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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-08
(54)【発明の名称】宿主細胞タンパク質が減少した修飾哺乳動物細胞
(51)【国際特許分類】
C12N 5/10 20060101AFI20230426BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230426BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20230426BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20230426BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20230426BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20230426BHJP
C12N 15/52 20060101ALN20230426BHJP
【ＦＩ】
C12N5/10 ZNA
C12P21/08
C12N15/09 110
C12N15/113 130Z
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N15/52 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022557712
(86)(22)【出願日】2021-03-26
(85)【翻訳文提出日】2022-11-11
(86)【国際出願番号】 US2021024295
(87)【国際公開番号】W WO2021195464
(87)【国際公開日】2021-09-30
(31)【優先権主張番号】63/128,419
(32)【優先日】2020-12-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/000,464
(32)【優先日】2020-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/155,225
(32)【優先日】2021-03-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ＰＬＵＲＯＮＩＣ
３．プルロニック
(71)【出願人】
【識別番号】509012625
【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】レアード， マイケル ウィルソン
(72)【発明者】
【氏名】ミサギ， シャーラム
(72)【発明者】
【氏名】シェン， エイミー
(72)【発明者】
【氏名】トムリンソン， アンソニー
(72)【発明者】
【氏名】ユク， イン フアム
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA90X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
(57)【要約】
本開示は、目的の生成物、例えば組換えタンパク質を製造するための方法、細胞、及び組成物に関する。特に、本開示は、目的の生成物を発現させる改善された哺乳動物細胞を提供し、ここで細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）は、特定の宿主細胞タンパク質の、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない酵素の活性、例えば発現の減少又は排除を有する。
【選択図】図２
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、１つ又は複数の酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項2】
１つ又は複数の酵素が、以下：リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；ホスホリパーゼＢドメイン含有２（ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２）；リパーゼＡ（リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ、リパーゼ）（ＬＩＰＡ）；ホスホリパーゼＡ－２－活性化タンパク質（ＰＬＡＡ）；ホスホリパーゼＤ３（ＰＬＤ３）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＶ（ＬＰＬＡ２）；ホスホリパーゼＣベータ１（ＰＬＣＢ１）；ホスホリパーゼＣデルタ１（ＰＬＣＤ１）；ＤＤＨＤドメイン含有タンパク質１（断片）（ＤＤＨＤ１）；リゾホスホリパーゼ様タンパク質１（ＬＹＰＬＡＬ１）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＩＩＡ（ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ）；ペルオキシレドキシン６（ＰＲＤＸ６）；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；酢酸イソアミル加水分解エステラーゼ１（推定）（ＩＡＨ１）；ＯＴＵ デユビキチナーゼ、ユビキチンアルデヒド結合１（ＯＴＵＢ１）；リゾホスホリパーゼ２（アシルタンパク質チオエステラーゼ２）（ＬＹＰＬＡ２）；アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ１３（ＡＣＯＴ１３）；脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）；ホスホリパーゼＡ２グループＶＩＩ（ＰＬＡ２Ｇ７）；ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＵＳＰ５）；Ｎ－アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ１（酸性セラミダーゼ）（ＡＳＡＨ１）；リパーゼ成熟因子１（ＬＭＦ１）；アポリポタンパク質Ｃ－ＩＩ（ＡＰＯＣ２）；アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）；カルボキシルエステラーゼ１Ｆ（ＣＥＳ１Ｆ）又は肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）；リゾホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）；カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）；ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）；及びシアル酸アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）からなる群より選択される、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項3】
以下：ａ）ＰＰＴ１；
ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡ；
ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１；
ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；
ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１；
ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３；
ｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１
ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１
ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１
ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ
ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ
ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ、ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ
ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１
ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１、又は
ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２
の活性が、減少しているか又は排除されている、請求項２に記載の組換え宿主細胞。
【請求項4】
１つ又は複数の酵素の活性が、（ａ）酵素の発現をノックダウンすること；
（ｂ）酵素の発現をノックアウトすること；又は
（ｃ）酵素をコードする核酸配列を改変すること
により減少しているか又は排除されている、請求項１から３のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項5】
細胞が、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項6】
１つ又は複数の改変された酵素遺伝子が、検出可能な酵素活性を有しない、請求項５に記載の組換え宿主細胞。
【請求項7】
哺乳動物細胞である、請求項１から６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項8】
ＣＨＯ細胞である、請求項７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項9】
目的の生成物をコードする核酸配列を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項10】
目的の生成物が、タンパク質、ウイルス粒子、又はウイルスベクターを含む、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
【請求項11】
目的の生成物が組換えタンパク質を含む、請求項９又は１０に記載の組換え宿主細胞。
【請求項12】
目的の生成物が、抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項13】
抗体が、多重特異性抗体又はその抗原結合断片である、請求項１２に記載の組換え宿主細胞。
【請求項14】
抗体が、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列、又はそれらの抗原結合断片からなる、請求項１２に記載の組換え宿主細胞。
【請求項15】
抗体が、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体を含む、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項16】
抗体がモノクローナル抗体を含む、請求項１２から１５のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項17】
核酸配列が、標的化された位置において哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれている、請求項９から１６のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞。
【請求項18】
哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた目的の生成物をコードする核酸をさらに含む、請求項１７に記載の組換え宿主細胞。
【請求項19】
修飾された細胞が、任意の検出可能なＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥを発現させない、請求項１に記載の組換え宿主細胞。
【請求項20】
請求項１から１９のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を含む組成物。
【請求項21】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項22】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法。
【請求項23】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項24】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項25】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項26】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；及びＡＳＡＨ１のうちの１つ又は複数をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項27】
遺伝子組換えシステムが、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項28】
遺伝子組換えシステムがＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムである、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムが以下：（ａ）Ｃａｓ９分子と、
（ｂ）ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＨＡＣＨ；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子中の標的配列に相補的である標的配列を含む１つ又は複数のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と
を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
遺伝子組換えシステムが、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群より選択されるＲＮＡを含み、ＲＮＡが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ遺伝子のうちの１つ又は複数によって発現するｍＲＮＡの一部に相補的である、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項31】
遺伝子組換えシステムが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システムである、請求項２５又は２６に記載の方法。
【請求項32】
細胞が哺乳動物細胞である、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
細胞が目的の生成物を発現させる、請求項２１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
細胞により発現した目的の生成物が核酸配列によりコードされる、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
核酸配列が、標的化された位置において細胞の細胞ゲノムに組み込まれている、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
細胞により発現した目的の生成物が、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた核酸配列によりさらにコードされる、請求項３４から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
目的の生成物がタンパク質を含む、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
目的の生成物が組み換えタンパク質を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
目的の生成物が、抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項３４から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
抗体が多重特異性抗体又はその抗原結合断片である、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
抗体が、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列、又はそれらの抗原結合断片からなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項43】
抗体が、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項４０から４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を製造する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法。
【請求項46】
目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；及びＡＳＡＨ１のうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法。
【請求項47】
活性の減少又は排除が、哺乳動物細胞中の以下：ａ）ＰＰＴ１；
ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡ；
ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１；
ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；
ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１；
ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３；
ｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１
ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１
ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１
ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１
ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ
ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ、ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ
ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１
ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１、又は
ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２
のものである、請求項３５又は３６に記載の方法。
【請求項48】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
哺乳動物細胞によって発現した目的の生成物が、核酸配列によってコードされる、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
核酸配列が、標的化された位置において哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれている、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
細胞により発現した目的の生成物が、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた核酸配列によりさらにコードされる、請求項４５から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
目的の生成物が、タンパク質、ウイルス粒子、又はウイルスベクターを含む、請求項４５から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
目的の生成物が組換えタンパク質を含む、請求項４５から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
目的の生成物が、抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項４５から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項55】
抗体が多重特異性抗体又はその抗原結合断片である、請求項５４に記載の方法。
【請求項56】
抗体が、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列、又はそれらの抗原結合断片からなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項57】
抗体が、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項５４から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
目的の生成物を精製すること、目的の生成物を採取すること、及び／又は目的の生成物を製剤化することをさらに含む、請求項４５から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの分解が減少する、請求項２１から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
ポリソルベート２０（ＰＳ２０又はＴｗｅｅｎ ２０）の分解が減少する、請求項２１から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
ポリソルベート８０（ＰＳ８０又はＴｗｅｅｎ ８０）の分解が減少する、請求項２１から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む組換え宿主細胞。
【請求項64】
１つ又は複数の改変された酵素遺伝子が、コード領域の破壊によって改変される、請求項６３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項65】
１つ又は複数の酵素遺伝子の改変が、対立遺伝子の改変を含む、請求項６３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項66】
１つ又は複数の酵素遺伝子の改変が、１以上の塩基対、２以上の塩基対、３以上の塩基対、４以上の塩基対、５以上の塩基対、６以上の塩基対、７以上の塩基対、８以上の塩基対、９以上の塩基対、１０以上の塩基対、１１以上の塩基対、１２以上の塩基対、１３以上の塩基対、１４以上の塩基対、１５以上の塩基対、１６以上の塩基対、１７以上の塩基対、１８以上の塩基対、１９以上の塩基対、又は２０以上の塩基対の欠失を含む、請求項６５に記載の組換え宿主細胞。
【請求項67】
１つ又は複数の酵素遺伝子が、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥである、請求項６３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項68】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項69】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項70】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項71】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項72】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項73】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項74】
組換え宿主細胞であって、細胞が、非修飾細胞におけるレベルに対してＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のレベルを減少させるか又は排除するために修飾されている、組換え宿主細胞。
【請求項75】
請求項６８から７４のいずれか一項に記載の組換え宿主細胞を含む組成物。
【請求項76】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項77】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項78】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項79】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項80】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦＩ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項81】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項82】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法。
【請求項83】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項84】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項85】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項86】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法。
【請求項87】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項88】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項89】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少をもたらす、方法。
【請求項90】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項91】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項92】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項93】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項94】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項95】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項96】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法。
【請求項97】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項98】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項99】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項100】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項101】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項102】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項103】
細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法。
【請求項104】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項105】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項106】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項107】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項108】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項109】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項110】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法。
【請求項111】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項112】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項113】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項114】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥをコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項115】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項116】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法。
【請求項117】
細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２をコードする核酸配列を改変する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／０００，４６４号、２０２０年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１２８，４１９号、及び２０２１年３月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５５，２２５号の利益を主張するものであり、これらの開示は、その全文が参照により本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／０００，４６４号、２０２０年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１２８，４１９号、及び２０２１年３月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１５５，２２５号の利益を主張するものであり、これらの開示は、その全文が参照により本明細書に援用される。
【0002】
技術分野
本開示は、特定の宿主細胞タンパク質、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない宿主細胞酵素の活性の減少又は排除を有する修飾哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）、そのような細胞を作製するための方法、並びに目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成におけるそのような細胞の使用方法に関する。
本開示は、特定の宿主細胞タンパク質、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない宿主細胞酵素の活性の減少又は排除を有する修飾哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）、そのような細胞を作製するための方法、並びに目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成におけるそのような細胞の使用方法に関する。
【背景技術】
【0003】
哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞は、細胞成長、生存、及び／又は生産性に不可欠ではない多くのタンパク質を発現させる。しかしながら、これらの宿主細胞タンパク質の発現は、かなりの細胞エネルギー及びＤＮＡ／タンパク質ビルディングブロックを消費する。そのようなタンパク質の発現の減少又は排除は、細胞成長をより効率的にすることができる。さらに、目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成に細胞が使用される状況では、これらのタンパク質の一部は目的の生成物と共精製される可能性があり、追加の精製プロセスに関連するコストの増加及び／又は得られる生成物の貯蔵寿命の低減につながる。例えば、目的の生成物と共精製する特定の残存宿主細胞は、最終薬物製品における界面活性剤として使用されるポリソルベートを分解し、粒子形成につながる可能性がある（Ｄｉｘｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ， ２０１６， Ｖｏｌｕｍｅ １０５， Ｉｓｓｕｅ ５， Ｐａｇｅｓ １６５７－１６６６）。したがって、当該技術分野では、目的の生成物、例えば組換えタンパク質を生成するための方法、細胞、及び組成物が必要であり、ここで、目的の生成物を発現させる細胞は、細胞成長、生存、及び／又は生産性に不可欠ではない特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない特定の宿主細胞タンパク質、例えば酵素の活性、例えば発現の減少又は排除を有する。例えば、ｍＡｂと共精製し、続いて薬物製品中のポリソルベートを分解する残存ＣＨＯ宿主細胞タンパク質からの加水分解活性を減少させるための調査により、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）が同定された：ＬＰＬがノックアウトされたＣＨＯ細胞株は、野生型の対応物よりもポリソルベートの分解が４１～５７％少ない細胞培養収穫物をもたらした（Ｃｈｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ， ２０１７， Ｖｏｌｕｍｅ １１４， Ｉｓｓｕｅ ５， Ｐａｇｅｓ １００６－１０１５）。そのような酵素の発現を減少させるか又は排除することにより、関連する酵素活性の悪影響（例えば、残存ヒドロラーゼによる薬物製品中のポリソルベートの加水分解）が軽減され得る。しかしながら、その調査では、細胞培養物採取段階でのＬＰＬノックアウトで観察された利点が、下流の処理を通じて維持されるかどうかは決定されなかった。ノックアウト細胞株から生成された精製材料を試験して、精製後に利点が得られ、それが薬物製品の利点につながることを実証することが重要である。
【発明の概要】
【0004】
本開示は、特定の宿主細胞タンパク質、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない宿主細胞酵素の活性の減少又は排除を有する修飾哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）、そのような細胞を作製するための方法、並びに目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成におけるそのような細胞の使用方法に関する。
【0005】
特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、１つ又は複数の酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素は、以下からなる群から選択される：リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；ホスホリパーゼＢドメイン含有２（ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２）；リパーゼＡ（リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ、リパーゼ）（ＬＩＰＡ）；ホスホリパーゼＡ－２－活性化タンパク質（ＰＬＡＡ）；ホスホリパーゼＤ３（ＰＬＤ３）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＶ（ＬＰＬＡ２）；ホスホリパーゼＣベータ１（ＰＬＣＢ１）；ホスホリパーゼＣデルタ１（ＰＬＣＤ１）；ＤＤＨＤドメイン含有タンパク質１（断片）（ＤＤＨＤ１）；リゾホスホリパーゼ様タンパク質１（ＬＹＰＬＡＬ１）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＩＩＡ（ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ）；ペルオキシレドキシン６（ＰＲＤＸ６）；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；酢酸イソアミル加水分解エステラーゼ １（推定）（ＩＡＨ１）；ＯＴＵ デユビキチナーゼ、ユビキチンアルデヒド結合１（ＯＴＵＢ１）；リゾホスホリパーゼ２（アシルタンパク質チオエステラーゼ２）（ＬＹＰＬＡ２）；アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ１３（ＡＣＯＴ１３）；脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）；ホスホリパーゼＡ２グループＶＩＩ（ＰＬＡ２Ｇ７）；ユビキチン特異的ペプチダーゼ ５（ＵＳＰ５）；Ｎ－アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ１（酸性セラミダーゼ）（ＡＳＡＨ１）；リパーゼ成熟因子１（ＬＭＦ１）；アポリポタンパク質－ＣＩＩ（ＡＰＯＣ２）；アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）；カルボキシルエステラーゼ１Ｆ（ＣＥＳ１Ｆ）又は肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）；リゾホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）；カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）；ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）；及びシアル酸アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）。
【0006】
特定の実施態様では、組換え宿主細胞中のａ）ＰＰＴ１；ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡ；ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３；ｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１；ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１；ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２は、減少又は排除されている。
【0007】
特定の実施態様では、組換え宿主細胞中の１つ又は複数の酵素の活性は、以下により減少又は排除されている：（ａ）酵素のノックダウン発現；又は（ｂ）酵素のノックアウト発現；又は（ｃ）酵素をコードする核酸配列の改変。
【0008】
特定の実施態様では、本開示は、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む組換え宿主細胞を対象とする。特定の実施態様では、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子は、検出可能な酵素活性を有しない。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、目的の生成物をコードする核酸配列を含む。特定の実施態様では、核酸配列は、標的化された位置における哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれる。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた目的の生成物をコードする核酸をさらに含む。特定の実施態様では、修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥを発現させない。
【0009】
特定の実施態様では、本開示は、本開示に記載される組換え宿主細胞を含む組成物を提供する。
【0010】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。
【0011】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。
【0012】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。
【0013】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。
【0014】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。
【0015】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ； ＳＩＡＥの１つ又は複数が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。
【0016】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を製造する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0017】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0018】
特定の実施態様では、本開示は、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む組換え宿主細胞を提供する。特定の実施態様では、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子は、コード領域の破壊によって改変される。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子の改変は、対立遺伝子の改変を含む。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子の改変は、１以上の塩基対、２以上の塩基対、３以上の塩基対、４以上の塩基対、５以上の塩基対、６以上の塩基対、７以上の塩基対、８以上の塩基対、９以上の塩基対、１０以上の塩基対、１１以上の塩基対、１２以上の塩基対、１３以上の塩基対、１４以上の塩基対、１５以上の塩基対、１６以上の塩基対、１７以上の塩基対、１８以上の塩基対、１９以上の塩基対、又は２０以上の塩基対の欠失を含む。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子は、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥである。
【0019】
上記の特定の実施態様では、遺伝子組み換えシステムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムである。
【0020】
上記の特定の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、（ａ）Ｃａｓ９分子と、（ｂ）ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子中の標的配列に相補的である標的配列を含む１つ又は複数のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）とを含む。
【0021】
上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群より選択されるＲＮＡを含み、ここで、ＲＮＡは、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ遺伝子のうちの１つ又は複数によって発現するｍＲＮＡの一部に相補的である。上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システムである。
【0022】
上記の特定の実施態様では、活性の減少又は排除は、哺乳動物細胞中のａ）ＰＰＴ１；ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及び／又はＬＩＰＡ；ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３又はｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１；ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１；ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のものである。
【0023】
上記の特定の実施態様では、本開示で提供される方法は、目的の生成物を精製すること、目的の生成物を採取すること、及び／又は目的の生成物を製剤化することをさらに含む。
【0024】
上記の特定の実施態様では、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの分解が減少する。上記の特定の実施態様では、ポリソルベート２０（ＰＳ２０又はＴｗｅｅｎ ２０）の分解が減少する。上記の特定の実施態様では、ポリソルベート８０（ＰＳ８０又はＴｗｅｅｎ ８０）の分解が減少する。
【0025】
上記の特定の実施態様では、細胞は哺乳動物細胞である。上記の特定の実施態様では、哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞である。
【0026】
上記の特定の実施態様では、細胞は、目的の生成物を発現させる。上記の特定の実施態様では、哺乳動物細胞によって発現する目的の生成物は、核酸配列によってコードされる。上記の特定の実施態様では、核酸配列は、標的化された位置における哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれる。上記の特定の実施態様では、細胞によって発現する目的の生成物は、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた核酸配列によってさらにコードされる。
【0027】
上記の特定の実施態様では、目的の生成物は、タンパク質、ウイルス粒子、又はウイルスベクターを含む。上記の特定の実施態様では、目的の生成物は組換えタンパク質を含む。上記の特定の実施態様では、目的の生成物は、抗体又はその抗原結合断片を含む。上記の特定の実施態様では、抗体は、多重特異性抗体又はその抗原結合断片である。上記の特定の実施態様では、抗体は、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列、又はそれらの抗原結合断片からなる。上記の特定の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である。上記の特定の実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。
【0028】
特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２を発現させない。
【0029】
特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における活性に対してＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。
【0030】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。
【0031】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＰＰＴＩの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少をもたらす、方法を提供する。
【0032】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。
【0033】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。
【0034】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムがＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。
【0035】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＰＰＴＩをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。
【0036】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0037】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞がＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0038】
【図1】３つの異なるモノクローナル抗体の精製プロセスのさまざまな段階から取った濃縮サンプル中でみられる酵素を示す表である。
【図2】空のＣＨＯ宿主細胞の生成に使用される多重ノックアウト（ＫＯ）アプローチを示す。
【図3】各空のＣＨＯ宿主細胞中で調節又はノックアウトされた遺伝子を示す表である。
【図4A-4C】ＰＬＢＬ２ ＫＯ細胞は、親宿主細胞と比較して、同様の又はより良好な力価を有する。生細胞濃度（ＩＶＣＣ）の積分によって表される成長率は、図４Ａに示されている。ＰＬＢＬ２－ＫＯ宿主細胞株に由来するＭＡｂ－Ａ産生プールは、図４Ｃに示すように比生産性（Ｑｐ）が高いため、図４Ｂ に示すように、親宿主細胞と比較して同等以上の力価を有した。
【図5A-5C】３×ＫＯ細胞は、親宿主細胞と比較して、同様の又はより良好な比生産性（Ｑｐ）を有する。成長率は図５Ａに示されている。３×ＫＯ宿主細胞株に由来するＭＡｂ－Ｂ産生プールは、図５Ｂに示されている。ｍＡｂ－Ｂの比生産性（Ｑｐ）は図５Ｃに示されている。
【図7A-7C】７×ＫＯ宿主細胞による３つの異なる抗体の産生ＩＶＣＣによって表される３つの異なるｍＡｂを発現させる７×ＫＯ宿主細胞の成長は、図７Ａに示されている。７×ＫＯ宿主細胞によって表される３つの異なるｍＡｂの力価は、図７Ｂに示されている。ｍＡｂ－Ｂ、ｍＡｂ－Ｃ、及びｍＡｂ－Ｄの比生産性（Ｑｐ）は、図７Ｃに示されている。
【図8A-8C】８×ＫＯ及びＢａ×Ｂａｋ ＫＯ空の宿主のパフォーマンス生細胞濃度（ＩＶＣＣ）の積分によって表される細胞成長は、図８Ａに示されている。生存率と乳酸蓄積は、それぞれ図８Ｂ及び８Ｃに示されている。
【図9A-9C】３Ｘ、７Ｘ、及び１２×ＫＯ空の宿主のパフォーマンス生細胞濃度（ＩＶＣＣ）の積分によって表される細胞成長は、図９Ａに示されている。生存率と乳酸蓄積は、それぞれ図９Ｂ及び９Ｃに示されている。
【図12】ＰＳ２０の分解。低ＰＳ２０の分解が、７×ＫＯ ｍＡｂ－Ｂ産生ＲＭＣＥプールで観察された。
【図13A-13K】精製された酵素：ａ． ＰＰＴ１；ｂ． ＡＳＡＨ１；ｃ． ＬＩＰＡ；ｄ． ＬＰＬＡ１；ｅ． ＨＡＣＨ；ｆ． ＣＥＳＢ１Ｌ；ｇ． ＬＹＰＬＡ１；ｈ． ＳＭＰＤ１；ｉ． ＣＥＳ１；ｊ． ＰＬＡ１Ａ；ｋ． ＳＩＡＥのＳＤＳ ＰＡＧＥ。
【図14A-14C】Ａ．組換え精製されたヒドロラーゼ酵素（ＰＰＴ１、ｒｈＬＰＬ、ＡＳＡＨ１、ＬＩＰＡ）の添加後の３０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ ２の溶液中、ＥＬＳＤを備えた混合モードＨＰＬＣによって測定された当初のＰＳ２０の濃度のパーセンテージ；ｂ．組換え精製されたヒドロラーゼ酵素（ＨＡＣＨ、ＬＹＰＬＡ１、ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＰＬＡ２）の添加後の製剤バッファーの溶液中、ＥＬＳＤを備えた混合モードＨＰＬＣによって測定された当初のＰＳ２０の濃度のパーセンテージ；ｃ．組換え精製されたヒドロラーゼ酵素（ＰＬＡ１Ａ、ＳＩＡＥ、ＣＥＳ１、ＳＭＰＤ１）の添加後の製剤バッファーの溶液中、ＥＬＳＤを備えた混合モードＨＰＬＣによって測定された当初のＰＳ２０の濃度のパーセンテージ。
【図15】精製されたｍＡｂサンプル中のポリソルベート分解に対するリパーゼ／エステラーゼＫＯの影響。精製されたサンプル中のポリソルベート分解に対する酵素活性を、ＰＳ２０分解アッセイによって評価した。各ｍＡｂ内では、ＫＯ細胞によって生成された精製材料をコントロール細胞（すなわちＫＯ実施せず）と比較することによって、ＰＳ２０分解の減少を評価した。すべてのＫＯ ｍＡｂ産生細胞は、対応するｍＡｂ遺伝子をＣＨＯ空のＫＯ宿主（図３に示すように７×ＫＯ又は１２×ＫＯ）にトランスフェクトすることによって生成された。
【図16】精製されたｍＡｂ Ｔサンプル中のポリソルベート分解に対するリパーゼ／エステラーゼＫＯの影響。精製されたｍＡｂ Ｔサンプル中のポリソルベート分解に対する酵素活性を、ＰＳ２０分解アッセイによって評価した。ＫＯ細胞によって生成された精製材料をコントロール細胞（すなわちＫＯ実施せず）と比較することによって、ＰＳ２０分解の減少を評価した。すべてのＫＯ細胞（１×、２×、３×、及び６×）は、親ｍＡｂ Ｔ細胞株中のリパーゼ／エステラーゼ遺伝子を連続してノックアウトすることによって生成された。
【発明を実施するための形態】
【0039】
限定を行うものではなく、明確化のために、本明細書にて開示する主題の詳細の説明を、以下の小項目に分ける：
１．定義；
２．酵素活性の調節；
３．遺伝子特異的修飾を含む細胞；
４．細胞培養法；及び
５．生成物。
１．定義；
２．酵素活性の調節；
３．遺伝子特異的修飾を含む細胞；
４．細胞培養法；及び
５．生成物。
【0040】
１．定義
本明細書中で使用される用語は一般に、本開示の文脈内で、かつ、各用語が使用される具体的な文脈においての、当該技術分野における通常の意味を有する。特定の用語を以下で、又は、本明細書の他の箇所にて論じ、本開示の組成物及び方法、並びに、それらの作製及び使用方法について記載する、実践者向けの追加の案内を示す。
本明細書中で使用される用語は一般に、本開示の文脈内で、かつ、各用語が使用される具体的な文脈においての、当該技術分野における通常の意味を有する。特定の用語を以下で、又は、本明細書の他の箇所にて論じ、本開示の組成物及び方法、並びに、それらの作製及び使用方法について記載する、実践者向けの追加の案内を示す。
【0041】
本明細書で使用する場合、特許請求の範囲、及び／又は明細書内で、用語「を含む」と共に用いられる場合、語句「ａ」又は「ａｎ」の使用は、「１つ」を意味し得るが、これは「１つ又は複数の」、「少なくとも１つの」、及び「１つ又は２つ以上」の意味とも一致する。
【0042】
本明細書で使用する場合、用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ）／ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「を有する（ｈａｖｉｎｇ／ｈａｓ）」、「することができる」、「を含有する」、及びこれらの変形は、追加の作用又は構造物の可能性を排除しない、オープンエンドの移行句、用語、又は単語であることが意図される。本開示はまた、明示的に記載されているかいないかに関わらず、本明細書にて提示される実施態様又は要素「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」他の実施態様を想到する。
【0043】
用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定される特定の値について許容される誤差範囲内であることを意味し、これは、その値が測定又は決定される方法、即ち、測定システムの制限事項にある程度依存する。例えば、「約」とは、当該技術分野での１回の実施当たり３つ又は３つよりも多くの標準偏差以内を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の、最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、そしてより好ましくはさらに、最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に生物学的システム又はプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。
【0044】
用語「細胞培養培地」及び「培地」とは、典型的には、以下のカテゴリーのうちの１つ又は複数からの、少なくとも１つの構成成分を提供する、哺乳動物細胞を増殖させるのに使用される栄養素溶液を意味する：
１）通常、グルコースなどの炭水化物の形態でのエネルギー供給源；
２）全ての必須アミノ酸、及び通常、２０個のアミノ酸＋システインの、塩基性のセット；
３）低濃度で必要とされるビタミン及び／又は他の有機化合物；
４）遊離脂肪酸；並びに
５）微量元素（微量元素は、非常に低濃度、通常マイクロモル範囲で典型的には必要とされる、無機化合物又は天然に存在する元素として定義される）。
１）通常、グルコースなどの炭水化物の形態でのエネルギー供給源；
２）全ての必須アミノ酸、及び通常、２０個のアミノ酸＋システインの、塩基性のセット；
３）低濃度で必要とされるビタミン及び／又は他の有機化合物；
４）遊離脂肪酸；並びに
５）微量元素（微量元素は、非常に低濃度、通常マイクロモル範囲で典型的には必要とされる、無機化合物又は天然に存在する元素として定義される）。
【0045】
栄養素溶液は、以下のカテゴリーのいずれかに由来する１つ又は複数の成分で補充されていてもよい：
１）例えばインスリン、トランスフェリン、及び上皮成長因子などの、ホルモン及び他の成長因子；
２）例えばカルシウム、マグネシウム、及びホスフェートなどの、塩類及び緩衝液；
３）例えばアデノシン、チミジン、及びヒポキサンチンなどの、ヌクレオシド及び塩基；並びに
４）タンパク質及び組織加水分解物。
１）例えばインスリン、トランスフェリン、及び上皮成長因子などの、ホルモン及び他の成長因子；
２）例えばカルシウム、マグネシウム、及びホスフェートなどの、塩類及び緩衝液；
３）例えばアデノシン、チミジン、及びヒポキサンチンなどの、ヌクレオシド及び塩基；並びに
４）タンパク質及び組織加水分解物。
【0046】
細胞を「培養すること」とは、細胞を、細胞の生残及び／又は成長及び／又は増殖に好適な条件下にて、細胞培養培地と接触させることを指す。
【0047】
「バッチ培養液」とは、培養プロセスの開始時に、細胞培養のための全ての成分（細胞、及び全ての培養栄養素を含む）が、培養バイオリアクターに供給されている培養液を指す。
【0048】
本明細書で使用される場合、「フェドバッチ細胞培養液」とは、細胞及び培地が培養バイオリアクターに最初に供給され、追加の培養栄養素が、培養終了前の定期的な細胞及び／又は生成物の採取の有無にかかわらず、培養プロセス中に培養液に継続して、又は個別に増加して供給されるバッチ培養液を指す。
【0049】
場合によっては連続培養液と呼ばれる「還流培養液」とは、細胞が、例えば濾過、封入、マイクロ担体へのアンカリングなどにより培養液中に保持され、培地が継続して、段階的に、又は断続的に（又はこれらの任意の組み合わせで）導入され、培養バイオリアクターから取り除かれる培養液である。
【0050】
本明細書で使用する場合、用語「細胞」とは、動物細胞、哺乳動物細胞、培養細胞、宿主細胞、組み換え細胞、及び組み換え宿主細胞を意味する。このような細胞は一般に、適切な栄養素及び／又は成長因子を含有する培地に配置されたときに、増殖及び生残可能な哺乳動物組織から入手される、又はその組織に由来する細胞株である。
【0051】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入され得るか又は導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらの細胞には、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫が、継代数に関係なく含まれる。子孫は、親細胞の核酸含有量と完全に同一である必要はないが、変異を含むことができる。元々の形質転換された細胞についてスクリーニングされるか又は選択されるのと同じ機能又は生物活性を有する変異体の子孫は、本発明に含まれる。
【0052】
用語「哺乳動物宿主細胞」又は「哺乳動物細胞」とは、適切な栄養素及び成長因子を含有する培地内の、単一層培養液又は懸濁培養液のいずれかに配置したときに、成長及び生存可能な哺乳動物に由来する細胞株を指す。特定の細胞株に必要な成長因子は、例えばＭａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．１９８４）、及びＢａｒｎｅｓ ａｎｄ Ｓａｔｏ，（１９８０）Ｃｅｌｌ，２２：６４９に記載されているように、過度な実験をすることなく、実験により速やかに決定される。典型的には、細胞は、目的の、多量の特定のタンパク質、例えば糖タンパク質を、培地に発現させて分泌させることができる。本開示の文脈内で好適な哺乳動物宿主細胞の例には、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６ １９８０）；ｄｐ１２．ＣＨＯ細胞（１９８９年３月１５日に出版された欧州特許第３０７，２４７号）；ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ－６１）；ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎臓株（２９３細胞、又は、懸濁培養液中での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９ １９７７）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３－２５１ １９８０）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザルサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６，ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファロー系ラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４－６８ １９８２）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）が含まれ得る。特定の実施態様では、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６ １９８０）；ｄｐ１２．ＣＨＯ細胞（１９８９年３月１５日に公開された欧州特許第３０７，２４７号）を含む。
【0053】
細胞培養物の「増殖期」とは、細胞が一般に、急速に分裂する、指数的に細胞が増殖する期間（対数期）を意味する。増殖期にて、細胞が維持される時間の長さは、例えば細胞の種類、細胞の増殖速度、及び／又は培地の状態に基づいて変化し得る。特定の実施態様では、この期の間に、細胞は一定期間（通常１～４日間）、細胞増殖が最大化されるような条件下において培養される。宿主細胞の増殖サイクルの決定は、過度な実験をすることなく想到される、特定の宿主細胞に対して決定される。「細胞増殖が最大化されるような期間及び条件下」などは、特定の細胞株に対して、細胞増殖及び分裂が最適であると測定される培養条件を意味する。特定の実施態様では、増殖期の間に、細胞は、特定の細胞株に対しての最適な増殖が達成されるように、一般に約３０～４０℃の加湿・制御大気下にて、必要な添加剤を含有する栄養素培地にて培養される。特定の実施態様では、細胞は、約１～４日間、通常は２～３日間の期間、増殖期で維持される。
【0054】
細胞培養の「産生期」とは、細胞増殖が停滞する／停滞を続ける期間を意味する。対数的な細胞増殖は典型的には、この期の前、又は間に低下し、タンパク質産生に引き継がれる。産生期の間、対数的な細胞増殖は終わり、タンパク質産生が主となる。この期間の間、培地は一般に、タンパク質の連続した産生を支え、所望の糖タンパク質生成物を得るために補充される。フェドバッチ及び／又は還流細胞培養プロセスは、この期の間に細胞培養培地を補充し、又は新鮮な培地を供給して、所望の細胞密度、生存能、及び／又は組み換えタンパク質生成物の力価を達成する、及び／又は維持する。産生期は大規模に実施することができる。
【0055】
タンパク質の活性に関して本明細書で使用される場合の「活性」という用語は、酵素活性、リガンド結合、薬物輸送、イオン輸送、タンパク質の局在化、受容体結合、及び／又は構造活性を含むがこれらに限定されない任意の活性を指す。このような活性は、タンパク質の発現を減少させるか又は排除し、それによりタンパク質の存在を減少させるか又は排除することによって、調節、例えば減少又は排除され得る。このような活性は、得られる修飾タンパク質が野生型タンパク質に対して活性の減少又は排除を示すように、タンパク質をコードする核酸配列を改変することによって、調節、例えば減少又は排除され得る。
【0056】
「発現」又は「発現させる」という用語は、本明細書において、宿主細胞内で生じる転写及び翻訳を意味するように用いられる。宿主細胞内での産生遺伝子の発現度合いは、細胞内に存在する、対応するｍＲＮＡの量、又は、細胞により産生される産生遺伝子によりコードされるタンパク質の量のいずれかに基づいて測定することができる。例えば、産生遺伝子から転写されるｍＲＮＡは、ノーザンハイブリダイゼーションにより定量化されるのが望ましい。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｐｐ．７．３－７．５７（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）。産生遺伝子によりコードされるタンパク質は、タンパク質の生物活性をアッセイすること、又は、そのような活性とは無関係な、タンパク質と反応可能な抗体を使用するウェスタンブロット若しくはラジオイムノアッセイなどのアッセイを用いることのいずれかにより定量化することができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｐｐ．１８．１－１８．８８（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）。
【0057】
本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」とは一般に、約１０個を超えるアミノ酸を有するペプチド及びタンパク質を意味する。ポリペプチドは、宿主細胞に相同であり得るか、又は好ましくは、外因性であり得る。後者は、利用される宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞により産生されるヒトタンパク質、又は、哺乳動物細胞により産生される酵母ポリペプチドに対して異種である、即ち、外部のものである、ということを意味する。特定の実施態様では、哺乳動物ポリペプチド（元々、哺乳動物生命体に由来したポリペプチド）、より好ましくは、培地に直接分泌するポリペプチドを使用する。
【0058】
用語「タンパク質」とは、鎖長が、より高度の三級及び／又は四級構造を産生するのに十分であるアミノ酸の配列を指すことを意味する。これは、「ペプチド」、又は、このような構造を有しない他の低分子量薬剤から、区別するためのものである。典型的には、本明細書のタンパク質は、少なくとも約１５～２０ｋＤ、好ましくは少なくとも約２０ｋＤの分子量を有する。本明細書中の定義に包含されるタンパク質の例には、宿主細胞タンパク質、並びに全ての哺乳動物タンパク質、特に、治療用及び診断用抗体などの治療用及び診断用タンパク質、並びに、１つ又は複数の鎖間及び／又は鎖内ジスルフィド結合を含む多鎖ポリペプチドを含む、１つ又は複数のジスルフィド結合を含有する一般的なタンパク質が含まれる。
【0059】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広い意味で用いられ、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体（例えば、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列からなる抗体（このような対の多量体を含む））、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。
【0060】
本明細書で使用する場合、抗体の「抗体断片」、「抗原結合部」（若しくは単に「抗体部」）、又は、抗体の「抗原結合断片」とは、抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を意味する。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ及びｓｃＦａｂ）；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。
【0061】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
【0062】
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。特定の実施態様では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。特定の実施態様では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられることができる。
【0063】
本明細書で使用する場合、用語「力価」とは、所与の量の培地体積で分けられた細胞培養液により産生された、組み換えにより発現した抗体の総量を意味する。力価は典型的には、１ミリリットル又は１リットルの培地当たりの、抗体のミリグラムの単位（ｍｇ／ｍＬ又はｍｇ／Ｌ）にて表される。特定の実施態様では、力価は、１リットルの培地当たりの抗体のグラム（ｇ／Ｌ）で表される。力価は、異なる培地条件下でタンパク質産生物を得ることと比較しての、力価の増加割合といった、相対的な測定値の観点から表現又は評価することができる。
【0064】
「核酸」、「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」との用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基で構成され、具体的には、プリン塩基又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基で構成される。しばしば、核酸分子は塩基の配列によって記述されることにより、これらの塩基は核酸分子の一次構造（直鎖状構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’へと表される。本明細書では、核酸分子という用語は、例えば相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡを含むデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、特にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成形態、並びにこれらの２つ以上の分子を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線形又は環状であってもよい。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方、並びに一本鎖形態及び二本鎖形態を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド又は天然に存在しないヌクレオチドを含み得る。誘導体化された糖又はホスフェート骨格結合又は化学修飾された残基を含む、天然に存在しないヌクレオチドの例には、修飾されたヌクレオチド塩基が含まれる。核酸分子はまた、例えば、宿主又は患者において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで本開示の抗体の直接的な発現のためのベクターとして好適なＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子も包含する。このようなＤＮＡ（例えばｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）ベクターは、修飾されていなくても、修飾されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡを化学的に修飾して、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を高め、ｍＲＮＡを対象に注入してｉｎ ｖｉｖｏで抗体を生成することができるようにすることが可能である（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、２０１７年６月１２日オンライン公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又は欧州特許第２１０１８２３号参照）。
【0065】
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」とは、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を意味する。
【0066】
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリ若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
【0067】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、そのドメイン中ではＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は、場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【0068】
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変可能であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。
【0069】
一般に、抗体は６つのＣＤＲを含み、３つがＶＨ中にあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、３つがＶＬ中にある（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。本明細書における例示的なＣＤＲには、以下が含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ（１９９１））；及び
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｎｔａｃｔ）（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２：７３２－７４５（１９９６））。
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ（１９９１））；及び
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｎｔａｃｔ）（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２：７３２－７４５（１９９６））。
【0070】
特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、又は、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定することができることを理解するであろう。
【0071】
「イムノコンジュゲート」は、細胞傷害剤を含むがこれに限定されない、１つ又は複数の異種分子にコンジュゲートされている抗体である。
【0072】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／又は同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得る変異型抗体は例外であり、かかる変異型は一般的に少量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、修飾語「モノクローナル」とは、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本開示の主題に従ったモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない様々な技法によって作製することができ、そのような方法及び他の例示のモノクローナル抗体の作製方法は、本明細書に記載されている。
【0073】
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ６ｔｈ ｅｄ．， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， ｐ． ９１（２００７）を参照されたい。）抗原結合特異性を与えるには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、その抗原に結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをそれぞれスクリーニングして、単離されてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照のこと。
【0074】
本明細書で使用する場合、用語「細胞密度」とは、所与の体積の培地中での、細胞の数を意味する。特定の実施態様では、より高いタンパク質産生能をもたらすという点で、高い細胞密度が望ましい。細胞密度は、培地からサンプルを抽出し、顕微鏡の下で細胞を分析すること、市販されている細胞計数装置を使用すること、又は、バイオリアクターそのもの（若しくは培地及び懸濁細胞が通過して、バイオリアクターに戻るループ）に導入した、市販されている好適なプローブを使用することを含むがこれらに限定されない、当該技術分野において公知の任意の技術により監視することができる。
【0075】
本明細書で使用する場合、用語「組換え細胞」とは、由来する元の親細胞に対して、いくらかの遺伝子組換えを有する細胞を意味する。このような遺伝子組み換えは、遺伝子産物、例えば組み換えタンパク質を発現させるために異種遺伝子を導入した結果であり得る。
【0076】
本明細書で使用する場合、用語「組み換えタンパク質」とは概して、抗体を含む、ペプチド及びタンパク質を意味する。このような組み換えタンパク質は「異種」、即ち、利用される宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞により産生した抗体に対して外来である。
【0077】
「ＰＳ２０」という用語は、ポリソルベート２０又はＴｗｅｅｎ ２０を指す。「ＰＳ８０」という用語は、ポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ ８０を指す。ＰＳ２０及びＰＳ８０は、脂肪酸エステル部分とポリオキシエチレン長鎖とを有するポリソルベート界面活性剤である。
【0078】
２．酵素活性の調節
特定の実施態様では、本開示は、リパーゼ、エステラーゼ、又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない、１つ又は複数の宿主細胞タンパク質の活性、例えば酵素活性を調節するための方法に関する。例えば、限定するものではないが、宿主細胞中の、リパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼタンパク質を含むがこれらに限定されない酵素活性を調節することは、対応するポリペプチドの活性を減少させるか又は排除することを含む。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、非修飾細胞におけるタンパク質の活性に対して１つ又は複数の宿主細胞タンパク質の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；ホスホリパーゼＢドメイン含有（ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２）；リパーゼＡ（リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ、リパーゼ）（ＬＩＰＡ）；ホスホリパーゼＡ－２－活性化タンパク質（ＰＬＡＡ）；ホスホリパーゼＤ３（ＰＬＤ３）；ホスホリパーゼＡ２グループ（ＬＰＬＡ２）；ホスホリパーゼＣベータ１（ＰＬＣＢ１）；ホスホリパーゼＣデルタ１（ＰＬＣＤ１）；ＤＤＨＤドメイン含有タンパク質１（断片）（ＤＤＨＤ１）；リゾホスホリパーゼ様タンパク質１（ＬＹＰＬＡＬ１）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＩＩＡ（ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ）；ペルオキシレドキシン６（ＰＲＤＸ６）；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；酢酸イソアミル加水分解エステラーゼ１（ＩＡＨ１）；ＯＴＵ デユビキチナーゼ、ユビキチンアルデヒド結合１（ＯＴＵＢ１）；リゾホスホリパーゼ２（アシルタンパク質チオエステラーゼ２）（ＬＹＰＬＡ２）；アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ１３（ＡＣＯＴ１３）；脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）；ホスホリパーゼＡ２グループＶＩＩ（ＰＬＡ２Ｇ７）；ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＵＳＰ５）；Ｎ－アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ１（酸性セラミダーゼ）（ＡＳＡＨ１）；リパーゼ成熟因子１（ＬＭＦ１）；アポリポタンパク質－ＣＩＩ（ＡＰＯＣ２）；アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）；カルボキシルエステラーゼ１Ｆ（ＣＥＳ１Ｆ）又は肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）；リゾホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）；カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）；ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）；及びシアル酸アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）の活性は、減少するか又は排除される。
特定の実施態様では、本開示は、リパーゼ、エステラーゼ、又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない、１つ又は複数の宿主細胞タンパク質の活性、例えば酵素活性を調節するための方法に関する。例えば、限定するものではないが、宿主細胞中の、リパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼタンパク質を含むがこれらに限定されない酵素活性を調節することは、対応するポリペプチドの活性を減少させるか又は排除することを含む。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、非修飾細胞におけるタンパク質の活性に対して１つ又は複数の宿主細胞タンパク質の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；ホスホリパーゼＢドメイン含有（ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２）；リパーゼＡ（リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ、リパーゼ）（ＬＩＰＡ）；ホスホリパーゼＡ－２－活性化タンパク質（ＰＬＡＡ）；ホスホリパーゼＤ３（ＰＬＤ３）；ホスホリパーゼＡ２グループ（ＬＰＬＡ２）；ホスホリパーゼＣベータ１（ＰＬＣＢ１）；ホスホリパーゼＣデルタ１（ＰＬＣＤ１）；ＤＤＨＤドメイン含有タンパク質１（断片）（ＤＤＨＤ１）；リゾホスホリパーゼ様タンパク質１（ＬＹＰＬＡＬ１）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＩＩＡ（ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ）；ペルオキシレドキシン６（ＰＲＤＸ６）；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；酢酸イソアミル加水分解エステラーゼ１（ＩＡＨ１）；ＯＴＵ デユビキチナーゼ、ユビキチンアルデヒド結合１（ＯＴＵＢ１）；リゾホスホリパーゼ２（アシルタンパク質チオエステラーゼ２）（ＬＹＰＬＡ２）；アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ１３（ＡＣＯＴ１３）；脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）；ホスホリパーゼＡ２グループＶＩＩ（ＰＬＡ２Ｇ７）；ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＵＳＰ５）；Ｎ－アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ１（酸性セラミダーゼ）（ＡＳＡＨ１）；リパーゼ成熟因子１（ＬＭＦ１）；アポリポタンパク質－ＣＩＩ（ＡＰＯＣ２）；アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）；カルボキシルエステラーゼ１Ｆ（ＣＥＳ１Ｆ）又は肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）；リゾホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）；カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）；ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）；及びシアル酸アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）の活性は、減少するか又は排除される。
【0079】
特定の実施態様では、ＰＰＴ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡの活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性は、減少するか又は排除される。特定の実施態様では、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性は、減少するか又は排除される。
【0080】
特定の実施態様では、基準細胞は、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性が、調節、例えば減少又は排除されていない細胞である。特定の実施態様では、基準細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子の野生型対立遺伝子の少なくとも一方又は両方を含む細胞である。例えば、限定するものではないが、基準細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子の野生型対立遺伝子の両方を有する細胞である。特定の実施態様では、基準細胞はＷＴ ＣＨＯ細胞である。
【0081】
特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満である。
【0082】
特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約４％、少なくとも約３％、少なくとも約２％、又は少なくとも約１％である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約４％、少なくとも約３％、少なくとも約２％、又は少なくとも約１％である。
【0083】
特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中の特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、又は約１％である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約４０％以下である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、又は約１％以下である。
【0084】
特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約１％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約１％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約１％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約１％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約１％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約１％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約１％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％の間、約１％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、約５％と約２０％の間、約５％と約３０％の間、約５％と約４０％の間である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約１％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約１％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約１％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約１％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約１％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約１％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約１％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％の間、約１％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、約５％と約２０％の間、約５％と約３０％の間、約５％と約４０％の間である。
【0085】
特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約５％と約４０％の間である。特定の実施態様では、ポリペプチドの活性を減少させるか又は排除するために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド活性の約５％と約４０％の間である。異なる基準細胞（対応する遺伝子の少なくとも一方又は両方の野生型対立遺伝子を含む細胞）中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性は、変化し得る。
【0086】
特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、特定のポリペプチドの活性（例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ活性）を調節する（例えば、減少させるか又は排除する）ために利用される。当該技術分野において公知の様々な遺伝子組み換えシステムを、本明細書で開示される方法のために使用することができる。このようなシステムの非限定例には、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、並びに、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）などの、遺伝子サイレンシングによるタンパク質ノックダウンのための、他のツールの使用が含まれる。従来の、改善された、又は修正されたＣａｓシステム、及び、Ｃｐｆ－１などの、その他の細菌ベースのゲノム切除ツールを含む、当該技術分野において公知の任意のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、本明細書で開示される方法と共に使用することができる。
【0087】
特定の実施態様では、遺伝子、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドをコードする遺伝子の一部は、対応するポリペプチドの活性を調節する、例えば減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、遺伝子の少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％が修飾されている。特定の実施態様では、遺伝子の約２％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約６５％以下、約７０％以下、約７５％以下、約８０％以下、約８５％、又は約９０％以下が修飾されている。特定の実施態様では、遺伝子の約２％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約２％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約２％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約２％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約２％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約２％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約２％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約２％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％、約２％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、又は約２％と約５％の間が修飾されている。
【0088】
特定の実施態様では、本開示は、宿主細胞中の１つ又は複数の遺伝子、例えば、リパーゼ、エステラーゼ、又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない酵素をコードする遺伝子の活性を調節するための方法に関する。例えば、限定するものではないが、宿主細胞中の、リパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼ遺伝子を含むがこれらに限定されない１つ又は複数の酵素遺伝子の活性を調節するための方法は、細胞中の対応するポリペプチド発現をノックアウト又はノックダウンすることを含む。特定の実施態様では、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；（ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＰＬＢＬ２の発現はノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡの発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。特定の実施態様では、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現は、ノックダウン又はノックアウトされる。本明細書で使用される場合、ノックアウトされた発現とは、基準細胞と比較して、細胞中の特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現の排除を指す。本明細書で使用される場合、ノックダウンされた発現とは、基準細胞と比較して、細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現の減少を指す。
【0089】
特定の実施態様では、基準細胞は、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現が、調節、例えば減少していない細胞である。特定の実施態様では、基準細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子の野生型対立遺伝子の少なくとも一方又は両方を含む細胞である。例えば、限定するものではないが、基準細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子の野生型対立遺伝子の両方を有する細胞である。特定の実施態様では、基準細胞はＷＴ ＣＨＯ細胞である。
【0090】
特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満である。
【0091】
特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約４％、少なくとも約３％、少なくとも約２％、又は少なくとも約１％である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約４％、少なくとも約３％、少なくとも約２％、又は少なくとも約１％である。
【0092】
特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中の特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、又は約１％である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約４０％以下である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチドの活性は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約９０％以下、約８０％以下、約７０％以下、約６０％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、又は約１％以下である。
【0093】
特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約１％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約１％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約１％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約１％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約１％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約１％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約１％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％の間、約１％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、約５％と約２０％の間、約５％と約３０％の間、約５％と約４０％の間である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約１％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約１％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約１％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約１％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約１％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約１％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約１％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約１％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％の間、約１％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、約５％と約２０％の間、約５％と約３０％の間、約５％と約４０％の間である。
【0094】
特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約５％と約４０％の間である。特定の実施態様では、ポリペプチドの発現をノックダウンするために修飾された細胞中のポリペプチドの発現は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞の対応するポリペプチド発現の約５％と約４０％の間である。異なる基準細胞（対応する遺伝子の少なくとも一方又は両方の野生型対立遺伝子を含む細胞）中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現レベルは、変化し得る。
【0095】
特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、特定のポリペプチドの発現（例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ発現）を調節する（例えば、ノックダウン又はノックアウトする）ために利用される。当該技術分野において公知の様々な遺伝子組み換えシステムを、本明細書で開示される方法のために使用することができる。このようなシステムの非限定例には、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、並びに、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）などの、遺伝子サイレンシングによるタンパク質ノックダウンのための、他のツールの使用が含まれる。従来の、改善された、又は修正されたＣａｓシステム、及び、Ｃｐｆ－１などの、その他の細菌ベースのゲノム切除ツールを含む、当該技術分野において公知の任意のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを、本明細書で開示される方法と共に使用することができる。
【0096】
特定の実施態様では、遺伝子、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドをコードする遺伝子の一部は、欠失されて、対応するポリペプチドの発現を調節（例えば、ノックダウン又はノックアウト）する。特定の実施態様では、遺伝子の少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％が欠失される。特定の実施態様では以下、遺伝子の約２％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約６５％以下、約７０％以下、約７５％以下、約８０％以下、約８５％以下、又は約９０％以下が欠失される。特定の実施態様では、遺伝子の約２％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約２％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約２％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約２％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約２％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約２％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約２％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約２％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％、約２％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、又は約２％と約５％の間が欠失される。
【0097】
特定の実施態様では、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドをコードする遺伝子の少なくとも１つのエクソンは、少なくとも部分的に欠失される。本明細書で使用される場合の「部分的に欠失された」という用語は、領域の、例えばエクソンの少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％以下、約２％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約６５％以下、約７０％以下、約７５％以下、約８０％以下、約８５％以下、約９０％以下、約９５％の間、約２％と約９０％の間、約１０％と約９０％の間、約２０％と約９０％の間、約２５％と約９０％の間、約３０％と約９０％の間、約４０％と約９０％の間、約５０％と約９０％の間、約６０％と約９０％の間、約７０％と約９０％の間、約８０％と約９０％の間、約８５％と約９０％の間、約２％と約８０％の間、約１０％と約８０％の間、約２０％と約８０％の間、約３０％と約８０％の間、約４０％と約８０％の間、約５０％と約８０％の間、約６０％と約８０％の間、約７０％と約８０％の間、約７５％と約８０％の間、約２％と約７０％の間、約１０％と約７０％の間、約２０％と約７０％の間、約３０％と約７０％の間、約４０％と約７０％の間、約５０％と約７０％の間、約６０％と約７０％の間、約６５％と約７０％の間、約２％と約６０％の間、約１０％と約６０％の間、約２０％と約６０％の間、約３０％と約６０％の間、約４０％と約６０％の間、約５０％と約６０％の間、約５５％と約６０％の間、約２％と約５０％の間、約１０％と約５０％の間、約２０％と約５０％の間、約３０％と約５０％の間、約４０％と約５０％の間、約４５％と約５０％の間、約２％と約４０％の間、約１０％と約４０％の間、約２０％と約４０％の間、約３０％と約４０％の間、約３５％と約４０％の間、約２％と約３０％の間、約１０％と約３０％の間、約２０％と約３０％の間、約２５％と約３０％の間、約２％と約２０％の間、約５％と約２０％の間、約１０％と約２０％の間、約１５％と約２０％の間、約２％と約１０％の間、約５％と約１０％の間、又は約２％と約５％の間が欠失されたことを指す。
【0098】
特定の非限定的な実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、ポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現を調節するために利用される。クラスター化され、規則的に間隔が空いた短い回文構造の繰り返し（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核細胞にて発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集に利用する場合、システムは、Ｃａｓ９（ｃｒＲＮＡをガイドとして利用してＤＮＡを修飾可能なタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ、Ｃａｓ９により使用され、Ｃａｓ９と活性の複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般にヘアピンループ形態である）に結合する領域と共に、宿主ＤＮＡの正しい部分にｃｒＲＮＡをガイドするためのＲＮＡを含有する）、及び、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡに結合し、Ｃａｓ９との活性の複合体を形成する）を含む。「ガイドＲＮＡ」及び「ｇＲＮＡ」という用語は、Ｃａｓ９などのＲＮＡガイドヌクレアーゼの、細胞中のゲノム配列又はエピソーム配列などの標的配列への特異的会合（又は「標的化」）を促進する任意の核酸を指す。ｇＲＮＡは、単分子（単一のＲＮＡ分子を含み、代わりにキメラと呼ばれる）又はモジュラー（通常は、例えば二重化によって、相互に関連付けられているｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡなどの複数の、典型的には２つの別個のＲＮＡ分子を含む）であり得る。
【0099】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９法では、哺乳動物細胞をトランスフェクションするためのベクターを使用することができる。ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）は、Ｃａｓ９を使用して、細胞内の標的ＤＮＡを識別して、直接結合するための配列であるため、各用途に対して設計することができる。複数のｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを合わせてパッケージ化して、一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成することができる。細胞内にトランスフェクションするために、ｓｇＲＮＡをＣａｓ９遺伝子と共に結合させ、ベクター内に組み入れることができる。
【0100】
特定の実施態様では、１つ又は複数のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現の調節に使用するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、Ｃａｓ９分子と、目的のポリペプチドをコードする遺伝子の標的配列に相補的である標的ドメインを含む１つ又は複数のｇＲＮＡとを含む。特定の実施態様では、標的遺伝子は、目的のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドをコードする遺伝子の領域である。標的配列は、遺伝子内の任意のエクソン又はイントロン領域であり得る。
【0101】
特定の実施態様では、ｇＲＮＡは単一のベクターで細胞に投与され、Ｃａｓ９分子は第２のベクターで細胞に投与される。特定の実施態様では、ｇＲＮＡ及びＣａｓ９分子は、単一のベクターで細胞に投与される。あるいは、ｇＲＮＡ及びＣａｓ９分子のそれぞれが、別のベクターにより投与されることができる。特定の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、１つ又は複数のｇＲＮＡと複合体化したＣａｓ９タンパク質を含む、リボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）として細胞に送達することができ、例えば、電気穿孔法により送達することができる（例えば、細胞にＲＮＰを送達するさらなる方法については、ＤｅＷｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ １２１－１２２：９－１５（２０１７）を参照のこと）。特定の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムを細胞に施すことは、ポリペプチド、例えばＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現のノックアウト又はノックダウンをもたらす。
【0102】
特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、哺乳動物細胞における特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現を調節するためのＺＦＮシステムである。ＺＦＮは制限酵素として作用することができ、これは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを、ＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより作製される。ジンクフィンガードメインを改変して、特異的なＤＮＡ配列を標的化することができ、これにより、ジンクフィンガーヌクレアーゼが、ゲノム内で所望の配列を標的化することが可能になる。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合ドメインは典型的には、複数の、個別のジンクフィンガー反復を含有し、それぞれが複数の塩基対を認識することができる。新しいジンクフィンガードメインを生成するための、最も一般的な方法は、既知の特異性を有する小さいジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。最も一般的な、ＺＦＮの切断ドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩ由来の、非特異的切断ドメインである。ＺＦＮは、標的ＤＮＡ配列内で二本鎖の切断（ＤＳＢ）を行うことにより、タンパク質の発現を調節し、これは、相同テンプレートの不存在下にて、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）により修復される。このような修復により、塩基対の欠失又は挿入をもたらすことができ、フレームシフトを生み出して、有害なタンパク質の産生を防止する（Ｄｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．；３３（１８）：５９７８－９０（２００５））。複数のＺＦＮ対もまた使用して、ゲノム配列の、全体の大きなセグメントを完全に除去することができる（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．；２０（１）：８１－９（２０１０））。
【0103】
特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、特定のポリペプチド、例えば、哺乳動物細胞におけるＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現を調節するためのＴＡＬＥＮシステムである。ＴＡＬＥＮは、改変してＤＮＡの特異的な配列を切断することができる制限酵素である。ＴＡＬＥＮシステムは、ＺＦＮに類似した原理で作動する。ＴＡＬＥＮは、転写活性化因子様エフェクターＤＮＡ結合ドメインを、ＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることにより生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特異的なヌクレオチドを強力に認識する２つの位置を備える、３３～３４個のアミノ酸反復モチーフで構成される。これらのＴＡＬＥのアレイを組み立てることで、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインを改変して、所望のＤＮＡ配列に結合することができ、これにより、ヌクレアーゼを、ゲノムの特定の場所で切断するようにガイドする（Ｂｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；２９（２）：１３５－６（２０１１））。特定の実施態様では、標的遺伝子は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする。
【0104】
特定の実施態様では、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの発現は、対応する核酸（例えばｍＲＮＡ）に対する相補的配列を有するオリゴヌクレオチドを使用してノックダウンされ得る。このようなオリゴヌクレオチドの非限定例には、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。特定の実施態様では、このようなオリゴヌクレオチドは、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ核酸配列の少なくとも一部と相同であり得る。ここで、対応する核酸配列に対する部分の相同性は、少なくとも約７５パーセント、又は少なくとも約８０パーセント、又は少なくとも約８５パーセント、又は少なくとも約９０パーセント、又は少なくとも約９５パーセント、又は少なくとも約９８パーセントである。特定の非限定的な実施態様では、相補的部分は、少なくとも１０個のヌクレオチド、又は少なくとも１５個のヌクレオチド、又は少なくとも２０個のヌクレオチド、又は少なくとも２５個のヌクレオチド、又は少なくとも３０個のヌクレオチドを構成することができ、アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡ分子は、最大１５、又は最大２０、又は最大２５、又は最大３０、又は最大３５、又は最大４０、又は最大４５、又は最大５０、又は最大７５、又は最大１００ヌクレオチド長であり得る。アンチセンス核酸、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡ分子は、ＤＮＡ、又は非定型若しくは天然に存在しない残基、例えば、これに限定されないがホスホロチオエート残基を含むことができる。
【0105】
本明細書に開示される遺伝子組換えシステムは、ウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターなどのレトロウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターを使用して哺乳動物細胞に送達することができる。キャプシドタンパク質が、ヒト細胞を感染させるのに機能的である場合、レトロウイルスベクターと、適切なパッケージング株の組み合わせが好適である。ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３１－４３７）；ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５－２９０２）；及びＣＲＩＰ（Ｄａｎｏｓ，ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４）を含むが、これらに限定されない、様々なアンホトロピックウイルス産生細胞株が知られている。非アンホトロピック粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４、又はＧＡＬＶエンベロープ、及び当該技術分野において公知の任意の他のものによる偽型化粒子もまた、好適である。可能な形質導入方法には、例えば、Ｂｒｅｇｎｉ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｂｌｏｏｄ ８０：１４１８－１４２２の方法による、細胞を、プロデューサー細胞と直接同時培養するもの、又は、例えば、Ｘｕ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔ．２２：２２３－２３０；及びＨｕｇｈｅｓ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８９：１８１７の方法による、ウイルス上清のみでの、又は、適切な成長因子及びポリカチオンを有する、若しくは有しない、濃縮ベクター原液による培養も含まれる。
【0106】
他の形質導入ウイルスベクターを使用して、本明細書にて開示した哺乳動物細胞を修飾することができる。特定の実施態様では、選択したベクターは、高効率の感染、並びに安定した組込み及び発現を示す（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：４２３－４３０，１９９７；Ｋｉｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：８３３－８４４，１９９６；Ｂｌｏｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６６４１－６６４９，１９９７；Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３ ２６７，１９９６；及びＭｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９４：１０３１９， １９９７を参照のこと）。使用され得る他のウイルスベクターには、例えば、アデノウイルス、レンチウイルス、及びアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、又はヘルペスウイルス、例えばエプスタイン・バールウイルスが含まれる（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １５－１４，１９９０；Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５－１２８１，１９８９；Ｅｇｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６０８－６１４，１９８８；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １：５５－６１，１９９０；Ｓｈａｒｐ，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ３３７：１２７７－１２７８，１９９１；Ｃｏｍｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３６：３１１－ ３２２，１９８７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２６：４０１－４０９，１９８４；Ｍｏｅｎ，Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ １７：４０７－４１６，１９９１；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：９８０－９９０，１９８９；ＬｅＧａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：９８８－９９０，１９９３；及びＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｈｅｓｔ １０７：７７Ｓ－８３Ｓ，１９９５のベクターも参照のこと）。レトロウイルスベクターが特に開発されており、臨床設定にて用いられている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ ３２３：３７０，１９９０；Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，３９９，３４６号）。
【0107】
非ウイルスアプローチもまた、本明細書にて開示した哺乳動物細胞の遺伝子組み換えに使用することができる。例えば、リポフェクションの存在下における核酸の投与（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３，１９８７；Ｏｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７：２５９，１９９０；Ｂｒｉｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９８：２７８，１９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １０１：５１２，１９８３）、アシアロオロソムコイド－ポリリシンコンジュゲーション（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３：１４６２１，１９８８；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６４：１６９８５，１９８９）、又は、外科的条件下におけるマイクロ注射（Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５，１９９０）により、核酸分子を哺乳動物細胞内に導入することができる。遺伝子導入のための、他の非ウイルス方法としては、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔法、及び原形質融合を用いる、インビトロでのトランスフェクションが挙げられる。リポソームもまた、核酸分子を細胞内に送達するのに、潜在的に有益である可能性がある。通常の遺伝子を、対象の感染組織に移植することもまた、通常の核酸を、エクスビボ培養が可能な細胞種（例えば、自己由来又は異種一次細胞又はそれらの後代）に移し、その後、細胞（又はその子孫）を、標的組織に注入する、又は全身注入することにより実行することができる。
【0108】
３．遺伝子特異的修飾を含む細胞
一態様では、本開示は、１つ又は複数のポリペプチド、例えば１つ又は複数の酵素、例えば、１つ又は複数のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼの活性の減少又は排除を有する、細胞、又は１つ又は複数の細胞、例えば哺乳動物細胞を含む組成物に関する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＰＬＢＬ２の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する。
一態様では、本開示は、１つ又は複数のポリペプチド、例えば１つ又は複数の酵素、例えば、１つ又は複数のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼの活性の減少又は排除を有する、細胞、又は１つ又は複数の細胞、例えば哺乳動物細胞を含む組成物に関する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＰＬＢＬ２の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＭＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する。特定の実施態様では、細胞は、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する。
【0109】
本明細書で使用される場合、排除された活性とは、基準細胞と比較して、細胞中の特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性の排除を指す。本明細書で使用される場合、減少した活性とは、基準細胞と比較して、細胞中のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性の減少を指す。
【0110】
本開示の主題に関連して有用な細胞の非限定的な例には、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＨＦＲ ＣＨＯ細胞）、ｄｐ１２．ＣＨＯ細胞のＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－６１）、ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１（例えば、ＣＯＳ－７ ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５１）、ヒト胎児腎臓株（例えば、懸濁培養液中で増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頚癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳房腫瘍（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、ヒト肝癌株（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、骨髄腫細胞株（例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０）が含まれる。特定の実施態様では、細胞はＣＨＯ細胞である。ＣＨＯ宿主細胞の、さらなる非限定的な例には、ＣＨＯ Ｋ１ＳＶ細胞、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ ＤＵＫＸＢ－１１細胞、ＣＨＯＫ１Ｓ細胞、及びＣＨＯ Ｋ１Ｍ細胞が含まれる。
【0111】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞は、目的の生成物を発現させる。特定の実施態様では、目的の生成物は、組換えタンパク質である。特定の実施態様では、目的の生成物は、モノクローナル抗体である。目的の生成物のさらなる非限定的な例は、セクション５．５に記載する。
【0112】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞を、商業的に有用な量の目的の生成物の生成のために使用することができる。特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞は、基準細胞、例えばＷＴ ＣＨＯ細胞と比べて、生成プロセスの成分の分解レベルの減少を誘導することにより、少なくとも部分的に、商業的に有用な量の目的の生成物の生成を容易にする。特定の実施態様では、生成プロセスの成分は、脂質含有成分である。特定の実施態様では、脂質含有成分は、界面活性剤である。特定の実施態様では、界面活性剤は、ポリソルベート含有成分である。特定の実施態様では、ポリソルベート含有成分は、ＰＳ２０（ポリソルベート２０又はＴｗｅｅｎ ２０）である。特定の実施態様では、ポリソルベート含有成分は、ＰＳ８０（ポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ ８０）である。特定の実施態様では、本開示の細胞は、生成プロセスの成分、例えばＰＳ２０の分解を、基準細胞、例えば、ＷＴ ＣＨＯ細胞で観察された対応するＰＳ２０の分解の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、又は約１％未満減少させ得る。
【0113】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞は、目的の生成物をコードする核酸を含むことができる。特定の実施態様では、核酸は、１つ又は複数のベクター、例えば発現ベクター中に存在し得る。ベクターの１種は「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲートされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自己複製することができる（例えば、細菌性複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクター、発現ベクターは、それらが作動可能に連結する遺伝子の発現を誘導することができる。一般に、組換えＤＮＡ技法において利用される発現ベクターは、プラスミド（ベクター）の形態である場合が多い。本開示で使用するための発現ベクターのさらなる非限定的な例には、等価な機能的役割を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）が含まれる。
【0114】
特定の実施態様では、目的の生成物をコードする核酸を、本明細書で開示される宿主細胞に導入することができる。特定の実施態様では、核酸の細胞への導入は、トランスフェクション、電気穿孔法、マイクロインジェクション、核酸配列含有ウイルス又はバクテリオファージベクターでの感染、細胞融合、染色体媒介遺伝子導入、マイクロセル媒介遺伝子導入、スフェロプラスト融合等を含むがこれらに限定されない任意の当該技術分野で知られる方法により実施され得る。特定の実施態様では、宿主細胞は、真核細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
【0115】
特定の実施態様では、目的の生成物をコードする核酸は、宿主細胞ゲノムに無作為に組み込むことができる（「無作為的組込み」又は「ＲＩ」）。例えば、限定するものではないが、目的の生成物をコードする核酸は、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性の減少又は排除を有するように調節された細胞のゲノム内へ無作為に組み込まれ得る。
【0116】
特定の実施態様では、目的の生成物をコードする核酸は、標的化する方式で宿主細胞ゲノムに組み込むことができる（「標的組込み」又は「ＴＩ」）。例えば、限定するものではないが、目的の生成物をコードする核酸は、標的化の方式で、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性の減少又は排除を有するように調節された細胞のゲノム内へ組み込まれ得る。「組込み部位」は、外因性ヌクレオチド配列が挿入される、宿主細胞ゲノム内の核酸配列を含む。特定の実施態様では、組込み部位は、宿主細胞ゲノム上の２つの隣接するヌクレオチド間に存在する。特定の実施態様では、組込み部位は、ヌクレオチド配列のストレッチを含む。特定の実施態様では、組込み部位は、ＣＨＯ宿主細胞のゲノムの特定の遺伝子座内に位置する。特定の実施態様では、組込み部位は、ＣＨＯ宿主細胞の内因性遺伝子内にある。当該技術分野において公知の任意の組込み部位を、本明細書にて開示した主題を用いて制御及び使用することができる。標的組込みは、当該技術分野において公知の方法及びシステムにより媒介することができる。例えば、限定されるものではないが、２０１８年１２月２１日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１８／０６７０７０号（その内容全体が本明細書に組み込まれている）に開示されている方法及びシステムを、標的組込みのために使用することができる。
【0117】
特定の実施態様では、目的の生成物をコードする核酸を、トランスポーゼース型組込みを使用して宿主細胞ゲノムに組み込むことができる。トランスポーゼース型組込みは例えば、Ｔｒｕｂｉｔｓｙｎａ ｅｔ ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４５（１０）：ｅ８９（２０１７）、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０（２５）：Ｅ２２７９－Ｅ２２８７（２０１３）、及び国際公開第２００４／００９７９２号（これらは参照によりその全体が本明細書に援用される）に開示されている。
【0118】
特定の実施態様では、目的の生成物をコードする核酸は、宿主細胞ゲノムに無作為に組み込むことができる（「無作為的組込み」又は「ＲＩ」）。特定の実施態様では、ランダム組込みは、当該技術分野において公知の任意の方法又はシステムにより媒介されることができる。特定の実施態様では、ランダム組込みは、ＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸ（登録商標）電気穿孔システムにより媒介される。
【0119】
特定の実施態様では、標的化組込みは、ランダム組込みと組み合わせ得る。特定の実施態様では、標的化組込みは、ランダム組込みの後に続けることができる。特定の実施態様では、無作為組込みは標的組込みの後に続けることができる。例えば、限定するものではないが、目的の生成物をコードする核酸は、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性の減少又は排除を有するように調節された細胞のゲノム内へ無作為に組み込まれ得、同じ目的の生成物をコードする核酸は、標的化の方式で細胞のゲノムに組み込まれ得る。
【0120】
特定の実施態様では、本明細書で開示される宿主細胞は、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む。特定の実施態様では、酵素遺伝子への改変は、酵素の活性を減少させるか又は排除する。特定の実施態様では、本明細書で開示される宿主細胞は、１つ又は複数の改変されたＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ遺伝子を含む。特定の実施態様では、改変されたＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ遺伝子のその後の転写物は、活性の減少又は排除を有するタンパク質をコードする。特定の実施態様では、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子は、コード領域の破壊によって改変される。特定の実施態様では、遺伝子の改変は、対立遺伝子の改変を含む。特定の実施態様では、酵素遺伝子の改変は、１以上の塩基対、２以上の塩基対、３以上の塩基対、４以上の塩基対、５以上の塩基対、６以上の塩基対、７以上の塩基対、８以上の塩基対、９以上の塩基対、１０以上の塩基対、１１以上の塩基対、１２以上の塩基対、１３以上の塩基対、１４以上の塩基対、１５以上の塩基対、１６以上の塩基対、１７以上の塩基対、１８以上の塩基対、１９以上の塩基対、又は２０以上の塩基対の欠失を含む。
【0121】
４．細胞培養法
一態様では、本開示は、本明細書にて開示した細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成するための方法を提供する。当該技術分野において公知の、哺乳動物細胞に対して好適な培養条件は、本明細書に記載の細胞の培養に使用することができる（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８３）５６：２２１－２３４）、又は、当事者により容易に測定することができる（例えば、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ｒｉｃｋｗｏｏｄ，Ｄ．ａｎｄ Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｄｓ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２）を参照のこと）。
一態様では、本開示は、本明細書にて開示した細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成するための方法を提供する。当該技術分野において公知の、哺乳動物細胞に対して好適な培養条件は、本明細書に記載の細胞の培養に使用することができる（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９８３）５６：２２１－２３４）、又は、当事者により容易に測定することができる（例えば、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ｒｉｃｋｗｏｏｄ，Ｄ．ａｎｄ Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ｅｄｓ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２）を参照のこと）。
【0122】
哺乳動物細胞は、培養されている特定の細胞に好適な培地にて準備することができる。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、例示的な栄養素溶液である。さらに、Ｈａｍ ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ，（１９７９）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，５８：４４；Ｂａｒｎｅｓ ａｎｄ Ｓａｔｏ，（１９８０）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０２：２５５；米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第５，１２２，４６９号、又は同第４，５６０，６５５号；国際公開第９０／０３４３０号；及び同第８７／００１９５号に開示されている培地のいずれか（それらの開示全ては、参照により本明細書に援用される）を、培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれかは、必要に応じてホルモン及び／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子）、塩類（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオシド（例えばアデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えばゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｙｃｉｎ／ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ））、微量元素（通常、終濃度にてマイクロモル範囲で存在する無機化合物として定義される）、脂質類（リノレン酸又は他の脂肪酸）及びそれらの好適な単体、並びにグルコース、又は等価なエネルギー供給源を補充することができる。任意の他の必要な補充物も、当業者に既知であろう適切な濃度で含まれ得る。
【0123】
特定の実施態様では、特定のポリペプチド、例えば、ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性を減少及び／又は排除するために修飾された哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞である。任意の好適な培地を使用して、ＣＨＯ細胞を培養することができる。特定の実施態様では、ＣＨＯ細胞を培養するのに好適な培地は、任意にグリシン、ヒポキサンチン、及びチミジンを含有する、アミノ酸、塩類、糖、及びビタミン；組み換えヒトインスリン、Ｐｒｉｍａｔｏｎｅ ＨＳ若しくはＰｒｉｍａｔｏｎｅ ＲＬ（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）などの加水分解ペプトン、又は等価物；Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８又は等価なプルロニックポリオールなどの、細胞保護剤；ゲンタマイシン；及び微量元素などの、いくつかの構成成分の濃度が変更された、ＤＭＥＭ／ＨＡＭ Ｆ－１２系配合物などの、基礎培地構成成分（ＤＭＥＭ及びＨＡＭ Ｆ１２培地の組成物に関しては、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃａｔａｌｏｇｕｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｓｉｘｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８８、３４６－３４９頁を参照のこと）（米国特許第５，１２２，４６９号に記載の培地の配合物が、特に適切である）を含有し得る。
【0124】
特定の実施態様では、特定のポリペプチド、特にＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥポリペプチドの活性を減少及び／又は排除した哺乳動物細胞は、組換えタンパク質を発現させる細胞である。組み換えタンパク質は、様々な細胞培養条件下にて、目的の生成物を発現させる細胞を成長させることにより生成され得る。例えば、タンパク質の大規模又は小規模産生のための、細胞培養手順は、本開示の文脈にて、潜在的に有用である。流動床バイオリアクター、中空繊維バイオリアクター、ローラーボトル培養、振盪フラスコ培養、又は撹拌槽バイオリアクターシステムを含むがこれらに限定されない手順を使用することができ（後者の２つのシステムでは、マイクロ担体と共に、又は無しで）、代替的にバッチ式、フェドバッチ式、又は連続モードで操作することができる。
【0125】
特定の実施態様では、本開示の細胞培養は、撹拌槽バイオリアクターシステムで実施され、フェドバッチ培養手順を用いる。フェドバッチ培養では、哺乳動物細胞及び培地が培養容器に最初に供給され、追加の培養栄養素が、培養終了前の定期的な細胞及び／又は生成物の採取の有無にかかわらず、培養中に培養液に継続して、又は個別に増加して供給される。フェドバッチ培養には、例えば、定期的に全ての培養液（細胞と培地を含む）が取り除かれ、新鮮な培地で交換される、半連続式フェドバッチ培養が含まれ得る。フェドバッチ培養は、細胞培養のための全ての構成成分（細胞、及び全ての培養栄養素を含む）が、培養プロセスの開始時に培養容器に供給される、単純なバッチ培養とは区別される。フェドバッチ培養はさらに、上清がプロセス中に培養容器から取り除かれない限りにおいて、還流培養とは区別することができる（還流培養では、細胞は例えば、濾過、封入、マイクロ担体へのアンカリングにより、培養液中に保持される。そして培地が連続して、又は断続的に導入され、培養容器から取り除かれる）。
【0126】
特定の実施態様では、想到される特定の宿主細胞及び特定の産生に好適であり得る、任意のスキーム又はルーティンに従い、培養液の細胞を、増殖させることができる。したがって、本開示は、単一工程又は複数工程の培養手順を想到する。単一工程培養において、宿主細胞を培養液環境に播種し、本開示のプロセスを、細胞培養の１回の産生期の間に用いる。あるいは、複数段階培養を想到する。複数段階培養において、細胞は多数の工程又は段階で培養することができる。例えば、細胞を、第１工程又は増殖期培養液中で成長させることができる。この段階において、場合により貯蔵庫から取り除かれた細胞が、成長及び高生存能を促進するのに好適な培地に播種される。新鮮な培地を宿主細胞培養液に添加することにより、細胞を好適な期間、増殖期で維持することができる。
【0127】
特定の実施態様では、フェドバッチ培養又は連続細胞培養条件を考案して、細胞培養液の増殖期における哺乳動物細胞の成長を増強する。増殖期において、細胞は、増殖のために最大化された条件下、及び期間、増殖する。培養条件、例えば温度、ｐＨ、溶存酸素（ｄＯ２）などは、特定の宿主で用いられるものであり、当業者には明らかであろう。概して、ｐＨは、酸（例えばＣＯ２）又は塩基（例えばＮａ２ＣＯ３又はＮａＯＨ）のいずれかを使用して、約６．５と７．５の間のレベルに調整される。ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞の培養の適切な温度範囲は、約３０℃と３８℃の間であり、適切なｄＯ２は空気飽和度の５～９０％である。
【0128】
特定の段階において、細胞を使用して、細胞培養の産生期又は産生工程を播種することができる。あるいは、上述のとおり、産生期又は工程を、播種又は増殖期又は工程と連続させることができる。
【0129】
特定の実施態様では、本開示に記載される培養方法は、例えば、細胞培養の産生期に、細胞培養液から生成物を採取することをさらに含み得る。特定の実施態様では、本開示の細胞培養方法により生成された生成物は、第３のバイオリアクター、例えば生成バイオリアクターから採取され得る。例えば、限定されるものではないが、開示した方法は、細胞培養の産生期の完了時に、生成物を採取することを含み得る。あるいは、又はさらに、生成物は、産生期の完了前に採取され得る。特定の実施態様では、生成物は、特定の細胞密度が達成されると、細胞培養液から採取され得る。例えば、限定されるものではないが、細胞密度は、採取前に、約２．０×１０７細胞／ｍＬ～約５．０×１０７細胞／ｍＬであり得る。
【0130】
特定の実施態様では、細胞培養液から生成物を採取することは、遠心分離、濾過、音波分離、凝集及び細胞除去技術のうちの１つ又は複数を含み得る。
【0131】
特定の実施態様では、目的の生成物を宿主細胞から分泌させることができ、又は、目的の生成物は、膜結合、サイトゾル、若しくは核タンパク質であり得る。特定の実施態様では、ポリペプチドの可溶形態を、条件づけられた細胞培養培地から精製することができ、発現する細胞から全ての膜画分を調製し、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００（ＥＭＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）などの非イオン性界面活性剤を用いて膜を抽出することにより、ポリペプチドの膜結合形態を精製することができる。特定の実施態様では、宿主細胞を（例えば、機械的な力、音波処理、及び／又は界面活性剤により）溶解させ、遠心分離により細胞膜画分を取り除き、上清を保持することにより、サイトゾル又は核タンパク質を調製することができる。
【0132】
５．生成物
本開示の細胞及び／又は方法を使用して、本明細書にて開示した細胞により発現可能な、目的の任意の生成物を作製することができる。特定の実施態様では、本開示の細胞及び／又は方法は、ポリペプチド、例えば哺乳動物ポリペプチドの生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルス粒子の生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルスベクターの生成に使用され得る。このようなポリペプチドの非限定的な例には、ホルモン、受容体、融合タンパク質、調節因子、成長因子、補体系因子、酵素、凝固因子、抗凝固因子、キナーゼ、サイトカイン、ＣＤタンパク質、インターロイキン、治療用タンパク質、診断用タンパク質、及び抗体が含まれる。本開示の細胞及び／又は方法は、分子、例えば、生成される抗体に対して、特異的ではない。
本開示の細胞及び／又は方法を使用して、本明細書にて開示した細胞により発現可能な、目的の任意の生成物を作製することができる。特定の実施態様では、本開示の細胞及び／又は方法は、ポリペプチド、例えば哺乳動物ポリペプチドの生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルス粒子の生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルスベクターの生成に使用され得る。このようなポリペプチドの非限定的な例には、ホルモン、受容体、融合タンパク質、調節因子、成長因子、補体系因子、酵素、凝固因子、抗凝固因子、キナーゼ、サイトカイン、ＣＤタンパク質、インターロイキン、治療用タンパク質、診断用タンパク質、及び抗体が含まれる。本開示の細胞及び／又は方法は、分子、例えば、生成される抗体に対して、特異的ではない。
【0133】
特定の実施態様では、本開示の方法は、治療用及び診断用抗体、又はその抗原結合断片を含む抗体の生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の細胞及び方法により生成される抗体は、単一特異性抗体（例えば、一本鎖重鎖配列及び一本鎖軽鎖配列からなる、このような対の多量体を含む抗体）、多重特異性抗体、及びその抗原結合断片であり得るが、これらに限定されない。例えば、限定されるものではないが、多重特異性抗体は、二重特異性抗体、二重エピトープ抗体、Ｔ細胞依存性二重特異性抗体（ＴＤＢ）、二重作用ＦＡｂ（ＤＡＦ）、又はこれらの抗原結合断片であり得る。
【0134】
５．１ 多重特異性抗体
特定の態様では、本明細書で提供される細胞及び方法によって生成された抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる部分、即ち異なる抗原の異なるエピトープ（即ち、二重特異的）、又は、同じ抗原の異なるエピトープ（即ち、二重エピトープ）に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の態様では、多重特異性抗体は３つ以上の結合特異性を有する。多重特異性抗体は、本明細書に記載した完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
特定の態様では、本明細書で提供される細胞及び方法によって生成された抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる部分、即ち異なる抗原の異なるエピトープ（即ち、二重特異的）、又は、同じ抗原の異なるエピトープ（即ち、二重エピトープ）に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の態様では、多重特異性抗体は３つ以上の結合特異性を有する。多重特異性抗体は、本明細書に記載した完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【0135】
多重特異性抗体を作製するための技法には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアの組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）を参照）及び「ノブ－イン－ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号及びＡｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２７０：２６（１９９７）を参照）が含まれる。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ－ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作すること（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号参照）；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２９：８１（１９８５）を参照）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）及び国際公開第２０１１／０３４６０５号を参照）；軽鎖の誤対合の問題を回避するための共通軽鎖技術を使用すること（例えば国際公開第９８／５０４３１号を参照）；二重特異性抗体断片を作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）；単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５２：５３６８（１９９４）を参照）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０（１９９１）に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作製することができる。
【0136】
例えば「オクトパス抗体」又はＤＶＤ－Ｉｇなど、３つ以上の抗原結合部位を有する操作抗体も本明細書に含まれる（例えば国際公開第２００１／７７３４２号及び同第２００８／０２４７１５号を参照）。３つ以上の抗原結合部位を有する多重特異性抗体の別の非限定例は、国際公開第２０１０／１１５５８９号、同第２０１０／１１２１９３号、同第２０１０／１３６１７２号、同第２０１０／１４５７９２号、及び同第２０１３／０２６８３１号に見出すことができる。二重特異性抗体又はその抗原結合断片は、「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含む（例えば、米国特許出願第２００８／００６９８２０号及び国際公開第２０１５／０９５５３９号を参照）。
【0137】
多重特異性抗体は、同じ抗原特異性の１つ又は複数の結合アームにドメインクロスオーバーを有する非対称形態で、すなわち、ＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号及び同第２０１５／１５０４４７号を参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５３号を参照）又は完全なＦａｂアーム（例えば、国際公開第２００９／０８０２５１号、同第２０１６／０１６２９９号、また、Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ， ＰＮＡＳ， １０８（２０１１）１１８７－１１９１、及びＫｌｅｉｎ ａｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０も参照）を交換することによっても提供され得る。特定の実施態様では、多重特異性抗体はクロスＦａｂ断片を含む。「クロスＦａｂ断片」又は「ｘＦａｂ断片」又は「クロスオーバーＦａｂ断片」との用語は、重鎖及び軽鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されたＦａｂ断片を指す。クロスＦａｂ断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と重鎖定常領域１（ＣＨ１）とで構成されるポリペプチド鎖、及び重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とで構成されるポリペプチド鎖を含む。非対称Ｆａｂアームは、荷電又は非荷電アミノ酸変異をドメインインターフェースに導入して正しいＦａｂペアリングを指示することによって操作することもできる。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照されたい。
【0138】
多重特異性抗体の様々な、さらなる分子フォーマットが当技術分野において既知であり、本明細書に含まれる（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２０１５）９５－１０６を参照のこと）。
【0139】
特定の実施態様では、本明細書にも含まれる、特定の種類の多重特異性抗体は、標的細胞、例えば腫瘍細胞上の表面抗原に、及びＴ細胞を再標的化するための、ＣＤ３などの、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の、活性化不変成分に同時に結合して、標的細胞を殺傷するように設計された二重特異性抗体である。
【0140】
本目的に有用であり得る二重特異性抗体フォーマットのさらなる非限定的な例には、２つのｓｃＦｖ分子が柔軟なリンカーにより融合された、いわゆる「ＢｉＴＥ」（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、同第２００５／０６１５４７号、同第２００７／０４２２６１号、及び同第２００８／１１９５６７号、Ｎａｇｏｒｓｅｎ ａｎｄ Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ３１７，１２５５－１２６０（２０１１）を参照のこと）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．９，２９９－３０５（１９９６））及びその誘導体、例えばタンデム二重特異性抗体（「ＴａｎｄＡｂ」；Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３，４１－５６（１９９９））；ダイアボディフォーマットに基づくが、さらなる安定化のための、Ｃ末端ジスルフィド架橋を特徴とする「ＤＡＲＴ」（二重親和性再標的化）分子（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９９，４３６－４４９（２０１０））、及び、全ハイブリッドマウス／ラットＩｇＧ分子である、いわゆるトリオマブ（Ｓｅｉｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．３６，４５８－４６７（２０１０）で確認される）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に含まれる、具体的なＴ細胞二重特異性抗体形式は、国際公開第２０１３／０２６８３３号、国際公開第２０１３／０２６８３９号、国際公開第２０１６／０２０３０９号；Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（８）（２０１６）ｅ１２０３４９８に記載されている。
【0141】
５．２．抗体断片
特定の態様では、本明細書において提供する細胞及び方法により生成される抗体は、抗体断片である。例えば、限定されるものではないが、抗体断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）２断片、特にＦａｂ断片である。インタクトな抗体をパパイン消化すると、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨ及びＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合断片（いわゆる「Ｆａｂ」断片）が得られる。よって「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖断片を有する抗体断片のことである。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域から１つ又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）、及びＦｃ領域の一部を有するＦ（ａｂ’）２断片が得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ断片及びＦ（ａｂ’）２断片の議論には、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
特定の態様では、本明細書において提供する細胞及び方法により生成される抗体は、抗体断片である。例えば、限定されるものではないが、抗体断片はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）２断片、特にＦａｂ断片である。インタクトな抗体をパパイン消化すると、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨ及びＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合断片（いわゆる「Ｆａｂ」断片）が得られる。よって「Ｆａｂ断片」とは、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖断片を有する抗体断片のことである。「Ｆａｂ’断片」は、抗体ヒンジ領域から１つ又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’断片である。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂ断片）、及びＦｃ領域の一部を有するＦ（ａｂ’）２断片が得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ断片及びＦ（ａｂ’）２断片の議論には、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【0142】
特定の実施態様では、抗体断片はダイアボディ、トリアボディ、又はテトラボディである。「ダイアボディ」は、二価又は二重特異性であってよい、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９：１２９－１３４（２００３）にも記載されている。
【0143】
さらなる態様では、抗体断片は一本鎖Ｆａｂ断片である。「一本鎖Ｆａｂ断片」又は「ｓｃＦａｂ」は、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）、及びリンカーからなるポリペプチドであり、上記抗体ドメイン及び上記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の順序：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、又はｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有する。特に、上記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２個と５０個の間のアミノ酸のポリペプチドである。前記一本鎖Ｆａｂ断片は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合を介して安定化される。加えて、これらの一本鎖Ｆａｂ断片は、システイン残基の挿入（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けによる、可変重鎖の位置４４及び可変軽鎖の位置１００）を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって、さらに安定化され得る。
【0144】
別の態様では、抗体断片は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」は、リンカーにより接続された、抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である。特に、リンカーは、１０～２５個のアミノ酸の短いポリペプチドであり、通常、柔軟性のためにグリシンが、かつ、溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端と、又はこの逆のいずれかで、接続させることができる。このタンパク質は、定常領域が取り除かれ、リンカーが導入されているにもかかわらず、元の抗体の特異性を保持することができる。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）， ｐｐ． ２６９－３１５（１９９４）のＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎを参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。
【0145】
別の態様では、抗体断片は単一ドメイン抗体である。「単一ドメイン抗体」とは、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照のこと）。
【0146】
抗体断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解を含むがこれに限定されない、様々な技術により作製され得る。
【0147】
５．３．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の態様では、本明細書において提供する細胞及び方法により作製される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の態様では、本明細書において提供する細胞及び方法により作製される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【0148】
特定の態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は保持するようにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ又は複数の可変ドメインを含み、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。ある特定の実施態様では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を復元又は改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【0149】
ヒト化抗体及びこれを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に記載され、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフト接合を記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；及びＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド付き選択」手法を記載する）に記載される。
【0150】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、以下を含む：「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、ＳｉｍｓらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、ＣａｒｔｅｒらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照）；並びにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、ＢａｃａらＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）、及びＲｏｓｏｋらＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照）。
【0151】
５．４ ヒト抗体
特定の態様では、本明細書において提供される細胞及び方法により生成される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して生成され得る。ヒト抗体は概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５：３６８－７４（２００１）ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
特定の態様では、本明細書において提供される細胞及び方法により生成される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して生成され得る。ヒト抗体は概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５：３６８－７４（２００１）ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
【0152】
抗原投与に対して応答するヒト可変領域を有する完全なヒト抗体又は完全な抗体を産生するために修飾したトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより、ヒト抗体を調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるか、又は染色体外に存在するか若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部分を含む。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照のこと。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術）を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾することができる。
【0153】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ｐｐ． ５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４７：８６（１９９１）を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２，２００６にも記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生成について記載している）及びＸｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ， ２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマについて記載している）に記載されているものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。
【0154】
５．５．標的分子
本明細書で開示される細胞及び方法により生成された抗体により標的化され得る分子の非限定的な例には、可溶性血清タンパク質及びそれらの受容体、並びに、他の膜結合タンパク質（例えば付着因子）が含まれる。特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により作製された抗体は、８ＭＰＩ、８ＭＰ２、８ＭＰ３８（ＧＤＦＩＯ）、８ＭＰ４、８ＭＰ６、８ＭＰ８、ＣＳＦＩ（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（αＦＧＦ）、ＦＧＦ２（βＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮ８１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷＩ、ＦＥＬ１、ＦＥＬ１（ＥＰＳＥＬＯＮ）、ＦＥＬ１（ＺＥＴＡ）、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢｂ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－β）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－α）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＨＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１ＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ １１ＲＡ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、及びＴＨＰＯ．ｋからなる群から選択される、１つ、２つ又はそれ以上のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、及びサイトカイン受容体に結合することができる。
本明細書で開示される細胞及び方法により生成された抗体により標的化され得る分子の非限定的な例には、可溶性血清タンパク質及びそれらの受容体、並びに、他の膜結合タンパク質（例えば付着因子）が含まれる。特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により作製された抗体は、８ＭＰＩ、８ＭＰ２、８ＭＰ３８（ＧＤＦＩＯ）、８ＭＰ４、８ＭＰ６、８ＭＰ８、ＣＳＦＩ（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（αＦＧＦ）、ＦＧＦ２（βＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮ８１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷＩ、ＦＥＬ１、ＦＥＬ１（ＥＰＳＥＬＯＮ）、ＦＥＬ１（ＺＥＴＡ）、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢｂ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－β）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－α）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＨＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１ＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ １１ＲＡ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、及びＴＨＰＯ．ｋからなる群から選択される、１つ、２つ又はそれ以上のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、及びサイトカイン受容体に結合することができる。
【0155】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成される抗体は、ＣＣＬＩ（１－３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－Ｉα）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－Ｉβ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－Ｉδ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＤＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３α）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エクソダス－２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯＩ）、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（１－ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦＩ）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤＩ）、ＳＣＹＥＩ、ＸＣＬＩ（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－Ｉβ）、ＢＬＲＩ（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲＩ（ＣＫＲＩ／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲＢ ＩＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩＩ）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬ８ＲＡ（ＩＬ８Ｒα）、ＩＬ８ＲＢ（ＩＬ８Ｒβ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＢＤＮＦ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＤＦ１、ＨＤＦ１α、ＤＬ８、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、及びＶＨＬからなる群から選択されるケモカイン、ケモカイン受容体、又はケモカイン関連タンパク質に結合することができる。
【0156】
特定の実施態様では、本明細書で開示される方法により生成された抗体（例えば、二重特異性抗体などの多重特異性抗体）は、以下から選択される１つ又は複数の標的分子に結合することができる：０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）（すなわち、卵巣がん抗原）、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；アミロイドベータ；ＡＮＧＰＴＬ；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＳＬＧ６５９；ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）；ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲＩ（ＭＤＲ１５）；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形態形成タンパク質受容体－ＩＢ型）；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；ブレビカン；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ１δ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３β）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３α）；ＣＣＬ２１（ＭＴＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＴＰ－Ｉα）；ＣＣＬ４（ＭＤＰ－Ｉβ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲＩ／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲβ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＢＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォーム）；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ（ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｂ細胞特異的タンパク質）；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤＳ；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１／ＷＡＦ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７／Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｃ；ＣＤＫＮ２Ａ（Ｐ１６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＬ－１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）；ＣＬＮ３；ＣＬＵ（クラスタリン）；ＣＭＫＬＲ１；ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）；ＣＮＲ１；ＣＯＬ １８Ａ１；ＣＯＬ１Ａ１；ＣＯＬ４Ａ３；ＣＯＬ６Ａ１；補体因子Ｄ；ＣＲ２；ＣＲＰ；ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）；ＣＳＦＩ（Ｍ－ＣＳＦ）；ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）；ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）；ＣＴＬＡ４；ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）；ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）；ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤＩ）；ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、Ｇタンパク質共役受容体）；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬＩ；ＤＰＰ４；Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮＯ１；ＥＮＯ２；ＥＮＯ３；ＥＰＨＢ４；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）；Ｆ３（ＴＦ）；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）；ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（αＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＥＬｌ（ＥＰＳＩＬＯＮ）；ＦＩＬｌ（ＺＥＴＡ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴＩ（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＤＮＦ－Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１Ｌ；ＧＤＮＦＲ－アルファ１；ＧＦＲ－ＡＬＰＨＡ－１）；ＧＥＤＡ；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭ－ＣＳＦ；ＧＮＡＳＩ；ＧＮＲＨＩ；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９；Ｍｍ．４７８７）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＧＲＣＣＩＯ（Ｃ１０）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＯＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ－Ａ；ＨＬＡ－ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原）；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＯＸＩ；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；１Ｄ２；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；ＩＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮガンマ；ＤＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６；ＩＬ－ｌ；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ－１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１７Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬＩＦ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０Ｒα；ＩＬ２１ Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ－２２ｃ；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；インフルエンザＡ；インフルエンザＢ；ＥＬ７；ＥＬ７Ｒ；ＥＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＤＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＤＬ９；ＤＬ９Ｒ；ＤＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）；ＥＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＩＴＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；α４β７及びαＥβ７インテグリンヘテロ二量体；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏ×ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫＩＯ；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＨＴＨＢ６（毛髪特異的Ｈ型ケラチン）；ＬＡＭＡＳ；ＬＥＰ（レプチン）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７，ＲＩＧ－Ｅ，ＳＣＡ－２，ＴＳＡ－１）；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６－Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯＭｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＤＰ；ＭＩＢ１；ミッドカイン；ＭＥＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７；（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－１１１）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹ０８８；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮａＰｉ２ｂとしても知られる）（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型依存性リン酸輸送体３ｂ）；ＮＣＡ；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；
ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１１２；ＮＲ１１３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺＩ；ＯＰＲＤ１；ＯＸ４０；Ｐ２ＲＸ７；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオン５）；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤ－Ｌ１；ＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－１；ＰＯＧＦＡ；ＰＯＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＭＥＬ１７（銀同族体；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲＩ；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤＩ；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１ Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ－ＥＬＥ１）；ＲＧＳＩ；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥＩ（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７のトロンボスポンジンリピート（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰ１ＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＤＭＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰＩ；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢＩ；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ（６の前立腺の膜貫通上皮抗原）；ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１、前立腺がん関連タンパク質１、６の前立腺２の膜貫通上皮抗原２、６の膜貫通前立腺タンパク質）；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰＩＯ；ＴＯＧＦＩ；ＴＥＫ；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢ１ＩＩ；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲＩ；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨＩＬ；ＴＨＢＳＩ（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＬＲ１０；ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１；トモレグリン－１）；ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ同族体２）；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＥＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦＩＩＡ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＥａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガードメイン、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲＩ）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２。
ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１１２；ＮＲ１１３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺＩ；ＯＰＲＤ１；ＯＸ４０；Ｐ２ＲＸ７；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオン５）；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤ－Ｌ１；ＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－１；ＰＯＧＦＡ；ＰＯＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＭＥＬ１７（銀同族体；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲＩ；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤＩ；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１ Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ－ＥＬＥ１）；ＲＧＳＩ；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥＩ（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７のトロンボスポンジンリピート（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰ１ＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＤＭＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰＩ；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢＩ；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ（６の前立腺の膜貫通上皮抗原）；ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１、前立腺がん関連タンパク質１、６の前立腺２の膜貫通上皮抗原２、６の膜貫通前立腺タンパク質）；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰＩＯ；ＴＯＧＦＩ；ＴＥＫ；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢ１ＩＩ；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲＩ；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨＩＬ；ＴＨＢＳＩ（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＬＲ１０；ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１；トモレグリン－１）；ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ同族体２）；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＥＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦＩＩＡ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＥａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガードメイン、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲＩ）；ＹＹ１；及びＺＦＰＭ２。
【0157】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成される抗体は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）又はＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）、又はＨｓ．７３７９２）；ＣＤ３３；ＣＤ３４；ＣＤ６４；ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ－２）；ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連β）、Ｂ２９）；ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、又はＨＥＲ４受容体などの、ＥｒｂＢ受容体ファミリーのＣＤ２００メンバー；ＬＦＡ－１、Ｍａｃ１、ｐ１５０．９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ、α４／β７インテグリン、及び、αｖ／β３インテグリン（これらのα又はβサブユニットのいずれかを含む）などの細胞接着分子（例えば、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、又は抗ＣＤ１１ｂ抗体）；ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ；組織因子（ＴＦ）；αインターフェロン（αＩＦＮ）などの成長因子；ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７ＡＦ、ＩＬ－１Ｓ、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ１３Ｒα２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－９Ｒ、ＩｇＥなどの、インターロイキンであるＴＮＦα；血液群抗原、ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ－４；ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＲＳＶ Ｆタンパク質、プロテインＣなどのＣＤタンパク質に結合することができる。
【0158】
特定の実施態様では、本明細書において提供される細胞及び方法を使用して、補体プロテインＣ５に特異的に結合する抗体（二重特異性抗体などの多重特異性抗体）（例えば、ヒトＣ５に特異的に結合する抗Ｃ５アゴニスト抗体）を産生することができる。特定の実施態様では、抗Ｃ５抗体は、（ａ）ＳＳＹＹＭＡ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＡＩＦＴＧＳＧＡＥＹＫＡＥＷＡＫＧ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）ＤＡＧＹＤＹＰＴＨＡＭＨＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＳＳＳＬＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）ＧＡＳＥＴＥＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び（ｆ）ＱＮＴＫＶＧＳＳＹＧＮＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲを含む。例えば、特定の実施態様では、抗Ｃ５抗体は、（ａ）ＳＳＹＹＭＡ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＡＩＦＴＧＳＧＡＥＹＫＡＥＷＡＫＧ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）ＤＡＧＹＤＹＰＴＨＡＭＨＹ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；から選択される１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、並びに／又は、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＳＳＳＬＡ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）ＧＡＳＥＴＥＳ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び（ｆ）ＱＮＴＫＶＧＳＳＹＧＮＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。上記重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに、軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列は、米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号にそれぞれ、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、及び配列番号１２５として開示されている。（米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号の表７及び８を参照のこと。）
【0159】
特定の実施態様では、抗Ｃ５抗体は、ＶＨ配列及びＶＬ配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＶＨ ＳＳＹＹＭＡＷＶＲＱ ＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ ＡＩＦＴＧＳＧＡＥＹ ＫＡＥＷＡＫＧＲＶＴ ＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶ ＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶ ＤＴＡＴＹＹＣＡＳＤ ＡＧＹＤＹＰＴＨＡＭ ＨＹＷＧＱＧＴＬＶＴ ＶＳＳ（配列番号３１）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳ ＳＳＬＡＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧ ＡＳＥＴＥＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮ ＴＫＶＧＳＳＹＧＮＴ ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３２）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。上記ＶＨ及びＶＬ配列は、米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号にそれぞれ、配列番号１０６及び配列番号１１１として開示されている。（米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号の表７及び８を参照のこと。）特定の実施態様では、抗Ｃ５抗体は３０５Ｌ０１５である（米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号を参照のこと）。
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＦＴＶＨ ＳＳＹＹＭＡＷＶＲＱ ＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ ＡＩＦＴＧＳＧＡＥＹ ＫＡＥＷＡＫＧＲＶＴ ＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶ ＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶ ＤＴＡＴＹＹＣＡＳＤ ＡＧＹＤＹＰＴＨＡＭ ＨＹＷＧＱＧＴＬＶＴ ＶＳＳ（配列番号３１）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳ ＳＳＬＡＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧ ＡＳＥＴＥＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＮ ＴＫＶＧＳＳＹＧＮＴ ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３２）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。上記ＶＨ及びＶＬ配列は、米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号にそれぞれ、配列番号１０６及び配列番号１１１として開示されている。（米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号の表７及び８を参照のこと。）特定の実施態様では、抗Ｃ５抗体は３０５Ｌ０１５である（米国特許出願公開第２０１６／０１７６９５４号を参照のこと）。
【0160】
特定の実施態様では、本明細書で開示される方法により生成された抗体は、ＯＸ４０に結合することができる（例えば、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗ＯＸ４０アゴニスト抗体）。特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）ＤＳＹＭＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＤＭＹＰＤＮＧＤＳＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）ＡＰＲＷＹＦＳＶ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）ＹＴＳＲＬＲＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び、（ｆ）ＱＱＧＨＴＬＰＰＴ（配列番号７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＣＤＲを含む。例えば、特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）ＤＳＹＭＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＤＭＹＰＤＮＧＤＳＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び（ｃ）ＡＰＲＷＹＦＳＶ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；から選択される１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、並びに／又は（ａ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＹＴＳＲＬＲＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び、（ｃ）ＱＱＧＨＴＬＰＰＴ（配列番号７）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、ＶＨ配列及びＶＬ配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＤＳＹＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤ ＭＹＰＤＮＧＤＳＳＹ ＮＱＫＦＲＥＲＶＴＩ ＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹ ＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＶＬＡＰ ＲＷＹＦＳＶＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳ ＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹ ＴＳＲＬＲＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ ＧＨＴＬＰＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＤＳＹＭＳＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤ ＭＹＰＤＮＧＤＳＳＹ ＮＱＫＦＲＥＲＶＴＩ ＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹ ＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＶＬＡＰ ＲＷＹＦＳＶＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳ ＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹ ＴＳＲＬＲＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ ＧＨＴＬＰＰＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号９）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【0161】
特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）ＮＹＬＩＥ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＶＩＮＰＧＳＧＤＴＹＹＳＥＫＦＫＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；（ｃ）ＤＲＬＤＹ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３；（ｄ）ＨＡＳＱＤＩＳＳＹＩＶ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｅ）ＨＧＴＮＬＥＤ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２；及び、（ｆ）ＶＨＹＡＱＦＰＹＴ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む。例えば、特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）ＮＹＬＩＥ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＶＩＮＰＧＳＧＤＴＹＹＳＥＫＦＫＧ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２；及び（ｃ）ＤＲＬＤＹ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１、２、又は３つのＣＤＲを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、並びに／又は（ａ）ＨＡＳＱＤＩＳＳＹＩＶ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１；（ｂ）ＨＧＴＮＬＥＤ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び、（ｃ）ＶＨＹＡＱＦＰＹＴ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３から選択される１、２、又は３つのＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、ＶＨ配列及びＶＬ配列
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴ ＮＹＬＩＥＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶ ＩＮＰＧＳＧＤＴＹＹ ＳＥＫＦＫＧＲＶＴＩ ＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹ ＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲ ＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶ ＴＶＳＳ（配列番号１６）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＨＡＳＱＤＩＳ ＳＹＩＶＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＨ ＧＴＮＬＥＤＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＶＨ ＹＡＱＦＰＹＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴ ＮＹＬＩＥＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶ ＩＮＰＧＳＧＤＴＹＹ ＳＥＫＦＫＧＲＶＴＩ ＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹ ＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲ ＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶ ＴＶＳＳ（配列番号１６）
及び
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＨＡＳＱＤＩＳ ＳＹＩＶＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＨ ＧＴＮＬＥＤＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＶＨ ＹＡＱＦＰＹＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７）をそれぞれ含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【0162】
抗ＯＸ４０抗体に関するさらなる詳細が、国際公開第２０１５／１５３５１３号で開示されており、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0163】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成された抗体は、インフルエンザウイルスＢヘマグルチニン、即ち「ｆｌｕＢ」に結合することができる（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでインフルエンザＢウイルスのＹａｍａｇａｔａリネージ由来のヘマグルチニンに結合する、インフルエンザＢウイルスのＶｉｃｔｏｒｉａリネージ由来のヘマグルチニンに結合する、インフルエンザＢウイルスの祖先リネージ由来のヘマグルチニンに結合する、又は、インフルエンザＢウイルスのＹａｍａｇａｔａリネージ、Ｖｉｃｔｏｒｉａリネージ、及び祖先リネージ由来のヘマグルチニンに結合する抗体）。抗ＦｌｕＢ抗体に関するさらなる詳細は国際公開第２０１５／１４８８０６号で開示されており、その全体が本明細書に参照により組み込まれている。
【0164】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成された抗体は、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）－１又はＬＲＰ－８又はトランスフェリン受容体、並びに、β－セクレターゼ（ＢＡＣＥ１又はＢＡＣＥ２）、α－セクレターゼ、γ－セクレターゼ、タウセクレターゼ、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイドβペプチド、α－シヌクレイン、パーキン、ハンチンチン、ｐ７５ ＮＴＲ、ＣＤ４０、及びカスパーゼ－６からなる群から選択される少なくとも１個の標的に結合することができる。
【0165】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成された抗体は、ＣＤ４０に対するヒトＩｇＧ２抗体である。特定の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体はＲＧ７８７６である。
【0166】
特定の実施態様では、本開示の細胞及び方法を使用して、ポリペプチドを作製することができる。例えば、限定されるものではないが、ポリペプチドは標的化された免疫サイトカインである。特定の実施態様では、標的化された免疫サイトカインはＣＥＡ－ＩＬ２ｖ免疫サイトカインである。特定の実施態様では、ＣＥＡ－ＩＬ２ｖ免疫サイトカインはＲＧ７８１３である。特定の実施態様では、標的化された免疫サイトカインはＦＡＰ－ＩＬ２ｖ免疫サイトカインである。特定の実施態様では、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ免疫サイトカインはＲＧ７４６１である。
【0167】
特定の実施態様では、本明細書において提供される細胞又は方法により生成した多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、ＣＥＡ、及び、少なくとも１つの追加の標的分子に結合することができる。特定の実施態様では、本明細書において提供される方法に従って生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、腫瘍標的化サイトカイン、及び少なくとも１つの追加の標的分子に結合することができる。特定の実施態様では、本明細書において提供される方法に従って生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、ＩＬ２ｖ（即ち、インターロイキン２バリアント）に融合され、ＩＬ－１系免疫サイトカイン、及び少なくとも１つの追加の標的分子に結合する。特定の実施態様では、本明細書において提供される方法に従って生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、Ｔ細胞二重特異性抗体（即ち、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー又はＢｉＴＥ）である。
【0168】
特定の実施態様では、本明細書において提供される方法に従って生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、ＩＬ－１アルファ及びＩＬ－１ベータ、ＩＬ－１２及びＩＬ－１Ｓ；ＩＬ－１３及びＩＬ－９；ＩＬ－１３及びＩＬ－４；ＩＬ－１３及びＩＬ－５；ＩＬ－５及びＩＬ－４；ＩＬ－１３及びＩＬ－１ベータ；ＩＬ－１３及びＩＬ－２５；ＩＬ－１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ－１３及びＭＤＣ；ＩＬ－１３及びＭＥＦ；ＩＬ－１３及びＴＧＦ－～；ＩＬ－１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ－１２及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ－１３及びＣＬ２５；ＩＬ－１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ－１３及びＳＰＲＲ２ｂ；ＩＬ－１３及びＡＤＡＭＳ；ＩＬ－１３及びＰＥＤ２；ＩＬ１７Ａ及びＩＬ１７Ｆ；ＣＥＡ及びＣＤ３；ＣＤ３及びＣＤ１９；ＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ１９及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ３Ｓ及びＣＤ１３Ｓ；ＣＤ３Ｓ及びＣＤ２０；ＣＤ３Ｓ及びＣＤ４０；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ－Ｓ及びＩＬ－６；ＣＤ２０及びＢＲ３；ＴＮＦアルファ及びＴＧＦ－ベータ、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１ベータ；ＴＮＦアルファ及びＩＬ－２、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－３、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－４、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－５、ＴＮＦアルファ及びＩＬ６、ＴＮＦアルファ及びＩＬ８、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－９、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１０、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１１、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１２、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１３、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１４、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１５、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１６、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１７、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１８、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－１９、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－２０、ＴＮＦアルファ及びＩＬ－２３、ＴＮＦアルファ及びＩＦＮアルファ、ＴＮＦアルファ及びＣＤ４、ＴＮＦアルファ及びＶＥＧＦ、ＴＮＦアルファ及びＭＩＦ、ＴＮＦアルファ及びＩＣＡＭ－１、ＴＮＦアルファ及びＰＧＥ４、ＴＮＦアルファ及びＰＥＧ２、ＴＮＦアルファ及びＲＡＮＫリガンド、ＴＮＦアルファ及びＴｅ３８、ＴＮＦアルファ及びＢＡＦＦ、ＴＮＦアルファ及びＣＤ２２、ＴＮＦアルファ及びＣＴＬＡ－４、ＴＮＦアルファ及びＧＰ１３０、ＴＮＦａ及びＩＬ－１２ｐ４０、ＶＥＧＦ及びアンジオポエチン、ＶＥＧＦ及びＨＥＲ２、ＶＥＧＦ－Ａ及びＨＥＲ２、ＶＥＧＦ－Ａ及びＰＤＧＦ、ＨＥＲ１及びＨＥＲ２、ＶＥＧＦＡ及びＡＮＧ２、ＶＥＧＦ－Ａ及びＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄ、ＨＥＲ２及びＤＲ５、ＶＥＧＦ及びＩＬ－８、ＶＥＧＦ及びＭＥＴ、ＶＥＧＦＲ及びＭＥＴ受容体、ＥＧＦＲ及びＭＥＴ、ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及びＣＤ６４、ＨＥＲ２及びＣＤ３、ＨＥＲ２及びＣＤ１６、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）及びＨＥＲ２、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ３、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ４、ＩＬ－１４及びＩＬ－１３、ＩＬ－１３及びＣＤ４０Ｌ、ＩＬ４及びＣＤ４０Ｌ、ＴＮＦＲ１及びＩＬ－１Ｒ、ＴＮＦＲ１及びＩＬ－６Ｒ並びにＴＮＦＲ１及びＩＬ－１８Ｒ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ３、ＭＡＰＧ及びＣＤ２８、ＥＧＦＲ及びＣＤ６４、ＣＳＰＧｓ及びＲＧＭ Ａ；ＣＴＬＡ－４及びＢＴＮ０２；ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＭＡＧ及びＲＧＭ Ａ；ＮｇＲ及びＲＧＭ Ａ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭ Ａ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭ Ａ；ＰＯＬ－ｌ及びＣＴＬＡ－４；並びにＲＧＭ Ａ及びＲＧＭ Ｂから選択される少なくとも２つの標的分子に結合する。
【0169】
特定の実施態様では、本明細書において提供される方法に従って生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体である。特定の実施態様では、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体はＲＧ７８０２である。特定の実施態様では、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、以下に示す配列番号１８～２１に記載のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧ ＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳ ＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱ ＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧ ＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ ＮＲＧＥＣ（配列番号１８）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬ ＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬ ＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴ ＴＳＮＹＡＮＷＶＱＥ ＫＰＧＱＡＦＲＧＬＩ ＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴ
ＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧ ＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡ ＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣ ＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦ ＧＧＧＴＫＬＴＶＬＳ ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ
ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ
ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣ（配列番号１９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷ ＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹ
ＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦ ＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤ ＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹ ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ
ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＥＶＱＬＬ
ＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧ ＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ ＧＦＴＦＳＴＹＡＭＮ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬ ＥＷＶＳＲＩＲＳＫＹ ＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ ＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭ ＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶ ＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧ ＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷ ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＶＡＡＰＳＶＦＩ ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳ ＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮ ＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱ ＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤ
ＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥ ＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴ ＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫ ＳＦＮＲＧＥＣＤＫＴ ＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ
ＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦ ＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩ ＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶ ＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥ ＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥ
ＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶ ＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷ ＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶ ＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥ ＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰ ＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰ
ＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶ ＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹ ＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳ ＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴ ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ ＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤ
ＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦ ＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨ ＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬ ＳＰＧＫ（配列番号２０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧ ＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹ
ＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦ ＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤ ＦＡＹＹＶＥＡＭＤ ＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ
ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣＤＫＴＨＴ ＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧ
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫ ＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴ ＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶ ＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮ ＷＹＶＤＧＶＥＶＨ ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹ
ＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬ ＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧ ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫ ＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩ ＳＫＡＫＧＱＰＲＥ ＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤ
ＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳ ＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤ ＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱ ＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰ ＶＬＤＳＤＧＳＦＦ ＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲ
ＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳ ＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹ ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ Ｋ（配列番号２１）。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧ ＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳ ＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱ ＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧ ＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴ ＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ ＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫ ＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳ ＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫ ＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨ ＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱ ＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦ ＮＲＧＥＣ（配列番号１８）
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬ ＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬ ＴＣＧＳＳＴＧＡＶＴ ＴＳＮＹＡＮＷＶＱＥ ＫＰＧＱＡＦＲＧＬＩ ＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴ
ＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧ ＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡ ＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣ ＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦ ＧＧＧＴＫＬＴＶＬＳ ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ
ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ
ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣ（配列番号１９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷ ＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹ
ＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦ ＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤ ＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹ ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ
ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧ ＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣＤＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＥＶＱＬＬ
ＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧ ＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ ＧＦＴＦＳＴＹＡＭＮ ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬ ＥＷＶＳＲＩＲＳＫＹ ＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳ
ＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤ ＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭ ＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶ ＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧ ＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷ ＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＶＡＡＰＳＶＦＩ ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳ ＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮ ＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱ ＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧ ＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤ
ＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥ ＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴ ＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫ ＳＦＮＲＧＥＣＤＫＴ ＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ
ＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦ ＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩ ＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶ ＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥ ＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥ
ＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶ ＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷ ＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶ ＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥ ＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰ ＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰ
ＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶ ＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹ ＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳ ＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴ ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ ＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤ
ＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦ ＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨ ＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬ ＳＰＧＫ（配列番号２０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧ ＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹ
ＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦ ＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹ ＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤ ＦＡＹＹＶＥＡＭＤ ＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳ
ＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦ ＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳ ＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶ ＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶ ＳＷＮＳＧＡＬＴＳ ＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳ
ＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶ ＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱ ＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰ ＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥ ＰＫＳＣＤＫＴＨＴ ＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧ
ＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫ ＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴ ＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶ ＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮ ＷＹＶＤＧＶＥＶＨ ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹ
ＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬ ＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧ ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫ ＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩ ＳＫＡＫＧＱＰＲＥ ＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤ
ＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳ ＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤ ＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱ ＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰ ＶＬＤＳＤＧＳＦＦ ＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲ
ＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳ ＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹ ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ Ｋ（配列番号２１）。
【0170】
抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体に関するさらなる詳細は、国際公開第２０１４／１２１７１２号に提供されており、その全体が本明細書に参照により援用されている。
【0171】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン二重特異性抗体である。特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン二重特異性抗体二重特異性抗体はＣｒｏｓｓｍａｂである。特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン二重特異性抗体はＲＧ７７１６である。特定の実施態様では、抗ＣＥＡ／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、以下に示す配列番号２２～２５に記載のアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴ ＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷ ＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹ
ＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦ ＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰ ＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦ ＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳ ＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳ ＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣ ＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶ ＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴ ＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬ
ＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳ ＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧ ＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨ ＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫ ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨ ＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡ
ＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ
ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＡＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ ＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣ
ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳ ＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ ＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ
ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＡＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＰＧＫ（配列番号２２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷ ＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭ ＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹ ＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰ ＮＰＹＹＹＤＳＳＧＹ ＹＹＰＧＡＦＤＩＷＧ
ＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡ ＳＶＡＡＰＳＶＦＩＦ ＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧ ＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ ＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷ ＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮ
ＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳ ＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴ ＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫ ＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨ ＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳ ＦＮＲＧＥＣＤＫＴＨ
ＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡ ＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ
ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＡＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ
ＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳ ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳ ＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ
ＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＡＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＰＧＫ（配列番号２３）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳ ＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦ ＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ ＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ
ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ ＲＧＥＣ（配列番号２４）
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶ ＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩ ＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫ ＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧ ＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤ ＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡ ＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧ ＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷ ＤＳＳＳＤＨＷＶＦＧ ＧＧＴＫＬＴＶＬＳＳ ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ
ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ
ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ ＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ ＫＳＣ（配列番号２５）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬ ＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴ ＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷ ＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹ
ＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦ ＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰ ＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦ ＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴ
ＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳ ＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳ ＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣ ＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶ ＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴ ＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬ
ＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳ ＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧ ＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨ ＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫ ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨ ＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡ
ＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ
ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＡＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ ＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣ
ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳ ＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ ＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ
ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＡＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＰＧＫ（配列番号２２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ ＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷ ＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹ
ＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭ ＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹ ＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰ ＮＰＹＹＹＤＳＳＧＹ ＹＹＰＧＡＦＤＩＷＧ
ＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡ ＳＶＡＡＰＳＶＦＩＦ ＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧ ＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ ＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷ ＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮ
ＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳ ＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴ ＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫ ＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨ ＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳ ＦＮＲＧＥＣＤＫＴＨ
ＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡ ＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰ ＰＫＰＫＤＴＬＭＡＳ ＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶ ＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫ ＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶ
ＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥ ＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳ ＶＬＴＶＬＡＱＤＷＬ ＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳ ＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫ ＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲ
ＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳ ＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳ ＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰ ＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮ ＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴ ＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦ
ＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳ ＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮ ＡＹＴＱＫＳＬＳＬＳ ＰＧＫ（配列番号２３）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳ ＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦ ＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ ＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱ ＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ ＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ
ＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡ ＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹ ＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱ ＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤ ＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴ
ＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫ ＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮ ＲＧＥＣ（配列番号２４）
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶ ＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩ ＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫ ＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧ ＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤ ＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲ
ＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡ ＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧ ＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷ ＤＳＳＳＤＨＷＶＦＧ ＧＧＴＫＬＴＶＬＳＳ ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ
ＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ ＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ
ＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳ ＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰ ＫＳＣ（配列番号２５）。
【0172】
特定の実施態様では、本明細書で開示される方法により生成された多重特異性抗体（二重特異性抗体など）は、抗Ａｎｇ２／抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体である。特定の実施態様では、抗Ａｎｇ２／抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体はＲＧ７２２１である。特定の実施態様では、抗Ａｎｇ２／抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体はＣＡＳ番号１４４８２２１－０５－３である。
【0173】
場合によっては、他の分子にコンジュゲートされる可溶性抗原又はその断片は、抗体を生成するための免疫原として使用され得る。受容体などの膜貫通分子の場合、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）が免疫原として使用され得る。あるいは、膜貫通分子を発現させる細胞が、免疫原として使用され得る。このような細胞は、天然源（例えば、がん細胞株）由来であり得るか、又は膜貫通分子を発現するように組換え技法によって形質転換された細胞であり得る。抗体の調製に有用な他の抗原及びその形態は、当業者には明らかであろう。
【0174】
特定の実施態様では、本明細書で開示される細胞及び方法により生成されたポリペプチド（例えば抗体）は、結合により、染料又は細胞傷害性剤、例えば化学療法剤、薬剤、成長阻害剤、毒素（例えば、微生物、菌類、植物若しくは動物由来の酵素活性毒素、又はこれらの断片）、又は放射性同位体（即ち放射性コンジュゲート）などの化学分子にさらにコンジュゲートすることが可能となり得る。本明細書に記載の方法を使用して生成された抗体又は二重特異性抗体を含む免疫コンジュゲートは、１つだけの重鎖、又は１つだけの軽鎖の定常領域にコンジュゲートした細胞傷害性剤を含有することができる。
【0175】
５．６．抗体バリアント
特定の態様では、本明細書で提供される抗体、例えば、セクション５．５．５に示す抗体のアミノ酸配列バリアントを想到する。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列に組み込むことで、又はペプチド合成により調製することができる。このような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。最終コンストラクトが所望の特性、例えば抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達するまでなされ得る。
特定の態様では、本明細書で提供される抗体、例えば、セクション５．５．５に示す抗体のアミノ酸配列バリアントを想到する。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列に組み込むことで、又はペプチド合成により調製することができる。このような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。最終コンストラクトが所望の特性、例えば抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達するまでなされ得る。
【0176】
５．６．１．置換、挿入、及び欠失バリアント
ある特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載されるとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その生成物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。
ある特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載されるとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その生成物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。
【0177】
アミノ酸は、共通の側鎖の性質に従い分類分けすることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【0178】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
【0179】
ある種類の置換型バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的には、さらなる研究のために選択された変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性に修飾（例えば、改善）（例えば、親和性の上昇、免疫原性の低下）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持するであろう。例示的な置換バリアントは、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成することができる、親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ又は複数のＣＤＲ残基が変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【0180】
改変（例えば置換）は、例えば結合親和性を改善するために、ＣＤＲでなされ得る。このような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２０７巻：第１７９～１９６頁（２００８年）を参照）、及び／又は抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、このライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指向手法を含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が標的とされることが多い。
【0181】
特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ又は複数のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的な変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＣＤＲで行われ得る。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ内の抗原接触残基の外側であっててもよい。上述の特定のバリアントＶＨ及びＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、又は３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。
【0182】
変異を標的とし得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５によって記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異生成」と呼ばれる。この方法では、一残基又は一群の標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けたかどうかが決定される。さらなる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点を特定することができる。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
【0183】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドに及ぶアミノ末端融合及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ治療法のための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端若しくはＣ末端の融合が含まれ、これは抗体の血清半減期を増大させる。
【0184】
５．６．２ グリコシル化バリアント
ある特定の態様では、本明細書で提供される抗体は改変されて、抗体のグリコシル化の程度を増減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作り出されるか又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
ある特定の態様では、本明細書で提供される抗体は改変されて、抗体のグリコシル化の程度を増減させる。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作り出されるか又は除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
【0185】
抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖を改変することができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に付着される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ． ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びにバイアンテナリーオリゴ糖構造の「ステム」のＧｌｃＮａｃに付着したフコースを含み得る。いくつかの態様では、特定の改善された性質を有する抗体バリアントを作製するために、本開示の抗体中のオリゴ糖に修飾を加えることができる。
【0186】
一態様では、非フコシル化オリゴ糖、即ち、Ｆｃ領域へのフコース結合（直接又は間接）が欠落した、オリゴ糖構造を有する抗体多様体を提供する。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分枝オリゴ糖構造の幹に第１のＧｌｃＮＡｃが結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖である。一態様では、内在性又は親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した抗体バリアントを提供する。例えば、非フコシル化オリゴ糖の比率は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％、又はさらに約１００％（即ち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であり得る。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、国際公開第２００６／０８２５１５号に記載のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定した、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のほぼ位置２９７（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体の軽度の配列変異により、アミノ酸の位置２９７の上流又は下流約±３、即ち、位置２９４～３００に位置することができる。Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した、このような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合、及び／又は改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有することができる。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号；同第２００４／００９３６２１号を参照のこと。
【0187】
フコシル化が低下した抗体を産生可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が不足しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子のＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）、又はＧＤＰ－フコース合成若しくはトランスポータータンパク質の活性が低下若しくは消滅した細胞（例えば、米国特許出願公開第２００４２５９１５０号、同第２００５０３１６１３号、同第２００４１３２１４０号、同第２００４１１０２８２号を参照されたい）が含まれる。
【0188】
さらなる態様では、抗体バリアントは、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分されたオリゴ糖と共に提供される。そのような抗体バリアントは、上述のとおり、低下したフコシル化、及び／又は改善されたＡＤＣＣを有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えばＵｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００３／０１１８７８号に記載されている。
【0189】
Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有することができる。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。
【0190】
５．６．３．Ｆｃ領域バリアント
特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作成する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作成する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
【0191】
特定の態様では、本開示は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有することで、抗体のインビボ半減期が重要でありながら、特定のエフェクター機能（例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が不必要、又は有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体バリアントを想到する。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏの細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現させるが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現させる。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用ＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているように、動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号における、Ｃ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野に既知の方法を使用して実施することもできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；ＷＯ２０１３／１２０９２９Ａｌを参照されたい）。
【0192】
エフェクター機能が低下した抗体とには、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の置換を含むものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が含まれ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【0193】
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号及びＳｈｉｅｌｄｓらＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照）
【0194】
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【0195】
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２３４及び２３５（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。ある特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇをさらに含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照されたい。）別の態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。
【0196】
いくつかの態様では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の改変（すなわち向上又は減少のいずれか）をもたらすＦｃ領域内で改変が起こる。
【0197】
半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善した、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ又は複数の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基の１つ又は複数：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４の１つ又は複数において置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照のこと）。
【0198】
マウスＦｃ－マウスＦｃＲｎ相互作用に重要なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発により識別されている（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ， Ｗ．Ｆ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照のこと）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５（ＥＵインデックスナンバリング）は、相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２６（１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３（２００１）９９３；Ｋｉｍ， Ｊ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４（１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、及びＨ４３５は、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎとの相互作用に重要であることがわかった（Ｋｉｍ， Ｊ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が相互作用に重要であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）において、残基２４８～２５９、及び３０１～３１７、及び３７６～３８２、及び４２４～４３７の様々な変異が報告され、調査されている。
【0199】
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２５３、及び／又は３１０、及び／又は４３５（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５３、３１０、及び４３５におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照されたい。
【0200】
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置３１０、及び／又は４３３、及び／又は４３６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。特定の態様では、抗体バリアントは、位置３１０、４３３、及び４３６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａである。（例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照されたい。）
【0201】
特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５２、及び／又は２５４、及び／又は２５６（残基のＥＵナンバリング）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５２、２５４、及び２５６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
【0202】
本明細書に報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であってもよい。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうち１つ又は２つが除去された、短くなったＣ末端であってもよい。１つの好ましい態様では、重鎖のＣ末端は短縮Ｃ末端末端ＰＧである。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リシンジペプチドを含む（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＥＵインデックス付番のアミノ酸位置）。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基を含む（Ｇ４４６、ＥＵインデックス付番のアミノ酸位置）。
【0203】
５．６．４．システイン操作抗体バリアント
特定の態様では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢＴＭを生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体の接触可能部位に配置され、抗体を他の部位、例えば薬物部位、又はリンカー／薬物部位と結合させ、本明細書でさらに記載する免疫コンジュゲートを作製するのに用いることができる。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０，９３０号、同第７，８５５，２７５号、同第９，０００，１３０号、又は国際公開２０１６０４０８５６号に記載されているとおりに作製することができる。
特定の態様では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢＴＭを生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が抗体の接触可能部位に配置され、抗体を他の部位、例えば薬物部位、又はリンカー／薬物部位と結合させ、本明細書でさらに記載する免疫コンジュゲートを作製するのに用いることができる。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０，９３０号、同第７，８５５，２７５号、同第９，０００，１３０号、又は国際公開２０１６０４０８５６号に記載されているとおりに作製することができる。
【0204】
５．６．５．抗体誘導体
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部位には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは任意の分子量であることができ、かつ分枝又は非分枝であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なってもよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であっても、異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定することができる。
特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部位には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは任意の分子量であることができ、かつ分枝又は非分枝であり得る。抗体に結合したポリマーの数は異なってもよく、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じ分子であっても、異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうか等の考慮事項に基づいて決定することができる。
【0205】
５．７．免疫コンジュゲート
本開示はまた、１つ又は複数の治療剤、例えば細胞傷害性剤、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、微生物、菌類、植物若しくは動物由来の酵素活性毒素、又はこれらの断片）、又は放射性同位元素にコンジュゲートした（化学結合した）、本明細書で開示される抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
本開示はまた、１つ又は複数の治療剤、例えば細胞傷害性剤、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、微生物、菌類、植物若しくは動物由来の酵素活性毒素、又はこれらの断片）、又は放射性同位元素にコンジュゲートした（化学結合した）、本明細書で開示される抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
【0206】
一態様では、免疫コンジュゲートは、抗体が、前述の治療薬の１つ又は複数にコンジュゲートした、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。抗体は典型的には、リンカーを使用して、治療剤の１つ又は複数に結合される。治療剤及び薬物並びにリンカーの例を含むＡＤＣ技術の概要は、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ ６８：３－１９（２０１６）に明記されている。
【0207】
別の態様では、免疫コンジュゲートは、本明細書に記載されるように、酵素活性毒素又はこれらの断片に結合する抗体を含む。これらは以下に限定されるわけではないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（緑膿菌からのもの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリのタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウのタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、並びにトリコテセンを含む。
【0208】
別の態様では、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされ、放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載される抗体を含む。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートの製造のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出のために使用する場合、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（別名、磁気共鳴画像法、ＭＲＩ）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄を含むことができる。
【0209】
抗体及び細胞傷害性剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製することができる。例えば、リシンイムノトキシンは、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているようにして調製することができる。炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示的キレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照のこと。リンカーは、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７－１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用することができる。
【0210】
本明細書における免疫コンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販（例：米国イリノイ州ロックフォードのＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社から）されている、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ及びスルホ－ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない架橋試薬を用いて調製されたコンジュゲートを明確に意図している。
【0211】
５．６．ウイルス粒子
特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルス粒子の生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルスベクターの生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ポリペプチド、例えばウイルスポリペプチドの発現に使用され得る。このようなポリペプチドの非現実的な例には、ウイルスタンパク質、ウイルス構造（Ｃａｐ）タンパク質、ウイルスパッケージング（Ｒｅｐ）タンパク質、ＡＡＶカプシドタンパク質、及びウイルスヘルパータンパク質が含まれる。いくつかの実施態様では、ウイルスポリペプチドはＡＡＶウイルスポリペプチドである。
特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルス粒子の生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ウイルスベクターの生成に使用され得る。特定の実施態様では、本開示の方法は、ポリペプチド、例えばウイルスポリペプチドの発現に使用され得る。このようなポリペプチドの非現実的な例には、ウイルスタンパク質、ウイルス構造（Ｃａｐ）タンパク質、ウイルスパッケージング（Ｒｅｐ）タンパク質、ＡＡＶカプシドタンパク質、及びウイルスヘルパータンパク質が含まれる。いくつかの実施態様では、ウイルスポリペプチドはＡＡＶウイルスポリペプチドである。
【0212】
特定の実施態様では、本明細書で記載される方法によって生成されるウイルス粒子によって担持され得る目的の遺伝子の例には、例えば、レニン等の哺乳類ポリペプチド；成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；アルファ－１－抗トリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；レプチン；凝固因子、例えば、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、及びフォン・ヴィレブランド因子；抗凝固因子、例えば、プロテインＣ；心房性ナトリウム利尿因子；肺界面活性剤；プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼ又はヒト尿若しくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－アルファ及び－ベータ；腫瘍壊死因子受容体、例えば、細胞死受容体５及びＣＤ１２０；ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；Ｂ－リンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）；増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化時に調節され、Ｔ細胞が正常に発現及び分泌している）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ－１－アルファ）；血清アルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質、例えば、ベータ－ラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えば、ＣＴＬＡ－４；インヒビン；アクチビン；血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ－ＥＣＧＦ）；血管内皮成長因子ファミリータンパク質（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及びＰ１ＧＦ）；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリータンパク質（例えば、ＰＤＧＦ－Ａ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤＧＦ－Ｃ、ＰＤＧＦ－Ｄ、及びそれらの二量体）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリー、例えば、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦ４、及びＦＧＦ９；上皮成長因子（ＥＧＦ）；ホルモン又は成長因子受容体、例えば、ＶＥＧＦ受容体（複数可）（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、及びＶＥＧＦＲ３）、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体（複数可）（例えば、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、及びＥｒｂＢ４ 受容体）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体（複数可）（例えば、ＰＤＧＦＲ－α及びＰＤＧＦＲ－β）、並びに線維芽細胞増殖因子受容体（複数可）；ＴＩＥリガンド（アンジオポイエチン、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２）、アンジオポイエチン受容体、例えば、ＴＩＥ１及びＴＩＥ２；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば、骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、ニューロトロフィン－５、若しくはニューロトロフィン－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、若しくはＮＴ－６）、又は神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－ｂ；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、又はＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－アルファ及びＴＧＦ－ベータ；インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）；ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）；ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、及びＣＤ２０；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；ケモカイン、例えば、ＣＸＣＬ１２及びＣＸＣＲ４；インターフェロン、例えば、インターフェロン－アルファ、インターフェロン－ベータ、及びインターフェロン－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＧ－ＣＳＦ；サイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１～ＩＬ－１０；ミッドカイン；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原、例えば、ＡＩＤＳエンベロープの一部分；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えば、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４、及びＶＣＡＭ；エフリン；Ｂｖ８；デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）；Ｄｅｌ－１；ＢＭＰ９；ＢＭＰ１０；フォリスタチン；肝細胞成長因子（ＨＧＦ）／散乱因子（ＳＦ）；Ａｌｋ１；Ｒｏｂｏ４；ＥＳＭ１；パールカン；ＥＧＦ様ドメインマルチプル７（ＥＧＦＬ７）；ＣＴＧＦ及びそのファミリーのメンバー；トロンボスポンジン、例えば、トロンボスポンジン１及びトロンボスポンジン２；コラーゲン、例えば、コラーゲンＩＶ及びコラーゲンＸＶＩＩＩ；ニューロピリン、例えば、ＮＲＰ１及びＮＲＰ２；プレイオトロフィン（ＰＴＮ）；プログラニュリン；プロリフェリン；Ｎｏｔｃｈタンパク質、例えば、Ｎｏｔｃｈ１及びＮｏｔｃｈ４；セマフォリン、例えば、Ｓｅｍａ３Ａ、Ｓｅｍａ３Ｃ、及びＳｅｍａ３Ｆ；腫瘍関連抗原、例えば、ＣＡ１２５（卵巣癌抗原）；イムノアドヘシン；並びに上述のポリペプチドのいずれかの断片及び／又はバリアント、並びに例えば、上述のタンパク質のいずれかを含む１つ又は複数のタンパク質に結合する抗体断片を含む抗体が含まれる。
【0213】
いくつかの実施態様では、本開示の宿主細胞によって生成されるウイルス粒子によって担持される目的の遺伝子は、いずれかのタンパク質、例えば、８ＭＰＩ、８ＭＰ２、８ＭＰ３８（ＧＤＦＩＯ）、８ＭＰ４、８ＭＰ６、８ＭＰ８、ＣＳＦＩ（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（αＦＧＦ）、ＦＧＦ２（βＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮ８１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷＩ、ＦＥＬ１、ＦＥＬ１（ＥＰＳＥＬＯＮ）、ＦＥＬ１（ＺＥＴＡ）、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢｂ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－β）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－α）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＨＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１ＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ １１ＲＡ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、及びＴＨＰＯ．ｋからなる群から選択されるサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、及びサイトカイン受容体を含むが、これらに限定されない任意のタンパク質に結合し、又はそれと相互作用するタンパク質をコードし得る。
【0214】
いくつかの実施態様では、本開示の宿主細胞によって生成されるウイルス粒子によって担持される目的の遺伝子は、ＣＣＬＩ（１－３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－Ｉα）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－Ｉβ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－Ｉδ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＤＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３α）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エクソダス－２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯＩ）、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（１－ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦＩ）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤＩ）、ＳＣＹＥＩ、ＸＣＬＩ（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－Ｉβ）、ＢＬＲＩ（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲＩ（ＣＫＲＩ／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲＢ ＩＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩＩ）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬ８ＲＡ（ＩＬ８Ｒα）、ＩＬ８ＲＢ（ＩＬ８Ｒβ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＢＤＮＦ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＤＦ１、ＨＤＦ１α、ＤＬ８、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、及びＶＨＬからなる群から選択されるケモカイン、ケモカイン受容体、又はケモカイン関連タンパク質に結合し、又はそれと相互作用するタンパク質をコードし得る。いくつかの実施態様では、本開示の宿主細胞によって発現するポリペプチドは、０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）（すなわち、卵巣がん抗原）、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグリカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；アミロイドベータ；ＡＮＧＰＴＬ；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＳＬＧ６５９；ＡＳＰＨＤ１（（アスパラギン酸ベータヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）；ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体 ３、ＢＲ３；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲＩ（ＭＤＲ１５）；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体－ＩＢ型）；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；ブレビカン；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（１－３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ１δ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３β）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３α）；ＣＣＬ２１（ＭＴＰ－２）；ＳＬＣ；エクソダス－２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＴＰ－Ｉα）；ＣＣＬ４（ＭＤＰ－Ｉβ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲＩ ／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲβ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＢＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォーム）；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ（ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｂ細胞特異的タンパク質）；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤＳ；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１／ＷＡＦ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７／Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｃ；ＣＤＫＮ２Ａ（Ｐ１６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クローディン－７）；ＣＬＬ－１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）；ＣＬＮ３；ＣＬＵ（クラスタリン）；ＣＭＫＬＲ１；ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）；ＣＮＲ１；ＣＯＬ １８Ａ１；ＣＯＬ１Ａ１；ＣＯＬ４Ａ３；ＣＯＬ６Ａ１；補体因子Ｄ；ＣＲ２；ＣＲＰ；ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）；ＣＳＦＩ（Ｍ－ＣＳＦ）；ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）；ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）；ＣＴＬＡ４；ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）；ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）；ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤＩ）；ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ－１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、Ｇタンパク質共役受容体）；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬＩ；ＤＰＰ４；Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮＯ１；ＥＮＯ２；ＥＮＯ３；ＥＰＨＢ４；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）；Ｆ３（ＴＦ）；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）；ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（αＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＥＬｌ（ＥＰＳＩＬＯＮ）；ＦＩＬｌ（ＺＥＴＡ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴＩ（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＤＮＦ－Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１Ｌ；ＧＤＮＦＲ－アルファ１；ＧＦＲ－ＡＬＰＨＡ－１）；ＧＥＤＡ；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭ－ＣＳＦ；ＧＮＡＳＩ；ＧＮＲＨＩ；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体 １９；Ｍｍ．４７８７）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＧＲＣＣＩＯ（Ｃ１０）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＯＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ－Ａ；ＨＬＡ－ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（Ｉａ抗原）；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＯＸＩ；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；１Ｄ２；ＩＦＮ－ａ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；ＩＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮガンマ；ＤＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６；ＩＬ－ｌ；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ－１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１７Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬＩＦ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０Ｒα；ＩＬ２１ Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ－２２ｃ；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；
ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；インフルエンザＡ；インフルエンザＢ；ＥＬ７；ＥＬ７Ｒ；ＥＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＤＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＤＬ９；ＤＬ９Ｒ；ＤＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）；ＥＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＩＴＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；α４β７及びαＥβ７インテグリンヘテロ二量体；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏ×ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫＩＯ；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＨＴＨＢ６（毛髪特異的Ｈ型ケラチン）；ＬＡＭＡＳ；ＬＥＰ（レプチン）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体 ５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ－Ｅ、ＳＣＡ－２、ＴＳＡ－１）；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６－Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯＭｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＤＰ；ＭＩＢ１；ミッドカイン；ＭＥＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７；（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－１１１）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹ０８８；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮａＰｉ２ｂとしても知られる）（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性ホスフェート輸送体３ｂ）；ＮＣＡ；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－ Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１１２；ＮＲ１１３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺＩ；ＯＰＲＤ１；ＯＸ４０；Ｐ２ＲＸ７；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤ－Ｌ１；ＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－１；ＰＯＧＦＡ；ＰＯＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＭＥＬ１７（銀同族体；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲＩ；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤＩ；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１ Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＥＴ（ｒｅｔ癌源遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ－ＥＬＥ１）；ＲＧＳＩ；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥＩ（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７のトロンボスポンジンリピート（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰ１ＮＢ５（ｍａｓｐｉｎ）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＤＭＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰＩ；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢＩ；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ（６の前立腺の膜貫通上皮抗原）；ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１、前立腺がん関連タンパク質１、６の前立腺の膜貫通上皮抗原２、６の膜貫通前立腺タンパク質）；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰＩＯ；ＴＯＧＦＩ；ＴＥＫ；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢ１ＩＩ；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲＩ；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨＩＬ；ＴＨＢＳＩ（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＬＲ１０；ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１；トモレグリン－１）；ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ同族体２）；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＥＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦＩＩＡ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＥａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲＩ）；ＹＹ１；及び／又はＺＦＰＭ２と結合し得るか又は相互作用し得る。
ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；インフルエンザＡ；インフルエンザＢ；ＥＬ７；ＥＬ７Ｒ；ＥＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＤＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＤＬ９；ＤＬ９Ｒ；ＤＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）；ＥＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＩＴＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；α４β７及びαＥβ７インテグリンヘテロ二量体；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏ×ＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫＩＯ；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＨＴＨＢ６（毛髪特異的Ｈ型ケラチン）；ＬＡＭＡＳ；ＬＥＰ（レプチン）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体 ５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ－Ｅ、ＳＣＡ－２、ＴＳＡ－１）；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６－Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯＭｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＤＰ；ＭＩＢ１；ミッドカイン；ＭＥＦ；ＭＩＰ－２；ＭＫＩ６７；（Ｋｉ－６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン－１１１）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹ０８８；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮａＰｉ２ｂとしても知られる）（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性ホスフェート輸送体３ｂ）；ＮＣＡ；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ－ Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ－ｐ７５；ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲ０Ｂ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１１２；ＮＲ１１３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺＩ；ＯＰＲＤ１；ＯＸ４０；Ｐ２ＲＸ７；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤ－Ｌ１；ＰＤ－Ｌ２；ＰＤ－１；ＰＯＧＦＡ；ＰＯＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；ホスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＭＥＬ１７（銀同族体；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲＩ；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤＩ；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１ Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＥＴ（ｒｅｔ癌源遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ－ＥＬＥ１）；ＲＧＳＩ；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥＩ（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７のトロンボスポンジンリピート（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰ１ＮＢ５（ｍａｓｐｉｎ）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）；ＳＥＲＰＤＭＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰＩ；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢＩ；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ（６の前立腺の膜貫通上皮抗原）；ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１、前立腺がん関連タンパク質１、６の前立腺の膜貫通上皮抗原２、６の膜貫通前立腺タンパク質）；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰＩＯ；ＴＯＧＦＩ；ＴＥＫ；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢ１ＩＩ；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲＩ；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨＩＬ；ＴＨＢＳＩ（トロンボスポンジン－１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）；ＴＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＬＲ１０；ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１；トモレグリン－１）；ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａ同族体２）；ＴＮＦ；ＴＮＦ－ａ；ＴＮＦＡＥＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦＩＩＡ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４－１ ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＥａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；バーシカン；ＶＨＬ Ｃ５；ＶＬＡ－４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）；ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲＩ）；ＹＹ１；及び／又はＺＦＰＭ２と結合し得るか又は相互作用し得る。
【0215】
他の多くのウイルス成分及び／又は他の目的の遺伝子が、本開示に従って宿主細胞によってパッケージされる場合があり、上記の一覧は限定的であることを意味しない。
【0216】
本開示の方法は、製造規模での目的のウイルス粒子の生成に用いられ得る。治療用タンパク質又は他のタンパク質の「製造規模」での生成は、生成されるタンパク質及び必要性に応じて、約４００Ｌ～約８０，０００Ｌの範囲の細胞培養物を利用する。典型的には、このような製造規模の生成には、約４００Ｌから約２５，０００Ｌの細胞培養物のサイズが利用される。この範囲内では、４，０００Ｌ、約６，０００Ｌ、約８，０００、約１０，０００、約１２，０００Ｌ、約１４，０００Ｌ、又は約１６，０００Ｌなどの特定の細胞培養物のサイズが利用され得る。
【0217】
例示的な実施態様
本開示は、特定の宿主細胞タンパク質、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない宿主細胞酵素の活性の減少又は排除を有する修飾哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）、そのような細胞を作製するための方法、並びに目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成におけるそのような細胞の使用方法に関する。
本開示は、特定の宿主細胞タンパク質、例えば、特定のリパーゼ、エステラーゼ、及び／又はヒドロラーゼを含むがこれらに限定されない宿主細胞酵素の活性の減少又は排除を有する修飾哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）、そのような細胞を作製するための方法、並びに目的の生成物、例えば組換えタンパク質の生成におけるそのような細胞の使用方法に関する。
【0218】
特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、１つ又は複数の酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素は、以下からなる群から選択される：リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）；ホスホリパーゼＢドメイン含有２（ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２）；リパーゼＡ（リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ、リパーゼ）（ＬＩＰＡ）；ホスホリパーゼＡ－２－活性化タンパク質（ＰＬＡＡ）；ホスホリパーゼＤ３（ＰＬＤ３）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＶ（ＬＰＬＡ２）；ホスホリパーゼＣベータ１（ＰＬＣＢ１）；ホスホリパーゼＣデルタ１（ＰＬＣＤ１）；ＤＤＨＤドメイン含有タンパク質１（断片）（ＤＤＨＤ１）；リゾホスホリパーゼ様タンパク質１（ＬＹＰＬＡＬ１）；ホスホリパーゼＡ２グループＸＩＩＡ（ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ）；ペルオキシレドキシン６（ＰＲＤＸ６）；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）；酢酸イソアミル加水分解エステラーゼ １（推定）（ＩＡＨ１）；ＯＴＵ デユビキチナーゼ、ユビキチンアルデヒド結合１（ＯＴＵＢ１）；リゾホスホリパーゼ２（アシルタンパク質チオエステラーゼ２）（ＬＹＰＬＡ２）；アシルコエンザイムＡチオエステラーゼ１３（ＡＣＯＴ１３）；脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳＮ）；ホスホリパーゼＡ２グループＶＩＩ（ＰＬＡ２Ｇ７）；ユビキチン特異的ペプチダーゼ ５（ＵＳＰ５）；Ｎ－アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ１（酸性セラミダーゼ）（ＡＳＡＨ１）；リパーゼ成熟因子１（ＬＭＦ１）；アポリポタンパク質－ＣＩＩ（ＡＰＯＣ２）；アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）；カルボキシルエステラーゼ１Ｆ（ＣＥＳ１Ｆ）又は肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）；リゾホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）；カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）；ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）；及びシアル酸アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）。
【0219】
特定の実施態様では、組換え宿主細胞中のａ）ＰＰＴ１；ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＬＩＰＡ；ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３；ｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１；ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１；ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２は、減少又は排除されている。
【0220】
特定の実施態様では、組換え宿主細胞中の１つ又は複数の酵素の活性は、以下により減少又は排除されている：（ａ）酵素のノックダウン発現；又は（ｂ）酵素のノックアウト発現；又は（ｃ）酵素をコードする核酸配列の改変。
【0221】
特定の実施態様では、本開示は、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む組換え宿主細胞を対象とする。特定の実施態様では、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子は、検出可能な酵素活性を有しない。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、目的の生成物をコードする核酸配列を含む。特定の実施態様では、核酸配列は、標的化された位置における哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれる。特定の実施態様では、組換え宿主細胞は、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた目的の生成物をコードする核酸をさらに含む。特定の実施態様では、修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥを発現させない。
【0222】
特定の実施態様では、本開示は、本開示に記載される組換え宿主細胞を含む組成物を提供する。
【0223】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。
【0224】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。
【0225】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。
【0226】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。
【0227】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；及び／又はＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。
【0228】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；及びＡＳＡＨ１のうちの１つ又は複数をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。
【0229】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を製造する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0230】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、以下ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥのうちの１つ又は複数の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0231】
特定の実施態様では、本開示は、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子を含む組換え宿主細胞を提供する。特定の実施態様では、１つ又は複数の改変された酵素遺伝子は、コード領域の破壊によって改変される。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子の改変は、対立遺伝子の改変を含む。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子の改変は、１以上の塩基対、２以上の塩基対、３以上の塩基対、４以上の塩基対、５以上の塩基対、６以上の塩基対、７以上の塩基対、８以上の塩基対、９以上の塩基対、１０以上の塩基対、１１以上の塩基対、１２以上の塩基対、１３以上の塩基対、１４以上の塩基対、１５以上の塩基対、１６以上の塩基対、１７以上の塩基対、１８以上の塩基対、１９以上の塩基対、又は２０以上の塩基対の欠失を含む。特定の実施態様では、１つ又は複数の酵素遺伝子は、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥである。
【0232】
上記の特定の実施態様では、遺伝子組み換えシステムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムである。
【0233】
上記の特定の実施態様では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムは、（ａ）Ｃａｓ９分子と、（ｂ）ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥをコードする遺伝子中の標的配列に相補的である標的配列を含む１つ又は複数のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と含む。
【0234】
上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群より選択されるＲＮＡを含み、ここで、ＲＮＡは、ＬＰＬ；ＰＬＢＬ２／ＰＬＢＤ２；ＬＩＰＡ；ＰＬＡＡ；ＰＬＤ３；ＬＰＬＡ２；ＰＬＣＢ１；ＰＬＣＤ１；ＤＤＨＤ１；ＬＹＰＬＡＬ１；ＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ＰＲＤＸ６；ＳＭＰＤ１；ＰＰＴ１；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；ＡＣＯＴ１３；ＦＡＳＮ；ＰＬＡ２Ｇ７；ＵＳＰ５；ＡＳＡＨ１；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及び／又はＳＩＡＥ遺伝子のうちの１つ又は複数によって発現するｍＲＮＡの一部に相補的である。上記の特定の実施態様では、遺伝子組換えシステムは、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システムである。
【0235】
上記の特定の実施態様では、活性の減少又は排除は、哺乳動物細胞中のａ）ＰＰＴ１；ｂ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及び／又はＬＩＰＡ；ｃ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｄ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＰＬＡＡ；ＩＡＨ１；ＯＴＵＢ１；ＬＹＰＬＡ２；及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ；ｅ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＤ３；及びＳＰＤ１；ｆ）ＢＡＸ；ＢＡＫ；ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＰＬＢＬ２；ＰＬＤ３；ＳＰＤ１；ＣＬＵ；ＰＲＤＸ１；ＰＬＡＡ；及びＡＣＯＴ１３又はｇ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；及びＰＰＴ１；ｈ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；及びＰＰＴ１；ｉ）ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｊ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｋ）ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｌ）ＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；ＬＹＰＬＡ１；ＳＭＰＤ１；ＣＥＳ１；ＰＬＡ１Ａ；及びＳＩＡＥ；ｍ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｎ）ＬＰＬＡ２；ＬＭＦ１；ＡＰＯＣ２；ＬＩＰＡ；ＰＰＴ１；ＨＡＣＨ；ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ；及びＬＹＰＬＡ１；ｏ）ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のものである。
【0236】
上記の特定の実施態様では、本開示で提供される方法は、目的の生成物を精製すること、目的の生成物を採取すること、及び／又は目的の生成物を製剤化することをさらに含む。
【0237】
上記の特定の実施態様では、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートの分解が減少する。上記の特定の実施態様では、ポリソルベート２０（ＰＳ２０又はＴｗｅｅｎ ２０）の分解が減少する。上記の特定の実施態様では、ポリソルベート８０（ＰＳ８０又はＴｗｅｅｎ ８０）の分解が減少する。
【0238】
上記の特定の実施態様では、細胞は哺乳動物細胞である。上記の特定の実施態様では、哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞である。
【0239】
上記の特定の実施態様では、細胞は、目的の生成物を発現させる。上記の特定の実施態様では、哺乳動物細胞によって発現する目的の生成物は、核酸配列によってコードされる。上記の特定の実施態様では、核酸配列は、標的化された位置における哺乳動物細胞の細胞ゲノムに組み込まれる。上記の特定の実施態様では、細胞によって発現する目的の生成物は、哺乳動物細胞の細胞ゲノムに無作為に組み込まれた核酸配列によってさらにコードされる。
【0240】
上記の特定の実施態様では、目的の生成物は、タンパク質、ウイルス粒子、又はウイルスベクターを含む。上記の特定の実施態様では、目的の生成物は組換えタンパク質を含む。上記の特定の実施態様では、目的の生成物は、抗体又はその抗原結合断片を含む。上記の特定の実施態様では、抗体は、多重特異性抗体又はその抗原結合断片である。上記の特定の実施態様では、抗体は、単一の重鎖配列及び単一の軽鎖配列、又はそれらの抗原結合断片からなる。上記の特定の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である。上記の特定の実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。
【0241】
特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥを発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１を発現させない。特定の実施態様では、本開示の修飾された細胞は、任意の検出可能なＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２を発現させない。
【0242】
特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における酵素の活性に対して、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。特定の実施態様では、本開示は、組換え宿主細胞を提供し、ここで、細胞は、非修飾細胞における活性に対してＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２酵素の活性を減少させるか又は排除するために修飾されている。
【0243】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトすることを含む、方法を提供する。
【0244】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＰＰＴＩの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２；ＬＰＬ；ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少をもたらす、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することを含み、細胞培養プロセス及び／又は培地組成を調節することがＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少をもたらす、方法を提供する。
【0245】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性が減少した細胞を選択することを含む、方法を提供する。
【0246】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＰＰＴ１をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥのうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるための方法であって、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２のうちの１つ又は複数をコードする遺伝子を改変することを含む、方法を提供する。
【0247】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムがＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の発現をノックダウン又はノックアウトする、方法を提供する。
【0248】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＰＰＴＩをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥ及びＰＰＴ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥが酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥをコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。
【0249】
特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、細胞中の酵素活性を減少させるか又は排除するための方法であって、細胞に遺伝子組換えシステムを施すことを含み、遺伝子組換えシステムが、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２が酵素活性の減少又は排除を有するように、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２をコードする核酸配列を改変する、方法を提供する。
【0250】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞を培養することを含む、目的の生成物を生成する方法であって、哺乳動物細胞が、目的の生成物を発現させ、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【0251】
特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞がＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＰＬＡＡ、ＩＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２Ａの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＭＰＤ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＢＬ２、ＰＬＤ３、ＳＭＰＤ１、ＣＬＵ、ＰＲＤＸ１、ＰＬＡＡ、及びＡＣＯＴ１３の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ及びＰＰＴ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＬＹＰＬＡ１、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＰＬＡ２、ＬＭＦ１、ＡＰＯＣ２、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ１Ｆ／ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＹＰＬＡ１の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。特定の実施態様では、本開示は、目的の生成物を発現させる哺乳動物細胞の集団を培養する方法であって、哺乳動物細胞が、ＬＭＦ１及びＡＰＯＣ２の活性の減少又は排除を有する、方法を提供する。
【実施例】
【0252】
以下の実施例は、本明細書で開示されている主題の単なる例示であり、いかなる意味においても制限とみなすべきではない。
【0253】
材料及び方法
発現プラスミドの構築
重鎖及び軽鎖の両方のｃＤＮＡは、サイトメガロウイルス前初期遺伝子プロモーター及びエンハンサー（ＣＭＶ）の制御下にあった。各ＣＭＶ転写開始部位の後には、最終転写物から除去されるイントロンを画定するスプライスドナー及びアクセプターシーケンスが続く（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ． １９９６）。（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ． １９９６）。
発現プラスミドの構築
重鎖及び軽鎖の両方のｃＤＮＡは、サイトメガロウイルス前初期遺伝子プロモーター及びエンハンサー（ＣＭＶ）の制御下にあった。各ＣＭＶ転写開始部位の後には、最終転写物から除去されるイントロンを画定するスプライスドナー及びアクセプターシーケンスが続く（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ． １９９６）。（Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ． １９９６）。
【0254】
抗体プラスミドＤＮＡコンストラクトの構成
１プラスミド抗体コンストラクトを構築するために、抗体重鎖（ＨＣ）遺伝子及び軽鎖（ＬＣ）遺伝子を有する断片を、Ｌ３及び２Ｌ配列並びにピューロマイシンＮ－アセチル－トランスフェラーゼ（ｐａｃ）選択可能マーカーを含有するベクターにクローニングした。２プラスミド抗体コンストラクトを構築するために、抗体ＨＣ及びＬＣ遺伝子断片を、Ｌ３及びＬｏｘＦＡＳ配列を含む前方ベクターに、並びにＬｏｘＦＡＳ及び２Ｌ配列並びにｐａｃ選択可能マーカーを含む後方ベクターにクローニングした。２プラスミド系では、ｐａｃの開始コドンは前方ベクターの末端にあり、残りのｐａｃコード配列は後方ベクターの始めにある。すべての抗体遺伝子の前には ＣＭＶプロモーターがあり、その後に ＳＶ４０ポリ（Ａ）配列が続いた。前述のＣｒｅリコンビナーゼプラスミド（ｐＯＧ２３１）をすべての ＲＭＣＥプロセスに使用した（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎ Ｓ， Ｄａｇｅｎａｉｓ ＮＡ， Ｑｉａｎ Ｍ， Ｍａｒｃｈｕｋ Ｙ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９９７ Ｄｅｃ ２３；９４（２６）：１４６０２－７）．
１プラスミド抗体コンストラクトを構築するために、抗体重鎖（ＨＣ）遺伝子及び軽鎖（ＬＣ）遺伝子を有する断片を、Ｌ３及び２Ｌ配列並びにピューロマイシンＮ－アセチル－トランスフェラーゼ（ｐａｃ）選択可能マーカーを含有するベクターにクローニングした。２プラスミド抗体コンストラクトを構築するために、抗体ＨＣ及びＬＣ遺伝子断片を、Ｌ３及びＬｏｘＦＡＳ配列を含む前方ベクターに、並びにＬｏｘＦＡＳ及び２Ｌ配列並びにｐａｃ選択可能マーカーを含む後方ベクターにクローニングした。２プラスミド系では、ｐａｃの開始コドンは前方ベクターの末端にあり、残りのｐａｃコード配列は後方ベクターの始めにある。すべての抗体遺伝子の前には ＣＭＶプロモーターがあり、その後に ＳＶ４０ポリ（Ａ）配列が続いた。前述のＣｒｅリコンビナーゼプラスミド（ｐＯＧ２３１）をすべての ＲＭＣＥプロセスに使用した（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎ Ｓ， Ｄａｇｅｎａｉｓ ＮＡ， Ｑｉａｎ Ｍ， Ｍａｒｃｈｕｋ Ｙ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９９７ Ｄｅｃ ２３；９４（２６）：１４６０２－７）．
【0255】
Ｌ３配列：５’ ＡＴＡＡＣＴＴＣＧＴＡＴＡＡＡＧＴＣＴＣＣＴＡＴＡＣＧＡＡＧＴＴＡＴ
ＬｏｘＦＡＳ配列：５’ ＡＴＡＡＣＴＴＣＧＴＡＴＡＧＡＡＡＧＧＴＡＴＡＴＡＣＧＡＡＧＴＴＡＴ
２Ｌ配列：５’ ＡＴＡＡＣＴＴＣＧＴＡＴＡＧＣＡＴＡＣＡＴＴＡＴＡＣＧＡＡＧＴＴＡＴ
ＬｏｘＦＡＳ配列：５’ ＡＴＡＡＣＴＴＣＧＴＡＴＡＧＡＡＡＧＧＴＡＴＡＴＡＣＧＡＡＧＴＴＡＴ
２Ｌ配列：５’ ＡＴＡＡＣＴＴＣＧＴＡＴＡＧＣＡＴＡＣＡＴＴＡＴＡＣＧＡＡＧＴＴＡＴ
【0256】
細胞培養
１５０ｒｐｍ、３７℃、及び５％ ＣＯ２の振とうフラスコ容器中の独自のＤＭＥＭ／Ｆ１２をベースとする培地中でＣＨＯ細胞を培養した。３～４日ごとに３×１０５／ｍＬの播種密度で細胞を継代した。
１５０ｒｐｍ、３７℃、及び５％ ＣＯ２の振とうフラスコ容器中の独自のＤＭＥＭ／Ｆ１２をベースとする培地中でＣＨＯ細胞を培養した。３～４日ごとに３×１０５／ｍＬの播種密度で細胞を継代した。
【0257】
安定なトランスフェクション及びタンパク質生成
製造業者の推奨に従って（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）、リポフェクタミン２０００ ＣＤを使用してＣＨＯ細胞を形質転換した。形質転換した細胞を遠心分離し、ＤＭＥＭ／Ｆ－１２をベースとする選択的な（グルタミン非含有）培地にさまざまな濃度のメチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）で播種した。播種の約３週間後、個別のコロニーを９６ウェルプレート中に採取した。採取されたコロニーを、ＥＬＩＳＡ分析のために上清を採取することにより、抗体産生について評価した。上位のクローンをスケールアップして、３日目に温度を３５度に変化させ、１４日間のフェドバッチ培養プロセスを使用して抗体を産生した。
製造業者の推奨に従って（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）、リポフェクタミン２０００ ＣＤを使用してＣＨＯ細胞を形質転換した。形質転換した細胞を遠心分離し、ＤＭＥＭ／Ｆ－１２をベースとする選択的な（グルタミン非含有）培地にさまざまな濃度のメチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）で播種した。播種の約３週間後、個別のコロニーを９６ウェルプレート中に採取した。採取されたコロニーを、ＥＬＩＳＡ分析のために上清を採取することにより、抗体産生について評価した。上位のクローンをスケールアップして、３日目に温度を３５度に変化させ、１４日間のフェドバッチ培養プロセスを使用して抗体を産生した。
【0258】
ＴＩ安定細胞株の発生
発現プラスミドをＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸエレクトロポレーション（ＭａｘＣｙｔｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によってトランスフェクトした。次いで、ピューロマイシン及び１－（２’－デオキシ－２’－フルオロ－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシル－５－ヨード）ウラシル（ＦＩＡＵ）（Ｍｏｒａｖｅｋ）を用いて、トランスフェクトされた細胞を選択した。プール選択後、単一細胞クローニング（ＳＣＣ）を実施した。ＨＴＲＦアッセイによってクローンを抗体力価についてスクリーニングし、最高力価のクローンをさらなる評価のためにスケールアップした。
発現プラスミドをＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸエレクトロポレーション（ＭａｘＣｙｔｅ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）によってトランスフェクトした。次いで、ピューロマイシン及び１－（２’－デオキシ－２’－フルオロ－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシル－５－ヨード）ウラシル（ＦＩＡＵ）（Ｍｏｒａｖｅｋ）を用いて、トランスフェクトされた細胞を選択した。プール選択後、単一細胞クローニング（ＳＣＣ）を実施した。ＨＴＲＦアッセイによってクローンを抗体力価についてスクリーニングし、最高力価のクローンをさらなる評価のためにスケールアップした。
【0259】
細胞培養のパフォーマンスについてのフェドバッチ産生アッセイ
フィードバッチ産生培養を、独自の化学的に定義された産生培地を含む振とうフラスコ又はａｍｂｒ１５容器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ）で実施した。細胞を０日目に１×１０６細胞／ｍＬで播種し、３日目に３７℃から３５℃に温度を変化させた。３、７、及び１０日目に、培養物に独自のフィード培地を加えた。Ｖｉ－Ｃｅｌｌ ＸＲ装置（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、０、３、７、１０、及び１４日目に、培養物中の細胞の生存細胞数（ＶＣＣ）及び生存率割合を測定した。Ｂｉｏｐｒｏｆｉｌｅ ４００ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を使用して、７、１０及び１４日目にグルコース濃度及び乳酸濃度を測定した。ＵＶ検出を伴うプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して、１４日目の力価を決定した。
フィードバッチ産生培養を、独自の化学的に定義された産生培地を含む振とうフラスコ又はａｍｂｒ１５容器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ）で実施した。細胞を０日目に１×１０６細胞／ｍＬで播種し、３日目に３７℃から３５℃に温度を変化させた。３、７、及び１０日目に、培養物に独自のフィード培地を加えた。Ｖｉ－Ｃｅｌｌ ＸＲ装置（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、０、３、７、１０、及び１４日目に、培養物中の細胞の生存細胞数（ＶＣＣ）及び生存率割合を測定した。Ｂｉｏｐｒｏｆｉｌｅ ４００ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を使用して、７、１０及び１４日目にグルコース濃度及び乳酸濃度を測定した。ＵＶ検出を伴うプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して、１４日目の力価を決定した。
【0260】
組換えリパーゼの発現及び精製
Ｃ末端６ｘＨｉｓ－又は二重６ｘＨｉｓ－Ｆｌａｇエピトープに融合し、哺乳動物サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって生じる、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＮ８９）、Ｎ－アシルスフィンゴシン アミドヒドロラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＧＺＢ２）、リパーゼＡ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＱＹ６）、ホスホリパーゼＡ２ グループ１５（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＫＶ９）、アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＩＧ１）、肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様タンパク質（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０６１ＩＡＡ７）、リソホスホリパーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０９８ＫＸＨ０）、スフィンゴミエリン ホスホジエステラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＭＨ４）、カルボキシルエステラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０６１ＩＤ９２）、ホスホリパーゼＡ１ メンバーＡ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３Ｉ１Ｊ５）、及びシアル酸 アセチルエステラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＩＢ１）などの酵素の発現のためのプラスミドを、遺伝子合成と、それに続くｐＲＫ５発現ベクターへのサブクローニングによって作成した。発現コンストラクトを、ＤＮＡ配列決定によって検証し、ＣＨＯ細胞中に一過性にトランスフェクトした。分泌された組換えリパーゼをトランスフェクション後１０日目に採取し、Ｎｉ－ＮＴＡ、サイズ排除、及び抗Ｈｉｓアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。精製したリパーゼを所望のバッファー中に透析し、－８０℃で保管した。
Ｃ末端６ｘＨｉｓ－又は二重６ｘＨｉｓ－Ｆｌａｇエピトープに融合し、哺乳動物サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって生じる、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＮ８９）、Ｎ－アシルスフィンゴシン アミドヒドロラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＧＺＢ２）、リパーゼＡ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＱＹ６）、ホスホリパーゼＡ２ グループ１５（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＨＫＶ９）、アシルカルニチンヒドロラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＩＧ１）、肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様タンパク質（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０６１ＩＡＡ７）、リソホスホリパーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０９８ＫＸＨ０）、スフィンゴミエリン ホスホジエステラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＭＨ４）、カルボキシルエステラーゼ１（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＡ０Ａ０６１ＩＤ９２）、ホスホリパーゼＡ１ メンバーＡ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３Ｉ１Ｊ５）、及びシアル酸 アセチルエステラーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＧ３ＩＩＢ１）などの酵素の発現のためのプラスミドを、遺伝子合成と、それに続くｐＲＫ５発現ベクターへのサブクローニングによって作成した。発現コンストラクトを、ＤＮＡ配列決定によって検証し、ＣＨＯ細胞中に一過性にトランスフェクトした。分泌された組換えリパーゼをトランスフェクション後１０日目に採取し、Ｎｉ－ＮＴＡ、サイズ排除、及び抗Ｈｉｓアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。精製したリパーゼを所望のバッファー中に透析し、－８０℃で保管した。
【0261】
組換えヒトリポタンパク質リパーゼ（ＵｎｉｐｒｏｔアクセッションＱ６ＩＡＶ０）を評価のための外部のベンダーから購入した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号９８８８－ＬＬ－１００）。
【0262】
同定したＨＣＰのサブセットにおけるポリソルベート分解活性の評価
ｍＡｂ ２原薬（ＤＳ）を、パルミトイル－チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、組換えヒトリポタンパク質リパーゼ（ｒｈＬＰＬ）、Ｎ－アシルスフィンゴシン アミドヒドロラーゼ１（ＡＳＡＨ１）、及びリパーゼＡ（ＬＩＰＡ）でスパイクし、最終濃度をそれぞれ１０μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、及び２．５μｇ／ｍＬにした。これらの溶液を、温度を２５℃にコントロールしながらＡｇｉｌｅｎｔ １２００オートサンプラー中でインキュベートした。１０～１５時間の選択した時点で、２０μＬをサンプリングして注入し、ＥＬＳＤに連結した混合モードＨＰＬＣによってＰＳ２０含有量を決定した。
ｍＡｂ ２原薬（ＤＳ）を、パルミトイル－チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、組換えヒトリポタンパク質リパーゼ（ｒｈＬＰＬ）、Ｎ－アシルスフィンゴシン アミドヒドロラーゼ１（ＡＳＡＨ１）、及びリパーゼＡ（ＬＩＰＡ）でスパイクし、最終濃度をそれぞれ１０μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、及び２．５μｇ／ｍＬにした。これらの溶液を、温度を２５℃にコントロールしながらＡｇｉｌｅｎｔ １２００オートサンプラー中でインキュベートした。１０～１５時間の選択した時点で、２０μＬをサンプリングして注入し、ＥＬＳＤに連結した混合モードＨＰＬＣによってＰＳ２０含有量を決定した。
【0263】
バイオ医薬的に代表的である製剤バッファー（ヒスチジン－アセテート、ｐＨ６．０、１２０ｍＭスクロース、０．０２％又は０．０４％ ＰＳ２０（ｗ：ｖ）含有）を精製した酵素でスパイクして、ホスホリパーゼＡ２ グループ１５（ＬＰＬＡ２）を０．５μｇ／ｍＬ、アシルカルニチン ヒドロラーゼ（ＨＡＣＨ）を５μｇ／ｍＬ、肝臓カルボキシルエステラーゼＢ－１様タンパク質（ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ）を５μｇ／ｍＬ、リポホスホリパーゼ１（ＬＹＰＬＡ１）を０．５μｇ／ｍＬ、スフィンゴミエリン ホスホジエステラーゼ（ＳＭＰＤ１）を５２μｇ／ｍＬ、カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）を５０μｇ／ｍＬ、ホスホリパーゼＡ１ メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）を３１μｇ／ｍＬ、及びシアル酸 アセチルエステラーゼ（ＳＩＡＥ）を７０μｇ／ｍＬの濃度にした。これらの溶液を、温度を２５℃にコントロールしながらＡｇｉｌｅｎｔ １２００オートサンプラー中でインキュベートした。６～１５時間の選択した時点で、２０μＬをサンプリングして注入し、ＥＬＳＤに連結した混合モードＨＰＬＣによってＰＳ２０含有量を決定した。
【0264】
ＰＳ２０分解アッセイを使用した、ＣＨＯ細胞からの精製したｍＡｂｓのリパーゼ／エステラーゼノックアウト（ＫＯ）の評価
ポリソルベート分解に対するＫＯの影響を、リパーゼ／エステラーゼ遺伝子がノックアウトされた組換えｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞株を使用して生成された精製ｍＡｂサンプルと、遺伝子がノックアウトされていない対応するｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞株とを比較することによって評価した。ｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞の産生培養を、同じ培養条件を使用して小規模（２－Ｌ）バイオリアクターで実施した。およそ２週間後、産生バイオリアクター内で培養物を採取及び精製した。各ｍＡｂについて、培養上清を、同じ下流の処理工程（アフィニティ及びポリッシングクロマトグラフィー）及び条件で採取し、試験用に精製材料を生成した。このように、所与のｍＡｂについて、精製サンプルは、上流と下流の処理工程及び条件が同一であるため、ＫＯ細胞又はコントロール細胞の使用において異なるだけである。ポリソルベート２０（ＰＳ２０）分解アッセイを細胞培養採取物ではなく精製材料で行うことは重要であるが、これは、精製材料が、リアルタイムの長期保存中にポリソルベートの分解及び粒子形成が起こり得る医薬品をより代表しているためである。
ポリソルベート分解に対するＫＯの影響を、リパーゼ／エステラーゼ遺伝子がノックアウトされた組換えｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞株を使用して生成された精製ｍＡｂサンプルと、遺伝子がノックアウトされていない対応するｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞株とを比較することによって評価した。ｍＡｂ産生ＣＨＯ細胞の産生培養を、同じ培養条件を使用して小規模（２－Ｌ）バイオリアクターで実施した。およそ２週間後、産生バイオリアクター内で培養物を採取及び精製した。各ｍＡｂについて、培養上清を、同じ下流の処理工程（アフィニティ及びポリッシングクロマトグラフィー）及び条件で採取し、試験用に精製材料を生成した。このように、所与のｍＡｂについて、精製サンプルは、上流と下流の処理工程及び条件が同一であるため、ＫＯ細胞又はコントロール細胞の使用において異なるだけである。ポリソルベート２０（ＰＳ２０）分解アッセイを細胞培養採取物ではなく精製材料で行うことは重要であるが、これは、精製材料が、リアルタイムの長期保存中にポリソルベートの分解及び粒子形成が起こり得る医薬品をより代表しているためである。
【0265】
ＰＳ２０分解アッセイを実施するために、精製サンプルをＰＳ２０（０．０４％ ｖ／ｖ）及びメチオニン（２０ｍｇ／ｍｌ）でスパイクし、およそ２週間２５℃でインキュベートし、サンプルを複数の時点で採取した。インキュベーション後、サンプルを、前述のように、酵素切断から放出される遊離脂肪酸（ラウリン酸）を定量することによって、ＰＳ２０の加水分解を分析した（Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ， ２０１９， Ｖｏｌｕｍｅ １０８， Ｉｓｓｕｅ ９， ２８８０－２８８６ページ）。ラウリン酸の放出速度は、ＰＳ２０の分解に対する酵素活性を表した。リパーゼ／エステラーゼ遺伝子がノックアウトした（すなわち、ＫＯ）細胞のラウリン酸の放出速度を、コントロール細胞（すなわち、ＫＯなし）の放出速度と比較した。コントロール細胞を使用した対応するｍＡｂサンプルに対する、遺伝子がノックアウトしたｍＡｂサンプルにおけるラウリン酸の放出速度の減少率を算出することによって、ＰＳ２０分解を阻害することに対するＫＯの有効性を評価した（図１５）。例えば、ＫＯ細胞におけるＰＳ２０加水分解の完全な阻害は、ＰＳ分解活性の１００％の減少をもたらすことになる（ラウリン酸の放出速度として表される）。
【0266】
実施例１：３つのモノクローナル抗体の濃縮したサンプル中で２８の酵素が見られた
図１は、精製プロセス中の異なる段階から取られた濃縮したｍＡｂ－１、ｍＡｂ－２、及びｍＡｂ－３サンプルで２８の酵素が見られたことを同定している。２８の酵素には、リパーゼ、エステラーゼ、及びヒドロラーゼが含まれる。ｍＡｂ－１サンプルでは、１８の酵素が見られた。ｍＡｂ－２サンプルでは、１５の酵素が見られた。さらに、ｍＡｂ－３サンプルでは、８つの酵素が見られた。
図１は、精製プロセス中の異なる段階から取られた濃縮したｍＡｂ－１、ｍＡｂ－２、及びｍＡｂ－３サンプルで２８の酵素が見られたことを同定している。２８の酵素には、リパーゼ、エステラーゼ、及びヒドロラーゼが含まれる。ｍＡｂ－１サンプルでは、１８の酵素が見られた。ｍＡｂ－２サンプルでは、１５の酵素が見られた。さらに、ｍＡｂ－３サンプルでは、８つの酵素が見られた。
【0267】
実施例２：空のＣＨＯ宿主細胞の生成のための多重ＫＯアプローチ
単一又は複数のノックアウト遺伝子を有する空のＣＨＯ細胞株宿主を、図２に示す手法を使用して親ＣＨＯ宿主細胞株から生成した。ＰＬＢＬ２遺伝子がノックアウトされた親宿主から１×ＫＯ宿主を生成した。親宿主から３×宿主を生成するために、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びリパーゼＡ遺伝子を同時にノックアウトした。３×宿主から７×宿主を生成するために、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、ＰＬＢＬ２、及びＳＭＰＤ１遺伝子をさらにノックアウトした。７×宿主から１２×宿主を生成するために、ＰＬＡＡ、ＬＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２ａ遺伝子をさらにノックアウトした。親宿主を使用し、Ｂａｘ遺伝子及びＢａｋ遺伝子をノックアウトすることにより、Ｂａｘ－Ｂａｋ ＫＯ宿主を生成した。Ｂａｘ－Ｂａｋ ＫＯ宿主から８×宿主を生成するために、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、リパーゼＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＰＤ１遺伝子をさらにノックアウトした。８×ＫＯ宿主から１３×宿主を生成するために、Ｃｌｕ、ＰＲＤＸ１、Ｐｌａａ、及びＡｃｏｔ１３遺伝子をさらにノックアウトした。各ＫＯ宿主細胞株のノックアウト遺伝子を図３に列挙する。
単一又は複数のノックアウト遺伝子を有する空のＣＨＯ細胞株宿主を、図２に示す手法を使用して親ＣＨＯ宿主細胞株から生成した。ＰＬＢＬ２遺伝子がノックアウトされた親宿主から１×ＫＯ宿主を生成した。親宿主から３×宿主を生成するために、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びリパーゼＡ遺伝子を同時にノックアウトした。３×宿主から７×宿主を生成するために、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、ＰＬＢＬ２、及びＳＭＰＤ１遺伝子をさらにノックアウトした。７×宿主から１２×宿主を生成するために、ＰＬＡＡ、ＬＡＨ１、ＯＴＵＢ１、ＬＹＰＬＡ２、及びＰＬＡ２Ｇ１２ａ遺伝子をさらにノックアウトした。親宿主を使用し、Ｂａｘ遺伝子及びＢａｋ遺伝子をノックアウトすることにより、Ｂａｘ－Ｂａｋ ＫＯ宿主を生成した。Ｂａｘ－Ｂａｋ ＫＯ宿主から８×宿主を生成するために、ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、リパーゼＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＳＰＤ１遺伝子をさらにノックアウトした。８×ＫＯ宿主から１３×宿主を生成するために、Ｃｌｕ、ＰＲＤＸ１、Ｐｌａａ、及びＡｃｏｔ１３遺伝子をさらにノックアウトした。各ＫＯ宿主細胞株のノックアウト遺伝子を図３に列挙する。
【0268】
実施例３：ＰＬＢＬ２ ＫＯ細胞は、親ＣＨＯ宿主細胞株と同等の細胞成長及び生産性を有する。
ｍＡｂ－Ａ発現細胞株の培養シードトレインを用いて、標準的又は強化された供給戦略を使用し、バイオリアクター内に産生培養物を準備した。１×ＫＯ及び親ＣＨＯ細胞株の成長及び生存率を図４Ａ及び図４Ｃに示した。１×ＫＯ細胞株の力価（図４Ｂ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等又はそれ以上であった。
ｍＡｂ－Ａ発現細胞株の培養シードトレインを用いて、標準的又は強化された供給戦略を使用し、バイオリアクター内に産生培養物を準備した。１×ＫＯ及び親ＣＨＯ細胞株の成長及び生存率を図４Ａ及び図４Ｃに示した。１×ＫＯ細胞株の力価（図４Ｂ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等又はそれ以上であった。
【0269】
実施例４：３－リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株の細胞成長
３種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（３×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長及びｍＡｂ－Ｂの発現に及ぼす影響を評価した。３×ＫＯ細胞株の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較した。ｍＡｂ－Ｂを発現させる３×ＫＯ細胞株の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）を図５Ａに示す。力価及び比生産性（Ｑｐ）をそれぞれ図５Ｂ及び５Ｃに示す。
３種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（３×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長及びｍＡｂ－Ｂの発現に及ぼす影響を評価した。３×ＫＯ細胞株の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較した。ｍＡｂ－Ｂを発現させる３×ＫＯ細胞株の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）を図５Ａに示す。力価及び比生産性（Ｑｐ）をそれぞれ図５Ｂ及び５Ｃに示す。
【0270】
実施例５：７－リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株の細胞成長
７種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（７×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。７×ＫＯ細胞の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較したところ、７×ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図６Ａ）。７×ＫＯ宿主の生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図６Ｂ及び６Ｃに示す。
７種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（７×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。７×ＫＯ細胞の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較したところ、７×ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図６Ａ）。７×ＫＯ宿主の生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図６Ｂ及び６Ｃに示す。
【0271】
実施例６：７×ノックアウトＣＨＯ細胞株における３つの異なる抗体の産生
７×ＫＯが３つの異なる抗体の発現に及ぼす影響も評価した。３つの異なる抗体に対する７×ＫＯ細胞株の成長（図７Ａ）、力価（図７Ｂ）、及び比生産性（図７Ｃ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等又はそれ以上であった。
７×ＫＯが３つの異なる抗体の発現に及ぼす影響も評価した。３つの異なる抗体に対する７×ＫＯ細胞株の成長（図７Ａ）、力価（図７Ｂ）、及び比生産性（図７Ｃ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等又はそれ以上であった。
【0272】
実施例７：８－リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株の細胞成長
８種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（８×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。Ｂａ×Ｂａｋ ＫＯ宿主及び８×ＫＯ細胞株の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較したところ、８×ＫＯ及びＢａ×Ｂａｋ ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図８Ａ）。８×ＫＯ宿主及びＢａ×Ｂａｋ ＫＯ宿主の生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図８Ｂ及び８Ｃに示す。
８種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（８×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。Ｂａ×Ｂａｋ ＫＯ宿主及び８×ＫＯ細胞株の細胞成長を親ＣＨＯ細胞株と比較したところ、８×ＫＯ及びＢａ×Ｂａｋ ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図８Ａ）。８×ＫＯ宿主及びＢａ×Ｂａｋ ＫＯ宿主の生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図８Ｂ及び８Ｃに示す。
【0273】
実施例８：１２－リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株の細胞成長
１２種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（１２×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。１２×ＫＯ細胞株の１３日目（Ｄ１３）の細胞成長を、親ＣＨＯ細胞株、３×ＫＯ宿主、及び７×ＫＯ宿主を比較したところ、１２×ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図９Ａ）。１２×ＫＯ宿主のＤ１３生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図９Ｂ及び９Ｃに示す。
１２種のリパーゼ／エステラーゼのノックアウト（１２×ＫＯ）がＣＨＯ細胞株の成長に及ぼす影響を評価した。１２×ＫＯ細胞株の１３日目（Ｄ１３）の細胞成長を、親ＣＨＯ細胞株、３×ＫＯ宿主、及び７×ＫＯ宿主を比較したところ、１２×ＫＯ細胞宿主の成長（生細胞数の積分値、ＩＶＣＣとして表される）が、親ＣＨＯ細胞株と同等であることを示した（図９Ａ）。１２×ＫＯ宿主のＤ１３生存率及び乳酸蓄積をそれぞれ図９Ｂ及び９Ｃに示す。
【0274】
実施例９：７×ノックアウトＣＨＯ細胞株におけるｍＡｂ－２の産生
７×ＫＯがｍＡｂ－２の発現に及ぼす影響も評価した。ｍＡｂ－２に対する７×ＫＯ細胞株の平均的なＤ１０力価（図１０Ａ）、Ｄ１０及びＤ１４の成長（図１０Ｂ）、Ｄ１０の比生産性（図１０Ｃ）、並びにＤ１４の乳酸蓄積（図１０Ｄ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等であった。
７×ＫＯがｍＡｂ－２の発現に及ぼす影響も評価した。ｍＡｂ－２に対する７×ＫＯ細胞株の平均的なＤ１０力価（図１０Ａ）、Ｄ１０及びＤ１４の成長（図１０Ｂ）、Ｄ１０の比生産性（図１０Ｃ）、並びにＤ１４の乳酸蓄積（図１０Ｄ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等であった。
【0275】
実施例１０：７×ノックアウトＣＨＯ細胞株におけるｍＡｂ－１の産生
７×ＫＯがｍＡｂ－１の発現に及ぼす影響も評価した。ｍＡｂ－２に対する７×ＫＯ細胞株の力価（図１１Ａ）、成長（図１１Ｂ）、及び比生産性（図１１Ｃ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等であった。
７×ＫＯがｍＡｂ－１の発現に及ぼす影響も評価した。ｍＡｂ－２に対する７×ＫＯ細胞株の力価（図１１Ａ）、成長（図１１Ｂ）、及び比生産性（図１１Ｃ）は、親ＣＨＯ宿主細胞と同等であった。
【0276】
実施例１１：７×リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株におけるＰＳ２０分解
ｍＡｂ－Ｂ産生細胞株で、７種の（７×ＫＯ）リパーゼ／エステラーゼノックアウトがＰＳ２０分解に及ぼす影響を評価した。これらの細胞株は、７×ＫＯ ＣＨＯ宿主（図３）をトランスフェクトしてｍＡｂ－Ｂを産生することにより生成された。バイオリアクター中で細胞を培養した後、アフィニティ及びポリッシングクロマトグラフィー工程を通じて細胞培養採取物を処理した。７×ＫＯリパーゼ細胞株では，下流処理の最後に得られる精製材料において、親ＣＨＯ細胞株と比較して、ＰＳ２０分解が６１％減少した（図１２）。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
ｍＡｂ－Ｂ産生細胞株で、７種の（７×ＫＯ）リパーゼ／エステラーゼノックアウトがＰＳ２０分解に及ぼす影響を評価した。これらの細胞株は、７×ＫＯ ＣＨＯ宿主（図３）をトランスフェクトしてｍＡｂ－Ｂを産生することにより生成された。バイオリアクター中で細胞を培養した後、アフィニティ及びポリッシングクロマトグラフィー工程を通じて細胞培養採取物を処理した。７×ＫＯリパーゼ細胞株では，下流処理の最後に得られる精製材料において、親ＣＨＯ細胞株と比較して、ＰＳ２０分解が６１％減少した（図１２）。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
【0277】
実施例１２：組換えＬＩＰＡ、ＡＳＡＨ１、ＬＰＬ、ＰＰＴ１、ＬＰＬＡ２、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥの特性評価
これまでのＰＳ加水分解酵素の報告やトリグリセリドとポリソルベートの構造の類似性を考慮し、ＬＩＰＡ、ＡＳＡＨ１、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１を選択して、ポリソルベート加水分解酵素の分解特性をより詳細に評価した。ＣＨＯ ＬＩＰＡ、ＡＳＡＨ１、ＰＰＴ１、ＬＰＬＡ２、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥは、ＣＨＯ細胞中のＨｉｓタグコンストラクトとして発現し、方法のセクションに記載するように精製される。各酵素のＳＤＳ－ＰＡＧＥを図１３に示す。すべての酵素は、インタクト質量ＭＳによって目的のタンパク質であることが確認された（データは示さず）。また、組換えヒトＬＰＬ（ｒｈＬＰＬ）は商業的な供給源から購入したのに対し、試験した他のすべての酵素はＣ． ｇｒｉｓｅｕｓ由来であることも言及すべきである。
これまでのＰＳ加水分解酵素の報告やトリグリセリドとポリソルベートの構造の類似性を考慮し、ＬＩＰＡ、ＡＳＡＨ１、ＬＰＬ、及びＰＰＴ１を選択して、ポリソルベート加水分解酵素の分解特性をより詳細に評価した。ＣＨＯ ＬＩＰＡ、ＡＳＡＨ１、ＰＰＴ１、ＬＰＬＡ２、ＨＡＣＨ、ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、ＳＭＰＤ１、ＣＥＳ１、ＰＬＡ１Ａ、及びＳＩＡＥは、ＣＨＯ細胞中のＨｉｓタグコンストラクトとして発現し、方法のセクションに記載するように精製される。各酵素のＳＤＳ－ＰＡＧＥを図１３に示す。すべての酵素は、インタクト質量ＭＳによって目的のタンパク質であることが確認された（データは示さず）。また、組換えヒトＬＰＬ（ｒｈＬＰＬ）は商業的な供給源から購入したのに対し、試験した他のすべての酵素はＣ． ｇｒｉｓｅｕｓ由来であることも言及すべきである。
【0278】
これらの酵素を、ポリソルベートを分解する能力についてさらに特性評価した。各酵素を、ポリソルベート含有ｍＡｂ製剤にスパイクした。時間の関数としてポリソルベート濃度を測定することによって、酵素活性を測定した。最終的に、ＰＰＴ１、ＬＩＰＡ、及びｒｈＬＰＬ（それぞれ１０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、及び０．６μｇ／ｍＬ）は、試験した時間枠、１０～１５時間以内にポリソルベートを分解できることが示された一方、ＡＳＡＨ１（２．５μｇ／ｍＬ）は図１４ａに示すように測定できる分解を示さなかった。また、ＨＡＣＨ、ＬＹＰＬＡ１、ＣＥＳ－Ｂ１Ｌ、及びＬＰＬＡ２（それぞれ５μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、及び０．５μｇ／ｍＬ）は、製剤バッファーの溶液中でポリソルベートを分解できることも示された（図１４ｂ）。さらなる加水分解酵素のセット、ＰＬＡ１Ａ、ＳＩＡＥ、ＣＥＳ１、及びＳＭＰＤ１（それぞれ３１μｇ／ｍＬ、７０μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、及び５２μｇ／ｍＬ）も製剤バッファーの溶液中でポリソルベートを分解できたが、ポリソルベートを分解するためには、これらの組換え発現酵素をより高濃度にする必要があった（図１４ｃ）。
【0279】
実施例１３：さらなる７×及び１２×リパーゼ／エステラーゼノックアウトＣＨＯ細胞株におけるＰＳ２０分解
ＣＨＯ細胞株中の７種（７×ＫＯ）及び１２種（１２×ＫＯ）の遺伝子をノックアウトすることがＰＳ２０分解に及ぼす影響を、４つのさらなるｍＡｂ産生細胞株において評価した。これらの細胞株を、７×ＫＯ又は１２×ＫＯ ＣＨＯ宿主（図３）をトランスフェクトして、目的のｍＡｂを産生することによって作製した。７×ＫＯの効果をｍＡｂ Ｗ細胞株及びｍＡｂ Ｘ細胞株で、１２×ＫＯの効果をｍＡｂ Ｙ細胞株及びとｍＡｂ Ｚ細胞株で試験した。バイオリアクター中細胞を培養した後、細胞培養採取物を、アフィニティクロマトグラフィー及びポリッシングクロマトグラフィーの工程を通じて処理した。いずれの場合も、精製終了時に生成された材料は、遺伝子をノックアウトしていないコントロール細胞株に対して、７×ＫＯ細胞株及び１２×ＫＯ細胞株のＰＳ２０分解に対する酵素活性が低下していた（図１５）。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
ＣＨＯ細胞株中の７種（７×ＫＯ）及び１２種（１２×ＫＯ）の遺伝子をノックアウトすることがＰＳ２０分解に及ぼす影響を、４つのさらなるｍＡｂ産生細胞株において評価した。これらの細胞株を、７×ＫＯ又は１２×ＫＯ ＣＨＯ宿主（図３）をトランスフェクトして、目的のｍＡｂを産生することによって作製した。７×ＫＯの効果をｍＡｂ Ｗ細胞株及びｍＡｂ Ｘ細胞株で、１２×ＫＯの効果をｍＡｂ Ｙ細胞株及びとｍＡｂ Ｚ細胞株で試験した。バイオリアクター中細胞を培養した後、細胞培養採取物を、アフィニティクロマトグラフィー及びポリッシングクロマトグラフィーの工程を通じて処理した。いずれの場合も、精製終了時に生成された材料は、遺伝子をノックアウトしていないコントロール細胞株に対して、７×ＫＯ細胞株及び１２×ＫＯ細胞株のＰＳ２０分解に対する酵素活性が低下していた（図１５）。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
【0280】
実施例１４：複数のリパーゼ／エステラーゼ遺伝子がノックアウトされたｍＡｂ Ｔ細胞株におけるＰＳ２０分解
ｍＡｂ Ｔを産生する組換えＣＨＯ細胞株のリパーゼ／エステラーゼ遺伝子をノックアウトすることがＰＳ２０の分解に及ぼす影響を評価した。これらの細胞株を、組換えｍＡｂ Ｔ産生ＣＨＯ細胞株からリパーゼ／エステラーゼ遺伝子を連続してノックアウトすることにより産生した。１×ＫＯ（ＬＰＬＡ２）及び２×ＫＯ（ＬＰＬＡ２及びＬＰＬ）が細胞株に及ぼす影響を初めに試験した。その後、３×ＫＯ（ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡ）及び６×ＫＯ（ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＰＬＢＬ２）が細胞株に及ぼす影響を試験した。バイオリアクター中細胞を培養した後、細胞培養採取物を、アフィニティクロマトグラフィー及びポリッシングクロマトグラフィーの工程を通じて処理した。いずれの場合も、精製終了時に生成された材料は、遺伝子をノックアウトしていないコントロール親ｍＡｂ Ｔ細胞株に対して、１×ＫＯ細胞株、２×ＫＯ細胞株、３×ＫＯ細胞株、及び６×ＫＯ細胞株のＰＳ２０分解に対する酵素活性が低下していた（図１６）。３×ＫＯ細胞株及び６×ＫＯ細胞株を用いた２セット目の実験は、１×ＫＯ細胞株及び２×ＫＯ細胞株を用いた１セット目の実験よりも低いＰＳ２０分解活性を示した。まとめると、これらの結果は、ポリソルベート分解酵素を発現させる複数の関連リパーゼ／エステラーゼ遺伝子をノックアウトすることの潜在的な利点を示している。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
ｍＡｂ Ｔを産生する組換えＣＨＯ細胞株のリパーゼ／エステラーゼ遺伝子をノックアウトすることがＰＳ２０の分解に及ぼす影響を評価した。これらの細胞株を、組換えｍＡｂ Ｔ産生ＣＨＯ細胞株からリパーゼ／エステラーゼ遺伝子を連続してノックアウトすることにより産生した。１×ＫＯ（ＬＰＬＡ２）及び２×ＫＯ（ＬＰＬＡ２及びＬＰＬ）が細胞株に及ぼす影響を初めに試験した。その後、３×ＫＯ（ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、及びＬＩＰＡ）及び６×ＫＯ（ＬＰＬＡ２、ＬＰＬ、ＬＩＰＡ、ＰＰＴ１、ＰＬＤ３、及びＰＬＢＬ２）が細胞株に及ぼす影響を試験した。バイオリアクター中細胞を培養した後、細胞培養採取物を、アフィニティクロマトグラフィー及びポリッシングクロマトグラフィーの工程を通じて処理した。いずれの場合も、精製終了時に生成された材料は、遺伝子をノックアウトしていないコントロール親ｍＡｂ Ｔ細胞株に対して、１×ＫＯ細胞株、２×ＫＯ細胞株、３×ＫＯ細胞株、及び６×ＫＯ細胞株のＰＳ２０分解に対する酵素活性が低下していた（図１６）。３×ＫＯ細胞株及び６×ＫＯ細胞株を用いた２セット目の実験は、１×ＫＯ細胞株及び２×ＫＯ細胞株を用いた１セット目の実験よりも低いＰＳ２０分解活性を示した。まとめると、これらの結果は、ポリソルベート分解酵素を発現させる複数の関連リパーゼ／エステラーゼ遺伝子をノックアウトすることの潜在的な利点を示している。ＰＳ２０の分解の減少は、精製プロセスの大幅な最適化を可能にすることができ、さらに重要なことは、医薬品における粒子形成のリスクを低減することである。
【0281】
本出願を通して引用される、全ての図面及び全ての参考文献、特許及び公開された特許出願、並びに寄託番号の内容物は、参照により本明細書に明示的に援用されている。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A-4C】
【図5A-5C】
【図6A-6C】
【図7A-7C】
【図8A-8C】
【図9A-9C】
【図10A-10C】
【図11A-11C】
【図12】
【図13A-13K】
【図14A-14C】
【図15】
【図16】
【配列表】
【国際調査報告】