種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの２回の投薬の免疫原性を評価するためにＨａｒｌａｎマウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。
この実施例は、同種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの２回の投薬の免疫原性を評価するためにＨａｒｌａｎマウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。
【0061】
ワクチン。Ｔｄａｐ単独（アジュバントなし）、Ｔｄａｐ－ミョウバン、Ｔｄａｐ－ＣｐＧ、およびＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧを含む、４種類のワクチンを、２つの異なる抗原希釈（未希釈および１：４希釈）で、試験した。Ｔｄａｐ単独のワクチンは、Ｔｄａｐ抗原を含有していたが、ミョウバンまたはＣｐＧのいずれも含有していなかった。Ｔｄａｐ－ミョウバンワクチンは、３９ｍｃｇのＡｌ（ＯＨ）３（水酸化アルミニウム、本明細書において「ミョウバン」と称される）に吸着させたＴｄａｐ抗原を含有していた。Ｔｄａｐ－ＣｐＧワクチンは、１０ｍｃｇのＣｐＧ １０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’、配列番号１として記載される）と混合したＴｄａｐ抗原を含有していた。Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧワクチンは、３９ｍｃｇのＡｌ（ＯＨ）３に吸着させ、続いて、１０ｍｃｇのＣｐＧ １０１８と混合した、Ｔｄａｐ抗原を含有していた。それぞれの５０μｌのワクチン用量は、以下の表１－１に示されるように、５つの異なる抗原を含有していた。１：４希釈群については、抗原のみを希釈し、ＣｐＧ １０１８およびミョウバン（含まれる場合）は、それぞれ、１０ｍｃｇおよび３９ｍｃｇで投薬した。
【0062】
【表1】
【0063】
マウスに、５０μｌのＴｄａｐワクチンを、０日目に皮下注射し、２８日目に追加免疫した。２１日目および４２日目に、ＥＬＩＳＡによる抗体レベルの測定のために、採血を行った。それぞれの群には、６～１０匹のマウスが存在していた。それぞれの群について、それぞれ２匹のマウスから得られた血清を使用して、最大で５つの血清部分プールを作製した。応答を測定し、最大４つの部分プール／群について平均し、５つ目の部分プールは、バックアップサンプルとして残した。それぞれの群から得られた部分的にプールした血清の平均の抗ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＤＴ、およびＴＴ ＩｇＧレベルを、以下の表１－２に示す。個々のマウスの血清応答もまた、未希釈抗原を受容したマウス群について測定した。ＩｇＧレベルは、参照血清を用いて構築したアッセイ標準曲線を使用して、ＩＵ／ｍＬで表す。
【0064】
【表2】
【0065】
未希釈Ｔｄａｐ単独群において、６匹のマウスすべてが、２１日目の時点で、いずれのＴｄａｐ抗原に対しても測定可能な抗体応答を有さなかった。未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン群においては、１０匹中５匹のマウスが、２１日目の時点で、３つすべての百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ）に対する測定可能な抗体応答を有し、１０匹中３匹のマウスは、２１日目の時点で、ＴＴに対する測定可能な抗体応答を有した。対照的に、未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群においては、１０匹中９匹のマウスが、２１日目の時点で、３つすべての百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ）ならびにＴＴに対する測定可能な抗体応答を有した。さらに、２１日目の時点（すなわち、初回免疫注射後）の時点における３つの百日咳抗原のそれぞれに対する未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群の抗体応答は、未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン群（すなわち、１０１８ ＣｐＧが欠如したＴｄａｐワクチン）よりも約８～１０倍高く、ＴＴ抗体応答については約１１倍高かった。
【0066】
未希釈Ｔｄａｐ単独群において、６匹中１匹のマウスが、４２日目の時点で、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＴＴに対する測定可能な抗体応答を有し、この外れ値に起因して、測定可能な抗体応答が、この群について、４２日目に観察された（表１－２）。未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン群において、８匹中６匹のマウスが、４２日目の時点で、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＴＴに対する測定可能な抗体応答を有した。注目すべきことに、未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群においては、８匹中８匹のマウスが、４２日目の時点で、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＴＴに対する測定可能な抗体応答を有した。さらに、未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群における３つの百日咳抗原のそれぞれに対する抗体応答は、４２日目（すなわち、追加免疫注射後）の時点で、未希釈Ｔｄａｐ－ミョウバン群（すなわち、１０１８ ＣｐＧが欠如したＴｄａｐワクチン）よりも９倍を上回って高かった。Ｔｄａｐ－ミョウバンおよびＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧの両方の群について、２回目の注射の明確な追加免疫効果が、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＴＴについて観察された（表１－２）。
【0067】
参照血清と比較してＥＬＩＳＡアッセイにおいて応答が検出されなかったため、ＤＴに対する抗体応答を、エンドポイント力価アッセイにおいて、未希釈抗原群の個々のマウスの血清において測定した（表１－２）。Ｔｄａｐ単独群またはＴｄａｐ－ミョウバン群のいずれにおいても、２１日目の時点で、ＤＴに対する測定可能な抗体応答を有したマウスはいなかった。４２日目までに、Ｔｄａｐ単独群における１０匹中１匹のマウスおよびＴｄａｐ－ミョウバン群における１０匹中１匹のマウスが、ＤＴに対する測定可能な抗体応答を有した。対照的に、２１日目（すなわち、初回免疫注射後）の時点において、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群における１０匹中５匹のマウスが、ならびに４２日目（すなわち、追加免疫注射後）の時点においては、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ群における８匹中８匹のマウスが、ＤＴに対する測定可能な抗体応答を有した。
【0068】
まとめると、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧワクチンは、１回および２回の投薬後に、Ｔｄａｐ抗原に対して、比較ワクチンよりも高い抗体応答を誘起した。
【実施例2】
【0069】
同種または異種Ｔｄａｐ初回免疫／追加免疫レジメンに供したマウスにおける百日咳抗原応答のＴｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７バランス
この実施例は、異種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの３回の投薬の免疫原性を評価するためにＨａｒｌａｎマウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。
この実施例は、異種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの３回の投薬の免疫原性を評価するためにＨａｒｌａｎマウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。
【0070】
ワクチン。すべてのミョウバン配合物は、９．８または３９ｍｃｇのいずれかのＡｌ（ＯＨ）３（水酸化アルミニウム、本明細書において「ミョウバン」と称される）に吸着させたＴｄａｐ抗原を含有していた。それぞれ、１回の初回免疫および２回の追加免疫を含む、４つのワクチンレジメンを試験した：Ｔｄａｐ－ミョウバン（初回免疫および２回の追加免疫）、Ｔｄａｐ－ミョウバン初回免疫＋Ｔｄａｐ－ＣｐＧ（２回の追加免疫）、Ｔｄａｐミョウバン初回免疫＋Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ（２回の追加免疫）、およびＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ（初回免疫および２回の追加免疫）。Ｔｄａｐ－ミョウバンワクチンは、３９ｍｃｇのＡｌ（ＯＨ）３に吸着させたＴｄａｐ抗原を含有していた。Ｔｄａｐ－ＣｐＧワクチンは、１０ｍｃｇのＣｐＧ １０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’、配列番号１として記載される）と混合したＴｄａｐ抗原を含有していた。Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧワクチンは、３９ｍｃｇのＡｌ（ＯＨ）３に吸着させ、続いて、１０ｍｃｇのＣｐＧ １０１８と混合した、Ｔｄａｐ抗原を含有していた。それぞれの５０μｌのワクチン用量は、以下の表２－１に示されるように、５つの異なる抗原を含有していた。初回免疫群については、抗原およびミョウバンを、後続の追加免疫用量の１：４で投与した。ＣｐＧ（含まれる場合）は、初回免疫および追加免疫の両方の用量において、１０ｍｃｇで投薬した。
【0071】
【表3】
【0072】
マウスに、５０μｌのＴｄａｐワクチンを、以下の表２－２に示されるように、０日目に皮下注射し、２８日目および５６日目に追加免疫した。２１日目、４２日目、および６８日目に、ＥＬＩＳＡによる抗体レベルの測定のために、採血を行った。それぞれの群には、１０匹のマウスが存在していた。血清を、３つのプール（マウス１～３、４～６、および７～８）において分析し、マウス９～１０から得られたサンプルは、バックアップとして保持した。総ＩｇＧ、ならびにＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ抗原特異的抗体応答を、判明している量のＩｇＧ（ＩＵ／ｍＬ）を使用して構築した標準曲線を参照して、ＥＬＩＳＡによって測定した。この標準曲線はまた、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａアイソタイプの特定の標準物が利用可能でなかったため、それらを定量するための代理物としての機能も果たした。６８日目（すなわち、初回免疫および２回の追加免疫投薬後）の時点においてサンプル採取したそれぞれの群から得られた総平均抗ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ ＩｇＧ結果、ならびにＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａレベルを、以下の表２－３に示す。Ｔｄａｐ抗原再刺激に対するインビトロリコール応答を、培養した脾臓細胞（９６時間）の上清において、すべてｐｇ／ｍＬでのＩＦＮ－γ、ＩＬ－５、およびＩＬ－１７の標準曲線を参照して、Ｌｕｍｉｎｅｘ多重検体プラットフォームを使用して、殺処分（６８日目）の時点で測定した。
【0073】
【表4】
【0074】
【表5】
【0075】
初回免疫および追加免疫、または追加免疫のみのいずれかで、ワクチン接種にＣｐＧを含めることにより、Ｔｄａｐ－ミョウバンの初回免疫および追加免疫群と比較して、高い総ＩｇＧレベルがもたらされた。Ｔｄａｐ－ミョウバンおよびＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧでの同種初回免疫／追加免疫レジメンは、それぞれ、２回の追加免疫後に測定した場合、百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡ、またはＰＲＮ）に対して、Ｔｈ２とＴｈ１との対比が偏った抗体応答を誘導した。Ｔｄａｐ－ミョウバンの初回免疫および追加免疫群のＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１比（Ｔｈ１／Ｔｈ２比）は、０．３（ＰＴについて）、０．２（ＦＨＡについて）、および１．０（ＰＲＮについて）であった。対照的に、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧの初回免疫／追加免疫は、応答を、Ｔｈ１へと強くシフトさせ、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１の比は２９（ＰＴについて）、１３６（ＦＨＡについて）、および１５５（ＰＲＮについて）であった。Ｔｄａｐ－ミョウバン／Ｔｄａｐ－ＣｐＧ（追加免疫ではミョウバンなし）の異種初回免疫／追加免疫レジメンでは、３．０（ＰＴについて）、１．２（ＦＨＡについて）、および５５（ＰＲＮについて）のＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１の比によって示されるように、Ｔｈ１シフトが生じた。Ｔｄａｐ－ミョウバン／Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧでの異種初回免疫／追加免疫は、より顕著なＴｈ２からＴｈ１へのシフトを誘導し、ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１比は、９．２（ＰＴについて）、２８（ＦＨＡについて）、および５７（ＰＲＮについて）であった。
【0076】
図１Ａ～Ｃに示されるように、Ｔｄａｐ抗原で再刺激したＴｄａｐ－ミョウバンの初回免疫／追加免疫したマウスから得られた脾臓細胞は、９６時間のインビトロ培養後に、ＩＬ－５（Ｔｈ２）を産生したが、ＩＦＮ－γ（Ｔｈ１）またはＩＬ－１７（Ｔｈ１７）は、ほとんど産生しなかった。対照的に、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧの初回免疫追加免疫したマウスから得られた脾臓細胞は、インビトロで再刺激すると、Ｔｈ１（ＩＦＮ－γ）およびＴｈ１７（ＩＬ－１７）サイトカイン産生へのシフトを示した。Ｔｄａｐ－ミョウバンで初回免疫したマウスを、Ｔｄａｐ－ＣｐＧまたはＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧのいずれかで２回追加免疫することにより、Ｔｄａｐ－ミョウバンで初回免疫および追加免疫したマウスと比較して、さらにＴｈ１／Ｔｈ１７表現型（低いＩＬ－５、高いＩＦＮ－γおよびＩＬ－１７）へのシフトを示した。Ｔｄａｐ－ＣｐＧと比べてＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧで追加免疫したマウスでは、わずかに多いＩＦＮ－γおよびＩＬ－１７となる傾向があり、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧで追加免疫したマウスにおけるＴｈ抗体応答への強いシフトと一致する。
【0077】
まとめると、Ｔｄａｐミョウバンで初回免疫し、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧで追加免疫したマウスは、Ｔｄａｐ－ミョウバンで初回免疫／追加免疫した対照と比較して、より高いレベルの百日咳抗原特異的総ＩｇＧ抗体応答を示した。加えて、Ｔｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧで追加免疫したマウスは、Ｔｈ１抗体応答への顕著なシフト（上昇したＩｇＧ２ａ、高いＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１比と関連）、ならびにインビトロにおいてＴｄａｐ抗原で再刺激した脾臓細胞からのＩＦＮ－γおよびＩＬ－１７産生の増加、ならびにＩＬ－５産生の低減を示した。Ｔｈ２からＴｈ１へのシフトは、Ｔｄａｐ－ＣｐＧ（ミョウバンなし）で追加免疫したマウスにおいても、顕著であった。
【実施例3】
【0078】
マウスにおけるＣｐＧアジュバント付加した破傷風、弱毒化ジフテリア、非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの有効性
この実施例は、同種および異種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの２回の投薬の有効性を評価するためにＣＤ１マウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。この研究には１４個の群が含まれ、表３－１に列挙されるように、１つの処置群当たり４～６匹のマウスであった。
この実施例は、同種および異種初回免疫／追加免疫レジメンにおける様々なＴｄａｐワクチンの２回の投薬の有効性を評価するためにＣＤ１マウスにおいて行われる前臨床研究の説明を提供する。この研究には１４個の群が含まれ、表３－１に列挙されるように、１つの処置群当たり４～６匹のマウスであった。
【0079】
【表6】
【0080】
研究デザイン。非近交系の雌性ＣＤ１マウスに、５週間の時点で免疫付与し、８週間の時点で追加免疫し、１０週間の時点でチャレンジした。マウスに、５０μｌのワクチンまたは生理食塩水対照（０．９％ ＮａＣｌ）の筋肉内注射によって免疫付与した。マウスを、約２６００万個の細菌Ｂ．パータシス、ＵＴ２５株（ＰＲＮ＋）の鼻腔内投与によってチャレンジした：群１～７は、マウス１匹当たり２．５５×１０７個（用量ＣＦＵ／ｍｌ＝１．２８×１０９個）を受容し、群８～１３は、マウス１匹当たり２．６５×１０７個（用量ＣＦＵ／ｍｌ＝１．３３×１０９個）を受容し、群１４は、マウス１匹当たり１．４７×１０７個（用量ＣＦＵ／ｍｌ＝７．３３×１０８個）を受容した。細菌は、麻酔したマウスの鼻孔に直接的にピペッティングした。チャレンジの２もしくは３日前、および／またはチャレンジの３日後に、採血を行った。
【0081】
ワクチン。Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＤＴｗＰ（ＳＩ ＤＴｗＰ）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｗＰ（ＮＩＢＳＣ ｗＰ）、Ｔｄａｐ－ミョウバン（実施例４においてＴｄａｐと称される）、およびＴｄａｐ－ミョウバン－ＣｐＧ（実施例４においてＴｄａｐ ＣｐＧ １０１８と称される）を含む、４つのワクチンを試験した。全細胞性百日咳ワクチン（ｗＰ）を、ヒト用量（ＨＤ）の１／２０で投与し、一方でＴｄａｐおよびＴｄａｐ－ＣｐＧ １０１８ワクチンは、ＨＤの１／１０、１／２０、１／４０、または１／８０で投与した。
【0082】
有効性。ワクチンの有効性を、百日咳感染および百日咳特異的免疫原性の様々なパラメーターの測定によって、評価した。含まれる測定値：
１．チャレンジしたマウスの鼻関連リンパ組織（ＮＡＬＴ）における細菌負荷量、
２．チャレンジしたマウスの鼻洗浄液における細菌負荷量、
３．チャレンジしたマウスの肺および気管における細菌負荷量、
４．ＣｐＧ １０１８を含めることに起因する細菌負荷量の変化パーセンテージ、
５．肺重量、
６．血中好中球数、
７．肺ホモジネートから得られたＩＬ－６レベル、
８．肺ホモジネートから得られたＩＦＮ－γレベル、
９．チャレンジ前およびチャレンジ後のＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、および全細菌に対する血清ＩｇＧレベル、
１０．肺への食細胞動員。
１．チャレンジしたマウスの鼻関連リンパ組織（ＮＡＬＴ）における細菌負荷量、
２．チャレンジしたマウスの鼻洗浄液における細菌負荷量、
３．チャレンジしたマウスの肺および気管における細菌負荷量、
４．ＣｐＧ １０１８を含めることに起因する細菌負荷量の変化パーセンテージ、
５．肺重量、
６．血中好中球数、
７．肺ホモジネートから得られたＩＬ－６レベル、
８．肺ホモジネートから得られたＩＦＮ－γレベル、
９．チャレンジ前およびチャレンジ後のＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、および全細菌に対する血清ＩｇＧレベル、
１０．肺への食細胞動員。
【0083】
【表7】
【0084】
ＮＡＬＴ、鼻洗浄液（１ｍｌのＰＢＳフラッシュ）、および肺＋気管における細菌負荷量を、Ｂ．パータシスチャレンジの３日後に測定した。表３－２および図２Ａに示されるように、ＴｄａｐワクチンにＣｐＧ １０１８を含めることにより、試験した４つすべてのＴｄａｐ抗原濃度において、Ｂ．パータシスでチャレンジしたレシピエントの鼻および肺組織における細菌負荷量が低減された。注目すべきことに、ＣｐＧ １０１８を含めることにより、肺＋気管におけるＣＦＵが、それぞれ、９９．６％（１／１０）、９８．８％（１／２０）、９３．８％（１／４０）、および８４．３％（１／８０）低減された（図２Ｂ）。実際に、ＨＤの１／１０または１／２０のＴｄａｐを含むＣｐＧ １０１８を含有するワクチンは、２つのｗＰ含有ワクチンのレシピエントに匹敵する細菌負荷量を有した。異種Ｔｄａｐ １／２０／Ｔｄａｐ １／２０＋１０１８免疫付与レジメンにより、同種Ｔｄａｐ １／２０とＴｄａｐ １／２０＋１０１８レジメンとの間の中間的なチャレンジ後細菌負荷量データが得られた。
【0085】
肺を、Ｂ．パータシスでのチャレンジの３日後に、肺の炎症を評価する手段としてホモジナイズする前に、計量した。疑似ワクチン接種群および２つのｗＰワクチン接種群のマウスの肺は、非ワクチン接種非チャレンジ（ＮＣＮＶ）群、およびＣｐＧ １０１８を含むかどうかにかかわらず９つのＴｄａｐワクチン接種群のマウスの肺よりも実質的に重く計量された。これらの結果は、ＣｐＧ １０１８を含めることが、細菌負荷量を低減させるために高いレベルの炎症を引き起こすことはないことを示す。
【0086】
全血中の好中球数を、Ｂ．パータシスでのチャレンジの３日後に測定した。疑似ワクチン接種、および２つのｗＰワクチン接種群のマウスの好中球数は、非ワクチン接種非チャレンジ（ＮＣＮＶ）群のマウスの好中球数より著しく高かった。９つのＴｄａｐワクチン接種群のマウスの好中球数は、２つのｗＰワクチン接種群の好中球数よりも低く、ＣｐＧ １０１８を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントにおいて、いくらか高い計数が観察された。
【0087】
肺ホモジネートのＩＬ－６およびＩＦＮ－γのレベルを、Ｂ．パータシスでのチャレンジの３日後に測定した。９つのＴｄａｐワクチン接種群のマウスのＩＬ－６レベルは、２つのｗＰワクチン接種群のＩＬ－６レベルよりも低かった。ＣｐＧ １０１８を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントのＩＬ－６レベルを、ＳＩＩ ＤＴｗＰワクチンのレシピエントと比較すると、ＩＬ－６レベルに８４～９５％の低減が観察された。Ｔｄａｐワクチン接種群のマウスのＩＦＮ－γレベルは、２つのｗＰワクチン接種群のＩＦＮ－γレベルよりも低かった。しかしながら、ＩＦＮ－γレベルは、ＣｐＧ １０１８を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントにおいて、ＣｐＧ １０１８の不在下で同等の抗原用量を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントよりも高く、ＣｐＧ １０１８アジュバント付加したＴｄａｐワクチンに応答したＴｈ１応答の増加が示唆される。
【0088】
【表8】
【0089】
【表9】
【0090】
百日咳特異的血清ＩｇＧ抗体力価を、ＥＬＩＳＡによって、チャレンジの２もしくは３日前（表３－３）、および／またはチャレンジの３日後（表３－４）に採血した血液から測定した。一般に、ＣｐＧ １０１８を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントは、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、および全細菌に対して、ＣｐＧ １０１８の不在下で同等の抗原用量を含有するＴｄａｐワクチンのレシピエントよりも、高いチャレンジ前およびチャレンジ後の血清ＩｇＧ力価を有していた。抗体力価に対するＣｐＧ １０１８の肯定的な影響は、図３Ａ～Ｃに示されるように、高い抗原用量（ＴｄａｐがＨＤの１／１０および１／２０）を受容した群において、もっとも顕著であった。
【0091】
肺ホモジネートにおける差次的細胞計数を、Ｂ．パータシスでのチャレンジの３日後に測定した。疑似ワクチン接種および２つのｗＰワクチン接種群のマウスの肺好中球、樹状細胞、マクロファージ、および単球の数は、非ワクチン接種非チャレンジ（ＮＣＮＶ）群のマウスにおけるこれらの細胞集団の数よりも著しく高かった。９つのＴｄａｐワクチン接種群のマウスの細胞数は、２つのｗＰワクチン接種群の細胞数よりも低い傾向にあり、ＣｐＧ １０１８を含有するＴｄａｐでワクチン接種した動物のいくつかの群において、いくらか高い計数が観察された。
【実施例4】
【0092】
ヒトにおけるＣｐＧアジュバント付加した破傷風、弱毒化ジフテリア、非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの免疫原性
この実施例では、試験Ｔｄａｐワクチンの安全性、寛容性、および免疫原性をＦＤＡに承認されているＴｄａｐワクチンと比較して評価するために健常対象において行おうとする臨床研究の説明を提供する。
この実施例では、試験Ｔｄａｐワクチンの安全性、寛容性、および免疫原性をＦＤＡに承認されているＴｄａｐワクチンと比較して評価するために健常対象において行おうとする臨床研究の説明を提供する。
【0093】
ワクチン。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８が、Ｄｙｎａｖａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）によって開発されている試験ワクチンである。それぞれ０．５ｍＬの用量の試験ワクチンは、Ｔｄａｐ抗原（５ＬｆのＴＴ、２．５ＬｆのＤＴ、８ｍｃｇのＰＴ、８ｍｃｇのＦＨＡ、および２．５ｍｃｇのＰＲＮ）、０．３９ｍｇのミョウバン、ならびに１５００ｍｃｇまたは３０００ｍｃｇのいずれかのＣｐＧ １０１８を含有する。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８ワクチンは、水酸化アルミニウム（０．３９ｍｇを上回らないＡｌ３＋）に吸着させたＴｄａｐ抗原を、ＣｐＧ １０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’、配列番号１として記載される）と混合することによって、使用の直前に調製する。ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）（破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、および非細胞性百日咳）は、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ、ＮＣ）によって市販されているＦＤＡに承認されているワクチンである。それぞれ０．５ｍＬの用量のＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）は、水酸化アルミニウム（０．３９ｍｇを上回らないＡｌ３＋）に個別に吸着させたＴｄａｐ抗原（５ＬｆのＴＴ、２．５ＬｆのＤＴ、８ｍｃｇのＰＴ、８ｍｃｇのＦＨＡ、および２．５ｍｃｇのＰＲＮ）、４．５ｍｇの塩化ナトリウム、１００ｍｃｇ以下の残留ホルムアルデヒド、ならびに１００ｍｃｇ以下のポリソルベート８０を含有する。プラセボは、保存剤を含まない０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰ（滅菌等張食塩水）である。
【0094】
目的：１）Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８の安全性および寛容性を評価すること、２）単回追加免疫ワクチン接種の１ヶ月後（４週目）の時点で、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８の非細胞性百日咳抗原に対する免疫原性を、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）と比較して評価すること、ならびに、３）単回追加免疫ワクチン接種の１ヶ月後（４週目）の時点で、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８の破傷風およびジフテリアに対する免疫原性を、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）と比較して評価すること。さらなる目的は、４）単回追加免疫ワクチン接種後６ヶ月および１２ヶ月の時点で、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８の百日咳に対する抗体応答の持続期間を、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）と比較して評価することである。
【0095】
安全性および寛容性は、局所および全身の注射後反応、臨床および研究室的有害事象、ならびに重篤な有害事象をモニタリングすることによって、評価する。ワクチン抗原に対する免疫原性は、ベースライン（１日目）および４週目（２９日目±５日）において、研究対象から得られたサンプルから行われる測定によって評価する。追加の免疫原性評価は、８週目、１２週目、６ヶ月目（２４～２６週目）、および１２ヶ月目（４８～５２週目）のうちの１つまたは複数の時点で行われる。血清における破傷風、ジフテリア、および百日咳抗原に対する抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡによって判定する。ＰＢＭＣの百日咳抗原に対するＴおよびＢ細胞応答もまた、測定する。加えて、血清または血漿における、百日咳毒素中和抗体、オプソニン化抗体、および他の機能性抗体応答のレベルを、測定する。研究対象から得られた鼻スワブを、Ｂ．パータシスコロニー形成を評価するために、マイクロＲＮＡ試験に供する。
【0096】
百日咳抗原に対する免疫原性を、ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮに対する抗体応答率を別個に測定することによって、評価する。ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ抗体応答は、それぞれ、以下のうちの１つとして定義される：１）当初血清陰性の対象におけるワクチン接種後の測定可能な抗体濃度、例えば、閾値レベル（例えば、検出限界）の２倍を上回るかもしくはそれに等しい、３倍を上回るかもしくはそれに等しい、または４倍を上回るかもしくはそれに等しいワクチン接種後の抗体濃度、２）当初血清陽性の対象における、ワクチン接種前の抗体濃度の少なくとも２倍、３倍、または４倍の増加。
【0097】
百日咳抗原に対する免疫原性はまた、抗ＰＴ、抗ＦＨＡ、および抗ＰＲＮ抗体のそれぞれについて、幾何平均濃度（ＧＭＣ）を判定することによっても評価する。破傷風およびジフテリア抗原に対する免疫原性を、ＴＴおよびＤＴに対する抗体応答率を別個に測定することによって、評価する。ＴＴおよびＤＴ抗体応答は、それぞれ、以下のうちの１つとして定義される：１）ワクチン接種前の抗体レベルが０．１ＩＵ／ｍＬ未満である対象においては、ワクチン接種後の抗体レベルが０．４ＩＵ／ｍＬ以上であること、および、２）ワクチン接種前の抗体レベルが０．１ＩＵ／ｍＬ以上である対象においては、ワクチン接種前のレベルの少なくとも４倍の増加。百日咳に対する抗体応答の持続期間は、ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮの抗体力価を測定することによって、測定される。
【0098】
研究デザイン。研究は、１０～２２歳の年齢の健常対象におけるＴｄａｐ追加免疫ワクチンの無作為化非盲検２部試験として行う。第１部は、１８～２２歳の年齢の健常な成人対象において行う。第２部は、１０～１７歳の年齢の健常な青年対象において行う。スクリーニング後に、対象を、以下の処置群に無作為化した：処置Ａ：Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８（用量１または用量２）、ならびに処置Ｂ：ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）。対象は、１日目に、ワクチン接種前の抗体レベルを判定するために、無作為化した処置ワクチンを受容する前にベースライン採血を受けるであろう。ワクチンは、三角筋への単回の０．５ｍＬ筋肉内注射として投与される。ワクチン接種後の抗体レベルの測定のための採血は、４週目（約２９日目）に行われ、任意選択で、１２週間、２４週間、および５２週間、または４週間、８週間、および１２週間で行われる。
【0099】
成人参加者は、１用量の割り当てられた処置（Ｔｄａｐ－１０１８ １５００ｍｃｇ、Ｔｄａｐ－１０１８ ３０００ｍｃｇ、またはＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標））を、１日目に受け、１用量（Ｔｄａｐ－１０１８ １５００ｍｃｇ、Ｔｄａｐ－１０１８ ３０００ｍｃｇ、またはプラセボ）を、８週目に受ける。青年参加者は、１用量の割り当てられた処置（Ｔｄａｐ－１０１８ １５００ｍｃｇ、Ｔｄａｐ－１０１８ ３０００ｍｃｇ、またはＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標））を、１日目に受ける。成人において、ワクチン接種後の抗体レベルを測定するための採血は、４週目、８週目、および１２週目に行い、試験評価を、４週目および１２週目に行う。青年において、ワクチン接種後の抗体レベルを測定するための採血は、４週目に行う。安全性の評価は、成人においては４週目、１２週目、および２０週目に行い、青年においては４週目および１２週目に行う。
【0100】
研究集団。研究対象の登用基準および除外基準としては、以下に提供されるリストのものが含まれるが、これらに限定されない。登用基準には、以下のすべてが含まれる：１８～２２歳（第１部）または１０～１７歳（第２部）の年齢の男性または女性であること、これまでのすべての百日咳免疫付与（例えば、これまでの２回またはそれ以上の非細胞性百日咳ワクチン接種）に関する書類を有すること、病歴、身体検査、および研究室評価に基づいて良好な健康状態にあること、ならびにヒト免疫不全ウイルスについて血清陰性であること。除外基準には、以下のうちのいずれか１つが含まれる：過去３年以内に非細胞性Ｔｄａｐ追加免疫を受けていること、ジフテリア、破傷風、もしくは百日咳の疾患歴、自己免疫疾患の病歴、ならびに／または研究の結果と混同し得る状態、治療、もしくは研究室の異常を有すること。混同する可能性のある治療としては、以下のうちのいずれかを受けることが挙げられる：研究ワクチン注射の２１日以内の任意の不活性化ワクチン、研究ワクチン注射の２８日以内の任意の生ウイルスワクチン、全身性コルチコステロイドもしくは他の免疫抑制医薬、顆粒球もしくは顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、または他の試験医薬、研究ワクチン注射の３ヶ月以内の免疫グロブリンまたは任意の血液製剤、あるいは任意の時点におけるデオキシリボ核酸プラスミドまたはオリゴヌクレオチドの注射。
【0101】
結果。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８のレシピエントは、追加免疫ワクチン接種の４週間後の時点において、ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ抗原のうちの１つまたは複数に対して、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）のレシピエントよりも高い濃度の抗体を有することが企図される。同様に、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８のレシピエントは、追加免疫ワクチン接種の４週間後の時点において、ＴＴおよびＤＴ抗原のうちの一方または両方に対して、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）のレシピエントよりも高い濃度の抗体を有することが企図される。加えて、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８を受容した対象のうち高いパーセンテージで、０．１ＩＵ／ｍＬ以上もしくは１．０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ＴＴ抗体、および／または０．１ＩＵ／ｍＬ以上もしくは１．０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ＤＴ抗体を有することが企図される。
【実施例5】
【0102】
Ｂ．パータシスでチャレンジしたヒトにおける鼻腔内コロニー形成の低減に関するＣｐＧアジュバント付加した破傷風、弱毒化ジフテリア、非細胞性百日咳（Ｔｄａｐ）ワクチンの有効性
この実施例では、試験Ｔｄａｐワクチンの安全性、寛容性、免疫原性、および保護作用をＦＤＡに承認されているＴｄａｐワクチンと比較して評価するために健常対象において行おうとする臨床研究の説明を提供する。具体的には、ヒト対象に、Ｔｄａｐワクチンの０回、１回、または２回の投薬を受けさせた後に、野生型Ｂ．パータシスでの制御された鼻腔内チャレンジを受けさせる。チャレンジした対象を、記載されるように、アジスロマイシンで処置して、細菌コロニー形成を根絶させた（ｄｅ Ｇｒａａｆら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，７１（２）：４０３－４１１，２０２０）。
この実施例では、試験Ｔｄａｐワクチンの安全性、寛容性、免疫原性、および保護作用をＦＤＡに承認されているＴｄａｐワクチンと比較して評価するために健常対象において行おうとする臨床研究の説明を提供する。具体的には、ヒト対象に、Ｔｄａｐワクチンの０回、１回、または２回の投薬を受けさせた後に、野生型Ｂ．パータシスでの制御された鼻腔内チャレンジを受けさせる。チャレンジした対象を、記載されるように、アジスロマイシンで処置して、細菌コロニー形成を根絶させた（ｄｅ Ｇｒａａｆら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，７１（２）：４０３－４１１，２０２０）。
【0103】
ワクチン。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８が、Ｄｙｎａｖａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）によって開発されている試験ワクチンである。それぞれ０．５ｍＬの用量の試験ワクチンは、Ｔｄａｐ抗原（５ＬｆのＴＴ、２．５ＬｆのＤＴ、８ｍｃｇのＰＴ、８ｍｃｇのＦＨＡ、および２．５ｍｃｇのＰＲＮ）、０．３９ｍｇのミョウバン、ならびに１５００ｍｃｇまたは３０００ｍｃｇのいずれかのＣｐＧ １０１８を含有する。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８ワクチンは、水酸化アルミニウム（０．３９ｍｇを上回らないＡｌ３＋）に吸着させたＴｄａｐ抗原を、ＣｐＧ １０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡ ＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴ ＧＡ－３’、配列番号１として記載される）と混合することによって、使用の直前に調製する。ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）（破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、および非細胞性百日咳）は、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ、ＮＣ）によって市販されているＦＤＡに承認されているワクチンである。それぞれ０．５ｍＬの用量のＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）は、水酸化アルミニウム（０．３９ｍｇを上回らないＡｌ３＋）に個別に吸着させたＴｄａｐ抗原（５ＬｆのＴＴ、２．５ＬｆのＤＴ、８ｍｃｇのＰＴ、８ｍｃｇのＦＨＡ、および２．５ｍｃｇのＰＲＮ）、４．５ｍｇの塩化ナトリウム、１００ｍｃｇ以下の残留ホルムアルデヒド、ならびに１００ｍｃｇ以下のポリソルベート８０を含有する。
【0104】
目的：１）チャレンジ後の鼻腔内コロニー形成の低減に関するＴｄａｐ－ミョウバン－１０１８の有効性（鼻洗浄液における低い細菌力価および／または細菌のより急速なクリアランス）を、非細胞性ワクチンと比較して評価すること、２）チャレンジした対象における早期臨床症状に対する保護を評価すること、３）Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８の安全性および寛容性を評価すること、ならびに、４）Ｂ．パータシスでの鼻腔内チャレンジ前に、単回ワクチン接種の４週間後または２回のワクチン接種の８週間後のＴｄａｐ－ミョウバン－１０１８の非細胞性百日咳抗原に対する免疫原性を、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）と比較して評価すること。
【0105】
安全性および寛容性は、局所および全身の注射後反応、臨床および研究室的有害事象、ならびに重篤な有害事象をモニタリングすることによって、評価する。ワクチン抗原に対する免疫原性は、ベースライン（１日目）、４週目（２９日目±５日）／チャレンジ前、または２回の投薬を受容する対象の場合には、８週目（６０日目±５日）／チャレンジ前において、研究対象から得られたサンプルから行われる測定によって評価する。また、免疫応答は、チャレンジの２週間後の時点において評価する。血清における破傷風、ジフテリア、および百日咳抗原に対する抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡによって判定する。ＰＢＭＣの百日咳抗原に対するＴ細胞応答もまた、測定する。加えて、血清における、百日咳毒素中和抗体、オプソニン化抗体、および他の機能性抗体応答のレベルを、測定する。
【0106】
百日咳抗原に対する免疫原性を、ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮに対する抗体応答率を別個に測定することによって、評価する。ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ抗体応答は、それぞれ、以下のうちの１つとして定義される：１）当初血清陰性の対象におけるワクチン接種後の測定可能な抗体濃度、例えば、閾値レベル（例えば、検出限界）の２倍を上回るかもしくはそれに等しい、３倍を上回るかもしくはそれに等しい、または４倍を上回るかもしくはそれに等しいワクチン接種後の抗体濃度、２）当初血清陽性の対象における、ワクチン接種前の抗体濃度の少なくとも２倍、３倍、または４倍の増加。
【0107】
百日咳抗原に対する免疫原性はまた、抗ＰＴ、抗ＦＨＡ、および抗ＰＲＮ抗体のそれぞれについて、幾何平均濃度（ＧＭＣ）を判定することによっても評価する。破傷風およびジフテリア抗原に対する免疫原性を、ＴＴおよびＤＴに対する抗体応答率を別個に測定することによって、評価する。ＴＴおよびＤＴ抗体応答は、それぞれ、以下のうちの１つとして定義される：１）ワクチン接種前の抗体レベルが０．１ＩＵ／ｍＬ未満である対象においては、ワクチン接種後の抗体レベルが０．４ＩＵ／ｍＬ以上であること、および、２）ワクチン接種前の抗体レベルが０．１ＩＵ／ｍＬ以上である対象においては、ワクチン接種前のレベルの少なくとも４倍の増加。
【0108】
百日咳抗原に対する免疫原性を、抗体特徴付けアッセイおよび機能性抗体応答の評価によって、さらに評価する。機能性抗体応答を、血清に基づくアッセイによって、抗体による百日咳毒素の中和を測定することおよびオプソニン化ファゴサイトーシスアッセイにおいて抗体オプソニン化活性を測定することによって、評価する。加えて、抗体のアイソタイプ決定、Ｆｃ受容体結合、および追加の抗体機能性リードアウトを、Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｓｅｒｏｌｏｇｙ分析において評価する。
【0109】
さらに、百日咳抗原に対する免疫原性はまた、Ｔ細胞における抗原リコール応答を測定することによって、評価される。対象から得られたＰＢＭＣを、インビトロにおいて、百日咳抗原（ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ）で再刺激し、細胞内サイトカイン発現を、フローサイトメトリーによって測定する。
【0110】
研究デザイン。研究は、Ｂ．パータシスでの鼻腔内チャレンジに対する健常対象の応答に対するＴｄａｐ追加免疫ワクチンの作用に関する無作為化非盲検研究として行う。健常成人対象は、非細胞性初回免疫（１８～２２歳の年齢）または全細胞性ワクチン初回免疫（２３～５０歳の年齢）のいずれかを受けるが、過去３年以内に追加免疫を受けておらず、百日咳毒素に対する血清抗体応答が陰性である。スクリーニングの後に、対象を、以下の処置群に無作為化する（ｎ＝５０人／群）：１）ワクチンなし、２）ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）、３）非細胞性または全細胞性ワクチンを以前に受けている対象においては、１回の投薬のＴｄａｐ－ミョウバン－１０１８（１５００もしくは３０００ｍｃｇの１０１８）、ならびに、４）非細胞性ワクチンを以前に受けている対象においては、２回の投薬のＴｄａｐ－ミョウバン－１０１８（１５００または３０００ｍｃｇの１０１８）。対象は、１日目に、ワクチン接種前の抗体レベル、ならびにベースライン機能性抗体応答およびＴ細胞応答（ＰＢＭＣ）を判定するために、処置ワクチンを受ける前にベースライン採血を受ける。ワクチンは、三角筋への単回の０．５ｍＬ筋肉内注射として投与される。ワクチン接種後の抗体レベル、機能性抗体応答、およびＴ細胞応答のためのＰＢＭＣの測定のための採血は、４週目（単回のチャレンジ前ワクチン投薬を受けた対象において、約２９日目）または８週目（２回のチャレンジ前ワクチン投薬を受けた対象において、約６０日目）に行う。採血後、対象に、Ｂ．パータシスＤ４２０株（およそ１０５コロニー形成単位）を鼻腔内に接種した。採血はまた、異なる研究群において免疫応答に対する百日咳コロニー形成の差次的作用の可能性を評価するために、Ｂ．パータシスでのチャレンジ後２週目にも行う。安全性、コロニー形成、および細菌排出を、入院施設において２１日間にわたってモニタリングする。コロニー形成は、培養および定量的ポリメラーゼ連鎖反応によって評価する。アジスロマイシンを、２１日目に投与して、Ｂ．パータシスによる鼻腔内コロニー形成を除去した。
【0111】
研究集団。研究対象の登用基準および除外基準としては、以下に提供されるリストのものが含まれるが、これらに限定されない。登用基準には、以下のすべてが含まれる：１８～５０歳の年齢の男性または女性であること、これまでのすべての百日咳免疫付与（例えば、これまでの２回またはそれ以上の非細胞性または全細胞性百日咳ワクチン接種）に関する書類を有すること、病歴、身体検査、および研究室評価に基づいて良好な健康状態にあること、ならびにヒト免疫不全ウイルスについて血清陰性であること。除外基準には、以下のうちのいずれか１つが含まれる：過去３年以内に非細胞性Ｔｄａｐ追加免疫を受けていること、ジフテリア、破傷風、もしくは百日咳の疾患歴、自己免疫疾患の病歴、ならびに／または研究の結果と混同し得る状態、治療、もしくは研究室の異常を有すること。混同する可能性のある治療としては、以下のうちのいずれかを受けることが挙げられる：研究ワクチン注射の２１日以内の任意の不活性化ワクチン、研究ワクチン注射の２８日以内の任意の生ウイルスワクチン、全身性コルチコステロイドもしくは他の免疫抑制医薬、顆粒球もしくは顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、または他の試験医薬、研究ワクチン注射の３ヶ月以内の免疫グロブリンまたは任意の血液製剤、あるいは任意の時点におけるデオキシリボ核酸プラスミドまたはオリゴヌクレオチドの注射。
【0112】
結果。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８のレシピエントは、鼻腔内接種後に低い細菌負荷量および／または早い細菌クリアランス、ならびに低いおよび／または軽度の疾患関連症状を有することが企図される。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８でワクチン接種した対象は、追加免疫ワクチン接種の４または８週間後の時点において、ＰＴ、ＦＨＡ、およびＰＲＮ抗原のうちの１つまたは複数に対して、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）のレシピエントよりも高い濃度の抗体を示すことが企図される。同様に、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８のレシピエントは、追加免疫ワクチン接種の４または８週間後の時点において、ＴＴおよびＤＴ抗原のうちの一方または両方に対して、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）のレシピエントよりも高い濃度の抗体を有することが企図される。加えて、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８を受容した対象のうち高いパーセンテージで、０．１ＩＵ／ｍＬ以上もしくは１．０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ＴＴ抗体、および／または０．１ＩＵ／ｍＬ以上もしくは１．０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ＤＴ抗体を有することが企図される。また、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）と比べたＴｄａｐ－ミョウバン－１０１８のワクチン接種の想定される作用としては、差次的抗体アイソタイプ決定およびＦｃ受容体結合プロファイル、ならびに機能的抗体応答の増加が挙げられる。Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８とＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）とのワクチン接種の対比は、Ｔ細胞サイトカイン発現プロファイルに対して差次的作用を有することが企図され、Ｔｄａｐ－ミョウバン－１０１８でワクチン接種した対象は、よりＴｈ１およびＴｈ１７に偏った応答（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７発現）を示すことが予測され、ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）でワクチン接種した対象は、よりＴｈ２に偏った応答（ＩＬ－４、ＩＬ－５、またはＩＬ－１３）を示すことが予測される。
【0113】
前述の開示は、明確さおよび理解の目的で、例示および実施例によっていくらか詳細に記載されているが、当業者であれば、ある特定の変更および改変を実施してもよいことが明らかであろう。したがって、実施例は、添付の特許請求の範囲によって記述される本開示の範囲を制限するものとして解釈されるものではない。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【配列表】
【国際調査報告】