(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-04-26
(54)【発明の名称】ＧＬＰ受容体アゴニスト
(51)【国際特許分類】
C07K 7/04 20060101AFI20230419BHJP
A61K 38/26 20060101ALI20230419BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230419BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20230419BHJP
A61P 1/12 20060101ALI20230419BHJP
A61P 1/14 20060101ALI20230419BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20230419BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20230419BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20230419BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20230419BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20230419BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230419BHJP
【ＦＩ】
C07K7/04 ZNA
A61K38/26
A61P43/00 111
A61P1/04
A61P1/12
A61P1/14
A61P3/10
A61P3/04
A61P37/08
A61P1/00
A61P9/10
A61P1/16
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022556026
(86)(22)【出願日】2021-03-16
(85)【翻訳文提出日】2022-11-16
(86)【国際出願番号】 GB2021050657
(87)【国際公開番号】W WO2021186166
(87)【国際公開日】2021-09-23
(31)【優先権主張番号】2003762.8
(32)【優先日】2020-03-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】514120896
【氏名又は名称】ヘプタレス セラピューティクス リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｈｅｐｔａｒｅｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100106080
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 晶子
(72)【発明者】
【氏名】ブラウン，ジャイルズ・アルバート
(72)【発明者】
【氏名】コングリーヴ，マイルズ・スチュアート
(72)【発明者】
【氏名】スカリー，コナー
(72)【発明者】
【氏名】ポール，レベッカ
(72)【発明者】
【氏名】ボルトラット，アンドレア
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA09
4C084BA19
4C084BA23
4C084BA32
4C084CA59
4C084NA14
4C084ZA36
4C084ZA66
4C084ZA68
4C084ZA70
4C084ZA72
4C084ZA75
4C084ZB13
4C084ZC35
4C084ZC41
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA18
4H045BA50
4H045EA20
4H045FA20
4H045FA50
(57)【要約】
本明細書における開示は、式（１）：
［式中、Ｑ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、ＡＡ５、ＡＡ６、ＡＡ７、ＡＡ８、ＡＡ９、ＬｙｓＲ、Ｒ１、Ｒ２及びｎは本明細書中に定義の通り］の新規化合物、及びその塩、ならびにグルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）受容体に関連する障害の治療、予防、改善、制御又はリスクの低減におけるそれらの使用に関する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（１）の配列を含む化合物：【化1】
Ｑは、フェニル又は単環式ヘテロアリール環であって、そのそれぞれは一つ又は複数のＲｑ基で置換されていてもよく；
Ｒｑは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、又は、Ｏ、Ｎ、もしくはＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含有していてもよいアルキル鎖を有するＣ１－６アルキルから選ばれ；
ｎは１～３であり；
Ｒ１及びＲ２は、水素又はＣ１－６アルキル基から独立に選ばれるか、又はそれらが結合している炭素と一緒になってＣ３－８シクロアルキル又はヘテロサイクリル基を形成し；
Ｗは、配列－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－、－Ａｌａ－Ｓｅｒ－、又は－ＤＡｌａ－Ｓｅｒ－であり；
Ｘは、配列－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－ＤＰｈｅ－Ｔｈｒ－又は－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－であり；
Ｙは、配列－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－であり；
Ｚは、配列－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－であり；
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－であり；前記式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）ｙＣＯＮＨ２、－（ＣＨ２）ｙＣＯＯＨ又は－（ＣＨ２）ｙテトラゾリルから選ばれ；ここでｙは１又は２であり；
ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ４ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ４ｂは、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、又はＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；
ＡＡ３は、－Ａｉｂ－又は－Ｉｌｅ－であり；
ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ５ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ５ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、又は－（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨ２であり；ここでｘは１又は２であり；
ＡＡ５は、－Ａｌａ－又は－Ａｉｂ－であり；
ＡＡ６は、－Ｌｙｓ－、－Ａｉｂ－又は基－ＬｙｓＲ－であり；
ＡＡ７は、－Ｌｙｓ－又は－Ａｒｇ－であり；
ＡＡ８は、－ＮＨＣＲ６ａＲ６ｂＣＯ－であり、前記式中、Ｒ６ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ６ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基であり；
ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ７ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ７ｂは、－（ＣＨ２）ｚＣＯＯＨ、又は、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、もしくはＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；ここでｚは１又は２であり；
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり；
ここで、ＡＡ９のＣ末端は、カルボキシル基又はカルボキサミド基であるか、又は任意の天然もしくは非天然アミノ酸配列又は任意のその他の部分、官能基（一つ又は複数）に隣接している］、又はその互変異性体もしくは立体化学的異性体、又はそのプロドラッグ、塩もしくは双性イオン。
【請求項2】
Ｑが、【化2】
【請求項3】
ｎが２である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｒ１及びＲ２が、水素又はＣ１－６アルキル基から独立に選ばれる、請求項１～３のいずれか１項に定義の化合物。
【請求項5】
Ｒ１及びＲ２がどちらもメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項6】
Ｒ３が、－ＣＨ２テトラゾリルを表す、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項7】
Ｒ４ａが水素又はメチルである、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒ４ｂがフッ素で置換されていてもよいベンジルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項9】
Ｒ５ａが水素又はメチルである、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項10】
Ｒ５ｂがイソブチル又は－ＣＨ２ＣＯＮＨ２である、請求項９に記載の化合物。
【請求項11】
Ｒ６ａが水素又はメチルである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項12】
Ｒ６ｂがイソブチル又はｓｅｃ-ブチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項13】
Ｒ７ａが水素又はメチルである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項14】
Ｒ７ｂがベンジル又は－ＣＨ２ＣＯＯＨである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項15】
ＬｙｓＲがＮ－置換リシン残基であり、その場合のＮ－置換基は、－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ３；－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＯ２Ｈ；－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２；－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ３；－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＯ２Ｈ及び－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２から選ばれ、ｑは１～２２である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項16】
ＬｙｓＲがＮ－置換リシン残基であり、その場合のＮ－置換基は、基－Ｌ－Ｇであり；Ｌは、
【化3】
【化4】
上記式中、
ｍは１～２３であり；
ｐは１～３であり；
ｒは１～２０であり；
ｓは０～３であり；
ｔは０～４であり；
そしてｗは０～４である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項17】
ＬｙｓＲが、【化5】
【請求項18】
ＡＡ９のＣ末端がカルボキサミド基である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項19】
実施例１～２３のいずれか一つから選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項20】
【化6】
【請求項21】
ＧＬＰ－１及び／又はＧＬＰ－２受容体アゴニスト活性を有する、請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項22】
ＧＬＰ－１受容体アゴニスト活性と比べて高いＧＬＰ－２受容体アゴニスト活性を有する、請求項２１に記載の化合物。
【請求項23】
請求項１～２２のいずれか１項に定義の化合物と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項24】
胃腸疾患及び代謝性疾患の治療に使用するための請求項１～２３のいずれか１項に記載の化合物又は組成物であって、吸収不良障害、腸不全、腸機能不全、下痢症、慢性炎症性腸疾患を有する患者の腸回復及び栄養状態を促進し、粘膜バリア機能を改良し、腸炎症、炎症性障害、セリアック病、先天性及び後天性の消化吸収不良症候群、慢性下痢症、粘膜損傷（例えばがん治療）によって引き起こされる状態、腸不全、腸機能不全又は吸収不良障害の患者における経腸及び経静脈栄養療法中の高血糖、胃腸傷害、下痢症、腸機能不全、腸不全、酸誘導性腸管傷害、アルギニン欠乏症、肥満、セリアック病、化学療法誘発性腸炎、糖尿病、肥満、脂肪吸収不全症、脂肪便、自己免疫疾患、食物アレルギー、胃潰瘍、消化管バリア障害、パーキンソン病、敗血症、細菌性腹膜炎、炎症性腸疾患、化学療法関連組織損傷、腸外傷、腸虚血、腸間膜虚血、短腸症候群、栄養不良、壊死性腸炎、壊死性膵炎、新生児の哺乳不耐、ＮＳＡＩＤ起因性胃腸損傷、栄養不足、完全経静脈栄養による消化管への損傷、新生児栄養不足、放射線誘発性腸炎、腸に対する放射線誘発性傷害、粘膜炎、回腸嚢炎、虚血、肥満、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、インスリン耐性、高血糖、インスリン耐性、耐糖能異常、刷子縁酵素欠乏症（先天性ラクターゼ欠乏症、先天性スクラーゼ－イソマルターゼ欠乏症、先天性マルターゼ－グルコアミラーゼ欠乏症）、膜担体の障害（グルコース－ガラクトース吸収不良、フルクトース吸収不良、Ｆａｎｃｏｎｉ－Ｂｉｃｋｅｌ症候群、腸性肢端皮膚炎、先天性塩化物／ナトリウム下痢、リジン尿性タンパク不耐症、原発性胆汁吸収不良、嚢胞性線維症）、酵素欠乏症（遺伝性膵炎、先天性膵リパーゼ欠乏症）、脂質／リポタンパク質代謝障害（カイロミクロン停滞病、低ベータリポタンパク血症、無ベータリポタンパク血症）、腸細胞分化又は細胞分極の障害（微絨毛萎縮症、Ｔｕｆｔｉｎｇ腸症、毛髪肝腸症候群、家族性血球貪食性リンパ組織症５型）、腸内分泌細胞の障害（先天性吸収不良性下痢、無内分泌症、タンパク質転換酵素１／３欠乏症）、先天性下痢症を改善するための請求項１～２３のいずれか１項に記載の化合物又は組成物の使用。
【請求項25】
障害がＴｕｆｔｉｎｇ腸症である、請求項２４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新規ペプチド化合物のクラス、それらの塩、それらを含有する医薬組成物、及び人体の治療におけるそれらの使用に関する。特に、本発明は、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）受容体のアゴニストである化合物のクラスに向けられる。さらに詳しくは、本発明は、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）及びグルカゴン様ペプチド－２（ＧＬＰ－２）受容体のアゴニストである化合物に向けられる。さらに詳しくは、本発明は、グルカゴン様ペプチド－２（ＧＬＰ－２）受容体の選択的アゴニストである化合物に向けられる。本発明はまた、ＧＬＰ受容体が関与するような疾患の予防又は治療におけるこれらの化合物及び組成物の製造及び使用にも関する。
【背景技術】
【0002】
グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）及びグルカゴン様ペプチド－２（ＧＬＰ－２）は、同じ前駆体タンパク質に由来する高度に保存されたアミノ酸ペプチドである。これらの生物活性ペプチドは、膵臓（アルファ細胞）、腸（Ｌ細胞）及び中枢神経系（ＣＮＳ）において、組織特異的翻訳後プロセシングを受けるプログルカゴン遺伝子によってコードされている。消化管では、プロホルモン転換酵素１／３がプログルカゴンの切断を担い、ＧＬＰ－１、ＧＬＰ－２、ＩＰ２、オキシントモジュリン及びグリセンチンを含むいくつかの生物活性ペプチドを生成する。ＧＬＰ－１及びＧＬＰ－２とも、遠位回腸及び結腸に局在する腸Ｌ細胞による栄養摂取に応答して分泌されるので、これらの消化管ペプチドの血漿中濃度はヒトが食物を摂取した後に上昇することが報告されている。
【0003】
ＧＬＰ－１及びＧＬＰ－２の作用は、クラスＢのＧタンパク質共役型受容体であるＧＬＰ－１Ｒ及びＧＬＰ－２Ｒの活性化を通じて媒介される。これらの受容体は、Ｇｓタンパク質に結合し、アデニル酸シクラーゼの活性化を通じてｃＡＭＰ産生を刺激する。ＧＬＰ－１Ｒは、脳、膵島細胞、心臓、腎臓及び消化管の筋層間神経叢ニューロンに発現していることが見出されている。他方、ＧＬＰ－２Ｒの発現は、より限定的で、該受容体は主にＣＮＳ及び消化管に局在している。消化管でＧＬＰ－２Ｒを発現するいくつかの細胞タイプが報告されている。例えば、腸ニューロン、上皮下筋線維芽細胞及び腸内分泌細胞などであるが、正確な細胞分布はまだ明らかにされていない。
【0004】
ＧＬＰ－２は、腸バリア機能、腸間膜の血流、胃運動性及び胃酸分泌を含む広範な生理学的機能に関与していることが報告されている。ＧＬＰ－２を外から投与すると、腺窩細胞増殖が刺激され、腸絨毛の長さが増大し、小腸粘膜の増殖及び修復が促進される。ＧＬＰ－２の強力な腸管栄養活性(intestinotrophic activity)は、ラット、ブタ及びヒトを含む種間で報告されている。ＧＬＰ－２はさらに、腸管刷子縁酵素(intestinal brush border enzymes)及び溶質輸送体の調節を通じて腸の吸収能を高め、エネルギー恒常性の制御におけるこの消化管ホルモンの潜在的役割を顕示している。消化管での強力な腸管栄養作用促進能力を基に、ＧＬＰ－２アナログであるＴｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅ（テデュグルチド）がＰＮ依存性ＳＢＳ患者のための薬物療法として承認されており、ＰＮの必要性を低減するとともに腸の自律を促進することが示されている。
【0005】
ＧＬＰ－１は、腸管栄養（炭水化物、脂肪、タンパク質）に応答してＧＬＰ－２と共放出される３１アミノ酸ペプチドで、グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）と協調して作用する消化管インクレチンホルモンとして働く。ＧＬＰ－１は、膵島β細胞機能において重要な生理学的役割を演じ、β細胞の増殖ならびに食後のインスリン合成／放出を調節している。さらに研究によれば、ＧＬＰ－１は、ソマトスタチン及びグルカゴンなどの他の消化管ペプチドの放出を制御していることも示されている。その放出後、ソマトスタチンはＧＬＰ－１及びＧＩＰ分泌を抑制するように作用することによって、腸内分泌細胞におけるフィードバック系を確立している。ＧＬＰ－１は、満腹及び食欲制御の調節に関与する重要な食欲抑制ペプチドで、胃内容排出及び腸運動性に対する作用を通じてＧＩ機能に影響を及ぼしている。いくつかのＧＬＰ－１剤が現在２型糖尿病の治療用として市販されており、糖尿病患者の血糖コントロールの改善に成功している。
【0006】
腸不全（ＩＦ）は、消化管が生存に必要な水分、電解質、主要栄養素及び微量栄養素を吸収できない重篤な機能障害状態を指す。ＩＦの原因は様々で、閉塞、運動障害、外科的切除、先天的欠陥又は疾患関連の吸収喪失から起こりうる。
【0007】
短腸症候群は腸不全の最も一般的な原因で、腸部分の物理的又は機能的喪失から生じ、栄養不良、体重減少、脱水、下痢、脂肪便、疲労及び腹痛をもたらすことが多い。ＳＢＳの管理は、大量の体液喪失を補い、栄養バランス及び電解質バランスを回復するために、集学的なケアと経静脈栄養（ＰＮ）管理を必要とする。生存のために不可欠とは言え、経静脈栄養への長期依存は、患者の生活の質に悪影響を及ぼしうるほか、カテーテル関連敗血症、静脈血栓症及び肝障害（例えば、脂肪症、胆汁鬱滞）などの命に関わる合併症のリスクも増大しかねない。
【0008】
ＳＢＳの症状及び重症度は、残存している腸の位置及び長さに応じて様々でありうる。腸運動性は、典型的には回腸及び近位結腸のＬ細胞によって産生されるＧＬＰ－１、ＧＬＰ－２及びＰＹＹを含む多数の消化管ホルモンの影響を受けることが知られている。ＧＬＰ－１などのホルモンは、効率的な栄養の消化吸収のためにＧＩ通過速度を制御するための重要なフィードバック機構を提供する役割を果たしている。空腸瘻造設術を受けて回腸ブレーキを失った患者は、空腹時の血漿中ＧＬＰ－１及びＧＬＰ－２濃度が低く、一般的に急速な胃内容排出とＧＩ通過及び高ストーマ排液(high stoma output)に苦しむ。小規模パイロット研究で、エキセナチド又はリラグルチド（ＧＬＰ－１アゴニスト）がＳＢＳ患者の下痢の症状を改善し、ＰＮの必要性をさらに低減することが示されている。
【0009】
複雑な臨床像に加えて、腸切除を受けた患者においては、経口グルコース投与に応答するインスリン反応の障害をもたらす腸管膵島軸調節異常に関するエビデンスも存在する。さらに、高血糖は、経静脈栄養を受けている入院患者によく起こる合併症であり、死亡及び感染性合併症のリスクを増大させうる。特殊な栄養管理を受けている患者における高血糖の有病率は、経腸栄養を受けている患者で最大３０％、経静脈栄養患者で５０％と推定されている。高血糖の継続的な管理不良は、膵臓ベータ細胞の機能低下を招きうることや微小血管疾患、心血管イベント及び高血圧などの合併症の増悪に寄与しうることが認識されている。ＴＰＮ中の高血糖患者は、高血糖のない患者と比べて、ＩＣＵに入院するリスクが高く、入院期間も長く、死亡率も高い。
【0010】
ＧＬＰ－１アゴニストの知られたインスリン分泌刺激活性を基にすると、この機序の活性化は、それ故、術後にインスリン感受性の低下を発症した患者及び経静脈栄養を受けている患者に更なる利益を提供できる可能性がある。従って、これらの知見は、ＳＢＳを含む腸不全状態の管理にＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１を組み合わせた薬理学的アプローチが有望であることを強く示している。
【0011】
ＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アゴニストが利益を提供しうる他の腸不全状態は、空腹時に持続する早発性重症難治性下痢を呈するＴｕｆｔｉｎｇ腸症（タフティング腸症、房性腸症）などの稀な先天性下痢症などである。経静脈栄養、水分及び電解質補給による乳幼児の急性治療は、脱水、電解質不均衡、及び重度の栄養不良による成長障害を防止するために、決定的に必要である。
【0012】
上皮細胞接着分子ＥｐＣＡＭをコードする遺伝子は、Ｔｕｆｔｉｎｇ腸症との関連を示しており、今日までに２５を超えるＥｐＣＡＭの変異が文献に記載されている。ＥｐＣＡＭ遺伝子に変異があると、細胞表面発現の喪失を招き、腸上皮に腸細胞の局所的密集及び‘房(tufts)’の形成といった著明な組織学的特徴を生ずる。ＥｐＣＡＭ遺伝子のエクソン４欠失を有するマウスは、Ｔｕｆｔｉｎｇ患者と類似した形態学的欠陥を示し、著しく高い有病率及び死亡率を有する。ＥｐＣＡＭは、密着結合（タイトジャンクション）分子であるクローディン７に直接関連しており、この遺伝子の破壊は、おそらくは密着結合分子のダウンレギュレーションにより腸細胞の接着不良と腸バリア機能の障害をもたらす。
【0013】
Ｔｕｆｔｉｎｇ腸症の乳幼児はＩＧＦ－１レベルが低く、減退した栄養吸収能力を補うために経静脈栄養に依存している。現在、この消耗性疾患に対する薬物治療はないため、腸機能を改善して非経口栄養法からの独立を促進できる薬剤が緊急に求められている。Ｔｕｆｔｉｎｇ患者の長期転帰に関する最近の分析によれば、腸の自律は、専門家のケア環境で効果的に管理されれば、大部分の患者でうまく達成できることが明らかになった。早期離脱を促進する療法は、これらの患者においてより良好な長期転帰をもたらし、生活の質を改善することが期待される。ＧＬＰ－２及びＧＬＰ－１受容体に作用する薬剤は、この先天性下痢症において、バリア機能を修復し、腸機能の回復を補助することが期待できる。
【発明の概要】
【0014】
本発明は、ＧＬＰ－２及びＧＬＰ－１受容体でアゴニスト活性を有する新規化合物、これらを含む医薬組成物、及び疾患の治療用医薬の製造のための該化合物の使用に関する。
【0015】
そこで、一態様において、本発明は、式（１）の化合物：
【0016】
【化1】
Ｑは、フェニル又は単環式ヘテロアリール環であって、そのそれぞれは一つ又は複数のＲｑ基で置換されていてもよく；
Ｒｑは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、又は、Ｏ、Ｎ、もしくはＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含有していてもよいアルキル鎖を有するＣ１－６アルキルから選ばれ；
ｎは１～３であり；
Ｒ１及びＲ２は、水素又はＣ１－６アルキル基から独立に選ばれるか、又はそれらが結合している炭素と一緒になってＣ３－８シクロアルキル又はヘテロサイクリル基を形成し；
Ｗは、配列－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－、－Ａｌａ－Ｓｅｒ－、又は－ＤＡｌａ－Ｓｅｒ－であり；
Ｘは、配列－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－ＤＰｈｅ－Ｔｈｒ－又は－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－であり；
Ｙは、配列－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－であり；
Ｚは、配列－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－であり；
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－であり；前記式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）ｙＣＯＮＨ２、－（ＣＨ２）ｙＣＯＯＨ又は－（ＣＨ２）ｙテトラゾリルから選ばれ；ここでｙは１又は２であり；
ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ４ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ４ｂは、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、又はＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；
ＡＡ３は、－Ａｉｂ－又は－Ｉｌｅ－であり；
ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ５ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ５ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、又は－（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨ２であり；ここでｘは１又は２であり；
ＡＡ５は、－Ａｌａ－又は－Ａｉｂ－であり；
ＡＡ６は、－Ｌｙｓ－、－Ａｉｂ－又は基－ＬｙｓＲ－であり；
ＡＡ７は、－Ｌｙｓ－又は－Ａｒｇ－であり；
ＡＡ８は、－ＮＨＣＲ６ａＲ６ｂＣＯ－であり、前記式中、Ｒ６ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ６ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基であり；
ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ７ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ７ｂは、－（ＣＨ２）ｚＣＯＯＨ、又は、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、もしくはＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；ここでｚは１又は２であり；
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり；
ここで、ＡＡ９のＣ末端は、カルボキシル基又はカルボキサミド基であるか、又は任意の天然もしくは非天然アミノ酸配列又は任意のその他の部分、官能基（一つ又は複数）に隣接している］、又はその互変異性体もしくは立体化学的異性体、又はそのプロドラッグ、塩もしくは双性イオンを提供する。
【0017】
本発明のＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１誘導体は、下記のような様々な疾患の治療に使用できる。
【0018】
一側面において、本発明は、小腸組織の増殖を、それを必要とする患者において促進するための方法を提供し、該方法は、腸管栄養量の本発明のＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログを患者に送達する手順を含む。
【0019】
更なる側面において、本発明は、腸不全又は栄養吸収不良及び腸機能不全をもたらすその他の状態を含む胃腸疾患を治療するための医薬の製造法に関する。そのような疾患の例は、小腸症候群、下痢症、炎症性腸症候群、クローン病、潰瘍性大腸炎、回腸嚢炎、放射線誘発性腸損傷、セリアック病（グルテン過敏性腸疾患）、ＮＳＡＩＤ起因性胃腸損傷、がん治療誘発性組織損傷（例えば化学療法誘発性腸炎）、パーキンソン病、経静脈栄養誘発性粘膜萎縮、胎児の腸不全、壊死性腸炎、新生児の哺乳不耐(feeding intolerance)、先天性下痢症、先天性又は後天性の消化吸収障害、血管閉塞、外傷又は虚血によって誘発される組織損傷などでありうる。
【0020】
本発明の更なる側面は、治療上有効な量の本発明のＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログを送達することにより、稀な先天性下痢症の症状又は該疾患そのものを、それを必要とする患者において治療するための方法である。制御されない下痢の持続は、重度の脱水、電解質不均衡、栄養不良及び発育障害を引き起こしかねず、治療されないまま放置されると、死を含む命に関わる状態を招きうる。
【0021】
更なる側面において、本発明は、上に概要を示した化合物を、腸不全に至ることが多い早発性重症難治性下痢を特徴とする稀な先天性下痢症であるＴｕｆｔｉｎｇ腸症の治療のための医薬の製造に使用することを提供する。
【0022】
本発明の更なる側面は、治療上有効な量の本発明のＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログを送達することにより、代謝性疾患及びメタボリックシンドロームを、それを必要とする患者において治療するための方法である。一態様において、代謝性疾患及びメタボリックシンドロームは、肥満、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、インスリン耐性、高血糖、インスリン耐性、耐糖能異常などである。ＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログによる治療は、血糖コントロール及びインスリン感受性を回復できると想定される。このことは、腸不全、腸機能不全又は吸収不良障害の患者の経腸及び経静脈栄養療法中の高血糖の管理に有益でありうる。
【図面の簡単な説明】
【0023】
【図1】図１は、インビボにおける化合物の腸増殖活性を示すグラフを示す。マウスに１日１回、ビヒクル（ＰＢＳ中０．１％Ｔｗｅｅｎ８０）、テデュグルチド又は化合物（２７０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のいずれかを皮下注射した。リラグルチドは静脈内注射として毎日投与された（２００ｕｇ／ｋｇ）。マウスを３日目に屠殺し、小腸の湿潤重量を定量した。ＧＬＰ－２活性ペプチドは、小腸重量の顕著な増大を示している。これに対し、ＧＬＰ－１化合物のリラグルチドは、モデルにおいて活性の証拠を示さなかった。実施例１及び３は、同じ用量でテデュグルチドと比べてそれに優る増大を示している。動物数Ｎ＝６／群。ビヒクルに対し*ｐ＜０．０５。
【図2-1】図２は、マウスに７日間投与後の腸質量増加に対する化合物の用量反応効果を示すグラフを示す。小腸湿潤重量の増加（対ビヒクル比）をペプチド用量の関数としてプロットする。Ａ）Ｔｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅ、Ｂ）実施例１、Ｃ）実施例３。概して、実施例１及び３は、Ｔｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅと比べて小腸湿潤重量のより大きい最大増加を示している。動物数Ｎ＝６／群。
【発明を実施するための形態】
【0024】
本発明は新規化合物に関する。本発明はまた、ＧＬＰ受容体のアゴニストとしての新規化合物の使用にも関する。本発明はさらに、ＧＬＰ受容体アゴニストとして使用するため又は胃腸障害及び代謝障害を治療するための医薬の製造における新規化合物の使用にも関する。本発明はさらに、選択的ＧＬＰ－２受容体アゴニストである化合物、組成物及び医薬にも関する。
【0025】
従って、一態様において、本発明は、式（１）の化合物：
【0026】
【化2】
Ｑは、フェニル又は単環式ヘテロアリール環であって、そのそれぞれは一つ又は複数のＲｑ基で置換されていてもよく；
Ｒｑは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、又は、Ｏ、Ｎ、もしくはＳから選ばれる１個又は複数個のヘテロ原子を含有していてもよいアルキル鎖を有するＣ１－６アルキルから選ばれ；
ｎは１～３であり；
Ｒ１及びＲ２は、水素又はＣ１－６アルキル基から独立に選ばれるか、又はそれらが結合している炭素と一緒になってＣ３－８シクロアルキル又はヘテロサイクリル基を形成し；
Ｗは、配列－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－、－Ａｌａ－Ｓｅｒ－、又は－ＤＡｌａ－Ｓｅｒ－であり；
Ｘは、配列－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－ＤＰｈｅ－Ｔｈｒ－又は－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－であり；
Ｙは、配列－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－であり；
Ｚは、配列－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｇｌｎ－Ｔｈｒ－であり；
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－であり；前記式中、Ｒ３は、－（ＣＨ２）ｙＣＯＮＨ２、－（ＣＨ２）ｙＣＯＯＨ又は－（ＣＨ２）ｙテトラゾリルから選ばれ；ここでｙは１又は２であり；
ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ４ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ４ｂは、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、又はＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；
ＡＡ３は、－Ａｉｂ－又は－Ｉｌｅ－であり；
ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ５ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ５ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基、又は－（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨ２であり；ここでｘは１又は２であり；
ＡＡ５は、－Ａｌａ－又は－Ａｉｂ－であり；
ＡＡ６は、－Ｌｙｓ－、－Ａｉｂ－又は基－ＬｙｓＲ－であり；
ＡＡ７は、－Ｌｙｓ－又は－Ａｒｇ－であり；
ＡＡ８は、－ＮＨＣＲ６ａＲ６ｂＣＯ－であり、前記式中、Ｒ６ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ６ｂは、置換されていてもよいＣ１－６アルキル基であり；
ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－であり；前記式中、Ｒ７ａは、水素又はＣ１－３アルキル基であり；そしてＲ７ｂは、－（ＣＨ２）ｚＣＯＯＨ、又は、一つ又は複数のハロゲン基、Ｃ１－３アルキル基、もしくはＣ１－３アルコキシ基で置換されていてもよいベンジル基であり；ここでｚは１又は２であり；
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり；
ここで、ＡＡ９のＣ末端は、カルボキシル基又はカルボキサミド基であるか、又は任意の天然もしくは非天然アミノ酸配列又は任意のその他の部分、官能基（一つ又は複数）に隣接している］、又はその互変異性体もしくは立体化学的異性体、又はそのプロドラッグ、塩もしくは双性イオンを提供する。
【0027】
Ｑはイミダゾール環でありうる。Ｑは、
【0028】
【化3】
【0029】
ｎは１でありうる。ｎは２でありうる。ｎは３でありうる。
【0030】
Ｒ１及びＲ２は、水素又はＣ１－６アルキル基から独立に選ぶことができる。Ｒ１は、水素又はＣ１－６アルキル基でありうる。Ｒ２は、水素又はＣ１－６アルキル基でありうる。Ｒ１及びＲ２はどちらもメチルでありうる。Ｒ１はメチルでありうる。Ｒ２はメチルでありうる。
【0031】
Ｗは、－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－でありうる。Ｗは－Ａｌａ－Ｓｅｒ－でありうる。Ｗは、－ＤＡｌａ－Ｓｅｒ－でありうる。
【0032】
Ｘは、－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－ＤＰｈｅ－Ｔｈｒ－でありうる。Ｘは、－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｎｌｅ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ－でありうる。
【0033】
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－でありうる［式中、Ｒ３は－（ＣＨ２）ｙテトラゾリルであり、ｙは１である］。
【0034】
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－でありうる［式中、Ｒ３は－（ＣＨ２）ｙテトラゾリルであり、ｙは２である］。
【0035】
Ｒ３は－ＣＨ２テトラゾリルでありうる。
【0036】
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－でありうる［式中、Ｒ３は－（ＣＨ２）ｙＣＯＯＨであり、ｙは１である］。
【0037】
ＡＡ１は、－ＮＨＣＨＲ３ＣＯ－でありうる［式中、Ｒ３は－（ＣＨ２）ｙＣＯＯＨであり、ｙは２である］。
【0038】
Ｒ３は－ＣＨ２ＣＯＯＨでありうる。
【0039】
ＡＡ１は、
【0040】
【化4】
【0041】
ＡＡ１は、－Ａｓｐ－でありうる。 ＡＡ１は、アスパラギン酸残基でありうる。ＡＡ１は、
【0042】
【化5】
【0043】
ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ４ａは水素であり、Ｒ４ｂはベンジルである］。ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ４ａはメチルであり、Ｒ４ｂはベンジルである］。ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ４ａはメチルであり、Ｒ４ｂはフッ素で置換されていてもよいベンジルである］。ＡＡ２は、－ＮＨＣＲ４ａＲ４ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ４ａはメチルであり、Ｒ４ｂは２－フルオロベンジルである］。
【0044】
Ｒ４ａは水素又はメチルでありうる。Ｒ４ａは水素でありうる。Ｒ４ａはメチルでありうる。Ｒ４ｂはベンジルでありうる。Ｒ４ｂはフッ素で置換されていてもよいベンジルでありうる。Ｒ４ｂは２－フルオロベンジルでありうる。
【0045】
ＡＡ２は、－Ｐｈｅ－でありうる。ＡＡ２は、フェニルアラニン残基でありうる。ＡＡ２は、
【0046】
【化6】
【0047】
ＡＡ２は、α－メチルフェニルアラニン残基でありうる。ＡＡ２は、
【0048】
【化7】
【0049】
ＡＡ２は、α－メチル ２－フルオロフェニルアラニン残基でありうる。ＡＡ２は、
【0050】
【化8】
【0051】
ＡＡ３は、－Ａｉｂ－でありうる。ＡＡ３は、－Ｉｌｅ－でありうる。
【0052】
ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ５ａは水素であり、Ｒ５ｂはイソブチルである］。ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ５ａはメチルであり、Ｒ５ｂはイソブチルである］。ＡＡ４は、－ＮＨＣＲ５ａＲ５ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ５ａは水素であり、Ｒ５ｂは－ＣＨ２ＣＯＮＨ２である］。
【0053】
Ｒ５ａは、水素又はメチルでありうる。Ｒ５ａは、水素でありうる。Ｒ５ａは、メチルでありうる。Ｒ５ｂは、イソブチル又はＣＨ２ＣＯＮＨ２でありうる。Ｒ５ｂは、イソブチルでありうる。Ｒ５ｂは、ＣＨ２ＣＯＮＨ２でありうる。
【0054】
ＡＡ４は、－Ｌｅｕ－でありうる。ＡＡ４は、ロイシン残基でありうる。ＡＡ４は、
【0055】
【化9】
【0056】
ＡＡ４は、α－メチルロイシン残基でありうる。ＡＡ４は、
【0057】
【化10】
【0058】
ＡＡ４は、－Ａｓｎ－でありうる。ＡＡ４は、アスパラギン残基でありうる。ＡＡ４は、
【0059】
【化11】
【0060】
ＡＡ５は、－Ａｌａ－でありうる。ＡＡ５は、－Ａｉｂ－でありうる。
【0061】
ＡＡ６は、－Ｌｙｓ－でありうる。ＡＡ６は、－Ａｉｂ－でありうる。ＡＡ６は、基－ＬｙｓＲ－でありうる。
【0062】
ＡＡ７は、－Ｌｙｓ－でありうる。ＡＡ７は、－Ａｒｇ－でありうる。
【0063】
ＡＡ８は、－ＮＨＣＲ６ａＲ６ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ６ａは水素であり、Ｒ６ｂはｓｅｃ－ブチルである］。
【0064】
ＡＡ８は、－ＮＨＣＲ６ａＲ６ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ６ａはメチルであり、Ｒ６ｂはイソブチルである］。
【0065】
Ｒ６ａは、水素又はメチルでありうる。Ｒ６ａは、水素でありうる。Ｒ６ａは、メチルでありうる。
【0066】
Ｒ６ｂは、イソブチル又はｓｅｃ－ブチルでありうる。Ｒ６ｂは、イソブチルでありうる。Ｒ６ｂは、イソブチルでありうる。
【0067】
ＡＡ８は、－Ｉｌｅ－でありうる。ＡＡ８は、イソロイシン残基でありうる。ＡＡ８は、
【0068】
【化12】
【0069】
ＡＡ８は、α－メチルロイシン残基でありうる。ＡＡ８は、
【0070】
【化13】
【0071】
ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ７ａは水素であり、Ｒ７ｂは－ＣＨ２ＣＯＯＨである］。ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ７ａは水素であり、Ｒ７ｂはベンジルである］。ＡＡ９は、－ＮＨＣＲ７ａＲ７ｂＣＯ－でありうる［式中、Ｒ７ａはメチルであり、Ｒ７ｂは－ＣＨ２ＣＯＯＨである］。
【0072】
Ｒ７ａは、水素又はメチルでありうる。Ｒ７ａは、水素でありうる。Ｒ７ａは、メチルでありうる。
【0073】
Ｒ７ｂは、ベンジル又は－ＣＨ２ＣＯＯＨでありうる。Ｒ７ｂは、ベンジルでありうる。Ｒ７ｂは、－ＣＨ２ＣＯＯＨでありうる。
【0074】
ＡＡ９は、－Ａｓｐ－でありうる。ＡＡ９は、アスパラギン酸残基でありうる。ＡＡ９は、
【0075】
【化14】
【0076】
ＡＡ９は、－Ｐｈｅ－でありうる。ＡＡ９は、フェニルアラニン残基でありうる。ＡＡ９は、
【0077】
【化15】
【0078】
ＡＡ９は、α－メチルアスパラギン酸残基でありうる。ＡＡ９は、
【0079】
【化16】
【0080】
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり得、その場合のＮ－置換基は、－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ３；－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＯ２Ｈ；－ＣＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２；－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ３；－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＯ２Ｈ及び－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２から選ばれ、ｑは１～２２である。
【0081】
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり得、その場合のＮ－置換基は、－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２であり、ｑは１～２２である。ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり得、その場合のＮ－置換基は、－ＣＯＯ（ＣＨ２）ｑＣＨＣＨ２であり、ｑは１である。ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり得、その場合のＮ－置換基は、－ＣＯＯＣＨ２ＣＨＣＨ２である。
【0082】
ＬｙｓＲは、
【0083】
【化17】
【0084】
ＬｙｓＲは、Ｎ－置換リシン残基であり得、その場合のＮ－置換基は、基－Ｌ－Ｇであり、Ｌは、
【0085】
【化18】
【0086】
【化19】
【0087】
上記式中、
ｍは１～２３であり；
ｐは１～３であり；
ｒは１～２０であり；
ｓは０～３であり；
ｔは０～４であり；
そしてｗは０～４である。
ｍは１～２３であり；
ｐは１～３であり；
ｒは１～２０であり；
ｓは０～３であり；
ｔは０～４であり；
そしてｗは０～４である。
【0088】
ＬｙｓＲは、
【0089】
【化20】
【0090】
ＬｙｓＲは、
【0091】
【化21】
【0092】
ＡＡ９のＣ末端は、カルボキサミド基でありうる。ＡＡ９のＣ末端は、カルボキシル基でありうる。ＡＡ９のＣ末端は、任意の天然もしくは非天然アミノ酸配列又は任意のその他の部分、官能基（一つ又は複数）に隣接しうる。
【0093】
当該化合物は、表１に示されている実施例１～２３のいずれか一つから選ばれうる。
【0094】
化合物の具体例は、ＧＬＰ受容体アゴニスト活性を有する化合物を含む。
【0095】
化合物の具体例は、ＧＬＰ－１及び／又はＧＬＰ－２受容体アゴニスト活性を有する化合物を含む。
【0096】
化合物の具体例は、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト活性と比べて高いＧＬＰ－２受容体アゴニスト活性を有する化合物を含む。
【0097】
本発明の化合物は、本発明の化合物と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物に使用することができる。
【0098】
本発明の化合物は医薬に使用できる。
【0099】
本発明は、胃腸疾患及び代謝性疾患の治療用医薬の製造のためのＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログ化合物の使用を提供する。本明細書中に定義されているようなＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログは、吸収不良障害、腸不全、腸機能不全、下痢症及び慢性炎症性腸疾患を有する患者の腸回復及び栄養状態を促進するために有用でありうる。さらに、ＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログによる治療は、粘膜バリア機能を改良し、消化管の炎症を改善し、そして腸透過性を低減できるので、炎症性障害、セリアック病、先天性及び後天性の消化吸収不良症候群、慢性下痢症、粘膜損傷（例えばがん治療）によって引き起こされる状態を有する患者の症状を改善できる。本発明のＧＬＰ－２／ＧＬＰ－１アナログは、血糖コントロール及びインスリン感受性を回復することが期待される。このことは、腸不全、腸機能不全又は吸収不良障害の患者の経腸及び経静脈栄養療法中の高血糖の管理にも有益でありうる。
【0100】
更なる側面において、本発明は、胃腸傷害、下痢症、腸機能不全、腸不全、酸誘導性腸管傷害、アルギニン欠乏症、肥満、セリアック病、化学療法誘発性腸炎、糖尿病、肥満、脂肪吸収不全症、脂肪便、自己免疫疾患、食物アレルギー、胃潰瘍、消化管バリア障害、パーキンソン病、敗血症、細菌性腹膜炎、炎症性腸疾患、化学療法関連組織損傷、腸外傷、腸虚血、腸間膜虚血、短腸症候群、栄養不良、壊死性腸炎、壊死性膵炎、新生児の哺乳不耐、ＮＳＡＩＤ起因性胃腸損傷、栄養不足、完全経静脈栄養による消化管への損傷、新生児栄養不足、放射線誘発性腸炎、腸に対する放射線誘発性傷害、粘膜炎、回腸嚢炎、虚血、肥満、２型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、インスリン耐性、高血糖、インスリン耐性、耐糖能異常からなる群の一つを治療する方法を提供する。
【0101】
具体的には、重度の下痢、体液及び電解質の喪失、吸収不良及び栄養輸送障害を特徴とする先天性下痢症は、本発明のＧＬＰ－２／及びＧＬＰ－１アナログによる治療によって改善できるであろうことが示唆される。特に、Ｔｕｆｔｉｎｇ腸症は、絨毛の形態学的構造の破壊と関連する状態であるため、栄養吸収障害と腸透過性の亢進をもたらす。水分及び栄養の吸収を改良できるだけでなく、腸バリア障害も補正できる薬剤は、経静脈栄養からの早期離脱を促進するのに価値を提供できるであろう。
【0102】
本発明のペプチドで治療できる先天性下痢症のその他の例は、刷子縁酵素欠乏症（先天性ラクターゼ欠乏症、先天性スクラーゼ－イソマルターゼ欠乏症、先天性マルターゼ－グルコアミラーゼ欠乏症）、膜担体の障害（グルコース－ガラクトース吸収不良、フルクトース吸収不良、腸性肢端皮膚炎(Acrodermatitis enteropathica)、先天性塩化物／ナトリウム下痢、原発性胆汁吸収不良、嚢胞性線維症）、脂質／リポタンパク質代謝障害（カイロミクロン停滞病、無ベータリポタンパク血症）、腸細胞分化又は細胞分極の障害（微絨毛萎縮症、Ｔｕｆｔｉｎｇ腸症、毛髪肝腸症候群）、及び腸内分泌細胞の障害（先天性吸収不良性下痢、無内分泌症(anendocrinosis)、タンパク質転換酵素１／３欠乏症）などである。
【0103】
本発明の化合物はＴｕｆｔｉｎｇ腸症の治療に使用できる。
【0104】
定義
本願においては、別段の指示がない限り、下記の定義が適用される。
本願においては、別段の指示がない限り、下記の定義が適用される。
【0105】
用語“アルキル”、“アリール”、“ハロゲン”、“アルコキシ”、“シクロアルキル”、“ヘテロサイクリル”及び“ヘテロアリール”は、別段の指示がない限り、それらの従来の意味で使用される(例えば、ＩＵＰＡＣ Ｇｏｌｄ Ｂｏｏｋに定義のような）。
【0106】
式（１）の化合物を含む本明細書中に記載の化合物のいずれかの使用に関連する用語“治療”は、問題の疾患又は障害に罹患している、又は罹患するリスクがある、又は潜在的に罹患するリスクがある対象に化合物を投与する何らかの形態の介入を記載するために使用される。従って、用語“治療”は予防的(preventative,prophylactic)治療と、疾患又は障害の測定可能な又は検出可能な症状が呈示されている場合の治療の両方をカバーする。
【0107】
本明細書中で使用されている用語“有効治療量”(例えば、障害、疾患又は状態の治療法との関連で）は、所望の治療効果を生ずるために有効な化合物の量のことを言う。例えば、状態が疼痛の場合、有効治療量は、所望レベルの疼痛緩和を提供するのに足る量である。所望レベルの疼痛緩和は、例えば、疼痛の完全除去又は疼痛の重症度の軽減でありうる。
【0108】
記載されている任意の化合物がキラル中心を有する限り、本発明は、そのような化合物のすべての光学異性体（ラセミ化合物の形態であるか又は分割されたエナンチオマーの形態であるかに関わらず）にまで及ぶ。本明細書中に記載されている発明は、任意の開示化合物のすべての結晶形、溶媒和物及び水和物（製造法を問わず）に関する。本明細書中に開示された任意の化合物がカルボン酸又はアミノ基などの酸又は塩基中心を有する限り、前記化合物のすべての塩形は本発明に包含される。製薬学的用途の場合、その塩は薬学的に許容可能な塩と見なされるべきである。
【0109】
言及されうる塩又は薬学的に許容可能な塩は、酸付加塩及び塩基付加塩を含む。そのような塩は従来手段によって形成できる。例えば、化合物の遊離酸又は遊離塩基形を、１当量又は複数当量の適当な酸又は塩基と、任意に溶媒中、又は塩が不溶性の媒体中で反応させた後、前記溶媒又は前記媒体を標準技術を用いて（例えば、真空下で、凍結乾燥により、又はろ過により）除去することによる。塩は、塩の形態の化合物の対イオンを、例えば適切なイオン交換樹脂を用いて、別の対イオンと交換することによって製造することもできる。
【0110】
薬学的に許容可能な塩の例は、鉱酸及び有機酸から誘導される酸付加塩、及びナトリウム、マグネシウム、カリウム及びカルシウムなどの金属から誘導される塩を含む。
【0111】
酸付加塩の例は、酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アリールスルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸及びｐ－トルエンスルホン酸）、アスコルビン酸（例えばＬ－アスコルビン酸）、Ｌ－アスパラギン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、ブタン酸、（＋）樟脳酸、樟脳－スルホン酸、（＋）－（１Ｓ）－樟脳－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸（例えばＤ－グルコン酸）、グルクロン酸（例えばＤ－グルクロン酸）、グルタミン酸（例えばＬ－グルタミン酸）、α－オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、イセチオン酸、乳酸（例えば（＋）－Ｌ－乳酸及び（±）－ＤＬ－乳酸）、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸（例えば（－）－Ｌ－リンゴ酸）、マロン酸、（±）－ＤＬ－マンデル酸、メタリン酸、メタンスルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、Ｌ－ピログルタミン酸、サリチル酸、４－アミノ－サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸（例えば（＋）－Ｌ－酒石酸）、チオシアン酸、ウンデシレン酸及び吉草酸と形成される酸付加塩を含む。
【0112】
化合物の任意の溶媒和物及びそれらの塩も包含される。好適な溶媒和物は、本発明の化合物の固体構造（例えば結晶構造）に、非毒性の薬学的に許容可能な溶媒（以下、溶媒和溶媒と呼ぶ）の分子を組み込むことによって形成される溶媒和物である。そのような溶媒の例は、水、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノール及びブタノール）及びジメチルスルホキシドなどである。溶媒和物は、本発明の化合物を溶媒又は溶媒和溶媒を含有する溶媒の温合物で再結晶化することによって製造できる。溶媒和物が任意の所与の場合に形成されたかどうかは、化合物の結晶を、熱重量分析（ＴＧＡ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）及びＸ線結晶構造解析などの周知の標準的な技術を用いて分析に付すことによって決定できる。
【0113】
溶媒和物は、化学量論的又は非化学量論的溶媒和物でありうる。特別な溶媒和物は水和物であり得、水和物の例は、半水和物、一水和物及び二水和物を含む。溶媒和物ならびにその製造及び特徴付けに使用される方法のより詳細な解説については、Ｂｒｙｎら、Ｓｏｌｉｄ－Ｓｔａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ、第２版、出版ＳＳＣＩ，Ｉｎｃ，米国ウェストラファイエット、１９９９、ＩＳＢＮ ０－９６７－０６７１０－３参照。
【0114】
本発明の文脈において、用語“医薬組成物”は、活性薬を含み、追加的に一つ又は複数の薬学的に許容可能な担体も含む組成物を意味する。前記組成物はさらに、投与様式及び剤形の性質に応じて、例えば、希釈剤、アジュバント、賦形剤、ビヒクル、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、フレーバー剤、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤及び分散剤から選ばれる成分も含有しうる。前記組成物は、例えば、錠剤、糖衣錠、散剤、エリキシル、シロップ、懸濁液を含む液体製剤、スプレー、吸入剤、錠剤、トローチ、エマルション、溶液、カシェ、顆粒剤、カプセル及び坐剤、ならびにリポソーム製剤を含む注射用液体製剤の形態をとりうる。
【0115】
本発明の化合物は一つ又は複数の同位体置換を含有していてもよく、特定の元素への言及は、その元素のすべての同位体をその範囲内に含む。例えば、水素への言及は、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、及び３Ｈ（Ｔ）をその範囲内に含む。同様に、炭素及び酸素への言及は、それぞれ１２Ｃ、１３Ｃ及び１４Ｃならびに１６Ｏ及び１８Ｏをそれらの範囲内に含む。似たように、特定の官能基への言及も、文脈上別の指示がない限り、同位体変化をその範囲内に含む。例えば、エチル基などのアルキル基又はメトキシ基などのアルコキシ基への言及も、例えば、全５個の水素原子がジュウテリウム同位体形であるエチル基（ペルジュウテロエチル基）又は全３個の水素原子がジュウテリウム同位体形であるメトキシ基（トリジュウテロメトキシ基）のように、基内の１個又は複数個の水素原子がジュウテリウム又はトリチウム同位体の形態である変化をカバーする。同位体は放射性でも又は非放射性でもよい。
【0116】
治療用量は、患者の要件、治療される状態の重症度、及び使用される化合物に応じて変動しうる。特定の状況に対する適正な用量は当該技術分野の技能の範囲内である。一般的に、治療は、化合物の最適用量より少ない用量で開始される。その後、用量は、状況下での最適効果に到達するまで少しずつ増量される。便宜上、総日用量は、所望であれば、その一日の中で分割し、分割量を投与してもよい。
【0117】
化合物の有効量の大きさは、当然ながら、治療される状態の重症度の性質、ならびに特定の化合物及びその投与経路に応じて変動する。適切な投与量の選択は、過度の負担なく当業者の能力の範囲内である。一般に、日用量範囲は、ヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約１０μｇ～約３０ｍｇ、好ましくはヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約５０μｇ～約３０ｍｇ、例えばヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約５０μｇ～約１０ｍｇ、例えばヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約１００μｇ～約３０ｍｇ、例えばヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約１００μｇ～約１０ｍｇ、最も好ましくはヒト及びヒト以外の動物の体重１ｋｇあたり約１００μｇ～約１ｍｇでありうる。
【0118】
医薬製剤
活性化合物は、単独で投与することも可能であるが、医薬組成物（例えば製剤）として提供するのが好ましい。
活性化合物は、単独で投与することも可能であるが、医薬組成物（例えば製剤）として提供するのが好ましい。
【0119】
そこで、本発明の別の態様において、上記定義の式（１）の少なくとも一つの化合物と共に、少なくとも一つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0120】
当該組成物は注射に適切な組成物でありうる。注射は静脈内（ＩＶ）又は皮下でありうる。当該組成物は、無菌緩衝液中に入れて供給されても又は注射用の無菌緩衝液中に懸濁又は溶解できる固体として供給されてもよい。
【0121】
薬学的に許容可能な賦形剤（一つ又は複数）は、例えば、担体（例えば、固体、液体又は半固体の担体)、アジュバント、希釈剤（例えば、充填剤又は増量剤などの固体希釈剤；溶媒及び共溶媒などの液体希釈剤)、造粒剤、バインダ、流動助剤、コーティング剤、放出制御剤（例えば、放出遅延(retarding又はdelaying)ポリマー又はワックス）、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、滑沢剤、保存剤、抗真菌剤及び抗菌剤、抗酸化剤、緩衝剤、張度調整剤、増粘剤、フレーバー剤、甘味剤、色素、可塑剤、味マスキング剤、安定剤、又は医薬組成物に従来使用される任意のその他の賦形剤から選ぶことができる。
【0122】
本明細書中で使用されている用語“薬学的に許容可能な”とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰の毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題もしくは合併症なしに対象（例えばヒト対象）の組織と接触させて使用するのに適切な、合理的な利益／リスク比に見合う化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を意味する。各賦形剤は、製剤のその他の成分とも適合性があるという意味においても“許容可能”でなければならない。
【0123】
式（１）の化合物を含有する医薬組成物は公知技術に従って製剤化できる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（米国ペンシルベニア州イーストン）参照。
【0124】
適切な製剤は、典型的には、０～２０％（ｗ／ｗ）の緩衝液、０～５０％（ｗ／ｗ）の共溶媒、及び／又は０～９９％（ｗ／ｗ）の注射用水（ＷＦＩ）（用量に応じて、及び凍結乾燥されている場合）を含有する。筋肉内デポ製剤は０～９９％（ｗ／ｗ）のオイルも含有しうる。
【0125】
式（１）の化合物は、一般的に単一剤形中に提供され、従って典型的には所望の生物活性レベルを提供するのに足る化合物を含有する。例えば、製剤は、１ナノグラム～２グラムの活性成分、例えば１ナノグラム～２ミリグラムの活性成分を含有しうる。これらの範囲内で化合物の特定の部分範囲は、０．１ミリグラム～２グラムの活性成分（より通常的には１０ミリグラム～１グラム、例えば５０ミリグラム～５００ミリグラム）、又は１マイクログラム～２０ミリグラム（例えば１マイクログラム～１０ミリグラム、例えば０．１ミリグラム～２ミリグラムの活性成分）である。
【0126】
活性化合物は、それを必要とする患者（例えばヒト又は動物患者）に、所望の治療効果を達成するのに足る量（有効量）で投与される。投与される化合物の正確な量は、標準的な手順に従って監督医師が決定できる。
【0127】
生物活性
表３及び４に、組換え細胞アッセイにおけるＧＬＰ－２Ｒ及びＧＬＰ－１Ｒに対するペプチドのインビトロ効力を示す。ペプチドの機能活性は、ＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイを用いて評価された。ｐＥＣ５０値を引用する。表１に示されている化合物についてのインビトロＧＬＰ－２アッセイの結果は、約０．００１ｎＭ～約１ｎＭの範囲であった。本発明のＧＬＰ－２アナログはＧＬＰ－２及びＧＬＰ－１受容体の両方で活性を示すが、ＧＬＰ－２受容体の方でより高い活性が示された。
表３及び４に、組換え細胞アッセイにおけるＧＬＰ－２Ｒ及びＧＬＰ－１Ｒに対するペプチドのインビトロ効力を示す。ペプチドの機能活性は、ＨＴＲＦ ｃＡＭＰアッセイを用いて評価された。ｐＥＣ５０値を引用する。表１に示されている化合物についてのインビトロＧＬＰ－２アッセイの結果は、約０．００１ｎＭ～約１ｎＭの範囲であった。本発明のＧＬＰ－２アナログはＧＬＰ－２及びＧＬＰ－１受容体の両方で活性を示すが、ＧＬＰ－２受容体の方でより高い活性が示された。
【実施例】
【0128】
次に、本発明を、以下の実施例に記載された特定の態様を参照することにより、非限定的に説明する。
【0129】
実施例１～２３
以下の表１に示されている実施例１～２３の化合物を調製した。それらのＬＣＭＳ特性及びそれらの調製に使用された方法は表２に示す。各実施例の出発物質は、別段の指示がない限り市販品である。
以下の表１に示されている実施例１～２３の化合物を調製した。それらのＬＣＭＳ特性及びそれらの調製に使用された方法は表２に示す。各実施例の出発物質は、別段の指示がない限り市販品である。
【0130】
【表1-1】
【0131】
【表1-2】
【0132】
【表1-3】
【0133】
【表1-4】
【0134】
【表1-5】
【0135】
【表1-6】
【0136】
【表1-7】
【0137】
【表1-8】
調製経路が含まれていない場合、当該中間体は市販品である。市販試薬は更なる精製をせずに利用した。室温（ｒｔ）はおよそ２０～２７℃を指す。１Ｈ ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ機器を用い、４００ＭＨｚで記録した。化学シフト値は百万分率（ｐｐｍ）、すなわち（δ）値で表す。ＮＭＲシグナルの多重度に対し、以下の略語が使用される：ｓ＝一重線、ｂｒ＝幅広線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｑｕｉｎｔ＝五重線、ｔｄ＝二重線の三重線、ｔｔ＝三重線の三重線、ｑｄ＝二重線の四重線、ｄｄｄ＝二重線の二重線の二重線、ｄｄｔ＝三重線の二重線の二重線、ｍ＝多重線。結合定数はＨｚで測定されたＪ値として記載する。ＮＭＲ及び質量分析の結果は、バックグラウンドピークを考慮して補正された。クロマトグラフィーは、６０～１２０メッシュのシリカゲルを用い、窒素圧（フラッシュクロマトグラフィー）条件下で実施されたカラムクロマトグラフィーを指す。
【0138】
分析法
化合物のＬＣＭＳ分析はエレクトロスプレー条件下で実施した。
化合物のＬＣＭＳ分析はエレクトロスプレー条件下で実施した。
【0139】
ＬＣＭＳ法Ａ
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ ３１００ ＰＤＡ検出器、ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＳＳ－Ｔ３、１．８ミクロン、２．１×１００ｍｍ；グラジエント［時間（分）／溶媒Ａ中Ｂ（％）］：０．００／１０、１．００／１０、２．００／１５、４．５０／５５、６．００／９０、８．００／９０、９．００／１０、１０．００／１０；溶媒：溶媒Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸水溶液；溶媒Ｂ＝アセトニトリル；注入量１μＬ；検出波長２１４ｎｍ；カラム温度３０℃；流速０．３ｍＬ／分。
機器：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ ３１００ ＰＤＡ検出器、ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ ＨＳＳ－Ｔ３、１．８ミクロン、２．１×１００ｍｍ；グラジエント［時間（分）／溶媒Ａ中Ｂ（％）］：０．００／１０、１．００／１０、２．００／１５、４．５０／５５、６．００／９０、８．００／９０、９．００／１０、１０．００／１０；溶媒：溶媒Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸水溶液；溶媒Ｂ＝アセトニトリル；注入量１μＬ；検出波長２１４ｎｍ；カラム温度３０℃；流速０．３ｍＬ／分。
【0140】
分析法Ｂ
ＭＳイオンは、エレクトロスプレー条件下で下記のＬＣＭＳ法を用いて決定し、ＨＰＬＣのリテンションタイム（ＲＴ）は、下記のＨＰＬＣ法を用いて決定し、純度は、特に明記されない限りＨＰＬＣにより＞９５％。
ＭＳイオンは、エレクトロスプレー条件下で下記のＬＣＭＳ法を用いて決定し、ＨＰＬＣのリテンションタイム（ＲＴ）は、下記のＨＰＬＣ法を用いて決定し、純度は、特に明記されない限りＨＰＬＣにより＞９５％。
【0141】
ＬＣＭＳ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣ＆６４１０Ｂ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ、カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８ ３．５ｕｍ ２．１＊３０ｍｍ。グラジエント［時間（分）／溶媒Ｂ（％）］：０．０／１０、０．９／８０、１．５／９０、８．５／５、１．５１／１０。（溶媒Ａ＝１０００ｍＬの水中１ｍＬのＴＦＡ；溶媒Ｂ＝１０００ｍＬのＭｅＣＮ中１ｍＬのＴＦＡ）；注入量５μＬ（変動あり）；ＵＶ検出 ２２０ｎｍ ２５４ｎｍ ２１０ｎｍ；カラム温度２５℃；１．０ｍＬ／分。
【0142】
ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２００、カラム：Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ５ｕｍ １１０Ａ １５０＊４．６ｍｍ。グラジエント［時間（分）／溶媒Ｂ（％）］：０．０／３０、２０／６０、２０．１／９０、２３／９０。（溶媒Ａ＝１０００ｍＬの水中１ｍＬのＴＦＡ；溶媒Ｂ＝１０００ｍＬのＭｅＣＮ中１ｍＬのＴＦＡ）；注入量５μＬ（変動あり）；ＵＶ検出 ２２０ｎｍ ２５４ｎｍ；カラム温度２５℃；１．０ｍＬ／分。
【0143】
分析法Ｃ
機器：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌ １００Å、２．６μｍ、２．１×５０ｍｍ；グラジエント［時間（分）／溶媒Ａ中Ｂ（％）］：０．００／１０、０．３０／１０、０．４０／６０、１．１０／９０、１．７０／９０、１．７５／１０、１．９９／１０、２．００／１０；溶媒：溶媒Ａ＝０．１％ギ酸水溶液；溶媒Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ギ酸；注入量５μＬ；カラム温度２５℃；流速０．８ｍＬ／分。
機器：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌ １００Å、２．６μｍ、２．１×５０ｍｍ；グラジエント［時間（分）／溶媒Ａ中Ｂ（％）］：０．００／１０、０．３０／１０、０．４０／６０、１．１０／９０、１．７０／９０、１．７５／１０、１．９９／１０、２．００／１０；溶媒：溶媒Ａ＝０．１％ギ酸水溶液；溶媒Ｂ＝アセトニトリル中０．１％ギ酸；注入量５μＬ；カラム温度２５℃；流速０．８ｍＬ／分。
【0144】
中間体及び化合物の合成
下記実施例は、本発明の好適な側面を例示するために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
下記実施例は、本発明の好適な側面を例示するために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
【0145】
中間体の合成
中間体１及び２を除き、すべてのＦｍｏｃ－アミノ酸は市販品である。
中間体１及び２を除き、すべてのＦｍｏｃ－アミノ酸は市販品である。
【0146】
２，２－ジメチル－３－オキソ－３－（（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アミノ）プロパン酸（中間体１）の合成
【0147】
【化22】
２－（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミンジヒドロクロリド（１、２５．０ｇ、１３６．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３Ｎ（６７ｍＬ、４６４．４ｍｍｏｌ）を室温（ｒｔ）で加え、反応混合物を０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸エチル（２０ｍＬ、１６４．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液を反応混合物に３０分かけて０℃で加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。この反応混合物を乾燥ＤＣＭ（２００ｍＬ）とＥｔ３Ｎ（６０ｍＬ、４０９．８ｍｍｏｌ）で希釈し、反応混合物を０℃に冷却した。Ｔｒ－Ｃｌ（７６ｇ、２７３．２ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。終了後、反応混合物を水（３００ｍＬ）でクエンチングし、水性層をクロロホルム（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。粗残渣をｎ－ヘキサンで粉砕し、２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アセトアミド（２、５０．１０ｇ、８１％）を白色固体として得た。
MS (ESI +ve): 450
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ2.75 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.60 - 3.65 (m, 2H), 6.61 (s, 1H), 7.08 - 7.15 (m, 6H), 7.31 - 7.38 (m, 9H), 7.40 (s, 1H), 8.41 (bs, 1H)。
【0148】
工程２：２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミン（３）の合成：
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アセトアミド（２、５０．０ｇ、１１１．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中溶液に、水（１００ｍＬ）中ＮａＯＨ（２２．０ｇ、５５６．７ｍｍｏｌ）を０℃で徐々に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。終了後、反応混合物を水（３００ｍＬ）でクエンチングし、水性層をクロロホルム（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮し、２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミン（３、３４．０ｇ、８６％）を帯黄色粘着固体として得た。粗残渣はそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
MS (ESI +ve): 354
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ1.53 (bs, 2H), 2.65 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 6.58 (s, 1H), 7.11 - 7.16 (m, 6H), 7.28 - 7.38 (m, 10H)。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アセトアミド（２、５０．０ｇ、１１１．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中溶液に、水（１００ｍＬ）中ＮａＯＨ（２２．０ｇ、５５６．７ｍｍｏｌ）を０℃で徐々に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。終了後、反応混合物を水（３００ｍＬ）でクエンチングし、水性層をクロロホルム（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮し、２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミン（３、３４．０ｇ、８６％）を帯黄色粘着固体として得た。粗残渣はそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
MS (ESI +ve): 354
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ1.53 (bs, 2H), 2.65 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 6.58 (s, 1H), 7.11 - 7.16 (m, 6H), 7.28 - 7.38 (m, 10H)。
【0149】
工程３：２，２，５，５－テトラメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（５）の合成：
２，２－ジメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（４、２０．０ｇ、１３８．８ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２００ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（９６ｇ、６９４．０ｍｍｏｌ）及びＭｅＩ（２６ｍＬ、４１６．６ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を１０時間還流した。終了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトのパッドに通してろ過し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮して２，２，５，５－テトラメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（５、２１ｇ、８８％）を黄色固体として得た。粗残渣はそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ1.63 (s, 6H), 1.73 (s, 6H)。
２，２－ジメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（４、２０．０ｇ、１３８．８ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２００ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（９６ｇ、６９４．０ｍｍｏｌ）及びＭｅＩ（２６ｍＬ、４１６．６ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を１０時間還流した。終了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトのパッドに通してろ過し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮して２，２，５，５－テトラメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（５、２１ｇ、８８％）を黄色固体として得た。粗残渣はそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ1.63 (s, 6H), 1.73 (s, 6H)。
【0150】
工程４：２，２－ジメチル－３－オキソ－３－（（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アミノ）プロパン酸（中間体１）の合成：
２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミン（３、８．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（１６．０ｍＬ、１１３．０ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）中溶液を、６０分かけて、２，２，５，５－テトラメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（５、５．８ｇ、２９．７６ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中溶液に７５℃で滴加した。反応混合物を同じ温度でさらに３時間撹拌した。終了後、反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）中に溶解し、１０％クエン酸水溶液（ｐＨ ～６－６．５）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。得られた粗残渣を熱クロロホルム（１５０ｍＬ）とｎ－ヘキサン（７５ｍＬ）で粉砕し、該懸濁液を室温で１６時間撹拌した。固体をろ過し、クロロホルム：ｎ－ヘキサン（１：１、２×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、２，２－ジメチル－３－オキソ－３－（（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アミノ）プロパン酸（中間体１、６．８ｇ、６４％）を白色固体として得た。
LCMS (方法Ａ): m/z 468 [M+H]+ (ES+), 5.38分時, 99.31%
1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): δ1.21 (s, 6H), 2.57 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.22 - 3.27 (m, 2H), 6.66 (s, 1H), 7.06 - 7.11 (m, 6H), 7.28 (s, 1H), 7.35 - 7.42 (m, 8H), 7.64 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 12.44 (bs, 1H)
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２－トリチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（中間体２）の合成
２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エタン－１－アミン（３、８．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（１６．０ｍＬ、１１３．０ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）中溶液を、６０分かけて、２，２，５，５－テトラメチル－１，３－ジオキサン－４，６－ジオン（５、５．８ｇ、２９．７６ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中溶液に７５℃で滴加した。反応混合物を同じ温度でさらに３時間撹拌した。終了後、反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をクロロホルム（１００ｍＬ）中に溶解し、１０％クエン酸水溶液（ｐＨ ～６－６．５）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。得られた粗残渣を熱クロロホルム（１５０ｍＬ）とｎ－ヘキサン（７５ｍＬ）で粉砕し、該懸濁液を室温で１６時間撹拌した。固体をろ過し、クロロホルム：ｎ－ヘキサン（１：１、２×５０ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、２，２－ジメチル－３－オキソ－３－（（２－（１－トリチル－１Ｈ－イミダゾール－４－イル）エチル）アミノ）プロパン酸（中間体１、６．８ｇ、６４％）を白色固体として得た。
LCMS (方法Ａ): m/z 468 [M+H]+ (ES+), 5.38分時, 99.31%
1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): δ1.21 (s, 6H), 2.57 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.22 - 3.27 (m, 2H), 6.66 (s, 1H), 7.06 - 7.11 (m, 6H), 7.28 (s, 1H), 7.35 - 7.42 (m, 8H), 7.64 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 12.44 (bs, 1H)
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２－トリチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（中間体２）の合成
【0151】
【化23】
（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）－Ｌ－アスパラギン（７、５０．０ｇ、４２３．７ｍｍｏｌ）のピリジン（２００ｍＬ）中懸濁液に、ＤＣＣ（３４．０ｇ、４６６．１ｍｍｏｌ）を０℃で加え、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物をｐＨが酸性になるまで２Ｎ ＨＣｌ水溶液で慎重にクエンチングし、ジエチルエーテル（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。残渣をペンタンで粉砕して、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－シアノプロパン酸（７、９６ｇ、６８％）を白色固体として得た。
MS (ESI -ve): 335。
1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): δ2.85 - 3.05 (m, 2H), 4.22 - 4.39 (m, 4H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H)。
【0152】
工程２：（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（８）の合成：
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－シアノプロパン酸（７、４８．０ｇ、１４２．８ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中懸濁液に、ジブチルスズオキシド（２１．０ｇ、８５．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１５分間撹拌した。この反応混合物に、トリメチルシリルアジド（６１ｍＬ、４２２．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２０℃で１５分間還流した。反応混合物を室温に冷却後、形成された得られた固体をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体残渣を５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５００ｍＬ）で粉砕し、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（８、３２．５ｇ、６０％）をオフホワイト色固体として得た。
MS (ESI +ve): 380
1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): δ3.22-3.41 (m, 2H), 4.18 - 4.28 (m, 3H), 4.41 - 4.48 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 2H)。
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－シアノプロパン酸（７、４８．０ｇ、１４２．８ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）中懸濁液に、ジブチルスズオキシド（２１．０ｇ、８５．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１５分間撹拌した。この反応混合物に、トリメチルシリルアジド（６１ｍＬ、４２２．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２０℃で１５分間還流した。反応混合物を室温に冷却後、形成された得られた固体をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した。固体残渣を５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５００ｍＬ）で粉砕し、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（８、３２．５ｇ、６０％）をオフホワイト色固体として得た。
MS (ESI +ve): 380
1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): δ3.22-3.41 (m, 2H), 4.18 - 4.28 (m, 3H), 4.41 - 4.48 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 2H)。
【0153】
工程３：（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２－トリチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（中間体２）の合成：
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（８、１２×５ｇ、１２×１３．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２×４５ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１２×５．６ｍＬ、１２×３９．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。５分間撹拌後、トリチルクロリド（１２×４．０ｇ、１２×１４．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を同じ温度で２時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）でクエンチングし、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した（１２回）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し［順相、シリカゲル（１００－２００メッシュ）、ＤＣＭ中１％～５％メタノールのグラジエント］、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２－トリチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（中間体２、４１ｇ、４１％）を白色固体として得た。
LCMS (方法Ａ): m/z 620 [M-H]+ (ES-), 5.99分時, 86.85%
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ3.44 - 3.62 (m, 2H), 4.12 - 4.20 (m, 1H), 4.25 - 4.32 (m, 1H), 4.36 - 4.44 (m, 1H), 4.82 - 4.88 (m, 1H), 7.02 - 7.12 (m, 6H), 7.24 - 7.32 (m, 11 H), 7.34 - 7.42 (m, 2H), 7.44 - 7.48 (m, 1H), 7.49 - 7.58 (m, 2H), 7.74 (d, J = 6.6 Hz, 2H)。
更なる精製をせずに固相ペプチド合成に使用
実施例１～２３の合成
標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を用いて直鎖ペプチドを合成した後、それらを樹脂から切断し、精製した。
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（８、１２×５ｇ、１２×１３．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２×４５ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１２×５．６ｍＬ、１２×３９．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。５分間撹拌後、トリチルクロリド（１２×４．０ｇ、１２×１４．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を同じ温度で２時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）でクエンチングし、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した（１２回）。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し［順相、シリカゲル（１００－２００メッシュ）、ＤＣＭ中１％～５％メタノールのグラジエント］、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（２－トリチル－２Ｈ－テトラゾール－５－イル）プロパン酸（中間体２、４１ｇ、４１％）を白色固体として得た。
LCMS (方法Ａ): m/z 620 [M-H]+ (ES-), 5.99分時, 86.85%
1H-NMR (400 MHz; CDCl3): δ3.44 - 3.62 (m, 2H), 4.12 - 4.20 (m, 1H), 4.25 - 4.32 (m, 1H), 4.36 - 4.44 (m, 1H), 4.82 - 4.88 (m, 1H), 7.02 - 7.12 (m, 6H), 7.24 - 7.32 (m, 11 H), 7.34 - 7.42 (m, 2H), 7.44 - 7.48 (m, 1H), 7.49 - 7.58 (m, 2H), 7.74 (d, J = 6.6 Hz, 2H)。
更なる精製をせずに固相ペプチド合成に使用
実施例１～２３の合成
標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を用いて直鎖ペプチドを合成した後、それらを樹脂から切断し、精製した。
【0154】
一般的なペプチド合成法：
ペプチドは標準的なＦｍｏｃ化学を用いて合成された。
ペプチドは標準的なＦｍｏｃ化学を用いて合成された。
【0155】
１）ＤＣＭをＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂（ｓｕｂ：０．３５ｍｍｏｌ／ｇ、０．２ｍｍｏｌ、０．５７ｇ）入り容器に加え、２時間膨潤。
【0156】
２）排水後、ＤＭＦで洗浄（５回、洗浄ごとに排水）。
【0157】
３）ＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液を加え、Ｎ２通気しながら３０分間撹拌。
【0158】
４）排水し、ＤＭＦで洗浄（５回、洗浄ごとに排水）。
【0159】
５）Ｆｍｏｃ－アミノ酸溶液（ＤＭＦ中３．０当量）を加え、３０秒間混合後、活性化緩衝液（ＤＭＦ中ＨＢＴＵ（２．８５当量）及びＤＩＥＡ（６当量））を加え、Ｎ２通気しながら１時間撹拌。
【0160】
６）カップリング反応はニンヒドリン試験によってモニターした。
【0161】
７）効率の悪いカップリングが発生した場合、必要であれば、同じアミノ酸カップリングについて工程４～６を繰り返す。
【0162】
８）次のアミノ酸カップリングについて工程２～６を繰り返す。
【0163】
注：以下の表中の酸については異なる当量及びカップリング剤が使用された。
【0164】
【表2】
１）切断緩衝液（９２．５％ＴＦＡ／２．５％ＥＤＴ／２．５％ＴＩＳ／２．５％Ｈ２Ｏ）を側鎖保護ペプチド入りフラスコに室温で加え、３時間撹拌。
【0165】
２）ペプチドを冷ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルで沈殿させ、遠心分離する（３０００ｒｐｍで３分間）。
【0166】
３）残渣をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルで洗浄（２回）。
【0167】
４）粗ペプチドを真空下で２時間乾燥。
【0168】
５）粗ペプチドを分取ＨＰＬＣで精製した。分取ＨＰＬＣ条件：機器：Ｇｉｌｓｏｎ ２８１。溶媒：Ａ－Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、Ｂ－アセトニトリル、カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８（２００×２５ｍｍ；１０μｍ）及びＧｅｍｉｎｉ Ｃ１８（１５０＊３０ｍｍ；５μｍ）を直列配置。グラジエント［時間（分）／溶媒Ｂ（％）］：２０ｍＬ／分で、０．０／２０、６０．０／５０、６０．１／９０、７０／９０、７０．１／１０、ＵＶ検出（波長＝２１５ｎｍ）。次いで凍結乾燥し、実施例３（２５．８ｍｇ、収率３．１％）を得た。
【0169】
【表3】
下記実施例は、本発明の好適な側面を例示するために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
【0170】
実施例Ａ．ペプチドのインビトロ薬理学的特性評価 － ヒトＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体の機能的アゴニズム、ｃＡＭＰ蓄積アッセイ
ヒトＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体のアゴニスト刺激によるｃＡＭＰ産生を、ＨｉＲａｎｇｅ ｃＡＭＰキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を利用して評価した。簡潔に述べると、ＨＥＫ細胞に、ヒトＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体ＢａｃＭａｍウイルスをそれぞれ２４時間感染させ、後でアッセイに使用するために凍結した。当日、様々な濃度の化合物を、ＥＣＨＯ－５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を用いて総容量１００ｎｌになるまで低容量３８４ウェルＰｒｏｘｉプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に分注した後、１０μｌの細胞懸濁液を添加して、ウェルあたり８００ｋ個の細胞を分配した。細胞はアッセイ緩衝液（０．５ｍＭのＩＢＭＸ（Ｔｏｃｒｉｓ）が補給されたＨＢＳＳ（Ｌｏｎｚａ））中に用意されたものであった。３７℃で４５分間のインキュベーション後、キットに付いている溶解緩衝液中ＨＴＲＦ検出試薬を添加することにより反応を停止させた。室温で１時間のインキュベーション後、プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒ ＦＳ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）で読み取った。Ｄｏｔｍａｔｉｃｓ Ｓｔｕｄｉｅｓソフトウェアを用い、データを４パラメーター用量反応曲線にあてはめることによりｐＥＣ５０値を計算した。
ヒトＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体のアゴニスト刺激によるｃＡＭＰ産生を、ＨｉＲａｎｇｅ ｃＡＭＰキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を利用して評価した。簡潔に述べると、ＨＥＫ細胞に、ヒトＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体ＢａｃＭａｍウイルスをそれぞれ２４時間感染させ、後でアッセイに使用するために凍結した。当日、様々な濃度の化合物を、ＥＣＨＯ－５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を用いて総容量１００ｎｌになるまで低容量３８４ウェルＰｒｏｘｉプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に分注した後、１０μｌの細胞懸濁液を添加して、ウェルあたり８００ｋ個の細胞を分配した。細胞はアッセイ緩衝液（０．５ｍＭのＩＢＭＸ（Ｔｏｃｒｉｓ）が補給されたＨＢＳＳ（Ｌｏｎｚａ））中に用意されたものであった。３７℃で４５分間のインキュベーション後、キットに付いている溶解緩衝液中ＨＴＲＦ検出試薬を添加することにより反応を停止させた。室温で１時間のインキュベーション後、プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒ ＦＳ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）で読み取った。Ｄｏｔｍａｔｉｃｓ Ｓｔｕｄｉｅｓソフトウェアを用い、データを４パラメーター用量反応曲線にあてはめることによりｐＥＣ５０値を計算した。
【0171】
Ｅｘｅｎｄｉｎ－４及びリラグルチドをＧＬＰ－１受容体活性化の基準化合物として使用し、Ｔｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅ及びＦＥ－２０３７９９をＧＬＰ－２受容体活性化の基準化合物として使用した。
【0172】
【表4】
マウスＧＬＰ２又はＧＬＰ１受容体のアゴニスト刺激によるｃＡＭＰ産生を、ＨｉＲａｎｇｅ ｃＡＭＰキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を利用して評価した。簡潔に述べると、ＨＥＫ細胞にｃＤＮＡを２４時間、ＧｅｎｅＪｕｉｃｅトランスフェクション試薬（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて一過性にトランスフェクトし、後でアッセイに使用するために－８０℃で凍結した。当日、様々な濃度の化合物を、ＥＣＨＯ－５５５（ＬａｂＣｙｔｅ）を用いて総容量１００ｎｌになるまで低容量３８４ウェルＰｒｏｘｉプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に分注した後、１０μｌの細胞懸濁液を添加して、ウェルあたり８０００個の細胞を分配した。細胞はアッセイ緩衝液（０．５ｍＭのＩＢＭＸ（Ｔｏｃｒｉｓ）が補給されたＨＢＳＳ（Ｌｏｎｚａ））中に用意されたものであった。３７℃で４５分間のインキュベーション後、キットに付いている溶解緩衝液中ＨＴＲＦ検出試薬を添加することにより反応を停止させた。室温で１時間のインキュベーション後、プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒ ＦＳ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）で標準的なＨＴＲＦ設定を用いて読み取った。Ｄｏｔｍａｔｉｃｓ Ｓｔｕｄｉｅｓソフトウェアを用い、データを４パラメーター濃度反応曲線にあてはめることによりｐＥＣ５０値を計算した。
【0173】
リラグルチドをＧＬＰ－１受容体活性化の基準化合物として使用し、Ｔｅｄｕｇｌｕｔｉｄｅ及びＦＥ－２０３７９９をＧＬＰ－２受容体活性化の基準化合物として使用した。
【0174】
【表5】
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリア、～８週齢）をベースライン体重に基づいて無作為に処置群に割り当てる。動物は研究の全期間を通じて自由に食物と水を摂取できる。マウスは皮下注射により試験化合物を毎日投与される。４日目に動物を屠殺し、発泡スチロールのパッド上に固定する。腹腔を開き、腸組織を穿孔しないように慎重に切除する。上部小腸からの組織（幽門から１５ｃｍのセグメント）を採取する。糞便を除去するために腸を氷冷ＰＢＳで洗い流すことによってきれいにする。
ＧＬＰ－２活性ペプチド（テデュグルチド、実施例１及び３）による処置を受けた動物で腸湿潤重量の顕著な増大が見られたが、ＧＬＰ－１ペプチドのリラグルチドは腸重量を増加しなかった（図１）。
【0175】
実施例Ｄ：正常マウスの腸質量に対する化合物の用量反応効果
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリア、～８週齢）をベースライン体重に基づいて無作為に処置群に割り当てる。動物は研究の全期間を通じて自由に食物と水を摂取できる。マウスは皮下注射によりビヒクル又は試験ペプチドを毎日投与される。７日目に動物を屠殺し、上部小腸からのセグメント（幽門から１５ｃｍのセグメント）を採取し、秤量する（実施例Ｂ参照）。
テデュグルチド又は実施例１及び３による処置を受けた動物は、小腸の湿潤重量に用量依存性の増大を示した（図２）。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリア、～８週齢）をベースライン体重に基づいて無作為に処置群に割り当てる。動物は研究の全期間を通じて自由に食物と水を摂取できる。マウスは皮下注射によりビヒクル又は試験ペプチドを毎日投与される。７日目に動物を屠殺し、上部小腸からのセグメント（幽門から１５ｃｍのセグメント）を採取し、秤量する（実施例Ｂ参照）。
テデュグルチド又は実施例１及び３による処置を受けた動物は、小腸の湿潤重量に用量依存性の増大を示した（図２）。
【0176】
実施例Ｅ．正常マウスの耐糖能に対する効果
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリア、～８週齢）を試験当日、飲料水は自由に与えながら６時間絶食させる。薬物投与に先立ち、投与前の血糖測定を血糖測定器（ＡＣＣＵ－ＣＨＥＫ ｐｅｒｆｏｒｍａ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＧｍｂＨ）を用いて行う。動物は皮下注射によりビヒクル（ＰＢＳ中０．１％Ｔｗｅｅｎ８０）か又は試験化合物（２７０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のいずれかを投与される。リラグルチド（２００ｕｇ／ｋｇ）は静脈内注射として投与された。投与の１時間後、マウスに２ｇ／ｋｇのグルコースを強制経口投与し、血糖値分析のために血液を規定の時点で採取する。採取時点：ｔ＝０（グルコース投与前）、１５分、３０分、６０分、１２０分及び１８０分。
ビヒクル処置マウスは、血糖値に急激な上昇を示し、最初の１５分でピークに達した後、３時間でベースライン値に戻った。リラグルチド、実施例１及び３で処置された動物ではピーク血糖濃度が著しく低下した（図３）。
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、イタリア、～８週齢）を試験当日、飲料水は自由に与えながら６時間絶食させる。薬物投与に先立ち、投与前の血糖測定を血糖測定器（ＡＣＣＵ－ＣＨＥＫ ｐｅｒｆｏｒｍａ、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ＧｍｂＨ）を用いて行う。動物は皮下注射によりビヒクル（ＰＢＳ中０．１％Ｔｗｅｅｎ８０）か又は試験化合物（２７０ｎｍｏｌ／ｋｇ）のいずれかを投与される。リラグルチド（２００ｕｇ／ｋｇ）は静脈内注射として投与された。投与の１時間後、マウスに２ｇ／ｋｇのグルコースを強制経口投与し、血糖値分析のために血液を規定の時点で採取する。採取時点：ｔ＝０（グルコース投与前）、１５分、３０分、６０分、１２０分及び１８０分。
ビヒクル処置マウスは、血糖値に急激な上昇を示し、最初の１５分でピークに達した後、３時間でベースライン値に戻った。リラグルチド、実施例１及び３で処置された動物ではピーク血糖濃度が著しく低下した（図３）。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3】
【国際調査報告】