(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-26
(54)【発明の名称】吸入のためのＧＭ－ＣＳＦの液体製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 38/17 20060101AFI20230419BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20230419BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20230419BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20230419BHJP
A61P 31/10 20060101ALI20230419BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20230419BHJP
A61K 9/72 20060101ALI20230419BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20230419BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20230419BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20230419BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20230419BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20230419BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20230419BHJP
C07K 14/535 20060101ALN20230419BHJP
C07K 14/765 20060101ALN20230419BHJP
C12N 15/14 20060101ALN20230419BHJP
C12N 15/27 20060101ALN20230419BHJP
【ＦＩ】
A61K38/17 ZNA
A61P11/00
A61P31/00
A61P31/04
A61P31/10
A61P31/12
A61K9/72
A61K47/26
A61K9/08
A61K47/42
A61K47/10
A61K47/02
A61K47/12
C07K14/535
C07K14/765
C12N15/14
C12N15/27
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022548034
(86)(22)【出願日】2021-03-17
(85)【翻訳文提出日】2022-09-30
(86)【国際出願番号】 EP2021056851
(87)【国際公開番号】W WO2021185921
(87)【国際公開日】2021-09-23
(31)【優先権主張番号】62/990,810
(32)【優先日】2020-03-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】20164648.6
(32)【優先日】2020-03-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522312539
【氏名又は名称】ドラッグリキュア エーピーエス
(74)【復代理人】
【識別番号】110003797
【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所
(74)【代理人】
【識別番号】100082072
【弁理士】
【氏名又は名称】清原 義博
(72)【発明者】
【氏名】スクリバー，ラース
(72)【発明者】
【氏名】ワット，アラン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA11
4C076AA93
4C076BB27
4C076CC15
4C076CC31
4C076CC32
4C076CC35
4C076DD09Q
4C076DD26Z
4C076DD38Q
4C076DD43Z
4C076DD67Q
4C076EE23Q
4C076EE41Q
4C076FF36
4C076FF61
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4C076FF68
4C084AA01
4C084AA02
4C084CA18
4C084CA53
4C084DA19
4C084MA13
4C084NA03
4C084NA06
4C084NA10
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZB321
4C084ZB322
4C084ZB331
4C084ZB332
4C084ZB351
4C084ZB352
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA12
4H045DA70
4H045EA22
4H045FA74
(57)【要約】
【解決手段】本明細書には、噴霧化による吸入のための組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）を含む液体製剤が提供される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
吸入による投与に使用するための組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）の液体製剤であって、ここで、前記液体製剤は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミンおよび水を含む、液体製剤。
【請求項2】
前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦは、モルグラモスチム（配列番号：１）、サルグラモスチム（配列番号：２）、またはレグラモスチムである、請求項１に記載の液体製剤。
【請求項3】
前記糖は、マルトース、トレハロース、スクロース、マンノース、ラクトース、またはガラクトース、あるいは前記糖アルコールは、マンニトールまたはソルビトールである、請求項１または２に記載の液体製剤。
【請求項4】
前記アルブミンは、組換えヒトアルブミンである、請求項１～３のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項5】
前記液体製剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をさらに含み、ここで、前記ＰＥＧは、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、またはＰＥＧ８０００、好ましくはＰＥＧ－４０００からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項6】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、少なくとも１５０μｇ／ｍＬである、請求項１～５のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項7】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、１５０～５００μｇ／ｍＬ、好ましくは２００～３００μｇ／ｍＬの範囲内にある、請求項６に記載の液体製剤。
【請求項8】
糖アルコールの濃度は、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～７のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項9】
糖アルコールの濃度は、４５～１００ｍｇ／ｍＬ好ましくは４５～５５ｍｇ／ｍＬの範囲内にある、請求項８に記載の液体製剤。
【請求項10】
アルブミンの濃度は、少なくとも０．２ｍｇ／ｍＬである、請求項１～９のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項11】
アルブミンの濃度は、０．５～１．５ｍｇ／ｍＬの範囲内にある、請求項１～１０のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項12】
前記ＰＥＧの濃度は、最大５０、例えば、最大４０、例えば、最大３０、例えば、最大２０、例えば、最大１０、例えば、最大１ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１１のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項13】
前記ＰＥＧの濃度は、０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬの範囲内にある、請求項１～１２のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項14】
前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦは、モルグラモスチム（配列番号：１）であり、前記糖アルコールはマンニトールであり、前記アルブミンは組換えヒトアルブミンであり、前記ＰＥＧはＰＥＧ－４０００である、請求項１～１３のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項15】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、少なくとも１５０μｇ／ｍＬであり、マンニトールの濃度は少なくとも２５ｍｇ／ｍＬであり、組換えヒトアルブミンの濃度は少なくとも０．２ｍｇ／ｍＬにあり、およびＰＥＧ－４０００の濃度は最大１ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載液体製剤。
【請求項16】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、２００～３００μｇ／ｍＬであり、マンニトールの濃度は４５～１００ｍｇ／ｍＬであり、組換えヒトアルブミンの濃度は０．５～１．５０ｍｇ／ｍＬであり、およびＰＥＧ－４０００の濃度は０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項１５に記載の液体製剤。
【請求項17】
クエン酸一水和物またはＮａ２ＨＰＯ４などの緩衝液をさらに含む、請求項１～１６のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項18】
前記液体製剤の重量モル浸透圧濃度は、２５０～３７５ｍＯｓｍ／Ｌ、好ましくは３２５～３３５ｍＯｓｍ／Ｌである、請求項１～１７のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項19】
４０℃で３ヶ月保存した後に残存するｒｈＧＭ－ＣＳＦの％は６０％を超え、および／または２５℃で６ヶ月後の不純物形成のレベルは５％未満である、請求項１～１８のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項20】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの生物学的効力の少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９８％、例えば、少なくとも９９％は噴霧化後に保持される、請求項１～１９のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項21】
前記液体製剤は、２５℃で少なくとも１８ヶ月間の保存で安定する、請求項１～２０のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項22】
吸入のための前記液体製剤が噴霧化される、請求項１～２１のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項23】
前記液体製剤は経肺投与に使用するためのものである、請求項１～２２のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項24】
前記使用が肺感染症の処置のための使用である、請求項１～２３のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項25】
前記使用が肺における細菌、ウイルス、または真菌の感染症の処置のための使用である、請求項１～２４のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項26】
前記使用が、自己免疫性肺胞たんぱく症（ａＰＡＰ）または非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）感染症の処置のための使用である、請求項１～２５のいずれか１つに記載の液体製剤。
【請求項27】
請求項１～２６のいずれか１つに記載の液体製剤を含む吸入器。
【請求項28】
前記吸入器が噴霧器である、請求項２７に記載の吸入器。
【請求項29】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミンおよび水を含む、組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）の肺用製剤。
【請求項30】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の噴霧化を含む、ｒｈＧＭ－ＣＳＦを肺に送達する方法であって、ここで、前記液体製剤はｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミンおよび水を含み、前記方法により前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦが送達される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）を含む吸入のための液体製剤に関する。
【背景技術】
【0002】
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）は、もともと造血成長因子として同定されていた。ヒトＧＭ－ＣＳＦは、インビトロの骨髄球ならびに赤血球前駆細胞の成長を刺激し、いくつかの免疫および炎症性のプロセスにおいて単球、マクロファージならびに顆粒球を活性化する（Ｇａｓｓｏｎ ＪＣ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ．１９９０；３５２：３７５-３８４．；Ｇａｓｓｏｎ ＪＣ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ．１９９０；３３８：２７-４１；Ｈａｒｔ ＳＰ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ．１９９８；２６（４）：６５０-６５２；Ｒａｐｏｐｏｒｔ ＡＰ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｖ．１９９２；６（１）：４３-５７．）。それは、リンパ球、単球、内皮細胞、線維芽細胞および一部の悪性細胞を含む多くの細胞型によって産生される（Ｍｅｔｃａｌｆ Ｄ．Ｂｌｏｏｄ．１９８６；６７（２）：２５７-２６７；Ｃｌａｒｋ ＳＣ，Ｋａｍｅｎ Ｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９８７；２３６（４８０６）：１２２９-１２３７；Ｈａｒｔ ＰＨ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８８；１４１（５）：１５１６-１５２１；Ｍｅｔｃａｌｆ Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１９８６；６７（１）：３７－４５）。造血前駆細胞上の成長刺激および分化の機能を有することに加えて、ＧＭ－ＣＳＦは、ＧＭ－ＣＳＦ受容体を発現する免疫系の細胞に様々な作用を及ぼすことも発見された（概説としてはＨａｍｉｌｔｏｎ ＪＡ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；２３（８）：４０３-４０８；ｄｅ Ｇｒｏｏｔ ＲＰ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ．１９９８；１０（９）：６１９－６２８を参照）。
【0003】
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子吸入療法は、自己免疫性肺胞たんぱく症（ａＰＡＰ）（Ｔａｚａｗａ Ｒ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１９；３８１（１０）：９２３－９３２）非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）の感染（Ｓｃｏｔｔ ＪＰ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．２０１８；５１（４）：１７０２１２７）、急性放射線症候群（Ｓｉｎｇｈ ＶＫ ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．２０１５；７１（１）：２２－３７）、急性呼吸窮迫症候群（Ｈｅｒｏｌｄ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２０１４；１８９（５）：６０９－６１１）および嚢胞性線維症（Ｈｅｓｌｅｔ Ｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｎｆｌａｍｍ Ｒｅｓ．２０１２；５：１９-２７．）に苦しむ患者を噴霧化によって処置するために開示されてきた。
【0004】
吸入療法は、全身性副作用を軽減するとともに肺への最適に送達する最良の可能性を提供する。吸入処置は、最適な有効性に必要な薬物の量を低下させて、気道を標的とする。さらに、通常、薬物の急速な作用発現に伴って、全身性副作用の発生率が低くなる。噴霧器は、肺のすべての部位で堆積させ得る呼吸可能な液滴の非常に微細なミストで空気を満たすため、真菌類または細菌の肺感染に非常に適切な処置方法である。
【0005】
しかしながら、吸入療法用の液体としてのタンパク質製剤は、噴霧器への添加が可能、かつエアロゾル生成中に安定した状態を維持できる製品が必要となるため、非常に複雑なプロセスである。製剤は、長期間保存の際に安定性を維持し、タンパク質の完全性に対する噴霧化の影響を最小限に抑え、経肺送達に適切な張性を有するべきである。したがって、安定性と、潜在的毒性を含む肺での耐容性と等張性との間の微妙なバランスが、吸入療法のための有効なタンパク質製剤を達成する秘訣である。
【0006】
タンパク質が、再懸濁のための凍結乾燥された製品として製剤される時、再懸濁の際に等張性が達成できる長期安定性が確保されるため、同じ課題は発生しない。したがって、同じ賦形剤組成物は、必ずしも２つの異なる製剤に適用可能とは限らない。
【0007】
ＧＭ－ＣＳＦの液体製剤（ＬＥＵＫＩＮＥ（登録商標））は、以前静脈内投与のために開示された（ＵＳ２００２１４１９７０Ａ１）。ＵＳ２００２１４１９７０Ａ１は、化合物の安定性を増大させるため、賦形剤としてキレート化剤の添加を示唆する。
【0008】
噴霧化のための薬液の製剤は、薬物の溶解性および安定性を最適化することを目指しており、製剤のわずかな変化が、吸入量、粒度分布および処置時間にも影響する場合がある。
【0009】
噴霧化は、タンパク質を不安定にする固有のリスクを内在する。噴霧化の際のタンパク質不安定性の主な原因は、気液界面でのアンフォールディングおよび凝集であるため、噴霧化のためのＧＭ－ＣＳＦの使用には、吸入のために使用準備ができており、かつ噴霧化の際に有意な変化をもたらさない安定した液体製剤が必要とされる。
【発明の概要】
【0010】
本発明は、吸入のために使用準備ができており、かつ噴霧化の際、妥当な不安定性を示さないｒｈＧＭ－ＣＳＦの安定した液体製剤を開示する。
【0011】
本発明の１つの実施形態では、糖アルコールまたは糖、アルブミン、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と水の組み合わせは、高度に安定したｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を提供する。
【0012】
１つの実施形態では、上記に記載された液体製剤は、噴霧化のために薬剤として使用されるものである。
【0013】
１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ａＰＡＰまたはＮＴＭ感染の処置に使用するものである。
【0014】
１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコール、アルブミンおよびＰＥＧを噴霧化する工程を含む組換えｒｈＧＭ－ＣＳＦを経肺送達するための方法が開示される。
【0015】
さらなる実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を含む噴霧器が、ａＰＡＰまたはＮＴＭ感染の処置に使用するために開示される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】図１は、４０℃で３ヶ月後に残存するｒｈＧＭ－ＣＳＦ％に対するマンニトールの影響。３ヶ月にわたって加速条件でｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の安定性に対するマンニトール濃度の影響が評価された。マンニトールの濃度は、薬物安定性に影響を及ぼすことが発見された。マンニトールのより高い濃度（５０ｍｇ／ｍＬ）によって、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの安定性が改善した。Ｙ軸は、Ｔ０と比較して、残存するｒｈＧＭ－ＣＳＦ含有量％である。
【図2】図２は、マンニトールの濃度の群化内のｒｈＧＭ－ＣＳＦレベルの４０℃で３ヶ月後に残存するＧＭ－ＣＳＦに対する影響。３ヶ月にわたる加速条件で液体製剤の安定性へｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度の影響も評価された。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、薬物安定性に影響を及ぼすことが発見された。特定のマンニトールの濃度でのｒｈＧＭ－ＣＳＦのより高い濃度（４００μｇ／ｍＬ）によって、液体製剤中のｒｈＧＭ－ＣＳＦの安定性が改善した。Ｙ軸は、Ｔ０と比較して、残存する％ｒｈＧＭ－ＣＳＦ含有量％である。
【図3】図３は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ不純物形成へのｒＨＡおよびＰＥＧ４０００の影響。安定化剤としてｒＨＡとＰＥＧ４０００を含む製剤では、６ヶ月にわたる冷却状態と加速条件でより少ないｒｈＧＭ－ＣＳＦ不純物が形成された。簡易型製剤（白丸）は、ｒＨＡまたはＰＥＧ４０００を含有していない。複合型体製剤（黒丸）は１．０ｍｇ／ｍＬのｒＨＡおよび０．１ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ４０００を含有している。
【図4A】図４Ａは、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型体製剤の１８ヶ月間の性能の安定性。噴霧化の際の複合型ｒｈＧＭ－ＣＳＦ製剤の性能の安定性は、５℃と２５℃で１８ヶ月間の保存まで評価された。以下の３つのパラメータ：ＤＤ＝シミュレートされた呼吸での送達量（ＵＳＰ＜１６０１＞、成人による）、ＦＰＦ＝微粒子フラクション（５μｍ未満の液滴）およびＭＭＡＤ＝空気動力学的質量中央径が評価された。噴霧化の際、１８ヶ月間までの時点で性能の安定性の変動は、ほとんどまたはまったく発見されなかった。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本発明は、吸入による投与に使用するための組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）の液体製剤であって、ここで、液体製剤は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミンおよび水を含む、液体製剤に関する。
【0018】
特定の賦形剤の組み合わせによって、吸入療法に使用する準備ができている液体製剤中のｒｈＧＭ－ＣＳＦの高安定性が保証される。
【0019】
１つの実施形態では、前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦは、モルグラモスチム（配列番号：１）、サルグラモスチム（配列番号：２）、またはレガラモスチム（Ｒｅｇｒａｍｏｓｔｉｍ）である。
【0020】
モルグラモスチムのアミノ酸配列は、内在性ヒトＧＭ－ＣＳＦのアミノ酸配列と同一である。サルグラモスチムのアミノ酸配列は、位置２３でのロイシンの置換で天然のＧＭ－ＣＳＦと異なる。好ましい実施形態では、前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦはモルグラモスチム（配列番号：１）である。モルグラモスチムは、大腸菌中で発現された非グリコシル化ｒｈＧＭ－ＣＳＦである。
【0021】
１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は糖を含み、ここで、前記糖は、マルトース、トレハロース、スクロース、マンノース、ラクトースまたはガラクトースからなる群から選択される。
【0022】
本発明の別の実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、マンニトールまたはソルビトールからなる群から選択された糖アルコールを含む。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤へのポリオール糖の添加によって、安定性が上昇する。さらに、ポリオール糖は、製剤がヒト血漿と等張であることを保証するための等張化剤として使用される。好ましい実施形態では、前記糖アルコールはマンニトールである。
【0023】
アルブミンは、球状タンパク質のファミリーであり、最も一般的なのは血清アルブミンである。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、ヒト血漿に含まれる最も一般的なタンパク質である。ＨＳＡの添加は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ液体製剤の安定性に貢献する。また、存在量およびアルブミンへの天然の自己寛容によって、ある患者集団においてＨＳＡが免疫応答を誘発する可能性を最小限に抑えることができる。したがって、本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤はアルブミンを含む。好ましい実施形態では、前記アルブミンはＨＳＡである。本発明の別の実施形態では、アルブミンが組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）である。
【0024】
本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ＰＥＧをさらに含む。
そのようなＰＥＧは、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、またはＰＥＧ８０００を含むが、それらに限定されない。したがって、１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００またはＰＥＧ８０００からなる群から選択されたＰＥＧをさらに含む。好ましい実施形態では、前記ＰＥＧはＰＥＧ－４０００である。
そのようなＰＥＧは、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、またはＰＥＧ８０００を含むが、それらに限定されない。したがって、１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ１５５０、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００またはＰＥＧ８０００からなる群から選択されたＰＥＧをさらに含む。好ましい実施形態では、前記ＰＥＧはＰＥＧ－４０００である。
【0025】
タンパク質の濃度は、安定的かつ使用する準備ができた製剤を保証するために決定的である。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度を増加させると、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の安定性を上昇させ得る。本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は少なくとも１５０μｇ／ｍＬである。本発明のさらなる実施形態では、開示された液体製剤中のｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、少なくとも１５０～５００μｇ／ｍＬの範囲にある。本発明の別の実施形態では、開示された液体製剤中のｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、２００～３００μｇ／ｍＬの範囲にある。本開示は、糖アルコールのマンニトールの存在下において、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度を増加させると、液体製剤を安定化させることを示す（図２）。
【0026】
吸入用のｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の等張性と安定性との間のバランスを保証するために、本発明の実施形態は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を開示し、ここで、糖アルコールの濃度は、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬである。本発明のさらなる実施形態では、糖アルコールの濃度は、４５～１００ｍｇ／ｍＬの範囲にある。本発明の別の実施形態では、糖アルコールの濃度は、４５～５５ｍｇ／ｍＬの範囲にある。本開示の図１で見えるように、糖アルコールのマンニトールの濃度を増加させると、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの安定性が改善する。マンニトールの安定化効果は、２５ｍｇ／ｍＬの糖アルコールの濃度で確認される。この効果は、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で大幅に増加する。
【0027】
本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、少なくとも０．２ｍｇ／ｍＬの濃度でのアルブミンを含む。さらなる実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、０．２～１０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内、例えば、０．３～５ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．５～１．５ｍｇ／ｍＬのアルブミンを含む。本開示の図３では、冷却状態および加速条件の両方において安定化剤としてのｒＨＡおよびＰＥＧ４０００を含有しているｒｈＧＭ－ＣＳＦ液体製剤（複合型体製剤）でｒｈＧＭ－ＣＳＦはほとんど含まれていない不純物は形成されることが示される。さらに、図５は、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度でアルブミンの安定化効果が既に確認され得、安定化効果は濃度を増加させることで増加することを示す。
【0028】
本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ＰＥＧを含み、例えば、ＰＥＧの濃度は、最大５０、例えば、最大４０、例えば、最大３０、例えば、最大２０、例えば、最大１０、例えば、最大１ｍｇ／ｍＬである。本発明の別の実施形態では、ＰＥＧの濃度は、例えば、０．０５～０．５ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．０５～０．３ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．０５～０．２ｍｇ／ｍＬの濃度範囲にある。本発明のさらなる実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬの濃度範囲内のＰＥＧを含む。
【0029】
賦形剤と生化学的製剤（ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）の最適な組み合わせおよび濃度の選択は、非常に特異的で複雑なプロセスであり、個々のタンパク質製剤に特有である。本発明は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の１つの実施形態を開示し、ここで、ｒｈＧＭ－ＣＳＦは、モルグラモスチム（配列番号：１）であり、前記糖アルコールはマンニトールであり、前記アルブミンは組換えヒトアルブミンであり、前記ＰＥＧはＰＥＧ－４０００である。
【0030】
１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、少なくとも１５０μｇ／ｍＬであり、マンニトールの濃度は少なくとも２５ｍｇ／ｍＬであり、組換えヒトアルブミンの濃度は少なくとも０．２ｍｇ／ｍＬであり、およびＰＥＧ－４０００の濃度は最大１ｍｇ／ｍＬである。
【0031】
本発明の別の実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は、１５０～５００μｇ／ｍＬであり、マンニトールの濃度は４５～１００ｍｇ／ｍＬであり、組換えヒトアルブミンの濃度は０．５～１．５ｍｇ／ｍＬであり、およびＰＥＧ－４０００の濃度は０．０５～０．１５ｍｇ／ｍＬである。
【0032】
好ましい実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの濃度は２００～３００μｇ／ｍＬの範囲にあり、マンニトールの濃度は５０ｍｇ／ｍＬであり、組換えヒトアルブミンの濃度は１ｍｇ／ｍＬであり、およびＰＥＧ－４０００の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬである。
【0033】
緩衝液は、ｐＨを調節し、安定化させ、および薬物溶解性および安定性を最適化するために製剤に添加された。吸入用の薬物については、生成物のｐＨが生理的なｐＨに接近していることが望ましい。本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は緩衝液をさらに含む。好ましい実施形態では、前記緩衝液がクエン酸一水和物またはＮａ２ＨＰＯ４を含む。
【0034】
液体製剤の重量モル浸透圧濃度は、液体製剤が吸入に適しているための重要なパラメータである。好ましくは、液体製剤は本質的に等張である。したがって、本発明の１つの実施形態では、製剤の重量モル浸透圧濃度は、２５０～３７５ｍＯｓｍ／Ｌ、好ましくは３２５～３３５ｍＯｓｍ／Ｌである。
【0035】
本発明の１つの実施形態では、４０℃で３ヶ月保存した後に残存するｒｈＧＭ－ＣＳＦの％が６０％を超えるｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤が開示される。本発明のさらなる実施形態では、２５℃で６ヶ月後の不純物形成のレベルが５％未満であるｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤が開示される。
【0036】
本発明は、１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコール、アルブミンおよびＰＥＧの噴霧化を含む、ｒｈＧＭ－ＣＳＦを肺に送達する方法をさらに開示する。
【0037】
本明細書に提示されるｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、特に噴霧化によく適している。本開示のデータは、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミン、ＰＥＧおよび水を含む液体製剤に対するモルグラモスチムの効力が、噴霧化時にｒｈＧＭ－ＣＳＦの生物学的効力の９９．４％を保持することを実証する。さらに、ｒｈＧＭ－ＣＳＦのこの液体製剤の噴霧化の後で、ｒｈＧＭ－ＣＳＦが噴霧化プロセスの後に大部分は元の状態のままであることが見出された。最後に、最大１８ヶ月の時点で本明細書に提示される液体製剤を噴霧化しても、性能安定性の変化はほとんど見られないか、またはまったく見られない。
【0038】
本発明の１つの実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの生物学的効力の少なくとも９０％、例えば、少なくとも９５％、例えば、少なくとも９８％、例えば、少なくとも９９％は噴霧化後に保持される。
【0039】
本発明のさらなる実施形態では、製剤は、２５℃で少なくとも１８ヶ月間の保存安定性である。
【0040】
本発明の別の実施形態では、液体製剤は経肺投与に使用するためのものである。経肺投与を容易にするために、製剤は小さな呼吸可能な液滴にエアロゾル化されなければならず、その液滴の大部分は直径５μｍ未満である。生物学的調製物の場合、製剤はエアロゾル化プロセス中に安定性を維持しなければならず、このプロセスでは、高レベルの機械エネルギーおよび気液界面の面積の増加によって、タンパク質の変性および／または凝集が引き起こされる可能性がある。製剤は、肺への投与に安全、かつ適切な範囲のｐＨ及び等張性の賦形剤も含む必要がある。
【0041】
本発明の別の実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は肺感染症の処置で使用するためのものである。
【0042】
さらなる実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、肺における細菌、ウイルス、または真菌類の感染症の処置で使用するためのものである。１つの実施形態では、細菌感染症は、肺炎球菌、ヘモフィルス属種、黄色ブドウ球菌および結核菌から成る群から選択される。別の実施形態では、ウイルス感染症は気管支炎、肺炎および毛細気管支炎からなる群から選択される。さらに別の実施形態では、真菌感染症は、アスペルギルス、クリプトコックス、ニューモシスティスおよび地方病性の真菌類から成る群から選択される。
【0043】
好ましい実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、自己免疫性肺胞たんぱく症（ａＰＡＰ）または非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）感染症の処置、結核、ＡＲＤＳ、インフルエンザ感染症、コロナウイルス感染症、急性および慢性の放射線症候群、気管支喘息、ＣＯＰＤ、肺線維症、肺癌および呼吸器系の炎症性障害の処置で使用するためのものである。製剤はさらに、免疫学的反応を刺激し、肺感染症から保護するために予防的に使用されてもよい。
【0044】
本発明の実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、噴霧化のための薬物として使用するために開示される。別の実施形態では、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤は、ａＰＡＰまたはＮＴＭ感染症の処置で使用するために開示される。
【0045】
１つの実施形態では、病状を治療する方法であって、対象に噴霧化によってｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を投与することを含む。別の実施形態では、ａＰＡＰまたはＮＴＭ感染症を処置する方法が提供され、該方法は対象にｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を投与することを含む。
【0046】
ＡＰＡＰはまれな自己免疫性の肺疾患である。それは、肺胞たんぱく症（ＰＡＰ）の最も一般的な形態（症例の９０％）である。ほとんどの症例は、２０～５０歳の成人が発症する。症状を示さない人もいれば、呼吸困難が進行し、労作時に息切れがする人もいる。他の徴候や症状は、乾燥した慢性咳、疲労、体重減少、胸痛、および不定愁訴を含む場合がある。まれな症例では、喀血、指先の丸みかつ腫れ、およびチアノーゼが存在することがある。自己免疫性ＰＡＰは、ＧＭ－ＣＳＦ効果を遮断するＩｇＧ抗体による免疫系の機能不全によって引き起こされる。ＧＭ－ＣＳＦは、肺胞マクロファージによるサーファクタント（タンパク質と脂肪の混合物）の排除を調節する。サーファクタントは肺（肺胞）の気嚢に蓄積し、および最終的には呼吸が不可能になる。標準処置は、肺洗浄と呼ばれる手技である。
【0047】
ＮＴＭは、結核やハンセン病を引き起こさないマイコバクテリアである。ＮＴＭは、結核に似た肺疾患を引き起こす。ＮＴＭ疾患の最も一般的な臨床症状は肺疾患であるが、リンパ、皮膚／軟部組織、および播種性の疾患も重要である。ＮＴＭによって引き起こされる肺疾患は、閉経後の女性、および嚢胞性線維症、気管支拡張症、および結核の前などの基礎肺疾患を有する患者に最もよく見られる。アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、マルファン症候群、および原発性線毛機能不全の患者が、肺のＮＴＭコロニー形成および／または感染症を発症することは珍しくない。肺性ＮＴＭはさらに、ＡＩＤＳおよび悪性疾患の個体にも発見され得る。
【0048】
臨床症状の範囲および強度は変動するが、一般的に化膿性痰を伴う慢性咳を含む。喀血がみられることもある。全身症状は、進行した疾患における倦怠感、疲労、および体重減少を含む。マイコバクテリウム・アブセサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）肺感染症の診断には、症状の存在、放射線学的異常、および微生物培養が必要とされる。
【0049】
本開示に係るｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を含む吸入器。好ましい実施形態では、吸入器は噴霧器である。噴霧器のタイプは、ジェット噴霧器、超音波および振動メッシュを含む。他の実施形態は、ソフトミスト吸入器、表面音響波噴霧化、および毛細管エアロゾル発生器を含む。
【0050】
１つの実施形態では、本発明は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤の噴霧化を含む、ｒｈＧＭ－ＣＳＦを肺に送達するための方法を開示し、ここで、液体製剤はｒｈＧＭ－ＣＳＦ、糖アルコールまたは糖、アルブミンおよび水を含み、該方法により前記ｒｈＧＭ－ＣＳＦが肺に送達される。
【0051】
別の実施形態では、本発明は、ａＰＡＰまたはＮＴＭ感染症の処置で使用されるためのｒｈＧＭ－ＣＳＦの液体製剤を含む噴霧器を開示する。これはジェット噴霧器、超音波および振動メッシュ噴霧器を含む。
【実施例】
【0052】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの安定性に対する異なる製剤の効果を、ＨＰＬＣを使用して研究した。各製剤の含有量と純度は、逆相高圧クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）によって評価された。高次構造（凝集体）およびｒｈＧＭ－ＣＳＦの分解生成物の決定は、サイズ排除高圧クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価された。
【0053】
実施例１（図１）―マンニトール濃度の効果
モルグラモスチムの３つの製剤パラメータは、下記の表（表１）に従って変更された。
１．マンニトールレベル（０～５０ｍｇ／ｍＬ）：製剤が等張性を維持するように、緩衝液濃度も同時に調整した。
２．安定化剤（４つのオプションのうちの１つ）：ｒＨＡおよびＰＥＧ、ｒＨＡ単独で、安定化剤不在、およびＴｗｅｅｎ８０単独で
３．モルグラモスチムレベル（０．１～０．４ｍｇ／ｍｌ）
モルグラモスチムの３つの製剤パラメータは、下記の表（表１）に従って変更された。
１．マンニトールレベル（０～５０ｍｇ／ｍＬ）：製剤が等張性を維持するように、緩衝液濃度も同時に調整した。
２．安定化剤（４つのオプションのうちの１つ）：ｒＨＡおよびＰＥＧ、ｒＨＡ単独で、安定化剤不在、およびＴｗｅｅｎ８０単独で
３．モルグラモスチムレベル（０．１～０．４ｍｇ／ｍｌ）
【0054】
【表1】
【0055】
データをＲＰ－ＨＰＬＣ方法によって収集した。バイアルを４０°Ｃで３ヶ月保存した。上の表の１５の製剤の各々に２つの調製物があった。この研究の主な発見は、図１に示されるものであった。マンニトールのレベルは３ヶ月で加速条件での安定性に顕著な影響を及ぼした。
【0056】
実施例２（図２）―ｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度の効果
実施例１で記載されているように収集されたデータから、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度が増加すると、マンニトールの特定の濃度でのｒｈＧＭ－ＣＳＦ製剤の安定性にも顕著な効果が見られることをさらに観察した。
実施例１で記載されているように収集されたデータから、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度が増加すると、マンニトールの特定の濃度でのｒｈＧＭ－ＣＳＦ製剤の安定性にも顕著な効果が見られることをさらに観察した。
【0057】
実施例３―ｒＨＡおよびＰＥＧ－４０００の効果（図３）
噴霧化のためのモルグラモスチム製剤の安定性に対するｒＨＡおよびＰＥＧ－４０００の効果を、以下の条件で研究した。
噴霧化のためのモルグラモスチム製剤の安定性に対するｒＨＡおよびＰＥＧ－４０００の効果を、以下の条件で研究した。
【0058】
【表2】
【0059】
製剤調製
以下に記載するように、モルグラモスチム製剤のバージョン（複合型および簡易型）を使用して、安定性試験を実施した。
以下に記載するように、モルグラモスチム製剤のバージョン（複合型および簡易型）を使用して、安定性試験を実施した。
【0060】
モルグラモスチム複合型製剤
複合型製剤を、以下の記載に従って重量ベースで調製した。除菌は、最終的に製剤された産物に対してのみ行った。最終的に製剤された産物の内容は下記の表の通りである。
複合型製剤を、以下の記載に従って重量ベースで調製した。除菌は、最終的に製剤された産物に対してのみ行った。最終的に製剤された産物の内容は下記の表の通りである。
【0061】
【表3】
【0062】
複合型ｒｈＧＭ－ＣＳＦ製剤を製造するために、最初に下記の手順に従って緩衝液を調製した。
【0063】
クエン酸／リン酸／ＨＳＡ緩衝液（例バッチサイズは＝２０００ｇ）の調製
【0064】
【表4】
【0065】
ｒＨＳＡを２～８℃の貯蔵庫から取り出し、室温に平衡化させた。必要とされた量のマンニトール、ＰＥＧ４０００、クエン酸一水和物、リン酸水素二ナトリウム（無水）およびｒＨＳＡを適切な容器に事前に秤量した。清潔なビーカー／ボトルと攪拌棒をトップローディング天秤の上に置き、ビーカーと攪拌棒の重量を記録して風袋を計った。約８００ｇの注射用水（ＷＦＩ）をビーカーに添加した。必要量のクエン酸一水和物、リン酸水素二ナトリウム（無水）、マンニトールおよびＰＥＧ４０００をＷＦＩに加え、ビーカーを攪拌プレートに移し、すべての固体が溶解するまで混合物を攪拌した。ビーカーをトップローディング天秤に戻し、必要量のｒＨＳＡをビーカーに添加した。その後、ビーカーを撹拌プレートに移し、約５分間または溶液が均質になるまで穏やかに撹拌した。発泡は回避するべきである。最後に、ＷＦＩを目標量２０００ｇまで添加し、発泡を避けながら再び約１０分間溶液を穏やかに攪拌した。緩衝液にラベル付けし、さらに処理するまで２－８℃で保存した。緩衝液は２～８℃で１００時間まで保存することができる。
【0066】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの製剤化産物の調製（実施例のバッチサイズ＝１０００ｇ）
緩衝液の調製後、下記の手順でｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤を調製する。
ｒｈＧＭ－ＣＳＦ溶液の重量（ｇ）＝Ａ
製剤化産物の重量（ｇ）＝Ａ＋（１０．１５０７×Ａ）
緩衝液の調製後、下記の手順でｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤を調製する。
ｒｈＧＭ－ＣＳＦ溶液の重量（ｇ）＝Ａ
製剤化産物の重量（ｇ）＝Ａ＋（１０．１５０７×Ａ）
【0067】
【表5】
【0068】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦを、２～８℃で２４時間±４時間解凍した。この時間内にバルク材が解凍されない場合は、室温でボトルを静かに回して解凍を継続する。ボトルを振るべきでなく、発泡を回避するべきである。必要量のｒｈＧＭ－ＣＳＦを適切な大きさの容器に事前に秤量した。清潔なボトルと攪拌棒をトップローディング天秤の上に置いた。ビーカーと攪拌棒の重量を記録して風袋を計った。約８００ｇのクエン酸／リン酸／ｒＨＡ緩衝液をビーカーに添加し、その後、事前に秤量された量のｒｈＧＭ－ＣＳＦもビーカーに添加した。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの容器をクエン酸／リン酸／ＨＳＡ緩衝液ですすぎ、すすぎ液をビーカーに移した。その後、ビーカーを撹拌プレートの上に置き、発泡を避けながら約５分間穏やかに撹拌した。混合物が完全に均質であることを確認した。クエン酸／リン酸／ＨＳＡ緩衝液を最終重量が１０００ｇになるように添加し、続いて発泡を避けながら約１０分間穏やかに攪拌した。製剤化産物は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｔｅｒｉｃｕｐフィルタユニット（ＰＶＤＦ膜（Ｄｕｒａｐｏｒｅ）、非常に低いタンパク質結合、孔径０．２２μｍ）を使用して濾過し、光から保護し２～８℃で保存した。
【0069】
モルグラモスチム簡易型製剤
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの簡易型製剤は、簡易型製剤用緩衝液の密度が不明なため、容量ベースで調製している。最終的な製剤化産物の１バイアルあたりの成分濃度および配合量は下記の表に示される。
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの簡易型製剤は、簡易型製剤用緩衝液の密度が不明なため、容量ベースで調製している。最終的な製剤化産物の１バイアルあたりの成分濃度および配合量は下記の表に示される。
【0070】
【表6】
【0071】
ｒｈＧＭ－ＣＳＦの製剤化産物の調製（実施例バッチサイズ＝１０００ｍＬ）
【0072】
【表7】
【0073】
必要量のマンニトール、クエン酸一水和物、リン酸水素二ナトリウム（無水）を適切な容器に事前に秤量した。約８００ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）は撹拌棒を備えたビーカーに添加した。クエン酸一水和物、リン酸水素二ナトリウム（無水）およびマンニトールをＷＦＩに添加した。その混合物を、すべての固体が溶解するまで攪拌した。必要量のｒｈＧＭ－ＣＳＦをビーカーに添加し、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの容器をＷＦＩですすぎ、すすぎ液をビーカーに移した。ビーカーを撹拌プレートの上に置き、発泡を避けながら混合物を約５分間穏やかに撹拌した。完全に均質であることをチェックする。ビーカーの内容物を１Ｌメスフラスコに移した。ビーカーをＷＦＩですすぎ、すすぎ液はメスフラスコに移した。移動中に泡が立たないように注意するべきである。ＷＦＩは１LまでＱＳへのメスフラスコに添加された。また、内容物はフラスコを軽ひっくり返すことによって混合された。製剤化産物を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｔｅｒｉｃｕｐフィルタユニット（ＰＶＤＦ膜（Ｄｕｒａｐｏｒｅ）、非常に低いタンパク質結合、孔径０．２２μｍ）を使用して濾過した。最終的な製剤化産物を、光から保護し２～８℃で保存した。
【0074】
本研究の主な発見は、図２に示すようなものである。ｒＨＡおよび安定剤としてＰＥＧ４０００を含む製剤（複合型製剤）では、冷蔵と加速条件下の両方で、ｒｈＧＭ－ＣＳＦの不純物の形成が少なかった。さらに、下記の表では、複合型製剤は、４０℃で１２日間保存した場合の純度が、簡易型製剤と比較して明らかに高いことが示される。
【0075】
【表8】
【0076】
【表9】
【0077】
実施例４―噴霧化後の安定性
噴霧化後のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤の安定性は、非噴霧化製剤と濃縮噴霧化製剤とを比較し、検出された不純物およびタンパク質凝集体を比較することによって評価した。振動メッシュによって生成されたエアロゾルを、メッシュに対して配置されたポリプロピレンチューブに収集することにより、噴霧化の直後に収集した。不純物およびたんぱく質凝集体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）それぞれによって検出された。本研究で評価された製剤は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度が２５０μｇ／ｍＬではなく３００μｇ／ｍＬであることを除いて、上記のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤と同一であった。高濃度のモルグラモスチムは不安定性を示す可能性が高く、最悪のシナリオを表している。
噴霧化後のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤の安定性は、非噴霧化製剤と濃縮噴霧化製剤とを比較し、検出された不純物およびタンパク質凝集体を比較することによって評価した。振動メッシュによって生成されたエアロゾルを、メッシュに対して配置されたポリプロピレンチューブに収集することにより、噴霧化の直後に収集した。不純物およびたんぱく質凝集体は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）それぞれによって検出された。本研究で評価された製剤は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度が２５０μｇ／ｍＬではなく３００μｇ／ｍＬであることを除いて、上記のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤と同一であった。高濃度のモルグラモスチムは不安定性を示す可能性が高く、最悪のシナリオを表している。
【0078】
ＨＰＬＣによって決定された未知不純物の検出は、下記の表２に表記される。主ピークに対するこれらのピークの相対保持時間（ＲＲＴ）は、０．８７、０．９６、１．０７であった。Ｈｅａｄ ｔｙｐｅ３０装置を使用して噴霧化を行った後、噴霧化サンプルでＲＲＴ０．８７の微上昇（０．２６％）、リザーバーでの残留（０．３２％）が検出された。これらの結果は、ｒｈＧＭ－ＣＳＦが噴霧化プロセスの後に大部分は元の状態のままであることを実証する。
【0079】
【表10】
【0080】
噴霧化による不純物や凝集物の発生を、振動メッシュ式噴霧器（ＰＡＲＩ ｅＦｌｏｗ）で産生されたエアロゾルを捕集して分析し、初期検討した。ＳＥＣによる凝集の評価では、ＨＭＷ１およびＨＭＷ２として表示されるアルブミン関連凝集体に観察可能な違いが認められた。このデータから、噴霧化プロセスでアルブミンのある程度の凝集が起こるが、製剤中のタンパク質の大部分は凝集しないままであることが推測される。
【0081】
【表11】
【0082】
【表12】
【0083】
表４に収集したデータは、振動メッシュ式噴霧器による噴霧化前後の複合型製剤のｒｈＧＭ－ＣＳＦ濃度である。含有量をＲＰ－ＨＰＬＣで測定した。
【0084】
最後に、モルグラモスチムの効力の噴霧化前後での評価も行い、複合型製剤の場合、噴霧化に際して、ＧＭ－ＣＳＦの生物学的効力の９９．４％が保持されていることを確認した。生物学的効力をＴＦ－１細胞株アッセイによって測定した。
【0085】
実施例５―ｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤の性能安定性。
噴霧化の際のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤の性能安定性を、５℃および２５℃で最大１８ヶ月間の保存で評価した。以下の３つのパラメータを評価した：ＤＤ＝シミュレートされた呼吸下での投与量（ＵＳＰによる＜１６０１＞、成人）、ＦＰＦ＝微粒子フラクション（５μｍ未満の液滴）、およびＭＭＡＤ＝空気動力学的質量中央径。最大１８ヶ月の時点では、噴霧化による性能安定性にほとんど変化は見られなかったか、または全く見られなかった。性能データは、ＵＳＰ＜６０１＞に準拠した医薬品カスケードインパクションによって生成された。
噴霧化の際のｒｈＧＭ－ＣＳＦ複合型製剤の性能安定性を、５℃および２５℃で最大１８ヶ月間の保存で評価した。以下の３つのパラメータを評価した：ＤＤ＝シミュレートされた呼吸下での投与量（ＵＳＰによる＜１６０１＞、成人）、ＦＰＦ＝微粒子フラクション（５μｍ未満の液滴）、およびＭＭＡＤ＝空気動力学的質量中央径。最大１８ヶ月の時点では、噴霧化による性能安定性にほとんど変化は見られなかったか、または全く見られなかった。性能データは、ＵＳＰ＜６０１＞に準拠した医薬品カスケードインパクションによって生成された。
【0086】
実施例６―ｒＨＡ低濃度製剤の安定性
低濃度（０．２ｍｇ／ｍＬ）のｒＨＡを含む複合型ｒｈＧＭ－ＣＳＦのバージョンが評価され、ｒＨＡまたはＰＥＧ４０００を含まない簡易型製剤よりも安定性が改善されていることが示された。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの含有量をＲＰ－ＨＰＬＣで測定した。
低濃度（０．２ｍｇ／ｍＬ）のｒＨＡを含む複合型ｒｈＧＭ－ＣＳＦのバージョンが評価され、ｒＨＡまたはＰＥＧ４０００を含まない簡易型製剤よりも安定性が改善されていることが示された。ｒｈＧＭ－ＣＳＦの含有量をＲＰ－ＨＰＬＣで測定した。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】