特表 2023-519962 抗ＭＥＲＴＫ抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-15

(54)【発明の名称】抗ＭＥＲＴＫ抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20230508BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20230508BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230508BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230508BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230508BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230508BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230508BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230508BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230508BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20230508BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/40 ZNA

C07K16/46

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P37/02

A61P25/00

A61P27/02

G01N33/53 D

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022559492

(86)(22)【出願日】2021-03-30

(85)【翻訳文提出日】2022-11-15

(86)【国際出願番号】 US2021024970

(87)【国際公開番号】W WO2021202590

(87)【国際公開日】2021-10-07

(31)【優先権主張番号】63/003,070

(32)【優先日】2020-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/165,592

(32)【優先日】2021-03-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517041235

【氏名又は名称】アレクトル エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】クルネラス マイケル

(72)【発明者】

【氏名】サラザール サンティアゴ ヴィヴェロス

(72)【発明者】

【氏名】ロール マリナ

(72)【発明者】

【氏名】イー アンジー グレース

(72)【発明者】

【氏名】イ スン－チュ

(72)【発明者】

【氏名】シュワブ ティナ

(72)【発明者】

【氏名】チャポン マキシム

(72)【発明者】

【氏名】エスタシオ ウィリアム フランシス

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンタール アーノン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA20

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA91X

4B065AB05

4B065AC14

4B065BA08

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB22

4C085CC23

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は概して、ＭｅｒＴＫポリペプチド、例えば、哺乳動物ＭｅｒＴＫまたはヒトＭｅｒＴＫに特異的に結合する抗体、例えば、モノクローナル抗体、抗体断片など、及びその必要のある個体における疾患または障害の予防、リスクの低下、または処置におけるそのような組成物の使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）に結合する単離された抗体であって、エフェロサイトーシスを４０％を超えて減少させない、前記単離された抗体。

【請求項2】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を減少させない、前記単離された抗体。

【請求項3】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を減少させない、前記単離された抗体。

【請求項4】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、食細胞による貪食を増加させる、前記単離された抗体。

【請求項5】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、
前記重鎖可変領域は、
（ａ）配列番号：２１３、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｂ）配列番号：２１５、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；ならびに
（ｃ）配列番号：２１７、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含み、
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）配列番号：１４７、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｅ）配列番号：１７２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに
（ｆ）配列番号：１９６、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含み、
任意に、前記抗体は、
（ｉ）それぞれ配列番号：２１３、２１５、２１７、１５６、１８０、及び２１９；
（ｉｉ）それぞれ配列番号：６４、８２、１１１、１３８、１６４、１８６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号：６５、８３、１１２、１３９、１６５、１８７；
（ｉｖ）それぞれ配列番号：６６、８４、１１３、１３８、１６４、１８８；
（ｖ）それぞれ配列番号：２２４、２２５、２２６、１４６、２２７、及び２２８；
（ｖｉ）それぞれ配列番号：６７、８５、１１４、１４０、１６６、及び１８９；
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号：６８、８６、１１５、１４１、１６７、及び１９０；
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：６５、８７、１１６、１４２、１６８、及び１９１；
（ｉｘ）それぞれ配列番号：６９、８８、１１７、１４３、１６９、及び１９２；
（ｘ）それぞれ配列番号：７０、８９、１１８、１４４、１６３、及び１９３；
（ｘｉ）それぞれ配列番号：７１、９０、１１９、１４５、１７０、１９４；
（ｘｉｉ）それぞれ配列番号：７２、９１、１２０、１４６、１７１、１９５；
（ｘｉｉｉ）それぞれ配列番号：７３、９２、１２１、１４７、１７２、１９６；
（ｘｉｖ）それぞれ配列番号：６５、９３、１２２、１４８、１７３、１９７；
（ｘｖ）それぞれ配列番号：６６、９４、１２３、１４９、１７４、１９８；
（ｘｖｉ）それぞれ配列番号：６６、９５、１２４、１５０、１６４、１８８；
（ｘｖｉｉ）それぞれ配列番号：７３、９６、１２５、１５１、１７５、及び１９９；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：７４、９７、１２６、１５２、１７６、及び２００；
（ｘｉｘ）それぞれ配列番号：７１、９８、１２７、１５３、１７７、及び２０１；
（ｘｘ）それぞれ配列番号：６６、９９、１２８、１３８、１６４、及び１８８；
（ｘｘｉ）それぞれ配列番号：７５、１００、１２９、１５４、１７８、及び２０２；
（ｘｘｉｉ）それぞれ配列番号：７１、１０１、１３０、１５５、１７９、及び２０１；
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ配列番号：７６、１０２、１３１，１５５、１７９、２０１；
（ｘｘｉｖ）それぞれ配列番号：７７、１０３、１３２、１５７、１８１、及び２０４；
（ｘｘｖ）それぞれ配列番号：７８、１０４、１３３、１５８、１８２、及び２０５；
（ｘｘｖｉ）それぞれ配列番号：７４、１０５、１２６、１５９、１７６、及び２００；
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ配列番号：７９、１０６、１３４、１６０、１８３、及び２０６；
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：７４、１０７、１２６、１６１、１７６、及び２００；
（ｘｘｉｘ）それぞれ配列番号：７０、１０８、１３５、１４４、１７０、及び２０７；
（ｘｘｘ）それぞれ配列番号：８０、１０９、１３６、１６２、１８４、及び２０８；
（ｘｘｘｉ）それぞれ配列番号：６３、８１、１１０、１３７、１６３、及び１８５；または
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ配列番号：２１４、２１６、２１８、２２０、１７２、及び２２１
のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、
前記単離された抗体。

【請求項6】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、ＭＴＫ－２３１、ＭＴＫ－２０１、ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１６、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、またはＭＴＫ－２３２の抗体のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を含む、前記単離された抗体。

【請求項7】

前記ＨＶＲは、Ｋａｂａｔで定義されたＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａで定義されたＨＶＲ、またはＡｂＭで定義されたＨＶＲである、請求項６に記載の抗体。

【請求項8】

前記重鎖可変領域は、配列番号：２０９、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２１０、及び２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号：２０９、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２１０、及び２２２と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項9】

前記軽鎖可変領域は、配列番号：２１１、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１２、及び２２３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号：２１１、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１２、及び２２３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項10】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭｅｒＴｋに結合する単離された抗体であって、前記重鎖可変領域は、配列番号：２０９、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２１０、及び２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記単離された抗体。

【請求項11】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＭｅｒＴｋに結合する単離された抗体であって、前記軽鎖可変領域は、配列番号：２１１、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１２、及び２２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記単離された抗体。

【請求項12】

それぞれ配列番号：２０９及び２１１；それぞれ配列番号：５及び３４；それぞれ配列番号：６及び３５；それぞれ配列番号：７及び３６；それぞれ配列番号：８及び３７；それぞれ配列番号：２２２及び２２３；それぞれ配列番号：９及び３８；それぞれ配列番号：１０及び３９；それぞれ配列番号：１１及び４０；それぞれ配列番号：１２及び４１；それぞれ配列番号：１３及び４２；それぞれ配列番号：１４及び４３；それぞれ配列番号：１５及び４４；それぞれ配列番号：１６及び４５；それぞれ配列番号：１７及び４６；それぞれ配列番号：１８及び４７；それぞれ配列番号：１９及び４８；それぞれ配列番号：２０及び４９；それぞれ配列番号：２１及び５０；それぞれ配列番号：２２及び５１；それぞれ配列番号：２３及び５２；それぞれ配列番号：２４及び５３；それぞれ配列番号：２５及び５４；それぞれ配列番号：２６及び５５；それぞれ配列番号：２７及び５６；それぞれ配列番号：２８及び５７；それぞれ配列番号：２９及び５８；それぞれ配列番号：３０及び５９；それぞれ配列番号：３１及び６０；それぞれ配列番号：３２及び６１；それぞれ配列番号：３３及び６２；ならびにそれぞれ配列番号：２１０及び２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項13】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、ヒトＭｅｒＴＫに対する結合について請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体の１つ以上の結合を競合的に阻害する、前記単離された抗体。

【請求項14】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する単離された抗体であって、ヒトＭｅｒＴＫに対する結合について、ＭｅｒＴＫ上の、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体と同じ、本質的に同じ、または重複するエピトープに結合する、前記単離された抗体。

【請求項15】

エフェロサイトーシスを４０％を超えて減少させない、請求項２～１４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項16】

エフェロサイトーシスを３０％を超えて減少させない、請求項１または１５に記載の抗体。

【請求項17】

エフェロサイトーシスを２０％を超えて減少させない、請求項１または１５に記載の抗体。

【請求項18】

エフェロサイトーシスを１０％を超えて減少させない、請求項１または１５に記載の抗体。

【請求項19】

ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合をブロックせず、任意に、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を３０％を超えて、２０％を超えて、１０％を超えて、または５％を超えて減少させない、請求項１、３、及び４～１８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項20】

ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合をブロックせず、任意に、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を３０％を超えて、２０％を超えて、１０％を超えて、または５％を超えて減少させない、請求項１、２、及び４～１９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項21】

食細胞による貪食を増加させる、請求項１及び３～１８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項22】

前記食細胞によるミエリンの前記貪食を増加させる、請求項４または２１に記載の抗体。

【請求項23】

前記食細胞は、マクロファージ、樹状細胞、ミクログリア細胞、または網膜色素上皮細胞である、請求項４、２１、及び２２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項24】

ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合をブロックせず、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合をブロックせず、任意に、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６またはＰｒｏＳの結合を３０％を超えて、２０％を超えて、１０％を超えて、または５％を超えて減少させない、請求項１～２３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項25】

ＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項26】

Ｇａｓ６の非存在下でＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる、請求項２５に記載の抗体。

【請求項27】

Ｇａｓ６の存在下でＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる、請求項２５または２６に記載の抗体。

【請求項28】

プロテインキナーゼＢ（ＡＫＴ）のリン酸化を増加させる、請求項１～２７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項29】

マクロファージにおける単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）発現を増加させる、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項30】

ＰｒｏＳの存在下でマクロファージにおけるＭＣＰ－１発現を増加させる、請求項２９に記載の抗体。

【請求項31】

ＰｒｏＳの非存在下でマクロファージにおけるＭＣＰ－１発現を増加させる、請求項２９または３０に記載の抗体。

【請求項32】

ＭｅｒＴＫのＮ末端ドメイン、Ｉｇ様ドメイン１、Ｉｇ様ドメイン２、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン１、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン２、及び／またはＭｅｒＴＫの膜近傍ドメインに結合する、請求項１～３１のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項33】

カニクイザルＭｅｒＴＫに結合するがマウスＭｅｒＴＫに結合しない、マウスＭｅｒＴＫに結合するがカニクイザルＭｅｒＴＫに結合しない、またはカニクイザルＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～３２のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項34】

４４０ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３５０ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満の親和性でヒトＭｅｒＴＫに結合する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項35】

ＭｅｒＴＫの非存在下でＧａｓ６リガンドに結合する、請求項１～３４のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項36】

ＭｅｒＴＫの非存在下でＰｒｏＳリガンドに結合する、請求項１～３５のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項37】

マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である、請求項１～３６のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項38】

ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項１～３７のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項39】

ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項３８に記載の抗体。

【請求項40】

全長抗体である、請求項１～３９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項41】

抗体断片である、請求項１～３９のいずれか１項に記載の抗体。

【請求項42】

前記断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片である、請求項４１に記載の抗体。

【請求項43】

請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。

【請求項44】

請求項４３に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項45】

請求項４３に記載の核酸または請求項４４に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。

【請求項46】

（ｉ）請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体のＶＨをコードする核酸配列を含む核酸、及び
（ｉｉ）前記抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶＬをコードする核酸配列を含む核酸
を含む、単離された宿主細胞。

【請求項47】

ヒトＭｅｒＴＫに結合する抗体を生成する方法であって、前記抗体が生成されるように請求項４５または４６に記載の細胞を培養する工程を含む、前記方法。

【請求項48】

前記細胞によって生成された前記抗体を回収する工程をさらに含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

請求項４７または４８に記載の方法によって生成された、抗体。

【請求項50】

請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む、薬学的組成物。

【請求項51】

個体における自己免疫性障害を予防し、リスクを低下させ、または処置する方法であって、その必要のある個体に治療的有効量の、請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体または請求項５０に記載の薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法。

【請求項52】

前記自己免疫性障害は、多発性硬化症である、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

個体における網膜神経節変性障害または網膜色素変性症を予防し、リスクを低下させ、または処置する方法であって、その必要のある個体に治療的有効量の、請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体または請求項５０に記載の薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法。

【請求項54】

個体における失明を予防し、リスクを低下させ、または処置する方法であって、その必要のある個体に治療的有効量の、請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体または請求項５０に記載の薬学的組成物を投与する工程を含む、前記方法。

【請求項55】

サンプルにおけるＭｅｒＴｋを検出するための方法であって、前記サンプルを請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体と接触させる工程を含む、前記方法。

【請求項56】

貪食を増加させる方法であって、食細胞を、請求項１～４２及び４９のいずれか１項に記載の抗体または請求項５０に記載の薬学的組成物と接触させる工程を含む、前記方法。

【請求項57】

ミエリンの前記貪食が増加する、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

視細胞外節の前記貪食が増加する、請求項５６または５７に記載の方法。

【請求項59】

前記接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏである、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記接触は、その必要のある個体におけるｉｎ ｖｉｖｏである、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年３月３１日に出願された米国仮出願第６３／００３，０７０号、及び２０２１年３月２４日に出願された米国仮出願第６３／１６５，５９２号の優先権の利益を主張し、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：４５０３＿０１１ＰＣ０２＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ＴＸＴ、記録日：２０２１年３月３０日、サイズ：１３５，２２９バイト）。

【0003】

本開示の分野
本開示は、抗ＭｅｒＴＫ抗体及びそのような抗体の使用（例えば、治療的使用）に関する。

【背景技術】

【0004】

本開示の背景
Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）は、受容体チロシンキナーゼのＴＡＭ（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、及びＭｅｒＴＫ）ファミリーに属する。ＭｅｒＴＫは、２つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様及び２つのフィブロネクチン（ＦＮ）ＩＩＩ型モチーフを有する細胞外ドメインを有する１回貫通１型膜貫通タンパク質である（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１４：７６９－７８５（非特許文献1）；Ｒｏｔｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３３：３５５－３９１（非特許文献2））。

【0005】

プロテインＳ（ＰｒｏＳまたはＰｒｏＳ１）、成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）、Ｔｕｂｂｙ、Ｔｕｂｂｙ様タンパク質１（ＴＵＬＰ－１）、及びガレクチン－３を含むＭｅｒＴＫのいくつかのリガンドが特定されている。ＭｅｒＴＫは、リガンド結合後の活性化を介して細胞外空間からシグナルを伝達し、ＭｅｒＴＫチロシン自己リン酸化（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９：５２７５－５２８０（非特許文献3）；Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ，１０：１７６３－１７７３（非特許文献4））ならびにその後のＥＲＫ及びＡＫＴ関連シグナル伝達をもたらす。

【0006】

ＭｅｒＴＫは、多発性硬化症（ＭＳ）感受性遺伝子として特定されており、稀なバリアント及び一般的なバリアントのいずれもが、ＭＳを発症させるまたは疾患経過を変化させるリスクの増加につながる（Ｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，ＰＬｏＳ ＯＮＥ，６：１－６（非特許文献5）；Ｂｉｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｐｐ．１－２５（非特許文献6）；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ，２０２１，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，３４，１０８８３５（非特許文献7））。ＭｅｒＴＫは、貪食によるミエリンデブリのクリアランスを制御する；効率的なミエリンデブリクリアランスは、組織修復及び再ミエリン化のための重要な工程である。ＭｅｒＴＫの阻害または喪失は、ミエリン貪食を減少させた（Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９６：３３７５－３３８４（非特許文献8）；Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ，４：ｅ４０２（非特許文献9）；Ｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ，２０１９，Ｄｉｓｅａｓｅ Ｍａｒｋｅｒｓ，ＩＤ２３８７６１４：１－１３（非特許文献10）；Ｗｅｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，２００９，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７５：２８３－２９３（非特許文献11）；Ｓｈａｒｉｔ－Ｚａｇａｒｄｏ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，１８８：９７－１１７（非特許文献12）；Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ，２０２１，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，３４：１０８８３５（非特許文献7））。また、ＭｅｒＴＫにおける変異は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が視細胞外節を貪食する能力を低下させ、ＲＰＥ細胞から光受容細胞を分離するデブリの蓄積につながり、それらの変性及びその後の失明をもたらした（Ｌｏｒａｃｈ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，８：１１３１２（非特許文献13））。

【0007】

自己免疫障害（例えば、多発性硬化症）及び網膜神経節変性に関連する障害を処置または予防するのに有効な新規治療用抗ＭｅｒＴＫ抗体が必要とされている。本開示は、貪食を増殖させることを含む、ＭｅｒＴＫ活性を増強する抗ＭｅｒＴＫ抗体を提供することによってこのニーズを満たす。

【0008】

特許出願及び公報を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ，２０１４，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１４：７６９－７８５

【非特許文献2】Ｒｏｔｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３３：３５５－３９１

【非特許文献3】Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ，２０１３，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９：５２７５－５２８０

【非特許文献4】Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ，１０：１７６３－１７７３

【非特許文献5】Ｍａ ｅｔ ａｌ，２０１１，ＰＬｏＳ ＯＮＥ，６：１－６

【非特許文献6】Ｂｉｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１６，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｐｐ．１－２５

【非特許文献7】Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ，２０２１，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，３４，１０８８３５

【非特許文献8】Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９６：３３７５－３３８４

【非特許文献9】Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ，４：ｅ４０２

【非特許文献10】Ｔｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ，２０１９，Ｄｉｓｅａｓｅ Ｍａｒｋｅｒｓ，ＩＤ２３８７６１４：１－１３

【非特許文献11】Ｗｅｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ，２００９，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７５：２８３－２９３

【非特許文献12】Ｓｈａｒｉｔ－Ｚａｇａｒｄｏ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ，１８８：９７－１１７

【非特許文献13】Ｌｏｒａｃｈ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，８：１１３１２

【発明の概要】

【0010】

本開示の概要
本開示は一般に、抗Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭｅｒＴＫ）抗体及びそのような抗体を使用する方法に関する。本明細書で提供される方法は、個体における自己免疫性障害、例えば、多発性硬化症などを予防または処置することに利用される。いくつかの態様において、本開示は、個体における自己免疫性障害（例えば、多発性硬化症）を処置するための方法であって、方法は、その必要のある個体に治療的有効量の抗ＭｅｒＴＫ抗体を投与する工程を含む、方法を提供する。

【0011】

一態様において、本開示は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号：６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、２１３、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号：８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、２１５、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；ならびに配列番号：１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、２１７、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、軽鎖可変領域は、配列番号：１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号：１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに配列番号：１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体に関する。

【0012】

一態様において、本開示は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、抗体は、（ｉ）それぞれ配列番号：６３、８１、１１０、１３７、１６３、及び１８５；（ｉｉ）それぞれ配列番号：６４、８２、１１１、１３８、１６４、１８６；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号：６５、８３、１１２、１３９、１６５、１８７；（ｉｖ）それぞれ配列番号：６６、８４、１１３、１３８、１６４、１８８；（ｖ）それぞれ配列番号：２２４、２２５、２２６、１４６、２２７、及び２２８；（ｖｉ）それぞれ配列番号：６７、８５、１１４、１４０、１６６、及び１８９；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号：６８、８６、１１５、１４１、１６７、及び１９０；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：６５、８７、１１６、１４２、１６８、及び１９１；（ｉｘ）それぞれ配列番号：６９、８８、１１７、１４３、１６９、及び１９２；（ｘ）それぞれ配列番号：７０、８９、１１８、１４４、１６３、及び１９３；（ｘｉ）それぞれ配列番号：７１、９０、１１９、１４５、１７０、１９４；（ｘｉｉ）それぞれ配列番号：７２、９１、１２０、１４６、１７１、１９５；（ｘｉｉｉ）それぞれ配列番号：７３、９２、１２１、１４７、１７２、１９６；（ｘｉｖ）それぞれ配列番号：６５、９３、１２２、１４８、１７３、１９７；（ｘｖ）それぞれ配列番号：６６、９４、１２３、１４９、１７４、１９８；（ｘｖｉ）それぞれ配列番号：６６、９５、１２４、１５０、１６４、１８８；（ｘｖｉｉ）それぞれ配列番号：７３、９６、１２５、１５１、１７５、及び１９９；（ｘｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：７４、９７、１２６、１５２、１７６、及び２００；（ｘｉｘ）それぞれ配列番号：７１、９８、１２７、１５３、１７７、及び２０１；（ｘｘ）それぞれ配列番号：６６、９９、１２８、１３８、１６４、及び１８８；（ｘｘｉ）それぞれ配列番号：７５、１００、１２９、１５４、１７８、及び２０２；（ｘｘｉｉ）それぞれ配列番号：７１、１０１、１３０、１５５、１７９、及び２０１；（ｘｘｉｉｉ）それぞれ配列番号：７６、１０２、１３１，１５５、１７９、２０１；（ｘｘｉｖ）それぞれ配列番号：７７、１０３、１３２、１５７、１８１、及び２０４；（ｘｘｖ）それぞれ配列番号：７８、１０４、１３３、１５８、１８２、及び２０５；（ｘｘｖｉ）それぞれ配列番号：７４、１０５、１２６、１５９、１７６、及び２００；（ｘｘｖｉｉ）それぞれ配列番号：７９、１０６、１３４、１６０、１８３、及び２０６；（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ配列番号：７４、１０７、１２６、１６１、１７６、及び２００；（ｘｘｉｘ）それぞれ配列番号：７０、１０８、１３５、１４４、１７０、及び２０７；（ｘｘｘ）それぞれ配列番号：８０、１０９、１３６、１６２、１８４、及び２０８；（ｘｘｘｉ）それぞれ配列番号：２１３、２１５、２１７、１５６、１８０、及び２１９；または（ｘｘｘｉｉ）それぞれ配列番号：２１４、２１６、２１８、２２０、１７２、及び２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、及びＨＶＲ－Ｌ３を含む、単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体に関する。

【0013】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、ＭＴＫ－２０１、ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１６、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、ＭＴＫ－２３１、またはＭＴＫ－２３２の抗体のＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３、ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３配列を含む、単離された抗体である。いくつかの態様において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔで定義されたＨＶＲ、Ｃｈｏｔｈｉａで定義されたＨＶＲ、またはＡｂＭで定義されたＨＶＲである。

【0014】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、及び２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体である。

【0015】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、及び２２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体である。

【0016】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、及び２２２から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、２２３から選択されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体である。

【0017】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、それぞれ配列番号：５及び３４；それぞれ配列番号：６及び３５；それぞれ配列番号：７及び３６；それぞれ配列番号：８及び３７；それぞれ配列番号：２２２及び２２３；それぞれ配列番号：９及び３８；それぞれ配列番号：１０及び３９；それぞれ配列番号：１１及び４０；それぞれ配列番号：１２及び４１；それぞれ配列番号：１３及び４２；それぞれ配列番号：１４及び４３；それぞれ配列番号：１５及び４４；それぞれ配列番号：１６及び４５；それぞれ配列番号：１７及び４６；それぞれ配列番号：１８及び４７；それぞれ配列番号：１９及び４８；それぞれ配列番号：２０及び４９；それぞれ配列番号：２１及び５０；それぞれ配列番号：２２及び５１；それぞれ配列番号：２３及び５２；それぞれ配列番号：２４及び５３；それぞれ配列番号：２５及び５４；それぞれ配列番号：２６及び５５；それぞれ配列番号：２７及び５６；それぞれ配列番号：２８及び５７；それぞれ配列番号：２９及び５８；それぞれ配列番号：３０及び５９；それぞれ配列番号：３１及び６０；それぞれ配列番号：３２及び６１；それぞれ配列番号：３３及び６２；それぞれ配列番号：２０９及び２１１；ならびにそれぞれ配列番号：２１０及び２１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、単離された抗体である。

【0018】

一態様において、本開示は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、ＭｅｒＴＫに対する結合について本明細書における態様のいずれかの抗体の１つ以上の結合を競合的に阻害する、単離された抗体に関する。

【0019】

別の態様において、本開示は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、ＭｅｒＴＫ上の、本明細書における態様のいずれかの抗体と同じまたは重複するエピトープに本質的に結合する、単離された抗体に関する。別の態様において、本開示は、ＭｅｒＴＫタンパク質に結合する単離された抗体であって、抗体は、ＭｅｒＴＫ上の、本明細書における態様のいずれかの抗体と同じエピトープに結合する、単離された抗体に関する。

【0020】

本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、ＭｅｒＴＫタンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、ＭｅｒＴＫタンパク質は、野生型タンパク質である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、ＭｅｒＴＫタンパク質は、天然に存在するバリアントである。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ヒトＭｅｒＴＫならびにカニクイザルＭｅｒＴＫ及び／またはマウスＭｅｒＴＫに結合する。

【0021】

本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対する１つ以上のリガンドの結合を阻害または減少させない。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を阻害または減少させない。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を阻害または減少させない。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を阻害または減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を阻害または減少させない。

【0022】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、貪食を増加させる。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、貪食によるミエリンデブリのクリアランスを増加させる。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴｋ抗体は、網膜色素上皮細胞による視細胞外節貪食を増加させる。

【0023】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを４０％を超えて減少させない。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを３０％を超えて減少させない。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを２０％を超えて減少させない。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを１０％を超えて減少させない。

【0024】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６の非存在下でＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６の存在下でＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる。

【0025】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、プロテインキナーゼＢ（ＡＫＴ）のリン酸化を増加させる。

【0026】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、マクロファージにおける単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）発現を増加させる。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＰｒｏＳの存在下でマクロファージにおけるＭＣＰ－１発現を増加させる。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＰｒｏＳの非存在下でマクロファージにおけるＭＣＰ－１発現を増加させる。

【0027】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫのＮ末端ドメイン、Ｉｇ様ドメイン１、Ｉｇ様ドメイン２、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン１、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン２、及び／またはＭｅｒＴＫの膜近傍ドメインに結合する。

【0028】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合するが、マウスＭｅｒＴＫに結合しない、マウスＭｅｒＴＫに結合するが、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合しない、またはカニクイザルＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫに結合する。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、４４０ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３５０ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、２５０ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１５０ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満の親和性でヒトＭｅｒＴＫに結合する。

【0029】

本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫの非存在下でＧａｓ６に結合する。本明細書で提供される態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫの非存在下でＰｒｏＳに結合する。

【0030】

本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、抗体は、ヒト抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、抗体は、ヒト化抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、抗体は、二重特異性抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、抗体は、多価抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、抗体は、キメラ抗体である。

【0031】

本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得るいくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。いくつかの態様において、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、抗体は、全長抗体である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、抗体は、抗体断片である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、抗体は、ヒトＭｅｒＴＫまたは哺乳動物ＭｅｒＴＫタンパク質上のエピトープに結合する抗体断片である。本明細書における態様のいずれかと組み合わされ得る所定の態様において、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖ断片である。

【0032】

別の態様において、本開示は、先行の態様のいずれかの抗ＭｅｒＴＫ抗体をコードする核酸配列を含む単離された核酸に関する。いくつかの態様において、本開示は、先行の態様のいずれかの核酸を含むベクターに関する。いくつかの態様において、本開示は、先行の態様のいずれかの核酸または先行の態様のいずれかのベクターを含む単離された宿主細胞に関する。いくつかの態様において、本開示は、（ｉ）先行の態様のいずれかの抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶＨをコードする核酸配列を含む核酸、及び（ｉｉ）抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶＬをコードする核酸配列を含む核酸を含む単離された宿主細胞に関する。

【0033】

別の態様において、本開示は、ヒトＭｅｒＴＫ抗体に結合する抗体を生成する方法であって、抗ＭｅｒＴＫ抗体が生成されるように先行の態様のいずれかの宿主細胞を培養する工程を含む、方法に関する。所定の態様において、方法は、細胞によって生成された抗ＭｅｒＴＫ抗体を回収する工程をさらに含む。

【0034】

別の態様において、本開示は、先行の態様のいずれか１つの抗ＭｅｒＴＫ抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物に関する。

【0035】

一態様において、本開示は、サンプルにおけるＭｅｒＴｋを検出する方法であって、前記サンプルを、先行の態様のいずれかの抗ＭｅｒＴＫ抗体と接触させる工程を含み、任意に、方法は、サンプルにおけるＭｅｒＴＫに対する抗体の結合を検出する工程をさらに含む、方法に関する。

【0036】

本明細書に記載の様々な態様の特性のうちの１つ、一部、または全てが組み合わされて本開示の他の態様を形成し得ることが理解されるべきである。本開示のこれらの及び他の態様は、当業者に明らかになる。本開示のこれらの及び他の態様は、以下の詳細な説明によってさらに説明される。

【図面の簡単な説明】

【0037】

【図1】本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の添加後のヒトマクロファージにおけるＭｅｒＴＫのリン酸化（ｐＭｅｒＴＫ）を示すデータを示している。

【図2】本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を示すデータを示している。

【図3A】マクロファージにおけるＭＣＰ－１発現に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を示すデータを示している。

【図3B】マクロファージにおけるＭＣＰ－１発現に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を示すデータを示している。

【図3C】マクロファージにおけるＭＣＰ－１発現に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を示すデータを示している。

【図4】Ｇａｓ６タンパク質の存在または非存在下でのＭｅｒＴＫのチロシンリン酸化（ｐＭｅｒＴＫ）に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を示すデータを示している。

【発明を実施するための形態】

【0038】

本開示の詳細な説明
本開示は、抗ＭｅｒＴＫ抗体（例えば、モノクローナル抗体）；そのような抗体を作製する及び使用する方法；そのような抗体を含む薬学的組成物；そのような抗体をコードする核酸；ならびにそのような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。

【0039】

本明細書で記載されるまたは参照される技術及び手順は概してよく理解されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）に記載されているものなどの広く利用されている方法論などの、当業者によって慣用の方法論を使用して一般的に用いられている。

【0040】

Ｉ．定義
「ＭｅｒＴＫ」または「ＭｅｒＴＫポリペプチド」または「ＭｅｒＴＫタンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、本明細書において、別段示されない限り、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）（カニクイザル（ｃｙｎｏ）））及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然ＭｅｒＴＫを指す。ＭｅｒＴＫは、ｃ－ｍｅｒ、ＭＥＲ、がん原遺伝子ｃ－Ｍｅｒ、受容体チロシンキナーゼＭｅｒＴＫ、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｒ、ＳＴＫキナーゼ、ＲＰ３８、及びＭＧＣ１３３３４９とも称される。いくつかの態様において、その用語は、野生型配列及び天然に存在するバリアント配列、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントの両方を包含する。いくつかの態様において、その用語は、「全長」のプロセシングされていないＭｅｒＴＫ及び細胞におけるプロセシングに起因するＭｅｒＴＫの任意の形態を包含する。いくつかの態様において、ＭｅｒＴＫは、ヒトＭｅｒＴＫである。本明細書で使用されるとき、「ヒトＭｅｒＴＫ」という用語は、配列番号：１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。

【0041】

「抗ＭｅｒＴＫ抗体」、「ＭｅｒＴＫ抗体」、「ＭｅｒＴＫに結合する抗体」、及び「ＭｅｒＴＫに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体がＭｅｒＴＫを標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用となるように十分な親和性でＭｅｒＴＫに結合することが可能な抗体を指す。一態様において、無関係の非ＭｅｒＴＫポリペプチドに対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって決定される場合、ＭｅｒＴＫに対する抗体の結合の約１０％未満である。所定の態様において、ＭｅｒＴＫに結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。所定の態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、異なる種からＭｅｒＴＫ間で保存されたＭｅｒＴＫのエピトープに結合する。

【0042】

抗体の標的分子への結合に関して、「特異的結合」または特定のポリペプチド標的上の特定のポリペプチドもしくはエピトープに「特異的に結合する」または「対して特異的である」という用語は、非特異的相互作用とはある程度異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することによって測定され得る。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰な非標識標的に類似である対照分子との競合によって決定され得る。この場合、プローブへの標識した標的の結合が過剰な非標識標的によって競合的に阻害された場合に、特異的結合が示される。本明細書に使用される、特定のポリペプチド、または特定のポリペプチド標的上のエピトープに「特異的な結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、例えば、標的に対して約１０^－４Ｍ以下、１０^－５Ｍ以下、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下のいずれかのＫＤまたは１０^－４Ｍ～１０^－６Ｍもしくは１０^－６Ｍ～１０^－１０Ｍもしくは１０^－７Ｍ～１０^－９Ｍの範囲内のＫＤを有する分子によって表され得る。当業者によって理解されるように、親和性及びＫＤの値は、逆相関している。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。

【0043】

「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において、「抗体」と同じ意味で使用される。本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、特にモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成されたものを含む多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及びそれらが所望の生物学的活性を呈する場合に限り抗原結合抗体断片を包含する。

【0044】

「天然抗体」とは、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖及び２つの同一の重（「Ｈ」）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合により重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、規則的な間隔を置いた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、これにいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、その他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。

【0045】

異なる抗体クラスの構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，ｐａｇｅ ７１ ａｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ ６を参照されたい。

【0046】

任意の脊椎動物種に由来する軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なる種類のうちの１つに割り当てられ得る。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスまたはアイソタイプに割り振ることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）、及びミュー（「μ」）と表記される重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の相対的にわずかな相違に基づいて、サブクラス（アイソタイプ）にさらに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。異なる免疫グロブリンクラスのサブユニット構造及び三次元構成は既知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４^ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）に大まかに記載されている。

【0047】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「Ｖ_Ｈ」及び「Ｖ_Ｌ」と呼ぶことができる。これらのドメインは、一般に、可変性の最も高い抗体部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。

【0048】

「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体などの抗体間で配列が大幅に異なるという事実を指す。可変ドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する、特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体に均一に分布しているわけではない。むしろ、それは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメインにおいて、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのうち、より高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、３つのＨＶＲによって接続されたベータシート立体配置を主とする４つのＦＲ領域を含み、これらのＨＶＲは、ベータシート構造を接続し、場合により、ベータシート構造の一部を形成するループを形成する。各鎖中のＨＶＲは、ＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他方の鎖からのＨＶＲと共に、その抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。

【0049】

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体、例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫモノクローナル抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある天然に存在する変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象としている。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養により合成され、他の免疫グロブリンが混入されていないという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、以下の方法、すなわち、ＤＮＡ（複数可）、ウイルス様粒子、ポリペプチド（複数可）、及び／または細胞（複数可）のうちの１つ以上でのラット、マウス、ウサギ、モルモット、ハムスター及び／またはニワトリを含むがこれらに限定されない動物の免疫方法、ハイブリドーマ法、Ｂ細胞クローニング法、組換えＤＮＡ法、ならびにヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全てを有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を生成するための技術のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない多様な技術によって作製され得る。

【0050】

「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）を指すために互換的に使用される。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。いくつかの場合において、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0051】

「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）参照）；一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

【0052】

抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）をパパイン消化すると、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した名称を持つ１つの残留「Ｆｃ」断片とが生成される。Ｆａｂ断片は、重鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）と共に全軽鎖、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型Ｆ（ａｂ’）_２断片をもたらし、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むいくつかのさらなる残基を、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。

【0053】

Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持された、両方とも重鎖であるカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、この領域はまた、特定の細胞型にみられるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。

【0054】

抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）の「機能性断片」は、インタクト抗体の部分を含み、概して、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するか、修飾されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例には、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

【0055】

「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間の可変ドメイン対合を達成し、それによって二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間に短いリンカー（約５～１０残基）を用いてｓＦｖ断片（前述の段落を参照）を構築することによって作製された小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在している、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。

【0056】

本明細書で使用されるとき、「キメラ抗体」は、抗体（免疫グロブリン）、例えば、本開示のキメラ抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、重鎖及び／または軽鎖の部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であり、かつ、その鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である、抗体、ならびにそのような抗体の断片（ただし、所望の生物活性を呈する場合に限る）を指す。本明細書中で対象とするキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれ、この場合、当該抗体の抗原結合領域は、例えば、マカクザルに目的の抗原で免疫性を与えることによって生成される抗体に由来する。本明細書で使用されるとき、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

【0057】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態、例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のヒト化形態は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。ある特定の態様において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体のそれらに対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のそれらに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。

【0058】

「ヒト抗体」は、ヒトによって生成された抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製する技法のうちのいずれかを使用して作製された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ及び酵母ディスプレイライブラリを含む、当該技術分野において既知の様々な技術を使用して生成され得る。ヒト抗体は、そのような抗体を抗原投与に応答して生成するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物（例えば、免疫化異種マウス）に、抗原を投与することによって調製され、また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成され得る。

【0059】

本明細書で使用されるとき、「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の抗体可変ドメインの領域）を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶ_Ｈ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶ_Ｌ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。天然抗体において、Ｈ３及びＬ３が６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を呈し、特にＨ３が抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられる。重鎖のみからなる天然に存在するラクダ抗体は、軽鎖がない状態で、機能的であり、安定している。

【0060】

多くのＨＶＲ記述が本明細書で使用され、本明細書に包含される。いくつかの態様において、ＨＶＲは、配列可変性に基づくＫａｂａｔによる相補性決定領域（ＣＤＲ）であり得、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、上掲）。いくつかの態様において、ＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲであり得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造的ループの位置に言及するものである（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。いくつかの態様において、ＨＶＲは、ＡｂＭ ＨＶＲであり得る。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。いくつかの態様において、ＨＶＲは、「接触」ＨＶＲであり得る。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲの各々由来の残基が以下に記載される。

【0061】

ＨＶＲは、次の「伸長ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ中、２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中、２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（好ましい態様）（Ｈ２）及び９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの伸長ＨＶＲ定義の各々に対して、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上掲）に従って付番される。

【0062】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0063】

本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶ_ＬフレームワークまたはＶ_Ｈフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、当該フレームワークと同じアミノ酸配列を含んでもよいし、既存のアミノ酸配列変化を含んでもよい。いくつかの態様において、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいそれらの変化が位置７１Ｈ、７３Ｈ及び７８Ｈのうちの３つ、２つ、または１つにのみ生じる、例えば、それらの位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または７８Ａであり得る。一態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、Ｖ_Ｌヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。

【0064】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶ_ＬまたはＶ_Ｈフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンのＶ_ＬまたはＶ_Ｈ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからなされる。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）などのサブグループである。例として、Ｖ_Ｌに関するものを挙げると、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上掲）などのサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩまたはカッパＩＶであり得る。さらに、Ｖ_Ｈについては、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上掲）などのサブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであり得る。

【0065】

指定位置における「アミノ酸修飾」（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のアミノ酸修飾）は、指定残基の置換もしくは欠失、または少なくとも１つのアミノ酸残基の指定残基に隣接する挿入を指す。指定残基に「隣接する」挿入とは、その１～２つの残基内への挿入を意味する。挿入は、指定された残基のＮ末端側またはＣ末端側であり得る。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は、置換である。

【0066】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが非共有結合で緊密に会合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つしか含まない半分のＦｖ）であっても、全結合部位よりも低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を有する。

【0067】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と短縮されることもある「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖の状態に連結された、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能となっている。

【0068】

抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて様々である。

【0069】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用され、天然配列のＦｃ領域及びバリアントＦｃ領域が含まれる。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、アミノ酸残基の位置Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで及ぶものと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番システムによると残基４４７）は、例えば、抗体の生成もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクト抗体の組成は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体において使用するための好適な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。

【0070】

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然に存在するバリアントが含まれる。

【0071】

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）の効力により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１～約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも８０％の相同性、最も好ましくは、それらと少なくとも９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも９５％の相同性を保有する。

【0072】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体（これらの受容体のアレルバリアント及び選択的スプライシング形態を含む）が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、同様のアミノ酸配列を有し、主にその細胞質ドメインが異なる、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する。今後特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期を延長し得る。

【0073】

本明細書で使用されるとき、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「アミノ酸配列相同性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後の、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しない、指定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術範囲内である種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当該技術分野において既知の任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを評価するための適切なパラメータを決定することができる。

【0074】

「競合する」という用語は、同じエピトープまたは重複エピトープについて競合する抗体に関連して使用される場合、試験されている抗体が共通の抗原（例えば、ＭｅｒＴＫまたはその断片）に対する参照分子（例えば、リガンド、または参照抗体）の特異的結合を防止するまたは阻害する（例えば、減少させる）アッセイによって決定される抗体間の競合を意味する。多数のタイプの競合的結合アッセイが、抗体が別の抗体と競合するかどうかを決定するために使用され得る（例えば：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照されたい）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２））。典型的には、そのようなアッセイは、これらのいずれかを保有する固体表面または細胞に結合した精製された抗原、未標識試験抗体及び標識参照抗体の使用を含む。競合的阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び生じる立体障害のために参照抗体が結合したエピトープに十分に近い隣接するエピトープに結合する抗体が含まれる。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、それは、共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または１００％近く阻害する（例えば、減少させる）。

【0075】

本明細書で使用されるとき、ＭｅｒＴＫポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の「相互作用」は、限定するものではないが、タンパク質－タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合及びイオン結合を包含する。本明細書で使用されるとき、抗体が２つのポリペプチド間の相互作用を中断、低減または完全に排除するとき、その抗体は、２つのポリペプチド間の「相互作用を阻害する」。その本開示の抗体が２つのポリペプチドのうちの１つに結合するとき、その抗体は、２つのポリペプチド間の「相互作用を阻害する」。いくつかの態様において、相互作用は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、及び／または１００％近く阻害され得る。

【0076】

「エピトープ」という用語には、抗体に結合することが可能な任意の決定基が含まれる。エピトープは、その抗原を標的とする抗体に結合する抗原の領域であり、抗原がポリペプチドである場合、抗体を直接的に接触させる特定のアミノ酸を含む。ほとんどの場合、エピトープは、ポリペプチド上に存在するが、いくつかの例では、核酸などの他の種類の分子上に存在し得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面分類を含み得、特定の三次元構造的特性、及び／または特定の電荷特性を有し得る。通常、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド及び／またはマクロ分子の複雑な混合物において標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。

【0077】

「単離された」抗体、例えば、本開示の単離された抗ＭｅｒＴＫ抗体は、その生成環境（例えば、天然または組換え）の成分から特定、分離及び／または回収されたものである。好ましくは、単離された抗体は、その生成環境に由来する他の全ての夾雑成分との会合がない。その生成環境に由来する夾雑成分、例えば、組換えトランスフェクション細胞に起因するものなどは、典型的に、抗体の研究上、診断上または治療上での使用を妨げる物質であり、これらには、酵素、ホルモン及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。好ましい態様において、抗体は、（１）抗体が、例えば、ローリー法によって決定したときに、９５重量％超、いくつかの態様では９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用により、少なくとも１５個のＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の残基を得るのに十分な程度になるまで、または（３）クマシーブルー染色もしくは好ましくはシルバー染色を使用して、非還元条件もしくは還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質性が得られるまで、精製される。単離された抗体には、組換えＴ細胞内でのｉｎ ｓｉｔｕ抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在していないためである。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。

【0078】

抗体（例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体）をコードする「単離された」核酸分子は、その核酸分子が生成された環境において通常会合している少なくとも１つの夾雑核酸分子から特定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、その生成環境に伴う全ての構成成分との会合がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、それが天然に見られる形態または設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞中に天然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。

【0079】

「ベクター」という用語は、本明細書で使用されるとき、結合された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。１つの種類のベクターは「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲートされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞における自己複製が可能である（例えば、細菌起源の複製を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を司ることができる。そのようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技法において利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、同じ意味で使用され得る。

【0080】

本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによりまたは合成反応によりポリマー中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。

【0081】

「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントになり得るか、レシピエントになっている個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、突然、または意図的変異のため、必ずしも元の親細胞と（形態においてまたはゲノムＤＮＡ相補体において）完全に同一である必要はない場合がある。宿主細胞には、本開示のポリヌクレオチド（複数可）でｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクションされた細胞が含まれる。

【0082】

本明細書で使用される「担体」には、使用される投薬量及び濃度で、それに曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤が含まれる。

【0083】

本明細書で使用されるとき、「予防する」という用語は、個体における特定の疾患、障害または病態の発生または再発に対する予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害または病態にかかりやすく敏感であり得て、あるいは、かかる疾患、障害または病態を発症するリスクがあり得るが、まだ当該疾患、障害または病態であると診断されていない。

【0084】

本明細書で使用されるとき、特定の疾患、障害または病態を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していてもいなくてもよく、本明細書に記載される処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を呈していてもいなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、当該技術分野で知られているように、特定の疾患、障害、または病態の発症と相関する測定可能なパラメータである、１つ以上のリスク因子を有することを意味する。これらのリスク因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子のうちの１つ以上を有さない個体よりも特定の疾患、障害、または病態を発症する可能性が高い。

【0085】

本明細書で使用されるとき、「処置」という用語は、臨床的病理の経過中に処置されている個体の自然経過を改変するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい効果には、特定の疾患、障害、または病態の進行速度の減速、病理学的状態の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が含まれる。個体は、例えば、特定の疾患、障害、または病態に関連する１つ以上の症状が軽減または排除された場合、成功裏に「処置される」。

【0086】

「有効量」は、少なくとも、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間における有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与で提供され得る。有効量は、治療上有益な効果が処置の任意の毒性効果または有害効果を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除もしくは低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延などの結果が含まれる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果には、疾患に起因する１つ以上の症状の減少、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の処置に必要な他の薬剤の用量の減少、標的化などを介する別の薬剤の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的状況において理解されるように、薬物、化合物または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物または薬学的組成物と併せて達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬の投与に関連して考慮される場合があり、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せると望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられることが考慮され得る。

【0087】

処置、予防またはリスク低下の目的のための「個体」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。いくつかの態様において、個体は、ヒトである。

【0088】

本明細書で使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者に容易に理解される、各値の通常の誤差範囲を指す。いくつかの態様において、「約」が数値または数値範囲を修飾するために使用される場合、その用語は、値または範囲より最大で１０％上回り及び１０％まで下回る逸脱が、記述された値または範囲の意図される意味内に留まることを示す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする態様を含む（かつ記載する）。

【0089】

本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、モル量等の１つ～多数の抗体への言及であり、当業者に既知のその等価物を含むといった具合である。

【0090】

本明細書に記載される本開示の態様は、態様を「含む」、態様「からなる」、ならびに態様「から本質的になる」を含むことを理解されたい。

【0091】

ＩＩ．抗ＭｅｒＴＫ抗体
本明細書では、抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。本明細書で提供される抗体は、例えば、ＭｅｒＴＫ関連障害の診断または処置に有用な抗体である。本明細書では、抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0092】

一態様において、本開示は、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド内のエピトープに結合する単離された（例えば、モノクローナル）抗体を提供する。本開示のＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチドには、限定されないが、哺乳動物ＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、ヒトＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、マウス（ｍｏｕｓｅ）（マウス（ｍｕｒｉｎｅ））ＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチド、及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）（カニクイザル（ｃｙｎｏ））ＭｅｒＴＫタンパク質またはポリペプチドが含まれる。本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドには、ＭｅｒＴＫの天然に存在するバリアントが含まれる。いくつかの態様において、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドは、膜に結合している。いくつかの態様において、本開示のＭｅｒＴＫタンパク質及びポリペプチドは、ＭｅｒＴＫの可溶性細胞外ドメインである。

【0093】

いくつかの態様において、ＭｅｒＴＫは、細胞に発現する。いくつかの態様において、ＭｅｒＴＫは、限定されないが、マクロファージ、樹状細胞、またはミクログリアを含む食細胞に発現する。いくつかの態様において、ＭｅｒＴＫは、ミクログリアに発現する。いくつかの態様において、ＭｅｒＴＫは、星状細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、内皮細胞、巨核球、及び血小板に発現する。いくつかの態様において、高レベルのＭｅｒＴＫ発現はまた、卵巣、前立腺、精巣、肺、網膜、及び腎臓に見られる。

【0094】

抗体活性
いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合するが、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合しない抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合するが、マウスＭｅｒＴＫに結合しない抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合するが、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合せず、マウスＭｅｒＴＫに結合しない抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合するが、マウスＭｅｒＴＫに結合しない抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、マウスＭｅｒＴＫに結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、マウスＭｅｒＴＫに結合するが、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合しない抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、マウスＭｅｒＴＫに結合し、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0095】

ＭｅｒＴＫ結合パートナー
本開示のＭｅｒＴＫタンパク質は、限定されないが、プロテインＳ（ＰｒｏＳまたはＰｒｏＳ１）、成長停止特異的遺伝子６（Ｇａｓ６）、Ｔｕｂｂｙ、Ｔｕｂｂｙ様タンパク質１（ＴＵＬＰ－１）、及びガレクチン－３を含む１つ以上のリガンドまたは結合パートナーと相互作用する（例えば、結合する）。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫと、その様々なリガンド及び結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用に影響を及ぼし得る。

【0096】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６リガンドの及び／またはＰｒｏＳリガンドの結合をブロックまたは阻害しない。したがって、いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫと１つ以上のＭｅｒＴＫリガンドとの間の結合を阻害または減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を阻害または減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を３０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を２０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を１０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を５％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を阻害または減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を３０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を２０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を１０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を５％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を阻害または減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を阻害または減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を３０％を超えて減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を３０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を２０％を超えて減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を２０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を１０％を超えて減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を１０％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳの結合を５％を超えて減少させず、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６の結合を５％を超えて減少させない。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６リガンド結合を阻害もしくは減少させず、及び／またはＰｒｏＳリガンド結合を阻害もしくは減少させない。

【0097】

さらに本明細書では、ＭｅｒＴＫに結合し、かつＭｅｒＴＫと１つ以上のＭｅｒＴＫリガンドまたは結合パートナーとの間の相互作用をブロックまたは減少させない抗ＭｅｒＴＫ抗体についてスクリーニングする方法が提供される。

【0098】

エフェロサイトーシス
エフェロサイトーシスは、瀕死細胞またはアポトーシス細胞の食作用クリアランスを指す。エフェロサイトーシスは、プロフェッショナル食細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、ミクログリア）、非プロフェッショナル食細胞（例えば、上皮細胞、線維芽細胞、網膜色素上皮細胞）、または特化した食細胞によって達成され得る。（Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９８：１３８７－１３９４。）エフェロサイトーシスは、死細胞または瀕死細胞の除去をもたらし（それらの膜全体性が破壊され、それらの内容物が周囲組織に漏出する前に）、これにより、毒性酵素、酸化性物質、及び他の細胞内成分に対する組織の曝露を防止する。

【0099】

アポトーシス細胞は、食細胞上の受容体によって認識されるそれらの細胞表面上の多様な分子（「イートミー（ｅａｔ－ｍｅ）」シグナル）を露出する。１つのそのような「イートミー」シグナル伝達分子は、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）であり、これは普段は、細胞膜の内葉に格納されている。アポトーシス中、ＰｔｄＳｅｒは、細胞膜の外葉に露出される。ＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳ及びＧａｓ６は、それらのＮ末端ドメインの近くにガンマ－カルボキシル化グルタミン酸残基を含有する；グルタミン酸ドメインのガンマ－カルボキシル化は、ホスファチジルセリンに対する結合を可能とする。Ｇａｓ６またはＰｒｏＳは、アポトーシス細胞上のＰｔｄＳｅｒに結合し、同時に食細胞上のＭｅｒＴＫに結合する。そのようなＭｅｒＴＫとのリガンド係合は、エフェロサイトーシスを活性化する。

【0100】

抗体がエフェロサイトーシスをブロックする（またはブロックしない）能力は、例えば、本明細書の実施例７における方法を使用して決定され得る。例えば、エフェロサイトーシスアッセイは、（ｉ）抗体に曝露されたもしくは曝露されていないまたは試験抗体及び陰性対照抗体に曝露された食細胞にアポトーシス細胞を添加すること、ならびに（ｉｉ）食細胞によるアポトーシス細胞の取り込みを決定することを含み得る。食細胞は、上で論述されるようにプロフェッショナル食細胞または非プロフェッショナル食細胞であり得る。いくつかの態様において、食細胞は、マクロファージである。いくつかの態様において、食細胞（例えば、マクロファージ）は、抗体及び／またはアポトーシス細胞への曝露前に飢餓状態とされる（例えば、約１時間）。いくつかの態様において、食細胞（例えば、マクロファージ）は、例えば、約３７℃で、アポトーシス細胞に曝露する前に、約５分～約１時間（例えば、約３０分）、抗体とインキュベートされる。アポトーシス細胞は、例えば、１μＭのスタウロスポリン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）などのアポトーシス誘導剤で処置されたＪｕｒｋａｔ細胞であり得る。アポトーシス細胞は、標識細胞（例えば、染色された細胞）であり得る。いくつかの態様において、アポトーシス細胞は、食細胞（例えば、マクロファージ）に約１時間曝露される。エフェロサイトーシスをブロックしない抗体は、抗体の非存在下または陰性対照抗体の存在下での取り込みと比較して、そのようなアッセイにおいてアポトーシス細胞の取り込みを有意に増加させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを５０％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを４５％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを４０％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを３５％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを３０％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを２５％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを２０％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを１５％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを１０％を超えて減弱させない。いくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体は、エフェロサイトーシスを５％を超えて減弱させない。

【0101】

貪食
貪食は、食細胞がアポトーシス細胞、粒子、または細胞デブリを取り込むまたは飲み込むプロセスを指す。中枢神経系内では、貪食は、適切な神経回路発達及び維持ホメオスタシスに必要とされる肝要なプロセスである。多発性硬化症で生じるように、ＣＮＳ内の髄鞘の破壊は、傷害及び炎症の部位で変性ミエリンを生成する。生じるミエリンデブリは、修復を促進するために傷害の部位から貪食を介して排除されなければならない。ヒトマクロファージ及びミクログリアを利用した研究は、ＭｅｒＴＫがミエリンのための必須の食作用受容体であり、ＭｅｒＴＫの発現がｉｎ ｖｉｔｒｏでミエリン貪食と相関し、ＭｅｒＴＫレベルがＭＳ患者マクロファージにおいて減少することを実証した（Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９６：３３７５－３３８４；Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍ，４：ｅ４０２；Ｇａｌｌｏｗａｙ ｅｔ ａｌ，２０１９，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０：ａｒｔｉｃｌｅ ７９０）。

【0102】

抗体が貪食を増加させる能力は、当該技術分野で知られているアッセイを使用して決定され得る（例えば、Ｈｅａｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９６：３３７５－３３８４を参照されたい）。例えば、貪食アッセイは、（ｉ）抗体の存在及び非存在下または試験抗体及び陰性対照抗体の存在下でミエリンを細胞（例えば、骨髄細胞）に添加すること、及び（ｉｉ）細胞によるミエリンの取り込みを決定することを含み得る。細胞は、細胞（例えば、播種された骨髄細胞）であり得る。細胞（例えば、骨髄細胞）は、極性化され得る。（例えば、Ｄｕｒａｆｏｕｒｔ ｅｔ ａｌ，２０１２，Ｇｌｉａ ６０：７１７－７２７を参照されたい。）ミエリンは、標識され得る。例えば、ミエリンは、例えば、そのようなｐｈ－ローダミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などのｐＨ感受性色素を使用して染色され得る。染色されたミエリンを得るために、ミエリン及び色素（例えば、ｐＨ感受性色素）は、例えば、約１時間、任意にＰＢＳ中でインキュベートされ得る。ミエリン（例えば、染色されたミエリン）は、例えば、約５μｇ／ｍｌ～約２０μｇ／ｍｌの最終濃度まで細胞（例えば、骨髄細胞）に添加され得る。よって、いくつかの態様において、ミエリン（例えば、染色されたミエリン）は、約５μｇ／ｍｌ～約２０μｇ／ｍｌの最終濃度まで細胞（例えば、骨髄細胞）に添加される。ミエリンの貪食を増加させる（すなわち、貪食によってミエリンのクリアランスを増加させる）抗体は、抗体の非存在下または陰性対照抗体の存在下での取り込みと比較してそのようなアッセイにおいて細胞によるミエリンの取り込みを増加させる。

【0103】

マクロファージ走化性タンパク質－１
単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）は、免疫細胞を傷害部位に動員する。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｍ２ｃ極性化マクロファージにおけるＭＣＰ－１レベルを増加させ、抗ＭｅｒＴｋ抗体が、ＭｅｒＴＫの活性を活性化または増加させるのに有効であり、よって、貪食及びエフェロサイトーシスを向上させるのに有効であることを示した。

【0104】

ｐＡＫＴ
プロテインキナーゼＢ（ＡＫＴ）シグナル伝達経路は、ＡＫＴのリン酸化（ｐＡＫＴ）によって開始するプロセスである、細胞生存及び成長を促進するシグナル伝達経路である。ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６は、細胞におけるｐＡＫＴレベルを増加させる。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６の非存在下で細胞におけるｐＡＫＴレベルを増加させた。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ｐＡＫＴレベルを少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍増加させる。

【0105】

ｐＭｅｒＴＫ
ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６は、ＭｅｒＴＫのリン酸化（ｐＭｅｒＴＫ）を増加させる。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６の非存在下でＭｅｒＴＫのリン酸化（ｐＭｅｒＴＫ）を増加させた。また、本開示の抗ＭｅｒＴｋ抗体は、Ｇａｓ６単独で観察されるものよりも高いレベルまでｐＭｅｒＴＫを増加させるのに有効であった。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ｐＭｅｒＴＫレベルを少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍増加させる。

【0106】

したがって、いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫ活性を増加させる（限定されないが、食細胞による貪食を増加させることを含む）、エフェロサイトーシスを４０％を超えて減少させず、ｐＭｅｒＴＫレベルを増加させ、ｐＡＫＴレベルを増加させ、ＭＣＰ－１発現を増加させ、またはそれらの任意の組み合わせである。理論に縛られることを望むものではなく、本開示の抗ＭｅｔＴＫ抗体によるＭｅｒＴＫの増加した活性は、ＭｅｒＴＫがその結合タンパク質（例えば、Ｇａｓ６、ＰｒｏＳ）と相互作用する能力の増加を可能とすることでミクログリア及び星状細胞にシグナル伝達して、分解されたミエリンの貪食を向上させ、ミエリン再生が必要とされる部位へのそれらの移行を向上させ、ミクログリアの生存及び／または増殖を向上させる。

【0107】

膜結合ＭｅｒＴＫは、タンパク質分解切断され、可溶性ＭｅｒＴＫ（ｓＭｅｒＴＫ）の形成につながることが示されており、これは、マウスにおいて血小板増加症を阻害し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでエフェロサイトーシスを阻害することが示されている。ＭｅｒＴＫは、マウスマクロファージにおいてプロリン４８５でメタロプロテイナーゼ（例えば、ＡＤＡＭ１７、ＡＤＡＭ１０）によって切断される。（Ｔｈｏｒｐ ｅｔ ａｌ，２０１１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８：３３３３５－３３３４４）。理論に縛られることを望むものではなく、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体によるＭｅｒＴＫ切断の減少は、ｓＭｅｒＴＫの形成を減少させ、よって、ＭｅｒＴＫ活性及びシグナル伝達を維持または増加させ、増加した貪食及びエフェロサイトーシス活性をもたらすために有効な手段である。

【0108】

Ａ．例示的な抗体及び所定の他の抗体態様
いくつかの態様において、本明細書では、（ａ）配列番号：６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、２１３、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、２１５、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、２１７、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに（ｆ）配列番号：１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0109】

いくつかの態様において、本明細書では、（ａ）配列番号：６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、２１３、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、２１５、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；ならびに（ｃ）配列番号：１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、２１７、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_ＨＨＶＲ配列を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0110】

いくつかの態様において、本明細書では、（ａ）配列番号：１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｂ）配列番号：１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；ならびに（ｃ）配列番号：１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_ＬＨＶＲ配列を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0111】

いくつかの態様において、本明細書では、（ａ）（ｉ）配列番号：６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、２１３、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、２１５、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号：１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、２１７、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_ＨＨＶＲ配列を含むＶ_Ｈドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号：１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号：１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶ_ＬＨＶＲ配列を含むＶ_Ｌドメインとを含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0112】

いくつかの態様において、本明細書では、（ａ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１６のアミノ酸配列を
含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；（ａ）配列番号：２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（ｂ）配列番号：２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（ｃ）配列番号：２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；（ｄ）配列番号：１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号：２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0113】

別の態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、及び２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）配列を含む。所定の態様において、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、及び２２２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｈ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに結合する能力を保持する。所定の態様において、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、または２２２において合計で１～１０アミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。所定の態様において、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、または２２２において合計で１～５アミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。所定の態様において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。任意に、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号：５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、２０９、２１０、または２２２のＶ_Ｈ配列を含む。特定の態様において、Ｖ_Ｈは、（ａ）配列番号：６３～８０、２１３、２１４、及び２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１（ｂ）配列番号：８１～１０９、２１５、２１６、及び２２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２ならびに（ｃ）配列番号：１１０～１３６、２１７、２１８、及び２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0114】

別の態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、抗体は、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、及び２２３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。所定の態様において、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、及び２２３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶ_Ｌ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに結合する能力を保持する。いくつかの態様において、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、または２２３において合計で１～１０アミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。所定の態様において、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、または２２３において合計で１～５アミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。所定の態様において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲ外の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。任意に、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号：３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、２１１、２１２、または２２３のＶ_Ｌ配列を含む。特定の態様において、Ｖ_Ｌは、（ａ）配列番号：１３７～１６２、及び２２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号：１６３～１８４、及び２２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、ならびに（ｃ）配列番号：１８５～２０８、２１９、２２１、及び２２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。

【0115】

いくつかの態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、抗体は、上に提供される態様のいずれかにあるようなＶ_Ｈ、及び上に提供される態様のいずれかにあるようなＶ_Ｌを含む、抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。いくつかの態様において、本明細書では、抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、抗体は、上に提供される態様のいずれかにあるようなＶ_Ｈ、及び上に提供される態様のいずれかにあるようなＶ_Ｌを含む、抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。一態様において、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ配列番号：５～３３、２０９、２１０、及び２２２ならびに配列番号：３４～６２、２１１、２１２、及び２２３におけるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列を含む。

【0116】

いくつかの態様において、本明細書では、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体であって、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２０９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２１１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２１０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２１２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ならびに配列番号：２２２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２２３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；からなる群から選択される、抗ＭｅｒＴＫ抗体が提供される。

【0117】

いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対する結合について、ＭＴＫ－２０１、ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１６、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、ＭＴＫ－２３１、及びＭＴＫ－２３２ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される少なくとも１つの参照抗体の結合を競合的に阻害する。

【0118】

いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭＴＫ－２０１、ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１６、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、ＭＴＫ－２３１、及びＭＴＫ－２３２から選択される少なくとも１つの参照抗体によって結合されるＭｅｒＴＫエピトープと同じまたは重複する、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。

【0119】

いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、少なくとも１つの参照抗体の結合を競合的に阻害し、または少なくとも１つの参照抗体が結合するＭｅｒＴＫエピトープと同じまたは重複する、ヒトＭｅｒＴＫのエピトープに結合し、参照抗体は、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＭｅｒＴＫ抗体であり、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：３９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５４のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５５のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５７のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２０９のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２１１のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；配列番号：２１０のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２１２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；ならびに配列番号：２２２のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ及び配列番号：２２３のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ；からなる群から選択される。

【0120】

いくつかの態様において、上の態様のいずれかによる抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ヒト化及び／またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。いくつかの態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、実質的に全長の抗体、例えば、ＩｇＧｌ抗体、ＩｇＧ２ａ抗体または本明細書に定義される他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。

【0121】

いくつかの態様において、上の態様のいずれかによる抗ＭｅｒＴＫ抗体は、以下のセクション１～７に記載されているような特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込み得る。

【0122】

（１）抗ＭｅｒＴＫ抗体結合親和性
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、または＜０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。解離定数は、任意の生化学的または生物物理学的技術、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、生物層干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍを参照されたい）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色分析または蛍光タンパク質溶融分析を含む任意の分析的技術を介して決定され得る。一態様において、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。いくつかの態様において、ＲＩＡは、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）に記載されるように、対象となる抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。いくつかの態様において、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイは、約１０反応単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。いくつかの態様において、Ｋ_Ｄは、一価抗体（例えば、Ｆａｂ）または全長抗体を使用して決定される。いくつかの態様において、Ｋ_Ｄは、一価形態の全長抗体を使用して決定される。

【0123】

いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ヒトＭｅｒＴＫに結合し、ヒトＭｅｒＴＫに結合するＫ_Ｄは、約１．４ｎＭ～約８１ｎＭである。いくつかの態様において、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合し、カニクイザルＭｅｒＴＫに結合するＫ_Ｄは、約１．６ｎＭ～約１０７ｎＭである。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、マウスＭｅｒＴＫに結合し、マウスＭｅｒＴＫに結合するＫ_Ｄは、約３０ｎＭ～約１８６ｎＭである。

【0124】

（２）抗体断片
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片のレビューについては、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５５７１８９４号及び同第５５８７４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加した体内半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。

【0125】

ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）に記載されている。シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の態様において、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号を参照されたい）。

【0126】

抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク分解消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）の生成を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製され得る。

【0127】

（３）キメラ及びヒト化抗体
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更された、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。

【0128】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化される。所定の態様において、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。所定の態様において、ヒト化抗体は、ヒト化抗体の由来となった別の種からの抗体と実質的に同じ標的に対する親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、同第５６９３７６１号；同第５６９３７６２号；及び同第５５８５０８９号を参照されたい。所定の態様において、その免疫原性を減少させながら抗原結合ドメインの天然親和性を減弱させずに修飾され得る抗体可変ドメインのアミノ酸が特定される。例えば、米国特許第５７６６８８６号及び同第５８６９６１９号を参照されたい。通常、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、及びＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。任意にヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの態様において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となった抗体）に由来する対応する残基で置換される。

【0129】

ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１ ９－１６３３（２００８）でレビューされており、例えば、米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、及び同第７０８７４０９号にさらに記載されている。ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、次のものが含まれるが、これらに限定されない：「最良適合（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）；及びＦＲライブラリのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）。

【0130】

（４）ヒト抗体
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して生成することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。

【0131】

ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を生成するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、調製されてもよい。そのようなマウスがマウス抗体の非存在下でヒト抗体を生成するであろうことを予期してヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を伴ってマウス抗体生成欠損マウス系統を操作することができる。大きなヒトＩｇ断片は、広い可変遺伝子多様性ならびに抗体生成及び発現の適切な制御を維持し得る。抗体多様化及び選択のためのマウス機構ならびにヒトタンパク質に対する免疫学的忍容性の欠如を利用することにより、これらのマウス系統における再現されたヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む、対象となる任意の抗原に対する高親和性完全ヒト抗体を生成し得る。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭＡｂが生成され、選択され得る。所定の例示的な方法は、米国特許第５５４５８０７号、ＥＰ５４６０７３、及びＥＰ５４６０７３に記載されている。例えば、米国特許第６０７５１８１号及び同第６１５０５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載）、米国特許第５７７０４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載）、米国特許第７０４１８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載）も参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。

【0132】

ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の生成のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１ ０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の生成を記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載される。ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって、生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。

【0133】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてｉｎ ｖｉｔｒｏ方法及び／またはコンビナトリアルライブラリのスクリーニングによって単離されたヒト抗体である。好適な例には、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイ（Ａｄｉｍａｂ）などが含まれるがこれらに限定されない。所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリにおいて無作為に組み合わされ、これは次いで抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように）。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０，２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（－２）：１ １９－１３２（２００４）も参照されたい。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化された源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５－７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８，１９９２に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含むＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＨＶＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載している特許公開には、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許公開第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。ヒト抗体ライブラリから単離された抗体は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片とみなされる。

【0134】

（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、Ｆｃを含む。いくつかの態様において、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／またはＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの態様において、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。

【0135】

本明細書で提供される抗体のいずれかの所定の態様において、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ２定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの態様において、抗体は、Ｆｃ受容体に対する結合とは独立して、１つ以上のＭｅｒＴＫ活性を誘導する。いくつかの態様において、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。所定の態様において、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0136】

本明細書で提供される抗体のいずれかの所定の態様において、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの態様において、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ１定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの態様において、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。所定の態様において、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0137】

本明細書で提供される抗体のいずれかの所定の態様において、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。いくつかの態様において、ヒトＩｇＧ４定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの態様において、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。所定の態様において、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ－ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。

【0138】

本明細書で提供される抗体のいずれかの所定の態様において、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ２のＥＵ付番によるアミノ酸１１８～２６０及びヒトＩｇＧ４のＥＵ付番によるアミノ酸２６１～４４７を含むアミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。

【0139】

いくつかの態様において、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まないＦｃ領域を含む対応する抗体と比較して補体を活性化することなくクラスター化を増加させる。いくつかの態様において、抗体は、抗体が特異的に結合する標的の１つ以上の活性を誘導する。いくつかの態様において、抗体は、ＭｅｒＴＫに結合する。

【0140】

また、抗体のエフェクター機能を修飾し、及び／または血清半減期を延長するために、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を修飾することが望ましい場合がある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位を修飾または変異させて、特定のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性を除去または低減して、抗体依存性細胞媒介細胞傷害を低減し得る。いくつかの態様において、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン中）のＮ－グリコシル化を除去することによって低下する。いくつかの態様において、エフェクター機能は、ＷＯ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６４：１９２５－１９３３（２０００）に記載されるように、ヒトＩｇＧの２３３～２３６、２９７及び／または３２７～３３１などの領域を修飾することによって低下する。他の態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を修飾してエフェクター機能を修飾して、ＩＴＩＭを含有するＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する発見選択性を向上させて、抗体依存性細胞媒介細胞傷害及び抗体依存性細胞貪食を含む体液性反応を活性化することなく、隣接細胞上でＭｅｒＴＫ抗体のクラスター化を増加させることも所望であり得る。

【0141】

抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されるようなサルベージ受容体結合エピトープが抗体（特に、抗体断片）中に組み込まれ得る。本明細書で使用されるとき、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期を延長させるのに貢献するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、またはＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープを指す。他のアミノ酸配列修飾。

【0142】

（６）抗体バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。

【0143】

（ｉ）置換、挿入、及び欠失バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されてもよい。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはそこへ残基の挿入、及び／またはその内の残基の置換が含まれる。

【0144】

（表Ａ）アミノ酸置換

【0145】

抗体の生物学的特性の実質的な修飾は、置換を選択することにより達成され、これらは、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくは螺旋立体配座、（ｂ）標的部位における分子の荷電もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクの維持に対するそれらの影響が著しく異なる。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて分類される：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0146】

例えば、非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーと別のクラスからのメンバーとの交換を含み得る。そのような置換残基は、例えば、非ヒト抗体と相同性のあるヒト抗体の領域に、または分子の非相同性領域に導入され得る。

【0147】

本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体に変化を加える際に、所定の態様によれば、アミノ酸のハイドロパシー指数が考慮され得る。各アミノ酸は、その疎水性及び荷電特性に基づいてハイドロパシー指数が割り当てられている。それらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；トレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リジン（－３．９）；及びアルギニン（－４．５）である。

【0148】

タンパク質に相互作用的生物学的機能を付与する際のハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当該技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２）。所定のアミノ酸は、同様のハイドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸で置換され得、なおも同様の生物学的活性を保持することが知られている。疎水性指数に基づいて変化を加える際には、所定の態様において、ハイドロパシー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。所定の態様において、±１以内であるものが含まれ、所定の態様において、±０．５以内のものが含まれる。

【0149】

また、同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて有効に行われ得ることも当該技術分野で理解される（特にそれによって作製された生物学的機能性タンパク質またはペプチドが、本事例のように免疫学的態様での使用が意図されている場合）。所定の態様において、その隣接アミノ酸の親水性によって支配される、タンパク質の最も高い局所平均親水性は、その免疫原性及び抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。

【0150】

以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）及びトリプトファン（－３．４）。同様の親水性値に基づいて変化を加える場合、所定の態様において、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、所定の態様において、±１以内であるものが含まれ、所定の態様において、±０．５以内のものが含まれる。親水性に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを特定することもできる。これらの領域は、「エピトープコア領域」とも称される。

【0151】

上で提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列の所定の態様において、各ＨＶＲは、改変されていない。

【0152】

アミノ酸配列挿入には、１つの残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入型バリアントには、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのため）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの抗体のＮ末端またはＣ末端の融合が含まれる。

【0153】

抗体の適切な立体配座の維持に関与しないＨＶＲ外の任意のシステイン残基も概してセリンで置換されて、分子の酸化的安定性が改善され、異常な架橋が阻止され得る。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加すると、その安定性を改善することができる（具体的には、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。

【0154】

（ｉｉ）グリコシル化バリアント
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または低下させるために改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、好都合に遂行されてもよい。

【0155】

抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在により、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合グリコシル化とは、糖類であるＮ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。

【0156】

グリコシル化部位の、抗体への付加は、（Ｎ連結グリコシル化部位のための）上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を改変することにより簡便に達成される。改変はまた、元の抗体の配列に１つ以上のセリン残基もしくはトレオニン残基を付加するか、これらの残基で置換することによっても行うことができる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。

【0157】

抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳類細胞によって生成される天然抗体は、典型的に、一般にＮ－結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＫａｂａｔ付番によるＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。オリゴ糖類には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの態様において、本開示の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作り出すために行われてもよい。

【0158】

一態様において、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合されるフコースを欠いた炭水化物構造を有する、抗体バリアントが提供される。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損性」抗体バリアントに関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を生成することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｄ３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；ＵＳ２００３／０１５７１０８）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）及びＫａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０－６８８（２００６）を参照されたい）が含まれる。

【0159】

（ｉｉｉ）修飾された定常領域
本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体Ｆｃは、抗体Ｆｃアイソタイプ及び／または修飾である。いくつかの態様において、抗体Ｆｃアイソタイプ及び／または修飾は、Ｆｃガンマ受容体に結合することが可能である。

【0160】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、修飾された抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１修飾Ｆｃである。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。いくつかの態様において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ Ｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：４０３－４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，６５９１－６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９２：１１９８０－１１９８４；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３．３１；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ，１０９：１１８５－１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００８，１０５：２０１６７－２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ付番規則に従うものである。

【0161】

ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＤ２７０Ａ変異を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番によるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異のうちの１つ以上（全てを含む）を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異のうちの１つ以上を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＮ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＳ２６７Ｅ変異を含む。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＩｇＧ１の定常重１（ＣＨ１）及びヒンジ領域の、カッパ軽鎖を有するＩｇＧ２のＣＨ１及びヒンジ領域（ＥＵ付番によるＩｇＧ２のアミノ酸１１８～２３０）での置換を含む。

【0162】

ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化することなく抗体クラスター化を増加させる２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であって、抗体は、位置Ｅ４３０Ｇでのアミノ酸置換ならびにＥＵ付番によるＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される残基位置でのＦｃ領域における１つ以上のアミノ酸置換を含む、抗体である。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓでのアミノ酸置換を含む。いくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。

【0163】

ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは本明細書では、補体活性化を排除するために、ＥＵ付番規則による、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０３：４００５－４０１０（２００６））、またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／もしくはＰ３３１Ｓ変異のうちの１つ以上（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０５：２０１６７－２０１７２（２００８））をさらに含み得る。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番によるＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓのうちの１つ以上をさらに含み得る。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ヒト血清における抗体半減期を延長させるための１つ以上の変異をさらに含み得る（例えば、ＥＵ付番規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異の１つ以上（全てを含む））。ＩｇＧ１修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ１修飾Ｆｃは、ＥＵ付番によるＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／またはＳ４４０Ｗのうちの１つ以上をさらに含み得る。

【0164】

本開示の他の態様は、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃ領域）を有する抗体に関する。標的とされた受容体を活性化するためにＦｃｇＲ受容体に対する結合に依存する抗体は、ＦｃｇＲ結合を排除するように操作された場合、そのアゴニスト活性を喪失し得る（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １９：１０１－１１３（２０１１）；Ａｒｍｏｕｒ ａｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５－５９３（２００３）；及びＷｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）を参照されたい）。このように、抗体がヒトＩｇＧ２アイソタイプからのＦｃドメイン（ＣＨ１及びヒンジ領域）もしくは阻害性ＦｃｇＲＩＩＢ ｒ受容体に優先的に結合することが可能な別のタイプのＦｃドメイン、またはそれらのバリエーションを有する場合、正確なエピトープ特異性を有する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、最小の有害作用で標的抗原を活性化し得ると考えられる。

【0165】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、修飾された抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２修飾Ｆｃである。いくつかの態様において、ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの態様において、ＩｇＧ２修飾Ｆｃは、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、１つ以上のアミノ酸置換は、ＥＵ付番規則に従ってＶ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３（１９９４）；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００：１６－２６（２０００））；Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８：５６３－５７１（１９９９））；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４（１９９９）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００）；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７（２０００））、Ｃ２１９Ｓ、及び／またはＣ２２０Ｓ（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８（２０１５））；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４５：３９２６－３９３３（２００８））；ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｖ２３４Ａ及びＧ２３７Ａでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｃ２１９ＳまたはＣ２２０Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。

【0166】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７，１３８－１４８；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及びＷＯ２００８／０７９２４６）。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、抗体は、ＥＵ付番規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５）；Ｌｉｇｈｔｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１９：７５３－７６２（２０１０）；及びＷＯ２００８／０７９２４６）。

【0167】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、抗体は、ＥＵ付番規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0168】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、抗体は、ＥＵ付番規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。

【0169】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２７：１３８－１４８（２０１５））。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの所定の態様において、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＥＵ付番による１１８～２３０のアミノ酸配列を含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ付番規則によるＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、もしくはその両方、及び／またはＮ２９７ＡもしくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。

【0170】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及びＳ４４０Ｗでの１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ヒト血清における抗体半減期を延長させるための１つ以上の変異をさらに含み得る（例えば、ＥＵ付番規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異の１つ以上（全てを含む））。ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓをさらに含み得る。

【0171】

ＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。いくつかの態様において、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２のａａ１１８～２６０及びＩｇＧ４のａａ２６１～４４７を含む。任意のＩｇＧ２修飾Ｆｃのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでの１つ以上のアミノ酸置換を含む。

【0172】

ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、またはＰ３３１Ｓ；及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の追加のアミノ酸置換を含む。

【0173】

ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかの所定の態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される残基位置での１つ以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ及びＳ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。

【0174】

本明細書で提供される抗体のいずれかのいくつかの態様において、修飾された抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４修飾Ｆｃである。いくつかの態様において、ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、１つ以上の修飾を含む。例えば、いくつかの態様において、ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、１つ以上のアミノ酸置換（同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、１つ以上のアミノ酸置換は、ＥＵ付番規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５－１９３３（２０００））、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａをさらに含み得る。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅをさらに含み得る。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ＥＵ付番規則によるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆをさらに含み得る。

【0175】

ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、抗体安定化を向上させるために、ＥＵ付番規則によるＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－１０８（１９９３））及び／またはＰｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７（２９）：２４５２５－３３（２０１２）に記載されている１つ以上の変異と組み合わされ得る。

【0176】

ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、ＩｇＧ４修飾Ｆｃは、ヒト血清における抗体半減期を延長させるための１つ以上の変異をさらに含み得る（例えば、ＥＵ付番規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異の１つ以上（全てを含む））。

【0177】

ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＬ２３５Ｅを含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかの所定の態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番によるＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される残基位置での１つ以上のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０でのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃ領域は、ＥＵ付番による位置Ｅ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｃ１２７Ｓでのアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４修飾Ｆｃのいずれかのいくつかの態様において、Ｆｃは、ＥＵ付番による位置Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ及びＳ４４０Ｙでのアミノ酸置換を含む。

【0178】

（７）他の抗体修飾
抗体のいずれかのいくつかの態様において、抗体は、誘導体である。「誘導体」という用語は、アミノ酸（または核酸）の挿入、欠失、または置換以外の化学的修飾を含む分子を指す。所定の態様において、誘導体は、ポリマー、脂質、または他の有機もしくは無機部位での化学結合を含むがこれらに限定されない共有結合性修飾を含む。所定の態様において、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、化学的に修飾されていない抗原結合タンパク質よりも長い循環半減期を有し得る。所定の態様において、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または器官に対する改善された標的化能力を有し得る。いくつかの態様において、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、またはポリプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない１つ以上の水溶性ポリマー結合物を含むように共有結合的に修飾される。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号及び同第４１７９３３７号を参照されたい。所定の態様において、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシ－ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）及びポリビニルアルコール、ならびにそのようなポリマーの混合物を含むがこれらに限定されない１つ以上のポリマーを含む。

【0179】

所定の態様において、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾される。所定の態様において、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の特定の位置、例えばアミノ末端で結合される。所定の態様において、１つ以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１つ以上の側鎖に無作為に結合される。所定の態様において、ＰＥＧは、抗原結合タンパク質についての治療的能力を改善するために使用される。所定の態様において、ＰＥＧは、ヒト化抗体についての治療的能力を改善するために使用される。所定のそのような方法は、例えば、米国特許第６１３３４２６号（任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる）で論述されている。

【0180】

ペプチド類似体は一般的に、鋳型ペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬物として製薬産業において使用される。これらの種類の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物」または「ペプチド模倣薬」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）（任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。そのような化合物はしばしば、コンピュータ化分子モデル化の助けを借りて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、同様の治療的または予防的効果を生み出し得る。通常、ペプチド模倣物は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、当該技術分野でよく知られている方法によって、－ＣＨ_２ＮＨ－、－ＣＨ_２Ｓ－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（ｃｉｓ及びｔｒａｎｓ）、－ＣＯＣＨ_２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２－、及び－ＣＨ_２ＳＯ－から選択される連結によって任意に置換された１つ以上のペプチド連結を有する。コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の同じタイプのＤ－アミノ酸での系統的置換（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）は、より安定なペプチドを生成するために所定の態様で使用され得る。また、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列バリエーションを含む制約されたペプチドは、当該技術分野で知られている方法（任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２））によって；例えば、ペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成することが可能な内部システイン残基を付加することによって生成され得る。

【0181】

薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞傷害性（抗がん）ペイロードまたは薬物を、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上にのみ見られるポリペプチド）を特異的に標的とする抗体にカップリングすることを伴う。抗体は、身体内でこれらのタンパク質を見つけ出し、それ自体をがん細胞の表面に結合させる。抗体と標的タンパク質（抗原）との間の生化学的反応は、腫瘍細胞におけるシグナルを誘発し、これは次いで細胞毒素と共に抗体を吸収し、または内在化する。ＡＤＣが内在化された後、細胞傷害性薬物が放出され、がんを殺傷する。この標的化により、理想的には、薬物は、他の化学療法剤よりも低い副作用を有し、より広い治療ウインドウを提供する。抗体をコンジュゲートするための技術は、当該技術分野において開示されており、既知である（例えば、Ｊａｎｅ ｄｅ Ｌａｒｔｉｇｕｅ ＯｎｃＬｉｖｅ Ｊｕｌｙ ５，２０１２；ＡＤＣ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及びＤｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１（１）：５－１３（２０１０）を参照されたい）。

【0182】

ＩＩＩ．核酸、ベクター、及び宿主細胞
本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して生成され得る。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列及び／または抗ＭｅｒＴＫ抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。いくつかの態様において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。いくつかの態様において、そのような核酸を含む宿主細胞も提供される。いくつかの態様において、宿主細胞は、（１）本抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列及び本抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）本抗体のＶ_Ｌを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び本抗体のＶ_Ｈを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。いくつかの態様において、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞にはまた、限定するものではないが、単離された細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養細胞、及びｅｘ ｖｉｖｏ培養細胞が含まれる。

【0183】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を作製する方法が提供される。いくつかの態様において、方法は、抗ＭｅｒＴＫ抗体をコードする核酸を含む本開示の宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。いくつかの態様において、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞培地）から回収される。

【0184】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を組換え生成するには、抗ＭｅｒＴＫ抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクター中に挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定することができる。

【0185】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体、または本明細書に記載の細胞表面発現断片もしくはそのポリペプチド（抗体を含む）のいずれかをコードする核酸配列を含有する好適なベクターには、限定するものではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。好適なクローニングベクターは、標準的技術に従って構築することができ、あるいは当該技術分野において入手可能な多数のクローニングベクターから選択してもよい。選択されるクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有し得、及び／またはベクターを含むクローンの選択に用いることができるマーカーの遺伝子を保持し得る。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが含まれる。これらの及び多くの他のクローニングベクターがＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的ベンダーから利用可能である。

【0186】

抗体コーディングベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、細菌において生成され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号、及び同第５８４０５２３号を参照されたい。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製することができる。

【0187】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物もまた、抗体コーディングベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主であり、これらには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす、真菌株及び酵母株が含まれる（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。

【0188】

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と共に、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用することができる、多数のバキュロウイルス株が特定されている。植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる（例えば、米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号及び同第６４１７４２９号（トランスジェニック植物で抗体を生成するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載されている））。

【0189】

脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な宿主哺乳動物細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ヒト胚性腎臓株（２９３細胞または例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ科腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な宿主哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体生成に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

【0190】

ＩＶ．薬学的組成物／製剤
本明細書では、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物及び／または薬学的製剤が提供される。

【0191】

いくつかの態様において、薬学的に許容可能な担体は好ましくは、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される薬学的組成物及び／または薬学的製剤は、無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。

【0192】

本明細書で提供される薬学的組成物及び／または薬学的製剤は、例えば、自己免疫性障害を処置するための薬剤として有用である。

【0193】

Ｖ．治療的及び予防的使用
本明細書に開示されるように、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、疾患及び障害を予防し、リスクを低下させ、または処置するために使用され得る。いくつかの態様において、本開示は、例えば、多発性硬化症などの個体における自己免疫性障害を予防し、リスクを低下させ、または処置するための方法であって、治療的有効量の本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を個体に投与する工程を含む、方法を提供する。

【0194】

ＭｅｒＴＫは、多発性硬化症に関連する。ＭｅｒＴＫにおけるＳＮＰ多型は、多発性硬化症感受性に関連する。したがって、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体でＭｅｒＴＫの活性を調節することは、多発性硬化症を予防または処置する有効な手段である。

【0195】

所定の態様において、本明細書では、多発性硬化症の処置をその必要のある対象において行うための方法であって、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体、または本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を含む薬学的組成物を対象に投与する工程を含む、方法が提供される。いくつかの態様において、多発性硬化症の処置をその必要のある対象において行うための方法であって、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を対象に投与する工程を含み、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ミエリンの貪食を増加させる、方法が提供される。いくつかの態様において、多発性硬化症の処置をその必要のある対象において行うための方法であって、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を対象に投与する工程を含み、抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫのリン酸化を増加させる、方法が提供される。

【0196】

いくつかのタイプの多発性硬化症（ＭＳ）が記載されている。再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、一次進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）、二次進行性ＭＳ（ＳＰＭＳ）、及び臨床的に分離された症候群（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＣＩＳ）。再発寛解型ＭＳは、予測不可能な再発と、それに続く数ヶ月～数年の疾患活性の兆候がない相対的停止（寛解）を特徴とする。これは、ＭＳを有する個体のおよそ８０％の初期過程を記載する。ＭＳの再発寛解型サブタイプは通常、個体が脱髄を示唆する発作を有するがＭＳの基準を依然として満たさない臨床的に分離された症候群から始まる。ＣＩＳを経験する個体の３０～７０％は、後にＭＳを発症する。

【0197】

一次進行性ＭＳは、個体のおよそ１０～２０％で生じ、初期症状の後に寛解がない。それは、発症から障害が進行し、緩和及び改善がなく、または一次的及び少ない緩和及び改善しかないことを特徴とする。二次進行性ＭＳは、初期の再発寛解型ＭＳを有するそれらの個体の約６５％で生じ、最終的にいかなる明白な寛解期を伴わずに急性発作間で進行性神経減退を有するが、時折の再発及び小さな寛解が現れ得る。

【0198】

いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＲＲＭＳにおける再発の数を減少させるのに有効である。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＲＲＭＳにおける再発の頻度を減少させるのに有効である。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＲＲＭＳにおける再発の数及び頻度を減少させるのに有効である。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＲＲＭＳからＳＰＭＳへの変化を防止または減少させるのに有効である。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＰＰＭＳにおける疾患進行を阻害または減少させるのに有効である。

【0199】

ＭｅｒＴＫ変異は、網膜色素変性症を含む様々な網膜神経節変性障害に関連する。しばしば、そのような網膜障害は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が視細胞外節を貪食する能力の減少に関連し、これは、ＲＰＥ細胞から視細胞を分離するデブリの蓄積につながり、それらの分解及び失明をもたらす。また、ＭｅｒＴＫ遺伝子の変異は、早期小児期における夜間視力の喪失、視野の緩やかな狭窄、及び成人期前の最終的な視力の喪失に関連する（Ｌｏｒａｃｈ ｅｔ ａｌ，２０１８，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，８：１１３１２）。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、網膜神経節変性障害を処置するのに有効である。いくつかの態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、視細胞外節の貪食を増加させるのに有効である。他の態様において、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、網膜色素変性症を処置するのに有効である。

【0200】

いくつかの態様において、対象または個体は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。いくつかの態様において、対象または個体は、ヒトである。

【0201】

本明細書で提供される抗体（及び任意の追加の治療剤）は、任意の好適な手段によって投与され得る。

【0202】

ＶＩ．診断用途
抗体のいずれかのいくつかの態様において、本明細書で提供される抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれかは、サンプルまたは個体におけるＭｅｒＴＫの存在を検出するのに有用である。「検出すること」という用語は、本明細書で使用されるとき、定量的または定性的検出を包含する。本明細書では、個体におけるまたは個体に由来する組織サンプルにおけるＭｅｒＴＫの検出などの診断目的のために本開示の抗体を使用する方法が提供される。いくつかの態様において、個体は、ヒトである。いくつかの態様において、組織サンプルは、食細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞）、腫瘍組織、がん細胞などである。

【0203】

検出方法は、抗原結合抗体の定量を含み得る。生物学的サンプルにおける抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡検査、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、またはマイクロ陽電子断層撮影法を含む、当該技術分野で知られている任意の方法で行われ得る。所定の態様において、抗体は、例えば^１８Ｆで、放射性標識され、その後マイクロ陽電子断層撮影法分析を利用して検出される。抗体結合はまた、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）及びコンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲性技法によって、患者において定量され得る。

【0204】

ＶＩＩ．製造品
本明細書では、本明細書に記載の抗ＭｅｒＴＫ抗体を含む製造品（例えば、キット）が提供される。製造品には、本明細書に記載の抗体を含む１つ以上の容器が含まれ得る。容器は、バイアル、ボトル、瓶、可撓性パッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などを含むがこれらに限定されない任意の好適なパッケージングであり得る。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数回用量包装）または分割単位用量でもよい。

【0205】

いくつかの態様において、キットは、第２の薬剤をさらに含み得る。いくつかの態様において、第２の薬剤は、薬学的に許容可能な緩衝液または希釈剤である。

【0206】

製造品のいずれかのいくつかの態様において、製造品は、本開示の方法に従って使用するための指示書をさらに含む。指示書は、一般に、目的の処置のための投薬量、投与計画及び投与経路に関する情報を含む。いくつかの態様において、これらの指示書は、本開示の任意の方法に従って、例えばがんなどの疾患、障害、または傷害を有する個体を予防し、リスクを低下させ、または処置するための本開示の単離された抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＭｅｒＴＫ抗体）の投与の説明を含む。

【0207】

本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体における全ての引用文献は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【実施例】

【0208】

実施例１：Ｈｉｓコンジュゲート化及びマウスＦｃコンジュゲート化ＭｅｒＴＫポリペプチドの生成
本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の生成及び特性化において使用するためのポリＨｉｓまたはＴＥＶＳ／トロンビン／マウスＩｇＧ２ａ－Ｆｃタグ付き融合タンパク質を含有するヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）（カニクイザル（ｃｙｎｏ））、及びマウスＭｅｒＴＫポリペプチドを以下のように生成した。ヒトＭｅｒＴＫ（配列番号：２）、カニクイザルＭｅｒＴＫ（配列番号：３）、及びマウスＭｅｒＴＫ（配列番号：４）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードする核酸を、異種シグナルペプチドをコードする核酸を含有し、かつポリＨｉｓ ＦｃタグまたはＴＥＶＳ／トロンビン／マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃタグのいずれかも含有する哺乳動物発現ベクターにそれぞれクローニングした。

【0209】

ヒトＭｅｒＴＫ、ヒトＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン、カニクイザルＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン、及びマウスＭｅｒＴＫ細胞外ドメインのアミノ酸配列が以下に示されている。

【0210】

ヒトＭｅｒＴＫアミノ酸配列（配列番号：１）：

【0211】

ヒトＭｅｒＴＫ ＥＣＤアミノ酸配列（配列番号：２）：

【0212】

カニクイザルＭｅｒＴＫ ＥＣＤアミノ酸配列（配列番号：３）：

【0213】

マウスＭｅｒＴＫ ＥＣＤアミノ酸配列（配列番号：４）：

【0214】

ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫ核酸融合コンストラクトをＨＥＫ２９３細胞に一過性にトランスフェクションした。組換え融合ポリペプチドを、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃａｔ＃１７５１９９０２）を使用して製造業者の指示書に従って細胞の上清から精製した。また、市販のＤＤＤＤＫタグ付きヒトＭｅｒＴＫ融合ポリペプチド（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｗａｙｎｅ，ＰＡ、Ｃａｔ＃１０２９８－ＨＣＣＨ）またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きマウスＭｅｒＴＫ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＡ、Ｃａｔ＃５９１－ＭＲ－１００）を以下に記載されるように抗ＭｅｒＴＫ抗体特性化のために使用した。

【0215】

実施例２：ヒト及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞株の生成
ヒトＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞株を以下のように調製した。ヒトＭｅｒＴＫオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）クローンレンチウイルス粒子（Ｃａｔ＃ＲＣ２１５２８９Ｌ４Ｖ）及びマウスＭｅｒＴＫ ＯＲＦクローンレンチウイルス粒子（Ｃａｔ＃ＭＲ２２５３９２Ｌ４Ｖ）（Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）（いずれともｍＧＦＰタグ付き）を使用して、ヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１安定細胞株世代をそれぞれ調製した。

【0216】

ＣＨＯ細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＦ１２－Ｋ培地（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ＃ＡＴＣＣ３０－２００４）中で＞８０％コンフルエントまで培養した。次いで細胞をトリプシン緩衝液（０．２５％ＥＤＴＡ／トリプシン、Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃２５２０００５６）中で解離させ、ヒトまたはマウスＭｅｒＴＫレンチウイルスコンストラクトのいずれかで形質導入する２４時間前に６ウェルプレートにおいて７０～８０％の密集度で播種した。翌日、細胞をレンチウイルス粒子と４℃で２時間インキュベートし、次いでプレートを３７℃で５％ＣＯ_２中でインキュベートした。２日後、ピューロマイシン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，Ｃａｔ＃ａｎｔ－ｐｒ－１）を選択のために添加した；選択したピューロマイシン耐性細胞を後の使用のためにＣｅｌｌ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ＃１２６４８０１０）中で凍結させた。

【0217】

これらの細胞株のＦＡＣＳ分析のため、上述したように生成したヒトＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）を９６ウェルＵ底プレートにおいてウェル当たり１～２×１０^５細胞で播種し、市販のマウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体「Ｈ１」（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローン：５９０Ｈ１１Ｇ１Ｅ３、Ｃａｔ＃３６７６０８、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）または市販のラット抗マウスＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、クローン：ＤＳ５ＭＭＥＲ、Ｃａｔ＃１２－５７５１－８２）と氷上で３０分間インキュベートした。細胞を氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳ＋ＰＢＳ）で２回すすぎ、次いでＡＰＣコンジュゲート化ヤギ抗マウス抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，Ｃａｔ＃１１５－６０６－０７１）またはヤギ－抗ラット抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１１２－６０６－０７１）と氷上で３０分間インキュベートした。二次抗体インキュベート後、細胞を氷冷ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、次いで０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ、Ｃａｔ＃５５６４６３）を含有する５０～２００μｌの最終体積のＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。分析をＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して実施した。

【0218】

得られたヒトＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＣＨＯ細胞株を、以下に記載されるように抗ＭｅｒＴＫ抗体を特性化するための後の研究のために使用した。

【0219】

実施例３：抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ抗体の生成
ＭｅｒＴＫに対する抗体を得るために、以下の実験を実施して抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマを生成した。ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）またはＭｅｒＴＫノックアウト（ＫＯ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫ（実施例１で上述したように得られた）の精製された細胞外ドメインポリペプチドをアジュバントを用いずにまたは用いて皮下または腹腔内注射によって週２回免疫を与えた。合計で８回の注射を４週にわたって実施した。最後の注射から３日後、脾臓及びリンパ節をハイブリドーマ細胞株生成のためにマウスから採取した。

【0220】

免疫を与えたマウスの脾臓及びリンパ節からのリンパ球を単離し、次いでＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＣＲＬ－１５８０、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）またはＳＰ２／ｍＩＬ－６（ＣＲＬ－２０１６、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）マウス骨髄腫細胞と、電気細胞融合（Ｈｙｂｒｉｍｍｕｎｅ，ＢＴＸ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を介して融合し、Ｃｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ、Ｃａｔ＃０３８０３）中で３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、融合した細胞を遠心分離し、抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を有する１０ｍｌのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃに再懸濁し、次いでＨＡＴ成分を含有する９０ｍｌのメチルセルロースベースのＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃０３８０４）と穏やかに混合した。細胞をＮｕｎｃ ＯｍｎｉＴｒａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で７日間成長させた。次いで蛍光コロニーを選択し、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用してＣｌｏｎａｃｅｌｌ－ＨＹ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃０３８０５）を含有する９６ウェルプレートに移した。合計で、１，７２８種のＩｇＧを分泌するハイブリドーマクローンを選択した。培養から６日後、ハイブリドーマからの組織培養上清を、以下に記載されるようにヒトまたはマウスＭｅｒＴＫに結合する特異性についてＦＡＣＳ分析によってスクリーニングした。

【0221】

実施例４：ＦＡＣＳによる抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清のスクリーニング
上述したように得た１，７２８種のハイブリドーマからのハイブリドーマ培養上清を、ヒトＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｈｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）またはマウスＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）（上述したように生成した）、ならびにＣＨＯ親細胞；Ｕ９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５９３．２）、ＳＫ－ＭＥＬ－５細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－７０）（ヒトＭｅｒＴＫを内因的に発現する）、Ｊ７７４Ａ．１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－６７）（マウスＭｅｒＴＫを内因的に発現する）、及びＡ３７５細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６１９）を含む、様々な細胞タイプ上のＭｅｒＴＫに結合するそれらの能力についてスクリーニングした。

【0222】

ハイブリドーマ細胞培養上清のスクリーニングのため、多重ＦＡＣＳ実験設計を利用して、これらの複数の細胞株に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合を決定した。簡潔には、細胞を様々な濃度及びＣｅｌｌＴｒａｃｅ細胞増殖色素ＣＦＳＥとＶｉｏｌｅｔ（それぞれＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｃａｔ＃Ｃ３４５５４及びＣａｔ＃３４５５７）の組み合わせで染色して独自にバーコード化された細胞集団を生成した。７０，０００細胞の各バーコード化細胞タイプを９６ウェルＵ底プレートに分配し、５０μｌのハイブリドーマ細胞培養上清または５μｇ／ｍｌの市販の精製されたマウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ＃３６７６０２；陽性抗ＭｅｒＴＫ抗体として機能する）と氷上で３０分間インキュベートした。様々なＭｅｒＴＫ発現細胞タイプとのこの一次抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清インキュベートの後、上清を遠心分離を介して除去し、細胞を１７５μｌの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、次いで細胞を抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－アロフィコシアニン（ＡＰＣ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ、Ｃａｔ＃１１５－１３６－０７１）（１：１０００で希釈した）と氷上で２０分間さらにインキュベートした。この二次抗体インキュベート後、細胞を再度、氷冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、０．２５μｌ／ウェルのヨウ化プロピジウム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ＃５５６４６３）を含有する３０μｌの最終体積のＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞に対する結合強度を、死（すなわち、ヨウ化プロピジウム陽性）細胞を除外するように引かれたソーティングゲートを用いて、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。各バーコード化された細胞集団上のＡＰＣ平均蛍光強度（ＭＦＩ）の比を、試験された各々の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清について決定した。

【0223】

この特定のハイブリドーマ上清スクリーンから、親または陰性対照細胞タイプで観察された結合と比較して、ヒトまたはマウスＭｅｒＴＫを安定的に過剰発現するまたは内因的に発現する細胞に対する結合（ＭＦＩによって決定される）において２倍を超える差を示した合計で３０８種の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンを特定した。このスクリーンを使用して特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体を以下に記載されるようにさらに特性化した。

【0224】

実施例５：組換えＭｅｒＴＫタンパク質結合アッセイによる抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清のスクリーニング
上述したように得られた１，７２８種のハイブリドーマからのハイブリドーマ培養上清を、無関係のＨｉｓタグ付き対照タンパク質に対する結合と比較してポリＨｉｓタグ付きヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫ（実施例１で上述したように調製した）に結合するそれらの能力についてスクリーニングした。簡潔には、９６ウェルポリスチレンプレートを、コーティング緩衝液（０．０５Ｍ炭酸塩緩衝液、ｐＨ９．６、Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ＃Ｃ３０４１）中の１μｇ／ｍｌのヒト、カニクイザル、またはマウスポリ－Ｈｉｓタグ付きＭｅｒＴＫポリペプチドで一晩４℃でコーティングした。次いでコーティングされたプレートをＥＬＩＳＡ希釈剤（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で１時間ブロッキングし、３００μｌのＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｈｅｒｍｏ２８３５２）で３回洗浄した。ハイブリドーマ細胞培養上清または２つの市販の精製されたマウス抗ヒトＭｅｒＴＫモノクローナル抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ Ｃａｔ＃３６７６０２；Ｒ＆Ｄ Ｃａｔ＃ＭＡＢ８９１２）を各ウェルに添加した（５０μｌ／ウェル）。３０分のインキュベート（室温、振盪しながら）後、プレートを３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄した。抗マウスＩｇＧ Ｆｃ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１１５－０３５－０７１）二次抗体をＥＬＩＳＡ希釈剤に１：５０００で希釈し、各ウェルに５０μｌ／ウェルで添加し、室温で振盪しながら３０分間インキュベートした。最終セットの洗浄（ＰＢＳＴ中で３×３００μｌ）後、５０μｌ／ウェルのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ、Ｃａｔ＃ＴＭＢＷ－１０００－０１）をウェルに添加した。次いで反応を、５～１０分後に５０μｌ／ウェルの停止溶液（ＢｉｏＦｘ、Ｃａｔ＃ＢＳＴＰ－１０００－０１）で抑えた。クエンチした反応ウェルを、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用してＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを用いて６５０ｎｍでの吸光度について検出した。このハイブリドーマ上清スクリーンから、バックグラウンドを上回って組換えＭｅｒＴＫに対する結合において１０倍を超える差を示した合計で３２６種の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンを特定した。このスクリーンを使用して特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体を以下に記載されるようにさらに特性化した。

【0225】

実施例６：抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清を使用したＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６及びリガンドＰｒｏＳブロックアッセイ
上述したように特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清をＥＬＩＳＡによってスクリーニングして、ヒトＭｅｒＴＫに対するヒトＧａｓ６リガンドの結合をブロックせず、及び／またはヒトＭｅｒＴＫに対するヒトＰｒｏＳリガンドの結合をブロックしなかった抗ＭｅｒＴＫ抗体を特定した。簡潔には、ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃３０９－００５－００８）を、２μｇ／ｍｌで高タンパク質結合プレートに４℃で一晩コーティングした。ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、ＰＢＳ中の５％ＢＳＡを１時間添加した。組換えヒトＭｅｒＴＫ－ヒトＦｃキメラタンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃３９１－ＭＲ－１００）を２μｇ／ｍｌで１時間添加し、プレートを洗浄してから、４０μｌの抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清及び４０μｌのＨｉｓタグコンジュゲート化組換えＧａｓ６（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃８８５－ＧＳＢ－０５０）を３μｇ／ｍｌでまたはＨｉｓタグコンジュゲート化組換えＰｒｏＳ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃９４８９－ＰＳ－１００）を２０μｇ／ｍｌで添加した。さらに１時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート化抗６ｘＨｉｓタグ付き抗体（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ、Ｃａｔ＃ａｂ１１８７）で１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、ＨＲＰ基質であるＴＭＢを添加してプレートを現像した。反応を、５０μｌの２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を添加することによって停止させ、ＯＤを分光光度計（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して測定した。

【0226】

合計で３０８種の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清クローンをスクリーニングして、ヒトＭｅｒＴＫに対するヒトＧａｓ６リガンドの結合をブロックせず、及び／またはヒトＭｅｒＴＫに対するヒトＰｒｏＳリガンドの結合をブロックしなかった抗ＭｅｒＴＫ抗体を特定した。２９種（２９）の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンは、組換えヒトＭｅｒＴＫタンパク質に対するＰｒｏＳリガンド及びＧａｓ６リガンドの両方の結合をブロックした。１４５種（１４５）の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンがヒトＭｅｒＴＫタンパク質に対するＰｒｏＳリガンドの結合のみをブロックし、組換えヒトＭｅｒＴＫタンパク質に対するＧａｓ６リガンドの結合をブロックしなかった。３０８種の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンのうち残りの１３４種は、このアッセイにおいて組換えヒトＭｅｒＴＫタンパク質に対してＰｒｏＳリガンドまたはＧａｓ６リガンドのいずれの結合もブロックしなかった。ハイブリドーマ上清を以下に記載されるようにさらに特性化した。

【0227】

実施例７：抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清を使用したエフェロサイトーシスブロックアッセイ
ＭｅｒＴＫ結合反応性について陽性であるものとして上で特定された抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清をスクリーニングして、以下のようにヒトマクロファージによるエフェロサイトーシスをブロックしなかった抗ＭｅｒＴＫ抗体を特定した。ヒトマクロファージをヒトＭ－ＣＳＦの存在下で７日間ヒト単球から分化させた。マクロファージを採取し（スクレイピングによって）、ＰＢＳに再懸濁し、９６ウェルプレートに５×１０^４細胞／ウェルで播種した。細胞を１時間飢餓状態とし、続いて抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清を各ウェルに３７℃で３０分間添加した。Ｊｕｒｋａｔ細胞を１μＭスタウロスポリン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）で３７℃で３時間処置し（アポトーシスを誘導するため）、ｐＨｒｏｄｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で室温で３０分間標識した。ＰＢＳで洗浄した後、ｐＨｒｏｄｏが標識されたＪｕｒｋａｔ細胞を各ウェルに１：４の比（１マクロファージ細胞対４Ｊｕｒｋａｔ細胞）で１時間添加した。プレートをＰＢＳで洗浄し、次いで細胞をＡＰＣがコンジュゲートされた抗ヒトＣＤ１４で氷上で暗所で３０分間染色した。次いで細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）中で２回洗浄し、フローサイトメトリーをＢＤ ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩで実施した。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。

【0228】

これらの実験において、ｐＨｒｏｄｏ ＣＤ１４二重陽性細胞を分析ゲートとして設定し、次いでこの正確なゲートを全てのサンプルに適用することによってエフェロサイトーシス陽性マクロファージを特定した。ベースラインのエフェロサイトーシスレベルを、培地のみで培養されたマクロファージを使用して確立し、これを１００％エフェロサイトーシス活性に設定した。相対的エフェロサイトーシスレベルを、抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清で処置された細胞において観察されたものと比較した、培地単独で処置された細胞において観察されたエフェロサイトーシスのパーセントとして計算した。これらの実験において、以下の追加の抗ＭｅｒＴＫ抗体を使用した：マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＩＤ：５９０Ｈ１１Ｇ１Ｅ３、マウスＩｇＧ１）及びヒト抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｍ６（ＷＯ２０１６／１０６２２１に開示されている）。

【0229】

以下の表１及び表２は、エフェロサイトーシス率として示された、これらのエフェロサイトーシス実験からの結果を示している（培地のみを１００％エフェロサイトーシスに設定した）。以下の表１において、試験された例示的なハイブリドーマ上清は、左に示されており、ハイブリドーマ上清ＩＤ番号として分類されている；これらの上清は、野生型ＢＡＬＢ／ｃマウスの免疫から特定されたハイブリドーマクローンからのものであった。以下の表２において、試験された例示的なハイブリドーマ上清は、左に示されており、ハイブリドーマ上清ＩＤ番号として分類されている；これらの上清は、ＭｅｒＴＫ ＫＯマウスの免疫から特定されたハイブリドーマクローンからのものであった。表１及び表２の両方において、抗体ＩＤは、追加の特性化について選択され、よって、示されたように特定の抗ＭｅｒＴＫ抗体名称が与えられた本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を指す。抗体の非存在下（培地処置単独）でのマクロファージにおけるエフェロサイトーシスと比較して、アイソタイプ対照マウスＩｇＧ１抗体で処置された細胞においてエフェロサイトーシスの有意な変化は観察されなかったことに留意されたい。

【0230】

まとめると、これらの結果は、本開示の所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、マクロファージによるエフェロサイトーシスを増加させるのに有効であることを示した。エフェロサイトーシスは、貪食活性の１つの態様であるため、結果は、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、食細胞による貪食を増加させるのに有効であることを示していた。これらの結果はまた、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、抗ＭｅｒＴＫ抗体処置の非存在下でマクロファージによって観察されるもの（例えば、培地単独対照またはアイソタイプ対照抗体添加）と比較して、マクロファージによるエフェロサイトーシス活性を４０％を超えて減少させなかったことを示した。

【0231】

（表１）

ｎ．ａ．データ利用不可

【0232】

（表２）

【0233】

表１及び表２において、両方の表において１００％エフェロサイトーシスに設定された培地単独（抗体添加なし）と共に、異なるドナーから得られたヒトマクロファージによるエフェロサイトーシスのパーセントが示されている。様々な抗ＭｅｒＴＫ抗体ハイブリドーマ上清によるエフェロサイトーシスブロック（非ブロック）活性の程度は、各ドナーから得られたマクロファージにおいて異なっていたが、抗ＭｅｒＴＫ抗体についてのエフェロサイトーシスブロック（または非ブロック）傾向は、異なるドナーからのマクロファージ間で一致していた。上の表１及び２に示されているように、本開示の抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマ上清は、抗ＭｅｒＴＫ抗体Ｈ１及び抗ＭｅｒＴＫ抗体Ｍ６（これらの両方がエフェロサイトーシスを阻害する）によって観察されるものと比較して、ヒトマクロファージによるエフェロサイトーシスをブロックまたは減少させる能力がより低いことを示した。これらの結果は、本明細書に記載されるように得られた所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、食細胞によるエフェロサイトーシスを阻害またはブロックするのに有効ではなかったことを示していた。

【0234】

実施例８：抗ＭｅｒＴＫ抗体の分子クローニング
上述したハイブリドーマからの抗ＭｅｒＴＫ抗体を以下のようにサブクローニングした。５×１０^５ハイブリドーマ細胞を採取し、ＰＢＳで洗浄し、次いで細胞ペレットをドライアイス中で瞬間凍結させ、－２０℃で保存した。製造業者のプロトコルに従ってＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、Ｃａｔ＃７４１０４）を使用することによって総ＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを、製造業者のプロトコルに従ってＣｌｏｎｔｅｃｈのＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ５’／３’ Ｋｉｔ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ ＵＳＡ、Ｃａｔ＃６３４８５９）を使用して生成した。可変重免疫グロブリン領域及び可変軽免疫グロブリン領域を、ＲＡＣＥキットで提供された５’ＵＰＭプライマーならびに重鎖及び軽鎖定常領域を認識するリバースプライマーを使用してタッチダウンＰＣＲによって別々にクローニングした。得られたＰＣＲ生成物を精製し、ｐＣＲ２．１－ＴＯＰＯクローニングベクター（ＴＯＰＯ ＴＡ ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ＃４５０６４１）にライゲーションし、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞に形質転換した。形質転換されたコロニーを単離し、可変重鎖（ＶＨ）核酸及び可変軽鎖（ＶＬ）核酸を、各対応するハイブリドーマ細胞株についてシーケンシングした。配列決定後、可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位を含有するプライマーを使用してＰＣＲによって増幅し、次いでヒトＩｇＧ１－Ｆｃ及びＩｇＧカッパをコードするｐＬＥＶ－１２３（ＬａｋｅＰｈａｒｍａ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。

【0235】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列が以下の表３に提供されている。表３において、ＣＤＲ配列（Ｋａｂａｔによる）に下線が引かれている。

【0236】

（表３）

【0237】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体についてのＫａｂａｔによるＣＤＲ配列が以下の表４（重鎖）及び表５（軽鎖）に提供されている。

【0238】

（表４）

【0239】

（表５）

【0240】

実施例９：抗ＭｅｒＴＫ抗体の生成
抗ＭｅｒＴＫハイブリドーマクローンを無血清ハイブリドーマ培地中で培養し、上清中の抗ＭｅｒＴＫ抗体を、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップ（Ｐｈｙｎｅｘｕｓ Ｉｎｃ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用してＨａｍｉｌｔｏｎ ＳＴＡＲプラットフォーム（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｅｎｏ，ＮＶ）で精製した。抗ＭｅｒＴＫ抗体をまた、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含有するキメラ抗体の生成のための組換え発現プラスミドへの、ハイブリドーマから得られた可変遺伝子領域の直接的クローニングを介して生成した。Ｔｕｎａ２９３（商標）及びＴｕｎａＣＨＯ（商標）Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ（ＬａｋｅＰｈａｒｍａ，Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）を使用して、私有ＨＥＫ２９３（Ｔｕｎａ２９３（商標））またはＣＨＯ－Ｋ１（ＴｕｎａＣＨＯ（商標））由来細胞を振盪フラスコに播種し、無血清の化学的に定義された培地を使用して増殖させた。発現プラスミドを細胞に一過性にトランスフェクションし、７及び１４日後に培養上清を採取した。遠心分離及び濾過による清澄化後、上清中の抗ＭｅｒＴＫ抗体をプロテインＡクロマトグラフィーを介して精製した。

【0241】

実施例１０：抗ＭｅｒＴＫ抗体はＳＫ－ＭＥＬ－５細胞、ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞、及びマウスマクロファージに結合する
本開示の組換え抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体が、陰性対照としてのＡ３７５及び親ＣＨＯ細胞と比較して、マウスＭｅｒＴＫを過剰発現するＳＫ－ＭＥＬ－５細胞及びＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞）に内因的に発現したヒトＭｅｒＴＫに結合するかどうかを決定するために、以下の実験を実施した。ＳＫ－ＭＥＬ－５細胞、Ａ３７５細胞、ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ ＯＥ細胞、及びＣＨＯ親細胞を１００，０００細胞／ウェルで播種した。抗ＭｅｒＴＫ抗体を細胞に１０μｇ／ｍｌで添加した。氷上で６０分後、細胞を洗浄し、次いでＰＥコンジュゲート化ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃａｔ＃２０４０－０９、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）でＦｃブロック溶液の存在下で氷上で３０分間染色し、次いで低温ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中の２％ＦＢＳ）で２回洗浄した。マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ－ＰＥコンジュゲート化（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン５９０Ｈ１１Ｇ１Ｅ３）または抗マウスＭｅｒＴＫ－ＰＥコンジュゲート化（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、クローンＤＳ５ＭＭＥＲ）抗体を陽性対照として使用した。染色した細胞をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩサイトメーターで取得し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＦｌｏｗＪｏで計算した。

【0242】

内因性マウスＭｅｒＴＫに結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体を確認するために、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を、ＭｅｒＴＫ野生型（ＷＴ）及びノックアウト（ＫＯ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃａｔ＃０１１１２２）から標準的なプロトコルを使用して単離した。簡潔には、骨髄から単離された細胞を、マクロファージへの分化を可能とするために５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃４１６－ＭＬ）の存在下で７日間播種した。細胞染色、ＦＡＣ、及びＭＦＩを上述したように実施し、計算した。

【0243】

以下の表６は、ＳＫ－ＭＥＬ－５細胞、Ａ３７５細胞、ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫ－ＯＥ細胞、ＣＨＯ親細胞、及びＭｅｒＴＫ ＷＴマウスからのＢＭＤＭ細胞（ＭｅｒＴＫ ＷＴマウスから得られたものから差し引かれたＭｅｒＴＫ ＫＯマウスからのＢＭＤＭ細胞で得られた結合／ＭＦＩの程度を用いた）に結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体のＦＡＣＳ分析からのＭＦＩ値を示している。

【0244】

（表６）

ｎ．ａ．データ利用不可

【0245】

組換え抗ＭｅｒＴＫ抗体はＳＫ－ＭＥＬ－５細胞に結合し、ヒトＭｅｒＴＫに対する抗ＭｅｒＴＫ抗体結合を示している。１２種の組換え抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＣＨＯ－ｍｕＭｅｒＴＫを過剰発現する細胞及びＢＭＤＭの強～中程度の結合を示し、マウスＭｅｒＴＫに対する抗ＭｅｒＴＫ抗体結合を示していた。

【0246】

実施例１１：ＭｅｒＴＫに対するリガンドＧａｓ６及びリガンドＰｒｏＳ結合の抗ＭｅｒＴＫ抗体ブロック
ヒトＭｅｒＴＫに結合するＧａｓ６及び／またはＰｒｏＳリガンドの能力を阻害しない抗ＭｅｒＴＫ抗体を特定するために、リガンドブロックアッセイを上述したように実施した。抗ＭｅｒＴＫ抗体を６６．６ｎＭから４ｐＭまでの最終濃度にタイトレーションし、抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｍ６（ＷＯ２０１６／１０６２２１に開示）またはアイソタイプ対照抗体に対して試験した。

【0247】

表７は、これらの研究において試験された抗体の最も高い濃度（６６．６ｎＭ）でのヒトＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６結合及びＰｒｏＳ結合を示している；データは、１００％結合に設定されたアイソタイプ対照ｈｕＩｇＧ１抗体のリガンド結合の程度と比較した、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６結合のパーセンテージ及びヒトＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳ結合のパーセンテージとして示されている。

【0248】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、表７で以下に示されるように、ヒトＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６結合を阻害しなかった（すなわち、ブロックしなかった）。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の大部分は、ヒトＭｅｒＴＫに対するＰｒｏＳリガンド結合をブロックしなかった。また、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２３、及びＭＴＫ－２３０は、このアッセイにおいてＭｅｒＴＫに対するリガンド結合の中程度の阻害（＞３０％の阻害）を示した。示されているように、抗ＭｅｒＴＫ抗体Ｍ６は、ヒトＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６及びＰｒｏＳの両方の結合をブロックするのに極めて有効であり、リガンド結合を９０％超ブロックした。また、表７に示されているように、本開示の所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭｅｒＴＫに対するＧａｓ６及び／またはＰｒｏＳの結合を向上させるようであった。

【0249】

（表７）

【0250】

実施例１２：Ｇａｓ６及びＰｒｏＳリガンドの直接的抗ＭｅｒＴＫ抗体結合
Ｇａｓ６またはＰｒｏＳに直接的に結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体を特定するために、結合アッセイを以下のように実施した。簡潔には、ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃３０９－００５－００８）を、２μｇ／ｍｌで高タンパク質結合プレートに４℃で一晩コーティングした。ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、ＰＢＳ中の５％ＢＳＡを１時間添加した。組換えヒトＭｅｒＴＫ－ヒトＦｃキメラタンパク質（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃３９１－ＭＲ－１００）または本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を２μｇ／ｍｌで１時間添加し、プレートを洗浄してから、Ｈｉｓタグコンジュゲート化組換えＧａｓ６（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃８８５－ＧＳＢ－０５０）を１．５μｇ／ｍｌで、またはＨｉｓタグコンジュゲート化組換えＰｒｏＳ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ＃９４８９－ＰＳ－１００）を１０μｇ／ｍｌで添加した。さらに１時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート化抗６ｘ Ｈｉｓタグ付き抗体（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ、Ｃａｔ＃ａｂ１１８７）で１時間インキュベートした。次いでプレートを洗浄し、ＨＲＰ基質であるＴＭＢを添加してプレートを現像した。反応を、５０μｌの２Ｎ Ｈ_２ＳＯ_４を添加することによって停止させ、ＯＤを分光光度計（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して測定した。

【0251】

ＭｅｒＴＫの非存在下でＧａｓ６及びＰｒｏＳリガンドのいずれかまたは両方に結合するそれらの能力について試験された３２種の抗体のうち、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２３１のみが両方のリガンドに強力に結合することができた。また、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２２４、及びＭＴＫ－２３２は、ＰｒｏＳリガンドに対する低～中程度の結合を示した。これらの結果は、本開示の所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、ＭｅｒＴＫ及びそのリガンドの１つ以上の両方に結合する追加の特性を有することを示していた。

【0252】

実施例１３：ＭｅｒＴＫチロシンリン酸化の調節
骨髄細胞におけるＭｅｒＴＫチロシンリン酸化（ｐ－ＭｅｒＴＫ）に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を以下のように試験した。単球由来マクロファージを生成するために、ヒト初代単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して製造業者のプロトコルに従ってヘパリン化ヒト血液（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ）から単離した。単球を、１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び５０ｎｇ／ｍＬ Ｍ－ＣＳＦ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有するＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に播種してマクロファージの分化を誘導した。６日後、マクロファージを、培地を除去することによって採取し、３ｍＭ ＥＤＴＡと３７℃で５分間インキュベートし、その後細胞をこすり落とした。次いでマクロファージを９６ウェルプレートに０．１×１０^６／ウェルで播種し、５０ｎｇ／ｍＬ Ｍ－ＣＳＦ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、１００ｎＭデキサメタゾン（Ｔｏｃｒｉｓ）、５０ｎｇ／ｍＬヒトＴｇｆβ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１０（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ）と共に培養した。２日（約４８時間）後、細胞から培地を除去し、ＰＢＳ中の抗ＭｅｒＴＫ抗体を１０μｇ／ｍＬで添加し、細胞を３７℃で８分間インキュベートすることによって細胞を抗ＭｅｒＴＫ抗体で処置した。次いで処置抗体を除去し、細胞を氷冷ＰＢＳで１回洗浄し、１５０μＬの氷冷１Ｘ溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で溶解することによって細胞を採取した。９６ウェルプレートを振盪機上で溶解緩衝液中で３０分間４℃でインキュベートした。次いでプレートを４，３００ｘｇで１０分間４℃での遠心分離によって細胞デブリを除去した。上清をｐｈｏｓｐｈｏ－Ｍｅｒ（ｐａｎＴｙｒ）ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びＢＣＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のために収集した。その後、ライセートを製造業者の指示書に従って処理し、ｐ－ＭｅｒＴＫレベルを総タンパク質レベルに対して正規化した。

【0253】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の多くは、このアッセイにおいて試験されたようにｐ－ＭｅｒＴＫを誘導することができた（図１を参照されたい）。抗ＭｅｒＴＫ抗体は、平均（図１において上側の点線によって示されている）の標準誤差でまたはそれを上回って、一元配置ＡＮＯＶＡテューキーの多重比較検定）を使用して、（図１において下側破線によって示されているように、アイソタイプ対照ｈｕＩｇＧ１抗体処置細胞において観察されたものと比較して）ｐ－ＭｅｒＴＫレベルの有意な増加を示す。アイソタイプ対照ｈｕＩｇＧ１抗体を１の値に設定した。Ｎ＝４（各Ｎは１つのヒトドナーである）。

【0254】

これらの結果は、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、ＭｅｒＴＫのリン酸化を誘導または増加させることによって、少なくとも部分的に、ＭｅｒＴＫ活性を増強することを示した。

【0255】

実施例１４：抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合動態
ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫに対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ ＩｇＧ１抗体の結合動態を、Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡ装置（Ｃａｒｔｅｒｒａ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）を使用して評価した。簡潔には、抗ＭｅｒＴＫ抗体を、１０ｍＭアセテートｐＨ４．２５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）に５０、２５０及び５００倍で希釈して１～１１３μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度を得ることによって調製した。ＨＣ２００Ｍセンサーチップ（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を、１００ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．５、１００ｍＭスルホ－ＮＨＳ、４００ｍＭ ＥＤＣの１：１：１の混合物（全てＭＥＳ ｐＨ５．５において再構成した；各１００μｌをアッセイを実行する直前にバイアル内で混合した）の７分間の注射を用いてシングルチャネルフローセルを使用して活性化した。多重チャネルアレイフローセルにスイッチした後、抗体を、３つの９６スポットアレイにおいてそれぞれ１０分間、活性化チップ上に注入した。次いでチップ上の残存する非コンジュゲート化活性基を、シングルチャネルフローセルを使用して１ＭエタノールアミンｐＨ８．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を７分間注入することによってブロックした。得られたセンサーチップは、各抗体について３つの異なる密度で３つのスポットを含有していた。２つの独立した実験を以下のように実施し、各抗体について１～６回決定のＮとした。２５ＲＵ未満の分析物結合もたらしたスポットは、さらなる分析から除外した。

【0256】

０．５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を有するランニング緩衝液（ＨＢＳ－ＴＥ、Ｃａｒｔｅｒｒａ）でプライミングした後、固定化された抗ＭｅｒＴＫ抗体を、上述したようにヒト、カニクイザル、及びマウスオルソログを含む、組換えＭｅｒＴＫ細胞外ドメインのいくつかの形態に結合するそれらの能力について試験した。親和性の推定値を、シングルチャネルフローセルを使用して抗体アレイ全体にわたった各分析物を注入することによって生成した。ＭｅｒＴＫ分析物を、ヒト及びカニクイザルＭｅｒＴＫの場合は１μＭ、及びマウスＭｅｒＴＫの場合は６００ｎＭから開始して一連の６つの３倍段階希釈でランニング緩衝液で希釈した。分析物を５分間注入し、解離を１０分間追跡した。各分析物注入後、抗体を、１Ｍ ＮａＣｌ（Ｔｅｋｎｏｖａ）を有するプロテインＡ／Ｇ溶出緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ）、または１０ｍＭグリシンｐＨ２．５のいずれかで再生した。３つの緩衝液ブランクを各段階間で流した（１段階当たり１種）。ＮｅｘｔＧｅｎＫＩＴハイスループット動態分析ソフトウェア（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を使用してデータを処理し、分析した。

【0257】

試験された抗ＭｅｒＴＫ抗体の各々についてのフィッティングされた会合及び解離速度定数（それぞれｋ－ｏｎ及びｋ－ｏｆｆ）から平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を計算した。値を組み合わせ、平均及び標準偏差を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してグラフを作製した。Ｋ_Ｄ値は、以下の表８にまとめられている。また、図２を参照されたい。

【0258】

（表８）

Ｎ＝決定の数；ＮＴ＝試験されていない；ＮＡ＝適用不可；ＬＢ＝低結合（測定限度未満）；ＮＢ＝結合が検出されなかった

【0259】

これらの結果は、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、およそ１ｎＭ～４μＭのＭｅｒＴＫに対する結合親和性の範囲を示したことを示していた。また、これらの結果は、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体が、ヒト特異的、ヒト及びカニクイザル交差反応性のみ、またはヒト、カニクイザル、及びマウス交差反応性を含む、この結合親和性範囲内の様々な種結合特異性を示したことを示していた。特に、ヒトＭｅｒＴＫに対する結合についての本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の親和性は、およそ１．３ｎＭ～４４０ｎＭの範囲であった；カニクイザルＭｅｒＴＫに対する結合についての本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の親和性は、１．４ｎＭ～３．６μＭの範囲であった；マウスＭｅｒＴＫに対する結合についての本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の親和性は、１．７ｎＭ～４６０ｎＭの範囲であった。

【0260】

実施例１５：ヒト、カニクイザル、及びマウスＭｅｒＴＫに対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の交差反応性
本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の種交差反応性を、上述した結合動態分析データから決定した。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の種結合交差反応性分析の結果が以下の表９にまとめられている。

【0261】

（表９）

【0262】

ヒトＭｅｒＴＫに対して観察されたものと比較したカニクイザルＭｅｒＴＫ及びマウスＭｅｒＴＫに結合する抗ＭｅｒＴＫ抗体の相対的強度が以下の表１０にまとめられている。より高いＫＤ値は、より低い結合親和性を表すことに留意されたい。

【0263】

（表１０）

ＮＴ＝試験されていない；ＬＢ＝低結合（測定限度未満）；ＮＢ＝結合が検出されなかった

【0264】

これらの結合実験からの結果は、本開示の３つの抗ＭｅｒＴＫ抗体が、ヒトＭｅｒＴＫのみに対する結合について強力な優先性を示した（定量可能な範囲でカニクイザルまたはマウスＭｅｒＴＫに対する結合を示さなかった）ことを示していた；これらは、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２１６、及びＭＴＫ－２３２であった。

【0265】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の大部分は、ヒト及びカニクイザルＭｅｒＴＫの両方に対する結合交差反応性を示した；これらは、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２９、及びＭＴＫ－２３１であった。これらの抗ＭｅｒＴＫ抗体のうち、６種は、ヒトＭｅｒＴＫに対する反応性についてカニクイザルＭｅｒＴＫに対する反応性よりも２～５倍の弱い優先性を示し（抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２３、及びＭＴＫ－２２９）、２種は、ヒトＭｅｒＴＫに対する反応性についてカニクイザルＭｅｒＴＫに対する反応性よりも２４及び１８倍の中程度の優先性を示した（それぞれ抗ＭｅｒＴＫ ＭＴＫ－２０６及びＭＴＫ－２１２）。

【0266】

本開示の１１種の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、試験された３つ全ての種（ヒト、カニクイザル、及びマウス）に対して交差反応性を示した；それは、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭｅｒＴＫ（ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、及びＭＴＫ－２３０であった。マウス交差反応性抗体のうち、１種は、ヒトＭｅｒＴＫについてマウスＭｅｒＴＫと比べて３．５倍の弱い優先性を示し（抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２３０）、３種は、１２．５、３５．４、及び６４．２倍の結合でマウスＭｅｒＴＫを上回るヒトＭｅｒＴＫについての中程度の優先性を示した（抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０９、及びＭＴＫ－２２４）。６種の抗体は、５～３０倍の相対的結合の範囲でヒトＭｅｒＴＫと比べてマウスＭｅｒＴＫについて中程度の優先性を示した（抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、及びＭＴＫ－２２８）。

【0267】

実施例１６：抗ＭｅｒＴＫ抗体のエピトープビニング分析
Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡ装置（Ｃａｒｔｅｒｒａ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）を使用してタンデム注入実験を実施することによって本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体についてエピトープビニング分析を実施した。簡潔には、上述した動態評価に使用したチップを次いでビニングアッセイにおいて試験し、ビニングアッセイでは、固定化された抗体を、組換えヒトＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン及び注入された抗体とサンドイッチ対を形成するそれらの能力について試験した。各サイクルについて、１００ｎＭのＭｅｒＴＫを５分間チップ上に注入し、続いて試験抗体（ランニング緩衝液に３０μｇ／ｍｌまで希釈した）を５分間注入し、次いで再生のために１０ｍＭグリシンｐＨ２．５（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を３０秒で２回注入した。エピトープハイスループットビニング分析ソフトウェア（Ｃａｒｔｅｒｒａ）を使用してデータを処理し、分析した。固定化された抗体によって捕捉された抗原に結合することができた抗体を「サンドイッチ」または「対合」抗体として指定し、これらの抗体を、固定化された抗体のものとは異なるエピトープビンに割り当てた。対合及び非対合抗体のマトリックスをこれらの実験の結合結果から構築し、これにより抗ＭｅｒＴＫ抗体のエピトープビンランドスケープを生成することが可能となった。抗体の一部は、重複ビニングプロファイル（それらが、隣接するが完全に重複しないエピトープを認識し得ることを示唆している）を有する。ビン内のわずかな不均一性は、文字ａ、ｂ、ｃ、及びｄをビン名称に加えることによって示されている。２つのエピトープビンに重複するようである抗体については、ビン番号は、重複しているビンを示すように下線を用いて指定されている。このアッセイによって決定されたエピトープビンが以下の表１１にまとめられている。

【0268】

（表１１）

【0269】

本明細書に記載のエピトープビニング実験の一部として、追加の研究を実施して、固定化された抗ＭｅｒＴＫ抗体によって捕捉されたＭｅｒＴＫにＧａｓ６及びＰｒｏＳが結合する能力を調べた。これらの２つのリガンドのいずれかの結合をブロックしない抗ＭｅｒＴＫ抗体は、サンドイッチ対合を示すことが予期されるのに対し、Ｇａｓ６及び／またはＰｒｏＳをブロックする抗ＭｅｒＴＫ抗体は、結合対を形成しないであろう。この分析の結果が以下の表１２に示されている。

【0270】

本開示の２２種の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６と対合したが、このアッセイによって評価されたＰｒｏＳと対合しなかった。これらの結果は、ＰｒｏＳのみのブロッカーであった抗ＭｅｒＴＫ抗体を示す上述した実験結果と一致していた；ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０７、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１４、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２１９、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２３、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２８、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、及びＭＴＫ－２３２。４種の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６及びＰｒｏＳの両方と対合し、これは非ブロッカーと一致している（ＭＴＫ－２０８、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１６、及びＭＴＫ－２３１）。５種の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６及びＰｒｏＳのいずれとも対合せず、これは二重ブロッカーと一致している（ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１７、及びＭＴＫ－２２６）。抗体とＧａｓ６またはＰｒｏＳとの対合の欠如は、機能的ブロックを示唆するが、それを完全に予測しない場合があり、その理由は、この特性が、細胞上の天然受容体に対する結合について抗体及びリガンドの相対的動態及び濃度にも依存するからであることが留意されるべきである。

【0271】

（表１２）

【0272】

実施例１７：ＭＣＰ－１生成に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果
単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）は、免疫細胞を傷害部位に動員する。脱髄のマウスＥＡＥモデルにおいて、ＭＣＰ－１の欠損は、炎症性免疫細胞がＭＣＰ－１の欠如及び関連する炎症反応により傷害部位に動員されないので、マウスが疾患進行することから保護する。

【0273】

ケモカインＭＣＰ－１の生成に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を以下のように決定した。ヒト初代単球をＨｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して製造業者の指示書に従って末梢血単核細胞から単離した。２％Ｈｅｐｅｓ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２％ナトリウムピルベート（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２％非必須アミノ酸（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）、８％ヒト血清ＡＢ（Ｓｉｇｍａ）、及び５０ｎｇ／ｍｌマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中で単球をマクロファージに６日間分化させた。培地を除去し、ＰＢＳで洗浄し、次いで３ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中で３７℃で５分間インキュベートしてから、それらの除去のために細胞をスクレイピングすることによってマクロファージを収集した。細胞を計数し、９６ウェル平底皿において１００μｌの培地中でウェル当たり５０，０００細胞で播種した。細胞を、血清及びＭ－ＣＳＦを除いたこと以外は分化のためのものと同じ基礎培地中でＭ２ｃマクロファージ表現型に極性化した。その基礎培地に５０ｎｇ／ｍｌ形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－ベータ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、２０ｎｇ／ｍｌインターロイキン－１０（ＩＬ－１０、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、１００ｎＭデキサメタゾン（Ｔｏｃｒｉｓ）、及び抗ＭｅｒＴＫ抗体（１０μｇ／ｍｌ）を２日間補充した。いくつかの例では、細胞を極性化中にＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳ（１００ｎＭ組換えヒトプロテインＳ）の存在下でインキュベートした。

【0274】

アポトーシス細胞は、アポトーシス細胞に関連する内因性リガンド（例えば、Ｇａｓ６、ＰｒｏＳ）とのその相互作用によってＭ２ｃマクロファージに発現したＭｅｒＴＫを活性化し得る。アポトーシス細胞の存在を介して同時に活性化されたＭ２ｃ細胞におけるＭＣＰ－１レベルの増加に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を調べるために設計された並行研究において、マクロファージを、１０％ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び０．５μＭスタウロスポリン（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）中での一晩の培養によって生成されたアポトーシスＪｕｒｋａｔ細胞の存在下でＭ２ｃマクロファージ表現型に極性化した。２日後、細胞上清を収集した。上清中のＭＣＰ－１濃度を、Ｕ－ＰＬＥＸ Ｈｕｍａｎ ＭＣＰ－１ Ａｓｓａｙ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して決定した。

【0275】

図３Ａは、ＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳの非存在下でｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で処置された細胞で観察されたものに対して正規化された上清中のＭＣＰ－１レベルを示している。図３Ａにおける値は、アイソタイプと比較したＭＣＰ－１濃度を２倍にすると１の値を有する一方で、分析物濃度を半分にすると－１の値を有するようにｌｏｇ２スケールでプロットされている。組換えＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳは、ＭＣＰ－１生成の増加を単独で誘導した。図３Ａに示されているように、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、ＭＣＰ－１生成の増加を誘導し、これはＭｅｒＴＫリガンドＰｒｏＳの添加によってさらに向上しなかった。しかしながら、この実験のセットでは、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２３１は、この特定のアッセイを使用して測定された場合、増加したＭＣＰ－１レベルを示すためにＰｒｏＳリガンドを必要とするようであった。

【0276】

図３Ｂは、これらの研究からの上清において測定されたＭＣＰ－１レベルを示している。図３Ｂに示されているように、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体は、培養中のマクロファージの上清中のＭＣＰ－１レベルを増加させた。

【0277】

図３Ｃは、ｌｏｇ２スケールで正規化及びプロットされたＭＣＰ－１生成を示している。図３Ｃに示されているように、増加量のアポトーシスＪｕｒｋａｔ細胞の添加（ＰｒｏＳなし）は、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２２６及びＭＴＫ－２２８に関連するＭＣＰ－１のＭＣＰ－１レベル生成の倍増加を減少させた。

【0278】

まとめると、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体がＭＣＰ－１レベルを増加させることを示すこれらの結果は、抗ＭｅｒＴＫ抗体が、ＭｅｒＴＫを増強する（すなわち、ＭｅｒＴＫの活性を活性化または増加させる）するのに有効であり、よって、貪食／エフェロサイトーシスを向上させるのに有効であることを示していた。

【0279】

実施例１８：Ｇａｓ６リガンドの非存在または存在下でのＭｅｒＴＫチロシンリン酸化に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果
ＭｅｒＴＫリガンドＧａｓ６の存在または非存在下での骨髄細胞におけるＭｅｒＴＫチロシンリン酸化（ｐＭｅｒＴＫ）に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を以下のように試験した。単球由来マクロファージを生成するために、ヒト初代単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して製造業者のプロトコルに従ってヘパリン化ヒト血液（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ）から単離した。単球を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び５０ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有するＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養してマクロファージの分化を誘導した。６日後、マクロファージを、培地を除去することによって採取し、３ｍＭ ＥＤＴＡと３７℃で５分間インキュベートし、その後細胞をこすり落とした。次いでマクロファージを９６ウェルプレートに０．１×１０^６／ウェルで播種し、５０ｎｇ／ｍＬ Ｍ－ＣＳＦ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、１００ｎＭデキサメタゾン（Ｔｏｃｒｉｓ）、５０ｎｇ／ｍＬヒトＴＧＦβ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１０（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ）と共に培養した。２日（約４８時間）後、細胞培地を除去し、１０％ＦＢＳを除いた完全成長培地（無血清培地）と交換することによって細胞を２時間血清飢餓状態とした。

【0280】

２時間の血清飢餓期間の最後に、細胞培地を除去し、細胞を、２００ｎＭ Ｇａｓ６タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在または非存在下で無血清培地中で様々な抗ＭｅｒＴＫ抗体とインキュベートした。抗ＭｅｒＴＫ抗体を１０μｇ／ｍＬの最終濃度で使用し、細胞を３７℃で８分間インキュベートした。次いで細胞を処置培地を除去することによって採取し、氷冷ＰＢＳで１回洗浄し、１５０μＬの氷冷１Ｘ溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で溶解した。各９６ウェルプレートを振盪機上で４℃で溶解緩衝液中で３０分間インキュベートした。次いでプレートを遠心分離によって４，３００ｘｇで１０分間４℃で細胞デブリを除去した。上清をｐｈｏｓｐｈｏ－Ｍｅｒ（ｐａｎＴｙｒ）ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びＢＣＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のために収集した。その後ライセートを製造業者の指示書に従って処理し、ｐＭｅｒＴＫレベルを決定し、ＢＣＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって測定された総タンパク質に対して正規化した。

【0281】

図４に示されているように、本開示のいくつかの抗ＭｅｒＴＫ抗体は、Ｇａｓ６の存在（黒色のカラム）または非存在（灰色のカラム）下でｐＭｅｒＴＫを誘導することができた。予期されたように、Ｇａｓ６は単独で、ｐＭｅｒＴＫレベルをある程度増加させることができた。抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０１、ＭＴＫ－２０２、ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１０、ＭＴＫ－２１１、ＭＴＫ－２１２、ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１５、ＭＴＫ－２１７、ＭＴＫ－２２１、ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２４、ＭＴＫ－２２６、ＭＴＫ－２２７、ＭＴＫ－２２９、ＭＴＫ－２３０、及びＭＴＫ－２３２は全て、Ｇａｓ６リガンドの非存在下で、それらだけでマクロファージにおけるｐＭｅｒＴＫレベルを増加させるのに有効であった。所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体については、Ｇａｓ６リガンドの添加は、Ｇａｓ６の非存在下で観察されたものよりも高いｐＭｅｒＴＫレベルのさらなる増加をもたらした。抗ＭｅｒＴＫ抗体は、アイソタイプ対照抗体で処置された細胞において観察されたものよりも約１倍～約４倍高いマクロファージにおけるｐＭｅｒＴＫレベルを増加させた。

【0282】

実施例１９：ｐＡＫＴに対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果
ＡＫＴ（プロテインキナーゼＢ）シグナル伝達経路は、細胞生存及び成長を促進するシグナル伝達経路である。ＡＫＴのリン酸化（ｐＡＫＴ）に対する抗ＭｅｒＴＫ抗体の効果を以下のように試験した。指数関数的に増殖する培養物からのＳＫ－ＭＥＬ－５細胞を９６ウェルプレートで５０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、一晩インキュベートした。細胞を４時間、血清飢餓状態とした。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体を細胞に３７℃で１５分間添加した（６６．６ｎＭの最終抗体濃度）。次いで培地を細胞から除去し、細胞を３０分間振盪しながら溶解した。ｐＡＫＴ測定値は、Ｃｉｓｂｉｏ ｐｈｏｓｐｈ－ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）Ｋｉｔ（Ｃｉｓｂｉｏ、＃６４ＡＫＳＰＥＧ）を使用して２プレートアッセイプロトコルについての製造業者の指示書に従って２０ｍＬの最終体積において細胞ライセートから決定した。

【0283】

以下の表１３は、対照ＩｇＧ抗体とインキュベートされたＳＫ－ＭＥＬ－５細胞において観察されたものに対する、本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体とインキュベートされたＳＫ－ＭＥＬ－５細胞におけるｐＡＫＴレベルの倍数増加を示している。２００ｎＭの組換えヒトＧａｓ６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とインキュベートされた細胞は、対照ＩｇＧ抗体の存在下で観察されたものよりもおよそ８～１２倍ｐＡＫＴレベルを増加させた。

【0284】

（表１３）

ｎｄ＝未決定

【0285】

本開示の所定の抗ＭｅｒＴＫ抗体のＥＣ５０値を、上述したｐＡＫＴアッセイから決定した。ＥＣ５０値は、上の表１３に示されている。

【0286】

実施例２０：抗ＭｅｒＴＫ抗体のドメイン結合分析
以下の研究を実施して、ヒトＭｅｒＴＫに対する本開示の様々な抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合部位を分析した。

【0287】

ＭｅｒＴＫは、ＴＡＭファミリーのメンバーであり、そのメンバーは、Ｎ末端領域（ＮＴ）、２つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇ１及びＩｇ２）、２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（ＦＮ１及びＦＮ２）、膜近傍領域（ＪＭ）、及び細胞内チロシンキナーゼドメインを含有する独自のドメイン構造を共有する。膜近傍領域内の切断は、可溶性ＭｅｒＴＫ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の放出をもたらす。ヒトＭｅｒＴＫ ＥＣＤは、以下のドメインに分けられ得、そのアミノ酸配列は、以下の表１４に示されている：

【0288】

（表１４）

【0289】

ＴＡＭファミリーの別のメンバーであるＡｘｌタンパク質は、以下で表１５に示される以下のドメイン及びそのＥＣＤにおける関連するアミノ酸配列を有する、ＭｅｒＴＫのものと共通のドメイン構造を共有する：

【0290】

（表１５）

【0291】

これらの実験において、ヒトＭｅｒＴＫの様々なドメインが、対応するヒトＡｘｌドメインと交換された一連のキメラタンパク質を組換え的に発現させた。得られたキメラタンパク質をＥｘｐｉ２９３細胞において組換え的に発現させ、次いで本開示の様々な抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合を、Ａｘｌ／ＭｅｒＴＫドメイン交換キメラに結合するそれらの能力について分析した。シグナル配列（ＭｅｒＴＫコンストラクトにおけるＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号：２４１）、及びＡｘｌコンストラクトにおけるＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧ（配列番号：２４２））及びリンカー＋Ｈｉｓ＋Ａｖｉタグ（ＧＧＳＧＨＨＨＨＨＨＧＧＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ；配列番号：２４３）を有するドメイン交換キメラ及び欠失変異体をコードするＤＮＡを遺伝子合成によって調製し、発現ベクターｐｃＤＮＡｔｏｐｏ３．４（ＧｅｎｅＡｒｔ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）にクローニングした。Ｅｘｐｉ２９３細胞を推奨手順（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に従って２０μｇのプラスミド及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅでトランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を２０ｍＬの培養物中で３７℃及び５％ＣＯ２で４日間振盪しながら成長させた。細胞を遠心分離によってペレット化し、上清を真空によって０．２μＭフィルターを介して濾過した。

【0292】

表１６は、これらの研究において使用するために生成した様々なＡｘｌ／ＭｅｒＴＫドメイン交換キメラの構成を示している。この表において、Ｍ（ＭｅｒＴＫ）またはＡ（Ａｘｌ）は、その特定のドメインが、対応するキメラタンパク質コンストラクトに含まれていた（すなわち、交換された）タンパク質を示している；ＮＴ（Ｎ末端ドメイン）、Ｉｇ１（免疫グロブリン様ドメイン１）、Ｉｇ２（免疫グロブリン様ドメイン２）、ＦＮ１（フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン１）、ＦＮ２（フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン２）、及びＪＭ（膜近傍ドメイン）。

【0293】

（表１６）

【0294】

これらのドメイン交換キメラまたは欠失変異体に対する本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体の結合を、Ｃａｒｔｅｒｒａ ＬＳＡを使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって試験した。精製された抗ＭｅｒＴＫ抗体を、製造業者の指示書（前述した）に従って、アミンカップリングによってＨＣ３０Ｍチップ（Ｃａｒｔｅｒｒａ）上に二重に固定化した。

【0295】

コンストラクトを含有する上清を０．５ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ（ＨＢＳ－ＴＥ、Ｃａｒｔｅｒｒａ；ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を含有するランニング緩衝液で１：１で希釈し、固定化された抗体上に注入した。表面を、各コンストラクト注入後に１０ｍＭグリシンｐＨ２．０で再生した。サンサーグラムをＣａｒｔｅｒｒａ Ｅｐｉｔｏｐｅソフトウェアを使用して分析してコンストラクト結合のパターンを特定した。Ａｘｌからドメインが欠失もしくは交換されたＭｅｒＴＫコンストラクトに対する結合の喪失及び／またはＭｅｒＴＫドメインが交換導入されたＡｘｌコンストラクトに対する結合の獲得を評価した。これらの研究からのデータを使用して、抗ＭｅｒＴＫ抗体及びヒトＭｅｒＴＫの様々なドメインに対するそれらの結合についてのドメイン結合マップを構築した。

【0296】

本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体に加えて、以下の抗ＭｅｒＴＫ抗体もこれらの研究において使用した：マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＩＤ：５９０Ｈ１１Ｇ１Ｅ３、マウスＩｇＧ１）、マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、クローンＩＤ：１２５５１８、マウスＩｇＧ２ｂ）、マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、クローンＩＤ １２５５０８、マウスＩｇＧ２ｂ）、マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローンＩＤ：Ａ３ＫＣＡＴ、マウスＩｇＧ１）、マウス抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｈ７（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、クローンＩＤ：０９、マウスＩｇＧ２ｂ）、ヒト抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体Ｍ６（ＷＯ２０１６／１０６２２１に開示、ｈｕＩｇＧ１ ＬＡＬＡＰＳ）、ヒト抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体ＣＤＸ Ａｂ２０００（ＷＯ２０１９／０８４３０７に開示、ｈｕＩｇＧ１ ＬＡＬＡＰＳ）、及びヒト抗ヒトＭｅｒＴＫ抗体ＣＤＸ Ａｂ３０００（ＷＯ２０２０／１０６４６１に開示、ｈｕＩｇＧ１ ＬＡＬＡＰＳ）。

【0297】

これらの結合研究の結果が以下の表１７に示されている。結合に必要とされるドメイン（複数可）が最初に列挙されており、括弧内に特定されたドメインは、おそらく間接的にコンフォメーショナル効果を介して、より低い程度で結合に影響する。２つのハーフアンドハーフキメラに対する結合の評価は、ここで試験された抗体についての主要な結合ドメインを確立及び／または確認することを補助する。

【0298】

（表１７）

【0299】

表１７に示されているように、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０４、ＭＴＫ－２２０、ＭＴＫ－２２３、及びＨ６は、ヒトＭｅｒＴＫのＮ末端領域を含有するキメラタンパク質コンストラクトに結合した。これは、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端を含んでいたが、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端、ハーフアンドハーフキメラを含んでいなかった。抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２０２及びＭＴＫ－２３１もまた、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端を含む、ＭｅｒＴＫのＮ末端領域を含有するコンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ハーフアンドハーフキメラには結合しなかったが、結合は、ＭｅｒＴＫ ＦＮ１ドメインがＡｘｌ ＦＮ１ドメインと交換された場合に減少した。

【0300】

抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２１３、ＭＴＫ－２１８、ＭＴＫ－２２５、ＭＴＫ－２２６、及びＭ６は、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端を含むＭｅｒＴＫ Ｉｇ１を含有していたコンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ハーフアンドハーフキメラに結合しなかった。抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２１５は、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端を含むＭｅｒＴＫ Ｉｇ１を含有していたキメラタンパク質コンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ハーフアンドハーフキメラに結合しなかった；しかしながら、その結合は、ＭｅｒＴＫ ＦＮ１ドメインがＡｘｌ ＦＮ１ドメインと交換された場合に減少した。

【0301】

抗体Ｈ１、Ｈ２、及びＣＤＸ Ａｂ３０００は、結合のためにＭｅｒＴＫ Ｉｇ２及びＦｎ１ドメインの両方の存在を必要とし、いずれのハーフアンドハーフキメラにも結合せず、それらの結合部位は、これらの２つのドメイン間の接続部にわたって伸長し得ることを示唆していた。同様に、抗ＭｅｒＴＫ抗体ＭＴＫ－２１２による結合は、Ｉｇ２及びＦＮ１ドメインの両方の存在を必要とした（それはまた、いずれのハーフアンドハーフキメラにも結合しなかった）が、上記のＩｇ２／ＦＮ１結合抗体とは異なり、抗体ＭＴＫ－２１２結合は、ＭｅｒＴＫ ＦＮ２ドメインがＡｘｌ ＦＮ２ドメインと交換された場合に減少した。

【0302】

抗体ＭＴＫ－２０３、ＭＴＫ－２０９、ＭＴＫ－２１４、及びＭＴＫ－２２４は、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端を含むＭｅｒＴＫ ＦＮ１ドメインを含有するコンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端ハーフアンドハーフキメラに結合しなかった。抗体ＭＴＫ－２２２、ＭＴＫ－２２７、及びＭＴＫ－２３０もまた、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ハーフアンドハーフを含むＭＴＫ ＦＮ１ドメインを含有するコンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端ハーフアンドハーフキメラには結合しなかったが、それらの結合は、ＭｅｒＴＫ ＦＮ２またはＩｇ１ドメインが存在しなかった場合に減少した。

【0303】

抗体ＭＴＫ－２０６、ＭＴＫ－２１７、及びＭＴＫ－２２９は、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ハーフアンドハーフを含むＭｅｒＴＫ ＦＮ２及びＪＭドメインを含有するコンストラクトに結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端ハーフアンドハーフキメラには結合しなかった一方で、それらの結合は、ＭｅｒＴＫ ＦＮ１ドメインが存在しなかった場合に減少した。抗体Ｈ３及びＨ７は、ＭｅｒＴＫ ＪＭドメインを含有していたコンストラクト及びＭｅｒＴＫ Ｃ末端ＥＣＤキメラに結合した。抗体ＭＴＫ－２０５、ＭＴＫ－２１０、及びＭＴＫ－２１９の結合は、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端ドメインのいずれか（ＦＮ１、ＦＮ２、またはＪＭ）が存在しなかった場合に減少し、それらは、ＭｅｒＴＫ Ｃ末端に結合したが、ＭｅｒＴＫ Ｎ末端ハーフアンドハーフキメラには結合しなかった。それらの結合はまた、ＭｅｒＴＫ Ｉｇ１ドメインの非存在下で減少した。本開示の抗ＭｅｒＴＫ抗体のいずれも、ヒトＡｘｌのＥＣＤドメインに結合しなかった（データは示されていない）。

【0304】

上の表１１からのビン割り当てを、表１７からのドメイン結合と比較すると、エピトープビン１、２、３、４、及び１０における抗ＭｅｒＴＫ抗体には、ＭｅｒＴＫ ＥＣＤのＣ末端領域に対する結合因子が含まれるのに対し、エピトープビン６、７、８、及び９における抗体には、ＭｅｒＴＫ ＥＣＤのＮ末端領域に対する結合因子が含まれる。エピトープビン５における抗体は、ＭｅｒＴＫ ＥＣＤのＮ及びＣ末端領域の両方を必要とする領域（潜在的にその２つの領域間の接続部に及ぶ）でＭｅｒＴＫに結合する。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4】

【配列表】

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【国際調査報告】