▶ イーライ リリー アンド カンパニーの特許一覧 ▶ ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システムの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-17
(54)【発明の名称】変異ＩＤＨ阻害剤とＢＣＬ－２阻害剤による併用療法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20230510BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230510BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230510BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230510BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20230510BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20230510BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20230510BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P35/00
A61P35/02
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K31/496
A61K31/5377
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022557866
(86)(22)【出願日】2021-03-22
(85)【翻訳文提出日】2022-11-22
(86)【国際出願番号】 US2021023442
(87)【国際公開番号】W WO2021194950
(87)【国際公開日】2021-09-30
(31)【優先権主張番号】62/993,166
(32)【優先日】2020-03-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/024,743
(32)【優先日】2020-05-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(71)【出願人】
【識別番号】500039463
【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(74)【代理人】
【識別番号】100150500
【弁理士】
【氏名又は名称】森本 靖
(74)【代理人】
【識別番号】100176474
【弁理士】
【氏名又は名称】秋山 信彦
(72)【発明者】
【氏名】ブルックス，ネイサン アーサー
(72)【発明者】
【氏名】ディナード，コートニー
(72)【発明者】
【氏名】ギルモア，レイモンド
(72)【発明者】
【氏名】コノプレバ，マリーナ
(72)【発明者】
【氏名】サラマ，ビビアン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC73
4C086CB05
4C086CB22
4C086GA12
4C086GA16
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、癌の治療のための、式（Ｉ）の変異ＩＤＨ阻害剤とＢｃｌ－２阻害剤による併用療法に関する。
（Ｉ）
【特許請求の範囲】
【請求項1】
癌を治療する方法であって、ＩＤＨ変異を有するヒト癌対象に治療的有効量の（ａ）式：
【化1】
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の第１の化合物またはその医薬的に許容される塩；および
（ｂ）Ｂｃｌ－２阻害剤である第２の化合物またはその医薬的に許容される塩
を投与することを含む方法。
【請求項2】
ＩＤＨ変異がＩＤＨ１変異である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
ＩＤＨ１変異がＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
ＩＤＨ変異がＩＤＨ２変異である、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
ＩＤＨ２変異がＩＤＨ２ Ｒ１４０またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
第１の化合物においてＸがＮであり、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
第１の化合物においてＸがＮであり、Ｒ１が－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２が－ＣＨ２ＣＨ３であり、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
第１の化合物が：７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
またはその医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
第１の化合物が式：【化2】
【請求項10】
第１の化合物が：【化3】
【請求項11】
癌が固形腫瘍癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項12】
固形腫瘍癌が胆管癌、頭頸部癌、軟骨肉腫、肝細胞癌、メラノーマ、膵臓癌、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、神経膠腫、神経膠芽腫、膀胱癌、結腸直腸癌、副鼻腔未分化癌、または肺癌である、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
固形腫瘍癌が胆管癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
癌が血液悪性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
血液悪性腫瘍が急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群 骨髄増殖性腫瘍、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、慢性骨髄性白血病、または原発性骨髄線維症である、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
血液悪性腫瘍が急性骨髄性白血病である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
第２の化合物がベネトクラクス、オバトクラクス、もしくはナビトクラクス、またはそれらのいずれか１つの医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項18】
第１の化合物が【化4】
【請求項19】
ＩＤＨ変異を有するヒト対象における癌の治療において、Ｂｃｌ－２阻害剤またはその医薬的に許容される塩と組み合わせて使用するための、式：【化5】
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項20】
ＩＤＨ変異がＩＤＨ１変異である、請求項２０に記載の使用するための化合物。
【請求項21】
ＩＤＨ１変異がＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である、請求項２０に記載の使用するための化合物。
【請求項22】
ＩＤＨ変異がＩＤＨ２変異である、請求項１９に記載の使用するための化合物。
【請求項23】
ＩＤＨ２変異がＩＤＨ２ Ｒ１４０またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である、請求項２２に記載の使用するための化合物。
【請求項24】
ＸがＮである、請求項１９に記載の使用するための化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項25】
Ｒ１が－ＣＨ２－シクロプロピルである、請求項１９または２４に記載の使用するための化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項26】
Ｒ２が－ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１９～２５のいずれか１項に記載の使用するための化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項27】
化合物が：７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
である、請求項１９に記載の使用するための化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項28】
化合物が：【化6】
【請求項29】
第１の化合物が：【化7】
【請求項30】
癌が固形腫瘍癌である、請求項１９～２９のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
【請求項31】
固形腫瘍癌が胆管癌、頭頸部癌、軟骨肉腫、肝細胞癌、メラノーマ、膵臓癌、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、神経膠腫、神経膠芽腫、膀胱癌、結腸直腸癌、または肺癌である、請求項３０に記載の使用するための化合物。
【請求項32】
固形腫瘍癌が胆管癌である、請求項３１に記載の使用するための化合物。
【請求項33】
癌が血液悪性腫瘍である、請求項１９～２９のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
【請求項34】
血液悪性腫瘍が急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群 骨髄増殖性腫瘍、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、または原発性骨髄線維症である、請求項３３に記載の使用するための化合物。
【請求項35】
血液悪性腫瘍が急性骨髄性白血病である、請求項３４に記載の使用するための化合物。
【請求項36】
Ｂｃｌ－２阻害剤がベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１９～３５のいずれか１項に記載の使用するための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、癌の治療のための、変異イソクエン酸脱水素酵素（ＩＤＨ）阻害剤とＢｃｌ－２阻害剤での併用療法に関する。
【背景技術】
【0002】
ＩＤＨおよびＩＤＨ２は、イソクエン酸のα－ケトグルタル酸（α－ＫＧ）への変換を触媒し、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ＋）をＮＡＤＰＨに還元する酵素である（Megias-Vericat J, et al., Blood Lymph. Cancer: Targets and Therapy 2019; 9: 19-32）。
【0003】
ＩＤＨ１の新形態の（新規の）変異、例えばＩＤＨ１のアミノ酸残基Ｒ１３２での変異は、数種類の癌、例えば固形腫瘍癌および血液悪性腫瘍における腫瘍形成の一因となる（Badur MG, et al., Cell Reports 2018; 25: 1680）。ＩＤＨ１変異は高レベルの２－ヒドロキシグルタラート（２－ＨＧ）の原因となって、細胞分化を阻害する可能性があり、変異ＩＤＨ１の阻害剤は２－ＨＧレベルを減少させ、細胞分化を促進する可能性がある（Molenaar RJ, et al., Oncogene 2018; 37: 1949-1960）。変異はＩＤＨ２、例えばアミノ酸残基Ｒ１７２、Ｒ１４０、およびＲ１７２にも生じる（Yang H, et al., Clin. Cancer. Res. 2012; 18: 5562-5571; Mondesir J, et al., J. Blood Med. 2016; 7: 171-180）。
【0004】
例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、時間と共に治療の選択圧下でダイナミックに進化する前白血病性および白血病性クローンを含む多様な範囲の変異遺伝子および多クローン性のゲノム構造によって特徴づけられる（Bloomfield CD, et al., Blood Revs. 2018; 32: 416-425）。シタラビンとアントラサイクリン（“７＋３”）による導入化学療法は、４０年以上、新たにＡＭＬと診断された対象に対する標準治療となっている。
【0005】
近年、ＡＭＬを治療するために５つのさらなる医薬が米国食品医薬品局に承認されている：ミドスタウリン、エナシデニブ、ＣＰＸ－３５１、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（Bloomfield CD, et al., Blood Revs. 2018; 32: 416-425）、およびイボシデニブ（Megias-Vericat J, et al., Blood Lymph. Cancer: Targets and Therapy 2019; 9: 19-32）である。ＡＭＬを患うおよそ６０％～７０％の成人が適切な導入療法後に完全寛解（ＣＲ）状態を達成することを期待することができ、ＡＭＬを患う成人の２５％以上（ＣＲを達成する患者の約４５％）３年以上生存することを期待することができ、治癒できる可能性もある。
【0006】
しかしながら、ＩＤＨ１耐性変異が７～１４％のＡＭＬ対象に観察され、付随する高２－ＨＧレベルはエピジェネティックな過剰メチル化表現型および分化の遮断の原因となり得、白血病誘発の原因となり得る（Megias-Vericat J, et al., Blood Lymph. Cancer: Targets and Therapy 2019; 9: 19-3）。加えて、Ｆｌｔ３キナーゼの変異がおよそ３分の１のＡＭＬ対象に観察されている（Lee HJ, et al., Oncotarget 2018; 9: 924-936）.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
それゆえ、代替的な変異ＩＤＨ関連癌治療に対する必要性が依然として存在する。
【0008】
特定の変異ＩＤＨ１およびＩＤＨ２阻害剤がＷＯ２０１８／１１１７０７Ａ１に開示されており、例えば本明細書で「化合物Ａ」として定義している化合物が開示されているが、この化合物はアロステリックな結合ポケット内で単一のシステイン（Ｃｙｓ２６９）を修飾する変異ＩＤＨ１の共有結合性の阻害剤であり、該酵素を急速に不活性化し、α－ＫＧレベルに影響することなく選択的に２－ＨＧ産生を阻害する（ＷＯ２０１８／１１１７０７Ａ１）。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、癌を治療する方法であって、ＩＤＨ変異を有するヒト癌対象に治療的有効量の
（ａ）第１の式Ｉ：
Ｉ
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩；および
（ｂ）Ｂｃｌ－２阻害剤である第２の化合物またはその医薬的に許容される塩
を投与することを含む方法を提供する。
（ａ）第１の式Ｉ：
【化1】
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩；および
（ｂ）Ｂｃｌ－２阻害剤である第２の化合物またはその医薬的に許容される塩
を投与することを含む方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0010】
１つの実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異またはＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｈ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３２Ｇ、Ｒ１３２Ｌ、またはＲ１３２Ｓである。別の実施態様では、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異はＲ１３２Ｈである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｃである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｇである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｌである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｓである。
【0011】
別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＩＤＨ２ Ｒ１４０変異またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１４０変異である。別の実施態様では、Ｒ１４０変異はＲ１４０Ｑ、Ｒ１４０Ｌ、またはＲ１４０Ｗである。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１７２変異である。別の実施態様では、Ｒ１７２変異はＲ１７２Ｋ、Ｒ１７２Ｍ、Ｒ１７２Ｇ、Ｒ１７２Ｓ、またはＲ１７２Ｗである。
【0012】
本発明の方法の１つの実施態様では、第１の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩において、ＸはＮである。
【0013】
別の実施態様では、第１の式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩において、ＸはＮであり、Ｒ１は－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２は－ＣＨ２ＣＨ３である。別の実施態様では、第１の式Ｉの化合物において、ＸはＮであり、Ｒ１は－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２は－ＣＨ２ＣＨ３である。
【0014】
別の実施態様では、第１の化合物は：
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
【0015】
別の実施態様では、第１の化合物は７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オンである。
【0016】
別の実施態様では、第１の化合物は：
化合物Ａ
またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、第１の化合物は化合物Ａである。
【化2】
またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、第１の化合物は化合物Ａである。
【0017】
別の実施態様では、対象はＩＤＨ変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象は組織内にＩＤＨ変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象はＩＤＨ１変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象はＩＤＨ２変異を有していると同定されている。
【0018】
別の実施態様では、対象はＲ１３２ ＩＤＨ１変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象は組織内にＲ１３２ ＩＤＨ１変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象はＩＤＨ２変異、例えばＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、またはＲ１７２変異を有していると同定されている。別の実施態様では、対象は組織内にＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、またはＲ１７２変異を有していると同定されている。
【0019】
別の実施態様では、癌は血液悪性腫瘍であり、かつ、対象は血液、骨髄、リンパ節、またはリンパ液内にＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有していると同定されている。別の実施態様では、対象は血液細胞、骨髄細胞、リンパ節細胞、またはリンパ液細胞内にＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有していると同定されている。
【0020】
別の実施態様では、癌は固形腫瘍癌であり、かつ、対象は固形腫瘍組織内にＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有していると同定されている。別の実施態様では、対象は固形腫瘍組織細胞内にＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有していると同定されている。
【0021】
別の実施態様では、第１の化合物またはその医薬的に許容される塩は、第２の化合物またはその医薬的に許容される塩の前に投与される。
【0022】
別の実施態様では、第１の化合物またはその医薬的に許容される塩は、第２の化合物またはその医薬的に許容される塩の後に投与される。
【0023】
別の実施態様では、第１の化合物またはその医薬的に許容される塩は、第２の化合物またはその医薬的に許容される塩と共に製剤化される。
【0024】
本発明の方法の別の実施態様では、癌は固形腫瘍癌である。別の実施態様では、固形腫瘍癌は胆管癌、頭頸部癌、軟骨肉腫、肝細胞癌、メラノーマ、膵臓癌、星状細胞腫、乏突起神経膠腫、神経膠腫、神経膠芽腫、膀胱癌、結腸直腸癌、肺癌、または副鼻腔未分化癌である。別の実施態様では、肺癌は非小細胞肺癌である。別の実施態様では、固形腫瘍癌は胆管癌である。
【0025】
別の実施態様では、癌が血液悪性腫瘍である。別の実施態様では、血液悪性腫瘍は急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群 骨髄増殖性腫瘍、血管免疫芽球性T細胞リンパ腫、T細胞性急性リンパ芽球性白血病、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性骨髄線維症、または慢性骨髄性白血病である。別の実施態様では、血液悪性腫瘍は急性骨髄性白血病である。
【0026】
本発明は、血液細胞、骨髄細胞、または血液および骨髄細胞にＩＤＨ変異を有するヒト対象における癌の治療において、Ｂｃｌ－２阻害剤またはその医薬的に許容される塩と組み合わせて使用するための、式Ｉ：
Ｉ
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩も提供する。
【化3】
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩も提供する。
【0027】
１つの実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異またはＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｈ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３２Ｇ、Ｒ１３２Ｌ、またはＲ１３２Ｓである。別の実施態様では、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異はＲ１３２Ｈである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｃである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｇである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｌである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｓである。
【0028】
別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＩＤＨ２ Ｒ１４０変異またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１４０変異である。別の実施態様では、Ｒ１４０変異はＲ１４０Ｑ、Ｒ１４０Ｌ、またはＲ１４０Ｗである。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１７２変異である。別の実施態様では、Ｒ１７２変異はＲ１７２Ｋ、Ｒ１７２Ｍ、Ｒ１７２Ｇ、Ｒ１７２Ｓ、またはＲ１７２Ｗである。
【0029】
１つの実施態様では、対象はＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有していると同定されている。
【0030】
１つの実施態様では、使用するための化合物は、ＸがＮである式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、使用するための化合物は、Ｒ１が－ＣＨ２－シクロプロピルである式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、使用するための化合物は、Ｒ２が－ＣＨ２ＣＨ３である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、使用するための化合物は、ＸがＮであり、Ｒ１が－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２が－ＣＨ２ＣＨ３である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、化合物は、ＸがＮであり、Ｒ１が－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２が－ＣＨ２ＣＨ３である式Ｉの化合物である。
【0031】
別の実施態様では、化合物は：
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
【0032】
別の実施態様では、化合物は７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オンまたはその医薬的に許容される塩である。
【0033】
別の実施態様では、化合物は：
（化合物Ａ）、またはその医薬的に許容される塩である。
【化4】
【0034】
別の実施態様では、化合物は化合物Ａである。
【0035】
癌を治療するための、式Ｉの化合物とＢｃｌ－２阻害剤を組み合わせて使用するための新規の方法が本明細書で提供される。従って、本発明のいくつかの態様は、癌の治療において、Ｂｃｌ－２阻害剤との同時の、別々の、または連続的な組み合わせに使用するための式Ｉの化合物を提供する。さらに、本発明のいくつかの態様は、固形腫瘍癌の治療において、Ｂｃｌ－２阻害剤との同時の、別々の、または連続的な組み合わせに使用するための式Ｉの化合物を提供する。加えて、本発明のいくつかの態様は、血液悪性腫瘍の治療において、Ｂｃｌ－２阻害剤との同時の、別々の、または連続的な組み合わせに使用するための式Ｉの化合物を提供する。
【0036】
本発明は、血液細胞、骨髄細胞、リンパ節、またはリンパ液内にＩＤＨ変異を有するヒト対象における癌の治療に使用するための、式Ｉの化合物を含む医薬組成物も提供する。
【0037】
１つの実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異またはＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｈ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３２Ｇ、Ｒ１３２Ｌ、またはＲ１３２Ｓである。別の実施態様では、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異はＲ１３２Ｈである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｃである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｇである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｌである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｓである。
【0038】
別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＩＤＨ２ Ｒ１４０変異またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１４０変異である。別の実施態様では、Ｒ１４０変異はＲ１４０Ｑ、Ｒ１４０Ｌ、またはＲ１４０Ｗである。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１７２変異である。別の実施態様では、Ｒ１７２変異はＲ１７２Ｋ、Ｒ１７２Ｍ、Ｒ１７２Ｇ、Ｒ１７２Ｓ、またはＲ１７２Ｗである。
【0039】
本発明は、血液、骨髄、リンパ節、リンパ液、血液細胞、骨髄細胞、リンパ節細胞、またはリンパ液細胞内にＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２、Ｒ１４０、もしくはＲ１７２変異）を有すると同定されているヒト対象における癌の治療のための医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用も提供する。
【0040】
本発明の方法の１つの実施態様では、癌は最前線の癌である。別の実施態様では、最前線の癌は固形腫瘍癌である。別の実施態様では、最前線の癌は血液悪性腫瘍である。別の実施態様では、最前線の血液悪性腫瘍は最前線のＡＭＬである。
【0041】
本発明の方法の別の実施態様では、癌は再発癌である。別の実施態様では、再発癌は固形腫瘍癌である。別の実施態様では、再発癌は血液悪性腫瘍である。別の実施態様では、再発血液悪性腫瘍は再発ＡＭＬである。
【0042】
本発明の方法の別の実施態様では、癌は難治性癌である。別の実施態様では、難治性癌は固形腫瘍癌である。別の実施態様では、難治性癌は血液悪性腫瘍である。別の実施態様では、難治性血液悪性腫瘍は難治性ＡＭＬである。
【0043】
本発明の方法の別の実施態様では、癌は進行癌である。別の実施態様では、進行癌は進行固形腫瘍癌である。別の実施態様では、進行癌は進行血液悪性腫瘍である。別の実施態様では、進行血液悪性腫瘍は進行ＡＭＬである。
【0044】
別の実施態様では、ＡＭＬは急性前骨髄球性白血病である。
【0045】
本発明の方法の１つの実施態様では、Ｂｃｌ－２阻害剤はベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、またはそれらのいずれか１つの医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、Ｂｃｌ－２阻害剤はベネトクラクスまたはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、Ｂｃｌ－２阻害剤はベネトクラクスである。
【0046】
本発明は、
（ａ）第１の式Ｉ：
Ｉ
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩；および
（ｂ）Ｂｃｌ－２阻害剤である第２の化合物またはその医薬的に許容される塩
での治療のためのヒト対象を同定する方法であって、
癌を有するヒト対象を同定すること；および
ヒト対象が血液、骨髄、リンパ節、リンパ液、血液細胞、骨髄細胞、リンパ節細胞、リンパ液細胞、または固体組織内にＩＤＨ変異を有するかどうかを決定すること
を含む方法であり、
対象が癌を有する方法も提供する。
（ａ）第１の式Ｉ：
【化5】
［式中：
Ｒ１は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、または－ＣＨ２－シクロプロピルであり；
Ｒ２は－ＣＨ３または－ＣＨ２ＣＨ３であり；かつ
ＸはＮまたはＣＨである］
の化合物またはその医薬的に許容される塩；および
（ｂ）Ｂｃｌ－２阻害剤である第２の化合物またはその医薬的に許容される塩
での治療のためのヒト対象を同定する方法であって、
癌を有するヒト対象を同定すること；および
ヒト対象が血液、骨髄、リンパ節、リンパ液、血液細胞、骨髄細胞、リンパ節細胞、リンパ液細胞、または固体組織内にＩＤＨ変異を有するかどうかを決定すること
を含む方法であり、
対象が癌を有する方法も提供する。
【0047】
１つの実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異またはＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ１変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＩＤＨ１ Ｒ１３２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｈ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３２Ｇ、Ｒ１３２Ｌ、またはＲ１３２Ｓである。別の実施態様では、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異はＲ１３２Ｈである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｃである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｇである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｌである。別の実施態様では、ＩＤＨ１変異はＲ１３２Ｓである。
【0048】
別の実施態様では、ＩＤＨ変異はＩＤＨ２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＩＤＨ２ Ｒ１４０変異またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異である。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１４０変異である。別の実施態様では、Ｒ１４０変異はＲ１４０Ｑ、Ｒ１４０Ｌ、またはＲ１４０Ｗである。別の実施態様では、ＩＤＨ２変異はＲ１７２変異である。別の実施態様では、Ｒ１７２変異はＲ１７２Ｋ、Ｒ１７２Ｍ、Ｒ１７２Ｇ、Ｒ１７２Ｓ、またはＲ１７２Ｗである。
【0049】
治療のためのヒト癌対象を同定する本発明の方法の１つの実施態様では、第１の式Ｉの化合物において、ＸはＮであり、またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、第１の式Ｉの化合物において、ＸはＮであり、Ｒ１は－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２は－ＣＨ２ＣＨ３であり、またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、第１の化合物において、ＸはＮであり、Ｒ１は－ＣＨ２－シクロプロピルであり、かつ、Ｒ２は－ＣＨ２ＣＨ３である。
【0050】
治療のためのヒト癌対象を同定する方法の別の実施態様では、第１の化合物は：
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｒ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；
７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン；もしくは
１－エチル－７－［［（１Ｓ）－１－［４－［１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）プロピル］フェニル］エチル］アミノ］－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オン
またはその医薬的に許容される塩である。
【0051】
別の実施態様では、第１の化合物は７－［［（１Ｓ）－１－［４－［（１Ｓ）－２－シクロプロピル－１－（４－プロプ－２－エノイルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル］エチル］アミノ］－１－エチル－４Ｈ－ピリミド［４，５－ｄ］［１，３］オキサジン－２－オンである。
【0052】
別の実施態様では、第１の化合物は：
（化合物Ａ）またはその医薬的に許容される塩である。別の実施態様では、第１の化合物は化合物Ａである。
【化6】
【0053】
変異ＩＤＨ１およびＩＤＨ２酵素活性をアッセイする方法は当業者に知られており、例えばＷＯ２０１８／１１１７０７Ａ１に記載されている。
【0054】
上記および本発明の記載を通して用いられている通り、下記の用語は、特段の記載がない限り、下記の意味を有すると理解されなければならない。
【0055】
用語「血液組織」は、血液、骨髄、脾臓、リンパ節、またはリンパ液を指す。
【0056】
用語「固形腫瘍組織」は、血液組織ではない組織を指す。固体組織の非限定的例は、胆管組織、膵臓組織、頭部組織、頸部組織、肝臓組織、皮膚組織、星状細胞組織、乏突起膠細胞組織、神経膠組織、脳組織、膀胱組織、結腸直腸組織、および肺組織である。
【0057】
本明細書で用いられている「Ｂｃｌ－２阻害剤」は、Ｂｃｌ－２と結合し、癌細胞における細胞毒性、癌細胞におけるＢｃｌ－２発現の下方制御、癌細胞におけるミトコンドリア機能障害、および癌細胞におけるアポトーシスの１つ以上をもたらす化合物である。その効果を決定する方法は当業者に知られており、例えばWen M, et al., Front. Pharmacol. 2019; 10: 391に記載されている。
【0058】
用語「変異ＩＤＨ阻害剤」は、変異ＩＤＨ酵素（例えば、変異ＩＤＨ１酵素または変異ＩＤＨ２酵素）による２－ＨＧの酵素活性および／または産生を阻害する化合物を指す。変異ＩＤＨ１および変異ＩＤＨ２酵素活性をアッセイする方法は当業者に知られており、例えばＷＯ２０１８／１１１７０７Ａ１に記載されている。用語「変異ＩＤＨ阻害剤」において、単語「変異」は、ＩＤＨ遺伝子を指し、阻害剤を指すものではない。
【0059】
用語「固形腫瘍癌」は、癌が血液または骨髄ではない組織に由来することを意味する。
【0060】
用語「血液悪性腫瘍」は、血液、骨髄、リンパ節、またはリンパ液に由来する癌に関する。
【0061】
用語「最前線の癌（frontline cancer）」は、治療対象の癌について、ヒト癌対象がこれまでに治療されていないことを意味する。
【0062】
用語「難治性癌」は、治療はされたが、ヒト癌対象が治療に反応しなかった癌を指す。
【0063】
用語「再発癌」は、ヒト癌対象が一定期間治療に反応したが、癌が再発したことを意味する。
【0064】
用語「進行癌」は、リンパ節または癌の起点以外の他の組織に転移した癌を指す。例えば、ＡＭＬは血液または骨髄以外の組織に転移したＡＭＬである。
【0065】
用語「癌対象」は、癌と診断された対象を意味する。
【0066】
用語「固形腫瘍対象」は、固形腫瘍癌と診断された対象を意味する。１つの実施態様では、固形腫瘍癌は胆管癌である。
【0067】
用語「血液悪性腫瘍対象」は、血液悪性腫瘍と診断された対象を意味する。１つの実施態様では、血液悪性腫瘍対象はＡＭＬ対象である。用語「ＡＭＬ対象」は、ＡＭＬと診断された対象を意味する。ＡＭＬを診断する方法は当業者に知られており、例えばDohner H, et al., Blood 2017; 129: 424-447に記載されている.
【0068】
用語「急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia）」、「急性骨髄性白血病（acute myelogenous leukemia）」、および「急性非リンパ性白血病」は同義語である。
【0069】
血液悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）治療に対する反応性」には、全生存の改善、治療に対する部分反応、長期にわたる安定した疾患の改善、または完全寛解（骨髄中５％未満の骨髄芽球もしくは循環芽球の欠如で決定される）もしくは血液学的回復（赤血球輸血を必要とせず、末梢血好中球絶対数が１，０００細胞／μＬを超え、血小板数が１００，０００／μＬを超え、髄外疾患がないことで証明される）を特徴とする長期生存の改善を含む（Bloomfield CD, et al., Blood Revs. 2018; 32: 416-425）.
【0070】
用語「ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異」は「Ｒ１３２ ＩＤＨ１変異」と同義語であり、例えば対象の核酸（例えば、ＤＮＡ）において決定される対象のＩＤＨ１遺伝子のアミノ酸残基１３２でのＩＤＨ１変異を指す。
【0071】
用語「ＩＤＨ変異を有すると同定されている」は、ヒト対象の組織または細胞由来の核酸（例えば、ＤＮＡ）が、ヒト対象がＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、ＩＤＨ２Ｒ１４０変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異）を有するかどうかを決定するために分析されていることを意味する。１つの実施態様では、ヒト対象の血液、血液細胞、骨髄、骨髄細胞、リンパ節、リンパ節細胞、リンパ液、またはリンパ液細胞がＩＤＨ変異について分析されている。別の実施態様では、ヒト対象の固体組織がＩＤＨ変異について分析されている。別の実施態様では、ヒト対象の固体組織がＩＤＨ変異について分析されている。
【0072】
本発明の方法において、ヒト対象がＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、ＩＤＨ２Ｒ１４０変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異）を有すると同定する当事者は、第１および第２の化合物を投与する当事者と異なっていてもよい。１つの実施態様では、ヒト対象がＩＤＨ変異（例えば、ＩＤＨ１ Ｒ１３２変異、ＩＤＨ２Ｒ１４０変異、またはＩＤＨ２ Ｒ１７２変異）を有すると同定する当事者は、第１および第２の化合物を投与する当事者と異なっている。
【0073】
遺伝子変異を同定する分析方法は当業者に知られており（Clark, O., et al., Clin. Cancer. Res. 2016; 22: 1837-42）、例えば限定されるものではないが、染色体分析（Guller JL, et al., J. Mol. Diagn. 2010; 12: 3-16）、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション （Yeung DT, et al., Pathology 2011; 43: 566-579）、サンガー配列決定（Lutha, R et al., Haematologica 2014; 99: 465-473）、代謝プロファイリング（Miyata S, et al., Scientific Reports 2019; 9: 9787）、ポリメラーゼ連鎖反応（Ziai, JM and AJ Siddon, Am. J. Clin. Pathol. 2015; 144: 539-554）、および次世代配列決定（例えば、全トランスクリプトーム配列決定）（Lutha, R et al., Haematologica 2014; 99: 465-473；およびWang H-Y, et al., J. Exp. Clin. Cancer Res. 2016; 35: 86）が含まれる。
【0074】
用語「と組み合わせて」は、癌の治療において、式Ｉの化合物がＢｃｌ－２阻害剤と同時に、別々に、または連続的に組み合わせで使用されているか、または使用されることを意味する。
【0075】
用語「治療」、「治療する」、および「治療すること」等とは、癌の進行を遅らせる、防ぐ、または止めることを含むことを意味する。これらの用語はまた、癌が実際に排除されない場合であっても、および癌の進行自体を遅らせる、防ぐ、または止めていなくても、障害または状態の１つ以上の症状を緩和、改善、減弱、排除、または軽減することを含む。
【0076】
「治療的有効量」は、対象に対する生物学的もしくは医学的反応または所望の治療効果を誘発する、対象に投与される化合物またはその医薬的に許容される塩の量を意味する。治療的有効量は、当業者として担当臨床医により、既知の技術を使用して類似の状況下で得られた結果を観察することによって容易に決定することができる。対象に対する有効量を決定する際に、担当臨床医は、対象の体格、年齢および一般的な健康状態、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度や関与または重症度、個々の対象の反応、投与された特定の化合物、投与方法、投与された製剤のバイオアベイラビリティ特性、選択された用法、併用薬の使用、およびその他の関連する状況を含むがこれらに限定されない多数の要因を考慮する。
【0077】
本発明の方法で投与される化合物は、経口、静脈内、経皮経路を含む、化合物を生物学的に利用可能にするいずれかの経路によって投与される医薬組成物として任意に製剤化することができる。１つの実施態様では、そのような組成物は経口投与用に製剤化される。そのような医薬組成物およびその調製方法は、当該技術分野において周知である。（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006）を参照のこと）。
【0078】
「医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤」は、哺乳動物、例えばヒトへの生物学的活性剤の送達のために当該技術分野で一般的に受け入れられている媒体である。
【0079】
当業者には、本発明の方法で投与される化合物が塩を形成することができることが理解されよう。化合物は、多数の無機酸および有機酸のいずれかと反応して、医薬的に許容される酸付加塩を形成する。そのような医薬的に許容される酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法論は、当該技術分野において周知である。例えば、P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008)を参照のこと。
【0080】
「医薬的に許容される塩類」または「医薬的に許容される塩」は、本発明の化合物類の比較的無毒な無機および有機塩または塩類を指す(S.M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977)。
【実施例】
【0081】
材料および方法
２－ＨＧ阻害アッセイ
細胞株構成
ＭＯＬＭ１４野生型ヒト白血病細胞およびＭＯＬＭ１４＿Ｒ１３２コンストラクト細胞株は、ＩＤＨ１ ＷＴ（ドキシサイクリン誘導性） ｐＳＬＩＫ－ＩＤＨ１－ＦＬＡＧ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド ＃６６８０２）およびＩＤＨ１ Ｒ１３２Ｈ（ドキシサイクリン誘導性） ｐＳＬＩＫ－ＩＤＨ１－Ｒ１３２Ｈ－ＦＬＡＧ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド ＃６６８０３）を用いてＭＯＬＭ１４細胞のレンチウイルストランスフェクションによって作成し、ジャン－エマヌエル・サリー博士（トゥールーズ癌研究センター（Centre de Recherches en Cancerologie de Toulouse）, UMR1037, Inserm, トゥールーズ第３ポール・サバティエ大学（Universite de Toulouse 3 Paul Sabatier, Toulouse）, フランス; bioRxiv 749580; doi.org/10.1101/749580）の厚意によって提供される。ＭＯＬＭ１４－ＷＴおよびＭＯＬＭ１４－Ｒ１３２変異細胞は、１０％ＦＢＳ（シグマ社）および１ｘＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（シグマ社）を含有する５ｍＬの完全ＲＰＭＩ培地内の６ウェルプレートに播種される（１ｘ１０６／ウェル）。２μｇ／ｍｌのドキシサイクリンと共にインキュベーションした後、細胞を３７℃で４日間インキュベートする。
２－ＨＧ阻害アッセイ
細胞株構成
ＭＯＬＭ１４野生型ヒト白血病細胞およびＭＯＬＭ１４＿Ｒ１３２コンストラクト細胞株は、ＩＤＨ１ ＷＴ（ドキシサイクリン誘導性） ｐＳＬＩＫ－ＩＤＨ１－ＦＬＡＧ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド ＃６６８０２）およびＩＤＨ１ Ｒ１３２Ｈ（ドキシサイクリン誘導性） ｐＳＬＩＫ－ＩＤＨ１－Ｒ１３２Ｈ－ＦＬＡＧ（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド ＃６６８０３）を用いてＭＯＬＭ１４細胞のレンチウイルストランスフェクションによって作成し、ジャン－エマヌエル・サリー博士（トゥールーズ癌研究センター（Centre de Recherches en Cancerologie de Toulouse）, UMR1037, Inserm, トゥールーズ第３ポール・サバティエ大学（Universite de Toulouse 3 Paul Sabatier, Toulouse）, フランス; bioRxiv 749580; doi.org/10.1101/749580）の厚意によって提供される。ＭＯＬＭ１４－ＷＴおよびＭＯＬＭ１４－Ｒ１３２変異細胞は、１０％ＦＢＳ（シグマ社）および１ｘＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（シグマ社）を含有する５ｍＬの完全ＲＰＭＩ培地内の６ウェルプレートに播種される（１ｘ１０６／ウェル）。２μｇ／ｍｌのドキシサイクリンと共にインキュベーションした後、細胞を３７℃で４日間インキュベートする。
【0082】
細胞を１２ウェルプレート（１００，０００細胞／ウェル）に１ｍＬにて３連で播種する。細胞を２μｇ／ｍｌのドキシサイクリンで処理してＩＤＨ１発現を誘導し、次いでＤＭＳＯ、または０．１もしくは１μＭの化合物Ａで処理し、３７℃で４日間インキュベートする。
【0083】
６５μＬの培地を収集および遠心分離し、６０μＬの上清培地を収集し、－８０℃で凍結する。
【0084】
ＬＣＭＳ ２－ＨＧ代謝物分析．
全２－ＨＧおよび（α－ＫＧ）の濃度に対するＩＤＨ１阻害の効果は、細胞培養上清の液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）分析によって決定される。２－ＨＧとα－ＫＧを細胞培養培地にスパイクすることにより、検量線を作成する。この方法は、ＬＣ－ＭＳによる分析の前にＯ－ベンジルヒドロキシルアミンによる誘導体化を利用する。１０μＬの各標準物質またはサンプルをディープウェル９６ウェルプレートに入れ、１０μＭ ｄ５－２－ヒドロキシグルタラートおよび１０μＭ ｄ６－α－ＫＧを含有する１００μＬの内部標準液と合わせる。ピリジンバッファー（８．６％ピリジン、ｐＨ５）中の５０μＬの１ＭＯ－ベンジルヒドロキシルアミンおよびピリジンバッファー中の５０μＬの１Ｍ Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を各サンプルに加える。誘導体化反応は室温で１時間進行させる。ベックマンバイオメックＦＸリキッドハンドラーを使用して、３００μＬの酢酸エチルを各サンプルに加える。プレートを密閉し、５分間ボルテックスした後、エッペンドルフ５８１０Ｒ遠心分離機で４０００ｒｐｍにて５分間遠心分離する。上層の２２０μＬを新しい９６ウェルプレートに移す。サンプルを５０℃の加熱窒素下で乾燥させ、１００μＬのメタノール／水（１:１）で戻す。１μＬの誘導体化サンプルを、島津製作所のＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ２０Ａ ＨＰＬＣシステムとＴｈｅｒｍｏ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｕｌｔｒａ（商標）トリプル四重極質量分析計からなるＬＣ－ＭＳシステムに注入する。分析対象物は、０．６ｍＬ／分の流速でＷａｔｅｒ ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ）に分離される。移動相Ａは水中の０．１％ギ酸であり、移動相Ｂはメタノールである。勾配プロファイルは、０分、５％ Ｂ；２分、１００％ Ｂ；４．００分、１００％ Ｂ；４．１分、５％ Ｂ； ５．５０分、そして停止である。質量分析計は、陽イオン選択反応モニタリングモードで動作するＨＥＳＩ－ＩＩプローブを利用する。検量線は、分析物濃度ｖｓ．分析物／内部標準ピーク面積比をプロットし、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（商標）ソフトウェアで１／濃度重み付けを使用してデータの二次適合を実行することによって作成される。未知物質の分析物濃度は、検量線から逆算する。
全２－ＨＧおよび（α－ＫＧ）の濃度に対するＩＤＨ１阻害の効果は、細胞培養上清の液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）分析によって決定される。２－ＨＧとα－ＫＧを細胞培養培地にスパイクすることにより、検量線を作成する。この方法は、ＬＣ－ＭＳによる分析の前にＯ－ベンジルヒドロキシルアミンによる誘導体化を利用する。１０μＬの各標準物質またはサンプルをディープウェル９６ウェルプレートに入れ、１０μＭ ｄ５－２－ヒドロキシグルタラートおよび１０μＭ ｄ６－α－ＫＧを含有する１００μＬの内部標準液と合わせる。ピリジンバッファー（８．６％ピリジン、ｐＨ５）中の５０μＬの１ＭＯ－ベンジルヒドロキシルアミンおよびピリジンバッファー中の５０μＬの１Ｍ Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を各サンプルに加える。誘導体化反応は室温で１時間進行させる。ベックマンバイオメックＦＸリキッドハンドラーを使用して、３００μＬの酢酸エチルを各サンプルに加える。プレートを密閉し、５分間ボルテックスした後、エッペンドルフ５８１０Ｒ遠心分離機で４０００ｒｐｍにて５分間遠心分離する。上層の２２０μＬを新しい９６ウェルプレートに移す。サンプルを５０℃の加熱窒素下で乾燥させ、１００μＬのメタノール／水（１:１）で戻す。１μＬの誘導体化サンプルを、島津製作所のＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ２０Ａ ＨＰＬＣシステムとＴｈｅｒｍｏ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｕｌｔｒａ（商標）トリプル四重極質量分析計からなるＬＣ－ＭＳシステムに注入する。分析対象物は、０．６ｍＬ／分の流速でＷａｔｅｒ ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ）に分離される。移動相Ａは水中の０．１％ギ酸であり、移動相Ｂはメタノールである。勾配プロファイルは、０分、５％ Ｂ；２分、１００％ Ｂ；４．００分、１００％ Ｂ；４．１分、５％ Ｂ； ５．５０分、そして停止である。質量分析計は、陽イオン選択反応モニタリングモードで動作するＨＥＳＩ－ＩＩプローブを利用する。検量線は、分析物濃度ｖｓ．分析物／内部標準ピーク面積比をプロットし、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（商標）ソフトウェアで１／濃度重み付けを使用してデータの二次適合を実行することによって作成される。未知物質の分析物濃度は、検量線から逆算する。
【0085】
本質的に上記の通り実施した実験において、表１の結果が得られる。
【表1】
【0086】
表１の結果は、ＭＯＬＭ１４＿Ｒ１３２細胞株コンストラクトにおいて、化合物Ａが変異ＩＤＨ１による２－ＨＧ産生を阻害することを立証している。
【0087】
細胞生存率アッセイ
ＭＯＬＭ１４野生型およびＭＯＬＭ１４＿Ｒ１３２細胞を２μｇ／ｍｌのドキシサイクリンで処理してＩＤＨ１ ＷＴおよびＩＤＨ１－Ｒ１３２Ｈの発現を誘導し、次いで３７℃で４日間インキュベートする。細胞を２μｇ／ｍＬのドキシサイクリンを含有する１ｍＬの増殖培地中の４（１２ウェル）プレートに１０，０００細胞／ウェルで播種する。
ＭＯＬＭ１４野生型およびＭＯＬＭ１４＿Ｒ１３２細胞を２μｇ／ｍｌのドキシサイクリンで処理してＩＤＨ１ ＷＴおよびＩＤＨ１－Ｒ１３２Ｈの発現を誘導し、次いで３７℃で４日間インキュベートする。細胞を２μｇ／ｍＬのドキシサイクリンを含有する１ｍＬの増殖培地中の４（１２ウェル）プレートに１０，０００細胞／ウェルで播種する。
【0088】
以下に記載の通り、ＤＭＳＯ（３連で）、または０、１２５、２５０、５００、もしくは１０００ｎＭの化合物Ａ（各３連で）で細胞を処理する：上記の最初のインキュベーション後、１ｘドキシサイクリン＋１ｘ化合物ＡまたはＤＭＳＯを含む０．５ｍＬの培地を加え、３日間インキュベートする。３日後、１Ｘドキシサイクリン＋１Ｘ化合物ＡまたはＤＭＳＯを含む別の０．５ｍＬ分量の新鮮な培地を加え、さらに３日間インキュベートする。次いで、ベネトクラクス（０、２５、５０、１００、または２００ｎＭ）を単剤として、または１Ｘ化合物Ａと組み合わせて加えた。２日後、フローサイトメトリー濾過チューブ内で細胞を収集し、およびフローサイトメトリー用に処理する。アネキシンＶバインディングバッファー（ＡＢＢ、２ｍＬ）［１Ｍ Ｈｅｐｅｓバッファー（１０ｍＬ）、５Ｍ ＮａＣｌ（２８ｍＬ）、１Ｍ ＣａＣｌ２（５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（９５７ｍＬ）］で細胞を洗浄し、次いで１５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。細胞をＡＢＢ（５０μＬ）で染色し、ＡＰＣアネキシンＶ抗体 （１μＬ、バイオレジェンド社 カタログ番号６４０９４１）で染色し、および２０分間暗闇状態に置いた。ＡＢＢ（２ｍＬ）で細胞を洗浄し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。ＤＡＰＩ（インビトロジェン社 カタログ番号Ｄ３５７１）およびカウンティングビーズ（インビトロジェン社 カタログ番号Ｃ３６９５０）をアネキシンＶバインディングバッファーに加え［ＤＡＰＩ（５μＬ、２ｇ／ｍＬ）＋カウンティングビーズ（５μＬ（５２０，０００ビーズ／５０μＬ））＋ＡＢＢ（１５０μＬ）］、全容量１６０μＬ／チューブとなるようにし、次いでＧａｌｌｉｏｓフローサイトメーター（ベックマン・コールター社）で分析される。カウンティングビーズが２５０ビーズ／サンプルに達したときに細胞収集を停止する。分析にＫａｌｕｓａソフトウェアを用いる。ゲートされた（ｇａｔｅｄ）アネキシンＶネガティブ／ＤＡＰＩネガティブ細胞のパーセンテージは％生存細胞を構成し、一方アネキシンＶポジティブ細胞のパーセンテージは％アポトーシスを構成する。
【0089】
本質的に上記の通り実施した実験において、表２A～２Cおよび３の結果が得られる。
【表2】
【0090】
表２Ａ～２Ｃの結果は、いずれかの化合物単独で処理し細胞の白血病細胞生存率のレベルと比較して、ベネトクラクスと化合物Ａの組み合わせが白血病細胞生存率のさらなる減少をもたらすことを立証している。
【表3】
【0091】
表３の結果は、それぞれの化合物単独で処理した細胞のアポトーシスレベルと比較して、ベネトクラクスと化合物Ａの組み合わせが白血病細胞のアポトーシスレベルの増加をもたらすことを立証している。
【0092】
ＡＭＬ－ＰＤＸモデル
オスのＮＳＧマウス（６～９週齢、ジャクソン・ラボラトリー社）に２５０ｃＧｙを照射し、翌日、ＡＭＬ－ＰＤＸ（１ｘ１０６細胞／１００μＬ）を静脈内注射した。後眼窩経路で末梢血液を収集し、処理し、フローサイトメトリーによってｈＣＤ４５＋細胞を測定し、白血病の発症を確認する。
オスのＮＳＧマウス（６～９週齢、ジャクソン・ラボラトリー社）に２５０ｃＧｙを照射し、翌日、ＡＭＬ－ＰＤＸ（１ｘ１０６細胞／１００μＬ）を静脈内注射した。後眼窩経路で末梢血液を収集し、処理し、フローサイトメトリーによってｈＣＤ４５＋細胞を測定し、白血病の発症を確認する。
【0093】
白血病の生着１％を超えると、マウスをビヒクルでの処理群、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ、毎日の強制経口投与）での処理群、ベネトクラクス（５０ｍｇ／ｋｇ、２週間強制経口投与し、１週間休薬する（２サイクル））での処理群、またはベネトクラクス（５０ｍｇ／ｋｇ、２週間強制経口投与し、１週間休薬する（２サイクル））と化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇ、毎日の強制経口投与）の組み合わせでの処理群にランダムにグループ分けする。６週間の治療後に残っている残存疾患のレベルの評価に基づいて、上記の２サイクルを超えて付加的な投薬を利用してもよい。
【0094】
後眼窩経路で２週間に１回末梢血液を収集し、処理し、フローサイトメトリーによって白血病負荷（％ｈＣＤ３３＋／ｈＣＤ４５＋細胞）を測定し、分化（全ｈＣＤ４５＋細胞の中の％ｈＣＤ１４＋細胞パーセンテージ）を測定する。６５μＬの染色／洗浄バッファー（ＤＰＢＳ中の５％熱失活（ＨＩ）－ＦＢＳ）をチューブ毎に加え、３～４回ピペットで上下に混合し、１００μＬの血液懸濁液を５ｍＬのポリプロピレンチューブに移す。製造者の使用説明書に従って染色を加える（抗ヒトＣＤ３３－ＡＰＣ（ＢＤバイオサイエンス社 カタログ番号５５１３７８）、抗ヒトＣＤ１４－ＰＥ－Ｃｙ７（ＢＤバイオサイエンス社 カタログ番号５５７７４２）、および抗ヒトＣＤ４５－ＡＰＣ－Ｃｙ７（ＢＤバイオサイエンス社 カタログ番号５５７８３３））。サンプルを室温で３０分間インキュベートし、光から保護する。インキュベーション後、１．５ｍＬの１ＸＢＤ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘバッファー（３７℃、（ＢＤ＃５５８０４９））を各サンプルに加え、室温で１２分間インキュベートする。次いでチューブを１５００ＲＰＭＩで５分間遠心分離する。ＢＤ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ溶液を吸引し、細胞ペレットを染色／洗浄バッファーで２回洗浄する。次いで固定細胞を２００μＬの染色／洗浄バッファーに再懸濁し、次いで濾過フローチューブに移す。標準的なフローサイトメトリーの原理および技術を用いて、サンプルをＧａｌｌｉｏｓフローサイトメーター（ベックマン社、テキサス）で分析する。集団ゲーティング（Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇａｔｉｎｇ）およびパーセント集団のデータ分析は、Ｆｌｏｗ Ｊｏソフトウェアで実施する。
【0095】
本質的に上記の通り実施した実験において、表４および５の結果が得られる。
【表4】
【表5】
【0096】
表４および５の結果は、ベネトクラクスと化合物Aの組み合わせはAML細胞分化レベルの増加をもたらさないが、該組み合わせはいずれかの化合物単独を用いて得られた白血病負荷と比較して白血病負荷の低下をもたらすことを立証しており、白血病負荷を減少することは関連する臨床的エンドポイントである。
【国際調査報告】