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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-17
(54)【発明の名称】ＬＡＧ３に結合する操作された抗体
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230510BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20230510BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20230510BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20230510BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20230510BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20230510BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20230510BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20230510BHJP
C07K 1/14 20060101ALI20230510BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230510BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230510BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230510BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
C07K1/14
A61P35/00
A61P35/02
A61K39/395 T
A61K39/395 E
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022559590
(86)(22)【出願日】2021-04-01
(85)【翻訳文提出日】2022-11-17
(86)【国際出願番号】 US2021025423
(87)【国際公開番号】W WO2021202904
(87)【国際公開日】2021-10-07
(31)【優先権主張番号】63/004,798
(32)【優先日】2020-04-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517284522
【氏名又は名称】ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ブレッソン， ダミアン
(72)【発明者】
【氏名】キム， ミン ソ
(72)【発明者】
【氏名】ジョウ， ヘユエ
(72)【発明者】
【氏名】グレイ， ジョン ディクソン
(72)【発明者】
【氏名】スワンソン， バーバラ エー．
(72)【発明者】
【氏名】シン， アロック
(72)【発明者】
【氏名】カーウィン， リサ ダイアン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA02
4B064CA05
4B064CA06
4B064CA08
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BD14
4B065CA44
4B065CA46
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB36
4C085BB41
4C085CC03
4C085CC21
4C085DD23
4C085DD31
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、抗原結合、細胞結合、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン放出能力を改善するために、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域にアミノ酸配列を有するように操作された完全ヒト抗ＬＡＧ３ ＩｇＧクラス抗体を提供する。実施形態１は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項2】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＬＡＧ３結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、配列番号４、６、８または１０に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５、７、９または１１に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む、ＬＡＧ３結合タンパク質。
【請求項3】
前記重鎖可変領域が、配列番号４に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号６に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号７に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号８に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号１０に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む、請求項２に記載のＬＡＧ３結合タンパク質。
【請求項4】
抗体または抗体断片である、請求項２または３に記載のＬＡＧ３結合タンパク質。
【請求項5】
前記重鎖可変領域配列および前記軽鎖可変領域配列が、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）を含む、請求項１に記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体または請求項２～４のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質。
【請求項6】
重鎖由来の可変ドメイン領域と軽鎖由来の可変ドメイン領域とを含むＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体であって、前記重鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項7】
前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４および５（本明細書中では１Ｃ５－３Ａ６と呼ばれる）、配列番号６および７（本明細書中では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ばれる）、配列番号８および９（本明細書中では５Ｃ８と呼ばれる）、または配列番号１０および１１（本明細書中では８Ｄ９と呼ばれる）を含む、請求項６に記載のＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項8】
重鎖由来の可変ドメイン領域と軽鎖由来の可変ドメイン領域とを含む一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体であって、前記重鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項9】
前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域がペプチドリンカーと一緒に結合している、請求項２～５のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または請求項８に記載の一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項10】
前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４および５（本明細書中では１Ｃ５－３Ａ６と呼ばれる）、配列番号６および７（本明細書中では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ばれる）、配列番号８および９（本明細書中では５Ｃ８と呼ばれる）、または配列番号１０および１１（本明細書中では８Ｄ９と呼ばれる）を含む、請求項８に記載の一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項11】
前記抗体が、１０－８Ｍまたはそれ未満のＫＤでヒトＬＡＧ３に結合する、先行する請求項のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項12】
前記抗体が、１０－６Ｍまたはそれ未満のＫＤでカニクイザルＬＡＧ３に結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項13】
ＩｇＧ４クラスの抗体を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項14】
薬学的に許容され得る賦形剤と、先行する請求項のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体とを含む、医薬組成物。
【請求項15】
請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質、Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体を含む、キット。
【請求項16】
請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域をコードする核酸。
【請求項17】
請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域をコードする核酸。
【請求項18】
（ａ）（ｉ）請求項１～１３のいずれか一項に記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域、および（ｉｉ）請求項１～１３のいずれか一項に記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域、または、（ｂ）請求項２～５、９もしくは１１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質、をコードする核酸。
【請求項19】
請求項１６に記載の核酸を含むベクター。
【請求項20】
請求項１７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項21】
請求項１８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項22】
請求項１９に記載のベクターを宿す宿主細胞。
【請求項23】
前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域を発現する、請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項24】
請求項２０に記載のベクターを宿す宿主細胞。
【請求項25】
前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記軽鎖可変領域を発現する、請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項26】
請求項１９に記載のベクターを含む第１のベクターおよび請求項２０に記載のベクターを含む第２のベクターを宿す宿主細胞。
【請求項27】
前記第１のベクターが第１の発現ベクターを含み、前記第２のベクターが第２の発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を発現する、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項28】
請求項２１に記載のベクターを宿す宿主細胞。
【請求項29】
前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を発現する、請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項30】
ＬＡＧ３結合タンパク質、あるいは完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域を調製するための方法であって、請求項２３に記載の宿主細胞の集団を、前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域を発現するのに適した条件下で培養することを含む、方法。
【請求項31】
前記宿主細胞から、前記発現されたＬＡＧ３結合タンパク質、あるいは前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域を回収することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域を調製するための方法であって、請求項２５に記載の宿主細胞の集団を、前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域を発現するのに適した条件下で培養することを含む、方法。
【請求項33】
前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
（ｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域と、（ｉｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域とを調製するための方法であって、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域と、（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域とを発現するのに適した条件下で、請求項２７に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む、方法。
【請求項35】
前記宿主細胞から、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された重鎖可変領域、および（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を回収することをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
（ｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域と、（ｉｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域とを調製するための方法であって、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域と、（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域とを発現するのに適した条件下で、請求項２９に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む、方法。
【請求項37】
前記宿主細胞から、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された重鎖可変領域、および（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を回収することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項38】
ＬＡＧ３過剰発現に関連する疾患を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体を含む治療用組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項39】
ＬＡＧ３過剰発現に関連する疾患の処置に使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項40】
前記疾患が、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、ファロピウス管の癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性白血病または急性骨髄性白血病などの急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児リンパ球性白血病の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘導される癌、またはアスベストによって誘導される癌である、請求項３８に記載の方法、あるいは請求項３９に記載の使用のためのＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【請求項41】
請求項３８のいずれか一項に記載の方法において使用するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年４月３日に出願された米国仮特許出願第６３／００４，７９８号に基づく優先権の利益を主張し、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２０年４月３日に出願された米国仮特許出願第６３／００４，７９８号に基づく優先権の利益を主張し、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本願を通じて、様々な刊行物、特許および／または特許出願が参照されている。本開示が関連する分野の水準をより完全に記載するために、これらの刊行物、特許および／または特許出願の開示は、参照により、その全体が本願中に組み込まれる。参照により組み込まれる内容が本出願で述べられる内容と矛盾する限りにおいて、本出願で述べられる内容が優先する。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年１月１４日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーの名称は２０２１－０１－１４＿０１２２３－００７５－００ＰＣＴ＿Ｓｅｑ＿Ｌｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、サイズは２３，７９３バイトである。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年１月１４日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーの名称は２０２１－０１－１４＿０１２２３－００７５－００ＰＣＴ＿Ｓｅｑ＿Ｌｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、サイズは２３，７９３バイトである。
【0003】
技術分野
本開示は、抗原結合、細胞結合、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン放出能力を改善するために、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域にアミノ酸配列を有するように操作された完全ヒト抗ＬＡＧ３ ＩｇＧクラス抗体を提供する。
本開示は、抗原結合、細胞結合、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン放出能力を改善するために、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域にアミノ酸配列を有するように操作された完全ヒト抗ＬＡＧ３ ＩｇＧクラス抗体を提供する。
【背景技術】
【0004】
序論および概要
リンパ球活性化遺伝子３またはＬＡＧ３（ＣＤ２２３としても知られる）は、免疫グロブリンスーパージーンファミリーのメンバーであり、ＣＤ４に構造的および遺伝的に関連している。ＬＡＧ３は静止期の末梢血リンパ球上に発現されないが、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞上に発現される。ＬＡＧ３は、ＣＤ４遺伝子の近くの１２番染色体の短腕の遠位部分に位置する遺伝子によってコードされる膜タンパク質であり、ＬＡＧ３遺伝子が遺伝子重複によって進化した可能性があることを示唆している（Ｔｒｉｅｂｅｌら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５）。
リンパ球活性化遺伝子３またはＬＡＧ３（ＣＤ２２３としても知られる）は、免疫グロブリンスーパージーンファミリーのメンバーであり、ＣＤ４に構造的および遺伝的に関連している。ＬＡＧ３は静止期の末梢血リンパ球上に発現されないが、活性化Ｔ細胞およびＮＫ細胞上に発現される。ＬＡＧ３は、ＣＤ４遺伝子の近くの１２番染色体の短腕の遠位部分に位置する遺伝子によってコードされる膜タンパク質であり、ＬＡＧ３遺伝子が遺伝子重複によって進化した可能性があることを示唆している（Ｔｒｉｅｂｅｌら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５）。
【0005】
ＣＤ４と同様に、ＬＡＧ３はＭＨＣクラスＩＩ分子と相互作用することが明らかにされているが、ＣＤ４とは異なり、ＬＡＧ３はヒト免疫不全ウイルスｇｐ１２０タンパク質と相互作用しない（Ｂａｉｘｅｒａｓら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：３２７－３３７）。可溶性ＬＡＧ３免疫グロブリン融合タンパク質（ｓＬＡＧ３Ｉｇ）を使用した研究によって、細胞表面上のＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ３の直接的かつ特異的な結合が明らかになった（Ｈｕａｒｄ他（１９９６）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１１８０－１１８６）。
【0006】
抗原特異的Ｔ細胞応答のインビトロ研究では、抗ＬＡＧ３抗体の添加は、Ｔ細胞増殖の増加、ＣＤ２５などの活性化抗原のより高い発現、ならびにインターフェロン－ガンマやインターロイキン－４などのサイトカインのより高い濃度をもたらし、ＣＤ４＋Ｔリンパ球の抗原依存性刺激の下方制御におけるＬＡＧ３／ＭＨＣクラスＩＩ相互作用をサポートしている（Ｈｕａｒｄ他（１９９４）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：３２１６－３２２１）。ＬＡＧ３の細胞質内領域は、ＣＤ３／ＴＣＲ活性化経路の下方制御に関与するシグナル伝達分子であると考えられているＬＡＰと呼ばれるタンパク質と相互作用することが明らかになっている（Ｉｏｕｚａｌｅｎら（２００１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：２８８５－２８９１）。さらに、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は活性化時にＬＡＧ３を発現することがわかっており、ＬＡＧ３に対する抗体は、インビトロおよびインビボの両方で誘導されたＴｒｅｇ細胞による抑制を阻害し、ＬＡＧ３がＴｒｅｇ細胞のサプレッサー活性に寄与することを示唆している（Ｈｕａｎｇ，Ｃ．ら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２１：５０３－５１３）。さらに加えて、ＬＡＧ３は、Ｔ細胞依存性機序および非依存性機序の両方において、制御性Ｔ細胞によってＴ細胞ホメオスタシスを負に制御することがわかっている（Ｗｏｒｋｍａｎ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：６８８－６９５）。
特定の状況では、ＬＡＧ３が免疫刺激効果を有することもわかっている。例えば、同系マウスに移植されたＬＡＧ３トランスフェクト腫瘍細胞は、トランスフェクトされていない腫瘍細胞と比較して増殖減少または完全な退縮を示し、腫瘍細胞上のＬＡＧ３発現が、ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して抗原ＬＡＧ３提示細胞を誘発することによって抗腫瘍応答を刺激したことを示唆した（Ｐｒｉｇｅｎｔら（１９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３８６７－３８７６）。さらに、可溶性ＬＡＧ３ Ｉｇ融合タンパク質は、抗原と共にマウスに投与した場合に体液性および細胞性免疫応答の両方を刺激することがわかっており、可溶性ＬＡＧ３ Ｉｇがワクチンアジュバントとして機能し得ることを示している（Ｅｌ Ｍｉｒ ａｎｄ Ｔｒｉｅｂｅｌ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５５８３－５５８９）。さらに、可溶性ヒトＬＡＧ３ Ｉｇは、Ｉ型腫瘍特異的免疫のインビトロでの発生を増幅することがわかっている（Ｃａｓａｔｉ他（２００６）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：４４５０－４４６０）。ＬＡＧ３の機能活性は、Ｔｒｉｅｂｅｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６１９－６２２にさらに概説されている。上記を考慮して、ＬＡＧ３の活性を調節するためのさらなる薬剤が注目されている。
特定の状況では、ＬＡＧ３が免疫刺激効果を有することもわかっている。例えば、同系マウスに移植されたＬＡＧ３トランスフェクト腫瘍細胞は、トランスフェクトされていない腫瘍細胞と比較して増殖減少または完全な退縮を示し、腫瘍細胞上のＬＡＧ３発現が、ＭＨＣクラスＩＩ分子を介して抗原ＬＡＧ３提示細胞を誘発することによって抗腫瘍応答を刺激したことを示唆した（Ｐｒｉｇｅｎｔら（１９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３８６７－３８７６）。さらに、可溶性ＬＡＧ３ Ｉｇ融合タンパク質は、抗原と共にマウスに投与した場合に体液性および細胞性免疫応答の両方を刺激することがわかっており、可溶性ＬＡＧ３ Ｉｇがワクチンアジュバントとして機能し得ることを示している（Ｅｌ Ｍｉｒ ａｎｄ Ｔｒｉｅｂｅｌ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５５８３－５５８９）。さらに、可溶性ヒトＬＡＧ３ Ｉｇは、Ｉ型腫瘍特異的免疫のインビトロでの発生を増幅することがわかっている（Ｃａｓａｔｉ他（２００６）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：４４５０－４４６０）。ＬＡＧ３の機能活性は、Ｔｒｉｅｂｅｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６１９－６２２にさらに概説されている。上記を考慮して、ＬＡＧ３の活性を調節するためのさらなる薬剤が注目されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｔｒｉｅｂｅｌら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５
【非特許文献2】Ｂａｉｘｅｒａｓら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：３２７－３３７
【非特許文献3】Ｈｕａｒｄ他（１９９６）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１１８０－１１８６
【非特許文献4】Ｈｕａｒｄ他（１９９４）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：３２１６－３２２１
【非特許文献5】Ｉｏｕｚａｌｅｎら（２００１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：２８８５－２８９１
【非特許文献6】Ｈｕａｎｇ，Ｃ．ら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２１：５０３－５１３
【非特許文献7】Ｗｏｒｋｍａｎ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：６８８－６９５
【非特許文献8】Ｐｒｉｇｅｎｔら（１９９９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３８６７－３８７６
【非特許文献9】Ｅｌ Ｍｉｒ ａｎｄ Ｔｒｉｅｂｅｌ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５５８３－５５８９
【非特許文献10】Ｃａｓａｔｉ他（２００６）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：４４５０－４４６０
【非特許文献11】Ｔｒｉｅｂｅｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６１９－６２２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
当技術分野では、ＬＡＧ３、特に抗ＬＡＧ３抗体に基づく有効な処置が依然として必要とされている。本開示は、親抗体と比較して、それらの標的抗原に対するより高い親和性結合および改善された殺細胞能力を示すように操作された抗体を提供する。本開示は、以下の実施形態を含む。
実施形態１は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
実施形態１は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0009】
実施形態２は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＬＡＧ３結合タンパク質であって、前記重鎖可変領域が、配列番号４、６、８または１０に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５、７、９または１１に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む、ＬＡＧ３結合タンパク質である。
【0010】
実施形態３は、前記重鎖可変領域が、配列番号４に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号６に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号７に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号８に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含むか、または、前記重鎖可変領域が、配列番号１０に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１に存在するＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含む、実施形態２に記載のＬＡＧ３結合タンパク質である。
【0011】
実施形態４は、抗体または抗体断片である、実施形態２または３に記載のＬＡＧ３結合タンパク質である。
【0012】
実施形態５は、前記重鎖可変領域配列および前記軽鎖可変領域配列が、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）を含む、実施形態１に記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体または実施形態２～４のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質である。
【0013】
実施形態６は、重鎖由来の可変ドメイン領域と軽鎖由来の可変ドメイン領域とを含むＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体であって、前記重鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0014】
実施形態７は、前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４および５（本明細書中では１Ｃ５－３Ａ６と呼ばれる）、配列番号６および７（本明細書中では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ばれる）、配列番号８および９（本明細書中では５Ｃ８と呼ばれる）、または配列番号１０および１１（本明細書中では８Ｄ９と呼ばれる）を含む、実施形態６に記載のＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0015】
実施形態８は、重鎖由来の可変ドメイン領域と軽鎖由来の可変ドメイン領域とを含む一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体であって、前記重鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0016】
実施形態９は、前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域がペプチドリンカーと一緒に結合している、実施形態２～５のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または実施形態８に記載の一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0017】
実施形態１０は、前記重鎖由来の可変ドメイン領域および前記軽鎖由来の可変ドメイン領域が、配列番号４および５（本明細書中では１Ｃ５－３Ａ６と呼ばれる）、配列番号６および７（本明細書中では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ばれる）、配列番号８および９（本明細書中では５Ｃ８と呼ばれる）、または配列番号１０および１１（本明細書中では８Ｄ９と呼ばれる）を含む、実施形態８に記載の一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0018】
実施形態１１は、前記抗体が、１０－８Ｍまたはそれ未満のＫＤでヒトＬＡＧ３に結合する、先行する実施形態のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0019】
実施形態１２は、前記抗体が、１０－６Ｍまたはそれ未満のＫＤでカニクイザルＬＡＧ３に結合する、実施形態１～７のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0020】
実施形態１３は、ＩｇＧ４クラスの抗体を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0021】
実施形態１４は、薬学的に許容され得る賦形剤と、先行する実施形態のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体とを含む、医薬組成物である。
【0022】
実施形態１５は、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質、Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体を含む、キットである。
【0023】
実施形態１６は、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域をコードする核酸である。
【0024】
実施形態１７は、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質または完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域をコードする核酸である。
【0025】
実施形態１８は、（ａ）（ｉ）実施形態１～１３のいずれか一つに記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域、および（ｉｉ）実施形態１～１３のいずれか一つに記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域、または、（ｂ）実施形態２～５、９もしくは１１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質、をコードする核酸である。
【0026】
実施形態１９は、実施形態１６に記載の核酸を含むベクターである。
【0027】
実施形態２０は、実施形態１７に記載の核酸を含むベクターである。
【0028】
実施形態２１は、実施形態１８に記載の核酸を含むベクターである。
【0029】
実施形態２２は、実施形態１９に記載のベクターを宿す宿主細胞である。
【0030】
実施形態２３は、前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域を発現する、実施形態２２に記載の宿主細胞である。
【0031】
実施形態２４は、実施形態２０に記載のベクターを宿す宿主細胞である。
【0032】
実施形態２５は、前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記軽鎖可変領域を発現する、実施形態２４に記載の宿主細胞である。
【0033】
実施形態２６は、実施形態１９に記載のベクターを含む第１のベクターおよび実施形態２０に記載のベクターを含む第２のベクターを宿す宿主細胞である。
【0034】
実施形態２７は、前記第１のベクターが第１の発現ベクターを含み、前記第２のベクターが第２の発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を発現する、実施形態２６に記載の宿主細胞である。
【0035】
実施形態２８は、実施形態２１に記載のベクターを宿す宿主細胞である。
【0036】
実施形態２９は、前記ベクターが発現ベクターを含み、前記宿主細胞が前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域を発現する、実施形態２８に記載の宿主細胞である。
【0037】
実施形態３０は、ＬＡＧ３結合タンパク質、あるいは完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域を調製するための方法であって、実施形態２３に記載の宿主細胞の集団を、前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域を発現するのに適した条件下で培養することを含む、方法である。
【0038】
実施形態３１は、前記宿主細胞から、前記発現されたＬＡＧ３結合タンパク質、あるいは前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域を回収することをさらに含む、実施形態３０に記載の方法である。
【0039】
実施形態３２は、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域を調製するための方法であって、実施形態２５に記載の宿主細胞の集団を、前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域を発現するのに適した条件下で培養することを含む、方法である。
【0040】
実施形態３３は、前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態３２に記載の方法である。
【0041】
実施形態３４は、（ｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域と、（ｉｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域とを調製するための方法であって、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域と、（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域とを発現するのに適した条件下で、実施形態２７に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む、方法である。
【0042】
実施形態３５は、前記宿主細胞から、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された重鎖可変領域、および（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を回収することをさらに含む、実施形態３４に記載の方法である。
【0043】
実施形態３６は、（ｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域と、（ｉｉ）完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、またはＦａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の軽鎖可変領域とを調製するための方法であって、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記重鎖可変領域と、（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記軽鎖可変領域とを発現するのに適した条件下で、実施形態２９に記載の宿主細胞の集団を培養することを含む、方法である。
【0044】
実施形態３７は、前記宿主細胞から、（ｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された重鎖可変領域、および（ｉｉ）前記完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記Ｆａｂ完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体、または前記一本鎖ヒト抗ＬＡＧ３抗体の前記発現された軽鎖可変領域を回収することをさらに含む、実施形態３６に記載の方法である。
【0045】
実施形態３８は、ＬＡＧ３過剰発現に関連する疾患を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体を含む治療用組成物を前記対象に投与することを含む、方法である。
【0046】
実施形態３９は、ＬＡＧ３過剰発現に関連する疾患の処置に使用するための、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0047】
実施形態４０は、前記疾患が、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、ファロピウス管の癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性白血病または急性骨髄性白血病などの急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児リンパ球性白血病の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘導される癌、またはアスベストによって誘導される癌である、実施形態３８に記載の方法、あるいは実施形態３９に記載の使用のためのＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【0048】
実施形態４１は、実施形態３８のいずれか一つに記載の方法において使用するための、実施形態１～１３のいずれか一つに記載のＬＡＧ３結合タンパク質またはヒト抗ＬＡＧ３抗体である。
【図面の簡単な説明】
【0049】
【0050】
【0051】
【0052】
【0053】
【0054】
【0055】
【0056】
【0057】
【0058】
【0059】
【0060】
【0061】
【発明を実施するための形態】
【0062】
定義
別段の定義がなければ、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、別段の定義がなければ当業者によって一般的に理解される意味を有する。一般的に、本明細書に記載されている、細胞培養および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、トランスジェニック細胞の作製、タンパク質化学および核酸化学およびハイブリダイゼーションの技術に関連する用語は、周知であり、本分野において一般的に使用されている。別段の記載がなければ、本明細書中に提供されている方法および技術は、一般に、本分野において周知の慣用的な手順に従って、ならびに本明細書に引用および論述されている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）を参照されたい。Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（ｅｄ） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＹ，１９９５；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ＩＲＬ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９６；およびＰａｕｌ（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｗａｔａ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；Ｐａｕｌ（ｅｄ．），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ，１９９３；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓｔｉｔｅｓら、（ｅｄｓ．） Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４ｔｈ ｅｄ．） Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，Ｃａｌｉｆおよびその中に引用されている参考文献；Ｃｏｄｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｎｄ ｅｄ．） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８６、およびＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７，１９７５などの多数の基本的な教科書が、標準的な抗体作製方法を記載している。本明細書中に引用されている参考文献の全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。酵素の反応および富化／精製技術も周知であり、製造業者の仕様に従って本分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されているように行われる。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医化学および薬化学に関連して使用される用語ならびにこれらの研究室手技および技術は、本分野において周知であり、一般的に使用されている。化学的合成、化学的分析、薬学的調製、製剤化および送達、および患者の処置に対しては、標準的な技術を使用することができる。
別段の定義がなければ、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、別段の定義がなければ当業者によって一般的に理解される意味を有する。一般的に、本明細書に記載されている、細胞培養および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、トランスジェニック細胞の作製、タンパク質化学および核酸化学およびハイブリダイゼーションの技術に関連する用語は、周知であり、本分野において一般的に使用されている。別段の記載がなければ、本明細書中に提供されている方法および技術は、一般に、本分野において周知の慣用的な手順に従って、ならびに本明細書に引用および論述されている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）を参照されたい。Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ（ｅｄ） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＮＹ，１９９５；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ＩＲＬ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９９６；およびＰａｕｌ（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｗａｔａ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；Ｐａｕｌ（ｅｄ．），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ，１９９３；Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓｔｉｔｅｓら、（ｅｄｓ．） Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４ｔｈ ｅｄ．） Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，Ｃａｌｉｆおよびその中に引用されている参考文献；Ｃｏｄｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｎｄ ｅｄ．） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８６、およびＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７，１９７５などの多数の基本的な教科書が、標準的な抗体作製方法を記載している。本明細書中に引用されている参考文献の全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。酵素の反応および富化／精製技術も周知であり、製造業者の仕様に従って本分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されているように行われる。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学および医化学および薬化学に関連して使用される用語ならびにこれらの研究室手技および技術は、本分野において周知であり、一般的に使用されている。化学的合成、化学的分析、薬学的調製、製剤化および送達、および患者の処置に対しては、標準的な技術を使用することができる。
【0063】
本明細書に記載されている見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、これらの態様は、本明細書を全体として参照することによって理解することができる。
【0064】
本明細書中の文脈によって別段の要求がされていなければ、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに任意の単語の単数での使用は、明示的かつ明確に１つの指示対象に限定されていなければ、複数の指示対象を含む。
【0065】
本明細書における選択肢（例えば、「または」の使用は、当該選択肢の一方または両方またはその任意の組み合わせを意味するように解釈されることが理解される。
【0066】
本明細書において使用される「および／または」という用語は、それ以外のものとともにまたはそれ以外のものなしに、指定された特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示を意味するように解釈されるべきである。例えば、本明細書において、「Ａおよび／またはＢ」などの語句において使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂおよび／またはＣ」などの語句において使用される「および／または」という用語は、以下の態様のそれぞれ：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を包含することが意図される。
【0067】
本明細書において使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」ならびにこれらの文法的変形は、本明細書において使用される場合、列記中の１つの項目または複数の項目が、列記された項目を置換しまたは列記された項目に追加することができる他の項目を除外しないように非限定的であることが意図される。本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語とともに態様が記載されている場合には常に、別途、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている類似の態様も提供されることが理解される。
【0068】
本明細書において使用される「約」という用語は、当業者によって決定された場合に特定の値または組成に対して許容され得る誤差範囲内にある値または組成を表し、これは、１つには、その値または組成がどのようにして測定または決定されるかに、すなわち、測定系の限界に依存する。例えば、「約」または「およそ」は、当該分野での慣行にしたがって、１または１を超える標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」または「およそ」は、測定系の限界に応じて、最大１０％の範囲（すなわち、±１０％）またはそれを超える範囲を意味することができる。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇと５．５ｍｇの間の任意の数を含むことができる。さらに、生物学的系または過程に関しては特に、これらの用語は、最大１桁の規模または最大５倍の値を意味することができる。本開示中に特定の値または組成が与えられている場合、別段の記載がなければ、「約」または「およそ」の意味は、その値または組成に対する許容され得る誤差範囲内にあると考えられるべきである。
【0069】
本明細書において使用される用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」ならびに他の関連する用語は互換的に使用され、アミノ酸のポリマーを表し、いずれかの特定の長さに限定されない。ポリペプチドは、天然のアミノ酸および非天然のアミノ酸を含み得る。ポリペプチドには、組換え形態または化学的に合成された形態が含まれる。ポリペプチドはまた、切断、例えば、分泌シグナルペプチドによる切断または特定のアミノ酸残基における非酵素的切断にまだ供されていない前駆体分子を含む。ポリペプチドには、切断を受けた成熟分子が含まれる。これらの用語は、天然および人工のタンパク質、タンパク質断片およびタンパク質配列のポリペプチドアナログ（ムテイン、バリアント、キメラタンパク質および融合タンパク質など）ならびに翻訳後修飾によってまたはその他共有結合的にもしくは非共有結合的に修飾されたタンパク質を包含する。本明細書では、組換え手順を用いて調製したＬＡＧ３（例えば、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合部分）に結合する結合タンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドについて説明する。
【0070】
本明細書において使用される用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」ならびに他の関連する用語は互換的に使用され、ヌクレオチドのポリマーを表し、いずれかの特定の長さに限定されない。核酸には、組換え形態および化学的に合成された形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ分子（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログ（例えば、ペプチド核酸および天然に存在しないヌクレオチドアナログ）を用いて生成されたＤＮＡまたはＲＮＡおよびこれらのハイブリッドが含まれる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。一実施形態では、本開示の核酸分子は、抗体、または、断片もしくはｓｃＦｖ、誘導体、ムテインもしくはそれらの変異体をコードする連続したオープンリーディングフレームを含む。一実施形態では、核酸は、１種類のポリヌクレオチドまたは２もしくはそれを超える異なる種類のポリヌクレオチドの混合物を含む。本明細書では、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸について説明する。一実施形態では、核酸は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする。一実施形態では、核酸は、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする。
【0071】
「回収する」または「回収」または「回収すること」という用語、および他の関連する用語は、宿主細胞培地または宿主細胞可溶化液からまたは宿主細胞膜からタンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）を得ることを指す。一実施形態において、タンパク質は、発現されたタンパク質の分泌を媒介する分泌シグナルペプチド配列に融合された組換えタンパク質として宿主細胞によって発現される。分泌されたタンパク質は、宿主細胞培地から回収することができる。一実施形態において、タンパク質は、宿主細胞可溶化液から回収することができる、分泌シグナルペプチド配列を欠く組換えタンパク質として宿主細胞によって発現される。一実施形態において、タンパク質は、発現されたタンパク質を宿主細胞膜から放出させるために界面活性剤を使用して回収することができる膜結合型タンパク質として宿主細胞によって発現される。一実施形態において、タンパク質を回収するために使用された方法に関係なく、タンパク質は、回収されたタンパク質から細胞残屑を除去する手順に供することができる。例えば、回収されたタンパク質は、クロマトグラフィー、ゲル電気泳動および／または透析に供することができる。一実施形態において、クロマトグラフィーは、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび／またはシリカでのクロマトグラフィーを含む任意の１つまたは任意の組み合わせまたは２つもしくはそれを超える手順を含む。一実施形態において、アフィニティークロマトグラフィーは、プロテインＡまたはＧ（黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）由来の細胞壁成分）を含む。
【0072】
「単離された」という用語は、他の細胞物質を実質的に含まないタンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）またはポリヌクレオチドを指す。タンパク質は、当技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって、天然に付随する成分（または抗体を生成するために使用される細胞発現系もしくは化学合成法に付随する成分）を実質的に含まないようにすることができる。単離されたという用語はまた、いくつかの実施形態において、同じ種の他の分子、例えば、それぞれ異なるアミノ酸またはヌクレオチド配列を有する他のタンパク質またはポリヌクレオチドを実質的に含まないタンパク質またはポリヌクレオチドを指す。所望の分子の均一性の純度は、ゲル電気泳動などの低分解能方法およびＨＰＬＣまたは質量分光測光法（mass spectrophotometry）などの高分解能方法を含む、当技術分野で周知の技術を使用してアッセイすることができる。一実施形態では、本明細書に記載の抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合タンパク質のいずれかを単離することができる。
【0073】
本明細書で使用される「抗原結合タンパク質」および関連用語（例えば、ＬＡＧ３結合タンパク質）は、抗原（例えば、ＬＡＧ３）に結合する部分と、必要に応じて、抗原結合部分が抗原への抗原結合タンパク質の結合を促進する立体構造をとることを可能にする足場またはフレームワーク部分とを含むタンパク質を指す。抗原結合タンパク質の例としては、抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合部分）、抗体派生物および抗体アナログが挙げられる。抗原結合タンパク質は、例えば、代替のタンパク質足場または移植されたＣＤＲもしくはＣＤＲ派生物を有する人工の足場を含むことができる。このような足場としては、限定されないが、例えば抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された変異を含む抗体由来足場の他、例えば生体適合性ポリマーを含む完全合成足場が挙げられる。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら、２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ５３，Ｉｓｓｕｅ １：１２１－１２９；Ｒｏｑｕｅら、２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９－６５４を参照されたい。さらに、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）の他、足場としてフィブロネクチン成分を利用する抗体模倣物に基づく足場を使用することができる。ＬＡＧ３に結合する抗原結合タンパク質が本明細書に記載されている。
【0074】
抗原結合タンパク質は、例えば、免疫グロブリンの構造を有することができる。一実施形態において、「免疫グロブリン」は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する四量体分子を表す。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主として関与する約１００～１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主として関与する定常領域を構成する。ヒト軽鎖は、κまたはλ軽鎖として分類される。重鎖は、μ、δ、γ、αまたはεとして分類され、それぞれ、抗体のイソタイプをＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとして規定する。軽鎖および重鎖の中で、可変および定常領域は、約１２またはそれを超えるアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖も、約１０を超えるアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））参照（あらゆる目的のために、その全体が参照により組み込まれる）。完全な免疫グロブリンが２つの抗原結合部位を有するように、各軽／重鎖対の可変領域が抗体結合部位を形成する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、四量体免疫グロブリン分子とは異なるが、１つの標的抗原をなお結合する、または２もしくはそれを超える標的抗原を結合する構造を有する合成分子であり得る。例えば、合成抗原結合タンパク質は、抗体断片、１～６もしくはそれを超えるポリペプチド鎖、ポリペプチドの非対称的集合体またはその他の合成分子を含むことができる。ＬＡＧ３に特異的に結合する免疫グロブリン様特性を有する抗原結合タンパク質が本明細書に記載されている。
【0075】
免疫グロブリン鎖の可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される３つの超可変領域によって連結された相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）という同一の一般的構造を呈する。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖および重鎖はいずれも、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【0076】
分子を抗原結合タンパク質にするために、１またはそれを超えるＣＤＲが共有結合的または非共有結合的に分子中に組み込まれ得る。抗原結合タンパク質は、より大きなポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲを組み込み得、ＣＤＲを別のポリペプチド鎖に共有結合的に連結し得、またはＣＤＲを非共有結合的に組み込み得る。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が関心対象の特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。
【0077】
各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，ＵＳ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２，１９９１におけるＫａｂａｔらの定義に従う。免疫グロブリン鎖中のアミノ酸に対する他のナンバリングシステムとしては、ＩＭＧＴ．ＲＴＭ．（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１８５－２０３；２００５）およびＡＨｏ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－６７０；２００１）；Ｃｈｏｔｈｉａ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２７３：９２７－９４８；Ｃｏｎｔａｃｔ（Ｍａｃｃａｌｌｕｍら、１９９６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２６２：７３２－７４５、およびＡｈｏ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ２００１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３０９：６５７－６７０が挙げられる。
【0078】
本明細書において使用される「抗体」および「複数の抗体」および関連する用語は、完全な免疫グロブリンまたは抗原に特異的に結合するその抗原結合部分を表す。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは完全な抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製され得る。抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディならびに特異的な抗原結合をポリペプチドに付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。
【0079】
抗体としては、組換え的に作製された抗体および抗原結合部分が挙げられる。抗体としては、非ヒト、キメラ、ヒト化および完全ヒト抗体が挙げられる。抗体としては、単一特異的、多重特異的（例えば、二重特異的、三重特異的およびこれより高次の特異性）が挙げられる。抗体としては、四量体抗体、軽鎖単量体、重鎖単量体、軽鎖二量体、重鎖二量体が挙げられる。抗体としては、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片およびＦａｂ断片が挙げられる。抗体としては、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体、アフィボディ、ジスルフィド結合されたＦｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ抗体（抗Ｉｄ）、ミニボディが挙げられる。抗体としては、モノクローナルおよびポリクローナル集団が挙げられる。本明細書では、軽鎖および／または重鎖を含む抗ＬＡＧ３抗体について説明する。
【0080】
本明細書において使用される「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」または「抗原結合部位」およびその他の関連する用語は、抗原と相互作用し、抗原結合タンパク質の抗原に対する特異性および親和性に寄与するアミノ酸残基（またはその他の部分）を含有する抗原結合タンパク質の部分を表す。その抗原に特異的に結合する抗体に関しては、これは、そのＣＤＲドメインの少なくとも１つの少なくとも一部を含む。本明細書では、抗ＬＡＧ３抗体由来の抗原結合ドメインについて説明する。
【0081】
抗体または抗原結合タンパク質または抗体断片の文脈で本明細書において使用される用語「特異的結合」、「特異的に結合する」または「特異的に結合している」およびその他の関連する用語は、他の分子または部分と比較した、抗原への非共有結合または共有結合の優先的結合を表す（例えば、抗体は、他の利用可能な抗原と比較して、特定の抗原に特異的に結合する）。一実施形態において、抗体が、１０－５Ｍもしくはそれ未満、または１０－６Ｍもしくはそれ未満、または１０－７Ｍもしくはそれ未満、または１０－８Ｍもしくはそれ未満、または１０－９Ｍもしくはそれ未満、または１０－１０Ｍもしくはそれ未満の解離定数ＫＤで抗原に結合すれば、抗体は標的抗原に特異的に結合する。本明細書では、ＬＡＧ３に特異的に結合する抗ＬＡＧ３抗体について説明する。
【0082】
一実施形態において、解離定数（ＫＤ）は、ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して測定することができる。表面プラズモン共鳴は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥシステム（ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＢｉａｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ部門、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな相互作用の分析を可能にする光学現象を表す。
【0083】
本明細書において使用される「エピトープ」および関連する用語は、抗原結合タンパク質によって（例えば、抗体またはその抗原結合部分によって）結合される抗原の部分を表す。エピトープは、抗原結合タンパク質によって結合される２つまたはそれを超える抗原の部分を含むことができる。エピトープは、１つの抗原のまたは２もしくはそれを超える抗原の非連続部分（例えば、抗原の一次配列中では連続しないが、抗原の三次構造および四次構造という観点では、抗原結合タンパク質によって結合されるのに互いに十分近接するアミノ酸残基）を含むことができる。一般的には、抗体の可変領域、特にＣＤＲがエピトープと相互作用する。本明細書では、ＬＡＧ３ポリペプチド（抗原）のエピトープに結合する抗ＬＡＧ３抗体およびその抗原結合タンパク質について説明する。
【0084】
本明細書において使用される「抗体断片」、「抗体部分」、「抗体の抗原結合断片」または「抗体の抗原結合部分」およびその他の関連する用語は、完全な抗体が結合する抗原を結合する完全な抗体の一部を含む完全な抗体以外の分子を表す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；Ｆｄ；およびＦｖ断片ならびにｄＡＢ；ダイアボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；特異的な抗原結合をポリペプチドに付与するのに十分である抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によってまたは完全な抗体の酵素的もしくは化学的切断によって作製され得る。抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディならびに抗原結合特性を抗体断片に付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。本明細書では、抗ＬＡＧ３抗体の抗原結合フラグメントについて説明する。
【0085】
「Ｆａｂ」、「Ｆａｂ断片」という用語およびその他の関連する用語は、可変軽鎖領域（ＶＬ）、定常軽鎖領域（ＣＬ）、可変重鎖領域（ＶＨ）および第一の定常領域（ＣＨ１）を含む一価断片を表す。Ｆａｂは、抗原を結合することができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である。Ｆ（Ａｂ’）２は、抗原結合能を有する。Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１領域を含む。Ｆｖ断片は、ＶＬおよびＶＨ領域を含む。Ｆｖは、抗原を結合することができる。ｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６，８４６，６３４号および同第６，６９６，２４５号；米国特許出願公開第２００２／０２５１２号；同第２００４／０２０２９９５号；同第２００４／００３８２９１号；同第２００４／０００９５０７号；同第２００３／００３９９５８号；およびＷａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，１９８９）。本明細書では、抗ＬＡＧ３抗体由来の抗原結合部分を含むＦａｂフラグメントについて説明する。
【0086】
一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬ領域とＶＨ領域とがリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して結合し、連続したタンパク質鎖を形成している抗体である。好ましくは、リンカーは、タンパク質鎖がそれ自体の上に折り返され、一価抗原結合部位を形成することを可能にするのに十分な長さである（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－２６ ａｎｄ Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－８３を参照されたい）。本明細書では、抗ＬＡＧ３抗体由来の抗原結合部分を含む一本鎖抗体について説明する。
【0087】
ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、各ポリペプチド鎖は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによって連結されたＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、その結果、各ドメインは別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対形成することができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－４８、およびＰｏｌｊａｋら、１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－２３を参照されたい）。ダイアボディの２つのポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対合から生じるダイアボディは、２つの同一の抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリペプチド鎖を使用して、２つの異なる抗原結合部位を有するダイアボディを作製することができる。同様に、トリボディおよびテトラボディは、それぞれ３つおよび４つのポリペプチド鎖を含み、それぞれ３つおよび４つの抗原結合部位を形成する抗体であり、これらは同じであっても異なっていてもよい。ダイアボディ、トリボディおよびテトラボディ構築物は、本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体由来の抗原結合部分を使用して調製することができる。
【0088】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する１またはそれを超える可変および定常領域を有する抗体を表す。一実施形態において、可変および定常ドメインの全てがヒト免疫グロブリン配列に由来する（例えば、完全ヒト抗体）。これらの抗体は、組換え法を通じて、またはヒト重鎖および／もしくは軽鎖をコードする遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝的に改変されているマウスを目的の抗原で免疫することを通じてなど、様々な方法で調製され得、その例は以下に記載されている。本明細書では、完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体およびその抗原結合タンパク質について説明する。
【0089】
「ヒト化」抗体は、ヒト化抗体がヒト被験体に投与された場合、非ヒト種抗体と比較して、ヒト化抗体が免疫応答を誘導する可能性がより低く、および／または重度がより低い免疫応答を誘導するように、非ヒト種に由来する抗体の配列と１またはそれを超えるアミノ酸の置換、欠失および／または付加が異なる配列を有する抗体を指す。一実施形態において、ヒト化抗体を作製するために、非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークおよび定常ドメイン中のある特定のアミノ酸が変異される。別の実施形態において、ヒト抗体由来の定常ドメインが、非ヒト種の可変ドメインに融合される。別の実施形態において、非ヒト抗体の１またはそれを超えるＣＤＲ配列中の１またはそれを超えるアミノ酸残基は、非ヒト抗体がヒト被験体に投与されたときに非ヒト抗体の可能性のある免疫原性を低下させるように変更され、ここで、変更されるアミノ酸残基は、抗体のその抗原への免疫特異的結合にとって重要ではないか、または行われるアミノ酸配列への変更は、抗原へのヒト化抗体の結合が抗原への非ヒト抗体の結合より著しく劣らないような保存的変更である。ヒト化抗体を作製する方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、米国特許第５，８８６，１５２号および米国特許第５，８７７，２９３号に見出され得る。
【0090】
本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語および関連する用語は、第一の抗体からの１またはそれを超える領域と、１またはそれを超える他の抗体からの１またはそれを超える領域とを含有する抗体を指す。一実施形態において、ＣＤＲの１つまたはそれより多くがヒト抗体に由来する。別の実施形態において、ＣＤＲのすべてがヒト抗体に由来する。別の実施形態において、１つより多くのヒト抗体からのＣＤＲが、キメラ抗体において混合され、適合される。例えば、キメラ抗体は、第一のヒト抗体の軽鎖からのＣＤＲ１、第二のヒト抗体の軽鎖からのＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに第三の抗体からの重鎖からのＣＤＲを含み得る。別の例では、ＣＤＲは、ヒトとマウス、またはヒトとウサギ、またはヒトとヤギなどの異なる種に由来する。当業者は、他の組み合わせが可能であることを理解するであろう。
【0091】
さらに、フレームワーク領域は、同じ抗体の１つに、ヒト抗体などの１またはそれを超える異なる抗体に、またはヒト化抗体に由来し得る。キメラ抗体の一例では、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種からの抗体もしくは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と同一であり、相同であり、または特定の種からのもしくは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体に由来するが、鎖の残りは、別の種からの抗体もしくは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体と同一であり、相同であり、または別の種からの抗体もしくは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体に由来する。所望の生物学的活性（すなわち、標的抗原を特異的に結合する能力）を示すこのような抗体の断片も含まれる。キメラ抗体は、本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体の部分から調製することができる。
【0092】
本明細書で使用される場合、「バリアント」ポリペプチドおよびポリペプチドの「バリアント」という用語は、参照ポリペプチド配列と比較してアミノ酸配列中に挿入された、アミノ酸配列から欠失された、および／またはアミノ酸配列中に置換された１またはそれを超えるアミノ酸残基を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。ポリペプチドバリアントには、融合タンパク質が含まれる。同様に、バリアントポリヌクレオチドは、別のポリヌクレオチド配列と比較して、ヌクレオチド配列中に挿入された、ヌクレオチド配列から欠失された、および／またはヌクレオチド配列中に置換された１またはそれを超えるヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含む。ポリヌクレオチドバリアントには、融合ポリヌクレオチドが含まれる。
【0093】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドの「派生物」という用語は、例えば、ポリエチレングリコール、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、リン酸化およびグリコシル化などの別の化学部分へのコンジュゲーションを介して化学的に修飾されたポリペプチド（例えば、抗体）である。別段示されない限り、「抗体」という用語は、２つの完全長重鎖および２つの完全長軽鎖を含む抗体に加えて、その派生物、バリアント、断片およびムテインを含み、その例は以下に記載されている。
【0094】
本明細書で使用される「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ領域」という用語は、ヒンジ領域内またはヒンジ領域の後で始まり、重鎖のＣ末端で終わる抗体重鎖定常領域の部分を指す。Ｆｃ領域は、ＣＨおよびＣＨ３領域の少なくとも一部を含み、ヒンジ領域の一部を含んだり、含まなかったりする場合がある。各々が半Ｆｃ領域を有する２つのポリペプチド鎖は、二量体化して完全Ｆｃドメインを形成することができる。Ｆｃドメインは、Ｆｃ細胞表面受容体および免疫補体系のいくつかのタンパク質を結合することができる。Ｆｃドメインは、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性食作用（ＡＤＰ）、オプソニン化および／または細胞結合を含む２つまたはそれを超える活性の任意の１つまたは任意の組み合わせを含むエフェクター機能を示す。Ｆｃドメインは、ＦｃγＲＩ（例えば、ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（例えば、ＣＤ３２）および／またはＦｃγＲＩＩＩ（例えば、ＣＤ１６ａ）を含むＦｃ受容体に結合することができる。
【0095】
本明細書で使用される「標識抗体」という用語または関連する用語は、標識されていないか、検出用の検出可能な標識または部分に連結されている抗体およびその抗原結合部分を指し、検出可能な標識または部分は、放射性、発色性、抗原性、酵素性、検出可能なビーズ（例えば、磁気ビーズまたは高電子密度（例えば、金）ビーズ）、ビオチン、ストレプトアビジンまたはプロテインＡである。放射性核種、蛍光物質、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤およびリガンド（例えば、ビオチン、ハプテン）などの様々な標識を使用することができるが、これらに限定されない。本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体は、標識されていなくてもよく、または検出可能な標識もしくは部分に連結されていてもよい。
【0096】
本明細書で使用される「パーセント同一性」または「パーセント相同性」および関連する用語は、２つのポリペプチド間または２つのポリヌクレオチド配列間の類似性の定量的測定値を指す。２つのポリペプチド配列間のパーセント同一性は、２つのポリペプチド配列のアラインメントを最適化するために導入することが必要であり得るギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリペプチド配列間で共有される整列された位置における同一のアミノ酸の数の関数である。同様に、２つのポリヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、２つのポリヌクレオチド配列のアラインメントを最適化するために導入することが必要であり得るギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、２つのポリヌクレオチド配列間で共有される整列された位置における同一のヌクレオチドの数の関数である。配列の比較および２つのポリペプチド配列間または２つのポリヌクレオチド配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。例えば、２つのポリペプチドまたは２つのポリヌクレオチド配列の「パーセント同一性」または「パーセント相同性」は、そのデフォルトパラメータを使用するＧＡＰコンピュータプログラム（ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン１０．３の一部（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．））を使用して配列を比較することによって決定され得る。試験配列に関して「Ｙに対して少なくともＸ％の同一性を有する配列を含む」などの表現は、上記のように配列Ｙに整列させた場合に、試験配列がＹの残基の少なくともＸ％と同一の残基を含むことを意味する。
【0097】
一実施形態では、試験抗体のアミノ酸配列は、本明細書に記載の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合タンパク質のいずれかを構成する軽鎖ポリペプチドおよび／または重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のいずれかと類似してはいるが同一ではない場合がある。試験抗体とポリペプチドとの間の類似性は、本明細書に記載の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合タンパク質のいずれかを構成する軽鎖ポリペプチドおよび／または重鎖ポリペプチドのいずれかと、少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。一実施形態においては、類似のポリペプチドは、重鎖および／または軽鎖内にアミノ酸置換を含有することができる。一実施形態において、アミノ酸置換は、１またはそれを超える保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されるアミノ酸置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。当業者は、抗体の物理的構造、結合能力または細胞死滅能力に悪影響を及ぼすことなく、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域に最大５％の保存的および／または非保存的アミノ酸置換を導入することができる。抗体結合特性を保持または改善するように設計された可変領域内の保存的アミノ酸置換を同定して行うための周知の方法は、Ｂｒｕｍｍｅｌら、１９９３ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１１８０－１１８７、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、１９９９ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １２（１０）：８７９－８８４、および、Ｂｕｒｋｓら、１９９７ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４１２－４１７に記載されている。抗原結合を保持または改善するように重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域における非保存的アミノ酸置換を同定して行うための方法も公知である（Ｎｅａｒら、１９９３ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０（４）：３６９－３７７）。したがって、当業者は、抗体の抗原結合能力を著しく低下させることなく、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域中のアミノ酸の最大５％を予測して変化させることができる。２つまたはそれを超えるアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合には、置換の保存的性質を補正するために、パーセント配列同一性または類似性の程度は上方に調整され得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニンおよびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄含有側鎖はシステインおよびメチオニンである、が挙げられる。
【0098】
抗体は、様々な抗原特異性を有する免疫グロブリンを含有する血清または血漿などの供給源から得ることができる。このような抗体が親和性精製に供される場合、このような抗体を特定の抗原特異性について濃縮することができる。このような濃縮された抗体の調製物は、通常、特定の抗原に対する特異的結合活性を有する約１０％未満の抗体から作られている。これらの調製物を数回の親和性精製に供することにより、抗原に対する特異的結合活性を有する抗体の割合を増加させることができる。このようにして調製された抗体は、しばしば「単一特異性」と呼ばれる。単一特異性抗体調製物は、特定の抗原に対して特異的結合活性を有する約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％または９９．９％の抗体から構成され得る。抗体は、以下に記載されるような組換え核酸技術を使用して作製され得る。
【0099】
本明細書で使用される「ベクター」および関連用語は、外来遺伝物質（例えば、核酸導入遺伝子）に機能的に連結することができる核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を指す。ベクターは、細胞（例えば、宿主細胞）中に外来遺伝物質を導入するための媒体として使用することができる。ベクターは、ベクター中への導入遺伝子の挿入のために少なくとも１つの制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含むことができる。ベクターは、ベクター－導入遺伝子構築物を保有する宿主細胞の選択を補助するために、抗生物質耐性または選択可能な特徴を付与する少なくとも１つの遺伝子配列を含むことができる。ベクターは、一本鎖または二本鎖核酸分子であり得る。ベクターは、直鎖または環状核酸分子であり得る。ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓを使用する遺伝子編集方法に使用されるドナー核酸は、ベクターの一種であり得る。ベクターの１つのタイプは、「プラスミド」であり、これは、導入遺伝子に連結することができ、宿主細胞において複製し、導入遺伝子を転写および／または翻訳することができる直鎖または環状の二本鎖の染色体外ＤＮＡ分子を指す。ウイルスベクターは、典型的には、導入遺伝子に連結することができるウイルスＲＮＡまたはＤＮＡ骨格配列を含有する。ウイルス骨格配列は、感染を無効化するが、宿主細胞ゲノム中へのウイルス骨格および共に連結された導入遺伝子の挿入を保持するように改変することができる。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴、バキュロウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタインバーウイルスベクターが挙げられる。ある種のベクターは、その中にベクターが導入されている宿主細胞中において自律的な複製をすることが可能である（例えば、細菌の複製起点を含む細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中に導入されると、宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。
【0100】
「発現ベクター」は、誘導性および／または構成的プロモーターおよびエンハンサーなどの１またはそれを超える制御配列を含有することができるベクターの一種である。発現ベクターは、リボソーム結合部位および／またはポリアデニル化部位を含むことができる。制御配列は、宿主細胞中に形質導入された発現ベクターに連結された導入遺伝子の転写または転写および翻訳を指示する。制御配列（複数可）は、導入遺伝子の発現のレベル、タイミングおよび／または場所を調節することができる。制御配列は、例えば、導入遺伝子に対して直接的に、または１もしくはそれを超える他の分子（例えば、制御配列および／または核酸に結合するポリペプチド）の作用を通じてその効果を発揮することができる。制御配列は、ベクターの一部であり得る。制御配列のさらなる例は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．およびＢａｒｏｎら、１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：３６０５－３６０６に記載されている。発現ベクターは、本明細書に記載の軽鎖、重鎖または抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの少なくとも一部をコードする核酸を含むことができる。
【0101】
本明細書では、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）について説明する。一実施形態では、ベクターは、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする核酸に作動可能に連結される。一実施形態では、核酸は、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする。
【0102】
ベクター中に含有される導入遺伝子配列の機能または発現を許容する連鎖が導入遺伝子とベクターとの間に存在する場合に、導入遺伝子はベクターに「機能的に連結」されている。一実施形態において、制御配列が導入遺伝子の発現（例えば、発現のレベル、タイミングまたは場所）に影響を与える場合に、導入遺伝子は制御配列に「機能的に連結」されている。
【0103】
本明細書において使用される用語「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」またはその他の関連する用語は、宿主細胞中に外来性核酸（例えば、導入遺伝子）を転移または導入する方法を表す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」宿主細胞は、外因性核酸（導入遺伝子）でトランスフェクトされた、形質転換されたまたは形質導入された宿主細胞である。宿主細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。本明細書に記載の軽鎖、重鎖または抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの少なくとも一部をコードする外因性核酸を宿主細胞に導入することができる。本明細書に記載の軽鎖、重鎖または抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの少なくとも一部を含む発現ベクターを宿主細胞に導入することができ、宿主細胞は、軽鎖、重鎖または抗ＬＡＧ３抗体のうちの少なくとも一部を含むポリペプチドを発現することができる。
【0104】
本明細書に使用されている用語「宿主細胞」または「宿主細胞の集団」または関連する用語は、外来（外来性または導入遺伝子）核酸がその中に導入されている細胞（または細胞の集団）を表す。外来核酸は、導入遺伝子に作動可能に連結された発現ベクターを含むことができ、宿主細胞は、外来核酸（導入遺伝子）によってコードされる核酸および／またはポリペプチドを発現するために使用することができる。宿主細胞（またはその集団）は培養された細胞であり得、または被験体から抽出され得る。宿主細胞（またはその集団）としては、初代対象細胞および継代の数に全く関係ないその子孫が挙げられる。子孫細胞は、親細胞と比べて同一の遺伝物質を保有してもよく、または保有しなくてもよい。宿主細胞は、子孫細胞を包含する。一実施形態では、宿主細胞は、本明細書に開示されているように、抗体を発現するためにいずれかの方法で改変され、トランスフェクトされ、形質導入され、形質転換され、かつ／または操作されている任意の細胞（その子孫を含む）を表す。一例において、宿主細胞（またはその集団）は、本明細書に記載されている所望の抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸に機能的に連結された発現ベクターを導入することができる。宿主細胞およびその集団は、宿主のゲノムに安定に組み込まれた発現ベクターを宿すことができ、または染色体外発現ベクターを宿すことができる。一実施形態において、宿主細胞およびその集団は、いくつかの細胞分裂後に存在するまたは一過性に存在し、いくつかの細胞分裂後に失われる染色体外ベクターを保有することができる。
【0105】
トランスジェニック宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮＳまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓなどの周知のデザイナーヌクレアーゼなどの非ウイルス法を用いて調製することができる。導入遺伝子は、ジンクフィンガーヌクレアーゼなどのゲノム編集技術を用いて、宿主細胞のゲノム中に導入することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼは一対のキメラタンパク質を含み、それぞれが、操作されたジンクフィンガーモチーフ由来のＤＮＡ結合ドメインに融合された制限エンドヌクレアーゼ（例えば、ＦｏｋＩ）の非特異的エンドヌクレアーゼドメインを含有する。ＤＮＡ結合ドメインは、宿主ゲノム中の特異的な配列を結合するように操作することができ、エンドヌクレアーゼドメインは、二本鎖切断を作る。ドナーＤＮＡは、導入遺伝子、例えば、本明細書に記載されているＣＡＲまたはＤＡＲ構築物をコードする核酸のいずれかと、宿主細胞のゲノム中の意図された挿入部位のいずれかの側にある領域に対して相同である隣接配列とを保有する。宿主細胞のＤＮＡ修復機構は、相同的ＤＮＡ修復による導入遺伝子の正確な挿入を可能とする。トランスジェニック哺乳動物宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼを用いて調製されてきた（米国特許第９，５９７，３５７号、同第９，６１６，０９０号、同第９，８１６，０７４号および同第８，９４５，８６８号）。トランスジェニック宿主細胞は、正確な導入遺伝子挿入を与えることができるＤＮＡ結合ドメインに融合された非特異的エンドヌクレアーゼドメインを含む点でジンクフィンガーヌクレアーゼと類似するＴＡＬＥＮ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖａｔｏｒ－Ｌｉｋｅ Ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅｓ（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ））を用いて調製することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼと同様、ＴＡＬＥＮは宿主のＤＮＡ中に二本鎖切断も導入する。トランスジェニック宿主細胞は、ＣＲＩＳＰＲ（Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔｓ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート））を用いて調製することができる。ＣＲＩＳＰＲは、標的特異的なドナーＤＮＡ組み込みのためのガイドＲＮＡに連結されたＣａｓエンドヌクレアーゼを利用する。ガイドＲＮＡは、標的ＤＮＡ中のｇＲＮＡ結合領域の上流にあるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列を含有する保存されたマルチヌクレオチドを含み、Ｃａｓエンドヌクレアーゼが二本鎖標的ＤＮＡを切断する場所である宿主細胞標的部位にハイブリッドを形成する。ガイドＲＮＡは、特異的な標的部位にハイブリッドを形成するように設計することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼおよびＴＡＬＥＮと同様に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、挿入部位に対して相同性を有する隣接配列を有するドナーＤＮＡの部位特異的挿入を導入するために使用することができる。ゲノムを改変するために使用されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の例は、例えば、米国特許第８，６９７，３５９号、同第１０，０００，７７２号、同第９，７９０，４９０号および米国特許出願公開第２０１８／０３４６９２７号中に記載されている。一実施形態では、トランスジェニック宿主細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を用いて調製することができ、宿主標的部位はＴＲＡＣ遺伝子（Ｔ細胞受容体アルファ定常部）であり得る。ドナーＤＮＡは、例えば、本明細書に記載のＣＡＲまたはＤＡＲ構築物をコードする核酸のいずれかを含み得る。エレクトロポレーション、ヌクレオフェクションまたはリポフェクションを使用して、ドナーＤＮＡを宿主細胞にジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系と共送達することができる。
【0106】
宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌であり得、または真核生物、例えば、単細胞真核生物（例えば、酵母またはその他の真菌）、植物細胞（例えば、タバコまたはトマト植物細胞）、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞、サル細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、マウス細胞または昆虫細胞）またはハイブリドーマであり得る。一実施形態では、宿主細胞に、所望の抗体をコードする核酸に作動可能に連結された発現ベクターを導入し、それにより、トランスフェクト／形質転換された宿主細胞による抗体の発現に適した条件下で培養されるトランスフェクト／形質転換された宿主細胞を生成し、必要に応じて、トランスフェクト／形質転換された宿主細胞から抗体を回収する（例えば、宿主細胞溶解物からの回収）か、または培養培地から回収することができる。一実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、ＳＰ２／０およびＹＢ２／０を含む非ヒト細胞を含む。一実施形態において、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＴ－１０８０、Ｈｕｈ－７およびＰＥＲ．Ｃ６などのヒト細胞を含む。宿主細胞の例としては、サル腎臓細胞のＣＯＳ－７株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎら、１９８１，Ｃｅｌｌ ２３：１７５参照）、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １６３）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはその派生物、例えば、Ｖｅｇｇｉｅ ＣＨＯおよび無血清培地中で成長する関連細胞系（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら、１９９８、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２８：３１参照）またはＤＨＦＲを欠損するＣＨＯ株ＤＸ－Ｂ １１（Ｕｒｌａｕｂら、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－２０参照）、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０）細胞系、アフリカミドリザル腎臓細胞系ＣＶ１由来のＣＶ１／ＥＢＮＡ細胞系（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）（ＭｃＭａｈａｎら、１９９１，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：２８２１参照）、ヒト胎児由来腎臓細胞、例えば、２９３、２９３ ＥＢＮＡもしくはＭＳＲ２９３、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ ２０５細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常な二倍体細胞、初代組織のインビトロ培養に由来する細胞株、初代外植片、ＨＬ－６０、Ｕ９３７、ＨａＫまたはジャーカット細胞が挙げられる。一実施形態において、宿主細胞は、Ｙ０、ＮＳ０またはＳｐ２０などのリンパ球系細胞を含む。一実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物の宿主細胞であるが、ヒト宿主細胞ではない。典型的には、宿主細胞は、次いで、宿主細胞中で発現することができるポリペプチドをコードする核酸で形質転換されまたは形質移入されることができる培養された細胞である。「トランスジェニック宿主細胞」または「組換え宿主細胞」という用語は、発現されるべき核酸を形質転換されたまたは形質移入された宿主細胞を表すために使用することができる。宿主細胞は、上記核酸を含むが、上記核酸と機能的に連結するようになるように制御配列が宿主細胞中に導入されなければ、所望のレベルでその核酸を発現しない細胞でもあり得る。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞のみならず、このような細胞の子孫または潜在的な子孫も表すことが理解される。例えば、変異または環境的な影響のために、後続の世代にある種の改変が起こり得るので、このような子孫は、実際には、親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書に使用されている用語の範囲内になお含まれる。
【0107】
本明細書では、抗体軽鎖、抗体重鎖、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）を宿す宿主細胞または宿主細胞の集団について説明する。一実施形態では、宿主細胞は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする核酸を作動可能に連結したベクターを宿す。一実施形態では、核酸は、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする。
【0108】
本開示のポリペプチド（例えば、抗体および抗原結合タンパク質）は、本分野において公知の任意の方法を用いて作製することができる。１つの例において、ポリペプチドは、宿主細胞中に導入され、発現を促進する条件下で宿主細胞によって発現される組換え発現ベクター中に、ポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、ＤＮＡ）を挿入することによって、組換え核酸法によって作製される。
【0109】
組換え核酸操作のための一般的な技術は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｖｏｌｓ．１－３，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ ｅｄ．，１９８９中に、またはＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）および定期的な改訂版中に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ポリペプチドをコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）は、哺乳動物、ウイルスまたは昆虫遺伝子に由来する１またはそれを超える適切な転写制御エレメントまたは翻訳制御エレメントを担持する発現ベクターに機能的に連結される。このような制御エレメントとしては、転写プロモーター、転写を調節するための必要に応じて存在するオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列ならびに転写および翻訳の終結を調節する配列が挙げられる。発現ベクターとしては、宿主細胞中に複製能を付与する複製開始点（ｏｒｉｇｉｎ ｏｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を含むことができる。発現ベクターは、トランスジェニック宿主細胞の認識を容易にするための選択を付与する遺伝子を含むことができる（例えば、形質転換体）。
【0110】
組換えＤＮＡは、タンパク質を精製するために有用であり得るタンパク質タグ配列の任意の種類をコードすることもできる。タンパク質タグの例としては、ヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグまたはＧＳＴタグを挙げることができるが、これらに限定されない。細菌、真菌、酵母および哺乳動物細胞宿主とともに使用するための適切なクローニングおよび発現ベクターは、Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８５）に見出すことができる。
【0111】
発現ベクター構築物は、宿主細胞に適した方法を用いて宿主細胞中に導入することができる。宿主細胞中に核酸を導入するための様々な方法は本分野において公知であり、電気穿孔；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストランまたはその他の物質を利用する形質移入；ウイルス形質移入；非ウイルス形質移入；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが感染性因子である場合）を含むが、これらに限定されない。適切な宿主細胞としては、原核生物、酵母、哺乳動物細胞または細菌細胞が挙げられる。
【0112】
適切な細菌としては、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはバチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）が挙げられる。酵母、例えば、エス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などのサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種の酵母なども、ポリペプチドの作製のために使用され得る。組換えタンパク質を発現するために、様々な哺乳動物または昆虫細胞培養系も利用することができる。昆虫細胞中で異種タンパク質を産生するためのバキュロウイルス系はＬｕｃｋｏｗ ａｎｄ Ｓｕｍｍｅｒｓ，（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：４７，１９８８）によって概説されている。適切な哺乳動物宿主細胞系の例としては、内皮細胞、ＣＯＳ－７サル腎臓細胞、ＣＶ－１、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ヒト胎児由来腎臓細胞、ＨｅＬａ、２９３、２９３ＴおよびＢＨＫ細胞系が挙げられる。精製されたポリペプチドは、組換えタンパク質を発現するために適切な宿主／ベクター系を培養することによって調製される。多くの用途のために、本明細書中に開示される多くのポリペプチドの小さいサイズは、発現のための好ましい方法として大腸菌において発現を行うであろう。次いで、タンパク質を培養培地または細胞抽出物から精製する。軽鎖、重鎖もしくは抗ＬＡＧ３抗体、またはその抗原結合タンパク質のいずれも、トランスジェニック宿主細胞によって発現され得る。
【0113】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合タンパク質は、細胞－翻訳系を用いて作製することもできる。このような目的のために、ポリペプチドをコードする核酸は、ｍＲＮＡを産生するためにインビトロでの転写を可能にするように、および特定の無細胞系中でのｍＲＮＡの無細胞翻訳が使用できるように（哺乳動物または酵母無細胞翻訳系などの真核生物のまたは細菌の無細胞翻訳系などの原核生物の）修飾されなければならない。
【0114】
本明細書に開示されている様々なポリペプチドのいずれかをコードする核酸は、化学的に合成され得る。細胞中での発現を改善するために、コドン使用頻度を選択し得る。このようなコドン使用頻度は、選択された細胞の種類に依存する。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびその他の細菌ならびに哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞および昆虫細胞に対して、特殊化されたコドン使用頻度パターンが開発されてきた。例えば、Ｍａｙｆｉｅｌｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００３ １００（２）：４３８－４２；Ｓｉｎｃｌａｉｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．２００２（１）：９６－１０５；Ｃｏｎｎｅｌｌ Ｎ Ｄ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１ １２（５）：４４６－９；Ｍａｋｒｉｄｅｓら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１９９６ ６０（３）：５１２－３８；およびＳｈａｒｐら、Ｙｅａｓｔ．１９９１ ７（７）：６５７－７８を参照されたい。
【0115】
本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、化学合成によって（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８４，Ｔｈｅ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．に記載されている方法によって）も作製することができる。タンパク質への修飾も、化学合成によって作製することができる。
【0116】
本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、タンパク質化学の分野において一般的に知られている、タンパク質に対する単離／精製法によって精製することができる。非限定的な例としては、抽出、再結晶、塩析（例えば、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムを用いた）、遠心分離、透析、限外ろ過、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲルろ過、ゲル浸透クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、電気泳動、向流分配またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。精製後に、ポリペプチドは、ろ過および透析を含むがこれらに限定されない本分野で公知の様々な方法のいずれかによって、異なる緩衝液中に交換されおよび／または濃縮され得る。
【0117】
本明細書に記載の精製抗体および抗原結合タンパク質は、好ましくは少なくとも６５％純粋、少なくとも７５％純粋、少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、最も好ましくは少なくとも９８％純粋である。純度の正確な数値にかかわらず、本ポリペプチドは医薬品として使用するのに十分に純粋である。本明細書に記載される軽鎖、重鎖もしくは抗ＬＡＧ３抗体、またはその抗原結合タンパク質のいずれも、トランスジェニック宿主細胞によって発現させ、次いで任意の当技術分野で公知の方法を使用して純度約６５～９８％または高レベルの純度まで精製することができる。
【0118】
ある実施形態において、本明細書の抗体および抗原結合タンパク質は、翻訳後修飾をさらに含むことができる。例示的な翻訳後タンパク質修飾としては、リン酸化、アセチル化、メチル化、ＡＤＰリボシル化、ユビキチン化、グリコシル化、カルボニル化、ＳＵＭＯ化、ビオチン化またはポリペプチド側鎖もしくは疎水性基の付加が挙げられる。その結果、修飾されたポリペプチドは、脂質、多糖または単糖およびホスフェートなどの非アミノ酸要素を含有し得る。グリコシル化の好ましい形態は、１またはそれを超えるシアル酸部分をポリペプチドにコンジュゲートするシアル化である。シアル酸部分は、タンパク質の免疫原性の可能性も低減しながら、溶解度および血清半減期を改善する。Ｒａｊｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１ ３１；４０（３０）：８８６８－７６を参照されたい。
【0119】
一実施形態において、本明細書に記載されている抗体および抗原結合タンパク質は、可溶性ポリペプチドとなるように修飾することができ、これは、抗体および抗原結合タンパク質を非タンパク質性ポリマーに連結することを含む。一実施形態において、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号または同第４，１７９，３３７号に記載されている様式で、非タンパク質性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンを含む。
【0120】
ＰＥＧは、市販されている水溶性ポリマーであり、または当技術分野で周知の方法（Ｓａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｋａｒｏ，Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｖｏｌ．３，ｐａｇｅｓ １３８－１６１）に従ってエチレングリコールの開環重合によって調製することができる水溶性ポリマーである。「ＰＥＧ」という用語は、サイズまたはＰＥＧの末端の修飾に関係なく、任意のポリエチレングリコール分子を包含するように大まかに使用され、式：Ｘ－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（１）（式中、ｎは２０から２３００であり、ＸはＨまたは末端修飾、例えば、Ｃ１～４アルキルである）によって表すことができる。一実施形態では、ＰＥＧは一端がヒドロキシまたはメトキシで終端しており、つまり、ＸはＨまたはＣＨ３（「メトキシＰＥＧ」）である。ＰＥＧは、結合反応に必要なさらなる化学基を含むことができ、これは、分子の化学合成から生じ、または分子の部分の最適な距離のためのスペーサーである。さらに、そのようなＰＥＧは、互いに連結された１またはそれを超えるＰＥＧ側鎖からなっていてもよい。２つ以上のＰＥＧ鎖を有するＰＥＧは、多腕または分枝ＰＥＧと呼ばれる。分岐ＰＥＧは、例えば、グリセロール、ペンタエリスリオールおよびソルビトールなどの様々なポリオールにポリエチレンオキシドを添加することによって調製することができる。例えば、四腕分岐ＰＥＧは、ペンタエリスリオールおよびエチレンオキシドから調製することができる。分岐ＰＥＧは、例えば、欧州特許出願公開第０４７３０８４号および米国特許出願公開第５，９３２，４６２号に記載されている。ＰＥＧの１つの形態は、リジンの第一級アミノ基を介して連結された２つのＰＥＧ側鎖（ＰＥＧ２）を含む（Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６（１９９５）６２－６９）。
【0121】
ＰＥＧ修飾ポリペプチドの血清クリアランス率は、未修飾抗体および抗原結合タンパク質結合ポリペプチドのクリアランス率に対して約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、またはさらには９０％に調節（例えば、増加または減少）され得る。ＰＥＧ修飾抗体および抗原結合タンパク質は、未修飾ポリペプチドの半減期と比較して増強された半減期（ｔ１／２）を有し得る。ＰＥＧ修飾ポリペプチドの半減期は、未修飾抗体および抗原結合タンパク質の半減期と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％もしくは５００％、またはさらには１０００％延長され得る。いくつかの実施形態では、タンパク質の半減期は、緩衝生理食塩水または血清などのインビトロで測定される。他の実施形態では、タンパク質の半減期は、インビボ半減期、例えば、動物の血清または他の体液中のタンパク質の半減期である。
【0122】
本開示は、本明細書に記載の軽鎖、重鎖もしくは抗ＬＡＧ３抗体、またはその抗原結合タンパク質のうちのいずれかと、薬学的に許容され得る賦形剤とを含む治療用組成物を提供する。賦形剤は、担体、安定剤および賦形剤を包含する。薬学的に許容され得る賦形剤の賦形剤には、例えば、不活性希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、潤滑剤、流動促進剤および抗接着剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油、またはタルク）が含まれる。さらなる例としては、緩衝剤、安定化剤、保存剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤および等張化剤が挙げられる。
【0123】
治療用組成物および治療用組成物を調製する方法は本分野において周知であり、例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”（２０ｔｈ ｅｄ．，ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ Ａ Ｒ．，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ）に見出される。治療用組成物は、非経口投与用に製剤化することができ、例えば、賦形剤、無菌水、生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物起源の油または水素化ナフタレンを含有してもよく、含有することができる。本明細書に記載されている抗体（またはその抗原結合タンパク質）の放出を調節するために、生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマーが使用され得る。抗体（またはその抗原結合タンパク質）の生体内分布を調節するために、ナノ粒子製剤（例えば、生分解性ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、リポソーム）が使用され得る。他の潜在的に有用な非経口送達系としては、エチレン－酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み可能な注入系およびリポソームが挙げられる。製剤中の抗体（またはその抗原結合タンパク質）の濃度は、投与されるべき薬物の投薬量および投与の経路を含む多数の要因に応じて様々である。
【0124】
抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合部分）のいずれもが、薬学産業において一般的に使用される無毒な酸付加塩または金属錯体などの薬学的に許容され得る塩として投与され得る。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸またはトリフルオロ酢酸などの有機酸、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸、および塩酸、臭化水素酸、硫酸 リン酸などの無機酸が挙げられる。金属錯体としては、亜鉛、鉄などが挙げられる。１つの例において、抗体（またはその抗原結合部分）は、熱的安定性を増加するために酢酸ナトリウムの存在下で製剤化される。
【0125】
任意の抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合部分）は、非毒性の薬学的に許容され得る賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤など、経口使用のために製剤化することができる。経口使用のための製剤はまた、チュアブル錠剤として、または活性成分が不活性固体希釈剤と混合される硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水もしくは油性媒体と混合される軟ゼラチンカプセルとして提供され得る。
【0126】
本明細書で使用される「被験体」という用語は、脊椎動物、哺乳動物および非哺乳動物を含むヒトおよび非ヒト動物を指す。一実施形態において、被験体は、ヒト、非ヒト霊長類、サル、類人猿、マウス（例えば、マウスおよびラット）、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ヤギ、オオカミ、カエルまたは魚であり得る。
【0127】
用語「投与する」、「投与される」および文法的変形は、当業者に公知の様々な方法および送達系のいずれかを使用した、被験体への作用物質の物理的導入を指す。本明細書中に開示される製剤のための例示的な投与経路としては、例えば注射または注入による静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄または他の非経口投与経路が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」という語句は、通常は注射による、経腸および局所投与以外の投与の様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射および注入ならびにインビボ電気泳動が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、製剤は、非経口経路を介して、例えば経口的に投与される。他の非経口経路としては、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、膣内、直腸、舌下または局所が挙げられる。投与は、例えば、１回、複数回、および／または１もしくはそれを超える長期の期間にわたって行うこともできる。本明細書に記載される抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合タンパク質）のいずれもが、当技術分野で公知の方法および送達経路を使用して被験体に投与することができる。
【0128】
「有効量」、「治療有効量」もしくは「有効用量」という用語または関連する用語は互換的に使用され得、対象に投与された場合、腫瘍または癌抗原発現に関連する疾患または障害の測定可能な改善または予防をもたらすのに十分な抗体または抗原結合タンパク質（例えば、本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合タンパク質）の量を指す。本明細書で提供される抗体の治療有効量は、単独でまたは組み合わせて使用される場合、抗体および組み合わせの（例えば、細胞増殖を阻害することにおける）相対活性に応じて、ならびに処置される対象および疾患症状、対象の体重および年齢および性別、対象の疾患症状の重症度、投与様式などに応じて異なり、当業者はこれを容易に決定することができる。
【0129】
一実施形態では、治療有効量は、処置される対象および処置される障害の特定の態様に依存し、公知の技術を使用して当業者によって特定され得る。一般に、ポリペプチドは、約０．０１ｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇから約３０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ／日で投与される。ポリペプチドは、毎日（例えば、１日１回、２回、３回、または４回）または好ましくはより低い頻度（例えば、毎週、２週間ごと、３週間ごと、毎月、または四半期ごと）で投与され得る。さらに、当技術分野で知られているように、年齢ならびに体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、および疾患の重症度に関して調整が必要になり得る。
【0130】
本開示は、ＬＡＧ３の発現に関連する疾患を有する対象を処置するための方法を提供する。疾患は、腫瘍関連抗原を発現する癌または腫瘍細胞を含む。一実施形態では、癌または腫瘍は、前立腺、乳房、卵巣、頭頸部、膀胱、皮膚、結腸直腸、肛門、直腸、膵臓、肺（非小細胞肺癌および小細胞肺癌を含む）、平滑筋腫、脳、神経膠腫、神経膠芽腫、食道、肝臓、腎臓、胃、結腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、外陰、喉頭、膣、骨、鼻腔、副鼻腔、上咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺、尿管、尿道、陰茎および精巣の癌を含む。
【0131】
一実施形態において、癌は、白血病、リンパ腫、骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫を含む血液癌を含む。血液癌には、多発性骨髄腫（ＭＭ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、形質細胞性骨髄腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫、形質細胞腫、巨細胞性骨髄腫、形質細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、軽鎖またはベンスジョーンズ骨髄腫、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節性障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、および急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性または免疫細胞関連アミロイドーシス、および意義不明の単クローン性γグロブリン血症が含まれる。
【0132】
本開示は、ＬＡＧ３に特異的に結合する操作されたＬＡＧ３結合タンパク質、特に抗ＬＡＧ３抗体、またはその抗原結合部分、およびその使用を提供する。抗ＬＡＧ３抗体は、改善された特徴を示し、改善された特徴には、ＬＡＧ３抗原への改善された結合、ＬＡＧ３発現細胞への改善された結合、および／またはより高いレベルのサイトカイン放出活性が含まれる。抗ＬＡＧ３抗体は、カニクイザルおよび／またはマウスＬＡＧ３抗原と交差反応（結合）することができる。
【0133】
本開示は、免疫チェックポイント阻害剤として作用することができ、癌などの障害を処置するための免疫療法に使用することができる完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体およびその断片を提供する。
【0134】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープ（例えば、標的抗原）またはＬＡＧ３ポリペプチドの断片に結合する抗原結合タンパク質、例えば、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体を提供する。一実施形態では、ＬＡＧ３標的抗原は、野生型または多型または変異型のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。一実施形態では、ＬＡＧ３標的抗原は、ヒトＬＡＧ３ポリペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ１８６２７、配列番号１）、カニクイザルＬＡＧ３ポリペプチド（ＮＣＢＩアクセッション番号ＸＰ００５５７００１１．１、配列番号２）もしくはマウスＬＡＧ３ポリペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ６１７９０、配列番号３）、または図１に示すこれらのＬＡＧ３ポリペプチドのいずれかの断片を含む。ＬＡＧ３標的抗原は、組換え法によって調製することができ、または化学的に合成することができる。ＬＡＧ３標的抗原は、可溶性形態または（例えば、細胞またはファージによって発現される）膜結合形態であり得る。一実施形態では、ＬＡＧ３標的抗原は、細胞表面ＬＡＧ３抗原の細胞外部分を含む。一実施形態では、ＬＡＧ３標的抗原は、細胞、例えば、ＬＡＧ３を天然に発現する癌もしくは非癌細胞株によって発現されるか、またはＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３、ＪｕｒｋａｔもしくはＰａｎｏｐｌｙ（商標）（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｇｅｎｅ製、シャーリー、ニューヨーク州）などのＬＡＧ３を発現するように操作された細胞株によって発現される。ＬＡＧ３を天然に発現しない細胞株は、抗ＬＡＧ３抗体に結合しないと予想される。ＬＡＧ３標的抗原は、融合タンパク質であり得、または例えばフルオロフォアなどの検出可能な部分とコンジュゲートされ得る。ＬＡＧ３標的抗原は、ヒスチジンタグなどの親和性タグの有無にかかわらず、組換えポリペプチドであり得る。ＬＡＧ３標的抗原は、ヒト、マウスまたはカニクイザル由来のビオチン化ＬＡＧ３タンパク質（例えば、カタログ番号ＬＡ３－Ｈ８２Ｆｂ、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのビオチン化ヒトＬＡＧ３タンパク質）であり得る。
【0135】
一実施形態では、野生型および／または変異ヒトＬＡＧ３抗原を、本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体の結合能を比較するアッセイおよび／またはエピトープマッピングアッセイに使用することができる。
【0136】
本開示は、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体などの抗原結合タンパク質を提供し、この抗体は、ＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープ（標的抗原）に結合し、この抗体は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含み、抗ＬＡＧ３抗体は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。抗体１Ｃ５－３Ａ６、抗体２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄ、抗体５Ｃ８および抗体８Ｄ９の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図２に示す。
【0137】
本開示は、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体などの抗原結合タンパク質を提供し、この抗体はＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープ（標的抗原）に結合し、この抗体は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。
【0138】
本開示は、ＩｇＧクラスの完全ヒト抗体などの抗原結合タンパク質を提供し、この抗体はＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープ（標的抗原）に結合し、この抗体は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。
【0139】
一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は単離された抗体である。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は組換え抗体である。
【0140】
一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４クラスの抗体を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ４クラスの抗体を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体のヒンジ領域を変異させて、潜在的なジスルフィド結合形成の数を変化させることができる。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、アミノ酸配列ＣＰＰＣ、ＣＰＳＣ、ＳＰＰＣまたはＳＰＳＣを有するヒンジ領域を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ヒンジ領域を有する重鎖定常領域を含み、アミノ酸配列ＣＰＳＣ、ＳＰＰＣまたはＳＰＳＣは配列ＣＰＰＣを置き換える。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖を、異性化することが知られている１またはそれを超えるＮＧモチーフ（例えば、ＮＧＲモチーフの一部）を排除するように変異させることができる。一実施形態では、異性化部位はインテグリンに結合することができる。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＮＧＲモチーフに取って代わってＳＧＲモチーフを含む重鎖を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＳＧＲモチーフがＮＧＲモチーフに取って代わる重鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖および／または軽鎖を変異させることができ、変異抗体は、ＬＡＧ３抗原および／またはＬＡＧ３発現細胞に対して同一または同等の結合能力を示す。
【0141】
一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはその断片は、１０－６Ｍまたはそれ未満、１０－７Ｍまたはそれ未満、１０－８Ｍまたはそれ未満、１０－９Ｍまたはそれ未満、あるいは１０－１０Ｍまたはそれ未満の結合親和性（ＫＤ）でＬＡＧ３ポリペプチド（標的抗原）のエピトープに結合する抗原結合部分を含む（図４参照）。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはその断片間の結合は、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリーおよび／またはＥＬＩＳＡを使用して検出および測定することができる。
【0142】
本開示は、ヒト由来のＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープに結合し、マウス、ラット、ヤギ、ウサギ、ハムスターおよび／またはサル（例えば、カニクイザル）などの非ヒト動物のうちの少なくとも１つに由来するＬＡＧ３ポリペプチドのエピトープ（例えば、相同抗原）と結合（例えば、交差反応）することができる抗ＬＡＧ３抗体を提供する。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、１０－５Ｍもしくはそれ未満、または１０－６Ｍもしくはそれ未満、または１０－７Ｍもしくはそれ未満、または１０－８Ｍもしくはそれ未満、または１０－９Ｍもしくはそれ未満、または１０－１０Ｍもしくはそれ未満の結合親和性ＫＤでマウスＬＡＧ３に結合する。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、１０－５Ｍもしくはそれ未満、または１０－６Ｍもしくはそれ未満、または１０－７Ｍもしくはそれ未満、または１０－８Ｍもしくはそれ未満、または１０－９Ｍもしくはそれ未満、または１０－１０Ｍもしくはそれ未満の結合親和性ＫＤでカニクイザルＬＡＧ３に結合する。
【0143】
本開示は、ＬＡＧ３ポリペプチドに結合する完全ヒト抗体を提供し、この抗体は、重鎖と軽鎖の両方を含み、この重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。抗体１Ｃ５－３Ａ６、抗体２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄ、抗体５Ｃ８および抗体８Ｄ９の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図２に示す。
【0144】
本開示は、抗体重鎖由来の可変領域および抗体軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、重鎖由来の可変領域の配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であり、軽鎖由来の可変領域の配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。いくつかの実施形態では、重鎖由来の可変領域の配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であり、軽鎖由来の可変領域の配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。抗体１Ｃ５－３Ａ６、抗体２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄ、抗体５Ｃ８および抗体８Ｄ９の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を図２に示す。
【0145】
本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントを提供し、ここで重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかと、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。
【0146】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とをつなぐリンカー（例えば、ペプチドリンカー）とを含む一本鎖完全ヒト抗体を提供する。いくつかの実施形態では、可変重鎖領域は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、可変軽鎖領域は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、可変重鎖領域は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、可変軽鎖領域は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【0147】
本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するポリペプチド鎖を含む一本鎖完全ヒト抗体を提供し、ここで重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列セットが、以下のアミノ酸配列セット：配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のいずれかと少なくとも９５％同一または少なくとも９６％同一または少なくとも９７％同一または少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である。一実施形態では、一本鎖完全ヒト抗体は、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とをつなぐ任意のリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を含む。
【0148】
本開示は、本明細書に記載の任意の抗ＬＡＧ３抗体、またはその抗原結合タンパク質、および薬学的に許容され得る賦形剤を含む治療用組成物を提供する。賦形剤は、担体および安定剤を包含する。一実施形態では、治療用組成物は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片を含み、この重鎖／軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のいずれかと、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。
【0149】
本開示は、開示された完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体のいずれか１つ、またはその抗原結合フラグメントのいずれか、または本明細書に記載のＦａｂフラグメントもしくは一本鎖抗体のいずれかを含むキットを提供する。
【0150】
本開示は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域をコードする核酸を提供する。本開示は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域をコードする核酸を提供する。
【0151】
本開示は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域をコードする第１の核酸を提供する。本開示は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域をコードする第２の核酸を提供する。
【0152】
本開示は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域をコードする核酸を提供し、この核酸は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域をコードする。
【0153】
本開示は、重鎖および軽鎖の両方を含む抗体をコードする核酸を提供し、この重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【0154】
本開示は、重鎖由来の可変領域および軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする核酸を提供し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一であるか、または少なくとも９６％同一であるか、または少なくとも９７％同一であるか、または少なくとも９８％同一であるか、または少なくとも９９％同一である。本開示は、重鎖由来の可変領域および軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする核酸を提供し、ここで、軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一であるか、または少なくとも９６％同一であるか、または少なくとも９７％同一であるか、または少なくとも９８％同一であるか、または少なくとも９９％同一である。
【0155】
本開示は、重鎖由来の可変領域および軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸を提供し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０アミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一であるか、または少なくとも９６％同一であるか、または少なくとも９７％同一であるか、または少なくとも９８％同一であるか、または少なくとも９９％同一である。本開示は、重鎖由来の可変領域および軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第２の核酸を提供し、ここで、軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一であるか、または少なくとも９６％同一であるか、または少なくとも９７％同一であるか、または少なくとも９８％同一であるか、または少なくとも９９％同一である。
【0156】
本開示は、重鎖由来の可変領域および軽鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする核酸を提供し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であり、この核酸は、軽鎖由来の可変領域をコードし、この軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。
【0157】
本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする核酸を提供し、ここで重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかと、少なくとも９５％同一、または少なくとも９６％同一、または少なくとも９７％同一、または少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一である。
【0158】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とをつなぐリンカー（例えば、ペプチドリンカー）とを含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する可変重鎖領域をコードし、核酸は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する可変軽鎖領域をコードする。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含み、ここで、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。
【0159】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とをつなぐリンカー（例えば、ペプチドリンカー）とを含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、可変重鎖領域は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、可変軽鎖領域は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含み、ここで、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。
【0160】
本開示は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するポリペプチド鎖を含む一本鎖抗体である一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸を提供し、ここで重鎖／軽鎖可変領域アミノ酸配列セットは、以下のアミノ酸配列セット：配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のいずれかと少なくとも９５％同一または少なくとも９６％同一または少なくとも９７％同一または少なくとも９８％同一または少なくとも９９％同一である。一実施形態では、核酸は、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とをつなぐ任意のリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含み、ここで、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。
【0161】
本開示は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）、および配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を提供する。
【0162】
本開示は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を提供する。一実施形態では、第１のベクターはまた、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結されている。
【0163】
本開示は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。
【0164】
本開示は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を提供する。本開示はまた、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を提供する。
【0165】
本開示は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を提供する。一実施形態では、第１のベクターはまた、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結されている。
【0166】
本開示は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。
【0167】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを連結するリンカー（例えば、ペプチドリンカー）とを含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を提供し、ここで、可変重鎖領域は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、ここで、可変軽鎖領域は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含み、ここで、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。
【0168】
本開示は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖と、必要に応じて可変重鎖と可変軽鎖領域とを連結するリンカー（例えば、ペプチドリンカー）とを含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を提供し、ここで、可変重鎖領域は、以下のアミノ酸配列セット、すなわち、配列番号４および５（本明細書では１Ｃ５－３Ａ６と呼ぶ）、配列番号６および７（本明細書では２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄと呼ぶ）、配列番号８および９（本明細書では５Ｃ８と呼ぶ）、または配列番号１０および１１（本明細書では８Ｄ９と呼ぶ）のうちのいずれかに対して、少なくとも９５％の配列同一性、または少なくとも９６％の配列同一性、または少なくとも９７％の配列同一性、または少なくとも９８％の配列同一性、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含み、ここで、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。
【0169】
本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、ここで、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を宿し、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を宿す。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団において、第１の発現ベクターが重鎖可変領域の発現を指示し、第２の発現ベクターが軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0170】
本開示は、第１の宿主細胞、または宿主細胞の第１の集団であって、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を宿す、第１の宿主細胞または宿主細胞の第１の集団の個々の宿主細胞と、第２の宿主細胞または宿主細胞の第２の集団であって、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を保有する、第２の宿主細胞または宿主細胞の第２の集団の個々の宿主細胞と、を提供する。一実施形態では、第１の発現ベクターは、第１の宿主細胞における重鎖可変領域の発現を指示し、第２の発現ベクターは、第２の宿主細胞における軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0171】
本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、ここで、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域をコードする第１の核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）を宿し、宿主細胞中のベクターはまた、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結されている。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞における重鎖可変領域および軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0172】
本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、ここで、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、重鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を宿し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一である。一実施形態では、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞はまた、軽鎖由来の可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を宿し、ここで、軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一である。一実施形態では、宿主細胞において、第１の発現ベクターが重鎖可変領域の発現を指示し、第２の発現ベクターが軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0173】
本開示は、第１の宿主細胞または宿主細胞の第１の集団を提供し、ここで、第１の宿主細胞または宿主細胞の第１の集団由来の個々の宿主細胞は、重鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を宿し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一である。本開示はまた、第２の宿主細胞または宿主細胞の第２の集団を提供し、ここで、第２の宿主細胞または宿主細胞の第２の集団由来の個々の宿主細胞は、軽鎖由来の可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結された第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を宿し、ここで、軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１アミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一である。一実施形態では、第１の発現ベクターは、第１の宿主細胞における重鎖可変領域の発現を指示し、第２の発現ベクターは、第２の宿主細胞における軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0174】
本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、ここで、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、重鎖由来の可変領域を含むＦａｂ完全ヒト抗体フラグメントをコードする第１の核酸に作動可能に連結されたベクター（例えば、発現ベクター）を宿し、ここで、重鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一であり、宿主細胞中のベクターはまた、軽鎖可変領域をコードする第２の核酸に作動可能に連結され、ここで、軽鎖由来の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせと少なくとも９５％同一である。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞における重鎖可変領域および軽鎖可変領域の発現を指示する。
【0175】
本開示は、宿主細胞または宿主細胞の集団を提供し、ここで、宿主細胞または宿主細胞の集団由来の個々の宿主細胞は、完全ヒト重鎖由来の可変領域および完全ヒト軽鎖由来の可変領域を有するポリペプチド鎖、ならびに、必要に応じて可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを連結するリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を含む一本鎖完全ヒト抗体をコードする核酸に作動可能に連結された第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）を宿し、ここで、可変重鎖領域は、配列番号４、６、８もしくは１０のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ここで、可変軽鎖領域は、配列番号５、７、９もしくは１１のアミノ酸配列またはそれらの組み合わせに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。一実施形態では、第１のベクターは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）Ｎ（配列番号１２）を含むペプチドリンカーをコードする核酸配列を含み、Ｎは１～６である。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）を含む。一実施形態では、発現ベクターは、宿主細胞における一本鎖抗体の発現を指示する。
【0176】
本開示は、抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを調製するための方法であって、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを発現させるのに適した条件下で、第１の発現ベクターを宿す第１の宿主細胞の集団（例えば、複数）を培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、第１の宿主細胞の集団から、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第１のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0177】
本開示は、抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを調製するための方法であって、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを発現させるのに適した条件下で、第２の発現ベクターを宿す第２の宿主細胞の集団（例えば、複数）を培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、第２の宿主細胞の集団から、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第２のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0178】
本開示は、抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを調製するための方法、および抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを調製するための方法であって、（第１のポリペプチドをコードする第１の核酸に作動可能に連結されている）第１の発現ベクターおよび（第２のポリペプチドをコードする第２の核酸に作動可能に連結されている）第２の発現ベクターを宿す宿主細胞の集団（例えば、複数）を、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドの発現に適し、かつ配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドの発現に適した条件下で培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、宿主細胞の集団から、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第１のポリペプチドを回収すること、および宿主細胞の集団から、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第２のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0179】
本開示は、抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを調製するための方法であって、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを発現させるのに適した条件下で、第１の発現ベクターを宿す第１の宿主細胞の集団（例えば、複数）を培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、第１の宿主細胞の集団から、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第１のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0180】
本開示は、抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを調製するための方法であって、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを発現させるのに適した条件下で、第２の発現ベクターを宿す第２の宿主細胞の集団（例えば、複数）を培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、第２の宿主細胞の集団から、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第２のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0181】
本開示は、抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドを調製するための方法、および抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドを調製するための方法であって、（第１のポリペプチドをコードする第１の核酸に作動可能に連結され、第２のポリペプチドをコードする第２の核酸に作動可能に連結されている）発現ベクターを宿す宿主細胞の集団（例えば、複数）を、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体重鎖可変領域を有する第１のポリペプチドの発現に適し、かつ配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する抗体軽鎖可変領域を有する第２のポリペプチドの発現に適した条件下で培養することを含む、方法を提供する。一実施形態では、本方法は、宿主細胞の集団から、配列番号４、６、８または１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第１のポリペプチドを回収すること、および宿主細胞の集団から、配列番号５、７、９または１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する発現された第２のポリペプチドを回収することをさらに含む。
【0182】
本開示は、ＬＡＧ３過剰発現またはＬＡＧ３偽発現に関連する疾患を有する対象を処置するための方法であって、有効量の、本明細書に記載の完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれか１つまたはそのうちの２～３からなる任意の組み合わせを含む治療用組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、疾患は、癌、腫瘍、自己免疫疾患、またはウイルスもしくは病原性ウイルスもしくは病原性細菌もしくは病原性真菌もしくは病原性寄生生物によって引き起こされる感染性疾患である。
【0183】
一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、サイトカイン処置（例えば、インターフェロン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）、または腫瘍抗原の提示を増強する二重特異性抗体療法（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８、Ｐｏｌｊａｋ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）などの他の形態の免疫療法と組み合わせることができる。
【0184】
一実施形態では、疾患は、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、ファロピウス管の癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性白血病または急性骨髄性白血病などの急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘導される癌、およびアスベストによって誘導される癌、からなる群から選択される癌である。
【0185】
一実施形態では、疾患は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、Ｂ慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳癌、卵巣癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋肉腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、および固形腫瘍からなる群から選択される癌または腫瘍であり、ここで、固形腫瘍は、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、および腎臓腫瘍からなる群から選択される。
【0186】
一実施形態では、疾患は、アルツハイマー病、アレルギー、喘息、セリアック病、クローン病、グレーブス病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、狼瘡、多発性硬化症、重症筋無力症、リウマチ性多発筋痛症、関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、または血管炎などの自己免疫疾患である。
【0187】
一実施形態では、疾患は、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、ＢおよびＣ）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟体動物ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス性脳炎ウイルスからなる群から選択される感染性疾患である。
【0188】
一実施形態では、疾患は、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、ＢまたはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩおよびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟体動物ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス性脳炎ウイルスなどの病原性ウイルスによって引き起こされる。
【0189】
一実施形態では、疾患は、病原性細菌、例えば、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭疽、ペスト、レプトスピラ症またはライム病細菌によって引き起こされる。
【0190】
一実施形態では、疾患は、Ｃａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓなど）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒなど）、Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、または、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍなどの病原性真菌によって引き起こされる。
【0191】
一実施形態では、疾患は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａｆｏｗｌｅｒｉ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ属の１種、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属の１種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、またはＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓなどの病原性寄生虫によって引き起こされる。
【実施例】
【0192】
以下の実施例は、例示であることが意図されており、本開示の実施形態をさらに理解するために使用することができ、いかなる形であれ本教示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【0193】
実施例１ ＥＬＩＳＡによる可溶性ＬＡＧ３タンパク質に対する用量依存的結合
【0194】
ノバルティス５２５抗体をクローニングし、自社作製した。抗ＬＡＧ３抗体（１Ｃ５－３Ａ６、２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄ、５Ｃ８および８Ｄ９）および競合抗体（ノバルティス５２５）を、１倍リン酸緩衝生理食塩水（１倍ＰＢＳ）中５μｇ／ｍＬ（２０μＬ／ウェル）で、４℃で一晩、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）プレートにコーティングした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を補充した１倍ＰＢＳ）で３回洗浄した。その後、プレートを室温（ＲＴ）で１時間、ＰＢＳ中の１００μＬ／ウェルのブロッカーカゼイン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３７５２８）でブロッキングした。２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、精製ヒトＬＡＧ３ Ｈｉｓタグタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１６４９８－Ｈ０８Ｈ）をウェルに連続希釈し（最高濃度１０μｇ／ｍＬ、希釈率１：３）、室温で１時間インキュベートした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄し、５０μＬ／ウェルのＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）ＴＭＢ－１成分マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＳｅｒａＣａｒｅ、カタログ番号５１２０－００７５）を塗布することによって結合を明らかにした。２５μＬ／ウェルの０．１６Ｍ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）停止溶液を使用してシグナルを停止し、プレートリーダーで４５０ｎＭで読み取った。この結果を図３に示す。
【0195】
実施例２ 表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用した結合親和性の測定
【0196】
抗ＬＡＧ３抗体（１Ｃ５－３Ａ６、２Ｄ１２－２Ｅ３－Ｎ１０２Ｄ、５Ｃ８および８Ｄ９）および競合剤抗体（ノバルティス５２５）の結合速度論を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定した。抗ヒトフラグメント結晶化可能領域（Ｆｃ領域）抗体を、標準的なＮ－ヒドロキシスクシンイミド／Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＮＨＳ／ＥＤＣ）カップリング方法を使用して約８，０００ＲＵに至るまでＣＭ５センサーチップに固定化した。抗体（２μｇ／ｍＬ）を流速１０μＬ／分で６０秒間捕捉した。組換えヒトＬＡＧ３－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１６４９８－Ｈ０８Ｈ）を、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）からなるランニングバッファーで段階希釈した。全ての測定を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中、流速３０μＬ／分で行った。１：１（ラングミュア）結合モデルを使用してデータをフィッティングした。全てのＢＩＡＣＯＲＥアッセイを室温で行った。この結果を図４に示す。測定されたＫＤを以下の表１に列挙する。
【0197】
【表1】
【0198】
実施例３ カニクイザルおよびマウスのＬＡＧ３抗原との交差反応性
【0199】
ヒト、マウスまたはカニクイザルのＬＡＧ３－Ｈｉｓ Ｔａｇ組換えタンパク質を、５０μＬ／ウェルの１倍リン酸緩衝生理食塩水（１倍ＰＢＳ）中、２μｇ／ｍＬで、Ｎｉ－ＮＴＡ ＥＬＩＳＡプレート（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号３５０６１）に、４℃で一晩コーティングした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を補充した１倍ＰＢＳ）で３回洗浄した。その後、プレートを室温で１時間、ＰＢＳ中の１００μＬ／ウェルのブロッカーカゼイン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３７５２８）でブロッキングした。２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、精製抗体をＰＢＳ－Ｔ中２μｇ／ｍＬ（５０μＬ／ウェル）で室温で１．５時間インキュベートした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート化ヤギ抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｓｅｒａ Ｃａｒｅ、カタログ番号５２２０－０２７９）を５０μＬ／ウェルで１：５，０００に希釈して室温で１時間インキュベートした。続いて、プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄し、５０μＬ／ウェルのＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）ＴＭＢ－１成分マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＳｅｒａＣａｒｅ、カタログ番号５１２０－００７５）を塗布することによって結合を明らかにした。２５μＬ／ウェルの０．１６Ｍ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）停止溶液を使用してシグナルを停止し、プレートリーダーで４５０ｎＭで読み取った。この結果を図５に示す。
【0200】
実施例４ ＬＡＧ３発現細胞への結合
【0201】
ヒトＬＡＧ３／ＮＦＡＴ－ＬｕｃレポーターＪｕｒｋａｔ細胞株（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号７１２７８）を、１ｍｇ／ｍＬのＧ４１８および２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢを補充した完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中で培養した。野生型（ＷＴ）Ｊｕｒｋａｔ細胞を完全ＲＰＭＩ中で培養した。
【0202】
細胞をＶ底９６ウェルプレートに８０，０００細胞／ウェルで播種し、１７０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ１Ｘ＋２％ＦＣＳ／ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム）を用いて２回洗浄した。抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照抗体を様々な濃度（１０から０．００３μｇ／ｍＬの範囲、希釈率１：５）でＦＡＣＳ緩衝液に希釈し、１００μＬ／ウェルのヒトＬＡＧ３細胞またはＷＴ Ｊｕｒｋａｔ細胞のいずれかと４℃で２０分間インキュベートした。１７０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を１００μＬ／ウェルのＡＦ６４７コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４０－３１、ロットＫ４７１Ｘ８７３Ｃ、ＦＡＣＳ緩衝液中での希釈１：２，０００）と共に４℃で２０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、１４０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴでフローサイトメトリーによって取得した。ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０を使用してデータを分析した。ΔＭＦＩを［（ＬＡＧ３発現Ｊｕｒｋａｔの幾何平均）－（ＷＴ Ｊｕｒｋａｔの幾何平均）］として算出した。この結果を図６に示す。
【0203】
実施例５ ＳＥＢ活性化カニクイザルＰＢＭＣへの特異的結合
【0204】
ＳＥＢ活性化 新鮮なカニクイザル末梢血単核細胞（カニクイザルＰＢＭＣ）を単離し、２００Ｕ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９７－７４８）を含有し、Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．製の３００ｎｇ／ｍＬのブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（カタログ番号１２２、ロット１２２４１７１）を含む、または含まない、２００μＬの完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中のＵ底プレートに、２．０Ｅ＋０５細胞／ウェルで播種した。カニクイザルＰＢＭＣを３７℃、５％ＣＯ２の組織培養インキュベーター中で４日間培養した。
【0205】
結合アッセイ ４日目に、ナイーブおよび活性化カニクイザルＰＢＭＣの両方を、１７０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ１Ｘ＋２％ＦＣＳ／ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム）を用いて２回洗浄し、８０，０００細胞でＶ底９６ウェルプレートに移した。抗ＬＡＧ３およびアイソタイプ対照抗体を様々な濃度（１０から０．０１６μｇ／ｍＬの範囲、希釈率１：５）でＦＡＣＳ緩衝液に希釈し、１００μＬ／ウェルのナイーブおよび活性化カニクイザルＰＢＭＣと共に４℃で２０分間インキュベートした。１７０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を１００μＬ／ウェルのＡＦ６４７コンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４０－３１、ロットＫ４７１Ｘ８７３Ｃ、ＦＡＣＳ緩衝液中での希釈１：２，０００）と共に４℃で２０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、１５０μＬ／ウェルのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴでフローサイトメトリーによって取得した。ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０を使用してデータを分析した。
【0206】
ΔＭＦＩを［（ＳＥＢ活性化カニクイザルＰＢＭＣの幾何平均）－（ナイーブカニクイザルＰＢＭＣの幾何平均）］として算出した。図７Ａを参照されたい。
【0207】
ΔＬＡＧ３＋細胞を、［（ＳＥＢ活性化カニクイザルＰＢＭＣのＬＡＧ３＋細胞％）－（ナイーブカニクイザルＰＢＭＣのＬＡＧ３＋細胞％）］として計算した。図７Ｂを参照されたい。
【0208】
実施例６ レポーターアッセイにおける抗ＬＡＧ３抗体の機能活性の検出
【0209】
アッセイ原理 ＲａｊｉおよびＬＡＧ３／ＮＦＡＴレポーターＪｕｒｋａｔ細胞を超抗原（例えば、ブドウ球菌エンテロトキシンＥ）の存在下で共培養すると、超抗原はエフェクター細胞上のＴＣＲ複合体（レポーターＪｕｒｋａｔ）および標的細胞上のＭＨＣクラスＩＩ（Ｒａｊｉ）を架橋し、ＴＣＲ活性化およびＮＦＡＴルシフェラーゼシグナルをもたらす。
【0210】
ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用は、この架橋を防ぎ、ＴＣＲ活性化およびＮＦＡＴルシフェラーゼシグナルを阻害する。
【0211】
抗ＬＡＧ－３抗体の存在下、ＬＡＧ３とＭＨＣ－ＩＩとの間の相互作用は遮断され、エフェクター細胞上の超抗原およびＮＦＡＴ－ルシフェラーゼシグナルによるＴ細胞活性化を促進する。
【0212】
ヒトＬＡＧ３／ＮＦＡＴ－ＬｕｃレポーターＪｕｒｋａｔ細胞株（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号７１２７８）を、１ｍｇ／ｍＬのＧ４１８および２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢを補充した完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中で培養した。ＲＡＪＩ細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＣＬ－８６）を完全ＲＰＭＩ中で培養した。
【0213】
ＬＡＧ３発現細胞の調製 ヒトＬＡＧ３／ＮＦＡＴ－ＬｕｃレポーターＪｕｒｋａｔ細胞（４０，０００細胞／ウェル）を完全ＲＰＭＩ中の９６ウェル白色透明底アッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３６１０）に播種し、１０、１または０．１μｇ／ｍＬ（最終濃度）の抗ＬＡＧ３抗体またはアイソタイプ対照抗体とプレインキュベートした（最終容量６０μＬ／ウェル）。プレインキュベーション中、細胞を３７℃、５％ＣＯ２の組織培養インキュベーター内で３０分間維持した。
【0214】
抗原提示細胞－ＲＡＪＩ細胞の調製 ＲＡＪＩ細胞を、０．１ｎｇ／ｍＬのＴｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．製のブドウ球菌エンテロトキシンＥ（ＳＥＥ）（カタログ番号ＥＴ４０４）を含有する完全ＲＰＭＩ中に０．７５Ｅ＋０６細胞／ｍＬで再懸濁した。プレインキュベーション中、細胞を３７℃、５％ＣＯ２の組織培養インキュベーター内で３０分間維持した。
【0215】
アッセイ開始および読み取り ＳＥＥ活性化ＲＡＪＩ細胞を混合し、プレインキュベートしたヒトＬＡＧ３／ＮＦＡＴ－ＬｕｃレポーターＪｕｒｋａｔ細胞を含むウェルに４０μＬを直接移した（総体積１００μＬ／ウェル）。９６ウェル白色透明底アッセイプレートを、組織培養インキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２で５から６時間インキュベートした。１００μＬ／ウェルのＯＮＥ－ｓｔｅｐルシフェラーゼアッセイシステム（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号６０６９０－１）を塗布することによってルシフェラーゼシグナルを明らかにした。プレートを室温で１５分間ゆっくりと撹拌しながら置いた。Ｓｐａｒｋ（登録商標）ＴＥＣＡＮリーダーを使用してシグナルを測定した。他のウェルの発光読み取り値から平均バックグラウンド発光（無細胞対照ウェル）を差し引くことによってデータを分析した。ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター発現の誘導倍率を、［（バックグラウンドを差し引いた抗体処置ウェルの発光）／（バックグラウンドを差し引いた未処置対照ウェルの平均発光）］として計算した。レポーターアッセイを２回実施し、その結果を図８Ａおよび図８Ｂに示す。
【0216】
実施例７ エピトープマッピング
【0217】
精製された抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体を、ＥＬＩＳＡ Ｍａｘｉｓｏｒｐ（商標）平底プレート上の５０μＬ／ウェルの１倍リン酸緩衝生理食塩水（１倍ＰＢＳ）中、５μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔ（０．０５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）２０を補充した１倍ＰＢＳ）で３回洗浄した。次いで、プレートを室温で１時間、ＰＢＳ中の１００μＬ／ウェルのブロッカーカゼイン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３７５２８）でブロッキングした。２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、組換えヒトＬＡＧ３－Ｆｃ Ｔａｇタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１６４９８－Ｈ０５Ｈ）をＰＢＳ－Ｔ中２μｇ／ｍＬ（５０μＬ／ウェル）で、室温で１．５時間インキュベートした。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄し、ビオチン化抗ＬＡＧ３ノバルティス５２５抗体クローン（ＮＶＳ５２５－ビオチンを、自家でクローン化し、生産し、ビオチン化した）をＰＢＳ－Ｔ（５０μＬ／ウェル）中５μｇ／ｍＬで、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、ストレプトアビジン－ＨＲＰ分子（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号Ｎ１００）をＰＢＳ－Ｔで１：５，０００に希釈し、室温で３０分間５０μＬ／ウェルでインキュベートし、結合したＮＶＳ５２５－ビオチンを検出するために使用した。プレートを２５０μＬ／ウェルのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、５０μＬ／ウェルのＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）ＴＭＢ－１成分マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＳｅｒａＣａｒｅ、カタログ番号５１２０－００７５）を塗布することによって結合を明らかにした。２５μＬ／ウェルの０．１６Ｍ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）停止溶液を使用してシグナルを停止し、プレートリーダーで４５０ｎＭで読み取った。この結果を図９に示す。
【0218】
実施例８ サイトカイン放出アッセイ
【0219】
新鮮なＰＢＭＣ（２人の異なるドナー由来）を単離し、組換えｈＩＬ－２（１，０００Ｕ／ｍＬ）を補充した完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）中、２．０Ｅ＋０６細胞／ｍＬで希釈した。細胞をＵ底プレート（１００μＬ／ウェル）に２．０Ｅ＋０５細胞／ウェルで播種した。次に、抗ＬＡＧ－３またはアイソタイプ対照抗体クローンを、１００ｎｇ／ｍＬの最終濃度のＳＥＢ（ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号１２２）を含有する完全ＲＰＭＩ中、１０、１および０．１μｇ／ｍＬ（最終濃度）に希釈した（５０μＬの抗体調製物と５０μＬのＳＥＢをいずれも２倍濃度で混合した）。プレートを３７℃のインキュベーターに４日間入れた。４日目に、細胞および上清をＶ底プレートに移し、１，４００ｒｐｍで５分間スピンダウンした。上清をＶ底９６ウェルプレートに移し、サイトカイン含有量（ＩＦＮγまたは他の炎症促進性サイトカイン）の分析まで－８０℃で凍結した。
【0220】
サイトカイン検出 Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）製の前炎症性パネル１（ヒト）キット（カタログ番号Ｋ１５０４９Ｄ）を、製造者の推奨事項に従って使用した。端的に言うと、アッセイサンプルを室温で解凍した。一方、サイトカイン標準は、希釈剤２（カタログ番号Ｒ５１ＢＢ－３、ロットＭ００２０１０２）を用いてエッペンドルフ（商標）チューブ中で較正物質１の段階希釈を行うことによって調製した。次いで、希釈剤２を使用して、アッセイサンプルを９６ウェル超低接着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号７００７、ロット１８２１９００８）で希釈した（通常、標準曲線範囲内の多数のサンプルを得るためには、１：２００から１：２，０００の範囲の最終希釈が必要である）。
【0221】
次いで、ＭＳＤ９６ウェルプレートを開封し、３００μｌ／ウェルのＫＰＬ緩衝液（Ｓｅｒａ Ｃａｒｅ、カタログ番号５１５０－０００８、ロット１０４３０８１１）で３回洗浄した。各希釈試料およびキャリブレータを、先に調製したプレートレイアウトに従って５０μＬ／ウェルで（気泡を避けて）ＭＳＤプレートに移した。プレートを接着性プレートシール（ＶＷＲ、カタログ番号６０９４１－１２０）を用いて密封し、ゆっくり撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。プレートを３００μｌ／ウェルのＫＰＬ緩衝液で３回洗浄し、希釈液３（希釈１：５０）で調製したＳＵＬＦＯ－Ｔａｇ検出抗体を２５μｌ／ウェルで塗布した。プレートを密封し、暗所でゆっくり撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。その後、３００μｌ／ウェルのＫＰＬ緩衝液で３回洗浄した。シグナルを、１５０μｌの２倍リード緩衝液を加えることによって明らかにし、ＭＳＤ装置（Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ６００、モデル１２０１）で検出した。この結果を図１０Ａおよび図１０Ｂに示す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【配列表】
【国際調査報告】