特表 2023-520233 間葉系統前駆細胞又は幹細胞を使用する過炎症の治療方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-16

(54)【発明の名称】間葉系統前駆細胞又は幹細胞を使用する過炎症の治療方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/28 20150101AFI20230509BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20230509BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230509BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230509BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20230509BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20230509BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20230509BHJP

   C12N 5/0775 20100101ALN20230509BHJP

   C12N 1/04 20060101ALN20230509BHJP

【ＦＩ】

A61K35/28

A61K35/545

A61P9/00

A61P11/00

A61P7/02

A61P29/00

A61K45/00

A61K9/08

A61K47/02

A61K47/12

A61K47/20

A61K47/42

C12N5/0775

C12N1/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022560101

(86)(22)【出願日】2021-04-01

(85)【翻訳文提出日】2022-10-17

(86)【国際出願番号】 EP2021058683

(87)【国際公開番号】W WO2021198454

(87)【国際公開日】2021-10-07

(31)【優先権主張番号】2020901052

(32)【優先日】2020-04-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020901124

(32)【優先日】2020-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020902312

(32)【優先日】2020-07-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020902425

(32)【優先日】2020-07-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020903041

(32)【優先日】2020-08-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020903694

(32)【優先日】2020-10-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(31)【優先権主張番号】2020904312

(32)【優先日】2020-11-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516300656

【氏名又は名称】メゾブラスト・インターナショナル・エスアーエールエル

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】シルヴィウ・イテスク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AC12

4B065AC20

4B065BD09

4B065BD12

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4C087ZA36

4C087ZA54

4C087ZA59

4C087ZB11

(57)【要約】

本開示は、過炎症の治療又は予防を必要とする対象において過炎症を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

過炎症の治療又は予防を必要とするヒト対象において過炎症を治療又は予防する方法であって、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記過炎症が、ウイルス感染によって引き起こされる、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ウイルス感染が、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによって引き起こされる、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ウイルス感染が、コロナウイルスによって引き起こされる、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、又はＣＯＶＩＤ－１９である、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記対象が、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）も有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＭＬＰＳＣが、凍結保存され、解凍されている、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＭＬＰＳＣが、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から培養増殖される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＭＬＰＳＣが、少なくとも約５継代培養増殖される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記ＭＬＰＳＣが、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり少なくとも１３ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記ＭＬＰＳＣが、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり約１３ｐｇ～約４４ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記培養増殖が、少なくとも２０回又は３０回の集団倍加を含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記対象がＭＩＳを有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記対象がウイルス性心筋炎を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＭＬＰＳＣが間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ＭＬＰＳＣが同種である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ＭＬＰＳＣが、抗ウイルス薬又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

１用量当たり１×１０^７～２×１０^８個の細胞を投与することを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

１用量当たり約１×１０^８個の細胞を投与することを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記対象が２回用量を受ける、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記対象の循環ＣＲＰレベルが治療後に減少する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

対象の白血球数が治療後に減少する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記対象のＦｉＯ２レベルが治療後に減少し、かつ／又は前記対象のＰ／Ｆ比が治療後に増加する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記対象のＤダイマーレベルが治療後に低減する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記対象のＤダイマーレベルが５μｇ／ｍｌ未満に低減する、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記対象のＢＮＰレベルが治療後に低減する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記対象のＬＶＥＦ％が治療後に増加する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記組成物が、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を更に含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記組成物が、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を更に含み、前記ＨＳＡ溶液が、５％ＨＳＡ及び１５％緩衝液を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記組成物が、６．６８×１０^６超の生細胞／ｍＬを含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

多系統炎症症候群（ＭＩＳ）の治療又は予防を必要とするヒト対象において多系統炎症症候群（ＭＩＳ）を治療又は予防する方法であって、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項32】

前記対象が小児である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

Ｄダイマーレベルの上昇に関連する疾患の治療又は予防を必要とするヒト対象においてＤダイマーレベルの上昇に関連する疾患を治療又は予防する方法であって、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項34】

前記疾患が血栓症又は肺塞栓症である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

治療が、前記対象のＤダイマーレベルを１５μｇ／ｍｌ未満に低減する、請求項３３又は３４に記載の方法。

【請求項36】

治療が、前記対象のＤダイマーレベルを５μｇ／ｍｌ未満に低減する、請求項３３又は３４に記載の方法。

【請求項37】

前記血栓症が動脈血栓症である、請求項３４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、過炎症の治療又は予防を必要とする対象において過炎症を治療又は予防するための方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ウイルス感染等の様々な状態に関連する呼吸器疾患は、一般集団において問題となる。多くの場合、これらは肺の状態を悪化させる過炎症を伴う。

【0003】

したがって、過炎症を有する患者において、特に新たな治療選択肢が必要とされるウイルス感染に続発する場合に、満たされていない治療的必要性が残る。

【発明の概要】

【0004】

本発明者らは、驚くべきことに、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与することによって、過炎症の治療を達成することができることを見出した。

【0005】

したがって、第１の例では、本開示は、過炎症の治療又は予防を必要とするヒト対象において過炎症を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。

【0006】

一例では、過炎症は、ウイルス感染によって引き起こされる。ウイルス感染は、例えば、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによって引き起こされ得る。

【0007】

一例では、過炎症はコロナウイルス感染症によって引き起こされる。コロナウイルスは、例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ＣＯＶＩＤ－１９、２２９Ｅ、ＮＬ６３、ＯＣ４３、又はＫＨＵ１であり得る。一例では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＣＯＶＩＤ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。

【0008】

別の例では、対象は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）も有する。別の例では、対象は、多系統炎症症候群を有する。この例では、対象は２１歳未満であり得る。一例では、ＭＩＳを有する対象は小児である。別の例では、対象は、ウイルス性心筋炎を有する。

【0009】

したがって、一例では、本開示は、ＡＲＤＳを治療する方法を必要とするヒト対象においてＡＲＤＳを治療する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。

【0010】

一例では、ＭＬＰＳＣは、凍結保存され、解凍されている。一例では、ＭＬＰＳＣは、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から培養増殖される。別の例では、ＭＬＰＳＣは、少なくとも約５継代培養増殖される。一例では、ＭＬＰＳＣは、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり少なくとも１３ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する。一例では、ＭＬＰＳＣは、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり約１３ｐｇ～約４４ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する。一例では、培養増殖ＭＬＰＳＣは、少なくとも２０回の集団倍加にわたって培養増殖される。別の例では、培養増殖ＭＬＰＳＣは、少なくとも３０回の集団倍加にわたって培養増殖される。一例では、ＭＬＰＳＣは、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。別の例では、ＭＬＰＳＣは、同種である。例えば、ＭＬＰＳＣは、同種ＭＳＣであり得る。

【0011】

別の例では、ＭＬＰＳＣは、抗ウイルス薬又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変される。一例では、抗ウイルス薬は、レムデシビルである。一例では、血栓溶解剤は、Ｅｍｉｎａｓｅ（アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ））Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）Ｓｔｒｅｐｔａｓｅ（ストレプトキナーゼ、カビキナーゼ（ｋａｂｉｋｉｎａｓｅ））からなる群から選択される。

【0012】

別の例では、ＭＬＰＳＣは、抗ウイルスペプチド又はそれをコードする核酸を発現するように遺伝子改変される。

【0013】

一例では、組成物は、静脈内に投与される。

【0014】

一例では、本開示の方法は、１×１０^７～２×１０^８個の細胞を投与することを包含する。例えば、１×１０^７～２×１０^８細胞の複数回用量が、０、３０、６０、及び９０日目に投与されてもよい。一例では、本開示の方法は、１用量当たり約１×１０^８個の細胞を投与することを包含する。一例では、対象は、２回用量を投与される。

【0015】

一例では、対象の循環ＣＲＰレベルが治療後に減少する。一例では、対象の白血球数が治療後に減少する。一例では、対象のＤダイマーレベルが治療後に低減する。一例では、対象のＤダイマーレベルは、５ｕｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、対象のＢＮＰレベルが治療後に低減する。一例では、対象のＦｉＯ２レベルが治療後に減少する。一例では、対象のＰ／Ｆ比が治療後に増加する。一例では、対象のＬＶＥＦ％が治療後に増加する。

【0016】

別の例では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を更に含む。一例では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を更に含み、ＨＳＡ溶液は、５％ＨＳＡ及び１５％緩衝液を含む。

【0017】

一例では、組成物は、６．６８×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。

【0018】

別の例では、本開示は、多系炎症症候群（ＭＩＳ）の治療又は予防を必要とするヒト対象において多系炎症症候群（ＭＩＳ）を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。一例では、対象は、小児であり得る。

【0019】

別の例では、本開示は、Ｄダイマーレベルの上昇に関連する疾患の治療又は予防を必要とするヒト対象においてＤダイマーレベルの上昇に関連する疾患を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。一例では、疾患は、静脈閉塞によって引き起こされる。一例では、疾患は、動脈閉塞によって引き起こされる。一例では、疾患は、血栓症によって引き起こされる。一例では、疾患は、肺塞栓症によって引き起こされる。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１５μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、対象は、治療前に５５％未満のＬＶＥＦを有する。一例では、対象は、治療前に５２％未満のＬＶＥＦを有する。別の例では、対象は、４００ｐｇ／ｍｌ超のＢＮＰレベルを有する。別の例では、対象は、５００ｐｇ／ｍｌ超のＢＮＰレベルを有する。

【0020】

別の例では、本開示は、Ｄダイマーレベルの上昇に関連する疾患の治療又は予防を必要とするヒト対象においてＤダイマーレベルの上昇に関連する疾患を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。一例では、疾患は血栓症又は塞栓症である。一例では、血栓症は動脈血栓症である。一例では、塞栓症は肺塞栓症である。

【0021】

別の例では、本開示は、血栓症の治療又は予防を必要とするヒト対象において血栓症を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。一例では、血栓症は静脈血栓症である。別の例では、血栓症は動脈血栓症である。別の例では、本開示は、肺塞栓症の治療又は予防を必要とするヒト対象において肺塞栓症を治療又は予防する方法に関し、方法は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１５μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、対象は、治療前に５５％未満のＬＶＥＦを有する。一例では、対象は、治療前に５２％未満のＬＶＥＦを有する。別の例では、対象は、４００ｐｇ／ｍｌ超のＢＮＰレベルを有する。別の例では、対象は、５００ｐｇ／ｍｌ超のＢＮＰレベルを有する。一例では、血栓症は動脈血栓症である。

【0022】

一例では、投与されるＭＬＰＳＣは間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。一例では、ＭＬＰＳＣは同種である。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】予備結果１－ＰａＯ２／ＦｉＯ２、白血球数。

【図2】予備結果１－ＣＲＰ、フェリチン。

【図3】予備結果３－ＰａＯ２／ＦｉＯ２、白血球数。

【図4】予備結果３－ＣＲＰ、フェリチン。

【図5】結果概要。

【図6】最低値ＰａＯ２／ＦｉＯ２比（ｎ＝５）。

【図7】中央値ＰａＯ２／ＦｉＯ２比（ｎ＝５）。

【図8】循環ＣＲＰレベル（ｎ＝５）。

【図9】クレアチニンレベル（ｎ＝５）。

【図10】フェリチンレベル（ｎ＝５）。

【図11】細胞治療薬注入からの時間に応じた事象のスイマープロット。左側の数字は、表２に示される個々の患者識別子を表す。

【図12】細胞治療薬注入からの時間に応じた中央値Ｐ：Ｆ比及び四分位間範囲。

【図13】細胞治療薬注入からの時間に応じた中央値Ｃ反応性タンパク質レベル及び四分位間範囲。

【図14】詳細な臨床経過、患者１。

【図15】詳細な臨床経過、患者２。

【図16】ＬＶＥＦ％、ＢＮＰ（ｐｇ／ｍｌ）及びＤダイマー（ｕｇ／ｍｌ）レベルの比較。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本明細書全体を通して、特に別段の定めがない限り、又は文脈上別段の定めが必要でない限り、単一のステップ、組成物、ステップの群、又は組成物の群は、それらのステップ、組成物、ステップの群、又は組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含するものとみなされるものとする。

【0025】

当業者は、本明細書に記載される開示が、具体的に記載されるもの以外の変形及び修正を受け入れることを理解するであろう。本開示は、全てのそのような変形及び修正を含むことを理解されたい。本開示はまた、本明細書において個別に又は集合的に言及又は示される全てのステップ、特徴、組成物及び化合物、並びに上述のステップ又は特徴のいずれか及び全ての組み合わせ又はいずれか２つ以上を含む。

【0026】

本開示は、例示のみを目的とする、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。機能的に等価な製品、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本開示の範囲内である。

【0027】

本明細書に開示される任意の例は、特に別段の定めがない限り、任意の他の例に準用されるものとする。

【0028】

特に別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学、幹細胞分化、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学の）当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものと理解されるべきである。

【0029】

別段の指示がない限り、本開示で利用される外科的技法は、当業者に周知の標準的な手順である。

【0030】

間葉系統幹細胞又は前駆細胞の集団を得る及び富化する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、間葉系統幹細胞又は前駆細胞の富化集団は、間葉系統幹細胞又は前駆細胞上で発現される細胞表面マーカーの使用に基づくフローサイトメトリー及び細胞選別手順の使用によって得ることができる。

【0031】

本明細書に引用又は参照される全ての文書、及び本明細書に引用される文書に引用又は参照される全ての文書は、本明細書に言及される、又は参照により本明細書に組み込まれる任意の製品の製造業者の指示、説明、製品仕様、及び製品シートとともに、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0032】

選択した定義
「及び／又は」という用語、例えば「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味するものと理解され、両方の意味又はいずれかの意味の明示的な支持を提供するものと理解されなければならない。

【0033】

本明細書で使用される場合、反対の記載がない限り、約という用語は、指定された値の＋／－１０％、より好ましくは＋／－５％を指す。

【0034】

本明細書全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、記載された要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の除外を意味するものではないことが理解されるであろう。

【0035】

本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈によりそうではないと指示されない限り、単数及び複数の指示参照を含む。

【0036】

「単離された」又は「精製された」とは、その天然の環境の少なくともいくつかの構成要素から分離された細胞を意味する。この用語は、細胞の天然の環境からの全体的な物理的分離（例えば、ドナーからの除去）を含む。「単離された」という用語は、例えば、解離による、それが直接的に関与している隣接細胞との細胞の関係の変化を含む。「単離された」という用語は、組織切片にある細胞を指すものではない。細胞の集団を指すために使用される場合、「単離された」という用語は、本開示の単離された細胞の増殖から生じる細胞の集団を含む。

【0037】

「継代」、「継代させる」又は「継代培養」という用語は、細胞数が継続的に増加することができるように、細胞を生存させ、長期間培養条件下で増殖させるために使用される既知の細胞培養技術を指すために本開示の文脈で使用される。細胞株が経た継代培養の程度は、「継代数」として表されることが多く、これは、一般に、細胞が継代培養された回数を指すために使用される。一例では、１回の継代は、非接着細胞を除去し、接着した間葉系統前駆細胞又は幹細胞を残すことを含む。そのような間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、次いで、基質又はフラスコから（例えば、トリプシン又はコラゲナーゼ等のプロテアーゼを使用することによって）解離することができ、培地を添加することができ、任意選択的な洗浄（例えば、遠心分離による）を行うことができ、次いで、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、全体としてより大きな表面積を含む１つ以上の培養容器に再プレーティング又は再播種することができる。間葉系統前駆細胞又は幹細胞は次いで、培養で増殖し続けることができる。別の例では、非接着細胞を除去する方法として、非酵素処理のステップ（例えば、ＥＤＴＡによる）が挙げられる。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、コンフルエンスで又はほぼコンフルエンス（例えば、約７５％～約９５％のコンフルエンス）で継代される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、培養培地の約１０％、約１５％、又は約２０％細胞／ｍｌの濃度で播種される。

【0038】

「培地」（単数又は複数）という用語は、本開示の文脈で使用される場合、培養中の細胞を取り囲む環境の構成要素を含む。培地は、細胞の増殖を可能にするのに好適な条件に寄与する、及び／又は条件を提供することが想定される。培地は、固体、液体、気体、又は相及び材料の混合物であり得る。培地は、液体増殖培地だけでなく、細胞増殖を維持しない液体培地も含むことができる。例示的な気体培地としては、ペトリ皿又は他の固体若しくは半固体支持体上で増殖する細胞が曝露される気相が挙げられる。

【0039】

本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」又は「治療」という用語は、間葉系統幹細胞若しくは前駆細胞の集団及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子を投与し、それによって過炎症の少なくとも１つの症状を低減又は排除することを含む。一例では、治療は、培養増殖された間葉系統幹細胞又は前駆細胞の集団を投与することを含む。一例では、治療応答は、ベースラインと比較して決定される。

【0040】

一例では、治療は、対象のＣＲＰレベルに基づいて決定される。他の例では、治療は、白血球数、Ｐ／Ｆ比、又はフェリチンレベルのうちの１つ以上に基づいて決定される。一例では、治療は、ベースラインと比較してＰ／Ｆを５０改善する。別の例では、治療は、対象のＰ／Ｆを２００超増加させる。別の例では、治療は、対象のＰ／Ｆを２５０超増加させる。

【0041】

「Ｃ反応性タンパク質」又は「ＣＲＰ」は、炎症媒介物質であり、急性炎症再発の条件下ではそのレベルが上昇し、炎症が収まると急速に正常化する。

【0042】

一例では、治療は、ＣＲＰ、プロカルシトニン（ＰＣＴ）及びフェリチンのレベルの低減に基づいて決定される。

【0043】

一例では、治療は、ベースラインと比較して、ＣＲＰを少なくとも１００ｍｇ／ｄｌ低減する。別の例では、治療は、ベースラインと比較して、ＣＲＰを少なくとも１５０ｍｇ／ｄｌ低減する。一例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの８０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。一例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの６０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの５０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの４０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの２０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの１０ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの５ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。別の例では、循環ＣＲＰレベルの減少は、ＣＲＰの３ｍｇ／ｄｌ以下への低減である。

【0044】

別の例では、治療は、ＣＲＰを０．５ｍｇ／ｄｌ～６０ｍｇ／ｄｌに低減する。別の例では、治療は、ＣＲＰを０．５ｍｇ／ｄｌ～３０ｍｇ／ｄｌに低減する。別の例では、治療は、ＣＲＰを０．５ｍｇ／ｄｌ～１０ｍｇ／ｄｌに低減する。

【0045】

一例では、治療は、フェリチンレベルを２０００ｍｇ／ｄｌ未満に減少させる。別の例では、治療は、ベースラインと比較して、フェリチンレベルを少なくとも５００ｍｇ／ｄｌ減少させる。別の例では、治療は、ベースラインと比較して、フェリチンレベルを少なくとも７５０ｍｇ／ｍｌ減少させる。別の例では、治療は、フェリチンレベルを７００ｍｇ／ｄｌ未満に減少させる。

【0046】

別の例では、治療は、ＰＣＴレベルを０．１２ｎｇ／ｍｌ未満に減少させる。別の例では、治療は、ＰＣＴレベルを０．１ｎｇ／ｍｌ未満に減少させる。別の例では、治療は、ＰＣＴレベルを０．０８ｎｇ／ｍｌ未満に減少させる。

【0047】

一例では、ＡＲＤＳを有する対象において、治療は、対象の中等度から重度のＡＲＤＳを改善する。この例では、治療は、ベースラインと比較して、対象のＰ／Ｆを少なくとも５０改善する。一例では、治療は、対象Ｐ／Ｆを２００超改善する。

【0048】

一例では、治療はＩＬ－６レベルを減少させる。別の例では、治療は、トリグリセリドレベルの変化に基づく。

【0049】

一例では、治療は、肺活量測定に基づいて決定される。一例では、肺活量測定は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃａｒｅ（ＡＡＲＣ）のＳｐｉｒｏｍｅｔｒｙ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｃａｒｅ：ＡＡＲＣ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ：Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒｙ，１９９６ Ｕｐｄａｔｅ．，Ｒｅｓｐｉｒ Ｃａｒｅ．，４１：６２９－６３８）に基づいて決定される。

【0050】

一例では、治療は、対象のＦＥＶ１を改善する。一例では、治療は、対象のＦＶＣを改善する。別の例では、治療は、対象のＦＥＶ１／ＦＶＣを改善する。別の例では、治療は、対象の６分間歩行試験を改善する。

【0051】

一例では、６分間歩行試験の結果は、ＡＴＳ ｓｔａｔｅｍｅｎｔ：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｘ－ｍｉｎｕｔｅ ｗａｌｋ ｔｅｓｔ（２００２）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１６６：１１１－７に基づいて決定される。

【0052】

「Ｄダイマー」は、血餅に対するプラスミンの作用に続いて形成されたフィブリンの循環末端分解産物の１つである。Ｄダイマーレベルは、主要な血栓症及び凝固のマーカーである。一例では、本開示による治療は、対象におけるＤダイマーレベルを低減し、したがって、血栓症及び凝固のリスクを低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを２５μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを２０μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１５μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１０μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを５μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを３μｇ／ｍｌ未満に低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１μｇ／ｍｌ～１５μｇ／ｍｌに低減する。一例では、治療は、対象のＤダイマーレベルを１μｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌに低減する。

【0053】

一例では、本開示の方法による治療は、対象の血栓症のリスクを低減する。一例では、対象のリスクは、治療を受けない対象と比較して低減する。一例では、治療は、動脈血栓症である血栓症のリスクを低減する。したがって、一例では、治療は心臓発作又は脳卒中のリスクを低減する。

【0054】

「Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド」又は「ＢＮＰ」は、心臓内の圧力の変化に応答して放出される心臓によって生成されたホルモンである。したがって、ＢＮＰは、心不全の状況下において一般的に評価されるマーカーである。ＢＮＰレベルは、一般に、正常な心臓を有する対象と比較して、心機能が低減した対象においてより高い。一例では、治療は、対象のＢＮＰレベルを改善する。例えば、ＢＮＰレベルは、ベースライン又は本開示の方法による治療の前に観察されるレベルから減少することができる。一例では、ＢＮＰレベルは５００ｐｇ／ｍｌ未満に低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、４００ｐｇ／ｍｌ未満に低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、３００ｐｇ／ｍｌ未満に低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、２００ｐｇ／ｍｌ未満に低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、１５０ｐｇ／ｍｌ未満に低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、１００ｐｇ／ｍｌ～４００ｐｇ／ｍｌに低減する。別の例では、ＢＮＰレベルは、１００ｐｇ／ｍｌ～３００ｐｇ／ｍｌに低減する。

【0055】

一例では、治療は、対象の左心室駆出率（ＬＶＥＦ）のパーセンテージを改善する。例えば、ＬＶＥＦ％は、５５％超まで増加させることができる。一例では、ＬＶＥＦ％は、５８％超まで増加する。別の例では、ＬＶＥＦ％は、６０％超まで増加する。別の例では、ＬＶＥＦ％は、６５％超まで増加する。一例では、ＬＶＥＦは、心エコー図によって測定される。

【0056】

「予防」又は「予防すること」という用語は、本明細書で使用される場合、間葉系統幹細胞若しくは前駆細胞の集団及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子を投与し、それによって過炎症の少なくとも１つの症状の発症を停止又は阻害することを含む。

【0057】

「過炎症」という用語は、本開示の文脈において、体内の重度かつ継続的な炎症プロセスを指すために使用される。例えば、過炎症は、気道及び／若しくは肺、腎臓、又は肝臓における重度かつ継続的な炎症プロセスを指すことができる。このようにして、過炎症は体内の複数の臓器とその血管系に影響を及ぼし得る。一例では、過炎症は、ウイルス感染によって引き起こされる。一例では、過炎症は、サイトカインストーム又はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と関連する。一例では、サイトカインストーム又はＣＲＳは、ＩＬ－６等の炎症性サイトカインの顕著な放出を伴う。

【0058】

一例では、過炎症は、続発性（又は後天的）血球貪食性リンパ組織球症（ｓＨＬＨ）を引き起こす。したがって、一例では、本開示の方法は、血液貪食性リンパ組織球症（ｓＨＬＨ）の治療を包含する。

【0059】

別の例では、過炎症は、ＣＲＰ、ＰＣＴ、ＩＬ－６及び／又はフェリチンの上昇と関連している。例えば、フェリチンは、２０００ｍｇ／ｄｌ超であり得る。別の例では、フェリチンは、２５００ｍｇ／ｄｌ超である。一例では、過炎症は細菌感染と関連している。一例では、本開示に従って治療される対象は、循環ＣＲＰレベルの上昇を有する。例えば、本開示に従って治療される対象は、１００ｍｇ／ｄｌ超の循環ＣＲＰレベルを有し得る。別の例では、治療される対象は、１２０ｍｇ／ｄｌ超の循環ＣＲＰレベルを有する。別の例では、治療された対象は、１５０ｍｇ／ｄｌ超の循環ＣＲＰレベルを有する。別の例では、治療された対象は、９０ｍｇ／ｄｌ～３００ｍｇ／ｄｌの循環ＣＲＰレベルを有する。

【0060】

他の例では、過炎症は、トリグリセリドの上昇又はフィブリノーゲンの減少と関連している。例えば、本開示に従って治療される対象は、＞１．５ｍｍｏｌ／Ｌのトリグリセリドレベルを有し得る。別の例では、治療される対象は、＞２、＞３、＞４ｍｍｏｌ／Ｌのトリグリセリドレベルを有する。別の例では、治療される対象は、１．５～５ｍｍｏｌ／Ｌのトリグリセリドレベルを有する。別の例では、治療される対象は、２．５ｇ／Ｌ以下のフィブリノーゲンレベルを有する。別の例では、治療される対象は、２．５ｇ／Ｌ未満のフィブリノーゲンレベルを有する。

【0061】

一例では、過炎症は、多系統炎症症候群（ＭＩＳ）を引き起こす。例えば、過炎症は、小児のＭＩＳ（ＭＩＳ－Ｃ）を引き起こす可能性がある。

【0062】

一例では、過炎症はウイルス感染によって引き起こされる。例えば、過炎症は、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによって引き起こされ得る。一例では、過炎症は、コロナウイルスによって引き起こされ得る。例えば、コロナウイルスは、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、又はＣＯＶＩＤ－１９であり得る。一例では、過炎症は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）によって引き起こされる。

【0063】

一例では、本開示の方法は、対象における疾患進行又は疾患合併症を抑制する。対象における疾患進行又は疾患合併症の「抑制」は、対象における疾患進行及び／又は疾患合併症を予防又は軽減することを意味する。したがって、一例では、本開示の方法は、過炎症がｓＨＬＨに進行するのを抑制する。

【0064】

本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒト対象を指す。例えば、対象は、成人であり得る。別の例では、対象は、小児であり得る。別の例では、対象は、青少年であり得る。「対象」、「患者」、又は「個体」等の用語は、状況に応じて、本開示において互換的に使用することができる用語である。

【0065】

本開示に従って治療される対象は、過炎症を示す症状を有し得る。例示的な症状には、疲労、呼吸困難、息切れ、運動不能又は運動能力の減少、血液又は粘液を伴う又は伴わない咳、息を吸う又は吐く際の疼痛、喘鳴、胸の圧迫感、原因不明の体重減少、及び筋骨格系の疼痛が含まれ得る。

【0066】

別の例では、対象は、１８～７５歳である。一例では、対象は５０歳超である。別の例では、対象は、ＡＲＤＳを有する。別の例では、対象は、肺炎を有する。一例では、対象は３０歳未満である。例では、対象は２１歳未満である。

【0067】

別の例では、対象は、ウイルス感染に続発するＡＲＤＳを有する。一例では、対象のＡＲＤＳは、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによる感染に続発する。一例では、対象のＡＲＤＳは、コロナウイルスによる感染に続発する。例えば、対象のＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＣＯＶＩＤ－１９による感染に続発し得る。

【0068】

一例では、本開示の方法は、多系統炎症症候群（ＭＩＳ）を有する対象を予防又は治療する。一例では、対象は、ＭＩＳを有する小児である。例えば、ＭＩＳを有する対象は、１ヶ月～１８歳であり得る。一例では、対象は、急性心不全を有する。心不全（ＨＦ）は、一般的に、一連の症状（呼吸困難、起坐呼吸（ｏｒｔｈｏｐｎｏｅａ）、下肢腫脹）及び徴候（頸静脈圧の上昇、肺うっ血）を特徴とする臨床症候群である。急性心不全は、心不全の新たな徴候若しくは症状の急速な発症、又は心不全の徴候若しくは症状の悪化として広義に定義される。一例では、対象は、左心室駆出率の低下を有する。例えば、対象のＬＶＥＦは、４５％未満であり得る。一例では、ＬＶＥＦは４０％未満である。別の例では、ＬＶＥＦは、３０％未満である。

【0069】

一例では、ＭＩＳを有する対象は、以下の基準を満たす：
－以下のうち１つ以上：
○低血圧若しくはショック（心原性若しくは血管原性）
○心筋炎、心膜炎、若しくは弁膜炎を含むがこれらに限定されない重度の心臓病の特徴、トロポニン／プロＢＮＰの著しい上昇、若しくは冠動脈異常。
○神経若しくは腎臓疾患（重度の呼吸器疾患のみを除く）を含むがこれらに限定されない他の重度の末端臓器関与；
又は、
－以下のうち２つ以上：
○斑状丘疹状皮疹
○両側性非化膿性結膜炎
○皮膚粘膜の炎症性徴候（口、手、若しくは足）
○急性の消化管症状（下痢、嘔吐、若しくは腹痛）。

【0070】

一例では、上記ＭＩＳ基準を満たす対象は、発熱（摂氏３８度以上の温度）を有する。

【0071】

別の例では、ＭＩＳを有する対象は、炎症性マーカーの上昇を呈する。例えば、対象は、好中球増加症、リンパ球減少症、血小板減少症、低アルブミン血症、ＣＲＰ上昇、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、フィブリノーゲン、Ｄダイマー、フェリチン、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、プロカルシトニン上昇のうちの１つ以上を呈し得る。一例では、対象は、好中球増加症、リンパ球減少症、血小板減少症、低アルブミン血症、ＣＲＰ上昇、ＥＳＲ、フィブリノーゲン、Ｄダイマー、フェリチン、ＬＤＨ、ＩＬ－６、プロカルシトニン上昇のうちの２つ以上を有する。

【0072】

一例では、対象は、心筋炎、心膜炎、又は弁膜炎のうちの１つ以上を有する。一例では、対象は、ウイルス誘発性の心筋炎、心膜炎、又は弁膜炎を有する。例えば、対象は、ウイルス性心筋炎を有し得る。

【0073】

一例では、ＭＩＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＣＯＶＩＤ－１９による感染に続発する。

【0074】

別の例では、本開示の方法は、軽度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、中等度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、重度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、中等度又は重度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、中等度、重度又は非常に重度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。

【0075】

「血栓症」という用語は、血栓又は凝血塊の形成を指すために本明細書において使用される。一例では、血栓症は、動脈内に凝血塊が発生する「動脈血栓症」である。そのような凝血塊は、心臓又は脳等の主要な器官への血流を妨げる可能性があるため、対象にとって特に危険である。一例では、血栓症は、静脈内に凝血塊が発生する「静脈血栓症」である。

【0076】

「血栓溶解」という用語は、凝血塊を分解する本開示の組成物を指して使用される。一例では、本開示の血栓溶解組成物は、血栓症のリスクを低減する。一例では、対象のリスクは、組成物を受けない対象と比較して低減する。一例では、組成物の投与は、動脈血栓症のリスクを低減する。したがって、一例では、組成物の投与は、心臓発作又は脳卒中のリスクを低減する。

【0077】

「肺塞栓症」という用語は、血流を通って体内の他の場所から移動した物質による肺の動脈の閉塞を指すために本明細書において使用される。

【0078】

本明細書で使用される場合、「遺伝子改変されていない」という用語は、核酸を用いたトランスフェクションによって改変されていない細胞を指す。疑義を回避するために、本開示の文脈において、Ａｎｇ１をコードする核酸でトランスフェクトされた間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、遺伝子改変されたものとみなされる。

【0079】

「総用量」という用語は、本開示の文脈において、本開示に従って治療される対象によって受容される細胞の総数を指すために使用される。一例では、総用量は、１回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、２回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、３回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、４回以上の細胞の投与からなる。例えば、総用量は、２～４回の細胞の投与からなり得る。

【0080】

間葉系統前駆細胞
本明細書で使用される場合、「間葉系統前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）」という用語は、多分化能を維持しながら自己再生する能力を有し、かつ、間葉系起源、例えば、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、間質細胞、線維芽細胞及び腱、又は非中胚葉起源、例えば、肝細胞、神経細胞及び上皮細胞のいずれかの多数の細胞型に分化する能力を有する未分化多能性細胞を指す。疑義を回避するために、「間葉系統前駆細胞」は、骨、軟骨、筋肉及び脂肪細胞等の間葉系細胞、並びに線維性結合組織に分化することができる細胞を指す。

【0081】

「間葉系統前駆細胞又は幹細胞」という用語は、親細胞及びそれらの未分化子孫の両方を含む。この用語はまた、間葉系前駆細胞、多能性間質細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、血管周囲の間葉系前駆細胞、及びそれらの未分化子孫も含む。

【0082】

間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、自家、同種、異種、同系、又は同質遺伝子系であり得る。自家細胞は、それらが再移植される同じ個体から単離される。同種細胞は、同じ種のドナーから単離される。異種細胞は、別の種のドナーから単離される。同系又は同質遺伝子細胞は、双子、クローン、又は高度に近交系の研究動物モデル等の遺伝的に同一の生物から単離される。

【0083】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、同種である。一例では、同種の間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、培養増殖され、凍結保存される。

【0084】

間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、主に骨髄に存在するが、例えば、臍帯血及び臍帯、成人末梢血、脂肪組織、海綿骨及び歯髄を含む多様な宿主組織にも存在することが示されている。これらはまた、皮膚、脾臓、膵臓、脳、腎臓、肝臓、心臓、網膜、脳、毛包、腸、肺、リンパ節、胸腺、靭帯、腱、骨格筋、真皮、及び骨膜にも見られ、中胚葉及び／又は内胚葉及び／又は外胚葉等の生殖系列に分化することができる。したがって、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、脂肪組織、骨組織、軟骨組織、弾性組織、筋肉組織、及び線維性結合組織を含むがこれらに限定されない多数の細胞型に分化することができる。これらの細胞が入る特定の系統コミットメント及び分化経路は、機械的影響及び／若しくは成長因子、サイトカイン等の内因性生物活性因子、並びに／又は宿主組織によって確立される局所微小環境条件からの様々な影響に依存する。

【0085】

「富化された」、「富化」という用語、又はそれらの変形は、未処理の細胞の集団（例えば、その本来の環境における細胞）と比較した場合に、１つの特定の細胞型の割合又は複数の特定の細胞型の割合が増加された細胞の集団を説明するために本明細書で使用される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞が富化された集団は、少なくとも約０．１％又は０．５％又は１％又は２％又は５％又は１０％又は１５％又は２０％又は２５％又は３０％又は５０％又は７５％の間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含む。これに関して、「間葉系統前駆細胞又は幹細胞が富化された細胞の集団」という用語は、「Ｘ％の間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含む細胞の集団」という用語を明示的に支持するものとみなされ、この場合のＸ％は、本明細書に記載されるパーセンテージである。間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、いくつかの例では、クローン原性コロニーを形成することができ、例えば、ＣＦＵ－Ｆ（線維芽細胞）又はそのサブセット（例えば、５０％又は６０％又は７０％又は７０％又は９０％又は９５％）は、この活性を有することができる。

【0086】

本開示の一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。ＭＳＣは、均一な組成物であり得るか、又はＭＳＣが富化された混合細胞集団であり得る。均一なＭＳＣ組成物は、接着性骨髄又は骨膜細胞を培養することによって得ることができ、ＭＳＣは、独自のモノクローナル抗体で同定される特定の細胞表面マーカーによって同定され得る。ＭＳＣが富化された細胞集団を得るための方法は、例えば、米国特許第５，４８６，３５９号に記載されている。ＭＳＣの代替供給源には、限定されないが、血液、皮膚、臍帯血、筋肉、脂肪、骨、及び軟骨周囲が含まれる。一例では、ＭＳＣは同種である。一例では、ＭＳＣは、凍結保存される。一例では、ＭＳＣ培養物は、培養増殖され、凍結保存される。

【0087】

別の例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、ＣＤ２９＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０２＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６＋、ＣＤ１６６＋、ＭＨＣ１＋ＭＳＣである。

【0088】

単離又は富化された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、培養によってインビトロで増殖させることができる。単離又は富化された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、凍結保存し、解凍し、その後、培養によってインビトロで増殖させることができる。

【0089】

一例では、単離又は富化された間葉系統前駆細胞又は幹細胞を、培養培地（無血清又は血清補充）、例えば、５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及びグルタミンを補充したα最小必須培地（αＭＥＭ）に、５０，０００生細胞／ｃｍ^２で播種し、３７℃、２０％Ｏ_２で一晩培養容器に付着させる。その後、必要に応じて培地を交換及び／又は変更し、細胞を更に６８～７２時間、３７℃、５％Ｏ_２で培養する。

【0090】

当業者に理解されるように、培養された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、生体内の細胞とは表現型が異なる。例えば、一実施形態において、それらは、以下のマーカー、ＣＤ４４、ＮＧ２、ＤＣ１４６及びＣＤ１４０ｂのうちの１つ以上を発現する。培養された間葉系統前駆細胞又は幹細胞はまた、生体内の細胞とは生物学的に異なり、生体内ではほとんど非循環性（静止状態）である細胞と比較してより高い増殖速度を有する。

【0091】

一例では、細胞の集団は、選択可能な形態のＳＴＲＯ－１＋細胞を含む細胞調製物から富化される。これに関して、「選択可能な形態」という用語は、細胞が、ＳＴＲＯ－１＋細胞の選択を可能にするマーカー（例えば、細胞表面マーカー）を発現することを意味すると理解される。マーカーはＳＴＲＯ－１であり得るが、そうである必要はない。例えば、本明細書に記載及び／又は例示されるように、ＳＴＲＯ－２及び／又はＳＴＲＯ－３（ＴＮＡＰ）及び／又はＳＴＲＯ－４及び／又はＶＣＡＭ－１及び／又はＣＤ１４６及び／又は３Ｇ５を発現する細胞（例えば、間葉系前駆細胞）は、ＳＴＲＯ－１も発現する（及びＳＴＲＯ－１ ｂｒｉｇｈｔであり得る）。したがって、細胞がＳＴＲＯ－１＋であるという指標は、細胞がＳＴＲＯ－１発現のみによって選択されることを意味しない。一例では、細胞は、少なくともＳＴＲＯ－３発現に基づいて選択され、例えば、それらはＳＴＲＯ－３＋（ＴＮＡＰ＋）である。

【0092】

細胞又はその集団の選択への言及は、特定の組織源からの選択を必ずしも必要としない。本明細書に記載されるように、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、多種多様な供給源から選択され得るか、又は単離され得るか、又は富化され得る。とはいえ、いくつかの例では、これらの用語は、ＳＴＲＯ－１＋細胞（例えば、間葉系前駆細胞）を含む任意の組織、又は血管新生組織、又は周皮細胞（例えば、ＳＴＲＯ－１＋周皮細胞）を含む組織、又は本明細書に列挙される組織のうちのいずれか１つ以上からの選択に支持を提供する。

【0093】

一例では、本開示において使用される細胞は、ＴＮＡＰ＋、ＶＣＡＭ－１＋、ＴＨＹ－１＋、ＳＴＲＯ－２＋、ＳＴＲＯ－４＋（ＨＳＰ－９０β）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４６＋、３Ｇ５＋、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から個別に又は集合的に選択される１つ以上のマーカーを発現する。

【0094】

「個別に」とは、本開示が、列挙されたマーカー又はマーカーの群を別々に包含し、個々のマーカー又はマーカーの群が本明細書に別々に列挙されていない場合であっても、添付の特許請求の範囲は、そのようなマーカー又はマーカーの群を互いに別々にかつ分割可能に定義し得ることを意味する。

【0095】

「集合的に」とは、本開示が、任意の数又は組み合わせの列挙されたマーカー又はマーカーの群を包含し、そのような数又は組み合わせのマーカー又はマーカーの群が本明細書に具体的に列挙されていない場合であっても、添付の特許請求の範囲は、そのような組み合わせ又は部分的組み合わせを、マーカー又はマーカーの群の任意の他の組み合わせから別々にかつ分割可能に定義し得ることを意味する。

【0096】

本明細書で使用される場合、「ＴＮＡＰ」という用語は、組織非特異的アルカリホスファターゼの全てのアイソフォームを包含することが意図される。例えば、この用語は、肝臓アイソフォーム（ＬＡＰ）、骨アイソフォーム（ＢＡＰ）、及び腎臓アイソフォーム（ＫＡＰ）を包含する。一例では、ＴＮＡＰはＢＡＰである。一例では、本明細書で使用されるＴＮＡＰは、ブダペスト条約の規定に基づいて受託番号ＰＴＡ－７２８２の下、２００５年１２月１９日にＡＴＣＣに預託されたハイブリドーマ細胞株によって産生されたＳＴＲＯ－３抗体に結合することができる分子を指す。

【0097】

更に、一例では、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、クローン原性ＣＦＵ－Ｆを生じさせることができる。

【0098】

一例では、かなりの割合のＳＴＲＯ－１＋細胞は、少なくとも２つの異なる生殖細胞株に分化することが可能である。ＳＴＲＯ－１＋細胞がコミットされ得る系統の非限定的な例としては、骨前駆細胞、胆管上皮細胞及び肝細胞に多能性である肝細胞前駆体、乏突起膠細胞及び星状膠細胞に進行するグリア細胞前駆体を生成することができる神経拘束細胞、ニューロンに進行するニューロン前駆体、心筋及び心筋細胞の前駆体、グルコース応答性インスリン分泌膵臓β細胞株が挙げられる。他の系統としては、限定されないが、象牙芽細胞、象牙質産生細胞及び軟骨細胞、並びに以下の前駆細胞が挙げられる：網膜色素上皮細胞、線維芽細胞、角質細胞等の皮膚細胞、樹状細胞、毛包細胞、腎管上皮細胞、平滑筋及び骨格筋細胞、精巣前駆細胞、血管内皮細胞、腱、靭帯、軟骨、脂肪細胞、線維芽細胞、骨髄間質、心筋、平滑筋、骨格筋、周皮細胞、血管細胞、上皮細胞、神経膠細胞、神経細胞、星状細胞、及び乏突起膠細胞。

【0099】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、単一のドナー、又は複数のドナーから得られ、ドナー試料又は間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞は、その後プールされ、次いで培養増殖される。

【0100】

本開示に包含される間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、対象に投与する前に凍結保存されてもよい。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、対象に投与する前に培養増殖され、凍結保存される。

【0101】

一例では、本開示は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞だけでなく、その子孫、それらから誘導される可溶性因子、及び／又はそれらから単離された細胞外小胞も包含する。別の例では、本開示は、間葉系統前駆細胞又は幹細胞だけでなく、それらから単離された細胞外小胞も包含する。例えば、細胞培養培地への細胞外小胞の分泌に好適な条件下で、一定期間、本開示の間葉系統前駆細胞又は幹細胞を培養増殖させることが可能である。分泌された細胞外小胞は、その後、治療に使用するために培養培地から得ることができる。

【0102】

本明細書で使用される「細胞外小胞」という用語は、細胞から自然に放出される、約３０ｎｍ～最大で１０ミクロンのサイズの範囲であるが、典型的には、２００ｎｍ未満のサイズである脂質粒子を指す。それらは、タンパク質、核酸、脂質、代謝産物、又は放出細胞（例えば、間葉系幹細胞、ＳＴＲＯ－１^＋細胞）由来の小器官を含むことができる。

【0103】

「エクソソーム」という用語は、本明細書で使用される場合、概して、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍのサイズであって、それらが細胞膜に輸送されて放出される哺乳類細胞のエンドソーム区画に由来する細胞外小胞のタイプを指す。これらは、核酸（例えば、ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ）、タンパク質、脂質、及び代謝産物を含み得、１つの細胞から分泌され、他の細胞に取り込まれてそれらのカーゴを送達することによって、細胞間通信で機能する。

【0104】

細胞の培養増殖
一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞が培養増殖される。「培養増殖された」間葉系統前駆細胞又は幹細胞培地は、それらが細胞培養培地で培養され、継代されている（すなわち、継代培養された）という点で、新たに単離された細胞と区別される。一例では、培養増殖された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、約４～１０継代培養増殖されている。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０継代培養増殖される。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５継代培養増殖され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～１０継代培養増殖され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～８継代培養増殖され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～７継代培養増殖され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、１０継代よりも多く培養増殖され得る。別の例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、７継代よりも多く培養増殖され得る。これらの例では、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖させて、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団を提供してもよい。一例では、本開示の組成物は、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から調製される。例えば、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団は、後に更に考察するように、投与前に更に培養増殖され得る。したがって、一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、培養増殖され、凍結保存される。これらの例の一実施形態において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、単一のドナー、又は複数のドナーから得ることができ、ドナー試料又は間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞は、その後プールされ、次いで培養増殖される。一例では、培養増殖プロセスは以下を含む：
－ｉ．継代増殖によって生存細胞の数を増加させ、少なくとも約１０億個の生存細胞の調製物を提供することであって、継代増殖は、単離された間葉系統前駆細胞又は幹細胞の一次培養物を確立することと、次いで、前の培養物から単離された間葉系統前駆細胞又は幹細胞の第１の非一次（Ｐ１）培養物を連続的に確立することと、を含む、提供すること、
－ｉｉ．単離された間葉系統前駆細胞又は幹細胞のＰ１培養物を、継代増殖によって間葉系統前駆細胞又は幹細胞の第２の非一次（Ｐ２）培養物に増殖させること、
－ｉｉｉ．間葉系統前駆細胞又は幹細胞のＰ２培養物から得られたプロセス内中間体間である間葉系統前駆細胞又は幹細胞調製物を調製し、凍結保存すること、及び
－ｉｖ．凍結保存されたプロセス内中間体である間葉系統前駆細胞又は幹細胞調製物を解凍し、プロセス内中間体である間葉系統前駆細胞又は幹細胞調製物の継代増殖によって増殖させること。

【0105】

一例では、増殖させた間葉系統前駆細胞又は幹細胞調製物は、以下を含む抗原プロファイル及び活性プロファイルを有する：
－ｉ．約０．７５％未満のＣＤ４５＋細胞、
－ｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞、
－ｉｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞。

【0106】

一例では、増殖させた間葉系統前駆細胞又は幹細胞調製物は、対照と比較して、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化ＰＢＭＣによるＩＬ２Ｒａ発現を少なくとも約３０％阻害することができる。

【0107】

一例では、培養増殖された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、約４～１０継代培養増殖され、この場合、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、更に培養増殖される前に少なくとも２又は３継代後に凍結保存されている。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５継代培養増殖され、凍結保存され、次いで、投与又は更に凍結保存される前に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５継代更に培養増殖される。

【0108】

一例では、本開示の組成物中の間葉系統前駆細胞又は幹細胞の大部分は、ほぼ同じ世代数である（すなわち、それらは、互いの約１回又は約２回又は約３回又は約４回の細胞倍加以内である）。一例では、本組成物における細胞倍加の平均数は、約２０～約２５回の倍加である。一例では、本組成物における細胞倍加の平均数は、一次培養物から生じる約９～約１３（例えば、約１１又は約１１．２）倍加、加えて、１経路当たり約１回、約２回、約３回、又は約４回の倍加（例えば、１経路当たり約２．５回の倍加）である。本組成物における例示的な平均細胞倍加は、それぞれ、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、及び約１０継代によって産生される場合、約１３．５回、約１６回、約１８．５回、約２１回、約２３．５回、約２６回、約２８．５回、約３１回、約３３．５回、及び約３６回のいずれかである。

【0109】

間葉系統前駆細胞又は幹細胞の単離及びエクスビボ増殖のプロセスは、当該技術分野で既知の任意の機器及び細胞ハンドリング方法を使用して実施することができる。本開示の様々な培養増殖実施形態は、細胞の操作を必要とするステップ、例えば、播種、供給、接着培養物の解離、又は洗浄のステップを用いる。細胞を操作する任意のステップは、細胞を傷つける可能性がある。間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、一般に、調製中に一定量の傷害に耐えることができるが、細胞への傷害を最小限に抑えながら、所与のステップを適切に実行するハンドリング手順及び／又は機器によって、細胞を操作することが好ましい。

【0110】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、例えば参照により本明細書に組み込まれるＵＳ６，２５１，２９５に記載されるように、細胞源バッグ、洗浄液バッグ、再循環洗浄バッグ、入口及び出口ポートを有する回転膜フィルター、濾液バッグ、混合ゾーン、洗浄細胞のための最終生成物バッグ、及び適切なチューブを含む装置で洗浄される。

【0111】

一例では、本開示による間葉系統前駆細胞又は幹細胞組成物は、ＣＤ１０５陽性及びＣＤ１６６陽性であり、ＣＤ４５陰性であることに関して、９５％均一である。一例では、この均一性は、エクスビボ増殖、すなわち、複数の集団倍加を通じて持続する。一例では、組成物は、少なくとも１つの治療用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含み、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、約１．２５％未満のＣＤ４５＋細胞、少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞、及び少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞を含む。一例では、この均一性は低温貯蔵及び解凍後も持続し、細胞はまた、概して約７０％以上の生存率も有する。

【0112】

一例では、本開示の組成物は、実質的なレベルのＴＮＦＲ１、例えば、百万個の間葉系統前駆細胞又は幹細胞当たり１３ｐｇ超のＴＮＦＲ１を発現する間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含む。一例では、この表現型は、エクスビボ増殖及び低温保存を通じて安定である。一例では、１００万個の間葉系統前駆細胞又は幹細胞当たり約１３～約１７９ｐｇ（例えば、約１３ｐｇ～約４４ｐｇ）の範囲におけるＴＮＦＲ１のレベルの発現は、エクスビボ増殖及び凍結保存を通じても持続する所望の治療電位と関連付けられる。

【0113】

一例では、培養増殖された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも１１０ｐｇ／ｍｌの量で腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）を発現する。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも１５０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも２５０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３００ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３２０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３３０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３４０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３５０ｐｇ／ｍｌの量でＴＮＦＲ１を発現することができる。

【0114】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも１３ｐｇ／１０^６細胞の量でＴＮＦＲ１を発現する。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも１５ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも２０ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも２５ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも３０ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも３５ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも４０ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも４５ｐｇ／１０^６細胞、又は少なくとも５０ｐｇ／１０^６細胞の量でＴＮＦＲ１を発現する。

【0115】

別の例では、本明細書に開示される間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、Ｔ細胞上のＩＬ－２Ｒα発現を阻害する。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも約３０％、代替的には少なくとも約３５％、代替的には少なくとも約４０％、代替的には少なくとも約４５％、代替的には少なくとも約５０％、代替的には少なくとも約５５％、代替的には少なくとも約６０、ＩＬ－２Ｒα発現を阻害することができる。

【0116】

一例では、本開示の組成物は、例えば、少なくとも約１億個の細胞又は約１億２５００万個の細胞を含むことができる、少なくとも１つの治療用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含む。

【0117】

細胞の改変
一例では、本開示の間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、投与時に細胞の溶解が阻害されるような方法で改変され得る。抗原の改変は、免疫学的非応答性又は寛容性を誘導することができ、それによって、正常な免疫応答における外来細胞の拒絶反応の最終的な原因である免疫応答のエフェクター相（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞生成、抗体産生等）の誘導を防止する。この目標を達成するために改変され得る抗原としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＬＦＡ－３及びＩＣＡＭ－１が挙げられる。

【0118】

間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、横紋骨格筋細胞の分化及び／又は維持のために重要なタンパク質を発現するように遺伝子改変されてもよい。例示的なタンパク質としては、成長因子（ＴＧＦ－β、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、ＦＧＦ）、筋原性因子（例えば、ＭｙｏＤ、ミオゲニン、筋原性因子５（Ｍｙｆ５）、筋原性制御因子（ＭＲＦ））、転写因子（例えば、ＧＡＴＡ－４）、サイトカイン（例えば、カルジオトロフィン１）、ニューレギュリンファミリーのメンバー（例えば、ニューレギュリン１、２及び３）、並びにホメオボックス遺伝子（例えば、Ｃｓｘ、ティンマン及びＮＫｘファミリー）が挙げられる。

【0119】

本開示の間葉系統前駆細胞又は幹細胞はまた、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変されることもできる。一例では、薬剤は、抗ウイルス薬である。一例では、薬剤は、抗インフルエンザ剤である。一例では、薬剤は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（例えば、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２）である。例示的な薬剤は、レムデシビルである。一例では、薬剤は、血栓溶解薬である。血栓溶解剤の例として、Ｅｍｉｎａｓｅ（アニストレプラーゼ）、Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）、Ｓｔｒｅｐｔａｓｅ（ストレプトキナーゼ、カビキナーゼ）が挙げられる。一例では、血栓溶解剤はヘパリンである。

【0120】

本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、薬剤が細胞に吸収されることを可能にするのに十分な時間及び条件下で細胞を薬剤とともに培養することにより、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を担持するように改変され得る。一例では、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤は、本明細書に開示される間葉系統前駆細胞又は幹細胞の培養培地に添加される。例えば、本明細書に開示される間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を含む培養培地で培養増殖させることができる。

【0121】

別の例では、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤は、ペプチドである。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、抗ウイルス又は血栓溶解ペプチド、又はそれをコードする核酸を発現するように遺伝子改変される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、インビトロでウイルスベクターとの接触を介して改変される。例えば、ウイルスを細胞培養培地に添加することができる。遺伝子組換えの非ウイルス法を用いてもよい。例としては、プラスミド転移、及びインテグラーゼ又はトランスポザーゼ技術の使用による標的遺伝子組み込みの適用、リポソーム又はタンパク質形質導入ドメイン媒介送達、並びにエレクトロポレーション等の物理的方法が挙げられる。

【0122】

遺伝子改変の効率が１００％であることはほとんどなく、改変に成功した細胞の集団を富化することが通常望ましい。一例では、改変細胞は、新しい遺伝子型の機能的特徴を利用することによって富化することができる。改変細胞を富化する１つの例示的な方法は、選択可能な又はスクリーニング可能なマーカー遺伝子を使用する陽性選択である。「マーカー遺伝子」とは、マーカー遺伝子を発現する細胞に明確な表現型を付与する遺伝子を指し、したがって、そのような形質転換された細胞を、マーカーを有しない細胞と区別することができる。選択マーカー遺伝子は、選択的薬剤（例えば、抗生物質）に対する耐性に基づいて「選択」することができる形質を付与する。スクリーニング可能なマーカー遺伝子（又はレポーター遺伝子）は、観察又は試験を通して、すなわち、「スクリーニング」（例えば、β－グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、又は非形質転換細胞に存在しない他の酵素活性）によって識別することができる形質を付与する。一例では、遺伝子改変された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、ネオマイシン等の薬物に対する耐性、又はｌａｃＺの発現に基づく比色選択に基づいて選択される。

【0123】

本開示の組成物
本開示の一例では、間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子は、組成物の形態で投与される。一例では、そのような組成物は、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含む。したがって、一例では、本開示の組成物は、培養増殖された間葉系統前駆細胞又は幹細胞を含むことができる。

【0124】

「担体」及び「賦形剤」という用語は、活性化合物の貯蔵、投与、及び／又は生物学的活性を促進するために当該技術分野で従来使用されている組成物を指す（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８０）を参照。担体はまた、活性化合物の任意の望ましくない副作用を低減し得る。好適な担体は、例えば、安定であり、例えば、担体中の他の成分と反応することができない。一例では、担体は、治療に用いる投薬量及び濃度では、レシピエントにおいて顕著な局所的又は全身的な有害作用を生じない。

【0125】

本開示に好適な担体として、従来使用されてきたもの、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、ラクトース、リンゲル液、緩衝溶液、ヒアルロナン、及びグリコールが、特に（等張性の場合）溶液のための例示的な液体担体である。好適な医薬担体及び賦形剤としては、デンプン、セルロース、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。

【0126】

別の例では、担体は、例えば、細胞が増殖又は懸濁される培地組成物である。例えば、そのような培地組成物は、それが投与された対象においていかなる副作用も誘発しない。

【0127】

例示的な担体及び賦形剤は、細胞の生存能並びに／又は代謝症候群及び／若しくは肥満を軽減、予防、若しくは遅延させる細胞の能力に悪影響を及ぼさない。

【0128】

一例では、担体又は賦形剤は、細胞及び／又は可溶性因子を好適なｐＨで維持するための緩衝活性を提供し、それによって生物学的活性を発揮する。例えば、担体又は賦形剤は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。ＰＢＳは、細胞及び因子と最小限に相互作用し、細胞及び因子の迅速な放出を可能にするため、魅力的な担体又は賦形剤を表し、そのような場合、本開示の組成物は、血流に、あるいは組織内に又は組織を取り囲む若しくは組織に隣接する領域内に、例えば注射によって、直接適用するための液体として生成され得る。

【0129】

間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子はまた、レシピエント適合性であり、かつ、レシピエントに有害ではない生成物に分解する足場内に組み込まれ得るか、又は埋め込まれ得る。これらの足場は、レシピエント対象に移植される細胞に支持及び保護を提供する。天然及び／又は合成の生分解性足場は、そのような足場の例である。

【0130】

様々な異なる足場が、本開示の実施において成功裏に使用され得る。例示的な足場は、限定されないが、生物学的に分解可能な足場を含む。天然の生分解性足場は、コラーゲン、フィブロネクチン、及びラミニンの足場を含む。細胞移植の足場に好適な合成材料は、広範な細胞増殖及び細胞機能を支持することができるはずである。そのような足場はまた、再吸収可能であってもよい。好適な足場は、ポリグリコール酸足場（例えば、Ｖａｃａｎｔｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄ．Ｓｕｒｇ．２３：３～９１９８８；Ｃｉｍａ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．３８：１４５１９９１；Ｖａｃａｎｔｉ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．８８：７５３－９１９９１に記載されるような）、又はポリ酸無水物、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の合成ポリマーを含む。

【0131】

別の例では、間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子は、ゲル足場（例えば、Ｕｐｊｏｈｎ ＣｏｍｐａｎｙのＧｅｌｆｏａｍ）において投与され得る。

【0132】

本明細書に記載の組成物は、単独で、又は他の細胞との混合物として投与され得る。異なる方の細胞は、投与の直前若しくは少し前に本開示の組成物と混合されてもよいか、又は投与の前の一定期間、一緒に共培養されてもよい。

【0133】

一例では、組成物は、有効量又は治療的若しくは予防的に有効な量の間葉系統前駆細胞若しくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子を含む。例えば、組成物は、約１×１０^５個の幹細胞～約１×１０^９個の幹細胞又は約１．２５×１０^３個の幹細胞～約１．２５×１０^７個の幹細胞／ｋｇ（８０ｋｇ対象）を含む。一例では、組成物は２×１０^６細胞／ｋｇを含む。投与される細胞の正確な量は、対象の年齢、体重、及び性別、並びに治療される障害の程度及び重症度を含む様々な要因に依存する。

【0134】

一例では、５０×１０^６～２００×１０^７細胞が投与される。他の例では、６０×１０^６～２００×１０^６個の細胞又は７５×１０^６～１５０×１０^６個の細胞が投与される。一例では、７５×１０^６個の細胞が投与される。別の例では、１５０×１０^６個の細胞が投与される。

【0135】

一例では、組成物は、５．００×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。別の例では、組成物は、５．５０×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。別の例では、組成物は、６．００×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。別の例では、組成物は、６．５０×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。別の例では、組成物は、６．６８×１０^６超の生存細胞／ｍＬを含む。

【0136】

一例では、本開示の方法は、６億個の細胞の総用量を投与することを包含する。例えば、本開示に従って治療された対象は、細胞の総用量が６億個を超えない限り、上記の組成物の複数回用量を受けることができる。例えば、対象は、２億個の細胞の３回用量を受けてもよい。一例では、細胞の総用量は、５億個の細胞である。一例では、細胞の総用量は、４億個の細胞である。例えば、対象は、１億個の細胞の４回用量を受けてもよい。一例では、対象は、ベースライン時に１億個の細胞の１回用量、続いて３ヶ月にわたって１ヶ月に１回投与される１億個の細胞の３回用量を受ける。一例では、用量は２×１０^６細胞／ｋｇである。一例では、用量は２×１０^６細胞／ｋｇであり、対象は２回用量又は３回用量を受ける。一例では、用量は２×１０^６細胞／ｋｇであり、対象は３回を超える用量を受ける。

【0137】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、組成物の細胞集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％を含む。

【0138】

本開示の組成物は、凍結保存され得る。間葉系統前駆細胞又は幹細胞の凍結保存は、当該技術分野で既知の低速冷却方法又は「高速」凍結プロトコルを使用して行うことができる。好ましくは、凍結保存方法は、非凍結細胞と比較して、凍結保存細胞の類似した表現型、細胞表面マーカー及び増殖速度を維持する。

【0139】

凍結保存組成物は、凍結保存溶液を含み得る。凍結保存溶液のｐＨは、典型的には６．５～８、好ましくは７．４である。

【0140】

凍結保存溶液は、例えば、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（商標）等の滅菌された非発熱性等張溶液を含んでもよい。１００ｍＬのＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（商標）は、５２６ｍｇの塩化ナトリウムＵＳＰ（ＮａＣｌ）、５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ_６Ｈ_１１ＮａＯ_７）、３６８ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物ＵＳＰ（Ｃ_２Ｈ_３ＮａＯ_２・３Ｈ_２Ｏ）、３７ｍｇの塩化カリウムＵＳＰ（ＫＣｌ）、及び３０ｍｇの塩化マグネシウムＵＳＰ（ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ）を含有する。抗菌剤は含まれていない。ｐＨは、水酸化ナトリウムを用いて調整する。ｐＨは、７．４（６．５～８．０）である。

【0141】

凍結保存溶液は、Ｐｒｏｆｒｅｅｚｅ（商標）を含み得る。凍結保存溶液は、追加的又は代替的に、培養培地、例えば、αＭＥＭを含み得る。

【0142】

凍結を促進するために、通常、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の凍結保護剤が、凍結保存溶液に添加される。理想的には、凍結保護剤は、細胞及び患者にとって無毒であり、非抗原性であり、化学的に不活性であり、解凍後に高い生存率を提供し、洗浄せずに移植を可能にするべきである。しかしながら、最も一般的に使用される凍結保護剤であるＤＭＳＯは、ある程度の細胞傷害性を示す。ヒドロキシルエチルデンプン（ＨＥＳ）を代替物として又はＤＭＳＯと組み合わせて使用して、凍結保存溶液の細胞傷害性を低減することができる。

【0143】

凍結保存溶液は、ＤＭＳＯ、ヒドロキシエチルデンプン、ヒト血清成分、及び他のタンパク質増量剤のうちの１つ以上を含み得る。一例では、凍結保存溶液は、約５％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及び約１０％のＤＭＳＯを含む。凍結保存溶液は、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）及びトレハロースのうちの１つ以上を更に含み得る。

【0144】

一実施形態において、細胞は、４２．５％ Ｐｒｏｆｒｅｅｚｅ（商標）／５０％ αＭＥＭ／７．５％ ＤＭＳＯに懸濁され、制御速度冷凍庫で冷却される。

【0145】

凍結保存組成物は、解凍されて対象に直接投与されてもよいか、又は例えばＨＡを含む別の溶液に添加されてもよい。代替的に、凍結保存組成物を解凍し、間葉系統前駆細胞又は幹細胞を投与前に代替の担体に再懸濁させてもよい。

【0146】

一例では、本開示の細胞組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むことができる。例えば、本開示の組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を含み得、ＨＳＡ溶液は、５％のＨＳＡ及び１５％の緩衝液を含む。

【0147】

一例では、本明細書に記載の組成物は、単回用量として投与されてもよい。

【0148】

いくつかの例では、本明細書に記載の組成物は、複数回用量にわたって投与され得る。例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回の用量である。他の例では、本明細書に記載の組成物は、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回の用量にわたって投与され得る。

【0149】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、対象に投与する前に培養増殖され得る。細胞培養の様々な方法が、当該技術分野で既知である。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、約４～１０継代培養増殖される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０継代培養増殖される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５継代培養増殖される。これらの例では、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖され得る。

【0150】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、投与前に無血清培地で培養増殖される。

【0151】

いくつかの例では、細胞は、細胞が対象の循環に出ることは許容しないが、細胞によって分泌される因子が循環に入ることを許容するチャンバ内に含まれる。このようにして、可溶性因子は、細胞が対象の循環内に因子を分泌することを許容することによって対象に投与され得る。そのようなチャンバは、可溶性因子の局所レベルを増加させるために、対象の部位に同様に植え込むことができる。

【0152】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、全身的に投与され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、対象の気道に投与され得る。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、対象の肺に投与され得る。別の例では、本開示の組成物は、静脈内に投与される。別の例では、組成物は、静脈内に及び対象の気道に投与される。

【0153】

一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、週１回投与される。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、２週間毎に週１回投与され得る。別の例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、週２回投与される。一例では、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、毎月１回投与され得る。一例では、２回用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞が、２週間にわたって週１回投与される。別の例では、２回用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞が、２週間毎に週１回投与される。別の例では、４回用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞が、後続の用量が毎月投与される前に、２週間にわたって投与される。一例では、２回用量の間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、後続の用量が毎月１回投与される前に、２週間毎に１回投与され得る。一例では、４回用量が毎月投与される。

【0154】

本開示の広範な一般的範囲から逸脱することなく、上述の実施形態に対して多数の変形及び／又は修正が行われ得ることが、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。

【0155】

以下の特定の実施例は、単なる例示として解釈されるべきであり、いかなる方法においても本開示の残りの部分を限定するものではない。更に詳述することなく、当業者は、本明細書の記載に基づいて、本発明を最大限に利用することができると考えられる。

【実施例】

【0156】

過炎症の治療のための、エクスビボで培養増殖された成人同種骨髄由来間葉系幹細胞（ＭＳＣ）
組成物
組成物は、健常な成人ドナーの骨髄から単離された、培養増殖された間葉系間質細胞（ｃｅＭＳＣ）からなる。最終組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）中に製剤化されたｃｅＭＳＣを含む。

【0157】

目的
以下を決定すること：
－安全性
－以下におけるベースラインからの変化：
○白血球数。
○Ｐ／Ｆ比。
○循環ＣＲＰレベル。
○フェリチンレベル

【0158】

測定値
ベースライン測定は、第１の用量（試験０日目）の投与前に行われた測定であるとみなした。白血球数、Ｐ／Ｆ比、循環ＣＲＰレベル及びフェリチンレベルを毎日測定した。

【0159】

対象
中等度のＣＯＶＩＤ－１９関連ＡＲＤＳを有することを特徴とする患者（ｎ＝５）に、間葉系幹細胞（１ｋｇ当たり２００万個の細胞）の静脈内注入を行った。

【0160】

解析
治療した患者の予備データを表１及び図１～５に示す。

【表1】

【0161】

ＭＳＣ注入後１１日間の５人の患者において、Ｐ／Ｆ比、ＣＲＰ、クレアチニン及びフェリチンレベルが示される（図６～１０）。０日目は、第１の用量の直前である。２～５日目に、全ての患者に第２の用量を投与した。Ｐ／Ｆ比は概して経時的に増加し、いくつかの事例ではＡＲＤＳグレードの改善を示した。循環ＣＲＰレベルは、概して経時的に減少し、炎症の低減が示された。

【0162】

集団の拡張
患者集団を１１人に拡張し、対象（表２）に、４８～１２０時間間隔で２回用量（静脈内）を２００万細胞／ｋｇ／注入で投与した。細胞生存率は、７８～９０％の範囲であった。

【表2】

【0163】

臨床転帰
臨床転帰を図１１に示す。全ての患者を死亡又はＩＣＵ退室まで追跡し、ＩＣＵでの死亡率は１８％であった（９５％ ＣＩ；２～５２％）。観察期間にわたって、１０人（９１％、９５％ ＣＩ；５９～１００％）の患者が抜管された。１人の患者（患者７）は、推定広範囲肺塞栓症による突然の代償不全のために、抜管から３日後に再挿管された。血栓溶解療法は酸素化及び血行動態の改善をもたらしたが、最終的には機械的な換気を必要としたまま、敗血症性ショックにより注入後２３日目に患者が死亡した。研究期間の終了時に、９人（８２％、９５％ ＣＩ；４８～９７％）の患者が機械的換気から解放され、９人（８２％、９５％ ＣＩ；４８～９７％）が集中治療室から退室し、７人（６４％、９５％ ＣＩ；３１～８９）が退院した。２人は、安定した状態で内科病棟に入院中である。最初の注入から抜管までの中央値時間は１０日であった（ＩＱＲ：３～１０日）。機械的換気の中央値期間は１２日であった（ＩＱＲ：７～１２日）。

【0164】

生理学的データ
０日目～３日目の１日の中央値Ｐ：Ｆ比（中央値差＋７８ｍｍＨｇ、ｐ＝０．００２）によって評価されるように、酸素化の改善が認められた（表３及び表４、図１２）。ＣＲＰレベルは、０日目～５日目に減少した（中央値２１９．２～３６．５ｍｇ／Ｌ、ｐ＝０．００２、図１３、表３及び表４）。発熱曲線又は白血球数に変化は認められなかった。フェリチンレベル及びＳＯＦＡスコアには、０日目～３日目又は５日目には顕著な変化は見られなかった。

【表3】

【表4】

【0165】

安全性
注入関連の有害事象は認められなかった。

【0166】

多系統炎症症候群（ＭＩＳ）治療のための、エクスビボで培養増殖された成人同種骨髄由来間葉系幹細胞（ＭＳＣ）
生来健康な男児が高熱を呈し、ＣＯＶＩＤ－１９抗体は陽性であったが、ウイルスは陽性ではなかった。彼は当初、高用量ステロイド、静脈内免疫グロブリン、昇圧剤、高用量アスピリン、及び抗血小板薬を用いたＭＩＳのための治療を受けた。これらの複数の治療薬にもかかわらず、彼は、心臓ポンプ機能の悪化、並びに炎症、心充血、及び血管内での血液凝固のバイオマーカーの持続的な上昇を経験した。入院から４日後、小児をある用量の静脈内間葉系幹細胞（２×１０^６細胞／ｋｇ）で治療し、続いて２日後に第２の静脈内用量で治療した。

【0167】

２回のＭＳＣ用量が投与された３日間の期間にわたり、ＣＲＰ、Ｄダイマー及びＢＮＰレベルが減少し、一方でＬＶＥＦ％が増加した（表５、図１４）。炎症性バイオマーカーの顕著な減少も観察された（図１４）。表５に示されるように、主要な血栓症及び凝固のマーカーであるＤダイマーレベルが劇的に低減し（＞２０μｇ／ｍＬから２．６μｇ／ｍＬへ）、心機能が顕著に改善され、駆出率が５１％から６８％に増加した。小児はその後、自宅退院した。

【表5】

【0168】

生来健康な女児は、ＣＯＶＩＤ－１９抗体は陽性であったが、ウイルスは陽性ではなかった。彼女は、当初、ＩＶステロイド、昇圧剤、低用量アスピリンを用いたＭＩＳのための治療を受け、予防措置として挿管された。入院から２日後、小児をある用量の静脈内間葉系幹細胞（２×１０^６細胞／ｋｇ）で治療し、続いて２日後に第２の静脈内用量で治療した。

【0169】

２回のＭＳＣ用量が投与された４日間の期間にわたり、ＣＲＰ、トロポニンＩ、フェリチン、クレアチニン、ＢＵＮ及びＢＮＰのレベルが減少し、一方でＬＶＥＦ％が増加した（表６、図１５）。炎症性バイオマーカーの顕著な減少も観察された（図１５）。フィブリノーゲンレベルの低減は、細胞の第２の用量の後に観察された。更に、表６に示すように、心機能が顕著に改善され、駆出率が４３．３％から６１．８％に増加した。

【表6】

【0170】

上記の表に記載されているように、細胞治療薬の投与後、両方の小児は、ＬＶ駆出率及びＢ型ナトリウム利尿タンパク質の急速な正常化、並びにレメステムセル（ｒｅｍｅｓｔｅｍｃｅｌ）－Ｌによる治療と時間的に関連するＤダイマーの改善を示した（図１６）。更に、連続心エコー画像診断により、弁全体の逆流の重症度の低減、及びＬＶ末端収縮期容積の増加が示された。後者の観察は、細胞治療薬の投与と時間的に関連するＬＶ収縮状態の改善と一致する。

【0171】

移植レシピエントにおける過炎症の治療のための、エクスビボで培養増殖された成人同種骨髄由来間葉系幹細胞（ＭＳＣ）
成人男性は、重度のクローン病のために結腸切除及び移植を受けた。その後、患者は細菌性ＡＲＤＳ、及び移植拒絶反応を示す症状を呈した。患者はまた、上葉に小葉中心性肺気腫のＣＴ所見を有するＣＯＰＤに罹患していた。患者は、経口バンコマイシン（再発性Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染の病歴のために開始）及び経口オーグメンチン（肺炎のために開始）による治療を含むいずれの治療にも応答しなかった。大腸内視鏡検査により、小腸粘膜にパッチ性の活動性炎症、構造的歪み、及び局所的に増加したアポトーシス活性（５／１０連続的陰窩）が認められ、急性細胞拒絶反応については不確定であった。胸部ＣＴでは、主に下葉において多巣性の気管支周囲結節性及び依存性の圧密性混濁の新たな所見が認められ、肺炎が疑われた。更に大腸内視鏡検査を行ったところ、回腸は正常であり、結腸粘膜は全体にわたり紅斑性であった。病理は急性細胞拒絶反応について再び不確定に戻ったが、炎症性変化が存在した。

【0172】

その後、患者に、２回の静脈内間葉系幹細胞（２×１０^６細胞）の注入、続いて、結腸壁への１．５億ＭＳＣの直接投与（内視鏡的）を行った。患者の呼吸器ＡＲＤＳは細胞治療後に消失し、患者は自宅退院となり、酸素が取り外され、１日に３～４回排便があった。半固体の硬さ。２週間後の経過観察では、臨床徴候の劇的な改善が見られ、回腸の炎症は最小限であり、結腸に背景炎症はなく、移植拒絶反応の証拠もなかったことが明らかになった。息切れは報告されず、下痢はベースラインに戻り（１０～１２回の発生頻度）、発熱又はＳＯＢは報告されず、補助的なＯ_２の使用は必要なかった。気管支洗浄培養も感染について陰性であった。更なる経過観察により、特許が自宅にあり、体調が良好であることが明らかになった。

【0173】

広範に記載されている本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように本発明に対して多数の変形及び／又は修正が行われ得ることは、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、あらゆる点で例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。

【0174】

上で考察された全ての刊行物は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0175】

本明細書に含まれる文書、行為、材料、デバイス、物品等の任意の考察は、本発明のための文脈を提供することのみを目的としている。これらの事項のいずれか又は全てが、従来技術の基盤の一部を形成するか、又は本出願の各請求項の優先日よりも前に存在したために、本発明に関連する分野における共通の一般的な知識であったことを認めるものとみなされるべきではない。

【0176】

本出願は、２０２０年４月３日に出願されたＡＵ２０２０／９０１０５２、２０２０年４月８日に出願されたＡＵ２０２０／９０１１２４、２０２０年７月６日に出願されたＡＵ２０２０／９０２３１２、２０２０年７月１４日に出願されたＡＵ２０２０／９０２４２５、２０２０年８月２５日に出願されたＡＵ２０２０／９０３０４１、２０２０年１０月１２日に出願されたＡＵ２０２０／９０３６９４、及び２０２０年１１月２３日に出願されたＡＵ２０２０／９０４３１２からの優先権を主張し、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図6-3】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14-1】

【図14-2】

【図15-1】

【図15-2】

【図16】

【国際調査報告】