▶ フルオレッセンス ダイアグノシス（シャンハイ） バイオテック カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-10
(54)【発明の名称】蛍光染料及びその製造方法と使用
(51)【国際特許分類】
C09B 55/00 20060101AFI20230428BHJP
C07D 233/70 20060101ALI20230428BHJP
C07D 233/84 20060101ALI20230428BHJP
C07D 401/06 20060101ALI20230428BHJP
C07D 413/06 20060101ALI20230428BHJP
C07D 403/06 20060101ALI20230428BHJP
C07D 455/04 20060101ALI20230428BHJP
C12Q 1/68 20180101ALI20230428BHJP
C12N 15/115 20100101ALN20230428BHJP
【ＦＩ】
C09B55/00 A
C07D233/70
C07D233/84
C07D401/06
C07D413/06
C07D403/06
C07D455/04
C12Q1/68 ZNA
C12N15/115 Z
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022557983
(86)(22)【出願日】2021-03-16
(85)【翻訳文提出日】2022-11-17
(86)【国際出願番号】 CN2021080926
(87)【国際公開番号】W WO2021190346
(87)【国際公開日】2021-09-30
(31)【優先権主張番号】202010207772.8
(32)【優先日】2020-03-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521398149
【氏名又は名称】フルオレッセンス ダイアグノシス（シャンハイ） バイオテック カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100166729
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 幸子
(72)【発明者】
【氏名】チャン ダーシェン
【テーマコード（参考）】
4B063
4C063
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QQ42
4B063QQ52
4B063QR35
4B063QR55
4B063QR56
4B063QS32
4B063QS34
4B063QS36
4B063QX01
4C063AA01
4C063BB03
4C063CC25
4C063CC29
4C063CC34
4C063CC54
4C063DD11
4C063DD12
4C063DD14
4C063DD25
4C063EE10
(57)【要約】
本発明は、蛍光染料及びその製造方法と使用であって、前記蛍光染料は、粘度応答に敏感かつ特異的であり、バックグラウンド蛍光が低いなどの利点を有し、更には、蛍光活性化発生型プローブとして、タンパク質、酵素又は核酸の蛍光標識、定量又は検出にも使用できる。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（I）で示される蛍光染料であって、【化1】
Ａｒは、アリーレン基又はヘテロアリーレン基であり、Ａｒにおける水素原子はそれぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されてもよく、Ｄ－は、ＨＯ－又はＮ（Ｘ１）（Ｘ２）－であり、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル基又は変性アルキル基から選択され、Ｘ１、Ｘ２は互いに結合して、Ｎ原子と共に脂肪族複素環を形成してもよく、Ｘ１、Ｘ２は独立して、Ａｒと脂肪族複素環を形成してもよく、
Ｙは、Ｏ又はＳであり、
Ｒ１は、水素又はアルキル基であり、
Ｒ２は、ハロゲン原子、－ＯＨ又は－ＣＮであり、
ただし、前記「アルキル基」は、Ｃ１－Ｃ１０直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｃ１－Ｃ６直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、Ｃ１－Ｃ４直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、イソアミル基、１－エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、３－エチルペンチル基又は２，２，３－トリメチルブチルから選択されてもよく、
前記「変性アルキル基」はそれぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ１６直鎖又は分岐鎖のアルキル基の任意の炭素原子が、ハロゲン原子、－ＯＨ、－ＣＯ－、－Ｏ－、－ＣＮ、－ＳＯ３Ｈ、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基から選択される１種又は複数種の基で置換された基であり、あるいは、その炭素－炭素単結合が独立して炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合で置換されてもよく、
前記炭素原子の置換とは、炭素原子が、あるいは炭素原子がその上の水素原子と共に、対応する基で置換されることであり、
前記「ハロゲン原子」はそれぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、
前記「脂肪族複素環」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉのうちの１種又は複数種のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の４～１５員の単環又は多環脂肪族複素環であり、前記脂肪族複素環中にＳ原子を有する場合、－Ｓ－、－ＳＯ－又は－ＳＯ２－であり、前記脂肪族複素環は、ハロゲン原子、アルキル基、アリール又は変性アルキル基で置換されてもよく、
前記「アリーレン基」はそれぞれ独立して、５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のアリーレン基であり、
前記「ヘテロアリーレン基」はそれぞれ独立して、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉから選択される１種又は複数種のヘテロ原子を有する５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のヘテロアリーレン基であり、
前記「一級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨ２基であり、
前記「二級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨＲ’’基であり、
前記「三級アミノ基」は、Ｒ’ＮＲ’’Ｒ’’’基であり、
各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立して、一重結合、水素、アルキル基、アルキレン基であり、
前記「アルキレン基」は、Ｃ１－Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、Ｃ１－Ｃ７直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、Ｃ１－Ｃ５直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよい、蛍光染料。
【請求項2】
前記「変性アルキル基」は、－ＯＨ、－Ｏ－、－ＮＨ２、エチレングリコール単位（－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－）、－ＣＮ、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ－、Ｍｅ２Ｎ－、Ｅｔ２Ｎ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－Ｃ≡ＣＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ基から選択される１種又は複数種の基を有することを特徴とする請求項１に記載の蛍光染料。
【請求項3】
前記Ａｒは、下式（II－１）～（II－７）から選択される構造であることを特徴とする請求項１に記載の蛍光染料。【化2】
【請求項4】
前記式（Ｉ）で示される化合物は、下式化合物から選択されることを特徴とする請求項１に記載の蛍光染料。【化3】
【請求項5】
請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料を製造する方法であって、式（ａ）化合物と式（ｂ）化合物がアルドール縮合反応を行う工程を含むことを特徴とする製造方法。【化4】
【請求項6】
疾患の診断方法用ではない使用であって、請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出のための使用。
【請求項7】
請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用。
【請求項8】
請求項１～４のいずれか１項に記載の蛍光染料を含む蛍光活性化発生型プローブ。
【請求項9】
疾患の診断方法用ではない使用であって、請求項８に記載の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出のための使用。
【請求項10】
請求項８に記載の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、蛍光染料の技術分野に関し、詳しくは、粘度応答性で、バックグラウンド蛍光の低い蛍光染料及びその製造方法と使用に関する。
【背景技術】
【0002】
蛍光タンパク質の発色団は主に、イミダゾリノン系染料であり、この系の染料は、比較的良い生体適合性を有すると同時に、光安定性が良好で、蛍光性質が調整可能であるなどの利点を有する。研究では、この系の染料が１種の分子ローターであり、その蛍光性質は粘度変化に応じて変化し、光を照射して励起された後、遊離状態の分子ローターは、励起状態の分子内の歪みによって、励起状態エネルギーを非放射の形で放出する。分子が粘度の比較的大きい又は比較的剛性である環境にある場合には、励起状態の分子内の歪みが制限され、励起状態エネルギーは主に放射発光の形で放出し、蛍光が強まる性質を示すことを見出した。したがって、分子ローターは微環境の変化の検出などによく利用される。
【0003】
現在、分子ローターの分子内の歪みの制限による発光は、粘度測定に用いられる他、蛍光センサーの構築、タンパク質の標識、核酸の標識などにも広く応用されている。例えば、ＤＣＶＪがＢＳＡなどのタンパク質と結合した後、分子ローターの励起状態の分子内の歪みが制限され、励起状態エネルギーを放射発光の形で放出し、蛍光活性化を示すことによって、標的タンパク質の検出、定量などに利用される。チアゾールオレンジなどの染料はＤＮＡ、ＲＮＡと結合した後、分子立体配座が制限されることで、蛍光を発生することによって、ＤＮＡ、ＲＮＡの無洗浄標識と検出に利用される。ＤＨＢＩを標的分子として、ＳＥＬＥＸによってスクリーニングしてそれと特異的に結合できるアプタマーを得て、蛍光アプタマーを構築し、天然蛍光ＲＮＡがないという課題を解決し、蛍光ＲＮＡの構築が可能となった。マラカイトグリーンなどを標的分子として、ファージディスプレイ技術によって、マラカイトグリーン誘導体と特異的に結合し蛍光を活性化することができる一本鎖抗体を得て、細胞膜タンパク質の標識に利用される。ＢＯＤＩＰＹなどの分子ローターは、アミロイドタンパク質、ｔｕａタンパク質と結合し蛍光を発生することによって、アルツハイマー病、パーキンソン病などの疾患の研究などに利用される。
【0004】
しかし、完全に蛍光タンパク質発色団に由来するイミダゾリノン系分子ローターの種類が非常に限られているが、有機合成方法によって改造することで、イミダゾリノンのスペクトル範囲を極めて大幅に拡大すると同時に、他の性質、例えば、光安定性、油水分配係数などを効果的に調整できる。しかし、現状では、この方法で得られる分子ローターは、普遍的に蛍光バックグラウンドが高い欠点を有するため、検出の信号対雑音比が比較的低いことから、サンプル量が少なく、成分が複雑で、及び基質の存在量が比較的低いサンプル類の検出と標識に応用し難い。したがって、バックグラウンド蛍光が低いイミダゾリノン系分子ローターの開発が必需であり、これによってこの種の分子ローターの使用を拡大することができる。
【発明の概要】
【0005】
本発明の目的は、粘度応答性を有し、バックグラウンド蛍光の低い蛍光染料を提供することであって、この種の分子ローターの粘度応答性の発現は、１０－５ｍｏｌの条件で、グリセリンでの蛍光強度とメタノールでの蛍光強度との比が１０よりも大きい。
【0006】
本発明の一側面では、式（I）で示される蛍光染料を提供することである。
【0007】
【化1】
【0008】
式中：
Ａｒは、アリーレン基又はヘテロアリーレン基であり、Ａｒにおける水素原子はそれぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されてもよく、Ｄ－は、ＨＯ－又はＮ（Ｘ１）（Ｘ２）－であり、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル基又は変性アルキル基から選択され、Ｘ１、Ｘ２は互いに結合して、Ｎ原子と共に脂肪族複素環を形成してもよく、Ｘ１、Ｘ２は独立して、Ａｒと脂肪族複素環を形成してもよく、
Ｙは、Ｏ又はＳであり、
Ｒ１は、水素又はアルキル基であり、
Ｒ２は、ハロゲン原子、－ＯＨ又は－ＣＮであり、
ただし、前記「アルキル基」は、Ｃ１－Ｃ１０直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｃ１－Ｃ６直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、Ｃ１－Ｃ４直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、イソアミル基、１－エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、３－エチルペンチル基又は２，２，３－トリメチルブチルから選択されてもよく、
前記「変性アルキル基」はそれぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ１６直鎖又は分岐鎖のアルキル基的の任意の炭素原子が、ハロゲン原子、－ＯＨ、－ＣＯ－、－Ｏ－、－ＣＮ、－ＳＯ３Ｈ、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基から選択される１種又は複数種の基で置換された基であり、あるいは、その炭素－炭素単結合が独立して炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合で置換されてもよく、
前記炭素原子の置換とは、炭素原子が、あるいは炭素原子がその上の水素原子と共に、対応する基で置換されることであり、
前記「ハロゲン原子」はそれぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、
前記「脂肪族複素環」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉのうちの１種又は複数種のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の４～１５員の単環又は多環脂肪族複素環であり、前記脂肪族複素環中にＳ原子を有する場合、－Ｓ－、－ＳＯ－又は－ＳＯ２－であり、前記脂肪族複素環は、ハロゲン原子、アルキル基、アリール又は変性アルキル基で置換されてもよく、
前記「アリーレン基」はそれぞれ独立して、５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のアリーレン基であり、
前記「ヘテロアリーレン基」はそれぞれ独立して、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉから選択される１種又は複数種のヘテロ原子を有する５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のヘテロアリーレン基であり、
前記「一級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨ２基であり、
前記「二級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨＲ’’基であり、
前記「三級アミノ基」は、Ｒ’ＮＲ’’Ｒ’’’基であり、
各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立して、一重結合、水素、アルキル基、アルキレン基であり、
前記「アルキレン基」は、Ｃ１－Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、Ｃ１－Ｃ７直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、Ｃ１－Ｃ５直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、
好ましくは、前記「変性アルキル基」は、－ＯＨ、－Ｏ－、－ＮＨ２、エチレングリコール単位（－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－）、－ＣＮ、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ－、Ｍｅ２Ｎ－、Ｅｔ２Ｎ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－Ｃ≡ＣＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ基から選択される１種又は複数種の基を有し、
好ましくは、Ａｒは、下式（II－１）～（II－７）から選択される構造であり、
Ａｒは、アリーレン基又はヘテロアリーレン基であり、Ａｒにおける水素原子はそれぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されてもよく、Ｄ－は、ＨＯ－又はＮ（Ｘ１）（Ｘ２）－であり、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ独立して、水素、アルキル基又は変性アルキル基から選択され、Ｘ１、Ｘ２は互いに結合して、Ｎ原子と共に脂肪族複素環を形成してもよく、Ｘ１、Ｘ２は独立して、Ａｒと脂肪族複素環を形成してもよく、
Ｙは、Ｏ又はＳであり、
Ｒ１は、水素又はアルキル基であり、
Ｒ２は、ハロゲン原子、－ＯＨ又は－ＣＮであり、
ただし、前記「アルキル基」は、Ｃ１－Ｃ１０直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｃ１－Ｃ６直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、Ｃ１－Ｃ４直鎖又は分岐鎖のアルキル基であってもよく、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔ－ブチル基、ｓ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、イソアミル基、１－エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、１－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、１，２－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、２－エチルブチル基、ｎ－ヘプチル基、２－メチルヘキシル基、３－メチルヘキシル基、２，２－ジメチルペンチル基、３，３－ジメチルペンチル基、２，３－ジメチルペンチル基、２，４－ジメチルペンチル基、３－エチルペンチル基又は２，２，３－トリメチルブチルから選択されてもよく、
前記「変性アルキル基」はそれぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ１６直鎖又は分岐鎖のアルキル基的の任意の炭素原子が、ハロゲン原子、－ＯＨ、－ＣＯ－、－Ｏ－、－ＣＮ、－ＳＯ３Ｈ、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基から選択される１種又は複数種の基で置換された基であり、あるいは、その炭素－炭素単結合が独立して炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合で置換されてもよく、
前記炭素原子の置換とは、炭素原子が、あるいは炭素原子がその上の水素原子と共に、対応する基で置換されることであり、
前記「ハロゲン原子」はそれぞれ独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、
前記「脂肪族複素環」は、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉのうちの１種又は複数種のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の４～１５員の単環又は多環脂肪族複素環であり、前記脂肪族複素環中にＳ原子を有する場合、－Ｓ－、－ＳＯ－又は－ＳＯ２－であり、前記脂肪族複素環は、ハロゲン原子、アルキル基、アリール又は変性アルキル基で置換されてもよく、
前記「アリーレン基」はそれぞれ独立して、５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のアリーレン基であり、
前記「ヘテロアリーレン基」はそれぞれ独立して、環中にＮ、Ｏ、Ｓ又はＳｉから選択される１種又は複数種のヘテロ原子を有する５～１３員（６員又は１０員であってもよい）の単環又は二環又は縮合二環又は縮合多環のヘテロアリーレン基であり、
前記「一級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨ２基であり、
前記「二級アミノ基」は、Ｒ’ＮＨＲ’’基であり、
前記「三級アミノ基」は、Ｒ’ＮＲ’’Ｒ’’’基であり、
各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’はそれぞれ独立して、一重結合、水素、アルキル基、アルキレン基であり、
前記「アルキレン基」は、Ｃ１－Ｃ１０の直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であり、Ｃ１－Ｃ７直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、Ｃ１－Ｃ５直鎖又は分岐鎖のアルキレン基であってもよく、
好ましくは、前記「変性アルキル基」は、－ＯＨ、－Ｏ－、－ＮＨ２、エチレングリコール単位（－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－）、－ＣＮ、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－ＣＯ－、－ＳＯ２－Ｏ－、－ＳＯ－、Ｍｅ２Ｎ－、Ｅｔ２Ｎ－、－ＣＨ＝ＣＨ－、－Ｃ≡ＣＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、シアノ基から選択される１種又は複数種の基を有し、
好ましくは、Ａｒは、下式（II－１）～（II－７）から選択される構造であり、
【0009】
【化2】
【0010】
好ましくは、式（Ｉ）で示される化合物は、下式化合物から選択される。
【0011】
【化3】
【0012】
本発明の第２の側面では、上記の蛍光染料を製造する方法であって、式（ａ）化合物と式（ｂ）化合物がアルドール縮合反応を行う工程を含むことを特徴とする製造方法を提供することである。
【0013】
【化4】
【0014】
本発明の第３の側面では、疾患の診断方法用ではない使用であって、上記の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出のための使用を提供することである。
【0015】
本発明の第４の側面では、上記の蛍光染料の、粘度測定、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用を提供することである。
【0016】
本発明の第５の側面では、上記蛍光染料を含む蛍光活性化発生型プローブを提供することである。
【0017】
本発明の第６の側面では、疾患の診断方法用ではない使用であって、上記の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出のための使用を提供することである。
【0018】
本発明の第７の側面では、上記の蛍光活性化発生型プローブの、タンパク質蛍光標識、核酸蛍光標識、タンパク質の定量又は検出、あるいは、核酸の定量又は検出用の試薬を製造するための使用を提供することである。
【0019】
本発明による蛍光染料は、サンプルの粘度測定に使用でき、例えば、微視的粘度の測定に適する。別の側面の具体的な実施形態によれば、得られた蛍光染料は、対応する抗体、アプタマー又はアミロイドタンパク質などと特異的に結合でき、あるいはリガンド又は阻害剤を介してタンパク質タグ又は酵素と結合でき、一連の蛍光活性化発生型プローブを得て、タンパク質、酵素又は核酸の蛍光標識、定量又はモニタリングに使用される。
【図面の簡単な説明】
【0020】
【図1】分子ローターＩＶ－１（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図2】分子ローターＩＶ－２（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図3】分子ローターＩＶ－３（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図4】分子ローターＩＶ－４（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図5】分子ローターＩＶ－５（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図6】分子ローターＩＶ－６（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図7】分子ローターＩＶ－１７（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図8】分子ローターＩＶ－１８（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図9】分子ローターＩＶ－１９（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図10】分子ローターＩＶ－２０（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図11】分子ローターＩＶ－２１（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図12】分子ローターＩＶ－２２（１×１０－５Ｍ）の異なる粘度条件での蛍光放射強度図である。
【図13】分子ローターＩＶ－３９、ＩＶ－４０、ＩＶ－４４とＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－７、ＩＶ－８（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図14】分子ローターＩＶ－４１、ＩＶ－４３とＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図15】分子ローターＩＶ－４２とＩＶ－３６（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図16】分子ローターＩＶ－４５、ＩＶ－４６とＩＶ－３（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図17】分子ローターＩＶ－４７、ＩＶ－４８とＩＶ－２０（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図18】分子ローターＩＶ－４９、ＩＶ－５０とＩＶ－５（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図19】分子ローターＩＶ－５１とＩＶ－１（１×１０－６Ｍ）のＰＢＳでの蛍光バックグラウンド比較図である。
【図20】分子ローターＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２を細胞内ＲＮＡアプタマーの標識に使用し、そのうち、Ａは標的ＲＮＡアプタマーを発現した細胞であり、Ｂは標的ＲＮＡアプタマーを発現していない細胞である。
【図21】分子ローターＩＶ－２１とＩＶ－４１でｍＲＮＡを標識する検出フローチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【0021】
実施例１：
化合物IV－１
化合物IV－１
【0022】
【化5】
【0023】
化合物１（０．５０４ｇ、２ｍｍｏｌ）、ｐ－シアノベンズアルデヒド（０．６２６ｇ、５ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ丸形フラスコに取り、１００ｍｌのテトラヒドロフランを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で、無水塩化亜鉛（０．５４５ｇ、４ｍｍｏｌ）を加えて、系を８０℃条件でオイルバスで加熱還流し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、溶媒を真空除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して目的の生成物（０．２９２ｇ、４０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．０７（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ，２Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１３Ｆ２Ｎ３Ｏ２ ３６５．０９７６；ｆｏｕｎｄ ３６４．０９０２，[Ｍ－Ｈ]－。
【0024】
実施例２：
化合物IV－２
化合物IV－２
【0025】
【化6】
【0026】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４７５ｇ、６５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．０４（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．１０－８．０２（ｍ，２Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１３Ｆ２Ｎ３Ｏ２ ３６５．０９７６；ｆｏｕｎｄ ３６４．０９０３，[Ｍ－Ｈ]－。
【0027】
実施例３：
化合物IV－３
化合物IV－３
【0028】
【化7】
【0029】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２２１ｇ、３１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．９４（ｓ，１Ｈ），１０．１１（ｓ，１Ｈ），８．０７－８．０１（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１４Ｆ２Ｎ２Ｏ３ ３５６．０９７２；ｆｏｕｎｄ ３５５．０９０１，[Ｍ－Ｈ]－。
【0030】
実施例４：
化合物IV－４
化合物IV－４
【0031】
【化8】
【0032】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２０７ｇ、２９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．７０（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．９８－７．８９（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１４Ｆ２Ｎ２Ｏ３ ３５６．０９７２；ｆｏｕｎｄ ３５５．０９００，[Ｍ－Ｈ]－。
【0033】
実施例５：
化合物IV－５
化合物IV－５
【0034】
【化9】
【0035】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１８６ｇ、２６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９９－７．８６（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１３Ｆ３Ｎ２Ｏ２ ３５８．０９２９；ｆｏｕｎｄ ３５７．０８５６，[Ｍ－Ｈ]－。
【0036】
実施例６：
化合物IV－６
化合物IV－６
【0037】
【化10】
【0038】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２２２ｇ、３１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．０２（ｓ，１Ｈ），８．０９－８．０３（ｍ，２Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔｄ，Ｊ＝８．０，６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔｄ，Ｊ＝８．７、２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１３Ｆ３Ｎ２Ｏ２ ３５８．０９２９；ｆｏｕｎｄ ３５７．０８５７，[Ｍ－Ｈ]－。
【0039】
実施例７：
化合物２
化合物２
【0040】
【化11】
【0041】
化合物IV－５（０．７１６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ｔ－ブチルジメチルクロロシラン（０．４５０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、イミダゾール（０．２０４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、５０ｍｌの乾燥ジメチルホルムアミドを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で室温で撹拌し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、系を１５０ｍｌの水に注いで、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して化合物２（０．９２７ｇ、９８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９９－７．８６（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），０．２（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２５Ｈ２８Ｆ３Ｎ２Ｏ２Ｓｉ ４７３．２；ｆｏｕｎｄ ４７３．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0042】
化合物IV－７
【0043】
【化12】
【0044】
化合物２（０．４７３ｇ、１ｍｍｏｌ）、ローソン試薬（０．８０８ｇ、２ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ三つ口フラスコに取り、１００ｍｌのトルエンを加えて溶解し、アニリンを２滴加えて、Ａｒ保護条件でオイルバスで加熱還流し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、減圧で溶媒を除去し、残留物を５０ｍｌのジクロロメタンに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウム（０．３１３ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えて、Ａｒ保護条件で室温で撹拌し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して化合物IV－７（０．２０９ｇ、５６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９８－７．８６（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１３Ｆ３Ｎ２ＮａＯＳ ３９７．０５９８；ｆｏｕｎｄ ３９７．０５９７，[Ｍ＋Ｎａ]＋。
【0045】
実施例８：
化合物３
化合物３
【0046】
【化13】
【0047】
化合物２の合成手順に従った（０．９３２ｇ、９９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．１０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ，２Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），０．２９（ｓ，９Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ２８Ｆ２Ｎ３Ｏ２Ｓｉ ４８０．２；ｆｏｕｎｄ ４８０．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0048】
化合物IV－８
【0049】
【化14】
【0050】
化合物IV－７の合成手順に従った（０．３３２ｇ、４９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．００（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝７．８，２．１Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＨＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１３Ｆ２Ｎ３ＮａＯＳ ４０４．０６４５；ｆｏｕｎｄ ４０４．０６４６，[Ｍ＋Ｎａ]＋。
【0051】
実施例９：
化合物５
化合物５
【0052】
【化15】
【0053】
３－フルオロ－４－ヒドロキシ－ベンズアルデヒド（０．５６０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、４０ｍｌの無水エタノールを加えて溶解し、１０ｇの無水硫酸ナトリウム、５ｍｌの３３％メチルアミン水溶液を加えて、Ａｒ保護条件で室温で２４ｈ撹拌し、ろ過し、加圧で有機溶媒を除去し、残留物を１０ｍｌの無水エタノールに溶解し、化合物４（０．７９０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を加えて、Ａｒ保護条件で室温で一晩撹拌し、翌日にろ過し、冷エタノールで３回リンスして化合物５（０．７９６ｇ、８５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），３．０９（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１２Ｈ１０ＦＮ２Ｏ２ ２３４．２；ｆｏｕｎｄ ２３４．２，[Ｍ－Ｈ]－。
【0054】
化合物IV－９
【0055】
【化16】
【0056】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２３９ｇ、２１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｍ，１Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１３ＦＮ３Ｏ２ ３４６．０９９７；ｆｏｕｎｄ ３４６．０９９８，[Ｍ－Ｈ]－。
【0057】
実施例１０：
化合物６
化合物６
【0058】
【化17】
【0059】
化合物５の合成手順に従った（０．８１２ｇ、９１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），１．２３（ｑ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１１ＣｌＦＮ２Ｏ２ ２８１．０；ｆｏｕｎｄ ２８１．０，[Ｍ－Ｈ]－。
化合物IV－１０
化合物IV－１０
【0060】
【化18】
【0061】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２３９ｇ、２１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ７．８４（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），１．２３（ｑ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ１４ＣｌＦＮ３Ｏ２ ３９５．０８３７；ｆｏｕｎｄ ３９４．０７６４，[Ｍ－Ｈ]－。
【0062】
実施例１１：
化合物７
化合物７
【0063】
【化19】
【0064】
化合物５の合成手順に従った（０．８１２ｇ、９１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｍ，１Ｈ），１．１１（ｄ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１５Ｈ１５ＢｒＦＮ２Ｏ２ ３５３．０；ｆｏｕｎｄ ３．０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0065】
化合物IV－１１
【0066】
【化20】
【0067】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２０９ｇ、２２％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｍ，１Ｈ），１．１１（ｄ，６Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ１９ＢｒＦＮ３Ｏ２ ４６７．０６４５；ｆｏｕｎｄ ４６６．０５７２，[Ｍ－Ｈ]－。
【0068】
実施例１２：
化合物８
化合物８
【0069】
【化21】
【0070】
化合物５の合成手順に従った（０．８１２ｇ、９１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），１．４０（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１４Ｈ２１４ＦＩＮ２Ｏ２ ３８８．０；ｆｏｕｎｄ ３８８．０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0071】
化合物IV－１２
【0072】
【化22】
【0073】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），７．９８－７．８６（ｍ，３Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），１．４０（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ１７ＣｌＦＩＮ２Ｏ２ ５１０．０００７；ｆｏｕｎｄ ４０８．９９３６，[Ｍ－Ｈ]－。
【0074】
実施例１３：
化合物９
化合物９
【0075】
【化23】
【0076】
化合物５の合成手順に従った（０．７３２ｇ、９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１２Ｈ１０Ｃｌ２Ｎ２Ｏ３ ２８４．０；ｆｏｕｎｄ ２８３．０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0077】
化合物IV－１３
【0078】
【化24】
【0079】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．０７－８．０１（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），３．１０（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１３ＢｒＣｌ２Ｎ２Ｏ２ ４４９．９５３７；ｆｏｕｎｄ ４４８．９４５５，[Ｍ－Ｈ]－。
【0080】
実施例１４：
化合物１０
化合物１０
【0081】
【化25】
【0082】
化合物５の合成手順に従った（０．７３２ｇ、９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），３．０１（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１３Ｈ１３ＣｌＮ２Ｏ２ ２６４．１；ｆｏｕｎｄ ２６３．１，[Ｍ－Ｈ]－。
【0083】
化合物IV－１３
【0084】
【化26】
【0085】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），８．０７－８．０１（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ１３ＣｌＩＮ２Ｏ２ ４８６．９７１６；ｆｏｕｎｄ ４８６．９７１５，[Ｍ－Ｈ]－。
【0086】
実施例１５：
化合物１１
化合物１１
【0087】
【化27】
【0088】
化合物５の合成手順に従った（０．７３２ｇ、９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１２Ｈ１１ＢｒＮ２Ｏ２ ２９４．０；ｆｏｕｎｄ ２９３．０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0089】
化合物IV－１５
【0090】
【化28】
【0091】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．４０－７．２２（ｍ，３Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），３．０５（ｓ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１４ＢｒＣｌＮ２Ｏ２ ４１５．９９２７；ｆｏｕｎｄ ４１４．９８５４，[Ｍ－Ｈ]－。
【0092】
実施例１６：
化合物９
化合物９
【0093】
【化29】
【0094】
化合物５の合成手順に従った（０．７３２ｇ、９３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１１Ｈ８Ｃｌ２Ｎ２Ｏ２ ２７０．０；ｆｏｕｎｄ ２７１．０，[Ｍ＋Ｈ][Ｍ＋Ｈ]－。
【0095】
化合物IV－１６
【0096】
【化30】
【0097】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．０７－８．０１（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ１１ＢｒＣｌ２Ｎ２Ｏ２ ４３５．９３８１；ｆｏｕｎｄ ４３６．９４５９，[Ｍ＋Ｈ][Ｍ＋Ｈ]－。
【0098】
実施例１７：
化合物IV－１７
化合物IV－１７
【0099】
【化31】
【0100】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２８６ｇ、２８％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１－７．２２（ｍ，２Ｈ），７．２１－７．１７（ｍ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｓ，１Ｈ），６．８８－６．７３（ｍ，３Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４Ｎ３Ｏ３ ３７８．１８１８；ｆｏｕｎｄ ３７８．１８１９，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0101】
実施例１８：
化合物IV－１８
化合物IV－１８
【0102】
【化32】
【0103】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４８６ｇ、６０％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．４３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７１（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２３Ｎ４Ｏ２ ３８７．１８２１；ｆｏｕｎｄ ３８７．１８２２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0104】
実施例１９：
化合物IV－１９
化合物IV－１９
【0105】
【化33】
【0106】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２８６ｇ、３８％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔｄ，Ｊ＝８．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．７３（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２３Ｎ３Ｏ３Ｆ ３８０．１７７４；ｆｏｕｎｄ ３８０．１７７５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0107】
実施例２０：
化合物IV－２０
化合物IV－２０
【0108】
【化34】
【0109】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２２２ｇ、３０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：８．１４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．５９（ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４Ｎ３Ｏ３ ３７８．１８１８；ｆｏｕｎｄ ３７８．１８１９，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0110】
実施例２１：
化合物IV－２１
化合物IV－２１
【0111】
【化35】
【0112】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．３５２ｇ、５６％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０８－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．９８－７．９０（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２３Ｎ４Ｏ２ ３８７．１８２１；ｆｏｕｎｄ ３８７．１８２０，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0113】
実施例２２：
化合物IV－２２
化合物IV－２２
【0114】
【化36】
【0115】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２５２ｇ、３２％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２３ＦＮ３Ｏ２ ３８０．１７７４；ｆｏｕｎｄ ３８０．１７７５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0116】
実施例２３：
化合物１３
化合物１３
【0117】
【化37】
【0118】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２５２ｇ、３２％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．４３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７１（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２３Ｎ４Ｏ２ ３８７．２；ｆｏｕｎｄ ３８７．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0119】
化合物１４
【0120】
【化38】
【0121】
化合物１３（０．７７４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．２７６ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ丸形フラスコに取り、１００ｍｌのアセトニトリルを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で２ｍｌの臭化アリルを加えて、オイルバスで加熱還流し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、ろ過し、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して化合物１８（０．６７３ｇ、７９％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．４３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７１（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ２７Ｎ４Ｏ２ ４２７．２；ｆｏｕｎｄ ４２７．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0122】
化合物IV－１４
【0123】
【化39】
【0124】
化合物IV－７の合成手順に従った（０．１５２ｇ、７２％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．４３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７１（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｓ，２Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ２７Ｎ４ＯＳ ４４３．１９０６；ｆｏｕｎｄ ４４３．１９０５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0125】
実施例２４：
化合物１５
化合物１５
【0126】
【化40】
【0127】
化合物５の合成手順に従った（０．６９２ｇ、８２％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ ＨＨ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｓ，６Ｈ），１．６６（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１５Ｈ２１Ｎ４Ｏ ２７３．２；ｆｏｕｎｄ ２７３．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0128】
化合物１６
【0129】
【化41】
【0130】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４５２ｇ、３４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｍ，２Ｈ），７．６８－７．５０（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．０６（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ ＨＨ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｓ，６Ｈ），１．６６（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４ＦＮ４Ｏ ３７９．２；ｆｏｕｎｄ ３７９．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0131】
化合物IV－２４
【0132】
【化42】
【0133】
化合物IV－７の合成手順に従った（０．１５２ｇ、７２％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｍ，２Ｈ），７．６８－７．５０（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．０６（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ ＨＨ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｓ，６Ｈ），１．６６（ｍ，２Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４ＦＮ４Ｓ ３９５．１７０６；ｆｏｕｎｄ ３９５．１７０５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0134】
実施例２５：
化合物１７
化合物１７
【0135】
【化43】
【0136】
化合物５の合成手順に従った（０．８９２ｇ、８０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．６１（ｍ，４Ｈ），１．３２（ｍ，１２Ｈ），０．８９（ｔ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ３６Ｎ５Ｏ ３８６．３；ｆｏｕｎｄ ３８６．３，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0137】
化合物IV－２５
【0138】
【化44】
【0139】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４５２ｇ、３４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ８．４１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．４０－７．２２（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．８６（ｓ，１Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．６１（ｍ，４Ｈ），１．３２（ｍ，１２Ｈ），０．８９（ｔ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２９Ｈ３９ＣｌＮ５Ｏ ５０８．２８４３；ｆｏｕｎｄ ５０８．２８４２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0140】
実施例２６：
化合物１８
化合物１８
【0141】
【化45】
【0142】
化合物５の合成手順に従った（０．８１２ｇ、８１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．９３（ｓ，２Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１４Ｈ１７Ｎ６Ｏ ２８５．１；ｆｏｕｎｄ ２８５．１，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0143】
化合物IV－２５
【0144】
【化46】
【0145】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．３１２ｇ、２６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝８．０２（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｍ，３Ｈ），７．６８－７．５０（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．２４－７．０６（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），２．８２（ｓ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ２０ｌＮ６Ｏ ４９９．０７４３；ｆｏｕｎｄ ４９９．０７４２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0146】
実施例２７：
化合物１９
化合物１９
【0147】
【化47】
【0148】
化合物５の合成手順に従った（０．９３２ｇ、８５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝７．５９（ｓ，２Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，４Ｈ），３．０６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，４Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．８６－１．８２（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ２５Ｎ３Ｏ ３２３．２；ｆｏｕｎｄ ３２４．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0149】
化合物IV－２７
【0150】
【化48】
【0151】
化合物５の合成手順に従った（０．９３２ｇ、８５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝８．３１（ｄｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，４Ｈ），３．０６（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，４Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．８６－１．８２（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｓ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２８Ｈ２８Ｎ４Ｏ２ ４３６．２２６３；ｆｏｕｎｄ ４３７．２３４０，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0152】
実施例２８：
化合物２０
化合物２０
【0153】
【化49】
【0154】
化合物IV－２１（０．７９２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（０．４７６ｇ、２．５ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．３０３ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ丸形フラスコに取り、１００ｍｌ乾燥ジクロロメタンを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で室温で撹拌し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、系を２００ｍｌの水に注いで、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して化合物２７（０．８２２ｇ、７６％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０８－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．９８－７．９０（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７２（ｍ，２Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ３０Ｈ２９Ｎ４Ｏ４Ｓ ５４１．２；ｆｏｕｎｄ ５４１．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0155】
化合物IV－２８
【0156】
【化50】
【0157】
化合物２０（０．５４１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、亜硫酸ナトリウム（０．６３０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、２０ｍｌの無水ＤＭＦを加えて、Ａｒ保護条件で５０℃のオイルバスで２４ｈ加熱反応し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、減圧で溶媒を除去し、残留物を逆相クロマトグラフィーで分離して生成物（０．３０１ｇ、６０％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０８－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．９８－７．９０（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７２（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｍ，４Ｈ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２１Ｎ４Ｏ４Ｓ ４９９．１２８９；ｆｏｕｎｄ ４９９．１２８８，[Ｍ－Ｈ]－。
【0158】
実施例２９：
化合物IV－２９
化合物IV－２９
【0159】
【化51】
【0160】
化合物IV－２１（０．３８６ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、化合物３１（０．２６５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．３８２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．１８３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、３０ｍｌの無水ＤＭＦを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で室温で撹拌し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して生成物（０．４９０ｇ、８３％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０８－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．９８－７．９０（ｍ，３Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．８６－６．７２（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６－３．７（ｍ，１０Ｈ），３．５７（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．３８（ｓ，３Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ３２Ｈ３９Ｎ４Ｏ７Ｓ ５９１．２８１９；ｆｏｕｎｄ ５９１．２８２０，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0161】
実施例３０：
化合物２２
化合物２２
【0162】
【化52】
【0163】
化合物５の合成手順に従った（０．６１２ｇ、８７％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），４．１１（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ），２．９２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２５Ｎ４Ｏ３ ３４５．２；ｆｏｕｎｄ ３４５．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0164】
化合物IV－３０
【0165】
【化53】
【0166】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４２２ｇ、３６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），４．１１（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ），２．９２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２５Ｈ２８ＢｒＮ４Ｏ３ ５１１．１３４５；ｆｏｕｎｄ ５１１．１３４４，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0167】
実施例３１：
化合物２３
化合物２３
【0168】
【化54】
【0169】
化合物２３の合成手順に従った（０．９１２ｇ、８９％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔｄ，Ｊ＝８．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２０（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．７３（ｍ，２Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２９Ｈ２９ＦＮ３Ｏ４Ｓ ５３４．２；ｆｏｕｎｄ ５３４．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0170】
化合物IV－３１
【0171】
【化55】
【0172】
化合物２３（０．５３４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、３５ｍｌ ＤＭＦを加えて溶解し、慎重にＮａＮ３（０．１９５ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加えて、Ａｒ保護条件で５０℃のオイルバスで一晩加熱し、翌日に系を室温まで冷却し、１００ｍｌの水に注いで、ＤＣＭで３回抽出し、有機相を合併し、飽和食塩水で２回洗浄し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で溶媒を除去し、残留物を精製する必要がなく、そのまま次の反応に用いた。
【0173】
残留物を３０ｍｌ ＴＨＦに溶解し、Ｐｈ３Ｐ（０．５２４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、２ｍｌの水を加えて、Ａｒ保護条件で室温で一晩撹拌し、翌日に加圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して目的の生成物（０．３０１ｇ、７９％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔｄ，Ｊ＝８．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．７３（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４ＦＮ４Ｏ ３７９．１９３４；ｆｏｕｎｄ ３７９．１９３５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0174】
実施例３２：
化合物IV－３２
化合物IV－３２
【0175】
【化56】
【0176】
化合物２４（０．５３４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を１００ｍｌ丸形フラスコに取り、５０ｍｌのエタノールを加えて溶解し、３３％のジメチルアミン溶液を加えて、Ａｒ保護条件で９０℃オイルバスで加熱還流し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、系を室温に戻し、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離して目的の生成物（０．２７６ｇ、６８％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｔｄ，Ｊ＝８．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．７３（ｍ，２Ｈ），３．４７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ），２．４９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２８ＦＮ４Ｏ ４０７．２２４７；ｆｏｕｎｄ ４０７．２２４６，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0177】
実施例３３：
化合物２５
化合物２５
【0178】
【化57】
【0179】
化合物５の合成手順に従った（０．８４２ｇ、８９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝７．９７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），３．０７（ｓ，３Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ２４Ｎ３Ｏ ３１０．２；ｆｏｕｎｄ ３１０．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
化合物IV－３３
化合物IV－３３
【0180】
【化58】
【0181】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２２２ｇ、２１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝７．９７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），３．０７（ｓ，３Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ），１．３２（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２７Ｈ２６Ｎ４Ｏ ４２２．２１０７；ｆｏｕｎｄ ４２３．２１８６，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0182】
実施例３４：
化合物２６
化合物２６
【0183】
【化59】
【0184】
化合物５の合成手順に従った（０．７３２ｇ、８１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．３２，１．９３Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝８．３５Ｈｚ，１Ｈ），４．２３－４．３１（ｍ，２Ｈ），３．４０－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１５Ｈ１８Ｎ３Ｏ２ ２２７．１；ｆｏｕｎｄ ２２７．１，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0185】
化合物IV－３４
【0186】
【化60】
【0187】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２２２ｇ、２１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝７．９５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．３２，１．９３Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝８．３５Ｈｚ，１Ｈ），４．２３－４．３１（ｍ，２Ｈ），３．４０－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２０ＦＮ３Ｏ２ ３７７．１５４０；ｆｏｕｎｄ ３７８．１６８１，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0188】
実施例３５：
化合物２８
化合物２８
【0189】
【化61】
【0190】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．７３２ｇ、３９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０７（ｍ，４Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１５Ｎ４Ｏ３ ３５９．１；ｆｏｕｎｄ ３５９．１，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0191】
化合物IV－３５
【0192】
【化62】
【0193】
化合物２８（０．７１８ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、塩化第一スズ（０．７５８ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌ丸形フラスコに取り、１００ｍｌの酢酸エチルを加えて溶解し、Ａｒ保護条件で室温で撹拌し、ＴＬＣで測定し、反応終了後、系を１５０のｍｌ水に注いで、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーで分離・精製して目的の生成物（０．５８６ｇ、８９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９７（ｍ，４Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ１７Ｎ４Ｏ ３２９．１４０２；ｆｏｕｎｄ ３２９．１４０３，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0194】
実施例３６：
化合物２９
化合物２９
【0195】
【化63】
【0196】
化合物５の合成手順に従った（０．７５６ｇ、７４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１５（１Ｈ，ｓ），７．８１（２Ｈ，ｍ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ２１Ｎ３Ｏ２ ３２３．２；ｆｏｕｎｄ ３２４．２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
化合物IV－３６
化合物IV－３６
【0197】
【化64】
【0198】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２７２ｇ、２４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１５（１Ｈ，ｓ），７．８１（２Ｈ，ｍ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．４０－７．２２（ｍ，３Ｈ），７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），３．６０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ２５Ｎ３Ｏ３ ４２７．１８９６；ｆｏｕｎｄ ４２８．１９７４，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0199】
実施例３７：
化合物IV－３７
化合物IV－３７
【0200】
【化65】
【0201】
化合物１３の合成手順に従った（０．３２２ｇ、７９％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ８．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３－６．７２（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２５Ｈ２５ＦＮ３Ｏ２ ４１８．１９３１；ｆｏｕｎｄ ４１８．１９３２，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0202】
実施例３８：
化合物３０
化合物３０
【0203】
【化66】
【0204】
化合物５の合成手順に従った（０．８１６ｇ、８９％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ９．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），８．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１，２．５Ｈｚ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），３．１１（ｓ，６Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１７Ｈ１８Ｎ４Ｏ ２９４．１；ｆｏｕｎｄ ２９５．１，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0205】
化合物IV－３８
【0206】
【化67】
【0207】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２７２ｇ、２４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝９．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），８．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．４９（ｍ，１Ｈ），７．４０－７．２２（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．１，２．５Ｈｚ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），３．１１（ｓ，６Ｈ），３．０６（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２５Ｈ２１Ｎ５Ｏ ４０７．１８２１；ｆｏｕｎｄ ４０８．１８２５，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0208】
比較例１：
化合物IV－３９
化合物IV－３９
【0209】
【化68】
【0210】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．２７５ｇ、７５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．００（ｓ，１Ｈ），８．０８－８．０４（ｍ，２Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），７．９２－７．８７（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４５（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），３．２９（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１３Ｆ２Ｎ３Ｏ２ ３３９．０９５１；ｆｏｕｎｄ ３３９．０９５０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0211】
比較例２：
化合物IV－４０
化合物IV－４０
【0212】
【化69】
【0213】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．３２７ｇ、５５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．７０（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．９８－７．８９（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ１２Ｆ２Ｎ３Ｏ２ ３４０．０９０３；ｆｏｕｎｄ ３４０．０９０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0214】
比較例３：
化合物IV－４１
化合物IV－４１
【0215】
【化70】
【0216】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．３４２ｇ、４６％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ＝８．２１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５０－７．４３（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），３．８５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），３．１０（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２２Ｈ２４Ｎ３Ｏ２ ３６２．１８６９；ｆｏｕｎｄ ３６２．１８６８，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0217】
比較例４：
化合物IV－４２
化合物IV－４２
【0218】
【化71】
【0219】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．３１２ｇ、４３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ＝８．１５（１Ｈ，ｓ），８．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．８１（２Ｈ，ｍ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．５０－７．４３（ｍ，３Ｈ），７．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），３．６５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ）３．０３（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２６Ｈ２６Ｎ３Ｏ２ ４１２．２０２５；ｆｏｕｎｄ ４１２．２０２６，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0220】
比較例５：
化合物IV－４３
化合物IV－４３
【0221】
【化72】
【0222】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．４１２ｇ、４６％）。１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ＝８．７２（ｓ，２Ｈ），８．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ），７．５０－７．４３（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），３．７５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．０５（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ２１ｌＮ６Ｏ ３７３．１７７７；ｆｏｕｎｄ ３７３．１７７８，[Ｍ＋Ｈ]＋。
【0223】
比較例６
【0224】
【化73】
【0225】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１９２ｇ、３３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９６－７．９９（ｍ，４Ｈ），７．３３－７．３７（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１２Ｆ４Ｎ２Ｏ２ ３７６．０８３５；ｆｏｕｎｄ ３７６．０８３０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0226】
比較例７
【0227】
【化74】
【0228】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１９２ｇ、３３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９６－７．９９（ｍ，４Ｈ），７．３３－７．３７（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１２Ｆ４Ｎ２Ｏ２ ３７６．０８３５；ｆｏｕｎｄ ３７６．０８３０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0229】
比較例８
【0230】
【化75】
【0231】
化合物IV－１の合成手順に従った。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ １０．７０（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，２Ｈ），８．１５（ｓ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５４６．８６４７ ｆｏｕｎｄ（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１９Ｈ１２Ｂｒ２Ｃｌ２Ｎ２Ｏ３，[Ｍ＋Ｈ]＋５４６．８６４４）。
【0232】
比較例９
【0233】
【化76】
【0234】
化合物IV－１の合成手順に従った。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ １０．３８（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），８．１２（ｓ，２Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５０５．９８５５ ｆｏｕｎｄ（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２１Ｈ１９Ｂｒ２Ｎ３Ｏ２，[Ｍ＋Ｈ]＋５０５．９８９６）。
比較例１０
比較例１０
【0235】
【化77】
【0236】
化合物IV－１の合成手順に従った。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ｐｐｍ １０．３８（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），８．１１（ｓ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｓ，３Ｈ），１．１４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５３４．０１５４ ｆｏｕｎｄ（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２３Ｂｒ２Ｎ３Ｏ２，[Ｍ＋Ｈ]＋５３４．０２０９）。
【0237】
比較例１１
【0238】
【化78】
【0239】
化合物IV－１の合成手順に従った（０．１５６ｇ、１８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ １０．５２（ｓ，１Ｈ），８．０７－８．０１（ｍ，２Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），６．８７－６．８３（ｍ，２Ｈ），４．１２（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２１Ｆ３Ｎ２Ｏ４ ４５７．５３８１；ｆｏｕｎｄ ４５７．５３８０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0240】
比較例１２
【0241】
【化79】
【0242】
文献に開示された方法に従って合成した（ＪＡＣＳ，２０１８，１４０，７３８１－７３８４．）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ＝９．９，２．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．３８（ｓ，２Ｈ），３．５９－３．４３（ｍ ８Ｈ），３．４１－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．１３（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ），２．１２－１．１７（ｍ，１８Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ３７Ｈ４４ＣｌＦ３Ｎ４Ｏ６ ７３２．２９０１；ｆｏｕｎｄ ７３３．２９８０，[Ｍ－Ｈ]－。
【0243】
比較例１３
【0244】
【化80】
【0245】
文献に開示された方法に従って合成した（ＪＡＣＳ，２０１８，１４０，７３８１－７３８４．）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ） δ ８．１７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ＝９．９，２．８Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６Ｈｚ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．３８（ｓ，２Ｈ），３．５９－３．４３（ｍ ８Ｈ），３．４１－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．１３（ｍ，２Ｈ），３．０４（ｓ，６Ｈ），２．１２－１．１７（ｍ，１８Ｈ）．ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ Ｃ３８Ｈ４４ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ６ ７３９．２９４８；ｆｏｕｎｄ ７４０．３０２６，[Ｍ＋Ｈ]－。
【0246】
試験例１：
実施例１－３８で製造された蛍光染料ＩＶ－１－ＩＶ－３８（分子ローター）のそれぞれを、ジメチルスルホキシドに溶解して、濃度が１×１０－２Ｍの母液をそれぞれ調製し、各母液をそれぞれグリセリン及びメタノールに加えて、均一に混合し、最終濃度が１×１０－５Ｍの溶液をそれぞれ調製した。蛍光染料によって、順次に各蛍光染料の最大励起波長を用いて同じ条件でその蛍光放射スペクトルを測定し、結果は表１に示されたとおりであり、本発明の蛍光染料が粘度変化への応答が敏感であることを示している。
実施例１－３８で製造された蛍光染料ＩＶ－１－ＩＶ－３８（分子ローター）のそれぞれを、ジメチルスルホキシドに溶解して、濃度が１×１０－２Ｍの母液をそれぞれ調製し、各母液をそれぞれグリセリン及びメタノールに加えて、均一に混合し、最終濃度が１×１０－５Ｍの溶液をそれぞれ調製した。蛍光染料によって、順次に各蛍光染料の最大励起波長を用いて同じ条件でその蛍光放射スペクトルを測定し、結果は表１に示されたとおりであり、本発明の蛍光染料が粘度変化への応答が敏感であることを示している。
【0247】
【表1】
【0248】
試験例２：
分子ローターＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２を、ジエチレングリコール－グリセリン混合溶液に加えて、最終濃度が１×１０－５Ｍの溶液を調製し、４８０ｎｍで励起し、異なる粘度条件での蛍光放射スペクトルを図１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２に示し、同じ濃度の分子ローターの異なる粘度条件での蛍光強度が次第に増加することから、分子ローターの蛍光強度が環境粘度の増大につれて増すことが分かり、分子ローターは粘度反応が敏感であり、１種の分子ローターであることを証明している。
分子ローターＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２を、ジエチレングリコール－グリセリン混合溶液に加えて、最終濃度が１×１０－５Ｍの溶液を調製し、４８０ｎｍで励起し、異なる粘度条件での蛍光放射スペクトルを図１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２に示し、同じ濃度の分子ローターの異なる粘度条件での蛍光強度が次第に増加することから、分子ローターの蛍光強度が環境粘度の増大につれて増すことが分かり、分子ローターは粘度反応が敏感であり、１種の分子ローターであることを証明している。
【0249】
試験例３：
分子ローターＩＶ－３９、ＩＶ－４０、ＩＶ－４４とＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－７、ＩＶ－８とを、ＩＶ－４１、ＩＶ－４３とＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２とを、ＩＶ－４２とＩＶ－３６とを、ＩＶ－４５、ＩＶ－４６とＩＶ－３とを、ＩＶ－４７、ＩＶ－４８とＩＶ－２０とを、ＩＶ－４９、ＩＶ－５０とＩＶ－５とを、ＩＶ－５１とＩＶ－１とを、ＤＭＳＯに溶解し、１×１０－３Ｍの母液を調製し、上記母液のそれぞれを取ってＰＢＳ溶液に加えて、最終濃度が１×１０－６Ｍの溶液を調製し、各化合物の最大励起波長をそれぞれ用いて励起し、ＰＢＳでの蛍光強度を測定し、各組の最強蛍光を１００として各サンプルを正規化し、それぞれを図１３、図１４、図１５、図１６、図１７、図１８、図１９に示した。図１３、図１４、図１５の結果では、電子求引基上の芳香環中に置換がない分子ローターと比較して、本発明の電子求引基上の芳香環中にヒドロキシル基、シアノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子の置換を有する分子ローターが、より低いバックグラウンド蛍光を有することを示している。図１６、図１７の結果では、電子求引基上の芳香環中に複数の置換を有する分子ローターと比べて、単置換の分子ローターがより低いバックグラウンド蛍光を有することを示しており、その理由としては、多置換が電子求引基上の芳香構造の電子雲分布を変えることによって、蛍光バックグラウンドが向上すると考えられる。図１８、図１９の結果では、Ｒ１箇所がシンプルなアルキル基置換である場合、バックグラウンド蛍光がより低いことを示しており、その理由としては、Ｒ１の体積が比較的大きい、あるいは、変性アルキル基上のヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子）と電子求引基上の芳香環とが微弱な相互作用を有することで、当該箇所の二重結合の回転などの放射エネルギーを消耗しない挙動が制限されることによって、化合物の蛍光バックグラウンドが向上すると考えられる。
分子ローターＩＶ－３９、ＩＶ－４０、ＩＶ－４４とＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－７、ＩＶ－８とを、ＩＶ－４１、ＩＶ－４３とＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２とを、ＩＶ－４２とＩＶ－３６とを、ＩＶ－４５、ＩＶ－４６とＩＶ－３とを、ＩＶ－４７、ＩＶ－４８とＩＶ－２０とを、ＩＶ－４９、ＩＶ－５０とＩＶ－５とを、ＩＶ－５１とＩＶ－１とを、ＤＭＳＯに溶解し、１×１０－３Ｍの母液を調製し、上記母液のそれぞれを取ってＰＢＳ溶液に加えて、最終濃度が１×１０－６Ｍの溶液を調製し、各化合物の最大励起波長をそれぞれ用いて励起し、ＰＢＳでの蛍光強度を測定し、各組の最強蛍光を１００として各サンプルを正規化し、それぞれを図１３、図１４、図１５、図１６、図１７、図１８、図１９に示した。図１３、図１４、図１５の結果では、電子求引基上の芳香環中に置換がない分子ローターと比較して、本発明の電子求引基上の芳香環中にヒドロキシル基、シアノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子の置換を有する分子ローターが、より低いバックグラウンド蛍光を有することを示している。図１６、図１７の結果では、電子求引基上の芳香環中に複数の置換を有する分子ローターと比べて、単置換の分子ローターがより低いバックグラウンド蛍光を有することを示しており、その理由としては、多置換が電子求引基上の芳香構造の電子雲分布を変えることによって、蛍光バックグラウンドが向上すると考えられる。図１８、図１９の結果では、Ｒ１箇所がシンプルなアルキル基置換である場合、バックグラウンド蛍光がより低いことを示しており、その理由としては、Ｒ１の体積が比較的大きい、あるいは、変性アルキル基上のヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子）と電子求引基上の芳香環とが微弱な相互作用を有することで、当該箇所の二重結合の回転などの放射エネルギーを消耗しない挙動が制限されることによって、化合物の蛍光バックグラウンドが向上すると考えられる。
【0250】
試験例４：
化合物ＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２は、ＲＮＡアプタマー（ＵＵＧＣＣＡＵＧＵＧＵＡＵＧＵＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＵＣＣＣＡＣＡＵＡＣＵＣＵＧＡＵＧＡＵＣＣＵＵＣＧＧＧＡＵＣＡＵＵＣＡＵＧＧＣＡＡ）と特異的に結合し、結合後の化合物蛍光が顕著に活性化し、適切な波長の励起光に励起されて明るい蛍光を発光した。結合後の光学性質を表２に示した。化合物は、細胞内の当該アプタマーとも結合でき、当該ＲＮＡアプタマーを発現している細胞は、図２０Ａに示されるように、明るい蛍光を有するが、当該ＲＮＡアプタマーを発現していない細胞は、図２０Ｂに示されるように、蛍光がないことから、この一連の染料を核酸の標識に使用できることを証明している。
化合物ＩＶ－１、ＩＶ－２、ＩＶ－３、ＩＶ－４、ＩＶ－５、ＩＶ－６、ＩＶ－１７、ＩＶ－１８、ＩＶ－１９、ＩＶ－２０、ＩＶ－２１、ＩＶ－２２は、ＲＮＡアプタマー（ＵＵＧＣＣＡＵＧＵＧＵＡＵＧＵＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＵＣＣＣＡＣＡＵＡＣＵＣＵＧＡＵＧＡＵＣＣＵＵＣＧＧＧＡＵＣＡＵＵＣＡＵＧＧＣＡＡ）と特異的に結合し、結合後の化合物蛍光が顕著に活性化し、適切な波長の励起光に励起されて明るい蛍光を発光した。結合後の光学性質を表２に示した。化合物は、細胞内の当該アプタマーとも結合でき、当該ＲＮＡアプタマーを発現している細胞は、図２０Ａに示されるように、明るい蛍光を有するが、当該ＲＮＡアプタマーを発現していない細胞は、図２０Ｂに示されるように、蛍光がないことから、この一連の染料を核酸の標識に使用できることを証明している。
【0251】
【表2】
【0252】
注：蛍光量子収率は、ローダミン６Ｇを基準（ＱＹ＝０．９４）として、相対法を用いて測定された。
【0253】
試験例５：
ＲＮＡアプタマー（ＡＵＧＧＡＵＧＡＵＧＡＵＡＵＣＧＣＣＧＣＧＣＵＣＧＵＣＧＵＣＧＡＣＡＡＣＧＧＣＵＣＣＧＧＣＡＵＧＵＧＣＡＡＧＧＣＣＧＧＣＵＵＣＧＣＧＧＧＣＧＡＣＧＡＵＧＣＣＣＣＣＣＧＧＧＣＣＧＵＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＧＵＧＡＵＧＧＵＧＧＧＣＡＵＧＧＧＵＣＡＧＡＡＧＧＡＵＵＣＣＵＡＵＧＵＧＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＣＡＵＣＣＵＣＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＡＣＣＣＣＡＵＣＧＡＧＣＡＣＧＧＣＡＵＣＧＵＣＡＣＣＡＡＣＵＧＧＧＡＣＧＡＣＡＵＧＧＡＧＡＡＡＡＵＣＵＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＡＧＣＵＧＣＧＵＧＵＧＧＣＵＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＡＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＣＣＣＣＵＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＵＧＡＣＣＣＡＧＡＵＣＡＵＧＵＵＵＧＡＧＡＣＣＵＵＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡＵＧＵＡＣＧＵＵＧＣＵＡＵＣＣＡＧＧＣＵＧＵＧＣＵＡＵＣＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＵＣＵＧＧＣＣＧＵＡＣＣＡＣＵＧＧＣＡＵＣＧＵＧＡＵＧＧＡＣＵＣＣＧＧＵＧＡＣＧＧＧＧＵＣＡＣＣＣＡＣＡＣＵＧＵＧＣＣＣＡＵＣＵＡＣＧＡＧＧＧＧＵＡＵＧＣＣＣＵＣＣＣＣＣＡＵＧＣＣＡＵＣＣＵＧＣＧＵＣＵＧＧＡＣＣＵＧＧＣＵＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＵＧＡＣＵＧＡＣＵＡＣＣＵＣＡＵＧＡＡＧＡＵＣＣＵＣＡＣＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＵＡＣＡＧＣＵＵＣＡＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＡＧＣＧＧＧＡＡＡＵＣＧＵＧＣＧＵＧＡＣＡＵＵＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＵＧＵＧＣＵＡＣＧＵＣＧＣＣＣＵＧＧＡＣＵＵＣＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＵＧＧＣＣＡＣＧＧＣＵＧＣＵＵＣＣＡＧＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＧＡＧＡＡＧＡＧＣＵＡＣＧＡＧＣＵＧＣＣＵＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＵＣＡＵＣＡＣＣＡＵＵＧＧＣＡＡＵＧＡＧＣＧＧＵＵＣＣＧＣＵＧＣＣＣＵＧＡＧＧＣＡＣＵＣＵＵＣＣＡＧＣＣＵＵＣＣＵＵＣＣＵＧＧＧＣＡＵＧＧＡＧＵＣＣＵＧＵＧＧＣＡＵＣＣＡＣＧＡＡＡＣＵＡＣＣＵＵＣＡＡＣＵＣＣＡＵＣＡＵＧＡＡＧＵＧＵＧＡＣＧＵＧＧＡＣＡＵＣＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＡＡＣＡＣＡＧＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＵＧＵＡＣＣＣＵＧＧＣＡＵＵＧＣＣＧＡＣＡＧＧＡＵＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＵＣＡＣＵＧＣＣＣＵＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＡＵＧＡＡＧＡＵＣＡＡＧＡＵＣＡＵＵＧＣＵＣＣＵＣＣＵＧＡＧＣＧＣＡＡＧＵＡＣＵＣＣＧＵＧＵＧＧＡＵＣＧＧＣＧＧＣＵＣＣＡＵＣＣＵＧＧＣＣＵＣＧＣＵＧＵＣＣＡＣＣＵＵＣＣＡＧＣＡＧＡＵＧＵＧＧＡＵＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＵＡＵＧＡＣＧＡＧＵＣＣＧＧＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＣＣＡＣＣＧＣＡＡＡＵＧＣＵＵＣＵＡＧＣＡＣＵＣＧＣＵＡＧＡＧＣＡＵＧＧＵＵＡＡＧＣＵＵＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣ）で標識されたｍＲＮＡを持続的に発現している細胞骨格タンパク質の安定細胞株（２９３Ｔ／１７）と、対照細胞（２９３Ｔ／１７）とを用いて、通常の哺乳類細胞の培養条件（３７℃、５％二酸化炭素、１００％相対湿度）で、細胞コンフルエンスが９０％になるまで成長した後、消化して細胞を取り、８００ｒｐｍで遠心して、０．２μＭ ＩＶ－２１とＩＶ－４１分子を含むＰＢＳで細胞を再懸濁させて５分間インキュベートした後、流体測定を行い、測定結果は、図２１に示した。ＩＶ－２１分子は、標的ＲＮＡを発現している細胞株においてＡＣＴＢのｍＲＮＡを特異的に標識でき、かつ明らかなバックグラウンド蛍光がなく（図２１Ａ）、一方で、ＩＶ－４１分子のバックグラウンド蛍光がＩＶ－２１より高く、ＡＣＴＢを発現しているか否かを明確に区別することができない（図２１Ｂ）。
ＲＮＡアプタマー（ＡＵＧＧＡＵＧＡＵＧＡＵＡＵＣＧＣＣＧＣＧＣＵＣＧＵＣＧＵＣＧＡＣＡＡＣＧＧＣＵＣＣＧＧＣＡＵＧＵＧＣＡＡＧＧＣＣＧＧＣＵＵＣＧＣＧＧＧＣＧＡＣＧＡＵＧＣＣＣＣＣＣＧＧＧＣＣＧＵＣＵＵＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＧＵＧＡＵＧＧＵＧＧＧＣＡＵＧＧＧＵＣＡＧＡＡＧＧＡＵＵＣＣＵＡＵＧＵＧＧＧＣＧＡＣＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＧＧＣＡＵＣＣＵＣＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＡＣＣＣＣＡＵＣＧＡＧＣＡＣＧＧＣＡＵＣＧＵＣＡＣＣＡＡＣＵＧＧＧＡＣＧＡＣＡＵＧＧＡＧＡＡＡＡＵＣＵＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＣＵＵＣＵＡＣＡＡＵＧＡＧＣＵＧＣＧＵＧＵＧＧＣＵＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＡＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＣＣＣＣＵＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＵＧＡＣＣＣＡＧＡＵＣＡＵＧＵＵＵＧＡＧＡＣＣＵＵＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡＵＧＵＡＣＧＵＵＧＣＵＡＵＣＣＡＧＧＣＵＧＵＧＣＵＡＵＣＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＵＣＵＧＧＣＣＧＵＡＣＣＡＣＵＧＧＣＡＵＣＧＵＧＡＵＧＧＡＣＵＣＣＧＧＵＧＡＣＧＧＧＧＵＣＡＣＣＣＡＣＡＣＵＧＵＧＣＣＣＡＵＣＵＡＣＧＡＧＧＧＧＵＡＵＧＣＣＣＵＣＣＣＣＣＡＵＧＣＣＡＵＣＣＵＧＣＧＵＣＵＧＧＡＣＣＵＧＧＣＵＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＵＧＡＣＵＧＡＣＵＡＣＣＵＣＡＵＧＡＡＧＡＵＣＣＵＣＡＣＣＧＡＧＣＧＣＧＧＣＵＡＣＡＧＣＵＵＣＡＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＡＧＣＧＧＧＡＡＡＵＣＧＵＧＣＧＵＧＡＣＡＵＵＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＵＧＵＧＣＵＡＣＧＵＣＧＣＣＣＵＧＧＡＣＵＵＣＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＵＧＧＣＣＡＣＧＧＣＵＧＣＵＵＣＣＡＧＣＵＣＣＵＣＣＣＵＧＧＡＧＡＡＧＡＧＣＵＡＣＧＡＧＣＵＧＣＣＵＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＵＣＡＵＣＡＣＣＡＵＵＧＧＣＡＡＵＧＡＧＣＧＧＵＵＣＣＧＣＵＧＣＣＣＵＧＡＧＧＣＡＣＵＣＵＵＣＣＡＧＣＣＵＵＣＣＵＵＣＣＵＧＧＧＣＡＵＧＧＡＧＵＣＣＵＧＵＧＧＣＡＵＣＣＡＣＧＡＡＡＣＵＡＣＣＵＵＣＡＡＣＵＣＣＡＵＣＡＵＧＡＡＧＵＧＵＧＡＣＧＵＧＧＡＣＡＵＣＣＧＣＡＡＡＧＡＣＣＵＧＵＡＣＧＣＣＡＡＣＡＣＡＧＵＧＣＵＧＵＣＵＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＵＧＵＡＣＣＣＵＧＧＣＡＵＵＧＣＣＧＡＣＡＧＧＡＵＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＵＣＡＣＵＧＣＣＣＵＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＡＵＧＡＡＧＡＵＣＡＡＧＡＵＣＡＵＵＧＣＵＣＣＵＣＣＵＧＡＧＣＧＣＡＡＧＵＡＣＵＣＣＧＵＧＵＧＧＡＵＣＧＧＣＧＧＣＵＣＣＡＵＣＣＵＧＧＣＣＵＣＧＣＵＧＵＣＣＡＣＣＵＵＣＣＡＧＣＡＧＡＵＧＵＧＧＡＵＣＡＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＵＡＵＧＡＣＧＡＧＵＣＣＧＧＣＣＣＣＵＣＣＡＵＣＧＵＣＣＡＣＣＧＣＡＡＡＵＧＣＵＵＣＵＡＧＣＡＣＵＣＧＣＵＡＧＡＧＣＡＵＧＧＵＵＡＡＧＣＵＵＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＧＡＡＧＡＵＵＧＵＡＡＡＣＡＣＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣＧＧＣＧＧＡＣＡＣＵＵＣＣ）で標識されたｍＲＮＡを持続的に発現している細胞骨格タンパク質の安定細胞株（２９３Ｔ／１７）と、対照細胞（２９３Ｔ／１７）とを用いて、通常の哺乳類細胞の培養条件（３７℃、５％二酸化炭素、１００％相対湿度）で、細胞コンフルエンスが９０％になるまで成長した後、消化して細胞を取り、８００ｒｐｍで遠心して、０．２μＭ ＩＶ－２１とＩＶ－４１分子を含むＰＢＳで細胞を再懸濁させて５分間インキュベートした後、流体測定を行い、測定結果は、図２１に示した。ＩＶ－２１分子は、標的ＲＮＡを発現している細胞株においてＡＣＴＢのｍＲＮＡを特異的に標識でき、かつ明らかなバックグラウンド蛍光がなく（図２１Ａ）、一方で、ＩＶ－４１分子のバックグラウンド蛍光がＩＶ－２１より高く、ＡＣＴＢを発現しているか否かを明確に区別することができない（図２１Ｂ）。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【配列表】
【国際調査報告】