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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-10
(54)【発明の名称】スフィンゴシン１ホスフェート受容体モジュレーター
(51)【国際特許分類】
C07D 271/06 20060101AFI20230428BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230428BHJP
A61K 31/4245 20060101ALI20230428BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20230428BHJP
【ＦＩ】
C07D271/06 CSP
A61P43/00 111
A61K31/4245
A61K31/454
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022558050
(86)(22)【出願日】2021-03-25
(85)【翻訳文提出日】2022-11-25
(86)【国際出願番号】 US2021024179
(87)【国際公開番号】W WO2021195396
(87)【国際公開日】2021-09-30
(31)【優先権主張番号】63/001,073
(32)【優先日】2020-03-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/018,327
(32)【優先日】2020-04-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521440389
【氏名又は名称】レセプトス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー
【氏名又は名称原語表記】Ｒｅｃｅｐｔｏｓ ＬＬＣ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162695
【弁理士】
【氏名又は名称】釜平 双美
(74)【代理人】
【識別番号】100156155
【弁理士】
【氏名又は名称】水原 正弘
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】バケール，ロジャー
(72)【発明者】
【氏名】シュカーヤンツ，ジェフ
(72)【発明者】
【氏名】マルシーニ，モーリス
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC71
4C086GA07
4C086GA09
4C086GA12
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZC41
(57)【要約】
構造式（Ｉ）：
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供され、ここでＲは本明細書にて定義されるとおりである。かかる化合物は、スフィンゴシン－１－ホスフェート受容体のモジュレーターとして供し、この受容体の活性化が医学的に指示されている病態を治療するとの有用性を有する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
構造式（Ｉ）：【化1】
Ｒは、
アルキル；
アルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２；
アルカンジイル－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１；または
ヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＨまたはＣ１－４アルキルである］
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物。
【請求項2】
Ｒがアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
アルキルがメチル、エチル、イソプロピルまたはtert－ブチルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｒがアルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
Ｒ１およびＲ２が、独立して、水素またはメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項6】
Ｒがアルカンジイル－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
Ｒ１が水素またはメチルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒがヘテロシクリルアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項9】
ヘテロシクリルアルキルが－（ＣＨ２）－ヘテロサイクルである、請求項８に記載の化合物。
【請求項10】
化合物が、次の構造の一つを有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物である、請求項１に記載の化合物。【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
スフィンゴシン－１－ホスフェート受容体のモジュレーターが、その受容体の活性化が医学的に示される病態を治療するために提供される。
【背景技術】
【0002】
Ｓ１Ｐ１／ＥＤＧ１受容体はＧタンパク質結合受容体（ＧＰＣＲ）であり、内皮細胞分化遺伝子（ＥＤＧ）受容体ファミリーのメンバーである。ＥＤＧ受容体に対する内因性リガンドには、スフィンゴシン－１－ホスフェート（Ｓ１Ｐ）などのリゾリン脂質が含まれる。すべてのＧＰＣＲと同様に、該受容体がライゲートすると、Ｇタンパク質（アルファ、ベータおよびガンマ）の活性化を介して第２のメッセンジャーシグナルが伝搬される。低分子のＳ１Ｐ１アゴニストおよびアンタゴニストが開発されたことで、Ｓ１Ｐ１／Ｓ１Ｐ受容体のシグナル伝達系のいくつかの生理学的役割に関する知見が提供された。このために、Ｓ１Ｐ受容体は５つの亜型（すなわち、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５）に分けられ、これらの亜型は多種多様な組織で発現し、異なる細胞特性を示す。Ｓ１Ｐ１受容体の作動性は、リンパ球の輸送を阻害し、それらのリンパ球をリンパ節および他の第２リンパ組織に隔離する。このことは迅速かつ可逆的なリンパ球減少をもたらし、このことは、おそらくは、リンパ内皮細胞およびリンパ球それ自体の両方での受容体のライゲーションによるものである（Rosenら、Immunol. Rev., 195:160-177, 2003）。
【発明の概要】
【0003】
簡単に言えば、スフィンゴシン－１－ホスフェート受容体の活性化が医学的に指示されている病態を治療するための、そのモジュレーターが提供される。
１の実施態様において、構造式（Ｉ）：
［式中、Ｒは下記のとおりである］
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
１の実施態様において、構造式（Ｉ）：
【化1】
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
【発明を実施するための形態】
【0004】
明細書および添付した特許請求の範囲にて使用されるような「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」なる単数形は、文脈が明らかに他の指示をする場合を除いて、複数の形態を包含する。さらには、「含む」、「包含する」および「有する」なる語は、本明細書で使用される場合に、制約のない用語であり、付加的な要素または構成要素の存在を排除するものではない。
【0005】
本発明は、Ｓ１Ｐ受容体をモジュレートする化合物、ならびにそれらの化合物を製造および使用するための関連する生成物および方法と関連付けられる。Ｓ１Ｐ受容体は５つの亜型（すなわち、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５）に分けられ、その亜型は多種多様な組織において発現し、異なる細胞特異性を呈する。本明細書にて開示される化合物は１または複数のこれらの亜型をモジュレートする。１の実施態様において、該化合物は、スフィンゴシン－１－ホスフェート受容体の亜型１をモジュレートするために、「Ｓ１Ｐ１」モジュレーターである。もう一つ別の実施態様において、該化合物は、亜型１と、亜型５などのもう一つ別の亜型とをモジュレートする。本明細書にて使用される場合、「Ｓ１Ｐ１モジュレーター」は、Ｓ１Ｐ１亜型だけをモジュレートするか、Ｓ１Ｐ１亜型、ならびに１または複数の他の亜型をモジュレートする化合物を包含すると理解される。１の実施態様において、Ｓ１Ｐ１モジュレーターはＳ１Ｐ１亜型およびＳ１Ｐ５亜型の両方をモジュレートする。
【0006】
本明細書にて使用される場合、Ｓ１Ｐ１受容体の「モジュレーター」とは、対象に投与されると、該化合物が受容体それ自体に直接作用するか、または化合物の代謝物が受容体に作用するかのいずれかで、標的とする受容体との望ましいインテグレーションを提供する、化合物である。対象に投与されると、本発明の化合物は、Ｓ１Ｐ１受容体をシグナル伝達のために活性化することで、該受容体をモジュレートする。かかる化合物はまた、本明細書にて、「アゴニスト」または「Ｓ１Ｐ１アゴニスト」とも称される。かかるＳ１Ｐ１アゴニストはＳ１Ｐ１に対する作用に選択的であり得る。例えば、Ｓ１Ｐ１に対する作用に選択的な化合物は、Ｓ１Ｐ受容体ファミリーの他の亜型に対するよりも、Ｓ１Ｐ１に対してより低い濃度で作用する。
【0007】
受容体アゴニストは、オルトステリックまたはアロステリックのいずれかに分類することができ、本発明のＳ１Ｐ１アゴニストは、該化合物が受容体に作用するか、該化合物の代謝物が該受容体に作用するかのいずれかで両方の分類を包含する。特定の実施態様において、本発明の化合物はオルトステリックアゴニストである。オルトステリックアゴニストは、天然のリガンドの結合と有意に重なる、受容体での部位に結合し、天然のリガンドと受容体との鍵となる相互作用を再現する。オルトステリックアゴニストは天然のリガンドの分子機構と同様の分子機構によって受容体を活性化し、天然のリガンドと競合し、天然のリガンドについて競合的なアンタゴニストである薬理剤と競合的に拮抗するであろう。
【0008】
特定の他の実施態様において、本発明の化合物はアロステリックアゴニストである。アロステリックアゴニストは、天然のリガンドと部分的または全体的にも重ならない、ある程度有意な相互作用をもたらす、受容体の部位に結合する。アロステリックアゴニストは真のアゴニストであり、アロステリック増強剤ではない。結果として、アロステリックアゴニストは受容体のシグナル伝達だけを活性化し、天然のリガンドの最大下濃度を必要としない。アロステリックアゴニストは、オルトステリックリガンドと競合することが知られているアンタゴニストが非競合的な拮抗作用を示す場合に、同定され得る。アロステリックアゴニスト部位は受容体の変異形成によってもマッピングされ得る。
【0009】
１の実施態様において、構造式（Ｉ）：
［式中：
Ｒは、
アルキル；
アルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２；
アルカンジイル－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１；または
ヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＨまたはＣ１－４アルキルである］
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
【化2】
Ｒは、
アルキル；
アルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２；
アルカンジイル－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１；または
ヘテロシクリルアルキルであり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、ＨまたはＣ１－４アルキルである］
で示される、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
【0010】
式（Ｉ）にて使用される場合に、次の用語は以下の意義を有する。
「アルカンジイル」は、アルキル基から２個の水素原子を除去することで誘導されるメチレン（－ＣＨ２－）などの二価の基を意味する。従って、本明細書で規定されるいずれのアルキル基も、２個の水素原子を除去し、二価の基とすることにより、アルカンジイルを構成する。
「アルカンジイル」は、アルキル基から２個の水素原子を除去することで誘導されるメチレン（－ＣＨ２－）などの二価の基を意味する。従って、本明細書で規定されるいずれのアルキル基も、２個の水素原子を除去し、二価の基とすることにより、アルカンジイルを構成する。
【0011】
「アルキル」は、直鎖、分岐鎖または環状アルキル基（シクロアルキル）の飽和または不飽和であって、１ないし約２０個の炭素原子を有し（Ｃ１－２０アルキル）、シクロアルキルの場合には３～２０個の炭素原子を有する、アルキル基を意味する。アルキルは、典型的には、１ないし１２個の炭素原子（Ｃ１－１２アルキル）で構成されるか、ある実施態様では、１ないし８個の炭素原子（Ｃ１－８アルキル）で構成されるか、ある実施態様では、１ないし４個の炭素原子（Ｃ１－４アルキル）で構成されるか、またはある実施態様では、１ないし３個の炭素原子（Ｃ１－３アルキル）で構成される。直鎖アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、およびｎ－オクチル基が含まれるが、これらに限定されない。分岐アルキル基の例には、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、ネオペンチル、イソペンチル、および２,２－ジメチルプロピル基が含まれるが、これらに限定されない。不飽和アルキルの例には、アルケニルおよびアルキニル基が含まれる。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、シクロアルキル基は３ないし８個の環員を有し、それに対して他の実施態様では、環炭素原子の数は、３ないし５個、３ないし６個、または３ないし７個の範囲にある。シクロアルキル基は、さらには、限定されないが、ノルボルニル、アダマンチル、ボルニル、カンフェニル、イソカンフェニル、およびカレニル基などの多環式シクロアルキル基、および限定されないが、デカリニル等などの縮合環を包含する。
【0012】
「アルケニル」は、上記した直鎖、分岐または環状アルキル基を意味し、ここで２個の炭素原子の間に少なくとも１個の二重結合が存在する。かくして、アルケニル基は２ないし約２０個の炭素原子を、典型的には２ないし１２個の炭素原子、またはいくつかの実施態様においては、２ないし８個の炭素原子を有する。例として、限定されないが、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ３）、ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、ビニル、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、およびヘキサジエニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0013】
「アルキニル」は、上記した直鎖、分岐または環状アルキル基を意味し、ここで２個の炭素原子の間に少なくとも１個の三重結合が存在する。かくして、アルキニル基は２ないし約２０個の炭素原子を、典型的には２ないし１２個の炭素原子、またはいくつかの実施態様においては、２ないし８個の炭素原子を有する。例として、限定されないが、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、－Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、－ＣＨ２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、および－ＣＨ２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）等が挙げられる。
【0014】
「ヘテロシクリル」は、３個またはそれ以上の環員を含有し、その中の１個または複数がヘテロ原子である、芳香族（ヘテロアリール）および非芳香族環化合物を意味する。いくつかの実施態様において、ヘテロシクリルは３ないし２０個の環員を含み、一方で他のそのような基は３ないし１５個の環員を有する。少なくとも１個の環はヘテロ原子を含有するが、多環系におけるすべての環がヘテロ原子を含有する必要はない。例えば、ジオキソラニル環およびベンズジオキソラニル環系（メチレンジオキシフェニル環系）は、共に本明細書でいうところのヘテロシクリル基である。Ｃ２－ヘテロシクリルと称されるヘテロシクリル基は、２個の炭素原子と３個のヘテロ原子を有する５員環、２個の炭素原子と４個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。同様に、Ｃ４－－ヘテロシクリルは、１個のヘテロ原子を有する５員環、２個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。炭素原子の数とヘテロ原子の数の和が、合計で環原子の総数と等しくなる。飽和ヘテロ環式環とは、不飽和の炭素原子を含有しないヘテロ環式環をいう。ヘテロ環式環には、芳香族基と非芳香族基の縮合した環種を含む、縮合環種が含まれる。それらはまた、キヌクリジルなどのヘテロ原子を含有する多環式環系を包含するが、これに限定されない。
【0015】
代表的なヘテロシクリルとして、ピロリジニル、フラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ジヒドロベンゾフラニル、インドリル、ジヒドロインドリル、アザインドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、アザベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イミダゾピリジニル、イソキサゾロピリジニル、チアナフタレニル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、キノキサリニル、およびキナゾリニル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【0016】
「ヘテロシクリルアルキル」は、アルキル基の水素または炭素結合が、上記したヘテロシクリル基との結合と置き換えられている、上記したアルキル基を意味する。
「ヘテロアリール」は、５個またはそれ以上の環員を含有し、その中の１個または複数がヘテロ原子である、芳香族ヘテロシクリルを意味する。Ｃ２－ヘテロアリールと称されるヘテロアリール基は、２個の炭素原子と３個のヘテロ原子を有する５員環、２個の炭素原子と４個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。同様に、Ｃ４－－ヘテロアリールは、１個のヘテロ原子を有する５員環、２個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。炭素原子の数とヘテロ原子の数の和が、合計で環原子の総数と等しくなる。
「ヘテロアリール」は、５個またはそれ以上の環員を含有し、その中の１個または複数がヘテロ原子である、芳香族ヘテロシクリルを意味する。Ｃ２－ヘテロアリールと称されるヘテロアリール基は、２個の炭素原子と３個のヘテロ原子を有する５員環、２個の炭素原子と４個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。同様に、Ｃ４－－ヘテロアリールは、１個のヘテロ原子を有する５員環、２個のヘテロ原子を有する６員環等とすることができる。炭素原子の数とヘテロ原子の数の和が、合計で環原子の総数と等しくなる。
【0017】
代表的なヘテロアリールとして、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、インドリル、アザインドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、アザベンズイミダゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イミダゾピリジニル、イソキサゾロピリジニル、チアナフタレニル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、キノキサリニル、およびキナゾリニル基が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールにはまた、少なくとも１個の環（必ずしもすべての環である必要はない）が芳香族である場合に、例えば、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリルおよび２,３－ジヒドロインドリルを含む、縮合環化合物が含まれる。
「ヘテロアリールアルキル」は、アルキル基の水素または炭素結合が上記したヘテロアリール基への結合と置き換えられている、上記したアルキル基を意味する。
「ヘテロアリールアルキル」は、アルキル基の水素または炭素結合が上記したヘテロアリール基への結合と置き換えられている、上記したアルキル基を意味する。
【0018】
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがアルキルであり、さらに具体的な実施態様において、アルキルがメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ－ブチルである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがアルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１およびＲ２が独立してＨまたはＣ１－４アルキルである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがアルカンジイル－ＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１およびＲ２が独立してＨまたはＣ１－４アルキルである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
【0019】
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがアルカンジイル－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１であり、Ｒ１がＨまたはＣ１－４アルキルである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがヘテロシクリルアルキルであり、ヘテロシクリルアルキルが－（ＣＨ２）１－３ヘテロサイクルであり、ヘテロサイクルが上記されるとおりである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
１の実施態様において、式（Ｉ）の構造を有する化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物であって、ここでＲがヘテロシクリルアルキルであり、ヘテロシクリルアルキルが－（ＣＨ２）１－３ヘテロサイクルであり、ヘテロサイクルが上記されるとおりである、化合物、あるいはその医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物が提供される。
【0020】
式（Ｉ）の代表的な化合物を表１に列挙する。
表１
表１
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【0021】
上記されるように、構造式（Ｉ）で示される化合物はまた、その医薬的に許容される塩、ホモログ、水和物または溶媒和物を包含する。
【0022】
当該分野において周知であるように、「塩」は、例えば、カルボン酸、スルホン酸またはアミンがイオン形態で対イオンと組み合わさった有機化合物を包含する。例えば、そのアニオン形態の酸は、金属カチオン、例えば、ナトリウム、カリウム等などのカチオンと塩を形成することができ、例えばＮＨ４
＋または種々のアミンのカチオンとアンモニウム塩（テトラメチルアンモニウムなどのテトラアルキルアンモニウム塩、およびトロメタナミン塩などのアルキルアンモニウム塩を含む）、または他のカチオン、例えばトリメチルスルホニウム等の他のカチオンと塩を形成し得る。「医薬的に許容される」または「薬理的に許容される」塩は、塩化物塩またはナトリウム塩などのヒトでの摂取が承認され、一般的に非毒性である、イオンから形成される塩である。「双性イオン」は、少なくとも２個のイオン化可能な基を有し、一方がアニオンを、他方がカチオンを形成し、それらが相互にバランスを取るのに供する、分子中にて形成され得るような内部塩である。例えば、グリシンなどのアミノ酸は双性イオンの形態で存在し得る。「双性イオン」は本明細書にて意図する範囲内にある塩である。本開示の化合物は塩の形態を取ってもよい。「塩」なる語は、本開示の化合物である、遊離酸または遊離塩基の付加塩を包含する。塩は「医薬的に許容される塩」であり得る。「医薬的に許容される塩」なる語は、医薬用途において有用性をもたらす範囲内で毒性プロファイルを有する塩をいう。医薬的に許容されない塩は、それにもかかわらず、本開示の化合物の合成、精製または製剤化の工程において例えば有用性があるなどの、本開示を実施するにおいて有用性を有する結晶性の高さなどの特性のある可能性がある。
【0023】
適切な医薬的に許容される酸付加塩は、無機酸から、または有機酸から製造され得る。無機酸の例には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸、およびリン酸が含まれる。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、ヘテロ環式、カルボン酸またはスルホン酸クラスの有機酸より選択され得、その例として、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、４－ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン酸（パモ酸）、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、β－ヒドロキシ酪酸、サリチル酸、ガラクタル酸、およびガラクツロン酸が挙げられる。医薬的に許容されない酸付加塩の例には、例えば、過塩素酸塩およびテトラフルオロホウ酸塩が含まれる。
【0024】
本開示の化合物の適切な医薬的に許容される塩基付加塩には、例えば、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛の塩などの、アルカリ金属、アルカリ土類金属および遷移金属の塩を含む、例えば、金属塩が含まれる。医薬的に許容される塩基付加塩はまた、例えば、Ｎ,Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）およびプロカインなどの塩基性アミンから製造される有機塩を包含する。医薬的に許容されない塩基付加塩の例として、リチウム塩およびシアン酸塩が挙げられる。医薬的に許容されない塩は、一般には、医薬品として有用ではないが、かかる塩は、例えば、化合物を合成する際の中間体として、例えば再結晶によりそれらを精製する際に有用である可能性がある。これらの塩はすべて、例えば、適切な酸または塩基を対応する化合物と反応させることにより、該化合物より通常の手段によって製造され得る。「医薬的に許容される塩」なる語は、非毒性の無機または有機酸および／または塩基付加塩をいう。例えば、Gouldら、Salt Selection for Basic Drugs (1986), Int J. Pharm., 33, 201-217（出典明示により本明細書に組み込む）を参照のこと。
【0025】
本開示の可能性のある塩の非限定的な例としては、塩酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、エタンスルホン酸塩、ケイ皮酸塩、イセチオン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、コハク酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、ジクロロ酢酸塩、乳酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パルミチン酸塩、ピドロ酸塩、パモ酸塩、サリチル酸酸、４－アミノサリチル酸塩、安息香酸塩、４－アセトアミド安息香酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、グリコレート、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、ベシル酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸、カプロン酸塩、サイクラミン酸塩、ラウリル硫酸塩、エジシル酸塩、ゲンチジン酸塩、ガラクタル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、オキソグルタル酸塩、馬尿酸塩、ラクトビオン酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、ナプシレート、ナパジシル酸塩、シュウ酸塩、オレイン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、チオシアン酸塩、ウンデシレン酸塩、およびキシナホ酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【0026】
本開示の化合物の「ホモログ」は、該化合物の１または複数の原子がかかる原子の同位体によって置き換えられている、化合物である。例えば、ホモログは、式Ｉ－ＲおよびＩ－Ｓのイソプロポキシ部分のメチル基が完全にまたは部分的に重水素化されている（例えば、（Ｄ３Ｃ）２ＣＨＯ－）、本開示の化合物などの該化合物の１または複数の水素原子に代わって重水素が用いられる化合物を包含する。本開示のホモログを形成するのに行われ得る同位体置換には、重水素および炭素１３などの非放射性（安定）原子、ならびに三重水素、炭素１４、ヨウ素１２３、ヨウ素１２５等などの放射性（不安定）原子が含まれる。
【0027】
「水和物」とは、組成物中に水分子が一緒に存在する、化合物である。組成物は、一水和物または二水和物などの化学量論量の水を含むことができ、あるいはランダムな量の水を含むことができる。該用語が本明細書にて用いられる場合、「水和物」は固体形態をいい、すなわち、水溶液中の化合物は、それは水和されているかもしれないが、その用語は本明細書にて用いる場合の水和物ではない。
【0028】
「溶媒和物」は、水が水以外の溶媒と置き換えられることを除いて、同様の組成物である。例えば、メタノールまたはエタノールは「アルコラート」を形成することができ、それは再び化学量論的または非化学量論的とすることもできる。該用語が本明細書にて使用される場合、「溶媒和物」は固体形態をいい、すなわち、化合物の溶媒中溶液は、それは溶媒和されているかもしれないが、その用語は本明細書にて用いる場合の溶媒和物ではない。
本明細書において開示される化合物は、当業者に公知の技法により、ならびに以下の実施例において開示される操作によって製造され得る。
本明細書において開示される化合物は、当業者に公知の技法により、ならびに以下の実施例において開示される操作によって製造され得る。
【0029】
実施例
合成の一般的方法
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）および１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）は、重水素クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素メタノール（ＣＤ３ＯＤ）またはジメチルスルホキシド－Ｄ６（ＤＭＳＯ）の溶液にて得られた。ＮＭＲスペクトルは、Mestrec５.３.０および６.０.１を用いて処理された。１３Ｃ ＮＭＲピークのうち、括弧で囲まれたものは、同じ炭素の２つの回転異性体である。質量分析（ＬＣＭＳ）は、ThompsonＯＤＳ－Ａ、１００Ａ、５μ（５０ｘ４.６ｍｍ）カラムを備えたAgilent１１００／６１１０ＨＰＬＣシステムを用い、移動相Ａとして水＋０.１％ギ酸を、移動相Ｂとしてアセトニトリル＋０.１％ギ酸を使用して得られた。勾配は、２.５分間にわたって移動相Ｂで２０～１００％とし、ついで１００％で２.５分間保持する。流速は１ｍＬ／分であった。疎水性がより高い化合物の場合、方法１（０.５分間にわたって４０～９５％とし、９５％で８.５分間保持し、次に２分間にわたって４０％に戻し、流速を１ｍＬ／分とする）と称される、次の勾配を用いた。最終化合物は、方法２（５％で１分間、９分間にわたって５～９５％とし、ついで９５％で５分間保持し、流速を１ｍＬ／分とする）を用いて純度をチェックした。エナンチオマー過剰率は、Chiralpak ＡＤ－Ｈ、２５０ｘ４.６ｍｍカラム、５μｍ粒径で分離したピークをインテグレーションに付すことで測定された。流速は１ｍＬ／分、移動相はアイソクラティックとした。特記されない限り、提供されるキラルデータはこの方法を用いる。別法として、キラル分離は、キラル方法１、キラル方法２と称される、次の条件の下で行われた：キラル方法１（Chiralpak ＡＹ－Ｈ、２５０ｘ４.６ｍｍカラム、５μ粒径；流速：１ｍＬ／分、および移動相：アイソクラティック）、およびキラル方法２（Chiralcel ＯＺ－３、２５０ｘ４.６、３μｍ粒径、流速：０.７５ｍｌ／分）。操作に使用されるピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびトルエンは、窒素（Ｎ２）下で貯蔵されていたAldrich Sure-Seal瓶からのものであった。反応はすべて磁気で撹拌され、温度は外部反応温度である。Redisep（Teledyne Isco）シリカゲル（ＳｉＯ２）カラムを備えたCombiflash Rfフラッシュ精製システム（Teledyne Isco）を用いてクロマトグラフィー操作を行った。分取性ＨＰＬＣ精製は、移動相Ａとして０.０５％トリフルオロ酢酸を含有する水、および移動相Ｂとして０.０５％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリルを用いて、Varian ProStar／PrepStarシステムで行われた。勾配は、２２ｍＬ／分の流速で、１２分間にわたって移動相Ｂで１０～８０％とし、次に８０％で２分間にわたって保持し、次に２分間にわたって１０％に戻した。この操作と同様の他の方法も利用され得る。Varian Prostarフラクション収集装置を用いてフラクションを集め、Savant SpeedVac Plus真空ポンプを用いて蒸発させた。Biotageマイクロ波容器を備えたBiotage Initiatorマイクロ波反応装置を用いて、マイクロ波加熱を行った。以下の略語：エタノール（ＥｔＯＨ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）および４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いた。
合成の一般的方法
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）および１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）は、重水素クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素メタノール（ＣＤ３ＯＤ）またはジメチルスルホキシド－Ｄ６（ＤＭＳＯ）の溶液にて得られた。ＮＭＲスペクトルは、Mestrec５.３.０および６.０.１を用いて処理された。１３Ｃ ＮＭＲピークのうち、括弧で囲まれたものは、同じ炭素の２つの回転異性体である。質量分析（ＬＣＭＳ）は、ThompsonＯＤＳ－Ａ、１００Ａ、５μ（５０ｘ４.６ｍｍ）カラムを備えたAgilent１１００／６１１０ＨＰＬＣシステムを用い、移動相Ａとして水＋０.１％ギ酸を、移動相Ｂとしてアセトニトリル＋０.１％ギ酸を使用して得られた。勾配は、２.５分間にわたって移動相Ｂで２０～１００％とし、ついで１００％で２.５分間保持する。流速は１ｍＬ／分であった。疎水性がより高い化合物の場合、方法１（０.５分間にわたって４０～９５％とし、９５％で８.５分間保持し、次に２分間にわたって４０％に戻し、流速を１ｍＬ／分とする）と称される、次の勾配を用いた。最終化合物は、方法２（５％で１分間、９分間にわたって５～９５％とし、ついで９５％で５分間保持し、流速を１ｍＬ／分とする）を用いて純度をチェックした。エナンチオマー過剰率は、Chiralpak ＡＤ－Ｈ、２５０ｘ４.６ｍｍカラム、５μｍ粒径で分離したピークをインテグレーションに付すことで測定された。流速は１ｍＬ／分、移動相はアイソクラティックとした。特記されない限り、提供されるキラルデータはこの方法を用いる。別法として、キラル分離は、キラル方法１、キラル方法２と称される、次の条件の下で行われた：キラル方法１（Chiralpak ＡＹ－Ｈ、２５０ｘ４.６ｍｍカラム、５μ粒径；流速：１ｍＬ／分、および移動相：アイソクラティック）、およびキラル方法２（Chiralcel ＯＺ－３、２５０ｘ４.６、３μｍ粒径、流速：０.７５ｍｌ／分）。操作に使用されるピリジン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびトルエンは、窒素（Ｎ２）下で貯蔵されていたAldrich Sure-Seal瓶からのものであった。反応はすべて磁気で撹拌され、温度は外部反応温度である。Redisep（Teledyne Isco）シリカゲル（ＳｉＯ２）カラムを備えたCombiflash Rfフラッシュ精製システム（Teledyne Isco）を用いてクロマトグラフィー操作を行った。分取性ＨＰＬＣ精製は、移動相Ａとして０.０５％トリフルオロ酢酸を含有する水、および移動相Ｂとして０.０５％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリルを用いて、Varian ProStar／PrepStarシステムで行われた。勾配は、２２ｍＬ／分の流速で、１２分間にわたって移動相Ｂで１０～８０％とし、次に８０％で２分間にわたって保持し、次に２分間にわたって１０％に戻した。この操作と同様の他の方法も利用され得る。Varian Prostarフラクション収集装置を用いてフラクションを集め、Savant SpeedVac Plus真空ポンプを用いて蒸発させた。Biotageマイクロ波容器を備えたBiotage Initiatorマイクロ波反応装置を用いて、マイクロ波加熱を行った。以下の略語：エタノール（ＥｔＯＨ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）および４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いた。
【0030】
実施例１
化合物番号１の合成
化合物番号１の合成
【化3】
【0031】
工程１：３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボニトリル（中間体２）の合成：
１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－カルボニトリル（中間体１）（２０.０ｇ、９８ｗｔ％、１８.６ｇアッセイ、１２４.８ミリモル）／無水ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）、トリエチルオルトホルメート（８０ｍＬ、４８１ミリモル）およびメタンスルホン酸（０.８８ｍＬ、１２.５ミリモル）／トルエン（８０ｍＬ）の撹拌した混合物を４３－４７℃で加熱した。１時間後、ＧＣ分析によって、オルトホルメートが消費され、１２.８面積％の中間体１が残っていることがわかった。トリエチルオルトホルメート（２０ｍＬ、１２０.２ミリモル）のさらなる充填がなされ、４５分後に、ＧＣ分析は１.５面積％の中間体１の存在を示した。バッチを外界温度に冷却し、ついで激しく撹拌し、そしてクエンチ温度を＜１５℃に維持しながら、１Ｍ水性Ｋ２ＨＰＯ４（２００ｍＬ）に注いだ。二相混合物を１０分間にわたって激しく撹拌した。相を分離し、水相（ｐＨ１１）をトルエン（１００ｍＬ）で逆抽出した。有機相を合わせ、大気圧で蒸留し、３４０ｍＬの留出液を除去した。トルエン（５００ｍＬ）を加え、大気圧で蒸留し、５００ｍＬの留出液を除去した。蒸留時間はすべてで３時間、温度範囲は８０－１２０℃であった。この時点で、バッチを＜５℃で一夜貯蔵した。減圧下、蒸留が止むまで酢酸エチル（１００ｍＬ）でチェイスすることにより過剰量のオルトホルメートを除去した。
もう一つ別の容量の酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、ついで蒸留が止むまで減圧下で濃縮した。第３の容量の酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、ついで蒸留が止むまで減圧下で濃縮し、その後でＧＣ分析によって、オルトホルメートが残っていないことを確認した。次に粗製物を１１０℃で１時間撹拌し、その中間体のケタールを３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボニトリル（中間体２）に変換した。冷却した後、該粗製物（流動油、２１.３４ｇ）を、内部標体としてメシチレンを利用する１Ｈ ＮＭＲによって中間体２についてアッセイした。該油は７８.１ｗｔ％生成物＝１６.７３ｇアッセイ、９０.０ミリモル＝７２.１％収率アッセイであるとアッセイされた。次に該粗製物をシリカゲルプラグを介する濾過に付し、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製した。純粋なフラクションを合わせ、次の工程に利用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ７.７８（ｄ，Ｊ＝８.４，１Ｈ）、７.６３（ｍ，１Ｈ）、７.４９（ｍ，１Ｈ）、５.６０（ｍ，１Ｈ）、１.３８（ｔ，Ｊ＝６,８Ｈｚ，１Ｈ）、１.１９（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ１２Ｈ１２ＮＯ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：１８６.２；測定値：１８６.２
１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－カルボニトリル（中間体１）（２０.０ｇ、９８ｗｔ％、１８.６ｇアッセイ、１２４.８ミリモル）／無水ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）、トリエチルオルトホルメート（８０ｍＬ、４８１ミリモル）およびメタンスルホン酸（０.８８ｍＬ、１２.５ミリモル）／トルエン（８０ｍＬ）の撹拌した混合物を４３－４７℃で加熱した。１時間後、ＧＣ分析によって、オルトホルメートが消費され、１２.８面積％の中間体１が残っていることがわかった。トリエチルオルトホルメート（２０ｍＬ、１２０.２ミリモル）のさらなる充填がなされ、４５分後に、ＧＣ分析は１.５面積％の中間体１の存在を示した。バッチを外界温度に冷却し、ついで激しく撹拌し、そしてクエンチ温度を＜１５℃に維持しながら、１Ｍ水性Ｋ２ＨＰＯ４（２００ｍＬ）に注いだ。二相混合物を１０分間にわたって激しく撹拌した。相を分離し、水相（ｐＨ１１）をトルエン（１００ｍＬ）で逆抽出した。有機相を合わせ、大気圧で蒸留し、３４０ｍＬの留出液を除去した。トルエン（５００ｍＬ）を加え、大気圧で蒸留し、５００ｍＬの留出液を除去した。蒸留時間はすべてで３時間、温度範囲は８０－１２０℃であった。この時点で、バッチを＜５℃で一夜貯蔵した。減圧下、蒸留が止むまで酢酸エチル（１００ｍＬ）でチェイスすることにより過剰量のオルトホルメートを除去した。
もう一つ別の容量の酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、ついで蒸留が止むまで減圧下で濃縮した。第３の容量の酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、ついで蒸留が止むまで減圧下で濃縮し、その後でＧＣ分析によって、オルトホルメートが残っていないことを確認した。次に粗製物を１１０℃で１時間撹拌し、その中間体のケタールを３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボニトリル（中間体２）に変換した。冷却した後、該粗製物（流動油、２１.３４ｇ）を、内部標体としてメシチレンを利用する１Ｈ ＮＭＲによって中間体２についてアッセイした。該油は７８.１ｗｔ％生成物＝１６.７３ｇアッセイ、９０.０ミリモル＝７２.１％収率アッセイであるとアッセイされた。次に該粗製物をシリカゲルプラグを介する濾過に付し、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出して精製した。純粋なフラクションを合わせ、次の工程に利用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ７.７８（ｄ，Ｊ＝８.４，１Ｈ）、７.６３（ｍ，１Ｈ）、７.４９（ｍ，１Ｈ）、５.６０（ｍ，１Ｈ）、１.３８（ｔ，Ｊ＝６,８Ｈｚ，１Ｈ）、１.１９（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ１２Ｈ１２ＮＯ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：１８６.２；測定値：１８６.２
【0032】
工程２：中間体３の合成：
３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボニトリル（中間体２）のＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶液（６５０ｍＬ）を減圧下で約１７ｍＬに濃縮し、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ、４０ｍＬ）を加えた。該溶液を約１７ｍＬに濃縮し、第２の容量のＩＰＡ（３４ｍＬ）を添加した。この撹拌した溶液に、水性ヒドロキシルアミン（５０％、３０ｍＬ、４５５ミリモル）を添加した。次にバッチを３５－４０℃で５時間にわたって加温に付し、ついで外界温度で一夜にわたって撹拌した。該バッチを０℃に冷却し、播種（５０ｍｇ）に供し、発生させるのに種床を３０分間撹拌した。次に水（２５０ｍＬ）を約１.５時間にわたって滴下して加えた。該バッチを０～２０℃で１時間撹拌した。生成物を濾過で単離し、ケーキを水（１００ｍＬ）で洗浄し、フィルター上にて真空および窒素雰囲気下で乾燥させ、３－エトキシ－Ｎ－ヒドロキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体３）（２０.８ｇ、収率９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ９.６１（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｍ，１Ｈ）、７.３２（ｍ，２Ｈ）、５.７７（ｓ，１Ｈ）、５.４１（ｓ，１Ｈ）、４.０８（ｑ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.４５（ｓ，２Ｈ）、１.３９（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ１２Ｈ１５Ｎ２Ｏ２ ＋として計算値［Ｍ＋Ｈ］：２１９.２；測定値：２１９.１
３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボニトリル（中間体２）のＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶液（６５０ｍＬ）を減圧下で約１７ｍＬに濃縮し、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ、４０ｍＬ）を加えた。該溶液を約１７ｍＬに濃縮し、第２の容量のＩＰＡ（３４ｍＬ）を添加した。この撹拌した溶液に、水性ヒドロキシルアミン（５０％、３０ｍＬ、４５５ミリモル）を添加した。次にバッチを３５－４０℃で５時間にわたって加温に付し、ついで外界温度で一夜にわたって撹拌した。該バッチを０℃に冷却し、播種（５０ｍｇ）に供し、発生させるのに種床を３０分間撹拌した。次に水（２５０ｍＬ）を約１.５時間にわたって滴下して加えた。該バッチを０～２０℃で１時間撹拌した。生成物を濾過で単離し、ケーキを水（１００ｍＬ）で洗浄し、フィルター上にて真空および窒素雰囲気下で乾燥させ、３－エトキシ－Ｎ－ヒドロキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体３）（２０.８ｇ、収率９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ９.６１（ｓ，１Ｈ）、７.４３（ｍ，１Ｈ）、７.３２（ｍ，２Ｈ）、５.７７（ｓ，１Ｈ）、５.４１（ｓ，１Ｈ）、４.０８（ｑ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.４５（ｓ，２Ｈ）、１.３９（ｔ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，３Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ１２Ｈ１５Ｎ２Ｏ２ ＋として計算値［Ｍ＋Ｈ］：２１９.２；測定値：２１９.１
【0033】
工程３：Ｎ－（（３－シアノ－４－イソプロポキシベンゾイル）オキシ）－３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体４）：
ＣＤＩ（１６.６４ｇ、１０２.６ミリモル）および３－シアノ－４－イソプロポキシル安息香酸（２１.０６ｇ、１０２.６ミリモル）のＤＭＦ（８３ｍＬ）中混合物を２０℃で１時間撹拌した。３－エトキシ－Ｎ－ヒドロキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体３）（２０.８ｇ、９３.３ミリモル）のＤＭＦ（４０ｍＬ）中溶液を滴下漏斗を介して約５分間にわたって添加した。約３０分後、バッチは粘性を増し、撹拌を助けるために、さらなる容量のＤＭＦ（４０ｍＬ）を添加した。この時点で、ＨＰＬＣアッセイは反応が完了していることを示した。得られたスラリーを水（１.５Ｌ）で希釈し、０℃に冷却し、濾過で単離した。濾過ケーキを水（１.５Ｌ）で洗浄し、その生成物を窒素流の下でフィルター上で乾燥させ、Ｎ－（（３－シアノ－４－イソプロポキシベンゾイル）オキシ）－３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体４）をオフホワイト色の固体（３４.８ｇ、収率９０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ８.７０（ｓ，１Ｈ）、８.３３（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｍ，４Ｈ）、７.１０（ｍ，２Ｈ）、５.４９（ｓ，１Ｈ）、４.９４（ｍ，１Ｈ）、４.１０（ｑ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.５５（ｓ，２Ｈ）、１.３８（ｍ，９Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ２３Ｈ２４Ｎ３Ｏ４ ＋として計算値［Ｍ＋Ｈ］：４０６.４；測定値：４０６.２
ＣＤＩ（１６.６４ｇ、１０２.６ミリモル）および３－シアノ－４－イソプロポキシル安息香酸（２１.０６ｇ、１０２.６ミリモル）のＤＭＦ（８３ｍＬ）中混合物を２０℃で１時間撹拌した。３－エトキシ－Ｎ－ヒドロキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体３）（２０.８ｇ、９３.３ミリモル）のＤＭＦ（４０ｍＬ）中溶液を滴下漏斗を介して約５分間にわたって添加した。約３０分後、バッチは粘性を増し、撹拌を助けるために、さらなる容量のＤＭＦ（４０ｍＬ）を添加した。この時点で、ＨＰＬＣアッセイは反応が完了していることを示した。得られたスラリーを水（１.５Ｌ）で希釈し、０℃に冷却し、濾過で単離した。濾過ケーキを水（１.５Ｌ）で洗浄し、その生成物を窒素流の下でフィルター上で乾燥させ、Ｎ－（（３－シアノ－４－イソプロポキシベンゾイル）オキシ）－３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体４）をオフホワイト色の固体（３４.８ｇ、収率９０％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ８.７０（ｓ，１Ｈ）、８.３３（ｄ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｍ，４Ｈ）、７.１０（ｍ，２Ｈ）、５.４９（ｓ，１Ｈ）、４.９４（ｍ，１Ｈ）、４.１０（ｑ，Ｊ＝６.８Ｈｚ，２Ｈ）、３.５５（ｓ，２Ｈ）、１.３８（ｍ，９Ｈ）；ＬＲＭＳ：Ｃ２３Ｈ２４Ｎ３Ｏ４ ＋として計算値［Ｍ＋Ｈ］：４０６.４；測定値：４０６.２
【0034】
工程４：５－（３－（３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（中間体５）の合成
Ｎ－（（３－シアノ－４－イソプロポキシベンゾイル）オキシ）－３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体４）（３４.８ｇ、８３.９７ミリモル）をトルエン（５９０ｍＬ）に懸濁させ、Dean-Stark装置で１８時間にわたって加熱して還流させた。約２ｍＬを集めた（理論上は１.５ｍＬ）。バッチを外界温度に冷却し、セライトを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗製固体の５－（３－（３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（中間体５）（３０ｇ、収率９０％）を次の工程にそのまま適用する。ＬＲＭＳ：Ｃ２３Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：３８８.４；測定値：３８８.３
Ｎ－（（３－シアノ－４－イソプロポキシベンゾイル）オキシ）－３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－カルボキシイミダミド（中間体４）（３４.８ｇ、８３.９７ミリモル）をトルエン（５９０ｍＬ）に懸濁させ、Dean-Stark装置で１８時間にわたって加熱して還流させた。約２ｍＬを集めた（理論上は１.５ｍＬ）。バッチを外界温度に冷却し、セライトを通して濾過し、真空下で濃縮した。粗製固体の５－（３－（３－エトキシ－１Ｈ－インデン－７－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（中間体５）（３０ｇ、収率９０％）を次の工程にそのまま適用する。ＬＲＭＳ：Ｃ２３Ｈ２２Ｎ３Ｏ３ ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：３８８.４；測定値：３８８.３
【0035】
工程５：２－イソプロポキシ－５－（３－（１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（化合物番号１）の合成：
中間体５（３０ｇ、７５.５７ミリモル）をＩＰＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）（３００ｍＬ）に懸濁させる。触媒作用のＨ２ＳＯ４（０.１ｍＬ、０.１９ミリモル）を加え、得られた混合物を１２時間にわたって加熱して還流させる。スラリーを外界温度に冷却し、１時間撹拌する。生成物を濾過で単離し、ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）（１００ｍＬ）で洗浄する。真空下にてフィルター上で１時間乾燥させた後、その湿ったケーキを反応器に戻し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に懸濁させる。該混合物を３時間にわたって加熱して還流させ、次に外界温度に冷却し、１時間撹拌する。スラリーを濾過し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄し、窒素下にてフィルター上で乾燥させ、２－イソプロポキシ－５－（３－（１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（化合物番号１）（２２ｇ、収率８０％）をオフホワイト色の固体として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ８.５５（ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ，１Ｈ）、８.４４（ｍ，２Ｈ）、７.８８（ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.６９（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.９９（ｈ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.４６（ｄｄ，Ｊ１＝５.６、Ｊ２＝１１.２Ｈｚ，２Ｈ）、２.７６（ｄｄ，Ｊ１＝５.６、Ｊ２＝１１.２Ｈｚ，２Ｈ）、１.４５（ｄ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ２０５.９、１７３.４、１６７.４、１６２.６、１５４.２、１３８.１、１３４.７、１３４.２、１３３.９、１２８.２、１２５.９、１２４.５、１１５.８、１１５.３、１１４.９、１０２.５、７２.６、３５.９、２７.３、２１.５；ＬＲＭＳ：Ｃ２１Ｈ１８Ｎ３Ｏ３ ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：３６０.１；測定値：３６０.２；ＣＨＮ分析：測定値：％Ｃ：７０.２５、％Ｈ：４.６９；％Ｎ：１１.７１；理論値：％Ｃ：７０.１８；％Ｈ：４.７７；％Ｎ：１１.６９
中間体５（３０ｇ、７５.５７ミリモル）をＩＰＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）（３００ｍＬ）に懸濁させる。触媒作用のＨ２ＳＯ４（０.１ｍＬ、０.１９ミリモル）を加え、得られた混合物を１２時間にわたって加熱して還流させる。スラリーを外界温度に冷却し、１時間撹拌する。生成物を濾過で単離し、ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ（４：１）（１００ｍＬ）で洗浄する。真空下にてフィルター上で１時間乾燥させた後、その湿ったケーキを反応器に戻し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に懸濁させる。該混合物を３時間にわたって加熱して還流させ、次に外界温度に冷却し、１時間撹拌する。スラリーを濾過し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄し、窒素下にてフィルター上で乾燥させ、２－イソプロポキシ－５－（３－（１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（化合物番号１）（２２ｇ、収率８０％）をオフホワイト色の固体として得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ８.５５（ｄ，Ｊ＝２.０Ｈｚ，１Ｈ）、８.４４（ｍ，２Ｈ）、７.８８（ｄ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.６９（ｔ，Ｊ＝７.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.９９（ｈ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.４６（ｄｄ，Ｊ１＝５.６、Ｊ２＝１１.２Ｈｚ，２Ｈ）、２.７６（ｄｄ，Ｊ１＝５.６、Ｊ２＝１１.２Ｈｚ，２Ｈ）、１.４５（ｄ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ） δ ２０５.９、１７３.４、１６７.４、１６２.６、１５４.２、１３８.１、１３４.７、１３４.２、１３３.９、１２８.２、１２５.９、１２４.５、１１５.８、１１５.３、１１４.９、１０２.５、７２.６、３５.９、２７.３、２１.５；ＬＲＭＳ：Ｃ２１Ｈ１８Ｎ３Ｏ３ ＋として、計算値［Ｍ＋Ｈ］：３６０.１；測定値：３６０.２；ＣＨＮ分析：測定値：％Ｃ：７０.２５、％Ｈ：４.６９；％Ｎ：１１.７１；理論値：％Ｃ：７０.１８；％Ｈ：４.７７；％Ｎ：１１.６９
【0036】
実施例２
式（Ｉ）の化合物の一般合成
式（Ｉ）の化合物は化合物１（実施例１）から出発して合成され得る。ＤＭＡＰのような触媒の存在下で環状酸無水物で処理し、式（Ｉ）の化合物を得る。さらには、式（Ｉ）の化合物の生成は、化合物１を強塩基で処理し、つづいて酸塩化物でトラップすることにより達成され得る。
式（Ｉ）の化合物の一般合成
【化4】
【0037】
【化5】
【0038】
実施例３
化合物１０
（（Ｚ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
２－イソプロポキシ－５－（３－（１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０.２８ミリモル）をＤＣＭ（８ｍｌ）に完全に溶かし、９５％ＥｔＯＨ（４ｍｌ）、ＮＨ２ＯＨ（４３ｍｇ、０.６１ミリモル）およびＮａＯＡｃ（５２ｍｇ、０.６１ミリモル）を室温で添加した。反応の進行をＨＰＬＣでモニター観察した。反応が完了した後（一夜）、沈殿物を集め、ＤＣＭ（５ｍｌｘ２）で洗浄し、純粋な生成物：（Ｚ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（６０ｍｇ、０.１６ミリモル、５７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－Ｄ６） δｐｐｍ １.４０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.９０（ｍ，２Ｈ）、３.３９（ｍ，２Ｈ）、４.９９（ｍ，１Ｈ）、７.５６（ｍ，２Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.１４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.５４（ｓ，１Ｈ）、１１.１（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２１Ｈ１８Ｎ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ３７５.３（Ｍ＋１）
化合物１０
（（Ｚ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化6】
【0039】
実施例４
化合物１１
（（Ｚ）－４－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）ブタン酸）
の合成
２－イソプロポキシ－５－（３－（１－オキソ－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０.２８ミリモル）をＤＣＭ（８ｍｌ）に完全に溶かし、７０％ ＥｔＯＨ（４ｍｌ）、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩（９５ｍｇ、０.６１ミリモル）およびＮａＯＡｃ（６８ｍｇ、０.６１ミリモル）を室温で添加した。反応の進行をＨＰＬＣでモニター観察に付した。反応物を室温で４８時間撹拌し、３０％の変換を達成した。溶媒を除去し、精製のためにＩＳＣＯに直接ロードした。しかしながら、分離されなかった；それでＲＰ ＩＳＣＯ［５－９５％ ＭｅＯＨ（０.０５％ＡｃＯＨを含有する）／水］に付して再び精製し、所望の生成物：（Ｚ）－４－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）ブタン酸（１９ｍｇ、０.０４１ミリモル、１５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－Ｄ６） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.０９（ｍ，２Ｈ）、２.５４（ｍ，２Ｈ）、２.９５（ｍ，２Ｈ）、３.４１（ｍ，２Ｈ）、４.２６（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、７.１０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４０（ｍ，１Ｈ）、７.８３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４０（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２５Ｈ２４Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４６１.３（Ｍ＋１）
化合物１１
（（Ｚ）－４－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）ブタン酸）
の合成
【化7】
【0040】
実施例５
化合物１２
（（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－（３－（ジメチルアミノ）プロピル）オキシム）
の合成
（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－（３－（ジメチルアミノ）プロピル）オキシムが、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりに３－（アミノオキシ）－Ｎ,Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミンを用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率２５％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.２５（ｍ，２Ｈ）、２.７（ｓ，６Ｈ）、２.９７（ｍ，４Ｈ）、３.４５（ｍ，２Ｈ）、４.２９（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２６Ｈ２９Ｎ５Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４６０.５（Ｍ＋１）
化合物１２
（（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－（３－（ジメチルアミノ）プロピル）オキシム）
の合成
【化8】
【0041】
実施例６
化合物１３
（（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－プロピオニルオキシム）
の合成
（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－プロピオニルオキシムが、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－プロピオニルヒドロキシルアミン・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率３％で製造された。Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ４として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４３１.５（Ｍ＋１）
化合物１３
（（Ｚ）－４－（５－（３－（（ｌ２－アザネイリデン）－ｌ３－メチル）－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－オン Ｏ－プロピオニルオキシム）
の合成
【化9】
【0042】
実施例７
化合物１４
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－メトキシエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－メトキシエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリルが、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－（２－メトキシエチル）ヒドロキシルアミンを用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率７％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、３.０（ｍ，２Ｈ）、３.０１（ｓ，３Ｈ）、３.０５（ｍ，２Ｈ）、３.７２（ｍ，２Ｈ）、４.３７（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４６（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２４Ｈ２４Ｎ４Ｏ４として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４３３.２（Ｍ＋１）
化合物１４
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－メトキシエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
【化10】
【0043】
実施例８
化合物６
（（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）酢酸）
の合成
（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）酢酸が、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりに２－（アミノオキシ）酢酸・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率４２％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－Ｄ６） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.９２（ｍ，２Ｈ）、３.２９（ｍ，２Ｈ）、４.６２（ｓ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、７.４８（ｍ，２Ｈ）、７.７１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.１１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４０（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２３Ｈ２０Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４３３.１（Ｍ＋１）
化合物６
（（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）酢酸）
の合成
【化11】
【0044】
実施例９
化合物１５
（（Ｚ）－５－（３－（１－（（２－（ジエチルアミノ）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
ＤＭＦ（１.５ｍｌ）中の２－クロロ－Ｎ,Ｎ－ジエチルエタン－１－アミン・塩酸塩（１３８ｍｇ、０.８ミリモル）に、Ｅｔ３Ｎ（０.１１２ｍｌ、０.８ミリモル）を添加し、室温で１０分間撹拌した。一方で、ＤＭＦ（１.５ｍｌ）中の（Ｚ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（１００ｍｇ、０.２７ミリモル）に、ＮａＨ（３２ｍｇ、０.８ミリモル、油中６０％）を室温で添加し、１０分間撹拌した。次に、その最初の溶液を第２の溶液に室温で添加し、一夜撹拌した。反応混合物を氷水中に注ぎ、ＤＣＭ（２０ｍｌ）で抽出し、そのＤＣＭ層をブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮し、ＩＳＣＯ（０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０.３５Ｍ ＮＨ３で溶出する）に付して精製し、所望の生成物：（Ｚ）－５－（３－（１－（（２－（ジエチルアミノ）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（２３ｍｇ、０.０４８ミリモル、１８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.０７（ｍ，６Ｈ）、１.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.６６（ｍ，４Ｈ）、２.９９（ｍ，４Ｈ）、３.４２（ｍ，２Ｈ）、４.３１（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２７Ｈ３１Ｎ５Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４７４.３（Ｍ＋Ｈ）
化合物１５
（（Ｚ）－５－（３－（１－（（２－（ジエチルアミノ）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化12】
【0045】
実施例１０
化合物９
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリルが、２－クロロ－Ｎ,Ｎ－ジエチルエタン－１－アミン・塩酸塩の代わりに１－（２－クロロエチル）ピペリジン・塩酸塩を用いることを除き、実施例９において記載される操作に従って収率３７％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.２５（ｍ，２Ｈ）、１.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、１.７７（ｍ，４Ｈ）、２.７６（ｍ，４Ｈ）、２.９９（ｍ，４Ｈ）、３.４２（ｍ，２Ｈ）、４.３１（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２８Ｈ３１Ｎ５Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４８６.５（Ｍ＋１）
化合物９
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－（ピペリジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
【化13】
【0046】
実施例１１
化合物７
（（Ｅ）－３－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロピオン酸）
の合成
（Ｅ）－３－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロピオン酸が、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりに３－（アミノオキシ）プロピオン酸・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率３％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.８６（ｍ，２Ｈ）、２.９７（ｍ，２Ｈ）、３.４６（ｍ，２Ｈ）、４.４８（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４４７.４（Ｍ＋１）
化合物７
（（Ｅ）－３－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロピオン酸）
の合成
【化14】
【0047】
実施例１２
化合物２
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（メトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（メトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（N３９－０３１）が、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－メチルヒドロキシルアミン・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率３４％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.９７（ｍ，２Ｈ）、３.４４（ｍ，２Ｈ）、４.０１（ｓ，３Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２２Ｈ２０Ｎ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ３８９.１（Ｍ＋１）
化合物２
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（メトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
【化15】
【0048】
実施例１３
化合物２
（（Ｚ）－５－（３－（１－（エトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－５－（３－（１－（エトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（N３９－０３０）が、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－エチルヒドロキシルアミン・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率６５％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.３４（ｍ，３Ｈ）、１.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.９７（ｍ，２Ｈ）、３.００（ｍ，２Ｈ）、４.２３（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２３Ｈ２２Ｎ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４０２.４（Ｍ＋）
化合物２
（（Ｚ）－５－（３－（１－（エトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化16】
【0049】
実施例１４
化合物４
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（イソプロポキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（イソプロポキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリルが、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－イソプロピルヒドロキシルアミン・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率４８％で製造された。Ｃ２４Ｈ２４Ｎ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４１７.２（Ｍ＋１）
化合物４
（（Ｚ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（イソプロポキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル）
の合成
【化17】
【0050】
実施例１５
化合物５
（（Ｚ）－５－（３－（１－（tert－ブトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
（Ｚ）－５－（３－（１－（tert－ブトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリルが、４－（アミノオキシ）ブタン酸・塩酸塩の代わりにＯ－（tert－ブチル）ヒドロキシルアミン・塩酸塩を用いることを除き、実施例４において記載される操作に従って収率５１％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.３６（ｓ，９Ｈ）、１.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.９７（ｍ，２Ｈ）、３.４４（ｍ，２Ｈ）、４.８１（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２５Ｈ２６Ｎ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４３１.２（Ｍ＋１）
化合物５
（（Ｚ）－５－（３－（１－（tert－ブトキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化18】
【0051】
実施例１６
化合物１６
（（Ｚ）－５－（３－（１－（（２－ヒドロキシエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
化合物１６
（（Ｚ）－５－（３－（１－（（２－ヒドロキシエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化19】
【0052】
工程１：
（Ｅ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（０.６ｇ、１.６ミリモル）のＤＭＦ（９ｍｌ）溶液に、ＮａＨ（１９２ｍｇ、４.８ミリモル）を添加し、２０分間撹拌した。このＤＭＦスラリーに、１,２－ジブロモエタン（３ｇ、１６ミリモル）のＤＣＭ（６ｍｌ）溶液を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳはいくらかの変換を示し、反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬｘ２）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、ＩＳＣＯ（２５ｇ カラム、０－１００％ ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）に付して精製し、所望の生成物：（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（０.０８ｇ、０.１６６ミリモル、１０％）を得た。Ｃ２３Ｈ２１ＢｒＮ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４８１.３（Ｍ＋１）
（Ｅ）－５－（３－（１－（ヒドロキシイミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（０.６ｇ、１.６ミリモル）のＤＭＦ（９ｍｌ）溶液に、ＮａＨ（１９２ｍｇ、４.８ミリモル）を添加し、２０分間撹拌した。このＤＭＦスラリーに、１,２－ジブロモエタン（３ｇ、１６ミリモル）のＤＣＭ（６ｍｌ）溶液を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳはいくらかの変換を示し、反応混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬｘ２）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、ＩＳＣＯ（２５ｇ カラム、０－１００％ ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）に付して精製し、所望の生成物：（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（０.０８ｇ、０.１６６ミリモル、１０％）を得た。Ｃ２３Ｈ２１ＢｒＮ４Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４８１.３（Ｍ＋１）
【0053】
工程２：
５０ｍＬのフラスコに、２－メトキシ－Ｎ－メチルエタン－１－アミン（１１ｍｇ、０.１２５ミリモル）、ＤＭＦ（１ｍｌ）、ＮａＨ（５ｍｇ、０.１２５ミリモル）を添加し、次に５分間撹拌した。その撹拌した混合物に、（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（４０ｍｇ、０.０８ミリモル）のＤＣＭ（４ｍｌ）中溶液を加え、次に室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をＩＳＣＯ（４ｇカラム、０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０.３５Ｎ ＮＨ３）に付して精製し、所望の生成物：（Ｅ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－（（２－メトキシethyl）（メチル）アミノ）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０.０２ミリモル、２４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.４９（ｓ，３Ｈ）、２.５０（ｍ，２Ｈ）、２.８０（ｍ，２Ｈ）、２.９９（ｍ，２Ｈ）、３.４０（ｓ，３Ｈ）、３.４６（ｍ，２Ｈ）、３.５０（ｍ，２Ｈ）、４.３６（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２７Ｈ３１Ｎ５Ｏ４として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４９０.５（Ｍ＋１）
５０ｍＬのフラスコに、２－メトキシ－Ｎ－メチルエタン－１－アミン（１１ｍｇ、０.１２５ミリモル）、ＤＭＦ（１ｍｌ）、ＮａＨ（５ｍｇ、０.１２５ミリモル）を添加し、次に５分間撹拌した。その撹拌した混合物に、（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－ブロモエトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル（４０ｍｇ、０.０８ミリモル）のＤＣＭ（４ｍｌ）中溶液を加え、次に室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をＩＳＣＯ（４ｇカラム、０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０.３５Ｎ ＮＨ３）に付して精製し、所望の生成物：（Ｅ）－２－イソプロポキシ－５－（３－（１－（（２－（（２－メトキシethyl）（メチル）アミノ）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０.０２ミリモル、２４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、２.４９（ｓ，３Ｈ）、２.５０（ｍ，２Ｈ）、２.８０（ｍ，２Ｈ）、２.９９（ｍ，２Ｈ）、３.４０（ｓ，３Ｈ）、３.４６（ｍ，２Ｈ）、３.５０（ｍ，２Ｈ）、４.３６（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２７Ｈ３１Ｎ５Ｏ４として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４９０.５（Ｍ＋１）
【0054】
実施例１７
化合物１７
（（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－（アゼチジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－（アゼチジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリルが、２－メトキシ－Ｎ－メチルエタン－１－アミンの代わりにアゼチジンを用いることを除き、実施例１６、工程２において記載される操作に従って収率１２.９％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、１.８２（ｍ，２Ｈ）、２.４６（ｍ，２Ｈ）、２.９０（ｍ，２Ｈ）、３.０１（ｍ，２Ｈ）、３.４６（ｍ，２Ｈ）、３.６０（ｍ，２Ｈ）、４.３６（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２６Ｈ２７Ｎ５Ｏ３として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４５８.６（Ｍ＋１）
化合物１７
（（Ｅ）－５－（３－（１－（（２－（アゼチジン－１－イル）エトキシ）イミノ）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）－１,２,４－オキサジアゾール－５－イル）－２－イソプロポキシベンゾニトリル）
の合成
【化20】
【0055】
実施例１８
化合物１８
（（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）アセトアミド）
の合成
（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）アセトアミドが、２－クロロ－Ｎ,Ｎ－ジエチルエタン－１－アミン・塩酸塩の代わりに２－クロロアセトアミドを用いることを除き、実施例９において記載される操作に従って収率１９.４％で製造された。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、３.００（ｍ，２Ｈ）、３.５（ｍ，２Ｈ）、４.６９（ｓ，２Ｈ）、４.７８（ｍ，１Ｈ）、５.５０（ｓ，１Ｈ）、６.４０（ｓ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２３Ｈ２１Ｎ５Ｏ４として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４３２.４（Ｍ＋１）
化合物１８
（（Ｚ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）アセトアミド）
の合成
【化21】
【0056】
実施例１９
化合物１９
（（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロピオン酸）
の合成
化合物１９
（（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロピオン酸）
の合成
【化22】
【0057】
工程１：
（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロパン酸メチルが、２－クロロ－Ｎ,Ｎ－ジエチルエタン－１－アミン・塩酸塩の代わりに２－ブロモプロパン酸メチルを用いることを除き、実施例９において記載される操作に従って収率８０％で製造された。Ｃ２５Ｈ２４Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４６１.４（Ｍ＋１）
（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロパン酸メチルが、２－クロロ－Ｎ,Ｎ－ジエチルエタン－１－アミン・塩酸塩の代わりに２－ブロモプロパン酸メチルを用いることを除き、実施例９において記載される操作に従って収率８０％で製造された。Ｃ２５Ｈ２４Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４６１.４（Ｍ＋１）
【0058】
工程２：
（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロパン酸メチル（３３ｍｇ、０.０７２ミリモル）のＴＨＦ（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の撹拌した溶液をＬｉＯＨ（１０.３ｍｇ、０.２１５ミリモル）の水溶液（１ｍＬ）で処理した。混合物を室温で２時間撹拌した。ついで該混合物を６Ｍ ＨＣｌを用いてｐＨ１の酸性にした。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で抽出した。水層をＤＣＭ（２０ｍＬｘ３）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ついで濃縮して所望の生成物：（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）－アミノ）オキシ）プロピオン酸（２６ｍｇ、０.０５８ミリモル、８１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、１.４３（ｓ，１Ｈ）、１.６３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ）、３.０７（ｍ，２Ｈ）、３.５０（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、４.８２（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４４７.４（Ｍ＋１）
（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）アミノ）オキシ）プロパン酸メチル（３３ｍｇ、０.０７２ミリモル）のＴＨＦ（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２ｍＬ）中の撹拌した溶液をＬｉＯＨ（１０.３ｍｇ、０.２１５ミリモル）の水溶液（１ｍＬ）で処理した。混合物を室温で２時間撹拌した。ついで該混合物を６Ｍ ＨＣｌを用いてｐＨ１の酸性にした。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で抽出した。水層をＤＣＭ（２０ｍＬｘ３）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ついで濃縮して所望の生成物：（Ｅ）－２－（（（４－（５－（３－シアノ－４－イソプロポキシフェニル）－１,２,４－オキサジアゾール－３－イル）－２,３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－１－イリデン）－アミノ）オキシ）プロピオン酸（２６ｍｇ、０.０５８ミリモル、８１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δｐｐｍ １.４７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，６Ｈ）、１.４３（ｓ，１Ｈ）、１.６３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ）、３.０７（ｍ，２Ｈ）、３.５０（ｍ，２Ｈ）、４.８０（ｍ，１Ｈ）、４.８２（ｍ，１Ｈ）、７.１２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４５（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、７.８０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、８.４３（ｓ，１Ｈ）；Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ５として、ＥＳＩＭＳ 測定値：ｍ／ｚ ４４７.４（Ｍ＋１）
【0059】
実施例２０
インビトロ生物学的アッセイ
細胞膜調製物
組換えＳ１Ｐ受容体を発現するＣＨＯ細胞を５００ｃｍ２の培養トレイで培養し、コンフルエントになれば、細胞リフティングバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５４ｍＭ ＮａＣｌ、６．８５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）で濯ぎ、剥離させた。次に、遠心分離に供することで細胞をペレット状にし、膜調製バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）中に再懸濁させ、Polytron PT 1200Eホモジナイザー（Kinematica、Luzern、Switzerland）を用いて均質にした。細胞タンパク質を４８,０００ｘｇで４℃にて３０分間にわたって遠心分離に付すことでペレット状にした。得られた上清を捨て、そのペレットを、上記されるように、膜調製バッファーに再び再懸濁させ、もう一度均質とし、次に再び遠心分離に付した。最終的な細胞タンパク質のペレットを氷冷した再懸濁バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）に懸濁させ、アリコートに分け、使用するまで－８０℃で貯蔵した。
インビトロ生物学的アッセイ
細胞膜調製物
組換えＳ１Ｐ受容体を発現するＣＨＯ細胞を５００ｃｍ２の培養トレイで培養し、コンフルエントになれば、細胞リフティングバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５４ｍＭ ＮａＣｌ、６．８５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）で濯ぎ、剥離させた。次に、遠心分離に供することで細胞をペレット状にし、膜調製バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）中に再懸濁させ、Polytron PT 1200Eホモジナイザー（Kinematica、Luzern、Switzerland）を用いて均質にした。細胞タンパク質を４８,０００ｘｇで４℃にて３０分間にわたって遠心分離に付すことでペレット状にした。得られた上清を捨て、そのペレットを、上記されるように、膜調製バッファーに再び再懸濁させ、もう一度均質とし、次に再び遠心分離に付した。最終的な細胞タンパク質のペレットを氷冷した再懸濁バッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）に懸濁させ、アリコートに分け、使用するまで－８０℃で貯蔵した。
【0060】
ＧＴＰγＳ結合アッセイ
［３５Ｓ］－ＧＴＰγＳに対する結合アッセイを、２００μＬの最終容量で、９６ウェルの非結合表面プレートにて行った。試験化合物をＤＭＳＯで連続希釈に付し、Tecan D300Eデジタルディスペンサーを用い、０.４μＬの総容量で、アッセイプレートに加えた。対照となるスフィンゴシン－１－ホスフェート（Ｓ１Ｐ）は、１００ナノモルのＳ１Ｐペレットからの、２％β－シクロデキストリンを含む、１０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３中の４００μＭのストック溶液を調製することで別個に調製された。Ｓ１Ｐの連続希釈は完全アッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.１％脂肪酸不含ウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］、および３０μｇ／ｍＬのサポニン、ｐＨ７.４）を用いて行われ、予め０.４μＬ ＤＭＳＯを含めたウェルに移した。ついで、非特異的結合（ＮＳＢ）ウェルを除き、すべてのウェルに総容量で４０μＬの完全アッセイバッファーをロードした。ＮＳＢウェルには、４０μＬ／ウェルの５０μＭ ＧＴＰγＳ（Sigma Aldrich、カタログ番号Ｇ８６３４、St. Louis、MO）を、０.４μＬのＤＭＳＯを含有するウェルに添加した。完全バッファー中に４０μｇ／ｍＬの膜タンパク質、１６.６７μＭのグアノシン二リン酸（ＧＤＰ；Sigma Aldrich、カタログ番号Ｇ７１２７、St. Louis、MO）、および２.５ｍｇ／ｍＬのＷＧＡ ＰＶＴ ＳＰＡビーズを含有する、１２０μＬ／ウェルのＣＨＯ－Ｓ１Ｐ受容体膜溶液を添加することでアッセイを開始した。ついでアッセイプレートを密封し、３０分間にわたって室温で緩やかにかき混ぜながらインキュベートした。次に、ベーシックアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＮａＣｌ、および１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）中の１ｎＭの［３５Ｓ］－ＧＴＰγＳ（PerkinElmer、カタログ番号ＮＥＧ０３０Ｘ２５０ＵＣ、Waltham、MA）を４０μＬ／ウェルでアッセイプレートに２００ｐＭの最終濃度が得られるように加え、該プレートを４０分間にわたって室温で緩やかにかき混ぜながらさらにインキュベートした。該プレートをEppendorf ５８１０Ｒ遠心分離機（Eppendorf、Hamburg、Germany）を用いて１０００ｒｐｍで３分間にわたって遠心分離に付すことでアッセイを終え、MicroBeta2マイクロプレートシンチレーションカウンター（PerkinElmer、Waltham、MA）を用いてＧタンパク質結合放射能を定量した。
［３５Ｓ］－ＧＴＰγＳに対する結合アッセイを、２００μＬの最終容量で、９６ウェルの非結合表面プレートにて行った。試験化合物をＤＭＳＯで連続希釈に付し、Tecan D300Eデジタルディスペンサーを用い、０.４μＬの総容量で、アッセイプレートに加えた。対照となるスフィンゴシン－１－ホスフェート（Ｓ１Ｐ）は、１００ナノモルのＳ１Ｐペレットからの、２％β－シクロデキストリンを含む、１０ｍＭ Ｎａ２ＣＯ３中の４００μＭのストック溶液を調製することで別個に調製された。Ｓ１Ｐの連続希釈は完全アッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０.１％脂肪酸不含ウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］、および３０μｇ／ｍＬのサポニン、ｐＨ７.４）を用いて行われ、予め０.４μＬ ＤＭＳＯを含めたウェルに移した。ついで、非特異的結合（ＮＳＢ）ウェルを除き、すべてのウェルに総容量で４０μＬの完全アッセイバッファーをロードした。ＮＳＢウェルには、４０μＬ／ウェルの５０μＭ ＧＴＰγＳ（Sigma Aldrich、カタログ番号Ｇ８６３４、St. Louis、MO）を、０.４μＬのＤＭＳＯを含有するウェルに添加した。完全バッファー中に４０μｇ／ｍＬの膜タンパク質、１６.６７μＭのグアノシン二リン酸（ＧＤＰ；Sigma Aldrich、カタログ番号Ｇ７１２７、St. Louis、MO）、および２.５ｍｇ／ｍＬのＷＧＡ ＰＶＴ ＳＰＡビーズを含有する、１２０μＬ／ウェルのＣＨＯ－Ｓ１Ｐ受容体膜溶液を添加することでアッセイを開始した。ついでアッセイプレートを密封し、３０分間にわたって室温で緩やかにかき混ぜながらインキュベートした。次に、ベーシックアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１００ｍＭ ＮａＣｌ、および１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４）中の１ｎＭの［３５Ｓ］－ＧＴＰγＳ（PerkinElmer、カタログ番号ＮＥＧ０３０Ｘ２５０ＵＣ、Waltham、MA）を４０μＬ／ウェルでアッセイプレートに２００ｐＭの最終濃度が得られるように加え、該プレートを４０分間にわたって室温で緩やかにかき混ぜながらさらにインキュベートした。該プレートをEppendorf ５８１０Ｒ遠心分離機（Eppendorf、Hamburg、Germany）を用いて１０００ｒｐｍで３分間にわたって遠心分離に付すことでアッセイを終え、MicroBeta2マイクロプレートシンチレーションカウンター（PerkinElmer、Waltham、MA）を用いてＧタンパク質結合放射能を定量した。
【0061】
上記の技法でアッセイされた代表的な化合物に関するデータを表２に示す。
表２
表２
【表5】
【0062】
実施例２１
インビボ生物学的アッセイ
ラットにおける絶対的経口生物学的利用能の測定
薬物動態試験を絶食していない雄のスプラーグドーリーラット（Simonsen LaboratoriesまたはHarlan Laboratories）で行う。ラットをＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認されている。実験を開始する前に、少なくとも４８時間にわたって動物を実験室に訓化させる。
インビボ生物学的アッセイ
ラットにおける絶対的経口生物学的利用能の測定
薬物動態試験を絶食していない雄のスプラーグドーリーラット（Simonsen LaboratoriesまたはHarlan Laboratories）で行う。ラットをＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認されている。実験を開始する前に、少なくとも４８時間にわたって動物を実験室に訓化させる。
【0063】
化合物を５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％精製水（静脈内注入）または５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％の０.１Ｎ ＨＣＬ（経口胃管投与）中にて製剤化する。投与用溶液の濃度はＨＰＬＣ－ＵＶで確認する。静脈内投与の場合、手で押さえ付けた動物に、１分間にわたって頸静脈にインフュージョンポンプを通して化合物を投与する（化合物に付きｎ＝４のラット）。経口投与は、標準的なステンレス製胃管投与針を用いるガベージによるものである（化合物に付きｎ＝２～４のラット）。両方の投与経路でも、投与した後に８つの時点で採血し、最終サンプルを投与から２４時間後に採取する。血液サンプルのアリコートをポリプロピレン製の９６ウェルプレートに移し、分析するまで－２０℃で凍結させる。
【0064】
血液サンプルを室温で解凍させた後、５μＬのＤＭＳＯを各ウェルに添加する。２００ｎＭの内部標体（４－ヒドロキシ－３－（アルファ－イミノベンジル）－１－メチル－６－フェニルピリンジン－２－（１Ｈ）－オン）および０.１％ギ酸を含有する、１５０μＬのアセトニトリルを添加することでタンパク質を沈降させる。プレートをプレート振盪器で１分間混合し、タンパク質の沈降を促進させ、次に３,０００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離に付し、タンパク質をペレット状にした。上清を清浄なプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析に供する前に、３,０００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離に付し、残りのいずれの固形物もペレット状にする。ＤＭＳＯ中の５μＬの化合物ストックを新たに採集したＥＤＴＡラット血液にスパイクすることで基準となる検量線を作成する。５ｎＭ～１０,０００ｎＭの範囲に及ぶ８点の標準曲線は各バイオ分析単位に含まれる。標準をラットの薬物動態学的サンプルと同様に処理する。
【0065】
ラット薬物動態サンプル中の濃度を、８ポイントの標準曲線に関連して標準化されたＨＰＬＣ－ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法を用いて測定する。このシステムは、Leap CTC Palインジェクター、Applied Biosystems 3200 QTrapと連結したバイナリーポンプ付きのAgilent1200HPLCで構成される。化合物を、Security Guardを備えたPhenomenex Synergy Fusion RPの２０ｘ２ｍｍ ２μｍのMercury Cartridgeでクロマトグラフィーに付す。水中０.１％ギ酸からなる移動相Ａと、アセトニトリル中０.１％ギ酸からなる移動相Ｂとの勾配方法であって、０.７～０.８ｍＬ／分の間で変化する流速で該方法を用いる。イオンは電子噴射イオン化（ＥＳＩ）インターフェースを用いるポジティブイオン化モードで生成される。各化合物に固有の複数反応モニタリング（ＭＲＭ）方法を開発する。加熱式ネブライザーを、３２５℃で、４.８μＡのネブライザー電流に設定する。衝突エネルギーは２９と３９Ｖとの範囲で娘イオンを生成するのに使用される。定量するのに用いられる各化合物に特異的な質量変化をＭＲＭに付し、ピーク面積比を得る。この方法の定量限界は、典型的には、５ｎＭである。Analystソフトウェアバージョン１.４.２を用いて、データを収集して解析する。
【0066】
血中濃度対時間のデータは、ノンコンパートメント方法（WinNonlin version 5.2；経口投与用のモデル２００および静脈内注入用のモデル２０２）を用いて解析される。絶対的経口生物学的利用能（％）は、次式：
（経口ＡＵＣｘＩＶ用量）／（ＩＶ ＡＵＣｘ経口用量）ｘ１００
を用いて算出される。
（経口ＡＵＣｘＩＶ用量）／（ＩＶ ＡＵＣｘ経口用量）ｘ１００
を用いて算出される。
【0067】
リンパ球減少症
マウスでは：
雌のＣ５７ＢＬ６マウス（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。マウス（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣｌからなるビヒクル中に化合物を１～３０ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。心臓穿刺によりイソフルランで麻酔処理に付したマウスから最終全血サンプルをＥＤＴＡに集める。全血をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（マウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ、＃５５３１４１）、ＰＥ－ラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ ＃５５３０８９）、ＡＰＣ－Ｃｙ７－ラット抗マウスＣＤ８ａ（ＢＤ ＃５５７６５４）、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７－ラット抗マウスＣＤ４（ＢＤ ＃５５７６８１）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＦＡＣＳにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
マウスでは：
雌のＣ５７ＢＬ６マウス（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。マウス（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣｌからなるビヒクル中に化合物を１～３０ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。心臓穿刺によりイソフルランで麻酔処理に付したマウスから最終全血サンプルをＥＤＴＡに集める。全血をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（マウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ、＃５５３１４１）、ＰＥ－ラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ ＃５５３０８９）、ＡＰＣ－Ｃｙ７－ラット抗マウスＣＤ８ａ（ＢＤ ＃５５７６５４）、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７－ラット抗マウスＣＤ４（ＢＤ ＃５５７６８１）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＦＡＣＳにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
【0068】
ラットでは：
雄のラット（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。ラット（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣＬからなるビヒクル中に化合物を１～３０ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。イソフルランで麻酔処理に付したラットから後眼窩洞を介して全血を集め、最終サンプルは心臓穿刺によりＥＤＴＡに集めた。全血をマウス抗ラットＣＤ３２（ＢＤ＃５５０２７１）、ＰＥ－マウス抗ラットＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ＃５５４８８１）、ＰＥＣｙ５－マウス抗ラットＣＤ４（ＢＤ ＃５５４８３９）、およびＡＰＣ－マウス抗ラットＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－００８４）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｒａｙにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
雄のラット（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。ラット（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣＬからなるビヒクル中に化合物を１～３０ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。イソフルランで麻酔処理に付したラットから後眼窩洞を介して全血を集め、最終サンプルは心臓穿刺によりＥＤＴＡに集めた。全血をマウス抗ラットＣＤ３２（ＢＤ＃５５０２７１）、ＰＥ－マウス抗ラットＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ＃５５４８８１）、ＰＥＣｙ５－マウス抗ラットＣＤ４（ＢＤ ＃５５４８３９）、およびＡＰＣ－マウス抗ラットＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－００８４）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｒａｙにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
【0069】
リンパ球減少症
マウスでは：
雌のＣ５７ＢＬ６マウス（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。マウス（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣｌからなるビヒクル中に化合物を１ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。心臓穿刺によりイソフルランで麻酔処理に付したマウスから最終全血サンプルをＥＤＴＡに集める。全血をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（マウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ、＃５５３１４１）、ＰＥ－ラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ ＃５５３０８９）、ＡＰＣ－Ｃｙ７－ラット抗マウスＣＤ８ａ（ＢＤ ＃５５７６５４）、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７－ラット抗マウスＣＤ４（ＢＤ ＃５５７６８１）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＦＡＣＳにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
マウスでは：
雌のＣ５７ＢＬ６マウス（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。マウス（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣｌからなるビヒクル中に化合物を１ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。心臓穿刺によりイソフルランで麻酔処理に付したマウスから最終全血サンプルをＥＤＴＡに集める。全血をラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（マウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ、＃５５３１４１）、ＰＥ－ラット抗マウスＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ ＃５５３０８９）、ＡＰＣ－Ｃｙ７－ラット抗マウスＣＤ８ａ（ＢＤ ＃５５７６５４）、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７－ラット抗マウスＣＤ４（ＢＤ ＃５５７６８１）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＦＡＣＳにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
【0070】
ラットでは：
雄のラット（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。ラット（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣＬからなるビヒクル中に化合物を１ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。イソフルランで麻酔処理に付したラットから後眼窩洞を介して全血を集め、最終サンプルは心臓穿刺によりＥＤＴＡに集めた。全血をマウス抗ラットＣＤ３２（ＢＤ＃５５０２７１）、ＰＥ－マウス抗ラットＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ＃５５４８８１）、ＰＥＣｙ５－マウス抗ラットＣＤ４（ＢＤ ＃５５４８３９）、およびＡＰＣ－マウス抗ラットＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－００８４）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｒａｙにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
雄のラット（Simonsen Laboratories、Gilroy CA）を、ＡＬＡＡＣ認定の施設で飼育し、その研究は施設のInstitutional Animal Care and Use Committee（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。実験を開始する前に、少なくとも５日間にわたって動物を実験室に訓化させる。ラット（ｎ＝３／化合物／時点）に、５％ＤＭＳＯ／５％ツゥーン２０および９０％ ０.１Ｎ ＨＣＬからなるビヒクル中に化合物を１ｍｇ／ｋｇで処方して経口胃管を介して投与する。対照となるマウスにビヒクルをＰＯ投与する。イソフルランで麻酔処理に付したラットから後眼窩洞を介して全血を集め、最終サンプルは心臓穿刺によりＥＤＴＡに集めた。全血をマウス抗ラットＣＤ３２（ＢＤ＃５５０２７１）、ＰＥ－マウス抗ラットＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０（ＢＤ＃５５４８８１）、ＰＥＣｙ５－マウス抗ラットＣＤ４（ＢＤ ＃５５４８３９）、およびＡＰＣ－マウス抗ラットＣＤ８ａ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃１７－００８４）と共に氷上で３０分間インキュベートする。BD Pharm Lyse Lysingバッファー（＃５５５８９９）を用いて赤血球を溶解し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｒａｙにより白血球を解析する。リンパ球減少はＣＤ４またはＣＤ８陽性Ｔ細胞である、白血球の％として表される。２４時間にわたる全体的なリンパ球減少応答は、線形台形法を用いて効果曲線下面積（ＡＵＥＣ）を計算することにより推定される。
【0071】
上記した種々の実施態様は組み合わされてさらなる実施態様を提供し得る。本願明細書に言及され、および／または出願データシートに列挙される、米国特許、米国特許出願公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許文献はすべて、出典明示によりその全体が本明細書に組み込まれるものとする。実施態様の態様は、必要に応じて種々の特許、出願および公報の概念を利用するように修飾され、さらに別の実施態様を提供することができる。これらの変形、および他の変形は、上記の詳細な説明に照らして、実施態様に対して行うことができる。一般に、次の特許請求の範囲において、使用される用語は、請求項を本明細書および特許請求の範囲に開示された特定の実施態様に限定するように解釈されるべきではなく、かかる請求項が権利を有する均等物の全範囲と共に、可能性のあるすべての実施態様を含むものと解釈されるべきである。２０２０年３月２７日付け出願の米国仮出願６３／００１,０７３、および２０２０年４月３０日付け出願の米国仮出願６３／０１８,３２７は、出典明示によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】